CZ283530B6 - Modifikované polysacharidy, antigenní konjugát obsahující modifikovaný polysachararid a způsob jeho přípravy a gamaglobulinová frakce - Google Patents
Modifikované polysacharidy, antigenní konjugát obsahující modifikovaný polysachararid a způsob jeho přípravy a gamaglobulinová frakce Download PDFInfo
- Publication number
- CZ283530B6 CZ283530B6 CS906284A CS628490A CZ283530B6 CZ 283530 B6 CZ283530 B6 CZ 283530B6 CS 906284 A CS906284 A CS 906284A CS 628490 A CS628490 A CS 628490A CZ 283530 B6 CZ283530 B6 CZ 283530B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- polysaccharide
- group
- groups
- gbmp
- modified
- Prior art date
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 70
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 66
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims abstract 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 title 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 19
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 claims abstract description 8
- 241000588677 Neisseria meningitidis serogroup B Species 0.000 claims abstract description 8
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 8
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 claims abstract description 5
- -1 isobutanoyl Chemical group 0.000 claims description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 16
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 16
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 16
- 241000617590 Escherichia coli K1 Species 0.000 claims description 11
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 11
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 11
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 125000003774 valeryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 11
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 9
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 claims description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 5
- 125000000268 heptanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 claims description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims description 4
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 4
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 claims description 2
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 5
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006181 N-acylation Effects 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 3
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N butanoyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OC(=O)CCC YHASWHZGWUONAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N hexanoyl hexanoate Chemical compound CCCCCC(=O)OC(=O)CCCCC PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- LSACYLWPPQLVSM-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid anhydride Chemical compound CC(C)C(=O)OC(=O)C(C)C LSACYLWPPQLVSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- DUCKXCGALKOSJF-UHFFFAOYSA-N pentanoyl pentanoate Chemical compound CCCCC(=O)OC(=O)CCCC DUCKXCGALKOSJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N propionic anhydride Chemical compound CCC(=O)OC(=O)CC WYVAMUWZEOHJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021023 Gamma-glutamyl hydrolase Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 206010027249 Meningitis meningococcal Diseases 0.000 description 1
- 206010058780 Meningitis neonatal Diseases 0.000 description 1
- 201000010924 Meningococcal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000872931 Myoporum sandwicense Species 0.000 description 1
- OHLUUHNLEMFGTQ-UHFFFAOYSA-N N-methylacetamide Chemical group CNC(C)=O OHLUUHNLEMFGTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- MGWWWSRHCOVLIU-UHFFFAOYSA-N benzene-1,3-diol;hydrochloride Chemical compound Cl.OC1=CC=CC(O)=C1 MGWWWSRHCOVLIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- HZXXSCOUSGLRRX-UHFFFAOYSA-N cyanoboronic acid Chemical compound OB(O)C#N HZXXSCOUSGLRRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- BUACSMWVFUNQET-UHFFFAOYSA-H dialuminum;trisulfate;hydrate Chemical compound O.[Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O BUACSMWVFUNQET-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000010200 folin Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108010062699 gamma-Glutamyl Hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 230000005182 global health Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000005567 liquid scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical group 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1228—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K16/1232—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia from Escherichia (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0258—Escherichia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1217—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Modifikovaný polysacharid skupiny B Neisseria meningitidis nebo modifikovaný kapsulární polysacharid Esterichia coli K1, který má N-acetylové skupiny kyseliny sialové přírodního polysacharidu nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku a jeho průměrná molekulová hmotnost je v rozmezí 10 000 až 50 000. Antigenní konjugát, který obsahuje modifikovaný polysacharid skupiny B Neisseria meningitidis, který má N-acetylové skupiny zbytku kyseliny sialové nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku, která je konjugována s imunologicky vhodným proteinem. Způsob přípravy tohoto antigenního konjugátu, zahrnující a) N-deacetylaci polysacharidu skupiny B Neisseria meningitidis nebo Esterichia coli K1; b) N-acylaci N-deacetylovaného polysacharidu ze stupně (a) za vzniku N-acylovaného polysacharidu; c) konjugaci N-acylovaného polysacharidu s imunologicky vhodným proteinovým nosičem za vzniku konjugátu. Dále je definována vakcína, která obsahuje antigenní konjugát a farmacŕ
Description
Tento vynález se týká chemicky modifikovaných polysacharidů Neisseria meningitidis skupiny B a modifikovaných kapsulámích polysacharidů Escherichia coli Kl. Rovněž se týká antigenního konjugátu a způsobu jeho přípravy, vakcíny obsahujícího antigenní konjugát a gamaglobulinové frakce k pasivní ochraně proti meningitidě.
Dosavadní stav techniky
Meningitida způsobovaná N. meningitidis skupiny B a E. coli_Kl zůstává velkým celosvětovým zdravotním problémem. Meningitida skupiny B se vyskytuje tak v endemických tak epidemických situacích. Způsobuje přibližně polovinu ze všech zaznamenaných případů meningokokových meningitid. Naproti tomu Kl-positivní E. coli jsou hlavní příčinou meningitidy novorozeňat. Běžně neexistuje žádná vakcína, která by byla komerčně dostupná, proti onemocnění způsobovanému meningokoky skupiny B a E. coli Kl. Je to z velké části proto, že meningokokový polysacharid skupiny B (GBMP) je u lidí pouze slabě imunogenní. Nedávno byly popsány některé případné vakcíny, které jsou založeny na komplexech GBMP s proteiny vnějších membrán, ale doposud neexistuje jasný důkaz, že jsou účinné u člověka.
V nedávné době byl vyvinut nový koncept vakcíny, která spočívá na konjugátu syntheticky modifikovaného (N-propionylovaného) polysacharidů skupiny B s proteinem (N-Pr-GBMPprotein). Tato vakcína vyvolává u myší vysoké titry IgG protilátek, které jsou nejen ochranné, ale také zkříženě reaktivní s nemodifikovaným GBMP (tj. N-acetyl-GBMP). Tento koncept je popsán a nárokován v US patentu č. 4727136, z 23. února 1988 (Harold J. Jennings a spol.).
Bylo naznačeno, že vakcína, která vyvolává zkříženě reaktivní protilátky, jako je popsáno například v US patentu č. 4727136, by mohla být úspěšná pouze tehdy, kdyby došlo ke zničení imunitní tolerance. Tato myšlenka se ukázala oprávněnou identifikací obvyklého epitopu sestávajícího z řetězce zbytků kyseliny sialové (minimálně 10 zbytků) a-(2-8)- navázaných jak v přírodním N-Ac-GBMP tak lidské i zvířecí tkáni (Jennings: Contrib. Microbiol. Immunol. 10, 151 až 165, Basilej 1989, Karger). Tyto polysialové řetězce fungují jako vývojové antigeny. Většina souvisí s plodovým stavem při adhesi embryonálních neutrálních buněk (Fiume a spol. : Biochem. Biophys. Res. Commun. 112, 482 (1983).). Tento antigen se po narození ztrácí (Friedlander a spol. : J. Cell Biol. 101. 412 (1985), kjeho expresi však dochází u dospělých lidí v průběhu regenerace onemocnělých svalů (Cashman a spol. : Ann. Neuron. 21, 481, (1987), v nádorových buňkách (Roth a spol. : Proč. Nati. Acad. Sci. USA 85, 299 (1988), v buňkách přirozených zabíječů (NK) a v buňkách CD3+T (Husmann a spol. : Eur. J. Immunol., 19, 1761 (1989). I když ještě nebyly zjištěny důsledky zničení tolerance vůči těmto plodovým antigenům, obvykle se připouští, že vzhledem ke zkřížené, reakci by konjugát N-Pr-GBMP-protein byl přísně prozkoumán licenčními agenturami. To by vedlo ke značným výdajům a zpožděním vzhledem ke složitým pokusům, které jsou nutné pro prokázání bezpečnosti vakcíny před jejich schválením ke komerčním účelům.
Předmětem tohoto vy nálezu je vyvinout vakcínu, která by měla zvýšené imunogenní vlastnosti ve srovnání s imunogenními vlastnostmi komplexu N-Pr-GBMP-protein. Předmětem tohoto vynálezu je také získáni vakcíny, která vykazuje podstatně sníženou zkříženou reaktivitu s GBMP.
Podstata vynálezu
Předmětem tohoto vynálezu je modifikovaný polysacharid skupiny B Neisseria meningitidis, který má N-acetylové skupiny kyseliny sialové přírodního polysacharidu nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku a jeho průměrná molekulová hmotnost je v rozmezí 10 000 až 50 000.
Jiným předmětem tohoto vynálezu je modifikovaný kapsulámí polysacharid Escherichia coli Kl, který má N-acetylové skupiny zbytku kyseliny sialové přírodního polysacharidu nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku ajeho průměrná molekulová hmotnost je v rozmezí 10 000 až 50 000.
Acylová skupina se čtyřmi až osmi atomy uhlíku je s výhodou vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové, hexanoylové, heptanoylové a oktanoylové skupiny, zejména je vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové a hexanoylové skupiny. Nejvýhodněji je když acylovou skupinou je n-butanoylová skupina.
Rovněž je výhodné, když 27 až 100% N-acetylových skupin zbytku kyseliny sialové je nahrazeno C4 až Cg-acylovými skupinami.
Dalším výhodným provedením je když 90 až 100% N-acetylových skupin zbytku kyseliny sialové je nahrazeno C4 až Cg-acylovými skupinami.
Jiným předmětem vynálezu je antigenní konjugát, který obsahuje modifikovaný polysacharid skupiny B Neisseria meningitidis, který má N-acetylové skupiny zbytku kyseliny sialové nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku, která je konjugována s imunologicky vhodným proteinem.
Acylová skupina je přitom s výhodou vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové, hexanoylové, heptanoylové a oktanoylové skupiny.
Protein je s výhodou vybrán ze skupiny sestávající ztoxoidu tetanu, toxoidu difterie, zkříženě reaktivního materiálu (CRM) a nosiče bakteriálního proteinu. CRM přitom znamená CRM^.
Rovněž je výhodné když protein je kovalentně navázán na polysacharid -CH2-NH-proteinovou vazbou.
Dalším předmětem vynálezu je způsob přípravy antigenního konjugátu obsahujícího modifikovaný polysacharid skupiny B Neisseria meningitidis nebo Escherichia coli Kl konjugovaný s imunologicky vhodným proteinem, kde N-acetylové skupiny zbytků kyseliny sialové polysacharidu jsou nahrazeny N-C4 až C8acylovými skupinami, kterého podstata spočívá v tom, že zahrnuje
a) N-deacetylaci polysacharidu skupiny B Neisseria meningitidis nebo Escherichia coli Kl;
b) N-acylaci N-deacetylovaného polysacharidu ze stupně (a) za vzniku N-acylovaného polysacharidu;
c) konjugaci N-acylovaného polysacharidu s imunologicky vhodným proteinovým nosičem za vzniku konjugátu.
,Acylová skupina je s výhodou vybrána ze skupiny zahrnující n-butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové, hexanoylové a oktanoylové skupiny, přičemž nejvýhodněji je když acylovou skupinou je butanoylová skupina.
-2CZ 283530 B6
Dalším předmětem vynálezu je vakcína, která obsahuje antigenní konjugát a farmaceuticky přijatelný injektovatelný nosič. Vakcína dále s výhodou obsahuje fýsiologicky přijatelný adjuvant.
Uvedený adjuvant je s výhodou vybrán ze skupiny sestávající z hydroxidu hlinitého, fosforečnanu hlinitého a síranu hlinitého.
Konečně posledním vynálezem je gamaglobulinová frakce, která je schopna pasivně chránit proti meningitidě způsobené Neisseria meningitidis skupiny B a Escherichia coli Kl, přičemž tato gamaglobulinová frakce je připravitelná imunizací savce vakcinou a následnou isolací gamaglobulinu z uvedeného savce.
Tato frakce se pak jednotlivci podává tak, že zajišťuje ochranu proti infekci způsobené shora uvedenými organismy, nebo že léčí nastupující infekci způsobenou shora uvedenými organismy. Bude výhodné, jestliže konjugáty imunogenní vakcíny podle tohoto vynálezu jsou zdrojem therapeutického antiséra ve světle jejich příznivé imunogenicity s minimální indukcí protilátek zkříženě reagujících sGBMP. Konjugáty podle vynálezu budou užitečné také pro získáváni monoklonálních protilátek a možná antidiotypových protilátek.
V našich nedávných pokusech jsme zjistili, že většina baktericidních a ochranných protilátek indukovaných konjugátem N-Pr-GBMP-protein shora popsaných (Jennings a spol.: USA patent č. 4 727 136) souvisí s protilátkami zkříženě reaktivními s GBMP. Ve skutečnosti většina ochranné aktivity je obsažena v populaci N-Pr-GBMP-specifických protilátek, která nereaguje zkříženě s GBMP. Předpokládá se tedy, že N-Pr-GBMP napodobuje jedinečný baktericidní epitop na povrchu meningokoků skupiny B.
Tento vynález je založen na objevu, že je možné synthetizovat chemicky modifikované GBMP, které napodobují baktericidní epitop a které ve své konjugované formě nejen vykazují zesílenou imunogenicitu, ale také se vyhýbají podstatné indukci protilátek, které zkříženě reagují s GBMP.
Podle tohoto vynálezu byly synthetizovány četné různě chemicky modifikované GBMP, jednotlivě zkonjugovány s proteinem, konjugáty byly injekčně podány myším a účinky byly srovnány s účinkem konjugátu proteinu s N-Pr-GBMP. Překvapivě bylo nalezeno, že konjugáty N-acyl(se čtyřmi až osmi atomy uhlíku)-GBMP s proteinem, např. butanoyl-, isobutanoyl-, pentanoyl-, isopentanoyl-, neopentanoyl-, hexanoyl-, heptanoyl- a oktanoyl-, zvláště pak Nbutanoyl (N-Bu)-GBMP s proteinem podstatně napodobují bakteriální epitop s podstatně sníženou indukcí zkříženě reaktivních protilátek.
Meningokokový polysacharid (skupiny B) se isoluje zN. meningitidis způsoby známými odborníkům. Podle jednoho z těchto způsobů se meningokoky skupiny B (kmen 9818) nechají růst při 37 °C ve fermentoru s 30 g dehydratovaného živného media Todd Hewitt (Difco Laboratories. Detroit. Michigan) v jednom litru destilované vody. Před růstem ve fermentoru se lyofilizovaný kmen nechal růst ve vysoké nádobce při 37 °C na deskách (objemové díly k objemovým dílům) s 5 % ovčím krevním agarem (Difco Laboratories. Detroit. Michigan). Bakterie se pak přenesou na 1,0 litru živného media Todd Hewit (jak shora uvedeno) v Erlenmayerově baňce, která se nechá třepat při 37 °C sedm hodin při 190 otáčkách za minutu. Toto inokulum se přenese do fermentoru. Po 16 hodinách růstu ve fermentoru se bakterie zabijí přidáním formalinu na konečnou koncentraci asi 0,75 %. Bakterie se pak odstraní kontinuálním odstřeďováním. Ze supematantu se isoluje meningokokový polysacharid skupiny B. Vyčistí se způsobem v podstatě podle Bundleho a spol. (J. Biol. Chem. 249, 4797 až 4801 (1974).) až na to, že se protein extrahuje mícháním roztoku surového polysacharidu s ochlazeným (na 4 °C) 90 % fenolem místo s horkým fenolem (50 až 60 °C). Tento postup zajišťuje, že se produkuje vysokomolekulámí forma GBMP.
-3 CZ 283530 B6
E. coli (018:Kl:H7) (NRCC 4283) se nechá růst při 37 °C ve fermentoru v destilované vodě, která obsahuje dehydratovanou infusi BHI (Brain-Heart Infusion; 37 g/litr. Difco Laboratories. Detroit. Michigan). Před růstem ve fermentoru se lyofilizovaný kmen nechal růst v 50 ml BHI roztoku (stejný jako výše) v Erlenmeyerově baňce, která se třepe při 37 °C sedm hodin při 200 otáčkách za minutu. Potom se vyrostlé buňky přenesou do 1,5 litru BHI (jako shora) a nechají se růst za stejných podmínek jak shora uvedeno sedm hodin. Inokulum se pak přenese do fermentoru.
Postupy, které se používají pro isolaci a čištění kapsulámího polysacharidu z E. coli Kl. byly identické s postupy shora popsanými při isolaci meningokokového polysacharidu skupiny B.
Shora popsané postupy isolace a čištění nejsou jedinými použitelnými postupy. Lze použít také jiné publikované postupy, například postupy popsané Watsonem a spol.: J. Immunol. 81, 331 (1958) a postupy ve shora uvedeném USA patentu č. 4 727 136.
Přírodní polysacharid se deacetyluje na atomu dusíku. V té části molekuly, která obsahuje zbytek kyseliny sialové, se tím získá reaktivní aminová skupina. Deacetylace na atomu dusíku se může provádět jakýmkoliv známým způsobem, například v bázickém vodném prostředí za zvýšených teplot, například asi 90 °C až 110°C, při pH asi 13 až 14. Vhodným bázickým vodným prostředím je vodný roztok hydroxidu alkalického kovu, například hydroxidu sodného při asi 2M koncentraci. Lze použít také vodný roztok hydrazinu. Stupeň deacetylace na atomu dusíku (Ndeacetylace) se může pohybovat od asi 30% do 100%, podle podmínek. Je výhodné, když dosáhne asi 90 až 100%. N-Deacetylovaný produkt se může isolovat Například ochlazením, neutralizací, vyčištěním a, jestliže je to žádoucí, lyofilizací.
Před N-decetylací má přírodní polysacharid průměrnou molekulovou hmotnost v oblasti asi 500 000 až 800 000. N-Deacetylací se získávají fragmenty polysacharidu s průměrnou molekulovou hmotností asi od 10 000 až 50 000.
Fragmenty polysacharadu, které jsou deacetylovány na atom dusíku, se pak znovu acylují na atomu dusíku. Získá se tak odpovídající N-acylovaný produkt. N-Acylace se provádí tak, že se N-deacetylovaný polysacharid rozpustí ve vodném prostředí o pH asi 7,5 až 9,0, potom se přidá příslušný acylanhydrid, rozpustnost se popřípadě zvýší přidáním alkoholu a směs se ochladí pod 10°C dokud není reakce ukončena. Reakční medium se pak vyčistí, jestliže je to žádoucí, například dialysou, a N-acylovaný produkt se isoluje, typicky lyofilizací Reakce je v podstatě ukončena během asi 10 až 20 hodin. Podle analytických měření, typicky měřením *HNMR spekter, probíhá N-acylace alespoň z 90%, pravděpodobně blízko 100%. N-Acylační reakce nevede k nějakým podstatným změnám molekulových hmot fragmentů.
Pro konjugaci je výhodné podle tohoto vynálezu vybrat N-acylovaný materiál s průměrnou molekulovou hmotou odpovídající asi 30 až 200 zbytků kyseliny sialové. Toho lze obvykle dosáhnout gelovou filtrací N-acylovaného GBMP na koloně s Ultragelem (obchodní značka) AcA 44 (velikost perliček 60 až 140 mikrometrů), eluce PBS. Lze použít také membránu, která dělí podle vhodných velikostí.
Podle tohoto vynálezu se po užívá N-acylovaný materiál s průměrnou molekulovou hmotou 10 000 až 40 000, například 10000 až 15 000. Tento materiál se získá spojením frakcí eluátu z kolony obsahující N-acylovaný GBMP materiál v rozmezí této průměrné molekulové hmoty. Ukázalo se, že N-acylovaný materiál o vyšší průměrné molekulové hmotě, například v oblasti 30 000 až 40 000, je rovněž použitelný podle tohoto vynálezu.
Vakcíny podle tohoto vynálezu se připravují tak, že se N-acylovaný polysacharid zkonjuguje s imunologicky vhodným nosným proteinem. Nosný protein sám je s výhodou imunogen. Mezi příklady vhodných nosných proteinů patří toxoid tetanu, toxoid difterie (záškrtu), zkříženě -4 CZ 283530 B6 reaktivní materiály (CRMs) , s výhodou CRM197, získaný od Sclavo Ltd., Siena. Itálie, a nosiče bakteriálních proteinů, například meningokokové proteiny vnější membrány.
Pro konjugaci modifikovaných polysacharidových fragmentů s nosným proteinem lze použít jakýkoliv způsob kcnjugace. Výhodný způsob je způsob popsaný v USA patentu č. 4 356 170, tj. zavedení koncových aldehydových skupin (oxidací cis-vicinálních hydroxylových skupin) do Nacylovaného polysacharidu a zkondenzováním aldehydových skupin s proteinovými aminovými skupinami reduktivní aminací. Polysacharid je pak navázán s proteinem prostřednictvím vazby -CHj-NH -protein.
Tomu je třeba rozumět tak, že konjugované vakcíny podle tohoto vynálezu nejsou omezeny na vakcíny, které jsou produkovány reduktivní aminací. Vakcíny tedy mohou být produkovány konjugaci N-acylovaného polysacharidu s nosným proteinem pomocí dihydrazitu kyseliny adipové jako spaceru, jak popsal Schheerson R. a spol.: Preparation. Characterization and Imunogenicity of Hsemophilus infuenza type b Polysacharide-Protein Conjugates vJ. Exp. Med. 1952, 381 až 476 (1980) a Laňce K.. Gordon v USA patentu č. 4 644 059. Může se používat také technologie binárního spaceru vyvinutá Merckem jak popisuje Marburg S. a spol.: Biomolecular Chemistry of Macromolecules: Synthesis of Bacterial Polysaccharide Conjugates with Neisseria meningitidis Membrane Protein v J. Amer. Chem. Soc. 108, 5282 až 5287 (1986) nebo metoda redukce konců, jak uvádí Anderson v USA patentu 4 673 574.
Výsledné konjugáty N-acylovaný polysacharid-protein nemají významné zkřížené vazby a jsou rozpustné ve vodných roztocích. Z tohoto důvodu jsou konjugáty podle vynálezu dobiými kandidáty pro použití jako vakcíny.
Výsledné konjugáty N-acylovaný polysacharid-protein podle tohoto vynálezu byly testovány in vitro testy na myších. Bylo ukázáno, že obvykle mají lepší imunogenní vlastnosti než Npropionyl-polysacharid. Navíc bylo pozorováno podstatné snížení tvorby zkříženě-reaktivních protilátek. Na základě toho, co zde bylo uvedeno, se předpokládá, že vakcíny podle tohoto vynálezu budou užitečné proti meningitidě způsobené organismem N. meningitidis skupiny B nebo E. coli K.1. Zvláště zajímavé jsou vakcíny pro ochranu dětí, které jsou vnímavé na bakteriální meningitidu.
Vakcíny podle vynálezu jsou typicky tvořeny dispergováním konjugátu v jakémkoliv vhodném farmaceuticky přijatelném nosiči, jako jsou například fysiologický solný roztok nebo jiné injektovatelné kapaliny. Vakcína se podává parenterálně, například subkutánně, intraperitoneálně nebo intramuskulámě. Ve vakcínách mohou být přítomna také obvyklá aditiva (pomocná činidla), například stabilizátory, jako je například laktosa nebo sorbitol, a adjuvanty, jako je například fosforečnan hlinitý, hydroxid hlinitý nebo síran hlinitý.
Vhodnou dávkou vakcíny pro děti je obvykle rozmezí od asi 5 do 25 pg nebo asi 1 až 10 pg na kg tělesné hmotnosti.
Příklady provedení vynálezu
Tento vynález je ilustrován následujícími neomezujícími příklady. Pro hodnocení byly připraveny konjugáty N-acetyl-, Ν-propionyl-, N-butanoyl-, Ν-isobutanoyl-, N-pentanoyl- a N-hexanoyl-GBMP s proteinem. Výsledky jsou diskutovány v příkladech.
Pro přípravu konjugátů byly použity následující materiály: anhydrid kyseliny propionové, anhydrid kyseliny butanové, anhydrid kyseliny isobutanové, anhydrid kyseliny pentanové a anhydrid kyseliny hexanové spolu s kyselinou kolominovou byly získány od firmy Sigma
-5CZ 283530 B6
Chemical Co., St. Louis. Mo. Jelikož kyselina kolominová je strukturně identická s meningokokovým polysacharidem skupiny B (GBMP), je na ni nadále odkazováno jako na GBMP. Toxoid tetanu (TT) byl získán z Institute Armand Frappier. Laval. Quebek; jeho monomemí forma, která je používána ve všech konjugacích, byla získána projitím shora uvedeného přípravku kolonou. Bio-Gel (obchodní značka) A 0,5 (0,074 až 0,038 mm) (1,6 x 90 cm) (Bio-Rad. Richmond. Ka.), ekvilibrováním aeluováním 0,01M fysiologickým solným roztokem (PBS) pufrovaným fosforečnanem (pH 7,4).
Příklad 1
N-Deacetylace GBMP
GBMP (sodná sůl, 1,0 g) se rozpustí v 5 ml 2M hydroxidu sodného. Přidá se tetrahydridoboritan sodný (150 mg). Roztok se zahřívá 6 hodin na 110 °C v teflonové nádobce (60 ml) se šroubovým uzávěrem. Tento postup je v podstatě popsán Haroldem J. Jenningsem a spol, v J. Immunol. 134, 2651 (1985) a v USA patentu 4 727 136. Ochlazený zředěný roztok se pak vyčerpávajícím způsobem dialyzuje proti destilované vodě při 4 °C a lyofilizuje se. Skutečnost, že byl získán Ndeacetylovaný GBMP, se zjistí na základě nepřítomnosti methylacetamidového signálu (singlet při 2,07 ppm) v ’H NMR spektru N-deacetylovaného GBMP.
Příklad 2
M-Acetylace GBMP
N-Deacetylovaný GBMP (1,09 g) se rozpustí v 50 ml 5 % vodného hydrogenuhličitanu sodného. K jednotlivým pěti podílům (10 ml shora uvedeného roztoku) se přidá buď anhydrid kyseliny propionové, butanové, isobutanové, pentanové nebo hexanové. Tato reakční činidla se přidají třikrát po 0,5 ml podílech během tří hodin za teploty místnosti, při čemž se pH roztoku udržuje na hodnotě 8,0 přidáváním 0,5 N hydroxidu sodného. S přidáním anhydridu se rovněž současně přidává methanol (0,5 ml), aby se zvýšila rozpustnost. Nakonec se roztoky míchají 16 hodin pri 4 °C, vyčerpávajícím způsobem se dialyzují proti destilované vodě při teplotě 4 °C a lyolizují se. Ve všech případech byly jednotlivé N-propionylovaný. N-butanoylovaný. N-isobutanoylovaný. N-pentanoylovaný a N-hexanoylovaný GBMP získány ve výtěžcích převyšujících 90%. Ve všech případech byla v podstatě úplná N-acetylace potvrzena zmizením signálu Ndeacetylovaného GBMP v 'H NMR spektru.
-6CZ 283530 B6
Příklad 3
Seřazení fragmentů různých N-acylovaných GBMP podle velikostí
Pro získání N-acylovaných GBMP materiálů o žádaných průměrných molekulových hmotách byla použita gelová filtrace na koloně (IBF) s Ultragelem (obchodní značka) AcA 44 (průměr perliček 60 až 140 pm). Frakce, které byly z kolony eluovány při KD 0,5 až KD 0,7 (měřeno FPLC, viz níže), byly spojeny, dialyzovány a lyofilizovány. Toto rozmezí hodnot KD odpovídá N-acylovanému GBMP s přibližně 30 až 50 zbytky kyseliny sialové (molekulová hmota 10 000 až 15 000, typická průměrná molekulová hmota 12 000). Frakce v oblasti KD 0,2 až 0,4, odpovídající fragmentům s průměrnou molekulovou hmotou v rozmezí od 30 000 do 40 000, byly také spojeny a zkonjugovány. Zajímavý je tedy N-acylovaný materiál, který se eluuje při K.Q v rozmezí od 0,2 do 0,7.
Příklad 4
Konjugáty polysacharidu
Koncové aldehydové skupiny byly zavedeny do N-acylovaného GBMP oxidací jodistanem (viz USA patent č. 4 356 170). Shora uvedené fragmenty N-acylovaného GBMP se oxidují v 0,lM vodném jodistanu sodném (NaIO4) (10 ml) dvě hodiny za teploty místnosti ve tmě. Nadbytek jodistanu se rozloží přidáním 1 ml ethylenglykolu a roztok se vyčerpávajícím způsobem dialyzuje při 4 °C, načež se lyofilizuje. Použití tetrahydridoboritanu sodného v N-deacetylačním procesu (vyjma GBMP) vede k převedení koncových redukujících skupin zbytků kyseliny sialové každého z N-acylovaných GBMP na zbytky otevřených polyolových řetězců. Tento typ zbytku je citlivý na jodistan (viz J. Immunol. 127, 1011 (1981) a USA patent č. 4 356 170, oboje Harold J. Jennings a spol.), což vede k zavedení aldehydových skupin do fragmentů N— acylovaného GBMP na obou koncích.
Oxidované fragmenty } 100 mg) se rozpustí v 0,lM hydrogenuhličitanu sodném (pH 8,1) (2 ml pufru). K tomuto roztoku se přidá TT (20 mg). Po přidání tetrahydridokyanboritanu sodného (40 mg) se roztok mírně míchá za teploty místnosti. Průběh konjugace se sleduje FPLC gelovou filtrací na koloně obsahující jako náplň Superosu (obchodní značka) 12 HR10/30 (Pharmacia), která se nechá probíhat isokraticky rychlostí 1 ml za minutu v pufru PBS při pH 7,2. Jak protein tak fragmenty N-acylovaného GBMP byly monitorovány při 214 nm. Fragmenty měly KD 0,6, TT měl KD 0,39 a konjugáty měly Kd 0,23. Konjugace byla úplná, když byl veškerý TT spotřebován, což lze stanovit na základě zmizení maxima v FPLC chromatogramu odpovídajícího složce s KD 0, 39. Ve většině případů byly konjugace ukončeny během dvou dnů, byly však nechány reagovat po celkovou reakční dobu čtyř dnů. Před filtrací na gelu se potenciální nezreagované skupiny (aldehydové skupiny) konečně zredukují působením tetrahydridoboritanu sodného (20 mg).
Konjugáty polysacharid-TT byly od fragmentů polysacharidu odděleny gelovou filtrací na koloně s náplní Bio Gel A, eluce PBS. Eluant obsahující konjugát byl dialyzován proti destilované vodě a lyofilizován. Konjugáty N-acylovaný GBMP-TT obsahovaly od 12 do 30 %, typicky 12 až 20%, kyseliny sialové (což bylo stanovováno resorcinolovým způsobem popsaným Swennerholmem L.: Quantitative Estimation of Sialic Acids., IK. A Colorimetric Resorcinol-Hydrochloric Acid Method. Biochim. Biophys. Acta 24, 604 (1957). To znamená, že molámí poměr polysacharidu k TT v konjugátech byl 2 až 3:1.
Příklad 5
Imunizace a imunoanalýzy: imunizační postupy
Dvacet bílých myší CFI. ve stáří 8 až 10 týdnů (samičky) se imunizuje intraperitoneálně (3krát ve 3-týdenních intervalech) N-acylovaným konjugátem GBMP-TT ve Freundově úplném adjuvantu (FCA) (Difco Detroit. Mi.). Každá imunizace obsahovala tolik konjugátu (10 až 12 pg), aby obsahoval 2 pg sialové kyseliny. Jedenáctý den po třetí injekci byly myši nechány vykrvácet. Sérum bylo použito pro následující testy.
Příklad 6
Imunizace a imunoanalýzy: analýza navázáním radioaktivního antigenu
Tato analýza se provádí modifikací Farrovy techniky s použitím GBMP označeného [3H] (Jennings H. J. a spol.: Determinant Specificities of the Groups B and C Polysaccharidesof Neisseria Meningitis. J. Immunol. 134, 2651 (1985).) nebo Pr-GBMP (Jennings H. J. a spol.: Unique Intermolecular Bactericidal Epitope involving the Momo-Sialo Polysaccharide Capsule on the Cell Surface of Group B Neisseria meningitis and E. coli Kl. J. Immunol. 142, 3585 až 3591 (1989).). Reakční směs pro analýzu navázáním radioaktivního antigenu byla získána smícháním 20 pl spojeného antisera ze skupiny dvaceti myší imunizovaných konjugátem N— acylovaný GBMP-TT, zředěného PBS na 100 pl, s GBMP označeným [3H] aN-Pr-GBMP označeným [3H] v 50 pl PBS v Eppendorfových polypropylenových mikroanalytických zkumavkách; po 16 hodinách inkubace při 4 °C se do zkumavek při 150 pl nasyceného (při 4 °C) síranu amonného (pH 7,0). Zkumavky se protřepou a nechají se stát při 4 °C 30 minut. Zkumavky se pak odstřeďují deset minut při 15 000 otáčkách za minutu. Ze zkumavek se odeberou dva podíly po 130 pl. Tyto podíly se smíchají se 2 ml vody a s xylenem obsahujícím scintilační činidlo (vodné scintilační činidlo ACS). Směsi se vyhodnotí kapalinovým scintilačním počítačem. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1.
Tabulka 1
Navázání N-Ac-GBMP označeného [3H] na různá myší anti-N-acyl-GBMP-TT konjugátová sera
| antiserum | % navázání a | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |
| N-Pr-GBMP-T | 41 | 40 | 39 | 12 |
| N-Bu-GBMP-T | 4 | 4 | 7 | 4 |
| N-IsoBu-GBMP-TT | 9 | - | - | - |
| N-Pen-GBMP-TT | 36 | - | - | - |
| N-Hex-GBMP-TT | 16 | - | - | - |
a Se spojeným antiserem z 20 imunizovaných myší byly provedeny čtyři vazebné experimenty.
Zkratky, které jsou použity v tabulce 1 a v dalších tabulkách, znamenají: N-Ac znamená Nacetyl-, N-Pr znamená Ν-propionyl-, N-Buznamená Ν-butanoyl-, N-isOBu znamená Nisobutanoyl-, N-Penznamená N-pentanoyla N-Hexznamená N-hexanoyl.
Čísla l, 2, 3 a 4 jsou výsledky čtyř opakovaných pokusů. Tabulka 1 zřetelně ukazuje, že N-AcGBMP (který nese stejný epitop jako podobný N-CAM) se váže na antiserum indukované NBu-GBMP, N-IsoBu-GBMP, N-Pen-GB a N-Hex-GBMP méně než na antiserum indukované
-8CZ 283530 B6
N-Pr-GBMP. Z toho lze odvodit, že N-Bu-, Ν-IsoBu-, N-Pena N-Hex-polysacharidové konjugázy poskytují méně zkříženě reaktivních protilátek nežN-Pr-konjugát.
Příklad 7
Kvantitativní srážecí analýza
Tyto pokusy se provádějí způsobem podle Kabata a Mayera: Immunochemistry, Charles C. Thomas. Springfield, str. 22 (1961). Jednotlivé podíly (100 μΐ) anti-N-acylGBMP-TT sera (zředěné 5krát PBS) se ve zkumavkách nechají zreagovat se zvyšujícími se koncentracemi Nacetyl-(kyselina kolaminová), Ν-propionyl-, N-butanoyl-, Ν-isobutanoyl-, N-pentanoyla Nhexanoyl-GBMP v celkovém objemu 200 /μΐ (upraveném přidáním PBS). Pro tyto pokusy byly použity frakce těchto derivátů o vyšší molekulové hmotě, které byly získány jako eluáty z kolony s Ultragelem AcA 44 (Ko 0,4 podle měření FPLC), která byla shora použita při dělení Nacylovaného GBMP na fragmenty podle velikostí. Zkumavky byly inkubovány čtyři dny při 4 °C s každodenním mícháním, odstřeďovány a množství proteinu protilátky bylo stanoveno způsobem podle Lowryho a spol.: Protein Measurement with the Folin Phenol Reagent, J. Biol. Chem. 265, 1933 (1951). Výsledky jsou uvedeny v tabulce II.
Tabulka II
Srážení3 myšího anti-N—acyl-GBMP-TT sera pomocí různých N-acyl-GBMP jako srážecích antigenů
| antiserum | N-acyl-GBMP antigen | |||
| N-acetyl- | N-propyl- | N-butyl- | N-hexyl- N-pentyl- | |
| N-Pr-GBMP-TT | 0,16 | 0,40 | 0,20 | 0,15 0,15 |
| N-Bu-GBMP-TT | 0,04 | 1,15 | 2,60 | 3,20 1,90 |
| N-Pen-GBMP-TT | 0,13 | 0,38 | 0,44 | 6,35 3,55 |
| N-Hex-GBMP-TT | 0,02 | 0,08 | 0,80 | 4,15 4,40 |
3 Maximum množství vysrážené protilátky vyjádřené jako mg/ml antisera.
Pokud jde o zkříženou reaktivitu, první sloupeček v Tabulce II ukazuje, že konjugáty N—Bu a N— Hex produkují velmi málo zkříženě reaktivních protilátek ve srovnání s konjugátem N-Pr-. Z tabulky lze vidět také to, že konjugát N-Pen produkuje méně zkříženě reaktivních protilátek než konjugát N-Pr.
Pokud se týká imunogenicity (v termínech homologní odpovědi), z tabulky 11 lze vidět, že konjugáty N-Bu(2,60), N-Pen(6,35) a N-Hex(4,40)-GBMP-TT jsou více imunogenní než NPr-GBMP analog (0,40).
Příklad 8
ELISA
Jamky mikrotitrovacích desek EIA (Flow Laboratories. Missisauga. Ontario. Kanada) se potáhnou 10 pg/ml roztoku konjugátu buď GBMP-, N-Pr-GBMP- nebo N-Bu-GBMP-BSA v PBS (100 μΐ na jamku). Desky se nechají 18 hodin při 4 °C a po potažení se promyjí 1% hovězím serumalbuminem v PBS deset minut za teploty místnosti (blokující stupeň). Jamky se pak naplní 100 μΐ seriálových lOonásobných zředění sera konjugátu anti-myššího-N-acyl
-9CZ 283530 B6
GBMP-TT v PBS. Desky se inkubují jednu hodinu za teploty místnosti. Po promytí SBT se desky inkubují jednu hodinu za teploty místnosti, a to s 50 μΐ příslušných zředění konjugátů značených kozí protimyší imunoglobulínovou peroxidasou. Obsah jamek se pak odebere a desky se promyjí pětkrát SBT. Do každé jamky se konečně přidá 50 μΐ substrátu tetramethylenová modř-peroxidasa (TMB) (Kirkegard and Perry Labpratories) a po 10 minutách se vyhodnotí spektrofotometrem Multiscan (Flow Laboratories. Mississauga. Ontario. Kanada). Výsledky jsou uvedeny níže v tabulce III.
Tabulka III
Titrace ELISA spojeného myšího anti-N-acyl-GBMP-TT konjugátového sera proti konjugátům N-acyl-GBMP-BSA
| potahovací antigen | titrya antisera | ||
| a. N-Pr-GBMPb | a. N-Bu-GBMPb | a. N-IsoBu-GBMPb | |
| N-Ac-GBMP-BSA | 7 800 | 1000 | 7 000 |
| N-Pr-GBMP-BSA | 40 000 | 39 000 | 9 800 |
| N-Bu-GBMP-BSA | 26 000 | 52 000 | 9 700 |
| N-IsoBu-GBMP-BSA | - | - | 25 000 |
a titr (GM) znamená reciproční zředění při 50 % maximální absorbance při 450 nm b N-acyl-specifické antiserum indukované v myších homologními konjugáty N-acyl-GBMPTT.
Pokud jde o zkříženou reaktivitu, z tabulky lze vidět, že konjugát N-Bu-GBMP-TT poskytuje méně zkříženě reaktivních protilátek vzhledem kN-Ac-GBMP (1000) než konjugát N-PrGBMP-TT (7800). Důvodem je to, že GBMP se na protilátku indukovanou konjugátem N-PrGBMP-TT váže méně než na protilátku indukovanou konjugátem N-Bu-GBMP-TT. Podobný komentář lze použít také na konjugát N-IsoBu-GBMP-TT.
Pokud se týká imunogenicity, konjugát N-Bu je více imunogenní než analog N-Pr, jak ukazují homologní vazebné titry 52 000 (N-Bu) a 40 000 (N-Pr).
Příklad 9
Radioaktivní analýza inhibice vazby
Ke 20 μΐ myšího anti-N-Pr-GBMP-TT konjugátového antisera se přidají zvýšené koncentrace N-acyl-GBMP inhibitoru o větších velikostech molekul v PBS (80 μΐ), množství postačující pro navázání 50 % [3H]-označeného N-Pr-GBMP v nepřítomnosti inhibitoru. Tyto zkumavky se inkubují jednu hodinu při 37 °C. Přidá se 50 μΙ [3H]-značeného N-Pr-GBMP v PBS. Po mírném míchání se zkumavky inkubují 16 hodin při 4 °C. Analýzy se provedou přesně stejným způsobem jak shora popsáno pro analýzu navázání radioaktivního antigenu. Procenta inhibice se vypočtou podle následujícího vzorce:
Procento inhibice = 100. [(počet impulsů za minutu s inhibitorem - počet impulsů za minutu bez inhibitoru)/počet impulsů za minutu s protilátkou - počet impulsů za minutu s inhibitorem).
Výsledky jsou uvedeny v tabulce IV.
- 10CZ 283530 B6
Tabulka IV
Inhibice navázání [3H]-označeného N-Pr-GBMP na myší konjugát anti-N-Pr-GBM-TT indukovaný protilátkami IgG2a IgG2b (A)a a IgGi (B)a
| Inhibitorb | A | B |
| N-Ac-GBMP | více než 50,0 | více než 50,0 |
| N-Pr-GBMP | 0,6 | 0,3 |
| N-Bu-GBMP | 0,3 | 0,2 |
| N-IsoBu-GBMP více než | 50,0 | - |
| N-Pen-GBM | 2,3 | 2,5 |
| N-Hex-GBMP | 10,2 | 10,0 |
a Toto byly frakce myšího polyklonálního anti-N-Pr-GBMP-TT, sera popsaného Jenningsem a spol.: J. Immunol. 142. 3585 až 3591 (1989).
b Mikrogramy inhibitoru, které poskytují 50 % inhibici.
Baktericidní analýzy byly prováděny způsobem popsaným Jenningsem a spol.: J. Exp. Med. 165. 1207 až 1211 (1987). V těchto analýzách byl použit kmen B (M 986) Neisseria meningitidis. Výsledky jsou uvedeny v tabulce V.
Tabulka V
Navázání [3H]-značeného N-Pr-GBMP na sérum myšího anti-N-acyl-GBMP-TT konjugátu a baktericidní titry příslušného antisera
| antiserum | μΐ antisera3 | baktericidní titrb |
| N-Pr-GBMP-TT | 13 | 128 |
| N-Bu-GBMP-TT | 10 | 64 |
| N-IsoBu-GBMP-TT | NS | 64 |
| N-Pen-GBMP-TT | 24 | 64 |
| N-Hex-GBMP-TT | více než 100 | 8 |
| N-Ac-GBMP-TT | více než 100 | 8 |
a mikrolitry antisera (pětinásobně zředěného PBS) požadované pro 50 % navázání b Pokud zřeďování: rozdíl jednoho zředění, například 128 versus 64, je v rámci experimentální chyby.
Tabulka IV ukazuje, že N-Bu-GBMP je stejně dobrý inhibitor jako N-Pr-GBMP při navázání N-Pr-GBMP na jeho vlastní homologní protilátky. Použití N-Bu-GBMP místo N-Pr-GBMP nevede tedy k žádné významné ztrátě vlastností vykazovaných N-Pr-GBMP. Tabulka V ukazuje, že N-Bu-GBMP se váže na protilátky indukované konjugátem N-Pr-GBMP-TT stejně dobře jako N-Pr-GBMP. Antisera indukovaná jak konjugáty N-Bu-GBMP-TT tak N-Pr-GBMP-TT poskytují podobné baktericidní titry. Tato skutečnost ukazuje na ekvivalenci N-Bu-GBMP, N IsoBu-GBMp aN-Pen-GBMP s N-Pr-GBMP v jejich schopnosti napodobovat baktericidní epitop na povrchu \ skupiny B.
Claims (25)
1. Modifikovaný polysacharid skupiny B Neisseria meningitidis, který má N-acetylové skupiny zbytku kyseliny sialové přírodního polysacharidu nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku a jeho průměrná molekulová hmotnost je v rozmezí 10 000 až 50 000.
2. Modifikovaný kapsulamí polysacharid Escherichia coli K.1, který má N-acetylové skupiny zbytku kyseliny sialové přírodního polysacharidu nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku a jeho průměrná molekulová hmotnost je v rozmezí 10 000 až 50 000.
3. Modifikovaný polysacharid podle nároku 1, kde acylová skupina se čtyřmi až osmi atomy uhlíku je vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové, hexanoylové, heptanoylové a oktanoylové skupiny.
4. Modifikovaný polysacharid podle nároku 3, kde acylová skupina je vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové a hexanoylové skupiny.
5. Modifikovaný polysacharid podle nároku 4, kde acylovou skupinou je n-butanoylová skupina.
6. Modifikovaný polysacharid podle nároku 2, kde acylová skupina se čtyřmi až osmi atomy uhlíku je vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové, hexanoylové, heptanoylové a oktanoylové skupiny.
7. Modifikovaný polysacharid podle nároku 6, kde acylová skupina je vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové a hexanoylové skupiny.
8. Modifikovaný polysacharid podle nároku 7, kde acylovou skupinou je n-butanoylová skupina.
9. Modifikovaný polysacharid podle nároku 1, kde 27 až 100 % N-acetylových skupin zbytku kyseliny sialové je nahrazeno C4 až Cg-acylovými skupinami.
10. Modifikovaný polysacharid podle nároku 2, kde 27 až 100 % N-acetylových skupin zbytku kyseliny sialové je nahrazeno C4 až Cg-acylovými skupinami.
11. Modifikovaný polysacharid podle nároku 1, kde 90 až 100 % N-acetylových skupin zbytku kyseliny sialové je nahrazeno C4 až Cg-acylovými skupinami.
12. Modifikovaný polysacharid podle nároku 2, kde 90 až 100 % N-acetylových skupin zbytku kyseliny sialové je nahrazeno C4 až Cg-acylovými skupinami.
13. Antigenní konjugát, který obsahuje modifikovaný polysacharid skupiny B Neisseria meningitidis, který má N-acetylové skupiny zbytku kyseliny sialové nahrazeny acylovou skupinou se čtyřmi až osmi atomy uhlíku, která je konjugována s imunologicky vhodným proteinem.
- 12CZ 283530 B6
14. Antigenní konjugát podle nároku 13, kde acylová skupina je vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové, hexanoylové, heptanoylové a oktanoylové skupiny.
5
15. Antigenní konjugát podle nároku 14, kde acylová skupina je vybrána ze skupiny sestávající z butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové a hexanoylové skupiny.
16. Antigenní konjugát podle nároku 15, kde protein je vybrán ze skupiny sestávající z toxoidu tetanu, toxoidu difterie, zkříženě reaktivního materiálu (CRM) a nosiče bakteriálního proteinu.
17. Antigenní konjugát podle nároku 13, kde protein je kovalentně navázán a polysacharid -CHr-NH-proteinovou vazbou.
18. Antigenní konjugát podle nároku 16, kde CRM znamená CRM197.
19. Způsob přípravy antigenního konjugátu obsahujícího modifikovaný polysacharid skupiny B Neísseria meningitídis podle nároku 1 nebo Escherichia coli K1 podle nároku 2, konjugovaný s imunologicky vhodným proteinem, kde N-acetylové skupiny zbytků kyseliny sialové polysacharidu jsou nahrazeny N-C4 až Cg-acylovými skupinami, vyznačující se tím,
20 že zahrnuje
a) N-deacetylaci polysacharidu skupiny B Neísseria meningitídis nebo Escherichia coli Kl;
b) N-acylaci N-deacetylovaného polysacharidu ze stupně (a) za vzniku N-acylovaného polysacharidu;
c) konjugaci N-acylovaného polysacharidu s imunologicky vhodným proteinovým nosičem za 25 vzniku konjugátu.
20. Způsob podle nároku 19, vyznačující se tím, že acylová skupina je vybrána ze skupiny zahrnující n-butanoylové, isobutanoylové, pentanoylové, hexanoylové a oktanoylové skupiny.
21. Způsob podle nároku 20, vyznačující se tím, že acylovou skupinou je butanoylová skupina.
22. Vakcina, vyznačující se tím, že obsahuje antigenní konjugát podle nároku 15 35 a farmaceuticky přijatelný injektovatelný nosič.
23. Vakcína podle nároku 22, vyznačující se tím, že dále obsahuje fysiologicky přijatelný adjuvant.
40
24. Vakcína podle nároku 23, vyznačující se tím, že uvedený adjuvant je vybrán ze skupiny sestávající z hydroxidu hlinitého, fosforečnanu hlinitého a síranu hlinitého.
25. Gamaglobulinová frakce, která je schopna pasivně chránit proti meningitidě způsobené Neísseria meningitídis skupiny B a Escherichia coli Kl, připravitelná imunizací savce vakcinou 45 podle nároku 22 a následnou isolací gamaglobulinu z uvedeného savce.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44819589A | 1989-12-14 | 1989-12-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ628490A3 CZ628490A3 (en) | 1997-12-17 |
| CZ283530B6 true CZ283530B6 (cs) | 1998-04-15 |
Family
ID=23779371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS906284A CZ283530B6 (cs) | 1989-12-14 | 1990-12-14 | Modifikované polysacharidy, antigenní konjugát obsahující modifikovaný polysachararid a způsob jeho přípravy a gamaglobulinová frakce |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5576002A (cs) |
| EP (1) | EP0504202B1 (cs) |
| JP (1) | JP2637845B2 (cs) |
| KR (1) | KR0158436B1 (cs) |
| CN (4) | CN1049223C (cs) |
| AR (1) | AR243934A1 (cs) |
| AT (1) | ATE121947T1 (cs) |
| AU (1) | AU641715B2 (cs) |
| BR (1) | BR9007917A (cs) |
| CA (1) | CA2071811C (cs) |
| CZ (1) | CZ283530B6 (cs) |
| DE (1) | DE69019164T2 (cs) |
| DK (1) | DK0504202T3 (cs) |
| ES (1) | ES2071288T3 (cs) |
| FI (2) | FI104539B (cs) |
| HR (1) | HRP920872A2 (cs) |
| HU (2) | HU218146B (cs) |
| IE (1) | IE68414B1 (cs) |
| IL (1) | IL96676A (cs) |
| IN (1) | IN171747B (cs) |
| NO (2) | NO305275B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ236471A (cs) |
| PH (1) | PH30305A (cs) |
| PL (2) | PL166659B1 (cs) |
| RO (1) | RO111416B1 (cs) |
| RU (1) | RU2105568C1 (cs) |
| SI (1) | SI20008B (cs) |
| WO (1) | WO1991008772A1 (cs) |
| YU (1) | YU24391A (cs) |
| ZA (1) | ZA9010065B (cs) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648241A (en) * | 1989-09-15 | 1997-07-15 | The General Hospital Corporation | Conjugate vaccine against group B streptococcus |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
| PT667787E (pt) * | 1992-09-24 | 2001-10-31 | Brigham & Womens Hospital | Vacinas de conjugado de polissacarido-proteina de estreptococos do grupo b do tipo ii e tipo v |
| US6153406A (en) * | 1993-07-23 | 2000-11-28 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane protein P2 from Haemophilus influenzae type B |
| US5439808A (en) * | 1993-07-23 | 1995-08-08 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| US5700787A (en) * | 1994-09-02 | 1997-12-23 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5679654A (en) * | 1994-09-02 | 1997-10-21 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5747287A (en) * | 1995-04-28 | 1998-05-05 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| US5811102A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-22 | National Research Council Of Canada | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines |
| US6284884B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-09-04 | North American Vaccine, Inc. | Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof |
| JP4233113B2 (ja) * | 1995-06-07 | 2009-03-04 | グラクソスミスクライン・バイオロジカルス・ソシエテ・アノニム | 多糖類抗原−キャリア蛋白接合体および遊離キャリア蛋白を有してなるワクチン |
| ZA97248B (en) * | 1996-01-18 | 1997-07-18 | Rohm & Haas | Method for identifying and quantifying polymers utilizing immunoassay techniques |
| JP4150082B2 (ja) * | 1996-08-27 | 2008-09-17 | カイロン コーポレイション | 独特の髄膜炎菌性ｂエピトープを規定するモノクローナル抗体およびワクチン組成物の調製におけるそれらの使用 |
| DE69708318T3 (de) † | 1996-08-27 | 2006-11-16 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc., Emeryville | Neisseria meningitidis serogruppe b glykokonjugate und verfahren zu deren verwendung |
| US6426074B1 (en) | 1997-03-19 | 2002-07-30 | The Brigham And Women's Hospital Inc. | Group B Streptococcus vaccine |
| JP2002506448A (ja) | 1997-06-24 | 2002-02-26 | カイロン コーポレイション | 抗髄膜炎菌ワクチン組成物を使用して成体を免疫する方法 |
| CA2301942C (en) | 1997-08-27 | 2011-05-31 | Chiron Corporation | Molecular mimetics of meningococcal b epitopes |
| KR100757630B1 (ko) | 1997-12-23 | 2007-09-10 | 박스터 헬쓰케어 에스.에이. | 신규한 추출 및 단리 방법으로 수득되는 세균성 캡슐형 다당류 |
| JP2004505885A (ja) * | 1998-08-19 | 2004-02-26 | ノース アメリカン ワクチン， インコーポレイテッド | Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドを用いて産生されたワクチンとして有用な免疫原性β−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体 |
| US6436653B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-08-20 | Exiqon A/S | Method for introduction of reporter groups into bacterial lipopolysaccharide-derived carbohydrates and the subsequent coupling of such derivatives onto solid surfaces |
| US7083777B1 (en) * | 1999-04-02 | 2006-08-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Immunomodulating polymers |
| US6518037B2 (en) * | 1999-11-12 | 2003-02-11 | University Of Iowa Research Foundation | Two-component system that controls bacterial membrane synthesis |
| GB9928196D0 (en) * | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
| SV2003000753A (es) | 2000-12-05 | 2003-06-16 | Brigham & Womens Hospital | Uso de polisacaridos zwitterionicos para la especifica modulacion del progreso inmunologico |
| AU2002252638A1 (en) | 2001-04-17 | 2002-10-28 | Children's Hospital Oakland Research Institute | Molecular mimetics of meningococcal b epitopes which elicit functionally active antibodies |
| GB0115176D0 (en) * | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| GB0121591D0 (en) * | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| DK1777236T3 (en) * | 2002-03-26 | 2017-02-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | MODIFIED SUCCARIDES WHICH IMPROVED WATER STABILITY FOR USE AS A MEDICINE |
| JP2006522135A (ja) * | 2003-03-31 | 2006-09-28 | ザ ブライアム アンド ウィミンズ ホスピタル インコーポレーテッド | 喘息およびアレルギーの処置のための両性イオン免疫調節剤 |
| US7731967B2 (en) | 2003-04-30 | 2010-06-08 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Compositions for inducing immune responses |
| WO2005016974A1 (en) | 2003-08-12 | 2005-02-24 | Lipoxen Technologies Limited | Sialic acid derivatives for protein derivatisation and conjugation |
| CA2568982A1 (en) | 2004-06-23 | 2006-01-05 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Polysaccharide derivatives and uses in induction of an immune response |
| US8148335B2 (en) | 2004-06-23 | 2012-04-03 | Children's Hospital & Research Center Oakland | De-N-acetyl sialic acid antigens, antibodies thereto, and methods of use in cancer therapy |
| GB0428394D0 (en) * | 2004-12-24 | 2005-02-02 | Chiron Srl | Saccharide conjugate vaccines |
| US9931397B2 (en) | 2005-06-27 | 2018-04-03 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| WO2007092451A2 (en) | 2006-02-06 | 2007-08-16 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Zwitterionic polysaccharides for promotion of immune system maturation and health |
| GB0611914D0 (en) | 2006-06-15 | 2006-07-26 | Teti Giuseppe | Peptides that mimic non-human cross-reactive protective epitopes of the group Bmeningococcal capsulsar polysaccharide |
| EP1872791A1 (en) | 2006-06-30 | 2008-01-02 | Institut Pasteur | Use of bacterial polysaccharides for biofilm inhibition |
| EP2170391B1 (en) * | 2007-06-20 | 2017-01-18 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | Modified polysaccharides for conjugate vaccines |
| EP2244695A1 (en) | 2007-12-07 | 2010-11-03 | Novartis AG | Compositions for inducing immune responses |
| EP2387417B1 (en) | 2009-01-16 | 2016-05-11 | University of Maryland, Baltimore | Broad spectrum vaccine against non-typhoidal salmonella |
| WO2013009945A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-01-17 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Lipid-containing psa compositions, methods of isolation and methods of use thereof |
| EP2752403A1 (de) * | 2013-01-08 | 2014-07-09 | Sika Technology AG | Amin für emissionsarme Epoxidharz-Produkte |
| CA2997211A1 (en) | 2015-08-19 | 2017-02-23 | President And Fellows Of Harvard College | Lipidated psa compositions and methods |
| WO2018014012A1 (en) | 2016-07-15 | 2018-01-18 | President And Fellows Of Harvard College | Glycolipid compositions and methods of use |
| AU2018215585B2 (en) * | 2017-01-31 | 2022-03-17 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4057685A (en) * | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
| US4356170A (en) * | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
| US4673574A (en) * | 1981-08-31 | 1987-06-16 | Anderson Porter W | Immunogenic conjugates |
| US4619828A (en) * | 1982-07-06 | 1986-10-28 | Connaught Laboratories, Inc. | Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines |
| US4496538A (en) * | 1982-07-06 | 1985-01-29 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine |
| US4644059A (en) * | 1982-07-06 | 1987-02-17 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae B polysaccharide-diptheria toxoid conjugate vaccine |
| US4695624A (en) * | 1984-05-10 | 1987-09-22 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency |
| US4727136A (en) * | 1985-10-01 | 1988-02-23 | Canadian Patents And Development Ltd. | Modified meningococcal group B polysaccharide for conjugate vaccine |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
-
1990
- 1990-12-13 AU AU68987/91A patent/AU641715B2/en not_active Ceased
- 1990-12-13 KR KR1019920701403A patent/KR0158436B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 RO RO92-0789A patent/RO111416B1/ro unknown
- 1990-12-13 ES ES91900142T patent/ES2071288T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 RU SU5052391A patent/RU2105568C1/ru active
- 1990-12-13 DK DK91900142.0T patent/DK0504202T3/da active
- 1990-12-13 JP JP3500908A patent/JP2637845B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 DE DE69019164T patent/DE69019164T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 EP EP91900142A patent/EP0504202B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU218146B/hu unknown
- 1990-12-13 CA CA002071811A patent/CA2071811C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 BR BR909007917A patent/BR9007917A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-12-13 AT AT91900142T patent/ATE121947T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 WO PCT/CA1990/000437 patent/WO1991008772A1/en active IP Right Grant
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU9201966D0/hu unknown
- 1990-12-14 SI SI9110243A patent/SI20008B/sl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 CZ CS906284A patent/CZ283530B6/cs unknown
- 1990-12-14 CN CN90110444A patent/CN1049223C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-14 NZ NZ236471A patent/NZ236471A/en unknown
- 1990-12-14 YU YU24391A patent/YU24391A/sh unknown
- 1990-12-14 IN IN1033/CAL/90A patent/IN171747B/en unknown
- 1990-12-14 PH PH41724A patent/PH30305A/en unknown
- 1990-12-14 IE IE451390A patent/IE68414B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 AR AR90318627A patent/AR243934A1/es active
- 1990-12-14 ZA ZA9010065A patent/ZA9010065B/xx unknown
- 1990-12-14 PL PL90302476A patent/PL166659B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 IL IL9667690A patent/IL96676A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 PL PL90288271A patent/PL166035B1/pl not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-06-12 NO NO922316A patent/NO305275B1/no unknown
- 1992-06-12 FI FI922737A patent/FI104539B/fi active
- 1992-10-02 HR HRP-243/91A patent/HRP920872A2/hr not_active Application Discontinuation
-
1993
- 1993-11-22 CN CN93119467A patent/CN1036504C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93114763A patent/CN1036522C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93114764A patent/CN1072506C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-05-05 US US08/238,600 patent/US5576002A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-07 US US08/485,623 patent/US5683699A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-07-17 NO NO973311A patent/NO307835B1/no unknown
- 1997-10-17 US US08/953,771 patent/US5902586A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-09-09 FI FI991917A patent/FI19991917A/fi unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ283530B6 (cs) | Modifikované polysacharidy, antigenní konjugát obsahující modifikovaný polysachararid a způsob jeho přípravy a gamaglobulinová frakce | |
| US7291343B2 (en) | Enterococcus antigens and vaccines | |
| US4727136A (en) | Modified meningococcal group B polysaccharide for conjugate vaccine | |
| JP4656728B2 (ja) | ブドウ球菌抗原及びワクチン | |
| KR101573648B1 (ko) | 합성 베타-1,6 글루코사민 올리고당에 관한 방법 및 조성물 | |
| US7595307B2 (en) | Polysaccharide derivatives and uses in induction of an immune response | |
| BRPI0316018B1 (pt) | vacina polissacarídica para infecções estafilocócicas | |
| PL184125B1 (pl) | Modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, skoniugowana cząsteczka, kompozycja szczepionki, surowica odpornościowa oraz zastosowanie skoniugowanej cząsteczki do wytwarzania szczepionki | |
| JPH11507964A (ja) | ２，５−アンヒドロ−ｄ−マンノース末端構造を持つ、抗原性グループｂ連鎖球菌▲ｉｉ▼型および▲ｉｉｉ▼型多糖断片とその複合ワクチン | |
| Moreno et al. | Thymic-dependence and immune memory in mice vaccinated with meningococcal polysaccharide group B complexed to outer membrane protein. | |
| Liao et al. | Characterization of a human monoclonal immunoglobulin M (IgM) antibody (IgMBEN) specific for Vi capsular polysaccharide of Salmonella typhi | |
| JPH01203317A (ja) | 抗体およびそれを有効成分とする齲蝕予防剤の製造方法 |