EA031379B1 - Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний - Google Patents

Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний Download PDF

Info

Publication number
EA031379B1
EA031379B1 EA201501033A EA201501033A EA031379B1 EA 031379 B1 EA031379 B1 EA 031379B1 EA 201501033 A EA201501033 A EA 201501033A EA 201501033 A EA201501033 A EA 201501033A EA 031379 B1 EA031379 B1 EA 031379B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
amino
alkyl
formula
thio
thia
Prior art date
Application number
EA201501033A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201501033A1 (ru
Inventor
Том Яо-Сян У
Ефэн Цзоу
Тимоти З. Хоффман
Цзяньфэн Пань
Original Assignee
Новартис Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новартис Аг filed Critical Новартис Аг
Publication of EA201501033A1 publication Critical patent/EA201501033A1/ru
Publication of EA031379B1 publication Critical patent/EA031379B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid, pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-aminoacids, e.g. alanine, edetic acids [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08—Bronchodilators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
    • C07F9/38—Phosphonic acids RP(=O)(OH)2; Thiophosphonic acids, i.e. RP(=X)(XH)2 (X = S, Se)
    • C07F9/3804—Phosphonic acids RP(=O)(OH)2; Thiophosphonic acids, i.e. RP(=X)(XH)2 (X = S, Se) not used, see subgroups
    • C07F9/3808—Acyclic saturated acids which can have further substituents on alkyl
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0606—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing heteroatoms not provided for by C07K5/06086 - C07K5/06139, e.g. Ser, Met, Cys, Thr
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/02—Systems containing only non-condensed rings with a three-membered ring

Abstract

Описан новый класс соединений формулы (I), таких как липопептиды типа Pam3CSK4, иммуногенные композиции и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения, и способы применения таких соединений для лечения или предупреждения заболеваний или нарушений, ассоциированных с Толл-подобными рецепторами типа 2. Согласно одному из объектов изобретения соединения можно применять в качестве адъювантов для повышения эффективности вакцины.

