CN102844047B - 含tlr活性调节剂的免疫原性组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一类新化合物、含有该化合物的免疫原性组合物和药物组合物以及用该化合物治疗或预防有关Toll样受体7的疾病或紊乱的方法。在一个方面，所述化合物用作提高疫苗有效性的佐剂。

Description

含TLR活性调节剂的免疫原性组合物
本申请要求2009年9月2日提交的美国临时申请61/239,156的优先权，其通过引用全文纳入本文用作所有目的。
技术领域
本发明涉及Toll样受体(TLR)调节剂以及使用所述化合物的方法，如与抗原和含铝佐剂一起给予时。
发明背景
通过先天免疫系统在模式识别受体(PRR)的协助下完成了特定类别病原体的早期检测。该检测病原体包括病毒、细菌、原生动物和真菌，且各组成型表达一组种类特异的突变抗性分子，称为病原相关分子模式(PAMP)。这些分子标记可由蛋白、糖、脂质、核酸或其组合组成，且可位于内部或外部。PAMP的例子包括细菌糖(脂多糖或LPS、甘露糖)、核酸(细菌或病毒DNA或RNA)、肽聚糖和脂磷壁酸(来自革兰氏阳性菌)、N-甲酰甲硫氨酸、脂蛋白和真菌葡聚糖。
模式识别受体已进化以利用3种PAMP性质。首先，组成型表达使宿主能检测病原体而无论其生命周期的阶段。其次，PAMP为种类特异的，这使宿主能区分病原体从而适合其应答。第三，突变抗性使宿主能识别病原体而无论其具体株系。
模式识别受体不仅通过其PAMP参与病原体识别。一旦结合，模式识别受体会成簇，招募其他胞外和胞内蛋白到复合体上，并起始最终影响转录的信号级联。此外，模式识别受体参与应答病原体检测的补体、凝结物、噬菌作用、炎症和凋亡功能的激活。
模式识别受体(PRR)可分为内吞作用PRR或信号PRR。信号PRR包括膜结合Toll样受体(TLR)和胞质NOD样受体的大家族，而内吞作用PRR通过噬菌细胞促进微生物体的结合、吞噬和破坏而不依赖胞内信号，其在所有噬菌细胞中发现且介导凋亡细胞的移除。此外，内吞PRR识别糖且包括巨噬细胞的甘露糖受体、存在于所有吞噬细胞中的葡聚糖受体和识别带电配体的清道夫受体。
发明概述
本文提供的免疫原性组合物包括toll样受体7(TLR7)激动剂、含铝的佐剂和抗原。该TLR7激动剂为结合含铝佐剂例如(仅为示例)氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝的免疫增强剂。在优选实施方式中，TLR7激动剂是下述式(I)的化合物。因此，本文还提供免疫原性组合物，其包括式(I)的化合物(下述)、含铝佐剂和抗原。在某些实施方式中，式(I)的化合物以有效引发、诱导或增加免疫应答的量存在以响应给予所述组合物的对象中的抗原。该免疫原性组合物中，式(I)的化合物以给予时足以产生免疫刺激作用的量存在。所述免疫原性组合物中，含铝佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在该免疫原性组合物的某些实施方式中，所述含铝佐剂为羟基氧化铝或氢氧化铝。在该免疫原性组合物的某些实施方式中，所述抗原为细菌抗原(如MenB抗原、MenA糖、MenY糖、MenW135糖、MenC糖等)。在该免疫原性组合物的某些实施方式中，所述抗原为病毒抗原(如RSV抗原、流感抗原等)。在该免疫原性组合物的某些实施方式中，所述抗原是多肽。在该免疫原性组合物的某些实施方式中，所述抗原是糖。在该免疫原性组合物的某些实施方式中，还包括额外的佐剂。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物是干燥的固体。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物是冻干固体。
在一个方面，本文提供的式(I)化合物包括其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物(如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、受保护衍生物、个体异构体及异构体混合物且具有式(I)的结构：
式中：
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是–C(O)-或–O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选取代有1-4个氟基团；
各L3独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基可选取代有1-4个氟基团；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自C1-C4烷基、–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自氢和氟；
R5是-P(O)(OR9)2,
R6是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R8是H或C1-C4烷基；
各R9独立地选自H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自1、2、3、4、5和6，以及
q是1、2、3或4；
前提是R3为C1-C4烷基或–OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OR9)2且R7是-CF2P(O)(OR9)2。
在式(I)化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基，在其他实施方式中R1为甲基。在某些实施方式中，R1是H。在其他实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6。
在式(I)化合物的某些实施方式中，若R1为-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5、或-OL2R6、则R3是-OR8或C1-C6烷基。在某些实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，且R3是–OMe。
在式(I)化合物的一些实施方式中，R2是C1-C6烷基。在某些实施方式中，R2是甲基。
在式(I)化合物的一些实施方式中，R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5和-L3L4L3R5。在其他实施方式中，R3选自-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8,-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH。在某些实施方式中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5为式-O(CH2)1-5P(O)(OR)2的基团。在其他实施方式中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5为式-O(CH2)1-5CF2P(O)(OR)2的基团。
在一些实施方式中，R3选自C1-C4烷基、–L3R5,-L1R5,-L3R7,-L3L4L3R7,-L3L4R5,-L3L4L3R5,-OL3R5,-OL3R7,-OL3L4R7,-OL3L4L3R7,-OR8,-OL3L4R5和-OL3L4L3R5；
存在多个R9时，如含P(O)(OR9)2部分的化合物中时，所述R9基团相同或不同。在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R9各为H。在其他实施方式中，至少一个R9为H而其他R9为C1-C6烷基。在其他实施方式中，至少一个R9为H而其他R9为甲基。在其他实施方式中，至少一个R9为H而其他R9为乙基。在式(I)所示化合物的其他实施方式中，各R9为C1-C6烷基，而在某些实施方式中R9为甲基或乙基或其组合。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L2和/或L3为式-((CR4R4)pO)q(CH2)p-所示基团，且在某些实施方式中，该基团具有式-(CH2CH2O)1-3(CH2)1-3-。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L2为C1-C6亚烷基，而在其他实施方式中L2为取代有1-4个氟基团的C1-C6亚烷基。在式(I)所示化合物的某些实施方式中，L2具有式(CH2)0- 5CF2，其中氟取代的碳不直接连接式I的苯环。在式(I)化合物的某些实施方式中，L2为C2-C6亚烯基，而在其他实施方式中L2为取代有1-4个氟基团的C2-C6亚烯基。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L3为C1-C6亚烷基，而在其他实施方式中L3为取代有1-4个氟基团的C1-C6亚烷基。在式(I)所示化合物的某些实施方式中，L3具有式(CH2)0- 5CF2，其中氟取代的碳不直接连接式I的苯环。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L2为亚芳基或杂亚芳基。在一些这类实施方式中，L2为亚苯基，如1,3-二取代亚苯基或1,4-二取代亚苯基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R7为–CF2P(O)(OR9)2且L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R7为–CF2P(O)(OR9)2；L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，且p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R6为-C(O)OR10；R7为-CF2P(O)(OR9)2；L2为C1-C6亚烷基，而L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R6为-C(O)OR10；R7为-CF2P(O)(OR9)2；L2为C1-C6亚烷基，而L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OR8；R8为C1-C6烷基；R5为-P(O)(OR9)2；R6为-CF2P(O)(OR9)2；L1为-C(O)-，而L2为C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，各自任选取代有1-4个氟基团。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3L4R5、-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R7为-CF2P(O)(OR9)2；各L3独立为C1-C6亚烷基而L4为亚苯基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-C(R5)2OH或-L1R5；R5为-P(O)(OR9)2，而L1为-C(O)-或-O-。
在式(I)所示化合物和其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物(如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、受保护衍生物、个体异构体及异构体混合物的某些实施方式中：
R1是C1-C4烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选取代有1-4个氟基团；
各L3独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基可选取代有1-4个氟基团；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C4烷基；
R3选自–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自氢和氟；
R5是-P(O)(OH)2,
R6是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R7是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R8是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自1、2、3、4、5和6；
q是1、2、3或4；
前提是R3为–OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OH)2且R7是-CF2P(O)(OH)2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OH)2；R7为–CF2P(O)(OH)2，且L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OH)2；R7为–CF2P(O)(OH)2；L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，且p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OH)2；R6为-C(O)OH；R7为-CF2P(O)(OH)2；L2为C1-C6亚烷基，而L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OH)2；R6为-C(O)OH；R7为-CF2P(O)(OH)2；L2为C1-C6亚烷基，而L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OR8；R8为C1-C6烷基；R5为-P(O)(OH)2；R6为-CF2P(O)(OH)2；L1为-C(O)-，而L2为C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，各自任选取代有1-4个氟基团。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3L4R5、-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5为-P(O)(OH)2；R7为-CF2P(O)(OH)2；各L3独立为C1-C6亚烷基而L4为亚苯基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-C(R5)2OH或-L1R5；R5为-P(O)(OH)2，而L1为-C(O)-或-O-。
在前述式(I)化合物的某些实施方式中，R8为甲基。在前述式(I)化合物的某些实施方式中，R1为甲基。在前述式(I)化合物的某些实施方式中，R2为甲基。
在某些实施方式中，式(I)的化合物选自：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸；3-(5-氨基-2-(4-(4,4-二氟-4-膦酰丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；3-(5-氨基-2-(4-(2-(3,3-二氟-3-膦丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二氢磷酸酯；(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸；5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸；4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸；3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸；2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸；2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧代乙基膦酸；(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸；2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸；(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸；3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸；5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羰基膦酸；3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(羟基)亚甲基二膦酸；3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3,3-二氟-3-膦丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)(羟基)亚甲基二膦酸；3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸；6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸；6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟-己基膦酸；4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸,和2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸。在其他实施方式中，式(I)化合物选自：3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(3,3-二氟-3-膦丙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1,7-萘啶-8-基]丙酸；{5-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1,7-萘啶-2-基}乙基)-3-甲基苯氧]戊基}膦酸,和{4-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1,7-萘啶-2-基}乙基)-3-甲基苯氧基]丁基}膦酸.这些化合物各包括本文所述化合物、组合物和方法的优选实施方式。
在某些实施方式中，本发明的化合物不是二膦酸盐。
本文提供的另一方面为提高免疫原性组合物有效性的方法，其中所述免疫原性组合物包括含铝佐剂，且所述方法包括将有效量的式(I)化合物加到所述免疫原性组合物中。所述方法中，含铝佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在该方法的某些实施方式中，所述含铝佐剂为羟基氧化铝或氢氧化铝。
本文提供的另一方面为在脊椎动物对象中引起或诱导免疫应答的方法，包括给予所述脊椎动物对象有效量的本发明所述免疫原性组合物。在一些实施方式中，本发明提供在脊椎动物对象中引起或诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的方法，包括给予所述脊椎动物对象有效量的本发明所述免疫原性组合物。在其他实施方式中，本发明提供在脊椎动物对象中引起或诱导抗体介导的免疫应答的方法，包括给予所述脊椎动物对象有效量的本发明所述免疫原性组合物。
本文提供的另一方面为制作本文所述免疫原性组合物的方法。
本文提供的另一方面为含本文所述免疫原性组合物的疫苗组合物。
本文还提供结合含铝佐剂的式(I)化合物和其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物(如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、受保护衍生物、个体异构体及异构体混合物中。在某些方面，该式(I)化合物为TLR7激动剂和免疫增强剂。
本文的另一方面为使用式(I)化合物，及含该化合物的药物组合物的方法。
本文的另一方面提供药物组合物，所述组合物包括治疗有效量的式(I)化合物和药学上可接受的载体。该药物组合物的某些实施方式中，配制该药物组合物用于静脉给予、玻璃体内给予、肌肉内给予、口服给予、直肠吸入给予、经鼻给予、局部给予、眼部给予或耳部给予。在其他实施方式中，所述药物组合物的形式为片剂、丸剂、胶囊、液体、吸入剂、鼻喷液、栓剂、溶液、乳液、药膏、滴眼液或滴耳液。在其他实施方式中，该药物组合物还包括一种或多种其它治疗剂。
本文的另一方面提供药物组合物，所述组合物包括治疗有效量的式(I)化合物、含铝佐剂、抗原和药学上可接受的载体。该药物组合物中，式(I)的化合物以给予时足以产生免疫刺激作用的量存在。该药物组合物的某些实施方式中，配制药物组合物用于静脉内给予、玻璃体内给予或肌肉内给予。该组合物中，含铝佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在这类组合物的某些实施方式中，所述含铝佐剂为羟基氧化铝或氢氧化铝。
本文的另一方面提供药物组合物，所述组合物包括结合含铝佐剂的治疗有效量的式(I)化合物和药学上可接受的载体。在某些实施方式中，所述组合物是干燥的固体。在某些实施方式中，所述组合物是冻干固体。该组合物中，含铝佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在这类组合物的某些实施方式中，所述含铝佐剂为羟基氧化铝或氢氧化铝。
本文提供的另一方面为治疗TLR7受体活性相关疾病或紊乱患者的药物，所述药物包括治疗有效量的式(I)化合物，其中所述式(I)化合物是TLR7受体激动剂。
本文提供的另一方面为使用式(I)化合物生产用于治疗涉及TLR7受体调控的患者疾病或紊乱的药物。本文提供的另一方面为使用式(I)化合物生产用于免疫患者的药物，例如其中所述药物为疫苗。
本文提供的另一方面包括激活TLR7受体的方法，其中所述方法包括将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物给予需要其的系统或患者，从而激活TLR受体。在该方法中，所述式(I)化合物为TLR7受体激动剂。在该方法的某些实施方式中，所述方法包括将所述化合物给予细胞或组织系统或给予人或动物对象。
本文提供的另一方面包括治疗涉及TLR7受体调控的疾病或紊乱的方法，其中所述方法包括将有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物给予需要该治疗的系统或对象，从而治疗所述疾病或病症。在该方法中，所述式(I)化合物为TLR7受体激动剂。在该方法的某些实施方式中，所述方法包括将所述化合物给予细胞或组织系统或给予人或动物对象。
该方法的某些实施方式中，所述疾病或病症为传染疾病、炎症疾病、呼吸道疾病、皮肤病或自身免疫病。在该方法的某些实施方式中，所述疾病或病症是哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、支气管炎、皮炎、光化性角化病、基底细胞癌、过敏性鼻炎、牛皮癣、硬皮病、荨麻疹、类风湿关节炎、多发性硬化症、癌症、乳腺癌、HIV或狼疮。
本文提供的另一方面包括治疗细胞增殖疾病的方法，所述方法包括将有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物给予需要该治疗的系统或对象；其中所述细胞增殖疾病为淋巴瘤、骨肉瘤、黑色素瘤，或乳腺、肾、前列腺、大肠、甲状腺、卵巢、胰腺、神经、肺、子宫或胃肠道的肿瘤。
本文提供的另一方面为包含式(I)化合物、抗原和药学上可接受载体的药物组合物，其中该药物组合物为免疫原性组合物，所述化合物为免疫增强剂且存在的量有效提高接受所述组合物的对象中对抗原的免疫应答。在某些实施方式中，所述药物组合物还包括一种或多种免疫调节剂。在某些实施方式中，所述一种或多种免疫调节剂包括一种或多种佐剂。在某些实施方式中，所述佐剂选自含矿物的组合物、油乳剂、皂苷制剂、病毒体、病毒样颗粒、细菌衍生物、微生物衍生物、人免疫调节剂、生物粘附剂、粘膜粘附剂、微粒、脂质体、聚氧乙烯醚制剂、聚氧乙烯酯制剂、聚磷腈、胞壁肽、或咪唑并喹诺酮化合物的佐剂。在某些实施方式中，所述佐剂为油乳剂。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物用作疫苗，且所述化合物以给予时足以产生免疫刺激作用的量存在。
本文提供的另一方面为用于药物治疗方法的化合物，其中所述药物治疗方法用于治疗有关TLR7受体活性的疾病，其中所述疾病选自传染病、炎症疾病、呼吸道疾病、皮肤病或自身免疫病，且其中所述化合物为权利要求1所述的式(I)化合物。在该方法的某些实施方式中，所述疾病或病症是哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、支气管炎、皮炎、光化性角化病、基底细胞癌、过敏性鼻炎、牛皮癣、硬皮病、荨麻疹、类风湿关节炎、多发性硬化症、癌症、乳腺癌、HIV或狼疮。
附图简要说明
图1显示添加或不添加氢氧化铝时化合物1在上清中的浓度。所述浓度通过HPLC分析获得。
图2显示化合物1和氢氧化铝佐剂的结合对脑膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitis)(MenB)的抗原与氢氧化铝佐剂的结合的影响。
图3显示注射后24小时的化合物16的血清浓度。菱形显示无化合物的数据；方块显示吸附化合物的数据。
图4和图5显示给予化合物6或化合物20后24小时的所示细胞因子水平的增加。
图6显示用5CVMB与(a)仅氢氧化铝佐剂,(b)氢氧化铝佐剂+25μg化合物6,(c)氢氧化铝佐剂+100μg化合物6,(d)仅化合物6,或(e)氢氧化铝佐剂和MenB外膜泡组合免疫后获得的对株系NZ98的血清杀菌效价。
图7显示用(a)无佐剂,(b)氢氧化铝佐剂+OMV,(c)100μg化合物20,(d)25μg化合物20+氢氧化铝佐剂,或(e)100μg化合物20+氢氧化铝佐剂配制的5CVMB的杀菌效价。
图8显示用(a)无佐剂,(b)氢氧化铝佐剂和小泡,(c)100μg化合物19,(d)25μg化合物19(e)100μg化合物19+氢氧化铝佐剂，或(f)25μg化合物19+氢氧化铝佐剂配制的5CVMB的杀菌效价。
发明详述
定义
如本文所用，术语“烯基”或“烯烃”指部分不饱和的具有至少一个碳-碳双键的支链或直链烃类。绕所述双键的原子方向为顺式(Z)或反式(E)构象。在某些实施方式中，所述烯基或烯烃基团被任选取代。如本文所用，术语"C2-C3烯基"、"C2-C4烯基"、"C2-C5烯基"、"C2-C6烯基"、"C2-C7烯基"和"C2-C8烯基"指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烯基基团。除非另有说明，烯基基团通常是C2-C6烯基。如本文所用，烯基基团的非限制性示例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等。
如本文所用，术语“亚烯基”指衍生自烯基的部分不饱和的支链或直链二价烃基。在某些实施方式中，所述亚烯基基团被任选取代。如本文所用，术语"C2-C3亚烯基"、"C2-C4亚烯基"、"C2-C5亚烯基"、"C2-C6亚烯基"、"C2-C7亚烯基"和"C2-C8亚烯基"指分别含至少2个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烯基基团。除非另有说明，亚烯基基团通常是C2-C6亚烯基。如本文所用，亚烯基基团的非限制性示例包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基、亚己烯基、亚庚烯基、亚辛烯基、亚壬烯基、亚癸烯基等。
如本文所用，术语“烷基”指饱和的支链或直链烃。在某些实施方式中，所述烷基基团被任选取代。如本文所用，术语"C1-C3烷基"、"C1-C4烷基"、"C1-C5烷基"、"C1-C6烷基"、"C1-C7烷基"和"C1-C8烷基"指分别含至少1个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷基基团。除非另有说明，烷基基团通常是C1-C6烷基。如本文所用，烷基基团的非限制性示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。
如本文所用，术语“亚烷基”指衍生自烷基的饱和支链或直链二价烃基。在某些实施方式中，所述亚烃基基团被任选取代。如本文所用，术语"C1-C3亚烷基"、"C1-C4亚烷基"、"C1-C5亚烷基"、"C1-C6亚烷基"、"C1-C7亚烷基"和"C1-C8亚烷基"指分别含至少1个，且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烷基基团。除非另有说明，亚烷基基团通常是C1-C6亚烷基。如本文所用，亚烷基基团的非限制性示例包括亚甲基、亚乙基、正亚丙基、异亚丙基、正亚丁基、异亚丁基、仲亚丁基、叔亚丁基、正亚戊基、异亚戊基、亚己基等。
如本文所用，术语“烷氧基”指-ORa基团，其中Ra为本文所定义的烷基。烷氧基可以任选被取代。如本文所用，术语"C1-C3烷氧基"、"C1-C4烷氧基"、"C1-C5烷氧基"、"C1-C6烷氧基"、"C1-C7烷氧基"和"C1-C8烷氧基"指其中烷基部分含至少1个且最多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷氧基。如本文所用，烷氧基的非限制性示例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基、壬氧基、癸氧基等。
如本文所用，术语“芳基”指具有总共5-14个环原子的单环、双环和三环的环系统，其中所述系统中至少一个环为芳族且其中系统内各环含3-7个环原子。在某些实施方式中，所述芳基基团被任选取代。如本文所用，芳基的非限制性示例包括苯基、萘基、芴基、茚基、薁基和蒽基等。作为任选的替代方式，术语“芳基”还可指具有总共6元、10元或14元碳原子环的单环或稠合双环的系统，被一种或多种取代基任选取代；该芳基基团的非限制性示例包括苯基和萘基。
如本文所用，术语“亚芳基”指衍生自芳基的二价基团。在某些实施方式中，所述亚芳基基团被任选取代。
如本文所用，术语“卤素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
如本文所用，术语"卤代”指卤素基团：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。
如本文所用，术语“卤代烷基”或“卤素取代的烷基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烷基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烷基可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烷基的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基，其中所述卤素基团相同或不同，包括但不限于三氟甲基、五氟乙基等。
如本文所用，术语“卤代烯基”或“卤素取代的烯基”指如本文所定义取代有一个或多个卤素基团的烯基，其中所述卤素基团相同或不同。卤代烯基可以任选被取代。如本文所用，此类支链或直链卤代烯基的非限制性示例包括取代有一个或多个卤素基团的乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等，其中所述卤素基团相同或不同。
如本文所用，术语“杂芳基”指具有总共5-14个环原子的单环、双环和三环的环系统，其中所述系统内至少一个环为芳族，系统内至少一个环含一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子，且其中系统内各环含3-7个环原子。在某些实施方式中，所述杂芳基基团被任选取代。如本文所用，杂芳基的非限制性示例包括苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并唑基、苯并吡喃基，苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并氮杂基(benzazepinyl)、苯并咪唑基、苯并噻喃基、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、噌啉基、呋吖基、呋喃基、呋喃并吡啶基、咪唑基、吲哚基、中氮茚基、二氢吲哚-2-酮、吲唑基、异吲哚基、异喹啉基、异唑基、异噻唑基、1,8-萘啶基、唑基、氧杂吲哚基(oxaindolyl)、氧杂二唑基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、4H-喹嗪基、噻唑基、噻二唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和四唑基。作为任选的替代方式，术语“杂芳基”还可指具有总共5、6、9或10个环原子的单环或稠合双环的环系统，其中至少一个环原子为选自氮、氧和硫的杂原子，任选地被一种或多种取代基取代，所述取代基如苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并唑基、苯并吡喃基，苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并氮杂基(benzazepinyl)、苯并咪唑基、苯并噻喃基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、噌啉基、呋吖基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、中氮茚基、吲唑基、异吲哚基、异喹啉基、异唑基、异噻唑基、1,8-萘啶基、唑基、氧杂吲哚基(oxaindolyl)、氧杂二唑基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、噻唑基、噻二唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和四唑基。
如本文所用，术语“杂亚芳基”指衍生自杂芳基的二价基团。在某些实施方式中，所述杂亚芳基基团被任选取代。
如本文所用，术语“杂原子”指一个或多个氧、硫、氮、磷或硅。
如本文所用，术语“羟基”指-OH基团。
如本文所用，术语“羟烷基”指如本文所定义取代有一个或多个羟基的烷基。如本文所用，支链或直链“C1-C6羟烷基基团的非限制性示例包括取代有一个或多个羟基基团的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基基团。
如本文所用，术语“可任选取代”指所述参考基团可被一个或多个额外基团取代或未被取代，所述额外基团单独且独立选自烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、羟基、烷氧基、巯基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、异氰酸基、硫氰酸基、异硫氰酸基、硝基、全卤代烷基、全氟代烷基和包括单取代和双取代氨基基团的氨基，及其受保护的衍生物。任选取代基的非限制性示例包括卤素、–CN、＝O、＝N-OH、＝N-OR、＝N-R、–OR、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-OC(O)OR、-C(O)NHR、-C(O)NR2、-OC(O)NHR、-OC(O)NR2、-SR-、-S(O)R、-S(O)2R、-NHR、-N(R)2、-NHC(O)R、–NRC(O)R、-NHC(O)OR、-NRC(O)OR、S(O)2NHR、–S(O)2N(R)2、-NHS(O)2NR2、-NRS(O)2NR2、-NHS(O)2R、-NRS(O)2R、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基、和卤素取代的C1-C8烷氧基，其中各R独立选自H、卤素、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基、和卤素取代的C1-C8烷氧基。此类取代基团的位置和数量按各基团熟知的价态限制确定，例如＝O是烷基的合适取代基但不适于芳基。
如本文所用，术语“溶剂合物”指由溶质(例如，如本文所述的式(I)化合物或其盐)和溶剂形成的可变化学计量的复合物。溶剂的非限制性示例为水、丙酮、甲醇、乙醇和乙酸。
如本文所用，有关制剂、组合物或成分的术语“可接受”表示对治疗对象的总体健康没有持续的有害效果。
对象化合物的术语“给予”或“给药”表示给需要治疗的对象提供式(I)化合物、其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂化物、或前药。
术语“抗原”指含能引起免疫学应答的一个或多个表位(如线性的、成构象的或兼有)的分子。该术语可与术语“免疫原”互换使用。“引发”表示诱导、促进、增强或调控免疫应答或免疫反应。在一些情况中，所述免疫应答或免疫反应是体液和/或细胞应答。抗原可诱导、促进、增强或调控体外和/或对象体内细胞和/或对象离体细胞或组织中的免疫应答或免疫反应。该免疫应答或反应可包括但不限于引发对象抗体形成或产生与抗原有反应性的特定淋巴细胞群。抗原通常是所述宿主的外源大分子(如蛋白、多糖、多核苷酸)。
本文所使用术语“抗原”还表示亚基抗原(即与该抗原天然关联的全生物体分开且离散的抗原)，以及杀死、减毒或灭活的细菌、病毒、寄生虫、寄生虫或其他病原体或肿瘤细胞，包括细胞表面受体的胞外结构域和含T细胞表位的胞内部分。抗体如抗独特型抗体，或其片段以及能模拟抗原或抗原决定簇的合成肽模拟表位也涵盖在本文所用的抗原定义下。类似的，在体内如在基因治疗和核酸免疫应用中，表达免疫原性蛋白、抗原或抗原决定簇的寡核苷酸或多核苷酸也包含在本文的抗原定义中。
“表位”是给定物质(例如，抗原性分子或抗原性复合物)中确定其免疫学特异性的部分。表位包含在所述抗原的定义范围内。通常，表位是天然产生抗原中的多肽或多糖。在人工抗原中，其可为低分子量物质如对氨苯基胂酸衍生物。B-细胞表位一般包括至少5个氨基酸，但可以小到3-4个氨基酸。T-细胞表位如CTL表位通常包含至少约7-9个氨基酸，而辅助T-细胞表位通常包括至少约12-20个氨基酸。
本文所用术语“癌症”指倾向于以不受控方式增殖的或在一些情况中转移(扩散)的细胞异常生长。癌症的类型包括但不限于实体瘤，如膀胱、肠、脑、胸、子宫内膜、心脏、肾、肺、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其他内分泌器官(甲状腺)、前列腺、皮肤(黑素瘤)或血液学肿瘤(如白血病)。
本文所用术语“运载体”指有助于将本文所述化合物纳入细胞或组织的化学化合物或试剂。
本文所用术语“共同给予”或“组合给予”等指包括将选定治疗试剂给予单一患者，并会包括不需要相同给药途径或相同时间给予的试剂的治疗方案。
本文所用术语“皮肤病”指皮肤疾病。所述皮肤病包括但不限于，皮肤的增生性或炎症性疾病，如特应性皮炎、大疱疾病、胶原纤维症、接触性皮炎湿疹、川崎病、红斑痤疮、斯-拉氏综合征(Sjogren-Larsso Syndrome)、光化性角化病、基底细胞癌和荨麻疹。
本文所用术语“稀释剂”指递送前用于稀释本文所述化合物的化学化合物。稀释剂可用于稳定本文所述化合物。
本文所用术语“有效量”或“治疗有效量”指使所治疗疾病或病症的一种或多种症状得到某种程度缓解的本文所述化合物的充足给药量。结果可为信号、症状或疾病原因的减弱和/或缓和，或者任何其他需要的生物系统变化。例如，治疗用途的“有效量”是含本文所述化合物的组合物用于临床显著降低疾病症状的所需量。个案中的适当“有效”量可用诸如剂量增加研究等技术确定。
本文所用术语“增高”或“增加”指所需效果的效力或持续时间的增多或延长。因此，就增加治疗剂的效果而言，术语“增加”指其他治疗剂对系统的效果的效力或持续时间的增多或延长的能力。本文所用“增加的有效量”指能充分增加所需系统中另一治疗剂效果的量。
术语“赋形剂”指可能存在于成品剂型中的任何基本辅助物质。例如，术语“赋形剂”包括载剂、粘合剂、崩解剂、填料(稀释剂)、润滑剂、悬浮/分散剂等。
本文所用术语“纤维化”或“纤维化疾病”指急性或慢性炎症后且与细胞和/或胶原异常积累相关的病症，包括但不限于个体器官或组织如心脏、肾脏、关节、肺或皮肤的纤维化，且包括疾病如特发性肺纤维变性和隐原性纤维化肺泡炎。
本文所用术语“医源性”指药物或手术治疗引起或恶化的病症、紊乱或疾病。
本文所用术语“免疫有效量”指在一次剂量或一系列剂量的一部分中给予个体的有效治疗或预防免疫疾病或紊乱的充足量。此量的变化取决于所治疗个体的健康和身体状况、年龄、所治疗个体的分类组(如非人灵长类动物、灵长类动物等)、个体的免疫系统合成抗体的能力、所需的保护程度、疫苗配方、治疗医生对医学情况的评估和其它相关因素。预计所述量将落入可通过常规试验测定的相对较宽范围内。
本文所用的对抗原或组合物的“免疫学应答”或“免疫应答”指对象中发生对抗原或组合物的体液和/或细胞免疫应答。
免疫应答包括先天和适应性免疫应答。先天免疫应答是为免疫系统提供一线防御的快速作用应答。相反，适应性免疫采用选择和克隆扩增含体细胞重排受体基因的免疫细胞(例如T-和B-细胞)来提供特异性和免疫记忆，所述受体基因识别给定病原或疾病(例如肿瘤)的抗原。在其很多效应中，先天免疫应答引起炎性细胞因子的快速突释并活化抗原呈递细胞(APC)如巨噬细胞和树突细胞。为区分病原体和自身组分，先天免疫系统利用多种相对不变的受体检测病原体的特征物，这些特征物称为病原相关分子模式或PAMP。已知实验性疫苗中添加微生物组分导致发生强烈且持续的适应性免疫应答。据报道，这种免疫应答增强的机理涉及模式识别受体(PRR)，其在包括嗜中性粒细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、B细胞和一些非免疫细胞如上皮和内皮细胞在内的多种免疫细胞上差异表达。PRR的参与导致这些细胞中有些被活化并分泌细胞因子和趋化因子，以及其他细胞成熟并迁移。这以串联方式产生炎性环境导致适应性免疫应答的确立。PRR包括非吞噬细胞受体，如Toll样受体(TLR)和核苷酸结合寡聚结构域(NOD)蛋白，和诱发吞噬作用的受体如清道夫受体、甘露糖受体和β-葡聚糖受体。树突细胞被视为在启动初始CD4+辅助T(TH)细胞和诱导CD8+T细胞分化成杀伤细胞中最重要的细胞类型。据报道，TLR信号传递在确定这些辅助T细胞应答特性中起重要作用，例如TLR信号的特性决定所观察到TH应答的具体类型(例如，TH1与TH2应答)。产生抗体(体液)与细胞免疫的组合作为TH1型应答的部分，而TH2型应答主要是抗体应答。
“体液免疫应答”指由抗体分子介导的免疫应答，而“细胞免疫应答”是T-淋巴细胞和/或其他白细胞介导的免疫应答。细胞免疫的一个重要方面涉及细胞溶解T-细胞(“CTL”)的抗原特异性应答。CTL特异性针对肽抗原，肽抗原与主要组织相容性复合抗体(MHC)编码并在细胞表面表达的蛋白关联呈递。CTL帮助诱导并促进胞内微生物的胞内破坏，或感染此类微生物的细胞的裂解。细胞免疫的另一方面涉及辅助T-细胞的抗原特异性应答。辅助T-细胞协助刺激非特异性效应细胞针对在表面展示MHC分子相关肽抗原的细胞的功能并集中其活性。"细胞免疫应答"也指由活化的T-细胞和/或包括CD4+和CD8+T细胞的衍生细胞在内的其他白细胞产生细胞因子、趋化因子和其他此类分子。
因此，引起细胞免疫应答的组合物如免疫原性组合物或疫苗可通过在细胞表面与MHC分子联合呈递抗原而使脊椎动物致敏。细胞介导的免疫应答指向在表面呈递抗原的细胞或其附近。此外，可产生抗原特异性T-淋巴细胞用于今后保护免疫宿主。特定抗原或组合物刺激细胞介导免疫应答的能力可通过本领域已知的多种试验确定，例如通过淋巴增殖(淋巴细胞活化)试验、CTL细胞毒性细胞试验，通过测定致敏对象中抗原特异性的T-淋巴细胞，或通过测量T细胞响应抗原再刺激的细胞因子生成。这些试验为本领域熟知。参见例如Erickson等，(1993)J.Immunol.151:4189-4199；Doe等，(1994)Eur.J.Immunol.24:2369-2376。因此，本文所用的免疫应答可刺激CTL生成和/或辅助T-细胞产生或激活。感兴趣的抗原还可引发抗体介导的免疫应答。因此，免疫应答可包括例如以下一种或多种效果：由例如B-细胞生成抗体；和/或特异性针对感兴趣组合物或疫苗中一种或多种抗原的抑制T-细胞和/或γδT-细胞的激活。这些应答可用以中和感染性和/或介导抗体-补体或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)来为经免疫宿主提供保护。这些应答可采用本领域熟知的标准免疫试验和中和试验确定。
与不同组合物中等量抗原(如将抗原作为可溶蛋白给予)所引起的免疫应答相比，本发明免疫原性组合物具有的引发免疫应答的能力更强时，该组合物显示对给定抗原的“增强的免疫原性”。因此，组合物可例如因为所述组合物产生更强的免疫应答或因为在给予对象中实现免疫应答所需抗原剂量更低或次数更少而显示“增强的免疫原性”。测定所述增强的免疫原性可通过例如将本发明的组合物和抗原对照给予动物并比较二者的试验结果。
本文所用术语“炎症病症”指由一种或多种疼痛信号(有害物质和神经刺激产生的痛感)、发热(血管舒张引起的灼热)、发红(血管舒张和血流增加引起的发红)、肿胀(液体过度流入或限制流出引起的肿块)、功能丧失(部分或完全、暂时或永久的功能丧失)表征的疾病或病症。炎症有多种形式，包括但不限于一种或多种下述炎症：急性的、粘附性的、萎缩性的、粘膜炎的、慢性的、肝硬化的、弥漫性的、播散性的、渗出性的、纤维蛋白的、纤维化的、病灶性的、肉芽肿的、增生的、肥大的、间质的、转移的、坏死的、闭塞的、薄壁组织的、整形外科的、生产性的、增殖的、伪膜性的、化脓性的、浆液性硬化的、浆液纤维蛋白性的、浆液的、简单的、特定的、亚急性的、化脓性的、毒性的、外伤性的、和/或溃疡性的。炎症病症还包括但不限于影响血管(多动脉炎、暂时性关节炎)；关节(关节炎：晶体、骨、牛皮癣性、反应性、类风湿性、赖特氏(Reiter's))；胃肠道(疾病)；皮肤(皮炎)；或多种器官和组织(系统性红斑狼疮)的那些。
本文所用术语“调控”表示与靶标直接或间接相互作用从而改变靶标的活性，包括，仅举例来说，增加靶标的活性、抑制靶标的活性、限制靶标的活性、或延伸靶标的活性。
本文所用术语“调节剂”指与靶标直接或间接相互作用的分子。所述相互作用包括但不限于激动剂和抗激动剂的相互作用。
本文所用术语“眼疾”或“眼病”指影响眼睛以及潜在周围组织的疾病。眼疾或眼病包括但不限于，水肿、视网膜炎、巩膜炎、葡萄膜炎、过敏水肿、春季结膜炎、乳头状结膜炎和巨细胞病毒(CMV)视网膜炎。
本文所用术语“寡核苷酸”指大小为5-100个核苷酸，通常5-30个核苷酸的多核苷酸。
本文所用术语“药学上可接受的”指如运载体或稀释剂等的材料，其不消除本文所述化合物的生物活性或特性。将所述材料给予个体而不引起不想要的生物学影响或以有害的方式与所含组合物任何组分相互作用。
本文所用术语“药学上可接受的盐”指不对给予的生物体引起显著刺激且不消除本文所述化合物的生物活性和特性的化合物制剂。
本文所用术语“组合”或“药物组合”指由多于一种活性成分混合或组合产生的产物且包括所述活性成分的固定和不固定组合。术语“固定的组合”指将活性成分，如示例性的式(I)化合物和额外的治疗剂以单一实体或剂量的形式同时给予患者。术语“不固定的组合”指将活性成分，如示例性的式(I)化合物和额外的治疗剂以单独实体同时、共同或依次给予患者，没有具体时间限制，其中所述给药在患者体内产生治疗有效水平的2种化合物。后者还用于混合治疗如给予3种或更多活性成分。
本文所用术语“组合物”或“药物组合物”指至少一种化合物如本文提供的式(I)化合物以及至少一种和任选多于一种的其他药学上可接受的化学组分如运载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。
“生理pH”或“生理范围内的pH”指pH大致在7.2-8.0(含端值)范围内，更典型在约7.2-7.6(含端值)范围内。
如本文所用，术语“前药”指在体内转化成母体药物的药剂。本文所述化合物的前药的非限制性示例是本文所述化合物作为酯给予，一旦进入细胞，该酯即代谢水解成活性实体——羧酸。前药的另一示例是连接于酸基团的短肽，其中所述肽经代谢显现活性部分。
术语“多核苷酸”和“核酸”可互换使用，指脱氧核苷酸或核糖核苷酸碱基的单链或双链聚合物。单链多核苷酸包括编码链和反义链。多核苷酸包括RNA和DNA，且可分离自天然来源、体外合成、或由天然和合成的分子组合制备。多核苷酸的示例包括但不限于基因、cDNA、mRNA、自复制RNA分子、自复制DNA分子、基因组DNA序列、基因组RNA序列、寡核苷酸。自复制RNA分子和自复制DNA分子导入宿主细胞后能自扩增。
多核苷酸可为线性或非线性(如，包括环形、分支形等元件。)术语“多核苷酸”和“核酸”包括修饰的变体(如含缺失、添加和/或取代的序列)。修饰变体可以是有意的，例如通过定点诱变，或者可以是意外的，例如通过天然突变。
多核苷酸可由天然产生的核苷酸单体(如DNA和RNA)、或天然产生的核酸类似物或其组合构成。修饰的核苷酸可在糖部分和/或嘧啶或嘌呤碱基部分改变。糖修饰包括例如，一种或多种羟基基团置换为卤素、烷基基团、胺、和叠氮基团，或糖可被官能化为醚或酯。此外，完整的糖部分可被空间上和电子上相似结构置换，如氮杂-糖和碳环糖类似物。碱基部分修饰的示例包括烷基化嘌呤和嘧啶，乙酰化嘌呤或嘧啶，或其他熟知的杂环取代物。多核苷酸单体可由磷酸二酯键或该键的类似物连接。磷酸二酯键的类似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺磷酸酯(phosphoranilidate)、氨基磷酸酯等。术语“多核苷酸”和“核酸”还包括所谓的“肽核酸”，其包括连接聚酰胺主链的天然产生或经修饰核酸碱基。
本文所用术语“含多核苷酸的种类”指至少部分为多核苷酸的分子。
本文所用术语“多肽”、“蛋白”和“肽”指至少部分通过共价相连的多个氨基酸形成的任何聚合物，不论长度或翻译后修饰(如磷酸化或糖基化)(如本文所用"蛋白"指肽键相连的线性氨基酸聚合物(链)以及表现二级、三级或四级结构的蛋白，其可包括肽链内或之间的其他形式的分子内和分子间连接，如氢键或范德华键)。多肽的例子包括但不限于蛋白、肽、寡肽、二聚体、多聚体、变体等。在一些实施方式中，所述多肽可去修饰从而其缺少修饰如磷酸化和糖基化。多肽可含部分或完整的单一天然产生多肽，或可为含来自两种或更多天然产生多肽的氨基酸序列的融合或嵌合多肽。
术语“含多肽的种类”指至少部分为多肽的分子。示例包括多肽，糖蛋白、金属蛋白、脂蛋白，与载体蛋白偶联的糖抗原等。
本文所用术语“呼吸道疾病”指影响参与呼吸的器官如鼻、喉咙、喉头、气管、支气管和肺的疾病。呼吸道疾病包括但不限于，哮喘、成人呼吸窘迫综合症和过敏性(外在)哮喘、非过敏性(内在)哮喘、急性重症哮喘、慢性哮喘、临床哮喘、夜间哮喘、过敏原诱发哮喘、阿司匹林敏感性哮喘、运动诱发哮喘、二氧化碳过度通气、儿童发病的哮喘、成人发病的哮喘、咳嗽变异型哮喘、职业性哮喘、类固醇抗性哮喘、季节性哮喘、季节性过敏性鼻炎、常年性过敏性鼻炎、慢性阻塞性肺病，包括慢性支气管炎或肺气肿、肺动脉高压、肺间质纤维化和/或呼吸道炎症和囊肿性纤维化、和组织缺氧。
本文所用术语“对象”或“患者”包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的示例包括但不限于：人、黑猩猩、猿猴、牛、马、绵羊、山羊、猪、兔、狗、猫、大鼠、小鼠、豚鼠等。非哺乳动物的示例包括但不限于鸟、鱼等。通常所述对象是人，且可为诊断为需要治疗本文所述疾病或病症的人。
本文所用术语“TLR7调节剂”指调控TLR7受体的化合物。
本文所用术语“TLR7疾病”或“有关TLR7活性的疾病或病症”指有关toll样受体的任何疾病状态。该疾病或病症包括但不限于传染病、炎症疾病、呼吸道疾病和自身免疫病，仅举例来说例如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、成人呼吸窘迫综合症(ARD)、克罗恩病、支气管炎、皮炎、过敏性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿关节炎、多发性硬化症、癌症、HIV和红斑狼疮。
本文所用术语“治疗有效量”指与没有接受该量的相应对象相比，引起疾病、紊乱、或副作用改良的治疗、治愈、预防、或缓解、或者疾病或紊乱发展速率降低的任何化合物量。该术语范围内还包括有效提高正常生理功能的量。
本文所用术语“治疗”、“处理”和“疗法”指预防性和/或治疗性的缓解、缓和或改善疾病或病症，阻止额外的症状、改善或阻止症状的疾病代谢病因、抑制所述疾病或病症、阻滞疾病或病症的发展、减轻疾病或病症、引起疾病或症状退化、减轻疾病或病状引起的病状、或停止所述疾病或病症的症状的方法。
术语"载体构建物"通常指能引导感兴趣核酸序列或基因表达的任何组件。"DNA载体构建物"指能引导感兴趣核酸序列或基因表达的DNA分子。DNA载体构建物的一种具体类型是质粒，其为能在宿主细胞内自主复制的环形附加体DNA分子。通常，质粒是环形双链DNA环，其中可接入额外的DNA片段。pCMV是本领域熟知的一种具体质粒。已知其他基于RNA病毒的DNA质粒构建物。这些DNA载体构建物通常含能在真核细胞中起作用的启动子，转录产物是RNA载体构建物(例如α病毒RNA载体复制子)的5'cDNA序列，和3'终止区。载体构建物的其他示例包括RNA载体构建物(例如，α病毒载体构建物)等。如本文所用，"RNA载体构建物"、"RNA载体复制子"和"复制子"指能在体内，通常在靶细胞内指导其自身扩增或自体复制的RNA分子。所述RNA载体构建物直接使用，无需将DNA引入细胞并转运到可进行转录的核中。通过使用RNA载体直接递送入宿主细胞的胞质，可有效发生异源核酸序列的自主复制和翻译。
本文提供的化合物命名采用ChemDraw Ultra 10.0(CambridgeSoftTM)或JChem5.0.3版(ChemAxon)获得。
考虑到以下详细说明，本文所述方法、组合物和组合的其他目的、特征和优点将显而易见。然而，应当理解虽然详细说明和具体实施例描述具体实施方式，其仅通过举例方式给予。
优选实施方式
本文提供化合物及其药物组合物，其为toll样受体7(TLR7)的激动剂。本文还提供治疗有关TLR7活性的疾病和/或紊乱治疗的化合物、药物组合物和方法。
本文提供的TLR7激动剂是具有式(I)结构的化合物及其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物(如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、受保护衍生物、个体异构体及异构体混合物：
式中：
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选取代有1-4个氟基团；
各L3独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基可选取代有1-4个氟基团；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自C1-C4烷基、–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自氢和氟；
R5是-P(O)(OR9)2,
R6是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R8是H或C1-C4烷基；
各R9独立地选自H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自1、2、3、4、5和6，以及
q是1、2、3或4；
前提是R3为C1-C4烷基或–OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OR9)2且R7是-CF2P(O)(OR9)2。
在式(I)化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基，在其他实施方式中，R1为甲基。在某些实施方式中，R1是H。在其他实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6。
在式(I)化合物的某些实施方式中，若R1为-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5、或-OL2R6、则R3是-OR8或C1-C6烷基。在某些实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，且R3是–OMe。
在式(I)化合物的一些实施方式中，R2是C1-C6烷基。在某些实施方式中，R2是甲基。
在式(I)化合物的一些实施方式中，R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5和-L3L4L3R5。在其他实施方式中，R3选自-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8,-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH。在某些实施方式中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5为式-O(CH2)1-5P(O)(OR)2所示基团。在其他实施方式中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5为式-O(CH2)1-5CF2P(O)(OR)2所示基团。
存在多个R9时，如含P(O)(OR9)2部分的化合物中时，所述R9相同或不同。如式(I)所示化合物的某些实施方式中，R9各为H。在其他实施方式中，至少一个R9为H而其他R9为C1-C6烷基。在其他实施方式中，至少一个R9为H而其他R9为甲基。在其他实施方式中，至少一个R9为H而其他R9为乙基。在式(I)化合物的其他实施方式中，各R9为C1-C6烷基，而在某些实施方式中R9为甲基或乙基或其组合。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L2和/或L3为式-((CR4R4)pO)q(CH2)p-所示基团，且在某些实施方式中，该基团具有式-(CH2CH2O)1-3(CH2)1-3-。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L2为C1-C6亚烷基，而在其他实施方式中L2为取代有1-4个氟基团的C1-C6亚烷基。在式(I)所示化合物的某些实施方式中，L2具有式(CH2)0- 5CF2，其中氟取代的碳不直接连接式I的苯环。在式(I)化合物的某些实施方式中，L2为C2-C6亚烯基，而在其他实施方式中L2为取代有1-4个氟基团的C2-C6亚烯基。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L3为C1-C6亚烷基，而在其他实施方式中L3为取代有1-4个氟基团的C1-C6亚烷基。在式(I)所示化合物的某些实施方式中，L3具有式(CH2)0- 5CF2，其中氟取代的碳不直接连接式I的苯环。
在式(I)化合物的某些实施方式中，L2为亚芳基或杂亚芳基。在一些这类实施方式中，L2为亚苯基，如1,3-二取代亚苯基或1,4-二取代亚苯基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R7为–CF2P(O)(OR9)2，且L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R7为–CF2P(O)(OR9)2；L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，且p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R6为-C(O)OR10；R7为-CF2P(O)(OR9)2；L2为C1-C6亚烷基，L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)所述化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R6为-C(O)OR10；R7为-CF2P(O)(OR9)2；L2为C1-C6亚烷基，而L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OR8；R8为C1-C6烷基；R5为-P(O)(OR9)2；R6为-CF2P(O)(OR9)2；L1为-C(O)-，L2为C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，各自任选取代有1-4个氟基团。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3L4R5、-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5为-P(O)(OR9)2；R7为-CF2P(O)(OR9)2；各L3独立为C1-C6亚烷基而L4为亚苯基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-C(R5)2OH或-L1R5；R5为-P(O)(OR9)2，L1为-C(O)-或-O-。
在式(I)所示化合物和其药学上可接受的盐、药学上可接受的溶剂合物(如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、受保护衍生物、个体异构体及异构体混合物的某些实施方式中：
R1是C1-C4烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选取代有1-4个氟基团；
各L3独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基可选取代有1-4个氟基团；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C4烷基；
R3选自–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自氢和氟；
R5是-P(O)(OH)2,
R6是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R7是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R8是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自1、2、3、4、5和6，以及
q是1、2、3或4；
前提是R3为–OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OH)2且R7是-CF2P(O)(OH)2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OOH)2；R7为–CF2P(O)(OH)2，且L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OH)2；R7为–CF2P(O)(OH)2；L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，且p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OH)2；R6为-C(O)OH；R7为-CF2P(O)(OH)2；L2为C1-C6亚烷基，L3为C1-C6亚烷基。
在式(I)化合物的某些实施方式中，R1为-L2R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3R5或-OL3R7；R5为-P(O)(OH)2；R6为-C(O)OH；R7为-CF2P(O)(OH)2；L2为C1-C6亚烷基，L3为-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4为H；q为1或2，p为2。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2为C1-C6烷基；R3为-OR8；R8为C1-C6烷基；R5为-P(O)(OH)2；R6为-CF2P(O)(OH)2；L1为-C(O)-，L2为C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，各自任选取代有1-4个氟基团。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-OL3L4R5、-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5为-P(O)(OH)2；R7为-CF2P(O)(OH)2；各L3独立为C1-C6亚烷基而L4为亚苯基。
在式(I)所示化合物的某些实施方式中，R1为C1-C6烷基；R2为C1-C6烷基；R3为-C(R5)2OH或-L1R5；R5为-P(O)(OH)2，而L1为-C(O)-或-O-。
在前述式(I)化合物的某些实施方式中，R8为甲基。在前述式(I)化合物的某些实施方式中，R1为甲基。在前述式(I)化合物的某些实施方式中，R2为甲基。
在式(I)化合物的其它实施方式中：
R5是-P(O)(O-X+)2或-P(O)(O-)2X2+；
R6是–CF2P(O)(O-X+)2、–CF2P(O)(O-)2X2+或-C(O)O-X+,和
R7是–CF2P(O)(O-X+)2、–CF2P(O)(O-)2X2+或-C(O)O-X+,
其中X+和X2+是药学上可接受的阳离子。在某些实施方式中，该药学上可接受的阳离子选自钠、钾、钙、锌和镁。
在式(I)化合物的某些实施方式中：
R5是-PO3 -X3+；
R6是–CF2PO3 -X3+,和
R7是–CF2PO3 -X3+,
其中X3+是Al3+。
含铝佐剂，如氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝用在疫苗中结合抗原。关于含铝佐剂和其在疫苗中应用的讨论见Expert Rev.Vaccines,46(5),2007,685-698和Vaccines,25,2007,6618-6624，其通过引用全文纳入本文。
本文提供的式(I)化合物为为结合含铝佐剂例如(仅为示例)氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝的TLR7激动剂。在某些实施方式中，所述式(I)化合物含磷酸盐、膦酸、膦酸盐、氟化膦酸或氟化膦酸盐基团。在其他实施方式中，所述式(I)化合物含磷酸盐、膦酸、膦酸盐、氟化膦酸或氟化膦酸盐基团，且一种或多种额外的可电离基团选自羧酸和硫酸盐。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物结合抗原、含铝佐剂、和任选运载体、药学上可接受的赋形剂以提供免疫原性组合物。在其他实施方式中，所述免疫原性组合物包括式(I)化合物和抗原，其中所述抗原包括但不限于细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、肿瘤抗原、或有关STD、阿尔茨海默病、呼吸道紊乱、自身免疫紊乱(仅举例来说)例如类风湿关节炎或红斑性狼疮、儿科疾病和肥胖的抗原，且其中所述化合物的量为有效提高给予该组合物的对象中对抗原的免疫应答的量。该免疫原性组合物中所用的合适抗原如本文所述。
在某些实施方式中，该免疫原性组合物包括脑膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitides)株系的细菌抗原如血清群A、C、W135、Y和/或B。这些组合物中所用的具体抗原如本文所述。在其他实施方式中，本文提供的免疫原性组合物和其他用作疫苗；其在治疗与组合物中所含抗原有关的紊乱中的应用如本文所述。
本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体，以及药物组合物也包括此类化合物、其药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体，以及药物组合物的所有合适的同位素变化。本发明提供的化合物或其药学上可接受盐的同位素变化定义为其中至少一个原子被与天然条件下通常发现原子的原子编号相同、但原子量不同的原子替代。可掺入本文所提供化合物及其药学上可接受盐的同位素示例包括但不限于氢、碳、氮和氧的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、35S、18F、36Cl和123I。本文提供的化合物及其药学上可接受盐的某些同位素变化，如掺有放射性同位素如3H或14C，可用于药物和/或底物的组织分布研究。在具体示例中，3H和14C同位素可因其易于制备和检测而使用。在其他示例中，用同位素如2H取代可提供某些治疗优势，产生更好的代谢稳定性，例如提高体内半衰期或降低剂量需求。本文所提供的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体以及药物组合物的同位素变化利用合适试剂的适当同位素变化采用常规方法制备。
式(I)化合物的制备方法
制备式(I)化合物的一般程序如下文实施例所述。所述反应中，最终产物中需要的反应性官能团例如羟基、氨基、亚氨基、硫代或羧基基团可受保护以避免其不必要的参与反应。常规保护基团可按照标准实践进行(参见例如T.W.Greene和P.G.M.Wuts的“ProtectiveGroups in Organic Chemistry,”(《有机化学中的保护基团》)，约翰威立出版公司(JohnWiley and Sons),1991)。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物通过该式(I)化合物的游离碱形式与药学上可接受的有机酸或无机酸反应制备为药学上可接受的酸加成盐。在其他实施方式中，本文提供的式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐通过该式(I)化合物的游离酸形式与药学上可接受的有机碱或无机碱反应制备。或者，本文提供的式(I)化合物的盐形式用起始材料或中间物的盐制备。在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物为其他盐的形式，包括但不限于草酸盐和三氟醋酸盐。在某些实施方式中，形成酸和碱的半盐(hemisalts)如半硫酸盐和半钙盐。
所述式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐包括但不限于氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、甲酸盐、醋酸盐、己二酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐盐、谷氨酸盐、天门冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐(如2-萘磺酸盐)、己酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、右旋樟脑磺酸盐、甜蜜素盐、糖精盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物，磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐(naphthylate)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、糖酸盐、硬脂酸盐、鞣酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟醋酸盐和昔美酸盐(xinofoate)。
用于形成式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐的有机酸或无机酸包括但不限于氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、甲酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸如2萘磺酸、或己酸。
所述式(I)化合物的药学上可接受的碱加成盐包括但不限于铝盐、精氨酸盐、苄星盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡胺盐、吡酮胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐和锌盐。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物的游离酸或游离碱形式分别由相应的碱加成盐或酸加成盐形式制备。例如酸加成盐形式的式(I)化合物通过用合适的碱(如氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处理转变为相应游离碱。例如碱加成盐形式的式(I)化合物通过用合适的酸(如盐酸)处理转变为相应游离酸。
在某些实施方式中，未氧化形式的式(I)化合物通过用还原剂(如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化合物等)在合适的惰性有机溶剂(如乙腈、乙醇、二烷水溶液等)中0-80℃处理从式(I)化合物的N-氧化物制备。
在某些实施方式中，式(I)化合物的前药衍生物用本领域普通技术人员已知的方法制备(如进一步的细节参见Saulnier等,(1994),Bioorganic and Medicinal ChemistryLetters,第4卷,1985页)。例如，合适的前药通过非衍生的式(I)化合物与合适的氨甲酰化剂(如1,1-酰氧基烷基氯甲酸、对硝基苯基碳酸等)反应制备。
在某些实施方式中，式(I)化合物用本领域普通技术人员已知的方法制备为保护衍生物。可用于产生保护基团和将其移除的技术的详细说明可参考T.W.Greene,“Protecting Groups in Organic Chemistry,”(《有机化学中的保护基团》)第3版,约翰威立出版有限公司(John Wiley and Sons,Inc.),1999。
在某些实施方式中，式(I)化合物作为溶剂化物(如氢氧化物)制备或形成。在某些实施方式中，式(I)化合物的水合物通过水/有机溶剂混合物重结晶制备，所述有机溶剂如二英、四氢呋喃或甲醇。
在某些实施方式中，式(I)化合物制备成其各自立体异构体。在其他实施方式中，通过所述化合物的外消旋混合物与光活性拆分剂反应形成一对非对映异构体化合物、分离非对映体并回收光学纯的对映异构体，将本文提供的式(I)化合物制备为其各自立体异构体。在某些实施方式中，对映异构体的溶解用式(I)化合物的共价非对映异构体衍生物进行，或用可分离的复合物(如晶体非对映异构体盐)。非对映异构体有不同的物理性质(如，熔点、沸点、溶解度、反应性等)且容易利用这些不同而分离。在某些实施方式中，所述非对映体比通过色谱或通过基于溶解度差异的分离/拆分技术而分开。然后通过不会产生外消旋作用的任何实践手段回收所述光学纯的对映异构体，以及拆分剂。可用于将化合物的立体异构体从其外消旋混合物中拆分出的技术的更详细描述可参见Jean Jacques,AndreCollet,Samuel H.Wilen,“Enantiomers,Racemates and Resolutions,”(《对映异构体、外消旋物和拆分》)约翰威立出版有限公司，1981。
式(I)化合物通过本文所述的方法制备，如实施例中所描述。在某些实施方式中，式(I)的化合物如下制备：
(a)任选地将式(I)化合物转化为药学上可接受的盐；
(b)任选地将式(I)化合物的盐形式转化为非盐形式；
(c)任选地将式(I)化合物的非氧化形式转化为药学上可接受的N氧化物；
(d)任选地将式(I)化合物的N氧化物形式转化为其非氧化形式；
(e)任选地从异构体混合物中拆分式(I)化合物的单独异构体；
(f)任选地将非衍生的式(I)化合物转化为药学上可接受的前药衍生物；和
(g)任选地将式(I)化合物的前药衍生物转化为其非衍生形式。
用于制备本文所提供式(I)化合物的合成方案的非限制性示例在反应方案(I)-(XI)中描述。
方案(I)显示在钯催化剂存在时通过偶联2-(叔丁氧基-羰酰-氨基)苯基硼酸(I-1)和3-卤氰基吡啶衍生物(I-2)合成苯并萘啶(I-3)。仅举例来说，所述3-卤氰基吡啶衍生物的卤素部分为溴或氯。苯并萘啶(I-3)上的RA和RB如本文所述为式(I)在各个位置上的取代基，或RA和RB是经过进一步修饰以获得本文所述式(I)的各个取代基的基团。
方案(I)
在某些实施方式中，用于合成式(I)化合物的苯基硼酸按照方案(II)合成。方案(II)中苯胺(II-1)在碱性条件下被Boc保护产生(II-2)，然后通过邻位锂化和与硼酸三甲酯反应及之后的水相反应转化为硼酸(I-1)。
方案(II)
硼酸(I-1)用于方案(I)中并与氰基吡啶(I-2)反应产生苯并萘啶(I-3)。
在某些实施方式中，包括但不限于硼酸酯的硼酸等价物用于式(I)化合物的合成。方案(III)显示所述硼酸酯(III-3)的合成，其在苯并萘啶(I-3)的合成中用作硼酸等价物。在方案(III)中，2-卤苯胺(III-1)在碱性条件下被Boc保护产生(III-2)，然后用钯介导的催化将其转化为硼酸酯(III-3)。这些硼酸酯(III-3)用于方案(I)且并与氰基吡啶(I-2)反应产生取代的或未取代的苯并萘啶(I-3)。
方案(III)
在某些实施方式中，方案(III)中所用的2-溴苯胺如下所示合成自其相应的硝基苯化合物：
在其他实施方式中，式(I)化合物用方案(IV)所述的方法合成。
方案(IV)
方案(IV)中，3-氯代苯甲醛(IV-1)首先被转化为相应的羟胺(IV-2)，然后用于制备相应的腈(IV-3)。用如方案(I)中的钯介导条件，腈(IV-3)的衍生物与硼酸(I1)(或硼酸酯(III-3))偶联产生苯并萘啶(I-3)。
在其他实施方式中，用方案(V)所示的合成途径制备具有碳连接取代基的某些式(I)化合物，包括在2位含各种碳连接取代基的苯并萘啶。
方案(V)
在方案(V)中，3,5-二卤素氰基吡啶(仅举例来说)例如3,5-二氯氰基吡啶(V-1)首先用硼酸/酯的一种等价物单取代从而产生相应的氰基吡啶(V-2)。用比方案(I)中更剧烈的钯介导条件，腈(V-2)的衍生物与硼酸(I-1)(或硼酸酯(III-3))偶联产生在2位具有碳连接取代基的苯并萘啶(V-3)。在某些实施方式中，所述碳连接的取代基为烯烃，而在其他实施方式中，所述烯烃还被进一步氢化修饰产生在2位含烷基基团的苯并萘啶。
在其他实施方式中，用方案(VI)所示方法合成具有各种取代基的某些式(I)化合物，包括在2位含各种取代基的苯并萘啶。
方案(VI)
在方案(VI)中，在5位取代的2,3-二卤素吡啶(VI-1)如(仅举例来说)(5,6-二氯吡啶-3-基)甲醇，先转化为相应的腈(VI-2)。用如方案(I)中的钯介导条件，腈(VI-2)的衍生物与硼酸(I-1)(或硼酸酯(III-3))偶联产生苯并萘啶(I-3)。
在其他实施方式中，某些式(I)化合物用方案(VII)所述的方法合成。
方案(VII)
在方案(VII)中，用钯介导的条件使芳基溴化物或芳基碘化物(VII-1)与三乙基(乙炔基)硅烷(或其等价物)偶联产生(VII-2)。甲硅烷基保护基团去保护后，用钯介导的条件将乙炔衍生物(VII-3)与3,5-二氯氰基吡啶(VII-4)偶联产生3-氯-2-氰基吡啶(VII-5)。(VII-5)的衍生物如(仅举例来说)3-氯-5-(苯基乙炔基)氰基吡啶与硼酸(I-1)(或硼酸酯(III-3))偶联产生苯并萘啶(VII-6)。然后化合物(VII-6)在氢化条件下产生苯并萘啶(VII-7)。本文描述R2且苯并萘啶(VII-7)上的RA和RB基团如本文所述为式(I)在各个位置上的取代基，或RA和RB基团是经过进一步修饰以获得本文所述式(I)的各个取代基的基团。
在其他实施方式中，某些式(I)化合物用方案(VIII)所述的方法合成。
方案(VIII)
在方案(VIII)中，用钯介导的条件使芳基溴化物或芳基碘化物(VIII-1)与三乙基(乙炔基)硅烷(或其等价物)偶联产生(VIII-2)。甲硅烷基保护基团去保护后，用钯介导的条件将乙炔衍生物(VIII-3)与3,5-二氯氰基吡啶(VIII-4)偶联产生3-氯-2-氰基吡啶(VIII-5)。(VII-5)的衍生物如(仅举例来说)3-氯-5-(苯基乙炔基)氰基吡啶在氢化条件下还原为相应的3-氯-5-苯乙基氰基吡啶(VIII-6)。化合物(VIII-6)偶联硼酸(I-1)(或硼酸酯(III-3)产生苯并萘啶(VIII-7)。本文描述R2且苯并萘啶(VII-7)上的RA和RB基团如本文所述为式(I)在各个位置上的取代基，或RA和RB是经过进一步修饰以获得本文所述式(I)的各个取代基的基团。
在其他实施方式中，某些式(I)化合物用方案(IX)所述的方法合成。
方案(IX)
在方案(IX)中，含苯酚基团的化合物(IX-1)用各种亲电子试剂烷基化，其中R1、R2、L1、L3、L4、R5和R7如本文所定义。在某些实施例中，如方案1所示制备在苯酚位置含烷氧基附属体的类似物，其中含苯酚基团的化合物用含膦酸盐的亲电子试剂烷基化以产生受保护的膦酸盐，其用合适的脱保护剂处理产生膦酸。
本文提供实施例以说明而非限制本文提供的式(I)化合物和该化合物的制备。仅举例来说，如方案2所示制备在C-8位含羧酸附属体的某些式(I)化合物。
仅举例来说，如方案3所示制备在C-8位含α,α’-二氟代膦酸附属体的某些式(I)化合物，其中伯醇氧化为醛且该醛用合适的膦酸盐试剂烷基化产生膦酸盐。此外，苄基醇的氧化产生酮部分且最终水解产生膦酸衍生物。
仅举例来说，如方案4所示制备在C-8位含膦酸附属体的某些式(I)化合物，其中醛用维蒂希试剂处理产生膦酸乙烯酯。用(仅为示例性)三甲基溴水解磷酸盐产生磷酸。或者，所述乙烯基部分的氢化提供连接烷基的膦酸盐，其水解产生连接烷基的磷酸。
仅举例来说，按照方案5制备含芳基磷酸盐基团的某些式(I)化合物，其中含苯酚的化合物用1-(溴甲基)-3-碘苯和碳酸铯处理产生中间物，该中间物通过钯催化交叉偶联磷酸三乙酯，然后用三甲基甲硅烷基溴水解产生含膦酸的化合物。
仅举例来说，如方案6所示制备在C-8位含α酮膦酸附属体的某些式(I)化合物，其中醛用三(三甲基甲硅烷基)亚磷酸盐处理然后用IBX氧化产生膦酸。
药理学和功用
当外源抗原刺激免疫系统时，其通过启动保护应答来反应，所述应答的特征是先天和获得性免疫系统的协同相互作用。这两种相互依赖的系统满足两种互斥的要求：速度(先天系统提供)和特异性(获得性系统提供)。
所述先天免疫系统作为抵御病原体入侵的第一道防线，在所述获得性应答成熟时控制住病原体。这在抗原依赖型方式中于感染数分钟内触发，响应广泛的病原体保守形式(虽然其不是特异性，且可区分自身和病原体)。关键的是其还产生炎症和共刺激环境(有时指危险的信号)，其加强获得性免疫系统并驱向(或偏向)最适于抗击该感染剂的细胞或体液应答。用于治疗性靶向先天免疫的TLR调节剂开发已有综述(参见Nature Medicine,2007,13,552-559；Drug Discovery Today:Therapeutic Stategies,2006,3,343-352和Journal of Immunology,2005,174,1259-1268)。
数天或数周后获得性应答才开始见效，但最终提供完全消除该病原体所需的良好抗原特异性并产生免疫记忆。这主要通过经过种系基因重排且具有特异性和长期记忆的T和B细胞介导。然而，其还涉及先天免疫系统的要素招募，包括吞噬细菌和甚至相当大的原生动物寄生虫的专门的吞噬细胞(巨噬细胞、中性白细胞等)和粒细胞(嗜碱细胞、嗜酸性粒细胞等)。一旦获得性免疫应答成熟，随后接触病原体会使其快速消除，这是由于已产生高度特异的记忆细胞，所述细胞在随后接触关联抗原时会被快速激活。
自身免疫病定义为(i)对自身抗原的体液或自身抗体应答(仅举例来说，具有针对TSH受体的抗体的格雷夫斯氏原发性甲状腺功能亢进)，或(ii)免疫细胞破坏衍生出自身抗原的非免疫细胞(仅举例来说，甲状腺细胞(桥本甲状腺炎)或胰岛β细胞(1型糖尿病))的细胞应答。许多自身免疫病为所述2种现象的组合，如桥本甲状腺炎和1型糖尿病都含有自身抗体、抗甲状腺过氧化物酶(TPO)或抗谷氨酸脱羧酶(GAD)/岛细胞。自身免疫病常有炎性组分，包括但不限于粘附分子(仅举例而言)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)增加和白细胞对脉管系统的粘附改变如(仅为示例性)如结肠炎、系统性红斑狼疮、全身硬化病和糖尿病的血管并发症。
Toll样受体(TLR)是I型跨膜蛋白，其特征为胞外N末端富含亮氨酸的重复(LRR)结构域，然后是富含半胱氨酸的区域、TM区域和含称为Toll/IL-1受体(TIR)结构域的保守区域的胞内(胞质)尾。TLR是主要在免疫细胞上表达的模式识别受体(PRR)，所述细胞包括但不限于树突细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞和天然杀伤细胞。LLR结构域对配体结合和关联信号传递很重要且是PRR的常见特征。TIR结构域在蛋白之间相互作用中重要且与先天免疫有关。所述TIR结构域还联合由三个亚组组成的较大的IL-1R/TLR超家族。第一组的成员在其胞外区域有免疫球蛋白结构域且包括IL-1和IL-18受体和辅助蛋白以及ST2。第二组包含所述TIR。第三组包含对信号传递重要的胞内衔接蛋白。
TLR是一组模式识别受体，其结合来自细菌、真菌、原生动物和病毒的病原体相关分子模式(PAMP)，并作为抵抗病原体入侵的第一道防线。TLR对诱导参与炎症应答的基因表达很关键，且TLR和所述先天免疫系统在抗原特异性获得性免疫发展中是关键步骤。
获得性(体液或细胞介导的)免疫与先天免疫的TLR信号机制有关。先天免疫是保护性免疫细胞应答，其快速起作用以对抗环境损伤，包括但不限于细菌或病毒剂。获得性免疫是较慢的应答，其涉及原初T淋巴细胞分化和激活成T辅助1(Th1)或T辅助2(Th2)细胞类型。Th1细胞主要促进细胞免疫，而Th2细胞主要促进体液免疫。虽然主要为宿主保护性系统，但来自TLR途径的先天免疫信号的病理表达与起始自身免疫炎症病有关。
在识别病原生物上存在的特异或一组特异分子决定簇中所有TLR似乎作为同二聚体或异二聚体发挥作用，所述病原生物包括细菌细胞表面脂多糖、脂蛋白、细菌鞭毛蛋白、细菌和病毒的DNA和病毒RNA。对TLR激活的细胞应答涉及一种或多种转录因子的激活，引起生成和分泌有助于杀伤及清除所述病原入侵的细胞因子和共刺激分子如干扰素、TNF-、白介素、MIP-1和MCP-1。
TLR空间表达与宿主环境界面一致。虽然果蝇中仅克隆少量其他Toll样蛋白，但人TLR家族包含至少11个成员TLR1-TLR11，由于其起始的细胞表达和信号通路中的差异，它们引发重叠但不同的生物应答。各TLR在白细胞不同亚组上表达，且各TLR在其表达模式和PAMP敏感性上特异，其检测不同亚组的病原体从而能严密监控免疫系统。
Toll-样受体1(TLR1)
TLR1定位在染色体4p14，其序列编码推定的786氨基酸(aa)蛋白，含18N末端LRR且计算分子量为84kDa。TLR1与TLR6和TLR10最密切相关，分别为68％和48％的总体(aa)序列相同。
TLR1mRNA普遍表达且比其他TLR水平更高。在主要白细胞群体中，TLR1由单核细胞最高表达，但其还由巨噬细胞、树突细胞、多形核白细胞、B、T、和NK细胞表达。体内观察到两种不同大小的TLR1转录本，说明mRNA选择性剪接产生两种不同形式的蛋白。体外情况中，单核白血病(THP-1)细胞中的TLR1mRNA和蛋白表达在PMA诱导分化时上调。TLR1的表达受自分泌IL-6上调，且还由IFN-γβ、IL-10和TNF-α提高。然而，TLR1水平不受接触革兰氏阳性或革兰氏阴性菌的影响。离体中，单核细胞和粒细胞TLR1的表达在接触革兰氏阴性菌后下调。TLR1与TLR2形成异二聚体。TLR1还与TLR4异二聚化，抑制TLR4活性。
Toll-样受体2(TLR2)
TLR2定位在染色体4q31-32，其编码推定的784(aa)蛋白，含19N末端LLR且计算分子量为84kDa。TLR2与TLR6最密切相关，有31％的总体(aa)序列相同性。
在大脑、心脏、肺和脾组织中观察到TLR2mRNA表达，且在PBL中最高，特别是骨髓单核细胞来源的那些。体内观察到两种不同大小的TLR2转录本表明mRNA选择性剪接。体外情况中，单核白血病(THP-1)细胞中TLR2mRNA和蛋白表达在PMA诱导分化时上调。TLR2由自分泌IL-6和TNF-α、IL-1β、和IL-10上调。接触革兰氏阳性或革兰氏阴性菌后TLR2mRNA表达都提高。TLR2与TLR、TLR6和可能的TLR10形成异二聚体，其中各复合物对TLR2相关PAMP尤其敏感。TLR2复合物识别广泛范围的PAMP(主要来自细菌)。这些包括但不限于脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)、脂多糖(LPS)、脂磷壁酸(LTA)，肽聚糖(PGN)，和其他糖脂、糖蛋白和脂蛋白。TLR2复合物也可检测病毒，包括但不限于麻疹病毒(MV)、人巨细胞病毒(HCMV)、和丙肝病毒(HCV)和真菌PAMP，包括但不限于酵母聚糖。TLR2识别来自各种病原体的多种脂蛋白/脂肽，所述病原体如(仅举例来说)革兰氏阳性菌、分枝杆菌(mycobacteria)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、真菌和螺旋体(Treponema)。此外，TLR2识别来自非肠细菌如(仅举例来说)肾脏钩端螺旋体(Leptospira interrogans)、牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis)和幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)的LPS制剂。TLR2复合物能检测非自身模式和检测改变的自身模式，如坏死细胞所展示的哪些。TLR2被招募到吞噬体处并参与细胞的微生物产物内化。
Toll-样受体3(TLR3)
TLR3定位在染色体4q35，其序列编码推定的904(aa)蛋白，含24N末端LRR且计算分子量为97kDa。TLR3与TLR6、TLR7和TLR8最密切相关，各有26％的总体(aa)序列相同性。
TLR3mRNA在胎盘和胰腺中表达水平最高。TLR3由树突细胞、T和NK细胞表达。体内观察到两种不同大小的TLR3转录本，说明mRNA选择性剪接产生两种不同形式的蛋白。在体外，PMA分化的THP-1TLR3受到自分泌IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的适度上调。接触革兰氏阴性菌后TLR3mRNA增加且响应格兰仕阳性菌的程度更大。离体中，单核细胞和粒细胞中TLR3的表达在接触革兰氏阴性细菌后都提高。TLR3形成同二聚体并识别病毒双链RNA(dsRNA)。虽然一般认为TLR在细胞表面表达，但对内源PAMP敏感的那些TLR(如TLR3情况中的dsRNA)胞内定位在溶酶体隔室中。
Toll-样受体4(TLR4)
TLR4定位在染色体9q32-33，且在完整(aa)序列上与dToll表现出高度相似性。TLR4序列编码839(aa)蛋白，含24N末端LRR区且计算分子量为90kDa。TLR4与TLR1和TLR6最密切相关，各有25％的总体(aa)序列相同性。
体内TLR4mRNA作为单一转录本表达，在脾和PBL中有最高水平。PBL群中，TLR4由B细胞、树突细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和T细胞表达。TLR4还在髓单核细胞中表达且在单核细胞中表达最高。体外情况中，THP-1细胞中TLR4mRNA和蛋白表达在PMA诱导分化时上调。TLR4由自分泌IFN-γ、IL-1β适度上调。THP-1细胞中TLR4mRNA表达不受接触革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的影响。离体中，粒细胞和单核细胞TLR4的表达在接触革兰氏阴性菌后上调。
TLR4形成同二聚体且需要额外组分MD-2的胞外关联。尽管TLR2复合物能识别脂多糖(LPS)，但TLR4通常被认为是LPS受体。然而MD-2相关的TLR4同二聚体不直接结合LPS。LPS首先需结合可溶的LPS结合蛋白(LBP)。然后LBP结合可溶的或GPI连接的CD14。通过TLR4进行的LPS检测需要额外的细胞类型依赖性组分，包括CXCR4、GDF-5、CD55、各种热激蛋白(HSP)、和补体受体(CR)。所述TLR4复合物还识别少量其他细菌PAMP，包括LTA。此外，所述TLR4复合物识别病毒，包括呼吸道合胞病毒(RSV)、丙型肝炎病毒(HCV)和鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)。所述TLR4复合物还可识别内源配体，例如热激蛋白(HSP60和HSP70)、纤维蛋白原、纤连蛋白结构域A、透明质酸寡糖、硫酸乙酰肝素、表面活性剂蛋白A(SP-A)和β-防御素。TLR4还与提高其活性的TLR5形成异二聚体，并与抑制其活性的TLR1形成异二聚体。
Toll-样受体5(TLR5)
TLR5定位在染色体1q41-42，其编码推定的858(aa)蛋白，计算分子量为91kDa。其与TLR3最密切相关，有26％的总体(aa)序列相同性。
在体内，TLR5mRNA在卵巢、前列腺和PBL中作为单一转录本表达。TLR5由数种PBL群表达，在单核细胞中表达最高。TLR5还在小肠上皮细胞的和上皮下隔室的小肠内皮细胞的基侧边表达。在体外，TLR5在PMA分化的THP-1细胞中由自分泌的IL-6、IL-10和TNF-α上调，但也被IFN-γβ提高。接触革兰氏阳性和革兰氏阴性菌后TLR5mRNA表达提高。离体中，粒细胞和单核细胞TLR5的表达在接触革兰氏阴性菌后下调。TLR5形成同二聚体以及与TLR4形成异二聚体。两种复合物的功能都是识别鞭毛细菌的鞭毛蛋白。人TLR5在CHO细胞中的表达产生对细菌鞭毛的单体组分-鞭毛蛋白的响应。鞭毛蛋白激活肺上皮细胞以诱导炎症细胞因子生成。TLR5的终止密码子多态性与对鞭毛细菌嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)引起的肺炎的易感性有关。
Toll-样受体6(TLR6)
TLR6定位在染色体4p14，且TLR6的序列编码796(aa)蛋白，含20N末端LRR基序且计算分子量为91kDa。TLR6与TLR1、TLR10和TLR2最密切相关，分别为68％、46％和31％的总体(aa)序列相同性。
体内，在胸腺、脾和肺中观察到TLR6转录本。TLR6mRNA在B细胞和单核细胞中表达最高。体外情况中，THP-1细胞中TLR6mRNA表达在PMA诱导分化时上调。TLR6由自分泌IFN-γ、IL-1β适度上调。然而，THP-1细胞中TLR6mRNA表达不受接触革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的影响。离体中，单核细胞和粒细胞TLR6的表达在接触革兰氏阴性菌后下调。TLR6与TLR2形成异二聚体。类似TLR1，TLR6被认为指定或增加TLR2的PAMP敏感性，且有助于其通过异二聚化的信号传递能力。
Toll-样受体7(TLR7)
TLR7定位在人染色体Xp22，且TLR7的序列编码1049(aa)蛋白，含27N末端LRR且计算分子量为121kDa。TLR7与TLR8和TLR9最密切相关，分别为43％和36％的总体(aa)序列相同性。
体内，TLR7mRNA在肺、胎盘、脾、淋巴结和扁桃体中表达。TLR7mRNA在单核细胞、B细胞和浆细胞样树突状细胞中表达最高。体外情况中，THP-1细胞中TLR7mRNA表达在PMA诱导分化时上调。TLR7通过接触IL-6而高度上调，和自分泌IFN-γ、IL-1β的上调程度稍小。THP-1细胞中TLR7mRNA表达在接触革兰氏阳性和革兰氏阴性菌后增加。离体时，单核细胞中TLR7的表达在接触革兰氏阳性菌和革兰阴性菌后增加，且粒细胞中程度更大。TLR7在内涵体中表达。TLR7的作用是检测细胞中是否存在“外源”单链RNA，作为应答病毒入侵的手段。TLR7是结构上高度保守的蛋白，其识别来自病毒的富含鸟苷或尿苷的单链RNA(ssRNA)如人免疫缺陷病毒、水泡性口炎病毒和流感病毒。
Toll-样受体8(TLR8)
TLR8定位于人染色体Xp22，且TLR8的序列编码1041(aa)蛋白，含26N末端LRR且计算分子量为120kDa。TLR8与TLR7和TLR9最密切相关，分别为43％和35％的总体(aa)序列相同性。
体内，TLR8mRNA在肺、胎盘、皮、淋巴结、骨髓和PBL中表达，髓细胞源的细胞如单核细胞、粒细胞和髓细胞性树突细胞中发现最高的表达。体外情况中，THP-1细胞中TLR8mRNA表达在PMA诱导分化时上调。TLR8受到自分泌IL-1β、IL-6、IL-10、和TNF-α的高度上调且接触IFN-γ后增加的更多。THP-1细胞中TLR8mRNA表达在接触革兰氏阳性和革兰氏阴性菌后增加。离体时，接触革兰氏阴性菌后，单核细胞TLR8的表达增加而粒细胞中表达下降。TLR8在内涵体中表达。TLR8的作用是检测细胞中是否存在“外源”单链RNA，作为应答病毒入侵的手段。TLR8是结构上高度保守的蛋白，其识别来自病毒的富含鸟苷或尿苷的单链RNA(ssRNA)如人免疫缺陷病毒、水泡性口炎病毒和流感病毒。
Toll-样受体9(TLR9)
TLR9定位于人染色体3p21，且TLR9的序列编码1032(aa)蛋白，含27N末端LRR且计算分子量为116kDa。TLR9与TLR7和TLR8最密切相关，分别为36％和35％的总体(aa)序列相同性。
体内，TLR7mRNA在脾、淋巴结、骨髓和PBL中表达。具体地，TLR9mRNA在B细胞和树突细胞中有最高水平的表达。体外，TLR3在PMA分化的THP-1细胞中受到自分泌IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的适度上调。THP-1细胞中TLR9mRNA表达不受接触革兰氏阳性或革兰氏阴性菌的影响。离体中，单核细胞中特别是粒细胞中TLR9的表达响应革兰阴性菌而下调。TLR9形成同二聚体且识别未甲基化的细菌DNA。TLR9参与响应细菌DNA和含未甲基化CpGDNA序列的寡核苷酸的炎症。TLR9可能定位于溶酶体或内吞隔室中，在其中TLR更可能遇到PAMP，包括未甲基化的CpG DNA序列。
TLR9是CpG DNA的受体，且识别细菌和病毒CpG DNA。细菌和病毒DNA含未甲基化的CpG基序，其能产生免疫刺激活性。脊椎动物中，CpG基序的频率严重降低且CpG基序的胞嘧啶残基高度甲基化，导致免疫刺激活性的消除。结构上至少有两种类型的CpG DNA：B/K型CpG DNA是炎症细胞因子如IL-12和TNF-α的有效诱导剂；A/D-型CpG DNA有更强的诱导浆细胞样树突状细胞(PDC)生成IFN-α的能力。TLR9还涉及自身免疫紊乱的发病机理，且可能在格拉夫斯自身免疫甲状腺机能亢进和由自身反应性B细胞生成类风湿性因子中很重要。相似地，Fc受体的内化可通过含IgG和染色质的免疫复合物引起TLR9介导的PDC诱导IFN-α，其与系统性红斑狼疮(SLE)的发病机理有关。TLR9通过识别染色质结构涉及数种自身免疫病的发病机理。
Toll-样受体10(TLR10)
TLR10序列编码推定的811(aa)蛋白，分子量为95kDa。TLR10与TLR1和TLR6最密切相关，分别为48％和46％的总体(aa)序列相同性。
体内，TLR10mRNA在免疫系统相关的组织中表达最高，包括脾、淋巴结、胸腺和扁桃体。TLR10mRNA在B细胞和浆细胞样树突状细胞(PDC)中表达最高。体外，TLR10在PMA分化的THP-1细胞中受到自分泌IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α的适度上调。THP-1细胞中TLR10mRNA表达在接触革兰氏阳性和革兰氏阴性菌后增加。离体接触革兰阴性菌后，单核细胞TLR10的表达增加而粒细胞表达下降。
Toll-样受体11(TLR11)
小鼠中TLR11在膀胱上皮细胞中表达且通过尿致病性细菌介导对感染的抗性。
如上所述，TLR2和TLR4分别识别革兰氏阳性和革兰氏阴性菌细胞壁产物；TLR5识别细菌鞭毛蛋白的结构表位；TLR3、TLR7、TLR8和TLR9识别不同形式的微生物衍生核酸。
所述TIR结构域与激活级联事件引起转录因子诱导的数种含TIR结构域的衔接分子(MyD88)、含TIR结构域的衔接蛋白(TIRAP)、含TIR结构域衔接诱导的IFN-β(TRIF)和TRIF相关衔接分子(TRAM)相互作用。
TLR信号转导途径
TLR在全细胞中分布。TLR1、TLR2、TLR3和TLR4在细胞表面上表达，而TLR3、TLR7、TLR8和TLR9在胞内隔室如内涵体中表达。TLR3-、TLR7-或TLR9-介导的其配体的识别需要内涵体的成熟和加工。当变为抗原呈递细胞的巨噬细胞、单核细胞、树突细胞或非免疫细胞通过吞噬作用吞没细菌时，该细菌降解且CpG DNA释放到吞噬体-溶酶体中或内涵体-溶酶体中，其中其可与非特异摄入CpG DNA后从内质网中招募的TLR9相互作用。此外，当病毒通过受体介导的内吞作用入侵细胞时，通过内涵体膜与病毒膜融合将该病毒内含物接触胞质。这导致TLR配体如dsRNA、ssRNA和CpG DNA在吞噬体/溶酶体或内涵体/溶酶体隔室中接触TLR9。
在TIR结构域的信号传导途径下游，含TIR结构域的衔接子MyD88对诱导炎症细胞因子如TNF-α和IL-12通过所有TLR很关键。尽管含TIR结构域的衔接分子(MyD88)对所有TLR都常见，但个体TLR信号传导通路不同，且特异TLR的激活导致基因表达分布模式稍有不同。仅举例来说，激活TLR3和TLR4信号传导途径诱导I型干扰素(IFN)，而激活TLR2-和TLR5-介导的途径则不诱导。然而，激活TLR7、TLR8和TLR9信号传导途径也诱导I型IFN，尽管这是通过不同于TLR3/4-介导的诱导机制发生。
一旦启用，TLR起始信号转导级联，通过衔接蛋白髓样分化因子初次应答基因88(MyD88)引起NFκB的激活并招募IL-1受体相关激酶(IRAK)。MyD88依赖性途径与IL-1受体的信号通路类似，且含C末端TIR结构域和N末端死亡结构域的MyD88被认为与TLR的TIR结构域相关联。刺激后，MyD88通过两种分子的死亡结构域相互作用来招募IRAK-4到TLR，且有助于IRAK-4介导的IRAK-1磷酸化。然后IRAK-1的磷酸化引起TNF受体相关因子6(TRAF6)的招募，导致两种不同信号传导途径的激活。一种途径通过MAP激酶的激活引起AP-1转录因子的激活。另一途径激活TAK1/TAB复合物，其增加IκB激酶(IKK)复合物的活性。一旦激活，该IKK复合物诱导NFκB抑制剂IκB的磷酸化和随后的降解，这导致转录因子NFκB的核转运并起始启动子含NFκB结合位置的基因如细胞因子的转录。MyD88依赖性途径有重要作用，且对所有TLR的炎症细胞因子生成至关重要。
刺激TLR8表达细胞如PBMC产生高水平的IL-12、IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-6和其他炎症细胞因子。相似地，刺激TLR7表达细胞如浆细胞样树突状细胞产生高水平的干扰素(IFNα)和低水平的炎症细胞因子。因此，通过树突细胞和其他抗原呈递细胞的激活，预期TLR7、TLR8或TLR9的介入和细胞因子生成能激活不同的先天和获得性免疫应答机制，引起病原体、感染细胞或肿瘤细胞的破坏。
本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合为toll样受体7活性的激动剂，用于治疗与所述TLR7受体有关的疾病和/或紊乱。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗呼吸道疾病和/或紊乱，包括但不限于：哮喘，包括支气管哮喘、过敏性哮喘、内因性哮喘、外因性哮喘、运动诱发的哮喘、药物-诱发的哮喘(包括阿司匹林和NSAID-诱发的)和灰尘诱发的哮喘，慢性阻塞性肺病(COPD)；支气管炎，包括传染性和嗜曙红细胞性支气管炎；肺气肿；支气管扩张；囊性纤维化；结节病；农民肺和相关疾病；超敏感性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质肺炎、纤维变性并发抗肿瘤治疗和慢性感染，包括结核病和曲霉病及其它真菌感染；肺移植的并发症；肺血管的脉管炎和血栓疾病及肺动脉高压；止咳活性，包括治疗气道的炎性和分泌条件相关的久咳和医源性咳嗽；急性和慢性鼻炎，包括药物性鼻炎和血管舒缩性鼻炎；全年性鼻炎和季节性变应性鼻炎，包括神经性鼻炎(枯草热)；鼻息肉病；急性病毒感染，包括普通感冒和呼吸道合胞体病毒、流感病毒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒导致的感染；
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗皮肤病，包括但不限于：银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病和迟发型超敏反应；植物性和光照性皮炎；脂溢性皮炎、疱疹样皮炎、扁平苔癣、硬化萎缩苔癣、坏疽性脓皮症、皮肤结节病、基底细胞癌、光化性角化病、盘状红斑狼疮、天疱疮、类天疱疮、大疱性表皮松解症、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、毒性红斑、表皮嗜曙红细胞增多、斑秃、男性型秃发、斯威特综合征、韦伯-克里斯迁综合征、多形性红斑；感染性和非感染性蜂窝组织炎；脂膜炎；表皮淋巴瘤、非黑色素瘤皮肤癌和其它发育不良病损；药物诱发疾病，包括固定性药疹。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗眼睛疾病和/或紊乱，包括但不限于：睑缘炎；结膜炎，包括终年和春季过敏性结膜炎；虹膜炎；前和后色素层炎；脉络膜炎；自身免疫病；影响视网膜的变性或炎性疾病；眼炎，包括交感性眼炎；结节病；感染，包括病毒、真菌和细菌感染。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗泌尿生殖系统疾病和/或紊乱，包括但不限于：肾炎，包括间质和肾小球肾炎；肾病综合征；膀胱炎，包括急性和慢性(间质)膀胱炎和杭纳溃疡；急性和慢性尿道炎、前列腺炎、附睾炎、卵巢炎和输卵管炎；女阴阴道炎；佩伦涅病；勃起机能障碍(男性和女性)。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗同种异体移植排斥，包括但不限于：在例如肾脏、心脏、肝脏、肺、骨髓、皮肤或角膜移植后或输血后的急性和慢性排异；或慢性移植物抗宿主病。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗其他自身免疫和过敏性疾病，包括但不限于：类风湿性关节炎、肠易激综合征、系统性红斑狼疮、多发性硬化、桥本甲状腺炎、克罗恩病、炎性肠病(IBD)、格拉夫斯病、阿狄森病、糖尿病、原发性血小板减少性紫癜、嗜酸细胞性筋膜炎、高-IgE综合征、抗磷脂综合症和萨冉拉综合征(Sazary syndrome)。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物用于治疗癌症，包括但不限于：前列腺、乳腺、肺、卵巢、胰腺、肠和结肠、胃、皮肤和脑肿瘤及影响骨髓(包括白血病)和淋巴组织增生系统的恶性肿瘤，例如霍奇金和非霍奇金淋巴瘤；包括预防和治疗转移性疾病和肿瘤复发及癌旁综合征。在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物用作toll样受体活性调节剂并用于治疗肿瘤，包括但不限于：基底细胞癌、鳞状细胞癌、光化性角化病、黑素瘤、癌、肉瘤、白血病、肾细胞癌、卡波济氏肉瘤、髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和多发性骨髓瘤。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗传染病，包括但不限于：病毒疾病如生殖器疣、寻常疣、脚底疣、呼吸道合胞病毒(RSV)、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、登革热病毒、单纯疱疹病毒(仅举示例来说，HSV-I、HSV-II、CMV、或VZV)、传染性软疣、牛痘、天花、慢病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、人乳头瘤病毒(HPV)、巨细胞病毒(CMV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、鼻病毒、肠病毒、腺病毒、冠状病毒(如SARS)、流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、乳多空病毒、嗜肝DNA病毒、黄病毒、逆转录病毒、沙粒病毒(仅举例来说，LCM、胡宁病毒、马丘博病毒、瓜纳瑞托病毒(Guanarito virus)和拉沙热)和纤丝病毒(仅举例来说，埃博拉病毒或马尔堡病毒)。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合用于治疗细菌、真菌和原生动物感染，包括但不限于：肺结核和鸟分枝杆菌病,麻疯病；卡氏肺囊虫肺炎(pneumocystis carnii),隐孢子虫病,组织胞浆菌病,弓形体病,锥虫病感染,利什曼病,埃希氏菌属(Escherichia)、肠细菌属(Enterobacter)、沙门氏菌属(Salmonella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、克氏杆菌属(Klebsiella)、变形杆菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链球菌属(Streptococcus)和衣原体属(Chlamydia)的细菌引起的感染，和真菌感染如念珠菌病(candidiasis)、曲霉病(aspergillosis)、组织胞浆菌病(histoplasmosis)、隐球菌脑膜炎(cryptococcal meningitis)。
在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体作免疫增强剂。在某些实施方式中，本文所述的化合物包括在免疫原性组合物中或与免疫原性组合物联用。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物用作疫苗，且所述化合物存在的量足以增强对疫苗或对与该化合物混合的抗原的免疫应答。所述疫苗包括至少一种抗原，其可为细菌抗原或癌症相关抗原或病毒抗原。在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体，和药物组合物包括在治疗疫苗中或与治疗疫苗联用。在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体，和药物组合物包括在预防疫苗中或与预防疫苗联用。在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体，和药物组合物包括在治疗性病毒疫苗中或与治疗性病毒疫苗联用。在某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体，和药物组合物包括在癌症疫苗中或与癌症疫苗联用。
在其他实施方式中，本文提供的式(I)化合物、或其药学上可接受的盐或溶剂化物用于治疗损伤或老化皮肤如疤痕和皱纹。
给药和药物组合物
对于本文所述式(I)化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、N-氧化物、前药和异构体的治疗用途，所述化合物以治疗有效量单独或作为部分药物组合物给予。因此，本文提供的药物组合物含至少一种本文提供的式(I)化合物，其药学上可接受的盐和/或溶剂化物，和一种或多种药学上可接受的运载体、稀释剂、或赋形剂。此外，所述化合物和组合物单独给予或与一种或多种额外治疗剂联合给予。给予所述化合物和组合物的方法包括但不限于口服给药、直肠给药、胃肠外、静脉内给药、玻璃体内给药、肌肉内给药、吸入、鼻内给药、局部给药、眼部给药或耳部给药。
所述治疗有效量根据所示疾病、疾病严重度、对象年龄和相对健康状况、给予的化合物的效力、给药方式和所需的治疗等而不同。在某些实施方式中，显示式(I)化合物的每日剂量在约0.03-2.5毫克/千克/体重的日剂量时获得全身性满意效果。在某些实施方式中，吸入给予的式(I)化合物每日剂量为0.05微克/千克体重(μg/kg)–100微克/千克体重(μg/kg)。在其他实施方式中，口服给予的式(I)化合物每日剂量为0.01微克/千克体重(μg/kg)–100毫克/千克体重(mg/kg)。较大哺乳动物如人的指定日剂量为约0.5mg-约100mg的式(I)化合物，例如以每日最多4次的分次剂量或以控释形式方便的给予。在某些实施方式中，口服给药的单位剂型含约1-50mg的式(I)化合物。
本文提供的其他方面是制备药物组合物的过程，所述组合物含至少一种本文所述的式(I)化合物、或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物。在某些实施方式中，所述过程包括混合本文提供的式(I)化合物、其药学上可接受的盐及溶剂化物，和一种或多种药学上可接受的运载体、稀释剂、或赋形剂。在某些实施方式中，含游离形式或药学上可接受的盐或溶剂化物形式的式(I)化合物的药物组合物与至少一种药学上可接受的运载体、稀释剂或赋形剂一起通过混合、粒化和/或包被方法加工。在其他实施方式中，所述药物组合物任选包含赋形剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、调节渗透压的盐类和/或缓冲液。在其他实施方式中，所述组合物经灭菌。
口服剂型
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物以离散剂型口服给予，其中所述剂型包括但不限于胶囊、明胶胶囊、囊片、片剂、咀嚼片剂、粉剂、粒剂、糖浆剂、调味糖浆剂、水溶液或悬液或无水液体、可食用泡沫剂或发泡剂、和水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。
用于口服给予至少一种式(I)化合物的胶囊、明胶胶囊、囊片、片剂、咀嚼片剂、粉剂或粒剂通过混合至少一种式(I)化合物(活性成分)与至少一种赋形剂用常规药物混合技术制备。本文所述口服剂型中使用的赋形剂的非限制性示例包括但不限于，粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、吸收剂、着色剂、风味剂、防腐剂和甜味剂。
所述粘合剂的非限制性示例包括但不限于，玉米淀粉、马铃薯淀粉、淀粉糊、预糊化淀粉或其他淀粉、糖、明胶、天然和合成树胶如阿拉伯树胶、海藻酸钠、海藻酸、其他藻酸盐、黄蓍胶、瓜尔豆胶、纤维素及其衍生物(仅举例来说，乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、钠羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和微晶纤维素)、镁铝硅酸盐、聚乙烯吡咯烷酮及其组合。
所述填充剂的非限制性示例包括但不限于滑石、碳酸钙(如，粒剂或粉剂)、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂、高岭土、甘露醇、偏硅酸、山梨醇、淀粉、预糊化淀粉，及其混合物。在某些实施方式中，本文提供的药物组合物中的粘合剂或填充剂以所述药物组合物或剂型的约50-约90％重量存在。
所述崩解剂的非限制性示例包括但不限于琼脂、褐藻酸、褐藻酸钠、碳酸钙、碳酸钠、微晶纤维素、交联羧甲基钠、交聚维酮、波拉克林钾、羧甲淀粉钠、马铃薯或木薯淀粉、预糊化淀粉、其他淀粉、粘土、其他藻胶、其他纤维素、树胶、及其组合。在某些实施方式中，本文提供的药物组合物中所用的崩解剂含量为约0.5–约15％重量的崩解剂，而在其他实施方式中，所述含量为约1-约5％重量的崩解剂。
所述润滑剂的非限制性示例包括但不限于硬脂酸钠、硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他二醇、十二烷基硫酸钠、滑石粉、氢化植物油(仅举例来说，花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸钠、油酸乙酯、乙酸乙酯、琼脂、硅、赛罗得(syloid)硅胶(AEROSIL200，由马里兰州巴尔的摩的格雷斯(W.R.Grace)公司制造)、合成氧化硅的凝结气溶胶(得克萨斯州普莱诺的德固赛(Degussa)公司销售)、CAB-O-SIL(马萨诸塞州波士顿的卡博特(Cabot)公司出售的发热二氧化硅产品)及其组合。在某些实施方式中，本文提供的药物组合物中使用的润滑剂含量低于约1％重量的所述药物组合物或剂型。
所述稀释剂的非限制性示例包括但不限于乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素、甘氨酸或其组合。
在某些实施方式中，片剂和胶囊的制备是通过均匀混合至少一种式(I)化合物(活性成分)和液体载体、良好分开的固体载体或二者均有，然后若需要将产品成型为所需的外表。在某些实施方式中，片剂通过压缩制备。在其他实施方式中，片剂通过模塑制备。
在某些实施方式中，至少一种式(I)化合物作为控释剂型口服给予。所述剂型用于提供缓释或控释的一种或多种式(I)化合物。通过羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、可穿透膜、渗透系统、多层包被、微颗粒、脂质体、微球或其组合实现控释。在某些实施方式中，控释剂型用于延伸式(I)化合物的活性、降低剂量频率和增加患者适应性。
作为口服液体如溶液、糖浆剂和酏剂给予的式(I)化合物制备成单位剂型，从而给定量的溶液、糖浆剂或酏剂含预定量的式(I)化合物。糖浆剂通过在合适的调味水溶液中溶解该化合物来制备，而酏剂通过使用非毒性酒精载剂制备。混悬剂通过在非毒性载剂中分散所述化合物来配制。作为口服液体用于口服给药的赋形剂的非限制性示例包括但不限于增溶剂、乳化剂、调味剂、防腐剂和著色剂。增溶剂和乳化剂的非限制示例包括但不限于水、甘油、油、酒精、乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇酯。防腐剂的非限制性示例包括但不限于苯甲酸钠。调味剂的非限制性示例包括但不限于薄荷油或天然甜味剂或糖精或其他人造甜味剂。
肠胃外剂型
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物通过各种途径胃肠外给予，所述途径包括但不限于皮下、静脉内(包括推注)、肌肉内和动脉内。
所述胃肠外药剂形式以下列形式给予：无菌或可灭菌可注射溶液、悬液、易在药学上可接受的载剂中溶解或悬浮以注射的干燥和/或冻干产物(可复水的粉末)和乳剂。所述剂型中使用的载剂包括但不限于用于注射USP的水；水性载剂如但不限于氯化钠注射液、林格注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化钠注射液、和乳酸林格注射液；水混溶性载剂如但不限于乙醇、聚乙二醇、和聚丙二醇；和非水性载剂如但不限于玉米油、棉花籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、和苯酸苄酯。
经皮剂型
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物经皮给予。所述经皮剂型包括“储器型”或“基质型”贴片，其应用于皮肤且佩戴一定时间以使所需量的式(I)化合物穿透。仅举例来说，所述经皮设备为含背衬组件的绷带形式、含所述化合物和任选载体的储器、以受控且预定的速率长期递送所述化合物到宿主皮肤的任选速率控制屏障、以及将所述设备固定在皮肤上的手段。在其他实施方式中，使用基质经皮制剂。
经皮递送式(I)化合物的制剂含有效量的式(I)化合物、载体和任选的稀释剂。载体包括但不限于辅助穿过宿主皮肤的可吸收的药学上可接受的溶剂如水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油、及其组合。
在一些实施方式中，所述经皮递送系统包括穿透促进剂以辅助递送一种或多种式(I)化合物到组织中。所述穿透促进剂包括但不限于丙酮；各种醇如乙醇、油醇和四氢呋喃；烷基亚砜如二甲基亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮如聚乙烯吡咯烷酮；科利当(Kollidon)级(聚乙烯吡咯酮、聚维酮)；尿素；和各种水溶性或不溶性糖酯如吐温80(聚山梨醇酯80)和司盘60(山梨醇酐单硬脂酸酯)。
在其他实施方式中，调节经皮药物组合物或剂型、或者所述药物组合物或剂型应用的组织的pH以改善一种或多种式(I)化合物的递送。在其他实施方式中，调节溶剂载体的极性、其离子强度或毒性来改善递送。在其他实施方式中，加入化合物如硬脂酸盐有利地改变一种或多种式(I)化合物的亲水性或亲脂性。在某些实施方式中，所述硬脂酸盐作为脂质载剂用于配制、作为乳化剂或表面活性剂、以及作为递送增强剂或穿透促进剂。在其他实施方式中，所述式(I)化合物的不同盐、水合物或溶剂化物用于进一步调节所得组合物的特性。
局部剂型
在某些实施方式中，通过含至少一种洗剂、凝胶、软膏溶液、乳剂、悬浮剂或乳膏剂形式的式(I)化合物的药物组合物来局部应用给予至少一种式(I)化合物。合适的皮肤局部应用制剂为水溶液、软膏、乳膏或凝胶、而眼部给予的制剂为水溶液。这类制剂任选地包含增溶剂、稳定剂、张度增强剂、缓冲液和防腐剂。
所述局部制剂包括至少一种载体和任选地至少一种稀释剂。所述载体和稀释剂包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油、及其组合。
在一些实施方式中，所述局部制剂包括穿透促进剂以辅助递送一种或多种式(I)化合物到组织中。所述穿透促进剂包括但不限于丙酮；各种醇如乙醇、油醇和四氢呋喃；烷基亚砜如二甲基亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮如聚乙烯吡咯烷酮；科利当(Kollidon)级(聚乙烯吡咯酮、聚维酮)；尿素；和各种水溶性或不溶性糖酯如吐温80(聚山梨醇酯80)和司盘60(山梨醇酐单硬脂酸酯)。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物通过吸入给予。吸入给予的剂型配制为气雾剂或干粉。用于吸入给予的气雾制剂包括药学上可接受的水或非水溶剂中的至少一种式(I)化合物的溶液或微悬液。此外，所述药物组合物任选地包括粉末基料如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇或淀粉，和任选的性能修饰剂如L-亮氨酸或另一氨基酸，和/或硬脂酸的金属盐如硬脂酸镁或硬脂酸钙。
在某些实施方式中，使用计量吸入器("MDI")或干粉吸入器(DPI)装置通过吸入将式(I)化合物直接给予肺，所述计量吸入器采用含合适的低沸点推进剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适气体的喷射筒，所述干粉吸入器用突释气体在容器中产生一团干粉，然后其被患者吸入。在某些实施方式中，可将用于吸入器或吹入器的明胶胶囊和药筒制成含有式(I)化合物和粉末基料如乳糖或淀粉的粉末混合物。在某些实施方式中，用液体喷雾设备将式(I)化合物递送到肺中，其中所述设备用极小的喷嘴孔以雾化液体药物制剂，然后直接吸入到肺中。在其他实施方式中，用喷雾器设备将式(I)化合物递送到肺中，其中所述喷雾剂通过超声能量产生液体药物制剂的气雾剂形成容易吸入的细小颗粒。在其他实施方式中，用电流体力学("EHD")气雾设备将式(I)化合物递送到肺中，其中所述EHD气雾设备用电能雾化液体药物溶液或悬液。
在某些实施方式中，所述药物组合物含本文所述的至少一种式(I)化合物，或其药学上可接受的盐和溶剂化物，还含一种或多种吸收促进剂。在某些实施方式中，所述吸收促进剂包括但不限于甘胆酸钠、癸酸钠、N-月桂醇-β-D-麦牙糖苷、EDTA和混合的胶束。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物经鼻给予。经鼻给予的剂型配制为气雾剂、溶液、滴剂、凝胶或干粉。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物以栓剂、灌肠剂、药膏、乳膏直肠泡沫或直肠凝胶。在某些实施方式中，所述栓剂从脂肪乳剂或悬液、可可油或其他甘油酯制备
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物以滴眼剂的形式经眼给予。这类药物组合物为任选含增溶剂、稳定剂、张度增强剂、缓冲液和防腐剂的水溶液。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物以滴耳剂的形式经耳给予。这类药物组合物为任选含增溶剂、稳定剂、张度增强剂、缓冲液和防腐剂的水溶液。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物制备为长效制剂。这种制剂通过植入(例如皮下或肌肉内植入)或肌肉内注射给药。在某些实施方式中，所述制剂包括聚合材料或疏水材料(例如，作为可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂，或者作为微溶性衍生物，例如，微溶性盐。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于口服给予治疗有关TLR7活性的病毒疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于口服给予治疗有关TLR7的传染病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于口服给予治疗有关TLR7的细菌性疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于口服给予治疗有关TLR7的真菌病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于口服给予治疗有关TLR7的癌症。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于静脉内给予治疗有关TLR7的癌症。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于口服给予治疗有关TLR7的同种异体移植排斥疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于口服给予治疗有关TLR7的泌尿生殖系统疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于以滴眼剂给予治疗有关TLR7的眼部疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于局部给予治疗有关TLR7的皮肤病和/或紊乱。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于局部给予治疗光化性角化病。在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于以乳膏剂局部给予治疗光化性角化病。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于局部给予治疗基底细胞癌。在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于以乳膏剂局部给予治疗基底细胞癌。
在其他实施方式中，含至少一种式(I)化合物的药物组合物适于吸入给予治疗有关TLR7的呼吸疾病和/或紊乱。在某些实施方式中，所述呼吸疾病是变应性哮喘。
本文提供式(I)化合物、其药学上可接受的盐和溶剂化物，以及含至少一种式(I)化合物和/或其药学上可接受的盐和溶剂化物的药物组合物用于激活TLR7活性，并因此用于防止或治疗有关TLR7活性的疾病和/或紊乱。所述式(I)化合物、其药学上可接受的盐和溶剂化物以及药物组合物是TLR7的激动剂。
本文还提供治疗患TLR7活性相关疾病和/或紊乱的对象的方法，其中所述方法包括单独或作为本文所述药物组合物的一部分给予对象有效量的式(I)化合物或药学上可接受的盐、溶剂化物。
本文提供式(I)化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备药物中的应用，所述药物用于治疗有关TLR7活性的疾病或紊乱。
联合治疗
在某些实施方式中，单独给予(没有额外的治疗剂)本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物，用于治疗一种或多种与本文所述TLR活性有关的疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物与一种或多种额外治疗剂联合给予，用于治疗一种或多种与本文所述TLR7活性有关的疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物与一种或多种额外治疗剂联合配制，用于治疗一种或多种与本文所述TLR7活性有关的疾病和/或紊乱。
本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物与一种或多种额外治疗剂一起依次给予，用于治疗一种或多种与本文所述TLR7活性有关的疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，本文提供的联合治疗包括给予本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物，然后给予一种或多种额外治疗剂，用于治疗一种或多种与本文所述TLR7活性有关的疾病和/或紊乱。
在其他实施方式中，本文提供的联合治疗包括给予一种或多种额外治疗剂，然后给予本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物，用于治疗一种或多种与本文所述TLR7活性有关的疾病和/或紊乱。
在某些实施方式中，本文提供的联合治疗包括给予本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物，同时给予一种或多种额外治疗剂，用于治疗一种或多种与本文所述TLR7活性有关的疾病和/或紊乱。
在某些实施方式中，本文提供的联合治疗包括给予本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或含至少一种本文提供的式(I)化合物的药物组合物，其用一种或多种额外治疗剂配制，用于治疗一种或多种与本文所述TLR7活性有关的疾病和/或紊乱。
在本文所述联合治疗的某些实施方式中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物为TLR7活性的激动剂。
在本文所述联合治疗的某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及额外的治疗剂作用叠加。在本文所述联合治疗的某些实施方式中，本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及额外的治疗剂协同作用。
在其他实施方式中，将本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或含式(I)化合物的药物组合物，给予之前没有用或当前没有用另一治疗剂治疗的患者。
与本文提供的至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的额外治疗剂包括但不限于抗生素或抗菌剂、镇吐剂、抗真菌剂、消炎药、抗病毒剂、免疫调节剂、细胞因子、抗抑郁药、激素、烷化剂、抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、抗有丝分裂剂、拓扑异构酶抑制剂、细胞生长抑制剂、抗入侵剂、抗血管生成剂、生长因子功能抑制剂、病毒复制抑制剂、病毒酶抑制剂、抗癌剂、α干扰素、β-干扰素、病毒唑、激素、细胞因子、和其他toll样受体调节剂。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗生素或抗菌剂包括但不限于盐酸缬更昔洛韦、甲硝唑、β-内酰胺类、大环内酯类(仅举例来说，如阿奇霉素、妥布霉素(TOBITM))、头孢菌素(仅举例来说，如，头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢拉定、头孢孟多、头孢曲秦、头孢西酮、头孢克肟、头孢唑兰、头孢咪唑、头孢呋辛、头孢匹胺、头孢丙烯、头孢匹罗、KEFLEXTM、VELOSEFTM、CEFTINTM、CEFZILTM、CECLORTM、SUPRAXTM和DURICEFTM)、克拉霉素(例举例来说，如克拉霉素和BIAXINTM)、红霉素(仅举例来说，如红霉素和EMYCINTM)、环丙沙星、CIPROTM，诺氟沙星(仅举例来说，如NOROXINTM)、氨基糖甙类抗生素(仅举例来说，如安普霉素、阿贝卡星、班贝霉素、丁酰苷菌毒、达下霉素、新霉素、新霉素、十一烯酸、奈替米星、巴龙霉素、核糖霉素、西索米星和大观霉素)、酰胺醇抗生素(仅举例来说，如叠氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素)、袢霉素抗生素(仅举例来说，利福米特和利福平)、碳头孢烯类(仅举例来说，如氯碳头孢(loracarbef))、碳青霉烯类(仅举例来说，如比阿培南和亚胺培南)、头孢菌素(仅举例来说，如头孢布宗、头孢美唑和头孢米诺)、单环β-内酰胺类(仅举例来说，氨曲南、卡芦莫南和替吉莫南(tigemonam))、氧头孢烯类(仅举例来说，如氟氧头孢和羟羧氧酰胺菌素)、青霉素(仅举例来说，如美西林、匹美西林、阿莫西林、巴卡西林、青霉噻唑酸、青霉素钠、依匹西林、芬贝西林、氟氯青霉素、盘纳目西林(penamccillin)、盐酸青霉素G二乙氨乙酯、苯明青霉素o、青霉素0、苄星青霉素V、青哌环素、芬丝西林(phencihicillin)钾，V-CILLIN KTM和PEN VEE KTM)、林可酰胺类(仅举例来说，如克林霉素和洁霉素)、双霉素、杆菌肽、卷曲霉素、多粘菌素、持久杀菌素、结核放射菌素、四环素类(仅举例来说，如阿哌环素、金霉素、羟甲金霉素和去甲金霉素)、2,4-二氨基嘧啶(仅举例来说，如溴莫普林)、硝基呋喃类(仅举例来说，如呋喃唑酮和呋唑氯铵)、喹诺酮类和其类似物(仅举例来说，如氟喹诺酮、氧氟沙星、西诺沙星、克林沙星、氟甲喹、古来沙星(grepagloxacin)和FLOXINTM)、磺胺类(仅举例来说，如乙酰磺胺甲氧基吡嗪、苄磺胺、诺丙磺胺、酞磺醋胺、磺胺柯衣酸、磺胺西汀)、砜(仅举例来说，如地百里砜、葡糖砜钠、和苯丙砜)、环丝氨酸、莫匹罗星、马铃薯球蛋白及其组合。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的镇吐剂包括但不限于甲氧氯普胺、吗丁啉、丙氯拉嗪、异丙嗪、氯丙嗪、曲美苄胺、昂丹司琼、格拉司琼、羟嗪、乙酰亮氨酸单乙醇胺、阿立必利、阿扎司琼、苯喹酰胺、氨醇醋茶碱、溴必利、安基敏、氯波必利、赛克利嗪、晕海宁、地芬尼多、多拉司琼、氯苯甲嗪、美沙拉妥、美托哌丙嗪、大麻隆、奥昔喷地、匹哌马嗪、东莨菪碱、舒必利、四氢大麻酚、硫乙拉嗪、硫丙拉嗪、托烷司琼及其组合。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗真菌剂包括但不限于两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟康唑、福司氟康唑、鞘内、氟胞嘧啶、咪康唑、布康唑、伊曲康唑、克霉唑、制霉菌素、特康唑、噻康唑、伏立康唑、环吡酮、益康唑、碘氯苯炔醚、萘替芬、特比萘芬、十一烯酸和灰黄霉素。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的消炎剂包括但不限于非甾体类消炎药物，如水杨酸、乙酰水杨酸、水杨酸甲酯、二氟尼柳、双水杨酯、奥沙拉嗪、柳氮磺胺吡啶、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、甲芬那酸、甲氯灭酸钠、托美汀、酮咯酸、双氯芬酸钠、布洛芬、萘普生、萘普生钠、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康、安吡昔康、屈唵昔康、吡罗昔康(pivoxicam)、替诺昔康、萘丁美酮、保泰松、羟保泰松、安替比林、氨基比林、炎爽痛和尼美舒利、白三烯拮抗剂，包括但不限于齐留通、金硫葡萄糖、硫代苹果酸金钠和醋硫葡、类固醇，包括但不限于阿氯米松、安西缩松、丙酸倍氯米松、倍他米松、苯甲酸倍他米松、二丙酸倍他米松、磷酸钠倍他米松、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、氯可托龙、氢化可的松、氢化可的松衍生物、地奈德(desonide)、去羟米松、地塞米松、氟尼缩松、氟康松(flucoxinolide)、氟氢缩松、氯氟松、甲羟松、甲泼尼龙、醋酸甲强龙、甲泼尼龙琥珀酸钠、糠酸莫米松、醋酸帕拉米松、波尼松龙、醋酸波尼松龙、波尼松龙磷酸钠、强的松龙叔丁乙酯、波尼松、去炎松、去炎松丙酮、双醋酸去炎松和己曲安缩松、和其他消炎药，包括但不仅限于甲氨喋呤、秋水仙碱、别嘌呤醇、丙磺舒、沙利度胺或其衍生物5-氨基水杨酸、维甲酸、蒽酚或卡泊三醇、苯磺唑酮和苯溴马隆。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗病毒剂包括但不限于蛋白酶抑制剂、核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、CCR1拮抗剂、CCR5拮抗剂和核苷类似物。所述抗病毒剂包括但不限于福米韦生、去羟肌苷、拉米夫定、司他夫定、扎西他滨、齐多夫定、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、更昔洛韦、刚昔洛韦(gangcyclovir)、西多福韦、扎那米韦、奥塞米韦、阿糖腺苷、疱疹净、三氟尿苷、左旋利巴韦林、韦拉米啶和利巴韦林、以及膦甲酸、金刚烷胺、金刚乙胺、沙奎那韦、茚地那韦、那非那韦、安普那韦、洛匹那韦、利托那韦、α-干扰素、β-干扰素，阿德福韦、克拉夫定(clevadine)、恩替卡韦、普拉康纳利(pleconaril)、HCV-086、EMZ702、恩曲他滨、西戈斯韦，瓦勒他滨(valopicitabine)、HCV蛋白酶抑制剂如BILN 2061、SCH-503034、ITMN-191或VX-950、NS5B多聚酶抑制剂如NM107(和其前药NM283)、R1626、R7078、BILN1941、GSK625433、GILD9128或HCV-796、依法韦仑、HBY-097、奈韦拉平、TMC-120(达匹韦林)、TMC-125、BX-471、依曲韦林、地拉韦啶、DPC-083、DPC-961、卡普韦林、利匹韦林、5-{[3,5-二乙基-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑-4-基]氧}间苯二氰、GW-678248、GW-695634、MIV-150、卡拉脑立德(calanolide)、TAK-779、SC-351125、安瑞维罗、维立韦罗、马拉韦罗、PRO-140、奥普拉韦罗(aplaviroc)40、Ono-4128,AK-602)、AMD-887CMPD-167、1-内-{8-[(3S)-3-(乙酰基氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮杂双环[3.-2.1]辛-3-基}-2-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑[4,5-c]吡啶-5-羧酸甲酯、3-内-{8-[(3S)-3-(乙酰胺基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮杂双环[3.2.-1]辛-3-基}-2-甲基-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑[4,5-c]吡啶-5-羧酸甲酯、1-内-{8-[(3S)-3-(乙酰基氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮杂双环[3.-2.1]辛-3-基}-2-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑[4,5-c]吡啶-5-羧酸乙酯、和N-{(1S)-3-[3-内-(5-异丁酰-2-甲基-4,5,6,7-四氢-1H-咪唑[4,-5-c]吡啶-1-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺)、BMS-806、BMS-488043、5-{(1S)-2-[(2R)-4-苯甲酰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-1-甲基-2-氧-乙氧基}-4-甲氧基-吡啶-2-羧酸甲酰胺和4-{(1S)-2-[(2R)-4-苯甲酰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-1-甲基-2-氧-乙氧基}-3-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺、恩夫韦肽(T-20)、西夫韦肽SP-01A、T1249、PRO 542、AMD-3100、可溶性CD4、HMG CoA还原酶抑制剂、阿托伐他、3-O-(3'3'-二甲基琥珀酰)白桦脂酸(或称为PA-457)和αHGA。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的免疫调节剂包括但不限于：咪唑硫嘌呤、他克莫司、环孢素、甲氨蝶呤、来氟米特、皮质激素类、环磷酰胺、环孢素A、环孢素G、麦考酚酸吗乙酯、子囊霉素、雷帕霉素(西罗莫司)、FK-506、咪唑立宾、脱氧精胍菌素、布喹那、霉酚酸、丙二腈氨化物(malononitriloamindes)(仅举例来说，如来氟米特)、T细胞受体调节剂、和细胞因子受体调节剂、肽模拟物、和抗体(仅举例来说，如人、人源化、嵌合体、单克隆、多克隆、FVS、ScFvs、Fab或F(ab)2片段或表位结合片段)、核酸分子(仅举例来说，如反义核酸分子和三重螺旋)、小分子、有机化合物、和无机化合物。T细胞调节剂的示例包括但不限于抗T细胞受体抗体(仅举例来说，如抗CD4抗体(例如，cM-T412(勃林格公司(Boehringer))、IDEC-CE9.1TM(IDEC和SKB)、mAB 4162W94、Orthoclone和OKTcdr4a(扬森齐拉格公司(Janssen-Cilag)))、抗-CD3抗体(例如，Nuvion(产品设计实验室(Product Design Labs))，OKT3(强生公司(Johnson&Johnson))或利妥昔(IDEC))、抗-CD5抗体(如抗-CD5蓖麻毒蛋白连接的免疫偶联物)、抗-CD7抗体(如CHH-380(诺华公司(Novartis)))、抗-CD8抗体、抗CD40配体单克隆抗体(仅举例来说，如IDEC-131(IDEC))、抗-CD52抗体(如CAMPATH 1H(Ilex))、抗-CD2抗体、抗CD11a抗体(仅举例来说，如Xanelim(基因泰克公司(Genentech))、抗B7抗体(例如，IDEC-114(IDEC)))和CTLA4-免疫球蛋白和其他toll样受体(TLR)调节剂。细胞因子受体调节剂的例子包括但不限于：可溶性细胞因子受体(仅举例来说，如TNFα受体胞外结构域或其片段、IL-1β受体胞外结构域或其片段和IL-6受体胞外结构域或其片段)、细胞因子或其片段(仅举例来说，如白介素(IL)-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15、TNF-α、干扰素(IFN)-α、IFN-β、IFN-γ和GM-CSF)、抗细胞因子受体抗体(仅举例来说，如抗IFN受体抗体、抗IL-2受体抗体(例如，Zenapax(蛋白质设计实验室(Protein Design Labs))、抗IL-4受体抗体、抗-IL-6受体抗体、抗-IL-10受体抗体和抗-IL-12受体抗体)、抗细胞因子抗体(仅举例来说，如抗-IFN受体抗体、抗TNF-α抗体、抗IL-1β抗体、抗IL-6抗体、抗-IL-8抗体(仅举例来说，如ABX-IL-8(阿布吉尼公司(Abgenix)))、和抗IL-12抗体)。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的细胞因子或细胞因子功能调节剂包括但不限于：白介素-2(IL-2)、白介素-3(IL-3)、白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-6(IL-6)、白介素-7(IL-7)、白介素-9(IL-9)、白介素-10(IL-10)、白介素-12(IL-12)、白介素15(IL-15)、白介素18(IL-18)、血小板衍生生长因子(PDGF)、促红细胞生成素(Epo)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、催乳激素、α-、β-和γ-干扰素、干扰素β-1a、干扰素β-1b、干扰素α-1、干扰素α-2a(罗飞龙(roferon))、干扰素α-2b、聚乙二醇化干扰素(仅举例来说，如聚乙二醇干扰素α-2a和聚乙二醇干扰素α-2b)、内含子、Peg-内含子、派革斯(Pegasys)、复合干扰素(干复津(infergen))、白蛋白-干扰素α和白飞龙(albuferon)。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗抑郁药包括但不限于：苯奈达林、卡罗沙酮、西酞普兰、二甲沙生、芬咖明、茚达品、盐酸茚洛秦、奈福泮、诺米芬辛、羟色氨酸、奥昔哌汀、帕罗西汀、舍曲林、硫西新、曲唑酮、苯酰甲下肼、蓝枣砂定碘、乙色胺、异丙氯肼、异烟酰异丙肼、异唑肼、美巴那肼、烟肼酰胺、优降宁、乙一肼辛烷、苯乙肼、苯异丙肼、苯氧丙肼、匹戊肼、哌异丙肼、司立吉林、丙炔苯丙胺、可铁宁、罗利普林、咯利普兰、马普替林、美曲吲哚、米安舍林、米氮平、阿地唑仑、阿米替林、氨基噻唑霉素、阿莫沙平、布替林、氯米帕明、地美替林、地昔帕明、二苯氮卓、二甲他林、多切斯特、多虑平、氟西嗪、丙咪嗪、N-氧化丙咪嗪、伊普吲哚、洛非帕明、美利曲辛、美他帕明、去甲替林、肟替林、奥匹哌醇、苯噻啶、丙吡西平、普罗替林、奎纽帕明、噻奈普汀、曲米帕明、艾捉非尼、胃复康、安非拉酮、布他西丁、地奥沙屈、度洛西汀、依托哌酮、非巴氨酯、非莫西汀、氯苯已二醇、氟西汀、氟伏沙明、血卟啉、金丝桃素、苯基六氢吡啶甲醇乙酸酯、美地沙明、米那普伦、米那卜林、吗氯贝胺、奈法唑酮、奥沙氟生、吡贝拉林、普罗林坦、吡啶琥醇、利坦色林、罗克吲哚、氯化铷、舒必利、坦度螺酮、胺苯唑酮、托芬那辛、托洛沙酮、反苯环丙胺、L-色氨酸、文拉法辛、维洛沙嗪、齐美定。
在某些实施方式中，与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗抑郁药为MAO抑制剂，包括但不限于苯莫辛、碘化蓝枣砂定碱、乙色胺、异丙氯肼、异烟酰异丙肼、异唑肼、美巴那肼、甲芬肼(metfendrazine)、马氯贝氨、烟肼酰胺、优降宁、苯乙肼、苯异丙肼、苯氧丙肼、匹戊肼、哌异丙肼、司立吉林、丙炔苯并胺、托洛沙酮和苯环丙胺。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的激素包括但不限于黄体激素释放激素(LHRH)、生长激素(GH)、生长激素释放激素、ACTH、促生长素抑制素、促生长素、生长调节素、甲状旁腺激素、下丘脑释放因子、胰岛素、胰高血糖素、脑啡肽、后叶加压素、降血钙素、肝素、低分子量肝素、类肝素、胸腺刺激素、合成和天然的类阿片、胰岛素甲状腺刺激激素和内啡肽。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的烷化剂包括但不限于氮芥、氮丙啶、甲基三聚氰胺、烷基磺酸盐、亚硝基脲、卡莫司汀、洛莫司汀、三氮烯、美法仑、双氯乙基甲胺、顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、噻替派、白消安、卡莫司汀、链脲霉素、达卡巴嗪和替莫唑胺。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗代谢物包括但不限于：阿糖胞苷、吉西他滨和抗叶酸剂，仅举例来说如氟嘧啶(如5-氟尿嘧啶和替加氟)、雷替曲塞、甲氨蝶呤、胞嘧啶阿糖胞苷和羟基脲。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗肿瘤抗生素包括但不限于：蒽环、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、黄胆素、丝裂霉素-C、更生霉素和光神霉素。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗有丝分裂剂包括但不限于：长春花生物碱(仅举例来说，长春新碱、长春碱、去乙酰长春酰胺和长春瑞滨)、紫杉烷类(仅举例来说，紫杉酚、紫杉醇和多西他赛)和保罗激酶(polokinase)抑制剂。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的拓扑异构酶抑制剂包括但不限于：表鬼臼脂素如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、拓扑替康、伊立替康和喜树碱。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的细胞抑制剂包括但不限于：抗雌激素(仅举例来说，如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和艾多昔芬(iodoxyfene))、抗雄激素(仅举例来说，如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙氯地孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(仅举例来说，如戈舍瑞林、亮丙瑞林、亮脯利特和布舍瑞林)、孕激素(仅举例来说，如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(仅举例来说，如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂(仅举例来说，如非那雄胺)。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗入侵剂包括但不限于：c-Src激酶家族抑制剂(仅举例来说，如4-(6-氯-2,3-亚甲基二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-l-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基羟喹唑啉(AZD0530)和N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟乙基)哌嗪-l-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-羧酰胺(达沙替尼,BMS-354825))、和金属蛋白酶抑制剂(仅举例来说，如马立马司他、尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能的抑制剂和肝素酶的抗体)。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的抗血管新生剂包括但不限于：抑制血管内皮生长因子的作用的那些药剂，仅举例来说，如抗血管内皮生长因子抗体贝伐珠单抗(AVASTINTM)和VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(l-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171)、瓦他拉尼(PTK787)和SUl 1248(舒尼替尼)、利诺胺、和整联蛋白αvβ3功能的抑制剂和血管他汀。
与至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物联用的生长因子功能抑制剂包括但不限于：生长因子抗体和生长因子受体抗体(仅举例来说，如抗erbB2抗体曲妥珠单抗(HERCEPTINTM)、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗erbBl抗体西妥昔单抗(艾比特思,C225)、酪氨酸激酶抑制剂，仅举例来说，如表皮生长因子家族抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，仅举例来说，如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼,ZDl 839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃罗替尼,OSI-774)和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033)、erbB2酪氨酸激酶抑制剂，仅举例来说如拉帕替尼、肝细胞生长因子家族抑制剂、血小板衍生生长因子家族抑制剂如伊马替尼、GLEEVECTM、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(仅举例来说，如Ras/Raf信号抑制剂如法尼基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(BAY 43-9006))、通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号传导抑制剂、肝细胞生长因子家族抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、IGF受体(胰岛素样生长因子)激酶抑制剂；极光(aurora)制剂(例如AZDl 152、PH739358、VX-680、MLν8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂如CDK2和/或CDK4抑制剂。
在其他实施方式中，至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与血管破坏剂如(仅示例性)考布他汀A4联用。
在其他实施方式中，至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与反义治疗剂如(仅示例性)抗-ras反义的ISIS 2503联用。
在其他实施方式中，至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与基因治疗方法联用，所述基因治疗方法包括例如，替代异常基因，如异常p53或异常BRCA1或BRCA2的方法、GDEPT(基因导向的酶前药治疗)方法，例如利用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法和增加患者对化疗或放疗耐受性的方法，如多药抗性基因治疗。
在其他实施方式中，至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与免疫治疗方法联用，所述免疫治疗方法包括例如离体和体内方法以增加患者肿瘤细胞的免疫原性，如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T细胞无反应性的方法，利用转染的免疫细胞例如细胞因子转染的树突细胞的方法，利用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和利用抗独特型抗体的方法。
在其他实施方式中，至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与其他治疗方法联用，所述治疗方法包括但不限于，外科手术和放疗(γ-放疗、中子束放疗、电子束放疗、质子治疗、短程疗法和系统性放射性同位素)。
在某些实施方式中，至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与吸收促进剂联合给予或配制，所述吸收促进剂包括但不限于胆酸钠、癸酸钠、N-月桂醇-β-D-麦牙糖苷、EDTA和混合的胶束。在某些实施方式中，所述吸收促进剂靶向淋巴系统。
在某些实施方式中，与本文所述治疗联用的额外治疗剂包括但不限于：诸如肿瘤坏死因子α(TNF-α)抑制剂(如抗TNF单克隆抗体(仅举例来说，英利昔单抗、CDP-870和阿达木单抗)和TNF受体免疫球蛋白分子(仅举例来说，依那西普))的试剂；无选择性环加氧酶COX-1/COX-2抑制剂(仅举例来说，如吡罗昔康、双氯芬酸,丙酸如甲氧萘丙酸、氟苯布洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬、灭酸酯类如甲灭酸、消炎痛、舒林酸、炎爽痛、吡唑啉酮如保泰松、水杨酸盐如阿斯匹林)、COX-2抑制剂(仅举例来说，美洛昔康、塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔、陆玛考昔(lumarocoxib)、帕瑞考昔和艾托考昔)；糖皮质激素；甲氨蝶呤、来氟米特；羟氯喹、d-青霉胺、金诺芬或其它胃肠外或口服金制品。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：白三烯生物合成抑制剂、5-脂氧合酶(5-LO)抑制剂或5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)拮抗剂，例如：齐留通；ABT-761；芬留顿；替泊沙林；Abbott-79175；Abbott-85761；N-(5-取代的)-噻吩-2-烷基磺酰胺；2,6-二叔丁基苯酚腙；甲氧基四氢吡喃，例如泽尼卡ZD-2138；化合物SB-210661；吡啶基-取代的2-氰基萘化合物，例如L-739,010；2-氰基喹啉化合物，例如L-746,530；或吲哚或喹啉化合物，例如MK-591、MK-886和BAY x 1005。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：白三烯(LT B4、LTC4、LTD4和LTE4)的受体拮抗剂，选自：吩噻嗪-3-1s如L-651,392；脒基化合物如CGS-25019c；氨基苯并唑类(benzoxalamines)如昂唑司特；苄甲(benzenecarboximidamides)，例如BIIL 284/260；和诸如扎鲁司特、阿鲁司特、孟鲁司特、SINGULAIRTM、普仑司特、维鲁司特(MK-679)、RG-12525、Ro-245913、伊拉司特(CGP 45715A)和BAY x 7195的化合物。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：磷酸二酯酶(PDE)抑制剂，例如甲基鸦片黄(methylxanthanine)，包括茶碱和氨茶碱；选择性PDE同工酶抑制剂，包括PDE4抑制剂(包括但不限于西洛司特或罗氟司特)、同种型PDE4D的抑制剂、或PDE5抑制剂。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：1型组胺受体拮抗剂例如西替立嗪、氯雷他定、地氯雷他定、非索非那定、阿伐斯汀、特非那定、阿司咪唑、氮卓斯汀、左卡巴司汀、氯苯那敏、普鲁本近、赛克利嗪或咪唑斯汀。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与胃保护性组胺2型受体拮抗剂的组合。在其他实施方式中，本文所述组合包括本文所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与组胺4型受体拮抗剂的组合。
在其他实施方式中，本文所述组合物包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：α-1/α-2肾上腺素受体激动剂、血管收缩剂、拟交感神经药，例如环己丙甲胺、苯福林、苯丙醇胺、麻黄素、伪麻黄碱、盐酸萘甲唑啉、盐酸氧甲唑啉、盐酸四氢唑啉、盐酸木甲唑啉、盐酸曲马唑啉或盐酸乙基去甲肾上腺素。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：抗胆碱能药包括毒蕈碱受体(M1、M2和M3)拮抗剂例如阿托品、东莨菪碱、格隆铵、异丙托溴铵、噻托溴铵、氧托溴铵、哌仑西平或替仑西平。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：β-肾上腺素受体激动剂(包括β受体亚型1-4)例如异丙肾上腺素、柳丁氨醇、舒喘宁、福莫特罗、沙美特罗、叔丁喘宁、间羟异丙肾上腺素、双甲苯喘定甲磺酸盐和吡布特罗。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与色酮例如色甘酸钠或奈多罗米钠的组合。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与I型胰岛素样生长因子(IGF-I)模拟物的组合。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：糖皮质激素，例如氟尼缩松、曲安西龙缩丙酮、二丙酸氯地米松、布地奈德、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松。
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：基质金属蛋白酶(MMP)的抑制剂，即以下的抑制剂：间质溶解素、胶原酶和明胶酶以及聚集蛋白聚糖酶；特别是胶原酶-1(MMP-1)、胶原酶-2(MMP-8)、胶原酶-3(MMP-13)、间质溶解素-1(MMP-3)、间质溶解素-2(MMP-10)和间质溶解素-3(MMP-11)以及MMP-9和MMP-12。
在其他实施方式中，本文所述组合物包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：趋化因子受体功能的调节剂，例如以下的拮抗剂：CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(C-C家族)；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5及CXCR6(C-X-C家族)和C-X3-C家族的CX3CR1；
在其他实施方式中，本文所述组合包括本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与下述的组合：免疫球蛋白(Ig)、伽马球蛋白、Ig制品或调节Ig功能的拮抗剂或抗体例如抗-IgE(奥马珠单抗)。
作为免疫增强剂的式I化合物
在某些实施方式中，含本文提供的至少一种式(I)化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物的药物组合物为免疫原性组合物。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物用作疫苗。在某些实施方式中，所述疫苗为预防性的(即防止感染)，而在其他实施方式中，所述疫苗为治疗性的(即治疗感染)。
在其他实施方式中，本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物为免疫增强剂，与不含式(I)化合物的免疫原性制剂相比，其给予后产生免疫刺激效应。在某些实施方式中，式(I)化合物包含在具有一种或多种免疫调控剂的免疫原性组合物中时，其给予后产生免疫刺激效应，而在其他实施方式中，式(I)化合物包含在不含其他免疫调控剂的免疫原性组合物中时，其给予后产生免疫刺激效应。
本文所述免疫刺激效应通常是增强免疫原性组合物效应。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少10％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少20％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少30％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少40％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少50％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少60％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少70％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少80％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少90％。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物的功效相较没有免疫增强剂的免疫原性组合物增强至少100％。
在某些实施方式中，用免疫原性组合物实现其保护效应中增加的有效性来测量所述免疫原性组合物效应的增强。在某些实施方式中，所述增加的有效性以接受该免疫原性组合物的对象产生病症的概率降低，或所述病症效应的持续时间或严重性降低来测量，其中该免疫原性组合物被认为对所述病症有保护性。在其他实施方式中，该增加的有效性以处理对象中该免疫原性组合物引起的抗体效价增加来测量。
除了本文提供的一种或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，所述免疫原性组合物还包含有效量的一种或多种抗原、和药学上可接受的载体。所述载体包括但不限于蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物、蔗糖、海藻糖、乳糖、脂质聚集体(如油滴或脂质体)、和灭活的病毒颗粒。所述免疫原性组合物通常还包含稀释剂，如水、盐水、和甘油，且任选地含其他赋形剂如湿润剂或乳化剂和pH缓冲液物质。
在某些实施方式中，所述免疫原性组合物任选包括一种或多种免疫调节剂。在某些实施方式中，一种或多种免疫调节剂包括一种或多种佐剂。所述佐剂包括但不限于TH1佐剂和/或TH2佐剂，其在下文中进一步讨论。在某些实施方式中，用于本文提供的免疫原性组合物的佐剂包括但不限于：
A.含矿物质的组合物；
B.油乳剂；
C.皂苷制剂；
D.病毒体和病毒样颗粒；
E.细菌或微生物衍生物；
F.人免疫调节剂；
G.生物粘着剂和粘膜粘着剂；
H.微粒；
I.脂质体；
J.聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯制剂；
K.聚磷腈(PCPP)；
L.胞壁酰肽，和
M.咪唑并喹诺酮化合物。
适用作佐剂的含矿物质的组合物包括但不限于矿物盐，例如铝盐和钙盐。仅举例来说，所述矿物盐包括氢氧化物(如，羟基氧化物，包括氢氧化铝和羟基氧化铝)、磷酸盐(如，羟基磷酸盐和正磷酸盐，包括磷酸铝、羟基磷酸铝、正磷酸铝和磷酸钙)、硫酸盐(如硫酸铝)、或不同矿物化合物的混合物。所述矿物盐为任何合适的形式，仅举例来说如凝胶、晶体和无定形形式。在某些实施方式中，所述含组合物的矿物制备为矿物盐颗粒。在某些实施方式中，本文所述免疫原性组合物的组分吸收到所述矿物盐中。在某些实施方式中，氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂用在本文所述免疫原性组合物中。在其他实施方式中，本文所述免疫原性组合物中所用的抗原吸收到所述氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂中。在某些实施方式中，磷酸钙佐剂用在本文所述免疫原性组合物中。在其他实施方式中，本文所述免疫原性组合物中所用的抗原吸收到所述磷酸钙佐剂中。
在某些实施方式中，磷酸铝在本文所述免疫原性组合物中用作佐剂。在其他实施方式中，磷酸铝在本文所述免疫原性组合物中用作佐剂，其中所述组合物包括流感嗜血杆菌(H.influenzae)糖类抗原。在某些实施方式中，所述佐剂是PO4/Al摩尔比为0.84-0.92的无定形的羟基磷酸铝，包含0.6mg Al3+/ml。在其他实施方式中，采用低剂量磷酸铝吸附，仅举例来说为50-100μg Al3+/偶联物/剂。当组合物中含有一种以上偶联物时，不需要吸附所有偶联物。
适用作佐剂的油乳剂包括但不限于角鲨烯-水乳剂，如MF59(5％角鲨烯、0.5％吐温80和0.5％司盘85，用微流化床配制成亚微米颗粒)、完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)。
皂苷是在许多种类植物的树皮、叶、茎干、根甚至花中发现的甾醇糖苷和三萜糖苷的异质群体。适用作佐剂的皂苷制剂包括但不限于来自皂树(Quillaia saponaria)Molina树皮、来自丽花菝葜(Smilax ornata)(墨西哥菝葜)、满天星(Gypsophilla paniculata)(婚纱花)和肥皂草(Saponaria officianalis)(皂根)的皂苷。在某些实施方式中，适用作佐剂的皂苷制剂包括但不限于纯化制剂，其包括但不限于QS7、QS17、QS18、QS21、QH-A、QH-B和QH-C。QS21市售为STIMULOMTM。在其他实施方式中，皂苷制剂包括固醇、胆固醇和脂质制剂，例如由皂苷和胆固醇的组合所形成的称为免疫刺激复合物(ISCOM)的独特颗粒。在某些实施方式中，ISCOM还包含磷脂，如磷脂酰乙醇胺或磷脂酰胆碱。任何已知的皂苷均可用于ISCOM中。在某些实施方式中，ISCOM包含QuilA、QHA和QHC中的一种或多种。在其他实施方式中，ISCOMS可选不含其他去污剂。
适用作佐剂的病毒体和病毒样颗粒(VLP)包括但不限于来自病毒的一种或多种蛋白，可选与磷脂联用或一同配制。此类病毒体和VLP通常无病原性，非复制，且通常不含任何天然病毒基因组。在某些实施方式中，病毒蛋白重组生成，而其他实施方式中，病毒蛋白分离自全病毒。
适用于病毒体或VLP的病毒蛋白包括但不限于来自流感病毒(例如HA或NA)、乙肝病毒(例如核心蛋白或衣壳蛋白)、戊肝病毒、麻疹病毒、辛德比斯病毒、轮状病毒、口蹄疫病毒、逆转录病毒、诺沃克病毒、人乳头状瘤病毒、HIV、RNA-噬菌体、Qβ-噬菌体(如外壳蛋白)、GA-噬菌体、fr-噬菌体、AP205噬菌体和Ty(如反转录转座子Ty蛋白p1)的蛋白。
适用作佐剂的细菌或微生物衍生物包括但不限于细菌或微生物衍生物如肠细菌脂多糖(LPS)的无毒衍生物、脂质A衍生物、免疫刺激性寡核苷酸和ADP-核糖基化毒素及其脱毒衍生物。这类LPS的无毒衍生物包括但不限于单磷酰脂质A(MPL)和3-O-脱酰基MPL(3dMPL)。3dMPL是3脱-O-酰基单磷酰脂质A与4、5或6条酰化链的混合物。其它无毒LPS衍生物包括单磷酰脂质A模拟物，如氨基烷基氨基葡萄糖苷磷酸盐衍生物(例如RC-529)。脂质A衍生物包括但不限于来自大肠杆菌(Escherichia coli)的脂质A衍生物(如OM-174)。
用作佐剂的免疫刺激性寡核苷酸包括但不限于含CpG基序(含有通过磷酸键与鸟苷连接的非甲基化胞嘧啶的二核苷酸序列)的核苷酸序列。此类CpG序列可以是双链或单链。在某些实施方式中，此类核苷酸序列为含回文结构或聚(dG)序列的双链RNA或寡核苷酸。在其他实施方式中，CpG包含核苷酸修饰/类似物如硫代磷酸酯修饰。
在某些实施方式中，CpG序列指向TLR9，而在某些实施方式中，所述基序为GTCGTT或TTCGTT。在某些实施方式中，CpG序列特异性诱导Th1免疫应答，仅举例来说如CpG-A ODN，或在其他实施方式中，CpG序列更特异性诱导B细胞应答，仅举例来说如CpG-B ODN。在某些实施方式中，CpG是CpG-A ODN。
在某些实施方式中，构建CpG寡核苷酸使其5’末端可为受体所识别。在其他实施方式中，可选将两个CpG寡核苷酸序列的3’末端相连接形成“免疫聚体”。
基于免疫刺激性寡核苷酸的特别有用的佐剂被称为IC31TM。在某些实施方式中，用于本文所述免疫原性组合物的佐剂包含(i)和(ii)的混合物：(i)含有至少一个(优选多个)CpI基序(仅举例来说，如胞嘧啶与肌苷相连形成二核苷酸)的寡核苷酸(仅举例来说，如15-40个核苷酸)，和(ii)聚阳离子聚合物，仅举例来说如含有至少一个(优选多个)Lys-Arg-Lys三肽序列的寡肽(仅举例来说，如5-20个氨基酸)。在某些实施方式中，所述寡核苷酸是包含26聚体序列5'-(IC)13-3'的脱氧核苷酸(SEQ ID NO:7)。在其他实施方式中，所述聚阳离子聚合物是含有11聚体氨基酸序列KLKLLLLLKLK的肽(SEQ ID NO:8)。
在某些实施方式中，细菌ADP-核糖基化毒素及其脱毒衍生物用作本文所述免疫原性组合物中的佐剂。在某些实施方式中，此类蛋白衍生自大肠杆菌(大肠杆菌不耐热肠毒素“LT”)、霍乱(“CT”)或百日咳(“PT”)菌。在其他实施方式中，所述毒素或类毒素为全毒素形式，包含A和B亚单位。在其他实施方式中，A亚单位含有脱毒突变；而B亚单位未突变。在其他实施方式中，所述佐剂为脱毒的LT突变体，如LT-K63、LT-R72和LT-G192。
适合用作佐剂的人免疫调节剂包括但不限于：细胞因子，仅举例来说如白介素(IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12等)、干扰素(如干扰素-γ)、巨噬细胞集落刺激因子和肿瘤坏死因子。
用作本文所述免疫原性组合物中佐剂的生物粘着剂和粘膜粘着剂包括但不限于：酯化的透明质酸微球和聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖和羧甲基纤维素的交联衍生物。在某些实施方式中，壳聚糖及其衍生物用作本文所述疫苗组合物中的佐剂。
适合用作佐剂的微粒包括但不限于可生物降解的和无毒的材料(如聚α-羟基酸、多羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐、聚己内酯等)和聚乙丙交酯共聚物形成的微粒。在某些实施方式中，处理所述微粒以具有带负电表面(如用SDS)或带正电表面(如用阳离子去污剂如CTAB)。适于用作佐剂的微粒具有约100nm–约150μm的粒径。在某些实施方式中，所述粒径为约200nm-约30μm，且在其他实施方式中所述粒径为约500nm-10μm。
适合用作佐剂的聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯制剂包括但不限于聚氧乙烯去水山梨糖醇酯表面活性剂和辛苯糖醇的组合，以及聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性剂和至少一种其它非离子表面活性剂如辛苯糖醇的组合。在某些实施方式中，聚氧乙烯醚选自聚氧乙烯-9-月桂醚(月桂醇聚醚9)、聚氧乙烯-9-硬脂醚、聚氧乙烯-8-硬脂醚、聚氧乙烯-4-月桂醚、聚氧乙烯-35-月桂醚和聚氧乙烯-23-月桂醚。
适合用作佐剂的胞壁酰肽包括但不限于N-乙酰基-胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-正胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷酰胺(去甲-MDP)和N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺酰-L-丙氨酸-2-(1'-2'-二棕榈酰-s-n-甘油-3-羟基磷酰氧基)-乙胺MTP-PE)。
在某些实施方式中，用作免疫增强剂的一种或多种式(I)化合物包括在具有一种或多种上述已鉴定佐剂组合的组合物中。所述组合包括但不限于：
(1)皂苷和水包油乳液；
(2)皂苷(例如QS21)+无毒LPS衍生物(例如3dMPL)；
(3)皂苷(例如QS21)+无毒LPS衍生物(例如3dMPL)+胆固醇；
(4)皂苷(例如QS21)+3dMPL+IL-12(任选包括固醇)；
(5)3dMPL与例如QS21和/或水包油乳液的组合；
(6)SAF，含10％角鲨烷、0.4％吐温80.TM、5％普流罗尼克嵌段聚合物L121和thr-MDP，微流化形成亚微米乳液或涡旋形成较大粒度的乳液；
(7)RIBITM佐剂系统(RAS)(瑞比免疫化学公司(Ribi Immunochem))，含2％角鲨烯、0.2％吐温80和一种或多种细菌细胞壁组分，所述细胞壁组分由单磷酰脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)组成，优选MPL+CWS(Detox.TM.)；和
(8)一种或多种无机盐(如铝盐)+无毒LPS衍生物(如3dMPL)。
在其他实施方式中，用在本文提供的免疫原性组合中的佐剂组合包括Th1和Th2佐剂的组合，例如(仅示例性)CpG和明矾或雷西莫特和明矾。
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物引起细胞介导的免疫应答以及体液免疫应答。在其他实施方式中，所述免疫应答诱导能在接触感染剂时迅速应答的持久性(如中和性)抗体和细胞介导的免疫。
通常认为两种T细胞类型CD4和CD8细胞是启动和/或增强细胞介导免疫和体液免疫所必需的。CD8T细胞可表达CD8共受体，通常称为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。CD8T细胞能够识别MHC I型分子上展示的抗原或与之相互作用。
CD4T细胞可表达CD4共受体，通常称为T辅助细胞。CD4T细胞能够识别结合于MHCII型分子的抗原性肽。与MHC II型分子相互作用时，CD4细胞可分泌诸如细胞因子等因子。这些分泌的细胞因子可激活B细胞、细胞毒性T细胞、巨噬细胞和参与免疫应答的其它细胞。辅助T细胞或CD4+细胞可进一步分成两个功能截然不同的亚组：即细胞因子和效应功能不同的TH1表型和TH2表型。
活化的TH1细胞能增强细胞免疫(包括抗原特异性CTL生成增加)，因而对响应胞内感染具有特定价值。活化的TH1细胞可分泌IL-2、IFN-γ和TNF-β中的一种或多种。TH1免疫应答可通过激活巨噬细胞、NK(自然杀伤)细胞和CD8细胞毒性T细胞(CTL)导致局部炎症反应。通过用IL-12刺激B和T细胞的生长，TH1免疫应答也可用于放大免疫应答。TH1刺激的B细胞可分泌IgG2a。
活化的TH2细胞提高抗体产量，因此对响应胞外感染具有价值。活化的TH2细胞可分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10中的一种或多种。TH2免疫应答可引起IgG1、IgE、IgA和用于未来保护的记忆B细胞生成。
增强的免疫应答可包括增强的TH1免疫应答和TH2免疫应答中的一种或多种。
TH1免疫应答可包括以下一种或多种：CTL增加，与TH1免疫应答相关的一种或多种细胞因子(如IL-2、IFN-γ和TNF-β)增加，活化巨噬细胞增加，NK活性增加，或者IgG2a产量增加。增强的TH1免疫应答优选包括IgG2a生成增加。
TH1佐剂可用于引发TH1免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，TH1佐剂通常引起IgG2a生成水平增加。适用于本文提供的免疫原性组合物的TH1佐剂包括但不限于：皂苷制剂、病毒体和病毒样颗粒、肠细菌脂多糖(LPS)的无毒衍生物、免疫刺激性寡核苷酸。在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物中用作TH1佐剂的免疫刺激性寡核苷酸含CpG基序。
TH2免疫应答可包括以下一种或多种：与TH2免疫应答相关的一种或多种细胞因子(如IL-4、IL-5、IL-6和IL-10)增加，或者IgG1、IgE、IgA和记忆B细胞生成增加。增强的TH2免疫应答优选包括IgG1生成增加。
TH2佐剂可用于引发TH2免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，TH2佐剂通常引起IgG1生成水平增加。适用于本文提供的免疫原性组合物中的TH2佐剂包括但不限于：含矿物质组合物、油乳剂和ADP-核糖基化毒素和其脱毒衍生物。在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物中用作TH2佐剂的含矿物质的组合物为铝盐。
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含TH1佐剂和TH2佐剂。在其他实施方式中，这种组合物优选引起增强的TH1和增强的TH2应答，如IgG1和IgG2a的生成相对于不用佐剂的免疫均有增加。在其他实施方式中，相对于用单一佐剂的免疫(即，相对于只用TH1佐剂的免疫或只用TH2佐剂的免疫)，这种包含TH1和TH2佐剂组合的组合物引起TH1和/或TH2免疫应答增强。
在某些实施方式中，所述免疫应答可以是TH1免疫应答和TH2免疫应答之一或两种。在其他实施方式中，所述免疫应答提供增强的TH1应答和增强的TH2应答之一或两种。
在某些实施方式中，增强的免疫应答是全身和粘膜免疫应答之一或两种。在其他实施方式中，该免疫应答提供增强的全身免疫应答和增强的粘膜免疫应答之一或两种。在某些实施方式中，粘膜免疫应答是TH2免疫应答。在某些实施方式中，粘膜免疫应答包括IgA生成增加。
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物用作疫苗，其中所述组合物包括免疫学上有效量的一种或多种抗原。
本文提供的免疫原性组合物中所用的抗原可以有效量提供(如用于治疗、预防或诊断方法的有效量)。例如，本发明的免疫原性组合物可用来治疗或预防任何下列病原体引起的感染。
本文提供的免疫原性组合物所用的抗原通常为宿主的外源大分子(如多肽、多糖、多核苷酸)，包括但不限于一种或多种下列抗原，或衍生自一种或多种下列病原体的抗原。
细菌抗原
适用于本文提供的免疫原性组合物的细菌抗原包括但不限于从细菌分离、纯化或衍生的蛋白质、多糖、脂多糖、多核苷酸和外膜囊泡。在某些实施方式中，细菌抗原包括细菌裂解物和灭活的细菌制剂。在某些实施方式中，细菌抗原由重组表达制得。在某些实施方式中，细菌抗原包括在细菌生命周期的至少一个阶段中暴露于细菌表面的表位。细菌抗原优选在多种血清型之间具有保守性。在某些实施方式中，细菌抗原包括衍生自一种或多种下述细菌的抗原以及以下鉴定的特定抗原例子：
脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)：脑膜炎球菌抗原可包括但不限于纯化或衍生自脑膜炎奈瑟球菌血清群如A、C、W135、Y、X和/或B的蛋白质，糖(包括多糖、寡糖、脂寡糖或脂多糖)或外膜囊泡。在某些实施方式中，脑膜炎蛋白质抗原选自粘附蛋白、自身转运蛋白、毒素、摄铁蛋白和膜相关蛋白(优选完整的外膜蛋白)。
肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)：肺炎链球菌抗原包括但不限于来自肺炎链球菌的糖(包括多糖或寡糖)和/或蛋白质。糖可以是多糖，其大小是在从细菌纯化该糖时形成，或者可以是这种多糖片段化产生的寡糖。例如，在7价PREVNARTM产品中，6种糖是完整多糖，而一种(18C血清型)是寡糖。在某些实施方式中，糖抗原选自下列肺炎球菌血清型1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和/或33F中的一种或多种。免疫原性组合物可包含多种血清型，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多种血清型。本领域已知7价、9价、10价、11价和13价偶联物组合，也了解23价非偶联组合。例如，10价组合可包含来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的糖。11价组合还可包含来自血清型3的糖。12价组合可加入10价混合物：血清型6A和19A；6A和22F；19A和22F；6A和15B；19A和15B；r 22F和15B；13价组合可加入11价混合物：血清型19A和22F；8和12F；8和15B；8和19A；8和22F；12F和15B；12F和19A；12F和22F；15B和19A；15B和22F；等等。在某些实施方式中，蛋白抗原可选自下列文献鉴定的蛋白质：WO98/18931、WO98/18930、美国专利6,699,703、美国专利6,800,744、WO97/43303、WO97/37026、WO 02/079241、WO 02/34773、WO 00/06737、WO 00/06738、WO 00/58475、WO2003/082183、WO 00/37105、WO 02/22167、WO 02/22168、WO 2003/104272、WO 02/08426、WO01/12219、WO 99/53940、WO 01/81380、WO 2004/092209、WO 00/76540、WO 2007/116322、LeMieux等，Infect.Imm.(2006)74:2453-2456，Hoskins等，J.Bacteriol.(2001)183:5709-5717，Adamou等，Infect.Immun.(2001)69(2):949-958，Briles等，J.Infect.Dis.(2000)182:1694-1701，Talkington等，Microb.Pathog.(1996)21(1):17-22，Bethe等，FEMSMicrobiol.Lett.(2001)205(1):99-104,Brown等，Infect.Immun.(2001)69:6702-6706，Whalen等，FEMS Immunol.Med.Microbiol.(2005)43:73-80，Jomaa等，Vaccine(2006)24(24):5133-5139。在其他实施方式中，肺炎链球菌蛋白可选自聚组氨酸三聚体家族(PhtX)、胆碱结合蛋白家族(CbpX)、CbpX截短物、LytX家族、LytX截短物、CbpX截短物-LytX截短物嵌合蛋白、肺炎链球菌溶血素(Ply)、PspA、PsaA、Sp128、SpIO1、Sp130、Sp125、Sp133、肺炎球菌菌毛亚基。
酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)(A群链球菌)：A群链球菌抗原包括但不限于WO 02/34771或WO 2005/032582中鉴定的蛋白质(包括GAS40)、GAS M蛋白片段的融合物(包括WO 02/094851和Dale,Vaccine(1999)17:193-200与Dale,Vaccine 14(10):944-948所述融合物)、纤连蛋白结合蛋白(Sfb1)、链球菌血红素相关蛋白(Shp)和链球菌素S(SagA)。
粘膜炎莫拉菌(Moraxella catarrhalis)：莫拉菌抗原包括但不限于WO 02/18595和WO 99/58562中鉴定的抗原、外膜蛋白抗原(HMW-OMP)、C-抗原和/或LPS。
百日咳博德特菌(Bordetella pertussis)：百日咳抗原包括但不限于来自百日咳博德特菌的百日咳全毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)，还可选与百日咳杆菌粘附素和/或凝集原2和3联用。
伯克霍尔德氏菌(Burkholderia):伯克霍尔德氏菌抗原包括但不限于鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia mallei)、鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pseudomallei)和洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)：金葡菌抗原包括但不限于来自金黄色葡萄球菌(S.aureus)的多糖和/或蛋白。金黄色葡萄球菌多糖包括但不限于5型和8型荚膜多糖(CP5和CP8)，可选与无毒重组绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)外毒素A偶联，如StaphVAXTM、336型多糖(336PS)、多糖胞内粘附素(PIA，也称为PNAG)。金黄色葡萄球菌蛋白包括但不限于衍生自以下的抗原：表面蛋白，侵袭素(杀白细胞素、激酶、透明质酸酶)，抑制吞噬细胞吞噬(荚膜、蛋白质A)、类胡萝卜素、过氧化氢酶产生的表面因子，蛋白质A，凝固酶，凝血因子和/或裂解真核细胞膜的膜损伤性毒素(可选经脱毒)(溶血素、白细胞毒素、杀白细胞素)。在某些实施方式中，金黄色葡萄球菌抗原可选自以下文献鉴定的蛋白：WO02/094868、WO 2008/019162、WO 02/059148、WO 02/102829、WO 03/011899、WO 2005/079315、WO 02/077183、WO 99/27109、WO 01/70955、WO 00/12689、WO 00/12131、WO 2006/032475、WO 2006/032472、WO 2006/032500、WO 2007/113222、WO 2007/113223、WO 2007/113224。在其他实施方式中，金黄色葡萄球菌抗原可选自IsdA、IsdB、IsdC、SdrC、SdrD、SdrE、ClfA、ClfB、SasF、SasD、SasH(AdsA)、Spa、EsaC、EsxA、EsxB、Emp、HlaH35L、CP5、CP8、PNAG、336PS。
表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermis)：表皮葡萄球菌(S.epidermidis)抗原包括但不限于黏液相关性抗原(SAA)。
破伤风梭菌(Clostridium tetani)(破伤风)：破伤风抗原包括但不限于破伤风类毒素(TT)。在某些实施方式中，此类抗原用作载体蛋白与本文提供的免疫原性组合物结合/偶联。
产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens):抗原包括但不限于来自产气荚膜梭菌的ε毒素。
肉毒梭菌(Clostridium botulinums)(肉毒杆菌中毒):肉毒杆菌中毒抗原包括但不限于衍生自肉毒梭菌(C.botulinum)的抗原。
白喉棒状杆菌(Corynebacterium diphtheriae)(白喉)：白喉抗原包括但不限于白喉毒素，优选经脱毒，如CRM197。此外，考虑将能够调节、抑制ADP核糖基化或与其相关的抗原与本文提供的免疫原性组合物组合/共同给予/结合。在某些实施方式中，白喉类毒素用作载体蛋白。
B型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae B)(Hib)：Hib抗原包括但不限于Hib糖抗原。
绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)：假单胞菌抗原包括但不限于内毒素A、Wzz蛋白、绿脓假单胞菌(P.aeruginosa)LPS、分离自PAO1(O5血清型)的LPS，和/或包括外膜蛋白F(OprF)在内的外膜蛋白。
嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)。细菌抗原衍生自嗜肺军团菌。
贝氏柯克斯体(Coxiella burnetti)。细菌抗原衍生自贝氏柯克斯体。
布鲁氏菌(Brucella)。细菌抗原衍生自布鲁氏菌，包括但不限于牛种布鲁氏菌(B.abortus)、犬种布鲁氏菌(B.canis)、羊种布鲁氏菌(B.melitensis)、沙林鼠种布鲁氏菌(B.neotomae)、绵羊种布鲁氏菌(B.ovis)、猪种布鲁氏菌(B.suis)和海豹种布鲁氏菌(B.pinnipediae)。
弗朗西斯氏菌(Francisella)。细菌抗原衍生自弗朗西斯氏菌，包括但不限于新凶手弗朗西斯氏菌(F.novicida)、蜃楼弗朗西斯氏菌(F.philomiragia)和土拉热弗朗西斯氏菌(F.tularensis)。
无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)(B群链球菌)：B群链球菌抗原包括但不限于WO 02/34771、WO 03/093306、WO 04/041157或WO 2005/002619中鉴定的蛋白质或糖抗原(包括蛋白质GBS 80、GBS 104、GBS 276或GBS 322，和衍生自血清型Ia、Ib、Ia/c、II、III、IV、V、VI、VII和VIII的糖抗原)。
淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae)：淋病抗原包括但不限于Por蛋白(或膜孔蛋白)如PorB(参见Zhu等,Vaccine(2004)22:660-669)、转移结合蛋白如TbpA和TbpB(参见Price等,Infection and Immunity(2004)71(1):277–283)、混浊蛋白(如Opa)、还原型可修饰蛋白(Rmp)和外膜囊泡(OMV)制备物(参见Plante等,J.Infectious Disease 182,848-855,2000；另参见例如WO99/24578、WO99/36544、WO99/57280、WO02/079243)。
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)：沙眼衣原体抗原包括但不限于衍生自血清型A、B、Ba和C(沙眼病原体，致盲原因)，血清型L1、L2和L3(与性病淋巴肉芽肿有关)和血清型D-K的抗原。在某些实施方式中，沙眼衣原体抗原包括但不限于WO 00/37494、WO 03/049762、WO 03/068811或WO 05/002619中鉴定的抗原，包括PepA(CT045)、LcrE(CT089)、ArtJ(CT381)、DnaK(CT396)、CT398、OmpH-样(CT242)、L7/L12(CT316)、OmcA(CT444)、AtosS(CT467)、CT547、Eno(CT587)、HrtA(CT823)和MurG(CT761)。
苍白密螺旋体(Treponema pallidum)(梅毒)：梅毒抗原包括但不限于TmpA糖抗原。
杜氏嗜血菌(Haemophilus ducreyi)(引起软下疳)：杜氏嗜血菌抗原包括但不限于外膜蛋白(DsrA)。
粪肠球菌(Enterococcus faecalis)或屎肠球菌(Enterococcus faecium)：抗原包括但不限于三糖重复或其他肠球菌衍生抗原。
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)：幽门螺杆菌抗原包括但不限于Cag、Vac、Nap、HopX、HopY和/或脲酶抗原。
腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)：抗原包括但不限于腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)抗原的160kDa血凝素。
小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)抗原包括但不限于LPS。
大肠杆菌(E.coli)：大肠杆菌抗原可衍生自肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAggEC)、弥散粘附性大肠杆菌(DAEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)和/或肠出血性大肠杆菌(EHEC)。ExPEC抗原包括但不限于辅助定居因子(orf3526)、orf353、细菌Ig-样结构域(1型)蛋白(orf405)、orf1364、NodT族外膜因子脂蛋白流出转运蛋白(orf1767)、gspK(orf3515)、gspJ(orf3516)、tonB-依赖性铁载体受体(orf3597)、菌毛蛋白(orf3613)、upec-948、upec-1232、1型菌毛蛋白的A链前体(upec-1875)、yap H同源物(upec-2820)和溶血素A(recp-3768)。
炭疽杆菌(Bacillus anthracis)(炭疽):炭疽杆菌(B.anthracis)抗原包括但不限于A组分(致死因子(LF)和水肿因子(EF))，二者共有称为保护性抗原(PA)的B组分。在某些实施方式中，炭疽杆菌抗原可选经脱毒。
鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis)(鼠疫)：鼠疫抗原包括但不限于F1荚膜抗原、LPS、鼠疫耶尔森菌V抗原。
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)：结核病抗原包括但不限于脂蛋白、LPS、BCG抗原、抗原85B(Ag85B)的融合蛋白、可选配制入阳离子脂囊泡中的ESAT-6、结核分枝杆菌(Mtb)异柠檬酸脱氢酶相关抗原和MPT51抗原。
立克次体(Rickettsia)：抗原包括但不限于外膜蛋白，包括外膜蛋白A和/或B(OmpB)，LPS和表面蛋白抗原(SPA)。
单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes)：细菌抗原包括但不限于衍生自单核细胞增生利斯特菌的抗原。
肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)：抗原包括但不限于WO 02/02606中鉴定的抗原。
霍乱弧菌(Vibrio cholerae)：抗原包括但不限于蛋白酶抗原、LPS，具体是霍乱弧菌II脂多糖、O1群稻叶型O(O1Inaba O)异性多糖、霍乱弧菌O139、IEM108疫苗抗原和封闭带毒素(Zot)。
鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhi)(伤寒)：抗原包括但不限于荚膜多糖，优选偶联物(Vi，即vax-TyVi)。
布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)(莱姆病)：抗原包括但不限于脂蛋白(如OspA、OspB、OspC和OspD)，其它表面蛋白如OspE-相关蛋白(Erps)，核心蛋白聚糖结合蛋白(如DbpA)和抗原性可变的VI蛋白，如与P39和P13(完整的膜蛋白)相关的抗原，VlsE抗原变异蛋白。
牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)：抗原包括但不限于牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)外膜蛋白(OMP)。
克雷伯菌(Klebsiella)：抗原包括但不限于：包括OMP A在内的OMP，或可选地偶联于破伤风类毒素的多糖。
本文提供的免疫原性组合物中所用的其他细菌抗原包括但不限于上述任意的荚膜抗原、多糖抗原、蛋白抗原或多核苷酸抗原。本文提供的免疫原性组合物中所用其他细菌抗原包括但不限于外膜囊泡(OMV)制品。此外，本文提供的免疫原性组合物中所用的其他细菌抗原包括但不限于活、减毒和/或纯化形式的任意上述细菌。在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物中所用的细菌抗原衍生自革兰氏阴性菌，而其他实施方式中，它们衍生自革兰氏阳性菌。在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物中所用的细菌抗原衍生自好氧细菌，而其他实施方式中，它们衍生自厌氧细菌。
在某些实施方式中，任何上述细菌来源的糖(多糖、LPS、LOS或寡糖)可与另一种试剂或抗原如载体蛋白(例如CRM197)偶联。在某些实施方式中，此类偶联物是通过将糖的羰基部分还原氨化到蛋白的氨基上而作用的直接偶联。在其他实施方式中，糖通过接头偶联，例如采用1996年的Bioconjugate Techniques(《生物偶联技术》)和1993年的CRC,Chemistryof Protein Conjugation and Cross-Linking(《蛋白质偶联与交联化学》)中提供的琥珀酰胺或其他连接偶联。
在可用于治疗或预防奈瑟菌感染和相关基疾病和紊乱的某些实施方式中，用于本文所提供免疫原性组合物的来自脑膜炎奈瑟菌的重组蛋白可参见WO99/24578、WO99/36544、WO99/57280、WO00/22430、WO96/29412、WO01/64920、WO03/020756、WO2004/048404和WO2004/032958。这些抗原可单独或联用。当联用多个纯化蛋白时，使用10种或更少(例如，9、8、7、6、5、4、3、2种)纯化抗原的混合物是有益的。
用于本文提供的免疫原性组合物的特别有用的抗原组合参见Giuliani等(2006)Proc Natl Acad Sci U S A 103(29):10834-9和WO2004/032958中的公开，因此免疫原性组合物可包含下列中的1、2、3、4或5种：(1)‘NadA’蛋白(也称GNA1994和NMB1994)；(2)；‘fHBP’蛋白(也称‘741’、LP2086、GNA1870和NMB1870)；(3)‘936’蛋白(也称GNA2091和NMB2091)；(4)‘953’蛋白(也称GNA1030和NMB1030)；以及(5)‘287’蛋白(也称GNA2132和NMB2132)。其他可能的抗原组合可包含转铁蛋白结合蛋白(例如TbpA和/或TbpB)和Hsf抗原。用于本文提供的免疫原性组合物的其他可能的纯化抗原包括含下列氨基酸序列之一的蛋白：来自WO99/24578的SEQ ID NO:650；来自WO99/24578的SEQ ID NO:878；来自WO99/24578的SEQ ID NO:884；来自WO99/36544的SEQ ID NO:4；来自WO99/57280的SEQ ID NO:598；来自WO99/57280的SEQ ID NO:818；来自WO99/57280的SEQ ID NO:864；来自WO99/57280的SEQ ID NO:866；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1196；来自WO99/57280的SEQ IDNO:1272；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1274；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1640；来自WO99/57280的SEQ ID NO:1788；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2288；来自WO99/57280的SEQID NO:2466；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2554出；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2576；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2606；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2608；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2616；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2668；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2780；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2932；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2958；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2970；来自WO99/57280的SEQ ID NO:2988(各前述氨基酸序列均通过对所引文献的引用纳入本文)，或含以下某氨基酸序列的多肽：(a)与所述序列具有50％或更高的相同性(如60％、70％、80％、90％、95％、99％或更高)；和/或(b)包含所述序列的至少n个连续氨基酸的片段，其中n是7个或更多(如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多个)。(b)的优选片段包含来自相关序列的表位。在免疫原性组合物中可包括超过一种(例如，2、3、4、5、6种)这些多肽。
所述fHBP抗原落入三种不同变体(WO2004/048404)。基于本文所公开免疫原性组合物的利用本文所公开化合物之一的脑膜炎奈瑟球菌血清群疫苗可包含单一fHBP变体，但包括来自两种或所有三种变体的fHBP将是有益的。因此，免疫原性组合物可包含两种或三种不同的纯化fHBP的组合，所述fHBP选自：(a)第一蛋白，所含氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少a％的序列相同性和/或所含氨基酸序列由SEQ ID NO:1的至少x个连续氨基酸的片段组成；(b)第二蛋白，所含氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少b％的序列相同性和/或所含氨基酸序列由SEQ ID NO:2的至少y个连续氨基酸的片段组成；和/或(c)第三蛋白，所含氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少c％的序列相同性和/或所含氨基酸序列由SEQ ID NO:3的至少z个连续氨基酸的片段组成。
SEQ ID NO:1
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:2
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO:3
VAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ.
a值至少为85，例如86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或更高。b值至少为85，例如86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或更高。c值至少为85，例如86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或更高。a、b和c的值本质上彼此并不相关。
x值至少为7，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250)。y值至少为7，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250)。z值至少为7，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、225、250)。x、y和z的值本质上彼此并不相关。
在一些实施方式中，如本文公开的免疫原性组合物包括脂化的fHBP蛋白，例如在N-末端半胱氨酸处脂化。在其他实施方式中，它们未脂化。
如本文公开的有用免疫原性组合物包括纯化蛋白，其含如下混合物：(i)含SEQ IDNO:4所示氨基酸序列的第一多肽；(ii)含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的第二多肽；和(iii)含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的第三多肽。参见Giuliani等，(2006)Proc NatlAcad Sci U S A 103(29):10834-9和WO2004/032958。如本文公开的有用免疫原性组合物包括纯化蛋白，其含如下混合物：(i)与SEQ ID NO:4所示氨基酸序列有至少a％序列相同性的第一多肽；(ii)与SEQ ID NO:5所示氨基酸序列有至少b％序列相同性的第二多肽；和(iii)与SEQ ID NO:6所示氨基酸序列有至少a％序列相同性的第三多肽。
SEQ ID NO:4
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGGQDMAAVSEENTGNGGAAATDKPKNEDEGAQNDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPAGNMENQAPDAGESEQPANQPDMANTADGMQGDDPSAGGENAGNTAAQGTNQAENNQTAGSQNPASSTNPSATNSGGDFGRTNVGNSVVIDGPSQNITLTHCKGDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVADSVQMKGINQYIIFYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGSYALRVQGEPSKGEMLAGTAVYNGEVLHFHTENGRPSPSRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSGDGLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTWTENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGVFAGKKEQDGSGGGGATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKIDITIPVANLQSGSQHFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTAPVKLKAEKFNCYQSPMAKTEVCGGDFSTTIDRTKWGVDYLVNVGMTKSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO:5
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGYTPQISVVGYNRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTAGDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATQARVKIVTYGNVTYVMGILTPEEQAQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:6
ATNDDDVKKAATVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDIDEDGTITKKDATAADVEADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALDATTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRIDGLNATTEKLDTRLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKETRQGLAEQAALSGLFQPYNVG.
细菌囊泡抗原
如本文公开的免疫原性组合物可包括外膜囊泡。这些外膜囊泡可获自各种病原菌并用作本文所公开免疫原性组合物的抗原组分。用作这类免疫原性组合物抗原组分的囊泡包括任何通过破坏细菌外膜以由此形成包含外膜蛋白组分的囊泡而获得的脂蛋白体囊泡。因此该术语包括OMV(有时称为“小泡”)、微囊泡(MV，参见如WO 02/09643)和“天然OMV”(“NOMV”，参见如Katial等，(2002)Infect.Immun.70:702-707)。包含一种或多种病原菌囊泡的本文所公开免疫原性组合物可用于治疗或预防此类病原菌的感染和相关疾病与紊乱。
MV和NOMV是天然产生的膜囊泡，在细菌生长时自发形成并释放到培养基中。MV可以通过以下方法获得：在肉汤培养基中培养细菌如奈瑟菌，将全细胞与肉汤培养基中较小的MV分离(例如，通过过滤或低速离心，只沉淀细胞而不沉淀较小囊泡)，然后从细胞耗尽的培养基中收集MV(例如，通过过滤、示差沉淀或MV聚集，通过高速离心沉淀MV)。一般可以根据培养基中产生的MV的量来选择用于生产MV的菌株(参见例如，美国专利6,180,111和WO01/34642，其描述了具有高MV产量的奈瑟菌)。
从细菌人工制备OMV，可以利用去污剂处理(例如用脱氧胆酸盐)或通过非去污剂方式(例如参见WO04/019977)进行制备。获取适当OMV制品的方法是本领域熟知的。形成OMV的技术包括：用胆酸盐去污剂(例如，石胆酸、鹅脱氧胆酸、乌索脱氧胆酸、脱氧胆酸、胆酸、乌索胆酸等的盐，优选用脱氧胆酸钠(EP0011243和Fredriksen等，(1991)NIPH Ann.14(2):67-80)处理奈瑟球菌)在不会沉淀去污剂的充分高的pH下(参见如WO01/91788)处理细菌。其它技术基本可以在没有去污剂的情况下(参见如WO04/019977)利用如超声、均化、微流化、空化、渗透压休克、研磨、弗氏压碎、混合等技术进行。不使用去污剂或使用低去污剂的方法可以保留有用的抗原，如奈瑟菌OMV中的NspA。因此一种方法可以使用含有约0.5％或更低如约0.2％、约0.1％、<0.05％或0浓度的脱氧胆酸盐的OMV提取缓冲液。
WO05/004908描述了一种制备OMV的有用过程，涉及对粗OMV进行超滤，代替高速离心。该过程可以涉及在超滤后进行超离心的步骤。
囊泡可从任何病原菌株如脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria minigtidis)制备以用于本发明。B群脑膜炎奈瑟球菌的囊泡可以是任意血清型(例如，1、2a、2b、4、14、15、16等)、任意血清亚型和任意免疫型(例如，L1；L2；L3；L3,3,7；L10等)。脑膜炎球菌可以来自任何适当谱系，包括高侵袭性与超毒力谱系，如以下7种超毒力谱系中任一种：亚组I、亚组III、亚组IV 1、ET 5复合物、ET 37复合物、A4簇、谱系3。这些谱系通过多位点酶电泳(MLEE)确定，但也使用多位点序列分型(MLST)对脑膜炎球菌分类，例如ET 37复合物为MLST所分的ST 11复合物，ET 5复合物为ST-32(ET-5)，谱系3为ST 41/44等。囊泡可从具有下列亚型之一的菌株制得：P1.2；P1.2,5；P1.4；P1.5；P1.5,2；P1.5,c；P1.5c,10；P1.7,16；P1.7,16b；P1.7h,4；P1.9；P1.15；P1.9,15；P1.12,13；P1.13；P1.14；P1.21,16；P1.22,14。
本文公开的免疫原性组合物中所含囊泡可从野生型病原菌株如脑膜炎奈瑟球菌或从突变菌株制得。例如，WO98/56901公开了从具有经修饰fur基因的脑膜炎奈瑟球菌获得的囊泡制品。WO02/09746教授了nspA表达可随同时敲除porA与cps而上调。WO02/0974、WO02/062378和WO04/014417描述了用于产生OMV的其他脑膜炎奈瑟球菌敲除突变体。WO06/081259公开了fHBP上调的囊泡。Claassen等(1996)14(10):1001-8描述从表达6种不同PorA亚型的改良菌株进行囊泡构建。也可以使用通过敲除参与LPS生物合成的酶而获得的具有低内毒素水平的突变奈瑟球菌(参见例如WO99/10497和Steeghs等(2001)i20:6937-6945)。这些或其它突变体均可以与本发明一起使用。
因此，在一些实施方式中，本文所公开免疫原性组合物中包括的B群脑膜炎奈瑟球菌可表达多于一种PorA亚型。之前已构建出6价和9价PorA菌株。所述菌株可表达2、3、4、5、6、7、8或9种PorA亚型：P1.7,16；P1.5-1,2-2；P1.19,15-1；P1.5-2,10；P1.121.13；P1.7-2,4；P1.22,14；P1.7-1,1和/或P1.18-1,3,6。在其它实施方式中，可下调菌株中PorA的表达，例如，PorA的量相对于野生型水平(例如相对于WO03/105890中公开的H44/76菌株)减少了至少20％(例如，>30％、>40％、>50％、>60％、>70％、>80％、>90％、>95％等)，或甚至被敲除。
在一些实施方式中，B群脑膜炎奈瑟球菌可过表达(相对于相应的野生型菌株)某些蛋白质。例如，菌株可过表达NspA、蛋白287(WO01/52885—也称作NMB2132和GNA2132)，一种或多种fHBP(WO06/081259和美国专利公开2008/0248065—也称作741蛋白、NMB1870和GNA1870)，TbpA和/或TbpB(WO00/25811)，Cu,Zn-超氧化物歧化酶(WO00/25811)等。
在一些实施方式中，B群脑膜炎奈瑟球菌菌株可包括一种或多种敲除和/或过表达突变。下调和/或敲除的优选基因包括：(a)Cps、CtrA、CtrB、CtrC、CtrD、FrpB、GalE、HtrB/MsbB、LbpA、LbpB、LpxK、Opa、Opc、PilC、PorB、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA和/或TbpB(WO01/09350)；(b)CtrA、CtrB、CtrC、CtrD、FrpB、GalE、HtrB/MsbB、LbpA、LbpB、LpxK、Opa、Opc、PhoP、PilC、PmrE、PmrF、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA和/或TbpB(WO02/09746)；(c)ExbB、ExbD、rmpM、CtrA、CtrB、CtrD、GalE、LbpA、LpbB、Opa、Opc、PilC、PorB、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA和/或TbpB(WO02/062378)；和(d)CtrA、CtrB、CtrD、FrpB、OpA、OpC、PilC、PorB、SiaD、SynA、SynB和/或SynC(WO04/014417)。
在使用突变菌株时，在一些实施方式中，可以具有一个或多个或全部下列特征：(i)LgtB和/或GalE下调或敲除，以截短脑膜炎球菌LOS；(ii)TbpA上调；(iii)Hsf上调；(iv)Omp85上调；(v)LbpA上调；(vi)NspA上调；(vii)PorA敲除；(viii)FrpB下调或敲除；(ix)Opa下调或敲除；(x)Opc下调或敲除；(xii)cps基因复合体缺失。截短的LOS可以不包括唾液酸-乳糖-N-新四糖表位，例如，其可以为半乳糖缺陷型LOS。所述LOS可以没有α链。
如果LOS存在于囊泡中，则可对囊泡进行处理，以连接其LOS与蛋白质组分(“内泡”偶联(WO04/014417))。
如本文公开的免疫原性组合物可包括来自不同菌株的囊泡的混合物。例如，WO03/105890公开了含多价脑膜炎球菌囊泡组合物的疫苗，含有衍生自具有所用国家的普遍性血清亚型的脑膜炎球菌菌株的第一囊泡，和衍生自无需具有所用国家普遍性的血清亚型菌株的第二囊泡。WO06/024946公开了不同囊泡的有用组合。在一些实施方式中，可使用各来自L2和L3免疫型菌株的囊泡组合。
可从B群以外的脑膜炎奈瑟球菌血清群(例如，WO01/91788公开了用于A群的方法)制备基于囊泡的抗原。因此，本文所公开免疫原性组合物可包含的囊泡由非血清群B(例如、A、C、W135和/或Y)制得和来自非奈瑟菌的细菌病原体。
病毒抗原
适用于本文所提供免疫原性组合物的病毒抗原包括但不限于灭活(或杀死的)病毒，减毒病毒，裂解病毒制剂、纯化的亚基制剂，可分离、纯化或衍生自病毒的病毒蛋白，病毒样颗粒(VLP)以及可分离、纯化或衍生自病毒或重组合成的多核苷酸抗原。在某些实施方式中，病毒抗原可衍生自在细胞培养物或其它底物上增殖的病毒。在其他实施方式中，病毒抗原为重组表达。在某些实施方式中，病毒抗原优选包括在其生命周期的至少一个阶段中暴露于病毒表面的表位。病毒抗原优选在多种血清型或分离物之间具有保守性。适用于本文所提供免疫原性组合物的病毒抗原包括但不限于衍生自一种或多种下述病毒的抗原以及下面鉴定的特定抗原示例。
正粘病毒(Orthomyxovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自正粘病毒如流感病毒A、B和C型的抗原。在某些实施方式中，正粘病毒抗原选自一种或多种病毒蛋白，包括血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M1)、膜蛋白(M2)、一种或多种转录酶组分(PB1、PB2和PA)。在某些实施方式中，病毒抗原包括HA和NA。在某些实施方式中，流感抗原衍生自暴发流行期之间(年度)的流感毒株，而在其他实施方式中，流感抗原衍生自可能引起流行爆发的毒株(即与目前流行毒株的血凝素相比具有新型血凝素的流感毒株，或对禽类对象具有致病性并可能水平传播给人群的流感毒株，或对人具有致病性的流感毒株)。
副粘病毒(Paramyxoviridae)：病毒抗原包括但不限于衍生自副粘病毒，如肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、偏肺病毒和麻疹病毒(麻疹)的抗原。
肺炎病毒(Pneumovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自肺炎病毒，如呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒，小鼠肺炎病毒和火鸡鼻气管炎病毒的抗原。肺炎病毒优选为RSV。在某些实施方式中，肺炎病毒抗原选自一种或多种以下蛋白，包括表面蛋白融合物(F)，糖蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)，基质蛋白M和M2，核衣壳蛋白N、P和L，以及非结构蛋白NS1和NS2。在其他实施方式中，肺炎病毒抗原包括F、G和M。在某些实施方式中，肺炎病毒抗原也可配制入或衍生自嵌合病毒，仅举例来说，如同时含RSV与PIV组分的嵌合型RSV/PIV病毒。
副粘病毒(Paramyxovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自副粘病毒，如1-4型副流感病毒(PIV)、腮腺炎、仙台病毒、猴病毒5、牛副流感病毒、尼帕病毒、亨尼帕病毒和新城疫病毒的抗原。在某些实施方式中，副粘病毒为PIV或流行性腮腺炎病毒。在某些实施方式中，副粘病毒抗原选自一种或多种以下蛋白质：血凝素-神经氨酸酶(HN)、融合蛋白F1和F2、核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)和基质蛋白(M)。在其他实施方式中，副粘病毒蛋白包括HN、F1和F2。在某些实施方式中，副粘病毒抗原也可配制入或衍生自嵌合病毒，仅举例来说，如同时含RSV与PIV组分的嵌合型RSV/PIV病毒。市售流行性腮腺炎疫苗包括单价形式或与麻疹和风疹疫苗(MMR)联用的减毒性活流行性腮腺炎病毒。在其他实施方式中，副粘病毒是尼帕病毒或亨尼帕病毒，抗原选自一种或多种以下蛋白质：融合(F)蛋白、糖(G)蛋白、基质(M)蛋白、核衣壳(N)蛋白、大(L)蛋白和磷蛋白(P)。
痘病毒(Poxviridae)：病毒抗原包括但不限于衍生自正痘病毒(Orthopoxvirus)如天花(Variola vera)的抗原，包括但不限于重型天花(Variola major)和轻型天花(Variola minor)。
偏肺病毒(Metapneumovirus)：病毒抗原包括但不限于偏肺病毒如人偏肺病毒(hMPV)和禽偏肺病毒(aMPV)。在某些实施方式中，偏肺病毒抗原选自一种或多种以下蛋白，包括表面蛋白融合物(F)，糖蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)，基质蛋白M和M2，核衣壳蛋白N、P和L。在其他实施方式中，偏肺病毒抗原包括F、G和M。在某些实施方式中，偏肺病毒抗原也可配制成嵌合病毒形式或衍生自嵌合病毒。
麻疹病毒(Morbillivirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自麻疹病毒如麻疹的抗原。在某些实施方式中，麻疹病毒抗原选自一种或多种以下蛋白质：血凝素(H)、糖蛋白(G)、融合因子(F)、大蛋白(L)、核蛋白(NP)、聚合酶磷蛋白(P)和基质(M)。市售麻疹疫苗包括减毒的活麻疹病毒，通常与流行性腮腺炎和风疹(MMR)联用。
小核糖核酸病毒(Picornavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自小核糖核酸病毒，如肠道病毒、鼻病毒、嗜肝RNA病毒、心脏病毒和口蹄疫病毒的抗原。在某些实施方式中，抗原衍生自肠道病毒，而在其他实施方式中，所示肠道病毒是脊髓灰质炎病毒。在其他实施方式中，抗原衍生自鼻病毒。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
肠道病毒(Enterovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自肠道病毒的抗原，如1、2或3型脊髓灰质炎病毒，1-22型和24型柯萨奇病毒A，1-6型柯萨奇病毒B，1-9、11-27和29-34型艾柯(ECHO)病毒和肠道病毒68-71。在某些实施方式中，抗原衍生自肠道病毒，而在其他实施方式中，所述肠道病毒是脊髓灰质炎病毒。在某些实施方式中，肠道病毒抗原选自一种或多种衣壳蛋白VP0、VP1、VP2、VP3和VP4。市售脊髓灰质炎疫苗包括灭活的脊髓灰质炎疫苗(IPV)和口服脊髓灰质炎病毒疫苗(OPV)。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒。
布尼亚病毒(Bunyavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自正布尼亚病毒(Orthobunyavirus)如加利福尼亚脑炎病毒、白蛉病毒(Phlebovirus)如裂谷热病毒或内罗病毒(Nairovirus)如克里米亚-刚果出血热的抗原。
鼻病毒(Rhinovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自鼻病毒的抗原。在某些实施方式中，鼻病毒抗原选自一种或多种以下衣壳蛋白：VP0、VP1、VP2、VP2和VP4。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
嗜肝RNA病毒(Heparnavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自嗜肝RNA病毒，仅举例来说如甲型肝炎病毒(HAV)的抗原。市售HAV疫苗包括灭活的HAV疫苗。
披膜病毒(Togavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自披膜病毒，如风疹病毒、α病毒或动脉炎病毒的抗原。在某些实施方式中，抗原衍生自风疹病毒属，仅举例来说如风疹病毒。在某些实施方式中，披膜病毒抗原选自E1、E2、E3、C、NSP-1、NSPO-2、NSP-3或NSP-4。在某些实施方式中，披膜病毒抗原选自E1、E2或E3。市售风疹疫苗含有冷适应活病毒，通常与流行性腮腺炎和麻疹疫苗(MMR)联用。
黄病毒(Flavivirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自黄病毒，如蜱传脑炎(TBE)病毒、登革热(1、2、3或4型)病毒、黄热病毒、日本脑炎病毒、开萨诺森林病毒、西尼罗河脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、俄国春夏脑炎病毒、波瓦生脑炎病毒的抗原。在某些实施方式中，黄病毒抗原选自PrM、M、C、E、NS-1、NS-2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5。在某些实施方式中，黄病毒抗原选自PrM、M和E。市售TBE疫苗包括灭活病毒疫苗。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
瘟病毒(Pestivirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自瘟病毒，如牛病毒性腹泻(BVDV)、猪瘟(CSFV)或边界病(BDV)病毒的抗原。
嗜肝DNA病毒(Hepadnavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自嗜肝DNA病毒如乙型肝炎病毒的抗原。在某些实施方式中，嗜肝DNA病毒抗原选自表面抗原(L、M和S)、核心抗原(HBc、HBe)。市售HBV疫苗包括含有表面抗原S蛋白的亚基疫苗。
丙肝病毒：病毒抗原包括但不限于衍生自丙肝病毒(HCV)的抗原。在某些实施方式中，HCV抗原选自E1、E2、E1/E2、NS345聚蛋白、NS345-核心聚蛋白、核心和/或非结构区肽中的一种或多种。在某些实施方式中，丙肝病毒抗原选自以下一种或多种：HCV E1和/或E2蛋白，E1/E2异二聚体复合物、核心蛋白和非结构蛋白，或这些抗原的片段，其中可任选地修饰所述非结构蛋白以在保持免疫原性的同时消除酶活性。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
杆状病毒(Rhabdovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自杆状病毒如恐水病病毒(狂犬病病毒)和水泡病毒(VSV)的抗原。杆状病毒抗原可选自糖蛋白(G)、核蛋白(N)、大蛋白(L)、非结构蛋白(NS)。市售狂犬病病毒疫苗包含用人双倍体细胞或胎猕猴肺细胞培养的灭活病毒。
杯状病毒(Caliciviridae)：病毒抗原包括但不限于衍生自杯状病毒，如诺沃克病毒和诺沃克样病毒，如夏威夷病毒和雪山病毒的抗原。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
冠状病毒(Coronavirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自冠状病毒、SARS、人呼吸道冠状病毒、禽传染性支气管炎(IBV)、小鼠肝炎病毒(MHV)和猪传染性肠胃炎病毒(TGEV)的抗原。在某些实施方式中，冠状病毒抗原选自刺突(S)、包膜(E)、基质(M)、核衣壳(N)和血凝素-酯酶糖蛋白(HE)。在某些实施方式中，冠状病毒抗原衍生自SARS病毒。在某些实施方式中，冠状病毒衍生自WO 04/92360所述的SARS病毒抗原。
逆转录病毒(Retrovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自逆转录病毒，如肿瘤病毒、慢病毒或泡沫病毒的抗原。在某些实施方式中，肿瘤病毒抗原衍生自HTLV-1、HTLV-2或HTLV-5。在某些实施方式中，慢病毒抗原衍生自HIV-1或HIV-2。在某些实施方式中，抗原衍生自HIV-1亚型(或进化支)，包括但不限于HIV-1亚型(或进化支)A、B、C、D、F、G、H、J、K、O。在其他实施方式中，抗原衍生自HIV-1循环重组形式(CRF)，包括但不限于A/B、A/E、A/G、A/G/I等。在某些实施方式中，逆转录病毒抗原选自gag、pol、env、tax、tat、rex、rev、nef、vif、vpu和vpr。在某些实施方式中，HIV抗原选自gag(p24gag和p55gag)、env(gp160和gp41)、pol、tat、nef、rev vpu、小蛋白(优选p55gag和gp140v缺失)。在某些实施方式中，HIV抗原衍生自一种或多种以下菌株：HIVIIIb、HIVSF2、HIVLAV、HIVLAI、HIVMN、HIV-1CM235、HIV-1US4、HIV-1SF162、HIV-1TV1、HIV-1MJ4。在某些实施方式中，抗原衍生自人内源性逆转录病毒，包括但不限于HERV-K(“旧型”HERV-K和“新型”HERV-K)。
呼肠病毒(Reovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自呼肠病毒，如正呼肠病毒、轮状病毒、环状病毒或科罗拉多蜱传热病毒的抗原。在某些实施方式中，呼肠病毒抗原选自结构蛋白λ1、λ2、λ3、μ1、μ2、σ1、σ2或σ3，或非结构蛋白σNS、μNS或σ1s。在某些实施方式中，呼肠病毒抗原衍生自轮状病毒。在某些实施方式中，轮状病毒抗原选自VP1、VP2、VP3、VP4(或切割产物VP5和VP8)、NSP 1、VP6、NSP3、NSP2、VP7、NSP4或NSP5。在某些实施方式中，轮状病毒抗原包括VP4(或切割产物VP5和VP8)和VP7。
细小病毒(Parvovirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自细小病毒如细小病毒B19的抗原。在某些实施方式中，细小病毒抗原选自VP-1、VP-2、VP-3、NS-1和NS-2。在某些实施方式中，细小病毒抗原是衣壳蛋白VP-1或VP-2。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
丁肝病毒(HDV)：病毒抗原包括但不限于衍生自HDV的抗原，特别是HDV的δ-抗原。
戊肝病毒(HEV)：病毒抗原包括但不限于衍生自HEV的抗原。
庚肝病毒(HGV)：病毒抗原包括但不限于衍生自HGV的抗原。
人疱疹病毒(Human Herpesvirus)：病毒抗原包括但不限于衍生自人疱疹病毒，仅举例来说如单纯疱疹病毒(HSV)，水痘-带状疱疹病毒(VZV)，EB病毒(EBV)，巨细胞病毒(CMV)，人疱疹病毒6(HHV6)，人疱疹病毒7(HHV7)和人疱疹病毒8(HHV8)的抗原。在某些实施方式中，人疱疹病毒抗原选自立即早期蛋白(α)、早期蛋白(β)和晚期蛋白(γ)。在某些实施方式中，HSV抗原衍生自HSV-1或HSV-2毒株。在某些实施方式中，HSV抗原选自糖蛋白gB、gC、gD或gH，融合蛋白(gB)，或免疫逃避蛋白(gC、gE或gI)。在某些实施方式中，VZV抗原选自核心、核衣壳、内膜或包膜蛋白。可市售获得减毒的活VZV疫苗。在某些实施方式中，EBV抗原选自早期抗原(EA)蛋白、病毒衣壳抗原(VCA)和膜抗原(MA)的糖蛋白。在某些实施方式中，CMV抗原选自衣壳蛋白、包膜糖蛋白(如gB与gH)和内膜蛋白。在其他实施方式中，CMV抗原可选自一种或多种以下蛋白质：pp65、IE1、gB、gD、gH、gL、gM、gN、gO、UL128、UL129、gUL130、UL150、UL131、UL33、UL78、US27、US28、RL5A、RL6、RL10、RL11、RL12、RL13、UL1、UL2、UL4、UL5、UL6、UL7、UL8、UL9、UL10、UL11、UL14、UL15A、UL16、UL17、UL18、UL22A、UL38、UL40、UL41A、UL42、UL116、UL119、UL120、UL121、UL124、UL132、UL147A、UL148、UL142、UL144、UL141、UL140、UL135、UL136、UL138、UL139、UL133、UL135、UL148A、UL148B、UL148C、UL148D、US2、US3、US6、US7、US8、US9、US10、US11、US12、US13、US14、US15、US16、US17、US18、US19、US20、US21、US29、US30和US34A。CMV抗原还可以是一种或多种CMV蛋白的融合体，仅举例来说如pp65/IE1(Reap等，Vaccine(2007)25:7441-7449)。在某些实施方式中，将抗原配制入病毒样颗粒(VLP)。
乳头状多瘤空泡病毒(Papovaviruses)：抗原包括但不限于衍生自乳头状多瘤空泡病毒如乳头瘤病毒和多瘤病毒的抗原。在某些实施方式中，乳头瘤病毒包括HPV血清型1、2、4、5、6、8、11、13、16、18、31、33、35、39、41、42、47、51、57、58、63和65。在某些实施方式中，HPV抗原衍生自血清型6、11、16或18。在某些实施方式中，HPV抗原选自衣壳蛋白(L1)和(L2)或E1-E7，或其融合物。在某些实施方式中，HPV抗原配制为病毒样颗粒(VLPs)。在某些实施方式中，多瘤病毒包括BK病毒和JK病毒。在某些实施方式中，多瘤病毒抗原选自VP1、VP2或VP3。
腺病毒(Adenovirus)：抗原包括衍生自腺病毒的抗原。在某些实施方式中，腺病毒抗原衍生自腺病毒血清型36(Ad-36)。在某些实施方式中，抗原衍生自编码Ad-36外壳蛋白或其片段的蛋白或肽序列(WO 2007/120362)。
还提供包含在Vaccines(《疫苗》)第4版(Plotkin和Orenstein编，2004)；MedicalMicrobiology(《医学微生物学》)第4版(Murray等编，2002)；Virology(《病毒学》)第3版(W.K.Joklik编，1988)；Fundamental Virology(《基础病毒学》)第2版(B.N.Fields和D.M.Knipe编，1991)中的抗原、组合物、方法和微生物，考虑将它们与本文所述免疫原性组合物联用。
真菌抗原
用于本文所提供免疫原性组合物的真菌抗原包括但不限于衍生自一种或多种下述真菌的抗原。
真菌抗原衍生自皮肤真菌，包括：絮状表皮霉菌(Epidermophyton floccusum)，奥杜安氏小孢子菌(Microsporum audouini)，犬小孢子菌(Microsporum canis)，扭曲小孢子菌(Microsporum distortum)，马小孢子菌(Microsporum equinum)，石膏样小孢子菌(Microsporum gypsum)，猪小孢子菌(Microsporum nanum)，同心性毛癣菌(Trichophytonconcentricum)，马毛癣菌(Trichophyton equinum)，鸡毛癣菌(Trichophyton gallinae)，石膏样毛癣菌(Trichophyton gypseum)，麦格毛癣菌(Trichophyton megnini)，须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)，发癣毛癣菌(Trichophyton quinckeanum)，红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)，许兰毛癣菌(Trichophyton schoenleini)，断发毛癣菌(Trichophyton tonsurans)，疣状毛癣菌(Trichophyton verrucosum)，疣状毛癣菌(T.verrucosum)album变种、discoides变种、ochraceum变种，紫色毛癣菌(Trichophytonviolaceum)和/或蜜块状毛癣菌(Trichophyton faviforme)；和
真菌病原体衍生自烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黄曲霉(Aspergillusflavus)、黑曲霉(Aspergillus niger)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、土曲霉(Aspergillus terreus)、聚多曲霉(Aspergillus sydowi)、黄曲菌(Aspergillusflavatus)、灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)、头状芽裂殖菌(Blastoschizomycescapitatus)、白假丝酵母(Candida albicans)、烯醇酶假丝酵母(Candida enolase)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、光滑假丝酵母(Candida glabrata)、克柔假丝酵母(Candida krusei)、近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、类星形假丝酵母(Candidastellatoidea)、克鲁斯假丝酵母(Candida kusei)、帕拉克斯假丝酵母(Candidaparakwsei)、葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)、伪热带假丝酵母(Candidapseudotropicalis)、季也蒙假丝酵母(Candida guilliermondi)、卡氏枝孢霉(Cladosporium carrionii)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatidis)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、棒地霉(Geotrichum clavatum)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、微孢子虫(Microsporidia)、脑炎微孢子虫属(Encephalitozoon spp)、表层角结膜炎微孢子虫(Septata intestinalis)和肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)；较不常见的短粒虫属(Brachiola spp.)、微胞子虫属(Microsporidium spp.)、微孢子虫属(Nosema spp.)、皮里虫属(Pleistophora spp)、气管普孢虫属(Trachipleistophora spp.)、条孢虫属(Vittaforma spp.)、巴西芽生菌(Paracoccidioides brasiliensis)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、苜蓿腐酶(Pythiumn insidiosum)、皮屑芽胞菌(Pityrosporum ovale)、酿酒酵母(Sacharomycescerevisae)、布拉酵母(Saccharomyces boulardii)、粟酒酵母(Saccharomyces pombe)、尖端赛多孢子菌(Scedosporium apiosperum)、申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)、白吉利丝孢酵母(Trichosporon beigelii)、弓形虫(Toxoplasma gondii)、马尔尼菲青霉菌(Penicillium marneffei)、马拉色菌属(Malassezia spp.)、着色真菌属(Fonsecaeaspp.)、王氏霉菌属(Wangiella spp.)、孢子丝菌属(Sporothrix spp.)、蛙粪霉属(Basidiobolus spp.)、耳霉属(Conidiobolus spp.)、根霉属(Rhizopus spp.)、毛霉属(Mucor spp.)、犁头霉属(Absidia spp.)、被孢霉属(Mortierella spp.)、小克银汉霉属(Cunninghamella spp.)、瓶霉属(Saksenaea spp.)、链格孢菌属(Alternaria spp.)、弯孢菌属(Curvularia spp.)、长蠕孢菌属(Helminthosporium spp.)、镰胞菌属(Fusariumspp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、青霉属(Penicillium spp.)、链核盘菌属(Monoliniaspp.)、丝核菌属(Rhizoctonia spp.)、拟青霉属(Paecilomyces spp.)、皮司霉属(Pithomyces spp.)和枝孢霉属(Cladosporium spp.)。
在某些实施方式中，制备真菌抗原的工艺包括如下方法：提取溶解部分，使之与可获自细胞壁已基本除去或至少部分除去的真菌细胞的不溶性部分分离，其特征在于，所述工艺包括以下步骤：获得活真菌细胞；获得细胞壁已基本除去或至少部分除去的真菌细胞；破碎细胞壁已基本除去或至少部分除去的真菌细胞；获得不溶性部分；以及从所述不溶性组分中提取和分离溶解部分。
原生动物抗原/病原体
用于本文所提供免疫原性组合物的原生动物抗原/病原体包括但不限于衍生自一种或多种下列原生动物的抗原：痢疾内变形虫(Entamoeba histolytica)、贾第鞭毛虫(Giardia lambli)、小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、卡宴环孢子球虫(Cyclosporacayatanensis)和弓形虫(Toxoplasma)。
植物抗原/病原体
用于本文所提供免疫原性组合物的植物抗原/病原体包括但不限于衍生自蓖麻(Ricinus communis)的抗原。
STD抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含衍生自性传播疾病(STD)的一种或多种抗原。在某些实施方式中，这种抗原可预防STD，如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软下疳。在其他实施方式中，这种抗原可治疗STD，如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软下疳。此类抗原衍生自一种或多种病毒或细菌STD。在某些实施方式中，病毒STD抗原衍生自HIV、单纯疱疹病毒(HSV-1和HSV-2)、人乳头瘤病毒(HPV)和肝炎(HCV)。在某些实施方式中，细菌STD抗原衍生自淋病奈瑟球菌(Neiserria gonorrhoeae)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、苍白密螺旋体(Treponema pallidum)、杜氏嗜血菌(Haemophilus ducreyi)、大肠杆菌和无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
呼吸道抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含衍生自导致呼吸道疾病的病原体的一种或多种抗原。仅举例来说，此类呼吸道抗原衍生自呼吸道病毒，如正粘病毒(流感)、肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、VZV和冠状病毒(SARS)。在某些实施方式中，呼吸道抗原衍生自导致呼吸道疾病的细菌，仅举例来说如肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、百日咳博代杆菌(Bordetella pertussis)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、炭疽杆菌(Bacillus anthracis)和卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis)。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
儿童疫苗抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含适用于儿童对象的一种或多种抗原。儿童对象通常年龄小于约3岁，或小于约2岁，或小于约1岁。儿童用抗原可在6个月、1年、2年或3年的时间中多次给药。儿童用抗原衍生自可靶向儿童群体的病毒和/或儿童群体易受感染的病毒。儿童用病毒抗原包括但不限于衍生自正粘病毒(流感)、肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV和腮腺炎)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、肠道病毒(脊髓灰质炎)、HBV、冠状病毒(SARS)和水痘带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)的一种或多种抗原。儿童用细菌抗原包括衍生自肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)、酿脓链球菌(A群链球菌)、粘膜炎莫拉菌、百日咳博德特菌、金黄色葡萄球菌、破伤风梭菌(破伤风)、白喉棒状杆菌(白喉)、B型流感嗜血杆菌(Hib)、绿脓假单胞菌、无乳链球菌(B群链球菌)和大肠杆菌的一种或多种抗原。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
适用于老年人或免疫低下个体的抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含适用于老年人或免疫低下个体的对象的一种或多种抗原。这类个体可能需要更为频繁地接种较高剂量或用佐剂辅助的制剂，以提高他们对靶抗原的免疫应答。靶向用于老年人或免疫低下个体的抗原包括衍生自一种或多种以下病原体的抗原：脑膜炎奈瑟球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌(A群链球菌)、粘膜炎莫拉菌、百日咳博德特菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、破伤风梭菌(破伤风)、白喉棒状杆菌(白喉)、B型流感嗜血杆菌(Hib)、绿脓假单胞菌、嗜肺军团菌、无乳链球菌(B群链球菌)、粪肠球菌、幽门螺杆菌、肺炎衣原体、正粘病毒(流感)、肺炎病毒(RSV)、副粘病毒(PIV和腮腺炎)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、肠道病毒(脊髓灰质炎)、HBV、冠状病毒(SARS)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)。以上描述了衍生自这些病原体的特定抗原的例子。
适用于青少年疫苗的抗原
在某些实施方式中，本文提供的免疫原性组合物包含适用于青少年对象的一种或多种抗原。青少年需要加强的先前已给予的儿童用抗原。上文描述了适用于青少年的儿童用抗原。此外，青少年是接受衍生自STD病原体抗原的目标人群，以保证在性行为开始之前产生保护性或治疗性免疫力。上文描述了适用于青少年的STD抗原。
肿瘤抗原
在某些实施方式中，肿瘤抗原或癌抗原与本文提供的免疫原性组合物联用。在某些实施方式中，肿瘤抗原是含肽的肿瘤抗原，如多肽肿瘤抗原或糖蛋白肿瘤抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原是含糖的肿瘤抗原，如糖脂肿瘤抗原或神经节苷脂肿瘤抗原。在某些实施方式中，肿瘤抗原是表达含多肽的肿瘤抗原的多核苷酸包含肿瘤抗原，例如，RNA载体构建物或DNA载体构建物，如质粒DNA。
适用于与本文所提供免疫原性组合物联用的肿瘤抗原包括各种分子，如(a)含多肽的肿瘤抗原，包括多肽(长度范围可以是(例如)8-20个氨基酸，虽然超出此长度以外的也常见)、脂多肽和糖蛋白，(b)含糖肿瘤抗原，包括多糖、粘蛋白、神经节苷脂、糖脂和糖蛋白；(c)表达抗原性多肽的多核苷酸。
在某些实施方式中，肿瘤抗原是例如：(a)与癌细胞相关的全长分子，(b)相同的同源和修饰形式，包括含有缺失、添加和/或取代部分的分子，以及(c)相同的片段。在某些实施方式中，肿瘤抗原以重组形式提供。在某些实施方式中，肿瘤抗原包括例如：CD8+淋巴细胞识别的I型-限制性抗原或CD4+淋巴细胞识别的II型-限制性抗原。
在某些实施方式中，肿瘤抗原包括但不限于(a)睾丸癌抗原如NY-ESO-1、SSX2、SCP1以及RAGE、BAGE、GAGE和MAGE家族多肽，如GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6和MAGE-12(例如，可用于检测黑色素瘤、肺肿瘤、头颈肿瘤、NSCLC瘤、乳腺肿瘤、胃肠道肿瘤和膀胱肿瘤)，(b)突变抗原，例如p53(与各种实体瘤如结直肠癌、肺癌、头颈癌有关)、p21/Ras(例如，与黑色素瘤、胰腺癌和结直肠癌有关)、CDK4(例如，与黑色素瘤有关)、MUM1(例如，与黑色素瘤有关)、胱冬酶-8(例如，与头颈癌有关)、CIA0205(例如，与膀胱癌有关)、HLA-A2-R1701、β联蛋白(例如，与黑色素瘤有关)、TCR(例如，与T-细胞非霍奇金淋巴瘤有关)、BCR-abl(例如，与慢性髓细胞性白血病有关)、磷酸丙糖异构酶、KIA0205、CDC-27和LDLR-FUT，(c)过量表达抗原，例如半乳糖凝集素4(例如，与结直肠癌有关)、半乳糖凝集素9(例如，与霍奇金病有关)、蛋白酶3(例如，与慢性髓细胞性白血病有关)、WT1(例如，与多种白血病有关)、碳酸酐酶(例如，与肾癌有关)、醛缩酶A(例如，与肺癌有关)、PRAME(例如，与黑色素瘤有关)、HER-2/neu(例如，与乳腺癌、结肠癌、肺癌与卵巢癌有关)、甲胎蛋白(例如，与肝细胞癌有关)、KSA(例如，与结直肠癌有关)、胃泌素(例如，与胰腺癌和胃癌有关)、端粒酶催化蛋白、MUC-1(例如，与乳腺癌和卵巢癌有关)、G-250(例如，与肾细胞癌有关)、p53(例如，与乳腺癌和结肠癌有关)和癌胚抗原(例如，与乳腺癌、肺癌和胃肠道癌如结直肠癌有关)，(d)共有抗原，例如黑色素瘤-黑素细胞分化抗原如MART-1/Melan A、gp100、MC1R、黑素细胞-刺激激素受体、酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1/TRP1和酪氨酸酶相关蛋白-2/TRP2(例如，与黑色素瘤有关)，(e)前列腺相关抗原如PAP、PSA、PSMA、PSH-P1、PSM-P1、PSM-P2，例如与前列腺癌有关，(f)免疫球蛋白独特型(例如，与骨髓瘤和B细胞淋巴瘤有关)，以及(g)其他肿瘤抗原，例如含多肽与糖的抗原，包括(i)糖蛋白如唾液酸Tn和唾液酸Lex(例如，与乳腺癌和结直肠癌有关)以及各种粘蛋白；与载体蛋白偶联的糖蛋白(例如，MUC-1偶联KLH)；(ii)脂多肽(例如，连有脂质部分的MUC-1)；(iii)偶联于载体蛋白(如KLH)的多糖(例如，Globo H合成己糖)，(iv)偶联于载体蛋白(如KLH)的神经节苷脂如GM2、GM12、GD2、GD3(例如，与脑癌、肺癌、黑色素瘤有关)。
在某些实施方式中，肿瘤抗原包括但不限于p15、Hom/Mel-40、H-Ras、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳头瘤病毒(HPV)抗原，包括E6和E7、乙肝和丙肝病毒抗原、人T-细胞嗜淋巴细胞病毒抗原、TSP-180、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、TAG-72-4、CA 19-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、p16、TAGE、PSCA、CT7、43-9F、5T4、791Tgp72、β-HCG、BCA225、BTAA、CA 125、CA 15-3(CA 27.29\BCAA)、CA 195、CA 242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2结合蛋白\亲环蛋白C相关蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS等。
与本文所提供免疫原性组合物联用的含多核苷酸的抗原包含编码如上所列癌多肽抗原的多核苷酸。在某些实施方式中，含多核苷酸的抗原包括但不限于DNA或RNA载体构建物，如质粒载体(如pCMV)，它们能在体内表达癌多肽抗原。
在某些实施方式中，肿瘤抗原衍生自突变或改变的细胞组分。改变后，这些细胞组分不再行使其调节功能，因此细胞可能发生非受控制生长。改变的细胞组分的代表性示例包括但不限于ras，p53，Rb，威尔姆氏肿瘤基因编码的已改变蛋白，泛素，粘液素，DCC、APC和MCC基因编码的蛋白，以及受体或受体样结构，如neu、甲状腺激素受体、血小板衍生生长因子(PDGF)受体、胰岛素受体、表皮生长因子(EGF)受体和集落刺激因子(CSF)受体。
此外，细菌和病毒抗原与本文所提供免疫原性组合物联用以治疗癌症。在某些实施方式中，载体蛋白如CRM197、破伤风类毒素或鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)抗原可与本文提供的化合物组合/结合使用以治疗癌症。癌抗原联合疗法的效力和生物利用度高于现有疗法。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含来自脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y中至少两种血清群的荚膜糖。在其他实施方式中，此类疫苗还包含一种或多种以下来源的抗原：(a)B群脑膜炎奈瑟球菌；(b)B型流感嗜血杆菌；和/或(c)肺炎链球菌。
在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌B、C、W135和Y血清群。在某些实施方式中，含至少一种式(I)化合物的免疫原性组合物包含B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟球菌A、B、C、W135和Y血清群。
药盒
本文还提供包括一种或多种含式(I)化合物的容器的药物包或药盒，所述化合物用于治疗或防止有关toll样受体的疾病或紊乱。在其他实施方式中，所述药物包或药盒包括一种或多种含用于治疗或防止有关toll样受体的疾病或紊乱的式(I)化合物的容器和一种或多种含额外治疗剂(包括但不限于如上所列)的容器。在某些实施方式中，所述药物包或药盒任选包括给予本文所述式(I)化合物的说明。在所述药盒的一些实施方式中，式(I)化合物以本文所述疫苗组合物的形式提供，且任选地包括注射器用于给对象注射该疫苗组合物。
本发明还提供含第一和第二药盒组分的药盒，其中：(i)所述第一药盒组分包括含铝佐剂和抗原；和(ii)所述第二组分含式(I)化合物。所述第二组分理想上不包括含铝佐剂和/或不含抗原。所述第一和第二组分可组合以提供适于给予对象的组合物。
本发明还提供含第一和第二药盒组分的药盒，其中：(i)所述第一药盒组分包括含铝佐剂和式(I)化合物；和(ii)所述第二组分含抗原。所述第二组分理想上不包括含铝佐剂和/或式(I)化合物。在一些实施方式中，所述第二组分经冻干。所述第一和第二组分可组合以提供适于给予对象的药物组合物。
本发明还提供含第一和第二药盒组分的药盒，其中：(i)所述第一药盒组分包含抗原和式(I)化合物；和(ii)所述第二组分包括含铝佐剂。所述第二组分理想地不含抗原和/或式(I)化合物。所述第一和第二组分可组合以提供适于给予对象的药物组合物。
在一些实施方式中，这些药盒包含两药瓶。在其他实施方式中，其包括一已填充注射器和一药瓶，所述注射器中的内含物与所述药瓶中的内含物在注射前混合。药瓶内含物经冻干时注射器/药瓶的设置有效。尽管，通常所述第一和第二药盒组分都会为水溶液形式。
治疗、防止和给予疫苗的方法
本文所述免疫原性组合物可与疫苗联用以改善所述疫苗的免疫原性，或所述免疫原性组合物包括一种或多种抗原时，该免疫原性组合物可用作疫苗。因此在某些实施方式中，本文所述的免疫原性组合物可用在引起或增加哺乳动物免疫应答的方法中，所述方法包括给予有效量的本文所述免疫原性组合物的步骤。所述免疫应答优选为保护性，并优选涉及抗体和/或细胞介导免疫。该方法可以引起增强的应答。
在某些实施方式中，本文所述免疫原性组合物可用作药物，如用于引起或增加哺乳动物中的免疫应答。
在某些实施方式中，本文所述组合物也可以用于生产引起哺乳动物免疫应答的药物。
本发明还提供了一种预填充本发明所述免疫原性组合物的递送装置。本发明还提供含本发明免疫原性组合物如含单位剂量的无菌容器(如药瓶)。本发明还提供包含本发明药物组合物的密封容器。合适的容器包括例如药瓶。
通过用这些应用和方法在哺乳动物中引起免疫应答，所述免疫原性组合物中包括的或与所述免疫原性组合物联合给予的抗原减少或甚至阻止病原体对所述哺乳动物的感染。所述哺乳动物优选人，但可以是如牛、猪、鸡、猫或狗，因为本文包括的病原体在广泛的物种中可能有问题。当疫苗用于预防性用途时，人优选为儿童(如幼童或婴儿)或青少年；当疫苗用于治疗性用途时，人优选为青少年或成人。用于儿童的疫苗也可给予成人，例如，以评估其安全性、剂量、免疫原性等。
检测治疗性处理功效的一种方式包括在给予本发明所述免疫原性组合物后监测病原体感染。一种检查预防性治疗功效的途径包括给予所述免疫原性组合物(以及抗原，若分别给予)后监测针对本发明免疫原性组合物中包括的或与之联合给予的抗原的全身免疫应答(如监测IgG1和IgG2a产生水平)和/或粘膜免疫应答(如监测IgA产生水平)。通常，在免疫后但在刺激前测定抗原特异性血清抗体应答，而在免疫后且刺激后测定抗原特异性粘膜抗体应答。
另一评价本文所述免疫原性组合物(其中抗原是蛋白)的免疫原性的方法是重组表达蛋白，以通过免疫印迹和/或微阵列筛查患者血清或粘膜分泌。蛋白质和患者样品间的阳性反应表明患者已经产生对受试蛋白的免疫应答。该方法也可用于鉴定免疫显性抗原和/或蛋白抗原中的表位。
所述免疫原性组合物的功效还可通过体内攻击感兴趣的病原体感染的合适动物模型来确定。
本文所述免疫原性组合物通常直接给予对象。可通过胃肠道外注射(如皮下、腹膜内、静脉内、肌肉内或组织间隙)，或通过粘膜如直肠、口腔(如片剂、喷雾)、阴道、局部、透皮或经皮、鼻内、眼、耳、肺或其它粘膜途径完成直接递送。
所述免疫原性组合物可用于引起全身和/或粘膜免疫，优选引起增强的全身和/或粘膜免疫。
增强的全身和/或粘膜免疫优先表现为提高的TH1和/或TH2免疫应答。增强的免疫应答优选包括IgG1和/或IgG2a和/或IgA生成增加。
可以通过单剂量方案或多剂量方案进行给药。多剂量可以用于初次免疫方案和/或加强免疫方案。在多剂量方案中，可通过相同或不同的途径如胃肠道外初次和粘膜加强、粘膜初次和胃肠道外加强等给予各剂量。一般以至少1周(例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周等)的间隔给予多个剂量。
包括一种或多种抗原或者与一种或多种抗原联用的本文所述免疫组合物可用于治疗儿童和成人。因此，人类对象可以小于1岁、1-5岁、5-15岁、15-55岁或至少55岁。接受所述免疫原性组合物的对象优选老年人(如>50岁，>60岁并优选>65岁)，幼童(如<5岁)，住院病人、保健护理人员、武装部队和军人、孕妇、慢性病人或免疫缺陷病人。然而所述免疫原性组合物不仅适用于这些人群，还可用于更广泛的人群。
包括一种或多种抗原或者与一种或多种抗原联用的本文所述免疫组合物可与其它疫苗基本上同时(在健康护理专业人员或疫苗接种中心的同一用药咨询或就诊期间)给予患者，例如与麻疹疫苗、腮腺炎疫苗、风疹疫苗、MMR疫苗、水痘疫苗、MMRV疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗、DTP疫苗、偶联的B型流感嗜血杆菌疫苗、脊髓灰质炎病毒灭活疫苗、乙型肝炎病毒疫苗、脑膜炎球菌偶联疫苗(如四价A-C-W135-Y疫苗)、呼吸道合胞病毒疫苗等基本上同时给药。
用含铝佐剂配制式(I)化合物
在某些实施方式中，至少一种本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与含铝佐剂和有效量的一种或多种抗原组合，产生免疫原性组合物。所述免疫原性组合物中，式(I)化合物与含铝佐剂结合。所述免疫原性组合物中，所述抗原为本文提供的任何抗原。所述免疫原性组合物中，所述抗原和式(I)化合物TLR7激动剂共递送到所需位置。
在所述免疫原性组合物中，式(I)化合物和含铝佐剂的结合不干扰抗原和含铝佐剂的结合。仅举例来说，图2证明脑膜炎奈瑟球菌的抗原吸附于氢氧化铝不受到式(I)化合物和氢氧化铝佐剂结合的影响。
在某些实施方式中，所述免疫原性组合物用作疫苗。在某些实施方式中，所述疫苗为预防性的(即防止感染)，而在其他实施方式中，所述疫苗为治疗性的(即治疗感染)。
本文提供的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物为TLR7激动剂且为免疫增强剂，与不含式(I)化合物的免疫原性制剂相比，其给予后产生免疫刺激效应。在某些实施方式中，式(I)化合物包含于具有一种或多种免疫调节剂的免疫原性组合物中时在给予后产生免疫刺激效应，而在其他实施方式中，式(I)化合物包含于不含其他免疫调节剂的免疫原性组合物中时在给予后产生免疫刺激效应。
在某些实施方式中，所述免疫原性组合物通过在注射位置保留式(I)化合物来提高免疫应答。
不同于TLR激动剂结合明胶，增加TLR激动剂在注射位置存留时间的替代方案为调节所述TLR激动剂的亲水性、疏水性和/或溶解性。无极性(疏水性或不溶性)化合物可在肌肉内给予时于注射位置增加存留时间，从而与显示注射位置快速清除且全身接触较高的相似效力的极性(亲水性或可溶)化合物相比，减少全身接触水平。相似地，非极性式(I)化合物可显示这些有用的特性。
在某些实施方式中，所述免疫原性组合物包括药学上可接受的载体例如但不限于蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物、蔗糖、海藻糖、乳糖、脂质聚集体(如油滴或脂质体)、和灭活的病毒颗粒。所述免疫原性组合物通常还包含稀释剂，如水、盐水、和甘油，且任选地含其他赋形剂如湿润剂或乳化剂和pH缓冲液物质。在某些实施方式中，所述免疫原性组合物包含一种或多种本文提供的额外佐剂。
实施例
提供下述实施例以说明而非限制本文提供的式(I)化合物和该化合物的制备。
合成起始化合物
制备5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔 丁酯(A-1)
方案A
步骤1：2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气下于0℃向含2-溴-5-甲基苯胺(1.0当量)的四氢呋喃溶液(0.2M)中滴加1MNaHMDS(2.5当量)。反应在0℃下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用卤水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-5％乙酸乙酯的己烷纯化原料以得到2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯浅黄色油。
步骤2：5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气下在二烷(0.2M)中混合2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯(前述步骤所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)(5％)和乙酸钠(4.5当量)。反应加热至100℃，并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-8％醚的己烷纯化原料，获得5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(A-1)。
制备4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)
方案B
步骤B-1:3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(B-1)
盖有隔片的圆底烧瓶内加入1-乙炔基-4-甲氧基-2-甲基苯(1.1当量)、3,5-二氯-2-氰基吡啶(1当量)、三乙胺(5当量)和无水DMF(0.2M)。将混合物除气(真空)并氮气吹扫3次。添加CuI(0.05当量)和双(三苯基膦)二氯-钯(II)(0.05当量)并将隔片换为回流冷凝器，将烧瓶加热至60℃在氮气下过夜。由TLC监控待反应完成后，烧瓶的内容物加载到经己烷预处理的大型硅胶柱上。快速色谱(硅胶，己烷:EtOAc(1:4％))得到产物3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(B-1)。
步骤B-2：2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(B-2)
向装有回流冷凝器的圆底烧瓶中加入3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(B-1)(1当量)、5-甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(A-1)(1.25当量)、K3PO4(2当量)、三(二亚苄基铜)二钯(0)(0.05当量)和2-二环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(Sphos)(0.1当量)。加入正丁醇与水(5:2,0.2M)，将内容物除气(抽真空然后氮气吹扫)3次。反应混合物在氮气下油浴中于100℃剧烈搅拌过夜。内容物冷却，转移到200mL水中，然后用二氯甲烷提取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并浓缩。快速色谱(硅胶，含0-50％EtOAc的CH2Cl2)得到产物2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(B-2)。
步骤B-3:2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(B-3)
2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺由2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(前步所得)制得。圆底烧瓶内加入2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶--5-胺(1当量)与搅拌子。添加乙醇和二氯甲烷(1:2，0.2M)，然后加入碳载钯(活化粉末，湿，10％碳载，0.1当量)。将内容物除气(抽真空)然后氢气吹扫(3次)。反应混合物在氢气球下室温剧烈搅拌过夜。此后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，随后用二氯甲烷和EtOAc清洗硅藻土垫直至滤液无UV吸光。浓缩合并的有机洗液。快速色谱(硅胶，含0-50％EtOAc的CH2Cl2)得到产物2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺。1H NMR(CDCl3):δ8.53(d,1H),8.29(d,1H),8.01(d,1H),7.44(s,1H),7.12(dd,1H),6.93(d,1H),6.67(d,1H),6.60(dd,1H),5.93(bs,2H),3.70(s,3H),3.05–3.00(dd,2H),2.93–2.88(dd,2H),2.44(s,3H),2.19(s,3H).LRMS[M+H]＝358.2
步骤B-4:乙基4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯甲酸(B-4)
向冰水浴中搅拌的含2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(来自前述步骤)的二氯甲烷(0.2M)溶液以滴加方式加入含1N BBr3的CH2Cl2溶液(2当量)。反应在30分钟内用甲醇淬灭并真空浓缩以获得粗残留物。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用含0-20％甲醇的二氯甲烷纯化原料以得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)白色固体。1H NMR(DMSO-d6):δ8.99(s,1H),8.75(d,1H),8.60(d,1H),8.27(d,1H),7.28(s,1H),7.09(dd,1H),6.99(bs,2H),6.88(d,1H),6.49(d,1H),6.42(dd,1H),3.02–2.96(dd,2H),2.86–2.81(dd,2H),2.38(s,3H),2.13(s,3H).LRMS[M+H]＝344.2.
制备(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(2-1: 见方案2)
步骤1：5-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气下于0℃向含5-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-氯代苯胺(市售可得)(1.0当量)的THF溶液(0.2M)中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。反应在0℃下搅拌15分钟，添加含二碳酸二叔丁酯的THF溶液。反应升至室温过夜。蒸发溶剂，所得残留物用0.1N HCl水溶液淬灭。水性悬液用EtOAc提取两次。合并的有机层用卤水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-30％EtOAc/己烷纯化原料以得到5-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯无色油。
步骤2：5-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
N2气下在二烷(0.2M)中混合5-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤1所得)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(3.0当量)、Pd2dba3(2.5％)、XPhos(10％)和KOAc(3当量)。反应加热至110℃并搅拌过夜。所得悬液冷至室温，用醚稀释，通过硅藻土过滤，真空浓缩滤出物。合并的有机层用卤水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-20％EtOAc/己烷纯化原料以获得5-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯白色泡沫。
步骤3：3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶
盖有隔片的圆底烧瓶内加入1-乙炔基-4-甲氧基-2-甲基苯(市售可得，1.1当量)、3,5-二氯-2-氰基吡啶(市售可得，1当量)、三乙胺(5当量)和无水DMF(0.2M)。抽真空并氮气吹扫三次。加入CuI(0.05当量)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(0.05当量)。用回流冷凝器替换隔片并在氮气下将烧瓶加热至60℃过夜。由TLC监控待反应完成后，烧瓶的内容物加载到经己烷预处理的大型硅胶柱上。快速色谱(硅胶，己烷:EtOAc(1:4％))得到3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶。
步骤4：8-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
装有回流冷凝管的圆底烧瓶内加入3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(步骤3所得)(1当量)、5-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(步骤3所得)(1.25当量)、K3PO4(2当量)、三(二亚苄基酮)二钯(0)(0.05当量)和2-二环己基膦-2',6'-二甲氧联苯(0.1当量)。添加正丁醇和水(5:2,0.2M)，内容物除气(抽真空后氮气吹扫)3次。反应混合物在氮气下油浴中于100℃剧烈搅拌过夜。内容物冷却，转移到水中，然后用二氯甲烷提取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，并浓缩。快速色谱(硅胶，含0-50％EtOAc的CH2Cl2)得到8-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺固体。
步骤5：8-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺
圆底烧瓶内加入8-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(步骤4获得)(1当量)与搅拌子。添加乙醇和二氯甲烷(1:2，0.2M)，然后加入碳载钯(活化粉末，湿，10％碳载，0.1当量)。内容物抽真空然后氢气吹扫三次。反应混合物在氢气囊下室温剧烈搅拌过夜。此后，反应混合物通过硅藻土垫过滤，随后用二氯甲烷和EtOAc清洗硅藻土垫直至滤液无UV吸光。浓缩合并的有机洗液。快速色谱(硅胶，含0-50％EtOAc的CH2Cl2)得到8-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺黄色固体。
步骤6：5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(2-1)
8-((叔丁基二甲基硅氧基)甲基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(步骤5所得)(1.0当量)和TBAF(1.1当量)在THF中室温搅拌过夜。用饱和NaHCO3淬灭该反应。分离两相，水层用Et2O提取两次。合并的有机层用卤水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上利用0-5％MeOH/DCM纯化原料以得到5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(2-1)白色固体。1H NMR(丙酮-d6):δ8.79(s,1H),8.73(s,1H),8.35(d,1H),7.61(s,1H),7.33(d,1H),7.09(d,1H),6.75(d,1H),6.68(dd,1H),6.57(br s,2H),4.47(d,2H),4.32(t,1H),3.58(s,3H),3.17(t,2H),3.04(t,2H),2.30(s,3H).[M+H+]374.2。
合成示例化合物
实施例1(表1：化合物6)：合成3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘 啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸(6)
方案1
步骤1：1,1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯(1-1)
-78℃下向含二氟甲基膦酸二乙酯(1.0当量)的THF溶液(0.8M)中缓慢添加含LDA(2M，1.1当量)的庚烷/THF/乙苯溶液，混合物剧烈搅拌30分钟。在另一反应烧瓶中，将含1,2-双(2-碘乙氧基)乙烷(1.0当量)的THF溶液(0.8M)冷至-78℃。向此溶液中用套管移入新鲜制备的烷基锂溶液，反应混合物在-78℃下搅拌1小时。此时，移去冷却浴，将反应混合物升至室温。然后反应混合物用1M的HCl水溶液淬灭。所得混合物转入分液漏斗并用CH2Cl2洗涤3次。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。所得残留物由系统(ISCO)用CH2Cl2纯化以提供1,1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯黄色油。1H NMR(CDCl3):δ4.23-4.31(m,4H),3.75-3.80(m,4H),3.60-3.67(m,4H),3.26(t,2H),2.33-2.50(m,2H),1.38(t,6H).
步骤2：合成2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1,1-二氟乙基膦酸二乙酯(1-2)
在22℃下向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)(1.0当量)的二甲基甲酰胺溶液(0.10M)中添加60％氢化钠的矿物油分散液(1.5当量)，然后将所得化合物搅拌30分钟。此时，向该混合物中添加1,1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯(1.2当量)。然后将反应混合物搅拌18小时，此后用乙酸乙酯和水稀释。分离两相层，有机层用水洗涤两次。有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。通过系统(ISCO)利用含0-50％乙酸乙酯的己烷梯度纯化所得残留物以提供3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯(1-2)固体。
步骤3：合成3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1,1-二氟乙基膦酸(6)
在0℃向含3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯(1-2)(1.0当量)的CH2Cl2溶液(0.10M)中缓慢添加溴化三甲基甲硅烷(10当量)。一小时后移去水浴，反应混合物在22℃下搅拌18小时。此时，真空除去挥发物，所得残留物由反相HPLC用20-90％的0.5mM NH4OAc(MeCN中)对10mM NH4OAc(水中)梯度纯化以递送3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸(6)固体。1HNMR(二甲基亚砜-d6):δ8.83(s,1H),8.68(s,1H),8.32(s,1H),7.34(s,1H),7.14(d,1H),7.09(br,2H),7.08(d,1H),6.74(s,1H),6.68(d,1H),4.01(t,2H),3.70(t,2H),3.61(t,2H),3.54-3.59(m,2H),3.48-3.50(m,2H),3.07(t,2H),2.94(t,2H),2.43(s,3H),2.25(s,3H),2.06-2.21(m,2H).LRMS[M+H]＝590.2
实施例2(表1：化合物1)：合成3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基) 乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸(1)
步骤1：3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基磷酸二乙酯
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用市售可得的3-溴丙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤2：3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸(1)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤所得的3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸酯。在1H NMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸(1)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ9.72(br,1H),9.01(s,1H),8.96(br,1H),8.85(s,1H),8.54(d,1H,J＝8.4Hz),7.54(s,1H),7.42(d,1H,J＝8.2Hz),7.08(d,1H,J＝8.4Hz),6.74(s,1H),6.66(d,1H,J＝8.3Hz),3.95(t,2H,J＝6.4Hz),3.14(t,2H,J＝8.6Hz),2.97(t,2H,J＝8.6Hz),2.50(s,3H),2.27(s,3H),1.91-1.81(m,2H),1.67-1.56(m,2H).LRMS[M+H]＝466.2
实施例3(表1：化合物2)：合成4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙 基)-3-甲基苯基二氢磷酸酯(2)
步骤1：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二苄基磷酸酯
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二苄基磷酸酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用市售可得的氯磷酸二苄酯作为试剂。
步骤2：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二氢磷酸酯
将含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二苄基磷酸酯(1.0当量)和10％Pd/C(20％重量当量)的甲醇溶液(0.66M)于H2气囊中搅拌18小时。此时，该混合物通过硅藻土垫，用CHCl3:MeOH的2:1混合物洗涤。合并的有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。所得残留物由反相HPLC用20-90％的0.5mM NH4OAc(MeCN中)对10mMNH4OAc(水中)梯度纯化以提供4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二氢磷酸酯(2)固体。在1H NMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ9.69(br,1H),9.33(s,1H),9.03(s,1H),8.87(s,1H),8.54(d,1H,J＝8.4Hz),7.51(s,1H),7.42(d,1H,J＝9.4Hz),7.22(s,1H),7.17(d,1H,J＝8.3Hz),7.10(s,1H),6.97(s,1H),6.92(d,1H,J＝6.1Hz),3.15(t,2H,J＝6.8Hz),3.00(t,2H,J＝6.8Hz),2.50(s,3H),2.29(s,3H).LRMS[M+H]＝424.1
实施例4(表1：化合物3)：合成(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙 基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸(3)
步骤1：(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸二乙酯
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用市售可得的(二乙氧基磷酰基)甲基4-甲基苯磺酸盐作为试剂。
步骤2：(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基-膦酸(3)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤所得的(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸酯。(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸(3)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ8.86(br,1H),8.67(br,1H),8.34(d,1H,J＝10.4Hz),7.37(s,1H),7.35(s,1H),7.14(d,1H,J＝8.4Hz),7.05(d,1H,J＝8.2Hz),6.73(s,1H),6.69(d,1H,J＝8.6Hz),6.60(s,1H),3.70-3.61(m,2H),3.10(t,2H,J＝8.8Hz),2.94(t,2H,J＝8.8Hz),2.45(s,3H),2.25(s,3H).LRMS[M+H]＝438.2
实施例5(表1：化合物4)：合成5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基) 乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸(4)
步骤1：5-溴-1,1-二氟戊基膦酸二乙酯
按实施例1-步骤1所述过程制备5-溴-1,1-二氟戊基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,4-二溴丁烷作为试剂。
步骤2：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸二乙酯
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤获得的5-溴-1,1-二氟戊基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸(4)
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸(4)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用步骤2所得的5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸二乙酯。在1HNMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸(4)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ9.70(br,1H),9.33(br,1H),8.98(s,1H),8.84(s,1H),8.50(d,1H,J＝8.4Hz),7.52(s,1H),7.40(d,1H,J＝8.4Hz),7.06(d,1H,J＝8.4Hz),6.74(s,1H),6.68(d,1H,J＝10.8Hz),3.91(t,2H,J＝6.2Hz),3.14(t,2H,J＝8.4Hz),2.97(t,2H,J＝8.4Hz),2.50(s,3H),2.27(s,3H),2.13-1.94(m,2H),1.78-1.70(m,2H),1.66-1.59(m,2H).LRMS[M+H]＝530.2
实施例6(表1：化合物5)：合成4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基) 乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸(5)
步骤1：4-溴-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯
按实施例1-步骤1所述过程制备4-溴-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,3-二溴丙烷作为试剂。
步骤2：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤获得的4-溴-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸(5)
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸(5)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用步骤2所得的4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯。在1HNMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸(5)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ9.71(br,1H),9.33(br,1H),9.00(s,1H),8.85(s,1H),8.54(d,1H,J＝8.4Hz),7.53(s,1H),7.42(d,1H,J＝8.3Hz),7.08(d,1H,J＝8.4Hz),6.76(s,1H),6.70(d,1H,J＝8.3Hz),3.97(t,2H,J＝6.2Hz),3.15(t,2H,J＝8.5Hz),2.98(t,2H,J＝8.5Hz),2.50(s,3H),2.28(s,3H),2.21-2.06(m,2H),1.97-1.87(m,2H).LRMS[M+H]＝516.2
实施例7(表1：化合物7)：合成3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸(7)
步骤1：3-(2-溴乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯
烘箱干燥的圆底烧瓶中添加干THF(1.07M)和二异丙基胺(2.0当量)。所述烧瓶在丙酮-干冰浴中冷却并用含正丁基锂(1.6当量)的环己烷(1.52M)通过注射器逐滴处理。添加完成后，将烧瓶转移到冰水浴中并搅拌30分钟。然后将烧瓶放回干冰-丙酮浴中冷却，并通过注射器用含二氟甲基膦酸二乙酯(1.0当量)的HMPA(1:1v/v)溶液处理。搅拌1小时。向上述反应混合物中通过注射器快速加入溶于THF(3M)的1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(3.0当量)冷却溶液，然后该反应再搅拌3小时之后用1N HCl淬灭。将所述烧瓶升至室温，并用1NHCl将pH调为<4。用EtOAc(3x)提取混合物。将合并的有机提取物用无水Na2SO4干燥，并真空浓缩。通过Combiflash用含0-75％EtOAc的己烷纯化该原料，然后用RP-HPLC(ACN中的0.035％TFA:水中的0.05％TFA,C18柱)，得到3-(2-溴乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯浅黄色油。
步骤2：3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯
3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤获得的3-(2-溴乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸
3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸(7)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用上述步骤2所得的3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯。3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸(7)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ8.83(s,1H),8.69(s,1H),8.35(d,1H,J＝8.3Hz),7.36(s,1H),7.26(br,2H),7.16(d,1H,J＝8.3Hz),7.07(d,1H,J＝8.4Hz),6.75(s,1H),6.66(d,1H,8.3J＝Hz),4.00(t,2H,J＝4.4Hz),3.67(t,2H,J＝6.7Hz),3.08(t,2H,J＝6.8Hz),2.94(t,2H,J＝6.8Hz),2.44(s,3H),2.25(s,3H),2.22-2.09(m,2H).LRMS[M+H]＝546.2
实施例8(表1：化合物8)：合成2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶- 2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸(8)
步骤1：2-(4-(溴甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸二乙酯
按实施例1-步骤1所述过程制备2-(4-(溴甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,4-双(溴甲基)苯作为试剂。
步骤2：2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸二乙酯
2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤获得的2-(4-(溴甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸
2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸(8)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤3所得的2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸二乙酯。在1H NMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸(8)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ9.71(br,1H),9.35(br,1H),9.01(s,1H),8.86(s,1H),8.54(d,1H,J＝8.4Hz),7.53(s,1H),7.44(d,1H),7.40(s,1H),7.38(s,1H),7.29(d,1H,J＝8.0Hz),7.24(s,1H),7.11(s,1H),7.09(s,1H),6.99(s,1H),6.85(s,1H),6.76(d,1H,J＝8.3Hz),5.04(s,2H),3.84-3.73(m,2H),3.15(t,2H,J＝8.5Hz),2.99(t,2H,J＝8.5Hz),2.50(s,3H),2.29(s,3H).[M+H+]578.2。
实施例9(表1：化合物9)：合成2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f] [1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧乙基膦酸(9)
方案2
步骤1：5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(2-2)
溶于DMSO(0.15M)的(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)甲醇(2-1)(1.0当量)溶液中室温加入IBX(1.5当量)。反应搅拌2.5小时，然后用水稀释。用2％MeOH/DCM(4x)提取水层。合并的有机层用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过系统(ISCO)利用0-5％MeOH/DCM梯度纯化所得残留物以提供5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(2-2)固体。
步骤2：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-羟乙基膦酸二乙酯(2-3)
在氮气下于-78℃向溶于THF(0.3M)的二氟甲基膦酸二乙酯溶液中逐滴加入2MLDA(3.0当量，商品级)。反应于-78℃搅拌25分钟，并缓慢加入溶于THF(0.1M)的5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(2-2)(1.0当量)溶液。该反应于-78℃搅拌1小时，0℃搅拌1小时，然后升至室温30分钟。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯提取2次。合并的有机层用卤水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过系统(ISCO)利用0-5％MeOH/DCM梯度纯化所得残留物以提供2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-羟乙基膦酸二乙酯(2-3)固体。
步骤3：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧乙基膦酸二乙酯(2-4)
溶于1:1DMSO/乙酸乙酯(0.07M)的2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-羟乙基膦酸二乙酯(2-3)(1.0当量)溶液中加入IBX(1.5当量)。该反应加热到80℃1小时，然后冷却至室温。所述混合物用乙酸乙酯稀释并通过硅藻土过滤。用水(2x)、卤水洗涤滤液，用MgSO4干燥，并进行真空浓缩。通过系统(ISCO)利用0-5％MeOH/DCM梯度纯化所得残留物以提供2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧乙基膦酸二乙酯(2-4)固体。
步骤4：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧乙基膦酸(9)
于0℃向溶于DCM(0.05M)的2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧代乙基膦酸二乙酯(2-4)(1.0当量)溶液中加入TMSI(5.0当量)。所述反应升至室温2小时，并加入更多TMSI(2.5当量)。反应再搅拌30分钟，然后用少量水淬灭。蒸发去除DCM，然后添加DMSO/水。所述混合物调节为pH 9并用C18柱在RP-HPLC上直接纯化，用含10-40％95:5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)梯度洗脱。合并含产物的部分并真空浓缩，产生2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧乙基膦酸(9)固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ8.82(s,1H),8.5(br,1H),8.44(s,1H),8.2(br,1H),7.98(d,1H,J＝8.2Hz),7.2(br,2H),7.05(d,1H,J＝8.3Hz),6.73(s,1H),6.67(d,1H,J＝8.3Hz),3.70(s,3H),2.99-2.87(m,4H),2.25(s,3H).LRMS[M+H]＝502.2
实施例10(表1：化合物10)：合成(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯 并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸(10)
方案3
步骤1：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)
向0℃冷却的含NaH(1.2当量)的THF搅拌悬液(0.1M)中加入含亚甲基二膦酸四乙酯(1.3当量)的THF(0.21M)溶液。向所得反应混合物中加入含5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(2-2)(实施例9–步骤1)(1.0当量)的THF(0.08M)溶液。反应于室温搅拌30分钟，然后真空移除溶剂，并通过系统(ISCO)利用0-5％MeOH/DCM梯度纯化所得残留物以提供(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)无色固体。
步骤2：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸(10)
于0℃向溶于DCM(0.095M)的(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)(1.0当量)溶液中加入TMSBr(10当量)。所述反应升至室温2小时，然后用少量MeOH淬灭。蒸发去除DCM，然后添加DMSO/水。所述混合物调节为pH 9并用C18柱在RP-HPLC上直接纯化，用含10-40％95:5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mMNH4OAc(pH 9)梯度洗脱。合并含产物的部分并真空浓缩，产生(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸(10)固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ9.76(s,1H),9.33(s,1H),9.03(s,1H),8.82(s,1H),8.60(d,1H,J＝8.4Hz),7.87(d,1H,J＝8.4Hz),7.78(s,1H),7.31(dd,1H,J＝17.6,21.6Hz),7.03(d,1H,J＝8.4Hz),6.69(m,2H),6.61(dd,1H,J＝2.8,8.4Hz),3.64(s,3H),3.14–3.06(m,2H),2.97-2.91(m,2H),2.23(s,3H).LRMS[M+H]＝450.2
实施例11(表1：化合物11)：合成2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f] [1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸(11)
步骤1：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸二乙酯(3-3)
向溶于DCM(0.05M)和EtOH(0.08M)中的(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)(实施例10–步骤1)(1.0当量)溶液中加入10％碳载钯(0.09当量)。用氢气球填充反应容器，并室温搅拌过夜。由LCMS监控所述反应完成后，移除溶剂并通过系统(ISCO)利用0-5％MeOH/DCM梯度纯化所得残留物以2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸二乙酯(3-3)。
步骤2：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸(11)
于0℃向溶于DCM(0.02M)的2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸二乙酯(3-3)(1.0当量)溶液中加入TMSBr(10当量)。所述反应升至室温2小时，然后用少量MeOH淬灭。蒸发去除DCM，然后添加DMSO/水。所述混合物调节为pH9并用C18柱在RP-HPLC上直接纯化，用含10-40％95:5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mM NH4OAc(pH9)梯度洗脱。合并含产物的部分并真空浓缩，产生2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸(11)固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ9.66(s,1H),9.30(s,1H),8.95(s,1H),8.78(s,1H),8.50(d,1H,J＝8.4Hz),7.54(s,1H),7.45(d,1H,J＝8.4Hz),7.02(d,1H,J＝8.4Hz),6.69(d,1H,J＝2.8Hz),6.61(dd,1H,J＝2.8,8.4Hz),3.64(s,3H),3.14–3.06(m,2H),3.00–2.90(m,4H),2.22(s,3H),2.02–1.92(m,2H).LRMS[M+H]＝452.2
实施例12(表1：化合物12)：合成(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯 并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸(12)
步骤1：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸二乙酯(3-2)
向-78℃冷却的含氟亚甲基二膦酸四乙酯(2.5当量)的THF搅拌溶液(0.27M)中加入LDA溶液(乙苯/戊烷/己烷中1.8M,2.0当量)。所得反应混合物升至室温并搅拌30分钟，然后冷却回-78℃。加入溶于THF(0.18M)的5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(2-2)(实施例9–步骤1)(1.0当量)溶液，然后将反应混合物缓慢升至室温。用饱和NH4Cl溶液淬灭反应。用DCM(3x)提取水相。合并的有机相经混合，然后真空浓缩。通过系统(ISCO)利用0-5％MeOH/DCM梯度纯化所得残留物以提供2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸二乙酯(3-2)无色固体。
步骤2：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸(12)
于0℃向溶于DCM(0.05M)的(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸二乙酯(3-2)(1.0当量)溶液中加入TMSBr(10当量)。所述反应升至室温2小时，然后用少量MeOH淬灭。蒸发去除DCM，然后添加DMSO/水。所述混合物调节为pH 9并用C18柱在RP-HPLC上直接纯化，用含10-40％95:5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mMNH4OAc(pH 9)梯度洗脱。合并含产物的部分并真空浓缩，产生(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸(12)固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ9.80(s,1H),9.41(s,1H),9.05(s,1H),8.87(s,1H),8.65(d,1H,J＝8.8Hz),8.08(s,1H),7.76(d,1H,J＝8.4Hz),7.08(d,1H,J＝8.4Hz),7.02(d,1H,J＝8.4Hz),6.83–6.65(m,2H),3.69(s,3H),3.18–3.12(m,2H),3.02–2.96(m,4H),2.28(s,3H).LRMS[M+H]＝468.1
实施例13(表1：化合物13)：合成3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸(13)
方案4
步骤1：2-(4-(3-碘苄氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(4-1)
于22℃向含4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲酚(B-4),1.0当量的二甲基甲酰胺溶液(0.10M)中添加碳酸铯(1.5当量)，然后将所得混合物搅拌30分钟。此时，将1-(溴甲基)-3-碘苯(1.5当量)加入该混合物。将反应混合物于55℃搅拌18小时，然后用乙酸乙酯和水稀释。分离两相层，有机层用水洗涤两次。有机层用无水Na2SO4干燥并真空除去挥发物。在系统(ISCO)上利用含0-50％乙酸乙酯的己烷梯度纯化提供2-(4-(3-碘苄氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(4-1)固体。
步骤2：3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸(13)
向含2-(4-(3-碘苄氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-5-胺(1.0当量)的磷酸三乙酯(1.05当量)搅拌溶液中添加碳载钯(0.08当量)。在90℃加热所得混合物过夜。反应冷却到室温后，残留物用DCM(0.27M)于0℃吸收，然后用TMSBr(11当量)处理。所述反应升至室温2小时，然后用少量MeOH淬灭。蒸发去除DCM，然后添加DMSO/水。所述混合物调节为pH 9并用C18柱在RP-HPLC上直接纯化，用含10-40％95:5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mMNH4OAc(pH 9)梯度洗脱。合并含产物的部分并真空浓缩，产生3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸(13)固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ8.84(s,1H),8.72(s,1H),8.35(d,1H,J＝8.4Hz),7.67(d,1H,J＝12Hz),7.60–7.54(m,1H),7.30-7.20(m,2H),7.15(d,1H,J＝8.4Hz),7.11(d,1H,J＝8.4Hz),7.04(s,1H),6.84(s,1H),6.77(m,1H),4.99(s,2H),3.12–2.92(m,4H),2.44(s,3H),2.27(s,3H).LRMS[M+H]＝514.2
实施例14(表1：化合物14)：合成5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1, 7]萘啶-8-羰基膦酸(14)
方案5
向溶于甲苯(0.27M)的5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-甲醛(2-2)(实施例9–步骤1)(1.0当量)搅拌溶液中加入三(三甲基甲硅烷基)亚磷酸盐(1.0当量)。反应在80℃搅拌60分钟，然后移除溶剂，得到的残留物用DMSO(0.27M)吸收，并加入IBX(1.5当量)。所述反应室温搅拌2.5小时，过滤并用C18柱在RP-HPLC上直接纯化，用含10-40％95:5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)梯度洗脱。合并含产物的部分并真空浓缩，产生5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羰基膦酸(14)固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ9.84(s,1H),9.35(s,1H),9.09(s,1H),8.89(s,1H),8.76(d,1H,J＝8.4Hz),8.60(s,1H),8.19(d,1H,J＝8.8Hz),7.04(d,J＝8.8Hz,1H),6.70(d,1H,J＝2.8Hz),6.62(dd,1H,J＝2.8,8.4Hz),3.64(s,3H),3.15–3.09(m,2H),2.97–2.91(m,2H),2.23(s,3H).LRMS[M+H]＝452.1
实施例15(表1：化合物15)：合成3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦丙氧基)苯乙基) 苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(15)
步骤1：3-(5-氨基-2-(4-(3-(二乙氧基磷酰基)丙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸
3-(5-氨基-2-(4-(3-(二乙氧基磷酰基)丙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸按实施例19-步骤11所述过程制备，但使用市售可得的3-溴丙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(15)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(15)按实施例19-步骤12所述过程制备，但使用前述步骤所得的3-(5-氨基-2-(4-(3-(二乙氧基磷酰基)丙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸。3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(15)获得的1H NMR((MeOD-d4)为：δ8.60(s,1H),8.27(s,1H),8.07(d,1H,J＝8.4Hz),7.52(s,1H),7.30(d,1H,J＝8.4Hz),6.87(d,1H,J＝8.4Hz),6.67(s,1H),6.60(d,1H,J＝8.4Hz),3.93(t,J＝6.4Hz,2H),3.49–3.47(m,2H),3.14–3.09(m,2H),2.99–2.95(m,2H),2.69–2.64(m,2H),2.17(s,3H),2.02–2.00(m,2H),1.74–.66(m,2H).LRMS[M+H]＝524.2
实施例16(表1：化合物16)：合成3-(5-氨基-2-(4-(4,4-二氟-4-膦酰丁氧基)-2- 甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(16)
步骤1：4-溴-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯
按实施例1-步骤1所述过程制备4-溴-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,3-二溴丙烷作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(4-(4-(二乙氧基磷酰基)-4,4-二氟丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸
3-(5-氨基-2-(4-(4-(二乙氧基磷酰基)-4,4-二氟丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸按实施例19-步骤11所述过程制备，但使用前述步骤获得的4-溴-1,1-二氟丁基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(4-(4,4-二氟-4-膦酰丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(16)
3-(5-氨基-2-(4-(4,4-二氟-4-膦酰丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(16)按实施例19-步骤12所述过程制备，但使用前述步骤2所得的3-(5-氨基-2-(4-(4-(二乙氧基磷酰基)-4,4-二氟丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸。3-(5-氨基-2-(4-(4,4-二氟-4-膦酰丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(16)获得的1H NMR((MeOD-d4)为：δ8.69(s,1H),8.45(s,1H),8.22(d,1H,J＝8.4Hz),7.53(s,1H),7.45(d,1H,J＝8.4Hz),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),6.69(s,1H),6.60(d,1H,J＝8.4Hz),3.95(t,2H,J＝6.4Hz),3.92–3.90(m,2H),3.49–3.47(m,2H),3.20–3.16(m,2H),3.14–3.10(m,2H),3.03–2.99(m,2H),2.74–2.70(m,2H),2.22(s,3H).LRMS[M+H]＝574.2
实施例17(表1：化合物17)：合成3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧 基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(17)
步骤1：3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[3-(二乙氧基磷酰基)-3,3-二氟丙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1,7-萘啶-8-基)丙酸乙酯
3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[3-(二乙氧基磷酰基)-3,3-二氟丙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1,7-萘啶-8-基)丙酸乙酯按实施例19-步骤11所述过程制备，但使用1,1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯(1-1)(实施例1–步骤1所述)作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(17)
3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(17)按实施例19-步骤12所述过程制备，但使用前述步骤所得的3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[3-(二乙氧基磷酰基)-3,3-二氟丙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1,7-萘啶-8-基)丙酸乙酯。3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3,3-二氟-3-膦丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(17)获得的1H NMR(DMSO-d6)为：δ9.02(s,1H),8.82(s,1H),8.55(d,1H,J＝8.4Hz),7.58(s,1H),7.49(d,1H,J＝8.4Hz),7.07(d,1H,J＝8.4Hz),6.75(s,1H),6.68(d,1H,J＝8.0Hz),4.03–4.00(m,2H),3.72–3.70(m,2H),3.66–3.62(m,2H),3.58–3.56(m,2H),3.53–3.52(m,2H),3.16–3.12(m,2H),3.03–2.96(m,4H),2.68–2.64(m,2H),2.31–2.33(m,2H),2.27(s,3H).LRMS[M+H]＝648.2
实施例18(表1：化合物18)：合成3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦酰乙氧 基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(18)
步骤1：2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯按实施例22-步骤1所述过程制备，但使用市售可得的1-碘-2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷作为试剂。
步骤2：3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1,7-萘啶-8-基]丙酸乙酯
3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1,7-萘啶-8-基]丙酸乙酯按实施例19-步骤11所述过程制备，但使用前述步骤1所得的2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(18)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(18)按实施例19-步骤12所述过程制备，但使用前述步骤2所得的3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1,7-萘啶-8-基]丙酸乙酯。3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(18)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ9.02(s,1H),8.82(s,1H),8.56(d,1H,J＝8.4Hz),7.57(s,1H),7.49(d,1H,J＝8.4Hz),7.07(d,1H,J＝8.4Hz),6.76(s,1H),6.68(d,1H,J＝8.4Hz),4.03–4.01(m,2H),3.72–3.69(m,2H),3.59–3.47(m,10H),3.16–3.13(m,2H),3.03–2.96(m,4H),2.68–2.64(m,2H),1.87–1.82(m,2H),2.27(s,3H).LRMS[M+H]＝642.3
实施例19(表1：化合物19)：合成3-(5-氨基-2-(4-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基) 乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(19)
方案6
步骤1：(E)-3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)丙烯酸乙酯(6-3)
溶于乙腈(0.3M)和EtOH(0.5M)中的5-溴-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯(6-1)(1.0当量)溶液中加入K2CO3(2.0当量)。所述反应脱气并用N2冲洗，然后加入(E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)丙烯酸乙酯(6-2)(1.2当量)和Pd(PPh3)4(0.1当量)。反应再用N2冲洗并于100℃搅拌过夜。冷却至室温后，加入己烷，通过硅垫过滤该混合物，并用EA/Hex(1:1)洗脱直到产物被完全洗脱。浓缩滤液并在Combiflash上纯化，用含0-15％EA的己烷洗脱产生(E)-3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)丙烯酸乙酯(6-3)白色固体。
步骤2：3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)丙酸乙酯(6-4)
含(E)-3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)丙烯酸乙酯(6-3)(1.0当量)的乙酸乙酯/乙醇溶液(1:1,0.3M)中添加威尔金森催化剂(0.10当量)。用气球引入氢气，反应在室温搅拌24小时。通过硅藻土垫过滤该混合物，用二氯甲烷洗涤。滤液真空浓缩，并通过Combiflash用含0-10％乙酸乙酯的己烷纯化以得到3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)丙酸乙酯(6-4)固体。
步骤3：3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸乙酯(6-5)
将溶于1,4-二烷(0.2M)的3-(3-(叔-丁氧基羰基氨基)-4-氯苯基)丙酸乙酯(6-4)(1.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷)(2.0当量)、三(二亚苄基酮)二钯(0)(0.05当量)、2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(0.20当量)和乙酸钾(2.0当量)溶液脱气并在100℃下搅拌过夜。冷却至室温后，反应内容物真空浓缩。通过Combiflash用含0-50％乙酸乙酯的己烷纯化原料，产生3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸乙酯(6-5)棕色油。产物储存于-20℃并在合成一个月之内使用。
步骤4：1-溴-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-7)
于0℃向溶于DMF(0.5M)的4-溴-3-甲酚(6-6)(1.0当量)溶液逐份添加60％重量的NaH(1.5当量)。控制所述添加以使内部反应温度不超过10℃。反应在室温搅拌45分钟，然后通过加液漏斗逐滴加入溶于DMF(3M)的氯(甲氧基)甲烷(1.2当量)溶液反应在室温搅拌3.5小时，然后通过倒入冰中淬灭。所得反应混合物室温搅拌1小时。加入醚，分成两层。用醚提取水层(1x)。合并的有机层用水(2x)、卤水清洗，用MgSO4干燥，并浓缩产生1-溴-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-7)无色油。该原料无须进一步纯化即可用于下一步骤。
步骤5：三乙基((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)硅烷
将溶于DMF(0.5M)的1-溴-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(1.0当量)、三乙基胺(5.0当量)溶液脱气并用氮气冲洗。在该反应中添加TES-乙炔(1.05当量)、CuI(0.098当量)和Pd(PPh3)2Cl2(0.098当量)。反应加热至60℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，加入水和醚。分层，用水(2x)洗涤有机层。分离有机层并穿过硅垫(己烷填充)。用含10％EA的己烷洗脱硅。合并组分并浓缩产生三乙基((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)硅烷黑色油。该原料无须进一步纯化即可用于下一步骤。
步骤6：1-乙炔基-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-8)
在0℃向三乙基((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)硅烷(1.0当量)溶液中缓慢加入四丁基氟化铵(THF中的1M溶液，0.20当量)。此时，移去冰浴，并将反应混合物室温搅拌45分钟。然后所述反应混合物穿过硅垫(己烷填充)并用含20％EtOAc的己烷洗脱以除去不溶性盐。然后通过Combiflash用含0-10％EtOAc的己烷纯化该粗产物产生1-乙炔基-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-8)浅褐色液体。步骤7：3-氯-5-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(6-10)
将溶于DMF(0.25M)的1-乙炔基-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-8)(1.0当量)、3,5-二氯-2-氰基吡啶(6-9)(0.90当量)、CuI(0.10当量)、和Pd(PPh3)2Cl2(0.10当量)、和三乙基胺(5.0当量)溶液脱气并用氮气冲洗。然后反应混合物加热至60℃，并搅拌过夜。冷却至室温后，加入水。用EA(2x)提取混合物。合并的有机层用10％NH4OH水溶液(2x)、卤水洗涤，并浓缩。通过硅垫过滤原料(己烷湿润)。用含10％EA的己烷洗脱硅。合并组分并浓缩。得到的固体在热醚中洗涤并过滤产生黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。浓缩滤液，并通过Combiflash用含0-10％EtOAc的己烷纯化以得到3-氯-5-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(6-10)黄色固体。
步骤8：3-(5-氨基-2-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-11)
将含3-氯-5-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-2-氰基吡啶(6-10)(1.0当量)、3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸乙酯(6-5)(1.25当量)、三(二苄亚基丙酮)二钯(0)(0.10当量)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(0.20当量)和碳酸氢钠(3.0当量)的正丁醇/H2O(5:1,0.2M)溶液脱气并在100℃下搅拌过夜。反应内容物冷却至室温后，用乙酸乙酯与水稀释。分离两相，水层用乙酸乙酯提取两次。合并的有机层用卤水洗涤，用无水MgSO4干燥并真空浓缩。通过快速色谱在系统(ISCO)上先用含0-40％乙酸乙酯的甲苯除去杂质，然后用含0-4％MeOH的DCM纯化原料，产生3-(5-氨基-2-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-11)。通过沉淀和热醚清洗进一步完成纯化。
步骤9：3-(5-氨基-2-(4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-12)
将含3-(5-氨基-2-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-11)(1.0当量)的EtOH/THF(3:1,0.16M)溶液用氮气冲洗。然后添加10％重量的Pd/C(0.20当量，重量)。所述反应用氢气冲洗(2x)并在氢气球下搅拌。24小时后，通过硅藻土垫过滤该反应，用含5％MeOH的DCM洗涤。用LCMS检查滤液中是否存在起始材料。重复氢化反应直到没有检测到更多炔烃起始材料或烯烃中间产物。通过Combiflash用含0-4％MeOH的DCM纯化粗产物产生3-(5-氨基-2-(4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-12)白色固体。
步骤10：3-(5-氨基-2-(4-羟基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-13)
3-(5-氨基-2-(4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-12)(1.0当量)溶于EtOH(0.2M)，然后添加溶于二烷(0.2M)的4M HCl溶液。沉淀出的产物为黄色盐。搅拌3小时后，将反应倒入醚的搅拌溶液。混合物搅拌10分钟，然后过滤并用醚冲洗。获得3-(5-氨基-2-(4-羟基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-13)黄色固体，并真空干燥过夜(双-HCl盐)。或者，通过Combiflash用含0-5％MeOH的DCM纯化粗产物以产生游离碱。
步骤11：3-(5-氨基-2-(4-(2-(3-(二乙氧基磷酰基)-3,3-二氟丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-15)
在溶于DMF(0.14M)的3-(5-氨基-2-(4-羟基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-13)(1.0当量)溶液中添加含3-(2-溴乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸二乙酯(6-14:实施例7–步骤1中所述)(1.3当量)的DMF(0.7M)和碳酸铯(4当量)溶液。60℃搅拌反应。1.5小时后(或直到通过LCMS确定反应完成)，所述反应中添加DCM(2体积当量)。过滤固体(无机)，浓缩滤液。通过Combiflash用含0-5％MeOH的DCM纯化粗产物产生3-(5-氨基-2-(4-(2-(3-(二乙氧基磷酰基)-3,3-二氟丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-15)油，其静置后变为白色固体。
步骤12：3-(5-氨基-2-(4-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(19)
于0℃向溶于DCM(0.16M)的3-(5-氨基-2-(4-(2-(3-(二乙氧基磷酰基)-3,3-二氟丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸乙酯(6-15)(1.0当量)溶液中缓慢加入TMSBr(10当量)。该反应在室温下搅拌过夜。0℃添加额外的TMSBr(5.0当量)，并再次室温搅拌反应过夜。通过蒸发移去溶剂，并将粗制橙色固体在hi-vac上简单干燥。所述固体在EtOH(0.5M)悬浮并加入2.5N NaOH(10.0当量)。80℃搅拌反应3小时。冷却到室温后，该混合物调节为pH 9-10并用C18柱在RP-HPLC上直接纯化，用含10-40％95:5(MeCN/5mMNH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)梯度洗脱。合并含产物的部分并真空浓缩。得到的白色凝胶溶于加入数滴氢氧化铵的回流1:1EtOH/水(0.04M)中。所述混合物趁热缓慢倒入50℃预热的搅拌的热丙酮溶液(0.009M)中。丙酮悬液边持续搅拌边缓慢冷却至室温15分钟，然后置于冰浴10分钟。过滤固体并用丙酮(2x)和醚(2x)依次清洗。该固体在hi-vac上干燥过夜，产生3-(5-氨基-2-(4-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(19)固体。1H NMR(二甲基亚砜-d6):δ9.02(s,1H),8.82(s,1H),8.55(d,1H,J＝8.4Hz),7.58(s,1H),7.48(d,1H,J＝8.4Hz),7.07(d,1H,J＝8.4Hz),6.75(s,1H),6.68(d,1H,J＝8.4Hz),4.03–4.00(m,2H),3.72–3.68(m,4H),3.16–3.12(m,2H),3.03–2.96(m,4H),2.67–2.64(m,2H),2.33–2.32(m,2H),2.26(s,3H).LRMS[M+H]＝604.2
实施例20(表1：化合物20)：合成3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦酰乙氧基) 乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(20)
步骤1：2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
在微波管中装入搅拌棒、市售可得的1,2-双(2-碘乙氧基)乙烷(1.0当量)和亚磷酸三乙酯(1.0当量)。该微波管盖上盖子然后边搅拌边160℃辐照40分钟。该反应混合物冷却至室温并通过Combiflash用含0-75％EtOAc的己烷纯化，或者通过RP-HPLC(ACN中的0.035％TFA:水中的0.05％TFA,C18柱)，得到2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯浅黄色油。
步骤2：3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1,7-萘啶-8-基)丙酸乙酯
3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1,7-萘啶-8-基)丙酸乙酯按实施例19-步骤11所述过程制备，但使用前述步骤1所得的2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(20)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(20)按实施例19-步骤12所述过程制备，但使用前述步骤2所得的3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1,7-萘啶-8-基)丙酸乙酯。3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(20)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ9.02(s,1H),8.82(s,1H),8.55(d,1H,J＝8.0Hz),7.58(s,1H),7.49(d,1H,J＝8.4Hz),7.06(d,1H,J＝8.0Hz),6.76(s,1H),6.68(d,1H,J＝8.0Hz),4.03–4.00(m,2H),3.71–3.69(m,2H),3.60–3.54(m,4H),3.51–3.49(m,2H),3.16–3.12(m,2H),3.03–2.96(m,4H),2.67–2.66(m,2H),2.33–2.32(m,2H),2.26(s,3H).LRMS[M+H]＝598.2
实施例21(表1：化合物21)：合成3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦酰乙氧基)乙 氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(21)
步骤1：2-(2-溴乙氧基)乙基膦酸二乙酯
按实施例22-步骤1所述过程制备2-(2-溴乙氧基)乙基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸
3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸按实施例19-步骤11所述过程制备，但使用前述步骤1获得的2-(2-溴乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(21)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(21)按实施例19-步骤12所述过程制备，但使用前述步骤2所得的3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸。3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸(21)获得的1H NMR(MeOD-d4)为：δ8.59(s,1H),8.45(s,1H),8.18(d,1H,J＝8.4Hz),7.52(s,1H),7.31(d,1H,J＝8.0Hz),6.93(d,1H,J＝8.4Hz),6.72(s,1H),6.65(d,1H,J＝8.4Hz),4.06–4.03(m,2H),3.84–3.76(m,4H),3.15–3.07(m,4H),3.01–2.97(m,2H),2.68–2.64(m,2H),2.22(s,3H),2.03–1.99(m,2H).LRMS[M+H]＝554.2
实施例22(表1：化合物22)：合成2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸(22)
步骤1：2-溴乙基膦酸二乙酯
市售可得的1,2-二溴乙烷(1.0当量)和亚磷酸三乙酯(1.0当量)用微波照射160℃加热20分钟。所得残留物通过反相高效液相色谱(HPLC)(ACN中的0.035％TFA:水中的0.05％TFA,C18柱)产生2-溴乙基膦酸二乙酯无色液体。
步骤2：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸二乙酯
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤1获得的2-溴乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸(22)
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸(22)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤2所得的2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸二乙酯。在1H NMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基-膦酸(22)获得的1H NMR(二甲亚砜)为：δ8.83(s,1H),8.71(s,1H),8.35(d,1H,J＝8.3Hz),7.35(s,1H),7.15(d,1H,J＝9.6Hz),7.08(d,1H,J＝8.4Hz),7.06–7.03(br,2H)6.71(s,1H),6.64(d,1H,J＝8.1Hz),4.09–3.99(m,2H),3.07(t,2H,J＝6.9),2.93(t,2H,J＝6.7),2.44(s,3H),2.26(s,3H),1.72–1.62(m,2H).LRMS[M+H]＝452.2
实施例23(表1：化合物23)：合成6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸(23)
步骤1：6-溴己基膦酸二乙酯
按实施例22-步骤1所述过程制备6-溴己基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,6-二溴己烷作为试剂。
步骤2：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸二乙酯
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤1所得的6-溴己基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸(23)
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸(23)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸二乙酯。在1H NMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸(23)获得的1H NMR(二甲亚砜-d6)为.:δ8.95(s,1H),8.81(s,1H),8.50(d,1H,J＝8.4Hz),7.52(s,1H),7.40(d,1H,J＝8.4Hz),7.01(d,1H,J＝8.4Hz),6.71(s,1H),6.64(d,1H,J＝10.9Hz),3.87(t,2H,J＝6.34Hz),3.13(t,2H,J＝7.1Hz),2.96(t,2H,J＝7.0Hz),2.69–2.66(m,1H),2.35–2.32(m,1H),2.25(s,2H),1.72–1.62(m,2H),1.62–1.51(m,2H),1.51–1.40(m,2H).LRMS[M+H]＝508.2
实施例24(表1：化合物24)：合成6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸(24)
步骤1：6-溴-1,1-二氟己基膦酸二乙酯
按实施例1-步骤1所述过程制备6-溴-1,1-二氟己基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,5-二溴戊烷作为试剂。
步骤2：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸二乙酯
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤1所得的6-溴-1,1-二氟己基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸(24)
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸(24)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤2所得的6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸二乙酯。在1H NMR样品中加入TFA以溶解所述化合物用于分析。6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸(24)获得的1H NMR(MeOD-d4)为：δ8.73(s,1H),8.60(s,1H),8.31(d,1H,J＝8.4Hz),7.48(s,1H),7.43(d,1H,J＝8.3Hz),6.91(d,1H,J＝8.4Hz),6.70(s,1H),6.61(d,1H,J＝11.0Hz),3.90(t,2H,J＝6.3Hz),3.20(t,2H,J＝7.3Hz),3.03(t,2H,J＝7.5Hz),2.54(s,2H),2.22(s,3H),1.79–1.71(m,2H),1.69–1.59(m,2H),1.57–1.47(m,2H).LRMS[M+H]＝544.2
实施例25(表1：化合物25)：合成4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸(25)
步骤1：4-(溴甲基)苄基膦酸二乙酯
按实施例22-步骤1所述过程制备4-(溴甲基)苄基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,4-双(溴甲基)苯作为试剂。
步骤2：4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸二乙酯
44-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤1所得的4-(溴甲基)苄基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸(25)
4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸(25)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤2所得的4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸二乙酯。4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸(25)获得的1H NMR(MeOD-d4)为：δ8.72(s,1H),8.58(s,1H),8.30(d,1H,J＝8.4Hz),7.48(s,1H),7.42(d,1H,J＝9.5Hz),7.36–7.30(m,4H),6.93(d,1H,J＝8.4Hz),6.78(s,1H),6.67(d,1H,J＝8.4Hz),4.98(s,2H),3.96(s,2H),3.20(t,2H,J＝7.2Hz),3.04(t,2H,J＝7.2Hz),2.54(s,3H),2.23(s,3H).LRMS[M+H]＝528.2
实施例26(表1：化合物26)：合成2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘 啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)
步骤1：2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯按照实施例20-步骤1所述的过程制备。
步骤2：2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤1获得的2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)
2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤2所得的2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯。2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)获得的1H NMR(MeOD-d4)为：δ8.73(s,1H),8.66(s,1H),8.38(d,1H,J＝8.4Hz),7.52(s,1H),7.47(d,1H,J＝8.3Hz),7.36(s,1H),6.93(d,1H,J＝8.4Hz),6.75(s,2H),6.64(d,1H,J＝10.8Hz),4.09–4.06(m,2H),3.80-3.76(m,2H),3.69–3.64(m,2H),3.643.59(m,2H),3.53–3.49(m,2H),3.25(t,2H,J＝7.0Hz),3.09(t,2H,J＝7.5Hz),2.58(s,3H),2.28(s,3H),2.13–2.01(m,2H).LRMS[M+H]＝540.2
实施例27(表1：化合物27)：合成5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸(27)
步骤1：5-溴戊基膦酸二乙酯
按实施例22-步骤1所述过程制备5-溴戊基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1.5-二溴戊烷作为试剂。
步骤2：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸二乙酯
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤1所得的5-溴戊基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸(27)
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸(27)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤2所得的5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸二乙酯。5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸(27)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ8.99(s,1H),8.83(s,1H),8.53(d,1H,J＝8.4Hz),7.51(s,1H),7.39(d,1H,J＝8.4Hz),7.06(d,1H,J＝8.4Hz),6.71(s,1H),6.65(d,1H,J＝8.3Hz),3.87(t,2H,J＝6.3Hz),3.12(t,2H,J＝7.0Hz),2.96(t,2H,J＝7.0Hz),2.5(s,3H),2.26(s,3H),1.73–1.64(m,2H),1.64–1.58(m,2H),1.58–1.51(m,2H),1.51–1.41(m,2H).LRMS[M+H]＝494.2
实施例28(表1：化合物28)：合成4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2- 基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸(28)
步骤1：4-溴丁基膦酸二乙酯
按实施例22-步骤1所述过程制备4-溴丁基膦酸二乙酯，但使用市售可得的1,4-二溴丁烷作为试剂。
步骤2：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸二乙酯
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸二乙酯按实施例1-步骤2所述过程制备，但使用前述步骤1所得的4-溴丁基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸(28)
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸(28)按实施例1-步骤3所述过程制备，但使用前述步骤2所得的4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸二乙酯。4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸(28)获得的1H NMR(二甲基亚砜-d6)为：δ8.93(s,1H),8.79(s,1H),8.48(d,1H,J＝8.3Hz),7.51(s,1H),7.37(d,1H,J＝8.5Hz),7.04(d,1H,J＝8.4Hz),6.71(s,1H),6.63(d,1H,J＝8.3Hz),3.89(t,2H,J＝6.09Hz),3.12(t,2H,J＝6.8Hz),2.96(t,2H,J＝6.9Hz),2.47(s,3H),2.34–2.31(m,2H),2.24(s,3H),1.80–1.67(m,4H),1.67–1.61(m,2H).LRMS[M+H]＝480.2.
按照上述过程制备的式(I)化合物与[M+H]数据和人TLR7EC50(nM)数据示于表1。
表1
试验
分析本文提供的式(I)化合物以检测其调节toll样受体7的能力。
人外周血单核细胞试验
本文提供的式(I)化合物的生物活性按照机构审查委员会批准的准则，使用独立正常人类供体在人外周血试验(人PBMC)中检测。人PBMC用菲科尔(Ficoll)密度梯度(通用电器医疗集团(GE healthcare)17-1440-03)从新鲜的外周血中分离。将30-35mL外周人血加在50ml锥形管中的15mL聚蔗糖(Ficoll)层上，然后1800rpm(艾本德(Eppendorf)离心机5810R，管桶上盖有生物安全盖)室温离心30分钟，无加速度且无制动。然后收集浅黄色层并转移到新的50ml锥形管上并在完全培养基中清洗2次，所述完全培养基由RPMI1640(加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen Corporation)的11875085)组成，添加有10％热灭活胎牛血清(Gibco 10099-141)、1％Pen-Strep(Gibco#15140-122)、1mM非必需氨基酸(Gibco#11140-050)、1mM丙酮酸钠(Gibco#11360-070)、2mM L-谷氨酰胺(Gibco#25030-081)和1mM HEPES(Gibco#15630-080)。然后用台盼蓝染色计数活细胞，以2x105细胞/孔接种于96孔平底板(BD公司(Becton Dickinson#353070))上200μl总体积的完全培养基中。然后将化合物加入10点剂量响应形式中，起始于100μM，稀释3倍。阴性对照孔接受等浓度DMSO。37℃、5％CO2孵育18-24小时后收集培养物上清，进一步使用前储存于-20℃。
用鲁米耐克斯(Luminex)试剂盒(伯乐(Biorad)公司)检测培养物上清中的IL-6水平。用GraphPad(加利福尼亚州圣地亚哥)的Prism软件进行数据分析。针对各化合物产生剂量响应曲线且EC50值测定为产生50％最大信号的浓度。
报告基因试验
人胚胎肾293(HEK 293)细胞用人TLR7和NF-kB-驱动的荧光素酶报告载体(pNifty-荧光素酶)稳定转染。作为对照试验，使用pNifty-荧光素酶转染的正常Hek293。细胞在补充有2mM L谷氨酰胺、10％热灭活FBS、1％青霉素和链霉素、2μg/ml嘌呤霉素(英杰公司#ant-pr-5)和5μg/ml杀稻瘟菌素(英杰公司#46-1120)的DMEM中培养。Bright-GloTM荧光素酶试验缓冲液和底物由普洛麦格(Promega)#E263B和#E264B提供(分别为试验底物和缓冲液)。底部透明的384孔板由葛莱娜第一生化有限公司(Greiner bio-one)(#789163-G)提供且为定制的带条码板。
细胞以25,000细胞/孔接种于384孔板中的50μl终体积培养基中。细胞于37℃和5％CO2培养过夜(18小时)后粘附所述板。然后将连续稀释的实验和阳性对照化合物分配到各孔并于37℃和5％CO2孵育7小时。还用DMSO单独刺激细胞作为阴性对照。孵育后，按照生产商说明将30μl预混合试验缓冲液和底物缓冲液加入各孔。发光信号用CLIPR机器读取，整合时间为20秒/板。
针对各化合物产生剂量响应曲线且EC50值测定为产生50％最大信号的浓度。
某些试验结果
采用游离形式或药学上可接受的盐形式的各种式(I)化合物表现出药理学特性，例如由本申请所述的体外检测所表明。这些实验中的EC50值作为引起基线和最大应答之间一半应答的所研究测试化合物的浓度。在某些实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-100μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-50μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-25μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-20μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-15μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-10μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-5μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-2μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-1μM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-500nM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-250nM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-100nM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-50nM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-25nM。在其他实施例中，式(I)化合物的EC50值为1nM-10nM。相对于雷西莫特活性设置为100％时获得该EC50值。
仅举例来说，某些式(I)化合物的TLR-7刺激的EC50列于表1。
有含铝佐剂的制剂
本文提供的式(I)化合物与含铝佐剂在pH 9和pH 6.5的结合用HPLC评价以监控上清中是否存在式(I)化合物。
pH 9的结合评估
化合物1(0.5mg/mL)溶于10mM NaOH中并添加氢氧化铝佐剂(2mg/mL)产生100μg/剂量制剂。上清用HPLC评价，在C18(50cm x 4.6mm)ACE柱上于45℃使用冲击梯度(2.5分钟内从10％CH3CN-0.1％TFA到100％CH3CN-0,1％TFA)。为了评价上清温度和孵育时间对结合的影响，在上清温度为室温和在37℃ 1小时、5小时和24小时后评价所述上清。还评价没有氢氧化铝的对照。含或不含氢氧化铝的化合物1制剂随着温度或孵育时间的HPLC色谱表明制剂中包括氢氧化铝时所述上清中不存在化合物1。图1显示HPLC检测的化合物1在上清中的浓度，用于室温和37℃时的含明矾的化合物1和单独化合物1(对照)。
化合物5(1mg/mL)溶于10mM NaOH中并添加氢氧化铝佐剂(2mg/mL)产生100μg/剂量制剂。上清用HPLC评价，在C18(50cm x 4.6mm)ACE柱上于45℃使用冲击梯度(2.5分钟内从10％CH3CN-0.1％TFA到100％CH3CN-0,1％TFA)。为了评价上清温度和孵育时间对结合的影响，在上清温度为室温和在37℃的1小时、5小时和24小时后评价所述上清。还评价没有氢氧化铝的对照。含或不含氢氧化铝的化合物5制剂随着温度或孵育时间的HPLC色谱表明制剂中包括氢氧化铝时所述上清中不存在化合物5。
pH 6.5的结合评估
化合物1(0.5mg/mL)溶于10mM NaOH中并添加氢氧化铝佐剂(2mg/mL)产生100μg/剂量制剂。用HCL将溶液的pH值调节到6.5。上清用HPLC评价，在C18(50cm x 4.6mm)ACE柱上于45℃使用冲击梯度(2.5分钟内从10％CH3CN-0.1％TFA到100％CH3CN-0,1％TFA)。为了评价上清温度和孵育时间对结合的影响，在上清温度为室温和在37℃ 1小时、5小时和24小时后评价所述上清。还评价没有氢氧化铝的对照。含或不含氢氧化铝的化合物1制剂随着温度或孵育时间的HPLC色谱表明制剂中包括氢氧化铝时所述上清中不存在化合物1。
pH 6.7的结合评估
化合物5(1mg/mL)溶于10mM组氨酸缓冲液中并添加氢氧化铝佐剂(2mg/mL)产生100μg/剂量制剂。上清用HPLC评价，在C18(50cm x 4.6mm)ACE柱上于45℃使用冲击梯度(2.5分钟内从10％CH3CN-0.1％TFA到100％CH3CN-0,1％TFA)。为了评价上清温度和孵育时间对结合的影响，在上清温度为室温和在37℃ 1小时、5小时和24小时后评价所述上清。还评价没有氢氧化铝的对照。含或不含氢氧化铝的化合物5制剂随着温度或孵育时间的HPLC色谱表明制剂中包括氢氧化铝时所述上清中不存在化合物5。
pH 9的结合评估(组氨酸缓冲液调节至pH 9)
采用有机溶剂提取方法评估化合物1是否与氢氧化铝共价结合。如下制备制剂：2mg/ml氢氧化铝、100μg/剂量化合物1、10mM组氨酸缓冲液且pH调节为9。还制备没有氢氧化铝的对照制剂。
含明矾的1ml制剂与1ml KH2PO41M pH 9(0.5M终浓度,pH 9)混合并37℃温和搅拌过夜，通过配体交换磷酸阴离子使化合物1(化合物5)与氢氧化铝解吸附。然后进行有机提取。1ml各样品与1ml正丁醇混合并涡旋。2相形成后，移出上层相(丁醇)，用N2干燥并用MeOH/10mM NaOH重悬。对制剂上清和丁醇提取样品(C18柱；2分钟内0-100％B；A＝水中的0.1％TFA；B＝ACN中的0.1％TFA)都进行HPLC分析。在用KH2PO4处理的制剂上清中发现化合物1的量增加，表明化合物1被磷酸阴离子解吸附。提取样品中发现相同的趋势。所获数据示于下表2：
氢氧化铝对化合物6、16、17、19和20的吸收如下评估：向三体积当量的水性氢氧化铝(2mg/mL)中加入一体积当量的pH 6.8的含化合物的10mM组氨酸缓冲液(4mg/mL)。所得溶液用空白组氨酸缓冲液稀释10倍至0.1mg/mL的终化合物浓度。稀释的溶液于37℃孵育5小时。样品在14,000rpm离心10分钟以沉淀不可溶物。然后根据0.005-50μM已知化合物浓度制备的校准曲线，在沃特世(Waters)Atlantis dC18(50mm x 2.1mm)柱上通过LC-MS/MS用冲击梯度(3.5分钟内从5％CH3CN-0.5％甲酸到95％CH3CN-1.0％甲酸)室温评价该上清(和内标)。上清中的浓度计算为相较对照的明矾未结合％；明矾结合％计算为100％减去未结合％。表3列出各测试化合物的结合％：
表1化合物 结合明矾百分比
6 98.2
16 94.5
17 96.2
19 96.0
20 97.0
化合物1本质上发荧光。与化合物1(0.25mg/ml)混合前和后的氢氧化铝佐剂(3mg/ml)的共聚焦显微分析直观显示该磷酸化合物与不可溶金属盐颗粒相关。
解吸附实验方案用于进一步证实所述化合物和氢氧化铝佐剂的结合。用0.5M磷酸盐缓冲液处理化合物/佐剂制剂(荧光)，然后用水(用于水溶性化合物)或丁醇(用于水溶性差的化合物)清洗。然后分析清洗的佐剂，其和与所述化合物混合前的氢氧化铝佐剂一样没有显示荧光。
稳定性研究显示吸收的化合物在化合物稳定性和吸收方面能稳定数周。所有化合物1、6、16、17、19和20在至少3周时间内显示至少95％的吸收。化合物19和20的连续研究显示其能稳定6周或更多。
体内递送后的全身接触
将化合物6、16、19和20单独用缓冲液或用氢氧化铝佐剂吸收后通过肌肉内注射以100μg(4mg/kg)给予Balb/C小鼠。然后全身血清接触所述化合物持续24小时。如图3的化合物16所示，未吸收化合物具有下降迅速的高初始血清浓度，吸收的化合物显示持续更长时间的平坦许多的应答。
相似地，Balb/C小鼠(每组3只)中肌肉内注射(100μg)化合物1、6、16、17、19和20与蛋白抗原和有或没有氢氧化铝佐剂的组合，24小时后检测所述化合物的肌肉水平。除了化合物1之外，若无佐剂注射则无法检测所述化合物，但含佐剂注射时容易检测。化合物1在组氨酸缓冲液中溶解较差，这解释了其不同的表现。因此佐剂的吸收能在局部注射位置保留高水平的可溶性膦酸盐。
用含或不含氢氧化铝佐剂或仅用缓冲液的化合物6免疫后24小时检测血清细胞因子。无佐剂的化合物6给药后IL-6和mKC水平都提高约4倍，且MCP-1的水平约高20倍(相较单独载剂)。相反，与佐剂组合给药时水平提高<2倍(参见图4；还参见图5中化合物20的结果)。相似地，氢氧化铝佐剂的吸收降低了CD4+T细胞(也为CD69+)的比例和CD19+B细胞(也为CD86+)的比例，且此效应在脾和引流淋巴结中均有发现。例如，吸收使CD86+B细胞的比例从约75％降低到约15％。
对MenB抗原与氢氧化铝结合的影响
用SDS-PAGE评价化合物1和氢氧化铝佐剂的结合对MenB抗原结合氢氧化铝佐剂能力的影响。化合物1以0.5mg/ml终浓度溶于10mM NaOH中。存在终浓度10mM组氨酸时，明矾和化合物1以1:6(化合物1:明矾)的重量比结合。pH调节为9.2且混合物室温温和搅拌3小时从而发生反应。将混合物在5000x g下离心10分钟并弃去上清。在初始的明矾缓冲液中重悬沉淀(即化合物1-修饰的明矾)以获得起始明矾浓度。将pH调整到6.5。然后将修饰的明矾用于含MenB抗原的制剂。
仅用氢氧化铝佐剂(明矾)或用氢氧化铝佐剂和化合物1一起配制的MenB抗原的上清SDS-PAGE分析示于图2。评价的MenB抗原为287-953、936-741和961c，其描述于WO2004/032958和Giuliani等(2006)PNAS USA 103:10834-9。标记“Sn”和TCA”的泳道代表离心沉淀所述氢氧化铝佐剂后制剂上清的分析。标记“Des”的泳道代表用0.5M磷酸盐缓冲液从氢氧化铝上解吸附后回收的抗原的分析。图2显示含化合物1时MenB抗原结合氢氧化铝与无化合物1时所获一样有效。
氢氧化铝对化合物16和化合物17的吸收还用上述化合物1的明矾制剂评价。HPLC分析显示对于两种化合物，添加氢氧化铝后的上清中没有观察到化合物。然而，用0.5MKH2PO4吸收后回收到化合物16和化合物17。应注意由于所述两种化合物的水溶性，有机溶剂提取不必需。此外，存在化合物16或化合物17时抗原结合的SDS-PAGE分析如上所述进行。对于两种化合物，所有3种MenB抗原完全吸收到化合物16修饰的明矾和化合物17修饰的明矾上。
用血清杀菌抗体(SBA)试验检测MenB抗原的体内免疫原性效力。图6显示用5CVMB与以下的组合免疫后获得的对株系NZ98的血清杀菌效价：(a)仅氢氧化铝佐剂,(b)氢氧化铝佐剂+25μg化合物6,(c)氢氧化铝佐剂+100μg化合物6,(d)仅化合物6,或(e)氢氧化铝佐剂和MenB外膜囊泡。氢氧化铝佐剂对化合物6的预吸收使得SBA效价大量增加，且比基于单独化合物6所见结果的预期要高很多。
本发明的其他TLR7激动剂也观察到相似效应。例如，图7显示化合物20的结果，使用与以下物质配制的5CVMB：(a)无佐剂,(b)氢氧化铝佐剂和OMV,(c)100μg化合物20,(d)25μg化合物20+氢氧化铝佐剂，或(e)100μg化合物20+氢氧化铝佐剂。图8显示化合物19的结果，使用与以下物质配制的5CVMB：(a)无佐剂,(b)氢氧化铝佐剂和囊泡,(c)100μg化合物19,(d)25μg化合物19，(e)100μg化合物19+氢氧化铝佐剂，或(f)25μg化合物19+氢氧化铝佐剂。
化合物20被氢氧化铝预吸收以研究用经修饰5CVMB免疫后获得的血清的株系覆盖，其中GNA2091/1870融合蛋白被要求USSN 61/237,576中权利(其中的SEQ ID NO:126)的2010年8月27日提交的国际专利申请中所公开的‘936-10A-10A’融合蛋白替代。下表显示用(a)仅氢氧化铝佐剂,(b)氢氧化铝佐剂+25μg外膜囊泡,(c)含100μg化合物20的氢氧化铝佐剂,(d)含25μg化合物20的氢氧化铝佐剂,(e)含25μg化合物20的氢氧化铝佐剂，或(f)氢氧化铝佐剂+IC31TM配制3种多肽后针对5种不同株系的效价：
MC58 NZ98 961-5945 UK355 599
(a) 16384 1024 16384 256 65536
(b) 32768 4096 8192 2048 >65536
(c) >65536 16384 32768 4096 >65536
(d) 32768 2048 16384 1024 >65536
(e) >65536 4096 8192 2048 >65536
(f) >65536 8192 16384 2048 >65536
因此与单独氢氧化铝相比，化合物20能改善株系覆盖。
应理解，本文所述的实施例和实施方式仅用于说明目的，本领域技术人员应了解据此作出的各种修饰或改变，且它们包括在本申请的精神和权限以及所附权利要求书的范围内。本文引用的所有发表物、专利和专利申请通过引用纳入本文以用于所有目的。

Claims (30)

1.一种免疫原性组合物，所述组合物含(i)式(I)化合物或其药学上可接受的盐,(ii)抗原,和(iii)含铝佐剂；其中所述含铝佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝；其中所述式(I)化合物是TLR7激动剂：
式(I)中：
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选取代有1-4个氟基团；
各L3独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选取代有1-4个氟基团；
L4是亚苯基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自C1-C4烷基、–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自氢和氟；
R5是-P(O)(OR9)2,
R6是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是–CF2P(O)(OR9)2；
R8是H或C1-C4烷基；
各R9独立地选自H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自1、2、3、4、5和6，以及
q是1、2、3或4；
前提是R3为C1-C4烷基或–OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OR9)2。
2.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，
R1是C1-C6烷基；
R2是C1-C6烷基；
R3是-OL3R5或-OL3R7；
R5是-P(O)(OH)2；
R7是–CF2P(O)(OH)2，和
L3是C1-C6亚烷基。
3.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，
R1是C1-C6烷基；
R2是C1-C6烷基；
R3是-OL3R5或-OL3R7；
R5是-P(O)(OH)2；
R7是–CF2P(O)(OH)2；
L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；
R4是H；
q是1或2,和
p是2。
4.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，
R1是–L2R6；
R2是C1-C6烷基；
R3是-OL3R5或-OL3R7；
R5是-P(O)(OH)2；
R6是-C(O)(OH)；
R7是–CF2P(O)(OH)2；
L2是C1-C6亚烷基，和
L3是C1-C6亚烷基。
5.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，
R1是–L2R6；
R2是C1-C6烷基；
R3是-OL3R5或-OL3R7；
R5是-P(O)(OH)2；
R6是-C(O)(OH)；
R7是–CF2P(O)(OH)2；
L2是C1-C6亚烷基；
L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；
R4是H；
q是1或2,和
p是2。
6.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，
R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；
R2是C1-C6烷基；
R3是-OR8；
R8是C1-C4烷基；
R5是-P(O)(OH)2；
R6是–CF2P(O)(OH)2；
L1是–C(O)-,和
L2是C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，各基团可任选地由1-4个氟基团取代。
7.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，
R1是C1-C6烷基；
R2是C1-C6烷基；
R3是-OL3L4R5、-OL3L4L3R5、或-OL3L4L3R7；
R5是-P(O)(OH)2；
R7是–CF2P(O)(OH)2；
L3各自独立地为C1-C6亚烷基，和
L4是亚苯基。
8.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，
R1是C1-C6烷基；
R2是C1-C6烷基；
R3是-C(R5)2OH或-L1R5；
R5是-P(O)(OH)2,和
L1是-C(O)-或-O-。
9.如权利要求1或权利要求6所述的免疫原性组合物，其特征在于，R8是甲基。
10.如权利要求1-3或7-8中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，R1是甲基。
11.如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，R2是甲基。
12.如权利要求1所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述化合物选自：
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸；
3-(5-氨基-2-(4-(4,4-二氟-4-膦酰丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；
3-(5-氨基-2-(4-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基二氢磷酸酯；
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸；
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸；
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸；
3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸；
2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸；
2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1,1-二氟-2-氧乙基膦酸；
(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙烯基膦酸；
2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)乙基膦酸；
(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)-1-氟乙烯基膦酸；
3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸；
5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-羰基膦酸；
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦酰丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯基)(羟基)亚甲基二膦酸；
3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；
(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)(羟基)亚甲基二膦酸；
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦酰乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]萘啶-8-基)丙酸；
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸；
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸；
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸；
4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸；
2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]萘啶-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸；
3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(3,3-二氟-3-膦酰丙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1,7-萘啶-8-基]丙酸；
{5-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1,7-萘啶-2-基}乙基)-3-甲基苯氧基]戊基}膦酸,和
{4-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1,7-萘啶-2-基}乙基)-3-甲基苯氧基]丁基}膦酸。
13.如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述化合物以给予时足以产生免疫刺激作用的量存在。
14.如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述化合物存在的量有效提高给予所述组合物的对象中对所述抗原的免疫应答。
15.如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是细菌抗原。
16.如权利要求15所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述细菌抗原是来自脑膜炎奈瑟球菌的抗原。
17.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是糖。
18.如权利要求17所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述糖来自脑膜炎奈瑟球菌血清群A、W135、Y或C。
19.如权利要求16所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是多肽。
20.如权利要求19所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述多肽的序列选自SEQ IDNO:1-6。
21.如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述抗原是病毒抗原。
22.如权利要求21所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述病毒抗原是来自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原。
23.如权利要求22所述的免疫组合物，其特征在于，所述抗原选自下组：F、G、M。
24.如权利要求1-8中任一所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述组合物还包含额外佐剂。
25.如权利要求1-8中任一所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述化合物以治疗有效量存在并结合所述含铝佐剂。
26.如权利要求1-8中任一所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述含铝佐剂选自羟基氧化铝或氢氧化铝。
27.如权利要求1-8中任一项所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述免疫原性组合物是固体。
28.如权利要求27所述的免疫原性组合物，其特征在于，所述免疫原性组合物是冻干固体。
29.式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于提高免疫原性组合物有效性的产品中的应用，其中所述免疫原性组合物包括含铝佐剂和抗原，其中所述含铝佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝，且其中所述式(I)化合物是TLR7激动剂：
式(I)中：
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选取代有1-4个氟基团；
各L3独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选取代有1-4个氟基团；
L4是亚苯基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自C1-C4烷基、–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
各R4独立地选自氢和氟；
R5是-P(O)(OR9)2,
R6是–CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是–CF2P(O)(OR9)2；
R8是H或C1-C4烷基；
各R9独立地选自H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
各p独立地选自1、2、3、4、5和6，以及
q是1、2、3或4；
前提是R3为C1-C4烷基或–OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OR9)2。
30.(i)如权利要求1-28中任一项所述的免疫原性组合物中或如权利要求29所述的应用中所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，(ii)抗原,和(iii)含铝佐剂在生产引发患者免疫应答的药物中的用途，其中所述含铝佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。
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Families Citing this family (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2010290896B2 (en) 2009-09-02 2014-07-03 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic compositions including TLR activity modulators
EP2590626B1 (en) 2010-07-06 2015-10-28 GlaxoSmithKline Biologicals SA Liposomes with lipids having an advantageous pka-value for rna delivery
WO2012006369A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Immunisation of large mammals with low doses of rna
DK3243526T3 (da) 2010-07-06 2020-02-17 Glaxosmithkline Biologicals Sa Levering af rna til at udløse flere immunsignalveje
EP4119155A1 (en) 2010-08-31 2023-01-18 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Pegylated liposomes for delivery of immunogen-encoding rna
ES2458355T3 (es) 2010-09-01 2014-05-05 Novartis Ag Adsorción de inmunopotenciadores sobre sales metálicas insolubles
TR201903651T4 (tr) 2010-10-11 2019-04-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antijen uygulama platformları.
US9618508B2 (en) 2010-12-14 2017-04-11 Glaxosmithkline Biologicals Sa Flow cytometry analysis of materials adsorbed to metal salts
AU2012205681B2 (en) 2011-01-10 2016-07-28 Cleveland Biolabs, Inc. Use of toll-like receptor agonist for treating cancer
BR112013022397A2 (pt) 2011-03-02 2017-09-26 Derek O’Hagan vacinas combinadas com doses menores de antígeno e/ou adjuvante
EP2502631A1 (en) * 2011-03-22 2012-09-26 Medizinische Hochschule Hannover Immune suppressor and its use
WO2012154987A1 (en) 2011-05-10 2012-11-15 Nestec Sa Methods of disease activity profiling for personalized therapy management
BR112013032675A2 (pt) * 2011-06-19 2017-08-08 Vaxine Pty Ltd composição adjuvante de vacina compreendendo partículas de inulina
CA2840989A1 (en) * 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic combination compositions and uses thereof
IN2014CN02152A (zh) * 2011-09-01 2015-09-04 Novartis Ag
EP2793939A1 (en) 2011-12-23 2014-10-29 Novartis AG Stable compositions for immunising against staphylococcus aureus
EP2822589A1 (en) * 2012-03-07 2015-01-14 Novartis AG Adjuvanted formulations of rabies virus immunogens
PL2822947T3 (pl) * 2012-03-07 2017-01-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Sole argininowe agonisty TLR7
JP2015510872A (ja) * 2012-03-07 2015-04-13 ノバルティス アーゲー Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原の増強された製剤
AU2013229432A1 (en) * 2012-03-08 2014-10-16 Novartis Ag Adjuvanted formulations of booster vaccines
CA2878344A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Novartis Ag Complexes of cytomegalovirus proteins
CN104736563A (zh) 2012-07-27 2015-06-24 国家健康与医学研究院 Cd147作为受体用于脑膜炎球菌至血管内皮的菌毛介导的粘附
CN103566369B (zh) * 2012-08-01 2015-11-25 中国医学科学院肿瘤医院 一种在慢性乙肝病毒感染状态下诱导机体产生特异性免疫的乙肝疫苗
CN104582723A (zh) 2012-08-31 2015-04-29 诺华股份有限公司 用于针对金黄色葡萄球菌的免疫的稳定化的蛋白质
DK2890394T3 (da) 2012-08-31 2019-07-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Stabiliserede proteiner til immunisering mod Staphylococcus aureus
RU2015106930A (ru) 2012-09-06 2016-10-20 Новартис Аг Комбинированные вакцины с менингококком серогруппы в и к/д/с
WO2014108515A1 (en) * 2013-01-10 2014-07-17 Novartis Ag Influenza virus immunogenic compositions and uses thereof
CN104338129B (zh) * 2013-07-26 2017-05-24 中国科学院上海巴斯德研究所 雷帕霉素作为疫苗佐剂的用途及制备方法
EP3798229A1 (en) 2014-03-25 2021-03-31 Yale University Uses of parasite macrophage migration inhibitory factors
MX2016012538A (es) 2014-03-26 2016-12-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antigenos estafilococicos mutantes.
KR20170031251A (ko) 2014-07-30 2017-03-20 클리브랜드 바이오랩스, 아이엔씨. 플라젤린 조성물 및 용도
WO2016051389A1 (en) * 2014-10-03 2016-04-07 Engeneic Molecular Delivery Pty Ltd Enhanced loading of intact, bacterially derived vesicles with small molecule compounds
US10183056B2 (en) 2014-10-16 2019-01-22 Cleveland Biolabs, Inc. Methods and compositions for the treatment of radiation-related disorders
EP3048114A1 (en) 2015-01-22 2016-07-27 Novartis AG Cytomegalovirus antigens and uses thereof
EP3061826A1 (en) 2015-02-27 2016-08-31 Novartis AG Flavivirus replicons
US10420836B2 (en) 2015-10-08 2019-09-24 Emory University Methods of immunizing a subject and compositions related thereto
US11344619B2 (en) * 2016-05-16 2022-05-31 Access To Advanced Health Institute Formulation containing TLR agonist and methods of use
CN110234401B (zh) * 2016-11-09 2024-03-01 德克萨斯大学系统董事会 用于适应性免疫调节的方法和组合物
WO2018175854A1 (en) * 2017-03-23 2018-09-27 The Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to adjuvants
CN107167524A (zh) * 2017-03-27 2017-09-15 万全万特制药（厦门）有限公司 气相色谱法分离检测阿立哌唑有关物质的方法
WO2018193307A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Modified cytomegalovirus proteins and stabilized complexes
AR111760A1 (es) 2017-05-19 2019-08-14 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de tumores sólidos mediante administración intratumoral
KR20200009095A (ko) 2017-05-31 2020-01-29 프로메테우스 바이오사이언시즈, 인크. 크론병 환자에서 점막 치유를 평가하는 방법
SG11202001826YA (en) 2017-10-16 2020-03-30 Adjuvance Technologies Inc Triterpene saponin analogues
CN108218982A (zh) * 2018-02-02 2018-06-29 暨南大学 人巨细胞病毒anti-UL148多克隆抗体及其制备方法与应用
WO2019169120A1 (en) 2018-02-28 2019-09-06 University Of Washington Self-asssembling nanostructure vaccines
US10730901B2 (en) 2018-07-27 2020-08-04 Aperta Biosciences, Llc Spinosyn formulations for treatment of demodex-induced ocular and facial conditions
CN109191326B (zh) * 2018-08-23 2021-11-30 东北大学 基于攻击方视角的配电网cps相依存系统网络攻击风险评估方法
BR112021006812A2 (pt) 2018-10-17 2021-07-20 Glaxosmithkline Biologicals S.A. proteínas e complexos estabilizados modificados do citomegalovírus
EP3894431A2 (en) 2018-12-12 2021-10-20 GlaxoSmithKline Biologicals SA Modified carrier proteins for o-linked glycosylation
US20220096526A1 (en) * 2019-01-22 2022-03-31 Tufts Medical Center, Inc. Methods and compositions for the treatment and prevention of ocular diseases and conditions
EP3777884A1 (en) 2019-08-15 2021-02-17 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic composition
CN111892648B (zh) * 2020-06-08 2022-08-26 中国科学院上海药物研究所 偶联tlr7激动剂的新型冠状病毒多肽疫苗及其应用
WO2022011014A1 (en) * 2020-07-09 2022-01-13 Exocure Biosciences, Inc. Bacteria-derived vesicles and use thereof for generating immune response to sars-cov-2
EP4243865A1 (en) 2020-11-13 2023-09-20 Icosavax, Inc. Protein-based nanoparticle vaccine for metapneumovirus
CN114053410A (zh) * 2021-11-24 2022-02-18 肖军宏 一种治疗冠状病毒感染及其相关症状的大蒜素制剂
CN114539426B (zh) * 2022-03-02 2023-07-07 山东仙普爱瑞科技股份有限公司 一种含干扰素α的融合蛋白、表达该融合蛋白的重组菌株及其制备方法
WO2023225562A1 (en) 2022-05-17 2023-11-23 Icosavax, Inc. Multivalent vaccine for paramyxoviruses and uses thereof
GB202215414D0 (en) 2022-10-18 2022-11-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine
CN117003898B (zh) * 2023-09-27 2023-12-29 贝格探索(成都)科技有限公司 一种lhrh4-crm197-lf多聚重组蛋白及其制备方法和应用

Family Cites Families (155)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3485094D1 (de) 1983-01-25 1991-10-31 Ciba Geigy Ag Neue peptidderivate.
US5059258A (en) * 1989-08-23 1991-10-22 Aluminum Company Of America Phosphonic/phosphinic acid bonded to aluminum hydroxide layer
US6699474B1 (en) 1990-08-20 2004-03-02 Erich Hugo Cerny Vaccine and immunserum against drugs of abuse
US5936076A (en) 1991-08-29 1999-08-10 Kirin Beer Kabushiki Kaisha αgalactosylceramide derivatives
CA2131729C (en) 1992-03-02 2008-02-12 Antonello Covacci Helicobacter pylori proteins useful for vaccines and diagnostics
FR2718452B1 (fr) 1994-04-06 1996-06-28 Pf Medicament Elément d'immunogène, agent immunogène, composition pharmaceutique et procédé de préparation.
EP0769018B1 (en) 1994-07-01 2002-12-18 Chiron Corporation Helicobacter proteins and vaccines
KR100417508B1 (ko) 1994-11-24 2004-03-18 바실리어 파마슈티카 아게 신규한벤질피리미딘
IL117483A (en) 1995-03-17 2008-03-20 Bernard Brodeur MENINGITIDIS NEISSERIA shell protein is resistant to proteinase K.
US6180111B1 (en) 1995-05-18 2001-01-30 University Of Maryland Vaccine delivery system
WO1997025429A1 (en) 1996-01-04 1997-07-17 Rican Limited Helicobacter pylori bacterioferritin
JP2000511769A (ja) 1996-04-02 2000-09-12 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 新規化合物
JP2000512487A (ja) 1996-05-14 2000-09-26 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 新規化合物
DE69737125T3 (de) 1996-10-31 2015-02-26 Human Genome Sciences, Inc. Streptococcus pneumoniae-Antigene und Impfstoffe
GB9623233D0 (en) 1996-11-07 1997-01-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
GB9711964D0 (en) 1997-06-09 1997-08-06 Medical Res Council Live attenuated vaccines
US6800744B1 (en) 1997-07-02 2004-10-05 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics
ATE384130T1 (de) 1997-08-21 2008-02-15 Nederlanden Staat Neue mutanten der gram-negativen mukosalen bakterien und ihre verwendung als impfstoffe
AU9363798A (en) 1997-11-06 1999-05-31 Chiron S.P.A. Neisserial antigens
EP1034277B1 (en) 1997-11-26 2012-06-27 Inhibitex, Inc. Extracellular matrix-binding proteins from Staphylococcus aureus
CA2317815A1 (en) 1998-01-14 1999-07-22 Chiron S.P.A. Neisseria meningitidis antigens
CA2328399A1 (en) 1998-04-23 1999-10-28 University Of Alabama At Birmingham Pneumococcal surface protein c(pspc), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor
ES2304065T3 (es) 1998-05-01 2008-09-01 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Antigenos y composiciones de neisseria meningitidis.
GB9810193D0 (en) 1998-05-12 1998-07-08 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
EP2053126A1 (en) 1998-07-27 2009-04-29 Sanofi Pasteur Limited Streptococcus pneumoniae proteins and nucleic acid molecules
EP1144640A3 (en) 1998-07-27 2001-11-28 Microbial Technics Limited Nucleic acids and proteins from streptococcus pneumoniae
US6635473B1 (en) 1998-08-31 2003-10-21 The Provost Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth Near Dublin Polypeptides and polynucleotides from coagulase-negative staphylococci
IL141639A (en) 1998-08-31 2005-12-18 Inhibitex Inc Multicomponent vaccines
AU1202200A (en) 1998-10-09 2000-05-01 Chiron Corporation Neisseria genomic sequences and methods of their use
GB9823978D0 (en) 1998-11-02 1998-12-30 Microbiological Res Authority Multicomponent meningococcal vaccine
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
PT1140157E (pt) 1998-12-21 2009-05-06 Medimmune Inc Proteínas de streptococcus pneumoniae e fragmentos imunogénicos para vacinas
JP4785014B2 (ja) 1999-03-26 2011-10-05 プロヴァリス・ユーケー・リミテッド 蛋白質
EP1185297B1 (en) 1999-06-10 2006-05-10 MedImmune, Inc. Streptococcus pneumoniae proteins and vaccines
GB9918319D0 (en) 1999-08-03 1999-10-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
EP1075841A1 (en) 1999-08-13 2001-02-14 Erasmus Universiteit Rotterdam Pneumococcal vaccines
AU1917501A (en) 1999-11-12 2001-06-06 University Of Iowa Research Foundation, The Control of neisserial membrane synthesis
DK2289545T3 (en) 2000-01-17 2016-09-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Supplemented OMV vaccine against meningococcus
CN100473663C (zh) 2000-02-28 2009-04-01 启龙股份公司 奈瑟球菌蛋白质的异源表达
DE10012370A1 (de) 2000-03-14 2001-09-27 Chiron Behring Gmbh & Co Adjuvans für Vakzinen
KR20020097200A (ko) 2000-03-21 2002-12-31 엘리트라 파마슈티컬즈, 인코포레이티드 원핵세포에서의 필수유전자의 동정
JP2003530872A (ja) 2000-04-27 2003-10-21 メディミューン，インコーポレイテッド 免疫原肺炎連鎖球菌タンパク質とそのワクチン組成物
NO20002828D0 (no) 2000-06-02 2000-06-02 Statens Inst For Folkehelse Proteinholdig vaksine mot Neisseria meningtidis serogruppe samt fremgangsmÕte ved fremstilling derav
US6495079B1 (en) 2000-06-28 2002-12-17 Prisma Fibers, Inc. Process to prepare polymeric fibers with improved color and appearance
GB0108364D0 (en) 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
AU2001276619A1 (en) 2000-07-03 2002-01-14 Chiron S.P.A. Immunisation against chlamydia pneumoniae
WO2002008426A2 (en) 2000-07-20 2002-01-31 Hansa Medical Ab Fh-binding protein of streptococcus pneumoniae
CA2416137C (en) 2000-07-27 2013-01-29 Dan Granoff Vaccines for broad spectrum protection against diseases caused by neisseria meningitidis
GB0103170D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
AU8743001A (en) 2000-08-28 2002-03-13 Aventis Pasteur Moraxella polypeptides and corresponding dna fragments and uses thereof
GB0022742D0 (en) 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
WO2002034773A2 (en) 2000-10-26 2002-05-02 Imperial College Innovations Ltd. Streptococcal genes
EP2189473A3 (en) 2000-10-27 2010-08-11 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Nucleic and proteins from streptococcus groups A & B
AT410798B (de) 2001-01-26 2003-07-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Verfahren zur identifizierung, isolierung und herstellung von antigenen gegen ein spezifisches pathogen
GB0103171D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
GB0103424D0 (en) 2001-02-12 2001-03-28 Chiron Spa Gonococcus proteins
WO2002077183A2 (en) 2001-03-21 2002-10-03 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in microorganisms
GB0107661D0 (en) 2001-03-27 2001-05-16 Chiron Spa Staphylococcus aureus
GB0108079D0 (en) 2001-03-30 2001-05-23 Microbial Technics Ltd Protein
CA2881980A1 (en) 2001-05-18 2002-11-28 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention, Technology Transfer Office Peptide vaccines against group a streptococci
JP4424984B2 (ja) 2001-06-15 2010-03-03 インヒビテックス インコーポレーテッド コアグラーゼ陰性ブドウ球菌および黄色ブドウ球菌由来の表面蛋白質を認識する、交差反応性モノクローナルおよびポリクローナル抗体
FR2827605B1 (fr) 2001-07-20 2004-07-16 Pf Medicament Nouveaux peptides derives de la proteine g du vrs et leur utilisation dans un vaccin
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
ATE542829T1 (de) 2001-08-02 2012-02-15 Univ Sheffield Impfstoff
JP4413617B2 (ja) 2001-12-12 2010-02-10 カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する免疫化
GB0203403D0 (en) 2002-02-13 2002-04-03 Chiron Spa Chlamydia cytotoxic-T cell epitopes
EP2275121B1 (en) 2002-04-02 2013-06-12 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Protein-based streptococcus pneumoniae vaccines
GB0210128D0 (en) 2002-05-02 2002-06-12 Chiron Spa Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B
GB0211118D0 (en) 2002-05-15 2002-06-26 Polonelli Luciano Vaccines
MXPA04012443A (es) 2002-06-11 2005-04-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Composiciones inmunogenicas.
GB0213622D0 (en) 2002-06-13 2002-07-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine Corporation
WO2003105769A2 (en) 2002-06-13 2003-12-24 New York University Synthetic c-glycolipid and its use for treating cancer infectious diseases and autoimmune diseases
JP2006500963A (ja) 2002-08-02 2006-01-12 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ワクチン組成物
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
EP1551357B1 (en) 2002-09-13 2014-07-16 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Group b streptococcus vaccine
AU2003274511B2 (en) 2002-10-11 2009-06-04 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
US7818252B2 (en) 2003-02-20 2010-10-19 Gilat Satellite Networks, Ltd Enforcement of network service level agreements
EP1618127B1 (en) 2003-04-10 2014-12-10 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Immunogenic composition comprising a spike protein of the SARS coronavirus
CA2522238A1 (en) 2003-04-15 2004-10-28 Intercell Ag S. pneumoniae antigens
AU2004247305B2 (en) 2003-06-16 2010-02-18 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry, Academy Of Sciences Of The Czech Republic Pyrimidine compounds having phosphonate groups as antiviral nucleotide analogs
US20100255002A1 (en) 2003-06-26 2010-10-07 Chiron Corporation Immunogenic compositions for chlamydia trachomatis
GB0316560D0 (en) 2003-07-15 2003-08-20 Chiron Srl Vesicle filtration
ES2505695T3 (es) 2003-07-31 2014-10-10 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Composiciones inmunógenas para Streptococcus pyogenes
US7771726B2 (en) 2003-10-08 2010-08-10 New York University Use of synthetic glycolipids as universal adjuvants for vaccines against cancer and infectious diseases
WO2005079315A2 (en) 2004-02-18 2005-09-01 Merck & Co., Inc. Polypeptides for inducing a protective immune response against staphylococcus aureus
RU2006134631A (ru) 2004-03-02 2008-04-10 Чирон Корпорейшн (Us) Иммуногенные композиции против chlamidia pneumoniae
GB0405787D0 (en) 2004-03-15 2004-04-21 Chiron Srl Low dose vaccines
JP2007531768A (ja) 2004-03-31 2007-11-08 ニューヨーク・ユニバーシティ 感染症、癌および自己免疫疾患を治療するための新規な合成ｃ−糖脂質、その合成および使用
GB0419627D0 (en) 2004-09-03 2004-10-06 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
CN102657855B (zh) 2004-09-22 2015-12-09 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 用于进行抗葡萄球菌接种的免疫原性组合物
EP2682126B1 (en) 2005-01-27 2016-11-23 Children's Hospital & Research Center at Oakland GNA1870-based vesicle vaccines for broad spectrum protection against diseases caused by Neisseria meningitidis
AU2006214064B2 (en) 2005-02-18 2012-04-26 J. Craig Venter Institute, Inc. Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli
MX291624B (es) 2005-02-18 2011-11-04 Novartis Vaccines & Diagnostic Inmunogenos de escherichia coli uropatogenica.
EP1866319B1 (en) 2005-04-01 2011-11-23 The Regents of The University of California Phosphono-pent-2-en-1-yl nucleosides and analogs
JP2008544745A (ja) 2005-05-12 2008-12-11 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓのための免疫原性組成物
MX2007016403A (es) 2005-06-27 2008-03-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Composicion inmunogenica.
TWI382019B (zh) 2005-08-19 2013-01-11 Array Biopharma Inc 作為類鐸受體（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）調節劑之胺基二氮雜呯
TW200801003A (en) 2005-09-16 2008-01-01 Astrazeneca Ab Novel compounds
US20090105212A1 (en) 2005-09-22 2009-04-23 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. a corporation of Japan Novel adenine compound
JPWO2007034817A1 (ja) 2005-09-22 2009-03-26 大日本住友製薬株式会社 新規アデニン化合物
WO2007034916A1 (ja) 2005-09-22 2007-03-29 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 新規アデニン化合物
TW200745114A (en) 2005-09-22 2007-12-16 Astrazeneca Ab Novel compounds
US20090192153A1 (en) 2005-09-22 2009-07-30 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. a corporation of Japan Novel adenine compound
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
EP1976557A2 (en) 2005-12-22 2008-10-08 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Chlamydial antigens
AU2006342053A1 (en) 2005-12-27 2007-10-25 Obetech, Llc Adipogenic adenoviruses as a biomarker for disease
EP2368569A3 (en) 2006-01-18 2012-05-02 University Of Chicago Compositions and methods related to staphylococcal bacterium proteins
KR20080085232A (ko) 2006-02-17 2008-09-23 화이자 리미티드 Ｔｌｒ7 조절제로서 3-데아자퓨린 유도체
WO2007116322A2 (en) 2006-02-17 2007-10-18 Novartis Ag Purification of bacterial antigens
ATE539079T1 (de) 2006-03-23 2012-01-15 Novartis Ag Imidazochinoxalinverbindungen als immunmodulatoren
CA2646891A1 (en) 2006-03-23 2007-09-27 Novartis Ag Immunopotentiating compounds
AR060188A1 (es) 2006-03-30 2008-05-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Procedimiento de conjugacion
NZ570805A (en) 2006-03-30 2011-10-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine comprising Type 5 and Type 8 capsular polysaccharides from Staphyloccocus aureus
US8138172B2 (en) 2006-07-05 2012-03-20 Astrazeneca Ab 8-oxoadenine derivatives acting as modulators of TLR7
US8338593B2 (en) 2006-07-07 2012-12-25 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptor 7
JP2010500399A (ja) 2006-08-16 2010-01-07 ノバルティス アーゲー 尿路病原性大腸菌由来の免疫原
GB0616306D0 (en) 2006-08-16 2006-09-27 Novartis Ag Vaccines
PL2097102T3 (pl) 2006-09-07 2012-10-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Szczepionka skojarzona o zmniejszonej ilości antygenu wirusa polio
WO2008047174A1 (en) 2006-10-18 2008-04-24 Centre National De La Recherche Scientifique Alpha-galactosylceramide analogs, their methods of manufacture, intermediate compounds useful in these methods, and pharmaceutical compositions containing them
EP2125792B1 (en) 2007-02-19 2010-12-01 GlaxoSmithKline LLC Purine derivatives as immunomodulators
PE20081887A1 (es) 2007-03-20 2009-01-16 Dainippon Sumitomo Pharma Co Nuevo compuesto de adenina
MY150519A (en) 2007-05-08 2014-01-30 Astrazeneca Ab Imidazoquinolines with immuno-modulating properties
ES2359123T3 (es) 2007-08-03 2011-05-18 Pfizer Limited Imidazopiridinonas.
PT2200642E (pt) 2007-10-19 2012-05-30 Novartis Ag Formulações de vacinas meningocócicas
PE20091236A1 (es) 2007-11-22 2009-09-16 Astrazeneca Ab Derivados de pirimidina como immunomoduladores de tlr7
JP5415449B2 (ja) 2007-12-24 2014-02-12 ノバルティス アーゲー 吸着されたインフルエンザワクチンのためのアッセイ
PT2268618E (pt) * 2008-03-03 2015-10-12 Novartis Ag Compostos e composições moduladores da actividade tlr
CN103396415B (zh) 2008-03-24 2016-08-10 4Sc股份有限公司 新的取代的咪唑并喹啉化合物
WO2010003009A2 (en) 2008-07-01 2010-01-07 Emory University Synergistic induction of humoral and cellular immunity by combinatorial activation of toll-like receptors
ES2438496T3 (es) 2008-08-01 2014-01-17 Ventirx Pharmaceuticals, Inc. Formulaciones de agonistas de receptores de tipo toll y su uso
TWM352127U (en) 2008-08-29 2009-03-01 Bestac Advanced Material Co Ltd Polishing pad
TWI432436B (zh) 2008-12-09 2014-04-01 Gilead Sciences Inc 類鐸受體的調節劑
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
EP2398821B1 (en) 2009-02-17 2017-08-30 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Inactivated dengue virus vaccine with aluminium-free adjuvant
JP5830009B2 (ja) 2009-04-14 2015-12-09 ノバルティス アーゲー Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓに対して免疫化するための組成物
ES2531115T3 (es) 2009-06-01 2015-03-10 Novartis Ag Combinaciones de clados de RrgB neumocócicos
WO2010144734A1 (en) * 2009-06-10 2010-12-16 Novartis Ag Benzonaphthyridine-containing vaccines
JP2013502918A (ja) 2009-08-27 2013-01-31 ノバルティス アーゲー 髄膜炎菌ｆＨＢＰ配列を含むハイブリッドポリペプチド
TWI445708B (zh) 2009-09-02 2014-07-21 Irm Llc 作為ｔｌｒ活性調節劑之化合物及組合物
AU2010290896B2 (en) 2009-09-02 2014-07-03 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic compositions including TLR activity modulators
WO2011057267A1 (en) 2009-11-09 2011-05-12 National Jewish Health Vaccine composition
WO2011119759A1 (en) 2010-03-23 2011-09-29 Irm Llc Compounds (cystein based lipopeptides) and compositions as tlr2 agonists used for treating infections, inflammations, respiratory diseases etc.
EP2558069A1 (en) * 2010-04-13 2013-02-20 Novartis AG Benzonapthyridine compositions and uses thereof
ES2458355T3 (es) 2010-09-01 2014-05-05 Novartis Ag Adsorción de inmunopotenciadores sobre sales metálicas insolubles
US9618508B2 (en) 2010-12-14 2017-04-11 Glaxosmithkline Biologicals Sa Flow cytometry analysis of materials adsorbed to metal salts
BR112013022397A2 (pt) 2011-03-02 2017-09-26 Derek O’Hagan vacinas combinadas com doses menores de antígeno e/ou adjuvante
IN2014CN02152A (zh) 2011-09-01 2015-09-04 Novartis Ag
EP2822589A1 (en) 2012-03-07 2015-01-14 Novartis AG Adjuvanted formulations of rabies virus immunogens
PL2822947T3 (pl) 2012-03-07 2017-01-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Sole argininowe agonisty TLR7
JP2015510872A (ja) 2012-03-07 2015-04-13 ノバルティス アーゲー Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原の増強された製剤
AU2013229432A1 (en) 2012-03-08 2014-10-16 Novartis Ag Adjuvanted formulations of booster vaccines
RU2015106930A (ru) 2012-09-06 2016-10-20 Новартис Аг Комбинированные вакцины с менингококком серогруппы в и к/д/с
MX2015005306A (es) 2012-10-25 2015-07-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Nicotinamida como adyuvante.

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