RU2475495C2 - Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий - Google Patents
Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2475495C2 RU2475495C2 RU2008122435/10A RU2008122435A RU2475495C2 RU 2475495 C2 RU2475495 C2 RU 2475495C2 RU 2008122435/10 A RU2008122435/10 A RU 2008122435/10A RU 2008122435 A RU2008122435 A RU 2008122435A RU 2475495 C2 RU2475495 C2 RU 2475495C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- proteins
- seq
- amino acid
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 183
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 178
- 241001212279 Neisseriales Species 0.000 title 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 46
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 7
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 23
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 22
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical group O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 5
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 168
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 43
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 39
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 37
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 25
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 19
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 17
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 14
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 12
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 10
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 108010094020 polyglycine Proteins 0.000 description 8
- 229920000232 polyglycine polymer Polymers 0.000 description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 6
- 101000626900 Trieres chinensis Uncharacterized 5.5 kDa protein in ccsA-rps6 intergenic region Proteins 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- NTNWOCRCBQPEKQ-YFKPBYRVSA-N N(omega)-methyl-L-arginine Chemical compound CN=C(N)NCCC[C@H](N)C(O)=O NTNWOCRCBQPEKQ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 241000588677 Neisseria meningitidis serogroup B Species 0.000 description 5
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 5
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 5
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 5
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 5
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 5
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 239000004627 regenerated cellulose Substances 0.000 description 5
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 5
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-6-[[(3s,4s,4ar,6ar,6bs,8r,8ar,12as,14ar,14br)-8a-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-5-[(3s,5s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@H]5CC(C)(C)CC[C@@]5([C@@H](C[C@@]4(C)[C@]3(C)CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)O)C(=O)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H]([C@@H]([C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@](O)(CO)CO3)O)[C@H](O)CO2)O)[C@H](C)O1)O)O)OC(=O)C[C@@H](O)C[C@H](OC(=O)C[C@@H](O)C[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](CO)O1)O)[C@@H](C)CC)C(O)=O)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 4
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 4
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 4
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 101000870438 Streptococcus gordonii UDP-N-acetylglucosamine-peptide N-acetylglucosaminyltransferase stabilizing protein GtfB Proteins 0.000 description 3
- 101100038645 Streptomyces griseus rppA gene Proteins 0.000 description 3
- 101000645119 Vibrio campbellii (strain ATCC BAA-1116 / BB120) Nucleotide-binding protein VIBHAR_03667 Proteins 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 3
- CTMZLDSMFCVUNX-VMIOUTBZSA-N cytidylyl-(3'->5')-guanosine Chemical group O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=C(C(N=C(N)N3)=O)N=C2)O)[C@@H](CO)O1 CTMZLDSMFCVUNX-VMIOUTBZSA-N 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 108700020354 N-acetylmuramyl-threonyl-isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- 241000588654 Neisseria cinerea Species 0.000 description 2
- 241000588649 Neisseria lactamica Species 0.000 description 2
- 241000921898 Neisseria meningitidis serogroup A Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N almurtide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CO[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O NWMHDZMRVUOQGL-CZEIJOLGSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 229960005225 mifamurtide Drugs 0.000 description 2
- JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N mifamurtide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COP(O)(=O)OCCNC(=O)[C@H](C)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O JMUHBNWAORSSBD-WKYWBUFDSA-N 0.000 description 2
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 2
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 2
- 229940066429 octoxynol Drugs 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N (4R)-4-[[(2S,3R)-2-[acetyl-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-4-[(1R)-1-carboxyethoxy]-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound C(C)(=O)N([C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)O)C(N)=O)C1[C@H](N)[C@@H](O[C@@H](C(=O)O)C)[C@H](O)[C@H](O1)CO YHQZWWDVLJPRIF-JLHRHDQISA-N 0.000 description 1
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 101100039010 Caenorhabditis elegans dis-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100181929 Caenorhabditis elegans lin-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 102100031725 Cortactin-binding protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100037840 Dehydrogenase/reductase SDR family member 2, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 108010002231 IgA-specific serine endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000588655 Moraxella catarrhalis Species 0.000 description 1
- WPNJAUFVNXKLIM-UHFFFAOYSA-N Moxonidine Chemical compound COC1=NC(C)=NC(Cl)=C1NC1=NCCN1 WPNJAUFVNXKLIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108700015872 N-acetyl-nor-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 241001174901 Neisseria meningitidis alpha275 Species 0.000 description 1
- 101100459189 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) mutS gene Proteins 0.000 description 1
- 241000947238 Neisseria meningitidis serogroup C Species 0.000 description 1
- 241001573069 Neisseria meningitidis serogroup Y Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 101150075249 ORF40 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101100156835 Paenarthrobacter nicotinovorans xdh gene Proteins 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 241000605862 Porphyromonas gingivalis Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 101710197985 Probable protein Rev Proteins 0.000 description 1
- 101710188053 Protein D Proteins 0.000 description 1
- 229940124875 RabAvert Drugs 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 101710132893 Resolvase Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241000193990 Streptococcus sp. 'group B' Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 description 1
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 description 1
- 102000010912 Transferrin-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010062476 Transferrin-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 230000002281 colonystimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- LLVRPYIQCYAUOE-UHFFFAOYSA-L dialuminum;dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Al+3].[Al+3] LLVRPYIQCYAUOE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000026058 directional locomotion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 229930186900 holotoxin Natural products 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 108700041430 link Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001459 mortal effect Effects 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 description 1
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000009666 routine test Methods 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 238000010845 search algorithm Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 1
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 101150101515 tbpl2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению иммуногенов из Neisseria meningitides, и может быть использовано в медицине. Предложен белок, на 80% и более идентичный аминокислотной последовательности SEQ ID NO:19, а также иммуногенная композиция с указанным белком. Изобретение позволяет примененять указанный белок для эффективной профилактики или лечения бактериального менингита. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 5 ил., 28 табл.
Description
Все процитированные в данном описании документы включены в виде ссылки в полном объеме.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Данное изобретение относится к области экспрессии белков. В частности, изобретение относится к экспрессии белков из Neisseria (например, N. gonorrhoeae или, предпочтительно, N. meningitidis).
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
В публикациях 1 и 2 раскрыты альтернативные и усовершенствованные способы экспрессии белков нейссерий, описанных в публикациях 3-6. Один из таких способов состоит в получении «гибридных» белков, при котором два или более белков нейссерий экспрессируются в виде одной полипептидной цепи. Указанный способ предоставляет два преимущества. Во-первых, белок, который может быть нестабильным или плохо экспрессируется сам по себе, может быть получен с помощью добавления подходящего партнера в гибриде, чтобы преодолеть данную проблему. Во-вторых, упрощается коммерческое производство, так как требуется использование только одной экспрессии и очистки, чтобы получить два отдельно применяемых белка.
Задачей данного изобретения являются новые альтернативные и улучшенные способы экспрессии белков нейссерий.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Гибридные белки
Таким образом, изобретение относится к способу одновременной экспрессии двух или более (например, 3, 4, 5, 6 или более) белков нейссерий, при котором указанные два или более белков связаны так, чтобы они транслировались в виде одной полипептидной цепи. В общем, гибридные белки согласно изобретению можно представить формулой: NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где Х означает аминокислотную последовательность, L означает необязательную аминокислотную последовательность линкера, А означает необязательную N-концевую аминокислотную последовательность, В означает необязательную С-концевую аминокислотную последовательность и n является целым числом, большим 1.
Значение n находится в пределах от 2 до x, а значение x обычно равно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10. Предпочтительно n равно 2, 3 или 4; более предпочтительно 2 или 3; наиболее предпочтительно n=2.
Составляющие -X-
Существует две основных группы гибридных белков согласно изобретению. Указанные две группы не являются взаимоисключающими.
В первой группе каждая составляющая -Х- представляет собой:
(a) аминокислотную последовательность orf1, orf4, orf25, orf40, orf46.1, orf83, NMB1343, 230, 233, 287, 292, 594, 687, 736, 741, 907, 919, 936, 953, 961 или 983;
(b) аминокислотную последовательность, обладающую идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью согласно (а); или
(c) аминокислотную последовательность, содержащую фрагмент аминокислотной последовательности согласно (а).
Предпочтительной подгруппой (а) являются: orf46.1, 230, 287, 741, 919, 936, 953, 961 и 983. Более предпочтительной подгруппой (а) являются: orf46.1, 287, 741 и 961. На фиг.3 показаны предпочтительные гибридные белки.
Во второй группе гибридный белок содержит первую составляющую -Х- (-Ха-) и вторую составляющую -Х- (-Хb-). Составляющая -Ха- имеет одну из следующих аминокислотных последовательностей:
(d) 446 четных SEQ ID (т.е. 2, 4, 6, …, 890, 892), представленных в публикации 3;
(e) 45 четных SEQ ID (т.е. 2, 4, 6, …, 88, 90), представленных в публикации 4;
(f) 1674 четных SEQ ID NO:2-3020, четных SEQ ID NO:3040-3114 и все SEQ ID NO:3115-3241, представленные в публикации 5;
(g) 2160 аминокислотных последовательностей с NMB0001 по NMB2160 из публикации 7; или
(h) аминокислотная последовательность, представленная в публикации 1 или публикации 2.
Составляющая -Хb- является родственной -Ха- при условии, что: (i) -Хb- обладает идентичностью последовательностей с -Ха- и/или (j) -Хb- содержит фрагмент -Ха-.
Примеры указанного второго типа гибридного белка включают белки, в которых две или более составляющих -Х- являются идентичными или в которых они являются вариантами одного и того же белка, например, две полиморфные формы одного и того же белка могут экспрессироваться в виде -Хa-Хb-, и три полиморфные формы могут экспрессироваться в виде -Хa-Хb-Хc- и т.д.
Составляющие -Ха- и -Хb- могут быть расположены в любом порядке от N-конца к С-концу.
Составляющая -Ха- предпочтительно представляет собой аминокислотную последовательность orf1, orf4, orf25, orf40, orf46.1, orf83, NMB1343, 230, 233, 287, 292, 594, 687, 736, 741, 907, 919, 936, 953, 961 или 983. Более предпочтительно составляющая -Ха- является аминокислотной последовательностью orf46.1, 230, 287, 741, 919, 936, 953, 961 или 983. Наиболее предпочтительно составляющая -Ха- является аминокислотной последовательностью orf46.1, 287, 741 или 961.
В случае белков, где каждый из n составляющих -Х- проявляет идентичность последовательностей с каждой другой составляющей -Х-, белок называют «тандемным белком». Предпочтительны тандемные белки, в которых n=2.
Степень «идентичности последовательностей» в отношении (b) и (1) предпочтительно составляет более 50% (например, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или более, до 100%). Это относится к мутантам, гомологам, ортологам, аллельным вариантам и т.д. [например, см. ссылку 8]. Идентичность предпочтительно определяют с помощью алгоритма поиска гомологии Смита-Ватермана, который выполняется в программе MPSRCH (Oxford Molecular), с использованием поиска аффинных гэпов с параметрами: штраф за открытие гэпа=12 и штраф за продолжение гэпа=1. Обычно идентичность, составляющая 50% или более, между двумя белками считается показателем функциональной эквивалентности.
«Фрагмент» по отношению к (с) и (j) должен состоять, по меньшей мере, из m следующих друг за другом аминокислот из аминокислотной последовательности из (a), (d), (е), (f), (g) или (h) и в зависимости от конкретной последовательности m равно 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200 или более).
Предпочтительно фрагмент содержит эпитоп из аминокислотной последовательности из (а), (d), (е), (f), (g) или (h). Предпочтительными фрагментами являются фрагменты, описанные в публикациях 9 и 10.
Предпочтительными (с)- и (j)-фрагментами являются усеченные на С- и/или N-конце фрагменты (например, Δ1-287, Δ2-287 и т.д.).
В предпочтительные последовательности (b), (с), (i) и (j) не включены полиглициновые последовательности. Обнаружено, что это способствует экспрессии [ссылка 2]. Полиглициновые последовательности могут быть представлены в виде (Gly)g, где g≥3 (например, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более). Если составляющая -Х- содержит полиглициновую последовательность в своей форме дикого типа, предпочтительно исключить указанную последовательность в гибридных белках согласно изобретению. Это можно осуществить путем нарушения или удаления (Gly)g - посредством делеции (например, CGGGGS-CGGGS, CGGS, CGS или CS), замены (например, CGGGGS-CGXGGS, CGXXGS, CGXGXS и т.д.) и/или вставки (например, CGGGGS→CGGXGGS, CGXGGGS и т.д.). Предпочтительна делеция (Gly)g и делеция N-концевой части белка до и включая полиглициновую последовательность (например, делеция остатков 1-32 в SEQ ID NO:1) обозначается в данном описании «ΔG». Удаление полиглицина, в частности, применимо в случае белков 287, 741, 983 и Tbp2 (ΔG287, ΔG741, ΔG983 и ΔGTbp2 - ссылки 1 и 2).
В предпочтительных (с)- и (j)-фрагментах исключены целые белковые домены. В частности, это применимо в случае белка 961, 287 и ORF46. В том случае, если белок условно разделен на домены, в (с)- и (j)-фрагментах могут быть исключены один или несколько указанных доменов (например, 287В, 287С, 287ВС, ORF461-433, ORF46434-608, 961с - ссылка 2; фигуры 4 и 5 в данном описании).
Белок 287 условно разделен на три домена, названных А, В и С (см. фигуру 5 в публикации 2). Домен В выравнивается с протеазами IgA, домен С выравнивается с белками, связывающими трансферрин, и не наблюдается строгого выравнивания домена А с последовательностями в базе данных. Выравнивание полиморфных форм 287 описано в публикации 8.
ORF46 условно разделен на два домена - первый домен (аминокислоты 1-433; ORF46.1), который высококонсервативен среди видов и серогрупп, и второй домен (аминокислоты 434-608), который не является высоко консервативным. Второй домен предпочтительно делегируют, оставляя ORF46.1. Выравнивание полиморфных форм ORF46 описано в публикации 8.
Белок 961 условно разделен на несколько доменов (фиг.4).
Если составляющая -Х- имеет последовательность лидерного пептида в своей форме дикого типа, она может быть включена или опущена в гибридных белках согласно изобретению. Когда лидерный пептид исключен, последовательность является предпочтительным примером аминокислотной последовательности по (с) и (j). В одном варианте лидерные пептиды будут делегированы, за исключением случая, когда составляющая -Х- расположена на N-конце гибридного белка, т.е. лидерный пептид X1 будет сохранен, а лидерные пептиды Х2…Хn будут удалены. Это эквивалентно делегированию всех лидерных пептидов и использованию лидерного пептида X1 в виде составляющей -А-.
В том случае, когда n=2, предпочтительными парами составляющих -Х- являются: ΔG287 и 230; ΔG287 и 936; ΔG287 и 741; 961с и 287; 961с и 230; 961с и 936; 961cL и 287; 961cL и 230; 961cL и 936; ORF46.1 и 936; ORF46.1 и 230; 230 и 961; 230 и 741; 936 и 961; 936 и 741. В том случае, когда n=2, предпочтительными парами составляющих -Х- для тандемных белков являются: ΔG741 и 741; ΔG287 и 287. Более конкретно в случае, когда n=2, предпочтительными являются следующие комбинации X1 и Х2:
| X1 | X2 | X1 | X2 | |
| ΔG287 | 230 | 230 | ΔG287 | |
| ΔG287 | 936 | 936 | ΔG287 | |
| ΔG287 | 741 | 741 | ΔG287 | |
| ΔG287 | 961 | 961 | ΔG287 | |
| ΔG287 | ORF46.1 | ORF46.1 | ΔG287 | |
| ΔG287 | 919 | 919 | ΔG287 | |
| ΔG287 | 953 | 953 | ΔG287 | |
| 961с | 287 | 287 | 961с | |
| 961с | 230 | 230 | 961с | |
| 961с | 936 | 936 | 961с | |
| 961с | 741 | 741 | 961с | |
| 961с | 983 | 983 | 961с | |
| 961с | ΔG983 | ΔG983 | 961с | |
| 961с | ORF46.1 | ORF46.1 | 961с | |
| 961 | ORF46.1 | ORP46.1 | 961 | |
| 961cL | 287 | 287 | 961cL | |
| 961cL | 230 | 230 | 961cL | |
| 961cL | 936 | 936 | 961cL | |
| ORF46.1 | 936 | 936 | ORF46.1 | |
| ORF46.1 | 230 | 230 | ORF46.1 | |
| ORF46.1 | 741 | 741 | ORF46.1 | |
| ORF46.1 | ΔG741 | ΔG741 | ORF46.1 | |
| ORF46.1 | 983 | 983 | ORF46.1 | |
| ORF46.1 | ΔG983 | ΔG983 | ORF46.1 | |
| 230 | 961 | 961 | 230 | |
| 230 | 741 | 741 | 230 | |
| 230 | ΔG741 | ΔG741 | 230 | |
| 936 | 961 | 961 | 936 | |
| 936 | 741 | 741 | 936 | |
| 936 | ΔG741 | ΔG741 | 936 | |
| ΔG741 | 741 | ΔG287 | 287 | |
| ORF46.1 | 983 | 983 | ORF46.1 | |
| ΔG741 | ORF46.1 | ORF46.1 | ΔG741 | |
| ΔG741 | 983 | 983 | ΔG741 | |
| ΔG741 | 961 | 961 | ΔG741 | |
| ΔG741 | 961с | 961с | ΔG741 | |
| ΔG983 | ORF46.1 | ORF46.1 | ΔG983 | |
| ΔG983 | 961 | 961 | ΔG983 | |
| ΔG983 | 961с | 961с | ΔG983 |
В том случае, когда 287 используют в полноразмерной форме, он предпочтительно находится на С-конце гибридного белка; если его необходимо использовать на N-конце, то предпочтительно используют ΔG-форму 287. Подобным образом, в том случае, когда 741 используют в полноразмерной форме, он предпочтительно расположен на С-конце гибридного белка; если его необходимо использовать на N-конце, то предпочтительно используют ΔG-форму 741.
Составляющие -L-
Для каждого n случая [-X-L-] линкерная аминокислотная последовательность -L- может присутствовать или отсутствовать. Например, когда n=2 гибрид может представлять собой NH2-X1-L1-X2-L2-COOH, NH2-X1-X2-COOH, NH2-X1-L1-X2-COOH, NH2-X1-X2-L2-COOH и т.д.
Линкерная аминокислотная последовательность(ти) -L- обычно будет(будут) короткой(короткими) (например, 20 или меньше аминокислот, т.е. 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают короткие пептидные последовательности, которые облегчают клонирование, полиглициновые линкеры (т.е. Glyn, где n=2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более) и гистидиновые метки (т.е. HiSn, где n=3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более). Другие подходящие линкерные аминокислотные последовательности будут очевидны для специалистов в данной области. Применим линкер GSGGGG (SEQ ID NO:27), при этом дипептид Gly-Ser образован из сайта рестрикции BamHI, таким образом, способствуя клонированию и манипуляциям, а тетрапептид Gly4 является типичным полиглициновым линкером.
Если Xn+1 является белком ΔG и Ln является глициновым линкером, это может быть эквивалентно случаю, когда Xn+1 не является ΔG-белком, а Ln отсутствует.
Составляющая -А-
-А- является необязательной N-концевой аминокислотной последовательностью. Обычно она является короткой (например, 40 или меньше аминокислот, т.е. 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают лидерные последовательности для направленного перемещения белков или короткие пептидные последовательности, которые облегчают клонирование или очистку (например, гистидиновые метки, т.е. Hisn, где n=3, 4, 5, 6, 1, 8, 9, 10 или более). Другие подходящие N-концевые аминокислотные последовательности будут очевидны для специалистов в данной области. Если X1 не содержит на своем N-конце метионин, -А- может быть остатком метионина.
Составляющая -В-
-В- является необязательной С-концевой аминокислотной последовательностью. Обычно она является короткой (например, 40 или меньше аминокислот, т.е. 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают последовательности для направленного перемещения белков, короткие пептидные последовательности, которые облегчают клонирование или очистку (например, содержащие гистидиновые метки, т.е. Hisn, где n=3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более), или последовательности, которые повышают стабильность белка. Другие подходящие С-концевые аминокислотные последовательности будут очевидны специалистам в данной области.
Полиморфные формы белков
В изобретении можно использовать аминокислотные последовательности из любых штаммов N. meningitidis. Ссылка на конкретный белок (например, «287» или «ORF46.1») таким образом включает в себя такой белок из любого штамма. Вариации последовательностей между штаммами включены в (b), (с), (i) и (j).
Опубликованные последовательности из N. meningitidis серогруппы В включают:
| Белок | Ссылка | Белок | Ссылка | |
| orf1 | Ref.3, SEQ ID 650 | orf4 | Ref.3, SEQ ID 218 | |
| orf25 | Ref.3, SEQ ID 684 | orf40 | Ref.4, SEQ ID 4 | |
| orf46 | Ref.6, SEQ ID 1049 | orf83 | Ref.3, SEQ ID 314 | |
| NMB1343 | Ref.7, NMB1343 | 230 | Ref.5, SEQ ID 830 | |
| 233 | Ref.5, SEQ ID 860 | 287 | Ref.5, SEQ ID 3104 | |
| 292 | Ref.5. SEQ ID 1220 | 594 | Ref.5, SEQ ID 1862 | |
| 687 | Ref.5, SEQ ID 2282 | 736 | Ref.5, SEQ ID 2506 | |
| 741 | Ref.5, SEQ ID 2536 | 907 | Ref.5, SEQ ID 2732 | |
| 919 | Ref.5, SEQ ID 3070 | 936 | Ref.5, SEQ ID 2884 | |
| 953 | Ref.5, SEQ ID 2918 | 961 | Ref.5, SEQ ID 940 | |
| 983 | Ref.7, NMB1969 |
В публикации 8 описаны полиморфные формы белков ORF4, ORF40, ORF46, 225, 235, 287, 519, 726, 919 и 953. Полиморфные формы 961 описаны в публикациях 11 и 12. Любую из указанных полиморфных форм можно использовать согласно данному изобретению.
Приведенный в данном описании список последовательностей включает полиморфные формы белков 741 (SEQ ID 1-22) и NMB1343 (SEQ ID 23-24), которые были идентифицированы.
Серогруппы и штаммы
Предпочтительные белки согласно изобретению содержат составляющие -Х-, имеющие аминокислотную последовательность, обнаруженную в N. meningitidis серогруппы В. В одном белке согласно изобретению отдельные составляющие -Х- могут быть из одного или нескольких штаммов. Например, когда n=2, Х2 может быть из того же самого штамма, что и X1, или из другого штамма. Когда n=3, штаммы могут быть (i) Х1=Х2=Х3, (ii) Х1=Х2≠Х3, (iii) Х1≠Х2=Х3, (iv) Х1≠Х2≠Х3 или (v) X1=X3≠X2 и т.д.
В серогруппе В предпочтительные составляющие -Х- получены из штаммов 2996, МС58, 95N477 или 394/98. Штамм 95N477 иногда в данном описании называют «ЕТ37», это его электрофоретический тип. Штамм 394/98 иногда в данном описании называют «nz», так как это новозеландский штамм.
В том случае, когда используют форму 287, она предпочтительно получена из штамма 2996 или из штамма 394/98.
В том случае, когда используют форму 741, предпочтительно она получена из штаммов серогруппы В МС58, 2996, 394/98 или 95N477 или из штамма серогруппы С 90/18311.
В том случае, когда используют форму 961, предпочтительно она получена из штамма 2996.
Штаммы указаны подстрочным индексом, например, 741мс58 означает белок 741 из штамма МС58. Если не оговорено особо, указанные в данном описании белки (например, без подстрочного индекса) из штамма 2996 N. meningitidis, который может быть принят в качестве «эталонного» штамма. Однако будет понятно, что изобретение в общем не ограничено штаммом. Как указано выше, можно полагать, что общая ссылка на белок (например, «287», «919» и т.д.) включает такой белок из любого штамма. Обычно он будет обладать идентичностью последовательностей с 2996, равной 90% или более (например, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более).
Основанная на доменах экспрессия белка 961
В публикациях 1 и 2 описано, как можно условно разделить белок на домены и как можно осуществлять манипуляции с белком на основе указанных доменов. В данном изобретении расширено применение данного способа по отношению к белку 961 (также, известный как «NadA» [11, 12]).
У штамма 2996 N. meningitidis серогруппы В NadA содержит 405 аминокислот. Указанный белок условно разделен на следующие девять доменов (фиг.4):
| Название домена | Аминокислоты | Название домена | Аминокислоты |
| 961-1 'L' | 1-23 | 961-6 | 269-286 |
| 961-2 | 24-87 | 961-7 | 287-330 |
| 961-3 | 88-143 | 961-8 | ЗЗТ-350 |
| 961-4 | 144-180 | 961-9 | 351-405 |
| 961-5 | 181-268 | ||
Приведенную информацию можно использовать для локализации таких же доменов в других формах 961.
Указанные домены были делегированы из 961 штамма 2996 различными способами (фиг.5). В предпочтительных фрагментах 961 исключен один или несколько из указанных девяти доменов, например, следующие:
- с 961-2 по 961-5 («961а»)
- с 961-6 по 961-9 («961b»)
- с 961-1 по 961-8 («961cL»)
- с 961-2 по 961-8 («961с»)
- с 961-2 по 961-6 и аминокислоты 287-325 из домена 961-7 («961d»)
- с 961-2 по 961-8 и аминокислоты 351-383 из домена 961-9 («961Δ1»)
- с 961-1 по 961-8 и аминокислоты 351-383 из домена 961-9 («961Δ1L»)
- с 961-1 по 961-7 и аминокислоты 331-343 из домена 961-8 («961cL-Δaro»)
- с 961-1 по 961-6 и аминокислоты 287-315 из домена 961-7 («961cL-Δcc»)
- с 961-1 по 961-5 («961aL»)
- с 961-1 по 961-4 («961aL-Δ1»)
- с 961-1 по 961-3 («961aL-Δ2»)
- с 961-1 по 961-2 («961aL-Δ3»)
Указанные тринадцать фрагментов (и их подфрагментов, в которых отсутствуют 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот на любом из концов или на обоих концах) являются предпочтительными (с)- и (j)-фрагментами, но они также могут быть экспрессированы сами по себе, т.е. не в форме гибридного белка согласно изобретению. Таким образом, изобретение относится к белку, содержащему один из указанных фрагментов, при условии, что белок не является полноразмерным 961 и не является белком, конкретно описанным в публикации 1 или 2. Данный белок может быть слитым белком (например, слиянием с GST или слиянием с His-меткой).
Последовательности
Изобретение также относится к белку, имеющему аминокислотную последовательность из SEQ ID 1-24. Изобретение также относится к белкам и нуклеиновой кислоте, имеющим последовательности, идентичные указанным. Как описано выше, степень «идентичности последовательностей» предпочтительно выше 50% (например, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% или выше).
Изобретение также относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей такие белки.
Кроме того, изобретение относится к нуклеиновой кислоте, которая может гибридизоваться с данной нуклеиновой кислотой предпочтительно в условиях «высокой жесткости» (например, при 65°С в растворе 0,1×SSC, 0,5% SDS).
Изобретение также относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей белки согласно изобретению.
Следует понимать, что изобретение относится к нуклеиновой кислоте, содержащей последовательности, комплементарные последовательностям, описанным выше (например, используемым в качестве антисмысловых или в виде зондов).
Нуклеиновую кислоту согласно изобретению, конечно, можно получить множеством способов (например, в результате химического синтеза, из библиотеки геномной или кДНК, из самого организма и т.д.), и она может принимать различные формы (например, однонитевую, двунитевую, векторы, зонды и т.д.).
Кроме того, термин «нуклеиновая кислота» включает ДНК и РНК, а также их аналоги, такие как аналоги, содержащие модифицированные остовы, а также пептидонуклеиновые кислоты (ПНК) и т.д.
Смеси
Изобретение также относится к композиции, содержащей два или более (например, 2, 3, 4, 5, 6 или 7) из следующих белков:
(1) 287
(2) 741
(3) ORF46.1
(4) 961
(5) NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где n=2, X1=287, X2=953
(6) NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где n=2, X1=287, X2=919
(7) NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где n=2, X1=287, X2=961
Смесь может содержать один или оба из следующих белков либо в комбинации с двумя или большим количеством белков (1)-(7), либо в комбинации только с одним из белков (1)-(7):
(8) NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где n=2, X1=287, X2=741
(9) NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где n=2, X1=936, Х2=741
В том случае, когда в смесь включены белки 287 и 741 (т.е. в случае белка 1, 2, 5, 6, 7 или 8), они могут быть в форме «ΔG». В том случае, когда включен белок 961, он предпочтительно находится в форме «961с», в которой отсутствуют N-концевой лидер и С-концевой мембранный якорь [например, см. ссылки 1, 2 и 11].
Предпочтительная смесь содержит следующие три белка:
(1) 961с, предпочтительно 961с2996 (например, SEQ ID NO:31, приведенная в данном описании);
(2) NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где n равно 2, -X1- означает ΔG287 (предпочтительно ΔG287NZ), -Х2- означает 953 (предпочтительно 9532996), не содержащий своего лидерного пептида, -L1- означает GSGGGG и -А- содержит N-концевой метионин (например, -А- является М или МА) (например, SEQ ID NO:28 и 29, приведенные в данном описании); и
(3) NH2-A-[-X-L-]n-B-COOH, где n=2, X1=936 (предпочтительно 9362996), X2=ΔG741 (предпочтительно ΔG741MC58), L1=GSGGGG (например, SEQ ID NO:30, приведенная в данном описании).
Смеси также могут содержать пузырьки наружной мембраны N. meningitidis.
Гетерологичный хозяин
Хотя экспрессия белков согласно изобретению может иметь место в Neisseria, в данном изобретении предпочтительно используется гетерологичный хозяин. Гетерологичный хозяин может быть прокариотическим (например, бактерией) или эукариотическим. Предпочтительно хозяином является Е.coli, но другие подходящие хозяева включают Bacillus subtilis, Vibrio cholerae, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Neisseria lactamica, Neisseria cinerea, Mycobacteria (например, М. tuberculosis), дрожжи и т.д.
Векторы и др.
Изобретение относится к (а) нуклеиновой кислоте, кодирующей описанные выше белки, (b) векторам, содержащим указанные последовательности нуклеиновых кислот, (с) клеткам-хозяевам, содержащим указанные векторы, (d) композициям, содержащим белки или нуклеиновые кислоты согласно изобретению, которые могут быть подходящими в качестве иммуногенных композиций (например, вакцин) или в качестве диагностических реагентов, (е) указанным композициям для применения в качестве лекарственных средств (например, в качестве вакцин) или в качестве диагностических реагентов, (f) применению указанных композиций в производстве (1) лекарственного средства для лечения или профилактики инфекций, обусловленных бактериями нейссериями, (2) диагностического реагента для выявления наличия бактерий нейссерий или антител, выработанных против бактерий нейссерий, и/или (3) реагента, который может вызывать образование антитела против бактерий нейссерий, и (g) к способу лечения пациента, предусматривающему введение пациенту терапевтически эффективного количества указанных композиций.
Осуществление изобретения, как правило, будет включать в себя основные стадии: получение первой нуклеиновой кислоты, кодирующей первый белок; получение второй нуклеиновой кислоты, кодирующей второй белок; и лигирование первой и второй нуклеиновых кислот. Полученную в результате нуклеиновую кислоту можно встраивать в экспрессирующий вектор, или она уже может быть частью экспрессирующего вектора.
Чтобы повысить растворимость, очистка гибридных белков может включать в себя способы рефолдинга, описанные в данной заявке.
Иммуногенные композиции и лекарственные средства
Композиции согласно изобретению предпочтительно являются иммуногенными композициями и более предпочтительно композициями вакцин. Значение рН композиции предпочтительно составляет от 6 до 7. рН можно поддерживать с использованием буфера. Композиция может быть стерильной.
Вакцины согласно изобретению могут быть либо профилактическими (т.е. для того, чтобы предотвращать инфекцию) или терапевтическими (т.е. для того, чтобы лечить инфекцию), но, как правило, будут профилактическими.
Изобретение также относится к композиции согласно изобретению для применения в качестве лекарственного средства. Лекарственное средство предпочтительно способно вызывать иммунный ответ у млекопитающего (т.е. является иммуногенной композицией) и наиболее предпочтительно является вакциной.
Изобретение также относится к применению композиции согласно изобретению в производстве лекарственного средства, вызывающего иммунный ответ у млекопитающего. Лекарственное средство предпочтительно является вакциной.
Изобретение также относится к способу, позволяющему вызвать иммунный ответ у млекопитающего, включающему в себя стадию введения эффективного количества композиции согласно изобретению. Иммунный ответ предпочтительно является защитным. Способ может вызывать вторичный иммунный ответ.
Млекопитающим предпочтительно является человек. В том случае, когда вакцина предназначена для профилактического применения, человек предпочтительно является ребенком (например, ребенком раннего или младшего возраста); в том случае, когда вакцина предназначена для терапевтического применения, человек предпочтительно является взрослым. Вакцину, предназначенную для детей, также можно вводить взрослым, например, чтобы оценить безопасность, дозу, иммуногенность и т.д.
Указанные применения и способы предпочтительно предназначены для профилактики и/или лечения заболевания, вызванного Neisseria (например, менингита, заражения крови, гонореи и т.д.). Предпочтительна профилактика и/или лечение бактериального менингита.
Дополнительные компоненты композиции
Композиция согласно изобретению, как правило, кроме указанных выше компонентов будет содержать один или несколько «фармацевтически приемлемых носителей», которые включают любой носитель, который сам по себе не индуцирует продукции антител, вредных для индивидуума, принимающего композицию. Подходящие носители обычно являются крупными, медленно метаболизирующими макромолекулами, такими как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, трегалоза (WO 00/56365) и липидные аггрегаты (такие как капельки масла или липосомы). Такие носители хорошо известны специалистам в данной области. Вакцины также могут содержать разбавители, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и т.д. Дополнительно могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие агенты, буферные вещества для поддержания рН и тому подобные. Подробное обсуждение фармацевтически приемлемых эксципиентов имеется в Remington's Pharmaceutical Sciences.
Иммуногенные композиции, используемые в качестве вакцин, содержат иммунологически эффективное количество антигена, а также при необходимости любой другой из вышеуказанных компонентов. Под «иммунологически эффективным количеством» подразумевается, что введение этого количества индивидууму либо в однократной дозе, либо в виде части серии доз является эффективным для лечения или профилактики. Данное количество варьирует в зависимости от состояния здоровья и физического состояния индивидуума, которого необходимо лечить, возраста, таксономической группы индивидуума, которого необходимо лечить (например, примат, отличный от человека, примат и т.д.), способности иммунной системы индивидуума синтезировать антитела, степени требуемой защиты, приготовления препарата вакцины, оценки лечащим врачом медицинского случая и других факторов, имеющих к этому отношение. Предполагается, что количество будет находиться в относительно широких пределах, которые можно определить посредством обычных испытаний. Режим дозирования может представлять собой схему на основе однократной дозы или схему с использованием многократных доз (например, включая повторные дозы). Вакцину можно вводить вместе с другими иммунорегулирующими агентами.
Композиция может содержать другие адъюванты в дополнение (или вместо) соли алюминия. Предпочтительные адъюванты для усиления эффективности композиции включают, но не ограничены указанным: (1) эмульсионные препараты типа «масло-в-воде» (в присутствии или без других специфичных иммуностимулирующих агентов, таких как мурамилпептиды (см. ниже) или компоненты клеточной стенки бактерий), такие как, например, (a) MF59™ (WO 90/14837; глава 10 в ссылке 13), содержащий 5% Сквален, 0,5% Твин 80 и 0,5% Спан 85 (необязательно содержащий МТР-РЕ), приготовленный в виде субмикронных частиц с использованием микрофлюидизатора, (b) SAF, содержащий 10% Сквалан, 0,4% Твин 80, 5% блок-сополимер полиоксиэтилена и полиоксипропилена L121 и thr-MDP, либо микрофлюидизированный до субмикронной эмульсии, либо подвергнутый встряхиванию для образования эмульсии с частицами более крупного размера, и (с) адъювантная система Ribi™ (RAS) (Ribi Immunochem, Hamilton, MT), содержащая 2% Сквален, 0,2% Твин 80 и один или несколько компонентов клеточной стенки бактерий из группы, состоящей из монофосфориллипида A (MPL), димиколата трегалозы (TDM) и скелета клеточной стенки (CWS), предпочтительно MPL+CWS (Detox™); (2) можно использовать адъюванты на основе сапонина, такие как QS21 или Stimulon™ (Cambridge Bioscience, Worcester, MA), или частицы, созданные на их основе, такие как ISCOM (иммуностимулирующие комплексы), и указанные ISCOM могут не содержать дополнительного детергента, например, WO 00/07621; (3) полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда (IFA); (4) цитокины, такие как интерлейкины (например, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 (WO 99/44636), и т.д.), интерфероны (например, гамма-интерферон), колониестимулирующий фактор макрофагов (M-CSF), фактор некроза опухолей (TNF) и т.д.; (5) монофосфориллипид А (MPL) или 3-O-деацилированный MPL (3dMPL), например, GB-2220221, ЕР-А-0689454; (6) комбинации 3dMPL, например, с QS21 и/или эмульсиями типа «масло-в-воде», например, ЕР-А-0835318, ЕР-А-0735898, ЕР-А-0761231; (7) олигонуклеотиды, содержащие CpG-мотивы [Krieg, Vaccine 2000, 19, 618-622; Krieg Curr. opin. Mol. Ther. 2001, 3: 15-24; Roman et al., Nat. Med., 1997, 3, 849-854; Weiner et al., PNAS USA, 1997, 94, 10833-10837; Davis et al., J. Immunol., 1998, 160, 870-876; Chu et al., J. Exp. Med., 1997, 186, 1623-1631; Lipford et al., Eur. J. Immunol., 1997, 27, 2340-2344; Moldoveanu et al., Vaccine, 1988, 16, 1216-1224, Krieg et al., Nature, 1995, 374, 546-549; Klinman et al., PNAS USA, 1996, 93, 2879-2883; Ballas et al., J. Immunol., 1996, 157, 1840-1845; Cowdery et al., J. Immunol., 1996, 156, 4570-4575; Halpern et al., Cell. Immunol., 1996, 167, 72-78; Yamamoto et al., Jpn. J. Cancer Res., 1988, 79, 866-873; Stacey et al., J. Immunol., 1996, 157, 2116-2122; Messina et al., J. Immunol., 1991, 147, 1759-1764; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 4918-4925; Yi et al., J. Immunol., 1996, 157, 5394-5402; Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 4755-4761; и Yi et al., J. Immunol., 1998, 160, 5898-5906; международные заявки на выдачу патентов WO 96/02555, WO 98/16247, WO 98/18810, WO 98/40100, WO 98/55495, WO 98/37919 и WO 98/52581], т.е. содержащие, по меньшей мере, один динуклеотид CG, при этом необязательно вместо цитозина используют 5-метилцитозин; (8) простой полиоксиэтиленовый эфир или сложный полиоксиэтиленовый эфир, например, WO 99/52549; (9) поверхностно-активное вещество сложный эфир полиоксиэтиленсорбитана в комбинации с октоксинолом (например, WO 01/21207) или поверхностно-активное вещество простой или сложный эфир полиоксиэтиленалкила в комбинации, по меньшей мере, с одним дополнительным неионогенным поверхностно-активным веществом, таким как октоксинол (например, WO 01/21152); (10) иммуностимулирующий олигонуклеотид (например, CpG-олигонуклеотид) и сапонин, например WO 00/62800; (11) иммуностимулятор и частица соли металла, например, WO 00/23105; (12) сапонин и эмульсия типа «масло-в-воде», например, WO 99/11241; (13) сапонин (например, QS21)+3dMPL+IL-12 (необязательно+стерол), например, WO 98/57659; (14) другие вещества, которые действуют как иммуностимулирующие агенты, чтобы повысить эффективность композиции.
Мурамилпептиды включают N-ацетилмурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетилнормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (nor-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-[1',2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)этиламин (МТР-РЕ) и т.д.
Дополнительные антигены
Дополнительные антигены, которые можно включать в композицию согласно изобретению, включают:
- препарат пузырьков наружной мембраны (OMV) из N. meningitidis серогруппы В, такой как препараты, описанные в ссылках 14, 15, 16, 17 и т.д.,
- сахаридный антиген из N. meningitidis серогруппы А, С, W135 и/или Y, такой как олигосахарид, описанный в публикации 18, из серогруппы С [см. также ссылку 19], или олигосахариды, описанные в публикации 20,
- сахаридный антиген из Streptococcus pneumoniae [например, ссылки 21, 22, 23],
- белковый антиген из Helicobacter pylori, такой как СаgА [например, 24], VacA [например, 24], NAP [например, 25], НорХ [например, 26], HopY [например, 26] и/или уреаза,
- антиген вируса гепатита А, такой как инактивированный вирус [например, 27, 28],
- антиген вируса гепатита В, такой как поверхностный и/или коровый антигены [например, 28, 29],
- антиген вируса гепатита С [например, 30],
- антиген из Bordetella pertussis, такой как голотоксин коклюша (РТ) и филаментный гемагглютинин (FHA) В. pertussis, необязательно также в комбинации с пертактином и/или агглютиногенами 2 и 3 [например, ссылки 31 и 32],
- дифтерийный антиген, такой как дифтерийный токсоид [например, глава 3, ссылка 33], например, мутант CRM197 [например, 34],
- антиген столбняка, такой как токсоид столбняка [например, глава 4 в ссылке 33],
- сахаридный антиген из Haemophilus influenzae В [например, 19],
- антиген из N. gonorrhoeae [например, 3, 4, 5],
- антиген из Chlamydia pneumoniae [например, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41],
- антиген из Chlamydia trachomatis [например, 42],
- антиген из Porphyromonas gingivalis [например, 43],
- антиген(ы) полиовируса [например, 44, 45], такого как IPV или OPV,
- антиген(ы) вируса бешенства [например, 46], такие как лиофилизованный инактивированный вирус [например, 47, RabAvert™],
- антигены кори, свинки и/или краснухи [например, главы 9, 10 и 11, ссылка 33],
- антиген(ы) гриппа [например, глава 19 в ссылке 33], такие как поверхностные белки гемагглютинин и/или нейраминидаза,
- антиген из Moraxella catarrhalis [например, 48],
- белковый антиген из Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В) [например, 49, 50],
- сахаридный антиген из Streptococcus agalactiae,
- антиген из Streptococcus pyogenes (стрептококк группы А) [например, 50, 51, 52],
- антиген из Staphylococcus aureus [например, 53].
Композиция может содержать один или несколько из указанных дополнительных антигенов.
В том случае, когда используют сахаридный или углеводный антиген, он предпочтительно конъюгирован с белком-носителем для того, чтобы повысить иммуногенность [например, ссылки 54-63]. Предпочтительными белками-носителями являются бактериальные токсины или токсоиды, такие как токсоиды дифтерии или столбняка. Токсоид дифтерии CRM197 является особенно предпочтительным. Другие подходящие белки-носители включают белок наружной мембраны N. meningitidis [например, ссылка 64], синтетические пептиды [например, 65, 66], белки теплового шока [например, 67], белки коклюша [например, 68, 69], белок D из Н. influenzae [например, 70], токсин А или В из С.difficile [например, 71] и т.д. В том случае, когда смесь содержит капсульные сахариды как А-, так и С-серогруппы, предпочтительно, чтобы отношение (мас./мас.) сахарид МеnА: сахарид МеnС было более 1 (например, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 или более). Сахариды из разных серогрупп N. meningitidis можно конъюгировать с одним и тем же или с разными белками-носителями.
Можно использовать любую подходящую реакцию конъюгации с любым подходящим линкером в случае необходимости.
Токсичные белковые антигены в случае необходимости можно подвергнуть детоксикации (например, детоксикация токсина коклюша химическими и/или генетическими способами [32]).
В том случае, когда в композицию включен дифтерийный антиген, также предпочтительно включить антиген столбняка и антигены коклюша. Подобным образом, когда включен антиген столбняка, предпочтительно также включить антигены дифтерии и коклюша. Подобным образом, когда включен антиген коклюша, предпочтительно также включить антигены дифтерии и столбняка.
Антигены предпочтительно смешивают (и более предпочтительно адсорбируют) с солью алюминия (например, фосфатом, гидроксидом, гидроксифосфатом, оксигидроксидом, ортофосфатом, сульфатом). Соль может принимать любую подходящую форму (например, гелеобразную, кристаллическую, аморфную и т.д.).
Антигены в композиции, как правило, будут присутствовать в концентрации, по меньшей мере, 1 мкг/мл каждого. В общем, концентрация любого данного антигена должна быть достаточна для того, чтобы вызвать иммунный ответ против данного антигена.
В качестве альтернативы использования белковых антигенов в композиции согласно изобретению можно использовать нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген [например, ссылки 72-80]. Таким образом, белковые компоненты композиций согласно изобретению можно заменить нуклеиновой кислотой (предпочтительно ДНК, например, в форме плазмиды), которая кодирует белок.
Определения
Термин «содержащий» означает «включающий в себя», а также «состоящий из», например, композиция, «содержащая» X, может состоять исключительно только из Х или может включать в себя что-нибудь дополнительно, например, X+Y.
Термин «примерно» по отношению к числовому значению х означает, например, x±10%.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фиг.1 показано выравнивание двадцати трех последовательностей белка 741. Последовательности представляют собой SEQ ID 1-22 плюс последовательность из МС58.
На фиг.2 показано выравнивание последовательности NMB1343 из гонококка (вверху; SEQ ID NO:25) и менингококка (внизу; SEQ ID NO:26).
На фиг.3 показаны гибридные и тандемные белки согласно изобретению.
На фиг.4 показаны 9 доменов в 9612996, а на фиг.5 показано, каким манипуляциям подвергали домены.
ВАРИАНТЫ ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Гибридные белки - X1=ΔG287
Кроме белков, описанных в публикациях 1 и 2, конструировали семь гибридных белков с ΔG287 из штамма 2996 на N-конце. Также получены восемь тандемных белков 287 (см. ниже).
| # | n | X1 | L1 | X2 | L2 |
| 1 | 2 | ΔG287 | - | 230 | (His)6 |
| 2 | 2 | - | 936 | (His)6 | |
| 3 | 2 | - | 741MC58 | (His)6 | |
| 4 | 2 | - | 741ET37 | (His)6 | |
| 5 | 2 | - | 74190/18311 | (His)6 | |
| 6 | 2 | - | 74195N477 | (His)6 | |
| 7 | 2 | ΔG287nz | - | 741MC58 | (His)6 |
К указанным белкам добавляли адъювант, либо полный адъювант Фрейнда (FCA), либо 3 мг/мл квасцов и использовали для иммунизации мышей. Полученные в результате сыворотки тестировали против различных штаммов нейссерий, используя бактерицидный анализ. Титры при использовании белка №3 были следующими:
В следующих экспериментах с использованием белка №3 с добавлением адъюванта гидроксида алюминия, титры анти-287 и анти-741 в ELISA, каждый из которых превышал титры 984150 и БСА, были следующими:
| 2996(B) | MC58(B) | NGH38(B) | 394/98(B) | 44/76(B) | F6124(A) | BZ133(C) |
| 8000 | 65000 | 4000 | 4000 | 32000 | 8000 | 16000 |
Следующие результаты получали после иммунизации белками, описанными в публикациях 1 и 2, тестированными против гомологичного штамма:
| n | X1 | L1 | X2 | L2 | Бактерицидный титр | EUSA | ||
| FCA | Квасцы | FCA | Квасцы | |||||
| 2 | ΔG287394/98 | - | 961 | (His)6 | - | 32768 | - | >109350 |
| 919 | 32768 | 4096 | 4718 | 3678 | ||||
| 953 | >32768 | >16384 | 1900 | 6936 | ||||
| 741 | 16384 | 2048 | 232 | 862 | ||||
| 2 | ΔG2872996 | - | 961 | (His)6 | 65536 | 32768 | 108627 | >109350 |
| 919 | 128000 | 32000 | 11851 | 2581 | ||||
| 953 | 65536 | - | 3834 | - | ||||
| 741 | 16384 | 8192 | 315 | 4645 | ||||
Гибридные белки - X1=961с или 961cL
Кроме белков, описанных в публикациях 1 и 2, конструировали восемь гибридных белков либо с 961с, либо с 961cL (т.е. 961с+лидерный пептид) на N-конце:
| # | n | X1 | L1 | X2 | L2 |
| 1 | 2 | 961с | - | 287 | - |
| 2 | 2 | - | 287 | (His)6 | |
| 3 | 2 | - | 230 | (His)6 | |
| 4 | 2 | - | 936 | (His)6 | |
| 5 | 2 | 961cL | - | 287 | - |
| 6 | 2 | - | 287 | (His)6 | |
| 7 | 2 | - | 230 | (His)6 | |
| 8 | 2 | - | 936 | (His)6 |
К указанным белкам добавляли адъювант, либо полный адъювант Фрейнда (FCA), либо 3 мг/мл квасцов и использовали для иммунизации мышей. Полученные в результате сыворотки тестировали против различных штаммов нейссерий, используя бактерицидный анализ. Титры при использовании белка №8 были следующими;
| Штамм (серогруппа) | 2996(B) | МС58(B) | 394/98(B) | 44/76(B) | F6124(A) |
| Гидроксид Al | 8192 | 8192 | 512 | 1024 | <16 |
| FCA | 65536 | 16384 | >2048 | >2048 | 8192 |
Титры, полученные после иммунизации 961с-741 [ссылки 1 и 2], были следующими:
Указанные результаты можно было улучшить в результате смешивания 961с-741 с ORF46.1 или с ΔG287-919.
Получали следующие результаты после иммунизации белками, описанными в публикациях 1 и 2, тестированными против гомологичного штамма:
| n | X1 | L1 | Х2 | L2 | Бактерицидный титр | ELISA | ||
| FCA | Квасцы | FCA | Квасцы | |||||
| 2 | 961с | - | ORF46.1 | (His)6 | 32768 | 1024 | >109350 | >109350 |
| 741 | >16384 | 8192 | >109350 | >109350 | ||||
| 936 | >32768 | 8192 | >109350 | >109350 | ||||
Гибридные белки - X1=ORF46.1
Кроме белков, описанных в публикациях 1 и 2, конструировали два гибридных белка с ORF46.1 на N-конце:
| # | n | X1 | L1 | X2 | L2 |
| 1 | 2 | ORF46.1 | - | 936 | (His)6 |
| 2 | 2 | - | 230 | (His)6 |
К указанным белкам добавляли адъювант, либо полный адъювант Фрейнда (FCA), либо 3 мг/мл квасцов и использовали для иммунизации мышей. Полученные в результате сыворотки тестировали против гомологичного штамма, используя бактерицидный анализ и ELISA.
Следующие результаты получали после иммунизации белками, описанными в публикациях 1 и 2:
| n | X1 | L1 | X2 | L2 | Бактерицидный титр | ELISA | ||
| FCA | Квасцы | FCA | Квасцы | |||||
| 2 | ORF46.1 | - | 961 | (His)6 | 8192 | 8192 | 21558 | >109350 |
| - | 961с | (His)6 | 8192 | 128 | 9020 | 76545 | ||
Гибридный белок - X1=230
Кроме белков, описанных в публикациях 1 и 2, конструировали четыре гибридных белка с 230 на N-конце:
| # | n | X1 | L1 | X2 | L2 |
| 1 | 2 | 230 | - | ORF46.1 | (His)6 |
| 2 | 2 | - | 961 | (His)6 | |
| 3 | 2 | - | 961с | (His)6 | |
| 4 | 2 | - | 741MC58 | (His)6 |
Гибридный белок - X1=936
Кроме белков, описанных в публикациях 1 и 2, конструировали семь гибридных белков с 936 на M-конце:
| # | n | X1 | L1 | X2 | L2 |
| 1 | 2 | 936 | - | ORF46.1 | (His)6 |
| 2 | 2 | - | 961 | (His)6 | |
| 3 | 2 | - | 741ET37 | (His)6 | |
| 4 | 2 | - | 741MC58 | (His)6 | |
| 5 | 2 | - | 74190/18311 | (His)6 | |
| 6 | 2 | - | 74195N477 | (His)6 | |
| 7 | 2 | - | 741 | (His)6 |
К указанным белкам добавляли адъювант, либо полный адъювант Фрейнда (FCA), либо 3 мг/мл квасцов и использовали для иммунизации мышей. Полученные в результате сыворотки тестировали против различных штаммов нейссерий, используя бактерицидный анализ. Титры при использовании белка №2 были следующими:
Титры при использовании белка №4 были следующими:
| Штамм (серогруппа) | 2996(B) | МС58(B) | 394/98(B) | 44/76(B) | F6124(A) |
| Гидроксид Al | 256 | >262144 | >2048 | 32768 | 8192 |
| FCA | 1024 | >262144 | >2048 | >32768 | >32768 |
Титры при использовании белка №7 были следующими:
| Штамм (серогруппа) | 2996(B) | МС58(B) | 394/98(B) | 44/76(B) | F6124(A) | BZ133(C) |
| Гидроксид Al | 256 | 130000 | 16000 | 32000 | 8000 | 16000 |
Следующие результаты получали после иммунизации белками, описанными в публикациях 1 и 2, тестированными против гомологичного штамма:
| n | X1 | L1 | X2 | L2 | Бактерицидный титр | EUSA | ||
| FCA | Квасцы | FCA | Квасцы | |||||
| 2 | 936 | - | 741 | (His)6 | 1024 | 256 | 1466 | 5715 |
| 936 | >32768 | >32768 | >109350 | >109350 | ||||
Смеси гибридных белков
Мышей иммунизировали тремя белками с добавлением адъюванта гидроксида алюминия, либо отдельно, либо в тройной комбинации: (1) 287NZ-953; (2) 936-741 и (3) 961с. Смесь обладала способностью индуцировать высокие бактерицидные титры против различных штаммов:
| 2996(B) | МС58(B) | NGH38 | 394/98(B) | Н44/76(B) | F6124(A) | BZ133(C) | C11(C) | |
| (1) | 32000 | 16000 | 130000 | 16000 | 32000 | 8000 | 16000 | 8000 |
| (2) | 256 | 131000 | 128 | 16000 | 32000 | 8000 | 16000 | <4 |
| (3) | 32000 | 8000 | - | - | - | 8000 | - | 32000 |
| Смесь | 32000 | 32000 | 65000 | 16000 | 260000 | 65000 | >65000 | 8000 |
| (X) | 4000 | 4000 | 1000 | 1000 | >4000 | 1000 | 4000 | n.d. |
| "-" показывает, что данный штамм не содержит гена NadA; | ||||||||
| (X) представлял собой комбинацию белка 287 с пузырьками наружной мембраны для сравнения; | ||||||||
| n.d. - не определено. | ||||||||
При наблюдении за отдельными мышами показано, что смесь индуцировала высокие и стойкие бактерицидные титры:
Тандемные белки
Гибридные белки согласно изобретению можно представить формулой NH2-[-X-L-]n-СООН. Когда -Х- во всех n случаях является одним и тем же основным белком (либо идентичным, либо таким же белком из разных штаммов или видов), белок называют «тандемным» белком.
Двенадцать конкретных тандемных белков:
| # | n | X1 | L1 | X2 | L2 |
| 1 | 2 | ΔG741MC58 | - | 741MC58 | (His)6 |
| 2 | 2 | ΔG2872996 | (Gly)6 | ΔG287394/98 | (His)6 |
| 3 | 2 | ΔG2872996 | (Gly)6 | ΔG2872996 | (His)6 |
| 4 | 2 | ΔG287394/98 | (Gly)6 | ΔG287394/98 | (His)6 |
| 5 | 2 | ΔG287394/98 | (Gly)6 | ΔG2872996 | (His)6 |
| 6 | 2 | ΔG2872996 | (Gly)6 | ΔG287394/98 | - |
| 7 | 2 | ΔG2872996 | (Gly)6 | ΔG2872996 | - |
| 8 | 2 | ΔG287394/98 | (Gly)6 | ΔG287394/98 | - |
| 9 | 2 | ΔG287394/98 | (Gly)6 | ΔG2872996 | - |
| 10 | 2 | ΔG741МС58 | - | 741394/98 | (His)6 |
| 11 | 2 | ΔG741MC58 | - | 74190/18311 | (His)6 |
| 12 | 2 | ΔG741МС58 | - | 74195N477 | (His)6 |
Все белки №1-№5 экспрессировались в растворимой форме в E.coli. Уровни экспрессии составляли от 0,24 до 0,50 мг белка на литр культуры. Тандемные белки очищали и смешивали с фосфатом алюминия в качестве адъюванта. Тандемные белки №2, №4 и №5 легко адсорбировались на фосфате алюминия; адсорбция была менее полной в случае тандемных белков №1 и №3.
Аллельные варианты - 741
Обнаружены двадцать две полиморфные последовательности 741 (SEQ ID 1-22). Указанные последовательности и последовательность МС58 выровнены на фиг.1.
Аллельные варианты - NMB1343
С использованием ПЦР на 42 штаммах менингококков различных серогрупп ген, кодирующий белок NMB1343, обнаружен в 24/42 штаммах и отсутствует в 18/42 штаммов (таблица 1). Ген NMB1343 секвенировали для 10 штаммов NMB1343+ (таблица 1, колонка 3). Последовательность нуклеиновой кислоты (и, следовательно, аминокислотная последовательность SEQ ID NO:23; GenBank AAF41718) идентична во всех 10 штаммах.
NMB1343 также обнаружен в двух штаммах N. gonorrhoeae (F62 и SN4). Аминокислотная последовательность из гонококка представляет собой SEQ ID NO:24. Выравнивание с последовательностью менингококка:
Выравнивание соответствующих нуклеотидных последовательностей показано на фиг.2. Выравнивание показывает, что последовательность гонококков имеет 4-мерную инсерцию в 5'-области гена NMB1343, которая вызывает сдвиг рамки считывания и, как следствие, утрату 5'-остатка метионина.
Делеция доменов - 961
961 не присутствует в геномной последовательности N. meningitidis серогруппы А [81], хотя окружающие области консервативны (>90%) в серогруппах А и В. В публикациях 11 и 12 описаны полиморфные формы 961. Обнаружено, что ген присутствует в 91% штаммов серогруппы В, относящихся к гипервирулентным линиям ЕТ-5, ЕТ-37 и кластеру А4, но отсутствует во всех протестированных штаммах линии 3. Большинство протестированных штаммов серогруппы С были позитивными, хотя и не относящимися к гипервирулентным линиям. Это же справедливо и для штаммов серогруппы В с серотипами 2а и 2b. В случае серогруппы А один штамм, относящийся к подгруппе III, был позитивным, тогда как другие два штамма, относящиеся к подгруппе IV-1, были негативными. 961 отсутствовал в N. gonorrhoeae и в видах-комменсалах N. lactamica и N. cinerea.
На фиг.4 и 5 показаны домены в белке 961.
Когда якорная область (домен 9) («961cL») в белке 961 делегирована и белок экспрессирован в Е.coli, он экспортируется в периплазму и секретируется в надосадок культуры.
Чтобы исследовать данный белок далее, конструировали делеционные мутанты в С-концевой области 961 (961cL-Δaro, 961cL-Δcc, 961aL, 961aL-Δ1, 961aL-Δ2, 961aL-Δ3) на основе структурных параметров (делеции ароматических остатков в случаях мутанта 961с-Δaro и областей двойной спирали в других случаях). Мутанты анализировали в отношении экспрессии и секреции в периплазму и надосадок культуры. Во всех случаях указанных делеционных мутантов белок продуцируется в большом количестве, присутствует в периплазматической фракции и высвобождается в надосадок культуры.
ΔG287 - перекрестная бактерицидная активность между штаммами
Клонировали 287 для пяти различных штаммов N. meningitidis серогруппы В и подвергали манипуляциям, чтобы делегировать N-конец вплоть до конца полиглициновой области и ввести С-концевую his-метку. Получили пять белков ΔG287. К белкам добавляли адъювант FCA и использовали для стимулирования образования иммунных сывороток у мышей, которые затем тестировали в отношении бактерицидной активности против всех пяти штаммов серогруппы В, а также против штаммов серогруппы А и С. Получали следующие бактерицидные титры:
| Белок, штамм | Сыворотка, тестированная в отношении бактерицидной активности штамма* | ||||||
| 2996 | BZ232 | МС58 | 1000 | 394/98 | F6124 | BZ133 | |
| 2996 | 16000 | 128 | 4096 | 4096 | 1024 | 8000 | 16000 |
| BZ232 | >8000 | 256 | 2048 | 8000 | 2048 | 16000 | 8000 |
| МС58 | >8000 | 64 | >8000 | 8000 | 2048 | 8000 | 8000 |
| 1000 | >8000 | 64 | 4096 | 8000 | 1024 | 16000 | 16000 |
| 394/98 | >16000 | 128 | 16000 | >2048 | >16000 | - | - |
| * титры против гомологичного штамма показаны жирным шрифтом | |||||||
Рефолдинг
Чтобы повысить уровни растворимого белка для некоторых гибридных белков, выбрали альтернативные протоколы рефолдинга по сравнению с протоколами, описанными в публикации 2.
Внутриклеточные тельца (IB) выделяли следующим образом:
1. Гомогенизировали клетки (5 г сырой массы) в 25 мл 0,1 М Трис-HCl, рН 7, 1 мМ EDTA при 4°С, используя гомогенизатор Ultraturrax (10000 об/мин).
2. Добавляли 1,5 мг лизоцима на грамм клеток, быстро перемешивали с помощью Ultraturrax и инкубировали при 4°С в течение 30 мин.
3. Использовали обработку ультразвуком или гомогенизацию при высоком давлении (Френч-пресс), чтобы разрушить клетки.
4. Чтобы расщепить ДНК, добавляли MgCl2 до конечной концентрации 3 мМ и ДНКазу до конечной концентрации 10 мкг/мл и инкубировали в течение 30 мин при 25°С.
5. К раствору добавляли 0,5 об. 60 мМ EDTA, 6% Тритона X-100, 1,5М NaCl, pH 7 и инкубировали в течение 30 мин при 4°С.
6. Осаждали внутриклеточные тельца центрифугированием при 31000×g (20000 об/мин) в течение 10 мин, 4°С.
7. Ресуспендировали осадок в 40 мл 0,1 М Трис-HCl, pH 7, 20 мМ EDTA, используя Ultraturrax.
8. Повторяли стадию центрифугирования 6.
9. Осадок внутриклеточных телец можно было использовать или хранить в замороженном виде при -20°С.
Гибридные белки экспрессировали в Е.coli следующим образом:
| Белок | Объем культуры (литры) | Объем колбы (литры) | Температура (°C) | Конечная OD600 | Выход внутриклеточных телец (мас./мас.) |
| ORF46.3-961-His | 1 | 2 | 37 | 1,51 | 33,2% |
| ORF46.1-961 c-His | 1 | 2 | 37 | 1,6 | 28,3% |
| 961c.ORF46.1 His | 1 | 2 | 37 | 1,18 | 23,5% |
| orf46.1-741 His | 5 | 5 | 37 | 12,42 | 35,2 |
Осадки растворяли, подвергали рефолдингу, ультрафильтровали, диализовали и затем белок очищали:
ORF46.1-961-His. IB растворяли следующим образом: белки IB ресуспендировали в 4 мл буфера, содержащего 6 М гуанидин-HCl, 1 мМ EDTA, pH 8,5, до конечной концентрации белка 1 мг/мл. Чтобы подвергнуть белок рефолдингу, 2 мл растворенного белка разбавляли в 400 мл буфера для рефолдинга (0,1 М Трис-HCl, 1 М L-аргинин, 2 мМ EDTA, pH 8,2) и инкубировали в течение 1 часа при 15°С, получая в результате концентрацию белка 5 мкг/мл. Затем добавляли другие 2 мл растворенного белка и инкубировали еще в течение часа при такой же температуре, получая в результате конечную концентрацию белка 10 мкг/мл. Продукт подвергали ультрафильтрации, используя ячейку для ультрафильтрации Amicon на 300 мл (8400), используя давление 3 бара на мембране Amicon с отсечением 30 кД (YM30), получая в результате конечный объем 130 мл. Продукт, полученный после ультрафильтрации, диализовали, используя мембрану из регенерированной целлюлозы в форме трубки с отсечением 12-14 кД (Cellusep - Step bio), в течение 24 часов против 10 л 0,1 М буфера Трис-HCl, pH 8,2. Выполняли второй диализ в течение 24 час против 10 л буфера, содержащего 300 мМ NaCl, 50 мМ фосфат натрия, pH 8,0. Отдиализованный продукт центрифугировали при 22000 об/мин в течение 45 минут при 4°С в центрифужном роторе Beckman JA25.5. Надосадок, выделенный после центрифугирования, использовали для очистки на основе His-метки.
orf46.1-961c-His. IB растворяли следующим образом: белки IB ресуспендировали в 4 мл буфера, содержащего 6 М гуанидин-HCl, 1 мМ EDTA, pH 8,5, до конечной концентрации белка 1 мг/мл. Чтобы подвергнуть белок рефолдингу, 2 мл растворенного белка разбавляли в 400 мл буфера для рефолдинга (0,5 М Трис-HCl, 1 М L-аргинин, 2 мМ EDTA, pH 8,2) и инкубировали в течение 1 часа при 15°С, получая в результате концентрацию белка 5 мкг/мл. Затем добавляли другие 2 мл растворенного белка и инкубировали еще в течение часа при такой же температуре, получая конечную концентрацию белка 10 мкг/мл. Продукт подвергали ультрафильтрации, используя ячейку для ультрафильтрации Amicon на 300 мл (8400), используя давление 3 бара на мембране Amicon с отсечением 30 кД (YM30), получая в результате конечный объем 150 мл. Продукт, полученный после ультрафильтрации, диализовали, используя мембрану из регенерированной целлюлозы в форме трубки с отсечением 12-14 кД (Cellusep - Step bio), в течение 24 часов против 10 л 0,1 М буфера Трис-HCl, рН 8,2. Выполняли второй диализ в течение 24 час против 10 л буфера, содержащего 300 мМ NaCl, 50 мМ фосфат натрия, рН 8,0. Отдиализованный продукт центрифугировали при 22000 об/мин в течение 45 минут при 4°С в центрифужном роторе Beckman JA25.5. Надосадок, выделенный после центрифугирования, использовали для очистки на основе His-метки.
961c-orf46.1-His. IB растворяли следующим образом: белки IB ресуспендировали в 4 мл буфера, содержащего 6 М гуанидин-HCl, 1 мМ EDTA, рН 8,5, до конечной концентрации белка 1 мг/мл. Чтобы подвергнуть белок рефолдингу, 2 мл растворенного белка разбавляли в 400 мл буфера для рефолдинга (0,1 М Трис-HCl, 0,5 М L-аргинин, 2 мМ EDTA, рН 8,2) и инкубировали в течение 1 часа при 15°С, получая концентрацию белка 5 мкг/мл. Затем добавляли другие 2 мл растворенного белка и инкубировали еще в течение часа при такой же температуре, получая в результате конечную концентрацию белка 10 мкг/мл. Продукт подвергали ультрафильтрации, используя ячейку для ультрафильтрации Amicon на 300 мл (8400), используя давление 3 бара на мембране Amicon с отсечением 30 кД (YM30), получая в результате конечный объем 150 мл. Продукт, полученный после ультрафильтрации, диализовали, используя мембрану из регенерированной целлюлозы в форме трубки с отсечением 12-14 кД (Cellusep - Step bio), в течение 24 часов против 10 л 0,1 М буфера Трис-HCl, рН 8,2. Выполняли второй диализ в течение 24 час против 10 л буфера, содержащего 300 мМ NaCl, 50 мМ фосфат натрия, рН 8,0. Отдиализованный продукт центрифугировали при 22000 об/мин в течение 45 минут при 4°С в центрифужном роторе Beckman JA25.5. Надосадок, выделенный после центрифугирования, использовали для очистки на основе His-метки.
orf46.1-741-His. IB растворяли следующим образом: белки IB ресуспендировали в 4 мл буфера, содержащего 6 М гуанидин-HCl, 1 мМ EDTA, рН 8,5, до конечной концентрации белка 10 мг/мл. Чтобы подвергнуть белок рефолдингу, 2 мл растворенного белка разбавляли в 400 мл буфера для рефолдинга (0,5 М Трис-HCl, 0,7 М L-аргинин, 2 мМ EDTA, рН 7,2) и инкубировали в течение 1 часа при 15°С, получая в результате концентрацию белка 50 мкг/мл. Затем добавляли другие 2 мл растворенного белка и инкубировали еще в течение часа при такой же температуре, получая в результате конечную концентрацию белка 100 мкг/мл. Продукт подвергали ультрафильтрации, используя ячейку для ультрафильтрации Amicon на 300 мл (8400), используя давление 3 бара на мембране Amicon с отсечением 30 кД (YM30), получая в результате конечный объем 120 мл. Продукт, полученный после ультрафильтрации, диализовали, используя мембрану из регенерированной целлюлозы в форме трубки с отсечением 12-14 кД (Cellusep - Step bio), в течение 24 часов против 10 л 0,1 М буфера Трис-HCl, рН 8,2. Выполняли второй диализ в течение 24 час против 10 л буфера, содержащего 300 мМ NaCl, 50 мМ фосфат натрия, рН 8,0. Отдиализованный продукт центрифугировали при 22000 об/мин в течение 45 минут при 4°С в центрифужном роторе Beckman JA25.5. Надосадок, выделенный после центрифугирования, использовали для очистки на основе His-метки.
При сравнении с белками, очищенными, как описано в публикации 2, получили следующие титры в бактерицидном анализе:
| Белок | Публикация 2 | После рефолдинга | |||
| CFA | Гидроксид алюминия | Гидроксид алюминия | MF59 | Фосфат алюминия | |
| ORF46.1-961-His | 8192 | 8192 | 32768 | - | - |
| ORF46.1-961c-His | 8192 | 128 | <64 | 8192 | - |
| 961c-ORF46.1 His | 32768 | 1024 | 16384 | - | - |
| orf46.1-741 His | <4 | 16 | <4 | 256 | - |
Сходные способы использовали в случае ORF46.1, чтобы очистить белок из IB, когда он экспрессировался без His-метки («ORF46.1K»):
| Белок | Объем культуры (литры) | Объем колбы (литры) | Температура (°С) | Конечная OD600 | Выход внутриклеточных телец (мас./мас.) |
| orf46.1K | 5 | 5 | 37 | 13.7 | 29.4 |
Белки IB ресуспендировали в 4 мл буфера, содержащего 6 М гуанидин-HCl, 1 мМ EDTA, рН 8,5, до конечной концентрации белка 10 мг/мл. Чтобы подвергнуть белок рефолдингу, 2 мл растворенного белка разбавляли в 400 мл буфера для рефолдинга (0,5 М Трис-HCl, 0,7 М L-аргинин, 2 мМ EDTA, рН 7,2) и инкубировали в течение 1 часа при 15°С, получая в результате концентрацию белка 50 мкг/мл. Затем добавляли другие 2 мл растворенного белка и инкубировали еще в течение часа при такой же температуре, получая конечную концентрацию белка 100 мкг/мл. Продукт подвергали ультрафильтрации, используя ячейку для ультрафильтрации Amicon на 300 мл (8400), используя давление 3 бара на мембране Amicon с отсечением 30 кД (YM30), получая в результате конечный объем 120 мл. Продукт, полученный после ультрафильтрации, диализовали, используя мембрану из регенерированной целлюлозы в форме трубки с отсечением 12-14 кД (Cellusep - Step bio), в течение 12 часов против 10 л буфера, содержащего 50 мМ фосфат натрия, 2 мМ EDTA, рН 7,2. Выполняли второй диализ в течение 24 час против 10 л такого же буфера. Отдиализованный продукт центрифугировали при 22000 об/мин в течение 45 минут при 4°С в центрифужном роторе Beckman JA25.5. Надосадок, выделенный после центрифугирования, использовали для катионообменной хроматографии. Очистку осуществляли в системе хроматографического анализатора АКТА (Amersham-Pharmacia Biotech), используя колонку HP с сефарозой SP HiTrap объемом 5 мл (Amersham-Pharmacia Biotech). Применяемая скорость потока составляла 1,5 мл в минуту. Колонку промывали 35 мл 50 мМ натрий-фосфатного буфера, рН 7,2. Создавали линейный градиент (0-1 М NaCl), используя 50 мМ натрий-фосфатный буфер, рН 7,2. Белок элюировался в двух пиках при 92 мМ и 380 мМ NaCl. Фракции, составляющие каждый пик, объединяли и соответственно называли пул 1 и пул 2.
При сравнении с белками, очищенными, как описано в публикации 2, титры в бактерицидном анализе при использовании в качестве адъюванта гидроксида алюминия были повышены от <4 до 1024. Титр при использовании в качестве адъюванта фосфата алюминия с подвергнутым рефолдингу белком составлял 2048. В ELISA титры были следующими:
| Белок | Алюминиевый адъювант | Elisa (М7) | SBA (2996) |
| Orf46.1k (пул 1) | Гидроксид 3,3 мг/мл | 1212 | 512 |
| Фосфат 0,6 мг/мл | 154 | 1024 | |
| Orf46.1k (пул 2) | Гидроксид 3,3 мг/мл | 1085 | 1024 |
| Фосфат 0,6 мг/мл | 250 | 1024 |
Будет понятно, что изобретение описано только в виде примера и могут быть осуществлены модификации, сохраняя при этом объем и сущность изобретения.
| Таблица 1 | |||
| Штамм | 1343 | Последовательность Классификация штамма | |
| 72/00 | + | ЕТ5 В:15:Р1.7,13,13а | |
| 30/00 | + | ЕТ5 В:15:Р1.7,16 | |
| 39/99 | + | ЕТ5 С:15:Р1.7,16 | |
| 95330 | + | ЕТ5 В:4:Р1.15 | |
| М4102 | + | ЕТ5 nd | |
| МС58(21) | + | + | ЕТ5 В:15:Р1.7,16b |
| BZ169(7) | + | + | ET5 B:NT:P1.16 |
| BZ83(19) | + | ЕТ5 В:15:-.- | |
| CU385 | + | + | ЕТ5 В:4:Р1.15 |
| 2201731 | + | ЕТ5 NG:4:P1.15 | |
| 64/96 | + | + | ЕТ5 NG:15:P1.7,16 (носитель) |
| 2201731 | + | ЕТ5 В:4:Р1.15 (носитель) | |
| ISS1071 | + | nd В:15:Р1.7,16 (ЕТ5?) | |
| BZ198(2) | + | + | lin. 3 В:8:Р1.1 |
| 980-2543 | + | + | lin. 3 B:NT:P1.4 |
| 16060 | + | + | другой В:4:Р1.14 (носитель) |
| 394-98 | + | nd B:4:P1.4(lin3?) | |
| ISS1106 | + | nd В:4:Р1.4 (lin.3?) | |
| BZ133(10) | + | + | sub I B:NT:-.- |
| S3446 | + | + | nd B:14:P1.23,14 |
| ISS1001 | + | + | nd B:14:P1.13 |
| 2411751 | + | другой NG:21:P1.16 (носитель) | |
| 1712741 | + | другой NG: 15:-(носитель) | |
| 66/96 | + | другой В:17:P 1.15 (носитель) | |
| 961-5945 | - | А4 | |
| 96217 | - | А4 | |
| 312294 | - | А4 | |
| 90/18311(24) | - | ЕТ37 | |
| 93/4286(25) | - | ЕТ37 | |
| M986 | - | ЕТ37 | |
| 1000(5) | - | другой | |
| NGE28(13) | - | другой носитель | |
| NGH38(14) | - | другой носитель | |
| BZ232(18) | - | другой | |
| F6124(23) | - | sub III А:-.- | |
| C11 | - | С:- | |
| NMB | - | nd | |
| 8047 | - | nd | |
| ISS759 | - | ndC:2b:P1.2 | |
| ISS1113 | - | ndC:2:P1.5 | |
| 65/96 | - | nd 4:P1.14 | |
| 2996(96) | - | nd B:2b:P1.5,2 | |
ПУБЛИКАЦИИ
(содержание которых включено в данное описание в виде ссылки)
1 - Международная заявка на выдачу патента WO01/64 920.
2 - Международная заявка на выдачу патента WO01/64922.
3 - Международная заявка на выдачу патента W099/24578.
4 - Международная заявка на выдачу патента W099/36544.
5 - Международная заявка на выдачу патента WO99/57280.
6 - Международная заявка на выдачу патента WO00/22430.
7 - Tettelin et al. (2000) Science 287:1809-1815.
8 - Международная заявка на выдачу патента WO00/66741.
9 - Международная заявка на выдачу патента WO00/71574.
10 - Международная заявка на выдачу патента WO01/04316.
11 - Международная заявка на выдачу патента PCT/IB02/03396.
12 - Comanducci et al. (2002) J Exp Med 195:1445-1454.
13 - Vaccine Design: subunit & adjuvant approach (1995) Powell & Newman (ISBN: 030644867X).
14 - Международная заявка на выдачу патента WO01/52885.
15 - Bjune et al. (1991) Lancet 338 (8775):1093-1096.
16 - Fukasawa et al. (1999) Vaccine 17:2 951-2 958.
17 - Rosenqvist et al. (1998) Dev. Biol. Stand. 92:323-333.
18 - Costantino et al. (1992) Vaccine 10:691-698.
19 - Costantino et al. (1999) Vaccine 17:1251-1263.
20 - Международная заявка на выдачу патента PCT/IB02/03191.
21 - Watson (2000) Pediatr Infect Dis J 19:331-332.
22 - Rubin (2000) Pediatr Clin North Am 47:269-285, v.
23 - Jedrzejas (2001) Microbiol Mol Biol Rev 65:187-207.
24 - Международная заявка на выдачу патента WO93/18150.
25 - Международная заявка на выдачу патента WO99/53310.
26 - Международная заявка на выдачу патента WO98/04702.
27 - Bell (2000) Pediatr Infect Dis J 19:1187-1188.
28 - Iwarson (1995) APMIS 103:321-326.
29 - Gerlich et al. (1990) Vaccine 8 Suppl:S63-68 & 79-80.
30 - Hsu et al. (1999) Clin Liver Dis 3:901-915.
31 - Gustafsson et al. (1996) N. Engl. J. Med. 334:349-355.
32 - Rappuoli et al. (1991) TIBTECH 9:232-238.
33 - Vaccines (1988) eds. Plotkin & Mortimer. ISBN 0-7216-1946-0.
34 - Del Guidice et al. (1998) Molecular Aspects of Medicine 19:1-70.
35 - Международная заявка на выдачу патента WO02/02606.
36 - Kalman et al. (1999) Nature Genetics 21:385-389.
37 - Read et al. (2000) Nucleic Acids Res 28:1397-406.
38 - Shirai et al. (2000) J. Infect. Dis. 181(Suppl 3):S524-S527.
39 - Международная заявка на выдачу патента WO99/27105.
40 - Международная заявка на выдачу патента WO00/27994.
41 - Международная заявка на выдачу патента WO00/37494.
42 - Международная заявка на выдачу патента WO99/28475.
43 - Ross et al. (2001) Vaccine 19:4135-4142.
44 - Sutter et al. (2000) Pediatr Clin North Am 47:287-308.
45 - Zimmerman & Spann (1999) Am Fam Physician 59:113-118, 125-126.
46 - Dreesen (1997) Vaccine 15 Suppl:S2-6.
47 - MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1998 Jan 16; 47(1):12, 19.
48 - McMichael (2000) Vaccine 19 Suppl 1:S101-107.
49 - Schuchat (1999) Lancet 353(9146):51-6.
50 - WO02/34771.
51 - Dale (1999) Infect Dis Clin North Am 13:227-43, viii.
52 - Ferretti et al. (2001) PNAS USA 98: 4658-4663.
53 - Kuroda et al. (2001) Lancet 357(9264):1225-1240; see also pages 1218-1219.
54 - Ramsay et al. (2001) Lancet 357 (9251):95-196.
55 - Lindberg (1999) Vaccine 17 Suppl 2:S28-36.
56 - Buttery & Moxon (2000) J R Coll Physicians Lond 34:163-168.
57 - Ahmad & Chapnick (1999) Infect Dis Clin North Am 13:113-133, vii.
58 - Goldblatt (1998) J. Med. Microbiol. 47:563-567.
59 - Европейский патент 0477508.
60 - Патент США 5306492.
61 - Международная заявка на выдачу патента WO 98/42721.
62 - Conjugate Vaccines (eds. Cruse et al.) ISBN 3805549326, particularly vol. 10:48-114.
63 - Hermanson (1996) Bioconjugate Techniques ISBN: 0123423368 or 012342335X.
64 - Европейская заявка на выдачу патента 0372501.
65 - Европейская заявка на выдачу патента 0378881.
66 - Европейская заявка на выдачу патента 0427347.
67 - Международная заявка на выдачу патента WO 93/17712.
68 - Международная заявка на выдачу патента WO 98/58668.
69 - Европейская заявка на выдачу патента 0471177.
70 - Международная заявка на выдачу патента WO 00/56360.
71 - Международная заявка на выдачу патента WO 00/61761.
72 - Robinson & Torres (1997) Seminars in Immunology 9:271-283.
73 - Donnelly et al. (1997) Annu Rev Immunol 15:617-648.
74 - Scott-Taylor & Dalgleish (2000) Expert Opin Investig Drugs 9:471-480.
75 - Apostolopoulos & Plebanski (2000) Curr Opin Mol Ther 2:441-447.
76 - Ilan (1999) Curr Opin Mol Ther 1:116-120.
77 - Dubensky et al. (2000) Mol Med 6:723-732.
78 - Robinson & Pertmer (2000) Adv Virus Res 55:1-74.
79 - Donnelly et al. (2000) Am J Respir Crit Care Med 162(4 Pt 2):S 190-193.
80 - Davis (1999) Mt. Sinai J. Med. 66:84-90.
81 - Parkhill et al. (2000) Nature 404:502-506.
Claims (6)
1.Белок для применения в целях профилактики и/или лечения бактериального менингита, характеризующийся:
(a) аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:19; или
(b) аминокислотной последовательностью на 80% или более идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:19.
(a) аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:19; или
(b) аминокислотной последовательностью на 80% или более идентичной аминокислотной последовательности SEQ ID NO:19.
2. Композиция для профилактики и/или лечения бактериального менингита, содержащая белок по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
3. Композиция по п.2, кроме того, содержащая адъювант.
4. Композиция по п.2, где белок адсорбируется на соли алюминия.
5. Композиция по п.4, где соль алюминия представляет собой фосфат алюминия.
6. Композиция по п.2, кроме того, содержащая буфер.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0121591.2 | 2001-09-06 | ||
| GBGB0121591.2A GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-09-06 | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004110230/13A Division RU2339646C2 (ru) | 2001-09-06 | 2002-09-06 | Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2008122435A RU2008122435A (ru) | 2009-12-10 |
| RU2475495C2 true RU2475495C2 (ru) | 2013-02-20 |
Family
ID=9921633
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008122435/10A RU2475495C2 (ru) | 2001-09-06 | 2002-09-06 | Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий |
| RU2004110230/13A RU2339646C2 (ru) | 2001-09-06 | 2002-09-06 | Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004110230/13A RU2339646C2 (ru) | 2001-09-06 | 2002-09-06 | Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US8980277B2 (ru) |
| EP (4) | EP2360176B1 (ru) |
| JP (4) | JP4511832B2 (ru) |
| CN (2) | CN101260148B (ru) |
| AT (1) | ATE496063T1 (ru) |
| AU (2) | AU2002339217B2 (ru) |
| BR (1) | BR0212363A (ru) |
| CA (1) | CA2459816C (ru) |
| CY (2) | CY1113218T1 (ru) |
| DE (1) | DE60238993D1 (ru) |
| DK (3) | DK2327719T3 (ru) |
| ES (3) | ES2357503T3 (ru) |
| GB (1) | GB0121591D0 (ru) |
| MX (2) | MXPA04002216A (ru) |
| NZ (3) | NZ537976A (ru) |
| PT (3) | PT2327719E (ru) |
| RU (2) | RU2475495C2 (ru) |
| WO (1) | WO2003020756A2 (ru) |
Families Citing this family (81)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999036544A2 (en) * | 1998-01-14 | 1999-07-22 | Chiron S.P.A. | Neisseria meningitidis antigens |
| US20070026021A1 (en) * | 1998-05-01 | 2007-02-01 | Chiron S.R.I. | Neisseria meningitidis antigens and compositions |
| JP5102414B2 (ja) | 1998-05-01 | 2012-12-19 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド | 髄膜炎菌抗原および組成物 |
| WO2001031019A2 (en) | 1999-10-29 | 2001-05-03 | Chiron Spa | Neisserial antigenic peptides |
| CN100392082C (zh) * | 1999-04-30 | 2008-06-04 | 启龙股份公司 | 保守的奈瑟球菌抗原 |
| GB9911683D0 (en) * | 1999-05-19 | 1999-07-21 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| DK2270173T3 (en) | 1999-05-19 | 2016-03-07 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Neisserial combination compositions |
| GB9928196D0 (en) | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
| CN1416352B (zh) * | 2000-01-17 | 2011-05-25 | 启龙股份公司 | 含有脑膜炎奈瑟球菌b血清群外膜蛋白质的外膜囊(omv)疫苗 |
| MXPA02008314A (es) | 2000-02-28 | 2002-12-09 | Chiron Spa | Expresion heterologa de proteinas de neisseria. |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
| MXPA04000653A (es) * | 2001-07-27 | 2004-11-22 | Chiron Srl | Adhesinas de meningococcus nada, app y orf 40. |
| GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| AR045702A1 (es) | 2001-10-03 | 2005-11-09 | Chiron Corp | Composiciones de adyuvantes. |
| US7838015B2 (en) | 2001-10-03 | 2010-11-23 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Adjuvanted meningococcus compositions |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| WO2004015099A2 (en) * | 2002-08-02 | 2004-02-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccine composition comprising lipooligosaccharide with reduced phase variability |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| GB0220194D0 (en) | 2002-08-30 | 2002-10-09 | Chiron Spa | Improved vesicles |
| CA2501812C (en) * | 2002-10-11 | 2012-07-10 | Mariagrazia Pizza | Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
| ATE466875T1 (de) | 2002-11-15 | 2010-05-15 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Unerwartete oberflächenproteine in neisseria meningitidis |
| GB0227346D0 (en) * | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| ES2411080T3 (es) | 2003-01-30 | 2013-07-04 | Novartis Ag | Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos |
| RU2378010C2 (ru) * | 2003-10-02 | 2010-01-10 | Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс С.Р.Л. | Жидкие вакцины для множественных серогрупп менингококков |
| GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| GB0408977D0 (en) | 2004-04-22 | 2004-05-26 | Chiron Srl | Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins |
| GB0415160D0 (en) * | 2004-07-06 | 2004-08-11 | Chiron Srl | Inhibitors of bacterial infection |
| GB0419408D0 (en) * | 2004-09-01 | 2004-10-06 | Chiron Srl | 741 chimeric polypeptides |
| ES2385045T3 (es) | 2005-02-18 | 2012-07-17 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Inmunógenos de Escherichia coli uropatogénica |
| HUE027400T2 (en) | 2005-02-18 | 2016-10-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Proteins and nucleic acids from meningitis / sepsis with Escherichia coli |
| AU2013201318B2 (en) * | 2005-11-25 | 2015-11-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Chimeric, hybrid and tandem polypeptides of meningococcal NMB 1870 |
| GB0524066D0 (en) * | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| WO2007066226A2 (en) * | 2005-12-06 | 2007-06-14 | Universita Degli Studi Di Padova | Methods and compositions relating to adhesins as adjuvants |
| EP2586790A3 (en) | 2006-08-16 | 2013-08-14 | Novartis AG | Immunogens from uropathogenic Escherichia coli |
| GB0700562D0 (en) | 2007-01-11 | 2007-02-21 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modified Saccharides |
| GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
| CA2702871A1 (en) | 2007-10-19 | 2009-04-23 | Novartis Ag | Meningococcal vaccine formulations |
| EP2245048B1 (en) | 2008-02-21 | 2014-12-31 | Novartis AG | Meningococcal fhbp polypeptides |
| WO2009111337A1 (en) | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Irm Llc | Compounds and compositions as tlr activity modulators |
| EP2265640B1 (en) * | 2008-03-10 | 2015-11-04 | Children's Hospital & Research Center at Oakland | Chimeric factor h binding proteins (fhbp) containing a heterologous b domain and methods of use |
| US20100105875A1 (en) * | 2008-06-09 | 2010-04-29 | Maria Scarselli | Antibodies against neisserial factor H binding protein |
| CN102300585A (zh) * | 2008-12-17 | 2011-12-28 | 诺华有限公司 | 包含血红蛋白受体的脑膜炎球菌疫苗 |
| WO2010109323A1 (en) | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Novartis Ag | Adjuvanting meningococcal factor h binding protein |
| MX2011011512A (es) * | 2009-04-30 | 2012-02-13 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Proteinas de union de factor h quimericas (fhbp) y metodos de uso. |
| AU2010258677B2 (en) | 2009-06-10 | 2016-10-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Benzonaphthyridine-containing vaccines |
| ES2596653T3 (es) | 2009-06-16 | 2017-01-11 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Ensayos bactericidas de opsonización y dependientes de anticuerpo mediado por el complemento de alto rendimiento |
| AU2010288240B2 (en) | 2009-08-27 | 2014-03-27 | Novartis Ag | Hybrid polypeptides including meningococcal fHBP sequences |
| CN102844047B (zh) | 2009-09-02 | 2017-04-05 | 诺华股份有限公司 | 含tlr活性调节剂的免疫原性组合物 |
| TWI445708B (zh) | 2009-09-02 | 2014-07-21 | Irm Llc | 作為ｔｌｒ活性調節劑之化合物及組合物 |
| WO2011039631A2 (en) | 2009-09-30 | 2011-04-07 | Novartis Ag | Expression of meningococcal fhbp polypeptides |
| AU2010310985B2 (en) | 2009-10-27 | 2014-11-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Modified meningococcal fHBP polypeptides |
| WO2011057148A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-12 | Irm Llc | Compounds and compositions as tlr-7 activity modulators |
| AU2010339921B2 (en) | 2009-12-15 | 2016-08-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Homogeneous suspension of immunopotentiating compounds and uses thereof |
| JP5363381B2 (ja) * | 2010-03-09 | 2013-12-11 | パナソニック株式会社 | プラズマディスプレイパネル |
| EA031379B1 (ru) | 2010-03-23 | 2018-12-28 | Новартис Аг | Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний |
| CN102834410B (zh) | 2010-03-30 | 2016-10-05 | 奥克兰儿童医院及研究中心 | 改性的h因子结合蛋白（fhbp）及其使用方法 |
| EP2585106A1 (en) | 2010-06-25 | 2013-05-01 | Novartis AG | Combinations of meningococcal factor h binding proteins |
| SI3246044T2 (sl) | 2010-08-23 | 2024-06-28 | Wyeth Llc | Stabilne formulacije antigenov neisseria meningitidis RLP2086 |
| CA2810971C (en) | 2010-09-10 | 2020-11-03 | Novartis Ag | Developments in meningococcal outer membrane vesicles |
| ES2585328T5 (es) | 2010-09-10 | 2022-12-14 | Wyeth Llc | Variantes no lipidadas de antígenos ORF2086 de Neisseria meningitidis |
| CN102028941B (zh) * | 2011-02-11 | 2013-02-13 | 中国医学科学院医学生物学研究所 | 一种b群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法 |
| WO2013009739A2 (en) * | 2011-07-11 | 2013-01-17 | Uvic Industry Partnerships Inc. | Soluble treponema pallidum protein tp0453,tp0453-tp0326 fusion protein, and use in syphilis diagnosis |
| JP2015505309A (ja) | 2011-12-29 | 2015-02-19 | ノバルティス アーゲー | 髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質のアジュバントされた組み合わせ |
| SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
| RU2665841C2 (ru) | 2012-03-09 | 2018-09-04 | Пфайзер Инк. | Композиции neisseria meningitidis и способы их применения |
| WO2013186753A1 (en) | 2012-06-14 | 2013-12-19 | Novartis Ag | Vaccines for serogroup x meningococcus |
| CN104736563A (zh) | 2012-07-27 | 2015-06-24 | 国家健康与医学研究院 | Cd147作为受体用于脑膜炎球菌至血管内皮的菌毛介导的粘附 |
| JP6446377B2 (ja) | 2013-03-08 | 2018-12-26 | ファイザー・インク | 免疫原性融合ポリペプチド |
| CN105431167A (zh) * | 2013-08-02 | 2016-03-23 | 奥克兰儿童医院及研究中心 | 非天然发生因子h结合蛋白(fhbp)及其使用方法 |
| EP3041502A2 (en) | 2013-09-08 | 2016-07-13 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
| CA2940447C (en) | 2014-02-28 | 2023-07-11 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| EP4074726A3 (en) | 2014-07-23 | 2022-11-23 | Children's Hospital & Research Center at Oakland | Factor h binding protein variants and methods of use thereof |
| RU2723045C2 (ru) | 2015-02-19 | 2020-06-08 | Пфайзер Инк. | Композиции neisseria meningitidis и способы их получения |
| US12109259B2 (en) * | 2016-09-02 | 2024-10-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccines for Neisseria gonorrhoeae |
| IL267733B2 (en) | 2017-01-31 | 2023-10-01 | Pfizer | NEISSERIA MENINGITIDIS preparations and methods therefor |
| TW202245836A (zh) | 2021-02-19 | 2022-12-01 | 美商賽諾菲巴斯德公司 | 重組ｂ型腦膜炎球菌疫苗 |
| GB202115151D0 (en) | 2021-10-21 | 2021-12-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods |
| GB202208093D0 (en) | 2022-06-01 | 2022-07-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
| GB202208089D0 (en) | 2022-06-01 | 2022-07-13 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic composition |
| TW202423477A (zh) | 2022-08-03 | 2024-06-16 | 美商賽諾菲巴斯德公司 | 針對腦膜炎奈瑟氏菌b的含佐劑免疫原性組成物 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996029412A1 (en) * | 1995-03-17 | 1996-09-26 | Biochem Vaccines Inc. | Proteinase k resistant surface protein of neisseria meningitidis |
| RU2105568C1 (ru) * | 1989-12-14 | 1998-02-27 | Нэшнл Рисерч Каунсл Оф Канада | Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b |
| WO1999024578A2 (en) * | 1997-11-06 | 1999-05-20 | Chiron S.P.A. | Neisserial antigens |
Family Cites Families (104)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE63757T1 (de) * | 1985-03-28 | 1991-06-15 | Chiron Corp | Expression durch verwendung von fusionsgenen fuer proteinproduktion. |
| DE3622221A1 (de) | 1986-07-02 | 1988-01-14 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur gentechnologischen gewinnung von proteinen unter verwendung gramnegativer wirtszellen |
| EP0273116A3 (en) | 1986-10-09 | 1990-05-02 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Gonococcal and meningococcal polypeptides, vaccines and diagnostics |
| GB8815795D0 (en) | 1988-07-02 | 1988-08-10 | Bkl Extrusions Ltd | Glazing bead |
| DE3841091A1 (de) | 1988-12-07 | 1990-06-13 | Behringwerke Ag | Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| NL8803111A (nl) | 1988-12-19 | 1990-07-16 | Nederlanden Staat | Multivalent meningococcen klasse i buitenmembraaneiwit vaccin. |
| ES2070312T5 (es) | 1988-12-19 | 2003-05-16 | American Cyanamid Co | Vacuna de proteina de membrana exterior meningococica de clase 1. |
| ES2055785T3 (es) | 1989-01-17 | 1994-09-01 | Eniricerche Spa | Peptidos sinteticos y su uso como vehiculos universales para la preparacion de conjugados inmunogenos aptos para el desarrollo de vacunas sinteticas. |
| HU212924B (en) | 1989-05-25 | 1996-12-30 | Chiron Corp | Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion |
| IT1237764B (it) | 1989-11-10 | 1993-06-17 | Eniricerche Spa | Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici. |
| CU22302A1 (es) * | 1990-09-07 | 1995-01-31 | Cigb | Secuencia nucleotidica codificante para una proteina de la membrana externa de neisseria meningitidis y uso de dicha proteina en preparados vacunales |
| EP0467714A1 (en) | 1990-07-19 | 1992-01-22 | Merck & Co. Inc. | The class II protein of the outer membrane of neisseria meningitidis |
| EP0471177B1 (en) | 1990-08-13 | 1995-10-04 | American Cyanamid Company | Filamentous hemagglutinin of bordetella pertussis as a carrier molecule for conjugate vaccines |
| US5153312A (en) | 1990-09-28 | 1992-10-06 | American Cyanamid Company | Oligosaccharide conjugate vaccines |
| ATE174625T1 (de) | 1991-03-14 | 1999-01-15 | Imclone Systems Inc | Rekombinante hybride porinepitope |
| DE69333110T2 (de) | 1992-03-02 | 2004-05-06 | Chiron S.P.A. | Mit dem cytotoxin von helicobacter pylori assoziiertes, immunodominantes antigen verwendbar in impfstoffen und zur diagnose |
| IT1262896B (it) | 1992-03-06 | 1996-07-22 | Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini. | |
| FR2692592B1 (fr) | 1992-06-19 | 1995-03-31 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Fragments d'ADN codant pour les sous-unités du récepteur de la transferrine de Neisseria meningitidis et procédés les exprimant. |
| ES2143716T3 (es) | 1992-06-25 | 2000-05-16 | Smithkline Beecham Biolog | Composicion de vacuna que contiene adyuvantes. |
| SG48309A1 (en) | 1993-03-23 | 1998-04-17 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a |
| US5439808A (en) | 1993-07-23 | 1995-08-08 | North American Vaccine, Inc. | Method for the high level expression, purification and refolding of the outer membrane group B porin proteins from Neisseria meningitidis |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| US6165747A (en) | 1993-12-30 | 2000-12-26 | President & Fellows Of Harvard College | Nucleic acids encoding hedgehog proteins |
| FR2720408B1 (fr) | 1994-05-31 | 1996-08-14 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Fragments Tbp2 de Neisseria meningitidis. |
| EP1167377B2 (en) | 1994-07-15 | 2012-08-08 | University of Iowa Research Foundation | Immunomodulatory oligonucleotides |
| US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| GB9513261D0 (en) | 1995-06-29 | 1995-09-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| FR2739624B1 (fr) | 1995-10-10 | 1997-12-05 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Nouvelle sous-unite tbp2 de neisseria meningitidis |
| DE19630390A1 (de) | 1996-07-26 | 1998-01-29 | Chiron Behring Gmbh & Co | Proteine, insbesondere Membranproteine von Helicobacter pylori, ihre Herstellung und Verwendung |
| ES2241042T3 (es) | 1996-10-11 | 2005-10-16 | The Regents Of The University Of California | Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora. |
| WO1998017805A2 (en) | 1996-10-24 | 1998-04-30 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES, c/o Centers for Disease Control and Prevention, Technology Transfer Office | Invasion associated genes from neisseria meningitidis serogroup b |
| CA2281838A1 (en) | 1997-02-28 | 1998-09-03 | University Of Iowa Research Foundation | Use of nucleic acids containing unmethylated cpg dinucleotide in the treatment of lps-associated disorders |
| AU753688B2 (en) | 1997-03-10 | 2002-10-24 | Ottawa Civic Loeb Research Institute | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant |
| US6299881B1 (en) | 1997-03-24 | 2001-10-09 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts |
| DE69838294T2 (de) | 1997-05-20 | 2009-08-13 | Ottawa Health Research Institute, Ottawa | Verfahren zur Herstellung von Nukleinsäurekonstrukten |
| PT1003850E (pt) | 1997-06-06 | 2009-08-13 | Dynavax Tech Corp | Inibidores da actividade de sequências de adn imunoestimulantes |
| GB9712347D0 (en) | 1997-06-14 | 1997-08-13 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| GB9713156D0 (en) | 1997-06-20 | 1997-08-27 | Microbiological Res Authority | Vaccines |
| DE69815692T2 (de) | 1997-09-05 | 2004-04-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Öl in wasser emulsionen mit saponinen |
| US6914131B1 (en) | 1998-10-09 | 2005-07-05 | Chiron S.R.L. | Neisserial antigens |
| KR20010032336A (ko) | 1997-11-21 | 2001-04-16 | 브랑디 빠스깔 | 클라미디아 뉴모니아 게놈 서열과 폴리펩티드, 이의 단편및 이의 용도, 특히, 감염의 진단, 예방 및 치료 용도 |
| KR100769103B1 (ko) | 1997-11-28 | 2007-10-23 | 세로노 제네틱스 인스티튜트 에스.에이. | 클라미디아 트라코마티스 게놈 서열과 폴리펩티드, 이의단편 및 이의 용도, 특히, 감염의 진단, 예방 및 치료 용도 |
| GB9726398D0 (en) | 1997-12-12 | 1998-02-11 | Isis Innovation | Polypeptide and coding sequences |
| WO1999036544A2 (en) * | 1998-01-14 | 1999-07-22 | Chiron S.P.A. | Neisseria meningitidis antigens |
| CA2284847A1 (en) * | 1998-01-30 | 1999-08-05 | Suntory Limited | Process for producing peptides using a helper peptide |
| US6303114B1 (en) | 1998-03-05 | 2001-10-16 | The Medical College Of Ohio | IL-12 enhancement of immune responses to T-independent antigens |
| GB9807721D0 (en) | 1998-04-08 | 1998-06-10 | Chiron Spa | Antigen |
| JP2002511423A (ja) | 1998-04-09 | 2002-04-16 | スミスクライン ビーチャム バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ワクチン |
| WO2001031019A2 (en) | 1999-10-29 | 2001-05-03 | Chiron Spa | Neisserial antigenic peptides |
| JP5102414B2 (ja) | 1998-05-01 | 2012-12-19 | ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド | 髄膜炎菌抗原および組成物 |
| US20070026021A1 (en) | 1998-05-01 | 2007-02-01 | Chiron S.R.I. | Neisseria meningitidis antigens and compositions |
| US6248329B1 (en) * | 1998-06-01 | 2001-06-19 | Ramaswamy Chandrashekar | Parasitic helminth cuticlin nucleic acid molecules and uses thereof |
| GB9817052D0 (en) | 1998-08-05 | 1998-09-30 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| EP1144998A3 (en) * | 1998-10-09 | 2002-08-07 | Chiron Corporation | Neisseria genomic sequences and methods of their use |
| CA2773698C (en) | 1998-10-16 | 2015-05-19 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Adjuvant systems comprising an immunostimulant adsorbed to a metallic salt particle and vaccines thereof |
| CA2347849C (en) * | 1998-10-22 | 2013-06-25 | The University Of Montana | Omp85 proteins of neisseria gonorrhoeae and neisseria meningitidis, compositions containing same and methods of use thereof |
| JP2002529069A (ja) | 1998-11-12 | 2002-09-10 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | クラミジア・ニューモニエのゲノム配列 |
| GB9828000D0 (en) | 1998-12-18 | 1999-02-10 | Chiron Spa | Antigens |
| HU228499B1 (en) | 1999-03-19 | 2013-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Streptococcus vaccine |
| FR2791895B1 (fr) | 1999-03-23 | 2001-06-15 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Utilisation de trehalose pour stabiliser un vaccin liquide |
| CA2365914A1 (en) | 1999-04-09 | 2000-10-19 | Techlab, Inc. | Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines |
| PT1187629E (pt) | 1999-04-19 | 2005-02-28 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicao adjuvante que compreende saponina e um oligonucleotido imunoestimulador |
| BR0010361A (pt) | 1999-04-30 | 2003-06-10 | Chiron Corp | Seq ências genÈmicas de neisseria e uso destas |
| CN100392082C (zh) | 1999-04-30 | 2008-06-04 | 启龙股份公司 | 保守的奈瑟球菌抗原 |
| GB9911683D0 (en) | 1999-05-19 | 1999-07-21 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| DK2270173T3 (en) | 1999-05-19 | 2016-03-07 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Neisserial combination compositions |
| GB9916529D0 (en) | 1999-07-14 | 1999-09-15 | Chiron Spa | Antigenic peptides |
| PL355232A1 (en) | 1999-09-24 | 2004-04-05 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Adjuvant comprising a polyxyethylene alkyl ether or ester and at least one nonionic surfactant |
| CO5200837A1 (es) | 1999-09-24 | 2002-09-27 | Smithkline Beecham Corp | Vacunas |
| CN1416352B (zh) | 2000-01-17 | 2011-05-25 | 启龙股份公司 | 含有脑膜炎奈瑟球菌b血清群外膜蛋白质的外膜囊(omv)疫苗 |
| JP2003523208A (ja) | 2000-01-25 | 2003-08-05 | ザ ユニバーシティ オブ クイーンズランド | 髄膜炎菌表面抗原ＮｈｈＡの保存領域を含むタンパク質 |
| MXPA02008314A (es) | 2000-02-28 | 2002-12-09 | Chiron Spa | Expresion heterologa de proteinas de neisseria. |
| US20040167058A1 (en) * | 2000-06-29 | 2004-08-26 | Colgate-Palmolive Company | Multi-phase clear fabric softening composition |
| CA2414884A1 (en) | 2000-07-03 | 2002-01-10 | Chiron S.P.A. | Immunisation against chlamydia pneumoniae |
| EP1328543B1 (en) | 2000-10-27 | 2009-08-12 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Nucleic acids and proteins from streptococcus groups a & b |
| GB0108024D0 (en) * | 2001-03-30 | 2001-05-23 | Chiron Spa | Bacterial toxins |
| GB0118249D0 (en) | 2001-07-26 | 2001-09-19 | Chiron Spa | Histidine vaccines |
| CA2452720C (en) | 2001-07-26 | 2012-04-17 | Chiron S.R.L. | Vaccines comprising aluminium adjuvants and histidine |
| GB0121591D0 (en) | 2001-09-06 | 2001-10-24 | Chiron Spa | Hybrid and tandem expression of neisserial proteins |
| MXPA04000653A (es) | 2001-07-27 | 2004-11-22 | Chiron Srl | Adhesinas de meningococcus nada, app y orf 40. |
| MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
| WO2004015099A2 (en) | 2002-08-02 | 2004-02-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccine composition comprising lipooligosaccharide with reduced phase variability |
| US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
| CA2501812C (en) | 2002-10-11 | 2012-07-10 | Mariagrazia Pizza | Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
| GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| CA2512917A1 (en) | 2003-01-15 | 2004-08-05 | Wyeth Holdings Corporation | Methods for increasing neisseria protein expression |
| ES2411080T3 (es) | 2003-01-30 | 2013-07-04 | Novartis Ag | Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos |
| MXPA05011110A (es) | 2003-04-16 | 2006-01-24 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de un padecimiento originado por meningococos. |
| RU2378010C2 (ru) | 2003-10-02 | 2010-01-10 | Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс С.Р.Л. | Жидкие вакцины для множественных серогрупп менингококков |
| GB0409748D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Lactoferrin cleavage |
| GB0419408D0 (en) | 2004-09-01 | 2004-10-06 | Chiron Srl | 741 chimeric polypeptides |
| TWI487535B (zh) | 2004-11-30 | 2015-06-11 | Centocor Inc | 類鐸受體３（ｔｏｌｌ ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ３）拮抗劑，方法及用途 |
| HUE033196T2 (en) | 2005-01-27 | 2017-11-28 | Children's Hospital & Res Center At Oakland | GNA1870-based vesicle vaccines for broad-spectrum protection against diseases caused by Neisseria meningitidis |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| TW200806315A (en) | 2006-04-26 | 2008-02-01 | Wyeth Corp | Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| US20100150912A1 (en) | 2007-04-11 | 2010-06-17 | Novartis Ag | Blocking interaction between pathogen factors and factor h to inhibit hemorrhagic syndromes |
| US20100203137A1 (en) | 2007-06-04 | 2010-08-12 | Mario Contorni | Formulation of meningitis vaccines |
| EP2245048B1 (en) | 2008-02-21 | 2014-12-31 | Novartis AG | Meningococcal fhbp polypeptides |
| EP2265640B1 (en) | 2008-03-10 | 2015-11-04 | Children's Hospital & Research Center at Oakland | Chimeric factor h binding proteins (fhbp) containing a heterologous b domain and methods of use |
| IT1394288B1 (it) | 2008-09-12 | 2012-06-06 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Immunogeni di proteine che legano il fattore h. |
| GB0819633D0 (en) | 2008-10-25 | 2008-12-03 | Isis Innovation | Composition |
| WO2010109323A1 (en) | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Novartis Ag | Adjuvanting meningococcal factor h binding protein |
| CA2810971C (en) | 2010-09-10 | 2020-11-03 | Novartis Ag | Developments in meningococcal outer membrane vesicles |
-
2001
- 2001-09-06 GB GBGB0121591.2A patent/GB0121591D0/en not_active Ceased
-
2002
- 2002-09-06 EP EP10179788.4A patent/EP2360176B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 EP EP14172613.3A patent/EP2829549A3/en not_active Withdrawn
- 2002-09-06 DK DK10179755.3T patent/DK2327719T3/da active
- 2002-09-06 EP EP10179755.3A patent/EP2327719B1/en not_active Revoked
- 2002-09-06 CN CN200810092103XA patent/CN101260148B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-06 NZ NZ537976A patent/NZ537976A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-09-06 JP JP2003525026A patent/JP4511832B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-06 CA CA2459816A patent/CA2459816C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-06 ES ES02777592T patent/ES2357503T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 RU RU2008122435/10A patent/RU2475495C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-09-06 US US10/488,786 patent/US8980277B2/en active Active
- 2002-09-06 ES ES10179788.4T patent/ES2556770T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 DK DK02777592.3T patent/DK1423419T3/da active
- 2002-09-06 EP EP02777592A patent/EP1423419B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 DK DK10179788.4T patent/DK2360176T3/en active
- 2002-09-06 PT PT101797553T patent/PT2327719E/pt unknown
- 2002-09-06 NZ NZ547145A patent/NZ547145A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-09-06 AT AT02777592T patent/ATE496063T1/de active
- 2002-09-06 MX MXPA04002216A patent/MXPA04002216A/es active IP Right Grant
- 2002-09-06 DE DE60238993T patent/DE60238993D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 NZ NZ532115A patent/NZ532115A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-09-06 PT PT101797884T patent/PT2360176E/pt unknown
- 2002-09-06 ES ES10179755.3T patent/ES2523365T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-09-06 WO PCT/IB2002/003904 patent/WO2003020756A2/en active IP Right Grant
- 2002-09-06 CN CNB028221877A patent/CN100390196C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-09-06 AU AU2002339217A patent/AU2002339217B2/en active Active
- 2002-09-06 RU RU2004110230/13A patent/RU2339646C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-09-06 PT PT02777592T patent/PT1423419E/pt unknown
- 2002-09-06 BR BR0212363-0A patent/BR0212363A/pt not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-03-08 MX MX2012000967A patent/MX336118B/es unknown
-
2005
- 2005-09-05 JP JP2005256658A patent/JP2005350486A/ja not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-10-24 AU AU2008234959A patent/AU2008234959B2/en not_active Ceased
-
2010
- 2010-07-23 JP JP2010166543A patent/JP5542276B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-04-15 CY CY20111100383T patent/CY1113218T1/el unknown
- 2011-06-13 US US13/159,370 patent/US9011869B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-02-03 US US13/366,252 patent/US8840907B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-09-24 JP JP2013196675A patent/JP2014051497A/ja not_active Withdrawn
-
2014
- 2014-06-16 US US14/305,979 patent/US9056075B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2015
- 2015-06-15 US US14/739,985 patent/US20150273044A1/en not_active Abandoned
- 2015-12-22 CY CY20151101166T patent/CY1117065T1/el unknown
-
2017
- 2017-11-02 US US15/802,347 patent/US20180169210A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2105568C1 (ru) * | 1989-12-14 | 1998-02-27 | Нэшнл Рисерч Каунсл Оф Канада | Полисахарид neisseria meningitidis с модифицированной группой b, конъюгированный антиген, вакцина против менингита группы b и способ индукции ответа антител к менингиту группы b |
| WO1996029412A1 (en) * | 1995-03-17 | 1996-09-26 | Biochem Vaccines Inc. | Proteinase k resistant surface protein of neisseria meningitidis |
| WO1999024578A2 (en) * | 1997-11-06 | 1999-05-20 | Chiron S.P.A. | Neisserial antigens |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2475495C2 (ru) | Гибридная и тандемная экспрессия белков нейссерий | |
| AU2002339217A1 (en) | Hybrid and tandem expression of Neisserial proteins | |
| JP4414226B2 (ja) | アジュバント化された抗原性髄膜炎菌性組成物 | |
| AU2014201962B2 (en) | Hybrid and tandem expression of Neisserial proteins | |
| AU2012202488B2 (en) | Hybrid and tandem expression of Neisserial proteins |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180907 |