CN102712636B - 作为tlr活性调节剂的化合物和组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一类新的化合物、包含这类化合物的免疫原性组合物和药物组合物以及使用这类化合物来治疗或预防与Toll样受体7有关的疾病或病症的方法。在一个方面，所述化合物可用作增强疫苗功效的佐剂。

Description

作为TLR活性调节剂的化合物和组合物
相关申请的交叉参考
根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2009年9月2日提交的美国临时专利申请序号61/239,217的优先权利益。优先权申请的内容整体引入本文作为参考并用于所有目的。
政府支持的声明
本发明是在由国防部授予的DTRA基金号HDTRA1-07-9-0001下部分地受政府支持完成的。在本发明中，政府享有一些权利。
发明领域
本发明涉及Toll样受体(TLRs)的调节剂和使用这些化合物的方法。
发明背景
借助模式识别受体(PRRs)的帮助，可通过先天免疫系统实现特定种类的病原体的早期检测。被检测的病原体包括病毒、细菌、原生动物和真菌，并且每一个都组成型地表达一系列被称为病原相关的分子模式(PAMPs)的种类特异性的突变抗性分子。这些分子标记物可以由蛋白质、碳水化合物、脂类、核酸或其组合组成，并且其可以位于内部或外部。PAMPs的实例包括细菌的碳水化合物(脂多糖或LPS、甘露糖)、核酸(细菌或病毒的DNA或RNA)、肽聚糖和脂磷壁酸(lipotechoic acids)(来自革兰氏阳性菌)、N-甲酰甲硫氨酸、脂蛋白和真菌葡聚糖。
模式识别受体已经发展成利用3种PAMP特性。第一，组成型表达允许宿主检测出在任何生命周期阶段的病原体。第二，PAMPs是种类特异性的，这使宿主辨别出不同病原体从而调节其应答。第三，突变抗性允许宿主识别任何特定株系的病原体。
模式识别受体不仅仅涉及通过其PAMP识别病原体。一旦结合，模式识别受体趋向于聚集，募集其他胞外和胞内的蛋白质至复合体，并引发最终影响转录的信号级联放大。此外，模式识别受体涉及响应于病原体检测的补体激活、凝结、吞噬、炎症和凋亡功能。
模式识别受体(PRRs)可以被分为胞吞PRRs或信号PRRs。信号PRR包括一大族的膜结合Toll样受体(TLR)和胞质NOD-样受体，而胞吞PRRs通过吞噬细胞促进对微生物的附着、吞食和破坏，但不传递胞内信号，在所有吞噬细胞上都发现了胞吞PRRs，其介导凋亡细胞的清除。此外，胞吞PRRs识别碳水化合物，并且包括巨噬细胞的甘露糖受体、在所有吞噬细胞上存在的葡聚糖受体和识别带电的配体的清道夫受体。
发明概述
本文提供化合物及其药物组合物，其是Toll样受体7(TLR7)的激动剂。这类TLR7激动剂是结合包含铝的佐剂的免疫增强剂，例如，仅作为实例，是氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。因此，本文还提供了包含抗原和本文提供的TLR7激动剂的免疫原性组合物，其结合包含铝的佐剂。当这种免疫原性组合物对有此需要的受试者施用时，这种TLR7激动剂增强对免疫原性组合物的免疫应答。
在一个方面，本文提供这类化合物及其药学可接受的盐、药学可接受的溶剂合物(例如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、被保护的衍生物、各异构体和异构体混合物，它们具有式(I)的结构：
式(I)
其中：
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选被1-4个氟基团取代；
L3各自独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选被1-4个氟基团取代；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
R4各自独立地选自H和氟；
R5是-P(O)(OR9)2，
R6是-CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是-CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R8是H或C1-C4烷基；
R9各自独立地选自H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
p各自独立地选自1、2、3、4、5和6；且
q是1、2、3或4；
条件是当R3是C1-C4烷基或-OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5，-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OR9)2，且R7是-CF2P(O)(OR9)2。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；在其他实施方案中，R1是甲基。在一些实施方案中，R1是H。在其他实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，当R1-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6时，R3是-OR8或C1-C6烷基。在一些实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，且R3是-OMe。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，R2是C1-C6烷基。在一些实施方案中，R2是甲基。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5和-L3L4L3R5。在备选的实施方案中，R3选自-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH。在一些实施方案中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5是式-O(CH2)1-5P(O)(OR)2的基团。在其他实施方案中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5是式-O(CH2)1-5CF2P(O)(OR)2的基团。
在一些实施方案中，R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5和-OL3L4L3R5。
如果作为在包含-P(O)(OR9)2部分的化合物上存在一个以上R9，则R9基团相同或不同。在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R9是在每次出现时为H。在其他实施方案中，至少一个R9是H，另一个R9是C1-C6烷基。在其他实施方案中，至少一个R9是H，另一个R9是甲基.在其他实施方案中，至少一个R9是H，另一个R9是乙基。在这种式(I)化合物的其他实施方案中，R9各自是C1-C6烷基，在一些实施方案中，R9是甲基或乙基或其组合。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2和/或L3是式-((CR4R4)pO)q(CH2)p-的基团，在一些实施方案中，该基团具有式-(CH2CH2O)1-3(CH2)1-3-。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2是C1-C6亚烷基，而在其他实施方案中，L2是被1-4个氟取代的C1-C6亚烷基。在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，L2具有式(CH2)0-5CF2，其中氟取代的碳不直接连接在式I的苯环上。在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2是C2-C6亚烯基，而在其他实施方案中，L2是被1-4个氟基团取代的C2-C6亚烯基。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L3是C1-C6亚烷基，而在其他实施方案中，L3是被1-4个氟基团取代的C1-C6亚烷基。在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，L3具有式(CH2)0-5CF2，其中氟取代的碳不直接连接在式I的苯环上。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2是亚芳基或杂亚芳基。在一些这些实施方案中，L2是亚苯基、例如1，3-二取代的亚苯基或1，4-二取代的亚苯基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R7是-CF2P(O)(OR9)2，L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，p是2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R6是-C(O)OR10；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L2是C1-C6亚烷基，L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R6是-C(O)OR10；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L2是C1-C6亚烷基；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，p是2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OR8；R8是C1-C6烷基；R5是-P(O)(OR9)2；R6是-CF2P(O)(OR9)2；L1是-C(O)-，L2是C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，其各自任选被1-4个氟基团取代。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3L4R5-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L3各自独立地是C1-C6亚烷基，L4是亚苯基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-C(R5)2OH或-L1R5；R5是-P(O)(OR9)2，L1是-C(O)-或-O-。
在这种式(I)的化合物及其药学可接受的盐、药学可接受的溶剂合物(例如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、被保护的衍生物、各异构体和异构体混合物的一些实施方案中，
式(I)
R1是C1-C4烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选被1-4个氟基团取代；
L3各自独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选被1-4个氟基团取代；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C4烷基；
R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
R4各自独立地选自H和氟；
R5是-P(O)(OH)2，
R6是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R7是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R8是H或C1-C4烷基；
p各自独立地选自1、2、3、4、5和6；
q是1、2、3或4；
条件是当R3是-OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5，-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OH)2，且R7是-CF2P(O)(OH)2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R7是-CF2P(O)(OH)2，且L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R7是-CF2P(O)(OH)2；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，且p是2.
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R6是-C(O)OH；R7是-CF2P(O)(OH)2；L2是C1-C6亚烷基，L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R6是-C(O)OH；R7是-CF2P(O)(OH)2；L2是C1-C6亚烷基；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，p是2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OR8；R8是C1-C6烷基；R5是-P(O)(OH)2；R6是-CF2P(O)(OH)2；L1是-C(O)-，和L2是C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，其各自任选被1-4个氟基团取代。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3L4R5-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5是-P(O)(OH)2；R7是-CF2P(O)(OH)2；L3各自独立地是C1-C6亚烷基，和L4是亚苯基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-C(R5)2OH或-L1R5；R5是-P(O)(OR9)2，L1是-C(O)-或-O-。
在上述式(I)化合物的一些实施方案中，R8是甲基。在上述式(I)化合物的一些实施方案中，R1是甲基。在上述式(I)化合物的一些实施方案中，R2是甲基。
在上述式(I)化合物的一些实施方案中，选自：
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟丁基膦酸；3-(5-氨基-2-(4-(4，4-二氟-4-膦羧基丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸；3-(5-氨基-2-(4-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸；3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸；磷酸单4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酯；(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸；5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟戊基膦酸；4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟丁基膦酸；3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸；2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸；2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1，1-二氟-2-氧代乙基膦酸；(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙烯基膦酸；2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙基膦酸；(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1-氟乙烯基膦酸；3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸；5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-羰基膦酸；3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦羧基丙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸；3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸；3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸；2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸；6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸；6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟己基膦酸；4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸；2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸；3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1，7-二氮萘-8-基]丙酸；{5-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1，7-二氮萘-2-基}乙基)-3-甲基苯氧基]戊基}膦酸，和{4-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1，7-二氮萘-2-基}乙基)-3-甲基苯氧基]丁基}膦酸。这些化合物各自分别包含本文所述化合物、组合物和方法的优选实施方案。
本文提供的另一个方面是使用式(I)的化合物和包含这类化合物的药物组合物的方法。
本文提供的另一个方面是药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)的化合物和药学可接受的载体。在这种药物组合物的一些实施方案中，将药物组合物配制成用于静脉内给药、玻璃体内给药、肌内给药、口服给药、直肠给药吸入、鼻内给药、局部给药、眼部给药或耳内给药。在其他实施方案中，药物组合物是片剂、丸剂、胶囊、液体、吸入剂、鼻腔喷雾溶液、栓剂、溶液、乳剂、软膏剂、滴眼剂或滴耳剂形式。在其他实施方案中，这种药物组合物进一步包括一种或多种其他的治疗剂。
本文提供的另一个方面是药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)的化合物、包含铝的佐剂、抗原和药学可接受的载体。在这种药物组合物中，式(I)的化合物以在给药时足以产生免疫刺激效果的用量存在。在这种药物组合物的一些实施方案中，将药物组合物配制成用于静脉内给药、玻璃体内给药或肌内给药。在这种组合物中，包含铝的佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在这种组合物的一些实施方案中，包含铝的佐剂是羟基氧化铝或氢氧化铝。
本文提供的另一个方面是药物组合物，其包括治疗有效量的结合了包含铝的佐剂和药学可接受载体的式(I)化合物。在一些实施方案中，这种组合物是干燥后的固体。在一些实施方案中，这种组合物是冻干的固体。在这种组合物中，包含铝的佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在这种组合物的一些实施方案中，包含铝的佐剂是羟基氧化铝或氢氧化铝。
本文提供的另一个方面是免疫原性组合物，其包含式(I)的化合物、包含铝的佐剂和抗原。在一些实施方案中，式(I)的化合物以在该组合物施与受试者时在其中有效引起、诱导或增强免疫应答的用量存在。在这种免疫原性组合物中，式(I)的化合物以在该组合物给药时足以产生免疫刺激效果的用量存在。在这种免疫原性组合物中，包含铝的佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在这种免疫原性组合物的一些实施方案中，包含铝的佐剂是羟基氧化铝或氢氧化铝。在这种免疫原性组合物的一些实施方案中，抗原是细菌抗原。在这种免疫原性组合物的其他实施方案中，抗原是病毒抗原或真菌抗原。在这种免疫原性组合物的一些实施方案中，抗原是多肽。在这种免疫原性组合物的一些实施方案中，还包含另外的佐剂。在一些实施方案中，这种免疫原性组合物是干燥后的固体。在一些实施方案中，这种免疫原性组合物是冻干的固体。
在一些实施方案中，本发明的化合物不是二膦酸盐。
本文提供的另一个方面是增强免疫原性组合物的有效性的方法，其中免疫原性组合物包含含有铝的佐剂，且该方法包括将有效量的式(I)的化合物加入到免疫原性组合物中。在这种方法中，包含铝的佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在这类方法的一些实施方案中，包含铝的佐剂是羟基氧化铝或氢氧化铝。
本文提供的另一个方面是在脊椎动物受试者中引起或诱导免疫应答的方法，包括对该脊椎动物受试者施与有效量的本发明的免疫原性组合物。在一些实施方案中，本发明提供了在脊椎动物受试者中引起或诱导免疫应答的方法，包括对该脊椎动物受试者施与有效量的本发明的免疫原性组合物。在一些实施方案中，本发明提供了在脊椎动物受试者中引起或诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的方法，包括对该脊椎动物受试者施与有效量的本发明的免疫原性组合物。在其他实施方案中，本发明提供了在脊椎动物受试者中引起或诱导抗体介导的免疫应答的方法，包括对该脊椎动物受试者施与有效量的本发明的免疫原性组合物。
本文提供的另一个方面是本文所述的免疫原性组合物的制备方法。
本文提供的另一个方面是包含本发明免疫原性组合物的疫苗组合物。
本文所提供的另一方面是用于治疗具有涉及TLR7受体活性的疾病或病症的患者的药物并且这种药物包括治疗有效量的式(I)的化合物，其中式(I)的化合物是TLR7受体激动剂。
本文所提供的另一方面是式(I)的化合物在制备治疗涉及调节TLR7受体的患者的疾病或病症的药物中的用途。
本文所提供的另一方面包括活化TLR7受体的方法，其中该方法包括向对其有需要的系统或受试者施与治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或其药物组合物从而活化TLR受体。在这种方法中，式(I)的化合物是TLR7受体激动剂。在这类方法的一些实施方案中，该方法包括向细胞或者组织系统或者人或动物受试者施与该化合物。
本文所提供的另一方面是用于治疗涉及调节TLR7受体的患者的疾病或病症的方法，其中该方法包括向对这种治疗需要的系统或受试者施与治疗有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或其药物组合物从而治疗所述的疾病或病症。在这种方法中，式(I)的化合物是TLR7受体激动剂。在这类方法的一些实施方案中，该方法包括向细胞或者组织系统或者人或动物受试者施与该化合物。
在这类方法的一些实施方案中，疾病或病症为传染病、炎性疾病、呼吸系统疾病、皮肤病或自身免疫性疾病。在这类方法的一些实施方案中，疾病或病症为哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、支气管炎、皮炎、光化性角化病、基层细胞癌、过敏性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化、癌症、乳腺癌、HIV或狼疮。
本文所提供的另一方面包括治疗细胞增殖性疾病的方法，其包括向需要该治疗的系统或受试者施与有效量的式(I)的化合物或其药学可接受盐或其药物组合物；其中细胞增殖性疾病是淋巴瘤、骨肉瘤、黑素瘤、或乳腺、肾、前列腺、结肠直肠、甲状腺、卵巢、胰腺、神经元、肺、子宫的肿瘤或胃肠道肿瘤。
本文所提供的另一方面是药物组合物，其包括式(I)的化合物、抗原和药学可接受的载体，其中该药物组合物是免疫原性组合物，且该化合物是免疫增强剂并且其存在的量足以在接受该组合物的受试者内有效增强对抗原的免疫应答。在一些实施方案中，这种药物组合物进一步包括一种或多种免疫调节剂。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫调节剂包括一种或多种佐剂。在一些实施方案中，这种佐剂选自为含矿物的组合物、油乳剂、皂苷制剂、病毒体、病毒样颗粒、细菌衍生物、微生物衍生物、人免疫调节剂、生物粘附剂、粘膜粘附剂、微粒、脂质体、聚氧乙烯醚制剂、聚氧乙烯酯制剂、聚膦腈、胞壁酰肽或咪唑并喹啉酮化合物的佐剂。在一些实施方案中，佐剂是油乳剂。在一些实施方案中，免疫原性组合物用作疫苗，并且在给药时化合物的存在的量足以产生免疫刺激效果。
本文提供的另一个方面是用于医学治疗方法的化合物，其中该医学治疗方法用于治疗与TLR7受体活性相关的疾病，其中所述疾病选自传染病、炎性疾病、呼吸系统疾病、皮肤病或自身免疫性疾病且其中化合物是权利要求1的式(I)的化合物。在这类方法的一些实施方案中，所述疾病或病症为哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、支气管炎、皮炎、光化性角化病、基层细胞癌、过敏性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化、癌症、乳腺癌、HIV或狼疮。
附图简述
图1显示在添加和不添加氢氧化铝的上清液中化合物1的浓度。通过HPLC分析得到浓度。
图2显示化合物1结合氢氧化铝佐剂对脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitis)抗原(MenB)结合氢氧化铝佐剂的影响。
发明详述
定义
如本文所用的术语“烯基”或“烯”是指具有至少1个碳-碳双键的部分不饱和的支链或直链烃。关于双键的定向的原子处于顺式(Z)或反式(E)构象。在一些实施方案中，这种烯基或烯能够任选地被取代。如本文所用，术语“C2-C3烯基”、“C2-C4烯基”、“C2-C5烯基”、“C2-C6烯基”、“C2-C7烯基”和“C2-C8烯基”是指分别含有至少2个和至多3、4、5、6、7或8个碳原子的烯基。除非另有说明，否则烯基通常是C2-C6烯基。如本文所用，烯基的非限制性的实例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等。
如本文所用的术语“亚烯基”是指衍生自烯基的部分不饱和的支链或直链二价烃基。在一些实施方案中，这种亚烯基任选被取代。本文所用的术语″C2-C3亚烯基″、″C2-C4亚烯基″、″C2-C5亚烯基″、″C2-C6亚烯基″、″C2-C7亚烯基″和″C2-C8亚烯基″是指分别包含至少2个和至多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烯基。除非另有说明，否则亚烯基通常是C2-C6亚烯基。本文所用的亚烯基的非限制性的实例包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚戊烯基、亚己烯基、亚庚烯基、亚辛烯基、亚壬烯基、亚癸烯基等。
如本文所用的术语“烷基”是指饱和的支链或直链烃。在一些实施方案中，这种烷基可以任选地被取代。如本文所用，术语″C1-C3烷基″、″C1-C4烷基″、″C1-C5烷基″、″C1-C6烷基″、″C1-C7烷基″和″C1-C8烷基″是指分别含有至少1个和至多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷基。除非另有说明，否则烷基通常是C1-C6烷基。如本文所用的烷基的非限制性的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。
如本文所用的术语“亚烷基”是指衍生自烷基的饱和的支链或直链二价烃基。在一些实施方案中，这种亚烷基可以任选地被取代。如本文所用，术语″C1-C3亚烷基″、″C1-C4亚烷基″、″C1-C5亚烷基″、″C1-C6亚烷基″、″C1-C7亚烷基″和″C1-C8亚烷基″是指分别含有至少1个和至多3、4、5、6、7或8个碳原子的亚烷基。除非另有说明，否则亚烷基通常是C1-C6亚烷基。如本文所用的亚烷基的非限制性的实例包括亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚异丙基、亚正丁基、亚异丁基、亚仲丁基、亚叔丁基、亚正戊基、亚异戊基、亚己基等。
如本文所用的术语“烷氧基”是指基团-ORa，其中Ra是如本文所定义的烷基。烷氧基可以任选地被取代。如本文所用，术语“C1-C3烷氧基”、“C1-C4烷氧基”、“C1-C5烷氧基”、“C1-C6烷氧基”、“C1-C7烷氧基”和“C1-C8烷氧基”是指其中的烷基部分含有至少1个和至多3、4、5、6、7或8个碳原子的烷氧基。如本文所用的烷氧基的非限制性的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基、庚基氧、辛氧基、壬氧基、癸氧基等。
如本文所用的术语“芳基”是指总计具有5-14个环成员的单环、二环和三环系统，其中系统中的至少1个环是芳香族的并且其中系统中的每一个环含有3-7个环成员。在一些实施方案中，这种芳基可以任选地被取代。如本文所用的芳基的非限制性的实例包括苯基、萘基、芴基、茚基、薁基、蒽基等。作为任选的可替代选择，术语“芳基”还可以指具有总计6、10或14个碳原子环成员的单环或稠合二环环系，其任选被一个或多个取代基取代；这种芳基的非限制性实例包括苯基和萘基。
如所用的术语“亚芳基”是指由芳基衍生而来的二价基团。在一些实施方案中，亚芳基可以任选地被取代。
如本文所用的术语“卤素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
如本文所用的术语″卤代″指卤素基团：氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)和碘(-I)。
如本文所用的术语“卤代烷基”或“卤素取代的烷基”是指如本文所定义的被一个或多个卤素基团取代的烷基，其中卤素基团是相同的或不同的。卤代烷基可以任选地被取代。如本文所用的这种支链或直链的卤代烷基的非限制性的实例包括被一个或多个卤素基团取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正丁基，其中卤素基团是相同的或不同的，其非限制性地包括三氟甲基、五氟乙基等。
如本文所用的术语“卤代烯基”或“卤素取代的烯基”是指如本文所定义的被一个或多个卤素基团取代的烯基，其中卤素基团是相同的或不同的。卤代烯基可以任选地被取代。如本文所用的这种支链或直链的卤代烯基的非限制性的实例包括被一个或多个卤素基团取代的乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基等，其中卤素基团是相同的或不同的。
如本文所用的术语“杂芳基”是指总计具有5-14个环成员的单环、二环和三环系统，其中系统中的至少1个环是芳香族的，系统中的至少1个环含有一个或多个选自氮、氧和硫的杂原子，并且其中系统中的每一个环含有3-7个环成员。在一些实施方案中，这种杂芳基可以任选地被取代。如本文所用的杂芳基的非限制性的实例包括苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并吖庚因基、苯并咪唑基、苯并噻喃基、苯并[1，3]二氧杂环戊烯、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、噌啉基、呋咱基、呋喃基、呋喃并吡啶基、咪唑基、吲哚基、吲嗪基、吲哚啉-2-酮、吲唑基、异吲哚基、异喹啉基、异唑基、异噻唑基、1，8-二氮萘基、唑基、氧杂吲哚基、二唑基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、4H-喹嗪基、噻唑基、噻二唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和四唑基。作为任选的可替代选择，术语“杂芳基”还可以指具有总计5、6、9或10个环成员的单环或稠合二环环系，其中至少1个环成员是选自氮、氧和硫的杂原子，所述环系任选被一个或多个取代基取代，所述的取代基例如苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并吖庚因基、苯并咪唑基、苯并噻喃基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、噌啉基、呋咱基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、吲嗪基、吲唑基、异吲哚基、异喹啉基、异唑基、异噻唑基、1，8-二氮萘基、唑基、氧杂吲哚基、二唑基、吡唑基、吡咯基、酞嗪基、蝶啶基、嘌呤基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹喔啉基、喹啉基、喹唑啉基、噻唑基、噻二唑基、噻吩基、三嗪基、三唑基和四唑基。
如本文所用的术语“杂亚芳基”指衍生自杂芳基的二价基团。在一些实施方案中，这种杂亚芳基任选被取代。
如本文所用的术语“杂原子”指一个或多个氧、硫、氮、磷或硅。
如本文所用的术语“羟基”指基团-OH。
如本文所用的术语“羟基烷基”指如本文所定义的被一个或多个羟基取代的烷基。本文所用的支链或直链“C1-C6羟基烷基的非限制性实例包括被一个或多个羟基取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基和正-丁基。
如本文所用的术语“任选地被取代”是指所述的基团可以被或者可以不被一个或多个另外的基团取代，所述的另外的基团分别地和独立地选自烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、羟基、烷氧基、巯基、氰基、卤素、羰基、硫代羰基、异氰酸基、硫氰酸基、异硫氰酸基、硝基、全卤代烷基、全氟代烷基和氨基(包括单-和二-取代的氨基)及其被保护的衍生物。任选的取代基的非限制性的实例包括卤素、-CN、＝O、＝N-OH、＝N-OR、＝N-R、-OR、-C(O)R、-C(O)OR、-OC(O)R、-OC(O)OR、-C(O)NHR、-C(O)NR2、-OC(O)NHR、-OC(O)NR2、-SR-、-S(O)R、-S(O)2R、-NHR、-N(R)2、-NHC(O)R、-NRC(O)R、-NHC(O)OR、-NRC(O)OR、S(O)2NHR、-S(O)2N(R)2、-NHS(O)2NR2、-NRS(O)2NR2、-NHS(O)2R、-NRS(O)2R、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基和卤素取代的C1-C8烷氧基，其中R各自独立地选自H、卤素、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基、卤素取代的C1-C8烷基，和卤素取代的C1-C8烷氧基。这种取代基的位置和数量取决于所公知的每一个基团的化合价限制，例如＝O是烷基的适合的取代基、但却不是芳基的适合的取代基。
如本文所用的术语“溶剂合物”是指由溶质(例如，如本文所述的式(I)的化合物或其盐)和溶剂形成的化学计量可变的络合物。溶剂的非限制性的实例是水、丙酮、甲醇、乙醇和乙酸。
如本文所用的关于制剂、组合物或成分的术语“可接受的”是指对接受治疗的受试者的一般健康没有持续的有害作用。
术语主题化合物的“给药”是指向需要治疗的受试者提供式(I)的化合物、其药学可接受的盐、药学可接受的溶剂合物或前药。
术语“抗原”指包含一个或多个引起免疫应答的表位的分子(例如线性、构象或它们两者)。该术语可以与术语“免疫原”互换使用。所谓“引起”指诱导、促进或调节免疫应答或免疫反应。在一些情况中，免疫应答或免疫反应是体液和/或细胞应答。抗原可以诱导、促进、增强或调节受试者体外和/或体内细胞和/或离体受试者细胞或组织中的免疫应答或免疫反应。这种免疫应答或免疫反应非限制性地包括引起受试者中抗体形成或生成与抗原反应的特异性淋巴细胞群体。抗原一般地是对宿主而言是外来的大分子(例如蛋白质、多糖类、多核苷酸)。
本文所用的术语“抗原”还表示亚单位抗原(即是单独和离散自抗原实际上与之结合的生物体的抗原)以及灭活、减毒或失活的细菌、病毒、寄生虫、寄生物或其他病原体或肿瘤细胞，包括细胞表面受体的胞外结构域和包含T细胞表位的胞内部分。可以模拟抗原或抗原决定簇的抗体例如抗特异型抗体或其片段和合成肽模拟位也包括在本文所用的抗原定义内。类似地，例如基因疗法或核酸免疫接种应用体内表达免疫原性蛋白质、抗原或抗原决定簇的寡核苷酸或多核苷酸也包括在本文的抗原定义内。
术语“表位”指决定其免疫特异性的指定种类的部分(例如抗原分子或抗原复合物)。表位在本发明抗原定义的范围内。通常地，表位是天然存在的抗原中的多肽或多糖。在人造抗原中，它可以是低分子量物质，例如氨苯胂酸(arsanilic acid)衍生物。通常地，B细胞表位包括至少约5个氨基酸，但可以小至3-4个氨基酸。T细胞表位例如CTL表位一般地包括至少约7-9个氨基酸，辅助T细胞表位一般地包括至少约12-20个氨基酸。
如本文所用的术语“癌症”是指倾向于以不受控制的方式增殖和在一些情况下转移(扩散)的细胞的异常生长。癌症的类型非限制性地包括实体瘤(例如膀胱、肠、脑、乳房、子宫内膜、心、肾、肺、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其他内分泌器官(甲状腺)、前列腺、皮肤(黑素瘤)的实体瘤或血液肿瘤(例如白血病)。
如本文所用的术语“载体(carrier)”是指促进如本文所述的化合物吸收进入细胞或组织的化合物或化学试剂。
如本文所用的术语“共同给药”或“联合给药”等包括向单个患者施与选定的治疗剂并且包括不需要以相同的给药途径或同时进行给药的治疗方案。
如本文所用的术语“皮肤病”是指皮肤病症。这种皮肤病非限制性地包括皮肤的增殖性或炎性病症，例如特应性皮炎、大疱性疾病、胶原病、接触性皮炎湿疹、川畸病、红斑痤疮、舍格伦-拉索综合征、光化性角化病、基层细胞癌和荨麻疹。
如本文所用的术语“稀释剂”是指用于在递送之前稀释本文所述的化合物的化合物。稀释剂也能用于使本文所述的化合物稳定。
如本文所用的术语“有效量”或“治疗有效量”是指所施与的本文所述的化合物的足够的量，其将在某种程度上缓解所治疗的疾病或情况的一种或多种症状。结果可以是疾病的体征、症状或病因的减少和/或缓解或者任意其他想要的生物系统的变化。例如，用于治疗的“有效量”是提供疾病症状的临床上显著降低所需的包含如本文所公开的化合物的组合物的量。在任何各种情况下，利用技术(例如剂量按比例增加的研究)可以确定任意个体病例中适合的“有效的”量。
如本文所用的术语“增强”是指在效能或持续时间方面增加或延长预期的效果。因此，关于增强治疗剂的效果，术语“增强”是指在效能或持续时间方面增加或延长其他治疗剂对系统的效果的能力。如本文所用的“增效的量”是指足以增强另一治疗剂在目的系统中的效果的量。
术语“赋形剂”是指可以存在于最终剂型中的任意必需的辅助物质。例如，术语“赋形剂”包括媒介物(vehicles)、粘合剂、崩解剂、填充剂(稀释剂)、润滑剂、助悬剂/分散剂等。
如本文所用的术语“纤维化”或“纤维化病症”是指伴随急性或慢性炎症并且与细胞和/或胶原的异常堆积有关的情况，其非限制性地包括各器官或组织(例如心脏、肾、关节、肺或皮肤)的纤维化，并且包括如特发性肺纤维化和隐原性纤维化肺泡炎的病症。
如本文所用的术语“医源性的”是指由医疗或外科治疗产生或加重的病症、病状或疾病。
如本文所用的术语“免疫学有效量”是指向个体以单剂量或系列剂量的部分施与足以有效地治疗或预防免疫性疾病或病症的量。该量因所治疗的个体的健康和身体状况、年龄、所治疗的个体的分类群(例如非人灵长类动物、灵长类动物等)、个体的免疫系统合成抗体的能力、所需要的保护程度、疫苗的制剂、主治医生对医疗情况的评估和其他的相关因素而改变。可以预见该量将落在能够通过常规试验确定的相对宽的范围内。
本文所用的针对抗原或组合物的“免疫应答”或“免疫反应”指在受试者中针对该抗原或组合物发生体液和/或细胞免疫应答。
免疫应答包括先天性和适应性免疫应答。先天性免疫应答是对免疫系统提供第一线防御的速效应答。相反，适应性免疫使用免疫细胞的选择和克隆扩充，所述的免疫细胞具有从指定病原体或病症(例如肿瘤)识别抗原的身体重排的受体基因(例如T和B细胞受体)，由此提供特异性和免疫记忆。先天性免疫应答在其许多效果中导致炎性细胞因子快速爆发和抗原呈递细胞(APCs)例如巨噬细胞和树突细胞活化。为了区别病原体与自身成分，先天性免疫系统使用各种相对不变的检测来自病原体的标记的受体，称作病原体伴随分子模式或PAMPs。已知将微生物成分添加到实验疫苗中导致发生稳定和持久的适应性免疫应答。已经报道增强这种免疫应答后面的机制涉及模式识别受体(PRRs)，它们在各种免疫细胞上差别表达，包括中性白细胞、巨噬细胞、树突细胞、天然杀伤细胞、B细胞和一些无免疫性细胞例如上皮和内皮细胞。PRRs的参与导致一些这些细胞活化及其细胞因子和趋化因子分泌以及其他细胞成熟和迁移。接下来，这生成导致建立适应性免疫应答的炎症环境。PRRs包括非吞噬细胞受体例如Toll样受体(TLRs)和核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白和诱导吞噬作用的受体，例如清道夫受体、甘露糖受体和β-葡聚糖受体。树突细胞被认为是一些用于开始稚CD4+辅助T(TH)细胞引发和诱导CD8+T细胞分化成杀伤细胞的最重要细胞类型。已经报道TLR信号传导在决定这些辅助T细胞应答质量中起重要作用，例如，观察到决定TH应答(例如TH1与TH2应答的关系)的特定类型的TLR信号的性质。抗体(体液)免疫和细胞免疫的组合作为TH1型应答的部分产生，而TH2型应答主要是抗体应答。
“体液免疫应答”指抗体分子介导的免疫应答，而“细胞免疫应答”指T淋巴细胞和/或其他白细胞介导的免疫应答。细胞免疫型的一个重要方面涉及溶细胞的T细胞(″CTLs″)的抗原特异性应答。CTLs具有对与主要组织相容性复合物(MHC)编码的蛋白质结合呈递并且在细胞表面上表达的肽抗原的特异性。CTLs辅助诱导和促进胞内微生物的胞内破坏或感染这种微生物的细胞溶胞。另一个细胞免疫的方面涉及辅助T细胞的抗原特异性应答。辅助T细胞起刺激非特异性效应细胞功能的作用并且使其活性集中于展示结合其表面上的MHC分子的肽抗原的细胞。″细胞免疫应答″还指产生细胞因子、趋化因子和其他这类由活化T细胞和/或其他白血细胞产生的分子，包括衍生自CD4+和CD8+T细胞的那些。
组合物例如作为引起细胞免疫应答的免疫原性组合物或疫苗由此可以用于通过呈递结合细胞表面上的MHC分子的抗原致敏脊椎动物受试者。细胞介导的免疫应答定向于或接近在其表面上呈递抗原的细胞。此外，可以生成抗原特异性T淋巴细胞以使免疫接种的宿主在将来得到保护。特定抗原或组合物刺激细胞介导的免疫应答的能力可以通过本领域公知的许多测定法测定，例如通过淋巴组织增殖(淋巴细胞活化)测定法、CTL细胞毒性细胞测定法、通过测定对致敏受试者中的抗原具有特异性的T淋巴细胞或通过测定作为对用抗原再刺激的应答的T细胞的细胞因子产生。这种测定法是本领域众所周知的。例如，参见Erickson等人(1993)J.Immunol.151：4189-4199；Doe等人(1994)Eur.J.Immunol.24：2369-2376。因此，本文所用的免疫应答可以是刺激CTLs产生和/或辅助T细胞产生或活化的应答。目的抗原还可以引起抗体介导的免疫应答。因此，免疫应答可以包括，例如一种或多种如下效应等：例如，B细胞产生抗体；和/或特异性针对目的组合物或疫苗中存在的抗原的阻抑T细胞和/或γδT细胞的活化。这些应答可以用于中和感染性和/或介导抗体-补体或抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，以便对免疫的宿主提供保护。此类应答能够使用标准的免疫测试法和中和测试法确定，这在本领域是熟知的。
本发明的免疫原性组合物在它们具有引起比不同组合物中的等量抗原引起的免疫应答更大的能力时，对指定抗原展示″增强的免疫原性″(例如，其中将抗原作为可溶性蛋白施与)。因此，例如，组合物可以展示出″增强的免疫原性″，因为该组合物产生更强的免疫应答或因为较低剂量或较少剂量的抗原是对所施与的受试者中实现免疫应答必不可少的。例如，可以通过对动物施与本发明的组合物和抗原对照并且比较两者的结果确定这种增强的免疫原性。
如本文所用的术语“炎性疾病”是指以疼痛(因产生有害物质和神经刺激而引起的疼痛)、发热(因血管舒张而引起的灼热)、发红(因血管舒张和血流增加而引起的发红)、肿胀(因液体的过量的流入或受限的流出而引起的肿块)和机能丧失(可以是部分的或完全的、临时的或永久的机能丧失)中的一种或多种体征为特征的那些疾病或病症。炎症有多种形式，其非限制性地包括以下的一种或多种：急性的、粘连性的、萎缩性的、卡他性的、慢性的、硬变性的、扩散性的、弥散性的、渗出性的、纤维性的、纤维化的、局部的、肉芽肿的、增生的、肥大的、间质性的、转移性的、坏死的、闭塞的、实质的、塑性的、产生性的、增殖的、假膜的、化脓性的、致硬化的、浆液纤维蛋白性的、血清的、单纯的、特异的、亚急性的、化脓性的、中毒性的、创伤性的和/或溃疡性的。炎性病症进一步非限制性地包括那些影响血管的病症(多动脉炎、暂时性关节炎)；影响关节的病症(关节炎：结晶性、骨性、银屑病性、反应性、类风湿性、莱特病引发的)；影响胃肠道的病症(疾病)；影响皮肤的病症(皮炎)；或影响多器官和组织的病症(系统性红斑狼疮)。
如本文所用的术语“调节”是指直接或间接地与靶点相互作用从而改变靶点的活性，仅举例性地包括增强靶点的活性、抑制靶点的活性、限制靶点的活性或扩展靶点的活性。
如本文所用的术语“调节剂”是指直接或间接地与靶点相互作用的分子。该相互作用非限制性地包括激动剂或拮抗剂的相互作用。
如本文所用的术语“眼部疾病”是指影响眼并且有可能影响其外围组织的疾病。眼部疾病非限制性地包括结膜炎、视网膜炎、巩膜炎、眼色素层炎、变应性结膜炎、春季结膜炎、乳头性结膜炎和巨细胞病毒(CMV)视网膜炎。
如本文所用的术语“寡核苷酸”指具有5-100个核苷酸、一般地5-30个核苷酸大小的多核苷酸。
如本文所用的术语“药学可接受的”是指没有废除本文所述的化合物的生物活性或性质的物质，例如载体或稀释剂。向个体施与这种物质而不会导致不希望的生物效应或不以有害的方式与其所在的组合物中包含的任何成分发生相互作用。
如本文所用的术语“药学可接受的盐”是指对给药的器官没有显著刺激并且没有废除本文所述的化合物的生物活性或性质的化合物的制剂。
如本文所用的术语“组合”或“药物组合”是指通过混合或联合多于1种活性成分而得到并且包括活性成分的固定和不固定的组合的产品。术语“固定组合”是指将活性成分(例如式(I)的化合物)和另外的治疗剂以单一实体或剂量的形式同时都施与患者。术语“不固定组合”是指将活性成分(例如式(I)的化合物)和另外的治疗剂以分开的实体同时、共同或无特定时间限制地先后施与患者，其中该给药提供患者体内的治疗上有效水平的2种化合物。后者也应用于鸡尾酒疗法，例如3种或更多种活性成分的给药。
如本文所用的术语“组合物”或“药物组合物”是指至少一种化合物(例如本文所述的式(I)的化合物)和至少一种和任选地多于一种的其他药学可接受的化学成分(例如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂)的混合物。
所谓“生理pH”或“在生理范围内的pH”是指pH范围约为7.2-8.0，更一般地约为7.2-7.6。
如本文所用的术语“前药”指在体内被转化成母体药物的试剂。本文所述化合物的前药的非限制性实例是本文所述的作为酯给予、然后一旦在细胞内部则被代谢水解成羧酸即活性本体的化合物。前药的另一种实例是键合酸基团的短肽，其中该肽被代谢以显示活性部分。
术语“多核苷酸”和“核酸”可以互换使用，并且指脱氧核苷酸或核苷酸碱基的单链或双链聚合物。单链多核苷酸包括编码链和反义链。多核苷酸包括RNA和DNA且可以分离自天然来源、在体外合成或由天然和合成分子的组合制备。多核苷酸的实例非限制性地包括基因、cDNAs、mRNAs、自主复制RNA分子、自主复制DNA分子、基因组DNA序列、基因组RNA序列、寡核苷酸。自主复制RNA分子和自主复制DNA分子能够在导入宿主细胞时自我扩增。
多核苷酸可以是线性的或非线性的(例如包含环状、支链等元件)。术语“多核苷酸”和“核酸”包括修饰的变体(例如具有缺失、添加和/或取代的序列)。修饰的变体可以是有意进行的，例如通过位点定向诱变；或可以是偶然的，例如通过自然突变。
多核苷酸可以由单体组成，这些单体是天然存在的核苷酸(例如DNA和RNA)或天然存在的核苷酸的类似物或两者的组合。修饰的核苷酸可以在糖部分和/或在嘧啶或嘌呤碱基部分上具有改变。糖的改变包括，例如用卤素、烷基、胺类和叠氮基替代一个或多个羟基或可以使糖类官能化为醚类或酯类。此外，整个糖部分可以被空间和电子类似的结构替代，例如氮杂-糖类和碳环糖类似物。在碱基部分上改变的实例包括烷基化嘌呤类和嘧啶类、酰化嘌呤类或嘧啶类或其他众所周知的杂环取代物。多核苷酸单体可以通过磷酸二酯键或这种键的类似物连接。磷酸二酯键的类似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、phosphoroanilothioate、phosphoranilidate、氨基磷酸酯等。术语“多核苷酸”和“核酸”还包括所谓的“肽核酸”，其包含与聚酰胺骨架连接的天然存在或修饰的核酸碱基。
如本文所用的术语“包含多核苷酸的种类”指分子，其至少一部分是多核苷酸。
如本文所用的术语“多肽”、“蛋白质”和“肽”指由多个氨基酸形成的任意聚合物，与长度或翻译后修饰(例如磷酸化或糖基化)无关，其至少部分通过共价键合结合(例如本文所用的″蛋白质″指通过肽键连接的氨基酸的线性聚合物(链)和显示二级、三级或四级结构的蛋白质，它们可以包括肽链内或之间的分子内和分子间结合例如氢键和范德华键的其他形式)。多肽的实例非限制性地包括蛋白质、肽类、寡肽类、二聚体、多聚体、变体等。在一些实施方案中，多肽可以未被修饰，使得它缺乏修饰，所述修饰是例如磷酸化和糖基化。多肽可以包含部分或全部单一天然存在的多肽或可以是包含来自两种或多种天然存在的多肽类的氨基酸序列的融合或嵌合多肽。
术语“包含多肽的种类”指分子，其至少一部分是多肽。实例包括多肽类、糖蛋白、金属蛋白质、脂蛋白、缀合至载体蛋白的糖抗原等。
如本文所用的术语“呼吸系统疾病”指侵害了涉及呼吸的器官例如鼻、咽喉、喉头、气管、支气管和肺的疾病。呼吸系统疾病非限制性地包括哮喘、成人呼吸窘迫综合征和过敏性(外源性)哮喘、非过敏性(内源性)哮喘、急性重度哮喘、慢性哮喘、临床性哮喘、夜间性哮喘、过敏原诱发的哮喘、阿司匹林敏感性哮喘、运动诱发哮喘、等二氧化碳换气过度、儿童发作性哮喘、成人发作性哮喘、咳嗽变异性哮喘、职业性哮喘、类固醇抵抗型哮喘、季节性哮喘、季节性变应性鼻炎、常年性变应性鼻炎、慢性阻塞性肺疾病包括慢性支气管炎或肺气肿、肺动脉高压、间质性肺纤维化和/或气道炎症和囊性纤维化和缺氧。
如本文所用的术语“受试者”或“患者”包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物的实例非限制性地包括人、黑猩猩、猿猴、牛、马、绵羊、山羊、猪；家兔、狗、猫、大鼠、小鼠、豚鼠等。非哺乳动物的实例非限制性地包括鸟类、鱼等。通常所述的受试者是人且可以是诊断为需要治疗的本文公开的疾病或病症的人。
如本文所用的术语“TLR7调节剂”指调节TLR7受体的化合物。
如本文所用的术语“TLR7疾病”或“与TLR7活性相关的疾病或病症”是指与toll样受体相关的任何疾病状态。这种疾病或病症非限制性地包括传染病、炎性疾病、呼吸系统疾病和自身免疫性疾病，仅举例性地例如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDs)、克罗恩病、支气管炎、皮炎、变应性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化症、癌、HIV和狼疮。
如本文所用的术语“治疗有效量”是指与没有接受该量的相应的个体相比改善了疾病、病症或副作用的治疗、痊愈、预防或改善或者疾病或病症的进展速率降低的化合物的任何量。在其范围内，该术语也包括有效增强正常生理机能的量。
如本文所用的术语“治疗”是指缓解、减轻或改善疾病或症状、预防其他的症状、改善或预防症状的潜在代谢原因、抑制疾病或病症、阻止疾病或病症的发展、缓解疾病或病症、导致疾病或病症的消退、缓解因疾病或病症的引起的状况、或预防性地和/或治疗性地阻止疾病或病症的症状的方法。
术语“载体构建体”一般指能够指导目的核酸序列或基因表达的任意装配物。″DNA载体构建体″指能够指导目的核酸序列表达的DNA分子。一种特异性类型的DNA载体构建体是质粒，它是能够在宿主细胞内自主复制的环状附加型DNA分子。一般地，质粒是可以连入另外的DNA片段的环状双链DNA环。pCMV是一种本领域众所周知的具体质粒。其他DNA载体构建体是已知的，它们基于RNA病毒。这些DNA载体构建体一般地包含在真核细胞中起作用的启动子、转录产物是RNA载体构建体的cDNA序列的5′(例如甲病毒属RNA载体复制子)和3′末端区。载体构建体的其他实例包括RNA载体构建体(例如甲病毒属载体构建体)等。如本文所用的″RNA载体″、″RNA载体构建体″和″复制子″指能够在体内、一般地在靶细胞内指导其自身扩增或自我复制的RNA分子。RNA载体构建体直接使用，无需将DNA导入细胞和输送至转录会发生的核。通过使用直接递送入宿主细胞细胞质的RNA载体，异源核酸序列的自主复制和翻译有效地进行。
本文提供的化合物名称使用ChemDraw Ultra 10.0或JChem版5.2.2(ChemAxon)得到。
通过以下的详细描述，本文所述的方法、组合物和组合的其他目的、特征和优点将变得很明显。然而，应该理解在表示具体实施方案的同时仅仅以示例的方式给出详细的描述和特定的实施例。
优选实施方案的描述
本文提供了作为Toll样受体-7(TLR7)的激动剂的化合物及其药物组合物。还提供了治疗与TLR7活性相关的疾病和/或病症的化合物、药物组合物和方法。
本文提供的TLR7激动剂是具有式(I)的结构的化合物及其药学可接受的盐、药学可接受的溶剂合物(例如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、被保护的衍生物、各异构体和异构体混合物：
式(I)
其中：
R1是H、C1-C6烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选被1-4个氟基团取代；
L3各自独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选被1-4个氟基团取代；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C6烷基；
R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
R4各自独立地选自H和氟；
R5是-P(O)(OR9)2，
R6是-CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R7是-CF2P(O)(OR9)2或-C(O)OR10；
R8是H或C1-C4烷基；
每一R9独立地选自H和C1-C6烷基；
R10是H或C1-C4烷基；
p各自独立地选自1、2、3、4、5和6；且
q是1、2、3或4；
条件是当R3是C1-C4烷基或-OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5，-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OR9)2，R7是-CF2P(O)(OR9)2。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基，在其他实施方案中，R1是甲基。在一些实施方案中，R1是H。在其他实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，当R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6时，R3是-OR8或C1-C6烷基。在一些实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，R3是-OMe。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，R2是C1-C6烷基。在一些实施方案中，R2是甲基。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、和-L3L4L3R5。在备选的实施方案中，R3选自-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH。在一些实施方案中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5是式-O(CH2)1-5P(O)(OR)2的基团。在其他实施方案中，R3是-OL3R5，其中-OL3R5是式-O(CH2)1-5CF2P(O)(OR)2的基团。
在一些实施方案中，R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5和-OL3L4L3R5。
如果作为包含-P(O)(OR9)2部分的化合物上存在一个以上R9，则R9基团相同或不同。在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R9每次出现时为H。在其他实施方案中，至少一个R9是H，另一个R9是C1-C6烷基.在其他实施方案中，至少一个R9是H，另一个R9是甲基。在其他实施方案中，至少一个R9是H，另一个R9是乙基。在这种式(I)化合物的其他实施方案中，R9各自是C1-C6烷基，在一些实施方案中，R9是甲基或乙基或其组合。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2和/或L3是式-((CR4R4)pO)q(CH2)p-的基团，在一些实施方案中，该基团具有式-(CH2CH2O)1-3(CH2)1-3-。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2是C1-C6亚烷基，而在其他实施方案中，L2是被1-4个氟基团取代的C1-C6亚烷基。在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，L2具有式(CH2)0-5CF2，其中氟取代的碳不直接连接在式I的苯环上。在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2是C2-C6亚烯基，而在其他实施方案中，L2是被1-4个氟基团取代的C2-C6亚烯基。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L3是C1-C6亚烷基，而在其他实施方案中，L3是被1-4个氟基团取代的C1-C6亚烷基。在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，L3具有式(CH2)0-5CF2，其中氟取代的碳不直接连接在式I的苯环上。
在式(I)的化合物的一些实施方案中，L2是亚芳基或杂亚芳基。在一些这些实施方案中，L2是亚苯基，例如1，3-二取代的亚苯基或1，4-二取代的亚苯基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R7是-CF2P(O)(OR9)2，L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，p是2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R6是-C(O)OR10；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L2是C1-C6亚烷基，L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R6是-C(O)OR10；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L2是C1-C6亚烷基；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，p是2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OR8；R8是C1-C6烷基；R5是-P(O)(OR9)2；R6是-CF2P(O)(OR9)2；L1是-C(O)-，L2是C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，其各自任选被1-4个氟基团取代。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3L4R5-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5是-P(O)(OR9)2；R7是-CF2P(O)(OR9)2；L3各自独立地是C1-C6亚烷基，L4是亚苯基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-C(R5)2OH或-L1R5；R5是-P(O)(OR9)2，L1是-C(O)-或-O-。
在这种式(I)的化合物及其药学可接受的盐、药学可接受的溶剂合物(例如水合物)、N-氧化物衍生物、前药衍生物、被保护的衍生物、各异构体和异构体混合物的一些实施方案中：
式(I)
R1是C1-C4烷基、-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是-C(O)-或-O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚芳基、杂亚芳基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选被1-4个氟基团取代；
L3各自独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基任选被1-4个氟基团取代；
L4是亚芳基或杂亚芳基；
R2是H或C1-C4烷基；
R3选自C1-C4烷基、-L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OR8、-OL3L4R5、-OL3L4L3R5和-C(R5)2OH；
R4各自独立地选自H和氟；
R5是-P(O)(OH)2，
R6是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R7是-CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R8是H或C1-C4烷基；
p各自独立地选自1、2、3、4、5和6；且
q是1、2、3或4；
条件是当R3是-OR8时，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L1R6、-L2R5，-L2R6、-OL2R5或-OL2R6，其中R6是-CF2P(O)(OH)2，R7是-CF2P(O)(OH)2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R7是-CF2P(O)(OH)2，L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的-些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R7是-CF2P(O)(OH)2；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，p是2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R6是-C(O)OH；R7是-CF2P(O)(OH)2；L2是C1-C6亚烷基，L3是C1-C6亚烷基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-L2R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3R5或-OL3R7；R5是-P(O)(OH)2；R6是-C(O)OH；R7是-CF2P(O)(OH)2；L2是C1-C6亚烷基；L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；R4是H；q是1或2，p是2。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是-C(R5)2OH、-L1R5、-L2R5或-L1R6；R2是C1-C6烷基；R3是-OR8；R8是C1-C6烷基；R5是-P(O)(OH)2；R6是-CF2P(O)(OH)2；L1是-C(O)-，L2是C1-C6亚烷基或C2-C6亚烯基，其各自任选被1-4个氟基团取代。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-OL3L4R5-OL3L4L3R5或-OL3L4L3R7；R5是-P(O)(OH)2；R7是-CF2P(O)(OH)2；L3各自独立地是C1-C6亚烷基，L4是亚苯基。
在式(I)的这类化合物的一些实施方案中，R1是C1-C6烷基；R2是C1-C6烷基；R3是-C(R5)2OH或-L1R5；R5是-P(O)(OR9)2，L1是-C(O)-或-O-。
在上述式(I)化合物的一些实施方案中，R8是甲基。在上述式(I)化合物的一些实施方案中，R1是甲基。在上述式(I)化合物的一些实施方案中，R2是甲基。
在式(I)化合物的其他实施方案中，
R5是-P(O)(O-X+)2或-P(O)(O-)2X2+；
R6是-CF2P(O)(O-X+)2、-CF2P(O)(O-)2X2+或-C(O)O-X+；且
R7是-CF2P(O)(O-X+)2、-CF2P(O)(O-)2X2+或-C(O)O-X+；
其中X+和X2+是药学可接受的阳离子。在一些实施方案中，这种药学可接受的阳离子选自钠、钾、钙、锌和镁。
在式(I)化合物的一些实施方案中，
R5是-PO3 -X3+；
R6是-CF2PO3 -X3+；且
R7是-CF2PO3 -X3+；
其中X3+是Al3+。
含铝的佐剂例如氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝在疫苗中用于结合抗原。有关疫苗中含铝的佐剂及其用途的讨论在Expert Rev.Vaccines，46(5)，2007，685-698和Vaccines，25，2007，6618-6624中给出，将这些文献的公开的内容完整地引入本文参考。
本文提供的式(I)的化合物是结合含铝的佐剂的TLR7激动剂，所述的含铝的佐剂仅作为实例例如氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。在一些实施方案中，这种式(I)的化合物具有磷酸酯、膦酸、膦酸酯、氟化膦酸或氟化膦酸酯基团。而在其他实施方案中，这种式(I)的化合物具有磷酸酯、膦酸、膦酸酯、氟化膦酸或氟化膦酸酯基团和一个或多个另外的选自羧酸和硫酸盐的可电离基团。
在一些实施方案中，将本文提供的式(I)的化合物与抗原、含铝的佐剂和任选的载体、药学可接受的赋形剂组合，得到免疫原性组合物。在其他实施方案中，这种免疫原性组合物包含式(I)的化合物和抗原，其中抗原非限制性地包括细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、肿瘤抗原或与STD、阿尔茨海默病、呼吸病、自身免疫性疾病仅作为实例为类风湿性关节炎或狼疮、儿科疾病和肥胖相关的抗原，且其中化合物的量是有效增强对组合物所施与的受试者中抗原的免疫应答的量。用于这种免疫原性组合物的适合的抗原如本文所述。
在一些实施方案中，这种免疫原性组合物包括脑膜炎奈瑟氏球菌菌株的细菌抗原，例如血清组A、C、W135、Y和/或B。用于这些组合物中的特定抗原如本文所述。在其他实施方案中，这种免疫原性组合物和本文所提供的其他组合物用作疫苗；其用于治疗与组合物中所包括的抗原相关的病症的用途在本文中描述。
本文所提供的式(I)的化合物及其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体以及药物组合物也包括该化合物及其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体以及药物组合物的所有适合的同位素变体。本文所提供的化合物或其药学可接受的盐的同位素变体定义为其中至少1个原子被具有相同原子序数、但原子量与通常在自然界发现的原子量不同的原子代替。可以引入本文所提供的化合物及其药学可接受的盐的同位素的实例非限制性地包括氢、碳、氮和氧的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、17O、18O、35S、18F、36Cl和123I。本文所提供的化合物及其药学可接受的盐的一些同位素变体(例如将例如3H或14C的放射性同位素引入其中的那些)用于药物和/或底物组织分布研究。在特定的实例中，3H和14C同位素因其易于制备和检测而可以被使用。在其他实例中，用例如2H的同位素进行替代可以提供一些由更好的代谢稳定性(例如体内半衰期增加或剂量需求减少)带来的治疗优势。通过使用适合的试剂的适合的同位素变体的常规方法制备本文所提供的化合物及其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体以及药物组合物的同位素变体。
式(I)化合物的制备方法
制备式(I)的化合物的一般方法记载于以下实施例中。在所述的反应中，可以将在最终产物中所需要的反应性官能团(例如羟基、氨基、亚氨基、硫代或羧基)保护起来从而避免其参与到不需要的反应。根据标准操作规程可以使用常规的保护基(例如，参见T.W.Greene和P.G.M.Wuts：“Protective Groups in Organic Chemistry，”John Wiley和Sons，1991)。
在一些实施方案中，通过使游离碱形式的式(I)的化合物与药学可接受的有机酸或无机酸反应从而将本文所述的式(I)的化合物制成药学可接受的酸加成盐。在其他实施方案中，通过使游离酸形式的式(I)的化合物与药学可接受的有机碱或无机碱反应制备本文所述的式(I)的化合物的药学可接受的碱加成盐。备选地，使用起始原料或中间体的盐制备本文所述的式(I)的化合物的盐形式。在一些实施方案中，本文所述的式(I)的化合物是非限制性地包括草酸盐和三氟乙酸盐的其他盐的形式。在一些实施方案中，形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。
这种式(I)的化合物的药学可接受的酸加成盐非限制性地包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、甲酸盐、乙酸酯、己二酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)、己酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、环磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴化物/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、巴莫酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、蔗糖盐、硬脂酸盐、鞣酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和昔萘酸盐。
用于形成式(I)的化合物的一些药学可接受的酸加成盐的有机酸或无机酸非限制性地包括氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、甲酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸(例如2-萘磺酸)或己酸。
这种式(I)的化合物的药学可接受的碱加成盐非限制性地包括铝盐、精氨酸盐、苄星盐(benzathine)、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、醇胺盐(olamine)、钾盐、钠盐、氨基丁三醇盐和锌盐。
在一些实施方案中，分别由相应的碱加成盐或酸加成盐制备游离酸或游离碱形式的本文提供的式(I)的化合物。例如，通过用适合的碱处理(仅作为实例，氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)将酸加成盐形式的式(I)化合物转化成相应的游离碱。例如，通过用适合的酸处理(仅作为实例，盐酸)将碱加成盐形式的式(I)化合物转化成相应的游离酸。
在一些实施方案中，通过在适合的惰性有机溶剂中(仅作为实例，乙腈、乙醇、二烷水溶液等)在0-80℃用还原剂(例如硫、二氧化硫、三苯膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化磷等)处理由式(I)的化合物的N-氧化物制备非氧化形式的式(I)的化合物。
在一些实施方案中，用本领域的普通技术人员已知的方法制备式(I)化合物的前药衍生物(例如，进一步的细节参见Saulnier等人，(1994)，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，Vol.4，p.1985)。例如，通过非衍生化的式(I)的化合物与适合的氨甲酰化剂(仅作为实例，1，1-酰氧基烷基碳酰氯、碳酸对硝基苯酯等)反应制备适合的前药。
在一些实施方案中，用本领域的普通技术人员已知的方法将式(I)的化合物制成被保护的衍生物。应用于产生保护基团和将其除去的技术的详细描述可见T.W.Greene，“Protecting Groups in Organic Chemistry，”第3版，John Wiley和Sons，Inc.，1999。
在一些实施方案中，将式(I)的化合物制成或形成为溶剂合物(例如水合物)。在一些实施方案中，通过用例如二英、四氢呋喃或甲醇的有机溶剂从水/有机溶剂混合物中重结晶来制备式(I)的化合物的水合物。
在一些实施方案中，将式(I)的化合物制成其分别的立体异构体。在其他实施方案中，通过化合物的外消旋混合物与旋光活性的拆分试剂反应从而形成一对非对映异构化合物、分离非对映异构体和回收光学纯的对映异构体，将本文所述的式(I)的化合物制成其分别的立体异构体。在一些实施方案中，用式(I)的化合物的共价的非对映衍生物或者通过使用可离解的复合体(例如晶体非对映体盐)来拆分对映异构体。非对映异构体具有不同的物理性质(例如熔点、沸点、溶解度、反应性等)并且利用这些不同点容易地分离。在一些实施方案中，通过色谱法或基于溶解度差异的分离/拆分技术分离非对映异构体。然后通过任何不会导致外消旋化的实用的方法回收光学纯的对映异构体和拆分试剂。应用于从其外消旋混合物拆分化合物的立体异构体的技术的更详细描述可见Jean Jacques，Andre Collet，SamuelH.Wilen，“Enantiomers，Racemates和Resolutions，”John Wiley和Sons，Inc.，1981。
用本文所述的方法制备式(I)的化合物并且在实施例中示例。在一些实施方案中，式(I)的化合物通过以下来制备：
(a)任选地将式(I)的化合物转化为药学可接受的盐；
(b)任选地将盐形式的式(I)的化合物转化为非盐形式；
(c)任选地将未氧化形式的式(I)化合物转化为药学可接受的N-氧化物；
(d)任选地将N-氧化物形式的式(I)的化合物转化为其未氧化的形式；
(e)任选地从异构体的混合物拆分式(I)化合物的分别的异构体；
(f)任选地将非衍生化的式(I)的化合物转化为药学可接受的前药衍生物；和
(g)任选地将式(I)的化合物的前药衍生物转化为其非衍生化的形式。
在反应方案(I)-(XI)中示例用于制备本文提供的式(I)化合物的合成方案的非限制性实例。
方案(I)示例在钯催化剂的存在下通过2-(叔丁氧羰基-氨基)苯基硼酸(I-1)与3-卤代2-氰基吡啶衍生物(I-2)偶合合成苯并二氮萘类(I-3)。仅作为实例，3-卤代2-氰基吡啶衍生物的卤代部分是溴或氯。苯并二氮萘类(I-3)上的RA和RB如本文对式(I)相应位置上的取代基所述，或RA和RB是进一步修饰以得到如本文所述相应式(I)取代基的基团。
方案(I)
在一些实施方案中，用于合成式(I)化合物的苯基硼酸根据方案(II)合成。在方案(II)中，苯胺(II-1)在碱性条件下被Boc-保护，得到(II-2)，然后通过原位锂化并且与硼酸三甲酯反应、然后进行水后处理被转化成硼酸(I-1)。
方案(II)
硼酸(I-1)作为在方案(I)中使用，与氰基吡啶类(I-2)反应，得到苯并二氮萘类(I-3)。
在一些实施方案中，硼酸等效物包括、但不限于硼酸酯类用于合成式(I)的化合物。方案(III)示例合成这种硼酸酯类(III-3)，其用作合成苯并二氮萘类(I-3)中的硼酸等效物。在方案(III)中，2-卤代苯胺类(III-1)在碱性条件下被Boc-保护，得到(III-2)，然后使用钯介导的催化转化成硼酸酯类(III-3)。这些硼酸酯类(III-3)在方案(I)中使用，与氰基吡啶类(I-2)反应，得到取代或未取代的苯并二氮萘类(I-3)。
方案(III)
在一些实施方案中，如下所示例的，由相应的硝基苯化合物合成作为方案(III)中使用的2-溴苯胺类：
在其他实施方案中，使用方案(IV)中所述的方法合成式(I)的化合物。
方案(IV)
在方案(IV)中，首先将3-氯苯甲醛(IV-1)转化成相应的羟基胺(IV-2)，然后用于制备相应的腈(IV-3)。如方案(I)中所述，使用钯为介体的条件，使腈衍生物(IV-3)与硼酸(I1)(或硼酸酯类(III-3)偶合，得到苯并二氮萘(I-3)。
在其他实施方案中，使用方案(V)中所述的合成途径制备一些具有碳连接的取代基的式(I)的化合物，包括在2-位上带有不同碳连接的取代基的苯并二氮萘类。
方案(V)
在方案(V)中，首先使用1当量的硼酸/酯将3，5-二卤代2-氰基吡啶例如仅作为实例3，5-二氯2-氰基吡啶(V-1)单取代，由此得到相应的2-氰基吡啶(V-2)。使用如方案(I)中所述的更剧烈的钯为介体的条件，使腈衍生物(V-2)与硼酸(I-1)(或硼酸酯类(III-3)偶合，得到在2-位上带有碳连接的取代基的苯并二氮萘(V-3)。在一些实施方案中，碳连接的取代基是烯，而在其他实施方案中，这种烯类进一步通过氢化被修饰，得到在2-位上带有烷基的苯并二氮萘类。
在其他实施方案中，使用方案(VI)中所述的方法合成一些具有不同取代基的式(I)的化合物，包括在2-位上带有不同取代基的苯并二氮萘类。
方案(VI)
在方案(VI)中，首先将在5位上被取代的2，3-二卤代吡啶类(VI-1)例如仅作为实例(5，6-二氯吡啶-3-基)甲醇转化成相应的腈(VI-2)。使用如方案(I)中所述的钯为介体的条件，使腈衍生物(VI-2)与硼酸(I-1)(或硼酸酯类(III-3)偶合，得到苯并二氮萘(I-3)。
在其他实施方案中，使用方案(VII)中所述的方法合成一些式(I)的化合物。
方案(VII)
在方案(VII)中，使用钯为介体的条件使芳基溴或芳基碘(VII-1)与三乙基(乙炔基)硅烷(或其等效物)偶合，得到(VII-2)。使甲硅烷基保护基脱保护后，使用钯为介体的条件使乙炔衍生物(VII-3)与3，5-二氯2-氰基吡啶(VII-4)偶合，得到3-氯-2-氰基吡啶类(VII-5)。使(VII-5)的衍生物例如仅作为实例的3-氯-5-(苯基乙炔基)2-氰基吡啶与硼酸(I-1)(或硼酸酯类(III-3)偶合，得到苯并二氮萘(VII-6)。然后使化合物(VII-6)接触氢化条件，得到苯并二氮萘类(VII-7)。R2如本文所述，苯并二氮萘类(VII-7)上的RA和RB基团如本文对式(I)相应位置上的取代基所述，或RA和RB是如本文所述使进一步被修饰以得到式(I)相应的取代基的基团。
在其他实施方案中，使用方案(VIII)中所述的方法合成一些式(I)的化合物。
方案(VIII)
在方案(VIII)中，使用钯为介体的条件使芳基溴或芳基碘(VIII-1)与三乙基(乙炔基)硅烷(或其等效物)偶合，得到(VIII-2)。使甲硅烷基保护基脱保护后，使用钯为介体的条件使乙炔衍生物(VIII-3)与3，5-二氯2-氰基吡啶(VIII-4)偶合，得到3-氯-2-氰基吡啶类(VIII-5)。使(VIII-5)的衍生物例如仅作为实例的3-氯-5-(苯基乙炔基)2-氰基吡啶在氢化条件下还原，得到相应的3-氯-5-苯乙基甲基吡啶(VIII-6)。使化合物(VIII-6)与硼酸(I-1)(或硼酸酯类(III-3)偶合，得到苯并二氮萘类(VIII-7)。R2如本文所述，苯并二氮萘类(VII-7)上的RA和RB基团如本文对式(I)相应位置上的取代基所述，或RA和RB是如本文所述使进一步被修饰以得到式(I)相应的取代基的基团。
在其他实施方案中，使用方案(IX)中所述的方法合成一些式(I)的化合物。
方案(IX)
在方案(IX)中，带有酚基的化合物(IX-1)用不同亲电体烷基化，其中R1、R2、L1、L3、L4、R5和R7如本文所定义。在一些实例中，如方案1例示的那样，制备在酚位置上包含烷氧基侧基的类似物，其中带有酚基的化合物被包含膦酸酯的亲电体烷基化，得到被保护的膦酸酯，用适合的脱保护试剂处理，得到膦酸。
提供本文提供的实例是为了示例、但不限制本文提供的式(I)的化合物和这类化合物的制备。仅作为实例，如方案2例示的那样，制备在C-8位上包含羧酸侧基的一些式(I)的化合物。
仅作为实例，如方案3例示的那样，制备在C-8位上包含α，α’-二氟膦酸侧基的一些式(I)的化合物，其中伯醇被氧化成醛，用适合的膦酸酯试剂使这种醛烷基化，得到膦酸酯。另外，氧化苄醇得到酮基，最终进行水解得到最终的膦酸衍生物。
仅作为实例，如方案4所示制备在C-8位上包含膦酸侧基的一些式(I)的化合物，其中用维悌希试剂处理醛，得到膦酸乙烯酯类。仅作为实例，用三甲基甲硅烷基溴水解膦酸酯得到膦酸。备选地，氢化乙烯基部分得到烷基连接的膦酸酯，水解得到烷基连接的膦酸。
仅作为实例，根据方案5制备包含磷酸芳基酯基的一些式(I)的化合物，其中用1-(溴甲基)-3-碘苯和碳酸铯处理带有酚基的化合物，得到中间体，使其进行钯催化的与磷酸三乙酯的交叉偶合，然后用三甲基甲硅烷基溴水解，得到带有膦酸的化合物。
仅作为实例，如方案6例示的那样，制备在C-8位上包含α-酮基膦酸侧基的一些式(I)的化合物，其中用亚磷酸三(三甲基甲硅烷基)酯处理醛，然后用IBX氧化得到膦酸。
药理学和用途
当外来抗原激发免疫系统时，其通过启动保护应答来做出反应，其特征在于先天的和获得的后天的免疫系统的协调的相互作用。这2个相互依赖的系统满足2个互相排他性的要求：速度(由先天的系统推动)和特异性(由适应性系统推动)。
先天免疫系统作为防御侵入的病原体的第一道防线，在适应性反应成熟的同时保持对病原体的检查。在感染的几分钟之内就以抗原非依赖性的形式激发，广泛地对病原体内的保守模式作出应答(但其不是非特异性的并且能够辨别出自身和病原体)。重要地，其也产生炎性和共刺激环境(有时是指危险信号)，其增强适应性免疫系统并且控制(或者使其极化)朝向最适合与传染源对抗的细胞或体液应答。用于先天免疫的治疗靶点的TLR调节剂的进展已经有综述(参见Nature Medicine，2007，13，552-559；Drug Discovery Today：Therapeutic Stategies，2006，3，343-352和Journal of Immunology，2005，174，1259-1268)。
经过几天或几周适应性反应变得有效，但其最终提供完全消除病原体和产生免疫记忆所需的良好的抗原特异性。其主要由已经经历胚系基因重排并且以特异性和持久记忆为特征的T和B细胞介导。然而，其也涉及先天免疫系统的元件的募集，包括吞噬细菌和甚至相对大的原生动物寄生虫的专门的吞噬细胞(巨噬细胞、嗜中性白细胞等)和粒细胞(嗜碱细胞、嗜酸性细胞等)。一旦适应性免疫应答已经成熟，由于已经产生了在以后接触其同源抗原就会迅速被激活的高度特异性的记忆细胞，以后再接触病原体就可导致其迅速的清除。
自身免疫疾病被定义为：(i)对自身抗原的体液或自身抗体应答(仅作为实例，具有针对TSH受体的抗体的格雷夫斯原发性甲状腺机能亢进)，或(ii)细胞应答，其中免疫细胞破坏产生自身抗原的非免疫细胞(仅作为实例，甲状腺细胞(桥本甲状腺炎)或胰岛β细胞(1型糖尿病))。许多自身免疫疾病是两种现象的组合，例如桥本病和1型糖尿病也具有自身抗体，抗甲状腺过氧化物酶(TPO)或抗谷氨酸脱羧酶(GAD)/胰岛细胞。自身免疫疾病通常具有炎性成分，其非限制性地包括粘附分子的增加(仅作为实例，血管细胞粘附分子-1(VCAM-1))和白细胞对脉管系统的粘附的改变(例如结肠炎、全身性红斑狼疮、全身性硬化症和糖尿病的血管并发症)。
Toll样受体(TLRs)是I型跨膜蛋白，其特征在于细胞外的N-末端富亮氨酸的重复(LRR)结构域、随后是富半胱氨酸区、TM域和含有名为Toll/IL-1受体(TIR)域的保守区的细胞内的(胞质)尾。TLR是主要表达在免疫细胞上的模式识别受体(PRR)，所述的免疫细胞非限制性地包括树突细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞和天然杀伤细胞。LLR域对于配体结合和相关信号传导是重要的并且是PRR的共同特征。TIR域对于蛋白质-蛋白质相互作用是重要的并且其与先天免疫有关。TIR域也联合由3个亚组组成的较大的IL-1R/TLR超家族。第一组的成员在其胞外区具有免疫球蛋白域并且包括IL-1和IL-18受体以及辅助蛋白和ST2。第二组包括TLRs。第三组包括对于信号传导很重要的胞内的衔接蛋白。
TLRs是一组模式识别受体，其结合到来源于细菌、真菌、原生动物和病毒的病原体相关分子模式(PAMP)上，并且作为防御侵入的病原体的第一道防线。TLRs本质上诱导参与炎症应答的基因表达，并且TLR和先天免疫系统是抗原特异性的后天免疫发育的关键步骤。
适应性(体液的或细胞介导的)免疫与先天免疫的TLR信号机制有关。先天免疫是保护性免疫细胞应答，其迅速发挥功能以对抗环境损害，所述环境损害非限制性地包括细菌或病毒物质。适应性免疫是较慢的应答，其涉及稚T淋巴细胞的分化和激活为T辅助细胞1(Th1)或T辅助细胞2(Th2)型。Th1细胞主要促进细胞免疫，而Th2细胞主要促进体液免疫。尽管是主要的宿主保护系统，但由TLR路径发出的先天免疫信号的病理表达参与启动自身免疫性-炎性疾病。
全部TLRs似乎都以同源二聚体或异源二聚体发挥作用，其识别在病原生物上存在的特异性的或一套特定的分子决定簇，包括细菌细胞表面脂多糖、脂蛋白、细菌鞭毛蛋白、来自细菌和病毒的DNA和病毒RNA。对TLR激活的细胞应答涉及一个或多个转录因子的激活，其导致细胞因子和共刺激分子(例如有助于杀死和清除病原侵入的干扰素、TNF-、白细胞介素、MIP-1和MCP-1)的产生和分泌。
TLR的空间表达符合宿主的环境界面。虽然只有少数其他的Toll样蛋白已经在果蝇属(Drosophila)中克隆，但人TLR家族由至少11个成员组成，TLR1到TLR11，因其细胞表达和其开启的信号通路不同而导致不同生物反应的重叠。每一种TLRs表达在不同亚组的白细胞上，并且每一种TLRs的表达模式和PAMP敏感度都是特异性的，并且检测病原体的不同亚型从而通过免疫系统来实现预警。
Toll样受体1(TLR1)
TLR1定位于染色体4p14并且其序列编码具有18个N-末端LRR的推定的786个氨基酸(aa)的蛋白质，计算分子量为84kDa。TLR1与TLR6和TLR10最接近，分别有68％和48％的总的(aa)序列同一性.
TLR1 mRNA被普遍地表达并且被发现比其他TLRs处于更高的水平。在主要的白细胞群中，TLR1在单核细胞上表达最高，但其也由巨噬细胞、树突细胞、多形核白细胞、B、T和NK细胞表达。在体内，发现了TLR1的2个不同大小的转录物，这表明mRNA可选择地剪接从而产生2种不同形式的蛋白质。在体外，当进行PMA诱导的分化后，在单核细胞白血病(THP-1)细胞中上调TLR1 mRNA和蛋白表达。TLR1表达由自分泌IL-6上调，并且其也被IFN-γβ、IL-10和TNF-α提高。然而，TLR1水平不受暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的影响。在先体外后体内时，在暴露于革兰氏阴性菌之后，单核细胞和粒细胞TLR1表达下调。TLR1与TLR2形成异源二聚体。TLR1也与TLR4异源二聚体化，其抑制TLR4活性。
Toll样受体2(TLR2)
TLR2定位于染色体4q31-32并且其序列编码具有19个N-末端LRR的推定的784(aa)蛋白质，计算分子量84kDa。TLR2与TLR6最接近，有31％的总的(aa)序列同一性。
在脑、心脏、肺和脾组织中发现了TLR2 mRNA表达，并且在PBL，特别是骨髓单核细胞来源的PBL中最高。在体内，发现了TLR2的2个不同大小的转录物，这表明mRNA可选择地剪接。在体外，当发生PMA诱导的分化时，在单核细胞白血病(THP-1)细胞中上调TLR2-mRNA和蛋白表达。TLR2由自分泌IL-6和TNF-α、IL-1β以及IL-10上调。在暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之后，提高TLR2 mRNA表达。TLR2与TLR1、TLR6、以及可能与TLR10形成异源二聚体，每一个复合体对TLR2相关的PAMP的亚型特别敏感。TLR2复合体识别宽范围的PAMP，大多数来自于细菌。其非限制性地包括脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)、脂多糖(LPS)、脂磷壁酸(LTA)、肽聚糖(PGN)、以及其他糖脂、糖蛋白和脂蛋白。TLR2复合体也能够检测病毒(其非限制性地包括麻疹病毒(MV)、人巨细胞病毒(HCMV)和丙肝病毒(HCV))和真菌PAMP(非限制性地包括酵母多糖)。TLR2识别来自各种病原体(例如革兰氏阳性菌、分枝杆菌、克鲁斯锥虫、真菌和密螺旋体)的各种脂蛋白/脂肽。此外，TLR2识别来自非肠细菌(例如问号钩端螺旋体、龈紫单胞菌(Porphyromonas gingivalis)和幽门螺旋杆菌)的LPS制备物。TLR2复合体能够检测非自身的模式和检测改变的自身模式，例如坏死的细胞显示的那些。TLR2被募集到吞噬体中并且其参与由细胞进行的微生物产物的内化作用。
Toll样受体3(TLR3)
TLR3定位于染色体4q35并且其序列编码具有24个N-末端LRR的推定的904(aa)蛋白质，计算分子量97kDa。TLR3与TLR5、TLR7和TLR8最接近，每一个有26％的总的(aa)序列同一性。
TLR3 mRNA在胎盘和胰腺中表达水平最高。TLR3由树突细胞、T和NK细胞表达。在体内，发现了TLR3的2个不同大小的转录物，这表明mRNA可选择地剪接从而产生2种不同形式的蛋白质。在体外，PMA-分化的THP-1 TLR3被自分泌IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α适度地上调。在暴露于革兰氏阴性菌之后，提高TLR3 mRNA，并且在应答革兰氏阳性菌时甚至提高的更多。在先体外后体内，当暴露于革兰氏阴性菌时，在单核细胞和粒细胞中提高TLR3表达。TLR3形成同源二聚体并且识别病毒双链RNA(dsRNA)。通常认为TLR在细胞表面上表达，但对内在PAMP(例如在TLR3的情况下的dsRNA)敏感的那些TLR在胞内定位于溶酶体隔室。
Toll样受体4(TLR4)
TLR4定位于染色体9q32-33并且全部(aa)序列表现出与dToll高度相似性。TLR4序列编码具有22个N-末端LRR区和90kDa的计算分子量的839(aa)蛋白质。TLR4与TLR1和TLR6最接近，每一个有25％的总的(aa)序列同一性。
在体内，TLR4 mRNA表达成单一转录物，并且发现其在脾和PBL中处于最高水平。在PBL中，TLR4被B细胞、树突细胞、单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和T细胞表达。TLR4也在骨髓单核细胞中表达并且在单核细胞中是最高的。在体外，当发生PMA诱导的分化时，在THP-1细胞中上调TLR4 mRNA和蛋白表达。TLR4被自分泌IFN-γ、IL-1β适度地上调。TLR4mRNA在THP-1细胞中的表达不受暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的影响。在先体外后体内，粒细胞和单核细胞当暴露于革兰氏阴性菌时，TLR4表达被上调。
TLR4形成同源二聚体并且需要另外的组分MD-2的细胞外缔合。虽然TLR2复合体能够识别脂多糖(LPS)，但是TLR4通常被视为LPS受体。然而，MD-2缔合的TLR4同源二聚体不直接结合LPS。LPS必须首先与可溶的LPS结合蛋白(LBP)结合。然后LBP再与可溶的或GPI连接的CD14结合。TLR4检测LPS所需的其他的细胞型依赖的组分包括CXCR4、GDF-5、CD55、多种热休克蛋白(HSPs)和补体受体(CRs)。TLR4复合体也识别少数其他的细菌PAMP，其包括LTA。另外，TLR4复合体识别病毒，其包括呼吸道合胞病毒(RSV)、丙肝病毒(HCV)和小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)。TLR4复合体也能够识别内源性的配体，例如热休克蛋白(HSP60和HSP70)、纤维蛋白原、纤连蛋白的A域、透明质酸的低聚糖、类肝素硫酸盐、表面活性蛋白A(SP-A)和β-防御素。TLR4与TLR5(增强其活性)、与TLR1(抑制其活性)也形成异源二聚体。
Toll样受体5(TLR5)
TLR5定位于染色体1q41-42并且基因编码具有91kDa的计算分子量的推定的858(aa)蛋白质。其与TLR3最接近，有26％的总的(aa)序列同一性。
在体内，在卵巢、前列腺和PBL中TLR5 mRNA表达成单一转录物。TLR5被若干PBL群表达，在单核细胞中具有最高表达。TLR5也在肠上皮细胞的基底外侧和上皮下隔室的肠内皮细胞表达。在体外，在PMA-分化的THP-1细胞中通过自分泌IL-6、IL-10和TNF-α来上调TLR5，但也通过IFN-γβ来提高TLR5。在暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之后提高TLR5 mRNA表达。在先体外后体内，当暴露于革兰氏阴性菌时，粒细胞和单核细胞TLR5表达被下调。TLR5形成同源二聚体和与TLR4形成异源二聚体。两种复合体都能够识别鞭毛细菌的鞭毛蛋白。在CHO细胞中的人TLR5的表达带来对鞭毛蛋白的应答，该蛋白是细菌鞭毛的单体成分。鞭毛蛋白激活肺上皮细胞从而导致产生炎性细胞因子。TLR5中的终止密码子多态性与对由有鞭毛的细菌嗜肺军团病杆菌(Legionella pneumophila)引起的肺炎的易感性相关。
Toll样受体6(TLR6)
TLR6定位于染色体4p14并且TLR6序列编码具有91kDa的计算分子量的、含有20个N-末端LRR基序的796(aa)蛋白质。TLR6与TLR1、TLR10和TLR2最接近，分别有68％、46％和31％的总的(aa)序列同一性。
在体内，在胸腺、脾和肺中发现了TLR6转录物。TLR6 mRNA的表达在B细胞和单核细胞中最高。在体外，当发生PMA诱导的分化时，在THP-1细胞中上调TLR6-mRNA表达。TLR6被自分泌IFN-γ、IL-1β适度地上调。然而，TLR6 mRNA在THP-1细胞中的表达不受暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的影响。在先体外后体内，当暴露于革兰氏阴性菌时，单核细胞和粒细胞TLR6表达被下调。TLR6与TLR2形成异源二聚体。类似于TLR1，认为TLR6特化或增强TLR2的PAMP敏感性并且通过异源二聚化作用促进其发送信号的能力。
Toll样受体7(TLR7)
TLR7定位于人染色体Xp22并且TLR7序列编码具有121kDa的计算分子量的、含有27个N-末端LRR的1049(aa)蛋白质。TLR7与TLR8和TLR9最接近，分别有43％和36％的总的(aa)序列同一性。
在体内，TLR7-mRNA在肺、胎盘、脾、淋巴结和扁桃体中表达。TLR7mRNA表达在单核细胞、B细胞和浆细胞样树突细胞中最高。在体外，当发生PMA诱导的分化时，在THP-1细胞中上调TLR7 mRNA表达。暴露于IL-6使TLR7被高度地上调，暴露于自分泌IFN-γ、IL-1β使TLR7被较轻微地上调。在暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之后，在THP-1细胞中的TLR7 mRNA表达被提高。在先体外后体内，在暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之后，在单核细胞中TLR7的表达被提高并且在粒细胞中被更大程度地提高。TLR7在内体中表达。作为应答病毒侵入的方法，TLR7的作用是在细胞内检测“外来的”单链RNA的存在。TLR7是结构上高度保守的蛋白质，其识别来自病毒(例如人免疫缺陷病毒、水泡性口膜炎病毒和流感病毒)的富鸟嘌呤或尿嘧啶的单链RNA(ssRNA)。
Toll样受体8(TLR8)
TLR8定位于染色体Xp22并且TLR8序列编码具有120kDa的计算分子量的、含有26个N-末端LRR的1041(aa)蛋白质。TLR8与TLR7和TLR9最接近，分别有43％和35％的总的(aa)序列同一性。
在体内，TLR8-mRNA在肺、胎盘、脾、淋巴结、骨髓和PBL中表达，发现在源自骨髓的细胞(例如单核细胞、粒细胞和骨髓树突细胞)中具有最高表达。在体外，当发生PMA诱导的分化时，在THP-1细胞中上调TLR8mRNA表达。TLR8被自分泌IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α高度地上调，并且暴露于IFN-γ甚至使其更加被增强。在暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之后，在THP-1细胞中的TLR8mRNA表达被提高。在先体外后体内，当暴露于革兰氏阴性菌时，单核细胞TLR8表达增加，而粒细胞表达减少。TLR8在内体中表达。作为应答病毒侵入的方法，TLR8的作用是在细胞内检测“外来的”单链RNA的存在。TLR8是结构上高度保守的蛋白质，其识别来自病毒(例如人免疫缺陷病毒、水泡性口膜炎病毒和流感病毒)的富鸟嘌呤或尿嘧啶的单链RNA(ssRNA)。
Toll样受体9(TLR9)
TLR9定位于染色体3p21并且TLR9序列编码具有116kDa的计算分子量的、含有27个N-末端LRR的1032(aa)蛋白质。TLR9与TLR7和TLR8最接近，分别有36％和35％的总的(aa)序列同一性。
在体内，TLR9 mRNA在脾、淋巴结、骨髓和PBL中表达。特别地，TLR9 mRNA在B细胞和树突细胞中以最高水平表达。在体外，在PMA分化的THP-1细胞中TLR9被自分泌IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α适度地上调。TLR9 mRNA在THP-1细胞中的表达不受暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的影响。在先体外后体内，在单核细胞中和特别在粒细胞中，为应答革兰氏阴性菌而下调TLR9表达。TLR9形成同源二聚体并且识别未甲基化的细菌DNA。TLR9参与对细菌DNA和寡核苷酸(其含有未甲基化的CpG-DNA序列)的炎症应答。TLR9可能内部定位于溶酶体或胞吞区室中，在该处其更可能遇到PAMPs(其包括未甲基化的CpG DNA序列)。
TLR9是CpG DNA的受体并且识别细菌的和病毒的CpG DNA。细菌和病毒的DNA含有未甲基化的CpG基序，这带来其免疫刺激活性。在脊椎动物中，CpG基序的频率严重减少并且CpG基序的胞嘧啶残基被高度甲基化，这导致免疫刺激活性的消除。在结构上，有至少2种类型的CpG DNA：B/K型CpG DNA是炎性细胞因子(例如IL-12和TNF-α)的强效诱导剂；A/D型CpG DNA具有更强的诱导浆细胞样树突细胞(PDC)产生IFN-α的能力。TLR9也参与自身免疫性疾病的发病，并且可能在格雷夫斯自身免疫甲状腺功能亢进和由自身反应性B细胞产生类风湿因子中是重要的。类似地，借助含有IgG和染色质的免疫复合体，通过Fc受体的内化作用能够导致IFN-α的由TLR9介导的PDC诱导作用，其参与全身性红斑狼疮(SLE)的发病。TLR9通过识别染色质结构参与若干自身免疫性疾病的发病。
Toll样受体10(TLR10)
TLR10序列编码具有95kDa分子量的推定的811(aa)蛋白质。TLR10与TLR1和TLR6最接近，分别有48％和46％的总的(aa)序列同一性。
在体内，TLR10mRNA在与免疫系统相关的组织(包括脾、淋巴结、胸腺和扁桃体)中表达最高。TLR10 mRNA在B细胞和浆细胞样树突细胞(PDCs)上最高地表达。在体外，在PMA分化的THP-1细胞中TLR10被自分泌IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α适度地上调。在暴露于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌之后，在THP-1细胞中的TLR10mRNA表达被提高。在先体外后体内，当暴露于革兰氏阴性菌时，单核细胞TLR10表达增加，而粒细胞TLR10表达减少。
Toll样受体11(TLR11)
TLR11在膀胱上皮细胞中表达并且介导对小鼠体内的尿路致病细菌造成的感染的抵抗力。
如上所述，TLR2和TLR4分别识别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁产物；TLR5识别细菌鞭毛蛋白的结构表位；TLR3、TLR7、TLR8和TLR9识别不同形式的来源于细菌的核酸。
TIR域与若干含TIR域的衔接分子(MyD88)、含TIR域的衔接蛋白(TIRAP)、含TIR域的诱导IFN-β的衔接体(TRIF)和与TRIF相关的衔接分子(TRAM)相互作用，其激活级联反应，导致转录因子的诱导。
TLR信号通路
TLR遍布于细胞中。TLR1、TLR2、TLR3和TLR4在细胞表面上表达，而TLR3、TLR7、TLR8和TLR9在胞内的隔室(例如内体)中表达。TLR3-、TLR7-或TLR9-介导的其配体的识别需要内体的成熟和加工。当转变成抗原呈递细胞的巨噬细胞、单核细胞、树突细胞或非免疫细胞通过吞噬作用吞入细菌时，细菌降解物和CpG DNA被释放到吞噬体-溶酶体或内体-溶酶体之中，其中它们能够与当非特异性摄取CpG DNA时从内质网募集的TLR9相互作用。此外，当病毒通过受体介导的内吞作用侵入细胞时，通过病毒膜与内体膜的融合，病毒的内容物暴露于细胞质。这导致在吞噬体/溶酶体或内体/溶酶体隔室中的TLR配体(例如dsRNA、ssRNA和CpG-DNA)暴露于TLR9。
在TIR域的信号通路下游，含TIR域的衔接体(MyD88)是通过所有TLR诱导炎性细胞因子(例如TNF-α和IL-12)所必需的。尽管含TIR域的衔接分子(MyD88)是所有TLR公用的，但是每一个TLR信号通路是发散的并且特定的TLR的激活导致略微不同类型的基因表达特征。举例来说，TLR3和TLR4信号通路的激活导致诱导I型干扰素(IFNs)，而TLR2-和TLR5-介导的通路的激活却不导致诱导I型干扰素(IFNs)。然而，TLR7、TLR8和TLR9信号通路的激活也导致诱导I型IFNs，但其发生机制不同于TLR3/4-介导的诱导。
一旦参与，TLR启动信号转导级联，这导致经由衔接蛋白骨髓分化初级应答基因88(MyD88)激活NFκB和募集IL-1受体相关激酶(IRAK)。MyD88-依赖性通路与通过IL-1受体的信号转导类似，并且认为MyD88(其带有C-末端TIR域和N-末端死亡结构域)结合TLR的TIR域。当发生刺激时，MyD88通过这两种分子的死亡结构域的相互作用向TLR募集IRAK-4，并且促进IRAK-4-介导的IRAK-1的磷酸化。然后IRAK-1的磷酸化导致募集TNF-受体相关因子6(TRAF6)，这导致激活2个不同的信号通路。一个通路导致通过激活MAP激酶来激活AP-1转录因子。另一个通路激活TAK1/TAB复合体，该复合体增强IκB激酶(IKK)复合体的活性。一旦被激活，IKK复合体诱导NFκB抑制物IκB的磷酸化作用和随后的降解，导致转录因子NFκB的核转位和启动其启动子含有NFκB结合位点的基因的转录(例如细胞因子)。MyD88-依赖性通路在通过所有TLR产生炎性细胞因子中发挥关键作用并且是必需的。
对表达TLR8的细胞(例如PBMC)的刺激导致产生高水平的IL-12、IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-6和其他的炎性细胞因子。类似地，表达TLR7的细胞(例如浆细胞样树突细胞)的刺激导致产生高水平的干扰素-α(IFNα)和低水平的炎性细胞因子。因此，通过激活树突细胞和其他的抗原呈递细胞，预期TLR7、TLR8或TLR9的参与和细胞因子的产生可激活不同的先天和后天的免疫应答机制，导致病原体、受感染细胞或肿瘤细胞的破坏。
本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药和异构体、药物组合物和/或组合是Toll样受体7活性的激动剂并且用于治疗与这种TLR7受体相关的疾病和/或病症。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合可用于治疗呼吸系统疾病和/或病症，其非限制性地包括哮喘、支气管哮喘、过敏性哮喘、内因性哮喘、外因性哮喘、运动诱发的哮喘、药物诱发的哮喘(包括阿司匹林和非甾体抗炎药诱发的)和粉尘诱发的哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)；支气管炎(包括感染性和嗜酸性支气管炎)；肺气肿；支气管扩张症；囊性纤维化；结节病；农民肺及相关的疾病；过敏性肺炎；肺纤维化(包括隐原性纤维化肺泡炎)、特发性间质性肺炎、抗瘤治疗并发的纤维化和慢性感染(包括结核病和曲霉病和其他真菌感染；肺移植的并发症；肺脉管系统的脉管炎和血栓疾病和肺动脉高血压症；止咳活动(包括治疗与气道的炎症和分泌情况相关的慢性咳嗽)和医源性咳嗽；急性和慢性鼻炎(包括药物性鼻炎)和血管舒缩性鼻炎；全年性和季节性过敏性鼻炎(包括神经性鼻炎(枯草热)；鼻息肉病；急性病毒感染(包括普通感冒)和由呼吸道合胞病毒、流行性感冒、冠状病毒(包括SARS)和腺病毒引起的感染。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合用于治疗皮肤病，其非限制性地包括银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎或其他湿疹性皮炎、和迟发型超敏反应；植物和光照性皮炎；脂溢性皮炎、疱疹样皮炎、扁平苔癣、硬化萎缩苔癣、坏疽性脓皮症、皮肤结节病、基层细胞癌、光化性角化病、盘状红斑狼疮、天疱疮、类天疱疮、大庖性表皮松解症、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、中毒性红斑、皮肤嗜酸细胞增多、斑秃、男性型秃发症、斯威特综合征、韦伯-克里斯迁综合征(Weber-Christiansyndrome)、多形性红斑；蜂窝组织炎(感染性的和非感染性的)；脂膜炎；皮肤淋巴细胞瘤、非黑色素瘤皮肤癌和其他发育不良性病变；药物诱发的病症(包括固定性药疹)。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合用于治疗眼科疾病和/或病症，其非限制性地包括睑炎；结膜炎(包括全年性和春季变应性结膜炎；虹膜炎；前和后葡萄膜炎；脉络膜炎；影响视网膜的自身免疫的、变性的或炎性的病症；眼炎(包括交感性眼炎)；结节病；感染(包括病毒的、真菌的和细菌的感染)。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合用于治疗泌尿生殖系统疾病和/或病症，其非限制性地包括肾炎(包括间质性肾炎和肾小球性肾炎)；肾病综合征；膀胱炎(包括急性和慢性(间质性)膀胱炎)和杭纳溃疡；急性和慢性尿道炎、前列腺炎、附睾炎、卵巢炎和输卵管炎；女阴阴道炎；佩罗尼氏病；勃起机能障碍(男性和女性)。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合用于治疗同种异体移植物排斥，其非限制性地包括急性和慢性如下的例如肾、心、肝、肺、骨髓、皮肤或角膜的移植或输血后的排斥；或者慢性移植物抗宿主病。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合用于治疗其他的自身免疫和变态反应性疾病，其非限制性地包括类风湿性关节炎、肠易激综合征、全身性红斑狼疮、多发性硬化症、桥本甲状腺炎、克罗恩病、炎性肠病(IBD)、格雷夫斯病、艾迪生病、糖尿病、特发性血小板减少性紫癜、嗜酸细胞性筋膜炎、高IgE综合征、抗磷脂综合征和Sazary综合征。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、和药物组合物用于治疗癌症，其非限制性地包括前列腺、乳房、肺、卵巢、胰腺、肠和结肠、胃、皮肤和脑的肿瘤以及影响骨髓(包括白血病)和淋巴组织增殖系统的恶性肿瘤(例如何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤)；包括预防和治疗转移性疾病和肿瘤复发以及副肿瘤综合征。在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、和药物组合物用作Toll样受体活性的调节剂，并且其用于治疗瘤形成，非限制性地包括基层细胞癌、鳞状细胞癌、光化性角化病、黑色素瘤、癌、肉瘤、白血病、肾细胞癌、卡波西肉瘤、髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病和多发性骨髓瘤。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合用于治疗感染性疾病，其非限制性地包括病毒性疾病，例如尖锐湿疣、单纯疣、足底疣、呼吸道合胞病毒(RSV)、乙型肝炎、丙型肝炎、登革热病毒、单纯疱疹病毒(例如HSV-I、HSV-II、CMV或VZV)、触染性软疣、牛痘、天花、慢病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、人乳头状瘤病毒(HPV)、巨细胞病毒(CMV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、鼻病毒、肠病毒、腺病毒、冠状病毒(例如SARS)、流感、副流感、腮腺炎病毒、麻疹病毒、乳多泡病毒、肝炎DNA病毒、黄病毒、逆转录病毒、沙粒病毒(例如LCM、胡宁病毒、马丘坡病毒、瓜纳瑞托病毒和拉沙热)和纤丝病毒(仅作为实例的埃博拉病毒或马尔堡病毒)。
在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、药物组合物和/或组合用于治疗细菌的、真菌的和原生动物的感染，其非限制性地包括结核和鸟分枝杆菌、麻风；卡氏肺囊虫病、隐孢子虫病、组织胞浆菌病、弓形体病、锥虫感染、利什曼病，由埃希氏菌属、肠杆菌属、沙门氏菌属、葡萄球菌属、克雷伯氏菌属、变形杆菌属、假单胞菌属、链球菌属和衣原体属细菌引起的感染，和真菌感染(例如念珠菌病、曲霉病、组织胞浆菌病、隐球菌脑膜炎)。
在一些实施方案中，式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体用作免疫增强剂。在一些实施方案中，本文所提供的化合物包括在免疫原性组合物中或者用于与免疫原性组合物的组合中。在一些实施方案中，免疫原性组合物用作疫苗，并且化合物的存在量足以增强对疫苗或对与该化合物混合的抗原的免疫应答。疫苗包含至少一种抗原，其可以是细菌抗原或癌症相关抗原、或病毒抗原。在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体、以及药物组合物包括在治疗性疫苗中或者用于与治疗性疫苗的组合中。在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体和药物组合物包括在预防性疫苗中或者用于与预防性疫苗的组合中。在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体和药物组合物包括在治疗性病毒疫苗中或者用于与治疗性病毒疫苗的组合中。在一些实施方案中，本文所提供的式(I)的化合物、其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体和药物组合物包括在癌症疫苗中或者用于与癌症疫苗的组合中。
在其他实施方案中，本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物用于治疗受损的或老化的皮肤，例如瘢痕和皱纹。
给药和药物组合物
为了本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、前药及其异构体的治疗用途，这类化合物以治疗有效量单独或作为药物组合物的一部分进行给药。相应地，本文提供药物组合物，其包含至少一种本文所述的式(I)的化合物、其药学可接受的盐和/或溶剂合物和一种或多种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。此外，这类化合物和组合物单独地或与一种或多种其他的治疗剂联合进行给药。该化合物和组合物的给药方法非限制性地包括口服给药、直肠给药、胃肠外给药、静脉内给药、玻璃体内给药、肌内给药、吸入、鼻内给药、局部给药、眼部给药或耳内给药。
治疗有效量因指示的疾病、疾病的严重性、个体的年龄和相对健康、所施与的化合物的效力、给药方式和所需要的治疗而不同。在一些实施方案中，式(I)的化合物的每日剂量，全身给药获得满意结果的每日剂量为约0.03-2.5mg/kg体重。在一些实施方案中，吸入法给药的式(I)的化合物的每日剂量范围在0.05微克每千克体重(μg/kg)至100微克每千克体重(μg/kg)。在其他实施方案中，口服给药的式(I)的化合物的每日剂量范围在0.01微克每千克体重(μg/kg)至100毫克每千克体重(mg/kg)。在较大的哺乳动物(例如人)中指示的每日剂量范围在约0.5mg至约100mg的式(I)的化合物，例如以多达一日四次的分份剂量或以控释的形式方便地给药。在某个实施方案中，口服给药的单位剂量形式包含约1-50mg的式(I)的化合物。
本文提供的其他方面是制备包含至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐和/或溶剂合物的药物组合物的方法。在一些实施方案中，这种方法包括将本文所述的式(I)的化合物和其药学可接受的盐和溶剂合物与一种或多种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂相混合。在一些实施方案中，通过混合、制粒和/或包衣方法制备药物组合物，所述的药物组合物包含游离形式的或药学可接受的盐或溶剂合物形式的式(I)的化合物和至少一种药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在其他实施方案中，这种组合物任选地含有赋形剂，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、调节渗透压的盐和/或缓冲剂。在其他实施方案中，这种组合物经灭菌。
口服剂型
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物以分散的剂型进行口服给药，其中这种剂型非限制性地包括胶囊剂、明胶胶囊剂、小胶囊、片剂、咀嚼片、粉剂、颗粒剂、糖浆剂、调味糖浆剂、水性或非水性液体中的溶液剂或混悬剂、可食的泡沫剂或棒和水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。
通过用常规的药物配方技术将至少一种式(I)的化合物(活性成分)与至少一种赋形剂混合在一起来制备用于至少一种式(I)的化合物的口服给药的胶囊剂、明胶胶囊剂、小胶囊、片剂、咀嚼片、粉剂或颗粒剂。用于本文所述的口服剂型的赋形剂的非限制性的实例非限制性地包括粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、吸收剂、着色剂、调味剂、防腐剂和增甜剂。
这种粘合剂的非限制性的实例非限制性地包括玉米淀粉、马铃薯淀粉、淀粉糊、预胶化淀粉或其他淀粉、糖、明胶、天然或合成的树胶(仅作为实例阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、其他海藻酸盐、西黄蓍胶、瓜尔胶)、纤维素及其衍生物(仅作为实例乙基纤维素、纤维素乙酸酯、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和微晶纤维素)、硅酸镁铝、聚乙烯吡咯烷酮及其组合。
这种填充剂的非限制性的实例非限制性地包括滑石粉、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉状纤维素、葡聚糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预胶化淀粉及其混合物。在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物中的粘合剂或填充剂占药物组合物或剂型的约50至约99重量百分比。
该崩解剂的非限制性的实例非限制性地包括琼脂、海藻酸、海藻酸钠、碳酸钙、碳酸钠、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚克立林钾、羧甲基淀粉钠、马铃薯或木薯淀粉、预胶化淀粉、其他淀粉、粘土、其他藻胶、其他纤维素、树胶及其组合。在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物中所用的崩解剂的量为约0.5至约15重量百分比，而在其他实施方案中，该量为约1至约5重量百分比的崩解剂。
该润滑剂的非限制性的实例非限制性地包括硬脂酸钠、硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他二醇类、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油(仅作为实例花生油、棉子油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、硬脂酸锌、油酸钠、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、二氧化硅、syloid硅胶(由W.R.Grace Co.of Baltimore，Md.生产的AEROSIL-200)、合成二氧化硅的凝结的气溶胶(由Degussa Co.of Plano，Tex.销售)、CAB-O-SIL(由Cabot Co.of Boston，Mass.销售的焦化的二氧化硅产品)及其组合。在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物中所用的润滑剂的量低于药物组合物或剂型的约1重量百分比。
该稀释剂的非限制性的实例非限制性地包括乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨醇、纤维素、甘氨酸或其组合。
在一些实施方案中，通过将至少一种式(I)的化合物(活性成分)与液体载体、细分的固体载体或两者均匀地混合、然后如果需要的话将产品成形为需要的规格来制备片剂和胶囊剂。在一些实施方案中，通过压片制备片剂。在其他实施方案中，通过模塑制备片剂。
在一些实施方案中，至少一种式(I)的化合物以控释剂型口服给药。这种剂型用于提供一种或多种式(I)的化合物的缓慢或控制的释放。使用例如羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球或其组合来实现控释。在一些实施方案中，控释剂型用于延长式(I)的化合物的活性、降低给药频率和增加患者顺应性。
以单位剂型制备以口服液(例如溶液剂、糖浆剂和酏剂)给药的式(I)的化合物，使给定量的溶液剂、糖浆剂或酏剂含有预定量的式(I)的化合物。通过将化合物溶解于适当调味的水溶液中来制备糖浆剂，而通过使用无毒的含酒精的溶媒来制备酏剂。通过将化合物分散于无毒的溶媒中来配制混悬剂。用于口服给药的口服液中所用的赋形剂的非限制性的实例非限制性地包括增溶剂、乳化剂、调味剂、防腐剂和着色剂。增溶剂和乳化剂的非限制性的实例非限制性地包括水、二醇类、油类、醇类、乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚。防腐剂的非限制性的实例非限制性地包括苯甲酸钠。调味剂的非限制性的实例非限制性地包括薄荷油或天然增甜剂或糖精或其他人工增甜剂。
胃肠外剂型
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物通过各种途径进行胃肠外给药，其非限制性地包括皮下、静脉内(包括快速推注)、肌内和动脉内。
这种胃肠外剂型以无菌或灭菌注射液、混悬液、易于溶解或混悬于药学可接受的注射用溶媒中的干燥和/或冻干产品(可重构的粉末)和乳液的形式进行给药。用于该剂型的溶媒非限制性地包括美国药典级注射用水；水性溶媒(非限制性地例如氯化钠注射液、林格注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液和乳酸盐林格注射液)；与水互溶的溶媒(非限制性地例如乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇)；和非水溶媒(非限制性地例如玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯)。
透皮剂型
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物进行经皮给药。该经皮剂型包括″贮库型″或″基质型″贴剂，将其施用于皮肤并且在特定的时期内使用从而允许透过需要量的式(I)的化合物。举例来说，该经皮装置是绷带的形式，其包含衬垫、含有化合物和任选的载体的贮库、任选的速率控制屏障从而在延长的时间内以控制的和预定的速率向宿主的皮肤递送化合物、和将装置固定于皮肤上的手段。在其他实施方案中，使用基质经皮制剂。
式(I)的化合物的经皮给药的制剂包括有效量的式(I)的化合物、载体和任选的稀释剂。载体非限制性地包括可吸收的药学可接受的溶剂从而协助通过宿主的皮肤，例如水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁-1，3-二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其组合。
在一些实施方案中，这种经皮给药系统包括渗透促进剂从而协助将一种或多种式(I)的化合物递送到组织。该渗透促进剂非限制性地包括丙酮；各种醇类(例如乙醇、油烯基和四氢呋喃基；烷基亚砜(例如二甲基亚砜)；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮(例如聚乙烯吡咯烷酮；Kollidon级(聚维酮)；尿素；和各种水溶性或水不溶性糖酯(例如吐温80(聚山梨醇酯80)和司盘60(脱水山梨醇单硬脂酸酯)。
在其他实施方案中，调整这种经皮药物组合物或剂型的pH、或药物组合物或剂型所施用的组织的pH从而改善一种或多种式(I)的化合物的给药。在其他实施方案中，调整溶剂载体的极性、其离子强度或张力从而改善给药。在其他实施方案中，加入化合物(例如硬脂酸盐)从而有利地改变一种或多种式(I)的化合物的亲水性或亲脂性以便改善给药。在一些实施方案中，该硬脂酸盐作为制剂的脂类溶媒、作为乳化剂或表面活性剂、和作为递送增强剂或渗透增强剂。在其他实施方案中，式(I)的化合物的不同的盐、水合物或溶剂合物用于进一步调整所得的组合物的性质。
局部剂型
在一些实施方案中，通过局部施用洗剂、凝胶、软膏剂、溶液、乳剂、混悬液或霜剂形式的包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物给予至少一种式(I)的化合物。用于对皮肤局部施用的适合的制剂是水溶液、软膏剂、霜剂或凝胶，而用于眼部给药的制剂是水溶液。这种制剂任选包含增溶剂、稳定剂、张度增强剂、缓冲剂和防腐剂。
这种局部制剂包括至少一种载体和任选地至少一种稀释剂。这种该载体和稀释剂非限制性地包括水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、丁-1，3-二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油及其组合。
在一些实施方案中，该局部制剂包括渗透增强剂从而协助将一种或多种式(I)的化合物递送到组织。该渗透增强剂非限制性地包括丙酮；各种醇类(例如乙醇、油烯基和四氢呋喃基)；烷基亚砜(例如二甲基亚砜)；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮(例如聚乙烯吡咯烷酮)；Kollidon级(聚维酮)；尿素；和各种水溶性或水不溶性糖酯(例如吐温80(聚山梨醇酯80)和司盘60(脱水山梨醇单硬脂酸酯)。
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物通过吸入进行给药。将用于吸入给药的剂型配制成气雾剂或干粉。用于吸入给药的气雾剂包含在药学可接受的水性或非水性溶剂中的至少一种式(I)的化合物的溶液或微细的混悬剂。此外，该药物组合物任选地包含粉末基质，例如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇或淀粉，和任选的性能改良剂(例如L-亮氨酸或其他氨基酸和/或硬脂酸的金属盐(例如硬脂酸镁或钙)。
在一些实施方案中，使用定量吸入器(″MDI″)或干粉吸入器(DPI)装置通过吸入直接向肺部施与式(I)的化合物，所述的定量吸入器利用含有适合的低沸点抛射剂(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体)的金属罐，所述的干粉吸入器装置利用气体爆发从而在容器内产生干粉云，该干粉云然后被患者吸入。在一些实施方案中，配制用于吸入器或吹入器的明胶的胶囊或药筒，其含有式(I)的化合物的粉末混合物和例如乳糖或淀粉的粉末基质。在一些实施方案中，用液体喷雾装置将式(I)的化合物递送到肺部，其中该装置使用极小的喷嘴孔从而使液体药物制剂气溶胶化，然后能够将其直接吸入到肺部。在其他实施方案中，使用喷雾器将式(I)的化合物递送到肺部，其中喷雾器利用超声能来产生液体药物制剂的气溶胶从而形成能够容易被吸入的细颗粒。在其他实施方案中，用电流体动力(″EHD″)将式(I)的化合物递送到肺部，其中该EHD气雾剂装置利用电能使液体的药物溶液或混悬剂气溶胶化。
在一些实施方案中，含有本文所述的至少一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和溶剂合物的药物组合物也含有一种或多种吸收促进剂。在一些实施方案中，该吸收促进剂非限制性地包括甘氨胆酸钠、癸酸钠、N-月桂基-β-D-麦芽吡喃糖苷、EDTA和混合胶束。
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物进行鼻腔给药。将用于鼻腔给药的剂型配制成气雾剂、溶液剂、滴剂、凝胶剂或干粉剂。
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物以栓剂、灌肠剂、软膏剂、乳膏剂、直肠泡沫或直肠凝胶剂的形式进行直肠给药。
在一些实施方案中，由脂肪乳剂或混悬剂、可可豆脂或其他甘油酯制备这种栓剂。
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物以滴眼液进行眼部给药。这种制剂是任选地含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂的水溶液。
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物以滴耳液进行耳内给药。这种制剂是任选地含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂的水溶液。
在一些实施方案中，将含有至少一种式(I)的化合物的药物组合物配制成贮库制剂。该长效制剂通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌肉注射进行给药。在一些实施方案中，这种制剂包括聚合的或疏水的材料(例如在可接受的油中的乳剂)或离子交换树脂，或略溶的衍生物(例如略溶的盐)。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于口服给药用于治疗与TLR7活性相关的病毒性疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于口服给药用于治疗与TLR7活性相关的感染性疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于口服给药用于治疗与TLR7活性相关的细菌性疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于口服给药用于治疗与TLR7活性相关的真菌性疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于口服给药用于治疗与TLR7相关的癌症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于静脉内给药用于治疗与TLR7相关的癌症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于口服内给药用于治疗与TLR7相关的同种异体移植排斥疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于口服内给药用于治疗与TLR7相关的生殖泌尿器疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物滴眼液给药用于治疗与TLR7相关的眼部疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于局部给药用于治疗与TLR7相关的皮肤疾病和/或病症。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于局部给药用于治疗光化性角化病。在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于作为霜剂局部给药用于治疗光化性角化病。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于局部给药用于治疗基层细胞癌。在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于作为霜剂局部给药用于治疗基层细胞癌。
在另一个实施方案中，包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物适合于通过吸入给药用于治疗与TLR7相关的呼吸系统疾病和/或病症。在一些实施方案中，所述的呼吸系统疾病是过敏性哮喘。
本文提供了式(I)的化合物、其药学可接受的盐和溶剂合物以及包含至少一种式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和溶剂合物的药物组合物，其用于活化TLR7活性且由此用于预防或治疗与TLR7活性相关的疾病和/或病症。这种式(I)的化合物、其药学可接受的盐和溶剂合物和药物组合物是TLR7激动剂。
本文还提供了治疗患有与TLR7活性相关的疾病和/或病症的受试者的方法，其中该方法包括对所述的受试者施与有效量的单独的式(I)的化合物或药学可接受的盐、溶剂合物或作为本文所述的药物组合物的一部分施与。
本文提供了式(I)的化合物或其药学可接受的盐或其溶剂合物在制备用于治疗与TLR7活性相关的疾病或病症的药物中的用途。
联合治疗
在一些实施方案中，本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物或含有至少一种本文所述的式(I)的化合物的药物组合物单独进行给药(没有另外的治疗剂)用于治疗一种或多种与本文所述的TLR活性相关的疾病和/或病症。
在其他实施方案中，本文提供的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物或含有至少一种本文提供的式(I)的化合物的药物组合物与一种或多种另外的治疗剂联合给药用于治疗一种或多种与本文所述的TLR7活性相关的疾病和/或病症。
在其他实施方案中，本文提供的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物或含有至少一种本文所述的式(I)的化合物的药物组合物与一种或多种另外的治疗剂联合配制并且给药用于治疗一种或多种与本文所述的TLR7活性相关的疾病和/或病症。
在本文提供的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物或含有至少一种本文所述的式(I)的化合物的药物组合物中，与一种或多种另外的治疗剂依次给药用于治疗一种或多种与本文所述的TLR7活性相关的疾病和/或病症。
在其他实施方案中，本文提供的联合治疗包括施与本文提供的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或包含式(I)的化合物的药物组合物，然后施与一种或多种另外的治疗剂，用于治疗一种或多种与本文所述的TLR7活性相关的疾病和/或病症。
在其他实施方案中，本文提供的联合治疗包括在施与一种或多种另外的治疗剂后施与本文提供的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或包含式(I)的化合物的药物组合物，用于治疗一种或多种与本文所述的TLR7活性相关的疾病和/或病症。
在一些实施方案中，本文提供的联合治疗包括施与本文提供的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或包含式(I)的化合物的药物组合物，同时施与一种或多种另外的治疗剂，用于治疗一种或多种与本文所述的TLR7活性相关的疾病和/或病症。
在一些实施方案中，本文提供的联合治疗包括施与本文提供的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或包含与一种或多种另外的治疗剂一起配制的式(I)的化合物的药物组合物，用于治疗一种或多种与本文所述的TLR7活性相关的疾病和/或病症。
在本文所述的联合治疗的一些实施方案中，式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物是TLR7活性激动剂。
在本文所述的联合治疗的一些实施方案中，本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物和另外的治疗剂相加地发挥作用。在本文所述的联合治疗的一些实施方案中，本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物和另外的治疗剂协同地发挥作用。
在其他实施方案中，其他实施方案中，将本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物、或含有式(I)的化合物的药物组合物施与先前未曾经历过或当前没有经历用另一种治疗剂治疗的患者。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的另外的治疗剂非限制性地包括抗生素或抗菌剂、止吐剂、抗真菌剂、抗炎剂、抗病毒剂、免疫调节剂、细胞因子、抗抑郁剂、激素、烷化剂、抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、抗有丝分裂剂、拓扑异构酶抑制剂、细胞生长抑制剂、抗侵袭剂、抗血管生成剂、病毒复制的生长因子功能抑制物的抑制剂、病毒酶抑制剂、抗癌剂、α-干扰素、β-干扰素、病毒唑、激素、细胞因子和其他的Toll样受体调节剂。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗生素或抗菌剂非限制性地包括盐酸缬更昔洛韦、甲硝哒唑、β-内酰胺、大环内酯类(仅作为实例例如阿齐霉素、妥布霉素(TOBFITM)、头孢菌素(仅作为实例例如头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢氨苄、头孢拉定、头孢孟多、头孢曲嗪、头孢吡酮、头孢克肟、头孢唑兰、头孢咪唑、头孢呋肟、头孢匹胺、头孢罗齐、头孢匹罗、KEFLEXTM、VELOSEFTM、CEFTINTM、CEFZILTM、CECLORTM、SUPRAXTM和DURICEFTM)、克拉霉素(仅作为实例例如克拉霉素和BIAXINTM)、红霉素(例如红霉素和EMYCINTM)、环丙沙星、CIPROTM、诺氟沙星(仅作为实例例如NOROXINTM)、氨基糖苷抗生素(仅作为实例例如阿泊拉霉素、阿贝卡星、班贝霉素、丁胺菌素、地贝卡星、新霉素、新霉素、十一烯酸酯、奈替米星、巴龙霉素、核糖霉素、西苏霉素和大观霉素)、amphenicol抗生素(仅作为实例例如叠氮氯霉素、氯霉素、氟苯尼考和甲砜霉素)、安沙霉素抗生素(仅作为实例例如利福酰胺和甲哌力复霉素)、碳头孢烯类(仅作为实例例如洛拉卡比)、碳青霉烯类(仅作为实例例如比阿培南和亚胺培南)、头霉素类(例如头孢拉宗、头孢美唑和头孢克肟)、单酰胺菌素(仅作为实例例如氨曲南、卡芦莫南和替吉莫南)、氧头孢烯类(仅作为实例例如夫洛莫西和拉氧头孢)、青霉素类(例如氮卓西林、匹美西林、阿莫西林、巴氨西林、苄基青霉酸、青霉素G钠、依比青霉素、苯苄青霉素、氟氯青霉素、penamccillin、氢碘酸喷沙西林、邻苯乙苄胺青霉素、青霉素0、青霉素V、苄星青霉素V、海巴明青霉素V、青哌四环素、氨苯乙基青霉素钾、V-CILLIN-KTM和PEN-VEE-KTM)、林可酰胺类(仅作为实例例如克林霉素和林可霉素)、安福霉素、杆菌肽、卷曲霉素、粘菌素、恩多霉素、结核放线菌素、四环素类(仅作为实例例如阿匹四环素、氯四环素、氯莫环素和地美环素)、2，4-二氨基嘧啶类(仅作为实例例如溴莫普林)、硝基呋喃类(仅作为实例例如呋喃他酮和盐酸呋噻咪唑)、喹诺酮类及其类似物(仅作为实例例如氟喹诺酮、氧氟沙星、西诺沙星、克林沙星、氟甲喹、grepagloxacin和FLOXINTM)、磺胺类(仅作为实例例如磺胺乙酰甲氧吡嗪、苄磺胺、诺丙磺胺、酞磺乙酰胺、偶氮磺胺和磺胺乙胞嘧啶、砜类(仅作为实例例如麝酚砜、葡糖砜钠和苯丙砜、环丝氨酸、莫匹罗星、马铃薯球蛋白及其组合。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的止吐剂非限制性地包括甲氧氯普胺、多潘立酮、丙氯拉嗪、异丙嗪、氯丙嗪、曲美苄胺、奥坦西隆、格拉司琼、羟嗪、乙酰亮氨酸单乙醇胺、阿立必利、阿扎司琼、苯喹酰胺、氨醇醋茶碱、溴必利、氯苯丁嗪、氯波必利、赛克利嗪、茶苯海明、地芬尼多、多拉司琼、氯苯甲嗪、美沙拉妥、美托哌丙嗪、大麻隆、oxyperndyl、匹哌马嗪、东茛菪碱、舒必利、四氢大麻酚、硫乙拉嗪、硫丙拉嗪、托烷司琼及其组合。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗真菌剂非限制性地包括两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑、氟康唑、膦氟康唑、intrathecal、氟胞嘧啶、咪康唑、布托康唑、伊曲康唑、克霉唑、制霉菌素、特康唑、噻康唑、伏立康唑、环吡司、益康唑、卤普罗近、萘替芳、特比萘芬、十一烯酸酯和灰黄霉素。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗炎剂非限制性地包括非甾体抗炎药(例如水杨酸、乙酰水杨酸、水杨酸甲酯、二氟尼柳、双水杨酯、奥沙拉秦、柳氮磺吡啶、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、甲灭酸、甲氯灭酸钠、托美汀、痛力克、双氯芬酸、布洛芬、萘普生、甲氧萘丙酸钠、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、丙嗪、吡罗昔康、美洛昔康、安吡昔康、哚昔康、吡罗昔康、替诺昔康、萘丁美酮、保泰松、羟基保泰松、安替比林、氨基比林、阿扎丙宗和尼美舒利)、白三烯拮抗剂(其非限制性地包括齐留通、金硫葡萄糖、硫代苹果酸金钠和金诺芬)、甾体(其非限制性地包括二丙酸阿氯米松、安西奈德、二丙酸倍氯米松、倍他米松、苯甲酸倍他米松、二丙酸倍他米松、倍他米松磷酸钠、戊酸倍他米松、丙酸氯倍米松、氯可托龙戊酸酯、氢化可的松、氢化可的松衍生物、地奈德、去羟米松、地塞米松、氟尼缩松、flucoxinolide、氟氢缩松、氯氟舒松、甲羟松、甲基泼尼松龙、醋酸甲基泼尼松龙、甲基泼尼松龙琥珀酸钠、糠酸莫米松、醋酸对氟米松、泼尼松龙、醋酸泼尼松龙、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松龙叔丁乙酯、泼尼松、去炎松、曲安奈德、双醋酸去炎松和己曲安奈德)，和其他的抗炎剂，非限制性地包括甲氨喋呤、秋水仙碱、别嘌醇、丙磺舒、沙利度胺或其衍生物、5-氨基水杨酸、维甲酸、蒽三酚或卡泊三醇、苯磺唑酮和苯溴马隆。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗病毒剂非限制性地包括蛋白酶抑制剂、核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、CCR1拮抗剂、CCR5拮抗剂和核苷类似物。抗病毒剂非限制性地包括福米韦生、地达诺新、拉米夫定、司他夫定、扎西他滨、齐多夫定、阿昔洛韦、泛西洛维、缬昔洛韦、更昔洛韦、更昔洛韦、西多福韦、扎那米韦、奥司他韦、阿糖腺苷、碘苷、曲氟尿苷、利巴韦林、viramidine和病毒唑，以及膦甲酸、金刚烷胺、金刚乙胺、沙奎那韦、印地那韦、奈非那韦、安泼那韦、洛匹那韦、利托那韦、α-干扰素；β-干扰素；阿德福韦、clevadine、恩替卡韦、普来可那立、HCV-086、EMZ702、恩曲他滨、西戈斯韦、valopicitabine、HCV蛋白酶抑制剂(例如BILN-2061、SCH-503034、ITMN-191或VX-950)、NS5B聚合酶抑制剂(例如NM107(及其前药NM283)、R1626、R7078、BILN1941、GSK625433、GILD9128或HCV-796)、依法韦仑、HBY-097、奈韦拉平、TMC-120(dapivirine)、TMC-125、BX-471、etravirine、地拉夫定、DPC-083、DPC-961、卡普韦林、rilpivirine、5-{[3，5-二乙基-1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基]氧基}间苯二甲腈、GW-678248、GW-695634、MIV-150、calanolide、TAK-779、SC-351125、ancriviroc、vicriviroc、maraviroc、PRO-140、aplaviroc-40、Ono-4128、AK-602)、AMD-887CMPD-167、1-内-{8-[(3S)-3-(乙酰基氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮杂二环[3.-2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氢-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯、3-内-{8-[(3S)-3-(乙酰氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮杂二环[3.2.-1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氢-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸甲酯、1-内-{8-[(3S)-3-(乙酰基氨基)-3-(3-氟苯基)丙基]-8-氮杂二环[3.-2.1]辛-3-基}-2-甲基-4，5，6，7-四氢-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-5-甲酸乙酯和N-{(1S)-3-[3-内-(5-异丁基-2-甲基-4，5，6，7-四氢-1H-咪唑并[4，-5-c]吡啶-1-基)-8-氮杂二环[3.2.1]辛-8-基]-1-(3-氟苯基)丙基}乙酰胺)、BMS-806、BMS-488043、5-{(1S)-2-[(2R)-4-苯甲酰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙氧基}-4-甲氧基-吡啶-2-甲酸甲基酰胺和4-{(1S)-2-[(2R)-4-苯甲酰基-2-甲基-哌嗪-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙氧基}-3-甲氧基-N-甲基-苯甲酰胺、恩夫韦地(T-20)、西夫韦肽SP-01A、T1249、PRO-542、AMD-3100、可溶性CD4、HMG-CoA还原酶抑制剂、阿托伐他汀、3-O-(3′3′-二甲基琥珀酰)桦木脑酸(另外称作PA-457)和αHGA。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的免疫调节剂非限制性地包括硫唑嘌呤、他克莫司、环孢霉素、甲氨蝶呤、来氟米特、皮质类固醇、环磷酰胺、环孢素A、环孢素G、麦考酚酸莫酯、子囊霉素、雷帕霉素(西罗莫司)、FK-506、咪唑立宾、脱氧精胍菌素、布喹那、麦考酚酸、丙二腈酰胺类(例如来氟米特)、T细胞受体调节剂和细胞因子受体调节剂、肽模拟物和抗体(例如人的、人源化的、嵌合的、单克隆的、多克隆的、Fv、ScFv、Fab或F(ab)2片段或表位结合片段)、核苷酸分子(仅作为实例例如反义核酸分子和三重螺旋)、小分子、有机化合物和无机化合物。T细胞受体调节剂的实例非限制性地包括抗T细胞受体抗体(例如抗CD4抗体(例如cM-T412(Boehringer)、IDEC-CE9.1TM(IDECand-SKB)、mAB-4162W94、Orthoclone和OKTcdR4a(Janssen-Cilag))、抗CD3抗体(仅作为实例例如Nuvion(Product-Design-Labs)、OKT3(Johnson-&Johnson)或Rituxan(IDEC))、抗CD5抗体(例如抗CD5的偶联了蓖麻毒蛋白的免疫缀合物)、抗CD7抗体(仅作为实例例如CHH-380(Novartis))、抗CD8抗体、抗CD40配体单克隆抗体(例如IDEC-131(IDEC))、抗CD52抗体(例如CAMPATH-1H(Ilex))、抗CD2抗体、抗CD11a抗体(例如Xanelim(Genentech))、抗B7抗体(例如IDEC-114(IDEC))、CTLA4-免疫球蛋白和其他的toll样受体(TLR)调节剂。细胞因子受体调节剂的实例非限制性地包括可溶的细胞因子受体(仅作为实例例如TNF-α受体的细胞外域或其片段、IL-1β受体的细胞外域或其片段和IL-6受体的细胞外域或其片段)、细胞因子或其片段(仅作为实例例如白细胞介素(IL)-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15、TNF-α、干扰素(IFN)-α、IFN-β、IFN-γ和GM-CSF)、抗细胞因子受体抗体(例如抗IFN受体抗体、抗IL-2受体抗体(仅作为实例例如赛尼哌(Protein Design Labs))、抗IL-4受体抗体、抗IL-6受体抗体、抗IL-10受体抗体和抗IL-12受体抗体)、抗细胞因子抗体(例如抗IFN抗体、抗TNF-α抗体、抗IL-1β抗体、抗IL-6抗体、抗IL-8受体(仅作为实例例如ABX-IL-8(Abgenix))和抗IL-12抗体)。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的细胞因子或细胞因子功能调节剂非限制性地包括白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-7(IL-7)、白细胞介素-9(IL-9)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素15(IL-15)、白细胞介素18(IL-18)、血小板衍生生长因子(PDGF)、促红细胞生成素(Epo)、上皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、催乳激素、α-、β-和γ-干扰素、干扰素β-1a、干扰素β-1b、干扰素α-1、干扰素α-2a(罗扰素)、干扰素α-2b、PEG化的干扰素(例如PEG干扰素α-2a和PEG干扰素α-2b)、内含子、PEG-内含子、派罗欣、共有干扰素(干复津)、白蛋白-干扰素α和Albuferon。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗抑郁剂非限制性地包括苯萘达林、卡罗沙酮、西酞普兰、二甲沙生、苯双胺咖啡碱、吲达品、盐酸茚洛秦、奈福泮、氨苯甲异喹、羟色氨酸、奥昔哌汀、帕罗西丁、舍曲林、硫西新、曲唑酮、苯酰甲苄肼、蓝刺头碱碘化物、乙色胺、异丙氯肼、异丙异烟肼、异唑肼、甲苄肼、metfendrazine、尼亚拉胺、帕吉林、奥他莫辛、苯乙肼、苯异丙肼、苯氧异丙肼、匹戊肼、沙夫肼、司来吉兰、l-司来吉兰、可替宁、罗利普令、咯利普兰、马普替林、美曲吲哚、米安色林、米氮平、阿地唑仑、阿米替林、氧阿米替林、阿莫沙平、布替林、氯米帕明、地美替林、地昔帕明、二苯西平、二甲他林、度硫平、多塞平、三氟丙嗪、米帕明、米帕明N-氧化物、胺丙吲哚、洛非帕明、四甲蒽丙胺、美他帕明、去甲替林、诺昔替林、羟乙哌卓、苯噻啶、丙吡氮卓、普罗替林、奎纽帕明、噻萘普丁、三甲丙咪嗪、阿屈非尼、贝那替秦、丁氨苯丙酮、布他西丁、地奥沙屈、度洛西汀、依托哌酮、非巴氨酯、非莫西汀、芬戊二醇、氟西汀、氟伏沙明、血卟啉、金丝桃素、左芬氟拉明、美地沙明、米那普仑、米那普令、吗氯贝胺、萘法唑酮、奥沙氟生、吡贝拉林、苯咯戊烷、吡琥胺酯、利坦色林、罗克吲哚、氯化铷、舒必利、坦度螺酮、托扎啉酮、二苯甲氧胺、托洛沙酮、反苯环丙胺、L-色氨酸、文拉法辛、维洛沙秦和齐美定。
在一些实施方案中，用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗抑郁剂为MAO-抑制剂，其非限制性地包括苯莫辛、蓝刺头碱碘化物、乙色胺、异丙氯肼、异丙异烟肼、异唑肼、甲苄肼、metfendrazine、吗氯贝胺、尼亚拉胺、帕吉林、苯乙肼、苯异丙肼、苯氧异丙肼、匹戊肼、沙夫肼、司来吉兰、l-司来吉兰、托洛沙酮和反苯环丙胺。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的激素非限制性地包括黄体生成素释放激素(LHRH)、生长激素(GH)、生长激素释放激素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、生长激素抑制素、生长激素、促生长因子、甲状旁腺激素、下丘脑释放因子、胰岛素、高血糖素、脑啡肽、加压素、降钙素、肝素、低分子量肝素、肝素类似物、胸腺刺激素、合成的和天然的阿片样物质、胰岛素促甲状腺激素和内啡肽。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的烷化剂非限制性地包括氮芥、氮丙啶、甲基蜜胺类、烷基磺酸酯、亚硝基脲、卡氮芥、洛莫司汀、三氮烯、美法仑、双氯乙基甲胺、顺铂、奥沙利铂、碳铂、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、六甲三聚氰胺、塞替派、白消安、卡氮芥、链脲霉素、达卡巴嗪和替莫唑胺。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗代谢剂非限制性地包括阿糖胞苷、吉西他滨和抗叶酸素，仅作为实例例如氟嘧啶类(仅作为实例例如5-氟尿嘧啶和替加氟)、雷替曲塞、甲氨喋呤、阿糖胞苷和羟基脲。
与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂化物联合的抗肿瘤抗生素非限制性地包括蒽环类抗生素、博来霉素、阿霉素、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素和光辉霉素。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗有丝分裂剂非限制性地包括长春花生物碱(仅作为实例例如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨)、紫杉烷类(仅作为实例例如紫杉酚、紫杉醇和泰索帝)和polo激酶抑制剂。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的拓扑异构酶抑制剂非限制性地包括表鬼臼毒素(仅作为实例例如依托泊苷和替尼泊苷)、安吖啶、托泊替康、依立替康和喜树碱。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的细胞生长抑制剂非限制性地包括抗雌激素(仅作为实例例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和idoxyfene)、抗雄激素(仅作为实例例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(仅作为实例例如戈舍瑞林、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(仅作为实例例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(仅作为实例例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂(仅作为实例例如非那雄胺)。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗侵袭剂非限制性地包括c-Src激酶家族抑制剂(仅作为实例例如4-(6-氯-2，3-亚甲基二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基羟喹唑啉(AZD0530)和N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2-甲基嘧啶-4-基氨基}噻唑-5-甲酰胺(dasatinib，BMS-354825))和金属蛋白酶抑制剂(仅作为实例例如马立马司他，尿激酶纤维蛋白溶酶原激活物受体功能的抑制剂类肝素酶的抗体)。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的抗血管生成剂非限制性地包括抑制血管内皮生长因子的作用的那些，例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(AVASTINTM)和VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂(例如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171)、瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787)和SUI-1248(舒尼替尼))、利诺胺和整联蛋白αvβ3功能的抑制剂和血管生成抑制因子。
用于与至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物联合的生长因子功能抑制剂非限制性地包括生长因子抗体和生长因子受体抗体(例如抗erbB2抗体曲妥单抗(HERCEPTINTM)、抗EGFR抗体帕尼单抗(panitumumab)、抗erbB1抗体西妥昔单抗(爱必妥，C225))、酪氨酸激酶抑制剂(仅作为实例例如表皮生长因子族的抑制剂(仅作为实例例如EGFR族酪氨酸激酶抑制剂(例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，ZDI-839)、N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼，OSI-774)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI-1033))、erbB2酪氨酸激酶抑制剂(例如拉帕替尼(lapatinib))、肝细胞生长因子家族的抑制剂、血小板衍生生长因子家族的抑制剂(例如伊马替尼，GLEEVECTM)、丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂(仅作为实例例如Ras/Raf信号抑制剂(仅作为实例例如法尼基转移酶抑制剂(例如索拉非尼(BAY43-9006))))、通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号的抑制剂、肝细胞生长因子族的抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、IGF受体(胰岛素样生长因子)激酶抑制剂；极光激酶抑制剂(例如AZDI-152、PH739358、VX-680、MLv8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(例如CDK2和/或CDK4抑制剂))。
在其他实施方案中，至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与血管损害剂(仅作为实例例如考布他汀A4)联合使用。
在其他实施方案中，至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与反义治疗(例如ISIS-2503，抗ras的反义序列)联合使用。
在其他实施方案中，至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与基因治疗联合使用，所述的基因治疗包括例如置换异常基因(仅作为实例例如异常的p53或异常的BRCA1或BRCA2)的方法、GDEPT(基因定向的酶前药疗法)法(例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的方法)，和增加患者对化学治疗或放射治疗的耐受性的方法(仅作为实例例如多药耐药基因治疗)。
在其他实施方案中，至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与免疫治疗方法联合使用，所述的免疫治疗方法包括例如增加患者肿瘤细胞的免疫原性的先体外后体内和体内方法(例如用细胞因子(例如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)转染)、减少T细胞无反应性的方法、使用转染的免疫细胞(例如细胞因子转染的树突细胞)的方法、使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法和使用抗独特型抗体的方法。
在其他实施方案中，至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与其他的治疗方法联合使用，所述的其他的治疗方法非限制性地包括手术和放射治疗(γ-辐射、中子束放射疗法、电子束放射疗法、质子疗法、近距离放射疗法和全身放射性同位素)。
在一些实施方案中，本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐和溶剂合物与吸收促进剂联合给药或配制，所述的吸收促进剂非限制性地包括甘氨胆酸钠、癸酸钠、N-月桂基-β-D-麦芽糖吡喃糖苷、EDTA和混合的胶束。在一些实施方案中，该吸收促进剂靶向淋巴系统。
在一些实施方案中，用于本文所述的联合治疗的另外的治疗剂非限制性地包括以下物质：例如肿瘤坏死因子α(TNF-α)抑制剂(例如抗TNF单克隆受体(仅作为实例例如英夫利西单抗，CDP-870和阿达木单抗)和TNF受体免疫球蛋白分子(仅作为实例例如依那西普)；非选择性环氧合酶COX-1/COX-2抑制剂(仅作为实例例如吡罗昔康、双氯芬酸、丙酸类(例如萘普生、氟比洛芬、非诺洛芬、酮洛芬和布洛芬)、灭酸酯类(例如甲灭酸)、消炎痛、舒林酸、阿扎丙宗、吡唑啉酮类(例如保泰松)、水杨酸盐类(例如阿司匹林))、COX-2抑制剂(仅作为实例例如美洛昔康、塞来考昔、罗非考昔、伐地考昔、芦米考昔、帕瑞考昔和艾托考昔)；糖皮质类固醇类；甲氨喋呤、来氟米特；羟氯喹、D-青霉胺、金诺芬或其他的胃肠外或口服的金制剂。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与白三烯生物合成抑制剂、5-脂氧合酶(5-LO)抑制剂或5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)拮抗剂，例如齐留通；ABT-761；芬留顿；替泊沙林；Abbott-79175；Abbott-85761；N-(5-取代)-噻吩-2-烷基磺酰胺；2，6-二-叔丁基苯酚腙；甲氧基四氢吡喃(例如ZenecaZD-2138)；化合物SB-210661；吡啶基取代的2-氰基萘化合物(例如L-739，010)；2-氰基喹啉化合物(例如L-746，530)；或者吲哚或喹啉化合物(例如MK-591、MK-886和BAYx1005)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与白三烯(LTB4、LTC4、LTD4和LTE4)的受体拮抗剂(选自酚噻嗪-3-基，例如L-651，392)；脒基化合物(例如CGS-25019c)；苯并唑胺(例如昂唑司特)；苯甲脒(例如BIIL-284/260)；和化合物(例如扎鲁司特、阿鲁司特、孟鲁司特、SINGULAIRTM、普仑司特、维鲁司特(MK-679)、RG-12525、Ro-245913、伊拉司特(CGP 45715A)和BAYx7195)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与磷酸二酯酶(PDE)抑制剂(例如甲基黄嘌呤(包括茶碱和氨茶碱))；选择性PDE同工酶抑制剂(包括PDE4抑制剂(非限制性地包括西洛司特或罗氟司特)、PDE4D亚型的抑制剂或PDE5的抑制剂)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与组胺1型受体拮抗剂(例如西替立嗪、氯雷他定、地氯雷他定、非索非那定、阿伐斯汀、特非那定、阿司咪唑、氮卓斯汀、左卡巴司汀、氯苯那敏、异丙嗪、赛克利嗪或咪唑斯汀)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与保护胃的组胺2型受体拮抗剂的联合。在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与组胺4型受体的拮抗剂的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与α-1/α-2肾上腺素受体激动剂血管收缩拟交感神经剂(例如丙己君、苯福林、苯丙醇胺、麻黄碱、假麻黄碱、盐酸萘唑啉、盐酸羟间唑啉、盐酸四氢唑啉、盐酸丁苄唑啉、盐酸萘胺唑啉或盐酸乙基去甲肾上腺素)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与抗胆碱剂(包括毒蕈碱受体(M1、M2和M3)拮抗剂(例如阿托品、东茛菪碱、格隆溴铵、异丙托溴铵、噻托溴铵、氧托溴铵、哌仑西平或替伦折平))的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与β-肾上腺素受体激动剂(包括β受体亚型1-4)(例如异丙肾上腺素、舒喘灵、沙丁胺醇、福莫特罗、沙美特罗、叔丁喘宁、奥西那林、甲磺酸比托特罗和吡布特罗)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与色酮(例如色甘酸钠或萘多罗米钠)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与I型胰岛素样生长因子(IGF-I)模拟剂的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与糖皮质激素例如氟尼缩松、曲安奈德、二丙酸倍氯米松、布地奈德、丙酸氟替卡松、环索奈德或糠酸莫米松的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与基质金属蛋白酶(MMPs)的抑制剂(即基质溶素、胶原酶和明胶酶、以及聚集蛋白聚糖酶；特别是胶原酶-1(MMP-I)、胶原酶-2(MMP-8)、胶原酶-3(MMP-13)、基质溶素-1(MMP-3)、基质溶素-2(MMP-IO)和基质溶素-3(MMP-II)和MMP-9和MMP-12)的抑制剂的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与趋化因子受体功能的调节剂(例如CCR1、CCR2、CCR2A、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11(对于C-C家族)；CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4和CXCR5(对于C-X-C家族)和CX3CR1(对于C-X3-C家族)的拮抗剂)的联合。
在其他实施方案中，本文所述的联合包括本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与免疫球蛋白(Ig)、丙种球蛋白、Ig制剂或者调节Ig功能的拮抗剂或抗体(例如抗IgE(奥马珠单抗))的联合。
作为免疫增强剂的式(I)的化合物
在一些实施方案中，含有至少一种本文所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物的药物组合物是免疫原性组合物。在一些实施方案中，该免疫原性组合物用作疫苗。在一些实施方案中，该疫苗是预防剂(即为了预防感染)，而在其他实施方案中，这种疫苗是治疗剂(即为了治疗感染)。
在其他实施方案中，本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物是免疫增强剂并且其与不含式(I)化合物的免疫原性制剂相比在给药时表现出免疫刺激作用。在一些实施方案中，当式(I)的化合物包含于具有一种或多种免疫调节剂的免疫原性组合物之中时，式(I)的化合物在给药时表现出免疫刺激作用，而在其他实施方案中，当式(I)的化合物包含于没有其他免疫调节剂的免疫原性组合物之中时，式(I)的化合物在给药时表现出免疫刺激作用。
免疫刺激作用在本文常指免疫原性组合物的效力的增强。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少10％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少20％。一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少30％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少40％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少50％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少60％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少70％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少80％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少90％。在一些实施方案中，相对于没有免疫增强剂的免疫原性组合物的效力，免疫原性组合物的效力增强了至少100％。
在一些实施方案中，通过实现其保护作用的免疫原性组合物的效力增加来测定免疫原性组合物的效力的增强。在一些实施方案中，该增加的效力测定为接受免疫原性组合物的受试者患上免疫原性组合物所预防的病症的概率降低、或者这种病症的持续时间或严重性降低。在其他实施方案中，该增加的效力测定为在接受治疗的受试者中由免疫原性组合物诱发的抗体的效价增加。
与一种或多种本文所述的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物一起，该免疫原性组合物包括有效量的一种或多种抗原和药学可接受的载体。该载体非限制性地包括蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、多聚氨基酸、氨基酸共聚物、蔗糖、海藻糖、乳糖、脂质聚集物(例如油滴或脂质体)和无活性的病毒粒子。免疫原性组合物通常也含有稀释剂(例如水、盐水和甘油)，和任选地含有其他的赋形剂(例如润湿剂或乳化剂)和pH缓冲物质。
在一些实施方案中，免疫原性组合物任选地包括一种或多种免疫调节剂。在一些实施方案中，一种或多种免疫调节剂包括一种或多种佐剂。这种佐剂非限制性地包括在下面进一步讨论的TH1佐剂和/或TH2佐剂。在一些实施方案中，用于本文所提供的免疫原性组合物的佐剂非限制性地包括：
A.包含矿物的组合物；
B.油乳剂；
C.皂苷制剂；
D.病毒体和病毒-样颗粒；
E.细菌或微生物衍生物；
F.人免疫调节剂；
G.生物粘附剂和粘膜粘着剂；
H.微粒；
I.脂质体；
J.聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯制剂；
K.聚膦腈(PCPP)；
L.胞壁酰肽类；和
M.咪唑并喹诺酮化合物。
适合用作佐剂的含矿物质的成分非限制性地包括矿物盐，例如铝盐和钙盐。例如，该矿物盐包括氢氧化物(例如羟基氧化物，其包括氢氧化铝和羟基氧化铝)、磷酸盐(例如羟基磷酸盐和正磷酸盐，其包括磷酸铝、羟基磷酸铝、正磷酸铝和磷酸钙)、硫酸盐(例如硫酸铝)，或不同无机化合物的混合物。该矿物盐是任意适合的形式，例如凝胶、晶体和无定形形式。在一些实施方案中，将该含矿物质的成分配制成金属盐的颗粒。在一些实施方案中，本文所述的免疫原性组合物的组分被吸附到该矿物盐中。在一些实施方案中，氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂用于本文所述的免疫原性组合物。在其他实施方案中，用于本文所述的免疫原性组合物的抗原被吸附到该氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂中。在一些实施方案中，磷酸钙佐剂用于本文所述的免疫原性组合物。在其他实施方案中，用于本文所述的免疫原性组合物的抗原被吸附到这种磷酸钙佐剂中。
在一些实施方案中，磷酸铝用作本文所述的免疫原性组合物中的佐剂。在其他实施方案中，磷酸铝用作本文所述的免疫原性组合物中的佐剂，其中该组合物包括流感嗜血杆菌糖抗原。在一些实施方案中，佐剂是无定形的羟基磷酸铝，其PO4/Al摩尔比在0.84和0.92之间，包含0.6mg Al3+/ml。在其他实施方案中，使用具有低剂量的磷酸铝的吸附，例如在50和100μgAl3+每缀合物每剂量之间。如果组合物中有多于一种缀合物，不需要吸附全部缀合物。
适合用作佐剂的油乳剂非限制性地包括角鲨烯-水乳剂(例如MF59(5％角鲨烯、0.5％吐温80和0.5％司盘85，用微流化装置将其配制成亚微米颗粒))、完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)。
皂苷是在宽范围的植物物种的树皮、叶、茎、根和甚至花中发现的甾醇苷和三萜糖苷的异源组。适合用作佐剂的皂苷制剂非限制性地包括来自皂树的树皮、菝葜(Smilax ornate)(sarsaprilla)、满天星(Gypsophillapaniculata)(brides veil)和肥皂草(皂根)的皂苷。在一些实施方案中，适合用作佐剂的皂苷制剂非限制性地包括纯化的制剂，其非限制性地包括QS7、QS17、QS18、QS21、QH-A、QH-B和QH-C。QS21以STIMULOMTM在市场上销售。在其他实施方案中，皂苷制剂包括甾醇、胆固醇和脂质制剂(例如由皂苷和胆固醇的组合形成的独特的颗粒，其被称为免疫刺激复合物(ISCOMs))。在一些实施方案中，ISCOMs也包括磷脂，例如磷脂酰乙醇胺或磷脂酰胆碱。任何已知的皂苷都能用于ISCOMs中。在一些实施方案中，ISCOM包括一种或多种QuilA、QHA和QHC。在其他实施方案中，ISCOMS任选地缺少另外的去垢剂。
适合用作佐剂的病毒体和病毒样颗粒(VLPs)非限制性地包括一种或多种来自病毒的蛋白质，其任选地与磷脂联合或配制。该病体和VLPs通常是非致病性的、非复制性的并且其通常不含有任何天然的病毒染色体。在一些实施方案中，病毒蛋白由重组产生，而在其他实施方案中，病毒蛋白分离自完整的病毒。
适合用于病体和VLPs的病毒蛋白非限制性地包括源自流感病毒(例如HA或NA)、乙型肝炎病毒(例如核心蛋白或衣壳蛋白)、戊型肝炎病毒、麻疹病毒、辛德比斯病毒、轮状病毒、口蹄病病毒、逆转录病毒、诺瓦克病毒、人乳头状瘤病毒、艾滋病病毒、RNA-噬菌体、Qβ-噬菌体(例如外壳蛋白)、GA-噬菌体、fr-噬菌体、AP205噬菌体和Ty(例如反转录转座子Ty蛋白p1)的蛋白质。
适合用作佐剂的细菌或微生物的衍生物非限制性地包括细菌或微生物的衍生物，例如肠道细菌脂多糖(LPS)的无毒衍生物、脂质A衍生物、免疫刺激的寡核苷酸和ADP-核糖基化毒素及其去毒衍生物。LPS的该无毒衍生物非限制性地包括单磷酰脂质A(MPL)和3-O-脱酰基的MPL(3dMPL)。3dMPL是具有4、5或6个酰化链的3脱-O-酰化单磷酰脂质A的混合物。其他的无毒LPS衍生物包括单磷酰脂质A模拟物，例如氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯衍生物(例如RC-529)。脂质A衍生物非限制性地包括来源于大肠埃希氏杆菌的脂质A的衍生物(例如OM-174)。
用作佐剂的免疫刺激的寡核苷酸非限制性地包括含有CpG基序的核苷酸序列(含有由磷酸酯键连接到鸟苷的未甲基化的胞嘧啶的二核苷酸序列)。该CpG序列可以是双链或单链的。在一些实施方案中，该核苷酸序列是双链的RNAs或含有回文或聚(dG)序列的寡核苷酸。在其他实施方案中，CpG′s包括核苷酸修饰/类似物，例如硫代磷酸酯修饰。
在一些实施方案中，CpG序列定向于TLR9，和在一些实施方案中，基序是GTCGTT或TTCGTT。在一些实施方案中，CpG序列对于诱导Th1免疫应答是特异性的(例如CpG-A ODN)，或者在其他实施方案中，CpG序列对于诱导B细胞应答是更特异性的(仅作为实例CpG-B ODN)。在一些实施方案中，CpG是CpG-A ODN。
在一些实施方案中，构建CpG寡核苷酸以便5′端易于受体识别。在其他实施方案中，2个CpG寡核苷酸序列任选地附于其3′端从而形成“免疫体(immunomers)”。
已知特别有用的基于免疫刺激寡核苷酸的佐剂是IC-31TM。在一些实施方案中，与本文所述的免疫原性组合物一起使用的佐剂包括以下成分的混合物：(i)寡核苷酸(例如15-40个核苷酸)(其包括至少1个(并且优选地多个)CpI基序(例如连接到肌苷上的胞嘧啶从而形成二核苷酸))，和(ii)聚阳离子聚合物(例如寡肽(例如5-20个氨基酸)(其包括至少1个(并且优选地多个)Lys-Arg-Lys三肽序列))。在一些实施方案中，寡核苷酸是包含26个核苷酸的序列5′-(IC)13-3′的脱氧核苷酸。在其他实施方案中，聚阳离子聚合物是包含11个氨基酸的序列KLKLLLLLKLK的肽。
在一些实施方案中，细菌ADP-核糖基化毒素及其去毒衍生物用作本文所述的免疫原性组合物中的佐剂。在一些实施方案中，该蛋白质源自大肠埃希杆菌(大肠杆菌不耐热肠毒素″LT″)、霍乱(″CT″)或百日咳(″PT″)。在其他实施方案中，毒素或类毒素是全毒素的形式，其包含A和B亚基。在其他实施方案中，A亚基含有去毒突变；而B亚基不突变。在其他实施方案中，佐剂是去毒的LT突变体，例如LT-K63、LT-R72和LT-G192。
适合用作佐剂的人免疫调节剂非限制性地包括细胞因子，例如白细胞介素(IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12)、干扰素(例如干扰素-γ)、巨噬细胞集落刺激因子和肿瘤坏死因子。
在本文所述的免疫原性组合物中用作佐剂的生物粘附剂和粘膜粘附剂非限制性地包括酯化的透明质酸微球和聚(丙烯酸)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖和羧甲基纤维素的交联衍生物。在一些实施方案中，脱乙酰壳多糖及其衍生物用作本文所述的疫苗组合物中的佐剂。
适合用作佐剂的微粒非限制性地包括由生物可降解和无毒的材料(例如聚(α-羟酸)、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚酐、聚己内酯等)和聚(丙交酯-共-乙交酯)形成的微粒。在一些实施方案中，处理该微粒从而使其具有带负电荷的表面(例如用SDS)或带正电荷的表面(例如用阳离子去垢剂，例如CTAB)。适合用作佐剂的微粒具有约100nm至约150μm的颗粒直径。在一些实施方案中，颗粒直径约为200nm至约30μm，并且在其他实施方案中，颗粒直径约为500nm至10μm。
适合用作佐剂的聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯制剂非限制性地包括与辛苯聚醇联合的聚氧乙烯山梨糖酐酯表面活性剂、和与至少一种另外的非离子表面活性剂(例如辛苯聚醇)联合的聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性剂。在一些实施方案中，聚氧乙烯醚选自聚氧乙烯-9-月桂基醚(聚氧乙烯(9)单十二醚)、聚氧乙烯-9-硬脂醚、聚氧乙烯-8-硬脂醚、聚氧乙烯-4-月桂醚、聚氧乙烯-35-月桂醚和聚氧乙烯-23-月桂醚。
适合用作佐剂的胞壁酰肽非限制性地包括N-乙酰基-胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-去甲胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(nor-MDP)和N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺酰基-L-丙氨酸-2-(1′-2′-二棕榈酰-s-n-甘油-3-羟基磷酰基氧基)-乙基胺MTP-PE)。
在一些实施方案中，具有一种或多种以上所定义的佐剂的组合的组合物包括用作免疫增强剂的一种或多种式(I)的化合物。这种组合非限制性地包括：
(1)皂苷和水包油型乳剂；
(2)皂苷(例如QS21)+无毒性LPS衍生物(例如3dMPL)；
(3)皂苷(例如QS21)+无毒性LPS衍生物(例如3dMPL)+胆固醇；
(4)皂苷(例如QS21)+3dMPTL+IL-12(任选地包括固醇)；
(5)3dMPL与例如QS21和/或水包油型乳剂的组合；
(6)包含10％角鲨烷、0.4％吐温80.TM.、5％普卢兰尼克-嵌段聚合物L121和thr-MDP的SAF，其微流体化成亚微米乳剂或蜗旋生成大粒径乳剂。
(7)RIBITM佐剂系统(RAS)(Ribi Immunochem)，其包含2％角鲨烷、0.2％吐温80和一种或多种细菌细胞壁成分，所述细菌细胞壁成分选自一磷酰基脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁支架(CWS)、优选地MPL+CWS(Detox.TM.)；和
(8)一种或多种无机盐(例如铝盐)+LPS的无毒性衍生物(例如3dMPL)。
在其他实施方案中，用于本文提供的免疫原性组合的佐剂组合包括Th1和Th2佐剂的组合，仅作为实例的CpG和明矾或瑞喹莫德和明矾的组合。
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物引起细胞介导的免疫应答和体液免疫应答。在其他实施方案中，免疫应答诱导长效(例如中和)抗体和细胞介导的免疫，这种免疫在暴露于感染物时快速应答。
一般认为T细胞的两种类型CD4和CD8细胞对于启动和/或增强细胞介导的免疫和体液免疫是必需的。CD8T细胞可以表达CD8共受体且通常称作细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)。CD8T细胞能够识别在MHC I类分子上展示的抗原或与之发生相互作用。
CD4T细胞可以表达CD4共受体且通常称作T辅助细胞。CD4T细胞能够识别结合MHC II类分子的抗原肽类。在与MHC II类分子发生相互作用时，CD4细胞可以分泌因子，例如细胞因子。这些分泌的细胞因子可以活化B细胞、细胞毒性T细胞、巨噬细胞和其他参与免疫应答的细胞。辅助T细胞或CD4+细胞可以进一步分成两个功能上不同的亚组：TH1表型和TH2表型，它们在其细胞因子和效应子功能方面不同。
活化的TH1细胞增强细胞免疫(包括抗原特异性CTL产生增加)且由此在对胞内感染的响应方面具有特别的价值。活化的TH1细胞可以分泌一种或多种IL-2、IFN-γ和TNF-β。TH1免疫应答可以通过活化巨噬细胞、NK(天然杀伤)细胞和CD8细胞毒性T细胞(CTLs)导致局部炎症反应。TH1免疫应答还可以通过用IL-12刺激B和T细胞生长起扩展免疫应答的作用。TH1刺激的B细胞可以分泌IgG2a。
活化的TH2细胞增强抗体产生且由此在对胞外感染的响应方面具有价值。活化的TH2细胞可以分泌一种或多种IL-4、IL-5、IL-6和IL-10。TH2免疫应答可以导致IgG1、IgE、IgA产生和记忆B细胞以用于未来的保护。
增强的免疫应答可以包括一种或多种增强的TH1免疫应答和TH2免疫应答。
TH1免疫应答可以包括一种或多种CTLs增加、一种或多种与TH1免疫应答相关的细胞因子增加(例如IL-2、IFN-γ和TNF-β)、活化的巨噬细胞增加、NK活性增加或IgG2a产生增加。优选地，增强的TH1免疫应答将包括IgG2a产生增加。
TH1佐剂可以用于引起TH1免疫应答。TH1佐剂相对于不使用佐剂的抗原的免疫一般引起IgG2a产生水平增加。适合用于本文提供的免疫原性组合物的TH1佐剂非限制性地包括皂苷制剂、病毒体和病毒样颗粒、肠细菌脂多糖(LPS)的无毒性衍生物、免疫刺激寡核苷酸。在一些实施方案中，用作本文提供的免疫原性组合物中的TH1佐剂的免疫刺激寡核苷酸包含CpG基序。
TH2免疫应答可以包括一种或多种与TH2免疫应答相关的细胞因子增加(例如IL-4、IL-5、IL-6和IL-10)或IgG1、IgE、IgA和记忆B细胞产生增加。优选地，增强的TH2免疫应答将包括IgG1产生增加。
TH2佐剂可以用于引起TH2免疫应答。TH2佐剂相对于不使用佐剂的抗原的免疫一般引起增加水平的IgG1产生。适合用于本文提供的免疫原性组合物的TH2佐剂非限制性地包括包含矿物的组合物、油乳剂和ADP-核糖基化毒素及其去毒的衍生物。在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物中用作TH2佐剂的包含矿物的组合物是铝盐。
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物包括TH1佐剂和TH2佐剂。在其他实施方案中，这种组合物引起增强的TH1和增强的TH2应答，例如相对于不使用佐剂的免疫而言，IgG1和IgG2a产生均增加。在其他实施方案中，这种包含TH1和TH2佐剂组合的组合物相对于单一佐剂的免疫(即相对于使用单独的TH1佐剂的免疫或使用单独的TH2佐剂的免疫)引起增加的TH1和/或增加的TH2免疫应答。
在一些实施方案中，免疫应答是一种或两种TH1免疫应答和TH2应答。在其他实施方案中，免疫应答提供一种或两种增强的TH1应答和增强的TH2应答。
在一些实施方案中，增强的免疫应答是一种或两种全身和粘膜免疫应答。在其他实施方案中，免疫应答提供一种或两种增强的全身和增强的粘膜免疫应答。在一些实施方案中，粘膜免疫应答是TH2免疫应答。在一些实施方案中，粘膜免疫应答包括IgA产生增加。
在一些实施方案中，本文提供的免疫原性组合物用作疫苗，其中这种组合物包括免疫有效量的一种或多种抗原。
以有效量(例如有效用于治疗、预防或诊断方法的量)提供用于本文提供的免疫原性组合物中的抗原。例如，本发明的免疫原性组合物可以用于治疗或预防由任意如下举出的病原体导致的感染。
用于本文提供的免疫原性组合物中的抗原一般地是对宿主而言外源的大分子(例如多肽类、多糖类、多核苷酸)，且非限制性地包括一种或多种如下举出细菌的抗原或来源于如下举出的一种或多种病原体的抗原。
细菌抗原
适合用于本文提供的免疫原性组合物中的细菌抗原非限制性地包括蛋白质、多糖类、脂多糖类、多核苷酸和分离、纯化或来源于细菌的外膜囊泡。在一些实施方案中，细菌抗原包括细菌裂解物和灭活细菌制品。在一些实施方案中，通过重组表达生产细菌抗原。在一些实施方案中，细菌抗原包括在其生命周期的至少一个阶段过程中细菌表面上暴露的表位。细菌抗原优选在多个血清型中是保守的。在一些实施方案中，细菌抗原包括来源于一种或多种如下举出细菌的抗原和如下鉴定的特定抗原实例：
脑膜炎奈瑟氏球菌：脑膜炎奈瑟氏球菌的抗原非限制性地包括蛋白质、糖类(包括多糖、寡糖、脂低聚糖或脂多糖)、或从脑膜炎奈瑟氏球菌血清组(例如A、C、W135、Y、X和/或B)纯化或衍生而得到的外膜囊泡。在一些实施方案中，脑膜炎蛋白抗原选自粘着物、自转运蛋白、毒素、铁获得蛋白(Fe acquisition proteins)和膜相关的蛋白(优选外膜内在蛋白)。
肺炎链球菌：肺炎链球菌抗原非限制性地包括来自肺炎链球菌的糖(包括多糖或寡糖)和/或蛋白质。糖可以是具有在纯化期间从细菌得到的糖的尺寸的多糖，或者其可以是通过该多糖片段化得到的寡糖。例如，在7价PREVNARTM产品中，糖中的6个呈递为完整的多糖，而1个(18C血清型)呈递为寡糖。在一些实施方案中，糖抗原选自一种或多种以下的肺炎球菌血清型：1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F和/或33F。免疫原性组合物可以包括多个血清型，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多个血清型。7价、9价、10价、11价和13价缀合物组合是本领域中已知的，其是23价非缀合的组合。例如，10价组合可以包括来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F和23F的糖。11价组合可以进一步包括来自血清型3的糖。12价组合可以将血清型6A和19A；6A和22F；19A和22F；6A和15B；19A和15B；r-22F和15B加入到10价混合物中；13价组合可以将血清型19A和22F；8和12F；8和15B；8和19A；8和22F；12F和15B；12F和19A；12F和22F；15B和19A；15B和22F加入到11价混合物中等。在一些实施方案中，蛋白抗原可以选自在WO98/18931、WO98/18930、美国专利US6,699,703、美国专利US6,800,744、WO97/43303、WO97/37026、WO 02/079241、WO 02/34773、WO 00/06737、WO 00/06738、WO00/58475、WO 2003/082183、WO 00/37105、WO 02/22167、WO 02/22168、WO 2003/104272、WO 02/08426、WO 01/12219、WO-99/53940、WO-01/81380、WO 2004/092209、WO 00/76540、WO 2007/116322、LeMieux等人，Infect.Imm.(2006)74：2453-2456，Hoskins等人，J.Bacteriol.(2001)183：5709-5717，Adamou等人，Infect.Immun.(2001)69(2)：949-958，Briles等人，J.Infect.Dis.(2000)182：1694-1701，Talkington等人，Microb.Pathog.(1996)21(1)：17-22，Bethe等人，FEMS Microbiol.Lett.(2001)205(1)：99-104，Brown等人，Infect.Immun.(2001)69：6702-6706，Whalen等人，FEMS Immunol.Med.Microbiol.(2005)43：73-80，Jomaa等人，Vaccine(2006)24(24)：5133-5139中确定的蛋白质。在其他实施方案中，肺炎链球菌蛋白可以选自聚组氨酸三联家族(PhtX)、胆碱结合蛋白家族(CbpX)、CbpX截短体、LytX家族、LytX截短体、CbpX截短体-LytX截短体嵌合蛋白质、肺炎球菌自溶酶(Ply)、PspA、PsaA、Spl28、SpIOl、Spl30、Spl25、Spl33、肺炎球菌菌毛亚单位。
酿脓链球菌(A组链球菌)：A组链球菌抗原非限制性地包括在WO02/34771或WO-2005/032582中确定的蛋白质(包括GAS 40)、GAS M蛋白片段的融合体(包括在WO 02/094851；和Dale，Vaccine(1999)17：193-200；和Dale，Vaccine 14(10)：944-948中所述的那些)、纤连蛋白结合蛋白(Sfb1)、链球菌血红素关联蛋白(Shp)和链球菌溶血素S(SagA)。
粘膜炎莫拉菌：莫拉菌属抗原非限制性地包括在WO-02/18595和WO99/58562中确定的抗原、外膜蛋白抗原(HMW-OMP)、C-抗原和/或LPS。
百日咳博德特菌：百日咳抗原非限制性地包括来自百日咳博德特菌的百日咳全毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)，任选地也与百日咳杆菌粘附素和/或凝集原2和3组合。
伯霍尔德杆菌属：伯霍尔德杆菌属抗原非限制性地包括鼻疽伯克霍尔德氏菌、类鼻疽伯霍尔德杆菌和洋葱伯霍尔德杆菌。
金黄色葡萄球菌：金黄色葡萄球菌抗原非限制性地包括来自金黄色葡萄球菌的多糖和/或蛋白。金黄色葡萄球菌多糖非限制性地包括5型和8型荚膜多糖(CP5和CP8)(其任选地缀合到无毒的重组绿脓假单胞菌外毒素A上(例如StaphVAXTM))、336型多糖(336PS)、多糖胞间粘着物(PIA，也已知是PNAG)。金黄色葡萄球菌蛋白非限制性地包括来源于下述的抗原：表面蛋白、侵袭素(杀白细胞素、激酶、透明质酸酶)、抑制吞噬细胞的吞食的表面因子(荚膜、A蛋白)、类胡萝卜素、过氧化氢酶产生、A蛋白、凝固酶、凝固因子和/或溶解真核细胞膜的膜损伤毒素(任选地去毒的)(溶血素、白细胞毒素、杀白细胞素)。在一些实施方案中，金黄色葡萄球菌抗原可以选自在WO 02/094868、WO 2008/019162、WO 02/059148、WO02/102829、WO 03/011899、WO 2005/079315、WO 02/077183、WO99/27109、WO 01/70955、WO 00/12689、WO 00/12131、WO 2006/032475、WO 2006/032472、WO 2006/032500、WO 2007/113222、WO 2007/113223、WO 2007/113224中确定的蛋白质。在其他实施方案中，金黄色葡萄球菌抗原可以选自IsdA、IsdB、IsdC、SdrC、SdrD、SdrE、ClfA、ClfB、SasF、SasD、SasH(AdsA)、Spa、EsaC、EsxA、EsxB、Emp、HlaH35L、CP5、CP8、PNAG、336PS。
表皮葡萄球菌：表皮葡萄球菌抗原非限制性地包括粘质相关抗原(SAA)。
破伤风梭状芽胞杆菌(破伤风)：破伤风抗原非限制性地包括破伤风毒素(TT)。在一些实施方案中，这种抗原用作与本文所提供的免疫原性组合物结合/缀合的载体蛋白。
产气荚膜梭状芽胞杆菌：抗原非限制性地包括来自产气荚膜梭状芽胞杆菌的ε毒素。
肉毒梭状芽胞杆菌(肉毒中毒)：肉毒中毒抗原非限制性地包括来源于肉毒梭状芽胞杆菌的那些。
白喉杆菌：白喉抗原非限制性地包括白喉毒素，优选去毒的，例如CRM197。此外，认为能够调节、抑制或与ADP核糖基化相关的抗原用于与本文所提供的免疫原性组合物的联合/共同给药/缀合。在一些实施方案中，白喉类毒素用作载体蛋白。
B型流感嗜血杆菌(Hib)：Hib抗原非限制性地包括Hib糖抗原。
绿脓假单胞菌：假单胞菌抗原非限制性地包括内毒素A、Wzz蛋白、绿脓假单胞菌LPS，分离自PAO1(O5血清型)的LPS和/或外膜蛋白(包括外膜蛋白F(OprF))。
嗜肺军团病杆菌：来源于嗜肺军团病杆菌的细菌抗原。
伯内特考克斯体：来源于伯内特考克斯体的细菌抗原。
布鲁杆菌属：来源于布鲁杆菌属的细菌抗原，其非限制性地包括流产布鲁杆菌、犬布氏杆菌、马尔他布鲁杆菌、木鼠布杆菌、羊布鲁氏菌、猪布氏杆菌和鳍脚目布氏杆菌(B.pinnipediae)。
弗朗西丝菌属：来源于弗朗西丝菌属的细菌抗原，其非限制性地包括新凶手弗朗西斯菌、F.philomiragia和土拉热弗朗西丝菌。
无乳链球菌(B组链球菌)：B组链球菌抗原非限制性地包括在WO02/34771、WO 03/093306、WO 04/041157或WO 2005/002619中确定的蛋白或糖抗原(包括蛋白GBS-80、GBS-104、GBS-276和GBS-322，和包括来源于血清型Ia、Ib、Ia/c、II、III、IV、V、VI、VII和VIII的糖抗原)。
淋病奈瑟球菌：淋病奈瑟球菌抗原非限制性地包括Por蛋白(或孔蛋白)(例如PorB(参见Zhu等人，疫苗(Vaccine)(2004)22：660-669))、转移结合蛋白(例如TbpA和TbpB(参见Price等人，感染与免疫(Infection andImmunity)(2004)71(1)：277-283))、不透明蛋白(例如Opa)、还原可修饰蛋白(Rmp)和外膜囊(OMV)制备物(参见Plante等人，J Infectious disease(2000)182：848-855)，也参见例如WO99/24578、WO99/36544、WO99/57280、WO02/079243)。
沙眼衣原体：沙眼衣原体抗原非限制性地包括来源于血清型A、B、Ba和C(沙眼物质，失明的原因)、血清型L1、L2和L3(与性病性淋巴肉芽肿相关)和血清型D-K的抗原。在一些实施方案中，沙眼衣原体抗原非限制性地包括在WO-00/37494、WO-03/049762、WO-03/068811或WO-05/002619中确定的抗原，其包括PepA(CT045)、LcrE(CT089)、ArtJ(CT381)、DnaK(CT396)、CT398、OmpH-样(CT242)、L7/L12(CT316)、OmcA(CT444)、AtosS(CT467)、CT547、Eno(CT587)、HrtA(CT823)和MurG(CT761)。
梅毒密螺旋体(梅毒)：梅毒抗原非限制性地包括TmpA抗原。
杜克雷嗜血杆菌(引起软下疳)杜克雷抗原非限制性地包括外膜蛋白(DsrA)。
粪肠球菌或屎肠球菌：抗原非限制性地包括三糖重复区或其他的肠球菌来源的抗原。
幽门螺杆菌：幽门螺杆菌抗原非限制性地包括Cag、Vac、Nap、HopX、HopY和/或脲酶抗原。
腐生性葡萄球菌：抗原非限制性地包括腐生性葡萄球菌抗原的160kDa血凝素。
小肠结肠炎耶尔森菌：抗原非限制性地包括LPS。
大肠埃希杆菌：大肠埃希杆菌抗原可以来自肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAggEC)、扩散黏附性大肠埃希菌(DAEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)和/或肠出血性大肠杆菌(EHEC)。ExPEC抗原非限制性地包括附属定居因子(orf3526)、orf353、细菌Ig样域(1组)蛋白(orf405)、orf1364、NodT家族外膜因子脂蛋白流出转运蛋白(orf1767)、gspK(orf3515)、gspJ(orf3516)、tonB依赖性铁载体受体(orf3597)、菌毛蛋白(orf3613)、upec-948、upec-1232、1型菌毛蛋白的A链前体(upec-1875)、yap H同系物(upec-2820)和溶血素A(recp-3768)。
炭疽杆菌(炭疽)：炭疽杆菌抗原非限制性地包括A-组分(致死因子(LF)和水肿因子(EF))，两者都能共享已知作为保护性抗原(PA)的共同的B-成分。在一些实施方案中，炭疽杆菌抗原是任选地去毒的。
鼠疫耶氏菌(鼠疫)：鼠疫抗原非限制性地包括F1荚膜抗原、LPS、鼠疫耶氏菌V抗原。
结核分支杆菌：结核抗原非限制性地包括脂蛋白、LPS、BCG抗原、抗原85B(Ag85B)的融合蛋白、ESAT-6(其任选地配制在阳离子脂囊泡中)、结核分枝杆菌(Mtb)异柠檬酸脱氢酶相关抗原和MPT51抗原。
立克次氏体：抗原非限制性地包括外膜蛋白，其包括外膜蛋白A和/或B(OmpB)、LPS和表面蛋白抗原(SPA)。
单核细胞增生利斯特菌：细菌抗原非限制性地包括来源于单核细胞增生利斯特菌的那些抗原。
肺炎衣原体：抗原非限制性地包括在WO-02/02606中确定的那些。
霍乱弧菌：抗原非限制性地包括蛋白酶抗原、LPS、特别是霍乱弧菌II的脂多糖、O1-Inaba-O-特异性多糖、霍乱弧菌O139、IEM108疫苗的抗原和封闭带毒素(Zonulaoc cludens toxin)(Zot)。
伤寒沙门氏菌(伤寒)：抗原非限制性地包括荚膜多糖，优选是缀合物(Vi，即vax-TyVi)。
博氏疏螺旋体(莱姆病)：抗原非限制性地包括脂蛋白(例如OspA、OspB、Osp-C和Osp-D)、其他的表面蛋白(例如OspE相关蛋白(Erps))、核心蛋白多糖结合蛋白(例如DbpA)和抗原性可变VI蛋白(例如与P39和P13相关的抗原(膜内在蛋白)、VlsE抗原性变异蛋白。
龈紫单胞菌：抗原非限制性地包括龈紫单胞菌的外膜蛋白(OMP)。
克雷伯菌属：抗原非限制性地包括OMP，其包括OMP-A、或任选地与破伤风类毒素缀合的多糖。
用于本文所提供的免疫原性组合物中的其他的细菌抗原非限制性地包括上述任意的荚膜抗原、多糖抗原、蛋白抗原或多核苷酸抗原。用于本文所提供的免疫原性组合物中的其他的细菌抗原非限制性地包括外膜囊泡(OMV)制备物。此外，用于本文所提供的免疫原性组合物中的其他的细菌抗原非限制性地包括前述的细菌的任何活的、减毒的和/或纯化的类型。在一些实施方案中，用于本文所提供的免疫原性组合物中的细菌抗原来源于革兰氏阴性菌，而在其他实施方案中，其来源于革兰氏阳性菌。在一些实施方案中，用于本文所提供的免疫原性组合物中的细菌抗原来源于需氧菌，而在其他实施方案中，其来源于厌氧菌。
在一些实施方案中，将任意以上来源于细菌的糖(多糖、LPS、LOS或寡糖)缀合到另一种物质或抗原上，例如载体蛋白(例如CRM197)。在某些实施方案中，该缀合是通过糖上的羰基部分的还原性氨化而直接缀合到蛋白质的氨基上。在其他实施方案中，糖通过连接体缀合，例如通过琥珀酰胺或Bioconjugate Techniques，1996和CRC，Chemistry of ProteinConjugation and Cross-Linking，1993中所提供的其他的连接。
在一些实施方案中，用于治疗或预防奈瑟球菌属感染和相关疾病和病症的、用于本文所提供的免疫原性组合物中的来源于脑膜炎奈瑟氏球菌的重组蛋白可以在WO99/24578、WO99/36544、WO99/57280、WO00/22430、WO96/29412、WO01/64920、WO03/020756、WO2004/048404和WO2004/032958中找到。该抗原可以单独或组合使用。如果组合多个纯化蛋白，那么使用10个或更少(例如9、8、7、6、5、4、3、2个)的纯化抗原的混合物是有益的。
用于本文所提供的免疫原性组合物中的抗原的特别有用的组合在Giuliani等人(2006)Proc Natl Acad Sci USA 103(29)：10834-9和WO2004/032958中公开，因此，免疫原性组合物可以包括以下之中的1、2、3、4或5个：(1)‘NadA’蛋白(aka GNA1994和NMB1994)；(2)‘fHBP’蛋白(aka‘741’、LP2086、GNA1870和NMB1870)；(3)‘936’蛋白(akaGNA2091和NMB2091)；(4)‘953’蛋白(aka GNA1030和NMB1030)；和(5)‘287’蛋白(aka GNA2132和NMB2132)。其他可能的抗原组合可以包含转铁蛋白结合蛋白(例如TbpA和/或TbpB)和Hsf抗原。用于本文所提供的免疫原性组合物中的其他可能的纯化抗原包括蛋白质或多肽，所述的蛋白质包含以下氨基酸序列之一：来自WO99/24578的SEQ-ID-NO：650；来自WO99/24578的SEQ-ID-NO：878；来自WO99/24578的SEQ ID NO：884；来自WO99/36544的SEQ ID NO：4；来自WO99/57280的SEQ-ID-NO：598；来自WO99/57280的SEQ ID NO：818；来自WO99/57280的SEQ ID NO：864；来自WO99/57280的SEQ ID NO：866；来自WO99/57280的SEQ IDNO：1196；来自WO99/57280的SEQ ID NO：1272；来自WO99/57280的SEQ ID NO：1274；来自WO99/57280的SEQ ID NO：1640；来自WO99/57280的SEQ ID NO：1788；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2288；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2466；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2554；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2576；来自WO99/57280的SEQ IDNO：2606；来自WO99/57280的SEQ-ID-NO：2608；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2616；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2668；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2780；来自WO99/57280的SEQ-ID NO：2932；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2958；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2970；来自WO99/57280的SEQ ID NO：2988(每一个以上的氨基酸序列从引用的文献引入作为参考)，所述的多肽包含(a)50％或更多(例如、60％、70％、80％、90％、95％、99％或更多)与所述序列的同一性；和/或(b)包含至少n个连续的来自所述序列的氨基酸的片段的氨基酸序列，其中n为7或更多(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。优选的(b)的片段包含来自相关序列的表位。免疫原性组合物可以包括1个以上的(例如2、3、4、5、6个)这些多肽。
fHBP抗原落入3种不同的变体(WO2004/048404)。基于利用本文所公开的化合物之一的本文所公开的免疫原性组合物的脑膜炎奈瑟氏球菌血清组疫苗可以包括单个fHBP变体，但是其有益地包括来自2种或全部3种变体的每一个的fHBP。因此免疫原性组合物可以包括2种或3种不同的纯化fHBPs的组合，其选自：(a)第一蛋白，其包含具有至少a％与SEQ ID NO：1序列同一性的氨基酸序列和/或包含由至少x个来自SEQ-ID-NO：1的连续的氨基酸的片段组成的氨基酸序列；(b)第二蛋白，其包含具有至少b％与SEQ-ID-NO：2序列同一性的氨基酸序列和/或包含由至少y个来自SEQ IDNO：2的连续的氨基酸的片段组成的氨基酸序列；和/或(c)第三蛋白，其包含具有至少c％与SEQ ID NO：3序列同一性的氨基酸序列和/或包含由至少z个来自SEQ ID NO：3的连续的氨基酸的片段组成的氨基酸序列。
SEQ ID NO：1
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSL
NTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSG
KMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGN
GKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAG
SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO：2
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSL
NTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDS
LINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGK
IEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSA
TVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO：3
VAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDN
SLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKT
DSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGY
GRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIA
GSATVKIGEKVHEIGIAGKQ.
a的值为至少85，例如86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，99.5或以上。b的值为至少85，例如86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，99.5或以上。c的值为至少85，例如86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，99.5或以上。a、b和c的值本质上互不相关。
x的值至少为7，例如8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，60，70，80，90，100，120，140，160，180，200，225，250)。y的值至少为7，例如8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，60，70，80，90，100，120，140，160，180，200，225，250)。z的值至少为7，例如8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，60，70，80，90，100，120，140，160，180，200，225，250)。x、y和z的值本质上互不相关。
在一些实施方案中，如本文所公开的免疫原性组合物将包括(例如在N末端半胱氨酸上)被脂化的fHBP蛋白。在其他实施方案中，其将不会被脂化。
如本文所公开的有用的免疫原性组合物包括纯化蛋白，其包含以下的混合物：(i)具有氨基酸序列SEQ ID NO：4的第一多肽；(ii)具有氨基酸序列SEQ ID NO：5的第二多肽；和(iii)具有氨基酸序列SEQ ID NO：6的第三多肽。参见Giuliani等人，(2006)Proc Natl Acad Sci USA 103(29)：10834-9和WO2004/032958。如本文所公开的有用的免疫原性组合物包括纯化蛋白，其包含以下的混合物：(i)具有至少a％与氨基酸序列SEQ-ID-NO：4序列同一性的第一多肽；(ii)具有至少b％与氨基酸序列SEQ ID NO：5序列同一性的第二多肽；和(iii)具有至少a％与氨基酸序列SEQ-ID-NO：6序列同一性的第三多肽。
SEQ ID NO：4
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGGQDMAAVSEE
NTGNGGAAATDKPKNEDEGAQNDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPAGNMENQAPD
AGESEQPANQPDMANTADGMQGDDPSAGGENAGNTAAQGTNQAENNQTAGSQNPA
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KLSDADKISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVADSVQMKGINQYIIFYKPKPTSFARFRRSA
RSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGS
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DSGDGLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTWTENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPT
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SVEFDQAKRDGKIDITIPVANLQSGSQHFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGK
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VNVGMTKSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO：5
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGYTPQIS
VVGYNRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTAGDIAGDTW
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AFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGG
KLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSY
SLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO：6
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KGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALD
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KVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRIDGLNATTEKLDTRLASAEKSI
ADHDTRLNGLDKTVSDLRKETRQGLAEQAALSGLFQPYNVG.
细菌囊泡抗原
如本文所公开的免疫原性组合物可以包括外膜囊泡。该外膜囊泡可以从宽范围的病原菌获得并且将其用作如本文所公开的免疫原性组合物的抗原性组分。用作该免疫原性组合物的抗原性组分的囊泡包括通过破坏细菌外膜而形成包括外膜的蛋白成分的囊泡所获得的任何脂蛋白体囊泡。因此，该术语包括OMVs(有时称‘水泡(bleb)’)、微泡(MVs，参见例如WO02/09643)和‘天然OMVs’(‘NOMVs’，参见例如Katial等人，(2002)Infect.Immun.70：702-707)。包括来自一种或多种病原菌的囊泡的如本文所公开的免疫原性组合物能够用于治疗或预防由该病原菌引起的感染和相关的疾病和病症。
MVs和NOMVs是天然存在的膜囊，其在细菌生长期间形成并且释放到培养基中。通过在肉汤培养基中培养细菌(例如奈瑟氏菌)、从肉汤培养基中的较小MVs分离全细胞(例如通过过滤或通过低速离心仅使细胞而非较小的囊泡沉淀)、然后从缺乏细胞的培养基收集MVs(例如通过过滤、通过MVs的示差沉淀或聚集、通过高速离心从而使MVs沉淀)能够得到MVs。通常能根据培养基中产生的MVs的量选择用于生产MVs的菌株(参见例如记载了具有高MV产量的奈瑟氏菌的美国专利6,180,111和WO01/34642)。
从细菌人工制备OMVs并且可以用去垢剂处理(例如用脱氧胆酸盐)或用非去垢剂方法(参见例如WO04/019977)制备OMVs。获得合适的OMV制备物的方法是本领域中熟知的。形成OMVs的技术包括在不使去垢剂沉淀的足够高的pH下(参见例如WO01/91788)用胆汁酸盐去垢剂(例如石胆酸、鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、脱氧胆酸、胆酸、胆烷酸等的盐，优选用去氧胆酸钠(EP0011243和Fredriksen等人，(1991)NIPH-Ann.14(2)：67-80)处理奈瑟氏菌)处理细菌。用例如超声处理、匀化、微流化、空化、渗透压冲击、研磨、弗氏细胞压碎器、混合等的技术可以实施基本上没有去垢剂的其他技术(参见例如WO04/019977)。不使用去垢剂或使用低去垢剂的方法能够保留有用的抗原(例如奈瑟氏菌OMVs中的NspA)。因此方法可以使用含有约0.5％或更低(例如约0.2％、约0.1％、＜0.05％或零)的脱氧胆酸盐的OMV提取缓冲剂。
有用的OMV制备方法记载于WO05/004908中并且其包括对粗制的OMVs超滤而非高速离心。在超滤之后，该方法可以包括超速离心步骤。
能够由任何致病菌株(例如用于本发明的脑膜炎奈瑟氏球菌)制备囊泡。来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B的囊泡可以是任意的血清型(例如1、2a、2b、4、14、15、16等)、任意的血清亚型和任意的免疫型(例如L1；L2；L3；L3，3，7；L10等)。脑膜炎球菌可以来自任何合适的谱系，其包括高侵入性和高毒性谱系，例如任意的以下7个高毒性谱系：亚组I；亚组III；亚组IV-1；ET-5复合体；ET-37复合体；A4簇；谱系3。已经用多位点酶电泳(MLEE)定义了这些谱系，但是也用多基因座序列分型法(MLST)对脑膜炎球菌进行分类，例如ET-37复合体是根据MLST的ST-11复合体，ET-5复合体是ST-32(ET-5)，谱系3是ST-41/44等。囊泡能够由具有以下亚型之一的菌株制备：P1.2；P1.2，5；P1.4；P1.5；P1.5，2；P1.5，c；P1.5c，10；P1.7，16；P1.7，16b；P1.7h，4；P1.9；P1.15；P1.9，15；P1.12，13；P1.13；P1.14；P1.21，16；P1.22，14。
可以由野生型致病菌株(例如脑膜炎奈瑟氏球菌株)或突变株制备本文所公开的免疫原性组合物中所包含的囊泡。例如，WO98/56901公开了由具有改变的fur基因的脑膜炎奈瑟氏球菌得到的囊泡制备物。WO02/09746教导了应该用同时porA和cps敲除上调nspA表达。用于OMV生产的脑膜炎奈瑟氏球菌的其他敲除突变体在WO02/0974、WO02/062378和WO04/014417中公开。WO06/081259公开了在其中fHBP被上调的囊泡。Claassen等人，(1996)14(10)：1001-8公开了由经改良而表达6种不同的PorA亚型的菌株构建的囊泡。也可以使用由LPS生物合成中所涉及的酶敲除所获得的具有低内毒素水平的奈瑟氏菌突变体(参见例如WO99/10497和Steeghs等人，(2001)i20：6937-6945)。这些或其他的突变体都能用于本发明。
因此，在一些实施方案中，本文所公开的免疫原性组合物中所包括的脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B菌株可以表达超过1种PorA亚型。之前已经构建了6价和9价PorA菌株。菌株可以表达2、3、4、5、6、7、8或9个PorA亚型：P1.7，16；P1.5-1，2-2；P1.19，15-1；P1.5-2，10；P1.121，13；P1.7-2，4；P1.22，14；P1.7-1，1和/或P1.18-1，3，6。在其他实施方案中，相对于野生型水平(例如相对于WO03/105890中所公开的菌株H44/76)，可以下调菌株的PorA表达，例如其中PorA的量已经减少了至少20％(例如＞30％、＞40％、＞50％、＞60％、＞70％、＞80％、＞90％、＞95％等)或甚至被敲除。
在一些实施方案中脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B菌株可以过表达(相对于相应的野生型菌株)某些蛋白。例如，菌株可以过表达NspA、蛋白287(WO01/52885-也称为NMB2132和GNA2132)、一种或多种fHBP(WO06/081259和美国专利公开文本2008/0248065-也称为蛋白741、NMB1870和GNA1870)、TbpA和/或TbpB(WO00/25811)、Cu，Zn-超氧化物歧化酶(WO00/25811)等。
在一些实施方案中，脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B菌株可以包括一种或多种敲除和/或过表达突变。用于下调的和/或敲除的优选的基因包括：(a)Cps、CtrA、CtrB、CtrC、CtrD、FrpB、GalE、HtrB/MsbB、LbpA、LbpB、LpxK、Opa、Opc、PilC、PorB、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA；和/或TbpB(WO01/09350)；(b)CtrA、CtrB、CtrC、CtrD、FrpB、GalE、HtrB/MsbB、LbpA、LbpB、LpxK、Opa、Opc、PhoP、PilC、PmrE、PmrF、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA；和/或TbpB(WO02/09746)；(c)ExbB、ExbD、rmpM、CtrA、CtrB、CtrD、GalE、LbpA、LpbB、Opa、Opc、PilC、PorB、SiaA、SiaB、SiaC、SiaD、TbpA；和/或TbpB(WO02/062378)；和(d)CtrA、CtrB、CtrD、FrpB、OpA、OpC、PilC、PorB、SiaD、SynA、SynB；和/或SynC(WO04/014417)。
在使用突变株的情况下，在一些实施方案中其可以具有以下特征的一个或多个、或全部：(i)下调的或敲除的LgtB和/或GalE从而截短脑膜炎球菌的LOS；(ii)上调的TbpA；(iii)上调的Hsf；(iv)上调的Omp85；(v)上调的LbpA；(vi)上调的NspA；(vii)敲除的PorA；(viii)下调的或敲除的FrpB；(ix)下调的或敲除的Opa；(x)下调的或敲除的Opc；(xii)删除的cps基因复合体。截短的LOS能够不包括唾液酸-乳糖-N-新四糖表位，例如其可以是缺乏半乳糖的LOS。LOS可以没有α链。
如果LOS存在于囊泡中，那么可能处理囊泡以便连接其LOS和蛋白组分(“内泡”缀合体(WO04/014417))。
本文所公开的免疫原性组合物可以包括来自不同菌株的囊泡的混合物。例如，WO03/105890公开了包含多价脑膜炎球菌囊泡成分的疫苗，其包含来源于具有在一个国家流行时采用的血清亚型的脑膜炎球菌株的第一囊泡，和来源于不必具有在一个国家预防时采用的血清亚型的第二囊泡。WO06/024946公开了不同囊泡的有用的组合。在一些实施方案中，可以使用来自L2和L3免疫型的各自的菌株的囊泡的组合。
能够由除血清组B以外的脑膜炎奈瑟氏球菌血清组制备基于囊泡的抗原(例如WO01/91788公开了血清组A的方法)。本文所公开的免疫原性组合物相应地能够包括除B之外的血清组(例如A、C、W135和/或Y)和来自除奈瑟氏菌之外的细菌病原体制备的囊泡。
病毒抗原
适合用于本文所提供的免疫原性组合物中的病毒抗原非限制性地包括灭活的(或杀死的)病毒、减毒病毒、裂解病毒(split-virus)制剂、纯化的亚单位制剂、可以从病毒分离、纯化或衍生的病毒蛋白、可以从病毒分离、纯化或衍生的或重组合成的病毒样颗粒(VLPs)和多核苷酸抗原。在一些实施方案中，病毒抗原来源于在细胞培养物或其他基质上繁殖的病毒。在其他实施方案中，重组表达病毒抗原。在一些实施方案中，病毒抗原优选包括在其生活周期的至少1个阶段期间暴露于病毒表面上的表位。病毒抗原优选地是在多个血清型或分离株中是保守的。适合用于本文所提供的免疫原性组合物中的病毒抗原非限制性地包括来源于一种或多种以下所述的病毒和以下所确定的特定抗原实例的抗原。
正粘液病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于正粘液病毒的那些，例如流感A、B和C。在一些实施方案中，正粘液病毒抗原选自一种或多种病毒蛋白，其包括血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M1)、膜蛋白(M2)、一种或多种转录酶组分(PB1、PB2和PA)。在一些实施方案中，病毒抗原包括HA和NA。在一些实施方案中，流感抗原来源于两次流行爆发之间(每年)的流感菌株，而在其他实施方案中，流感抗原来源于有潜力引起大流行爆发的菌株(即与当前流行的菌株中的血细胞凝集素相比具有新的血细胞凝集素的流感菌株、或在禽个体中有致病性的并且具有在人群中水平传播的潜力的流感菌株或对人有致病性的流感菌株)。
副粘液病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于副粘液病毒的那些，例如肺病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、变性肺病毒和麻疹病毒(麻疹)。
肺病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于肺病毒的那些，例如呼吸道合胞病毒(RSV)、牛呼吸道合胞病毒、鼠肺炎病毒和火鸡鼻气管炎病毒。优选地，肺病毒是RSV。在一些实施方案中，肺病毒抗原选自一种或多种以下蛋白，其包括表面融合蛋白(F)、糖蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)、基质蛋白M和M2、核壳体蛋白N、P和L以及非结构蛋白NS1和NS2。在其他实施方案中，肺病毒抗原包括F、G和M。在一些实施方案中，肺病毒抗原也配制于或来源于嵌合病毒，例如包含RSV和PIV的成分的嵌合RSV/PIV病毒。
副粘病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于副粘病毒的那些，例如1-4型副流感病毒(PIV)、流行性腮腺炎、仙台病毒、猿猴病毒5、牛副流感病毒、Nipah病毒、Henipa病毒和新城鸡瘟病毒。在一些实施方案中，副粘病毒为PIV或流行性腮腺炎。在一些实施方案中，副粘病毒抗原选自一种或多种以下蛋白：血凝素-神经氨酸酶(HN)、融合蛋白F1和F2、核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)和基质蛋白(M)。在其他实施方案中，副粘病毒蛋白包括HN、F1和F2。在一些实施方案中，副粘病毒抗原也配置于或来源于嵌合病毒，例如包含RSV和PIV的组分的嵌合RSV/PIV病毒。商购流行性腮腺炎疫苗包括单价形式的或与麻疹和风疹疫苗组合(MMR)的活的减毒流行性腮腺炎病毒。在其他实施方案中，副粘病毒是Nipah病毒或Henipa病毒，并且抗原选自一种或多种以下蛋白：融合(F)蛋白、糖(G)蛋白、基质(M)蛋白、核壳体(N)蛋白、大(L)蛋白和磷蛋白(P)。
痘病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于正痘病毒的那些，例如天花，其非限制性地包括重型天花和类天花。
变性肺病毒：病毒抗原非限制性地包括变性肺病毒，例如人变性肺病毒(hMPV)和禽变性肺病毒(aMPV)。在一些实施方案中，变性肺病毒抗原选自一种或多种以下蛋白，其包括表面融合蛋白(F)、糖蛋白(G)和小疏水蛋白(SH)、基质蛋白M和M2、核壳体蛋白N、P和L。在其他实施方案中，变性肺病毒抗原包括F、G和M。在一些实施方案中，变性肺病毒抗原也配制于或来源于嵌合病毒。
麻疹病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于麻疹病毒的那些，例如麻疹。在一些实施方案中，麻疹病毒抗原选自一种或多种以下蛋白：血凝素(H)、糖蛋白(G)、融合因子(F)、大蛋白(L)、核蛋白(NP)、聚合酶磷蛋白(P)和基质蛋白(M)。商购麻疹疫苗包括活的减毒麻疹病毒，通常与流行性腮腺炎和风疹组合(MMR)。
细小核糖核酸病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于小核糖核酸病毒的那些，例如肠病毒、鼻病毒、嗜肝RNA病毒、心病毒和口蹄疫病毒。在一些实施方案中，抗原来源于肠病毒，而在其他实施方案中，肠病毒是脊髓灰质炎病毒。在其他实施方案中，抗原来源于鼻病毒。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。
肠病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于肠病毒的那些，例如1、2或3型脊髓灰质炎病毒、1至22和24型柯萨奇A病毒、1-6型柯萨奇B病毒、1-9、11-27和29-34型埃可病毒(ECHO)和68-71型肠病毒。在一些实施方案中，抗原来源于肠病毒，而在其他实施方案中，肠病毒是脊髓灰质炎病毒。在一些实施方案中，肠病毒抗原选自一种或多种以下衣壳蛋白VP0、VP1、VP2、VP3和VP4。商购脊髓灰质炎疫苗包括灭活的脊髓灰质炎疫苗(IPV)和口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒。
布尼亚病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于正布尼亚病毒，例如加利福尼亚脑炎病毒、白蛉病毒、例如立夫特山谷病毒或内罗病毒、例如克里米亚-刚果出血热病毒。
鼻病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于鼻病毒属的那些。在一些实施方案中，鼻病毒抗原选自一种或多种以下衣壳蛋白：VP0、VP1、VP2、VP2和VP4。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。
嗜肝RNA病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于嗜肝RNA病毒属的那些，例如甲型肝炎病毒(HAV)。商购HAV疫苗包括灭活的HAV疫苗。
披膜病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于披膜病毒的那些，例如风疹病毒、甲病毒或动脉炎病毒。在一些实施方案中，抗原来源于风疹病毒，例如风疹病毒。在一些实施方案中，披膜病毒抗原选自E1、E2、E3、C、NSP-1、NSPO-2、NSP-3或NSP-4。在一些实施方案中，披膜病毒抗原选自E1、E2或E3。商购风疹疫苗包括活的冷适应病毒，通常与流行性腮腺炎和麻疹疫苗(MMR)组合。
黄病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于黄病毒属的那些，例如蜱传脑炎(TBE)病毒、登革热(1、2、3或4型)病毒、黄热病病毒、日本脑炎病毒、科萨努尔森林病毒、西尼罗河脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、俄罗斯春夏型脑炎病毒、波瓦生脑炎病毒。在一些实施方案中，黄病毒抗原选自PrM、M、C、E、NS-1、NS-2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5。在一些实施方案中，黄病毒抗原选自PrM、M和E。商购TBE疫苗包括灭活的病毒疫苗。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。
瘟病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于瘟病毒属的那些，例如牛病毒性腹泻(BVDV)、典型猪霍乱(CSFV)或边界病(BDV)。
嗜肝DNA病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于嗜肝DNA病毒属的那些，例如乙型肝炎病毒。在一些实施方案中，嗜肝DNA病毒抗原选自表面抗原(L、M和S)、核心抗原(HBc、HBe)。商购HBV疫苗包括包含表面抗原S蛋白的亚单位疫苗。
丙肝病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于丙肝病毒(HCV)的那些。在一些实施方案中，HCV抗原选自E1、E2、E1/E2、NS345多聚蛋白、NS-345-核心多聚蛋白、核心、和/或来自非结构区域的肽的一种或多种。在一些实施方案中，丙肝病毒抗原包括以下的一种或多种：HCV-E1和或E2蛋白、E1/E2异源二聚体复合体、核心蛋白和非结构蛋白、或这些抗原的片段，其中非结构蛋白能够任选地被修饰从而去除酶活性、但保留免疫原性。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。
弹状病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于弹状病毒属的那些，例如狂犬病病毒(狂犬病病毒)和水泡性病毒(VSV)。弹状病毒抗原可以选自糖蛋白(G)、核蛋白(N)、大蛋白(L)、非结构蛋白(NS)。商购狂犬病病毒疫苗包含在人二倍体细胞或胎猕猴肺细胞上生长的杀死的病毒。
杯状病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于杯状病毒的那些，例如诺瓦克病毒和诺瓦克样病毒，例如夏威夷病毒和雪山病毒。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。
冠状病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于冠状病毒、SARS，人呼吸道冠状病毒、禽传染性支气管炎(IBV)、小鼠肝炎病毒(MHV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的那些。在一些实施方案中，冠状病毒抗原选自突起蛋白(S)、包膜蛋白(E)、基质蛋白(M)、核壳体蛋白(N)和血凝素-酯酶糖蛋白(HE)。在一些实施方案中，冠状病毒抗原来源于SARS病毒。在一些实施方案中，冠状病毒来源于WO 04/92360中所述的SARS病毒抗原。
逆转录病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于逆转录病毒的那些，例如肿瘤病毒、慢病毒或泡沫病毒(Spumavirus)。在一些实施方案中，肿瘤病毒原来源于HTLV-1、HTLV-2或HTLV-5。在一些实施方案中，慢病毒抗原来源于HIV-1或HIV-2。在一些实施方案中，抗原来源于HIV-1亚型(或进化枝)，其非限制性地包括A、B、C、D、F、G、H、J、K、O亚型(或进化枝)HIV-1。在其他实施方案中，抗原来源于HIV-1在循环中的重组形式(CRF)，其非限制性地包括A/B、A/E、A/G、A/G/I等。在一些实施方案中，逆转录病毒抗原选自gag、pol、env、tax、tat、rex、rev、nef、vif、vpu和vpr。在一些实施方案中，HIV抗原选自gag(p24gag和p55gag)、env(gp160和gp41)、pol、tat、nef、rev vpu、小蛋白(miniproteins)(优选p55gag和gp140v缺失)。在一些实施方案中，HIV抗原来源于一种或多种以下菌株：HIVIIIb、HIVSF2、HIVLAV、HIVLAI、HIVMN、HIV-1CM235、HIV-1US4、HIV-1SF162、HIV-1TV1、HIV-1MJ4。在一些实施方案中，抗原来源于内源性人逆转录病毒，其非限制性地包括HERV-K(“老”HERV-K和“新”HERV-K)。
呼肠孤病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于呼肠孤病毒的那些，例如正呼肠孤病毒、轮状病毒、环状病毒或科蜱病毒属。在一些实施方案中，呼肠孤病毒抗原选自结构蛋白λ1、λ2、λ3、μ1、μ2、σ1、σ2或σ3、或者非结构蛋白σNS、μNS或σ1s。在一些实施方案中，呼肠孤病毒抗原来源于轮状病毒。在一些实施方案中，轮状病毒抗原选自VP1、VP2、VP3、VP4(或经切割的产物VP5和VP8)、NSP-1、VP6、NSP3、NSP2、VP7、NSP4或NSP5。在一些实施方案中，轮状病毒抗原包括VP4(或经切割的产物VP5和VP8)和VP7。
细小病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于细小病毒属的那些，例如细小病毒B19。在一些实施方案中，细小病毒抗原选自VP-1、VP-2、VP-3、NS-1和NS-2。在一些实施方案中，细小病毒抗原是衣壳蛋白VP1或VP-2。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。
丁型肝炎病毒(HDV)：病毒抗原非限制性地包括来源于HDV的那些，特别是来自HDV的δ-抗原。
戊型肝炎病毒(HEV)：病毒抗原非限制性地包括来源于HEV的那些。
庚型肝炎病毒(HGV)：病毒抗原非限制性地包括来源于HGV的那些。
人疱疹病毒：病毒抗原非限制性地包括来源于人疱疹病毒的那些，例如单纯疱疹病毒(HSV)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、人疱疹病毒6(HHV6)、人疱疹病毒7(HHV7)和人疱疹病毒8(HHV8)。在一些实施方案中，人疱疹病毒抗原选自即刻早期蛋白(α)、早期蛋白(β)和晚期蛋白(γ)。在一些实施方案中，HSV抗原来源于HSV-1或HSV-2菌株。在一些实施方案中，HSV抗原选自糖蛋白gB、gC、gD和gH、融合蛋白(gB)或免疫逃避蛋白(gC、gE或gI)。在一些实施方案中，VZV抗原选自核心蛋白、核壳体蛋白、壳皮蛋白或包膜蛋白。活的减毒VZV疫苗可购买得到。在一些实施方案中，EBV抗原选自早期抗原(EA)蛋白、病毒衣壳抗原(VCA)和膜抗原(MA)的糖蛋白。在一些实施方案中，CMV抗原选自衣壳蛋白、包膜糖蛋白(例如gB和gH)和壳皮蛋白。在其他实施方案中，CMV抗原可以选自一种或多种以下蛋白：pp65、IE1、gB、gD，gH、gL、gM，gN、gO、UL128、UL129、gUL130、UL150、UL131、UL33、UL78、US27、US28、RL5A、RL6、RL10、RL11、RL12、RL13、UL1、UL2、UL4、UL5、UL6、UL7、UL8、UL9、UL10、UL11、UL14、UL15A、UL16、UL17、UL18、UL22A、UL38、UL40、UL41A、UL42、UL116、UL119、UL120、UL121、UL124、UL132、UL147A、UL148、UL142、UL144、UL141、UL140、UL135、UL136、UL138、UL139、UL133、UL135、UL148A、UL148B、UL148C、UL148D，US2、US3、US6、US7、US8、US9、US10、US11、US12、US13、US14、US15、US16、US17、US18、US19、US20、US21、US29、US30和US34A。CMV抗原也可以是一种或多种CMV蛋白的融合物，仅例示如pp65/IE1(Reap等人，Vaccine(2007)25：7441-7449)。在一些实施方案中，将抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。
乳多泡病毒：抗原非限制性地包括来源于乳多泡病毒的那些，例如乳头状瘤病毒和多瘤病毒。在一些实施方案中，乳头状瘤病毒包括HPV血清型1、2、4、5、6、8、11、13、16、18、31、33、35、39、41、42、47、51、57、58、63和65。在一些实施方案中，HPV抗原来源于血清型6、11、16或18。在一些实施方案中，HPV抗原选自衣壳蛋白(L1)和(L2)、或E1-E7、或其融合体。在一些实施方案中，将HPV抗原配制成病毒样颗粒(VLPs)。在一些实施方案中，多瘤病毒包括BK病毒和JK病毒。在一些实施方案中，多瘤病毒抗原选自VP1、VP2或VP3。
腺病毒：抗原包括来源于腺病毒的那些。在一些实施方案中，腺病毒抗原来源于腺病毒血清型36(Ad-36)。在一些实施方案中，抗原来源于编码Ad-36外壳蛋白或其片段的蛋白质或肽序列(WO-2007/120362)。
进一步提供了记载于Vaccines，第4版(Plotkin和Orenstein编著，2004)；Medical Microbiology第4版(Murray等人编著，2002)；Virology，第3版(W.K.Joklik编著，1988)；Fundamental Virology，第2版(B.N.Fields和D.M.Knipe编著，1991)中的抗原、组合物、方法和微生物，也考虑了将其与本文所提供的免疫原性组合物组合。
真菌抗原
用于本文所提供的免疫原性组合物中的真菌抗原非限制性地包括来源于一种或多种以下所述的真菌的那些。
真菌抗原来源于皮肤真菌，其包括：絮状表皮癣菌、奥杜安氏小孢子菌、犬小孢子菌、扭曲小孢子菌、马类小孢子菌、石膏样小孢子菌、矮小孢子菌、同心发癣菌、马发癣菌、鸡发癣菌、石膏样发癣菌、麦格氏毛菌、须疮癣菌、昆克努发癣菌、红色发癣菌、舍恩莱发癣菌、断发发癣菌、疣状发癣菌、疣状发癣菌album变种、疣状发癣菌discoides变种、疣状发癣菌ochraceum变种、堇色发癣菌和/或黄癣菌(Trischophyton-faviforme)；和
真菌病原体来源于烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、构巢曲霉、土曲霉、聚多曲霉、淡黄曲霉、灰绿曲霉、头状芽生裂殖酵母、白色假丝酵母、Candidaenolase、热带假丝酵母、光滑假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、近平滑假丝酵母、星状假丝酵母、克柔假丝酵母、近平滑假丝酵母、葡萄牙假丝酵母、假热带假丝酵母、吉利蒙氏假丝酵母、卡里翁氏分支孢子菌、粗球孢子菌、皮炎芽生菌、新型隐球菌、棒地霉、荚膜组织胞浆菌、肺炎克雷白氏杆菌、微孢子目、脑炎微孢子虫属的物种、Septata-intestinalis和比氏肠胞虫；较不常见的是小孢子虫属的物种、微孢子虫属的物种、微粒子虫属的物种、具褶孢虫属的物种、Trachipleistophora的物种、角膜微孢子的物种巴西副球孢子菌、卡氏肺囊虫、Pythiumn insidiosum、卵状糠秕孢子菌、酿酒酵母、布拉酵母、粟酒裂殖酵母、Scedosporium apiosperum、申氏孢子丝菌、白色毛孢子菌、鼠弓形体、马尼弗氏青霉菌、马拉色霉菌属的物种、产色芽生菌属的物种、瓶霉属的物种、孢子丝菌属的物种、蛙粪霉菌属的物种、耳霉属的物种、根霉菌属的物种、毛霉菌属的物种、犁头霉属的物种、被孢霉菌的物种、小克银霉属的物种、瓶霉属的物种、链格孢属的物种、弯孢霉属的物种、长蠕孢属的物种、镰刀菌属的物种、曲霉菌属的物种、青霉属的物种、链核盘菌属的物种、丝核菌属的物种、拟青霉属的物种、皮思霉属的物种和分枝孢子菌属的物种。
在一些实施方案中，生产真菌抗原的方法包括下述方法，在所述方法中自可从已经基本或至少部分除去了细胞壁的真菌细胞获得的不溶部分提取并分离可溶部分，特征在于该方法包括步骤：获得活的真菌细菌；获得已经基本或至少部分除去了细胞壁的真菌细菌；使已经基本或至少部分除去了细胞壁的真菌细菌破裂；获得不溶部分；和从不溶部分提取并分离可溶部分。
原生动物抗原/病原体
用于本文所提供的免疫原性组合物中的原生动物抗原/病原体非限制性地包括来源于一种或多种以下原生动物的那些：溶组织内阿米巴、兰伯贾第虫、小隐孢子虫、卡晏环孢子虫和弓形虫。
植物抗原/病原体
用于本文所提供的免疫原性组合物中的植物抗原/病原体非限制性地包括来源于蓖麻的那些。
STD抗原
在一些实施方案中，本文所提供的免疫原性组合物包括一种或多种来源于性传播疾病(STD)的抗原。在一些实施方案中，该抗原提供STD(例如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(例如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软下疳)的预防。在其他实施方案中，该抗原提供STD(例如衣原体、生殖器疱疹、肝炎(例如HCV)、生殖器疣、淋病、梅毒和/或软下疳)的治疗。该抗原来源于一种或多种病毒性或细菌性STD。在一些实施方案中，病毒性STD抗原来源于HIV、单纯疱疹病毒(HSV-1和HSV-2)、人乳头状瘤病毒(HPV)和肝炎(HCV)。在一些实施方案中，细菌性STD抗原来源于奈瑟氏淋球菌、沙眼衣原体、梅毒密螺旋体、杜克雷嗜血杆菌、大肠埃希杆菌和无乳链球菌。上文记载了来源于这些病原体的特定抗原的实例。
呼吸抗原
在一些实施方案中，本文所提供的免疫原性组合物包括一种或多种来源于引起呼吸系统疾病的病原体的抗原。例如，该呼吸抗原来源于呼吸系统病毒，例如正粘病毒(流感)、肺病毒(RSV)、副粘病毒(PIV)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、VZV和冠状病毒(SARS)。在一些实施方案中，呼吸抗原来源于引起呼吸系统疾病的细菌，例如肺炎链球菌、绿脓假单胞菌、百日咳杆菌、结核分枝杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、炭疽杆菌和粘膜炎莫拉菌。上文记载了来源于这些病原体的特定抗原的实例。
儿科疫苗抗原
在一些实施方案中，本文所提供的免疫原性组合物包括一种或多种适合用于儿科个体的抗原。儿科个体通常小于约3岁、或小于约2岁、或小于约1岁。在6个月、1、2或3岁的过程中多次施与儿科抗原。儿科抗原来源于可以靶向于儿科人群的病毒和/或来自易于感染的儿科人群的病毒。儿科病毒抗原非限制性地包括来源于正粘病毒(流感)、肺病毒(RSV)、副粘病毒(PIV和流行性腮腺炎)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、肠病毒(脊髓灰质炎)、HBV、冠状病毒(SARS)和水痘-带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)中的一种或多种病毒的抗原。儿科细菌抗原包括来源于肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏球菌、酿脓链球菌(A组链球菌)、粘膜炎莫拉菌、百日咳杆菌、金黄色葡萄球菌、破伤风杆菌(破伤风)、白喉杆菌(白喉)、B型流感嗜血杆菌(Hib)、绿脓假单胞菌、无乳链球菌(B组链球菌)和大肠埃希杆菌中的一种或多种细菌的抗原。上文记载了来源于这些病原体的特异性抗原的实例。
适应于中老年或免疫受损个体的抗原
在一些实施方案中，本文所提供的免疫原性组合物包括一种或多种适合用于老年或免疫受损的个体的抗原。这些个体可能需要更频繁地、用更高剂量或用有佐剂的制剂进行疫苗接种从而改善其对靶抗原的免疫应答。靶向用于老年或免疫受损的个体的抗原包括来源于一种或多种以下病原体的抗原：脑膜炎奈瑟氏球菌、肺炎链球菌、酿脓链球菌(A组链球菌)、粘膜炎莫拉菌、百日咳杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、破伤风杆菌(破伤风)、白喉杆菌(白喉)、B型流感嗜血杆菌(Hib)、绿脓假单胞菌、嗜肺性军团病杆菌、无乳链球菌(B组链球菌)、粪肠球菌、幽门螺旋杆菌、肺炎衣原体、正粘病毒(流感)、肺病毒(RSV)、副粘病毒(PIV和流行性腮腺炎)、麻疹病毒(麻疹)、披膜病毒(风疹)、肠病毒(脊髓灰质炎)、HBV、冠状病毒(SARS)和水痘-带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)。上文记载了来源于这些病原体的特异性抗原的实例。
适用于青少年疫苗的抗原
在一些实施方案中，本文所提供的免疫原性组合物包括一种或多种适合用于青少年个体的抗原。青少年需要之前施与的儿科抗原的追加剂量。上文记载了适合用于青少年的儿科抗原。此外，为了在性活动开始之前确保预防性或治疗性免疫，对青少年靶向接受来源于STD病原体的抗原。上文记载了适合用于青少年的STD抗原。
肿瘤抗原
在一些实施方案中，肿瘤抗原或癌抗原用于与本文所提供的免疫原性组合物组合。在一些实施方案中，肿瘤抗原是含肽的肿瘤抗原，例如多肽肿瘤抗原或糖蛋白肿瘤抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原是含糖的肿瘤抗原，例如糖脂肿瘤抗原或神经节苷脂肿瘤抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原是含多核苷酸的肿瘤抗原，其表达含多肽的肿瘤抗原，例如RNA载体构建体或DNA载体构建体，例如质粒DNA。
适合与本文所提供的免疫原性组合物联合使用的肿瘤抗原包括多种分子，例如(a)含多肽的肿瘤抗原，其包括多肽(其长度范围能在例如8-20个氨基酸，但此范围之外的长度也是常见的)、脂多肽和糖蛋白，(b)含糖肿瘤抗原，其包括多糖、粘蛋白、神经节苷脂、糖脂和糖蛋白，和(c)表达抗原性多肽的多核苷酸。
在一些实施方案中，肿瘤抗原例如是(a)与癌细胞相关的全长型分子、(b)其同系物和修饰的形式，其包括具有删除的、增加的和/或取代的部分的分子和(c)其片段。在一些实施方案中，以重组形式提供肿瘤抗原。在一些实施方案中，肿瘤抗原包括例如通过CD8+淋巴细胞识别的I类限制性抗原或通过CD4+淋巴细胞识别的II类限制性抗原。
在一些实施方案中，肿瘤抗原非限制性地包括(a)睾丸癌抗原，例如NY-ESO-1、SSX2、SCP1以及RAGE、BAGE、GAGE和MAGE家族多肽(例如GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6和MAGE-12(例如其能用于对付黑素瘤、肺肿瘤、头颈肿瘤、NSCLC、乳腺肿瘤、胃肠肿瘤和膀胱肿瘤))、(b)突变的抗原，例如p53(与各种实体瘤(例如结肠直肠癌、肺癌、头颈癌)相关)、p21/Ras(与例如黑素瘤、胰腺癌和结肠直肠癌相关)、CDK4(与例如黑素瘤相关)、MUM1(与例如黑素瘤相关)、胱天蛋白酶-8(与例如头颈癌相关)、CIA0205(与例如膀胱癌相关)、HLA-A2-R1701、β连环蛋白(与例如黑素瘤相关)、TCR(与例如T细胞非霍奇金淋巴瘤相关)、BCR-abl(与例如慢性髓细胞性白血病相关)、磷酸丙糖异构酶、KIA-0205、CDC-27和LDLR-FUT，(c)过表达的抗原，例如半乳凝素4(与例如结肠直肠癌相关)、半乳凝素9(与例如何杰金氏病相关)、蛋白酶3(与例如慢性髓细胞性白血病相关)、WT1(与例如各种白血病相关)、碳酸酐酶(与例如肾癌相关)、醛缩酶A(与例如肺癌相关)、PRAME(与例如黑素瘤相关)、HER-2/neu(与例如乳腺癌、结肠癌、肺癌和卵巢癌相关)、甲胎蛋白(与例如肝细胞瘤相关)、KSA(与例如结肠直肠癌相关)、胃泌素(与例如胰腺癌和胃癌相关)、端粒末端转移酶催化蛋白、MUC-1(与例如乳腺癌和卵巢癌相关)、G-250(与例如肾细胞癌相关)、p53(与例如乳腺癌、结肠癌相关)和癌胚抗原(与例如乳腺癌、肺癌和胃肠道的癌(例如结肠直肠癌)相关)、(d)共享抗原，例如黑素瘤-黑素细胞分化抗原，例如MART-1/Melan-A、gp100、MC1R、黑素细胞刺激激素受体、酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1/TRP1和酪氨酸酶相关蛋白-2/TRP2(与例如黑素瘤相关)、(e)前列腺相关抗原，例如PAP、PSA、PSMA、PSH-P1、PSM-P1、PSM-P2(与例如前列腺癌相关)、(f)免疫球蛋白特异型(例如与骨髓瘤和B细胞淋巴瘤相关)和(g)其他的肿瘤抗原，例如含多肽和糖的抗原，其包括(i)糖蛋白，例如唾液酸基Tn和唾液酸基Lex(与例如乳腺癌和结肠直肠癌相关)以及各种粘蛋白；将糖蛋白偶联到载体蛋白上(例如将MUC-1偶联到KLH上)；(ii)脂多肽(例如连接到脂部分上的MUC-1)；(iii)多糖(例如Globo-H合成己糖)，将其偶联到载体蛋白上(例如连接到KLH上)、(iv)神经节苷脂，例如GM2、GM12、GD2、GD3(与例如脑癌、肺癌、黑素瘤相关)，也将其偶联到载体蛋白(例如KLH)上。
在一些实施方案中，肿瘤抗原非限制性地包括p15、Hom/Mel-40、H-Ras、E2A-PRL、H4-RET、IGH-IGK、MYL-RAR、EB病毒抗原、EBNA、人乳头状瘤病毒(HPV)抗原(包括E6和E7)、乙型肝炎和丙型肝炎病毒抗原、人T细胞亲淋巴病毒抗原、TSP-180、p185erbB2、p180erbB-3、c-met、mn-23H1、TAG-72-4、CA 19-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、p16、TAGE、PSCA、CT7、43-9F、5T4、791 Tgp72、β-HCG、BCA225、BTAA、CA 125、CA 15-3(CA 27.29\BCAA)、CA 195、CA 242、CA-50、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、MOV18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2结合蛋白\亲环蛋白C相关蛋白)、TAAL6、TAG72、TLP、TPS等。
与本文所提供的免疫原性组合物联合使用的含多核苷酸的抗原包括编码多肽癌抗原(例如以上所列的那些)的多核苷酸。在一些实施方案中，含多核苷酸的抗原非限制性地包括DNA或RNA载体构建体，例如质粒载体(例如pCMV)，其能够在体内表达多肽癌抗原。
在一些实施方案中，肿瘤抗原衍生自突变的或改变的细胞成分。在发生变化之后，细胞成分不再执行其调控功能，因此细胞可以经历不受控制的生长。改变的细胞成分的典型实例非限制性地包括ras、p53、Rb、由威尔姆斯瘤基因编码的改变的蛋白、遍在蛋白、粘蛋白、由DCC、APC和MCC基因编码的蛋白、以及受体或受体样结构(例如neu、甲状腺激素受体、血小板衍生生长因子(PDGF)受体、胰岛素受体、上皮生长因子(EGF)受体和集落刺激因子(CSF)受体)。
此外，细菌性和病毒性抗原与本文所提供的免疫原性组合物联合使用用于治疗癌症。在一些实施方案中，载体蛋白(例如CRM197、破伤风类毒素或鼠伤寒沙门氏菌抗原)与本文所提供的化合物联合/结合使用用于治疗癌症。与现有的治疗相比，癌抗原联合治疗将表现出增加的效力和生物利用度。
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括来自脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、C、W135和Y中的至少2种血清组的荚膜糖。在其他实施方案中，这些疫苗进一步包含来自以下的一种或多种的抗原：(a)血清组B脑膜炎奈瑟氏球菌；(b)B型流感嗜血杆菌；和/或(c)肺炎链球菌。
在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组B、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、B、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组B、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、B、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组B、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、B、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组B、C、W135和Y。在一些实施方案中，含有至少一种式(I)的化合物的免疫原性组合物包括B型流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟氏球菌的血清组A、B、C、W135和Y。
药盒
本文也提供药物包装或药盒，所述的药物包装或药盒包括一个或多个含有用于治疗或预防与Toll样受体相关的疾病或病症的式(I)的化合物的容器。在其他实施方案中，这些药物包装或药盒包括一个或多个含有用于治疗或预防与Toll样受体相关的疾病或病症的式(I)的化合物的容器和一个或多个含有另外的治疗剂(其非限制性地包括以上所列的那些)的容器。在一些实施方案中，这些药物包装或药盒任选地包括本文所公开的式(I)的化合物的给药说明书。在这些药盒的一些实施方案中，以如本文所述的疫苗组合物的形式提供式(I)的化合物并且任选地包括向受试者注射疫苗组合物的注射器。
治疗、预防和疫苗给药的方法
如本文所公开的免疫原性组合物可以与疫苗联合使用从而改善疫苗的免疫原性，或者当免疫原性组合物包括一种或多种抗原，免疫原性组合物可以用作疫苗。因此，在某个实施方案中，本文所公开的免疫原性组合物可以用在提高或增强哺乳动物的免疫应答的方法中，其包含施与有效量的如本文所公开的免疫原性组合物的步骤。免疫应答优选是保护性的并且优选涉及抗体和/或细胞介导的免疫。该方法可以产生加强应答。
在一些实施方案中，本文所公开的免疫原性组合物可以用作药物，例如用于产生或增强哺乳动物的免疫应答。
在一些实施方案中，本文所公开的免疫原性组合物可以用于制备提高哺乳动物的免疫应答的药物。
本发明也提供预装填了本文所公开的免疫原性组合物的递送装置。
通过用这些应用和方法提高哺乳动物的免疫应答，抗原包含在免疫原性组合物中或与免疫原性组合物联合给药，能够减少或者甚至预防哺乳动物被病原体感染。哺乳动物优选是人，但其可以是例如奶牛、猪、鸡、猫或狗，因为本文所涵盖的病原体可以在宽范围的物种中存在。当疫苗用于预防用途，人优选是儿童(例如蹒跚学步的小孩或婴儿)或青少年；当疫苗用于治疗用途，人优选是青少年或成人。用于儿童的疫苗也可以向成人给药，例如为了评价安全性、剂量、免疫原性等。
核查治疗处理的效力的一种方式涉及在本文所公开的免疫原性组合物给药后监测病原体感染。核查预防处理的效力的一种方式涉及在免疫原性组合物(和抗原，如果分别给药的话)给药后全身地监测(例如监测IgG1和IgG2a产生的水平)和/或粘膜监测(例如监测IgA产生的水平)对抗原的免疫应答，所述抗原包含在本文所公开的免疫原性组合物中或与本文所公开的免疫原性组合物联合给药。一般地，在免疫接种之后、但在攻击之前测定抗原特异性血清抗体应答，而在免疫接种之后和在攻击之后测定抗原特异性粘膜抗体应答。
如果抗原是蛋白质，评价本文所公开的免疫原性组合物的免疫原性的另一种方法是以重组方式表达蛋白，从而通过免疫印迹和/或微阵列筛选患者血清或粘膜分泌物。蛋白质和患者样本之间的阳性反应表明患者已经对该蛋白质产生了免疫应答。该方法也可以用于鉴别蛋白抗原内的优势免疫抗原和/或表位。
在体内通过目的感染的病原体攻击的合适动物模型也能够测定免疫原性组合物的效力。
通常将本文所公开的免疫原性组合物向受试者直接给药。直接给药可以通过胃肠外注射(例如皮下、腹膜内、静脉内、肌内或向组织间隙)、或粘膜给药(例如通过直肠、口服(例如片剂、喷雾剂)、阴道、局部、透皮或经表皮、鼻内、眼、耳、肺或其他粘膜给药)来完成。
免疫原性组合物可以用于引发全身的和/或粘膜的免疫，优选引发增强的全身和/或粘膜的免疫。
增强的全身和/或粘膜的免疫优选地反映在增强的TH1和/或TH2免疫应答上。优选地，增强的免疫应答包括IgG1和/或IgG2a和/或IgA的产生的增加。
剂量可以是单剂量给药方案或多剂量给药方案。多剂量可以用于初次免疫接种程序表和/或加强免疫接种程序表。在多剂量给药方案中，可以通过相同或不同的途径施与多种剂量，例如胃肠外的初次免疫和粘膜的加强免疫、粘膜的初次免疫和胃肠外的加强免疫等。多剂量给药通常相隔至少1周(例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周等)。
包括一种或多种抗原的或与一种或多种抗原联合使用的本文所公开的免疫原性组合物可以用于治疗儿童和成人。因此，人类受试者可以是小于1岁、1-5岁、5-15岁、15-55岁或至少55岁。接受该免疫原性组合物的优选的受试者是老年人(例如＞50岁、＞60岁和优选地＞65岁)、年幼的人(例如＜5岁)、住院患者、健康护理人员、武装和军事人员、孕妇、慢性病人或免疫缺陷患者。然而免疫原性组合物不仅仅适合这些人群，并且可以更广泛地用于更多人群中。
包括一种或多种抗原的或与一种或多种抗原联合使用的本文所公开的免疫原性组合物可以与其他疫苗基本上相同时间向患者给药(例如在同一会诊或者回访健康护理人员或免疫接种中心期间)，例如与麻疹疫苗、流行性腮腺炎疫苗、风疹疫苗、MMR疫苗、水痘疫苗、MMRV疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗、DTP疫苗、缀合的b型流感嗜血杆菌疫苗、灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗、乙型肝炎病毒疫苗、脑膜炎球菌缀合疫苗(例如四价的A C W135Y疫苗)、呼吸道合胞病毒疫苗等基本上同一时间。
使用含铝的佐剂配制的式(I)的化合物
在一些实施方案中，将本文提供的至少一种式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物与含铝的佐剂和有效量的一种或多种抗原组合，得到免疫原性组合物。在这种免疫原性组合物中，式(I)的化合物与含铝的佐剂结合。在这种免疫原性组合物中，抗原是本文提供的任意的抗原。在这种免疫原性组合物中，抗原和式(I)的化合物即TLR7激动剂共同被递送至目的部位。
在这种免疫原性组合物中，式(I)的化合物与含铝的佐剂的结合不会干扰抗原与含铝的佐剂结合。仅作为实例，图1显示脑膜炎奈瑟氏球菌抗原吸附在氢氧化铝上未受到式(I)的化合物与氢氧化铝佐剂结合的影响。
在一些实施方案中，这种免疫原性组合物用作疫苗。在一些实施方案中，这种疫苗是预防性的(即预防感染)，而在其他实施方案中，这种疫苗是治疗性的(即治疗感染)。
本文提供的至少一种式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物是TLR7激动剂和免疫增强剂，在与不含式(I)的化合物的免疫原性制剂相比时，其在给药时赋予免疫刺激效应。在一些实施方案中，式(I)的化合物当包括在具有一种或多种免疫调节剂的免疫原性组合物中时，在给药时赋予免疫刺激效应，而在其他实施方案中，式(I)的化合物当包括在不存在其他免疫调节剂的免疫原性组合物中时，在给药时赋予免疫刺激效应。
在一些实施方案中，这种免疫原性组合物通过将式(I)的化合物保留在注射部位增强免疫应答。增加TRL激动剂在注射部位停留时间的备选策略是改变TLR激动剂的亲水性、疏水性和/或溶解性，而不是将TLR激动剂与明矾结合。非极性(疏水性或不溶性)化合物在肌内注射时可以增加注射部位的停留时间，由此与具有类似功效的显示更快的注射部位清除和更高的全身暴露的极性(亲水性或可溶性)化合物相比降低全身暴露水平。类似地，式(I)的非极性化合物可以展示这些有用的特性。
在一些实施方案中，这种免疫原性组合物包括药学可接受的载体，例如但不限于蛋白质、多糖类、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸、氨基酸共聚物、蔗糖、海藻糖、乳糖、脂质聚集物(例如油小滴或脂质体)和非活性病毒颗粒。该免疫原性组合物一般地还包含稀释剂例如水、盐水、甘油和任选地包含其他赋形剂例如湿润剂或乳化剂和pH缓冲物质。在一些实施方案中，这种免疫原性组合物包括一种或多种本文提供的其它佐剂。
实施例
提供下列实施例是为了示例、但不限制本文提供的式(I)的化合物和这类化合物的制备。
原料化合物的合成
5-甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔 丁酯(A-1)的制备
方案A
步骤1：2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯
在0℃在N2气气氛中向2-溴-5-甲基苯胺(1.0当量)在四氢呋喃(0.2M)中的溶液中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。将该反应体系在0℃搅拌15分钟，加入二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液。将该反应体系温至室温过夜。蒸发溶剂，用0.1N HCl水溶液使得到的残余物猝灭。用乙酸乙酯将水性混悬液提取2次。用盐水洗涤合并的有机层，用无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过使用系统(ISCO)、应用0-5％乙酸乙酯的己烷溶液的快速色谱法纯化粗物质，得到2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯，为淡黄色油状物。
步骤2：5-甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
在N2气气氛中在二烷(0.2M)中混合2-溴-5-甲基苯基氨基甲酸叔丁酯(来自上述步骤)(1.0当量)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(1.5当量)、二氯[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)(5％)和乙酸钠(4.5当量)。将该反应体系加热至100℃，搅拌过夜。将得到的混悬液冷却至环境温度。用醚稀释，通过C盐过滤，真空浓缩滤液。通过使用系统(ISCO)、应用0-8％醚的己烷溶液的快速色谱法纯化粗物质，得到5-甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(A-1)。
4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)的 制备
方案B
步骤B-1：3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶(B-1)
向用隔片封盖的圆底烧瓶中加入1-乙炔基-4-甲氧基-2-甲基苯(1.1当量)、3，5-二氯2-氰基吡啶(1当量)、三乙胺(5当量)和无水DMF(0.2M)。给该混合物脱气(真空)，通氮气3次。加入CuI(0.05当量)和双(三苯膦)二氯-钯(II)(0.05当量)，用回流冷凝器替代隔片，将烧瓶在60℃在氮气气氛中加热过夜。通过TLC监测反应完成时，使烧瓶内含物上样至用己烷预处理的大硅胶柱。进行快速色谱(硅胶，己烷∶EtOAc(1∶4％))，得到产物3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶(B-1)。
步骤B-2：2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(B-2)
向带有回流冷凝器的圆底烧瓶中加入3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶(B-1)(1当量)、5-甲基-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(A-1)(1.25当量)、K3PO4(2当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.05当量)和2-二环己基膦基-2′，6′-二甲氧基联苯(Sphos)(0.1当量)。加入正丁醇和水(5∶2，0.2M)，给内含物脱气(真空、然后氮气流)3次。在100℃在氮气气氛中在油浴中将该反应混合物剧烈搅拌过夜。冷却内含物，溶于200mL水，然后用二氯甲烷提取。干燥合并的有机层(Na2SO4)，浓缩。进行快速色谱(硅胶，0-50％EtOAc的CH2Cl2溶液)，得到产物2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(B-2)。
步骤B-3：2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(B-3)
由2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(来自上述步骤)制备2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺。用搅拌棒向圆底烧瓶中加入2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(1当量)。加入乙醇和二氯甲烷(1∶2，0.2M)，然后加入钯/碳(活性粉末，湿，10％在碳上，0.1当量)。给内含物脱气(真空)、然后氢气流(3次)。在室温在氢气气囊中将该反应混合物剧烈搅拌过夜。然后通过C盐垫过滤该反应混合物，然后用二氯甲烷和EtOAc洗涤C盐垫，直到滤液无UV吸收为止。浓缩合并的有机洗出液。进行快速色谱(硅胶，0-50％EtOAc的CH2Cl2溶液)，得到产物2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺。1H NMR(CDCl3)：δ8.53(d，1H)，8.29(d，1H)，8.01(d，1H)，7.44(s，1H)，7.12(dd，1H)，6.93(d，1H)，6.67(d，1H)，6.60(dd，1H)，5.93(bs，2H)，3.70(s，3H)，3.05-3.00(dd，2H)，2.93-2.88(dd，2H)，2.44(s，3H)，2.19(s，3H).LRMS[M+H]＝358.2
步骤B-4：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)
向在冰-水浴中的经搅拌的2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(来自上述步骤)在二氯甲烷(0.2M)中的溶液中以滴加的方式加入1N BBr3(2当量)的CH2Cl2溶液。30分钟后，用甲醇使反应停止，真空浓缩，得到粗残余物。通过使用系统(ISCO)、应用0-20％甲醇的二氯甲烷溶液的快速色谱法纯化粗物质，得到4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)，为白色固体。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.99(s，1H)，8.75(d，1H)，8.60(d，1H)，8.27(d，1H)，7.28(s，1H)，7.09(dd，1H)，6.99(bs，2H)，6.88(d，1H)，6.49(d，1H)，6.42(dd，1H)，3.02-2.96(dd，2H)，2.86-2.81(dd，2H)，2.38(s，3H)，2.13(s，3H).LRMS[M+H]＝344.2.
(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)甲醇的制备 (2-1：参见方案2)
步骤1：5-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯
在0℃在N2气气氛中向5-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-氯苯胺(商购)(1.0当量)在THF(0.2M)中的溶液中滴加1M NaHMDS(2.5当量)。将该反应体系在0℃搅拌15分钟，加入二碳酸二叔丁酯的THF溶液。将该反应体系温至环境温度过夜。蒸发溶剂，用0.1N HCl水溶液使得到的残余物猝灭。用EtOAc将水性混悬液提取2次。用盐水洗涤合并的有机层，用无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过使用系统(ISCO)、应用0-30％EtOAc/己烷的快速色谱法纯化粗物质，得到5-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯，为无色油状物。
步骤2：5-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二 氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯
在N2气气氛中在二烷(0.2M)中混合5-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯(来自步骤1)(1.0当量)，4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(3.0当量)、Pd2dba3(2.5％)、XPhos(10％)和KOAc(3当量)。将该反应体系加热至110℃，搅拌过夜。将得到的混悬液冷却至环境温度，用醚稀释，通过C盐过滤，真空浓缩滤液。用盐水洗涤合并的有机层，用无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过使用系统(ISCO)、应用0-20％EtOAc/己烷的快速色谱法纯化粗物质，得到5-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯，为白色泡沫。
步骤3：3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶
向用隔片封盖的圆底烧瓶中加入1-乙炔基-4-甲氧基-2-甲基苯(商购，1.1当量)、3，5-二氯2-氰基吡啶(商购，1当量)、三乙胺(5当量)和无水DMF(0.2M)。抽真空，通氮气3次。加入CuI(0.05当量)和双(三苯膦)二氯-钯(II)(0.05当量)。用回流冷凝器替代隔片，将烧瓶在60℃在氮气气氛中加热过夜。通过TLC监测反应完成时，使烧瓶内含物上样至用己烷预处理的大硅胶柱。进行快速色谱(硅胶，己烷∶EtOAc(1∶4％))，得到3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶。
步骤4：8-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-((4-甲氧基-2-甲基苯基) 乙炔基)苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺
向带有回流冷凝器的圆底烧瓶中加入3-氯-5-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶(来自步骤3)(1当量)、5-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基氨基甲酸叔丁酯(来自步骤2)(1.25当量)、K3PO4(2当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.05当量)和2-二环己基膦基-2′，6′-二甲氧基联苯(0.1当量)。加入正丁醇和水(5∶2，0.2M)，给内含物脱气(真空、然后氮气流)3次。在100℃在氮气气氛中在油浴中将该反应混合物剧烈搅拌过夜。冷却内含物，溶于水，然后用二氯甲烷提取。干燥合并的有机层(Na2SO4)，浓缩。进行快速色谱(硅胶，0-50％EtOAc的CH2Cl2溶液)，得到8-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺，为固体。
步骤5：8-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基) 苯并[f][1，7]二氨萘-5-胺
用搅拌棒向圆底烧瓶中加入8-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-((4-甲氧基-2-甲基苯基)乙炔基)苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(来自步骤4)(1当量)。加入乙醇和二氯甲烷(1∶2，0.2M)，然后加入钯/碳(活性粉末，湿，10％在碳上，0.1当量)。给内含物抽真空、然后氢气流3次。在室温在氢气气囊中将该反应混合物剧烈搅拌过夜。然后通过C盐垫过滤该反应混合物，然后用二氯甲烷和EtOAc洗涤C盐垫，直到滤液无UV吸收为止。浓缩合并的有机洗涤液。进行快速色谱(硅胶，0-50％EtOAc的CH2Cl2溶液)，得到8-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺，为黄色固体。
步骤6：5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)甲醇 (2-1)
将在THF中的8-((叔丁基二甲基甲硅烷氧基)甲基)-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(来自步骤5)(1.0当量)和TBAF(1.1当量)在环境温度搅拌过夜。用饱和NaHCO3使反应停止。分离两相，用Et2O将水层提取2次。用盐水洗涤合并的有机层，用无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过使用系统(ISCO)、应用0-5％MeOH/DCM的快速色谱法纯化粗物质，得到5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)甲醇(2-1)，为白色固体。1H NMR(丙酮-d6)：δ8.79(s，1H)，8.73(s，1H)，8.35(d，1H)，7.61(s，1H)，7.33(d，1H)，7.09(d，1H)，6.75(d，1H)，6.68(dd，1H)，6.57(br s，2H)，4.47(d，2H)，4.32(t，1H)，3.58(s，3H)，3.17(t，2H)，3.04(t，2H)，2.30(s，3H).LRMS[M+H]＝374.2.
示例化合物的合成
实施例1
(表1：化合物6)
3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)乙氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸(6)的合成
方案1
步骤1：1，1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯(1-1)
在-78℃向二氟甲基膦酸二乙酯(1.0当量)在THF(0.8M)中的溶液中缓慢加入LDA(2M，1.1当量)在庚烷/THF/乙苯中的溶液，将该混合物剧烈搅拌30分钟。在单独的反应烧瓶中，将1，2-双(2-碘乙氧基)乙烷(1.0当量)在THF(0.8M)中的溶液冷却至-78℃。通过套管向该溶液中转入新鲜制备的烷基锂溶液，将该反应混合物在-78℃搅拌1小时。此时，除去冷却浴，将该反应混合物温至室温。然后用1M HCl水溶液使该反应混合物猝灭。将得到的混合物转入分液漏斗，用CH2Cl2洗涤3次。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，真空除去挥发性物质。通过系统(ISCO)、使用CH2Cl2纯化得到的残余物，得到1，1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯(1-1)，为黄色油状物。1H NMR(CDCl3)：δ4.23-4.31(m，4H)，3.75-3.80(m，4H)，3.60-3.67(m，4H)，3.26(t，2H)，2.33-2.50(m，2H)，1.38(t，6H)。
步骤2：2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲 基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯(1-2)的合成
在22℃向4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)(1.0当量)在二甲基甲酰胺(0.10M)中的溶液中加入60％氢化钠的矿物油分散液(1.5当量)，将得到的混合物搅拌30分钟。此时，向该混合物中加入1，1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯(1.2当量)。然后将该反应混合物搅拌18小时，然后用乙酸乙酯和水稀释。分离双层，用水将有机层洗涤2次。用无水Na2SO4干燥有机层，真空除去挥发性物质。通过系统(ISCO)、使用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度纯化得到的残余物，得到3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯(1-2)，为固体。
步骤3：3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲 基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1，1-二氟乙基膦酸(6)的合成
在0℃向3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯(1-2)(1.0当量)在CH2Cl2(0.10M)中的溶液中缓慢加入三甲基甲硅烷基溴(10当量)。1小时后，除去冰浴，将该反应混合物在22℃搅拌18小时。此时，真空除去挥发性物质，通过反相-HPLC、使用20-90％0.5mM NH4OAc(在MeCN中)-10mM NH4OAc(在水中)梯度纯化得到的残余物，得到3-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸(6)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ8.83(s，1H)，8.68(s，1H)，8.32(s，1H)，7.34(s，1H)，7.14(d，1H)，7.09(br，2H)，7.08(d，1H)，6.74(s，1H)，6.68(d，1H)，4.01(t，2H)，3.70(t，2H)，3.61(t，2H)，3.54-3.59(m，2H)，3.48-3.50(m，2H)，3.07(t，2H)，2.94(t，2H)，2.43(s，3H)，2.25(s，3H)，2.06-2.21(m，2H).LRMS[M+H]＝590.2
实施例2
(表1：化合物1)
3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙 基膦酸(1)的合成
步骤1：3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)丙基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸二乙酯，但使用商购的3-溴丙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤2：3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)丙基膦酸
根据实施例1-步骤3中所述的方法、但使用来自上述步骤的3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸二乙酯制备3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸(1)。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。对3-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丙基膦酸(1)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ9.72(br，1H)，9.01(s，1H)，8.96(br，1H)，8.85(s，1H)，8.54(d，1H，J＝8.4Hz)，7.54(s，1H)，7.42(d，1H，J＝8.2Hz)，7.08(d，1H，J＝8.4Hz)，6.74(s，1H)，6.66(d，1H，J＝8.3Hz)，3.95(t，2H，J＝6.4Hz)，3.14(t，2H，J＝8.6Hz)，2.97(t，2H，J＝8.6Hz)，2.50(s，3H)，2.27(s，3H)，1.91-1.81(m，2H)，1.67-1.56(m，2H).LRMS[M+H]＝466.2
实施例3
(表1：化合物2)
磷酸单4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酯 (2)的合成
步骤1：磷酸4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基 苯基二苄基酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备磷酸4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯基二苄基酯，但使用商购氯磷酸二苄酯作为试剂。
步骤2：磷酸单4-(2-(5-氮基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲 基苯酯
在H2气囊中将磷酸4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯基二苄基酯(1.0当量)和10％Pd/C(按重量计20％当量)的MeOH(0.66M)溶液搅拌18小时。此时，使该反应混合物通过C盐垫，用2∶1 CHCl3∶MeOH混合物洗涤。用无水Na2SO4干燥合并的有机层，真空除去挥发性物质。通过反相-HPLC、使用20-90％0.5mM NH4OAc(在MeCN中)-10mM NH4OAc(在水中)梯度纯化得到的残余物，得到磷酸单4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酯(2)，为固体。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ9.69(br，1H)，9.33(s，1H)，9.03(s，1H)，8.87(s，1H)，8.54(d，1H，J＝8.4Hz)，7.51(s，1H)，7.42(d，1H，J＝9.4Hz)，7.22(s，1H)，7.17(d，1H，J＝8.3Hz)，7.10(s，1H)，6.97(s，1H)，6.92(d，1H，J＝6.1Hz)，3.15(t，2H，J＝6.8Hz)，3.00(t，2H，J＝6.8Hz)，2.50(s，3H)，2.29(s，3H).LRMS[M+H]＝424.1
实施例4
(表1：化合物3)
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基 膦酸(3)的合成
步骤1：4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)甲基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸二乙酯，但使用商购4-甲基苯磺酸(二乙氧基磷酰基)甲酯作为试剂。
步骤2：(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)甲基膦酸
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸(3)、但使用来自上述步骤的(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸二乙酯。对(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸(3)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ8.86(br，1H)，8.67(br，1H)，8.34(d，1H，J＝10.4Hz)，7.37(s，1H)，7.35(s，1H)，7.14(d，1H，J＝8.4Hz)，7.05(d，1H，J＝8.2Hz)，6.73(s，1H)，6.69(d，1H，J＝8.6Hz)，6.60(s，1H)，3.70-3.61(m，2H)，3.10(t，2H，J＝8.8Hz)，2.94(t，2H，J＝8.8Hz)，2.45(s，3H)，2.25(s，3H).LRMS[M+H]＝438.2
实施例5
(表1：化合物4)
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)-1，1-二氟戊基膦酸(4)的合成
步骤1：5-溴-1，1-二氟戊基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤1中所述的方法制备5-溴-1，1-二氟戊基膦酸二乙酯，但使用商购1，4-二溴丁烷作为试剂。
步骤2：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氨萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)-1，1-二氟戊基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟戊基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤的5-溴-1，1-二氟戊基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)-1，1-二氟戊基膦酸(4)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟戊基膦酸(4)、但使用来自步骤2的5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟戊基膦酸二乙酯。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。对5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟戊基膦酸(4)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ9.70(br，1H)，9.33(br，1H)，8.98(s，1H)，8.84(s，1H)，8.50(d，1H，J＝8.4Hz)，7.52(s，1H)，7.40(d，1H，J＝8.4Hz)，7.06(d，1H，J＝8.4Hz)，6.74(s，1H)，6.68(d，1H，J＝10.8Hz)，3.91(t，2H，J＝6.2Hz)，3.14(t，2H，J＝8.4Hz)，2.97(t，2H，J＝8.4Hz)，2.50(s，3H)，2.27(s，3H)，2.13-1.94(m，2H)，1.78-1.70(m，2H)，1.66-1.59(m，2H).LRMS[M+H]＝530.2
实施例6
(表1：化合物5)
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)-1，1-二氟丁基膦酸(5)的合成
步骤1：4-溴-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤1中所述的方法制备4-溴-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯，但使用商购1，3-二溴丙烷作为试剂。
步骤2：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤的4-溴-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)-1，1-二氟丁基膦酸(5)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟丁基膦酸(5)、但使用来自步骤2的4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。对4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟丁基膦酸(5)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ9.71(br，1H)，9.33(br，1H)，9.00(s，1H)，8.85(s，1H)，8.54(d，1H，J＝8.4Hz)，7.53(s，1H)，7.42(d，1H，J＝8.3Hz)，7.08(d，1H，J＝8.4Hz)，6.76(s，1H)，6.70(d，1H，J＝8.3Hz)，3.97(t，2H，J＝6.2Hz)，3.15(t，2H，J＝8.5Hz)，2.98(t，2H，J＝8.5Hz)，2.50(s，3H)，2.28(s，3H)，2.21-2.06(m，2H)，1.97-1.87(m，2H).LRMS[M+H]＝516.2
实施例7
(表1：化合物7)
3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基) 乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸(7)的合成
步骤1：3-(2-溴乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯
给烘干的圆底烧瓶中加入无水THF(1.07M)和二异丙基胺(2.0当量)。用丙酮-干冰浴冷却烧瓶，用正丁基锂(1.6当量)的环己烷溶液(1.52M)通过注射器以滴加方式处理。在添加完成时将烧瓶转入冰-水浴，搅拌30分钟。然后用干冰-丙酮浴冷却烧瓶，用二氟甲基膦酸二乙酯(1.0当量)的HMPA(1∶1v/v)溶液通过注射器处理。使搅拌进行1小时。向上述反应混合物中通过注射器快速加入冷却的1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(3.0当量)在THF(3M)中的溶液，将该反应体系再搅拌3小时，然后用1N HCl使反应停止。将烧瓶温至室温，用1N HCl将pH调整至＜4。用EtOAc(3x)提取该混合物。用无水Na2SO4干燥合并的有机提取物，真空浓缩。通过使用0-75％EtOAc的己烷溶液的Combiflash、然后是RP-HPLC(0.035％TFA的ACN溶液：0.05％TFA的H2O溶液，C18柱)纯化粗物质，得到3-(2-溴乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯，为淡黄色油状物。
步骤2：3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基 苯氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤的3-(2-溴乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基 苯氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸(7)、但使用来自上述步骤2的3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯。对3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸(7)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ8.83(s，1H)，8.69(s，1H)，8.35(d，1H，J＝8.3Hz)，7.36(s，1H)，7.26(br，2H)，7.16(d，1H，J＝8.3Hz)，7.07(d，1H，J＝8.4Hz)，6.75(s，1H)，6.66(d，1H，8.3J＝Hz)，4.00(t，2H，J＝4.4Hz)，3.67(t，2H，J＝6.7Hz)，3.08(t，2H，J＝6.8Hz)，2.94(t，2H，J＝6.8Hz)，2.44(s，3H)，2.25(s，3H)，2.22-2.09(m，2H).LRMS[M+H]＝546.2
实施例8
(表1：化合物8)
2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基) 甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸(8)的合成
步骤1：2-(4-(溴甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤1中所述的方法制备2-(4-(溴甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯，但使用商购1，4-双(溴甲基)苯作为试剂。
步骤2：2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氨萘-2-基)乙基)-3-甲基 苯氧基)甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤的2-(4-(溴甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基 苯氧基)甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸(8)、但使用来自上述步骤3的2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸二乙酯。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。对2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1，1-二氟乙基膦酸(8)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ9.71(br，1H)，9.35(br，1H)，9.01(s，1H)，8.86(s，1H)，8.54(d，1H，J＝8.4Hz)，7.53(s，1H)，7.44(d，1H)，7.40(s，1H)，7.38(s，1H)，7.29(d，1H，J＝8.0Hz)，7.24(s，1H)，7.11(s，1H)，7.09(s，1H)，6.99(s，1H)，6.85(s，1H)，6.76(d，1H，J＝8.3Hz)，5.04(s，2H)，3.84-3.73(m，2H)，3.15(t，2H，J＝8.5Hz)，2.99(t，2H，J＝8.5Hz)，2.50(s，3H)，2.29(s，3H).LRMS[M+H]＝578.2
实施例9
(表1：化合物9)
2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1，1-二氟 -2-氧代乙基膦酸(9)的合成
方案2
步骤1：5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-醛(2-2)
在室温向(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)甲醇(2-1)，1.0当量在DMSO(0.15M)中的溶液中加入IBX(1.5当量)。将该反应体系搅拌2.5小时，然后用水稀释。用2％MeOH/DCM(4x)提取水层。用无水MgSO4干燥合并的有机层，真空浓缩。通过系统(ISCO)、使用0-5％MeOH/DCM梯度纯化得到的残余物，得到5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-醛(2-2)，为固体。
步骤2：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8- 基)-1，1-二氟-2-羟基乙基膦酸二乙酯(2-3)
在-78℃在氮气气氛中向二氟甲基膦酸二乙酯(3.0当量)在THF(0.3M)中的溶液中滴加2M LDA(3.0当量，商品级)。将该反应体系在-78℃搅拌25分钟，缓慢加入5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-醛(2-2)(1.0当量)在THF(0.1M)中的溶液。将该反应体系在-78℃搅拌1小时、在0℃搅拌1小时、然后在30分钟内温至室温。用饱和氯化铵水溶液使反应停止，用乙酸乙酯提取2次。用盐水洗涤合并的有机层，用无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过系统(ISCO)、使用0-5％MeOH/DCM梯度纯化得到的残余物，得到2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1，1-二氟-2-羟基乙基膦酸二乙酯(2-3)，为固体。
步骤3：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氨萘-8- 基)-1，1-二氟-2-氧代乙基膦酸二乙酯(2-4)
向2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1，1-二氟-2-羟基乙基膦酸二乙酯(2-3)(1.0当量)在1∶1DMSO/乙酸乙酯(0.07M)中的溶液中加入IBX(1.5当量)。将该反应体系加热至80℃1小时，然后冷却至室温。用乙酸乙酯稀释该混合物并通过C盐过滤。用水(2x)、盐水洗涤滤液，用无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过系统(ISCO)、使用0-5％MeOH/DCM梯度纯化得到的残余物，得到2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1，1-二氟-2-氧代乙基膦酸二乙酯(2-4)，为固体。
步骤4：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8- 基)-1，1-二氟-2-氧代乙基膦酸(9)
在0℃向2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1，1-二氟-2-氧代乙基膦酸二乙酯(2-4)(1.0当量)在DCM(0.05M)中的溶液中加入TMSI(5.0当量)。将该反应体系在2小时内温至室温，再加入TMSI(2.5当量)。将该反应体系再搅拌30分钟，然后用少量水使反应停止。通过蒸发除去DCM，然后加入DMSO/水。将该混合物调整至pH 9，直接用应用C18柱的RP-HPLC纯化，用10-40％95∶5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)溶液梯度洗脱。合并包含产物的级分，真空浓缩，得到2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1，1-二氟-2-氧代乙基膦酸(9)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ8.82(s，1H)，8.5(br，1H)，8.44(s，1H)，8.2(br，1H)，7.98(d，1H，J＝8.2Hz)，7.2(br，2H)，7.05(d，1H，J＝8.3Hz)，6.73(s，1H)，6.67(d，1H，J＝8.3Hz)，3.70(s，3H)，2.99-2.87(m，4H)，2.25(s，3H).LRMS[M+H]＝502.2
实施例10
(表1：化合物10)
(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙烯 基膦酸(10)的合成
方案3
步骤1：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8- 基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)
在0℃向搅拌的NaH(1.2当量)在THF(0.1M)中的混悬液中加入亚甲基二膦酸四乙酯(1.3当量)在THF(0.21M)中的溶液。向得到的混合物中加入5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-醛(2-2)(实施例9-步骤1)(1.0当量)的THF(0.08M)溶液。将该反应体系在室温搅拌30分钟，然后真空除去溶剂，通过系统(ISCO)、使用0-5％MeOH/DCM梯度纯化得到的残余物，得到(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)，为无色固体。
步骤2：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8- 基)乙烯基膦酸(10)
在0℃向(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)(1.0当量)在DCM(0.095M)中的溶液中加入TMSBr(10当量)。将该反应体系在2小时内温至室温，然后用少量MeOH使反应停止。通过蒸发除去DCM，然后加入DMSO/水。将该混合物调整至pH 9，直接用应用C18柱的RP-HPLC纯化，用10-40％95∶5(MeCN/5mMNH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)溶液梯度洗脱。合并包含产物的级分，真空浓缩，得到(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙烯基膦酸(10)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ9.76(s，1H)，9.33(s，1H)，9.03(s，1H)，8.82(s，1H)，8.60(d，1H，J＝8.4Hz)，7.87(d，1H，J＝8.4Hz)，7.78(s，1H)，7.31(dd，1H，J＝17.6，21.6Hz)，7.03(d，1H，J＝8.4Hz)，6.69(m，2H)，6.61(dd，1H，J＝2.8，8.4Hz)，3.64(s，3H)，3.14-3.06(m，2H)，2.97-2.91(m，2H)，2.23(s，3H).LRMS[M+H]＝450.2
实施例11
(表1：化合物11)
2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙基膦 酸(11)的合成
步骤1：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基) 乙基膦酸二乙酯(3-3)
向(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙烯基膦酸二乙酯(3-1)(实施例10-步骤1)(1.0当量)在DCM(0.05M)和EtOH(0.08M)中的溶液中加入10％钯/碳(0.09当量)。给反应容器中加入氢气囊，在室温搅拌过夜。如通过LCMS监测的反应完成后，除去溶剂，通过系统(ISCO)、使用0-5％MeOH/DCM梯度纯化得到的残余物，得到2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙基膦酸二乙酯(3-3)。
步骤2：2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基) 乙基膦酸(11)
在0℃向2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙基膦酸二乙酯(3-3)(1.0当量)在DCM(0.02M)中的溶液中加入TMSBr(10当量)。将该反应体系在2小时内温至室温，然后用少量MeOH使反应停止。通过蒸发除去DCM，然后加入DMSO/水。将该混合物调整至pH 9，直接用应用C18柱的RP-HPLC纯化，用10-40％95∶5(MeCN/5mMNH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)溶液梯度洗脱。合并包含产物的级分，真空浓缩，得到2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)乙基膦酸(11)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ9.66(s，1H)，9.30(s，1H)，8.95(s，1H)，8.78(s，1H)，8.50(d，1H，J＝8.4Hz)，7.54(s，1H)，7.45(d，1H，J＝8.4Hz)，7.02(d，1H，J＝8.4Hz)，6.69(d，1H，J＝2.8Hz)，6.61(dd，1H，J＝2.8，8.4Hz)，3.64(s，3H)，3.14-3.06(m，2H)，3.00-2.90(m，4H)，2.22(s，3H)，2.02-1.92(m，2H).LRMS[M+H]＝452.2
实施例12
(表1：化合物12)
(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1- 氟乙烯基膦酸(12)的合成
步骤1：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8- 基)-1-氟乙烯基膦酸二乙酯(3-2)
在-78℃向冷却的搅拌的氟亚甲基二膦酸四乙酯(2.5当量)在THF(0.27M)中的溶液中加入LDA溶液(1.8M的乙苯/戊烷/己烷溶液，2.0当量)。将得到的反应混合物温至室温，搅拌30分钟，然后将其冷却回-78℃。加入5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-醛(2-2)(实施例9-步骤1)(1.0当量)在THF(0.18M)中的溶液，将该反应混合物缓慢温至室温。用饱和NH4Cl溶液使反应停止。用DCM(3x)提取水相。合并已合并的有机相，真空浓缩。通过系统(ISCO)、使用0-5％MeOH/DCM梯度纯化残余物，得到(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1-氟乙烯基膦酸二乙酯(3-2)，为无色固体。
步骤2：(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8- 基)-1-氟乙烯基膦酸(12)
在0℃向(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1-氟乙烯基膦酸二乙酯(3-2)(1.0当量)在DCM(0.05M)中的溶液中加入TMSBr(10当量)。将该反应体系在2小时内温至室温，然后用少量MeOH使反应停止。通过蒸发除去DCM，然后加入DMSO/水。将该混合物调整至pH 9，直接用应用C18柱的RP-HPLC纯化，用10-40％95∶5(MeCN/5mMNH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)溶液梯度洗脱。合并包含产物的级分，真空浓缩，得到(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)-1-氟乙烯基膦酸(12)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ9.80(s，1H)，9.41(s，1H)，9.05(s，1H)，8.87(s，1H)，8.65(d，1H，J＝8.8Hz)，8.08(s，1H)，7.76(d，1H，J＝8.4Hz)，7.08(d，1H，J＝8.4Hz)，7.02(d，1H，J＝8.4Hz)，6.83-6.65(m，2H)，3.69(s，3H)，3.18-3.12(m，2H)，3.02-2.96(m，4H)，2.28(s，3H).LRMS[M+H]＝468.1
实施例13
(表1：化合物13)
3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲 基)苯基膦酸(13)的合成
方案4
步骤1：2-(4-(3-碘苄氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5- 胺(4-1)
在22℃向4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酚(B-4)，1.0当量在二甲基甲酰胺(0.10M)中的溶液中加入碳酸铯(1.5当量)，将得到的混合物搅拌30分钟。此时，向该混合物中加入1-(溴甲基)-3-碘苯(1.5当量)。将该反应混合物在55℃搅拌18小时，此后用乙酸乙酯和水稀释。分离双相层，用水将有机层洗涤2次。用无水Na2SO4干燥有机层，真空除去挥发性物质。通过系统(ISCO)、使用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度纯化得到的残余物，得到2-(4-(3-碘苄氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(4-1)，为固体。
步骤2：3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)甲基)苯基膦酸(13)
向搅拌的2-(4-(3-碘苄氧基)-2-甲基苯乙基)-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-5-胺(1.0当量)在磷酸三乙酯(1.05当量)中的溶液中加入乙酸钯(0.08当量)。将得到的反应混合物在90℃加热过夜。将该反应体系冷却至室温后，在0℃将残余物溶于DCM(0.27M)，用TMSBr(11当量)处理。将该反应体在2小时内升温至室温，然后用少量MeOH使反应停止。通过蒸发除去DCM，然后加入DMSO/水。将该混合物调整至pH 9，直接用应用C18柱的RP-HPLC纯化，用10-40％95∶5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)溶液梯度洗脱。合并包含产物的级分，真空浓缩，得到3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸(13)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ8.84(s，1H)，8.72(s，1H)，8.35(d，1H，J＝8.4Hz)，7.67(d，1H，J＝12Hz)，7.60-7.54(m，1H)，7.30-7.20(m，2H)，7.15(d，1H，J＝8.4Hz)，7.11(d，1H，J＝8.4Hz)，7.04(s，1H)，6.84(s，1H)，6.77(m，1H)，4.99(s，2H)，3.12-2.92(m，4H)，2.44(s，3H)，2.27(s，3H).LRMS[M+H]＝514.2
实施例14
(表1：化合物14)
5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-羰基膦酸(14) 的合成
方案5
向搅拌的5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-醛(2-2)(实施例9-步骤1)(1.0当量)在甲苯(0.27M)中的溶液中加入亚磷酸三(三甲基甲硅烷基)酯(1.0当量)。将该反应体系在80℃搅拌60分钟，然后除去溶剂，将得到的残余物溶于DMSO(0.27M)，加入IBX(1.5当量)。将该反应体系在室温搅拌2.5小时，过滤，直接用应用C18柱的RP-HPLC纯化，用10-40％95∶5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)溶液梯度洗脱。合并包含产物的级分，真空浓缩，得到5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-羰基膦酸(14)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ9.84(s，1H)，9.35(s，1H)，9.09(s，1H)，8.89(s，1H)，8.76(d，1H，J＝8.4Hz)，8.60(s，1H)，8.19(d，1H，J＝8.8Hz)，7.04(d，J＝8.8Hz，1H)，6.70(d，1H，J＝2.8Hz)，6.62(dd，1H，J＝2.8，8.4Hz)，3.64(s，3H)，3.15-3.09(m，2H)，2.97-2.91(m，2H)，2.23(s，3H).LRMS[M+H]＝452.1
实施例15
(表1：化合物15)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦羧基丙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8- 基)丙酸(15)的合成
步骤1：3-(5-氨基-2-(4-(3-(二乙氧基磷酰基)丙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并 [f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸
根据实施例19-步骤11中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(4-(3-(二乙氧基磷酰基)丙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸，但使用商购3-溴丙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦羧基丙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二 氮萘-8-基)丙酸(15)
根据实施例19-步骤12中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦羧基丙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(15)、但使用来自上述步骤的3-(5-氨基-2-(4-(3-(二乙氧基磷酰基)丙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸。对3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦羧基丙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(15)得到的1H NMR(MeOD-d4)是：δ8.60(s，1H)，8.27(s，1H)，8.07(d，1H，J＝8.4Hz)，7.52(s，1H)，7.30(d，1H，J＝8.4Hz)，6.87(d，1H，J＝8.4Hz)，6.67(s，1H)，6.60(d，1H，J＝8.4Hz)，3.93(t，J＝6.4Hz，2H)，3.49-3.47(m，2H)，3.14-3.09(m，2H)，2.99-2.95(m，2H)，2.69-2.64(m，2H)，2.17(s，3H)，2.02-2.00(m，2H)，1.74-.66(m，2H).LRMS[M+H]＝524.2
实施例16
(表1：化合物16)
3-(5-氨基-2-(4-(4，4-二氟-4-膦羧基丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二 氮萘-8-基)丙酸(16)的合成
步骤1：4-溴-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤1中所述的方法制备4-溴-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯，但使用商购1，3-二溴丙烷作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(4-(4-(二乙氧基磷酰基)-4，4-二氟丁氧基)-2-甲基苯 乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸
根据实施例19-步骤11中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(4-(4-(二乙氧基磷酰基)-4，4-二氟丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸、但使用来自上述步骤1的4-溴-1，1-二氟丁基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(4-(4，4-二氟-4-膦羧基丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并 [f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(16)
根据实施例19-步骤12中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(4-(4，4-二氟-4-膦羧基丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(16)、但使用来自上述步骤2的3-(5-氨基-2-(4-(4-(二乙氧基磷酰基)-4，4-二氟丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸。对3-(5-氨基-2-(4-(4，4-二氟-4-膦羧基丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(16)得到的1HNMR(MeOD-d4)是：δ8.69(s，1H)，8.45(s，1H)，8.22(d，1H，J＝8.4Hz)，7.53(s，1H)，7.45(d，1H，J＝8.4Hz)，6.89(d，J＝8.4Hz，1H)，6.69(s，1H)，6.60(d，1H，J＝8.4Hz)，3.95(t，2H，J＝6.4Hz)，3.92-3.90(m，2H)，3.49-3.47(m，2H)，3.20-3.16(m，2H)，3.14-3.10(m，2H)，3.03-2.99(m，2H)，2.74-2.70(m，2H)，2.22(s，3H).LRMS[M+H]＝574.2
实施例17
(表1：化合物17)
3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基 苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(17)的合成
步骤1：3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[3-(二乙氧基磷酰基)-3，3-二氟丙氧基]乙 氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1，7-二氮萘-8-基)丙酸乙酯
根据实施例19-步骤11中所述的方法制备3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[3-(二乙氧基磷酰基)-3，3-二氟丙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1，7-二氮萘-8-基)丙酸乙酯、但使用1，1-二氟-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙基膦酸二乙酯(1-1)(实施例1-步骤1中所述)作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)乙氧 基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氨萘-8-基)丙酸(17)
根据实施例19-步骤12中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(17)、但使用来自上述步骤的3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[3-(二乙氧基磷酰基)-3，3-二氟丙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1，7-二氮萘-8-基)丙酸乙酯。对3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(17)得到的1H NMR((DMSO-d6)是：δ9.02(s，1H)，8.82(s，1H)，8.55(d，1H，J＝8.4Hz)，7.58(s，1H)，7.49(d，1H，J＝8.4Hz)，7.07(d，1H，J＝8.4Hz)，6.75(s，1H)，6.68(d，1H，J＝8.0Hz)，4.03-4.00(m，2H)，3.72-3.70(m，2H)，3.66-3.62(m，2H)，3.58-3.56(m，2H)，3.53-3.52(m，2H)，3.16-3.12(m，2H)，3.03-2.96(m，4H)，2.68-2.64(m，2H)，2.31-2.33(m，2H)，2.27(s，3H).LRMS[M+H]＝648.2
实施例18
(表1：化合物18)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基) 苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(18)的合成
步骤1：2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
根据实施例22-步骤1中所述的方法制备2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯，但使用商购1-碘-2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙烷作为试剂。
步骤2：3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基} 乙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1，7-二氮萘-8-基]丙酸乙酯
根据实施例19-步骤11中所述的方法制备3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1，7-二氮萘-8-基]丙酸乙酯、但使用来自上述步骤1的2-(2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基) 乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(18)
根据实施例19-步骤12中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(18)、但使用来自上述步骤2的3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1，7-二氮萘-8-基]丙酸乙酯。对3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(18)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ9.02(s，1H)，8.82(s，1H)，8.56(d，1H，J＝8.4Hz)，7.57(s，1H)，7.49(d，1H，J＝8.4Hz)，7.07(d，1H，J＝8.4Hz)，6.76(s，1H)，6.68(d，1H，J＝8.4Hz)，4.03-4.01(m，2H)，3.72-3.69(m，2H)，3.59-3.47(m，10H)，3.16-3.13(m，2H)，3.03-2.96(m，4H)，2.68-2.64(m，2H)，1.87-1.82(m，2H)，2.27(s，3H).LRMS[M+H]＝642.3
实施例19
(表1：化合物19)
3-(5-氨基-2-(4-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯 并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(19)的合成
方案6
步骤1：(E)-3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-氯苯基)丙烯酸乙酯(6-3)
向5-溴-2-氯苯基氨基甲酸叔丁酯(6-1)(1.0当量)在乙腈(0.3M)和EtOH(0.5M)中的溶液中加入K2CO3(2.0当量)。给该反应体系脱气，通N2，然后加入(E)-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)丙烯酸乙酯(6-2)(1.2当量)和Pd(PPh3)4(0.1当量)。再次给反应体系通N2，在100℃搅拌过夜。冷却至室温后，加入己烷，将该混合物通过二氧化硅垫过滤，用EA/Hex(1∶1)洗脱至完全洗脱产物。浓缩滤液，用Combiflash纯化，用0-15％EA的Hex溶液洗脱得到(E)-3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-氯苯基)丙烯酸乙酯(6-3)，为白色固体。
步骤2：3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-氯苯基)丙酸乙酯(6-4)
向(E)-3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-氯苯基)丙烯酸乙酯(6-3)(1.0当量)在乙酸乙酯/乙醇(1∶1，0.3M)中的溶液中加入威尔金森催化剂(0.10当量)。通过气囊导入氢气，将该反应体系在室温搅拌24小时。将该混合物通过C盐垫过滤，用二氯甲烷洗涤。真空浓缩滤液，通过Combiflash、使用0-10％乙酸乙酯的己烷溶液纯化，得到3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-氯苯基)丙酸乙酯(6-4)，为固体。
步骤3：3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷 -2-基)苯基)丙酸乙酯(6-5)
给3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-氯苯基)丙酸乙酯(6-4)(1.0当量)，4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧杂环戊硼烷)(2.0当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.05当量)、2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(0.20当量)和乙酸钾(2.0当量)在1，4-二烷(0.2M)中的溶液脱气，在100℃搅拌过夜。冷却至环境温度后，真空浓缩反应内含物。通过Combiflash、使用0-50％乙酸乙酯的己烷溶液纯化粗物质，得到3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸乙酯(6-5)，为棕色油状物。将产物贮存在-20℃，在合成的一个月内使用。
步骤4：1-溴-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-7)
在0℃向4-溴-3-甲基苯酚(6-6)(1.0当量)在DMF(0.5M)中的溶液中分批加入60％wt NaH(1.5当量)。控制添加，使得内部反应温度始终不高于10℃。将该反应体系在室温搅拌45分钟，然后通过加液漏斗滴加氯(甲氧基)甲烷(1.2当量)在DMF(3M)中的溶液。将该反应体系在室温搅拌3.5小时，然后通过倾入至冰中终止反应。将得到的混合物在室温搅拌1小时。加入醚，分离双层。用醚提取水层(1x)。用水(2x)、盐水洗涤合并的有机层，用MgSO4干燥，浓缩，得到1-溴-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-7)，为无色油状物。将粗物质不经进一步纯化用于下一步。
步骤5：三乙基((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)硅烷
给1-溴-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(1.0当量)、三乙胺(5.0当量)在DMF(0.5M)中的溶液脱气，通氮气。向反应体系中加入TES-乙炔(1.05当量)、CuI(0.098当量)和Pd(PPh3)2Cl2(0.098当量)。将该反应体系加热至60℃，搅拌过夜。冷却至室温后，加入水和醚。分离各层，用水(2x)洗涤有机层。分离有机层，通过二氧化硅垫(填充己烷)。用10％EA的Hex溶液洗脱二氧化硅。合并级分，浓缩，得到三乙基((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)硅烷，为黑色油状物。将粗物质不经进一步纯化用于下一步。
步骤6：1-乙炔基-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-8)
在0℃向三乙基((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)硅烷(1.0当量)中缓慢加入氟化四丁基铵(1M在THF中的溶液，0.20当量)。此时，除去冰浴，将该反应混合物在室温搅拌45分钟。然后使该反应混合物通过二氧化硅垫(填充己烷)，用20％EtOAc的己烷溶液洗脱，以除去不溶性盐。然后通过Combiflash，使用0-10％EtOAc的己烷溶液纯化粗产物，得到1-乙炔基-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-8)，为淡棕色液体。
步骤7：3-氯-5-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶 (6-10)
给1-乙炔基-4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯(6-8)(1.0当量)，3，5-二氯2-氰基吡啶(6-9)(0.90当量)、CuI(0.10当量)和Pd(PPh3)2Cl2(0.10当量)和三乙胺(5.0当量)在DMF(0.25M)中的溶液脱气，通氮气。然后将该反应混合物加热至60℃，搅拌过夜。冷却至室温后，加入水。用EA(2x)提取该混合物。用10％NH4OH水溶液(2x)、盐水洗涤合并的有机层，浓缩。使粗物质通过二氧化硅垫(用己烷湿润)过滤。用10％EA的Hex溶液洗脱二氧化硅。合并级分，浓缩。用热醚洗涤得到的固体，过滤，得到黄色固体，将其不经进一步纯化用于下一步。浓缩滤液，通过Combiflash使用0-10％EtOAc的己烷溶液纯化，得到3-氯-5-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶(6-10)，为黄色固体。
步骤8：3-(5-氨基-2-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-苯并[f][1，7] 二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-11)
给3-氯-5-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)2-氰基吡啶(6-10)(1.0当量)、3-(3-(叔丁氧羰基氨基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸乙酯(6-5)(1.25当量)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.10当量)、二环己基(2′，6′-二甲氧基联苯-2-基)膦(0.20当量)和碳酸氢钠(3.0当量)在正丁醇/H2O(5∶1，0.2M)中的溶液脱气，在100℃搅拌过夜。冷却至室温后，用乙酸乙酯和水稀释反应内含物。分离两相，用乙酸乙酯将水层提取2次。用盐水洗涤合并的有机层，用无水MgSO4干燥，真空浓缩。通过使用系统(ISCO)的快速色谱法、首先应用除去杂质的0-40％乙酸乙酯的DCM溶液、然后使用0-4％MeOH的DCM溶液纯化粗物质，得到3-(5-氨基-2-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-11)。通过沉淀和用热醚洗涤进行进一步纯化。
步骤9：3-(5-氨基-2-(4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮 萘-8-基)丙酸乙酯(6-12)
给3-(5-氨基-2-((4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯基)乙炔基)-苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-11)(1.0当量)在EtOH/THF(3∶1，0.16M)中的溶液通氮气。然后加入10％wt Pd/C(按重量计0.20当量)。给该反应体系通氢气(2x)，在氢气气囊中搅拌。24小时后，将该反应体系通过C盐垫过滤，用5％MeOH的DCM溶液洗涤。使用LCMS检查滤液中存在的原料。反复氢化反应，直到不再检测到有炔原料或烯中间体。通过Combiflash使用0-4％MeOH的DCM溶液纯化粗产物，得到3-(5-氨基-2-(4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-12)，为白色固体。
步骤10：3-(5-氨基-2-(4-羟基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙 酸乙酯(6-13)
将3-(5-氨基-2-(4-(甲氧基甲氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-12)(1.0当量)溶于EtOH(0.2M)，然后加入4M HCl的二烷溶液(0.2M)。产物作为黄色盐沉淀出来。搅拌3小时后，将该反应体系倾入搅拌的醚溶液。将该混合物搅拌10分钟，然后过滤，用醚洗涤。得到3-(5-氨基-2-(4-羟基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-13)，为黄色固体，真空干燥过夜(双-HCl盐)。备选地，通过Combiflash使用0-5％MeOH的DCM溶液纯化粗产物，得到游离碱。
步骤11：3-(5-氨基-2-(4-(2-(3-(二乙氧基磷酰基)-3，3-二氟丙氧基)乙氧 基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-15)
向溶于DMF(0.14M)的3-(5-氨基-2-(4-羟基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-13)(1.0当量)中加入3-(2-溴乙氧基)-1，1-二氟丙基膦酸二乙酯(6-14：描述在实施例7-步骤1中)(1.3当量)在DMF(0.7M)和碳酸铯(4当量)中的溶液。在60℃搅拌该反应体系。1.5小时(或直到通过LCMS检测反应完成)后，向反应体系中加入DCM(2体积当量)。过滤固体(无机物)，浓缩滤液。通过Combiflash使用0-5％MeOH的DCM溶液纯化粗产物得到3-(5-氨基-2-(4-(2-(3-(二乙氧基磷酰基)-3，3-二氟丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-15)，为油状物，在静置时变成白色固体。
步骤12：3-(5-氨基-2-(4-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯 乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(19)
在0℃向3-(5-氨基-2-(4-(2-(3-(二乙氧基磷酰基)-3，3-二氟丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸乙酯(6-15)(1.0当量)在DCM(0.16M)中的溶液中缓慢加入TMSBr(10当量)。将该反应体系在室温搅拌过夜。在0℃再加入TMSBr(5.0当量)，将该反应体系在室温再搅拌过夜。通过蒸发除去溶剂，用高度真空简短干燥粗的橙色固体。将该固体混悬于EtOH(0.5M)，加入2.5N NaOH(10.0当量)。将该反应体系在80℃搅拌3小时。冷却至室温后，将该混合物调整至pH 9-10，直接用RP-HPLC、应用C18柱纯化，用10-40％95∶5(MeCN/5mM NH4OAc)的10mM NH4OAc(pH 9)溶液梯度洗脱。合并包含产物的级分，真空浓缩。将得到的白色凝胶溶于回流的添加了若干滴氢氧化铵的1∶1EtOH/水(0.04M)。当热时，将该混合物缓慢倾入搅拌的在50℃预加热的丙酮热溶液(0.009M)。将丙酮混悬液缓慢冷却至室温15分钟，持续搅拌，然后置于冰浴中10分钟。过滤固体，依次用丙酮(2x)和醚(2x)洗涤。用高度真空干燥固体过夜，得到3-(5-氨基-2-(4-(2-(3，3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(19)，为固体。1H NMR(二甲亚砜-d6)：δ9.02(s，1H)，8.82(s，1H)，8.55(d，1H，J＝8.4Hz)，7.58(s，1H)，7.48(d，1H，J＝8.4Hz)，7.07(d，1H，J＝8.4Hz)，6.75(s，1H)，6.68(d，1H，J＝8.4Hz)，4.03-4.00(m，2H)，3.72-3.68(m，4H)，3.16-3.12(m，2H)，3.03-2.96(m，4H)，2.67-2.64(m，2H)，2.33-2.32(m，2H)，2.26(s，3H).LRMS[M+H]＝604.2
实施例20
(表1：化合物20)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基) 苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(20)的合成
步骤1：2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
给带有搅棒的微波试管中加入商购1，2-双(2-碘乙氧基)乙烷(1.0当量)和亚磷酸三乙酯(1.0当量)。封盖微管试管，然后在160℃在搅拌的同时照射40分钟。将该反应混合物冷却至室温，通过使用0-75％EtOAc的己烷溶液的Combiflash或通过RP-HPLC(0.035％TFA的ACN溶液：0.05％TFA的H2O溶液，C18柱)纯化，得到2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯，为淡黄色油状物。
步骤2：3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙 氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1，7-二氮萘-8-基)丙酸乙酯
根据实施例19-步骤11中所述的方法制备3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1，7-二氮萘-8-基)丙酸乙酯、但使用来自上述步骤1的2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯 乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(20)
根据实施例19-步骤12中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(20)、但使用来自上述步骤2的3-(5-氨基-2-{2-[4-(2-{2-[2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)-2-甲基苯基]乙基}苯并[f]1，7-二氮萘-8-基)丙酸乙酯。对3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(20)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ9.02(s，1H)，8.82(s，1H)，8.55(d，1H，J＝8.0Hz)，7.58(s，1H)，7.49(d，1H，J＝8.4Hz)，7.06(d，1H，J＝8.0Hz)，6.76(s，1H)，6.68(d，1H，J＝8.0Hz)，4.03-4.00(m，2H)，3.71-3.69(m，2H)，3.60-3.54(m，4H)，3.51-3.49(m，2H)，3.16-3.12(m，2H)，3.03-2.96(m，4H)，2.67-2.66(m，2H)，2.33-2.32(m，2H)，2.26(s，3H).LRMS[M+H]＝598.2
实施例21
(表1：化合物21)
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7] 二氮萘-8-基)丙酸(21)的合成
步骤1：2-(2-溴乙氧基)乙基膦酸二乙酯
根据实施例22-步骤1中所述的方法制备2-(2-溴乙氧基)乙基膦酸二乙酯，但使用商购1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷作为试剂。
步骤2：3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基 苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸
根据实施例19-步骤11中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸、但使用来自上述步骤1的2-(2-溴乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并 [f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(21)
根据实施例19-步骤12中所述的方法制备3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(21)，但使用来自上述步骤2的3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(二乙氧基磷酰基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸。对3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1，7]二氮萘-8-基)丙酸(21)得到的1HNMR(MeOD-d4)是：δ8.59(s，1H)，8.45(s，1H)，8.18(d，1H，J＝8.4Hz)，7.52(s，1H)，7.31(d，1H，J＝8.0Hz)，6.93(d，1H，J＝8.4Hz)，6.72(s，1H)，6.65(d，1H，J＝8.4Hz)，4.06-4.03(m，2H)，3.84-3.76(m，4H)，3.15-3.07(m，4H)，3.01-2.97(m，2H)，2.68-2.64(m，2H)，2.22(s，3H)，2.03-1.99(m，2H).LRMS[M+H]＝554.2
实施例22
(表1：化合物22)
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙 基膦酸(22)的合成
步骤1：2-溴乙基膦酸二乙酯
将商购1，2-二溴乙烷(1.0当量)和亚磷酸三乙酯(1.0当量)在160℃用微波辐射加热20分钟。通过反相高效液相色谱法(HPLC)(0.035％TFA的ACN溶液：0.05％TFA的H2O溶液，C18柱)纯化得到的残余物，得到2-溴乙基膦酸二乙酯，为无色液体。
步骤2：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)乙基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸二乙酯，但使用来自上述步骤1的2-溴乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)乙基膦酸(22)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸(22)、但使用来自上述步骤2的2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸二乙酯。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。对2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸(22)得到的1H NMR(二甲亚砜)是：δ8.83(s，1H)，8.71(s，1H)，8.35(d，1H，J＝8.3Hz)，7.35(s，1H)，7.15(d，1H，J＝9.6Hz)，7.08(d，1H，J＝8.4Hz)，7.06-7.03(br，2H)6.71(s，1H)，6.64(d，1H，J＝8.1Hz)，4.09-3.99(m，2H)，3.07(t，2H，J＝6.9)，2.93(t，2H，J＝6.7)，2.44(s，3H)，2.26(s，3H)，1.72-1.62(m，2H).LRMS[M+H]＝452.2
实施例23
(表1：化合物23)
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己 基膦酸(23)的合成
步骤1：6-溴己基膦酸二乙酯
根据实施例22-步骤1中所述的方法制备6-溴己基膦酸二乙酯，但使用商购1，6-二溴己烷作为试剂。
步骤2：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)己基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤1的6-溴己基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)己基膦酸(23)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸(23)、但使用6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸二乙酯。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。对6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸(23)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ8.95(s，1H)，8.81(s，1H)，8.50(d，1H，J＝8.4Hz)，7.52(s，1H)，7.40(d，1H，J＝8.4Hz)，7.01(d，1H，J＝8.4Hz)，6.71(s，1H)，6.64(d，1H，J＝10.9Hz)，3.87(t，2H，J＝6.34Hz)，3.13(t，2H，J＝7.1Hz)，2.96(t，2H，J＝7.0Hz)，2.69-2.66(m，1H)，2.35-2.32(m，1H)，2.25(s，2H)，1.72-1.62(m，2H)，1.62-1.51(m，2H)，1.51-1.40(m，2H).LRMS[M+H]＝508.2
实施例24
(表1：化合物24)
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)-1，1-二氟己基膦酸(24)的合成
步骤1：6-溴-1，1-二氟己基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤1中所述的方法制备6-溴-1，1-二氟己基膦酸二乙酯，但使用商购1，5-二溴戊烷作为试剂。
步骤2：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)-1，1-二氟己基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟己基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤1的6-溴-1，1-二氟己基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)-1，1-二氟己基膦酸(24)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟己基膦酸(24)、但使用来自上述步骤2的6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟己基膦酸二乙酯。将TFA加入到1H NMR样品中以增溶用于分析的化合物。对6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1，1-二氟己基膦酸(24)，得到的1H NMR(MeOD-d4)是：δ8.73(s，1H)，8.60(s，1H)，8.31(d，1H，J＝8.4Hz)，7.48(s，1H)，7.43(d，1H，J＝8.3Hz)，6.91(d，1H，J＝8.4Hz)，6.70(s，1H)，6.61(d，1H，J＝11.0Hz)，3.90(t，2H，J＝6.3Hz)，3.20(t，2H，J＝7.3Hz)，3.03(t，2H，J＝7.5Hz)，2.54(s，2H)，2.22(s，3H)，1.79-1.71(m，2H)，1.69-1.59(m，2H)，1.57-1.47(m，2H).LRMS[M+H]＝544.2
实施例25
(表1：化合物25)
4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲 基)苄基膦酸(25)的合成
步骤1：4-(溴甲基)苄基膦酸二乙酯
根据实施例22-步骤1中所述的方法制备4-(溴甲基)苄基膦酸二乙酯，但使用商购1，4-双(溴甲基)苯作为试剂。
步骤2：4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)甲基)苄基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤1的4-(溴甲基)苄基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)甲基)苄基膦酸(25)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸(25)、但使用来自上述步骤2的4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸二乙酯。对4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸(25)得到的1H NMR(MeOD-d4)是：δ8.72(s，1H)，8.58(s，1H)，8.30(d，1H，J＝8.4Hz)，7.48(s，1H)，7.42(d，1H，J＝9.5Hz)，7.36-7.30(m，4H)，6.93(d，1H，J＝8.4Hz)，6.78(s，1H)，6.67(d，1H，J＝8.4Hz)，4.98(s，2H)，3.96(s，2H)，3.20(t，2H，J＝7.2Hz)，3.04(t，2H，J＝7.2Hz)，2.54(s，3H)，2.23(s，3H).LRMS[M+H]＝528.2
实施例26
(表1：化合物26)
2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧 基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)的合成
步骤1：2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
根据实施例20-步骤1中所述的方法制备2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯。
步骤2：2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲 基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤1的2-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲 基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)、但使用来自上述步骤2的2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸二乙酯。对2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸(26)得到的1H NMR(MeOD-d4)是：δ8.73(s，1H)，8.66(s，1H)，8.38(d，1H，J＝8.4Hz)，7.52(s，1H)，7.47(d，1H，J＝8.3Hz)，7.36(s，1H)，6.93(d，1H，J＝8.4Hz)，6.75(s，2H)，6.64(d，1H，J＝10.8Hz)，4.09-4.06(m，2H)，3.80-3.76(m，2H)，3.69-3.64(m，2H)，3.64-3.59(m，2H)，3.53-3.49(m，2H)，3.25(t，2H，J＝7.0Hz)，3.09(t，2H，J＝7.5Hz)，2.58(s，3H)，2.28(s，3H)，2.13-2.01(m，2H).LRMS[M+H]＝540.2
实施例27
(表1：化合物27)
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊 基膦酸(27)的合成
步骤1：5-溴戊基膦酸二乙酯
根实施例22-步骤1据中所述的方法制备5-溴戊基膦酸二乙酯，但使用商购1，5-二溴戊烷作为试剂。
步骤2：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)戊基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤1的5-溴戊基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)戊基磷酸(27)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸(27)、但使用来自上述步骤2的5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸二乙酯。对5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)戊基膦酸(27)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ8.99(s，1H)，8.83(s，1H)，8.53(d，1H，J＝8.4Hz)，7.51(s，1H)，7.39(d，1H，J＝8.4Hz)，7.06(d，1H，J＝8.4Hz)，6.71(s，1H)，6.65(d，1H，J＝8.3Hz)，3.87(t，2H，J＝6.3Hz)，3.12(t，2H，J＝7.0Hz)，2.96(t，2H，J＝7.0Hz)，2.5(s，3H)，2.26(s，3H)，1.73-1.64(m，2H)，1.64-1.58(m，2H)，1.58-1.51(m，2H)，1.51-1.41(m，2H).LRMS[M+H]＝494.2
实施例28
(表1：化合物28)
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁 基膦酸的合成(28)
步骤1：4-溴丁基膦酸二乙酯
根据实施例22-步骤1中所述的方法制备4-溴丁基膦酸二乙酯，但使用商购1，4-二溴丁烷作为试剂。
步骤2：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)丁基膦酸二乙酯
根据实施例1-步骤2中所述的方法制备4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸二乙酯、但使用来自上述步骤1的4-溴丁基膦酸二乙酯作为试剂。
步骤3：4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯 氧基)丁基膦酸(28)
根据实施例1-步骤3中所述的方法制备4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸(28)、但使用来自上述步骤2的4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸二乙酯。对4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1，7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)丁基膦酸(28)得到的1H NMR(二甲亚砜-d6)是：δ8.93(s，1H)，8.79(s，1H)，8.48(d，1H，J＝8.3Hz)，7.51(s，1H)，7.37(d，1H，J＝8.5Hz)，7.04(d，1H，J＝8.4Hz)，6.71(s，1H)，6.63(d，1H，J＝8.3Hz)，3.89(t，2H，J＝6.09Hz)，3.12(t，2H，J＝6.8Hz)，2.96(t，2H，J＝6.9Hz)，2.47(s，3H)，2.34-2.31(m，2H)，2.24(s，3H)，1.80-1.67(m，4H)，1.67-1.61(m，2H).LRMS[M+H]＝480.2
根据上述方法制备的式(I)的化合物以及[M+H]数据和人TLR7 EC50(nM)数据在表1中列出。
表1
测定法
测定本文提供的式(I)的化合物以确定其调节Toll样受体7的能力。
人外周血单核细胞测定法
使用一组独立的正常人供体、根据经公共机构评审委员会批准的指导原则在人外周血测定法(人PBMC)中测试本文提供的式(I)的化合物的生物活性。使用Ficoll密度梯度(GE医疗保健17-1440-03)从新鲜的外周血中分离人PBMC。将30-35mLs外周人血置于50ml圆锥形试管内的15mLs Ficoll上，然后在室温以1800rpm离心(在试管槽上带有生物危害帽的Eppendorf离心机5810R)30分钟，无加速且无制动。然后采集棕黄层(buffy layers)，转移至新50ml圆锥形试管上，用由补充了10％热灭活胎牛血清(Gibco10099-141)、1％Pen-Strep(Gibco#15140-122)、1mM非必需氨基酸(Gibco#11140-050)、1mM丙酮酸钠(Gibco#11360-070)、2mM L-谷氨酰胺(Gibco#25030-081)和1mM HEPES(Gibco#15630-080)的RPMI 1640(来自Invitrogen Corporation，Carlsbad，California的11875085)组成的完全培养基洗涤2次。然后使用锥虫蓝染色计数活细胞，以2x105个细胞/孔在96孔平底培养板(Becton Dickinson#353070)的200μl总完全培养基体积上铺板。然后在100μM开始以10点剂量响应形式加入化合物，稀释3倍。阴性对照孔接受等浓度的DMSO。在37℃、5％ CO2 18-24小时温育后采集培养物上清液，在-20℃贮存至再使用为止。
使用Luminex试剂盒(Biorad)测定培养物上清液中的IL-6水平。使用来自GraphPad(San Diego，CA)的Prism软件进行数据分析。生成各化合物的剂量反应曲线，将EC50值测定为得到50％最大信号的浓度。
报道基因测定法
用人TLR7和NF-kB-驱动的萤光素酶报道载体(pNifty-Luciferase)稳定转染人胚肾293(HEK 293)细胞。作为对照测定，使用用pNifty-Luc转染的正常Hek293。在补充了2mM L-谷氨酰胺、10％热灭活的FBS、1％青霉素和链霉素、2μg/ml嘌呤霉素(InvivoGen #ant-pr-5)和5μg/ml杀稻瘟素(Invitrogen #46-1120)的DMEM中培养细胞。Bright-GloTM Luciferase测定缓冲液和底物由Promega #E263B和#E264B提供(分别为测定底物和缓冲液)。384孔澄清底培养板由Greiner bio-one(#789163-G)提供并且是定制的条形码培养板。
以25000个细胞/孔在384孔培养板的最终体积50μl培养基上将细胞铺板。在37℃和5％CO2培养过夜(18小时)后使细胞贴壁至板。然后将系列稀释的实验化合物和阳性对照化合物配入各孔，在37℃和5％CO2温育7小时。仅用DMSO刺激的细胞也用作阴性对照。温育后，根据制造商的说明将30μl的预混合物测定缓冲液和底物缓冲液加入到各孔中。用CLIPR机读取发光信号，积分时间为20秒/培养板。
生成各化合物的剂量反应曲线，将EC50值测定为得到50％最大信号的浓度。
一些测定结果
游离形式或药学可接受的盐形式的式(I)的多种化合物显示药理学特性，例如，正如通过在本申请中所述的体外试验所示的。将那些实验中的EC50值定为引起基线与最大应答之间的中间应答的所述测试化合物的浓度。在一些实施例中，式(I)的化合物具有1nM-100μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-50μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-25μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-20μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-15μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-10μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-5μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-2μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-1μM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-500nM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-250nM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-100nM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-50nM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-25nM的EC50值。在其他实施例中，式(I)的化合物具有1nM-10nM的EC50值。这种EC50值相对于设定为100％的瑞喹莫德的活性得到。
仅作为实例，一些式(I)化合物的TLR-7刺激的EC50如表1中所列。
具有含铝的佐剂的制剂
使用HPLC评价本文提供的式(I)的化合物与含铝的佐剂在pH 9和pH6.5的结合，以监测上清液中存在的式(I)的化合物。
在pH9的结合评价
将化合物1(0.5mg/mL)溶于10mM NaOH，加入到氢氧化铝佐剂(2mg/mL)中，得到100μg/剂量制品。用HPLC、在45℃、应用冲击梯度(10％CH3CN-0.1％TFA至100％CH3CN-0.1％TFA，2.5分钟内)在C18(50cmx4.6mm)ACE柱上评价上清液。为了评价上清液温度和温育时间对结合的影响，在1小时、5小时和24小时后在室温的上清液温度和37℃评价上清液。还评价了无氢氧化铝的对照。使用和不使用氢氧化铝在任一温度或温育时间的化合物1制品的HPLC色谱图显示当制品中包括氢氧化铝时上清液中不存在化合物1。图1显示就室温和37℃具有明矾的化合物1而言，以及仅就化合物1而言(对照)，如通过HPLC测定的上清液中化合物1的浓度。
将化合物5(1mg/mL)溶于10mM NaOH，加入到氢氧化铝佐剂(2mg/mL)中，得到100μg/剂量制品。用HPLC、在45℃、应用冲击梯度(10％CH3CN-0.1％TFA至100％CH3CN-0.1％TFA，2.5分钟内)在C18(50cmx4.6mm)ACE柱上评价上清液。为了评价上清液温度和温育时间对结合的影响，在1小时、5小时和24小时后在室温的上清液温度和37℃评价上清液。还评价了无氢氧化铝的对照。使用和不使用氢氧化铝在任一温度或温育时间的化合物5的制品的HPLC色谱图显示当制品中包括氢氧化铝时上清液中不存在化合物5。
在pH6.5的结合评价
将化合物1(0.5mg/mL)溶于10mM NaOH，加入到氢氧化铝佐剂(2mg/mL)中，得到100μg/剂量制品。使用HCl将该溶液的pH调整至pH 6.5。用HPLC、在45℃、应用冲击梯度(10％ CH3CN-0.1％TFA-100％CH3CN-0.1％TFA，2.5分钟内)在C18(50cmx4.6mm)ACE柱上评价上清液。为了评价上清液温度和温育时间对结合的影响，在1小时、5小时和24小时后在室温的上清液温度和37℃评价上清液。还评价了无氢氧化铝的对照。使用和不使用氢氧化铝在任一温度或温育时间的化合物1的制品的HPLC色谱图显示当制品中包括氢氧化铝时上清液中不存在化合物1。
在pH6.7的结合评价
将化合物5(1mg/mL)溶于10mM组氨酸缓冲液(1mg/mL)，加入到氢氧化铝佐剂(2mg/mL)中，得到100μg/剂量制品。用HPLC、在45℃、应用冲击梯度(10％ CH3CN-0.1％TFA-100％ CH3CN-0.1％TFA，2.5分钟内)在C18(50cmx4.6mm)ACE柱上评价上清液。为了评价上清液温度和温育时间对结合的影响，在1小时、5小时和24小时后在室温的上清液温度和37℃评价上清液。还评价了无氢氧化铝的对照。使用和不使用氢氧化铝在任一温度或温育时间的化合物5的制品的HPLC色谱图显示当制品中包括氢氧化铝时上清液中不存在化合物5。
在pH 9的结合评价(调节至pH9的组氨酸缓冲液)
有机溶剂提取法用于评价化合物1是否与氢氧化铝共价结合。如下制备制品：2mg/ml氢氧化铝、100μg/剂量化合物1、10mM组氨酸缓冲液)，将pH调整至9。还制备了不含氢氧化铝的对照制品。
将包含明矾的1ml制品与1ml KH2PO4 1M pH 9(0.5M终浓度，pH 9)混合，在37℃轻轻搅拌过夜，以使化合物1(化合物5)通过与磷酸盐阴离子的配体交换从氢氧化铝解吸。然后进行如下有机提取：将1ml各样品与1ml正丁醇混合，并涡旋。形成2相后，回收上部相(丁醇)，用N2干燥，重新混悬于MeOH/10mM NaOH。对制品上清液和丁醇提取的样品均进行HPLC分析(C18柱；0-100％B，2分钟内；A＝0.1％TFA的H2O溶液；B＝0.1％TFA的ACN溶液)。在用KH2PO4处理的制品上清液中观察到增加量的化合物1的量，显示化合物1被磷酸盐阴离子解吸。使用提取的样品观察到了相同的趋势。得到的数据如下表2中所示：
表2
对MenB抗原与氢氧化铝结合的影响
SDS PAGE用于评价化合物1结合氢氧化铝佐剂对MenB抗原结合氢氧化铝佐剂的能力的影响。将化合物1以0.5mg/ml的终浓度溶于10mM NaOH。在10mM组氨酸终浓度的存在下以1∶6(化合物1：明矾)重量比合并明矾和化合物1。将pH调整至9.2，在室温将该混合物轻轻搅拌3小时，使反应进行。以5000xg离心该混合物10分钟，弃去上清液。将沉淀(即化合物1修饰的明矾)重新混悬于最初的明矾缓冲液，得到起始的明矾浓度。将pH调整至6.5。然后将修饰的明矾用于具有MenB抗原的制剂。
仅用氢氧化铝佐剂(明矾)或用氢氧化铝佐剂与化合物1一起配制的MenB抗原上清液的SDS PAGE分析如图1中所示。所评价的MenB抗原是287-953、936-741和961c，这些抗原描述在WO2004/032958和Giuliani等人(2006)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103：10834-10839中。标记“Sn”和TCA”的泳道代表离心以沉淀氢氧化铝佐剂后制品上清液的分析。标记“Des”的泳道代表使用0.5M磷酸盐缓冲液从氢氧化铝中解吸后回收的抗原分析。图2显示使用化合物1与不使用化合物1得到的MenB抗原结合氢氧化铝同样有效。
还使用对上述化合物1所述的明矾制品评价了化合物16和化合物17与氢氧化铝的吸附。HPLC分析显示，就两种化合物而言，在添加氢氧化铝后上清液中未观察到化合物。然而，使用0.5M KH2PO4解吸后回收了化合物16和化合物17。注意因两种化合物的水溶性而无需有机溶剂提取。此外，如上所述进行在化合物16或化合物17的存在下的抗原结合的SDS PAGE分析。就两种化合物而言，全部3种MenB抗原完全吸附至化合物16修饰的明矾和吸附至化合物17修饰的明矾。
在10mM组氨酸缓冲液中结合明矾的评价
如下评价化合物6、16、17、19和20与氢氧化铝的吸附：向3个体积当量的氢氧化铝水溶液(2mg/mL)中加入1个体积当量的化合物的10mM pH6.8组氨酸缓冲液的溶液(4mg/mL)。用空白组氨酸缓冲液将得到的溶液稀释10倍至0.1mg/mL化合物终浓度。将稀释的溶液在37℃温育5小时。以14000rpm将样品离心10分钟以沉淀不溶物。然后在室温通过LC-MS/MS使用冲击梯度(5％CH3CN-0.5％甲酸至95％ CH3CN-1.0％甲酸，3.5分钟内)、使用Waters Atlantis dC18(50mmx2.1mm)柱、对以已知化合物浓度0.005-50μM制备的校准曲线评价上清液(以及内标)。将上清液中的浓度计算为与对照相比未结合明矾的％；将结合明矾的％计算为100％-％未结合。表3列举了所测试的相应化合物的结合％。
表3
可以理解，本文所述的实施例和实施方案仅仅是出于示例目的，关于其各种修饰或变化对于本领域的技术人员而言是显而易见的并且包括在本申请的精神和范围以及所附的权利要求的范围之内。本文所引用的全部公开物、专利和专利申请均引入作为参考，用于所有目的。

Claims (14)

1.式(I)的化合物或其药学可接受的盐：
其中：
R1是-L1R5、-L2R5、-L2R6、-OL2R5或-OL2R6；
L1是–C(O)-或–O-；
L2是C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基、亚苯基或-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L2的C1-C6亚烷基和C2-C6亚烯基任选被1－4个氟基团取代；
L3各自独立地选自C1-C6亚烷基和-((CR4R4)pO)q(CH2)p-，其中L3的C1-C6亚烷基被1－4个氟基团取代；
L4是亚苯基；
R2是H或C1-C4烷基；
R3选自–L3R5、-L1R5、-L3R7、-L3L4L3R7、-L3L4R5、-L3L4L3R5、-OL3R5、-OL3R7、-OL3L4R7、-OL3L4L3R7、-OL3L4R5和-OL3L4L3R5；
R4各自独立地选自H和氟；
R5是-P(O)(OH)2,
R6是–CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R7是–CF2P(O)(OH)2或-C(O)OH；
R8是H或C1-C4烷基；
p各自独立地选自1,2,3,4,5和6；且
q是1、2、3或4。
2.权利要求1的化合物，其中：
R1是–L2R6；
R2是C1-C4烷基；
R3是-OL3R5或-OL3R7；
R5是-P(O)(OH)2；
R6是-C(O)OH；
R7是–CF2P(O)(OH)2；
L2是C1-C6亚烷基；且
L3是被1－4个氟基团取代的C1-C6亚烷基。
3.权利要求1的化合物，其中：
R1是–L2R6；
R2是C1-C4烷基；
R3是-OL3R5或-OL3R7；
R5是-P(O)(OH)2；
R6是-C(O)OH；
R7是–CF2P(O)(OH)2；
L2是C1-C6亚烷基；
L3是-((CR4R4)pO)q(CH2)p-；
R4是H；
q是1或2；且
p是2。
4.权利要求1-3任一项的化合物,其中R2是甲基。
5.权利要求1的化合物，其中该化合物选自：
3-(5-氨基-2-(4-(4,4-二氟-4-膦羧基丁氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)丙酸；
3-(5-氨基-2-(4-(2-(3,3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)丙酸；
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)丙酸；
3-(5-氨基-2-(4-(2-(2-(3,3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基)乙氧基)-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)丙酸；和
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(2-(2-膦羧基乙氧基)乙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)丙酸。
6.选自以下的化合物：
4-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟丁基膦酸；
磷酸单4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯酯；
(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基膦酸；
5-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟戊基膦酸；
3-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)-1,1-二氟丙基膦酸；
2-(4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基)-1,1-二氟乙基膦酸；
2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)-1,1-二氟-2-氧代乙基膦酸；
(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)乙烯基膦酸；
2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)乙基膦酸；
(E)-2-(5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)-1-氟乙烯基膦酸；
3-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苯基膦酸；
5-氨基-2-(4-甲氧基-2-甲基苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-羰基膦酸；
3-(5-氨基-2-(2-甲基-4-(3-膦羧基丙氧基)苯乙基)苯并[f][1,7]二氮萘-8-基)丙酸；
2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙基膦酸；
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)己基膦酸；
6-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)-1,1-二氟己基膦酸；
4-((4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)甲基)苄基膦酸；
2-(2-(2-(4-(2-(5-氨基-8-甲基苯并[f][1,7]二氮萘-2-基)乙基)-3-甲基苯氧基)乙氧基)乙氧基)乙基膦酸；
3-[5-氨基-2-(2-{4-[2-(3,3-二氟-3-膦羧基丙氧基)乙氧基]-2-甲基苯基}乙基)苯并[f]1,7-二氮萘-8-基]丙酸；
{5-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1,7-二氮萘-2-基}乙基)-3-甲基苯氧基]戊基}膦酸；和
{4-[4-(2-{5-氨基-8-甲基苯并[f]1,7-二氮萘-2-基}乙基)-3-甲基苯氧基]丁基}膦酸。
7.药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1-6任一项的化合物和药学可接受的载体。
8.治疗具有与TLR7受体活性相关的疾病或病症的患者的药物，其中所述药物包含治疗有效量的权利要求1-6任一项的化合物，且其中式(I)的化合物是TLR7受体激动剂。
9.权利要求1-6任一项的化合物的用途，用于制备治疗涉及调节TLR7受体的患者的疾病的药物。
10.权利要求9的用途，其中所述疾病是传染病、炎性疾病、呼吸系统疾病、皮肤病或自身免疫性疾病。
11.权利要求10的用途，其中所述疾病是哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、支气管炎、皮炎、光化性角化病、基层细胞癌、过敏性鼻炎、银屑病、硬皮病、荨麻疹、类风湿性关节炎、多发性硬化、癌症、乳腺癌、HIV或狼疮。
12.药物组合物，包含权利要求1-6任一项的化合物、含有铝的佐剂、抗原和药学可接受的载体。
13.权利要求12的药物组合物，其中化合物结合至包含铝的佐剂。
14.权利要求12的药物组合物，其中包含铝的佐剂选自氢氧化铝、羟基氧化铝和羟基磷酸铝。
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