RU2000112926A

RU2000112926A - Способ конструирования бактериальных штаммов, продуцирующих аминокислоты, и способ получения аминокислот путем ферментации с использованием сконструированных бактериальных штаммов, продуцирующих аминокислоты

Info

Publication number: RU2000112926A
Application number: RU2000112926/13A
Authority: RU
Inventors: Йоко АСАКУРА; Дзун НАКАМАРА; Сохеи КАННО; Микико СУГА; Эйитиро КИМУРА; Хисао ИТО; Казухико МАЦУИ; Цуйоси НАКАМАЦУ; Осаму КУРАХАСИ; Цуйоси ОХСУМИ
Original assignee: Адзиномото Ко., Инк.
Priority date: 1998-09-25
Filing date: 1999-09-22
Publication date: 2002-04-27

Claims

1. Способ продуцирования коринеформных бактерий, обладающих повышенной продуктивностью аминокислот или нуклеиновых кислот, включающий в себя стадии введения мутации в промоторную последовательность генов биосинтеза аминокислот или нуклеиновых кислот на хромосоме коринеформной бактерии в целях генерирования последовательности, подобной консенсусной последовательности, или введения замены в промоторную последовательность генов биосинтеза аминокислот или нуклеиновых кислот на хромосоме коринеформной бактерии по средством рекомбинации генов в целях создания последовательности, подобной консенсусной последовательности, с получением мутанта коринеформного микроорганизма, продуцирующего аминокислоты и нуклеиновые кислоты; культивирования этого мутанта; и отбора мутанта, способного продуцировать нужную аминокислоту или нуклеиновую кислоту в больших количествах.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанную аминокислоту выбирают из группы, состоящей из глутаминовой кислоты, лизина, аргинина, серина, фенилаланина, пролина и глутамина, а нуклеиновую кислоту выбирают из группы, состоящей из инозина, гуанозина, аденозина и нуклеотида.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанной аминокислотой является глутаминовая кислота, а промотор для гена биосинтеза выбирают из группы, состоящей из промотора гена глутамат-дегидрогеназы (GDH), промотора гена цитрат-синтазы (CS), промотора гена изо-цитрат-синтазы (ICDH), промотора гена пируват-дегидрогеназы (PDH) и промотора гена аконитазы (АСО).

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный промотор гена глутамат-дегидрогеназы (GDH) имеет ДНК-последовательность, выбранную из группы, состоящей из (i) по крайней мере, одной ДНК-последовательности, выбранной из группы, состоящей из CGGTCA, TTGTCA, TTGACA и TTGCCA в области -35, (ii) последовательности ТАТААТ или той же самой последовательности ТАТААТ, но в которой основание АТААТ заменено другим основанием, в области -10, и (iii) комбинации (i) и (ii), где указанная последовательность не ингибирует функцию промотора.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что указанный промотор для GDH имеет TGGTCA в области -35, и ТАТААТ в области -10, или TTGTCA в области -35 и ТАТААТ в области -10.

6. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный промотор для CS имеет (i) последовательность TTGACA в области -35, (ii) последовательность ТАТААТ в области -10, или (iii) последовательность комбинации (i) и (ii), где указанная последовательность не ингибирует функцию промотора.

7. Способ по п. 3, отличающийся тем, что, по крайней мере, один из первого и второго промоторов для ICDH имеет (i) последовательность TTGCCA или TTGACA в области -35, (ii) последовательность ТАТААТ в области -10, или (iii) последовательность комбинации (i) и (ii), где указанная последовательность не ингибирует функцию промотора.

8. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный промотор для PDH имеет (i) последовательность TTGCCA в области -35, (ii) последовательность ТАТААТ в области -10, или (iii) последовательность комбинации (i) и (ii), где указанная последовательность не ингибирует функцию промотора.

9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанной аминокислотой является аргинин, а промотором для гена биосинтеза является промотор для аргининосукцинат-синтазы.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что указанный промотор для аргининосукцинат-синтазы имеет ДНК-последовательность, выбранную из группы, состоящей из (i) по крайней мере, одной ДНК-последовательности, выбранной из группы, состоящей из TTGCCA, TTGCTA и TTGTCA в области -35, (ii) последовательности ТАТААТ или ТАТААТ, но в которой основание АТААС заменено другим основанием, в области -10, и (iii) комбинации (i) и (ii), где указанная последовательность не ингибирует функцию промотора.

11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что промотор для аргининосукцинат-синтазы имеет ДНК-последовательность, выбранную из группы, состоящей из (i) TTGTCA в области -35, (ii) последовательности ТАТААТ в области -10, и (iii) комбинации (i) и (ii).

12. Ген синтеза глутаминовой кислоты, имеющий промотор по любому из пп. 4-8.

13. Ген аргинин-синтетазы, имеющий промотор по п. 10.

14. Коринеформная бактерия, продуцирующая глутаминовую кислоту, имеющая ген глутамат-синтетазы по п. 12.

15. Коринеформная бактерия, продуцирующая аргинин, имеющая ген аргинин-синтетазы по п. 13.

16. Способ продуцирования аминокислоты или нуклеиновой кислоты путем ферментации, включающий в себя стадии культивирования коринеформной бактерии, сконструированной способом по любому из пп. 1-11 и имеющей повышенную продуктивность аминокислоты или нуклеиновой кислоты, либо коринеформной бактерии по п. 14 или 15 в культуральной среде с образованием и накоплением нужной аминокислоты или нуклеиновой кислоты в этой культуральной среде; и сбора этой аминокислоты или нуклеиновой кислоты из этой культуральнои среды.

17. Способ продуцирования L-глутаминовой кислоты путем ферментации, включающий в себя стадии культивирования коринеформной бактерии, продуцирующей L-глутаминовую кислоту и резистентной к 4-фторглутаминовой кислоте, присутствующей в жидкой культуральной среде, с получением и накоплением L-глутаминовой кислоты в этой культуральной среде; и ее сбора из этой культуральной среды.