FI77874B - Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara peptider. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara peptider. Download PDFInfo
- Publication number
- FI77874B FI77874B FI834083A FI834083A FI77874B FI 77874 B FI77874 B FI 77874B FI 834083 A FI834083 A FI 834083A FI 834083 A FI834083 A FI 834083A FI 77874 B FI77874 B FI 77874B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- phe
- met
- amino
- gly
- peptide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Anesthesiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
77874
Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi
Keksinnön kohteena on menetelmä uusien, terapeutti-5 sesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi, joilla on yleinen kaava I
Z-ALK-C-NH-CHn-C-L-Phe-L-Met -Q-Phe-Y I
li 2 n x 0 0 10 jossa Z on vety tai amino, ALK on alkyleeni- tai alkylideeniryhmä, jossa on 1 tai 2 hiiliatomia,
Met on aminohapporadikaali Met, Met(O) tai Met(00), Q on aminohapporadikaali Lys tai Arg, sillä ehdolla, että 15 toinen aminohapporadikaaleista Q ja C-pääte-Phe on D-kon-figuraatiossa ja toisella on L-konfiguraatio, ja Y on hydroksi tai amino, ja niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi.
Edullisia peptidejä ovat ne peptidit, joilla on 20 yleinen kaava I, jossa Q on D-lys ja/tai jossa Z on amino ja ALK on metyleeniryhmä tai etylideeniryhmä.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle uusien kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tunnusomaista, että peptidistä, jolla on kaava II
25 Z1-ALK-C-NH-CH0-C-L-Phe-L-Met -Q1-Phe-Y1 II
Il 2 k x
O O
jossa ALK ja Met merkitsevät samaa kuin edellä, 1 x 1 Z merkitsee samaa kuin Z edellä tai Z on aminoryhmä, 30 joka on suojattu N-suojaryhmällä, Q* merkitsee samaa kuin Q edellä tai Q1 merkitsee (^-ami- . . no)-suojattua lysyyliä tai (guanidyyli)-suojattua arginyy- liä, sillä ehdolla, että toinen radikaaleista Q1 ja C-pää- te-Phe on D-konfiguraatiossa ja toisella on L-konfiguraa- 35 tio, ja 2 77874 Y^ merkitsee samaa kuin Y edellä tai Y^ on suojattu hydr-oksiryhmä tai hartsi, joka poistettaessa muodostaa osan, joka on hydroksi tai amino, sillä ehdolla, että kun Y1 merkitsee muuta kuin hartsia, ainakin yksi ryhmistä Z^, 5 Q* ja Y* merkitsee suojaryhmää tai sisältää suojaryhmän, poistetaan suojaryhmä tai -ryhmät ja/tai hartsi, ja haluttaessa näin saatu peptidi muutetaan happoadditiosuolaksi ja/tai hapetetaan vastaavaksi sulfoksidiksi tai sulfoniksi.
Yleisen kaavan II mukaiset peptidit ja peptidijoh-10 dannaiset valmistetaan peptideille tavanomaisella tavalla. Tavallisin menetelmä näiden peptidien valmistamiseksi on liittää tarvittavat aminohapot kondensaatiolla, joko homogeenisessä faasissa tai ns. kiinteän faasin avulla.
Kondensaatio homogeenisessä faasissa voidaan toteut-15 taa seuraavasti: a) yhdisteen (aminohappo tai peptidi), jossa on vapaa karboksyyliryhmä ja suojattuja muita reaktiokykyisiä ryhmiä, kondensaatiolla yhdisteen (aminohapon, peptidin tai amiinin) kanssa, jossa on vapaa aminoryhmä ja suojat- 20 tuja muita reaktiivisia ryhmiä, kondensaatioaineen läsnäollessa, b) yhdisteen (aminohappo tai peptidi), jossa on aktivoitu karboksyyliryhmä ja, valinnaisesti, muita suojattuja reaktiivisia ryhmiä, kondensaatiolla yhdisteen (ami- 25 nohapon, peptidin tai amiinin) kanssa, jossa on vapaa aminoryhmä ja, valinnaisesti, suojattuja muita reaktiivisia ryhmiä, ja c) yhdisteen (aminohappo tai peptidi), jossa on vapaa karboksyyliryhmä ja suojattuja muita reaktiivisia 30 ryhmiä, kondensaatiolla yhdisteen (aminohapon, peptidin tai amiinin) kanssa, jossa on aktivoitu aminoryhmä ja, valinnaisesti, suojattuja muita reaktiokykyisiä ryhmiä.
Karboksyyliryhmän aktivointi voi mm. tapahtua muuttamalla karboksyyliryhmä happohalogeniksi, atsidiksi, an-35 hydridiksi, imidatsolidiksi tai aktivoiduksi esteriksi.
3 77874 kuten N-hydroksi-sukkiini-imidiksi, N-hydroksi-bentstri-atsoliksi tai p-bentstriatsoliksi tai p-nitrofenyylieste-riksi.
Aminoryhmä voidaan aktivoida muuttamalla se fosfiit-5 tiamidiksi tai käyttämällä "fosforatso"-menetelmää.
Tavallisimmat menetelmät edellä esitettyjä konden-saatioreaktioita varten ovat: karbodi-imidi-menetelmä, atsidi-menetelmä, seka-anhydridi-menetelmä sekä aktivoitujen estereiden menetelmä, kuten E. Schröder ja K. Lubke 10 ovat kuvanneet julkaisussa "The Peptides", nide I, 1965 (Academic Press).
On kuitenkin myös mahdollista valmistaa kaavan II mukaisia yhdisteitä Merrifield’in "kiinteäfaasi"-menetel-mällä, joka on selostettu julkaisussa J. Am. Chem. Soc.
15 85 (1963) s. 2149. Valmistettavien peptidien aminohappo jen liittäminen alkaa karboksi-päätepuolelta. Tätä varten tarvitaan kiinteä kännin, jossa on läsnä reaktiokykyisiä ryhmiä tai johon tällaisia ryhmiä voidaan kiinnittää. Tämä kännin voi olla, esimerkiksi, styreenin ja divinyyli-20 bentseenin kopolymeeri, jossa on reaktiivisia kloorime- tyyliryhmiä tai polymeerikannin, joka on tehty reaktiiviseksi hydroksimetyyli- tai bentsyyliamiiniryhmillä.
Jos käytetään esimerkiksi kanninta, joka sisältää kloorimetyyliryhmiä, tapahtuu ensimmäinen Oz-aminosuoja-25 tun aminohapon sitominen kantimeen esterisidoksen kautta. Kaavan II mukaisen peptidin synteesissä tämä reaktio antaa siten:
Phe_ R - N - CH - C -' O - CH2 - (kiinteä" 30 H CH~ Ö kännin
I 2 Q
jossa R on oc-aminosuojaryhmä.
Ryhmän R poistamisen jälkeen jälkeentuleva o6-ami-35 nosuojattu aminohappo (esimerkiksi lysiini, jonka £-ami-noryhmä on myös suojattu), voidaan liittää kondensaatio- 77874 4 reaktiolla ja oö-aminoryhmän suojauksen purkamisen jälkeen seuraava aminohappo voidaan liittää mukaan jne.
Halutun aminohapposekvenssin synteesin jälkeen kaavan II mukainen peptidi vapautetaan kantajasta esimerkik-5 si nestemäisen fluorivedyn, trimetaanisulfonihapon tai me-taanisulfonihapon avulla, liuotettuna trifluorietikkahap-poon. Peptidi voidaan poistaa kantajasta mm. pilkkomalla ammoniakilla, jolloin saadaan peptidin amidi.
Reaktiokykyiset ryhmät, joiden ei tule osallistua 10 kondensaatioreaktioon, suojataan tehokkaasti, kuten todettiin, ryhmillä, jotka voidaan jälleen hyvin helposti poistaa, esimerkiksi hydrolyysillä tai pelkistämällä. Siten karboksyyliryhmä voidaan tehokkaasti suojata, esimerkiksi esteröimällä metanolilla, etanolilla, tertiäärisellä buta-15 nolilla, bentsyylialkoholilla tai p-nitrobentsyylialkoho-lilla.
Ryhmät, jotka voivat tehokkaasti suojata aminoryh-män, ovat tavallisesti happoryhmiä, esimerkiksi happoryh-mä, joka on johdettu alifaattisesta, aromaattisesta, arali-20 faattisesta tai heterosyklisestä karboksyylihaposta, kuten etikkahaposta, bentsoehaposta tai pyridiinikarboksyyliha-posta tai happoryhmä, joka on johdettu hiilihaposta, kuten etoksikarbonyyli-, bentsyylioksikarbonyyli-, t-butok-sikarbonyyli- tai p-metoksi-bentsyylioksikarbonyyliryhmä 25 tai happoryhmä, joka on johdettu sulfonihaposta, kuten bentseenisulfonyyli- tai p-tolueenisulfonyyliryhmä, mutta voidaan käyttää myös muita ryhmiä, kuten substituoituja tai substituoimattomia aryyli- tai aralkyyliryhmiä, esimerkiksi bentsyyli- ja trifenyylimetyyliryhmiä tai ryhmiä, 30 kuten orto-nitrofenyylisulfenyyli ja 2-bentsoyyli-l-metyy-livinyyli.
On suotavaa suojata myös lysiinin £,-aminoryhmä ja arginiinin guanidiiniryhmä. Tavanomaisia suojaryhmiä tässä yhteydessä ovat lysiinille tertiaarinen butoksikarbo-35 nyyliryhmä tai tosyyliryhmä ja arginiinille nitro- tai Mbs-ryhmä (4-metoksibentseenisulfonyyli).
i 5 77874
Suojaryhmät poistetaan kaavan II mukaisista yhdisteistä tavanomaisia menetelmiä käyttäen riippuen kyseessä olevan ryhmän tyypistä, esimerkiksi trifluorietikkahapon avulla tai pelkistämällä lievästi, esimerkiksi vedyllä ja 5 katalyytillä, kuten palladiumilla tai hydrobromidilla jääetikassa.
Kaavan I mukaisia peptidejä, joissa Metx on amino-happoradikaali Met(O), voidaan valmistaa vastaavista Met-peptideistä sinänsä tunnetulla lievällä hapetuksella, 10 esimerkiksi laimealla vetyperoksidilla tai perhapolla. Tällainen hapettaminen antaa S- ja R-sulfoksidien seoksen, joka voidaan erottaa yksittäisiksi diastereoisomee-reiksi sinänsä tunnetulla tavalla, esimerkiksi selektiivisesti kiteyttämällä. Käyttämällä metioniini-S- (tai R-) 15 sulfoksidia kaavan II mukaisen peptidin synteesissä yksittäiset diastereoisomeerit voidaan saada myös suoraan.
Kaavan I mukaisia sulfonipeptidejä, joissa Met on happoradikaali MetiC^), voidaan valmistaa hapettamalla vastaava kaavan I mukainen Met-peptidi tai käyttämällä 20 metioniini-sulfonia kaavan II mukaisen peptidin synteesissä.
Kaavan I mukaisen peptidi voidaan muuttaa happo-additiosuolaksi peptidin reaktiolla hapon, kuten kloori-vetyhapon, hydrobromidin, fosforihapon, rikkihapon, etik-25 kahapon, maleiinihapon, viinihapon, sitruunahapon, poly-glutamiinihapon, karboksyylimetyyliselluloosan, jne. kanssa.
Amidit, joita ensisijaisesti käytetään, ovat subs-tituoimattomia amideja.
30 Kuten jo edellä mainittiin, on kaavan I mukaisil la peptideillä jännitystä laukaiseva vaikutus, josta syystä ne ovat sopivia mm. jakomielitaudin hoitoon.
6 77874
Kaavan I mukaisia peptidejä voidaan antaa ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti, kielenalaisesti, nenänsisäises-ti, peräsuolen kautta tai suun kautta. Näistä ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti ja nenänsisäisesti antamista on pi-5 dettävä edullisina, koska tällaisilla antotavoilla peptidin imeytyminen on suurin. Peptidit sekoitetaan sen tähden edullisesti farmaseuttisesti hyväksyttävien apuaineiden kanssa, jotka tekevät peptidit sopiviksi ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti tai nenänsisäisesti annettaviksi, jol-10 loin syntyy liuoksia, suspensioita (missä on sopivaa mikro-kapseloinnin kautta), emulsioita ja suihkeita.
Sekoitettuina sopivien apuaineiden kanssa, näitä peptidejä voidaan käyttää myös muodossa, joka on sopiva suun kautta antamiseksi, kuten pillereinä, tabletteina ja 15 rakeina. Näitä peptidejä voidaan antaa myös peräpuikon muodossa.
Keksinnön mukaisia peptidejä tai peptidijohdannaisia käytetään edullisesti 1 yug:n - 5 mg:n annoksissa/kg kehon painoa päivässä ruoansulatuskanavan ulkopuolista an-20 tamista varten. Suositeltu annos ihmisille annettavaksi on väliltä 0,3 - 30 mg, erityisesti väliltä 1 - 10 mg päivässä. Nenänsisäistä ja peräsuolensisäistä antamista varten annos on yleensä 10 - 100 kertaisesti suurempi ja suun kautta antamista varten se on 100 - 1000 -kertaisesti suu-25 rempi.
