JP2001505216A

JP2001505216A - ブラジキニンｂ▲下２▼レセプターのペプチドアゴニスト

Info

Publication number: JP2001505216A
Application number: JP52528598A
Authority: JP
Inventors: ドデイ，ピエール; ルッカリーニ，ジャン−ミシェル; マルティネス，ジャン; アンブラール，ミュリエル; ダフィ，イザベル
Original assignee: フルニエアンデュストリエエサンテ
Priority date: 1996-12-04
Filing date: 1997-12-03
Publication date: 2001-04-17
Also published as: FR2756566A1; US6316413B1; CA2273190A1; FR2756566B1; WO1998024809A1; EP0948524A1

Abstract

(57)【要約】本発明は以下に示す組み合わせの中から選択される擬ペプチド化合物に関する。（i）式Ｉの化合物: 式中:A₁は単結合であって、D-ArgまたはL-Lysを表し;A₂はL-Proまたはトランス-4-ヒドロキシ-L-Pro(4Hyp)を表し;A₃はL-PheまたはL-チエニルアラニン(Thi)を表し;Ｙは水素原子またはC₁-C₃アルキル基を表し;Ｘは硫黄または酸素原子を表し;および，（ii）式Ｉの化合物の付加塩。本発明は療法におけるこの化合物およびこの化合物の付加塩の調製法および使用にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】ブラジキニンＢ₂レセプターのペプチドアゴニスト発明の属する技術分野本発明は、ペプチド型またはペプチド類似型の新規な化合物、その調製法およびその療法上の使用に関する。これらの新規な化合物は、”擬ペプチド”（pseu dopeptide）と呼ばれ、ブラジキニンＢ₂レセプターのペプチドアゴニストとして作用し、療法上、特に心臓血管系の疾患状態の治療において有用である。従来の技術ブラジキニンは９個のアミノ酸（Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg)により構成されたペプチドであり、そのＢ₂レセプターへの作用を通じて、ある一定の疾患状態、特に心臓血管系の治療に対して有益な効果を有する。このように、ブラジキニンは心臓を心筋虚血から保護し、虚血性心臓の再灌流に関連するある一定の有害な障害を防ぐ。(L.E．RUBINらの論文(Circ．Res.，76，434-440，199 5)およびT.J.M．TOBEらの論文(J．Cardiovasc．Pharmacol.，17，600-607，1991 )を参照。) ブラジキニンは血液脳関門の浸透性を増大させるとともに、それによって抗感染性または抗腫瘍性の薬剤の通過性を促進することも可能にする(T．INAMURAら、J．Cerebral Blood Flow and Metab.，14，862-870，1994;FR-M-7979)。さらに、ブラジキニンは、子宮収縮の引き金をひく原因になり(T．ENGSTROMら、J．E ndocr.，118，81-85，1988)、排卵を誘発することを可能にし(Y．YOSHIMURAら、 Endocrinology，122，2540-2546，1988)、および精子の運動性を増大させることを可能にするともいわれている(W．MISKAら、Arch．Androl.，33，1-5，1994)。ブラジキニンはプロテアーゼによる自身の急速な分解によって活動継続時間を制限されるため、実用性がない。したがって、ブラジキニンＢ₂レセプターのアゴニスト型の性質を持った化合物、すなわち、ブラジキニンのそれと同様の作用を有するが、蛋白質酵素によって分解することのできない化合物を見出すことが望まれている。この目的のために、WO-A-89/09231はアミド結合の一つを還元して得られるブラジキニン誘導体を提案した。ブラジキニンより誘導され、還元されたアミド結合を再び含む他の修飾構造は、US-A-5 112 596およびUS-A-5 268 1 6 4に提案されており、これらの提案は、ブラジキニン誘導体の血液脳関門の浸透性を増大させる性質に関するものであり；これらの化合物の一つであるRMP7は、脳神経膠種を患う患者におけるその抗がん剤の作用の効力を増大させる能力を評価するために、現在臨床試験を受けているところである。 WO-A-95/07294およびWO-A-95/24422はそれぞれ、ペプチドおよび擬ペプチドをブラジキニンレセプターのアンタゴニスト（antagonists）として推奨していたことが以前から知られている。現在、これらペプチドおよび擬ペプチドは偶然にも下記の式Ｉの発明に従う化合物とは構造的に異なるものである。 EP-A-0322779が抗健忘症剤として5-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン-1-アセトアミド誘導体（5-oxo-1,5-benzothiazepin-1-acetamide derivatives）および5- オキソ-1,5-ベンゾオキサアゼピン-1-アセトアミド誘導体（5-oxo-1,5-benzooxa zepin-1-acetamide derivatives）を提案していることも知られている。これらの誘導体は本発明に従う式Ｉの擬ペプチドとは構造的に異なるということがわかっている。発明の目的本発明によると、前述したブラジキニンの使用に関する不利な点を克服するために新規な技術的解決法の供給が提案されている。この新規な解決法はブラジキニンＢ₂レセプターのアゴニストとして作用する、すなわち、ブラジキニンのその作用と同様の作用を有する化合物を含んでいる。これらの化合物は、ブラジキニンおよび従来技術の既知の類似生産品の構造とは異なる、新規な構造を有している。これらの化合物はプロテアーゼの作用に対して潜在的に抵抗力があり、このことから、療法上の使用に堪え得る作用持続期間を有する。この新規な技術的解決法にしたがって、本発明の第１の特徴にしたがい新規な工業用的生産品として擬ペプチド型の化合物の提供が提案され、本発明の第２の特徴にしたがいこれらの化合物の調製法の提供が提案され、ならびに本発明の第３の特徴にしたがいこれらの化合物の使用、特に療法上において、例えば血液脳関門の浸透性を増大させるため、生殖機能を改善するため、および心筋虚血の治療のための活性成分としての提供が提案されている。発明の主題本発明の新規な技術的解決法にしたかって、擬ペプチド構造を有する化合物は新規な工業用的生産品として推奨されるものであり、前記化合物は、以下の構成からなるグループから選択されることにより特徴づけられる: (i)式Ｉの化合物: （SEQ ID No.