RU2105568C1 - Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b - Google Patents
Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b Download PDFInfo
- Publication number
- RU2105568C1 RU2105568C1 SU5052391A SU5052391A RU2105568C1 RU 2105568 C1 RU2105568 C1 RU 2105568C1 SU 5052391 A SU5052391 A SU 5052391A SU 5052391 A SU5052391 A SU 5052391A RU 2105568 C1 RU2105568 C1 RU 2105568C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- polysaccharide
- group
- butanoyl
- protein
- vaccine
- Prior art date
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 45
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 43
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 title claims abstract description 13
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 17
- 230000006698 induction Effects 0.000 title abstract description 7
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 title abstract 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 title 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 13
- 125000003047 N-acetyl group Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- -1 n-butanoyl Chemical group 0.000 claims description 22
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 claims description 12
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 4
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 3
- 125000003774 valeryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 2
- 125000000268 heptanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 abstract description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 abstract description 2
- SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 1-[(1r,6r)-9-azabicyclo[4.2.1]non-4-en-5-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)C1=CCC[C@@H]2CC[C@H]1N2 SGNXVBOIDPPRJJ-PSASIEDQSA-N 0.000 abstract 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 abstract 1
- 239000003948 anatoxin Substances 0.000 abstract 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 abstract 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 7
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 230000006181 N-acylation Effects 0.000 description 5
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 5
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N hexanoyl hexanoate Chemical class CCCCCC(=O)OC(=O)CCCCC PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- NNPPMTNAJDCUHE-UHFFFAOYSA-N isobutane Chemical compound CC(C)C NNPPMTNAJDCUHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N pentanoic acid group Chemical group C(CCCC)(=O)O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000617590 Escherichia coli K1 Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 101000827746 Homo sapiens Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 206010027249 Meningitis meningococcal Diseases 0.000 description 1
- 201000010924 Meningococcal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000588677 Neisseria meningitidis serogroup B Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- MGWWWSRHCOVLIU-UHFFFAOYSA-N benzene-1,3-diol;hydrochloride Chemical compound Cl.OC1=CC=CC(O)=C1 MGWWWSRHCOVLIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000001273 butane Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000010200 folin Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000005182 global health Effects 0.000 description 1
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000001282 iso-butane Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N n-butane Chemical compound CCCC IJDNQMDRQITEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N n-pentane Natural products CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical group 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000008927 postnatal maturation Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1228—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K16/1232—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia from Escherichia (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0258—Escherichia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1217—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Использование: биотехнология, микробиология, вакцина, полисахарид, менингит. Сущность изобретения: полисахарид Neisseria meningitidis группы В (ГВМП), модифицированный путем замещения N-ацетильных групп остатка сиаловой кислоты на С4 - С8-ацильные группы, демонстрирует повышенный иммунный ответ. Кроме того, сведена к минимуму индукция антител, которые перекрестно взаимодействуют с немодифицированным группы В менингококковым капсульным полисахаридом и другими тканевыми клетками, имеющими простой эпитоп. Конъюгация модифицированного полисахарида с физиологически приемлемым белком, таким как стобнячный анатоксин, индуцирует производство специфических защитных антител с незначительными уровнями ГВМП - перекрестно реагирующих антител, тем самым осуществляя защиту против инфекций, вызываемых менингококком группы В. 4 с. и 14 з.п. ф-лы, 5 табл. 1 пр.
Description
Изобретение относится к химически модифицировнным полисахаридам группы B Neisseria meningitidis. Изобретение также обеспечивает вакцины, в которых соответствующим образом модифицированные полисахариды связаны с белковым носителем.
Менингит, вызываемый N.meningitidis группы B и E.coli KI, остается основной проблемой мирового здравоохранения. Менингит группы B встречается как в эндемической, так и в эпидемической ситуациях и составляет приблизительно половину всех зарегистрированных случаев менингококкового менингита, в то время как KI-положительные E.coli являются основной причиной менингита у новорожденных. В настоящее время не существует вакцины, коммерчески приемлемой против болезни, вызываемой менингококком группы B и E.coli KI. Она в значительной степени обусловлена тем фактом, то менингококковый полисахарид группы B /ГВМП/ является лишь слабо иммуногенным у людей. Недавно сообщалось о кандидатах-вакцинах на основе комплексов ГВМП с наружными белками мембраны, но пока не существует явным данных об их эффективности для человека.
Недавно разработана новая концепция вакцины на основе синтетического химического модифицированного N-пропионилированный группы B полисахарид-белок конъюгата /N-Пр-ГВМП-белок/. Вакцина вызывает у мышей высокие титры IgG антител, которые являются не только защитными, но также перекрестно взаимодействуют с немодифицированным ГВМП /т. е. N-ацетил-ГВМП/. Эта концепция описана и заявлена в пат. США N 4727136, выданном 23, 1988 Harold J.Jennings et al.
Это означает, что вакцина, которая увеличивает перекрестно-реагирующие антитела (пат. США N 4727136), может быть успешной за счет разрушения иммунной толерантности. Эта гипотеза легитимизирована путем идентификации обычного эпитопа, состоящего из цепи α -2-8-связанных остатков сиаловой кислоты /с минимальным требованием десяти остатков/ как в нативном N-Ац-ГВМП, так и в ткани человека и животного (Jennings, Contrib. Microbiol. Immunol. Basel, Karger, 1989, Vol. 10, 151-154). Эти полисиаловые цепи функционируют как эволюционные антитела и в значительной степени связаны с зародышевым состоянием при соединении эмбриональной нервной клетки (Finne et al. Biochem. B, iophys. Res. Commun. 1983, 112, 482). В течение постнатального созревания этот антиген плохо контролируем (Friedlander et al, Cell Biol. 1985, 101, 412), но этот антиген проявляется у развивавшихся людей во время регенерации больных мышц. (Cashman et al, Ann. Neuron. 1987, 21, 481) в опухолевых клетках /Roth et al, Proc. Natl, Acad. Sci, 1988, 85, 299/ и в природных клетках-киллерах /ПК/ и CD3+ T клетках /Husmann et al, Eur. J/ Immenol. 1989,19 1961/. Хотя последовательности разрушения толерантности для этих зародышевых антигенов все еще не установлены, обычно допускают, что из-за этого перекрестного взаимодействия N-Пр-ГВМП-белок конъюгат должен быть внимательно рассмотрен лицензирующими агенствами, что приводит к значительному удорожанию и задержкам из-за необходимости комплексного проведения эксперимента для того, чтобы доказать безопасность вакцины до ее одобрения для коммерческого маркетинга.
Целью изобретения является разработка вакцины, имеющей иммуногенные свойства, которые повышены по сравнению с иммуногенными свойствами N-Пр-ГВМП-белок. Также целью изобретения является разработка вакцины, которая демонстрирует существенно уменьшенное перекрестное взаимодействие по отношению к антигену сращивания нервных клеток человека и животного /зародышевый N-САМ/.
Одним из аспектов изобретения является разработка модифицированного B полисахарида Neisseria meningitidis, в котором N-ацетильные /C2/ группы остатка сиаловой кислоты замещены C4-C8-ацильной группой.
Другой аспект заключается в разработке антигенного конъюгата, включающего N-C4-C8-ацильный полисахарид, связанный с иммунологическим приемлемым белком, и этот конъюгат имеет повышенную иммуногенность со значительно уменьшенным индуцированием перекрестно реагирующих антител.
Еще одним аспектом является разработка вакцины, включающей N-C4-C8-ацил полисахарид-белок конъюгат в ассоциации с приемлемым носителем или разбавителем. Вакцины данного изобретения также включают терапевтически эффективное количество адъюванта, приемлемого для использования человека, например фосфат алюминия или гидроксид алюминия.
Следующим аспектом является разработка способа иммунизации млекопитающих против N. meningitis и E.coli KI инфекций, и этот способ включает введение парентерально млекопитающему объекту с такими инфекциями, включая человека, иммунологически достаточного количества вакцины изобретения. Вакцину обычно вводят в количестве от около 1 до 50 мкг на 1 кг веса тела, например от 5 до 25 мкг на 1 кг веса тела.
Еще одним аспектом изобретения является разработка гамма-глобулиновой фракции, способной защитить от менингита, вызываемого группой B N.meningitis и E.coli KI. Фракцию получают путем иммунизации млекопитающего вакциной изобретения. Фракцию затем вводят индивидууму, чтобы получить защиту против или обработать продвигающуюся инфекцию, вызванную вышеуказанными организмами. Исходя из этого, следует отдать должное, что иммуногенные вакциновые конъюгаты данного изобретения следует рассматривать в качестве источника терапевтической иммунной сыворотки в свете их благоприятной иммуногенности с минимальным индуцированием антител, перекрестно взаимодействующих с антигеном зародышевой N-САМ сращивания нервных клеток человека и животного.
Конъюгаты изобретения могут быть также полезны для выращивания моноклональных антител и, возможно, антидиотипных антител.
В наших недавних экспериментах установлено, что большинство из бактерицидных и защитных антител, индуцированных при помощи N-Пр-ГВМП-белок конъюгата, описанного в вышеупомянутом пат. США 4727136 Tenninigs et al. не связаны с зародышевыми N-САМ перекрестно реагирующими антителами.
В действительности большая часть защитной активности заключена в специфической популяции антител N-Пр-ГВМП, которая перекрестно не взаимодействует с зародышевым N-САМ. В свете этого считают, что N-Пр-ГВМП имитирует уникальный бактерицидный эпитоп на поверхности менингококка группы B.
Изобретение основывается на открытии того, что возможно синтезировать химически модифицированные ГВМП-ы, которые имитируют бактерицидный эпитоп, и которые в своей связанной форме не только демонстрируют повышенную иммуногенность, но также избегают значительного индуцирования антител, которые перекрестно взаимодействуют с зародышевым N-САМ.
В результате данного изобретения ряд различных химически модифицированных ГВМП был синтезирован и индивидуально связан с белком, с последующей инъекцией конъюгатов мышам, и изучены их воздействия по сравнению с воздействием, полученным путем N-Пр-ГВМП белкового конъюгата. Неожиданно установлено, что N-C4-C8-ацил ГВМП-белок конъюгаты, например, н-бутанол, изо-бутанол, н-пентаноил, изо-пентаноил, нео-пентаноил, гексаноил, гептаноил, и октаноил, и особенно N-бутаноил /N-Бу/ ГВМП-белок конъюгат, в основном имитирует бактерицидный эпитоп со значительно уменьшенным индуцированием перекрестно, реагирующих антител.
Менингококковый полисахарид группы B выделяют из N.meningitidis с помощью способов, известных в данной области техники. В одном из таких способов, менингококк группы B /штамм 981B/ выращивают при 37oC в ферментере, используя 50 г дегидратированного Todd Hewitt Broth /Difco Laboratories, Detroit, Michigan/ на литр дистиллированной воды. До роста в ферментере лиофилизованный штамм выращивают сначала в керамическом сосуде при 37oC на пластинах на 5% /об./об/ кровяном агаре овцы (Difco-Laboratories, Detroit, Michigan). Бактерии затем переносят в 1,0 л Todd Hewitt Broth /как вышеупомянуто/ в сосуд EtIenmeyer, который подвергают вибрации при 37oC в течение 7 ч при 190 об. /мин. Этот инокулят затем переносят в ферментер. После роста в ферментере /16 ч/ бактерии убивают добавлением формалина до конечной концентрации 0,75% Бактерии удаляют непрерывным центрифугированием, и менингококковый полисахарид группы B выделяют из супернатанта и очищают, в основном, как описано Bundli et al, J.Biol. Chem, 249, 4797-4801 /1974/ за исключением того, что белок экстрагируют при перемешивании раствора неочищенного полисахарида с холодным (4oC) 90% фенолом вместо горячего (50-60oC). Последний способ обеспечивает получение высокомолекулярной формы ГВМП.
E. coli /018:KI:H7/ (NRCC 4283) выращивают при 37oC в ферментере в дистиллированной воде, содержащей дегидратированный Brain Heart Infusion /BH1; 37 г/л/ /Difco Laboratories, Detroit, Michigan/. До роста в ферментере лиофилизованный штамм выращивают на 50 мл BHI раствора (тот же вышеупомянутый) в колбе Erlenmeyer, который подвергают вибрации при 200 об./мин при 37oC в течение 7 ч. Это содержимое затем переносят в 1,5 л BHI /вышеупомянутый/ и выращивают при тех же самых условиях, как описано выше, в течение 7 ч. Инокулят затем переносят в ферментер.
Методики, используемые для выделения и очистки капсулярного полисахарида E.coli KI, были идентичными методикам, описанным выше для выделения менингококкового полисахарида группы B.