Seuraava on huomattava seuraavien esimerkkien suhteen.
I. Missä mitään optista konfiguraatiota ei ole mainittu, tarkoitetaan L-muotoa.
30 II. Seuraavia lyhennyksiä käytetään käytetyille suo- jaryhmille tai aktivoiville ryhmille:
Boc = tertiaarinen butoksikarbonyyli tBu = tertiaarinen butyyli
Me = metyyli 35 ONp = p-nitrofenoksi Z = bentsyylioksikarbonyyli
Fmoc = 9-fluorenyylimetoksikarbonyyli
Ac = asetyyli 77874 7 III. Seuraavia lyhennyksiä käytetään käytetyille liuottimille tai reagensseille:
To = tolueeni
EtOH = etanoli 5 BuOH = butanoli
Py = pyridiini HOAc = etikkahappo
EtOAc = etyyliasetaatti tBuOH = tert-butanoli 10 DMF = dimetyyliformamidi DCC = disykloheksyylikarbodi-imidi DCU = disykloheksyyliurea TFA = trifluorietikkahappo
Wa = vesi 15 HOBt = N-hydroksibentstriatsoli IV. Seuraavia lyhennyksiä käytetään aminohapporyh- mille:
Met = metionyyli
Met(O) = metionyylin sulfoksidi 20 MetiC^) = metionyylin sulfoni Lys = lysyyli
Gly = glysyyli
Phe = fenyylialanyyli
Arg = arginyyli 25 Ala = alanyyli Λ-Ala = Λ-alanyyli
Vai = valyyli
Esimerkki 1
H-Gly-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-OH:n synteesi 30 (1) Boc-Gly-Gly-Phe-Met-OH
Tämä peptidi saadaan, kuten julkaisussa Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 99, (1980), s. 63 on selostettu.
(2) H-Gly-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-OH
Suojattu dipeptidi Z-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu vapautettiin 35 suojaryhmästä Z ennen liittämistä kohdassa 1(1) saatuun peptidiin. Tätä tarkoitusta varten dipeptidi liuotettiin DMFtään, minkä jälkeen lisättiin Pd/C-katalyyttiä (vahvuus 10 %) ja H2 johdettiin seoksen läpi kunnes CC^sta ei enää 8 77874 vapautunut. Sen jälkeen katalyytti suodatettiin pois.
Kohdassa 1(1) saatu peptidi sekä myös 1,1 ekvivalenttia DCC ja 2 ekvivalenttia HOBt lisättiin täten suojauksesta purettuun peptidiin H-D-Lys(Boc)-Phe-OtBu, minkä jälkeen 5 reaktioseosta sekoitettiin kaksi tuntia 0°C:ssa ja sitten 12 tuntia huoneen lämpötilassa. DCU:n sakka suodatettiin sitten pois, suodos haihdutettiin ja jäännös kiteytettiin EtOH/EtOAc (1:2)-seoksesta. Tämän suojatun peptidin Rf To/EtOH:ssa (4:1) oli 0,73.
10 Tämä peptidi vapautettiin suojaryhmistä 90-%:isessa TFA:ssa plus anisolissa ^-kaasuvirran alaisena, minkä jälkeen lisättiin eetteriä ja sakka suodatettiin pois ja liuotettiin uudelleen t-BuOH/Wa-seokseen (1:1). Ioninvaihtajaa asetaattimuodossa (LEWATIT^ lisättiin sen jälkeen ja seosta 15 sekoitettiin 40 minuuttia. Sen jälkeen ioninvaihtaja suodatettiin pois ja suodos puhdistettiin vastavirtajakamisella BuOH/HOAc/Wa (4:1:5)-seoksessa.
Rf BuOH/Py/HOAc/Wa (8:3:1:4) =0,64.
Esimerkki 2 20 H-Gly-Gly-Phe-Met-D-Arg-Phe-OH:n synteesi
(1) Boc-Gly-Gly-Phe-Met-OH
Tämä on jo selostettu esimerkissä 1(1).
(2) Z-D-Arq(N02)-Phe-OtBu
Ekvimolaariset määrät Z-D-Arg(NC^)-OH ja H-Phe-OtBu 25 liuotettiin DMF:ään ja liitettiin lisäämällä DCC ja HOBt esimerkissä 1(2) kuvatuissa olosuhteissa. DCU suodatettiin pois ja suodoksen orgaanista EtOAc-kerrosta uutettiin peräkkäin hapolla, emäksellä ja vedellä, kuivattiin ja kiteytettiin EtOAc-heksaani-seoksesta. Peptidillä, joka sen jälkeen puh-30 distettiin Si02~pylvään avulla, Rf on 0,52 To/EtOH:ssa (4:1) .
(3) H-Gly-Gly-Phe-Met-D-Arg-Phe-OH
Esimerkissä 2(2) saatu peptidi hydrattiin ja liitettiin kohdassa 2(1) saatuun peptidiin ja liitäntätuote vapau-35 tettiin sen jälkeen suojaryhmistä esimerkissä 1 (2) kuvatulla tavalla.
i 9 77874 Näin saatu heksapeptidi puhdistettiin Si02~pylvääl-lä BuOH/Py/HOAc/Wa (20:3:1:4)-seoksen avulla ja sen Rf-arvo on 0,46 BuOH/Py/HOAc/Wa (8:3:1:4)-seoksessa.
Esimerkki 3 5 H-Gly-Gly-Phe-Met-Lys-D-Phe-OH:n synteesi (1) Z-Lys(Boc)-D-Phe-OtBu Tämä peptidi valmistettiin kytkemällä Z-Lys(Boc)-OH Η-D-Phe-OtBu:n kanssa DCC/HOBt-seoksen läsnäollessa kohdassa 1 (2) kuvatulla tavalla ja kiteytettiin uudelleen eette-10 ri/petrolieetteristä (1:3). Rf = 0,60 To/eetteri (4:1)-seoksessa.
(2) H-Gly-Gly-Phe-Met-Lys-D-Phe-OH
Kohdan (1) mukaisesti saatu peptidi hydrattiin ja liitettiin Boc-Gly-Gly-Phe-Met-OH:hon, vapautettiin suoja-15 ryhmistä ja puhdistettiin, kuten esimerkissä 1 (2) selostettiin.
Näin saadun heksapeptidin Rf on 0,40 BuOH/PY/HOAc/
Wa (8:3:1:4)-seoksessa.
Esimerkki 4 20 Seuraavat peptidit valmistetaan samalla tavalla, joka kuvattiin esimerkeissä 1-3: H-Ala-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-OH, Rf = 0,48 H-Gly-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-NH2, Rf = 0,46 Ac-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-OH, Rf = 0,51 25 β-Ala-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-OH, Rf = 0,39.
Rf:t saatu BuOH/Py/HOAc/Wa (8: 3:1: 4)-seoksesta (Sioilla).
Esimerkki 5 H-Gly-Gly-Phe-Met(O)-D-Lys-Phe-OH:n synteesi 1,0 g (1,34 mmol) H-Gly-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-OH 30 liuotettiin 80 ml:aan etikkahappoa, minkä jälkeen lisättiin 10 ekvivalenttia (13,4 mmol) vetyperoksidia (30 %:n vahvuisena vesipitoisena liuoksena).
Sen jälkeen kun reaktioseosta oli sekoitettu n. 30 minuuttia huoneen lämpötilassa, lisättiin vasta valmistet-35 tua platinaa. Tämän platinakatalyytin valmistamiseksi sus-pendoitiin 5,4 g PtC>2 etikkahappoon ja vetyä ja typpeä johdettiin suspension läpi 30 minuutin ajan.
10 77874 15 minuutin sekoittamisen jälkeen reaktioseos suodatettiin ja suodos haihdutettiin. Jäännös puhdistettiin vastavirta jakamisella BuOH/HOAc/Wa (4:1:5)-seoksessa. Saanto oli 600 mg. Rf = 0,26 1-BuOH/Py/HOAc/Wa-seoksessa (8:3:1:4).
5 Esimerkki 6 H-Gly-Gly-Phe-Met-D-Lys-Phe-OH:n synteesi 1,0 g (1,34 mmol) H-Gly-Gly-Phe-Met(C^)-D-Lys-Phe-OH liuotettiin 10 ml:aan Wa ja 0,14 ml:aan (70 %:n vahvuus) HCLO^. Lisättiin 2,2 ekvivalenttia vetyperoksidia ja 10 mg 10 (NH4)gMo^C^·41^0. Sen jälkeen kun seosta oli sekoitettu n. kaksi päivää vetyperoksidiylimäärä hävitettiin lisäämällä NaHSO^, minkä jälkeen pH asetettiin seitsemään ja liuos pakastekuivattiin.
Saatu peptidi puhdistettiin osittain vastavirtajaka-15 misella l-BuOH/HOAc/Wa-seoksessa (4:1:5).
800 mg näin saatua tuotetta puhdistettiin edelleen SiC^-pylväässä käyttäen liikkuvana faasina 1-BuOH/Py/HOAc/ Wa-seosta (8:3:1:4). Rf = 0,33 edellä mainitussa 1-BuOH/Py/ HOAc/Wa-seoksessa.
20 Esimerkki 7
Seuraavat peptidit valmistettiin tavalla, joka vastaa esimerkeissä 5 ja 6 kuvattuja valmistustapoja: Ac-Gly-Phe-Met(O)-D-Lys-Phe-OH, Rf = 0,33 H-Gly-Gly-Phe-Met (C>2) -Lys-D-Phe-OH, Rf = 0,29.
25 Rf:t saatu BuOH/Py/HOAc/Wa (8 : 3 :1: 4)-seoksessa (SiC^lla).
Esimerkki 8 H-Gly-Gly-Phe-Met-Lys-Phe-OH:n synteesi "kiinteä faasi" menetelmällä (1) Hartsin valmistus jähmeää faasia varten 30 Lähtien styreenin ja 1 %:n divinyylibentseeniä kloo- rimetyloidusta kopolymeeristä valmistettiin vastaava p-hydr-oksibentsyylialkoholihartsi menetelmän mukaisesti, jonka on selostanut S.S. Wang (J. Amer. Chem. Soc. 95, (1973), s. 1328).
77874 (2) Fmoc-Phe-^kiinteä kannin7 10,9 milliraoolia Fmoc-Phe-OH liuotettuna 40 ml saan DMF liitettiin 10 gsaan hartsia (7 mmol), joka oli valmistettu kohdan 8 (1) mukaisesti, 160 mlsssa metyleenidiklori-5 dia Meienhofer'in et ai. menetelmän mukaisesti, joka on kuvattu julkaisussa Int. J. Peptide Protein Res. 13 (1979) ss. 35-42.
(3) Boc-Gly-Gly-Phe-Met-D-Lys(Boc)-Phe-ffiiinteä kannin7 Lähtien Fmoc-Phe-£kiinteä kannin7:sta liitettiin mukaan peräkkäin suojatut aminohapot Fmoc-D-Lys(Boc)-OH, 10 Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Gly-OH ja Boc-Gly-OH. Suoja-ryhmien poistaminen ja liittäminen suoritettiin, kuten seu-raavassa on selostettu viimeiselle liitäntävaiheelle, nimittäin Boc-Gly-OH:n liitännälle H-Gly-Phe-Met-D-Lys(Voc)-Phe-£kiinteä kannin7teen.
15 10 g Fmoc-Gly-Phe-Met-D-Lys (Boc)-Phe-/Tciinteä kannin7 vapautettiin suojäävästä Fmoc-ryhmästä pesemällä peräkkäin kolme kertaa 60 ml:11a DMF, kahdesti 60 ml :11a 50-%:n vahvuista piperidiiniä DMFsssa, kahdesti 60 ml:11a dioksaani/
Via (2:1) ja kuusi kertaa 60 ml:11a DMF.
20 6,6 millimoolia (3 ekvivalenttia) Boc-Gly-OH ja 3 ekvivalenttia DCC ja HOBt lisättiin tuotteeseen, josta suojaus oli purettu. Liitäntäreaktion loputtua peptidi-hartsi pestiin peräkkäin 60 ml:11a EtOH ja 60 ml:11a DMF.
(4) Peptidin poistaminen kiinteästä kantimesta 25 11 9 edellä kuvattua tuotetta pestiin 60 ml:11a me- tyleenidikloridia ja vietiin sitten 70 ml:aan TFA/metyleeni-dikloridia (1:1), johon oli lisätty 0,1 ml tioanisolia.
Kahden tunnin kuluttua jähmeä faasi suodatettiin pois ja pestiin 10 %:n vahvuisella HOAc:lla.
30 Suodos haihdutettiin kuiviin tyhjössä ja jäännös, liuotettuna 30 ml:aan tBuOH/H20, saatettiin sen jälkeen io-ninvaihtajalla muuttumaan asetaattimuotoon.
Sen jälkeen seos suodatettiin ja suodos haihdutettiin kuiviin tyhjössä.
35 Jäännös puhdistettiin Si02~pylväässä käyttäen 1-BuOH/Py/HOAc/Wa-seosta (8:3:1:4). Saanto oli 0,27 g.
Rf on 0,64 BuOH/Py/HOAc/Wa /8 : 3 :1: 4)-seoksessa (Si02:Ha).
Claims (3)
- 77874 Patenttivaatimus Menetelmä uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi, joilla on yleinen kaava I
- 5 Z-ALK-C-NH-CH0-C-L-Phe-L-Met -Q-Phe-Y I n 2 Ιί x 0 0 jossa Z on vety tai amino, ALK on alkyleeni- tai alkylideeniryhmä, jossa on 1 tai 2 10 hiiliatomia, Met on aminohapporadikaali Met, Met(O) tai Met (0~) , λ L Q on aminohapporadikaali Lys tai Arg, sillä ehdolla, että toinen aminohapporadikaaleista Q ja C-pääte-Phe on D-kon-figuraatiossa ja toisella on L-konfiguraatio, ja 15 Y on hydroksi tai amino, ja niiden happoadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että peptidistä, jolla on kaava II Z1-ALK-C-NH-CH~-C-L-Phe-L-Met -Q1-Phe-Y1 II H 2 II x 0 0 20 jossa ALK ja Met merkitsevät samaa kuin edellä,
- 1 X 1 Z merkitsee samaa kuin Z edellä tai Z on aminoryhmä, joka on suojattu N-suojaryhmällä, Q1 merkitsee samaa kuin Q edellä tai Q1 merkitsee (β -ami-25 no)-suojattu lysyyliä tai (guanidyyli)-suojattua arginyy-liä, sillä ehdolla, että toinen radikaaleista ja C-pää-te-Phe on D-konfiguraatiossa ja toisella on L-konfiguraatio, ja Y^· merkitsee samaa kuin Y edellä tai Y^ on suojattu hydr-30 oksiryhmä tai hartsi, joka poistettaessa muodostaa osan, joka on hydroksi tai amino, sillä ehdolla, että kun Y1 merkitsee muuta kuin hartsia, ainakin yksi ryhmistä Z^, ja Y* merkitsee suojaryhmää tai sisältää suojaryhmän, poistetaan suojaryhmä tai -ryhmät ja/tai hartsi, ja halut-35 taessa näin saatu peptidi muutetaan happoadditiosuolaksi ja/tai hapetetaan vastaavaksi sulfoksidiksi tai sulfoniksi.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NL8204346 | 1982-11-10 | ||
NL8204346 | 1982-11-10 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FI834083A0 FI834083A0 (fi) | 1983-11-08 |
FI834083A FI834083A (fi) | 1984-05-11 |
FI77874B true FI77874B (fi) | 1989-01-31 |
FI77874C FI77874C (fi) | 1989-05-10 |
Family
ID=19840557
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FI834083A FI77874C (fi) | 1982-11-10 | 1983-11-08 | Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara peptider. |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4491579A (fi) |
EP (1) | EP0109117B1 (fi) |
JP (1) | JPS59101450A (fi) |
KR (1) | KR910004867B1 (fi) |
AT (1) | ATE17585T1 (fi) |
AU (1) | AU555187B2 (fi) |
CA (1) | CA1246060A (fi) |
DE (1) | DE3361937D1 (fi) |
DK (1) | DK506283A (fi) |
ES (1) | ES527149A0 (fi) |
FI (1) | FI77874C (fi) |
GR (1) | GR79715B (fi) |
HU (1) | HU197030B (fi) |
IE (1) | IE56254B1 (fi) |
PT (1) | PT77609B (fi) |
ZA (1) | ZA838187B (fi) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4623715A (en) | 1984-10-22 | 1986-11-18 | Hoechst Aktiengeselleschaft | Novel peptides which are active on the central nervous system and have an action on the cholinergic system |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL7607684A (nl) * | 1976-07-12 | 1978-01-16 | Akzo Nv | Werkwijze ter bereiding van nieuwe peptiden en peptide-derivaten en de toepassing hiervan. |
US4152322A (en) * | 1978-04-28 | 1979-05-01 | Merck & Co., Inc. | Process for selective reduction of nitroarginyl peptides with titanium (iii) |
US4388236A (en) * | 1979-08-30 | 1983-06-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Enkephalin-like compounds in bovine adrenal medulla |
US4264492A (en) * | 1979-08-30 | 1981-04-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Enkephalin-like compounds in bovine adrenal medulla |
NL8101724A (nl) * | 1981-04-08 | 1982-11-01 | Akzo Nv | Peptiden met zenuw-regenererende eigenschappen. |
-
1983
- 1983-10-28 IE IE2544/83A patent/IE56254B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-10-31 EP EP83201555A patent/EP0109117B1/en not_active Expired
- 1983-10-31 AT AT83201555T patent/ATE17585T1/de active
- 1983-10-31 DE DE8383201555T patent/DE3361937D1/de not_active Expired
- 1983-11-01 US US06/547,438 patent/US4491579A/en not_active Expired - Fee Related
- 1983-11-02 ZA ZA838187A patent/ZA838187B/xx unknown
- 1983-11-02 AU AU20888/83A patent/AU555187B2/en not_active Ceased
- 1983-11-04 DK DK506283A patent/DK506283A/da not_active Application Discontinuation
- 1983-11-04 PT PT77609A patent/PT77609B/pt not_active IP Right Cessation
- 1983-11-08 GR GR72918A patent/GR79715B/el unknown
- 1983-11-08 FI FI834083A patent/FI77874C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-11-09 HU HU833840A patent/HU197030B/hu not_active IP Right Cessation
- 1983-11-09 CA CA000440838A patent/CA1246060A/en not_active Expired
- 1983-11-09 JP JP58210697A patent/JPS59101450A/ja active Granted
- 1983-11-10 KR KR1019830005336A patent/KR910004867B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1983-11-10 ES ES527149A patent/ES527149A0/es active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI77874C (fi) | 1989-05-10 |
HU197030B (en) | 1989-02-28 |
EP0109117B1 (en) | 1986-01-22 |
PT77609B (en) | 1986-03-19 |
KR910004867B1 (ko) | 1991-07-15 |
US4491579A (en) | 1985-01-01 |
AU555187B2 (en) | 1986-09-18 |
EP0109117A1 (en) | 1984-05-23 |
ES8501365A1 (es) | 1984-11-16 |
PT77609A (en) | 1983-12-01 |
FI834083A0 (fi) | 1983-11-08 |
IE832544L (en) | 1984-05-10 |
ES527149A0 (es) | 1984-11-16 |
JPS59101450A (ja) | 1984-06-12 |
FI834083A (fi) | 1984-05-11 |
CA1246060A (en) | 1988-12-06 |
DE3361937D1 (en) | 1986-03-06 |
JPH0569840B2 (fi) | 1993-10-01 |
DK506283D0 (da) | 1983-11-04 |
DK506283A (da) | 1984-05-11 |
ZA838187B (en) | 1984-06-27 |
AU2088883A (en) | 1984-05-17 |
GR79715B (fi) | 1984-10-31 |
IE56254B1 (en) | 1991-06-05 |
ATE17585T1 (de) | 1986-02-15 |
KR840007567A (ko) | 1984-12-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1241643A (en) | Peptides affecting the immune regulation and a process for their preparation | |
US4261886A (en) | Peptides having thymopoietin-like activity | |
US4487765A (en) | Peptides | |
EP0226217B1 (en) | Peptides with sulfate ester group | |
EP0016612B1 (en) | Peptides having ubiquitin-like activity, process for their preparation, therapeutic compositions containing them and their use | |
US4623640A (en) | Peptides | |
EP0018182B1 (en) | Peptides having thymopoietin-like activity, therapeutic compositions containing them, and process for their preparation | |
US4397842A (en) | Peptides having thymopoietin-like activity | |
US5409899A (en) | Pseudopeptide compounds having anti-inflammatory activity | |
FI77874B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara peptider. | |
RU2243974C2 (ru) | Способ получения цикло(arg-gly-asp-dphe-nmeval) | |
IE47448B1 (en) | Analogs of somatostatin and process for the manufacture thereof | |
Or et al. | Cysteine alkylation in unprotected peptides: synthesis of a carbavasopressin analog by intramolecular cysteine alkylation | |
Pawlak et al. | Synthesis of a novel side‐chain to side‐chain cyclized enkephalin analogue containing a carbonyl bridge | |
JPH047360B2 (fi) | ||
US5502164A (en) | Peptide compounds having therapeutic activity | |
EP0248440A2 (en) | Peptides | |
Procházka et al. | The analogs of oxytocin and D-homoarginine vasopressin with bulky substituted phenylalanine in position 2 | |
JPH07316193A (ja) | ペプチド誘導体およびその用途 | |
FI96115B (fi) | Menetelmä peptidien valmistamiseksi, joilla on T-soluavustaja-aktiivisuutta | |
US20060160989A1 (en) | Polypeptide useful as antiallergic/antiasthmatic activity, methods for the preparation thereof, pharmaceutical compositions containing such polypeptide and use thereof | |
JPS60100595A (ja) | 新規ペプチド | |
GB2156822A (en) | Biologically active tridecapeptides |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM | Patent lapsed | ||
MM | Patent lapsed |
Owner name: AKZO N.V. |