CS199673B2 - Method of producing polypeptides - Google Patents

Method of producing polypeptides Download PDF

Info

Publication number
CS199673B2
CS199673B2 CS772980A CS298077A CS199673B2 CS 199673 B2 CS199673 B2 CS 199673B2 CS 772980 A CS772980 A CS 772980A CS 298077 A CS298077 A CS 298077A CS 199673 B2 CS199673 B2 CS 199673B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
tyr
pro
leu
arg
azgly
Prior art date
Application number
CS772980A
Other languages
English (en)
Inventor
Anand S Dutta
Barrington J Furr
Michael B Giles
Original Assignee
Ici Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ici Ltd filed Critical Ici Ltd
Priority to CS79207A priority Critical patent/CS199674B2/cs
Publication of CS199673B2 publication Critical patent/CS199673B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/06095—Arg-amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Fodder In General (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

Vynález se týká způsobu výroby polypeptidů vykazujících vlastnosti agonistů luliberif nu. Luliberin je mezinárodně přijatý triviální , název pro faktor uvolňující luteinizační hori mon (LH-RF) (viz J. Biol. Chem., 1975, 250, ! 3215).
I Je již známo· (viz Dutta, Furr, Giles a Morky, Clinical Endocrinology, · 1976, Supple* ment, 5, str. 291s—298s), že substitučním ; zavedením a-aza-aminokyselin do poloh 6 nebo 10 luliberinu se získají sloučeniny, které jsou méně účinné než základní molekula co do schopnosti uvolňovat luteinizační hormon (LH) z hypofýzy. Nyní bylo zjištěno, že substituční zavedení azaglycinu do polohy 10 spojené se substitučním zavedením různých D-a-aminokyselin do polohy 6 luliberinu nebo· substituční zavedení azaglycinu nebo azalaninu do polohy 6 luliberinu spojené s náhradou terminálního glycinamidu v luliberinu ethylaminoskupinou vede ke sloučeninám, které jsou účinnější než luliberin z hlediska jejich schopnosti · uvolňovat luteinizační hormon.
V souhlase s tím popisuje vynález způsob výroby polypeptídů obecného· vzorce I
La-H/s -Trp -Аг£-рго-Е-Е (!) ve kterém
A znamená D-Tyr, D-Tyr(Me), D-Ser,
D-Ser(Bul), D-Phe, D-Ala nebo D-Trp,
B představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a
F představuje aminoskupinu, nebo
A znamená Azgly nebo Azala,
B představuje Leu,
E je přímá vazba a
F znamená ethylaminoskupinu, a jejich farmaceuticky nebo veterinárně upotřebiteiných adičních solí s kyselinami.
Ve shora uvedeném obecném vzorci I a v celém textu jsou zbytky aminokyselin označovány svými standardními zkratkami (viz Риге and Applied Chemistry, 1974, 40, 317 až 331). Zbytkem a-aza-aminokyseliny je takový zbytek, v němž α-CH-skupina aminokyseliny je nahrazena dusíkem. Zkratka a-aza-aminokyseliny se odvozuje od zkratky odpovídající aminokyseliny zařazením prefixu „Az“. Tak tedy Azgly představuje azaglycin a Azala znamená azalanin. V případech, kdy není uvedena konfigurace příslušné aminokyseliny, má tato aminokyselina (s výjimkou a-aza-aminokyselin, které v sousedství karboxylové skupiny neobsahují žádné centrum asymetrie) přírodní L-konf iguraci. Rovněž zkratky Me a Bul jsou v daném oboru běžiné a standardně používané a představují methylovou resp. terc.butylovou skupinu.
Zvlášť vhodnými skupinami sloučenin vyráběných způsobem podle vynálezu jsou:
látky shora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém
A znamená D-Tyr, D-Tyr(Me), D-Ser, D-Ser (Bul), D-Phe, D-Ala nebo D-Trp,
В představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a
F představuje aminoskupinu;
látky shora uvedeného- obecného vzorce I, ve kterém
A znamená Azgly nebo Azala,
В představuje Leu,
E znamená přímou vazbu a
F představuje ethylaminoskupinu;
látky shora uvedeného obecného vzorce I, ve kterém
A znamená D-Tyr (Me), D-Ser, D-Ser (Buř), D-Pihe, D-Ala .nebo D-Trp,
В představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a
F představuje aminoskupinu.
Výhodnou skupinu sloučenin vyráběných způsobem podle vynálezu tvoří látky shora uvedeného· obecného vzorce I, ve kterém
A znamená D-Tyr(Me) D-Ser (Bul) nebo D-Phe,
В představuje Leu nebo MeLeu,
E znamená Azgly a
F představuje aminoskupinu.
Tři výhodné sloučeniny vyráběné způsobem podle vynálezu mají následující struktury:
Qlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Phe-LeuM^-Pro-Az^ly-NH^
Qzu-His-bp-Ser-V*-D-Tyr (Me )-Leu-Аг£-Рго-А2£1Г№]>
Ogíu-H.S-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Ви)-1-еи-Аг&-Рго-А1я,1^-ЧН?_
Vhodnými farmaceuticky nebo veterinárně upotřebitelnými adičními solemi sloučenin vyráběných způsobem podle vynálezu s ky selinami jisou například hydrochloridy, fosfáty, citráty nebo acetáty.
Způsob podle vynálezu spočívá v reakci □к -OH, Qlu-Wis-OH;
“His “Trp -Ser-OHf
Qíw-Hzs-Trp-Ser-T yr-A-B-OH ^-—Glu-His-Trp-S&r-Tyy-A-B-Atg-OH pebo □Gřu-/-/iS-Trp-$er-Tyr-4 -B-Arg-Pro-OH .nebo vhodného aktivního derivátu libovolného z těchto peptidů, s
H-His-T.rp-Ser-Tyr-A-B-Arg-P:ro-E-F,
H-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
H-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
H-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
H-A-B-Arg-Pro-E-F,
H-B-Arg-Pro-E-F,
H-Arg-Pro-E-F-,
H-Pro-E-F resp.
H-Azgly-NHs, » nebo s vhodným· aktivovaným derivátem libovolné z těchto látek, podle standardních kondenzačních reakcí obvyklých v chemii peptidů.
Při práci způsobem podle vynálezu je možno použít' kteroukoli ze standardních kondenzačních reakcí obvyklých v chemii peptidů, · například ' reakce popsané v knize M. Bodanskl a M. A. Ondetti, „Peptide Synthesis“, Interscienče, New York, 1966, kapitola V, a ve svazcích 1 až 8 publikace · „Amino-acids, Peptides and Protelns“ (Speclali-st Periodical Reporte), The Chemical Society, London.
Zvlášť vhodnými kondenzačními reakcemi použitelnými při práci způsobem podle vynálezu jsou azidová metoda, metoda aktivního esteru nebo kondenzace za použití N,N‘-dicyklohexylkarbodii.midu a 1-hydroxybenztriazolu. Výhodnou kondenzační reakcí je azidová metoda, zejména pak v případě, kdy se tvoří peptidová vazba His-Trp nebo Ser-Tyir.
Výchozí materiály pro práci způsobem podle vynálezu je možno připravit ze známých sloučenin standardními kondenzačními reakcemi známými z chemie peptidů, standardním zaváděním chránících skupin, známých z chemie peptidů a standardním odštěpováním chránících skupin, známým z chemie peptidů. Tyto reakce jsou popsány například v níže uvedených příkladech 1 až 8.
Jak již bylo uvedeno výše, vykazují sloučeniny, které je možno vyrobit způsobem podle vynálezu, vlastnosti agonistů luliberinu, tj. napodobují působení luliberinu. Luliberin je přírodní hormon vylučovaný hypothalamem, který působí na hypofýzu tak, že hypofýza uvolňuje luteinizační hormon (LH) a folikulostimulační hormon (FSH). Tyto dva hormony hypofýzy řídí reprodukční procesy, · přičemž posledně jmenovaný, folikulastimulační hormon, · působí na vajecníky v tom smyslu, že· napomáhá zrání folikulů, a prvně zmíněný, luteinizační hormon, vyvolává ovulaci. Sloučeniny obecného vzorce I jsou neočekávaně účinnější než luliberin pokud jde o schopnost uvolňovat luteinizační hormon, jsou proto užitečné pro řízení a/nebo zlepšování reprodukce u živočichů. Zmíněné sloučeniny jsou zejména užitečné pro množení velkých domácích zvířat během anioestru a při všech typech umělé iniseminace k přesnějšímu řízení doby ovulace. Sloučeniny podle vynálezu mohou být rovněž používány k zlepšení infertility u mužů a žen.
Agonistické vlastnosti popisovaných sloučenin vůči luliberinu je možno prokázat například jejich schopností vyvolat ovulaci u krys s konstantním esterem, sterilizovaných androgenem, nebo jejich schopností uvolňovat luteinizační hormon a folikulostimulační hormon, měřeno dvojitou radioimunologickou zkouškou· na protilátky v krevní plasmě nedospělých krysích samců nebo v krevní plasmě anestrálních nebo díestrálních ovcí.
Shora zmíněný· test na krysách sterilizovaných androgenem se provádí následovně:
Androgenem sterilizované krysí samice, připravené podáním lOO^g testosteron-propionátu krysám ve třetím, čtvrtém a pátém dnu věku, mají 'trvalý estrus, jak je možno prokázat vaginálními výtěry a přítomností četných preovulačních folikulů ve vaječnících. Aplikace luliberinu a · jeho aktivních analogů způsobí uvolnění ovulační dávky luteinizačního· hormonu a folikulostimulačního hormonu, což je možno prokázat přítomností vajíček ve vejcovodech a čerstvých žlutých tělísek ve vaječnících.
Všechny sloučeniny jmenované v tomto textu jsou účinnější než luliberin co do jejich schopnosti vyvolávat' ovulaci u krys s konstantním esterem a mimoto· nevykazují žádné známky toxicity při podání v dávce nejméně čtyřnásobně vyšší než je jejích minimální · účinná dávka. Zejména pak vý'ho-dné sloučeniny podle vynálezu, což jsou látky u199673 vedené v příkladech 4, 6 a 7, jsou zhruba stokrát účinnější než luliberin a nemají toxické účinky při podání v dávce stonásobně vyšší než je jeich minimální účinná dávka.
Sloučeniny vyrobené způsobem podle vynálezu je možno používat - ve formě farmacelutickýcih nebo veterinárních prostředků obsahujících jako.' účinou látku sloučeninu vyrobenou způsobem podle vynálezu, v kombinaci s farmaceuticky nebo veterinárně upotřébitelným ředidlem nebo nosičem.
Tento prostředek může být například ve formě vhodné k Orální nebo perlinguální aplikaci, například ve formě tablety, kapsle, roztoku či suspenze, k nasální aplikaci, například ve formě šňupacího prášku, nosního· spreje nebo· nosních kapek, k vaginální nebo· rektální aplikaci, například ve formě čípků, nebo k parenterální aplikaci, například ve formě sterilního injekčního- roztoku nebo suspenze.
Obecně je možno sho-ra uvedené prostředky -připravovat obvyklým způsobem za použití běžných pomocných látek, v případě prostředků k orální aplikaci však může být výhodné opatřit prostředek povlakem .chránícím polypeptidickou účinnou komponentu před účinkem enzymů v žaludku.
Popisované prostředky mohou kromě polypeptidu vyrobené způsobem podle vynálezu obsahovat ještě jedno nebo několik známých léčiv vybraných ze skupiny zahrnující prostaglandinbvé deriváty, například prostaglandin F2ft, cloprostenol nebo fluprostenol, a další léčiva, jako -clomiphene nebo tamoxifen.
Výhodným prostředkem je preparát k orálnímu podání v jednotkové dávkovači formě, například tableta, kapsle, kapky nebo bolus, obsahující v každé jednotkové dávce od 2,5 do 5Ό0 mg, s výhodou od 10 do 100 miligramů, polypeptidu, nebo preparát vhodný k parenterálnímu podání, obsahující cd 5 pg -do 1 mg polypeptidu na 1 ml roztoku s výhodou od 10 pg -do 100 pg polypeptidu na 1 . ml roztoku.
Prostředkem k- parenterálnímu podání je s výhodou roztok v isotornickém solném nebo isotonickém dextrózovém roztoku, popřípadě pufirovaný na pH 5 až 9. Prostředek k parenterálnímu podání může být alternativně ve formě, z níž se účinná látka postupně pomalu uvolňuje, v kterémžto případě je .množství polypeptidu n'a jednotkovou dávku obecně vyšší než při použití běžných injekčních preparátů. Výhodný prostředek -k parenterálnímu podání s pomalým uvolňováním účinné látky obsahuje v jednotkové -dávce od 100 pg do 1,0 mg polypeptidu.
Popisované prostředky se normálně aplikují ’ tak, aby při orálním podání činila denní dávka od 50 <g/kg do- 20 mg/kg a denní dávka při parenterálním podání, například intravenózní, subkutánní či intramuskulární injekcí nebo infusí, se pohybovala od 0,2 pg/kg do 100 (tgZkg. U lidí odpovídá toto dávkování celkové denní dávce - od 3,5 mg do 1,4 g při orálním podání a celkové denní dávce od 14 pg do 7 mg při podání parenterálním. Při aplikaci prostřednictvím sliz-. nic -se dávky pohybují mezi výše zmíněnými dávkami pro orální a parenterální podání.
Vynález ilustrují následující příklady provedení, jimiž se však -rozsah vynálezu v žádném směru neomezuje.
V - příkladech uváděné hodnoty Rf se týkají vzestupné chromatografie na tenké vrstvě silikagelu. Rozpouštědlovými systémy používanými př'i -této chromatografií jsou systémy
1-butanol — kyselina octová — voda (4:1:
: 5 objem/objem) (RfA),
1- butanol — kyselina octová — voda — - pyridin (15 : 3 : 12 : 10 objem/objem) (RfB),
2- butanol — 3% (hmotnost/objem) vodný roztok hydroxidu -amonného- (3:1 -objem/ /objem) (RfC), acetonitril — voda (3:1 objem/objem) (RfD), aceton — chloroform (1:1 objem/objem) (RfE), chloroform — ethanol (1:4 objem/objem) (RfF), cyklohexan — ethylacetát (1:1 objem/objem) (RfG), cyklohexan — ethylacetát — methanol (1: :1: 1 objem/objem) (RfH), .............. .............
chloroform — methanol — voda (11: 8 : 2 objem/objem) (RfK), chloroform — methanol (19 :1 objem/objem) (RfP) a chloroform — methanol (9:1 objem/objem) (RfQ).
Ve všech případech se chrom-Btografické desky zkoumají v ultrafialovém -světle a detekují se fluorescaminem, ninhydrinem a chlor-škrob-jodovým -činidlem. Pokud není uvedeno jinak, znamená uvedení symbolu Rf, že při těchto postupech byla detekována pouze jediná skvrna.
Kyselé hyd-rolyzáty všech produktů v příkladech se získávají záhřevem peptidu nebo chráněného peptidu s 6 N kyselinou chlorovodíkovou -obsahující 1 % (hmotnost/objem) fenolu v zatavené evakuované ampulí na teplotu 100 - po dobu 16 hodin. Složení aminokyselin v každém hydrolyzátu se stanovuje za pomoci analyzátoru aminokyselin (LoíOirte) a ve všech případech je v souladu s -očekávaným složením.
Výraz „zpracuje se obvyklým způsobem“, používaný v příkladech, znamená, že po re199673 akci se všechny pevné podíly odfiltrují, filtrát se odpaří к suchu při teplotě pod 40 °C, zbytek se rozpustí v ethylacetátu, roztok se promyje 20% roztokem kyseliny citrónové, vodou, nasyceným -roztokem hydrogenuhličitanu sodného a znovu vodou, vysuší se bezvodým síranem sodným a ethylacetát se odpaří ve vakuu, čímž se získá žádaná sloučenina.
Příklady 1 až 8
Syntéza L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-tryptofyl-L-seryl-L-tyrosyl-A-L-leucyl-L-airginyl-L-propyl-E-F
Obecný postup (m) (schémata 1 a 2)
К suspenzi 0,2 mmol L-pyroglutamyl-L-histidin-hydrazidu v 0,9 ml dimethylformamidu a 0,7 ml dimethylsulfoxidu se za míchání a chlazení na 0 °C přidá 0,8 mmol 5,7 N chlorovodíku v dioxanu. Po pětiminutovém energickém míchání se získá -čirý roztok, který se Ochladí na —20 °C, přidá se к němu 0,22 mmol terc.butylnitritu a v míchání se -pokračuje ještě 25 minut. Teplota se sníží na —30 PC, roztok se zneutralizuje přidáním 0,8 mmol triethylaminu, přidá se к němu směs 0,1 mmol L-triptofyl-L-seryl-L-tyrosyl-A-L-leucyl-L-arginyl-L-prolyl-E-F-dihydrochloridu (připraveného šestnáctihodinovou hydrogenolýzou odpovídajícího N-benzyloxykarbonylderivátu v 80% [objem/objem] vodném methanolu obsahujícím 2 ekvivalenty chlorovodíku, v přítomnosti 5% [hmotnost/hmot nost] paládia na uhlí] a 0,1 mmol triethylaminu v 1 ml dimethylformamidu, předem ochlazená na —20°C, a reakční směs se 24 hodiny míchá při teplotě 4 °C. Dimethylformamid se odpaří ve vakuu a zbytek se chromatografuje na iontoměniči Sephadex LH-20 za použití dimethylformamidu jako elučního činidla. Hydrochlorid peptidu se dále čistí rozdělovači chromatografií na molekulárním sítu Sephadex G-25 za použití rozpouštědlového systému n-butanol — kyselina octová — — voda — pyridin (5:1:5 objem/objem).
Syntéza L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-tryptofyl-L-seryl-L-tyirosyl-A-B-argmyl-L-prolyl-azaglycin-amidu
Obecný postup (n) (schémata 3, 4 a 5)
0,2 mmol L-pyroglutamyl-Ljhistidyl-L-tryptofyl-L-serin-ihydrazldu se rozpustí ve 4 ml dimethylformamidu a postupem (m) se převede na azid, který se postupem (m) kondenzuje s 0,15 mmol L-tyrosyl-A-B-L-arginyl-L-prolyl-azaglycmamid-hydroichloridu (připraveného katalytickou redukcí N-benzyloxykarbonybO-benzyl-L-tyrosyl-A-L-leucy 1- (Nw-nitro) -L-arginyl-L-prolylazaglycinamidu v 80’% [objem/objem] vodném methanolu po dobu 20 hodin v přítomnosti 5% [hmotnost/hmotnost] paládia na uhlí). Finální produkt ve formě hydrochloridu se čistí shora popsaným způsobem.
Sloučeniny podle vynálezu, připravené podle některého z těchto dvou obecných postupů, jsou shrnuty do následující tabulky:
ООООГхМЛЮ^
CM, CO CO CM CO CM CM 00 CD CD o CD CD CD θ' o <
CO rH Гч l> CO O cd o, a, > m oo cd cn, rd i-Γ rH O O O CD O
CO K O CO CM Ό1 OCD CD CD CD ID CD CD CO, CD θ' o Г-T CD o o o
А-,-
tO CM CM o to id i—1 CO CM^CO^lrHrHCOCM ёёёдййяй >D >5 >5 ' P>>
Tj Έο Έο Τ) Έο Έο I I N N N N N N I !<<<<<<
ti
CQ
t t ti 2 Z3 ti
Φ Φ Φ Φ Φ Φ Φ
£££ J J££
—. dd 'Ή и í>* Φ £*» bS<LHHDH N N i i i i ι i <<QQ-QQQQ
Tabulka
HCMC^'TilOC2t>tO ri s
>,-<
>Η .
Pj >CD
Výchozí látky pro použití ve shora uvedených postupech je možno připravit podle následujících schémat 1 a 2 [postup [m]] a schémat 3, 4 a 5 [postup (n) ].
V těchto schématech se používají následující zkratky:
OCP = 2,4,5-trichlorfeinylester
Bzl = benzyl
Z='benzyloxykarbonyl
Boc = terc.butoxykarbonyl
DMF = dimetihylformamid
Čísla v kroužcích označují příslušné reakční stupně popsané dále.
a
199B73 rt E
Φ ja o
U)
azaglycin (R=H), ^zalanin. (R=CH,)
1 ..... .
© © 1 © 1 o 24
1 24 L
© 2 ΓΥ o % . 1 O CD
24 N ISI 1 N N 1
i i Bzl Z__ í 1 Bzl 1/ v__ N b’ i | Bzl 1/ Kl F
© © fQ) \§/ 23 1
fuft Uy © fV 2i Ž 1 1 о riF
24 l rsi L<1 CSJ |
© i Q
24 L·—
Ч: 4 ч ь X 4- \ ' г1 3 4- ;r, -!- 4 + \ O rv : к i g2 К Sn?
í^\ \№j . 24 i N -
/ř3\ \gy ©
24
1
ω
О
2Г φ
К)
yr(Me), D-Ser(Bu )
A
Βζΐ Ζ Bzl Z \ ω N h-J \ w c N C η τ Γ\ ? w N 5 H << z <1 m U 1 --— z
© © © © © 1 << O 4 z ©x Ϊ s Φ
кл к 1 rv 2 К < zz : К < > D ( s : D ( D < s : D < tz Φ D OČ z z D Φ > H
ж 4- + ч о r\J \ OQ S3 O hj T) 4
o © > N
Ί Ú4 H*
ω о rr φ Η ω
ЧЛ
Stupe* (®
19,94 g (80 mmol) N-benzyloxykarbo.nyl-L-prolinu a 8,8 ml .(80 mmol) N-methylmorfolinu se rozpustí ve 200 ml suchého tetrahydrofuranu, roztok .se ochladí na. —20 QC, přikape se k němu 7,15 ml (76 mmol) chlormravenčanu ethylnatého, po dvouminutovém míchání se přidá 20' ml (300 mmol) 70% vodného roztoku éthylaminu, ochlazeného na —20 °C .a v míchání se pokračuje 18 hodin při teplotě 4 °C. Reakční směs se zpracuje obvyklým způsobem a zbytek se krystaluje ze směsi ethylacetátu a petroletheru (teplota varu 60 až 80 °C). Výtěžek činí 12,97 gramů (58,7 %). Produkt má ' teplotu tání 107 až 10'8 °C a [α.]η25'5=—43,88° (c=1 v methanolu),
RřD='0,69,
RfE = '0,53, RřF=0,67, RfH = 0,62, r{P = '0,57, R(Q = 0,66.
Stupeň
Pětihodinová katalytická redukce při teplotě místnosti v přítomnosti 5% paládia na uhlí ve vodném ethanolu obsahujícím 1 . ekvivalent chlorovodíku.
StupeaCl)
Roztok 13,5 g (42,3 mmol) NMterc.butoxykarbonyl-N“-nitro-L--argininu, 7,15 g (47 mmol) L-prolin-ethylamid-hydrochlorid, 11,5 gramů (85 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a
6,58 ml (47 mmol) triethylaminu v dimethylformamidu se ochladí na 0°C a přidá se k němu 9,13 g (44,4 mol) dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě 4 °C, filtrací se zbaví pevných podílů a filtrát se odpaří ve vakuu k suchu. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu proťiproudným roztřepá váním (4 stupně). Vodné fáze se spojí, odpaří se k · suchu a zbytek. se rozdělí mezi n-butanol a 5% (objem/objem) vodnou kyselinou octovou protiproudným roztřepáváním (12 stupňů). Surový peptid získaný odpařením spojených n-butanolových fází se vyčistí chromatografii na sloupci silikagelu za použití 5% (objem/objem) methanolu v chloroformu a 10% (objem/objem) methanolu v chloroformu jako elučních činidel. Frakce obsahující produkt se spojí, odpaří se k suchu a vodný roztok zbytku se k odstranění Na-terc.butoxykarbonyl-N“-nitroargininu nechá projít sloupcem aniontoměniče (AG 1-X2). Sloupec se pak promyje vodou a spojené vodné fáze a kapaliny z pro mývání se lyofilizují. Ve výtěžku 16,67 g [89 procent) se získá azapeptidový derivát tající za rozkladu při 109 . až 111 °C;
[a]D 25 = .39,0° (c = l v methanolu),
RfA=0,62,
RfB=O,74,
RfC = 0,59,
RfD — 0,70,
RfE = 0,20,
RfF = 0,60,
RfH = 0,61, '
RfK=0,85,
RfQ = 0,13.
Stupen
N-terc.butoxykarbonylderivát se rozpustí v ethylacetátu a .nechá se 1 hodinu reagovat při teplotě místnosti s. 3 N .chlorovodíkem v ethylacetátu (4 ekvivalenty).
Stupen (ReH)
Roztok 2,90 g (22 mmol) terc,butoxykarbonylhydrazidu a 11,71 g (20 mmol) 2,4,5-trichlorfenylesteru N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosin.u ve 40 ml dimethylformamidu se nechá přes noc stát při teplotě místnosti. Reakční směs se .pak zpracuje <obvyklým způsobem a zbytek se překrystaluje ze směsi etheru a petroletheru (teplota varu 60 až 80' °C. Získá se 3,46 g (67%) chráněného hydrazidu ve formě bílého prášku o teplotě tání 126 až 127 QC;
[a]D25=—13,2° (c='1 v methanolu),
RfD = 0,82,
RfE =0,65,
RfF = 0,63,
R£H = 0,70. ' ® №1
5,19 g (10 mmol) l-(N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyr osyl} -2-terc.butoxykarbonylhydrazidu · se rozpustí v 50 ml ethylacetátu a 1 hodinu se nechá reagovat při teplotě místnosti s 8 ml [40 mmol) 5 N chlorovodíku v ethylacetátu. Ethylacetát se odpaří ve vakuu, hydrochlorid se odfiltruje, promyje se etherem a vysuší se.
stuPe£0
Shora zmíněný hydrochlorid se vyjme 75 mililitry tetrahydrofuranu .a k roztoku se přidá nejprve 1,15 g (8 mmol) tríethylaminu a pak . 1,36 g (8 mmol) methylesteru N-karbo199673 nyl-L-leucinu. Po šestnáctih-odinové reakci při teplotě místnosti se reakční směs zpracuje obvyklým způsobem a zbytek se překrystaluje ze směsi ethylacetátu a petroletheru (teplota varu 60 až 80 °C).
Získá se 4,57 g (77,,7%) žádaného azatripeptidu o teplotě tání 156 až 157 °C;
[a]o24 — —10,3° [c — 1 v methanolu),
RřD = 0,81,
RřE = 0,45,
RfP —0,26,
RfQ = 0,47.
c. , ® SÍUPqOl
K roztoku 2,95 g (5 mmol) methylesteru N-be·гlzyicxykarbonyl-O-benzyi-L-tyrosylazaglycyl-L-leucinu v 50 ml methanolu se přidá 5 ml (100 mmol) hydrazinihydrátu. Po dvouhodinové reakci při teplotě místnosti se hydrazid vysráží vodou a překrystaluje se ze směsi methanolu a etheru. Získá se 2,74 g (92,8 %) produktu o teplotě tání 169 až 170 stupňů Celsia;
[a]Z' = -9,0P (c = l v dimethylformamidu),
R[A — 0,76, RfB=0,75, RfC = 0,73, RfD = 0,63, RřF = '0,60, RfH = 0,55.
SturnÁ ®*® (R=h)
1,18 g (2,0 mmol) N-benzyloxykarbonyl-O-beiizyl-L4yrosylazag]ycyI-L-leuciinhydrazidu se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu, roztok se ochladí na —20 °C a přidá se k němu nejprve 1,46 ml (8 1 mmol) 5,49 M roztoku chlorovodíku v dioxanu a pak 0,25 ml (2,2 mmol) terc.butylnitritu. Po 5 minutách se roztok ochladí na —30 °C a přidá se k němu ochlazená směs 0,836 g (2,2 mmol) · hydrochloridu Nω-mtro-L-argmyl-L-prclin-etιhylamiamidu a 1,43 ml (10,2 mmol) triethylaminu v 10 ml dimethylformamidu. Reakční směs se míchá nejprve 1 hodinu při 'teplotě —10 °C a pak 48 hodin při teplotě 4 °C, načež 'se zpracuje obvyklým způsobem a výsledný pentapeptid se vyčistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití chloroformu a 3% (objern/objem) methanolu v chloroformu jako elučních činidel. Výtěžek produktu činí 0,695 g (38,5 %),
R(.A = 0,71,
R{B = 0,72,
RfC = 0,84.
Stupen ®) (R-H)
Katalytická redukce v 80% (objem/objem) vodné kyselině octové obsahující 2 ekvivalenty chlorovodíku, v přítomnosti 5% (hmotnost/hmotnost) paládia na uhlí.
Stu.pgQ·
K roztoóu· 33,84 g (100 mmol) N-benzylcxykarbonyi-L-tryptofanu a 11,0 ml (100 mmol) N-methylmorfolinu ve 200 ml tetrahydrofuranu se za ' energického míchání a chlazení na —20 °C přidá 9,0 ml (95 mmol) chlormravenčanu ethylnatého. Po' 2 minutách se přidá roztok 17,10 g (110 mmol) hydrochloridu methylesteru L-serinu a 12,1 ml (110 mmol) N-meth-ylmorfolinu ve 150 ml dimethylformamidu, předem ochlazený na —20 °C, a v míchání se pokračuje nejprve 30 minut při teplotě —20 °C a pak 3 hodiny při teplotě místnosti. Obvyklým zpracováním se získá olejovitý produkt, který dvojnásobnou krystalizací ze směsi ethylacetátu a petroletheru (teplota varu 60 až 80 °C) poskytne 30,53 g (69,5 ' %) žádaného dipeptidového derivátu o teplotě tání 140,5 až 141 °C;
fa]D24= -22,13° (c = l,4 v dimethylfcrmamidu).
Stupen®
30,53 g (69,5 mmol) shora připraveného esteru se rozpustí v 1 litru methanolu a k roztoku se přidá 15 · ml 62% (hmotnost/objem) roztoku hydrazinhydrátu. Po 16 hodinách se hydrazid shromáždí, promyje se methanolem a etherem a krystaluje se z horkého ethanolu. Získá se 23,18 g (75,8 %) žádaného 'produktu o teplotě tání 178 až 179 stupňů Celsia;
[a],+ = —25,27° (c —1 v dimethylformamidu),
RfD=0,65,
RfE = 0,20,
RfF = 0,43,
RfH = 0,50.
stupně ® A®
K roztoku 0,502 g (1,16 mmol) N-benzylcxy'^karbcnyl-L-tI’ypt(Cfyl-L--errnιhyd.razídu v 5 mililitrech dimethylformamidu, ochlazenému na —20 °C, se za míchání přidá 0,77 ml (4,64 mmol) 6,02 N chlorovodíku v dioxanu a pak 0,14 ml (1,22 mmol) terc.butylnitritu. Po· ' 30 minutách se roztok ochladí na —30 °C, zneutralizuje se přidáním 0,65 ml (4,65 mmol) triethylaminu, přidá se k němu směs 0,547 g (0,77 mmol) dihydrochloridu L-tyrosylazaglycyl-L-leucyl-L-arglnyl-L-prolin-ethylamidu a 0,108 ml (0,77 mmol) trietihylamínu v 5 mililitrech dimetihylformamidu, předem ochlazená na —20 °C, a v míchání se pokračuje nejprve 1 hodinu při teplotě —20 °C a pak 48 hodin při teplotě 4 °C. Reakční směs se zfiltruje a filtrát se odpaří ve vakuu к suchu. Surový peptid se vyčistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití chloroformu, 10% (objem/objem) methanolu v chloroformu a směsi chloroform — methanol — voda (11: 8 : 2 objem/objem) jako elučních činidel. Získá se 0,424 g (52,9%) produktu o (a]o25=—16,84° (o—1,5 v methanolu),
RfA=0,61, RfC=0,36, RfD = 0,67, RfK = 0,90.
Stupen ®) (R* methyl)
Pracuje se stejně jako ve stupni
Výtěžek produktu činí 66 %, teplota tání 102 až 104 °C;
(a]D 24=—15,5° (с —1 v methanoluj,
RíD = 0,76,
RfE'=0,68,
RfF=0,76,
R(H = 0,74.
stupeň ® (Rs methyl)
Pracuje se stejně jako ve stupni
Stuperi ®
К roztoku 2,41 g (4 mmol) methylosteru N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosylazalanyl-L-leucinu ve 36 ml methanolu se při teplotě místnosti za míchání přidá 12 ml (12 mmol) 1 N hydroxidu sodného a v míchání se pokračuje ještě 3 hodiny. Methanol se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí ve 40 mililitrech vody, roztok se okyselí kyselinou citrónovou na pH 3 a extrahuje se ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt se promyje vodou, vysuší se síranem sodným, rozpouštědlo se odpaří, odparek se rozpustí ve 200 mililitrech směsi dimethylformamidu a vody (3:2 objem/objem) a nanese se na sloupec 100 ml aniontoměniče (AG 1 X-2). Sloupec se promyje 50 ml shora uvedeného rozpouštědla a tripeptid se vymyje 0,2 M kyselinou octovou ve směsi dimethylformamidu a vody (3:2 objem/objem). Frakce obsahující tripeptid se spojí, odpaří se ve vakuu, zbytek se trituruje s etherem a pak se odfiltruje. Získá se 1,22 g žádaného produktu (51,7 procent) tajícího za rozkladu při 195°'C;
[a] o24 =-25,4° (c='l v dimethylformamidu).
Stupeň® (R^metbyl)
Pracuje se stejně jako u postupu Výtěžek produktu činí 43 %;
[a]D 25= —25,9° (c='l v methanolu),
RfA = 0,72,
RfB = 0,76,
RfC = 0,85.
Stupen ® (R = methyl)
Pracuje se stejně jako ve stupni
Výtěžek produktu činí 93 %, teplota tání 145 až 146 °C;
(«]d25=+8,7° (c —1,2 v methanolu),
R[A = 0,88,
RfB = 0,88,
RfC = 0,83,
R(D = 0,80, R(E=0,59,
Stupen®) (R- methyl)
Pracuje se stejně jako u postupu
stupen®) (R= methyl)
Pracuje se stejně jako u postupu ^5) s tím, že produkt po chromatografii na sloupci silikagelu se čistí rovněž filtrací na molekulárním sítu Sephadex LH-20 v dimetihylformamidu. Výtěžek produktu činí 63 %;
RfF = 0,78,
RfH = 0,73.
[α]ο25 =—24,76° (c=O,8 v methanolu),
RfA’=O,58,
RfC = 0,42,
RfD = 0,65, RfK=O,95.
Stupen
К suspenzi 24,9 g (100 mmol) N-benzyloxykarbonyl-L-prolinu, 11,2 g (100 mmol) semikarbazid-hydrochloridu a 14,5 ml (100 mmol) triethylaminu ve 200 ml dimethylformamidu, ochlazené na 0 °C, se za míchání přidá 20,6 g (100 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu a v míchání se pokračuje ještě 16 hodin při teplotě 4 °C. Dicyklohexylmočovina se odfiltruje a filtrát se odpaří na malý objem. Přidá se 200 ml vody a roztok se extrahuje třikrát vždy 50 ml ethylacetátu. Z vodného roztoku se zhruba během 1 hodiny vysráží produkt, který po překrystalování z vodného methanolu 'poskytne 16,5 g (53,9 %) žádaného dipeptid-amidu o teplotě tání 189 až 190 °C;
Í«]d24 =--43,6° (c='l,4 v dimethylformamidu),
RfD=0,54,
RfF=0,52,
R(H=0,38,
RfK=0,78.
Stupen QÉ)
Šestihodinová katalytická redukce při teplotě místnosti za použití 5% paládia na uhlí v 80% (objem/objem) vodiném dimethylformamidu v přítomnosti 2 ekvivalentů chlorovodíku.
Stupen &
К roztoku 8,24 g (31 mmol) N-benzyloxykarbonyl-L-leucinu a 4,55 ml (32,5 mmol) triethylaminu ve 100 ml tetrahydrofuranu se při teplotě od —10 do —15 °C přidá 2,83 ml (29,5 mmol) chlormravenčanu ethylnatého. Reakční směs se 3 minuty míchá při shora uvedené teplotě, načež se vnese do intenzívně míchaného roztoku 5,79 g (31 mmol) N<ú-nltro-L-argininu v 15,5 ml (31 mmol) 2 N hydroxidu sodného a 50 ml dimethylformamidu, ochlazeného na —10 °C. V míchání se pokračuje ještě 30 minut při teplotě —10 °C a pak 1 hodinu při teplotě místnosti. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi 50 ml ethylacetátu a 50 ml vody. Vodná fáze se oddělí a extrahuje se dvěma dalšími podíly ethylacetátu. Spojené organické fáze se promyjí ještě jednou 25 ml vody a odloží se. Spojené vodné fáze se okyselí nasyceným vodným roztokem kyseliny citrónové a extrahují se třikrát vždy 100 ml ethylacetátu. Ethylacetáťové extrak ty se spojí, promyjí se vodou, vysuší se síranem sodným a odpaří se k suchu. Překrystalováním zbytku ze směsi ethylacetátu a; petrol-etheru (teplota varu 60 až 80°C) se získá 8,98 g (62 %) dipeptidu tajícího za rozkladu při 150 až 165 °C.
Roztok 9,2 g [20 mmol) N-benzyloxykarbonyl-L-leucyl-(Nw-nitro)-L-arginmu, 4,2 g (20 mmol) hydrochloridu L-prolylazaglycinamidu, 5,4 g (40 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu a 3 ml (20 mmol) triethylaminu ve 200 ml dimethylformamidu se ochladí na 0 °C a přidá se k němu 8,2 g (40 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu.
Reakiční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti, pak se 'dicyklohexylmočovina odfiltruje a filtrát se odpaří k suchu. Překrystalováním zbytku ze směsí methanolu a etheru se získá tetrapeptidický derivát o teplotě tání 88 až 90 °C. Výtěžek 'činí 12,2 g (98,3 %);
( + + = -30,2° (0=1,6 v dimethylformamidu),
RfD = 0,57, RfF=0,40, RfH = 0,26, RfK = 0,63.
Siu.pen
Hydrogenace za použití 5% paládia na uhlí ve vodném ethanolu v přítomnosti 2 ekvivalentů chlorovodíku, trvající 16 hodin.
Stupe o &)
6,484 g (11,0 mmol) 2,4,5-trichlorfenylesteru N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosinu a 1,396 g (10 mmol) hydrochloridu methylesteru D-alaninu se rozpustí v 50 ml dimethylformamidu, ipřidá se 1,4 ml (10,0 mmol) triethylaminu a výsledný roztok se přes noc míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zpracuje obvyklým způsobem a zbytek se krystaluje z horkého ethylacetátu. Získá se 3,782 g (77,2 %) methylesteru chráněného dipeptidu o teplotě tání 163 °C;
[«Id24·8 = —12,84° (0=1,1 v dimethylformamidu).
Stupwí Θ
3,435 g (7,0 mmol) methylesteru N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosyl-D-alaninu se rozpustí ve 400 ml teplého methanolu, k roztoku se přidá 10 ml (120 mmol) 62% (hmotnost/objem) hydrazinhydrátu a· směs se nechá přes noc stát při teplotě 25 QC.
Hydrazid se odfiltruje, promyje se methanolem a etiherem, a dvakrát se překrystaluje z vroucího methanolu. Získá se 3,068 g (89,2 procent) žádaného produktu o teplotě tání 217 °C;
[a]D 24 = —20,44° (c = l,l v dimethylforinamidp),
R(A = 0,73, RfB = 0,7'5, RfC='0,67, j Rfp = 0,70,
RfE='0,50, RfF='0,54, RfH —0,67, у R(K = 0,85,
RfQ=0,25.
Stupce
К roztoku 1,18 g (2,4 mmol) N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosyl-Ď-alaninhydrazidu se Za míchání a chlazení na —20 °C přidá nejprve 1,6 ml (9,6 mmol) 6,02 M roztoku chlorovodíku v dioxanu a pak 0,29 ml (2,52 mmol) terc.butylnitritu. Po 14 minutách se přidá roztok 1,03 g (2,0 mol) dihydrochloridu L-leucyl-L-arginyl-L-prolylazaglycinamidu a 1,62 ml (11,6 mmol) triethylaminu v 15 ml dimethylformamidu, předem ochlazený na —20 °C a v míchání se pokračuje 24 hodiny při teplotě 4°C. Triethylamin-'hydrochlorid se odfiltruje a filtrát se odpaří ve vakuu k suchu. Odparek se nanese na sloupec silikagelu a sloupec se vymývá 5% (objem/objem) methanólem v chloroformu, - 10% (objem/objem) methanólem v chlproformu a směsí chloroform — methanoj — — voda (11: 8 : 2 objem/objem). Frakce obsahující produkt se spojí, odpaří se a peptid 1 se znoyu chromatografuje na sloupci silikpgeju za použití směsí acetonitrilu a vodv (3:1 objemově) jako elučního činidla. Získá se 890 mg (46,4 %) produktu o (a]D 25 = —45,7° (c=l,l v methanolu),
RfA'=Ú,54, RfB = 0,69, RfC'=0,41.
Stupen.
Pracuje se stejně jako u postupu ^7) .
StUPea®
Pracuje se stejně jako u post,upu (l5) .
Výtěžek čiflí 4? %;
2?
[a]o25= - 41,4° (c—1,3 v methanolu),
RjA-0,80,
RfČ = 0,47,
RfD =0,65, RfK=IO,95.
Pracuje se stejně jako u Výtěžek činí 69 %;
teplota tání 135 °C, postupu .
RfA=O,49, RfB =0,65, RfC=O,46, RfD'=O,64, RfF = 0,35, RfH = 0,19, RfK=0,86.
Stupen <3
Pracuje se stejně jako u postupu
Stupeá © ^=0-Phe)
Roztok 7,41 g (24,8 mmol) N-benzylpxykarbonyl-D-fenylalaninu a 3,62 g (25 mmol) metihylesteru L-leucinu ve 100 ml ethylácetátu se ochladí na 0°C a přidá se k němu 5,15 g (25 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě 4 °C, načež se obvyklým způsobem zpracuje. Překrystalováním zbytku ze směsi ethylacetátu a petroletheru (teplota varu 60 až 80 °C) se získá 9,1 g (86 %) žádaného dipeptidu o teplotě tání 123 až 124 ?C;
[tt]D 26-'-18,7° (c = 2,l v methanolu),
RfD=0,76, RfE = 0,65, RfF=0,74, RfH—0,73.
Stupen®) (A-D~Ph.e)
Katalytická redukce v přítomnosti 5% paládia na uhlí v ethanolu obsahujícím 1 ekvivalent chlorovodíku, trvající 5 hodin.
Stupeň© (A=D Phe)
К roztoku 4,89 g (8,36 mmol) 2,4,5-trichlorfenylesteru N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosinu a 2,5 g (7,6 mmol) hydrochloridu methylesteru D-fenylalanyl-L-leucinu v dimethylformamidu se přidá 1,1 ml (7,6 mmol) triethylaminu a v míchání se pokračuje přes noc při teplotě místnosti. Triethylamin-hydrochlOríd se odfiltruje a filtrát se odpaří k suchu. Překrystalováním zbytku z vodného methanolu se získá 3,6 g (69,,7%) tripeptidického· derivátu o teplotě tání 183 až 184 °C;
RfD = 0,82,
RfE-0,69,
RfH = 0,78,
RfP=O,71, RfQ=0,82.
Stupe !© <A=D-Pbe)
Roztok 3,42 g [5,04 mmol) shora uvedeného methylesteru a 60 mmol hydrazinhydrátu ve 30· ml dimethylformamidu se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti, pak se zahustí na malý objem a hydrazid sé vysráží přidáním 500 ml vody, načež se shromáždí, promyje se vodou, směsí methanolu a etheru - [1:4 objem/objem) a etherem, a vysuší se. Výtěžek produktu činí 2,94 g (85,9 %);
teplota tání 179 až 180 · °C,
Rf A=0,81,
RfB· = 0,79,
RfC = 0,88,
RfD=0,69,
RfE=0,49,
RfF=lO,65,
RfH = 0,67,
RfP = 0,25,
RfQ =0,57.
K roztoku 1,86 g (2,75 mmol) N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyro1syi-D-fenylalanyl-L-leucinhydrazidu v 5 ml dimethylformamídu se pří teplotě —20 °C přidá 1,83 ml (11 mmol) 6,02 M roztoku - chlorovodíku v dioxanu a pak 0,33 ml (2,89 mmol) terc.butylnitritu. Po 2 mtoutách se přidá roztok 1,89 mililitrů (13,5 mmol) triethylaminu a 1,02 g (2,5 mmol) hydrochloridu N“-nitro-L-arginyl-L-prolylazaglycinamidu v 10 ml dimethylformamidu a reakční směs se přes noc míchá při teplotě 4°C. Obvyklým zpracováním se získá hexapeptidický derivát, který se dále čistí chromatografií na sloupci 120 g silikagelu za použití - 51% - (objem/objem) methanolu v chloroformu, 10% (objem/objem) methanolu v chloroformu a směsi chloroform - methanol - voda - (11:8:2 objem/objem) jako elučních rozpouštědel. Získá se 0,74 g (29,3 ·%) žádaného produktu o teplotě tání 137 až 139 °C;
RfA=iO,68, RfB = 0,72,
RfC = 0,58,
RřD=0,62,
RfH^O.39, RfK = 0,95.
mmo- L-pyiogiutamy-L-histidinhydrazidu -se postupem popsaným u obecného postupu (a) převede na azid, který se kondenzuje s 11 mmol methylesteru L-tryptofyl-L-serinu (připraveným hydrogeinací N-benzyloxykarbonylderivátu v dimethylformamidu v přítomnosti 5% paládia na uhlí) nejprve po· χ dobu 30 minut při teplotě —10 °C ia pak 24 hodiny při teplotě 4 °C. Triethylamm-hydroc^ll^jrid -se -odfiltruje a filtrát se odpaří -k suchu. Surový produkt se vyčistí chromato- <
grafií na sloupci silikagelu za použití - 10% (»c^t^jj^i^/4^>bjem) methanolu v chloroformu, 20% (objem/objem) methanolu v chloroformu a směsi chloroform - methanol - voda (11:8:2 -objem/objem) jako elučních činidel.
Výtěžek - produktu činí 70%;
teplota tání 142 až 145 °C (rozklad),
RfA=O,39, f=t,,72, RfC = 0,45, RfD=0,48, RfK=D,61.
Stup*!®
5,4 mmol methylesteru L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-tryptofyl-L-serinu se rozpustí v 70 mililitrech dimethylformamidu a roztok se nechá 4 hodiny reagovat se 100 mmol hydrazinhydrátu. Dimethylformamid se odpaří ve vakuu, zbytek se trituruje s ethanolem, produkt se shromáždí, promyje se ethanolem a etherem, a vysuší se. Získá -se produkt o teplotě tání 184 až 189 °C. Výtěžek činí 82 %;
RfA = 0,18,
RfB=O,55,
RfC = 0,39,
RfD=0,27, RfK=O,58.
Stupen (A-D~Trp)
K roztoku 7,27 g (21,5 mmol) N-benzyloxykarboonyllD-tryptofanU) 3,12 g (21,5 mmol) methylesteru leuicinu a 5,8 g (43 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu v 50 ml -dimethylformamidu se -při teplotě 0 °C přidá
4,87 g -23,6 πιπίϋΐ) dicyklohexylkarbodiimidu). Reakční směs se -přes -noc - míchá při teplotě místnosti, načež se obvyklým způsobem zpracuje. Po překrystalování ze směsi ethylacetátu a petroletheru (teplota varu 60 až 80 - °C) se získá 9,55 g -dipeptidického derivátu, který podle chromatografie na tenké vrst- vě obsahuje stopy nečistot. Tento materiál se vyčistí chromatografií na sloupci 300 g silikagelu za použití chloroformu a 5% (objem/objem) methanolu v chloroformu jako elučnícih činidel. Výtěžek produktu činí 9,18 gramu (91,7%);
teplota tání 151 až 153 '°C,
RfA = 0,84,
RfB = 0,80,
RfC=0,86, RfD=0,78, J RfE=0,61,
RfF=O,68,
RfH=0,73, RfP—0,55, J RfQ —0,73.
S^upeh (A=í^-Trp)
Pětihodinová katalytická redukce v 80% (objem/objem) vodném 'dimethylformamidu v přítomnosti 5% paládia na uhlí.
Sfqpea @ (A=D~Trp)
Roztok 11,69 g (20 mmol) 2,4,5-trichlorfenylesteru N-benzyloxykarbonyl-O-benzyl-L-tyrosinu, a 6,28 g (19 mmol) methylesteru D-tryptofyl-L-leucmu ve 100 ml dimethylformamidu se 60 hodin míchá při teplotě místnosti, načež se reakční směs obvyklým způsobem zpracuje a zbytek se krystaluje ze směsi ethylacetátu a petroletheru (teplota varu 60 až 80 °C). Získá se 8,52 g (62,5 %) žádaného tripeptidického derivátu o teplotě J tání 165 až 166 °C;
RfA = 0,78,
RfB = 0,73,
J RfC=t>,84,
RfD = 0,80,
R(E = 0,62,
RřF=iO,7O,
RfH = 0,76, RfP=0,58, RfQ=0,68.
Stupeň. ® !A--D-Trp)
K roztoku 7,26 g (10,1 mmol) methylesteru N-benzyloxylkarbonyl-O-benzyl-L-tyrosyl-D-tryptofyl-L-leucinu ve směsi 200 ml methanolu a 50 ml dimethylformamidu se při teplotě místnosti přidá 100 mmol hydrazinhyrátu. Po 24 hodinách se roztok zahustí zhruba na objem 30 ml a k odparku se přidá 500 ml vody. ' Tripeptid-hydrazid ' se shromáždí, promyje se vodou, směsí methanolu a etheru (1:4 objem/objem) a etherem, a vysuší se. Získá se 6,86 g (94,6 %) žádaného produktu o teplotě 'tání 200 až 202 °C;
Rf A =0,90,
RfB = 0,95,
R{C=0,90,
RfD = 0,74,
RfQ = 0,59.
StupcP®*® (frO-Kp)
K roztoku 1,97 g (2,75 mmol) N-benzyloxykarbonyl-O-beιnzyllLltyrosyllD--tryptofyl-Ll leucinhydrazidu v 10 ml dimethylformamidu se za míchání a chlazení na =20 “C přidá nejprve 1,83 ml (11 mmol) 6,02 M roztoku chlorovodíku v dioxanu a pak 0,33 ml (2,89 mmol terc.buitylniitritu. Po 2 min. se přidá roztok 1,02 g (2,5 mmol) hydrochloridu Νω-пИго-Ь-а^1пу1-Ьфго1у1а:2^1ус1пат1йп a 1,89 ml (13,5 mmol) triethylaminu v 10 ml diimethylforniaiinidu, předem ochlazený na —20 °C, reakční směs se přes noc míchá při teplotě 4 °C, načež se zpracuje obvyklým způsobem.
Zbytek (1,27 g) se nanese na sloupec 230 g silikagelu a sloupec se vymývá chloroformem a 5% ' (objem/objem) methanolem v chloroformu. Získá se 0,91 g (34,,4%) produktu o teplotě tání 139 až 140 °C (rozklad);
RfA=0,67,
RfB=O,72,
RfD'=0,62, RfH = 0,34, RfK=O,95.
Stupe a® [A= D-Tyr
Roztok 3,17 g (9,64 mmol) Z-D-Tyr(Me)-OH, 1,92 g (10,6 mmol) 2,6 gramu (19,2 mmol) l-hydroxybenzotriazolu a 1,6 ml ' (11 mmol) triethylaminu ve 30 ml dimethylformamidu se ochladí na 0 °C a přidá se k němu 2,29 g (11,1 mmol) N,N‘-dicyklohexylkarbodiimidu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě 4 °C, načež se obvyklým ' způsobem zpracuje. Po překrystalování z horkého cyklohexanu se získá chráněný dipeptidický derivát ve výtěžku 1,41 g (95,2 %);
RřD=0,83,
RfE = 0,69,
RfP'=0,72,
RfQ' = 8,76.
SuPeri ® = D~ Tyr jj]
Katalytická redukce ve směsi methanol-dimethylfomiiamid - voda (8:1:1) obsahující 1,2 ekvivalentu chlorovodíku, v přítomnosti 5% paládia na uhlí, trvající 3 hodiny.
199973
Μ'
Stupe ο (¾ — = D~ Туг (íj
Roztok 8,2 mmol Z-Tyr(Bzl)-OOp, 8,2 mmol H-D-Tyr(Me)-Leu-OMe.HCl a 8,2 mmol triethylaminu v 60 ml dimethylformamidu se přes noc míchá . při teplotě místnosti, načež se reakční směs zpracuje. obvyklým způsobem. .Produkt se rozmíchá v . . etheru, zfitruje se, promyje .se etherem a vysuší se. . Výtěžek činí 81,2%; . teplota tání 191 až - 192°Ό,
Rf 0=0,85,
RfE=0,73,.
RfF = 0,72,
RfQ'=D,'78.
Stupě.* ® [д-о-ψ. ÍMe/]
K roztoku 4,59 g (6,4 mmol) Z-Tyr(Bzl)-D-Tyr(Me)-Leu-OMe . - ve ·25 ml dimethylformamidu a 50 ml methanolu se .přidá 12,9 mmol hydrazin-hydrátu a směs · se nechá .přes noc stát při teplotě místnosti. Methanol se odpaří ve vakuu, produkt se vysráží vodou, shromáždí se, promyje se vodou a vysuší se. Teplota tání činí 212 až 213 °C,
RfE=0,49,
RfF=0,66,
RfH =0,69, RfQ = 0,70.
®л® (А=0’Туг(МеГ|
3,54 g . (5,0 mmol) hydrazidu ze stupně
se rozpustí v . 10 ml . dimethylformamidu, roztok se . .za . míchání ochladí na—^20.°C· a . přidá . se k němu nejprve 3,38 ml . (20 . mmol) 5,9 M chlorovodíku v dioxanu a . . pak 0,6 ml (5,25 mmol) terc.butylnitritu. . Po·· 2 minutách se . přifU · předem . ochlazený .. roztok ·. - 2,04 .·.g (5 mmol) H-Arg(NO2)-Pro-Azgly-NH2.HCl.a 3,55 :ml tríethylaminu (25 mmo)) v 10 . ml dimeťhylformamidu a . v míchání se pokračuje přes noc při teplotě 4 °C. Reakční směs se obvyklým způsobem zpracuje a .surový produkt se vyčistí chromatografií na sloupci Í5ilikagelu za použití chloroformu, 5%o .(objem/objem) methanolu v chloroformu . a .100/o (objem/objem) methanolu v chloroformu jako elučních činidel. Výtěžek produktu činí
3,72 g .(70,9 %);
S/upeoT D”Ser (Bu íj
Rracuje se stejně . jako ve styppj -
Produkt se krystaluje z vodného methanolu. Výtěžek činí 90,4 . %; teplota tání . 1Q7 . až 108 °C,
RfD = 0,80,
RfE=0,68,
RfF ='0,73,
R(H=0,72,
R(P=0,72, R(Q=0,74.
Stupeo.
® D-S&>
Pětiihodinová katalytická redukce v přítomnosti . 5 % . (hmotnest/hmotnpst) . paládia na uhlí, ve směsi . dimethylformamidu a .vody (8:2).
Stupea® - [A=D-Sen ffiuj]
Roztok . 19,17 g . . (32,7 mmol) . Z-Tyr(Bzl)-OCp - a‘ ..32,7 mmo. . H-SpríBu1 J-LemO-Me ve 100 . ml dimethyfformamldu se nechá . 72 hodiny stát . při . teplotě . . místnosti. Obvyklým zpracovánfa ..se .- .z$ská..pevný produkt, . který se shromáždí, . promyje . .se . . etherem a vysuší se. Výtěžek . činí . 17,6. g (79,4 .. %);. teplota. tání 135 až 137 °C,
RfD=0,80,
RfH=0,77,
RfQ = 0,81.
Stupou {Áe D~Ser (Bu Tj
Pracuje se stejně jako ve stupni.
Produkt se překrystaluje z vodného . methanolu. Výtěžek činí 56,2 %; teplota tání 134 až 136 °C,
RfD=0,66, RfH=0,64, RíQ=Q;64.
RfA=0,64,
RíB‘.=0,72,
RfC=0,55,
RfD=0,66, RfF=0,40, RfH=0,52.
Produki· -se vyčistí- eheamaíografií na -stoup» ci silikagelu · za použití ·chloroformu · a 5% (objem/objem.) methanolu-, v - chloroformu jaPracuje. se stejně j-afcp,-y.e stupních ko elučnícih činidel. Výtěžek produktu činí 38,5%; teplota tání 142 až 145 °C,
RfA='0,84,
R(B = 0,71,
RfG='O,55,
RfD = 0,85.
RfF=0,46,
RfH=0,43,
RfQ = 0,16.
SiUPen ® JA = D- lyr (Me J
K roztoku 22,6 mmol Z-D-Tyr(Me]-OH, 5,98 g ( 22,9 rnmoll H-MeLeu-OMe.HBr, 335 ml (2,4,9 mmol] triethylaminu a 6,12 g (4'5,2 mmol] l-hydroxybenzotriazolu v 50 ml dimethylformamidu se za míchání a chlazení na 0°C přidá 5,13 g (24,9 mmol) dicyklohexylkarbodiimldu a v míchání se pokračuje ještě přes noc při teplotě 4 °C. Reakční směs se zpracuje obvyklým způsobem a produkt ' se vyčistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití chloroformu jako elučního činidla. Zíiská se olejovitý produkt ve výtěžku 55,2'%.
RfD=0,83,
RfE:=0,78, RfH=0,79, R(P = 0,80, Rf° =0,79.
f=O-7-yHM<0
Šestihodinová katalytická redukce v přítomnosti 5% (hmotnost/ihmotnost] paládia na uhlí ve směsi methanolu a vody (8:2 objem/objem] obsahující 1 ekvivalent chlorovodíku.
Slupé ® β=Ο-γ ÍMU)
Produkt se vyčistí chromatografií na sloupci silikagelu za použití etheru jako elučního činidla.
OmÍ ® 2A=0--ríMj]
Roztok 4,85 g (6,69 mmol] Z-Tyr(Bzlj-D-Tyr(Mu)-Mueuu-OMu a 120,7 mmol hydrazinihydrátu ve 150 ml methanolu se nechá přes noc reagovat při teplotě místnosti. Hydrazid se vysráží přidáním vody, shromáždí se a krystaluje se ze směsi methanolu a vody. Výtěžek činí 91,1 %; teplota tání 129 až 131 stupňů Celsia,
RfD = 0,79,
RfE=0,60, RfF=O,68, RfH =01,73, RfQ = 0,77.
Stupně®*® [Á=P--yfMej]
Pracuje se stejně jako ve stupních .
@ a ®
Produkt se překrystaluje ze směsi methanolu a etheru. Výtěžek činí 23,8 %, teplota tání 152 až 154 °C,
RfA=0,67,
RfB(=0,68,
RfC=0,58,
RfD = 0,59,
Rf H(=(0,50,
RfK=O,94,
Rf°=0,35.
Příklad 9 a 10
Za použití jednoho z obecných postupů (m] a (n], uvedených' v příkladech 1 až 8, je možno připravit následující sloučeniny:
Pracuje se stejně jako ve stupni
Příklad číslo A B Papírová elektroforéza Rf (vztaženo RfA
na ^libertn] pH 2,1 pH 6,5
9 D-Ser Leu 0,94 0,96 0,25
10 D-Phe MeLeu 0,84 0,87 0,35

Claims (3)

  1. PREDMET VYNALEZU
    1. Způsob výroby poly.peptidů obec-ného vzorce I lurHis -Trp -ЗАГ-Туп-д-д -Arj-pr0-E-F ve kterém
    A znamená D-Tyr, D-Tyr-(Me), D-Ser,
    D-Serf(Bul), D-Phe, D-Ala nebo D-Trp,
    B představuje Leu nebo MeLeu,
    E znamená Azgly a
    F představuje aminoskupinu, nebo (!)
    A znamená Azgly nebo Azala,
    B představuje Leu,
    E je přímá vazba a£
    F znamená ethylamtaoiskupinu,] a jejich farmaceuticky a veterinárně upotřebitelných adičních solí · s kyselinami, vyzna-i čující se tím, že se nechá reagovat1
    -OH, Q1U-W--0H,
    I—klu.-Hi s-Trp-OHj
    LZgíu“Hís -Trp -Ser-OH)
    -HifTrp-Ser-Tip-ArOH P~OH
    E^ll^-^řyís-^Trp-eB |тТуг-А- S-AI£-OH pebo nebo aktivní derivát libovolné z těchto látek, s
    H-His-Trp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
    H-Tnp-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
    H-Ser-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
    H-Tyr-A-B-Arg-Pro-E-F,
    H-A-B-Arg-Pro-E-F,
    H-B-Arg-Pro-E-F,
    H-Arg-Pro-E-F,
    H-Pro-E-F nebo
    H-Azgly-NH2, nebo s aktivním derivátem libovolné z těchto látek, načež se popřípadě výsledný produkt v neprotonované formě reakcí s kyselinou poskytující farmaceuticky nebo veterinárně upotřebitelný anion převede na svoji sůl.
  2. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se jako aktivní derivát prvně zmíněné reakční složky použije azid.
  3. 3. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznačující se tím, že se použijí výchozí látky, v nichž
    A znamená D-Ser (Bul ],
    B představuje Leu,
    E znamená Azgly a
    F představuje aminoskupinu.
CS772980A 1976-05-11 1977-05-05 Method of producing polypeptides CS199673B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS79207A CS199674B2 (cs) 1976-05-11 1979-01-09 Způsob výroby polypeptidů

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB19327/76A GB1524747A (en) 1976-05-11 1976-05-11 Polypeptide

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS199673B2 true CS199673B2 (en) 1980-07-31

Family

ID=10127509

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS772980A CS199673B2 (en) 1976-05-11 1977-05-05 Method of producing polypeptides

Country Status (27)

Country Link
US (1) US4100274A (cs)
JP (1) JPS52136172A (cs)
AT (2) AT379400B (cs)
AU (1) AU508025B2 (cs)
BE (1) BE854467A (cs)
BG (1) BG60740B2 (cs)
CA (1) CA1101844A (cs)
CH (2) CH627151A5 (cs)
CS (1) CS199673B2 (cs)
DD (1) DD136738A5 (cs)
DE (1) DE2720245C2 (cs)
DK (1) DK149596C (cs)
ES (1) ES458691A1 (cs)
FI (1) FI64139C (cs)
FR (1) FR2351092A1 (cs)
GB (1) GB1524747A (cs)
HU (1) HU179990B (cs)
IE (1) IE44426B1 (cs)
IL (1) IL52014A (cs)
NL (2) NL191793C (cs)
NO (2) NO147304C (cs)
NZ (1) NZ183931A (cs)
PL (2) PL108860B1 (cs)
SE (2) SE437837B (cs)
SU (1) SU910116A3 (cs)
YU (1) YU40672B (cs)
ZA (1) ZA772433B (cs)

Families Citing this family (139)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4234571A (en) * 1979-06-11 1980-11-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Nonapeptide and decapeptide derivatives of luteinizing hormone releasing hormone
DE3411224A1 (de) * 1984-03-27 1985-10-10 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Verfahren zur racematarmen herstellung von peptidzwischenprodukten der gonadorelin- und gonadorelinanaloga-synthese und neue zwischenprodukte bei diesem verfahren
US4760053A (en) * 1984-08-02 1988-07-26 Fernand Labrie Combination therapy for selected sex steroid dependent cancers
US4666885A (en) * 1985-02-08 1987-05-19 Fernand Labrie Combination therapy for treatment of female breast cancer
US4705778A (en) * 1985-10-22 1987-11-10 Sri International Orally active LHRH analogs
JPH0284272U (cs) * 1988-12-20 1990-06-29
JP2672677B2 (ja) * 1989-02-09 1997-11-05 タツプ・フアーマシユーテイカルズ・インコーポレイテツド Ｌｈｒｈ同族体
US5372996A (en) * 1989-03-10 1994-12-13 Endorecherche, Inc. Method of treatment of androgen-related diseases
ZA901847B (en) * 1989-03-10 1991-10-30 Endorecherche Inc Combination therapy for the treatment of estrogen sensitive diseases
HUT60139A (en) * 1989-07-07 1992-08-28 Endorecherche Inc Process for producing pharmaceutical composition suitable for treating prostate cancer connected with androgen
HUT60280A (en) * 1989-07-07 1992-08-28 Endorecherche Inc Process for producing androgen derivatives inhibiting sexual steroidal activity, as well as pharmaceutical compositions comprising same
GB9112859D0 (en) * 1991-06-14 1991-07-31 Ici Plc Peptide process
JPH07506575A (ja) * 1992-05-21 1995-07-20 アンドルシェルシュ・インコーポレイテッド テストステロン５α−レダクターゼ活性の阻害剤
US6413536B1 (en) 1995-06-07 2002-07-02 Southern Biosystems, Inc. High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device
US7833543B2 (en) * 1995-06-07 2010-11-16 Durect Corporation High viscosity liquid controlled delivery system and medical or surgical device
CA2192782C (en) 1995-12-15 2008-10-14 Nobuyuki Takechi Production of microspheres
CA2192773C (en) 1995-12-15 2008-09-23 Hiroaki Okada Production of sustained-release preparation for injection
US6448031B1 (en) 1996-06-13 2002-09-10 Itoham Foods Inc. Process for producing LH-RH derivatives
US6051558A (en) * 1997-05-28 2000-04-18 Southern Biosystems, Inc. Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs
US20060025328A1 (en) * 1997-05-28 2006-02-02 Burns Patrick J Compositions suitable for controlled release of the hormone GnRH and its analogs
US6242421B1 (en) 1997-11-06 2001-06-05 Richard Lloyd Bowen Methods for preventing and treating Alzheimer's disease
US6833373B1 (en) 1998-12-23 2004-12-21 G.D. Searle & Co. Method of using an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
US6858598B1 (en) 1998-12-23 2005-02-22 G. D. Searle & Co. Method of using a matrix metalloproteinase inhibitor and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
US20040258672A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-23 Monash University Graft acceptance through manipulation of thymic regeneration
US20040259803A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-23 Monash University Disease prevention by reactivation of the thymus
US20040241842A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-02 Monash University Stimulation of thymus for vaccination development
US20050020524A1 (en) * 1999-04-15 2005-01-27 Monash University Hematopoietic stem cell gene therapy
US20070274946A1 (en) * 1999-04-15 2007-11-29 Norwood Immunoloty, Ltd. Tolerance to Graft Prior to Thymic Reactivation
US20040265285A1 (en) * 1999-04-15 2004-12-30 Monash University Normalization of defective T cell responsiveness through manipulation of thymic regeneration
AUPR074500A0 (en) * 2000-10-13 2000-11-09 Monash University Treatment of t cell disorders
ES2154590B1 (es) 1999-05-20 2001-11-01 Lipotec Sa Procedimiento de sintesis de peptidos en fase solida
AR023940A1 (es) 2000-05-03 2002-09-04 Eriochem Sa Procedimiento para la produccion de microcapsulas de liberacion prolongada de peptidos solubles en agua
DE10032256C2 (de) * 2000-07-03 2003-06-05 Infineon Technologies Ag Chip-ID-Register-Anordnung
US20060088512A1 (en) * 2001-10-15 2006-04-27 Monash University Treatment of T cell disorders
EP3351246B8 (en) 2001-02-19 2019-09-18 Novartis Pharma AG Rapamycin derivative for the treatment of a solid tumor associated with deregulated angiogenesis
PL392652A1 (pl) 2001-05-16 2010-12-06 Novartis Ag Kombinacja zawierająca N-{5-[4-(4-metylo-piperazyno-metylo)-benzoiloamido]-2-metylofenylo}-4-(3-pirydylo)-2-pirymidyno-aminę oraz środek chemoterapeutyczny, jej zastosowanie, kompozycja farmaceutyczna ją zawierająca oraz zestaw zawierający taką kombinację
US20060287282A1 (en) * 2001-06-25 2006-12-21 Steiner Mitchell S Compositions comprising a SARM ad GnRH agonist or a GnRH antagonist, and methods of use thereof
CA2466659A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Anticancer agents
GB0128510D0 (en) * 2001-11-28 2002-01-23 Novartis Ag Organic compounds
US20030144203A1 (en) * 2001-12-19 2003-07-31 Voyager Pharmaceutical Corporation Methods for slowing senescence and treating and preventing diseases associated with senescence
GB0206215D0 (en) 2002-03-15 2002-05-01 Novartis Ag Organic compounds
JP5227492B2 (ja) 2002-05-16 2013-07-03 ノバルティス アーゲー 癌におけるｅｄｇレセプター結合剤の使用
US20040001889A1 (en) 2002-06-25 2004-01-01 Guohua Chen Short duration depot formulations
SI1575569T1 (sl) 2002-12-13 2010-12-31 Durect Corp Oralni sistem dostave zdravila, ki obsega visokoviskozne tekoče nosilne materiale
CA2532965C (en) 2003-07-22 2013-05-14 Astex Therapeutics Limited 3, 4-disubstituted 1h-pyrazole compounds and their use as cyclin dependent kinases (cdk) and glycogen synthase kinase-3 (gsk-3) modulators
GB0320806D0 (en) * 2003-09-05 2003-10-08 Astrazeneca Ab Therapeutic treatment
US20080279812A1 (en) * 2003-12-05 2008-11-13 Norwood Immunology, Ltd. Disease Prevention and Vaccination Prior to Thymic Reactivation
EP1735307B1 (en) 2004-04-07 2012-08-29 Novartis AG Inhibitors of iap
GB0512324D0 (en) 2005-06-16 2005-07-27 Novartis Ag Organic compounds
PE20060371A1 (es) * 2004-06-25 2006-06-15 Takeda Pharmaceutical Derivados de metastina en el tratamiento del cancer
LT2767292T (lt) * 2004-09-17 2016-12-12 Durect Corporation Palaikomosios vietinės anestezijos mišinys su saib
GB0425854D0 (en) * 2004-11-25 2004-12-29 Astrazeneca Ab Therapeutic treatment
KR101346886B1 (ko) 2005-01-21 2014-01-02 아스텍스 테라퓨틱스 리미티드 제약 화합물
RU2436575C2 (ru) * 2005-01-21 2011-12-20 Астекс Терапьютикс Лимитед Соединения для использования в фармацевтике
AR054425A1 (es) 2005-01-21 2007-06-27 Astex Therapeutics Ltd Sales de adicion de piperidin 4-il- amida de acido 4-(2,6-dicloro-benzoilamino) 1h-pirazol-3-carboxilico.
US8404718B2 (en) 2005-01-21 2013-03-26 Astex Therapeutics Limited Combinations of pyrazole kinase inhibitors
WO2006119388A2 (en) * 2005-05-03 2006-11-09 Novetide, Ltd. Methods for the production of peptide having a c-terminal amide
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
US20070027105A1 (en) 2005-07-26 2007-02-01 Alza Corporation Peroxide removal from drug delivery vehicle
AR058065A1 (es) 2005-09-27 2008-01-23 Novartis Ag Compuestos de carboxiamina y uso de los mismos.composiciones farmaceuticas.
GB0605120D0 (en) 2006-03-14 2006-04-26 Novartis Ag Organic Compounds
KR20090007635A (ko) 2006-05-09 2009-01-19 노파르티스 아게 철 킬레이터 및 항-신생물 약제를 포함하는 조합물 및 그의용도
KR20090073121A (ko) 2006-09-29 2009-07-02 노파르티스 아게 Ｐｉ3ｋ 지질 키나제 억제제로서의 피라졸로피리미딘
US8916552B2 (en) 2006-10-12 2014-12-23 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
WO2008044045A1 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Astex Therapeutics Limited Pharmaceutical combinations
PT2117521E (pt) 2006-11-03 2012-09-10 Durect Corp Sistemas de administração transdérmica que compreendem bupivacaína
EP2491923A3 (en) 2007-02-15 2012-12-26 Novartis AG Combinations of therapeutic agents for treating cancer
US8415401B2 (en) 2007-12-06 2013-04-09 Durect Corporation Oral pharmaceutical dosage forms
PL2268612T3 (pl) 2008-03-24 2015-02-27 Novartis Ag Arylosulfonamidowe inhibitory metaloproteinaz macierzy
ES2519474T3 (es) 2008-03-26 2014-11-07 Novartis Ag Inhibidores de las desacetilasas B basados en hidroxamato
US20100260844A1 (en) 2008-11-03 2010-10-14 Scicinski Jan J Oral pharmaceutical dosage forms
RU2519673C2 (ru) * 2008-11-28 2014-06-20 Новартис Аг Комбинации ингибитора hsp90
WO2010083617A1 (en) 2009-01-21 2010-07-29 Oncalis Ag Pyrazolopyrimidines as protein kinase inhibitors
PT2391366E (pt) 2009-01-29 2013-02-05 Novartis Ag Benzimidazoles substituídos para o tratamento de astrocitomas
WO2010149755A1 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Novartis Ag 1, 3-disubstituted imidazolidin-2-one derivatives as inhibitors of cyp 17
US8389526B2 (en) 2009-08-07 2013-03-05 Novartis Ag 3-heteroarylmethyl-imidazo[1,2-b]pyridazin-6-yl derivatives
EP2464649A1 (en) 2009-08-12 2012-06-20 Novartis AG Heterocyclic hydrazone compounds and their uses to treat cancer and inflammation
MX2012002179A (es) 2009-08-20 2012-03-16 Novartis Ag Compuestos heterociclicos de oxima.
CA2771936A1 (en) 2009-08-26 2011-03-03 Novartis Ag Tetra-substituted heteroaryl compounds and their use as mdm2 and/or mdm4 modulators
CN102596963A (zh) 2009-09-10 2012-07-18 诺瓦提斯公司 二环杂芳基的醚衍生物
PE20121471A1 (es) 2009-11-04 2012-11-01 Novartis Ag Derivados de sulfonamida heterociclicos utiles como inhibidores de mek
JP2013512215A (ja) 2009-11-25 2013-04-11 ノバルティス アーゲー 二環式ヘテロアリールのベンゼン縮合６員酸素含有ヘテロ環誘導体
KR20120102750A (ko) 2009-12-08 2012-09-18 노파르티스 아게 헤테로시클릭 술폰아미드 유도체
CU24130B1 (es) 2009-12-22 2015-09-29 Novartis Ag Isoquinolinonas y quinazolinonas sustituidas
US8440693B2 (en) 2009-12-22 2013-05-14 Novartis Ag Substituted isoquinolinones and quinazolinones
KR20200144591A (ko) 2010-06-16 2020-12-29 앙도르쉐르슈 인코포레이티드 에스트로겐-관련 질병의 치료 또는 예방 방법
JP2013532149A (ja) 2010-06-17 2013-08-15 ノバルティス アーゲー ピペリジニル置換１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−イリデンアミン誘導体
US20130090342A1 (en) 2010-06-17 2013-04-11 Novartis Ag Biphenyl substituted 1,3-dihydro-benzoimidazol-2-ylideneamine derivatives
UA112517C2 (uk) 2010-07-06 2016-09-26 Новартіс Аг Тетрагідропіридопіримідинові похідні
EP2627648A1 (en) 2010-09-16 2013-08-21 Novartis AG 17aHYDROXYLASE/C17,20-LYASE INHIBITORS
US20130324526A1 (en) 2011-02-10 2013-12-05 Novartis Ag [1,2,4] triazolo [4,3-b] pyridazine compounds as inhibitors of the c-met tyrosine kinase
CN103492390A (zh) 2011-03-08 2014-01-01 诺瓦提斯公司 氟苯基双环杂芳基化合物
EA023064B1 (ru) 2011-04-28 2016-04-29 Новартис Аг ИНГИБИТОРЫ 17α-ГИДРОКСИЛАЗЫ/C-ЛИАЗЫ
KR20210094672A (ko) 2011-05-16 2021-07-29 젠자임 코포레이션 Ｃｘｃｒ４ 길항제의 용도
MX2013014398A (es) 2011-06-09 2014-03-21 Novartis Ag Derivados de sulfonamida heterociclicos.
WO2012175520A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 Novartis Ag Hydroxy substituted isoquinolinone derivatives
WO2012175487A1 (en) 2011-06-20 2012-12-27 Novartis Ag Cyclohexyl isoquinolinone compounds
CN103608349A (zh) 2011-06-27 2014-02-26 诺瓦提斯公司 四氢-吡啶并-嘧啶衍生物的固体形式和盐
ES2691650T3 (es) 2011-09-15 2018-11-28 Novartis Ag 3-(quinolin-6-il-tio)-[1,2,4]-triazolo-[4,3-a]-piridinas 6-sustituidas como inhibidores de tirosina quinasa c-Met
CN104080787B (zh) 2011-11-29 2016-09-14 诺华股份有限公司 吡唑并吡咯烷化合物
US20150148377A1 (en) 2011-12-22 2015-05-28 Novartis Ag Quinoline Derivatives
HUE036953T2 (hu) 2011-12-22 2018-08-28 Novartis Ag 2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-származékok és rokon vegyületek, mint foszfoinozitid-3-kináz (PI3K) inhibitorok például reumatoid arthritis kezelésére
KR20140107575A (ko) 2011-12-23 2014-09-04 노파르티스 아게 Bcl2와 결합 파트너의 상호작용을 억제하기 위한 화합물
EA201491264A1 (ru) 2011-12-23 2014-11-28 Новартис Аг Соединения для ингибирования взаимодействия bcl-2 с партнерами по связыванию
KR20140107573A (ko) 2011-12-23 2014-09-04 노파르티스 아게 Bcl2와 결합 파트너의 상호작용을 억제하기 위한 화합물
AU2012355624A1 (en) 2011-12-23 2014-07-17 Novartis Ag Compounds for inhibiting the interaction of BCL2 with binding partners
MX2014007725A (es) 2011-12-23 2015-01-12 Novartis Ag Compuestos para inhibir la interaccion de bcl2 con los componentes de enlace.
JO3357B1 (ar) 2012-01-26 2019-03-13 Novartis Ag مركبات إيميدازوبيروليدينون
US20130310387A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Novartis Ag Monocyclic Heteroaryl Cycloalkyldiamine Derivatives
WO2013175417A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Novartis Ag Pyrrolopyrrolidinone compounds
EP2861256B1 (en) 2012-06-15 2019-10-23 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Compositions for treating cancer and methods for making the same
HK1209421A1 (en) 2012-08-13 2016-04-01 Novartis Ag Bicyclic heteroaryl cycloalkyldiamine derivatives as inhibitors of spleen tyrosine kinases (syk)
CN107434803B (zh) 2012-10-02 2020-05-05 吉利德科学公司 组蛋白去甲基化酶抑制剂
TW201422625A (zh) 2012-11-26 2014-06-16 Novartis Ag 二氫－吡啶并－□衍生物之固體形式
EP2948453B1 (en) 2013-01-22 2017-08-02 Novartis AG Pyrazolo[3,4-d]pyrimidinone compounds as inhibitors of the p53/mdm2 interaction
US9403827B2 (en) 2013-01-22 2016-08-02 Novartis Ag Substituted purinone compounds
WO2014128612A1 (en) 2013-02-20 2014-08-28 Novartis Ag Quinazolin-4-one derivatives
EP3170811A1 (en) 2013-02-27 2017-05-24 Gilead Sciences, Inc. Ethyl pyridine-4-carboxylate compound as inhibitor of histone demethylases
US9555113B2 (en) 2013-03-15 2017-01-31 Durect Corporation Compositions with a rheological modifier to reduce dissolution variability
US20150018376A1 (en) 2013-05-17 2015-01-15 Novartis Ag Pyrimidin-4-yl)oxy)-1h-indole-1-carboxamide derivatives and use thereof
UY35675A (es) 2013-07-24 2015-02-27 Novartis Ag Derivados sustituidos de quinazolin-4-ona
WO2015022663A1 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Novartis Ag Compounds and compositions as inhibitors of mek
WO2015022664A1 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Novartis Ag Compounds and compositions as inhibitors of mek
US9227969B2 (en) 2013-08-14 2016-01-05 Novartis Ag Compounds and compositions as inhibitors of MEK
SG11201600028YA (en) 2013-09-22 2016-02-26 Calitor Sciences Llc Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use
RU2016133285A (ru) 2014-01-15 2018-02-20 Новартис Аг Фармацевтические комбинации
US9394281B2 (en) 2014-03-28 2016-07-19 Calitor Sciences, Llc Substituted heteroaryl compounds and methods of use
WO2015153498A1 (en) 2014-03-31 2015-10-08 Epitherapeutics, Aps Inhibitors of histone demethylases
MX2016012893A (es) 2014-04-03 2017-05-12 Invictus Oncology Pvt Ltd Sustancias terapéuticas combinadas supramoleculares.
EA201790154A1 (ru) 2014-08-27 2017-08-31 Джилид Сайэнс, Инк. Соединения и способы для ингибирования гистоновых деметилаз
JP2018527362A (ja) 2015-09-11 2018-09-20 サンシャイン・レイク・ファーマ・カンパニー・リミテッドＳｕｎｓｈｉｎｅ Ｌａｋｅ Ｐｈａｒｍａ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 置換されたヘテロアリール化合物および使用方法
CA3028450A1 (en) 2016-07-06 2018-01-11 Durect Corporation Oral dosage form with drug composition, barrier layer and drug layer
EP3710006A4 (en) 2017-11-19 2021-09-01 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. SUBSTITUTED HETEROARYL COMPOUNDS AND THEIR METHODS OF USE
EP3730483B1 (en) 2017-12-21 2023-08-30 Hefei Institutes of Physical Science, Chinese Academy of Sciences Class of pyrimidine derivative kinase inhibitors
WO2019143874A1 (en) 2018-01-20 2019-07-25 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Substituted aminopyrimidine compounds and methods of use
JP7680763B2 (ja) 2019-09-26 2025-05-21 エス．アイ．エス． シュロフ イノベイティブ サイエンス リミテッド 抗老化組成物およびその使用方法
US20220395553A1 (en) 2019-11-14 2022-12-15 Cohbar, Inc. Cxcr4 antagonist peptides
CN115666621A (zh) 2020-01-13 2023-01-31 度勒科特公司 具有减少的杂质的持续释放药物递送系统及相关方法
JP2024503402A (ja) 2021-01-12 2024-01-25 デュレクト コーポレーション 徐放性薬物送達システム及び関連の方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3914412A (en) * 1973-10-11 1975-10-21 Abbott Lab {8 Des{13 Gly{9 {0 10 -Gn{13 RH nonapeptide amide analogs in position 6 having ovulation-inducing activity
US4005063A (en) * 1973-10-11 1977-01-25 Abbott Laboratories [Des-gly]10 -GnRH nonapeptide anide analogs in position 6 having ovulation-inducing activity
US3901872A (en) * 1974-03-13 1975-08-26 American Home Prod P-glu-his-trp-ser-tyr-d-pgl-leu-arg-pro-gly-nh' 2 'and intermediates
JPS50142563A (cs) * 1974-04-26 1975-11-17
US3896104A (en) * 1974-05-22 1975-07-22 American Home Prod P-glu-his-trp-ser-tyr-d-lys-leu-arg-pro-gly-nh' 2 'and intermediates
DE2438350C3 (de) * 1974-08-09 1979-06-13 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Peptide mit starker LH-RH/FSH-RH-Wirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen
US3971737A (en) * 1975-03-24 1976-07-27 American Home Products Corporation [2-Methyl-Ala6 ]LRH
US4010125A (en) * 1975-06-12 1977-03-01 Schally Andrew Victor [D-Trp6 ]-LH-RH and intermediates therefor
US4024121A (en) * 1976-01-27 1977-05-17 Schally Andrew Victor (Pyro)-Glu-His-Trp-D-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHR and intermediates
US4018726A (en) * 1975-06-12 1977-04-19 Andrew Victor Schally [D-Phe6 ]-LH-RH and intermediates therefor
US3992530A (en) * 1975-12-08 1976-11-16 American Home Products Corporation [D-2-(1,4-Cyclohexadienyl)gly]6 -des-gly10 -lrh nonapeptide amides

Also Published As

Publication number Publication date
NL970002I1 (nl) 1997-03-03
IE44426L (en) 1977-11-11
NL191793B (nl) 1996-04-01
NO147304B (no) 1982-12-06
NL191793C (nl) 1996-08-02
PL108860B1 (en) 1980-05-31
HU179990B (en) 1983-01-28
DD136738A5 (de) 1979-07-25
DE2720245A1 (de) 1977-11-24
DK207977A (da) 1977-11-12
ES458691A1 (es) 1978-08-16
NO149586B (no) 1984-02-06
DE2720245C2 (de) 1986-09-25
NO771644L (no) 1977-11-14
CH627151A5 (cs) 1981-12-31
NO149586C (no) 1984-05-16
DK149596B (da) 1986-08-04
ATA335877A (de) 1985-05-15
PL197889A1 (pl) 1978-02-13
NL970002I2 (nl) 1997-05-01
NZ183931A (en) 1979-03-16
AU2468177A (en) 1978-11-02
DK149596C (da) 1987-01-05
FI771480A7 (cs) 1977-11-12
BE854467A (fr) 1977-11-10
NL7705130A (nl) 1977-11-15
FR2351092B1 (cs) 1980-02-22
GB1524747A (en) 1978-09-13
SE437993B (sv) 1985-03-25
IL52014A0 (en) 1977-07-31
AU508025B2 (en) 1980-03-06
US4100274A (en) 1978-07-11
CH629475A5 (de) 1982-04-30
SE437837B (sv) 1985-03-18
SE8007763L (sv) 1980-11-05
NO822984L (no) 1977-11-14
PL104362B1 (pl) 1979-08-31
SE7705432L (sv) 1977-11-12
ATA217979A (de) 1981-06-15
CA1101844A (en) 1981-05-26
FR2351092A1 (fr) 1977-12-09
AT379400B (de) 1985-12-27
YU117277A (en) 1983-02-28
AT365562B (de) 1982-01-25
NO147304C (no) 1983-03-16
BG60740B2 (bg) 1996-01-31
FI64139C (fi) 1983-10-10
JPS52136172A (en) 1977-11-14
YU40672B (en) 1986-04-30
IL52014A (en) 1979-11-30
IE44426B1 (en) 1981-11-18
ZA772433B (en) 1978-03-29
JPS6113480B2 (cs) 1986-04-14
FI64139B (fi) 1983-06-30
SU910116A3 (ru) 1982-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS199673B2 (en) Method of producing polypeptides
US3853837A (en) Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor
US4024248A (en) Peptides having LH-RH/FSH-RH activity
US4003884A (en) Peptides having LH-RH/FSH-RH activity
IE902740A1 (en) Lhrh analogs
HU186749B (en) Process for preparing new, biologically active peptides
HU185535B (en) Process for preparing new gonadoliberin derivatives
US4124703A (en) Luliberin analogs
CZ1021084A3 (en) Gonadoliberin derivatives and process for preparing thereof
US3862927A (en) Process for preparation of vasoactive intestinal peptide
US4636490A (en) Novel peptidic derivatives inhibiting gastric secretion, process for preparing them and drugs containing them
US3801561A (en) Derivatives of salmon thyrocalcitonin
US3850904A (en) Psychopharmacologically active d-glu or d-his containing peptides
SE461042B (sv) Peptider med tillvaextbefraemjande aktivitet jaemte veterinaera kompositioner innehaallande naemnda peptider
HU194913B (en) Process for producing novel gonadoliberin derivatives containing in the sixth position aromatic amino carboxylic acid and medical preparations containing these compounds
Van Nispen et al. INVESTIGATION OF THE ROLE OF TRYPTOPHAN IN α‐MSH*: Replacement by L‐Pentamethylphenylalanine and L‐Phenylalanine
GB2130590A (en) Peptides
HU187503B (en) Process for preparing gonadoliberine derivatives containing beta-aspartyl group
US3873510A (en) Peptides of ACTH activity containing {60 -aminooxy carboxylic acid on the N-terminal moiety, and a process for the preparation thereof
KiSFALUDY et al. Pentagastrin Analogs Containing α-Aminooxy Acids, I Synthesis of Analogs Substituted at the N-Terminus
US3400118A (en) Intermediates in the preparation of secretin
US3417072A (en) Intermediates in the synthesis of secretin
US3812091A (en) D-analogs of secretin
US3767639A (en) Process for the preparation of secretin
US3812092A (en) Intermediates in the preparation of secretin