BR112012032189B1 - usos de um agonista ou antagonista de lhrh em associação com um modulador de receptor de estrogênio seletivo e com um precursor de esteróide sexual para a preparação de uma medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças relacionadas com estrogênio e kits - Google Patents

Abstract

MÉTODOS DE TRATAMENTO OU PREVENÇÃO DE DOENÇAS RELACIONADAS COM ESTROGÊNIO. Métodos para o tratamento ou redução da probabilidade de adquirir doenças relacionadas ao estrogênio (por exemplo exacerbadas por estrogênio) que incluem endometriose inclui a administração a uma paciente de um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM), em combinação com a inibição das secreções ovarianas, por exemplo, por administração de um agonista ou antagonista de LHRH. Em algumas modalidades, um precursor de esteróides sexuais, o referido precursor sendo selecionado do grupo que consiste em desidroepiandrosterona (DHEA), sulfatod e desidroepiandrosterona (DHEA-S), androst-5-eno-3ß,17ß-diol (5-diol), e androstenodiona ou um composto transformado em um desses, é também administrado.

Description

Referência cruzada a pedidos relacionados

[001] O presente pedido reivindica prioridade de Pedido Provisório U.S. N° 61/355.465 depositado em 16 de junho de 2010, cujo teor é aqui incorporado por referência.

Campo da invenção

[002] A presente invenção relaciona-se a métodos para o tratamento ou redução da probabilidade de aquisição de doenças relacionadas ao estrogênio (por exemplo, exacerbadas por estrogênio) que incluem endometriose com ouso de novas terapias de combinação em animais suscetíveis de sangue quente, que incluem humanos. Em particular, uma combinação inclui a administração de um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM), e inibição de secreções ovarianas, por exemplo, por administração de um agonista ou antagonista de LHRH. Em algumas modalidades, um precursor de esteróides sexuais, o referido precursor sendo selecionado do grupo que consiste em desidroepiandrosterona (DHEA), sulfato de desidroepiandrosterona (DHEA-S), androst-5-eno-3β,17β-diol (5-diol), e androstenodiona ou um composto transformado em um desses, é também administrado.

Fundamento da técnica relacionada

[003] Endometriose é uma doença ginecológica freqüente responsável por uma proporção significativa de infertilidade e por alta incidência de dismenorréia bem como dor pélvica, abdominal ou vaginal. Em termos de incidência, endometriose é o Segundo distúrbio ginecológico mais freqüente depois de leiomioma (Jones and Jones 1981) que são observados em 2 0% de mulheres acima de 3 5 anos de idade (Conley and Lacey 1984). Endometriose é definidas como "the presença de tecido ectópico que possui a estrutura histológica e função da mucosa uterina"(Sampson 1921). Ela é uma doença debilitante que pode afetar mulheres da menarca até a menopausa. Kistner (1979) estimou que 30 a 40% das mulheres com endometriose são inférteis.

[004] Uma vez que o tecido endometrial requer estrogênios para seu crescimento e proliferação, um estado de hipoestrogenismo resulta em atrofia e regressão da endometriose como observado após menopausa natural ou cirúrgica em mulheres bem como em animais experimentais (Dizerega, Barber e cols., 1980). Como será discutido posteriormente, a remoção de estrogênios ovarianos não remove todos os estrogênios no tecido endometriótico, embora ela remova todos os estrogênios no endométrio humano normal que é desprovido das enzimas para confeccionar estradiol, especialmente aromatase.

[005] Tem sido relatado que pseudogravidez e terapia com progestina melhoram a endometriose, aliviando a dor pélvica e dismenorréia em mais de 80% das pacientes, mas freqüentemente transitoriamente (Kistner 1959; Riva, Wilson e cols., 1961; Kistner 1962; Moghissi and Boyce 1976). Observações similares foram relatadas com androgênios: metil testosterona foi parcialmente eficaz no alívio de dismenorréia e dor abdominal, mas se dosagens maiores forem usadas, importantes sinais masculinizantes surgiram. Em adição, a ovulação não foi consistentemente inibida e tratamento com androgênios elevaram a possibilidade de virilização dos fetos femininos ou teratogenicidade genitourinária (Kistner 1979).

[006] Estudos iniciais de terapia com GnRH-a (também chamado agonista de LHRH) mostraram melhoria subjetiva e objetiva entre pacientes com endometriose (Lemay, Maheux e cols., 1984; Erickson and Ory 1989), e estudos comparativos controlados demonstraram eficácia similar e melhor tolerabilidade {01248809.1) para GnRH-a comparado ao Danazol (Henzl, Corson e cols., 1988; Rock, Truglia e cols., 1993). É também bem estabelecido que a deficiência de estrogênio induzida por agonistas de LHRH mostra benefícios clínicos em endometriose (Meldrum, Chang e cols., 1982; Lemay, Maheux e cols., 1984).

[007] A despeito dos benefícios acima mencionados, a ampla aplicação de terapia com GnRH-a em endometriose tem sido limitada pelos efeitos colaterais hipoestrogênicos, como sintomas vasomotores, secura vaginal, instabilidade emocional, insônia, e perda de densidade mineral óssea (BMD) . Preocupações em relação ao efeito de longa duração desses efeitos colaterais, particularmente perda de BMD, têm limitado a duração do tratamento com GnRH-a a 6 meses para a maioria dos distúrbios ginecológicos (Surrey 1995) .

[008] Depois de nossas observações originais de que a administração crônica de um agonista de LHRH leva a uma inibição da função ovariana caracterizada por uma perda de receptores de LH ovariano (Auclair, Kelly e cols., 1977a; Auclair, Kelly e cols., 1977b; Auclair, Ferland e cols., 1978) e bloqueio de esteroidogênese (Belanger, Auclair e cols., 1979; Rivier, Rivier e cols., 1979; Belanger, Labrie e cols., 1980) em machos de ratos, ornou-se interessante investigar a possibilidade de uma perda similar de receptores de gonadotrofina ovariana em fêmeas de animais. De fato, uma única injeção de 8 ng de urn agonista de LHRH em diestro I leva a uma redução significativa de receptores de LH ovariano (30%) (Kledzik, Cusan e cols., 1978). Uma inibição próxima a maxima (60%) dos receptores de LH ovariano é observada na dose de 40 ng, o efeito inibidor restante de magnitude similar até uma dose de 2 5 pg. A diminuição nos receptores de LH ovariano é acompanhada por uma marcante redução do peso líquido uterino, fluido intrauterino e concentração plasmática de progesterona como medido na manhã do proestro esperado; níveis séricos de LH FSH permanecem inalterados (Kledzik, Cusan e cols., 1978).

[009] De fato, deficiência de estrogênio é conhecida por causar perda óssea e osteoporose, assim limitando o uso de agonistas de LHRH eficientes para o tratamento de endometriose e fibróides uterinos. Isso levo à sugestão de uso de um ciclo de 6 meses de agonista de LHRH para o tratamento de endometriose (Fogelman 1992). Tal esquema de tratamento é geralmente acompanhado por um retono da endometriose após a cessação do tratamento com agonista de LHRH devido à apoptose insuficiente das células endometrióticas.

[010] Terapia de reposição hormonal "add-back"(HRT), a combinação de vários agentes com GnRH-a, tem sido recomendada como um meio de manutenção de uma resposta terapêutica e redução de potenciais eventos adversos da terapia com GnRH. 0 argumento para essa abordagem deriva da hipótese de limiar de estrogênio, que estipula que estrogênio em uma certa faixa de concentração pode prevenir parcialmente a perda óssea embora não estimule o crescimento de lesões endometriais (Barbieri 1992). Para prevenir a perda óssea associada com terapia por LHRH-A, a adição de estrogênio de baixa dose (terapia add-back)tem sido estudada. É improvável, no entanto, qe efeitos máximos sobre a endometriose sejam atingidos com terapia add-back de estrogênio.

[011] Quando o acetato de progestágeno medroxiprogesterona (MPA) foi usado com um agonista de LHRH por 6 meses, nenhuma alteração significativa de BMD foi observada no antebraço proximal e distal (Friedman 1989). Terapia com progestágeno na forma de acetato de medroxiprogesterona (MPA) (Lemay, Dodin e cols., 1989; Cedars, Lu e cols., 1990) ou noretindrona (Riis, Christiansen e cols., 1990; Eldred, Haynes e cols., 1992; Surrey and Judd 1992) em combinação com terapia com GnRH-a foi avaliada em vários estudos pequenos. Ambas as terapias parecem eliminar sintomas vasomotores e perda de BMD associados com terapia com GnRH-a, mas a administração contínua de MPA parece reverter os efeitos benéficos de GnRH-a, e noretindrona possui efeitos adversos sobre o perfil lipídico (Surrey 1995).

[012] MPA, no entanto, mostrou um risco aumentado de câncer de mama (Women's Health Initiative 2002).

[013] Antagonistas de receptor de estrogênio também podem ser úteis para bloquear os estrogênios responsáveis por estimular a proliferação do tecido endometriótico. Antagonistas de receptor de estrogênio a serem usados podem ser Fulvestrant, Raloxifeno, Tamoxifeno, Toremifeno, Arzoxifeno, LY 335563 (Desmetilarzoxifeno), LY 335124, LY 326315, CHF-4227, Nafoxidina, Lasofoxifeno, LY-2066948, LY- 2120310, Ospemifeno, Sivifeno (A-007), TAS-108, acetato de bazedoxifeno (1-{4-[2-(Azepan-l-il(etoxi]benzil}-2-(4- hidroxifenil)-3-metil-lH-indol-5-ol acetato), ERA-923, Afimoxifeno, (Z)-4-hidroxitamoxifeno, Enclomifeno, Fispemifeno, Acolbifeno, EM-652, EM-800, Droloxifeno, Idoxifeno, GW 5638, TAT-59, GW-7603, Centcroman, Levormeloxifeno, ICI-164384, BL-3040, CH-4893237, SR 16158, SR 16137, Rad-1901, SERM 3471 (PSK-3471), HMR 3339, HMR 3656, CC 8490, llβ-flúor-7α-[5-(metil-3-[(4,4,5,5,5 - pentafluorpentil)sulfanil]propilamino)pentil]estra-1,3,5 (10)-trieno-3,17β-diol (SH 646, veja W01998/007740) , llβ- flúor-17α-metil-7α-5-[metil(8,8,9,9,9- pentafluornonil)amino]pentilestra-1,3,5(10)-trieno-

[014] 3,17β-diol (veja W02003/045972) ou ( + )-3-(4- Hidroxifenil)-2-[4-(2-piperidin-l-iletoxi)fenil] -4- (trifluorometil)-2H-cromen-7-ol (veja WO2001/68634).

[015] Antiestrogênios esteroidais e não esteroidais (moduladores de receptor de estrogênio seletivo) foram revelados no tratamento de doenças relacionadas ao estrogênio, incluindo endometriose em US 5.395.842; US 5.393.785; e em US 5.204.337. outros moduladores de receptor de estrogênio seletivo também foram revelados para o tratamento de endometriose em WO 97/04763; UK 2 303 628 A; WO 96/09040; WO 96/09041; EP 0 652 005 Al; EP 0 731 093 Al; US 5.484.797; EP 0 761 669 A2; US 5.567.828; EP 0 729 951 Al; e EP 0 703 228 Al; WO 2004/009086; WO 2004/259915; WO 2005/073190; WO 2005/073205; WO 2005/073206; e WO 2005/073244. Terapia de combinação para o tratamento de doença sensível ao estrogênio foi revelada em US 5.550.107.

[016] A combinação de agonista ou antagonista de LHRH com um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM) ou antiestrogênio tem sido revelada no tratamento de doenças relacionadas ao estrogênio que incluem endometriose em EP 1424080 Al, US 7.309.691 B2, US 2001/0041672 Al e WO 02/056903 A2. 0 uso de clomifeno para proteger o esqueleto durante terapia com agonista de LHRH de endometriose tem sido sugerido (Goulding and Fisher 1991) .

[017] DHEA, DHEA-S, 5-diol e androstenodiona podem ser convertidos em uma maneira específica para célula e tecido em estrogênios e/ou androgênios pelo processo de intracrinologia (Labrie, }Manger e cols., 1988; Labrie 1991; Labrie, Luu-The e cols., 2005 e Labrie 2007).

[018] Esta invenção descrevei, novo método para o tratamento de doenças relacionadas ao estrogênio qe incluem endometriose.

Sumário da invenção

[019] Ê um objetivo da presente invenção fornecer métodos eficazes de tratamento para doença relacionada ao estrogênio que inclui endometriose enquanto minimiza efeitos colaterais indesejáveis.

[020] Ê também um objetivo da presente invenção fornecer métodos de redução do risco de adquirir as doenças acima.

[021] É um outro objetivo fornecer kits adequados para uso nos métodos acima.

[022] Em uma modalidade, a invenção pertence a um método de tratamento ou redução do risco de adquirir doenças relacionadas ao estrogênio que incluem endometriose que compreende a administração a uma paciente em necessidade do referido tratamento ou referida redução de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agonista ou antagonista de LHRH e que também compreende administração à referida paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM) como parte de uma terapia de combinação.

[023] Em outra modalidade, a invenção pertence a um método de tratamento ou redução do risco de adquirir doenças relacionadas ao estrogênio que incluem endometriose e compreende a administração a uma paciente em necessidade do referido tratamento ou referida redução de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agonista ou antagonista de LHRH e também compreende a administração à referida paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM) e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um precursor de esteróide sexual selecionado do grupo que consiste em desidroepiandrosterona (DHEA), sulfato de desidroepiandrosterona (DHEA-S), 4-androsteno-3,17-diona, androst-5-eno-3β,17β-diol (5-diol), compostos transformados in vivo em pró-fármacos, e sais desses.

[024] Como aqui usado, um antiestrogênio é um composto que bloqueia diretamente ou através de seu metabólito ativo os receptores de estrogênio, com isso tornando-os disponíveis para compostos estrogênicos que podem, se outro modo, ativar esses receptores. Um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM) é um composto que funciona diretamente ou através de seu metabólito ativo como um antagonista de receptor de estrogênio ("antiestrogênio") em tecido endometrial da mama, embora ele forneça um efeito semelhante ao estrogênio no tecido ósseo e sobre os níveis de colesterol sérico (ou seja, por redução do colesterol sérico). Compostos não esteroidais que funcionam como antagonistas de receptor de estrogênio in vitro,em linhagens de câncer de mama humano ou em modelos in vivo de câncer de mama humano (especialmente se o composto age como um antiestrogênio em células de câncer de mama humano que crescem como xenoenxerto em camundongos nude) provavelmente agem como um SERM. De modo inverso, antiestrogênios esteroidais tendem a não agir como SERMs porque eles tendem a não apresentar quaisquer efeitos benéficos sobre o osso. Antiestrogênios não esteroidais encontrados por nós ou relatados na literatura por agirem como SERMs incluem EM- 800, EM-652.HC1 (Acolbifeno), Raloxifeno, LY 335563, LY 353381 (Arzoxifeno), Idoxifeno, GW 5638, Tamoxifeno, (Z)-4- hidroxitamoxifeno, Toremifeno, Ospemifeno, Droloxifeno, Lasofoxifeno, Bazedoxifeno (TSE-424), e Pipendoxifeno (ERA -923), mas não são limitados a esses compostos. SERMs de acordo com a invenção podem ser administrados na mesma dosagem como conhecido na técnica quando esses compostos são usados no tratamento de câncer de mama ou para redução do risco de desenvolvimento de câncer de mama ou osteoporose.

[025] Como aqui usado, o termo endometriose inclui, sem limitação, doença peritoneal, endometriose ovariana, e doença retovaginal. Ele inclui crescimento de tecido endometrial em qualquer local, incluindo a camada interna do útero ou endométrio.

[026] Em outra modalidade, a invenção pertence a um método de tratamento ou redução do risco de adquirir outras doenças relacionadas ao estrogênio como fibróides uterinos, leiomiomas uterinos, câncer do endométrio, câncer do uterino, leiomiossarcomas uterinos, câncer ovariano, câncer de mama, síndrome de ovário policístico, sangramento uterino disfuncional, sangramento vaginal, menorragia, sindrome pré-menstrual, cefaléia, neoplasia cervical intraepitelial, adenomiose e doença de Alzheimer e compreende a administração a uma paciente em necessidade do referido tratamento ou referida redução, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agonista ou antagonista de LHRH e também compreende a administração à referida paciente de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM) e opcionalmente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um precursor de esteróide sexual selecionado do grupo que consiste em desidroepiandrosterona (DHEA), sulfato de desidroepiandrosterona (DHEA-S), 4-androsteno-3,17-diona, androst-5-eno-3β,17β-diol (5-diol), compostos transformados in vivo em pró-fármacos e sais desses.

[027] Outras características e vantagens da presente invenção estarão aparentes a partir da seguinte descrição não limitante de modalidades preferidas, que fazem referência aos desenhos em anexo.

Breve descrição dos desenhos

[028] Figura 1 é uma representação esquemática da diminuição progressiva no DHEA sérica com a idade. No momento da menopausa, DHEA sérica já diminuiu em 60% e a diminuição continua depois disso. Uma diminuição em paralelo é observada para exposição a androgênio total.

[029] Figura 2 é uma ilustração da ampla variabilidade dos níveis séricos de DHEA em mulheres normais de 3 0 a 40 anos de idade e de 50 a 75 anos de idade. Os dados são apresentados individualmente vem como por médias e percentis de 5%-95% (Labrie e cols., dados não publicados).

[030] Figura 3 é um gráfico em barra que mostra que DHEA sérica é 22,3% maior em mulheres na pós-menopausa intactas comparadas a mulheres na pós-menopausa ooforectomizadas de 42 a 74 anos de idade em uma amostragem cujo número é mostrado no eixo X.

[031] Figura 4 é uma representação esquemática da fonte única de esteróides sexuais em mulheres na pós-menopausa, ou seja, DHEA. Depois da menopausa, todos os estrogênios e androgênios são feitos localmente em tecidos intrácrinos periféricos da adrenal (80%) ou DHEA ovariana (20%). Durante toda a vida, os androgênios são exclusivamente derivados da adrenal e DHEA ovariana. A quantidade de esteróides sexuais feita nos tecidos periféricos alvo depende do nível das enzimas formadoras de esteróide especificamente expressas em cada tecido.

[032] Figura 5 é um gráfico em barras que compara o efeito de tratamento com DHEA (10 mg, percutâneo, uma vez ao dia) ou EM-800 (precursor de EM-652 que também deriva de EM-652.HC1 (Acolbifeno) ) (75 pg, por via oral, uma vez ao dia) isoladamente ou em combinação por 9 meses nos níveis de triglicerídeo sérico (A) e colesterol (B) no rato. Os dados são expressos como as médias ± SEM. **: P<0,01 experimental versus controle respectivo.

[033] Figura 6 é um gráfico em barras que compara o efeito de tratamento de 12 meses com desidroepiandrosterona (DHEA) isoladamente ou em combinação com Flutamida ou EM- 800 em volume do osso trabecular em ratos ooforectomizados. Animais intactos são adicionados como controles adicionais. Os dados são expressos como as médias ± SEM ** p<0,01 versus Controle de OVX.

[034] Figura 7 é um gráfico em barras que compara o efeito de tratamento de 12 meses com desidroepiandrosterona (DHEA) isoladamente ou em combinação com Flutamida ou EM- 800 no número trabecular em ratos ooforectomizados. Animais intactos são adicionados como controles adicionais. Os dados são apresentados como as médias ± SEM ** p<0,01 versus Controle de OVX.

[035] Figura 8 mostra metáfises tibiais proximais de controle intacto (A), controle ooforectomizado (B), e ratos ooforectomizados tratados com DHEA isoladamente (C) ou em combinação com Flutamida (D) ou EM-800 (E) . Note a quantidade reduzida de osso trabecular (T) em animais de controle ooforectomizados (B), e o aumento significante no volume do osso trabecular (T) induzido depois da administração de DHEA (C) . a adição de Flutamida a DHEA bloqueou parcialmente o efeito de DHEA sobre o volume do osso trabecular (D), enquanto a combinação de DHEA e EM-800 forneceu proteção completa contra a perda óssea associada a ooforectomia. Masson-Goldner tricromo modificado, ampliação de x 80. T: Trabéculas, GP: placa de crescimento.

[036] Figura 9 mostra comparação dos efeitos de HRT padrão (estrogênio) e um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SEEM) em parâmetros de menopausa.

[037] Figura 10 mostra comparação dos efeitos de HRT padrão (estrogênio) e desidroepiandrosterona sobre os parâmetros de menopausa.

[038] Figura 11 mostra os efeitos combinados de SEEM (acolbifeno) e DHEA sobre os parâmetros de menopausa. Nenhum efeito negativo é esperado.

Descrição detalhada

[039] Uma lista complete de citações para referências aqui citadas em format curto é apresentada baixo:

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Visão geral

[176] Embora não haja qualquer aromatase que permita a transformação de DHEA em estradiol em endométrio normal, aromatase é expressa em endometriose. Veja, Kitawaki, J., T. Noguchi et al, (1997) "Expression of aromatase cytochrome P450 protein and messenger ribonucleic acid in human endometriotic and adenomyotic tissues but not in normal endometrium"Biol. Reprod. 57(3): 514-19.; Balun, S.E, S.Yang e cols., (2001) Role of aromatase in endometrial disease"J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 79(1- 5): 19-25; Fang, Z., S. Yang e cols. (2002) "Genetic or enzymatic disruption of aromatase inhibits growth of ectopic uterine tissue", J. Clin. Endocrin. Metab. 87(7): 3.460-6. 0 peticionário propõe o fornecimento de modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM) para bloquear a ação de estrogênios feitos localmente em tecido endometriótico como uma terapia de combinação com inibição de secreções hormonais ovarianas. Em algumas modalidades, a presença do SERM permite a administração adicional de precursor de esteróide sexual exógeno como DHEA para obter os benefícios de tal precursor mostrado abaixo.

Efeitos benéficos de SERMs

[177] Acolbifeno, um SERM da presente invenção, é um derivado de benzopirano originalmente desenvolvido como antiestrogênio puro para o tratamento de câncer de mama (Gauthier, Caron e cols., 1997; Luo, Martel e cols., 1997a; Luo, Martel e cols., 1997b; Luo, Sourla e cols., 1997; Simard, Labrie e cols., 1997; Simard, Sanchez e cols., 1997; Tremblay, Tremblay e cols., 1997; Couillard, Gutman e cols., 1998; Couillard, Labrie e cols., 1998; Luo, Labrie e cols., 1998; Luo, Stojanovic e cols., 1998; Tremblay, Tremblay e cols., 1998a; Tremblay, Tremblay e cols., 1998b; Tremblay, Tremblay e cols., 1999). EM-800 é urn precursor inativo quantitativamente transformado em EM-652, o composto ativo, em células intactas bem como in vivo. Acolbifeno (EM-1538) é o sal de cloridrato de EM-652.

[178] Este antiestrogênio oralmente ativo mostra atividade antiestrogênica pura na glândula mamária e epitélio endometrial no rato, macaco e camundongo (Luo, Martel e cols., 1997b; Sourla, Luo e cols., 1997) bem como em células de câncer de mama humano e de carcinoma endometrial humano in vitro (Gauthier, Caron e cols., 1997; Simard, Labrie e cols., 1997) e xenoenxertos in vivo em camundongos nude (Couillard, Gutman e cols., 1998).

[179] EM-652, o metabólito ativo de EM-800 e acolbifeno, é o composto que possui a afinidade mais alta conhecida pelo receptor de estrogênio humano. EM-652 é assim 1,5 a 3,0 vezes mais potente que 17β-estradiol e dietilstilbestrol para deslocar [3H]estradiol do receptor de estrogênio em câncer de mama humano e tecido uterino normal. No ensaio de ligação, EM-652 é 5 vezes mais potente que hidroxitamoxifeno, o metabólito ativo de tamoxifeno e 200 vezes mais potente que tamoxifeno em si. Dependendo das condições do ensaio de ligação, EM-652 é 10 a 140 vezes mais potente que o antiestrogênio esteroidal ICI 182 780, 20 a 85 vezes mais potente que ICI 164 384, 100 a 1.500 vezes mais potente que toremifeno em competição pelo receptor de estrogênio de câncer de mama humano. 0 valor de Ki da afinidade de EM-652 pelo receptor de estrogênio humano é no valor mais inferior de 0,05 nM, assim mostrando a maior afinidade até agora conhecida para qualquer composto pelo receptor de estrogênio.

[180] Como acima mencionado, EM-800 (EM-652) mostra atividade antiestrogênica pura em células de carcinoma de Ishikawa endometriais humanas (Simard, Sanchez e cols., 1997). Deve ser mencionado que Raloxifeno, Arzoxifeno, Droloxifeno, Idoxifeno, Toremifeno, Ospemifeno e Tamoxifeno estimulam em vários graus, a fosfatase alcalina de parâmetro sensível ao estrogênio em células de carcinoma de Ishikawa endometriais humanas (Gauthier, Caron e cols., 1997; Simard, Sanchez e cols., 1997; Labrie, Martel e cols., 2 010) .

[181] Foi relatado que raloxifeno, um composto derivado de uma série de benzotiofeno de antiestrogênios (Black, Sato e cols., 1994), exerce um efeito protetor sobre a perda óssea e possui efeitos benéficos sobre lipídeos séricos (Black, Sato e cols., 1994; Draper, Flowers e cols., 19 96) .

[182] EM-652 é único entre os SERMs por possuir atividade antiestrogênica pura tanto em células de mama humanas quanto células uterinas (Gauthier, Caron e cols., 1997; Simard, Labrie e cols., 1997; Simard, Sanchez e cols., 1997; Couillard, Gutman e cols., 1998). Como acima mencionado, EM-652 parece ser o SERM mais potente na prevenção de perda da densidade mineral óssea e inibidor de colesterol sérico no rato.

[183] A despeito de ser o único composto que possui atividade antiestrogênica pura na glândula mamária e endométrio como resumido acima, EM-652, devido a seus efeitos benéficos sobre o osso e lipídeos sangüíneos, pode ser classificado como um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM), como originalmente proposto para Raloxifeno (Draper, Flowers e cols., 1995; Kauffman e Bryant 1995) . De fato, EM-800 mostrou inibir a reabsorção ósseo depois de ooforectomia no rato, um efeito máximo sendo já atingido a 0,01 mg/kg, comparado a 0,1 mg/kg para Raloxifeno (Martel, Sourla e cols., 1998) . Uma potência alta similar de EM-800 (EM-652) sobre o colesterol sérico foi encontrada no rato (Martel, Sourla e cols., 1998) . Além disso, na dose oral diária de 5, 10, 20 e 40 mg, por 2 semanas, em mulheres na pós-menopausa, EM-800 (EM-652) causa uma diminuição de 10% no colesterol sérico total enquanto uma diminuição de 15% nos níveis de triglicerídeo sérico é já observada em 1 semanas (Labrie e cols., dados não publicados).

Efeitos benéficos de precursor de esteróides sexuais

[184] Humanos, como alguns outros primatas, são únicos entre as espécies animais por terrem adrenais que secretam grandes quantidades do precursor inativo de esteróides DHEA e especialmente DHEA-S, que são convertidos em potentes androgênios e/ou estrogênios nos tecidos periféricos. Os níveis plasmáticos de DHEA-S são 200-1.000 vezes maiores que aqueles de testosterona em homens adultos e 5.000 a 25.000 vezes maiores que aqueles de estradiol, em mulheres adultas, assim fornecendo um grande suprimento de substrato para a formação de androgênios e/ou estrogênios. Como acima mencionado, a síntese local e ação de esteróides sexuais nos tecidos periféricos alvo tem sido chamada intracrinologia; os exemplos escolhidos incluíam DHEA e androstenodiona (Labrie, Belanger e cols., 1988; Labrie 1991).

Alterações de DHEA sérica com a idade e alta variabilidade

[185] A secreção de DHEA diminui marcadamente a partir da idade de 3 0 anos, com lima perda média de 6 0% já observada no momento da menopausa (Labrie, Belanger e cols., 2006; Labrie, Luu-The e cols., 2005; Labrie, Luu-The e cols., 2003; Labrie, Belanger e cols., 1997b). Essa redução marcante na secreção de DHEA pelas adrenais durante o envelhecimento (Labrie, Belanger e cols., 1997b) resulta em uma queda paralela na formação de androgênios e estrogênios nos tecidos periféricos alvo, uma situação que se acredita estar associada a uma série de problemas médicos da menopausa (resistência à insulina (Coleman, Leiter e cols., 1982), acúmulo de gordura (Tchernof, Despres e cols., 1995), perda óssea, perda muscular, diabetes tipo 2, atrofia vaginal e atrofia da pele (Labrie, Luu-The e cols., 2005; Simon 2009; Diamond, Cusan e cols., 1996; Labrie, Diamond e cols., 1997; Labrie 2007), perda de memória e cognição (Ruttimann 2008) we outros. Alguns desses problemas que são bem reconhecidos depois da menopausa também podem se tornar aparentes antes da menopausa, perda óssea, secura vaginal e fogachos sendo exemplos. A Figura 1 mostra uma diminuição nos níveis de DHEA com a idade.

[186] Além da diminuição marcante com a idade, os níveis séricos de DHEA são altamente variáveis, com algumas mulheres tendo baixos níveis de DHEA mesmo durante os anos reprodutivos. Veja a Figura 2.

Quantidades significativas de DHEA são secretadas pelo ovário humano

[187] Uma observação recente mais importante é que o ovário secreta uma quantidade significativa de DHEA. Portanto, um tratamento que interrompe a secreção de estrogênio ovariano como realizado pelo uso de um agonista ou antagonista de LHRH como parte dessa invenção, também deve diminuir a secreção de DHEA a partir do ovário na circulação geral, assim contribuindo para a ausência de atividade de esteróide sexual em mulheres com mais de 30 anos (Figura 1) . Além disso, nossos dados recentes mostram que todos os androgênios em mulheres se originam de DHEA e que o ovário humano não secreta diretamente androgênios que são importantes para a fisiológica endócrina normal em mulheres (Labrie, Martel e cols.,2011). De fato, mulheres possuem cerca de até 40% dos androgênios que os homens (Labrie 2007).

[188] Uma vez que não há mecanismo de feedbackpara aumentar a secreção de DHEA quando a concentração sérica do esteróide é baixa, mulheres com uma baixa taxa de secreção de DHEA permanecem deficientes em esteróides sexuais pelo restante de sua vida na ausência de terapia de substituição com DHEA exógeno.

[189] Dados foram obtidos de 442 mulheres na pós- menopausa intactas de 46 a 74 anos de idade (média: 59,9 anos; mediana: 60,5 anos), 71 mulheres na pós-menopausa com ooforectomia bilateral prévia de 42 a 72 anos (média: 60,6 anos; mediana: 62,0 anos) e 47 mulheres com ciclo normal na pré-menopausa de 30 a 39 anos (média e mediana: 33 anos). Os níveis de esteróide foram medidos em amostras de sangue coletado no rastreamento ou no Io dia das mulheres que participam de vários experimentos clínicos. Todas as amostras foram coletadas antes da administração de qualquer fármaco de pesquisa. As mulheres participaram de experimentos clínicos depois da aprovação pelo IRB e com consentimento informado dado por escrito.

[190] Amostras de sangue foram processadas para preparação sérica e mantidas congeladas a -20°C ou menos até a medição de esteróides. Os níveis séricos de esteróide de DHEA, DHEA-S, androst-5-eno-3β,17β-diol (5-diol), androstenodiona (4-diona), testosterona (testo), dihidrotestosterona (DHT), estradiol (E2), estrona (El) , sulfato de estrona (El-S), androsterona glucuronida (ADT- G), androstano-3α,17β-diol-3-glucuronida (3α-diol-3G) e 3α- diol-17G foram medidos por espectrometria de massa, como previamente descrito (Labrie, Belanger e cols., 2006; Labrie, Belanger e cols., 2007; Labrie, Cusan e cols., 2009). Detalhes a respeito da performance dos ensaios, bem como precisão e sensibilidade podem ser encontrado em (Labrie, Belanger e cols., 2006) e (Labrie, Cusan e cols., 2008).

[191] Estatísticas descritivas apresentadas na Tabela 1 foram realizadas com o uso de programa SAS. Signif icância estatística baseada em uma a comparação de níveis médios de esteróide entre as mulheres na pós-menopausa intactas e ooforectomizadas foi determinada com ouso de um teste t em u programa SAS (Tabela 1). Tabela 1: Níveis de esteróide sérico em mulheres intactas e ooforectomizadas na pós-menopausa bem como em Mulheres com ciclo normal

‘ Androstano-3α,17β-diol-3G = Androstano-3α,17β-dio1-17G *, p<0,05; **, p<0,01; OVX vs INTACTA 5

[193] Como mostrado na Tabela 1, os presentes dados mostram que o ovário na pós-menopausa secreta aproximadamente 18% do DHEA total nesse grupo de idade. Os níveis séricos menores de DHEA em OVX comparados às mulheres intactas na pós-menopausa observados no presente estudo podem ser melhor explicados por secreção da quantidade correspondente de DHEA pelo ovário na circulação. Essa DHEA de origem ovariana é então submetida aos mesmos mecanismos intrácrinos que a DHEA de origem adrenal.

[194] Pelo fato de não haver qualquer mecanismo regulador para aumentar a secreção de DHEA quando a DHEA sérica é baixa, parece que o único meio de corrigir essa deficiência é suprir DHEA exógeno para compensar a ausência de controle de feedbackda secreção de DHEA. Os níveis séricos inferiores de DHEA de 18% porém paralelos e todos os seus metabólitos encontrados em mulheres OVX (Figura 3), incluindo E2 e testosterona, sugerem que o ovário na pós- menopausa secreta 18% do DHEA total no grupo de 42 a 74 anos de idade sem quantidades signif icantes de E2 ou testosterona secretadas diretamente pelo ovário (Figura 4).

[195] Não há razão para acreditarmos que a situação de uma contribuição significante (-18%) do ovário na pós- menopausa para o conjunto total de DHEA circulante deva ser menor na pré-menopausa.

[196] Nós percebemos que a compreensão aumentada da formação e ação de androgênio e estrogênio nos tecidos periféricos também chamada intracrinologia (Labrie 1991; Labrie, Simard e cols.,1992a; Labrie, Simard e cols., 1992b; Labrie, Durocher e cols., 1995; Luu-The, Dufort e cols., 1995; Labrie, Simard e cols., 1996; Labrie, Belanger e cols., 1997a; Labrie, Belanger e cols., 19971); Labrie, Diamond e cols., 1997; Labrie, Luu-The e cols., 1997) bem como nossas recentes observações que indicam que o papel predominante de androgênios sobre aquele de estrogênios na prevenção de perda óssea depois de ooforectomia no rato (Martel, Sourla e cols., 1998) e a observação de uma situação similar em mulheres na pós-menopausa (Labrie, Diamond e cols., 1997) facilitou o caminho para u progresso potencialmente e altamente significativo no campo da terapia de reposição de esteróide sexual. Tal possibilidade é bem sustentada por nossas observações e por outros de uma série de efeitos benéficos de DHEA observados em mulheres na pós-menopausa (Morales, Nolan e cols., 1994; Diamond, Cusan e cols., 1996; Labrie, Diamond e cols., 1997; Labrie 2007, 2010; Labrie, Archer e cols., 2009a, 2009b, 2009c), uma situação análoga à castração médica induzida por agonistas ou antagonistas de LHRH para o tratamento de endometriose.

[197] Uma demonstração muito convincente da eficácia e segurança de DHEA foi recentemente obtida em um experimento clínico randomizado, controlado por placebo, de fase pivô III, em que mulheres na pós-menopausa que sofrem de atrofia vaginal receberam DHEA diariamente ou placebo intravaginalmente por 3 meses. Uma melhoria rápida e muito marcante de todos os sintomas e sinais de atrofia vaginal foi observada, sem alteração no estradiol ou testosterona circulante. Um benefício adicional nao observado com estrogênios foi o achado de uma melhoria significante de todos os domínios da disfunção sexual, ou seja, desejo, excitação, orgasmo e prazer (Labrie, Archer e cols., 2009a, 2009b).

Formação de estrogênio na endometriose

[198] Embora as enzimas necessárias para a formação de estrogênio, especialmente aromatase, sejam ausentes no endométrio humano normal (Bulun, Lin e cols., 2005; Baxendale, Reed e cols., 1981), aromatase é altamente expressa e a produção local de estrogênio está presente no tecido endometriótico ((Kitawaki, Noguchi e cols., 1997; Zeitoun, Takayama e cols., 1999; Bulun, Yang e cols., 2001; Fang, Yang e cols., 2002; Gurates, Sebastian e cols., 2002; Yang, Fang e cols., 2002) . A subseqüente introdução de inibidores da aromatase no tratamento de endometriose ressalta, de modo bem sucedido a presença de aromatase no tecido endometriótico (Takayama, Zeitoun e cols., 1998; Ailawadi, Jobanputra e cols., 2004) .

[199] Em endometriose, o protótipo de anormalidade é a presença de níveis significativos de StAR e atividade de aromatase e expressão de proteína e mRNA no componente de célula estromal da endometriose, enquanto a expressão de StAR ou aromatase foi ausente ou pouco detectável no endométrio eutópico de mulheres livres da doença (Noble, Simpson e cols., 1996; Noble, Takayama e cols., 1997; Tsai, Wu e cols., 2001; Gurates, Sebastian e cols., 2002; Sun, Hsiao e cols., 2003) . 0 endométrio eutópico de mulheres com endometriose contém níveis baixos, porém significativos, de mRNA de aromatase e atividade de enzima e representa um estado intermediário dessa doença. Parece que após menstruação retrógrada e implante desse tecido inerentemente anormal nas superfícies peritoneais pélvicas, a expressão de aromatase e atividade da enzima são amplificadas em até 400 vezes (Noble, Simpson e cols., 1996; Noble, Takayama e cols., 1997).

[200] O que separa endométrio normal de endometriose, no entanto, é a ausência in vivo de StAR e aromatase. Níveis fisiologicamente significativos desses produtos de gene não são detectados em tecido endometrial normal ou células estromais endometriais estimuladas por PGE2 (Bulun, Lin e cols., 2005) . A atividade de aromatase ou mRNA não pode ser induzida por PGE2 ou análogos de cAMP em células estromais de mulheres livres da doença (Noble, Takayama e cols., 1997).

Efeitos benéficos de combinação de SERM + precursor de esteróide sexual

[201] DHEA é conhecida por prevenir o desenvolvimento e por inibir o crescimento de tumores mamários induzidos por dimetilbenz(a)antraceno no rato (Labrie, Luu-The e cols., 2003) . DHEA, além disso, inibes o crescimento de xenoenxertos de câncer de mama humano em camundongos nude (Labrie, Luu-The e cols., 2003). Portanto, em contraste aos estrogênios e progestinas, que exercem efeitos estimulantes, espera-se que DHEA - como demonstrado na maioria das linhagens de células de câncer de mama humano - iniba tanto o desenvolvimento quanto o crescimento de câncer de mama em mulheres (Labrie, Luu-The e cols., 2003; Labrie 2010, 2006; Labrie, Belanger e cols., 2006) .

[202] Para evitar os problemas ilustrados pelo estudo de Will (Women's Health Initiative, JAMA288: 321-333, 2002) com o uso de HRT tradicional, parece lógico usar um composto antiestrogênico/estrogênico tecido-específico (dependendo do tecido) (SERM) combinado com uma terapia de reposição direcionado ao tecido androgênica e/ou estrogênica em perimenopausa e pós-menopausa. Essa estratégia pode ser a melhor ou possivelmente a única forma de manter um equilíbrio fisiológico entgre androgênios e estrogênios em cada célula de cada tecido e simultaneamente prevenir o câncer de mama e uterino. Tal objetivo pode ser potencialmente alcançado por combinação de um SERM com DHEA (Labrie, Luu-The e cols., 2005; Labrie, Luu-The e cols., 2003; Labrie 2007).

[203] Enquanto SERMs possuem efeitos no osso limitados a inibição de reabsorção óssea, DHEA estimula a formação de osso através de seu componente androgênico ou anabólico (Michalska, Stepan e cols., 2006; Martel, Sourla e cols., 1998) . Tal efeito anabólico ou formador de osso não pode ser atingido com SERMs, bisfosfonatos, estrogênios ou calcitonina, que apenas diminuem a taxa de reabsorção óssea. De fato, essas terapias anti-reabsorção não melhoram todas as características da perda óssea normal, especialmente a microarquitetura. Enquanto a alta potência de acolbifeno (10 vezes maior que raloxifeno) sobre o osso foi demonstrada no nível pré-clínico (Labrie, Labrie e cols., 2001), foi já observado que tratamento com DHEA aumenta a formação de osso em mulheres na pós-menopausa através de ação anabólica (Labrie, Diamond e cols., 1997).

[204] Em adição a um aumento na formação do osso, foi demonstrado que DHEA em mulheres na pós-menopausa estimula a maturação vaginal, diminui a adiposidade bem como a glicose sérica e níveis de insulina. 0 efeito de DHEA sobre a gordura e metabolismo da glicose descrito em alguns estudos (Diamond, Cusan e cols., 1996; Villareal e Holloszy 2004; Morales, Haubrich e cols., 1998) não foi encontrado em outros estudos (Jankowski, Gozansky e cols., 2006; Nair, Rizza e cols., 2006) . Também é possível que SERMs possam exercer efeitos benéficos adicionais em mulheres na pós- menopausa. De fato, dados pré-clínicos obtidos com acolbifeno incluem os seguintes efeitos benéficos: níveis de colesterol e triglicerídeos diminuídos, acúmulo de gordura reduzido e sensibilidade à insulina aumentada (Labrie, Labrie e cols., 2001; Labrie 2007).

[205] A combinação de um SERM mais DHEA (Figura 7) também pode ajudar a controlar os fogachos, através do efeito androgênico de DHEA, enquanto previne o câncer de mama, câncer do uterino, câncer ovariano, perda óssea e muscular bem como diminui o acúmulo de gordura, diabetes tipo 2 e colesterol sérico (Tabela 2). Tabela 2

[206] Neste contexto, é importante indicar que a ausência de um efeito estimulante de DHEA sobre o endométrio humano normal (Labrie, Diamond e cols., 1997) elimina a necessidade de administrar uma progestina para neutralizar o efeito potencial de estrogênios sobre o endométrio. Em relação à mama, DHEA é conhecida por prevenir o desenvolvimento (Luo, Sourla e cols., 1997) e por inibir o crescimento (Li, Yan e cols., 1993) de tumores mamários de dimetilbenz(a)antraceno no rato. DHEA, além disso, inibe o crescimento de xenoenxertos de câncer de mama humano em camundongos nude(Couillard, Labrie e cols., 1998) . Portanto, contrário aos estrogênios e progestinas que exercem efeitos estimulantes, espera-se que DHEA iniba tanto o desenvolvimento quanto o crescimento de câncer de mama em mulheres.

Papel de androgênios na fisiologia do osso

[207] Em osteoporose estabelecida, foi relatado que esteróides anabólicos ajudam a prevenir a perda óssea (Hennernan e Wallach 1957) . A terapia com androgênio, como observado com decanoato de nandrolona, aumenta a densidade vertebral do osso mineral em mulheres na pós-menopausa (Need, Horowitz e cols., 1989) . Embora os androgênios estejam ganhando suporte crescente devido a suas ações únicas em mulheres na pós-menopausa, os efeitos virilizantes são observados com o uso de testosterona (Burger, Hailes e cols., 1984; Studd, Collins e cols., 1977).

Outros papéis de androgênios em mulheres

[208] É cada vez mais e mais reconhecido que os androgênios produzidos a partir de DHEA possuem múltiplos efeitos benéficos em mulheres na pós-menopausa. Os benefícios detalhados de androgênios adicionados a ERT ou HRT foram descritos sobre o bem estar geral, energia, humor, e qualidade geral de vida (Sherwin and Gelfand 1985; Sherwin 1988). As melhorias nos sintomas principais psicológicos e psicossomáticos, ou seja, irritabilidade, nervosismo, memória e insônia foram observados após a adição de androgênios à terapia de reposição de estrogênio (ERT) (Notelovitz, Watts e cols., 1991).

[209] A perda da libido e/ou da satisfação sexual é comum na pós-menopausa inicial. A adição de androgênios à terapia de reposição hormonal (HRT) sabidamente possui efeitos benéficos nesses problemas (Leiblum, Bachmann e cols., 1983; Sherwin and Gelfand 1987; Sherwin 1988). Além disso, foi constatada uma correlação positiva, em mulheres na pós-menopausa entre o comportamento sexual e os níveis circulantes de androgênios. Em adição, foi constatado que os compostos androgênicos são benéficos para o tratamento da mastalgia freqüentemente causada por HRT (Pye, Mansel e cols., 1985). De fato, a terapia de reposição de estrogênio pode resultar em dor severa nas mamas que pode levar à interrupção da terapia. A adição de androgênios se mostrou eficaz no alívio dos fogachos em mulheres que tiveram resultados insatisfatórios com estrogênio isoladamente (Sherwin e Gelfand 1984).

Outros benefícios de DHEA

[210] Os 70 a 95% de redução na formação de DHEA e DHEA-S pelas adrenais durante o envelhecimento resultam em uma redução dramática na formação de androgênios e estrogênios em tecidos periféricos-alvo, o que poderia estar envolvido na patogênese de doenças relacionadas à idade como, por exemplo, resistência à insulina (Coleman, Leiter e cols., 1982; Schriock, Buffington e cols., 1988) e obesidade (Nestler, Barlascini e cols., 1988; MacEwen and Kurzman 1991; Tchernof, Despres e cols., 1995). Níveis circulantes baixos de DHEA-S e DHEA, na verdade, foram encontrados em pacientes com câncer de mama (Zumoff, Levin e cols., 1981) e verificou-se que DHEA exerce uma atividade antioncogênica em uma série de modelos animais (Schwartz, Pashko e cols., 1986; Gordon, Shantz e cols., 1987; Li, Yan e cols., 1993). DHEA também demonstrou ter efeitos imunomoduladores in vitro(Suzuki, Suzuki e cols., 1991) e in vivo em doenças fúngicas e virais (Rasmussen, Arrowood e cols., 1992), incluindo HIV (Henderson, Yang e cols., 1992) . Por outro lado, um efeito estimulador de DHEA no sistema imune foi descrito em mulheres na pós-menopausa (Casson, Andersen e cols., 1993).

Dados prévios obtidos com DHEA em mulheres

[211] Como acima mencionado, osteoporose é um problema enorme entre mulheres em envelhecimento, causando morbidade e mortalidade, principalmente através de taxas aumentadas de fratura (Johnston Jr e Epstein 1981) . 0 uso da terapia de reposição de estrogênio exige a adição de progestinas para se contrapor à proliferação endometrial induzida por estrogênios, enquanto tanto estrogênios quanto progestinas poderiam aumentar o risco de câncer de mama (Bardon, Vignon e cols., 1985; Colditz, Hankinson e cols., 1995). A fim de evitar as limitações da terapia hormonal de padrão com estrogênio (ERT) ou da terapia de reposição hormonal (HRT), estudamos o efeito da administração de DHEA a mulheres com 6 0 a 7 0 anos de idade por 12 meses sobre a densidade mineral óssea, parâmetros de formação e turnover ósseos, lipídeos, glicose e insulina séricos, massa de tecido adiposo, massa muscular, energia, bem-estar, bem como sobre a histologia vaginal e endometrial (Diamond, Cusan e cols., 1996; Labrie, Diamond e cols., 1997). DHEA foi administrada por via percutânea para evitar a primeira passagem do precursor de esteróide através do fígado.

[212] Dessa forma, avaliamos o efeito da terapia de reposição crônica com um creme a 10% de DHEA aplicado uma vez ao dia por 12 meses em mulheres com 60 a 70 anos de idade (N = 15) . Medidas antropométricas não evidenciaram alterações no peso corporal, mas uma diminuição de 9,8% na espessura da prega de pele subcutânea em 12 meses (p < 0,05) (Diamond, Cusan e cols., 1996). A densidade da massa óssea foi aumentada em 2,3% no quadril, 3,75% no triângulo de Ward do quadril e 2,2% no nível da coluna lombar (todos p < 0,05) (Labrie, Diamond e cols., 1997). Essas alterações na densidade mineral óssea eram acompanhadas por diminuições significativas em 12 meses de 38% e 22% na hidroxiprolina urinária e na fosfatase alcalina óssea plasmática, respectivamente (todos p < 0,05) . Um aumento de 135% em relação ao controle (p < 0,05) na osteocalcina plasmática foi observado concomitantemente.

[213] Medidas de áreas de gordura e músculo da coxa média por tomografia computadorizada demonstraram uma diminuição de 3,8% (p < 0,05) da gordura femoral e um aumento de 3,5% (p < 0,05) na área muscular femoral em 12 meses (Diamond, Cusan e cols., 1996) . Não houve alteração significativa nas medidas da gordura abdominal. Essas alterações nas áreas de superfície de gordura e muscular do corpo foram associadas a uma diminuição de 12% (p < 0,05) dos níveis de glicose plasmática de jejum e uma diminuição de 17% (p < 0,05) nos níveis plasmáticos de insulina de jejum. 0 tratamento com DHEA não teve nenhum efeito indesejável sobre o perfil lipídico ou de lipoproteína. Na verdade, houve uma tendência global para uma diminuição de 3% a 10% no colesterol total e suas frações de lipoproteína. Os triglicerídeos plasmáticos não foram afetados.

[214] O índice de secreção sebácea estava 79% aumentado após 12 meses de terapia com DHEA com um retorno aos valores pré-tratamento 3 meses após término do tratamento. A administração de DHEA estimulou a maturação do epitélio vaginal em 8 de 10 mulheres que tinham um valor de maturação de zero no início da terapia, enquanto uma estimulação também foi observada nas três mulheres que tinham uma maturação vaginal intermediária antes da terapia. Principalmente, o efeito estimulador estrogênico observado na vagina não foi encontrado no endométrio que permaneceu completamente atrófico em todas as mulheres após 12 meses de tratamento com DHEA (Labrie, Diamond e cols., 1997).

[215] Os presentes dados indicam claramente os efeitos benéficos da terapia com DHEA em mulheres na pós-menopausa por meio de sua transformação em androgênios e/ou estrogênios em tecidos intrácrinos-alvo específicos, sem efeitos colaterais significativos. A ausência de estimulação do endométrio por DHEA elimina a necessidade de terapia de reposição com progestina, evitando, dessa forma, o medo de câncer de mama induzido por progestina. 0 efeito estimulador de DHEA observado sobre a densidade mineral óssea e o aumento da osteocalcina sérica, um marcador de formação óssea, são de interesse particular para a prevenção e tratamento de osteoporose, e indicam uma atividade única de DHEA sobre a fisiologia óssea, especificamente sobre fisiologia óssea, ou seja, a formação óssea, enquanto ERT e HRT só podem reduzir a taxa de perda óssea.

Benefícios da combinação de um SERM e DHEA em mulheres tratadas com um agonista ou antagonista de LHRH

[216] Nós mostramos que DHEA tem efeitos benéficos sobre oosso nas fêmeas de rato (Luo e cols., Endocrinology 138: 4.435-4.444, 1997), e em mulheres na pós-menopausa (Labrie e cols., J. Clin. Endocrinol. Metab. 82: 3.498- 3.505, 1997) . Portanto, em fêmeas de rato intactas, tratamento com DHEA aumenta a densidade mineral óssea (BMD) do esqueleto total, medula espinhal lombar e fêmur (Luo e cols., Endocrinology138: 4435-4444, 1997).

[217] Além disso, como ilustrado na Figura 5 a Figura 8, nós constatamos que a combinação de um precursor de esteróide sexual (DHEA) e um SERM (EM-800) manteve não apenas o efeito estimulante de DHEA sobre a formação de osso, mas também potenciou o efeito inibidor do SERM (EM- 800) isoladamente em turnovere reabsorção do osso como demonstrado pelas diminuições adicionais na hidroxiprolina urinária e excreção de cálcio quando ambos os both compostos foram combinados (Luo, Sourla e cols., 1997).

[218] Resumidamente, os dados acima descritos demonstram claramente os efeitos benéficos da combinação de um SERM (EM-800) e um precursor de esteróide sexual (DHEA) sobre o desenvolvimento de carcinoma mamário induzido por DMBA bem como os efeitos protetores de tal a combinação sobre a massa óssea e lipídeos séricos. Tais dados sugerem claramente os efeitos benéficos adicionais de tal combinação para o tratamento e prevenção de osteoporose enquanto melhora o perfil lipídico e previne o câncer de mama e câncer do endométrio.

[219] É particularmente importante indicar que a combinação de DHEA e EM-800 exerceu efeitos benéficos inesperados sobre importantes parâmetros bioquímicos do metabolismo ósseo. Na verdade, DHEA isoladamente não afetou a proporção de hidroxiprolina/creatinina urinárias, um marcador de reabsorção óssea. Além disso, nenhum efeito de DHEA isoladamente pode ser detectado na excreção urinária diária de cálcio ou fósforo (Luo, Sourla e cols., 1997) . EM-800, por outro lado, diminuiu a proporção de hidroxiprolina/creatinina urinárias em 48%, enquanto, similarmente ao DHEA, nenhum efeito de EM-800 foi observado na excreção urinária de cálcio ou fósforo. EM-800, além disso, não teve nenhum efeito sobre a atividade de fosfatase alcalina sérica, um marcador de formação óssea, enquanto DHEA aumentou o valor do parâmetro em cerca de 75% (Luo, Sourla e cols., 1997) (Tabela 2).

[220] Um dos efeitos inesperados da combinação de DHEA e EM-800 está relacionado à proporção de hidroxiprolina/creatinina urinárias, um marcador de reabsorção óssea, que era reduzido em 69% quando tanto DHEA quanto EM-800 eram combinados, esse valor sendo estatisticamente diferente (p < 0,01) dos 48% de inibição obtidos por EM-800 isoladamente, enquanto DHEA isoladamente não mostrou nenhum efeito. Dessa forma, a adição de DHEA ao EM-800 aumenta em 50% o efeito inibidor de EM-800 sobre a reabsorção óssea. Mais importante, outro efeito inesperado da adição de DHEA ao EM-800 foi a diminuição de aproximadamente 84% no cálcio urinário (de 23,17 + 1,55 a 3,71 ± 0,75 pmol/24 h/100 g (p < 0,01)) e a diminuição de 55% no fósforo urinário (de 132,72 ± 6,08 para 59,06-14,76 pmol/24 h/100 g (p < 0,01)), respectivamente (Luo, Sourla e cols., 1997) (Tabela 2).

[221] Os presentes resultados obtidos no rato demonstram claramente que DHEA pode fornecer os efeitos benéficos que são ausentes com o uso de um modulador de receptor de estrogênio seletivo (SERM) isoladamente como EM-800, Raloxifeno etc. Embora um SERM tenha efeitos limitados à inibição da reabsorção óssea, acredita-se que a adição de DHEA estimule a formação óssea (um efeito não alcançado com um SERM, estrogênio, bisfosfonato ou calcitonina) e também reduz a reabsorção óssea acima do efeito atingido com with EM-652 isoladamente.

[222] Significativamente, a combinação de EM-800 e DHEA em ratos ooforectomizados tratados por 12 meses teve efeitos benéficos sobre a morfometria óssea. 0 volume ósseo trabecular é particularmente importante para a resistência óssea e para evitar fraturas ósseas. Dessa forma, no estudo mencionado acima, o volume ósseo trabecular da tíbia aumentou de 4,1 + 0,7% em ratos ooforectomizados para 11,9 ± 0,6% (p < 0,01) com DHEA isoladamente, enquanto a adição de EM-800 ao DHEA aumentou ainda mais o volume ósseo trabecular para 14,7 + 1,4%, um valor similar àquele encontrado em controles intactos (Fig. 6).

[223] A partir de um valor de 0,57 + 0,08 por mm em ratos ooforectomizados, o tratamento com DHEA resultou em um aumento de 137% no número de ossos trabeculares, comparados com controles ooforectomizados. 0 efeito estimulador de DHEA, dessa forma, alcançou 1,27 + 0,1 por mm, enquanto o tratamento simultâneo com EM-800 e DHEA resultou em um aumento adicional de 28% no número de ossos trabeculares (p < 0,01), comparado com aquele obtido por DHEA isoladamente (Fig. 7) . Similarmente, a adição de EM- 800 ao tratamento com DHEA resultou em uma diminuição adicional de 15% (p < 0,05) na separação do osso trabecular, comparado com aquele obtido com DHEA isoladamente, levando, dessa forma, a valores nãos diferentes daqueles observados em controles intactos.

[224] Como complemento aos dados numéricos apresentados nas Figuras 6 e 7, a Fig. 8 ilustra o aumento no volume ósseo trabecular na metáfise proximal da tíbia induzido por DHEA em animais ooforectomizados tratados (C) comparados com controles ooforectomizados (B) , bem como a inibição parcial do efeito estimulador de DHEA após a adição de flutamida ao tratamento com DHEA (D) . Por outro lado, a administração de DHEA em combinação com EM-800 resultou em uma prevenção completa da osteopenia induzida por ooforectomia (E) , com o volume ósseo trabecular sendo comparável àquele observado em controles intactos (A).

[225] No estudo mencionado (Figuras 5-8), o efeito estimulante androgênico de DHEA foi observado em quase todos os parâmetros histomorfométricos ósseos estudados. DHEA assim resultou em um aumento significativo no volume do osso trabecular bem como no número trabecular, embora ela diminua a área intertrabecular.

[226] Para atingir escassez de estrogênio mais completa, um antiestrogênio puro é adicionado no presente estudo ao agonista ou antagonista de LHRH para neutralizar a "explosão" da secreção ovariana de estrogênio durante as primeiras 2 semanas de tratamento com o agonista de LHRH e também para neutralizar a ação de estrogênios derivados de androstenodiona ovariana bem como DHEA adrenal e ovariana (Labrie, Martel e cols., 2011) . De fato, a DHEA adrenal e ovariana são convertidos a estrogênios em tecido endometriótico mas não no tecido endometrial normal. Portanto, os estrogênios de origens adrenal e ovariana feitos a partir de DHEA podem continuar a estimular células endometrióticas depois da cessação da secreção ovariana de estrogênio pelo agonista ou antagonista de LHRH.

[227] Ê importante mencionar que embora o endométrio normal não possa sintetizar estrogênios a partir de DHEA por causa da ausência de aromatase, o tecido endometriótico possui a enzima capaz de transformar DHEA em estrogênios (Bulun, Lin e cols., 2005) . Tais dados indicam que o bloqueio da secreção ovariana de estrogênio por um agonista ou antagonista de LHRH é apenas um tratamento parcial para a endometriose uma vez quer os estrogênios são feitos localmente em tecido endometriótico a partir de DHEA, assim estimulando a proliferação de células endometrióticas enquanto o endométrio normal não é estimulado por DHEA devido à ausência de formação local de estrogênios. A potência particularmente alta de um SERM que possui atividade antagonista de estrogênio pura e potente no tecido endometrial bloqueará qualquer atividade de qualquer estrogênio feito a partir de DHEA no tecido endometriótico. Tal bloqueio completo de estrogênio deve levar a uma apoptose mais completa e mais rápida e assim diminui a incidência de endometriose recorrente depois da cessação da terapia.

[228] Por outro lado, enquanto EM-652HCI reduz a perda óssea e DHEA estimula a formação óssea, com isso protegendo mais eficientemente a função óssea, a adição de DHEA deve preverir os fogachos, uma grande limitação do tratamento com agonista de LHRH isoladamente. A comparação dos efeitos esperados da combinação proposta versus terapia add-backno HRT é ilustrada nas Figuras 9, 10 e 11.

[229] A fim de facilitar o aspecto da terapia combinada da invenção, para qualquer indicação aqui discutida, a invenção fornece kits que incluem um ou mais SERMs e precursor de esteróides sexuais em separado ou em um recipiente e em outro recipiente um inibidor da secreção hormonal ovariana. 0 kit pode incluir materiais apropriados à administração oral, por exemplo, comprimidos, cápsulas, xaropes e semelhantes, e para administração transdérmica, por exemplo, pomadas, loções, géis, cremes, emplastros de liberação sustentada, e semelhantes para administração intravaginal, por exemplo, supositórios, cremes, pomadas, comprimidos, géis e outros e para injeção subcutânea e injeção intramuscular. Acolbifeno e DHEA podem ser administrados por via intravaginal.

[230] Os requerentes acreditam que a administração de SERM e inibidor da secreção hormonal ovariana com ou sem a administração de precursor de esteróide sexual tem utilidade no tratamento e/ou prevenção do desenvolvimento de endometriose e de outras doenças relacionadas ao estrogênio.

[231] Um modulador de receptor de estrogênio seletivo da invenção tem uma fórmula molecular com as seguintes características: a) dois anéis aromáticos espaçados por 1 a 2 átomos de carbono, ambos anéis aromáticos sendo não substituídos ou substituídos por um grupo hidroxil ou um grupo convertido in vivo a hidroxil or halogênio ou Ci-C6 alquil ou Ci-C6alquilsulfona; e b) uma cadeia lateral que possui um anel aromático e uma amina terciária, função de ácido ou álcool carboxílico ou sal desses.

[232] Uma cadeia lateral preferida do modulador de receptor de estrogênio seletivo da invenção é selecionado do grupo que consiste em:

[233] Um modulador de receptor de estrogênio seletivo preferido da invenção é selecionado do grupo que consiste em um derivado de benzotiofeno, derivado de trifeniletileno, derivado de indol, derivado de benzopirano, derivado de croman, derivado de naftaleno, derivado de dihidronaftaleno, derivado de tetrahidronaftaleno, derivado de benzotiopirano, derivado de tiocroman, derivado de quinolina, derivado de dihidroquinolina, e derivado de tetrahidroquinolina.

[234] Um modulador de receptor de estrogênio seletivo preferido da invenção tem uma das seguintes fórmulas selecionadas do grupo que consiste em:

em que Ri e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxil, uma porção convertida in vivo em hidroxil, halogênio, Ci-C6 alquil e Ci-C6alquilsulfona; em que R3 e R4 são independentemente selecionados do grupo que consiste em Ci-C4 alquil, ou uma porção que em combinação com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados, é selecionado do grupo que consiste em pirrolidinil, 2,2-dimetilpirrolidinil, 2-metilpirrolidinil, piperidino, hexametilenoimino e morfolino; em que A é selecionado do grupo que consiste em -CO-, -CHOH-, -0-, e -CH2-; em que B é selecionado do grupo que consiste em fenileno, piridilideno, e -cicloC4H2N2-;

em que D é -OCH2CH2N (R3) R4, -OCH2CH2OH, -OCH2CH2OCH2CH2OH ou -CH=CH-COOH (R3 e R4 sendo independentemente selecionados do grupo que consiste em Ci_C4 alquil, ou uma porção que em combinação com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados, é selecionado do grupo que consiste em pirrolidinil, 2,2-dimetilpirrolidinil, 2-metilpirrolidinil, piperidino, hexametilenoimino e morfolino); em que E e K são independentemente hidrogênio, hidroxil, uma porção convertida in vivo em hidroxil ou halogênio; em que J é hidrogênio ou halogênio; em que M é hidrogênio ou Ci-C6 alquil;

em que D é selecionado do grupo que consiste em - OCH2CH2N(R7)R8, - CH=CH-CON(R7) RS, -CC- (CH2) n-N (R7) R8 (R7 e R8 sendo independentemente selecionados do grupo que consiste em Ci-C4 alquil, ou uma porção que em combinação com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados, é selecionado do grupo que consiste em pirrolidinil, 2,2- dimetilpirrolidinil, 2-metilpirrolidinil, piperidino, hexametilenoimino e morfolino); em que X é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e Ci-C6 alquil; em que R3, R2 R3, R4, Rs, θ Re são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxil, Ci-C6 alquil, halogênio, e uma porção convertida in vivo em hidroxil;

em que R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxil, halogênio, C1-C6 alquil e C1-C6 alquilsulfona, e uma porção convertida in vivo em hidroxil; em que R5 e R6 são independentemente hidrogênio ou Ci- C6 alquil; em que D é -OCH2CH2N (R3) R4 (R3 e R4 sendo independentemente selecionados do grupo que consiste em Ci- C4 alquil, ou uma porção que em combinação com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados, é selecionado do grupo que consiste em pirrolidinil, 2,2-dimetilpirrolidinil, 2- metilpirrolidinil, piperidino, hexametilenoimino e morfolino); em que X é selecionado do grupo que consiste em -O-, - CH2-, -S-, -CH=, -N=, e -NR7- (R7 sendo hidrogênio ou Ci-C6 alquil); em que Y é selecionado do grupo que consiste em -O- e -CH2- OU ligação direta;

em que R1 e R2 são independentemente hidrogênio, hidroxil, halogênio, Ci-C6 alquil, e uma porção que é convertida em hidroxil in vivo; em que Z é selecionado do grupo que consiste em -0-, - CH2-, -S-, e —NR7 — (R7 sendo hidrogênio ou Ci-C6 alquil); em que o R100 θ uma porção bivalente que distancia L do anel B por 4-10 átomos intervenientes; em que L é uma porção polar bivalente ou trivalente selecionada do grupo de -S0-, -CON<, -N<, e -SON<; em que Gi é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, um C2 a C5 hidrocarboneto, uma porção bivalente que em combinação com G2 e L é um anel heterocíclico de 5 a 7 membros, e halo ou derivados insaturados do anterior; em que G2 é ausente ou selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, um Ci a C5 hidrocarboneto, uma porção bivalente que em combinação com Gi e L é um anel heterocíclico de 5 a 7 membros, e halo ou derivados insaturados do anterior; em que G3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, metil, etil e trifluormetil;

 ou um sal farmaceuticamente aceitável desses; em que D é -OCH2CH2N (R3) R4 (R3 e R4 sendo independentemente selecionados do grupo que consiste em C4- C4 alquil, ou uma porção que em combinação com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados, é selecionada do grupo que consiste em pirrolidinil, 2,2-dimetilpirrolidinil, 2- xnetilpirrolidinil, piperidino, hexametilenoimino e morfolino); em que R4 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, hidroxil, halogênio, C4- C6 alquil, e uma porção convertida in vivo em hidroxil; em que G3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, metil, etil e trifluormetil;

ou um sal farmaceuticamente aceitável desses; em que um derivado de benzopirano é oticamente ativo devido a uma maioria de seus estereoisômeros terem uma configuração absoluta S no carbono 2 e é desprovido substancialmente de enantiômero (2R); em que R3 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidroxil, halogênio, Ci-C6 alquil, e uma porção conversível in vivo a hidroxil; em que R3 é uma espécie selecionada do grupo que consiste em pirrolidinil saturado, insaturado ou substituído, piperidino saturado, insaturado ou substituído, piperidinil saturado, insaturado ou substituído, morfolino saturado, insaturado ou substituído, porção cíclica que contém nitrogênio, porção policíclica que contém nitrogênio, e NRaRb (Ra e Rb sendo independentemente hidrogênio, Ci-C6 alquil linear ou ramificado, C2-C6 alquenil linear ou ramificado, e C2-C6 alquinil linear ou ramificado); em que G3 é selecionado do grupo que consiste em metil e trifluormetil; em que um sal opcional deum ácido selecionado do grupo que consiste em ácido acético, ácido adípico, ácido benzenossulfônico, ácido benzóico, ácido canforsulfônico, ácido cítrico, ácido fumárico, ácido hidroiódico, ácido hidrobrômico, ácido clorídrico, ácido de hidroclorotiazida, ácido hidróxi-naftóico, ácido lático, ácido maléico, ácido metanossulfônico, ácido metilsulfúrico, ácido 1,5- naftalenodissulfônico, ácido nítrico, ácido palmítico, ácido piválico, ácido fosfórico, ácido propiônico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido tartárico, ácido tereftálico, ácido p-toluenossulfônico e ácido valérico.

[235] Um SERM preferido da invenção é EM-800 relatado em PCT/CA96/00097 (WO 96/26201). A estrutura molecular de EM-800 é:

[236] Outro SERM preferido da invenção é EM-652-HC1 relatado na patente US 6.710.059 BI:

[237] EM-652-HC1, (também, chamado EM-1538 ou acolbifeno) é o sal de cloridrato do antiestrogênio potente EM-652. Comparado a EM-800, EM-652-HC1 é um sal de síntese mais simples e fácil. Ele também é fácil de ser isolado, purificado, cristalizado e apresenta boa estabilidade de em estado sólido. A administração de EM-800 ou EM-652-HC1, resultou no mesmo composto ativo que possui a mesma atividade in vivo. Uma vez que ambos os precursores levam a níveis sangüíneos similares do composto ativo EM-652.

[238] Outro SERM preferido é bazedoxifeno (TSE 424; WAY-TSE 424; WAY 140424; 1-[[4 -[2 -(hexahidro-lH-azepin-1- il)etóxi]fenil]metil]-2-(4-hidroxifenil)-3-metil-lH-indol- 5-ol, acetato) desenvolvido por Wyeth Ayers (USA) revelado em JP10036347 (American Home Products Corporation) e aprovado nos EUA para a prevenção de osteoporose pós- menopausa e derivados não esteroidais de estrogênio descritos em WO 97/32837. Outros SERMs preferidos da invenção incluem tamoxifeno ( (Z)-2-[4-(1,2-difenil-l- butenil)fenóxi]-N,N-dimetiletanamina) (disponível por Zeneca, GB), toremifeno ((Z)-2-[4-(4-cloro-l,2-difenil-l- butenil)fenóxi]-N,N-dimetiletanamina) disponível por Orion,

[239] Finlândia, sob o nome comercial Fareston ou Schering-Plough), droloxifeno ((E)-3-[1-[4-[2- (dimetilamino)etóxi] fenil]-2-fenil-l-butenil]fenol) e, de Eli Lilly e Co., EUA: raloxifeno (cloridrato de [2-(4- hidroxifenil)- 6-hidroxibenzo[b]tien-3-il] [4 - [2- (1- piperidinil)etóxi]fenil] -metanona), LY 335124, LY 326315, LY 335563 (cloridrato de 6-hidróxi-3-[4-[2-(1- piperidinil)etóxi]fenoxil]-2-(4- hidroxifenil)benzo[b]tiofeno) e arzoxifeno (LY 353381, cloridrato de 6-hidróxi-3-[4-[2-(1-piperidinil)etóxi] fenoxil]-2-(4-metoxifenil)benzo[b]tiofeno). Outros SERMs preferidos são Lasofoxifeno (CP-336,156) (sal de cis-lR- [4'-pirrolidinoetoxifenil]-2S-fenil- 6-hidróxi-1,2,3,4- tetrahidronaftaleno D-(-)-tartrato) (Pfizer Inc., USA descrito em US 5.889.042), idoxifeno ( (E)-1-[2-[4-[1-(4- iodofenil)-2-fenil-l-butenil]fenóxi]etil]pirrolidina) (Smith Kline Beecham, EUA), levormeloxifeno (3,4-trans-2,2- dimetil-3-fenil-4-[4-(2-(2-(pirrolidin-1-il)etóxi)fenil]-7- metoxicromano) (Novo Nordisk, A/S, Dinamarca) que é revelado em Shalmi e cols. WO 97/25034, WO 97/25035, WO 97/25037, WO 97/25038; e Korsgaard e cols. WO 97/25036), GW5638 (descrito por Willson e cols., 1997) e derivados de indol (revelados por Miller e cols.,EP 0802183A1). Também são incluídos iproxifeno (TAT 59; diidrogenofosfato de (E)- 4-[1-[4-[2-(dimetilamino)etóxi]fenil]-2- [4-(1- metiletil)fenil]-1-buteniilfenol) de Taiho (Japão), ospemifeno (FC 1271; ((Z)-2 -[4 -(4-cloro-1,2-difenil-1- butenil)fenoxil] etanol) disponível por Orion-Farmos Pharmaceutica, Finlândia, SERM 3471, HMR 3339 e HMR 3656 de Sanofi-Aventis (França), SH 646 de Schering AG, Alemanha, pipendoxifeno (ERA 923) desenvolvido por Wyeth-Ayers, derivados não esteroidais de estrogênio descritos em WO 97/3283, fispemifeno, desenvolvido por QuatRx (EUA) e CC 8490 desenvolvido por Celgene nos EUA.

[240] Qualquer SERM usado como necessário quanto à eficácia, como recomendado pelo fabricante, pode ser usado. Dosagens apropriadas são conhecidas na técnica. Qualquer outro antiestrogênio não esteroidal comercialmente disponível pode ser usado de acordo com a invenção. Qualquer composto que possua atividade similar aos SERMs (exemplo: raloxifeno) pode ser usado.

[241] SERMs administrados de acordo com a invenção são preferivelmente administrados em uma faixa de dosagem entre 0,01 e 10 mg/kg de peso corporal por dia (preferivelmente 0,05 a 1,0 mg/kg), com 60 mg por dia, especialmente 20 mg por dia, em uma ou duas doses igualmente divididas sendo preferidas para uma pessoa de peso corporal médio, quando administrados oralmente, ou em uma faixa de dosagem entre 0,003 e 3,0 mg/kg de peso corporal por dia (preferivelmente 0,015 a 0,3 mg/ml), com 20 mg por dia, especialmente 10 mg por dia, em duas doses igualmente divididas sendo preferidas para uma pessoa de peso corporal médio, quando administrados por via parental (ou seja, administração intramuscular, subcutânea ou percutânea ou intravaginal). De preferência, os SERMs são administrados juntos com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável, como descrito abaixo.

[242] Com relação a todas as dosagens aqui recomendadas, o médico assistente deve monitorar a resposta individual do paciente e ajustar a dosagem de acordo.

[243] Precursores de esteróides sexuais preferidos são desidroepiandrosterona (DHEA) (disponível por Proquina, México), seus pró-fármacos (disponível por Steraloids, Wilton, New Hampshire, USA), 5-androsten-3β,17β-diol e seus pró-fármacos androst-5-eno-3β,17 β -diol 3-acetato e androst-5-eno-3β,17β-diol dihemissuccinato (disponível por Steraloids, Wilton, New Hampshire USA). androst-5-eno-3β,17β-diol 3-acetato

androst-5-eno-3 β,17β-diol dihemissuccinato

[244] Os ingredientes ativos da invenção (SERM ou precursor ou inibidor de secreção hormonal ovariana) podem ser formulados e administrados de várias maneiras.

[245] Precursores de esteróides sexuais administrados de acordo com a invenção são administrados de preferência em uma faixa de dosagem (1) entre 0,5 a 100 mg por dia, (de preferência 3 a 50 mg por dia) , quando administrados por via intravaginal; (2) em uma faixa de dosagem entre 15 a 200 mg por dia (de preferência 30 mg a 100 mg por dia) , quando administrados na pele; (3) em uma faixa de dosagem entre 10 a 200 mg por dia (de preferência 25 mg a 100 mg por dia), por exemplo, 75 mg por dia, quando administrados por via oral; ou (4) em uma faixa de dosagem entre 1,0 a 25 mg por dia (de preferência 3,25 a 20 mg por dia), quando administrados por via parental (ou seja intramuscular, ou subcutânea).

[246] O ingrediente ativo para administração transdérmica ou transmucosa é preferivelmente presente de 0,5% a 10% por peso em relação ao peso total da composição farmacêutica mais preferivelmente entre 0,1 a 10%. Alternativamente, o ingrediente ativo pode ser colocado em um emplastro transdérmico que possui estruturas conhecidas na técnica, por exemplo, estruturas como aquelas apresentadas na Patente E.P. No.0279982.

[247] Quando formulado como uma pomada, loção, gel, creme, ou semelhantes, o composto ativo é misturado com um veículo adequado que seja compatível com a pele ou mucosa humana e que aumente a penetração transdérmica ou transmucosa do composto através da pele ou mucosa. Veículos adequados são conhecidos na técnica e incluem, sem limitação, base Klucel HF e Glaxal. Alguns são disponíveis comercialmente, por exemplo, base Glaxal disponível por Glaxal Canada Limited Company. Outros veículos adequados podem ser encontrados em Koller e Buri, S.T.P. Pharma3(2), 115-124, 1987. 0 veículo é preferivelmente aquele no qual os ingredientes ativos são solúveis em temperatura ambiente na concentração de ingrediente ativo que é usada. 0 veículo deve ter viscosidade suficiente para manter o inibidor em uma área localizada da pele ou mucosa à qual a composição foi aplicada, sem correr ou evaporar por um período de tempo suficiente para permitir penetração substancial do precursor através da área localizada da pele ou mucosa e na corrente sangüínea onde causará um efeito clínico desejado. 0 veículo é tipicamente uma mistura de vários componentes, por exemplo, solventes farmaceuticamente aceitáveis e um agente espessante. Uma mistura de solventes orgânicos e inorgânicos pode ajudar a solubilidade hidrofílica e lipofílica, por exemplo, água e um álcool como, por exemplo, etanol.

[248] Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um precursor de esteróide sexual selecionado do grupo que consiste em desidroepiandrosterona, sulfato de desidroepiandrosterona, androst-5-eno-38, 17β-diol, e 4-androsteno-3,17-diona e que também compreende um excipiente, diluente ou carreador farmaceuticamente aceitável selecionado do grupo que consiste em triglicerídeos de ácidos graxos saturados C12- C18 com porções variadas dos glicerídeos parciais correspondentes (gordura rígida, Witepsol), manteiga, triglicerídeos mistos de ácidos oleico, palmítico, e esteárico (manteiga de cacau), óleo de algodão parcialmente hidrogenado (Cotomar), álcoois e ésteres graxos hidrogenados (Dehydag Base I, Base II ou Base III, também podem conter glicerídeos de ácidos graxos saturados C12- C16), triglicerídeos de óleos de palma, e coco com gliceril monoestearato auto-emulsificante e polioxil estearato (Fattibase), Hexaride Base 95, frações de fusão mais alta de óleo de coco e palma (Hidrokote), óleos vegeais hidrogenados rearranjados (S-70-XX95 e S-070-XXA), misturas eutéticas de mono-, di-, triglicerídeos derivados de óleos vegetais naturais (Suppocire), Tegester Triglicerídeos, Tween 61, triglicerídeos derivados de óleo de coco (Wecobee), óleo de teobroma, glicerídeos semi-sintéticos (Japocire, Ovucire), mistura de tri- di- e monoglicerídeos de ácidos graxos saturados (Massa Estarinum) e uma combinação dos anteriores (veja, Allen e cols., 2008). Qualquer veículo que inclua líquido em que DHEA e outros precursores sejam solúveis são incluídos nessa invenção.

[249] É preferível que o precursor de esteróide sexual seja formulado como um gel alcoólico que contém 2,0 a 10% do triglicerídeo caprílico-cáprico (Neobee M-5); 10 a 20% de hexileno glicol; 2,0 a 10% de dietilenoglicol monometil éter (Transutol); 2,0 a 10% de Ciclometicona (Dow Corning 345); 1,0 a 2% de álcool benzílico e 1,0 a 5,0% de hidroxipropilcelulose (Klucel HF).

[250] O veículo também pode incluir vários aditivos comumente usados em pomadas e loções e bem conhecidos nas técnicas cosméticas e médicas. Por exemplo, fragrâncias, antioxidantes, perfumes, agentes gelificantes, agentes espessantes como, por exemplo, carboximetilcelulose, tensoativos, estabilizantes, emolientes, agentes corantes e outros agentes similares, podem estar presentes. Quando usado para tratar doenças sistêmicas, o local de aplicação na pele deve ser alterado para evitar concentração local em excesso do ingrediente ativo e possível superestimulação da pele e de glândulas sebáceas por metabolitos androgênicos do precursor de esteróide sexual.

[251] Em uma composição farmacêutica para administração oral, DHEA ou outro precursor é preferivelmente presente em uma concentração entre 5 e 98% por peso em relação ao peso total da composição more de preferência entre 50 e 98 por cento, especialmente entre 80 e 98 por cento. Um precursor único como DHEA pode ser o único ingrediente ativo, ou alternativamente, uma pluralidade de precursores e/ou seus análogos podem ser usados (por exemplo, uma combinação de DHEA, DHEA-S, 5-diol, ou uma combinação de dois ou mais compostos convertidos in vivo a DHEA, DHEA-S ou 5-diol ou uma combinação de DHEA ou 5-diol e um ou mais análogos desses que são convertidos a DHEA ou 5-diol in vivo etc. o nível sanguíneo de DHEA é o critério final de dosagem adequada que leva em consideração variação individual na absorção e metabolismo.

[252] De preferência, o profissional médico, especialmente no início do tratamento, irá monitorar uma resposta individual geral do paciente e níveis séricos de DHEA (em comparação às concentrações séricas preferidas discutidas acima), e monitorar a resposta geral do paciente ao tratamento, ajustando as dosagens quando necessário quando um metabolismo ou reação dos pacientes ao tratamento é atípica.

[253] O tratamento de acordo com a invenção é adequado para continuação indefinida. Espera-se que o tratamento com DHEA e/ou 5-diol simplesmente manterá os níveis de DHEA em uma faixa similar àquela que ocorre naturalmente em mulheres antes da menopausa (concentração sérica entre 4 e 10 microgramas por litro).

[254] O SERM ou composto antiestrogênico e o precursor de esteróide sexual também podem ser administrados pela via oral, e podem ser formulados com excipientes farmacêuticos convencionais, por exemplo, lactose seca por spray, celulose microcristalina e estearato de magnésio em comprimidos ou cápsulas para administração oral.

[255] As substâncias ativas (composto de SERM ou o precursor de esteróide sexual) podem ser trabalhadas em comprimidos ou núcleos de drágeas ao serem misturadas com substâncias transportadoras pulverulentas sólidas, por exemplo, citrato de sódio, carbonato de cálcio ou fosfato dicálcico, e aglutinantes como, por exemplo, polivinil pirrolidona, gelatina ou derivados de celulose, possivelmente também se adicionando lubrificantes como, por exemplo, estearato de magnésio, lauril sulfato de sódio, "Carbowax"ou polietileno glicol. Evidentemente, substâncias que melhoram o sabor podem ser adicionadas, no caso de formas de administração oral.

[256] Como formas adicionais, podem-se usar cápsulas plug, por exemplo, de gelatina rígida, bem como cápsulas fechadas de gelatina macia que compreendem um amaciante ou plasticizante, por exemplo, glicerina. As cápsulas plug contêm a substância ativa preferivelmente na forma de granulado, por exemplo, em mistura com enchimentos, por exemplo, lactose, sacarose, manitol, amidos como, por exemplo, amido de batata ou amilopectina, derivados de celulose ou ácidos silícicos altamente dispersos. Em cápsulas de gelatina macia, a substância ativa é preferivelmente dissolvida ou suspensa em líquidos adequados, por exemplo, óleos vegetais ou polietileno glicóis líquidos.

[257] A loção, pomada, gel ou creme deve ser cuidadosamente esfregada na pele de modo que não seja claramente visível nenhum excesso, e a pele não deve ser lavada naquela região até que a maior parte da penetração transdérmica tenha ocorrido, preferivelmente pelo menos 4 horas e, mais preferivelmente, pelo menos 6 horas.

[258] Um emplastro transdérmico pode ser usado para liberar o precursor ou agonista ou antagonista de LHRH acordo com técnicas conhecidas. Ele é tipicamente aplicado por um período de tempo bem maior, por exemplo, 1 a 4 dias, mas tipicamente o ingrediente ativo entra em contato com uma área de superfície menor, permitindo uma liberação lenta e constante do ingrediente ativo.

[259] Diversos sistemas de liberação transdérmica de fármacos que foram desenvolvidos e estão em uso são adequados para liberação do ingrediente ativo (SERM, precursor de esteróide sexual, agonista ou antagonista de LHRH) da presente invenção. A taxa de liberação é tipicamente controlada por uma matriz de difusão, ou por passagem do ingrediente ativo através de uma membrana de controle.

[260] Aspectos mecânicos de dispositivos transdérmicos são bem conhecidos na técnica, e são explicados, por exemplo, nas Patentes U.S. 5.162.037, 5.154.922, 5.135.480, 4.666.441, 4.624.665, 3.742.951, 3.797.444, 4.568.343, 5.064.654, 5.071.644, 5.071.657, cujas revelações são aqui incorporadas por referência. Fundamentos adicionais são fornecidos pela Patente Européia 0279982 e pelo Pedido de Patente Britânica 2185187.

[261] O dispositivo pode ser qualquer um dos tipos gerais conhecidos na técnica, incluindo dispositivos de liberação transdérmica de matriz adesiva e do tipo reservatório. 0 dispositivo pode incluir matrizes que contêm fármaco que incorporam fibras que absorvem o ingrediente ativo e/ou veículo. Em um dispositivo do tipo reservatório, o reservatório pode ser definido por uma membrana de polímero impermeável ao veículo e ao ingrediente ativo.

[262] Em um dispositivo transdérmico, o próprio dispositivo mantém o ingrediente ativo em contato com a superfície localizada da pele desejada. Em um dispositivo desse tipo, a viscosidade do veículo para o ingrediente ativo é menos importante do que com um creme ou gel. Um sistema solvente para um dispositivo transdérmico pode incluir, por exemplo, ácido oléico, álcool lactato linear e dipropileno glicol, ou outros sistemas solventes conhecidos na técnica. 0 ingrediente ativo pode ser dissolvido ou suspenso no veículo.

[263] Para adesão à pele, um emplastro transdérmico pode ser montado em uma fita adesiva cirúrgica que possui um orifício perfurado no meio. 0 adesivo é preferivelmente coberto por um forro de liberação para protegê-lo antes do uso. 0 material típico adequado à liberação inclui polietileno e papel revestido com polietileno e, preferivelmente, revestido com silicone, para facilitar a remoção. Para aplicação do dispositivo, o forro de liberação é simplesmente puxado e o adesivo anexado à pele do paciente. Na Patente U.S. 5.135.480, cuja revelação é incorporada por referência, Bannon e cols. descrevem um dispositivo alternativo que possui um meio não adesivo para fixar o dispositivo à pele.

[264] O sistema de liberação percutâneo ou transmucoso da invenção também pode ser usado como um sistema de liberação novo e aperfeiçoado para a prevenção e/ou tratamento de endometriose ou outras doenças que respondem favoravelmente ao tratamento com androgênios e/ou estrogênios.

[265] O agonista ou antagonista de LHRH é administrado por via parenteral, ou seja, intramuscular, subcutânea ou intravenosa por injeção ou infusão por gotas nasais ou por supositório. 0 agonista ou antagonista de LHRH também pode ser microencapsulado ou anexado a um polímero biocompatível, biodegradável, por exemplo, poli(d,1- lactida-co-glicolida) e injetado por via subcutânea ou intramuscular por uma técnica chamada depósito subcutâneo ou intramuscular para fornecer liberação contínua, lenta do agonista ou antagonista de LHRH por um período de 3 0 dias ou maior. A via de administração mais preferida do agonista ou antagonista de LHRH é injeção de depósito subcutânea ou intramuscular.

[266] O agonista ou antagonista de LHRH pode ser administrado de cerca de 10 a 1.500 pg por dia e cerca de 250 (de preferência 50 gg a 500 pg por dia) para o agonista de LHRH e a cerca de 100 a 2.000 pg por dia para o antagonista de LHRH sendo preferido.

[267] O agonista ou antagonista de LHRH pode ser administrado por via subcutânea em uma dose diária de 500 pg pelos primeiros 30 dias e depois por via subcutânea em uma dose diária de 250 pg sem levar em consideração o peso corporal dos pacientes. Quando o agonista ou antagonista de LHRH é administrado, é usado uma vez a cada periodo de 3 0 dias é, com uma dose de 750 a 15.000 pg por periodo de 30 dias sendo preferida. Doses de liberação diária similares são usadas para formulações de liberação controlada de longa duração.

[268] Agonistas de LHRH preferidos são acetato de leuprolida disponível sob o nome comercial "Lupron" de Abbott Laboratories Ltd., "Viadur" de Bayer AG, "Eligard" de Sanofi-Aventis, e "Prostap SR" e "Prostap 3"de Takeda UK, acetato de goserelina disponível sob o nome comercial "Zoladex"e "Zoladex LA" de AstraZeneca, nafarelina disponível sob o nome comercial "Synarel" de Searle (agora parte de Pfizer), acetato de buserelina disponível sob o nome comercial "Suprefact" ou "Suprefact Depot" de Sanofi- Aventis e "CinnaFact" de CinnaGen, acetato de histrelina disponível sob o nome comercial "Vantas" e "Supprelin LA"de Endo Pharmaceuticals, acetato ou pamoato de triptorelina disponível sob o nome comercial "Decapeptil" de Ipsen, "Diphereline"e "Gonapeptil"de Ferring Pharmaceuticals, e "Trelstar"de Watson. Qualquer agonista ou antagonista de LHRH pode ser usado.

[269] Uma composição farmacêutica típica do agonista ou antagonista de LHRH inclui o agonista ou antagonista de LHRH ou um sal de ácido farmaceuticamente aceitável desses, álcool benzílico, um tampão de fosfato (pH 6,0-6,5) e água estéril.

[270] O agonista ou antagonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular ou subcutânea podem ser microencapsulados em um polímero biocompatível, biodegradável, por exemplo, poli (d,1-lactida-co-glicolida) por um processo de separação de fase ou formado em um pélete ed. As microesferas podem ser então suspensas em um veículo para fornecer uma preparação injetável ou o depósito pode ser injetado na forma de um pélete. Veja também, pedido de patente Européia EPA No. 58.481 publicada em 25 de agosto de 1982 para composições sólidas para injeção subdérmica ou implante de formulações líquidas para injeções intramusculares ou subcutâneas que contêm polímeros biocompatíveis, biodegradáveis como copolímero de lactida-glicolida e agonista de LHRH, por exemplo, D-Ser-t- BuO6, Azgly10-LHRH. Essas formulações permitem liberação controlada do peptide.

[271] Pelo termo "agonista de LHRH"entende-se análogos sintéticos do hormônio de liberação de hormônio luteinizante natural (LHRH), por exemplo, um decapeptídeo da estrutura: L-piroglutamil-L-histidil-L-triptofil-L- seril -L- tirosil -glicil -L-leucil -L-arginil -L-prolilglicil - NH2. Agonistas de LHRH adequados incluem nonapeptídeos e decapeptídeos representados pela formula: L-piroglutamil-L- histidil-L-triptofil-L-seril-L-tirosil-X-Y-arginil-L- prolil-Z em que X é D-triptofil, D-leucil, D-alanil, iminobenzil-D-histidil, 3 -(2-naftil)-D-alanil, O-terc- butil-D-seril, D-tirosil, D-lisil, D-fenilalanil, 1-benzil- D-histidil ou N-metil-D-alanil e Y é L-leucil, D-leucil, N“-metil-D-leucil, N“-metil-L-leucil ou D-alanil e em que Z é (Aza) glicil-NHRi ou NHR3 em que R3 é H, alquil inferior ou haloalquil inferior. Alquil inferior inclui grupos alquil de cadeia linear ou ramificada que possuem 1 a 6 átomos de carbono, por exemplo, metil, etil, propil, pentil ou hexil, isobutil, neopentil e outros. Haloalquil inferior inclui grupos alquil de cadeia linear ou ramificada de 1 a 6 átomos de carbono que possuem um substituinte de halogênio, por exemplo, -CF3, -CH2CF3, -CF2CH3. Halogênio significa F, Cl, Br, I com Cl sendo preferido.

[272] Em nonapeptídeos preferidos, Y é L-leucil, X é uma D-forma oticamente ativa de triptofano, serina (t-BuO), leucina, histidina (iminobenzil), e alanina.

[273] Decapeptídeos preferidos incluem [D-Trp6]-LHRH em que X=D-Trp, Y=L-leucil, Z=glicil-NH2, [D-Pheê]LHRH em que X=D-fenilalanil, Y=L-leucil e Z-glicil-NH2) ou [D- Nal (2)6] LH-RH que é [ (3-(2-naftil) -D-Ala6] LHRH em que X=3- (2-naftil)-D-alanil, Y=L-leucil e Z=glicil-NH2) .

[274] Outros agonistas de LHRH úteis no escopo dessa invenção são os análogos α-aza do LH-RH natural, especialmente, [D-Phe6, Azgly10] -LHRH, [D-Tir(Me)6, Azgly10] - LHRH, e [D-Ser-(t-BuO)6, Azgly10-LHRH, revelados por (Dutta, Purr e cols., 1978) e Pat. U.S. No. 4.100.274 as bem como aqueles revelados nas Pat. U.S. Nos. 4.024.248 e 4.118.483.

[275] Antagonistas de LHRH preferidos são Abarelix disponível sob o nome comercial "Plenaxis" de Speciality European Pharma, Teverelix desenvolvido por Ardana, acetato de cetrorelix disponível sob o nome comercial "Cetrotide" de Merck Serono, acetato de ganirelix disponível sob o nome comercial "Antagon" de Organon International, Iturelix sob o nome comercial "Antide" de Serono, Aciline desenvolvido por Merrion Pharmaceuticals, Degarelix sob o nome comercial "Firmagon" de Ferring Pharmaceuticals, e Ornirelix desenvolvido por Oakwood Laboratories.

[276] Outros antagonistas de LHRH são Azaline B (Salk Institute), Ozarelix (Spectrum Pharmaceuticals), LXT-101 ("Department of Pharmaceutical Chemistry, Beijing Institute of Pharmacology and Toxicology"), Elagolix (Neurocrine Biosciences), e TAK-013 e TAK-385 (Takeda).

[277] Antagonistas de LHRH adequados típicos incluem [N-Ac-D-p-Cl-Phe1,3, D-Phe3, D-Arg6, D-Ala10] LHRH revelados por (Erchegyi, Coy e cols., 1981) [N-Ac-D-p-Cl-Phe1,2, D- Trp3, D-Arg6, D-Ala10] LHRH revelado por (Coy, Horvath e cols., 1982); [N-Ac-D-(3-(2-naftil)-Ala)1, D-p-Cl-Phe2, D- Trp3, D-hArg (Et2)6, D-Ala10]-LHRH e [N-Ac-Pros, D-p-Cl-Phe2, (D-(3-(2-naftil (Ala3'6]-LHRH revelado por (Nestor, Ho e cols., 1984); os análogos de nona- e decapeptfdeos de LHRH úteis como antagonistas de LHRH revelados em Pat US No 4.481.190, análogos de antagonista cíclico altamente constrito, ciclo [Δ3Pro1, D-p-Cl-Phe2, D-Trp3,5, N-Me-Leu7, P-Ala10] LHRH revelado por (Rivier, Rivier e cols., 1984), e [N-Ac-D-(3-(2-naftil)-Ala)1, D-p-F-Phe2, D-Trp3, D-Arg6]- LHRH revelado por (Corbin, Bex e cols., 1984).

[278] Outros análogos de agonistas e antagonistas de LHRH são revelados em "LHRH and its Analogues" (B.H. Vickery e cols.,editores na página 3-10 (J.J. Nestor), 11- 22 (J. River e cols.,) e 23-33 Q.J. Nestor e cols.,) e Gynecological Endocrinology 13 (Suppl. 1) 1999: veja, GnRH antagonist (T-98475), p.8, abst. #015. Outro agonista de LHRH é acetato de deslorelina disponível sob o nome comercial "Ovuplant" de Pep tech.

Exemplo de eficiência A- Materiais e métodos A.l- Animais e tratamento

[279] Fêmeas de ratos Sprague-Dawley de dez a doze semanas de idade (Cri:CD(SD)Br) pesando aproximadamente 235-250g no início do tratamento foram usadas. Cento e vinte ratos foram aleatoriamente distribuídos entre 5 grupos de 15 animais intactos por grupo como se segue: 1) Controle; 2) LHRH-A (0,002 mg/animal); 3) LHRH-A + EM- 652.HC1 (2,5 mg/kg); 4) LHRH-A + DHEA (100 mg/kg); 5) LHRH- A + EM-652-HC1 + DHEA. EM-652-HC1 ( (S)- (+)- 7-hidroxi-3 -(4'- hidroxifenil)-4-metil-2-(4"-(2"-piperidinoetoxi)fenil)-2H-1 benzopirano cloridrato) foi administrado uma vez ao dia por ingesta oral como suspensão em 0,4% metilcelulose (0,5 ml/rato) por 3 meses, DHEA foi aplicada topicamente uma vez ao dia na pele dorsal como uma solução em etanol 50%- propileno glicol 50% (0,5 ml/rato) pelo menos período de tempo enquanto LHRH-A foi injetado por via subcutânea uma vez ao dia em tampão de fosfato (0,5 ml/rato) . Aproximadamente depois de 3 meses de tratamento, uma amostra de sangue foi coletada da veia jugular de animais em jejum de um dia para o outro para medição dos níveis de colesterol sérico total com o uso do analisador diagnóstico de Boehringer Mannheim Hitachi 911.

Medição da densidade mineral óssea

[280] Depois de 12 semanas de tratamento, os ratos sob anestesia com isoflurano tiveram seu esqueleto total bem como seu fêmur direito mapeados com o uso de absormetria de raios X de energia dupla (DEXA; QDR 4500A, Hologic, Waltham, MA) e um programa "Regional High Resolution Scan". O teor mineral ósseo (BMC), e a densidade mineral óssea (BMD) do esqueleto, espinha lombar e fêmur foram determinados. A composição corporal foi determinada ao mesmo tempo.

Fosfatase alcalina óssea

[281] A atividade total da fosfatase alcalina sérica foi determinada com o uso do Analisador "Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911" (Boehringer Mannheim Diagnostic Laboratory Systems). Então, as amostras de soro (0,1 ml) foram misturadas com 0,1 ml de uma solução de lecitina de germe de trigo (6 mg/ml em água), incubadas 30 minutos em temperatura ambiente e centrifugadas por 3 minutos a 10.000g para precipitação de ALP óssea. A atividade de ALP no sobrenadante resultante foi determinada com ouso do analisador "Boehringer Mannheim Diagnostic Hitachi 911" e a atividade de ALP óssea foi calculada como se segue: ALP óssea = ALP Total - (2 X ALP do sobrenadante).

Análise estatística

[282] Os dados são expressos como a média ± SEM. A significância estatística foi determinada de acordo com o teste de múltiplo alcance de Duncan-Kramer.

Exemplos de kit

[283] 83] São apresentados abaixo, como um exemplo e não uma limitação, vários kits que utilizam o SERM ativo preferido Acolbifeno (EM-652-HC1, EM-1538), precursor de esteróide sexual ativo preferido desidroepiandrosterona (DHEA, Prasterone) e agonista de LHRH preferido acetato de Leuprolida (Lupron depot). Outros compostos da invenção ou combinações desses, podem ser usados no lugar de (ou adicionalmente) Acolbifeno, desidroepiandrosterona, e acetato de leuprolida. 0 antagonista de LHRH pode ser usado em vez de agonista de LHRH. A concentração do ingrediente ativo pode variar por uma ampla faixa como aqui discutido. As quantidades e tipos de outros ingredientes que podem ser incluídos são bem conhecidos na técnica.

Exemplo A

[284] O SERM e o precursor de esteróide sexual são administrados juntos por via oral na mesma formulação (cápsulas) enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[285] Composição de SERM e precursor de esteróide sexual para administração oral (cápsulas)

[286] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo B

[287] O SERM e o precursor de esteróide sexual são administrados juntos por via oral na mesma formulação (comprimidos) enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[288] Composição de SERM e precursor de esteróide sexual para administração oral (comprimidos)

[289] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo C

[290] O SERM e o precursor de esteróide sexual são administrados juntos por via percutânea na mesma formulação (creme) enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[291] Composição de SERM e precursor de esteróide sexual para administração percutânea (creme)

[292] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo D

[293] O SERM e o precursor de esteróide sexual são administrados juntos por via intravaginal na mesma formulação (supositório ou óvulo) enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[294] Composição de SERM e precursor de esteróide sexual para administração intravaginal (supositório ou óvulo)

[295] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo E

[296] O SERM e o precursor de esteróide sexual são administrados por via oral (cápsulas) enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[297] Composição de SERM para administração oral (cápsulas)

[298] Composição de DHEA para administração oral (cápsula de gelatina)

[299] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

[300] Outros SERMs podem substituir Acolbifeno nas formulações acima, bem como outros precursores de esteróides sexuais podem substituir DHEA, bem como outros agonistas ou antagonistas de LHRH podem substituir Acetato de leuprolida. Mais de um SERM ou mais de um precursor de esteróide sexual ou mais de um agonista de LHRH podem ser incluídos em cujo caso a percentagem de peso combinado é preferível do que a percentagem de peso para o precursor de esteróide sexual único ou SERM único ou agonista de LHRH único dados nos exemplos acima.

Exemplo F

[301] O SERM é administrado por via oral e o precursor de esteróide sexual é administrado por via intravaginal enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[302] Composição de SERM para administração oral (cápsulas)

[303] Precursor de esteróide sexual composição para administração intravaginal (supositório ou óvulo)

[304] Os supositórios de DHEA foram preparados com o uso de Witepsol H-15 base (Paddock Laboratories, Minneapolis, USA) . Qualquer outra base lipofílica como Hard Fat, Fattibase, Wecobee,manteiga de cacao, óleo de teobroma ou outras combinações de bases de Witepsol podem ser usadas.

[305] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo G

[306] O SERM e o precursor de esteróide sexual são administrados por via intravaginal enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[307] Composição de precursor de esteróide sexual para administração intravaginal (supositório ou óvulo)

[308] Composição de SERM para administração intravaginal (supositório ou óvulo)

[309] Supositórios de acolbifeno foram preparados com o uso de Hard Fat (Witepsol) . Qualquer outra base como Fattibase, Wecobee,manteiga de cacao, óleo de teobroma ou outras combinações de Hard Fatpodem ser usadas.

[310] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo H

[311] O SERM é administrado por via oral e o precursor de esteróide sexual é administrado por via percutânea enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[312] Composição de SERM para administração oral (cápsulas)

[313] Composição de precursor de esteróide sexual para administração percutânea (gel)

ou

[314] Composição de precursor de esteróide sexual para administração percutânea (creme)

[315] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo I

[316] O SERM é administrado por via oral(cápsulas) enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[317] Composição de SERM para administração oral (cápsulas)

[318] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

Exemplo I

[319] O SERM é administrado por via oral (comprimidos) enquanto o agonista de LHRH é administrado por via parenteral.

[320] Composição de SERM para administração oral (comprimidos)

[321] Agonista de LHRH para injeção de depósito intramuscular

[322] Outros SERMs (toremifeno, ospemifeno, raloxifeno, arzoxifeno, lasofoxifeno, acetato de bazedoxifeno (TSE- 424), ERA-923, GW 5638) podem substituir acolbifeno nas formulações acima, bem como outros precursores de esteróides sexuais como sulfato de desidroepiandrosterona (DHEA-S), 4-androsteno-3,17-diona e androst-5-eno-3β,17β- diol (5-diol) podem substituir DHEA. Outros agonistas de LHRH comerciais podem substituir acetato de leuprolida. Mais de um SERM ou mais de um precursor de esteróide sexual ou mais de um agonista ou antagonista de LHRH podem ser incluídos, quando então a percentagem de peso combinada é preferivelmente aquela da percentagem de peso para o precursor de esteróide sexual único ou SERM único ou agonista de LHRH único dados nos exemplos acima.

[323] A invenção foi descrita em termos de modalidades e exemplos preferidos, mas não se limita a estes. Aqueles habilitados na técnica reconhecerão facilmente que a aplicabilidade ampla e o escopo da invenção serão limitados apenas pelas reivindicações da patente em anexo.

Claims (13)

1. Uso de (i) um agonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em acetato de leuprolide, acetato de goserelina, nafarelina, acetato de buserelina, acetato de histrelina, acetato ou pamoato de triptorelina e acetato de deslorelina ou antagonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em abarelix, teverelix , acetato de cetrorelix, acetato de ganirelix, iturelix, acilina, degarrelix, ornirelix, azalina B, ozarelix, LXT-101, elagolix, TAK-013, TAK-385 e T-98475 em associação com (ii) o modulador seletivo do receptor de estrogênio Acolbifeno (EM-652.HC1, EM-1538) e com (iii) o precursor dos esteróides sexuais, desidroepiandrosterona caracterizado por ser na preparação de um medicamento para o tratamento ou redução da probabilidade de adquirir doenças relacionadas com o estrogênio, selecionadas no grupo que consiste em endometriose uterina miomas, leiomiomas uterinos, câncer endometrial, câncer uterino, leiomiossarcomas uterinos, câncer de ovário, câncer de mama, sindrome dos ovários policisticos, sangramento uterino disfuncional, sangramento vaginal, menorragia a, sindrome pré-menstrual, dor de cabeça da enxaqueca, neoplasia intra-epitelial cervical, adenomiose e doença de Alzheimer, compreendendo inibir a secreção hormonal ovariana em um paciente.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a referida doença relacionada ao estrogênio exacerbada é endometriose.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas doenças relacionadas com estrogênio exacerbado são miomas uterinos ou leiomiomas uterinos.

4. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas doenças relacionadas a estrogênio exacerbadas são câncer endometrial, câncer uterino, leiomiossarcomas uterinos, câncer de ovário ou câncer de mama.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as referidas doenças relacionadas a estrogênio exacerbadas são sindrome dos ovários policisticos, sangramento uterino disfuncional, sangramento vaginal, menorragia, sindrome pré-menstrual, dor de cabeça de enxaqueca, neoplasia intra-epitelial cervical, adenomiose ou doença de Alzheimer.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o referido paciente é um humano.

7. Kit, caracterizado por compreender um primeiro recipiente contendo uma formulação farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do modulador seletivo do receptor de estrogênio Acolbifeno (EM-652.HC1, EM-1538) e uma quantidade terapeuticamente eficaz do precursor de esteróide sexual desidroepiandrosterona e compreendendo ainda um segundo recipiente contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um agonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em acetato de leuprolide, acetato de goserelina, nafarelina, acetato de buserelina, acetato de histrelina, acetato ou pamoato de triptorelina e acetato de deslorelina ou antagonista de LHRH selecionado do grupo que consiste de abarelix, teverelix, acetato de cetrorelix, acetato de ganirelix, iturelix, acilina, degarrelix, ornirelix, azalina B, ozarelix, LXT-101, elagolix, TAK-013, TAK-385 e T-98475.

8. Kit caracterizado por compreender um primeiro recipiente contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do modulador seletivo do receptor de estrogênio Acolbifeno (EM-652.HC1, EM-1538), um segundo recipiente contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do precursor de esteróide sexual selecionado dehidroepiandrosterona e mais compreendendo um terceiro recipiente contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um agonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em acetato de leuprolide, acetato de goserelina, nafarelina, acetato de buserelina, acetato de histrelina, acetato ou pamoato de triptorelina e acetato de deslorelina ou antagonista de LHRH selecionado do grupo consistindo em abarelix, teverelix, acetato de cetrorelix, acetato de ganirelix, iturelix, acilina, degarrelix, ornirelix, azalina B, ozarelix, LXT-101, elagolix, TAK-013, TAK-385 e T-98475.

9. Kit, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizado por ser para uso conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1, 11 e 12.

10. Kit, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a formulação farmacêutica é selecionada do grupo que consiste em pilula, cápsula, comprimido, creme, gel, supositório intravaginal e óvulo intravaginal.

11. Uso de (i) um agonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em acetato de leuprolide, acetato de goserelina, nafarelina, acetato de buserelina, acetato de histrelina, acetato ou pamoato de triptorelina e acetato de deslorelina ou antagonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em abarelix, teverelix , acetato de cetrorelix, acetato de ganirelix, iturelix, acilina, degarrelix, ornirelix, azalina B, ozarelix, LXT-101, elagolix, TAK-013, TAK-385 e T-98475 em associação com (ii) um modulador seletivo do receptor de estrogênio, nomeadamente Acolbifeno (EM-652.HC1, EM-1538) e com (iii) um precursor de esteróide sexual, nomeadamente desidroepiandrosterona caracterizado por ser na preparação de um medicamento para tratar ou reduzir a probabilidade de adquirir endometriose numa mulher.

12. Uso de (i) um agonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em acetato de leuprolide, acetato de goserelina, nafarelina, acetato de buserelina, acetato de histrelina, acetato ou pamoato de triptorelina e acetato de deslorelina ou antagonista de LHRH selecionado do grupo que consiste em abarelix, teverelix , acetato de cetrorelix, acetato de ganirelix, iturelix, acilina, degarrelix, ornirelix, azalina B, ozarelix, LXT-101, elagolix, TAK-013, TAK-385 e T-98475 em associação com (ii) um modulador seletivo do receptor de estrogênio, ou seja, Acolbifeno (EM-652.HC1, EM-1538) e com (iii) um precursor de esteróide sexual, nomeadamente desidroepiandrosterona caracterizado por ser na preparação de um medicamento para tratar ou reduzir a probabilidade de adquirir fibróides uterinos ou leiomiomas uterinos em uma mulher.

13. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 11 e 12, caracterizado pelo fato de que o modulador seletivo do receptor de estrogênio não possui atividade estrogênica nos tecidos mamário, uterino ou endometrial.