JPH0317098A

JPH0317098A - 合成ペプチド及びその塩並びにそれらの製造法

Info

Publication number: JPH0317098A
Application number: JP2137315A
Authority: JP
Inventors: Paolo Rovero; パオロ・ロヴエロ; Vittorio Pestellini; ヴイトリオ・ペステリニ; Carlo A Maggi; カルロ・アルベルト・マギー; Riccardo Patacchini; リカルド・パタチニ; Paolo Santicioli; パオロ・サンテイチオリ; Sandro Giuliani; サンドロ・ジウリアニ; Alberto Meli; アルベルト・メリ
Original assignee: Menarini Industrie Farmaceutiche Riunite SRL; Menarini SAS
Current assignee: Menarini Industrie Farmaceutiche Riunite SRL; Menarini SAS
Priority date: 1989-05-29
Filing date: 1990-05-29
Publication date: 1991-01-25
Also published as: EP0401177A1; IT1233696B; DE69003172D1; ATE94169T1; ES2058873T3; US5128447A; IT8909432A0; DE69003172T2; EP0401177B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明はニュ・一ロキニンＡ　（ＮＫ−２レセプター）
に対する競合的拮抗薬としての合或ペプチド及びその医
薬的に許容し得る塩、並びにそれらの製造法に関する。

ニューロキニン（ｎｅｕｒｏｋｉｎ）　Ａはサブスタン
ス（ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）　Ｋ　（　Ｋ物質ともいう）
又はａ−：−ユ−ロキニンどしても知られており、サブ
スタンスＰ（Ｐ物質ともいう）及びニューロキニン３と
同様に，次のＣ一末端アミノ酸配列：Ｐｈｅ−Ｘ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ，を右する
ペプチド類からなるタキキニン類（ｔａｃｈｙｋｉｎｉ
ｎｓ）　（ＩＵＰＨＡＲ会議、Ｃ．ＪｏｒｄａｎとＰ．
Ｏｅｈｍｃ、「サブスタンスＰ；代謝と生物学的作用（
ｍｅｔａｂｏｉ−ｉｓｍ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌ　ａｃｔ．ｉｏｎｓ）；　Ｔａｙｌｏｒ　ａｎｄＦｒ
ａｎｃｉｓ（英国ロンドン）発行、１９８５年、によっ
て提案された命名〕の種類に属する。

？ミノ酸類の命名法と略記法については、ＩＵＰＡＣ（
国際純正および応用化学連合）−ＨＪＢ（国際生化学連
合）合同生化学命名委員会の勧’９　（ｒＥｕｒ．　Ｊ
．１１ｉｏｃｈｅｍ，　Ｊ、１３８．　９（１９８４）
）が参照される。

ニューロキニンＡは１９８３年に豚の脊髄から単離され
（Ｓ．Ｋｉｍｕｒａらの論文ｒＰｒｏｃ．　Ｊａｐ．　
Ａｃａｄ．　Ｓｅｒ．Ｂ」、５９．　１ｏｆ（１９８３
）及びＫ　．　Ｋａｎａｇａｗａらの論文ｒＢｉｏ−ｃ
ｈｅｍ．　Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ｒｅｓ．　ＧＯＨ，Ｊ、
月４，５３３　（１　９８３））、次のアミノ酸配列：Ｈ−Ｈｙｓ１−Ｌ，ｙｓ２−Ｔｈｒ１−Ａｓｐ’−Ｓｅ
ｒ’−Ｐｈ♂−Ｖａｌ’−Ｇｌｙ″−Ｌｅａ９−Ｍｅｔ
１０−ＮＨ，を有するＣ一末端デカペプチドアミドとし
て特定された。このアミノ酸配列１よ、サブスタンスＰ
のアミノ酸配列とは位置７のアミノ酸及びＮ一末端アミ
ノ酸配列（位置１〜５〉が異なっており，またニューロ
キニンＢのアミノ酸配列とはＮ一末端帯域において、常
に位置１〜３及び５のアミノ酸が異なっている。サブス
タンスＰとニューロキニンＢの構造はそれぞれ次に示す
通りである。

サブスタンスＰ　：　ｔｌ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−
Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌ
ｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ■ ？ューロキニンＢ　：　ｌＩ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−１１ｉ
ｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−１’ｈｅ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｅ
ｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ２サブスタンスＰのペブチド桔抗薬及びニューロキニンＢ
のペプチド拮抗薬は既知であり、それらは米国特許第４
，４８１，１３９号明細書及び同第４，６６５，１５７
号明細書にそれぞれ記載されている６しかしながら、ニ
ューロキニンＡの拮抗薬は知られていない。ニューロキ
ニンＡのＣ一末端ヘプタペプチド１折片が，完全なペプ
チド（すなわちニューロキニンＡ）と同一の生物学的活
性を保持していることもまた同様に知られている（Ｄ．
Ｒｅｇｏｌｉらの論文ｒＬｊｆｅＳｃｉ．Ｊ、４０、１
０９（１９８７））。

本発明の要旨によれば，次の一般式（【）：Ｘ−Ａｓｐ
−Ｙ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｚ−Ｋ−ＮＨ■（
　１　）（式中、Ｘは■Ｉを表わすかあるいはＨ及びア
ミノ酸残基Ａｒｇ，　ＤＡｒｇ，　Ｌｙｓ．　ＤＬｙｓ
．　Ｔｈｒ又はＤＴｈｒを表わし、Ｙはアミノ酸残基Ｔ
ｙｒ．Ｔｒｐ，　ＤＴｒｐ．　Ｓｃｒ又はＭｅｔを表わ
し、Ｚはアミノ酸残基Ｔｒｐ又はＤＴｒｐを表わし、Ｋ
はアミノ酸残基Ａｒｃ．　Ｐｈｅ．ＤＴｒｐ、Ｔｙｒ又
はＭｓｔを表わす）で示される合或ペプチド並び？その
有機及び無機酸との医薬的に許容し得る塩が提供される
。上記ベプチド類はニューロキニンＡに対して競合的拮
抗薬としての生物学的活性を有することを示すが、作動
薬作用は有しない。

更に詳しくは本発明の要旨によれば、次の式：Ｘ−Ａｓ
ｐ−Ｙ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｚ−Ｋ−ＮＨ■
（式中、ＸはＨを表わすかあるいはＨ及びアミノ酸残基
Ａｒｇ．　Ｌｙｓ又はＴｈｒを表わし、Ｙはアミノ酸残
基Ｔｙｒを表わし、２はアミノ酸残．３Ｊ　ＤＴｒｐを
表わし、Ｋはアミノ酸残Ｊ．％　Ａｒｇ．　Ｐｈｅ．　
ＤＴｒｐ．　Ｔｙｒ又はＮｅｔを表わす）で示される合
成ペブチド並びにその有機及び焦機酸との医薬的に許容
し得る塩が提供される。

本発明のペプチドの例としては次のペプチドが挙げられ
る。すなわち一次の構造：１１　−　Ａｒｇ　−　Ａｓｐ　−　Ｔｙｒ−　ＤＴｒ
ｐ　−　Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ　−　Ａｒｇ　−
　Ｎ＋＋２を有するオクタペプチド。

一次の構造：Ｈ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｄ
Ｔｒｐ−Ａｒｇ−ＮＨ，を有するヘプタペプチド。

一次の構造：ｆｌ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−Ｄ
Ｔｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を有するオクタペプ
チドゥ一次の構造：Ｈ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｄ
Ｔｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｎｉｌ２を有するヘプタペプチド。

一次の構造：Ｈ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｄ
Ｔｒｐ−Ａｒｇ−ＮＨ２を有するヘプタペプチド９前記の合或ペプチド類はニューロキニンＡ　（ＮＫ２レ
セプター）に対する競合的拮抗薬である。

本発明の別の要旨によれば、前記合成ペプチド類の製造
法であって、不溶性の重合体支持体上で前記ペプチド鎖
をＣ一末端からＮ一末端方向に同相合或法で組み立てる
工程と、次後のフッ化水素酸中で加水分解することによ
って前記重合体状支持体から前記ペプチド鎖を切り離す
工程とからなる前記合或ペプチド類の製造法が提供され
る。

本発明の新規ペプチド類は、動物や人間において、過剰
のニューロキニンＡによる病理的効果例えば気管支狭窄
あるいは腸管又は膀胱の痙肇を低減させるか又は拮抗す
るのに有用である。

本発明の要旨のペプチド類は、ペプチド合或において公
知の方法、例えばＭ．ＢｏｄａｎｓｚｋｙとＡ．Ｂｏｎ
ｄａｎｓｚｋｙの著作「ペプチド合或の実１５（Ｔｈｅ
ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ）Ｊ（Ｓｐｌｉｎｇｅｒ−ＶｅｒＬａｇ発行、
ベルリンハイデルベルグ、１９８４年）に２己載されて
いるような方法を利用することにより製造できる。非限
定的な例として、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによる固相中で
のペプチド合成の方広（Ｒ，Ｂ．Ｍｅｒｒｉｅｆｉｅｌ
ｄの論文ｒＪ．Ａｍ．ＣＩ＋ｅａ＋．Ｓｏｃ．Ｊ，　８
５．　２１４９（１９６３））が報告されている。

アミノ酸類のα−アミノ基（ｆｕｎｃｔｉｏｎ）をｔ−
ブ１〜キシ力ルボニル（ＢｏＣと略記する）基で保護し
た場合には、Ｃ一末端アミドを製造するための固体支持
体として４−メチルベンズヒトリルアミン樹脂（ＭＢ＋
１Ａ４−］脂と略記する；アミノ基；０．４〜０．６ミ
ルモル／樹脂１ｇ）を使用できる。３官能アミノ酸類の
渚側鎖は、上記文献に記載の公知の方法で保護した。

本発明のペプチド類は、対称無水物法を使用して半自動
合戊装ａ　（ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ）を用いて組立て
た。

すなわち．前記反応器に樹脂１〜２ｇを入れ、トリエチ
ルアミンの１０％クロロホルム溶液で中和し、次いで塩
化メチレン／ジメチルホルムアミドの１／工溶液中の製
造したばかりの、アミノ酸の対称無水物２当量を上記反
応器に加える。６０分間のアミノ酸連結反応工程（ｃｏ
ｕρｌｉｎｇ　ｃｙｃｉｅ）及び塩化メチレンとインプ
ロパノールで前記樹脂を洗滌する工程（ｃｙｃｌｅ）を
実施した後に、Ｋａｉｓｅｒらの論文ｒＡｎａ１、　Ｂ
ｉｏｃｈｅ＋＋＋．Ｊ，　３４，　５９５（１９７０）
に記載のニンヒドリン呈色試験により連結反応の完結を
確認する。前記と同じ方法で実施される次の連結反応に
用意する上？！ｉｌ！樹脂を収得するために、連結され
たアミノ酸のアミノ基からの保護基の除去は、トリフル
オロ酢酸の４０％塩化メチレン溶液で処理し，次いでジ
イソプ口ピルエチルアミンの５％塩化メチレン溶液で処
理すること（すなわち，自助的な保護基除去及び中和工
程）によって行なわれる。

最後のアミノ酸（Ｎ一末端）の添加とＢｏｃ基の脱離（
トリフルオ口酢酸による保護基除去工程）を行なった後
に、前記樹脂を反応器から取り出し、真空中で１夜乾燥
する。上記樹脂からペプチドをＣ一末端アミドの形で分
離し、同時にアミノ酸類の諸側鎖の全部から保護基を除
去するのには、上記樹脂を′゛テフロン″製反応器中で
フッ化水素ｒｌｉ／アニソール／ジメチルスルフィドの
９５／５／０．５混合物でＯ℃で１時間処理する。窒素
気流中で上記フッ化水素酸を除去した後に、上記樹脂を
減圧乾燥し、次いでエチルエーテルで洗滌し、その後に
得られた粗製ベブチドを５０％酢酸で抽出する。得られ
た酢酸溶液を減圧濃縮して小容量とし、次いで最初の精
製工程用の立体障害除外（ｓｔｅｒｉｃ　６ｘｃｌｕｓ
ｉｏｎ）樹脂のカラムに直接に装填する。ペブチド（Ｈ
ＰＬＣ分析法により特定される）を含有する両分を一緒
にし、真空中で蒸発させ、次いで凍結乾燥する。

最後に，ペプチドを９８％以上の純度で得ろために、分
離用逆相高圧クロマトグラフ法で精製する。

本発明を以下の実施例により更に詳しく説明する。

実施例１０．４５ミリ当量／樹脂１ｇのアミノ基を有するＭ　Ｂ
　１１　Ａ樹脂［Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社（スイス国
）製］　２．０ｇを半自動合成装ｉｉ７Ｌａｂｏｒｔｅ
ｃ　ＳＰ６４０（商品名）の反応器に装入した。前記樹
脂をトリエチルアミンの１０％クロロホルム溶液（２　
Ｘ　ｉ５ｍｌ）で２回（５分＋１５分）手動で洗ｊ條し
、次いで塩化メチレン（３　Ｘ　１５ｍｌ２）で３回（
３×１分）手動で洗滌することにより中和した。α−ア
ミノ基をｔ−ブトキシ力ルボニル（［ｌｏｃと略記する
）基で保護し且つ側鎖のグアニジン基をｐ−１−ルエン
スルホニル基（トシル基ともいう；　Ｔｏｃと略記する
）で保護してあるアルギニンを用いて、慣用の対称酸無
水物縮合方法でアルギニンを樹脂に連結した。

すなわち、Ｂｏａ−Ａｒｇ（Ｔｏｃ）−０１１　１．５
４ｇ（３．６ミリ当＋１）を塩化メチレン３ｍＲに溶解
し、その溶液へ次いで塩化メチレンにジシクロへキシル
力ルポジイミド（ＤＣＣ）を溶解してなるジシクロへキ
シル力ルポジイミドの８％（重量／容量）溶液４．６４
ｍＵ（１．８ミリ当量に相当する）を水浴中で連続的に
電磁攪拌しながら加えた。生成されたアミノ酸活性魚水
物を含む１！｝られた混合液をグーチ（Ｇｏｏｃｈ）濾
過器で濾過して生成したジシクロヘキシル尿素を除去し
、得られた濾液を前記の樹脂を含む反応器に加え、更に
ジメチルホルムアミド５ｍｆｌで希釈し，次いで自動的
アミノ酸連結反応のサイクル（第１表参照）を開始させ
た。

』　１　聚一自動的アミノ酸連結サイクル手順１．洗　　　滌：塩化メチレン　　　　　　　　１回×
１分３．上記と同じ４．洗　　　滌；塩化メチレン１回ＸｌＳ分３回×｛分６。洗滌；塩化メチレン３回Ｘ１分ミノ酸無水物を使用　　　　　３回Ｘ６０分８．洗　　
　滌；塩化メチレン　　　　　　　２回×１分９．洗　
　　滌；イソプロパノール　　　　　　２回Ｘ２分１０
．　　洗　　　滌；塩化メチレン　　　　　　　　３回
×１分前記第１表に記載のアミノ酸連結サイクルの終了
時に、前記樹脂から一部分を試料として取出し、この試
料についてＫａｉｓｅｒ試験（すなわちニンヒドリン呈
色試験）を実施した。アミノ酸の組み込み率が９９％よ
りも高い場合には、アミノ基からの保護基の自動的除去
工程を開始させるが、左もなくばアミノ酸連結工程を反
復する。次後に複数のアミノ酸を順次に連結するに当っ
ては常に第１表に手順に従い、下記のアミノ酸を以下に
示した量で使用した。すなわち、Ｂｏｃ−ＤＴｒρ（３
回の連結の各々について１．０９ｇ）、Ｂｏａ−Ｖａｌ
（０．７８ｇ）．　Ｂｏｃ−（０−２’−ブロモベンジ
ノレオキシ力ルボニル）−Ｔｙｒ（１．７８　ｇ　）．
Ｂｏａ−アスパラギン酸シクロヘキシルエステル（１．
Ｉ．２Ｅ）及びＢｏｃ−ｔｏｓｙｌ−アルギニン（１．
５４　Ｋ　）である。

