RO111416B1 - Polizaharide modificate de neisseria meningitidis si e coli, combinatii antigenice si metoda de imunizare - Google Patents
Polizaharide modificate de neisseria meningitidis si e coli, combinatii antigenice si metoda de imunizare Download PDFInfo
- Publication number
- RO111416B1 RO111416B1 RO92-0789A RO92078990A RO111416B1 RO 111416 B1 RO111416 B1 RO 111416B1 RO 92078990 A RO92078990 A RO 92078990A RO 111416 B1 RO111416 B1 RO 111416B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- gbmp
- group
- protein
- polysaccharides
- butanoyl
- Prior art date
Links
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 title claims abstract description 35
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 34
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 title claims description 10
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 title claims description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 title description 6
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 title description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- -1 n- butanoyl Chemical group 0.000 claims description 30
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical group [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 3
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 4
- 241000617590 Escherichia coli K1 Species 0.000 abstract description 3
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 241000588677 Neisseria meningitidis serogroup B Species 0.000 abstract 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 25
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000006181 N-acylation Effects 0.000 description 4
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N hexanoyl hexanoate Chemical class CCCCCC(=O)OC(=O)CCCCC PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical group CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 102000001068 Neural Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 108010069196 Neural Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 1
- YQKFJYBRZVNXKQ-UHFFFAOYSA-N [Na].BC#N Chemical compound [Na].BC#N YQKFJYBRZVNXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N butanoyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OC(=O)CCC YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012045 crude solution Substances 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 125000000268 heptanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- LSACYLWPPQLVSM-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid anhydride Chemical compound CC(C)C(=O)OC(=O)C(C)C LSACYLWPPQLVSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 229910000000 metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004692 metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N pentanoic acid group Chemical group C(CCCC)(=O)O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DUCKXCGALKOSJF-UHFFFAOYSA-N pentanoyl pentanoate Chemical compound CCCCC(=O)OC(=O)CCCC DUCKXCGALKOSJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical group 0.000 description 1
- 230000008927 postnatal maturation Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N propionic anhydride Chemical compound CCC(=O)OC(=O)CC WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1228—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K16/1232—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia from Escherichia (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0258—Escherichia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1217—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
Prezenta invenție se referă la polizaharide modificate de Neisseria meningitidis și E.Coli, la combinații antigenice ce conțin aceste polizaharide și la o metodă de imunizare a mamiferelor, folosind aceste combinații antigenice.
Meningitele produse de bacteriile din grupa B Neisseria meningitidis și E.coli K 1 sunt problemele majore ale sănătății mondiale. Grupul de meningite H apar atât în situații endemice, cât și epidemice, și sunt răspunzătoare pentru aproximativ jumătate din toate cazurile de meningite care au la bază meningococi, în timp ce E.coli K 1 pozitivi sunt cauzele de bază a meningitelor la noii născuți.
Nu există vaccin, cunoscut până în prezent, care să ajute la bolile cauzate de grupa B de meningococi și E.coli K 1. Aceasta se datorește în mare parte faptului că grupa B de plizaharide meningococice (GBMP) este doar slab imunogenică la oameni. Există unele vaccinuri care au fost recent descoperite, bazate pe complexe ale GBMP cu membrană exterioară de proteină, dar până în prezent nu există o evidență clară asupra eficacității lor la oameni. Recent s-a dezvoltat un nou concept și anume un nou vaccin bazat pe o combinație de grupa B modificată prin sinteza chimică (N-propionilată) și polizaharidă proteică (proteina N-Pr-GBMP). Acest vaccin care s-a administrat la șoareci cu titru înalt de anticorpi IgG, nu sunt numai protectori ci reacționează contrar GBMP modificat (adică - acetil GBMP). Acest concept este descris în patentul US 4727*136.
S-a ajuns la concluzia că un vaccin care dă naștere la anticorpi cu reacțiecontrară, ca acela despre care s-a arătat mai sus, poate fi eficace numai cu prețul de a-i distruge toleranța imună. Această ipoteză este legitimată prin identificarea unui epitop comun constând dintr-un lanț de a-{2-8) - legate de rezidii de acid sialic (cu o cerință minimă de 10 rezidii), atât în N-Ac-GBMP natural, cât și în țesuturile umane sau animale. Aceste lanțuri polisialosil funcționează ca antigen în dezvoltare și au fost în cea mai mare parte asociate cu starea fetală din celula embrională neurală de adeziune (Brochem, Biophys.Res.Commun.1983, 112 - 487). In timpul maturării post-natale acest antigen este reglat în jos (J. Cell. Biol.1985, 101,412), dar se identifică la oamnii maturi în timpul regenerării mușchilor bolnavi (Ann.Neuron. 1987, 21, 481) în celulele tumorale (Proc. Natl.Acad.Sci.1988, 85, 299) și în copii care au fost născuți fără viață (NX) și în celulele CD3+T(Eur.j.lmmunol.1989, 19, 1761). Deși consecințele distrugerii toleranței acestor antigeni fetali nu au fost până în prezent stabilite, seacceptă în general, că din cauza acestei reacții contrare combinația de N - Pr - GBMP proteină, ar fi analizată de către specialiștii din domeniu, conducând la cheltuieli considerabile și amânări din cauza experimentărilor complexe care sunt necesare pentru a dovedi securitatea vaccinului înaintea aprobării pentru lansarea pe piața comercială.
Invenția de față are ca scop să pună la punct un vaccin care să aibe proprietăți imunogenetice îmbunătățite, în comparație cu cele ale N-Pr-GBMPproteină. Invenția are, de asemenea, ca scop să ofere un vaccin care prezintă reactivitate-contrară redusă în mod substanțial cu un antigen de celule neurale de adeziune la oameni si animale (fetal n - CAM).
Polizaharidele, în conformitate cu prezenta invenție au 27 - 1D0% din grupările N-acetil ale polizaharidelor inițiale înlocuite cu grupări C4 - C8 acil alese dintr-un grup constând din n-butanoil, izobutanoil, n-pentanoil, n-hexanoil, /7-heptanoil sau n-octanoil și în care grupa acil este n-butanoil, /zo-butanoil, n-pentanoil, n-hexanoil, n-heptanoil sau n-octanoil, iar greutatea moleculară este 1D000 ... 50000 daltoni. Gruparea preferată este n-butanoil. Aceste polizaharide sunt combinate cu o proteină corespunzătoare din punct de vedere imunologic aleasă din grupa toxoidului tetanosului, toxoidului difteriei, un material de reacție contrară (CMR) sau o bacterie suport pentru proteină. Combinarea dintre polizahari și
RO 111416 Bl proteină se face prin legătura coovalentă CH2-NH-proteină. Materialul de reacție contrară (CMR) este CMR197. Metoda de imunizare a mamiferelor cu aceste combinații anigenice constă în aceea că se administrează parenteral de trei ori, și la intervale de câte o săptămână, 1...25 pg/kg corp de combinație antigenică împreună cu un suport acceptabil farmaceutic, iar la 12 zile după ultima administrare se recoltează sângele. Suportul acceptabil farmaceutic este ales dintre hidroxid de aluminiu, fosfat de aluminiu sau sulfat de aluminiu.
Intr-unui din aspectele invenției de față se oferă o B polizaharidă de Neisseria memingitidis modificată care are grupa de reziduuri N-acetil acid sialic înlocuită cu C4 - Ca-acil.
Un alt aspect al invenției, este că se oferă o combinație antigenică care cuprinde acil-polizaharidă N-C4-Ca combinată cu o proteină imunologică potrivită și care are o imunogenitate îmbunătățită și o tendință substanțial redusă de a produce anticorpi cu reacție-contrară.
Un alt aspect al invenției, este că se oferă un vaccin care cuprinde o combinație N-C4-Cb acil polizaharidă-proteină în asociere cu un suport potrivit sau cu un diiuant.
Vaccinurile, conform invenției, pot, de asemenea, să cuprindă o cantitate eficace, din punct de vedere terapeutic, dintr-un adjuvant potrivit pentru utilizare la oameni, de exemplu, fosfat de aluminiu sau hidroxid de aluminiu.
Și un alt aspect al invenției, este că oferă o metodă de imunizare a animalelor împotriva infecțiilor cu N. meningitidis și E.coli K 1, metodă care constă în administrarea la mamiferele supuse la asemenea infecții (incluzând și oamenii) a vaccinului din prezenta invenție. Vaccinul se administrează în valori de circa 1 la 50 μνη la un kilogram de greutate a corpului, de exmeplu, 5 la 25 μπι pe kilogram de greutate a corpului.
Și încă un alt aspect al invenției, este că oferă o fracțiune de gama-globulină capabilă de protecție contrară meningitei produse de grupa Β N.
meningitidis și E.coli K 7. Fracțiunea se produce prin imunizarea unui mamifer cu vaccinul conform invenției. Fracțiunea este apoi administrată unui individ pentru a-i oferi protecție împotriva unei infecții cauzată de microorganismele care s-au arătat mai sus. Din acest motiv se apreciază că vaccinul imunogenetic din prezenta invenție, oferă o sursă de antiser terapeutic în vederea obținerii imunității favorabile și cu tendință minimă de reactivitate-contrară a anticorpilor cu antigeni fetali N-CAM de celule neurale de adeziune, umane sau animale. Combinațiile din prezenta invenție sunt, de asemenea, utile pentru producerea de anticorpi cu o singură coloană și posibil anticorpi antidiotip.
S-a constatat, în experimentările recente, că cei mai mulți anticorpi bactericizi și de protecție, produși de combinația N-Pr-GBMP-proteină descrisă în materialele cunoscute din stadiul tehnicii (cum ar fi patentul US 4727136] nu sunt asociați cu anticorpi fetali N-CAM cu reacție-contrară. Pe scurt, cea mai mare activitate de protecție este cuprinsă într-o populație de anticorpi N-PrCBMP specific care nu reacționează contrar cu N-CAM fetal. In acest sens.se crede că N-Pr-CBM simulează un epitop bactericid unic, pe suprafața corpului B de meningococi. Invenția de față se bazează pe faptul că este posibil să se sintetizeze, pe cale chimică, grupuri CBMP care simulează epitopul bactericid și care în forma lor combinată nu prezintă numai imunogenitate, dar evită, de asemenea, în mod substanțial și producerea de anticorpi care să reacționeze-contrar cu N-CAM fetal.
Pentru a ajunge la invenția de față, s-a sintetizat un număr de diferite CBMP modificați chimic precum și combinații individuale cu proteine, urmat de injectarea acestor combinații la șoareci și apoi compararea efectelor cu cele produse prin combinația de proteină cu N-Pr-CBMP. Surprinzător este faptul că s-a constatat că combinația N-C4-Ca-acil GBMP-proteină, de exemplu /7-butanoil, /zo-butanoil, n-pentanoil, rwzo-pentanoil,
RO 111416 Bl neo-pentanoil, hexanoil, heptanoil și octanoil și în special compusul N-butanoil (NBu) GBMP-proteină simulează foarte puternic epitopul bacterial cu reducerea substanțială de anticorpi de reacție contrară.
Pentru o mai bună înțelegere a invenției arătăm și următoarele:
Grupa B de polizaharide meningococice este izolată din N. meningididis prin metodele cunoscute în domeniul de specialitate. In continuare acest grup B de meningococi (produsul 981 B) au fost lăsate să crească la temperatura de 37°C, într-un fermentator folosind 30 g de bulion Todd Hewitt Broth la un litru de apă distilată. înainte de a se adăuga în fermentator pentru creștere, produsul care este liofilizat a fost cultivat inițial întrun recipient încălzit la 37°C, pe plăci ce conțin agar-agar, în cantitate de 5% (v/v) cu sânge de oaie. Bacteriile au fost apoi transferate într-un litru de bulion, care sa arătat mai sus, într-un flacon tip Erlenmeyer care se agită, la temperatura de 37°C timp de 7 h la o agitație de 190 rot/min. Acest vaccin (inocul) s-a transferat apoi în fermentator, și după o creștere prin fermentație timp de 16 h, bacteriile au fost omorâte prin adaos de formaldehidă care s-a adăugat până la obținerea unei concentrații finale de 0,75%. Bacteriile au fost apoi îndepărtate printr-o centrifugare continuă și s-a izolat astfel grupa de B polizaharide meningococice din supernatantul obținut. Această grupă B se purifică după procedeele cunoscute în domeniu (J. Biol. Chem. 249.4797, 4801, 1974). Excepție face că proteina s-a extras prin agitarea unei soluții brute de polizaharidă cu 90% fenol, la temperatura de 4°C, în condiții de căldură cum ar fi temperatura de 50 ... 60°C. Acest ultim proces asigură producerea unei forme de GBMP cu greutate moleculară mare.
E.coli(018:K2YR7) (NRCC 4283) s-au maturizat la temperatura de 37°C, într-un fermentator, în apă distilată care conține infuzie de creer în cantitate de 37 g/l. Este preferabil ca înainte de maturarea în fermentator, produsul liofilizat să fie maturat în 50 ml soluție de BHI (aceeași ca mai sus) într-un flacon Erlenmeyer, agitat, la temperatura de 37°C, timp de 7 h cu agitație de 200 rot/min Acest produs maturizat a fost apoi transferat într-o cantitate de 1,5 I de BHI și maturizat timp de 7 h în acelleași condiții ca cele descrise mai sus. Produsul inoculat a fost apoi transferat în fermentator.
Procedeele utilizate la izolarea și purificarea polizaharidei capsulare de E.coli K 1, sunt identice cu cele descris e mai sus pentru izolarea grupei B de polizaharide meningococice. Se apreciază că procedeele de purificare și izolare care s-au descris mai sus nu sunt singurele care pot fi izolate, ci și alte procedee care sunt cunoscute în domeniul de specialitate sunt valabile (de exemplu, cele descrise în J. Imunol. 81, 331, 1958) sau în patentul U.S. 4727136).
Polizaharida nativă este N-deacilată, pentru a asigura un grup aminic reactiv în părțile reziduale din acidul sialic al moleculei. N-deacetilarea se poate efectua prin orice metodă cunoscută, de exemplu, într-un mediu de bază apos, la temperaturi ridicate, de exemplu la temperaturi de la 90°C la 110°C și la un pH de circa 13 la 14. Mediul de bază apos este în mod corespunzător o soluție apoasă alcalină de hidroxid metalic, de exemplu, hidroxid de sodiu la o concentrație în jur de 2 M. Ca alternativă, se poate utiliza o soluție apoasă de hidrazidă. Gradul de H-de acilare variază de la circa 30% la 100%, în funcție și de alte condiții. Este de preferat să se atingă o N-deacetilare de 90 la 100%.
Produsul N-deacetilat poate fi recuperat din mediul respectiv, de exemplu, prin răcire, neutralizare, purificare și dacă se dorește prin liofilizare. înainte de procesul de N-deacetilare, polizaharida are o greutate moleculară medie în domeniul de circa 500000 la 800000 daltoni. Ca un rezultat al N-deacetilării, se obțin fragmente de polizaharidă care au greutatea moleculară medie ce se situează de la circa 10000 la 50000 daltoni. Fragmentele de polizaharidă de
RO 111416 Bl acetilate sunt apoi N-acetilate pentru a obține produsul corespunzător N-acilat. Procesul de N-acilare se poate efectua prin dizolvarea polizaharidei N-deacetilată într-un mediu apos care are un pH de circa 7,5 la 9,0, urmată de adăugarea anhidridei acil potrivite, opțional, cu un alcool pentru a crește solubilitatea, după care se răcește la o temperatură sub 10°C, până la reacție completă. Mediul de reacție poate fi purificat, dacă se dorește, de exmeplu, prin dializă, și produsul N-acilat obținut este apoi recuperat din mediu prin metode cunoscute, cum ar fi, de exemplu, liofilizarea. Reacția este total completă, în circa 10 ... 20 h. Gradul de N-acilare, așa cum s-a măsurat prin metode analitice tipic 1H nmr, este de cel puțin 90% și foarte aproape de 100%. Reacția de N-acilare nu conduce la o reducere semnificativă a greutății moleculare a fragmentelor.
Este de preferat, în concordanță cu invenția de față, să se aleagă pentru scopuri de combinare un material Nacilat care are o greutate moleculară medie ce corespunde la 30 până la 200 rezidii de acid sialic. Aceasta se realizează, în general, prin metoda de filtrare în gel a produsului GBMP n-acilat și utilizând o coloană de ultragel (marca comercială AcA 44, coloană cu diametrul patului de 60 ... 140 ^m) și PBS ca eluent. Ca alternativă, se poate utiliza o membrană pe bază de clei. Materialul Nacilat cu o greutate moleculară medie de 10000 la 40000 daltoni, de exemplu, 10000 la 15000 Daltoni, este întrebuințat în cadrul prezentei invenții. Acest material se obține prin colectarea, din eluatul coloanei, a materialului GBMP-Nacilat care are un domeniu al greutății moleculare asemănător. Materialul N-acilat cu greutate moleculară mai mare, de exemplu, în domeniul 30000 la 40000 daltoni s-a dovedit a fi util în conformitate cu prezenta invenție.
Vaccinurile, conform invenței, se obțin prin combinarea polizaharidei Nacilate cu un suport de proteină corespunzătoare din punct de vedere imunologic. In mod preferabil, proteina suport este ea însăți un imunogen. Exemple de proteine purtătoare și potrivite sunt toxoidul de tetanos, toxoidul de difterie, materiale cu reacție contrară (CRMS), de preferat CRM 197, și suport de proteine bacteriale, de exemplu proteine cu membrana exterioară meningococică. Se poate utiliza orice mod de combinare care este cunoscut în domeniul de specialitate, pentru a combina fragmentele de polizaharidă modificate cu proteina purtătoare (o metodă preferată, este cea descrisă în patenul US 4356170), metoda preferată fiind aceea de introducere a grupelor de aldehide terminale (calea de oxidare a grupelor de hidroxil c/s-vecinal) în polizaharida N-acilată și cuplând grupele de aldehidă la grupele de amino-proteină prin procesul de aminare reducătoare. Polizaharida și proteina sunt legate prin legătura -CH2-NHproteină.
Este de înțeles, însă, că vaccinurile combinate, în conformitate cu prezenta invenție, nu sunt limitate la cele produse pe calea aminării reducătoare. Astfel, vaccinurile se pot produce, de asemenea și prin combinarea polizaharidei N-acilată cu o proteină purtătoare și utilizând un moderator de dihidrazidă adipică, așa cum este cunoscut din domeniul de specialitate (J.Exp. Med. 1952, 361-476, 1980) precum și în patentul US 464405S). In mod alternativ, se poate utiliza tehnologia de moderator liniar, care, de asemenea, este cunsocută în doemniul de specialitate (J.Am.Chem.Soc. 108, 5282),5287, 1986) sau posibil metodologia de reducere a capetelor (așa cum se arată în patentul US 4675574). Combinația rezultată N-acilată de polizaharidă-proteină în conformitate cu prezenta invenție, a fost testată pe șoareci în condiții de in vitro, și s-a arătat că în general posedă proprietăți imunogenetice îmbunătățite în comparație cu N.propionilat-polizaharide. In plus, s-a observat o formare substanțial de redusă, de anticorpi de reacție contrară. In lumina acestor fapte, se crede că vaccinurile din prezenta invenție sunt eficace împotriva meningitelor sau
RO 111416 Bl zate de grupa B.N meningitidis sau de E.coli K 1. De interes deosebit sunt vaccinurile pentru protecția copiilor, care sunt cei mai predispuși la meningite bacteriale.
Vaccinurile din prezenta invenție sunt obținute în mod tipic prin dispersarea combinației în orice suport acceptabil din punct de vedere farmaceutic, cum ar fi ser fiziologic sau alt lichid care se folosește pentru injecții. Vaccinul se administrează parenteral, de exemplu subcutanat, intraperitoneal sau intramuscular. Aditivii obișnuiți și care sunt folosiți în vaccinuri, pot fi prezenți și în aceste vaccinuri, cum ar fi, de exemplu, stabilizatori ca lactoza sau sorbitolul, adjuvanți ca fosfatul de aluminiu, hidroxidul de aluminiu sau sulfatul de aluminiu. □ doză potrivită pentru un vaccin care se administrează la copii, este, de exemplu, în general, în domeniul de 2 până la 25 ,ug, sau de circa 1 până la 10 Mg pe kilogram/corp.
Se daufîn continuare,două exemple de realizare a invenției, care însă exemplele pot fi nelimitate.
Exemplul Ί. S-a preparat combinațiile de N-acetil, N-propionil, n-butanoil, N-izobutanoil, N-pentanoil și N-hexanoil GBMP - proteină, pentru evaluarea scopurilor, iar rezultatele sunt discutate în cele ce urmează.
Materiale și metode pentru prepararea combinațiilor:
a] materiale: s-au utilizat anhidridele propionice, butanoice, izobutanoice, pentanoice și hexanoice împreună cu acidul colominic. Deoarece acidul colominic este din punct de vedere structural identic grupei B polizaharidei meningococice (GBMP) se va referi în continuare la GBMP. Toxoidul de tetanos (TT) este utilizat în forma lui monomerică, în toate combinațiile, și acesta s-a obținut prin trecerea preparatului de mai sus printr-o coloană de Bio-Gel (marca A 0,5 și 200 ... 400 mesh) cu 1,6 x 90 cm, care este echilibrată și eluată cu ser fiziologic tamponat cu fosfat 0,01 M (PBS), la un pH de 7,4.
b) N-de acetilarea GBMP: 1 g de sare de sodiu de GBMP s-a dizolvat în 5 ml de NaOH 2 M și apoi s-a adăugat 150 mg de NaNH4, după care soluția a fost încălzită la temperatura de 110°C, timp de 6 h într-un container de 60 ml care este prevăzut cu un dop filetat (acest procedeu este descris în patentul US 4727136 și în J.Immunol. 134, 2651, 1985). Soluția diluată obținută și răcită, a fost apoi complet dializată cu apă distilată la temperatura de 4°C, după care a fost liofilizată. Faptul că s-a format N-deacetil GBMP, este determinat prin absența semnalului metilacetamido (la delta 2,0), în spectrul 1H nmr, al N-deacetilat -GBMP.
c) N-acetilarea GBMP: 1 g de Nacetilat-GBMP a fost dizolvat în 50 ml de soluție apoasă ce conține 5% NaHN03. La cinci părți alicote individuale (10 ml din soluția de mai sus) s-a dăugat una dintre anhidridele arătate mai sus, și anume anhidrida propionică, butanoică, izobutanoică, pentanoică sau hexanoică. Acești reactivi au fost adăugați în trei reprize, a câte 0,5 ml alicote, pe parcursul unei perioade de trei ori și la temperatura camerei, în timp ce soluția este menținută la un pH=8,8 prin adăugare de NaOH 0,5 N. Se adaugă apoi 0,5 ml metanol, simultan cu fiecare adaos de anhidridă, în scopul de a le mări solubilitatea. In final, soluțiile au fost agitate timp de 16 h, la temperatura de 4°C și dializate complet cu apă distilată, tot la temperatura de 4°C, după care a urmat liofilizarea. Fiecare combinație Npropionilată, N-butanoilată, N-izobutanoilată, N-pentanoilată și N-hexanoilată GBMP au fost obținute în randamente de 90%. In fiecare caz s-a afirmat că este o N-acilare completă, prin dispariția în 1H nmr spectru a N-deacetilată-GBMP.
d) Sortarea fragmentelor din diferite combinații de N-acilat-GBMP: S-a utilizat filtrarea prin gel, folosind o coloană de Ultragel (cum ar fi AcA 44 cu diametrul patului 60 x 140 μπί) cu PBS ca eluant, pentru a obține materialul Nacilat-GBMP și cu greutatea moleculară medie dorită. S-au colectat fracțiuni din eluatul din coloană de la KD 0,5 la KD r
RO 111416 Bl
0,7, așa cum s-a măsurat cu FLPC (vezi mai jos), după care au fost dializate și liofilizate. Acest domeniu al valorilor Ko corespunde la N-acilat-GBMP de aproximativ 30 ... 50 rezidii de acid sialic (cu greutatea moleculară de 10000 ... 15000 daltoni), tipic medie de 12000 Daltoni pentru greutateamoleculară medie. Fracțiunile în domeniu de KD 0,2 la 0,4 corespund fragmentelor care au o greutate moleculară medie în domeniul 30000 ... 40000 daltoni, care au fost, de asemenea, colectate și combinate. Astfel materialul N-acilat, eluat din domeniul KD de la 0,2 la 0,7 este de interes deosebit.
e) Combinații cu polizaharide: Grupele de aldehide terminale au fost introduse în N-acilat-GBMP prin oxidare cu periodat (așa cum este arătat în patentul US 4356170). Fragmentele Nacilat-GBMP de mai sus au fost oxidate, în soluție apoasă, cu 10 ml NalO4 0,1 M (sodiu metaperiodat), timp de 2 h și la temperatura camerei, în condiții de întuneric. Un exces de periodat a fost apoi distrus prin adaos de etilenglicol după care soluția a fost dializată la temperatura de 4°C și liofilizată. Utilizarea NaBH4, în procesul de N-deacetilare (exceptând pentru GBMP) a condus la transformarea rezidiilor de reducere de acid sialic, din fiecare N-acilat-GBMP, la un lanț deschis de rezidii de poliol. Acest tip de rezidii este sensibil la periodat, și prin aceasta rezultă introducerea grupelor de aldehidă în fragmentele de Nacilat-GBMP, la ambele terminale.
In acest sens, 100 mg de fragmente oxidate au fost dizolvate în NaHCOg 0,1 M, la pH 8,1 și api tamponate. Se adaugă în soluție 20 mg TT. In final, după adăugare de 40 mg de cianoborhidrură de sodiu (NaCNBH3), soluția a fost ușor agitată la temperatura camerei. Desfășurarea combinării a fost urmărită prin FPLC, utilizând o coloană de filtrare din gel conținând Superose 12 HR 10/30, agitată la 1 ml/min, în tampon PBS și la pH=7,2; ambele fragmente de proteină și N-acilat GBMP sunt monitorizate la 214 mm. Fragmentele au Kg 0,6; TT au Kg 0,39 și combinațiile au KD 0,23. Combinarea a fost completă când tot TT a fost consumat (așa cum sa determinat prin lipsa vârfului în cromatografia FPLC), corespunzând componentului cu KD 0,39. In cele mai multe cazuri, combinările sunt complete în două zile, dar pentru o reacție totală s-a lăsat o durată de 4 zile. Posibilele grupe de aldehide care nu au reacționat, au fost reduse cu 20 mg borohidrură de sodiu, care s-a dăugat anterior filtrării prin gel. Combinațiile polizaharidă - TT au fost izolate de fragmentele de polizaharidă, prin filtrare prin gel, utilizând o coloană de Bio Gel A și PBS ca eluant. Eluantul care conține combinația a fost dializat cu apă distilată și apoi liofilizat. Combinațiile N-acilat GBMP-TT au conținut 12 ... 30%, tipic 12 ... 20%, acid sialic așa cum este determinat prin metoda cu rezorcinol descrisă în materialele cunoscute din stadiul tehnicii (Biochim. Biophys. Acta 24, 604, 1957). Aceasta arată că combinațiile au un raport molar de polizaharidă -TT de 2 ... 3:1.
Exemplul 2. Imunizarea (și încercări de imunizare):
a) Procedee de imunizare: S-au imunizat trei șoareci femele CFI în vârstă de 8 ... 10 săptămâni, prin administrare intraperitoneală, de trei ori și la interval de trei săptămâni, a unei combinații de N-acilat GBMP-TT care a fost preparată cu adjuvantul Freunds complet (FCA). Fiecare imunizare conține o combinație suficientă (10 ... 12 mg] ca să conțină 2 mg acid sialic. După 12 zile, după a treia injecție s-a recoltat sângele șoarecilor și s-au efectuat următoarele teste pe seruri:
b) încercarea radioactivă de legare-antigen: Această încercare s-a efectuat printr-o tehnică modificată Farr, utilizând GBMP extern cu eticheta (3H) (vezi J.lmmunol, 134, 2651, 1985) ori N-Pr-GBMP cu etichetă (3H)(vezi J., Immunol.,142, 3585 - 3591, 1989). Amestecul de reacție pentru încercarea radioactivă de legare-antigen, s-a obținut prin amestecarea în microtuburi de încercare 20 pl Eppendorf cu propilenă
RO 111416 Bl de seruri acumulate de la un grup de 20 șoareci care a fost imunizat fiecare (și separat) cu combinația N-acilat GBMP TT diluat la 100 pl cu PBS cu etichetă (3H) GBMP și (3H) N-Pr-GBMP în 50 pl 5 de PBS. După incubare la temperatura de 4°C, timp de 16 h, s-a adăugat în tuburile de 150 ml sulfat de amoniu saturat, tot la temperatura de 4°C și pH 7,0, iar tuburile au fost agitate și lăsate io să stea la temperatura de 4°C(timp de 30 min. In continuare, tuburile au fost centrifugate la 15000 rot/min, timp de 10 min, după care s-a extras din tuburi două alicote de câte 130 pl. Aceste 15 alicote au fost amestecate cu 2 ml apă și o substanță scintilantă care conține xilen (soluție apoasă de scintilant, ACS), și amestecurile au fost numărate într-un dispozitiv de numărare pentru lichide 20 scintilante. Rezultatele obținute sunt date în tabelul 1.
Tabelul 1
Legarea lui N-Ac-GBMP cu eticheta (3H) la diferite antiseruri de șoareci cu combinația N-acil-GBMP-TT
| Antiser | % Legare (a) | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| N-Pe-GBMPTT | 41 | 40 | 39 | 1 |
| H-Bu-GBMP-TT | 4 | 4 | 7 | 2 |
| N-lzoBu-CBMP-TT | 9 | - | - | 4 |
| N-Pe n-CBMP-TT | 36 | - | - | - |
| N-Hex-CBMP-TT | 16 | - | - | - |
H = cele patru exprimări asupra legării s-au efectuat pe seruri acumulate de la 20 de șoareci imunizați sunt următoarele:
N-Ac; N-Pr; N-Bu; N-lzoBu; N-Pen; N-Hex reprezintă:
N-acetil; N-propionil; N-butanoil; N-izobutanoil; N-pentanoil și N-hexanoil.
Numerele 1,2, 3 și 4 sunt rezultatele a patru experimentări repetate. Tabelul 1 demonstrează că N -AcGBMP (care are același epitop ca și NCAM fetal) se leagă mai puțin de antiserul introdus de N-Bu-CBMP, NIzoBut-GBM. Deci din tabelul 1 se poate deduce că combinațiile de M-Bu-; NIzoBu - ; N-Pen - și N-Hex -polizaharide dau naștere la anticorpi cu acțiunecontrară mai puțin decât combinația de bază de N-Pr-,
c) Analize cantitative ale precipitațiilor: Aceste experimentări s-au efectuat prin metoda Kabat și Mayar. Alicote de 100 pl de antiseruri de N-acil-GBMPTT (diluate de 5 ori în PBS) sunt introduse în tuburi și puse în reacție cu concentrații crescânde de N-acetil (acid colominic), N-propionil, N-butanoil, N-izobutanoil, N-pentanoil și N-hexanoil GBMP, într-un volum total de 200 pl (care a fost ajustat cu PBS). Fracțiunile cu greutate moleculară mai ridicată din aceste derivații s-au utilizat ăn aceste experiențe, și ele s-au obținut din eluatul de la coloana de Ultragel AcA 44 (KD 0,4 așa cum s-a măsurat la FPLC); utilizat ulterior pentru clasarea fragmentelor de N-acetil-GBMP. Tuburile au fost incubate la temperatura de 4°C, timp de 4 zile cu amestecare zilnică după care au fost centrifugate și apoi determinată cantitatea de proteină anticorp (prin metoda lui Lowry și alți). Rezultatele obținute sunt date în tabelul 2 care urmează.
Prescurtările care au fost utilizate 40 în tabelul 1, precum și în celelalte tabele
RO 111416 Bl
16
Tabelul 2
Precipitare ia/1 din antiser de șoarece N-acil-GBMP-TT, utilizând diferite N-acil GBMP ca antigeni de precipitare
| Antiser | Antigen N-acil-GBMP | ||||
| N-acetil | N-propil | N-butil | N-pentil | N-hexil | |
| N-Pr-GBMP-TT | 0,16 | 0,40 | 0,20 | 1,15 | 0,15 |
| N-Bu-GBMP-TT | 0,04 | 1,15 | 2,60 | 3,20 | 1,90 |
| N-Pent-GBMP-TT | 0,13 | 0,38 | 0,44 | 6,35 | 3,55 |
| N-Hex-GBMP-TT | □,02 | 0,08 | 0,80 | 4,15 | 4,40 |
(a) - cantitatea maximă de anti- io corp precipitat este exprimată în mg/ml de antiser ln ceea ce privește activitatea-contrară, prima coloană din tabelul 2 arată că se produc foarte puțini anticorpi de 15 reacție-contrară de către compușii de bază de N-Bu și N-Hex-, în comparație cu combinația de N-Pr. Se poate vedea, de asemenea, că combinația N-Pent- produce mai puțini anticorpi de reacție-con- 20 trară decât combinația N-Pr. In ceeace privește imunogenitatea, în termeni de reacție omologi se poate vedea, din tabelul 2, că combinațiile N-Bu (2,60), N-Pen(6,35), N-Hex(4,40) GBMP-TT 25 sunt mai imunogenetice decât N-PrGBMP analog [0,40],
d) Elisa: S-au acoperit scobiturile plăcilor de microtitrare RIA, fie de combinații GBMP -NPrGBMP sau N-Bu- 30 GBMP-BSAîn PBS (1 CO pl în scobitură). Plăcile au fost lăsate timp de 16 h la temperatura de 4°C și, după acoperire, au fost spălate cu ser de bovină ce conține 1% albumină, în PBS, timp de 10 min la temperatura camerei [faza de stopare). Scobiturile au fost apoi umplute cu 100 pl seruri de compus de antișoareci N-acil-CBMP-TT, în serie de diluții de 10 ori în PBS, iar apoi plăcile au fost incubate timp de o oră la temperatura camerei. După spălare cu SBT, plăcile au fost incubate timp de o oră la temperatura camerei cu 50 pl dintr-o diluție potrivită de combinații etichetate, de peroxidază de imunoglobulină de capră antișoarece, apoi conținuturile scobiturilor au fost aspirate și plăcile au fost spălate de cinci ori cu SBT. In final, s-a adăugat în fiecare scobitură, câte 50 pl dintr-un substrat de peroxidază albastră de tetrametilenă (TMB), și după 10 min s-a măsurat absorbția la 450 mm, cu spectrofotometru Multiscan. Rezultatele obținute sunt date în tabelul 3.
Tabelul 3
Titrări Elisa de combinații de antiser N-acil-GBMP -TT, acumulat de la șoareci în cu combinațiile N-acil-GBMP-BSA
| Acoperire antigen | Titrările (a) antiserurilor | ||
| a.N-Pr-GBMPb | A.n-bU-GBMPb | a.N-lzoBu-GBMPb | |
| N-Ac-GBMP-BSA | 7800 | 1000 | 7000 |
| N-Pr-GBMP-BSA | 40000 | 39000 | 9800 |
| N-Bu-GBMP-BSA | 26000 | 52000 | 9700 |
| N-lzoBu-GBMP-BSA | - | 25000 |
(a] = Titrul (GM) = reciproca diluției de maximum 50% absorbantă la 45 mm
b) = antiser specific N-acil introdus în șoareci de către combinațiile omoloage N-acil-GBMP-TT.
RO 111416 Bl
In ceea ce privește reactivitatea contrară, se poate vedea din tabelul 3, că, combinația N-Bu-GBMP-TT crește mai puțin anticorpii de reacție-negativă, în raport cu N-Ac-GBMP-TT (1000), decât o face combinația N-Pr-GBMP-TT. Motivația este că GBMP se leagă mai puțin la anticorpul introdus de combinația N-Pr-GBMP-TT, decât cea introdusă de combinația N-Bu-GBMP-TT. Comentarii similare se aplică la combinația N-lzoBu-GBMP-TT.
In ceea ce privește imunogenitatea, combinația N-Bu- este mai imunogenică decât analogul N-Pr-, așa cum arată titrurile omoloage de legare de 52000 (N-Bu) și 40000 (N-Pr).
e) încercare radioactivă de inhibare a legării: S-au adăugat concentrații crescând de inhibitor de mărime moleculară cea mai mare de N-acil-GBMP în PBS [80 pl) la 20 pl de combinație antiN-Pr-GBMP-TT de antiser de șoarece, cantitate suficientă pentru a lega 50% din N-Pr-GBMP cu etichetă (3H) în absență de inhibitor. Tuburile au fost incubate timp de o oră la temperatura de 37°C, după care s-au adăugat 50 pl de N-Pr-GBMP în PBS. După o ușoară amestecare, tuburile au fost incubate la temperatura de 4°C, timp de 16 h, și încercările au fost făcute exact ca cele descrise anterior pentru încercarea radioactivă de legare a antigenului. Procentul de inhibiție s-a calculat utilizând următoarea formulă:
procent inhibiție = 100 X [(cpm cu inhibitor minus cpm fără inhibitor) / (cpm fără anticorp minus cpm fără inhibitor)]
Rezultatele obținute sunt date în tabelul 4.
Tabelul 4 Inhibarea legării N-Pr-GBMP cu eticheta (3H) la combinația anti-N-PrGBMP-TT, la care s-au introdus anticorpii IqG^ și lqG?h (AȚ și Ig G-, (BȚ
| Inhibitor | A | B |
| N-Ac-GBMP | > 50,0 | > 50,0 |
| N-Pr-GBMP | 0,6 | 0,3 |
| N-Bu-GBMP | 0,3 | 0,2 |
| N-lzoBu-GBMP | > 50,0 | - |
| N-Pen-GBMP | 2.3 | 2,5 |
| N-Hex-GBMP | 10,2 | 10,0 |
a) acestea au fost fracțiuni de ser policlonal de șoarece anti-N-Pr-GBMP-TT.
b) micrograme de inhibitor pentru a produce 50% inhibare.
S-au făcut și încercări bactericide, după metodele cunoscute în domeniu (de exemplu, J.Exp.Med. 165, 1207-1211, 1987).
Neisseria meningitidis fracțiunea B[M 986) a fost utilizată în aceste încercări, iar rezultatele sunt date în tableul 5. care urmează
Tabelul 5
Legarea N-Pr-GBMP cu etichetă (3H) la diferite antiseruri de șoarece cu combinația N-acil-GBMP-TT
| Antiser | pl de antiser® | Titru bactericid® |
| N-Pr-GBMP-TT | 13 | 126 |
| N-Bu-GBMP-TT | 10 | 64 |
| N-lzoBu-GBMP-TT | ND | 64 |
| N-Pen-GBMP-TT | 24 | 64 |
| N-Hex-GBMP-TT | > 100 | 8 |
| N-Ac-GBMP-TT | > 100 | 8 |
a) pl de antiser (dluat de cinci ori cu PBS) necesar pentru 50% legare
b) diluția la încercare: o diferența de diluție, de exemplu 128 în comparație cu 64. este în cadrul erorii experimentale.
Datele din tabelul 4 arată că NBu-GBMP este tot așa de bun ca inhibitor ca și N-Pr-GBMP pentru legarea terminalului la proprii săi anticorpi omologi. De aceea, utilizarea de N-Bu-GBMP în loc de N-Pr-GBMP nu conduce la vreo pierdere semnificativă a proprietăților arătate de N-Pr.GBMP. Datele din tabelul 5 demonstrează că N-Bu-GBMP leagă tot așa de bine ca și N-Pr-GBMP la anticorpi, introdusă de combinația N-PrGBMP-TT.
Antiserurile introduse de ambele combinații N-Bu-GBMP și N-Pr.GBMP-TT dau titruri bactericide similare. Această constatare indică echivalența lui N-Bu, NIzoBu și N-Pen-GBMP dată de N-PrGBMP în calitatea lor de a asimila epitopul bactericid pe suprafața grupei B de meningococi.
RO 111416 Bl
VERSIUNE CORECTATĂ - CORRECTED VERSION Semnalat în: / Reffered to in: BOPI 2/1998
Claims (7)
- Revendicări1. Polizaharide modificate de Neisseria meningitidis și E.coli, caracterizat prin aceea că 27 ... 100% din 5 grupările N-acetil ale polizaharidelor inițiale sunt înlocuite cu grupări C4 - Οθ acil, alese dintr-un grup constând din n-butanoil, /zo-butanoil, n-pentanoil, n-hexanoil, n-heptanoil sau n-octanoil și în care gru- io pa acil este n-butanoil, /zo-butanoil, npentanoil, n-hexanoil, n-heptanoil sau noctanoil, iar greutatea moleculară este 10000 .... 50000 daltoni.
- 2. Polizaharide modificate, con- 15 form revnedicării 1, caracterizate prin aceea că gruparea acil este de preferință gruparea n-butanoil.
- 3. Combinații antigenice ce conțin polizaharidele din revendicarea 1, carac- 20 terizate prin aceea că acestea sunt combinate cu o proteină corespunzătoare din punct de vedere imunologic, aleasă din grupa toxoidului tetanosului, toxoidului difteriei, un material de reacție 25 contrară (CMR) sau o bacterie suport pentru proteină.
- 4. Combinații antigenice, conform revendicării 3, caracterizate prin aceea că combinarea dintre polizaharide și proteină se face prin legătura covalentă CHa-NH-proteină.
- 5. Combinații antigenice, conform revendicării 3, caracterizate prin aceea că materialul de reacție contrară (CMR) este CMR197.
- 6. Metodă de imunizare a mamiferelor cu combinațiile antigenice din revendicarea 3, caracterizată prin aceea că se administrează parenteral de 3 ori și la interval de câte o săptămână, 1 ...25 pg/kg corp combinație antigenică împreună cu un suport acceptabil din punct de vedere farmaceutic, iar la 12 zile după ultima administrare se recoltează sângele.
- 7. Metodă, conform revendicării 6, caracterizată prin aceea că suportul acceptabil farmaceutic este ales dintre hidroxid de aluminiu, fosfat de aluminiu sau sulfat de aluminiu.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44819589A | 1989-12-14 | 1989-12-14 | |
| PCT/CA1990/000437 WO1991008772A1 (en) | 1989-12-14 | 1990-12-13 | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO111416B1 true RO111416B1 (ro) | 1996-10-31 |
Family
ID=23779371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO92-0789A RO111416B1 (ro) | 1989-12-14 | 1990-12-13 | Polizaharide modificate de neisseria meningitidis si e coli, combinatii antigenice si metoda de imunizare |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5576002A (ro) |
| EP (1) | EP0504202B1 (ro) |
| JP (1) | JP2637845B2 (ro) |
| KR (1) | KR0158436B1 (ro) |
| CN (4) | CN1049223C (ro) |
| AR (1) | AR243934A1 (ro) |
| AT (1) | ATE121947T1 (ro) |
| AU (1) | AU641715B2 (ro) |
| BR (1) | BR9007917A (ro) |
| CA (1) | CA2071811C (ro) |
| CZ (1) | CZ283530B6 (ro) |
| DE (1) | DE69019164T2 (ro) |
| DK (1) | DK0504202T3 (ro) |
| ES (1) | ES2071288T3 (ro) |
| FI (2) | FI104539B (ro) |
| HR (1) | HRP920872A2 (ro) |
| HU (2) | HU218146B (ro) |
| IE (1) | IE68414B1 (ro) |
| IL (1) | IL96676A (ro) |
| IN (1) | IN171747B (ro) |
| NO (2) | NO305275B1 (ro) |
| NZ (1) | NZ236471A (ro) |
| PH (1) | PH30305A (ro) |
| PL (2) | PL166659B1 (ro) |
| RO (1) | RO111416B1 (ro) |
| RU (1) | RU2105568C1 (ro) |
| SI (1) | SI20008B (ro) |
| WO (1) | WO1991008772A1 (ro) |
| YU (1) | YU24391A (ro) |
| ZA (1) | ZA9010065B (ro) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648241A (en) * | 1989-09-15 | 1997-07-15 | The General Hospital Corporation | Conjugate vaccine against group B streptococcus |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
| PT667787E (pt) * | 1992-09-24 | 2001-10-31 | Brigham & Womens Hospital | Vacinas de conjugado de polissacarido-proteina de estreptococos do grupo b do tipo ii e tipo v |
| US6153406A (en) * | 1993-07-23 | 2000-11-28 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane protein P2 from Haemophilus influenzae type B |
| US5439808A (en) * | 1993-07-23 | 1995-08-08 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| US5700787A (en) * | 1994-09-02 | 1997-12-23 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5679654A (en) * | 1994-09-02 | 1997-10-21 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5747287A (en) * | 1995-04-28 | 1998-05-05 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| US5811102A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-22 | National Research Council Of Canada | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines |
| US6284884B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-09-04 | North American Vaccine, Inc. | Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof |
| JP4233113B2 (ja) * | 1995-06-07 | 2009-03-04 | グラクソスミスクライン・バイオロジカルス・ソシエテ・アノニム | 多糖類抗原−キャリア蛋白接合体および遊離キャリア蛋白を有してなるワクチン |
| ZA97248B (en) * | 1996-01-18 | 1997-07-18 | Rohm & Haas | Method for identifying and quantifying polymers utilizing immunoassay techniques |
| JP4150082B2 (ja) * | 1996-08-27 | 2008-09-17 | カイロン コーポレイション | 独特の髄膜炎菌性ｂエピトープを規定するモノクローナル抗体およびワクチン組成物の調製におけるそれらの使用 |
| DE69708318T3 (de) † | 1996-08-27 | 2006-11-16 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc., Emeryville | Neisseria meningitidis serogruppe b glykokonjugate und verfahren zu deren verwendung |
| US6426074B1 (en) | 1997-03-19 | 2002-07-30 | The Brigham And Women's Hospital Inc. | Group B Streptococcus vaccine |
| JP2002506448A (ja) | 1997-06-24 | 2002-02-26 | カイロン コーポレイション | 抗髄膜炎菌ワクチン組成物を使用して成体を免疫する方法 |
| CA2301942C (en) | 1997-08-27 | 2011-05-31 | Chiron Corporation | Molecular mimetics of meningococcal b epitopes |
| KR100757630B1 (ko) | 1997-12-23 | 2007-09-10 | 박스터 헬쓰케어 에스.에이. | 신규한 추출 및 단리 방법으로 수득되는 세균성 캡슐형 다당류 |
| JP2004505885A (ja) * | 1998-08-19 | 2004-02-26 | ノース アメリカン ワクチン， インコーポレイテッド | Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドを用いて産生されたワクチンとして有用な免疫原性β−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体 |
| US6436653B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-08-20 | Exiqon A/S | Method for introduction of reporter groups into bacterial lipopolysaccharide-derived carbohydrates and the subsequent coupling of such derivatives onto solid surfaces |
| US7083777B1 (en) * | 1999-04-02 | 2006-08-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Immunomodulating polymers |
| US6518037B2 (en) * | 1999-11-12 | 2003-02-11 | University Of Iowa Research Foundation | Two-component system that controls bacterial membrane synthesis |
| GB9928196D0 (en) * | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
| SV2003000753A (es) | 2000-12-05 | 2003-06-16 | Brigham & Womens Hospital | Uso de polisacaridos zwitterionicos para la especifica modulacion del progreso inmunologico |
| AU2002252638A1 (en) | 2001-04-17 | 2002-10-28 | Children's Hospital Oakland Research Institute | Molecular mimetics of meningococcal b epitopes which elicit functionally active antibodies |
| GB0115176D0 (en) * | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| GB0121591D0 (en) * | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| DK1777236T3 (en) * | 2002-03-26 | 2017-02-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | MODIFIED SUCCARIDES WHICH IMPROVED WATER STABILITY FOR USE AS A MEDICINE |
| JP2006522135A (ja) * | 2003-03-31 | 2006-09-28 | ザ ブライアム アンド ウィミンズ ホスピタル インコーポレーテッド | 喘息およびアレルギーの処置のための両性イオン免疫調節剤 |
| US7731967B2 (en) | 2003-04-30 | 2010-06-08 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Compositions for inducing immune responses |
| WO2005016974A1 (en) | 2003-08-12 | 2005-02-24 | Lipoxen Technologies Limited | Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation |
| CA2568982A1 (en) | 2004-06-23 | 2006-01-05 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Polysaccharide derivatives and uses in induction of an immune response |
| US8148335B2 (en) | 2004-06-23 | 2012-04-03 | Children's Hospital & Research Center Oakland | De-N-acetyl sialic acid antigens, antibodies thereto, and methods of use in cancer therapy |
| GB0428394D0 (en) * | 2004-12-24 | 2005-02-02 | Chiron Srl | Saccharide conjugate vaccines |
| US9931397B2 (en) | 2005-06-27 | 2018-04-03 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| WO2007092451A2 (en) | 2006-02-06 | 2007-08-16 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Zwitterionic polysaccharides for promotion of immune system maturation and health |
| GB0611914D0 (en) | 2006-06-15 | 2006-07-26 | Teti Giuseppe | Peptides that mimic non-human cross-reactive protective epitopes of the group Bmeningococcal capsulsar polysaccharide |
| EP1872791A1 (en) | 2006-06-30 | 2008-01-02 | Institut Pasteur | Use of bacterial polysaccharides for biofilm inhibition |
| EP2170391B1 (en) * | 2007-06-20 | 2017-01-18 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | Modified polysaccharides for conjugate vaccines |
| EP2244695A1 (en) | 2007-12-07 | 2010-11-03 | Novartis AG | Compositions for inducing immune responses |
| EP2387417B1 (en) | 2009-01-16 | 2016-05-11 | University of Maryland, Baltimore | Broad spectrum vaccine against non-typhoidal salmonella |
| WO2013009945A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-01-17 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Lipid-containing psa compositions, methods of isolation and methods of use thereof |
| EP2752403A1 (de) * | 2013-01-08 | 2014-07-09 | Sika Technology AG | Amin für emissionsarme Epoxidharz-Produkte |
| CA2997211A1 (en) | 2015-08-19 | 2017-02-23 | President And Fellows Of Harvard College | Lipidated psa compositions and methods |
| WO2018014012A1 (en) | 2016-07-15 | 2018-01-18 | President And Fellows Of Harvard College | Glycolipid compositions and methods of use |
| AU2018215585B2 (en) * | 2017-01-31 | 2022-03-17 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4057685A (en) * | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
| US4356170A (en) * | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
| US4673574A (en) * | 1981-08-31 | 1987-06-16 | Anderson Porter W | Immunogenic conjugates |
| US4619828A (en) * | 1982-07-06 | 1986-10-28 | Connaught Laboratories, Inc. | Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines |
| US4496538A (en) * | 1982-07-06 | 1985-01-29 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine |
| US4644059A (en) * | 1982-07-06 | 1987-02-17 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae B polysaccharide-diptheria toxoid conjugate vaccine |
| US4695624A (en) * | 1984-05-10 | 1987-09-22 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency |
| US4727136A (en) * | 1985-10-01 | 1988-02-23 | Canadian Patents And Development Ltd. | Modified meningococcal group B polysaccharide for conjugate vaccine |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
-
1990
- 1990-12-13 AU AU68987/91A patent/AU641715B2/en not_active Ceased
- 1990-12-13 KR KR1019920701403A patent/KR0158436B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 RO RO92-0789A patent/RO111416B1/ro unknown
- 1990-12-13 ES ES91900142T patent/ES2071288T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 RU SU5052391A patent/RU2105568C1/ru active
- 1990-12-13 DK DK91900142.0T patent/DK0504202T3/da active
- 1990-12-13 JP JP3500908A patent/JP2637845B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 DE DE69019164T patent/DE69019164T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 EP EP91900142A patent/EP0504202B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU218146B/hu unknown
- 1990-12-13 CA CA002071811A patent/CA2071811C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 BR BR909007917A patent/BR9007917A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-12-13 AT AT91900142T patent/ATE121947T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 WO PCT/CA1990/000437 patent/WO1991008772A1/en active IP Right Grant
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU9201966D0/hu unknown
- 1990-12-14 SI SI9110243A patent/SI20008B/sl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 CZ CS906284A patent/CZ283530B6/cs unknown
- 1990-12-14 CN CN90110444A patent/CN1049223C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-14 NZ NZ236471A patent/NZ236471A/en unknown
- 1990-12-14 YU YU24391A patent/YU24391A/sh unknown
- 1990-12-14 IN IN1033/CAL/90A patent/IN171747B/en unknown
- 1990-12-14 PH PH41724A patent/PH30305A/en unknown
- 1990-12-14 IE IE451390A patent/IE68414B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 AR AR90318627A patent/AR243934A1/es active
- 1990-12-14 ZA ZA9010065A patent/ZA9010065B/xx unknown
- 1990-12-14 PL PL90302476A patent/PL166659B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 IL IL9667690A patent/IL96676A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 PL PL90288271A patent/PL166035B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-06-12 NO NO922316A patent/NO305275B1/no unknown
- 1992-06-12 FI FI922737A patent/FI104539B/fi active
- 1992-10-02 HR HRP-243/91A patent/HRP920872A2/hr not_active Application Discontinuation
-
1993
- 1993-11-22 CN CN93119467A patent/CN1036504C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93114763A patent/CN1036522C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93114764A patent/CN1072506C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-05-05 US US08/238,600 patent/US5576002A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-07 US US08/485,623 patent/US5683699A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-07-17 NO NO973311A patent/NO307835B1/no unknown
- 1997-10-17 US US08/953,771 patent/US5902586A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-09-09 FI FI991917A patent/FI19991917A/fi unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO111416B1 (ro) | Polizaharide modificate de neisseria meningitidis si e coli, combinatii antigenice si metoda de imunizare | |
| ES2621359T3 (es) | Polisacáridos modificados para vacunas conjugadas | |
| EP1109576B1 (en) | Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide | |
| FI79024C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av haemophilus influenzae b-polysackaridexotoxoidkonjugatvaccin. | |
| US5969130A (en) | Meningococcal polysaccharide conjugate vaccines | |
| EP0088303B1 (fr) | Procédé de préparation de complexes polysaccharide-protéine de capsules bactériennes, produits obtenus et compositions immunogènes les contenant | |
| Dale et al. | Type-specific immunogenicity of a chemically synthesized peptide fragment of type 5 streptococcal M protein. | |
| JPH06500772A (ja) | 改良されたワクチン組成物 | |
| EP0120532B1 (en) | Mucoid exopolysaccharide vaccine against pseudomonas aeruginosa | |
| JP2008509886A (ja) | 多糖誘導体および免疫応答の誘導における用途 | |
| EP0334467B1 (en) | Cell-associated glucosyltransferase, an antibody thereto, and a dental caries prophylactic composition containing said antibody | |
| US8337863B2 (en) | Anti-sepsis conjugate vaccine | |
| Moreno et al. | Thymic-dependence and immune memory in mice vaccinated with meningococcal polysaccharide group B complexed to outer membrane protein. |