PL184125B1 - Modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, skoniugowana cząsteczka, kompozycja szczepionki, surowica odpornościowa oraz zastosowanie skoniugowanej cząsteczki do wytwarzania szczepionki - Google Patents
Modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, skoniugowana cząsteczka, kompozycja szczepionki, surowica odpornościowa oraz zastosowanie skoniugowanej cząsteczki do wytwarzania szczepionkiInfo
- Publication number
- PL184125B1 PL184125B1 PL96323862A PL32386296A PL184125B1 PL 184125 B1 PL184125 B1 PL 184125B1 PL 96323862 A PL96323862 A PL 96323862A PL 32386296 A PL32386296 A PL 32386296A PL 184125 B1 PL184125 B1 PL 184125B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- polysaccharide
- protein
- group
- meningococcal
- unsaturated
- Prior art date
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 156
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 154
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 154
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 98
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 98
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 claims abstract description 27
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 23
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 13
- 241000588677 Neisseria meningitidis serogroup B Species 0.000 claims abstract description 12
- 241000617590 Escherichia coli K1 Species 0.000 claims abstract description 10
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 7
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 39
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 21
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 19
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 18
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 15
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 claims description 13
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 9
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 claims description 8
- -1 acyl carbon Chemical compound 0.000 claims description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 8
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 7
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 7
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 7
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 6
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 claims description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 4
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims 2
- 101100004408 Arabidopsis thaliana BIG gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100485279 Drosophila melanogaster emb gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100029095 Exportin-1 Human genes 0.000 claims 1
- 206010027249 Meningitis meningococcal Diseases 0.000 claims 1
- 206010058780 Meningitis neonatal Diseases 0.000 claims 1
- 201000010924 Meningococcal meningitis Diseases 0.000 claims 1
- 101100485284 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) CRM1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 101150094313 XPO1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 claims 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 108700002148 exportin 1 Proteins 0.000 claims 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 claims 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 claims 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims 1
- 230000008927 postnatal maturation Effects 0.000 claims 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 15
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 15
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 15
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006181 N-acylation Effects 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 239000007330 chocolate agar Substances 0.000 description 3
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 3
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N acryloyl chloride Chemical compound ClC(=O)C=C HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N adipic acid dihydrazide Chemical compound NNC(=O)CCCCC(=O)NN IBVAQQYNSHJXBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910000000 metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004692 metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229940052778 neisseria meningitidis Drugs 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/08—Clostridium, e.g. Clostridium tetani
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/831—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving capsular polysaccharide of bacterium, e.g. polyribosyl ribitol phosphate
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
1. Modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, w którym grupy N-acetylowe zostaly zastapione pochodna N-acylowa o wzorze 1: w którym R1 oznacza nienasycona grupe C3-C4-alkilowa zawierajaca co najmniej jedno podwójne wiazanie. 10. Skoniugowana czasteczka zawierajaca co najmniej jeden polisacharyd majacy budowe modyfikowanego polisacharydu menin- gokokowego Neisseria meningitidis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastapieniu grup N -acetylowych polisacharydu nienasycony- mi grupami acylowymi o wzorze 2. w którym R2 oznacza nienasycona grupe alkilowa zawierajaca co najmniej jedno podwójne wiazanie, który to polisacharyd jest kowa- lencyjnie zwiazany z bialkiem. 25. Kompozycja szczepionki, zawierajaca skoniugowana czasteczke modyfikowanego polisacharydu meningokokowego grupy B, znamienna tym, ze zawiera nienasycona C3-5-N-acylowa pochodna fragmentu polisacharydu m eningokokowego grupy B, kow alencyj- nie zw iazana z bialkiem. 29. Surowica odpornosciowa, znamienna tym, ze zawiera przeciwciala wzbudzone u ssaka immunizowanego skoniugowana czasteczka zawierajaca co najmniej jeden polisacharyd majacy budowe modyfikowanego polisacharydu meningokokowego Neisseria meningiti- dis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastapieniu grup N-acetylowych polisacharydu nienasyconymi grupami acylowymi o wzorze 2: 45. Zastosowanie skoniugowanej czasteczki zawierajacej co najmniej jeden polisacharyd majacy budowe modyfikowanego polisacha- rydu meningokokowego Neisseria meningitidis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastapieniu grup N-acetylowych polisacharydu nienasyconymi grupami acylowymi o wzorze 2: w którym R2 oznacza nienasycona grupe alkilowa zawierajaca co najmniej jedno podwójne wiazanie, który to polisacharyd jest kowalency- jnie zwiazany z bialkiem do wytwarzania szczepionki do szczepienia ssaka przeciwko infekcjom Neisseria meningitidis i Escherichia coli K 1. PL PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku są chemicznie modyfikowane polisacharydy grupy B z Neisseria meningitidis. Przedmiotem wynalazku sąrównież szczepionki, w których te modyfikowane polisacharydy są skoniugowane z nośnikiem białkowym.
Wynalazek dotyczy zwłaszcza nienasyconych, N-acylowych pochodnych polisacharydów grupy B z N. meningitidis, koniugatów tych nienasyconych, N-acylowych pochodnych polisacharydów związanych kowalencyjnie z białkami, kompozycji farmaceutycznych zawierających skoniugowane cząsteczki nienasyconych, N-acylowych pochodnych polisacharydów N. meningitidis i zastosowania tych kompozycji jako szczepionek.
W jednym z aspektów, przedmiotem wynalazku jest modyfikowany polisacharyd grupy B z N. meningitidis z grupami N-acetylowymi (C2) reszty kwasu sialowego wymienionymi na nienasycone grupy C3_5-acylowe.
W innym aspekcie, przedmiotem wynalazku jest koniugat antygenowy zawierający nienasycone C3-5-N-acylowe pochodne polisacharydowe skoniugowane z odpowiednim immunologicznie białkiem, wykazujący wzmocnioną immunogenność w porównaniu do polisacharydów natywnych i obniżonązdolność wzbudzania przeciwciał reagujących krzyżowo, oraz zastosowanie takiego koniugatu do wytwarzania szczepionki do szczepienia ssaka przeciwko infekcjom Neisseria meningitidis i Escherichia coli K1.
W następnym aspekcie, przedmiotem wynalazku jest kompozycja szczepionki zawierająca koniugat nienasyconej, N-acylowej pochodnej polisacharydu z białkiem w połączeniu z odpowiednim nośnikiem albo rozcieńczalnikiem. Szczepionki według wynalazku mogąrównież zawierać skuteczną leczniczo ilość adiuwanta dopuszczonego do stosowania u ludzi, np. fosforanu glinu, wodorotlenku glinu albo stearylo-tyrozyny.
Kompozycja szczepionki według wynalazku ma zastosowanie do uodporniania ssaków przed zakażeniami N. meningitidis i E. coli K1. Uodpornianie to polega na parenteralnym podaniu ssakom podlegającym takim zakażeniom, w tym również ludziom, skutecznej immunologicznie ilości szczepionki według wynalazku. Na ogół, szczepionkę podaje się w ilości od około 1 pg do 50 pg/kg masy ciała, np. 5 do 25 pg/kg masy ciała.
W następnym aspekcie, przedmiotem wynalazkujest surowica i frakcja gamma-globuliny, nadająca ochronę przed zapaleniem opon wywołanym przez N. meningitidis grupy B i E. coli K1. Frakcję tę wytwarza się przez immunizację ssaka szczepionką według wynalazku i korzystnie wydzielenie frakcji gamma-globuliny z surowicy odpornościowej. Frakcję tę podaje się następnie osobnikowi w celu nadania ochrony przed nadchodzącym zakażeniem bądź w celu leczenia istniejącego zakażenia powyższymi mikroorganizmami. Z powyższego opisu jasno wynika, że immunogenne, skoniugowane szczepionki według wynalazku są źródłem leczniczej antysurowicy dzięki ich korzystnej immunogenności i minimalnym właściwościom wzbudzania przeciwciał reagujących krzyżowo. Koniugaty według wynalazku będą również użyteczne do wytwarzania przeciwciał monoklonalnych i być może, przeciwciał anty-idiotypowych.
184 125
Ί
Stwierdziliśmy, że większość bakteriobójczych i ochronnych przeciwciał, których wytwarzanie jest pobudzane przez koniugat N-Pr-GBMP-białko, cytowany powyżej w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 727 136 (Jennings i wsp.) nie jest związana z reagującymi krzyżowo przeciwciałami GBMP. W rzeczywistości, większość aktywności ochronnej jest zawarta w populacji swoistych wobec N-Pr-GBMP przeciwciał, które nie reagują krzyżowo z GBMP. W świetle tych danych przypuszcza się, że N-Pr-GBMP naśladuje unikalny epitop bakteryjny na powierzchni meningokoków grupy B.
Niniejszy wynalazek oparty jest na odkryciu możliwości zsyntetyzowania modyfikowanych chemicznie GBMP, które naśladują bakteryjny epitop i które w formie skoniugowanej nie tylko wykazują wzmożoną immunogenność lecz również w zasadzie nie powodują wzbudzania przeciwciał, które reagują krzyżowo z GBMP.
W dochodzeniu do niniejszego wynalazku zsyntetyzowano różne chemicznie modyfikowane GBMP i koniugowano je indywidualnie z białkiem, następnie wstrzykiwano te koniugaty myszom i porównywano skutki z tymi, jakie obserwowano dla koniugatu N-Pr-GBMP z białkiem. Nieoczekiwanie okazało się, że obecność wiązania nienasyconego w reszcie N-acylowej daje szczególnie immunogenne koniugaty.