１および２を参照）式中: A₁は、単結合であって、D-ArgまたはL-Lysであり、 A₂は、L-Proまたはトランス-4-ヒドロキシ-L-Pro(4Hyp)であり、 A₃は、L-PheまたはL-チエニルアラニン(Thi)であり、Ｙは、水素原子またはC₁-C₃-アルキル基であり、およびＸは、硫黄または酸素原子である;ならびに、 (ii)これらの化合物の付加塩（addition salts）。以下に与えられたシーケンスリスティング（sequence listing）において、SE Q ID No．1はA₁が単結合である場合の構造Ｉの生成物に関し、SEQ ID No．2はA₁ がD-ArgまたはL-Lysである場合の構造Ｉの生成物に関する。本発明に従って、式Ｉの化合物を調整する方法およびその付加塩も推奨される。この方法の特性は以下に示すとうりである。式Ｉの化合物あるいはその非毒性の付加塩のうちの一つの使用もまた、療法上においてブラジキニンがもたらす有益な効果、特に心臓血管系において、例えば、心筋虚血の治療もしくは血液脳関門の浸透性の改善、または生殖器系において、例えば、排卵の誘発、精子の運動性の改善もしくは子宮の萎縮の誘発といった効果が働く疾患状態の治療の際に使用するための薬剤を得るために推奨される。式Ｉの化合物およびその付加塩は生物学的定量法における試薬としても有用である。略語便宜上、以下に示す略語および頭文字を本文中に使用した。 a)アミノ酸およびアミノ酸残基について Ala アラニン Arg アルギニン DBO(Y)は以下の構造式の”擬”（“pseudo”）アミノ酸である。（式中Ｙは先に定義された通りである。） DBT(Y)は以下の構造式の”擬”アミノ酸である。（式中Ｙは先に定義された通りである。） DBZ(Y)はDBO(Y)またはDBT(Y)であり、式中Ｙは先に定義された通りである。 Gly グリシン 4Hyp トランス-4-ヒドロキシプロリン[Ｌ配置生成物に関する別名:(2S,4R)-4- ヒドロキシピロリジン-2-カルボン酸] Phe フェニルアラニン Pro プロリン Ser セリン Thi チエニルアラニン[別名:3-(チエン-2-イル)アラニンまたはThAla] （ｂ）他の物質について Adoc アダマンチルオキシカルボニル（adamantyloxycarbonyl） Aoc t-アミルオキシカルボニル Boc t-ブトキシカルボニル（または1,1-ジメチルエトキシカルボニル） BOP ベンゾトリアゾル-1-イル-オキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロリン酸(benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphonium hexafluoro-phosphate) Bzl ベンジル（またはフェニルメチル） DCM ジクロロメタン DIEA ジイソプロピルエチルアミン DMF N,N-ジメチルホルムアミド Fmoc フルオレン-9-イルメトキシカルボニル（fluoren-9-ylmethoxycarbonyl ） Foc フルフリルオキシカルボニル HTFA トリフルオロ酢酸 Iboc イソボルニルオキシカルボニル Res 樹脂 RT 室温(15-20℃) THF テトラヒドロフラン Tos p-トルエンスルホニル（またはトシル） Z フェニルメトキシカルボニル（またはベンジルオキシカルボニル） Z(p-Cl) p-クロロベンジルオキシカルボニル Z(p-OMe) p-メトキシベンジルオキシカルボニル発明の詳細な説明以下のように、アミノ酸が不斉炭素原子を含有する時（この場合は、Gly以外のあらゆるアミノ酸）、天然に存在するのＬ配置をとるアミノ酸は省かれ、天然には存在しないＤ配置をとるアミノ酸が指定される。 DBZ(Y)に関する限りにおいては、アミングループ（amine group）を伴う３位の炭素が、（カーン−インゴールド−プレローグ絶対配置法に従った場合において）Ｘが硫黄原子のときＳ配置をとり、Ｘが酸素原子のときＲ配置をとることが指摘されている。実用に関する点においては、GlyおよびA₁=D-Argの場合を除いて、式Ｉの擬ペプチドの全てのアミノ酸はＬ配置を有している。付加塩は式Ｉの化合物と無機酸または有機酸が反応して得られるあらゆる酸付加塩（acid addition salt）を意味するとして理解されている。式Ｉの基本的な化合物と塩を形成するために好ましい無機酸は、塩化水素、臭化水素、リン酸および硫酸である。式Ｉの基本的な化合物と塩を形成するために好ましい有機酸は、メタンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸、シュウ酸、クエン酸、酢酸およびトリフルオロ酢酸である。ここで、C₁-C₃-アルキル基は、メチル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基を意味するとして理解されている。本発明にしたがい推奨される式Ｉの化合物の調製法は下記の(1)〜(7)のステップから構成される: (1)エチルブロモアセテートと式IIの化合物との反応: 式中; Xは酸素原子または硫黄原子であり、Ｂはオキシカルボニルタイプのアミノ保護基（amino-protecting group）であり、およびＹは先に定義された通りのものであり、不活性溶媒中（特にTHF）、塩基の存在下（特にKOH）、もし必要ならば相間移動触媒を用い、室温で、１から８時間反応すると、式IIIの化合物が得られる:式中Ｂ、ＸおよびＹは上記に示されるように定義されたものである; (2)水素との反応による得られた式IIIの化合物のアミングループの脱保護は水素化触媒、例えば木炭または硫酸バリウム上に担持したパラジウムの存在下、ある溶媒、例えばエタノール中、室温に近い温度で、水素分圧を約10⁵から5.10⁵パスカルとしておこなわれ、式IVの化合物が得られる: 式中ＸおよびＹは上記に示されるように定義されたものである; (3)得られた式IVの化合物と式VのL-セリン誘導体との反応: 式中：ここでＢは上記に示したように定義されたものであり、Bocであることが都合がよく、およびＲ₁は水素化反応に鋭敏なヒドロキシル保護基（hydroxyl-protecti ng group）、特にBzlであり、不活性溶媒中、特にDMF中で、BOPおよび３級アミン（特にN-メチルモルホリン）のような活性化剤の存在下で、室温と同等の温度または室温に近い温度で、1から10時間反応すると、式VIの化合物が得られる:式中、Ｘ、Ｒ₁ ＢおよびＹは上記に示されるように定義されたものである; (4)NaOH（好ましくは1Nの水酸化ナトリウム溶液）を伴う処理によって得られた式VIの化合物のエチルエステルグループの加水分解は、エタノールのような溶媒中で、室温と同等の温度または室温に近い温度で、1から５時間反応が行われ、式VIIの化合物が得られる: 式中、Ｘ、Ｒ₁ ＢおよびＹは上記に示されるように定義されたものである; (5)得られた式VIIの化合物とL-アルギニンにより修飾されたメリフィールド樹脂（Merrifield resin）(ここで、Argの塩基サイドグループ（basic side-group）はトシル基よって保護されており、そのC-末端酸性基（C-terminal acid group ）によって、Arg残基は樹脂と結合されている)との反応は、不均一系で行われ、好適な溶媒（特にDCM）の存在下、ペプチド合成に習慣的に用いられるカップリング試薬（特にBOPおよびDIEA）の存在下、室温で、１から４時間反応が行われ、式VIIIの化合物が得られる: ［各部位の命名法:B-Ser(R₁)-DBZ(Y)-Arg(Tos)-O-Res］式中、ＸはＳまたはＯであり、 Resは樹脂であり、Ｂはアミノ保護基（好ましくはBoc）であり、Ｒ₁はヒドロキシル保護基（好ましくはBzl）であり、Ｙは上記に示されるように定義されたものであり、および、 Tosはトシル基である; (6)既知のペプチド合成法（特にメリフィールド合成（MERRIFIELD synthesis）のような既知の巧妙な技術）によって得られた式VIIIの化合物とHTFAを、DCM中において反応させ、アミングループをセリンのN-末端に再生し、その次に、 N-末端アミングループ（N-terminal amine group）がグループB(group B)で保護されているアミノ酸、および塩基またはヒドロキシルサイドグループ（basic or hydroxyl side-group）が保護されているアミノ酸があれば、このアミノ酸とも反応し、そして好適なアミノ酸を伴う脱保護／カップリングのこの手法は、式Ｉの配列が得られるまで必要に応じて繰り返される。すなわち下記に示すアミノ酸と次々に反応し: （α） B-Phe-OHまたはB-Thi-OH （β） B-Gly-OH （γ） B-Pro-OHまたはB-4Hyp-OH （δ） B-Pro-OH （ε） B-Arg(R₂)-OH （ζ）および、もし好ましければ、B-Lys(R₂)-OHまたはB-D-Arg(R₂)-OH その結果、望みの保護された擬ペプチド配列のうちの一つが得られ、特に: B-D-Arg(R₂)-Arg(R₂)-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser(R₁)-DBZ(Y)-Arg(Tos)-O-Res、 B-Lys(R₂)-Arg(R₂)-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser(R₁)-DBZ(Y)-Arg(Tos)-O-Resまたは B-Arg(R₂)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser(R₁)-DBZ(Y)-Arg(Tos)-O-Res、式中、略語は前述と同等であり、Ｒ₂は塩基サイドグループの保護基である;そして、 (7)トリフルオロ酢酸（この試薬は保護基Ｂを除去する）による最初の処理によって望みの化合物を脱保護および遊離し、続いてフッ化水素による第二の処理によって他の保護基を除去し、樹脂から擬ペプチドを遊離して、式Ｉの望みの化合物を得る。本発明にしたがって式Ｉの化合物を調製するのに適したアミノ保護基とヒドロキシル保護基はペプチド合成の分野における既知のグループ（groups）から選択され、一方でアミンまたは塩基グループ（amine or basic groups）を保護し、他方でヒドロキシルグループ（hydroxyl groups）を保護する。以下においては特にここで推奨されているアミノ保護基に関して言及する: -N-末端の一時的な保護のためは、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニルおよびヘテロアリールオキシカルボニルのようなオキシカルボニルタイプのグループＢ、特にAdoc、Aoc、Boc、Fmoc、Foc、Iboc、Z、Z(4-Cl)およびZ(4-O Me)が好ましく用いられる。ならびに −塩基サイドグループ（LysおよびArgの場合）には、上記したグループＢ、Tos またはNO₂の一つが好ましく用いられる。 N-末端に関するアミノ保護基として使用されるグループＢは、好適には(i)式I IおよびIIIの生成物に関してはＺであり、(ii)(6)のステップにおける式V〜VIII の生成物に関してはBocである。もし存在するならば、塩基サイドグループの保護基、Ｒ₂は好ましくはＺ、Tos またはNO₂である。好ましくは、Ｒ₁は、すなわちOHサイドグループ（OH side-groups）に関するヒドロキシル保護基は、Bzlである。上記のことを考慮して、以下に示すアミノ酸がステップ(6)の一連のカップリングに関してより好ましく用いられる: （α） Boc-Phe-OHまたはBoc-Thi-OH （β） Boc-Gly-OH （γ） Boc-Pro-OHまたはBoc-4Hyp-OH （δ） Boc-Pro-OH （ε） Boc-Arg(Tos)-OH （ζ）そして、もし好ましければ、Boc-Lys(Z)-OHまたはBoc-D-Arg(NO₂)-OH。ステップ（１）において、エチルブロモアセテートは他のC₁-C₄-アルキルハロゲノアセテートに置き換えられる。ここに含まれるハロゲン（halogeno group）は、特にCl、BrまたはＩである。ここで、エチルブロモアセテートが、式IIIの化合物の調製において、収率の都合上、好適な試薬として用いられる。室温（RT）は15から20℃の温度を表し、室温に近い温度（a temperature clos e to RT）とは5から30℃の間の温度を表し、より好ましくは10から25℃を表す。前述した方法の変形例として、以下に示す(1a)から(3a)からなるステップを行うことができる: (1a)エチルブロモアセテートと式IIの化合物の反応: 式中、ＸはＳまたはＯであり、ＢおよびＹは上記に示されるように定義されたもの（この場合Ｂは好ましくはBoc）であり、前記の方法のステップ(1)に記された類似の条件のもとで式IIIの化合物が与えられる:式中、Ｘ、ＢおよびＹは上記に示されるように定義されたものである; (2a)前記の方法のステップ(4)に記された類似の反応条件のもとで、エステルグループの加水分解を実施すると、式IXの化合物が与えられる: 式中、Ｘ、ＢおよびＹは上記に示されるように定義されたものである;そして (3a)特に上記に示したようなメリフィールド（MERRIFIELD）法によって、前述のように式IXの化合物をN-末端が保護されたアミノ酸（N-protected amino acid）とみなし、式Ｉの化合物の合成を継続することにより、支持樹脂（support resi n）からの脱保護および分離後に、式Ｉの化合物が得られる。本発明の更なる利点と特徴は以下に示す予備例の記述（Preparatory Examples ）および薬理学的試験の結果によってさらに明確に理解される。もちろん、これらの詳細は全体的に本発明を限定することを意図するものではなく、実施例の一例として与えられているものである。調製Ｉエチル 3-(S)−[(フェニルメトキシカルボニル)アミノ]-3,4-ジヒドロ-4-オキソ -1,5-ベンゾチアアゼピン 5(2H)-アセテート（Ethyl 3-(S)-[(phenylmethoxycarbonyl)amino]-3,4-dihydro-4-oxo-1,5-benzo thiazepin-5(2H)-acetate）水酸化ナトリウム7.40ｇ（0.13ｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム3.74ｇ（0.01ｍｏｌ）を、3-(S)-[(フェニルメトキシカルボニル)アミノ]-2,3 -ジヒドロ-1,5-ベンゾチアアゼピン4(5H)-オン（3-(S)-[(phenylmethoxycarbony l)amino]-2,3-dihydro-1,5-benzothiazepin-4(5H)-one）33.27ｇ（0.1ｍｏｌ）が入ったテトラヒドロフラン300ｍｌの溶液に加える。氷浴中で冷却後、エチルブロモアセテート16.92ｇ（0.1ｍｏｌ）を加え、次に、その混合溶液（the mixt ure）を２時間攪拌する。反応が終了した時点で、その混合溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機物の抽出層は水で洗浄され、硫酸マグネシウム上で乾燥され、そして次に減圧下で濃縮される。得られた黄色のオイルは、溶離液として塩化メチレン／イソプロピルエーテル混合液（9/1,ｖ/ｖ）を使用したフラッシュクロマトグラフィーによって、シリカ上で精製される。溶媒を蒸発させた後に、淡黄色オイル（収率＝57.3％）24.1ｇが得られる。 [α]_D ²⁷=+102°(c=1.01;CHCl₃)調製ＩＩエチル 3-(S)-アミノ-3,4-ジヒドロ-4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン 5(2H)- アセテート(塩酸塩) （Ethyl 3-(S)-amino-3,4-dihydro-4-oxo-1,5-benzothiazepin-5(2H)-acetate(h ydrochloride)）調製Ｉにしたがい得られた化合物2.24ｇ（5.4.10^-3ｍｏｌ）は95％エタノール 50ｍｌに溶解する。95％エタノールを溶媒とする1MのHCl溶液5.4ｍｌが加えられ、次に10％パラジウム担持硫酸バリウム（10% palladium on barium sulfate）8 .1ｇを加える。得られた混合溶液を、水素雰囲気下、大気圧、室温のもとで、４時間攪拌する。次に、混合溶液を濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させる。残査はエチルエーテル中で再度懸濁され、次に減圧下で再び濃縮され、最後にエーテル中で沈殿させられ、その結果、ベージュ色の固体（収率=94％）の形で望みの生成物1.61ｇが得られる。 [α]_D ²³=+169.9°(c=0.76;DMF)調製ＩＩＩエチル 3-(S)−[[2-(S)-(1,1-ジメチルエトキシカルボニルアミノ)-3-(フェニルメトキシ)-1-オキソプロピル]アミノ]-3,4-ジヒドロ-4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン 5(2H)アセテート[Boc-Ser(Bzl)-DBT(H)-OEt] （Ethyl 3-(S)-[[2-(S)-(1,1-dimethylethoxycarbonylamino)-3-(phenylmethoxy )-1-oxopropyl]amino]-3,4-dihydro-4-oxo-1,5-benzothiazepin-5(2H)-acetate[ Boc-Ser(Bzl)-DBT(H)-OEt]） DMF溶媒15ｍｌ中で、調製IIにしたがって得られた化合物1.52ｇ（4.8.10^-3ｍｏｌ）の溶液が調製され、N-メチルモルホリン0.53ｍｌ（4.8.10^-3ｍｏｌ）と、 2-(S)-[(1,1-ジメチルエトキシカルボニル)アミノ]-3-(フェニルメトキシ)プロピオン酸［すなわち、Boc-L-Ser(Bzl)-OH］1.56ｇ(5.28.10^-3mol)が加えられ、次にBOP2.33ｇ(5.28.10^-3mol)とN-メチルモルホリン0.57ｍｌ(5.28.10^-3mol)が加えられる。2時間攪拌後、炭酸水素ナトリウム飽和溶液15ｍｌを加え、次にその混合溶液は酢酸エチルとともに抽出される。有機相は硫酸水素カリウム溶液で洗浄され、次に塩化ナトリウム溶液で洗浄され、そして硫酸ナトリウム上で乾燥される。減圧下で濃縮することにより、粗生成物2.54ｇが得られ、この粗生成物は、溶離液として酢酸エチル／ヘキサン（1/1,v/v）混合液を使用したクロマトグラフィーを用いてシリカゲル上で精製され、その結果、望みの生成物が白色粉末（収率=70％）の形で得られる。 M.p．=52-54℃ [α]_D ²³=+150.8°(c=0.85;DMF)調製ＩＶ 3-(S)-[[2-(S)-(1,1-ジメチルエトキシカルボニルアミノ)-3-(フェニルメトキシ )-1-オキソプロピル]アミノ]-3,4-ジヒドロ-4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン 5(2H)-酢酸[Boc-Ser(Bzl)-DBT(H)-OH] （3-(S)-[[2-(S)-(1,1-Dimethylethoxycarbonylamino)-3-(phenylmethoxy)-1-ox opropyl]amino]-3,4-dihydro-4-oxo-1,5-benzothiazepin-5(2H)-acetic acid[Bo c-Ser(Bzl)-DBT(H)-OH]）調製IIIにしたがい得られた化合物0.80ｇ（1.43.10^-3ｍｏｌ）を95％エタノール15ｍｌに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム2.2ｍｌを加える。室温で、1時間攪拌した後、エタノールの一部を蒸発させ、次に残査の混合物を水で溶解させて、エチルエステルで洗浄する。水相は、１Ｎ硫酸水素カリウムで酸性化され、次に酢酸エチルで抽出される。有機相は、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄され、硫酸ナトリウム上で乾燥される。減圧下で濃縮後、生成物は、エチルエーテル／ヘキサン混合溶液中で沈殿させられ、その結果、白色沈殿（収率=90％）の形で望みの生成物0.70ｇが得られる。 M.p．=92-94℃ [α]_D ²³=+174.3°(c=0.86;DMF)調製Ｖ Boc-D-Arg(NO₂)-Arg(Tos)-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser(Bzl)-DBT(H)-Arg(Tos)-Res この化合物はペプチド合成に使用されるメリフィールド固相法（MERRIFIELD's solid phase method）によって調製されたものである。合成の出発点は、ジビニルベンゼンで架橋し、Boc-L-Arg(Tos)-OH(0.41.10^-3mol/gram)の側鎖（the gr ouping Boc-L-Arg(Tos)-OH）によって修飾された従来のポリスチレンをベースとするメリフィールド樹脂である。望みの擬ペプチド配列を構成する異なる要素は、以下に示すサイクルで順番に導かれる。ａ)DCM中において40％トリフルオロ酢酸および２％エタンジチオールを含んだ溶液と２分間反応し、次にDCMでの洗浄相（a washing phase）、次に上記の溶液との28分間再接触により、最後に、DCM、イソプロパノールおよび再度のDCMで洗浄することによる（Boc基によって保護された）アミングループの脱保護。ｂ)DCMおよび／またはDMF中に（Boc基によってＮ-末端アミングループ（N-ter minal amine group）上を保護され、もし好ましければ、酸性基以外の反応性官能基上を保護された）アミノ酸、BOPおよびDIEAを含む溶液との反応によるカップリング。過剰のこの反応溶液との反応後、樹脂は連続してDCM、メタノールさらにDCMで洗浄される。それぞれの新しいアミノ酸のカップリングの後、カイゼルテスト（Kaiser test）が反応が実際に起こったことを確認するために実行される。カップリング反応は以下に示す反応物を使用して次々に実行される（括弧内に示されているのは、反応に使用される化学量論的な相対量（the relati ve amount reacted）、反応時間および使用された溶媒）: 1）Boc-Ser(Bzl)-DBT(H)-OH（1.2当量.，1時間40分，DCM） 2）Boc-Thi-OH［またはBoc-(チエン-2-イル)アラニン］(3当量.，1時間30分，DC M) 3）Boc-Gly-OH（3当量.，30分，DCM） 4）Boc-4Hyp-OH［またはBoc-4−ヒドロキシプロリン］(3当量.，20分，DCM） 5）Boc-Pro-OH（6当量.，40分，DCM） 6）Boc-Arg(Tos)-OH［またはNα-Boc-Nω-p-トシル-L-アルギニン］(6当量.，10 0分，DCM) 7）Boc-D-Arg(NO₂)-OH［またはNα-Boc-Nω-ニトロ-D-アルギニン］(3当量.，1 時間，DMF) 望みの擬ペプチドはこのようにして得られ、保護され、メリフィールド樹脂に固定される。類似の手法によって、以下に示す化合物が樹脂に結合されて得られる:調製ＶＩ Boc-L-Lys(Z)-Arg(Tos)-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser(Bzl)-DBT(H)-Arg(Tos)-Res調製ＶＩＩ Boc-Arg(Tos)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser(Bzl)-DBT(H)-Arg(Tos)-Res 例１（Example 1） H-D-Arg-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBT(H)-Arg-OH （SEQ ID No．3）調製Vにしたがい得られた樹脂はトリフルオロ酢酸、エタンジチオールおよびD CM（40/2/60,v/v）の混合溶液で処理され、さらにはDCMおよびイソプロパノールで洗浄される。この最初の段階において、D-Arg残査により運ばれるBoc保護基の除去が可能になる。次に樹脂はアニソールおよびエタンジチオールの存在下、樹脂1ｇに対して液体フッ化水素1ｍｌ、アニソール0.1ｍｌおよびエタンジチオール0.05ｍｌの割合でフッ化水素により処理される。0−5℃で約1時間反応後、エーテルが加えられ、樹脂／擬ペプチドの混合溶液が濾過される。次に擬ペプチドは、アセトニトリル／水の混合溶液に溶解され、得られた溶液は濾過後に凍結乾燥される。次に残査がクロマトグラフィーによりC18型グラフトシリカゲル（C18 type grafted silica gel）上で、１％ＨＴＦＡ水溶液から１％ＨＴＦＡアセトニトリル溶液への溶媒の濃度勾配により溶離することで精製される。生成物は、白色薄片固体の外観を有しており、質量分析によって確認される。 (C₅₁H₇₇N₁₉O₁₃S₂:M=1227)． [α]_D ²¹=+6°(c=0.26;CH₃OH) 例１に類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる: 例２（Example 2） H-Lys-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBT(H)-Arg-OH （SEQ ID No．4）[α]_D ²⁰=-6.4°(c=0.97;H₂O) 例３（Example 3） H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DBT(H)-Arg-OH （SEQ ID No．5）[α]_D ²⁰=+4.8°(c=0.83;H₂O) 調製Ｉに類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製ＶＩＩＩエチル 3-(S)-[(1,1-ジメチルエトキシカルボニル)アミノ]-3,4-ジヒドロ-4-オキソ-1,5-ベンズオキサゼピン-5(2H)-アセテート（Ethyl 3-(S)-[(1,1-dimethylethoxycarbonyl)amino]-3,4-dihydro-4-oxo-1,5- benzoxazepin-5(2H)-acetate） [α]_D ²³=+184°(c=1;CHCl₃) 調製IVに類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製ＩＸ 3-(S)-[(1,1-ジメチルエトキシカルボニル)アミノ]-3,4-ジヒドロ-4-オキソ-1,5 -ベンズオキサゼピン-5(2H)-酢酸[すなわち、Boc-DBO(H)-OH] （3-(S)-[(1,1-Dimethylethoxycarbonyl)amino]-3,4-dihydro-4-oxo-1,5-benzox azepin-5(2H)-acetic acid[i.e．Boc-DBO(H)-OH]） [α]_D ²³=+179°(c=1;DMF) 調製Ｖに類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製Ｘ Boc-D-Arg(NO₂)-Arg(Tos)-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser(Bzl)-DBO(H)-Arg(Tos)-Res 例１に類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる: 例４（Example 4） H-D-Arg-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBO(H)-Arg-OH （SEQ ID No．6）[α]_D ²⁰=-13.55°(c=0.86;H₂O) J．SLADEらによってJ．Med．Chem.，1985，28，1517-1521に記述された調製法に類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製ＸＩ R-(5-メチル-2-ニトロフェニル)-N-アセチル-D-システイン（R-(5-Methyl-2-nitrophenyl)-N-acetyl-D-cysteine） [α]_D ²¹=-73°(c=0.5;CH₃OH) M.p．=172℃調製ＸＩＩ R-(5-メチル-2-ニトロフェニル)-D-システイン（R-(5-Methyl-2-nitrophenyl)-D-cysteine） [α]_D ²²=-151°(c=0.36;CH₃OH) M.p．=188℃調製ＸＩＩＩ R-(5-メチル-2-ニトロフェニル)-N-(フェニルメトキシカルボニル)-D−システイン (R-(5-Methyl-2-nitrophenyl)-N-(phenylmethoxycarbonyl)-D-cysteine） [α]_D ²³=-21°(c=0.34;CH₃OH) M.p．=141℃調製ＸＩＶ R-(5-メチル 1-2-アミノフェニル)-N-(フェニルメトキシカルボニル)-D−システイン（R-(5-Methyl-2-aminophenyl)-N-(phenylmethoxycarbonyl)-D-cysteine） [α]_D ²³=+93°(c=0.40;DMSO) M.p．=175℃調製ＸＶ 3-(S)−[(フェニルメトキシカルボニル)アミノ]-3,4-ジヒドロ-8-メチル-4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン（3-(S)-[(Phenylmethoxycarbonyl)amino]-3,4-dihydro-8-methyl-4-oxo-1,5-be nzothiazepine） [α]_D ²³=+172°(c=0.56;DMSO) M.p．=77℃ 調製Ｉに類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製ＸＶＩエチル 3-(S)-[(フェニルメトキシカルボニル)アミノ]-3,4-ジヒドロ-8-メチル- 4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン 5(2H)-アセテート（Ethyl 3-(S)-[(phenylmethoxycarbonyl)amino]-3,4-dihydro-8-methyl-4-oxo -1,5-benzothiazepin-5(2H)-acetate） [α]_D ²³=+167°(c=0.54;CHCl₃) 調製IIに類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製ＸＶＩＩエチル 3-(S)−アミノ-3,4-ジヒドロ-8-メチル-4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン 5(2H)-アセテート（Ethyl 3-(S)-amino-3,4-dihydro-8-methyl-4-oxo-1,5-benzothiazepin-5(2H)- acetate）この化合物は単離されず、次のステップで直接使用される。調製IIIに類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製ＸＶＩＩＩエチル 3-(S)-[[2-(S)-(1,1-ジメチルエトキシカルボニルアミノ)-3-(フェニルメトキシ)-1-オキソプロピル]アミノ]-3,4-ジヒドロ-8-メチル-4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン5(2H)-アセテート［Boc-Ser(Bzl)-DBT(CH₃)-OEt］（Ethyl 3-(S)-[[2-(S)-(1,1-dimethylethoxycarbonylamino)-3 -(phenylmethoxy)-1-oxopropyl]amino]-3,4-dihydro-8-methyl-4-oxo-1,5-benzo thiazepin-5(2H)-acetate［Boc-Ser(Bzl)-DBT(CH₃)-OEt］） [α]_D ²¹=+92.3°(c=0.75;DMF) 調製IVに類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる:調製ＸＩＸ 3-(S)-[[2-(S)-(1,1-ジメチルエトキシカルボニルアミノ)-3-(フェニルメトキシ )-1-オキソプロピル]アミノ]-3,4-ジヒドロ-8-メチル-4-オキソ-1,5-ベンゾチアアゼピン 5(2H)-酢酸［Boc-Ser(Bzl)-DBT(CH₃)-OH］（3-(S)-[[2-(S)-(1,1-Dimethylethoxycarbonylamino)-3-(phenylmethoxy)-1-ox opropyl]amino]-3,4-dihydro-8-methyl-4-oxo-1,5-benzothiazepin-5(2H)-aceti c acid[Boc-Ser(Bzl)-DBT(CH₃)-OH]） [α]_D ²¹=+121.1°(c=0.71;DMF) M.p．=76-78℃ 例１に類似の手法によって、以下に示す化合物が得られる: 例５(Example 5) H-D-Arg-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBT(CH₃)-Arg-OH （SEQ ID No．7）[α]_D ²¹=-2.08°(c=0.38;CH₃OH) 本発明にしたがう生成物の薬理学的活性は、ブラジキニンＢ₂レセプターへの結合活性およびブラジキニンと同様の効果を誘発する活性の点において評価された。本発明にしたがう生成物の薬理学的活性は、検定用生成物のブラジキニンＢ₂ レセプターへの結合活性（安定な方法でＣＨＯ細胞株（CHO cell line）内へクローン化され、移入される人間のＢ₂レセプターに関するＫｉの測定）およびブラジキニンに比較して機能的な効果を誘発する活性（人間の臍静脈の分節（segm ents）に関するｐＤ₂値の測定）の点において決定された。これらの本発明にしたがう生成物を用いた検定により得られた結果は、以下の表１において照合されている。クローン化されたＢ₂レセプターへの化合物の親和性はＫｉの値で評価され、ブラジキニンに類似する機能的効果の誘発はＢ₂レセプターに依存した臍静脈の収縮に起因する濃度から算出されるｐＤ₂によって評価される。ブラジキニンも伴ったこれらの検定から得られた値は比較するために与えられている。本発明の化合物であるブラジキニンＢ₂レセプターのアゴニストは、療法上ブラジキニンまたはその同族体が有益な作用を発揮する疾患状態、例えば、ある一定の心臓血管の疾患状態の治療において有用である。例として、本発明にしたがう化合物は、心筋虚血の治療の点において、または虚血性心臓の再灌流に関連する有害な障害の防止の点において有益な効果を有している。本発明の化合物は血液脳関門の浸透性を増大させることも可能であり、それによって抗感染性もしくは抗腫瘍性の活性成分の通過を促進することも可能にし、またはプラスミドもしくは裸のＤＮＡ（naked DNA）のような遺伝子治療ベクターが組織に浸透できるようにする。本発明の化合物は、排卵の誘発、精子の運動性の増加または子宮の収縮の誘発についても有用である。本発明の化合物は、生理的に適合した賦形剤（excipient）と共に、任意に非毒性の付加塩の形態で好ましく用いられ、一般的に、静脈内、筋肉内、皮下もしくは動脈内の注射によって投与され得る形態、または皮膚浸透的に（ transdermally）、局部的なグルもしくは軟膏剤（ointments）の形態で、一日当り約0.1ｍｇから一日当り約200ｍｇの服用量で療法上処方される。本発明の化合物は、例えば抗腫瘍性もしくは抗感染性の化合物、アルツハイマー病の治療に対する活性化合物（active compounds）、肥満症の治療に対する活性化合物または中枢もしくは大脳神経系に作用するあらゆる他の活性成分（acti ve principles）のような活性成分に関しても処方されている。このような活性成分に関して、本発明の化合物は中枢または大脳神経系の疾患状態の治療に有用である。本発明の化合物は、特にホルモン受容体の相互作用の研究に関するような薬理学的な試薬として、または一方でブラジキニンＢ₂レセプターの、および／またはもう一方で前記ブラジキニンの、生化学的定量分析のような生化学的な分析における麻酔試薬としてもまた有用である。式III、IV、VI、VII、VIIIおよびIXの化合物は、式Ｉの化合物の合成において中間体として働くものであり、新規な生成物である。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１０年４月２４日（１９９８．４．２４）【補正内容】本発明の化合物は、生理的に適合した賦形剤（excipient）と共に、任意に非毒性の付加塩の形態で好ましく用いられ、一般的に、静脈内、筋肉内、皮下もしくは動脈内の注射によって投与され得る形態、または皮膚浸透的に（transderma lly）、局部的なゲルもしくは軟膏剤（ointments）の形態で、一日当り約0.1ｍｇから一日当り約200ｍｇの服用量で療法上処方される。本発明の化合物は、例えば抗腫瘍性もしくは抗感染性の化合物、アルツハイマー病の治療に対する活性化合物（active compounds）、肥満症の治療に対する活性化合物または中枢もしくは大脳神経系に作用するあらゆる他の活性成分（acti ve principles）のような活性成分に関しても処方されている。このような活性成分に関して、本発明の化合物は中枢または大脳神経系の疾患状態の治療に有用である。本発明の化合物は、特にホルモン受容体の相互作用の研究に関するような薬理学的な試薬として、または一方でブラジキニンＢ₂レセプターの、および／またはもう一方で前記ブラジキニンの、生化学的定量分析のような生化学的な分析における麻酔試薬としてもまた有用である。ＹがCH₃である場合、ならびに式Ｉの化合物の合成において中間体として働く場合の式III、IV、VI、VII、VIIIおよびIXの化合物は新規な生成物である。式中、ＹはCH₃であり、ならびにＸ、Ｂ、Ｒ₁、ResおよびTosは上記に示されたように定義されたものおよびそれらの付加塩である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 43/00 １１１Ａ６１Ｐ 43/00 １２１１２１Ｃ０７Ｋ 5/078 Ｃ０７Ｋ 5/078 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者マルティネス，ジャンフランスエフ―34570 ソッサンシュマンデロマン（番地なし) (72)発明者アンブラール，ミュリエルフランスエフ―34070 モンペリエアヴニュドモーラン 54 (72)発明者ダフィ，イザベルフランスエフ―34000 モンペリエリュアッベドレペ 12 ロランジュレ

Claims

【特許請求の範囲】 1. 擬ペプチド化合物であって、以下に示すような(i)〜(ii)からなるグループから選択されることを特徴とする化合物: (i)式Ｉの化合物: （SEQ ID No.１およびNo.２を参照）式中: A₁は、単結合であって、D-ArgまたはL-Lysであり、 A₂は、L-Proまたはトランス-4-ヒドロキシ-L-Pro(4Hyp)であり、 A₃は、L-PheまたはL-チエニルアラニン(Thi)であり、Ｙは、水素原子またはC₁-C₃のアルキル基であり、およびＸは、硫黄または酸素原子であり、ならびに、 (ii)式Ｉの化合物の付加塩。 2. 請求の範囲第１項記載の化合物であって、以下に示すようなグループから選択されることを特徴とする化合物であり: H-D-Arg-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBT(H)-Arg-OH、 H-Lys-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBT(H)-Arg-OH、 H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-DBT(H)-Arg-OH、 H-D-Arg-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBO(H)-Arg-OHおよび H-D-Arg-Arg-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser-DBT(CH₃)-Arg-OH (SEQ ID No.３からNo.７をそれぞれ参照)，式中: Thiはチエニルアラニンであり、 DBO(H)は以下の構造のアミノ酸であり、DBT(H)は以下の構造のアミノ酸であり、およびDBT(CH₃)は以下の構造のアミノ酸であり、ならびに、これらの化合物の酸付加塩である。 3. ブラジキニンまたはブラジキニンの同族体の関連する疾患状態の治療における療法上の使用を意図した薬剤を含む、請求の範囲第１項にしたがう式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の非毒性の酸付加塩の一の使用。 4. 心筋虚血の治療における療法上の使用を意図した薬剤を含む、式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の非毒性の酸付加塩の一の請求の範囲第３項記載の使用。 5. 血脳関門の浸透性の改善に関する療法上の使用を意図した薬剤を含む、式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の非毒性の酸付加塩の一の請求の範囲第３項記載の使用。 6. 中枢または大脳神経系の疾患状態の治療における療法上の使用を意図した薬剤であって、少なくとも他の活性成分の一つと共同で作用する、式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の非毒性の酸付加塩の一の請求の範囲第３項記載の使用。 7. (i)ブラジキニンＢ₂レセプター、および／または(ii)前記ブラジキニンの生化学的な定量分析における試薬として作用する、式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の非毒性の酸付加塩の一の使用。 8. 請求の範囲第１項記載の式Ｉの化合物または式Ｉの化合物の付加塩の一の調製法であって、以下に示す(1)〜(7)ステップから構成されることを特徴とする前記調製法： (1)エチルブロモアセテートと式IIの化合物の反応であって: 式中: Ｘは酸素原子または硫黄原子であり、Ｂはオキシカルボニルタイプのアミノ保護基であり、ならびに、Ｙは水素原子またはC₁-C₃アルキル基であり、不活性溶媒中、塩基の存在下、室温下および１から８時間反応させた結果、式II Iの化合物が得られる: 式中Ｂ、ＸおよびＹは、上記に示したように定義されたものである; (2)水素化触媒の存在下で水素と反応することによる、得られた式IIIの化合物のアミングループの脱保護であって、水素分圧約10⁵から5.10⁵パスカルの下で行い、式IVの化合物を得ることで: 式中、ＸおよびＹは上記に示したように定義されたものである; (3)得られた式IVの化合物と式VのL-セリン誘導体の反応であって: 式中: Ｂは上記に示したように定義されたものであり、およびＲ₁はヒドロキシル保護基であり、不活性溶媒中、室温に等しいまたは室温に近い温度において、1から10時間反応することによって、式VIの化合物が得られる: 式中Ｘ、Ｒ₁、ＢおよびＹは上記に示したように定義されたものである; (4)得られた化合物式VIのエチルエステルグループの加水分解であって、1から5 時間反応すると、式VIIの化合物が得られる: 式中Ｘ、Ｒ₁、ＢおよびＹは上記に示したように定義されたものである; (5)得られた式VIIの化合物とL-アルギニン（ここで、Argの塩基サイドグループはトシル基によって保護されており、Arg残査はそのC-末端酸性基によって結合されている。）によって修飾されたメリフィールド樹脂との反応であって、式VI IIの構造のグラフト樹脂生成物がえられ:式中: ＸはＳまたはＯであり、 Resは樹脂であり、Ｂはアミノ保護基であり、Ｒ₁はヒドロキシル保護基であり、Ｙは水素原子またはC₁-C₃アルキル基であり、および Tosはトシル基である; (6)既知のペプチド合成技術によって、得られた式VIIIの化合物を反応させ、アミングループをセリンのN-末端に再生し、次に、N-末端アミングループがグループＢで保護されているアミノ酸、および塩基またはヒドロキシルサイドグループが保護されているアミノ酸があれば、このアミノ酸とも反応する。そしてこの好適なアミノ酸との脱保護／カップリングの反応は、式Ｉの配列が得られるまでくりかえされ、すなわち下記に示すアミノ酸と次々に反応し: （α） B-Phe-OHまたはB-Thi-OH （β） B-Gly-OH （γ） B-Pro-OHまたはB-4Hyp-OH （δ） B-Pro-OH （ε） B-Arg(R₂)-OH （ζ）および、もし好ましければ、B-Lys(R₂)-OHまたはB-D-Arg(R₂)-OH その結果、望みの保護された擬ペプチド配列の一つ、特に以下に示す化合物がが得られる: B-D-Arg(R₂)-Arg(R₂)-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser(R₁)-DBZ(Y)-Arg(Tos)-O-Res、 B-Lys(R₂)-Arg(R₂)-Pro-4Hyp-Gly-Thi-Ser(R₁)-DBZ(Y)-Arg(Tos)-O-Resまたは B-Arg(R₂)-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser(R₁)-DBZ(Y)-Arg(Tos)-O-Res、式中、Ｂ、Ｒ₁およびResは上記に示したように定義されたものであり、Ｒ₂は塩基サイドグループに関する保護基である;および (7)式Ｉの望みの化合物の脱保護および樹脂からの遊離。 9. 請求の範囲第８項記載の方法であって、以下に示す(1a)から(3a)ステップから構成されることを特徴とする方法。 (1a)エチルブロモアセテートと式IIの化合物との反応: 式中、ＸはＳまたはＯであり、ならびにＢおよびＹは上記に示したように定義されたものであり、請求の範囲第８項記載のステップ(１)に記載に類似の条件の下で、式IIIの化合物が選られる: 式中Ｘ、ＢおよびＹは上記に示したように定義されたものであり; (2a)請求の範囲第８項記載のステップ（４）に記載に類似の条件の下で、エステルグループの加水分解を実行し、式IXの化合物が得られる: 式中、Ｘ、ＢおよびＹは上記に示したように定義されたものであり;さらに (3a)上記の式IXの化合物をN-末端が保護されたアミノ酸とみなして、式Ｉの化合物の合成を継続し、請求の範囲第８項記載のステップ(6)および(7)の手法に従い支持樹脂から脱保護および分離した後、望みの式Ｉの化合物を得る。 10. 式III、IV、VI、VII、VIIIおよびIXからなるグループから選択されることで特徴づけられる請求の範囲第１項記載の式Ｉの化合物および式Ｉの化合物の酸付加塩の合成において使用される中間体: 式中、Ｘ、Ｙ、Ｂ、Ｒ₁、ResおよびTosは上記に示されたように定義されたものおよびそれらの付加塩である。