最後のアミノ酸連結を行なった後に、前記の保護基除去
工程を反復し、樹脂を反応器から取り出し、次いで炭酸
カリウム上で減圧乾燥して生或物３．６０　ｇを得た。

次いで，フッ化水素酸を用いて樹脂からのペプチドの分
離及び同時に側鎖からの保護基の除去を行なった。得ら
れたべプチドー樹脂２ｇをアニソール２＋ｎＱ及びジメ
チルスルフィド０．２ｍｌ２と共にテフロン製反応器に
入れ、混合物を一５０℃に冷却し、その後に濃フッ化水
ｉ酸２０一を蒸留して生じた蒸気を吹込み、次いで電磁
撹拌を水浴中で６０分間続けた。窒素を吹き込むことに
よって、フッ化水素を除去し、得られた粗生成物を減圧
下で２時間乾燥し、エチルエーテル（２Ｘｌ５ｌ＋２）
で洗滌し、次いで５０％酢酸（３Ｘｌ５ｍ塁）中に抽出
し、その後にグーチ濾過器を通して濾過して使用済み樹
脂を除去した。このようにして得られた粗生成物溶液を
ロータリーエバボレーター中でぬ縮して小容量にしＬＨ
２０カラム（２．５　ｘ　１００ｃｎ＋）に直接に装填
し、０．２Ｍ酢酸／アセトニトリルのｌ／１混合液（２
Ｑ）を用いて重力で溶出し、１０ｍｌｌずつの画分を採
集した。ペプチド含有画分を流出液のＵＶプロット（２
４５ｒ＋ｍ）により同定し、一緒にし，ロータリエバボ
レーター中で濃縮して小容量にし，次いで凍結乾燥し、
粗生成物４５０ｍｇを得た。高圧液体クロマｊヘグラフ
ィーによる生成物の最終精製については、上記粗生成物
１００Ｈｌｇを０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液／ア
セ１・ニトリルの８：２の混合液４Ｈ劃に溶解し、この
ようにして得られた透明ｌ８液をＲＰｌ８カラム（１．
．５Ｘ１５ｃＩ＋１）に装填し、２５４ｎｍでＵＶ検出
しながら０．０５％トリフルオ口酢酸を含むアセトニト
リルの２０％から８０％までの０．０５％１−リフルオ
口酢酸に対する濃度勾配でｌｏｍｆｆ／分の流量で１２
０分ｌｉｄで溶出した．約２５分で生成物が溶出し、均
質な両分を一緒にし、濃縮し、次いで凍結乾燥して生成
物２６■を得た。ＨＰＬｃ（高圧液体クロマトグラフィ
ー）特性決定：　３．９Ｘ１５０ｎｎ　Ｃ１８　Ｗａｔ
ｅｒｓ　Ｄｅｌｔａ−Ｐａｋ力ラム、０．０５％　トリ
フルオロ酢酸に対するアセトニトリルの濃度勾配２０分
で２０〜８０％、流ｍ１ｍＱ／分，　２１０ｎｍでのＵ
Ｖ検出：ＲＴ（保持時間＝８．３分、ＨＰＬＣ純度＝９
８．０％。

失笈旌茎のアミノ　　１：Ｈ−Ａｓｐ−’Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−
ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−ＮＨ２を　するヘプタペプチドの
八０．５ミリ当量／樹脂１ｇのアミノ基を有する゛’Ｆｍ
ｏｃ（フルオレニルメトキシカルボニル）化方法（ｓｔ
ｒａ−ｔｅｇｙ）によって：ＡｆＡしたアミドペプチド
用樹脂″（ＣＩｌ，Ｏ−Ｐｈ（１．　４）−Ｃｌｌ（Ｎ
Ｈ−Ｆｍｏｃ）−Ｐｈ（１．　４）−０−（ＣＩ，）３
−ＣＯＮＨ−ＣＨ　（Ｃｌｌ３）−ＣＯＮＩｉ−ＣＨ，
−Ｐｈ一重合体；　　［１　ａ　ｃ　ｈ　ｅ　ｍ社（ス
イス国）ｔＪ］　１、Ｏｇを半自動合成装ｉ！　Ｌ　ａ
　ｂ　ｏ　ｒ　ｔ　ｅ　ｃＳＰ６４０の反応器に装入し
た。フルオレニルメトキシ力ルボニル（Ｆｍｏｃと鴫記
する）基の加水分解をジメチルホルムアミド（ＤＭＦと
略記する）に溶解した２０％ピペリジンを用いて、第２
表に示した手順のサイクル１〜７に従って自動的に行な
った。

一第−２一表一 ′″Ｆ　ｍ　ｏ　ｃ　”方法による自動的アミノ酸連結
サイクル手順１．保護基除去：２０％ピペリジンＤＭＦ
溶液　　　　　１回×３分２．上記と同じ　　　　　　
　　　　　　　　　　工回×７分３。洗　　滌；塩化メ
チレン（ＤＣＭと略記する）　　２回×１分４．洗　１
１１；ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　２回Ｘ１分５
．洗　　滌；イソプロパノール　　　　　　　　２回×
１分６．洗　滌：　ＤＭＦ　　　　　　　　　　　　　
２回×工分７．洗　滌；　ＤＣＭ　　　　　　　　　　
　　　２回×１分ｌＯ．洗　　滌；イソプロバノール　
　　　　　　　１回×１分比洗　滌；　ＤＭＦ　　　　
　　　　　　１回×１分１２．洗　滌；　ＤＣＭ　　　
　　　　　　　　　　１回×工分１３．洗　　滌；上記
１０以降を２回以上反復次いで、ジンクロへキシル力ル
ポジイミド（ＤＣＣと略記する）によって“その場で（
ｉｎ　ｓｉｊｕ）″′製造したヒドロキシベンゾトリア
ゾール（ｌｌＯＢｔと略記する）を用いる活性エステル
法により最初のＤ一トリブトファンの連結を行なった。

Ｆｍｏｃ　−　Ｄ−　トリプトファン１．５ミリ当量（
欄脂のアミノ基に対して３倍過剰量）（０．６３９ｇ）
とｌＩＯＢｔ２ミリ当量（０．３１０　ｇ　）をＤ（．
１　／　Ｄ朴の２；１混合液１２ｍｆｆに溶解し、前記
合或装置の反応器に移し、次いで撹拌しながら２分間予
備平衡化した後にＤＣＭ　／　ＤＭＦの２＝１混合液に
１容解したＩＭ　ＤＣＣ　１、５ｍｆ２（１．５ミリ当
量に相当する）を加え、このようにして前記の自動的ア
ミノ酸連結工程（第２表の９行目の操作）を開始させた
。第２表に記載の連結工程の終了時に、樹脂から一部分
を試料として取出し，この試料についてＫａｉｓｅｒ試
験を実施した。アミノ酸の組み込み率が９９％以上であ
る場合には同様に前記の連結工程を反復した。連続的ア
ミノ酸連結を各々行なうに当っては、常に第２表の手順
に従い、下記の各アミノ酸を以下に示した量で使用した
。すなわち、Ｆｍｏｃ−ＤＴｒｐ（３回の連結の各々に
ついて０．６３９　ｇ　）、Ｆｍｏｃ−バリン（０．５
０９　ｇ　）．　Ｆｍｏｃ−チロシンｔ−ブチルエーテ
ル（０．６８９ｇ）及びＦｍｏｃ−アスパラギン酸ｔ−
ブチルエステル（０．６１７　ｇ　）である。最後のア
ミノ酸連結を行なった後に、保護基除去工程を反復し、
樹脂を反応器から取り出し、次いで炭酸カリウム上で真
空乾燥して生成物１．６５０ｇを得た。次いで、樹脂か
らのペプチドの分離とトリフルオロ酢ｍ（ＴＦＡと略記
する）による各側鎖からの保護基の除去とを同時に行な
った。すなわち．　ＴＦＡ／エタンジチオール／ρ−ク
レゾールの２７　：　１．５　：　［５（容量／容量比
）の混合物からなる溶液３０−を入れた小さなフラスコ
にペプチドー樹脂１．５ｇを入れ、電磁撹拌しながら３
５℃の水浴中で２時間保持した。粗生成物を沈澱させる
ために、Ｏ℃に冷却したエチルエーテル１０容量とＯ℃
に冷却した石浦エーテル５容量とを加えた。得られた混
合物を−７８゜Ｃで１夜保持し、次いで多孔質のロート
状濾過器上で濾過して粗結品質生成物３５０■を得た。

高圧液体グロマトグラフィーによるｍ製については、実
施例１の方法を行ない生或物１２■を得た。ＨＰＬＣ分
析（分析条件１土実施例１に記載の条件と同一である）
による特性決定：　Ｒｔ（保持時間）　＝１２．６分、
ＨＰＬＣ純度＝９８％。

本発明に包含される前記一般式（１）の化合物の？の非
限定的な例は次の通りである。

Ｆ１−Δｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−
ＤＴｒｐ−Ｔｙｒ−ＮＨ．ＬＲｔ　＝＝　１１　．７Ａ
ｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ
−Ａｒ（；−ＮＨ■Ｒｔ＝　９，９Ｉｆ−Ｔｈｒ−Ａｓ
ｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−
Ａｒｇ−ＮＨ，　　Ｒｔ＝　９．６Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｍｅｔ
−ＮＨ２　　Ｒｔ＝１１．０１１−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−Ａｒｇ
一〜Ｈ２　　　Ｒｔ＝　　８．８ｌ１−八ｒｇ−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｐ
ｈｅ−ＮＨ，　　　　ｌｌｔ＝１１．７Ｈ−．Ａｒｇ−
Ａｓｐ−Ｓｅｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒ
ｐ−Ｍｅｔ−ＮＪＩ，　　　ｌ１ｔ＝１０，５Ｈ−Ａｓ
ｐ−Ｓｃｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−
Ｍｃｔ−Ｎｔ｛，　　　Ｒｔ　＝　１　１．３Ｈ−Ｌｙ
ｓ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｄ
Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｎｉｌ２　　　Ｒｊ＝　　８．７−Ａ
ｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−
ＤＴｒｐ−Ａｒｇ−ＮＨ２Ｒｔ＝　８．２Ｉ１−Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｍ
ｅｔ、−ＮＨ２　　　　　　　Ｒｔ＝１２．３Ｈ−Ａｓ
ｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−’ｒｒｐ−
Ａｒｇ−Ｎｉｌ２Ｒｔ＝　９．４Ｈ−　Ａｓｐ−Ｔｒｐ
−　ＤＴｒｐ−Ｖａ　ｌ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−Ａｒｇ
−Ｎｌ　ｌ，　　　　Ｒ　ｔ．　＝　］　０　．　９１
１−Ａｓｐ−ＤＴｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−
ＤＴｒｐ−Ａｒｇ−ＮＨ■　　　　　　Ｒｔ＝　　９．
４上記のｌｉＰＬｃ保持時間（Ｒｔ）は実施例１に記載
のようにして測定した。

在Ｕ’４’ｌ鈎一括一性〜作動薬又は桔抗薬としてニューロキニンＡレセプターに
作用する本発明のペプチトの活性は試験標本を使用する
試験管内（ｉｎ　ｖｉｔｒｏ）効力検定によって評価し
た。該効力検定においては、タキキニン及び関連ペプチ
ドによって生じる生物学的応答が専らニューロキニンＡ
レセプター（ＮＫ−２レセプター）に対する作用に基づ
いて測定される。用いる試験標本は単離したラットの輸
精管であり、これにタキキニン類が作用すると、電気的
刺激を伴なう輸精管の壁内神経によって生起された収縮
の増強作用（ρｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）　を生みだす
。この試験標本におけるペプチド類の活性の測定はＲｏ
ｖｅｒｏらの論文（ｒＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ　Ｊ
、１０，　３５５（１９８７））に記載のようにして行
なった。評価したペプチドの作動薬活性はＰＤ２として
表わした。このＰＤ２は最大効果の５０％を生じる作動
薬のモル請度の逆対数を表わす。拮抗薬活性はρＡ２と
して示される。ＰＡ２は作動薬の２倍〜２倍に等しい有
効投与量に等しい投与量を生じる拮抗薬のモル濃度の逆
対数を表わす。

ＰＤｚはＶａｎ　Ｒｏｓｓｕｍの論文（ｒＡｒｃｈ．Ｉ
ｎｔ．Ｐｈｅｒｍａｃｏｄｙｎ．Ｊ，ν巳、２４９　（
１９６３））に従って算出し、ρ八２はＳｃｈｉｌｄプ
ロツｈ　［０．Ａｒｕｎｌａｋｓｈａｎａとｔ１、ｏ．
ｓｃｈｉｌｄの論文「８ｒ．Ｊ，Ｅ’ｈａｒｍａｃｏ１
．Ｊ、１４、４８（１９５９）〕の分析から算出した。

得られた結果は以下の通りである。

」４４一表− 拮抗薬活性は接触時間１５分後のニューロキニンＡの濃
度／応答曲線の右方向に平行移動（ｐａｒａ１、ｌｅｌ
ｄｉｓｐｌａｃｃ＋＋＋ｅｎＬ）を生じる生成物の活性
として評価される。上記の表中のＮＫＡはニューロキニ
ンＡを表わし、ＮＫＡ（４−１０）はニューロキニンＡ
のＣ一末端ヘプタペプチド断片である。

記載した方法は本発明の実際的な例証としてのみ示した
単なる例示であり，本発明は本発明の基礎である概念の
範囲から免脱することなくその形及び配列におい゛Ｃ変
化し得る。

注）表中のｎ．ａ．は活性がないことを示す。

上記桔抗薬類は、単離したラットの輸精管の神経によっ
て生起された収縮の増強作用を生じる。

Claims

【特許請求の範囲】１、次の式（ I ）：Ｘ−Ａｓｐ−Ｙ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｚ−Ｋ
−ＮＨ＿２（Ｉ）（式中、ＸはＨを表わすかあるいはＨ
及びアミノ酸残基Ａｒｇ、ＤＡｒｇ、Ｌｙｓ、ＤＬｙｓ
、Ｔｈｒ又はＤＴｈｒを表わし、Ｙはアミノ酸残基Ｔｙ
ｒ、Ｔｒｐ、ＤＴｒｐ、Ｓｅｒ又はＭｅｔを表わし、Ｚ
はアミノ酸残基Ｔｒｐ又はＤＴｒｐを表わし、Ｋはアミ
ノ酸残基Ａｒｇ、Ｐｈｅ、ＤＴｒｐ、Ｔｙｒ又はＭｅｔ
を表わす）で示される合成ペプチド並びにその有機及び
無機酸との医薬的に許容し得る塩。２、次の式：Ｘ−Ａｓｐ−Ｙ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｚ−Ｋ
−ＮＨ＿２（式中、ＸはＨを表わすかあるいはＨ及びア
ミノ酸残基Ａｒｇ、Ｌｙｓ又はＴｈｒを表わし、Ｙはア
ミノ酸残基Ｔｙｒを表わし、Ｚはアミノ酸残基ＤＴｒｐ
を表わし、Ｋはアミノ酸残基Ａｒｇ、Ｐｈｅ、ＤＴｒｐ
、Ｔｙｒ又はＭｅｔを表わす）で示される請求項１記載
の合成ペプチド並びにその有機及び無機酸との医薬的に
許容し得る塩。３、次の構造：Ｈ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴ
ｒｐ−ＤＴｒｐ−Ａｒｇ−ＮＨ＿２を有する請求項１又
は２記載のオクタペプチド。４、次の構造：Ｈ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｄ
Ｔｒｐ−Ａｒｇ−ＮＨ＿２を有する請求項１又は２記載
のヘプタペプチド。５、次の構造：Ｈ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴ
ｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ＿２を有する請求項１又
は２記載のオクタペプチド。６、次の構造：Ｈ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｄ
Ｔｒｐ−ＤＴｒｐ−ＮＨ＿２を有する請求項１又は２記
載のヘプタペプチド。７、次の構造：Ｈ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−ＤＴｒｐ−Ｖａｌ−ＤＴｒｐ−Ｄ
Ｔｒｐ−Ａｒｇ−ＮＨ＿２を有する請求項１又は請求項
２記載のヘプタペプチド。８、請求項１又は請求項２記載の合成ペプチド類を有効
成分とすることを特徴とするニューロキニンＡ（ＮＫ−
２レセプター）に対する競合的拮抗薬。９、請求項１又は請求項２記載の合成ペプチドの製造法
であって、不溶性の重合体状支持体上で前記ペプチド鎖
をＣ−末端からＮ−末端方向に固相合成法で組み立てる
工程と、次後のフッ化水素酸中で加水分解することによ
って前記重合体状支持体から前記ペプチド鎖を切り離す
工程とからなる前記合成ペプチドの製造法。１０、請求項１又は請求項２記載の合成ペプチドの製造
法であって、不溶性の重合体状支持体上で前記ペプチド
類をＣ−末端からＮ−末端方向に組み立てる固相合成反
応を行うに当って、適当に保護された側鎖基を有するア
ミノ酸であって且つ前記重合体状支持体にカルボキシル
官能基によって係留されているＣ−末端アミノ酸に対し
て適当に保護されたα−アミノ基と適当に保護された側
鎖とを有する活性型の第２のアミノ酸を有機溶媒中で反
応させる工程；次後に、適当に保護された活性型の所定
の複数のアミノ酸を上記と同じ要領で順次に連結する工
程；次いで前記重合体状支持体から、組み立てた前記ペ
プチドを切り離す工程及び適当な酸又は塩基中で加水分
解を行なうことによって、保護基を合成されたペプチド
から除去する工程からなる前記合成ペプチドの製造法。