Te i inne cechy wynalazku będą lepiej zrozumiałe po zapoznaniu się z poniższym szczegółowym opisem szczególnych rozwiązań według wynalazku. Zakres wynalazku jest ograniczony jedynie załączonymi zastrzeżeniami.
Przedmiotem wynalazku jest nowa grupa nienasyconych N-acylowych pochodnych polisacharydów Neisseria meningitidis grupy B, nowe skoniugowane cząsteczki (koniugaty) nienasyconych N-acylowych pochodnych polisacharydów grupy B, kompozycje szczepionki zawierające skoniugowane cząsteczki fragmentów nienasyconych N-acylowych pochodnych polisacharydów Neisseria meningitidis grupy B związanych kowalencyjnie z białkami, zastosowanie tych skoniugowanych cząsteczek do wytwarzania szczepionki oraz surowica odpornościowa wzbudzona u ssaka immunizowanego przez podawanie takich skoniugowanych cząsteczek.
Przedmiotem wynalazkujest modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, w którym grupy N-acetylowe zostały zastąpione pochodną N-acylową o wzorze 1:
w którym R, oznacza nienasyconą grupę C3-C4-alkilową zawierającą co najmniej jedno podwójne wiązanie.
W jednej z postaci wynalazku, R, we wzorze 1 oznacza trzy albo cztery atomy węgla i dwa niesąsiadujące podwójne wiązania.
W innej postaci wynalazku, R! we wzorze 1 oznacza dwa, trzy albo cztery atomy węgla a węgiel najbardziej odległy od węgla acylowego jest związany przez podwójne wiązanie.
Szczególnymi ale nieogranicząjącymi przykładami modyfikowanych N-acylowych pochodnych polisacharydów meningokokowych grupy B o wzorze 1 użytecznymi w niniejszym wynalazku są pochodne następujące:
N-pentenoilowa (CH2=CH-CH2-CH2-CONH-), ch2=ch—ch2—ch2—Cx XNH
18-4 125 i N-krotonoilowa (3-butenoilowa; CH2=CH-CH2-CONH-),
CH,=CH—CHNH
Polisacharyd meningokokowy z grupy B izoluje się z N. meningitidis w znany sposób. W jednym ze sposobów, prowadzi się wzrost meningokoków grupy B (szczepu 981B) w temperaturze 37°C w fermentorze, z użyciem 30 g odwodnionej pożywki Todd Hewitt Broth (Difco Laboratories, Detroit, Michigan) na litr wody destylowanej. Przed wzrostem prowadzonym w fermentorze, liofilizowany szczep hoduje się w naczyniu cylindrycznym w temperaturze 37°C na płytkach z agarem zawierającym 5% (objętościowych) krwi owczej (Sheep's Blood Agar; Difco Laboratories, Detroit, Michigan). Następnie bakterie przenosi się do litra pożywki Todd Hewitt Broth (jak wyżej) w kolbie Erlenmeyera i miesza się w temperaturze 37°C przez 7 godzin z szybkością 190 obrotów/minutę. Inoculum przenosi się do fermentora. Po wzroście w fermentorze (16 godzin) bakterie zabija się przez dodanie formaliny do końcowego stężenia 0,75%. Bakterie usuwa się przez ciągłe wirowanie a polisacharyd meningokokowy grupy B izoluje się z supematantu i oczyszcza w sposób zasadniczo podobny do opisanego przez Bundle'ego i wsp. (J. Biol. Chem. 249,4797-480L 1974), z tą różnicą, że białko poddaje się ekstrakcji przez mieszanie roztworu surowego polisacharydu z zimnym (4°C) 95% fenolem zamiast fenolem gorącym (50-60°C). Ten ostatni sposób zapewnia uzyskanie formy GBMP o wysokiej masie cząsteczkowej.
Wzrost E. coli (018:K1 :H7)(NRCC 4283) prowadzi się w temperaturze 37°C w fermentorze, w wodzie destylowanej zawierającej odwodnioną pożywkę Brain Heart Infusion (BHI; 37 g/litr) (Difco Laboratories, Detroit, Michigan). Przed wzrostem w fermentorze prowadzi się wzrost liofilizowanego szczepu w 50 ml roztworu BHI (takiego samego jak wyżej) w kolbie Erlenmeyera, mieszając w temperaturze 37°C przez 7 godzin z szybkość ią.200 obrotów/minutę. Tę hodowlę przenosi się do ilości 1,5 litra BHI (jak wyżej) i prowadzi się wzrost przez 7 godzin tych samych warunkach, jakie opisano powyżej. Następnie przenosi się inoculum do fermentora.
Procedury stosowane do izolacji i oczyszczania otoczkowego polisacharydu E. coli K1 są identyczne do tych, jakie zostały opisane powyżej do izolacji meningokokowego polisacharydu grupy B.
Należy zaznaczyć, że opisane powyżej procedury izolacji i oczyszczania nie sąjedynymi procedurami, które mogąbyć użyte i że dostępne sąinne opublikowane procedury, np. przez Watsonai wsp. (J. Immunol., 81,331,1958) i wyżej wspomniany opis patentowy Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 727 136.
Natywny polisacharyd N-deacetyluje się z wytworzeniem reaktywnych grup aminowych w resztach kwasu stalowego wchodzących w skład cząsteczki. N-Deacetylację można prowadzić w dowolny znany sposób, np. w zasadowym środowisku wodnym, w podwyższonych temperaturach, przykładowo od około 90°C do 110°C, przy pH około 13 do 14. Jako zasadowe środowisko wodne dogodnie stosuje się wodny roztwór wodorotlenku metalu alkalicznego, np. wodorotlenku sodu w stężeniu około 2M. Alternatywnie można użyć hydrazynę w roztworze wodnym. Stopień N-deacetylacji może się wahać od około 30% do 100%, zależnie od warunków. Korzystne jest osiągnięcie około 90-100% N-deacetylacji. Produkt N-deacetylowany można odzyskać przykładowo przez oziębienie, zobojętnienie, oczyszczanie i o ile to wskazane, przez liofilizację.
W wyniku N-deacetylacji zazwyczaj otrzymuje się fragmenty polisacharydowe o średniej masie cząsteczkowej w zakresie od około 3000 do 50000 daltonów. Do celów niniejszego wynalazku można użyć fragmenty albo polisacharydy o pełnej długości.
Wytworzone N-deacetylowane fragmenty polisacharydowe albo polisacharydy o pełnej długości następnie N-acyluje się, wytwarzając odpowiedni produkt N-acylowany. Tę N-acylację można prowadzić przez rozpuszczenie N-deacetylowanego polisacharydu w wodnym buforo184 125 wanym środowisku o pH od około 7,5 do 9,0, następnie dodaje się odpowiedni nienasycony bezwodnik acylowy, ewentualnie z alkoholem w celu zwiększenia rozpuszczalności i ziębi się mieszaninę do temperatury poniżej 10°C aż do zakończenia reakcji. Jeśli to pożądane, mieszaninę reakcyjną można oczyszczać. Do nieograniczających przykładów metod oczyszczania, które można wykorzystać, należy dializa z następnym odzyskaniem N-acylowanego produktu przez liofilizację. Reakcja zasadniczo przebiega do końca w czasie około 10 do 20 godzin. Stopień N-acylacji mierzony technikami analitycznymi, typowo techniką rH-NMR, wynosi co najmniej 90% a przeważnie jest bliski 100%,. Reakcja N-deacetylacji nie powoduje znaczącego zmniejszenia masy cząsteczkowej fragmentów.
Przedmiotem wynalazku jest także skoniugowana cząsteczka, która zawiera co najmniej jeden polisacharyd Neisseria meningitidis grupy B, w którym grupa N-acetylowa jest zastąpiona nienasyconą grupą N-acylową o wzorze 2:
r2—C \
NH— w którym R2 oznacza nienasyconągrupę C2-C4-alkilową. Koniugaty te mogą zatem zawierać polisacharydy nienasycone według wynalazku, w tym pochodną akryloilową.
Zgodnie z wynalazkiem, korzystne jest wyselekcjonowanie do celów koniugowania materiału Ckj-Cs-N-acylowanego, o średniej masie cząsteczkowej odpowiadającej około 10 do 200 resztom kwasu sialowego. Tak więc, korzystnym koniugatem jest pochodna N-akryloilowa (2-propenoilowa). Uzyskuje się ją na ogół drogą filtracji żelowej N-acylowanego GBMP, stosując kolumnę Ultragel AcA 44 (średnica ziarenek 60-140 pm) i PBS do eluowania. Alternatywnie, można zastosować odpowiednią membranę sortującą według wielkości cząstek.
Korzystnie, w wynalazku stosuje się nienasycony, N-acylowany materiał o średniej masie cząsteczkowej 10000 do 15000 daltonów. Uzyskuje się go przez zbieranie frakcji wycieku z kolumny zawierającego N-acylowany materiał GBMP o tym właśnie zakresie średnich mas cząsteczkowych. Materiał N-acylowany o wyższej średniej masie cząsteczkowej, przykładowo w zakresie od 30000 do 40000 również okazał się użyteczny w niniejszym wynalazku.
Stosunek molowy polisacharydu do białka w skoniugowanych cząsteczkach według wynalazku wynosi korzystnie 1 mol białka na 20 moli polisacharydu. Bardziej korzystnie, stosunek ten wynosi 1 mol białka na 2-15 moli polisacharydu a najkorzystniej, 1 mol białka na 4 do 7 moli polisacharydu. Przesunięcia w stosunku białko/polisacharyd można dokonać dobierając odpowiednio proporcje składników wyjściowych w reakcji koniugowania.
Poza skoniugowanymi cząsteczkami zawierającymi nienasycone N-acylowe pochodne polisacharydowe skoniugowane z białkiem, wynalazkiem objęte są również koniugaty wielowartościowe i szczepionki, w których różne typy polisacharydów są skoniugowane z pojedynczym białkiem.
Skoniugowane cząsteczki według wynalazku wytwarza się przez skoniugowanie nienasyconego N-acylowanego polisacharydu z odpowiednim pod względem immunologicznym białkiem nośnikowym. Korzystnie, samo białko nośnikowe jest immunogenem. Nieograniczającymi przykładami odpowiednich białek nośnikowych sąbiałka albo polipeptydy bakteryjne, w tym anatoksyna tężca, anatoksyna błonicy, substancje reagujące krzyżowo (CRM), korzystnie CRM197 (otrzymany z Sclavo Ltd., Siena, Włochy) i bakteryjne białka nośnikowe, takie jak meningokokowe białka błony zewnętrznej.
Do skoniugowania modyfikowanych fragmentów polisacharydowych z białkiem nośnikowym można zastosować każdy sposób koniugacji. Korzystnym sposobem jest sposób podany w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 356 170, polegający na wprowadzeniu terminalnych grup aldehydowych (poprzez utlenianie cis-wicynalnych grup hydroksylowych) do tego N-acylowanego polisacharydu i sprzęgnięcie grup aldehydowych z grupami aminowymi
184 125 białka przez redukcyjne aminowanie. Polisacharyd i białko łączy się w ten sposób wiązaniem -CH2-NH-białko.
Należy jednak mieć na względzie, że skoniugowane szczepionki według wynalazku nie ograniczają się do tych, które wytwarza się metodą redukcyjnego aminowania. Szczepionki te można również wytwarzać przez skoniugowanie N-acylowanego polisacharydu z białkiem nośnikowym stosując przedłużającą resztę dihydrazydu kwasu adypinowego, co jest opisane przez Schneersona R. i wsp. (Preparation, Characterization and Immunogenicity ofHaemophilus influenzae type b Polysaccharide-Protein Conjugates, J. Exp. Med. 1952, 361-476, 1980) i w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 644 059 przez Lance K. Gordona. Alternatywnie, można zastosować opracowanąprzez Mercka technologię binarnego przedłużenia (Marburg S. i wsp., Biomolecular Chemistry of Macromolecules: Synthesis ofBacterial Polysaccharide Conjugates with Neisseria meningitidis Membrane Protein, J. Am. Chem. Soc. 108,5282-5287,1986) bądź ewentualnie technologię końców redukujących.
Skoniugowane cząsteczki wytworzone według wynalazku na ogół zawierają białko, do którego przyłączony jest co najmniej jeden fragment polisacharydu meningokokowego według wynalazku poprzez jedno miejsce wiążące na końcu szkieletu fragmentu polisacharydowego. Tak więc, wynalazek stwarza możliwość wytwarzania skoniugowanych cząsteczek meningokokowych, w których składnik polisacharydowy, za wyjątkiem jednego końca, jest nieosłonięty przez białko. Inne sposoby koniugowania polisacharydów meningokokowych z białkiem przez końcowe kwasy sialowe rozgałęzień mogą powodować sieciowanie i przyłączenie polisacharydu do białka w wielu miejscach. Wynalazkiem objęte są również skoniugowane cząsteczki, wytworzone z zastosowaniem kombinacji sposobów.
Wytworzone koniugaty N-acylowanego polisacharydu z białkiem nie zawierające znaczących sieciowań sąrozpuszczalne w roztworach wodnych, co sprawia, że te koniugaty według wynalazku są szczególnie dobrymi kandydatami do użycia jako szczepionki.
Wytworzone koniugaty nienasyconego N-acylowanego polisacharydu z białkiem według wynalazku badano w testach in vitro na myszach. Okazało się, że posiadająone ulepszone właściwości immunogenne w porównaniu z N-propionylowanym polisacharydem. Ponadto, obserwuje się znaczne obniżenie tworzenia się przeciwciał reagujących krzyżowo. Nienasycony koniugat wykazał poza tym niespodziewanie wysokie miana bakteriobójcze w porównaniu z innymi badanymi koniugatami. Na podstawie powyższych wyników sądzi się, że szczepionki według wynalazku będą skuteczne przeciw zapaleniu opon wywoływanemu przez N meningitidis albo przez E. coli K1. Szczególnie interesujące są szczepionki przeznaczone do ochrony niemowląt, które są najbardziej wrażliwe na bakteryjne zapalenie opon.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja szczepionki, zawierająca skoniugowaną cząsteczkę modyfikowanego polisacharydu meningokokowego grupy B, znamienna tym, że zawiera nienasyconąC3_5-N-acylowąpochodną fragmentu polisacharydu meningokokowego grupy B, kowalencyjnie związaną z białkiem.
Korzystnie, białko jest wybrane z grupy obejmującej anatoksynę tężca, anatoksynę błonicy, CRMję, i białka meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
Korzystnie, białko pochodzi z bakterii Neisseria meningitidis.
Korzystnie, masa cząsteczkowa fragmentu polisacharydu wynosi od około 3000 do około 50000.
Szczepionki według wynalazku mogą zawierać znane specjalistom standardowe nośniki, bufory albo środki konserwujące stosowane do przygotowywania szczepionek. Dla wzmocnienia odpowiedzi immunologicznej, do gotowych form można również dodać adiuwanty, takie jak ałun albo stearylo tyrozynę.
Szczepionki według wynalazku na ogół przygotowuje się przez zdyspergowanie koniugatu w dowolnym dopuszczalnym farmaceutycznie nośniku, takim jak sól fizjologiczna lub inne płyny iniekcyjne.
Szczepionkę według wynalazku można podawać dowolnąznaną drogą, w tym podskórnie, dootrzewnowo lub domięśniowo. Korzystną drogą podawania szczepionki jest podawanie pa184 125 renteralne. Mogą w niej również występować zwyczajowe dodatki, np. stabilizatory, takie jak laktoza albo sorbitol oraz adiuwanty, takie jak fosforan, wodorotlenek albo siarczan glinu.
Szczepionki według wynalazku podaje się w ilościach wystarczających do wywołania odpowiedzi immunologicznej. Typowo, do generowania takiej odpowiedzi będzie skuteczna dawka od około 1do 50 pg polisacharydu. Dawki można dobierać, stosownie do wielkości, wagi lub wieku osobnika przyjmującego szczepionkę. Odpowiedź u danego osobnika w postaci wytwarzania przeciwciał można śledzić oznaczając miano przeciwciał albo aktywność bakteriobójczą i jeśli to potrzebne, dla wzmocnienia odpowiedzi można podać dawkę podtrzymującą.
Odpowiednią, dawką szczepionki dla niemowląt będzie na ogół dawka w zakresie od około 5 do 25 pg albo od około 1do 10 pg/kg masy ciała.
Przedmiotem wynalazku jest także surowica odpornościowa, która zawiera przeciwciała wzbudzone u ssaka immunizowanego skoniugowaną cząsteczką zawierającą co najmniej jeden polisacharyd mający budowę modyfikowanego polisacharydu meningokokowego Neisseria meningitidis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastąpieniu grup N-acetylowych polisacharydu nienasyconymi grupami acylowymi o wzorze 2:
O /
R2—c \|Hw którym R2 oznacza nienasyconągrupę alkilowązawierającąco najmniej jedno podwójne wiązanie, który to polisacharyd jest kowalencyjnie związany z białkiem.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie skoniugowanej cząsteczki zawierającej co najmniej jeden polisacharyd mający budowę modyfikowanego polisacharydu meningokokowego Neisseria meningitidis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastąpieniu grup N-acetylowych polisacharydu nienasyconymi grupami acylowymi o wzorze 2:
O /
R2—c \
NHw którym R2 oznacza nienasyconą grupę alkilowązawieraj ącąco najmniej j edno podwójne wiązanie, który to polisacharyd jest kowalencyjnie związany z białkiem do wytwarzania szczepionki do szczepienia ssaka przeciwko infekcjom Neisseriameningitidis i Escherichia coliK1.
Korzystnie, białko pochodzi z bakterii, zwłaszcza z bakterii Neisseria meningitidis.
Korzystnie, białko jest wybrane z grupy obejmującej anatoksynę tężca, anatoksynę błonicy, CRM197 i białka meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
Korzystnie, jako białko występuje anatoksyna tężca lub OMP, a masa cząsteczkowa polisacharydu wynosi od około 3000 do około 50000, szczególnie w zakresie około 10000 do 15000.
Korzystny stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 20 moli polisacharydu na 1 mol białka, zwłaszcza około 4 do 7 moli polisacharydu na około 1 mol białka.
Korzystnie, modyfikowanym polisacharydem meningokokowym Neisseria meningitidis grupy B jest pochodna N-akryloilowa, a białkiem jest białko meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
Korzystnie R2 oznacza nienasyconągrupę C2-C4-alkilową, a stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 2 do 15 moli polisacharydu na 1 mol białka.
Korzystnie R2 oznacza nienasyconągrupę C2-C4-alkilową, i około 30 do 100% grup N-acetylowych polisacharydu jest de-N-acetylowanych.
Korzystnie R2 oznacza nienasyconągrupę C2-C4-alkilową, i polisacharyd jest kowalencyjnie połączony z białkiem poprzez redukcyjne aminowanie.
184 125
Korzystnie R2 oznacza nienasyconą grupę C2-C4-alkilową, i masa cząsteczkowa fragmentu polisacharydu jest zawarta w zakresie około 10000 do 15000.
Przykłady
Podane w opisie przykłady ilustrująróżne aspekty rozwiązań według wynalazku. Nie mają one na celu ograniczania zakresu wynalazku w jakikolwiek sposób.
Przykład I. Synteza N-akiyloilowanego GBMP
Synteza N-akryloilowanego GBMP jest opisana przez Roy'a R. i wsp. (Glycoconjugate J. 7, 3-12,1990). Ilość 150 mg N-deacetylowanego GBMP rozpuszczono w 2,0 ml wody destylowanej, roztwór oziębiono do temperatury 0°C i dodano 500 μΐ chlorku akryloilu (Aidrich Chemical Co.) w porcjach po 50 μ! (1 równoważnik). Wartość pH roztworu utrzymywano na 8,5 4M roztworem NaOH, stosując jednostkę do automiareczkowania. Po zakończeniu dodawania chlorku kwasowego (2 godziny) podniesiono wartość pH do 12 i utrzymywano go na tym poziomie przez 30 minut. Materiał oczyszczono przez wyczerpującą dializę wobec wody destylowanej, w temperaturze 4°C, po czym liofilizowano go, uzyskując 163 mg. Analiza H-NMR tego materiału wykazała 100% N-acylację, dając wzorzec całki odpowiadający podstawnikowi akryloilowemu.
Przykład II. Aktywacja N-akryloilowanego GBMP
Ilość 150 mg N-akryloilowanego GBMP rozpuszczono w 1,25 ml wody destylowanej i następnie dodano 3,75 ml 0,2 M roztworu (około 50 równoważników) NaIO4 w wodzie. Roztwór utrzymywano w ciemności w temperaturze pokojowej przez godzinę i po tym czasie dodano 400 μl (10 równoważników) glikolu etylenowego. Po godzinie utrzymywania w temperaturze pokojowej roztwór bezpośrednio podano na kolumnę Sephadex G-10 (1,6 x 100) uprzednio zrównoważonąw wodzie (Pharmacia Fine Chemicals). Aktywowany produkt eluował z kolumny w piku objętości międzyziarnowej. Frakcję tę zebrano i liofilizowano. Utleniony produkt frakcjonowano następnie na kolumnie BioGel A.5 (1,6 x 100) dostarczonej przez firmę BioRad. Kolumna była zrównoważona solanką buforowaną fosforanem (pH = 7,6). Frakcje o odpowiednich masach cząsteczkowych łączono opierając się na analizie HPLC (wysokosprawnej chromatografii cieczowej) wybranych frakcji spływającego z kolumny materiału. Stosowano kolumnę Pharmacia-Superose 12. Porównanie względnych wartości Kav dla każdej frakcji z uprzednio przygotowaną krzywą kalibracyjną pozwoliło wyselekcjonować oddzielne frakcje o masie cząsteczkowej 11000 (11 kDa) utlenionego akryloilowanego GBMP. Frakcje te oczyszczano przez dializę, jak opisano powyżej. Spektroskopia H-NMR frakcjonowanego materiału była zgodna z tąjaką otrzymano dla utlenionego N-akryloilowanego GBMP.
Przykład III. Sporządzenie koniugatu anatoksyny tężca z N-akryloilowanym GBMP
Ilość 3,5 mg świeżo oczyszczonego monomeru anatoksyny tężca (TT-m) połączono we fiolce reakcyjnej Pierce'a z 10,5 mg frakcji o masie cząsteczkowej 11000 (11 kDa) utlenionego akryloilowanego GBMP. Dodano 7,0 mg cyjanoborowodorku sodu i mieszaninę rozpuszczono w 233 μΐ buforu fosforanowego (0,1 M, pH=7,5). Roztwór inkubowano w temperaturze 37°C w całkowitym czasie 5 dni. Okresowo kontrolowano koniugację metodą ekskluzyjnej HPLC z sortowaniem wielkości cząsteczek (Superose-12, Pharmacia) w celu obserwacji przesunięcia w kierunku wyższych mas cząsteczkowych w miarę przebiegu koniugacji. Końcowy koniugat oczyszczano od substancji wyjściowych metodą frakcjonowania na kolumnie BioGel A.5 zrównoważonej w PBS a następnie przez dializę i liofilizację. Metodą kolorymetryczną oznaczania całkowitego kwasu sialowego (metoda Sven-nerholma) i oznaczania białka (metoda BCA, Pierce) wykazano obecność koniugatów zawierających od 12%o do 30% kwasu sialowego.
Przykład IV. Immunizacja myszy
Typowo, 10 samic myszy CF1 w wieku 8-10 tygodni immunizowano dootrzewnowo, podając ilość koniugatu (0,2 ml) odpowiadającą 2 μg kwasu sialowego, z dodatkiem lub bez dodatku adiuwantów, takich jak ałun (Aihydrogel, Superfor Biosector) albo kompletny lub niekompletny układ adiuwanta RIBI (RIBI Immunochem). Po pierwszym szczepieniu wykonywano szczepienia wspomagające w dniu 21 i w dniu 35 i następnie, w 45 dniu myszy wykrwawiano. Krew zbierano przez nakłucie serca i surowicę, podzielonana próbki, przechowywano w temperaturze -86°C.
184 125
Przykład V. Próba na aktywność bakteriobójczą
Próbę na aktywność bakteriobójczą przeprowadzono w hodowlach tkankowych na 96-dołkowych płytkach do mikromianowania (Corning). Wszystkie antysurowice przed użyciem inaktywowano ciepłem w temperaturze 56°C w czasie 30 minut. Wzrost bakterii meningokoków grupy B (szczep 80-165 B:2b:p.l) prowadzono przez dobę na płytkach z agarem czekoladowym (OueLab) w temperaturze 37°C w atmosferze zawierającej 5% CO2. Następnie zaszczepiano drugą płytkę i prowadzono inkubację przez 5 godzin. Odpowiednie rozcieńczenia antysurowic wykonywano bezpośrednio na płytce, stosując jako rozcieńczalnik zrównoważony roztwór soli Hanka (HBSS), do końcowej objętości 50 pl/wgłębienie. Przygotowano zawiesinę GMB w HBSS o wartości absorbancji OD (λ580) = 0,1. Tę zawiesinę rozcieńczono 40000 razy w HBSS, otrzymując końcowe rozcieńczenie robocze bakterii do prób. Do każdego wgłębienia dodano świeżo rozmrożony komplement noworodków króliczych (Pel-Freeze Biologicals) w ilości 20 pl/wgłębienie i następnie 30 pl roboczego rozcieńczenia bakterii. Następnie płytkę wytrząsano w temperaturze 37°C przez godzinę. Zawartości każdego wgłębienia zmieszano i wysiano (po 35 pl) na płytki z agarem czekoladowym. Płytki inkubowano przez dobę w temperaturze 37°C w atmosferze zawierającej 5% CO2 i następnie zliczano ilość jednostek kolonizujących (CFU). Procent zabitych bakterii oznaczano względem średnich wartości w dołkach z kontrolą HBSS albo w surowicy nierelewantnej w następujący sposób:
% zabijania = (CFUoonrrola - CFUnHlysurowica/CFUkontrola) X 100
Przykład VI. Próba ochrony biernej
Antysurowice mysie uzyskane po immunizacjach N-acylo-GBMP-TT rozcieńczano typowo w sterylnej soli fizjologicznej albo w PBS (buforowana fosforanem sól fizjologiczna). Grupom po 5 samic myszy CF1w wieku 8-10 tygodni wstrzykiwano dożylnie 200 pl rozcieńczonych antysurowic. Po godzinie, każdej grupie myszy podawano drogą iniekcji dootrzewnowej 500 pl (800-1200 CFU/ml) zawiesiny Neisseria meningitidis grupy B (GMB 80165 B:2b:P.1). Po 5 godzinach zbierano krew od poszczególnych myszy przez nakłucie serca i próbki po 10 pl tej krwi posiewano na płytki z agarem czekoladowym. Płytki inkubowano w temperaturze 37°C w atmosferze zawierającej 5% CO2 i po 15-20 godzinach oznaczano ilość jednostek kolonizujących (CFU).
Powyższa próba ochrony biernej opiera się na redukcji ilości albo całkowitym oczyszczeniu z bakterii w obecności swoistego przeciwciała. Pomiary wykonywano względem grupy kontrolnej nie posiadającej swoistego przeciwciała. Stopień ochrony zapewniany przez mysie antysurowice przeciw koniugatom N-acyl-GBMP wyrażano w procentowym zmniejszeniu ilości CFU dla każdej antysurowicy względem nierelewantnej surowicy kontrolnej albo PBS.
Przykład VII. Synteza i aktywność biologiczna szczepionki przeciw Neisseria meningitidis z grupy serologicznej B
Zsyntetyzowano nową skoniugowaną szczepionkę przeciw N. meningitidis z grupy serologicznej B. Projekt tej szczepionki oparto na unikalnej modyfikacji natywnego polisacharydu. Ten natywny polisacharyd (N-Ac-GBMP) derywatyzowano na końcu aminowym przez całkowite podstawienie grup N-acetylowych grupami N-akryloilowymi (NH-CO-CH=CH2). Metodami fizycznymi, takimi jak spektroskopia *H- i 13C-NMR scharakteryzowano wiarygodnie tożsamość i homogenność nowych produktów a metodą HPLC z ekskluzjąpod względem wielkości cząstek wykazano, że proces nie zmieniał mas cząsteczkowych polisacharydu w wyniku depolimeryzacji. Koniugaty z białkami przygotowano w sposób podobny do znanych procedur. Pokrótce, wychodząc z preparatu polisacharydu N-akryloilo-GBMP przygotowano dwie różne szarże koniugatów: N-akiyloilo-GBMP-anatoksyna tężca. Analiza kolorymetryczna każdego koniugatu wykazała 13% i 20% całkowitej ilości kwasu sialowego w koniugacie. Metodą spektroskopii ’H-NMR tych koniugatów wykazano niezmienioną obecność modyfikowanego polisacharydu w białku.
W oddzielnych doświadczeniach na zwierzętach, wstrzykiwano myszom koniugaty N-akryloilo-GBMP-TT razem z solą fizjologiczną, wodorotlenkiem glinu albo z kompletnym adiu14
184 125 wantem RIBI (MPL+TDM+CWS) w jednym przypadku i tylko adiuwant RIBI w drugim przypadku. Na podstawie obserwacji wizualnych stwierdzono, że szczepionki były dobrze tolerowane przez myszy.
Badania serologiczne każdej antysurowicy wykazały, że obydwa koniugaty wywołują, swoistą odpowiedź, porównywalną lub wyższą od tej, jaką obserwowano dla konstrukcji N-propionylo-GBMP-TT, z użyciem układu adiuwantu RIBI (tabela 1). Wstępne badania reaktywności krzyżowej antysurowic przeciw N-akryloilo-GBMP-TT dały wyniki wskazujące na podobny stopień reaktywności krzyżowej jaki dawały antysurowice anty-N-propionylo-GBMP-TT (tabela 2). Jedna z dwu szarż antysurowicy N-akryloilo-GBMP-TT wykazała znacząco słabszą reakcję krzyżową z natywnym GBMP od tej jaką dawała konstrukcja N-propionylo-GBMP-TT podana w tym samym doświadczeniu.
Obydwie szarże N-akryloilo-GBMP-TT badano na aktywność bakteriobójczą przeciw żywym bakteriom GBM. Wykazano znaczącą ich aktywność w porównaniu z antysurowicąN-propionylo-GBMP-TT. Wyniki są sumarycznie przedstawione w tabelach 1 i 3. Wyniki podane w tabeli 1 odnoszą się do próby na aktywność bakteriobójczą przeprowadzonej w dwu równoległych próbach i są zgodne z wartościami rozcieńczeń uzyskiwanymi w innych analizach prowadzonych na tym samym materiale. Dane zawarte w tabeli 1 potwierdzają, że pochodne akryloilowe posiadają szczególnie skuteczną aktywność przeciwbakteryjną. W tabeli 3 porównanajest aktywność bakteriobójcza dwóch szarż antysurowicy N-akryloilo-GBMP-TT z antysurowicąN-propionylo-GBMP-TT otrzymaną w tych samych doświadczeniach na zwierzętach. W próbie użyto 15-krotnie większą, ilość bakterii i z tego powodu wykryto tylko te antysurowice, które wykazywały silną aktywność. Porównanie antysurowicy N-akryloilo-GBMP-TT z antysurowicą N-propionylo-GBMP-TT wykazało że ich aktywności bakteriobójcze są rzeczywiście równoważne.
Badania ochrony biernej przeprowadzono z różnymi rozcieńczeniami. Wszystkie one dawały znaczące oczyszczenie od bakterii, nadaj ąc w ten sposób ochronę myszom (tabela 1). Porównanie z antysurowicą N-propionylo-GBMP-TT w różnych rozcieńczeniach dało prawie identyczne wyniki. Porównanie dwu szarż antysurowicy N-akryloilo-GBMP-TT w próbie ochrony biernej wykazało, że obie szarże chroniły myszy identycznie, w granicach błędu doświadczenia (tabela 3).
Tabela 1. Wyniki badania RPV-1-63 porównującego właściwości koniugatów modyfikowanych polisacharydów meningokokowych grupy B z anatoksyną tężca w różnych adiuwantach
| Antysurowicą | Miano w próbie ELISA- | Miano bakteriobójcze1 | Miano w próbie ochrony biernej | |||||
| Sól fizjologiczna | Ałun | RIBI | 90% zabicia | 50% zabicia | Klirens (bez rozcieńczenia) | Klirens (1:4) | Klirens (1:6) | |
| N-Propiony- lo-GBMP-TT | 14,38Ί | 38,66Ί | 235,456 | 210 | 690 | 100 | 81 | Ί3 |
| N-Butanoi- lo-GBMP-TT | 11,253 | 38,859 | 363,264 | 9,2 | 50 | 60 | - | 0 |
| N-pentanoi- lo-GBMP-TT | 14,019 | 53,248 | 465,920 | 12,1 | 28 | 5Ί | - | 0 |
| N-akryloi- lo-GBMP-TT | 1,698 | Ί,280 | 218,304 | 1000 | 2,120 | 96 | Ί8 | 46 |
H * 1
- Miano w próbie ELISA jest wyrażone jako O.D x rozcieńczenie uśrednione o trzy miejsca na krzywej. Sól fizjologiczna, ałun i RIBI są to adiuwanty stosowane do wytwarzania antysurowic.
b odwrotność rozcieńczenia antysurowic przeciw modyfikowanym GBMP-TT/RIBI wymagana do zabicia 50% lub 90% bakterii GBM 80-165. Dokładność wyników wynosi +/-jedno rozcieńczenie.
c Procent oczyszczania od bakterii GBM 80165 przy różnych rozcieńczeniach antysurowic przeciw modyfikowanym GBMP-TT/RIBI w stosunku do HBSS jako kontroli.
184 125
Tabela 2. Reakcja krzyżowa antysurowic przeciw modyfikowanym N-acylo-GBMP-TT (RPV-1-63) z natywnym antygenem N-acetylo-GBMP
| Miano ELISAa | |||||||||
| Antysurowica | Sól fizjologiczna | Ałun | RIBI | ||||||
| Miano N-acylob | Miano N-acetyloc | Stosunek mkaiN-acy- lo/N-acetylo | Miano N-acylo | Miano N-acetylo | Stosunek mian Nacylo/Nacetylo | Miano N-acylo | Miano N-acetylo | Stosunek mian Nacylo/Nacetylo | |
| N-Propiony- lo-GBMP-TT | 2,557 | 53 | 49 | 6,217 | 795 | 8 | 51,373 | 2,910 | 18 |
| N-Butano- ilo-GBMP-TT | 2,628 | 45 | 59 | 10,979 | 226 | 49 | 66,267 | 406 | 163 |
| N-pentano- ilo-GBMP-TT | 2,764 | 9 | 314 | 6,491 | 150 | 43 | 120,53 | 311 | 388 |
| N-akrylo- ilo-GBMP-TT | 338 | 7 | 46 | 3,022 | 546 | 6 | 50,040 | 1,100 | 45 |
& 1
- Miano wpróbie ELISA jest wyrażone jako O.D x rozcieńczenie uśrednione o trzy miejsca na krzywej. Sól fizjologiczna, ałun i RIBI są to adiuwanty stosowane do wytwarzania antysurowic.
b - N-Acyl oznacza homologiczny koniugat: homologiczny polisacharyd-ludzka albumina surowicy jako antygen opłaszczający.
c - N-Acetyl oznacza koniugat: N-acetylo-GBMP-ludzka albumina surowicy jako antygen opłaszczający.
Tabela 3. Zestawienie właściwości ochronnych dwóch szarż antysurowicy przeciw N-akryloilo-GBMP-TT w porównaniu do antysurowicy przeciw N-Propionylo-GBMP-TT
| Antysurowicaa | Aktywność bakteriobójczab 50% zabicia | Ochrona biernac % klirensu |
| N-Propionylo-GBMP-TT (RPV-1-45) | 53 | 92 |
| N-Butanoilo-GBMP-TT (R.PV-1-45) | 80 | 100 |
| N-pentanoilo-GBMP-TT (RPV-1-63) | 29 | 81 |
| N-akryloilo-GBMP-TT (RPV-1-63) | 100 | 78 |
a - antysurowice otrzymane z użyciem układu adiuwantu RIBI
- Odwrotność rozcieńczenia antysurowic wymagana do zabicia 50% bakterii GBM 87165. Uwaga! W doświadczeniu użyto 15-krotnie większe ilości GBM (2600 cfu/100 μΐ) niż w opisanej procedurze. Spowodowało to, że aktywność bakteriobójcza dawała się oznaczać tylko w surowicach o silnej aktywności.
c - Procent klirensu z GBM 80165 w porównaniu do kontroli PBS dla rozcieńczenia 1:4 odpowiedniej antysurowicy.
Przykład VIII. Dalsze badania z użyciem N-acylo-modyfikowanych koniugatów GBMP-TT
Zsyntetyzowano serię N-acylo-modyfikowanych polisacharydów GBM: N-propionylo-GBMP (NPr), N-butanoilo-GBMP (NBu), N-pentanoilo-GBMP (NPe) i N-akryloilo-GBMP (N-Akryl) w sposób zasadniczo podobny do opisanego powyżej, za wyjątkiem kontroli wartości pH w celu ograniczenia depolimeryzacji polisacharydów. Spektroskopia 'H- i l3C-NMR pozwalała na pełną identyfikację tych modyfikowanych polisacharydów. Wykazano, że każdy polisacharyd był w 100% zderywatyzowany. Otrzymano serię utlenionych fragmentów polisacharydowych o tej samej masie cząsteczkowej 11000 (11 kDa) wykorzystując wyprofilowaną, standaryzowaną kolumnę HPLC z ekskluzją wielkości cząstek. Wszystkie koniugaty syntetyzowano w dokładnie ta16
18-4125 kich samych warunkach. Analiza kolorymetryczna wytworzonych koniugatów wykazała następujące wbudowanie do kwasu sialowego:
NPr-28%, NBu-30%, NPe-18%, NAkryl-19%.
Myszy immunizowano ilośc.ią2 pl koniugatu z kwasem sialowym, albo w samej soli fizjologicznej, albo zaabsorbowanego na wodorotlenku glinu albo zemulgowanego w adiuwancie RIBI. Wszystkie te koniugaty były dobrze tolerowane przez myszy, u których nie obserwowano oznak złego samopoczucia.
Wyniki prób mianowania różnych antysurowic przeciw homologicznym antygenom polisacharydowym w teście ELISA są sumarycznie podane w tabeli 1. Adiuwantem dającym najwyższe miana okazał się adiuwant RIBI. Wzrosty w serii od N-propionylo- do N-pentanoilo-pochodnych potwierdziły poprzednie spostrzeżenia z użyciem innych hydrofobowych układów adiuwantu. W układzie adiuwanta takiego jak ałun nie obserwowano podobnej tendencji w zmianie miana. Swoistość wobec immunizującego polisacharydu również wzrasta wraz ze wzrostem długości łańcucha, od N-propionylowego do N-pentanoilowego, co najmocniej wyraża się w seriach RIBI (tabela 2). Ten wynik jest zgodny z poprzednimi doświadczeniami, które wykazały tę samą tendencję. Pomimo wzrostu miana i swoistości, nie obserwowano towarzyszącego im wzrostu aktywności przeciw bakteriom natywnym, zarówno w testach na aktywność bakteriobójcząjak i w próbach ochrony biernej. Antysurowica N-Pr wykazuje znacznie wyższe miana bakteriobójcze (14-25 razy wyższe) przy poziomach 50% i 90% w porównaniu z antysurowicąN-Bu i N-Pe. Odpowiednio, badania ochrony biernej różnych rozcieńczeń antysurowic dawały znaczące oczyszczenie od bakterii przez N-Bu i N-Pe tylko przy najwyższym stężeniu, odwrotnie do antysurowicy N-Pr, która dawała znaczący klirens nawet przy rozcieńczeniu 1:6.
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 60 egz.
Cena 4,00 zł.
Claims (59)
- Zastrzeżenia patentowe1. Modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, w którym grupy N-acetylowe zostały zastąpione pochodną N-acylową o wzorze 1:FtNH w którym Rj oznacza nienasyconągrupę C3-C4-alkilową zawierającą co najmniej jedno podwójne wiązanie.
- 2. Polisacharyd według zastrz. 1, w którym R1 oznacza łańcuch złożony z 4 atomów węgla i zawierający dwa niesąsiadujące podwójne wiązania.
- 3. Polisacharyd według zastrz. 1, w którym R, oznacza łańcuch złożony z 4 atomów węgla i zawierający jedno podwójne wiązanie.
- 4. Polisacharyd według zastrz. 1, w którym R1 oznacza łańcuch złożony z 3 atomów węgla.
- 5. Polisacharyd według zastrz. 3, w którym Rt oznacza grupę CH2=CH-CH2-CH2-.
- 6. Polisacharyd według zastrz. 4, w którym R1 oznacza grupę CH2=CH-CH2-.
- 7. Polisacharyd według zastrz. 1, w którym atom węgla najbardziej odległy od węgla acylowego jest związany poprzez podwójne wiązanie.
- 8. Polisacharyd według zastrz. 7, w którym R1 oznacza łańcuch złożony z 4 atomów węgla.
- 9. Polisacharyd według zastrz. 7, w którym R1 oznacza łańcuch złożony z 3 atomów węgla.
- 10. Skoniugowana cząsteczka zawierająca co najmniej jeden polisacharyd mający budowę modyfikowanego polisacharydu meningokokowego Neisseria meningitidis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastąpieniu grup N-acetylowych polisacharydu nienasyconymi grupami acylowymi o wzorze 2:NHw którym R2 oznacza nienasyconągrupę alkilowązawierającąco najmniej jedno podwójne wiązanie, który to polisacharyd jest kowalencyjnie związany z białkiem.
- 11. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 10, w której białko pochodzi z bakterii.
- 12. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 11, w której białko pochodzi z bakterii Neisseria meningitidis.
- 13. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 10, w której białkojest wybrane z grupy obej mującej anatoksynę tężca, anatoksynę błonicy, CRMI97 i białka meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
- 14. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 10, w której jako białko występuje anatoksyna tężca lub OMP, a masa cząsteczkowa polisacharydu wynosi od około 3000 do około 50000.
- 15. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 10, w której jako białko występuje anatoksyna tężca, a masa cząsteczkowa polisacharydu jest zawarta w zakresie około 10000 do 15000.
- 16. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 10 albo 11, albo 12, albo 13, albo 14, albo 15, w której stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 20 moli polisacharydu na 1 mol białka.
- 17. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 16, w której stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 4 do 7 moli polisacharydu na około 1 mol białka.
- 18. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 10, w której modyfikowanym polisacharydem meningokokowym Neisseria meningitidis grupy B jest pochodna N-akryloilowa.
- 19. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 18, w której białkiem jest białko meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
- 20. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 10, w której R2 oznacza nienasyconą grupę C2-C4-alkilową.
- 21. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 20, w której stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 2 do 15 moli polisacharydu na 1 mol białka.
- 22. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 20, w której około 30% do 100% grup N-acetylowych polisacharydu jest de-N-acetylowanych.
- 23. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 20, w której polisacharyd jest kowalencyjnie połączony z białkiem poprzez redukcyjne aminowanie.
- 24. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 20, w której masa cząsteczkowa fragmentu polisacharydu jest zawarta w zakresie około 10000 do 15000.
- 25. Kompozycja szczepionki, zawierająca skoniugowimącząsteczkę modyfikowanego polisacharydu meningokokowego grupy B, znamienna tym, że zawiera nienasyconąC^-N-acylową pochodną fragmentu polisacharydu meningokokowego grupy B, kowalencyjnie związaną z białkiem.
- 26. Kompozycja szczepionki według zastrz. 25, znamienna tym, że białko jest wybrane z grupy obejmującej anatoksynę tężca, anatoksynę błonicy, CRM'197 i białka meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
- 27. Kompozycja szczepionki według zastrz. 25, znamienna tym, że masa cząsteczkowa fragmentu polisacharydu wynosi od około 3000 do około 50000.
- 28. Kompozycja szczepionki według zastrz. 25, znamienna tym, że białko pochodzi z bakterii Neisseria meningitidis.
- 29. Surowica odpornościowa, znamienna tym, że zawiera przeciwciała wzbudzone u ssaka immunizowanego skoniugowana cząsteczką zawierającą co najmniej jeden polisacharyd mający budowę modyfikowanego polisacharydu meningokokowego Neisseria meningitidis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastąpieniu grup N-acetylowych polisacharydu nienasyconymi grupami acylowymi o wzorze 2:R2NHw którym R2 oznacza nienasyconą grupę alkilowązawieraj ącąco naj mniej jedno podwójne wiązanie, który to polisacharyd jest kowalencyjnie związany z białkiem.
- 30. Surowica według zastrz. 29, znamienna tym, że białko pochodzi z bakterii.
- 31. Surowica według zastrz. 30, znamienna tym, że białko pochodzi z bakterii Neisseria meningitidis.184 125
- 32. Surowica według zastrz. 29, znamienna tym, że białko jest wybrane z grupy obejmującej anatoksynę tężca, anatoksynę błonicy, CRM197 i białka meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
- 33. Surowica według zastrz. 29, znamienna tym, że białko stanowi anatoksyna tężca lub OMP, a masa cząsteczkowa polisacharydu wynosi od około 3000 do około 50000.
- 34. Surowica według zastrz. 29, znamienna tym, że białko stanowi anatoksyna tężca, a masa cząsteczkowa polisacharydu jest zawarta w zakresie około 10000 do 15000.
- 35. Surowica według zastrz. 29 albo 30, albo 31, albo 32, albo 33, albo 34, znamienna tym, że stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 20 moli polisacharydu na 1 mol białka.
- 36. Surowica według zastrz. 35, znamienna tym, że stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 4 do 7 moli polisacharydu na około 1 mol białka.
- 37. Surowica według zastrz. 29, znamienna tym, że modyfikowanym polisacharydem meningokokowym Neisseria meningitidis grupy B jest pochodna N-akryloilowa.
- 38. Skoniugowana cząsteczka według zastrz. 37, znamienna tym, że białkiem jest białko meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
- 39. Surowica według zastrz. 29, znamienna tym, że r2 oznacza nienasyconą grupę C2-C4-alkilową.
- 40. Surowica według zastrz. 39, znamienna tym, że stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 2 do 15 moli polisacharydu na 1 mol białka.
- 41. Surowica według zastrz. 39, znamienna tym, że około 30 do 100% grup N-acetylowych polisacharydu jest de-N-acetylowanych.
- 42. Surowica według zastrz. 39, znamienna tym, że polisacharyd jest kowalencyjnie połączony z białkiem poprzez redukcyjne aminowanie.
- 43. Surowica według zastrz. 39, znamienna tym, że masa cząsteczkowa polisacharyduj est zawarta w zakresie około 10000 do 15000.
- 44. Surowica według zastrz. 29, znamienna tym, że polisacharydy wchodzące w skład skoniugowanej cząsteczki są fragmentami nienasyconych C3-C5-N-acylowych pochodnych polisacharydów.
- 45. Zastosowanie skoniugowanej cząsteczki zawierającej co najmniej jeden polisacharyd maj ący budowę modyfikowanego polisacharydu meningokokowego Neisseria meningitidis grupy B, w którym modyfikacja polega na zastąpieniu grup N-acetylowych polisacharydu nienasyconymi grupami acylowymi o wzorze 2:NHw którym R2 oznacza nienasyconągrupę alkilową, zawierającą co najmniej jedno podwójne wiązanie, który to polisacharyd jest kowalencyjnie związany z białkiem do wytwarzania szczepionki do szczepienia ssaka przeciwko infekcjom Neisseria meningitidis i Escherichia coli K1.
- 46. Zastosowanie według zastrz. 44, w którym białko pochodzi z bakterii.
- 47. Zastosowanie według zastrz. 45, w którym białko pochodzi z bakterii Neisseria meningitidis.
- 48. Zastosowanie według zastrz. 44, w którym białko jest wybrane z grupy obejmującej anatoksynę tężca, anatoksynę błonicy, CRM^ i białka meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
- 49. Zastosowanie według zastrz. 44, w którymjako białko występuje anatoksyna tężca lub OMP, a masa cząsteczkowa polisacharydu wynosi od około 3000 do około 50000.184 125
- 50. Zastosowanie według zastrz. 44, w którym jako białko występuje anatoksyna tężca, a masa cząsteczkowa polisacharydu jest zawarta w zakresie około 10000 do 15000.
- 51. Zastosowanie według zastrz. 44 albo 45, albo 46, albo 47, albo 48, albo 49, w którym stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 20 moli polisacharydu na 1 mol białka.
- 52. Zastosowanie według zastrz. 51, w którym stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 4 do 7 moli polisacharydu na około 1 mol białka.
- 53. Zastosowanie według zastrz. 44, w którym modyfikowanym polisacharydem meningokokowym Neisseria meningitidis grupy B jest pochodna N-akryloilowa.
- 54. Zastosowanie według zastrz. 53, w którym białkiemjest białko meningokokowej błony zewnętrznej (OMP).
- 55. Zastosowanie według zastrz. 44, w którym R2 oznacza nienasyconągrupę C2-C4-alkilową.
- 56. Zastosowanie według zastrz. 55, w którym stosunek molowy polisacharydu do białka wynosi około 2 do 15 moli polisacharydu na 1 mol białka.
- 57. Zastosowanie według zastrz. 55, w którym około 30 do 100% grup N-acetylowych polisacharydu jest de-N-acetylowanych.
- 58. Zastosowanie według zastrz. 55, w którym polisacharyd jest kowalencyjnie połączony z białkiem poprzez redukcyjne aminowanie.
- 59. Zastosowanie według zastrz. 55, w którym masa cząsteczkowa fragmentu polisacharydu jest zawarta w zakresie około 10000 do 15000.Wynalazek dotyczy chemicznie modyfikowanych polisacharydów grupy B z Neisseria meningitidis, skoniugowanej cząsteczki, w której te modyfikowane polisacharydy są skoniugowane z białkiem nośnikowym, kompozycji szczepionki zawierającej takie skoniugowane cząsteczki, surowicy odpornościowej wzbudzonej u ssaka przez szczepionkę zawierającą taką skoniugowaną cząsteczkę, oraz zastosowania skoniugowanej cząsteczki do wytwarzania szczepionki do szczepienia ssaka przeciwko infekcjom Neisseria meningitidis i Escherichia coli K1.Zapalenie opon powodowane przez N. meningitidis i E. coli K1 jest jednym z większych światowych problemów ochrony zdrowia. Zapalenie opon grupy B pojawia się w sytuacjach zarówno endemicznych jak i epidemicznych i stanowi przyczynę około połowy wszystkich zarejestrowanych przypadków meningokokowego zapalenia opon, a K1-dodatnia E. coli jest głównym czynnikiem zapalenia opon u noworodków. Obecnie nie ma powszechnie dostępnej szczepionki chroniącej przed chorobą wywołaną przez grupę meningokoków grupy B i E. coli K1. W znacznej mierze wynika to z faktu, że meningokokowy polisacharyd B (GBMP) jest bardzo słabo immunogenny u ludzi. Przypuszcza się, że ta słaba immunogenność natywnego GBMP i wynikająca stąd tolerancja immunologiczna jest rezultatem obecności wspólnego epitopu w tkance ludzkiej i zwierzęcej. Ostatnio opisano propozycje szczepionek opartych na kompleksach GBMP z białkami błony zewnętrznej ale dotychczas nie ma wyraźnych dowodów ich skuteczności u ludzi.Ostatnio opracowano nowy projekt szczepionki opartej na modyfikowanym metodą syntezy chemicznej koniugacie N-propionylowanego polisacharydu grupy B z białkiem (N-Pr-GBMP-białko). Ta szczepionka wzbudza u myszy wysokie miana przeciwciał IgG, które nie tylko majądziałanie ochronne ale reagują krzyżowo z niemodyfikowanym GBMP (z N-acetylo-GBMP). Ten projekt jest opisany przez Harolda J. Jenningsa i wsp. w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 727 136 opublikowanym 23 lutego 1988 r.Istnieje pogląd, że szczepionka, która wzbudza przeciwciała reagujące krzyżowo, taka jak opisana w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 727 136, może być skuteczna tylko wówczas, gdy zostanie przełamana tolerancja immunologiczna. Hipoteza ta opiera się na zidentyfikowaniu wspólnego epitopu, składającego się z łańcucha reszt α (2-8)-związanych kwasu sialowego (z wymaganą ilością minimum 10 reszt) zarówno w natywnym N-Ac-GBMP jak i w tkankach ludzkich i zwierzęcych (Jennings, Contrib. Microbiol. Immunol., Basel, Karger,1989, tom 1^0,151-165). Te łańcuchy polisialozylowe służąjako antygeny rozwojowe. W najwię6184 125 kszym stopniu są one związane ze stanem płodowym, z adhezjąkomórek nerwowych płodu (Finne i wsp. Biochem. Biophys. Res. Commun., 112, 482, 1983). Podczas dojrzewania post-nataJnego antygen ten ulega tłumieniu (Friedlander i wsp., J. Cell Biol. 101,412,1985) ale jego ekspresja przebiega u ludzi dojrzałych podczas regeneracji chorych mięśni (Cashman i wsp., Ann. Neuron., 21481,1987), w komórkach nowotworowych (Roth i wsp.. Proc. Natl. Acad. Sci. 85,299, 1988) oraz w naturalnych komórkach bójczych (NK) i w komórkach CD3+T (Husmann i wsp., Eur. J. Immunol., 19, 1761, 1989). Jakkolwiek nie są dotychczas poznane skutki złamania tolerancji na te antygeny płodowe, celowe jest opracowanie szczepionek o obniżonej immunogenności wobec epitopów ludzkich.Tak więc, celem wynalazku było opracowanie modyfikowanych meningokokowych polisacharydów grupy B, które to polisacharydy są immunogenne ale charakteryzują się obniżoną reaktywnościąkrzyżową wobec natywnych epitopów gospodarza. Następnym celem było otrzymanie koniugatów polisacharyd-białko, zawierających te modyfikowane polisacharydy. Jeszcze innym celem wynalazku było otrzymanie szczepionek o właściwościach immunogennych i znacząco obniżonej reaktywności krzyżowej z GBMP.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/484,569 US5811102A (en) | 1995-06-07 | 1995-06-07 | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines |
| PCT/CA1996/000379 WO1996040239A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-06-07 | Modified meningococcal polysaccharide conjugate vaccines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL323862A1 PL323862A1 (en) | 1998-04-27 |
| PL184125B1 true PL184125B1 (pl) | 2002-09-30 |
Family
ID=23924694
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL96323862A PL184125B1 (pl) | 1995-06-07 | 1996-06-07 | Modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, skoniugowana cząsteczka, kompozycja szczepionki, surowica odpornościowa oraz zastosowanie skoniugowanej cząsteczki do wytwarzania szczepionki |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US5811102A (pl) |
| EP (1) | EP0831898B1 (pl) |
| JP (2) | JP4171068B2 (pl) |
| KR (1) | KR100452475B1 (pl) |
| CN (1) | CN1163270C (pl) |
| AT (1) | ATE238064T1 (pl) |
| AU (1) | AU706053B2 (pl) |
| BR (1) | BR9609229A (pl) |
| CA (1) | CA2223567C (pl) |
| CZ (1) | CZ391497A3 (pl) |
| DE (1) | DE69627652T2 (pl) |
| ES (1) | ES2196153T3 (pl) |
| HU (1) | HU224972B1 (pl) |
| IL (3) | IL147121A (pl) |
| NO (1) | NO321705B1 (pl) |
| PL (1) | PL184125B1 (pl) |
| WO (1) | WO1996040239A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA964823B (pl) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7655699B1 (en) | 1992-04-22 | 2010-02-02 | Eisai Inc. | Compounds having selective activity for retinoid X receptors, and means for modulation of processes mediated by retinoid X receptors |
| US20030157129A1 (en) * | 1995-06-23 | 2003-08-21 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Vaccine comprising a polysaccharide antigen - carrier protein conjugate and free carrier protein |
| US6048527A (en) | 1996-08-27 | 2000-04-11 | Chiron Corporation | Antibodies that define unique Meningococcal B epitopes and vaccine compositions |
| DK0939647T4 (da) * | 1996-08-27 | 2006-10-23 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Neisseria Meningitidis-serogruppe B-glycokonjugat og fremgangsmåde til anvendelse deraf |
| US6299881B1 (en) * | 1997-03-24 | 2001-10-09 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts |
| KR100757630B1 (ko) * | 1997-12-23 | 2007-09-10 | 박스터 헬쓰케어 에스.에이. | 신규한 추출 및 단리 방법으로 수득되는 세균성 캡슐형 다당류 |
| NZ509986A (en) * | 1998-08-19 | 2003-10-31 | Baxter Healthcare S | Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide and oligosaccharide protein conjugates as vaccines |
| US6585973B1 (en) * | 1998-10-29 | 2003-07-01 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Method for preparing solid phase conjugated vaccine |
| CA2279134A1 (en) * | 1999-07-29 | 2001-01-29 | Tianmin Liu | Novel strategy for carbohydrate-based therapeutic vaccines |
| AU2001278323A1 (en) * | 2000-07-28 | 2002-02-13 | National Research Council Of Canada | Modified sialic acid vaccines |
| GB0024200D0 (en) * | 2000-10-03 | 2000-11-15 | Smithkline Beecham Sa | Component vaccine |
| AP1897A (en) | 2001-01-23 | 2008-10-10 | Aventis Pasteur | Multivalent Meningococcal polysaccharide-Protein Conjugate Vaccine. |
| RU2322451C2 (ru) * | 2001-04-17 | 2008-04-20 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс, Инк. | Молекулярные миметики эпитопов менингококка в, которые вызывают выработку функционально активных антител |
| GB0115176D0 (en) * | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| GB0130215D0 (en) * | 2001-12-18 | 2002-02-06 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| WO2004011027A1 (en) * | 2002-07-30 | 2004-02-05 | Baxter International Inc. | Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines |
| CN102302776B (zh) * | 2003-01-30 | 2014-06-18 | 诺华疫苗和诊断有限公司 | 抗多种脑膜炎球菌血清组的可注射性疫苗 |
| AU2004251734B2 (en) * | 2003-06-23 | 2010-11-04 | Baxalta GmbH | Vaccines against group Y neisseria meningitidis and meningococcal combinations thereof |
| US8148335B2 (en) | 2004-06-23 | 2012-04-03 | Children's Hospital & Research Center Oakland | De-N-acetyl sialic acid antigens, antibodies thereto, and methods of use in cancer therapy |
| MXPA06015107A (es) * | 2004-06-23 | 2007-03-26 | Childrens Hosp & Res Ct Oak | Derivados de polisacaridos y sus usos en la induccion de una respuesta inmune. |
| WO2006096970A1 (en) * | 2005-03-14 | 2006-09-21 | Governors Of The University Of Alberta | Synthetic anti-candida albicans oligosaccharide based vaccines |
| US20070184072A1 (en) * | 2005-04-08 | 2007-08-09 | Wyeth | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| US7709001B2 (en) * | 2005-04-08 | 2010-05-04 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| ES2383209T3 (es) | 2006-03-22 | 2012-06-19 | Novartis Ag | Regímenes para la inmunización con conjugados meningococicos |
| US10828361B2 (en) * | 2006-03-22 | 2020-11-10 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Regimens for immunisation with meningococcal conjugates |
| WO2007116409A2 (en) * | 2006-04-11 | 2007-10-18 | Yeda Research And Development Co. Ltd. At The Weizmann Institute Of Science | Improved vaccines comprising multimeric hsp60 peptide carriers |
| GB0611914D0 (en) * | 2006-06-15 | 2006-07-26 | Teti Giuseppe | Peptides that mimic non-human cross-reactive protective epitopes of the group Bmeningococcal capsulsar polysaccharide |
| ATE511398T1 (de) | 2006-09-07 | 2011-06-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Inaktiviertes poliovirus mischimpfstoff |
| ES2621359T3 (es) * | 2007-06-20 | 2017-07-03 | Pfizer Ireland Pharmaceuticals | Polisacáridos modificados para vacunas conjugadas |
| WO2010064437A1 (ja) | 2008-12-03 | 2010-06-10 | 株式会社カネカ | ホルミル基含有多孔質担体、それを用いた吸着体、およびそれらの製造方法 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4057685A (en) * | 1972-02-02 | 1977-11-08 | Abbott Laboratories | Chemically modified endotoxin immunizing agent |
| US4356170A (en) * | 1981-05-27 | 1982-10-26 | Canadian Patents & Development Ltd. | Immunogenic polysaccharide-protein conjugates |
| US4673574A (en) * | 1981-08-31 | 1987-06-16 | Anderson Porter W | Immunogenic conjugates |
| US4902506A (en) * | 1983-07-05 | 1990-02-20 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
| US4619828A (en) * | 1982-07-06 | 1986-10-28 | Connaught Laboratories, Inc. | Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines |
| US4644059A (en) * | 1982-07-06 | 1987-02-17 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae B polysaccharide-diptheria toxoid conjugate vaccine |
| US4496538A (en) * | 1982-07-06 | 1985-01-29 | Connaught Laboratories, Inc. | Haemophilus influenzae b polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccine |
| NZ214503A (en) * | 1984-12-20 | 1990-02-26 | Merck & Co Inc | Covalently-modified neutral bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates |
| US4601903A (en) | 1985-05-01 | 1986-07-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against Neisseria meningitidis Group B serotype 2 invasive disease |
| US4727136A (en) * | 1985-10-01 | 1988-02-23 | Canadian Patents And Development Ltd. | Modified meningococcal group B polysaccharide for conjugate vaccine |
| US5034516A (en) * | 1987-08-04 | 1991-07-23 | University Of Ottawa | Synthetic antigens of sialic acid and derivatives thereof |
| WO1990006696A2 (en) | 1988-12-19 | 1990-06-28 | Praxis Biologics, Inc. | Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine |
| KR0158436B1 (ko) * | 1989-12-14 | 1998-12-01 | 피에르 오. 페론 | 개선된 수막염균성 폴리사카라이드 결합체 백신 |
| FI903414A (fi) | 1990-07-06 | 1992-01-07 | Kansanterveyslaitos | Produktion av proteiner i grampositiva bakterier. |
| FR2682388B1 (fr) * | 1991-10-10 | 1995-06-09 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal. |
| US5425946A (en) * | 1992-08-31 | 1995-06-20 | North American Vaccine, Inc. | Vaccines against group C Neisseria meningitidis |
| US5780606A (en) * | 1995-06-07 | 1998-07-14 | Connaught Laboratories Limited | Neisseria meningitidis capsular polysaccharide conjugates |
| US6048527A (en) * | 1996-08-27 | 2000-04-11 | Chiron Corporation | Antibodies that define unique Meningococcal B epitopes and vaccine compositions |
-
1995
- 1995-06-07 US US08/484,569 patent/US5811102A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-06-07 IL IL147121A patent/IL147121A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-06-07 IL IL11860496A patent/IL118604A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-06-07 JP JP50004397A patent/JP4171068B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-07 KR KR1019970709190A patent/KR100452475B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-06-07 DE DE69627652T patent/DE69627652T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-06-07 CZ CZ973914A patent/CZ391497A3/cs unknown
- 1996-06-07 EP EP96917303A patent/EP0831898B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-07 BR BR9609229A patent/BR9609229A/pt unknown
- 1996-06-07 WO PCT/CA1996/000379 patent/WO1996040239A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-06-07 CA CA002223567A patent/CA2223567C/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-07 ZA ZA964823A patent/ZA964823B/xx unknown
- 1996-06-07 HU HU9802664A patent/HU224972B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-06-07 AT AT96917303T patent/ATE238064T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-06-07 AU AU59937/96A patent/AU706053B2/en not_active Ceased
- 1996-06-07 PL PL96323862A patent/PL184125B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1996-06-07 ES ES96917303T patent/ES2196153T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-06-07 CN CNB961945826A patent/CN1163270C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-12-02 NO NO19975547A patent/NO321705B1/no not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-02-11 US US09/022,155 patent/US5969130A/en not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-07-20 US US09/357,491 patent/US6350449B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2001
- 2001-07-20 US US09/910,568 patent/US6596283B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-12-16 IL IL14712101A patent/IL147121A0/xx unknown
-
2008
- 2008-05-14 JP JP2008126880A patent/JP2008285675A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL184125B1 (pl) | Modyfikowany polisacharyd meningokokowy grupy B, skoniugowana cząsteczka, kompozycja szczepionki, surowica odpornościowa oraz zastosowanie skoniugowanej cząsteczki do wytwarzania szczepionki | |
| AU641715B2 (en) | Improved meningococcal polysaccharide conjugate vaccine | |
| AU748973B2 (en) | Immunogenic conjugates comprising a group B meningococcal porin and an H. influenzae polysaccharide | |
| PL175595B1 (pl) | Antygenowy/immunogenny koniugat do wytwarzania szczepionki przeciwko infekcji N.meningitidis, sposób wytwarzania antygenowego/immunogennego koniugatu oraz szczepionka przeciwko infekcji N.meningitidis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20100607 |