TW201919713A - 用於帕金森氏症之aadc多核苷酸 - Google Patents

用於帕金森氏症之aadc多核苷酸 Download PDF

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Abstract

本發明係關於用於製備、製造編碼AADC之多核苷酸及將其用於治療帕金森氏症之治療用途的組合物及方法。

Description

用於帕金森氏症之AADC多核苷酸
本發明係關於用於治療帕金森氏症之組合物，尤其核酸分子，例如編碼AADC之多核苷酸。在一些實施例中，此類AADC多核苷酸可由重組腺相關病毒(AAV)編碼或在其內部編碼。
芳族L-胺基酸脫羧酶(AADC)為負責多巴胺及血清素之合成的均二聚吡哆醛磷酸鹽依賴性酶。所編碼之蛋白質催化L-3,4-二羥基苯丙胺酸(L-DOPA或左旋多巴)脫羧為多巴胺；L-5-羥色胺酸脫羧為血清素；及L-色胺酸脫羧為色胺。此基因中之缺陷為芳族L-胺基酸脫羧酶缺乏症(AADCD)之原因，其為先天性神經傳遞質代謝錯誤，導致血清素及兒茶酚胺缺乏症組合，引起嚴重運動及自主功能異常。
帕金森氏症(PD)為產生感覺及運動症狀之中樞神經系統(CNS)進行性神經退化性疾病。多巴胺替代物(亦即左旋多巴)一直為用於PD中運動障礙的標準藥物療法。然而，多巴胺療法之益處隨時間變得較不明顯，此係部分地歸因於生成多巴胺之細胞的進行性死亡及AADC活性之對應損失。此外，全身性投與高劑量多巴胺因副作用而複雜化，該等副作用諸如由多巴胺激導性刺激中腦邊緣系統而引起的運動性能波動、異動症及幻覺。一種恢復多巴胺激導性功能且使副作用最小化之策略為使用基因療法將AADC直接遞送至CNS之標靶區域中。
由於腺相關病毒(AAV)具長期基因表現、沒有輔助病毒下沒有能力自主複製、具有轉導分裂中或非分裂中細胞以及缺乏野生型病毒感染之病原性，因此其已成為供基因療法之有吸引力載體(參見例如Hadaczek等人 Mol. Ther. 18(8), 1458-1461, 2010年8月)。AAV為屬於依賴病毒(Dependovirus )屬之輔助依賴型DNA小病毒。
出於在治療帕金森氏症中使用基因療法的目的，本發明提供此類經改良之核酸構築體(例如多核苷酸)與包含編碼全長AADC蛋白質之多巴羧化酶(「DDC」)基因序列的AAV源性載體一起使用。
本文所描述之核酸構築體至少包含圍繞DDC 基因序列 定位之5'-ITR及3'-ITR，其各自或兩者均可來源於AAV，以及基因表現及純系選擇所要求之額外組分。
本文描述用於設計、製備、製造及/或調配AADC多核苷酸之組合物、方法、製程、套組及裝置。
在一些實施例中，此類AADC多核苷酸可由質體或載體重組腺相關病毒(AAV)之質體或載體編碼或含於其內部。
本發明之各個實施例的細節闡述於下文描述中。本發明之其他特徵、目標及優勢將根據該描述及申請專利範圍而為顯而易見的。
序列表之參考
本申請案與電子格式之序列表一起提交。名稱為14482-022-228_Sequence_Listing.txt之序列表文件在2018年6月10日產生，且大小為6,461,106位元組。電子格式之序列表中的資訊以全文引用之方式併入本文中。 I. 本發明之組合物腺相關病毒 (AAV) 及 AAV 顆粒
細小病毒科(Parvoviridae family)病毒為以單股DNA基因組為特徵之非包膜二十面體小衣殼病毒。細小病毒科病毒由兩種亞科組成：感染脊椎動物之細小病毒亞科(Parvovirinae)，及感染無脊椎動物之濃核病毒亞科(Densovirinae)。由於其結構相對簡單、使用標準分子生物學技術操縱容易，因此此病毒科適用作生物學工具。病毒之基因組可經修飾以含有用於組裝功能重組病毒或病毒顆粒的最少組分，該等組分負載有所需有效負載或經工程改造以表現或遞送所需有效負載，該有效負載可向靶細胞、組織、器官或生物體進行遞送。
細小病毒及細小病毒科之其他成員大體描述於Kenneth I. Berns, 「Parvoviridae: The Viruses and Their Replication」, 第69章, 於FIELDS VIROLOGY (第3版, 1996)中，該文獻內容以全文引用之方式併入。
細小病毒科包含依賴病毒屬(Dependovirus genus)，該依賴病毒屬包括能夠在脊椎動物宿主中複製之腺相關病毒(AAV)，該等脊椎動物宿主包括(但不限於)人類、靈長類動物、牛、犬、馬及綿羊物種。
載體基因組為長度約5,000個核苷酸(nt)之線性單股DNA (ssDNA)分子。AAV病毒基因組可包含有效負載區域及至少一個反向末端重複序列(ITR)或ITR區域。ITR傳統上側接用於非結構蛋白(由Rep基因編碼)及結構蛋白(由衣殼基因或Cap基因編碼)之編碼核苷酸序列。雖然不希望受理論束縛，但AAV病毒基因組通常包含兩個ITR序列。載體基因組包含特徵性T形髮夾結構，該T形髮夾結構由ssDNA之5'及3'端的自互補末端145 nt限定，其形成能量上穩定之雙股區域。該等雙股髮夾結構包含多種功能，包括(但不限於)藉由充當宿主病毒複製細胞之內源DNA聚合酶複合物的引子來充當DNA複製之起點。
除所編碼之異源有效負載以外，AAV顆粒可包含任何天然存在及/或重組之AAV血清型核苷酸序列或變異體的全部或部分病毒基因組。AAV變異體可具有在核酸層面(基因組或衣殼)及胺基酸層面(衣殼)顯著同源之序列，以產生在物理及功能上大體等效、藉由相似機制複製且藉由相似機制組裝的構築體。Chiorini等人, J. Vir. 71: 6823-33(1997)；Srivastava等人, J. Vir. 45:555-64 (1983)；Chiorini等人, J. Vir. 73:1309-1319 (1999)；Rutledge等人, J. Vir. 72:309-319 (1998)；及Wu等人, J. Vir. 74: 8635-47 (2000)，該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒為複製缺陷性重組AAV顆粒，其病毒基因組內缺乏編碼功能性Rep及Cap蛋白之序列。此等缺陷性AAV顆粒可缺乏大部分或全部親本編碼序列，且基本上僅攜載一或兩個AAV ITR序列及用於遞送至細胞、組織、器官或生物體中的所關注之核酸。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒的病毒基因組包含至少一個提供其中所編碼之編碼序列之複製、轉錄及轉譯的控制元件。並非所有控制元件均需要始終存在，只要編碼序列能夠在適當宿主細胞中加以複製、轉錄及/或轉譯即可。表現控制元件之非限制性實例包括用於轉錄起始及/或終止之序列、啟動子及/或增強子序列、有效RNA加工信號(諸如剪接及多腺苷酸化信號)、使細胞質mRNA穩定之序列、增強轉譯功效之序列(例如Kozak共同序列)、增強蛋白質穩定性之序列及/或增強蛋白質加工及/或分泌的序列。
根據本發明，治療及/或診斷用之AAV顆粒包含已蒸餾或濃縮為所關注之核酸有效負載或負荷轉導所必需之最少組分的病毒。以此方式，AAV顆粒經工程改造為用於特異性遞送、同時缺乏發現於野生型病毒中之有害複製及/或整合特徵的運載工具(vehicle)。
本發明之AAV顆粒可以重組方式產生，且可係基於腺相關病毒(AAV)親本或參考序列。如本文所用，「載體」為轉運、轉導或以其他方式充當異源分子(諸如本文所描述之核酸)之運載體的任何分子或部分。
除單股AAV顆粒(例如ssAAV)之外，本發明亦提供自互補AAV (scAAV)顆粒。scAAV顆粒含有黏接在一起以形成雙股DNA之DNA股。藉由跳過第二股合成，scAAV允許在細胞中快速表現。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒為scAAV。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒為ssAAV。
用於產生及/或修飾AAV顆粒之方法揭示於此項技術中，諸如假型化AAV顆粒(PCT專利公開案第WO200028004號、第WO200123001號、第WO2004112727號、第WO 2005005610號及第WO 2005072364號，該等公開案中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中)。
AAV顆粒可經修飾以增強遞送效率。此類經修飾之AAV顆粒可高效地封裝且用於成功地以高頻率及最小毒性感染靶細胞。在一些實施例中，AAV顆粒之衣殼係根據美國公開案第US 20130195801號中所描述之方法加以工程改造，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，可將包含編碼本發明多肽之有效負載區域的AAV顆粒引入哺乳動物細胞中。AAV 血清型
本發明之AAV顆粒可包含或來源於任何天然或重組AAV血清型。根據本發明，AAV顆粒可利用或係基於選自以下中之任一者的血清型：PHP.B、PHP.A、AAV1、AAV2、AAV2G9、AAV3、AAV3a、AAV3b、AAV3-3、AAV4、AAV4-4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42-1b、AAV42-2、AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-10、AAV42-11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2-15/rh.62、AAV2-3/rh.61、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-9/rh.52、AAV3-11/rh.53、AAV4-8/r11.64、AAV4-9/rh.54、AAV4-19/rh.55、AAV5-3/rh.57、AAV5-22/rh.58、AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH-1/hu.1、AAVH-5/hu.3、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVN721-8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCy.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、AAVrh8R、AAVrh8R A586R突變體、AAVrh8R R533A突變體、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、綿羊AAV、AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV-PAEC、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAV-LK07、AAV-LK08、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK15、AAV-LK16、AAV-LK17、AAV-LK18、AAV-LK19、AAV-PAEC2、AAV-PAEC4、AAV-PAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAEC8、AAV-PAEC11、AAV-PAEC12、AAV-2-pre-miRNA-101、AAV-8h、AAV-8b、AAV-h、AAV-b、AAV SM 10-2、AAV改組100-1、AAV改組100-3、AAV改組100-7、AAV改組10-2、AAV改組10-6、AAV改組10-8、AAV改組100-2、AAV SM 10-1、AAV SM 10-8、AAV SM 100-3、AAV SM 100-10、BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、AAVrh.50、AAVrh.43、AAVrh.62、AAVrh.48、AAVhu.19、AAVhu.11、AAVhu.53、AAV4-8/rh.64、AAVLG-9/hu.39、AAV54.5/hu.23、AAV54.2/hu.22、AAV54.7/hu.24、AAV54.1/hu.21、AAV54.4R/hu.27、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、AAV128.1/hu.43、真實型AAV (ttAAV)、UPENN AAV 10、日本AAV 10血清型、AAV CBr-7.1、AAV CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.3、AAV CBr-7.4、AAV CBr-7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAV CBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAV CBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAV CHt-6.5、AAV CHt-6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAV CKd-4、AAV CKd-6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKd-B4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、AAV CKd-N3、AAV CKd-N4、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV Clv1-10、AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-4、AAV Clv1-7、AAV Clv1-8、AAV Clv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLv-M7、AAV CLv-M8、AAV CLv-M9、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R6、AAV CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-1、AAV CSp-10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAV CSp-8、AAV CSp-8.10、AAV CSp-8.2、AAV CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-9、AAV.hu.48R3、AAV.VR-355、AAV3B、AAV4、AAV5、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AAVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/HSC2、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/HSC9、PHP.B (AAV-PHP.B)、PHP.A (AAV.PHP.A)、G2B-26、G2B-13、TH1.1-32、TH1.1-35、AAVPHP.B2、AAVPHP.B3、AAVPHP.N/PHP.B-DGT、AAVPHP.B-EST、AAVPHP.B-GGT、AAVPHP.B-ATP、AAVPHP.B-ATT-T、AAVPHP.B-DGT-T、AAVPHP.B-GGT-T、AAVPHP.B-SGS、AAVPHP.B-AQP、AAVPHP.B-QQP、AAVPHP.B-SNP(3)、AAVPHP.B-SNP、AAVPHP.B-QGT、AAVPHP.B-NQT、AAVPHP.B-EGS、AAVPHP.B-SGN、AAVPHP.B-EGT、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-STP、AAVPHP.B-PQP、AAVPHP.B-SQP、AAVPHP.B-QLP、AAVPHP.B-TMP、AAVPHP.B-TTP、AAVPHP.S/G2A12、AAVG2A15/G2A3、AAVG2B4及/或AAVG2B5，及其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國公開案第US 20160361439號中所描述之修飾，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該修飾諸如(但不限於)野生型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12及其雜合體之Y252F、Y272F、Y444F、Y500F、Y700F、Y704F、Y730F、Y275F、Y281F、Y508F、Y576F、Y612G、Y673F及Y720F。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利第US 9546112號中所描述之突變，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該突變諸如(但不限於) AAV6 (US 9546112之SEQ ID NO: 4)、AAV1 (US 9546112之SEQ ID NO: 6)、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV7、AAV9、AAV10或AAV11或其衍生物之序列中之F129L、D418E、K531E、L584F、V598A及H642N突變中的至少兩者，但非全部。在又另一個實施例中，AAV血清型可為或具有包含K531E突變之AAV6序列(US 9546112之SEQ ID NO: 5)。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有處於AAV1序列中之突變，如美國公開案第US 20130224836號中所描述，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該突變諸如(但不限於)表面所暴露之至少一個酪胺酸殘基(較佳處於AAV1 (US 20130224836之SEQ ID NO: 2)之位置252、273、445、701、705及731處)經另一個胺基酸(較佳經苯丙胺酸殘基)取代。在一個實施例中，AAV血清型可為或具有處於AAV9序列中之突變，諸如(但不限於)表面所暴露之至少一個酪胺酸殘基(較佳處於AAV2 (US 20130224836之SEQ ID NO: 4)之位置252、272、444、500、700、704及730處)經另一個胺基酸(較佳經苯丙胺酸殘基)取代。在一個實施例中，處於AAV9 (SEQ ID NO: 6 US 20130224836)之位置446處的酪胺酸殘基經苯丙胺酸殘基取代。
在一些實施例中，血清型可為AAV2或其變異體，如國際公開案第WO2016130589號中所描述，該公開案以全文引用之方式併入本文中。AAV2之胺基酸序列可包含N587A、E548A或N708A突變。在一個實施例中，任何AAV之胺基酸序列均可包含V708K突變。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國公開案第US20030138772號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAV1 (US20030138772之SEQ ID NO: 6及64)、AAV2 (US20030138772之SEQ ID NO: 7及70)、AAV3 (US20030138772之SEQ ID NO: 8及71)、AAV4 (US20030138772之SEQ ID NO: 63)、AAV5 (US20030138772之SEQ ID NO: 114)、AAV6 (US20030138772之SEQ ID NO: 65)、AAV7 (US20030138772之SEQ ID NO: 1-3)、AAV8 (US20030138772之SEQ ID NO: 4及95)、AAV9 (US20030138772之SEQ ID NO: 5及100)、AAV10 (US20030138772之SEQ ID NO: 117)、AAV11 (US20030138772之SEQ ID NO: 118)、AAV12 (US20030138772之SEQ ID NO: 119)、AAVrh10 (US20030138772之SEQ ID NO: 81的胺基酸1至738)、AAV16.3 (US20030138772 SEQ ID NO: 10)、AAV29.3/bb.1 (US20030138772 SEQ ID NO: 11)、AAV29.4 (US20030138772 SEQ ID NO: 12)、AAV29.5/bb.2 (US20030138772 SEQ ID NO: 13)、AAV1.3 (US20030138772 SEQ ID NO: 14)、AAV13.3 (US20030138772 SEQ ID NO: 15)、AAV24.1 (US20030138772 SEQ ID NO: 16)、AAV27.3 (US20030138772 SEQ ID NO: 17)、AAV7.2 (US20030138772 SEQ ID NO: 18)、AAVC1 (US20030138772 SEQ ID NO: 19)、AAVC3 (US20030138772 SEQ ID NO: 20)、AAVC5 (US20030138772 SEQ ID NO: 21)、AAVF1 (US20030138772 SEQ ID NO: 22)、AAVF3 (US20030138772 SEQ ID NO: 23)、AAVF5 (US20030138772 SEQ ID NO: 24)、AAVH6 (US20030138772 SEQ ID NO: 25)、AAVH2 (US20030138772 SEQ ID NO: 26)、AAV42-8 (US20030138772 SEQ ID NO: 27)、AAV42-15 (US20030138772 SEQ ID NO: 28)、AAV42-5b (US20030138772 SEQ ID NO: 29)、AAV42-1b (US20030138772 SEQ ID NO: 30)、AAV42-13 (US20030138772 SEQ ID NO: 31)、AAV42-3a (US20030138772 SEQ ID NO: 32)、AAV42-4 (US20030138772 SEQ ID NO: 33)、AAV42-5a (US20030138772 SEQ ID NO: 34)、AAV42-10 (US20030138772 SEQ ID NO: 35)、AAV42-3b (US20030138772 SEQ ID NO: 36)、AAV42-11 (US20030138772 SEQ ID NO: 37)、AAV42-6b (US20030138772 SEQ ID NO: 38)、AAV43-1 (US20030138772 SEQ ID NO: 39)、AAV43-5 (US20030138772 SEQ ID NO: 40)、AAV43-12 (US20030138772 SEQ ID NO: 41)、AAV43-20 (US20030138772 SEQ ID NO: 42)、AAV43-21 (US20030138772 SEQ ID NO: 43)、AAV43-23 (US20030138772 SEQ ID NO: 44)、AAV43-25 (US20030138772 SEQ ID NO: 45)、AAV44.1 (US20030138772 SEQ ID NO: 46)、AAV44.5 (US20030138772 SEQ ID NO: 47)、AAV223.1 (US20030138772 SEQ ID NO: 48)、AAV223.2 (US20030138772 SEQ ID NO: 49)、AAV223.4 (US20030138772 SEQ ID NO: 50)、AAV223.5 (US20030138772 SEQ ID NO: 51)、AAV223.6 (US20030138772 SEQ ID NO: 52)、AAV223.7 (US20030138772 SEQ ID NO: 53)、AAVA3.4 (US20030138772 SEQ ID NO: 54)、AAVA3.5 (US20030138772 SEQ ID NO: 55)、AAVA3.7 (US20030138772 SEQ ID NO: 56)、AAVA3.3 (US20030138772 SEQ ID NO: 57)、AAV42.12 (US20030138772 SEQ ID NO: 58)、AAV44.2 (US20030138772 SEQ ID NO: 59)、AAV42-2 (US20030138772 SEQ ID NO: 9)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國公開案第US20150159173號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAV2 (US20150159173之SEQ ID NO: 7及23)、rh20 (US20150159173之SEQ ID NO: 1)、rh32/33 (US20150159173之SEQ ID NO: 2)、rh39 (US20150159173之SEQ ID NO: 3、20及36)、rh46 (US20150159173之SEQ ID NO: 4及22)、rh73 (US20150159173之SEQ ID NO: 5)、rh74 (US20150159173之SEQ ID NO: 6)、AAV6.1 (US20150159173之SEQ ID NO: 29)、rh.8 (US20150159173之SEQ ID NO: 41)、rh.48.1 (US20150159173之SEQ ID NO: 44)、hu.44 (US20150159173之SEQ ID NO: 45)、hu.29 (US20150159173之SEQ ID NO: 42)、hu.48 (US20150159173之SEQ ID NO: 38)、rh54 (US20150159173之SEQ ID NO: 49)、AAV2 (US20150159173之SEQ ID NO: 7)、cy.5 (US20150159173之SEQ ID NO: 8及24)、rh.10 (US20150159173之SEQ ID NO: 9及25)、rh.13 (US20150159173之SEQ ID NO: 10及26)、AAV1 (US20150159173之SEQ ID NO: 11及27)、AAV3 (US20150159173之SEQ ID NO: 12及28)、AAV6 (US20150159173之SEQ ID NO: 13及29)、AAV7 (US20150159173之SEQ ID NO: 14及30)、AAV8 (US20150159173之SEQ ID NO: 15及31)、hu.13 (US20150159173之SEQ ID NO: 16及32)、hu.26 (US20150159173之SEQ ID NO: 17及33)、hu.37 (US20150159173之SEQ ID NO: 18及34)、hu.53 (US20150159173之SEQ ID NO: 19及35)、rh.43 (US20150159173之SEQ ID NO: 21及37)、rh2 (US20150159173之SEQ ID NO: 39)、rh.37 (US20150159173之SEQ ID NO: 40)、rh.64 (US20150159173之SEQ ID NO: 43)、rh.48 (US20150159173之SEQ ID NO: 44)、ch.5 (US20150159173之SEQ ID NO: 46)、rh.67 (US20150159173之SEQ ID NO: 47)、rh.58 (US20150159173之SEQ ID NO: 48)，或其變異體，包括(但不限於) Cy5R1、Cy5R2、Cy5R3、Cy5R4、rh.13R、rh.37R2、rh.2R、rh.8R、rh.48.1、rh.48.2、rh.48.1.2、hu.44R1、hu.44R2、hu.44R3、hu.29R、ch.5R1、rh64R1、rh64R2、AAV6.2、AAV6.1、AAV6.12、hu.48R1、hu.48R2及hu.48R3。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利第US 7198951號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV9 (US 7198951之SEQ ID NO: 1-3)、AAV2 (US 7198951之SEQ ID NO: 4)、AAV1 (US 7198951之SEQ ID NO: 5)、AAV3 (US 7198951之SEQ ID NO: 6)及AAV8 (US7198951之SEQ ID NO: 7)。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有處於AAV9序列中之突變，如N Pulicherla等人(Molecular Therapy 19(6):1070-1078 (2011)，該文獻以全文引用之方式併入本文中)所描述，該突變諸如(但不限於) AAV9.9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利第US 6156303號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV3B (US 6156303之SEQ ID NO: 1及10)、AAV6 (US 6156303之SEQ ID NO: 2、7及11)、AAV2 (US 6156303之SEQ ID NO: 3及8)、AAV3A (US 6156303之SEQ ID NO: 4及9)或其衍生物。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國公開案第US20140359799號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV8 (US20140359799之SEQ ID NO: 1)、AAVDJ (US20140359799之SEQ ID NO: 2及3)，或其變異體。
在一些實施例中，血清型可為AAVDJ或其變異體，諸如AAVDJ8 (或AAV-DJ8)，如由Grimm等人(Journal of Virology 82(12): 5887-5911 (2008)，該文獻以全文引用之方式併入本文中)所描述。AAVDJ8之胺基酸序列可包含兩個或超過兩個突變以便移除肝素結合域(HBD)。作為一個非限制性實例，在美國專利第7,588,772號(其內容以全文引用之方式併入本文中)中描述為SEQ ID NO: 1之AAV-DJ序列可包含兩個突變：(1) R587Q，其中胺基酸587處之精胺酸(R；Arg)變為麩醯胺(Q；Gln)；及(2) R590T，其中胺基酸590處之精胺酸(R；Arg)變為蘇胺酸(T；Thr)。作為另一個非限制性實例，可包含三個突變：(1) K406R，其中胺基酸406處之離胺酸(K；Lys)變為精胺酸(R；Arg)；(2) R587Q，其中胺基酸587處之精胺酸(R；Arg)變為麩醯胺(Q；Gln)；及(3) R590T，其中胺基酸590處之精胺酸(R；Arg)變為蘇胺酸(T；Thr)。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如國際公開案第WO1998011244號中所描述之AAV4的序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV4 (WO1998011244之SEQ ID NO: 1-20)。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有處於AAV2序列中之突變以產生AAV2G9，如國際公開案第WO2014144229號中所描述，該公開案以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如國際公開案第WO2005033321號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAV3-3 (WO2005033321之SEQ ID NO: 217)、AAV1 (WO2005033321之SEQ ID NO: 219及202)、AAV106.1/hu.37 (WO2005033321之SEQ ID No: 10)、AAV114.3/hu.40 (WO2005033321之SEQ ID No: 11)、AAV127.2/hu.41 (WO2005033321之SEQ ID No: 6及8)、AAV128.3/hu.44 (WO2005033321之SEQ ID No: 81)、AAV130.4/hu.48 (WO2005033321之SEQ ID NO: 78)、AAV145.1/hu.53 (WO2005033321之SEQ ID No: 176及177)、AAV145.6/hu.56 (WO2005033321之SEQ ID NO: 168及192)、AAV16.12/hu.11 (WO2005033321之SEQ ID No: 153及57)、AAV16.8/hu.10 (WO2005033321之SEQ ID No: 156及56)、AAV161.10/hu.60 (WO2005033321之SEQ ID No: 170)、AAV161.6/hu.61 (WO2005033321之SEQ ID No: 174)、AAV1-7/rh.48 (WO2005033321之SEQ ID NO: 32)、AAV1-8/rh.49 (WO2005033321之SEQ ID NOs: 103及25)、AAV2 (WO2005033321之SEQ ID NO: 211及221)、AAV2-15/rh.62 (WO2005033321之SEQ ID No: 33及114)、AAV2-3/rh.61 (WO2005033321之SEQ ID NO: 21)、AAV2-4/rh.50 (WO2005033321之SEQ ID No: 23及108)、AAV2-5/rh.51 (WO2005033321之SEQ ID NO: 104及22)、AAV3.1/hu.6 (WO2005033321之SEQ ID NO: 5及84)、AAV3.1/hu.9 (WO2005033321之SEQ ID NO: 155及58)、AAV3-11/rh.53 (WO2005033321之SEQ ID NO: 186及176)、AAV3-3 (WO2005033321之SEQ ID NO: 200)、AAV33.12/hu.17 (WO2005033321之SEQ ID No: 4)、AAV33.4/hu.15 (WO2005033321之SEQ ID No: 50)、AAV33.8/hu.16 (WO2005033321之SEQ ID No: 51)、AAV3-9/rh.52 (WO2005033321之SEQ ID NO: 96及18)、AAV4-19/rh.55 (WO2005033321之SEQ ID NO: 117)、AAV4-4 (WO2005033321之SEQ ID NO: 201及218)、AAV4-9/rh.54 (WO2005033321之SEQ ID NO: 116)、AAV5 (WO2005033321之SEQ ID NO: 199及216)、AAV52.1/hu.20 (WO2005033321之SEQ ID NO: 63)、AAV52/hu.19 (WO2005033321之SEQ ID NO: 133)、AAV5-22/rh.58 (WO2005033321之SEQ ID No: 27)、AAV5-3/rh.57 (WO2005033321之SEQ ID NO: 105)、AAV5-3/rh.57 (WO2005033321之SEQ ID No: 26)、AAV58.2/hu.25 (WO2005033321之SEQ ID No: 49)、AAV6 (WO2005033321之SEQ ID NO: 203及220)、AAV7 (WO2005033321之SEQ ID NO: 222及213)、AAV7.3/hu.7 (WO2005033321之SEQ ID No: 55)、AAV8 (WO2005033321之SEQ ID NO: 223及214)、AAVH-1/hu.1 (WO2005033321之SEQ ID No: 46)、AAVH-5/hu.3 (WO2005033321之SEQ ID No: 44)、AAVhu.1 (WO2005033321之SEQ ID NO: 144)、AAVhu.10 (WO2005033321之SEQ ID NO: 156)、AAVhu.11 (WO2005033321之SEQ ID NO: 153)、AAVhu.12 (WO2005033321 SEQ ID NO: 59)、AAVhu.13 (WO2005033321之SEQ ID NO: 129)、AAVhu.14/AAV9 (WO2005033321之SEQ ID NO: 123及3)、AAVhu.15 (WO2005033321之SEQ ID NO: 147)、AAVhu.16 (WO2005033321之SEQ ID NO: 148)、AAVhu.17 (WO2005033321之SEQ ID NO: 83)、AAVhu.18 (WO2005033321之SEQ ID NO: 149)、AAVhu.19 (WO2005033321之SEQ ID NO: 133)、AAVhu.2 (WO2005033321之SEQ ID NO: 143)、AAVhu.20 (WO2005033321之SEQ ID NO: 134)、AAVhu.21 (WO2005033321之SEQ ID NO: 135)、AAVhu.22 (WO2005033321之SEQ ID NO: 138)、AAVhu.23.2 (WO2005033321之SEQ ID NO: 137)、AAVhu.24 (WO2005033321之SEQ ID NO: 136)、AAVhu.25 (WO2005033321之SEQ ID NO: 146)、AAVhu.27 (WO2005033321之SEQ ID NO: 140)、AAVhu.29 (WO2005033321之SEQ ID NO: 132)、AAVhu.3 (WO2005033321之SEQ ID NO: 145)、AAVhu.31 (WO2005033321之SEQ ID NO: 121)、AAVhu.32 (WO2005033321之SEQ ID NO: 122)、AAVhu.34 (WO2005033321之SEQ ID NO: 125)、AAVhu.35 (WO2005033321之SEQ ID NO: 164)、AAVhu.37 (WO2005033321之SEQ ID NO: 88)、AAVhu.39 (WO2005033321之SEQ ID NO: 102)、AAVhu.4 (WO2005033321之SEQ ID NO: 141)、AAVhu.40 (WO2005033321之SEQ ID NO: 87)、AAVhu.41 (WO2005033321之SEQ ID NO: 91)、AAVhu.42 (WO2005033321之SEQ ID NO: 85)、AAVhu.43 (WO2005033321之SEQ ID NO: 160)、AAVhu.44 (WO2005033321之SEQ ID NO: 144)、AAVhu.45 (WO2005033321之SEQ ID NO: 127)、AAVhu.46 (WO2005033321之SEQ ID NO: 159)、AAVhu.47 (WO2005033321之SEQ ID NO: 128)、AAVhu.48 (WO2005033321之SEQ ID NO: 157)、AAVhu.49 (WO2005033321之SEQ ID NO: 189)、AAVhu.51 (WO2005033321之SEQ ID NO: 190)、AAVhu.52 (WO2005033321之SEQ ID NO: 191)、AAVhu.53 (WO2005033321之SEQ ID NO: 186)、AAVhu.54 (WO2005033321之SEQ ID NO: 188)、AAVhu.55 (WO2005033321之SEQ ID NO: 187)、AAVhu.56 (WO2005033321之SEQ ID NO: 192)、AAVhu.57 (WO2005033321之SEQ ID NO: 193)、AAVhu.58 (WO2005033321之SEQ ID NO: 194)、AAVhu.6 (WO2005033321之SEQ ID NO: 84)、AAVhu.60 (WO2005033321之SEQ ID NO: 184)、AAVhu.61 (WO2005033321之SEQ ID NO: 185)、AAVhu.63 (WO2005033321之SEQ ID NO: 195)、AAVhu.64 (WO2005033321之SEQ ID NO: 196)、AAVhu.66 (WO2005033321之SEQ ID NO: 197)、AAVhu.67 (WO2005033321之SEQ ID NO: 198)、AAVhu.7 (WO2005033321之SEQ ID NO: 150)、AAVhu.8 (WO2005033321 SEQ ID NO: 12)、AAVhu.9 (WO2005033321之SEQ ID NO: 155)、AAVLG-10/rh.40 (WO2005033321之SEQ ID No: 14)、AAVLG-4/rh.38 (WO2005033321之SEQ ID NO: 86)、AAVLG-4/rh.38 (WO2005033321之SEQ ID No: 7)、AAVN721-8/rh.43 (WO2005033321之SEQ ID NO: 163)、AAVN721-8/rh.43 (WO2005033321之SEQ ID No: 43)、AAVpi.1 (WO2005033321 SEQ ID NO: 28)、AAVpi.2 (WO2005033321 SEQ ID NO: 30)、AAVpi.3 (WO2005033321 SEQ ID NO: 29)、AAVrh.38 (WO2005033321之SEQ ID NO: 86)、AAVrh.40 (WO2005033321之SEQ ID NO: 92)、AAVrh.43 (WO2005033321之SEQ ID NO: 163)、AAVrh.44 (WO2005033321 SEQ ID NO: 34)、AAVrh.45 (WO2005033321 SEQ ID NO: 41)、AAVrh.47 (WO2005033321 SEQ ID NO: 38)、AAVrh.48 (WO2005033321之SEQ ID NO: 115)、AAVrh.49 (WO2005033321之SEQ ID NO: 103)、AAVrh.50 (WO2005033321之SEQ ID NO: 108)、AAVrh.51 (WO2005033321之SEQ ID NO: 104)、AAVrh.52 (WO2005033321之SEQ ID NO: 96)、AAVrh.53 (WO2005033321之SEQ ID NO: 97)、AAVrh.55 (WO2005033321 SEQ ID NO: 37)、AAVrh.56 (WO2005033321之SEQ ID NO: 152)、AAVrh.57 (WO2005033321之SEQ ID NO: 105)、AAVrh.58 (WO2005033321之SEQ ID NO: 106)、AAVrh.59 (WO2005033321 SEQ ID NO: 42)、AAVrh.60 (WO2005033321 SEQ ID NO: 31)、AAVrh.61 (WO2005033321之SEQ ID NO: 107)、AAVrh.62 (WO2005033321之SEQ ID NO: 114)、AAVrh.64 (WO2005033321之SEQ ID NO: 99)、AAVrh.65 (WO2005033321 SEQ ID NO: 35)、AAVrh.68 (WO2005033321 SEQ ID NO: 16)、AAVrh.69 (WO2005033321 SEQ ID NO: 39)、AAVrh.70 (WO2005033321 SEQ ID NO: 20)、AAVrh.72 (WO2005033321 SEQ ID NO: 9)，或其變異體，包括(但不限於) AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVcy.6、AAVrh.12、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.25/42 15、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh14。變異體之非限制實例包括WO2005033321之SEQ ID NO: 13、15、17、19、24、36、40、45、47、48、51-54、60-62、64-77、79、80、82、89、90、93-95、98、100、101,、109-113、118-120、124、126、131、139、142、151、154、158、161、162、165-183、202、204-212、215、219、224-236，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如國際公開案第WO2015168666號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAVrh8R (WO2015168666之SEQ ID NO: 9)、AAVrh8R A586R突變體(WO2015168666之SEQ ID NO: 10)、AAVrh8R R533A突變體(WO2015168666之SEQ ID NO: 11)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利第US9233131號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAVhE1.1 (US9233131之SEQ ID NO: 44)、AAVhEr1.5 (US9233131之SEQ ID NO: 45)、AAVhER1.14 (US9233131之SEQ ID NO: 46)、AAVhEr1.8 (US9233131之SEQ ID NO: 47)、AAVhEr1.16 (US9233131之SEQ ID NO: 48)、AAVhEr1.18 (US9233131之SEQ ID NO: 49)、AAVhEr1.35 (US9233131之SEQ ID NO: 50)、AAVhEr1.7 (US9233131之SEQ ID NO: 51)、AAVhEr1.36 (US9233131之SEQ ID NO: 52)、AAVhEr2.29 (US9233131之SEQ ID NO: 53)、AAVhEr2.4 (US9233131之SEQ ID NO: 54)、AAVhEr2.16 (US9233131之SEQ ID NO: 55)、AAVhEr2.30 (US9233131之SEQ ID NO: 56)、AAVhEr2.31 (US9233131之SEQ ID NO: 58)、AAVhEr2.36 (US9233131之SEQ ID NO: 57)、AAVhER1.23 (US9233131之SEQ ID NO: 53)、AAVhEr3.1 (US9233131之SEQ ID NO: 59)、AAV2.5T (US9233131之SEQ ID NO: 42)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利公開案第US20150376607號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAV-PAEC (US20150376607之SEQ ID NO: 1)、AAV-LK01 (US20150376607之SEQ ID NO: 2)、AAV-LK02 (US20150376607之SEQ ID NO: 3)、AAV-LK03 (US20150376607之SEQ ID NO: 4)、AAV-LK04 (US20150376607之SEQ ID NO: 5)、AAV-LK05 (US20150376607之SEQ ID NO: 6)、AAV-LK06 (US20150376607之SEQ ID NO: 7)、AAV-LK07 (US20150376607之SEQ ID NO: 8)、AAV-LK08 (US20150376607之SEQ ID NO: 9)、AAV-LK09 (US20150376607之SEQ ID NO: 10)、AAV-LK10 (US20150376607之SEQ ID NO: 11)、AAV-LK11 (US20150376607之SEQ ID NO: 12)、AAV-LK12 (US20150376607之SEQ ID NO: 13)、AAV-LK13 (US20150376607之SEQ ID NO: 14)、AAV-LK14 (US20150376607之SEQ ID NO: 15)、AAV-LK15 (US20150376607之SEQ ID NO: 16)、 AAV-LK16 (US20150376607之SEQ ID NO: 17)、AAV-LK17 (US20150376607之SEQ ID NO: 18)、AAV-LK18 (US20150376607之SEQ ID NO: 19)、AAV-LK19 (US20150376607之SEQ ID NO: 20)、AAV-PAEC2 (US20150376607之SEQ ID NO: 21)、AAV-PAEC4 (US20150376607之SEQ ID NO: 22)、AAV-PAEC6 (US20150376607之SEQ ID NO: 23)、AAV-PAEC7 (US20150376607之SEQ ID NO: 24)、AAV-PAEC8 (US20150376607之SEQ ID NO: 25)、AAV-PAEC11 (US20150376607之SEQ ID NO: 26)、AAV-PAEC12 (US20150376607之SEQ ID NO: 27)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利第US9163261號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV-2-pre-miRNA-101 (SEQ ID NO:1 US9163261)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利公開案第US20150376240號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV-8h (US20150376240之SEQ ID NO: 6)、AAV-8b (US20150376240之SEQ ID NO: 5)、AAV-h (US20150376240之SEQ ID NO: 2)、AAV-b (US20150376240之SEQ ID NO: 1)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利公開案第US20160017295號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV SM 10-2 (US20160017295之SEQ ID NO: 22)、AAV改組100-1 (US20160017295之SEQ ID NO: 23)、AAV改組100-3 (US20160017295之SEQ ID NO: 24)、AAV改組100-7 (US20160017295之SEQ ID NO: 25)、AAV改組10-2 (US20160017295之SEQ ID NO: 34)、AAV改組10-6 (US20160017295之SEQ ID NO: 35)、AAV改組10-8 (US20160017295之SEQ ID NO: 36)、AAV改組100-2 (US20160017295之SEQ ID NO: 37)、AAV SM 10-1 (US20160017295之SEQ ID NO: 38)、AAV SM 10-8 (US20160017295之SEQ ID NO: 39)、AAV SM 100-3 (US20160017295之SEQ ID NO: 40)、AAV SM 100-10 (US20160017295之SEQ ID NO: 41)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利公開案第US20150238550號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) BNP61 AAV (US20150238550之SEQ ID NO: 1)、BNP62 AAV (US20150238550之SEQ ID NO: 3)、BNP63 AAV (US20150238550之SEQ ID NO: 4)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或可具有如美國專利公開案第US20150315612號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAVrh.50 (US20150315612之SEQ ID NO: 108)、AAVrh.43 (US20150315612之SEQ ID NO: 163)、AAVrh.62 (US20150315612之SEQ ID NO: 114)、AAVrh.48 (US20150315612之SEQ ID NO: 115)、AAVhu.19 (US20150315612之SEQ ID NO: 133)、AAVhu.11 (US20150315612之SEQ ID NO: 153)、AAVhu.53 (US20150315612之SEQ ID NO: 186)、AAV4-8/rh.64 (US20150315612之SEQ ID No: 15)、AAVLG-9/hu.39 (US20150315612之SEQ ID No: 24)、AAV54.5/hu.23 (US20150315612之SEQ ID No: 60)、AAV54.2/hu.22 (US20150315612之SEQ ID No: 67)、AAV54.7/hu.24 (US20150315612之SEQ ID No: 66)、AAV54.1/hu.21 (US20150315612之SEQ ID No: 65)、AAV54.4R/hu.27 (US20150315612之SEQ ID No: 64)、AAV46.2/hu.28 (US20150315612之SEQ ID No: 68)、AAV46.6/hu.29 (US20150315612之SEQ ID No: 69)、AAV128.1/hu.43 (US20150315612之SEQ ID No: 80)，或其變異體。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如國際公開案第WO2015121501號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)真實型AAV (ttAAV) (WO2015121501之SEQ ID NO: 2)、「UPenn AAV10」(WO2015121501之SEQ ID NO: 8)、「日本AAV10」(WO2015121501之SEQ ID NO: 9)，或其變異體。
根據本發明，AAV衣殼血清型選擇或使用可來自多種物種。在一個實施例中，AAV可為禽類AAV (AAAV)。AAAV血清型可為或具有如美國專利第US 9238800號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAAV (US 9,238,800之SEQ ID NO: 1、2、4、6、8、10、12及14)，或其變異體。
在一個實施例中，AAV可為牛AAV (BAAV)。BAAV血清型可為或具有如美國專利第US 9,193,769號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) BAAV (US 9193769之SEQ ID NO: 1及6)，或其變異體。BAAV血清型可為或具有如美國專利第US7427396號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) BAAV (US7427396之SEQ ID NO: 5及6)，或其變異體。
在一個實施例中，AAV可為山羊AAV。山羊AAV血清型可為或具有如美國專利第US7427396號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)山羊AAV (US7427396之SEQ ID NO: 3)，或其變異體。