Следует отметить, что могут быть использованы не только вышеупомянтые методики по выделению и очистке, но и другие опубликованные методики являются приемлемыми, например методики, описанные Watson et al. J. Immunol. 81, 331 (1958) и в вышеупомянутом пат. США 4727136.
Нативный полисахарид N-деацетилируют, чтобы получить реакционноспособную аминную группу в сиаловых кислотных остатках молекулы. N-ацетилирование осуществляют любым известным способом, например в основной водной среде при повышенных температурах, например от около 90 до 110oC, и при pH от около 13 до 14. Основная водная среда обычно представляет собой водный раствор гидроксида щелочного металла, например гидроксида натрия при около 2М концентрации. Или же, гидразин в водном растворе может быть использован. Степень N-деацетилирования можно варьировать от около 30 до 100% в зависимости от условий. Предпочтительнее достижение от около 90 до 100% N-деацитилирования. N-деацетилированный продукт можно выделять, например, путем охлаждения, нейтрализации, очистки, если требуется, и лиофилизации.
До процедуры N-деацетилирования нативный полисахарид имеет среднюю мол. м. в области от около 500000 до 800000 дальтон. В результате N-деацетилирования получают фрагменты полисахарида, имеющие среднюю мол. м. в пределах от около 10000 до 50000 дальтон.
N-деацетилированные полисахаридные фрагменты затем N-ацилируют, чтобы получить соответствующий N-ацилированный продукт. N-ацилирование может быть осуществлено путем растворения N-деацетилированного полисахарида в водной среде, имеющей pH от около 7,5 до 9, с последующим добавлением соответствующего ацилангидрида, произвольно со спиртом для увеличения растворимости, и охлаждением до ниже 10oC до тех пор, пока реакция не завершится. Реакционную среду можно очистить при желании, например, путем диализа, и затем N-ацилированный продукт выделяют обычно лиофилизацией. Реакция в основном завершается в течение около от 10 до 20 ч. Степень N-ацилирования, измеряемая аналитическими методами, обычно 1H-ЯМР, составляет по крайней мере 90% и, вероятно, близко 100% Реакция N-ацилирования не приводит к какому-либо уменьшению молекулярной массы фрагментов.
Предпочтительно, согласно изобретению выбрать для цели связывания N-ацилированное вещество, имеющее среднюю молекулярную массу, соответствующую от около 30 до 200 сиаловых кислотных остатков. Это обычно достигается посредством гель-фильтрации N-ацилированного ГВМП, используя Ultragel /торговая марка/ АсА 44 /бусинки диаметром 60-140 мкм/ колонку, используя ФБС в качестве элюента, или же можно использовать приемлемого размера мембрану.
N-ацилированное вещество средней мол. м. от 10000 до 40000 дальтон, например от 10000 до 15000 дальтон, используют в данном изобретении. Его получают путем сбора фракций элюата колонки, содержащей N-ацилированное ГВМП вещество, имеющее диапазон средней молекулярной массы. N-ацилированное вещество с более высокой средней молекулярной массой, например в диапазоне от 30000 до 40000 дальтон, как доказано тоже является пригодным для данного изобретения.
Вакцины изобретения получают связыванием N-ацилированного полисахарида с иммунологически приемлемым носителем-белком. Предпочтительно, чтобы белковый носитель сам по себе являлся иммуногеном. Примерами приемлемых белковых носителей являются столбнячный анатоксин, дифтерийный токсоид, перекрестнореагирующее вещества /CRMs/, предпочтительно CRM197, получаемые из Sclavo Ltd. Siena, Italy, и бактериальные белковые носители, например, менингококковые белки наружной мембраны.
Любой способ связывания может быть использован, для того чтобы связать фрагменты модифицированного полисахарида с белковым носителем. Предпочтительным способом является способ, описанный в пат. США 4356170, т.е. путем введения концевых альдегидных групп /посредством окисления цис-вицинальных гидроксильных групп/ в N-ацилированный полисахарид и связывания альдегидных групп амино группами белка путем восстановительного аминирования. Полисархаид и белок при этом связываются посредством -CH2-NH-белок связи.
Следует понимать, однако, что связанные вакцины изобретения не ограничиваются вакцинами, полученными посредством восстановительного аминирования. Так, вакцины могут быть получены связыванием N-ацилированного полисахарида с белковым носителем, используя адипиновый дигидразидный спейсер, как описано Schneerson. R, et al, Preparation, Characterization and Immunogenicity of Haemophilus influenzae type b Polysaccharide-Protein Conjugates, T.Exp.Med.
1952, 361-476/1980/, и в пат. США 4644059 Lance K.Gordon. Кроме того, можно использовать бинарную спейсерную методику, разработанную Merck, как описано Marburg, S, et al. "Biomolecular Chemistry of Marcomolecules: Synthesis of Bacterial Polysaccharide Conjugates with Neisseria meningitidis Membrane Protein, T.Am.Chem.Soc. 108, 5282-5287 /1986/ или, возможно, методологию восстановления концов, упомянутую Anderson в пат. США 4673574.
Полученные N-ацилированные полисахарид-белок конъюгаты не обладают сильной трехмерной структурой и являются растворимыми в водных растворах. Это делает конъюгаты изобретения хорошими претендентами для использования в качестве вакцин.
Полученные N-ацилированные полисахарид-белок конъюгаты изобретения были испытаны in vitro тестах на мышах и в большинстве случаях, как было показано, обладает повышенными иммуногенными свойствами по сравнению с N-пропионилированный полисахарид. Кроме того, наблюдается значительное уменьшение образования перекрестнореагирующих антител. В свете этого считают, что вакцины данного изобретения будут полезными против менингита, вызываемого N. meningitidis группы B или E.coli K1 организмами. Особый интерес представляют вакцины для защиты младенцев человека, которые наиболее чувствительны к бактериальному менингиту.
Вакцины данного изобретения обычно формируют путем диспергирования конъюгата в любом приемлемом фармацевтически пригодном носителе, такие как физиологические соляные или другие инъекцируемые жидкости. Вакцину вводят парентерально, например подкожно, внутрибрюшинно или внутримышечно. В вакцинах могут присутствовать общепринятые добавки, например стабилизаторы, такие как лактоза или сорбитол и адъюванты, такие как фосфат алюминия, гидроксид алюминия, или сульфат алюминия.
Приемлемая доза вакцины для младенца человека, в большинстве случаев, находится в диапазоне от около 5 до 25 мкг или от около 1 до 10 мкг на 1 кг веса тела.
Изобретение иллюстрируется следующими неограничивающими его примерами. N-ацетил, N-пропионил, N-бутаноил, N-изобутаноил, N-пентаноил и N-гексаноил-ГВМП-белок конъюгаты были получены с целью оценки, и результаты обслуживаются в примерах.
Вещества и способы получения конъюгатов.
a/ Вещества.
Пропионовый, бутановый, изобутановый, пентановый и гексановый ангидриды наряду с коломиновой кислотой получены от Sigma Chemicals Co. St.Louis, Mo. Так как коломиновая кислота структурно идентична менингококковому полисахариду группы B /ГВМП/, ее называют впредь как ГВМП. Столбнячный анатоксин /СА/ получают от Armand Frappier, Laval, Quebec, и его мономерную форму, используемую по всех конъюгатах, получают путем пропускания вышеупомянутого приготовления через BiO-Gel /торговая марка/ A 0,5 /200-400 меш/ колонку /1,6х90 см/ /BiO-Rad, Richmond, CA/, уравновешенную и элюируемую 0,01 М фосфатным буферным физиологическим соляным раствором /ФВС/ (pH 7,4).
b) N-деацетилирование ГВМЦ.
ГВМЦ (Na+ соль) (1,0 г) растворяют в 5 мл 2 М NaOH и после добавления NaBH4 /150 мг/ раствор нагревают при 110oC в течение 6 ч в контейнере (6 мл), закрытом крышкой Teflon/торговая марка/. Эта методика в основном описана в J.Immunol. 134, 2651 (1985) и пат. США 4727136, Harold. J.Tennings et al. Охлажденный разбавленный раствор затем исчерпывающе диализуют против дистиллированной воды при 4oC и лиофилизуют. Тот факт, что N-диацетилированный ГВМП получают, определяют по отсутствию метилацетамидо сигнала /синглет при дельта 2,07/ в 1H-ЯМР спектре N-деацетилированного ГВМП.
c) N-ацилирование ГВМП.
N-деацетилированный ГВМП /1,0 г/ растворяют в 50 мл 5% водного NaHCO3. К пяти отдельным аликвотным пробам /10 мл вышеуказанного раствора/ добавляют либо пропионовый, бутановый, изобутановый, пентановый или гексановый ангидриды.
Эти реагенты добавляют в 3х 0,5 мл аликвотах в течение 3 ч при комнатной температуре, в то время как раствор поддерживают при pH 8,0 с помощью 0,5 N NaOH. Метанол (0,05 мл) добавляют одновременно с каждым добавлением ангидрида в порядке увеличения их растворимости. Наконец, растворы перемешивают в течение 16 ч при 4oC, исчерпывающе диализуют против дистиллированной воды при 4oC и лиофизилуют. N-пропионолировнный, N-бутаноилированный, N-изобутаноилированный, N-пентаноилированный и N-гексаноилированный ГВМП получают с выходами свыше 90% В каждом случае, полное N-ацилирование подтверждают исчезновением в соответствующем 1H-ЯРМ спектре N-деацетилированного ГВМП.
d) Сортировка по размерам фрагментов различных N-ацилированных ГВМП.
Для получения N ацилированного ГВМП вещества с требуемой средней молекулярной массой используют гель-фильтрацию, применяя Ultragel /торговая марка АсА 44 /бусинка диаметром 60 140 мкм /колонку/ IBF Biotechnics, Savahe, MD/ с ФБС в качестве элюента. Фракции, элюирующие из колонки или KD 0,5 до KD 0,7, измеряемые с помощью FLPC /смотри ниже/, собирают, диализуют и лиофилизуют. Эта область KD значений соответствует N-ацилированному ГВМП с приблизительно 30 50 сиаловыми кислотными остатками /10000 15000 дальтон, обычно 12000 дальтон средняя молекулярная масса/. Фракции в диапазоне от KD 0,2 до 0,4, соответствующие фрагментам, имеющим среднюю молекулярную массу в диапазоне от 30000 до 40000 дальтон, также были собраны и связаны. Так, N-ацилированное вещество, элюирующее в KD диапазоне от 0,2 до 0,7, представляет особый интерес.
Конъюгаты полисахарида.
Концевые альдегидные группы вводят в N-ацилированный ГВМП путем окисления периодатом (см. пат. США 4356170/.
Вышеупомянутые N-ацилированные ГВМП фрагменты окисляют в 0,1 М водном NalO4 /натрий метапериодат/ /10 мл/ в течение 2 ч при комнатной температуре в темноте. Избыток периодата затем разрушают добавлением 1 мл этиленгликоля и раствор затем исчерпывающе диализуют при 4oC и лиофилизуют. Использование NaBH4 в процедуре N-деацетилирования (за исключением ГВМП) приводит к трансформированию концевых восстанавливающих сиаловых кислотных остатков каждого из N-ацилированного ГВМП, открывая цепные полиольные остатки. Этот тип остатка является чувствительным к периодату (см. J.Immunol, 127 1011/1981/и пат. США 4356170 Harolol. J. Jenninds et al/, тем самым приводя к введению альдегидных групп в N-ацилированные ГВМП фрагменты в оба конца. Окисленные фрагменты /100 мг/ растворяют в 0,1 М NaHCO3 /pH 8,1/ буфер /2 мл/ и CA /20 мг/ добавляют к раствору. Наконец, после добавления натрийцианборгидрида /NaCNBH3/ /40 мг/ раствор осторожно перемешивают при комнатной температуре. За ходом связывания следят с помощью FPLC, используя гель-фильтрационную колонку, содержащую Superose /торговая марка/ 12 HR10/30 / Pharmacia/ при скорости при 1 мл/мин в ФБС буфере фрагменты контролируют при 214 нм. Фрагменты имели KD 0,6, CA имеет KD 0,39 и конъюгаты имели KD 0,23. Связывание заканчивают, когда весь CA бывает израсходованным, как определяют по потери пика в FPLC хроматограмме, соответствующей компоненту при KD 0,39. В большинстве случаев связывание завершается в 2 дня, но его продолжают в течение суммарного времени реакции 4 дня. Потенциально непрореагировавшие альдегидные группы в конечном итоге восстанавливают натрий боргидридом /20 мг/ до гельфильтрации.
Полисахарид-CA конъюгаты отделяют от полисахаридных фрагментов с помощью гель-фильтрации, используя BiO Gel A колонку с ФБС в качестве элюента. Элюант, содержащий конъюгат, диализуют против дистиллированной воды и лиофилизуют. N-ацилированный ГВМП-CA конъюгаты содержат 12 30% обычно 12 20% сиаловой кислоты, как определено по резорционовому способу, описанному Svennerholm, L. Quantitative Estimation of Sialic Acids, IIA, Colorimetric Resorcinol Hydrochloric Acid Method, Biochem. Biophys. Acta 24, 604 /1957/. Это указывает, что конъюгаты имеют молярное отношение полисахарида к CA 2-3:1 соответственно.
Иммунизация и иммуноанализ.
a) Методики иммунизации.
Двадцать самок белых CFI мышей /в возрасте 8 10 недель/ иммунизируют внутрибрюшинно /3 раза с интервалами в 3 недели/ каждым индивидуальным N-ацилированным ГВМП-CA конъюгантом в Freuds полном адъюванте /FПА/ Difco, Detroit, MI/. Каждая иммунизация содержит конъюгат /10 12 мкг/, что соответствует 2 мкг сиаловой кислоты. Через 11 дней после третьей инъекции мышей обескровливают. Следующие тесты делают на иммунных сыворотках.
b) Радиоактивный анализ связывания антигена.
Этот анализ проводят путем модификации Farr методики, используя наружно /3H/-меченый ГВМП/ Jennings H. J. et al, Determinant Specificities of the groups Band C polysaccharides of Neisseria meningitidis, J. Immunol, 134, 2651 /1985/, или /3H-меченый N-Пр-ГВМП /Jennings H.J. et al, Unique Jntermolecular Bactericidal Epitope involving the Homo-Sialo Polysaccharide Capsule on the Cell Surface ofgroup B Neisseria meningitidis and Escherichia coli KI, J. Immunol, 142: 3585 3591 /1989/. Реакционную смесь для радиоактивного антигенсвязывающего анализа получают смешением в полипропиленовых микротрубках Eppendorf для испытания 20 мкл объединенной иммунной сыворотки, от групп из 20 мышей, иммунизированных каждым индивидуальным N-ацилированным ГВМП-CA конъюгатом, разбавленным до 100 мкл ФБС, с /3H/-меченым ГВМП и /3H/-меченым N-Пр-ГВМП в 50 мкл ФБС. После инкубации при 4oC в течение 16 ч. 150 мкл насыщенного /при 4oC/ сульфата аммония /pH 7,0/ добавляют в трубки и эти трубки перемешивают и оставляют стоять при 4oC в течение 30 мин. Трубки центрифугируют при 15000 об./мин в течение 10 мин и две аликвоты по 130 мкл отбирают из трубок. Аликвоты смешивают с 2 мл воды и ксилолом, содержащим сцинтиллирующее вещество /ACS водный сцинтиллятор/ и смеси просчитывают в сцинтилляционном счетчике для измерения жидкости. Результаты представлены в табл.1.
Табл. 1 убедительно демонстрирует, что
-АЦ-ГВМП /который несет тот же самый эпитоп как зародышевый N-САМ/ связывается меньше с иммунной сывороткой, индуцируемой N-Бу-ГВМП, N-изоБу-ГВМП, N-Пен-ГВМП, и N-Гекс-ГВМП, чем с иммунной сывороткой, индуцируемой N-/Пр-ГВМП. Из этого, как можно заключить из табл. 1, N-Бу-, N-изоБу, N-Пен- и N-Гекс-полисахарид-конъюгаты в меньшей степени перекрестно-реагирующие антитела, чем N-Пр-конъюгат.
c) Количественные преципитиновые анализы.
Эти эксперименты проводят по способу Kabatand Mayer, E[perimental Bmmunochemistry Charles C. Thomas, Springaield p. 22 /1961/. Аликвоты /100 мкл/ анти- 
-ацил ГИМП-СА сывороток /разбавленные в 5 раз ФБС/ взаимодействуют в трубках с увеличивающимися концентрациями N-ацетил/коломиновая кислота/, 
-пропионил, 
-бутаноил, 
-пентаноил и 
гексаноил ГВМП в суммарном объеме 200 мкл /подведенном с помощью ФБС/. В этих экспериментах используют более высокомолекулярные фракции этих производных и их получают из элюата Ultragel AcA 44 колонки /KD 0,4 как измерено с помощью FRLC/, ранее использованной для контроля размеров фрагментов 
-ацилированного ГВМП. Трубки инкубируют при 4oC в течение 4 дней, ежедневно перемешивая, центрифугируют, и количество белка антител определяют по способу Lowry et ai. Измерение белка с помощью Folin фенольного реагента, J. Biok Chem, 1933, 265 /1951/. Результаты представлены в табл. 2.
Что касается перекрестного реагирования, первая колонка табл. 2 указывает, что очень мало перекрестно-реагирующих антител образуется с помощью N-Бу и n-Гекс конъюгатов по сравнению с N-Пр конъюгатом. Также видно, что N-Пен конъюгат производит меньше перекрестнореагирующих антител, чем N-Пр конъюгат.
В отношении иммуногенности в терминах гомологического ответа из табл.2 можно видеть, что N-Бу /2,60/, N-Пен- /6,35/, и N-Гекс- /4,40/ ГВМП конъюгаты являются более иммуногенными, чем N-Пр-ГВМП аналог /0,40/.
d) Иммуноферментный твердофазный анализ /EL ISA/.
Лунки EIA микрофильтрационных пластинок /Flow Labs, Missisauda, Ontario, Canada /заполняют 10 мкг/ мл раствором либо ГВМП-, 
-ПрГВМП-, либо 
- ГВМП-СБА конъюгатов в ФБС /100 мкл/на лунку/. Пластины оставляют стоять в течение 18 ч при 4oC и после нанесения их промывают 1% сывороткой бычьего альбумина в ФБС в течение 10 мин при комнатной температуре /стадия блокинга/. Лунки затем наполняют 100 мкл 10-кратно разбавленными в ФБС сыворотками анти-мышь- 
-ацил ГВМП-СА конъюгатов и пластины инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. После промывания SBN пластины инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре с 50 мкл соответствующего разбавления козьих антимышиных иммуноглобулиновых конъюгатов, меченных пероксидазой /Kirkegard and Perry Laboratories/, затем содержимое лунок аспирируют и пластины промывают пять раз SBT. Наконец, добавляют 50 мкл тетраметилен синий-пероксидаза субстрата /ТМС/ /Kirkegart fnd Perry Laboratories/ в каждую лунку и через 10 мин определяют абсорбцию при 450 нм с помощью Multiscan спектрофотометра /Flow Laboratories, Mississauga, Ont/. Результаты представлены в табл.3.
Что касается перекрестного реагирования, из табл. 3 можно видеть, что N-Бу-ГВМП-СА конъюгат повышает в меньшей степени перекрестно-реагирующие антитела N-АЦ-ГВМП /1000/, чем это делает N-Пр-ГВМП-СА конъюгат /7800/. Причина заключается в том, что ГВМП связывается в меньшей степени с антителом, индуцированным N-Пр-ГВМП-СА конъюгатом, чем с антителом, индуцированным N-Бу-ГВМП-СА конъюгантом.
Аналогичные комментарии используют в отношении N-изоБут-ГВМП-СА конъюгата.
Что касается иммуногенности, N-Бу конъюгат является более иммуногенным, чем N-Пр аналог, как показано с помощью гомологических титров связывания 52000 /N-Бу/ и 40000 /N-Пр/.
e/ Радиоактивный анализ ингибирования связывания.
Увеличивающую концентрацию N-ацил ГВМП ингибитора с большим молекулярным размером в ФБС /90 мкл/ добавляют к 20 мкл сыворотки мышиного анти- 
-Пр-ГВМП-СА конъюгата, количество, достаточное для связывания 50% /3H/-меченого 
-Пр-ГВМП в отсутствие ингибитора. Трубки инкубируют в течение 1 ч при 37oC и добавляют 50 мкм /3H/ меченого 
-Пр-ГВМП в ФБС. После осторожного перемешивания трубки инкубируют при 4oC в течение 16 ч и выполняют анализы точно как описано ранее для радиоактивного анализа связывания антигена. ингибирования рассчитывают, используя следующую формулу: процент ингибирования100 x /имп/ мин с ингибитором минус имп/мин без ингибитора/ /имп/мин без антитела минус имп/мин без ингибитора/.
Результаты представлены в табл. 4.
Бактерицидные анализы выполняют по способу, описанному Jennings et al, J. Exp. Med. 165, 1207-1211 /1987/.
Neisseria meningitidis штамм B /M 986/ используют в этих анализах. Результаты представлены в табл. 5.
Таблица 4 иллюстрирует, что N-Бу-ГВМП является таким же хорошим ингибитором, как N-Пр-ГВМП для связывания последнего с его собственными гомологическими антителами. Поэтому использование N-Бу-ГВМП вместе N-Пр-ГВМП не приводит к какой-либо существенной потере свойств, проявляемых N-Пр-ГВМП. Табл. 5 демонстрирует, что N-Бу-ГВМП связывается также хорошо как N-Пр-ГВМП с антителами, индуцируемыми N-Пр-ГВМП-СА конъюгатом. Антисыворотки, индуцируемые как N-Бу-ГВМП-СА, так и N-Пр-ГВМП-СА конъюгатами, дают сходные бактерицидные титры. Эти данные указывают на эквивалентность N-Бу-, N-изоБу- и Т-Пен-ГВМП к N-Пр- ГВМП к N-Пр-ГВМП в их способности имитировать бактерицидный эпитоп на поверхности менингококка группы B.
Claims (18)
1. Полисахарид Neisseria meningitidis с модифицированной группой В, со средней мол. м. 10000 50000 D, в котором N-ацетилгруппы остатков сиаловой кислоты нативного полисахарида замещены С4 С8-ацильными группами.
2. Полисахарид по п.1, в котором С4 С8-ацильная группа является н-бутаноилом, изо-бутаноилом, н-пентаноилом, н-гексаноилом, н-гептаноилом или н-октаноилом.
3. Полисахарид по п.2, в котором ацильная группа является н-бутаноилом, изо-бутаноилом, н-пентаноилом или н-гексаноилом.
4. Полисахарид по п.3, в котором ацильной группой является н-бутаноил.
5. Полисахарид по п.1, в котором от около 27 до 100% N-ацетильных групп остатков сиаловой кислоты замещены С4 С8-ацильными группами.
6. Полисахарид по п.5, в котором ацильной группой является н-бутаноил.
7. Полисахарид по п.2, в котором от около 27 до 100% N-ацетильных групп остатков сиаловой кислоты замещены С4 С8-ацильными группами.
8. Конъюгированный антиген, содержащий полисахарид Neisseria meningitidis с модифицированной группой В, со средней мол.м. 10000 50000 D, в котором N-ацетилгруппы остатков сиалоновой кислоты нативного полисахарида замещены С4 С8-ацильными группами, связанный с иммунологически приемлемым белком.
9. Антиген по п.8, в котором С4 С8-ацильная группа является н-бутаноилом, изо-бутаноилом, пентаноилом, гексаноилом, гептаноилом или октаноилом.
10. Антиген по п.8, в котором ацильная группа является н-бутаноилом, изо-бутаноилом, пентаноилом или гексаноилом.
11. Антиген по п.8, в котором иммунологически приемлемым белком является столбнячный анатоксин, дифтерийный токсоид, перекрестно-рагирующие вещества (CRM) и белковый бактерионоситель.
12. Антиген по п.11, в котором перекрестно-реагирующим белком является CRM1 9 7.
13. Антиген по п. 8, в котором полисахарид ковалентно связан через -СН2-NH-белковую связь с белком.
14. Вакцина против менингита группы В, содержащая конъюгированный антиген, содержащий полисахарид Neisseria meningitidis с модифицированной группой В, со средней мол.м. 10000 50000 D, в котором N-ацетилгруппы остатков сиаловой кислоты нативного полисахарида замещены С4 - С8-ацильными группами, связанный с иммунологически приемлемым белком.
15. Вакцина по п.14, отличающаяся тем, что дополнительно содержит физиологически приемлемый адъювант.
16. Вакцина по п.14, отличающаяся тем, что в качестве адъюванта содержит гидроксид, фосфат или сульфат алюминия.
17. Способ индукции ответа антител к менингиту группы В путем парентерального введения млекопитающему вакцины, отличающийся тем, что вводят вакцину, содержащую конъюгированный антиген, содержащий полисахарид Neisseria meningitidis с модифицированной группой В, со средней мол.м. 10000 50000 D, в котором N-ацетилгруппы остатков сиаловой кислоты нативного полисахарида замещены С4 С8-ацильными группами, связанный с иммунологически приемлемым белком, в иммунологически эффективном количестве.
18. Способ по п.14, отличающийся тем, что вакцину вводят в дозе от 1 до 25 мкг/кг веса тела.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44819589A | 1989-12-14 | 1989-12-14 | |
| US448.195 | 1989-12-14 | ||
| PCT/CA1990/000437 WO1991008772A1 (en) | 1989-12-14 | 1990-12-13 | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2105568C1 true RU2105568C1 (ru) | 1998-02-27 |
Family
ID=23779371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5052391A RU2105568C1 (ru) | 1989-12-14 | 1990-12-13 | Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5576002A (ru) |
| EP (1) | EP0504202B1 (ru) |
| JP (1) | JP2637845B2 (ru) |
| KR (1) | KR0158436B1 (ru) |
| CN (4) | CN1049223C (ru) |
| AR (1) | AR243934A1 (ru) |
| AT (1) | ATE121947T1 (ru) |
| AU (1) | AU641715B2 (ru) |
| BR (1) | BR9007917A (ru) |
| CA (1) | CA2071811C (ru) |
| CZ (1) | CZ283530B6 (ru) |
| DE (1) | DE69019164T2 (ru) |
| DK (1) | DK0504202T3 (ru) |
| ES (1) | ES2071288T3 (ru) |
| FI (2) | FI104539B (ru) |
| HR (1) | HRP920872A2 (ru) |
| HU (2) | HU9201966D0 (ru) |
| IE (1) | IE68414B1 (ru) |
| IL (1) | IL96676A (ru) |
| IN (1) | IN171747B (ru) |
| NO (2) | NO305275B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ236471A (ru) |
| PH (1) | PH30305A (ru) |
| PL (2) | PL166659B1 (ru) |
| RO (1) | RO111416B1 (ru) |
| RU (1) | RU2105568C1 (ru) |
| SI (1) | SI20008B (ru) |
| WO (1) | WO1991008772A1 (ru) |
| YU (1) | YU24391A (ru) |
| ZA (1) | ZA9010065B (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2454244C2 (ru) * | 2004-12-24 | 2012-06-27 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | Сахарид-конъюгатные вакцины |
| RU2475495C2 (ru) * | 2001-09-06 | 2013-02-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий |
| RU2508122C2 (ru) * | 1999-11-29 | 2014-02-27 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | КОМПОЗИЦИИ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ АНТИГЕНЫ Neisseria meningitidis ИЗ СЕРОГРУПП В И С, И ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ АНТИГЕН |
| RU2528066C2 (ru) * | 2001-06-20 | 2014-09-10 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов |
| US9452224B2 (en) | 2003-08-12 | 2016-09-27 | Lipoxen Technologies Limited | Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation |
Families Citing this family (42)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648241A (en) * | 1989-09-15 | 1997-07-15 | The General Hospital Corporation | Conjugate vaccine against group B streptococcus |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
| ES2160601T3 (es) * | 1992-09-24 | 2001-11-16 | Brigham & Womens Hospital | Vacunas de conjugado de polisacaridos de estreptococos del grupo b tipo ii y tipo v-proteina. |
| US5439808A (en) * | 1993-07-23 | 1995-08-08 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| US6153406A (en) * | 1993-07-23 | 2000-11-28 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane protein P2 from Haemophilus influenzae type B |
| US5700787A (en) * | 1994-09-02 | 1997-12-23 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5679654A (en) * | 1994-09-02 | 1997-10-21 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5747287A (en) * | 1995-04-28 | 1998-05-05 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| EP1090642B8 (en) * | 1995-06-07 | 2010-08-11 | GlaxoSmithKline Biologicals s.a. | Vaccines comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein |
| US5811102A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-22 | National Research Council Of Canada | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines |
| US6284884B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-09-04 | North American Vaccine, Inc. | Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof |
| ZA97248B (en) * | 1996-01-18 | 1997-07-18 | Rohm & Haas | Method for identifying and quantifying polymers utilizing immunoassay techniques |
| ATE252602T1 (de) | 1996-08-27 | 2003-11-15 | Chiron Corp | Meningokokkus b-epitop ausbildende monoklonale antikoerper und deren verwendung zur herstellung von impfstoffzusammenstellungen |
| ATE208629T1 (de) | 1996-08-27 | 2001-11-15 | Chiron Corp | Neisseria meningitidis serogruppe b glykokonjugate und verfahren zu deren verwendung |
| US6426074B1 (en) * | 1997-03-19 | 2002-07-30 | The Brigham And Women's Hospital Inc. | Group B Streptococcus vaccine |
| EP0994723A1 (en) | 1997-06-24 | 2000-04-26 | Chiron Corporation | Methods of immunizing adults using anti-meningococcal vaccine compositions |
| PT1630168E (pt) | 1997-08-27 | 2011-07-20 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Compostos miméticos moleculares de péptidos de meningococos do serogrupo b |
| ES2611464T3 (es) | 1997-12-23 | 2017-05-09 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | Polisacárido capsular bacteriano para su uso como vacuna o para su unión a proteínas en vacunas de conjugados |
| NZ509986A (en) * | 1998-08-19 | 2003-10-31 | Baxter Healthcare S | Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide and oligosaccharide protein conjugates as vaccines |
| US6436653B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-08-20 | Exiqon A/S | Method for introduction of reporter groups into bacterial lipopolysaccharide-derived carbohydrates and the subsequent coupling of such derivatives onto solid surfaces |
| US7083777B1 (en) * | 1999-04-02 | 2006-08-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Immunomodulating polymers |
| US6518037B2 (en) * | 1999-11-12 | 2003-02-11 | University Of Iowa Research Foundation | Two-component system that controls bacterial membrane synthesis |
| SV2003000753A (es) | 2000-12-05 | 2003-06-16 | Brigham & Womens Hospital | Uso de polisacaridos zwitterionicos para la especifica modulacion del progreso inmunologico |
| RU2322451C2 (ru) | 2001-04-17 | 2008-04-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс, Инк. | Молекулярные миметики эпитопов менингококка в, которые вызывают выработку функционально активных антител |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| DK1490409T3 (da) * | 2002-03-26 | 2009-03-23 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modificerede saccharider med forbedret stabilitet i vand |
| WO2004089407A2 (en) * | 2003-03-31 | 2004-10-21 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Zwitterionic immunomodulators for the treatment of asthma and allergy |
| US7731967B2 (en) | 2003-04-30 | 2010-06-08 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Compositions for inducing immune responses |
| WO2006002402A2 (en) | 2004-06-23 | 2006-01-05 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Polysaccharide derivatives and uses in induction of an immune response |
| US8148335B2 (en) | 2004-06-23 | 2012-04-03 | Children's Hospital & Research Center Oakland | De-N-acetyl sialic acid antigens, antibodies thereto, and methods of use in cancer therapy |
| US8329184B2 (en) | 2005-06-27 | 2012-12-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Process for manufacturing vaccines |
| US8206726B2 (en) | 2006-02-06 | 2012-06-26 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Zwitterionic polysaccharides for promotion of immune system maturation and health |
| GB0611914D0 (en) | 2006-06-15 | 2006-07-26 | Teti Giuseppe | Peptides that mimic non-human cross-reactive protective epitopes of the group Bmeningococcal capsulsar polysaccharide |
| EP1872791A1 (en) | 2006-06-30 | 2008-01-02 | Institut Pasteur | Use of bacterial polysaccharides for biofilm inhibition |
| US20100189740A1 (en) * | 2007-06-20 | 2010-07-29 | Francis Michon | Modified polysaccharides for conjugate vaccines |
| ES2664753T3 (es) | 2007-12-07 | 2018-04-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composiciones de inducción de respuestas inmunes |
| WO2010083477A2 (en) | 2009-01-16 | 2010-07-22 | University Of Maryland, Baltimore | Broad spectrum vaccine against non-typhoidal salmonella |
| WO2013009945A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-01-17 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Lipid-containing psa compositions, methods of isolation and methods of use thereof |
| EP2752403A1 (de) * | 2013-01-08 | 2014-07-09 | Sika Technology AG | Amin für emissionsarme Epoxidharz-Produkte |
| WO2017031431A1 (en) | 2015-08-19 | 2017-02-23 | President And Fellows Of Harvard College | Lipidated psa compositions and methods |
| US11491181B2 (en) | 2016-07-15 | 2022-11-08 | President And Fellows Of Harvard College | Glycolipid compositions and methods of use |
| PE20191107A1 (es) * | 2017-01-31 | 2019-08-26 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y metodos respectivos |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4057685A (en) * | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
| US4356170A (en) * | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
| US4673574A (en) * | 1981-08-31 | 1987-06-16 | Anderson Porter W | Immunogenic conjugates |
| US4644059A (en) * | 1982-07-06 | 1987-02-17 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae B polysaccharide-diptheria toxoid conjugate vaccine |
| US4619828A (en) * | 1982-07-06 | 1986-10-28 | Connaught Laboratories, Inc. | Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines |
| US4496538A (en) * | 1982-07-06 | 1985-01-29 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine |
| US4695624A (en) * | 1984-05-10 | 1987-09-22 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency |
| US4727136A (en) * | 1985-10-01 | 1988-02-23 | Canadian Patents And Development Ltd. | Modified meningococcal group B polysaccharide for conjugate vaccine |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
-
1990
- 1990-12-13 AU AU68987/91A patent/AU641715B2/en not_active Ceased
- 1990-12-13 RO RO92-0789A patent/RO111416B1/ro unknown
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU9201966D0/hu unknown
- 1990-12-13 RU SU5052391A patent/RU2105568C1/ru active
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU218146B/hu unknown
- 1990-12-13 BR BR909007917A patent/BR9007917A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-12-13 AT AT91900142T patent/ATE121947T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 CA CA002071811A patent/CA2071811C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 DE DE69019164T patent/DE69019164T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 KR KR1019920701403A patent/KR0158436B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 DK DK91900142.0T patent/DK0504202T3/da active
- 1990-12-13 WO PCT/CA1990/000437 patent/WO1991008772A1/en active IP Right Grant
- 1990-12-13 EP EP91900142A patent/EP0504202B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 ES ES91900142T patent/ES2071288T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 JP JP3500908A patent/JP2637845B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-14 IL IL9667690A patent/IL96676A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 CN CN90110444A patent/CN1049223C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-14 SI SI9110243A patent/SI20008B/sl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 AR AR90318627A patent/AR243934A1/es active
- 1990-12-14 PL PL90302476A patent/PL166659B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 IN IN1033/CAL/90A patent/IN171747B/en unknown
- 1990-12-14 ZA ZA9010065A patent/ZA9010065B/xx unknown
- 1990-12-14 IE IE451390A patent/IE68414B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 YU YU24391A patent/YU24391A/sh unknown
- 1990-12-14 PL PL90288271A patent/PL166035B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 PH PH41724A patent/PH30305A/en unknown
- 1990-12-14 NZ NZ236471A patent/NZ236471A/en unknown
- 1990-12-14 CZ CS906284A patent/CZ283530B6/cs unknown
-
1992
- 1992-06-12 FI FI922737A patent/FI104539B/fi active
- 1992-06-12 NO NO922316A patent/NO305275B1/no unknown
- 1992-10-02 HR HRP-243/91A patent/HRP920872A2/hr not_active Application Discontinuation
-
1993
- 1993-11-22 CN CN93114764A patent/CN1072506C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93119467A patent/CN1036504C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93114763A patent/CN1036522C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-05-05 US US08/238,600 patent/US5576002A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-07 US US08/485,623 patent/US5683699A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-07-17 NO NO973311A patent/NO307835B1/no unknown
- 1997-10-17 US US08/953,771 patent/US5902586A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-09-09 FI FI991917A patent/FI19991917A/fi unknown
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2508122C2 (ru) * | 1999-11-29 | 2014-02-27 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | КОМПОЗИЦИИ, ВКЛЮЧАЮЩИЕ АНТИГЕНЫ Neisseria meningitidis ИЗ СЕРОГРУПП В И С, И ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ АНТИГЕН |
| RU2528066C2 (ru) * | 2001-06-20 | 2014-09-10 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | Вакцины на основе солюбилизированных и комбинированных капсулярных полисахаридов |
| RU2475495C2 (ru) * | 2001-09-06 | 2013-02-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий |
| US9452224B2 (en) | 2003-08-12 | 2016-09-27 | Lipoxen Technologies Limited | Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation |
| US10406209B2 (en) | 2003-08-12 | 2019-09-10 | Lipoxen Technologies Limited | Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation |
| RU2454244C2 (ru) * | 2004-12-24 | 2012-06-27 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс С.Р.Л. | Сахарид-конъюгатные вакцины |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2105568C1 (ru) | Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b | |
| CA2223567C (en) | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines | |
| US7595307B2 (en) | Polysaccharide derivatives and uses in induction of an immune response | |
| JP2004505885A (ja) | Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドを用いて産生されたワクチンとして有用な免疫原性β−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体 |