RU2528066C2 - Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов - Google Patents
Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2528066C2 RU2528066C2 RU2009108660/10A RU2009108660A RU2528066C2 RU 2528066 C2 RU2528066 C2 RU 2528066C2 RU 2009108660/10 A RU2009108660/10 A RU 2009108660/10A RU 2009108660 A RU2009108660 A RU 2009108660A RU 2528066 C2 RU2528066 C2 RU 2528066C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- saccharide
- serogroup
- kit according
- saccharides
- phosphate
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/04—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from fish or other sea animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
- A23J1/205—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey from whey, e.g. lactalbumine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
- A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/285—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Pasteurellaceae (F), e.g. Haemophilus influenza
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09F—NATURAL RESINS; FRENCH POLISH; DRYING-OILS; DRIERS (SICCATIVES); TURPENTINE
- C09F1/00—Obtaining purification, or chemical modification of natural resins, e.g. oleo-resins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09G—POLISHING COMPOSITIONS; SKI WAXES
- C09G1/00—Polishing compositions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/831—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving capsular polysaccharide of bacterium, e.g. polyribosyl ribitol phosphate
Abstract
Изобретение относится к биохимии и представляет собой набор для профилактики или лечения бактериального менингита, содержащий: (а) конъюгированный капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, в лиофилизированной форме; и (b) капсулярные сахариды, происходящие из N. meningitidis серогрупп С, W135 и Y, в жидкой форме, в котором соотношение (масс./масс.) сахарида серогруппы А и сахарида серогруппы С превышает 1. Изобретение позволяет получать эффективные вакцины на основе указанного набора. 2 н. и 27 з.п. ф-лы, 19 ил.
Description
Техническая область
Настоящее изобретение относится к вакцинам, в частности против инфекции и болезни, вызванной менингококками.
Предпосылки к созданию настоящего изобретения
Neisseria meningitidis представляет собой грамотрицательный патоген, поражающий человека. Она колонизирует глотку, вызывая менингит и, изредка, септицемию при отсутствии менингита. Она является близкородственной по отношению к N.gonorrhoeae, хотя одним признаком, который четко дифференцирует менингококк, является наличие полисахаридной капсулы, которая имеется у всех патогенных менингококков.
На основе капсулярного полисахарида данного микроорганизма идентифицировано двенадцать серогрупп N.meningitidis (А, В, С, Н, I, К, L, 29Е, W135, X, Y и Z). Группа А представляет собой патоген, который наиболее часто является причиной болезни в Африке южнее Сахары. Серогруппы В и С ответственны за абсолютное большинство случаев в США и наиболее развитых странах. Серогруппы W135 и Y ответственны за остальные случаи в США и развитых странах.
Капсулярные полисахариды N. meningitidis обычно получают с помощью способа, включающего стадии осаждения полисахаридов (например, с использованием катионного детергента), выделение фракции этанолом, экстракцию холодным фенолом (для удаления белка) и ультрацентрифугирование (для удаления LPS) [например, ссылка 1].
Четырехвалентная вакцина из капсулярных полисахаридов серогрупп А, С, Y и W135 известна много лет [2, 3] и лицензирована для применения для людей. Несмотря на эффективность для подростков и взрослых людей она вызывает слабый иммунный ответ и короткую продолжительность защиты и не может использоваться для детей младшего возраста (например, 4]. Это происходит потому, что полисахариды представляют собой независимые от Т-клеток антигены, которые вызывают слабый иммунный ответ, который невозможно усилить. Полисахариды в указанной вакцине не конъюгированы и присутствуют в соотношении 1:1:1:1 [5]. MENCEVAX ACWY™ содержит 50 мкг каждого очищенного полисахарида после повторного растворения из его лиофилизированной формы.
Конъюгированные олигосахариды серогруппы С также разрешены для применения у людей (например, Menjugate™; ссылка 6]. Однако сохраняется необходимость улучшения конъюгированных вакцин против серогрупп A, W135 и Y и их производства.
Описание изобретения
Настоящее изобретение относится к способу очистки бактериального капсулярного полисахарида, включающему стадии (а) осаждения указанного полисахарида с последующей (b) солюбилизацией осажденного полисахарида с использованием этанола. Полисахарид можно использовать для изготовления вакцин, таких как конъюгированные вакцины, в частности против серогрупп A, W135 и Y N.meningitidis.
Осаждение и солюбилизация с использованием этанола
Специалистам известно много методик для осаждения растворимых полисахаридов. В предпочтительных способах используют один или более катионных детергентов. Детергенты предпочтительно имеют следующую общую формулу:
где: R1, R2 и R3 являются идентичными или различаются между собой и каждый обозначает алкил или арил; или R1 и R2 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-6-членное насыщенное гетероциклическое кольцо, a R3 обозначает алкил или арил; или R1, R2 и R3 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо, ненасыщенное у атома азота,
R4 обозначает алкил или арил, и
X- обозначает анион.
Особенно предпочтительными детергентами для применения в данном способе являются соли тетрабутиламмония и цетилтриметиламмония (например, бромидные соли). Бромид цетилтриметиламмония («СТАВ») является особенно предпочтительным [8]. СТАВ известен также как бромид гексадецилтриметиламмония, бромид цетримония, Cetavlon и Centimide. Другие детергенты включают бромид гексадиметрина и соли миристилтриметиламмония.
Капсулярные полисахариды высвобождаются в среду во время культивирования. Соответственно, исходным материалом для осаждения обычно будет надосадочная жидкость после центрифугирования бактериальной культуры или концентрированная культура.
Стадия осаждения может быть избирательной по отношению к полисахаридам, но она обычно будет также вызывать соосаждение и других компонентов (например, белков, нуклеиновой кислоты и т.п.).
Осажденный полисахарид перед солюбилизацией можно собирать центрифугированием.
После осаждения полисахарид (обычно в форме комплекса с катионным детергентом) ресолюбилизируют. Предпочтительно использовать растворитель, который является относительно избирательным по отношению к полисахаридам, с целью свести к минимуму содержание примесей (например, белков, нуклеиновой кислоты и т.п.). Как было установлено, с этой точки зрения преимущества имеет этанол, и он является высокоизбирательным по отношению к СТАВ-полисахаридному комплексу. Можно использовать другие низшие спирты (например, метанол, пропан-1-ол, пропан-2-ол, бутан-1-ол, бутан-2-ол, 2-метилпропан-1-ол, 2-метилпропан-2-ол, диолы и т.п.)
Этанол предпочтительно добавляют к осажденному полисахариду до получения конечной концентрации этанола (на основе общего содержания этанола и воды) от 50% до 95% (например, около 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% или около 90%) и, предпочтительно, от 75% до 95%. Оптимальная конечная концентрация этанола может зависеть от серогруппы бактерии, из которой получают полисахарид.
Этанол можно добавлять к осажденному полисахариду в чистой форме или в разбавленной смешиваемым растворителем форме (например, водой). Предпочтительными смесями растворителей являются смеси этанол:вода с предпочтительными соотношениями приблизительно от 70:30 до 95:5 (например, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10).
В противоположность способу, описанному в ссылке 9, в данном способе используется катионный детергент, а не анионный детергент. В отличие от способа, описанного в ссылке 10, полисахарид ресолюбилизируют с использованием этанола, а не катионного обмена с использованием солей кальция или магния. В отличие от способа, описанного в ссылке 11, осаждение не требует инертной пористой подложки. Помимо этого, в отличие от известных ранее способов, спирт используют скорее для ресолюбилизации полисахарида, чем для его осаждения.
Бактериальный капсулярный полисахарид обычно получают из Neisseria. Предпочтительно, его получают из N.meningitidis, включая серогруппы А, В, С, W135 и Y. Предпочтительными серогруппами являются A, W135 и Y.
Способ также подходит для получения капсулярного полисахарида из Haemophilus influenzae (особенно типа В или «Hib») и из Streptococcus pneumoniae (пневмококка).
Дальнейшая обработка солюбилизированного полисахарида
После ресолюбилизации полисахарид можно подвергать дальнейшей обработке для удаления примесей. Это особенно важно в тех ситуациях, когда даже минимальная контаминация является неприемлемой (например, для изготовления вакцин для человека). Обычно указанная обработка будет включать одну или более стадий фильтрации.
Можно использовать объемную фильтрацию. Это является особенно пригодным для очистки.
Можно использовать фильтрацию через активированный уголь. Это является пригодным для удаления пигментов и следовых количеств органических соединений. Данный процесс можно повторять до получения, например, ОП275нм<0,2.
Можно использовать фильтрацию по размеру или ультрафильтрацию.
После фильтрования для удаления примесей полисахарид можно осаждать для дальнейшего воздействия и/или обработки. Удобно осуществлять данный процесс с использованием обмена катионов (например, добавлением солей кальция или натрия).
Полисахарид можно химически модифицировать. Например, его можно модифицировать заменой одной или более гидроксильных групп на блокирующие группы. Это особенно пригодно для MenA [12]. Полисахариды из серогруппы В можно N-пропионилировать [13].
Полисахарид (необязательно модифицированный) обычно гидролизуют для получения олигосахаридов. Это предпочтительно осуществляют для получения конечной средней степени полимеризации (DP) в олигосахариде менее 30 (например, от 10 до 20, предпочтительно, приблизительно 10 для серогруппы А; от 15 до 25 для серогрупп W135 и Y, предпочтительно, приблизительно 15-20; и т.п.). Для использования в вакцинах олигосахариды предпочтительнее полисахаридов. DP удобно можно измерять использованием ионообменной хроматографии или колориметрических анализов [14].
Если проводят гидролиз, то гидролизат обычно разделяют по размерам с целью удаления коротких олигосахаридов. Этого можно добиваться различными путями, такими как ультрафильтрация с последующей ионообменной хроматографией. Олигосахариды со степенью полимеризации, менее или равной приблизительно 6, предпочтительно удаляют в случае серогруппы А, а те из них, которые имеют степень полимеризации менее приблизительно 4, предпочтительно удаляют в случае серогрупп W135 и Y.
Для усиления иммуногенности полисахариды или олигосахариды по настоящему изобретению предпочтительно конъюгируют с носителем (фиг.18). Конъюгация с белками-носителями является особенно пригодной для педиатрических вакцин [например, ссылка 15] и представляет собой хорошо известную методику [например, обзор в ссылках от 16 до 24 и т.п.].
Предпочтительными белками-носителями являются бактериальные токсины или анатоксины, такие как дифтерийный или столбнячный анатоксины. Дифтерийный анатоксин CRM197 [25, 26, 27] является особенно предпочтительным. Другие подходящие белки-носители включают белок внешней оболочки N.meningitidis [28], синтетические пептиды [29, 30], белки теплового шока [31, 32], коклюшные белки [33, 34], цитокины [35], лимфокины [35], гормоны [35], факторы роста [35], искусственные белки, включающие множественные человеческие CD4+ Т-клеточные эпитопы из различных полученных из патогенов антигенов [36, белок D из H.influenzae [37], токсин А или В из С.difficile [38] и т.п. Возможно использование смесей белков-носителей.
Конъюгаты с соотношением (масс./масс.) сахарид:белок от 0,5:1 (т.е. с избытком белка) до 5:1 (т.е. с избытком сахарида) являются предпочтительными, а конъюгаты с соотношением от 1:1,25 до 1:2,5 являются более предпочтительными.
Один белок-носитель может нести множество различных сахаридов [39]. Конъюгаты можно использовать в сочетании со свободным белком-носителем [40].
Можно использовать любую подходящую реакцию конъюгации с любым подходящим линкером, если это необходимо.
Сахарид обычно активируют или функционализируют перед конъюгацией. В активации могут участвовать, например, цианилирующие агенты, такие как CDAP (например, тетрафторборат 1-циан-4-диметиламинопиридиния [41, 42 и т.п.]). В других подходящих методиках используют карбодиимиды, гидразиды, активные сложные эфиры, норборан, п-нитробензойную кислоту, N-гидроксисукцинимид, S-NHS, EDC, TSTU; см. также введение в ссылке 22).
Связи посредством линкерной группы можно осуществить с помощью любой известной методики, например с помощью методик, описанных в ссылках 43 и 44. Один тип связи включает восстановительное аминирование полисахарида, связывание полученной аминогруппы с одним концом линкерной группы адипиновой кислоты, а затем связывание белка с другим концом линкерной группы адипиновой кислоты [20, 45, 46]. Другие линкеры включают В-пропионамидо [47], нитрофенилэтиламин [48], галогенацильные галогеноиды [49], гликозидные связи [50], 6-аминокапроновую кислоту [51], ADH [52], компоненты с С4-С12 [53] и т.п. В качестве альтернативы использованию линкера можно использовать прямую связь. Прямые связи с белком могут включать окисление полисахарида с последующим восстановительным аминированием с белком, как описано, например, в ссылках 54 и 55.
Способ, включающий введение аминогрупп в сахарид (например, путем замены концевых =O групп на -NH2) с последующей дериватизацией диэфиром адипиновой кислоты (например, N-гидроксисукцинимидного диэфира адипиновой кислоты) и взаимодействием с белком-носителем, является предпочтительным.
После конъюгации свободные и конъюгированные сахариды можно отделять друг от друга. Существует множество подходящих способов, включая гидрофобную хроматографию, тангенциальную ультрафильтрацию, диафильтрацию и т.п. [см. также ссылки 56 и 57 и т.п.].
Смеси и композиции, включающие сахариды
Олигосахариды, полисахариды и конъюгаты по настоящему изобретению можно смешивать с другими биологическими молекулами. Смеси сахаридов из более чем одной серогруппы N.meningitidis являются предпочтительными, например, композиции, включающие сахариды из серогрупп А+С, A+W135, A+Y, C+W135, C+Y, W135+Y, A+C+W135, A+C+Y, C+W135+Y, A+C+W135+Y и т.п. Предпочтительно, чтобы протективная эффективность отдельных сахаридных антигенов не устранялась после их объединения, хотя истинная иммуногенность (например, титры ELISA) может снижаться.
В случае когда используется сахарид из серогруппы С, он предпочтительно имеет от ~12 до ~22 повторяющихся единиц.
Сахариды из различных серогрупп N.meningitidis можно конъюгировать с одними и теми же или различными белками-носителями.
В случае когда смесь включает капсулярные сахариды из обеих серогрупп А и С, предпочтительно, чтобы соотношение (масс./масс.) сахарид MenА:сахарид MenС было более 1 (например, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 или более). Неожиданно было установлено, что компонент MenА обладает улучшенной иммуногенностью, когда он имеется в избытке (масса/доза) по сравнению с компонентом МеnС.
В случае когда смесь включает капсулярные сахариды (например, олигосахариды) из серогруппы W135 и по меньшей мере из одной из серогрупп А, С и Y, неожиданно было установлено, что иммуногенность сахарида MenW135 выше, когда его вводят в комбинации с сахаридом (сахаридами) из другой серогруппы (серогрупп), чем когда его вводят в отдельности (в той же дозировке и т.п.) [сравн. со ссылкой 58]. Таким образом, способность антигена MenW135 вызывать иммунный ответ больше, чем иммунный ответ, вызываемый эквивалентным количеством того же самого антигена после введения без ассоциации с антигенами из других серогрупп. Указанная усиленная иммуногенность может быть установлена путем введения антигена MenW135 контрольным животным, а смеси - экспериментальным животным, и сравнения титров антител против указанных двух с использованием стандартных анализов, таких как бактерицидные титры, радиоиммунный анализ и анализы ELISA и т.п. Вакцины, включающие синергические комбинации сахаридов из серогруппы W135 и других серогрупп, имеют преимущества в иммунологическом смысле. Они позволяют усилить анти-№135 ответы и/или уменьшить дозы W135.
В случае когда смесь включает капсулярные сахариды из серогруппы Y и один или оба из серогрупп С и W135, предпочтительно, чтобы соотношение (масс./масс.) сахарид МеnY:сахарид MenW135 было более 1 (например, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 или более), и/или соотношение (масс./масс.) сахарид МеnY:сахарид МеnС было менее 1 (например, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 или менее).
Предпочтительными соотношениями (масс./масс.) для сахаридов из серогрупп A:C:W135:Y являются: 1:1:1:1, 1:1:1:2, 2:1:1:1, 4:2:1:1, 8:4:2:1, 4:2:1:2, 8:4:1:2, 4:2:2:1, 2:2:1:1, 4:4:2:1, 2:2:1:2, 4:4:1:2 и 2:2:2:1.
Смеси могут также включать белки. Предпочтительно включать белки из серогруппы В N. meningitidis [например, ссылки с 59 по 64] или препараты OMV [например, ссылки с 65 по 68 и т.п.].
Можно включать также антигены, не имеющие отношения к менингококку и нейсерии, предпочтительно, такие, которые не уменьшают иммунный ответ против менингококковых компонентов. В ссылке 69, например, описаны комбинации олигосахаридов из серогрупп В и С N. meningitidis с сахаридом Hib. Предпочтительными являются антигены из пневмококка, вируса гепатита А, вируса гепатита В, В.pertussis, дифтерии, столбняка, Helicobacter pylori, полиомиелита и/или Н.influenzae. Особенно предпочтительные антигены, не имеющие отношения к нейсерии, включают:
- антигены из Helicobacter pylori, такие как СаgА [с 70 по 73], VacA [74, 75], NAP [76, 77, 78], НорХ [например, 79], HopY [например, 79] и/или уреазу,
- сахаридный антиген из Streptococcus pneumoniae [например, 80, 81, 82],
- антиген из вируса гепатита А, такой как инактивированный вирус [например, 83, 84],
- антиген из вируса гепатита В, такой как поверхностный и/или сердцевинный антигены [например, 84, 85], поверхностный антиген предпочтительно адсорбирован на фосфате алюминия [86],
- сахаридный антиген из Haemophilus influenzae В [например, 87], предпочтительно, неадсорбированный или адсорбированный на фосфате алюминия [88],
- антиген из вируса гепатита С [например, 89],
- антиген из N. gonorrhoeae [например, с 59 по 62],
- антиген из Chlamydia pneumoniae [например, ссылки с 90 по
96],
- антиген из Chlamydia trachomatis [например, 97],
- антиген из Porphyromonas gingivalis [например, 98],
- антиген (антигены) из вируса полиомиелита [например, 99, 100], такой как IPV,
- антиген (антигены) из вируса бешенства [например, 101], такой как лиофилизированный инактивированный вирус [например, 102, RabAvert™],
- антигены кори, эпидемического паротита и/или краснухи [например, главы 9, 10 и 11 ссылки 103],
- антиген (антигены) из вируса гриппа [например, глава 19 ссылки 103], такой как поверхностные белки гемагглютинин и/или нейраминидаза,
- антиген из Moraxella catarrhalis [например, 104],
- антиген из Streptococcus agalactiae (стрептококка группы В) [например, 105, 106],
- антиген из Streptococcus pyogenes (стрептококка группы А) [например, 106, 107, 108],
- антиген из Staphylococcus aureus [например, 109],
- антиген (антигены) из парамиксовируса, такого как респираторно-синцитиальный вирус (RSV [110, 111] и/или вирус парагриппа (PIV3 [112]),
- антиген из Bacillus anthracis [например, 113, 114, 115],
- антиген из вируса семейства flaviviridae (род flavivirus), такого как вирус желтой лихорадки, вирус японского энцефалита, четыре серотипа вирусов Денге, вирус клещевого энцефалита, вирус лихорадки западного Нила,
- пестивирусный антиген, такой как антиген из вируса классической лихорадки свиней, вирус вирусной диареи крупного рогатого скота и/или вирус пограничной болезни,
- парвовирусный антиген, например из парвовируса В19,
- столбнячный анатоксин [например, ссылка 116],
- коклюшный голотоксин (РТ) и нитевидный гемагглютинин (FHA) из В.pertussis, необязательно также в комбинации с пертактином и/или агглютиногенами 2 и 3 [например, ссылки 117 и 118],
- клеточный коклюшный антиген.
Смесь может включать один или более. из указанных дополнительных антигенов, которые могут быть подвергнуты детоксикации, когда это необходимо (например, детоксикация коклюшного токсина химическими и/или генетическими средствам).
В случае, когда в смесь включен дифтерийный антиген, предпочтительно также включать столбнячный антиген и коклюшные антигены. Подобно этому, когда в смесь включен столбнячный антиген, предпочтительно также включать дифтерийный и коклюшный антигены. Подобно этому, когда в смесь включен коклюшный антиген, предпочтительно также включать дифтерийный и столбнячный антигены.
Антигены в смеси обычно будут присутствовать в концентрации по меньшей мере 1 мкг/мл каждый. В общих чертах, концентрация любого данного антигена будет достаточной для того, чтобы вызвать иммунный ответ против данного антигена.
В качестве альтернативы использования белковых антигенов в смеси можно использовать нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген. Белковые компоненты смеси, таким образом, можно заменять на нуклеиновую кислоту (предпочтительно, ДНК, например, в форме плазмиды), которая кодирует белок.
Поливалентные сахаридные вакцины
Настоящее изобретение относится также к вакцинам и иммуногенным композициям, включающим капсулярные сахариды по меньшей мере из двух (т.е. 2, 3 или 4) из серогрупп А, С, W135 и Y N.meningitidis, в которых указанные капсулярные сахариды конъюгированы с белком-носителем (белками-носителями) и/или представляют собой олигосахариды. В случае когда в вакцине имеются только два конъюгированных олигосахарида или полисахарида из серогрупп А, С, W135 и Y, они предпочтительно не из серогрупп А и С (сравн. со ссылками 6, 119 и 120). Предпочтительные композиции включают сахариды из серогрупп С и Y. Другие предпочтительные композиции включают сахариды из серогрупп С, W135 и Y.
Настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, включающей конъюгат олигосахарида серогруппы А и конъюгат олигосахарида серогруппы С и дополнительно включающей (i) адъювант - фосфат алюминия или гидроксид алюминия и (и) буфер. В случае когда композиция включает в качестве адъюванта фосфат алюминия, буфер предпочтительно представляет собой фосфатный буфер; в случае когда композиция включает в качестве адъюванта гидроксид алюминия, буфер предпочтительно представляет собой гистидиновый буфер.
В случае когда вакцина включает капсулярный сахарид из серогруппы А, то предпочтительно комбинировать сахарид серогруппы А с другим сахаридом (сахаридами) непосредственно перед применением, чтобы свести к минимуму его гидролиз (сравн. сахариды Hib). Удобно осуществить данный этап, если компонент серогруппы А находится в лиофилизированной форме, а компонент(ы) другой серогруппы находится (находятся) в жидкой форме и его используют для повторного растворения лиофилизированного компонента перед применением. Жидкий компонент предпочтительно включает в качестве адъюванта соль алюминия, в то время как лиофилизированный компонент серогруппы А может включать или может не включать в качестве адъюванта соль алюминия.
Таким образом, настоящее изобретение относится к набору, включающему: (а) капсулярный сахарид из серогруппы А N.meningitidis в лиофилизированной форме; и (b) капсулярный сахарид (сахариды) из одной или более (например, 1, 2, 3) серогрупп С, W135 и Y N.meningitidis в жидкой форме. Сахариды, предпочтительно, конъюгированы с белком-носителем (белками-носителями) и/или представляют собой олигосахариды. Набор может иметь форму двух флаконов.
Настоящее изобретение относится также к способу изготовления вакцинной композиции по настоящему изобретению, включающему смешивание лиофилизированного капсулярного сахарида из серогруппы А N.meningitidis с капсулярным сахаридом (сахаридами) из одной или более (например, 1, 2, 3) серогрупп С, W135 и Y, N.meningitidis, причем указанный один или более сахаридов находятся в жидкой форме.
Настоящее изобретение относится также к набору, включающему: (а) конъюгированный капсулярный олигосахарид из серогруппы А N.meningitidis в лиофилизированной форме; и (b) один или более дополнительных антигенов в жидкой форме. Дополнительный антиген может представлять собой или может не представлять собой конъюгированный капсулярный олигосахарид из серогруппы С N. meningitidis.
Иммуногенные композиции и вакцины
Полисахариды, олигосахариды и конъюгаты по настоящему изобретению являются особенно подходящими для включения в иммуногенные композиции и вакцины. Способ по настоящему изобретению может, следовательно, включать стадию изготовления из полисахарида, олигосахарида или конъюгата иммуногенной композиции или вакцины. Изобретение относится к композиции или вакцине, получаемой указанным путем.
Иммуногенные композиции и вакцины по настоящему изобретению, помимо менингококковых сахаридов, обычно будут включать «фармацевтически приемлемые носители», которые включают любой носитель, который сам по себе не вызывает выработки антител, вредных для индивидуума, которому вводят композицию. Подходящие носители обычно представляют собой большие, медленно метаболизируемые макромолекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимеризованные аминокислоты, аминокислотные сополимеры, трегалоза [121], липидные агрегаты (такие как масляные капельки или липосомы) и частицы неактивного вируса. Указанные носители хорошо известны специалистам. Вакцины могут также содержать разбавители, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и т.п. Помимо этого, могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие агенты, вещества, корригирующие рН, и т.п. Полное обсуждение фармацевтически приемлемых наполнителей можно найти в ссылке 122.
Иммуногенные композиции, используемые в качестве вакцин, включают иммунологически эффективное количество сахаридного антигена, а также любой другой из упомянутых выше компонентов, если это необходимо. Под «иммунологически эффективным количеством» подразумевается, что введение указанного количества индивидууму, как в виде однократной дозы, так и в виде части серии, является эффективным для лечения или профилактики.
Указанное количество варьирует в зависимости от состояния здоровья и физического состояния индивидуума, подвергаемого лечению, возраста, таксономической группы индивидуума, подвергаемого лечению (например, примат, не являющийся человеком, примат и т.п.), способности иммунной системы индивидуума синтезировать антитела, желательной степени защиты, состава вакцины, оценки лечащим врачом медицинской ситуации и других имеющих значение факторов. Ожидается, что количество будет заключаться в относительно обширных пределах, которые могут быть определены в ходе обычных испытаний. Схема введения может представлять собой однократную дозу или многократные дозы (например, схему, включающую бустер-дозы). Вакцину можно вводить в сочетании с другими иммунорегулирующими агентами.
Вакцина может включать адъювант. Предпочтительные адъюванты для усиления эффективности композиции включают, без ограничения: (1) алюминиевые соли (квасцы), такие как гидроксиды алюминия (включая оксигидроксиды), фосфаты алюминия (включая гидроксифосфаты), сульфат алюминия и т.п. [главы 8 и 9 в ссылке 123]; (2) эмульсионные композиции типа «масло-в-воде» (содержащие или не содержащие другие специфичные иммуностимулирующие агенты, такие как мурамиловые пептиды [мурамиловые пептиды включают N-ацетилмурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетилнормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (nor-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-(1'-2'-дипальмитоил-БП-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)этиламин МТР-РЕ) и т.п.] или компоненты клеточной стенки бактерий), такие как, например, (a) MF59™ [глава 10 в ссылке 123; 124, 125], содержащий 5% Squalene, 0,5% Tween 80 и 0,5% Span 85 (необязательно содержащий МТР-РЕ), изготовленный в виде субмикронных частиц с использованием микрофлуидизирующего оборудования, (b) SAF, содержащий 10% Squalane, 0,4% Tween 80, 5% pluronic-блокированного полимера L121, и thr-MDP, микрофлуидизированный в субмикронную эмульсию или обработанный вихревым смешением для получения эмульсии с частицами большего размера, и (с) адъювантная система Ribi™ (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT), содержащая 2% Squalene, 0,2% Tween 80 и один или более компонентов бактериальной клеточной стенки из группы, состоящей из монофосфориллипида A (MPL), димиколята трегалозы (TDM) и скелета клеточной стенки (CWS), предпочтительно, MPL+CWS (Detox™); (3) сапониновые адъюванты [глава 22 ссылки 123], такие как QS21 или Stimulon™ (Cambridge Bioscience, Worcester, MA), в простой форме или в форме выработанных из них частиц, таких как ISCOM (иммуностимулирующие комплексы; глава 23 ссылки 123), указанные ISCOM могут быть лишены дополнительного детергента, например, ссылка 126; (4) полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда (IFA); (5) цитокины, такие как интерлейкины (например, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 [127] и т.п.), интерфероны (например, гамма-интерферон), колониестимулирующий фактор макрофагов (М-CSF), фактор некроза опухолей (TNF) и т.п.; (6) монофосфориллипид A (MPL) или 3-О-деацилированный MPL (3dMPL), например, ссылки 128 и 129, необязательно, при практическом отсутствии квасцов, если используется с пневмококковыми сахаридами, например, ссылка 130; (7) комбинации , например, с QS21 и/или эмульсиями типа «масло-в-воде», например, ссылки 131, 132 и 133; (8) олигонуклеотиды, включающие мотивы CpG (Roman et al., Nat. Med., 1997, 3, 849-854; Werner et al., PNAS USA, 1997, 94, 10833-10837; Davis et al., J. Immunol., 1998, 160, 870-876; Chu et al., J. Exp.Med., 1997, 186, 1623-1631; Lipford et al., Eur. J. Immunol., 1997, 27, 2340-2344; Moldoveanu et al., Vaccine, 1988, 16, 1216-1224, Krieg et al., Nature, 1995, 374, 546-549; Klinman et al., PNAS USA, 1996, 93, 2879-2883; Ballas et al., J. Immunol., 1996, 157, 1840-1845; Cowdery et al., J. Immunol., 1996, 156, 4570-4575; Halpern et al., Cell. Immunol., 1996, 167, 72-78; Yamamoto et al., Jpn. J. Cancer Res., 1988, 79, 866-873; Stacey et al., J. Immunol., 1996, 157, 2116-2122; Messina et al., J. Immunol., 1991, 147, 1759-1764; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 4918-4925; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 5394-5402; Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 4755-4761 и Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 5898-5906; международные патентные заявки WO 96/02555, WO 98/16247, WO 98/18810, WO 98/40100, WO 98/55495, WO 98/37919 и WO 98/52581), т.е. содержащие по меньшей мере один динуклеотид CG, в котором 5-метилцитозин, необязательно, используется вместо цитозина; (8) полиоксиэтиленовый эфир или полиоксиэтиленовый сложный эфир, например, ссылка 134; (9) сложный эфир полиоксиэтилена и сорбитана как поверхностно-активный агент в комбинации с октоксинолом [135] или полиоксиэтиленалкиловый эфир или сложный эфир, как поверхностно-активный агент в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным неионным поверхностно-активным агентом, таким как октоксинол [136]; (10) сапонин и иммуностимулирующий олигонуклеотид (например, олигонуклеотид CpG) [137]; (11) иммуностимулятор и частицу соли металла, например, ссылка 138; (12) сапонин и эмульсию типа «масло-вводе», например, ссылка 139; (13) сапонин (например, QS21)+3dMPL+IL12 (необязательно,+стерол), например, ссылка 140; (14) термолабильный энтеротоксин E.coli ("LT") или его детоксифицированные мутанты, такие как мутанты К63 или R72 [например, глава 5 ссылки 141]; (15) холерный токсин («СТ») или его детоксифицированные мутанты [например, глава 5 ссылки 141]; (16) липосомы [главы 13 и 14 ссылки 123]; (17) хитозан [например, ссылка 142]; (18) двухцепочечная РНК; (19) микрочастицы (т.е. частицы диаметром от ~100 нм до -150 мкм, более предпочтительно, диаметром от ~200 нм до ~30 мкм, и, наиболее предпочтительно, диаметром от ~500 нм до -10 мкм), полученные из материалов, которые являются биоразлагаемыми и нетоксичными (например, поли(α-гидроксикислота), таких как поли(лактид-согликолид), полигидроксимасляная кислота, полиортоэфир, полиангидрид, поликапролактон и т.п.), необязательно обработанные таким образом, чтобы иметь отрицательный заряд на поверхности (например, с использованием SDS) или положительный заряд на поверхности (например, с использованием катионного детергента, такого как СТАВ); или (20) другие вещества, которые действуют как иммуностимулирующие агенты, для повышения эффективности композиции [например, глава 7 ссылки 123].
Соли алюминия (особенно фосфаты и/или гидроксиды алюминия) и MF59 являются предпочтительными для использования с сахаридными антигенами по настоящему изобретению. В случае когда используется фосфат алюминия, возможно адсорбировать один или более сахаридов на соли алюминия, но предпочтительно не адсорбировать сахариды на соли алюминия, и этому благоприятствует включение в раствор свободных фосфатных ионов (например, посредством использования фосфатного буфера). В случае когда используется гидроксид алюминия, предпочтительно адсорбировать сахариды на соли. Использование гидроксида алюминия в качестве адъюванта является особенно выгодным для сахарида из серогруппы А.
В композициях по настоящему изобретению возможно адсорбировать некоторые антигены на гидроксиде алюминия, но тогда они должны содержать другие антигены в ассоциации с фосфатом алюминия. Для четырехвалентных комбинаций серогрупп N.meningitidis, например, доступны следующие перестановки:
Серогруппа Соль алюминия (Н=гидроксид; Iр -фосфат) | ||||||||||||||||
А | Р | Н | Р | Н | Н | Н | Р | Р | Р | H | Н | Н | Р | Р | Р | Н |
С | Р | Н | Н | Р | Н | Н | Р | Н | Н | Р | Р | Н | Р | Н | Р | Р |
W135 | Р | Н | Н | Н | Р | Н | Н | Р | Н | Н | Р | Р | Р | Р | Н | Р |
Y | Р | Н | Н | Н | Н | Р | Н | Н | Р | Р | Н | Р | Н | Р | Р | Р |
Для трехвалентных комбинаций серогрупп N. meningitidis доступны следующие перестановки:
Серогруппа Соль алюминия (Н=гидроксид; Р=фосфат) | ||||||||
С | Р | Н | Н | Н | Р | Р | Р | Н |
W135 | Р | Н | Н | Р | Н | Р | Н | Р |
Y | Р | Н | Р | Н | Н | Н | Р | Р |
После изготовления композиции по настоящему изобретению можно вводить непосредственно субъекту. Субъектами, подлежащими лечению, могут быть животные, в частности можно лечить людей.
Вакцины являются особенно пригодными для вакцинации детей и подростков. Их можно вводить системным путем и/или через слизистые оболочки.
Обычно иммуногенные композиции изготавливают в форме препаратов для инъекций, в виде жидких растворов или суспензий; также можно изготавливать твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидких носителях перед применением. Для усиления адъювантного эффекта препарат также можно эмульгировать или инкапсулировать в липосомы. Прямая доставка композиции обычно будет парентеральной (например, путем инъекции, подкожной, интраперитонеальной, внутривенной или внутримышечной, или путем доставки в интерстициальное пространство ткани). Композиции также можно вводить в участок повреждения. Другие способы введения включают оральное и внутрилегочное введение, суппозитории и трансдермальные или чрескожные аппликации (например, см. ссылку 14 3), иглы и гипоспреи. Схема введения может представлять собой однократную дозу или многократные дозы (например, схему, включающую бустер-дозы).
Вакцины по настоящему изобретению предпочтительно являются стерильными. Предпочтительно, они не содержат пирогенов. Предпочтительно, они содержат буфер, поддерживающий рН на уровне, например, от 6 до 8, обычно около 7. В случае когда вакцина включает соль гидроксида алюминия, предпочтительно использовать гистидиновый буфер [144].
Вакцины по настоящему изобретению могут включать детергент (например, Tween, такой как Tween 80) в малых количествах (например,<0,01%). Вакцины по настоящему изобретению могут включать сахарный спирт (например, маннит) или трегалозу, например, около 15 мг/мл, особенно, если им предстоит лиофильная сушка.
Оптимальные дозы отдельных антигенов можно оценить эмпирическим путем. Обычно, однако, сахаридные антигены по настоящему изобретению будут вводиться в дозе от 0,1 до 100 мкг каждого сахарида на одну дозу, при типичном объеме дозы 0,5 мл. Доза обычно содержит от 5 до 20 мкг сахарида на одну дозу. Указанные величины измеряют как сахарид.
Вакцины по настоящему изобретению могут быть профилактическими (т.е. для предупреждения инфекции) или терапевтическими (т.е. для лечения заболевания после инфекции), но обычно будут профилактическими.
Настоящее изобретение относится к способу получения иммунного ответа у пациента, включающему введение пациенту вакцины по настоящему изобретению. Иммунный ответ является предпочтительно защитным против менингококкового заболевания и может включать гуморальный иммунный ответ и/или клеточный иммунный ответ. Пациентом предпочтительно является ребенок.
Способ может вызывать бустерную реакцию у пациента, которому уже была сделана первая прививка от N. meningitidis.
Настоящее изобретение относится также к применению полисахарида, олигосахарида или конъюгата по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для получения иммунного ответа у животного. Лекарственное средство предпочтительно представляет собой иммуногенную композицию (например, вакцину). Лекарственное средство предпочтительно предназначено для профилактики и/или лечения заболевания, вызванного Neisseria (например, менингита, септицемии, гонореи и т.п.), H.influenzae (например, среднего отита, бронхита, пневмонии, целлюлита, перикардита, менингита и т.п.) или пневмококком (например, менингита, сепсиса, пневмонии и т.п.). Таким образом, предпочтительной является профилактика и/или лечение бактериального менингита.
Вакцины можно испытывать на обычных экспериментальных животных (например, см. ссылку 145).
Настоящее изобретение также относится к способу солюбилизации осажденного бактериального капсулярного полисахарида, при котором в качестве растворителя используется этанол.
Определения
Термин «включающий» означает «имеющий в своем составе», а также «состоящий из», например композиция, «включающая» X, может состоять исключительно из X или может иметь в своем составе еще что-либо другое, например X+Y.
Термин «приблизительно» по отношению к численной величине х означает, например, х±10%.
Краткое описание рисунков
Фиг.1 показывает влияние изменяющихся соотношений этанол:вода на солюбилизацию полисахаридов.
Фиг.2-4 показывают титры IgG, полученные у мышей против олигосахаридных антигенов: фиг.2 показывает результаты использования олигосахарида серогруппы А; фиг.3 показывает результаты для серогруппы Y; и фиг.4 показывает результаты для серогруппы W135.
Фиг.5 показывает пост-II титры IgG, полученные у мышей для смеси олигосахаридных конъюгатов для серогрупп А и С: фиг.5а показывает ответы против серогруппы А, и фиг.5b показывает ответы против серогруппы С.
Фиг.6-8 показывают титры IgG, полученные у мышей для смеси олигосахаридных конъюгатов для серогрупп С, W135 и Y: фиг.6 показывает ответы против серогруппы W135; фиг.7 показывает ответы против серогруппы Y; и фиг.8 показывает ответы против серогруппы С.
Фиг.9-11 показывают пост-II титры IgG, полученные у мышей для смеси олигосахаридных конъюгатов для серогрупп А, С, W135 и Y: фиг.9 показывает ответы против серогруппы W135; фиг.10 показывает ответы против серогруппы Y; и фиг.11 показывает ответы против серогруппы А.
Фиг.12 представляет собой калибровочную кривую, полученную с использованием испытуемых образцов полисахарида MenА через различные промежутки времени гидролиза. Кривая показывает линейную зависимость обратной величины степени полимеризации от оптической вращательной способности.
Фиг.13 представляет собой калибровочную кривую, полученную с использованием испытуемых образцов полисахарида MenY через различные промежутки времени гидролиза. Кривая показывает линейную зависимость log степени полимеризации от KD (коэффициента распределения).
Фиг.14-16 показывают пост-II титры IgG, разделенные по подклассам IgG, полученные у мышей после иммунизации олигосахаридными конъюгатами для серогрупп (14) А; (15) С; (16) W135 и (17)Y.
Фиг.17 показывает пост-II титры IgG, разделенные по подклассам IgG, полученные у мышей после иммунизации четырехвалентной смесью олигосахаридных конъюгатов.
Фиг.18 иллюстрирует изготовление олигосахаридного конъюгата.
Фиг.19 показывает (А) анти-MenA и (В) анти-MenC GMT (±95% доверительные интервалы), полученные у морских свинок. Величины над столбиками представляют собой титры сывороточного бактериального анализа (SBA), т.е. обратные величины от величины разведения сыворотки, дающего 50% гибель бактерий.
Способы осуществления настоящего изобретения
А. Получение и очистка менингококковых полисахаридов
Менингококки серогрупп A, W135 и Y выращивали в 500 мл флаконах, содержавших 150 мл среды Franz А, в течение 12 часов при 35±1°С. Перемешивание производилось со скоростью 150 об/мин, с использованием 35 мм возвратно-поступательного шейкера. 85 мл среды затем инокулировали в 20-л ферментер, содержащий среду Watson.
Спустя 18,5 часов (W135 и Y) или 16,5 часов (А), когда ОП достигала 10, ферментацию прерывали добавлением 300 мл формалина, а затем, после 2 часов инкубации, ферментер охлаждали до 10°С. Надосадочную жидкость собирали центрифугированием с последующей фильтрацией (0,22 мкм) и ультрафильтрацией через мембрану 30 кДа.
Необработанный концентрированный полисахарид добавлением СТАВ в виде раствора 100 мг/мл воды. Добавленные объемы показаны в следующей таблице. Через 12 часов выдержки при комнатной температуре СТАВ комплексы собирали центрифугированием. СТАВ комплекс экстрагировали добавлением 95% раствора этанола при комнатной температуре в течение 16-20 ч при интенсивном перемешивании. Объем добавленного этанола показан в следующей таблице:
Серогруппа | Объем СТАВ (мл) | Объем 95% этанола (литры на кг сырой пасты) |
А | 475 | от 3,5 до 6 |
W135 | 200 | от 4 до 6 |
Y | 650 | 3,4 |
Полученные суспензии фильтровали через объемный фильтр CUNO 10 SP. Фильтрат рециркулировал через картридж CUNO zetacarbon™ до достижения ОП275нм<0,2. Фильтрат угля Z затем собирали и фильтровали через 0,22 мкм фильтр. В конечном итоге полисахарид осаждали из этанольной фазы добавлением 2М водного раствора СаСl2 (конечный раствор 10-12 мл/л EtOH). Очищенный полисахарид затем собирали центрифугированием, отмывали 95% этанолом и высушивали в условиях вакуума.
В других экспериментах конечную концентрацию этанола, использовавшегося для экстракции, изменяли (фиг.1). Для полисахарида серогруппы А наиболее эффективными были пределы от 80 до 95% этанола, при более низких процентных долях эффективность экстракции понижалась. Для серогруппы W135 хорошей экстракции добивались с использованием этанола в пределах от 75% до 90%, причем 95% концентрация была менее эффективной. Для серогруппы Y наилучших результатов добивались с использованием этанола в пределах от 75% до 85%, причем более высокие процентные доли (например, 90%, 95%) были менее эффективными. В целом, отмечено, что процентные доли этанола, которые были ниже, чем указанные в настоящем документе, имели тенденцию увеличивать совместную экстракцию примесей, таких как белки. Процентные доли этанола, приведенные в данном параграфе, выражены как конечная концентрация (этанол как процентная доля от общего объема этанол+вода) и основаны на содержании воды в пастах СТАВ-полисахарид, полученных центрифугированием, приблизительно 50% (т.е. 500 г Н2О на кг сырой пасты). Данную величину определили эмпирическим путем в небольших экспериментах с масштабным переходом.
В. Конъюгация полисахаридом серогруппы А
а) Гидролиз
Менингококковый полисахарид серогруппы А подвергали гидролизу в 50 мМ буфере ацетата натрия, рН 4,7, в течение приблизительно 3 ч при 73°С. Гидролиз контролировали с целью получения олигосахаридов со средней степенью полимеризации (DP) приблизительно 10, как определено по соотношению (масс./масс.) общего органического фосфора к сложному моноэфиру фосфорной кислоты.
Соотношение DP (общего органического фосфора) и (фосфора-сложного моноэфира) является обратно пропорциональным оптической вращательной способности (а), как показано на фиг.12. Эти взаимоотношения можно использовать для мониторинга степени гидролиза более удобным образом, чем с помощью прямого измерения количеств фосфора.
b) Разделение по размерам
На данной стадии удаляют короткие олигосахариды, полученные в ходе гидролиза. Полученный выше гидролизат подвергали ультрафильтрации через мембрану с отсекающей величиной 30 кДа (12 диафильтрационных объемов 5 мМ ацетатного буфера, рН 6,5). Удержанный материал, содержащий группу высокомолекулярных соединений, удаляли; прошедший через фильтр материал загружали на колонку Q-Sepharose Fast Flow, уравновешенную в ацетатном буфере 5 мМ, рН 6,5. Затем колонку промывали 5 колоночными объемами (CV) уравновешивающего буфера, затем 10 CV смеси 5 мМ ацетатный буфер/125 мМ NaCl, рН 6,5, с целью удаления олигосахаридов с DP<6. Отделенный по размеру олигосахарид затем элюировали 5 CV смеси 5 мМ ацетатный буфер/0,5 М NaCl, рН 6,5.
Популяция элюированного олигосахарида имела среднюю DP около 15.
c) Введение первичной аминогруппы в восстанавливающийся конец
Соль аммония (ацетат или хлорид) добавляли к раствору отделенного по размеру олигосахарида до конечной концентрации 49-300 г/л, затем добавляли цианоборгидрид натрия до конечной концентрации 12-73 г/л. После доводки рН до 6-7,3 смесь инкубировали при 37°С в течение 5 дней.
Аминоолигосахариды затем очищали тангенциальной проточной ультрафильтрацией с использованием мембраны с отсекающей величиной 1 кДа или 3 кДа и 13 диафильтрационных объемов 0,5 М NaCl, с последующими 7 диафильтрационными объемами 20 мМ NaCl. Раствор очищенных аминоолигосахаридов анализировали на содержание фосфора (одну химическую активность антигена) с помощью процедуры, описанной в ссылке 14 6, и на количество введенных аминогрупп, с помощью процедуры, описанной в ссылке 147.
Очищенные олигосахариды затем сушили с использованием роторного испарителя для удаления воды.
d) Дериватизация до активного сложного эфира
Высушенные аминоолигосахариды солюбилизировали в дистиллированной воде с концентрацией аминогрупп 40 мМ, затем добавляли 9 объемов ДМСО, с последующим добавлением триэтиламина до конечной концентрации 200 мМ. К полученному раствору добавляли N-гидроксисукцинимидный диэфир адипиновой кислоты до конечной концентрации 480 мМ.
Реакционную смесь поддерживали при комнатной температуре при перемешивании в течение 2 часов, затем активированный олигосахарид осаждали ацетоном (конечная концентрация 80% об./об.). Осадок собирали центрифугированием и несколько раз промывали ацетоном для удаления непрореагировавшего N-гидроксисукцинимидного диэфира адипиновой кислоты и побочных продуктов. В конце активированный олигосахарид высушивали в условиях вакуума.
Количество активных сложноэфирных групп, введенных в структуру олигосахарида, определяли колориметрическим способом, как описано в ссылке 148.
e) Конъюгирование с CRM197
Высушенный активированный олигосахарид добавляли к раствору 45 мг/мл CRM.197 в 0,01 М фосфатном буфере с рН 7,2 до соотношения активный сложный эфир/белок (моль/моль) 12:1. Реакционную смесь полдерживали при комнатной температуре при перемешивании в течение ночи. После данного периода времени конъюгат очищали гидрофобной хроматографией или тангенциальной проточной ультрафильтрацией. Очищенный конъюгат MenA-CRM197 фильтровали в стерильных условиях и хранили при температуре от -20°С до -60°С до изготовления вакцины.
Конъюгат анализировали: на содержание белка (анализ на белок microBCA Protein Assay), на содержание сахарида MenА (колориметрический анализ на фосфор), на содержание свободного сахарида, ВЭЖХ профиль (на колонке TSKgel G4000SW 7,5 мм ВД × 30 см) и SDS-PAGE. Характеристики типичных препаратов показаны в следующей таблице:
Код серии | Сахарид (мг/мл) | Белок (мг/мл) | Гликозилирование | KD |
210201/А | 0,257 | 0,864 | 0,3 | 0,489 |
210201/BS | 0, 308 | 1,354 | 0,23 | 0,503 |
210201/BL | 0,28 | 1, 482 | 0,19 | 0,501 |
351230595 | 0,138 | 0,3 | 0, 46 | |
010900 | 0,092 | 0,337 | 0,27 | |
DP29 | 0,105 | 0,245 | 0,43 | |
А1 (не отделенный по размеру) | 0,08 | 0,291 | 0,27 | |
А2 (отделенный по размеру) | 0, 446 | 2, 421 | 0,18 |
С. Конъюгация полисахаридов серогруппы W135
а) Гидролиз
Менингококковый полисахарид серогруппы W подвергали гидролизу в 50 мМ буфере ацетата натрия, рН 4,7, в течение приблизительно 3 ч при 80°С. В результате получали олигосахариды со средней DP приблизительно от 15 до 20, как определено по соотношению сиаловой кислоты (SA) к восстановленной концевой SA.
DP соотношение (общей SA) и (восстановленной концевой SA) относится к KD по результатам ВЭЖХ-SEC, как показано на фиг.13. Эти взаимоотношения можно использовать для мониторинга степени гидролиза более удобным образом, чем с помощью прямого измерения количества SA.
b) Разделение по размерам
Гидролизат подвергали ультрафильтрации через мембрану с отсекающей величиной 30 кДа (от 12 до 20 диафильтрационных объемов 5 мМ ацетатного буфера/15-30 мМ NaCl, рН 6,5). Удержанный материал, содержащий высокомолекулярные соединения, удаляли, в то время как прошедший через фильтр материал загружали на колонку Q-Sepharose Fast Flow, уравновешенную в смеси 5 мМ ацетатного буфера/15 мМ NaCl, рН 6,5. Затем колонку промывали 10 CV уравновешивающего буфера, с целью удаления олигосахаридов с DP ≤3-4 и элюировали 3 CV смеси 5 мМ ацетатный буфер/500 мМ NaCl, рН 6,5.
c) Введение первичной аминогруппы в восстанавливающийся конец
Хлорид или ацетат аммония добавляли к раствору отделенного по размеру олигосахарида до конечной концентрации 300 г/л, затем добавляли цианоборгидрид натрия до конечной концентрации 49 или 73 г/л. Смесь инкубировали при 50°С в течение 3 дней.
Аминоолигосахариды затем очищали тангенциальной проточной ультрафильтрацией, как описано для серогруппы А. Очищенный материал анализировали на содержание сиаловой кислоты (колориметрический способ, как описано в ссылке 149) и/или галактозы (ВЭЖХ) (химическая активность антигена MenW135). Очищенные олигосахариды затем сушили с использованием роторного испарителя для удаления воды.
d) Дериватизация до активного сложного эфира
Высушенные аминоолигосахариды дериватизировали, как описано для серогруппы А.
e) Конъюгирование с CRM197
Конъюгацию выполняли, как описано выше для серогруппы А, но для очистки конъюгата использовали диафильтрацию с мембраной 30 кДа (50 диафильтрационных объемов 10 мМ фосфатного буфера, рН 7,2). Очищенный конъюгат фильтровали в стерильных условиях и хранили при температуре от -20°С до -60°С до изготовления вакцины.
Конъюгат анализировали по тем же параметрам, которые описаны выше для серогруппы А. Содержание сахарида MenW анализировали колориметрическим определением сиаловой кислоты:
Код серии | Сахарид (мг/мл) | Белок (мг/мл) | Гликозилирование | KD |
Серия 1 | 5,73 | 3,52 | 1, 63 | 0,296 |
Серия 2/4,5 | 3,51 | 2,88 | 1,22 | 0,308 |
Серия 3S | 2,49 | 2,25 | 1,11 | 0,380 |
Серия 3Sd | 2,03 | 2,24 | 0, 91 | 0,394 |
Серия 3L | 2,32 | 2,3 | 1,01 | 0,391 |
Серия 3Ld | 1, 94 | 2,29 | 0,85 | 0,383 |
Серия 3S/pr.Glic6 | 0,363 | 0, 82 | 0,44 | 0,498 |
Серия 3S/pr.Glic9 | 0,424 | 0,739 | 0,57 | 0,447 |
Серия 3S/pr.Glicl2 | 0,479 | 0, 714 | 0, 671 | 0,414 |
D. Конъюгация полисахаридов серогруппы Y
а) Гидролиз
Менингококковый полисахарид серогруппы Y подвергали гидролизу, как описано выше для серогруппы W135. В результате получали олигосахариды со средней DP приблизительно от 15 до 20, как определено по соотношению сиаловой кислоты (SA) к восстановленной концевой SA (измеренным косвенно, как описано в пункте С(а) выше).
b) Разделение по размерам, с) Введение аминогруппы, d) Дериватизация до активного сложного эфира и е) Конъюгирование
Данные стадии выполняли, как описано выше для серогруппы W135. Очищенный конъюгат фильтровали в стерильных условиях и хранили при температуре от -20°С до -60°С до изготовления вакцины.
Конъюгат анализировали так же, как описано выше для серогруппы W135:
Код серии | Сахарид (мг/мл) | Белок (мг/мл) | Гликозилирование | KD |
Серия 1А | 1,16 | 0, 92 | 1,26 | 0,303 |
Серия 1 В | 4,57 | 3,55 | 1,29 | 0,339 |
Серия 2/4,5 | 2,32 | 6,1 | 0,38 | 0,467 |
Серия 2/6 | 1,75 | 5,73 | 0,3 | 0,498 |
Е. Иммуногенность отдельных конъюгатов
Замороженные массы конъюгатов оттаивали. Каждый из них разбавляли при перемешивании до конечной концентрации 20 мкг сахарида/мл, 5 мМ фосфата, 9 мг/мл NaCl, фосфата алюминия (до получения концентрации А13+0,6 мг/мл), рН 7,2. Смеси затем держали, без перемешивания, при 2-8°С в течение ночи и дополнительно разбавляли физиологическим раствором до концентрации 4 мкг сахарида/мл для иммунизации мышей.
Вторую серию изготавливали для каждой серогруппы тем же способом, но добавление фосфата алюминия заменяли тем же объемом воды.
Десяти мышам Balb/c для каждой группы иммунизации инъецировали п/к дважды 0,5 мл вакцины на 0 и 4 неделе. Забор крови осуществляли до иммунизации, за день до второй дозы и спустя 2 недели после второй дозы. Иммунизацию проводили (a) конъюгатной вакциной, содержащей или не содержащей квасцы (b) контролем - физиологическим раствором и (с) неконъюгированным полисахаридным контролем.
Специфичные антиполисахаридные антитела IgG определяли в сыворотке крови иммунизированных животных, главным образом, как описано в ссылке 150. Сыворотку от каждой мыши анализировали с двумя повторностями с помощью титрационной кривой и для каждой группы иммунизации рассчитывали величину GMT. Титры рассчитывали в мышиных единицах по ELISA (MEU) с использованием компьютерной программы "Titerun" (FDA). Специфичность антиполисахаридных титров определяли конкурентным ELISA с соответствующим полисахаридом в качестве конкурента.
Как показано на фиг.2, конъюгат MenА индуцировал высокие титры антител у животных. Как ожидалось, неконъюгированный полисахарид не обладал иммуногенностью. Конъюгатная композиция с фосфатом алюминия в качестве адъюванта индуцировала более высокий уровень антител по сравнению с титром, полученным для конъюгата в отдельности. Сходные результаты наблюдались для MenY (фиг.3) и MenW135 (фиг.4).
Подкласс IgG пост-II иммунных ответов измеряли для различных групп.Специфичные подклассы определяли с использованием того же способа ELISA, как для определения общего титра IgG в разделе Е, выше, но с использованием антител против щелочной фосфатазы мышей -IgGl, -IgG2a, -IgG2b или -IgG3 (Zymed) в качестве вторичных антител. Титры выражали как величины OF405нм, полученные через 30 минут проявки субстрата с использованием сыворотки, разведенной 1:3200, и они показаны на фиг.14 (MenА), 15 (MenW135) и 16 (MenY). Ответы наблюдаются, главным образом, в подклассе IgGl, который представляет собой подкласс, преимущественно индуцируемый у мышей Т-зависимыми антигенами. Поскольку полисахариды по своей природе являются Т-зависимыми антигенами, которые не способны индуцировать иммунологическую память, эти данные показывают, что конъюгация обладает желательным действием.
Сыворотки с пост-II также анализировали на предмет бактерицидной активности in vitro с помощью анализа для определения опосредованного комплементом лизиса бактерий. Сыворотки с пост-II инактивировали в течение 30 минут при 56°С перед использованием в анализе, а в качестве источника комплемента использовали 25% комплемент крольчат. Бактерицидный титр выражали как величину, обратную разведению сыворотки, получая 50% гибели бактерий следующих штаммов: MenА G8238, А1, F6124; MenW135 5554(ОАс+) и 242317(ОАс-); MenY 242975(ОАс-) и 240539(ОАс+).
Результаты для MenА включали:
Носитель | Поли/олигосахарид | Прибл. CCDP | Алюминиевый адьювант | GMT | Бактерицидная активность |
CRM197 | О | 15 | - | 461 | F8238: 2048-4096; F6124: 2048-4096 |
CRM197 | О | 15 | фосфат | 920 | F8238: 4096; F6124: 4096 |
- | Р | - | фосфат | 3 | F8238: 8; F6124: 128 |
CRM197 | О | 15 | - | 290 | F8238: 512-1024 |
- | Р | - | - | 2 | F8238:<4 |
CRM197 | О | 15 | - | 155 | F8238: 512-1024 |
CRM197 | O | 15 | - | 393 | F8238: 1024 |
CRM197 | O | 15 | - | 396 | - |
CRM197 | O | 15 | фосфат | 1396 | F8238: 4096 |
CRM197 | O | 15 | фосфат | 1461 | F8238: 2048-4096 |
CRM197 | O | 15 | фосфат | 1654 | F8238: 2048 |
CRM197 | O | 29 | фосфат | 1053 | F8238: 2048 |
CRM197 | неразделенный по размеру O | 10 | фосфат | 1449 | F8238: 2048 |
CRM197 | O | 15 | фосфат | 626 | F8238: 2048-4096 |
CRM197 | O | 15 | - | 742 | - |
CRM197 | O | 15 | - | 2207 | - |
CRM197 | O | 29 | - | 1363 | - |
CRM197 | неразделенный по размеру O | 10 | - | 615 | - |
CRM197 | О | 15 | фосфат | 1515 | - |
CRM197 | O | 15 | фосфат | 876 | - |
CRM197 | О | 15 | фосфат | 1232 | - |
CRM197 | О | 15 | фосфат | 852 | - |
CRM197 | О | 15 | фосфат | 863 | F8238: 2048; А1: 2048; F6124:>2048 |
CRM197 | О | 27 | фосфат | 1733 | F8238: 4096-8192; F6124: 4096-8192 |
CRM197 | О | 15 | фосфат | 172 | F8238: 1024; А1: 1024-2048; F6124: 2048 |
CRM197 | О | 15 | гидроксид | 619 | F8238: 1024; А1: 2048; F6124: 2048 |
Результаты для MenW135 включали:
Носитель | Поли/олигосахарид | ОАс | Алюминиевый адъювант | GMT | Бактерицидная активность |
CRM197 | О | + | - | 14 | 5554: 256-512 |
CRM197 | О | + | фосфат | 23 | 5554: 256-512 |
- | Р | - | - | 5554: 4 | |
CRM197 | О | + | - | 45 | 5554: 1024 |
CRM191 | O | + | - | 101 | 5554: 64-128 |
O | + | - | 80 | 5554: 256-512 | |
CRM197 | O | + | фосфат | 221 | 5554: 1024-2048; 242317: 1024-2048 |
CRM197 | O | - | - | 52 | 5554: 512-1024 |
CRM197 | O | - | фосфат | 329 | 5554: 1024-2048; 242317: 1024-2048 |
CRM197 | O | + | - | 41 | 5554: 256-512 |
CRM197 | O | + | фосфат | 24 | 5554: 1024; 242317: 128-256 |
CRM197 | O | - | - | 116 | 5554: 256-512 |
CRM197 | O | - | фосфат | 185 | 5554: 1024; 242317: 512-1024 |
CRM197 | O | + | фосфат | 565 | 5554: 2048 |
CRM197 | O | + | фосфат | 328 | 5554: 512-1024 |
CRM197 | O | + | фосфат | 490 | 5554: 1024-2048 |
CRM197 | O | + | гидроксид | 189 | 5554: 512-1024; 242317: 512-1024 |
CRM197 | O | + | фосфат | 80 | 5554: 512-1024; 242317: 512-1024 |
CRM197 | O | + | гидроксид | 277 | 5554: 512-1024; 242317: 1024-2048 |
Результаты для MenY включали:
Носитель | Поли/олигосахарид | ССОР | Алюминиевый адъювант | GMT | Бактерицидная активность |
CRM197 | O | >15 | - | 751 | 242975: 8192 |
CRM197 | O | >15 | фосфат | 1190 | 242975: 8192-16384; 240539: 8192-16384 |
CRM197 | O | >15 | - | 284 | 242975: 2048-4096 |
CRM197 | O | >15 | фосфат | 775 | 242975: 2048-4096 |
- | Р | - | - | - | 242975: 256 |
CRM197 | O | >15 | - | 1618 | 242975: 4096-8192 |
CRM197 | O | >15 | - | 2123 | 242975: 2048 |
CRM197 | O | <10 | - | 253 | 242975: 512-1024 |
CRM197 | O | <10 | - | 1060 | 242975: 256-512 |
CRM197 | O | >15 | гидроксид | 1167 | 242975: 8192; 240539: 8192-16384 |
CRM197 | O | >15 | фосфат | 665 | 242975: 8192; 240539: 8192-16384 |
CRM197 | O | >15 | фосфат | 328 | 242975: 4096; 240539: 2048-4096 |
CRM197 | O | >15 | гидроксид | 452 | 242975: 2048; 240539: 1024-2048 |
F. Иммуногенностъ конъюгата МеnА в комбинации с конъюгатом
MenСКонцентрированную массу CRM-MenC (от Chiron Vaccines, Италия) смешивали с концентрированной массой CRM-MenA (полученной, как описано выше), разводили и смешивали перемешиванием. Изготавливали три различных препарата. Каждый содержал 20 мкг сахарида/мл для MenА, но включал различные количества конъюгата MenС: (д.) 20 мкг сахарида/мл; (и) 10 мкг сахарида/мл; (iii) 5 мкг сахарида/мл. Таким образом, соотношения MenА:MenС (масс./масс.) были следующими: (i) 1:1; (ix) 2:1; (iii) 4:1.
Каждый препарат также содержал 5 мМ фосфата натрия, 9 мг/мл NaCl, фосфат алюминия (до концентрации А13+ 0,6 мг/мл), рН 7,2. Каждую смесь затем держали, без перемешивания, при 2-8°С в течение ночи и дополнительно разбавляли 1:5 физиологическим раствором перед иммунизацией мышей.
Вторую серию вакцин изготавливали таким же способом, но добавление фосфата алюминия заменяли тем же объемом воды.
Для каждой из шести вакцин иммунизировали по десять мышей Balb/c, как описано выше. Контрольные группы получали физиологический раствор или только конъюгат MenА.
Антиполисахаридные антитела для MenА и MenС определяли, как описано выше.
Результаты, полученные для смеси конъюгатов MenА+MenС, ясно показывают, что соотношение (масс./масс.) компонентов А и С играет главную роль для иммуногенности MenА. 1
Титр специфичных анти-MenApS, полученный для конъюгата MenА, был выше (с содержанием или без содержания квасцов в качестве адъюванта), чем для комбинации MenА+MenС в той же дозе (фиг.5а). В случае когда в комбинации используется меньшее количество конъюгата MenС, компонентом MenА конъюгата индуцируется более высокий титр анти-MenApS. В то же время, титр анти-MenС остается приемлемым (фиг.5b).
Проводились также эксперименты с морскими свинками. Изготавливали три различных препарата с использованием того же самого фосфата алюминия в качестве адъюванта, как ранее (аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение PO4/AI от 0,84 до 0, 92, 0, 6 мг А13+/мл:
Препарат | MenА* | MenС* | Соотношение MenА:MenС |
А | 20 мкг/мл | 20 мкг/мл | 1:1 |
В | 40 мкг/мл | 20 мкг/мл | 2:1 |
С | 20 мкг/мл | 10 мкг/мл | 1:1/2 |
*Выражено как сахарид |
Данные препараты разбавляли 1:2 физиологическим раствором и использовали для иммунизации морских свинок. Пяти морским свинкам (линия Hartelley, самки, 450-500 граммов) для каждой группы иммунизации инъецировали п/к дважды по 0,5 мл вакцины на 0 и 28 дни. Забор крови осуществляли до первой иммунизации, а затем на 42 день. Сыворотки хранили при -70°С до анализа ELISA и анализа на бактерицидность сыворотки (против MenА штамма МК 83/94 или MenС штамма СИ). Результаты показаны на фиг.19.
G. Комбинированная вакцина для серогрупп С, W135 и Y
Конъюгаты полисахаридов из серогрупп С, W135 и Y смешивали, как описано выше, до получения конечной концентрации 20 мкг сахарида/мл для каждого конъюгата. Вакцина содержала конечную концентрацию 5 мМ фосфата натрия и 9 мг/мл NaCl, рН 7,2. После хранения в течение ночи смесь разбавляли до концентрации 4 мкг сахарида/мл для каждого конъюгата для иммунизации мышей.
Иммунизации и анализ проводили, как описано выше.
Результаты показывают, что иммуногенность конъюгата MenW135 усиливалась, если его вводили в комбинации с конъюгатами MenС и MenY, по сравнению с иммуногенностью, полученной для конъюгата MenW135 в отдельности (фиг.6). Иммуногенность MenY в комбинации была сравнима с иммуногенностью, полученной для отдельного конъюгата (фиг.7) и была сравнима также с иммуногенностью конъюгата MenС (фиг.8).
H. Комбинированная вакцина для серогрупп А, С, W135 и Y
Конъюгаты полисахаридов из серогрупп А, С, W135 и Y смешивали, как описано выше, до получения конечной концентрации 20 мкг сахарида/мл для конъюгатов серогрупп A, W135 и Y и 5 мкг сахарида/мл для конъюгата серогруппы С. Вакцина содержала конечную концентрацию 5 мМ фосфата натрия, 9 мг/мл NaCl, фосфата алюминия (до получения концентрации А13+ 0,6 мг/мл), рН 7,2. Смеси затем держали, без перемешивания, при 2-8°С в течение ночи и дополнительно разбавляли физиологическим раствором до концентрации 4 мкг сахарида/мл для конъюгатов A, W135 и Y и 1 мкг сахарида/мл для конъюгата С. Указанную разбавленную смесь использовали для иммунизации.
Иммунизации и анализ проводили, как описано выше, с контролями, включавшими отдельные конъюгаты, за исключением серогруппы С.
Фиг.9 показывает, что, как ранее, иммуногенность конъюгата MenW135 усиливалась, если его вводили в комбинации с конъюгатами MenА, MenС и MenY. Фиг.10 показывает, что иммуногенность конъюгата MenY практически не отличалась при его доставке в комбинации с конъюгатами MenА, MenС и MenW135. Фиг.11 показывает, что иммуногенность конъюгата MenА значительно снижалась в комбинации, даже если конъюгат MenС вводили в более низкой дозе (1/4). Данная антигенная конкуренция не наблюдалась в неконъюгированной четырехвалентной (ACWY) полисахаридной вакцине [5].
I. ЛиофилизированныЙ антиген серогруппы А
Капсулярный полисахарид серогруппы А N. meningitidis является особенно чувствительным к гидролизу. Конъюгаты капсулярного олигосахарида MenА, таким образом, изготавливали в лиофилизированной форме, готовой для повторного растворения перед введением. Изготавливали лиофилизированную форму с компонентами, которые дают следующий состав после восстановления с получением единичной дозы:
Компонент | Концентрация |
CRM-MenA | 20 мкг сахарида/мл |
Буфер фосфат калия | 5 мМ |
Маннит | 15 мг/мл |
Данная композиция не содержит адъюванта. Для восстановления ее изготавливали два адъюванта:
Компонент | Концентрация | Концентрация |
Гидроксид алюминия | 0, 68 мг А1-**/мл | - |
Фосфат алюминия* | - | 0, 6 мг Аl3+/мл |
Буфер фосфат натрия | - | 10 мМ |
Гистидиновый буфер | 10 мМ | - |
Хлорид натрия | 9 мг/мл | 9 мг/мл |
Tween 80 | 0,005% | 0,005% |
рн | 7,2±0,05 | 7,2±0,05 |
*Аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение РО4/А1 от 0,84 до 0,92 |
После восстановления водой для инъекций стабильность сахаридного компонента была следующей:
Время (Дни) | Хранение при 2-8°С | Хранение при 36-38°С | ||||
Общий сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид, % | Общий сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид, % | |
0 | 17,72 | 1,04 | 5,9 | 17,72 | 1,04 | 5,9 |
15 | 17,01 | 0,88 | 5,2 | 16, 52 | 2,26 | 13,7 |
30 | 17,82 | 0,89 | 5,0 | 17,29 | 2, 64 | 15,3 |
По истечении той же временной шкалы в 4 недели величина рН была стабильной на уровне 7,2 как при 2-8°С, так и при 36-38°С, содержание белка было стабильным на уровне 24,5 мкг/мл, а содержание влаги было менее 2,5%.
После восстановления раствором фосфата алюминия в качестве адъюванта и хранении при 2-8°С стабильность была следующей:
Время (часы) | Общий сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид, % |
0 | 16, 62 | 1,09 | 6, 6 |
24 | 16, 51 | 0, 98 | 5,9 |
48 | 16, 83 | 0, 99 | 5,9 |
J. Комбинированная вакцина для серогрупп А, С, W135 и Y (лиофилизированныЙ конъюгат серогруппы А)
Изготавливали трехвалентную смесь компонентов MenС, W135 и Y, адсорбированную на гидроксиде алюминия в качестве адъюванта (2 мг/мл) или смешанную с фосфатом алюминия в качестве адъюванта (аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение PO4/AI от 0,84 до 0,92, 0,6 мг/мл А13+, в присутствии 10 мМ фосфатного буфера). Составы двух трехвалентных смесей были следующими:
Компонент | Концентрация | Концентрация |
Гидроксид алюминия | 0, 68 мг AlJ+/Mn | - |
Фосфат алюминия* | - | 0, 6 мг А^/мл |
CRM-MenC | 20 мкг сахарида/мл | 20 мкг сахарида/мл |
CRM-MenY | 20 мкг сахарида/мл | 20 мкг сахарида/мл |
CRM-MenW135 | 20 мкг сахарида/мл | 20 мкг сахарида/мл |
Буфер фосфат натрия | - | 10 мМ |
Гистидиновый буфер | 10 мМ | - |
Хлорид натрия | 9 мг/мл | 9 мг/мл |
Tween 80 | 0,005% | 0,005% |
*Аморфный гидроксифосфат, молярное соотношение РO4/Аl от 0,84 до 0,92 |
Для гидроксидной смеси стабильность сахаридных компонентов была следующей:
Время (дни) | Хранение при 2-8°С | Хранение при 36-38°С | ||
Свободный сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид, % | Свободный сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид, % | |
MenС в массе | ||||
0 | <1,2 | <6 | <1,2 | <6 |
15 | <1,2 | <б | <1,2 | <6 |
30 | <1,2 | <6 | <1,2 | <6 |
MenС во флаконах | ||||
0 | <1,2 | <б | <1,2 | <б |
15 | <1,2 | <6 | <1,2 | <б |
30 | <1,2 | <6 | 1,3 | 6, 6 |
MenW135 в массе | ||||
0 | 2,5 | 12,5 | 2,5 | 12,5 |
15 | 2,3 | 11,4 | 3,4 | 16,8 |
30 | 2,3 | 11,5 | 3,5 | 17,3 |
MenW135 во флаконах | ||||
0 | 2,1 | 10, 6 | 2,1 | 10, 6 |
15 | 2,3 | 11,7 | 2,7 | 13,3 |
30 | 2,0 | 10,2 | 3,3 | 16, 3 |
MenY в массе |
0 | 1,7 | 8,3 | 1,7 | 8,3 |
15 | <1,3 | <6,3 | 2,0 | 10,2 |
30 | 1,3 | 6,3 | 2,4 | 12,2 |
MenY во флаконах | ||||
0 | 1,4 | 7,1 | 1,4 | 7,1 |
15 | 1,5 | 7,6 | 2,1 | 10,7 |
30 | 1,3 | 6,3 | 2,9 | 14,3 |
По истечении той же временной шкалы в 4 недели величина рН была стабильной на уровне 7,15±0,05 как при 2-8°С, так и при 36-38°С.
Для фосфатной смеси стабильность сахаридных компонентов была
следующей:
Время (дни) | Хранение при 2-8°С | Хранение при 36-38°С | ||||
Общий сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид, % | Общий сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид (мкг/мл) | Свободный сахарид, % | |
MenС в массе | ||||||
0 | 22,8 | <1,0 | <5 | 22,8 | <1,0 | <5 |
15 | 17,2 | <1,0 | <5 | 18, 6 | <1,0 | <5 |
30 | 18,9 | <1,0 | <5 | 20,5 | <1,0 | <5 |
MenС во флаконах | ||||||
0 | 20,5 | <1,0 | <5 | 20,5 | <1,0 | <5 |
15 | 18,3 | <1,0 | <5 | 23, 4 | <1,0 | <5 |
30 | 18,0 | <1,0 | <5 | 20, 5 | <1,0 | <5 |
MenW135 в массе | ||||||
0 | 20,7 | 2,0 | 10, 4 | 20,7 | 2,0 | 10,4 |
15 | 21,9 | 2,3 | 11,6 | 21,2 | 2,1 | 10,3 |
30 | 19,6 | 2,1 | 10,6 | 21,0 | 2,4 | 11,8 |
MenW135 во флаконах | ||||||
0 | 23,4 | 1,7 | 8,4 | 23, 4 | 1,7 | 8,4 |
15 | 21,2 | 1,9 | 9,5 | 20, 1 | 2,2 | 11,1 |
30 | 20,1 | 2,2 | 11,2 | 21,3 | 3,2 | 16,1 |
MenY в массе | ||||||
0 | 19,1 | <1,1 | <5,3 | 19,1 | <1,1 | <5,3 |
15 | 20,1 | 1,4 | 6,8 | 18,7 | 1,3 | 6,4 |
30 | 18, 6 | 1,4 | 7,6 | 19,2 | 1,7 | 8,3 |
MenY во флаконах | ||||||
0 | 21,4 | <1,1 | <5,3 | 21,4 | <1,1 | <5,3 |
15 | 19,6 | 1,4 | 6,8 | 19,0 | 1,5 | 7,4 |
30 | 17,7 | 1,2 | 6,2 | 18, 4 | 1,9 | 9,4 |
По истечении той же временной шкалы в 4 недели величина рН
была стабильной на уровне 7,05±0,05 как при 2-8°С, так и при 36-38°С.
Трехвалентные жидкие композиции разбавляли и использовали 0,5 мл для восстановления лиофилизированного конъюгата MenА. Полученную трехвалентную смесь вводили десяти мышам Balb/c (самки в возрасте 6-8 недель) в каждой группе путем подкожной инъекции на 0 и 28 день. Смесь содержала по 2 мкг каждого сахаридного конъюгата на дозу, что составляет 1/5 от однократной человеческой дозы (SHD). Контроли представляли собой физиологический раствор или неконъюгированные гомологичные полисахариды. Забор крови осуществляли до иммунизации, а затем на 42 день, и сыворотки хранили при -70°С. IgG определяли, как описано выше.
Все использованные конъюгаты для животных были безопасными и иимуногенными. Пост-II GMT титры по результатам ELISA (с 95% доверительными интервалами) были следующими:
Вакцина | Адъювант | А | Y | W135 | С |
MenА (лиофилизированный и суспендированный) | Фосфат алюминия | 172 (69-439) | - | - | - |
Гидроксид алюминия | 619 (419-906) | - | - | - | |
MenY | Фосфат алюминия | - | 328 (147-731) | - | - |
Гидроксид алюминия | - | 452 (344-593) | - | - | |
MenW | Фосфат алюминия | - | - | 80 (28-225) | - |
Гидроксид алюминия | - | - | 277 (185-411) | - | |
MenС | Фосфат алюминия | - | - | - | 317 (152-659) |
Гидроксид алюминия | - | - | - | 723 (615-851) | |
MenА (лиофилизированный)+MenС, W135, Y |
Фосфат алюминия | 32 (15-68) | 397 (252-627) | 99 (35-288) | 114 (53-246) |
Гидроксид алюминия | 206 (112-372) | 141 (97-205) | 139 (76-251) | 163 (122-218) |
Фиг.17 показывает результаты анализа подкласса IgG для: (17А) MenА; 17(B) MenС; (17С) MenW135 и (17D) MenY. IgGl отчетливо является наиболее выраженным подклассом.
Сывороточные бактерицидные титры были следующими: | |||||||||
Вакцина | Адъювант | Анти-MenА | Анти-MenY | Анти-MenWI35 | Анти-MenС | ||||
F8238 | А1 | F6124 | 242975 | 240539 | 5554 | 242317 | СП | ||
MenА (лиофилизи-рованный) | Фосфат алюминия | 512-1024 | 1024-2048 | 2048- | - | - | - | - | - |
Гидроксид алюминия | 1024-2048 | 1024-2048 | 2048 | - | - | - | - | - | |
MenY | Фосфат алюминия | - | - | - | 4096 | 2048-4096 | - | - | - |
Гидроксид алюминия | - | - | - | 2048 | 1024-2048 | - | - | - | |
MenW | Фосфат алюминия | - | - | - | - | - | 512 | 512-1024 | - |
Гидроксид алюминия | - | - | - | - | - | 1024 | 1024-2048 | - | |
MenС | Фосфат алюминия | - | - | - | - | - | - | - | 2048-4096 |
Гидроксид алюминия | - | - | - | - | - | - | - | 4096 | |
MenА (лиофилизи-рованный)+MenС, W135, Y | Фосфат алюминия | 128-256 | 1024 | 1024-2048 | 2048 | - | 256-512 | 1024 | 512 |
Гидроксид алюминия | 512 | 1024-2048 | 1024-2048 | 2048-4096 | 256-512 | 1024 | 512-1024 | ||
К. Комбинированная вакцина для серогрупп А, С, W135 и Y (различные дозировки) |
Мышей иммунизировали, как описано выше, но вакцинные композиции имели разные соотношения различных олигосахаридных конъюгатов. Дозы составляли 0,5, 1, 2 или 4 мкг на дозу и изменялись. Во всех экспериментах использовали лиофилизированный олигоконъюгат MenА.
Титры ELISA были следующими: | ||||||||
Количество антигена (м кг/доза) | Алюминиевый адъювант | GMT ELISA (95% доверительный интервал) | ||||||
А | С | W135 | Y | А | С | W135 | Y | |
4 | 2 | 2 | 2 | Фосфат | 177 (107-291) | 367 (263-510) | 239 (135-424) | 239 (184-311) |
4 | 2 | 2 | 2 | Гидроксид | 390 (313-486) | 494 (345-706) | 338 (266-430) | 158 (96-260) |
2 | 2 | 2 | 2 | Фосфат | 132 (59-296) | 582 (268-1155) | 143 (75-272) | 247 (152-400) |
2 | 2 | 2 | 2 | Гидроксид | 337 (239-476) | 569 (462-679) | 171 (117-251) | 100 (59-169) |
4 | 2 | 1 | 1 | Фосфат | 137 (47-397) | 192 (88-421) | 18 (4-75) | 315 (174-571) |
4 | 2 | 1 | 0,5 | Фосфат | 152 (85-271) | 207 (100-428) | 51 (21-125) |
220 (125-388) | |
4 | 2 | 1 | 2 | Фосфат | 113 (49-263) | 230 (98-540) | 23 (6-91) | 267 (81-877) | |
4 | 2 | 0,5 | 1 | Фосфат | 267 (109-656) | 504 (300-847) | 46 (15-134) | 583 (330-1030) | |
4 | 2 | 2 | 1 | Фосфат | 87 (49-155) | 118 (51-278) | 24 (8-72) | 214 (140-326) | |
2 | 2 | 1 | 1 | Фосфат | 217 (132-355) | 514 (332-796) | ПО (66-183) | 206 (141-300) | |
2 | 2 | 1 | 0,5 | Фосфат | 105 (40-279) | 381 (180-808) | 90 (34-236) | 206 (96-445) | |
2 | 2 | 1 | 2 | Фосфат | 155 (71-339) | 374 (196-713) | 53 (28-100) | 502 (335-752) | |
2 | 2 | 0,5 | 1 | Фосфат | 224 (125-400) | 358 (223-577) | 43 (14-128) | 624 (426-914) | |
2 | 2 | 2 | 1 | Фосфат | 180 (113-288) | 306 (190-492) | 70 (34-146) | 423 (258-696) | |
Сывороточные бактерицидные титры были следующими: | |||||||||
Количество антигена (м кг/доза) | Алюминиевый | Бактерицидный титр антител | |||||||
А | С | W135 | Y | адъювант | А | С | W135 | Y | |
4 | 2 | 2 | 2 | Фосфат | 256-512 | 1024-2048 | 1024-2048 | 4096-8192 | |
4 | 2 | 2 | 2 | Гидроксид | 1024-2048 | 256-512 | 1024-2048 | 1024-2048 | |
2 | 2 | 2 | 2 | Фосфат | 512-1024 | 1024-2048 | 128-256 | 8192-16384 | |
2 | 2 | 2 | 2 | Гидроксид | 256 | 1024-2048 | 256 | 512-1024 | |
4 | 2 | 1 | I | Фосфат | 512-1024 | 2048 | 128 | 2048-4096 | |
4 | 2 | 1 | 0,5 | Фосфат | 512-1024 | 1024-2048 | 128 | 2048-4096 | |
4 | 2 | 1 | 2 | Фосфат | 512-1024 | 2048-4096 | 128 | 8192-16384 | |
4 | 2 | 0,5 | 1 | Фосфат | 1024-2048 | 8192 | 256-512 | 8192-16384 | |
4 | 2 | 2 | 1 | Фосфат | - | 2048-4096 | 128 | 4096-8192 | |
2 | 2 | 1 | 1 | Фосфат | 1024-2048 | 1024-2048 | 256 | 4096-8192 | |
2 | 2 | 1 | 0,5 | Фосфат | 1024-2048 | 2048-4096 | 256-512 | 2048-4096 | |
2 | 2 | 1 | 2 | Фосфат | 512-1024 | 1024-2048 | 128 | 8192-16384 | |
2 | 2 | 0,5 | 1 | Фосфат | 1024-2048 | 2048 | 256-512 | 4096-8192 | |
2 | 2 | 2 | 1 | Фосфат | 128-256 | 512-1024 | 64-128 | 1024-2048 |
Вторую серию экспериментов проводили с использованием дозы сахарида 2 мкг/мл для MenА и MenС; половину указанной дозы для MenY и четверть дозы для MenW135. Титры ELISA были следующими:
Количество антигена (мкг/доза) | Алюминиевый адъювант | GMT ELISA (95% доверительный интервал) | ||||||||||||||||
А | С | W135 | Y | А | С | W135 | Y | |||||||||||
2 | 2 | 2 | 2 | Фосфат | 32 (15-68) | 114 (53-246) | 99 (35-288) | 397 (252-627) | ||||||||||
Гидроксид | 206 (112-372) | 163 (122-218) | 139 (76-251) | 141 (97-205) | ||||||||||||||
2 | 2 | 1 | 0,5 | Фосфат | 96 (49-187) | 238 (101-561) | 42 (20-89) | 315 (114-867) | ||||||||||
Гидроксид | 293 (144-597) | 267 (158-451) | 83 (43-163) | 244 (152-392) | ||||||||||||||
Сывороточные бактерицидные титры были следующими: | ||||||||||||||||||
Количество антигена мкг/доза) |
Алюминиевый адъювант | А | С | W135 | Y | |||||||||||||
А | С | W | Y | F8238 | А1 | F6124 | С11 | 5554 | 242317 | 242975 | ||||||||
2 | 2 | 2 | 2 | Фосфат | 128-256 | 1024 | 1024-2048 | 512 | 256-512 | 1024 | 2048 | |||||||
Гидроксид | 512 | 1024-2048 | 1024-2048 | 512-1024 | 256-512 | 1024 | 2048-4096 | |||||||||||
2 | 2 | 1 | 0,5 | Фосфат | 256 | - | 1024-2048 | 512 | 256-512 | 1024 | 2048-4096 | |||||||
Гидроксид | 128 | - | 512-1024 | 512-1024 | 512-1024 | 1024 | 1024 | |||||||||||
L. Олигосахаридные конъюгаты MenА, W135 и Y |
Следующая таблица показывает данные, относящиеся к конъюгатам MenА, MenW135 и MenY, подходящим для изготовления комбинированных композиций по настоящему изобретению:
А | W135 | Y | |
DP после отделения по размеру | 16, 6 | 21,9 | 21,1 |
Соотношение сахарид/белок | 0,5 | 1,1 | 0,7 |
KD | 0,44 | 0,36 | 0,41 |
Свободный сахарид | 5% | 10% | 5% |
Свободный белок | <2% | <2% | <2% |
Следует понимать, что настоящее изобретение было описано примером и что в нем можно производить изменения, оставаясь в пределах объема и идеи настоящего изобретения.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ (содержание которых целиком включено в настоящий документ в качестве ссылок)
[1] Frash (1990) pp.123-145 of Advances in Biotechnological Processes vol. 13 (eds. Mizrahi & Van Wezel).
[2] Armand et al. (1982) J. Biol. Stand. 10:335-339.
[3] Cadoz et al. (1985) Vaccine 3:340-342.
[4] MMWR (1997) 46(RR-5) 1-10.
[5] Baklaic et al. (1983) Infect. Immun. 42:599-604.
[6] Costantino et al. (1992) Vaccine 10:691-698.
[7] WO 02/00249.
[8] Inzana (1987) Infect. Immun. 55:1573-1579.
[9] WO 98/32873.
[10] US patent 4,753,796.
[11] European patent 0072513.
[12] UK patent application 0207117.3.
[13] Pon et al. (1997) J Exp Med 185:1929-1938.
[14] Ravenscroft et al. (1999) Vaccine 17:2802-2816.
[15] Ramsay et al. (2001) Lancet 357(9251):195-196.
[16] Lindberg (1999) Vaccine 17 Suppl 2:S28-36.
[17] Buttery & Moxon (2000) J R Coll Physicians Lond 34:163-168.
[18] Ahmad & Chapnick (1999) Infect Dis Clm North Am 13:113-133, vii.
[19] Goldblatt (1998) J. Med. Microbiol. 47:563-567.
[20] European patent 0477508.
[21] US patent 5,306,492.
[22] WO 98/42721.
[23] Dick et al. in Conjugate Vaccines (eds. Cruse et al.) Karger, Basel, 1989, Vol.10, pp.48-114.
[24] Hermanson Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego (1996) ISBN: 0123423368.
[25] Anonymous (Jan 2002) Research Disclosure, 453077.
[26] Anderson (1983) Infect Immun 39(1):233-238.
[27] Anderson et al. (1985) J Clin Invest 76(l):52-59.
[28] EP-A-0372501.
[29] EP-A-0378881.
[30] EP-A-0427347.
[31] WO 93/17712.
[32] WO 94/03208.
[33] WO 98/58668.
[34] EP-A-0471177.
[35] WO 91/01146.
[36] Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824.
[37] WO 00/56360.
[38] WO 00/61761.
[39] WO 99/42130.
[40] WO 96/40242.
[41] Lees et al. (1996) Vaccine 14:190-198.
[42] WO 95/08348.
[43] US patent 4,882,317.
[44] US patent 4,695,624.
[45] Mol. Immunol., 1985, 22, 907-919.
[46] EP-A-0208375.
[47] WO 00/10599.
[48] Gever et al., Med. Microbiol. Immunol, 165: 171-288 (1979).
[49] US patent 4,057,685.
[50] US patents 4,673,574; 4,761,283; 4,808,700.
[51] US patent 4,459,286.
[52] US patent 4,965,338.
[53] US patent 4,663,160.
[54] US patent 4,761,283.
[55] US patent 4,356,170.
[56] Lei et al. (2000) Dev Biol (Basel) 103:259-264.
[57] WO 00/38711; US patent 6,146,902.
[58] McLeod Griffiss et al. (1981) Infect. Immun. 34:725-732.
[59] WO 99/24578.
[60] WO 99/36544.
[61] WO 99/57280.
[62] WO 00/22430.
[63] Tettelin et al. (2000) Science 287:1809-1815.
[64] Pizza et al. (2000) Science 287:1816-1820.
[65] WO 01/52885.
[66] Bjune et al. (1991) Lancet 338(8775):1093-1096.
[67] Fukasawa et al. (1999) Vaccine 17:2951-2958.
[68] Rosenqvist et al. (1998) Dev. Biol. Stand. 92:323-333.
[69] WO 96/14086.
[70] Covacci & Rappuoli (2000) J. Exp.Med. 19:587-592.
[71] WO 93/18150.
[72] Covacci et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5791-5795.
[73] Tummuru et al. (1994) Infect. Immun. 61:1799-1809.
[74] Marchetti et al. (1998) Vaccine 16:33-37.
[75] Telford et al. (1994) J. Exp.Med. 179:1653-1658.
[76] Evans et al. (1995) Gene 153:123-127.
[77] WO 96/01272 & WO96/01273, especially SEQ ID N0:6.
[78] WO 97/25429.
[79] WO 98/04702.
[80] Watson (2000) Pediatr Infect Dis J 19:331-332.
[81] Rubin (2000) Pediatr Clin North Am 47:269-285, v.
[82] Jedrzejas (2001) Microbiol Mol Biol Rev 65:187-207.
[83] Bell (2000) Pediatr Infect Dis J 19:1187-1188.
[84] Iwarson (1995) APMIS 103:321-326.
[85] Gerlich et al. (1990) Vaccine 8 Suppl:S63-68 & 79-80.
[86] WO 93/24148.
[87] Costantino et al. (1999) Vaccine 17:1251-1263.
[88] WO 97/00697.
[89] Hsu et al. (1999) Clm Liver Dis 3:901-915.
[90] WO 02/02606.
[91] Kalman et al. (1999) Nature Genetics 21:385-389.
[92] Read et al. (2000) Nucleic Acids Res 28:1397-406.
[93] Shirai et al. (2000) J. Infect. Dis. 181(Suppl 3):S524-
S527.
[94] WO 99/27105.
[95] WO 00/27994.
[96] WO 00/37494.
[97] WO 99/28475.,
[98] Ross et al. (2001) Vaccine 19:4135-4142.
[99] Sutter et al. (2000) Pediatr Clin North Am 47:287-308.
[100] Zimmerman & Spann (1999) Am Fam Physician 59:113-118, 125-126.
[101] Dreesen (1997) Vaccine 15 Suppl:S2-6.
[102] MMWR Morb Mortal Nkly Rep 1998 Jan 16; 47(1):12, 19.
[103] Vaccines (1988) eds. Plotkin & Mortimer. ISBN 0-7216-1946-0.
[104] McMichael (2000) Vaccine 19 Suppl 1:S101-107.
[105] Schuchat (1999) Lancet 353(9146):51-6.
[106] WO 02/34771.
[107] Dale (1999) Infect Dis Clm North Am 13:227-43, vni.
[108] Ferretti et al. (2001) PNAS USA 98: 4658-4663.
[109] Kuroda et al. (2001) Lancet 357(9264): 1225-1240; see also pages 1218-1219.
[110] Anderson (2000) Vaccine 19 Suppl l:S59-65.
[111] Kahn (2000) Curr Opin Pediatr 12:257-262.
[112] Crowe (1995) Vaccine 13:415-421.
[113] J Toxicol Clm Toxicol (2001) 39:85-100.
[114] Demicheli et al. (1998) Vaccine 16:880-884.
[115] Stepanov et al. (1996) J Biotechnol 44:155-160.
[116] Wassilak & Orenstein, Chapter 4 of Vaccines (eds.
Plotkin & Mortimer), 1988.
[117] Gustafsson et al. (1996) N. Engl. J. Med. 334:349-355.
[118] Rappuoli et al. (1991) TIBTECH 9:232-238.
[119] WO 97/28273.
[120] Lieberman et al. (1996) JAMA 275:1499-1503.
[121] WO 00/56365.
[122] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 20th ed ISBN: 0683306472.
[123] Vaccine Design... (1995) eds. Powell & Newman. ISBN: 030644867X. Plenum.
[124] WO 90/14837.
[125] US patent 6,299,884.
[126] WO 00/07621.
[127] WO 99/44636.
[128] GB-2220221.
[129] EP-A-0689454.
[130] WO 00/56358.
[131] JEP-A-0835318.
[132] EP-A-0735898.
[133] EP-A-0761231.
[134] WO 99/52549.
[135] WO 01/21207.
[136] WO 01/21152.
[137] WO 00/62800.
[138] WO 00/23105.
[139] WO 99/11241.
[140] WO 98/57659.
[141] Del Giudice et al. (1998) Molecular Aspects of Medicine, vol. 19, number 1.
[142] WO 99/27960.
[143] WO 98/20734.
[144] UK patent application 0118249.2.
[145] WO 01/30390.
[146] Chen et al. (1956) Anal. Chem. (1956) 28:1756-1758.
[147] Habeeb et al. (1966) Anal. Biochem. 14:328-336.
[148] Miron & Wilchek (1982) Anal. Biochem. 126:433-435.
[149] Svennerholm (1957) Biochem. Biophys. Acta 24:604-61.
[150] Carlone et al (1992) J.Clin. Microbiol. 30:154-159.
Claims (28)
1. Набор для профилактики или лечения бактериального менингита, содержащий: (а) конъюгированный капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, в лиофилизированной форме; и (b) капсулярные сахариды, происходящие из N. meningitidis серогрупп С, W135 и Y, в жидкой форме, в котором соотношение (масс./масс.) сахарида серогруппы А и сахарида серогруппы С превышает 1.
2 Набор по п.1, в котором один или более из сахаридов (b) конъюгированы с белком-носителем.
2 Набор по п.1, в котором один или более из сахаридов (b) конъюгированы с белком-носителем.
3. Набор по п.2, в котором белок-носитель представляет собой дифтерийный анатоксин CRM197.
4. Набор по п.1, в котором капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, конъютрован с бактериальным токсином или анатоксином.
5. Набор по п. 4, в котором бактериальный токсин или анатоксин представляет собой дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин или дифтерийный анатоксин CRM197.
6. Набор по п.1, в котором конъюгация осуществляется способом, включающим введение аминогрупп в сахарид, с последующими получением производных с помощью сложного диэфира адипиновой кислоты и реакцией с белком-носителем.
7. Набор по п.1, в котором конъюгированный капсулярный сахарид, происходящий из N. meningitidis серогруппы А, имеет соотношение сахарид: белок (масс./масс.) между 0.5:1 и 5:1.
8. Набор по п.1, в котором один или более из сахаридов адсорбируется на гидроксиде алюминия в качестве адъюванта.
9. Набор по п.1, в котором компонент (b) содержит соль алюминия в качестве адъюванта.
10. Набор по п.9, в котором компонент (b) содержит фосфат алюминия в качестве адъюванта.
11. Набор по п.1, в котором один или более из сахаридов представляют собой олигосахарид.
12. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы А имеет среднюю степень полимеризации между 10 и 20.
13. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы W135 имеет среднюю степень полимеризации между 15 и 25.
14. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы Y имеет среднюю степень полимеризации между 15 и 25.
15. Набор по п.1, в котором сахарид серогруппы С имеет от 12 до 22 повторяющихся звеньев.
16. Набор по п.1, в котором соотношение (масс./масс.) сахарида серогруппы А и сахарида серогруппы С составляет 2:1.
17. Набор по п.1, в котором соотношение (масс./масс.) сахаридов серогрупп А: С: W135: Y представляет собой 2:1:1:1.
18. Набор по п.1, в виде двух ампул.
19. Набор по п.1, кроме того, содержащий сахаридный антиген, происходящий из Haemophilus influenzae В.
20. Набор по п.1, в котором доза находится в промежутке от 5 до 20 мг в расчете на сахарид.
21. Применение набора по п.1 для приготовления вакцины для профилактики или лечения бактериального менингита.
22. Применение по п.21, в котором соотношение (масс./масс.) сахаридов серогрупп А: С: W135: Y представляет собой 2:1:1:1.
23. Применение по п.21, в котором сахариды конъюгированы с дифтерийным анатоксином CRM197.
24. Применение по п.21, в котором конъюгация осуществляется способом, включающим введение аминогрупп в сахарид с последующими получением производных с помощью сложного диэфира адипиновой кислоты и реакцией с белком-носителем.
25. Применение по п.21, в котором один или более из сахаридов представляют собой олигосахарид.
26. Применение по п.21, в котором один или более из сахаридов адсорбируется на гидроксиде алюминия в качестве адъюванта.
27. Применение по п.21, в котором вакцина содержит фосфат алюминия в качестве адъюванта.
28. Применение по п.21, в котором вакцина содержит сахаридный антиген, происходящий из Haemophilus influenzae В, белки, происходящие из N. meningitidis серогруппы В, или OMV препараты.
29. Применение по п.21, в котором доза находится в промежутке от 5 до 20 мг в расчете на сахарид.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0115176,0 | 2001-06-20 | ||
GBGB0115176.0A GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-06-20 | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004101284/13A Division RU2381814C2 (ru) | 2001-06-20 | 2002-06-20 | Способ очистки бактериального капсулярного полисахарида neisseria meningitidis или haemophilus influenzae и способ получения вакцины |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009108660A RU2009108660A (ru) | 2010-09-20 |
RU2528066C2 true RU2528066C2 (ru) | 2014-09-10 |
Family
ID=9917070
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004101284/13A RU2381814C2 (ru) | 2001-06-20 | 2002-06-20 | Способ очистки бактериального капсулярного полисахарида neisseria meningitidis или haemophilus influenzae и способ получения вакцины |
RU2009108660/10A RU2528066C2 (ru) | 2001-06-20 | 2009-03-11 | Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2004101284/13A RU2381814C2 (ru) | 2001-06-20 | 2002-06-20 | Способ очистки бактериального капсулярного полисахарида neisseria meningitidis или haemophilus influenzae и способ получения вакцины |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (9) | US8753651B2 (ru) |
EP (10) | EP2229954B1 (ru) |
JP (4) | JP5075317B2 (ru) |
CN (4) | CN101524533A (ru) |
AT (3) | ATE556718T1 (ru) |
AU (3) | AU2002321716B2 (ru) |
BE (4) | BE2010C033I2 (ru) |
BR (2) | BRPI0210590B8 (ru) |
CA (3) | CA2450203C (ru) |
CY (6) | CY1110820T1 (ru) |
DE (6) | DE122010000042I1 (ru) |
DK (6) | DK2189165T3 (ru) |
ES (9) | ES2670219T3 (ru) |
FR (4) | FR10C0042I1 (ru) |
GB (1) | GB0115176D0 (ru) |
LU (4) | LU91732I2 (ru) |
MX (1) | MXPA03011462A (ru) |
NL (3) | NL300458I2 (ru) |
NZ (2) | NZ529881A (ru) |
PT (6) | PT2277536T (ru) |
RU (2) | RU2381814C2 (ru) |
TR (2) | TR201808055T4 (ru) |
WO (1) | WO2003007985A2 (ru) |
Families Citing this family (118)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9928196D0 (en) | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
PT2332581E (pt) | 2001-01-23 | 2015-10-16 | Sanofi Pasteur Inc | Vacina meningocócica tri- ou tetravalente de conjugados de polissacárido e crm-197 |
GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
GB0118249D0 (en) * | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
DE60325565D1 (de) * | 2002-03-26 | 2009-02-12 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modifizierte saccharide mit verbesserter stabilität in wasser |
MXPA04011249A (es) | 2002-05-14 | 2005-06-06 | Chiron Srl | Vacunas mucosales con adyuvante de quitosano y antigenos meningococicos. |
GB0302218D0 (en) | 2003-01-30 | 2003-03-05 | Chiron Sri | Vaccine formulation & Mucosal delivery |
CA2493124C (en) * | 2002-08-02 | 2014-04-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine |
GB0220194D0 (en) | 2002-08-30 | 2002-10-09 | Chiron Spa | Improved vesicles |
ATE492288T1 (de) | 2002-10-11 | 2011-01-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Polypeptidimpstoffe zum breiten schutz gegen hypervirulente meningokokken-linien |
PT2279746E (pt) | 2002-11-15 | 2013-12-09 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Proteínas de superfície de neisseria meningitidis |
GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
JP4827726B2 (ja) * | 2003-01-30 | 2011-11-30 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | 複数の髄膜炎菌血清群に対する注射可能ワクチン |
GB0308198D0 (en) | 2003-04-09 | 2003-05-14 | Chiron Srl | ADP-ribosylating bacterial toxin |
JP4918356B2 (ja) * | 2003-06-23 | 2012-04-18 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | Y群髄膜炎菌ワクチン及びそれらの髄膜炎菌組合せワクチン |
GB0323103D0 (en) * | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
CN103357002A (zh) * | 2003-10-02 | 2013-10-23 | 诺华疫苗和诊断有限公司 | 多种脑膜炎球菌血清群的液体疫苗 |
GB0406013D0 (en) * | 2004-03-17 | 2004-04-21 | Chiron Srl | Analysis of saccharide vaccines without interference |
GB0408977D0 (en) | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Chiron Srl | Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins |
GB0408978D0 (en) | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Chiron Srl | Meningococcal fermentation for preparing conjugate vaccines |
RU2379052C2 (ru) | 2004-04-30 | 2010-01-20 | Чирон С.Р.Л. | Вакцинация менингококковыми конъюгатами |
GB0409745D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
GB0500787D0 (en) | 2005-01-14 | 2005-02-23 | Chiron Srl | Integration of meningococcal conjugate vaccination |
GB0410866D0 (en) | 2004-05-14 | 2004-06-16 | Chiron Srl | Haemophilius influenzae |
GB0411387D0 (en) | 2004-05-21 | 2004-06-23 | Chiron Srl | Analysis of saccharide length |
GB0413868D0 (en) * | 2004-06-21 | 2004-07-21 | Chiron Srl | Dimensional anlaysis of saccharide conjugates |
BRPI0515125A (pt) * | 2004-08-30 | 2008-07-08 | Sanofi Pasteur Inc | conjugados de polissacarìdeo derivatizado-proteìna multivalentes, meningocócicos e vacina |
AU2005286798A1 (en) * | 2004-09-21 | 2006-03-30 | Sanofi Pasteur, Inc. | Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine |
GB0424092D0 (en) | 2004-10-29 | 2004-12-01 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
GB0502095D0 (en) * | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Conjugation of streptococcal capsular saccharides |
GB0502096D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Purification of streptococcal capsular polysaccharide |
SG164344A1 (en) | 2005-02-18 | 2010-09-29 | Novartis Vaccines & Diagnostics Srl | Immunogens from uropathogenic escherichia coli |
EP1858920B1 (en) | 2005-02-18 | 2016-02-03 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli |
GB0505518D0 (en) | 2005-03-17 | 2005-04-27 | Chiron Srl | Combination vaccines with whole cell pertussis antigen |
KR101730748B1 (ko) | 2005-04-08 | 2017-04-26 | 와이어쓰 엘엘씨 | 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물 |
WO2006113528A2 (en) | 2005-04-18 | 2006-10-26 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Expressing hepatitis b virus surface antigen for vaccine preparation |
GB0513071D0 (en) * | 2005-06-27 | 2005-08-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
GB0513069D0 (en) * | 2005-06-27 | 2005-08-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
US8431136B2 (en) | 2005-06-27 | 2013-04-30 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
RU2457858C2 (ru) | 2005-09-01 | 2012-08-10 | Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс Гмбх Унд Ко Кг | Множественная вакцинация, включающая менингококки серогруппы с |
CA2621578C (en) * | 2005-09-05 | 2014-07-22 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Serum bactericidal assay for n. meningitidis specific antisera |
GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
CA2644724C (en) | 2006-03-17 | 2016-05-24 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Methods for preparing complex multivalent immunogenic conjugates |
ES2670231T3 (es) | 2006-03-22 | 2018-05-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Regímenes para inmunización con conjugados meningocócicos |
US10828361B2 (en) * | 2006-03-22 | 2020-11-10 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Regimens for immunisation with meningococcal conjugates |
GB0605757D0 (en) | 2006-03-22 | 2006-05-03 | Chiron Srl | Separation of conjugated and unconjugated components |
TW200806315A (en) * | 2006-04-26 | 2008-02-01 | Wyeth Corp | Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions |
CN101081296B (zh) * | 2006-05-29 | 2010-08-04 | 北京民海生物科技有限公司 | 一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖制备方法及其联合疫苗 |
US7491517B2 (en) | 2006-07-19 | 2009-02-17 | Jeeri R Reddy | Method of producing meningococcal meningitis vaccine for Neisseria meningitidis serotypes A,C,Y, and W-135 |
EP2586790A3 (en) | 2006-08-16 | 2013-08-14 | Novartis AG | Immunogens from uropathogenic Escherichia coli |
AU2007307800C1 (en) * | 2006-10-10 | 2014-03-13 | Wyeth Llc | Purification of Streptococcus pneumoniae type 3 polysaccharides |
GB0700136D0 (en) | 2007-01-04 | 2007-02-14 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process for manufacturing vaccines |
GB0700562D0 (en) * | 2007-01-11 | 2007-02-21 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modified Saccharides |
DK2129693T3 (en) * | 2007-03-23 | 2017-02-13 | Wyeth Llc | BRIEF PURIFICATION PROCEDURE FOR THE PREPARATION OF STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE-Capsule POLYACCHARIDES |
US8398985B2 (en) * | 2007-04-23 | 2013-03-19 | Serum Institute Of India Ltd. | Antigenic polysaccharides and process for their preparation |
EP2152302B1 (en) | 2007-06-04 | 2015-10-07 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Formulation of meningitis vaccines |
GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
CA2698157C (en) * | 2007-09-11 | 2016-10-11 | University Of Guelph | Novel polysaccharide immunogens from clostridium difficile |
ES2383231T3 (es) | 2007-10-19 | 2012-06-19 | Novartis Ag | Formulaciones para vacunas meningocócicas |
ES2532946T3 (es) | 2008-02-21 | 2015-04-06 | Novartis Ag | Polipéptidos PUfH meningocócicos |
CN101724085B (zh) * | 2008-10-22 | 2011-09-21 | 上海生物制品研究所 | 一种荚膜多糖纯化方法 |
AU2009309416B2 (en) | 2008-10-27 | 2015-05-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Purification method |
GB0822633D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Formulation |
GB0822634D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Meningitis vaccines |
US20100189737A1 (en) | 2008-12-17 | 2010-07-29 | Arico Beatrice | Meningococcal vaccines including hemoglobin receptor |
CN102596240B (zh) | 2009-08-27 | 2015-02-04 | 诺华股份有限公司 | 包括脑膜炎球菌fHBP序列的杂交多肽 |
CA2779798C (en) | 2009-09-30 | 2019-03-19 | Novartis Ag | Conjugation of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular polysaccharides |
MX2012004850A (es) | 2009-10-27 | 2012-05-22 | Novartis Ag | Polipeptidos fhbp meningococicos modificados. |
EP3199177A1 (en) | 2009-10-30 | 2017-08-02 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Purification of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular saccharides |
EP2547357A1 (en) | 2010-03-18 | 2013-01-23 | Novartis AG | Adjuvanted vaccines for serogroup b meningococcus |
WO2012025873A2 (en) | 2010-08-23 | 2012-03-01 | Wyeth Llc | STABLE FORMULATIONS OF NEISSERIA MENINGITIDIS rLP2086 ANTIGENS |
EP2612148B1 (en) | 2010-09-04 | 2019-06-12 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Bactericidal antibody assays to assess immunogenicity and potency of meningococcal capsular saccharide vaccines |
PE20140173A1 (es) | 2010-09-10 | 2014-02-20 | Wyeth Llc | Variantes no lipidadas de antigenos orf2086 de neisseria meningitidis |
GB201101665D0 (en) | 2011-01-31 | 2011-03-16 | Novartis Ag | Immunogenic compositions |
WO2012085668A2 (en) | 2010-12-24 | 2012-06-28 | Novartis Ag | Compounds |
RU2013144207A (ru) | 2011-03-02 | 2015-04-10 | Новартис Аг | Комбинированные вакцины с пониженными дозами антигена и/или адъюванта |
US9149541B2 (en) | 2011-07-08 | 2015-10-06 | Novartis Ag | Tyrosine ligation process |
CU20110202A7 (es) | 2011-11-02 | 2013-12-27 | Inst Finlay Ct De Investigación Producción De Sueros Y Vacunas | Composición inmunogénica de polisacáridos planos adyuvados y las formulaciones resultantes |
CN104080479B (zh) | 2011-11-07 | 2019-11-05 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 包括spr0096和spr2021抗原的运载体分子 |
CA2863178C (en) * | 2012-01-30 | 2021-04-06 | Serum Institute Of India Ltd. | Immunogenic composition |
EP2822584A1 (en) | 2012-03-08 | 2015-01-14 | Novartis AG | Combination vaccines with tlr4 agonists |
SG10201602558UA (en) | 2012-03-09 | 2016-05-30 | Pfizer | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
MX2014014067A (es) | 2012-05-22 | 2015-02-04 | Novartis Ag | Conjugado de serogrupo x de meningococo. |
CN104487086B (zh) * | 2012-07-07 | 2019-08-30 | 巴拉特生物技术国际有限公司 | 无动物源的不含酒精的疫苗组合物及其制备方法 |
CN103623404B (zh) * | 2012-08-28 | 2016-08-03 | 天士力制药集团股份有限公司 | 一种b型流感嗜血杆菌多糖结合疫苗的制备方法 |
CA2882619A1 (en) | 2012-09-06 | 2014-03-13 | Novartis Ag | Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p |
CA2892035C (en) * | 2012-11-21 | 2019-11-05 | Serum Institute Of India Ltd. | Production of neisseria meningitidis x capsular polysaccharide |
CN105007935A (zh) | 2012-12-18 | 2015-10-28 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 用于保护免于白喉和/或破伤风的缀合物 |
EP2964665B1 (en) | 2013-03-08 | 2018-08-01 | Pfizer Inc | Immunogenic fusion polypeptides |
EP3613755A1 (en) | 2013-07-11 | 2020-02-26 | Novartis AG | Lysine-specific chemoenzymatic protein modifications using microbial transglutaminase |
US9910041B2 (en) | 2013-07-12 | 2018-03-06 | Emd Millipore Corporation | Method of determining virus removal from a sample containing a target protein using activated carbon |
CA2923129C (en) | 2013-09-08 | 2020-06-09 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
RS61246B1 (sr) | 2014-02-28 | 2021-01-29 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modifikovani meningokokni fhbp polipeptidi |
EP3148577B1 (en) | 2014-05-24 | 2021-01-20 | Biological E Limited | Novel semi-synthetic meningococcal conjugate vaccine |
CN104548090B (zh) * | 2015-01-27 | 2016-11-30 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种β-葡聚糖修饰的脑膜炎多糖结合疫苗及其制备方法 |
BR112017017460A2 (pt) | 2015-02-19 | 2018-04-10 | Pfizer Inc. | composições de neisseria meningitidis e métodos das mesmas |
CN105037579A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-11-11 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | A群脑膜炎球菌细菌荚膜粗多糖的制备工艺 |
BE1024634B1 (fr) | 2016-04-05 | 2018-05-14 | Gsk Vaccines S.R.L. | Compositions immunogenes |
SG11201901394XA (en) | 2016-09-02 | 2019-03-28 | Sanofi Pasteur Inc | Neisseria meningitidis vaccine |
CA3035320A1 (en) | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccines for neisseria gonorrhoeae |
US11951165B2 (en) | 2016-12-30 | 2024-04-09 | Vaxcyte, Inc. | Conjugated vaccine carrier proteins |
AU2018215585B2 (en) | 2017-01-31 | 2022-03-17 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
CA3052621A1 (en) | 2017-02-03 | 2018-08-09 | Schadeck, Eva Barbara | Haemophilus influenzae saccharide-carrier conjugate compositions and uses thereof |
US20200061542A1 (en) * | 2017-02-24 | 2020-02-27 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Methods for improving filterability of polysaccharide-protein conjugate reactions |
US11400162B2 (en) | 2017-02-24 | 2022-08-02 | Merck Sharp & Dohme Llc | Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein |
AU2018262438B2 (en) * | 2017-05-05 | 2022-07-14 | Serum Institute Of India Private Limited | Method for removal of impurities from bacterial capsular polysaccharide based preparations |
KR20200010321A (ko) * | 2017-05-17 | 2020-01-30 | 엠에스디 웰컴 트러스트 힐레맨 랩스 피브이티. 리미티드 | 세균성 다당류의 정제 |
EP3678694A4 (en) * | 2017-09-07 | 2021-10-20 | Merck Sharp & Dohme Corp. | METHOD FOR FORMULATING PNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDES FOR CONJUGATION TO A CARRIER PROTEIN |
WO2019175900A1 (en) * | 2018-03-16 | 2019-09-19 | Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt. Ltd. | Purification of neisseria meningitidis polysaccharides |
CN113966234A (zh) | 2019-05-10 | 2022-01-21 | 葛兰素史克生物有限公司 | 缀合物的产生 |
CA3161857A1 (en) | 2019-11-22 | 2021-05-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Dosage and administration of a bacterial saccharide glycoconjugate vaccine |
GB202013262D0 (en) | 2020-08-25 | 2020-10-07 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccine Composition |
CN115721709A (zh) * | 2021-08-27 | 2023-03-03 | 康希诺生物股份公司 | 一种肺炎球菌结合疫苗制备方法 |
GB202115151D0 (en) | 2021-10-21 | 2021-12-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods |
GB202208089D0 (en) | 2022-06-01 | 2022-07-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
GB202208093D0 (en) | 2022-06-01 | 2022-07-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1996040242A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein |
RU2105568C1 (ru) * | 1989-12-14 | 1998-02-27 | Нэшнл Рисерч Каунсл Оф Канада | Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b |
Family Cites Families (144)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB207117A (en) | 1923-04-05 | 1923-11-22 | Fernand Prosper Constant Lebru | Improvements in otter boards |
US4057685A (en) | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
US4123520A (en) * | 1977-08-01 | 1978-10-31 | Merck & Co., Inc. | Method for preparing high molecular weight meningococcal Group C vaccine |
US4134214A (en) | 1977-08-05 | 1979-01-16 | Merck & Co., Inc. | Freeze-drying process for the preparation of meningococcus vaccine without degradation of potency |
DE2748132A1 (de) * | 1977-10-27 | 1979-05-03 | Behringwerke Ag | Stabilisator fuer polysaccharid |
US4220717A (en) | 1977-12-22 | 1980-09-02 | American Cyanamid Company | Isolation and purification of polyribosyl ribitol phosphate from Haemophilus influenzae type b. |
US4242501A (en) * | 1979-08-08 | 1980-12-30 | American Cyanamid Company | Purification of pneumococcal capsular polysaccharides |
US4351762A (en) | 1981-03-10 | 1982-09-28 | Bioresearch, Inc. | Rapid, quantitative peptide synthesis using mixed anhydrides |
US4356170A (en) | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
BE889979A (fr) † | 1981-08-14 | 1982-02-15 | Smith Kline Rit | Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation |
US4902506A (en) | 1983-07-05 | 1990-02-20 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
US4673574A (en) | 1981-08-31 | 1987-06-16 | Anderson Porter W | Immunogenic conjugates |
US4451446A (en) * | 1982-03-04 | 1984-05-29 | Smithkline-Rit | Process for the preparation of polysaccharide-protein complexes from bacterial capsules, obtained products and immunogenic compositions containing them |
US4496538A (en) | 1982-07-06 | 1985-01-29 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine |
EP0109688A3 (en) | 1982-11-23 | 1986-12-03 | The Wellcome Foundation Limited | Improved complexes, processes for obtaining them and formulations containing such complexes |
JPS59176214A (ja) * | 1982-11-23 | 1984-10-05 | ザ・ウエルカム・フアウンデ−シヨン・リミテツド | 抗原性組成物 |
US4459286A (en) | 1983-01-31 | 1984-07-10 | Merck & Co., Inc. | Coupled H. influenzae type B vaccine |
US4663160A (en) | 1983-03-14 | 1987-05-05 | Miles Laboratories, Inc. | Vaccines for gram-negative bacteria |
US4761283A (en) | 1983-07-05 | 1988-08-02 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
US4762713A (en) | 1983-07-05 | 1988-08-09 | The University Of Rochester | Boosting of immunogenic conjugate vaccinations by unconjugated bacterial capsular polymers |
EP0145359B1 (en) * | 1983-11-21 | 1991-01-16 | The Wellcome Foundation Limited | Improved complexes, processes for obtaining them and formulations containing such complexes |
US4695624A (en) | 1984-05-10 | 1987-09-22 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency |
US4882317A (en) | 1984-05-10 | 1989-11-21 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency |
US4808700A (en) | 1984-07-09 | 1989-02-28 | Praxis Biologics, Inc. | Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers |
IT1187753B (it) | 1985-07-05 | 1987-12-23 | Sclavo Spa | Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente |
US4814276A (en) | 1986-04-25 | 1989-03-21 | Becton, Dickinson And Company | Selective medium for growth of neisseria |
US4877613A (en) | 1987-08-05 | 1989-10-31 | Biotech Connections, Inc. | Process for preparing veterinary acellular vaccines against gram-negative nonenteric pathogenic bacilli |
US4761713A (en) * | 1987-11-06 | 1988-08-02 | North American Philips Corp. | Glycol based mid-volt capacitor |
GB8815795D0 (en) | 1988-07-02 | 1988-08-10 | Bkl Extrusions Ltd | Glazing bead |
NL8802046A (nl) | 1988-08-18 | 1990-03-16 | Gen Electric | Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen. |
DE3841091A1 (de) | 1988-12-07 | 1990-06-13 | Behringwerke Ag | Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
JP3436756B2 (ja) | 1988-12-19 | 2003-08-18 | アメリカン・サイアナミド・カンパニー | 髄膜炎菌のクラスiの外膜タンパク質のワクチン |
EP0378881B1 (en) | 1989-01-17 | 1993-06-09 | ENIRICERCHE S.p.A. | Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines |
US4963534A (en) | 1989-05-19 | 1990-10-16 | Merck & Co., Inc. | Process for solubilizing polyanoinic bacterial polysaccharides in aprotic solvents |
JPH0832638B2 (ja) | 1989-05-25 | 1996-03-29 | カイロン コーポレイション | サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤 |
CA2063271A1 (en) | 1989-07-14 | 1991-01-15 | Subramonia Pillai | Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines |
IT1237764B (it) | 1989-11-10 | 1993-06-17 | Eniricerche Spa | Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici. |
ATE128628T1 (de) | 1990-08-13 | 1995-10-15 | American Cyanamid Co | Faser-hemagglutinin von bordetella pertussis als träger für konjugierten impfstoff. |
US5256294A (en) * | 1990-09-17 | 1993-10-26 | Genentech, Inc. | Tangential flow filtration process and apparatus |
US5153312A (en) | 1990-09-28 | 1992-10-06 | American Cyanamid Company | Oligosaccharide conjugate vaccines |
CA2059692C (en) * | 1991-01-28 | 2004-11-16 | Peter J. Kniskern | Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine |
CA2059693C (en) | 1991-01-28 | 2003-08-19 | Peter J. Kniskern | Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae |
DE69231663T2 (de) | 1991-03-12 | 2001-08-23 | Nasa | Polysaccharid-protein-konjugate |
SK18594A3 (en) * | 1991-08-16 | 1994-08-10 | Merck & Co Inc | Method of production of capsular polysacharide without lipid and endotoxine |
US5314811A (en) | 1992-07-13 | 1994-05-24 | Merck & Co., Inc. | Process for converting lipid-containing bacterial capsular polysaccharide into lipid-free polysaccharide |
FR2682388B1 (fr) | 1991-10-10 | 1995-06-09 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal. |
EP0967279B1 (en) | 1992-03-02 | 2008-01-02 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Helicobacter pylori cytotoxin useful for vaccines and diagnostics |
IT1262896B (it) | 1992-03-06 | 1996-07-22 | Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini. | |
NZ253065A (en) | 1992-05-23 | 1996-10-28 | Smithkline Beecham Biolog | Combination vaccines comprising hepatitis b surface antigens and other antigens wherein aluminium phosphate adjuvant is used to adsorb the hepatitis antigen |
HU219808B (hu) | 1992-06-25 | 2001-08-28 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Adjuvánst tartalmazó vakcinakompozíció és eljárás annak előállítására |
IL102687A (en) | 1992-07-30 | 1997-06-10 | Yeda Res & Dev | Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them |
DE69405551T3 (de) | 1993-03-23 | 2005-10-20 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen |
AU678613B2 (en) * | 1993-09-22 | 1997-06-05 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
ATE229978T1 (de) | 1994-07-01 | 2003-01-15 | Chiron Corp | Helicobacter proteine und impstoffe |
US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
CA2194761C (en) | 1994-07-15 | 2006-12-19 | Arthur M. Krieg | Immunomodulatory oligonucleotides |
GB9422096D0 (en) * | 1994-11-02 | 1994-12-21 | Biocine Spa | Combined meningitis vaccine |
US6696065B1 (en) * | 1995-05-04 | 2004-02-24 | Aventis Pastuer Limited | Acellular pertussis vaccines and methods of preparation thereof |
US20030157129A1 (en) | 1995-06-23 | 2003-08-21 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine comprising a polysaccharide antigen - carrier protein conjugate and free carrier protein |
US5811102A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-22 | National Research Council Of Canada | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines |
SI1082965T1 (sl) | 1995-06-23 | 2009-08-31 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Sestavek cepiva, ki vsebuje antigen konjugata polisaharida, adsorbiranega na aluminijevem fosfatu |
US20020054884A1 (en) | 1995-06-23 | 2002-05-09 | Smithkline Beecham Biologicals, Sa | Vaccine composition comprising a polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate |
GB9513261D0 (en) | 1995-06-29 | 1995-09-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
AU1463097A (en) | 1996-01-04 | 1997-08-01 | Rican Limited | Helicobacter pylori bacterioferritin |
KR19990082265A (ko) | 1996-02-01 | 1999-11-25 | 다니엘 제이. 압둔-나비 | 효모중에서 b군 나이세리아 멘인기티디스 외막(mb3)단백질을 발현시키는 방법 및 백신 |
DK0897427T3 (da) † | 1996-02-14 | 2005-02-14 | Merck & Co Inc | Fremgangsmåde til fældning af polysaccharid |
DE19630390A1 (de) | 1996-07-26 | 1998-01-29 | Chiron Behring Gmbh & Co | Proteine, insbesondere Membranproteine von Helicobacter pylori, ihre Herstellung und Verwendung |
JP4162267B2 (ja) | 1996-08-27 | 2008-10-08 | カイロン コーポレイション | Neisseria meningitidis血清型B複合糖質およびその使用法 |
ATE292980T1 (de) | 1996-10-11 | 2005-04-15 | Univ California | Immunostimulierende oligonucleotidekonjugate |
US5980898A (en) | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
US6248334B1 (en) | 1997-01-08 | 2001-06-19 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Process for preparing conjugate vaccines including free protein and the conjugate vaccines, immunogens, and immunogenic reagents produced by this process |
AU722315B2 (en) * | 1997-01-21 | 2000-07-27 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Polysaccharide-peptide conjugates |
EP0975790B1 (de) * | 1997-01-24 | 2004-09-29 | Schweiz. Serum-&Impfinstitut Bern | Neues verfahren zur isolierung von polysacchariden |
WO1998037919A1 (en) | 1997-02-28 | 1998-09-03 | University Of Iowa Research Foundation | USE OF NUCLEIC ACIDS CONTAINING UNMETHYLATED CpG DINUCLEOTIDE IN THE TREATMENT OF LPS-ASSOCIATED DISORDERS |
ATE441432T1 (de) | 1997-03-10 | 2009-09-15 | Ottawa Hospital Res Inst | Verwendung von nicht-methyliertem cpg dinukleotid in kombination mit aluminium als adjuvantien |
US6299881B1 (en) | 1997-03-24 | 2001-10-09 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts |
US6403306B1 (en) | 1997-04-09 | 2002-06-11 | Emory University | Serogroup-specific nucleotide sequences in the molecular typing of bacterial isolates and the preparation of vaccines thereto |
ES2230687T3 (es) | 1997-04-24 | 2005-05-01 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Copulacion de proteinas nomodificadas con polisacaridos derivados de haloacilo o de dihaloacilo para la preparacion de vacunas que incluyen proteinas-polisacaridos. |
EP1003531B1 (en) | 1997-05-20 | 2007-08-22 | Ottawa Health Research Institute | Processes for preparing nucleic acid constructs |
EP1849860B1 (en) | 1997-05-28 | 2010-11-17 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Process for preparing an immunogenic factor of Corynebacterium diphtheriae using a culture medium with yeast extract as aminoacid source and no protein complexes of animal origin |
CA2291483C (en) | 1997-06-06 | 2012-09-18 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof |
GB9712347D0 (en) | 1997-06-14 | 1997-08-13 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
GB9713156D0 (en) | 1997-06-20 | 1997-08-27 | Microbiological Res Authority | Vaccines |
JP2002506448A (ja) | 1997-06-24 | 2002-02-26 | カイロン コーポレイション | 抗髄膜炎菌ワクチン組成物を使用して成体を免疫する方法 |
DK1007546T3 (da) * | 1997-08-27 | 2009-03-16 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Molekylære mimetika af meningokok-B-epitoper |
EP1009382B1 (en) | 1997-09-05 | 2003-06-18 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Oil in water emulsions containing saponins |
US5965714A (en) | 1997-10-02 | 1999-10-12 | Connaught Laboratories, Inc. | Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules |
BR9813930A (pt) | 1997-11-06 | 2006-12-19 | Chiron Spa | antìgeno neisserial |
CA2307846A1 (en) | 1997-11-21 | 1999-06-03 | Genset S.A. | Chlamydia pneumoniae genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection |
GB9725084D0 (en) | 1997-11-28 | 1998-01-28 | Medeva Europ Ltd | Vaccine compositions |
BR9814912A (pt) | 1997-11-28 | 2000-10-03 | Genset Sa | Sequência genÈmica e polipeptìdeos de chlamydia trachomatis, fragmentos dos mesmos e usos dos mesmos, em particular para o diagnóstico, a prevenção e o tratamento de infecção |
CA2316975C (en) | 1997-12-23 | 2009-03-24 | North American Vaccine, Inc. | Procedures for the extraction and isolation of bacterial capsular polysaccharides for use as vaccines or linked to proteins as conjugate vaccines |
EP1047784B2 (en) | 1998-01-14 | 2015-03-18 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Neissera meningitidis antigens |
US7018637B2 (en) | 1998-02-23 | 2006-03-28 | Aventis Pasteur, Inc | Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines |
US6303114B1 (en) | 1998-03-05 | 2001-10-16 | The Medical College Of Ohio | IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens |
GB9806456D0 (en) * | 1998-03-25 | 1998-05-27 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
WO1999052549A1 (en) | 1998-04-09 | 1999-10-21 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Adjuvant compositions |
NZ532665A (en) | 1998-05-01 | 2005-11-25 | Inst Genomic Research | Neisseria meningitidis antigens and compositions |
JP5074644B2 (ja) | 1998-05-29 | 2012-11-14 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス,インコーポレーテッド | 組合わせの髄膜炎菌b/cワクチン |
GB9817052D0 (en) | 1998-08-05 | 1998-09-30 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
CA2340692A1 (en) | 1998-08-19 | 2000-03-02 | North American Vaccine, Inc. | Immunogenic .beta.-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide |
US6128656A (en) * | 1998-09-10 | 2000-10-03 | Cisco Technology, Inc. | System for updating selected part of configuration information stored in a memory of a network element depending on status of received state variable |
MXPA01003557A (es) | 1998-10-09 | 2004-04-05 | Chiron Corp | Secuencias genomicas de neisseria y metodos para su uso. |
DE122007000087I1 (de) | 1998-10-16 | 2008-03-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Adjuvanzsysteme und impfstoffe |
AU1722300A (en) | 1998-11-12 | 2000-05-29 | Regents Of The University Of California, The | Chlamydia pneumoniae genome sequence |
GB9828000D0 (en) | 1998-12-18 | 1999-02-10 | Chiron Spa | Antigens |
US6146902A (en) | 1998-12-29 | 2000-11-14 | Aventis Pasteur, Inc. | Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions |
BR0009163A (pt) | 1999-03-19 | 2001-12-26 | Smithkline Beecham Biolog | Vacina |
FR2791895B1 (fr) | 1999-03-23 | 2001-06-15 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Utilisation de trehalose pour stabiliser un vaccin liquide |
JP2002541808A (ja) | 1999-04-09 | 2002-12-10 | テクラブ, インコーポレイテッド | ポリサッカリド結合体ワクチンのための組換えトキシンaタンパク質キャリア |
BRPI0010612B8 (pt) | 1999-04-19 | 2021-05-25 | Smithkline Beecham Biologicals S A | vacinas |
CA2373236C (en) | 1999-05-19 | 2014-08-26 | Chiron S.P.A. | Combination neisserial compositions |
GB9918319D0 (en) * | 1999-08-03 | 1999-10-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
US6531131B1 (en) | 1999-08-10 | 2003-03-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Conjugate vaccine for Neisseria meningitidis |
CZ20021045A3 (cs) | 1999-09-24 | 2002-08-14 | Smithkline Beecham Biologicals S. A. | Pomocný prostředek |
KR20020038770A (ko) | 1999-09-24 | 2002-05-23 | 장 스테판느 | 애쥬번트로서의 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와옥톡시놀의 조합물의 용도 및 백신과 관련된 이의 용도 |
GB9925559D0 (en) | 1999-10-28 | 1999-12-29 | Smithkline Beecham Biolog | Novel method |
ES2307553T3 (es) * | 1999-12-02 | 2008-12-01 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Composiciones y procedimientos para estabilizar moleculas biologicas tras liofilizacion. |
EP2275129A3 (en) | 2000-01-17 | 2013-11-06 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Outer membrane vesicle (OMV) vaccine comprising N. meningitidis serogroup B outer membrane proteins |
WO2001064920A2 (en) | 2000-02-28 | 2001-09-07 | Chiron Spa | Hybrid expression of neisserial proteins |
US6800455B2 (en) | 2000-03-31 | 2004-10-05 | Scios Inc. | Secreted factors |
GB0108364D0 (en) * | 2001-04-03 | 2001-05-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine composition |
AU8189501A (en) | 2000-06-29 | 2002-01-08 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
DE60139690D1 (de) | 2000-07-03 | 2009-10-08 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Immunisierung gegen chlamydia pneumoniae |
GB0022742D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
CN101428006A (zh) * | 2000-09-28 | 2009-05-13 | 诺华疫苗和诊断公司 | 微粒体组合物及其生产方法 |
SG165981A1 (en) | 2000-10-27 | 2010-11-29 | Chiron Srl | Nucleic acids and proteins from streptococcus groups a & b |
PT2332581E (pt) * | 2001-01-23 | 2015-10-16 | Sanofi Pasteur Inc | Vacina meningocócica tri- ou tetravalente de conjugados de polissacárido e crm-197 |
WO2002080648A2 (en) * | 2001-04-05 | 2002-10-17 | Chiron Corporation | Mucosal boosting following parenteral priming |
GB0115176D0 (en) * | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
AU2002334844B2 (en) | 2001-10-03 | 2007-08-02 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Adjuvanted meningococcus compositions |
DE60325565D1 (de) | 2002-03-26 | 2009-02-12 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modifizierte saccharide mit verbesserter stabilität in wasser |
GB0302218D0 (en) | 2003-01-30 | 2003-03-05 | Chiron Sri | Vaccine formulation & Mucosal delivery |
CA2485999C (en) | 2002-05-14 | 2015-02-17 | Chiron Srl | Mucosal combination vaccines for bacterial meningitis |
GB0220198D0 (en) | 2002-08-30 | 2002-10-09 | Chiron Spa | Modified saccharides,conjugates thereof and their manufacture |
ATE492288T1 (de) | 2002-10-11 | 2011-01-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Polypeptidimpstoffe zum breiten schutz gegen hypervirulente meningokokken-linien |
JP4827726B2 (ja) | 2003-01-30 | 2011-11-30 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス エスアールエル | 複数の髄膜炎菌血清群に対する注射可能ワクチン |
GB0409745D0 (en) * | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
ES2670231T3 (es) | 2006-03-22 | 2018-05-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Regímenes para inmunización con conjugados meningocócicos |
US10828361B2 (en) | 2006-03-22 | 2020-11-10 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Regimens for immunisation with meningococcal conjugates |
GB0822633D0 (en) * | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Formulation |
GB2495341B (en) * | 2011-11-11 | 2013-09-18 | Novartis Ag | Fermentation methods and their products |
-
2001
- 2001-06-20 GB GBGB0115176.0A patent/GB0115176D0/en not_active Ceased
-
2002
- 2002-06-20 BR BR0210590-0 patent/BRPI0210590B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-06-20 EP EP09075010.0A patent/EP2229954B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 EP EP10007477.2A patent/EP2263688B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 ES ES09075010.0T patent/ES2670219T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 PT PT101797975T patent/PT2277536T/pt unknown
- 2002-06-20 EP EP06075175A patent/EP1741442B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 EP EP10179806.4A patent/EP2277537B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 ES ES10007477T patent/ES2387592T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 DE DE122010000042C patent/DE122010000042I1/de active Pending
- 2002-06-20 TR TR2018/08055T patent/TR201808055T4/tr unknown
- 2002-06-20 DE DE60210456T patent/DE60210456T3/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 AT AT10007477T patent/ATE556718T1/de active
- 2002-06-20 CA CA2450203A patent/CA2450203C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 JP JP2003513590A patent/JP5075317B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 EP EP10179797.5A patent/EP2277536B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 CN CNA2009101281393A patent/CN101524533A/zh active Pending
- 2002-06-20 BR BR122019009186A patent/BR122019009186B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-06-20 ES ES02755452T patent/ES2261705T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 RU RU2004101284/13A patent/RU2381814C2/ru not_active Application Discontinuation
- 2002-06-20 MX MXPA03011462A patent/MXPA03011462A/es active IP Right Grant
- 2002-06-20 NZ NZ529881A patent/NZ529881A/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-06-20 WO PCT/IB2002/003191 patent/WO2003007985A2/en active IP Right Grant
- 2002-06-20 DE DE122011000003C patent/DE122011000003I1/de active Pending
- 2002-06-20 EP EP09075009.2A patent/EP2216044B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 AT AT02755452T patent/ATE322287T1/de active
- 2002-06-20 DE DE122010000040C patent/DE122010000040I1/de active Pending
- 2002-06-20 CA CA2641585A patent/CA2641585C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 DE DE122010000041C patent/DE122010000041I1/de active Pending
- 2002-06-20 PT PT02755452T patent/PT1401489E/pt unknown
- 2002-06-20 EP EP10180707A patent/EP2277539A3/en not_active Ceased
- 2002-06-20 ES ES10179806.4T patent/ES2539134T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 PT PT06075175T patent/PT1741442E/pt unknown
- 2002-06-20 CN CNB028124448A patent/CN100482273C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 TR TR2018/08026T patent/TR201808026T4/tr unknown
- 2002-06-20 PT PT101798064T patent/PT2277537E/pt unknown
- 2002-06-20 ES ES09075005.0T patent/ES2603275T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 CN CN200910128140.6A patent/CN101524534B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 NZ NZ544332A patent/NZ544332A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-06-20 DK DK09075006.8T patent/DK2189165T3/en active
- 2002-06-20 US US10/481,457 patent/US8753651B2/en active Active
- 2002-06-20 ES ES09075009.2T patent/ES2670196T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 ES ES10179797.5T patent/ES2662015T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 DE DE60237123T patent/DE60237123D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 EP EP02755452.6A patent/EP1401489B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 EP EP09075006.8A patent/EP2189165B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 ES ES06075175T patent/ES2347458T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 AU AU2002321716A patent/AU2002321716B2/en not_active Expired
- 2002-06-20 EP EP09075005.0A patent/EP2184071B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 DK DK09075005.0T patent/DK2184071T3/en active
- 2002-06-20 ES ES09075006.8T patent/ES2573259T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 PT PT10007477T patent/PT2263688E/pt unknown
- 2002-06-20 DK DK06075175.7T patent/DK1741442T3/da active
- 2002-06-20 DK DK02755452.6T patent/DK1401489T4/da active
- 2002-06-20 DK DK10179797.5T patent/DK2277536T3/en active
- 2002-06-20 DK DK10007477.2T patent/DK2263688T4/da active
- 2002-06-20 PT PT90750050T patent/PT2184071T/pt unknown
- 2002-06-20 CN CN200910128141.0A patent/CN101524535B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-20 AT AT06075175T patent/ATE474594T1/de active
- 2002-06-20 CA CA2730856A patent/CA2730856C/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-07-24 AU AU2007203442A patent/AU2007203442B2/en not_active Expired
-
2009
- 2009-01-09 US US12/351,281 patent/US8889152B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-01-14 US US12/353,409 patent/US8852606B2/en active Active
- 2009-01-20 US US12/321,418 patent/US9782466B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-01-20 US US12/321,464 patent/US9358278B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-01-20 US US12/321,420 patent/US20090130147A1/en not_active Abandoned
- 2009-01-20 US US12/321,417 patent/US9452207B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-01-20 US US12/321,434 patent/US9782467B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2009-02-26 JP JP2009044924A patent/JP5220658B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2009-02-26 JP JP2009044925A patent/JP5380111B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2009-03-11 RU RU2009108660/10A patent/RU2528066C2/ru active
-
2010
- 2010-09-13 FR FR10C0042C patent/FR10C0042I1/fr active Active
- 2010-09-13 BE BE2010C033C patent/BE2010C033I2/fr unknown
- 2010-09-13 BE BE2010C032C patent/BE2010C032I2/fr unknown
- 2010-09-13 NL NL300458C patent/NL300458I2/nl unknown
- 2010-09-13 NL NL300459C patent/NL300459I2/nl unknown
- 2010-09-13 NL NL300460C patent/NL300460I2/nl unknown
- 2010-09-13 FR FR10C0043C patent/FR10C0043I1/fr active Active
- 2010-09-13 BE BE2010C031C patent/BE2010C031I2/fr unknown
- 2010-09-13 FR FR10C0044C patent/FR10C0044I1/fr active Active
- 2010-09-14 LU LU91732C patent/LU91732I2/fr unknown
- 2010-09-14 LU LU91734C patent/LU91734I2/fr unknown
- 2010-09-14 LU LU91733C patent/LU91733I2/fr unknown
- 2010-10-11 CY CY20101100902T patent/CY1110820T1/el unknown
- 2010-11-19 AU AU2010246331A patent/AU2010246331B2/en not_active Expired
-
2011
- 2011-01-13 BE BE2011C001C patent/BE2011C001I2/fr unknown
- 2011-01-13 LU LU91778C patent/LU91778I2/fr unknown
- 2011-01-14 FR FR11C0001C patent/FR11C0001I2/fr active Active
- 2011-01-18 CY CY2011001C patent/CY2011001I1/el unknown
-
2012
- 2012-08-03 CY CY20121100693T patent/CY1113020T1/el unknown
- 2012-10-05 JP JP2012222942A patent/JP2013007057A/ja not_active Withdrawn
-
2016
- 2016-05-18 CY CY20161100432T patent/CY1117528T1/el unknown
- 2016-10-21 CY CY20161101065T patent/CY1118130T1/el unknown
- 2016-10-31 US US15/339,741 patent/US10716841B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2018
- 2018-03-30 CY CY20181100356T patent/CY1120499T1/el unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2105568C1 (ru) * | 1989-12-14 | 1998-02-27 | Нэшнл Рисерч Каунсл Оф Канада | Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b |
WO1996040242A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2528066C2 (ru) | Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов | |
AU2002321716A1 (en) | Capsular polysaccharide solubilisation and combination vaccines | |
AU2014218428B2 (en) | Capsular polysaccharide solubilisation and combination vaccines | |
AU2012230097A1 (en) | Capsular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |