JPH051798B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

［発明の技術分野］ 本発明は、新規ポリペプチド及びその製造法に
関し、更に詳しくは、血中Ca²⁺濃度を低下させ
る作用を有する新規ポリペプチド及びその製造法
に関するものである。 ［従来技術及びその問題点］ 従来より、血中Ca²⁺濃度低下作用を有するポ
リペプチドとして、カルシトニン（Calcitonin；
以下「CT」という）が公知である。CTは、ヒト
などの各種哺乳動物の甲状腺から、あるいは、魚
類、円口類、鳥類の鰓後体から抽出採取され、そ
のアミノ酸一次配列が明らかにされており、この
配列に基づき類似構造の合成CTも多く報告され
ている。これら動物由来CTは、いずれも32個の
構成アミノ酸からなるポリペプチドであつて、そ
の１番目と７番目のアミノ酸がＬ−システインで
あり、両者のメルカプト基がジスルフイド結合を
形成し、カルボキシル基末端（以下「Ｃ末端」と
いう）がプロリンアミドである点で全て共通して
いる。 最近、本発明者らはニワトリ鰓後体から、CT
を抽出精製し、その構造決定を行なつたところ、 次式（）： （式中、Cysはシステインを、Alaはアラニン
を、Serはセリンを、Leuはロイシンを、Thrは
スレオニンを、Valはバリンを、Glyはグリシン
を、Lysはリジンを、Glnはグルタミンを、Gluは
グルタミン酸を、Hisはヒスチジンを、Tyrはチ
ロシンを、Proはプロリンを、Argはアルギニン
を、Aspはアスパラギン酸を表わす。） で示される、従来既知のCTとは全く異なる構造
を有することを見い出した。このCTは、円口類
及び魚類のCTと同等又はそれ以上の生物活性を
有するものである（特開昭60−123500号公報参
照） このニワトリCTは、骨ページエツト病や骨粗
鬆症また血液中のCa²⁺濃度が異常に高い高Ca血
症などの諸症状に有用な新規医薬品となることが
期待される。しかしながら、これを医薬品とする
ためには、ニワトリCTの有するジスルフイド結
合が溶液中で極めて不安定であると推定され、生
理活性が低下するおそれがあるなどの問題があ
る。そこで、本発明者らは、このニワトリCTの
構造をもとに、溶液状態においても安定なCT誘
導体を得ることを目的として鋭意研究を行なつた
結果、ニワトリCTの１及び７番目のシステイン
の代りに、 次式（）： （式中、ｎは３〜７の整数を表わす。） で示されるα−アミノ酸を用い、該アミノ酸の側
鎖カルボキシル基と、アミノ基末端（以下「Ｎ末
端」という）のアミノ酸、即ちアラニンのアミノ
基との間で閉環せしめることにより、前記目的を
達成できることを見い出し、本発明を完成するに
至つた。 ［発明の構成］ 本発明は、 次式（）： （式中、Ala、Ser、Leu、Thr、Val、Gly、
Lys、Gln、Glu、His、Tyr、Pro、Arg、Asp及
びｎは、前記と同義である。以下同様。） で示される新規ポリペプチド又はその酸付加塩及
びその製造法に関するものである。 本発明の新規ポリペプチド又はその酸付加塩
は、次のようにして製造することができる。 即ち、前記式（）で示されるアミノ酸配列を
有するポリペプチドを形成させるにあたつて、活
性基が適宜保護された次式（） （Ｒは活性エステル残基を表わし、ｎは前述と
同じ） で示されるペプチドの側鎖カルボキシル基とＮ−
末端アミノ酸（Ala）の遊離アミノ基とを縮合さ
せ、生成した次式（） （Ｒ及びｎは前記と同じ） の環状ペプチドに、Ｈ−Val−Leu−Gly−OHを
縮合させ、さらに前記式（）の10〜31番目のア
ミノ酸配列を有するペプチドを縮合させることに
より製造することができる。 本製造法は、通常、活性基を適当な保護基で保
護して、反応の任意の過程で保護基を脱離するこ
とにより行なう。 本発明に用いる前記式（）で示されるα−ア
ミノ酸としては、その反応の容易性の点から、式
中のｎが４〜６のものが好ましく、ｎが５のもの
が更に好ましい。また、このα−アミノ酸として
は、ｄ−体又はd1−体を用いてもよいが、１−
体を用いることが好ましい。 反応それ自身はペプチド合成の常法手段に従つ
て保護基の脱着、縮合反応を繰り返すことにより
行なう。即ち、本発明の製造法の原料及び全ての
中間体の製造において使用される各種保護基とし
ては、ペプチド合成で既知なもの、即ち、加水分
解、酸分解、還元、アミノリシス又はヒドラジノ
リシスのような既知手段によつて容易に脱離する
ことのできる保護基が用いられる。 例えば、アミノ基に使用する保護基としては、
ホルミル基、トリフルオロアセチル基、フタロイ
ル基、ベンゼンスルホニル基、トシル（以下
「Tos」という）基、ｏ−ニトロフエニルスルフ
エニル基、２，４−ジニトロフエニルスルフエニ
ル基などのアシル基；ベンジル（以下「Bzl」と
いう）基、ジフエニルメチル基、トリフエニルメ
チル基（これらの基はｏ−メトキシ基、ｐ−メト
キシ基などの低級アルコキシ基によつて置換する
こともできる）などのアラルキル基；ベンジルオ
キシカルボニル（以下「Cbz」という）基、ｏ−
又はｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基、ｏ
−クロロベンジルオキシカルボニル（以下「Cbz
（ｏ−Cl）という）基、ｍ−又はｐ−クロロベン
ジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジルオ
キシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシ
カルボニル基、ｐ−フエニルアゾ−ベンジルオキ
シカルボニル基、ｐ−（p′−メトキシフエニルア
ゾ）−ベンジルオキシカルボニル基などのベンジ
ルオキシカルボニル誘導体基；シクロペンチオキ
シカルボニル基、トリクロロエチルオキシカルボ
ニル基、ｔ−アミルオキシカルボニル（以下
「AOC」という）基、ｔ−ブトキシカルボニル
（以下「BOC」という）基、ジイソプロピルメト
キシカルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル
基；２−フエニルイソプロポキシカルボニル基、
２−トリルイソプロポキシカルボニル基、２−ｐ
−ジフエニルイソプロポキシカルボニル基などの
アラルキルオキシカルボニル基；などがある。 カルボキシル基は、通常、アミド化、ヒドラジ
ド化又はエステル化によつて保護される。アミド
基は、通常、３，４−ジメトキシベンジル基、ビ
ス−（ｐ−メトキシフエニル）メチル基などによ
つて置換される。ヒドラジド基は、通常、Cbz
基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、トリ
フルオロアセチル基、BOC基、トリチル基、ジ
フエニルイソプロポキシカルボニル基などによつ
て置換される。エステル化には、通常、メタノー
ル、エタノール、ｔ−ブタノール、シアノメチル
アルコールなどのアルカノール；ベンジルアルコ
ール、ｐ−ブロモベンジルアルコール、ｐ−クロ
ロベンジルアルコール、ｐ−メトキシベンジルア
ルコール、ｐ−ニトロベンジルアルコール、２，
４，６−トリメチルベンジルアルコール、ベンズ
ヒドリルアルコール、ベンゾイルメチルアルコー
ル、ｐ−ブロモベンゾイルメチルアルコール、ｐ
−クロロベンゾイルメチルアルコールなどのアラ
ルカノール；２，４，６−トリクロロフエノー
ル、２，４，５−トリクロロフエノール、ペンタ
クロロフエノール、ｐ−ニトロフエノール、２，
４−ジニトロフエノール、ｐ−シアノフエノー
ル、ｐ−メタンスルホニルフエノールなどのフエ
ノール類；チオフエノール、チオクレゾール、ｐ
−ニトロチオフエノールなどのチオフエノール
類；などを用いる。 次に、各種アミノ酸の保護について述べる。前
記Ser，Thr及びTyrの水酸基は、例えばエステ
ル化又はエーテル化によつて保護できる。このエ
ステル化に適する基としては、例えば、アセチル
基などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基など
のアロイル基、Cbz基、エトキシカルボニル基な
どの炭酸から誘導される基が挙げられる。また、
エーテル化に適する基としては、例えば、Bzl
基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基など
が挙げられる。これらの水酸基の保護には、２，
２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブトキシカルボ
ニルアミノエチル基、２，２，２−トリフルオロ
−１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチル基
も適する。しかしながら、これらの水酸基は必ず
しも保護する必要はない。 前記Lysのε−アミノ基は、Cbz基、ｏ，ｍ，
ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル基、Tos基
などによつて保護できる。前記Glu及びAspの側
鎖のカルボキシル基はベンジルエステル（以下
「OBzl」という）基によつて保護できる。前記
Hisのイミノ基は、例えば、Bzl基、トリチル基、
Cbz基、Tos基、アダマンチルオキシカルボニル
基、２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブトキ
シカルボニルアミノエチル基、２，２，２−トリ
フルオロ−１−ベンジルオキシカルボニルアミノ
エチル基などによつて保護できる。しかしなが
ら、このイミノ基は必ずしも保護する必要はな
い。前記Argのグアニジノ基の保護基としては、
例えば、ニトロ基、Tos基、Cbz基が挙げられる
が、このグアニジノ基は必ずしも保護する必要は
ない。 本発明において、アミノ酸の縮合は、アミノ酸
を１個ずつ順次縮合させてもよく、２個以上のア
ミノ酸からなるペプチド又はポリペプチドを縮合
させてもよい。かかる縮合は、例えば、保護され
たα−アミノ基及び活性化末端カルボキシル基を
もつアミノ酸又はペプチド若しくはポリペプチド