Description

Изобретение относится также к соединениям, фармацевтическим композициям и способам, предназначенным для лечения заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2.
Указанные в настоящем описании агонисты TLR2 представляют собой соединения, которые имеют структуру, которая описывается формулой (I), и их фармацевтически приемлемые соли, фармацевтически приемлемые сольваты (например, гидраты), производные, представляющие собой N-оксиды, производные, представляющие собой пролекарства, защищенные производные, индивидуальные изомеры и смеси изомеров
в которой
R1 обозначает Н, -С(О)-С7-С18алкил или -С(О)-С1-С6алкил;
R2 обозначает С7-С18алкил;
R3 обозначает С7-С18алкил;
L1 обозначает -СН2ОС(О)-, -СН2О- или -CH2NR7C(O)-;
- 17 031379
L2 обозначает -ОС(О)-, -О- или -NR7C(O)-;
R4 обозначает -L3R5 или -L4R5;
R5 обозначает -P(O)(OR7)2, -NR7C(O)L3R8, -NR7C(O)L4R8, -OL3R6, -C(O)NR7L3R8, -C(O)NR7L4R8, -OS(O)2OR7, С1-С6алкил, С6арил, С10арил, С14арил, 5-14-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, С3-С8циклоалкил или 5-6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, где арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклоалкил, каждый, является необязательно замещенным 1-3 заместителями, независимо друг от друга выбранными из -OR9, -OL3R6, -OL4R6, -OR7 и -C(O)OR7;
L3 обозначает ^-С^алкилен, который необязательно замещен 1-4 R6-группами, или ^-С^алкилен, замещенный 2 Ci -С6алкильными группами на одном и том же атоме углерода, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p- или -(CR11R11)((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-, где R11, каждый, обозначает С1-С6алкильные группы, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
R6, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, Q-Сбалкил, C1С6алкил, замещенный 1-2 гидроксильными группами, -OR7, -N(R7)2, -C(O)N(R7)2, -P(O)(OR7)2, С6арил, С10арил и С14арил;
R7, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и Ci-Салкила;
R8 выбран из -SR7, -P(O)(OR7)2 и 5-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1-3 гетероатома, которые выбраны из О и N;
R9 обозначает фенил;
R10, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и галогена;
р, каждый независимо друг от друга, выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) представляют собой соединения, которые имеют структуру, представленную в формуле (II)
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) представляют собой соединения, которые имеют структуру, представленную в формуле (III)
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) представляют собой соединения, которые имеют структуру, представленную в формуле (IV)
э формулы (IV).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) представляют собой соединения, которые имеют структуру, представленную в формуле (V)
- 18 031379
формула (V).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) представляют собой соединения, которые имеют структуру, представленную в формуле (VI)
R> °Y^R3 I η
Κι формула (VI).
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R1 обозначает Н. В других вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R1 обозначает -С(О)-С15алкил. В других вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R1 обозначает -С(О)-С10-С18алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), L1 обозначает -СН2ОС(О)- и L2 обозначает -ОС(О)-, -О-, -NR7C(O)- или -OC(O)NR7-; или L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -ОС(О)-, -О-, -NR7C(O)- или -OC(O)NR7-; или L1 обозначает -CH2NR7C(O)- и L2 обозначает -ОС(О)-, -О-, -NR7C(O)- или -OC(O)NR7-; или L1 обозначает -CH2OC(O)NR7- и L2 обозначает -ОС(О)-, -О-, NR7C(O)- или -OC(O)NR7-.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), L1 обозначает -СН2ОС(О)- и L2 обозначает -ОС(О)-. В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -О-. В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), L1 обозначает - СН2О- и L2 обозначает -NR7C(O)-. В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), L1 обозначает -CH2OC(O)NR7- и L2 обозначает -OC(O)NR7-. В других вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), L1 обозначает -CH2NR7C(O)- и L2 обозначает -NR7C(O)-.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R2 обозначает С10С18алкил. В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R3 обозначает С10С18алкил. В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R2 обозначает -С11алкил и R3 обозначает -С11алкил; или R2 обозначает -С16алкил и R3 обозначает -С16алкил; или R2 обозначает -С16алкил и R3 обозначает -С11алкил; или R2 обозначает -С12алкил и R3 обозначает -С12алкил; или R2 обозначает -С7алкил и R3 обозначает -С7алкил; или R2 обозначает -С9алкил и R3 обозначает -С9алкил; или R2 обозначает -С8алкил и R3 обозначает -С8алкил; или R2 обозначает -С13алкил и R3 обозначает -С13алкил; или R2 обозначает -С12алкил и R3 обозначает -С11 алкил; или R2 обозначает -С12алкил и R3 обозначает С12алкил; или R2 обозначает -С10алкил и R3 обозначает -С10алкил; или R2 обозначает -С15алкил и R3 обозначает -С15алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R2 обозначает -С11алкил и R3 обозначает -С11 алкил.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R5 обозначает -NH2, -N(CH2CH3)2, -ОН, -ОСН3, -Р(О)(ОН)2, -С(О)ОН, -NHC(O)L3R8, -S(O)2OH, -OS(O)2OH, -OL3R6, -C(O)NHL/|R8 или -C(O)NHL3R8. В других вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R5 обозначает -NH2, -N(CH2CH3)2, -ОН, -ОСН3, -Р(О)(ОН)2, -С(О)ОН, -NHC(O)L3R8, -S(O)2OH, -OS(O)2OH и -OL3R6.
- 19 031379
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R5 обозначает -NH2, -N(CH2CH3)2, -ОН, -ОСН3, -Р(О)(ОН)2, -С(О)ОН, -NHC(O)L3R8, -OL3R6, -C(O)NHL4R8 или -C(O)NHL3R8.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R5 обозначает -NH2, -ОН, -Р(О)(ОН)2, -С(О)ОН, -NHC(O)L3R8, -OL3R6 или -C(O)NHL3R8. В других вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R5 обозначает С1-С6алкил, фенил, пиридинил, имидазолил или морфолинил, каждый из которых необязательно замещен i-3 заместителями, независимо друг от друга выбранными из -OR9, -OL3R6, -OL4R6, -ОН и -С(О)ОН.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R8 выбран из группы, включающей -SH, -С(О)ОН, -Р(О)(ОН)2 и 5-6-членный гетероциклоалкил, который содержит i-2 гетероатома, выбранных из О. В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R8 выбран из группы, включающей -SH, -С(О)ОН и 5-6-членный гетероциклоалкил, который содержит i-2 гетероатома, выбранных из О.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), L3 обозначает Сг С10алкилен, где С1-С10алкилен, представляющий собой L3, необязательно замещен 1-4 R6-группами.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-, R10, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и F; р, каждый независимо друг от друга, выбран из 2, 3 и 4 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R6, каждый независимо друг от друга, выбран из С1-С6алкила, -ОН, -NH2, -C(O)NH2, -P(O)(OH)2 и фенила.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R6, каждый независимо друг от друга, выбран из метила, этила, изопропила, изобутила, -СН2ОН, -ОН, -F, -NH2, -С(О)ОН, -C(O)NH2, -P(O)(OH)2 и фенила.
В конкретных вариантах указанных соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (I), формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI), R7, каждый независимо друг от друга, выбран из Н, метила и этила.
В указанных вариантах соединений, которые имеют структуру, представленную в формуле (II), формуле (III), формуле (IV), формуле (V) и формуле (VI),
R1 обозначает Н, -С(О)-С7-С18алкил или -С(О)-С1-С6алкил;
R2 обозначает С7-С18алкил;
R3 обозначает С7-С18алкил;
L1 обозначает -СН2ОС(О)-, -СН2О- или -CH2NR7C(O)-;
L2 обозначает -ОС(О)-, -О- или -NR7C(O)-;
R4 обозначает -L3R5 или -L4R5;
R5 обозначает -P(O)(OR7)2, -NR7C(O)L3R8, -NR7C(O)L4R8, -OL3R6, -C(O)NR7L3R8, -C(O)NR7L4R8, -OS(O)2OR7, С1-С6алкил, С6арил, С10арил, С14арил, 5-14-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, С3-С8циклоалкил или 5-6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, где арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклоалкил, каждый, является необязательно замещенным 1-3 заместителями, независимо друг от друга выбранными из -OR9, -OL3R6, -OL4R6, -OR7 и -C(O)OR7;
L3 обозначает С1-С10алкилен, который необязательно замещен 1-4 R6-группами, или С1-С10алкилен, замещенный 2 С1 -С6алкильными группами на одном и том же атоме углерода, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p- или -(CR11R11)((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-, где R11, каждый, обозначает С1-С6алкильные группы, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
R6, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С1-С6алкил, С1С6алкил, замещенный 1-2 гидроксильными группами, -OR7, -N(R7)2, -C(O)N(R7)2, -P(O)(OR7)2, С6арил, С10арил и С14арил;
R7, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и С1-С6алкила;
R8 выбран из -SR7, -P(O)(OR7)2 и 5-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1-3 гетероатома, которые выбраны из О и N;
R9 обозначает фенил;
R10, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и галогена;
- 20 031379 р, каждый независимо друг от друга, выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
В конкретных вариантах соединений формул (I)-(V) R5 обозначает -Р(О)(О-Х+)2 или -Р(О)(О-)2Х2+; где Х+ и Х2+ обозначают фармацевтически приемлемые катионы. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные фармацевтически приемлемые катионы выбраны из натрия, калия, кальция, цинка и магния.
В конкретных вариантах соединений формулы (I) R5 обозначает -РО3-Х3+; где Х3+ обозначает Al3+.
Содержащие алюминий адъюванты, такие как гидроксид алюминия, оксигидроксид алюминия и гидроксифосфат алюминия, применяют в вакцинах для связывания антигенов. Обсуждение содержащих алюминий адъювантов и их применение в вакцинах представлено в Expert Rev. Vaccines, 46(5), 2007, сс. 685-698 и Vaccines, 25, 2007, сс. 6618-6624, описание которых полностью включено в настоящее описание в качестве ссылки.
В конкретном варианте осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, являются агонистами TLR2, которые связаны с содержащими алюминий адъювантами, такими как (но не ограничиваясь только ими) гидроксид алюминия, оксигидроксид алюминия и гидроксифосфат алюминия. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные соединения формулы (I) содержат фосфат, фосфоновую кислоту, фосфонат, фторированную фосфоновую или фторированную фосфонатную группу. В других вариантах осуществления изобретения указанные соединения формулы (I) содержат фосфат, фосфоновую кислоту, фосфонат, фторированную фосфоновую кислоту или фторированную фосфонатную группу и одну или несколько дополнительных ионизируемых групп из карбоновой кислоты и сульфата.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, объединяют с антигеном, содержащим алюминий адъювантом и необязательно с носителем, фармацевтически приемлемым эксципиентом с получением иммуногенной композиции. В других вариантах осуществления изобретения указанная иммуногенная композиция содержит соединение формулы (I) и антиген, где антиген представляет собой (но не ограничиваясь только ими) бактериальный антиген, вирусный антиген, грибной антиген, опухолевый антиген или антиген, ассоциированный с З1ПП1 (заболевание, передающееся половым путем), болезнью Альцгеймера, респираторными нарушениями, аутоиммунными нарушениями, такими, например, как (но не ограничиваясь только ими) ревматоидный артрит или обыкновенная волчанка, педиатрическими нарушениями и ожирением, и где количество соединения представляет собой количество, эффективное в отношении усиления иммунного ответа на антиген у индивидуума, которому вводят композицию. Приемлемые для применения в указанных иммуногенных композициях антигены представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции содержат бактериальный антиген из штамма Neisseria meningitides, например, серогруппы А, С, W135, Y и/или В. Конкретные антигены, предназначенные для применения в указанных композициях, представлены в настоящем описании. В других вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции и другие представленные в настоящем описании композиции применяют в качестве вакцин; их применение для лечения нарушений, ассоциированных с входящим в композицию антигеном, представ лено в настоящем описании.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают все приемлемые изотопные вариации указанных соединений и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, N-оксидов, пролекарств и изомеров и фармацевтических композиций. Под изотопной вариацией соединения, представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли подразумевают соединение, в котором по меньшей мере один атом заменен на атом, который имеет такое же атомное число, но атомная масса которого отличается от атомной массы, обычно встречающейся в естественных условиях. Примерами изотопов, которые можно включать в соединения, представленные в настоящем описании, и их фармацевтически приемлемые соли, являются (но не ограничиваясь только ими) изотопы водорода, углерода, азота и кислорода, такие как 2Н, 3Н, С. 13С, 14С, 15N, 17O, 18O, 35S, 18F, 36Cl и 123I. Определенные изотопные вариации соединений, представленных в настоящем описании, и их фармацевтически приемлемых солей, например, в которые включен радиоактивный изотоп, такой как 3Н или 14С, можно применять в качестве лекарственного средства и/или субстрата в опытах по изучению распределения в тканях. В конкретных примерах можно применять изотопы 3Н и 14С благодаря легкости их получения и простоты выявления. В других примерах замена на изотопы, такие как 2Н, может обеспечивать определенные терапевтические преимущества в результате более высокой метаболической стабильности, например, удлиненное время полужизни in vivo или пониженные требуемые дозы. Изотопные вариации соединений и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, N-оксидов, пролекарств и изомеров и фармацетических композиций, представленных в настоящем описании, получают общепринятыми методами с использованием соответствующих изотопных вариаций приемлемых реагентов.
Способы получения соединений формулы (I)
Общие процедуры получения соединений формулы (I) описаны ниже в примерах. В описанных ре
- 21 031379 акциях реактивные функциональные группы, например гидроксигруппу, аминогруппу, иминогруппу, тиогруппу или карбоксигруппу, если они должны присутствовать в конечном продукте, можно защищать, препятствуя тем самым их нежелательному участию в реакциях. Можно использовать общепринятые защитные группы согласно стандартной практике (см., например, T.W. Greene и P.G.M. Wuts в Protective Groups in Organic Chemistry, изд-во John Wiley and Sons, 1991).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, получают в виде фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли путем взаимодействия соединения формулы (I) в форме свободного основания с фармацевтически приемлемой органической кислотой или неорганической кислотой. В других вариантах осуществления изобретения получают фармацевтически приемлемую соль присоединения основания соединений формулы (I), представленных в настоящем описании, путем взаимодействия соединения формулы (I) в форме свободной кислоты с фармацевтически приемлемым органическим основанием или неорганическим основанием. В альтернативном варианте соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, в форме солей получают, используя соли исходных продуктов или промежуточных продуктов. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, находятся в форме других солей, включая (но не ограничиваясь только ими) оксалаты и трифторацетаты. В конкретных вариантах осуществления изобретения образуются полусоли кислот и оснований, например полусульфат и полукальциевые соли.
Указанные фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли соединений формулы (I) включают (но не ограничиваясь только ими) такие соли, как гидробромид, гидрохлорид, сульфат, нитрат, сукцинат, малеат, формиат, ацетат, адипат, безилат, бикарбонат/карбонат, пропионат, фумарат, цитрат, тартрат, лактат, бензоат, салицилат, глутамат, аспартат, паратолуолсульфонат, бензолсульфонат, метансульфонат, этансульфонат, нафталинсульфонат (например, 2-нафталинсульфонат), соль гексаноат, бисульфат/сульфат, борат, камсилат, цикламат, эдизилат, эзилат, глюцептат, глюконат, глюкуронат, гексафторфосфат, гибензат, гидрохлорид/хлорид, гидробромид/бромид, гидройодит/йодит, изетионат, лактат, малат, малонат, мезилат, метилсульфат, нафтилат, 2-напзилат, никотинат, оротат, оксалат, пальмитат, памоат, фосфат/вторичный кислый фосфат/первичный кислый фосфат, пироглутамат, сахарат, стеарат, таннат, тозизилат, трифторацетат и ксинафоат.
Органические или неорганические соли, которые можно применять для получения определенных фармацевтически приемлемых солей соединений формулы (I), включают (но не ограничиваясь только ими) бромисто-водородную, соляную, серную, азотную, фосфорную, янтарную, малеиновую, муравьиную, уксусную, пропионовую, фумаровую, лимонную, винную, молочную, бензойную, салициловую, глутаминовую, аспарагиновую, паратолуолсульфоновую, бензолсульфоновую, метансульфоновую, этансульфоновую, нафталинсульфоновую, например 2-нафталинсульфоновую, или капроновую кислоту.
Указанные фармацевтически приемлемые соли присоединения оснований соединений формулы (I) включают (но не ограничиваясь только ими) соли алюминия, аргинана, бензатина, кальция, холина, диэтиламина, диоламина, глицина, лизина, магния, меглумина, оламина, калия, натрия, трометамина и цинка.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, в форме свободной кислоты или свободного основания получают из соответствующей соли присоединения основания или кислотно-аддитивной соли соответственно. Например, соединение формулы (I) в форме кислотно-аддитивной соли превращают в соответствующее свободное основание путем обработки приемлемым основанием (например, (но не ограничиваясь только ими), раствором гидроксида аммония, гидроксида натрия и т.п.). Например, соединение формулы (I) в форме соли присоединения основания превращают в соответствующую свободную кислоту путем обработки приемлемой кислотой (например, (но не ограничиваясь только ею) соляной кислотой).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) в неокисленной форме получают из N-оксидов соединений формулы (I) путем обработки восстановителем (например (но не ограничиваясь только ими), серой, диоксидом серы, трифенилфосфином, борогидридом лития, борогидридом натрия, трихлоридом фосфора, трибромидом фосфора или т.п.) в приемлемом инертном органическом растворителе (например (но не ограничиваясь только ими), в ацетонитриле, этаноле, водном диоксане или т.п.) при температуре от 0 до 80°С.
В конкретных вариантах осуществления изобретения производные соединений формулы (I) в виде пролекарств получают с помощью методов, хорошо известных обычным специалистам в данной области (например, см. более подробное описание у Saulnier и др., Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, т. 4, 1994, с. 1985). Например, приемлемые пролекарства получают путем взаимодействия недериватизированного соединения формулы (I) с приемлемым карбамилирующим агентом (например, (но не ограничиваясь только ими), 1,1-ацилоксиалкилкарбанохлоридатом, паранитрофенилкарбонатом или т.п.).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают в виде защищенных производных с помощью методов, известных обычным специалистам в данной области. Подробное описания методик, пригодных для создания защитных групп и их удаления, представлено у TW. Greene, Protecting Groups in Organic Chemistry, 3-е изд., изд-во John Wiley и Sons, Inc., 1999 г.
- 22 031379
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают или они образуются в виде сольватов (например, гидратов). В конкретных вариантах осуществления изобретения гидраты соединений формулы (I) получают путем перекристаллизации из смеси водных/органических растворителей, используя такие органические растворители, как диоксин, тетрагидрофуран или метанол.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают в виде их индивидуальных стереоизомеров. В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, получают в виде индивидуальных стереоизомеров путем взаимодействия рацемической смеси соединения с оптически активным разделяющим агентом с получением пары диастереоизомерных соединений, разделения диастереомеров и выделения оптически чистых энантиомеров. В конкретных вариантах осуществления изобретения разделение энантиомеров осуществляют с помощью ковалентных диастереомерных производных соединений формулы (I) или с использованием диссоциируемых комплексов (например, кристаллических диастереомерных солей). Диастереомеры обладают различными физическими свойствами (например, температурой плавления, температурой кипения, растворимостью, реактивностью и т.д.) и их легко разделять на основе указанных различий. В конкретных вариантах осуществления изобретения диастереомеры разделяют с помощью хроматографии или методов разделения /обратного растворения на основе различий в растворимости. Затем оптически чистый энантиомер выделяют вместе с разделяющим агентом с помощью любых применяемых на практике средств, которые не приводят к рацемизации. Более подробное описание методик, которые можно применять для разделения стереоизомеров соединений из их рацемической смеси, см. у Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, Enantiomers, Racemates and Resolutions, изд-во John Wiley And Sons, Inc., 1981 г.
Соединения формулы (I) получают с помощью процессов, представленных в настоящем описании и проиллюстрированных в примерах. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) получают следующим образом:
(а) необязательно превращают соединение формулы (I) в фармацевтически приемлемую соль;
(б) необязательно превращают соль соединения формулы (I) в несолевую форму;
(в) необязательно превращают неокисленную форму соединения формулы (I) в фармацевтически приемлемый N-оксид;
(г) необязательно превращают N-оксид соединения формулы (I) в его неокисленную форму;
(д) необязательно разделяют и выделяют индивидуальный изомер соединения формулы (I) из смеси изомеров;
(е) необязательно превращают недериватизированное соединение формулы (I) в производное в виде фармацевтически приемлемого пролекарства и (ж) необязательно превращают производное в виде пролекарства соединения формулы (I) в его недериватизированную форму.
Примеры (но не ограничиваясь только ими) схем синтеза, применяемых для получения соединений формулы (I), представленных в настоящем описании, проиллюстрированы на реакционных схемах (I)(II).
На схеме (I) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), согласно которому получают липопептид I-4 путем сочетания замещенного №защищенного-^)-цистеина (I-1) с различными аминами (I2) в присутствии связывающего реагента и последующего удаления защитных групп. Дополнительное взаимодействие первичного амина липопептида I-4 приводит к получению липопептида I-5. Заместители L1, L2, R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании. Prot. обозначает аминозащитную группу, такую, например, как (но не ограничиваясь только ими) Fmoc, Boc и Cbz.
Схема (I)
На схеме (II) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -СН2ОС(О)- и L2 обозначает -ОС(О)-. При этом путем восстановления (N-Fmoc-OtBu-Cys)2 (II-1) получали N-Fmoc-OtBu-цистеин (II-2) и тиол N-Fmoc-OtBu-цистеина (II-2) алкилировали с помощью эпоксида
- 23 031379 сложного эфира с получением №Ртос-О1Ви-[2^),3-дигидроксилпропил]-^)-цистеина (II-3). Путем ацилирования соединения (II-3) получали соединение (II-4), и последующий гидролиз сложного третбутилового эфира позволял получать замещенный N-Fmoc-(R)-цистеин (II-5). Липопептид (II-7) получали путем сочетания замещенного N-Fmoc-(R)-цистеина (II-5) с различными аминами (II-6) в присутствии связывающего реагента. После удаления защитной группы Fmoc получали липопептид (II-8), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (II-8) получали липопептид (II-9). Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
Схема (II) ацилиру!
основание h2n tBuOH NaOH удаление защитной группы связываю щии реагент
На схеме (III) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -О-. При этом путем взаимодействия с трифлиновой (трифторметансульфоновой) кислотой 1,2-диалкоксилглицерина (III-1) получали трифлат (III-2), который применяли для алкилирования тиола (III-3) с получением (III-4). Путем последующего гидролиза сложного трет-бутилового эфира получали замещенную карбоновую кислоту (III-5). Липопептид (III-7) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (III-5) с различными аминами (III-6) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитной группы Fmoc получали липопептид (III-8), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (III-8) получали липопептид (III-9). Заместители R. R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
- 24 031379
На схеме (IV) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -NR7C(O)-. При этом путем избирательного удаления защитных групп первичного спирта в 3-алкоксилглицерине (IV-1) получали соединение (IV-2). Путем мезилирования вторичного спирта глицерина (IV-2) получали соединение (IV-3), а после обработки NaN3 получали азид (IV-4). После удаления защитной силильной группы соединения (IV-4) с последующей обработкой трифлиновой кислотой образовавшего спирта (IV-5) получали трифлированный глицерин (IV-6). Тиол (IV-7) алкилировали трифлатом (IV-6) с получением азида (IV-8). Азид (IV-8) восстанавливали до соответствующего амина, который ацилировали с получением амида (IV-9). Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира (IV-9) получали замещенную карбоновую кислоту (IV-10). Липопептид (IV-12) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (IV-10) с различными аминами (IV-11) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитной группы Fmoc получали липопептид (IV-13), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (IV-13) получали липопептид (IV-14). Заместители Rb R2, R3, R4 и R7 имеют значения, указанные в настоящем описании.
Схема (IV) но
ОБТБС-С1,
ДМАП, Net,
ТБСО
OtBu
IV-8
Pd(OH)2, Η,
ДИЭА ;А
R3 Li
ТФК/ДХМ ,м
H2N-R4
IV-11
связывающий реагент удаление защитной группы11
На схеме (V) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -CH2NR7C(O)- и L2 обозначает -NR7C(O)-. При этом путем восстановления дисульфида (V-2) получали тиол (V-3), который алкилировали с помощью R-эпоксида сложного эфира с получением диола (V-4). Путем мезилирования диола (V-4) получали соединение (V-5), которое обрабатывали NaN3 с получением диазида (V-6). Диазид (V-6) восстанавливали с получением диамина (V-7) с помощью Pd(OH)2, а затем ацилировали с получением диамида (V-8). После гидролиза сложного трет-бутилового эфира (V-8) получали замещенную карбоновую кислоту (V-9). Липопептид (V-11) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (V-9) с различными аминами (V-10) в присутствии связывающего реагента. После удаления защитной группы Cbz получали липопетид (V-12), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (V-12) получали липопептид (V-13). Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
- 25 031379
На схеме (VI) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -ОС(О)- При этом путем циклизации диола (VI-1) получали эпоксид (VI-2), который алкилировали тиолом с получением спирта (VI-3). После ацилирования спирта (VI-3) получали соединение (VI-4). Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира (VI-4) получали замещенную карбоновую кислоту (VI-5). Липопептид (VI-7) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (VI-5) с различными аминами (VI-6) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитных групп липопептида (VI-7) получали липопептид (VI-8), а после дополнительного взаимодействия первичного амина липопептида (VI-8) получали липопептид (VI-9). Заместители Rb R2, R3 и R4 имеют зна чения, указанные в настоящем описании.
Схема (VI)
,or2 xor2
1) НВг/АсОН Г
Х*он 2) NaOH/MeOH ^-О
он
VI-1 VI-2
о рЭС1 NHFmoc <°R2 °®и r3A
пиридин
VI-4
r4-nh2 VI-6 ,or2 NHFmoc <
связывающий ^,ΝΗ _
реагент П4 ' '3 VI-7
NHFmoc
θγΧ OtBu NHFmoc C°R2 ο·^χΕΧ'Υ'>οη OtBu VI-3
K2CO3
ТФК/ДХМ NHFmoc <OR2 0H r3A
VI-5
удаление защитной группы ,or2 nh2 f θγΥ3-Υ·ο
R/NH rA
VI-8
VI-9
- 26 031379
На схеме (VII) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой R1 обозначает -Н-, L1 обозначает -CH2OC(O)NH- и L2 обозначает -OC(O)NH-. При этом путем алкилирования тиола (VII-1) с помощью эпоксида получали диол (VII-2), который ацилировали с помощью изоцианата (VII-3) с полученим бискарбамата (VII-4). Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира (VII-4) получали замещенную карбоновую кислоту (VII-5). Липопептид (VII-7) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (VII-5) с различными аминами (VII-6) в присутствии связывающего реагента. Затем после удаления защитных групп липопептида (VII-7) получали липопептид (VII-8). Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
На схеме (VIII) проиллюстрирован синтез соединений формулы (I), в которой R1 обозначает -С(О)С8-С18алкил-, L1 обозначает -CH2OC(O)NH- и L2 обозначает -OC(O)NH-. При этом путем восстановления соединения VIII-1 получали свободный амин (VIII-2), который подвергали взаимодействию с RX1 (VIII3) с получением соединения VIII-4. Путем гидролиза сложного трет-бутилового эфира VIII-4 получали замещенную карбоновую кислоту (VIII-5). Липопептид (VIII-7) получали путем сочетания замещенной карбоновой кислоты (VIII-5) с различными аминами (VIII-6) в присутствии связывающего реагента. Заместители R1, R2, R3 и R4 имеют значения, указанные в настоящем описании.
Представленные в настоящем описании примеры служат для иллюстрации соединений формулы (I), представленных в настоящем описании (но не ограничены только ими), и путей получения указанных соединений.
Фармакология и полезность
Когда чужеродный антиген опознается иммунной системой, она реагирует, запуская иммунный ответ, который характеризуется скоординированным взаимодействием систем как врожденного, так и приобретенного иммунитета. Эти две независимые системы удовлетворяют двум взаимно исключающим требованиям: быстрота (определяемая врожденной системой) и специфичность (определяемая адаптив
- 27 031379 ной системой).
Врожденная иммунная система служит в качестве первой линии защиты от внедряющихся патогенов, осуществляя контроль патогена, в это время происходит подготовка (созревание) адаптивных ответов. Она запускается в течение нескольких минут после заражения независимым от антигена образом, реагируя на широкое разнообразие консервативных паттернов у патогенов (хотя они не являются неспецифическими и могут отличать свои патогены от чужих). Важно, что она создает также воспалительную и костимулирующую окружающую среду (иногда это обозначают как сигнал опасности), которая потенциирует адаптивную иммунную систему и направляет (или поляризирует ее) в сторону клеточных или гуморальных ответов, наиболее пригодных для уничтожения инфицирующего агента. Данные о разработке модуляторов TLR, предназначенных для терапевтического направленного воздействия врожденного иммунитета, обобщены в литературе (см. Nature Medicine, 13, 2007, сс. 552-559; Drug Discovery Today: Therapeutic Stategies, 3, 2006, cc. 343-352 и Journal of Immunology, 174, 2005, cc. 1259-1268).
Адаптивный ответ становится эффективным через несколько дней или недель, но в конце концов приобретает тонкую антигенную специфичность, необходимую для полной элиминации патогена, и создает иммунологическую память. Он опосредуется в основном Т- и В-клетками, которые подвергнуты реаранжировке зародышевого гена и отличаются специфичностью и длительной памятью. Однако он включает также рекрутмент элементов врожденной иммунной системы, включая профессиональные фагоциты (макрофаги, нейтрофилы и т.д.) и гранулоциты (базофилы, эозинофилы и т.д.), которые поглощают бактерии и даже относительно крупных паразитов из числа простейших. После созревания адаптивного иммунного ответа последующее воздействие патогенов приводит к их быстрой элиминации благодаря созданным высокоспецифическим клеткам памяти, которые быстро активируются при последующем воздействии родственного антигена.
Аутоиммунные заболевания зависят от (I) гуморального ответа или образования аутоантител на свой антиген (например, как в случае (но не ограничиваясь только им) первичного гипертиреоза Грейвса, при котором образуются антитела к TSH-рецептору) или (II) клеточного ответа, при котором иммунные клетки разрушают неиммунные клетки, из которых образуется аутоантиген, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) тироциты (тиреоидит Хашимото) или поджелудочные островковые бетаклетки (диабет типа 1). Многие аутоиммунные заболевания связаны с комбинацией обоих явлений, например, при тиреоидите Хашимото и диабете типа 1 также присутствуют аутоантитела, антитела к пероксидазе щитовидной железы (ТРО) или антитела к декарбоксилазе глутаминовой кислоты (GAD)/островковой клетке. Аутоиммунные заболевания часто имеют воспалительный компонент, включая (но не ограничиваясь только ими) увеличение количества адгезионных молекул, таких, например, как (но не ограничиваясь только ими), молекулы клеточной адгезии-1 (VCAM-1), и изменение адгезии лейкоцитов к сосудистой сети, примерами таких заболеваний являются (но не ограничиваясь только ими) колит, системная волчанка, систмный склероз и сосудистые осложнения при диабете.
Толл-подобные рецепторы (TLR) представляют собой трансмембранные белки типа-I, характеризующиеся наличием внеклеточного N-концевого домена богатого лейцином повтора (LRR), за которым расположена богатая цистеином область, ТМ-домен, и внутриклеточный (цитоплазматический) хвост, который содержит консервативную область, обозначенную как домен рецептора Толл/IL-t (TIR). TLR представляют собой паттерн-распознающие рецепторы (PRR), которые экспрессируются главным образом на иммунных клетках, таких как (но не ограничиваясь только ими) дендритные клетки, Тлимфоциты, макрофаги, моноциты и естественные клетки-киллеры. LLR-домен является важным для связывания лиганда и ассоциированной передачи сигналов и имеет общую структуру, характерную для PRR. TIR-домен является важным для белок-белковых взаимодействий и ассоциирован с врожденным иммунитетом. TIR-домен объединяет также более крупное суперсемейство IL-1 R/TLR, которое состоит из трех подгрупп. Представители первой группы несут иммуноглобулиновые домены в их внеклеточных областях и включают рецепторы IL-1 и IL-18 и вспомогательные белки, такие как ST2. Вторая группа включает TLR. Третья группа включает внутриклеточные белки-адапторы, важные для передачи сигналов.
TLR представляют собой группу паттерн-распознающих рецепторов, которые связываются с ассоциированными с патогенами молекулярными паттернами (РАМР) из бактерий, грибов, простейших и вирусов, и действуют в качестве первой линии защиты от внедряющихся патогенов. TLR играют важную роль для индукции экспрессии генов, участвующих в воспалительных ответах, и TLR, и врожденная иммунная система представляют собой имеющую решающее значение стадию в развитии антигенспецифического приобретенного иммунитета.
Адаптивный (гуморальный или клеточно-опосредованный) иммунитет ассоциирован с механизмом передачи сигналов TLR врожденного иммунитета. Врожденный иммунитет представляет собой защитный ответ иммунных клеток, который функционирует быстро, борясь со связанным с окружающей средой вмешательством, включающим (но не ограничиваясь только ими) бактериальные и вирусные агенты. Адаптивный иммунитет является более медленным ответом, который включает дифференцировку и активацию нестимулированных Т-лимфоцитов в такие типы клеток, как Т-клетки-хелперы 1 (Th1) или Тклетки-хелперы 2 (Th2). !Ъ1-клетки главным образом усиливают клеточный иммунитет, а Th2-клетки
- 28 031379 главным образом усиливают гуморальный иммунитет. Хотя они представляют собой прежде всего защитную систему хозяина, патологическое усиление сигналов врожденного иммунитета, связанных с TLR-путем, участвует в инициации аутоиммунных-воспалительных заболеваний.
Все TLR, вероятно, функционируют либо в виде гомодимера, либо в виде гетеродимера при распознавании специфических молекулярных детерминант или набора специфических молекулярных детерминант, присутствующих на патогенных организмах, таких как бактериальные расположенные на клеточной поверхности липополисахариды, липопротеины, бактериальный флагеллин, ДНК как из бактерий, так и из вирусов, и вирусная РНК. Клеточный ответ на активацию TLR включает активацию одного или несколько факторов транскрипции, что приводит к производству и секреции цитокинов и костимулирующих молекул, таких как интерфероны, TNF, интерлейкины, MIP-1 и МСР-1, которые участвуют в уничтожении и клиренсе патогенной инвазии.
Пространственная экспрессия TLR совпадет с поверхностью раздела хозяина и окружающей среды. В то время как в Drosophila клонировали лишь несколько Толл-подобных белков, семейство человеческих TLR состоит по меньшей мере из 11 членов, а именно TLR1-TLR11, которые вызывают перекрывающиеся, но тем не менее различные биологические ответы из-за различий в клеточной экспрессии и в путях передачи сигналов, которые они инициируют. Каждый из TLR экспрессируется на различной субпопуляции лийкоцитов и каждый из TLR является специфическим касательно его схем экспрессии и чувствительности к РАМР и выявляет различные субпопуляции патогенов, обеспечивая бдительный надзор иммунной системой.
Пути передачи сигналов TLR
TLR распределены по всей клетке. TLR1, TLR2, TLR3 и TLR4 экспрессируются на клеточной поверхности, a TLR3, TLR2, TLR8 и TLR9 экспрессируются во внутриклеточных компартментах, таких как эндосомы. Для опосредуемого TLR3, TLR2 или TLR9 распознавания их лигандов требуется созревание и процессинг эндосом. Когда макрофаги, моноциты, дендритные клетки или неиммунные клетки, которые становятся антигенпрезентирующими клетками, поглощают бактерии путем фагоцитоза, бактерии расщепляются и содержащие CpG ДНК (CpG-ДНК) высвобождаются в фагосомы-лизосомы или в эндосомы-лизосомы, где они могут взаимодействовать с TLR9, который рекрутирован из эндоплазматического ретикулума при неспецифическом поглощении CpG-ДНК. Кроме того, когда вирусы внедряются в клетки с помощью опосредуемого рецептором эндоцитоза, то содержимое вирусов презентуется цитоплазме путем слияния вирусной мембраны с эндосомальной мембраной. Это приводит к презентации TLR9 TLR-лигандов, таких как dsPHK, ssPHK и CpG-ДНК, в фагосомальных/лизосомальных или эндосомальных/лизосомальных компартментах.
В путях передачи сигналов в прямом направлении относительно TIR-домена содержащий TIRдомен адаптер, т.е. MyD88, играет важную роль для индукции воспалительных цитокинов, таких как TNF-α и IL-12, посредством всех TLR. Хотя содержащие TIR-домен адапторные молекулы (MyD88) являются общими для всех TLR, индивидуальные пути передачи сигналов TLR являются дивергентными, и активация специфических TLR приводит к слегка различающимся схемам профилей генной экспрессии. Например, но не ограничиваясь только этим, активация путей передачи сигналов TLR3 и TLR4 приводит к индукции интерферонов типа I (IFN), в то время как активация опосредуемых TLR2 и TLR5 путей не приводит к такому действию. Однако активация путей передачи сигналов TLR2, TLR8 и TLR9 приводит также к индукции IFN типа I, хотя это происходит посредством механизма, отличного от опосредуемой TLR3/4 индукции.
Будучи задействованным, TLR инициируют каскад трансдукции сигналов, приводящий к активации NFkB посредством гена 88 (MyD88) адаптерного белка первичного ответа миелоидной дифференцировки, и к рекрутменту ассоциированной с рецептором IL-1 киназы (IRAK). MyD88-зависимый путь является аналогом пути передачи сигналов рецепторами IL-1 и считается, что MyD88, несущий С-концевой TIR-домен и N-концевой домен смерти, ассоциирован с TIR-доменом TLR. При стимуляции MyD88 осуществляет рекрутмент IRAK-4 в TLR посредством взаимодействия доменов смерти обеих молекул и облегчает опосредуемое IRAK-4 фосфорилированием IRAK-1. Затем фосфорилирование IRAK-1 приводит к рекрутменту ассоциированного с TNF-рецептором фактора 6 (TRAF6), что приводят к активации двух различных путей передачи сигналов. Один путь приводит к активации факторов транскрипции АР-1 посредством активации МАР-киназ. Другой путь активирует комплекс TAK1/ТАВ, что повышает активность комплекса БкВ-киназы (IKK). После активации IKK-комплекс индуцирует фосфорилирование и последующее расщепление ингибитора NFkB IkB, что приводит к ядерной транслокации фактора транскрипции NFkB и инициирует транскрипцию генов, промоторы которых содержат сайты связывания NFkB, например цитокинов. MyD88-зависимый путь играет решающую роль и имеет большое значение для производства воспалительных цитокинов посредством всех TLR.
Стимуляция экспрессирующих TLR8 клеток, таких как РВМС, приводит к производству высоких уровней IL-12, IFN-γ, IL-1, TNF-α, IL-6 и других воспалительных цитокинов. Аналогично этому стимуляция экспрессирующих TLR2 клеток, таких как плазмацитоидные дендритные клетки, приводит к производству высоких уровней интерферона-α (IFNa) и низких уровней воспалительных цитокинов. Таким
- 29 031379 образом, следует ожидать, что в результате активации дендритных клеток и других антигенпрезентирующих клеток вовлечение TLR2, TLR8 или TLR9 и производство цитокинов будет активировать разнообразные механизмы врожденных и приобретенных ответов, приводящих к деструкции патогенов, зараженных клеток или опухолевых клеток.
Толл-подобный рецептор 2 (TLR2)
Для TLR2 характерен высокий уровень экспрессии на мембране дендритных клеток, которые считаются наиболее эффективным типом клеток для презентации антигена (Wetzler L.M., The role of Tolllike receptor 2 in microbial disease and immunity, Vaccine, 21, 2003, cc. 55-60; Iwasaki A., Medzhitov R., Toll-like receptor control of the adaptive immune Responses, Nat. Immunol., 5, 2004, cc. 987-995; Schmitt A., Li L., Giannopoulos K., Greiner J., Reinhardt P., Wiesneth M., Schmitt M., Quantitative expression of Toll-like receptor-2, -4, and -9 in dendriticcells generated fromblasts of patients with acutemyeloid leukemia, Transfusion, 48, 2008, cc. 861-870). TLR2 картирован на хромосоме 4q31-32 и кодирует предполагаемый состоящий из 784 (ак) белок, содержащий 19 N-концевых LLR и имеющий рассчитанную молекулярную массу 84 кДа. TLR2 является наиболее родственным TLR6, при этом обнаружена идентичность последовательностей (31% по всей длине аминокислотной последовательности). Экспрессия мРНК TLR2 обнаружена в тканях головного мозга, сердца, легкого и селезенки, и наиболее высокий ее уровень обнаружен в PBL (лимфоциты периферической крови), прежде всего миеломоноцитного происхождения. In vivo обнаружены два имеющих различный размер транскрипта TLR2, что позволяет предположить наличие альтернативного спайсинга мРНК. In vitro обнаружена повышающая регуляция экспрессии мРНК TLR2 и белка в клетках моноцитарного лейкоза (ТНР-1) при индуцированной РМА дифференцировке. Повышающая регуляция TLR2 обеспечивается аутокринным IL-6 и TNF-α, IL-1 β и IL-10. Экспрессия мРНК TLR2 повышается после контакта как с грамположительными, так и с грамотрицательными бактериями.
TLR2 распознает свои лиганды в виде гетеродимера в комбинации либо с TLR-1, либо с TLR-6. TLR2 образует гетеродимеры с TLR1, TLR6 и возможно с TLR10, при этом каждый комплекс является особенно чувствительным к субпопуляциям ассоциированных с TLR2 РАМР. Основное различие между двумя типами гетеродимеров состоит в том, что димер TLR-1/TLR2 обладает способностью распознавать триацилированные липопротеины, а TLR2/TLR-6 выявляет диацилированные липопротеины и пептидогликаны (Wetzler L.M., The role of Toll-like receptor 2 in microbial disease and immunity, Vaccine, 21, 2003, cc. 55-60).
Из всех TLR TLR2 распознает наиболее широкий спектр ассоциированных с патогеном молекулярных паттернов (РАМР) из большого разнообразия патогенов, прежде всего бактерий. Они включают (но не ограничиваясь только ими) липоарабиноманнан (LAM), липополисахарид (LPS), липотейхоевую кислоту (LTA), пептидогликан (PGN) и другие гликолипиды, гликопротеины и липопротеины. Включающие TLR2 комплексы обладают также способностью выявлять вирусы, включая (но не ограничиваясь только ими) вирус кори (MV), человеческий цитомегаловирус (HCMV) и вирус гепатита С (HCV), и грибковые РАМР, включая (но не ограничиваясь только им) зимозан. TLR2 распознает широкое разнообразие липопротеинов/липопетидов различных патогенов, таких как (но не ограничиваясь только ими) грамположительные бактерии, микобактерии, Trypanosoma cruzi, грибы и трепонемы. Кроме того, TLR2 распознает препараты LPS из не относящихся к энтеробактериям видов, таких, например, как (но не ограничиваясь только ими) Leptospira interrogates, Porphyromonas gingivalis и Helicobacter pylori. Включающие TLR2 комплексы обладают способностью как выявлять чужие паттерны, так и выявлять измененные свои паттерны, например, экспонируемые некротическими клетками. TLR2 рекрутируется в фагосомы и участвует в интернализации микробных продуктов клетками.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, являются агонистами активности Толл-подобного рецептора 2 и их применяют для лечения заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с указанными рецепторами TLR2.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения респираторных заболеваний и/или нарушений, включающих (но не ограничиваясь только ими) астму, бронхиальную астму, аллергическую астму, наследственную астму, приобретенную астму, индуцированную физической нагрузкой астму, индуцированную лекарственными средствами астму (например, иднуцированную аспирином и НСПВС) и индуцированную пылью астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ); бронхит, включая инфекционный и эозинофильный бронхит; эмфизему; бронхоэктаз; муковисцидоз; саркоидоз; легкие фермера (экзогенный аллергический альвеолит) и родственные заболевания; гиперчувствительный пневмонит; фиброз легких, включая криптогенный фиброзирующий альвеолит, идиопатический интерстициальный пневмонит, фиброз, представляющий собой осложнение, связанное с антинеопластической терапией, и хроническую инфекцию, включая туберкулез и аспергиллез и другие грибковые инфекции; осложения после трансплантации легкого; васкулит и тромботические нарушения сосудистой сети легкого и легочную гипертензию; противокашлевое действие, включая лечение хронического кашля, ассоциированного с воспалительными секреторными состояниями дыхательных путей, и
- 30 031379 иатрогенный кашель; острый и хронический ринит, включая медикаментозный ринит и вазомоторный ринит; перениальный и сезонный аллергический ринит, включая ринит nervosa (сенная лихорадка); носовой полипоз; острую вирусную инфекцию, включая насморк и инфекцию, связанную с респираторносинцитиальным вирусом, вирусом гриппа, коронавирусом (включая SARS) и аденовирусом.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения дерматологических нарушений, включая (но не ограничиваясь только ими) псориаз, атопический дерматит, контактный дерматит или другие экзематозные дерматозы и реакции гиперчувствительности замедленного типа; фито- фотодерматит; себоррейный дерматит, дерматит герпетиформный, красный плоский лишай, склеротический и атрофический лишай, гангренозную пиодермию, кожный саркоидоз, базальноклеточную карциному, старческий кератоз, дискоидную красную волчанку, пемфигус, пемфигоид, врожденный буллезный эпидермолиз, крапивницу, ангионевротический отек, васкулитид, токсические эритемы, кожные эозинофилии, гнездую алопецию, мужскую алопецию, синдром Свита, синдром Вебера-Кристиана, мулиформную эритему; целлюлит как инфекционный, так и неинфекционный; панникулит; кожные лимфомы, немеланомный рак кожи и другие диспластические повреждения кожи; индуцированные лекарственными средствами нарушения, включая фиксированную лекарственную сыпь.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения глазных болезней и/или нарушений, включая (но не ограничиваясь только ими) блефарит; конъюнктивит, включая перениальный и весенний аллергический конъюнктивит; ирит; передний и задний увеит; хороидит; аутоиммунные, дегенеративные или воспалительные нарушения, поражающие сетчатку; офтальмит, включая симпатический офтальмит; саркоидоз, инфекции, включая вирусные, грибковые и бактериальные.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения заболеваний и/или нарушений мочеполовой системы, включая (но не ограничиваясь только ими) нефрит, включая интерстициальный и гломерулонефрит; нефротический синдром; цистит, включая острый и хронический (интерстициальный) цистит и язву Гуннера; острый и хронический уретрит, простатит, эпидидимит, оофорит и сальпингит; вульво-вагинит; болезнь Пейрони; эректильную дисфункцию (как мужскую, так и женскую).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения отторжения трансплантата, включая (но не ограничиваясь только ими) острое и хроническое отторжение, например, после трансплантации почки, сердца, печени, легкого, костного мозга, кожи или роговицы, или после трансфузии крови; или хроническую реакцию трансплантат против хозяина.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения других аутоиммунных и аллергических нарушений, включая (но не ограничиваясь только ими) ревматоидный артрит, синдром разраженной толстой кишки, системную красную волчанку, рассеянный склероз, тиреоидит Хашимото, болезнь Крона, воспалительное заболевание кишечника (IBD), болезнь Грейвса, болезнь Аддисона, сахарный диабет, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, эозинофильный фасцит, гипер-IgEсиндром, антифосфолипидный синдром и синдром Сезари.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, применяют для лечения рака, включая (но не ограничиваясь только ими) опухоли предстательной железы, молочной железы, легкого, яичника, поджелудочной железы, пищеварительного тракта и ободочной кишки, желудка, кожи и головного мозга и злокачественные заболевания, поражающие головной мозг (включая лейкозы), и лимфопролиферативные системы, такие как болезнь Ходжкина и неходжкинская лимфома; включая предупреждение и лечение метастатического заболевания и рецидивов опухолей, и паранеопластичекие синдромы. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, Nоксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, можно применять в качестве модуляторов активности Толл-подобного рецептора, и их применяют для лечения неоплазм, включая (но не ограничиваясь только ими) базальноклеточную карциному, плоскоклеточную карциному, старческий кератоз, меланому, карциномы, саркомы, лейкозы, почечноклеточную карциному, саркому Капоши, миелогенный лейкоз, хронический лимфолейкоз и множественную миелому.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или
- 31 031379 комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения инфекционных болезней, включая (но не ограничиваясь только ими) вирусные заболевания, такие как генитальные бородавки, обычные бородавки, подошвенные бородавки, заболевания, вызываемые респираторным синцитиальным вирусом (RSV), вирусом гепатита В, гепатита С, вирусом Денге, вирусом герпеса простого (например, (но не ограничиваясь только ими) ^V-I, ^V-II, CMV или VZV), контагиозным моллюском, вирусом коровьей оспы, натуральной оспы, лентивирусом, вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусом человеческой папилломы (ЭТУ), цитомегаловирусом (CMV), вирусом ветряной оспы (VZV), риновирусом, энтеровирусом, аденовирусом, коронавирусом (например, SARS), вирусом гриппа, пара-гриппа, вирусом эпидемического паротита, вирусом кори, паповавирусом, гепаднавирусом, флавивирусом, ретровирусом, аренавирусом (таким, например, как (но не ограничиваясь только ими) LCM (вирус лимфоцитарного хориоменингита), вирус Хунин, вирус Мачупо, вирус Гуанарито и вирус лихорадки Ласса) и филовирусом (таким, например, как (но не ограничиваясь только ими) вирус Эбола или вирус Марбург).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры, фармацевтические композиции и/или комбинации, представленные в настоящем описании, применяют для лечения бактериальных, грибковых и протозойных инфекций, включая (но не ограничиваясь только ими) туберкулез и болезни, вызываемые Mycobacterium avium, проказу; пневмоцистоз, криптоспоридиоз, гистоплазмоз, токсоплазмоз, инфекцию, вызываемую трипаносомой, лейшманиоз, инфекции, вызываемые бациллами из рода Escherichia, Enterobacter, Salmonella, Staphylococcus, Klebsiella, Proteus, Pseudomonas, Streptococcus и Chlamydia, и грибковые инфекции, такие как кандидоз, аспергиллез, гистоплазмоз, криптококковый менингит.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры применяют в качестве потенциаторов иммунной системы. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения, представленные в настоящем описании, включают в иммуногенные композиции или их применяют в сочетании с иммуногенными композициями. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции можно применять в виде вакцин, и соединение присутствует в них в количестве, достаточном для усиления иммунного ответа на вакцину или на антиген, применяемый в смеси с соединением. Вакцина содержит по меньшей мере один антиген, который может представлять собой бактериальный антиген или ассоциированный с раком антиген, или вирусный антиген. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают в терапевтические вакцины или их применяют в сочетании с терапевтическими вакцинами. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают в профилактические вакцины или применяют в сочетании с профилактическими вакцинами. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают или применяют в сочетании с терапевтическими вирусными вакцинами. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, N-оксиды, пролекарства и изомеры и фармацевтические композиции, представленные в настоящем описании, включают или применяют в сочетании с противораковыми вакцинами.
В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты, представленные в настоящем описании, можно применять для лечения поврежденной или старения кожи, например рубцов и морщин.
Введение и фармацевтические композиции
Для терапевтического применения соединений формулы (I), их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, N-оксидов, пролекарств и изомеров, представленных в настоящем описании, указанные соединения вводят в терапевтически эффективных количествах либо индивидуально, либо в виде части фармацевтической композиции. Таким образом, в настоящем изобретении предложены фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, его фармацевтически приемлемые соли и/или сольваты и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или эксципиентов. Кроме того, указанные соединения и композиции вводят индивидуально или в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами. Метод введения указанных соединений и композиций включает (но не ограничиваясь только ими) оральное введение, ректальное введение, парентеральное введение, внутривенное введение, введение в стекловидное тело, внутримышечное введение, введение путем ингаляции, введение в нос, местное применение, введение в глаз или введение в ухо.
Терапевтически эффективное количество может варьироваться в зависимости, среди прочего, от заболевания, для лечения которого оно показано, серьезности заболевания, возраста и относительного состояния здоровья индивидуума, эффективности вводимого соединения, пути введения и требуемого лечения. В конкретных вариантах осуществления изобретения суточная доза соединения формулы (I),
- 32 031379 обеспечивающая удовлетворительные результаты, может представлять собой системные суточные дозы, составляющие от примерно 0,03 до 2,5 мг/кг веса тела. В конкретных вариантах осуществления изобретения суточная доза соединения формулы (I), которую вводят путем ингаляции, составляет от 0,05 до 100 мкг/кг. В других вариантах осуществления изобретения суточная доза соединения формулы (I), вводимая оральным путем, составляет от 0,01 мкг на 1 кг веса тела до 100 мкг на 1 кг веса тела. Для более крупных млекопитающих, например людей, показанная суточная доза составляет от примерно 0,5 до примерно 100 мг соединения формулы (I), которую удобно вводить, например, в виде разделенных доз вплоть до 4 раз в день, или в форме с контролируемым высвобождением. В конкретных вариантах осуществления изобретения стандартные лекарственные дозы, предназначенные для орального введения, составляют примерно от 1 до 50 мг соединения формулы (I).
Другими объектами изобретения являются способы получения фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемые соли и/или сольваты. В конкретных вариантах осуществления изобретения способы предусматривают смешение соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемых солей и/или сольватов с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или эксципиентами. В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат соединение формулы (I) в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли или сольвата в сочетании по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом, приготавливают с использованием методов смешения, гранулирования и/или нанесения покрытия. В других вариантах осуществления изобретения указанные композиции необязательно содержат эксципиенты, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие или эмульгирующие агенты, вещества, повышающие растворимость, соли для регулирования осмотического давления и/или буферы. В других вариантах осуществления изобретения указанные композиции являются стерильными.
Оральные лекарственные формы
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят орально в виде отдельных лекарственных форм, при этом указанные лекарственные формы представляют собой (но не ограничиваясь только ими) капсулы, желатиновые капсулы, каплетки, таблетки, жевательные таблетки, порошки, гранулы, сиропы, ароматизированные сиропы, растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях, съедобные пены или взбитые продукты и жидкие эмульсии типа масло-в-воде или жидкие эмульсии типа вода-вмасле.
Капсулы, желатиновые капсулы, каплетки, таблетки, жевательные таблеки, порошки или гранулы. применяемые для орального введения по меньшей мере одного соединения формулы (I), приготавливают путем смешения по меньшей мере одного соединения формулы (I) (действующее вещество) по меньшей мере с одним эксципиентом, используя общепринятые фармацевтические методы приготовления препаративных форм. Примерами эксципиентов, которые применяют в оральных лекарственных формах, представленных в настоящем описании, являются (но не ограничиваясь только ими) связующие вещества, наполнители, разрыхлители, замасливатели, абсорбенты, красители, корригенты, консервативы и подслащивающие вещества.
Примерами связующих веществ являются (но не ограничиваясь только ими) кукурузный крахмал, картофельный крахмал, крахмальная паста, предварительно желированный крахмал или другие крахмалы, сахара, желатин, встречающиеся в естественных условиях или синтетические камеди, такие как гуммиарабик, альгинат натрия, альгиновая кислота и другие альгинаты, трагакант, гуаровая камедь, целлюлоза и ее производные (например (но не ограничиваясь только ими), этилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, кальциевая соль карбокиметилцеллюлозы, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза и микрокристаллическая целлюлоза), алюмосиликат магния, поливинилпирролидон и их комбинации.
Примерами наполнителей являются (но не ограничиваясь только ими) тальк, карбонат кальция (например, гранулы или порошок), микрокристаллическая целлюлоза, порошкообразная целлюлоза, декстраны, каолин, маннит, кремневая кислота, сорбит, крахмал, предварительно желированный крахмал и их смеси. В конкретных вариантах осуществления изобретения связующее вещество или наполнитель в фармацевтических композициях, представленных в настоящем описании, присутствует в количестве от примерно 50 до примерно 99 мас.% в пересчете на фармацевтическую композицию или лекарственную форму.
Примерами разрыхлителей являются (но не ограничиваясь только ими) агар-агар, альгиновая кислота, альгинат натрия, карбонат кальция, карбонат натрия, микрокристаллическая целлюлоза, натриевая соль кармелозы, кросповидон, полакрилин калия, натрийгликолят крахмала, картофельный крахмал или крахмал из тапиоки, предварительно желированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгинаты, другие производные целлюлозы, камеди и их комбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения разрыхлитель, применяемый в фармацевтических композициях, представленных в настоящем описании, присутствует в количестве от примерно 0,5 до примерно 15 мас.%, а в других вариантах
- 33 031379 осуществления изобретения в количестве от примерно 1 до примерно 5 мас.%.
Примерами замасливателей являются (но не ограничиваясь только ими) стеарат натрия, стеарат кальция, стеарат магния, стеариновая кислота, минеральное масло, жидкое минеральное масло, глицерин, сорбит, маннит, полиэтиленгликоль, другие гликоли, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрогенизированное растительное масло (например (но не ограничиваясь только ими), арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло), стеарат цинка, олеат натрия, этилолеат, этиллаурат, агар, кремнезем, силодный силикагель (AEROSIL 200, производимый фирмой W.R. Grace Co., Балтимор, шт. Мэриленд), коагулированный аэросил синтетического кремнезема (поступает в продажу от фирмы Degussa Co., Планто, шт. Техас), CAB-O-SIL (пирогенный диоксид кремния, который поступает в продажу от фирмы Cabot Co., Бостон, шт. Массачусетс) и их комбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения замасливатели, применяемые в фармацевтических композициях, представленных в настоящем описании, присутствуют в количестве, составляющем менее примерно 1 мас.% в пересчете на фармацевтические композиции или лекарственные формы.
Примерами разбавителей являются (но не ограничиваясь только ими) лактоза, декстроза, сахароза, маннит, сорбит, целлюлоза, глицин или их комбинации.
В конкретных вариантах осуществления таблетки и капсулы приготавливают путем однородного смешения по меньшей мере одного соединения формулы (I) (действующее вещество) с жидкими носителями, тонкоизмельченными твердыми носителями или и обоими этими типами носителей и затем при необходимости придают продукту требуемую форму. В конкретных вариантах осуществления таблетки получают прессованием. В других вариантах осуществления таблетки получают формованием.
В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одно соединение формулы (I) вводят орально в лекарственной форме с контролируемым высвобождением. Указанные лекарственные формы применяют для замедленного или контролируемого высвобождения одного или нескольких соединений формулы (I). Для обеспечения контролируемого высвобождения применяют, например, гидроксипропилметилцеллюлозу, другие полимерные матрицы, гели, проницаемые мембраны, осмотические системы, многослойные покрытия, микрочастицы, липосомы, микросферы или их комбинацию. В конкретных вариантах осуществления лекарственные формы с контролируемым высвобождением применяют для удлинения активности соединения формулы (I), снижения частоты приема доз и повышения удобства для пациента.
Для введения соединений формулы (I) в виде предназначенных для орального применения жидкостей, таких как раствор, сиропы и эликсиры, их приготавливают в виде стандартных доз лекарственного средства, в которых в данном количестве раствора, сиропов или эликсиров находится предварительно определенное количество соединения формулы (I). Сиропы приготавливают путем растворения соединения в приемлемом содержащем корригенты водном растворе, а эликсиры приготавливают с использованием нетоксичного спиртового носителя. Суспензии приготавливают путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Примерами эксципиентов, применяемых в предназначенными для орального введения жидкостей, являются (но не ограничиваясь только им) солюбилизаторы, эмульгаторы, корригенты, консерванты и красители. Примерами солюбилизаторов являются (но не ограничиваясь только ими) вода, гликоли, масла, спирты, этоксилированные изостеариловые спирты и простые эфиры полиоксиэтилена и сорбита. Примерами консервантов являются (но не ограничиваясь только ими) бензоат натрия. Примерами корригентов являются (но не ограничиваясь только ими) масло мяты перечной или встречающиеся в естественных условиях подслащивающие вещества или сахарин или другие искусственные подслащивающие вещества.
Парентеральные лекарственные формы
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят парентерально различными путями, включая (но не ограничиваясь только ими) подкожно, внутривенно (включая болюсную инъекцию), внутримышечно и внутриартериально.
Указанные парентеральные лекарственные формы вводят в виде стерильных или подлежащих стерилизации инъецируемых растворов, суспензий, сухих и/или лиофилизированных продуктов, которые легко растворять или суспендировать в фармацевтически приемлемом наполнителе, предназначенном для инъекции (восстанавливаемые порошки), и в виде эмульсий. Наполнители, применяемые в указанных лекарственных формах, представляют собой (но не ограничиваясь только ими) воду для инъекций USP; водные наполнители, такие как (но не ограничиваясь только ими) хлорид натрия для инъекций, раствор Рингера для инъекций, декстроза для инъекций, декстроза и хлорид натрия для инъекций и лактированный раствор Рингера для инъекций; смешивающиеся с водой наполнители, такие как (но не ограничиваясь только ими) этиловый спирт, полиэтиленгликоль и полипропиленгликоль; и неводные наполнители, такие как (но не ограничиваясь только ими) кукурузное масло, хлопковое масло, арахисовое масло, кунжутное масло, этилолеат, изопропилмиристат и бензилбензоат.
Трансдермальные лекарственные формы
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие
- 34 031379 по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят трансдермально. Указанные трансдермальные лекарственные формы могут представлять собой пластыри резервуарного типа или матриксного типа, которые наносят на кожу и носят в течение определенного периода времени, обеспечивающего проникновение требуемого количества соединения формулы (I). Например (но не ограничиваясь только ими), указанные трансдермальные устройства имеют форму повязки, содержащей элемент, служащий подкладкой, резервуар, содержащий соединение необязательно в сочетании с носителями, необязательно контролирующий скорость высвобождения барьер для поступления соединения на кожу хозяина с контролируемой и заранее определенной скоростью в течение продолжительного периода времени, и средства для закрепления устройства на коже. В других вариантах осуществления изобретения применяют также трансдермальные матриксные препаративные формы.
Препаративные формы, предназначенные для трансдермального введения соединения формулы (I), включают в эффективном количестве соединение формулы (I), носитель и необязательно разбавитель. Носитель представляет собой (но не ограничиваясь только ими) абсорбируемые фармакологически приемлемые растворители, способствующие проникновению через кожу хозяина, такие как вода, ацетон, этанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, минеральное масло и их комбинации.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные трансдермальные системы введения включают вещества, усиливающие проникновение, которые способствуют введению одного или нескольких соединений формулы (I) в ткань. Указанные вещества, усиливающие проникновение, включают (но не ограничиваясь только ими) ацетон; различные спирты, такие как этанол, олеил и тетрагидрофурил; алкилсульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; диметилацетамид; диметилформамид; полиэтиленгликоль; пирролидоны, такие как поливинилпирролидон; различные виды коллидонов (повидон, поливидон); мочевину; и различные водорастворимые или нерастворимые сложные сахарные эфиры, такие как Твин 80 (полисорбат 80) и Спан 60 (сорбитанмоностеарат).
В других вариантах осуществления изобретения значение рН указанной трансдермальной фармацевтической композиции или лекарственной формы или ткани, на которую наносят фармацевтическую композицию или лекарственную форму, регулируют для улучшения введения одного или нескольких соединений формулы (I). В других вариантах осуществления изобретения полярность растворителяносителя, его ионную силу или тоничность регулируют для улучшения введения. В других вариантах осуществления изобретения добавляют соединения, такие как стеараты, для требуемого изменения гидрофильности или липофильности одного или нескольких соединений формулы (I) с целью улучшения введения. В других вариантах осуществления изобретения указанные стеараты служат в качестве липидного наполнителя для препаративной формы, такого как эмульгирующий агент или поверхностноактивное вещество, и в качестве усиливающего введение или усиливающего проникновения агента. В других вариантах осуществления изобретения используют различные соли, гидраты или сольваты соединений формулы (I) для дополнительного регулирования свойств образовавшейся композиции.
Лекарственные формы для местного применения
В конкретных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I) применяют с помощью местного нанесения фармацевтической композиции, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), в форме лосьонов, гелей, мазей, растворов, эмульсий, суспензий или кремов. Приемлемыми препаративными формами для местного применения на кожу являются водные растворы, мази, кремы или гели, а препаративными формами для офтальмологического применения являются водные растворы. Указанные препаративные формы необязательно содержат солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и консерванты.
Указанные препарпативные формы для местного применения содержат по меньшей мере один носитель и необязательно по меньшей мере один разбавитель. Такие носители и разбавители представляют собой (но не ограничиваясь только ими) воду, ацетон, этанол, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутан1,3-диол, изопропилмиристат, изопропилпальмитат, минеральное масло и их комбинации.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные препаративные формы для местного применения включают вещества, усиливающие проникновение, которые способствуют введению одного или нескольких соединений формулы (I) в ткань. Указанные вещества, усиливающие проникновение, включают (но не ограничиваясь только ими) ацетон; различные спирты, такие как этанол, олеил и тетрагидрофурил; алкилсульфоксиды, такие как диметилсульфоксид; диметилацетамид; диметилформамид; полиэтиленгликоль; пирролидоны, такие как поливинилпирролидон; различные виды коллидонов (повидон, поливидон); мочевину; и различные водорастворимые или нерастворимые сложные сахарные эфиры, такие как Твин 80 (полисорбат 80) и Спан 60 (сорбитанмоностеарат).
