HRP920872A2 - Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine - Google Patents
Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine Download PDFInfo
- Publication number
- HRP920872A2 HRP920872A2 HRP-243/91A HRP920872A HRP920872A2 HR P920872 A2 HRP920872 A2 HR P920872A2 HR P920872 A HRP920872 A HR P920872A HR P920872 A2 HRP920872 A2 HR P920872A2
- Authority
- HR
- Croatia
- Prior art keywords
- group
- butyl
- gbmp
- conjugate
- polysaccharide
- Prior art date
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims description 41
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims description 39
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims description 39
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 title description 2
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 title description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- -1 n-octyl Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 10
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 241000617590 Escherichia coli K1 Species 0.000 claims description 9
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 8
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 230000006181 N-acylation Effects 0.000 claims description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 6
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 4
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 claims description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 2
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 2
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims 6
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 6
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 claims 4
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 4
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 2
- 125000003136 n-heptyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 2
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 claims 2
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims 1
- 125000003187 heptyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 15
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 5
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 4
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 230000009567 fermentative growth Effects 0.000 description 3
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 3
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 3
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N hexanoyl hexanoate Chemical class CCCCCC(=O)OC(=O)CCCCC PKHMTIRCAFTBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 2
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 206010027249 Meningitis meningococcal Diseases 0.000 description 1
- 201000010924 Meningococcal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- MGWWWSRHCOVLIU-UHFFFAOYSA-N benzene-1,3-diol;hydrochloride Chemical compound Cl.OC1=CC=CC(O)=C1 MGWWWSRHCOVLIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000010200 folin Substances 0.000 description 1
- 230000005182 global health Effects 0.000 description 1
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 1
- 125000000268 heptanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000003104 hexanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000010807 negative regulation of binding Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N pentanoic acid group Chemical group C(CCCC)(=O)O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical group 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000008927 postnatal maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1228—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K16/1232—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia from Escherichia (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0258—Escherichia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1217—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
Područje tehnike
Izum je iz područja farmaceutske industrije. Ovaj izum je usmjeren na kemijski modificiranu grupu B polisaharida Neisseria meningitidis. Izum također osigurava cjepivo u kojima su odgovarajuće modificirani polisaharidi konjugirani na proteinski nosač.
Tehnički problem
Meningitis uzrokovan grupom B N. meningitidis i E. coli K1 ostaje glavni svjetski zdravstveni problem. Grupa B meningitis se javlja u endemskim i epidemskim situacijama i računa se da obuhvaća oko polovine svih zabilježenih slučajeva meningokoknog meningitisa, dok K1-pozitivne E. coli su uzročnici meningitisa u novorođenčadi. Trenutno nema cjepiva komercijalno dostupnog protiv bolesti izazvanih grupom B meningokoki i E. coli K1. Ovo je velikim dijelom uvjetovano činjenicom da grupa B meningokoknog polisaharida (GBMP) je slabo imunogena kod ljudi. Postoje nedavno određeni kandidati cjepiva bazirani na kompleksima GBMP sa vanjskom proteinskom membranom, ali još uvijek nije jasna evidencija njihove humane djelotvornosti.
Stanje tehnike
Nedavno je razvijen nov koncept cjepiva zasnovan na sintetski kemijski modificiranoj (N-propioniliranoj) grupi B polisaharid-protein, (N-Pr-GRMP-protein) konjugatu. Cjepivo inducira u miševa visoke titre Igt; antitijela koja nisu sama zaštitna, već također unakrsno reagiraju (cross-reaction) sa nemodificiranim GBMP (tj. N-acetil-GBMP). Ovaj koncept je opisan i zaštićen u US patentu br. 4 127 136, od 23. veljače, 1988 od Harold J. Jennings et al.
Zaključeno je da cjepivo koja uvećava unakrsno-reaktivna antitijela, takva kao ona opisana u US patentu 4727136 može biti uspješno samo na račun kidanja imune tolerancije. Ova hipoteza je potvrđena identifikacijom općeg epitopa koji se sastoji od alfa-(2-8)-vezanih ostataka sialinske kiseline (sa minimalnim zahtjevom od 10 ostataka) u urodjenom N-Ac-GBMP humanom i animalnom tkivu (Jennigs, Contrib. Microbiol. Immunol. Basel, Karger, 1989 vol. 10, 151-165). Ovi polisialozil lanci djeluju kao razvijajući antigeni i najvećim dijelom su vezani sa fetalnim stanjem u embrinskoj neutralnoj staničnoj adheziji (Finne et al, Biochem. Biophvs. Res. Commun, 1983, 112, 482). Tijekom postnatalnog sazrijevanja, ovaj antigen niže-održavan (Friedlander et al, J. Cell Biol. 1985, 101, 412) ali se izražava u odraslih ljudi tijekom regeneracije oboljelih mišića (Cashman et al, Ann Neuron, 1981, 21, 481) u tumorskim ćelijama (Roth et al, Proc. Natl. Acad. Sci. 1988, 85, 299) i u prirodnim ubijajućim (NK) i CD3+T ćelijama (Husmann et al. Eur. J. Immunol. 1989, 19, 1761. Mada posljedice raskidanja tolerencije prema ovim fetalnim antigenima još nisu razjašnjene, opće se smatra zbog ove unakrsne reakcije, N-Pr-GBMP-protein konjugat treba biti ozbiljno proučen od licencnig agencija, što zahtijeva znatan trošak i odlaganje zbog kompleksnosti eksperimentiranja potrebnog za potvrdu sigurnosti cjepiva prije njegovog odobravanja za komercijalnu prodaju.
Predmet ovog izuma je razvijanje cjepiva koje ima imunogene osobine koje su pojačane u odnosu na one za N-Pr-GBMP-protein. Predmet izuma je također osiguravanje koje pokazuje uglavnom smanjenu ukrštenu reaktivnost sa GBMP.
Opis rješenja tehničkog problema sa primjerima
U jednom aspektu ovog izuma, osiguran je modificiran B polisaharid Neisseria meningitidis koji ima ostatak sialinske kiseline, N-acetil (C2) grupe zamijenjene sa C4-8 acil grupom. U drugom aspektu, osiguran je antigeni konjugat koji obuhvaća N-C4-C8 acil polisaharid konjugiran na imunološki pogodan protein, koji ima naglašenu imunogenost sa bitno smanjenom induktibilnošću unakrsno-reaktivnih antitijela.
U daljem aspektu, osigurano je cjepivo koja obuhvaća N-C4-C8 acil polisaharid-protein konjugat zajedno sa pogodnim nosačem ili razrjeđivačem. Cjepiva izuma mogu također, obuhvaćati terapeutski efikasnu količinu adjuvanta pogodnog za humano korištenje, npr. aluminij fosfata ili aluminij hidroksida.
U još daljem aspektu, osiguran je postupak imuniziranja sisavaca protiv N. meningitidis i E. coli K1 infekcija, koji obuhvaća parenteralno davanje sisavcu u takvim infekcijama, uključujući čovjeka, imunološki djelotvorne količine cjepiva izuma. Cjepivo se tipično daje u količini od oko 1-50 mikrograma na kilogram tjelesne mase, npr. 5-25, mikrograma na kilogram tjelesne mase.
U još drugom aspektu, pronalazak daje gama globulinsku frakciju sposobnu za zaštitu protiv meningitisa izazvanog sa grupom B N. meningitidis i E. coli K1. Frakcija se dobiva imuniziranjem sisavaca sa cjepivom izuma. Frakcija se tada daje individualno radi omogućavanja zaštite protiv ili za tretiranje infekcije u toku izazvane gornjim organizmima. Iz ovog, biti će jasno da će imunogeni konjugati cjepiva izuma biti izvor terapeutskog antiseruma u svjetlu njihove pogodne imunogenosti sa minimalnim induciranjem GBMP unakrsno-reaktivnih antitijela. Konjugati izuma će biti također primjenjivi za porast broja monoklonskih antitijela, i moguće, antidiotipičnih antitijela.
Nađeno je našim ranijim eksperimentima da većina bakterijskih i zaštitnih antitijela induciranih sa N-Pr-G B M protein konjugatom opisanim u naprijed navedenom Jennings et al, US patentu 4 727 136 nije povezana sa GBMP unakrsno-reaktivnim antitijelima. Ustvari, većina zaštitne aktivnosti je sadržana u N-Pr-GBMP-specifičnoj populaciji antitijela koja ne reagira unakrsno sa GBMP. U svjetlu ovoga, vjeruje se da N-Pr-GBMP podržava bakterijski epitop na površini grupe B meningokoki.
Ovaj izum je zasnovan na otkriću da je moguće sintetizirati kemijski modificirane GBMP-e koji podržavaju bakterijski epitop i koji, u svom konjugiranom obliku ne pokazuju samo naglašenu imunogenost već također i bitno smanjuju induciranje antitijela koja unakrsno reagiraju sa GBMP.
Pri dolasku do ovog izuma, sintetizirani su brojni različito kemijski modificirani GBMP-i i konjugirani su individualno na protein što je bilo praćeno injiciranjem konjugata miševima i dobiveni efekti su uspoređeni sa onima dobivenim pomoću N-Pr-GBMP protein konjugata. Iznenađujuće je nađeno da N-C4-C8 acil GBMP-protein konjugata, npr. n-butanoil, izo-butanoil, n-pentanoil, izo-pentanoil, neopentanoil, heksanoil, heptanoil i oktanoil, i naročito N-butanoil (N-Bu) GBMP-protein konjugat, podržavaju bakterijski epitop sa bitno smanjenim induciranjem unakrsno-reaktivnih antitijela.
Grupa B meningokoknog polisaharida je izolirana iz N. meningitidis postupcima koji su poznati u tehnici. U jednom takvom postupku, grupa B meningokoki (vrsta 981B) je uzgojena na 37°C u fermentatoru koristeći 30 g dehidratizirane Todd Hewitt juhe (Difco Laboratories, Detroit, Michigen) na litru destilirane vode. Prije fermentatorskog rasta, liofilizirana vrsta je početno rasla u svijetloj posudi na 37°C na 5% (v/v) ovčje krv agarnim (Difco Laboratories, Detroit, Michigan) pločama. Bakterije su tada prenesene u 1,0 litru Todd Hewitt Broth (kao napred) u Erlenmajerskoi boci koja je mućkana 7 sati na 37°C na 190 okr/min. .Ovaj inokulat je tada prenesen u fermentator. Poslije fermentatorskog rasta (16 sati) bakterije su ubijene dodavanjem formalina do krajnje koncentracije od 0,75%. Bakterije su uklonjene neprekidnim centrifugiranjem i grupa R meningokoknog polisaharida je izolirana iz supernatanta i pročišćena uglavnom kao što je opisano od Bundle et al. J. Biol. Chem., 249, 4797-4801 (1974) izuzev što je protein bio ekstrahiran miješanjem otopine sirovog polisaharida sa hladnim (4°C) 90% fenolom umjesto sa toplim (50-60°C). Ovaj zadnji postupak omogućuje da se dobije visokomolekularni oblik GBMP.
E. coli (018:K1:H7) (NRCC 4283) izrasle su na 37°C u fermentatoru i destiliranoj vodi koja sadrži dehidratiziranu moždano-srčanu infuziju (BHI, 37 g/litra) (Difco Laboratories, Detroit, Michigpn). Prije fermentatorskog rasta, liofilizirana vrsta je rasla na 50 ml BHI otopine (istog kao naprijed) u Erlenmaverskoj boci koja je 7 sati mućkana na 37°C na 200 okr/min. Ova je tada prenesena u 1,5 litru BHI (kao naprijed) i rasla je pod istim uvjetima kao što je opisano naprijed tijekom 7 sati. Inokulat je tada prenesen u fermentator. Korišteni postupci u izoliranju i pročišćavanju kapsularnog polisaharida E. coli K1 su bili identični onima opisanim naprijed za izoliranje grupe B meningokoknog polisaharida.
Procjenjuje se da postupci izoliranja i pročišćavanja opisani naprijed nisu jedini koji se mogu koristiti, i da su drugi publicirani postupci dostupni, npr. oni koje je opisao Watson et al. J. Immunol. 81 331 (1958) i u naprijed spomenutom US patentu 4 727 136.
Prirodni polisaharid je N-deacetiliran radi nastajanja reaktivne amino grupe u ostatku sialinske kiseline kao dijelu molekule. Ovo se može izvesti poznatim postupkom, npr. u baznom vodenom mediju na povišenim temperaturama, npr. oko 90-110°C, i na pH od oko 13-14. Alkalni vodeni medij je pogodno vodena otopina hidroksida alkalnog metala, npr. natrij hidroksid na oko 2 M koncentracije. Alternativno, može biti korišten hidrazin u vodenoj otopini. Stupanj N-deacetilacije može varirati od oko 30-100%, zavisno od uvjeta. Poželjno je dostići oko 30-100% N-deacetilacije. N-deacetiliran produkt može biti izdvojen npr. hlađenjem, neutralizacijom, pročišćavanjem i liofilizacijom.
Prije postupka N-deacetilacije, prirodni polisaharid ima prosječnu molekularnu masu u području od oko 500 000 do 800 000 daltona. Kao rezultat N-decetilacije, nastaju fragmenti polisaharida koji imaju prosječnu molekularnu masu od oko 10 000 do 50 000 daltona.
N-decetilirani polisharidni fragmenti su tada N-acetilirani radi dobivanja odgovarajućeg N-acetiliranog produkta. N-acilacija se može izvesti otapanjem N-deacetiliranog polisaharida u vodenom mediju koja ima pH od oko 7,5 do 9,0, što je praćeno dodavanjem odgovarajućeg acil anhidrida, po izboru sa alkoholom, radi povećanja topljivosti, i hlađenjem ispod 10°C do završetka reakcije. Reakcijski medij se može pročistiti ako se želi, npr. dializom, a N-aciliran produkt se može izdvojiti tipično liofilizacijom. Reakcija se uglavnom završava tijekom oko 10-20 časova. Stupanj N-acilacije, kako je mjereno analitičkim tehnikama, obično 1H NMR, je bar 90% i vrlo blizak 100%. Reakcija N-aciliranja ne daje znatno smanjenje molekularne mase fragmenata.
Poželjno je prema ovom izumu, odabrati radi konjugcije N-aciliran materijal koji ima prosječnu molekularnu masu koja odgovara do oko 30-200 ostataka sialične kiseline. Ovo se obično ostvaruje putem gel filtracije N-acetiliranog GBMP korištenjem Ultragel (trgovačko ime), AcA 44 (promjer kuglica 60-140 µm) kolone i PBS kao eluenta.
Alternativno, može se koristiti membrana pogodne veličine.
N-aciliran materijal prosječne molekularne mase od 10 000 do 40 000 daltona, npr. 10 000-15 000 daltona je korišten za izum. Ovaj je dobiven sakupljanjem frakcija eluata kolone koja sadrži N-aciliran GHMP materijal koji ima prosječnu molekularnu masu tog ranga. N-aciliran materijal više prosječne molekulske mase, npr. u području od 3 000 do 40 000 daltona., pokazano je da je primjenjiv prema izumu.
Cjepiva izuma se dobivaju konjugiranom N-aciliranog polisaharida, sa imunološki pogodnim nosećim proteinom. Poželjno, sam noseći protein je imunogen. Primjeri pogodnih nosećih proteina su tetanus toksoid, difterija toksoid, unakrsno-reagirajući materijali (CRMs), poželjno CRM197, dobiven od Scčavo Ltd., Siena, Italy i bakterijski proteinski nosači, npr. proteini meningokokne vanjske membrane.
Može se koristiti neki način konjugacije radi konjugacije modificiranih polisaharidnih fragmenata sa nosećim proteinom. Poželjni postupak je onaj opisan u US patentu 4 356 170, npr. uvođenjem terminslnih aldehidnih grupa (preko oksidacije cis-vicinalnih hidroksilnih grupa) u N-aciliran polisaharid i povezivanjem aldehidnih grupa na proteinske amino grupe reduktivnom aminacijom. Polisaharid i protein se tako povezuju preko -CH2-NH-protein vezanja.
Jasno je međutim, da konjugatna cjepiva izuma nisu ograničena na ona dobivena preko reduktivne aminacije. Tako, cjepiva se također mogu dobiti konjugiranjem N-aciliranog polisaharida sa nosećim proteinom koristeći adipinski dihidrazidni držač udaljenosti, kao što je opisao Schneerson R., et al, Preparation, Characterization and Immunogenicity of Haemophilus influenzae type b Polysaccharide Protein Conjugates, J. Exp. Med. 1952, 361-476 (1980), i u US patentu 4 644 059 Lance K. Gordon-a. Alternativno, može se koristiti tehnologija dvojnog držača udaljenosti koju je razvio Merck, kao što su opisali Marburg S. et al, "Biomolecular Chemistry of Macromolecules: Synthesis of Bacterial Polysacharide Conjugates with Neisserin meninqitidis Membrane Protein", J. Am. Chem. Soc, 108, 5282-5287 (1986) ili moguće metodologije smanjenja krajeva kao što je dao Anderson u US patentu 4 513 514.
Dobiveni N-acilirani polisaharid-protein konjugati ne posjeduju značajno unakrsno vezanje i topljivi su u vodenim otopinama. Ovo pravljenje konjugata izuma dobro se kandidira za korištenje u cijepljenju. Dobiveni N-acilirani-polisaharid-protein konjugati izuma su testirani in vitro testovima na miševima, i općenito je pokazano da posjeduju poboljšane imunogene osobine u usporedbi sa N-propionskim-polisaharidom. Dodatno, uočeno je bitno smanjenje stvaranja unakrsno:reaktivnih antitijela. Prema ovom, vjeruje se da će cjepiva izuma biti korisna protiv meningitisa izazvanog grupom B N. meninqitidis ili E. coli K1 organizama. Od naročitog interesa se cjepiva za zaštitu djece koja su najpodložnija bakterijskom meningitisu.
Cjepiva izuma se obično dobivaju dispergiranjem konjugata u farmaceutski pogodnom nosaču, takvom kao fiziološka slana otopina ili druge injicirajuće tekućine. Cjepivo se daje parenteralno, npr. podkožno intraperitonalmo ili intramuskularno. Uobičajeni aditivi također mogu biti prisutni, npr. stabilizatori takvi kao laktoza ili sorbitol i adjuvanti takvi kao aluminij fosfat, hidroksid ili sulfat. Također je isto moguće za konjugat. Pogodna doza za djecu je obično u području od oko 5 do oko 25 mikrograma, ili oko 1 do 10 mikrograma na kilogram tjelesne mase.
Primjeri
Izum je ilustriran slijedećim neograničavajućim primjerima. N-acetil, N-propionil, N-butanoil, N-izobutanoil, N-pentanoil i N-heksanoil-GBMP konjugati su dobiveni radi procjene i rezultati su razmotreni na primjerima.
Materijali i postupci konjugata
a)Materijali
Propionski, butanoilski, izobutanoilski, pentanoilski i heksanoilski anhidridi zajedno sa kolominskom kiselinom dobiveni su od Sigma Chemicals Co., St. Louis, MO. Pošto je kolominska kiselina strukturno identična sa grupom B meningokoknog polisaharida (GBMP), ovdje je dalje označavana kao GBMP. Tetanus toksoid (TT) je dobiven iz Institute Armand Frappier, Lavel, Quebec, a njen monomerni oblik, korišten u svim konjugacijama je dobiven prevođenjem gornjeg preparata preko Bio-Gel (trgovačko ime) A 0,5 (200-400 mesha) kolonu (1,6x90 cm) (Bio-Rad, Richmond, CA) uravnoteženu i eluiranu sa 0,01 M fosfatnom puferiranom otopinom (PBS) (pH 7,4).
b) N-deacilacija GBMP-a
GHMP (Na+ sol) (1,0 g) se otopi u 5 ml 2 M NaOH, što je praćeno dodatkom NaBH4 (150 mg), otopina je grijana 6 sati na 110°C u posudi (60 mL) sa teflonskim čepom na fraf. Ovaj postupak je uglavnom kao što je opisano u J. ImmunoL, 134, 2651 (1985) i US patentu 4 727 136, oba od Harold J. Jemnings-a et al. Ohlađena otopina se tada iscrpno dijalizira prema destiliranoj vodi na 4°C, i liofilizira. Činjenica da je N-deacetiliran GBMP bio dobiven ne određuje se odsustvom metilacetamido signala (singlet na delta 2,07) u 1H-NMR spektru N-deacetiliranog GBMP-a.
c) N-acilacije GBMP-a
N-deacetiliran GBMP (1,0 g) se otopi u 50 ml 5% vodenog NaHCO3. U 5 individualnih alikvota (10 ml gornje otopine) doda se propionski, butanoilski, izobutanoilski ili heksanoilski anhidrid. Ovi reagensi se dodaju u 3x0,5 ml alikvotima tijekom vremenskog perioda od 3 sata na sobnoj temperaturi, dok se otopina održava na pH 8,0 sa 0,5 N NaOH. Metanol (0,5 ml) se dodaje simultano sa svakim dodavanjem anhidrida u cilju povećanja njihove topljivosti. Konačno, otopine se mešaju 16 sati na 4°C, iscrpno dijaliziraju prema destiliranoj vodi na 4°C, i liofiliziraju. Individualno se dobivaju N-propioniliran, N-butanoiliran, N-izobutanoiliran, N-pentanoiliran i N-heksanoiliran GBMP u prinosima iznad 90%. U svakom slučaju, uglavnom se završetak N-acilacije potvrđuje nestajanjem u odgovarajućem 1H-NMR spektru N-deaciliranog GBMP.
d) Sređivanje po veličini fragmenata različitih N-aciliranih GBMP
Gel filtracija, korištenjem Ultragel (trgovačko ime) AcA 44 (promjer kuglica 60-140 µm) kolona (IBF je korištena radi dobivanja željene prosječne molekularne mase N-aciliranog GBMP materijala. Frakcije sakupljene iz eluiranja kolone na KD 0,5-0,7 kako je izmjereno pomoću FLPC (vidi niže) su sakupljene, dializirane i liofilizirane. Ovo područje KD vrijednosti odgovara N-aciliranom GBMP od oko 30-50 ostataka sialične kiseline (10 000-15 000 daltona, tipično 12 000 daltona je prosječna molekularna masa). Frakcije u području Kd 0,2-0,4 koje odgovaraju fragmentima koje imaju prosječnu molekularnu masu u području od 30 000 do 40 000 daltona su također sakupljene i konjugirane. Tako, N-aciliran materijal eluiran u KD području 0,2-0,7 je naročito interesantan.
e) Polisaharidni konjugati
Terminalne aldehidne grupe se uvode u N-aciliran GBMP perjodatnom oksidacijom (vidi US patent br. 4 356 170). N-acilirani GBMP fragmenti naprijed su oksidirani u 0,1 M vodenom NaIO4 (natrij metaperjodat) (10 ml) tijekom 2 sata na sobnoj temperaturi u tamnom. Višak perjodata se tada razara dodatkom 1 ml etilen glikola i otopina se iscrpno dijalizira na 4°C i liofilizira. Korištenje NaBH4 u postupku N-deacilacije (izuzev za GBMP) daje transformaciju terminalnih ostataka sialinske kiseline svakog od N-aciliranog GBMP u otvoren lanac poliolnih ostataka. Ovaj tip ostatka je perjodatno osjetljiv (vidi J. Immunol., 121, 1011 (19811) i US patent 4 356 170 Harold J. Jennings et ah), što dovodi do uvođenja aldehidnih grupa u N-aciliran GHMP fragment na oba kraja.
Oksidirani fragmenti (100 mg) se otope u 0,1 M NaHCO3 (pH 8,1) puferu (2 ml) i otopini se doda TT (20 mg). Konačno, prateći dodatak natrij cijanoborohidrida (NaCNBH3) (40 mg), otopina se polako miješa na sobnoj temperaturi. Tok konjugacije se prati pomoću FPLC koristeći gel filtracijsku kolonu koja sadrži Superose (trgovačko ime) 12 HR10/30 (Pharmacia), izokratično na 1 ml/min u PBS puferu na pH 7,2, protein i N-aciliran GBMP fragment sa prate na 214 nm. Fragmenti imaju KD 0,23. Konjugacija se završava kada se sav TT se potroši što se određuje gubitkom pika u FPLC kromatogramu koji odgovara komponenti na KD 0,39. U većini slučajeva, konjugacija se završava za 2 dana ali se ostavi ukupno reakcijsko vrijeme od 4 dana. Potencijalno neizreagirane aldehidne grupe se konačno reduciraju sa natrij borohidridom (20 mg) prije gel filtriranja.
Polisaharidni TT konjugati se odvajaju od polisaharidnih fragmenata gel filtracijom koristeći Bio Gel A kolonu sa PBS kao eluentom. Eluent koji sadrži konjugat se dijalizira nasuprot destilirane vode i liofilizira. N-acilirani GBMP-TT konjugati sadrže od 12-30%, tipično 12-20% sialinske kiseline kao što je određeno pomoću rezorcinske metode opisane od Svenneholm-a L., Quantitative Estimation of Sialic Acids, II A Colorimetrir Resorcinol-Hydrochloric Acid Method, Biochem. Biophys. Acta, 24, 604 (1957). Ovo pokazuje da konjugati imaju molarni odnos polisaharida prema TT od 2-3:l,respektivno.
Imunizacija i imunoispitivanja
a) Postupci imunizacije
20 ženki bijelih CFI miševa (stare 8-10 tjedana) su imunizirane intraperitonalno (3 puta na trotjednim intervalima), svaka individualno sa N-aciliranim GBMT-TT konjugatom u Freundovom adjuvantu (FCA) (Difco, Detroit, MI). Svaka imunizacija sadržala je dovoljno konjugata (10-12 µg) da bi sadržala 2 µg sialinske kiseline. 11 dana poslije treće injekcije; miševi su bili malokrvni. Slijedeći testovi su izvršeni na serumu.
(b) Radioaktivno ispitivanje antigen vezanja
Ovo ispitivanje-se izvodi pomoću modifikacije Farrove tehnike koja koristi vanjsko /3H/-obilježen GBMP (Jenninqs H.J., et al.. Determinant Specificities of Groups B andb C polysaccharides of Neisseria meningitidis, J. Immunol., 134, 2651 (1985) ili /3H/-obilježen N-Pr-GHMP (Jennings H.J., et al, Unique Intermolecular Bactericidal Epitope) koji obuhvaća Homo-Sialo Polisaharidnu kapsulu na površini stanice grupe B Neisseria meningitidis i Escherichia coli K1; J. Immunol., 142, 3585-3591 (1989). Reakcijska smjesa za radioaktivno ispitivanje antigen-vezanja je dobivena miješanjem u Eppendorfovim polipropilenskim mikro testnim epruvetama 20 µl sakupljenog antiseruma iz grupa od 20 miševa imuniziranih svakog individualno sa N-aciliranim GBMP-TT konjugatom; razrijeđenog do 100 µl sa PBS, sa /3H/-obilježenim GBMP i /3H/obilježenim N-Pr-GBMP u 50 µl PBS-a. Posle inkubacije na 4°C 16 sati 150 µl zasićenog (na 4°C) amonij sulfata (pH 7,0) se doda u epruvete i ove se miješaju i ostave da stoje na 4°C 30 min. Epruvete su centrifugirane na 15000 okr/min 10 min, i iz cijevi su uzeta 2 alikvota od 130 µl. Alikvoti su izmiješani sa 2 µl vode i ksilen koji sadrži scintilant (ACS vodeni scintilant) i smjese su izbrojane u tekućem scintilacijskom brojaču. Rezultati su dani u tablici 1.
Tablica 1
Vezanje /3H/-obiIježenog N-Ac-GBMP za različite mišje anti-N- acil-GBMP-TT konjugirane serume
Antiserum
[image]
a izvedena su 4 eksperimenta vezanja na sakupljenim antiserumom iz 20 imuniziranih miševa.
Oznake korištene u tablici 1 i drugim tablicama:
N-Ac-, N-Pr, N-Bu, N-IsoBu, N-Pen, N-Hex znači N-acetil, N-propionil, N-butanoil-, N-izobutanoil-,N-pentanoil- i N-heksanoil. Brojevi 1, 2, 3 i 4 su rezultati 4 ponovljena eksperimenta. Tablica 1 pokazuje zaključno da N-Ac-GBMP (koji nosi epitop kao fetalni N-CAM) se manje veže na antiserum induciran pomoću N-Bu-GBMP, N-IsoBu-GBMP, N-Pen-GBMP i N-Hex-GBMP nego za onaj induciran pomoću N-Pr-GBMP. Iz ovoga
može se zaključiti iz tablice 1 da N-Bu-, N-IsoBu, N-Pen- i N-Hex- polisaharid-konjugati povisuju manje ukršteno-reaktivna antitijela od N-Pr-konjugata.
c) Kvantitativne taložne analize
Ovi eksperimenti se izvode pomoću metoda Kabat i Mayer-a, Experimental Immunochemistry Charles C. Thomas,Springfield, str 22 (1961). Alikvoti (100 µl) anti-N-acil GBMP-TT seruma (razrijeđeni 5 puta u PBS) reagiraju u epruvetama sa rastućim koncentracijama N-acetil (kolominska kiselina), N-propionil, N-butanoil, N-izobutanoil, N-pentanoil i N-heksanoil GBMP u ukupnom volumenu od 200 µl (podešeno sa PBS). Frakcije više molekularne mase ovih derivata se koriste u ovim eksperimentima i dobivaju se iz eluata Ultragel AcA kolone (KD 04 kako je izmjereno pomoću FPLC) prethodno korištene do veličine fragmenata od N-aceteliranog GBMP. Epruvete se inkubiraju na 4°C 4 dana sa dnevnim miješanjem centriraju se, i komina proteina antitjela se određuje metodom Lowry et al.,Protein Measurement with folin phenol reagent, J.Biol. Chem, 1933, 265 (1951).rezultati su dani u tablici 2.
Tablica 2
Taloženje mišjeg anti-N-acil-GBMP-TT seruma korištenjem različitih N-acil GBMP-a kao taložnih antigena
[image]
a maksimalna količina staloženih antitijela je izražena u mg/ml antiseruma
S obzirom na ukrštenu reaktivnost, prva kolona tablice 2 naznačava da samo malo ukršteno-reaktivnih antitijela nastaje pomoću N-Hex konjugata u usporedbi sa N-Pr-konjugatom. Također se može vidjeti da N-Pen konjugat daje manje ukršteno-reaktivnih antitijela od N-Pr-konjugata.
S obzirom na imunogenost, u terminima homologog odgovora, može se vidjeti iz tablice 2 da N-Bu-(2,60), N-Pen-(6,35) i N-Hex-(4,40) GHMP-TT konjugati su imunogeniji od N-Pr-GBMP analoga. (0,40).
d) Elisa
Izvori mikrotitracionih ploča (Fow Labe, Maddissauga, Ontario, Kanada) su prekriveni sa 10 µl/ml otopine bilo GMBP,N-Pr-GMBP ili N-Bu-GMBP-BSA konjugata u PBS-u (100µl/izvoru).Ploče su ostavljene 18 sati na 4OC i poslije prekrivanja isprane su sa 1% albuminskim serumom goveda u PBS-u tijekom 10min. na sobnoj temperaturi (blokirajući stupanj). Izvori su tada ispunjeni sa 100 µl serijskih-10-strukih razrjeđenja u PBS-u anti-mišjeg-N-acil GBMP-TT konjugatnog seruma i ploče su inkubirane 1 sat na sobnoj temperaturi. Posle ispiranja sa SBT, ploče su inkubirane 1 sat na sobnoj temperaturi sa 50 µl odgovarajuće razrijeđenih kozjih antimišjih imunoglobulinskih peroksidazno obilježenih konjugata (Kirkegard and Perry Laboratories), tada su sadržaji izvora usisani i ploče su isprane 5 puta sa SBT. Konačno se doda svakom izvoru 50 µl tetrametilen plavo-peroksidaznog substrata (TMB) (Kirkegard and Perry Laboratories) i poslije 10 minuta su ispitivani sa Multiscan spektrofotometrom (Flow Laboratories, Missi-ssauga, Ont.) Rezultati su dani u tablici 3.
Tablica 3,
ELISA titracije sakupljenog mišjeg anti-N-acil-GBMP-TT konjugatnim serumom nasuprot N-acil-GBMP-BSA konjugata
[image]
a titar (GM)=recipročno razrijeđenje na 50% maksimuma apsorbancije na 450 nm.
b N-acil specifični antiserum induciran u miševima pomoću homolognih N-acil-GBMP-TT konjugata.
Sa obzirom na ukrštenu reaktivnost, može se vidjeti iz tablice 3 da N-Bu-GBMP-TT konjugat povećava manje ukršteno-reaktivna antitijela sa obzirom na N-Ac-GBMP (1000) od N-Pr-GBMP-TT konjugata (7800). Razlog za ovo je što se GBMP veže manje na antitijelo inducirano sa N-Pr-GBMP-TT konjugatom nego ono inducirano sa N-Bu-GBMP-TT konjugatom. Sličan komentar se primjenjuje sa obzirom na N-IsoBut-GBMP-TT konjugatom. S obzirom na imunogenost; N-Bu konjugat je imunogeniji od N-Pr analoga, kao što je pokazano pomoću homologno vezujućih titara od 52000 (N-Bu) i 40000 (N-Pr).
e) radioaktivno ispitivanje inhibicije vezivanja
Rastuća koncentracija veće molekularne mase N-acil GBMP inhibitora u PBS (80 µl) se doda u 20 µl mišjeg anti-N-Pr-GBMP-TT konjugatnog seruma, količina dovoljna da veže 50% (3H)-obilježenog-GBMP u odsutnosti inhibitora. Epruvete su inkubirane 1 sat na 37°C i doda se 50 µl (3H)-obilježenog N-Pr-GBMP u PBS-u. Poslije blagog miješanja, epruvete se inkubiraju na 4°C 16 sati i ispitivanja se izvode isto kao što je opisano prethodno za radioaktivno ispitivanje antigenskog vezanja. Izračunat je postotak inhibicije korištenjem slijedeće formule:
% inhibicije =100x /(cpm sa inhibitorom - cpm bez inhibitora)/(cpm bez antitijela - cpm bez inhibitora)/
Rezultati su dani u tablici 4. Tablica 4
Inhibicija vezanja /3H/-obilježenog N-Pr-GBMP na mišji anti-N-Pr-GBMP-TT konjugat inducirana IgG2a> IgG2b (A)a i IgG1(B)a antitijela
[image]
a. Ove frakcije mišjeg poliklonskog anti-N-Pr-GBMP-TT seruma, su opisane u Jennings et al, J. Imrhunol., 142, 3585-3591 (1989)
b. Mikrogrami inhibitora za dobivanje 50% inhibicije
Bakterijska ispitivanja
Ova ispitivanja su izvedena pomoću metode opisane od Jennings-a et al, J. Exp. Med., 165, 1207-1211 (1987).
Neisseria meningitidis vrsta B (M 986) je korištena u ovim ispitivanjima. Rezultati su dani u tablici 5.
Tablica 5
Vezanje /3H/obilježenog N-Pr-GBMP na različite anti-N-acil-GBMP-TT konjugatne serume i bakterijski titri odgovarajućih antiseruma
[image]
a μl antiseruma (razrijeđeno 5-erostruko sa PBS) potrebni za 50% vezanja.
b Eksperiment razrjeđivanja: jedna razlika razrjeđivanja, npr. 128 uspoređeno sa 64, je unutar eksperimentalne greške.
Tablica 4 ilustrira da je N-Bu-GBMP dobar inhibitor isto kao i N-Pr-GBMP za vezanje zadnjeg na vlastita homologna antitijela. Stoga, korištenje N-Bu-GBMP umjesto N-Pr-GBMP ne daje znatan gubitak osobina pokazanih pomoću N-Pr-GBMP. Tablica 5 pokazuje da se N-Bu-GBMP veže isto dobro kao i N-Pr-GBMP na antitijela inducirana pomoću N-Bu-GBMP-TT i N-Pr-GBMP-TT konjugate dajući slične bakterijske titre. Ova činjenica naznačava ekvivalenciju N-Bu-, N-IsoBu- i N-Pen-GBMP na N-Pr-GBMP u svojoj sposobnosti na majmunski bakterijski epitop na površini grupe B meningococci.
Claims (21)
1. Modificiran polisaharid B grupe Neisseria meningitidis-a, naznačen time koji ima ostatak sialinske kiseline N-acetil grupe zamijenjen sa C4-8 acil grupom.
2. E. coli K1 kapsularni polisaharid, naznačen time koji ima ostatak sialinske kiseline N-acetil grupe zamijenjen sa C4-8acil grupom
3. Modificiran polisaharid prema zahtjevu 1, naznačen time gdje se C4-8 acil grupa bira iz grupe koju čine n-butil, izobutil, n-pentil, n-heksil, n-heptil i n-oktil
4. Modificiran polisaharid prema zahtjevu 3, naznačen time gdje se acil grupa bira iz grupe koju čine n-butil, izo-butil, n-pentil i n-heksil
5. Modificiran polisaharid prema zahtjev 2 naznačen time gdje se C4-8 grupa bira iz grupe koju čine n-butil, izo-butil, n-pentil, n-heksil, n-heptil i n-oktil.
6. Modificiran polisaharid prema zahtjevu 5, naznačen time gdje se acil grupa bira iz grupe koju čine n-butil, izo-butil, n-pentil i n-heksil.
7. Modificiran polisaharid prema zahtjevu 1, naznačen time koji ima prosječnu molekularnu masu u području 10 000 do 50 000.
8. Modificiran polisaharid prema zahtjevu 2, naznačen time koji ima prosječnu molekularnu masu u području od 10 000 do 50 000.
9. Modificiran polisaharid prema zahtjevu 1, naznačen time koji ima stupanj N-aciliranja od oko 90-100%.
10. Modificiran polisaharid prema zahtjevu 2, naznačen time koji ima stupanj N-aciliranja od oko 90-100%.
11. Antigeni konjugat koji obuhvaća modificiranu grupu B polisaharida Neisseria meningitidis-a, naznačen time koji ima ostatak sialinske kiseline N-acetil grupe zamijenjen sa N-C4-C8-acil grupe konjugiran na imunogeno pogodan protein.
12. Konjugat prema zahtjevu 11, naznačen time gdje se acil grupa bira iz grupe koju čine n-butil, izo-butil, pentil, heksil, heptil i oktil.
13. Konjugat prema zahtjevu 12, naznačen time gdje se acil grupa bira iz grupe koju čine n-butil, izo-butil, pentil i heksil.
14. Konjugat prema zahtjevu 11, naznačen time gdje se protein bira iz grupe koju čine tetanus toksoid, difteria toksoid, unakrsno reagirajući materijal (CRM) i bakterijski proteinski nosač.
15. Konjugat prema zahtjevu 11, naznačen time gdje su protein i polisharid kovalento vezani preko -CH2-NH-protein vezanja.
16. Konjugat prema zahtjevu 14, naznačen time gdje CRM je CRM197.
17. Cjepivo, naznačeno time koje obuhvaća konjugat zahtjeva 11 i farmaceutski prihvatljiv injekcijski nosač.
18. Cjepivo prema zahtjevu 11, naznačeno time što obuhvaća i fiziološki prihvatljiv adjuvant.
19. Cjepivo prema zahtjevu 18, naznačeno time gdje se spomenuti adjuvant bira iz grupe koju čine aluminij hidroksid, aluminij fosfat i aluminij sulfat.
20. Postupak imuniziranja sisavac protiv N. meningitidis i E. coli Kl infekcija, naznačen time spomenuti postupa koji obuhvaća stupanj parenteralnog davanja jedinci sisavaca spomenutih infekcija terapeutski djelotovorne količine cjepiva kao što je zahtijevano u zahtjevu 17.
21 Postupak prema zahtjevu 20, naznačen time gdje se cjepivo daje u doznoj količini od oko 1-25 mikrograma na kilogram tjelesne mase.
21. Gama-globulinska frakcija sposobna za pasivnu zaštitu protiv meningitisa izazvanog pomoću grupe B N. meningitidis i E. coli K1, naznačena time gdje se spomenuta gama-globulinska frakcija dobiva imuniziranjem sisavaca sa cjepivom kao što je zahtijevano u zahtjevu 17 i izdvajanje gama-globulina iz spomenutog sisavca.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44819589A | 1989-12-14 | 1989-12-14 | |
| YU24391A YU24391A (sh) | 1989-12-14 | 1990-12-14 | Poboljšana meningokokna polisaharid kon-jugovana vakcina |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HRP920872A2 true HRP920872A2 (en) | 1997-06-30 |
Family
ID=23779371
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HRP-243/91A HRP920872A2 (en) | 1989-12-14 | 1992-10-02 | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5576002A (hr) |
| EP (1) | EP0504202B1 (hr) |
| JP (1) | JP2637845B2 (hr) |
| KR (1) | KR0158436B1 (hr) |
| CN (4) | CN1049223C (hr) |
| AR (1) | AR243934A1 (hr) |
| AT (1) | ATE121947T1 (hr) |
| AU (1) | AU641715B2 (hr) |
| BR (1) | BR9007917A (hr) |
| CA (1) | CA2071811C (hr) |
| CZ (1) | CZ283530B6 (hr) |
| DE (1) | DE69019164T2 (hr) |
| DK (1) | DK0504202T3 (hr) |
| ES (1) | ES2071288T3 (hr) |
| FI (2) | FI104539B (hr) |
| HR (1) | HRP920872A2 (hr) |
| HU (2) | HU9201966D0 (hr) |
| IE (1) | IE68414B1 (hr) |
| IL (1) | IL96676A (hr) |
| IN (1) | IN171747B (hr) |
| NO (2) | NO305275B1 (hr) |
| NZ (1) | NZ236471A (hr) |
| PH (1) | PH30305A (hr) |
| PL (2) | PL166659B1 (hr) |
| RO (1) | RO111416B1 (hr) |
| RU (1) | RU2105568C1 (hr) |
| SI (1) | SI20008B (hr) |
| WO (1) | WO1991008772A1 (hr) |
| YU (1) | YU24391A (hr) |
| ZA (1) | ZA9010065B (hr) |
Families Citing this family (47)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5648241A (en) * | 1989-09-15 | 1997-07-15 | The General Hospital Corporation | Conjugate vaccine against group B streptococcus |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
| ES2160601T3 (es) * | 1992-09-24 | 2001-11-16 | Brigham & Womens Hospital | Vacunas de conjugado de polisacaridos de estreptococos del grupo b tipo ii y tipo v-proteina. |
| US5439808A (en) * | 1993-07-23 | 1995-08-08 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| US6153406A (en) * | 1993-07-23 | 2000-11-28 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane protein P2 from Haemophilus influenzae type B |
| US5700787A (en) * | 1994-09-02 | 1997-12-23 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5679654A (en) * | 1994-09-02 | 1997-10-21 | Brigham & Women's Hospital, Inc. | Capsular polysaccharide immunomodulator |
| US5747287A (en) * | 1995-04-28 | 1998-05-05 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| EP1090642B8 (en) * | 1995-06-07 | 2010-08-11 | GlaxoSmithKline Biologicals s.a. | Vaccines comprising a polysaccharide antigen-carrier protein conjugate and free carrier protein |
| US5811102A (en) | 1995-06-07 | 1998-09-22 | National Research Council Of Canada | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines |
| US6284884B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-09-04 | North American Vaccine, Inc. | Antigenic group B streptococcus type II and type III polysaccharide fragments having a 2,5-anhydro-D-mannose terminal structure and conjugate vaccine thereof |
| ZA97248B (en) * | 1996-01-18 | 1997-07-18 | Rohm & Haas | Method for identifying and quantifying polymers utilizing immunoassay techniques |
| ATE252602T1 (de) | 1996-08-27 | 2003-11-15 | Chiron Corp | Meningokokkus b-epitop ausbildende monoklonale antikoerper und deren verwendung zur herstellung von impfstoffzusammenstellungen |
| ATE208629T1 (de) | 1996-08-27 | 2001-11-15 | Chiron Corp | Neisseria meningitidis serogruppe b glykokonjugate und verfahren zu deren verwendung |
| US6426074B1 (en) * | 1997-03-19 | 2002-07-30 | The Brigham And Women's Hospital Inc. | Group B Streptococcus vaccine |
| EP0994723A1 (en) | 1997-06-24 | 2000-04-26 | Chiron Corporation | Methods of immunizing adults using anti-meningococcal vaccine compositions |
| PT1630168E (pt) | 1997-08-27 | 2011-07-20 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Compostos miméticos moleculares de péptidos de meningococos do serogrupo b |
| ES2611464T3 (es) | 1997-12-23 | 2017-05-09 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | Polisacárido capsular bacteriano para su uso como vacuna o para su unión a proteínas en vacunas de conjugados |
| NZ509986A (en) * | 1998-08-19 | 2003-10-31 | Baxter Healthcare S | Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide and oligosaccharide protein conjugates as vaccines |
| US6436653B1 (en) | 1998-12-15 | 2002-08-20 | Exiqon A/S | Method for introduction of reporter groups into bacterial lipopolysaccharide-derived carbohydrates and the subsequent coupling of such derivatives onto solid surfaces |
| US7083777B1 (en) * | 1999-04-02 | 2006-08-01 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Immunomodulating polymers |
| US6518037B2 (en) * | 1999-11-12 | 2003-02-11 | University Of Iowa Research Foundation | Two-component system that controls bacterial membrane synthesis |
| GB9928196D0 (en) * | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
| SV2003000753A (es) | 2000-12-05 | 2003-06-16 | Brigham & Womens Hospital | Uso de polisacaridos zwitterionicos para la especifica modulacion del progreso inmunologico |
| RU2322451C2 (ru) | 2001-04-17 | 2008-04-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс, Инк. | Молекулярные миметики эпитопов менингококка в, которые вызывают выработку функционально активных антител |
| GB0115176D0 (en) * | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| GB0121591D0 (en) * | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| DK1490409T3 (da) * | 2002-03-26 | 2009-03-23 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modificerede saccharider med forbedret stabilitet i vand |
| WO2004089407A2 (en) * | 2003-03-31 | 2004-10-21 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Zwitterionic immunomodulators for the treatment of asthma and allergy |
| US7731967B2 (en) | 2003-04-30 | 2010-06-08 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Compositions for inducing immune responses |
| JP4566194B2 (ja) | 2003-08-12 | 2010-10-20 | リポクセン テクノロジーズ リミテッド | タンパク質の誘導体化及び結合のためのシアル酸誘導体 |
| WO2006002402A2 (en) | 2004-06-23 | 2006-01-05 | Children's Hospital & Research Center At Oakland | Polysaccharide derivatives and uses in induction of an immune response |
| US8148335B2 (en) | 2004-06-23 | 2012-04-03 | Children's Hospital & Research Center Oakland | De-N-acetyl sialic acid antigens, antibodies thereto, and methods of use in cancer therapy |
| GB0428394D0 (en) * | 2004-12-24 | 2005-02-02 | Chiron Srl | Saccharide conjugate vaccines |
| US8329184B2 (en) | 2005-06-27 | 2012-12-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Process for manufacturing vaccines |
| US8206726B2 (en) | 2006-02-06 | 2012-06-26 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Zwitterionic polysaccharides for promotion of immune system maturation and health |
| GB0611914D0 (en) | 2006-06-15 | 2006-07-26 | Teti Giuseppe | Peptides that mimic non-human cross-reactive protective epitopes of the group Bmeningococcal capsulsar polysaccharide |
| EP1872791A1 (en) | 2006-06-30 | 2008-01-02 | Institut Pasteur | Use of bacterial polysaccharides for biofilm inhibition |
| US20100189740A1 (en) * | 2007-06-20 | 2010-07-29 | Francis Michon | Modified polysaccharides for conjugate vaccines |
| ES2664753T3 (es) | 2007-12-07 | 2018-04-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composiciones de inducción de respuestas inmunes |
| WO2010083477A2 (en) | 2009-01-16 | 2010-07-22 | University Of Maryland, Baltimore | Broad spectrum vaccine against non-typhoidal salmonella |
| WO2013009945A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-01-17 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Lipid-containing psa compositions, methods of isolation and methods of use thereof |
| EP2752403A1 (de) * | 2013-01-08 | 2014-07-09 | Sika Technology AG | Amin für emissionsarme Epoxidharz-Produkte |
| WO2017031431A1 (en) | 2015-08-19 | 2017-02-23 | President And Fellows Of Harvard College | Lipidated psa compositions and methods |
| US11491181B2 (en) | 2016-07-15 | 2022-11-08 | President And Fellows Of Harvard College | Glycolipid compositions and methods of use |
| PE20191107A1 (es) * | 2017-01-31 | 2019-08-26 | Pfizer | Composiciones de neisseria meningitidis y metodos respectivos |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4057685A (en) * | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
| US4356170A (en) * | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
| US4673574A (en) * | 1981-08-31 | 1987-06-16 | Anderson Porter W | Immunogenic conjugates |
| US4644059A (en) * | 1982-07-06 | 1987-02-17 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae B polysaccharide-diptheria toxoid conjugate vaccine |
| US4619828A (en) * | 1982-07-06 | 1986-10-28 | Connaught Laboratories, Inc. | Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines |
| US4496538A (en) * | 1982-07-06 | 1985-01-29 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine |
| US4695624A (en) * | 1984-05-10 | 1987-09-22 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency |
| US4727136A (en) * | 1985-10-01 | 1988-02-23 | Canadian Patents And Development Ltd. | Modified meningococcal group B polysaccharide for conjugate vaccine |
| AU641715B2 (en) * | 1989-12-14 | 1993-09-30 | National Research Council Of Canada | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine |
-
1990
- 1990-12-13 AU AU68987/91A patent/AU641715B2/en not_active Ceased
- 1990-12-13 RO RO92-0789A patent/RO111416B1/ro unknown
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU9201966D0/hu unknown
- 1990-12-13 RU SU5052391A patent/RU2105568C1/ru active
- 1990-12-13 HU HU9201966A patent/HU218146B/hu unknown
- 1990-12-13 BR BR909007917A patent/BR9007917A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-12-13 AT AT91900142T patent/ATE121947T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 CA CA002071811A patent/CA2071811C/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 DE DE69019164T patent/DE69019164T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-13 KR KR1019920701403A patent/KR0158436B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-12-13 DK DK91900142.0T patent/DK0504202T3/da active
- 1990-12-13 WO PCT/CA1990/000437 patent/WO1991008772A1/en active IP Right Grant
- 1990-12-13 EP EP91900142A patent/EP0504202B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 ES ES91900142T patent/ES2071288T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-13 JP JP3500908A patent/JP2637845B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-14 IL IL9667690A patent/IL96676A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 CN CN90110444A patent/CN1049223C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-14 SI SI9110243A patent/SI20008B/sl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 AR AR90318627A patent/AR243934A1/es active
- 1990-12-14 PL PL90302476A patent/PL166659B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 IN IN1033/CAL/90A patent/IN171747B/en unknown
- 1990-12-14 ZA ZA9010065A patent/ZA9010065B/xx unknown
- 1990-12-14 IE IE451390A patent/IE68414B1/en not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 YU YU24391A patent/YU24391A/sh unknown
- 1990-12-14 PL PL90288271A patent/PL166035B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1990-12-14 PH PH41724A patent/PH30305A/en unknown
- 1990-12-14 NZ NZ236471A patent/NZ236471A/en unknown
- 1990-12-14 CZ CS906284A patent/CZ283530B6/cs unknown
-
1992
- 1992-06-12 FI FI922737A patent/FI104539B/fi active
- 1992-06-12 NO NO922316A patent/NO305275B1/no unknown
- 1992-10-02 HR HRP-243/91A patent/HRP920872A2/hr not_active Application Discontinuation
-
1993
- 1993-11-22 CN CN93114764A patent/CN1072506C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93119467A patent/CN1036504C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1993-11-22 CN CN93114763A patent/CN1036522C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-05-05 US US08/238,600 patent/US5576002A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-06-07 US US08/485,623 patent/US5683699A/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-07-17 NO NO973311A patent/NO307835B1/no unknown
- 1997-10-17 US US08/953,771 patent/US5902586A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-09-09 FI FI991917A patent/FI19991917A/fi unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HRP920872A2 (en) | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine | |
| JP4656728B2 (ja) | ブドウ球菌抗原及びワクチン | |
| JP4171068B2 (ja) | 修飾したメニンゴコッカスのポリサッカライドを結合したワクチン | |
| AU2005316864B2 (en) | Glycoconjugate vaccines containing peptidoglycan | |
| JP4295431B2 (ja) | 髄膜炎菌性ｂエピトープの分子模倣物 | |
| US7595307B2 (en) | Polysaccharide derivatives and uses in induction of an immune response | |
| JP2009227680A (ja) | 腸球菌抗原およびワクチン | |
| JP2004505885A (ja) | Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドを用いて産生されたワクチンとして有用な免疫原性β−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1OB | Publication of a patent application | ||
| AIPI | Request for the grant of a patent on the basis of a substantive examination of a patent application | ||
| OBST | Application withdrawn |