在其他實施例中，AAV可經工程改造為來自兩種或超過兩種親本血清型之雜合AAV。在一個實施例中，AAV可為包含來自AAV2及AAV9之序列的AAV2G9。AAV2G9 AAV血清型可為或具有如美國專利公開案第US20160017005號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV可為由在胺基酸390-627 (VP1編號)中具有突變之AAV9衣殼文庫所產生的血清型，如由Pulicherla等人(Molecular Therapy 19(6):1070-1078 (2011)，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)所描述。血清型及對應之核苷酸及胺基酸取代可為(但不限於)AAV9.1 (G1594C；D532H)、AAV6.2 (T1418A及T1436X；V473D及I479K)、AAV9.3 (T1238A；F413Y)、AAV9.4 (T1250C及A1617T；F417S)、AAV9.5 (A1235G、A1314T、A1642G、C1760T；Q412R、T548A、A587V)、AAV9.6 (T1231A；F411I)、AAV9.9 (G1203A、G1785T；W595C)、AAV9.10 (A1500G、T1676C；M559T)、AAV9.11 (A1425T、A1702C、A1769T；T568P、Q590L)、AAV9.13 (A1369C、A1720T；N457H、T574S)、AAV9.14 (T1340A、T1362C、T1560C、G1713A；L447H)、AAV9.16 (A1775T；Q592L)、AAV9.24 (T1507C、T1521G；W503R)、AAV9.26 (A1337G、A1769C；Y446C、Q590P)、AAV9.33 (A1667C；D556A)、AAV9.34 (A1534G、C1794T；N512D)、AAV9.35 (A1289T、T1450A、C1494T、A1515T、C1794A、G1816A；Q430L、Y484N、N98K、V606I)、AAV9.40 (A1694T、E565V)、AAV9.41 (A1348T、T1362C；T450S)、AAV9.44 (A1684C、A1701T、A1737G；N562H、K567N)、AAV9.45 (A1492T、C1804T；N498Y、L602F)、AAV9.46 (G1441C、T1525C、T1549G；G481R、W509R、L517V)、9.47 (G1241A、G1358A、A1669G、C1745T；S414N、G453D、K557E、T582I)、AAV9.48 (C1445T、A1736T；P482L、Q579L)、AAV9.50 (A1638T、C1683T、T1805A；Q546H、L602H)、AAV9.53 (G1301A、A1405C、C1664T、G1811T；R134Q、S469R、A555V、G604V)、AAV9.54 (C1531A、T1609A；L511I、L537M)、AAV9.55 (T1605A；F535L)、AAV9.58 (C1475T、C1579A；T492I、H527N)、AAV.59 (T1336C；Y446H)、AAV9.61 (A1493T；N498I)、AAV9.64 (C1531A、A1617T；L511I)、AAV9.65 (C1335T、T1530C、C1568A；A523D)、AAV9.68 (C1510A；P504T)、AAV9.80 (G1441A,;G481R)、AAV9.83 (C1402A、A1500T；P468T、E500D)、AAV9.87 (T1464C、T1468C；S490P)、AAV9.90 (A1196T；Y399F)、AAV9.91 (T1316G、A1583T、C1782G、T1806C；L439R、K528I)、AAV9.93 (A1273G、A1421G、A1638C、C1712T、G1732A、A1744T、A1832T；S425G、Q474R、Q546H、P571L、G578R、T582S、D611V)、AAV9.94 (A1675T；M559L)及AAV9.95 (T1605A；F535L)。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如國際公開案第WO2016049230號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，諸如(但不限於)AAVF1/HSC1 (WO2016049230之SEQ ID NO: 2及20)、AAVF2/HSC2 (WO2016049230之SEQ ID NO: 3及21)、AAVF3/HSC3 (WO2016049230之SEQ ID NO: 5及22)、AAVF4/HSC4 (WO2016049230之SEQ ID NO: 6及23)、AAVF5/HSC5 (WO2016049230之SEQ ID NO: 11及25)、AAVF6/HSC6 (WO2016049230之SEQ ID NO: 7及24)、AAVF7/HSC7 (WO2016049230之SEQ ID NO: 8及27)、AAVF8/HSC8 (WO2016049230之SEQ ID NO: 9及28)、AAVF9/HSC9 (WO2016049230之SEQ ID NO: 10及29)、AAVF11/HSC11 (WO2016049230之SEQ ID NO: 4及26)、AAVF12/HSC12 (WO2016049230之SEQ ID NO: 12及30)、AAVF13/HSC13 (WO2016049230之SEQ ID NO: 14及31)、AAVF14/HSC14 (WO2016049230之SEQ ID NO: 15及32)、AAVF15/HSC15 (WO2016049230之SEQ ID NO: 16及33)、AAVF16/HSC16 (WO2016049230之SEQ ID NO: 17及34)、AAVF17/HSC17 (WO2016049230之SEQ ID NO: 13及35)，或其變異體或衍生物。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利第US 8734809號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAV CBr-E1 (US8734809之SEQ ID NO: 13及87)、AAV CBr-E2 (US8734809之SEQ ID NO: 14及88)、AAV CBr-E3 (US8734809之SEQ ID NO: 15及89)、AAV CBr-E4 (US8734809之SEQ ID NO: 16及90)、AAV CBr-E5 (US8734809之SEQ ID NO: 17及91)、AAV CBr-e5 (US8734809之SEQ ID NO: 18及92)、AAV CBr-E6 (US8734809之SEQ ID NO: 19及93)、AAV CBr-E7 (US8734809之SEQ ID NO: 20及94)、AAV CBr-E8 (US8734809之SEQ ID NO: 21及95)、AAV CLv-D1 (US8734809之SEQ ID NO: 22及96)、AAV CLv-D2 (US8734809之SEQ ID NO: 23及97)、AAV CLv-D3 (US8734809之SEQ ID NO: 24及98)、AAV CLv-D4 (US8734809之SEQ ID NO: 25及99)、AAV CLv-D5 (US8734809之SEQ ID NO: 26及100)、AAV CLv-D6 (US8734809之SEQ ID NO: 27及101)、AAV CLv-D7 (US8734809之SEQ ID NO: 28及102)、AAV CLv-D8 (US8734809之SEQ ID NO: 29及103)、AAV CLv-E1 (US8734809之SEQ ID NO: 13及87)、AAV CLv-R1 (US8734809之SEQ ID NO: 30及104)、AAV CLv-R2 (US8734809之SEQ ID NO: 31及105)、AAV CLv-R3 (US8734809之SEQ ID NO: 32及106)、AAV CLv-R4 (US8734809之SEQ ID NO: 33及107)、AAV CLv-R5 (US8734809之SEQ ID NO: 34及108)、AAV CLv-R6 (US8734809之SEQ ID NO: 35及109)、AAV CLv-R7 (US8734809之SEQ ID NO: 36及110)、AAV CLv-R8 (US8734809之SEQ ID NO: X及X)、AAV CLv-R9 (US8734809之SEQ ID NO: X及X)、AAV CLg-F1 (US8734809之SEQ ID NO: 39及113)、AAV CLg-F2 (US8734809之SEQ ID NO: 40及114)、AAV CLg-F3 (US8734809之SEQ ID NO: 41及115)、AAV CLg-F4 (US8734809之SEQ ID NO: 42及116)、AAV CLg-F5 (US8734809之SEQ ID NO: 43及117)、AAV CLg-F6 (US8734809之SEQ ID NO: 43及117)、AAV CLg-F7 (US8734809之SEQ ID NO: 44及118)、AAV CLg-F8 (US8734809之SEQ ID NO: 43及117)、AAV CSp-1 (US8734809之SEQ ID NO: 45及119)、AAV CSp-10 (US8734809之SEQ ID NO: 46及120)、AAV CSp-11 (US8734809之SEQ ID NO: 47及121)、AAV CSp-2 (US8734809之SEQ ID NO: 48及122)、AAV CSp-3 (US8734809之SEQ ID NO: 49及123)、AAV CSp-4 (US8734809之SEQ ID NO: 50及124)、AAV CSp-6 (US8734809之SEQ ID NO: 51及125)、AAV CSp-7 (US8734809之SEQ ID NO: 52及126)、AAV CSp-8 (US8734809之SEQ ID NO: 53及127)、AAV CSp-9 (US8734809之SEQ ID NO: 54及128)、AAV CHt-2 (US8734809之SEQ ID NO: 55及129)、AAV CHt-3 (US8734809之SEQ ID NO: 56及130)、AAV CKd-1 (US8734809之SEQ ID NO: 57及131)、AAV CKd-10 (US8734809之SEQ ID NO: 58及132)、AAV CKd-2 (US8734809之SEQ ID NO: 59及133)、AAV CKd-3 (US8734809之SEQ ID NO: 60及134)、AAV CKd-4 (US8734809之SEQ ID NO: 61及135)、AAV CKd-6 (US8734809之SEQ ID NO: 62及136)、AAV CKd-7 (US8734809之SEQ ID NO: 63及137)、AAV CKd-8 (US8734809之SEQ ID NO: 64及138)、AAV CLv-1 (US8734809之SEQ ID NO: 35及139)、AAV CLv-12 (US8734809之SEQ ID NO: 66及140)、AAV CLv-13 (US8734809之SEQ ID NO: 67及141)、AAV CLv-2 (US8734809之SEQ ID NO: 68及142)、AAV CLv-3 (US8734809之SEQ ID NO: 69及143)、AAV CLv-4 (US8734809之SEQ ID NO: 70及144)、AAV CLv-6 (US8734809之SEQ ID NO: 71及145)、AAV CLv-8 (US8734809之SEQ ID NO: 72及146)、AAV CKd-B1 (US8734809之SEQ ID NO: 73及147)、AAV CKd-B2 (US8734809之SEQ ID NO: 74及148)、AAV CKd-B3 (US8734809之SEQ ID NO: 75及149)、AAV CKd-B4 (US8734809之SEQ ID NO: 76及150)、AAV CKd-B5 (US8734809之SEQ ID NO: 77及151)、AAV CKd-B6 (US8734809之SEQ ID NO: 78及152)、AAV CKd-B7 (US8734809之SEQ ID NO: 79及153)、AAV CKd-B8 (US8734809之SEQ ID NO: 80及154)、AAV CKd-H1 (US8734809之SEQ ID NO: 81及155)、AAV CKd-H2 (US8734809之SEQ ID NO: 82及156)、AAV CKd-H3 (US8734809之SEQ ID NO: 83及157)、AAV CKd-H4 (US8734809之SEQ ID NO: 84及158)、AAV CKd-H5 (US8734809之SEQ ID NO: 85及159)、AAV CKd-H6 (US8734809之SEQ ID NO: 77及151)、AAV CHt-1 (US8734809之SEQ ID NO: 86及160)、AAV CLv1-1 (US8734809之SEQ ID NO: 171)、AAV CLv1-2 (US8734809之SEQ ID NO: 172)、AAV CLv1-3 (US8734809之SEQ ID NO: 173)、AAV CLv1-4 (US8734809之SEQ ID NO: 174)、AAV Clv1-7 (US8734809之SEQ ID NO: 175)、AAV Clv1-8 (US8734809之SEQ ID NO: 176)、AAV Clv1-9 (US8734809之SEQ ID NO: 177)、AAV Clv1-10 (US8734809之SEQ ID NO: 178)、AAV.VR-355 (US8734809之SEQ ID NO: 181)、AAV.hu.48R3 (US8734809之SEQ ID NO: 183)，或其變異體或衍生物。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如國際公開案第WO2016065001號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAV CHt-P2 (WO2016065001之SEQ ID NO: 1及51)、AAV CHt-P5 (WO2016065001之SEQ ID NO: 2及52)、AAV CHt-P9 (WO2016065001之SEQ ID NO: 3及53)、AAV CBr-7.1 (WO2016065001之SEQ ID NO: 4及54)、AAV CBr-7.2 (WO2016065001之SEQ ID NO: 5及55)、AAV CBr-7.3 (WO2016065001之SEQ ID NO: 6及56)、AAV CBr-7.4 (WO2016065001之SEQ ID NO: 7及57)、AAV CBr-7.5 (WO2016065001之SEQ ID NO: 8及58)、AAV CBr-7.7 (WO2016065001之SEQ ID NO: 9及59)、AAV CBr-7.8 (WO2016065001之SEQ ID NO: 10及60)、AAV CBr-7.10 (WO2016065001之SEQ ID NO: 11及61)、AAV CKd-N3 (WO2016065001之SEQ ID NO: 12及62)、AAV CKd-N4 (WO2016065001之SEQ ID NO: 13及63)、AAV CKd-N9 (WO2016065001之SEQ ID NO: 14及64)、AAV CLv-L4 (WO2016065001之SEQ ID NO: 15及65)、AAV CLv-L5 (WO2016065001之SEQ ID NO: 16及66)、AAV CLv-L6 (WO2016065001之SEQ ID NO: 17及67)、AAV CLv-K1 (WO2016065001之SEQ ID NO: 18及68)、AAV CLv-K3 (WO2016065001之SEQ ID NO: 19及69)、AAV CLv-K6 (WO2016065001之SEQ ID NO: 20及70)、AAV CLv-M1 (WO2016065001之SEQ ID NO: 21及71)、AAV CLv-M11 (WO2016065001之SEQ ID NO: 22及72)、AAV CLv-M2 (WO2016065001之SEQ ID NO: 23及73)、AAV CLv-M5 (WO2016065001之SEQ ID NO: 24及74)、AAV CLv-M6 (WO2016065001之SEQ ID NO: 25及75)、AAV CLv-M7 (WO2016065001之SEQ ID NO: 26及76)、AAV CLv-M8 (WO2016065001之SEQ ID NO: 27及77)、AAV CLv-M9 (WO2016065001之SEQ ID NO: 28及78)、AAV CHt-P1 (WO2016065001之SEQ ID NO: 29及79)、AAV CHt-P6 (WO2016065001之SEQ ID NO: 30及80)、AAV CHt-P8 (WO2016065001之SEQ ID NO: 31及81)、AAV CHt-6.1 (WO2016065001之SEQ ID NO: 32及82)、AAV CHt-6.10 (WO2016065001之SEQ ID NO: 33及83)、AAV CHt-6.5 (WO2016065001之SEQ ID NO: 34及84)、AAV CHt-6.6 (WO2016065001之SEQ ID NO: 35及85)、AAV CHt-6.7 (WO2016065001之SEQ ID NO: 36及86)、AAV CHt-6.8 (WO2016065001之SEQ ID NO: 37及87)、AAV CSp-8.10 (WO2016065001之SEQ ID NO: 38及88)、AAV CSp-8.2 (WO2016065001之SEQ ID NO: 39及89)、AAV CSp-8.4 (WO2016065001之SEQ ID NO: 40及90)、AAV CSp-8.5 (WO2016065001之SEQ ID NO: 41及91)、AAV CSp-8.6 (WO2016065001之SEQ ID NO: 42及92)、AAV CSp-8.7 (WO2016065001之SEQ ID NO: 43及93)、AAV CSp-8.8 (WO2016065001之SEQ ID NO: 44及94)、AAV CSp-8.9 (WO2016065001之SEQ ID NO: 45及95)、AAV CBr-B7.3 (WO2016065001之SEQ ID NO: 46及96)、AAV CBr-B7.4 (WO2016065001之SEQ ID NO: 47及97)、AAV3B (WO2016065001之SEQ ID NO: 48及98)、AAV4 (WO2016065001之SEQ ID NO: 49及99)、AAV5 (WO2016065001之SEQ ID NO: 50及100)，或其變異體或衍生物。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國公開案第US 20160361439號中所描述之修飾，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該修飾諸如(但不限於)野生型AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12及其雜合體之Y252F、Y272F、Y444F、Y500F、Y700F、Y704F、Y730F、Y275F、Y281F、Y508F、Y576F、Y612G、Y673F及Y720F。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有如美國專利第US 9546112號中所描述之突變，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該突變諸如(但不限於) AAV6 (US 9546112之SEQ ID NO: 4)、AAV1 (US 9546112之SEQ ID NO: 6)、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV7、AAV9、AAV10或AAV11或其衍生物之序列中之F129L、D418E、K531E、L584F、V598A及H642N突變中的至少兩者，但非全部。在又另一個實施例中，AAV血清型可為或具有包含K531E突變之AAV6序列(US 9546112之SEQ ID NO: 5)。
在一些實施例中，AAV血清型可為或具有處於AAV1序列中之突變，如美國公開案第US 20130224836號中所描述，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該突變諸如(但不限於)表面所暴露之至少一個酪胺酸殘基(較佳處於AAV1 (US 20130224836之SEQ ID NO: 2)之位置252、273、445、701、705及731處)經另一個胺基酸(較佳經苯丙胺酸殘基)取代。在一個實施例中，AAV血清型可為或具有處於AAV9序列中之突變，諸如(但不限於)表面所暴露之至少一個酪胺酸殘基(較佳處於AAV2 (US 20130224836之SEQ ID NO: 4)之位置252、272、444、500、700、704及730處)經另一個胺基酸(較佳經苯丙胺酸殘基)取代。在一個實施例中，處於AAV9 (SEQ ID NO: 6 US 20130224836)之位置446處的酪胺酸殘基經苯丙胺酸殘基取代。
在一些實施例中，血清型可為AAV2或其變異體，如國際公開案第WO2016130589號中所描述，該公開案以全文引用之方式併入本文中。AAV2之胺基酸序列可包含N587A、E548A或N708A突變。在一個實施例中，任何AAV之胺基酸序列均可包含V708K突變。
在一個實施例中，AAV可為選自表1中所發現之任何血清型的血清型。
在一個實施例中，AAV可包含表1中之序列、該序列之片段或其變異體。
在一個實施例中，AAV可由如表1中所描述之序列、片段或變異體編碼。 表1. AAV血清型
在一個實施例中，AAV血清型可為或可具有如國際專利公開案WO2015038958中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV9 (WO2015038958之SEQ ID NO: 2及11或本文中分別為SEQ ID NO: 132及131)、PHP.B (WO2015038958之SEQ ID NO: 8及9或本文中為SEQ ID NO: 1及2)、G2B-13 (WO2015038958之SEQ ID NO: 12或本文中為SEQ ID NO: 3)、G2B-26 (WO2015038958之SEQ ID NO: 13或本文中為SEQ ID NO: 1)、TH1.1-32 (WO2015038958之SEQ ID NO: 14或本文中為SEQ ID NO: 4)、TH1.1-35 (WO2015038958之SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO: 5本文中)或其變異體。此外， WO2015038958中所描述之任一種靶向肽或胺基酸插入序列均可插入至任何親本AAV血清型中，諸如(但不限於) AAV9 (SEQ ID NO: 131作為DNA序列及SEQ ID NO: 132作為胺基酸序列)。在一個實施例中，胺基酸插入序列係插入在親本AAV (例如AAV9)之胺基酸586-592之間。在另一個實施例中，胺基酸插入序列係插入在親本AAV序列之胺基酸588-589之間。胺基酸插入序列可為(但不限於)以下胺基酸序列中之任一者：TLAVPFK (WO2015038958之SEQ ID NO: 1；本文中為SEQ ID NO: 876)、KFPVALT (WO2015038958之SEQ ID NO: 3；本文中為SEQ ID NO: 877)、LAVPFK (WO2015038958之SEQ ID NO: 31；本文中為SEQ ID NO: 878)、AVPFK (WO2015038958之SEQ ID NO: 32；本文中為SEQ ID NO: 879)、VPFK (WO2015038958之SEQ ID NO: 33；本文中為SEQ ID NO: 880)、TLAVPF (WO2015038958之SEQ ID NO: 34；本文中為SEQ ID NO: 881)、TLAVP (WO2015038958之SEQ ID NO: 35；本文中為SEQ ID NO: 882)、TLAV (WO2015038958之SEQ ID NO: 36；本文中為SEQ ID NO: 883)、SVSKPFL (WO2015038958之SEQ ID NO: 28；本文中為SEQ ID NO: 884)、FTLTTPK (WO2015038958之SEQ ID NO: 29；本文中為SEQ ID NO: 885)、MNATKNV (WO2015038958之SEQ ID NO: 30；本文中為SEQ ID NO: 886)、QSSQTPR (WO2015038958之SEQ ID NO: 54；本文中為SEQ ID NO: 887)、ILGTGTS (WO2015038958之SEQ ID NO: 55；本文中為SEQ ID NO: 888)、TRTNPEA (WO2015038958之SEQ ID NO: 56；本文中為SEQ ID NO: 889)、NGGTSSS (WO2015038958之SEQ ID NO: 58；本文中為SEQ ID NO: 890)或YTLSQGW (WO2015038958之SEQ ID NO: 60；本文中為SEQ ID NO: 891)。可編碼胺基酸插入序列之核苷酸序列的非限制性實例包括以下：AAGTTTCCTGTGGCGTTGACT (WO2015038958之SEQ ID NO: 3；本文中為SEQ ID NO: 892)、ACTTTGGCGGTGCCTTTTAAG (WO2015038958之SEQ ID NO: 24及49；本文中為SEQ ID NO: 893)、AGTGTGAGTAAGCCTTTTTTG (WO2015038958之SEQ ID NO: 25；本文中為SEQ ID NO: 894)、TTTACGTTGACGACGCCTAAG (WO2015038958之SEQ ID NO: 26；本文中為SEQ ID NO: 895)、ATGAATGCTACGAAGAATGTG (WO2015038958之SEQ ID NO: 27；本文中為SEQ ID NO: 896)、CAGTCGTCGCAGACGCCTAGG (WO2015038958之SEQ ID NO: 48；本文中為SEQ ID NO: 897)、ATTCTGGGGACTGGTACTTCG (WO2015038958之SEQ ID NO: 50及52；本文中為SEQ ID NO: 898)、ACGCGGACTAATCCTGAGGCT (WO2015038958之SEQ ID NO: 51；本文中為SEQ ID NO: 899)、AATGGGGGGACTAGTAGTTCT (WO2015038958之SEQ ID NO: 53；本文中為SEQ ID NO: 900)或TATACTTTGTCGCAGGGTTGG (WO2015038958之SEQ ID NO: 59；本文中為SEQ ID NO: 901)。
在一個實施例中，AAV血清型可為或可具有如國際專利公開案WO2017100671中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV9 (WO2017100671之SEQ ID NO: 45，本文中為SEQ ID NO: 875)、PHP.N (WO2017100671之SEQ ID NO: 46，本文中為SEQ ID NO: 873)、PHP.S (WO2017100671之SEQ ID NO: 47，本文中為SEQ ID NO: 874)，或其變異體。此外，WO2017100671中所描述之任一種靶向肽或胺基酸插入序列均可插入至任何親本AAV血清型中，諸如(但不限於) AAV9 (SEQ ID NO: 127或SEQ ID NO: 875)。在一個實施例中，胺基酸插入序列係插入在親本AAV (例如AAV9)之胺基酸586-592之間。在另一個實施例中，胺基酸插入序列係插入在親本AAV序列之胺基酸588-589之間。胺基酸插入序列可為(但不限於)以下胺基酸序列中之任一者：AQTLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 1；本文中為SEQ ID NO: 902)、AQSVSKPFLAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 2；本文中為SEQ ID NO: 903)、AQFTLTTPKAQ (WO2017100671之序列表中的SEQ ID NO: 3；本文中為SEQ ID NO: 904)、DGTLAVPFKAQ (WO2017100671之序列表中的SEQ ID NO: 4；本文中為SEQ ID NO: 905)、ESTLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 5；本文中為SEQ ID NO: 906)、GGTLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 6；本文中為SEQ ID NO: 907)、AQTLATPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 7及33；本文中為SEQ ID NO: 908)、ATTLATPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 8；本文中為SEQ ID NO: 909)、DGTLATPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 9；本文中為SEQ ID NO: 910)、GGTLATPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 10；本文中為SEQ ID NO: 911)、SGSLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 11；本文中為SEQ ID NO: 912)、AQTLAQPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 12；本文中為SEQ ID NO: 913)、AQTLQQPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 13；本文中為SEQ ID NO: 914)、AQTLSNPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 14；本文中為SEQ ID NO: 915)、AQTLAVPFSNP (WO2017100671之SEQ ID NO: 15；本文中為SEQ ID NO: 916)、QGTLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 16；本文中為SEQ ID NO: 917)、NQTLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 17；本文中為SEQ ID NO: 918)、EGSLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 18；本文中為SEQ ID NO: 919)、SGNLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 19；本文中為SEQ ID NO: 920)、EGTLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 20；本文中為SEQ ID NO: 921)、DSTLAVPFKAQ (WO2017100671之表1中的SEQ ID NO: 21；本文中為SEQ ID NO: 922)、AVTLAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 22；本文中為SEQ ID NO: 923)、AQTLSTPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 23；本文中為SEQ ID NO: 924)、AQTLPQPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 24及32；本文中為SEQ ID NO: 925)、AQTLSQPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 25；本文中為SEQ ID NO: 926)、AQTLQLPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 26；本文中為SEQ ID NO: 927)、AQTLTMPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 27及34以及WO2017100671之序列表中的SEQ ID NO: 35；本文中為SEQ ID NO: 928)、AQTLTTPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 28；本文中為SEQ ID NO: 929)、AQYTLSQGWAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 29；本文中為SEQ ID NO: 930)、AQMNATKNVAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 30；本文中為SEQ ID NO: 931)、AQVSGGHHSAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 31；本文中為SEQ ID NO: 932)、AQTLTAPFKAQ (WO2017100671之表1中的SEQ ID NO: 35；本文中為SEQ ID NO: 933)、AQTLSKPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 36；本文中為SEQ ID NO: 934)、QAVRTSL (WO2017100671之SEQ ID NO: 37；本文中為SEQ ID NO: 935)、YTLSQGW (WO2017100671之SEQ ID NO: 38；本文中為SEQ ID NO: 891)、LAKERLS (WO2017100671之SEQ ID NO: 39；本文中為SEQ ID NO: 936)、TLAVPFK (WO2017100671之序列表中的SEQ ID NO: 40；本文中為SEQ ID NO: 876)、SVSKPFL (WO2017100671之SEQ ID NO: 41；本文中為SEQ ID NO: 884)、FTLTTPK (WO2017100671之SEQ ID NO: 42；本文中為SEQ ID NO: 885)、MNSTKNV (WO2017100671之SEQ ID NO: 43；本文中為SEQ ID NO: 937)、VSGGHHS (WO2017100671之SEQ ID NO: 44；本文中為SEQ ID NO: 938)、SAQTLAVPFKAQAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 48；本文中為SEQ ID NO: 939)、SXXXLAVPFKAQAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 49，其中X可為任何胺基酸；本文中為SEQ ID NO: 940)、SAQXXXVPFKAQAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 50，其中X可為任何胺基酸；本文中為SEQ ID NO: 941)、SAQTLXXXFKAQAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 51，其中X可為任何胺基酸；本文中為SEQ ID NO: 942)、SAQTLAVXXXAQAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 52，其中X可為任何胺基酸；本文中為SEQ ID NO: 943)、SAQTLAVPFXXXAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 53，其中X可為任何胺基酸；本文中為SEQ ID NO: 944)、TNHQSAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 65；本文中為SEQ ID NO: 945)、AQAQTGW (WO2017100671之SEQ ID NO: 66；本文中為SEQ ID NO: 946)、DGTLATPFK (WO2017100671之SEQ ID NO: 67；本文中為SEQ ID NO: 947)、DGTLATPFKXX (WO2017100671之SEQ ID NO: 68，其中X可為任何胺基酸；本文中為SEQ ID NO: 948)、LAVPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 80；本文中為SEQ ID NO: 949)、VPFKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 81；本文中為SEQ ID NO: 950)、FKAQ (WO2017100671之SEQ ID NO: 82；本文中為SEQ ID NO: 951)、AQTLAV (WO2017100671之SEQ ID NO: 83；本文中為SEQ ID NO: 952)、AQTLAVPF (WO2017100671之SEQ ID NO: 84；本文中為SEQ ID NO: 953)、QAVR (WO2017100671之SEQ ID NO: 85；本文中為SEQ ID NO: 954)、AVRT (WO2017100671之SEQ ID NO: 86；本文中為SEQ ID NO: 955)、VRTS (WO2017100671之SEQ ID NO: 87；本文中為SEQ ID NO: 956)、RTSL (WO2017100671之SEQ ID NO: 88；本文中為SEQ ID NO: 957)、QAVRT (WO2017100671之SEQ ID NO: 89；本文中為SEQ ID NO: 958)、AVRTS (WO2017100671之SEQ ID NO: 90；本文中為SEQ ID NO: 959)、VRTSL (WO2017100671之SEQ ID NO: 91；本文中為SEQ ID NO: 960)、QAVRTS (WO2017100671之SEQ ID NO: 92；本文中為SEQ ID NO: 961)或AVRTSL (WO2017100671之SEQ ID NO: 93；本文中為SEQ ID NO: 962)。
可編碼胺基酸插入序列之核苷酸序列的非限制性實例包括以下：GATGGGACTTTGGCGGTGCCTTTTAAGGCACAG (WO2017100671之SEQ ID NO: 54；本文中為SEQ ID NO: 963)、GATGGGACGTTGGCGGTGCCTTTTAAGGCACAG (WO2017100671之SEQ ID NO: 55；本文中為SEQ ID NO: 964)、CAGGCGGTTAGGACGTCTTTG (WO2017100671之SEQ ID NO: 56；本文中為SEQ ID NO: 965)、CAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAG (WO2017100671之SEQ ID NO: 57及78；本文中為SEQ ID NO: 966)、CAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTAAAATCG (WO2017100671之SEQ ID NO: 58；本文中為SEQ ID NO: 967)、ACTCATCGACCAATACTTGTACTATCTCTCTAGAAC (WO2017100671之SEQ ID NO: 59；本文中為SEQ ID NO: 968)、GGAAGTATTCCTTGGTTTTGAACCCA (WO2017100671之SEQ ID NO: 60；本文中為SEQ ID NO: 969)、GGTCGCGGTTCTTGTTTGTGGAT (WO2017100671之SEQ ID NO: 61；本文中為SEQ ID NO: 970)、CGACCTTGAAGCGCATGAACTCCT (WO2017100671之SEQ ID NO: 62；本文中為SEQ ID NO: 971)、GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCMNNMNNMNNMNNMNNMNNMNNTTGGGCACTCTGGTGGTTTGTC (WO2017100671之SEQ ID NO: 63，其中N可為A、C、T或G；本文中為SEQ ID NO: 972)、GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCMNNMNNMNNAAAAGGCACCGCCAAAGTTTG (WO2017100671之SEQ ID NO: 69，其中N可為A、C、T或G；本文中為SEQ ID NO: 973)、GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCMNNMNNMNNCACCGCCAAAGTTTGGGCACT (WO2017100671之SEQ ID NO: 70，其中N可為A、C、T或G；本文中為SEQ ID NO: 974)、GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCCTTAAAMNNMNNMNNCAAAGTTTGGGCACTCTGGTGG (WO2017100671之SEQ ID NO: 71，其中N可為A、C、T或G；本文中為SEQ ID NO: 975)、GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCCTTAAAAGGCACMNNMNNMNNTTGGGCACTCTGGTGGTTTGTG (WO2017100671之SEQ ID NO: 72，其中N可為A、C、T或G；本文中為SEQ ID NO: 976)、ACTTTGGCGGTGCCTTTTAAG (WO2017100671之SEQ ID NO: 74；本文中為SEQ ID NO: 893)、AGTGTGAGTAAGCCTTTTTTG (WO2017100671之SEQ ID NO: 75；本文中為SEQ ID NO: 894)、TTTACGTTGACGACGCCTAAG (WO2017100671之SEQ ID NO: 76；本文中為SEQ ID NO: 895)、TATACTTTGTCGCAGGGTTGG (WO2017100671之SEQ ID NO: 77；本文中為SEQ ID NO: 901)或CTTGCGAAGGAGCGGCTTTCG (WO2017100671之SEQ ID NO: 79；本文中為SEQ ID NO: 977)。
在一個實施例中，AAV血清型可為或可具有如國際專利第US 9624274號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)AAV1 (US9624274之SEQ ID NO: 181)、AAV6 (US9624274之SEQ ID NO: 182)、AAV2 (US9624274之SEQ ID NO: 183)、AAV3b (US9624274之SEQ ID NO: 184)、AAV7 (US9624274之SEQ ID NO: 185)、AAV8 (US9624274之SEQ ID NO: 186)、AAV10 (US9624274之SEQ ID NO: 187)、AAV4 (US9624274之SEQ ID NO: 188)、AAV11 (US9624274之SEQ ID NO: 189)、bAAV (US9624274之SEQ ID NO: 190)、AAV5 (US9624274之SEQ ID NO: 191)、GPV (US9624274之SEQ ID NO: 192；本文中為SEQ ID NO: 992)、B19 (US9624274之SEQ ID NO: 193；本文中為SEQ ID NO: 993)、MVM (US9624274之SEQ ID NO: 194；本文中為SEQ ID NO: 994)、FPV (US9624274之SEQ ID NO: 195；本文中為SEQ ID NO: 995)、CPV (US9624274之SEQ ID NO: 196；本文中為SEQ ID NO: 996)，或其變異體。此外，US 9624274中所描述之任一種結構蛋白插入序列均可插入至(但不限於)任何親本AAV血清型之I-453及I-587中，該親本AAV血清型諸如(但不限於) AAV2 (US9624274之SEQ ID NO: 183)。胺基酸插入序列可為(但不限於)以下胺基酸序列中之任一者：VNLTWSRASG (US9624274之SEQ ID NO: 50；本文中為SEQ ID NO: 1375)、EFCINHRGYWVCGD (US9624274之SEQ ID NO: 55；本文中為SEQ ID NO: 1376)、EDGQVMDVDLS (US9624274之SEQ ID NO: 85；本文中為SEQ ID NO: 1377)、EKQRNGTLT (US9624274之SEQ ID NO: 86；本文中為SEQ ID NO: 1378)、TYQCRVTHPHLPRALMR (US9624274之SEQ ID NO: 87；本文中為SEQ ID NO: 1379)、RHSTTQPRKTKGSG (US9624274之SEQ ID NO: 88；本文中為SEQ ID NO: 1380)、DSNPRGVSAYLSR (US9624274之SEQ ID NO: 89；本文中為SEQ ID NO: 1381)、TITCLWDLAPSK (US9624274之SEQ ID NO: 90；本文中為SEQ ID NO: 1382)、KTKGSGFFVF (US9624274之SEQ ID NO: 91；本文中為SEQ ID NO: 1383)、THPHLPRALMRS (US9624274之SEQ ID NO: 92；本文中為SEQ ID NO: 1384)、GETYQCRVTHPHLPRALMRSTTK (US9624274之SEQ ID NO: 93；本文中為SEQ ID NO: 1385)、LPRALMRS (US9624274之SEQ ID NO: 94；本文中為SEQ ID NO: 1386)、INHRGYWV (US9624274之SEQ ID NO: 95；本文中為SEQ ID NO: 1387)、CDAGSVRTNAPD (US9624274之SEQ ID NO: 60；本文中為SEQ ID NO: 1388)、AKAVSNLTESRSESLQS (US9624274之SEQ ID NO: 96；本文中為SEQ ID NO: 1389)、SLTGDEFKKVLET (US9624274之SEQ ID NO: 97；本文中為SEQ ID NO: 1390)、REAVAYRFEED (US9624274之SEQ ID NO: 98；本文中為SEQ ID NO: 1391)、INPEIITLDG (US9624274之SEQ ID NO: 99；本文中為SEQ ID NO: 1392)、DISVTGAPVITATYL (US9624274之SEQ ID NO: 100；本文中為SEQ ID NO: 1393)、DISVTGAPVITA (US9624274之SEQ ID NO: 101；本文中為SEQ ID NO: 1394)、PKTVSNLTESSSESVQS (US9624274之SEQ ID NO: 102；本文中為SEQ ID NO: 1395)、SLMGDEFKAVLET (US9624274之SEQ ID NO: 103；本文中為SEQ ID NO: 1396)、QHSVAYTFEED (US9624274之SEQ ID NO: 104；本文中為SEQ ID NO: 1397)、INPEIITRDG (US9624274之SEQ ID NO: 105；本文中為SEQ ID NO: 1398)、DISLTGDPVITASYL (US9624274之SEQ ID NO: 106；本文中為SEQ ID NO: 1399)、DISLTGDPVITA (US9624274之SEQ ID NO: 107；本文中為SEQ ID NO: 1400)、DQSIDFEIDSA (US9624274之SEQ ID NO: 108；本文中為SEQ ID NO: 1401)、KNVSEDLPLPTFSPTLLGDS (US9624274之SEQ ID NO: 109；本文中為SEQ ID NO: 1402)、KNVSEDLPLPT (US9624274之SEQ ID NO: 110；本文中為SEQ ID NO: 1403)、CDSGRVRTDAPD (US9624274之SEQ ID NO: 111；本文中為SEQ ID NO: 1404)、FPEHLLVDFLQSLS (US9624274之SEQ ID NO: 112；本文中為SEQ ID NO: 1405)、DAEFRHDSG (US9624274之SEQ ID NO: 65；本文中為SEQ ID NO: 1406)、HYAAAQWDFGNTMCQL (US9624274之SEQ ID NO: 113；本文中為SEQ ID NO: 1407)、YAAQWDFGNTMCQ (US9624274之SEQ ID NO: 114；本文中為SEQ ID NO: 1408)、RSQKEGLHYT (US9624274之SEQ ID NO: 115；本文中為SEQ ID NO: 1409)、SSRTPSDKPVAHWANPQAE (US9624274之SEQ ID NO: 116；本文中為SEQ ID NO: 1410)、SRTPSDKPVAHWANP (US9624274之SEQ ID NO: 117；本文中為SEQ ID NO: 1411)、SSRTPSDKP (US9624274之SEQ ID NO: 118；本文中為SEQ ID NO: 1412)、NADGNVDYHMNSVP (US9624274之SEQ ID NO: 119；本文中為SEQ ID NO: 1413)、DGNVDYHMNSV (US9624274之SEQ ID NO: 120；本文中為SEQ ID NO: 1414)、RSFKEFLQSSLRALRQ (US9624274之SEQ ID NO: 121；本文中為SEQ ID NO: 1415); FKEFLQSSLRA (US9624274之SEQ ID NO: 122；本文中為SEQ ID NO: 1416)或QMWAPQWGPD (US9624274之SEQ ID NO: 123；本文中為SEQ ID NO: 1417)。
在一個實施例中，AAV血清型可為或可具有如美國專利第US 9475845號中所描述之序列，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)在原生AAV2衣殼蛋白之胺基酸位置585至590處包含一或多個胺基酸修飾的AAV衣殼蛋白。此外，修飾可產生(但不限於)以下胺基酸序列：RGNRQA (US9475845之SEQ ID NO: 3；本文中為SEQ ID NO: 1418)、SSSTDP (US9475845之SEQ ID NO: 4；本文中為SEQ ID NO: 1419)、SSNTAP (US9475845之SEQ ID NO: 5；本文中為SEQ ID NO: 1420)、SNSNLP (US9475845之SEQ ID NO: 6；本文中為SEQ ID NO: 1421)、SSTTAP (US9475845之SEQ ID NO: 7；本文中為SEQ ID NO: 1422)、AANTAA (US9475845之SEQ ID NO: 8；本文中為SEQ ID NO: 1423)、QQNTAP (US9475845之SEQ ID NO: 9；本文中為SEQ ID NO: 1424)、SAQAQA (US9475845之SEQ ID NO: 10；本文中為SEQ ID NO: 1425)、QANTGP (US9475845之SEQ ID NO: 11；本文中為SEQ ID NO: 1426)、NATTAP (US9475845之SEQ ID NO: 12；本文中為SEQ ID NO: 1427)、SSTAGP (US9475845之SEQ ID NO: 13及20；本文中為SEQ ID NO: 1428)、QQNTAA (US9475845之SEQ ID NO: 14；本文中為SEQ ID NO: 1429)、PSTAGP (US9475845之SEQ ID NO: 15；本文中為SEQ ID NO: 1430)、NQNTAP (US9475845之SEQ ID NO: 16；本文中為SEQ ID NO: 1431)、QAANAP (US9475845之SEQ ID NO: 17；本文中為SEQ ID NO: 1432)、SIVGLP (US9475845之SEQ ID NO: 18；本文中為SEQ ID NO: 1433)、AASTAA (US9475845之SEQ ID NO: 19及27；本文中為SEQ ID NO: 1434)、SQNTTA (US9475845之SEQ ID NO: 21；本文中為SEQ ID NO: 1435)、QQDTAP (US9475845之SEQ ID NO: 22；本文中為SEQ ID NO: 1436)、QTNTGP (US9475845之SEQ ID NO: 23；本文中為SEQ ID NO: 1437)、QTNGAP (US9475845之SEQ ID NO: 24；本文中為SEQ ID NO: 1438)、QQNAAP (US9475845之SEQ ID NO: 25；本文中為SEQ ID NO: 1439)或AANTQA (US9475845之SEQ ID NO: 26；本文中為SEQ ID NO: 1440)。在一個實施例中，胺基酸修飾為原生AAV2衣殼蛋白中之胺基酸位置262至265處的取代或具有靶向序列之另一種AAV之衣殼蛋白中之相應位置處的取代。靶向序列可為(但不限於)以下胺基酸序列中之任一者：NGRAHA (US9475845之SEQ ID NO: 38；本文中為SEQ ID NO: 1441)、QPEHSST (US9475845之SEQ ID NO: 39及50；本文中為SEQ ID NO: 1442)、VNTANST (US9475845之SEQ ID NO: 40；本文中為SEQ ID NO: 1443)、HGPMQKS (US9475845之SEQ ID NO: 41；本文中為SEQ ID NO: 1444)、PHKPPLA (US9475845之SEQ ID NO: 42；本文中為SEQ ID NO: 1445)、IKNNEMW (US9475845之SEQ ID NO: 43；本文中為SEQ ID NO: 1446)、RNLDTPM (US9475845之SEQ ID NO: 44；本文中為SEQ ID NO: 1447)、VDSHRQS (US9475845之SEQ ID NO: 45；本文中為SEQ ID NO: 1448)、YDSKTKT (US9475845之SEQ ID NO: 46；本文中為SEQ ID NO: 1449)、SQLPHQK (US9475845之SEQ ID NO: 47；本文中為SEQ ID NO: 1450)、STMQQNT (US9475845之SEQ ID NO: 48；本文中為SEQ ID NO: 1451)、TERYMTQ (US9475845之SEQ ID NO: 49；本文中為SEQ ID NO: 1452)、DASLSTS (US9475845之SEQ ID NO: 51；本文中為SEQ ID NO: 1453)、DLPNKKT (US9475845之SEQ ID NO: 52；本文中為SEQ ID NO: 1454)、DLTAARL (US9475845之SEQ ID NO: 53；本文中為SEQ ID NO: 1455)、EPHQFNY (US9475845之SEQ ID NO: 54；本文中為SEQ ID NO: 1456)、EPQSNHT (US9475845之SEQ ID NO: 55；本文中為SEQ ID NO: 1457)、MSSWPSQ (US9475845之SEQ ID NO: 56；本文中為SEQ ID NO: 1458)、NPKHNAT (US9475845之SEQ ID NO: 57；本文中為SEQ ID NO: 1459)、PDGMRTT (US9475845之SEQ ID NO: 58；本文中為SEQ ID NO: 1460)、PNNNKTT (US9475845之SEQ ID NO: 59；本文中為SEQ ID NO: 1461)、QSTTHDS (US9475845之SEQ ID NO: 60；本文中為SEQ ID NO: 1462)、TGSKQKQ (US9475845之SEQ ID NO: 61；本文中為SEQ ID NO: 1463)、SLKHQAL (US9475845之SEQ ID NO: 62；本文中為SEQ ID NO: 1464)、SPIDGEQ (US9475845之SEQ ID NO: 63；本文中為SEQ ID NO: 1465)、WIFPWIQL (US9475845之SEQ ID NO: 64及112；本文中為SEQ ID NO: 1466)、CDCRGDCFC (US9475845之SEQ ID NO: 65；本文中為SEQ ID NO: 1467)、CNGRC (US9475845之SEQ ID NO: 66；本文中為SEQ ID NO: 1468)、CPRECES (US9475845之SEQ ID NO: 67；本文中為SEQ ID NO: 1469)、CTTHWGFTLC (US9475845之SEQ ID NO: 68及123；本文中為SEQ ID NO: 1470)、CGRRAGGSC (US9475845之SEQ ID NO: 69；本文中為SEQ ID NO: 1471)、CKGGRAKDC (US9475845之SEQ ID NO: 70；本文中為SEQ ID NO: 1472)、CVPELGHEC (US9475845之SEQ ID NO: 71及115；本文中為SEQ ID NO: 1473)、CRRETAWAK (US9475845之SEQ ID NO: 72；本文中為SEQ ID NO: 1474)、VSWFSHRYSPFAVS (US9475845之SEQ ID NO: 73；本文中為SEQ ID NO: 1475)、GYRDGYAGPILYN (US9475845之SEQ ID NO: 74；本文中為SEQ ID NO: 1476)、XXXYXXX (US9475845之SEQ ID NO: 75；本文中為SEQ ID NO: 1477)、YXNW (US9475845之SEQ ID NO: 76；本文中為SEQ ID NO: 1478)、RPLPPLP (US9475845之SEQ ID NO: 77；本文中為SEQ ID NO: 1479)、APPLPPR (US9475845之SEQ ID NO: 78；本文中為SEQ ID NO: 1480)、DVFYPYPYASGS (US9475845之SEQ ID NO: 79；本文中為SEQ ID NO: 1481)、MYWYPY (US9475845之SEQ ID NO: 80；本文中為SEQ ID NO: 1482)、DITWDQLWDLMK (US9475845之SEQ ID NO: 81；本文中為SEQ ID NO: 1483)、CWDDXWLC (US9475845之SEQ ID NO: 82；本文中為SEQ ID NO: 1484)、EWCEYLGGYLRCYA (US9475845之SEQ ID NO: 83；本文中為SEQ ID NO: 1485)、YXCXXGPXTWXCXP (US9475845之SEQ ID NO: 84；本文中為SEQ ID NO: 1486)、IEGPTLRQWLAARA (US9475845之SEQ ID NO: 85；本文中為SEQ ID NO: 1487)、LWXXX (US9475845之SEQ ID NO: 86；本文中為SEQ ID NO: 1488)、XFXXYLW (US9475845之SEQ ID NO: 87；本文中為SEQ ID NO: 1489)、SSIISHFRWGLCD (US9475845之SEQ ID NO: 88；本文中為SEQ ID NO: 1490)、MSRPACPPNDKYE (US9475845之SEQ ID NO: 89；本文中為SEQ ID NO: 1491)、CLRSGRGC (US9475845之SEQ ID NO: 90；本文中為SEQ ID NO: 1492)、CHWMFSPWC (US9475845之SEQ ID NO: 91；本文中為SEQ ID NO: 1493)、WXXF (US9475845之SEQ ID NO: 92；本文中為SEQ ID NO: 1494)、CSSRLDAC (US9475845之SEQ ID NO: 93；本文中為SEQ ID NO: 1495)、CLPVASC (US9475845之SEQ ID NO: 94；本文中為SEQ ID NO: 1496)、CGFECVRQCPERC (US9475845之SEQ ID NO: 95；本文中為SEQ ID NO: 1497)、CVALCREACGEGC (US9475845之SEQ ID NO: 96；本文中為SEQ ID NO: 1498)、SWCEPGWCR (US9475845之SEQ ID NO: 97；本文中為SEQ ID NO: 1499)、YSGKWGW (US9475845之SEQ ID NO: 98；本文中為SEQ ID NO: 1500)、GLSGGRS (US9475845之SEQ ID NO: 99；本文中為SEQ ID NO: 1501)、LMLPRAD (US9475845之SEQ ID NO: 100；本文中為SEQ ID NO: 1502)、CSCFRDVCC (US9475845之SEQ ID NO: 101；本文中為SEQ ID NO: 1503)、CRDVVSVIC (US9475845之SEQ ID NO: 102；本文中為SEQ ID NO: 1504)、MARSGL (US9475845之SEQ ID NO: 103；本文中為SEQ ID NO: 1505)、MARAKE (US9475845之SEQ ID NO: 104；本文中為SEQ ID NO: 1506)、MSRTMS (US9475845之SEQ ID NO: 105；本文中為SEQ ID NO: 1507)、KCCYSL (US9475845之SEQ ID NO: 106；本文中為SEQ ID NO: 1508)、MYWGDSHWLQYWYE (US9475845之SEQ ID NO: 107；本文中為SEQ ID NO: 1509)、MQLPLAT (US9475845之SEQ ID NO: 108；本文中為SEQ ID NO: 1510)、EWLS (US9475845之SEQ ID NO: 109；本文中為SEQ ID NO: 1511)、SNEW (US9475845之SEQ ID NO: 110；本文中為SEQ ID NO: 1512)、TNYL (US9475845之SEQ ID NO: 111；本文中為SEQ ID NO: 1513)、WDLAWMFRLPVG (US9475845之SEQ ID NO: 113；本文中為SEQ ID NO: 1514)、CTVALPGGYVRVC (US9475845之SEQ ID NO: 114；本文中為SEQ ID NO: 1515)、CVAYCIEHHCWTC (US9475845之SEQ ID NO: 116；本文中為SEQ ID NO: 1516)、CVFAHNYDYLVC (US9475845之SEQ ID NO: 117；本文中為SEQ ID NO: 1517)、CVFTSNYAFC (US9475845之SEQ ID NO: 118；本文中為SEQ ID NO: 1518)、VHSPNKK (US9475845之SEQ ID NO: 119；本文中為SEQ ID NO: 1519)、CRGDGWC (US9475845之SEQ ID NO: 120；本文中為SEQ ID NO: 1520)、XRGCDX (US9475845之SEQ ID NO: 121；本文中為SEQ ID NO: 1521)、PXXX (US9475845之SEQ ID NO: 122；本文中為SEQ ID NO: 1522)、SGKGPRQITAL (US9475845之SEQ ID NO: 124；本文中為SEQ ID NO: 1523)、AAAAAAAAAXXXXX (US9475845之SEQ ID NO: 125；本文中為SEQ ID NO: 1524)、VYMSPF (US9475845之SEQ ID NO: 126；本文中為SEQ ID NO: 1525)、ATWLPPR (US9475845之SEQ ID NO: 127；本文中為SEQ ID NO: 1526)、HTMYYHHYQHHL (US9475845之SEQ ID NO: 128；本文中為SEQ ID NO: 1527)、SEVGCRAGPLQWLCEKYFG (US9475845之SEQ ID NO: 129；本文中為SEQ ID NO: 1528)、CGLLPVGRPDRNVWRWLC (US9475845之SEQ ID NO: 130；本文中為SEQ ID NO: 1529)、CKGQCDRFKGLPWEC (US9475845之SEQ ID NO: 131；本文中為SEQ ID NO: 1530)、SGRSA (US9475845之SEQ ID NO: 132；本文中為SEQ ID NO: 1531)、WGFP (US9475845之SEQ ID NO: 133；本文中為SEQ ID NO: 1532)、AEPMPHSLNFSQYLWYT (US9475845之SEQ ID NO: 134；本文中為SEQ ID NO: 1533)、WAYXSP (US9475845之SEQ ID NO: 135；本文中為SEQ ID NO: 1534)、IELLQAR (US9475845之SEQ ID NO: 136；本文中為SEQ ID NO: 1535)、AYTKCSRQWRTCMTTH (US9475845之SEQ ID NO: 137；本文中為SEQ ID NO: 1536)、PQNSKIPGPTFLDPH (US9475845之SEQ ID NO: 138；本文中為SEQ ID NO: 1537)、SMEPALPDWWWKMFK (US9475845之SEQ ID NO: 139；本文中為SEQ ID NO: 1538)、ANTPCGPYTHDCPVKR (US9475845之SEQ ID NO: 140；本文中為SEQ ID NO: 1539)、TACHQHVRMVRP (US9475845之SEQ ID NO: 141；本文中為SEQ ID NO: 1540)、VPWMEPAYQRFL (US9475845之SEQ ID NO: 142；本文中為SEQ ID NO: 1541)、DPRATPGS (US9475845之SEQ ID NO: 143；本文中為SEQ ID NO: 1542)、FRPNRAQDYNTN (US9475845之SEQ ID NO: 144；本文中為SEQ ID NO: 1543)、CTKNSYLMC (US9475845之SEQ ID NO: 145；本文中為SEQ ID NO: 1544)、CXXTXXXGXGC (US9475845之SEQ ID NO: 146；本文中為SEQ ID NO: 1545)、CPIEDRPMC (US9475845之SEQ ID NO: 147；本文中為SEQ ID NO: 1546)、HEWSYLAPYPWF (US9475845之SEQ ID NO: 148；本文中為SEQ ID NO: 1547)、MCPKHPLGC (US9475845之SEQ ID NO: 149；本文中為SEQ ID NO: 1548)、RMWPSSTVNLSAGRR (US9475845之SEQ ID NO: 150；本文中為SEQ ID NO: 1549)、SAKTAVSQRVWLPSHRGGEP (US9475845之SEQ ID NO: 151；本文中為SEQ ID NO: 1550)、KSREHVNNSACPSKRITAAL (US9475845之SEQ ID NO: 152；本文中為SEQ ID NO: 1551)、EGFR (US9475845之SEQ ID NO: 153；本文中為SEQ ID NO: 1552)、AGLGVR (US9475845之SEQ ID NO: 154；本文中為SEQ ID NO: 1553)、GTRQGHTMRLGVSDG (US9475845之SEQ ID NO: 155；本文中為SEQ ID NO: 1554)、IAGLATPGWSHWLAL (US9475845之SEQ ID NO: 156；本文中為SEQ ID NO: 1555)、SMSIARL (US9475845之SEQ ID NO: 157；本文中為SEQ ID NO: 1556)、HTFEPGV (US9475845之SEQ ID NO: 158；本文中為SEQ ID NO: 1557)、NTSLKRISNKRIRRK (US9475845之SEQ ID NO: 159；本文中為SEQ ID NO: 1558)、LRIKRKRRKRKKTRK (US9475845之SEQ ID NO: 160；本文中為SEQ ID NO: 1559)、GGG、GFS、LWS、EGG、LLV、LSP、LBS、AGG、GRR、GGH及GTV。