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят путем ингаляции. Лекарственные формы для ингаляционного введения приготавливают в виде аэрозолей или сухих порошков. Аэрозольные препаративные формы для ингаляционного введения содержат раствор или тонкую суспензию по меньшей мере одного соединения формулы (I) в фармацевтически приемлемом водном или неводном растворителе. Кроме того, указанные фармацевтические композиции необязательно содержат порошкообразное
- 35 031379 основание, такое как лактоза, глюкоза, трегалоза, маннит или крахмал, и необязательно модификатор свойств, такой как L-лейцин или другую аминокислоту, и/или соли металлов и стеариновой кислоты, такие как стеарат магния или кальция.
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят непосредственно в легкое путем ингаляции с помощью ингалятора с дозировочной шкалой (MDI), который представляет собой баллоны, содержащие приемлемый имеющий низкую температуру кипения пропеллент, например дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, диоксид углерода или другой пригодный газ, или устройство в виде ингалятора для сухого порошка (DPI), в котором применяют выброс газа для создания облака сухого порошка внутри контейнера, которое затем вдыхает пациент. В конкретных вариантах осуществления изобретения изготавливают капсулы и картриджы из желатина, предназначенные для применения в ингаляторе или инсуффляторе, которые содержат порошкообразную смесь соединения формулы (I) и порошкообразного основания, такого как лактоза или крахмал. В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят в легкое с помощью устройства для распыления жидкостей, такое устройство включает насадку с очень малыми отверстиями для создания аэрозоля жидких препаративных форм лекарственного средства, которые затем непосредственно вводят путем ингаляции в легкое. В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят в легкое с помощью распылительного устройства, при этом распылители создают аэрозоль жидких препаративных форм лекарственного средства на основе ультразвуковой энергии с получением тонкоизмельченных частиц, которые легко можно вдыхать. В других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) вводят в легкое с помощью электрогидродинамического (EHD) аэрозольного устройства, при этом в указанных аэрозольных EHD-устройствах используется электрическая энергия для создания аэрозоля растворов или суспензий жидких лекарственных средств.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соли или сольваты, представленные в настоящем описании, включает также один или несколько усилителей абсорбции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные усилители абсорбции представляют собой (но не ограничиваясь только ими) гликохолат натрия, капрат натрия, №лаурил-Р-Эмальтопиранозид, ЭДТК и смешенные мицеллы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят в нос. Лекарственные формы для назального введения приготавливают в виде аэрозолей, растворов, капель, гелей или сухих порошков.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтическую композицию, содержащую по меньшей мере одно соединение формулы (I), вводят ректально в форме суппозиториев, клизм, мазей, кремов, ректальных пен или ректальных гелей. В конкретных вариантах осуществления изобретения суппозитории приготавливают из жирных эмульсий или суспензий, масла какао или других глицеридов.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), применяют в виде офтальмологического средства, такого как глазные капли. Указанные препаративные формы представляют собой водные растворы, которые необязательно содержат солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и консерванты.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), применяют для введение в ухо в виде ушных капель. Указанные препаративные формы представляют собой водные растворы, которые необязательно содержат солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и консерванты.
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), приготавливают в виде препаратов в форме депо. Указанные препаративные формы вводят путем имплантации (например, подкожно или внутримышечно) или путем внутримышечной инъекции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные препаративные формы включают полимерные или гидрофобные материалы (такие, например, как эмульсию в приемлемом масле) или ионообменные смолы, или слабо растворимые производные, например слабо растворимую соль.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения вирусных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения инфекционных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения бактериальных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лече
- 36 031379 ния грибковых заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения рака, ассоциированного с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для внутривенного введения для лечения рака, ассоциированного с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения связанных с отторжением трансплантата заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для орального введения для лечения заболеваний и/или нарушений мочеполовой системы, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для введения в виде глазных капель для лечения офтальмологических заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения для лечения дерматологических заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения для лечения старческого кератоза. В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения в виде крема для лечения старческого кератоза.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения для лечения базальноклеточной карциномы. В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения в виде крема для лечения базальноклеточной карциномы.
В дополнительных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), адаптированы для местного применения путем ингаляции для лечения респираторных заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с TLR2. В конкретных вариантах осуществления изобретения респираторное заболевание представляет собой аллергическую астму.
В настоящем изобретении предложены соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и сольваты и фармацевтические композиции, которые содержат по меньшей мере одно соединение формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемые соли или сольваты, предназначенные для применения с целью активации активности TLR2, и которые в результате применяют для предупреждения или лечения заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2. Указанные соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и сольваты и фармацевтические композиции являются агонистами TLR2.
В настоящем описании представлены также способы лечения индивидуума, страдающего заболеванием и/или нарушением, ассоциированным с активностью TLR2, где способы заключаются в том, что вводят индивидууму в эффективном количестве соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват либо индивидуально, либо в виде компонента фармацевтической композиции, представленной в настоящем описании.
В настоящем описании представлено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, ассоциированного с активностью TLR2.
Комбинированное лечение
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, вводят индивидуально (без дополнительного терапевтического средства) для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, вводят в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
- 37 031379
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, включают в состав препарата в сочетании с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами и вводят для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват, или фармацевтическую композицию, которая содержит по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, вводят последовательно с одним или несколькими дополнительными терапевтическими средствами для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем описании, предусматривает введение соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), перед введением одного или нескольких дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В других вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем изобретении, предусматривает введение соединения формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), после введения одного или нескольких дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем изобретении, предусматривает введение соединения формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), одновременно с введением одного или нескольких дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах осуществления изобретения комбинированное лечение, представленное в настоящем изобретении, предусматривает введение соединения формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата, или фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы (I), в виде препарата, включающего одно или несколько дополнительных терапевтических средств для лечения одного или нескольких из заболеваний и/или нарушений, ассоциированных с активностью TLR2, которые представлены в настоящем описании.
В конкретных вариантах комбинированного лечения, представленных в настоящем описании, соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты являются агонистами активности TLR2.
В конкретных вариантах комбинированного лечения, представленных в настоящем описании, соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты и дополнительное(ые) терапевтическое(ие) средство(а) обладают аддитивным действием. В конкретных вариантах комбинированного лечения, представленных в настоящем описании, соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты и дополнительное(ые) терапевтическое(ие) средство(а) обладают синергетическим действием.
В других вариантах осуществления изобретения соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемые соли или сольваты или фармацевтическую композицию, которая содержит соединение формулы (I), вводят пациенту, который ранее не подвергался или который в данное время не подвергается лечению другим терапевтическим средством.
Дополнительными терапевтическими средствами, применяемыми в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, являются (но не ограничиваясь только ими) антибиотики или антибактериальные средства, противорвотные средства, противогрибковые средства, противовоспалительные средства, противовирусные средства, иммуномодуляторные средства, цитокины, антидепрессанты, гормоны, алкилирующие средства, антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики, антимитотические средства, ингибиторы топоизомеразы, цитостатические средства, антиинвазивные средства, антиангиогенные средства, ингибиторы функции фактора роста, ингибиторы вирусной репликации, ингибиторы вирусных ферментов, противораковые средства, а-интерфероны, β-интерфероны, рибавирин, гормоны, цитокины и другие модуляторы Толл-подобного рецептора.
Антибиотики или антибактериальные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически при
- 38 031379 емлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) валганцикловира гидрохлорид, метронидазол, β-лактам, макролиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) азитромицин, тобрамицин (TOBI™)), цефалоспорины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) цефаклор, цефадроксил, цефалексин, цефрадин, цефамандол, цефатризин, цефазедон, цефиксим, цефозопран, цефпимизол, цефуроксим, цефпирамид, цефпрозил, цефпиром, KEFLEX™, VELOSEF™, CEFTIN™, CEFZIL™, CECLOR™, SUPRAX'™ и DURICEF™), кларитромицин (такой, например, как (но не ограничиваясь только ими) кларитромицин и BIAXIN™), эритромицин (такой, например, как (но не ограничиваясь только им) эритромицин и EMYCIN™), ципрофлоксацин, CIPRO™, норфлоксацин (такой, например, как (но не ограничиваясь только им) NOROXIN™), аминогликозидные антибиотики (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) апрамицин, арбекацин, бамбермицины, бутирозин, дибекацин, неомицин, ундециленат, нетилмицин, паромомицин, рибостамицин, сизомицин и спектиномицин), амфениколовые антибиотики (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) азидамфеникол, хлорамфеникол, флорфеникол и тиамфеникол), анзамициновые антибиотики (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) рифамид и рифампин), карбацефемы (такие, например, как (но не ограничиваясь только им) лоракарбеф), карбапенемы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) биапенем и имипенем), цефамицины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) цефбуперазон, цефметазол и цефминокс), монобактамы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) азтреонам, карумонам и тигемонам), оксацефемы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фломоксеф и моксалактам), пенициллины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) амдиноциллин, амдиноциллина пивоксил, амоксициллин, бакампициллин, бензилпенициллиновая кислота, натрийбензилпенициллин, эпициллин, фенбенициллин, флоксациллин, пенамциллин, пенетамата гидройодид, пенициллин о-бенетамин, пенициллин О, пенициллин V, пенициллин V бензантин, пенициллин V гидрабамин, пенимепициклин, фенцихициллин калий, V-CILLIN K™ и PEN VEE K™), линкозамиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) клиндамицин и линкомицин), амфомицин, бацитрацин, капреомицин, колистин, эндурацидин, энвиомицин, тетрациклины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) апициклин, хлортетрациклин, кломоциклин и демеклоциклин), 2,4диаминопиримидины (такой, например, как (но не ограничиваясь только им) бродимоприм), нитрофураны (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фуралтадон и фуразолиния хлорид), хинолоны и их аналоги (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фторхинолон, офлоксацин, циноксацин, клинафлоксацин, флумеквин, грепаглоксацин и FLOXIN™), сульфонамиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) сульфаметоксипиразина ацетил, бензилсульфамид, ноприлсульфамид, фталилсульфацетамид, сульфахризоидин и сульфацитин), сульфоны (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) диатимосульфон, натрий глюкосульфон и соласульфон), циклосерин, мупироцин, туберин и их комбинации.
Противорвотные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) метоклопрамид, домперидон, прохлорперазин, прометазин, хлорпромазин, триметобензамид, ондасетрон, гранисетрон, гидроксизин, ацетиллейцина моноэтаноламин, ализаприд, азасетрон, бензхинамид, биетанаутин, бромоприд, буклизин, клебоприд, циклизин, дименгидринат, дифенидол, доласетрон, меклизин, металлатал, метопимазин, набилон, оксиперндил, пипамазин, скополамин, сульпирид, тетрагидроканнабинолы, тиэтилпиперазин, тиопроперазин, трописетрон и их комбинации.
Противогрибковые средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) амфотерицин В, итраконазол, кетоконазол, флуконазол, фосфлуконазол, интратекал, флуцитозин, миконазол, бутоконазол, клотримазол, нистатин, терконазол, тиоконазол, вориконазол, циклопирокс, эконазол, галопрогрин, нафтифин, тербинафин, ундециленат и гризеофулвин.
Противовоспалительные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) нестероидные противовоспалительные лекарственные средства, такие как салициловая кислота, ацетилсалициловая кислота, метилсалицилат, дифлунисал, салсалат, олсалазин, сульфасалазин, ацетаминофен, индометацин, сулиндак, этодолак, мефенамовая кислота, натрия меклофенамат, толметин, кеторолак, диклофенак, ибупрофен, напрксен, натрия напроксен, фенопрофен, кетопрофен, флурбинпрофен, оксапрозин, пироксикам, мелоксикам, ампироксикам, дроксикам, пивоксикам, теноксикам, набуметом, фенилбутазон, оксифенбутазон, антипирин, аминопирин, апазон и нимесулид, антагонисты лейкотриена, включая (но не ограничиваясь только ими) зилеутон, ауротиоглюкозу, золото-натрий тиомалат и ауранофин, стероиды, включая (но не ограничиваясь только ими) алклометазона дипропионат, амцинонид, беклометазона дипропионат, бетаметазон, бетаметазона бензоат, бетаметазона дипропионат, бетаметазона натрия фосфат, бетаметазона валерат, клобетазола пропионат, клокорталона пивалат, гидрокортизон, производные гидрокортизона, десонид,
- 39 031379 дезоксиматазон, дексаметазон, флунизолид, флукоксинолид, флурандренолид, гальциноцид, медризон, метилпреднизолон, метпреднизолона ацетат, метилпреднизолона натрия сукцинат, мометазона фуроат, параметазона ацетат, преднизолон, преднизолона ацетат, преднизолона натрия фосфат, преднизолона тебуатат, преднизон, триамцинолон, триамцинолона ацетонид, триамцинолона диацетат и триамцинолона гексатонид, и другие противовоспалительные средства, включая (но не ограничиваясь только ими) метотрексат, колхицин, аллопуринол, пробенецид, талидомид или его производное, 5-аминосалициловую кислоту, ретиноид, дитранол или кальципотриол, сульфинпиразон и бензбромарон.
Противовирусные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы протеаз, нуклеозидные/нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI), ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NNRTI), антагонисты CCR1, антагонисты CCR5 и нуклеозидные аналоги. Противовирусные средства включают (но не ограничиваясь только ими) фомивирсен, диданозин, ламивудин, ставудин, залцитабин, зидовудин, ацикловир, фамцикловир, валацикловир, ганцикловир, гангцикловир, цидофовир, заманавир, оселтамавир, видарабин, идоксуридин, трифлуридин, левовирин, вирамидин и рибавирин, а также фоскарнет, амантадин, римантадин, саквинавир, индинавир, нелфинавир, ампренавир, лопинавир, ритонавир, а-интерфероны; β-интерфероны; адефовир, клевадин, энтекавир, плеконарил, HCV-086, EMZ702, эмтрицитабин, целгосивир, валопицитабин, ингибиторы протеазы HCV, такие как BILN 2061, SCH-503034, ITMN-191 или VX-950, ингибиторы полимеразы NS5B, такие как NM107 (и его пролекарство NM283), R1626, R7078, BILN1941, GSK625433, GILD9128 или HCV-796, эфавиренц, HBY097, невирапин, ТМС-120 (дапивирин), ТМС-125, ВХ-471, этравирин, делавирдин, DPC-083, DPC-961, каправирин, рилпивирин, 5-{ [3,5-диэтил-1-(2-гидроксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]окси}изофталонитрил,
GW-678248, GW-695634, MIV-150, каланолид, TAK-779, SC-351125, анкривирок, викривирок, маравирок, PRO-140, аплавирок 40, Ono-4128, AK-602), AMD-887 CMPD-167, метил-1-эндо-{8-[^)-3(ацетиламино)-3-(3-фторфенил)пропил]-8-азабицикло[3.-2.1]окт-3-ил}-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-1Нимидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат, метил-3-эндо-{8-[^)-3-(ацетамидо)-3-(3-фторфенил)пропил]-8азабицикло[3.2.-1]окт-3-ил}-2-метил-4,5,6,7-тетрагидро-3Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат, этил1-эндо-{8-[^)-3-(ацетиламино)-3-(3-фторфенил)пропил]-8-азабицикло[3.-2.1]окт-3-ил}-2-метил-4,5,6,7тетрагидро-1Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и Ы-{(Ш)-3-[3-эндо-(5-изобутирил-2-метил-4,5,6,7тетрагидро-1Н-имидазо[4,-5-с]пиридин-1-ил)-8-азабицикло[3.2.1]окт-8-ил]-1-(3-фторфенил)пропил}ацетамид), BMS-806, BMS-488043, метиламид 5-{(1S)-2-[(2R)-4-бензоил-2-метилпиперазин-1-ил]-1-метил-2оксоэтокси}-4-метоксипиридин-2-карбоновой кислоты и 4-{(1S)-2-[(2R)-4-бензоил-2-метилпиперазин-1ил]-1-метил-2-оксоэтокси}-3-метокси-Ы-метилбензамид, энфувиртид (Т-20), сифувертид SP-01A, Т1249, PRO 542, AMD-3100, растворимый CD4, ингибиторы HMG-CoA-редуктазы, аторвастатин, 3-0-(3'3'диметилсукцинил)бетулиновую кислоту (другое название РА-457) и aHGA.
Иммуномодуляторные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) азатиоприн, такролимус, циклоспорина метотрексат, лефлуномид, кортикостероиды, циклофосфамид, циклоспорин А, циклоспорин G, микофенолят мофетила, аскомицин, рапамицин (сиролимус), FK-506, мизорибин, дезоксиспергуалин, бреквинар, микофеноловая кислота, малононитрилоамиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только им) лефлунамид), модуляторы Т-клеточных рецепторов и модуляторы цитокиновых рецепторов, пептидные миметики и антитела (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) человеческие, гуманизированные, химерные, моноклональные, поликлональные, Fvs-, ScFvs-, Fab- или F(ab)2-фрагменты или эпитопсвязывающие фрагменты), молекулы нуклеиновой кислоты (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антисмысловые молекулы нуклеиновой кислоты и тройные спирали), низкомолекулярные соединения, органические соединения и неорганические соединения. Примерами модуляторов Тклеточных рецепторов являются (но не ограничиваясь только ими) антитела к Т-клеточным рецепторам (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитела к CD4 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) сМ-Т412 (фирма Boehringer), IDEC-CE9.1™ (фирма IDEC и SKB), MAt 4162W94, Orthoclone и OKTcdr4a (фирма Janssen-Cilag)), антитела к CD3 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) Nuvion (фирма Product Design Labs), OKT3 (фирма Johnson & Johnson) или ритуксан (фирма IDEC)), антитела к CD5 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) иммуноконъюгат антитело к CD5, сцепленное с рицином), антитела к CD7 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) СНН-380 (фирма Novartis)), антитела к CD8, моноклональные антитела к лиганду CD40 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) IDEC-131 (фирма IDEC)), антитела к CD52 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) CAMPATH 1H (фирма Ilex)), антитела к CD2, антитела к CD11a (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ксанелим (фирма Genentech)), антитела к В7 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) IDEC-114 (фирма IDEC)), CTLA4иммуноглобулин и другие модуляторы Толл-подобного рецептора (TLR). Примерами модуляторов цитокиновых рецепторов являются (но не ограничиваясь только ими) растворимые рецепторы цитокинов (та
- 40 031379 кие, например, как (но не ограничиваясь только ими) внеклеточный домен рецептора TNF-α или его фрагмент, внеклеточный домен рецептора IL-1 β или его фрагмент и внеклеточный домен рецептора IL-6 или его фрагмент), цитокины или их фрагменты (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) интерлейкин (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, TNF-α, интерферон (IFN)-a, IFN-β, IFN-γ и GM-CSF), антитела к рецепторам цитокинов (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитела к рецептору IFN, антитела к рецептору IL-2 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) зенапакс (фирма Protein Design Labs)), антитела к рецептору IL-4, антитела к рецептору IL, антитела к рецептору IL-10 и антитела к рецептору IL-12), антитела к цитокинам (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитела к IFN, антитела к TNF, антитела к IL-1 β, антитела к IL, антитела к IL-8 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ABX-IL-8 (фирма Abgenix)) и антитела к IL-12).
Цитокины или модулятор функции цитокинов, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-3 (IL-3), интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-5 (IL-5), интерлейкин-6 (IL-6), интерлейкин-7 (IL-7), интерлейкин-9 (IL-9), интерлейкин-10 (IL-10), интерлейкин-12 (IL-12), интерлейкин 15 (IL-15), интерлейкин 18 (IL-18), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), эритропоэтин (Еро), эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов (GM-CSF), колониестимулирующий фактор гранулоцитов (G-CSF), колониестимулирующий фактор макрофагов (M-CSF), пролактин, α-, β- и γ-интерферон, интерферон β-Ха, интерферон β-tb. интерферон α-1, интерферон а-2а (роферон), интерферон a-2b, пэгилированные интерфероны (включая (но не ограничиваясь только ими) пэгинтерферон а-2а и пэгинтерферон a-2b), интрон, Пэг-интрон, пегасис, консенсусный интерферон (инферген), альбумин-интерферон а и албуферон.
Антидепрессанты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) бинедалин, кароксазон, циталопрам, диметазан, фенкамин, индалпин, инделоксазина гидрохлорид, нефопам, номифензин, окситриптан, оксипертин, пароксетин, сертралин, тиазесим, тразодон, бенмоксин, эхинопсидина йодид, этриптамин, ипоклозид, ипрониазид, изокарбоксазид, мебаназин, метфендразин, ниаламид, паргилин, октамоксин, фенелзин, фенипразин, феноксипропазин, пивгидразин, сафразин, селегилин, 1-депренил, котинин, ролициприн, ролипрам, мапротилин, метралиндол, миансерин, миртазепин, адиназолам, амитриптилин, амитриптилиноксид, амоксапин, бутриптилин, кломипрамин, демексептилин, дезипрамин, дибензепин, диметакрин, дитиепин, доксепин, флуацизин, имипрамин, имипрамина N-оксид, иприндол, лофепрамин, мелитрацен, метапрамин, нортриптилин, ноксиптилин, опипрамол, пизотилин, пропизепин, протриптилин, квинупрамин, тианептин, тримипрамин, адрафинил, бенактизин, бупропион, бутацетин, диоксадрол, дулоксетин, этоперидон, фебарбамат, фемоксетин, фенпентадиол, флуоксетин, флувоксамин, гематопорфирин, гиперицин, левофацетоперан, медифоксамин, милнаципран, минаприн, моклобемид, нефазодон, оксафлозан, пибералин, пролинтан, пирисукцидеанол, ритансерин, роксиндол, рубидия хлорид, сульпирид, тандоспирон, тозалинон, тофенацин, толоксатон, транилципромин, L-триптофан, венлафаксин, вилоксазин и зимелдин.
В конкретных вариантах осуществления изобретения антидепрессанты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, представляют собой ингибиторы МАО (моноаминооксидаза), включая (но не ограничиваясь только ими) бенмоксин, эхинопсидина йодид, этриптамин, ипроклозид, ипрониазид, изокарбоксазид, мебаназин, метфендразин, моклобамид, ниаламид, паргилин, фенелзин, фенипразин, феноксипропазин, пивгидразин, сафразин, селегилин, 1-депренил, толоксатон и транилципромин.
Гормоны, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) рилизинг-фактор лютенинизирующего гормона (LHRH), гормон роста (GH), рилизинг-фактор гормона роста, АСТН (кортикотропный гормон), соматостатин, соматотропин, соматомедин, гормон паращитовидной железы, гипоталамические рилизинг-факторы, инсулин, глюкагон, энкефалины, вазопрессин, кальцитонин, гепарин, низкомолекулярные гепарины, гепариноиды, тимостимулин, синтетические и природные опиоиды, инсулин- и тироид-стимулирующие гормоны и эндорфины.
Алкилирующие агенты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) азотистый иприт, этиленимины, метилмеламины, алкилсульфонаты, нитрозомочевины, кармустин, ломустин, триазены, мелфалан, мехлорэтамин, цисплатин, оксалиплатин, карбоплатин, циклофосфамид, ифосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, гексаметилмелаин, тиотепу, бусульфан, кармустин, стрептозоцин, даркабазин и темозоломид.
Антиметаболиты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением форму
- 41 031379 лы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) цитарабин, гемцитабин и антифолаты, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) фторпиримидины (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) 5-фторурацил и тегафур), ралтитрексед, метотрексат, цитозина арабинозид и гидроксимочевину.
Противоопухолевые антибиотики, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) антрациклины, блеомицин, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин и митрамицин.
Антимитотические агенты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) винка-алкалоиды (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) винкристин, винбластин, виндесин и винорелбин), таксоиды такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) таксол, паклитаксел и таксотер) и ингибиторы киназ семейства Polo.
Ингибиторы топоизомеразы, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) эпиподофиллотоксины, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) этопозид и тенипозид, амсакрин, топотекан, иринотекан и камптотецин.
Цитостатические средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) антиэстрогены (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) тамоксифен, фулвестрант, торемифен, ралоксифен, дролоксифен и иодоксифен), антиандрогены (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) бикалутамид, флутамид, нилутамид и ципротерона ацетат), антагонисты LHRH или агонисты LHRH (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) госерелин, леупрорелин, леупролид и бусерелин), прогестогены (такие, например, как (но не ограничиваясь только им) мегестрола ацетат), ингибиторы ароматазы (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) анастрозол, летрозол, воразол и эксеместан) и ингибиторы 5 аредуктазы (такие, например, как (но не ограничиваясь только им) финастерид).
Антиинвазивные агенты, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы киназ семейства c-Src (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) 4-(6-хлор-2,3-метилендиоксианилино)-7-[2-(4метилпиперазин-1-ил)этокси]-5-тетрагидропиран-4-илоксихиназолин (AZD0530) и №(2-хлор-6метилфенил)-2-{6-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-ил]-2-метилпиримидин-4-иламино}тиазол-5-карбоксамид (дазатиниб, BMS-354825)) и ингибиторы металлопротеиназ (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) маримастат, ингибиторы функции активатора плазминогена урокиназного типа и антитела к гепараназе).
Антиангиогенные средства, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) средства, которые ингибируют воздействия сосудистого эндотелиального фактора роста, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитело к сосудистому эндотелиальному фактору роста бевацизумаб (AVASTEST™) и ингибиторы тирозинкиназного рецептора VEGF, такие как 4-(4-бромо-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперазин-4илметокси)хиназолин (ZD6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3-пирролидин-1илпропокси)хиназолин (AZD2171), ваталаниб (PTK787) и SU1 1248 (сунитиниб), линомид и ингибиторы функции интегрина ανβ3 и ангиостатин.
Ингибиторы функции фактора роста, которые применяют в сочетании по меньшей мере с одним соединением формулы (I), представленным в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом, включают (но не ограничиваясь только ими) антитела к фактору роста и антитела к рецептору фактора роста (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) антитело к erbB2 трастузумаб (HERCEPTIN'™), антитело к EGFR панитумумаб, антитело к erbB 1 цетуксимаб (Erbitux, C225), ингибиторы тирозинкиназы, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы семейства эпидермального фактора роста (например, ингибиторы семейства тирозинкиназ EGFR, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) №(3-хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6-(3орфолинопропокси)хиназолин-4-амин (гефитиниб, ZD1 839), №(3-этинилфенил)-6,7-бис(2метоксиэтокси)хиназолин-4-амин (эрлотиниб, OSI-774) и 6-акриламидо-№(3-хлор-4-фторфенил)-7-(3морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (CI 1033), ингибиторы тирозинкиназы erbB2, такие, например, как (но не ограничиваясь только им) лапатиниб, ингибиторы семейства факторов роста гепатоцитов, ингибиторы семейства тромбоцитарных факторов роста, такие как иматиниб, GLEEVEC™, ингибиторы
- 42 031379 сериновых/треониновых киназ (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) ингибиторы передачи сигналов Ras/Raf, такие как ингибиторы фарнесилтрансферазы, например, сорафениб (BAY 439006)), ингибиторы передачи клеточных сигналов, опосредуемых киназами MEK и/или AKT, ингибиторы семейства факторов роста гепатоцитов, ингибиторы c-kit, ингибиторы киназы ab1, ингибиторы киназы рецептора IGF (инсулинподобный фактор роста); ингибиторы киназы aurora (например, AZD1 152, РН739358, VX-680, MLv8054, R763, МР235, МР529, VX-528 и АХ39459) и ингибиторы циклинзависимой киназы, такие как ингибиторы CDK2 и/или CDK4.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват применяют в сочетании со средствами против новообразования сосудов, таким, например, как (но не ограничиваясь только им) комбретастатин А4.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват применяют в сочетании со средствами антисмысловой терапии, таким, например, как (но не ограничиваясь только им) ISIS 2503, представляющий собой антисмысловой олигонуклеотид к гену ras.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват применяют в сочетании с подходами, основанными на генной терапии, включая, например, подходы, основанные на замене аберрантных генов, таких как аберрантный ген р53 или аберрантный ген BRCA1 или BRCA2, подходы на основе GDEPT (gene-directed enzyme gro-drug s therapy (ген-направленная ферментно-пролекарственная терапия)), такие как подходы с использованием цитозиндеаминазы, тимидинкиназы или фермента, представляющего собой бактериальную нитроредуктазу, и подходы, направленные на повышение переносимости пациентом химиотерапии или лучевой терапии, такие как генная терапия устойчивости ко многим лекарственным средствам.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват применяют в сочетании с иммунотерапевтическими подходами, включая, например, подходы ex vivo и in vivo, направленные на повышение иммуногенности опухолевых клеток пациента, такие как осуществление трансфекции с использованием цитокинов, таких как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов, подходы, направленные на снижение Т-клеточной анергии, подходы с использованием трансфектированных иммунных клеток, таких как трансфектированные цитокинами дендритные клетки, подходы с использованием трансфектированных цитокинами линий опухолевых клеток и подходы с использованием антиидиотипических антител.
В других вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленной в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват применяют в сочетании с другими методами лечения, включая (но не ограничиваясь только ими) хирургическое вмешательство и лучевую терапию (γ-излучение, лучевая терапия с использованием нейтронных пучков, лучевая терапия с использованием электронных пучков, протонная терапия, брахитерапия и системная терапия с использованием радиоактивных изотопов).
В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты вводят или включают в состав лекарственной формы в сочетании с усилителем абсорбции, включая (но не ограничиваясь только ими) гликохолат натрия, капрат натрия, Ы-лаурил-а-О-мальтопиранозид, ЭДТК и смешанные мицеллы. В конкретных вариантах осуществления изобретения мишенью таких усилителей абсорбции является лимфатическая система.
В конкретных вариантах осуществления изобретения доплнительный(е) терапевтический(е) агент(ы), применяемый(е) в комбинированной терапии, представленной в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) такие агенты, как ингибиторы фактора некроза опухоли альфа (TNF-а) (такие как моноклональные антитела к TNF (например (но не ограничиваясь только ими), ремикад, CDP-870 и адалимумаб) и молекулы иммуноглобулина к рецептору TNF (такие как (но не ограничиваясь только им) энбрел)); неселективные ингибиторы циклооксигеназы СОХ-1/СОХ-2 (такие как (но не ограничиваясь только ими) пироксикам, диклофенак, пропионовые кислоты, такие как напроксен, флубипрофен, фенопрофен, кетопрофен и ибупрофен, фенаматы, такие как мефенамовая кислота, индометацин, сулиндак, азапропазон, пиразолоны, такие как фенилбутазон, салицилаты, такие как аспирин), ингибиторы СОХ-2 (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) мелоксикам, целекоксиб, рофекоксиб, вальдекоксиб, лумарококсиб, парекоксиб и эторикоксиб); глюкокортикостероиды, мететрексат, лефуномид, гидроксихлорохин, d-пеницилламин, ауранофин или другие парентеральные или оральные золотосодержащие препараты.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с ингибитором биосинтеза лейкотриена, ингибитором
- 43 031379
5-липоксигеназы (5-LO) или антагонистом белка-активатора 5-липоксигеназы (FLAP), таким как зилеутон; АВТ-761; фенлеутон; тепоксалин; Abbott-79175; Abbott-85761; №(5-замещенные)тиофен-2алкилсульфонамид; 2,6-ди-трет-бутилфенолгидразоны; метокситетрагидропираны, такие как ZD-2138 фирмы Zeneca; соединение SB-210661; замещенное пиридинилом 2-цианнафталиновое производное, такое как L-739,010; 2-цианхинолиновое производное, такое как L-746,530; или индоловое или хинолиновое производное, такое как MK-591, MK-886 и BAYxl005.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с антагонистом рецепторов лейкотриенов (LT) В4, LTC4, LTD4 и LTE4, выбранным из группы, включающей фенотиазины-3-1, такие как L-651392; амидиновые соединения, такие как CGS-25019c; бензоксаламины, такие как онтазоласт; бензолкарбоксиимидамиды, такие как BIIL 284/260; и такие соединения, как зафирлукаст, аблукаст, монтелукаст, SINGULAIR™, пранлукаст, верлукаст (MK-679), RG-12525, Ro-245913, иралукаст (CGP 45715A) и BAYx7195.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с ингибитором фосфодиэстеразы (PDE), таким как метилксантанин, включая теофиллин и аминофиллин; селективным ингибитором изофермента PDE, включая ингибитор PDE4, в том числе (но не ограничиваясь только ими) циломиласт или рофлумиласт, ингибитор изоформы PDE4D или ингибитор PDE5.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с антагонистом гистаминового рецептора типа 1, таким как цетиризин, лоратадин, дезлоратадин, фексофенадин, акривастин, терфенадин, астемизол, азеластин, левокабастин, хлорфенирамин, прометазин, циклизин или мизоластин.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с гастропротективным антагонистом гистаминового рецептора типа 2. В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с антагонистом гистаминового рецептора типа 4.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с сосудосуживающим симпатомиметиком, представляющим собой агонист адренорецепторов α-1/α-2, таким как пропилгекседрин, фенилэфрин, фенилпропаноламин, эфедрин, псевдоэфедрин, нафазолина гидрохлорид, оксиметазолина гидрохлорид, тетрагидрозолина гидрохлорид, ксилометазолина гидрохлорид, трамазолина гидрохлорид или этилнорэпинефрина гидрохлорид.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с антихолинергическим агентом, включая антагонисты мускаринового рецептора (M1, M2 и М3), такие как атропин, хиосцин, гликопирролат, ипратропия бромид, тиотропия бромид, окситропия бромид, пирензепин или телензепин.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с агонистом β-адренорецептора (включая β-рецепторы подтипов 1-4), таким как изопреналин, сальбутамол, альбутерол, формотерол, сальметерол, тербуталин, орципреналин, битолтерола мезилат и пирбутерол.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с хромоном, таким как хромогликат натрия или недохромил натрия.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с миметиком инсулинподобного фактора роста типа I (IGF-I).
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с глюкокортикоидом, таким как флунизолид, триамцинолона ацетонид, беклометазона дипропионат, будесонид, флутиказона пропионат, циклезонид или мометазона фуроат.
- 44 031379
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с ингибитором матриксных металлопротеаз (ММР), а именно стромелизинов, коллагеназ и желатиназ, а также аггреканазы; прежде всего коллагеназы-1 (MMP-I), коллагеназы-2 (ММР-8), коллагеназы-3 (ММР-13), стромелизина-1 (ММР-3), стромелизина-2 (ММР-10) и стромелизина-3 (ММР-11) и ММР-9 и ММР-12.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с модуляторами функции хемокинового рецептора, такими как антагонисты CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 и CCR11 (для С-С-семейства); CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 и CXCR5 (для С-Х-С-семейства) и CX3CR1 для С-Х3-С-семейства.
В других вариантах осуществления изобретения представленные в настоящем описании комбинации включают комбинацию соединения формулы (I), представленного в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата с иммуноглобулином (Ig), γ-глобулином, содержащим Ig препаратом, либо антагонистом или антителом, модулирующим функцию Ig, таким как антитело к IgE (омализумаб).
Соединения формулы (I) в качестве иммунных потенциаторов
В конкретных вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или фармацевтически приемлемую соль или сольват, представляют собой иммуногенные композиции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные иммуногенные композиции можно применять в качестве вакцин. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные вакцины являются профилактическими (т.е. предназначены для предупреждения инфекции), а в других вариантах осуществления изобретения указанные вакцины являются терапевтическими (т.е. предназначены для лечения инфекции).
В других вариантах осуществления изобретения соединение(я) формулы (I), представленное(ые) в настоящем описании, или его(их) фармацевтически приемлемая соль или сольват являются иммунными потенциаторами и при введении придают иммуностимулирующее действие по сравнению с иммуногенными препаратами, которые не содержат соединение(я) формулы (I). В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) при введении придают иммуностимулирующее действие, когда входят в иммуногенную композицию, содержащую один или несколько иммунорегуляторов, а в других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) при введении придают иммуностимулирующее действие, когда входят в иммуногенную композицию, в которой отсутствуют другие иммунорегуляторы.
Иммуностимулирующее действие в контексте настоящего описания относится, как правило, к повышению действия иммуногенной композиции. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 10% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 20% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 30% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 40% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 50% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 60% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 70% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 80% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 90% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности иммуногенной композиции составляет по меньшей мере 100% по сравнению с действием иммуногенной композиции в отсутствие иммунного потенциатора.
В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение действия иммуноген
- 45 031379 ной композиции оценивают по повышению эффективности иммуногенной композиции в отношении обеспечения защитных действий. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности оценивают по снижению вероятности того, что у индивидуума, которому вводят иммуногенную композицию, возникнет состояние, в отношении которого иммуногенная композиция должна обладать защитным действием, или по уменьшению продолжительности или серьезности проявлений указанного состояния. В других вариантах осуществления изобретения указанное повышение эффективности оценивают по повышению титра антитела, образовавшегося под действием иммуногенной композиции у обработанного индивидуума.
Наряду с одним или несколькими соединениями формулы (I), представленными в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемой солью или сольватом указанные иммуногенные композиции включают в эффективном количестве один или несколько антигенов и фармацевтически приемлемый носитель. Такие носители представляют собой (но не ограничиваясь только ими) белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, сахарозу, трегалозу, лактозу, липидные агрегаты (такие как масляные капли или липосомы) и инактивированные вирусные частицы. Иммуногенные композиции, как правило, содержат также разбавители, такие как вода, физиологический раствор и глицерин, и необязательно содержат другие эксципиенты, такие как смачивающие или эмульгирующие агенты и забуферивающие рН субстанции.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции необязательно содержит один или несколько иммунорегуляторов. В конкретных вариантах осуществления изобретения один или несколько иммунорегуляторов включают один или несколько адъювантов. Указанные адъюванты представляют собой (но не ограничиваясь только ими) ТН1-адъювант и/или ТН2-адъювант, которые дополнительно будут описаны ниже. В конкретных вариантах осуществления изобретения адъюванты, которые применяют в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, представляют собой (но не ограничиваясь только ими):
A) содержащие минералы композиции;
Б) масляные эмульсии;
B) сапониновые формы;
Г) виросомы и вирусоподобные частицы;
Д) бактериальные или микробные производные;
Е) человеческие иммуномодуляторы;
Ж) биоадгезивы и мукоадгезивы;
З) микрочастицы;
И) липосомы;
К) препараты простого полиоксиэтиленового эфира и сложного полиоксиэтиленового эфира;
Л ) полифосфазен (РСРР);
М) мурамилпептиды и
Н) имидазохинолоновые производные.
Содержащие минералы композиции, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) соли минералов, такие как соли алюминия и соли кальция. Например, минеральные соли включают (но не ограничиваясь только ими) гидроксиды (например, оксигидроксиды, включая гидроксиды алюминия и оксигидроксиды алюминия), фосфаты (например, гидроксифосфаты и ортофосфаты, включая фосфаты алюминия, гидроксифосфаты алюминия и ортофосфаты алюминия, и фосфат кальция), сульфаты (например, сульфат алюминия) или смеси различных содержащих минералы соединений. Указанные минеральные соли находятся в любой приемлемой форме, такой, например, как (но не ограничиваясь только ими) гель, кристаллическая и аморфная формы. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные содержащие минералы композиции приготавливают в виде частиц, содержащих соли металла. В конкретных вариантах осуществления изобретения компоненты иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании, адсорбируют на указанных минеральных солях. В конкретных вариантах осуществления изобретения в иммуногенных комрозициях, представленных в настоящем описании, применяют в качестве адъюванта гидроксид алюминия и/или фосфат алюминия. В других вариантах осуществления изобретения антигены, которые применяют в иммуногенных композициях, адсорбируют на указанных применяемых в качестве адъювантов гидроксиде алюминия и/или фосфате алюминия. В конкретных вариантах осуществления изобретения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, в качестве адъюванта применяют фосфат кальция. В других вариантах осуществления изобретения антигены, которые применяют в иммуногенных композициях, адсорбируют на указанном используемом в качестве адъюванта фосфате кальция.
В конкретных вариантах осуществления изобретения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, в качестве адъюванта применяют фосфаты алюминия. В других вариантах осуществления изобретения фосфаты алюминия применяют в качестве адъюванта в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, при этом указанные композиции включают в качестве антигена сахарид H.influenzae. В конкретных вариантах осуществления изобретения адъювант представляет собой аморфный гидроксифосфат алюминия, в котором молярное соотношение PO4/A1 составляет
- 46 031379 от 0,84 до 0,92, в частности 0,6 мг А13+/мл. В других вариантах осуществления изобретения применяют адсорбцию с использованием низкой дозы фосфата алюминия, составляющей, например (но не ограничиваясь только ими), от 50 до 100 мкг А13+ на дозу конъюгата. Если в композицию входит более одного конъюгата, то не является необходимым, чтобы все конъюгаты были адсорбированы.
Масляные эмульсии, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) эмульсии сквален-вода (такие как MF59 (5% сквалена, 0,5% Твин 80 и 0,5% Спан 85, приготовленные в виде субмикронных частиц с помощью микрофлуидизатора), полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда (IFA).
Сапонины представляют собой гетерологичную группу гликозидов стеролов и гликозидов тритерпеноидов, которые присутствуют в коре, листьях, стеблях, корнях и даже цветках широкого разнообразиция видов растений. Формы сапонинов, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) сапонины из коры мыльного дерева Quillaia saponaria Molina, из Smilax ornata (сарсапарилла), Gypsophi11apanicu1ata (вуаль невесты) и Saponaria officiana1is (мыльный корень). В конкретных вариантах осуществления изобретения формы сапонинов, пригодные для применения в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) очищенные препараты, такие как (но не ограничиваясь только ими) QS7, QS17, QS18, QS21, QH-A, QH-B и QH-C. QS21 поступает в продажу под товарным знаком STIMULOM™. В других вариантах осуществления изобретения препараты санонинов включают препараты стеролов, холестерины и липидные препараты, такие как уникальные частицы, образованные из комбинаций сапонинов и холестеринов, которые называют иммуностимулирующими комплексами (ISCOM). В конкретных вариантах осуществления изобретения ISCOM включают фосфолипид, такой как фосфатидилэтаноламин или фосфатидилхолин. Любой известный сапонин можно применять в ISCOM. В конкретных вариантах осуществления изобретения ISCOM включает один или несколько из QuilA, QHA и QHC. В других вариантах осуществления изобретения в ISCOM необязательно отсутствует дополнительный детергент.
Виросомы и вирусоподобные частицы (ВПЧ), которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) один или несколько вирусных белков, необязательно объединенных с фосфолипидом или включенных вместе с ним в препаративную форму. Указанные виросомы и ВПЧ, как правило, являются непатогенными, нереплицирующимися и, как правило, не содержат никакого нативного вирусного генома. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные белки получают методами рекомбинации, а в других вариантах осуществления изобретения вирусные белки выделяют из полных вирусов.
Вирусные белки, которые можно применять в виросомах или ВПЧ, включают (но не ограничиваясь только ими) белки, полученные из вируса гриппа (такие как НА или NA), вируса гепатита В (такие как коровые или капсидные белки), вируса гепатита Е, вируса кори, вируса Синдбис, ротавируса, вируса ящура, ретровируса, вируса Норвалка, вируса человеческой папилломы, ВИЧ, РНК-фагов, QP-фага (например, оболочечные белки), GA-фага, fr-фага, АР205-фага и Ту (например, белок p1 ретротранспозона Ту).
Бактериальные и микробные производные, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) такие бактериальные или микробные производные, как нетоксичные производные энтеробактериального липополисахарида (LPS), производные липида А, иммуностимулирующие олигонуклеотиды и АДФ-рибозилирующие токсины и их детоксицированные производные. Указанные нетоксичные производные LPS включают (но не ограничиваясь только ими) монофосфориллипид A (MPL) и 3-О-деацилированный MPL (3dMPL). 3dMPL представляет собой смесь 3-Oдеацилированного монофосфориллипида А с 4, 5 или 6 ацилированными цепями. Другие нетоксичные производные LPS включают миметики монофосфориллипида А, такие как производные аминоалкилглюкозаминидфосфата (например, RC-529). Производные липида А включают (но не ограничиваясь только ими) производные липида А из Escherichia coli (например, ОМ-174).
Иммуностимулирующие олигонуклеотиды, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) нуклеотидные последовательности, содержащие мотив CpG (динуклеотидная последовательность, содержащая неметилированный цитозин, сцепленный фосфатной связью с гуанозином). Указанные CpG-последовательности могут быть двухцепочечными или одноцепочечными. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные нуклеотидные последовательности представляют собой двухцепочечные РНК или олигонуклеотиды, содержащие палиндромные или поли(dG) последовательности. В других вариантах осуществления изобретения CpG включают нуклеотидные модификации/аналоги, такие как фосфоротиоатные модификации.
В конкретных вариантах осуществления изобретения мишенью CpG-последовательностей является TLR9, а в других конкретных вариантах осуществления изобретения мотив представляет собой GTCGTT или TTCGTT. В конкретных вариантах осуществления изобретения CpG-последовательность является специфической в отношении индукции иммунного Th1-ответа, например (но не ограничиваясь только ими) олигодезоксинуклеотид (ODN) CpG-А, или в других вариантах осуществления изобретения CpGпоследовательность является более специфической в отношении индукции В-клеточного ответа, напри
- 47 031379 мер (но не ограничиваясь только ими) ODN CpG-B. В конкретных вариантах осуществления изобретения CpG представляет собой ODN CpG-A.
В конкретных вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид CpG конструируют таким образом, чтобы 5'-конец был доступен для распознавания рецептором. В других вариантах осуществления изобретения две олигонуклеотидные последовательности CpG необязательно присоединяют к 3'-концам с получением иммуномеров.
Наиболее часто применяемым адъювантом на основе иммуностимулирующих олигонуклеотидов является IC-31™. В конкретных вариантах осуществления изобретения адъювант, который применяют в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включает смесь (I) олигонуклеотида (например (но не ограничиваясь только им), состоящего из 15-40 нуклеотидов), включающего по меньшей мере один (и предпочтительно несколько) CpI-мотив (например (но не ограничиваясь только ими), цитозин, сцепленный с инозином с образованием динуклеотида), и (II) поликатионного полимера, такого, например, как (но не ограничиваясь только ими) олигопептид (например (но не ограничиваясь только им), состоящий из 5-20 аминокислот), который включает по меньшей мере один (и предпочтительно несколько) трипептидную(ые) последовательност(и) Lys-Arg-Lys. В конкретных вариантах осуществления изобретения олигонуклеотид представляет собой дезоксинуклеотид, содержащий 26-мерную последовательность 5'-(IC)I3-3'. В других вариантах осуществления изобретения поликатионный полимер представляет собой пептид, содержащий 11-мерную аминокислотную последовательность KLKLLLLLKLK.
В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные АДФ-рибозилирующие токсины и их детоксицированные производные применяют в качестве адъювантов в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные белки получают из Е. coli (чувствительный к нагреванию энтеротоксин Е. coli LT), возбудителя холеры (СТ) или коклюша (РТ). В других вариантах осуществления изобретения токсин или токсоид находится в форме голотоксина, содержащего как А-, так и В-субъединицу. В других вариантах осуществления изобретения А-субъединица содержит детоксицирующую мутацию; а В-субъединица не содержит мутации. В других вариантах осуществления изобретения адъювант представляет собой детоксицированный мутант LT, такой как LT-K63, LT-R72 и LT-G192.
Человеческие иммуномодуляторы, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) цитокины, такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) интерлейкины (IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12), интерфероны (такие, например, как (но не ограничиваясь только ими) интерферон-γ), колониестимулирующий фактор макрофагов и фактор некроза опухолей.
Биоадгезивы и мукоадгезивы, которые можно применять в качестве адъювантов в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) микросферы из этерифицированной гиуалуроновой кислоты и перекрестно-сшитые производные поли(акриловой кислоты), поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полисахариды и карбоксиметилцеллюлозу. В конкретных вариантах осуществления изобретения в композициях вакцин, представленных в настоящем описании, в качестве адъювантов применяют хитозан и его производные.
Микрочастицы, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) микрочастицы, состоящие из материалов, которые являются биоразлогаемыми и нетоксичными (например, поли(а-гидроксикислота), полигидроксимасляная кислота, сложный полиортоэфир, полиангидрид, поликапролактон и т.д.), в сочетании с поли(лактид-когликолидом). В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные микрочастицы обрабатывают таким образом, чтобы они имели отрицательно заряженную поверхность (например, с использованием ДСН) или положительно заряженную поверхность (например, с использованием катионного детергента, такого как СТАВ). Микрочастицы, которые можно применять в качестве адъювантов, имеют диаметр частиц, составляющий от примерно 100 нм до примерно 150 мкм. В конкретных вариантах осуществления изобретения диаметр частиц составляет от примерно 200 нм до примерно 30 мкм, а в других вариантах осуществления изобретения диаметр частиц составляет от примерно 500 нм до 10 мкм.
Препараты простого полиоксиэтиленового эфира и сложного полиоксиэтиленового эфира, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) поверхностноактивные вещества, представляющие собой сложные эфиры полиоксиэтиленсорбитана, в сочетании с октоксинолом, и поверхностно-активные вещества, представляющие собой простые или сложные алкиловые эфиры полиоксиэтилена, в сочетании по меньшей мере с одним дополнительным неионогенным поверхностно-активным веществом, таким как октоксинол. В конкретных вариантах осуществления изобретения простые полиоксиэтиленовые эфиры выбирают из простого полиоксиэтилен-9-лаурилового эфира (лаурет 9), полиоксиэтилен-9-стеорилового эфира, полиоксиэтилен-8-стеорилового эфира, полиоксиэтилен-4-лаурилового эфира, полиоксиэтилен-35-лаурилового эфира и полиоксиэтилен-23лаурилового эфира.
Мурамилпептиды, которые можно применять в качестве адъювантов, включают (но не ограничиваясь только ими) №ацетилмурамил-Е-треонил-Э-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетил-нормурамил-Е
- 48 031379 аланил-Э-изоглутамин (нор-MDP) и №ацетилмурамилА-аланилЮ-изоглутаминилШ-аланин-2-(Г-2'дипальмитоил^-н-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)этиламин МТР-РЕ).
В конкретных вариантах осуществления изобретения одно или несколько соединений формулы (I), применяемых в качестве иммунных потенциаторов, включают в композиции, которые содержат комбинации одного или нескольких указанных выше адъювантов. Указанные комбинации включают (но не ограничиваясь только ими):
(1) сапонин и эмульсию типа масло-в-воде;
(2) сапонин (например, QS21) + нетоксичное производное LPS (например, 3dMPL);
(3) сапонин (например, QS21) + нетоксичное производное LPS (например, 3dMPL)+ холестерин;
(4) сапонин (например, QS21) + 3dMPI'L+IL-12 (необязательно включающий стерол);
(5) комбинации 3dMPL, например, с QS21 и/или эмульсиями типа масло-в-воде;
(6) SAF, содержащий 10% сквалана, 0,4% Твин 80™, 5% блок-полимера плюроника L121 и thrMDP, либо подвергнутый микропсевдоожижению с образованием субмикронной эмульсии, либо интенсивно перемешанный с образованием эмульсии с частицами более крупного размера;
(7) систему адъюванта RIBI™ (RAS), (фирма Ribi Immunochem), содержащую 2% сквалена, 0,2% Твин 80 и один или несколько компонентов оболочки бактериальной клетки, выбранных из группы, включающей монофосфориллипид A (MPL), димеколат трегалозы ^DM) и скелет клеточной оболочки (CWS), предпочтительно MPL+CWS (Detox™); и (8) одну или несколько минеральных солей (такую как соль алюминия salt) + нетоксичное производное LPS (такое как 3dMPL).
В других вариантах осуществления изобретения комбинации адъювантов, применяемых в иммуногенных комбинациях, представленных в настоящем описании, включают комбинации Т111- и Т112адъювантов, таких как (но не ограничиваясь только ими) CpG и квасцы или резиквимод и квасцы.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, вызывают как клеточно-опосредованный иммунный ответ, так и гуморальный иммунный ответ. В других вариантах осуществления изобретения иммунный ответ индуцирует длительный (например, нейтрализующий) гуморальный ответ и клеточно-опосредованный иммунитет, включающий быстрые ответы при воздействии инфекционного агента.
Два типа Т-клеток, CD4+- и ΟΟ8+-κ№τκη, как правило, необходимы для инициации и/или усиления клеточно-опосредованного иммунитета и гуморального иммунитет. CD8+-Т-клетки могут экспрессировать корецептор CD8 и их обычно обозначают как цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ). CD8+-Т-клетки обладают способностью распознавать или взаимодействовать с антигенами, которые презентуются молекулами ГКГ класса I.
CD4+-Т-клетки могут экспрессировать корецептор CD4 и их обычно обозначают как Т-клеткихелперы. CD4+-Т-клетки обладают способностью распознавать антигенные пептиды, связанные с молекулами ГКГ класса II. При взаимодействии с молекулой ГКГ класса II ΟΟ4+-κ№τκη могут секретировать факторы, такие как цитокины. Указанные секретированные цитокины могут активировать В-клетки, цитотоксические Т-клетки, макрофаги и другие клетки, которые участвуют в иммунном ответе. Т-клеткихелперы или CD4+-клетки можно подразделять также на две функционально различные подпопуляции: ТН1-фенотип и ТН2-фенотипы, которые различаются по их цитокинам и эффекторной функции.
Активированные ТН1-клетки усиливают клеточный иммунитет (включая повышение производства антигенспецифических ЦТЛ), и поэтому играют важную роль в ответах на внутриклеточные инфекции. Активированные ТН1-клетки могут секретировать один или несколько таких факторов, как IL-2, IFN-γ и Т№-3. Тн1-иммунный ответ может приводить к местным воспалительным реакциям путем активации макрофагов, NK-клеток (естественных киллеров) и цитотоксических ОЭ8+-Т клеток (ЦТЛ). Действием ТН1-иммунного ответа может быть также расширение иммунного ответа путем стимуляции роста В- и Тклеток с помощью IL-12. Стимулированные ТН1 В-клетки могут секретировать IgG2a.
Актированные ТН2-клетки могут повышать производство антител и поэтому играют важную роль в ответах на внеклеточные инфекции. Активированные ТН2-клетки могут секретировать один или несколько таких факторов, как IL-4, IL-5, IL-6 и IL-10. ТН2-иммунный ответ может приводить к производству IgG1, IgE, IgA и В-клеток памяти для последующей защиты.
Усиленный иммунный ответ включает один или несколько усиленных ТН1-иммунных ответов и ТН2-иммунных ответов.
ТН1-иммунный ответ включает один или несколько следующих вариантов: повышение активности ЦТЛ, повышение активности одного или нескольких цитокинов, ассоциированных с ТН1-иммунным ответом (таких как IL-2, IFN-γ и Т№-3), повышение уровня активированных макрофагов, повышение активности NK или повышение производства IgG2a. Предпочтительно усиленный ТН1-иммунный ответ должен включать повышение производства IgG2a.
Тн1-адъюванты можно применять для вызывания Тн1-иммунного ответа. Тн1-адъювант может, как правило, вызывать повышенные уровни производства IgG2a по сравнению с иммунизацией антигеном без адъюванта. Тн1-адъюванты, которые можно применять в иммуногенных композициях, пред
- 49 031379 ставленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) препараты сапонина, виросомы и вирусоподобные частицы, нетоксичные производные энтеробактериального липополисахарида (LPS), иммуностимулирующие олигонуклеотиды. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуностимулирующие олигонуклеотиды, которые применяют в качестве ТН1-адъювантов в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, содержат CpG-мотив.
ТН2-иммунный ответ может включать повышение уровня одного или нескольких цитокинов, ассоциированных с ТН2-иммунным ответом (таких как IL-4, IL-5, IL-6 и IL-10), или увеличение производства IgG1, IgE, IgA и В-клеток памяти. Предпочтительно усиленный ТН2- иммунный ответ должен включать повышение производства IgG1.
ТН2-адъюванты можно применять для вызывания ТН2- иммунного ответа. ТН2-адъюванты, как правило, должны вызывать повышенные уровни производства IgG1 по сравнению с иммунизацией антигеном без адъюванта. ТН2-адъюванты, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) содержащие минералы композиции, масляные эмульсии и АДФ-риболизирующие токсины и их детоксицированные производные. В конкретных вариантах осуществления изобретения содержащие минералы композиции, применяемые в качестве ТН2-адъювантов в иммуногенных композициях, указанных в настоящем описании, представляют собой соли алюминия.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают TH1-адъювант и ТН2-адъювант. В других вариантах осуществления изобретения указанные композиции вызывают усиленный ТН1-ответ и усиленный ТН2-ответ, например, повышение производства как IgG1, так и IgG2a по сравнению со иммунизацией без адъюванта. В следующих вариантах осуществления изобретения указанные композиции, содержащие комбинацию ТН1адъюванта и ТН2-адъюванта, вызывают повышенный ТН1- и/или повышенный ТН2-иммунный ответ по сравнению с иммунизацией одним адъювантом (т.е. по сравнению с иммунизацией только с использованием ТН1-адъюванта или иммунизацией с использованием только ТН2-адъюванта).
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммунный ответ представляет собой только ТН1-иммунный ответ или только ТН2-ответ или оба эти ответа. В других вариантах осуществления изобретения иммунный ответ представляет собой только усиленный ТН1-ответ и усиленный ТН2-ответ или оба эти ответа.
В конкретных вариантах осуществления изобретения усиленный иммунный ответ представляет собой только системный иммунный ответ или только иммунный ответ слизистой оболочки или оба эти ответа. В других вариантах осуществления изобретения иммунный ответ представляет собой только усиленный системный иммунный ответ, или только усиленный иммунный ответ слизистой оболочки, или оба эти ответа. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммунный ответ слизистой оболочки представляет собой ТН2-иммунный ответ. В конкретных вариантах осуществления изобретения имунный ответ слизистой оолочки включает повышение производства IgA.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, применяют в качестве вакцин, при этом указанные композиции включают в иммунологически эффективном количестве один или несколько антигенов.
Антигены, предназначанные для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, могут находиться в эффективном количестве (например, в количестве, эффективном для применения в терапевтических, профилактических или диагностических методах). Например, иммуногенные композиции, предлагаемые в изобретении, можно применять для лечения или предупреждения инфекций, вызываемых любым из перечисленных ниже патогенов.
Антигены, предназначенные для применения в иммуногенных композициях, указанных в настоящем описании, как правило, представляют собой макромолекулы (например, полипептиды, полисахариды, полинуклеотиды), которые являются чужеродными для хозяина, и они включают (но не ограничиваясь только ими) один или несколько из представленных ниже антигенов или антигенов, полученных из одного или нескольких из перечисленных ниже патогенов.
Бактериальные антигены
Бактериальные антигены, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) белки, полисахариды, липополисахариды, полинуклеотиды везикулы наружной мембраны, которые выделены, очищены или получены из бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены включают бактериальные лизаты и инактивированные препараты бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены получают путем рекомбинантной экспрессии. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены включают эпитопы, которые экспрессируются на поверхности бактерий в течение по меньшей мере одной стадии их жизненного цикла. Бактериальные антигены предпочтительно являются консервативными для множества серотипов. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены включают антигены, полученные из одного или нескольких указанных ниже видов бактерий, а также представляют собой специфические антигены, перечисленные ниже.
- 50 031379
Neisseria meningitidis: антигены Neisseria meningitides включают (но не ограничиваясь только ими) белки, сахариды (включая полисахарид, олигосахарид, липоолигосахарид или липополисахарид) или везикулы наружной мембраны, очищенные или полученные из серогруппы N. meningitides, такой как А, С, W135, Y, X и/или В. В конкретных вариантах осуществления изобретения белковые антигены Neisseria meningitides выбирают из адгезивов, автотранспортеров, токсинов, захватывающих Fe белков и ассоциированных с мембраной белков (предпочтительно интегрального (трансмембранного) белка наружной мембраны).
Streptococcuspneumoniae: антигены Streptococcuspneumoniae включают (но не ограничиваясь только ими) сахарид (включая полисахарид или олигосахарид) и/или белок из Streptococcus pneumoniae. Сахарид может представлять собой полисахарид, который имеет размер, полученный в процессе очистки сахарида из бактерий, или он может представлять собой олигосахарид, полученный в результате фрагментации указанного полисахарида. Например, в 7-валентном продукте PREVNAR™ 6 сахаридов присутствуют в виде интактных полисахаридов, а один (серотип 18С) присутствует в виде олигосахарида. В конкретных вариантах осуществления изобретения сахаридные антигены выбирают из одного или нескольких следующих пневмококковых серотипов: 1, 2, 3, 4, 5, 6А, 6В, 7F, 8, 9N, 9V, 10А, 11 А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 19А, 19F, 20, 22F, 23F и/или 33F. Иммуногенная композиция может включать несколько серотипов, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или большее количество серотипов. В данной области уже известны 7-валентные, 9-валентные, 10-валентные, 11валентные и 13-валентные конъюгированные комбинации, а кроме того, известна 23-валентная неконъюгированная комбинация. Например, 10-валентная комбинация может включать сахарид из серотипов 1, 4, 5, 6В, 7F, 9V, 14, 18С, 19F и 23F. 11-валентная комбинация может включать также сахарид из серотипа 3. 12-Валентную комбинацию можно добавлять в смесь 10-валентных: серотипы 6А и 19А; 6А и 22F; 19А и 22F; 6А и 15В; 19А и 15В; 22F и 15В; 13-валентную комбинацию можно добавлять к смеси 11валентных: серотипы 19А и 22F; 8 и 12F; 8 и 15В; 8 и 19А; 8 и 22F; 12F и 15В; 12F и 19А; 12F и 22F; 15В и 19А; 15В и 22F и т.д. В конкретных вариантах осуществления изобретения белковые антигены можно выбирать из белка, идентифицированного в WO 98/18931, WO 98/18930, US 6699703, US 6800744, WO 97/43303, WO 97/37026, WO 02/079241, WO 02/34773, WO 00/06737, WO 00/06738, WO 00/58475, WO 2003/082183, WO 00/37105, WO 02/22167, WO 02/22168, WO 2003/104272, WO 02/08426, WO 01/12219, WO 99/53940, WO 01/81380, WO 2004/092209, WO 00/76540, WO 2007/116322, у LeMieux и др., Infect. Imm., 74, 2006, cc. 2453-2456, Hoskins и др., J. Bacteriol., 183, 2001, cc. 5709-5717, Adamou и др., Infect. Immun., 69(2), 2001, cc. 949-958, Briles и др., J. Infect. Dis., 182, 2000, cc. 1694-1701, Talkington и др., Microb. Pathog., 21(1), 1996, cc. 17-22, Bethe и др., FEMS Microbiol. Lett., 205(1), 2001, cc. 99-104, Brown и др., Infect. Immun., 69, 2001, cc. 6702-6706, Whalen и др., FEMS Immunol. Med. Microbiol., 43, 2005, cc. 7380, Jomaa и др., Vaccine, 24(24), 2006, cc. 5133-5139. В других вариантах осуществления изобретения белки Streptococcus pneumoniae можно выбирать из семейства белков полигистидиновой триады (PhtX), холинсвязывающих белков (CbpX), укороченных белков CbpX, семейства LytX, укороченных белков LytX, химерных белков укороченный белок CbpX-укороченный белок LytX, пневмолизина (Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125, Sp133, субъединиц Pneumococcal pilus.