と遊離のα−アミノ基及び保護された末端カルボ
キシ基をもつアミノ酸又はペプチド若しくはポリ
ペプチドとを反応させるか、あるいは活性化α−
アミノ基及び保護された末端カルボキシル基をも
つアミノ酸又はペプチド若しくはポリペプチドと
遊離の末端カルボキシル基及び保護されたα−ア
ミノ基をもつアミノ酸又はペプチド若しくはポリ
ペプチドを反応させることにより実施することが
できる。 この場合、カルボキシル基は、例えば、酸アジ
ド、酸無水物、酸イミダゾリド又は活性エステ
ル、例えば、シアノメチルエステル、チオフエニ
ルエステル、ｐ−ニトロチオフエニルエステル、
ｐ−メタンスルホニルフエニルエステル、チオジ
エステル、ｐ−ニトロフエニルエステル（以下
「ONP」という）、２，４−ジニトロフエニルエ
ステル、２，４，５−トリクロロフエニルエステ
ル、２，４，６−トリクロロフエニルエステル、
ペンタクロロフエニルエステル、Ｎ−ヒドロキシ
コハク酸イミドエステル（以下「OSU」とい
う）、Ｎ−ヒドロキシフタル酸イミドエステル、
８−ヒドロキシキノリンエステルなどに変換する
ことによつて、あるいはカルボジイミド、Ｎ，
N'−カルボニル−ジイミダゾール又はイソオキ
ゾリウム塩、例えば、ウツドワード反応剤などで
処理することによつて活性化することができる。 本発明において好ましい縮合方法は、カルボジ
イミド法、アジド法、活性エステル法及び混合酸
無水物法である。このうち、縮合の各段階でのラ
セミ化が最小になる方法、例えば、アジド法、活
性エステル法、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド
（以下「HOSU」という）−Ｎ，N'−ジシクロヘ
キシルカルボジイミド（以下「DCC」という）
法又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下
「HOBT」という）−DCC法を用いることが更に
好ましい。 前記式（）の環状ペプチドの合成は、式
（）のペプチドの側鎖カルボキシル基とＮ−末
端アミノ酸（Ala）の遊離アミノ基との縮合反応
により行なわれる。その際、Ser及びThrの水酸
基は保護しておくことが好ましい。 本発明の望ましい方法は前記式（）で示され
るα−アミノ酸を含む活性基の保護された、又は
保護されていない環状ペプチドと、それ以外の活
性基の保護された、又は保護されていないポリペ
プチドを縮合させ、引続き保護基のある場合に
は、保護基を脱離させることにより行なわれる。
即ち、Ｎ末端の１番から６〜９番までのアミノ酸
からなるＮ−末端フラグメントに、残りの全配列
７〜10番から31番までのポリペプチドを縮合させ
るのであるが、この場合、フラグメントの縮合に
おける反応性及びラセミ化防止の点を考慮すれば
GlyがＣ−末端アミノ酸であることが有利であ
る。 従つて、本発明においては、式（）の環状ペ
プチドに７〜９番のアミノ酸を縮合させた後、こ
の１〜９番のアミノ酸配列からなるペプチドと10
〜31番のアミノ酸配列からなるポリペプチドを縮
合させるのが最も好ましい。この縮合は、アジド
若しくはヒドラジドから出発するアジド法又は活
性エステル法、混合酸無水物法等の方法によつて
行なうことができる。 次に、Ｎ−末端フラグメントの製造をノナペプ
チド１−９の合成に関して更に詳細に説明する
が、ヘキサペプチド１−６、ヘプタペプチド１−
７、オクタペプチド１−８も全く同様の方法によ
つて製造することができる。 このノナペプチドの形成は、Ｃ−末端アミノ酸
（Cly）又はＣ−末端フラグメントにそのアミノ
酸配列に従つて個々のアミノ酸又は２個以上のア
ミノ酸からなる低級ペプチドを順次縮合させて行
なわれる。個々のアミノ酸、例えばGly、Leu、
Val、ω−カルボキシ−α−アミノ酸、Thr、
Ser、Alaは活性エステル法により縮合させるの
が有利である。低級ペプチド、例えば、ジペプチ
ド２−３はHOBT−DCC法で縮合させるのが有
利である。また、ヘキサペプチド１−６はトリペ
プチド１−３と今一つのトリペプチド４−６をア
ジド法によつて縮合させるのが有利である。 このノナペプチドの合成に際して、その末端カ
ルボキシル基は、必ずしも保護する必要はない。
例えば、アジド法、活性エステル法又は混合酸無
水物法によつて縮合させる場合には、その末端カ
ルボキシル基を保護しなくてもよいが、これらの
基を前述したようなエステル化によつて保護する
ことが望ましい。例えば、メタノール、ベンジル
アルコールでエステル化することによつて保護す
ることができる。これらのエステル基、例えばメ
チルエステル基は希薄な水酸化ナトリウム溶液、
好ましくは、１〜2Nの水酸化ナトリウム溶液に
より短時間で分解され、又はヒドラジドに変換し
た後、分解することができる。また、ベンジルエ
ステル基は、水素添加によつて分解することがで
きる。これらの中間体のアミノ基は、通常の保護
基、例えばCbz基、トリチル基、BOC基、ジフエ
ニルイソプロポキシカルボニル基で保護する。ま
た、これらの中間体のカルボキシル基は、必要で
あれば常法によつてエステル化する。そのSer，
Thr及びTyrの水素基は、必要であればｔ−ブタ
ノール、ベンジルアルコールなどでエーテル化す
ることによつて保護することができる。 前記のCbz基、ｐ−ニトロベンジルエステル基
及びOBzl基はパラジウム／炭素の存在下で水素
添加することによつて、脱離又は分解され、Ｎ−
トリチル基は酢酸水溶液によつて脱離され、
BOC基はトリフルオロ酢酸（以下「TFA」とい
う）によつて脱離され、ｏ−ニトロフエニルスル
フエニル基は塩化水素を含む有機溶媒によつて、
又は青酸若しくは亜硫酸によつて脱離され、ジフ
エニルイソプロポキシカルボニル基は氷酢酸−ギ
酸−水（７：１：２）の混液によつて脱離され
る。また、ｔ−ブチルエステルはｔ−ブチルエー
テルと同様にTFAによつて分解される。 更に、前記Ｎ−末端フラグメントと縮合する第
７〜10番から第31番までのＣ−末端フラグメント
の合成に関して詳細に説明する。 Ｃ−末端アミノ酸（第31番のアミノ酸）（Pro）
又はＣ−末端フラグメント、例えばペプチド30−
31，28−31，26−31，25−31，24−31又は23−31
に、そのアミノ酸配列に従つて個々のアミノ酸又
は２〜４個のアミノ酸からなる低級ペプチドを順
次縮合させることが好ましい。例えば、Ｃ−末端
フラグメント10−31は、Ｃ−末端側より個々のア
ミノ酸又は低級ペプチド、例えばジペプチド28−
29、ジペプチド26−27、トリペプチド20−22、ジ
ペプチド17−18、ジペプチド15−16、トリペプチ
ド10−12を活性エステル法、HOBT−DCC法な
どによつて縮合させることにより合成できる。こ
こで、各アミノ酸のα−アミノ基及び官能基の保
護は前述の通りである。 前記の保護されたα−アミノ基をもつ第７〜10
番から第31番までのＣ−末端フラグメント、例え
ばドコサペプチドアミド10〜31の保護基は前述の
方法により脱離される。 得られた２つのペプチド、即ち、第１番から第
９番までのＮ−末端フラグメントと第10番から第
31番までのＣ−末端フラグメントを前述の方法に
より縮合し、前記式（）で示されるがポリペプ
チドの保護体が得られる。この保護体中の保護基
は、前述の方法、好ましくは酸分解による方法、
例えば無水弗化水素による方法によつて脱離さ
れ、前記式（）で示される目的物質が得られ
る。 本発明の新規ポリペプチドはその方法の条件に
より塩基又はその塩の形で得られる。この塩基及
びその塩は、公知の方法によつて相互変換可能で
ある。また、この塩基を薬学的に許容される塩の
形成に適する酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫
酸、リン酸、過塩素酸などの無機酸；ギ酸、酢
酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビ
ン酸、シユウ酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、
クエン酸、安息香酸、サリチル酸、低級アルカン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスル
ホン酸（以下「TosOH」という）などの有機酸
と反応させることによつて相当する塩を形成する
ことができる。 ［発明の効果］ 本発明によれば、溶液状態においても安定な
CT誘導体を供給することができる。 ［発明の実施例］ 次に、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれにより制限されるもので
はない。 尚、以下の実施例で使用した血清カルシウム低
下作用の生物活性測定法、薄層クロマトグラフイ
ーの担体及び溶媒系並びにアミノ酸分析の条件は
次の通りである。 （生物活性測定法） 被検体を１％酢酸ナトリウム（pH4.0；0.1％牛
血清アルブミン含有）溶液を用いて適当に希釈
後、更に希釈した液数種を雄幼若ラツト（100ｇ
前後）１匹当り0.1mlを尾静脈に注射し、注射１
時間後に心臓より血液を採取し、遠心分離して血
清を採取し、血清中のCa²⁺濃度を分光学的方法
（試薬；ワコーカルシウム測定用キツト）にて測
定し、Ca²⁺濃度を10％低下させるのに必要な量
を10mMRC（Medical Research Council）Ｕと
定義する。 （薄層クロマトグラフイー（以下「TLC」とい
う））担体：シリカリゲルＧ（メルク社製） 溶媒系 １ クロロホルム−メタノール−酢酸 95：５：３ ２ クロロホルム−メタノール−酢酸 85：10：５ ３ クロロホルム−エタノール−酢酸エチル ５：２：５ ４ クロロホルム−メタノール−酢酸−水 10：10：１：10の水層 ５ ｎ−ブタノール−酢酸−水 60：20：20の上層 （アミノ酸分析） 被検体約5.0μｇを50μの6N塩酸−0.1％フエ
ノールを用いて110℃で22時間加水分解し、次に、
クエン酸溶液（pH2.25）300μに溶解し、アミ
ノ酸分析計（HITACHI 835F型）にて分析し
た。 実施例 の製造 BOC−Lys（Cbz）−Leu−Ser（Bzl）−Gln−Glu
（OBzl）−Leu−His−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−
Gln−Thr（Bzl）−Try（Bzl）−Pro−Arg−（Tos）
−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−
Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂303mg（83.5μM）
を、冷却下、TFA3mlを加えて溶解し、室温で40
分攪拌した。反応後、減圧濃縮してTFAを留去
し、残渣にジエチルエーテルを加え、生成する沈
殿物をデカンテーシヨンにより採取し、水酸化ナ
トリウム上デシケーター中で一夜乾燥した。 次いで、これをジメチルホルムアミド（以下
「DMF」という）２mlに溶解せしめ、トリエチル
アミン（以下「TEA」という）でpH約７に調整
した後、これに 100.3mg（87.7μM）及びHOSU19.0mgを加え冷却
攪拌下、更にDCC34.0mgを加え、２日間攪拌し
た。 これに1M酢酸20mlを加え、生ずる沈殿物を
取し、1M酢酸で２回、水で３回洗浄し、乾燥し
て縮合粗生成物393mgを得た。 この粉末393mgをフツ化水素20mlとアニソール
１mlの混合液中において、０℃で60分反応させ
た。反応後、フツ化水素を留去し、残渣を酢酸エ
チルで洗浄し、乾燥して粉末270mgを得た。 このうち、粉末10mgを1N酢酸１mlに溶解し、
セフアデツクスＧ−50カラム（1.6×83cm）を用
いて溶出（６ml／時間）し、溶出液を３mlずつ分
画し、活性画分（26〜30本目）を集め、凍結乾燥
して活性粉末2.2mg（2400MRCY／mg）を得た。 この活性粉末2.2mgを1N酢酸に溶解し、高速液
体クロマトグラフイー（以下「HPLC」という）
（逆相）にて精製し、活性粉末1.7mg
（6500MRCU／mg）を得た。ここで、HPLCの条
件は、以下の通りである。 カラム： chemcosorb ５ ODS−Ｈ（4.6×
150mm） 溶出方法： 直線型濃度勾配溶出（40分間） 溶出液： 水：アセトニトリル：10％ TFA 100：０：１（Ａ液）〜40：60：１
（Ｂ液） 流速： １ml／min 得られた活性粉末の一部をchemcosorb ３
ODS−Ｈカラム（4.6×75mm）を用いて前記と同
様にHPLC（逆相）操作を行ない、純度を検定し、
アミノ酸分析より本発明のポリペプチドであるこ
とを確認した。

【表】 (2) (1) (1) (1) (4) (
3) (3) (2) (3) (2) (2)
(5) (1) (1)
前記の原料は次のようにして製造した。 ポリペプチド10−31：BOC−Lys（Cbz）−Leu−
Ser（Bzl）−Gln−Glu（OBzl）−Leu−His−Lys
［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr
（Bzl）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp
（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH₂の製造 (1) BOC−Thr（Bzl）−Pro−NH₂の製造 BOC−Thr（Bzl）−OH 3.09ｇ、Ｈ−Pro−
NH₂・HCl 2.03ｇ及びHOBT 1.35ｇをテトラヒ
ドロフラン（以下「THF」という） 30mlに溶
解し、−５℃に冷却下、Ｎ−エチル−N′−ジメチ
ルアミノプロピルカルボジイミド（以下「WSC」
という） 1.82mlを滴下し、−５℃で１時間、室
温で一夜攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣に
酢酸エチルを加え、1N塩酸で２回、５％重曹水
で２回、水の順で洗浄した。無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣の油状物を酢酸
エチル−ｎ−ヘキサンより結晶化してBOC−
Thr（Bzl）−Pro−NH₂の白色粉末3.60ｇ（収率
85.3％）を得た。 Rf₂＝0.63 元素分析［C₂₁H₃N₃O₅として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.10 8.05 10.01 計算値 62.20 7.71 10.36 (2) BOC−Ala−Gly−OBzlの製造 BOC−Ala−OH 5.68ｇ、Ｈ−Gly−OBzl・
TosOH 10.12ｇ及びHOBT 4.0ｇをTHF 50ml
に溶解し、−５℃に冷却下WSC 5.5mlを加え、−
５℃で１時間、室温で一夜攪拌した。反応液を減
圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。酢酸エ
チル層を1N塩酸で２回、５％重曹水で２回、水
で順次洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥
後、減圧濃縮した。残渣をｎ−ヘキサンで結晶化
し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサンで２回再結晶して
融点85〜87℃のBOC−Ala−Gly−OBzl 9.32ｇ
（収率92.3％）を得た。Rf₁＝0.54 (3) BOC−Ala−Gly−OHの製造 BOC−Ala−Gly−OBzl 8.00ｇを THF 60
mlに溶解し、５％パラジウム／炭素の存在下、水
素添加した。 24時間後、触媒を除去して減圧濃縮し、残渣を
ｎ−ヘキサンで処理して固化し、融点 120〜122
℃のBOC−Ala−Gly−OH 5.71ｇ（収率97.4％）
を得た。 元素分析［C₁₀H₁₈N₂O₅として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 48.70 7.15 11.32 計算値 48.77 7.37 11.38 (4) BOC−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂の
製造 BOC−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 2.00ｇに−５
℃に冷却下、TFA ６mlを加え、30分間攪拌した
後、減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルで処
理し、析出した生成物を取し、水酸化ナトリウ
ム上で一夜真空乾燥してＨ−Thr（Bzl）−Pro−
NH₂・TFAを得た。 前記の生成物並びにBOC−Ala−Gly−OH
1.21ｇ及びHOBT 0.66ｇを DMF 15mlに加え、
−５℃で冷却下、 WSC 1.06mlを添加した。−
５℃で１時間、室温で一夜攪拌後、減圧濃縮し
た。残渣を酢酸エチルに溶解し、飽和食塩水、５
％重曹水で２回、1N塩酸（食塩飽和）、飽和食塩
水で順次洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナト
リウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し、残渣にｎ−
ヘキサンを加えて結晶化させ、融点 110〜120℃
のBOC−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂
1.64ｇ（収率62.4％）を得た。 Rf₃＝0.21、Rf₄＝0.45 元素分析［C₂₆H₃₉N₅O₇・１／４H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.17 7.26 12.76 計算値 58.03 7.40 13.01 アミノ酸分析値： Thr 0.91（１），Gly 1.01
（１），Ala 1.00（１），Pro 0.96（１） (5) Boc−Val−Gly−OEtの製造 Ｈ−Gly−OEt・HCl 3.21ｇを DMF 10mlに
溶解し、−５℃に冷却下、Boc−Val−OH 5.00
ｇ、HOBT3.10ｇ、WSC・HCl 4.79ｇを加えて、
−５℃で１時間、室温で一夜攪拌した。反応液を
減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え溶解し、
1N塩酸で３回、飽和食塩水で１回、５％重曹水
で３回、飽和食塩水で３回順次洗浄し、無水硫酸
ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣を酢酸
エチル−ｎ−ヘキサンで再結晶して融点91.5〜93
℃のBoc−Val−Gly−OEt 5.93ｇ（収率85.2％）
を得た。 (6) BOC−Val−Gly−OHの製造 BOC−Val−Gly−OEt 5.80ｇをメタノール
10mlに溶解し、冷却下、1N水酸化ナトリウム水
溶液23mlを加え、１時間攪拌した後、1N塩酸で
pH8.0に調整した。反応液を減圧濃縮してメタノ
ールを留去し、水層をジエチルエーテルで洗浄
後、水層のpHを1N塩酸で2.0に調整した。この
水層を酢酸エチルで抽出し、抽出液を無水硫酸ナ
トリウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をｎ−ヘ
キサンで処理し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから
再結晶して融点 101〜107℃のBOC−Val−Gly
−OH 4.76ｇ（収率90.5％）を得た。Rf₁＝0.20 元素分析［C₁₂H₁₂N₂O₅として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 52.24 7.94 10.05 計算値 52.54 8.08 10.21 (7) BOC−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH₂の製造 BOC−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂
1.53ｇに冷却下、TFA ７mlを加え、50分間攪拌
した後、減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテル
で処理し、析出した生成物を取し、水酸化ナト
リウム上で真空乾燥してＨ−Ala−Gly−Thr
（Bzl）−Pro−NH₂・TFAを得た。 前記の生成物に DMF 15mlを加え、−５℃に
冷却下、TEAを加えてpH約7.0に調整した。こ
れにBOC−Val−Gly−OH 0.79ｇ及びHOBT
0.39ｇを加えた後、 WSC・HCl 0.61ｇ、
TEA 0.44mlを加え、−５℃で１時間、室温で一
夜攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣をクロロ
ホルムに溶解した。この溶液を食塩飽和1N塩酸
で２回、食塩飽和５％重曹水で２回、飽和食塩水
で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減
圧濃縮した。残渣をメタノール−ジエチルエーテ
ルで２回再結晶し、融点148℃（分解）のBOC−
Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂
1.41ｇ（収率71.2％）を得た。 元素分析［C₃₃H₅₁N₇O₉・１／２H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 56.59 7.33 13.84 計算値 56.72 7.50 14.03 アミノ酸分析値：Thr 0.82（１），Gly 1.98（２），
Ala 1.00（１），Val 0.96（１），Pro 1.08
（１） (8) BOC−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly
−Thr（Bzl）−Pro−NH₂の製造 BOC−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro
−NH₂ 1.41ｇに冷却下、 TFA ７mlを加え、
30分間攪拌した後、減圧濃縮した。残渣にジエチ
ルエーテルを加えて処理し、析出した生成物を水
酸化ナトリウム上で一夜真空乾燥した。前記の生
成物に DMF 15mlを加え、これにTEAを加え
てpHを約7.0に調整し、TEAとBOC−Asp
（OBzl）−OSU 0.86ｇを加えた後、TEAでpHを
再び約7.0に調整し、２日間攪拌した。その間、
TEAでpHを約7.0に調整した。多量の水を加え、
析出した粘稠物をデカントして分離し、ジエチル
エーテルで処理して結晶化させた。水層をクロロ
ホルムで抽出し、抽出液を減圧濃縮し、残渣に水
を加えた。析出した粘稠物をジエチルエーテルで
処理して結晶化させた。前の結晶と合せてメタノ
ール−ジエチルエーテルで４回再結晶し、熱酢酸
エチル−ジエチルエーテルで洗浄し、乾燥後、
BOC−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr
（Bzl）−Pro−NH₂ 1.48ｇ（収率80.9％）を得
た。融点 190〜200℃、Rf₄＝0.44 元素分析［C₄₄H₆₂N₈O₁₂・１／２H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.48 6.95 12.33 計算値 58.46 7.02 12.40 アミノ酸分析値： Asp 1.02（１），Thr 0.90
（１），Gly 1.96（２），Ala 0.92（１），Val
1.00（１），Pro 0.99（１） (9) BOC−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly
−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂の製造 BOC−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−
Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 1.46ｇに冷却下、TFA
８mlを加え、60分間攪拌した後、減圧濃縮した。
残渣にジエチルエーテルを加えて処理し、析出し
た生成物を水酸化ナトリウム上で一夜真空乾燥し
た。前記の生成物に DMF 10mlを加え、−５℃
に冷却下、TEAでpHを7.0に調整した。これに
BOC−Thr（Bzl）−OSU0.66ｇを加えた後、TEA
でpHを7.0に調整し、室温で２日間攪拌した。 反応終了後、反応液に多量の水を加え、析出し
た沈殿物を取し、メタノール−ジエチルエーテ
ルで３回再結晶して融点 174〜182℃のBOC−
Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly
−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 1.16ｇ（収率65.5％）
を得た。 元素分析［C₅₅H₇₅N₉O₁₄・１／２H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.20 6.88 11.54 計算値 60.31 6.99 11.51 アミノ酸分析値： Asp 1.01（１），Thr 1.69
（２），Gly 2.00（２），Ala 1.01（１），Val
1.00（１），Pro 1.08（１） (10) AOC−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）
−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−
NH₂の製造 BOC−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−
Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 1.10ｇに冷
却下、TFA ５mlを加え、30分間攪拌した後、減
圧濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加えて処
理し、析出した生成物を水酸化ナトリウム上で一
夜真空乾燥した。前記の生成物にDMF ５mlを加
え、−５℃に冷却下、TEAでpHを7.0に調整し
た。これにHOBT 160mgとAOC−Arg（Tos）−
OH 0.57ｇを加え、冷却下、WSC・HCl 0.23ｇ、
TEA 0.17mlを加えて−５℃で１時間、室温で一
夜攪拌した。 反応終了後、反応液を減圧濃縮し、残渣に酢酸
エチルを加え、析出した生成物を熱メタノール−
ジエチルエーテルで２回処理し、融点 198℃
（分解）のAOC−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp
（0Bzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro
−NH₂ 1.07ｇ（収率74.8％）を得た。 Rf₂＝0.49 元素分析［C₆₉H₉₅N₁₃O₁₇Ｓ・H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.30 6.76 12.83 計算値 58.01 6.84 12.75 アミノ酸分析値： Asp 1.00（１），Thr 1.85
（２），Gly 1.96（２），Ala 0.91（１），Val
1.00（１），Arg 1.01（１），Pro 0.96（１） （11） BOC−Tyr（Bzl）−Pro−OBzlの製造 BOC−Tyr（Bzl）−OH 10.00ｇをジクロロメタ
ン50mlに溶解し、Ｈ−Pro−OBzl・HCl 6.53ｇ
を加えた。この混合物に−５℃に冷却下、WSC
4.93mlを加え、−５℃で１時間、室温で一夜攪拌
した。反応混合物を減圧濃縮し、残渣に酢酸エチ
ルと1N塩酸を加えて振り混ぜ分液し、酢酸エチ
ル層を1N塩酸で２回、飽和食塩水で２回、５％
重曹水で３回、飽和食塩水で２回順次洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した後、減圧濃縮して油
状のBOC−Tyr（Bzl）−Pro−OBzl 14.46ｇ（収
率96.1％）を得た。 Rf₁＝0.71 （12） BOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
OBzlの製造 BOC−Try（Bzl）−Pro−OBzl 7.06ｇに冷却
下、TFA20mlを加え、室温で１時間攪拌した後、
減圧濃縮した。残渣の油状物を水酸化ナトリウム
上で一夜真空乾燥し、DMF 15mlを加えた後、−
５℃に冷却下、TEAでpHを約7.0に調整した。
これにHOBT 1.76ｇ、BOC−Thr（Bzl）−OH
4.02ｇ、WSC・HCl 2.74ｇ及びTWA 2.00mlを
加え、−５℃で１時間、室温で一夜攪拌した。反
応後、反応液を減圧濃縮し、残渣を水、酢酸エチ
ルで振り混ぜ分液し、水層を酢酸エチルで再抽出
した。両酢酸エチル層を１つに集め、1N塩酸、
飽和食塩水、５％重曹水で３回、飽和食塩水で順
次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧
濃縮した。残渣をジエチルエーテル−ｎ−ヘキサ
ンで処理して結晶化し、ジエチルエーテル−ｎ−
ヘキサンで再結晶してBOC−Thr（Bzl）−Tyr
（Bzl）−Pro−OBzl 7.75ｇ（収率81.8％）を得
た。Rf₂＝0.79 （13） BOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
OHの製造 BOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−OBzl
3.60ｇをTHF20mlに溶解し、冷却攪拌下、1N水
酸化ナトリウム 5.83mlを加えて室温で３時間攪
拌した後、1N塩酸を加えてpHを７に調整し、減
圧濃縮してTHFを留去した。残水溶液に水を加
え、ジエチルエーテルで洗浄後、水層に1N塩酸
を加えてpHを２に調整し、酢酸エチルで２回抽
出した。酢酸エチル層を水洗し、無水硫酸マグネ
シウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をジエチル
エーテル−ｎ−ヘキサンより結晶化して粗生成物
を得た。これを酢酸エチル−ジエチルエーテル−
ｎ−ヘキサンで再結晶して融点 134〜137℃の
BOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−OH 2.15ｇ
（収率67.8％）を得た。Rf₁＝0.46 Rf₃＝0.24 元素分析［C₃₇H₄₅N₃O₈として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 67.29 6.91 6.37 計算値 67.36 6.87 6.37 （14） BOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−
Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂の製
造 AOC−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−
Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂
1.00ｇに冷却下、TFA ５mlを加え、30分間攪拌
した後、減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテル
で処理した後、水酸化ナトリウム上で真空乾燥し
た。この生成物にDMF ５mlを加え、−５℃に冷
却下、TEAでpHを4.5に調整した後、これに
HOBT 120mgとBOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−
Pro−OH 0.56ｇを加え、−５℃に冷却下、WSC
0.16mlを滴下した。−５℃で１時間、室温で一夜
攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣にメタノー
ルとジエチルエーテルを加え、析出した生成物を
取した。これをメタノール−ジエチルエーテル
で３回、DMF−ジエチルエーテル、メタノール
−ジエチルエーテルで順次再結晶して融点 185
〜191℃のBOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly
−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 0.99ｇ
（収率71.7％）を得た。 元素分析［C₁₀₀H₁₂₈N₁₆O₂₂Ｓとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.91 6.64 11.55 計算値 61.97 6.68 11.56 アミノ酸分析値： Asp 1.01（１），Thr 2.60
（３），Gly 1.91（２），Ala 0.89（１），Val
1.00（１），Tyr 0.96（１），Arg 1.03（１），
Pro 2.06（２） （15） BOC−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−
Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−
Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂
の製造 BOC−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−Arg
（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−
Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 0.90ｇに冷
却下、TFA ５mlを加え、30分間攪拌した後、減
圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルで処理した
後、水酸化ナトリウム上で一夜真空乾燥した。前
記の生成物にDMF ５mlを加え、−５℃に冷却下、
TEAを加えてpHを7.0に調整し、HOBT 17mgと
BOC−Gln−ONP 0.20ｇを加え、室温で２日間
攪拌した。途中、TEAでpHを7.0に調整した。
反応終了後、減圧濃縮し、反応液に多量の水を加
え、析出した生成物を取し、メタノール−ジエ
チルエーテルで３回再結晶して融点 174〜180℃
のBOC−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
Arg−（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−
Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 0.85ｇ
（収率88.5％）を得た。 Rf₂＝0.61 元素分析［C₁₀₅H₁₃₆N₁₈O₂₄Ｓとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 60.99 6.62 12.13 計算値 61.03 6.63 12.20 アミノ酸分析値： Asp 1.02（１），Thr 2.68
（３），Glu 1.02（１），Gly 1.97（２），Ala
0.91（１），Val 1.00（１），Tyr 0.97（１），
Arg 1.00（１），Pro 2.10（２） （16） Boc−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−OEtの
製造 Boc−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−OH・（ｔ−ブチル
アミン）6.00ｇを酢酸エチル 50mlに懸濁せし
め、1N塩酸でpHを２に調整し、更に飽和食塩水
で３回洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥し、酢酸
エチルを留去した。次いで、ジクロロメタン 50
mlに溶解せしめ、−５℃に冷却下、HCl・Leu−
OEt 2.40ｇ、HOBT 1.82ｇを加え、冷却下、
WSC・HCl 2.57ｇ、TEA 3.59mlを加えた。１
時間後、室温にもどし、一夜攪拌した。反応終了
後、減圧濃縮してジクロロメタンを留去し、残渣
を酢酸エチルに溶解し、1N塩酸、５％重曹水、
水で順次洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥
後、減圧濃縮し、酢酸エチル−ｎ−ヘキサンから
再結晶してBOC−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−
OEt 5.47ｇ（収率80.7％）を得た。融点77〜80℃ （17） BOC−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−OHの
製造 BOC−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−OEt 3.70ｇ
をエタノール 20mlに溶解し、０℃で1N水酸化
ナトリウム7.98mlを加え、室温で３時間攪拌し
た。1N塩酸でpHを７に調整して減圧濃縮し、残
渣をジエチルエーテルで洗浄し、水層をpH3に調
整した。次いで、酢酸エチルで３回抽出し、酢酸
エチル層を水で１回洗浄後、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、減圧濃縮した残渣をジエチルエーテ
ルに転溶した。次いでジエチルエーテルを減圧留
去し、乾燥してBOC−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu
−OHの粉末 3.50ｇ（収率99.7％）得た。融点
45〜65℃。 元素分析［C₂₅H₃₈N₃O₇Clとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 56.75 7.18 8.07 計算値 56.87 7.25 7.96 （18） BOC−Leu−His−OHの製造 His・H₂Ｏ・HCl 3.00ｇ（14.3ｍＭ）を水30ml
に溶解し、冷却下、TEA2mlを加えてpHを7.0に
調整した後、BOC−Leu−OSU 6.57ｇを加えた。
反応液が常に均一となるように、THF、水を加
えて調節した。室温で２日間攪拌した後、反応液
を減圧濃縮して、水層に析出した結晶を別し、
液を減圧濃縮した。残渣を水飽和のｎ−ブタノ
ール溶液に溶解し、ｎ−ブタノール飽和の水で３
回洗浄後、ｎ−ブタノール溶液（水飽和）を減圧
濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加えて結晶
化し、メタノール−ジエチルエーテルより再結晶
を繰り返し、目的物4.46ｇ（収率85.8％）を得
た。融点 173〜174.5℃。 元素分析［C₁₇H₂₈N₄Ｏ５として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 55.52 7.62 15.12 計算値 55.42 7.66 15.21 （19） BOC−Leu−Ser（Bzl）−OHの製造 BOC−Ser（Bzl）−OH 4.53ｇ（15.3ｍＭ）に冷
却下、TFA 15mlを加えて溶解し、室温で30分間
攪拌した後、減圧濃縮した。残渣を水酸化ナトリ
ウム上で一夜真空乾燥した。前記の生成物に水
100mlを加えて溶解し、冷却下、TEAを加えて
pHを約7.0に調整した。これに、THF 200mlに
溶解したBOC−Leu−OSU 4.20ｇ（12.3ｍＭ）
を加えて、室温で２日間攪拌した。途中、pHが
約7.0になるようにTEAを加えて調整した。反応
後、反応液を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶
解し、1N塩酸で２回、飽和食塩水で３回洗浄後、
無水硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを
減圧留去し、残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンよ
り再結晶を繰り返して、BOC−Leu−Ser（Bzl）
−OH 3.25ｇ（収率64.7％）を得た。融点78〜82
℃。 元素分析［C₂₁H₃₂N₂O₆として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.93 7.87 6.88 計算値 61.75 7.90 6.86 （20） BOC−Lys（Cbz）−Leu−Ser（Bzl）−
OHの製造 BOC−Leu−Ser（Bzl）−OH 3.20ｇ（7.83ｍ
Ｍ）を冷却下、TFA 12mlに加え、50分間攪拌
後、減圧濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加
え、生じた結晶を取し、水酸化ナトリウム上、
デシケーター中で一夜真空乾燥した。これを水
10mlに溶解し、冷却下、THF 50mlに溶解した
BOC−Lys（Cbz）−OSU3.10ｇ（6.53ｍＭ）を加
え、TEAでpHを７に調整して室温で２日間攪拌
した。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、クロロ
ホルムに溶解し、1N塩酸で３回、飽和食塩水で
１回、５％重曹水で３回、飽和食塩水で３回順次
洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した。次い
で、クロロホルム層を５mlまで減圧濃縮し、シリ
カゲルを充填したカラムに注入した。溶出溶媒と
して、酢酸エチル：ベンゼン（２：１）の混合溶
媒、次いで酢酸エチルを用い、酢酸エチル溶出液
を減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサン
より再結晶してBOC−Lys（Cbz）−Leu−Ser
（Bzl）−OHの粉末2.64ｇ（収率60.3％）を得た。
融点50〜58℃。 元素分析［C₃₅H₅₀N₄O₉として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.80 7.55 8.10 計算値 62.69 7.48 8.36 （21） BOC−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−Gln−
Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−Arg（Tos）−Thr
（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−
Thr（Bzl）−Pro−NH₂の製造 BOC−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly
−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 0.80ｇ
（0.39ｍＭ）を冷却下、TFA 35mlに溶解し、30
分間攪拌後、減圧濃縮した。残渣をジエチルエー
テルで処理し、析出した生成物を取し、水酸化
ナトリウム上で真空乾燥した。これをDMF ５ml
に溶解せしめ、−５℃にてHOBT64mg、BOC−
Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−OH 0.25ｇ及びWSC
0.072mlを加え、−５℃で１時間、次いで室温で一
夜攪拌した。反応終了後（TLC、溶媒系２でチ
エツク）、反応液に1N塩酸を加え、生ずる沈殿物
を取し、メタノール−ジエチルエーテルより再
沈殿を２回繰り返して、前記目的化合物0.80ｇ
（収率83.3％）を得た。融点 169〜172℃。 元素分析［C₁₂₅H₁₆₄N₂₁O₂₈SCl・HClとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.85 6.56 11.73 計算値 59.75 6.62 11.71 アミノ酸分析値： Asp 1.02（１），Thr 2.73
（３），Glu 1.04（１），Gly 1.95（２），Ala
0.89（１），Val 1.00（１），Leu 0.91（１），
Tyr 0.87（１），Lys 0.94（１），Arg 1.00
（１），Pro 2.07（２） （22） BOC−Leu−His−Lys［Cbz（ｏ−CL）］
−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−
Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂の製
造 BOC−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−Gln−Thr
（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）
−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr
（Bzl）−Pro−NH₂ 0.70ｇ（0.28ｍＭ）を冷却
下、TFA ５mlに溶解し、30分間攪拌後、減圧濃
縮した。残渣をジエチルエーテルで処理し、析出
した生成物を取し、水酸化ナトリウム上で減圧
乾燥した。これをDMF ５mlに溶解し、冷却下、
TEAでpHを7.0に調整し、HOBT 46mgを添加
後、BOC−Leu−His−OH 125mgを加え、更に
−５℃に冷却下、WSC・HCl 65mg及びTEA
0.048mlを加えて１時間攪拌し、室温にもどして
一夜攪拌した。反応終了後（TLC、溶媒系４で
チエツク）、反応液に1N塩酸を加え、生ずる沈殿
物を取し、メタノール−ジエチルエーテルより
再沈殿せしめ、更にDMF−ジエチルエーテルよ
り再沈殿を繰り返し、採取した沈殿物を乾燥して
前記目的化合物の粉末0.70ｇ（収率92.1％）を得
た。融点 160〜170℃。 元素分析［C₁₃₇H₁₈₂N₂₅O₃₀SCl・4H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.60 6.55 12.35 計算値 58.80 6.84 12.51 アミノ酸分析値： Asp 1.01（１），Thr 2.60
（３），Glu 0.98（１），Gly 1.92（２），Ala
0.89（１），Val 1.00（１），Leu 1.75（２），
Tyr 0.84（１），Lys 0.95（１），His 0.87
（１），Arg 1.01（１），Pro 2.10（２） （23） BOC−Glu（OBzl）−Leu−His−Lys
［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr
（Bzl）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp
（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH₂の製造 BOC−Leu−His−Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−
Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−Arg（Tos）−
Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly
−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 0.65ｇ（0.24ｍＭ）を
冷却下、TEA ５mlに溶解し、40分間攪拌後、減
圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルで処理し、
析出した生成物を取して水酸化ナトリウム上で
真空乾燥し、これをDMF ５mlに溶解し、TEA
でpHを７に調整後、冷却下、BOC−Glu（OBzl）
−OSU 0.16ｇを加え、再びTEAでpHを７に調
整し、室温で２日間攪拌した。反応終了後
（TLC、溶媒系４でチエツク）、反応液に1N塩酸
を加え、生ずる沈殿物を取し、メタノール−ジ
エチルエーテルより再沈殿を２回繰り返し、採取
した沈殿物を乾燥して粉末0.55ｇ（収率73.3％）
を得た。融点169〜175℃（分解）。 元素分析［C₁₄₉H₁₉₅N₂₆O₃₃SCl・4H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 59.57 6.57 12.04 計算値 59.30 6.78 12.07 アミノ酸分析値： Asp 1.03（１），Thr 2.90
（３），Glu 2.02（２），Gly 2.00（２），Ala
0.90（１），Val 1.00（１），Leu 1.86（２），
Tyr 0.89（１），Lys 0.97（１），His 0.88
（１），Arg 1.03（１），Pro 2.04（２） （24） BOC−Gln−Glu（OBzl）−Leu−His−
Lys［Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−Gln−Thr（Bzl）−
Tyr（Bzl）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp
（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH₂の製造 BOC−Glu（OBzl）−Leu−His−Lys［Cbz（ｏ−
Cl）］−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro−
Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−Gly
−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂ 0.50ｇ
（0.17ｍＭ）を冷却下、TFA ５mlに溶解し、45
分間攪拌後、減圧濃縮した。残渣をジエチルエー
テルで処理し、析出した生成物を取し、水酸化
ナトリウム上で真空乾燥し、これをDMF ５mlに
溶解し、TEAでpHを７に調整後、BOC−Gln−
ONP96mgを加え、室温で２日間攪拌した。反応
終了後、反応液に1N塩酸を加え、生ずる沈殿物
を取し、水洗後、メタノール−ジエチルエーテ
ルより再沈殿を３回繰り返した。採取した沈殿物
を乾燥して粉末0.48ｇ（収率92.3％）を得た。融
点212〜216℃（分解）。 元素分析［C₁₅₄H₂₀₃N₂₈O₃₅SCl・4H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.62 6.49 12.30 計算値 58.79 6.76 12.47 アミノ酸分析値： Asp 1.02（１），Thr 2.83
（３），Glu 2.95（３），Gly 1.96（２），Ala
0.92（１），Val 1.00（１），LEU 1.80（２），
Tyr 0.77（１），Lys 0.93（１），His 0.88
（１），Arg 1.00（１），Pro 2.15（２） （25） BOC−Lys（Cbz）−Leu−Ser（Bzl）−
Gln−Glu（OBzl）−Leu−His−Lys［Cbz（ｏ−
Cl）］−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr（Bzl）−Pro
−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp（OBzl）−Val−
Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−Pro−NH₂の製
造 BOC−Gln−Glu（OBzl）−Leu−His−Lsy
［（Cbz（ｏ−Cl）］−Leu−Gln−Thr（Bzl）−Tyr
（Bzl）−Pro−Arg（Tos）−Thr（Bzl）−Asp
（OBzl）−Val−Gly−Ala−Gly−Thr（Bzl）−
Pro−NH₂ 0.45ｇ（0.15ｍＭ）を冷却下、TFA
３mlに溶解し、更に4N塩酸／ジオキサン0.2mlを
加え、室温にて45分間攪拌した。反応終了後、反
応液を減圧濃縮し、残渣をジエチルエーテルを加
えて生ずる沈殿物を取し、ジエチルエーテルで
充分洗浄後、水酸化ナトリウム上デシケーター中
で一夜真空乾燥した。次いで、これをDMF ４ml
に溶解し、−５℃においてTEAでpHを7.0に調整
し、HOBT20mg、BOC−Lys（Cbz）−Leu−Ser
（Bzl）−OH 0.10ｇを加え、更にWSC・HCl 32
mg、TEA 0.023mlを加え、１時間攪拌後、室温
にもどして一夜攪拌した。反応終了後、反応液を
減圧濃縮し、1N塩酸を加え、生ずる沈殿物を
取した。メタノール−ジエチルエーテルより再沈
殿を３回繰り返し、採取される沈殿物を乾燥して
粉末0.37ｇ（収率69.8％）を得た。融点170〜180
℃（分解）。 元素分析［C₁₈₄H₂₄₃N₃₂O₄₁SCl・HCl・5H₂Ｏと
して］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 58.74 6.58 12.22 計算値 58.88 6.82 11.94 アミノ酸分析値： Asp 1.01（１），Thr 2.69
（３），Ser 0.88（１），Glu 2.77（３），Gly
2.00（２），Ala 0.91（１），Val 1.00（１），
Leu 2.95（３），Tyr 0.85（１），Lys 1.92
（２），His 0.90（１），Arg 1.00（１），Pro
2.16（２） ペプチド１−９： は次のようにして製造される。 (1)

【式】の製造

【式】10.0ｇ（0.03M）パ ラホルムアルデヒド1.38ｇ、TosOH 0.3ｇ。ベン
ゼン130mlをナス型フラスコ中で４時間加熱環流
した。反応終了後、室温迄放冷し、このベンゼン
溶液を３回水洗し、無水硫酸マグネシウムにて乾
燥後、ベンゼンを減圧留去して油状残渣を得た。 この油状物をメタノール60mlに溶解し、冷却し
ながら金属ナトリウム0.7ｇをメタノール60mlに
溶解して生成するナトリウムメチラートを加え、
室温で一夜攪拌した。 塩酸にてpH5とした後、メタノールを減圧留去
して得られる油状残渣を酢酸エチルに溶解した。
これを1N塩酸で洗浄し、次いで４回水洗し、無
水硫酸ナトリウムにて乾燥後、酢酸エチルを減圧
留去して前記目的物より成る油状物10.2ｇを得
た。 (2)

【式】の 製造

【式】よりなる油状物 10.2ｇをメタノール60ml、水30mlに溶解し、パラ
ジウム−炭素を加え、48時間水素添加を行なつ
た。触媒別後、液を減圧濃縮した。残渣にメ
タノール100mlを加え、不溶物を別し、液を
減圧濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加えて
結晶化し、融点117〜119℃の

【式】4.12ｇ（収率67.6％）を得 た。これをDMF80mlに懸濁せしめ、冷却下、
TEA2.84mlを加えてpHを約7.0に調整して、BOC
−Thr（Bzl）−OSU 9.06ｇを加え、室温にて２日
間攪拌した。 反応後、DMFを減圧留去し、酢酸エチルで抽
出した。1N塩酸で２回、飽和食塩水で１回、２
％重曹水で２回、飽和食塩水で３回順次洗浄後、
無水硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチルを
減圧留去して得られた油状物をジエチルエーテル
20mlに溶解し、５％重曹水で抽出した。これを
1N塩酸でpHを7.0に調整後、酢酸エチルで抽出
した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄後、無水
硫酸ナトリウムで乾燥した。酢酸エチルを減圧留
去して目的物よりなる油状物5.90ｇを得た。 (3) の製造

【式】5.90 ｇに冷却下、TFA 18mlを加えて溶解し、室温で
30分間攪拌した後、TFAを減圧留去し、残渣を
水酸化ナトリウム上デシケーター中で一夜真空乾
燥させた。 この油状物をDMF15mlに溶解し、冷却下、
TEA 1.67mlを加え、pH7.0とし、BOC−Ser
（Bzl）−OSU 4.69ｇを加え、室温で２日間攪拌
した。反応後、DMFを減圧留去し、酢酸エチル
で抽出した。この酢酸エチル層を1N塩酸、飽和
食塩水、５％重曹水、飽和食塩水で順次洗浄後、
無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。 次いで、酢酸エチル抽出液を約10mlまで減圧濃
縮し、冷却下、当量のシクロヘキシルアミン
（C₆H₁₁NH₂）を加えた後、減圧濃縮し、得られ
る油状物をジエチルエーテル、ｎ−ヘキサンによ
り固化させ、酢酸エチル−ジエチルエーテル−ｎ
−ヘキサンで再沈殿して融点71〜74℃の目的物
5.56ｇ（収率51.1％）を得た。 (4) BOC−Ser（Bzl）−Leu−OEtの製造 Ｈ−Leu−OEt・HCl 4.30ｇをTHF 70mlに懸
濁し、−５℃に冷却下、当量のTEAを加えて中和
した。これにBOC−Ser（Bzl）−OH 5.90ｇ、
HOBT 2.70ｇを加えた。更に、THF 30mlに溶
解したDCC4.33ｇを加え、そのまま１時間、次い
で室温で一夜攪拌した。反応終了後、DCU（ジシ
クロヘキシルウレア）を除去しTHFを減圧留去
した。残渣を酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層
を水、1Nクエン酸溶液、飽和食塩水、５％重曹
水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥した。次いで、酢酸エチルを減圧留去
し、残渣を酢酸エチル−ｎ−ヘキサンより再結晶
して融点75〜77℃の目的物7.10ｇ（収率81.3％）
を得た。 (5) BOC−Ala−Ser（Bzl）−Leu−OEtの製造 BOC−Ser（Bzl）−Leu−OEt 6.00ｇ（13.74ｍ
Ｍ）に冷却下、TFA10mlを加え、室温で30分間
反応せしめた後、TFAを減圧留去し、残渣を水
酸化ナトリウム上デシケーター中で一夜真空乾燥
させた。これをDMF 20mlに溶解し、TEAでpH
約7.0に調整した後、BOC−Ala−OSU 4.33ｇを
加え、室温で一夜攪拌した。 反応終了後、DMFを減圧留去し、残渣を酢酸
エチルで抽出した。酢酸エチル層を1N塩酸、飽
和食塩水、５％重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し
た。無水硫酸ナトリウムで乾燥し、酢酸エチルを
減圧留去後、残渣にジエチルエーテル−ｎ−ヘキ
サンを加えて結晶化し融点98〜99℃の目的物6.43
ｇ（収率92.2％）を得た。 (6) BOC−Ala−Ser（Bzl）−Leu−NHNH₂の製
造 BOC−Ala−Ser（Bzl）−Leu−OEt 10.98ｇ
（22.0ｍＭ）をメタノール40mlに溶解し、 80％
NH₂NH₂・H₂O13.8mlを加え、室温で一夜放置
した。これにジエチルエーテルを加えて沈殿物を
完全に析出させ、これを取し、ジエチルエーテ
ルで洗浄後、メタノール−ジエチルエーテルで再
沈殿して融点174〜176℃の前記目的物9.61ｇ（収
率90.0％）を得た。 元素分析［C₂₄H₃₉N₅O₆・１／４H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 57.86 7.87 13.95 計算値 57.87 7.99 14.06 (7) の製造 3.87ｇを酢酸エチル中1N塩酸で処理して遊離酸
とし、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し
た。油状残渣に冷却下、TFA 10mlを加え、室温
にて30分間攪拌後、TFAを減圧留去して残渣を
NaOH上デシケーター中で一夜真空乾燥した。 BOC−Ala−Ser（Bzl）−Leu−NHNH₂ 2.73
ｇをDMF 20mlに溶解し、−15℃に冷却し、6N塩
酸／ジオキサン 2.76mlを加え、同温度を維持さ
せつつイソアミルニトリツト 0.74mlを加え、ア
ジド化した。 一方、前記で得た乾燥TFA塩をDMF 30mlに
溶解し、TEAで中和後、これを前記アジド化物
を含む溶液中に、−20℃に冷却下、徐々に加えた。
添加終了後、TEAでpH約７に調整し、そのまま
４℃で一夜反応した。 反応終了後、DMFを減圧留去し、残渣を酢酸
エチルで抽出した。酢酸エチル層を1N塩酸、飽
和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。酢酸エチルを減圧留去後、ｎ−ヘキサン
を加えて結晶化し、目的物4.31ｇ（収率83.1％）
を得た。融点 170〜177℃（分解）。 元素分析［C₅₄H₇₆N₆O₁₄として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.58 7.32 8.24 計算値 62.77 7.41 8.13 (8) の製造 2.21ｇ（2.14ｍＭ）を乾燥ピリジン 20mlに溶解
し、TFA−ONP 3.5ｇを加え、45℃で４時間攪
拌した。反応後、減圧濃縮し、残渣でジエチルエ
ーテルを加え、生ずる沈殿物を取し、ジエチル
エーテルで洗浄後、乾燥せしめて黄褐色の粉末
2.1ｇを得た。 この粉末に冷却下、TFA 14.5mlを加え、室温
にて30分間攪拌後、TFAを減圧留去し、残渣を
水酸化ナトリウム上デシケーター中で一夜真空乾
燥した。これをDMF 14.5mlに溶解し、45℃の乾
燥ピリジン1.8に攪拌下、１時間かけて滴下し
た。滴下終了後、液温を50℃にして一夜攪拌し、
更に室温で２日間攪拌した。反応終了後、約10ml
迄減圧濃縮し、これをクロロホルム500mlに溶解
後、飽和食塩水、1N塩酸、飽和食塩水、５％重
曹水、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸マグネ
シウムで乾燥し、クロロホルムを減圧留去した。
これにｎ−ヘキサンを加え、生ずる沈殿物を取
し、融点 185℃（分解）の前記目的物1.60ｇ
（収率81.9％）を得た。 元素分析［C₄₉H₆₆N₆O₁₁として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 63.99 7.20 9.05 計算値 64.31 7.27 9.18 (9) の製造 0.85ｇをDMF ６ml、メタノール 30mlに溶解
し、80％NH₂NH₂・H₂Ｏ 13.3mlを加え、室温
で一夜攪拌した。 反応終了後、水を加え、生ずる沈殿物を取
し、水洗後、メタノール 20mlを加えて加熱環流
した。次いで、室温迄放冷後、沈殿物を取して
融点 245〜250℃（分解）の前記目的物0.51ｇ
（収率60％）を得た。 元素分析［C₄₈H₆₆N₈O₁₀・１／２H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.56 7.32 12.13 計算値 62.39 7.31 12.13 アミノ酸分析値： Thr 0.89（１），Ser 1.75
（２），Ala 0.89（１），Leu 1.00（１），α−
アミノスベリン酸1.08（１） (10) BOC−Leu−Gly−OBzlの製造 BOC−Leu−OH・H₂Ｏ 6.00ｇ、HOBT
3.49ｇ及びＨ−Gly−OBzl・TosOH 9.59ｇを
DMF 30mlに溶解し、−５℃に冷却攪拌下、DMF
10mlに溶解したWSC4.97mlの溶液を滴下し、１
時間後、室温に戻し一夜攪拌した。反応液を減圧
濃縮してDMFを留去し、残渣に酢酸エチルを加
えて溶解した。酢酸エチル層を1N塩酸、水、５
％重曹水、水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥後、減圧濃縮して油状のBOC−Leu−Gly
−OBzl 9.2ｇを得た。 Rf₁＝0.59。 元素分析［C₂₀H₂₀N₂O₅として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 65.50 5.40 7.58 計算値 65.21 5.47 7.60 （11） BOC−Val−Leu−Gly−OBzlの製造 BOC−Leu−Gly−OBzl 9.2ｇに冷却下、TFA
45mlを加え、30分間攪拌した後、減圧濃縮した。
残渣を水酸化ナトリウム上で真空乾燥した。これ
にDMF 25mlを加え、−５℃に冷却下、TEAで
pH7.0に調整し、BOC−Val−OH 5.54ｇ、
HOBT3.45ｇ、WSC・HCl 5.37ｇ及びTEA 3.93
mlを加えて１時間反応し、更に室温で一夜攪拌し
た。反応終了後、反応液を減圧濃縮し、酢酸エチ
ルで抽出した。飽和食塩水、1N塩酸、５％重曹
水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。酢酸エチルを留去して、ｎ−ヘ
キサンで結晶化して融点 125〜129℃のBOC−
Val−Leu−Gly−OBzl10.2ｇ（収率80.3％）を得
た。 元素分析［C₂₅H₃₉N₃O₆として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 62.87 8.21 8.79 計算値 62.87 8.23 8.80 （12） BOC−Val−Leu−Gly−OHの製造 BOC−Val−Leu−Gly−OBzl ５ｇ（10ｍＭ）
をメタノール 25mlに溶解し、冷却下、2N水酸
化ナトリウム６mlを加え、室温で３時間攪拌し
た。 次いで、1N塩酸でpH約７として酢酸エチルで
抽出し、この酢酸エチル層を1N塩酸及び水で洗
浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。次いで、
酢酸エチルを減圧留去し、残渣をジエチルエーテ
ル−ｎ−ヘキサンから再結晶して融点 106〜115
℃の前記目的物3.59ｇ（収率92.5％）を得た。 元素分析［C₁₈H₃₃N₃O₆・１／４H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.96 8.48 10.56 計算値 55.16 8.61 10.72 （13） Ｈ−Val−Leu−Gly−OHの製造 BOC−Val−Gly−OH 1.40ｇ（3.61ｍＭ）を
酢酸エチル 17mlに溶解し、冷却攪拌下、3.5N
塩酸を含む酢酸エチル９mlを加え、室温で２時間
反応させた。反応終了後、酢酸エチルを減圧留去
し、その残渣を水：メタノール（１：５）3.5ml
に溶解し、TEAで中和後、ジエチルエーテルを
加えて冷蔵庫中に放置した。析出する結晶を取
して融点 239〜241℃（分解）の前記目的物0.78
ｇ（収率75.0％）を得た。 元素分析［C₁₃H₂₅N₃O₄として］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 54.11 8.74 14.41 計算値 54.34 8.77 14.62 （14） の製造 0.25ｇ（0.27ｍＭ）をDMF ５mlに懸濁し、−５℃
に冷却下、6N塩酸／ジオキサン0.14mlを加え、
10℃迄温度を上げて完全に溶解せしめた。 次いで−５〜−10℃に冷却し、イソアミルニト
リツト0.036mlを徐々に加え、同温度で20分間反
応を行なつた。 反応終了後、−50℃迄冷却してＨ−Val−Leu−
Gly−OH 0.23ｇを加え、更にTEAでpH約７に
調整して氷浴中で２日間反応を行なつた。この反
応液を冷却下、0.5N塩酸 20ml中に徐々に加え、
生ずる沈殿物を取し、0.5N塩酸、水で洗浄後、
乾燥して融点 255〜264℃（分解）の前記目的物
0.22ｇ（収率69.6％）を得た。 元素分析［C₆₁H₈₇N₉O₁₄・H₂Ｏとして］ Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 測定値 61.31 7.11 10.51 計算値 61.65 7.55 10.61 アミノ酸分析値： Thr 0.88（１），Ser 1.77
（２），Gly 1.01（１），Ala 0.91（１），Val
1.00（１），Leu 2.00（２），α−アミノスベ
リン酸 1.05（１）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 次式（） （式中、Alaはアラニンを、Serはセリンを、
   Leuはロイシンを、Thrはスレオニンを、Valは
   バリンを、Glyはグリシンを、Lysはリジンを、
   Glnはグルタミンを、Gluはグルタミン酸を、His
   はヒスチジンを、Tyrはチロシンを、Proはプロ
   リンを、Argはアルギニンを、Aspはアスパラギ
   ン酸を表わし、ｎは３〜７の整数を表わす） で示されるポリペプチド又はその酸付加塩。 ２ 次式（） （式中、Alaはアラニンを、Serはセリンを、
   Leuはロイシンを、Thrはスレオニンを、Valは
   バリンを、Glyはグリシンを、Lysはリジンを、
   Glnはグルタミンを、Gluはグルタミン酸を、His
   はヒスチジンを、Tyrはチロシンを、Proはプロ
   リンを、Argはアルギニンを、Aspはアスパラギ
   ン酸を表わし、ｎは３〜７の整数を表わす） で示されるポリペプチド又はその酸付加塩の製造
   法であつて、活性基が適宜保護された次式（） （Ｒは活性エステル残基を表わし、ｎは前述と
   同じ） で示されるペプチドの側鎖カルボキシル基とＮ−
   末端アミノ酸（Ala）の遊離アミノ基とを縮合さ
   せ、生成した次式（） （Ｒ及びｎは前記と同じ） の環状ペプチドに、Ｈ−Val−Leu−Gly−OHを
   縮合させ、さらに前記式（）の10〜31番目のア
   ミノ酸配列を有するペプチドを縮合させることを
   特徴とする前記ポリペプチドの製造方法。