在一個實施例中，AAV血清型可為或可具有如美國公開案第US 20160369298號中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於) AAV2之位點特異性突變衣殼蛋白(US 20160369298之SEQ ID NO: 97；本文中為SEQ ID NO: 1560)或其變異體，其中特異性位點為至少一個選自VP1或其片段之位點R447、G453、S578、N587、N587+1、S662的位點。
此外，US 20160369298中所描述之任一種突變序列可為或可具有(但不限於)以下序列中之任一者：SDSGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 231；本文中為SEQ ID NO: 1561)、SPSGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 2；本文中為SEQ ID NO: 1562)、SHSGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 3；本文中為SEQ ID NO: 1563)、SRSGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 4；本文中為SEQ ID NO: 1564)、SKSGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 5；本文中為SEQ ID NO: 1565)、SNSGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 6；本文中為SEQ ID NO: 1566)、SGSGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 7；本文中為SEQ ID NO: 1567)、SASGASN (US20160369298之SEQ ID NO: 8、175及221；本文中為SEQ ID NO: 1568)、SESGTSN (US20160369298之SEQ ID NO: 9；本文中為SEQ ID NO: 1569)、STTGGSN (US20160369298之SEQ ID NO: 10；本文中為SEQ ID NO: 1570)、SSAGSTN (US20160369298之SEQ ID NO: 11；本文中為SEQ ID NO: 1571)、NNDSQA (US20160369298之SEQ ID NO: 12；本文中為SEQ ID NO: 1572)、NNRNQA (US20160369298之SEQ ID NO: 13；本文中為SEQ ID NO: 1573)、NNNKQA (US20160369298之SEQ ID NO: 14；本文中為SEQ ID NO: 1574)、NAKRQA (US20160369298之SEQ ID NO: 15；本文中為SEQ ID NO: 1575)、NDEHQA (US20160369298之SEQ ID NO: 16；本文中為SEQ ID NO: 1576)、NTSQKA (US20160369298之SEQ ID NO: 17；本文中為SEQ ID NO: 1577)、YYLSRTNTPSGTDTQSRLVFSQAGA (US20160369298之SEQ ID NO: 18；本文中為SEQ ID NO: 1578)、YYLSRTNTDSGTETQSGLDFSQAGA (US20160369298之SEQ ID NO: 19；本文中為SEQ ID NO: 1579)、YYLSRTNTESGTPTQSALEFSQAGA (US20160369298之SEQ ID NO: 20；本文中為SEQ ID NO: 1580)、YYLSRTNTHSGTHTQSPLHFSQAGA (US20160369298之SEQ ID NO: 21；本文中為SEQ ID NO: 1581)、YYLSRTNTSSGTITISHLIFSQAGA (US20160369298之SEQ ID NO: 22；本文中為SEQ ID NO: 1582)、YYLSRTNTRSGIMTKSSLMFSQAGA (US20160369298之SEQ ID NO: 23；本文中為SEQ ID NO: 1583)、YYLSRTNTKSGRKTLSNLSFSQAGA (US20160369298之SEQ ID NO: 24；本文中為SEQ ID NO: 1584)、YYLSRTNDGSGPVTPSKLRFSQRGA (US20160369298之SEQ ID NO: 25；本文中為SEQ ID NO: 1585)、YYLSRTNAASGHATHSDLKFSQPGA (US20160369298之SEQ ID NO: 26；本文中為SEQ ID NO: 1586)、YYLSRTNGQAGSLTMSELGFSQVGA (US20160369298之SEQ ID NO: 27；本文中為SEQ ID NO: 1587)、YYLSRTNSTGGNQTTSQLLFSQLSA (US20160369298之SEQ ID NO: 28；本文中為SEQ ID NO: 1588)、YFLSRTNNNTGLNTNSTLNFSQGRA (US20160369298之SEQ ID NO: 29；本文中為SEQ ID NO: 1589)、SKTGADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 30；本文中為SEQ ID NO: 1590)、SKTDADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 31；本文中為SEQ ID NO: 1591)、SKTEADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 32；本文中為SEQ ID NO: 1592)、SKTPADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 33；本文中為SEQ ID NO: 1593)、SKTHADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 34；本文中為SEQ ID NO: 1594)、SKTQADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 35；本文中為SEQ ID NO: 1595)、SKTIADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 36；本文中為SEQ ID NO: 1596)、SKTMADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 37；本文中為SEQ ID NO: 1597)、SKTRADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 38；本文中為SEQ ID NO: 1598)、SKTNADNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 39；本文中為SEQ ID NO: 1599)、SKTVGRNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 40；本文中為SEQ ID NO: 1600)、SKTADRNNNSEYSWTG (US20160369298之SEQ ID NO: 41；本文中為SEQ ID NO: 1601)、SKKLSQNNNSKYSWQG (US20160369298之SEQ ID NO: 42；本文中為SEQ ID NO: 1602)、SKPTTGNNNSDYSWPG (US20160369298之SEQ ID NO: 43；本文中為SEQ ID NO: 1603)、STQKNENNNSNYSWPG (US20160369298之SEQ ID NO: 44；本文中為SEQ ID NO: 1604)、HKDDEGKF (US20160369298之SEQ ID NO: 45；本文中為SEQ ID NO: 1605)、HKDDNRKF (US20160369298之SEQ ID NO: 46；本文中為SEQ ID NO: 1606)、HKDDTNKF (US20160369298之SEQ ID NO: 47；本文中為SEQ ID NO: 1607)、HEDSDKNF (US20160369298之SEQ ID NO: 48；本文中為SEQ ID NO: 1608)、HRDGADSF (US20160369298之SEQ ID NO: 49；本文中為SEQ ID NO: 1609)、HGDNKSRF (US20160369298之SEQ ID NO: 50；本文中為SEQ ID NO: 1610)、KQGSEKTNVDFEEV (US20160369298之SEQ ID NO: 51；本文中為SEQ ID NO: 1611)、KQGSEKTNVDSEEV (US20160369298之SEQ ID NO: 52；本文中為SEQ ID NO: 1612)、KQGSEKTNVDVEEV (US20160369298之SEQ ID NO: 53；本文中為SEQ ID NO: 1613)、KQGSDKTNVDDAGV (US20160369298之SEQ ID NO: 54；本文中為SEQ ID NO: 1614)、KQGSSKTNVDPREV (US20160369298之SEQ ID NO: 55；本文中為SEQ ID NO: 1615)、KQGSRKTNVDHKQV (US20160369298之SEQ ID NO: 56；本文中為SEQ ID NO: 1616)、KQGSKGGNVDTNRV (US20160369298之SEQ ID NO: 57；本文中為SEQ ID NO: 1617)、KQGSGEANVDNGDV (US20160369298之SEQ ID NO: 58；本文中為SEQ ID NO: 1618)、KQDAAADNIDYDHV (US20160369298之SEQ ID NO: 59；本文中為SEQ ID NO: 1619)、KQSGTRSNAAASSV (US20160369298之SEQ ID NO: 60；本文中為SEQ ID NO: 1620)、KENTNTNDTELTNV (US20160369298之SEQ ID NO: 61；本文中為SEQ ID NO: 1621)、QRGNNVAATADVNT (US20160369298之SEQ ID NO: 62；本文中為SEQ ID NO: 1622)、QRGNNEAATADVNT (US20160369298之SEQ ID NO: 63；本文中為SEQ ID NO: 1623)、QRGNNPAATADVNT (US20160369298之SEQ ID NO: 64；本文中為SEQ ID NO: 1624)、QRGNNHAATADVNT (US20160369298之SEQ ID NO: 65；本文中為SEQ ID NO: 1625)、QEENNIAATPGVNT (US20160369298之SEQ ID NO: 66；本文中為SEQ ID NO: 1626)、QPPNNMAATHEVNT (US20160369298之SEQ ID NO: 67；本文中為SEQ ID NO: 1627)、QHHNNSAATTIVNT (US20160369298之SEQ ID NO: 68；本文中為SEQ ID NO: 1628)、QTTNNRAAFNMVET (US20160369298之SEQ ID NO: 69；本文中為SEQ ID NO: 1629)、QKKNNNAASKKVAT (US20160369298之SEQ ID NO: 70；本文中為SEQ ID NO: 1630)、QGGNNKAADDAVKT (US20160369298之SEQ ID NO: 71；本文中為SEQ ID NO: 1631)、QAAKGGAADDAVKT (US20160369298之SEQ ID NO: 72；本文中為SEQ ID NO: 1632)、QDDRAAAANESVDT (US20160369298之SEQ ID NO: 73；本文中為SEQ ID NO: 1633)、QQQHDDAAYQRVHT (US20160369298之SEQ ID NO: 74；本文中為SEQ ID NO: 1634)、QSSSSLAAVSTVQT (US20160369298之SEQ ID NO: 75；本文中為SEQ ID NO: 1635)、QNNQTTAAIRNVTT (US20160369298之SEQ ID NO: 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ID NO: 1704)及YFLSRTNGEAGSATLSELRFSQPG (US20160369298之SEQ ID NO: 252；本文中為SEQ ID NO: 1705)。可編碼胺基酸突變位點之核苷酸序列的非限制性實例包括以下：AGCVVMDCAGGARSCASCAAC (US20160369298之SEQ ID NO: 97；本文中為SEQ ID NO: 1706)、AACRACRRSMRSMAGGCA (US20160369298之SEQ ID NO: 98；本文中為SEQ ID NO: 1707)、CACRRGGACRRCRMSRRSARSTTT (US20160369298之SEQ ID NO: 99；本文中為SEQ ID NO: 1708)、TATTTCTTGAGCAGAACAAACRVCVVSRSCGGAMNCVHSACGMHSTCAVVSCTTVDSTTTTCTCAGSBCRGSGCG (US20160369298之SEQ ID NO: 100；本文中為SEQ ID NO: 1709)、TCAAMAMMAVNSRVCSRSAACAACAACAGTRASTTCTCGTGGMMAGGA (US20160369298之SEQ ID NO: 101；本文中為SEQ ID NO: 1710)、AAGSAARRCRSCRVSRVARVCRATRYCGMSNHCRVMVRSGTC (US20160369298之SEQ ID NO: 102；本文中為SEQ ID NO: 1711)、CAGVVSVVSMRSRVCVNSGCAGCTDHCVVSRNSGTCVMSACA (US20160369298之SEQ ID NO: 103；本文中為SEQ ID NO: 1712)、AACTWCRVSVASMVSVHSDDTGTGSWSTKSACT (US20160369298之SEQ ID NO: 104；本文中為SEQ ID NO: 1713)、TTGTTGAACATCACCACGTGACGCACGTTC (US20160369298之SEQ ID NO: 256；本文中為SEQ ID NO: 1714)、TCCCCGTGGTTCTACTACATAATGTGGCCG (US20160369298之SEQ ID NO: 257；本文中為SEQ ID NO: 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1724)、TGGGACAATGGCGGTCGTCTCTCAGAGTTKTKKT (US20160369298之SEQ ID NO: 267；本文中為SEQ ID NO: 1725)、AGAGGACCKKTCCTCGATGGTTCATGGTGGAGTTA (US20160369298之SEQ ID NO: 268；本文中為SEQ ID NO: 1726)、CCACTTAGGGCCTGGTCGATACCGTTCGGTG (US20160369298之SEQ ID NO: 269；本文中為SEQ ID NO: 1727)及TCTCGCCCCAAGAGTAGAAACCCTTCSTTYYG (US20160369298之SEQ ID NO: 270；本文中為SEQ ID NO: 1728)。
在一些實施例中，AAV血清型可包含如國際專利公開案WO2016134375中中所描述的靶向眼細胞之肽，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該肽諸如(但不限於) WO2016134375之SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 10。此外，WO2016134375中所描述的任一種靶向眼細胞之肽或胺基酸均可插入至任何親本AAV血清型中，諸如(但不限於) AAV2 (WO2016134375之SEQ ID NO: 8；本文中為SEQ ID NO: 1729)或AAV9 (WO2016134375之SEQ ID NO: 11；本文中為SEQ ID NO: 1730)。在一些實施例中，諸如插入之修飾發生於AAV2蛋白中之P34-A35、T138-A139、A139-P140、G453-T454、N587-R588及/或R588-Q589處。在某些實施例中，插入發生於AAV9之D384、G385、1560、T561、N562、E563、E564、E565、N704及/或Y705處。靶向眼細胞之肽可為(但不限於)以下胺基酸序列中之任一者：GSTPPPM (WO2016134375之SEQ ID NO: 1；本文中為SEQ ID NO: 1731)，或GETRAPL (WO2016134375之SEQ ID NO: 4；本文中為SEQ ID NO: 1732)。
在一些實施例中，AAV血清型可如美國公開案US 20170145405中所描述加以修飾，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。AAV血清型可包括經修飾之AAV2 (例如在Y444F、Y500F、Y730F及/或S662V處之修飾)、經修飾之AAV3 (例如在Y705F、Y731F及/或T492V處之修飾)及經修飾之AAV6 (例如在S663V及/或T492V處之修飾)。
在一些實施例中，AAV血清型可如國際公開案WO2017083722中所描述加以修飾，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。AAV血清型可包括AAV1 (Y705+731F+T492V)、AAV2 (Y444+500+730F+T491V)、AAV3 (Y705+731F)、AAV5、AAV 5 (Y436+693+719F)、AAV6 (VP3變異體Y705F/Y731F/T492V)、AAV8 (Y733F)、AAV9、AAV9 (VP3變異體Y731F)及AAV10 (Y733F)。
在一些實施例中，如國際專利公開案WO2017015102 (該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中)中所描述，AAV血清型可包含經工程改造之抗原決定基，該經工程改造之抗原決定基包含胺基酸SPAKFA (WO2017015102之SEQ ID NO: 24；本文中為SEQ ID NO: 1733)或NKDKLN (WO2017015102之SEQ ID NO: 2；本文中為SEQ ID NO: 1734)。抗原決定基可插入於AAV8之胺基酸665至670 (根據VP1衣殼之編號) (WO2017015102之SEQ ID NO: 3)及/或AAV3B之殘基664至668 (SEQ ID NO: 3)的區域中。
在一個實施例中，AAV血清型可為或可具有如國際專利公開案WO2017058892中所描述之序列，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中，該序列諸如(但不限於)具有衣殼蛋白之AAV變異體，該等衣殼蛋白可包含AAV1之胺基酸殘基262-268、370-379、451-459、472-473、493-500、528-534、547-552、588-597、709-710、716-722中之一或多者(例如2、3、4、5、6或7者)之任何組合處，或在AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAVrh8、AAVrh10、AAVrh32.33、牛AAV或禽類AAV中之等效胺基酸殘基處的取代。胺基酸取代可為(但不限於) WO2017058892中所描述之任一種胺基酸序列。在一個實施例中，AAV可包含在AAV1 (WO2017058892之SEQ ID NO: 1)之殘基256L、258K、259Q、261S、263A、264S、265T、266G、272H、385S、386Q、S472R、V473D、N500E 547S、709A、710N、716D、717N、718N、720L、A456T、Q457T、N458Q、K459S、T492S、K493A、S586R、S587G、S588N、T589R及/或722T之任何組合處，在AAV5 (WO2017058892之SEQ ID NO: 5)之244N、246Q、248R、249E、250I、251K、252S、253G、254S、255V、256D、263Y、377E、378N、453L、456R、532Q、533P、535N、536P、537G、538T、539T、540A、541T、542Y、543L、546N、653V、654P、656S、697Q、698F、704D、705S、706T、707G、708E、709Y及/或710R之任何組合處，在AAV5 (WO2017058892之SEQ ID NO: 5)之248R、316V、317Q、318D、319S、443N、530N、531S、532Q 533P、534A、535N、540A、541 T、542Y、543L、545G、546N、697Q、704D、706T、708E、709Y及/或710R之任何組合處，在AAV6 (SEQ ID NO: 6 WO2017058892)之264S、266G、269N、272H、457Q、588S及/或589I之任何組合處，在AAV8 (SEQ ID NO: 8 WO2017058892)之457T、459N、496G、499N、500N、589Q、590N及/或592A之任何組合處，在AAV9 (SEQ ID NO: 9 WO2017058892)之451I、452N、453G、454S、455G、456Q、457N及/或458Q之任何組合處的胺基酸取代。
在一些實施例中，AAV可包括VP1之位置155、156及157處或VP2之位置17、18、19及20處之胺基酸的序列，如國際公開案第WO 2017066764號中所描述，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。胺基酸序列可為(但不限於) N-S-S、S-X-S、S-S-Y、N-X-S、N-S-Y、S-X-Y及N-X-Y，其中N、X及Y獨立地為(但不限於)非絲胺酸或非蘇胺酸之胺基酸，其中AAV可為(但不限於) AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAV12。在一些實施例中，AAV可包括VP1之位置156、157或158處或VP2之位置19、20或21處之至少一個胺基酸的缺失，其中AAV可為(但不限於) AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAV12。病毒基因組組分 ： 反向末端重複序列 (ITR)
本發明之AAV顆粒包含具有至少一個ITR區域及有效負載區域之病毒基因組。在一個實施例中，病毒基因組具有兩個ITR。此兩個ITR側接有效負載區域之5'及3'端處。ITR充當複製起點，包含用於複製之識別位點。ITR包含可互補且對稱地配置之序列區域。併入本發明之病毒基因組中的ITR可包含天然存在之多核苷酸序列或以重組方式衍生之多核苷酸序列。
ITR可來源於與衣殼相同之血清型，選自表1中所列之任一種血清型，或其衍生物。ITR可具有與衣殼不同之血清型。在一個實施例中，AAV顆粒具有超過一個ITR。在一個非限制性實例中，AAV顆粒具有包含兩個ITR之病毒基因組。在一個實施例中，ITR具有彼此相同之血清型。在另一個實施例中，ITR具有不同血清型。非限制性實例包括零個、一個或兩個具有與衣殼相同之血清型的ITR。在一個實施例中，AAV顆粒之病毒基因組的兩個ITR均為AAV2 ITR。
獨立地，各ITR長度可為約100至約150個核苷酸。ITR長度可為約100-105個核苷酸，長度106-110個核苷酸，長度111-115個核苷酸，長度116-120個核苷酸，長度121-125個核苷酸，長度126-130個核苷酸，長度131-135個核苷酸，長度136-140個核苷酸，長度141-145個核苷酸或長度146-150個核苷酸。在一個實施例中，ITR長度為140-142個核苷酸。ITR長度之非限制實例為長度102、140、141、142、145個核苷酸，及與其具有至少95%一致性之彼等核苷酸。病毒基因組組分：啟動子
在一個實施例中，病毒基因組之有效負載區域包含至少一個增強轉殖基因標靶特異性及表現之元件(參見例如Powell等人 Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)。增強轉殖基因標靶特異性及表現之元件的非限制性實例包括啟動子、內源miRNA、轉錄後調控元件(PRE)、多腺苷酸化(PolyA)信號序列及上游增強子(USE)、CMV增強子及內含子。
熟習此項技術者可認識到，本發明之多肽在靶細胞中的表現可能要求具有特異性啟動子，包括(但不限於)具有物種特異性、可誘導性、組織特異性或細胞週期特異性之啟動子(Parr等人,Nat. Med. 3:1145-9 (1997)；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)。
在一個實施例中，當啟動子驅動在AAV顆粒病毒基因組之有效負載區域中所編碼之多肽的表現時，該啟動子視為有效。作為一個非限制性實例，該多肽為AADC。
在一個實施例中，當啟動子驅動在所靶向之細胞中表現時，該啟動子為視為有效之啟動子。
在一個實施例中，啟動子為對所靶向之細胞具有趨向性之啟動子。
在一個實施例中，啟動子驅動有效負載在標靶組織中表現一段時間。由啟動子驅動之表現可持續1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、8天、9天、10天、11天、12天、13天、2週、15天、16天、17天、18天、19天、20天、3週、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、31天、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1年、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或超過10年之時段。表現可持續1-5小時、1-12小時、1-2天、1-5天、1-2週、1-3週、1-4週、1-2個月、1-4個月、1-6個月、2-6個月、3-6個月、3-9個月、4-8個月、6-12個月、1-2年、1-5年、2-5年、3-6年、3-8年、4-8年或5-10年。作為一個非限制性實例，啟動子為用於在神經組織中持續表現有效負載之弱啟動子。
在一個實施例中，啟動子驅動本發明之多肽表現持續至少1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1年、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、21年、22年、23年、24年、25年、26年、27年、28年、29年、30年、31年、32年、33年、34年、35年、36年、37年、38年、39年、40年、41年、42年、43年、44年、45年、46年、47年、48年、49年、50年、55年、60年、65年或超過65年。
啟動子可為天然存在的或非天然存在的。啟動子之非限制性實例包括病毒啟動子、植物啟動子及哺乳動物啟動子。在一些實施例中，啟動子可為人類啟動子。在一些實施例中，啟動子可為截短的。
驅動或促進在大部分組織中表現之啟動子包括(但不限於)人類延長因子1α-亞單元(EF1α)、細胞巨大病毒(CMV)即刻早期增強子及/或啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)及其衍生物CAG、β葡糖醛酸酶(GUSB)或泛素C (UBC)。組織特異性表現元件可用於限定表現為某些細胞類型，諸如(但不限於)肌肉特異性啟動子、B細胞啟動子、單核球啟動子、白細胞啟動子、巨噬細胞啟動子、胰臟腺泡細胞啟動子、內皮細胞啟動子、肺組織啟動子、星形膠質細胞啟動子，或可用於限定表現為神經元、星形膠質細胞或寡樹突神經膠質細胞之神經系統啟動子。
肌肉特異性啟動子之非限制性實例包括哺乳動物肌肉肌酸激酶(MCK)啟動子、哺乳動物肌間線蛋白(DES)啟動子、哺乳動物肌鈣蛋白I (TNNI2)啟動子及哺乳動物骨架α-肌動蛋白(ASKA)啟動子(參見例如美國專利公開案US 20110212529，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中)。
用於神經元之組織特異性表現元件的非限制性實例包括神經元特異性烯醇酶(NSE)、血小板源生長因子(PDGF)、血小板源生長因子B鏈(PDGF-β)、突觸蛋白(Syn)、甲基-CpG結合蛋白2 (MeCP2)、Ca2+ /鈣調蛋白依賴性蛋白激酶II (CaMKII)、代謝型麩胺酸受體2 (mGluR2)、神經纖毛輕鏈(NFL)或重鏈(NFH)、β-血球蛋白小型基因nβ2、前腦啡肽原(PPE)、腦啡肽(Enk)及激動性胺基酸轉運體2 (EAAT2)啟動子。用於星形膠質細胞之組織特異性表現元件的非限制性實例包括膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)及EAAT2啟動子。用於寡樹突神經膠質細胞之組織特異性表現元件的非限制性實例包括髓磷脂鹼性蛋白(MBP)啟動子。
在一個實施例中，啟動子可小於1 kb。啟動子之長度可為200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800或超過800個核苷酸。啟動子之長度可介於200-300、200-400、200-500、200-600、200-700、200-800、300-400、300-500、300-600、300-700、300-800、400-500、400-600、400-700、400-800、500-600、500-700、500-800、600-700、600-800或700-800之間。
在一個實施例中，啟動子可為相同或不同起始或親本啟動子中之兩種或超過兩種組分的組合，諸如(但不限於) CMV與CBA。各組分之長度可為200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、500、510、520、530、540、550、560、570、580、590、600、610、620、630、640、650、660、670、680、690、700、710、720、730、740、750、760、770、780、790、800或超過800。各組分之長度可介於200-300、200-400、200-500、200-600、200-700、200-800、300-400、300-500、300-600、300-700、300-800、400-500、400-600、400-700、400-800、500-600、500-700、500-800、600-700、600-800或700-800之間。在一個實施例中，啟動子為382個核苷酸之CMV增強子序列與260個核苷酸之CBA啟動子序列的組合。
在一個實施例中，病毒基因組包含普遍存在之啟動子。普遍存在之啟動子的非限制性實例包括CMV、CBA (包括衍生物CAG、CBh等)、EF-1α、PGK、UBC、GUSB (hGBp)及UCOE (HNRPA2B1-CBX3之啟動子)。
Yu等人(Molecular Pain 2011, 7:63；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)評估在大鼠DRG細胞及初代DRG細胞中使用慢病毒載體在CAG、EFIα、PGK及UBC啟動子存在下的eGFP之表現，且發現UBC所展示之表現比其他3種啟動子弱且對所有啟動子均僅觀察到10-12%神經膠質表現。Soderblom等人(E. Neuro 2015；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)評估在注射至運動皮質之後，eGFP在具有CMV及UBC啟動子之AAV8中的表現及在具有CMV啟動子之AAV2中的表現。鼻內投與含有UBC或EFIα啟動子之質體展示持久之呼吸道表現，其大於使用CMV啟動子之表現(參見例如Gill等人, Gene Therapy 2001, 第8卷, 1539-1546；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)。Husain等人(Gene Therapy 2009；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)評估具有hGUSB啟動子、HSV-1LAT啟動子及NSE啟動子之HβH構築體，且發現HβH構築體在小鼠腦中所展示之表現比NSE弱。Passini及Wolfe (J. Virol. 2001, 12382-12392，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)評估HβH載體在心室內注射至新生小鼠之後的長期作用，且發現存在至少1年之持續表現。當使用NFL及NFH啟動子時，Xu等人(Gene Therapy 2001, 8, 1323-1332；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)發現所有腦區域中之表現低於CMV-lacZ、CMV-luc、EF、GFAP、hENK、nAChR、PPE、PPE + wpre、NSE (0.3 kb)、NSE (1.8 kb)及NSE (1.8 kb + wpre)。Xu等人發現啟動子活性依降序為NSE (1.8 kb)、EF、NSE (0.3 kb)、GFAP、CMV、hENK、PPE、NFL及NFH。NFL為650個核苷酸之啟動子且NFH為920個核苷酸之啟動子，此兩種啟動子在肝中均不存在，但NFH在感覺性本體感受性神經元、腦及脊髓中為豐富的且NFH存在於心臟中。SCN8A為表現於整個DRG、脊髓及腦中的470個核苷酸之啟動子，其中在海馬體神經元及小腦浦金埃氏細胞(Purkinje cell)、皮質、丘腦及下丘腦中觀察到表現特別高(參見例如Drews等人,Identification of evolutionary conserved, functional noncoding elements in the promoter region of the sodium channel gene SCN8A , Mamm Genome (2007) 18:723-731；及Raymond等人,Expression of Alternatively Spliced Sodium Channel α-subunit genes , Journal of Biological Chemistry (2004) 279(44) 46234-46241；該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中)。
前述Yu、Soderblom、Gill、Husain、Passini、Xu、Drews或Raymond教示之任一種啟動子均可用於本發明中。
在一個實施例中，啟動子不具有細胞特異性。
在一個實施例中，啟動子為泛素c (UBC)啟動子。UBC啟動子之大小可為300-350個核苷酸。作為一個非限制性實例，UBC啟動子為332個核苷酸。
在一個實施例中，啟動子為β-葡糖醛酸酶(GUSB)啟動子。GUSB啟動子之大小可為350-400個核苷酸。作為一個非限制性實例，GUSB啟動子為378個核苷酸。
在一個實施例中，啟動子為神經纖毛輕鏈(NFL)啟動子。NFL啟動子之大小可為600-700個核苷酸。作為一個非限制性實例，NFL啟動子為650個核苷酸。
在一個實施例中，啟動子為神經纖毛重鏈(NFH)啟動子。NFH啟動子之大小可為900-950個核苷酸。作為一個非限制性實例，NFH啟動子為920個核苷酸。
在一個實施例中，啟動子為SCN8A啟動子。SCN8A啟動子之大小可為450-500個核苷酸。作為一個非限制性實例，SCN8A啟動子為470個核苷酸。
在一個實施例中，啟動子為共濟蛋白(FXN)啟動子。FXN啟動子亦可稱為FRDA啟動子。
在一個實施例中，啟動子為磷酸甘油酸激酶1 (PGK)啟動子。
在一個實施例中，啟動子為雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子。
在一個實施例中，啟動子為細胞巨大病毒(CMV)啟動子。
在一個實施例中，啟動子為H1啟動子。
在一個實施例中，啟動子為經工程改造之啟動子。
在一個實施例中，啟動子為肝臟或骨胳肌肉啟動子。肝臟啟動子之非限制性實例包括人類α-1-抗胰蛋白酶(hAAT)及甲狀腺素結合球蛋白(TBG)。骨胳肌肉啟動子之非限制性實例包括肌間線蛋白、MCK或合成C5-12。
在一個實施例中，啟動子為RNA pol III啟動子。作為一個非限制性實例，RNA pol III啟動子為U6。作為一個非限制性實例，RNA pol III啟動子為H1。
在一個實施例中，病毒基因組包含兩個啟動子。作為一個非限制性實例，啟動子為EF1α啟動子及CMV啟動子。
在一個實施例中，病毒基因組包含增強子元件、啟動子及/或5' UTR內含子。增強子元件在本文中亦稱為「增強子」，其可為(但不限於) CMV增強子；啟動子可為(但不限於) CMV、CBA、UBC、GUSB、NSE、突觸蛋白、MeCP2及GFAP啟動子；且5' UTR/內含子可為(但不限於) SV40及CBA-MVM。作為一個非限制性實例，組合使用之增強子、啟動子及/或內含子可為：(1) CMV增強子、CMV啟動子、SV40 5' UTR內含子；(2) CMV增強子、CBA啟動子、SV 40 5' UTR內含子；(3) CMV增強子、CBA啟動子、CBA- 5' UTR內含子；(4) UBC啟動子；(5) GUSB啟動子；(6) NSE啟動子；(7)突觸蛋白啟動子；(8) MeCP2啟動子及(9) GFAP啟動子。
在一個實施例中，病毒基因組包含經工程改造之啟動子。
在另一個實施例中，病毒基因組包含來自天然表現之蛋白質的啟動子。
在一個實施例中，區域位於有效負載之第一外顯子上游大致約5 kb處以便允許用啟動子表現有效負載。(參見例如Puspasari等人Long Range Regulation of Human FXN Gene Expression , PLOS ONE, 2011；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中；17 bp區域位於共濟蛋白基因之第一外顯子上游大致4.9 kb處以便允許用FRDA啟動子表現)。
在一個實施例中，載體基因組可包含啟動子，諸如(但不限於)CMV或U6。作為一個非限制性實例，用於包含本發明有效負載之AAV顆粒的啟動子為CMV啟動子。作為另一個非限制性實例，用於包含本發明有效負載之AAV顆粒的啟動子為U6啟動子。
在一個實施例中，載體基因組可包含CMV及U6啟動子。
在一個實施例中，載體基因組可包含CBA啟動子。病毒基因組組分 ： 非轉譯區域 (UTR)
根據定義，基因之野生型非轉譯區域(UTR)被轉錄，但不轉譯。一般而言，5' UTR起始於轉錄起始位點且結束於起始密碼子，而3' UTR緊隨終止密碼子之後起始且持續直至轉錄終止信號為止。
通常發現於經充分表現之具體靶器官基因中的特徵可經工程改造而進入UTR中以增強穩定性及蛋白質產量。作為一個非限制性實例，在本發明之AAV顆粒的病毒基因組中可使用來自通常於肝臟中表現之mRNA的5' UTR (例如白蛋白、血清澱粉樣蛋白A、脂蛋白元A/B/E、轉鐵蛋白、α胎蛋白、紅血球生成素或因子VIII)以增強在肝細胞株或肝臟中之表現。
雖然不希望受理論束縛，但野生型5'非轉譯區域(UTR)包括在轉譯起始中起作用之特徵。5' UTR中通常包括Kozak序列，Kozak序列通常已知涉及核糖體藉以起始許多基因之轉譯的過程。Kozak序列具有共同CCR(A/G)CCAUGG，其中R為起始密碼子(ATG)上游三個鹼基處之嘌呤(腺嘌呤或鳥嘌呤)，其之後為另一個『G』。
在一個實施例中，病毒基因組中的5' UTR包括Kozak序列。
在一個實施例中，病毒基因組中的5' UTR不包括Kozak序列。
雖然不希望受理論束縛，但已知野生型3' UTR中嵌有腺苷及尿苷之序列段。此等富AU標誌在周轉率較高之基因中尤其普遍。富AU元件(ARE)基於其序列特徵及功能特性可分成三類(Chen等人, 1995，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)：I類 ARE，諸如(但不限於) c-Myc及MyoD，在富U區域內含有若干個分散之AUUUA基元複本。II類ARE，諸如(但不限於) GM-CSF及TNF-a，具有兩個或超過兩個重疊UUAUUUA(U/A)(U/A)九聚體。III類ARES，諸如(但不限於) c-Jun及成肌素，定義不太明確。此等富U區域不含AUUUA基元。已知結合於ARE之大部分蛋白質使信使失穩，而已記錄到ELAV家族成員(最顯著地，HuR)增加mRNA之穩定性。HuR結合於所有三類ARE。將HuR特異性結合位點工程改造至核酸分子之3' UTR中將引起HuR結合，且因此引起活體內訊息穩定。
3' UTR富AU元件(ARE)之引入、移除或修飾可用於調節多核苷酸之穩定性。在對具體多核苷酸(例如病毒基因組之有效負載區域)進行工程改造時，可引入ARE之一或多個複本以降低多核苷酸穩定性，且藉此減少所得蛋白質之轉譯且減少其產量。同樣，可鑑別出ARE且將其移除或使其突變以增加胞內穩定性，且因此增加所得蛋白質之轉譯及產量。
在一個實施例中，病毒基因組之3' UTR可包括用於模板化添加poly-A尾之寡聚(dT)序列。
在一個實施例中，病毒基因組可包括至少一個miRNA種子、結合位點或完整序列。微RNA (或miRNA或miR)為19-25個核苷酸之非編碼RNA，其結合於核酸標靶之位點且藉由降低核酸分子穩定性或藉由抑制轉譯來下調基因表現。微RNA序列包含「種子」區域，亦即成熟微RNA之位置2-8區域中的序列，該序列相對於核酸之miRNA靶序列具有完美的沃森-克里克互補性(Watson-Crick complementarity)。
在一個實施例中，病毒基因組可經工程改造以包括、改變或移除至少一個miRNA結合位點、序列或種子區域。
來自此項技術中已知之任何基因的任何UTR均可併入AAV顆粒之病毒基因組中。此等UTR或其部分之置放取向可與在其所選自之基因中相同，或其取向或位置可變化。在一個實施例中，AAV顆粒之病毒基因組中所用的UTR可經倒轉、縮短、延長、製成具有此項技術中已知之一或多個其他5' UTR或3' UTR。如本文所用，在與UTR相關時，術語「改變」意謂UTR已以某種方式相對於參考序列變化。舉例而言，3'或5' UTR可如上文所教示藉由取向或位置變化而相對於野生型或原生UTR發生改變，或可藉由包括額外核苷酸、核苷酸缺失、核苷酸調換或轉位而發生改變。
在一個實施例中，AAV顆粒之病毒基因組包含至少一個人工UTR，該等UTR不為野生型UTR之變異體。
在一個實施例中，AAV顆粒之病毒基因組包含已選自轉錄物家族之UTR，該等轉錄物之蛋白質共有共同的功能、結構、特徵或特性。病毒基因組組分：多腺苷酸化序列
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒的病毒基因組包含至少一個多腺苷酸化序列。AAV顆粒之病毒基因組可包含位於有效負載編碼序列之3'端與3' ITR之5'端之間的多腺苷酸化序列。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列或「polyA序列」之長度可在不存在至約500個核苷酸之範圍內。多腺苷酸化序列長度可為(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、431、432、433、434、435、436、437、438、439、440、441、442、443、444、445、446、447、448、449、450、451、452、453、454、455、456、457、458、459、460、461、462、463、464、465、466、467、468、469、470、471、472、473、474、475、476、477、478、479、480、481、482、483、484、485、486、487、488、489、490、491、492、493、494、495、496、497、498、499及500個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為50-100個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為50-150個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為50-160個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為50-200個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為60-100個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為60-150個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為60-160個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為60-200個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為70-100個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為70-150個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為70-160個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為70-200個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為80-100個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為80-150個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為80-160個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為80-200個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為90-100個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為90-150個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為90-160個核苷酸。
在一個實施例中，多腺苷酸化序列長度為90-200個核苷酸。病毒基因組組分：內含子
在一個實施例中，有效負載區域包含至少一個增強表現之元件，諸如一或多個內含子或其部分。內含子之非限制性實例包括MVM (67-97 bps)、F.IX截短之內含子1 (300 bps)、β-血球蛋白SD/免疫球蛋白重鏈剪接受體(250 bps)、腺病毒剪接供體/免疫球蛋白剪接受體(500 bps)、SV40晚期剪接供體/剪接受體(19S/16S) (180 bps)及雜合腺病毒剪接供體/IgG剪接受體(230 bps)。
在一個實施例中，內含子或內含子部分長度可為100-500個核苷酸。內含子之長度可為80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500。內含子之長度可介於80-100、80-120、80-140、80-160、80-180、80-200、80-250、80-300、80-350、80-400、80-450、80-500、200-300、200-400、200-500、300-400、300-500或400-500之間。
在一個實施例中，載體基因組包含至少一個增強轉殖基因標靶特異性及表現之元件(參見例如Powell等人Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy , 2015；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)，諸如內含子。內含子之非限制性實例包括MVM (67-97 bps)、F.IX截短之內含子1 (300 bps)、β-血球蛋白SD/免疫球蛋白重鏈剪接受體(250 bps)、腺病毒剪接供體/免疫球蛋白剪接受體(500 bps)、SV40晚期剪接供體/剪接受體(19S/16S) (180 bps)及雜合腺病毒剪接供體/IgG剪接受體(230 bps)。
在一個實施例中，內含子長度可為100-500個核苷酸。內含子之長度可為80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500。內含子之長度可介於80-100、80-120、80-140、80-160、80-180、80-200、80-250、80-300、80-350、80-400、80-450、80-500、200-300、200-400、200-500、300-400、300-500或400-500之間。病毒基因組組分：填充序列
在一個實施例中，病毒基因組包含一或多個填充序列。
在一個實施例中，病毒基因組包含一或多個填充序列以便使病毒基因組之長度為最佳封裝大小。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列以便使病毒基因組之長度為約2.3 kb。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列以便使病毒基因組之長度為約4.6 kb。
在一個實施例中，病毒基因組為單股(ss)病毒基因組且包含一或多個填充序列，該等填充序列之長度大約介於0.1 kb-3.8 kb之間，諸如(但不限於) 0.1 kb、0.2 kb、0.3 kb、0.4 kb、0.5 kb、0.6 kb、0.7 kb、0.8 kb、0.9 kb、1 kb、1.1 kb、1.2 kb、1.3 kb、1.4 kb、1.5 kb、1.6 kb、1.7 kb、1.8 kb、1.9 kb、2 kb、2.1 kb、2.2 kb、2.3 kb、2.4 kb、2.5 kb、2.6 kb、2.7 kb、2.8 kb、2.9 kb、3 kb、3.1 kb、3.2 kb、3.3 kb、3.4 kb、3.5 kb、3.6 kb、3.7 kb或3.8 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中之填充序列總長度為3.1 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中之填充序列總長度為2.7 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中之填充序列總長度為0.8 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中之填充序列總長度為0.4 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中各填充序列之長度為0.8 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中各填充序列之長度為0.4 kb。
在一個實施例中，病毒基因組為自互補(sc)病毒基因組且包含一或多個填充序列，該等填充序列之長度大約介於0.1 kb-1.5 kb之間，諸如(但不限於) 0.1 kb、0.2 kb、0.3 kb、0.4 kb、0.5 kb、0.6 kb、0.7 kb、0.8 kb、0.9 kb、1 kb、1.1 kb、1.2 kb、1.3 kb、1.4 kb或1.5 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中之填充序列總長度為0.8 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中之填充序列總長度為0.4 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中各填充序列之長度為0.8 kb。作為一個非限制性實例，載體基因組中各填充序列之長度為0.4 kb。
在一個實施例中，病毒基因組包含填充序列之任何部分。病毒基因組可包含填充序列之1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%。
在一個實施例中，病毒基因組為單股(ss)病毒基因組且包含一或多個填充序列以便使病毒基因組之長度為約4.6 kb。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於5' ITR序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於啟動子序列之5'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於多腺苷酸化信號序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於3' ITR序列之5'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於兩個內含子序列之間。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於內含子序列內。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含兩個填充序列，且第一填充序列位於5' ITR序列之3'位且第二填充序列位於多腺苷酸化信號序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含兩個填充序列，且第一填充序列位於啟動子序列之5'位且第二填充序列位於多腺苷酸化信號序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含兩個填充序列，且第一填充序列位於5' ITR序列之3'位且第二填充序列位於5' ITR序列之5'位。
在一個實施例中，病毒基因組為自互補(sc)病毒基因組且包含一或多個填充序列以便使病毒基因組之長度為約2.3 kb。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於5' ITR序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於啟動子序列之5'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於多腺苷酸化信號序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於3' ITR序列之5'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於兩個內含子序列之間。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含至少一個填充序列，且該填充序列位於內含子序列內。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含兩個填充序列，且第一填充序列位於5' ITR序列之3'位且第二填充序列位於多腺苷酸化信號序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含兩個填充序列，且第一填充序列位於啟動子序列之5'位且第二填充序列位於多腺苷酸化信號序列之3'位。作為一個非限制性實例，病毒基因組包含兩個填充序列，且第一填充序列位於5' ITR序列之3'位且第二填充序列位於5' ITR序列之5'位。
在一個實施例中，病毒基因組可包含處於病毒基因組之一或多個區域之間的一或多個填充序列。在一個實施例中，填充區域可位於諸如(但不限於)以下之區域之前：有效負載區域、反向末端重複序列(ITR)、啟動子區域、內含子區域、增強子區域、多腺苷酸化信號序列區域、多選殖位點(MCS)區域及/或外顯子區域。在一個實施例中，填充區域可位於諸如(但不限於)以下之區域之後：有效負載區域、反向末端重複序列(ITR)、啟動子區域、內含子區域、增強子區域、多腺苷酸化信號序列區域、多選殖位點(MCS)區域及/或外顯子區域。在一個實施例中，填充區域可位於諸如(但不限於)以下之區域之前及之後：有效負載區域、反向末端重複序列(ITR)、啟動子區域、內含子區域、增強子區域、多腺苷酸化信號序列區域、多選殖位點(MCS)區域及/或外顯子區域。
在一個實施例中，病毒基因組可包含一或多個將病毒基因組之至少一個區域分開的填充序列。病毒基因組的分開之區域可包含位於填充序列區域之5'位的該分開之區域之1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之10%位於填充序列之5'位且該區域之90%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之20%位於填充序列之5'位且該區域之80%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之30%位於填充序列之5'位且該區域之70%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之40%位於填充序列之5'位且該區域之60%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之50%位於填充序列之5'位且該區域之50%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之60%位於填充序列之5'位且該區域之40%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之70%位於填充序列之5'位且該區域之30%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之80%位於填充序列之5'位且該區域之20%位於填充序列之3'位。作為一個非限制性實例，填充序列可將至少一個區域分開，以使得該區域之90%位於填充序列之5'位且該區域之10%位於填充序列之3'位。
在一個實施例中，病毒基因組包含處於5' ITR之後的填充序列。
在一個實施例中，病毒基因組包含處於啟動子區域之後的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於有效負載區域之後的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於內含子區域之後的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於增強子區域之後的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於多腺苷酸化信號序列區域之後的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於MCS區域之後的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於外顯子區域之後的填充序列。
在一個實施例中，病毒基因組包含處於啟動子區域之前的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於有效負載區域之前的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於內含子區域之前的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於增強子區域之前的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於多腺苷酸化信號序列區域之前的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於MCS區域之前的填充序列。在一個實施例中，病毒基因組包含處於外顯子區域之前的填充序列。
在一個實施例中，病毒基因組包含處於3' ITR之前的填充序列。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) 5' ITR與啟動子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) 5' ITR與有效負載區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) 5' ITR與內含子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) 5' ITR與增強子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) 5' ITR與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) 5' ITR與MCS區域之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) 5' ITR與外顯子區域之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)啟動子區域與有效負載區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)啟動子區域與內含子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)啟動子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)啟動子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)啟動子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)啟動子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)啟動子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)有效負載區域與內含子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)有效負載區域與增強子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)有效負載區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)有效負載區域與MCS區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)有效負載區域與外顯子區域之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)有效負載區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)內含子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)內含子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)內含子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)內含子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)內含子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)增強子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)增強子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)增強子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於) MCS區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，填充序列可位於兩個區域之間，諸如(但不限於)外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與有效負載區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與內含子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與內含子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與啟動子區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與有效負載區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與內含子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與內含子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與有效負載區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
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在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與有效負載區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與內含子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於啟動子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與內含子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於有效負載區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與增強子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於內含子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於5' ITR與增強子區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
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在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於內含子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
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在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與多腺苷酸化信號序列區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於增強子區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與MCS區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於MCS區域與3' ITR之間。在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於多腺苷酸化信號序列區域與3' ITR之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。
在一個實施例中，病毒基因組可包含兩個填充序列，第一填充序列可位於MCS區域與外顯子區域之間，且第二填充序列可位於外顯子區域與3' ITR之間。AAV 產生
本發明提供用於產生細小病毒顆粒，例如AAV顆粒之方法，其藉由在病毒複製細胞中進行病毒基因組複製來產生。
根據本發明，包含有效負載區域之病毒基因組將併入在病毒複製細胞中所產生之AAV顆粒中。製造AAV顆粒之方法為此項技術中熟知的，且描述於例如以下中：美國專利第US6204059號、第US5756283號、第US6258595號、第US6261551號、第US6270996號、第US6281010號、第US6365394號、第US6475769號、第US6482634號、第US6485966號、第US6943019號、第US6953690號、第US7022519號、第US7238526號、第US7291498號及第US7491508號、第US5064764號、第US6194191號、第US6566118號、第US8137948號；或國際公開案第WO1996039530號、第WO1998010088號、第WO1999014354號、第WO1999015685號、第WO1999047691號、第WO2000055342號、第WO2000075353號及第WO2001023597號；Methods In Molecular Biology, Richard編, Humana Press, NJ (1995)；O'Reilly等人, Baculovirus Expression Vectors, A Laboratory Manual, Oxford Univ. Press (1994)；Samulski等人,J. Vir. 63:3822-8 (1989)；Kajigaya等人,Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 88: 4646-50 (1991)；Ruffing等人,J. Vir. 66:6922-30 (1992)；Kimbauer等人,Vir., 219:37-44 (1996)；Zhao等人,Vir. 272:382-93 (2000)；該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，AAV顆粒使用WO2015191508中所描述之方法來加以製造，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中。
常用於產生重組AAV顆粒之病毒複製細胞包括(但不限於) 293細胞、COS細胞、HeLa細胞、KB細胞及其他哺乳動物細胞株，如美國專利第US6156303號、第US5387484號、第US5741683號、第US5691176號及第US5688676號；美國專利公開案第2002/0081721號及國際專利公開案第WO 00/47757號、第WO 00/24916號及第WO 96/17947號中所描述，該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，本發明提供一種用於產生轉導效率得到增強(增加、改良)之AAV顆粒的方法，該方法包含以下步驟：1)用穿梭載體及病毒構築體載體及/或AAV有效負載構築體載體共同轉染勝任細菌細胞；2)分離所得病毒構築體表現載體及AAV有效負載構築體表現載體且分別轉染病毒複製細胞；3)分離及純化包含病毒構築體表現載體或AAV有效負載構築體表現載體之所得有效負載及病毒構築體顆粒；4)用包含病毒構築體表現載體或AAV有效負載構築體表現載體之AAV有效負載及病毒構築體顆粒兩者共同感染病毒複製細胞；及5)採集及純化包含病毒基因組之AAV顆粒。
在一些實施例中，本發明提供一種用於產生AAV顆粒之方法，該方法包含以下步驟：1)用有效負載區域、表現rep及cap基因之構築體及輔助構築體同時共同轉染哺乳動物細胞，諸如(但不限於) HEK293細胞；2)採集及純化包含病毒基因組之AAV顆粒。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒的病毒基因組視情況編碼可選標記物。可選標記物可包含細胞表面標記物，諸如在細胞表面上表現之任何蛋白質，包括(但不限於)受體、CD標記物、凝集素、整合素或其截短型式。
在一些實施例中，可選標記物報導基因如國際申請案第WO 96/23810號；Heim等人, Current Biology 2:178-182 (1996)；Heim等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995)；或Heim等人, Science 373:663-664 (1995)；WO 96/30540中所描述，該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中)。基因組大小
在一個實施例中，包含本文所描述之有效負載的AAV顆粒可為單股或雙股載體基因組。病毒基因組之大小可為大小較小、中等、較大或最大。另外，載體基因組可包含啟動子及polyA尾。
在一個實施例中，包含本文所描述之有效負載的載體基因組可為較小單股載體基因組。較小單股載體基因組之大小可為2.7至3.5 kb，諸如大小約2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4及3.5 kb。作為一個非限制性實例，較小單股載體基因組之大小可為3.2 kb。另外，載體基因組可包含啟動子及polyA尾。
在一個實施例中，包含本文所描述之有效負載的載體基因組可為較小雙股載體基因組。較小雙股載體基因組之大小可為1.3至1.7 kb，諸如大小約1.3、1.4、1.5、1.6及1.7 kb。作為一個非限制性實例，較小雙股載體基因組之大小可為1.6 kb。另外，載體基因組可包含啟動子及polyA尾。
在一個實施例中，包含本文所描述之有效負載的載體基因組可為中等單股載體基因組。中等單股載體基因組之大小可為3.6至4.3 kb，諸如大小約3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2及4.3 kb。作為一個非限制性實例，中等單股載體基因組之大小可為4.0 kb。另外，載體基因組可包含啟動子及polyA尾。
在一個實施例中，包含本文所描述之有效負載的載體基因組可為中等雙股載體基因組。中等雙股病毒基因組之大小可為1.8至2.1 kb，諸如大小約1.8、1.9、2.0及2.1 kb。作為一個非限制性實例，中等雙股載體基因組之大小可為2.0 kb。另外，載體基因組可包含啟動子及polyA尾。
在一個實施例中，包含本文所描述之有效負載的載體基因組可為較大單股載體基因組。較大單股載體基因組之大小可為4.4至6.0 kb，諸如大小約4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9及6.0 kb。作為一個非限制性實例，較大單股載體基因組之大小可為4.7 kb。作為另一個非限制性實例，較大單股載體基因組之大小可為4.8 kb。作為又一個非限制性實例，較大單股病毒基因組之大小可為6.0 kb。另外，載體基因組可包含啟動子及polyA尾。
在一個實施例中，包含本文所描述之有效負載的載體基因組可為較大雙股載體基因組。較大雙股載體基因組之大小可為2.2至3.0 kb，諸如大小約2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9及3.0 kb。作為一個非限制性實例，較大雙股載體基因組之大小可為2.4 kb。另外，載體基因組可包含啟動子及polyA尾。本發明之有效負載
本發明之AAV顆粒包含至少一個有效負載區域。如本文所用，「有效負載」或「有效負載區域」係指由病毒基因組編碼或在其內部編碼之一或多個多核苷酸或多核苷酸區域、或此類多核苷酸或多核苷酸區域之表現產物，例如轉殖基因(一種編碼多肽或多元多肽之多核苷酸)或調節性核酸或調控性核酸。本發明之有效負載通常編碼多肽或其片段或變異體。
有效負載區域可以一定方式構築以反映與天然mRNA組織相似或與其成鏡像之區域。
有效負載區域可包含編碼及非編碼核酸序列之組合。
在一些實施例中，AAV有效負載區域可對編碼或非編碼RNA進行編碼。
在一個實施例中，AAV顆粒包含具有有效負載區域之病毒基因組，該有效負載區域包含編碼超過一種所關注之多肽的核酸序列。在此類實施例中，編碼超過一種多肽之病毒基因組可複寫及封裝至病毒顆粒中。經包含超過一種多肽之病毒顆粒轉導的靶細胞可在單個細胞中表現該等多肽中之每一者。
在一個實施例中，有效負載區域可包含如圖1中所展示之組分。有效負載區域110 位於病毒基因組100 內。在有效負載區域110 之5'及/或3'端處可存在至少一個反向末端重複序列(ITR)120 。在有效負載區域內，存在啟動子區域130 、內含子區域140 及編碼區域150 。
在AAV顆粒有效負載區域編碼多肽的情況下，該多肽可為肽或蛋白質。本文所描述的編碼多肽之病毒基因組可適用於人類疾病、病毒、感染、獸醫學應用之領域及多種活體內及活體外環境中。
在一些實施例中，AAV顆粒適用於治療、預防、減輕或改善神經疾病及/或病症之藥物的領域。
在一些實施例中，AAV顆粒適用於治療、預防、減輕或改善帕金森氏症之藥物的領域。
在一些實施例中，AAV顆粒適用於治療、預防、減輕或改善中樞神經系統疾病之藥物的領域。多肽及變異體之性質
由本發明病毒基因組之有效負載區域編碼的胺基酸序列可轉譯為完整多肽、複數個多肽或多肽片段，其獨立地可由一或多個核酸、核酸片段或前述中任一者之變異體編碼。如本文所用，「多肽」」意謂最常藉由肽鍵連接在一起的胺基酸殘基(天然或非天然)之聚合物。如本文所用，該術語係指具有任何大小、結構或功能之蛋白質、多肽及肽。在一些情況下，所編碼之多肽小於約50個胺基酸，且該多肽隨後稱為肽。若多肽為肽，則其將為至少約2、3、4或至少5個胺基酸殘基長。因此，多肽包括基因產物、天然存在之多肽、合成多肽、同源物、直系同源物、旁系同源物、片段及前述者之其他等效物、變異體及類似物。多肽可為單分子或可為多分子複合物，諸如二聚體、三聚體或四聚體。其亦可包含單鏈或多鏈多肽，且可為締合或連接的。術語多肽亦可應用於胺基酸聚合物，其中一或多個胺基酸殘基為對應之天然存在之胺基酸的人工化學類似物。
術語「多肽變異體」係指其胺基酸序列與原生或參考序列不同之分子。與原生或參考序列相比，胺基酸序列變異體可在胺基酸序列內某些位置處具有取代、缺失及/或插入。通常，變異體將與原生或參考序列具有至少約50%一致性(同源性)，且較佳地，其將與原生或參考序列至少約80%、更佳地至少約90%一致(同源)。
在一些實施例中，提供「變異體模擬物」。如本文所用，術語「變異體模擬物」為含有將模擬活化序列之一或多個胺基酸的模擬物。舉例而言，麩胺酸可充當偶磷基-蘇胺酸及/或偶磷基-絲胺酸之模擬物。或者，變異體模擬物可引起失活或產生含有該模擬物之非活化產物，例如苯丙胺酸可充當酪胺酸之失活性取代；或丙胺酸可充當絲胺酸之非活化性取代。
術語「胺基酸序列變異體」係指其胺基酸序列與原生或起始序列相比具有一些差異之分子。胺基酸序列變異體可在胺基酸序列內某些位置處具有取代、缺失及/或插入。「原生」或「起始」序列不應與野生型序列混淆。如本文所用，原生或起始序列為相對術語，其細緻可針對其進行比較之原始分子。「原生」或「起始」序列或分子可表示野生型(在自然中所發現之序列)但不一定為野生型序列。
通常，變異體將與原生序列具有至少約70%同源性，且較佳地，其將與原生序列至少約80%、更佳地至少約90%同源。在應用於胺基酸序列時，「同源性」定義為在比對序列且視需要引入空隙以達成最大同源性百分比之後，候選胺基酸序列中之殘基與第二序列之胺基酸序列中之殘基一致的百分比。用於比對之方法及電腦程式為此項技術中所熟知。應理解，同源性視一致性百分比之計算而定，但其值可由於在計算中引入之空隙及罰分而不同。
在應用於胺基酸序列時，「同源物」意謂與第二物種之第二序列大體上一致的其他物種之對應序列。
「類似物」意謂包括仍維持親本多肽之特性的相差一或多個胺基酸改變(例如胺基酸殘基之取代、添加或缺失)的多肽變異體。
可向本發明之肽序列中(例如在N端或C端處)添加序列標籤或胺基酸，諸如一或多個離胺酸。序列標籤可用於肽純化或定位。離胺酸可用於增加肽溶解度或允許生物素化。或者，位於肽或蛋白質之胺基酸序列的羧基及胺基端區域處的胺基酸殘基可視情況缺失，從而提供截短之序列。或者，視序列之用途而定，某些胺基酸(例如C端或N端殘基)可缺失，如舉例而言，表現該序列以作為可溶或與固體支撐物連接之較大序列的部分。
當提及蛋白質時，「取代型變異體」為將原生或起始序列中之至少一個胺基酸殘基移除且將不同胺基酸代替其插入在同一位置處的彼等蛋白質。取代可為單取代，其中分子中僅一個胺基酸已經取代；或其可為多取代，其中同一個分子中兩個或超過兩個胺基酸已經取代。
如本文所用，術語「保守性胺基酸取代」係指用具有相似大小、電荷或極性之不同胺基酸取代通常存在於序列中之胺基酸。保守性取代之實例包括將諸如異白胺酸、纈胺酸及白胺酸之非極性(疏水性)殘基取代為另一種非極性殘基。同樣，保守性取代之實例包括將一種極性(親水性)殘基取代為另一種，諸如在精胺酸與離胺酸之間、在麩醯胺與天冬醯胺之間及在甘胺酸與絲胺酸之間。另外，將諸如離胺酸、精胺酸或組胺酸之鹼性殘基取代為另一種，或將一種諸如天冬胺酸或麩胺酸之酸性殘基取代為另一種酸性殘基為保守性取代之額外實例。非保守性取代之實例包括將諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸、丙胺酸或甲硫胺酸之非極性(疏水性)胺基酸殘基取代為諸如半胱胺酸、麩醯胺、麩胺酸或離胺酸之極性(親水性)殘基及/或將極性殘基取代為非極性殘基。
當提及蛋白質時，「插入型變異體」為將一或多個胺基酸緊鄰於原生或起始序列中特定位置處之胺基酸插入的彼等蛋白質。「緊鄰」於胺基酸意謂連接至該胺基酸之α-羧基或α-胺基官能基。
當提及蛋白質時，「缺失型變異體」為將原生或起始胺基酸序列中之一或多個胺基酸移除的彼等蛋白質。通常，缺失型變異體將在分子之特定區域中缺失一或多個胺基酸。
如本文所用，術語「衍生物」與術語「變異體」同義地使用，且係指已相對於參考分子或起始分子以任何方式加以修飾或變化的分子。在一些實施例中，衍生物包括已用有機蛋白質或非蛋白質衍生劑及轉譯後修飾來加以修飾之原生或起始蛋白質。共價修飾在傳統上藉由使蛋白質之標靶胺基酸殘基與能夠與所選側鏈或末端殘基反應之有機衍生劑反應，或藉由利用在所選重組宿主細胞中起作用的轉譯後修飾之機制來進行引入。所得共價衍生物適用於針對鑑別對生物學活性、免疫分析或製備抗蛋白質抗體用於重組糖蛋白免疫親和力純化而言至關重要之殘基的程式。此類修飾在一般技術者之能力內，且在無不當實驗的情況下執行。
某些轉譯後修飾由重組宿主細胞對所表現之多肽的作用產生。常使麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基在轉譯後脫除醯胺基以分別形成對應的麩胺醯基及天冬胺醯基殘基。或者，此等殘基在適度酸性條件下脫除醯胺基。任一形式之此等殘基均可存在於根據本發明使用之蛋白質中。
其他轉譯後修飾包括使脯胺酸及離胺酸羥基化，使絲胺醯基或蘇胺醯基殘基之羥基磷酸化，使離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基甲基化(T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, 第79-86頁 (1983))。
當提及蛋白質時，「特徵」定義為分子中基於獨特胺基酸序列之組分。本發明之蛋白質的特徵包括表面表現特徵(manifestation)、局部構形形狀、摺疊、環、半環、域、半域、位點、端或其任何組合。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「表面表現特徵」係指在最外表面上出現的基於多肽之蛋白質組分。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「局部構形形狀」意謂位於可界定之蛋白質空間內的基於多肽之蛋白質結構表現特徵。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「摺疊」意謂在能量最小化時所得的胺基酸序列之構形。摺疊可發生在摺疊過程之二級或三級處。二級摺疊之實例包括β摺疊及α螺旋。三級摺疊之實例包括由於能量較高之力的聚集或分離而形成的域及區域。以此方式形成之區域包括疏水性及親水性袋，及其類似物。
如本文所用，在與蛋白質構形相關時，術語「轉角」意謂改變肽或多肽之主鏈方向且可涉及一個、兩個、三個或超過三個胺基酸殘基的彎曲。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「環」係指使肽或多肽之主鏈方向反轉且包含四個或超過四個胺基酸殘基的肽或多肽結構特徵。Oliva等人已鑑別至少5類蛋白質環(J. Mol Biol 266 (4): 814-830; 1997)。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「半環」係指具有其所衍生自之環之至少一半胺基酸殘基數目的所鑑別之環部分。應理解，環可能並非始終含有偶數個胺基酸殘基。因此，在其中環含有或鑑別為包含奇數個胺基酸之彼等情況下，奇數編號之環的半環將包含該環之整數部分或下一整數部分(環之胺基酸數目/2 +/- 0.5個胺基酸)。舉例而言，鑑別為7個胺基酸之環的環可產生3個胺基酸或4個胺基酸之半環(7/2=3.5 +/- 0.5為3或4)。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「域」係指具有一或多個可鑑別之結構或功能特徵或特性(例如結合力，充當蛋白質-蛋白質相互作用之位點)的多肽基元。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「半域」意謂具有其所衍生自之域之至少一半胺基酸殘基數目的所鑑別之域部分。應理解，域可能並非始終含有偶數個胺基酸殘基。因此，在其中域含有或鑑別為包含奇數個胺基酸之彼等情況下，奇數編號之域的半域將包含該域之整數部分或下一整數部分(域之胺基酸數目/2 +/- 0.5個胺基酸)。舉例而言，鑑別為7個胺基酸之域的域可產生3個胺基酸或4個胺基酸之半域(7/2=3.5 +/- 0.5為3或4)。亦應理解，可在域或半域內鑑別子域，此等子域並不完全具有在其所衍生自之域或半域中所鑑別的全部結構或功能特性。亦應理解，包含本文中之任一域類型的胺基酸不必沿著多肽主鏈連續(亦即，非相鄰胺基酸可在結構上摺疊以產生域、半域或子域)。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「位點」在其涉及基於胺基酸之實施例時與「胺基酸殘基」及「胺基酸側鏈」同義地使用。位點表示可在本發明的基於多肽之分子內經修飾、操縱、改變、衍生或變化的肽或多肽內位置。
如本文所用，當提及蛋白質時，術語「端(termini/terminus)」係指肽或多肽之末端。此類末端並非僅限於肽或多肽之第一或最末位點，而可包括末端區域中之額外胺基酸。本發明的基於多肽之分子可表徵為具有N端(由具有自由胺基(NH2)之胺基酸封端)及C端(由具有自由羧基(COOH)之胺基酸封端)。在一些情況下，本發明之蛋白質由藉由二硫鍵或藉由非共價力結合在一起之多個多肽鏈構成(多聚體、寡聚體)。此等分類之蛋白質將具有多個N端及C端。或者，多肽之端可經修飾以使得視具體情況，其以基於非多肽之部分(諸如有機結合物)起始或結束。
一旦已將任一該等特徵鑑別或定義為本發明之分子的組分，在可藉由移動、調換、反轉、缺失、隨機化或複製來執行對此等特徵之若干操縱及/或修飾中的任一者。此外，應理解操縱特徵可產生與對本發明之分子進行修飾相同的結果。舉例而言，涉及使域缺失之操縱將引起分子長度改變，正如修飾核酸以編碼小於全長之分子將產生的改變。
修飾及操縱可藉由此項技術中已知之方法(諸如定點突變誘發)來實現。可隨後使用活體外或活體內分析(諸如本文所描述之彼等分析或此項技術中已知之任何其他適合之篩選分析)來測試所得經修飾之分子的活性。有效負載： AADC 多核苷酸構築體
根據本發明，提供芳族L-胺基酸脫羧酶(AADC；亦稱為多巴脫羧酶及DDC)多核苷酸，其單獨或與額外核酸序列組合起作用以編碼AADC蛋白質。如本文所用，「AADC多核苷酸」為編碼AADC蛋白質之任何核酸聚合物，且當存在於載體、質體或可轉譯構築體中時，在細胞、組織、器官或生物體中表現此類AADC蛋白質。
AADC多核苷酸包括在細胞內部加工之前驅體分子。AADC多核苷酸或其經加工形式可在用於遞送至細胞中之質體、載體、基因組或其他核酸表現載體中進行編碼。
在一些實施例中，AADC多核苷酸經設計為AAV病毒基因組之組分且封裝在AAV顆粒中，該等AAV顆粒在細胞內加工以產生野生型AADC蛋白質。
在一些實施例中，AADC多核苷酸可為AAV顆粒之有效負載。
如本文所用，野生型AADC蛋白質可為來自DDC 基因 的任何天然存在之同功異型物或變異體。已鑑別編碼AADC不同同功異型物的多個交替剪接之轉錄物變異體。具體言之，DDC 基因 產生編碼六種獨特同功異型物之七種轉錄物變異體。DDC轉錄物變異體1及2兩者均編碼AADC同功異型物1。在一些實施例中，AADC多核苷酸編碼DDC轉錄物變異體2，藉此編碼原生AADC同功異型物1 (NCBI參考序列：NP_000781.1)。此序列在此處給出：MNASEFRRRGKEMVDYVANYMEGIEGRQVYPDVEPGYLRPLIPAAAPQEPDTFEDIINDVEKIIMPGVTHWHSPYFFAYFPTASSYPAMLADMLCGAIGCIGFSWAASPACTELETVMMDWLGKMLELPKAFLNEKAGEGGGVIQGSASEATLVALLAARTKVIHRLQAASPELTQAAIMEKLVAYSSDQAHSSVERAGLIGGVKLKAIPSDGNFAMRASALQEALERDKAAGLIPFFMVATLGTTTCCSFDNLLEVGPICNKEDIWLHVDAAYAGSAFICPEFRHLLNGVEFADSFNFNPHKWLLVNFDCSAMWVKKRTDLTGAFRLDPTYLKHSHQDSGLITDYRHWQIPLGRRFRSLKMWFVFRMYGVKGLQAYIRKHVQLSHEFESLVRQDPRFEICVEVILGLVCFRLKGSNKVNEALLQRINSAKKIHLVPCHLRDKFVLRFAICSRTVESAHVQRAWEHIKELAADVLRAERE (SEQ ID NO: 978)
本發明之AADC多核苷酸可經工程改造以含有經組裝以產生AADC多核苷酸構築體之模組化元件及/或序列基元。
根據本發明，提供AADC多核苷酸。此類多核苷酸包含核酸聚合物，其包含編碼AADC蛋白質之一或多種同功異型物或變異體的連接核苷之區域。
在一些實施例中，AADC多核苷酸包含編碼AADC蛋白質的經密碼子最佳化之轉錄物。
在一些實施例中，AADC多核苷酸包含編碼AADC蛋白質之一或多種野生型同功異型物或變異體的序列區域。此類多核苷酸亦可包含編碼以下中之任何一或多者的序列區域：5' ITR、細胞巨大病毒(CMV)增強子、CMV啟動子、ie1外顯子1、ie1內含子1、hbB球蛋白內含子2、hB球蛋白外顯子3、5' UTR、3' UTR、hGH poly(A)信號及/或3'ITR。此類序列區域教示於本文中，或可為此項技術中已知之彼等序列區域中的任一者。
在一些實施例中，AADC多核苷酸包含SEQ ID NO: 979或其片段或變異體。
在一個實施例中，AADC多核苷酸包含與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者具有一定一致性百分比的序列。AADC多核苷酸可與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者具有1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%一致性。AADC多核苷酸可具有與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者的1-10%、10-20%、30-40%、50-60%、50-70%、50-80%、50-90%、50-99%、50-100%、60-70%、60-80%、60-90%、60-99%、60-100%、70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%一致性。作為一個非限制性實例，AADC多核苷酸包含與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者具有80%一致性的序列。作為另一個非限制性實例，AADC多核苷酸包含與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者具有85%一致性的序列。作為另一個非限制性實例，AADC多核苷酸包含與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者具有90%一致性的序列。作為另一個非限制性實例，AADC多核苷酸包含與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者具有95%一致性的序列。作為另一個非限制性實例，AADC多核苷酸包含與SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者具有99%一致性的序列。
在一些實施例中，AADC多核苷酸之編碼區域的長度為1440個核苷酸。此類AADC多核苷酸可為在多核苷酸之全部或一部分上經密碼子最佳化。
在一些實施例中，AADC多核苷酸包含SEQ ID NO: 979或其片段或變異體中之任一者但缺乏5'及/或3' ITR。此類多核苷酸可併入質體或載體中，且用以表現所編碼之AADC蛋白質。
在一個實施例中，AADC多核苷酸可在昆蟲細胞(例如Sf9細胞)中產生。
在一個實施例中，AADC多核苷酸可使用三重轉染來產生。
在一個實施例中，AADC多核苷酸可包含經密碼子最佳化的AADC mRNA之開讀框、至少一個5' ITR及至少一個3' UTR，其中該等5' ITR中之一或多者可位於啟動子區域之5'端處，且一或多個3' ITR可位於poly(A)信號之3'端處。AADC mRNA可包含啟動子區域、5'非轉譯區域(UTR)、3' UTR及poly(A)信號。啟動子區域可包括(但不限於)增強子元件、啟動子元件、第一外顯子區域、第一內含子區域、第二內含子區域及第二外顯子區域。作為一個非限制性實例，增強子元件及啟動子元件來源於CMV。作為另一個非限制性實例，第一外顯子區域為ie1外顯子1或其片段，第一內含子區域為ie1內含子1或其片段，第二內含子區域為hbB球蛋白內含子2或其片段，且第二外顯子區域為hbB球蛋白外顯子3或其片段。作為又另一個非限制性實例，poly(A)信號來源於人類生長激素。
在一個實施例中，至少一個元件可與本文所描述之AADC多核苷酸一起使用以增強增強轉殖基因標靶特異性及表現(參見例如Powell等人Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy , 2015；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)。增強轉殖基因標靶特異性及表現之元件的非限制性實例包括啟動子、內源miRNA、轉錄後調控元件(PRE)、多腺苷酸化(PolyA)信號序列及上游增強子(USE)、CMV增強子及內含子。
在一個實施例中，至少一個元件可與本文所描述之AADC多核苷酸一起使用以增強增強轉殖基因標靶特異性及表現(參見例如Powell等人Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy , 2015；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)，諸如啟動子。
在一個實施例中，AADC多核苷酸在質體或載體中進行編碼，該質體或載體可來源於腺相關病毒(AAV)。AAV可包含以下衣殼血清型，諸如(但不限於)PHP.B、PHP.A、AAV1、AAV2、AAV2G9、AAV3、AAV3a、AAV3b、AAV3-3、AAV4、AAV4-4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42-1b、AAV42-2、AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-10、AAV42-11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2-15/rh.62、AAV2-3/rh.61、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-9/rh.52、AAV3-11/rh.53、AAV4-8/r11.64、AAV4-9/rh.54、AAV4-19/rh.55、AAV5-3/rh.57、AAV5-22/rh.58、AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH-1/hu.1、AAVH-5/hu.3、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVN721-8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCy.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、AAVrh8R、AAVrh8R A586R 突變體、AAVrh8R R533A 突變體、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV-PAEC、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAV-LK07、AAV-LK08、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK15、 AAV-LK16、AAV-LK17、AAV-LK18、AAV-LK19、AAV-PAEC2、AAV-PAEC4、AAV-PAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAEC8、AAV-PAEC11、AAV-PAEC12、AAV-2-pre-miRNA-101、AAV-8h、AAV-8b、AAV-h、AAV-b、AAV SM 10-2、AAV改組100-1、AAV改組100-3、AAV改組100-7、AAV改組10-2、AAV改組10-6、AAV改組10-8、AAV改組100-2、AAV SM 10-1、AAV SM 10-8、AAV SM 100-3、AAV SM 100-10、BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、AAVrh.50、AAVrh.43、AAVrh.62、AAVrh.48、AAVhu.19、AAVhu.11、AAVhu.53、AAV4-8/rh.64、AAVLG-9/hu.39、AAV54.5/hu.23、AAV54.2/hu.22、AAV54.7/hu.24、AAV54.1/hu.21、AAV54.4R/hu.27、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、AAV128.1/hu.43、真實型AAV (ttAAV)、UPENN AAV 10、日本AAV 10血清型、AAV CBr-7.1、AAV CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.3、AAV CBr-7.4、AAV CBr-7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAV CBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAV CBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAV CHt-6.5、AAV CHt-6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAV CKd-4、AAV CKd-6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKd-B4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、AAV CKd-N3、AAV CKd-N4、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV Clv1-10、AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-4、AAV Clv1-7、AAV Clv1-8、AAV Clv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLv-M7、AAV CLv-M8、AAV CLv-M9、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R6、AAV CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-1、AAV CSp-10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAV CSp-8、AAV CSp-8.10、AAV CSp-8.2、AAV CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-9、AAV.hu.48R3、AAV.VR-355、AAV3B、AAV4、AAV5、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AAVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/HSC2、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/HSC9、PHP.B (AAV-PHP.B)、PHP.A (AAV.PHP.A)、G2B-26、G2B-13、TH1.1-32、TH1.1-35、AAVPHP.B2、AAVPHP.B3、AAVPHP.N/PHP.B-DGT、AAVPHP.B-EST、AAVPHP.B-GGT、AAVPHP.B-ATP、AAVPHP.B-ATT-T、AAVPHP.B-DGT-T、AAVPHP.B-GGT-T、AAVPHP.B-SGS、AAVPHP.B-AQP、AAVPHP.B-QQP、AAVPHP.B-SNP(3)、AAVPHP.B-SNP、AAVPHP.B-QGT、AAVPHP.B-NQT、AAVPHP.B-EGS、AAVPHP.B-SGN、AAVPHP.B-EGT、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-STP、AAVPHP.B-PQP、AAVPHP.B-SQP、AAVPHP.B-QLP、AAVPHP.B-TMP、AAVPHP.B-TTP、AAVPHP.S/G2A12、AAVG2A15/G2A3、AAVG2B4及/或AAVG2B5，及其變異體。II. 調配物及遞送醫藥組合物
根據本發明，AAV顆粒可製備為醫藥組合物。應理解，此類組合物必然包含一或多種活性成分，且最常包含醫藥學上可接受之賦形劑。
視所治療之個體的屬性、大小及/或條件而定，且進一步視用以投與組合物之途徑而定，根據本發明之醫藥組合物中的活性成分(例如AAV顆粒)、醫藥學上可接受之賦形劑及/或任何額外成分的相對量可變化。舉例而言，組合物可包含介於0.1%與99% (w/w)之間的活性成分。舉例而言，組合物可包含介於0.1%與100%之間，例如介於.5與50%之間、介於1-30%之間、介於5-80%之間、至少80%(w/w)的活性成分。
在一些實施例中，本文所描述之AAV顆粒醫藥組合物可包含至少一個有效負載。作為一個非限制性實例，醫藥組合物可含有具有1、2、3、4或5個有效負載之AAV顆粒。
儘管描述本文所提供之醫藥組合物主要針對適用於向人類投與之醫藥組合物，但熟習此項技術者應理解，此類組合物一般適用於向任何其他動物投與，例如向非人類動物，例如非人類哺乳動物投與。應充分理解，為使組合物適用於向各種動物投與，對適用於向人類投與之醫藥組合物進行修改，且一般熟練之獸醫藥理學家可僅用一般實驗(若存在)設計及/或執行此類修改。醫藥組合物之投藥所涵蓋的個體包括(但不限於)人類及/或其他靈長類動物；哺乳動物，包括商業相關之哺乳動物，諸如家牛、豬、馬、綿羊、貓、狗、小鼠、大鼠、鳥類，包括商業相關之鳥類，諸如家禽、雞、鴨、鵝及/或火雞。
在一些實施例中，向人類、人類患者或個體投與組合物。調配物
本發明之調配物可包括(但不限於)生理鹽水、脂質體、脂質奈米顆粒、聚合物、肽、蛋白質、經AAV顆粒轉染之細胞(例如用於向個體中轉移或移植)及其組合。
本文所描述之醫藥組合物的調配物可藉由藥理學技術中已知或此後研發之任何方法來進行製備。如本文所用，術語「醫藥組合物」係指包含至少一種活性成分且視情況包含一或多種醫藥學上可接受之賦形劑的組合物。
一般而言，此類預備方法包括使活性成分與賦形劑及/或一或多種其他附屬成分締合之步驟。如本文所用，片語「活性成分」一般係指攜載編碼本發明多肽之有效負載區域的AAV顆粒或由如本文所描述AAV顆粒之病毒基因組編碼的最終產物。
本文所描述之AAV顆粒及醫藥組合物的調配物可藉由藥理學技術中已知或此後研發之任何方法來進行製備。一般而言，此類預備方法包括以下步驟：使活性成分與賦形劑及/或一種或多種其他附屬成分締合，及隨後視需要及/或期望地將產物分割、塑形及/或封裝成所需單劑量或多劑量單元。
根據本發明之醫藥組合物可以散裝、以單個單位劑量形式及/或以複數個單個單位劑量形式製備、封裝及/或出售。如本文所用，「單位劑量」係指包含預定量之活性成分之醫藥組合物的離散量。活性成分之量一般等於將向個體投與之活性成分之劑量及/或此類劑量之適宜分數，諸如此類劑量之一半或三分之一。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可在具有0.001% 普洛尼克酸(F-68)之PBS (pH為約7.0)中進行調配。
在一些實施例中，本文所描述之AAV調配物可含有足以表現至少一個所表現功能性有效負載之AAV顆粒。作為一個非限制性實例，AAV顆粒可含有編碼1、2、3、4或5個功能性有效負載之病毒基因組。
根據本發明，AAV顆粒可經調配以用於CNS遞送。可使用穿過腦血障壁之藥劑。舉例而言，可使分子靶向腦血障壁內皮之一些細胞穿透肽可用於調配(例如Mathupala,Expert Opin Ther Pat ., 2009, 19, 137-140；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)。賦形劑及稀釋劑
本發明之AAV顆粒可使用一或多種賦形劑或稀釋劑來進行調配以(1)增加穩定性；(2)增加細胞轉染或轉導；(3)容許有效負載之持續或延遲釋放；(4)改變生物分佈(例如使病毒顆粒靶向具體組織或細胞類型)；(5)增加所編碼蛋白質之轉譯；(6)改變所編碼蛋白質之釋放曲線；及/或(7)允許對本發明之有效負載進行可調控表現。
在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑可為至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%純。在一些實施例中，賦形劑經批准用於人類及用於獸醫學用途。在一些實施例中，賦形劑可經美國食品與藥物管理局(United States Food and Drug Administration)批准。在一些實施例中，賦形劑可具有醫藥級。在一些實施例中，賦形劑可滿足美國藥典(United States Pharmacopoeia；USP)、歐洲藥典(European Pharmacopoeia；EP)、英國藥典及/或國際藥典之標準。
如本文所用，賦形劑包括(但不限於)適用於所需特定劑型之任何及全部溶劑、分散介質、稀釋劑或其他液體媒劑、分散或懸浮助劑、表面活性劑、等張劑、增稠或乳化劑、防腐劑及其類似物。用於調配醫藥組合物之各種賦形劑及用於製備該組合物之技術為此項技術中已知的(參見Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006；以全文引用之方式併入本文中)。除非任何習知賦形劑介質與物質或其衍生物不相容，諸如藉由產生任何不合期望之生物學作用或在其它方面以有害方式與醫藥組合物之任何其他組分相互作用而不相容，否則使用習知賦形劑介質可涵蓋於本發明之範疇內。
例示性稀釋劑包括(但不限於)碳酸鈣、碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸二鈣、硫酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈉乳糖、蔗糖、纖維素、微晶纖維素、高嶺土、甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、氯化鈉、乾燥澱粉、玉米澱粉、粉末狀糖等，及/或其組合。
在一個實施例中，可在投與之前將AAV顆粒調配在水凝膠中。由於水凝膠之高水含量，其柔性程度與天然組織相似。
在另一個實施例中，可在投與AAV顆粒調配物之前向個體投與水凝膠。作為一個非限制性實例，投與水凝膠之位點可在投與AAV顆粒調配物之位點的3吋內(例如，2.9、2.8、2.7、2.6、2.5、2.4、2.3、2.2.、2.1、2.0、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5、1.4、1.3、1.2、1.1、1.0、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1或小於0.1吋內)。非活性成分
在一些實施例中，AAV顆粒調配物可包含至少一種非活性成分。如本文所用，術語「非活性成分」係指一或多種對調配物中所包括醫藥組合物之活性成分的活性無幫助的藥劑。在一些實施例中，可用於本發明調配物中之非活性成分中的全部、無或一些可經美國食品及藥物管理局(FDA)批准。
在一個實施例中，AAV顆粒醫藥組合物包含至少一種非活性成分，諸如(但不限於) 1,2,6-己三醇；1,2-二肉豆蔻醯基-Sn-丙三氧基-3-(磷酸-S-(1-甘油))；1,2-二肉豆蔻醯基-Sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼；1,2-二油醯基-Sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼；1,2-二棕櫚醯基-Sn-丙三氧基-3-(磷酸-外消旋-(1-甘油))；1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三氧基-3-(磷酸-外消旋-(1-甘油))；1,2-二硬脂醯基-Sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼；1-O-甲苯基二胍；2-乙基-1,6-己二醇；乙酸；冰乙酸；乙酸酐；丙酮；丙酮亞硫酸氫鈉；乙醯化羊毛脂醇；乙醯化單酸甘油酯；乙醯基半胱胺酸；DL-乙醯基色胺酸；丙烯酸酯共聚物；丙烯酸-丙烯酸異辛酯共聚物；丙烯酸黏著劑788；活性炭；Adcote 72A103；膠帶；己二酸；Aerotex樹脂3730；丙胺酸；聚集白蛋白；膠態白蛋白；人類白蛋白；醇；脫水醇；變性醇；稀釋醇；α-環糊精(Alfadex)；海藻酸；烷基銨磺酸甜菜鹼；磺酸烷基芳基鈉；尿囊素；烯丙基α-紫羅蘭酮；杏仁油；α-松香醇；α-生育酚；Dl-α-生育酚乙酸酯；Dl-α-生育酚；乙酸鋁；氯羥基尿囊酸鋁；氫氧化鋁；水合氫氧化鋁-蔗糖；氫氧化鋁凝膠；氫氧化鋁凝膠F 500；氫氧化鋁凝膠F 5000；單硬脂酸鋁；氧化鋁；鋁聚酯；矽酸鋁；澱粉辛烯基丁二酸鋁；硬脂酸鋁；次乙酸鋁；無水硫酸鋁；Amerchol C；愛美高-Cab；胺甲基丙醇；氨氣；氨溶液；強氨溶液；乙酸銨；氫氧化銨；月桂基硫酸銨；壬苯醇醚-4硫酸銨；C-12-C-15直鏈一級醇乙氧基化物之銨鹽；硫酸銨；Ammonyx；Amphoteric-2；Amphoteric-9；大茴香腦；無水檸檬酸；無水右旋糖；無水乳糖；無水檸檬酸三鈉；大茴香油；Anoxid Sbn；消泡劑；安替比林(Antipyrine)；阿帕氟烷(Apaflurane)；杏核油Peg-6酯；Aquaphor；精胺酸；Arlacel；抗壞血酸；抗壞血酸棕櫚酸酯；天冬胺酸；秘魯香脂；硫酸鋇；蜂蠟；合成蜂蠟；山崳醇聚醚-10；膨潤土；苯紮氯銨；苯磺酸；苄索氯銨；溴化十二烷基二甲基苯甲基銨；苯甲酸；苯甲醇；苯甲酸苯甲酯；苯甲基氯；β-環糊精(Betadex)；雙巴西肽(Bibapcitide)；次沒食子酸鉍；硼酸；溴克利那(Brocrinat)；丁烷；丁醇；乙烯基甲基醚/順丁烯二酸酐共聚物之丁酯(125000 Mw)；硬脂酸丁酯；丁基化羥基大茴香醚；丁基化羥基甲苯；丁二醇；對羥基苯甲酸丁酯；丁酸；C20-40鏈烷醇醚-24；咖啡鹼；鈣；碳酸鈣；氯化鈣；葡庚糖酸鈣；氫氧化鈣；乳酸鈣；考布曲鈣(Calcobutrol)；卡地胺鈉；鈣塞酸三鈉；鈣立醇鈣；加拿大香脂；辛酸/癸酸三酸甘油酯；辛酸/癸酸/硬脂酸三酸甘油酯；蓋普丹(Captan)；卡布迪索(Captisol)；焦糖(Caramel)；卡波姆(Carbomer) 1342；卡波姆1382；卡波姆934；卡波姆934p；卡波姆940；卡波姆941；卡波姆980；卡波姆981；B型卡波姆均聚物(以烯丙基季戊四醇交聯)；C型卡波姆均聚物(以烯丙基季戊四醇交聯)；二氧化碳；羧基乙烯基共聚物；羧甲基纖維素；羧甲基纖維素鈉；羧基聚亞甲基(Carboxypolymethylene)；角叉菜膠(Carrageenan)；角叉菜膠鹽；蓖麻油；柏葉油；纖維素；微晶纖維素；Cerasynt-Se；純地蠟(Ceresin)；鯨蠟硬脂醇醚-12；鯨蠟硬脂醇醚-15；鯨蠟硬脂醇醚-30；鯨蠟硬脂醇/鯨蠟硬脂醇醚-20；乙基己酸鯨蠟硬脂基酯；鯨蠟醇聚醚-10；鯨蠟醇聚醚-2；鯨蠟醇聚醚-20；鯨蠟醇聚醚-23；鯨蠟硬脂醇；氯化鯨蠟基三甲基銨；鯨蠟醇；鯨蠟酯蠟；棕櫚酸鯨蠟基酯；氯化鯨蠟基吡錠；氯丁醇；半水合氯丁醇；無水氯丁醇；氯甲酚；氯二甲酚；膽固醇；膽固醇聚醚；膽固醇聚醚-24；檸檬酸酯；檸檬酸；單水合檸檬酸；含水檸檬酸；椰油醯胺醚硫酸鹽；椰油胺氧化物；可可甜菜鹼；可可二乙醇醯胺；可可單乙醇醯胺；可可脂；可可-甘油酯；椰子油；氫化椰子油；氫化椰子油/棕櫚仁油甘油酯；辛醯癸酸椰油醯基酯；光亮可樂果(Cola Nitida)種子提取物；膠原蛋白；著色懸浮液；玉米油；棉籽油；乳膏基體；肌酸；肌酐；甲酚；交聯羧甲纖維素鈉；交聯普維酮(Crospovidone)；硫酸銅；無水硫酸銅；環甲聚矽氧烷/二甲聚矽氧烷共聚醇；半胱胺酸；半胱胺酸鹽酸鹽；無水半胱胺酸鹽酸鹽；DL-半胱胺酸；D&C紅第28號；D&C紅第33號；D&C紅第36號；D&C紅第39號；D&C黃第10號；達方吡啶(Dalfampridine)；Daubert 1-5 Pestr (啞光) 164z；癸基甲基亞碸；Dehydag Wax Sx；脫氫乙酸；Dehymuls E；苯甲酸地那銨鹽(Denatonium Benzoate)；脫氧膽酸；葡聚糖；葡聚糖40；糊精；右旋糖；單水合右旋糖；右旋糖溶液；泛影酸；重氮利定脲；二氯苯甲醇；二氯二氟甲烷；二氯四氟乙烷；二乙醇胺；焦碳酸二乙酯；癸二酸二乙酯；二甘醇單乙醚；鄰苯二甲酸二乙基己酯；胺基乙酸二羥基鋁；二異丙醇胺；己二酸二異丙酯；二亞油酸二異丙酯；二甲聚矽氧烷350；二甲聚矽氧烷共聚醇；二甲聚矽氧烷Mdx4-4210；二甲聚矽氧烷醫用流體360；二甲基異山梨醇；二甲亞碸；甲基丙烯酸二甲基胺基乙酯-甲基丙烯酸丁酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物；二甲基二(十八烷基)銨膨潤土；二甲基矽氧烷/甲基乙烯基矽氧烷共聚物；地樂酚銨鹽(Dinoseb Ammonium Salt)；DL-二棕櫚醯磷脂醯甘油；二丙二醇；椰油兩性二乙酸二鈉；月桂醇醚磺基丁二酸二鈉；月桂基磺基丁二酸二鈉；磺基水楊酸二鈉；地索苯寧(Disofenin)；二乙烯基苯-苯乙烯共聚物；Dmdm乙內醯脲；多可沙諾(Docosanol)；多庫酯鈉(Docusate Sodium)；Duro-Tak 280-2516；Duro-Tak 387-2516；Duro-Tak 80-1196；Duro-Tak 87-2070；Duro-Tak 87-2194；Duro-Tak 87-2287；Duro-Tak 87-2296；Duro-Tak 87-2888；Duro-Tak 87-2979；乙二胺四乙酸鈣二鈉；乙二胺四乙酸二鈉；無水乙二胺四乙酸二鈉；乙二胺四乙酸鈉；乙二胺四乙酸；蛋磷脂；恩磺酸(Entsufon)；恩磺酸鈉；表半乳糖；表四環素鹽酸鹽；香精花香(Essence Bouquet) 9200；乙醇胺鹽酸鹽；乙酸乙酯；油酸乙酯；乙基纖維素；乙二醇；乙烯乙酸乙烯酯共聚物；乙二胺；乙二胺二氫氯化物；乙烯-丙烯共聚物；乙烯-乙酸乙烯酯共聚物(28%乙酸乙烯酯)；乙烯-乙酸乙烯酯共聚物(9%乙酸乙烯酯)；羥基硬脂酸乙基己酯；對羥基苯甲酸乙酯；桉油醇(Eucalyptol)；依沙美肟(Exametazime)；可食用脂肪；硬脂肪；脂肪酸酯；脂肪酸季戊四醇酯；脂肪酸；脂肪醇檸檬酸酯；脂肪醇；Fd&C藍第1號；Fd&C綠第3號；Fd&C紅第4號；Fd&C紅第40號；Fd&C黃第10號(劃去)；Fd&C黃第5號；Fd&C黃第6號；氯化鐵；氧化鐵；調味劑89-186；調味劑89-259；調味劑Df-119；調味劑Df-1530；調味劑增強劑；調味劑無花果827118；調味劑覆盆子Pfc-8407；調味劑羅地亞醫藥公司(Rhodia醫藥)第Rf 451號；氟氯烴；甲醛；甲醛溶液；分級分離椰子油；芳香劑3949-5；芳香劑520a；芳香劑6.007；芳香劑91-122；芳香劑9128-Y；芳香劑93498g；芳香劑松香脂第5124號；芳香劑花香10328；芳香劑Chemoderm 6401-B；芳香劑Chemoderm 6411；芳香劑乳膏第73457號；芳香劑Cs-28197；芳香劑Felton 066m；芳香劑Firmenich 47373；芳香劑Givaudan Ess 9090/1c；芳香劑H-6540；芳香劑本草(Herbal) 10396；芳香劑Nj-1085；芳香劑P O Fl-147；芳香劑Pa 52805；芳香劑Pera Derm D；芳香劑Rbd-9819；芳香劑Shaw Mudge U-7776；芳香劑Tf 044078；芳香劑Ungerer金銀花K 2771；芳香劑Ungerer N5195；果糖；氧化釓；半乳糖；γ環糊精；明膠；交聯明膠；明膠海綿；結蘭膠(低醯基)；Gelva 737；龍膽酸；龍膽酸乙醇醯胺；葡庚糖酸鈉；二水合葡庚糖酸鈉；葡萄糖酸內酯；葡糖醛酸；Dl-麩胺酸；麩胱甘肽；丙三醇；氫化松香之甘油酯；檸檬酸甘油酯；異硬脂酸甘油酯；月桂酸甘油酯；單硬脂酸甘油酯；油酸甘油酯；油酸甘油酯/丙二醇；棕櫚酸甘油酯；蓖麻油酸甘油酯；硬脂酸甘油酯；硬脂酸甘油酯-月桂醇醚-23；硬脂酸甘油酯/Peg硬脂酸酯；硬脂酸甘油酯/Peg-100硬脂酸酯；硬脂酸甘油酯/Peg-40硬脂酸酯；硬脂酸甘油酯-硬脂醯胺基乙基二乙胺；三油酸甘油酯；甘胺酸；甘胺酸鹽酸鹽；二醇二硬脂酸酯；二醇硬脂酸酯；鹽酸胍；瓜爾豆膠；護髮素(18n195-1m)；庚烷；羥乙基澱粉；己二醇；高密度聚乙烯；組胺酸；微球人類白蛋白；玻尿酸鈉；烴；塑化烴凝膠；鹽酸；稀鹽酸；氫皮質酮；水凝膠聚合物；過氧化氫；氫化蓖麻油；氫化棕櫚油；氫化棕櫚/棕櫚仁油Peg-6酯；氫化聚丁烯635-690；氫氧根離子；羥乙基纖維素；羥乙基哌嗪乙磺酸；羥甲基纖維素；羥基硬脂酸羥基二十八烷基酯；羥丙基纖維素；羥丙基甲基纖維素2906；羥丙基-β-環糊精；羥丙甲纖維素2208 (15000 Mpa.S)；羥丙甲纖維素2910 (15000 Mpa.S)；羥丙甲纖維素；咪唑啶基脲；碘；碘沙酸；碘非他胺鹽酸鹽；愛爾蘭苔提取物；異丁烷；異鯨蠟醇聚醚-20；異白胺酸；丙烯酸異辛酯；異丙醇；異硬脂酸異丙酯；肉豆蔻酸異丙酯；肉豆蔻酸異丙酯-肉豆蔻醇；棕櫚酸異丙酯；硬脂酸異丙酯；異硬脂酸；異硬脂醇；等張氯化鈉溶液；Jelene；高嶺土；Kathon Cg；Kathon Cg II；乳酸酯；乳酸；Dl-乳酸；L-乳酸；乳糖酸；乳糖；單水合乳糖；含水乳糖；羊毛脂醇聚醚；羊毛脂；羊毛脂醇-礦物油；羊毛脂醇；無水羊毛脂；羊毛脂膽固醇；羊毛脂非離子型衍生物；乙氧基化羊毛脂；氫化羊毛脂；勞拉氯銨(Lauralkonium Chloride)；月桂基胺氧化物；月桂基二甲基銨水解之動物膠原蛋白；月桂醇醚硫酸酯；月桂醇醚-2；月桂醇醚-23；月桂醇醚-4；月桂酸二乙醇醯胺；月桂酸肉豆蔻酸二乙醇醯胺；月桂醯基肌胺酸；乳酸月桂酯；硫酸月桂酯；薰衣草(Lavandula Angustifolia)花梢；卵磷脂；未經漂白之卵磷脂；蛋卵磷脂；氫化卵磷脂；氫化大豆卵磷脂；大豆卵磷脂；檸檬油；白胺酸；乙醯丙酸；利多苯寧(Lidofenin)；輕質礦物油；輕質礦物油(85 Ssu)；(+/-)-檸檬烯；Lipocol Sc-15；離胺酸；離胺酸乙酸酯；單水合離胺酸；矽酸鎂鋁；水合矽酸鎂鋁；氯化鎂；硝酸鎂；硬脂酸鎂；順丁烯二酸；甘露糖醇；磺化脂肪醇(Maprofix)；甲溴菲寧(Mebrofenin)；經醫用黏著劑改性之S-15；醫學消泡A-F乳液；亞甲基二膦酸二鈉；亞甲基二膦酸；葡甲胺；薄荷醇；間甲酚；偏磷酸；甲磺酸；甲硫胺酸；甲醇；甲基葡糖醇聚醚-10；甲基葡糖醇聚醚-20；甲基葡糖醇聚醚-20倍半硬脂酸酯；甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯；月桂酸甲酯；甲基吡咯啶酮；水楊酸甲酯；硬脂酸甲酯；甲基酸；甲基纖維素(4000 Mpa.S)；甲基纖維素；甲基氯異噻唑啉酮；亞甲基藍；甲基異噻唑啉酮；對羥基苯甲酸甲酯；微晶蠟；礦物油；單及二酸甘油脂；檸檬酸單硬脂醯基酯；單硫代甘油；多固醇提取物；肉豆蔻醇；乳酸肉豆蔻基酯；肉豆蔻基-γ-甲基吡啶鎓氯化物；N-(胺甲醯基-甲氧基Peg-40)-1,2-二硬脂醯基-腦磷脂鈉；N,N-二甲基乙醯胺；菸鹼醯胺；環己二酮二肟；硝酸；氮；壬苯醇醚碘；壬苯醇醚-15；壬苯醇醚-9；諾氟烷(Norflurane)；燕麥片；十八烯-1/順丁烯二酸共聚物；辛酸；奧替柳酯(Octisalate)；辛苯聚醇-1；辛苯聚醇-40；辛苯聚醇-9；辛基十二醇；辛基苯酚聚亞甲基；油酸；油醇醚-10/油醇醚-5；油醇醚-2；油醇醚-20；油醇；油醇油酸酯；橄欖油；羥亞甲基二膦酸二鈉；氧基喹啉；棕櫚仁油；棕櫚胺氧化物；對羥基苯甲酸酯；石蠟；白色軟石蠟；Parfum Creme 45/3；花生油；精製花生油；果膠；Peg 6-32硬脂酸酯/二醇硬脂酸酯；Peg植物油；Peg-100硬脂酸酯；Peg-12甘油基月桂酸酯；Peg-120甘油基硬脂酸酯；Peg-120甲基葡萄糖二油酸酯；Peg-15椰油胺；Peg-150二硬脂酸酯；Peg-2硬脂酸酯；Peg-20脫水山梨糖醇異硬脂酸酯；Peg-22甲醚/十二烷基二醇共聚物；Peg-25丙二醇硬脂酸酯；Peg-4二月桂酸酯；Peg-4月桂酸酯；Peg-40蓖麻油；Peg-40脫水山梨糖醇二異硬脂酸酯；Peg-45/十二烷基二醇共聚物；Peg-5油酸酯；Peg-50硬脂酸酯；Peg-54氫化蓖麻油；Peg-6異硬脂酸酯；Peg-60蓖麻油；Peg-60氫化蓖麻油；Peg-7甲醚；Peg-75羊毛脂；Peg-8月桂酸酯；Peg-8硬脂酸酯；聚乙二醇7硬脂酸酯；十五內酯；季戊四醇椰油酸酯；噴替酸五鈉；噴替酸鈣三鈉；噴替酸；薄荷油；全氟丙烷；香料25677；香料花香；香料E-1991；香料Gd 5604；香料Tana 90/42 Scba；香料W-1952-1；石蠟脂；白色石蠟脂；石油餾出物；苯酚；液化苯酚；Phenonip；苯氧基乙醇；苯丙胺酸；苯乙醇；乙酸苯汞；硝酸苯汞；蛋磷脂醯基甘油；磷脂；蛋磷脂；Phospholipon 90g；磷酸；松針油(歐洲赤松(Pinus Sylvestris))；六水合哌嗪；Plastibase-50w；泊拉可林(Polacrilin)；泊利氯銨(Polidronium Chloride)；泊洛沙姆(Poloxamer) 124；泊洛沙姆181；泊洛沙姆182；泊洛沙姆188；泊洛沙姆237；泊洛沙姆407；聚(雙(對羧基苯氧基)丙酸酐):癸二酸；二甲基乙烯基或二甲基羥基或三甲基封端之聚(二甲基矽氧烷/甲基乙烯基矽氧烷/甲基氫矽氧烷)；聚(Dl-乳酸-共-乙醇酸)，(50:50)；乙酯封端之聚(Dl-乳酸-共-乙醇酸)，(50:50)；聚丙烯酸(250000 Mw)；聚丁烯(1400 Mw)；聚卡波非(Polycarbophil)；聚酯；聚酯多元胺共聚物；聚酯嫘縈；聚乙二醇1000；聚乙二醇1450；聚乙二醇1500；聚乙二醇1540；聚乙二醇200；聚乙二醇300；聚乙二醇300-1600；聚乙二醇3350；聚乙二醇400；聚乙二醇4000；聚乙二醇540；聚乙二醇600；聚乙二醇6000；聚乙二醇8000；聚乙二醇900；含有黑色氧化鐵(＜1%)之高密度聚乙烯；含有硫酸鋇(20-24%)之低密度聚乙烯；聚乙烯T；聚對苯二甲酸伸乙酯；聚多糖；聚甘油基-3油酸酯；聚甘油基-4油酸酯；聚甲基丙烯酸羥乙酯；聚異丁烯；聚異丁烯(1100000 Mw)；聚異丁烯(35000 Mw)；聚異丁烯178-236；聚異丁烯241-294；聚異丁烯35-39；低分子量聚異丁烯；中分子量聚異丁烯；聚異丁烯/聚丁烯黏著劑；聚乳酸交酯；多元醇；聚氧乙烯-聚氧丙烯1800；聚氧乙烯醇；聚氧乙烯脂肪酸酯；聚氧乙烯丙烯；聚乙二醇20鯨蠟硬脂基醚；聚乙二醇35蓖麻油；聚乙二醇40氫化蓖麻油；聚乙二醇40硬脂酸酯；聚乙二醇400硬脂酸酯；聚乙二醇6及聚乙二醇32棕櫚基硬脂酸酯；聚乙二醇二硬脂酸酯；聚乙二醇甘油基硬脂酸酯；聚乙二醇羊毛脂；聚乙二醇棕櫚酸酯；聚乙二醇硬脂酸酯；聚丙烯；聚丙二醇；聚四級銨-10；聚四級銨-7 (70/30丙烯醯胺/Dadmac；聚矽氧烷；聚山梨醇酯20；聚山梨醇酯40；聚山梨醇酯60；聚山梨醇酯65；聚山梨醇酯80；聚胺酯；聚乙酸乙烯酯；聚乙烯醇；聚氯乙烯；聚氯乙烯-聚乙酸乙烯酯共聚物；聚乙烯吡啶；罌粟種子油；鉀鹼(Potash)；乙酸鉀；鋁鉀礬；碳酸氫鉀；亞硫酸氫鉀；氯化鉀；檸檬酸鉀；氫氧化鉀；偏亞硫酸氫鉀；磷酸氫二鉀；磷酸二氫鉀；鉀皂；山梨酸鉀；普維酮丙烯酸酯共聚物；普維酮水凝膠；普維酮K17；普維酮K25；普維酮K29/32；普維酮K30；普維酮K90；普維酮K90f；普維酮/二十烯共聚物；普維酮；Ppg-12/Smdi共聚物；Ppg-15硬脂醯基醚；Ppg-20甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯；Ppg-26油酸酯；Product Wat；脯胺酸；Promulgen D；Promulgen G；丙烷；推進劑A-46；沒食子酸丙酯；碳酸亞丙酯；丙二醇；丙二醇二乙酸酯；丙二醇二辛酸酯；丙二醇單月桂酸酯；丙二醇單棕櫚醯硬脂酸酯；丙二醇棕櫚基硬脂酸酯；丙二醇蓖麻油酸酯；丙二醇/重氮利定脲/對羥基苯甲酸甲酯/對羥基苯甲酸丙酯；對羥基苯甲酸丙酯；硫酸魚精蛋白；蛋白質水解產物；Pvm/Ma共聚物；四級銨鹽-15；順式四級銨鹽-15；四級銨鹽-52；Ra-2397；Ra-3011；糖精；糖精鈉；無水糖精鈉；紅花油；Sd醇3a；Sd醇40；Sd醇40-2；Sd醇40b；Sepineo P 600；絲胺酸；芝麻油；乳油木油脂；矽橡膠商標醫用管；矽橡膠醫用黏著劑，A型矽酮；牙科用二氧化矽；矽；二氧化矽；膠態二氧化矽；矽酮；矽酮黏著劑4102；矽酮黏著劑4502；矽酮黏著劑Bio-Psa Q7-4201；矽酮黏著劑Bio-Psa Q7-4301；矽酮乳液；矽酮/聚酯膜條帶；聚二甲矽氧烷；聚二甲矽氧烷乳液；Sipon Ls 20np；蘇打灰；乙酸鈉；無水乙酸鈉；烷基硫酸鈉；抗壞血酸鈉；苯甲酸鈉；碳酸氫鈉；硫酸氫鈉；亞硫酸氫鈉；硼酸鈉；十水合硼酸鈉；碳酸鈉；十水合碳酸鈉；單水合碳酸鈉；鯨蠟硬脂基硫酸鈉；氯酸鈉；氯化鈉；氯化鈉注射劑；抑菌性氯化鈉注射劑；膽固醇基硫酸鈉；檸檬酸鈉；椰油醯基肌胺酸鈉；脫氧膽酸鈉；二硫磺酸鈉；十二烷基苯磺酸鈉；甲醛合次硫酸氫鈉；葡糖酸鈉；氫氧化鈉；次氯酸鈉；碘化鈉；乳酸鈉；L-乳酸鈉；月桂醇醚-2硫酸鈉；月桂醇醚-3硫酸鈉；月桂醇醚-5硫酸鈉；月桂醯基肌胺酸鈉；月桂基硫酸鈉；月桂基磺基乙酸鈉；偏亞硫酸氫鈉；硝酸鈉；磷酸鈉；二水合磷酸鈉；磷酸氫二鈉；無水磷酸氫二鈉；二水合磷酸氫二鈉；十二水合磷酸氫二鈉；七水合磷酸氫二鈉；磷酸二氫鈉；無水磷酸二氫鈉；二水合磷酸二氫鈉；單水合磷酸二氫鈉；聚丙烯酸鈉(2500000 Mw)；焦磷酸鈉；吡咯啶酮甲酸鈉；羥基乙酸澱粉鈉；六水合丁二酸鈉；硫酸鈉；無水硫酸鈉；十水合硫酸鈉；亞硫酸鈉；磺基丁二酸化十一烯酸單烷醇醯胺鈉；酒石酸鈉；硫代乙酸鈉；硫代蘋果酸鈉；硫代硫酸鈉；無水硫代硫酸鈉；三偏磷酸鈉；二甲苯磺酸鈉；Somay 44；山梨酸；脫水山梨糖醇；脫水山梨糖醇異硬脂酸酯；脫水山梨糖醇單月桂酸酯；脫水山梨糖醇單油酸酯；脫水山梨糖醇單棕櫚酸酯；脫水山梨糖醇單硬脂酸酯；脫水山梨糖醇倍半油酸酯；脫水山梨糖醇三油酸酯；脫水山梨糖醇三硬酯酸酯；山梨糖醇；山梨糖醇溶液；大豆粉；大豆油；綠薄荷油；鯨蠟；角鯊烷；穩定化氯氧化物複合物；2-乙基己酸亞錫；氯化亞錫；無水氯化亞錫；氟化亞錫；酒石酸亞錫；澱粉；預膠凝化澱粉1500；玉米澱粉；氯化硬酯基二甲基苯甲基銨；司拉氯銨水輝石(Stearalkonium Hectorite)/碳酸亞丙酯；硬脂醯胺基乙基二乙胺；硬脂醇醚-10；硬脂醇醚-100；硬脂醇醚-2；硬脂醇醚-20；硬脂醇醚-21；硬脂醇醚-40；硬脂酸；硬脂酸二乙醇醯胺；硬脂氧基三甲基矽烷；硬脂基三甲基銨水解之動物膠原蛋白；十八烷醇；吸入用無菌水；苯乙烯/異戊二烯/苯乙烯嵌段共聚物；二巰丁二酸(Succimer)；丁二酸；蔗糖素；蔗糖；蔗糖二硬脂酸酯；蔗糖聚酯；磺胺乙醯胺鈉；磺基丁醚.β-環糊精；二氧化硫；硫酸；亞硫酸；Surfactol Qs；D-塔格糖(Tagatose)；滑石；妥爾油(Tall Oil)；牛脂甘油酯；酒石酸；Dl-酒石酸；Tenox；Tenox-2；第三丁醇；第三丁基氫過氧化物；第三丁基對苯二酚；肆(2-甲氧基異丁基異腈)四氟硼酸銅(I)；正矽酸四丙酯；替曲膦(Tetrofosmin)；茶鹼(Theophylline)；硫柳汞(Thimerosal)；蘇胺酸；瑞香草酚(Thymol)；錫；二氧化鈦；生育酚；托可索侖(Tocophersolan)；總計非經腸營養脂質乳液；三乙酸甘油酯；三辛酸甘油酯；三氯單氟甲烷；十三烷醇聚醚-10；月桂基硫酸三乙醇胺；三氟乙酸；中長鏈三酸甘油酯；三羥基硬脂精；三月桂醇聚醚-4磷酸酯；三月桂醇聚醚-4磷酸酯；二水合檸檬酸三鈉；Hedta三鈉；曲拉通(Triton) 720；曲拉通X-200；三乙醇胺；曲金剛胺；緩血酸胺(TRIS)；色胺酸；泰洛沙泊(Tyloxapol)；酪胺酸；十一碳烯酸；76 Amsco-Res 6038集合；尿素；纈胺酸；植物油；氫化植物油甘油酯；氫化植物油；維塞胺(Versetamide)；Viscarin；黏膠纖維/棉；維生素E；乳化蠟；Wecobee Fs；白色純地蠟；白蠟；三仙膠；鋅；乙酸鋅；碳酸鋅；氯化鋅；及氧化鋅。
本文所揭示之AAV顆粒的醫藥組合物調配物可包括陽離子或陰離子。在一個實施例中，調配物包括金屬陽離子，諸如(但不限於) Zn2+、Ca2+、Cu2+、Mn2+、Mg+及其組合。作為一個非限制性實例，調配物可包括具有金屬陽離子之聚合物及複合物(參見例如美國專利第6,265,389號及第6,555,525號，該等專利中之每一者均以全文引用之方式併入本文中)。
本發明之調配物亦可包括一或多種醫藥學上可接受之鹽。如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示之化合物的以下衍生物，其中母體化合物藉由將現有酸或鹼部分轉化成其鹽形式(例如，藉由使游離鹼基團與適合之有機酸反應)來加以修飾。醫藥學上可接受之鹽的實例包括(但不限於)鹼性殘基(諸如胺)之無機酸鹽或有機酸鹽；酸性殘基(諸如羧酸)之鹼鹽或有機鹽；及其類似物。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、乙酸、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯磺酸、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似物。代表性鹼或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂及其類似物，以及無毒銨、四級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺及其類似物。本發明的醫藥學上可接受之鹽包括例如由無毒無機酸或有機酸形成的母體化合物之習知無毒鹽。
本發明的醫藥學上可接受之鹽可藉由習知化學方法由含有鹼性或酸性部分之母體化合物合成。一般而言，此類鹽可藉由使此等化合物之游離酸或鹼形式與化學計量之適當鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者之混合物中反應來製備；一般而言，非水性介質(如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈)較佳。適合之鹽的清單見於Remington's Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, 第1418頁；Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl及C.G. Wermuth (編), Wiley-VCH, 2008，及Berge等人, Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)中；該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之溶劑合物」意謂其中適合溶劑之分子併入晶格中的本發明化合物。適合溶劑在所投與之劑量下為生理學上可耐受的。溶劑合物可藉由自包括有機溶劑、水或其混合物之溶液結晶、再結晶或沈澱來進行製備。適合溶劑之實例為乙醇、水(例如單水合物、二水合物及三水合物)、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、二甲亞碸(DMSO)、N ,N '-二甲基甲醯胺(DMF)、N ,N '-二甲基乙醯胺(DMAC)、1,3-二甲基-2-咪唑啶酮(DMEU)、1,3-二甲基-3,4,5,6-四氫-2-(1H)嘧啶酮(DMPU)、乙腈(ACN)、丙二醇、乙酸乙酯、苯甲醇、2-吡咯啶酮、苯甲酸苯甲酯及其類似物。當水為溶劑時，該溶劑合物稱為「水合物」。 III. 投藥及給藥投藥
在一個實施例中，AAV顆粒可以治療有效量向個體(例如向個體之CNS)進行投與，以減輕個體之中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)的症狀(例如，使用已知評估方法所確定)。
本發明之AAV顆粒可藉由產生治療學上有效之結果的任何遞送途徑來進行投與。此等途徑包括(但不限於)經腸(向腸中)、經胃腸、硬膜外(向硬腦膜中)、經口(通過口腔)、經皮、腦內(向大腦中)、腦室內(向大腦腦室中)、上表皮(施用於皮膚上)、皮內(向皮膚本身中)、皮下(在皮膚下)、經鼻投藥(經由鼻)、靜脈內(向靜脈中)、靜脈內推注、靜脈內滴注、動脈內(向動脈中)、肌肉內(向肌肉中)、心內(向心臟中)、骨內輸注(向骨髓中)、鞘內(向脊椎管中)、實質內(向腦組織中)、腹膜內(向腹膜中輸注或注射)、膀胱內輸注、玻璃體內(經由眼睛)、海綿體內注射(向陰莖底部中)、腔內(向病理性空腔中)、陰道內投藥、子宮內、羊膜外投藥、經皮(經由完整皮膚擴散以全身分佈)、經黏膜(經由黏膜擴散)、經陰道、吹入(吹氣)、舌下、唇下、灌腸、滴眼(向結膜上)或滴耳、經耳(在耳中或通過耳)、頰內(針對頰部)、結膜、皮膚、牙(向一或多個牙齒)、電滲透、子宮頸內、竇內、氣管內、體外、血液透析、浸潤、間質內、腹內、羊膜內、關節內、膽內、支氣管內、囊內、軟骨內(在軟骨內)、尾部內(在馬尾內)、腦池內(在枕大池小腦延髓池內)、角膜內(在角膜內)、牙冠內、冠狀動脈內(在冠狀動脈內)、海綿體內(在陰莖海綿體之可膨脹空間內)、椎間盤內(在椎間盤內)、管內(在腺管內)、十二指腸內(在十二指腸內)、硬膜內(在硬膜內或下方)、表皮內(向表皮)、食道內(向食道)、胃內(在胃內)、齒齦內(在齒齦內)、迴腸內(在小腸之遠端部分內)、病灶內(在局部病灶內或直接引入至局部病灶)、內腔內(在管之內腔內)、淋巴內(在淋巴內)、髓內(在骨骼之骨髓腔內)、腦脊膜內(在腦膜內)、心肌內(在心肌內)、眼內(在眼睛內)、卵巢內(在卵巢內)、心包內(在心包內)、胸膜內(在胸膜內)、前列腺內(在前列腺內)、肺內(在肺或其支氣管內)、竇內(在鼻竇或眶周竇內)、脊柱內(在脊柱內)、滑膜內(在關節之滑液腔內)、肌腱內(在肌腱內)、睾丸內(在睾丸內)、鞘內(在腦脊髓軸之任何平面處的腦脊髓液內)、胸內(在胸部內)、小管內(在器官之腎小管內)、瘤內(在腫瘤內)、鼓室內(在中耳內)、血管內(在一或多個血管內)、心室內(在心室內)、離子電滲(藉助於電流，其中可溶性鹽之離子遷移至身體組織中)、沖洗(沖刷或沖洗開放傷口或體腔)、經喉(直接在喉上)、經鼻胃管(經由鼻且進入胃中)、封閉包紮技術(局部途徑投與，隨後由封閉該區域之敷料覆蓋)、經眼(向眼睛外部)、經口咽(直接向口腔及咽)、非經腸、經皮、關節周、硬膜周、神經周、牙周、經直腸、呼吸道(在呼吸道內藉由經口或經鼻吸入以用於局部或全身作用)、眼球後(在腦橋之後或在眼球之後)、軟組織、蛛膜下、結膜下、黏膜下、局部、經胎盤(經由或跨越胎盤)、經氣管(經由氣管壁)、經鼓室(跨越或經由鼓腔)、經輸尿管(向輸尿管)、經尿道(向尿道)、經陰道、骶管阻滯(caudal block)、診斷、神經阻滯、膽灌注、心臟灌注、光除去法及經脊椎。
在一些實施例中，組合物可以允許其穿過血腦障壁、血管障壁或其他上皮障壁之方式進行投與。本發明之AAV顆粒可以任何適合之形式進行投與，以液體溶液或懸浮液形式、以適用於液體溶液之固體形式或以液體溶液中之懸浮液形式進行投與。AAV顆粒可使用任何適當及醫藥學上可接受之賦形劑來進行調配。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由單途徑投藥向個體進行遞送。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由多位點投藥途徑向個體進行遞送。個體可在2、3、4、5或超過5個位點處進行投與。
在一個實施例中，可使用推注輸注向個體投與本發明之AAV顆粒。
在一個實施例中，可歷經數分鐘、數小時或數天之時段使用持續遞送向個體投與本發明之AAV顆粒。輸注速率可視個體、分佈、調配物或另一遞送參數而變化。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由肌肉內遞送途徑進行遞送。(參見例如美國專利第6506379號；該專利之內容以全文引用之方式併入本文中)。肌肉內投藥之非限制性實例包括靜脈內注射或皮下注射。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由經口投藥進行遞送。經口投藥之非限制性實例包括消化道投藥及頰內投藥。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由眼內遞送途徑進行遞送。眼內投藥之非限制性實例包括玻璃體內注射。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由鼻內遞送途徑進行遞送。鼻內遞送之非限制性實例包括投與鼻滴劑或鼻噴霧劑。
在一些實施例中，AAV顆粒可藉由外周注射向個體進行投與。外周注射之非限制性實例包括腹膜內、肌肉內、靜脈內、結膜或關節注射。此項技術中揭示，外周投與AAV顆粒可轉運至中樞神經系統，例如轉運至運動神經元(例如美國專利公開案第20100240739號；及第20100130594號；該等公開案中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中)。
在一個實施例中，AAV顆粒可藉由注射至CSF路徑中來進行遞送。遞送至CSF路徑中之非限制性實例包括鞘內及腦室內投藥。
在一個實施例中，AAV顆粒可藉由全身遞送進行遞送。作為一個非限制性實例，全身遞送可為藉由血管內投藥。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由顱內遞送向個體進行投與(參見例如美國專利第8,119,611號；該專利之內容以全文引用之方式併入本文中)。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由注射進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可藉由注射向個體進行投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由肌肉注射進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可藉由肌肉投藥向個體進行投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由肌肉內投藥進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可藉由肌肉內投藥向個體進行投與。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒向個體進行投與且轉導個體肌肉。作為一個非限制性實例，AAV顆粒藉由肌肉內投藥進行投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可經由實質內注射進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可藉由實質內投藥向個體進行投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由靜脈內投藥進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可藉由靜脈內投藥向個體進行投與。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由靜脈內遞送進行投與。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由單劑量靜脈內遞送進行投與。作為一個非限制性實例，單劑量靜脈內遞送可為單次治療。在中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)之情形下，單劑量靜脈內遞送可對具有中樞神經系統(例如帕金森氏症)及/或相關症狀之個體產生持久緩解。緩解可持續數分鐘，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59分鐘或超過59分鐘；數小時，諸如(但不限於) 1、2、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或超過48小時；數天，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或超過31天；數週，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或超過16週；數月，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或超過24個月；數年，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超過15年。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由靜脈內遞送至DRG感受傷害性神經元中來進行投與。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由單劑量靜脈內遞送至DRG感受傷害性神經元中來進行投與。作為一個非限制性實例，單劑量靜脈內遞送可為單次治療。在中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)之情形下，單劑量靜脈內遞送可對患有中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)及/或具有相關症狀之個體產生持久緩解。緩解可持續數分鐘，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59分鐘或超過59分鐘；數小時，諸如(但不限於) 1、2、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或超過48小時；數天，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或超過31天；數週，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或超過16週；數月，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或超過24個月；數年，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超過15年。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由鞘內注射進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可藉由鞘內注射進行投與。
在一個實施例中，AAV顆粒可以治療有效量向枕大池進行投與以轉導脊髓運動神經元及/或星形膠質細胞。作為一個非限制性實例，AAV顆粒可進行鞘內投與。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用鞘內輸注以治療有效量進行投與以轉導脊髓運動神經元及/或星形膠質細胞。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可經由單劑量鞘內注射進行投與。作為一個非限制性實例，單劑量鞘內注射可為單次治療。在中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)之情形下，單劑量鞘內注射可對患有中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)及/或具有相關症狀之個體產生持久緩解。緩解可持續數分鐘，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59分鐘或超過59分鐘；數小時，諸如(但不限於) 1、2、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或超過48小時；數天，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或超過31天；數週，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或超過16週；數月，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或超過24個月；數年，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超過15年。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可經由鞘內注射至DRG感受傷害性神經元中來進行投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可經由單劑量鞘內注射至DRG感受傷害性神經元中來進行投與。作為一個非限制性實例，單劑量鞘內注射可為單次治療。在中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)之情形下，單劑量鞘內注射可對患有中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)及/或具有相關症狀之個體產生持久緩解。緩解可持續數分鐘，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59分鐘或超過59分鐘；數小時，諸如(但不限於) 1、2、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或超過48小時；數天，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或超過31天；數週，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或超過16週；數月，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或超過24個月；數年，諸如(但不限於) 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超過15年。
在一個實施例中，本文所描述之AAV顆粒在C1處經由鞘內(IT)輸注進行投與。輸注可持續1、2、3、4、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或超過15小時。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由實質內注射進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可藉由實質內注射向個體進行投與。
在一個實施例中，AAV顆粒可以治療有效量向枕大池進行投與以轉導脊髓運動神經元及/或星形膠質細胞。作為一個非限制性實例，AAV顆粒可進行實質內注射投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由實質內注射及鞘內注射進行投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可經由實質內注射及鞘內注射進行投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由皮下注射進行投與。在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可藉由皮下注射向個體進行投與。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可進行局部投與。作為一個非限制性實例，本發明之AAV顆粒可向個體進行局部投與。
在一個實施例中，AAV顆粒可藉由直接注射至腦中來進行遞送。作為一個非限制性實例，腦遞送可為藉由紋狀體內投藥。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由紋狀體內注射進行投與。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可經由紋狀體內注射及本文所描述之另一種投藥途徑進行投與。
在一個實施例中，AAV顆粒可藉由超過一種投藥途徑進行遞送。作為組合投藥之非限制性實例，AAV顆粒可藉由鞘內及腦室內或藉由靜脈內及實質內投藥進行遞送。
在一個實施例中，AAV顆粒可以治療有效量向CNS進行投與以改善患有中樞神經系統疾病(例如帕金森氏症)之個體的功能及/或存活率。作為一個非限制性實例，載體可藉由直接輸注至紋狀體中進行投與。
AAV顆粒可以「治療有效」量進行投與，亦即，以足以緩解及/或預防與疾病相關聯之至少一種症狀或提供個體病狀改善的量進行投與。
在一個實施例中，導管可位於脊椎中超過一個位點處以用於多位點遞送。AAV顆粒可以連續及/或推注輸注方式進行遞送。各自遞送位點可為不同給藥方案，或對各遞送位點可使用相同給藥方案。作為一個非限制性實例，遞送位點可在子宮頸及腰部區域中。作為另一個非限制性實例，遞送位點可在子宮頸區域中。作為另一個非限制性實例，遞送位點可在腰部區域中。
在一個實施例中，可在遞送本文所描述之AAV顆粒之前分析個體之脊椎解剖學及病理學。作為一個非限制性實例，具有脊柱側彎之個體的給藥方案及/或導管位置可不同於未具有脊柱側彎之個體。
在一個實施例中，個體之脊椎方向在遞送AAV顆粒期間係與地面呈垂直。
在另一個實施例中，個體之脊椎方向在遞送AAV顆粒期間係與地面呈水平。
在一個實施例中，個體之脊椎在遞送AAV顆粒期間係與地面成一定角度。個體之脊椎與地面的角度可為至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150或180度。
在一個實施例中，遞送方法及持續時間經選擇以在脊髓中提供廣泛轉導。作為一個非限制性實例，鞘內遞送用於沿著脊髓之喙部-尾部長度提供廣泛轉導。作為另一個非限制性實例，多位點輸注沿著脊髓之喙部-尾部長度提供更均勻轉導。作為又另一個非限制性實例，長期輸注沿著脊髓之喙部-尾部長度提供更均勻轉導。
在一個實施例中，投藥藉由後部(例如頭部背部)手術遞送方法對殼核進行。作為一個非限制性實例，平均殼核覆蓋度在後部遞送的情況下為50%，且手術時間少於10小時。
在一個實施例中，投藥藉由經額(例如頭頂部)手術遞送方法對殼核進行。作為一個非限制性實例，平均殼核覆蓋度在後部遞送的情況下小於50%，且手術時間超過10小時非經腸及可注射投藥
在一些實施例中，本發明之醫藥組合物、AAV顆粒可進行非經腸投與。用於經口及非經腸投藥之液體劑型包括(但不限於)醫藥學上可接受之乳液、微乳液、溶液、懸浮液、糖漿及/或酏劑。除活性成分以外，液體劑型可包含此項技術中常用之惰性稀釋劑，諸如水或其他溶劑、增溶劑及乳化劑，諸如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油(特定言之，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇及脫水山梨糖醇脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀釋劑以外，經口組合物可包括佐劑，諸如濕潤劑、乳化劑及懸浮劑、甜味劑、調味劑及芳香劑。在用於非經腸投藥之某些實施例中，將組合物與增溶劑混合，該等增溶劑諸如CREMOPHOR® 、醇、油、經改性之油、二醇、聚山梨醇酯、環糊精、聚合物及/或其組合。在其他實施例中，包括界面活性劑，諸如羥丙基纖維素。
可根據已知技術使用適合之分散劑、濕潤劑及/或懸浮劑來調配可注射製劑，例如無菌可注射水性或油性懸浮液。無菌可注射製劑可為無毒非經腸可接受之稀釋劑及/或溶劑中的無菌可注射溶液、懸浮液及/或乳液，例如呈1,3-丁二醇中之溶液形式。在可接受之媒劑及溶劑當中，可採用的為水、林格氏溶液(Ringer's solution) U.S.P.及等張氯化鈉溶液。無菌、不揮發性油習知地用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和不揮發性油，包括合成之單酸甘油酯或二酸甘油酯。諸如油酸之脂肪酸可用於製備可注射劑。
可注射調配物可例如藉由經由細菌截留過濾器過濾或藉由併入滅菌劑來進行滅菌，呈可在使用之前溶解或分散於無菌水或其他無菌可注射介質中之無菌固體組合物形式。
為了延長活性成分之作用，常常期望減緩來自皮下或肌肉內注射劑之活性成分的吸收。此可藉由使用具有不佳水溶性之結晶或非晶形物料的液體懸浮液來實現。活性成分之吸收速率視其溶解速率而定，而溶解速率可視晶體大小及結晶形式而定。或者，非經腸投與之藥物形式的延遲吸收藉由將藥物溶解或懸浮於油性媒劑中來實現。藉由在可生物降解之聚合物(諸如聚乳酸交酯-聚乙交酯)中形成藥物之微膠囊基質來製得可注射積存形式。視藥物與聚合物之比率及所採用特定聚合物之性質而定，可控制藥物釋放速率。其他生物可降解聚合物的實例包括聚(原酸酯)及聚(酸酐)。藉由將藥物包覆於與身體組織相容之脂質體或微乳液中來製備積存式可注射調配物。積存式投藥
如本文所描述，在一些實施例中，將本發明之醫藥組合物、AAV顆粒調配成用於緩釋之積存式。一般而言，靶向具體器官或組織(「標靶組織」)用於投藥。
在本發明之一些態樣中，本發明之醫藥組合物、AAV顆粒在空間上截留於標靶組織內或其附近。提供向哺乳動物個體之標靶組織提供醫藥組合物、AAV顆粒之方法，其藉由使標靶組織(其包含一或多個靶細胞)與醫藥組合物、AAV顆粒在使得該等醫藥組合物、AAV顆粒大體上截留於標靶組織中的條件下接觸來進行，該大體上截留意謂至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%、99.99%或大於99.99%之組合物截留於該等標靶組織中。有利地，保持性藉由量測進入一或多個靶細胞之醫藥組合物、AAV顆粒的量來加以確定。舉例而言，向個體投與的至少1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、99.9%、99.99%或大於99.99%之醫藥組合物、AAV顆粒在投藥後一段時間時存在於細胞內。舉例而言，向哺乳動物個體肌肉內注射可使用包含本發明之醫藥組合物、AAV顆粒及一或多種轉染試劑的水性組合物來執行，且保持性藉由量測存在於肌肉細胞中之醫藥組合物、AAV顆粒的量來加以確定。
本發明之某些態樣係針對向哺乳動物個體之標靶組織提供本發明之醫藥組合物、AAV顆粒的方法，其藉由使標靶組織(其包含一或多個靶細胞)與醫藥組合物、AAV顆粒在使得該等醫藥組合物、AAV顆粒大體上截留於此類標靶組織中的條件下接觸來進行。醫藥組合物、AAV顆粒包含足夠活性成分以使得在至少一種靶細胞中產生所關注之作用。在一些實施例中，在存在或不存在醫藥學上可接受之載劑的情況下，醫藥組合物、AAV顆粒一般包含一或多種細胞穿透劑，但亦涵蓋「裸」調配物(諸如不具有細胞穿透劑或其他藥劑)。遞送至中樞神經系統中
在一個實施例中，將包含AAV顆粒之醫藥組合物遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中包含輸注至多1 mL。在一個實施例中，將包含AAV顆粒之醫藥組合物遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中可包含輸注0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.010、0.015、0.020、0.025、0.030、0.040、0.050、0.060、0.070、0.080、0.090、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8或0.9 mL。
在一個實施例中，將包含AAV顆粒之醫藥組合物遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中包含輸注介於約1 mL至約120 mL之間。在一個實施例中，將包含AAV顆粒之醫藥組合物遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中可包含輸注0.1、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119或120 mL。在一個實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中包含輸注至少3 mL。在一個實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中由輸注3 mL組成。在一個實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中包含輸注至少10 mL。在一個實施例中，將AAV顆粒遞送至中樞神經系統(例如實質)之細胞中由輸注10 mL組成。
在一個實施例中，向個體中樞神經系統(例如實質)之細胞遞送的包含AAV顆粒之醫藥組合物的體積為50 μl、100 μl、200 μl、300 μl、400 μl、500 μl、600 μl、700 μl、800 μl、900 μl、1000 μl、1100 μl、1200 μl、1300 μl、1400 μl、1500 μl、1600 μl、1700 μl、1800 μl、1900 μl、2000 μl或超過2000 μl。
在一個實施例中，向個體腦部兩個半球中之區域遞送的包含AAV顆粒之醫藥組合物的體積為50 μl、100 μl、200 μl、300 μl、400 μl、500 μl、600 μl、700 μl、800 μl、900 μl、1000 μl、1100 μl、1200 μl、1300 μl、1400 μl、1500 μl、1600 μl、1700 μl、1800 μl、1900 μl、2000 μl或超過2000 μl。作為一個非限制性實例，向兩個半球中之區域遞送的體積為200 μl。作為另一個非限制性實例，向兩個半球中之區域遞送的體積為900 μl。作為又另一個非限制性實例，向兩個半球中之區域遞送的體積為1800 μl。
在一個實施例中，向個體腦部兩個半球中之殼核遞送的包含AAV顆粒之醫藥組合物的體積為50 μl、100 μl、200 μl、300 μl、400 μl、450 μl、500 μl、600 μl、700 μl、800 μl、900 μl、1000 μl、1100 μl、1200 μl、1300 μl、1400 μl、1500 μl、1600 μl、1700 μl、1800 μl、1900 μl、2000 μl或超過2000 μl。作為一個非限制性實例，向兩個半球中之殼核遞送的體積為100 μl。作為另一個非限制性實例，向兩個半球中之殼核遞送的體積為200 μl。作為一個非限制性實例，向兩個半球中之殼核遞送的體積為300 μl。作為另一個非限制性實例，向兩個半球中之殼核遞送的體積為450 μl。作為另一個非限制性實例，向兩個半球中之殼核遞送的體積為900 μl。作為又另一個非限制性實例，向兩個半球中之殼核遞送的體積為1800 μl。
在一個實施例中，向個體遞送的包含AAV顆粒之醫藥組合物的體積對各殼核為900 μl。
在一個實施例中，向個體遞送的包含AAV顆粒之醫藥組合物的體積對各殼核為450 μl。
在一個實施例中，向個體遞送之總體積可在一或多個投藥位點，例如1、2、3、4、5或超過5個位點之間分割。作為一個非限制性實例，總體積在向左殼核與右殼核投與之間分割。作為另一個非限制性實例，總體積在向左殼核及右殼核中之每一者投與的兩個位點之間分割。
在一個實施例中，使用有孔針頭投與包含AAV顆粒之醫藥組合物。有孔針頭之非限制性實例描述於美國專利第8,333,734號、第7,135,010號、第7,575,572號、第7,699,852號、第4,411,657號、第6,890,319號、第6,613,026號、第6,726,659號、第6,565,572號、第6,520,949號、第6,382,212號、第5,848,996號、第5,759,179號、第5,674,267號、第5,588,960號、第5,484,401號、第5,199,441號、第5,012,818號、第4,474,569號、第3,766,907號、第3,552,394號中，該等專利中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，組合物包含至少一個本文所描述之有效負載，且該等有效負載為封裝於AAV顆粒中之病毒基因組的組分。組合物中包含有效負載之AAV顆粒與不具有有效負載之AAV顆粒(在本文中亦稱為空衣殼)的百分比(%)比率可為0:100、1:99、0: 90、15:85、25:75、30:70、50:50、70:30、85:15、90:10、99:1或100:0。作為一個非限制性實例，包含有效負載之AAV顆粒與空衣殼的百分比比率為50:50。作為另一個非限制性實例，包含有效負載之AAV顆粒與空衣殼的百分比比率為70:30。作為另一個非限制性實例，包含有效負載之AAV顆粒與空衣殼的百分比比率為85:15。作為另一個非限制性實例，包含有效負載之AAV顆粒與空衣殼的百分比比率為100:0。
在一個實施例中，本文所描述之組合物包含至少1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或大於99%的包含有效負載之AAV顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含至少50%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，組合物包含至少52%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，組合物包含至少58%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，組合物包含至少70%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，組合物包含至少83%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，組合物包含至少85%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，組合物包含至少99%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，組合物包含100%的包含有效負載之AAV顆粒。
在一個實施例中，本文所描述之組合物包含1-10%、10-20%、30-40%、50-60%、50-70%、50-80%、50-90%、50-99%、50-100%、60-70%、60-80%、60-90%、60-99%、60-100%、70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%的包含有效負載之AAV顆粒。作為一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含50-100%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含50-60%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含80-99%的包含有效負載之AAV顆粒。作為另一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含80-90%的包含有效負載之AAV顆粒。作為一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含80-95%的包含有效負載之AAV顆粒。作為一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含80-85%的包含有效負載之AAV顆粒。
在一個實施例中，本文所描述之組合物包含少於1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99或100%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於50%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於45%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於40%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於35%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於30%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於25%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於20%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於15%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於10%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於5%之空顆粒。作為一個非限制性實例，組合物包含少於1%之空顆粒。
在本文所描述之組合物中包含1-10%、10-20%、30-40%、50-60%、50-70%、50-80%、50-90%、50-99%、50-100%、60-70%、60-80%、60-90%、60-99%、60-100%、70-80%、70-90%、70-99%、70-100%、80-85%、80-90%、80-95%、80-99%、80-100%、90-95%、90-99%或90-100%之空顆粒。作為一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含30-40%之空顆粒。作為另一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含30-50%之空顆粒。作為另一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含30-60%之空顆粒。作為另一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含30-70%之空顆粒。作為一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含30-80%之空顆粒。作為一個非限制性實例，本文所描述之組合物包含30-90%之空顆粒。
在一個實施例中，個體區域之實質中之分佈體積與個體區域之輸注體積的比率可為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0或超過6.0。作為一個非限制性實例，實質中之分佈體積與輸注體積的比率在尾核中為1.6。作為一個非限制性實例，實質中之分佈體積與輸注體積的比率在殼核中為3.1。作為一個非限制性實例，AAV顆粒在殼核中之分佈可為輸注體積之2-3倍。
在一個實施例中，劑量有效性、投藥途徑及/或投藥體積可使用本文所描述之各種方法來加以評估，諸如(但不限於) PET成像、L-DOPA攻擊測試(例如參見Forsayeth等人 2006, Mol. Ther. 14(4): 571-577)、UPDRS得分及患者日記(例如Hauser日記)。作為一個非限制性實例，個體在投與包含AAV顆粒之醫藥組合物之後，個體會有經減輕之異動症或縮短經減輕異動症之時段。作為另一個非限制性實例，個體之帕金森氏症相關症狀(包括運動受限及異動症)減輕。作為又另一個非限制性實例，個體在不活動狀態時間及運動波動會展現改善。改善可為至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或大於90%。改善可持續數分鐘(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或超過55分鐘)、數小時(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或超過24小時)、數天(例如1、2、3、4、5、6或超過7天)、數週(1、2、3、4、5、6、7或超過7週)、數月(1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或超過11個月)或數年(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或超過9年)。
在一個實施例中，對用於投與本文所描述AAV顆粒之個體及/或劑量有效性、投藥途徑及/或投藥體積的選擇可使用亦稱為Virchow-Robin空間之血管周間隙(PVS)的成像來加以評估。PVS在其穿孔腦實質且經腦脊髓液(CSF)/間質液填充時包圍小動脈及小靜脈。PVS常見於中腦、BG及半卵圓中心中。雖然不希望受理論束縛，但PVS可在代謝物之正常清除中起作用且與較差之認知及若干疾病病況(包括帕金森氏症)相關聯。PVS之大小通常為正常的但其大小可能在多種疾病病況中增加。Potter等人(Cerebrovasc Dis. 2015年1月;39(4): 224-231；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)研發出一種定級法，其中其研究全範圍之PVS且對基底節、半卵圓中心及中腦PVS進行評級。其使用Mac及Lullich等人(J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2004年11月;75(11):1519-23；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)所使用的PVS之頻率及範圍，且Potter等人為基底節及半卵圓中心PVS提供5個等級：0 (無)、1 (1-10)、2 (11-20)、3 (21-40)及4 (＞40)且為中腦PVS提供2個等級：0 (非可見)或1 (可見)。Potter等人所提供之評級系統的用戶手冊可見於：www.sbirc.ed.ac.uk/documents/epvs-rating-scale-user-guide.pdf。
在一個實施例中，對用於投與本文所描述AAV顆粒之個體及/或劑量有效性、投藥途徑及/或投藥體積的選擇可使用諸如(但不限於) [18 F]FDOPA之神經成像生物標記物發正電子發射斷層攝影術(positron emission tomography，PET)量測來加以評估。諸如[18 F]FDOPA之神經成像生物標記物可用於鑑別受影響之個體及/或可用於在臨床表現特徵開始之前偵測黑質紋狀體缺陷。此外，基於PET之基準可用於基於個體之黑質紋狀體神經元完整性對其分類(例如異常、正常或不確定之黑質紋狀體神經元完整性) (Rachette等人 Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2006年4月5日; 141B(3): 245-249；該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中)。
在一個實施例中，可投與一定劑量之本文所描述AAV顆粒的個體可能患有晚期PD且仍對左旋多巴療法有反應，但該個體亦經歷醫學難治性運動併發症(例如，即使對藥物治療進行調整及最佳化但仍在左旋多巴及其他多巴胺激導性療法期間發生的嚴重運動波動及/或異動症)。個體可能夠健康以進行神經外科手術程序，其健康可藉由此項技術中已知之方法加以判定。作為一個非限制性實例，個體要滿足腦部深層刺激(DBS)之選擇標準。個體可能患有特發性PD，小於69歲，對左旋多巴具有明顯反應，具有藥物難治性症狀(例如運動波動及/或異動症)且/或具有極少或不具有認知功能異常。
在一個實施例中，可投與一定劑量之本文所描述AAV顆粒的個體亦可能患有癡呆或認知障礙。
在一個實施例中，可投與一定劑量之本文所描述AAV顆粒的個體可能先前已用相同或相似治療劑進行治療。在另一個實施例中，個體可能已用治療劑進行治療，其已展示帕金森氏症症狀減輕。
在一個實施例中，可投與一定劑量之本文所描述AAV顆粒的個體可能未能自標準醫學療法得到恰當益處。作為一個非限制性實例，個體可能對治療無反應。作為另一個非限制性實例，個體可能即使進行治療但仍具有殘餘失能。
在一個實施例中，可對可投與一定劑量之本文所描述AAV顆粒的個體進行評估神經傳遞質分析物之含量的測試以確定劑量有效性。作為一個非限制性實例，可分析CSF神經傳遞質、血漿AADC活性及/或尿液VLA。
在一個實施例中，可投與一定劑量之本文所描述AAV顆粒的個體可進行錄影或錄音以便監測個體在治療時程期間的進展。 遞送至殼核中
在一個實施例中，AAV顆粒可向右殼核及/或左殼核進行投與。投藥可在殼核中之一或多個位點處進行，諸如(但不限於) 2個位點、3個位點、4個位點或超過4個位點。作為一個非限制性實例，將AAV顆粒遞送至左殼核中之2個位點及右殼核中之2個位點。
在一個實施例中，向個體投與AAV顆粒調配物提供對個體殼核(例如左及/或右殼核)之覆蓋。在一個態樣中，投與AAV顆粒可提供對個體左及/或右殼核之至少8%、9%、10%、13%、14%、15%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或超過95%覆蓋。作為一個非限制性實例，覆蓋度為至少20%。作為一個非限制性實例，覆蓋度為至少40%。在另一個態樣中，投與AAV顆粒可提供對個體左及/或右殼核之表面區域的至少8%、9%、10%、13%、14%、15%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或超過95%覆蓋。作為一個非限制性實例，總覆蓋度為至少20%。作為一個非限制性實例，總覆蓋度為至少40%。在又另一個態樣中，投與AAV顆粒可提供對個體左及/或右殼核或對個體左及/或右殼核之總表面區域的10-40%、20-40%、20-30%、20-35%、20-50%、30-40%、35-40%、30-60%、40-70%、50-80%或60-90%覆蓋。
在一個實施例中，向個體投與AAV顆粒調配物提供對個體後部殼核(例如左及/或右後部殼核)之覆蓋。在一個態樣中，投與AAV顆粒可提供對個體左及/或右後部殼核之至少10%、15%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或超過95%覆蓋。作為一個非限制性實例，覆蓋度為至少20%。作為一個非限制性實例，覆蓋度為至少40%。在另一個態樣中，投與AAV顆粒可提供對個體左及/或右後部殼核之表面區域的至少10%、15%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或超過95%覆蓋。作為一個非限制性實例，總覆蓋度為至少20%。作為一個非限制性實例，總覆蓋度為至少40%。在又另一個態樣中，投與AAV顆粒可提供對個體左及/或右後部殼核或對個體左及/或右殼核之總表面區域的10-40%、20-50%、30-60%、40-70%、50-80%或60-90%覆蓋。
在一個實施例中，本文所描述之AAV顆粒可使用緊急(acute)兩側置放至各殼核中之導管來進行投與。置放可使用此項技術中已知或本文所描述之磁共振影像(MRI)引導的立體定位神經外科手術技術。另外，可在調配物中使用對比劑，諸如(但不限於)基於釓之對比劑(例如PROHANCE®)以監測及確認調配物之分佈。
在一個實施例中，可在向殼核(例如連合後殼核)中進行的兩側立體定位CED輔助之階段式輸注中對個體投與AAV顆粒。
在一個實施例中，可以每殼核900 μl之體積以4.5 × 1012 個載體基因組之劑量對個體投與本發明之AAV顆粒。
在一個實施例中，可以每殼核900 μl之體積以1.5 × 1012 個載體基因組之劑量對個體投與本發明之AAV顆粒。
在一個實施例中，可以每殼核450 μl之體積以7.5 × 1011 個載體基因組之劑量對個體投與本發明之AAV顆粒。
在一個實施例中，可使用後部(亦即頭部背部)手術遞送方法用向至少一個殼核中進行之兩側手術輸注對個體投與AAV顆粒。後部兩側手術輸注之數目可為一或多次，諸如(但不限於) 1次輸注、2次輸注、3次輸注、4次輸注或超過4次輸注。作為一個非限制性實例，用一次後部兩側手術輸注在左殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用一次後部兩側手術輸注在右殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用兩次後部兩側手術輸注在左殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用兩次後部兩側手術輸注在右殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用兩次後部兩側手術輸注在右及左殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用三次後部兩側手術輸注在左殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用三次後部兩側手術輸注在右殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用三次後部兩側手術輸注在右及左殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用四次後部兩側手術輸注在左殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用四次後部兩側手術輸注在右殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用四次後部兩側手術輸注在右及左殼核中遞送AAV顆粒。
在一個實施例中，可使用經額(亦即頭部頂部)手術遞送方法用向至少一個殼核中進行之兩側手術輸注對個體投與AAV顆粒。兩側手術輸注之數目可為兩次或超過兩次，諸如(但不限於) 2次輸注、3次輸注、4次輸注或超過4次輸注。作為一個非限制性實例，用2次經額兩側手術輸注在左殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用2次經額兩側手術輸注在右殼核中遞送AAV顆粒。作為一個非限制性實例，用2次經額兩側手術輸注在左及右殼核中遞送AAV顆粒。 遞送至SNpc及VTA或STN中
在一個實施例中，可向個體投與本發明之AAV顆粒，將其安全地經由兩側輸注遞送至黑質密部(substantia nigra pars compacta；SNpc)及腹側蓋區(ventral tegmental area；VTA)，或者在紋狀體內遞送(至尾核及殼核)中，或遞送至丘腦下核(subthalamic nucleus；STN)中。遞送，劑量及方案
本發明提供向有需要之個體投與根據本發明之AAV顆粒的方法。本發明之醫藥、診斷或預防性AAV顆粒及組合物可使用對預防、治療、控制或診斷疾病、病症及/或病狀有效的任何量及任何投藥途徑向個體進行投與。視個體之物種、年齡及一般條件、疾病之嚴重強度、特定組合物、其投藥模式、其活動模式及其類似因素而定，所要求之確切量將隨各個體而變化。個體可為人類、哺乳動物或動物。根據本發明之組合物通常以單位劑型調配以易於投藥及劑量均勻。然而，應理解，本發明之組合物的總日用量可由主治醫師在合理醫學判斷範疇內決定。對任何特定個體之具體治療有效、預防有效或適當診斷劑量水準將視多種因素而定，包括所治療之病症及病症之嚴重程度；所採用之具體有效負載的活性；所採用之具體組合物；患者之年齡、體重、一般健康狀況、性別及膳食；投藥時間、投藥途徑及所採用之具體AAV顆粒的排泄速率；治療持續時間；與所採用之具體AAV顆粒組合同時使用的藥物；及醫學技術中熟知之類似因素。
在一個實施例中，遞送本發明之AAV顆粒引起由於遞送AAV顆粒所致的最小嚴重不良事件(serious adverse event；SAE)。
在一個實施例中，AAV顆粒可以多次給藥方案遞送。多次給藥方案可為2、3、4、5、6、7、8、9、10或超過10次給藥。
在一個實施例中，AAV顆粒可經由多位點投藥途徑向個體進行遞送。可在2、3、4、5或超過5個位點處對個體投與AAV顆粒。 劑量水準
在某些實施例中，根據本發明之AAV顆粒醫藥組合物可以足以遞送每天每公斤個體體重約0.0001 mg至約100 mg、約0.001 mg至約0.05 mg、約0.005 mg至約0.05 mg、約0.001 mg至約0.005 mg、約0.05 mg至約0.5 mg、約0.01 mg至約50 mg、約0.1 mg至約40 mg、約0.5 mg至約30 mg、約0.01 mg至約10 mg、約0.1 mg至約10 mg或約1 mg至約25 mg之劑量水準一天一或多次進行投與，以獲得所需治療、診斷或預防作用。應理解，上文給藥濃度可由熟習此項技術者轉化為所投與的每公斤之vg或病毒基因組量或總病毒基因組量。
在某些實施例中，根據本發明之AAV顆粒醫藥組合物可以約10至約600微升/位點、50至約500微升/位點、100至約400微升/位點、120至約300微升/位點、140至約200微升/位點、約160微升/位點進行投與。作為非限制性實例，AAV顆粒可以50微升/位點及/或150微升/位點進行投與。
在一個實施例中，向細胞遞送根據本發明之組合物包含由[VG/小時 = mL/小時 × VG/mL]定義之遞送速率，其中VG為病毒基因組；VG/mL為組合物濃度；且mL/小時為長期遞送之速率。
在一個實施例中，向細胞遞送根據本發明之組合物可包含介於約1×106 VG與約1×1016 VG之間的每個體之總濃度。在一些實施例中，遞送可包含約1×106 、2×106 、3×106 、4×106 、5×106 、6×106 、7×106 、8×106 、9×106 、1×107 、2×107 、3×107 、4×107 、5×107 、6×107 、7×107 、8×107 、9×107 、1×108 、2×108 、3×108 、4×108 、5×108 、6×108 、7×108 、8×108 、9×108 、1×109 、2×109 、3×109 、4×109 、5×109 、6×109 、7×109 、8×109 、9×109 、1×1010 、2×1010 、3×1010 、4×1010 、5×1010 、6×1010 、7×1010 、8×1010 、9×1010 、1×1011 、2×1011 、2.1×1011 、2.2×1011 、2.3×1011 、2.4×1011 、2.5×1011 、2.6×1011 、2.7×1011 、2.8×1011 、2.9×1011 、3×1011 、4×1011 、5×1011 、6×1011 、7×1011 、7.1×1011 、7.2×1011 、7.3×1011 、7.4×1011 、7.5×1011 、7.6×1011 、7.7×1011 、7.8×1011 、7.9×1011 、8×1011 、9×1011 、1×1012 、1.1 ×1012 、1.2×1012 、1.3×1012 、1.4×1012 、1.5×1012 、1.6×1012 、1.7×1012 、1.8×1012 、1.9×1012 、2×1012 、3×1012 、4×1012 、4.1×1012 、4.2×1012 、4.3×1012 、4.4×1012 、4.5×1012 、4.6×1012 、4.7×1012 、4.8×1012 、4.9×1012 、5×1012 、6×1012 、7×1012 、8×1012 、8.1×1012 、8.2×1012 、8.3×1012 、8.4×1012 、8.5×1012 、8.6×1012 、8.7×1012 、8.8 ×1012 、8.9×1012 、9×1012 、1×1013 、2×1013 、3×1013 、4×1013 、5×1013 、6×1013 、6.7×1013 、7×1013 、8×1013 、9×1013 、1×1014 、2×1014 、3×1014 、4×1014 、5×1014 、6×1014 、7×1014 、8×1014 、9×1014 、1×1015 、2×1015 、3×1015 、4×1015 、5×1015 、6×1015 、7×1015 、8×1015 、9×1015 或1×1016 VG/個體之組合物濃度。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為1×1013 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為3×1012 VG/個體。作為一個非限制性實例，向個體投與之組合物的濃度為約3×1011 VG/個體。作為一個非限制性實例，向個體投與之組合物的濃度為約9×1011 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為2.3×1011 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為7.2×1011 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為7.5×1011 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為1.4×1012 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為4.8×1012 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為8.8×1012 VG/個體。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為2.3×1012 VG/個體。
在一個實施例中，向細胞遞送根據本發明之組合物可包含介於約1×106 VG/kg與約1×1016 VG/kg之間的每個體之總濃度。在一些實施例中，遞送可包含約1×106 、2×106 、3×106 、4×106 、5×106 、6×106 、7×106 、8×106 、9×106 、1×107 、2×107 、3×107 、4×107 、5×107 、6×107 、7×107 、8×107 、9×107 、1×108 、2×108 、3×108 、4×108 、5×108 、6×108 、7×108 、8×108 、9×108 、1×109 、2×109 、3×109 、4×109 、5×109 、6×109 、7×109 、8×109 、9×109 、1×1010 、2×1010 、3×1010 、4×1010 、5×1010 、6×1010 、7×1010 、8×1010 、9×1010 、1×1011 、2×1011 、2.1×1011 、2.2×1011 、2.3×1011 、2.4×1011 、2.5×1011 、2.6×1011 、2.7×1011 、2.8×1011 、2.9×1011 、3×1011 、4×1011 、5×1011 、6×1011 、7×1011 、7.1×1011 、7.2×1011 、7.3×1011 、7.4×1011 、7.5×1011 、7.6×1011 、7.7×1011 、7.8×1011 、7.9×1011 、8×1011 、9×1011 、1×1012 、1.1 ×1012 、1.2×1012 、1.3×1012 、1.4×1012 、1.5×1012 、1.6×1012 、1.7×1012 、1.8×1012 、1.9×1012 、2×1012 、3×1012 、4×1012 、4.1×1012 、4.2×1012 、4.3×1012 、4.4×1012 、4.5×1012 、4.6×1012 、4.7×1012 、4.8×1012 、4.9×1012 、5×1012 、6×1012 、7×1012 、8×1012 、8.1×1012 、8.2×1012 、8.3×1012 、8.4×1012 、8.5×1012 、8.6×1012 、8.7×1012 、8.8 ×1012 、8.9×1012 、9×1012 、1×1013 、2×1013 、3×1013 、4×1013 、5×1013 、6×1013 、6.7×1013 、7×1013 、8×1013 、9×1013 、1×1014 、2×1014 、3×1014 、4×1014 、5×1014 、6×1014 、7×1014 、8×1014 、9×1014 、1×1015 、2×1015 、3×1015 、4×1015 、5×1015 、6×1015 、7×1015 、8×1015 、9×1015 或1×1016 VG/kg之組合物濃度。
在一個實施例中，向中樞神經系統(例如實質)之細胞遞送AAV顆粒可包含介於約1×106 VG與約1×1016 VG之間的總劑量。在一些實施例中，遞送可包含約1×106 、2×106 、3×106 、4×106 、5×106 、6×106 、7×106 、8×106 、9×106 、1×107 、2×107 、3×107 、4×107 、5×107 、6×107 、7×107 、8×107 、9×107 、1×108 、2×108 、3×108 、4×108 、5×108 、6×108 、7×108 、8×108 、9×108 、1×109 、2×109 、3×109 、4×109 、5×109 、6×109 、7×109 、8×109 、9×109 、1×1010 、1.9×1010 、2×1010 、3×1010 、3.73×1010 、4×1010 、5×1010 、6×1010 、7×1010 、8×1010 、9×1010 、1×1011 、2×1011 、2.5×1011 、3×1011 、4×1011 、5×1011 、6×1011 、7×1011 、8×1011 、9×1011 、1×1012 、2×1012 、3×1012 、4×1012 、5×1012 、6×1012 、7×1012 、8×1012 、9×1012 、1×1013 、2×1013 、3×1013 、4×1013 、5×1013 、6×1013 、7×1013 、8×1013 、9×1013 、1×1014 、2×1014 、3×1014 、4×1014 、5×1014 、6×1014 、7×1014 、8×1014 、9×1014 、1×1015 、2×1015 、3×1015 、4×1015 、5×1015 、6×1015 、7×1015 、8×1015 、9×1015 或1×1016 VG之總劑量。作為一個非限制性實例，總劑量為1×1013 VG。作為另一個非限制性實例，總劑量為2.1×1012 VG。
在一個實施例中，可投與每劑量約105 至106 個病毒基因組(單元)。
在一個實施例中，向細胞遞送根據本發明之組合物可包含介於約1×106 VG/mL與約1×1016 VG/mL之間的總濃度。在一些實施例中，遞送可包含約1×106 、2×106 、3×106 、4×106 、5×106 、6×106 、7×106 、8×106 、9×106 、1×107 、2×107 、3×107 、4×107 、5×107 、6×107 、7×107 、8×107 、9×107 、1×108 、2×108 、3×108 、4×108 、5×108 、6×108 、7×108 、8×108 、9×108 、1×109 、2×109 、3×109 、4×109 、5×109 、6×109 、7×109 、8×109 、9×109 、1×1010 、2×1010 、3×1010 、4×1010 、5×1010 、6×1010 、7×1010 、8×1010 、9×1010 、1×1011 、2×1011 、3×1011 、4×1011 、5×1011 、6×1011 、7×1011 、8×1011 、9×1011 、1×1012 、1.1×1012 、1.2×1012 、1.3×1012 、1.4×1012 、1.5×1012 、1.6×1012 、1.7×1012 、1.8×1012 、1.9×1012 、2×1012 、2.1×1012 、2.2×1012 、2.3×1012 、2.4×1012 、2.5×1012 、2.6×1012 、2.7×1012 、2.8×1012 、2.9×1012 、3×1012 、3.1×1012 、3.2×1012 、3.3×1012 、3.4×1012 、3.5×1012 、3.6×1012 、3.7×1012 、3.8×1012 、3.9×1012 、 4×1012 、4.1×1012 、4.2×1012 、4.3×1012 、4.4×1012 、4.5×1012 、4.6×1012 、4.7×1012 、4.8×1012 、4.9×1012 、5×1012 、6×1012 、7×1012 、8×1012 、9×1012 、1×1013 、2×1013 、3×1013 、4×1013 、5×1013 、6×1013 、6.7×1013 、7×1013 、8×1013 、9×1013 、1×1014 、2×1014 、3×1014 、4×1014 、5×1014 、6×1014 、7×1014 、8×1014 、9×1014 、1×1015 、2×1015 、3×1015 、4×1015 、5×1015 、6×1015 、7×1015 、8×1015 、9×1015 或1×1016 VG/mL之組合物濃度。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為1×1013 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為3×1012 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為1.1×1012 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為3.7×1012 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為8×1011 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為2.6×1012 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為4.9×1012 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為0.8×1012 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為0.83×1012 VG/mL。在一個實施例中，組合物中AAV顆粒之濃度為小瓶中可含有的最大最終劑量。
在一個實施例中，向中樞神經系統(例如實質)之細胞遞送AAV顆粒可包含介於約1×106 VG/mL與約1×1016 VG/mL之間的組合物濃度。在一些實施例中，遞送可包含約1×106 、2×106 、3×106 、4×106 、5×106 、6×106 、7×106 、8×106 、9×106 、1×107 、2×107 、3×107 、4×107 、5×107 、6×107 、7×107 、8×107 、9×107 、1×108 、2×108 、3×108 、4×108 、5×108 、6×108 、7×108 、8×108 、9×108 、1×109 、2×109 、3×109 、4×109 、5×109 、6×109 、7×109 、8×109 、9×109 、1×1010 、2×1010 、3×1010 、4×1010 、5×1010 、6×1010 、7×1010 、8×1010 、9×1010 、1×1011 、2×1011 、3×1011 、4×1011 、5×1011 、6×1011 、7×1011 、8×1011 、9×1011 、1×1012 、2×1012 、3×1012 、4×1012 、5×1012 、6×1012 、7×1012 、8×1012 、9×1012 、1×1013 、2×1013 、3×1013 、4×1013 、5×1013 、6×1013 、7×1013 、8×1013 、9×1013 、1×1014 、2×1014 、3×1014 、4×1014 、5×1014 、6×1014 、7×1014 、8×1014 、9×1014 、1×1015 、2×1015 、3×1015 、4×1015 、5×1015 、6×1015 、7×1015 、8×1015 、9×1015 或1×1016 VG/mL之組合物濃度。在一個實施例中，遞送包含1×1013 VG/mL之組合物濃度。在一個實施例中，遞送包含2.1×1012 /mL之組合物濃度。 方案
本發明之AAV顆粒的所需劑量可遞送僅一次、一天三次、一天兩次、一天一次、每隔一天、每三天、每週、每兩週、每三週或每四週。在某些實施例中，所需劑量可使用多次投藥進行遞送(例如兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或超過十四次投藥)。當採用多次投藥時，可使用分次給藥方案，諸如本文中所描述之彼等方案。如本文所用，「分次劑量」為將「單個單位劑量」或每日總劑量分成兩個或超過兩個劑量，例如兩次或超過兩次投與「單個單位劑量」。如本文所用，「單個單位劑量」為以一個劑量/一次性/在單個途徑/單個接觸點中投與的任何治療劑之劑量，亦即，單個投藥事件。
本發明之AAV顆粒的所需劑量可以「脈衝劑量」或以「連續流」形式進行投與。如本文所用，「脈衝劑量」為歷經一段時間以固定頻率投與的任何治療劑之一系列單個單位劑量。如本文所用，「連續流」為在單個途徑/單個接觸點中連續地投與持續一段時間的治療劑之劑量(亦即，連續投藥事件)。每日總劑量(在24小時時段中給予或以處方開具之量)可藉由此等方法中之任一者或此等方法之組合或藉由適用於醫藥投藥之任何其他方法來進行投與。
在一個實施例中，向個體遞送本發明之AAV顆粒提供在個體中調控AADC之活性。調控活性可為使AADC在個體中之產生增加。調控活性可持續至少1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1年、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、20個月、21個月、22個月、23個月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或超過10年。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可使用單劑量單次治療來向個體進行投與。單次治療之劑量可藉由此項技術中已知及/或本文所描述之任何方法進行投與。如本文所用，「單次治療」係指僅投與一次之組合物。若需要，則可向個體投與加強劑量以確保達到適當功效。加強劑可在單次治療之後1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、1年、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月、24個月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年或超過10年時進行投與。 遞送方法
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用美國專利第8,999,948號或國際公開案第WO2014178863號中所描述的用於治療疾病之方法來進行投與或遞送，該等文獻之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用如美國申請案第20150126590號中所描述的用於在阿茲海默氏病(Alzheimer's Disease)或其他神經退化性病狀中遞送基因療法之方法來進行投與或遞送，該申請案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用如美國專利第6,436,708號及第8,946,152號以及國際公開案第WO2015168666號中所描述的用於遞送CNS基因療法之方法來進行投與或遞送，該等文獻之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，包含AADC多核苷酸之AAV顆粒可使用歐洲專利申請案第EP1857552號中所描述的用於遞送AAV病毒粒子之方法來進行投與或遞送，該申請案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用歐洲專利申請案第EP2678433號中所描述的用於使用AAV顆粒遞送蛋白質之方法來進行投與或遞送，該申請案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，包含AADC多核苷酸之AAV顆粒可使用美國專利第US 5,858,351號中所描述的用於使用AAV顆粒遞送DNA分子之方法來進行投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用美國專利第US 6,211,163號中所描述的用於向血流遞送DNA之方法來進行投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用美國專利第US 7,588,757號中所描述的用於向中樞神經系統遞送有效負載之方法來進行投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用美國專利第US 6,325,998號中所描述的用於遞送AAV病毒粒子之方法來進行投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用美國專利第US 8,283,151號中所描述的用於遞送有效負載之方法來進行投與或遞送，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用國際專利公開案第WO2001089583號中所描述的用於使用麩胺酸脫羧酶(GAD)遞送有效負載之方法來進行投與或遞送，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒或醫藥組合物可使用國際專利公開案第WO2012057363號中所描述的用於向神經細胞遞送有效負載之方法來進行投與或遞送，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。 遞送至細胞中
本發明提供一種向細胞或組織遞送任一種上文所描述之AAV顆粒的方法，其包含使該細胞或組織與該AAV顆粒接觸或使該細胞或組織與包含該AAV顆粒之調配物接觸，或使該細胞或組織與任一種所描述之組合物(包括醫藥組合物)接觸。向細胞或組織遞送AAV顆粒之方法可活體外、離體或活體內實現。 遞送至個體中
本發明另外提供一種向個體(包括哺乳動物個體)遞送任一種上文所描述之AAV顆粒的方法，其包含向該個體投與該AAV顆粒或向該個體投與包含該AAV顆粒之調配物或向該個體投與任一種所描述之組合物(包括醫藥組合物)。組合
AAV顆粒可與一或多種其他治療劑、預防劑、研究劑或診斷劑組合使用。「與……組合」不欲暗示藥劑必須同時投與及/或調配成一起遞送，但此等遞送方法處於本發明之範疇內。組合物可與一或多種其他所需治療劑或醫學程序同時、在其之前、或在其之後投與。一般而言，各藥劑將以針對該藥劑所確定之劑量及/或時程來進行投與。在一些實施例中，本發明涵蓋遞送醫藥、預防、研究或診斷組合物與可改善其生物可用性、減弱及/或調節其代謝、抑制其排泄及/或調節其在體內之分佈的藥劑組合。
在一個實施例中，本文所描述之AAV顆粒可向亦進行左旋多巴療法之個體進行投與。作為一個非限制性實例，個體可對左旋多巴療法具有陽性反應，且PD之至少一種症狀減輕。作為另一個非限制性實例，個體可對左旋多巴療法有反應，其中個體經歷之PD症狀穩定。作為又另一個非限制性實例，個體可對左旋多巴療法具有陰性反應，其中個體經歷之PD症狀增加。
在一個實施例中，在AAV製品之前向個體投與的左旋多巴之劑量為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或超過25 mg/kg。作為一個非限制性實例，劑量為3 mg/kg。作為另一個非限制性實例，劑量為10 mg/kg。作為又另一個非限制性實例，劑量為20 mg/kg。可在投與AAV顆粒之前評定個體對左旋多巴之反應(例如行為反應)。另外，可在投與AADC多核苷酸之後(例如在投與AAV顆粒之後1週、2週、3週、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1年或超過1年時)再次對個體投與左旋多巴。可對行為反應進行再評定，且將其與初始反應相比以確定AAV顆粒之作用。個體可具有1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或100%行為改善。
在一個實施例中，可在投與AAV顆粒之後多次投與左旋多巴。可以重複時程(例如每5天、每週、每10天、每15天、每30天、每月、每兩個月、每3個月、每4個月、每5個月、每6個月、每7個月、每8個月、每9個月、每10個月、每11個月或每年)隨症狀產生而投與左旋多巴。作為一個非限制性實例，在投與AADC多核苷酸後3年時，個體在殼核輸注區域內之紋狀體神經元的1-10%、5-15%、10-20%、15-30%、20-40%、25-50%、30-50%、40-50%、40-60%、50-70%、50-80%、60-70%、60-75%、60-80%、60-90%、70-80%、70-90%、75-90%、80-90%、90-100%可具有AADC免疫反應性。作為一個非限制性實例，在投與AAV顆粒後6年時，個體在殼核輸注區域內之紋狀體神經元的 1-10%、5-15%、10-20%、15-30%、20-40%、25-50%、30-50%、40-50%、40-60%、50-70%、50-80%、60-70%、60-75%、60-80%、60-90%、70-80%、70-90%、75-90%、80-90%、90-100%可具有AADC免疫反應性。作為一個非限制性實例，在投與AADC多核苷酸後9年時，個體在殼核輸注區域內之紋狀體神經元的1-10%、5-15%、10-20%、15-30%、20-40%、25-50%、30-50%、40-50%、40-60%、50-70%、50-80%、60-70%、60-75%、60-80%、60-90%、70-80%、70-90%、75-90%、80-90%、90-100%可具有AADC免疫反應性。
在一個實施例中，可投與本文所描述之AAV顆粒的個體記錄有對左旋多巴療法之反應但具有醫學難治性波動，且視為良好手術候選者。個體是否為良好手術候選者可由治療個體PD之醫師或投與AAV顆粒之醫師在考慮患者進行遞送AAV顆粒所要求之手術干預的整體風險與益處比率的情況下決定。表現量測
來自病毒基因組之有效負載的表現可使用此項技術中已知之各種方法來確定，諸如(但不限於)免疫化學(例如IHC)、原位雜交(ISH)、酶聯免疫吸附分析(ELISA)、親和力ELISA、ELISPOT、流式細胞量測術、免疫細胞學、表面電漿子共振分析、動力學排除分析、液相層析-質譜法(LCMS)、高效液相層析(HPLC)、BCA分析、免疫電泳、西方墨點法、SDS-PAGE、蛋白質免疫沈澱及/或PCR。
本文所描述之AAV顆粒的醫藥組合物可由生物可用性、治療窗及/或分佈體積中之一或多者加以表徵。生物可用性
當與如本文所描述之遞送劑一起調配成組合物時，AAV顆粒可展現其生物可用性與缺乏如本文所描述之遞送劑的組合物相比增加。如本文所用，術語「生物可用性」係指向哺乳動物投與的給定量之AAV顆粒或所表現有效負載的全身可用性。生物可用性可藉由在向哺乳動物投與AAV顆粒後量測組合物之曲線下面積(AUC)或最大血清或血漿濃度(Cmax )來加以評定。AUC為沿縱座標(Y軸)之化合物(例如AAV顆粒或所表現有效負載)血清或血漿濃度相對於沿橫座標(X軸)之時間繪製的曲線的曲線下面積測定值。一般而言，特定化合物之AUC可使用一般技術者已知及如G. S. Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, 第72卷, Marcel Dekker, New York, Inc., 1996中所描述之方法來加以計算，該文獻之內容以全文引用之方式併入本文中。
Cmax 值為在向哺乳動物投與AAV顆粒後在該哺乳動物之血清或血漿中達成的AAV顆粒或所表現有效負載之最大濃度。Cmax 值可使用一般技術者已知之方法來加以量測。如本文所用之片語「生物可用性增加」或「藥物動力學改善」意謂當與如本文所描述之遞送劑共同投與時，以AUC、Cmax 或Cmin 形式量測的第一AAV顆粒或所表現有效負載在哺乳動物中之全身可用性比在不進行此類共同投與時的全身可用性更大。在一些實施例中，生物可用性可增加至少約2%、至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或約100%。治療窗
如本文所用，「治療窗」係指治療活性物質在作用位點處引發治療作用之機率較高的血漿濃度範圍或含量範圍。在一些實施例中，如本文所描述之AAV顆粒的治療窗可增加至少約2%、至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或約100%。分佈體積
如本文所用，術語「分佈體積」係指在與血液或血漿中相同之濃度下，在體內含有藥物總量將要求具有之流體體積：Vdist 等於體內藥物之量/藥物在血液或血漿中之濃度。舉例而言，對於10 mg劑量及10 mg/L之血漿濃度，分佈體積將為1公升。分佈體積反映藥物存在於血管外組織中的程度。較大分佈體積反映與血漿蛋白質結合相比，化合物傾向於與組織組分結合。在臨床環境中，Vdist 可用於確定達成穩態濃度之起始劑量。在一些實施例中，如本文所描述之AAV顆粒的分佈體積可減少至少約2%、至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%。生物學作用
在一個實施例中，向動物遞送之AAV顆粒的生物學作用可藉由分析該等動物中之有效負載表現來加以分類。有效負載表現可由分析自投與本發明之AAV顆粒的哺乳動物收集之生物樣品來確定。舉例而言，對於由向哺乳動物遞送之AAV顆粒編碼之蛋白質，50-200 pg/ml之蛋白質表現可視為該哺乳動物中之蛋白質的治療有效量。 IV. 本發明之組合物的方法及用途CNS 疾病
本發明之多核苷酸可用於治療、預防或改善以異常或非所需標靶表現為特徵之任何疾病或病症。在一個實施例中，本發明係關於用於治療帕金森氏症之AAV顆粒。
在一些實施例中，AAV顆粒可用於治療、預防或改善以異常或非所需標靶表現為特徵之任何疾病或病症，其中將有效負載(亦即AADC)調換為替代性有效負載。
本發明提供一種用於在哺乳動物個體(包括人類個體)中治療疾病、病症及/或病狀之方法，其包含向該個體投與本文所描述之AAV顆粒。
在一個實施例中，疾病、病症及/或病狀為神經疾病、病症及/或病狀。CNS疾病可為影響大腦(包括大腦半球、間腦、腦幹及小腦)或脊髓之任何組分的疾病。
在一些實施例中，經由遞送本身為可調節CNS中基因產物含量或功能之治療產物的功能性有效負載，本發明之病毒顆粒可用於治療神經退化性疾病及/或以神經退化為特徵之疾病或病症，肌神經疾病、溶酶體疾病、外傷、骨髓損傷、疼痛(包括神經痛)、神經系統癌症、脫髓鞘疾病、神經系統自體免疫疾病、神經毒性症候群、睡眠障礙症、遺傳性腦病及發育性CNS病症。功能性有效負載可在有需要之個體中緩解或減輕由基因產物之含量及/或功能異常(例如蛋白質之不存在或缺陷)引起的症狀，或在有需要之個體中以其他方式為CNS病症提供益處。
作為非限制性實例，由本發明之AAV顆粒遞送的治療產物可包括(但不限於)生長及營養因子、細胞介素、激素、神經傳遞質、酶、抗凋亡因子、血管生成因子及已知在病理性病症中突變之任何蛋白質，諸如「運動神經元存活」蛋白質(survival of motor neuron；SMN)；靶向編碼在本文所論述之任一CNS疾病中受治療關注之蛋白質之信使RNA的反義RNA或RNAi；或在CNS中起基因靜默及轉錄後調控基因表現之作用的微RNA (例如腦特異性Mir-128a，參見Adlakha及Saini, Molecular cancer, 2014, 13:33)。舉例而言，靶向超氧化物歧化酶之RNAi可由本發明之病毒顆粒封裝以用於治療ALS。
生長及營養因子可包括(但不限於)腦源性生長因子(BDNF)、表皮生長因子(EGF)、鹼性纖維母細胞生長因子(bFGF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、促皮質素釋放因子(CRF)、膠細胞株源性生長因子(GDNF)、類胰島素生長因子-1 (IGF-1)、神經生長因子(NGF)、神經營養蛋白-3 (NT-3)、神經營養蛋白-4 (NT-4)及血管內皮生長因子(VEGF)。細胞介素可包括介白素-10 (IL-10)、介白素-6、介白素-8、趨化激素CXCL12 (SDF-1)、TGF-β及生長及分化因子(GDF-1/10)。
在一些實施例中，神經病症可為神經退化性病症，包括(但不限於)阿茲海默氏病(Alzheimer's Diseases，AD)；肌肉萎縮性側索硬化(ALS)；庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob Disease，CJD)；亨廷頓氏病(Huntingtin's disease，HD)；弗里德希氏共濟失調(Friedreich's ataxia，FA)；帕金森病(Parkinson Disease，PD)；多發性系統萎縮症(MSA)；脊髓性肌肉萎縮症(SMA)、多發性硬化症(MS)；原發性進行性失語；進行性核上麻痺(PSP)；癡呆；腦癌、退化性神經疾病、腦炎、癲癇症、引起神經退化之基因腦病、色素性視網膜炎(RP)、頭部及腦部畸形、水腦、中風、朊病毒病、嬰兒神經元蠟樣質脂褐質沈積症(INCL) (由溶酶體酶棕櫚醯基蛋白質硫酯酶-1 (PPT1)缺乏症造成之兒童神經退化性疾病)及其他。
在一些實施例中，本發明之病毒顆粒可用於治療與CNS生長及發育障礙相關聯之疾病，亦即神經發育性障礙症。在一些態樣中，此類神經發育性病症可由基因突變造成，包括(但不限於) X脆折症候群(由FMR1基因突變造成)、唐氏症候群(Down syndrome) (由染色體21之三體性造成)、雷特症候群(Rett syndrome)、威廉姆斯症候群(Williams syndrome)、安格爾曼症候群(Angelman syndrome)、史密斯-瑪格尼斯症候群(Smith-Magenis syndrome)、ATR-X症候群、巴特症候群(Barth syndrome)；嬰兒期免疫功能異常及/或感染性疾病，諸如西登哈姆氏舞蹈症(Sydenham's chorea)、精神分裂症、先天性弓蟲病、先天性風疹症候群；代謝障礙症，諸如糖尿病及苯酮尿症；營養缺陷及/或腦外傷；孤獨症及孤獨譜系疾病。
在一些實施例中，本發明之病毒顆粒可用於治療CNS中之腫瘤，包括(但不限於)聽神經瘤、星形細胞瘤(I級、II級、III級及IV級)、脊索瘤、CNS淋巴瘤、顱咽管瘤、神經膠質瘤(例如腦幹神經膠質瘤、室管膜瘤、視神經神經膠質瘤、室管膜下室管膜瘤)、神經管母細胞瘤、腦膜瘤、轉移性腦瘤、寡樹突神經膠質瘤、垂體腫瘤、原始神經外胚層(PNET)及神經鞘瘤。
在一些實施例中，神經病症可為具有運動及/或感覺症狀之功能性神經病症，其在神經學上源於CNS。作為非限制性實例，功能性神經病症可為慢性疼痛、癲癇、語言障礙、非自主運動及睡眠紊亂。
在一些實施例中，神經病症可為白質病症(影響CNS中神經纖維之一組疾病)，包括(但不限於)佩利措伊斯-梅茨巴赫疾病(Pelizaeus-Merzbacher disease)、髓鞘形成不良伴隨基底節及小腦萎縮症、艾卡迪-戈緹耶斯症候群(Aicardi-Goutières syndrome)、巨腦性腦白質病伴隨皮層下囊腫、先天性肌肉營養不良、肌緊張性營養不良、威爾遜疾病(Wilson disease)、洛維症候群(Lowe syndrome)、休格連-拉森症候群(Sjögren-Larsson syndrome)、PIBD或塔伊症候群(Tay syndrome)、科凱恩氏病(Cockayne's disease)、腦腱黃瘤症、澤爾韋格症候群(Zellweger syndrome)、新生兒腎上腺腦白質營養不良、嬰兒雷夫蘇姆病(Infantile Refsum disease)、類澤爾韋格症候群、偽澤爾韋格症候群、偽新生兒腎上腺腦白質營養不良、雙功能性蛋白質缺乏症、X性聯腎上腺腦白質營養不良及腎上腺脊髓神經病及雷夫蘇姆病。
在一些實施例中，神經病症可為由CNS中之細胞不能使代謝最終產物斷裂而造成的溶酶體貯積病(lysosomal storage disorder，LSD)，包括(但不限於)尼曼-匹克病(Niemann-Pick disease) (由遺傳性酸神經磷脂酶(ASM)缺乏症引起之LSD)；異染性腦白質營養不良(MLD) (以髓硫脂在膠細胞及神經元中積聚為特徵之LSD，該積聚由遺傳性芳基硫酸酯酶A (ARSA)缺乏症引起)；球狀細胞腦白質障礙(GLD) (由半乳糖神經醯胺酶突變造成之LSD)、法布立病(Fabry disease) (由α-半乳糖苷酶A(GLA)基因之突變造成的LSD)、戈謝病(Gaucher disease) (由β-葡糖腦苷脂酶(GBA)基因之突變造成)；GM1/GM2神經節苷脂貯積病；黏多醣貯積症；龐培病(Pompe disease)；及神經元蠟樣質脂褐質沈積症。
在另一個實施例中，神經疾病、病症及/或病狀為弗里德希氏共濟失調。在一個實施例中，用於治療弗里德希氏共濟失調之AAV顆粒包含諸如(但不限於) SEQ ID NO: 979或其片段或變異體之核酸序列，其中有效負載經共濟蛋白或此項技術中已知用於治療弗里德希氏共濟失調之任何其他有效負載置換。
在另一個實施例中，神經疾病、病症及/或病狀為肌肉萎縮性側索硬化(ALS)。在一個實施例中，用於治療ALS之AAV顆粒包含諸如(但不限於) SEQ ID NO: 979或其片段或變異體之核酸序列，其中有效負載經SOD1之shRNA、miRNA、siRNA、RNAi或此項技術中已知用於治療ALS之任何其他有效負載置換。
在另一個實施例中，神經疾病、病症及/或病狀為亨廷頓氏病。在一個實施例中，用於治療亨廷頓氏病之AAV顆粒包含諸如(但不限於) SEQ ID NO: 979或其片段或變異體之核酸序列，其中有效負載經Htt之shRNA、miRNA、siRNA、RNAi或此項技術中已知用於治療亨廷頓氏病之任何其他有效負載置換。
在另一個實施例中，神經疾病、病症或病狀為脊髓性肌肉萎縮症(SMA)。在另一個實施例中，神經疾病、病症及/或病狀為弗里德希氏共濟失調。在一個實施例中，用於治療SMA之AAV顆粒包含諸如(但不限於) SEQ ID NO: 979或其片段或變異體之核酸序列，其中有效負載經共濟蛋白或此項技術中已知用於治療SMA之任何其他有效負載置換。帕金森氏症
在一個實施例中，神經疾病、病症及/或病狀為帕金森氏症。在一個實施例中，用於治療帕金森氏症之AAV顆粒包含諸如(但不限於) SEQ ID NO: 979或其片段或變異體之有效負載。
在一個實施例中，個體為在帕金森氏症統一評級量表中最小運動得分為約30至最大得分約100、約10至最大得分約100、約20至最大得分約100的人類患者。
在一個實施例中，個體在用本文所描述之組合物進行治療之前的過去5年內已診斷患有帕金森氏症。作為一個非限制性實例，個體可在用本文所描述之組合物進行治療之前一週、2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、1年、2年、3年、4年或小於5年內已診斷患有帕金森氏症。
在一個實施例中，個體在用本文所描述之組合物進行治療之前5與10年之間時已診斷患有帕金森氏症。作為一個非限制性實例，個體可在用本文所描述之組合物進行治療之前5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10年時已診斷患有帕金森氏症。
在一個實施例中，個體在用本文所描述之組合物進行治療之前超過10年時已診斷患有帕金森氏症。作為一個非限制性實例，個體可在用本文所描述之組合物進行治療之前10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24或超過24年時已診斷患有帕金森氏症。
在一個實施例中，個體為50-65歲。作為一個非限制性實例，個體為50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65歲。作為一個非限制性實例，個體為50歲。作為一個非限制性實例，個體為51歲。作為一個非限制性實例，個體為52歲。作為一個非限制性實例，個體為53歲。作為一個非限制性實例，個體為54歲。作為一個非限制性實例，個體為55歲。作為一個非限制性實例，個體為56歲。作為一個非限制性實例，個體為57歲。作為一個非限制性實例，個體為58歲。作為一個非限制性實例，個體為59歲。作為一個非限制性實例，個體為60歲。作為一個非限制性實例，個體為61歲。作為一個非限制性實例，個體為62歲。作為一個非限制性實例，個體為63歲。作為一個非限制性實例，個體為64歲。作為一個非限制性實例，個體為65歲。
在一個實施例中，個體為30至50歲。作為一個非限制性實例，個體為30歲。作為一個非限制性實例，個體為31歲。作為一個非限制性實例，個體為32歲。作為一個非限制性實例，個體為33歲。作為一個非限制性實例，個體為34歲。作為一個非限制性實例，個體為35歲。作為一個非限制性實例，個體為36歲。作為一個非限制性實例，個體為37歲。作為一個非限制性實例，個體為38歲。作為一個非限制性實例，個體為39歲。作為一個非限制性實例，個體為40歲。作為一個非限制性實例，個體為41歲。作為一個非限制性實例，個體為42歲。作為一個非限制性實例，個體為43歲。作為一個非限制性實例，個體為44歲。作為一個非限制性實例，個體為45歲。作為一個非限制性實例，個體為46歲。作為一個非限制性實例，個體為47歲。作為一個非限制性實例，個體為48歲。作為一個非限制性實例，個體為49歲。作為一個非限制性實例，個體為50歲。
在一個實施例中，個體為65至85歲。作為一個非限制性實例，個體為65歲。作為一個非限制性實例，個體為66歲。作為一個非限制性實例，個體為67歲。作為一個非限制性實例，個體為68歲。作為一個非限制性實例，個體為69歲。作為一個非限制性實例，個體為70歲。作為一個非限制性實例，個體為71歲。作為一個非限制性實例，個體為72歲。作為一個非限制性實例，個體為73歲。作為一個非限制性實例，個體為74歲。作為一個非限制性實例，個體為75歲。作為一個非限制性實例，個體為76歲。作為一個非限制性實例，個體為77歲。作為一個非限制性實例，個體為78歲。作為一個非限制性實例，個體為79歲。作為一個非限制性實例，個體為80歲。作為一個非限制性實例，個體為81歲。作為一個非限制性實例，個體為82歲。作為一個非限制性實例，個體為83歲。作為一個非限制性實例，個體為84歲。作為一個非限制性實例，個體為85歲。
在一個實施例中，在投與本文所描述之組合物之前，個體已觀察到運動(motor)症狀(諸如痙攣症及運動(movement))變化。痙攣症之非限制性實例包括單側或兩側輕度痙攣症、兩側或中線中度痙攣症或難以控制之痙攣症。運動之非限制性實例包括輕度動作遲緩、中度動作遲緩、嚴重動作遲緩及早晨運動不能。
在一個實施例中，個體可具有平衡變化，諸如(但不限於)平衡障礙、翻正反射障礙、顯著平衡病症或跌倒。
在一個實施例中，個體生活品質可能降低。作為一個非限制性實例，個體可能對其生活品質具有中度影響，諸如經歷一些日常生活活動限制。作為另一個非限制性實例，個體之生活品質可能已因疾病而下降。
在一個實施例中，在投與本文所描述之組合物之前，個體已觀察到非運動症狀變化。作為一個非限制性實例，在投與本文所描述之組合物之前，個體可具有輕度至中度認知障礙。作為另一個非限制性實例，個體可具有顯著認知障礙，諸如癡呆，其亦可包括行為紊亂，諸如幻覺。
在一個實施例中，在投與本文所描述之組合物之前，個體可在一或多次多巴胺激導性藥物治療後具有良好反應而波動有限。
在一個實施例中，在投與本文所描述之組合物之前，個體可在一或多次多巴胺激導性藥物治療後具有運動波動，造成輕度至中度失能。
在一個實施例中，個體在投與本文所描述之組合物之前，其具有由「藥效消退(wearing off)」及/或左旋多巴誘導之異動症組成的醫學難治性運動波動，造成顯著失能。
在一個實施例中，個體可具有與帕金森氏症相關聯之輕度症狀，諸如(但不限於)無認知障礙、在過去5年內診斷、在一或多種多巴胺激導性藥物治療後良好反應而波動有限、單側或兩側輕度痙攣症、對生活品質影響極小至無影響、及/或無平衡障礙。
在一個實施例中，個體可具有與帕金森氏症相關聯之中度症狀，諸如(但不限於)輕度至中度認知障礙、平衡及翻正反射障礙之初期徵象、在一或多種多巴胺激導性藥物治療後運動波動造成輕度-中度失能、在過去5至10年內診斷、兩側或中線中度痙攣症、中度動作遲緩及/或個體經歷一些日常生活活動限制。
在一個實施例中，個體可具有與帕金森氏症相關聯之晚期症狀，諸如(但不限於)診斷患有帕金森氏症超過10年、中等難治性運動波動藥效消退及/或左旋多巴誘導之異動症造成顯著失能、難以控制之痙攣症、顯著平衡病症及/或跌倒、顯著認知障礙(諸如癡呆伴隨或不伴隨行為紊亂)、嚴重動作遲緩、生活品質因疾病明顯下降及/或早晨運動不能。
在一個實施例中，已向個體介紹運動障礙症專家(MDS)，但尚未進行腦部深層刺激。
在一個實施例中，個體使用DUOPATM 與本文所描述之組合物組合。作為一個非限制性實例，個體可在單獨使用DUOPATM 的情況下獲得成功。作為一個非限制性實例，個體可在單獨使用DUOPATM 時並未獲得任何成功或成功有限。
在一個實施例中，個體為本身為包括(但不限於)腦部深層刺激之手術干預之候選者的個體。作為一個非限制性實例，儘管用最佳抗帕金森氏病藥物治療進行治療，但由於失能性運動併發症，建議採用腦部深層刺激。
在一個實施例中，基於個體日記，個體之平均活動時間為7.5-14小時。作為一個非限制性實例，平均活動時間為7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9或14小時。在一個實施例中，基於個體日記，個體之平均活動時間為10.5小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後6個月時，個體每日活動時間(沒有令人麻煩的異動症)增加約1.5小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及4.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體每日活動時間增加約1.5小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後6個月時，個體每日活動時間(沒有令人麻煩的異動症)增加約2.2小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體每日活動時間增加約2.2小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後6個月時，個體每日活動時間(沒有令人麻煩的異動症)增加約4小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體每日活動時間增加約4小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後12個月時，個體每日活動時間(沒有令人麻煩的異動症)增加約1.6小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，個體每日活動時間增加約1.6小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後12個月時，個體每日活動時間(沒有令人麻煩的異動症)增加約3.3小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，個體每日活動時間增加約3.3小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後12個月時，個體每日活動時間(沒有令人麻煩的異動症)增加約4小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，個體每日活動時間增加約4小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後24個月時，個體每日活動時間(沒有令人麻煩的異動症)增加約2.3小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後24個月時，個體每日活動時間增加約2.3小時。
在一個實施例中，基於個體日記，個體不活動狀態之平均時間為2至7小時。作為一個非限制性實例，不活動狀態之平均時間為2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9或7。在一個實施例中，基於個體日記，個體不活動狀態之平均時間為4.6小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在投與本發明之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.3小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及4.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.3小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.1小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.1小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少約0.8小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少約0.8小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少約2.3小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少約2.3小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.4小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.4小時。
在一個實施例中，與初始時間相比，在本發明投藥之後24個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.8小時。作為一個非限制性實例，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後24個月時，個體每日不活動狀態時間減少約1.8小時。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少10%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少10%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少20%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少20%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少30%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少30%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少40%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少40%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少50%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少50%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少60%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少60%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少70%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少70%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少80%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少80%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少90%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少90%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後6個月時，個體每日不活動狀態時間減少95%。在一個實施例中，在本發明投藥之後12個月時，個體每日不活動狀態時間減少95%。
在一個實施例中，在本發明投藥之前評估個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之前，個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分介於1-40、1-10、1-15、1-20、1-25、1-30、1-35、1-40、5-10、5-15、5-20、5-25、5-30、5-35、5-40、10-15、10-20、10-25、10-30、10-35、10-40、15-20、15-25、15-30、15-35、15-40、20-25、20-30、20-35、20-40、25-30、25-35、25-40、30-35、30-40或35-40之間。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之前，個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之前，個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分為10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9、14、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9或15。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之前，個體之UPDRS-3藥物治療得分為13.5。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分降低。
個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分可降低一定百分比，諸如(但不限於) 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或超過95%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低10%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低20%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低30%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低40%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低50%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低60%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低70%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低80%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-3藥物治療得分降低90%。
個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分可改變0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9、14、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9或15分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分改變0.4分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分改變1.6分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分改變1.8分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分改變8.6分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分改變9.6分。
個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分可增加0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9、14、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9或15分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分增加0.4分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分增加1.6分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分增加1.8分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分增加8.6分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分增加9.6分。
個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分可降低0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9、14、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9或15分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分降低0.4分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分降低1.6分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分降低1.8分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分降低8.6分。作為一個非限制性實例，個體之UPDRS-3得分降低9.6分。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及4.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分降低8.6。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分降低9.6。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，個體之UPDRS-3 (或UPDRS-III)藥物治療得分降低9.6。
在一個實施例中，在本發明投藥之前，個體之帕金森氏症藥物治療平均量為每天約1500 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療為左旋多巴。
在一個實施例中，在本發明投藥之前評估個體之UPDRS-II得分。在本發明投藥之前，個體之UPDRS-II得分介於20與50之間，諸如(但不限於) 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49及50。
個體之UPDRS-2 (或UPDRS-II)得分可改變0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9、14、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9或15分。
個體之UPDRS-2 (或UPDRS-II)得分可增加0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9、14、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9或15分。
個體之UPDRS-2 (或UPDRS-II)得分可降低0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9、11、11.1、11.2、11.3、11.4、11.5、11.6、11.7、11.8、11.9、12、12.1、12.2、12.3、12.4、12.5、12.6、12.7、12.8、12.9、13、13.1、13.2、13.3、13.4、13.5、13.6、13.7、13.8、13.9、14、14.1、14.2、14.3、14.4、14.5、14.6、14.7、14.8、14.9或15分。作為一個非限制性實例，在用本發明投藥之後12個月時，觀察到降低3.6分。作為一個非限制性實例，在用本發明投藥之後6個月時，觀察到降低3.6分。
在一個實施例中，與在投藥之前的UPDRS-II得分相比，在本發明投藥之後，個體之UPDRS-II得分降低2至4分。
在一個實施例中，與在投藥之前的UPDRS-II藥物治療得分相比，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體之UPDRS-II得分降低2至3分。
在一個實施例中，與在投藥之前的UPDRS-II藥物治療得分相比，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，個體之UPDRS-II得分降低2至3分。
在一個實施例中，與在投藥之前的UPDRS-II藥物治療得分相比，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及4.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，個體之UPDRS-II得分降低3至4分。
在一個實施例中，本發明用於改善個體之運動功能。
在一個實施例中，本發明用於控制個體之運動功能及改善其生活品質。
在一個實施例中，本發明用於減少個體需要服用以改善個體運動功能之帕金森氏症藥物治療的劑量。
在一個實施例中，與在治療之前的運動功能相比，向個體殼核中進行單次本發明投藥提供運動功能改善。
在一個實施例中，向個體殼核中進行單次本發明投藥提供運動功能改善及個體控制症狀所要求的左旋多巴之量減少。
在一個實施例中，向個體殼核中進行單次本發明投藥提供運動功能改善及個體控制症狀所要求的多巴胺激導性藥物治療之量減少。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少10-50%。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後6個月時，觀察到減少。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後12個月時，觀察到減少。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少10-20%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少10%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少11%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少12%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少13%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少14%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少15%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少16%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少17%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少18%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少19%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少20%。
在一個實施例中，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少14%。
在一個實施例中，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少10%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少20-30%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少20%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少21%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少22%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少23%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少24%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少25%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少26%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少27%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少28%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少29%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少30%。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少27%。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少28%。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少29%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少30-40%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少30%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少31%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少32%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少33%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少34%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少35%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少36%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少37%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少38%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少39%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少40%。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少34%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少40-50%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少40%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少41%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少42%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少43%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少44%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少45%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少46%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少47%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少48%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少49%。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少50%。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及4.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少34%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少108-641 mg。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後6個月時，觀察到減少。作為一個非限制性實例，在本發明投藥之後12個月時，觀察到減少。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少108-339 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少108 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少134 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少159 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少154 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少208 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少231 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少254 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少276 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少298 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少319 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少339 mg。
在一個實施例中，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少208 mg。
在一個實施例中，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少108 mg。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少339-505 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少339 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少358 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少377 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少396 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少413 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少430 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少446 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少462 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少477 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少491 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少505 mg。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少462 mg。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少477 mg。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後12個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少491 mg。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少505-606 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少505 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少518 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少530 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少542 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少553 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少563 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少573 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少582 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少591 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少599 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少606 mg。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少553 mg。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少606-641 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少606 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少612 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少618 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少623 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少628 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少632 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少635 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少637 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少639 mg。作為一個非限制性實例，帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)減少641 mg。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及4.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後6個月時，發生個體控制症狀所要求的帕金森氏症藥物治療(例如左旋多巴)之每日劑量減少553 mg。
在一個實施例中，在用本發明投藥之後，殼核AADC酶活性在個體中增加。作為一個非限制性實例，觀察到增加相對於初始時間持續至少6個月。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，殼核AADC酶活性在個體中增加10-20%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約10%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約11%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約12%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約13%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約14%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約15%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約16%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約17%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約18%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約19%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約20%。
在一個實施例中，在以每殼核至多450 μL之劑量體積及7.5×1011 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後，殼核AADC酶活性在個體中增加約13%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，殼核AADC酶活性在個體中增加50-60%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約50%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約51%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約52%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約53%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約54%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約55%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約56%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約57%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約58%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約59%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約60%。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及1.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後，殼核AADC酶活性在個體中增加約56%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，殼核AADC酶活性在個體中增加70-85%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約70%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約71%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約72%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約73%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約74%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約75%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約76%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約77%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約78%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約79%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約80%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約81%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約82%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約83%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約84%。作為一個非限制性實例，殼核AADC酶活性增加約85%。
在一個實施例中，在以每殼核至多900 μL之劑量體積及4.5×1012 個載體基因組之總劑量進行本發明投藥之後，殼核AADC酶活性在個體中增加約79%。
在一個實施例中，在本發明投藥之後，個體多巴胺含量增加。作為一個非限制性實例多巴胺之量增加10-20%、15-25%、20-30%、25-35%、30-40%、35-45%、40-50%、45-55%、50-60%、55-65%、60-70%、65-75%、70-80%、75-85%、80-90%、85-95%、90-100%或95-100%。晝夜節律及睡眠 - 清醒週期
晝夜節律為傾向於遵循24小時週期之物理、心理及行為變化。晝夜節律可影響睡眠-清醒週期、激素釋放、體溫及其他身體功能。晝夜節律變化可導致病狀及/或病症，諸如(但不限於)睡眠障礙症(例如失眠)、抑鬱症、躁鬱症、季節性情緒障礙症、肥胖症及糖尿病。
在一個實施例中，本文所描述之AAV顆粒可用於治療失眠。
睡眠-清醒週期包含睡眠時段及清醒時段。一般而言，在24小時時段中，總睡眠小時數小於總清醒小時數。作為一個非限制性實例，睡眠-清醒週期包含睡眠7-9小時及清醒15-17小時。作為一個非限制性實例，睡眠-清醒週期包含睡眠8小時及清醒16小時。作為一個非限制性實例，睡眠-清醒週期包含睡眠8-10小時及清醒14-16小時。
在一個實施例中，藉由向個體投與本文所描述之AAV顆粒來改善該個體之睡眠-清醒週期。
在一個實施例中，藉由向個體投與本文所描述之AAV顆粒來調控該個體之睡眠-清醒週期。作為一個非限制性實例，調控可為進行在夜晚睡眠時間較多，而進行在白天睡眠時間較少的修正。
在一個實施例中，與在投與AAV顆粒之前的個體之睡眠-清醒週期相比，投與本文所描述之AAV顆粒的個體之睡眠-清醒週期改善。作為一個非限制性實例，個體之睡眠時段增加而清醒時段減少。作為另一個非限制性實例，個體之睡眠時段減少而清醒時段增加。
在一個實施例中，與在投與AAV顆粒之前的個體之睡眠-清醒週期相比，投與本文所描述之AAV顆粒的個體之睡眠-清醒週期得到調控。作為一個非限制性實例，睡眠時段及清醒時段之長度可約相同(例如+/- 1小時)持續至少2天。作為另一個非限制性實例，24小時時段中睡眠時段及清醒時段之長度可在前一個24小時時段的10分鐘、15分鐘、20分鐘、25分鐘、30分鐘、35分鐘、40分鐘、45分鐘、50分鐘、55分鐘、1小時、1.5小時或2小時內。
在一個實施例中，在對個體投與本文所描述之AAV顆粒之後，個體在24小時時段中經歷之快速眼球運動(REM)睡眠的量改變。REM睡眠一般視為以密集腦活動標記之睡眠活性時段，其中腦波快速且不同步。成人平均將其每日總睡眠時段之約20-25%耗費於REM睡眠。作為一個非限制性實例，REM睡眠之量減少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，REM睡眠之量減少1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。作為一個非限制性實例，REM睡眠之量增加1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，REM睡眠之量增加1-5%、1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。
在一個實施例中，在對個體投與本文所描述之AAV顆粒之後，個體在24小時時段中經歷之非REM (NREM)睡眠的量改變。NREM睡眠之特徵一般在於，由於隨著藉由EEG來量測之腦波變慢且振幅變大，生理學活性降低。NREM具有四個階段：階段1為有睡意或自清醒轉變為入睡之時間，其中腦波及肌肉活性開始變慢；階段2為輕度睡眠之時段，在此期間眼球運動停止，且腦波變得更慢而偶爾突發快波(有時稱為睡眠紡錘波(sleep spindle))；階段3及階段4(共同稱為慢波睡眠)之特徵在於存在穿插有較小較快波之慢腦波(δ波)，其中不存在眼球運動。成人平均將其每日總睡眠時段之約75-80%耗費於NREM睡眠，其中其每日總睡眠時間之約一半耗費於NREM階段2睡眠。
在一個實施例中，在對個體投與本文所描述之AAV顆粒之後，該個體經歷的NREM睡眠之量改變。作為一個非限制性實例，NREM睡眠之量減少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM睡眠之量減少1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。作為一個非限制性實例，NREM睡眠之量增加1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM睡眠之量增加1-5%、1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。
在一個實施例中，在對個體投與本文所描述之AAV顆粒之後，該個體經歷的NREM階段1睡眠之量改變。作為一個非限制性實例，NREM階段1睡眠之量減少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM階段1睡眠之量減少1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。作為一個非限制性實例，NREM階段1睡眠之量增加1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM階段1睡眠之量增加1-5%、1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。
在一個實施例中，在對個體投與本文所描述之AAV顆粒之後，該個體經歷的NREM階段2睡眠之量改變。作為一個非限制性實例，NREM階段2睡眠之量減少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM階段2睡眠之量減少1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。作為一個非限制性實例，NREM階段2睡眠之量增加1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM階段2睡眠之量增加1-5%、1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。
在一個實施例中，在對個體投與本文所描述之AAV顆粒之後，該個體經歷的NREM階段3及4睡眠之量改變。作為一個非限制性實例，NREM階段3及4睡眠之量減少1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM階段3及4睡眠之量減少1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。作為一個非限制性實例，NREM階段3及4睡眠之量增加1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%或超過65%。作為一個非限制性實例，NREM階段3及4睡眠之量增加1-5%、1-10%、5-10%、5-15%、10-15%、15-20%、15-25%、20-25%、20-30%、25-30%、25-35%、30-35%、30-40%、35-40%、40-50%或40-60%。
在一個實施例中，在對個體投與本文所描述之AAV顆粒之後，NREM及REM週期之時段在個體中更一致。一般而言，NREM及REM週期每90至110分鐘交替一次，每夜四至六次。 V. 套組及裝置套組
在一個實施例中，本發明提供多種用於便利地及/或有效地實行本發明之方法的套組。套組通常將包含足以允許使用者對個體執行多個治療及/或執行多個實驗的組分量之及/或數目。
本發明之任一AAV顆粒均可包含於套組中。在一些實施例中，套組可進一步包括用於產生及/或合成本發明之化合物及/或組合物的試劑及/或說明書。在一些實施例中，套組亦可包括一或多種緩衝劑。在一些實施例中，本發明之套組可包括用於製造蛋白質或核酸陣列或庫之組分，且因此可包括例如固體支撐物。
在一些實施例中，套組組分可封裝於水性介質中或以凍乾形式封裝。套組之容器構件一般將包括至少一個小瓶、試管、燒瓶、瓶、注射器或其他容器構件，在其中可置放有組分且較佳將該組分適當地等分。在存在超過一種套組組分(標記試劑及標記可封裝在一起)的情況下，套組一般亦可含有第二、第三或其他額外容器，在其中可分開地置放有額外組分。在一些實施例中，套組亦可包含用於容納醫藥學上可接受之無菌緩衝劑及/或其他稀釋劑的第二容器構件。在一些實施例中，組分之各種組合可包含於一或多個小瓶中。本發明之套組亦可通常包括密封存放以用於商業銷售的用於容納本發明之化合物及/或組合物(例如蛋白質、核酸)的構件及任何其他試劑容器。此類容器可包括固持所需小瓶的注射模製或吹塑模製之塑膠容器。
在一些實施例中，套組組分以一種及/或多種液體溶液形式來提供。在一些實施例中，液體溶液為水溶液，其中無菌水溶液尤其較佳。在一些實施例中，套組組分可以乾粉形式來提供。當試劑及/或組分以乾粉形式來提供時，此類粉末可藉由添加適合體積之溶劑來加以復原。在一些實施例中，預想亦可在另一個容器構件中提供溶劑。在一些實施例中，標記染料以乾燥粉末形式來提供。在一些實施例中，預期在本發明之套組中提供10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、120、130、140、150、160、170、180、190、200、300、400、500、600、700、800、900、1000微克或至少或至多彼等量之乾燥染料。在此類實施例中，染料可隨後再懸浮於任何適合之溶劑，諸如DMSO中。
在一些實施例中，套組可包括用於採用套組組分以及實用為包括於該套組中之任何其他試劑的說明書。說明書可包括可實施之變化形式。裝置
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可與裝置組合、塗佈至裝置上或包埋於裝置中。裝置可包括(但不限於)血管內支架、泵及/或其他可植入治療裝置。另外，AAV顆粒可在個體使用壓縮裝置的同時向該個體進行遞送，該壓縮裝置諸如(但不限於)在個體中降低深層靜脈栓塞(deep vein thrombosis，DVT)可能性之壓縮裝置。
本發明提供可併入有AAV顆粒之裝置。此等裝置以穩定調配物形式含有可立即向有需要之個體(諸如人類患者)遞送的AAV顆粒。
可採用用於投藥之裝置以根據本文所教示之單次、多次或分割給藥方案來遞送本發明之AAV顆粒。
涵蓋此項技術中已知用於向細胞、器官及組織多次投與之方法及裝置以與本文所揭示之方法及組合物結合用作本發明之實施例。此等方法及裝置包括例如具有多個針頭之彼等方法及裝置、採用例如內腔或導管之混合型裝置以及利用熱、電流或輻射驅動機制之裝置。
在一些實施例中，本發明之AAV顆粒可使用諸如(但不限於)血管內支架、試管、導管、管、吸管、針頭及/或管道之裝置來進行遞送。使用此等裝置之方法描述於本文中且為此項技術中已知的。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用整合有影像引導療法及整合有成像之遞送系統來向個體進行投與，諸如(但不限於)雷射、MRgFUS、內窺鏡及機器人手術裝置。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用MRI Interventions, Inc之CLEARPOINT®神經干預系統來向個體進行投與。CLEARPOINT®神經干預系統可單獨或與本文所描述之其他投藥方法及裝置中之任一者組合使用。CLEARPOINT®神經干預系統有助於在規劃及操作神經手術程序期間提供對儀器或裝置之放置及操作的立體定位引導。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用Renishaw PLC之NEUROMATE®立體定位機器人系統來向個體進行投與。NEUROMATE®系統可單獨或與本文所描述之其他投藥方法及裝置中之任一者組合使用。作為一個非限制性實例，NEUROMATE®系統可與頭部固持器、CT影像定位器、框架附接件、遙控器及軟體一起使用
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用Elekta AB之Elekta MICRODRIVETM 裝置來向個體進行投與。MICRODRIVETM 裝置可單獨或與本文所描述之其他投藥方法及裝置中之任一者組合使用。作為一個非限制性實例，MICRODRIVETM 裝置可用於對電極進行定位(例如用於微電極記錄(MER)、宏刺激及腦部深層刺激(DBS)電極植入)，使用十字線及A-P固持器進行導管、試管或DBS電極植入以檢驗位置，進行活體組織檢查，注射及抽吸，腦損傷，內窺鏡引導及GAMMA KNIFE®放射外科手術。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用MONTERIS® Medical,Inc之AXIIIS®立體定位微型框架來向個體進行投與。AXIIIS®立體定位微型框架可單獨或與本文所描述之其他投藥方法及裝置中之任一者組合使用。AXIIIS®立體定位微型框架為軌跡對準裝置，其可用於雷射凝結、活體組織檢查、導管置放、電極植入、內窺鏡檢查及凝塊清除。微型框架允許360度介接，且提供在簡單調整的情況下接近多個顱內標靶。此外，微型框架與MRI相容。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用Integra LifeSciences Corporation之INTEGRATM CRW®系統來向個體進行投與。INTEGRATM CRW®系統可單獨或與本文所描述之其他投藥方法及裝置中之任一者組合使用。CRW®系統可用於諸如(但不限於)立體定位手術、顯微手術、導管插入術及活體組織檢查之各種應用。CRW®系統經設計以向使用該系統者提供準確性(例如指旋螺釘(thumb lock screw)、游標縮放(Vernier scaling)、雙螺栓固定及實體框架)。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用Stereotaxis, Inc之EPOCH®溶液系統來向個體進行投與，其可包括NIOBE® ES磁性導航系統、VDRIVE®機器人導航系統及/或ODYSSEY®資訊溶液(均來自Stereotaxis, Inc.)。EPOCH®溶液系統可單獨或與本文所描述之其他投藥方法及裝置中之任一者組合使用。作為一個非限制性實例，NIOBE® ES磁性導航系統可用於準確接觸個體。作為另一個非限制性實例，NIOBE® ES磁性系統可與VDRIVE®機器人導航系統一起使用以提供精確移動及穩定性。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用NeuroStation工作站來向個體進行投與，其使用無框架立體定位方法以為諸如(但不限於)手術規劃、活體組織檢查、顱骨切開術、內窺鏡檢查、手術內超音波及放射療法之應用提供影像引導。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用機器人立體定位系統來向個體進行投與，諸如(但不限於)美國專利第5,078,140號中所描述之裝置，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。該裝置之機器人臂可用於對手術工具或用於進行手術程序之其他器具進行精確取向。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可使用自動遞送系統來向個體進行投與，諸如(但不限於)美國專利第5,865,744號中所描述之裝置，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。基於由遞送系統採集之影像，電腦將針頭投藥調整為適於特定個體之深度。
在一個實施例中，本發明之AAV顆粒可向在投藥期間同時使用及/或在投藥之前及/或之後持續一段時間使用壓縮裝置的個體進行投與，該壓縮裝置諸如(但不限於)在個體中降低深層靜脈栓塞(DVT)可能性之壓縮裝置。在對個體投與AAV顆粒之前，可使用壓縮裝置持續至少5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時或超過8小時。在對個體投與AAV顆粒之後，可使用壓縮裝置持續至少5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、1週、2週、3週或一個月。作為一個非限制性實例，在遞送AAV顆粒之程序期間同時使用壓縮裝置。作為另一個非限制性實例，在投與AAV顆粒之前使用壓縮裝置。作為另一個非限制性實例，在投與AAV顆粒之後使用壓縮裝置。作為另一個非限制性實例，在投與AAV顆粒之前、期間及之後使用壓縮裝置。
壓縮裝置之非限制性實例包括ActiveCare +S.F.T.間歇性壓縮裝置、ActiveCare +S.F.T氣動壓縮裝置、DVTlite's Venowave、KCI系統壓縮泵、Aircast VenaFlow系統、SCD Express壓縮系統或Bio Compression Systems, Inc.氣動壓縮療法設備(例如，泵可選自型號SC-2004、型號SC-2004-FC、型號SC-3004、型號SC-3004-FC、型號SC-2008、型號SC-2008-DL、型號SC-3008-T、BioCryo系統、型號IC-BAP-DL或multi-flo DVT combo IC_1545-DL，且與該泵一起使用服裝之可為4腔室、8腔室、BioCryo、Multi-Flo或BioArterial服裝)。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用遞送AAV顆粒之裝置及頭部固定組件來向個體進行遞送。頭部固定組件可為(但不限於)由MRI interventions出售之任一頭部固定組件。作為一個非限制性實例，頭部固定組件可為美國專利第8,099,150號、第8,548,569號及第9,031,636號以及國際專利公開案第WO201108495號及第WO2014014585號中所描述之任一組件，該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入。頭部固定組件可與MRI相容性鑽孔器組合使用，諸如(但不限於)國際專利公開案第WO2013181008號及美國專利公開案第US20130325012號中所描述之MRI相容性鑽孔器，該等公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用將設備定位於個體上之目標點以遞送AAV顆粒的方法、系統及/或電腦程式來進行遞送。作為一個非限制性實例，方法、系統及/或電腦程式可為美國專利第8, 340,743號中所描述之方法、系統及/或電腦程式，該專利之內容以全文引用之方式併入本文中。所述方法可包括：在體內確定目標點及參考點，其中該目標點及該參考點界定延伸穿過各點之規劃軌跡線(planned trajectory line，PTL)；確定可視化平面，其中該PTL與該可視化平面在觀察點處相交；相對於身體安裝引導裝置以關於PTL移動，其中該引導裝置不與可視化平面相交；確定引導軸與可視化平面之間的相交點(GPP)；及在可視化平面中使與觀察點對準。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用對流增強之遞送裝置來向個體進行遞送。使用對流來進行藥物靶向遞送之非限制性實例描述於美國專利公開案第US20100217228號、第US20130035574號及第US20130035660號以及國際專利公開案第WO2013019830號及第WO2008144585號中，該等公開案中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，可在遞送AAV顆粒之前、期間及/或之後對個體進行成像。成像方法可為此項技術中已知及/或本文所描述之方法，諸如(但不限於)磁共振成像(MRI)。作為一個非限制性實例，成像可用於評定治療效果。作為另一個非限制性實例，成像可用於輔助遞送AAV顆粒。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用MRI引導之裝置進行遞送。MRI引導之裝置的非限制性實例描述於美國專利第9,055,884號、第9,042,958號、第8,886,288號、第8,768,433號、第8,396,532號、第8,369,930號、第8,374,677號及第8,175,677號以及美國專利申請案第US20140024927號中，該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。作為一個非限制性實例，MRI引導之裝置可能夠提供實時資料，諸如美國專利第8,886,288號及第8,768,433號中所描述之彼等資料，該等專利中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。作為另一個非限制性實例，MRI引導之裝置或系統可與定向插管一起使用，諸如美國專利第8,175,677號及第8,374,677號中所描述之系統，該等專利中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。作為又另一個非限制性實例，MRI引導之裝置包括如例如美國專利第9,055,884號及美國專利申請案第US20140024927號中所描述的用於引導干預裝置之軌跡引導框架，該等文獻中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用MRI相容性端部組件來進行遞送。MRI相容性端部組件之非限制性實例描述於美國專利公開案第US20140275980號中，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用MRI相容性插管來進行遞送。MRI相容性插管之非限制性實例包括國際專利公開案第WO2011130107號中所教示之彼等，該公開案之內容以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用MRI相容性導管來進行遞送。MRI相容性導管之非限制性實例包括國際專利公開案第WO2012116265號、美國專利公開案第8,825,133號及美國專利公開案第US20140024909號中所教示之彼等導管，該等公開案中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用如美國專利公開案第US20140276582號及第US20140276614號中所描述的具有細長管式主體及隔膜之裝置來進行，該等公開案中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用MRI相容性定位及/或引導系統來進行遞送，該系統諸如(但不限於)美國專利公開案第US20150223905號及第US20150230871號中所描述之彼等系統，該等公開案中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。作為一個非限制性實例，MRI相容性定位及/或引導系統可包含適宜於對患者進行固定之安裝件、經配置以附接至該安裝件以便能夠在至少三個維度中可控制地平移的具有內腔之定向插管、及經配置以在定向插管內腔中經由滑道貼合地前進及縮回的細長探針，該細長探針包含刺激或記錄電極中之至少一者。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用如美國專利公開案第US20150031982號及第US20140066750號以及國際專利公開案第WO2015057807號及第WO2014039481號中所描述之軌跡框架來向個體進行遞送，該等公開案中之每一者的內容均以全文引用之方式併入本文中。
在一個實施例中，AAV顆粒可使用基因槍來向個體進行遞送。 定義
在本發明書中各個位置處，本發明之化合物的取代基以群組或範圍形式揭示。具體言之，期望本發明包括此類群組及範圍之成員中的各個及每一個別子組合。
約 ：如本文所用，術語「約」意謂所列舉之值的+/- 10%。
活性 ：如本文所用，術語「活性」係指其中事件發生或進行之情況。本文所描述之組合物可具有活性，且此活性可涉及一或多個生物學事件。
腺相關病毒 ：如本文所用之術語「腺相關病毒」或「AAV」係指依賴病毒屬之成員，包含來源於其之任何顆粒、序列、基因、蛋白質或組分。如本文所用之術語「AAV顆粒」包含衣殼及多核苷酸。AAV顆粒可來源於本文所描述或此項技術中已知之任何血清型，包括血清型之組合(亦即「假型化」AAV)；或來自各種基因組(例如單股或自互補)。另外，AAV顆粒可為複製缺陷性AAV顆粒及/或標靶對象。
組合投與 ：如本文所用，術語「組合投與」或「組合投藥」意謂兩種或超過兩種藥劑同時向個體進行投與，或在使得各藥劑對患者之作用可存在重疊及/或個體在某一時間點同時暴露於兩者的時間間隔內向個體進行投與。在一些實施例中，其在彼此間隔約60、30、15、10、5或1分鐘內或在與至少一次給予一或多種其他藥劑間隔約24小時、12小時、6小時、3小時內進行投與。在一些實施例中，投藥以重疊給藥方案發生。如本文所用，術語「給藥方案」係指在時間上間隔開之複數個劑量。此類劑量可以規則時間間隔發生，或可包括一或多次投藥遺漏。在一些實施例中，藥劑投藥以在一起足夠緊密的程度間隔開以使得達成組合(例如協同)作用。
改善 ：如本文所用，術語「改善(amelioration/ameliorating)」係指病狀或疾病之至少一種指標的嚴重程度減輕。舉例而言，在神經退化病症之情形下，改善包括神經元損失之減少。
動物 ：如本文所用，術語「動物」係指動物界之任何成員。在一些實施例中，「動物」係指處於任何發育階段之人類。在一些實施例中，「動物」係指處於任何發育階段之非人類動物。在某些實施例中，非人類動物為哺乳動物(例如嚙齒類動物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、貓、綿羊、家牛、靈長類動物或豬)。在一些具體例中，動物包括(但不限於)哺乳動物、鳥類、爬行動物、兩棲動物、魚類及蠕蟲。在一些實施例中，動物為基因轉殖動物、經基因工程改造之動物或純系。
反義股 ：如本文所用，術語siRNA分子之「反義股」或「第一股」或「引導股」係指與受靶向以用於靜默之基因之mRNA的約10-50個核苷酸(例如約15-30、16-25、18-23或19-22個核苷酸)之部分大體上互補的股。反義股或第一股具有與所需標靶mRNA序列充分互補以引導標靶特異性之靜默的序列，例如互補性足以藉由RNAi機制或過程觸發所需標靶mRNA之破壞。
大致 ：如本文所用，在應用於一或多個所關注之值時，術語「大致」或「約」係指與所陳述之參考值相似的值。在某些實施例中，除非另外陳述或以其他方式自上下文顯而易見，否則術語「大致」或「約」係指在任一方向(大於或小於)上處於所述參考值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或小於1%內的一系列值(除非此類數字將超出可能值之100%)。
與…締合 ：如本文所用，當關於兩個或超過兩個部分使用時，術語「與…締合」、「結合」、「連接」、「附接」及「繫留」意謂該等部分直接或經由一或多個充當連接劑之額外部分而在物理上彼此締合或連接，以形成足夠穩定之結構以使得該等部分在使用該結構之條件(例如生理學條件)下保持在物理上締合。「締合」不必絕對地經由直接共價化學鍵結進行。其亦可表明離子鍵或氫鍵或基於雜化之連接性足夠穩定以使得「締合」之實體保持在物理上締合。
雙功能性 ：如本文所用，術語「雙功能性」係指任何物質、分子或部分能夠具有或維持至少兩種功能。該等功能可影響相同結果或不同結果。產生該功能之結構可相同或不同。
生物學活性 ：如本文所用，片語「生物學活性」係指任何物質(例如AAV)在生物系統及/或生物體中具有活性之特徵。舉例而言，當向生物體投與時對該生物體具有生物學作用之物質視為具有生物學活性。在特定實施例中，若本發明之多核苷酸的即使一部分仍具有生物學活性或模擬視為生物學相關之活性，則該等多核苷酸可視為具有生物學活性。
生物系統 ：如本文所用，術語「生物系統」係指在一起起作用以在細胞膜、細胞隔室、細胞、組織、器官、器官系統、多細胞生物體或任何生物性實體內執行某一生物任務的器官、組織、細胞、細胞內組分、蛋白質、核酸、分子(包括(但不限於)生物分子)之群組。在一些實施例中，生物系統為包含細胞內及/或細胞外細胞信號傳導生物分子之細胞信號傳導路徑。在一些實施例中，生物系統包含細胞外/細胞基質及/或細胞微環境(niche)內之生長因子信號傳導事件。
生物分子 ：如本文所用，術語「生物分子」為基於胺基酸\基於核酸\基於碳水化合物或基於脂質之任何天然分子，及其類似物。
互補及大體上互補 ：如本文所用，術語「互補」係指多核苷酸能夠彼此形成鹼基對。鹼基對通常由反平行多核苷酸股中之核苷酸單元之間的氫鍵形成。互補多核苷酸股可以沃森-克里克方式(例如，A與T，A與U，C與G)或以允許形成雙螺旋之任何其他方式形成鹼基對。如熟習此項技術者所知，當與DNA相對使用RNA時，尿嘧啶而非胸腺嘧啶為視為與腺苷互補之鹼基。然而，除非另外陳述，否則當在本發明之上下文中標示U時，暗示能夠取代T。完美互補性或100%互補性係指一個多核苷酸股之各核苷酸單元可與第二多核苷酸股之核苷酸單元形成氫鍵的情況。次完美互補性係指兩個股之一些但並非所有核苷酸單元可彼此形成氫鍵的情況。舉例而言，對於兩種20聚體，若各股上僅兩個鹼基對可彼此形成氫鍵，則該等多核苷酸股展現10%互補性。在同一實例中，若各股上18個鹼基對可彼此形成氫鍵，則該等多核苷酸股展現90%互補性。如本文所用，術語「大體上互補」意謂siRNA之序列(例如在反義股中)足以結合所需標靶mRNA及觸發該標靶mRNA之RNA靜默。
化合物 ：如本文所用，術語「化合物」係指獨特化學實體。在一些實施例中，特定化合物可以一或多種異構形式或同位素形式存在(包括(但不限於)立體異構體、幾何異構體及同位素)。在一些實施例中，化合物以僅單一此類形式進行提供或利用。在一些實施例中，化合物以兩種或超過兩種此類形式之混合物的形式進行提供或利用(包括(但不限於)立體異構體之外消旋混合物)。熟習此項技術者瞭解，一些化合物以不同此類形式存在，展示不同特性及/或活性(包括(但不限於)生物活性)。在此類情況下，選擇或避免根據本發明使用的特定形式之化合物處於一般技術者之技能內。舉例而言，含有經不對稱取代之碳原子的化合物可以光學活性或外消旋形式分離。如何自光學活性起始物料製備光學活性形式之方法為此項技術中已知的，諸如藉由解析外消旋混合物或立體選擇性合成來製備。烯烴、C=N雙鍵及其類似物之許多幾何異構體亦可存在於本文所描述之化合物中，且所有此類穩定異構體均涵蓋於本發明中。描述本發明之化合物的順式及反式幾何異構體，且可以異構體混合物或以分開之異構形式對其進行分離。
本發明之化合物亦包括互變異構形式。互變異構形式由單鍵與相鄰雙鍵之調換以及伴隨之質子遷移而產生。互變異構形式包括處於具有相同經驗式及總電荷之異構質子化狀態的質子轉移互變異構體。
本發明之化合物亦包括存在於中間物或最終化合物中之原子的所有同位素。「同位素」係指具有相同原子數但具有不同質量數(由原子核中之不同中子數目產生)之原子。舉例而言，氫之同位素包括氚及氘。
本發明化合物及鹽可藉由常規方法與溶劑或水分子組合製備以形成溶劑合物及水合物。
保守 ：如本文所用，術語「保守」係指多核苷酸序列或多肽序列之核苷酸或胺基酸殘基分別在所比較兩個或超過兩個序列之相同位置中未發生改變。與在序列中其他地方出現之核苷酸或胺基酸相比，相對保守之核苷酸或胺基酸為在更相關之序列當中保留的核苷酸或胺基酸。
在一些實施例中，若兩個或超過兩個序列彼此100%一致，則將其稱為「完全保守」。在一些實施例中，若兩個或超過兩個序列彼此至少70%一致、至少80%一致、至少90%一致或至少95%一致，則將其稱為「高度保守」。在一些實施例中，若兩個或超過兩個序列彼此約70%一致、約80%一致、約90%一致、約95%、約98%或約99%一致，則將其稱為「高度保守」。在一些實施例中，若兩個或超過兩個序列彼此至少30%一致、至少40%一致、至少50%一致、至少60%一致、至少70%一致、至少80%一致、至少90%一致或至少95%一致，則將其稱為「保守」。在一些實施例中，若兩個或超過兩個序列彼此約30%一致、約40%一致、約50%一致、約60%一致、約70%一致、約80%一致、約90%一致、約95%一致、約98%一致或約99%一致，則將其稱為「保守」。序列之保守可應用於寡核苷酸、多核苷酸或多肽之整個長度，或可應用於其一部分、區域或特徵。
在一個實施例中，保守序列不為連續的。熟習此項技術者能夠瞭解如何在序列之間存在連續比對空隙時達成比對及如何比對對應之殘基而不經受所存在之插入或缺失。
遞送 ：如本文所用，「遞送」係指向標靶遞送化合物，諸如小病毒(例如AAV)及/或AAV化合物、物質、實體、部分、負荷或有效負載的行為或方式。此類標靶可為細胞、組織、器官、生物體或系統(不論是生物系統還是產生系統)。
遞送劑 ：如本文所用，「遞送劑」係指至少部分地促進多核苷酸及/或一或多種物質(包括(但不限於)本發明之化合物及/或組合物，例如病毒顆粒或表現載體)向靶細胞之活體內及/或活體外遞送的任何藥劑或物質。
失穩 ：如本文所用，術語「失穩」、「失穩化」或「失穩化區域」意謂穩定性比相同區域或分子之起始、參考、野生型或原生形式更小的區域或分子。
可偵測標記 ：如本文所用，「可偵測標記」係指容易藉由此項技術中已知之方法偵測的與另一個實體附接、併入或締合之一或多種標記物、信號或部分，該等方法包括放射照相術、螢光、化學發光、酶活性、吸光度免疫偵測及其類似方法。可偵測標記可包括放射性同位素、螢光團、發色團、酶、染料、金屬離子、配位體(諸如生物素、抗生物素蛋白、抗生蛋白鏈菌素及半抗原)、量子點及其類似物。可偵測標記可位於其所附接、併入或締合之實體中的任何位置處。舉例而言，當附接肽或蛋白質、併入於其中或與其締合時，該等可偵測標記可處於胺基酸、肽或蛋白質內或位於N端或C端處。
給藥方案 ：如本文所用，「給藥方案」為投藥時程或醫師確定之治療、預防或姑息性照護方案。
有效量 ：如本文所用，術語藥劑之「有效量」為足以實現有益或所需結果之量，舉例而言，在向個體細胞進行單劑量或多劑量投藥時，在治癒、緩解、減輕或改善病症之一或多種症狀方面實現臨床結果，且因此，「有效量」視其所應用之情形而定。舉例而言，在投與治療帕金森氏症之藥劑的情形下，藥劑之有效量為例如與在未投與藥劑的情況下所獲得之反應相比，足以達成如本文所定義之帕金森氏症治療的量。
囊封 ：如本文所用，術語「囊封」意謂封入、包圍或包覆。
經工程改造 ：如本文所用，當實施例經設計以具有與起始點、野生型或原生分子不同之特徵或特性(不論是結構還是化學)時，該等實施例「經工程改造」。因此，經工程改造之藥劑或實體為其設計及/或產生包括人手行為的彼等藥劑或實體。
抗原決定基 ：如本文所用，「抗原決定基」係指分子上能夠與生物分子相互作用之表面或區域。舉例而言，蛋白質可含有與抗體(例如生物分子)相互作用之一或多個胺基酸(例如抗原決定基)。在一些實施例中，當提及蛋白質或蛋白質模組時，抗原決定基可包含胺基酸之線性序列段或由經摺疊胺基酸鏈形成之三維結構。
表現 ：如本文所用，核酸序列之「表現」係指以下事件中之一或多者：(1)自DNA序列產生RNA模板(例如藉由轉錄)；(2)加工RNA轉錄物(例如藉由剪接、編輯、5'封蓋形成及/或3'端加工)；(3)將RNA轉譯成多肽或蛋白質；(4)使多肽或蛋白質摺疊；及(5)對多肽或蛋白質進行轉譯後修飾。
特徵 (feature) ：如本文所用，「特徵」係指特徵(characteristic)、特性一種獨特要素。
調配物 ：如本文所用，「調配物」包括本發明之至少一種多核苷酸及/或化合物及/或組合物(例如載體、AAV顆粒等)及遞送劑。
片段 ：如本文所用，「片段」係指整體之連續部分。舉例而言，蛋白質之片段可包含藉由使自經培養細胞分離之全長蛋白質消化而獲得的多肽。在一些實施例中，蛋白質之片段包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、250或超過250個胺基酸。在一些實施例中，抗體之片段包括經受酶消化或由此合成之抗體部分。
功能性 ：如本文所用，「功能性」生物分子為具有展現其特徵所在之特性及/或活性的結構及呈展現其特徵所在之特性及/或活性的形式的生物分子及/或實體。
基因表現 ：術語「基因表現」係指核酸序列進行成功轉錄且在大部分情況下進行成功轉譯以產生蛋白質或肽的過程。為了清楚起見，當提及「基因表現」之量測時，此應理解為意謂量測可為量測轉錄之核酸產物(例如RNA或mRNA)或量測轉譯之胺基酸產物(例如多肽或肽)。量測RNA、mRNA、多肽及肽之量或含量的方法為此項技術中熟知的。
同源性 ：如本文所用，術語「同源性」係指聚合性分子之間，例如核酸分子(例如DNA分子及/或RNA分子)之間及/或多肽分子之間的整體相關性。在一些實施例中，若聚合性分子之序列至少25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致或相似，則將其視為彼此「同源」。術語「同源」必然係指在至少兩個序列(多核苷酸或多肽序列)之間比較。根據本發明，若兩個多核苷酸序列編碼之多肽對於至少一個具有至少約20個胺基酸之序列段至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或甚至99%一致，則將該等多核苷酸序列視為同源。在一些實施例中，同源多核苷酸序列之特徵在於能夠編碼具有至少4-5個特別指定之胺基酸的序列段。對於長度小於60個核苷酸之多核苷酸序列，同源性通常由能夠編碼具有至少4-5個特別指定之胺基酸的序列段來確定。根據本發明，若兩個蛋白質序列對於至少一個具有至少約20個胺基酸之序列段至少約50%、60%、70%、80%或90%一致，則將該等蛋白質視為同源。在許多實施例中，同源蛋白質可展示較大程度之整體同源性及在至少一個具有至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50或超過50個胺基酸之短序列段內的較高程度之同源性。在許多實施例中，同源蛋白質共有一或多個特徵序列元件。如本文所用，術語「特徵序列元件」係指存在於相關蛋白質中之基元。在一些實施例中，此類基元之存在與特定活性(諸如生物活性)相關。
一致性 ：如本文所用，術語「一致性」係指聚合性分子之間，例如寡核苷酸及/或多核苷酸分子(例如DNA分子及/或RNA分子)之間及/或多肽分子之間的整體相關性。舉例而言，兩個多核苷酸序列之一致性百分比的計算可藉由出於最佳比較目的比對該兩個序列來執行(例如，可將空隙引入第一及第二核酸序列中之一或兩者中以便最佳比對且出於比較目的可忽略非一致序列)。在某些具體例中，出於比較目的比對之序列的長度為參考序列之長度的至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或100%。隨後比較對應核苷酸位置處之核苷酸。當第一序列中之位置經與第二序列中之對應位置相同的核苷酸佔據時，則所述分子在所述位置上一致。在考慮到需要引入以供用於最佳比對兩個序列的空隙之數目及各空隙之長度的情況下，該兩個序列之間的一致性百分比為該等序列共有之一致位置之數目的函數。可使用數學演算法來實現序列比較及兩個序列之間一致性百分比的確定。舉例而言，兩個核苷酸序列之間的一致性百分比可使用以下方法來確定，諸如Computational Molecular Biology, Lesk, A. M.編, Oxford University Press, New York, 1988；Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W.編, Academic Press, New York, 1993；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987；Computer Analysis of Sequence Data, 第I部分, Griffin, A. M.及Griffin, H. G.編, Humana Press, New Jersey, 1994；及Sequence Analysis Primer, Gribskov, M.及Devereux, J.編, M Stockton Press, New York, 1991中所描述之方法；該等文獻中之每一者均以全文引用之方式併入本文中。舉例而言，兩個核苷酸序列之間的一致性百分比可例如使用Meyers及Miller (CABIOS, 1989, 4:11-17)之演算法來確定，該演算法已併入使用PAM120權數殘基表、空隙長度罰分12及空隙罰分4之ALIGN程式(2.0版)中。或者，兩個核苷酸序列之間的一致性百分比可使用GCG套裝軟體中之GAP程式，使用NWSgapdna.CMP矩陣來確定。常用以確定序列之間一致性百分比的方法包括(但不限於) Carillo, H.及Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48:1073 (1988)中所揭示之彼等方法；該文獻以全文引用之方式併入本文中。用於確定一致性之技術編碼在公開可獲得之電腦程式中。確定兩個序列之間同源性的例示性電腦軟體包括(但不限於) GCG套裝程式(Devereux, J.等人,Nucleic Acids Research , 12(1), 387 (1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA (Altschul, S. F.等人,J. Molec. Biol. , 215, 403 (1990))。
抑制基因表現 ：如本文所用，片語「抑制基因表現」意謂引起基因表現產物之量減少。表現產物可為自基因轉錄之RNA (例如mRNA)或由自基因轉錄之mRNA轉譯的多肽。通常，mRNA含量之減少導致自其轉譯之多肽的含量減少。表現量可使用量測mRNA或蛋白質之標準技術來確定。
活體外 ：如本文所用，術語「活體外」係指發生在人工環境中(例如試管或反應容器中、細胞培養物中、皮氏培養皿中等)而非發生在生物體(例如動物、植物或微生物)內的事件。
活體內 ：如本文所用，術語「活體內」係指發生在生物體(例如動物、植物、或微生物或其細胞或組織)內之事件。
經分離 (isolated) ：如本文所用，術語「經分離(isolated)」與「經分離(separated)」同義，但其攜有分離係藉由人手進行之推斷。在一個實施例中，經分離之物質或實體為已與其先前締合(不論是在自然中還是在實驗環境中)之至少一些組分分離的物質或實體。經分離之物質關於其曾締合之物質的純度水準可變化。經分離之物質及/或實體可與其最初締合之其他組分的至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或超過90%分離。在一些實施例中，經分離之藥劑為約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或超過約99%純。如本文中所用，若物質大體上不含其他組分，則該物質為「純的」。
大體上經分離 ：「大體上經分離」意謂化合物自其中形成或偵測到該化合物之環境大體上分離。部分分離可包括例如以本發明之化合物增濃的組合物。大體上分離可包括含有本發明化合物或其鹽之至少約50重量%、至少約60重量%、至少約70重量%、至少約80重量%、至少約90重量%、至少約95重量%、至少約97重量%或至少約99重量%的組合物。用於分離化合物及其鹽之方法為此項技術中之常規方法。在一些實施例中，分離物質或實體包括破壞化學締合及/或化學鍵。在一些實施例中，分離僅包括與經分離之物質或實體先前組合之組分分離，而不包括此類破壞。
經修飾 ：如本文所用，術語「經修飾」係指與親本或參考分子或實體相比，本發明之分子或實體的狀態或結構發生變化。分子可以包括化學上、結構上及功能上之許多方式進行修飾。在一些實施例中，本發明之化合物及/或組合物藉由引入非天然胺基酸或非天然核苷酸來進行修飾。
突變 ：如本文所用，術語「突變」係指變化及/或改變。在一些實施例中，突變可為對蛋白質(包括肽及多肽)及/或核酸(包括多核酸)進行的變化及/或改變。在一些實施例中，突變包含對蛋白質及/或核酸序列進行的變化及/或改變。此類變化及/或改變可包含一或多個胺基酸(在蛋白質及/或肽的情況下)及/或核苷酸(在核酸及多核酸的情況下)之添加、取代及或缺失。在其中突變包含胺基酸及/或核苷酸之添加及/或取代的實施例中，此類添加及/或取代可包含1或多個胺基酸及/或核苷酸殘基，且可包括經修飾之胺基酸及/或核苷酸。
天然存在 ：如本文所用，「天然存在」意謂在不進行人工輔助或人手參與的情況下存在於自然中
非人類脊椎動物 ：如本文所用，「非人類脊椎動物」包括除了智人(Homo sapiens )之外的所有脊椎動物，包括野生及家養物種。非人類脊椎動物之實例包括(但不限於)哺乳動物，諸如羊駝、爪哇牛(banteng)、野牛、駱駝、貓、家牛、鹿、狗、驢、大額牛(gayal)、山羊、天竺鼠、馬、駱馬、騾、豬、兔、馴鹿、綿羊、水牛及犛牛(yak)。
核酸 ：如本文所用，術語「核酸」、「多核苷酸」及「寡核苷酸」係指由以下構成之任何核酸聚合物：多聚脫氧核糖核苷酸(含有2-脫氧-D-核糖)、或多聚核糖核苷酸(含有D-核糖)、或本身為嘌呤或嘧啶鹼基或經修飾嘌呤或嘧啶鹼基之N醣苷的任何其他類型之多核苷酸。在術語「核酸」、「多核苷酸」及「寡核苷酸」之間不存在預期長度區別，且此等術語將可互換使用。此等術語僅係指分子之一級結構。因此，此等術語包括雙股及單股DNA，以及雙股及單股RNA。
脫靶 (off-target) ：如本文所用，「脫靶」係指對任何一或多種標靶、基因及/或細胞轉錄物之任何非預期作用。
開放閱讀框架 (open reading frame) ：如本文所用，「開放閱讀框架」或「ORF」係指在給定閱讀框架中不含有終止密碼子之序列。
可操作地連接 ：如本文所用，片語「可操作地連接」係指在兩個或超過兩個分子、構築體、轉錄物、實體、部分或其類似物之間的功能性連接。
顆粒 ：如本文所用，「顆粒」為包含至少兩種組分，即蛋白質衣殼及封入該衣殼內之多核苷酸序列的病毒。
患者 ：如本文所用，「患者」係指可能尋求或需要治療、要求進行治療、接受治療、將接受治療之個體，或處於針對特定疾病或病狀(諸如帕金森氏症)經過訓練之專業人員的照護下的個體。
有效負載 ：如本文所用，「有效負載」係指由病毒基因組編碼或在其內部編碼之一或多個多核苷酸或多核苷酸區域、或此類多核苷酸或多核苷酸區域之表現產物，例如轉殖基因(一種編碼多肽或多元多肽之多核苷酸)或調節性核酸或調控性核酸。
有效負載構築體 ：如本文所用，「有效負載構築體」為編碼或包含在一側或兩側由反向末端重複(ITR)序列側接之有效負載的一或多個多核苷酸區域。有效負載構築體為在病毒產生細胞中複製以產生病毒基因組之模板。
有效負載構築體載體 ：如本文所用，「有效負載構築體載體」為編碼或包含有效負載構築體及用於在細菌細胞中複製及表現之調控性區域的載體。
有效負載構築體表現載體 ：如本文所用，「有效負載構築體表現載體」為以下載體，其編碼或包含有效負載構築體且進一步包括一或多個編碼或包含用於在病毒複製細胞中進行病毒表現之組分的多核苷酸區域。
肽 ：如本文所用，「肽」小於或等於50個胺基酸長，例如為約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸長。
醫藥學上可接受 ：片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷範疇內，適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相匹配的彼等化合物、物料、組合物及/或劑型。
醫藥學上可接受之賦形劑 ：如本文所用，片語「醫藥學上可接受之賦形劑」係指除化合物及/或活性劑(例如，如本文所描述)以外存在於醫藥組合物中且具有在個體(諸如患者)中大體上無毒性且無發炎性之特性的任何成分。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑為能夠使活性劑懸浮及/或溶解之媒劑。賦形劑可包括例如：抗黏劑、抗氧化劑、黏合劑、包衣、壓縮助劑、崩解劑、染料(顏料)、潤膚劑、乳化劑、填充劑(稀釋劑)、成膜劑或包衣、調味劑、芳香劑、助滑劑(流動增強劑)、潤滑劑、防腐劑、印刷油墨、吸附劑、懸浮劑或分散劑、甜味劑或水合用水。例示性賦形劑包括(但不限於)：丁基化羥基甲苯(BHT)、碳酸鈣、磷酸鈣(磷酸氫二鈣)、硬脂酸鈣、交聯羧甲纖維素、交聯聚乙烯吡咯啶酮、檸檬酸、交聯普維酮(crospovidone)、半胱胺酸、乙基纖維素、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乳糖、硬脂酸鎂、麥芽糖醇、甘露糖醇、甲硫胺酸、甲基纖維素、對羥基苯甲酸甲酯、微晶纖維素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮、普維酮(povidone)、預膠凝化澱粉、對羥基苯甲酸丙酯、棕櫚酸視黃酯、蟲膠、二氧化矽、羧甲基纖維素鈉、檸檬酸鈉、羥基乙酸澱粉鈉、山梨糖醇、澱粉(玉米)、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化鈦、維生素A、維生素E、維生素C及木糖醇。
醫藥學上可接受之鹽 ：本文所描述之化合物的醫藥學上可接受之鹽。如本文所用，「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示之化合物的衍生物或形式，其中母體化合物藉由將現有酸或鹼部分轉化成其鹽形式來進行修飾(例如，如藉由使自由鹼基團與適合之有機酸反應來產生)。醫藥學上可接受之鹽的實例包括(但不限於)鹼性殘基(諸如胺)之無機酸鹽或有機酸鹽；酸性殘基(諸如羧酸)之鹼鹽或有機鹽；及其類似物。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、乙酸、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯磺酸、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及其類似物。代表性鹼或鹼土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂及其類似物，以及無毒銨、四級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺及其類似物。本發明的醫藥學上可接受之鹽包括例如由無毒無機酸或有機酸形成的母體化合物之習知無毒鹽。在一些實施例中，本發明的醫藥學上可接受之鹽可為藉由習知化學方法由含有鹼性或酸性部分之母體化合物製備的合成鹽。一般而言，此類鹽可藉由使此等化合物之游離酸或鹼形式與化學計量之適當鹼或酸在水中或在有機溶劑中或在兩者之混合物中反應來製備；一般而言，非水性介質(如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈)較佳。適合之鹽的清單見於Remington's Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, 第1418頁；Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl及C.G. Wermuth (編), Wiley-VCH, 2008，及Berge等人, Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)中；該等文獻中之每一者均以全文引用之方式併入本文中。
醫藥學上可接受之溶劑合物 ：如本文所用，術語「醫藥學上可接受之溶劑合物」係指其中適合溶劑之分子併入晶格中的本發明化合物之結晶形式。適合溶劑在所投與之劑量下為生理學上可耐受的。舉例而言，溶劑合物可藉由自包括有機溶劑、水或其混合物之溶液結晶、再結晶或沈澱來加以製備。適合溶劑之實例為乙醇、水(例如單水合物、二水合物及三水合物)、N-甲基吡咯啶酮(NMP)、二甲亞碸(DMSO)、N,N'-二甲基甲醯胺(DMF)、N,N'-二甲基乙醯胺(DMAC)、1,3-二甲基-2-咪唑啶酮(DMEU)、1,3-二甲基-3,4,5,6-四氫-2-(1H)嘧啶酮(DMPU)、乙腈(ACN)、丙二醇、乙酸乙酯、苯甲醇、2-吡咯啶酮、苯甲酸苯甲酯及其類似物。當水為溶劑時，該溶劑合物稱為「水合物」。在一些實施例中，併入溶劑合物中之溶劑的類型或含量對於投與該溶劑合物(例如，以醫藥組合物之單位劑型投與)之生物體為生理學上可耐受的。
藥物動力學 ：如本文所用，「藥物動力學」係指分子或化合物在涉及確定向活生物體投與之物質的結局時的任何一或多種特性。藥物動力學分成若干領域，包括吸收、分佈、代謝及排泄之程度及速率。此通常稱為ADME，其中：(A)吸收為物質進入血液循環之過程；(D)分佈為物質在整個體液及身體組織中之分散或擴散；(M)代謝(或生物轉化)為母體化合物轉化成子體代謝物之不可逆轉化；及(E)排泄(或消除)係指自身體消除物質。在罕見情況下，一些藥物在身體組織中不可逆地積聚。
物理化學 ：如本文所用，「物理化學」意謂具有或涉及物理及/或化學性質。
預防 (preventing) ：如本文所用，術語「預防」係指部分或完全地延遲感染、疾病、病症及/或病狀之發作；部分或完全地延遲特定感染、疾病、病症及/或病狀之一或多種症狀、特徵或臨床表現特徵的發作；部分或完全地延遲特定感染、疾病、病症及/或病狀之一或多種症狀、特徵或表現特徵的發作；部分或完全地延遲來自感染、特定疾病、病症及/或病狀之進展；及/或降低患上與感染、疾病、病症及/或病狀相關聯之病變的風險，該感染、疾病、病症及/或病狀諸如帕金森氏症。
前藥 ：本發明亦包括本文所描述之化合物的前藥。如本文所用，「前藥」係指呈基於任何物質、分子或實體之形式以在化學或物理改變時充當治療劑的物質、分子或實體。前藥可藉由以一定方式共價鍵結或鉗合來得到，且其在向哺乳動物個體投與之前、投與時或投與之後釋放或轉化成活性藥物部分。前藥之製備及使用論述於T. Higuchi及V. Stella, 「Pro-drugs as Novel Delivery Systems」, A.C.S. Symposium Series 第14卷及Bioreversible Carriers in Drug Design , Edward B. Roche編, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987中，其均特此以全文引用之方式併入。
增殖 ：如本文所用，術語「增殖」意謂生長、擴增、複製或增加，或引起生長、擴增、複製或增加。「增殖性」意謂具有增殖能力。「抗增殖性」意謂具有與增殖特性相對或相反之特性。
預防 (prophylactic) ：如本文所用，「預防」係指用於預防疾病擴散之治療或作用時程。
預防 (prophylaxis) ：如本文所用，「預防」係指維持健康狀況及預防疾病擴散而採用之措施。
所關注之蛋白質 ：如本文所用，術語「所關注之蛋白質」或「所需蛋白質」包括本文所提供之彼等蛋白質及其片段、突變體、變異體及改變形式。
經純化 ：如本文所用，「純化(purify)」、「經純化(purified)」、「純化(purification)」意謂自不合需要之組分、物料污物、混雜物或缺陷品進行大體上純化或清潔。「經純化」係指純之狀態。「純化」係指進行純化之過程。
區域 (region) ：如本文所用，術語「區域」係指區(zone)或一般區域(area)。在一些實施例中，當提及蛋白質或蛋白質模組時，區域可包含沿著蛋白質蛋白質模組之線性胺基酸序列，或可包含三維區域、抗原決定基及/或抗原決定基簇。在一些實施例中，區域包含末端區域。如本文所用，術語「末端區域」係指位於給定藥劑之端或末端處的區域。當提及蛋白質時，末端區域可包含N端及/或C端。N端係指包含具有自由胺基之胺基酸的蛋白質末端。C端係指包含具有自由羧基之胺基酸的蛋白質末端。N端及/或C端區域可因此包含N端及/或C端以及周圍胺基酸。在一些實施例中，N端及/或C端區域包含約3個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約40個胺基酸、約10個胺基酸至約50個胺基酸、約20個胺基酸至約100個胺基酸及/或至少100個胺基酸。在一些實施例中，N端區域可包含包括N端但不包括C端的任何長度之胺基酸。在一些實施例中，C端區域可包含包括C端但不包含N端的任何長度之胺基酸。
在一些實施例中，當提及多核苷酸時，區域可包含沿著多核苷酸之線性核酸序列，或可包含三維區域、二級結構或三級結構。在一些實施例中，區域包含末端區域。如本文所用，術語「末端區域」係指位於給定藥劑之端或末端處的區域。當提及多核苷酸時，末端區域可包含5'端及3'端。5'端係指包含具有自由磷酸酯基團之核酸的多核苷酸末端。3'端係指包含具有自由羥基之核酸的多核苷酸末端。5'及3'區域可因此包含5'端及3'端以及周圍核酸。在一些實施例中，5'端及3'端區域包含約9個核酸至約90個核酸、約15個核酸至約120個核酸、約30個核酸至約150個核酸、約60個核酸至約300個核酸及/或至少300個核酸。在一些實施例中，5'區域可包含包括5'端但不包括3'端的任何長度之核酸。在一些實施例中，3'區域可包含包括3'端但不包括5'端的任何長度之核酸。
RNA 或 RNA 分子 /DNA 或 D NA 分子 ：如本文所用，術語「RNA」或「RNA分子」或「核糖核酸分子」係指核糖核苷酸之聚合物；術語「DNA」或「DNA分子」或「脫氧核糖核酸分子」係指脫氧核糖核苷酸之聚合物。DNA及RNA可分別例如藉由DNA複製及DNA轉錄天然合成；或化學合成。DNA及RNA可為單股(亦即分別為ssRNA或ssDNA)或多股(例如雙股，亦即分別為dsRNA及dsDNA)。如本文所用，術語「mRNA」或「信使RNA」係指編碼一或多種多肽股之胺基酸序列的單股RNA。
RNA 干擾 ：如本文所用，術語「RNA干擾」或「RNAi」係指由RNA分子介導的引起對應蛋白質編碼基因之表現受到抑制或干擾或「靜默」的序列特異性調控機制。
樣品 ：如本文所用，術語「樣品」係指獲自來源及/或供用於分析或加工之等分試樣、子組或部分。在一些實施例中，樣品來自生物來源，諸如組織、細胞或組分部分(例如體液，包括(但不限於)血液、黏液、淋巴液、滑液、腦脊髓液、唾液、羊膜液、羊膜臍帶血、尿液、陰道液及精液)。在一些實施例中，樣品可為或包含由完整生物體或其組織、細胞或組分部分之子組或其級分或部分製備的均質物、溶胞物或提取物，包括(但不限於)例如血漿、血清、脊髓液、淋巴液，皮膚、呼吸道、腸道及生殖泌尿道之外部切片，眼淚、唾液、乳汁、血細胞、腫瘤或器官。在一些實施例中，樣品為或包含培養基，諸如營養物培養液或凝膠，其可含有細胞組分，諸如蛋白質或核酸分子。在一些實施例中，「初級」樣品為來源之等分試樣。在一些實施例中，使初級樣品經受一或多個加工(例如分離、純化等)步驟以製備用於分析或其他用途之樣品。
自互補病毒顆粒 ：如本文所用，「自互補病毒顆粒」為包含至少兩種組分，即蛋白質衣殼及封入該衣殼內之編碼自互補基因組之多核苷酸序列的顆粒。
有義股 ：如本文所用，術語siRNA分子之「有義股」或「第二股」或「隨從股」係指與反義股或第一股互補之股。siRNA分子之反義股及有義股雜交以形成雙螺旋結構。如本文所用，「siRNA雙螺旋體」包括與受靶向以用於靜默之基因之mRNA的約10-50個核苷酸之部分具有足夠互補性的siRNA股，及與該siRNA股具有足夠互補性以形成雙螺旋體的siRNA股。
信號序列 ：如本文所用，片語「信號序列」係指可引導轉運或定位之序列。
單個單位劑量 ：如本文所用，「單個單位劑量」為以一個劑量/一次性/在單個途徑/單個接觸點中投與的任何治療劑之劑量，亦即，單個投藥事件。在一些實施例中，單個單位劑量以離散劑型(例如錠劑、膠囊、貼片、已裝載之注射器、小瓶等)提供。
相似性 ：如本文所用，術語「相似性」係指聚合性分子之間，例如核酸分子(例如DNA分子及/或RNA分子)之間及/或多肽分子之間的整體相關性。聚合性分子彼此之相似性百分比的計算可以與一致性百分比之計算相同的方式執行，除了計算相似性百分比考慮如在此項技術中所理解之保守性取代之外。
小 / 短干擾 RNA ：如本文所用，術語「小/短干擾RNA」或「siRNA」係指能夠引導或介導RNAi的包含介於約5-60個之間之核苷酸(或核苷酸類似物)的RNA分子(或RNA類似物)。較佳地，siRNA分子包含介於約15-30個之間的核苷酸或核苷酸類似物，更佳介於約16-25個之間的核苷酸(或核苷酸類似物)，甚至更佳介於約18-23個之間的核苷酸(或核苷酸類似物)，且甚至更佳介於約19-22個之間的核苷酸(或核苷酸類似物) (例如19、20、21或22個核苷酸或核苷酸類似物。術語「短」siRNA係指包含5-23個核苷酸，較佳21個核苷酸(或核苷酸類似物)，例如19、20、21或22個核苷酸之siRNA。術語「長」siRNA係指包含24-60個核苷酸，較佳約24-25個核苷酸，例如23、24、25或26個核苷酸之siRNA。在一些情況下，短siRNA可包括少於19個核苷酸，例如16、17或18個核苷酸，或少至5個核苷酸，其限制條件為較短的siRNA保留介導RNAi之能力。同樣地，在一些情況下，長siRNA可包括超過26個核苷酸，例如27、28、29、30、35、40、45、50、55或甚至60個核苷酸，其限制條件為較長siRNA保留介導RNAi或轉譯阻遏而不需進一步加工，例如酶加工為短siRNA之能力。siRNA可為單股RNA分子(ss-siRNA)或雙股RNA分子(ds-siRNA)，其包含雜交以形成稱為siRNA雙螺旋體之雙螺旋結構的有義股及反義股。
分次劑量 ：如本文所用，「分次劑量」為將單個單位劑量或每日總劑量分成兩個或超過兩個劑量。
穩定 ：如本文所用，「穩定」係指化合物或實體足夠穩固以經受住自反應混合物中分離得到適用純度且較佳能夠調配成有效治療劑。
穩定化 ：如本文所用，術語「穩定化」、「經穩定化」、「穩定化區域」意謂使之穩定或變穩定。在一些實施例中，相對於絕對值量測穩定性。在一些實施例中，相對於參考化合物或實體量測穩定性。
個體 ：如本文所用，術語「個體」或「患者」係指可例如出於實驗、診斷、預防及/或治療目的而向其投與根據本發明之組合物的任何生物體。典型個體包括動物(例如哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、兔、非人類靈長類及人類)及/或植物。在一些實施例中，個體可為嬰兒、新生兒或小於12歲之兒童。在一些實施例中，個體可未出生。
大體上 ：如本文所用，術語「大體上」係指展現所關注特徵或特性之總的或近總的程度或等級之定性狀況。生物技術中之一般技術者應理解，生物及化學現象很少(若曾有)進行完全及/或繼續進行至完全或達成或避免絕對結果。因此，術語「大體上」在本文中用以獲得許多生物及化學現象中所固有的完整性之潛在缺乏。
大體上相等 ：如本文所用，在其涉及給藥之間的時間差異時，該術語意謂加/減2%。
大體上同時 ：如本文所用且在其涉及複數個劑量時，該術語通常意謂在約2秒內。
罹患 ：「罹患」疾病、病症及/或病狀之個體已診斷患有疾病、病症及/或病狀(諸如帕金森氏症)或顯示其一或多種症狀。
易患 ：「易患」疾病、病症及/或病狀之個體尚未診斷患有該疾病、病症及/或病狀及/或可能未展現其症狀，但具有患上疾病或其症狀之傾向。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或病狀(例如癌症)之個體的特徵可在於以下中之一或多者：(1)與患上該疾病、病症及/或病狀相關聯之基因突變；(2)與患上該疾病、病症及/或病狀相關聯之遺傳多態性；(3)與該疾病、病症及/或病狀相關聯之蛋白質及/或核酸的表現及/或活性增加及/或減少；(4)與患上該疾病、病症及/或病狀相關聯之習慣及/或生活方式；(5)該疾病、病症及/或病狀之家族病史；及(6)暴露於及/或感染有與患上該疾病、病症及/或病狀相關聯之微生物。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或病狀之個體將患上該疾病、病症及/或病狀。在一些實施例中，易患疾病、病症及/或病狀之個體將不患上該疾病、病症及/或病狀。
持續釋放 ：如本文所用，術語「持續釋放」係指醫藥組合物或化合物釋放曲線在具體時間段內符合一定釋放速率。
合成 ：術語「合成」意謂藉由人手產生、製備及/或製造。多核苷酸或多肽或本發明之其他分子的合成可為化學或酶合成。
靶向 ：如本文所用，「靶向」意謂設計及選擇將與靶核酸雜交且誘導所需作用之核酸序列的過程。
靶細胞 ：如本文所用，「靶細胞」係指任何一或多種所關注之細胞。細胞可見於活體外、活體內、原位或生物體之組織或器官中。生物體可為動物，較佳為哺乳動物，更佳為人類，且最佳為患者。
治療劑 ：術語「治療劑」係指當向個體投與時，具有治療、診斷及/或預防作用及/或引起所需生物及/或藥理學作用之任何藥劑。
治療有效量 ：如本文所用，術語「治療有效量」意謂當向罹患或易患感染、疾病、病症及/或病狀(諸如帕金森氏症)之個體投與時，足以治療該感染、疾病、病症及/或病狀、改善其症狀、對其進行診斷、預防及/或延遲其發作的待遞送之藥劑(例如核酸、藥物、治療劑、診斷劑、預防劑等)的量。在一些實施例中，治療有效量將以單劑量形式提供。在一些實施例中，治療有效量在包含複數個劑量之給藥方案中進行投與。熟習此項技術者應瞭解，在一些實施例中，若單位劑型包含在作為此類給藥方案之部分投與時有效的量，則其可視為包含治療有效量之特定藥劑或實體。
治療有效結果 ：如本文所用，術語「治療有效結果」意謂在罹患或易患感染、疾病、病症及/或病狀之個體中足以治療該感染、疾病、病症及/或病狀、改善其症狀、對其進行診斷、預防及/或延遲其發作的結果。
每日總劑量 ：如本文所用，「每日總劑量」為在24小時時段中給予或以處方開具之量。其可以單個單位劑量形式進行投與。
轉染 ：如本文所用，術語「轉染」係指將外源性核酸引入細胞中之方法。轉染方法包括(但不限於)化學方法、物理處理及陽離子型脂質或混合物。
治療 ：如本文所用，術語「治療」係指部分或完全地緩解、改善(ameliorating)、改善(improving)、減輕特定感染、疾病、病症及/或病狀、延遲其發作、抑制其進展、降低其嚴重程度及/或降低其一或多種症狀或特徵的發生率。舉例而言，「治療」癌症可指抑制腫瘤之存活、生長及/或擴散。出於降低患上與疾病、病症及/或病狀(諸如帕金森氏症)相關聯之病變的風險的目的，治療可向未展現疾病、病症及/或病狀之徵象的個體及/或向僅展現疾病、病症及/或病狀之早期徵象的個體進行投與。
未經修飾 ：如本文所用，「未經修飾」係指任何物質、化合物或分子尚未以任何方式變化。未經修飾可指，但並非始終係指生物分子或實體之野生型或原生形式。分子或實體可進行一系列修飾，由此，各經修飾之物質、化合物、分子或實體可充當「未經修飾之」起始分子用於後續修飾。
載體 ：如本文所用，「載體」為轉運、轉導或以其他方式充當異源分子運載體的任何分子或部分。本發明之載體可以重組方式產生，且可係基於及/或可包含腺相關病毒(AAV)親本或參考序列。此類親本或參考AAV序列可充當用於對載體進行工程改造之原始、第二、第三或後續序列。在非限制性實例中，此類親本或參考AAV序列可包含以下序列中之任何一或多者：編碼多肽或多元多肽之多核苷酸序列，該序列可為野生型或自野生型修飾，且該序列可編碼蛋白質、蛋白質域或蛋白質之一或多個子單元的全長或部分序列；包含調節性或調控性核酸之多核苷酸，該序列可為野生型或自野生型修飾；及轉殖基因，其可或可未自野生型修飾；。此等AAV序列可充當一或多個密碼子(在核酸水準)或胺基酸(在多肽水準)之「供體」序列或一或多個密碼子(在核酸水準)或胺基酸(在多肽水準)之「受體」序列。
病毒構築體載體 ：如本文所用，「病毒構築體載體」為包含一或多個編碼或包含Rep及或Cap蛋白質之多核苷酸區域的載體。
病毒構築體表現載體 ：如本文所用，「病毒構築體表現載體」為以下載體：其包含一或多個編碼或包含Rep及或Cap之多核苷酸區域的載體，進一步包括一或多個編碼或包含用於在病毒複製細胞中進行病毒表現之組分的多核苷酸區域。
病毒基因組 ：如本文所用，「病毒基因組」為編碼至少一個反向末端重複序列(ITR)、至少一個調節序列及至少一個有效負載之多核苷酸。病毒基因組藉由自有效負載構築體表現載體複製有效負載構築體來衍生。病毒基因組編碼至少一個有效負載構築體複本。 等效物及範疇
熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗即可確定本文所描述的根據本發明之具體實施例的許多等效物。本發明之範疇不意欲限於以上描述，而是如所附申請專利範圍中所闡述。
在申請專利範圍中，除非相反地指示或以其他方式自上下文顯而易見，否則諸如「一(a/an)」及「該」之冠詞可意謂一或大於一。除非相反地指示或以其他方式自上下文顯而易見，否則若一個、超過一個或所有群成員存在於給定產物或方法中、用於給定產物或方法中或以其他方式與給定產物或方法相關，則在該群的一或多個成員之間包括「或」的申請專利範圍或描述視為滿足。本發明包括其中群中恰好一個成員存在於給定產物或方法中、用於給定產物或方法中或以其他方式與給定產物或方法相關的實施例。本發明包括其中超過一個或所有群成員存在於給定產物或方法中、用於給定產物或方法中或以其他方式與給定產物或方法相關的實施例。
亦應注意，術語「包含」意欲為開放的且容許但不要求包括額外要素或步驟。當本文使用術語「包含」時，亦因此涵蓋及揭示術語「由……組成」。
除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域之一般技術者通常所理解相同之含義。本文描述方法及物料以用於本發明；亦可使用此項技術中已知的其他適合之方法及物料。
在給出範圍的情況下，包括端點。此外，應理解，除非另外指示或以其他方式自上下文及一般技術者之理解顯而易見，否則表示為範圍之值可在本發明之不同實施例中採用所陳述範圍內之任何具體值或子範圍，除非上下文另外明確規定，否則達到該範圍下限之單位的十分之一。
另外，應理解，屬於先前技術的本發明之任何特定實施例均可自技術方案中之任何一或多者明確排除。因為認為此類實施例為一般技術者已知的，所以可對其進行排除，即使未在本文中明確地闡述該排除亦可。不論是否與先前技術之存在相關，本發明之組合物的任何特定實施例(例如，任何核酸或由其編碼之蛋白質；任何產生方法；任何使用方法；等)均可出於任何原因自任何一或多個技術方案排除。
即使未在引用中明確陳述，所引用之所有來源，例如本文所引用之參考文獻、公開案、數據庫、數據庫項及技術仍均以引用之方式併入本申請案中。在所引用之來源與本申請案的陳述衝突的情況下，應以本申請案中之陳述為準。
章節及表格標題不意欲為限制性的。 實例 實例1. 設計有效負載：AADC多核苷酸
AADC多核苷酸經設計以至少包含編碼AADC蛋白質之核酸序列。
一旦經設計，將該序列工程改造或合成或插入於質體或載體中，且向細胞或生物體進行投與。適合之質體或載體為轉導或轉染靶細胞之任何質體或載體。
可使用腺相關病毒(AAV)顆粒。
投藥引起AADC多核苷酸加工以產生AADC蛋白質，該AADC蛋白質改變疾病(在此情況下為帕金森氏症)之病源學。
在一個非限制性實例中，含有本發明之AADC多核苷酸的質體具有CMV啟動子且編碼AADC。在一些實施例中，AADC蛋白質mRNA之開放閱讀框架經密碼子最佳化。
以ITR至ITR列出的適用於AAV顆粒之多核苷酸包括表2中之彼等AADC多核苷酸。 表2. ITR至ITR AADC多核苷酸
給出AADC多核苷酸之各個區域的起始及終止位置，其係相對於表2中所描述之ITR至ITR AADC多核苷酸。在表3中，ITR為反向末端重複序列，MCS為多選殖位點，CMV為細胞巨大病毒，Ie1為即刻早期1，hBglobin為人類β-血球蛋白，AADC為編碼AADC多肽之區域，且poly(A)為多腺苷酸化信號。 表3. AADC多核苷酸之組分區域 實例2. 設計AADC多核苷酸以治療帕金森氏症
AADC多核苷酸經設計以至少包含編碼AADC蛋白質之核酸序列。
一旦經設計，將該序列工程改造或合成或插入於質體或載體中，且向細胞或生物體進行投與。適合之質體或載體為轉導或轉染靶細胞之任何質體或載體。
可使用腺相關病毒(AAV)顆粒。
投藥引起AADC多核苷酸加工以產生AADC蛋白質，該AADC蛋白質改變疾病(在此情況下為帕金森氏症)之病源學。 實例3. 投與AAV顆粒
將AAV顆粒輸注至患有帕金森氏症且鑑別為適合於根據此項技術中已知之方法治療的患者中的黑質，且特定言之，黑質密部(SNpc)及腹側蓋區(VTA)中。
預期用於本文所描述之方法中的一種投藥方法為藉由共同輸注釓特醇(gadoteridol，一種磁共振(MR)對比劑)及T1或T2磁共振成像(MRI)來進行的AAV顆粒組合物之即時對流增強遞送(real-time convection-enhanced delivery，RCD)，其可能預測後續AADC基因表現之區域。如Richardson等人, 2011中所描述，插管置放之準確度及初始輸液分佈可藉由生理鹽水輸注來安全地確定而不顯著地改變示蹤劑之後續分佈(Richardson等人, 2011, Neurosurgery, 69(1):154-163)。T2 RCD提供對未受損傷之腦中之腦實質內對流增強遞送的偵測，且可預測在AAV顆粒輸注之後的轉殖基因之後續分佈。個體在殼核及腦幹中進行生理鹽水輸注/T2採集，緊接著進行釓特醇輸注/T1採集。分析分佈體積及空間模式。在丘腦中在交替T2/T1採集下共同輸注釓特醇及AAV編碼之AADC，且將高強度區域與後續轉殖基因表現之區域相比。預期分佈體積與輸注體積之比在生理鹽水與釓特醇RCD之間相似。空間重疊應在T2與T1影像之間良好相關。第二輸液將遵循與第一輸液相似之時空模式，從而在出現靶外分佈之前填充標靶區域。AADC表現之區域應與在RCD期間觀測到的T1及T2高強度兩者之區域良好相關(Richardson等人, 2011,Neurosurgery , 69(1):154-163)。
將大分子直接對流增強遞送(CED)至大腦實質中為人所知已有超過二十年。CED為表示使用壓力梯度以在大腦實質內產生總體流動的術語，亦即藉由經由直接置放於靶結構中之插管輸注溶液來驅動的大分子在間質液內之對流。此方法允許治療劑藉由繞過血腦屏障且超越簡單擴散而在較大體積之腦組織中均勻分佈(Richardson等人, 2011,Stereotact. Funct. Neurosurg. 89:141-151)。
Salegio等人最近證實具有不同大小之奈米顆粒，包括微胞(大小約15 nm)、AAV (約20-25 nm)及脂質體(約65 nm)在嚙齒動物及NHP之CNS內的分佈(Salegio等人2014,Frontiers in Neuroanatomy , 第8卷, 第9篇文章: 第1-8頁)。簡單注射無法接入血管周系統，且要求使用專門輸注插管，使得恆定壓力能夠在插管端部施加，以使得超出間質靜流體壓力且輸液可向外流動至組織中。簡單針頭產生明顯回流；因此，已開發出抗回流性插管以對抗此傾向。用於MRI引導之對流增強輸注的平台出現進一步優化對血管周流動之機制的理解，且證實脂質體之血管周分佈相對於時間為線性的，曲線之斜率在有髓鞘之區域中為，且停止輸注防止分佈體積進一步擴展。(Richardson等人, 2011,Stereotact. Funct. Neurosurg. 89:141-151；Salegio等人, 2014,Frontiers in Neuroanatomy , 第8卷, 第9篇文章: 第1-8頁)。
已知腦實質內rAAV注射引起穩固但相對局部之轉導。當對由定位於具體解剖區域或解剖迴路之神經病變產生的神經病症嘗試基因療法時，諸如在帕金森氏症的情況下，此類局部遞送方法為有利的。然而，在要求使用更廣泛CNS轉導之治療中，腦實質內注射不切實際。對可歸因於先天性代謝缺陷及/或單基因缺陷之神經病症或影響脊髓運動神經元之彼等神經病症的治療可能要求分別對大比例之大腦或脊髓進行轉導。開發用於載體的侵襲性更小之跨BBB遞送方法為極其重要之努力方向。已報導許多使用已知與各種主動轉運機制(很可能由受體介導)相互作用之分子來輸送蛋白質跨越BBB的嘗試，其結果不同。鑒於可獲得的大量數目之AAV血清型，一或多種血清型可結合能夠轉運AAV衣殼跨越BBB的細胞進入受體(Manfredsson等人, 2009, 「AAV9: a potential blood-brain barrier buster」. Molecular Therapy 17(3):403-405)。 載體及立體定位輸注
立體定位方法可用於以手術方式遞送AADC多核苷酸。儘管患有AADC缺乏症之個體缺乏腎上腺素及去甲腎上腺素(norepinephrine)，但此等患者在手術期間應維持穩定血壓及心跳速率。在手術後電腦斷層攝影術(CT)或MRI掃描中不應存在顯著腦內出血。如在MRI掃描上所示，針道應展示準確注射至黑質密部(SNpc)及腹側蓋區(VTA)中。患者將在手術之後約一週時離開醫院(Hwu, W.L.等人, 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency.Sci. Transl. Med. 第4卷, 134ra61)。
治療個體接受AAV載體組合物載體，其安全地經由兩側輸注遞送至黑質密部(SNpc)及腹側蓋區(VTA)，或者在紋狀體內遞送(至尾核及殼核中)，或遞送至丘腦下核(STN)中，例如視情況使用FDA批准的為臨床應用具體設計之SMARTFLOW®神經心室插管(SurgiVision, Inc.)在存在或不存在CLEARPOINT®系統輔助的情況下遞送，以幫助治療神經外科標靶且觀測到治療劑在大腦中之遞送(參見例如San Sebastian等人, 2014,Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 3: 14049；參見例如Feng及Maguire-Zeiss, 2010,CNS Drugs 24(3):177-192)。
舉例而言，在手術期間，在背外側方向上在黑質密部(SNpc)及腹側蓋區(VTA)中確定彼此足夠分開之兩個靶點，且在磁共振影像上鑑別。在顱骨骨骼之各側中環鑽錐出一個鑽孔，經由其將載體經由雙軌插入途徑注射至兩個靶點中。將含AAV載體之溶液製備成濃度為1.5 × 1012 個載體基因組/毫升，且以1 μl/min注射每點50 μl溶液；各患者接受3 × 1011 個AAV載體構築體載體基因組。
針對AAV2之中和抗體效價藉由在各種血清稀釋液中量測經5 × 103 個載體基因組/細胞的表現β-半乳糖苷酶之AAV2載體轉導的HEK293細胞中的β-半乳糖苷酶活性來加以確定。 PET
在手術之前六天時及在基因轉移之後一個月及六個月時，在使用FMT的情況下於PET成像上評定AADC在黑質中之表現量。所有患者均在PET之前18小時時停止服用多巴胺激導性藥物治療，且在FMT注射之前一小時時經口服用2.5 mg/kg之卡比多巴(carbidopa)。隨後，將0.12 mCi/kg的含FMT之生理鹽水輸注至肘前靜脈中，且獲得90分鐘動態採集序列。用融合處理程式共同記錄PET及磁共振成像資料(Syntegra; Philips, Amsterdam, The Netherlands)以產生融合影像。在示蹤劑注射之後80與90分鐘之間時，計算吸入黑質紋狀體路徑中之所關注體積內的放射活性。使用黑質與紋狀體之放射活性比來評定自初始時間至24週時的黑質紋狀體路徑FMT吸收之變化。 統計分析
使用斯圖登氏t測試(Student's t-test) (成對分析)來比較初始時間及基因轉移之後6個月時的值。以雙側P值＜0.05指示顯著差異。對P值進行邦弗朗尼校正(Bonferroni correction)之雙向變異數分析用於對左旋多巴之短持續時間反應。(參見例如Muramatsu等人, 2010, 「A phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease」.Mol. Ther. 18:1731-1735)。
可監測使用即時影像引導之輸注向帕金森氏症個體之大腦中兩側投與AAV載體組合物的安全性及耐受性持續手術後至多9個月或9個月之後。應在不誘導任何不利影響的情況下達成對標靶區域(黑質密部(SNpc)及腹側蓋區(VTA))之寬覆蓋及AADC蛋白質在紋狀體中之廣泛分佈。
生長及運動技能變化 ：在基因轉移之後，患者在治療後一年內應體重增加且展現其運動得分改善。將在基因轉移之後3至6個月時量測體重。所有患者最初在阿爾伯塔嬰兒運動量表(Alberta Infant Motor Scale，AIMS)上之原始得分應為零，且第二版畢堡運動發育量表(Peabody Developmental Motor Scale, Second Edition，PDMS-II)之原始得分應極低。在基因轉移之後，所有患者均若展示其在此兩種量表上之原始得分持續增加，其指示患者運動功能改善。嬰兒及幼童全面發展量表(Comprehensive Developmental Inventory for Infants and Toddlers，CDIIT)涵蓋認知及運動發育兩者。所有患者在基因轉移之前均應展示低原始CDIIT得分，而得分後續增加證實運動及認識功能兩者改善。 在基因轉移之後的主觀改善
為了記錄更難以量化之症狀，要求患者之配偶、監護人或照護人在研究結束時填寫調查表。眼動危象(oculogyric crises)之症狀應減輕，且舉例而言，眼睛偏斜及睡眠中斷為在基因療法之後可能保持之眼動危象的一些輕度症狀。個體可經歷情緒穩定性增加，及/或出汗及體溫過高(在炎熱天氣中體溫不穩定之常見表現特徵)的一些改善。如由24小時霍爾特心電圖監測(Holter monitoring)所評定，在基因轉移之前或之後不應存在可偵測之心跳速率反常變化。在基因療法之前臥床不起且展示極少自發性運動之患者在基因轉移之後一至兩週時可展現上瞼下垂(上部眼瞼之下垂)嚴重減輕。根據先前研究，異動症會在基因轉移之後一個月發生，但在觀測到異動症減輕時，應開始運動發育(Hwu, W.L.等人, 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency.Sci. Transl. Med. 第4卷, 134ra61)。舉例而言，個體可展現在三個月之後頭部控制增加，在六至九個月之後在支撐下坐立，在十三個月之後自俯臥位置坐起，及在基因轉移之後十六個月時抓握玩具且在支撐下站立。在基因療法之前，抗AAV2抗體在患者中應為陰性，且在基因轉移之後效價可略微增加。 PET掃描及CSF分析
對所治療之患者完成PET掃描及CSF分析。在基因轉移之後六個月時，PET掃描應揭示，在組合之(右及左)治療位點中，6-[18F]氟多巴(FDOPA)之吸收自初始時間增加。CSF分析應揭示高香草酸(homovanillic acid，HVA，一種多巴胺代謝物)及5-羥吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetic acid，HIAA，一種血清素代謝物)之含量增加。然而，L-DOPA及3-O-甲基多巴之含量可保持升高(Hwu, W.L.等人, 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency.Sci. Transl. Med. 第4卷, 134ra61)。 實例4. 投與AADC多核苷酸
使用實例3中所描述之投藥方法將AAV顆粒組合物輸注至患有帕金森氏症之患者的殼核中。劑量、患者數目及體積概述於表4中。 表4. 研究設計
在研究時程期間，評估含AADC多核苷酸之重組腺相關病毒(AAV)載體組合物在診斷患有帕金森氏症之人類患者中輸注的安全性及耐受性。在手術前及在手術後持續六個月每月使用多種量測方法評估患者，包括全球肌張力障礙(Global Systonia Scale，GDS) (參見Comella等人, 2003,Movement Disorders , 18(3):303-312)、L-DOPA攻擊測試、UPDRS得分、運動狀態日記及實驗室測試。使用將白天分成數個半小時節段之日記，患者之照護者將在進入研究點之前四天期間及在進入研究點之後六個月時的另外四天記錄患者運動。患者護理人員係經過訓練，以將個體之病狀評定為睡眠狀態、不動狀態、沒有令人麻煩之異動症的移動或具有令人麻煩之異動症的移動。計算在此等類別中之每一者中耗費的小時總數，且在群之間比較初始時間與六個月得分之間的差異。在初始時間及基因轉移之後6個月時評估對左旋多巴之短持續時間反應；在不進行多巴胺激導性藥物治療20小時之後，個體經口服用100 mg左旋多巴與25 mg苄絲肼(benserazide)。在初始時間及左旋多巴攝入之後30分鐘、1、2、3及4小時時評定基於GDS之運動症狀及血漿左旋多巴濃度(參見例如Muramatsu等人, 2010, 「A phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease」.Mol. Ther. 18:1731-1735)。
雖然已相對於若干所描述之實施例以一定篇幅及一些特殊性描述本發明，但並非意欲其應受限於任何此類特性或實施例或任何特定實施例，而應視為參考隨附申請專利範圍進行理解以便鑒於先前技術提供此類申請專利範圍之可能的最廣泛解釋，且因此有效地涵蓋本發明之預期範疇。
本文所提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻均以全文引用之方式併入。在有衝突的情況下，將以本說明書(包括定義)為準。另外，章節標題、物料、方法及實例僅為說明性的而不意欲為限制性的。
100‧‧‧病毒基因組
110‧‧‧ 有效負載區域
120‧‧‧反向末端重複序列
130‧‧‧啟動子區域
140‧‧‧內含子區域
150‧‧‧編碼區域
前述及其他目標、特點及優勢將根據如附圖中所說明的本發明特定實施例之以下描述而為顯而易見的。附圖不一定按比例繪製，相反側重說明本發明之各個實施例的原理。
圖1為本發明之病毒基因組的示意圖。

Claims (34)

  1. 一種芳族L-胺基酸脫羧酶(AADC)多核苷酸，其包含與SEQ ID NO: 979具有至少95%一致性之AADC序列區域。
  2. 如請求項1之AADC多核苷酸，其中該AADC序列區域包含啟動子區域、增強子區域、多選殖位點(MCS)區域及多腺苷酸化(poly(A))信號區域。
  3. 如請求項2之AADC多核苷酸，其中該AADC序列區域包含至少一個5'反向末端重複序列(ITR)區域及一個3' ITR區域。
  4. 如請求項3之AADC多核苷酸，其中該等5' ITR中之一或多者位於該MCS區域之5'位，且該等3' ITR中之一或多者位於該poly(A)信號之3'位。
  5. 如請求項3之AADC多核苷酸，其中該AADC序列區域包含第一外顯子區域、第一內含子區域、第二內含子區域及第二外顯子區域。
  6. 如請求項5之AADC多核苷酸，其中該增強子區域及該啟動子區域來源於CMV。
  7. 如請求項6之AADC多核苷酸，其中該第一外顯子區域為即刻-早期1 (ie1)外顯子1或其片段，該第一內含子區域為ie1內含子1或其片段，該第二內含子區域為人類β-血球蛋白(hBglobin)內含子2或其片段，且該第二外顯子區域為hBglobin外顯子3或其片段。
  8. 如請求項2之AADC多核苷酸，其中該poly(A)信號來源於人類生長激素。
  9. 一種編碼如請求項1至8中任一項之AADC多核苷酸的質體或載體。
  10. 如請求項9之質體或載體，其為腺相關病毒(AAV)或來源於腺相關病毒(AAV)。
  11. 一種包含如請求項10之AAV質體或載體的重組AAV病毒。
  12. 如請求項11之重組AAV病毒，其包含選自由以下組成之群的衣殼血清型：AAV2、PHP.B、PHP.A、AAV1、AAV2G9、AAV3、AAV3a、AAV3b、AAV3-3、AAV4、AAV4-4、AAV5、AAV6、AAV6.1、AAV6.2、AAV6.1.2、AAV7、AAV7.2、AAV8、AAV9、AAV9.11、AAV9.13、AAV9.16、AAV9.24、AAV9.45、AAV9.47、AAV9.61、AAV9.68、AAV9.84、AAV9.9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV16.3、AAV24.1、AAV27.3、AAV42.12、AAV42-1b、AAV42-2、AAV42-3a、AAV42-3b、AAV42-4、AAV42-5a、AAV42-5b、AAV42-6b、AAV42-8、AAV42-10、AAV42-11、AAV42-12、AAV42-13、AAV42-15、AAV42-aa、AAV43-1、AAV43-12、AAV43-20、AAV43-21、AAV43-23、AAV43-25、AAV43-5、AAV44.1、AAV44.2、AAV44.5、AAV223.1、AAV223.2、AAV223.4、AAV223.5、AAV223.6、AAV223.7、AAV1-7/rh.48、AAV1-8/rh.49、AAV2-15/rh.62、AAV2-3/rh.61、AAV2-4/rh.50、AAV2-5/rh.51、AAV3.1/hu.6、AAV3.1/hu.9、AAV3-9/rh.52、AAV3-11/rh.53、AAV4-8/r11.64、AAV4-9/rh.54、AAV4-19/rh.55、AAV5-3/rh.57、AAV5-22/rh.58、AAV7.3/hu.7、AAV16.8/hu.10、AAV16.12/hu.11、AAV29.3/bb.1、AAV29.5/bb.2、AAV106.1/hu.37、AAV114.3/hu.40、AAV127.2/hu.41、AAV127.5/hu.42、AAV128.3/hu.44、AAV130.4/hu.48、AAV145.1/hu.53、AAV145.5/hu.54、AAV145.6/hu.55、AAV161.10/hu.60、AAV161.6/hu.61、AAV33.12/hu.17、AAV33.4/hu.15、AAV33.8/hu.16、AAV52/hu.19、AAV52.1/hu.20、AAV58.2/hu.25、AAVA3.3、AAVA3.4、AAVA3.5、AAVA3.7、AAVC1、AAVC2、AAVC5、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAVF3、AAVF5、AAVH2、AAVrh.72、AAVhu.8、AAVrh.68、AAVrh.70、AAVpi.1、AAVpi.3、AAVpi.2、AAVrh.60、AAVrh.44、AAVrh.65、AAVrh.55、AAVrh.47、AAVrh.69、AAVrh.45、AAVrh.59、AAVhu.12、AAVH6、AAVLK03、AAVH-1/hu.1、AAVH-5/hu.3、AAVLG-10/rh.40、AAVLG-4/rh.38、AAVLG-9/hu.39、AAVN721-8/rh.43、AAVCh.5、AAVCh.5R1、AAVcy.2、AAVcy.3、AAVcy.4、AAVcy.5、AAVCy.5R1、AAVCy.5R2、AAVCy.5R3、AAVCy.5R4、AAVcy.6、AAVhu.1、AAVhu.2、AAVhu.3、AAVhu.4、AAVhu.5、AAVhu.6、AAVhu.7、AAVhu.9、AAVhu.10、AAVhu.11、AAVhu.13、AAVhu.15、AAVhu.16、AAVhu.17、AAVhu.18、AAVhu.20、AAVhu.21、AAVhu.22、AAVhu.23.2、AAVhu.24、AAVhu.25、AAVhu.27、AAVhu.28、AAVhu.29、AAVhu.29R、AAVhu.31、AAVhu.32、AAVhu.34、AAVhu.35、AAVhu.37、AAVhu.39、AAVhu.40、AAVhu.41、AAVhu.42、AAVhu.43、AAVhu.44、AAVhu.44R1、AAVhu.44R2、AAVhu.44R3、AAVhu.45、AAVhu.46、AAVhu.47、AAVhu.48、AAVhu.48R1、AAVhu.48R2、AAVhu.48R3、AAVhu.49、AAVhu.51、AAVhu.52、AAVhu.54、AAVhu.55、AAVhu.56、AAVhu.57、AAVhu.58、AAVhu.60、AAVhu.61、AAVhu.63、AAVhu.64、AAVhu.66、AAVhu.67、AAVhu.14/9、AAVhu.t 19、AAVrh.2、AAVrh.2R、AAVrh.8、AAVrh.8R、AAVrh.10、AAVrh.12、AAVrh.13、AAVrh.13R、AAVrh.14、AAVrh.17、AAVrh.18、AAVrh.19、AAVrh.20、AAVrh.21、AAVrh.22、AAVrh.23、AAVrh.24、AAVrh.25、AAVrh.31、AAVrh.32、AAVrh.33、AAVrh.34、AAVrh.35、AAVrh.36、AAVrh.37、AAVrh.37R2、AAVrh.38、AAVrh.39、AAVrh.40、AAVrh.46、AAVrh.48、AAVrh.48.1、AAVrh.48.1.2、AAVrh.48.2、AAVrh.49、AAVrh.51、AAVrh.52、AAVrh.53、AAVrh.54、AAVrh.56、AAVrh.57、AAVrh.58、AAVrh.61、AAVrh.64、AAVrh.64R1、AAVrh.64R2、AAVrh.67、AAVrh.73、AAVrh.74、AAVrh8R、AAVrh8R A586R 突變體、AAVrh8R R533A 突變體、AAAV、BAAV、山羊AAV、牛AAV、AAVhE1.1、AAVhEr1.5、AAVhER1.14、AAVhEr1.8、AAVhEr1.16、AAVhEr1.18、AAVhEr1.35、AAVhEr1.7、AAVhEr1.36、AAVhEr2.29、AAVhEr2.4、AAVhEr2.16、AAVhEr2.30、AAVhEr2.31、AAVhEr2.36、AAVhER1.23、AAVhEr3.1、AAV2.5T、AAV-PAEC、AAV-LK01、AAV-LK02、AAV-LK03、AAV-LK04、AAV-LK05、AAV-LK06、AAV-LK07、AAV-LK08、AAV-LK09、AAV-LK10、AAV-LK11、AAV-LK12、AAV-LK13、AAV-LK14、AAV-LK15、 AAV-LK16、AAV-LK17、AAV-LK18、AAV-LK19、AAV-PAEC2、AAV-PAEC4、AAV-PAEC6、AAV-PAEC7、AAV-PAEC8、AAV-PAEC11、AAV-PAEC12、AAV-2-pre-miRNA-101、AAV-8h、AAV-8b、AAV-h、AAV-b、AAV SM 10-2、AAV改組100-1、AAV改組100-3、AAV改組100-7、AAV改組10-2、AAV改組10-6、AAV改組10-8、AAV改組100-2、AAV SM 10-1、AAV SM 10-8、AAV SM 100-3、AAV SM 100-10、BNP61 AAV、BNP62 AAV、BNP63 AAV、AAVrh.50、AAVrh.43、AAVrh.62、AAVrh.48、AAVhu.19、AAVhu.11、AAVhu.53、AAV4-8/rh.64、AAVLG-9/hu.39、AAV54.5/hu.23、AAV54.2/hu.22、AAV54.7/hu.24、AAV54.1/hu.21、AAV54.4R/hu.27、AAV46.2/hu.28、AAV46.6/hu.29、AAV128.1/hu.43、真實型AAV (ttAAV)、UPENN AAV 10、日本AAV 10血清型、AAV CBr-7.1、AAV CBr-7.10、AAV CBr-7.2、AAV CBr-7.3、AAV CBr-7.4、AAV CBr-7.5、AAV CBr-7.7、AAV CBr-7.8、AAV CBr-B7.3、AAV CBr-B7.4、AAV CBr-E1、AAV CBr-E2、AAV CBr-E3、AAV CBr-E4、AAV CBr-E5、AAV CBr-e5、AAV CBr-E6、AAV CBr-E7、AAV CBr-E8、AAV CHt-1、AAV CHt-2、AAV CHt-3、AAV CHt-6.1、AAV CHt-6.10、AAV CHt-6.5、AAV CHt-6.6、AAV CHt-6.7、AAV CHt-6.8、AAV CHt-P1、AAV CHt-P2、AAV CHt-P5、AAV CHt-P6、AAV CHt-P8、AAV CHt-P9、AAV CKd-1、AAV CKd-10、AAV CKd-2、AAV CKd-3、AAV CKd-4、AAV CKd-6、AAV CKd-7、AAV CKd-8、AAV CKd-B1、AAV CKd-B2、AAV CKd-B3、AAV CKd-B4、AAV CKd-B5、AAV CKd-B6、AAV CKd-B7、AAV CKd-B8、AAV CKd-H1、AAV CKd-H2、AAV CKd-H3、AAV CKd-H4、AAV CKd-H5、AAV CKd-H6、AAV CKd-N3、AAV CKd-N4、AAV CKd-N9、AAV CLg-F1、AAV CLg-F2、AAV CLg-F3、AAV CLg-F4、AAV CLg-F5、AAV CLg-F6、AAV CLg-F7、AAV CLg-F8、AAV CLv-1、AAV CLv1-1、AAV Clv1-10、AAV CLv1-2、AAV CLv-12、AAV CLv1-3、AAV CLv-13、AAV CLv1-4、AAV Clv1-7、AAV Clv1-8、AAV Clv1-9、AAV CLv-2、AAV CLv-3、AAV CLv-4、AAV CLv-6、AAV CLv-8、AAV CLv-D1、AAV CLv-D2、AAV CLv-D3、AAV CLv-D4、AAV CLv-D5、AAV CLv-D6、AAV CLv-D7、AAV CLv-D8、AAV CLv-E1、AAV CLv-K1、AAV CLv-K3、AAV CLv-K6、AAV CLv-L4、AAV CLv-L5、AAV CLv-L6、AAV CLv-M1、AAV CLv-M11、AAV CLv-M2、AAV CLv-M5、AAV CLv-M6、AAV CLv-M7、AAV CLv-M8、AAV CLv-M9、AAV CLv-R1、AAV CLv-R2、AAV CLv-R3、AAV CLv-R4、AAV CLv-R5、AAV CLv-R6、AAV CLv-R7、AAV CLv-R8、AAV CLv-R9、AAV CSp-1、AAV CSp-10、AAV CSp-11、AAV CSp-2、AAV CSp-3、AAV CSp-4、AAV CSp-6、AAV CSp-7、AAV CSp-8、AAV CSp-8.10、AAV CSp-8.2、AAV CSp-8.4、AAV CSp-8.5、AAV CSp-8.6、AAV CSp-8.7、AAV CSp-8.8、AAV CSp-8.9、AAV CSp-9、AAV.hu.48R3、AAV.VR-355、AAV3B、AAV4、AAV5、AAVF1/HSC1、AAVF11/HSC11、AAVF12/HSC12、AAVF13/HSC13、AAVF14/HSC14、AAVF15/HSC15、AAVF16/HSC16、AAVF17/HSC17、AAVF2/HSC2、AAVF3/HSC3、AAVF4/HSC4、AAVF5/HSC5、AAVF6/HSC6、AAVF7/HSC7、AAVF8/HSC8、AAVF9/HSC9、PHP.B (AAV-PHP.B)、PHP.A (AAV.PHP.A)、G2B-26、G2B-13、TH1.1-32、TH1.1-35、AAVPHP.B2、AAVPHP.B3、AAVPHP.N/PHP.B-DGT、AAVPHP.B-EST、AAVPHP.B-GGT、AAVPHP.B-ATP、AAVPHP.B-ATT-T、AAVPHP.B-DGT-T、AAVPHP.B-GGT-T、AAVPHP.B-SGS、AAVPHP.B-AQP、AAVPHP.B-QQP、AAVPHP.B-SNP(3)、AAVPHP.B-SNP、AAVPHP.B-QGT、AAVPHP.B-NQT、AAVPHP.B-EGS、AAVPHP.B-SGN、AAVPHP.B-EGT、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-DST、AAVPHP.B-STP、AAVPHP.B-PQP、AAVPHP.B-SQP、AAVPHP.B-QLP、AAVPHP.B-TMP、AAVPHP.B-TTP、AAVPHP.S/G2A12、AAVG2A15/G2A3、AAVG2B4、及/或AAVG2B5，及其變異體。
  13. 如請求項12之重組AAV病毒，其中該衣殼血清型為AAV2。
  14. 如請求項12之重組AAV病毒，其中該衣殼血清型為AAVrh10。
  15. 如請求項12之重組AAV病毒，其中該衣殼血清型為AAV9 (hu14)。
  16. 如請求項12之重組AAV病毒，其中該衣殼血清型為AAV-DJ。
  17. 如請求項12之重組AAV病毒，其中該衣殼血清型為AAV9.47。
  18. 如請求項12之重組AAV病毒，其中該衣殼血清型為AAV-DJ8。
  19. 如請求項1之AADC多核苷酸，其中該AADC序列區域與SEQ ID NO: 979具有至少99%一致性。
  20. 一種包含腺相關病毒(AAV)顆粒之醫藥組合物，該AAV顆粒包含AAV衣殼及載體基因組，該載體基因組包含至少一個與SEQ ID NO: 900具有至少95%一致性之AADC序列區域。
  21. 如請求項20之醫藥組合物，其中該AADC序列區域與SEQ ID NO: 979具有至少99%一致性。
  22. 如請求項20之醫藥組合物，其中至少70%之該等AAV顆粒含有載體基因組。
  23. 一種如請求項20至22中任一項之醫藥組合物的用途，其用於製造用於縮短個體中異動症(dyskinesia)時段之藥劑。
  24. 如請求項23之用途，其中異動症之時段縮短係藉由以下展現：改善不活動狀態的時間及運動波動至少30%。
  25. 如請求項24之用途，其中該改善持續至少6小時。
  26. 如請求項23至25中任一項之用途，其中該個體患有帕金森氏症。
  27. 一種如請求項20至22中任一項之醫藥組合物的用途，其用於製造用於改善個體之睡眠-清醒週期的藥劑。
  28. 如請求項27之用途，其中該個體之快速眼球運動(REM)睡眠的量與在投與該藥劑之前的該個體之REM睡眠的量相比係減少的。
  29. 如請求項27之用途，其中該個體之非REM (NREM)睡眠的量與在投與該藥劑之前的該個體之NREM睡眠的量相比係增加的。
  30. 如請求項27至29中任一項之用途，其中該個體患有帕金森氏症。
  31. 一種如請求項20至22中任一項之醫藥組合物的用途，其用於製造用於治療個體之睡眠障礙症的藥劑。
  32. 如請求項31之用途，其中該睡眠障礙症為失眠。
  33. 如請求項31或32之用途，其中該個體患有帕金森氏症。
  34. 一種如請求項20至22中任一項之醫藥組合物的用途，其用於製造用以增加個體中AADC蛋白質含量之藥劑。
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