Streptococcuspyogenes (стрептококк группы А): антигены стрептококка группы А включают (но не ограничиваясь только ими) белок, описанный в WO 02/34771 или WO 2005/032582 (включая GAS 40), слияния фрагментов белков GAS М (включая слияния, описанные в WO 02/094851 и Dale, Vaccine, 17, 1999, cc. 193-200 и Dale, Vaccine 14(10), cc. 944-948), фибронектинсвязывающий белок (Sfb1), стрептококковый гемассоциированный белок (Shp) и стрептолизин S (SagA).
Moraxella catarrhalis: антигены Moraxella catarrhalis включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, описанные в WO 02/18595 и WO 99/58562, белковые антигены наружной мембраны (HMWOMP), С-антиген и/или LPS.
Bordetellapertussis: коклюшные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) коклюшный голотоксин (РТ) и волокнистый гемагглютинин (FHA) B.pertussis, необязательно также в сочетании с антигенами пертактина и/или агглютиногенов 2 и 3.
Burkholderia: антигены Burkholderia включают (но не ограничиваясь только ими) Burkholderia mallei, Burkholderia pseudomallei и Burkholderia cepacia.
Staphylococcus aureus: антигены S. aureus включают (но не ограничиваясь только ими) полисахарид и/или белок из S. aureus, полисахариды S. aureus включают (но не ограничиваясь только ими) капсульные полисахариды типа 5 и типа 8 (СР5 и СР8), необязательно конъюгированные с нетоксичным рекомбинантным экзотоксином A Pseudomonas aeruginosa, такие как StaphVAXTM, полисахаридов типа 36 (336PS), полисахарид внутриклеточной адгезии (PIA, также известный как PNAG). Белки S. aureus включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из поверхностных белков, инвазинов (лейкоцидин, киназы, гиалуронидаза), поверхностных факторов, которые ингибируют фагоцитарное поглощение (капсула, белок А), каротиноидов, белков, участвующих в производстве каталазы, белка А, коагулазы, фактора свертывания и/или повреждающих мембрану токсинов (необязательно детоксицированных), которые лизируют мембраны эукариотических клеток (гемолизины, лейкотоксин, лейкоцидин). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены S. aureus можно выбирать из белков, ука
- 51 031379 занных в WO 02/094868, WO 2008/019162, WO 02/059148, WO 02/102829, WO 03/011899, WO 2005/079315, WO 02/077183, WO 99/27109, WO 01/70955, WO 00/12689, WO 00/12131, WO 2006/032475, WO 2006/032472, WO 2006/032500, WO 2007/113222, WO 2007/113223, WO 2007/113224. В других вариантах осуществления изобретения антигены S. aureus можно выбирать из IsdA, IsdB, IsdC, SdrC, SdrD, SdrE, ClfA, ClfB, SasF, SasD, SasH (AdsA), Spa, EsaC, EsxA, EsxB, Emp, HlaH35L, CP5, CP8, PNAG, 336PS.
Staphylococcus epidermis: антигены S. epidermidis включают (но не ограничиваясь только ими) ассоциированный со слизью антиген (SAA).
Clostridium tetani (столбняк): антигены столбняка включают (но не ограничиваясь только ими) столбнячный токсоид (ТТ). В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные антигены применяют в качестве белка-носителя в сочетании с/конъюгированного с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании.
Clostridium perfringens: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) эпсилон-токсин из Clostridium perfringen.
Clostridium botulinums (ботулизм): антигены ботулизма включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из С. botulinum.
Cornynebacterium diphtheriae (дифтерия): дифтерийные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) дифтерийный токсин, предпочтительно детоксицированный, такой как CRM197. Дополнительные антигены, которые обладают способностью модулировать, ингибировать АДФ-рибозилирование или связанные с ним, можно применять в комбинации/для совместного введения/конъюгации с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления изобретения дифтерийные токсоиды применяют в качестве белков-носителей.
Haemophilus influenzae В (Hib): антигены Hib включают (но не ограничиваясь только ими) сахаридный антиген Hib.
Pseudomonas aeruginosa: антигены Pseudomonas включают (но не ограничиваясь только ими) эндотоксин А, белок Wzz, LPS P. aeruginosa, LPS, выделенный из РАО1 (серотип 05) и/или белки наружной мембраны, включая белки F наружной мембраны (OprF).
Legionellapneumophila: бактерильные антигены, полученные из Legionella pneumophila.
Coxiella burnetii: бактериальные антигены, полученные из Coxiella burnetii.
Brucella: бактериальные антигены, полученные из Brucella, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены В. abortus, В. canis, В. melitensis, В. neotomae, В. ovis, В. suis и В. pinnipediae.
Francisella: Бактериальные антигены, полученные из Francisella, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены из F. novicida, F. philomiragia и F. tularensis.
Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В): антигены стрептококка группы В включают (но не ограничиваясь только ими) белковые или сахаридные антигены, описанные в WO 02/34771, WO 03/093306, WO 04/041157 или WO 2005/002619 (включая белки GBS 80, GBS 104, GBS 276 и GBS 322 и включая сахаридные антигены, полученные из серотипов Ia, Ib, Ia/c, II, III, IV, V, VI, VII и VIII).
Neiserria gonorrhoeae: гонорейные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) белок Por (или порин), такой как PorB (см. Zhu и др., Vaccine, 22, 2004, сс. 660-669), трансферринсвязывающий белок, такой как TbpA и TbpB (см. Price и др., Infection and Immunity, 71(1), 2004, сс. 277-283), обусловливающий мутность белок (такой как Ора), модифицируемый восстановлением белок (Rmp) и препараты везикул наружной мембраны (OMV) (см. Plante и др., J. Infectious Disease, 182, 2000, сс. 848-855), см., например, также WO 99/24578, WO 99/36544, WO 99/57280, WO 02/079243).
Chlamydia trachomatis: антигены Chlamydia trachomatis включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из серотипов А, В, Ва и С (агенты, вызывающие трахому, которая является причиной слепоты), серотипов Lj, L2 и L3 (ассоциированы с венерической лимфогранулемой) и серотипов DK. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены Chlamydia trachomatis включают (но не ограничиваясь только ими) антиген, описанный в WO 00/37494, WO 03/049762, WO 03/068811 или WO 05/002619, включая РерА (СТ045), LcrE (CT089), ArtJ (CT381), DnaK (CT396), СТ398, OmpH-подобный (СТ242), L7/L12 (СТ316), OmcA (CT444), AtosS (CT467), CT547, Eno (CT587), HrtA (CT823) и MurG (CT761).
Treponemapallidum (сифилис): сифилитические антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антиген TmpA.
Haemophilus ducreyi (возбудитель мягкого шанкра): антигены Haemophilus ducreyi включают (но не ограничиваясь только ими) белок наружной мембраны (DsrA).
Enter-ococcus faecalis или Enterococcus faecium: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) трисахаридный повтор или другие полученные из Enterococcus антигены.
Helicobacter pylori: антигены Н. pylori включают (но не ограничиваясь только ими) Cag, Vac, Nap, HopX, HopY и/или уреазный антиген.
Staphylococcus saprophyticus: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) гемагглютинин массой 160 кДа антигена S. saprophyticus.
Yersinia enterocolitica: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) LPS.
- 52 031379
Е. coli: антигены Е. coli можно получать из энтеротоксигенной E.coli (ЕТЕС), энтероагрегативной H.coli (EAggEC), диффузно прикрепляющейся Е.осН (DAEC), энтеропатогенной E.coli (EPEC) и/или энтерогеморрагической E.coli (ЕНЕС). Антигены ЕхРЕС включают (но не ограничиваясь только ими) вспомогательный фактор колонизации (orf3526), orf353, белок бактериального Ig-подобного домена (группа 1) (orf405), orf1364, относящийся в семейству NodT фактор наружной мембраны - транспортер оттока липопротеина (orf1767), gspK (orf3515), gspJ (orf3516), tonB-зависимый сидерофорный рецептор (orf3597), фимбриальный белок (orf3613), upec-948, upec-1232, А-цепь предшественника типа-1 фимбриального белка (upec-1875), гомолог yap H (upec-2820) и гемолизин А (recp-3768).
Bacillus anthracis (сибирская язва): антигены В. anthracis включают (но не ограничиваясь только ими) А-компоненты (летальный фактор (LF) и фактор отека (EF)), каждый из которых может содержать общий В-компонент, известный как протективный антиген (РА). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены В. anthracis необязательно детоксицируют.
Yersiniapestis (чума): чумные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) капсульный антиген F1, LPS, антиген V Yersinia pestis.
Mycobacterium tuberculosis: туберкулезные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) липопротеины, LPS, антигены БЦЖ, слитый белок антигена 85В (Ag85B), ESAT-6, необязательно включенные в состав катионных липидных везикул, антигены, ассоциированные с изоцитратдегидрогеназой Mycobacterium tuberculosis (Mtb) и антигены МРТ51.
Rickettsia: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) белки наружной мембраны, включая белок А и/или В наружной мембраны (OmpB), LPS и поверхностный белковый антиген (SPA).
Listeria monocytogenes: бактериальные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из Listeria monocytogenes.
Chlamydia pneumoniae: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, указанные в WO 02/02606.
Vibrio cholerae: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) протеиназные антигены, LPS, прежде всего липополисахариды Vibrio cholerae II, O1 Inaba О-специфические полисахариды, V. cholera 0139, антиген вакцины IEM108 и токсин Zonula occludens (Zot).
Salmonella typhi (брюшной тиф): антигены включают (но не ограничиваясь только ими) капсулярные полисахариды, предпочтительно конъюгаты (Vi, т.е. vax-TyVi).
Borrelia burgdorferi (болезнь Лайма): антигены включают (но не ограничиваясь только ими) липопротеины (такие как OspA, OspB, Osp С и Osp D), другие поверхностные белки, такие как OspEсвязанные белки (Erps), декоринсвязывающие белки (такие как DbpA), антигенно вариабельные белки VI, такие как антигены, ассоциированные с Р39 и Р13 (интегральный мембранный белок, антигенный вариационный белок VlsE).
Porphyromonas gingivalis: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) белок наружной мембраны (ОМР) P. gingivalis.
Klebsiella: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) ОМР, включая ОМР А, или полисахарид, необязательно конъюгированный с токсоидом столбняка.
Другие бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) капсульные антигены, полисахаридные антигены, белковые антигены или полинуклеотидные антигены любой из указанных выше бактерий. Другие бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) препарат везикул наружной мембраны (OMV). Кроме того, другие бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) живые, ослабленные и/или очищенные версии любой из вышеуказанных бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают антигены, полученные из грамотрицательных, а в других вариантах осуществления изобретения их получают из грамположительных бактерий. В конкретных вариантах осуществления изобретения бактериальные антигены, применяемые в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, получают из аэробных бактерий, а в других вариантах осуществления изобретения их получают из анаэробных бактерий.
В конкретных вариантах осуществления изобретения любые вышеуказанные полученные из бактерий сахариды (полисахариды, LPS (липополисахарид), LOS (липоолигосахарид) или олигосахариды) конъюгируют с другим агентом или антигеном, таким как белок-носитель (например, CRM197). В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные конъюгаты представляют собой непосредственно связанные конъюгаты, полученные путем восстановительного аминирования карбонильных фрагментов сахарида с образованием аминогрупп белка. В других вариантах осуществления изобретения сахариды конъюгируют через линкер, такой как сукцинамидный или другие линкеры, описанные в Bioconjugate Techniques, 1996 и CRC, Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking, 1993.
В конкретных вариантах осуществления изобретения пригодные для применения с целью лечения или предупреждения вызываемой Neisseria инфекции и родственных заболеваний и нарушений, реком
- 53 031379 бинантные белки из N. meningitides, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, могут представлять собой белки, упомянутые в WO 99/24578, WO 99/36544, WO 99/57280, WO 00/22430, WO 96/29412, WO 01/64920, WO 03/020756, WO 2004/048404 и WO 2004/032958. Указанные антигены можно применять индивидуально или в комбинациях. Если объединяют несколько очищенных белков, то целесообразно применять смесь из 10 или меньшего количества (например, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2) очищенных антигенов.
Наиболее пригодная комбинация антигенов для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, указана у Giuliani и др., Proc Natl Acad Sci USA, 103(29), 2006, сс. 10834-10839 и в WO 2004/032958, и такая иммуногенная композиция может включать 1, 2, 3, 4 или 5 следующих компонентов: (1) белок NadA (известный также как GNA1994 и NMB1994); (2) белок fHBP (известный также как 741, LP2086, GNA1870 и NMB1870); (3) белок 936 (известный также как GNA2091 и NMB2091); (4) белок 953 (известный также как GNA1030 и NMB1030) и (5) белок 287 (известный также как GNA2132 и NMB2132). Другие возможные комбинации антигенов могут содержать трансферринсвязывающий белок (например, TbpA и/или TbpB) и антиген Hsf. Другие возможные очищенные антигены, предназначенные для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают белки, которые содержат одну из следующих аминокислотных последовательностей: SEQ ID NO: 650 из WO 99/24578; SEQ ID NO: 878 из WO 99/24578; SEQ ID NO: 884 из WO 99/24578; SEQ ID NO: 4 из WO 99/36544; SEQ ID NO: 598 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 818 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 864 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 866 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1196 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1272 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1274 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 1640 из WO 99/57280; SEQ ID NO:
1788 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2288 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2466 из WO 99/57280; SEQ ID NO:
2554 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2576 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2606 из WO 99/57280; SEQ ID NO:
2608 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2616 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2668 из WO 99/57280; SEQ ID NO:
2780 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2932 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2958 из WO 99/57280; SEQ ID NO:
2970 из WO 99/57280; SEQ ID NO: 2988 из WO 99/57280 (каждая из вышеуказанных аминокислотных последовательностей включена в настоящее описании путем включения в качестве ссылки процитированного документа), или полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, которая: (а) идентична на 50% или более (например, на 60, 70, 80, 90, 95, 99% или более) указанным последовательностям; и/или (б) содержащий фрагмент, который состоит по меньшей мере из n последовательных аминокислот из указанных последовательностей, где n обозначает 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 или более). Предпочтительные фрагменты, указанные в подпункте (б), содержат эпитоп из соответствующей последовательности. В иммуногенные композиции можно включать более одного (например, 2, 3, 4, 5, 6) из этих полипептидов.
Антиген fHBP характеризуется наличием трех различных вариантов (WO 2004/048404). В вакцине, включающей серогруппу N. meningitides, основой которой являются иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, в которых используется одно из соединений, представленных в настоящем описании, может входить один вариант fHBP, но могут входить также fHBP из каждого из двух или всех трех вариантов. Таким образом, иммуногенные композиции могут включать комбинации из двух или трех различных очищенных fHBP, выбранных из: (а) первого белка, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на а% последовательности SEQ ID NO: 1, и/или который содержит аминокислотную последовательность, состоящую из фрагмента, который содержит по меньшей мере х смежных аминокислот из SEQ ID NO: 1; (б) второго белка, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на b% последовательности SEQ ID NO: 2, и/или который содержит аминокислотную последовательность, состоящую из фрагмента, который содержит по меньшей мере у смежных аминокислот из SEQ ID NO: 2; и/или (в) третьего белка, который содержит аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на с% последовательности SEQ ID NO: 3, и/или который содержит аминокислотную последовательность, состоящую из фрагмента, который содержит по меньшей мере z смежных аминокислот из SEQ ID NO: 3.
SEQ ID NO: 1
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGN
GDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQI
QDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLT
YTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGS
YSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
- 54 031379
SEQ ID NO: 2
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGN
GDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKI
NNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYT IDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYH LALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO: 3
VAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGD
KDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEK
INNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHY SIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTY HLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ.
Значение а составляет по меньшей мере 85, например 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 или более. Значение b составляет по меньшей мере 85, например 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5 или более. Значение с составляет по меньшей мере 85, например 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99, 5 или более. Значения а, b и с не зависят друг от друга.
Значение х составляет по меньшей мере 7, например 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. Значение у составляет по меньшей мере 7, например 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. Значение z составляет по меньшей мере 7, например 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, 225, 250. Значения х, у и z не зависят друг от друга.
В некоторых вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать белок(и) fHB, который(е) является(ются) липидированным(и), например, на N-концевом остатке цистеина. В других вариантах осуществления изобретения они могут не быть липидированными.
Предпочтительная иммуногенная композиция, представленная в настоящем описании, включает очищенные белки, которые содержат смесь следующих компонентов: (I) первый полипептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4; (II) второй полипептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5; и (III) третий полипептид, который имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 (см. Giuliani и др., Proc Natl Acad Sci USA, 103(29), 2006, сс. 10834-10839 и в WO 2004/032958). Предпочтительная иммуногенная композиция, представленная в настоящем описании, включает очищенные белки, которые содержат смесь следующих компонентов: (I) первый полипептид, аминокислотная последовательность которого идентична по меньшей мере на a% последовательности SEQ ID NO: 4; (II) второй полипептид, аминокислотная последовательность которого идентична по меньшей мере на b% последовательности SEQ ID NO: 5; и (III) третий полипептид, аминокислотная последовательность которого идентична по меньшей мере на а% последовательности SEQ ID NO: 6.
SEQ ID NO: 4
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGGQDMAA
VSEENTGNGGAAATDKPKNEDEGAQNDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPAGN
MENQAPDAGESEQPANQPDMANTADGMQGDDPSAGGENAGNTAAQGTNQAE
NNQTAGSQNPASSTNPSATNSGGDFGRTNVGNSVVIDGPSQNITLTHCKGDSCS
GNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVADSVQMKGI
NQYIIFYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSG
NIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGSYALRVQGEPSKGEMLAGTAVYNGEVLHFHT
ENGRPSPSRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSGDGLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTW
TENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGVFAGKKEQDGSGGGG
ATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKIDITIPVAN
LQSGSQHFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTA
PVKLKAEKFNCYQSPMAKTEVCGGDFSTTIDRTKWGVDYLVNVGMTKSVRIDI
QIEAAKQ
- 55 031379
SEQ ID NO: 5
MVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGY
TPQISVVGYNRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTA
GDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATQARVKIVTYGNVTYVMGILTPEEQAQITQK
VSTTVGVQKVITLYQNYVQRGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL
TLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQ LITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFD KLPEGGRAT YRGT AF GSDDAGGKLTYTIDF A AKQGNGKIEHLK SPELN VDL A A ADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHI GLAAKQ
SEQ ID NO: 6
ATNDDDVKKAATVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDIDEDGTITKKDATAADV
EADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAAL
ADTDAALDATTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFN
DIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAA
GTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRI
DGLNATTEKLDTRLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKETRQGLAEQAALS
GLFQPYNVG.
Бактериальные антигены из везикул
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать другие везикулы наружной мембраны. Указанные везикулы наружной мембраны можно получать из широкого разнообразия патогенных бактерий и применять их в качестве антигенных компонентов иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании. Везикулы, предназначенные для применения в качестве антигенных компонентов указанных иммуногенных композиций, включают любую протеолипосомную везикулу, полученную в результате разрушения наружной мембраны бактерий с образованием из нее везикул, которые включают белковые компоненты наружной мембраны. Таким образом, понятие OMV (иногда применяют понятие пузырьки) относится к микровезикулам (MV, см., например, WO 02/09643) и нативным OMV (NOMV, см., например, Katial и др., Infect. Immun. 70, 2002, сс. 702-707). Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, которые включают везикулы из одной или нескольких патогенных бактерий, можно применять для лечения или предупреждния инфекций, вызываемых указанными патогенными бактериями, и родственных заболеваний и нарушений.
MV и NOMV представляют собой встречающиеся в естественных условиях мембранные везикулы, которые спонтанно образуются в процессе роста бактерий и высвобождаются в культуральную среду. MV можно получать путем культивирования бактерий, таких как Neisseria, в культуральном бульоне, отделения целых клеток от более мелких MV в культуральном бульоне (например, путем фильтрации или низкоскоростного центрифугирования для получения дебриса клеток, но не более мелких везикул), и последующего сбора MV из истощенной клеточной среды (например, с помощью фильтрации, путем дифференцированного осаждения или агрегации MV, с помощью высокоскоростного центрифугирования с получением дебриса MV). Предназначенные для получения MV штаммы, как правило, можно отбирать на основе количества MV, получаемых в культуре (см., например, в US 6180111 и WO 01/34642 описание штаммов Neisseria, отличающихся высокой производительностью MV).
OMV получают искусственно из бактерий и их можно получать путем обработки детергентом (например, дооксихолатом) или без использования обработки детергентом (см., например, WO 04/019977). Методы получения приемлемых препаратов OMV хорошо известны в данной области. Методики получения OMV включают обработку бактерий детергентом на основе солей желчных кислот (например, солей литохолевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, урсодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой, холевой кислоты, урсохолевой кислоты и т.д., при этом дезоксихолат натрия (ЕР 0011243 и Fredriksen и др., NIPH Ann., 14(2), 1991, сс. 67-80) является предпочтительным для лечения вызываемой Neisseria инфекции) при значении рН достаточно высоким, чтобы не вызывать осаждение детергента (см., например, WO 01/91788). Другие методики можно осуществлять практически в отсутствие детергента (см, например, WO 04/019977) с помощью таких методов, как облучение ультразвуком, гомогенизация, микропсевдоожижение, кавитация, осмотический шок, измельчение, применение Френч-пресса, смешение и т.д.
Методы, в которых не применяют детергент или применяют незначительное количество детергента, могут сохранять возможность применения антигенов, таких как NspA в OMV Neisserials. В указанном методе можно применять буфер для экстракции OMV, содержащий дезоксихолат в количестве, составляющем примерно 0,5% или менее, например примерно 0,2%, примерно 0,1%, <0,05%, или не содержащий дезоксихолат.
- 56 031379
Приемлемый процесс получения OMV описан в WO 05/004908 и предусматривает ультрафильтрацию неочищенных OMV вместо высокоскоростного центрифугирования. Процесс может включать стадию ультрацентрифугирования после осуществления ультрафильтрации.
Для применения их согласно изобретению везикулы можно получать из любого патогенного штамма, например Neisseria minigtidis. Везикулы из Neisserial meningitidis серогруппы В можно получать из любого серотипа (например, 1, 2а, 2b, 4, 14, 15, 16 и т.д.), любого серосубтипа и любого иммунотипа (например, L1; L2; L3; L3,3,7; L10 и т.д.). Менингококки могут иметь происхождение из любой приемлемой линии дифференцировки, включая гиперинвазивные и гипервирулентные линии, например, из следующих семи гипервирулентных линий: подгруппа I; подгруппа III; подгруппа IV 1; комплекс ЕТ 5; комплекс ЕТ 37; кластер А4; линия 3. Эти линии выявляли с помощью многолокусного электрофореза ферментов (MLEE), но для классификации менингококков можно применять также многолокусное типирование последовательностей (MLST), например, комплекс ЕТ 37 представляет собой комплекс ST 11 по данным MLST, комплекс ЕТ 5 представляет собой ST-32 (ЕТ-5), линия 3 представляет собой ST 41/44 и т.д. Везикулы можно получать из штаммов, имеющих один из следующих субтипов: Р1.2; P1.2,5; P1.4; Р1.5; P1.5,2; P1.5,c; P1.5c,10; P1.7,16; P1.7,16b; P1.7h,4; P1.9; P1.15; P1.9,15; P1.12,13; P1.13; P1.14; P1.21,16; P1.22,14.
Везикулы, которые включают в иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно получать из патогенных штаммов дикого типа, например штаммов N. meningitides или мутантных штаммов. Например, в WO 98/56901 описаны препараты везикул, полученные из N.meningitidis с модифицированным геном fur. В WO 02/09746 описано, что экспрессию nspA можно подвергать повышающей регуляции с помощью выключения сопутствующего гена porA и гена cps. Другие несущие выключенные гены мутанты N.meningitides, пригодные для получения OMV, описаны в WO 02/0974, WO 02/062378 и WO 04/014417. В WO 06/081259 описаны везикулы, в которых происходит повышающая регуляция fHBP. У Claassen и др., 14(10), 1996, сс. 1001-1008 описана конструкция везикул из штаммов, модифицированных таким образом, что они экспрессируют шесть различных субтипов PorA. Можно применять также мутант Neisseria с низкими уровнями эндотоксина, полученные в результате выключения ферментов, которые участвуют в биосинтезе LPS (см., например, WO 99/10497 и Steeghs и др., 20, 2001, сс. 6937-6945). Согласно изобретению можно применять все указанные или другие мутанты.
Таким образом, штаммы N. meningitidis серогруппы В, которые включают в иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут в некоторых вариантах осуществления изобретения экспрессировать более одного субтипа PorA. Ранее были сконструированы шестивалентные и девятивалентные штаммы PorA. Штамм может экспрессировать 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 субтипов PorA: P1.7,16; P1.5-1,2-2; P1.19,15-1; P1.5-2,10; P1.12 1,13; P1.7-2,4; P1.22,14; P1.7-1,1 и/или P1.18-1,3,6. В других вариантах осуществления изобретения штамм может отличаться отрицательной регуляцией экспрессии PorA, например в нем количество PorA может быть снижено по меньшей мере на 20% (например, >30, >40, >50, >60, >70, >80, >90, >95% и т.д.), или даже полностью отсутствовать по сравнению с уровнями в штаммах дикого типа (например, относительно штамма Н44/76, описанного в WO 03/105890).
В некоторых вариантах осуществления изобретения в штаммах N. meningitidis серогруппы В может иметь место сверхэкспрессия (по сравнению с соответствующим штаммом дикого типа) конкретных белков. Например, в штаммах может происходить сверхэкспрессия NspA, белка 287 (который обозначают также как NMB2132 и GNA2132, WO 01/52885), одного или нескольких fHBP (который обозначают также как белок 741, NMB1870 и GNA1870, WO 06/081259 и публикация патента США 2008/0248065), TbpA и/или TbpB (WO 00/25811), Cu,Zn-супероксиддисмутазы (WO 00/25811) и т.д.
В некоторых вариантах осуществления изобретения штаммы N. meningitidiss, серогруппы В могут иметь одну или несколько приводящих к выключению гена и/или приводящих к сверхэкспрессии мутаций. Предпочтительными генами для понижающей регуляции и/или выключения являются: (a) Cps, CtrA, CtrB, CtrC, CtrD, FrpB, GalE, HtrB/MsbB, LbpA, LbpB, LpxK, Opa, Opc, PilC, PorB, SiaA, SiaB, SiaC, SiaD, TbpA и/или TbpB (WO 01/09350); (б) CtrA, CtrB, CtrC, CtrD, FrpB, GalE, HtrB/MsbB, LbpA, LbpB, LpxK, Opa, Ope, PhoP, PilC, PmrE, PmrF, SiaA, SiaB, SiaC, SiaD, TbpA и/или TbpB (WO 02/09746); (в) ExbB, ExbD, rmpM, CtrA, CtrB, CtrD, GalE, LbpA, LpbB, Opa, Opc, PilC, PorB, SiaA, SiaB, SiaC, SiaD, TbpA и/или TbpB (WO 02/062378); и (г) CtrA, CtrB, CtrD, FrpB, OpA, OpC, PilC, PorB, SiaD, SynA, SynB и/или SynC (WO 04/014417).
Если применяют мутантный штамм, то в некоторых вариантах осуществления изобретения он может иметь одну или несколько или все следующие характеристики: (I) понижающая регуляция или выключение LgtB и/или GalE, что приводит к укороченной форме LOS менингококка; (II) повышающая регуляция TbpA; (III) повышающая регуляция Hsf; (IV) повышающая регуляция Omp85; (V) повышающая регуляция LbpA; (VI) повышающая регуляция NspA; (VII) выключение PorA; (VIII) понижающая регуляция FrpB; (IX) понижающая регуляция или выключение Ора; (X) понижающая регуляция или выключение Орс; (XI) делеция комплекса гена cps. Укороченная форма LOS может представлять собой форму, в которой отсутствует эпитоп сиалиллакто-И-неотетраозы, например может представлять собой LOS с дефицитом галактозы. LOS может не иметь а-цепи.
Если LOS присутствует в везикуле, то можно обрабатывать везикулу таким образом, что связывать
- 57 031379 ее LOS и белковые компоненты (внутрипузырьковый конъюгат (WO 04/014417)).
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать смеси из различных штаммов. Например, в WO 03/105890 описана вакцина, содержащая многовалентные везикулярные композиции из менингококков, которые содержат первую везикулу, полученную из штамма менингококка с серосубтипом, превалирующим в стране применения, и вторую везикулу, полученную из штамма, который не должен иметь серосубтип, использование которого в стране применения предотвращается. В WO 06/024946 описаны пригодные комбинации различных везикул. Комбинацию везикулы из штаммов, каждый из которых имеет иммунотипы L2 и L3, можно применять в некоторых вариантах осуществления изобретения.
Антигены, основой которых являются везикулы, можно получать из серогрупп N. meningitides, отличных от серогруппы В (например, в WO 01/91788 описан процесс для серогруппы А). Таким образом, иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, могут включать везикулы, полученные из серогрупп, отличных от В (например А, С, W135 и/или Y) и из бактериальных патогенов, отличных от Neisseria.
Вирусные антигены
Вирусные антигены, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) инактивированный (или убитый) вирус, ослабленный вирус, сплит-формы (формы на основе расщепленного вируса), формы на основе очищенной субъединицы, вирусные белки, которые можно выделять, очищать или получать из вируса, вирусоподобные частицы (ВПЧ) и полинуклеотидные антигены, которые можно выделять, очищать или получать из вируса или синтезировать с помощью методов рекомбинации. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные антигены получают из вирусов, выращенных на клеточной культуре или на другом субстрате. В других вариантах осуществления изобретения вирусные антигены рекомбинантно экспрессируют. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные антигены предпочтительно включают эпитопы, находящиеся на поверхности вируса в процессе по меньшей мере одной стадии его жизненного цикла. Вирусные антигены предпочтительно являются консервативными для множества серотипов или изолятов. Вирусные антигены, которые можно применять в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из одного или нескольких указанных ниже вирусов, а также представлять собой конкретные антигены, примеры которых приведены ниже.
Ортомиксовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортомикосвируса, такого как вирус гриппа А, В и С. В конкретных вариантах осуществления изобретения ортомиксовирусные антигены выбраны из одного или нескольких вирусных белков, таких как гемагглютинин (НА), нейраминидаза (NA), нуклеопротеин (NP), матриксный белок (M1), мембранный белок (М2), один или несколько компонентов траскриптазы (РВ1, РВ2 и РА). В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусный антиген включает НА и NA. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены вируса гриппа получают из межпандемических (ежегодных) штаммов вируса гриппа, а в других вариантах осуществления изобретения антигены вируса гриппа получают из штаммов, обладающих потенциалом в отношении вызывания пандемической вспышки (т.е. штаммов вируса гриппа с новым гемагглютинином по сравнению с гемагглютинином в штаммах, циркулирующих в настоящее время, или штаммов вируса гриппа, патогенных для птиц и обладающих потенциалом для горизонтальной передачи в человеческой популяции, или штаммов вируса гриппа, патогенных для человека.
Вирусы сем. Paramyxoviridae: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из вирусов сем. Paramyxoviridae, таких как пневмовирусы (RSV), парамиксовирусы (PIV), метапневмовирусы и морбилливирусы (возбудитель кори).
Пневмовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из пневмовируса, такого как респираторно-синцитиальный вирус (RSV), респираторносинцитиальный вирус крупного рогатого скота, вирус мышиной пневмонии и вирус ринотрахеита индеек. Предпочтительно пневмовирус представляет собой RSV. В конкретных вариантах осуществления изобретения пневмовирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков, включая слитые поверхностные белки (F), гликопротеин (G) и малый гидрофобный белок (SH), матриксные белки М и М2, нуклеокапсидные белки N, Р и L и неструктурные белки NS1 и NS2. В других вариантах осуществления изобретения пневмовирусные антигены включают F, G и М. В конкретных вариантах осуществления изобретения пневмовирусные антигены также включают в препаративную форму или получают из химерных вирусов, таких как (но не ограничиваясь только ими) химерные вирусы RSV/PIV, которые содержат компоненты как RSV, так и PIV.
Парамиксовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из парамиксовируса, такого как вирус парагриппа типов 1-4 (PIV), вирус эпидемического паротита, вирус Седаи, обезьяний вирус-5, вирус парагриппа крупного рогатого скота, вирус Нипах, генипавирус и вирус ньюкаслской болезни. В конкретных вариантах осуществления изобретения парамиксовирус представляет собой PIV или вирус эпидемического паротита. В конкретных вариантах осуществления
- 58 031379 изобретения парамиксовирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков: гемагглютинин-нейраминидаза (HN), слитые белки F1 и F2, нуклеопротеин (NP), фосфопротеин (Р), большой белок (L) и матриксный белок (М). В других вариантах осуществления изобретения парамиксовирусные белки включают HN, F1 и F2. В конкретных вариантах осуществления изобретения парамиксовирусные антигены также включают в препаративную форму или получают из химерных вирусов, таких как (но не ограничиваясь только ими) химерные вирусы RSV/PIV, которые содержат компоненты как RSV, так и PIV. Поступающие в продажу вакцины против эпидемического паротита содержат живой ослабленный вирус эпидемического паротита либо в моновалентной форме, либо в сочетании с вакцинами против кори и краснухи (MMR). В других вариантах осуществления изобретения парамиксовирус представляет собой вирус Нипах или генипавирус и антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков: слитый белок (F), гликопротеин (G), матриксный белок (М), нуклеокапсид (N), большой белок (L) и фосфопротеин (Р).
Вирусы сем. Poxviridae: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортопоксвируса, такого как вирус натуральной оспы Variola vera, включая (но не ограничиваясь только ими) Variola major и Variola minor.
Метапневмовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) метапневмовирус, такой как человеческий метапневмовирус (hMPV) и птичий метапневмовирус (aMPV). В конкретных вариантах осуществления изобретения метапневмовирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков, таких как поверхностные слитые белки (F), гликопротеин (G) и малый гидрофобный белок (SH), матриксные белки М и М2, нуклеокапсидные белки N, Р и L. В других вариантах осуществления изобретения метапневмовирусные антигены включают F, G и М. В конкретных вариантах осуществления изобретения метапневмовирусные антигены также включают в препаративные формы или получают из химерных вирусов.
Морбилливирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из морбилливируса, такого как вирус кори. В конкретных вариантах осуществления изобретения морбилливирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих белков: гемагглютинин (Н), гликопротеин (G), фактор слияния (F), большой белок (L), нуклеопротеин (NP), полимеразный фосфоропротеин (Р) и матриксный белок (М). Поступающие в продажу вакцины против кори включают живой ослабленный вирус кори, как правило, в сочетании с вирусами эпидемического паротита и краснухи (MMR).
Пикорновирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из пикорновирусов, таких как энтеровирусы, риновирусы, гепарнавирусы, кардиовирусы и афтовирусы. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из энтеровирусов, а в других вариантах осуществления изобретения энтеровирус представляет собой полиовирус. В следующих вариантах осуществления изобретения антигены получают из риновирусов. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Энтеровирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из энтеровируса, такого как полиовирус типов 1, 2 или 3, вирус Коксаки типов 1-22 и 24, вирус Коксаки В типов 1-6, эховирус (ЕСНО-вирус) типов 1-9, 11-27 и 29-34 и энтеровирус 68-71. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из энтеровирусов, а в других вариантах осуществления изобретения энтеровирус представляет собой полиовирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения энтеровирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих капсидных белков VP0, VP1, VP2, VP3 и VP4. Поступающие в продажу полиовакцины включают инактивированную полиовакцину (IPV) и оральную полиовирусную вакцину (OPV). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц.
Буньявирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортобуньявируса, такого как вирус Калифорнийского энцефалита, флебовируса, такого как вирус лихорадки Рифт-Валли, или найровируса, такого как вирус геморрагической лихорадки Крым-Конго.
Риновирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из риновируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения риновирусные антигены выбирают из одного или нескольких следующих капсидных белков: VP0, VP1, VP2, VP2 и VP4. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц.
Гепарнавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из гепарнавируса, такого как (но не ограничиваясь только ими) вирус гепатита A (HAV). Поступающие в продажу вакцины против HAV включают вакцину на основе инактивированного вируса HAV.
Тогавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из тогавируса, такого как рубивирус, альфавирус или артеривирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из рубивируса, такого, например, как вирус краснухи. В конкретных вариантах осуществления изобретения тогавирусные антигены выбирают из Е1, Е2, Е3, С, NSP-1, NSPO2, NSP-3 или NSP-4. В конкретных вариантах осуществления изобретения тогавирусные антигены выбирают из E1, E2 или Е3. Поступающие в продажу вакцины против краснухи включают живой прошедший холодовую адаптацию вирус, как правило, в сочетании с вакцинами против эпидемического паротита и
- 59 031379 кори (MMR).
Флавивирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из флавивируса, такого как вирус клещевого энцефалита (ТВЕ), вирус Денге (типы 1, 2, 3 или 4), вирус желтой лихорадки, вирус японского энцефалита, вирус болезни Кьясанурского леса, вирус энцефалита западного Нила, вирус сент-луисского энцефалита, вирус русского весенне-летнего энцефалита, вирус энцефалита Повассан. В конкретных вариантах осуществления изобретения флавивирусные антигены выбирают из PrM, М, С, Е, NS-1, NS-2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b и NS5. В конкретных вариантах осуществления изобретения флавивирусные антигены выбирают из PrM, М и Е. Поступающие в продажу вакцины против ТВЕ представляют собой вакцины на основе инактивированного вируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Пестивирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из пестивируса, такого как вирус диареи крупного рогатого скота (BVDV), вирус классической лихорадки свиней (CSFV) или вирус пограничной болезни (BDV).
Гепаднавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из гепаднавируса, такого как вирус гепатита В. В конкретных вариантах осуществления изобретения гепаднавирусные антигены выбирают из поверхностных антигенов (L, М и S), коровых антигенов (НВс, НВе). Поступающие в продажу вакцины против HBV представляют собой субъединичные вакцины, содержащие в качестве антигена S-белок.
Вирус гепатита С: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из вируса гепатита С (HCV). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены HCV выбирают из одной или нескольких следующих субстанций: E1, E2, Е1/Е2, плипротеин NS345, NS 345коровый полипротеин и/или пептиды из неструктурных областей. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены вируса гепатита С включают одну или несколько следующих субстанций: белки HCV Е1 и/или Е2, гетеродимерные комплексы Е1/Е2, коровые белки и неструктурные белки или фрагменты этих антигенов, где неструктурные белки необязательно можно модифицировать таким образом, чтобы устранять у них ферментативную активность, но сохранять иммуногенность. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Рабдовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из рабдовируса, такого как лиссавирус (вирус бешенства) и везикуловирус (VSV). Рабдовирусные антигены можно выбирать из гликопротеина (G), нуклеопротеина (N), большого белка (L), неструктурных белков (NS). Поступающая в продажу вакцина против бешества включает убитый вирус, выращенный на диплоидных человеческих клетках или клетках легкого плода макака резус.
Вирус сем. Caliciviridae: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из вирусов сем. Calciviridae, таких как вирус Норволк и Норволкподобные вирусы, такие как гавайский вирус и вирус Снежных гор. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Коронавирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из коронавируса, вируса SARS, человеческого респираторного коронавируса, вируса инфекционного бронхита птиц (IBV), вируса гепатита мышей (MHV) и вируса инфекционного гастроэнтерита свиней (TGEV). В конкретных вариантах осуществления изобретения коронавирусные антигены можно выбирать из антигена шипов (S), антигена оболочки (Е), матриксного антигена (М), нуклеокапсидного антигена (N) и гемагглютининэстеразного гликопротеина (НЕ). В конкретных вариантах осуществления изобретения коронавирусный антиген получают из вируса SARS. В конкретных вариантах осуществления изобретения коронавирусный антиген получают из антигена вируса SARS, описанного в WO 04/92360.
Ретровирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ретровируса, такого как онковирус, лентивирус или спумавирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения онковирусные антигены получают из HTLV-1, HTLV-2 или HTLV-5. В конкретных вариантах осуществления изобретения лентивирусные антигены получают из HIV-1 (ВИЧ-1) или HIV-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получат из подтипов HIV-1 (или кладов), включая (но не ограничиваясь только ими) подтипы HIV-1 (или клады) А, В, С, D, F, G, H, J. К, О. В других вариантах осуществления изобретения антигены получают из циркулирующих рекомбинантных форм HIV-1 (CRF), включая (но не ограничиваясь только ими) А/В, А/Е, A/G, A/G/I и т.д. В конкретных вариантах осуществления изобретения ретровирусные антигены выбирают из gag, pol, env, tax, tat, rex, rev, nef, vif, vpu и vpr. В конкретных вариантах осуществления изобретения HIV-антигены выбирают из gag (p24gag и p55gag), env (gp160 и gp41), pol, tat, nef, rev vpu, минибелков (предпочтительно с делецией р55gag и gp140v). В конкретных вариантах осуществления изобретения HIV-антигены получают из одного или нескольких следующих штаммов: HIVIIIb, HIVSF2, HIVLAV, HIVLAI, HIVMN, HIV-1CM235, HIV-1US4, HIV-1SF162, HIV-1TV1, HIV-1MJ4. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены получают из эндогенных человеческих ретровирусов, включая (но не ограничиваясь только ими), HERV-K (старый HERV-K и новый HERV-K).
Реовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из реовируса, такого как ортореовирус, ротавирус, орбивирус или колтивирус. В конкретных вариантах
- 60 031379 осуществления изобретения реовирусные антигены выбирают из структурных белков λ1, λ2, λ3, μ1, μ2, σ1, σ2 или σ3 или неструктурных белков nNS, ,n.NS или n1s. В конкретных вариантах осуществления изобретения реовирусные антигены получают из ротавируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения ротавирусные антигены выбирают из VP1, VP2, VP3, VP4 (или расщепленного продукта VP5 и VP8), NSP1, VP6, NSP3, NSP2, VP7, NSP4 или NSP5. В конкретных вариантах осуществления изобретения ротавирусные антигены включают VP4 (или расщепленный продукт VP5 и VP8) и VP7.
Парвовирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из парвовируса, такого как парвовирус В19. В конкретных вариантах осуществления изобретения парвовирусные антигены выбирают из VP-1, VP-2, VP-3, NS-1 и NS-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения парвовирусный антиген представляет собой капсидный белок VP1 или VP-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Вирус гепатита дельта (HDV): вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из HDV, прежде всегоу δ-антиген из HDV.
Вирус гепатита Е (HEV): вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из HEV.
Вирус гепатита G (HGV): вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из HGV.
Человеческий герпесвирус: вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из человеческого герпесвируса, такого, например, как вирусы герпеса простого (HSV), вирус опоясывающего лишая (VZV), вирус Эпштейна-Барра (EBV), цитомегаловирус (CMV), герпесвирус-6 человека (HHV6), герпесвирус-7 человека (HHV7) и герпесвирус-8 человека (HHV8). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены герпесвируса человека можно выбирать из немедленноранних белков (а), ранних белков (β) и поздних белков (γ). В конкретных вариантах осуществления изобретения HSV-антигены получают из штаммов HSV-1 или HSV-2. В конкретных вариантах осуществления изобретения HSV-антигены выбирают из гликопротеинов gB, gC, gD и gH, слитого белка (gB) или белков иммунного избегания (gC, gE или gI). В конкретных вариантах осуществления изобретения VZVантигены выбирают из корового, нуклеокапсидного белка, белка внутренней оболочки или наружной оболочки. В продаже имеется вакцина на основе живого ослабленного VZV. В конкретных вариантах осуществления изобретения EBV-антигены выбирают из белков раннего антигена (ЕА), вирусного капсидного антигена (VCA) и гликопротеинов мембранного антигена (МА). В конкретных вариантах осуществления изобретения CMV-антигены можно выбирать из капсидных белков, гликопротеинов наружной оболочки (таких как gB и gH) и белков внутренней оболочки. В других вариантах осуществления изобретения CMV- антигены можно выбирать из следующих белков: рр65, IE1, gB, gD, gH, gL, gM, gN, gO, UL128, UL129, gUL130, UL150, UL131, UL33, UL78, US27, US28, RL5A, RL6, RL10, RL11, RL12, RL13, UL1, UL2, UL4, UL5, UL6, UL7, UL8, UL9, UL10, UL11, UL14, UL15A, UL16, UL17, UL18, UL22A, UL38, UL40, UL41A, UL42, UL116, UL119, UL120, UL121, UL124, UL132, UL147A, UL148, UL142, UL144, UL141, UL140, UL135, UL136, UL138, UL139, UL133, UL135, UL148A, UL148B, UL148C, UL148D, US2, US3, US6, US7, US8, US9, US10, US11, US12, US13, US14, US15, US16, US17, US18, US19, US20, US21, US29, US30 и US34A. CMV-антигены можно сливать также с одним или несколькими белками CMV, такими, например, как pp65/IE1 (Reap и др., Vaccine, 25, 2007, сс. 7441-7449). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ).
Паповавирусы: антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из паповавирусов, таких как вирусы папилломы и вирусы полиомы. В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусы папилломы включают HPV серотипов 1, 2, 4, 5, 6, 8, 11, 13, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 41, 42, 47, 51, 57, 58, 63 и 65. В конкретных вариантах осуществления изобретения HPV-антигены получают из серотипов 6, 11, 16 или 18. В конкретных вариантах осуществления изобретения HPV-антигены выбирают из капсидных белков (L1) и (L2) или Е1-Е7 или их гибридов. В конкретных вариантах осуществления изобретения HPV-антигены приготавливают в виде вирусоподобных частиц (ВПЧ). В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусы полиомы включают BK-вирус и JK-вирус. В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены вируса полиомы выбирают из VP1, VP2 или VP3.
Аденовирус: антигены включают антигены, полученные из аденовируса. В конкретных вариантах осуществления изобретения аденовирусные антигены получают из аденовируса серотипа 36 (Ad-36). В конкретных вариантах осуществления изобретения антиген получают из белковой или пептидной последовательности оболочечного белка Ad-36 или его фрагмента (WO 2007/120362).
Кроме того, изобретение относится к антигенам, композициям, методам и микробам, которые описаны в Vaccines, 4-е изд., под ред. Plotkin и Orenstein, 2004); Medical Microbiology, 4-е изд., под ред. Murray и др., 2002; Virology, 3-е изд., под ред. W.K. Joklik, 1988; Fundamental Virology, 2-е изд., под ред. B.N. Fields и D.M. Knipe, 1991, которые можно применять в сочетании с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании.
Грибковые антигены
- 61 031379
Грибковые антигены, предназначенные для применения в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из одного или нескольких приведенных ниже грибов.
Грибковые антигены получают из дерматофитных грибов, включая
Epidermophyton floccusum, Microsporum audouini, Microsporum cams,
Microsporum distortum, Microsporum equinum, Microsporum gypsum, Microsporum напит, Trichophyton concentricum, Trichophyton equinum, Trichophyton gallinae, Trichophyton gypseum, Trichophyton megnini, Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton quinckeanum, Trichophyton rubrum, Trichophyton schoenleini, Trichophyton tonsurans, Trichophyton verrucosum, T. verrucosum var. album, var. discoides, var. ochraceum, Trichophyton violaceum и/или Trichophyton faviforme.
Грибковые патогены получают также из Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus, Aspergillus niger, Aspergillus nidulans, Aspergillus terreus, Aspergillus sydowi, Aspergillus flavatus, Aspergillus glaucus, Blastoschizomyces capitatus,
Candida albicans, Candida enolase, Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis, Candida stellatoidea, Candida kusei, Candida parakwsei, Candida lusitaniae, Candida pseudotropicalis, Candida guilliermondi, Cladosporium carrionii, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatidis, Cryptococcus neoformans, Geotrichum clavatum, Histoplasma capsulatum, Klebsiella pneumoniae, Microsporidia, Encephalitozoon spp., Septata intestinalis и Enterocytozoon bieneusi·, реже их получают из Brachiola spp, Microsporidium spp., Nosema spp., Pleistophora spp., Trachipleistophora spp., Vittaforma spp., Paracoccidioides brasiliensis, Pneumocystis carinii, Pythiumn insidiosum, Pityrosporum ovale, Sacharomyces cerevisae, Saccharomyces boulardh, Saccharomyces pombe, Scedosporium apiosperum, Sporothrix schenckii, Trichosporon beigelii, Toxoplasma gondii, Penicillium marneffei, Malassezia spp , Fonsecaea spp., Wangiella spp., Sporothrix spp., Basidiobolus spp., Conidiobolus spp., Rhizopus spp., Mucor spp., Absidia spp., Mortierella spp., Cunninghamella spp., Saksenaea spp., Alternaria spp., Curvularia spp., Helminthosporium spp., Fusarium spp., Aspergillus spp., Penicillium spp., Monolinia spp., Rhizoctonia spp., Paecilomyces spp., Pithomyces spp. и Cladosporium spp.
В конкретных вариантах осуществления изобретения процесс получения грибкового антигена заключается в том, что солюбилизированную фракцию экстрагируют и отделяют от нерастворимой фракции, полученной из клеток гриба, из которых клеточная оболочка практически удалена или, по меньшей мере частично, удалена, при этом процесс отличается тем, что включает стадии, на которых получают живые клетки гриба; получают клетки гриба, клеточная оболочка которых практически удалена или, по меньшей мере частично, удалена; разрушают клетки гриба, клеточная оболочка которых практически удалена или, по меньшей мере частично, удалена; получают нерастворимую фракцию и экстрагируют и отделяют солюбилизированную фракцию от нерастворимой фракции.
Антигены/патогены простейших
Антигены/патогены простейшх, которые применяют в иммуногенных композициях, представленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены/патогены, полученные из одного или нескольких следующих видов простйших: Entamoeba histolytica, Giardia lambli, Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayatanensis и токсоплазма.
Растительные антигены/патогены
Растительные антигены/патогены, которые применяют в иммуногенных композициях, представ
- 62 031379 ленных в настоящем описании, включают (но не ограничиваясь только ими) антигены/патогены, полученные из Ricinus communis.
Антигены возбудителей ЗППП
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, полученных из возбудителей заболеваний, передающихся половым путем (З1ПП1). В конкретных вариантах осуществления изобретения указанные антигены применяют для профилактики ЗППП, таких как хламидиоз, генитальный герпес, гепатит (такой как гепатит, вызываемый HCV), генитальные бородавки, гонорея, сифилис и/или мягкий шанкр. В других вариантах осуществления изобретения указанные антигены применяют для лечения З111 , таких как хламидиоз, генитальный герпес, гепатит (такой как гепатит, вызываемый HCV), генитальные бородавки, гонорея, сифилис и/или мягкий шанкр. Указанные антигены получают из одного или нескольких вирусных или бактериальных возбудителей З111 . В конкретных вариантах осуществления изобретения вирусные антигены возбудителей З111 получают из ВИЧ (HIV), вируса герпеса простого (HSV-1 и HSV-2), вируса человеческой папиллломы (HPV) и гапатита (HCV). В конкретных вариантах осуществления изобретения антигены бактериальных возбудителей З111 получают из Neiserria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Treponema pallidum, Haemophilus ducreyi, E. coli и Streptococcus agalactiae. 1римеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше.
Респираторные антигены
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, полученных из патогенов, которые вызывают респираторные заболевания. Примером указанных респираторных антигенов являются (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из респираторного вируса, такого как ортомиксовирусы (грипп), пневмовирус (RSV), парамиксовирус (PIV), морбилливирус (корь), тогавирус (краснуха), VZV и коронавирус (SARS). В конкретных вариантах осуществления изобретения респираторные антигены получают из бактерий, которые вызывают респираторное заболевание, таких, например, как (но не ограничиваясь только ими) Streptococcus pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Bordetella pertussis, Mycobacterium tuberculosis, Mycoplasma pneumoniae, Chlamydia pneumoniae, Bacillus anthracis и Moraxella catarrhalis. 1римеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше.
Антигены педиатрических вакцин
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, которые можно применять для детей. Дети, которым можно вводить педиатрические вакцины, как правило, имеют возраст менее примерно 3 лет, или менее примерно 2 лет, или менее примерно 1 года. 1едиатрические антигены вводят несколько раз в течение 6 месяцев, 1, 2 или 3 лет. 1едиатрические антигены можно получать из вируса, поражающего популяции детей, и/или вируса, заражению которым подвержены популяции детей. 1едиатрические вирусные антигены включают (но не ограничиваясь только ими) антигены, полученные из ортомиксовируса (грипп), пневмовируса (RSV), парамиксовируса (PIV и эпидемический паротит), морбилливируса (корь), тогавируса (краснуха), энтеровируса (полиомиелит), HBV, коронавируса (SARS) и вируса опоясывающего лишая (VZV), вируса Эпштейна-Барра (EBV). Педиатрические бактериальные антигены включают антигены, полученные из одного или нескольких следующих видов Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitides, Streptococcus pyogenes (стрептококк группы A), Moraxella catarrhalis, Bordetellapertussis, Staphylococcus aureus, Clostridium tetani (столбняк), Cornynebacterium diphtheriae (дифтерия), Haemophilus influenzae В (Hib), Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В) и Е. coli. Примеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше.
Антигены, которые можно применять для престарелых индивидуумов или индивидуумов с нарушениями иммунной системы
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, которые можно использовать для престарелых индивидуумов или индивидуумов с нарушениями иммунной системы. Такие индивидуумы могут нуждаться в более частой вакцинации, вакцинации с использованием более высоких доз или препаратами с добавлением адъювантов для повышения их иммунного ответа на антигены-мишени. Антигены-мишени, которые можно применять для престарелых индивидуумов или индивидуумов с нарушениями иммунной системы, включают антигены, полученные из одного или нескольких следующих патогенов: Neisseria meningitides, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes (стреатококк группы A), Moraxella catarrhalis, Bordetellapertussis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermis, Clostridium tetani (столбняк), Cornynebacterium diphtheriae (дифтерия), Haemophilus influenzae В (Hib), Pseudomonas aeruginosa, Legionella pneumophila, Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В), Enter ococcus faecalis, Helicobacter pylori, Chlamydia pneumoniae, ортомиксовирус (грипп), пневмовирус (RSV), парамиксовирус (PIV и эпидемический паротит), морбилливирус (корь), тогавирус (краснуха), энтеровирус (полиомиелит), HBV, коронавирус (SARS), вирус опоясывающего лишая (VZV), бирус Эпштейна-Барра (EBV), цитомегаловирус (CMV). Примеры конкретных антигенов, полученных из указанных патогенов, описаны выше.
- 63 031379
Антигены, которые можно применять в вакцинах для подростков
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, включают один или несколько антигенов, которые можно применять для подростков. Подростки могут нуждаться в повторной иммунизации ранее применявшимся педиатрическим антигеном. Педиатрические антигены, которые можно применять для подростков, описаны выше. Кроме того, подросткам можно вводить антигены, полученные из вызывающего ЗППП патогена, для обеспечения защитного или терапевтического иммунитета перед началом периода половой активности. Антигены из возбудителей ЗППП, которые можно применять для подростков, описаны выше.
Опухолевые антигены
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевый антиген или раковый антиген применяют в сочетании с иммуногенными композицияями, представленными в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены представляют собой пептидсодержащие опухолевые антигены, такие как полипептидный опухолевый антиген или гликопротеиновые опухолевые антигены. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевый антиген представляет собой сахаридсодержащий опухолевый антиген, такой как гликолипидный опухолевый антиген или ганглиозидный опухолевый антиген. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевый антиген представляет собой полинуклеотидсодержащий опухолевый антиген, который экспрессирует полипептидсодержащий опухолевый антиген, например РНК-векторную конструкцию или ДНКвекторную конструкцию, такую как плазмидная ДНК.
Опухолевые антигены, которые можно применять в сочетании с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании, включают широкое разнообразие молекул, таких как (а) полипептидсодержащие опухолевые антигены, включая полипептиды (которые состоят, например, из 8-20 аминокислот, хотя встречаются также длины, находящиеся вне указанного диапазона), липополипептиды и гликопротеины, (б) сахаридсодержащие опухолевые антигены, включая полисахариды, муцины, ганглиозиды, гликолипиды и гликопротеины, и (в) полинуклеотиды, которые экспрессируют антигенные полипептиды.
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены представляют собой, например, (а) полноразмерные молекулы, связанные с раковыми клетками, (б) их гомологи и модифицированные формы, включая молекулы с удаленными в результате делеции, добавленными и/или замененными фрагментами, и (в) их фрагменты. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены находятся в рекомбинантной форме. В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены включают, например, антигены класса II, распознаваемые CD4+-лимфоцитами.
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены включают (но не ограничиваясь только ими) (а) антигены рака яичка, такие как NY-ESO-1, SSX2, SCP1, а также полипептиды семейств RAGE, BAGE, GAGE и MAGE, например GAGE-1, GAGE-2, MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6 и MAGE-12 (которые можно применять, например, для вакцинации против меланомы, опухолей легкого, головы и шеи, NSCLC, опухолей молочной железы, желудочно-кишечного тракта и мочевого пузыря), (б) мутантные антигены, например, р53 (ассоциированный с многими плотными (солидными) опухолями, например, со злокачественными опухолями ободочной кишки и прямой кишки, легкого, головы и шеи), p21/Ras (ассоциированный, например, с меланомой, раком поджелудочной железы и колоректальным раком), CDK4 (ассоциированный, например, с меланомой), MUM1 (ассоциированный, например, с меланомой), каспаза-8 (ассоциированная, например, с раком головы и шеи), CIA 0205 (ассоциированный, например, с раком мочевого пузыря), HLA-A2-R1701, бета-катенин (ассоциированный, например, с меланомой), TCR (ассоциированный, например, с Т-клеточной неходжкинской лимфомой), BCR-ab1 (ассоциированный, например, с хроническим миелолейкозом), триозофосфатизомераза, KIA 0205, CDC-27 и LDLR-FUT, (в) сверхэкспрессируемые антигены, например, галектин-4 (ассоциированный, например, с колоректальным раком), галектин-9 (ассоциированный, например, с болезнью Ходжкина), протеиназа-3 (ассоциированная, например, с хроническим миелолейкозом), WT 1 (ассоциированный, например, с различными лейкозами), карбоангидраза (ассоциированная, например, с раком почки), альдолаза А (ассоциированная, например, с раком легкого), PRAME (ассоциированный, например, с меланомой), HER-2/neu (ассоциированный, например, с раком молочной железы, ободочной кишки, легкого и яичника), альфа-фетопротеин (ассоциированный, например, с гепатомой), KSA (ассоциированный, например, с колоректальным раком), гастрин (ассоциированный, например, с раком поджелудочной железы и желудка), теломеразный каталитический белок, MUC-1 (ассоциированный, например, с раком молочной железы и яичника), G-250 (ассоциированный, например, с почечноклеточной карциномой), р53 (ассоциированный, например, с раком молочной железы и ободочной кишки) и карциноэмбриональный антиген (ассоциированный, например, с раком молочной железы, раком легкого и злокачественными опухолями желудочно-кишечного тракта, такими как колоректальный рак), (г) общие антигены, например, антигены меланомы-дифференцировки меланоцитов, такие как MART-1/Melan A, gp100, MC1R, рецептор меланоцитстимулирующего гормона, тирозиназа, связанный с тирозиназой белок1/TRP1 и связанный с тирозиназой белок-2/ТРР2 (ассоциированные, например, с меланомой), (д) ассоциированные с предстательной железой антигены, такие как PAP, PSA, PSMA, PSH-P1, PSM-P1, PSM-P2,
- 64 031379 ассоциированные, например, с раком предстательной железы, (е) иммуноглобулиновые идиотипы (ассоциированные, например, с миеломой и В-клеточными лимфомами), и (ж) другие опухолевые антигены, такие как полипептид- и сахаридсодержащие антигены, включая (I) гликопротеины, такие как сиалил-Tn и сиалил-Le х (ассоциированные, например, с раком молочной железы и колоректальным раком), а также различные муцины; гликопротеины могут быть связаны с белком-носителем (например, MUC-1 может быть связан с KLH); (II) липополипептиды (например, MUC-1, связанный с липидным фрагментом); (III) полисахариды (например, синтетический гексасахарид Globo Н), которые могут быть связаны с белкомносителем (например, с KLH), (IV) ганглиозиды, такие как GM2, GM12, GD2, GD3 (ассоциированные, например, со злокачественными опухолями головного мозга, легкого, меланомой), которые также могут быть связаны с белком-носителем (например, с KLH).
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены включают (но не ограничиваясь только ими) р15, Hom/Mel-40, H-Ras, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, антигены вируса Эпштейна-Барра, EBNA, антигены вируса папилломы человека (HPV), включая Е6 и Е7, антигены вирусов гепатита В и С, антигены лимфотропного вируса Т-клеток человека, TSP-180, pl85erbB2, p180eibB-3, c-met, mn-23Hl, TAG-72-4, CA 19-9, СА 72-4, САМ 17.1, NuMa, K-ras, p16, TAGE, PSCA, CT7, 43-9F, 5Т4, 791 Tgp72, бета-HCG, ВСА225, ВТАА, СА 125, СА 15-3 (СА 27.29ВСАА), СА 195, СА 242, СА-50, САМ43, CD68/KP1, СО-029, FGF-5, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, МА-50, MG7-Ag, MOV18, NB/70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, ТА-90 (Мас-2-связывающий белок/циклофилин Сассоциированный белок), TAAL6, TAG72, TLP, TPS и т.п.
Полинуклеотидсодержащие антигены, которые применяют в сочетании с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании, включают полинуклеотиды, которые кодируют полипептидные раковые антигены, например перечисленные выше. В конкретных вариантах осуществления изобретения полинуклеотидсодержащие антигены включают (но не ограничиваясь только ими) ДНКили РНК-векторые конструкции, такие как плазмидные векторы (например, pCMV), которые могут экспрессировать полипептидные раковые антигены in vivo.
В конкретных вариантах осуществления изобретения опухолевые антигены получают из мутантных или измененных клеточных компонентов. После внесения изменений клеточные компоненты больше не выполняют своих регуляторных функций, и, следовательно, клетка может неконтролируемо расти. Репрезентативными примерами измененных клеточных компонентов являются (но не ограничиваясь только ими) ras, p53, Rb, измененный белок, кодируемый геном опухоли Вилмса, убиквитин, муцин, белок, кодируемый генами DCC, АРС и МСС, а также рецепторы или рецептороподобные структуры, такие как neu, рецептор тиреоидного гормона, рецептор тромбоцитарного фактора роста (PDGF), рецептор инсулина, рецептор эпидермального фактора роста (EGF) и рецептор колониестимулирующего фактора (CSF).
Кроме того, бактериальные и вирусные антигены применяют в сочетании с иммуногенными композициями, представленными в настоящем описании, для лечения рака. В конкретных вариантах осуществления изобретения белки-носители, такие как CRM197, столбнячный анатоксин или антиген Salmonella typhimurium применяют в сочетании/в виде конъюгатов с соединениями, представленными в настоящем описании, для лечения рака. Комбинированные терапевтические средства на основе антигенов злокачественных опухолей обладают повышенной эффективностью и биологической доступностью по сравнению с существующими терапевтическими средствами.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают капсульные сахариды по меньшей мере из двух серогрупп А, С, W135 и Y Neisseria meningitides. В других вариантах осуществления изобретения указанные вацины содержат также антиген, выбранный из одного или нескольких следующих антигенов: (а) серогруппа В N. meningitidis; (б) Haemophilus influenzae типа В; и/или (в) Streptococcuspneumoniae.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают серогруппы С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают серогруппы А, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают серогруппы А, В, С, W135 и Y.N meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруппы С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруппы А, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруппы В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В и серогруппы А, В, С, W135 и Y N. meningitides.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по
- 65 031379 меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы А, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают S. pneumoniae и серогруппы
A, В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа
B, S. pneumoniae и серогруппы С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В, S. pneumoniae и серогруппы А, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В, S. pneumoniae и серогруппы В, С, W135 и Y N. meningitides. В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I), включают Н. influenzae типа В, S. pneumoniae и серогруппы А, В, С, W135 и Y N. meningitidis.
Способы лечения, предупреждения и применения вакцин
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем изобретении, можно применять в сочетании с вакцинами для повышения иммуногенности вакцины, или когда иммуногенная композиция включает один или несколько антигенов, то иммуногенную композицию можно применять в качестве вакцины. Таким образом, в конкретном варианте осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно применять в способе для индукции или усиления иммунного ответа у млекопитающего, который включает стадии, на которых вводят в эффективном количестве иммуногенную композицию, представленную в настоящем описании. Иммунный ответ предпочтительно представляет собой защитный ответ и предпочтительно включает гуморальный и/или клеточно-опосредованный иммунитет. Способ может включать получение вторичного иммунного ответа.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно применять в качестве лекарственного средства, например, предназначенного для индукции или усиления иммунного ответа у млекопитающего.
В конкретных вариантах осуществления изобретения иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, можно применять для приготовления лекарственного средства, предназначенного для индукции иммунного ответа у млекопитающего.
Изобретение относится также к устройству для введения, предварительно заполненному иммуногенной композицией, представленной в настоящем описании.
Путем индукции иммунного ответа у млекопитающего с помощью вариантов применения и способов можно уменьшать или даже предотвращать заражение млекопитающего патогенами, которые содержат антиген, включенный в иммуногенную композицию, или введенный в сочетании с иммуногенной композицией. Млекопитающее предпочтительно представляет собой человека, но может, например, представлять собой корову, свинью, курицу, кошку или собаку, поскольку патогены, подпадающие под объем изобретения, могут вызывать проблемы у широкого разнообразия видов. Если вакцину применяют с целью профилактики, то человек предпочтительно представляет собой ребенка (например, ребенка, начинающего ходить, или младенца) или подростка; если вакцину применяют для терапевтических целей, то человек предпочтительно представляет собой подростка или взрослого. Вакцину, предназначенную для детей, можно вводить взрослому человеку, например, для оценки безопасности, определения дозы, иммуногенности и т. д.
Одним из путей оценки эффективности терапевтической обработки является мониторинг вызываемой патогеном инфекции после введения иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании. Одним из путей оценки эффективности профилактической обработки является мониторинг иммунных ответов, системно (например, мониторинг уровня производства IgG1 и IgG2a) и/или в слизистых оболочках (например, мониторинг уровня производства IgA), в отношении антигенов, включенных или вводимых в сочетании с иммуногенными композициями, которые представлены в настоящем описании, после введения иммуногенной композиции (и антигена, если его вводят отдельно). Как правило, гуморальные ответы в виде производства специфических для антигена сывороточных антител определяют после введения, но перед осуществлением контрольного заражения, а специфические для антигена гуморальные ответы в виде производства антител в слизистых оболочках определяют после иммунизации и после осуществления контрольного заражения.
Другой путь оценки иммуногенности иммуногенных композиций, представленных в настоящем описании, в которых антиген представляет собой белок, включает рекомбинантную экспрессию белков для скрининга сыворотки пациента или слизистых секреций методом иммуноблоттинга и/или с помощью микромассивов. Положительная реакция между белком и образом из организма пациента свидетельствует о том, что у пациента возник иммунный ответ на рассматриваемый белок. Этот метод можно приме
- 66 031379 нять также для идентификации иммунодоминантных антигенов и/или эпитопов в белковых антигенах.
Эффективность иммуногенных композиций можно определять также in vivo путем контрольного заражения соответствующих животных моделей патогеном, который вызывает представляющую интерес инфекцию.
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, как правило, вводят индивидууму непосредственно. Для непосредственного введения можно применять парентеральную инъекцию (например, подкожную, внутрибрюшинную, внутривенную, внутримышечную или в интерстициальное пространство ткани), или в слизистые оболочки, например, ректально, орально (например, с помощью таблетки, спрея), вагинально, местно, трансдермально или чрескожно, в нос, в глаз, в ухо, в легкое или можно использовать другой вариант введения в слизистые оболочки.
Иммуногенные композиции можно применять для вызывания системного иммунитета и/или защитных свойств слизистых оболочек, предпочтительно для вызывания усиленного системного иммунитета и/или усиления защитных свойств слизистых оболочек.
Предпочтительно усиленный системный иммунитет и/или усиление защитных свойств слизистых оболочек выражается в усиленном иммунном ТН1- и/или ТН2-ответе. Предпочтительно усиленный иммунный ответ включает повышение производства IgG1, и/или IgG2a, и/или IgA.
Дозирование может представлять собой схему введения, основанную на применении однократных доз, или схему введения, основанную на применении нескольких доз. Несколько доз можно использовать в схеме первичной вакцинации и/или в схеме бустер-иммунизации. При использовании схемы, основанной на применении нескольких доз, различные дозы можно вводить одинаковыми или различными путями, например, парентеаральная первичная вакцинации и бустер-иммунизация в слизистые оболочки, первичная вакцинация в слизистые оболочки и парентеральная бустер-иммунизация и т.д. Несколько доз, как правило, вводят с интервалом, составляющим по меньшей мере 1 неделю (например, примерно через 2 недели, примерно 3 недели, примерно 4 недели, примерно 6 недель, примерно 8 недель, примерно 10 недель, примерно 12 недель, примерно 16 недель и т.д.).
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, которые включают один или несколько антигенов, или которые применяют в сочетании с одним или несколькими антигенами, можно использовать для лечения как детей, так и взрослых. Таким образом, человек может иметь возраст менее 1 года, 1-5 лет, 5-15 лет, 15-55 лет или по меньшей мере 55 лет. Предпочтительными индивидуумами для обработки указанными иммуногенными композициями являются престарелые люди (например, возрастом >50 лет, >60 лет и предпочтительно >65 лет), молодые люди (например, возрастом <5 лет), госпитализированные пациенты, сотрудники службы медико-санитарной помощи, медицинской службы армии и военный персонал, беременные женщины и пациенты, страдающие хроническим заболеванием, или пациенты с иммунодефицитом. Однако иммуногенные композиции можно применять не только для указанных групп, их можно применять для более широкой популяции.
Иммуногенные композиции, представленные в настоящем описании, которые включают один или несколько антигенов, или которые применяют в сочетании с одним или несколькими антигенами, можно использовать для обработки пациентов практически одновременно (например, в процессе одной медицинской консультации или визита к специалисту по медико-санитарной помощи или в центр по вакцинации) с другими вакцинами, например, практически одновременно с вакциной против кори, вакциной против эпидемического паротита, вакциной против краснухи, вакциной против MMR, вакциной против ветряной оспы, MMRV-вакциной, вакциной против дифтерита, вакциной против столбняка, вакциной против коклюша, DTP-вакциной (коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина), объединенной с вакциной против Н. influenzae типа b, инактивированной вакциной против полимиелита, вакциной против вируса гепатита В, менингококковой конъюгатной вакциной (такой как четырехвалентная А С W135 Y вакцина), вакцина против респираторного синцитиального вируса и т.д.
Соединения формулы (I), включенные в состав препарата в сочетании с содержащими алюминий адъювантами
В конкретных вариантах осуществления изобретения по меньшей мере одно соединение формулы (I), представленное в настоящем описании, или его фармацевтически приемлемую соль или сольват объединяют с содержащим алюминий адъювантом и взятым(и) в эффективном количестве одним или несколькими антигенами, в результате чего получают иммуногенную композицию. В конкретных вариантах таких иммуногенных композиций соединение формулы (I) связывают с содержащим алюминий адъювантом. В таких иммуногенных композициях антиген представляет собой любой из антигенов, представленных в настоящем описании. С помощью таких иммуногенных композиций антиген и соединение формулы (I), являющееся агонистом TLR2, совместно доставляют в требуемую область.
В конкретных вариантах таких иммуногенных композиций связывание соединения формулы (I) с содержащим алюминий адъювантом не препятствует связыванию антигена с содержащим алюминий адъювантом.
В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции можно применять в качестве вакцин. В конкретных вариантах осуществления изобретения такие вакцины являются профилактическими (т.е. они предназначены для предупреждения инфекции), в то время как в других
- 67 031379 вариантах осуществления изобретения такие вакцины являются терапевтическими (т.е. они предназначены для лечения инфекции).
Соединение(я) формулы (I), представленное(ые) в настоящем описании, или его(их) фармацевтически приемлемая соль или сольват являются агонистами TLR2 и иммунными потенциаторами, которые оказывают иммуностимулирующее действие после введения, по сравнению с иммуногенными препаратами, которые не содержат соединение(я) формулы (I). В конкретных вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) оказывают иммуностимулирующее действие после введения, когда они включены в состав иммуногенной композиции, содержащей одно или несколько иммунорегуляторных средств, в то время как в других вариантах осуществления изобретения соединения формулы (I) оказывают иммуностимулирующее действие после введения, когда они входят в состав иммуногенной композиции, которая не содержит других иммунорегуляторных средств.
В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции повышают иммунный ответ в результате удерживания соединения формулы (I) в области инъекции.
В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции включают фармацевтически приемлемый носитель, такой как (но не ограничиваясь только ими) белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, сахарозу, трегалозу, лактозу, липидные агрегаты (такие как масляные капли или липосомы) и неактивные вирусные частицы. Иммуногенные композиции, как правило, содержат также разбавители, такие как вода, физиологический раствор и глицерин, и необязательно содержат и другие эксципиенты, такие как смачивающие агенты или эмульгаторы, и рН-забуферивающие субстанции. В конкретных вариантах осуществления изобретения такие иммуногенные композиции включают один или несколько дополнительных адъювантов, представленных в настоящем описании.
Примеры
Представленные ниже примеры приведены для иллюстрации соединений формулы (I), предлагаемых в изобретении, и получения указанных соединений, но они не направлены на ограничение объема изобретения.
Синтез исходных соединений
Получение (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6)
Стадия 1: ^)-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8).
Раствор, содержащий (N-Fmoc-Cys-OtBu)2 (7, 1 экв.), NEt3 (3 экв.) и ДТЭ (1,4-дитиоэритритол, 2,5 экв.) в дихлорметане (ДХМ, 0,1М), перемешивали при комнатной температуре до полного восстановления (1,5 ч). Реакционную смесь разводили в ДХМ, промывали трижды 5%-м раствором лимонной кислоты, дважды водой и один раз соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 2: ^)-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(^)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноат (10).
Раствор, содержащий ^)-(+)-глицидил-4-нитробензоат (9, 1,1 экв.) и 1М NaOH (1,1 экв.) в tBuOH (0,1M), перемешивали при комнатной температуре до полного гидролиза нитробензоата (30 мин). В образовавшуюся смесь вносили раствор (Я)-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3меркаптопропаноата (8, 1 экв.) в tBuOH (1M). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления tBuOH и растворяли
- 68 031379 в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды водой и один раз соляным раствором. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-90% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3: Щ)-3-(Щ)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат (11).
Раствор, содержащий (R)-трет-бутил-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3дигидроксипропилтио)пропаноат (10, 1 экв.) в ДХМ (0,1М), охлаждали в ледяной бане. Добавляли пиридин (3,7 экв.), а затем додеканоилхлорид (3,7 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, промывали насыщенным водным раствором NH4Cl. Водную фазу повторно экстрагировали ДХМ. Объединенные органические фазы промывали Н2О и водную фазу повторно экстрагировали ДХМ. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 4: (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновая кислота (6).
Раствор, содержащий (R)-3 -(Щ)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3 оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат (11) в 40%-м растворе ТФК в ДХМ (0,3М), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в метил-трет-бутиловом эфире (МТБЭ), промывали трижды 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3) и один раз смесью (1:2) 1н. HCl/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный воскообразный твердый продукт использовали без дополнительной очистки.
Синтез соединений из примеров
Пример 1. Синтез (И)-3-(Щ)-2-амино-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио) пропан-1,2-диилдидодеканоата
Стадия 1: Щ)-3-(Щ)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ГБТУ (гексафторфосфат О-бензотриазолМ,М,МгЫ'-тетраметилурония, 1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем гидрохлорид (1-аминоциклопропил)метанола (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 30-50% EtOAc/Нех, в результате чего получали (R)-3-((R)-2(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3 -(1 -(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
Стадия 2: (R)-3 -((R)-2-амино-3 -(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшийся гель разводили ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. Смесь добавляли к толуолу и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали Щ)-3-(Щ)-2-амино-3-(Б (гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат в виде твердого вещества беловатого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): δ 7,85 (br s, 1H), 5,11-5,18 (m, 1H), 4,36 (dd, 1H), 4,14 (dd, 1H), 4,05 (br s, 1H), 3,59 (q, 2H), 3,50 (dd, 1H), 3,06 (dd, 1H), 2,80 (dd, 1H), 2,68-2,76 (m, 2H), 2,32 (q, 4Н), 1,51-1,68 (m, 4H), 1,191,35 (m, 32H), 0,90-0,94 (m, 2H), 0,88 (t, 6H), 0,79-0,83 (m, 2H). МСНР (масс-спектр низкого разрешения) [М+Н] = 629,5.
Пример 2. Синтез 3-(Щ)-2-амино-3-(Щ)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропил- 69 031379 фосфоновой кислоты
Стадия 1: диэтил-3-азидопропилфосфонат.
К раствору диэтил-3-бромпропилфосфоната (1 экв.) в EtOH (2M) добавляли азид натрия (5 экв.) в воде (4М). Реакционную смесь выдерживали при температуре дефлегмации в течение ночи. Затем смесь разводили водой, трижды экстрагировали ДХМ. Объединенные органические слои промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 80100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2: диэтил-3-аминопропилфосфонат.
Диэтил-3-азидопропилфосфонат (1 экв.) растворяли в EtOH (0,1M). К реакционной смеси добавляли Pd(OH)2 (0,02 экв.). Вводили газообразный водород из баллона и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь перемешивали еще в течение 2 ч при комнатной температуре, фильтровали через целит и промывали метанолом. Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН в ДХМ, содержащего 0,5% NH3 в МеОН, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 3: сложный диэтиловый эфир 3-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(^)2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропилфосфорила.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1М), добавляли диэтил-3аминопропилфосфонат (1,3 экв.), диизопропилэтиламин (ДИЭА, 2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 70-100% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 4: сложный диэтиловый эфир 3-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио) пропанамидо)пропилфосфорила.
К раствору сложного диэтилового эфира 3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3№)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропилфосфорила (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь разводили дихлорметаном и облучали ультразвуком в течение 3 мин. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде желтоватого масла.
Стадия 5: 3 -((R)-2-амино-3 -(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропилфосфоновая кислота.
К раствору сложного диэтилового эфира 3-(^)-2-амино-3-(^)-2,3бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)пропилфосфорила (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной темпера туре и концентрировали.
Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAC (рН 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO d-6): δ 8,51 (t, 1H), 5,10-5,17 (m, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,12 (dd, 1H), 3,86 (t, 1H), 3,083,24 (m, 2Н), 2,96 (dd, 1H), 2,83 (dd, 2H), 2,74 (dd, 1H), 2,23-2,31(m, 4H), 1,58-1,70 (m, 2Н), 1,44-1,58 (m, 6H), 1,13-1,32 (m, 32H), 0,85 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 681,4.
Пример 3. Синтез (8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6азагексакозилфосфоновой кислоты
- 70 031379
OiS^'C'l 1H23
Стадия 1: диэтил-2-(2-бромэтокси)этилфосфонат.
1-Бром-2-(2-бромэтокси)этан (1,0 экв.) смешивали с триэтилфосфатом (1 экв.) и затем нагревали до 160°С в течение 20 мин с помощью микроволновой печи. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 70-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2: диэтил-2-(2-азидоэтокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-бромэтокси)этилфосфоната (1 экв.) в EtOH (0,3М) добавляли азид натрия (5 экв.) в воде (2М). Реакционную смесь выдерживали при температуре дефлегмации в течение ночи. Затем смесь разводили водой и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты, насыщенным NaHCO3, водой и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очщали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 80-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 3: диэтил-2-(2-аминоэтокси)этилфосфонат.
Диэтил-2-(2-азидоэтокси)этилфосфонат (1 экв.) растворяли в EtOH (0,1М). К реакционной смеси добавляли Pd(OH)2 (0,05 экв.). Вводили газообразный водород из баллона и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали через целит и промывали с помощью МеОН. Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, содержащем 2% NH3 в метаноле, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 4: сложный диэтиловый эфир (8R,12R)-8-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-12(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2аминоэтокси)этилфосфонат (1,3 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 50-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 5: сложный диэтиловый эфир ((8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила.
К раствору сложного диэтилового эфира (8R,12R)-8-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила (1 экв.) добавляли 20%ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь разводили с помощью ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 6: ((8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфоновая кислота.
К раствору сложного диэтилового эфира (8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14диокса-10-тиа-6-азагексакозилфосфорила (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (DMSO d-6): δ 9,16 (br s, 1H), 5,09 (br, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,11 (dd, 1H), 3,44-3,70 (m, 3H), 3,25-3,27 (m, 2H), 3,17-3,25 (m, 1H), 3,03-3,15 (m, 1H), 2,94 (dd, 1H), 2,83 (dd, 1H), 2,61-2,76 (m, 2H), 2,222,23 (m, 4H), 1,58-1,75 (m, 2H), 1,45-1,56 (m, 4H), 1,15-1,34 (m, 32H), 0,86 (t, 6H). MCHP [M+H] = 711,4.
Пример 4. Синтез (12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты
- 71 031379
Стадия 1: диэтил-1,1 -дифтор-3 -(2-(2-йодэтокси)этокси)пропилфосфонат.
К раствору диизопропиламина (1,6 экв.) в ТГФ (1,28М) медленно добавляли по каплям нбутиллитий (1,5М в циклогексане, 1,5 экв.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 40 мин. Затем смесь охлаждали до -78°С и к раствору медленно добавляли диэтилдифторметилфосфонат (1 экв.) в ГМПК (2-гидрокси-2-метилпропановая кислота) (2,1М). Затем смесь перемешивали при -78°С в течение 40 мин и к образовавшемуся раствору быстро добавляли охлажденный раствор 1,2бис(2-йодэтокси)этана (12,8М в ТГФ, 4 экв.). Через 1,5 ч реакцию прекращали, сливая смесь в насыщенный раствор NH4Cl. Водные фазы трижды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Образовавшийся неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 10-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде масла желтого цвета.
Стадия 2: диэтил-3 -(2-(2-азидоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфонат.
К раствору диэтил-1,1-дифтор-3-(2-(2-йодэтокси)этокси)пропилфосфоната (1 экв.) в ДМФ (0,5М) добавляли азид натрия (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. Смесь разводили этилацетатом и промывали водой. Водные фазы повторно экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 10-50% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3: гидрохлорид диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната.
К раствору диэтил-3-(2-(2-азидоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1 экв.) в растворе EtOH (2M) добавляли гидроксид палладия (0,05 экв.) и 2М HCl в простом эфире (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (при давлении 1 атм) в течение ночи. Палладий отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь использовали для осуществления следующей реакции без дополнительной очистки.
Стадия 4: диэтил-(12R,16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16-(додеканоилокси)-
1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфонат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли гидрохлорид диэтил 3-(2-(2аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1,3 экв.), ДИЭА (3,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 30-80% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 5: диэтил-(12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1 -дифтор-11,19-диоксо-4,7,18триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфонат.
К раствору диэтил-(12R,16R)-12-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь перемешивали при 25°С до исчезновения исходных продуктов. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 6: (12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа10-азатриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтил-(12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-1,1 -дифтор-11,19-диоксо-4,7,18триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали (12R,16R)-12амино-16-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоно
- 72 031379 вую кислоту.
1Н ЯМР (CDCl3): δ 8,47 (br s, 1H), 5,10-5,23 (m, 1H), 4,32 (dd, 1H), 4,18-4,26 (m, 1H), 4,12 (dd, 1H), 3,683,86 (m, 2H), 3,44-3,68 (m, 6H), 3,20-3,36 (m, 1H), 2,96-3,16 (m, 2H), 2,76-2,85 (m, 1H), 2,68-2,76 (m, 1H), 2,21-2,38 (m, 4H), 2,12-2,07 (m, 2H), 1,52-1,65 (m, 4Н), 1,36-1,15 (m, 32H), 0,87 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 805,5.
Пример 5. (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфоновая кислота
Стадия 1: диэтил-2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этилфосфонат.
1,2-бис(2-Йодэтокси)этан (1,0 экв.) смешивали с триэтилфосфатом (1 экв.), затем нагревали до 160°С в течение 20 мин с помощью микроволновой печи. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 85-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали диэтил-2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этилфосфонат в виде бесцветного масла.
Стадия 2: диэтил-2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этилфосфоната (1 экв.) в EtOH (0,2M) добавляли азид натрия (5 экв.) в воде (1,4М). Реакционную смесь выдерживали при температуре дефлегмации в течение ночи. Затем смесь разводили водой, экстрагировали с помощью EtOAc (3 раза). Объединенные органические слои промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали диэтил-2-(2-(2азидоэтокси)этокси)этилфосфонат в виде бесцветного масла.
Стадия 3: диэтил-2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этилфосфонат.
Диэтил-2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этилфосфонат (1 экв.) растворяли в EtOH (0,1М). К реакционной смеси добавляли Pd(OH)2 (0,05 экв.). Вводили газообразный водород из баллона и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали через целит и промывали с помощью МеОН. Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием смеси 0-10% МеОН/ДХМ с 0,5% NH3, в результате чего получали диэтил-2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этилфосфонат в виде бесцветного масла.
Стадия 4: сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2-(2аминоэтокси)этокси)этилфосфонат (1,3 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 70-100% EtOAc/Hex, в результате чего получали сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-(((9H-флуорен-9ил)метокси)карбониламино)-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила.
Стадия 5: сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17триокса-13 -тиа-9-азанонакозилфосфорила.
К раствору сложного диэтилового эфира (11R,15R)-11-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшуюся смесь разводили с помощью ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% ЕА (этилацетат), а затем 0-10% МеОН в ДХМ, в результате чего получали сложный диэтиловый эфир (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила.
Стадия 6: (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфоновая кислота.
К раствору сложного диэтилового эфира (11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозилфосфорила (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и концентриро
- 73 031379 вали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали (11R,15R)-11-амино15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозил фосфоновую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (DMSO d-6): δ 8,70 (br t, 1H), 5,05-5,14 (m, 1H), 4,28 (dd, 1H), 4,10 (dd, 1H), 3,79 (t, 2H), 3,20-3,69 (m, 8H), 3,04-3,13 (m, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,83 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,64-2,72 (m, 1H), 2,21-2,30 (m, 4H), 1,61-1,72 (m, 2H), 1,43-1,55 (m, 4H), 1,15-1,32 (m, 32H), 0,84 (t, 6H). MCHP [M+H] = 755,5.
Пример 6. ^)-3-(^)-2-амино-3-оксо-3-(2-(пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат
Стадия 1: да-3-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-оксо-3-(2-пиридин-3ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли 3-(2-аминоэтил)пиридин (1,2 экв.), затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.) и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (R)-3-((R)-2(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-оксо-3-(2-пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио) пропан-
1,2-диилдидодеканоат.
Стадия 2: (R)-3 -((R)-2-амино-3 -оксо-3 -(2-(пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2 диилдидодеканоат.
Раствор (R)-3-((R)-2-(((9H-(флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-оксо-3-(2-пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования неочищенную реакционную смесь очищали с помо щью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH® с использованием 0-10% МеОН/ДХМ (осуществляя мониторинг путем окрашивания нингидрином), в результате чего получали (R)-3-((R)-2амино-3-оксо-3 -(2-(пиридин-3-ил)этиламино)пропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
Ή ЯМР (CDCl3): δ 8,49 (m, 2H), 7,53 (m, 2H), 7,24 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 4,36-4,40 (dd, 1H), 4,11-4,19 (dd, 2H), 3,54 (m, 2H), 3,50 (m, 1H), 3,09 (dd, 1H), 2,83 (t, 2H), 2,74 (m, 2H), 2,29-2,38 (q, 4H), 1,60-1,71 (m, 4H), 1,21-1,34 (m, 32H), 0,88 (t, 6H). MCHP [M+H] = 664,5.
Пример 7. ^)-3-(^)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат
Стадия 1: (12R, 16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,11диоксо-2-окса-14-тиа-4,10-диазагептадекан-16,17-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли защищенный с помощью Fmoc гидрохлорид 1,5-диаминопентана (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.) и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtO Ac/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (12R,16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н
- 74 031379 флуорен-9-ил)-3,11-диоксо-2-окса-14-тиа-4,10-диазагептадекан-16,17-диилдидодеканоат.
Стадия 2: Щ)-3-(Щ)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидо деканоат.
Раствор (12R,16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,11диоксо-2-окса-14-тиа-4,10-диазагептадекан-16,17-диилдидодеканоата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH® с использованием градиента 0-20% МеОН (1% NHз)/ДХМ, в результате чего получали (И)-3-(Щ)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
1Н ЯМР (DMSO d-6): δ 7,91 (t, 1H), 5,09 (m, 1H), 4,26-4,32 (dd, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 3,24-3,36 (m, 8Н), 3,05-3,08 (m, 2H), 3,06 (m, 1H), 2,80 (m, 1H), 2,74 (t, 1H), 2,67 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 2,29-2,34 (q, 4H), 1,48-1,54 (m, 4H), 1,32-1,40 (m, 4H), 1,21-1,34 (m, 32Н), 0,88 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 645,1.
Пример 8. ((2R,6R)-6,20-диамино-7-оксо-12,17-диокса-4-тиа-8-азаэйкозан-1,2-диилдидодеканоат
Стадия 1: (19R,23R)-19-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,18диоксо-2,8,13-триокса-21-тиа-4,17-диазатетракозан-23,24-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли гидрохлорид 1-(Pmoc-амино)-4,9-диокса-12додеканамина (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.) и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (19R,23R)-19-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9ил)-3,18-диоксо-2,8,13-триокса-21-тиа-4,17-диазатетракозан-23,24-диилдидодеканоат.
Стадия 2: Щ)-3-(Щ)-2-амино-3-(5-аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
Раствор (19R,23R)-19-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1 -(9Н-флуорен-9-ил)-3,18диоксо-2,8,13-триокса-21-тиа-4,17-диазатетракозан-23,24-диилдидодеканоата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали с помощью ЖХВР с управлением от масс-спектрометра (mass triggered HPLC) с использованием градиента 50-100% MeCN в Н2О (0,1% ТФК), в результате чего получали Щ)-3-Щ)-2-амино-3-(5аминопентиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат).
1Н ЯМР (DMSO d-6): δ 8,49 (t, 1Н), 5,12 (m, 1H), 4,26-4,32 (dd, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 3,85 (t, 1H), 3,32-3,41 (m, 7Н), 3,20 (m, 2H), 3,11 (m, 1H), 2,91 (dd, 1H), 2,82 (m, 4H), 2,73 (m, 1H), 2,52 (m, 2Н), 2,292,34 (q, 4H), 1,71-1,79 (m, 2H), 1,62-1,68 (m, 2H), 1,49-1,52 (m, 8H), 1,21-1,34 (m, 32H), 1,18-1,21 (t, 2H), 0,88 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 747,1.
Пример 9. (20R,24R)-2,20-диамино-1-меркапто-3,19-диоксо-8,11,14-триокса-22-тиа-4,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат
Стадия 1: (20R,24R)-20-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-2,2-диметил-4,19-диоксо
- 75 031379
3,9,14-триокса-22-тиа-5,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додeканоилокси)-1-(9Н-флуорeн-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) перемешивали в безводном ДХМ (ОДМ) при комнатной температуре. После этого добавляли Вос-1-амино-4,7,10-триокса-13тридеканамин (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.) и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (20R,24R)-20-(((9H-флуорeн-9-ил)мeтокси)карбониламино)-2,2-димeтил-4,19диоксо-3,9,14-триокса-22-тиа-5,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат.
Стадия 2: (2R,6R)-6-(((9Н-флуорeн-9-ил)мeтокси)карбониламино)-20-амино-7-оксо-12,17-диокса-4тиа-8-азаэйкозан-1,2-диилдидодеканоат.
(20R,24R)-20-(((9H-флуорeн-9-ил)мeтокси)карбониламино)-2,2-димeтил-4,19-диоксо-3,9,14триокса-22-тиа-5,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат перемешивали в 30% ТФК/ДХМ в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и промывали 1М лимонной кислотой (рН 3). После этого органические слои сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали, в результате чего получали (2R,6R)-6-(((9Н-флуорeн-9-ил)мeтокси)карбониламино)20-амино-7-оксо-12,17-диокса-4-тиа-8-азаэйкозан-1,2-диилдидодеканоат.
Стадия 3: (23R,27R)-23-(((9Н-флуорeн-9-ил)мeтокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорeн-9-ил)-3,6,221риоксо-5-(тритилтиометил)-2,11,14,17-те1раокса-25-тиа-4,7,21-1риазаоктакозан-27,28-диилдидодеканоат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-9-(додeканоилокси)-1-(9Н-флуорeн-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли Fmoc-Cys(Trt)-OH (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.) и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (23R,27R)-23(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,6,22-триоксо-5-(тритилтиометил)2,11,14,17-тетраокса-25-тиа-4,7,21-триазаоктакозан-27,28-диилдидодеканоат.
Стадия 4: (22R,26R-4,22-диамино-5,21-диоксо-1,1,1-трифeнил-10,13,16-триокса-2,24-дитиа-6,20диазагептакозан-26,27-диилдидодеканоат.
Раствор (23R,27R)-23 -(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)- 1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,6,22триоксо-5-(тритилтиометил)-2,11,14,17-тетраокса-25-тиа-4,7,21-триазаоктакозан-27,28-диилдидодеканоата в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH®, используя начальный градиент 0-100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (22R,26R)-4,22-диамино-5,21-диоксо-1,1,1-трифeнил-10,13,16-триокса-2,24-дитиа-6,20-диазагeптакозан26,27-диилдидодеканоат.
Стадия 5: (20R,24R-2,20-диамино-1-мeркапто-3,19-диоксо-8,11,14-триокса-22-тиа-4,18-диазапeнтакозан-24,25-диилдидодеканоат.
(22R,26R)-4,22-диамино-5,21-диоксо-1,1,1-трифeнил-10,13,16-триокса-2,24-дитиа-6,20-диазагептакозан-26,27-диилдидодеканоат перемешивали в ТФК (0,1М), содержащей 5% триизопропилсилана, при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH® с использованием градиента 0-20% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (20R,24R)-2,20-диамино-1-мeркапто-3,19-диоксо-8,11,14триокса-22-тиа-4,18-диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат.
Ή ЯМР (DMSO d-6): δ 8,51 (t, 1H), 8,49 (t, 1H), 5,12 (m, 1H), 4,26-4,32 (dd, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 3,86 (q, 2H), 3,46-3,52 (m, 8H), 3,40 (t, 4H), 3,35 (br s, 4H), 3,12-3,25 (m, 4H), 2,82-2,94 (m, 6H), 2,72-2,79 (dd, 1H), 2,29-2,34 (q, 4H), 1,68-1,72 (q, 4H), 1,49-1,52 (m, 4H), 1,21-1,34 (m, 32H), 0,86 (t, 6H). MCHP [M+H] = 866,3.
Пример 10. (4R,7S,10R,14R)-l 0-амино-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1 -овая кислота
Стадия 1: Щ)-2,3-бис(гексадецилокси)пропилтрифторметансульфонат.
- 76 031379
К раствору, содержащему ^)-2,3-бис(гексадецилокси)пропан-1-ол (1 экв.) и пиридин (4 экв.) в ДХМ (0,1М), добавляли при 0°С Tf2O (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и реакцию прекращали с помощью Н2О. Водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали Н2О и водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали насыщенным NaHCO3 и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB FLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Нех, в результате чего получали Щ)-2,3-бис(гексадецилокси)пропилтрифторметансульфонат в виде бесцветного масла.
Стадия 2: (5R,9R)-трет-бутил-1-(9Н-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азагептакозан-5-карбоксилат.
Смесь, содержащую Щ)-2,3-бис(гексадецилокси)пропилтрифторметансульфонат (1 экв.), Щ)-третбутил 2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8, 2 экв.) и K2CO3 (1 экв.) в EtOH (0,1М), перемешивали в течение 30 мин при 60°С. Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали (5R,9R)-трет-бутил-1-(9Н-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат в виде бесцветного масла.
Стадия 3: (5R,9R)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоновая кислота.
Раствор (5R,9R)-трет-бутил 1-(9H-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азагептакозан-5-карбоксилата в 40% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1М лимонной кислотой (рН 3) и один раз смесью (1:2) HCl (3М)/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Образовавшееся воскообразное твердое вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4: (4R,7S,10R,14R)-бензил-10-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-оат.
Раствор, содержащий (5R,9R)-1-(9H-флуорен-9-ил)-9-(гексадецилокси)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азагептакозан-5-карбоновую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.), перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) при комнатной температуре. После этого добавляли гидрохлорид Щ)-бензил-5-амино-4-(^)-2аминобутанамидо)-5-оксопентаноата (1,2 экв.), а затем диизопропилэтиламин (2,0 экв.) и реакционной смеси давали перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали (4R,7S,10R,14R)-бензил-10-(((9Н-флуорен-9ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8диазадотриаконтан-1-оат.
Стадия 5: (4R,7S,10R,14R)-10-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овая кислота.
Смесь, содержащую (4R,7S,10R,14R)-бензил-10-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-оат) и
Pd(OH)2 (1,2 экв.) в EtOH (0,1М), перемешивали в течение ночи при 25°С в атмосфере Н2 (1 атм). Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (4R,7S,10R,14R)-10-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 6: (4R,7S,10R,14R)-10-амино-4-карбамоил-7-этил-14-(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овая кислота.
Раствор (4R,7S,10R,14R)-10-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-4-карбамоил-7-этил-14(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овой кислоты в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После концентрирования продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе ISCO COMBFLASH® с использованием градиента 010% МеОН/ДХМ, в результате чего получали (4R,7S,10R,14R)-10-амино-4-карбамоил-7-этил-14(гексадецилокси)-6,9-диоксо-16-окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-овую кислоту. 1Н ЯМР (DMSO d6): δ 12,12 (br, s, 1H), 8,56 (d, 1H), 8,14 (t, 2H), 8,12 (d, 1H), 7,25 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 4,21-4,34 (m, 2H), 3,95-3,97 (m, 1H), 3,44-3,52 (m, 3H), 3,32-3,40 (m, 3H), 2,96 (dd, 1H), 2,66-2,78 (m, 4H), 2,19 (t, 2H), 1,891,98 (m, 2H), 1,67-1,76 (m, 4H), 1,56-1,64 (m, 2H), 1,42-1,50 (m, 4H), 1,21-1,28 (m, 48H), 0,83-0,89 (m, 9H).
- 77 031379
MCHP [M+H] = 857,7.
Пример 11. №(Щ)-1-(Щ)-2-амино-3 -(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)-3(гексадецилокси)пропан-2-ил)додеканамид
Стадия 1: (5)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ол.
Раствор, содержащий Щ)-3-(гексадецилокси)пропан-1,2-диол (1 экв.), TBDMSCl (третбутилдиметилсилилхлорид, 1,4 экв.), NEt3 (1,4 экв.) и ДМАП (0,05 экв.) в ДХМ (0,5М) перемешивали при 25°С в течение ночи. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и дважды с помощью Н2О, водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органический фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали ^)-1-(третбутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ол в виде бесцветного масла.
Стадия 2: метансульфонат ^)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ила.
К раствору ^)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ола (1 экв.) в пиридине (0,5М) при 0°С добавляли MsCl (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и реакцию прекращали с помощью Н2О. Водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органический фазы промывали Н2О и водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали насыщенным NaHCO3 и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB FLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-15% EtOAc/Hex, в результате чего получали метансульфонат ^)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ила в виде бесцветного масла.
Стадия 3: Щ)-(2-азидо-3-(гексадецилокси)пропокси)(трет-бутил)диметилсилан.
Смесь, содержащую метансульфонат ^)-1-(трет-бутилдиметилсилилокси)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ила (1 экв.) и NaN3 (5 экв.) в ДМФ (0,5М), перемешивали при 100°С в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-15% EtOAc/Hex, в результате чего получали Щ)-(2-азидо-3-(гексадецилокси) пропокси)(трет-бутил)диметилсилан в виде бесцветного масла.
Стадия 4: ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропан-1-ол.
Раствор, содержащий Щ)-(2-азидо-3-(гексадецилокси)пропокси)(трет-бутил)диметилсилан (1 экв.) и 1М ТБАФ (тетрабутиламмонийфторид) в ТГФ (1,1 экв.), в ТГФ (0,2М) перемешивали при 25°С в течение 20 мин. Реакционную смесь разводили Et2O и промывали насыщенным NH4Cl, H2O и соляным раствором. Органическую фазу сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали ^)-2-азидо-3(гексадецилокси)пропан-1-ол в виде бесцветного масла.
Стадия 5: трифторметансульфонат Щ)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропила.
К раствору, содержащему ^)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропан-1-ол (1 экв.) и пиридин (4 экв.) в ДХМ (0,1М), при 0°С добавляли Tf2O (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и реакцию прекращали с помощью Н2О. Водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали Н2О и водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органический фазы промывали насыщенным NaHCO3 и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMB FLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Нех, в результате чего получали трифторметансульфонат Щ)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропила.
Стадия 6: (5R,9R)-трет-бутил-9-азидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат.
Смесь, содержащую трифторметансульфонат (И)-2-азидо-3-(гексадецилокси)пропила (1 экв.), (R)трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8, 2 экв.) и K2CO3 (1 экв.) в EtOH (0,1М), перемешивали в течение 30 мин при 60°С. Реакционную смесь фильтровали и промывали ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали (5R,9R)-трет-бутил-9-азидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат.
- 78 031379
Стадия 7: (5R,9R)-трет-бутил 9-додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азагептакозан-5-карбоксилат.
Смесь, содержащую (5R,9R)-трет-бутил-9-азидо-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азагептакозан-5-карбоксилат (1,0 экв.), Pd(OH)2 (0,5 экв.), додеканоилхлорид (2,4 экв.) и ДИЭА (4,8 экв.) в EtOAc (0,01M), перемешивали в атмосфере Н2 (1 атм) при 25°С в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и промывали с помощью ДХМ. Фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали (5R,9R)-трет-бутил-9додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоксилат в виде бесцветного масла.
Стадия 8: (5R,9R)-9-додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2Л 1-диокса-7-тиа-4-азагептакозан5-карбоновая кислота.
Раствор (5R,9R)-трет-бутил-9-додеканамидо-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азагептакозан-5-карбоксилата в 40% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1М лимонной кислотой (рН 3) и один раз смесью (1:2) HCl (3М)/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме, в результате чего получали (5R,9R)-9-додеканамидо-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагептакозан-5-карбоновую кислоту.
Стадия 9: (9Н-флуорен-9-ил)метил-Щ)-3 -(Щ)-2-додеканамидо-3 -(гексадецилокси)пропилтио)-1-(1 (гидроксиметил)циклопропиламино)-1-оксопропан-2-илкарбамат.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-додеканамидо-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-
4-азагептакозан-5-карбоновую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем гидрохлорид (1-аминоциклопропил)метанола (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 30-50% EtOAc/Нех, в результате чего получали (9Н-флуорен-9-ил)метил Щ)-3-(Щ)-2-додеканамидо-3-(гексадецилокси)пропилтио)-1-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-1-оксопропан-2-илкарбамат.
Стадия 10: №(Щ)-1-(Щ)-2-амино-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)-3(гексадецилокси)пропан-2-ил)додеканамид.
К раствору (9Шфлуорен-9-ил)метил Щ)-3-(Щ)-2-додеканамидо-3-(гексадецилокси) пропилтио)-1(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-1-оксопропан-2-илкарбамата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Образовавшийся гель разводили с помощью ДХМ и облучали ультразвуком в течение 3 мин. Смесь добавляли к толуолу и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали N-((R)-1-((R)-2амино-3-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ил)додеканамид.
'11 ЯМР (DMSO d-6): δ 8,13 (s, 2H), 7,73 (d, 2H), 4,68 (t, 2H), 3,89-3,97 (m, 2H), 3,35-3,44 (m, 5H), 3,20-3,24 (m, 1H), 2,59-2,74 (m, 4H), 2,32-2,34 (m, 1H), 2,05 (t, 2H), 1,42-1,50 (m, 4H), 1,21-1,28 (m, 40H), 0,85 (t, 6H), 0,67 (dd, 2H), 0,56 (dd, 2H). MCHP [M+H] = 670,6.
Пример 12. Синтез N,N'-((R)-3-((R)-2-амино-3-(l-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диил)дидодеканамида
Стадия 1: (N-Cbz-Cys-OtBu)2.
Раствор, содержащий (N-H-Cys-OtBu)2 (1 экв.), CbzCl (2,2 экв.) и ДИЭА (5 экв.) в ДХМ (0,1М), перемешивали при 25°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, затем промывали последовательно 1М HCl, насыщенным NaHCO3 и соляным раствором. Затем органическую фазу сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-60% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде смолы белого цвета.
Стадия 2: Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-меркаптопропаноат.
Раствор, содержащий (N-Cbz-Cys-OtBu)2 (1 экв.), NEt3 (3 экв.) и ДТЭ (1,4-дитиоэритритол, 2,5 экв.) в ДХМ (0,1М), перемешивали при комнатной температуре до завершения восстановления (1,5 ч). Затем
- 79 031379 реакционную смесь разводили в ДХМ, промывали трижды 5%-ным раствором лимонной кислоты, дважды водой и один раз соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3: Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноат.
Раствор, содержащий (2R)-(-)-глицидил-4-нитробензоат (1,1 экв.) и 1М NaOH (1,1 экв.) в tBuOH (0,1М), перемешивали при комнатной температуре до достижения полного гидролиза нитробензоата (30 мин). К образовавшейся смеси добавляли раствор Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3меркаптопропаноата (1 экв.) в tBuOH (1M). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч и концентрировали в вакууме для удаления tBuOH; затем образовавшийся остаток растворяли в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды с помощью Н2О, а затем один раз с помощью соляного раствора. Органический слой сушили над безводным Na2SO4, затем концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-90% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 4: Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-бис(метилсульфонилокси)пропилтио)пропаноат.
Раствор Щ)-трет-бутил 2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (1 экв.) перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) в ледяной бане (0°С) в атмосфере N2. Затем осторожно при 0°С добавляли пиридин (8,0 экв.). Добавляли метансульфонилхлорид (4,0 экв.) и ДМАП (4-(N,Nдиметиламино)пиридин, 0,1 экв.), при этом реакционной смеси давали медленно нагреться до комнатной температуры, после чего осуществляли перемешивание в течение ночи. После этого неочищенную реакционную смесь загружали непосредственно на колонку с силикагелем и очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-20% EtOAc/Hex, 20-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде масла.
Стадия 5: Щ)-трет-бутил 2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-диазидопропилтио)пропаноат.
Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-бис(метилсульфонилокси)пропилтио)пропаноат (1 экв.) перемешивали в ДМФ (0,05М) при комнатной температуре в пузырьке вместимостью 40 мл. Затем осторожно добавляли NaN3 (8,0 экв.). После этого реакционный сосуд переносили в масляную баню и перемешивали при 50°С в течение 16 ч в открытом для доступа воздуха состоянии. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разводили с помощью ДХМ. Осадившиеся твердые частицы белого цвета отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50% EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали указанное в заголовке соединениев виде беловатого твердого вещества.
Стадия 6: ^)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-диаминопропилтио)пропаноат.
^)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-диазидопропилтио)пропаноат (1 экв.) перемешивали в безводном EtOH (0,05M) в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем добавляли Pd(OH)2 (0,5 экв.) в виде одной порции. Реакционную смесь продували и затем перемешивали в атмосфере водорода (1 атм.) в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем неочищенный продукт дважды фильтровали через целит и хлопковую пробку. Органический продукт концентрировали и использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 7: (5R,9R)-трет-бутил-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1 -фенил-2-окса-7-тиа-4,11-диазатрикозан-5-карбоксилат.
^)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-диаминопропилтио)пропаноат (1 экв.) перемешивали в безводном ДХМ (0,1М) в ледяной бане (0°С). После этого добавляли пиридин (3,7 экв.), а затем лауроилхлорид (3,7 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 5 мин, после чего нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Неочищенную реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, затем промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты, насыщенным NaHCO3 и соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4, затем концентрировали в вакууме, неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 100% Hex, 0-50%EtOAc/Hex, 100% EtOAc, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 8: (5R,9R)-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1-фенил-2-окса-7-тиа-4,11-диазатрикозан-5карбоновая кислота.
(5R,9R)-трет-бутил-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1 -фенил-2-окса-7 -тиа-4,11-диазатрикозан-5карбоксилат перемешивали в растворе, содержащем 30% ТФК/ДХМ (0,05М), в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем реакционную смесь концентрировали и разводили ДХМ. Органическую фазу промывали один раз 1М лимонной кислотой (рН 3), затем сушили над безводным Na2SO4, фильтровали и
- 80 031379 концентрировали, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде вязкого масла, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 9: бензил-(И)-3 -((И)-2,3-дидодеканамидопропилтио)-1-(1 -(гидроксиметил)циклопропил амино)-1-оксопропан-2-илкарбамат.
К раствору (5К,9К)-9-додеканамидо-3,12-диоксо-1-фенил-2-окса-7-тиа-4,11-диазатрикозан-5карбоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли гидрохлорид (1-аминоциклопропил)метанола (1,3 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% EtOAc/Hex, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде беловатого твердого вещества.
Стадия 10: N,N'-((R)-3 -((R)-2-амино-3 -(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио) пропан-1,2-диил)дидодеканамид.
Бензил-Щ)-3-(Щ)-2,3-дидодеканамидопропилтио)-1-(1-(гидроксиметил)циклопропиламино)-1оксопропан-2-илкарбамат (1 экв.) перемешивали в безводном EtOH (0,05M) в атмосфере N2 при комнатной температуре. Затем добавляли Pd(OH)2 (2,1 экв.) в виде одной порции. Затем реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) до полного восстановления. Неочищенную реакционную смесь фильтровали дважды через целит и хлопковую пробку, затем органический продукт концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали ^№-(Щ)-3-(Щ)-2-амино-3-(1(гидроксиметил)циклопропиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диил)дидодеканамид в виде масла.
!Н ЯМР (CDCl3): δ 8,02 (s, 1H), 6,83 (t, 1H), 6,70 (t, 1H), 3,50-3,71 (m, 6H), 3,00-3,12 (m, 3H), 2,882,94 (m, 2H), 2,21 (t, 4H), 1,64 (t, 4H), 1,21-1,35 (m, 32H), 0,93 (m, 4H), 0,82 (t, 6Н). МСНР [М+Н] = 628,0.
Пример 13. Синтез (5S,8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-5-этил-7,15-диоксо-3,14-диокса-10тиа-6-азагексакозан-1-овой кислоты χταχ.,,
он
Стадия 1: ^)-трет-бутил-1-гидроксибутан-2-илкарбамат.
К раствору (Х)-2-аминобутан-1-ола (1 экв.) в ТГФ (0,26М) при 0°С добавляли ди-третбутилкарбонат (1 экв.) и триэтиламин (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток разводили в этилацетате. Органический раствор промывали водой (2х), соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2: ^)-трет-бутил-2-(2-(трет-бутоксикарбониламино)бутокси)ацетат.
К раствору (Х)-трет-бутил 1-гидроксибутан-2-илкарбамата (1 экв., полученного на предыдущей стадии) в ТГФ (0,23М) при 0°С добавляли порциями 60 мас.% NaH (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин, а затем добавляли по каплям раствор трет-бутил-2-бромацетата (1 экв.) в ТГФ (0,12М). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Реакцию прекращали путем медленного добавления насыщенного водного раствора NH4Cl и разводили простым эфиром. Органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-40% этилацетата в гексанах, в результате чего получали продукт в виде масла.
Стадия 3: ^)-трет-бутил-2-(2-аминобутокси)ацетат.
К раствору (Х)-трет-бутил 2-(2-(трет-бутоксикарбониламино)бутокси)ацетата (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ДХМ (0,4М) при комнатной температуре добавляли раствор 4М HCl в диоксане (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего добавляли еще одну порцию 4М HCl в диоксане (3 экв.) и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали продукт в виде масла. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 4: (8S, 11R, 15R)-11-(Т(9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-8-этил-2,2-диметил-4,10диоксо-3,6 -диокса-13 -тиа-9-азагексадекан-15,16-диилдидодеканоат.
К раствору, содержащему (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.) и ^)-трет-бутил-2-(2-аминобутокси)ацетат
- 81 031379 (1,5 экв., полученный на предыдущей стадии) в смеси (2:1) ТГФ/ДМФ (0,13М), добавляли ЭДКИ (1-этил3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид, 1,3 экв.), ГОБТ (1-гидроксибензотриазол, 1,3 экв.) и ДИЭА (5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разводили этилацетатом. Органический слой промывали смесью (2:1) насыщенный водный раствор МаНСО3/вода, соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-40% этилацетата в гексанах, в результате чего получали продукт.
Стадия 5: (5S,8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-5-этил-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6азагексакозан-1-овая кислота.
Раствор (8S,11R,15R)-11-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-8-этил-2,2-диметил-4,10диоксо-3,6-диокса-13-тиа-9-азагексадекан-15,16-диилдидодеканоата (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в 50% ТФК в ДХМ (0,05М) перемешивали на открытом воздухе при 40°С в течение 1,5 ч. Смесь сушили в потоке воздуха и быстро упаривали в условиях глубокого вакуума. Образовавшееся масло растворяли в 20%-ном растворе пиперидина в ТГФ (0,1 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь разводили этилацетатом. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% метанола в ДХМ, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества.
Ή ЯМР (DMSO-d6): δ 8,30 (d, 1H), 5,11 (m, 1H), 4,27 (dd, 1H), 4,09 (dd, 1H), 3,96 (s, 2H), 3,67-3,76 (m, 2H), 3,37-3,48 (m, 2H), 2,71-2,95 (m, 4H), 2,25-2,28 (m, 4H), 1,23-1,62 (m, 41H), 0,83-0,88 (m, 6H). MCHP [M+H] = 689,4.
Пример 14. Синтез (6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты
Стадия 1: ^)-трет-бутил-1-гидроксипропан-2-илкарбамат.
К раствору ^)-2-аминопропан-1-ола (1 экв.) в ТГФ (0,3М) добавляли при комнатной температуре ди-трет-бутилкарбонат (1 экв.) и триэтиламин (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме; остаток разводили в этилацетате. Органический раствор промывали водой (2х), смесью (1:1) насыщенный водный раствор NH/iCl/вода и соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 2: (Ь)-трет-бутил-1 -(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)пропан-2-илкарбамат.
К раствору ^)-трет-бутил-1-гидроксипропан-2-илкарбамат (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ТГФ (0,1М) при комнатной температуре добавляли KOH (5 экв.), тетрабутиламмонийбромид (0,1 экв.) и диэтил-3-бромпропилфосфонат (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и затем вносили в смесь ДХМ/вода. Водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (2х). Объединенные органические слои сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% этилацетата в гексанах, а затем 100% этилацетата, в результате чего получали продукт в виде масла.
Стадия 3: диэтиловый эфир (6S,9R,13R)-9-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-13(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты.
К раствору (Ь)-трет-бутил 1-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)пропан-2-илкарбамата (1,3 экв., полученный на предыдущей стадии) в ДХМ (0,22М) при комнатной температуре добавляли 4М раствор HCl в диоксане (20 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, получая масло, которое быстро упаривали в условиях глубокого вакуума. Полученный остаток вносили в ДХМ (0,1М). К этому раствору добавляли (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновую кислоту (6, 1 экв.), ГБТУ (1,2 экв.) и ДИЭА (4 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% этилацетата в гексанах, а затем 100% этилацетата, в результате чего получали продукт в виде масла.
Стадия 4: диэтиловый эфир (6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты.
- 82 031379
Диэтиловый эфир (6S,9R, 13R)-9-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-13 -(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты (1 экв., полученный на предыдущей стадии) растворяли в 20%-м растворе пиперидина в ТГФ (0,1М) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Вязкую реакционную смесь разводили в простом метил-третбутиловом эфире и этилацетате. Органический слой промывали смесью (1:1) насыщенный водный раствор Хн4а/вода (2х), соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-5% метанола в ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 5: (6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7азагептакозилфосфоновая кислота.
К раствору диэтилового эфира (6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15диокса-11-тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ДХМ (0,1М) добавляли ТМСБ (LMSBr, триметилсилилбромид, 10 экв.) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-80% MeCN/10 мМ N^OAc (95:5) в 10 мМ NG-iOAc (рн 9). Содержащие продукт фракции объединяли и лиофилизировали, в результате чего получали требуемый продукт в виде твердого вещества.
!Н ЯМР (DMSO-d6): δ 7,97 (d, 1н), 5,09 (m, 1н), 4,27 (dd, 1н), 4,09 (dd, 1н), 3,86 (m, 1н), 3,20-3,43 (m, 5н), 2,59-2,85 (m, 4н), 2,24-2,27 (m, 4н), 1,62-1,69 (m, 2н), 1,23-1,51 (m, 38н), 1,14 (d, 3н), 0,83-0,88 (m, 6н). MC IP [M+н] = 739,4.
Пример 15. Синтез 3-((1-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо) циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты
Н23
Стадия 1: трет-бутил-1-(гидроксиметил)циклопропилкарбамат.
К раствору гидрохлорида этил-1-аминоциклопропанкарбоксилата (1 экв.) в ЕЮн (0,3M) при комнатной температуре добавляли ди-трет-бутилкарбонат (1,5 экв.), триэтиламин (2 экв.) и ДМАП (0,05 экв.). Реационную смсь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали в вакууме и остаток разводили в этилацетате. Органический раствор промывали смесью (1:1) насыщенный водный раствор МЩС/вода, соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Продукт растворяли в ТГФ (0,3М) и охлаждали до 0°С. К полученному раствору добавляли 2М LiB! в ТГФ (4 экв.). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч, после чего добавляли еще одну порцию 2М LiB^ (1,3 экв.) и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и реакцию медленно прекращали, добавляя в течение 10 мин МеОН, а затем воду. Раствор перемешивали в течение 10 мин, в результате чего появлялся осадок. Осадившийся продукт фильтровали и промывали этилацетатом. Фильтрат промывали водой, соляным раствором, сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-75% этилацетата в гексанах, в результате чего получали продукт.
Стадия 2: трет-бутил-1-((3 -(диэтоксифосфорил)пропокси)метил)циклопропилкарбамат.
К раствору трет-бутил-1-(гидроксиметил)циклопропилкарбамата (1 экв., полученный на предыдущей стадии) в ТГФ (0,1М) при комнатной температуре добавляли КОн (5 экв.), тетрабутиламмонийбромид (0,1 экв.) и диэтил-3-бромпропилфосфонат (2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме и затем растворяли в смеси ДХМ/вода. Водный слой экстрагировали с помощью ДХМ (2х). Объединенные органические слои сушили над безводным MgSO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% этилацетата в гексанах, а затем 100% этилацетата, в результате чего получали продукт в виде масла.
Стадия 3: диэтиловый эфир 3-((1-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(^)-2,3бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфос фоновой кислоты.
Указанное в заголовке соединение получали согласно процедуре, описанной в примере 14, стадия 3, но с использованием трет-бутил-1-((3-(диэтоксифосфорил)пропокси)метил)циклопропилкарбамата (полученного на предыдущей стадии) в качестве исходного продукта.
- 83 031379
Стадия 4: диэтиловый эфир 3-((1-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты.
Указанное в заголовке соединение получали согласно процедуре, описанной в примере 14, стадия 4, но с использованием диэтилового эфира 3-((1-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты (полученного на предыдущей стадии) в качестве исходного продукта.
Стадия 5: 3-((1-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновая кислота.
Указанное в заголовке соединение получали согласно процедуре, описанной в примере 14, стадия 5, но с использованием диэтилового эфира 3-((1-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио) пропанамидо)циклопропил)метокси)пропилфосфоновой кислоты (полученного на предыдущей стадии) в качестве исходного продукта.
1Н ЯМР (DMSO-d6): δ 8,61 (d, 1H), 5,07 (m, 1H), 4,26 (dd, 1H), 4,08 (dd, 1H), 3,14-3,61 (m, 5H), 2,592,81 (m, 4H), 2,24-2,27 (m, 4H), 1,23-1,69 (m, 40H), 0,83-0,86 (m, 6H), 0,62-0,63 (m, 4Н). МСНР [М+Н] = 751,4.
Пример 16. Синтез 3-(4-(2-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо) этил)фенокси)пропилфосфоновой кислоты
Стадия 1: трет-бутил-4-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтилкарбамат.
К раствору трет-бутил-4-гидроксифенэтилкарбамата (1 экв.) в ДМФ (0,17М) добавляли карбонат цезия (5 экв.). Образовавшуюся смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем в реакционную смесь добавляли диэтил-3-бромпропилфосфонат (1,2 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 4 ч до поглощения трет-бутил-4гидроксифенэтилкарбамата. Затем смесь разводили этилацетатом и промывали трижды 5%-ным раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором NaHCO3, водой и соляным раствором. Затем органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 80100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2: диэтил-3-(4-(2-аминоэтил)фенокси)пропилфосфонат.
К раствору трет-бутил-4-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтилкарбамата (1 экв.) в ДХМ (0,14М) добавляли 4М HCl в диоксане (50 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-15% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3: ^)-3-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(4-(3-(диэтоксифосфорил) пропокси)фенэтиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-3-(4-(2аминоэтил)фенокси)пропилфосфонат (1,1 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,1 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь разводили этилацетатом и промывали дважды 5%-ным раствором лимонной кислоты, дважды насыщенным раствором NaHCO3, водой и соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 60-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 4: ^)-3-(^)-2-амино-3-(4-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(4-(3-(диэтоксифосфорил) пропокси)фенэтиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до исчезновения исходного продукта. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцвет
- 84 031379 ного масла.
Стадия 5: 3-(4-(2-(Щ)-2-амино-3-(Щ)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)этил)фенокси)пропилфосфоновая кислота.
К раствору Щ)-3-((И)-2-амино-3-(4-(3-(диэтоксифосфорил)пропокси)фенэтиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 50100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO-d6): δ 7,13 (d, 2Н), 6,85 (d, 2H), 5,10-5,19 (m, 2H), 4,28 (dd, 1H), 4,12 (dd, 1H), 3,97 (t, 1H), 3,81-3,90 (m, 1H), 2,93 (dd, 1H), 2,70-2,86 (m, 3Н), 2,64-2,70 (m, 2H), 2,31-2,35 (m, 2H), 2,24-2,31 (m, 2H), 2,14-2,21 (m, 2H), 1,82-1,93 (m, 4H), 1,57-1,70 (m, 4H), 1,41-1,57 (m, 4H), 1,07-1,38 (m, 32H), 0,85 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 801,5.
Пример 17. Синтез 6-(Щ)-2-амино-3-(Щ)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)капроновой кислоты
Стадия 1: Бензил-6-(трет-бутоксикарбониламино)гексаноат.
К раствору 6-(трет-бутоксикарбониламино)капроновой кислоты (1 экв.) в ацетоне (0,2М) добавляли карбонат калия (2 экв.) и (бромметил)бензол (2 экв.) в ацетоне (2М). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем к реакционной смеси добавляли дополнительно порцию ДМФ для облегчения растворения карбоната калия. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре еще в течение 30 мин. Затем смесь разводили этилацетатом и промывали 5%-ным раствором лимонной кислоты, водой и соляным раствором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 10-40% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 2: гидрохлорид бензил-6-аминогексаноата.
К раствору бензил-6-(трет-бутоксикарбониламино)гексаноата (1 экв.) в ДХМ (0,17М) добавляли 4М HCl в диоксане (30 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт растворяли в ДХМ и осаждали в простом диэтиловом эфире, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 3: Щ)-3-(Щ)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(6-(бензилокси)-6оксогексиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДМФ (0,2М) добавляли ДИЭА (5 экв.) и ЭДКИ (1,3 экв.), и ГОБТ (1,3 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, после чего добавляли гидрохлорид бензил-6-аминогексаноата (1,2 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разводили этилацетатом и промывали насыщенным раствором NaHCO3, водой и соляным расвтором. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт.
Стадия 4: (R)-3-((R)-2-амино-3 -(6-(бензилокси)-6-оксогексиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2диилдидодеканоат.
К раствору (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(6-(бензилокси)-6оксогексиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдидодеканоата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до завершения удаления защитных групп. Смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 5: 6-(Щ)-2-амино-3-(Щ)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)капроновая кислота.
К раствору (R)-3-((R)-2-амино-3 -(6-(бензилокси)-6-оксогексиламино)-3-оксопропилтио)пропан-1,2диилдидодеканоата в EtOH (0,1М) добавляли палладиевую чернь (2 экв.). Реакционную смесь перемеши
- 85 031379 вали в течение ночи в атмосфере водорода (1 атм). Палладий отфильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (CDCl3): δ 7,33 (t, 1Н), 5,06-5,15 (m, 1H), 4,30 (dd, 1H), 4,08 (dd, 1H), 3,43 (dd, 1H), 3,20-3,31 (m, 1H), 3,09-3,19 (m, 1H), 3,04 (dd, 1H), 2,61-2,74 (m, 3H), 2,21-2,31 (m, 6H), 1,84-2,06 (m, 3H), 1,40-1,63 (m, 8H), 1,28-1,37 (m, 2H), 1,12-1,28 (m, 32H), 0,81 (t, 6H). MCHP [M+H] = 673,5.
Пример 18. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1: 1-йод-2-(2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этокси)этан.
К раствору 1-хлор-2-(2-(2-(2-хлорэтокси)этокси)этокси)этана (1 экв.) в ацетоне (0,25М) добавляли йодид натрия (4 экв.). Смесь выдерживали при 80°С в закрытом пузырьке в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь суспендировали в ДХМ и фильтровали. После этого фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-20% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 2: диэтил-2-(2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат.
1-Йод-2-(2-(2-(2-йодэтокси)этокси)этокси)этан (1 экв.) смешивали с триэтилфосфатом (1 экв.), после чего нагревали до 160°С в течение 20 мин посредством микроволнового облучения. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3: диэтил-2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-(2-(2-йодоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1 экв.) в ДМФ (0,5М) добавляли азид натрия (3 экв.). Реакционную смесь выдерживали при 50°С в течение ночи. Затем смесь концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали бесцветное масло.
Стадия 4: диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат.
К раствору диэтил-2-(2-(2-(2-азидоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1 экв.) в EtOH (0,1М) добавляли Pd(OH)2 (0,05 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение 4 ч. Смесь фильтровали черз целит и промывали с помощью МеОН. Растворитель удаляли в вакууме. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% смеси МеОН/ДХМ, содержащей 0,5% NH3, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 5: диэтил-(14R,18R)-14-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додеканоилокси)13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса- 16-тиа-12-азадотриаконтилфосфонат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2-(2-(2аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв.), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,1 экв.). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 6: диэтиловый эфир (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору диэтил-(14R,18R)-14-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додеканоилокси)-13,21 -диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до завершения удаления защитных групп. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 7: (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтилфосфоновая кислота.
- 86 031379
К раствору диэтилового эфира (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, а затем концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAC (рН 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (CDCl3): δ 8,80 (br s, 1H), 5,13-5,24 (m, 1H), 4,35 (dd, 1H), 4,15 (dd, 1H), 3,45-3,88 (m, 15H), 3,31-3,45 (m, 2H), 3,03-3,17 (m, 2H), 2,82-2,96 (m, 1H), 2,76 (dd, 1H), 2,30 (q, 4H), 1,78-2,00 (m, 2H), 1,511,66 (m, 4H), 1,17-1,37 (m, 32H), 0,86 (t, 6H). МСНР [М+Н] =799,5.
Пример 19. Синтез 4-(Щ)-2-амино-3-(Щ)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1дифторбутилфосфоновой кислоты
Стадия 1: диэтил-1,1-дифтор-4-йодбутилфосфонат.
К раствору диизопропиламина (1,6 экв.) в ТГФ (1,28М) медленно по каплям добавляли нбутиллитий (1,5М в циклогексане, 1,5 экв.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 40 мин. Затем смесь охлаждали до -78°С и к реакционной смеси медленно добавляли диэтилдифторметилфосфонат (1 экв.) в ГМПК (гексаметилфосфорамид, 2,1М). После этого смесь перемешивали при -78°С в течение 40 мин и к полученному раствору быстро добавляли охлажденный раствор 1,3дийодпропана (12,8М в ТГФ, 4 экв.). Через 1,5 ч реакцию прекращали путем сливания смеси в насыщений раствор NH4Cl. Водную фазу трижды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 10-100% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт в виде масла желтого цвета.
Стадия 2: диэтил-4-азидо-1,1-дифторбутилфосфонат.
К раствору диэтил-1,1-дифтор-4-йодобутилфосфоната (1 экв.) в ДМФ (0,27М) добавляли азид натрия (3 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. Смесь разводили этилацетатом и промывали водой. Водную фазу повторно экстрагировали этилацетатом. Объединенные органический фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 10-50% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт в виде масла желтоватого цвета.
Стадия 3: гидрохлорид диэтил-4-амино-1,1-дифторбутилфосфоната.
К раствору диэтил-4-азидо-1,1-дифторбутилфосфоната (1 экв.) в EtOH (2М) добавляли гидроксид палладия (0,05 экв.) и 2М HCl в простом эфире (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи в атмосфере водорода (1 атм). Палладий отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь использовали при осуществлении следующей реакции без дополнительной очистки.
Стадия 4: диэтил-4-(Щ)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифторбутилфосфонат.
К раствору (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли гидрохлорид диэтил-4-амино-1,1дифторбутилфосфоната (1,1 экв.), ДИЭА (3,5 экв.) и ГБТУ (1,1 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 30-70% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 5: диэтил-4-(Щ)-2-амино-3-(Щ)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1дифторбутилфосфонат.
К раствору диэтил-(4-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифторбутилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до завершения удаления защитных групп. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
- 87 031379
Стадия 6: 4-((R)-2-амино-3 -(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1-дифторбутилфосфоновая кислота.
К раствору диэтил-4-(^)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропилтио)пропанамидо)-1,1дифторбутилфосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 30-80% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (CDCl3): δ 8,74 (br s, 1H), 5,07-5,17 (m, 1H), 4,29 (dd, 1H), 4,19 (dd, 1H), 3,66-3,78 (m, 1H), 2,25-3,51 (m, 4H), 2,66-2,98 (m, 4H), 2,23-2,36 (m, 4H), 1,05-1,84 (m, 2H), 1,60-1,84 (m, 2H), 1,44-1,58 (m, 4H), 1,17-1,34 (m, 32H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H] =731,4.
Пример 20. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1: да-((2,3-бис(додецилокси)пропокси)метил)бензол.
К раствору ^)-3-(бензилокси)пропан-1,2-диола (1 экв.) в ТГФ (0,3М) добавляли нтетрабутиламмонийбромид (0,2 экв.), 1-бромдодекан (4 экв.) и гидроксид калия (5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разводили простым этиловым эфиром, промывали водой, 1н. соляной кислотой, водой и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 2: ^)-2,3-бис(додецилокси)пропан-1-ол.
К раствору да-((2,3-бис(додецилокси)пропокси)метил)бензола (1 экв.) в EtOH (0,1М) добавляли гидроксид палладия (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере водорода (1 атм) в течение ночи. Палладий отфильтровывали и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт.
Стадия 3: да-2,3-бис(додецилокси)пропилтрифторметансульфонат.
К раствору ^)-2,3-бис(додецилокси)пропан-1-ола (1 экв.) в ДХМ (0,12М) медленно добавляли пиридин (4 экв.) и трифторметансульфоновый ангидрид (2 экв.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 20 мин. Смесь разводили с помощью ДХМ, промывали водой, насыщенным раствором сульфата меди, водой и соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% EtOAc/Hex, в результате чего получали продукт (перед осуществлением экспресс-хроматографии проводили деактивацию силикагеля с использованием МеОН).
Стадия 4: (5R,9R)-Ίрет-бутил-9-(додецилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоксилат.
К раствору ^)-2,3-бис(додецилокси)пропилтрифторметансульфоната (1 экв.) в этаноле (0,15М) добавляли (R)-трет-бутил-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8, 1,5 экв.) и карбонат калия (1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 30 мин. Отфильтровывали соль из реакционной смеси и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-40% EtOAc/Нех, в результате чего получали продукт.
Стадия 5: ^)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((^)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановая кислота.
Раствор (5R,9R)-трет-бутил-9-(додецилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-5-карбоксилата в 50% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (30 мин). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3) и один раз смесью (1:2) 1н. HCl/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученное воскообразное твердое вещество использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Стадия 6: диэтил-(14R,18R)-14-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додецилокси)-13оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфонат.
- 88 031379
К раствору (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,3 экв., полученный согласно методу, описанному в примере 18, стадия 4), ДИЭА (2,5 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.). Затем реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт.
Стадия 7: диэтил-(14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтилфосфонат.
К раствору диэтил-(14R,18R)-14-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-18-(додецилокси)13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоната (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в ацетонитриле. Полученную смесь перемешивали при 25°С до полного удаления защитной группы. К смеси добавляли толуол и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 100% EtOAc, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 8: (14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтил-(14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтилфосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (20 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрировали.
Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 50-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAC (рН 9), в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (CDCl3): δ 8,73 (br s, 1Н), 4,17 (br s, 1H), 3,70-3,83 (m, 3Н), 3,57-3,70 (m, 10Н), 3,50-3,57 (m, 4H), 3,45-3,50 (m, 2H), 3,33-3,45 (m, 4H), 3,02-3,16 (m, 2H), 2,65-2,79 (m, 2H), 1,90 (dd, 2H), 1,47-1,61 (m, 4H), 1,16-1,36 (m, 36H), 0,88 (t, 6H). МСНР [М+Н] =771,5.
Пример 21. Синтез (9R,13R-9-амино-13-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-8,16-диоксо-4,15-диокса-11тиа-7-азагептакозилфосфоновой кислоты
HN
Стадия 1: диэтил-3-(2-бромэтокси)-1,1-дифторпропилфосфонат.
Раствор диизопропиламина (2 экв.) в безводном ТГФ (1М) охлаждали в бане со смесью ацетонсухой лед. К раствору добавляли по каплям с помощью шприца н-бутиллитий (1,5М в циклогексане, 1,6 экв.). После осуществления добавления реакционную смесь нагревали в бане с ледяной водой и перемешивали в течение 30 мин. Затем реакционную смесь снова охлаждали до -78°С в бане со смесью ацетонсухой лед и обрабатывали с помощью шприца раствором диэтилдифторметилфосфоната (1 экв.) в ГМПК (1:1 об./об.). Цвет реакционной смеси мгновенно изменялся с темно-коричневого на светло-желтый. Смеси давали перемешиваться в течение одного часа. К указанной выше реакционной смеси быстро добавляли с помощью шприца охлажденный раствор 1-бром-2-(2-бромэтокси)этана (3 экв.) в ТГФ (0,6М) и реакционной смеси давали перемешиваться еще в течение 3 ч, после чего реакцию прекращали с помощью 1н. HCl. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, значение рН доводили до <4 с помощью 1н. HCl и трижды экстрагировали этилацетатом. Объединенные органический фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-70% EtOAc/Hex, а затем с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на 08-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 20-50% MeCN (0,035% ТФК) в Н2О (0,05% ТФК), в результате чего получали продукт в виде масла светло-желтого цвета.
Стадии 2-3: гидрохлорид диэтил-3-(2-аминоэтокси)-1,1-дифторпропилфосфоната.
Указанный в заголовке продукт получали из диэтил-3-(2-бромэтокси)-1,1-дифторпропилфосфоната с помощью процедуры, описанной в примере 4, стадия 2-3.
Стадии 4-6: (9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7азагептакозилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-9-(додеканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12
- 89 031379 диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азатрикозан-5-карбоновой кислоты (6, 1 экв.) и гидрохлорида диэтил-3-(2аминоэтокси)-1,1-дифторпропилфосфоната (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 19, стадии 4-6.
1Н ЯМР (CDCl3): δ 8,08 (br s, 1H), 5,11-5,24 (m, 1H), 4,31 (dd, 1H), 4,08-4,25 (m, 2H), 3,64-3,80 (m, 3H), 3,48-3,64 (m, 2H), 2,99-3,19 (m, 3H), 2,82 (dd, 1H), 2,72 (dd, 1H), 2,23-2,37 (m, 6H), 1,51-1,64 (m, 4H), 1,16-1,36 (m, 32H), 0,88 (t, 6H). MCHP [M+H]=761,4.
Пример 22. Синтез (12R,16R)-12-амино-16-(додецилокси)-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты ми /ОС12Н25
Ν Π 2 Г ayVs^A0Ci2Ha
Стадии 1-3: гидрохлорид диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1-дифторпропилфосфоната.
Продукт получали из 1,2-бис(2-йодоэтокси)этана с помощью процедуры, описанной в примере 19, стадии 1-3.
Стадии 4-6: (12R,16R)-12-амино-16-(додецилокси)-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10азатриаконтилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)3-((Щ)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной согласно процедуре, описанной в примере 20, стадия 5) и гидрохлорида диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1дифторпропилфосфоната (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 19, стадии 4-6.
1Н ЯМР (CDCl3): δ 9,15 (br s, 1Н), 4,16 (br s, 1H), 3,48-3,77 (m, 9H), 3,34-3,48 (m, 4H), 3,07-3,17 (m, 2H), 2,93-3,07 (m, 2H), 2,67-2,82 (m, 2H), 2,25-2,41 (m, 2H), 1,62-1,71 (m, 2H), 1,45-1,60 (m, 4Н), 1,04-1,35 (m, 36H), 0,87 (t, 6H). МСНР [М+Н]=777,5.
Пример 23. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(октаноилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-
12-азаоктакозилфосфоновой кислоты
Стадия 1: Щ)-3-(Щ)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдиоктаноат.
Продукт получали из (R)-трет-бутил 2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3дигидроксипропилтио)пропаноата (10, 1 экв.) и октаноилхлорида (3,7 экв.) с помощью процедуры, описанной для соединения 11.
Стадия 2: (5R,9R)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-9-(октаноилокси)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4азанонадекан-5-карбоновая кислота.
Продукт получали из (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3оксопропилтио)пропан-1,2-диилдиоктаноата с помощью процедуры, описанной для соединения 6.
Стадии 3-5: (14R,18R)-14-амино-18-(октаноилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азаокиакозилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-1-(9H-флуорен-9-ил)-9-(октаноилокси)-3,12диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азанонадекан-5-карбоновой кислоты (1 экв.) и диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1,3 экв., из примера 18, стадия 4) с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадии 6-8.
1Н ЯМР (DMSO-d6): δ 8,18 (t, 1Н), 5,04-5,11 (m, 1H), 4,27 (dd, 1H), 4,10 (dd, 1H), 3,46-3,56 (m, 8H), 3,38-3,56 (m, 4H), 3,27-3,36 (m, 1H), 3,18-3,25 (m, 2H), 2,74-2,83 (m, 2H), 2,68 (dd, 1H), 2,57 (dd, 1H), 2,212,33 (m, 4H), 1,55-1,67 (m, 2H), 1,44-1,55 (m, 4H), 1,16-1,32 (m, 16H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H] = 687,4.
Пример 24. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(деканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа12-азатриаконтилфосфоновой кислоты
- 90 031379
Стадия 1: ^)-3-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилбис(деканоат).
Продукт получали из ^)-трет-бутил-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-(^)-2,3дигидроксипропилтио)пропаноата (10, 1 экв.) и деканоилхлорида (3,7 экв.) с помощью процедуры, описанной для соединения 11.
Стадия 2: (5R,9R)-9-(деканоилокси)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагеникозан-5-карбоновая кислота.
Продукт получали из ^)-3-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3оксопропилтио)пропан-1,2-диилбис(деканоата) с помощью процедуры, описанной для соединения 6.
Стадии 3-5: (14R,18R)-14-амино-18-(деканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азатриаконтилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-9-(деканоилокси)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12диоксо-2,11-диокса-7-тиа-4-азагеникозан-5-карбоновой кислоты (1 экв.) и диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1,3 экв., полученного согласно процедуре, описанной в примере 18, стадия 4) с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадии 6-8.
Ή ЯМР (CDCl3): δ 8,67 (br s, 1Н), 5,07-5,16 (m, 1H), 3,29 (dd, 1H), 4,08 (dd, 1H), 3,40-3,73 (m, 13H), 3,26-3,38 (m, 2H), 3,02 (dd, 1H), 2,87-2,97 (m, 1H), 2,78 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,18-2,29 (m, 4H), 1,75-1,89 (m, 2H), 1,46-1,59 (m, 4H), 1,10-1,31 (m, 24H), 0,81 (t, 6H). MCHP [M+H]=743,5.
Пример 25. Синтез (14R,18R)-14-амино-13,21-диоксо-18-(тетрадеканоилокси)-3,6,9,20-тетраокса-16тиа-12-азатетратриаконтилфосфоновой кислоты
Стадия 1: ^)-3-(^)-2-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3-оксопропилтио)пропан-1,2-диилдитетрадеканоат.
Продукт получали из (R)-трет-бутил 2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-((R)-2,3дигидроксипропилтио)пропаноата (10, 1 экв.) и тетрадеканоилхлорида (3,7 экв.) с помощью процедуры, описанной для соединения 11.
Стадия 2: (5R,9R)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-9-(тетрадеканоилокси)-2,11-диокса-7-тиа-4азапентакозан-5-карбоновая кислота.
Продукт получали из (R)-3-((R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-трет-бутокси-3оксопропилтио)пропан-1,2-диилдитетрадеканоата с помощью процедуры, описанной для соединения 6.
Стадии 3-5: (14R,18R)-14-амино-13,21-диоксо-18-(тетрадеканоилокси)-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азатетратриаконтилфосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (5R,9R)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3,12-диоксо-9(тетрадеканоилокси)-2,11-диокса-7-тиа-4-азапентакозан-5-карбоновой кислоты (1 экв.) и диэтил-2-(2-(2(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфоната (1,3 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4) с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадии 6-8.
Ή ЯМР (CDCl3): δ 7,30 (br s, 1H), 5,13-5,23 (m, 2H), 4,30-4,43 (m, 2H), 4,07-4,20 (m, 2H), 3,44-3,87 (m, 11H), 2,92-3,13 (m, 3H), 2,68-2,92 (m, 4H), 2,22-2,38 (m, 4H), 1,69-2,17 (m, 8H), 1,52-1,67 (m, 4H), 1,10-
1,36 (m, 32H), 0,88 (t, 6H). MCHP [M+H]=855,6.
Пример 26. Синтез ((14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса- 16-тиа-12азадотриаконтил)фосфоновой кислоты
- 91 031379
Стадии 1 -8: (И)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((И)-2-додеканамидо-3 (додецилокси)пропил)тио)пропановая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (И)-3-(додецилокси)пропан-1,2-диола с помощью процедуры, описанной в примере 11, стадии 1-8.
Стадия 9: (9Н-флуорeн-9-ил)мeтил-((14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-додeканамидо-13-оксо-
3.6.9.20- тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-14-ил)карбамат.
К раствору, содержащему (R)-2-((((9H-флуорeн-9-ил)мeтокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2-додeканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем диэтил-(2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этил)фосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 10: диэтил-((14R,18R)-14-амино-18-додeканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тeтраокса-16-тиа-12азадотриаконтил)фосфонат.
К раствору ((9Шфлуорен-9-ил)метил ((14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-додeканамидо-13-оксо-
3.6.9.20- тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-14-ил)карбамата (1 экв.) добавляли 20%-ный раствор пиперидина (50 экв.) в смеси (4:1) ТГФ/ДМФ. Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин при 25°С и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 11: ((14R,18R)-14-амино-18-додeканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тeтраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
К раствору диэтил-((14И,18И)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтил)фосфоната (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего после лиофилизации получали ((14И,18И)-14-амино-18-додеканамидо-
13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновую кислот в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (CDCl3): δ 8,84 (s, 2H), 6,54 (d, 2H), 4,20 (t, 2H), 4,07-4,11 (m, 2H), 3,49-3,70 (m, 12H), 3,31-
3,36 (m, 4H), 3,00-3,02 (m, 4H), 2,72 (d, 4H), 2,15 (t, 2H), 1,43-1,55 (m, 6H), 1,16-1,22 (m, 32H), 0,80 (t, 6H). MCHP [M+H] = 784,5.
Пример 27. Синтез ((14И,18И)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадия 1: ^)-2-((додецилокси)метил)оксиран.
Раствор ^)-3-(додецилокси)пропан-1,2-диола (1 экв.) в смеси HBr/AcOH (33 мас.%, 0,4М) перемешивали при 35°С в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, разводили с помощью ДХМ и значение рН доводили до 7 путем добавления насыщенного раствора Na2CO3. Органический слой отделяли, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в МеОН (0,5М), охлаждали до 0°С и обрабатывали с помощью NaOH (3н. раствор в МеОН, 2,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и разводили с помощью Et2O. Органический слой отделяли, промывали H2O и соляным раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного масла без дополнительной очистки.
Стадия 2: (Ц)-трет-бутил 2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((И)-3-(додецилокси)2-гидроксипропил)тио)пропаноат.
Раствор, содержащий ^)-2-((додецилокси)метил)оксиран (1,1 экв.), (И^трет-бутал-З-^И
- 92 031379 флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-3-меркаптопропаноат (8,1 экв.) и 1М K2CO3 (1,1 экв.) в tBuOH (0,1M), перемешивали при 25°С в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления tBuOH и растворяли в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды водой и один раз соляным раствором. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3: (5R,9R)-5-(трет-бутоксикарбонил)-1-(9Н-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-9-илдодеканоат.
Раствор (R)-трет-бутил-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-3 -(додецилокси)-2гидроксипропил)тио)пропаноата (1 экв.) в ДХМ (0,1М) охлаждали в ледяной бане. Добавляли пиридин (3,0 экв.), а затем додеканоилхлорид (3,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и промывали с помощью насыщенного водного раствора NH4Cl. Водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-30% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 4: Щ)-2-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((Щ)-2-(додеканоилокси)-3(додецилокси)пропил)тио)пропановая кислота.
Раствор ((5R,9R)-5-(трет-бутоксикарбонил)-1-(9H-флуорен-9-ил)-3-оксо-2,11-диокса-7-тиа-4азатрикозан-9-илдодеканоата в 40% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутилъиой группы (2 ч). Реакционную смесь разводили в МТБЭ, промывали трижды 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3) и один раз смесью (1:2) 1н. HCl/соляной раствор. Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученное воскообразное твердое вещество использовали без дополнительной очистки.
Стадии 5-7: ((14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)3-((Щ)-2-(додеканоилокси)-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадии 9-11.
'11 ЯМР (DMSO-d6): δ 8,82 (t, 2H), 7,11 (br s, 4H), 5,00-5,05 (m, 2H), 3,76 (t, 2H), 3,16-3,60 (m, 12H), 2,92 (dd, 2H), 2,73-2,81 (m, 2H), 2,62-2,67 (m, 2H), 2,32-2,34 (m, 1H), 2,28 (t, 2H), 1,68-1,77 (m, 3H), 1,431,54 (m, 5H), 1,23-1,27 (m, 32H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H] = 785,5.
Пример 28. Синтез ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадия 1: ^)-трет-бутил-(1-(2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)этокси)этокси)этокси)пропан-2-ил)карбамат.
Суспензию, содержащую ^)-трет-бутил-(1-гидроксипропан-2-ил)карбамат (1 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 14, стадия 1), диэтил-(2-(2-(2-йодэтокси) этокси)этил)фосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 5, стадия 1), KOH (3 экв.) и Bu4NBr (0,11 экв.) в ТГФ (0,1М), перемешивали при 25°С в течение ночи. Реакционную смесь разводили с помощью EtOAc. Органический слой отделяли, промывали Н2О, насыщенным раствором NH4Cl и соляным раствором, сушили над Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 2: ^)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси)этокси)этил)фосфонат.
Раствор (Ъ)-трет-бутил-( 1 -(2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)этокси)этокси)этокси)пропан-2-ил)карбамата (1 экв.) в смеси 4н. HCl/диоксан (0,4М) перемешивали при 25°С в течение 1 ч.
Реакционную смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 3: (9Н-флуорен-9-ил)метил ((11S,14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-18-додеканамидо-11метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-14-ил)карбамат.
- 93 031379
К раствору, содержащему (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановую кислоту (1 экв., полученную с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем (Ь)-диэтил (2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси)этокси)этил)фосфонат (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадии 4-5: ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (9H-флуорен-9-ил)метил ((11S,14R,18R)-1(диэтоксифосфорил)-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтан-
14-ил)карбамата с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадии 10-11.
!Н ЯМР (CDCl3): δ 8,63 (s, 2Н), 6,59 (d, 2H), 4,04-4,13 (m, 4H), 3,45-3,72 (m, 11H), 3,43 (d, 2H), 3,32-
3,36 (m, 4Н), 3,00-3,13 (m, 4H), 2,72 (d, 2H), 2,13 (t, 2H), 1,44-1,55 (m, 6H), 1,17-1,22 (m, 32Н), 1,12 (d, 3H), 0,81 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 798,5.
Пример 29. Синтез ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадии 1-3: ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)3-((Щ)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадия 5) и (Ь)-диэтил (2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси) этокси)этил)фосфоната (1,2 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадия 2) с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадия 3-5.
!Н ЯМР (CDCl3): δ 8,21 (br s, 1H), 4,10-4,16 (m, 3H), 3,36-3,82 (m, 18H), 3,06 (dd, 2H), 2,91 (dd, 2H), 2,02-2,06 (m, 4H), 1,84-1,89 (m, 2H), 1,51-1,58 (m, 8H), 1,13-1,23 (m, 32H), 1,17 (d, 3H), 0,81 (t, 6H). MCHP [M+H] = 785,5.
Пример 30. Синтез ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20триокса-16-тиа-9,12-диазадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадия 1: ^)-трет-бутил-(1-((2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)этокси)этокси)этил)амино)-1-оксопропан-
2- ил)карбамат.
К раствору, содержащему ^)-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропановую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем диэтил-(2-(2-(2аминоэтокси)этокси)этил)фосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 5, стадия 3). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 2: ^)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропанамидо)этокси)этокси)этил)фосфонат.
Раствор ^)-трет-бутил-(1-((2-(2-(2-(диэтоксифосфорил)этокси)этокси)этил)амино)-1-оксопропан-2ил)карбамата (1 экв.) в смеси 4н. HCl/диоксан (0,4М) перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадии 3 -5: (9Н-флуорен-9-ил)метил-(( 11 S,14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)- 18-(додецилокси)-11метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа-9,12-дназадотриаконтан-14-ил)карбамат.
Указанный в заголовке продукт получали из (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-
3- ((Щ)-2,3-бис(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процеду
- 94 031379 ры, описанной в примере 20, стадия 5) и ^)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропокси)этокси) этокси)этил)фосфоната (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадии 3-5.
Ή ЯМР (DMSO-d6): δ 9,28 (br s, 1H), 8,16 (t, 1H), 4,18-4,25 (m, 1H), 3,08-3,65 (m, 16H), 2,93 (dd, 2H), 2,76 (dd, 2Н), 2,59-2,67 (m, 4H), 2,32-2,34 (m, 2H), 1,66-1,75 (m, 4H), 1,43-1,48 (m, 4H), 1,21-1,29 (m, 35H), 0,85 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 798,5.
Пример 31. Синтез ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-10,1З-диоксо-3,6,20триокса-16-тиа-9,12-диазадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадии 1-3: ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16тиа-9,12-диазадотриаконтил)фосфоновая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)3-((^)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и ^)-диэтил-(2-(2-(2-(2-аминопропокси) этокси)этокси)этил)фосфоната (1,2 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 30, стадия 2) с помощью процедуры, описанной в примере 28, стадии 3-5.
Ή ЯМР (DMSO-d6): δ 9,38 (br s, 1H), 8,14 (t, 2H), 4,18-4,25 (m, 1H), 3,92-4,00 (m, 1H), 3,06-3,67 (m, 15H), 2,92 (dd, 2H), 2,79 (dd, 2H), 2,59-2,73 (m, 4H), 2,07 (t, 2H), 1,65-1,75 (m, 2H), 1,42-1,50 (m, 4H), 1,21-
1,28 (m, 35H), 0,85 (t, 6H). MCHP [M+H] = 811,5.
Пример 32. Синтез (15R,19R)-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13азатритриаконтан-1-овой кислоты
Стадия 1: (15R,19R)-трет-бутил 15-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-оат.
К раствору, содержащему (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-(((R)-2,3бис(додецилокси)пропил)тио)пропановую кислоту (1 экв., полученную с помощью процедуры, описанной в примере 20, стадия 5) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (3,5 экв.), а затем третбутил-3-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)пропаноат (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-5% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 2: (15R,19R)-трет-бутил-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13азатритриаконтан-1-оат.
К раствору (15R, 19R)-трет-бутил- 15-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-19(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-оата (1 экв.) добавляли 20%ный раствор пиперидина (50 экв.) в смеси (4:1) ТГФ/ДМФ. Полученный раствор перемешивали в течение 15 мин при 25°С и затем концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 3: (15R,19R)-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-овая кислота.
Раствор (15R,19R)-трет-бутил-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13азатритриаконтан-1-оата в смеси (1:1) ТФК/ДХМ (0,1М) перемешивали при 25°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего после лиофилизации получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Ή ЯМР (DMSO-d6): δ 8,04 (t, 1H), 7,36 (s, 1H), 5,04 (d, 2Н), 3,58 (t, 2H), 3,19-3,50 (m, 20H), 2,77 (dd, 2H), 2,59 (dd, 2H), 2,40 (t, 2H), 1,43-1,48 (m, 4H), 1,21-1,28 (m, 36H), 0,85 (t, 6H). МСНР [М+Н] = 735,6.
Пример 33. Синтез (15R,19R)-15-амино-19-додеканамидо-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13- 95 031379 азатритриаконтан-1-овой кислоты
Стадии 1-3: (15R,19R)-15-амино-19-додеканамидо-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13азатритриаконтан-1-овая кислота.
Указанный в заголовке продукт получали из (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)3-((Щ)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропил)тио)пропановой кислоты (1 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и трет-бутил-3-(2-(2-(2-аминоэтокси) этокси)этокси)пропаноата (1,2 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 32, стадии 1-3.
'Н ЯМР (DMSO-d6): δ 8,06 (t, 1H), 7,78 (d, 1H), 5,05 (br s, 2H), 3,90-3,98 (m, 1H), 3,58 (t, 2H), 3,193,50 (m, 15H), 2,77 (dd, 2Н), 2,62 (dd, 2H), 2,39 (t, 2H), 2,05 (t, 2H), 1,42-1,48 (m, 4H), 1,21-1,29 (m, 36H), 0,85 (t, 6H). MCHP [М+Н] = 748,5.
Пример 34. Синтез ((14R,18R)-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновой кислоты
Стадия 1: (14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-13-оксо-14-пальмитамидо-3,6,9-триокса-16-тиа-12азанонадекан-18,19-диилдидодеканоат.
Раствор диэтилового эфира (14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 6) в ДХМ (0,1М) охлаждали в ледяной бане. Добавляли пиридин (1,2 экв.), а затем пальмитоилхлорид (1,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ, промывали насыщенным водным раствором NH4Cl. Водную фазу повторно экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические фазы промывали соляным раствором, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме.Полученный неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 2: ((14R,18R)-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновая кислота.
К раствору (14R,18R)-1-(диэтоксифосфорил)-13-оксо-14-пальмитамидо-3,6,9-триокса-16-тиа-12азанонадекан-18,19-диилдидодеканоата (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение ночи и концентрировали. Неочищенную смесь очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAC (95:5) в 10 мМ NH4OAC (рН 9), в результате чего после лиофилизации получали указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета.
'Н ЯМР (CDCl3): δ 8,09 (br s, 2Н), 5,18 (d, 2H), 4,62-4,70 (m, 2H), 4,36 (d, 2H), 4,13 (dd, 2H), 3,40-3,80 (m, 13H), 2,70-3,05 (m, 8H), 2,27-2,32 (m, 6H), 1,54-1,62 (m, 6H), 1,20-1,32 (m, 56H), 0,88 (t, 9H). МСНР [М+Н] = 1037,7.
Пример 35. Синтез (12R,16R)-12-амино-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты
- 96 031379
Стадия 1: диэтиловый эфир (12R,16R)-12-(((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты.
Указанное в заголовке соединение получали из (R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)3-(^)-2-додеканамидо-3-(додецилокси)пропилтио)пропановой кислоты (1,0 экв., полученной с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 8) и диэтил-3-(2-(2-аминоэтокси)этокси)-1,1дифторпропилфосфоната (1,2 экв., полученного с помощью процедуры, описанной в примере 22, стадия 3) с помощью процедуры, описанной в примере 26, стадия 9.
Стадия 2: диэтил-((12R,16R)-12-амино-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа10-азатриаконтил)фосфонат.
Раствор диэтилового эфира (12R,16R)-12-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбониламино)-16додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтилфосфоновой кислоты в ацетонитриле (0,1М) перемешивали при комнатной температуре. Затем добавляли пиперидин (конечная концентрация 20%) и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. После осуществления концентрирования неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% EtOAc/Hex, а затем 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества беловатого цвета.
Стадия 3: (12R, 16R)- 12-амино-16-додеканамидо-1,1 -дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10азатриаконтилфосфоновая кислота.
Указанное в заголовке соединение получали с использованием диэтил-((12R,16R)-12-амино-16додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтил)фосфоната (1 экв.) с помощью процедуры, описанной в примере 14, стадия 5.
!Н ЯМР (DMSO-d6): δ 8,53 (t, 1H), 8,01 (d, 1H), 3,98 (m, 1Н), 3,62 (t, 2H), 3,55 (t, 2H), 3,20-3,50 (m, 14H), 2,76 (dd, 1H), 2,62 (m, 2H), 2,58 (m, 1H), 2,52 (m, 2H), 2,02-2,20 (m, 3Н), 1,49 (m, 4H), 1,21-1,42 (m, 34H), 0,82 (t, 6Н). МСНР [М+Н] = 790,5.
Пример 36. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты
Получение исходного соединения, а именно ^)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3бис(децилкарбамоилокси)пропилтиопропановой кислоты (15).
Стадия 1: ^)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноат (13).
Раствор, содержащий ^)-(+)-глицидил-4-нитробензоат (1,1 экв.) и 1М NaOH (1,1 экв.) в tBuOH
- 97 031379 (0,1М), перемешивали при комнатной температуре до тех пор, пока не обнаруживали, что произошел полный гидролиз нитробензоата (30 мин). В полученную смесь вносили раствор Щ)-трет-бутил-2(бензилоксикарбониламино)-3-меркаптопропаноата (12, 1 экв.) в tBuOH (1M) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления tBuOH, после чего растворяли в EtOAc. EtOAc-раствор промывали трижды водой, один раз соляным раствором, затем сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-90% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного вязкого масла.
Стадия 2: (И)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноат (14).
Раствор Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (13) перемешивали в безводном бензоле (0,1М) в атмосфере азота при комнатной температуре. Добавляли децилизоцианат (2,02 экв.) и ДМАП (диметиламинопиридин, 2,02 экв.) и полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали для удаления бензола, после чего восстанавливали в ДХМ и очищали на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-50% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 3: Щ)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропановая кислота (15).
Раствор (И)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноата (14) в 30% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота. Затем остаток разводили в МТБЭ и промывали с помощью 1М лимонной кислоты (значение рН доводили до 3). Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме, в результате чего получали (И)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропановую кислоту (15) в виде воскообразного твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.
Стадия 1: диэтиловый эфир (14R,18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(децилкарбамоилокси)-
13.21- диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору, содержащему (И)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(децилкарбамоилокси) пропилтио)пропановую кислоту (15, 1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде прозрачного вязкого масла.
Стадия 2: (14R,18R)-14-амино-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-
12.22- диазадотриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтилового эфира (14R,18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ при 0°С (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 32°С в течение ночи, затем охлаждали до комнатной температуры, разводили с помощью ДХМ и концентрировали. Неочищенный продукт сушили в условиях глубокого вакуума в течение 2 ч, затем очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали (14R,18R)-14-амино-18-(децилкарбамоилокси)-13,21 -диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
1Н ЯМР (DMSO-d6): δ 8,49 (t, 1H), 7,32 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,01(m, 2H), 3,0-3,6 (m, 18H), 2,88 (m, 4H), 2,52-2,81 (m, 5H), 1,54 (m, 2H), 1,34 (m, 4H), 1,12-1,24 (m, 28H), 0,81 (t, 6H). MCHP [M+H] = 801,5.
Пример 37. Синтез (15R,19R)-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса17 -тиа-13,23-диазатритриаконтан-1 -овая кислота
- 98 031379
Стадия 1: (15R, 19R)-трет-бутил-15-(бензилоксикарбониламино)-19-(децилкарбамоилокси)-14,22диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1 -оат.
К раствору, содержащему ^)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропановую кислоту (15, 1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем трет-бутил-3-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)пропаноат (1,2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-100% EtOAc/fex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества беловатого цвета.
Стадия 2: (15R, 19R)-трет-бутил-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1 -оат.
Раствор (15R, 19R)-трет-бутил- 15-(бензилоксикарбониламино)-19-(децилкарбамоилокси)-14,22диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-оата в МеОН (0,1М) перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем добавляли небольшую порцию (каталитическое количество) Pd/C и перемешивали. После этого добавляли раствор формиата аммония (8 экв.) в смеси (9:1) МеОН/вода, реакционный сосуд продували азотом и нагревали до 40°С в течение 4 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разводили с помощью EtOAc. Реакционную смесь фильтровали через целит, затем сушили над Na2SO4 и концентрировали, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде масла светло-желтого цвета. Сконцентрированный продукт использовали без дополнительной очистки.
Стадия 3: (15R,19R)-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-
13,23-диазатритриаконтан-1-овая кислота.
Раствор (15R, 19R)-трет-бутил-15-амино-19-(децилкарбамоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21 -тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-оата в 30%-ном растворе ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота, затем очищали с помощью экспрессхроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ с 0,5% АсОН, в результате чего получали (15R,19R)-l5-амино-19-(децилкарбамоилокси)14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13,23-диазатритриаконтан-1-овую кислоту в виде прозрачного масла.
!Н ЯМР (DMSO-d6): δ 12,21 (br s, 1н), 8,22 (t, 1н), 7,23 (m, 2н), 4,92 (m, 1н), 4,18 (dd, 2н), 3,94 (m, 1н), 3,57 (t, 2н), 3,30-3,54 (m, 12н), 3,37 (t, 2н), 2,90-3,08 (m, 4н), 2,60-2,82 (m, 4н), 2,48 (t, 2н), 1,32 (m, 4н), 1,22-1,28 (m, 28н), 0,79 (t, 6н). MC№ [M+н] = 765,5.
Пример 38. Синтез (14R,18R)-14-амино-18-(октилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса16-тиа-12,22-диазатриаконтилфосфоновой кислоты
- 99 031379
Стадия 1: Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(октилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноат.
Раствор Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-дигидроксипропилтио)пропаноата (13) перемешивали в безводном бензоле (0,1М) в атмосфере азота при комнатной температуре. Добавляли октилизоцианат (2,02 экв.) и ДМАП (диметиламинопиридин, 2,02 экв.) и полученную смесь нагревали до 40°С и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали для удаления бензола, затем восстанавливали в ДХМ и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-50% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанный в заголовке продукт в виде бесцветного масла.
Стадия 2: (И)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(октилкарбамоилокси)пропилтио)пропановая кислота.
Раствор Щ)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(октилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноата в 30% ТФК а ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота. Затем реакционную смесь разводили в МТБЭ и однократно промывали 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3).
Органический слой сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный воскообразный твердый продукт использовали без дополнительной очистки.
Стадия 3: диэтиловый эфир (14R,18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(октилкарбамоилокси)-
13.21- диоксо-3,6,9,20-тетраокса- 16-тиа-12,22-диазатриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору, содержащему (И)-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(Щ)-2,3-бис(децилкарбамоилокси) пропилтио)пропановую кислоту (1 экв.) и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем диэтил-2-(2-(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде непрозрачного масла.
Стадия 4: (14R,18R)-14-амино-18-(октилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-
12.22- диазатриаконтилфосфоновая кислота.
К раствору диэтилового эфира (14R,18R)-14-(бензилоксикарбониламино)-18-(октилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) добавляли триметилсилилбромид (10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 32°С в течение ночи, затем охлаждали до комнатной температуры, разводили с помощью ДХМ и концентрировали. Неочищенный продукт сушили в условиях глубокого вакуума в течение 2 ч, затем очищали с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на С4-колонке, осуществляя элюирование с использованием градиента 40-100% MeCN/10 мМ NH4OAc (95:5) в 10 мМ NH4OAc (pH 9), в результате чего получали (14R,18R)-14-амино-18-(октилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-
3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазатриаконтил фосфоновую кислоту в виде твердого вещества белого цвета.
!Н ЯМР (DMSO-d6): δ 8,57 (t, 1H), 7,42 (m, 2H), 4,78 (m, 1H), 4,01(m, 2H), 3,0-3,6 (m, 18H), 2,88 (m, 4H), 2,52-2,81 (m, 5H), 1,68 (m, 2H), 1,54 (m, 2H), 1,40 (m, 2H), 1,12-1,24 (m, 20H), 0,82 (t, 6H). MCHP [M+H] = 745,4.
Пример 39. Синтез (14R,18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты
- 100 031379
Стадия 1: ^)-трет-бутил-2-амино-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноат.
Раствор ^)-трет-бутил-2-(бензилоксикарбониламино)-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноата (14) в МеОН (0,1М) перемешивали в атмосфере азота при комнатной температуре. Затем добавляли небольшую порцию (каталитическое количество) Pd/C и перемешивали. После этого добавляли раствор формиата аммония (8 экв.) в смеси (9:1) МеОН/вода, реакционный сосуд продували азотом и нагревали до 40°С в течение 4 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разводили с помощью EtOAc. Реакционную смесь фильтровали через целит, затем сушили над Na2SO4 и концентрировали. Неочищенный продукт очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-60% EtOAc/Hex, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла.
Стадия 2: ^)-трет-бутил-3-(^)-2.3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидопропаноат.
К раствору ^)-трет-бутил-2-амиио-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)пропаноата в безводном ДХМ (0,1М) при 0°С добавляли ДИЭА (1,2 экв.) и пальмитоилхлорид (1,1 экв.). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры, после чего перемешивали в течение 16 ч. Затем неочищенную реакционную смесь концентрировали и очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-60% EtOAc/Нех, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета.
Стадия 3: ^)-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидопропановая кислота
Раствор ^)-трет-бутил-3 -((К)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидопропаноата в 30% ТФК в ДХМ (0,3М) перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитной трет-бутильной группы (4 ч). Реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота. Затем реакционную смесь разводили в МТБЭ и однократно промывали 1М лимонной кислотой (значение рН доводили до 3). Органический слой сушили над Na2SO4 и концентрировали. Полученное соединение использовали без дополнительной очистки.
Стадия 4: диэтиловый эфир (14R,18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-
3.6.9.20- тетраокса-16-тиа-12,22-дназадотриаконтилфосфоновой кислоты.
К раствору, содержащему ^)-3-(^)-2,3-бис(децилкарбамоилокси)пропилтио)-2-пальмитамидопропановую кислоту и ГБТУ (1,2 экв.) в ДХМ (0,06М), добавляли ДИЭА (2,4 экв.), а затем диэтил-2-(2(2-(2-аминоэтокси)этокси)этокси)этилфосфонат (1,2 экв., полученный с помощью процедуры, описанной в примере 18, стадия 4). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Неочищенную смесь очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 0-10% МеОН/ДХМ, в результате чего получали указанное в заголовке соединение в виде масла беловатого цвета.
Стадия 4: (14R, 18R)- 18-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновая кислота.
Раствор диэтилового эфира (14R,18R)-l8-(децилкарбамоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-
3.6.9.20- тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновой кислоты (1 экв.) в ДХМ (0,1М) перемешивали при 0°С. Добавляли триметилсилилбромид (10 экв.) и давали нагреться до комнатной температуры. После этого реакционную смесь нагревали до 32°С и перемешивали в течение ночи. Затем реакционную смесь разводили с помощью ДХМ и концентрировали в потоке азота, после чего очищали с помощью экспресс-хроматографии на системе COMBFLASH® (фирма ISCO) с использованием градиента 010% МеОН/ДХМ с 0,5% АсОН, в результате чего получали (14R,18R)-18-(децилкарбамоилокси)-13,21диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12,22-диазадотриаконтилфосфоновую кислоту в виде бесцветного масла.
Ή ЯМР (DMSO-d6): δ 7,32 (t, 1H), 6,65 (t, 1H), 5,63 (t, 1H), 5,24 (t, 1H), 5,16 (t, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,48
- 101 031379 (m, 1H), 3,46-3,78 (m, 15H), 3,17 (m, 4H), 2,75-2,95 (m, 4H), 2,15-2,35 (m, 4H), 1,56 (m, 4H), 1,49 (m, 4H),
1,20-1,45 (m, 52H), 0,87 (t, 9H). MCHP [M+H] = 1039,7.
В табл. 1 представлены соединения формулы (I) с соответствующими физическими данными и данными, полученными в результате анализа, которые получали с использованием соответствующих исходных продуктов путем повторения процедур, описанных в приведенных выше примерах.
Соединения формулы (I), представленные в настоящем описании, анализировали с целью оценки их способности модулировать Толл-подобный рецептор 2.
Анализ с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека.
Биологическую активность соединений формулы (I), представленных в настоящем описании, тестировали с помощью анализа с использованием человеческой периферической крови (человеческие РВМС) с использованием панели образцов, полученных от независимых здоровых доноров, согласно руководствам, утвержденным наблюдательным комитетом в области здравоохранения. Человеческие РВМС выделяли из свежей периферической крови с использованием градиента плотности фиколла (фирма GE healthcare, 17-1440-03). 30-35 мл человеческой периферической крови наслаивали на 15 мл фиколла в конических пробирках вместимостью 50 мл, после чего их центрифугировали при 1800 об/мин (центрифуга фирмы Eppendorf 5810R, снабженная обеспечивающими биобезопасность крышками, закрывающими стаканы для пробирок) при комнатной температуре в течение 30 мин без ускорения и торможения. Затем собирали слои лейкоцитарных пленок и переносили в новые конические пробирки вместимостью 50 мл и дважды промывали полной средой, которая представляла собой среду RPMI 1640 (11875085, фирма Invitrogen Corporation, Карлсбад, шт. Калифорния), дополненную 10% инактивированной тепловой обработкой фетальной телячьей сыворотки (фирма Gibco, 10099-141), 1% Pen-Strep (фирма Gibco, № 15140-122), 1 мМ заменимыми аминокислотами (фирма Gibco № 11140-050), 1 мМ пируватом натрия (фирма Gibco № 11360-070), 2 мМ L-глутамином (фирма Gibco № 25030-081) и 1 мМ HEPES (фирма Gibco № 15630-080). После этого подсчитывали жизнеспособные клетки с использованием окрашивания трипановым синим, высевали в 96-луночные плоскодонные планшеты (фирма Becton Dickinson, № 353070) с плотностью 2х105 клеток/лунку в общем объеме 200 мкл полной среды. Затем добавляли соединения с использованием 10-точечного формата для получения дозовой зависимости, применяя 3кратные разведения, начиная с концентрации 100 мкМ. Для отрицательных контролей использовали взятый в эквивалентной концентрации DMSO. Супернатанты культур собирали после инкубации в течение 18-24 ч при 37°С, 5% СО2, их хранили при -20°С до дальнейшего использования.
Уровни IL-6 в супернатантах культур измеряли с использованием набора Luminex (фирма Biorad). Анализ данных осуществляли с помощью программного обеспечения Prism фирмы GraphPad (Сан-Диего, Калифорния). Для каждого соединения строили кривые дозовой зависимости и определяли значения ЕС50 как концентрации, при которых величина сигнала составляла 50% от максимальной.
Анализ репортерного гена.
Линию клеток почек эмбриона человека 293 (HEK293) стабильно трансфектировали человеческим TLR2 и вектором, содержащим репортерный ген люциферазы под контролем NF-кБ (pNiftyлюцифераза). В контрольном анализе применяли здоровые HEK293-клетки, трансфектированные pNiftyLuc. Клетки культивировали в среде DMEM, дополненной 2 мМ L-глутамином, 10% инактивированной тепловой обработкой FBS, 1% пенницилина и стрептомицина, 2 мкг/мл пуромицина (фирма InvivoGen, № ant-pr-5) и 5 мкг/мл бластицидина (фирма Invitrogen, № 46-1120). Буфер и субстрат для анализа люциферазы Bright-Glo™ получали от фирмы Promega (каталожные номера № Е263В и № Е264В субстрата и буфера соответственно). 384-Луночные планшеты с прозрачным дном получали от фирмы Greiner bioone (№ 789163-G), и они представляли собой сделанные на заказ снабженные штрих-кодом планшеты.
Клетки высевали из расчета 25000 клеток/лунку в 384-луночные планшеты в конечном объеме 50 мкл среды. Клеткам давали прикрепиться к планшетам путем культивирования в течение ночи (18 ч) при 37°С и 5% СО2. Затем в каждую лунку вносили серийные разведения тестируемых и служащих в качестве положительного контроля соединений и инкубировали в течение 7 ч при 37°С и 5% CO2. В качестве отрицательных контролей служили клетки, стимулированные только одним DMSO. После инкубации в каждую лунку добавляли в соответствии с инструкциями производителя по 30 мкл премикса буфера для анализа и субстратного буфера. Люминисцентный сигнал считывали с помощью устройства CLIPR, при этом время интегрирования составляло 20 с на один планшет.
Для каждого соединения строили кривые дозовой зависимости и определяли значения ЕС50 как концентрацию, при которой сигнал составлял 50% от максимального. Значения ЕС50 получали в виде величин, стандартизованных относительно активности резиквимода, которую принимали за 100%. Значения ЕС50 и % эффективности в отношении стимуляции TLR2 соединениями формулы (I) представлены в табл. 1.
- 102 031379
Таблица 1
Ном ер примера Структура Физические характеристики MC (m/z) [М+Н] HekTLR2 мкМ (%Eff)*
1 О^^-С^Нзз .0 nh2 г о OyYs^AoACiiH23 ΗΝ^Λ ΌΗ 629,5 0,265 (74%)
2 ογΧγ... н\ 9 Άηοη 681,4 0,44 (90%)
3 °<γ-ΎΐΗ23 .0 νη2 < ρ 0γΥβΥ>0Λ0ιιΗ23 Η\ Η°γ 711,4 0,119 (103%)
4 0<Y^CnH23 ,0 νη2 < ρ ΗΝ> 0 ° ^JqH OH 806,0 0,031 (101%)
5 CK „CKl-К Τ ~ ΝΗ2 <° 0 θγΥ-®Υ>οΛ0ιιΗ23 ΗΝ^ ^¾0 755,5 0,051 (101%)
6 О^СцНгз ΥΥοΥ ΗΝ. Ό 664,5 1,31 (113%)
7 ОуСц Η23 °Т^'ДАс11нгз ΗΝ^ 644,5 1,22 (113%)
- 103 031379
8 °4^CiiH23 nh2 <° о θΥ^ΑΑ,,Η. HN. h2n 746,6 0,81 (98%)
9 °<^С11Н23 ,0 ын2 Г ft O.A. ,s. A* A. 0 C11H23 HN. U^0^O г 7¾ hn^A^s 0 865,6 0,247 (73%)
10 NH2 XOC16H33 °Y^S'''-A>clliH33 SNH X .Xnh2° on γ 2 H 0 857,7 14,1 (72%)
11 NH2 /^^= ΗΝ.Λ он 671,1 >100 (3,6%)
12 О^^-СцНгз NH2 r% o^_A. ,s. A* A. N СцН23 нм.А н ΌΗ 628,0 >100 (3,5%)
13 14 15 Ог^СцНгз »γι„, ΗΝγ*\ % V он 1Η23 ο^+Χπ,, но 0Н 0<i^C11H23 γχ HN γ ζ»^ρ.Ο но 0Η 689.4 739.4 751.4 6,5 (118%) 0,019 2 (153%) 0,165 (96%)
16 0<γ<^11Η23 ,0 νη2 < 0 0^_A^S.A» Ж Ο Ci-|H23 ΗΝ. τν^» Η00Η 801,5 0,41 (107%)
17 О<^СцН23 н% ΟΗ VsAo 673,5 0,108 (121%)
- 104 031379
18 °-^сцНэз nh2 <° о °γΥ-ε^Α0Λ0ιιΗ23 HN. η он 1 нои 799,5 0,27 (96%)
19 0<ψΛ?ιιΗ23 ΑΧ HN. ъ> HO I он 731,5 0,25 (110%)
20 NH2 [ХО(-12Н25 HN. 1 o но. \Ζ^0^\ζ 771,5 0,552 (84%)
21 ГУ пи *ςγ^·-Ί1· ·23 νη2 <ο ο О-хХ-/х.Д,.нг:, ΗΝ W он 761,4 0,014 (122%)
22 ΝΗ2 ХОС,2Н2= °УЛ-'8-Лос12н3 ΗΝ> 0 I n ί Ϊ ο'^χ^' --ύ-Αοη F °H 777,5 2,45 (60%)
23 Οίγ-'θτΗΐδ nh2 <° о HN. Ί HO. 687,4 3,04 (73%)
24 O^^-CgHjg ш2 /° о ν^ΆΑθκ,θ HN. L n HCk 743,4 1,45 (66%)
25 0<^Ci3H27 ш2 Г0 о Ϋ^-ΑΛ,,η, HN. 1 О но. 855,6 0,006 3 (99%)
26 /OC12H25 nh2 ( о HN. M L о но' \/X'' 784,5 1,75 (28%)
27 >oc12h25 nh2 r 0 °Y%^S^AOAC11H23 HN. I HO. 785,5 0,61 (77%)
28 zOCijHjs NH2 Г О Ϋ'-’ΑΛλ HN^* M I HO. o 798,5 0,99 (37%)
29 Ш2 Г-ОС12Н25 0Y^SvZA3hh HN^X [ HO, V4' 785,5 1,85 (74%)
- 105 031379
30 NH2 |--OC12H2S °-'/'-s-AOCi2H25 HN.y/ 0 N 0 H 798,5 0,92 (59%)
31 NH2 р~ОС12Н25 ΟγΚ>3^Α HN/Cl,H=s ° HO, c> H 811,5 2,91 (35%)
32 NH2 |>OC12H2S HN. 735,6 9,13 (78?4>)
33 /OC12H25 nh2 [ о ϋ^α\ιΗβ HN. H 748,5 3,85 48%)
34 r L-l О^&хСцНгз γΐ5Μ31 1 cAlIH Г° 0 oyY,s^AoACiiH23 HN. ] О HO' 1037,7 >100 (47%)
35 <i <_ j>O TV Ή V _I__________ 790,5 0,77 (15%)
36 о^мнс10н21 nh2 6° 0 o<yA^s^aoanhCioH HN. Ί HO. 801,5 0,822 (76%)
37 о^мнс10н21 NH2 <° 0 °У%-3-Ау%нс13н HN. 765,5 6,21 (7%)
38 ΟγΝΗΟ6Η17 NH2 <° 0 0<А/'--/лА,, ,, | v nnvgn· HN. 1 HO. 745,4 7,03 (107%)
39 c H O^.NHC1CH21 γΐ5Μ3ΐ | O^NH <° 0 °yY,s^A0ANHCioH HN. 1 HO. 1039,7 2,64 (92%)
40 ОуС„Н2, ο,,ηΛη r° о HN. ъ^°р Η,Υ'·Α· 0 1128,8 0,096 (25%)
- 106 031379
41 °^с11н23 ΗΙΥ 767,5 15,3 (61%)
42 °-^С11Н23 ,О νη2 Г о ОхА хА А ] О СцНгз НА о 729,5 4,40 (101%)
43 °<5^СПН23 Х-О νη2 Г о HN^_ ОН 631,5 15,5 (54%)
44 О^^хСцНзз χθ nh2 г о ΗΝ. \>0^А 749,5 8,17 (72%)
45 О^^х-СпНгз Ό νη2 Г о oY^sAAc„H23 HNy.Y ОН 617,5 22,2( 50%)
46 О-^^хСцН^ хО nh2 Г о отХ=Х0ЛС11Н2з HNy* ОН 617,5 1,56 (116%)
47 48 49 р Ы г, С15Н2 Ci5H3i NH θγ^θ^οΛο15κ2 χ^χ,.'ΝΗ χ—χ·ΟΗ Λ Χνη2° О Ν ]ί Η О χ χθ\Χ15Η2 χΑΥ, _x- 4ΝΗ /Ύ/ΟΗ X ,Χνη° ο Ν η ___________________L1___ο______________________ O<5[X-CiiH23 Ύ 1107,7 869.5 679.5 0,565 (88%) 1,36 (106%) >21( ζ 1 о/. \ ·“>/
50 О-^СцНгз χ-0 ΝΗ2 < 0 ΟχχΑ ,S, χΛ, Χ^ О СцН23 ΗΝχ/ φ он 679,5 2,09 (118%)
51 О^^х-СцНгз ΝΗ2 Γ° ίϊ °<>A^s^A А н 1 υ ^11и23 ΗΝ. X 679,5 4,69 (102%)
- 107 031379
52 сх^с-иНгз nh2 < о Дх о СпНгз ΗΝ^Χ^ 663,5 9,9 (57%)
53 С^у-СцНгз .О ΝΗ2 < О Ox/kxSxA A, У О СцНгз ΗΝ-χ Ό 663,5 1,37 (93%)
54 О^^С-цНгз •Ай., НЬк ' nh2 690,5 1,29 (101%)
55 ΟγΟ, ι ΗΞ3 ,0 ΝΗ2 < 0 ^-s< А» Д, О СцН2з ΗΝχ 4nh2 602,5 5,24 (66%)
56 °-^С11Н23 -О nh2 Iх 0 ΗΝ-χ <4^χΧΧ'-χ^ΝΗ2 658,5 1,22 (107%)
57 О^^СцН23 .0 ΝΗ2 ρ Ο 0<^Av-SxJ> Дх д о СцН23 HNx ^nh2 630,5 1,04 (111%)
58 °^с11н23 .0 nh2 < 0 о^Дх .Sx^ А» Дх I 0 С11Н23 HN. ъ 664,5 0,145 (117%)
59 О^^-'С11Н2з 0γ1>·^ίοΧ,ιιΒ11 ™w 686,5 0,71 (121%)
60 Ог^-СцН^з νη2 р о Ox A --S- Дч Αχ. 7 0 СцНгз ΗΝ% 666,5 0,41 (119%)
61 °-^С11Н23 -О NH2 < О Ох А Дч А> ΗΝχ k^NH2 616,5 1,96 (55%)
62 О^^СцНгз HN^ А 664,5 0,004 4 (102%)
63 θίγ^1ιΗ23 ΗΝγΛΖ 645,5 0,071 8 (96%)
- 108 031379
64 О^^-С-|-|Н2з nh2 С0 о oyk^s^A0AC|HB Hhk °·% nh2 762,6 0,498 (124%)
65 θίγ-'θ 11^23 ,O NH2 < 0 С^ДжА ДΟΊ1Η23 ΗΝ^χ κολθ 692,5 0,04 (91%)
66 О-^С-иНгз .0 NH2 Г 9 Дч- Д, о СцНга ΌΟ 691,5 0,16 (93%)
67 О^хСпНгз °Л-Хк„. 739,5 0,068 (64%)
68 °^^>С11Н23 .0 ΝΗ2 < О Оо^Лч^-Sx. Дч Дх О СцНзз Дд XJ) 755,5 4,08 (77%)
69 <ДСцН23 NH2 < 0 °·-./'-εΆ/·Ει1ΗΚ ΗΝγс 700,6 0,257 (118%)
70 °Л^С11Н23 ΝΗ2 Г ί O^xA^SxД, Д, j 0 СцН2з HhK <4^Vs*^OH 659,5 0,033 (92%)
71 0<^х-СцН2з J3 nh2 < о оук/З^АоЛС11Нгз ΗΝχ ΌΗ 603,4 0,024 (95%)
72 0<уХ-^1-123 NH2 Г ft ОхД .5ч Дч Дх θ СцН2з HN-. кДДон 673,5 30,7 (49%)
73 °-^С11Н23 .0 NH2 < 0 ОхДД> Дч ] 0 СцНзз НЫч Лэ 677,5 0,81 (115%)
74 О^СцНгз °Α··Χ% “а 657,5 0,19 (105%)
- 109 031379
75 с н А Ан= С15Н31 NH f 9 C· ,н2 . „NH A A-nh2° 0 N if H 0 997,7 0,96 (58%)
76 NH2 Y»H33 °.^sYCC;H3 HN> Ol· I _ HOY 883,7 3,45 (109%)
77 О-^СцНй 1Нг ί° ϊ ΟγΥ*2·Υ\ι СцН^ ΗΝ. 843,5 0,038 (100%)
78 ΝΗ2 Υ’^25 °γΛ^χ5^χΛ*οο, ,Η,5 ΗΙΚ 815,6 1,43 (35%)
79 νη2 γ,ϊΗκ ™χ oAc„h2S 0 Ύ/° -Ж0*\х°Ж 828,6 1,86 (20%)
80 ΝΗ2 <OCi!H2S “AA Ά0Η нХ Η 814,5 1,91 (52%)
81 ΝΗ2 r-'OC12H25 CY.A. .S. Js у NH hnV^oh οΑ,γοΗ ЛрЖ-А 827,5 1,97 (30%)
82 ϊ Xn'^2’ ЖН /ОН °2::A^S'.A'qLn-C’-H2 Лн Η А °^0.___ ОН ОУ'°Н 844,1 0,83 (84%)
83 О .О-ХС,°Н21 nh2 Г- 0 н %A^SY>0YCi»H2, Jh н U Ο^4Ά-Χ ОН оАон 802,0 0,82 (76%)
84 0 Ле н мн2 о с На θγΧ^ΧνΑο,,Ηζ, ΗΝ^| Ί O=S-OH 0 682,0 5,56 (72%)
85 А ААс,°нг1 C6H13^NH 6 0H OyA^SxA*q-^N'C10H21 Ϊη h X °^-Ж 0 </' 914,2 2,17 (71%)
86 0 оЛс Η νη2 <° о С,,Н23 °γΧ5'-^·οΧ11Η2ϊ 763.5 0,90 (84%)
87 ο Ci5HSi II оХн <° 0 с,,Нг! ογΧ®'Χ·οΧ11Η23 ΗΝ^.0^Ο^.,0^ 1001,7 38 (30%)
- 110 031379
88 о NH, А”» °Y^s^AoACiiHa i Н ''ОН 850,5 0,009 2 (145%)
89 С15Н31 II сАн i Η ^он 1088,8 4,94 (104%)
90 Ci2H25 Г2 f° ηΊν Y l-o % °p;oh О-Д __Aoh Α οΖ 787,1 >100 (47%)
91 о nh2 OyAsA4oACiiH23 HN, - r, ό' 'он 727,5 0,061 (120%)
92 A cA'Ci oA-^-SxAoAAw A c 900,2 0,28 (99%)
* %Eff относительно Pam3CSK4
Оценка % связывания с квасцами.
Связывание конкретных соединений формулы (I) с содержащими алюминий адъювантами при рН 6,5 оценивали с помощью ЖХВР-МС/МС для выявления присутствия соединения формулы (I) в супернатанте.
Оценка связывания при рН 6,5.
К смеси соединения (4 мг/мл) в свободной от эндотоксинов воде добавляли 1М NaOH (2,1 экв.) до получения прозрачного раствора. Смесь, содержащую полученный раствор (0,5 мл), свободную от эндотоксинов воду (0,86 мл), 100 мМ гистидиновый буфер (0,2 мл) и служащий в качестве адъюванта гидроксид алюминия (13,78 мг/мл, 0,44 мл), перемешивали при 25°С в течение ночи, в результате чего получали препарат с концентрацией 1 мг/мл. Дополнительно в качестве контроля приготавливали препарат с концентрацией 1 мг/мл в 10 мМ гистидиновом буфере без гидроксида алюминия.
Три аликвоты по 50 мкл каждого препарата (в гистидиновом буфере, содержащем гидроксид алюминия, и без него) центрифугировали при 14000 об/мин в течение 10 мин при 4°С. Супернатант разводили, обрабатывали внутренним стандартом и анализировали с помощью ЖХВР-МС/МС с использованием баллистического градиента (от 50% CH3CN-1,0% NH4OH до 95% CH3CN-1,0% NH4OH в течение 1,5 мин) на С8-колонке (50 см х 2,1 мм) фирмы Waters XBridge при температуре окружающей среды. Для каждого препарата определяли концентрацию в супернатанте. Фракцию содержащего гидроксид алюминия препарата, связанного с квасцами, рассчитывали следующим образом:
% связывания с квасцами = 100% - (концентрация в супернатанте содержащего квасцы препарата)/ (концентрация в супернатанте гистидинового буфера)
Величины % связывания с квасцами для конкретных репрезентативных примеров фосфонатных соединений, предлагаемых в изобретении, представлены в табл. 2.
- 111 031379
Таблица 2
Номер примера Структура % связывания с квасцами
3 °<уС11Н23 Г £°ϊ ΗΝ. Ί ноД > 80%
5 О-^-СиНгз Г2 ί°ϊ у-5'АЛ С11^ HI'K но ОН > 80%
15 CXj^Ci (Нгз аАа,л. ΗΝγ ° -г > 80%
18 0^-СцНгз nh2 <° О oyAsxAoACiiH2 HN^ 1 л > 80%
19 °<г^хСцН23 Ηΐκ U;.o НО'· он > 80%
20 ΝΗ2 γ<2Η25 °Y^'S'^>ocl2H25 НГк λ /χ,Ο^ Л > 80%
26 ,ОС12Н25 nh2 < 0 θγ^χΑΑ1ιΗ; ΗΝ^ θ^° ’•'-''Ч СА'Х > 80%
Следует понимать, что примеры и варианты осуществления изобретения, представленные в настоящем описании, даны только для целей иллюстрации и что специалисты в данной области могут предложить на его основе различные модификации или изменения, которые соответствуют сущности и подпадают под сферу действия настоящего описания и объем изобретения, который определяется прилагаемой формулой изобретения. Все публикации, патенты и заявки на патент, процитированные в настоящем описании, включены в настоящее описание в качестве ссылки для всех целей.
- 112 031379
Перечень последовательностей <110> АЙРМ ЛЛК <120> СОЕДИНЕНИЯ (ЛИПОПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ ЦИСТЕИНА) И КОМПОЗИЦИИ В КАЧЕСТВЕ АГОНИСТОВ TLR2, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ, ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ, РЕСПИРАТОРНЫХ И ДРУГИХ <130> РАТО54111-WO-РСТ <160> 6 <170> Patentin, версия 3.5 <210> 1 <211> 248 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis <400> 1
Val 1 Ala Ala Asp lie 5 Gly Ala Gly Leu Ala 10 Asp Ala Leu Thr Ala 15 Pro
Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser
20 25 30
Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys
35 40 45
Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp
50 55 eo
Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln
65 70 75 80
Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His
35 90 95
Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu Gln Ile Gln Asp Ser Glu His
100 105 110
- 113 031379
Ser Gly Lys 115 Met Val Ala Lys Arg 120 Gln Phe Arg Ile Gly 125 Asp lie Ala
Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr
130 135 140
Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr
145 150 155 160
Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly Asn Gly Lys lie Glu His
165 170 175
Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala Ala Asp He Lys
180 185 190
Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn
195 200 205
Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu. Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala
210 215 220
Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg
225 230 235 240
His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln
245 <210> 2 <211>247 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis <40О>2
Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro
1015
- 114 031379
Leu Asp His Lys 20 Asp Lys Ser Leu Gln 25 Ser Leu Thr Leu Asp 30 Gln Ser
Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys
35 40 35
Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp
50 55 60
Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe lie Arg Gln He Glu Val Asp Gly Gln
65 70 75 80
Leu lie Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln He Tyr Lys Gln Asp His
85 90 95
Ser Ala Val Val Ala Leu Gln lie Glu Lys lie Asn Asn Pro Asp Lys
100 105 110
He Asp Ser Leu He Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly
115 120 125
Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr
130 135 140
His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr
145 150 155 160
Thr lie Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys He Glu His Leu
165 170 175
Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala
180 185 190
Asp Glu Lys Ser His Ala Val lie Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser
115 031379
195 200 205
Glu Glu 210 Lys Gly Thr Tyr His 215 Leu Ala Leu Phe Gly 220 Asp Arg Ala Gln
Glu lie Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys lie Gly Glu Lys Val Hls Glu
225 230 235 240
He Gly Ile Ala Gly Lys Gln
245
<210> 3
<211> 250
<212> PRT
<213> Neisseria meningitidis
<400> 3
Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly
1 5
Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu
20
Ile Pro Gln Asn Gly Thr Leu Thr
35 40
Thr Phe Lys Ala Gly Asp Lys Asp
50 55
Lys As n Asp Lys Ile Se r Arg Phe
65 70
Asp Gly Gln Thr lie Thr Leu Ala
85
Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala
Leu Ala 10 Asp Ala Leu Thr Ala 15 Pro
Lys 25 Ser Leu Thr Leu Glu 30 Asp Ser
Leu Ser Ala Gln Gly 45 Ala Glu Lys
Asn Ser Leu Asn 60 Thr Gly Lys Leu
Asp Phe Val 75 Gln Lys He Glu Val 80
Ser Gly 90 Glu Phe Gln Ile Tyr 95 Lys
Leu Gln Ile Glu Lys He Asn Asn
116 031379
100
Pro Asp Lys Thr Asp Ser Leu lie
115 120
Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala
130 135
Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe
145 150
Leu His Tyr Ser lie Asp Phe Thr
165
Glu His Leu Lys Thr Leu Glu Gln
180
Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His
195 200
Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr
210 215
Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser
225 230
Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly
245
105 110
Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser
125
Phe Asn Gln Leu Pro Gly Gly Lys
140
Ser Ser Asp Asp Pro Asn Gly Arg
155 160
Lys Lys Gln Gly Tyr Gly Arg Ile
170 175
Asn Val Glu Leu Ala Ala Ala Glu
185 190
Ala Val Tie Leu Gly Asp Thr Arg
205
Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp
220
Ala Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys
235 240
Lys Gln
250
<210>4 <211>644 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis <400>4
Met Ala Ser Pro Asp Val Lys Ser
Ala Asp Thr Leu Ser Lys Pro Ala
- 117 031379
1 5 10 15
Ala Pro Val Val Ser Glu Lys Glu Thr Glu Ala Lys Glu Asp Al a Pro
20 25 30
Gln Ala Gly Ser Gln Gly Gln Gly Ala Pro Ser Ala Gln Gly Gly Gln
35 40 45
Asp Me t Ala Ala Val Ser Glu Glu Asn Thr Gly Asn Gly Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Thr Asp Lys Pro Lys Asn Glu Asp Glu Gly Ala Gln Asn Asp Met
65 70 75 80
Pro Gln As n Ala Ala Asp Thr Asp Ser Leu Thr Pro Asn His Thr Pro
85 90 95
Ala Ser Asn Met Pro Ala Gly Asn Met Glu Asn Gln Ala Pro Asp Ala
100 105 110
Gly Glu Ser Glu Gln Pro Ala Asn Gln Pro Asp Met Ala Asn Thr Ala
115 120 125
Asp Gly Met Gln Gly Asp Asp Pro Ser Ala Gly Gly Glu Asn Ala Gly
130 135 140
Asn Thr Ala Ala Gln Gly Thr Asn Gln Ala Glu Asn Asn Gln Thr Ala
145 150 155 160
Gly Ser Gln Asn Pro Ala Ser Se r Thr Asn Pro Ser Ala Thr Asn Ser
165 170 175
Gly Gly Asp Phe Gly Arg Thr Asrt Val Gly Asn Ser Val Val Ile Asp
180 185 190
- 118 031379
Gly Pre Ser 195 Gln Asn Ile Thr Leu 200 Thr His Cys Lys Gly 205 Asp Ser Cys
Ser Gly Asn Asn Phe Leu Asp Glu Glu Val Gln Leu Lys Ser Glu Phe
210 215 220
Glu Lys Leu Ser Asp Ala Asp Lys Ile Ser Asn Tyr Lys Lys Asp Gly
225 230 235 240
Lys Asn Asp Gly Lys Asn Asp Lys Phe Val Gly Leu Val Ala Asp Ser
245 250 255
Val Gln Met Lys Gly Ile Asn Gln Tyr lie Ile Phe Tyr Lys Pro Lys
260 265 270
Pro Thr Ser Phe Ala Arg Phe Arg Arg Ser Ala Arg Ser Arg Arg Ser
275 280 285
Leu Pro Ala Glu Met Pro Leu lie Pro Val Asn Gln Ala Asp Thr Leu
290 295 300
Ile Val Asp Gly Glu Ala Val Ser Leu Thr Gly His Ser Gly Asn lie
305 310 315 320
Phe Ala Pro Glu Gly Asn Tyr Arg Tyr Leu Thr Tyr Gly Ala Glu Lys
325 330 335
Leu Pro Gly Gly Ser Tyr Ala Leu Arg Val Gln Gly Glu Pro Ser Lys
340 345 350
Gly Glu Met Leu Ala Gly Thr Ala Val Tyr Asn Gly Glu Val Leu His
355 360 365
Phe His Thr Glu Asn Gly Arg Pro Ser Pro Ser Arg Gly Arg Phe Ala
370 375 380
119 031379
Ala 385 Lys Val Asp Phe Gly 390 Ser Lys Ser Val Asp 395 Gly Ile Ile Asp Ser 400
Gly Asp Gly Leu His Met Gly Thr Gln Lys Phe Lys Ala Ala Ile Asp
405 410 4 15
Gly Asn Gly Phe Lys Gly Thr Trp Thr Glu Asn Gly Gly Gly Asp Val
420 425 430
Ser Gly Lys Phe Tyr Gly Pro Ala Gly Glu Glu val Ala Gly Lys Tyr
435 440 445
Ser Tyr Arg Pro Thr Asp Ala Glu Lys Gly Gly Phe Gly Val Phe Ala
450 455 460
Gly Lys Lys Glu Gln Asp Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ala Thr Tyr Lys
465 470 475 480
Val Asp Glu Tyr His Ala Asn Ala Arg Phe Ala lie Asp His Phe Asn
485 490 495
Thr Ser Thr Asn Val Gly Gly Phe Tyr Gly Leu Thr Gly Ser Val Glu
500 505 510
Phe Asp Gln Ala Lys Arg Asp Gly Lys Ile Asp lie Thr lie Pro Val
515 520 525
Ala Asn Leu Gln Ser Gly Ser Gln His Phe Thr Asp His Leu Lys Ser
530 535 540
Ala Asp lie Phe Asp Ala Ala Gln Tyr Pro Asp Ile Arg Phe Val Ser
545 550 555 560
Thr Lys Phe Asn Phe Asn Gly Lys Lys Leu Val Ser Va 1 Asp Gly Asn
565 570 575
- 120 031379
Leu Thr Met His 580 Gly Lys Thr Ala Pro 585 Val Lys Leu Lys Ala 590 Glu Lys
Phe Asn Cys Tyr Gln Ser Pro Met Ala Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly
595 600 605
Asp Phe Ser Thr Thr Ile Asp Arg Thr Lys Trp Gly Val Asp Tyr Leu
610 615 620
Val Asn Val Gly Met Thr Lys Ser Val Arg lie Asp lie Gln Ile Glu
625 630 635 64 0
Ala Ala Lys Gln <210>5 <211>434 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis <400>5
Met 1 Val Ser Ala Val 5 Ile Gly Ser Ala Ala 10 Val Gly Ala Lys Ser 15 Al a
Val Asp Arg Arg Thr Thr Gly Ala Gln Thr Asp Asp Asn Val Met Ala
20 25 30
Leu Arg Ile Glu Thr Thr Ala Arg Ser Tyr Leu Arg Gln Asn Asn Gln
35 40 45
Thr Lys Gly Tyr Thr Pro Gln Ile Ser Val Val Gly Tyr Asn Arg His
50 55 60
Leu Leu Leu Leu Gly Gln Val Ala Thr Glu Gly Glu Lys Gln Phe Vai
65 70 75 80
- 121 031379
Gly Gln Ile Ala Arg 85 Ser Glu Gln Ala Ala 90 Glu Gly Val Tyr Asn 95 Tyr
Ile Thr Val Ala Ser Leu Pro Arg Thr Ala Gly Asp Ile Ala Gly Asp
100 105 110
Thr Trp Asn Thr Ser Lys Val Arg Ala Thr Leu Leu Gly Ile Ser Pro
115 120 125
Ala Thr Gln Ala Arg Val Lys Ile Val Thr Tyr Gly Asn Val Thr Tyr
130 135 140
Val Met Gly Ile Leu Thr Pro Glu Glu Gln Ala Gln Ile Thr Gln Lys
145 150 155 160
Va 1 Ser Thr Thr Val Gly Val Gln Lys Val Ile Thr Leu Tyr Gln Asn
165 170 175
Tyr Val Gln Arg Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp lie Gly
180 185 190
Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys
195 200 205
Gly Leu Gln Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys
210 215 220
Leu Lys Leu Ala Ala Gln Gly Al a Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp
225 230 235 240
Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp
245 250 255
Phe lie Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser
- 122 031379
260 265 270
Gly Glu Phe 275 Gln Val Tyr Lys Gln 280 Ser His Ser Ala Leu 285 Thr Ala Phe
Gln Thr Glu Gln lie Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala
290 295 300
Lys Arg Gln Phe Arg lie Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe
305 310 315 320
Asp Lys Leu Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe
325 330 335
Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr lie Asp Phe Ala
340 345 350
Ala Lys Gln Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu
355 360 365
Asn Val Asp Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His
370 375 380
Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser
3B5 390 395 400
Tyr Ser Leu Gly lie Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser
405 410 415
Ala Glu Val Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala
420 425 430
Lys Gln
- 123 031379 <210> 6 <211> 327 <212> PRT <213> Neisseria meningitidis <400> 6
Ala 1 Thr Asn Asp Asp 5 Asp Val Lys Lys Al a 10 Ala Thr Val Ala Ile 15 Ala
Ala Ala Tyr Asn Asn Gly Gln Glu lie Asn Gly Phe Lys Ala Gly Glu
20 25 30
Thr Ile Tyr Asp Ile Asp Glu Asp Gly Thr Ile Thr Lys Lys Asp Ala
35 40 45
Thr Ala Ala Asp Val Glu Ala Asp Asp Phe Lys Gly Leu Gly Leu Lys
50 55 60
Lys Val Val Thr Asn Leu Thr Lys Thr Val Asn Glu Asn Lys Gln Asn
65 70 75 80
Val Asp Ala Lys Val Lys Ala Ala Glu Ser Glu Ile Glu Lys Leu Thr
35 90 95
Thr Lys Leu Ala Asp Thr Asp Ala Al a Leu Ala Asp Thr Asp Ala Ala
100 105 110
Leu Asp Ala Thr Thr Asn Ala Leu Asn Lys Leu Gly Glu Asn lie Thr
115 120 125
Thr Phe Ala Glu Glu Thr Lys Thr Asn Ile Val Lys Ile Asp Glu Lys
130 135 140
Leu Glu Ala Val Ala Asp Thr Val Asp Lys His Ala Glu Ala Phe Asn
145 150 155 160
124 031379
Asp lie Ala Asp Ser 165 Leu Asp Glu Thr Asn 170 Thr Lys Ala Asp Glu 175 Ala
Val Lys Thr Ala Asn Glu Ala Lys Gln Thr Ala Glu Glu Thr Lys Gln
180 185 190
Asn Val Asp Ala Lys Val Lys Ala Ala Glu Thr Ala Ala Gly Lys Ala
195 200 205
Glu Ala Ala Ala Gly Thr Ala Asn Thr Ala Ala Asp Lys Ala Glu Ala
210 215 220
Val Ala Ala Lys Val Thr Asp lie Lys Ala Asp Ile Ala Thr Asn Lys
225 230 235 240
Asp Asn Ile Ala Lys Lys Ala Asn Ser Ala Asp Val Tyr Thr Arg Glu
245 250 255
Glu Ser Asp Ser Lys Phe Val Arg Ile Asp Gly Leu Asn Ala Thr Thr
260 265 270
Glu Lys Leu Asp Thr Arg Leu Ala Ser Ala Glu Lys Ser lie Ala Asp
275 280 285
His Asp Thr Arg Leu Asn Gly Leu Asp Lys Thr Val Ser Asp Leu Arg
290 295 300
Lys Glu Thr Arg Gln Gly Leu Ala Glu Gln Ala Ala Leu Ser Gly Leu
305 310 315 320
phe Gln Pro Tyr Asn Val Gly
325

Claims (25)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль Ri I
    NH Li— R2
    NH
    I Rr
    Формула (I) в которой
    R1 обозначает Н, -С(О)-С7-С18алкил или -С(О)-С1-С6алкил;
    R2 обозначает С7-С18алкил;
    R3 обозначает С7-С18алкил;
    L1 обозначает -СН2ОС(О)-, -СН2О- или -CH2NR7C(O)-;
    L2 обозначает -ОС(О)-, -О- или -NR7C(O)-;
    - 125 031379
    R4 обозначает -L3R5 или -L4R5;
    R5 обозначает -P(O)(OR7)2, -NR7C(O)L3R8, -NR7C(O)L4R8, -OL3R6, -C(O)NR7L3R8, -C(O)NR7L4R8, -OS(O)2OR7, С1-С6алкил, С6арил, С10арил, С14арил, 5-14-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, С3-С8циклоалкил или 5-6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, где арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклоалкил, каждый, является необязательно замещенным 1-3 заместителями, независимо друг от друга выбранными из -OR9, -OL3R6, -OL4R6, -OR7 и -C(O)OR7;
    L3 обозначает ί/-С^алкилен, который необязательно замещен 1-4 R6-группами, или С-С^алкилен, замещенный 2 Ci -С6алкильными группами на одном и том же атоме углерода, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
    L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p- или -(CR11R11)((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-, где R11, каждый, обозначает Q-С6алкильные группы, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
    R6, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, ^-^алкил, C1С6алкил, замещенный 1-2 гидроксильными группами, -OR7, -N(R7)2, -C(O)N(R7)2, -P(O)(OR7)2, С6арил, С10арил и С14арил;
    R7, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и С-Салкила;
    R8 выбран из -SR7, -P(O)(OR7)2 и 5-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1-3 гетероатома, которые выбраны из О и N;
    R9 обозначает фенил;
    R10, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и галогена;
    р, каждый независимо друг от друга, выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
  2. 2. Соединение по п.1, в котором
    R1 обозначает Н, -С(О)-С10-С18алкил;
    R2 обозначает С10-С18алкил;
    R3 обозначает С10-С18алкил;
    L1 обозначает -СН2О-, -СН2ОС(О)- или -CH2NR7C(O)-;
    L2 обозначает -О-, -ОС(О)- или -NR7C(O)-;
    R4 обозначает -L3R5 или -L4R5;
    R5 обозначает -P(O)(OR7)2, -NR7C(O)L3R8, -OL3R6, -C(O)NR7L3R8, С1-С6алкил, С6арил, С10арил, С14арил, 5-14-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, С3С8циклоалкил или 5-6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1-3 гетероатома, которые выбраны из О, S и N, где арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклоалкил, каждый, необязательно замещен 1-3 заместителями, независимо друг от друга выбранными из -OR9, -OL3R6, -OL4R6, -OR7 и -C(O)OR7;
    L3 обозначает Q-С^алкилен, необязательно замещенный 1-4 R6-группами, или ^-^алкилен, замещенный 2 ^-^алкильными группами на одном и том же атоме углерода, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
    L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p- или -(CR11R11)((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-, где R11, каждый, обозначает ^-^алкильные группы, которые вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С8циклоалкил;
    R6, каждый независимо друг от друга, выбран из группы, включающей галоген, С1-С6алкил, -OR7, -N(R7)2, -C(O)N(R7)2, -P(O)(OR7)2, С6арил, С10арил и С14арил;
    R7, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и С-Салкила;
    R8 выбран из -SR7 и 5-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1-3 гетероатома, которые выбраны из О и N;
    R9 обозначает фенил;
    R10, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и галогена;
    р, каждый независимо друг от друга, выбран из 1, 2, 3, 4, 5 и 6 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
  3. 3. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R1 обозначает Н.
  4. 4. Соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R1 обозначает -С(О)-С15алкил.
  5. 5. Соединение по одному из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором
    L1 обозначает -СН2ОС(О)- и L2 обозначает -ОС(О)-, -О- или -NR7C(O)-; или
    L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -ОС(О)-, -О- или -NR7C(O)-; или
    L1 обозначает -CH2NR7C(O)- и L2 обозначает -ОС(О)-, -О- или -NR7C(O)-.
  6. 6. Соединение по одному из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором
    L1 обозначает -СН2ОС(О)- и L2 обозначает -ОС(О)-; или
    L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -О-; или
    L1 обозначает -СН2О- и L2 обозначает -NHC(O)-.
  7. 7. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором
    - 126 031379
    R2 обозначает -Си алкил и R3 обозначает -Си алкил; или
    R2 обозначает -С!6алкил и R3 обозначает -С16алкил; или
    R2 обозначает -С!6алкил и R3 обозначает -Си алкил; или
    R2 обозначает -С7алкил и R3 обозначает -С7алкил; или
    R2 обозначает -С9алкил и R3 обозначает -С9алкил; или
    R2 обозначает -С8алкил и R3 обозначает -С8алкил; или
    R2 обозначает -С13алкил и R3 обозначает -С13алкил; или
    R2 обозначает -С12алкил и R3 обозначает -Си алкил; или
    R2 обозначает -С12алкил и R3 обозначает -С12алкил; или
    R2 обозначает -С10алкил и R3 обозначает -С^алкил; или
    R2 обозначает -С^алкил и R3 обозначает -С^алкил.
  8. 8. Соединение по одному из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R2 обозначает -Си алкил и R3 обозначает -Си алкил.
  9. 9. Соединение по одному из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R5 обозначает -Р(О)(ОН)2, -OS(O)2OH, -NHC(O)L3R8, -OL3R6, -C(O)NHL4R8 или -C(O)NHL3R8.
  10. 10. Соединение по одному из пп.1-9 или его фармацевтически приемлемая соль, в котором R5 обозначает -Р(О)(ОН)2, -NHC(O)L3R8, -OS(O^OH и -OL3R6.
  11. 11. Соединение по одному из пп. 1-8, в котором R5 обозначает Q-Оалкил, фенил, пиридинил, имидазолил или морфолинил, каждый из которых является незамещенным или замещен 1-3 заместителями, выбранными независимо друг от друга из -OR9, -OL3R6, -OL4R6 и -ОН.
  12. 12. Соединение по одному из пп.1-11, в котором R8 выбран из -SH, -Р(О)(ОН)2 и 5-6-членного гетероциклоалкила, содержащего 1-2 O гетероатома.
  13. 13. Соединение по одному из пп.1-12, в котором L3 обозначает Cl-Сl0алкилен, который является незамещенным или замещен 1-4 R6-группами.
  14. 14. Соединение по одному из пп.1-12, в котором
    L4 обозначает -((CR7R7)pO)q(CR10R10)p-, где R10, каждый независимо друг от друга, выбран из Н и F;
    р, каждый независимо друг от друга, выбран из 2, 3 и 4 и q обозначает 1, 2, 3 или 4.
  15. 15. Соединение по одному из пп.1-14, в котором R6, каждый независимо друг от друга, выбран из метила, этила, изопропила, изобутила, -СН2ОН, -ОН, -F, -NH2, -C(O)NH2, -P(O)(OH)2 и фенила.
  16. 16. Соединение по одному из пп.1-15, в котором R7, каждый независимо друг от друга, выбран из Н, метила и этила.
  17. 17. Соединение по п.1, где соединение выбрано из группы, включающей (3-(^)-2-амино-3-(№)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил)тио)пропанамидо)пропил)фосфоновую кислоту;
    ((8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азагексакозил)фосфоновую кислоту;
    ((12R,16R)-12-амино-16-(додеканоилокси)-l,1-дифтор-11,19-диоксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((11R,15R)-11-амино-15-(додеканоилокси)-10,18-диоксо-3,6,17-триокса-13-тиа-9-азанонакозил) фосфоновую кислоту;
    ^)-3-((^)-2-амино-3 -оксо-3 -((2-(пиридин-2-ил)этил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (20R,24R)-2,20-диамино-1 -меркапто-3,19-диоксо-8,11,14-триокса-22-тиа-4,18-диазапентакозан24,25-диилдидодеканоат;
    ((6S,9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-6-метил-8,16-диоксо-4,15-диокса-11 -тиа-7-азагептакозил)фосфоновую кислоту;
    (3 -((1 -(Ш)-2-амино-3 -((^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил)тио)пропанамидо)циклопропил)метокси)пропил)фосфоновую кислоту;
    (3-(4-(2-(^)-2-амино-3-(№)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил)тио)пропанамидо)этил)фенокси)пропил)фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    (4-№)-2-амино-3-(^)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил)тио)пропанамидо)-1,1-дифторбутил)фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((9R,13R)-9-амино-13-(додеканоилокси)-1,1-дифтор-8,16-диоксо-4,15-диокса-11-тиа-7-азагептакозил)фосфоновую кислоту;
    ((12R,16R)-12-амино-16-(додецилокси)-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-14-амино-18-(октаноилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азаоктакозил)
    - 127 031379 фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-14-амино-18-(деканоилокси)-13,21-диоксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азатриаконтил) фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-14-амино-13,21-диоксо-18-(тетрадеканоилокси)-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азатетратриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-14-амино-18-(додеканоилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил) фосфоновую кислоту;
    ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа-9,12диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((11S,14R,18R)-14-амино-18-додеканамидо-11-метил-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа-9,12диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((14R,18R)-18-(додеканоилокси)-13,21-диоксо-14-пальмитамидо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12азадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((12R,16R)-12-амино-16-додеканамидо-1,1-дифтор-11-оксо-4,7,18-триокса-14-тиа-10-азатриаконтил)фосфоновую кислоту;
    (20R,24R)-1-(1,3-диоксолан-2-ил)-3,19-диоксо-20-пальмитамидо-8,11,14-триокса-22-тиа-4,18диазапентакозан-24,25-диилдидодеканоат;
    ^)-3-(^)-2-амино-3-((4-(2-(2-гидроксиэтокси)этокси)фенэтил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан1,2-диилдидодеканоат;
    ^)-3-(^)-2-амино-3-((4-(изопентилокси)фенэтил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (R)-3 -(^)-2-амино-3 -((3-гидроксифенэтил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (2R)-3-(((2R)-2-амино-3-((1-(4-гидроксифенил)этил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    ^)-3-(^)-2-амино-3 -((4-гидроксифенэтил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (2R)-3 -(((2R)-2-амино-3 -оксо-3 -((1-фенилэтил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (R)-3 -(^)-2-амино-3 -оксо-3-(фенэтиламино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    ^)-3-((^)-2-амино-3 -оксо-3 -((2-(пиридин-4-ил)этил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    ^)-3-((^)-2-амино-3-((3-морфолинопропил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (R)-3-(((R)-3 -((3-(Ш-имидазол-1-ил)пропил)амино)-2-амино-3 -оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    ^)-3-((^)-2-амино-3-оксо-3-((2-(пиридин-3-ил)этил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (2R)-3 -(((2R)-2-амино-3 -((1 -метоксибутан-2-ил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    ^)-3-((^)-2-амино-3 -(((1R,2S)-1 -гидрокси-1-фенилпропан-2-ил)амино)-3 -оксопропил)тио)пропан1,2-диилдидодеканоат;
    (2R)-3 -(((2R)-2-амино-3 -оксо-3 -((4-фенилбутан-2-ил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (2R)-3 -(((2R)-2-амино-3 -((1,2-дифенилэтил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    ^)-3-((^)-2-амино-3-оксо-3-((4-феноксифенэтил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат; (2R)-3 -(((2R)-2-амино-3 -оксо-3 -((2-фенилпропил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат; (2R)-3-(((2R)-2-амино-3-((5-метилгексан-2-ил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    ((14R,18R)-14-амино-18-(гексадецилокси)-13-оксо-3,6,9,20-тетраокса-16-тиа-12-азагексатриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((17R,21R)-17-амино-21-(додеканоилокси)-16,24-диоксо-3,6,9,12,23-пентаокса-19-тиа-15-азапентатриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((17R,21R)-17-амино-21-(додецилокси)-16-оксо-3,6,9,12,23-пентаокса-19-тиа-15-азапентатриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((17R,21R)-17-амино-21-додеканамидо-16-оксо-3,6,9,12,23-пентаокса-19-тиа-15-азапентатриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((11S,14R,18R)-14-амино-18-(додецилокси)-11-(гидроксиметил)-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16
    - 128 031379 тиа-9,12-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((118,14К,18К)-14-амино-18-додеканамидо-11-(гидроксиметил)-10,13-диоксо-3,6,20-триокса-16-тиа9,12-диазадотриаконтил)фосфоновую кислоту;
    ((14К,18И)-14-амино-18-((додецилокси)метил)-13,20-диоксо-3,6,9,19-тетраокса-16-тиа-12,21диазагентриаконтил)фосфоновую кислоту и (К)-3-(((К)-2-амино-3-оксо-3-((2-(2-(сульфокси)этокси)этил)амино)пропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат.
  18. 18. Соединение, выбранное из (R)-3 -((Ш)-2-амино-3 -((1-(гидроксиметил)циклопропил)амино)-3 -оксопропил)тио)пропан-1,2диилдидодеканоата;
    N-((R)-1 -((Ш)-2-амино-3 -((1-(гидроксиметил)циклопропил)амино)-3-оксопропил)тио)-3-(гексадецилокси)пропан-2-ил)додеканамида;
    N,N'-((R)-3 -((Ш)-2-амино-3-((1 -(гидроксиметил)циклопропил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2диил)дидодеканамида;
    (5S,8R,12R)-8-амино-12-(додеканоилокси)-5-этил-7,15-диоксо-3,14-диокса-10-тиа-6-азатритриаконтан-1-овой кислоты;
    6-(Ш)-2-амино-3-((Ш)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил)тио)пропанамидо)капроновой кислоты;
    (15R, 19R)-15-амино-19-(додецилокси)-14-оксо-4,7,10,21 -тетраокса-17-тиа-13 -азатритриаконтан-1 овой кислоты;
    (15R,19R)-15-амино-19-додеканамидо-14-оксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1овой кислоты;
    10-(Ш)-2-амино-3-((Ш)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил)тио)пропанамидо)декановой кислоты;
    Ш)-3-(Ш)-2-амино-3-((1-гидрокси-2-метилпропан-2-ил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2диилдидодеканоат;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3 -(((R)-1 -гидроксипропан-2-ил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3-(((8)-1-гидроксипропан-2-ил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3 -((6-гидроксигексил)амино)-3 -оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3-((2-гидроксиэтил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (R)-3 -(Ш)-2-амино-3 -((5-гидрокси-4,4-диметилпентил)амино)-3 -оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат;
    (15R,19R)-15-амино-19-(додеканоилокси)-14,22-диоксо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13-азатритриаконтан-1-овой кислоты;
    (15R,19R)-19-(додеканоилокси)-14,22-диоксо-15-пальмитамидо-4,7,10,21-тетраокса-17-тиа-13азатритриаконтан-1-овой кислоты;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3-((5-аминопентил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоат; (2R,6R)-6,20-диамино-7-оксо-12,17-диокса-4-тиа-8-азаэйкозан-1,2-диилдидодеканоата; (11R,15R)-1,11 -диамино-10-оксо-3,6-диокса-13-тиа-9-азагексадекан-15,16-диилдидодеканоата;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3 -((2-аминоэтил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоата;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3 -((6-аминогексил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоата;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3 -((4-аминобутил)амино)-3 -оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоата;
    Ш)-3-((Ш)-2-амино-3 -((3-аминопропил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоата;
    (16R,20R)-1,16-диамино-15-оксо-4,7,10-триокса-18-тиа-14-азагеникозан-20,21-диилдидодеканоата;
    (2R)-3-(((2R)-2-амино-3-((5-(диэтиламино)пентан-2-ил)амино)-3-оксопропил)тио)пропан-1,2-диилдидодеканоата;
    3-(Ш)-2-амино-3-((Ш)-2,3-бис(додеканоилокси)пропил)тио)пропанамидо)пропан-1-сульфоновой кислоты;
    (15S,18R,22R)-18-амино-22-(додеканоилокси)-15-(гидроксиметил)-14,17,25-триоксо-4,7,10,24тетраокса-20-тиа-13,16-диазадотриаконтан-1 -оновой кислоты;
    (15S,18R,22R)-22-(додеканоилокси)-15-(гидроксиметил)-14,17,25-триоксо-18-пальмитамидо4,7,10,24-тетраокса-20-тиа-13,16-диазадотриаконтан-1 -оновой кислоты;
    (4R,7S,10R,14R)-4-карбамоил-7-этил-6,9,17-триоксо-10-пальмитамидо-14-(пальмитоилокси)-16окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1 -оновой кислоты;
    (4R,7S,10R,14R)-10-амино-4-карбамол-7-этил-6,9,17-триоксо-14-(пальмитоилокси)-16-окса-12-тиа5,8-диазадотриаконтан-1-оновой кислоты и (4R,7S,10R,14R)-4-карбамоил-14-(додеканоилокси)-7-метил-6,9,17-триоксо-10-пальмитамидо-16окса-12-тиа-5,8-диазадотриаконтан-1-оновой кислоты.
  19. 19. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью агонистов Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), содержащая терапевтически эффективное количество соединения по одному из пп.1-18 и фармацевтически приемлемый носитель.
  20. 20. Применение соединения по одному из пп.1-18 для приготовления лекарственного средства для
    - 129 031379 лечения заболевания, опосредованного модуляцией Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), где заболевание выбирают из инфекционного заболевания, воспалительного заболевания, респираторного заболевания, дерматологического заболевания и аутоиммунного заболевания.
  21. 21. Применение по п.20, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.
  22. 22. Способ лечения заболевания, опосредованного модуляцией Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), заключающийся в том, что вводят пациенту, нуждающемуся в таком лечении, в эффективном количестве соединение по одному из пп.1-18, где соединение формулы (I) представляет собой агонист рецептора TLR2 и заболевание выбирают из инфекционного заболевания, воспалительного заболевания, респираторного заболевания, дерматологического заболевания и аутоиммунного заболевания.
  23. 23. Способ по п.22, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.
  24. 24. Применение соединения по одному из пп.1-18 для лечения заболевания, ассоциированного с активностью Толл-подобного рецептора 2 (TLR2), где заболевание представляет собой инфекционное заболевание, воспалительное заболевание, респираторное заболевание, дерматологическое заболевание или аутоиммунное заболевание.
  25. 25. Применение по п.24, в котором заболевание представляет собой астму, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, бронхит, дерматит, старческий кератоз, аллергический ринит, псориаз, склеродерму, крапивницу, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, рак, ВИЧ-инфекцию или обыкновенную волчанку.
    4^j)
EA201501033A 2010-03-23 2011-03-23 Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний EA031379B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31655110P 2010-03-23 2010-03-23

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201501033A1 EA201501033A1 (ru) 2016-06-30
EA031379B1 true EA031379B1 (ru) 2018-12-28

Family

ID=43982260

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201201321A EA023725B1 (ru) 2010-03-23 2011-03-23 Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний
EA201501033A EA031379B1 (ru) 2010-03-23 2011-03-23 Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201201321A EA023725B1 (ru) 2010-03-23 2011-03-23 Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний

Country Status (10)

Country Link
US (2) US8808703B2 (ru)
EP (1) EP2549990A1 (ru)
JP (1) JP5848748B2 (ru)
KR (1) KR101853513B1 (ru)
CN (1) CN102905703B (ru)
AU (1) AU2011232421B2 (ru)
CA (1) CA2792938C (ru)
EA (2) EA023725B1 (ru)
MX (1) MX341395B (ru)
WO (1) WO2011119759A1 (ru)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2012002723A (es) 2009-09-02 2012-04-11 Novartis Ag Composiciones inmunogenicas que incluyen moduladores de la actividad de receptores tipo toll.
ES2458355T3 (es) 2010-09-01 2014-05-05 Novartis Ag Adsorción de inmunopotenciadores sobre sales metálicas insolubles
US9676819B2 (en) 2010-09-22 2017-06-13 Innavac Pty Ltd Immunostimulatory method
RU2013144207A (ru) 2011-03-02 2015-04-10 Новартис Аг Комбинированные вакцины с пониженными дозами антигена и/или адъюванта
EP2502631A1 (en) * 2011-03-22 2012-09-26 Medizinische Hochschule Hannover Immune suppressor and its use
EP2763695A1 (en) 2011-09-01 2014-08-13 Novartis AG Adjuvanted formulations of staphylococcus aureus antigens
NL2007536C2 (en) * 2011-10-05 2013-04-08 Academisch Ziekenhuis Leiden Lumc Adjuvant compound.
WO2013131983A1 (en) 2012-03-07 2013-09-12 Novartis Ag Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens
WO2013131984A1 (en) 2012-03-07 2013-09-12 Novartis Ag Adjuvanted formulations of rabies virus immunogens
RU2014140521A (ru) 2012-03-08 2016-04-27 Новартис Аг Адъювантные составы бустерных вакцин
US8782263B1 (en) * 2012-04-20 2014-07-15 Disney Enterprises, Inc. Authenticated session controller
CN103570809B (zh) * 2012-07-20 2015-06-24 华东师范大学 一种抗炎症的脂肽及其制备方法和应用
CA2882619A1 (en) 2012-09-06 2014-03-13 Novartis Ag Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p
US9676818B2 (en) 2013-01-17 2017-06-13 University Of Kansas Toll-like receptor 2-agonistic lipopeptides, and method of making the same
TR201807340T4 (tr) 2013-02-01 2018-06-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Çan benzeri reseptör agonistleri içeren immünolojik kompozisyonların intradermal yoldan verilmesi.
JP2016521282A (ja) 2013-05-10 2016-07-21 ノバルティス アーゲー インフルエンザワクチンにおけるナルコレプシーのリスクの回避
CN104338129B (zh) * 2013-07-26 2017-05-24 中国科学院上海巴斯德研究所 雷帕霉素作为疫苗佐剂的用途及制备方法
WO2015065168A1 (en) * 2013-10-28 2015-05-07 Universiti Malaya Oligo-ethylene glycol based phosphonate surface modification reagents and use thereof
US9902690B2 (en) 2013-12-27 2018-02-27 Novus International, Inc. Ethoxylated surfactants
BR112018077397A2 (pt) 2016-06-29 2019-10-01 Univ Texas diprovocims: uma classe de agonistas de tlr
US20200147028A1 (en) * 2017-03-31 2020-05-14 Ena Therapeutics Pty Ltd Treatment of respiratory infection with a tlr2 agonist
US10584306B2 (en) 2017-08-11 2020-03-10 Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Surfactant microemulsions
KR20200101428A (ko) * 2017-12-21 2020-08-27 에나 테라퓨틱스 피티와이 엘티디 최적화된 화합물
RU2703264C1 (ru) * 2018-05-30 2019-10-16 Татьяна Борисовна Корженевская Способ лечения катаральных осложнений верхних дыхательных путей при острых респираторных вирусных инфекциях у детей
US20230132397A9 (en) * 2018-07-27 2023-04-27 Children's Medical Center Corporation Use of toll-like receptor 2 (tlr-2) agonist for modulating human immune response
CN109758467B (zh) * 2019-03-08 2020-12-25 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种吉西他滨在制备预防口蹄疫病毒感染的药物中的应用
CA3142501A1 (en) * 2019-06-26 2020-12-30 Axelia Oncology Pty Ltd Novel molecules
CN110742880A (zh) * 2019-10-24 2020-02-04 上海长海医院 Cl419在制备治疗炎性肠病药物中的用途
AU2020407871A1 (en) 2019-12-20 2022-06-30 Nammi Therapeutics, Inc. Formulated and/or co-formulated liposome compositions containing toll-like receptor ("TLR") agonist prodrugs useful in the treatment of cancer and methods thereof
US20230158063A1 (en) * 2020-04-06 2023-05-25 The Trustees Of Indiana University Airway epithelial alkaline therapy to treat viral respiratory infection
JP2023531387A (ja) * 2020-06-26 2023-07-24 イーナ レスパラトリー ピーティーワイ リミテッド 分岐脂質化合物
WO2023141470A2 (en) * 2022-01-19 2023-07-27 President And Fellows Of Harvard College Immunomodulatory lipids and uses thereof
WO2023229891A1 (en) * 2022-05-25 2023-11-30 Ayuvis Research, Inc. Novel immunodulating small molecules

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0114787A2 (de) * 1983-01-25 1984-08-01 Ciba-Geigy Ag Neue Peptidderivate
EP0548024A2 (de) * 1991-12-19 1993-06-23 Ciba-Geigy Ag Aminosulfonsäurederivate und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP0604957A1 (en) * 1992-12-28 1994-07-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. 2-Amino-6,7-dihydroxy-4-thiaheptanoic acid derivatives, production and use thereof
US20050214359A1 (en) * 2002-11-20 2005-09-29 Crucell Holland B.V. Compositions comprising antigen-complexes, method of making same as well as methods of using the antigen-complexes for vaccination
WO2007063421A2 (en) * 2005-12-01 2007-06-07 The Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin Compositions and methods relating to treatment of cancer and infectious diseases
EP2050455A1 (en) * 2007-10-18 2009-04-22 DC Gesellschaft für dentritic-cell-Therapie mbH Compounds leading to an increase of the IL-12/IL-10 ratio and their use for therapy of infectious and proliferative diseases
WO2009108762A2 (en) * 2008-02-26 2009-09-03 The Penn State Research Foundation Methods and compositions for treatment of retinoid-responsive conditions

Family Cites Families (92)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2848965A1 (de) 1978-11-11 1980-05-22 Behringwerke Ag Verfahren zur herstellung von membranproteinen aus neisseria meningitidis und diese enthaltende vaccine
DE3937412A1 (de) * 1989-11-10 1991-05-16 Hoechst Ag Synthetische vakzine zur spezifischen induktion zytotoxischer t-lymphozyten
DE3546150A1 (de) * 1985-06-24 1987-01-22 Hoechst Ag Membrananker-wirkstoffkonjugat, seine herstellung sowie seine verwendung
DE3813821A1 (de) * 1988-04-22 1989-11-02 Hoechst Ag Synthetische vakzine gegen die maul- und klauenseuche und verfahren zu deren herstellung
DE4116256C2 (de) * 1991-05-17 1996-08-29 Max Planck Gesellschaft Bestimmung von Peptidmotiven auf MHC-Molekülen
EP0547681A2 (en) * 1991-12-18 1993-06-23 Merck & Co. Inc. Synthetic peptides comprising a cyclic HIV principal neutralizing determinant and a lipopeptide
JPH07145084A (ja) * 1992-12-28 1995-06-06 Takeda Chem Ind Ltd Ｔａｎ−１５１１関連化合物
EP0604945A1 (en) 1992-12-28 1994-07-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. TAN-1511, its derivatives, production and use thereof
JPH07126243A (ja) * 1993-09-10 1995-05-16 Takeda Chem Ind Ltd チオグリセロール誘導体
IL117483A (en) 1995-03-17 2008-03-20 Bernard Brodeur MENINGITIDIS NEISSERIA shell protein is resistant to proteinase K.
US6180111B1 (en) 1995-05-18 2001-01-30 University Of Maryland Vaccine delivery system
WO1997037026A1 (en) 1996-04-02 1997-10-09 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
EP0914330A4 (en) 1996-05-14 2002-01-09 Smithkline Beecham Corp NEW TYPE COMPOUNDS
EP1770164B1 (en) 1996-10-31 2010-09-01 Human Genome Sciences, Inc. Streptococcus pneumoniae antigens and vaccines
GB9711964D0 (en) 1997-06-09 1997-08-06 Medical Res Council Live attenuated vaccines
US6800744B1 (en) 1997-07-02 2004-10-05 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics
WO1999010497A1 (en) 1997-08-21 1999-03-04 De Staat Der Nederlanden, Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur Novel mutants of gram negative mucosal bacteria and application thereof in vaccines
BR9813930A (pt) 1997-11-06 2006-12-19 Chiron Spa antìgeno neisserial
AU1537699A (en) 1997-11-26 1999-06-15 Bioresearch Ireland a division of Eolas - The Irish Science and Technology Agency Extracellular matrix-binding proteins from (staphylococcus aureus)
EP1047784B2 (en) 1998-01-14 2015-03-18 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Neissera meningitidis antigens
CA2328399A1 (en) 1998-04-23 1999-10-28 University Of Alabama At Birmingham Pneumococcal surface protein c(pspc), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor
NZ532665A (en) 1998-05-01 2005-11-25 Inst Genomic Research Neisseria meningitidis antigens and compositions
GB9810193D0 (en) 1998-05-12 1998-07-08 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
JP2002531055A (ja) 1998-07-27 2002-09-24 マイクロビアル テクニクス リミティッド 肺炎連鎖球菌のタンパク質及び核酸分子
WO2000006738A2 (en) 1998-07-27 2000-02-10 Microbial Technics Limited NUCLEIC ACIDS AND PROTEINS FROM $i(STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE)
AU772547B2 (en) 1998-08-31 2004-04-29 Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth Near Dublin, The Polypeptides and polynucleotides from coagulase-negative staphylococci
AU771426B2 (en) 1998-08-31 2004-03-18 Inhibitex, Inc. Multicomponent vaccines
MXPA01003557A (es) 1998-10-09 2004-04-05 Chiron Corp Secuencias genomicas de neisseria y metodos para su uso.
GB9823978D0 (en) 1998-11-02 1998-12-30 Microbiological Res Authority Multicomponent meningococcal vaccine
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
ES2322306T3 (es) 1998-12-21 2009-06-18 Medimmune, Inc. Proteinas de streptpcpccus pneumoniae y fragmentos inmunogenicos para vacunas.
CN1198932C (zh) 1999-03-26 2005-04-27 科特克斯(Om)有限公司 肺炎链球菌抗原
EP1185297B1 (en) 1999-06-10 2006-05-10 MedImmune, Inc. Streptococcus pneumoniae proteins and vaccines
EP1075841A1 (en) 1999-08-13 2001-02-14 Erasmus Universiteit Rotterdam Pneumococcal vaccines
WO2001034642A2 (en) 1999-11-12 2001-05-17 University Of Iowa Research Foundation Control of neisserial membrane synthesis
EP2275129A3 (en) 2000-01-17 2013-11-06 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Outer membrane vesicle (OMV) vaccine comprising N. meningitidis serogroup B outer membrane proteins
WO2001064920A2 (en) 2000-02-28 2001-09-07 Chiron Spa Hybrid expression of neisserial proteins
EP1268774A2 (en) 2000-03-21 2003-01-02 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in prokaryotes
JP2003530872A (ja) 2000-04-27 2003-10-21 メディミューン，インコーポレイテッド 免疫原肺炎連鎖球菌タンパク質とそのワクチン組成物
NO20002828D0 (no) 2000-06-02 2000-06-02 Statens Inst For Folkehelse Proteinholdig vaksine mot Neisseria meningtidis serogruppe samt fremgangsmÕte ved fremstilling derav
US6495079B1 (en) 2000-06-28 2002-12-17 Prisma Fibers, Inc. Process to prepare polymeric fibers with improved color and appearance
DE60139690D1 (de) 2000-07-03 2009-10-08 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunisierung gegen chlamydia pneumoniae
US20040091495A1 (en) 2000-07-20 2004-05-13 Lars Bjorck Protein
JP5511117B2 (ja) 2000-07-27 2014-06-04 チルドレンズ ホスピタル アンド リサーチ センター アット オークランド 髄膜炎菌に起因する疾患に対する広域防御のためのワクチン
GB0103170D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
AU8743001A (en) 2000-08-28 2002-03-13 Aventis Pasteur Moraxella polypeptides and corresponding dna fragments and uses thereof
GB0022742D0 (en) 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CA2426738A1 (en) 2000-10-26 2002-05-02 David William Holden Streptococcal genes
SG165981A1 (en) 2000-10-27 2010-11-29 Chiron Srl Nucleic acids and proteins from streptococcus groups a & b
AT410798B (de) 2001-01-26 2003-07-25 Cistem Biotechnologies Gmbh Verfahren zur identifizierung, isolierung und herstellung von antigenen gegen ein spezifisches pathogen
GB0103171D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
GB0103424D0 (en) 2001-02-12 2001-03-28 Chiron Spa Gonococcus proteins
AU2002306849A1 (en) 2001-03-21 2002-10-08 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in microorganisms
GB0107661D0 (en) 2001-03-27 2001-05-16 Chiron Spa Staphylococcus aureus
GB0108079D0 (en) 2001-03-30 2001-05-23 Microbial Technics Ltd Protein
ATE557041T1 (de) 2001-05-18 2012-05-15 Us Gov Health & Human Serv Peptid-vakzinen gegen streptokokken der gruppe a
US6841154B2 (en) 2001-06-15 2005-01-11 Inhibitex, Inc. Cross-reactive monoclonal and polyclonal antibodies which recognize surface proteins from coagulase-negative staphylococci and Staphylococcus aureus
GB0121591D0 (en) 2001-09-06 2001-10-24 Chiron Spa Hybrid and tandem expression of neisserial proteins
CA2453937C (en) 2001-08-02 2013-05-14 University Of Sheffield Antigenic polypeptides
EP2335723A1 (en) 2001-12-12 2011-06-22 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Immunisation against chlamydia trachomatis
GB0203403D0 (en) 2002-02-13 2002-04-03 Chiron Spa Chlamydia cytotoxic-T cell epitopes
EP2275123B1 (en) 2002-04-02 2012-12-05 Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Protein-based streptococcus pneumoniae vaccines
GB0210128D0 (en) 2002-05-02 2002-06-12 Chiron Spa Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B
DK1511768T3 (da) 2002-06-11 2007-08-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogene sammensætninger
GB0213622D0 (en) 2002-06-13 2002-07-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine Corporation
EP1382352A1 (de) * 2002-07-19 2004-01-21 GBF Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH Bisacyloxypropylcystein-Konjugate und deren Verwendung
CA2493124C (en) 2002-08-02 2014-04-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
KR101151368B1 (ko) 2002-08-12 2012-06-08 더 카운실 오브 더 퀸스랜드 인스티튜트 오브 메디칼 리서어치 Ｔ-헬퍼 및 세포독성 ｔ 림프구(ｃｔｌ) 에피토프를포함하는 신규한 면역원성 리포펩타이드
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
PT1551357E (pt) 2002-09-13 2014-10-10 Novartis Vaccines & Diagnostic Vacina contra os estreptococos do grupo b
ATE492288T1 (de) 2002-10-11 2011-01-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Polypeptidimpstoffe zum breiten schutz gegen hypervirulente meningokokken-linien
EP1578443B1 (en) * 2002-11-20 2011-01-12 Bestewil Holding B.V. Compositions comprising antigen-complexes, method for making same as well as methods of using the antigen-complexes for vaccination
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
CA2522379C (en) 2003-04-10 2012-10-23 Chiron Corporation The severe acute respiratory syndrome coronavirus
EP2298934A1 (en) 2003-04-15 2011-03-23 Intercell AG S. pneumoniae antigens
AR056245A1 (es) 2003-06-19 2007-10-03 Bestewil Holding Bv Membranas virales reconstituidas funcionales que contienen un coadyuvante
BRPI0411857A (pt) 2003-06-26 2006-05-23 Chiron Corp composições imunogênicas para chlamydia trachomatis
GB0316560D0 (en) 2003-07-15 2003-08-20 Chiron Srl Vesicle filtration
US7709009B2 (en) 2003-07-31 2010-05-04 Novartis Vaccines And Diagnostics, Srl Immunogenic compositions for streptococcus pyogenes
JP2007528217A (ja) 2004-02-18 2007-10-11 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド スタヒロコッカス・アウレウスに対する防御免疫応答を誘導するためのポリペプチド
GB0419627D0 (en) 2004-09-03 2004-10-06 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
EP1793849A2 (en) 2004-09-22 2007-06-13 GlaxoSmithKline Biologicals SA Immunogenic composition for use in vaccination against staphylococcei
JP4993750B2 (ja) 2005-01-27 2012-08-08 チルドレンズ ホスピタル アンド リサーチ センター アット オークランド 髄膜炎菌に起因する疾患に対する広域防御のための、ｇｎａ１８７０を基にした小胞ワクチン
US7560436B2 (en) 2005-02-22 2009-07-14 The Regents Of The University Of California Methods of treating gastrointestinal inflammation
US7442511B2 (en) 2005-12-27 2008-10-28 Obetech, Llc Adipogenic adenoviruses as a biomarker for disease
WO2007079448A2 (en) 2006-01-03 2007-07-12 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Three component carbohydrate vaccine
EP2368570A3 (en) 2006-01-18 2012-05-02 University Of Chicago Compositions and methods related to staphylococcal bacterium proteins
CN101484464A (zh) 2006-02-17 2009-07-15 诺华有限公司 纯化细菌抗原
AR060188A1 (es) 2006-03-30 2008-05-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Procedimiento de conjugacion
MX337528B (es) 2006-03-30 2016-03-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Composición inmunogénica que comprende un sacárido capsular estafilocócico o-acetilado y una proteína estafilocócica.
GB0907989D0 (en) 2009-05-08 2009-06-24 Hybrid Systems Ltd Multivalent adjuvant display
ES2458355T3 (es) * 2010-09-01 2014-05-05 Novartis Ag Adsorción de inmunopotenciadores sobre sales metálicas insolubles

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0114787A2 (de) * 1983-01-25 1984-08-01 Ciba-Geigy Ag Neue Peptidderivate
EP0548024A2 (de) * 1991-12-19 1993-06-23 Ciba-Geigy Ag Aminosulfonsäurederivate und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP0604957A1 (en) * 1992-12-28 1994-07-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. 2-Amino-6,7-dihydroxy-4-thiaheptanoic acid derivatives, production and use thereof
US20050214359A1 (en) * 2002-11-20 2005-09-29 Crucell Holland B.V. Compositions comprising antigen-complexes, method of making same as well as methods of using the antigen-complexes for vaccination
WO2007063421A2 (en) * 2005-12-01 2007-06-07 The Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin Compositions and methods relating to treatment of cancer and infectious diseases
EP2050455A1 (en) * 2007-10-18 2009-04-22 DC Gesellschaft für dentritic-cell-Therapie mbH Compounds leading to an increase of the IL-12/IL-10 ratio and their use for therapy of infectious and proliferative diseases
WO2009108762A2 (en) * 2008-02-26 2009-09-03 The Penn State Research Foundation Methods and compositions for treatment of retinoid-responsive conditions

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MI SUN JIN, SUNG EUN KIM, JIN YOUNG HEO1, MI EUN LEE, HO MIN KIM, SANG-GI PAIK, HAYYOUNG LEE AND JIE-OH LEE: "Crystal structure of the TLR1-TLR2 heterodimer induced by binding of a tri-acylated lipopeptide", CELL, CELL PRESS, AMSTERDAM, NL, vol. 130, no. 6, 21 September 2007 (2007-09-21), AMSTERDAM, NL, pages 1071 - 1082, XP002641163, ISSN: 0092-8674, DOI: 10.1016/j.cell.2007.09.008 *

Also Published As

Publication number Publication date
KR20130012068A (ko) 2013-01-31
US20130065861A1 (en) 2013-03-14
JP5848748B2 (ja) 2016-01-27
KR101853513B1 (ko) 2018-04-30
CN102905703A (zh) 2013-01-30
US9365506B2 (en) 2016-06-14
WO2011119759A1 (en) 2011-09-29
MX341395B (es) 2016-08-18
EA023725B1 (ru) 2016-07-29
JP2013527142A (ja) 2013-06-27
US8808703B2 (en) 2014-08-19
MX2012010968A (es) 2012-11-23
EA201501033A1 (ru) 2016-06-30
EA201201321A1 (ru) 2013-04-30
CA2792938C (en) 2018-07-31
AU2011232421B2 (en) 2015-08-13
US20140323390A1 (en) 2014-10-30
CA2792938A1 (en) 2011-09-29
CN102905703B (zh) 2016-09-28
AU2011232421A1 (en) 2012-10-25
EP2549990A1 (en) 2013-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA031379B1 (ru) Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний
ES2443952T3 (es) Composiciones inmunógenas que incluyen moduladores de la actividad de TLR
TWI445708B (zh) 作為ｔｌｒ活性調節劑之化合物及組合物
CN102015651B (zh) 作为tlr活性调节剂的化合物和组合物
WO2011057148A1 (en) Compounds and compositions as tlr-7 activity modulators

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU