JPH06179697A - ブラジキニン拮抗作用をもつ新規の擬似ペプチド化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 ブラジキニン拮抗作用をもつ新規の擬似ペプ
チド化合物の提供。 【構成】 〔化１〕の化合物 【化１】 ここにＧ は４−グアニジノベンゾイル基、Ａｒｇ は
アルギニル残基、Ｐｒｏ はプロリル残基、Ｈｙｐ は
４−ヒドロキシプロリル残基、Ｇｌｙ はグリシル残
基、Ｔｈｉａ はβ−（２−チエニル）アラニル残基、
Ｓｅｒ はセリル残基、Ｔｉｃ は１，２，３，４−テ
トラヒドロイソキノリン−３−カルボニル残基、Ｏｉｃ
はオクタヒドロインドール−２−カルボニル残基を示
す。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明はブラジキニン拮抗作用
をもつ新規の擬似ペプチド化合物、およびそれらを含む
薬剤組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ブラジキンは天然のノナペプチドで、低
血圧状態におけるばかりでなく炎症性で苦痛を伴う作用
の媒介者として知られる。それに加えてブラジキンは平
滑筋、とりわけ気管、子宮または平滑筋の収縮作用をも
つ。臨床医学においてブラジキンはショック状態の生理
病理学、炎症性の反応、喘息および気管支の作用亢進、
アレルギー性のまたはウイルス性の鼻炎、膵炎、関節
炎、胃切除後のダンピング症候群、乾癬、遺伝性の血管
神経症性浮腫および偏頭痛にかかわりをもった。

【０００３】出願ＥＰ ０，３７０，４５３には、式

【化４】Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｅ−Ｆ−Ｋ−（Ｄ）Ｔｉｃ−Ｇ−
Ｍ−Ｆ−Ｉ である擬似ペプチド構造をもつブラジキニン拮抗薬が記
載され、そしてこれらの中に式

【化５】H-(D)Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-O
ic-Arg-OH のデカペプチドが記載される。式中、Ａｒｇ はアルギ
ニル残基を表し、Ｐｒｏ はプロリル残基を表し、Ｈｙ
ｐ は４−ヒドロキシプロリル残基を表し、Ｇｌｙ は
グリシル残基を表し、Ｔｈｉａ はβ−（２−チエニ
ル）アラニル残基を表し、Ｓｅｒ はセリル残基を表
し、Ｔｉｃ は式

【化６】 のテトラヒドロイソキノリン−３−カルボニル残基を表
しＯｉｃ は式

【化７】 のオクタヒドロインドール−２−カルボニル残基を表
し、上記アミノ酸の一種に対する記号の前の省略形
（Ｄ）はこのアミノ酸が（Ｄ）配置をもつことを意味す
る。省略形（Ｄ）がない場合はそのアミノ酸は（Ｌ）配
置をもつと考えられる。

【０００４】より詳しくは、この発明は式

【化８】Ｇ−Ａｒｑ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉ
ａ−Ｓｅｒ−Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｑ−ＯＨ のノナペプチドに関する。式中Ｇ は式

【化９】 の４−グアニジンベンゾイル基を表し、Ａｒｇ はアル
ギニル残基を表し、Ｐｒｏ はプロリル残基を表し、Ｈ
ｙｐ は４−ヒドロキシプロリル残基を表し、Ｇｌｙ
はグリシル残基を表し、Ｔｈｉａ はβ−（２−チエニ
ル）アラニル残基を表し、Ｓｅｒ はセリル残基を表
し、Ｔｉｃ は１，２，３，４−テトラヒドロイソキノ
リン−３−カルボニル残基を表し、Ｏｉｃ はオクタヒ
ドロインドール−２−カルボニル残基を表し、ペプチド
配列のそれぞれのアミノ酸はそのα炭素においてＤまた
はＬ配置をもつ。本発明はまた、そのノナペプチドのエ
ナンチオマー、ジアステレオマーおよびエピマーならび
に薬剤として許容される酸または塩基との付加塩をも
つ。

【０００５】この発明の好ましい化合物は式

【化１０】 の化合物である。式中（Ｄ）Ｔｉｃはそのα炭素におい
てＤ配置をもち、ペプチド配列のその他のアミノ酸はそ
のα炭素においてＬ配置をもち、Ｈｙｐは４Ｒ配置で、
そしてＯｉｃは（２Ｓ，３ａＳ，７ａＳ）配置であり、
さらに薬剤として許容される酸または塩基をもつ付加塩
をもつ。

【０００６】薬剤として許容し得る酸としては、塩酸、
臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフロオロ酢酸、
乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、
フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アルコルビ
ン酸、シュウ酸、メタンスルホン酸、ショウノウ酸等を
挙げることができるが、これらに限定されるものではな
い。薬剤として許容し得る塩基としては、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム、トリエチルアミン、第三級ブチ
ルアミン等を挙げることができるが、これらに限定され
るものではない。

【０００７】この化合物は新規であることとは別に、出
願ＥＰ ０，３７０，４５３の好ましい誘導体よりも有
利な性質を賦与されている。この発明の生成物の新規の
ノナペプチド構造、とりわけＮ−末端α−アミノ基の欠
如は、生体内でそれに、出願ＥＰ ０，３７０，４５３
の好ましい化合物のデカペプチド構造と比べアミノペプ
チダーゼに対しより大きな抵抗性を与える。

【０００８】更に、そのノナペプチド構造はそれに９個
の非対称中心を賦与し、それは出願ＥＰ ０，３７０，
４５３に記載のデカペプチドの場合より非対称中心がひ
とつ少いということができ、工業的合成に少なからざる
利益を与える。更に、固有の活性を調査するためにおこ
なわれる生体内試験において、この発明の化合物は出願
ＥＰ ０，３７０，４５３の好ましい生成物よりも有意
に良い結果を与える。

【０００９】この発明はまた発明の化合物の調製方法に
も拡張でき、それは逐次固相合成、フラグメントの合成
と溶液中でのそれらの結合、酵素的合成および形質転換
バクテリア中の遺伝子のクローニングおよび発現による
遺伝子合成のような各種方法により得ることができる。
一般的な固相ペプチド合成法はＢ．Ｗ．ＥＲＩＣＫＳＯ
ＮおよびＲ．Ｂ．ＭＥＲＲＩＦＩＥＬＤにより記載され
た。（“蛋白質”、固相ペプチド合成、第３版、ｖｏｌ
II、２５７−５２７、１９７６）（“Ｔｈｅ Ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ”，Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄ
ｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｖ
ｏｌｕｍｅ II, ２５７−５２７，１９７６）

【００１０】固相合成は自動化装置でおこなうことがで
き、それはペプチド鎖にアミノ酸を逐次導入するために
必要な繰返しのプログラム化可能な方法の脱保護、結
合、および洗浄サイクルにおいて実行される。好ましく
はＣ−末端のアミノ酸はポリペプチドの調製に好都合に
使われる樹脂、好ましくは０．５〜３．０％のジビニル
ベンゼンを用いて架橋されそして第一のアミノ酸を樹脂
に共有結合させ得るクロロメチレンまたはヒドロキシメ
チレンのような活性化残基を備えたポリスチレンに結合
される。フラグメントの結合サイトの選択はしばしばラ
セミ化の危険を最少限になるように決定される。３個の
結合サイトは、たとえばプロリン（位置２）、ヒドロキ
シプロリン（位置３）およびグリシン（位置４）のＣ−
末端基である。

【００１１】アミノ酸はついで操作者により決められた
順序によりひとつずつ導入される。アミノ酸の導入に対
応するそれぞれの合成サイクルはペプチド鎖、好ましく
はＮ−末端の脱保護、反応物を除去するためにまたは樹
脂を膨張させるために設計された連続的洗浄、アミノ酸
の活性化を伴う結合および追加の洗浄を必然的に伴う。
これらの各操作についで、合成がおこなわれる反応器中
に備えられた焼結ガラスフィルタによりろ過される。

【００１２】使われるカップリング試薬はジシクロヘキ
シルカルボジイミド（ＤＣＣ）およびヒドロキシベンゾ
トリアゾル（ＨＯＢＴ）またはベンゾトリアゾル−１−
イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキ
サフルオロホスファート（ＢＯＰ）またはその代りにジ
フェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）のようなペプチ
ド合成の標準試薬である。混合された無水物形成による
活性化もまた可能である。それぞれのアミノ酸は樹脂の
置換度に関し過剰に（例えば４倍に）、そして結合剤に
関しほぼ当量に反応器中に導入される。結合反応は合成
の各ステップにおいてＥ．ＫＡＩＳＥＲらにより記載の
ニンヒドリン反応試験（Ａｎａｌｙｔ，Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，３４，５９５，１９７０）によりチェックするこ
とができる。

【００１３】樹脂上のペプチド鎖の組み立て後、アニソ
ール、エタンジチオールまたは２−メチルインドールの
存在下でトリフルオロ酢酸またはフッ化水素酸のような
強酸による処理は、樹脂からペプチドを分離しそしてま
た適当であればその保護基からペプチドを遊離するのに
役立つ。その化合物はついで標準精製技術、特にクロマ
トグラフィー技術により精製される。

【００１４】この発明のペプチドはまた、固相において
もまたは溶液においても調製することができる選択的に
保護されたペプチドフラグメントを溶液中で結合するこ
とによっても得ることができる。溶液中での一般的なペ
プチドの合成方法はＦ．Ｍ．ＦＩＮＮ およびＫ．ＨＯ
ＦＭＡＮにより記載される。（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，３ｒ
ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｖｏｌｕｍｅ II，ｐ．１０５−
２５３，１９７６）保護基の使用およびそれらの差別安
定性（ｄｉｆｆｉｒｅｎｔｉａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔ
ｙ）の利益をとる方法は、樹脂へのペプチド鎖の結合に
対する場合を除き固相法と同様である。Ｃ−末端カルボ
ニル基はたとえばメチルエステルまたはアミド基により
保護される。結合中の活性化法もまた固相法合成で用い
られるものと同様である。

【００１５】この発明の化合物を逐次固相合成法により
調製するための特定の方法において、連続するアミノ酸
はＦｍｏｃ−Ａｒｇ−ＯＨで置換された樹脂と反応して
組成物Ｈ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｔｈｉａ−Ｓｅｒ
−（Ｄ）Ｔｉｃ−Ｏｉｃ−Ａｒｇ−樹脂をつくり、それ
は最終的にＧ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨと反応する。こ
の発明の化合物は極めて有利な薬学的性質、とりわけブ
ラジキニン拮抗性を、炎症および気管支収縮において有
する。

【００１６】これを基礎にして、それらは外傷、擦過
傷、火傷、皮膚発疹、湿疹、紅斑、浮腫、咽喉炎、関節
炎、喘息、アレルギー、鼻炎、過敏症のショック、炎
症、動脈低血圧症、陣痛、そうよう症、および精子移動
不全のような多くの治療症候群に便利に使うことができ
る。この発明の主題はまた、有効成分として少くともこ
の発明のひとつの化合物、または薬剤として許容される
酸または塩基とのその付加塩の少くともひとつを、単独
でもしくは一種またはそれより多い無毒性、不活性の賦
形剤または賦形薬と組み合わせて含有する薬剤組成物で
ある。

【００１７】この発明による薬剤組成物の中でも、より
特定的に、経口、非経口または鼻腔投与に適したもの、
単味または糖衣錠、舌下錠、薬包、硬質ゼラチンカプセ
ル、舌下におく製剤、トローチ、坐薬、クリーム、軟
膏、スキンゲル、エアーゾル、嚥下用または注射用製剤
を含むアンプル等を挙げることができる。

【００１８】投与量は患者の年齢および体重、苦痛の性
質および強さならびにまた投与経路によっても変わる。
後者は経口、鼻腔、直腸または非経口であってもよい。
一般的に言って投与量は２４時間当たり１または数回投
与する治療に対し５μｇ／kg乃至５mg／kgの範囲であ
る。

【００１９】例 １

【化１１】 トリフルオロアセテート オクタヒドロインドール−２−カルボン酸残基（Ｏｉ
ｃ）は（２Ｓ，３ａＳ，７ａＳ）の配置である。例１の
化合物は０．３３ｍｍｏｌ／ｇのＦｍｏｃ−Ａｒｇ−Ｏ
Ｈで置換された２ｇの樹脂から次の繰返しプロトコルに
より合成される。

【表１】 操作Ｎｏ 作 用 溶剤／薬剤 繰返し数／時間 １ 洗浄 ＤＭＦ ２×２分 ２ 脱保護 ２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×５分 ３ 脱保護 ２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×１５分 ４ 洗浄 ＤＭＦ ３×２分 ５ 洗浄 ジクロロメタン ３×２分 ６ 結合 活性化保護化アミノ酸 １×９０分 ７ 洗浄 ＤＭＦ ３×２分 ８ 洗浄 イソプロピルアルコール ３×２分 ９ 洗浄 ジクロロメタン ３×２分

【００２０】これらの操作のそれぞれは、室温でかき混
ぜられる３０mlの溶剤中においてなされ、ついで合成が
進行するガラス容器（反応器）中に備えられた焼結ガラ
スろ過材を通してろ過される。フィルタには成長したペ
プチド鎖が結合した樹脂が残る。選ばれた保護化アミノ
酸は次の順序で導入される。Ｆｍｏｃ−Ｏｉｃ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−（Ｄ）Ｔｉｃ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ
Ｂｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉａ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−
Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｙｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ，Ｆ
ｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨおよびＧ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ｏ
Ｈ。

【００２１】結合を目的とする活性化（操作６）は各サ
イクルにおいて、４当量（２．６４ｍｍｏｌ）の保護化
アミノ酸を３０mlのＤＭＦ中の３６０mgのＨＯＢｔに溶
解し、ついで室温で３０分後に６１８mgのＤＣＣを加え
ることにより得られる。この溶液はそのあと直ちに１０
mlのジクロロメタンと共に反応容器に導かれる。

【００２２】８種のアミノ酸の逐次結合に相当する８サ
イクルの終りに、そしてＣ末端アルギニンと共に、その
側鎖が保護されそしてＣ−末端位置において樹脂に結合
しているノナペプチドがそれにより得られた。樹脂はつ
いでトリフルオロ酢酸（１８ml）ジクロロメタン（１m
l）およびアニソール（１ml）の混合物で室温において
９０分間処理される。ろ液と、樹脂の洗浄に用いられる
溶剤（３×２０mlのジクロロメタン）とは、いっしょに
し、乾燥するまで蒸発される。生成物はエーテルに懸濁
されろ過されて乾燥され、ついで用意されたＣ₁₈カラム
（内径４７mm、長さ３００mm）によるＨＰＬＣで精製さ
れ凍結乾燥される。

【００２３】得られた生成物の分析は最終物を６Ｎの塩
酸中で１８時間１１０℃の加水分解によりアミノ酸に分
解後、得られたアミノ酸のＨＰＬＣによる定量検定によ
りおこなわれる。この分析は通常要求される基準に従
う。

【００２４】例 ２ この発明の化合物の薬理学的研
究、ウサギの頸静脈、Ｂ₂ 受容器 ブラジキニンは例１の生成物により抑制される収縮をひ
き起す。ｐＡ₂ （この発明の化合物のモル濃度の負の対
数で、これは同じ効果を得るためにブラジキニン濃度を
２倍にすることを必要とする）は９．７３±０．１（ｎ
＝５）である。同一条件下で出願ＥＰ ０，３７０，４
５３の好ましい化合物のｐＡ₂ は９．２３±０．４５
で、この発明の化合物が有意差をもって勝っているとい
える。

【００２５】例 ３ この発明の化合物の抗炎症作用の
生体内測定 この発明の化合物の抗炎症作用がカラゲニンの注射によ
り誘起されたラットの足の浮腫のモデルを用いて測定さ
れた。（ＷＩＮＴＥＲ Ｇ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｓｏ
ｃ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，３，５４４−５４７，１９６
０）この研究は１８０−２１０ｇの体重のオスのラット
の８個のグループについておこなわれる。この発明の化
合物が、ラットの右後足の足裏にカラゲニン（IV型ラム
ダカラゲニン、シグマ、１％溶液、注射容積０．１ml）
を皮下注射した直後にＩ．Ｖ．（静脈内）投与される。
実験の異った時点における足の容積が肢体容積計を用い
て測定される。浮腫の抑制が３時間の時点で、賦形薬を
受けた対照グループとの比較において計算され、抑制パ
ーセンテージとして表された。これらの条件において例
１の化合物を０．１mg／kgＩ．Ｖ．投与することにより
３時間の時点で５９％の抑制をもたらした。

【００２６】例 ４ 薬物組成物 例１のペプチドを５μｇ／ml含む軟膏 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-Oic-Arg-OH ---- ５０mg ポリエチレングリコールＱ．Ｓ． ----１００ml 注射用溶液 G-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thia-Ser-(D)Tic-Oic-Arg-OH ----０．５mg 注射用蒸留水Ｑ．Ｓ． ---- ２５ml

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＤ ＡＥＰ 8314−4Ｃ // Ｃ０７Ｋ 99:00

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）の化合物： 【化１】 （ここにＧは次式の４−グアニジノベンゾイル基を表
   し、 【化２】 そしてＡｒｇ はアルギニル残基を表し、 Ｐｒｏ はプロリル残基を表し、 Ｈｙｐ は４−ヒドロキシプロリル残基を表し、 Ｇｌｙ はグリシル残基を表し、 Ｔｈｉａ はβ−（２−チエニル）アラニル残基を表
   し、 Ｓｅｒ はセリル残基を表し、 Ｔｉｃ は１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン
   −３−カルボニル残基を表し、 Ｏｉｃ はオクタヒドロインドール−２−カルボニル残
   基を表し、ペプチド配列の各アミノ酸は、そのα炭素に
   おいてＤまたはＬ配置をもつ）、およびそのエナンチオ
   マーおよびジアステレオマーならびに薬剤として許容さ
   れる酸または塩基とのその付加塩。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物であ
   って、式 【化３】 の化合物であることを特徴とする化合物：（ここに、
   （Ｄ）Ｔｉｃはそのα炭素においてＤ配置の１，２，
   ３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボニル基
   を表し、ペプチド配列のその他のアミノ酸はそれらのα
   炭素においてＬ配置をもち、Ｈｙｐは４Ｒ配置でありそ
   してＯｉｃは（２Ｓ，３ａＳ，７ａＳ）配置である）な
   らびに薬剤として許容される酸または塩基との付加塩。
3. 【請求項３】 有効成分として請求項１および２のいず
   れかに記載の式（Ｉ）の少くとも１種の化合物を、単独
   であるいは１種もしくはそれより多い薬剤として許容さ
   れる賦形剤または賦形薬と組み合わせて含む薬剤組成物
   であって、それが各種原因の外傷、炎症性疾患、苦痛、
   ショック状態、アレルギー性疾患、気管支の作用亢進お
   よび精子移動不全の治療においてブラジキニン拮抗薬と
   して有用である組成物。