PT635498E

PT635498E - Derivados de quinazolina e sua utilizacao como agentes anticancerosos

Info

Publication number: PT635498E
Application number: PT94305195T
Authority: PT
Inventors: Andrew John Barker
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1993-07-19
Filing date: 1994-07-15
Publication date: 2001-08-30
Also published as: US5475001A; IL110164A; EP0635498B1; GB9414341D0; IL110164A0; AU7191694A; ATE200667T1; ZA945156B; DE69427104D1; ES2156137T3; TW270117B; EP0635498A1; WO1995003283A1; DK0635498T3; JP3545763B2; JPH09500636A; GB9314893D0; GR3035890T3; DE69427104T2

Description

DESCRIÇÃO "DERIVADOS DE QUINAZOLINA E SUA UTILIZAÇÃO COMO AGENTES ANTI- CANCEROSOS" A presente invenção refere-se a derivados de quinazolina ou aos seus sais farmaceuticamente aceitáveis que possuem actividade anticancerosa e são assim úteis em métodos de tratamento do cancro no corpo humano ou animal. A presente invenção refere-se também a processos para a preparação dos ditos derivados de quinazolina, aos compostos farmacêuticos que os contêm e à sua aplicação na preparação de medicamentos de uso na produção de um efeito anticanceroso num animal de sangue quente, tal como o homem.

Muitos dos actuais regimes de tratamento para o cancro recorrem a compostos que inibem a síntese do ADN. Esses compostos são geralmente tóxicos para as células em geral mas o seu efeito tóxico nas células de tumores que se dividem rapidamente pode ser benéfico. As abordagens alternativas aos agentes anticancerosos que actuam através de mecanismos diferentes da inibição da síntese de ADN podem potencialmente apresentar uma selectividade de acção superior contra as células cancerosas.

Recentemente descobriu-se que uma célula pode tornar-se cancerosa em virtude da transformação de uma porção do seu ADN num oncogene, isto é, num gene que, ao ser activado, leva à formação de células de tumor malignas (Bradshaw, Mutagenesis, 1986, 1, 91). Vários destes oncogenes dão origem à produção de peptídeos que são receptores de factores de crescimento. 0 complexo do receplor de factor de crescimento subsequentemente leva a um aumento da proliferação celular. Sabe-se, por exemplo, que vários oncogenes codificam para enzimas de quinase de tirosina e que determinados receptores do factor de crescimento são também enzimas de quinase de tirosina (Yarden 1 <r U íl ^ t et al., Ann. Rev. Biochem., 1988, 57, 443; Larse et al., Ann. Reports in Med. Chem. 1989, cap. 13).

As quinases de tirosina receptoras são importantes na transmissão de sinais bioquímicos que iniciam a replicação das células. São enzimas grandes que atravessam a membrana da célula e possuem vim dominio de ligação extracelular para factores de crescimento tais como o factor de crescimento epidérmico e uma porção intracelular que funciona como uma quinase para fosforilar ácidos aminados de tirosina em proteínas e em consequência influenciar a proliferação celular. Sabe-se que estas quinases estão frequentemente presentes nos cancros humanos comuns, tais como o cancro da mama (Sainsbury et al., Brit. J. Câncer, 1988, 58, 458; Guerin et al., Oncogene Res. 1988, 3, 21), cancros gastrointestinais tais como o cancro do cólon, do recto ou do estômago (Bolen et al., Oncogene Res., 1987, 1, 149, leucemia (Konaka et al., Cell, 1984, 37_, 1035) e o cancro dos ovários, dos brônquios ou do pâncreas (Especificação de Patente Europeia n.° 0400586). À medida que se vão testando mais tecidos cancerosos humanos quanto à actividade da quinase de tirosina receptora, prevê-se que a sua ampla prevalência seja estabelecida em mais cancros, tais como o da tiróide ou do útero. Sabe-se também que a actividade da quinase de tirosina é raramente detectada em células normais enquanto que é frequentemente detectada em células malignas (Hunter, Cell, 1987, 50, 823). Mais recentemente provou-se (W J Gullick, Brit. Med. Buli., 1991, 41_, 87) que o receptor do factor de crescimento da epiderme, que possui a actividade da quinase de tirosina, é superexpresso em muitos dos cancros humanos, tal como tumores do encéfalo, das células escamosas do pulmão, da bexiga, do estômago, da mama, da cabeça e do pescoço, do esófago, ginecológicos e da tiróide.

Em conformidade, reconheceu-se que um inibidor da quinase de tirosina receptora seria valioso como inibidor selectivo do crescimento de células cancerosas em mamíferos (Yaish et al.,

Science, 1988, 242, 933) . Esta perspectiva é sustentada pela 2 í|— L-C. ---- li ' demonstração que a erbstatina, um inibidor da quinase de tirosina receptora, atenua especificamente o crescimento em ratos nus atímicos de um carcinoma da mama humano transplantado que expressa a quinase de tirosina receptora factor de crescimento epidérmico (FCE) mas que não afecta o crescimento de outro carcinoma que não expressa a quinase de tirosina receptora FCE (Toi et al.f Eur. J. Câncer Clin. Oncol , 1990, 26, 722.) Vários derivados do estireno são também apontados como possuidores de propriedades inibidoras da quinase de tirosina (Pedidos de Patente Europeia n.os 0211363, 0304493 e 0322738) e como sendo úteis como agentes antitumor. O efeito inibidor in vivo de dois destes derivados do estireno foi demonstrado contra o crescimento do carcinoma das células escamosas humano, inoculado em ratos nus (Yoneda et al., Câncer Research, 1991, 5^, 4430) . Em conformidade, foi indicado que os inibidores de quinase de tirosina receptora deverão ser úteis no tratamento de uma variedade de cancros humanos. Vários inibidores da quinase de tirosina conhecidos são apresentados numa publicação mais recente por T R Burke Jr. (Drugs of the Future, 1992, 1/7, 119) .

Os requerentes constataram agora que certos derivados de quinazolina possuem propriedades anticancerosas que se crê terem origem nas suas propriedades inibidoras da quinase de tirosina receptora.

Sabe-se do Pedido de Patente WO 92/20642 que determinados compostos de arilo e heteroarilo inibem a quinase de tirosina receptora. Nesta publicação são dados a conhecer determinados derivados de quinazolina mas não se faz qualquer menção a derivados de 4-anilinoquinazolina.

Sabe-se também do Pedido de Patente Europeia n.° 92305703.8 (publicação n.° 0 520 722) que determinados derivados de 4-anilinoquinazolinas, que não são substituídos nas posições 5 a 8 do anel de quinazolina ou que possuem um substituinte halogénio, trifluorometilo ou nitro numa dessas 3 1 .

V Γ posições, são úteis como inibidores da quinase de tirosina receptora. Nes3a publicação não se fala de derivados de 4-anilinoquinazolinas que possuam substituintes amina, alquilamina, acilamina ou alcoxilo em qualquer das posições 5 a 8.

Os requerentes constataram agora que determinados derivados de 4-anilinoquinazolinas com um substituinte halogénio na posição 7 e também com um substituinte amina, alquilamina, acilamina ou alcoxilo na posição 6 são úteis como inibidores da quinase de tirosina receptora.

De acordo com a presente invenção, proporciona-se um derivado de quinazolina da fórmula I (apresentada mais adiante), em que R1 é hidroxilo, amina, hidroxiamina, trifluorometoxilo, (1-4C)alcoxilo, (1-4C)alquilamina, di--[(1-4C)alquil]amina, 1-aziridinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, morfolina, 1-piperazinilo, 4-(1-4C)alquil-l-piperazinilo, (1-4C)alquiltio, halogeno-- (2-4C)alcoxilo, hidroxi-(2-4C)alcoxilo, (1-4C)alcoxi-(2-4C)-alcoxilo, fenil-(1-4C)alcoxilo, halogeno-(2-4C)alquilamina, hidroxi-(2-4C)alquilamina, (1-4C)alcoxi-(2-4C)alquilamina, fenil-(1-4C)alquilamina, (2-4C)alcanoilamina, benzamida, 2-oxo--1-pirrolidinilo, 2-oxo-l-piperidinilo, halogeno-(2-4C)-alcanoilamina, hidroxi-(2-4C)alcanoilamina, (1-4C)alcoxi--(2-4C)alcanoilamina, (3-4C)alcenoilamina, (3-4C)alcinoilamina, N- (1-4C)alquil-(2-4C)alcanoilamina, N- (1-4C)alquilbenzamida, N- (1-4C)alquil-halogeno-(2-4C)alcanoilamina, N-(1-4C)alquil--hidroxi-(2-4C)alcanoilamina, N- (1-4C)alquil-(1-4C)alcoxi--(2-4C)alcanoilamina, N-(1-4C)alquil-(3-4C)alcenoilamina ou N-(1-4C)alquil-(3-4C)alquinoilamina e em que o referido substituinte benzamida ou N-(1-4C)alquilbenzamida ou qualquer grupo fenilo num substituinte R1 pode possuir opcionalmente um ou dois substituintes halogénio, (1-4C)alquilo ou (1—4C)— alcoxilo; R3 é halogénio e n é o número inteiro 1, 2 ou 3 e cada R2 é, 4 u ^ independentemente um do outro, hidrogénio, hidroxilo, halogénio, trifluorometilo, amina, nitro, ciano, (1-40 alquilo, (1-4C)alcoxilo ou (2-4C)alcanoilamina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

As fórmulas químicas a que se faz referência através de numerais romanos encontram se por conveniência numa Tolha em separado no fim da presente descrição. Nesta descrição, o termo "alquilo" inclui tanto grupos alquilo de cadeia linear como ramificada mas as referências a grupos alquilo individuais, tais como "propilo" são específicos apenas da versão de cadeia linear. Uma convenção análoga aplica-se a outros termos genéricos.

No âmbito da presente invenção deve-se pressupor que uma quinazolina da fórmula I pode apresentar o fenómeno de tautomerismo e que as representações das fórmulas no âmbito da presente especificação podem representar apenas uma das formas tautoméricas. Deve-se pressupor que a presente invenção abrange qualquer forma tautomérica com actividade anticancerosa e que não é limitada apenas a qualquer forma tautomérica específica utilizada entre as representações das fórmulas.

As quinazolinas da fórmula I não são substituídas nas posições 2, 5 e 8.

Deve-se também pressupor que determinadas quinazolinas da fórmula I podem existir sob forma solvatada bem como não solvatada, tais como por exemplo formas hidratadas. Deve-se pressupor que a presente invenção inclui todas estas formas solvatadas com actividade anticancerosa.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção, proporciona-se um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 é hidroxilo, amina, hidroxiamina, trifluorometoxilo, (1-40-alcoxilo, (1-4C)alquilamina, di-[(1-4C)alquil]amina, 1-azirídinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, 5 U, t morfolina, 1-piperazinilo, 4-(1-40alquil-l-piperazinilo, í1-40alquiltio, halogeno-(2-40alcoxilo, hidroxi-(2-40-alcoxilo, (1-4C)alcoxi-(2-4C)alcoxilo, fenil-(1-40alcoxilo, halogeno- (2-4C) alquilamina, hidroxi-(2-4C) alquilamina, (1-40 ~ alcoxi-(2-4C)alquilamina, fenil-(1-4C)alquilamina, (2—4 C) — alcanoilamina, benzamida, 2-oxo-l-pirrolidinilo, 2-oxo-l--piperidinilo, halogeno-(2-4C)alcanoilamina, hidroxi-(2-4C)-alcanoilamina ou (1-40alcoxi-(2-4C)alcanoilamina, e em que o dito substituinte benzamida ou qualquer grupo fenilo num substituinte R1 pode opcionalmente possuir um ou dois substituintes halogénio, (1-40 alquilo ou (1-40alcoxilo; R3 é halogénio e n é o número inteiro 1, 2 ou 3 e cada R2 é, independentemente uns dos outros, hidrogénio, halogénio, trifluorometilo, amina, nitro, ciano, (1-40 alquilo, (1 —4C) — alcoxilo ou (2-4C)alcanoilamina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Os valores adequados para os radicais genéricos mencionados anteriormente incluem os indicados em seguida.

Um valor adequado para R2 quando este é (1-40 alquilo é, por exemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, butilo secundário ou butilo terciário; quando aquele é (1-40alcoxilo é, por exemplo, metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo ou butoxilo e quando aquele é (1-40alcanoilamina é, por exemplo, acetamida, propionamida ou butiramida.

Os valores adequados para cada substituinte R1 que pode estar presente no anel quinazolina incluem, por exemplo:- para (1-40alcoxilo: para (1-40alquilamina; para di-[(1-4C)alquil]-amina: para (1-40alquiltio: metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo e butoxilo; metilamina, etilamina e propilamina; N-etil-N-metilamina e dipropilamina; metiltio, etiltio e propiltio; 6 Γ u para 4-(1-4C)alquil-1--piperazinilo: para halogeno-(2-40-alcoxilo: para hidroxi-(2-40 -alcoxilo: para (1-4C)alcoxl-(2-40-alcoxilo: para fenil-(1-4C)alcoxilo: para halogeno-(2-40 -alquilamina: para hidroxi-(2-4C)-alquilamina: para (1-4C)alcoxi-(2-4C)-alquilamina: para fenil-(1-40-alquilamina: para (2-4C)alcanoilamina: para halogeno-(2-40 -alcanoilamina: para hidroxi-(2-40 -alcanoilamina: para (1-4C)alcoxi-(2-40--alcanoilamina:- para (3-40alcenoilamína: para (3-4C)alcinoilamina: para N-(1-4C)alquil-- (2-4C)-alcanoilamina: 4-metil-l-piperazinilo e 4-etil--1-piperazinilo/ 2-fluoroetoxilo, 2-cloroetoxilo, 2-bromoetoxilo, 3-fluoro-propoxilo e 3-cloropropoxilo; 2- hidroxietoxilo, 3- hidroxipropoxilo e 4- hidroxibutoxilo; 2- metoxietoxiio, 2-etoxietoxiio, 3- metoxipropoxilo e 3-etoxipropoxilo; benziloxilo, 2-feniletoxilo e 3-fenilpropoxilo; 2-fluoroetilamina, 2-cloroetilamina, 2- bromoetilamina, 3- fluoropropilamina e 3-cloropropilamina; 2- hidroxietilamina, 3- hidroxipropilamina e 4- hidroxibutilamina; 2-metoxietilamina, 2- etoxietilamina, 3- metoxipropilamina e 3-etoxipropilamina; benzilamina, fenetilamina e 3-fenilpropilamina; acetamida, propionamida e butiramida; 2-cloroacetamida, 2- bromoacetamida, 3- cloropropionamida, 3-bromo--propionamida e 4- clorobutiramida; 2-hidroxiacetamida, 3-hidroxi--propionamida e 4-hidroxibutiramida; 2- metoxiacetamida, 2-etoxi--acetamida, 2-propoxiacetamida, 3- metoxipropionamida, 3- etoxipropionamida e 4- metoxibutiramida; acrilamida, metacrilamida, crotonamida e isocrotonamida/ propiolamida; N-metilacetamida, N-etilacetamida e N-me t ilprop i onami da; 7

para N-(1-4C)-alquilbenzamida: para N-(1-4C)alquil--halogeno-(2-4C)-alcanoilamina: para N-(1-4C)alquil--hidroxi-(2-4C)- N-metilbenzamida; alcanoilamina: para N- (1-40 alquil--(1-4C)alcoxi-(2-4C)-alcanoilamina: para N-(1-4C)alquil-- (3-4C)-alcenoilamina: para N-(1-4C)alquil-- (3-4C)-alquinoilamina: 2-cluiu-N-metilacetamida, 2- cloro-N-etilacetamida e 3- cloro-N-metilpropionamida; 2- hidroxi-N-metilacetamida, N-etil-2-hidroxiacetamida e 3- hidroxi-N-metilacetamida; 2-metoxi-N-metilacetamida, N-etil-2-metoxiacetamida, 2-etoxi-N-metilacetamida e 2-etoxi-N-etilacetamida; N-metilacrilamida, N-etilacrilamida e N-metilmetacrilamida; N-metilpropiolamida e N-etilpropiolamida.

Os valores adequados para os substituintes que podem estar presentes no anel fenilo quando R1 é benzamida ou N-(1-4C)-alquilbenzamida ou num substituinte R1 que contenha um grupo fenilo incluem, por exemplo: para halogénio para (1-4C)alquilo: para (1-4C)alcoxilo flúor, cloro e bromo metilo, etilo e propilo metoxilo, etoxilo e propoxilo.

Um valor adequado para R2 ou R3 quando qualquer deles é halogénio é, por exemplo, flúor, cloro, bromo ou iodo.

Um sal farmaceuticamente aceitável adequado de um derivado de quinazolina da presente invenção é, por exemplo, um sal de adição de ácido de um derivado de quinazolina da presente invenção que seja suficientemente básico, por exemplo, um sal de adição de ácido com, por exemplo, um ácido inorgânico ou orgânico, por exemplo ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, trifluoroacético, cítrico ou maleico. Além destes, um sal farmaceuticamente aceitável adequado de um derivado de quinazolina da presente invenção suficientemente ácido é um sal de um metal alcalino, por exemplo um sal de sódio ou de potássio, um sal de um metal alcalinoterroso, por exemplo um sal de cálcio ou de magnésio, um sal de amónio ou um sal com uma base orgânica que possua um catiâo fisiologicamente aceitável, por exemplo, um sal com metilamina, dímetilamina, 8

trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2- -hidroxietil)amina.

Entre os compostos particulares da presente invenção incluem-se, por exemplo, derivados de quinazolina da fórmula I, ou os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em queria) R1 é hidroxilo, amina, hidroxiamina, trifluorometoxilo, (1-4C)alcoxilo, (1-4C)alquilamina, di-[(1-4C)alquil]amina, 1-aziridinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, morfolina, 1-piperazinilo, 4-(1-4C)alquil-l-piperazinilo, (1-4C)alquiltio, halogeno-(2-4C)alcoxilo, hidroxi-(2-4C)- alcoxilo, (1-4C)alcoxi-(2-4C)alcoxilo, hidroxi-(2-4C)- alquilamina, (1-4C) alcoxi-(2-4C)alquilamina, (2-4C)- alcanoilamina, 2-oxo-l-pirrolidinilo, halogeno-(2-4C)- alcanoilamina, hidroxi-(2-4C)alcanoilamina ou (1-4C)alcoxi--(2-4C)alcanoilamina e n, R2 e R3 têm qualquer um dos significados definidos anterior-mente ou nesta secção relativa a compostos novos particulares da presente invenção; (b) R1 é amina, hidroxiamina, (1-4C)alquilamina, di-l(l-4C)- alquil]amina, 1-aziridinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, morfolina, 1-piperazinilo, 4- (1-4C)alquil-1--piperazinilo, hidroxi-(2-4C)alquilamina, (1-4C)alcoxi-(2-4C)-alquilamina, (2-4C)alcanoilamina, 2-oxo-l-pirrolidinilo, halogeno-(2-4C)alcanoilamina, hidroxi-(2-4C)alcanoilamina ou (1-4C)alcoxi-(2-4C)alcanoilamina; e n, R2 e R3 possuem qualquer um dos significados definidos anteriormente ou nesta secção relativamente aos compostos novos particulares da presente invenção; (c) R1 é amina, hidroxiamina, (1-4C)alquilamina, di—[(1 — 4C) — alquil]amina, (2-4C)alcanoilamina, 2-oxo-l-pirrolidinilo, halogeno-(2-4C)alcanoilamina, (3-4C)alcenoilamina, (3-4C)-alcinoilamina, N-(1-4C)alquil-(2—4C)alcanoilamina e N-(1-4C)-alquil-halogeno-(2-4C)alcanoilamina; e n, R2 e R3 possuem qualquer um dos significados definidos anteriormente ou nesta 9

L-Cj t secção relativamente aos compostos novos particulares da presente invenção; (d) R1 é hidroxilo, trifluorometoxilo, (1-4C)alcoxilo, (1-4C)-alquiltio, halogeno-(2-4C)alcoxilo, hidroxi-(2-4C)alcoxilo ou (1-4C) alcoxi-(2-4C) alcoxilo; e n, R2 e R3 possuem qualquer um dos significados definidos anteriormente ou nesta secção relativamente aos compostos novos particulares da presente invenção; ou (e) n é 1 ou 2 e cada R2 é independentemente uns dos outros hidrogénio, hidroxilo, halogénio, trifluorometilo, amina, nitro, ciano ou (1-4C)alquilo; e R1 e R3 possuem qualquer dos significados atribuídos anteriormente ou nesta secção relativamente aos compostos novos particulares da presente invenção.

Um outro composto particular da presente invenção é o derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 é hidroxilo, amina, hidroxiamina, metilamina, etilamina, dimetilamina, dietilamina, 1-aziridinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, morfolina, 1- piperazinilo, 4-metil-l-piperazinilo, acetamida, propionamida, 2-oxo-l-pirrolidinilo, 2-cloroacetamida, 3-cloro-propionamida, 4-clorobutiramida, 2-hidroxiacetamida ou 2- metoxiacetamida; R3 é flúor ou cloro; e (R2) n é 4'-flúor, 3'-cloro, 3'-bromo, 3',4'-dicloro, 3'-cloro--4'-flúor, 3'-trifluorometilo, 4'-fluor-3'-trifluorometilo, 3'--nitro, 4'-cloro-3'-nitro, 4'-fluoro-3'-nitro ou 3'-metilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Um outro composto particular da presente invenção é um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 é hidroxilo, amina, hidroxiamina, metilamina, etilamina, dimetilamina, dietilamina, 1-aziridinilo, 10 1-azetidinilo, 1-piperazinilo

1-pirrolidinilo, piperidina 4-metil-1-piperazinilo, morfolina acetamida propionamida, 2-oxo-l-pirrolidinilo, 2-cloroacetamida, 3-cloro-propionamida, 4-clorobutiramida, 2-hidroxiacetamida, 2-metoxi- acetamida, acrilamida metacrilamida, N-metilacetamida N-etilacetamida, N-metilpropionamida, 2-cloro-N-metilacetamida ou 2-cloro-N-etilacetamida; R3 é flúor ou cloro; e (R2) n é 4'-flúor, 3'-cloro, 3'-bromo, 3',4'-dicloro, 3'-cloro--4'-flúor, 3'-trifluorometilo, 4'-fluoro-3'-trifluorometilo, 3'-nitro, 4'-cloro-3'-nitro, 4'-fluor-3'-nitro ou 3'-metilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Um outro composto particular da presente invenção é um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 é metoxilo, etoxilo, metiltio, 2-cloroetoxilo, 2-bromoetoxilo, 2-hidroxietoxilo ou 2-metoxietoxilo; R3 é flúor ou cloro; e (Rz)n é 4'-flúor, 3'-cloro, 3'-bromo, 3',4'-dicloro, 3'-cloro--4'-flúor, 3'-trifluorometilo, 4'-fluoro-3'-trifluorometilo, 3'-nitro, 4'-cloro-3'-nitro, 4’-fluoro-3'-nitro ou 3'-metilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Um composto preferido da presente invenção é um derivado da quinazolina da fórmula I em que R1 é amina, hidroxiamina, metilamina, dimetilamina, acetamida, 2-oxo-l-pirrolidinilo, 2-cloroacetamida ou 4-clorobutiramida; R3 é flúor ou cloro; e (R2)n é 3f-cloro, 3' , 4' -dicloro, 3r-cloro-4'-flúor ou 3f--metilo; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável. 11 t

Um outro composto preferido da presente invenção é um

derivado da quinazolina da fórmula I em que R1 é amina, hidroxiamina, metilamina, dimetilamina, acetamida, 2-oxo-l-pirrolidinilo, 2-cloroacetamida, 4-cloro-butiramida, acrilamida ou 2-cloro-N-metilacetamida; R3 é flúor ou cloro; e (R2) n é 3'-cloro, 3',4'-dicloro, 3' -cloro-4'-flúor ou 3'-metilo; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.

Um outro composto preferido da presente invenção é um

derivado da quinazolina da fórmula I em que R1 é metoxilo ou etoxilo; R3 é flúor ou cloro; e (R2)n é 3'-cloro, 3',4'-dicloro, 3'-cloro-4'-flúor ou 3'-metilo; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.

Um composto da presente invenção especificamente preferido é o seguinte derivado de quinazolina da fórmula I, 6-amino-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina, 6-(2-cloroacetamido)-7-fluoro-4-(3' -metilanilino)quinazolina, 6- amino-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoroquinazolina, 7- cloro-6-metilamino-4-(3'-metilanilino)quinazolina, 7-cloro-6-(2-cloroacetamido)-4-(3' -metilanilino)quinazolina ou 7-cloro-6-(2-cloroacetamido)-4-(3',4'-dicloroanilino)-quinazolina; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.

Um outro composto da presente invenção especificamente preferido é o seguinte derivado de quinazolina da fórmula I, 12 I—^

7-fluoro-6-hidroxiamino-4-(3' -metilanilino)quinazolina, 4-(3' -cioro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro-6-hidroxiamino-quinazolina, 6-acrilamido-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina, 4- (3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluor-6-metilaminoquinazolina, 6-(2-cloroacetamido)-4-(3'-cloro-4' -fluoroanilino)-7-fluoro--quinazolina, 6-(4-clorobutiramido)-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro--quinazolina ou 4- (3r -cloro-4' -fluoroanilino) -7-fluoro-6- (2-oxo-l--pirrolidinil)-quinazolina; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.

Um derivado de quinazolina da fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável podem ser preparados através de qualquer processo que se saiba ser aplicável à preparação dos compostos quimicamente relacionados. Um processo adequado é, por exemplo, ilustrado pelo que é utilizado no Pedido de Patente Europeia n.° 0 520 722.

Estes processos, quando são utilizados para preparar um derivado de quinazolina da fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, são proporcionados como um objecto adicional da presente invenção e são ilustrados pelos exemplos representativos que se seguem, em que, excepto quando houver indicação em contrário, R1, R2 e R3 possuem qualquer um dos significados definidos anteriormente para um derivado de quinazolina da fórmula I. Os materiais de partida necessários podem ser obtidos através dos procedimentos normais da química orgânica. A preparação destes materiais de partida é descrita através dos exemplos não limitativos que acompanham a presente invenção. Materiais de partida necessários em alternativa podem ser obtidos através de procedimentos análogos aos que são ilustrados, que estejam ao alcance das capacidades ordinárias de um especialista em química orgânica. 13 f L·, (a) A reacção, de modo conveniente em presença de uma base adequada, de uma quinazolina da fórmula TT (apresentada posteriormente) , em que Z é um grupo deslocável, com uma anilina da fórmula III.

Um grupo Z deslocável adequado é, por exemplo, um grupo halogénio, alcoxilo, ariloxilo ou sulfoniloxllo, por exemplo um grupo cloro, bromo, metoxilo, fenoxilo, metanossulfoniloxilo ou tolueno-p-sulfoniloxilo.

Uma base adequada é, por exemplo, uma amina orgânica tal como, por exemplo, piridina, 2,6-lutidina, colidina, 4-di-metilaminopiridina, trietilamina, morfolina, N-metilmorfolina ou diazabiciclo[5.4.0]-7-undeceno ou, por exemplo, um carbonato ou um hidróxido de um metal alcalino ou alcalinoterroso, por exemplo carbonato de sódio, carbonato de potássio, carbonato de cálcio, hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio. Em alternativa, uma base adequada é, por exemplo, uma amida de um metal alcalino ou de um metal alcalinoterroso, por exemplo amida de sódio ou bis(trimetilsilil)amida de sódio. A reacção é de preferência executada em presença de um solvente ou diluente inerte adequado, por exemplo um alcanol ou éster, tal como metanol, etanol, isopropanol ou acetato de etilo, um solvente halogenado tal como cloreto de metileno, clorofórmio ou tetracloreto de carbono, um éter tal como tetra--hidrofurano ou 1,4-dioxano, um solvente aromático tal como tolueno ou um solvente aprótico dipolar tal como N,N-dimetil-formamida, N,N-dimetilacetamida, N-metilpirrolidina-2-ona ou sulfóxido de dimetilo. A reacção é de modo conveniente executada a uma temperatura entre os limites de, por exemplo, 10 a 150 °C, de preferência entre os limites de 20 e 80 °C. 0 derivado de quinazolina da fórmula I pode ser obtido a partir deste processo sob a forma de uma base livre ou em alternativa pode ser obtido sob a forma de um sal com o ácido da fórmula W-z, em que Z possui o significado atribuído 14 t Γ anteriormente. Quando se deseja obter a base livre a partir do sal, este pode ser tratado com uma base adequada tal como definido anteriormente, utilizando um procedimento convencional. (b) Para a produção destes compostos da fórmula I, em que R1 ou R2 é hidroxllo, a clivagem de um derivado de quinazolina da fórmula I, em que R1 ou R2 é (1-4C)alcoxilo. A reacção de separação pode ser realizada de forma conveniente através de qualquer um dos procedimentos conhecidos para uma transformação deste género. A reacção pode ser executada, por exemplo, através de tratamento do derivado de quinazolina com um (1-4C)alquilsulfureto de metal alcalino, tal como etanotiolato de sódio ou, por exemplo, através de tratamento com um diarilfosforeto de metal alcalino tal como difenilfosforeto de litio. Em alternativa a reacção de separação pode ser de modo conveniente realizada, por exemplo, através de tratamento do derivado de quinazolina com um tri--haleto de boro ou alumínio, tal como o tribrometo de boro. Estas reacções são de preferência realizadas em presença de um solvente ou diluente inerte adequado, tal como definido anteriormente e a uma temperatura adequada, tal como é ilustrado nos Exemplos juntos. (c) Para a produção dos compostos da fórmula I, em que R1 é amina ou hidroxiamina, a redução de um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 é nitro. A redução pode ser adequadamente realizada através de qualquer um dos processos conhecidos para uma transformação deste tipo. A redução pode ser realizada, por exemplo, através da hidrogenação de uma solução do composto nitro num solvente ou diluente inerte tal como definido anteriormente, em presença de um catalisador metálico adequado, tal como paládio ou platina. Um outro agente de redução adequado é, por exemplo, um metal activado tal como ferro activado (produzido através da 15 r u lavagem de pó de ferro com uma solução diluída de um ácido como o ácido clorídrico). Assim, por exemplo, a redução pode ser realizada aquecendo uma mistura do composto nitro e do metal activado num solvente ou diluente adequado, tal como uma mistura de água e um álcool, por exemplo, metanol ou etanol, a uma temperatura entre os limites de, por exemplo, 50 a 150 °C, de modo conveniente a ou perto dos 70 °c. (d) Para a produção dos compostos da fórmula I, em que R1 é (2-4C)alcanoilamina, (2-4C)alcanoilamina substituída, benzamida, (3-4C)alcenoilamina, (3-4C)alcinoilamina, N-(1-4C)-alquil- (2-4C)alcanoilamina, N-(1—4C)alquil-(2-4C)alcanoilamina substituída, N-(1-4C)alquil-(3-4C)alcenoilamíno, N-(1-4C)-alquil-(2-4C)alcinoilamina ou N-(1-4C)alquilbenzamida, ou R2 é (2-4C)alcanoilamina, a acilação de um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 ou R2 é amina.

Um agente de acilação adequado é, por exemplo, qualquer agente conhecido na técnica para a acilação de aminas em acilaminas, por exemplo um haleto de acilo, por exemplo um cloreto ou brometo de (2-4C)alcanoílo ou um cloreto ou brometo de benzoílo, de modo conveniente em presença de uma base adequada, tal como definido anteriormente, um anidrido ácido alcanóico ou anidridos mistos, por exemplo anidrido ácido (2-4C)alcanóico, tal como anidrido acético ou o anidrido misto formado através da reacção de um ácido alcanóico e um haleto de (1-4C)alcoxicarbonilo, por exemplo um cloreto de (1-4C)alcoxi-carbonilo, em presença de uma base adequada, tal como definido anteriormente. Em geral a acilação é executada num solvente ou diluente inerte adequado, tal como definido anteriormente e a uma temperatura entre os limites de, por exemplo, -30 a 120 °C, de modo conveniente à temperatura ambiente ou a cerca da temperatura ambiente. (e) Para a produção dos compostos da fórmula I, em que R1 é (1-4C)alcoxilo ou (1-4C)alcoxilo substituído ou R1 é (1-4CJ-alqu.i 1 amina, di- f (1-4C) alquil] amina ou (1-4C) alquilamina 16

u substituída, a alquilação de preferência em presença de uma base adequada, tal como definido anteriormente, de um derivado de quinazolina da fórmula I, em que R1 é hidroxilo ou amina conforme for apropriado.

Um agente de alquilação adequado é, por exemplo, qualquer agente conhecido da técnica para a alquilação do hidroxilo em alcoxilo ou alcoxilo substituído ou para a alquilação do amina em alquilamina ou alquilamina substituída, por exemplo um haleto de alquilo ou de alquilo substituído, por exemplo um cloreto, brometo ou iodeto de (1-4C)alquilo ou um cloreto, brometo ou iodeto de (1-4C)alquilo substituído em presença de uma base adequada, tal como definido anteriormente, num solvente ou diluente inerte adequado, tal como definido anteriormente e a um temperatura entre os limites de, por exemplo, 10 a 140 °C, de modo conveniente à temperatura ambiente ou a cerca da temperatura ambiente.

Quando é necessário um sal farmaceuticamente aceitável de um derivado de quinazolina da fórmula I, por exemplo, um sal de adição de ácido de um derivado de quinazolina da fórmula I, este pode ser obtido, por exemplo, através de reacção do dito composto com, por exemplo, um ácido adequado utilizando um procedimento convencional.

Tal como foi mencionado anteriormente o derivado de quinazolina definido na presente invenção possui uma actividade anticancerosa que se crê ter origem na actividade inibidora da quinase de tirosina receptora do composto. Estas propriedades podem ser verificadas, por exemplo, utilizando um ou vários dos procedimentos apresentados em seguida: (a) Uma experiência in vitro que determina a capacidade de um composto em ensaio para inibir a enzima quinase de tirosina receptora. A quinase de tirosina receptora foi obtida sob forma parcialmente purificada a partir de células A-431 (derivadas do carcinoma da vulva humano) através de procedimentos semelhante 17 com os que são descritos por Carpenter et al., J. Biol Chem., 1979, 254, 4884, Cohen et al ,, J. Biol. Chem., 1982, 257, 1523 e por Braun et al., J. Biol. Chem., 1984, 259, 2051.

As células A-431 foram cultivadas até à confluência utilizando o meio Eagle modificado da Dulbecco (Dulbecco's modified Eagle's médium - dmem) contendo soro de bovino fetal (FCS) a 5 %. As células obtidas foram homogeneizadas num tampão hipotónico de borato / EDTA com pH a 10,1. O homogeneizado foi centrifugado a 400 g durante 10 minutos, entre 0 e 4 °C. O sobrenadante foi centrifugado a 25.000 g durante 30 minutos entre 0 e 4 °C. O material aglomerado foi suspenso em tampão Hepes 30 mM, a pH 7,4, contendo 5 % de glicerol, benzamidina 4 mM e 1 % de Triton X-100, foi agitado durante 1 hora entre 0 e 4 °C e recentrifugado a 100.000 g durante 1 hora entre 0 e 4 °C. 0 sobrenadante, contendo a quinase de tirosina receptora solubilizada, foi armazenado em azoto líquido.

Para fins experimentais, adicionaram-se 40 μΐ da solução enzimática obtida desta forma a uma mistura de 400 μι de uma mistura de tampão Hepes 150 mM a pH 7.4, ortovanadato de sódio 500 μΜ, 0,1 % de Triton X-100, 10 % de glicerol, 200 μΐ de água, 80 μΐ de DTT 25 mM e 80 μΐ de uma mistura de cloreto de manganês 12,5 mM, cloreto de magnésio 125 mM e água destilada. Desta forma obteve-se a solução enzimática do ensaio.

Cada composto do ensaio foi dissolvido em sulfóxido de dimetilo (DMSO) para se obter uma solução 50 mM que foi diluida com tampão Hepes 40 mM contendo 0,1 % de Triton X-100, 10 % de glicerol e 10 % de DMSO para se obter uma solução 500 μΜ. Misturaram-se volumes iguais desta solução e de uma solução de factor de crescimento epidérmico (EGF; 20 μ5/ιη1) .

Diluiu-se [γ-32Ρ]ΑΤΡ (3000 Ci/mM, 250 μΟϊ) até atingir um volume de 2 ml, através da adição de uma solução de ATP (100 mM) em água destilada. Adicionou-se um volume igual do peptideo Arg-Arq-Leu-Ile-Glu-Asp-Ala-Glu-Tyr-Ala-Ala-Arg-Gly numa mistura de tampão Hepes 40 mM a pH 7,4, 0,1 10 % de glicerol. •6 de Triton X-100 e A solução de mistura com o composto a ensaiar / EGF (5 μΐ) foi adicionada à solução enzímática a ensaiar (10 μΐ) e a mistura foi incubada entre 0 e 4 °C durante 30 minutos. A mistura de ATP/peptídeo (10 μΐ) foi adicionada e a mistura foi incubada a 25 °C durante 10 minutos. A reacção de fosforilação foi feita parar através da adição de ácido tricloroacético a 5 % (40 μΐ) e albumina de soro bovino (BSA; 1 mg/ml, 5 μΐ) . A mistura foi deixada repousar a 4 °C durante 30 minutos e depois foi centrifugada. Uma aliquota (40 μΐ) do sobrenadante foi colocada numa tira de papel de fosfocelulose Whatman p 81. A tira foi lavada em ácido fosfórico 75 mM (4 x 10 ml) e a humidade foi absorvida com papel mata-borrão. A radioactividade presente no papel de filtro foi medida com um contador de cintilação em líquidos (sequência A) . A sequência de reacção foi repetida na ausência de EGF (sequência B) e novamente na ausência do composto a ensaiar (sequência C). A inibição da quinase de tirosina receptora foi calculada da seguinte forma: 100 - (A - B) % de inibição = - x 100

C - B O grau de inibição foi depois determinado numa série de concentrações do composto a ensaiar para se obter um valor de IC50. (b) Uma análise in vitro que determina a capacidade de um composto em ensaio para inibir o crescimento da linha de células do cancro naso-faringico humano KB.

As células KB foram colocadas em cavidades, a uma densidade de 1 x 104 - 1,5 x 104 de células por cavidade e foram cultivadas durante 24 horas em DMEM, suplementado com 5 % FCS (passado por carvão activado) . o cresci mento das células foi t f- u κ determinado após a incubação durante 3 dias através da extensão da produção de uma cor azulada pelo metabolismo do pigmento de tetrazólio MTT. 0 crescimento celular foi então determinado em presença de EGF (10 ng/ml) ou em presença de EGF (10 ng/ml) e um composto a ensaiar a várias concentrações. Pôde-se então calcular um valor IC50. (c) Uma análise in vitro num grupo de ratos machos que determina a capacidade de um composto em ensaio (normalmente administrado por via oral sob a forma de uma suspensão do produto moido em moinho de bolas em polissorbato a 0,5 %) para inibir a estimulação do crescimento de hepatócitos no fígado causada pela administração do factor de crescimento TGFa (400μg/kg por via subcutânea, normalmente em duas doses, 3 e 7 horas respectivamente depois da administração do composto a ensaiar).

Num grupo de ratos de controlo, a administração de TGFa provoca uma estimulação em média 5 vezes superior do crescimento de hepatócitos do fígado. 0 crescimento celular no grupo de controlo e nos animais da experiência é determinado do seguinte modo:

Na manhã do dia seguinte à aplicação do composto a ensaiar (ou de polissorbato a 0,5 % no grupo de controlo), os animais recebem uma dose de bromodesoxiuridina (BrdU; 100 mg/kg por via intraperitoneal). Os animais são mortos quatro horas depois e os fígados são excisados. São cortadas tiras de cada fígado e a absorção de BrdU é determinada através da técnica imuno--histoquímica convencional, semelhante à descrita nas páginas 267 e 268 de um artigo de Goldsworth et al., em Chemically Induced Cell Proliferation: Implications for Risk Assessment, Wiley-Liss Inc., 1991, páginas 253-284.

Foram realizadas mais experiências com uma série de dosagens dos compostos a ensaiar de forma a permitir o cálculo 20 p ^^ de um valor de ED5o aproximado para a inibição da proliferação de hepaLócitos do fígado conforme determinado pela inibição da absorção de BrdU.

Apesar de as propriedades farmacológicas dos compostos da fórmula I variarem com as alterações estruturais de forma prevista, em geral a actividade que os compostos da fórmula I possuem pode ser demonstrada às concentrações ou doses apresentadas em seguida em um ou vários dos ensaios mencionados (a), (b) e (c)

Ensaio (a): IC50 entre os limites de, por exemplo, 0,0001 a 1 μΜ;

Ensaio (b): IC50 entre os limites de, por exemplo, 0,01 a 10 μΜ;

Ensaio (c) : ED50 entre os limites de, por exemplo, 1 a 100 mg/kg.

Desta forma, a titulo de exemplo, o composto 6-amino-7--fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina possui uma IC5o de 0,075 μΜ no ensaio (a) , uma IC5o de 0, 68 μΜ no ensaio (b) e uma ED50 <40 mg/kg no ensaio (c) ; o composto 6-(2-cloroacetamido)-7--fluoro-4-(3'-metilanilino)-quinazolina possui uma IC50 de 0,01 μΜ no ensaio (a) e uma IC50 de 0,02 μΜ no ensaio (b) e o composto 4- (3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro-6-metoxi- quinazolina possui uma IC5o de 0,07 μΜ no ensaio (a), uma IC5o de 0,53 μΜ no teste (b) e um ED50 <12,5 mg/kg no ensaio (c) .

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, proporciona-se uma composição farmacêutica que inclui um derivado de quinazolina da fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, conforme definido anteriormente em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. A composição pode encontrar-se sob a forma adequada para administração por via oral, por exemplo como um comprimido ou 21 í uma cápsula, para injecção por via parentérica (incluindo via intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão) sob a forma de uma solução, suspensão ou emulsão estéril, para administração tópica sob a forma de unguento ou creme ou para administração rectal sob a forma de supositório.

Em geral as composições acima mencionadas podem ser preparadas de uma forma convencional com excipientes convencionais. A quinazolina será administrada normalmente a um animal de sangue quente, a uma dose unitária entre os limites de 5 e 5000 mg por metro quadrado de área corporal do animal, isto é, aproximadamente 0,1 a 100 mg/kg, e esta quantidade proporciona normalmente uma dose com eficácia terapêutica. Uma forma de dose unitária, tal como um comprimido ou uma cápsula, conterá, normalmente, por exemplo 1 a 250 mg de ingrediente activo. De preferência utiliza-se uma dose diária entre 1 e 50 mg/kg. No entanto, a dose diária terá necessariamente de variar conforme o hospedeiro tratado, a via de administração especifica e a gravidade da doença a tratar. Em conformidade a dosagem óptima pode ser determinada pelo médico assistente de um doente específico.

De acordo com um aspecto adicional da presente invenção, é proporcionado um derivado de quinazolina da fórmula I, tal como definido anteriormente, para utilização num método de tratamento do corpo humano ou animal através de terapia.

Os requerentes constataram agora que os compostos da presente invenção possuem propriedades anticancerosas, que se crê terem origem na sua actividade inibidora da quinase de tirosina receptora. Em conformidade, é de prever que os compostos da presente invenção sejam úteis no tratamento de doenças ou situações médicas causadas, completamente ou em parte, pela enzima quinase de tirosina receptora, isto é, os compostos podem ser utilizados para broduzir um efeito inibidor 22

t da quinase de tirosina receptora num animal de sangue quente que tenha necessidade deste tipo de tratamento. Desta forma, os compostos da presente invenção oferecem um método de tratamento da proliferação de células malignas, caracterizado pela inibição da enzima quinase de tirosina receptora, isto é, os compostos podem ser utilizados para produzir um efeito anti-proliferativo, causado, inteiramente ou em parte, pela inibição da enzima quinase de tirosina receptora. Em conformidade, os compostos da presente invenção devem ser úteis no tratamento do cancro ao proporcionar um efeito antiproliferativo, em particular no tratamento dos cancros sensíveis à quinase de tirosina receptora, tais como os cancros da mama, do pulmão, do cólon, do recto, do estômago, da próstata, da bexiga, do pâncreas e dos ovários.

Assim, de acordo com este aspecto da presente invenção, é proporcionado a utilização de um derivado de quinazolina da fórmula I, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, tal como definido anteriormente, para o fabrico de um medicamento para utilização na produção de um efeito anticanceroso num animal de sangue quente, tal como o ser humano.

Tal como já foi mencionado, a dimensão da dose necessária para o tratamento terapêutico ou profilático de um cancro particular irá necessariamente variar conforme o hospedeiro tratado, a via de administração e a gravidade da doença a ser tratada. Calcula-se que uma dose unitária oscile entre os limites de, por exemplo, 1 a 100 mg/kg, de preferência 1 a 50 mg/kg. O tratamento anticanceroso definido anteriormente pode ser aplicado como terapia isolada ou pode envolver, para além do derivado de quinazolina da presente invenção, uma ou mais substâncias antitumor, por exemplo as que são seleccionadas de entre, por exemplo, inibidores mitóticos, por exemplo vinblastina; agentes de alquilação, por exemplo cis-platina, carboplatina e ciclofosfamida; anlimetabolitos, por exemplo 23 Γ u, 5-fluoro-uracilo, citosina-arabinoside e hidroxiureia ou, por exetfiplo, um doc antimetabolitos proferidos apresentados no Pedido de Patente Europeia n.° 239362, tal como ácido N-{5-[N--(3,4-di-hidro-2-metil-4-oxo-6-quinazolinilmetil)-N--metilamino]-2-tenoil}-L-glutâmico; antibióticos de intercalação, por exemplo adriamicina e bleomicina; enzimas, por exemplo asparaginase; inibidores de topoisumerase, por exemplo etoposide; modificadores de resposta biológica, por exemplo interferão e anti-hormonas, por exemplo antiestrogénios tal como o 'NOLVADEX' (tamoxifeno) ou, por exemplo antiandrogénios tal como 'CASODEX' (4'-ciano-3-(4-fluorofenil-sulfonil)-2-hidroxi-2-metil-3'-(trifluorometil)propionanilida. Um tratamento conjunto deste género pode ser realizado através da dosagem simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. De acordo com este aspecto da presente invenção é proporcionado um produto farmacêutico que inclui um derivado de quinazolina da fórmula I, tal como definido anteriormente, e uma substância anticancerosa adicional, tal como definido anteriormente, para o tratamento conjunto do cancro.

Tal como mencionado anteriormente o derivado de quinazolina definido na presente invenção é um agente anti-canceroso eficaz, cuja eficácia se crê ter origem nas propriedades inibidoras da quinase de tirosina receptora. Prevê-se que um derivado de quinazolina da presente invenção possua um largo espectro de propriedades anticancerosas na medida em que as quinases de tirosina receptoras têm sido implicadas em muitos cancros humanos comuns, tal como a leucemia e cancros da mama, pulmão, cólon, recto, estômago, próstata, bexiga, pâncreas e ovários. Desta forma prevê-se que um derivado de quinazolina da presente invenção possua uma actividade anticancerosa contra estes cancros. Espera-se também que uma quinazolina da presente invenção possua actividade contra uma série de leucemias, afecções malignas da linfa e tumores sólidos, tais como carcinomas e sarcomas em tecidos tal como o fígado, o riiu., a próstata e o pâncreas. 24

U κ t A presente invenção passará agora a ser ilustrada nos exemplos que sc seguem, onde, excepto quando houver indicação em contrário (i) as evaporações foram executadas através de evaporação rotativa sob vácuo e os procedimentos de transformação foram executados após remoção dos sólidos residuais, tais como agentes de secagem, por filtração; (ii) as operações foram executadas à temperatura ambiente, isto é entre os limites de 18 e 25 °C e sob uma atmosfera de um gás inerte, tal como árgon; (iii) realizou-se a cromatografia em coluna (pelo processo relâmpago) e a cromatografia liquida a pressão média (MPLC) em sílica da Merck Kieselgel (art. 9385) ou sílica de fase invertida Lichroprep RP-18 da Merck (art. 9303) da E. Merck, Darmstadt, Alemanha; (iv) os rendimentos são indicados apenas para ilustração e não são necessariamente o máximo atingível; (v) os pontos de fusão não foram corrigidos e foram determinados com um aparelho detector de ponto de fusão automático Mettler SP62, um aparelho de banho a óleo ou um aparelho de placa quente Koffler. (vi) as estruturas dos produtos finais da fórmula I foram confirmadas através de ressonância magnética nuclear (geralmente de protões) (RMN) e por técnicas de espectrometria de massa; os valores dos desvios químicos da ressonância magnética por protões foram medidos numa escala delta e as multiplicidades de pico são apresentadas em seguida: s, singuleto; d, dupleto; t, tripleto; m, multipleto; 25

(vii) em geral os produtos intermédios não foram completamentc caracterizados e a pureza foi estimada através de cromatografia em camada fina (CCF), análise de infravermelhos (IV) ou RMN; (viii) utilizaram-se as seguintes abreviaturas: DMF N,N-dimetilformamida DMA N,N-dimetilacetamida

Exemplo 1

Uma mistura de 7-fluoro-4-(3f-metilanilino)-6-nitro--quinazolina (0,25 g) , catalisador de paládio sobre carbono a 10 % (0,03 g) e etanol (10 ml) foi agitada sob uma pressão de uma atmosfera de hidrogénio durante 16 horas. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi triturado sob éter dietilico. Obteve-se desta forma 6-amino-7-fluoro-4-- (3'-metilanilino)quinazolina (0,18 g), p.f. 205 a 206 °C;

Espectro de RMN: (CD3S0CD3) 2,33 (s, 3H) , 5,67 (s largo, 2H) , 6,9 (m, 1H) , 7,24 (m, 1H) , 7,4 (d, 1H) , 7,6 (m, 3H) , 8,3 (s, 1H), 9,35 (s largo, 1H);

Análise elementar: determinado C, 67,1; H, 4,9; N, 20,8; C15H13FN4 corresponde a C, 67,2; H, 4,9; N, 20,9%. A 7-fluoro-4-(3'-metilanilino)-6-nitroquinazolina utilizada como material de partida foi obtida da seguinte forma:

Uma mistura de ácido 4-fluoroantranílico (15 g) e formamida (30 ml) foi agitada e aquecida até à temperatura de refluxo durante 6 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente. A mistura foi triturada sob água. 0 sólido foi isolado, lavado com água e seco. Obteve-se assim 7-f1uoroquinazolina-4-ona (13,8 g) . 26

V

u

Uma porção (4 g) do material obtido desta forma foi adicionado pui porções a uma mistura agitada de ácido sulfúrico concentrado (8 ml) e ácido nítrico fumante (8 ml) previamente arrefecida a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois foi aquecida a 110 °C durante 30 minutos. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente e vertida sobre uma mistura de gelo e água. υ precipitado foi isolado, lavado com água e seco. Desta forma obteve-se 7-fluoro-6-nitroquinazolina-4-ona {4,3 g) , p.f. 268 a 270 °C.

Uma mistura de uma porção (2,09 g) do material obtido desta forma, cloreto de tionilo (16 ml) e DMF (8 gotas) foi agitada e aquecida à temperatura de refluxo durante 2 horas. A mistura foi evaporada, adicionou-se tolueno e a mistura foi re--evaporada. Desta forma obteve-se 4-cloro-7-fluoro-6-nitro- quinazolina sob a forma de um sólido que foi utilizado sem qualquer purificação adicional.

Uma mistura do sólido obtido desta forma, 3'-metilanilina (1,1 ml) e isopropanol (40 ml) foi agitada e aquecida à temperatura de refluxo durante 2 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e conservada a 3 °C durante 16 horas. O precipitado foi isolado, lavado com isopropanol e com éter dietílico e seco. O sólido obtido desta forma (2,7 g) foi dissolvido numa mistura de cloreto de metileno e metanol e lavado com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A fase orgânica foi lavada com água, seca (MgS04) e evaporada. 0 resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna, com uma mistura 4:1 de cloreto de metileno e acetato de etilo como eluente. Desta forma obteve-se 7-fluoro-4-(3'-metilanilino)-6-nitroquinazolina (1,69 g) .

Exemplo 2

Uma mistura de 7-fluoro-4-(3'-metilanilino)-6-nitroquinazolina (0,12 g), catalisador de paládio sobre carbono a 10 % (0,02 g) e etanol (10 ml) foi agitada sob uma pressão de uma 27

atmosfera de hidrogénio durante 1 hora. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna com misturas de polaridade crescente de cloreto de metileno e metanol como eluente. 0 material obtido desta forma foi triturado sob metanol e o sólido resultante foi recristalizado a partir de uma mistura de metanol e água. Desta forma obteve-se 7-fluoro-6-hidroxiamino-4-(3'-metilanilino)-quinazolina (0,051 g), p.f. 228 a 230 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,33 (s, 3H) , 6,9 (d, 1H) , 7,25 (m, 1H), 7,4 , (d, 1H), 7,63 (m, 2H) , 8,1 (d, 1H), 8,4 (s, 1H), 8,8 (s largo, 1H), 8,9 (s largo, 1H) , 9,7 (s largo, 1H).

Análise elementar: determinado C, 63,8; H, 4,6; N, 19,6;

Ci5Hi3FN4 corresponde a C, 63,8; H, 4,5; N, 19,7%.

Exemplo 3

Adicionou-se anidrido acético (0,11 ml) a uma solução agitada de 6-amino-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina (0,268 g) em DMA (2 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. Adicionou-se água (10 ml). Isolou-se o precipitado, lavou-se com água e secou-se. Obteve-se desta forma 6-acetamido-7-fluoro-4-(3r-metilanilino)quinazolina (0,204 g, p.f. 269 a 270 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2, 15 (s, 3H) , 2,3 (s, 3H) , 1H), 7,2 (t, 1H), 7,6 , (m, 3H) , 8,5 (s, 1H), 8,8 (d, 1 (s largo, 1H), 10, 0 (s largo, 1H) • Análise elementar: determinado c, 65, 5; H, , 4,9; N, 17, 9; C17H15FN4 corresponde a C, 65,8; H, 4,8 ; n, 18,1%.

Exemplo 4

Adicionou-se cloreto de 2-cloroacetilo (0,12 ml) a uma solução agitada de 6-amino-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)-quinazolina (0,2 68 y) em DMA (2 ml) e a mistura foi agitada à 28 temperatura ambiente durante 3 horas. 0 precipitado foi isolado e lavado com éter dietílico. Desta forma obteve-se cloridrato de 6-(2-cloroacetamido)-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina (0,315 g), p.f. > 320 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,36 (s, 3H) , 4,5 (s, 2H) , 7,15 (d, 1H) , 7,4 (m, 3H) , 7,9 (d, 1H) , 8,9 (s, 1H) , 9,2 (d, 1H) , 10,8 (s largo, 1H), 11,5 (s largo, 1H);

Análise elementar: determinado C, 54,0; H, 4,2; N, 14,6; C17H14CIFN4O 1HC1 corresponde a C, 53,5; H, 3,9; N, 14,7%.

Exemplo 5

Adicionou-se cloreto de 4-clorobutirilo (0,4 ml) a uma solução agitada de 6-amino-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)- quinazolina (0,8 g) em DMA (6 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas. O precipitado foi isolado e lavado com éter dietílico. Desta forma obteve-se 6-(4-cloro-butiramido)-7-fluoro-4-(3' -metilanilino)quinazolina (0,76 g);

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,1 (m, 2H) , 2,36 (s, 3H) , 2,66 (t, 2H), 3,74 (t, 2H) , 7,14 (d, 1H) , 7,4 (m, 3H), 7,89 (d, 1H), 9,2 (d, 1H), 10,3 (s largo, 1H) , 11,4 (s largo, 1H);

Análise elementar: determinado C, 56,1; H, 4,6; N, 13,7; C19H18CIFN4O corresponde a C, 55,8; H, 4,7; N, 13,7%.

Exemplo 6

Uma solução de 6-(4-clorobutiramido)-7-fluoro-4-(3'--metilanilino) quinazolina (0,64 g) em DMA (20 ml) foi adicionada a uma suspensão agitada de hidreto de sódio (dispersão a 80 % em óleo mineral, 0,15 g) em DMA (2 ml) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos. A mistura foi vertida sobre gelo e extraída com cloreto de metileno. A fase orgânica foi lavada com água, seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi recristalizado a partir de uma mistura 29 J-' LCj ^ de cloreto de metileno e acetato de etilo. Obteve-se desta forma 7-fluoro-4-(3'-meti 1anilino)-6-(2-oxo-l-pirrolidinil) -quinazolina (0,35 g), p.f. 218 a 220 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,2 (m, 2H) , 2,35 (s, M) , 2,5 (m, M), 3,9 (t, M), 7,0 (m, 1H), 7,3 (m, 1H) , 7,6 (m, M), 8,56 (s, 1H), 8,65 (m, 1H), 9,75 (s largo, 1H);

Análise elementar: determinado C, 67,4; H, 5,1; N, 16,5; C19H17FN4O corresponde a C, 67,8; H, 5,1; N, 16,7%.

Exemplo 7

Uma mistura de 4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro-6--nitroquinazolina (0,11 g), catalisador de paládio sobre carbono a 30 % (0,01 g) e ácido acético (10 ml) foi agitada sob uma atmosfera de pressão de hidrogénio durante 30 minutos. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi triturado sob metanol. Obteve-se desta forma 6-amino-4-(3'--cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoroquinazolina (0,037 g), p.f. > 250 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 5,8 (s largo, 2H) , 7,4 (m, 2H) , 7,75 (d, 1H), 7,8 (m, 1H) , 8,1 (m, 1H) , 8,4 (s, 1H) , 9,7 (s largo, 1H) . A 4-(3'-cloro-4' -fluoroanilino)-7-fluoro-6-nitroquinazo-lina utilizada como material de partida foi obtida através da reacção de 4-cloro-7-fluoro-6-nitroquinazolina e 3'-cloro-4'--fluoroanilina, recorrendo a um procedimento análogo ao descrito no último parágrafo da porção do Exemplo 1 relativa à preparação dos materiais de partida. Desta forma obteve-se o material de partida necessário.

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 7,5 (t, 1H) , 7,8 (m, 2H) , 8,1 (m, 1H), 8,7 (s, 1H), 9,6 (d, 1H), 10,5 (s largo, 1H). 30

L-Cj

Exemplo 8

Uma mistura de 4-(3' -cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro-6--nitroquinazolina (0,11 g), catalisador de paládio sobre carbono a 30 % (0,01 g) e etanol (10 ml) foi agitada sob uma atmosfera de pressão de hidrogénio durante 30 minutos. A mistura foi filtrada e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi triturado sob metanol. Obteve-se desta forma 4-(3'-cloro-4'--fluoroanilino)-7-fluoro-6-hidroxiaminoquinazolina (0,065 g)

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 7,4 (m, 2H) , 7,8 (m, 1H) , 8,1 (m, 2H) , 8,47 (s, 1H), 8,8 (s largo, 1H) , 8,97 (s largo, 1H), 9,85 (s largo, 1H);

Análise elementar: determinado C, 50,5; H, 3,0; N, 16,2; C14H8CIF2N4O 0,75H20 corresponde a C, 50,0; H, 3,1; N, 16,7%.

Exemplo 9

Adicionou-se limalha de ferro (5 g) por porções, durante 5 minutos, a uma mistura agitada de 7-cloro-4-(3'-metilanilino)--6-nitroquinazolina (5 g) , água (10 ml) e ácido acético glacial (100 ml) que fora a aquecida a 50 °C. A mistura foi aquecida a 50 °C durante 2 horas. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e foi filtrada. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna, utilizando uma mistura 9:1 de cloreto de metileno e metanol como eluente. Desta forma obteve-se 6-amino-7-cloro-4-(3'--metilanilino)-quinazolina (2,1 g), p.f. > 270 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,35 (s, 3H), 6,0 (s largo, 2H), 7,0 (d, 1H), 7,3 (t, 1H), 7,55 (m, 1H) , 7,6 (m, 1H) , 7,7 (s, 1H) , 7,8 (5, 1H) , 0,5 (s, III), 10,2 (a largo, 1H) . A 7-cloro-4-(3'-metilanilino)-6-nitroquinazolina utilizada como material de partida foi obtida da seguinte forma: 31

Uma mistura de ácido 4-cloroantranílico (17,2 g) e de funuaniida (10 ml) foi agitada e aquecida a 130 °C durante 45 minutos e a 175 °C durante 75 minutos. A mistura foi deixada arrefecer até aproximadamente 100 °C e adicionou-se 2-(2-etoxi-etoxi)etanol (50 ml). A solução constituída desta forma foi vertida para uma mistura (250 ml) de gelo e água. 0 precipitado foi isolado, lavado com água e seco. Desta forma obteve-se 7-cloroquinazolina-4-ona (15,3 g, 85 %).

Uma porção (6 g) do material obtido desta forma foi adicionada por porções a uma mistura agitada de ácido sulfúrico concentrado (12 ml) e ácido nítrico fumante (12 ml) que fora arrefecida a 0 °C. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos e depois aquecida a 110 °C durante 30 minutos. A mistura foi arrefecida até à temperatura ambiente e vertida sobre uma mistura de gelo e água. 0 precipitado foi isolado, lavado com água e seco. Desta forma obteve-se 7-cloro--6-nitroquinazolina-4-ona (6,89 g).

Uma mistura de uma porção (4 g) do material obtido desta forma, cloreto de tionilo (30 ml) , cloreto do fosforilo (5 ml) e DMF (10 gotas) foi agitada e aquecida à temperatura de refluxo durante 4 horas. A mistura foi evaporada, adicionou-se tolueno (20 ml) e a mistura foi re-evaporada. Desta forma obteve-se 4,7-dicloro-6-nitroquinazolina sob a forma de um sólido que foi utilizado sem ser submetido a qualquer purificação adicional.

Uma mistura do sólido obtido desta forma, 3'-metilanilina (1,89 g) e isopropanol (25 ml) foi agitada e aquecida à temperatura de refluxo durante 2 horas. A mistura foi filtrada a quente. O sólido isolado foi lavado com isopropanol e com éter dietílico e foi seco. Desta forma obteve-se cloridrato de 7-cloro-4-(3'-metilanílino)-6-nitroquinazolina (3,74 g) , p.f. 271 a 274 °C. 32

Exemplo 10

Adicionou-se ácido acético glacial (0,85 ml) a uma mistura agitada de 6-amino-7-cloro-4-(3'-metilanilino)quinazolina (1 g) , formaldeido (solução a 37 % em água, 2,28 ml) e etanol (80 ml) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 10 minutos. Adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,443 g) por porções e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura foi neutralizada através da adição de bicarbonato de sódio. A mistura foi evaporada e o resíduo foi dividido por cloreto de metileno e água. A fase orgânica foi seca (MgSCh) e evaporada. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna com uma mistura 48:1 de cloreto de metileno e metanol como eluente. Desta forma obteve-se 7-cloro-6-dimetilamino-4-(3' -metilanilino)quinazolina (0,043 g) , p.f. 150 a 152 °C;

Espectro de RMN: (CD3S0CD3) 2,35 (s, 3H) , 2,9 (s, 6H) , 7,0 (d, 1H), 7,3 (t, 1H), 7,6 (m, 2H) , 7,8 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 9,7 (s largo, 1H);

e 7-cloro-6-metilamino-4-(3'-metilanilino)quinazolina (0,171 g), p.f. 149 a 152 °C

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,35 (s, 3H) , 2,95 (d, 3H) , 6,03 (m, 1H) , 6,9 (d, 1H) , 7,26 (t, 1H) , 7,36 (s, 1H) , 7,6 (s, 1H) , 7,65 (largo d, 1H) , 7,7 (s, 1H) , 8,34 (s, 1H) , 9,44 (s largo, 1H) .

Exemplo 11

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 4, fez-se reagir 6-amino-7-cloro-4-(3'-metilanilino)quinazolina com cloreto de 2-eloroacetilo para se obter cloridrato de 7-cloro-6-(2-cloroacetamido)-4-(3'-metilanilino)quinazolina com 79 % de rendimento;

Espectro de RMN: (CD3S0CD3) 2,35 (s, 3H), 4,5 (s, 2H) , 7,15 (d, 1H), 7,4 (t, 1H) , 7,5 (m, 2H) , 8,15 (s, III) , 8,88 (s, 1H) , 9,02 t (s, 1H), 10,55 (s largo, 1H), 11,4 (s largo, 1H) .

Exemplo 12

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 9, reduziu-se 7-cloro-4-(3',4'-dicloroanilino)-6-nitro- quinazolina com ferro em ácido acético para se obLer 6-amino-7--cloro-4-(3',4'-dicloroanilino)-quinazolina com 20 % de rendimento:

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 6,0 (s largo, 2H), 7,65 (m, 2H), 7,8 (m, 2H), 8,22 (d, 1H) , 8,55 (s, 1H), 10,25 (s largo, 1H) . A 7-cloro-4-(3',4' -dicloroanilino)-6-nitroquinazolina utilizada como material de partida foi obtida através da reacção de 4,7-dicloro-6-nitroquinazoina e 3',4'-dicloroanilina recorrendo a um procedimento análogo ao descrito no último parágrafo da porção do Exemplo 9 relativo à preparação dos materiais de partida.

Exemplo 13

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 4, 6-amino-7-cloro-4-(3r , 4'-dicloroanilino)quinazolina foi feita reagir com cloreto de 2-cloroacetilo para se obter 7-cloro-6-(2-cloroacetamido)-4-(3',4’-dicloroanilino)--quinazolina com 76 % de rendimento, p.f. > 280 °C:

Espectro de RMN: (CD3S0CD3) 4,5 (s, 2H) , 7,75 (m, 2H) , 8,1 (m, 2H) , 8,9 (s, 1H) , 8,95 (s, 1H) , 10,5 (s largo, 1H) , 11,3 (s largo, 1H).

Exemplo 14

Uma mistura de 4-cloro-7-fluoro-6-metoxiquinazolina (0,32 g), 3'-metilanilina (0,16 g) e isopropanol (5 ml) foi agitada e aquecida sob refluxo durante 90 minutos. 0 precipitado foi 34 ^ ί—^ ^ isolado, lavado com isopropanol e com éter dietilico e seco. DesLa forma obteve se cloridrato de 7-fluoro-6-metoxi-4-(3'--metilanilino)quinazolina (0,468 g), p.f. 265 a 267 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,37 (s, 3H) , 4,1 (s, 3H) , 7,16 (d, 1H), 7,37 (t, 1H) , 7,50 (m, 2H) , 7,82 (s, 1H) , 8,77 (s, 1H) , 8,84 (s, 1H), 11,66 (s largo, 11H);

Análise elementar: determinado C, 60,2; H, 4,7; N, 13,0; Ci6Hi4FN30 1HC1 corresponde a C, 60,1; H, 4,7; N, 13,1%. A 4-cloro-7-fluoro-6-metoxiquinazolina utilizada como material de partida foi obtida da seguinte forma:

Adicionou-se gota a gota ácido nítrico concentrado (70 %, 4,8 ml) ao longo de 20 minutos a uma mistura agitada de 4-fluoro-3-metoxibenzoato de metilo (14 g) e ácido sulfúrico concentrado (140 ml) que fora previamente arrefecida a -10 °C. Deixou-se a mistura aquecer até aos 5 °C e agitou-se a essa temperatura durante 15 minutos. A mistura foi vertida sobre gelo e extraída com acetato de etilo. A fase orgânica foi lavada com água, seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com misturas de polaridade crescente de hexano e cloreto de metileno como eluente. Desta forma obteve-se 4-fluoro-5-metoxi-2-nitro-benzoato de metilo (11,8 g).

Uma mistura de uma porção (10,3 g) do material obtido da forma descrita, catalisador de paládio sobre carbono a 10 % (1 g) e etanol (500 ml) foi agitada sob uma atmosfera de pressão de hidrogénio durante 4 horas. A mistura obtida desta forma foi filtrada e o filtrado foi evaporado. Desta forma obteve-se 4-fluoro-5-metoxiantranilato de meLilo (9 g).

Utilizando procedimentos análogos aos descritos no primeiro e terceiro parágrafos da porção do Exemplo 1 relativa à preparação dos materiais de partida, converteu-se 4-fluoro-5- 35 % y u -metoxiantranilato de metilo em 4-cloro-7-fluoro-6-metoxi-quinazolina com 30 % de rendimento.

Exemplo 15

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 14, fez-se reagir 4-cloro-7-fluoro-6-metoxiquinazolina cum 3'--cloro-4'-fluoroanilina para se obter cloridrato de 4 —(3r — -cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro-6-metoxiquinazolina com 80 % de rendimento, p.f. 274 a 275 °C;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 4,08 (s, 3H), 7,54 (m, 1H), 7,77 (m, 2H), 8,04 (m, 1H), 8,60 (d, 1H), 8,86 (s, 1H),

Análise elementar: determinado C, 50,5; H, 3,1; N, 11,3; C15H10CIF2N3O 1HC1 corresponde a C, 50,3; H, 3,1; N, 11,7%.

Exemplo 16

Adicionou-se ácido acético glacial (0,46 ml) a uma mistura agitada de 6-amino-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina (1,07 g), formaldeído (solução a 37 % em água, 0,7 ml) e etanol (100 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 5 minutos. Adicionou-se cianoboro-hidreto de sódio (0,51 g) por porções e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 24 horas. A mistura foi evaporada e o resíduo foi neutralizado através da adição de uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A mistura foi partilhada entre cloreto de metileno e água. A fase orgânica foi lavada com água, seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna com uma mistura 9:1 de cloreto de metileno e metanol como eluente. Desta forma obteve-se 7-fluoro-6-metilamino-4-- (3'-metilanilíno)quinazolina sob a forma de um 3Ólido (0,62 g) r

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,3 (s, 3H) , 2,9 (d, 3H) , 6,2 (d, 1H), 6,95 (d, 1H), 7,25 (t, 1H), 7,4 (m, 2H), 7,6 (m, 2H) , 8,3 36

H (s, 1H), 9,4 (s largo, 1H) .

Exemplo 17

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 16, fez-se reagir 6-amino-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)- quinazolina (0,268 g) com formaldeido (solução a 37 % em água, 0,65 ml) e cianoboro-hidreto de sódio (0,126 g) durante 24 horas. Porções secundárias das mesmas quantidades de formaldeido e cianoboro-hidreto de sódio foram adicionadas e a reacção prosseguiu durante mais 24 horas. Porções terciárias das mesmas quantidades dos dois reagentes foram adicionadas e a reacçâo prosseguiu durante mais 24 horas. A mistura reaccional foi processada através de um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 16. Desta forma obteve-se 7-fluoro-6-dimetilamino-4-- (3'-metilanilino)-quinazolina sob a forma de um sólido (0,132 g);

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,3 (s, 3H), 2,9 (s, 6H), 6,99 (d, 1H), 7,3 (t, 1H) , 7,45 (d, 1H) , 7,6 (m, 2H) , 7,8 (d, 1H) , 8,45 (s, 1H), 9,65 (s largo, 1H).

Exemplo 18

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 4, fez-se reagir 7-fluoro-6-metilamino-4-(3'-metilanilino)-quinazolina com cloreto de 2-cloroacetilo para se obter cloridrato de 6-(2-cloro-N-metilacetamido)-7-fluoro-4-(3'--metilanilino)quinazolina (0,087 g);

Espectro de RMN: (CD3SOCD3 + CD3C02D, a 100 °C) 2,3 (s, 3H) , 3,4 (s, 3H) , 4,2 (s, 2H) , 7,1 (d, 1H) , 7,3 (t, 1H) , 7,5 (m, 2H) , 7,7 (d, 1H), 8,7 (s, 1H), 8,9 (d, 1H).

Exemplo 19

Adicionou-se cloreto de acriloílo (0,1 ml) a uma solução 37 p U, ^^ agitada de 6-amino-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina (0,268 g) em DMA (2 ml) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Adicionou-se éter dietilico à mistura e o precipitado resultante foi isolado e lavado com éter dietilico. 0 sólido foi dissolvido numa mistura de cloreto de metileno e metanol e a solução foi lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A fase orgânica fui seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna com uma mistura 9:1 de cloreto de metileno e metanol como eluente. Desta forma obteve-se 6-acrilamido-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina sob a forma de um sólido (0, 062 g) ;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,3 (s, 3H) , 5,9 (m, 1H) , 6,4 (m, 1H), 6,7 (m, 1H), 7,0 (d, 1H) , 7,3 (m, 1H) , 7,6 (m, 3H) , 8,5 (s, 1H), 9,0 (d, 1H), 9,8 (s largo, 1H), 10,2 (s largo, 1H).

Exemplo 20

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 16, fez-se reagir 6-amino-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7- -fluoroquinazolina com cianoboro-hidreto de sódio para se obter 4- (3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro-6-metilaminoquinazolina sob a forma de um sólido com 19 % de rendimento;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,9 (d, 3H) , 6,3 (s largo, 1H) , 7,4 (m, 3H) , 7,8 (m, 1H) , 8,1 (m, 1H) , 8,4 (s, 1H) , 9,5 (s largo, 1H) .

Exemplo 21

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 17, fez-se reagir 6-amino-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7- -fluoroquinazolina com cianoboro-hidreto de sódio para se obter 4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-6-dimetilamino-7-fluoroquinazolina sob a forma de um sólido com 29 % de rendimento; 38

Espectro de: 2,95 (s, 6H) , 7,5 (m, 2H) , 7,75 (m, 2H) , 8,1 (m, 1H), 8,5 (s, 1H), 9,7 (s largo, 1H).

Exemplo 22

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 4, fez-se reagir 6-amino-4-(3' -cloro-4'-fluoroanilino) -7--fluoroquinazolina com cloreto de 2-cloroacetilo para se obter um precipitado que foi isolado. 0 sólido foi dissolvido em cloreto de metileno e adicionou-se trietilamina. 0 precipitado foi isolado e purificado através e cromatografia em coluna com uma mistura 1:1 de cloreto de metileno e acetona como eluente. Obteve-se desta forma 6-(2-cloroacetamido)-4-(3'-cloro-4'--fluoroanilino)-7-fluoroquinazolina sob a forma de um sólido com 23 % de rendimento;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 4,4 (s, 2H) , 7,45 (t, 1H) , 7,7 (d, 1H) , 7,8 (m, 1H), 8,1 (m, 1H) , 8,6 (s, 1H) , 8,9 (d, 1H) , 10,1 (s largo, 1H), 10,4 (s, 1H).

Exemplo 23

Utilizando um procedimento análogo ao descrito no Exemplo 5, fez-se reagir 6-amino-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7- -fluoroquinazolina com cloreto de 4-clorobutirilo para se obter cloridrato de 6-(4-clorobutiramido)-4-(3'-cloro-4'-fluoro anilino) -7-fluoroquinazolina sob a forma de um sólido com 91 % de rendimento;

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,15 (m, 2H) , 2,7 (t, 2H) , 3,8 (t, 2H) , 7,55 (t, 1H) , 7,7 (m, 1H) , 7,9 (d, 1H) , 8,0 (m, 1H) , 8,9 (s, 1H), 9,15 (d, 1H), 10,4 (s largo, 1H), 11,5 (s largo, 1H).

Exemplo 24

Uma solução de cloridrato de 6-(4-clorobutiramido)-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoroquinazolina (0,64 g) em DMA. (6 39 Γ

U t ml) foi adicionada a uma suspensão agitada de hidreto de sódio (dispersão a 80 % em óleo mineral (0,14 g) da Ç[Ual se lavou o óleo com hexano) em DMA (2 ml) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A mistura de gelo e água (40 ml) foi adicionada e a mistura resultante foi agitada durante 30 minutos. 0 precipitado foi isolado, lavado com água, com uma pequena quantidade de isopropanol e éLer dietílico e seco. 0 sólido foi purificado através de cromatografia em coluna com uma mistura 9:1 de cloreto de metileno e metanol como eluente. Desta forma obteve-se 4-(3'-cloro-4'-fluoro-anilino)-7-fluoro-6-(2-oxo-l-pirrolidinil)-quinazolina sob a forma e um sólido (0,13 g);

Espectro de RMN: (CD3SOCD3) 2,2 (m, 2H) , 2,5 (m, 2H) , 3,9 (t, 2H) , 7,5 (t, 1H), 7,7 (d, 1H) , 7,8 (m, 1H) , 8,15 (m, 1H) , 8,6 (m, 2H), 9,9 (s largo, 1H).

Exemplo 25

Uma mistura de 4,7-dicloro-6-metoxiquinazolina (1,19 g) , 3'-cloro-4'-fluoroanilina (0,76 g) e isopropanol (25 ml) foi agitada e aquecida sob refluxo durante 2 horas. A mistura foi arrefecida até a temperatura ambiente. 0 precipitado foi separado por filtração. O sólido foi dissolvido numa mistura 9:1 de cloreto de metileno e metanol e a solução foi lavada com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio. A fase orgânica foi seca (MgS04) e evaporada. O resíduo foi purificado através de cromatografia em coluna com uma mistura 9:1 de cloreto de metileno e acetato e etilo como eluente. Desta forma obteve-se 7-cloro-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-6-metoxi- quinazolina (0,32 g), p.f. 223 a 224 °C;

Análise elementar: determinado C, 53,0; H, 2,8; N, 12,2; C15H10CI2FN3O corresponde a C, 53,5; H, 3,0; N, 12,4%. A 4,7-dicloro-6-metoxiquinazolina utilizada como material de parLida lui obtida da seguinte forma: 40 t

Uma mistura de 7-hidroxi-6-metoxi-4-(3-metilanilino)--quinazolina [Pedido de Patente Europeia n.° 0 566 226 (Exemplo 19); 8,3 g] , ácido clorídrico concentrado (100 ml) e etanol (100 ml) foi agitada e aquecida sob refluxo durante 72 horas. A mistura foi evaporada, adicionou-se água (50 ml) e a mistura foi alcalinizada através de adição de uma solução aquosa saturada de hidróxido de amónio. O precipitado foi isolado, lavado com água e seco. Desta forma obteve-se 4,7-di-hidroxi-6--metoxiquinazolina (4 g) .

Uma mistura de 4,7-di-hidroxi-6-metoxiquinazolina (1 g) e cloreto de tionilo (14 ml) foi aquecida à temperatura de refluxo durante 2 horas. A mistura foi evaporada para se obter 4,7-di-cloro-6-metoxiquinazolina que foi utilizada sem ser submetido a qualquer purificação adicional. 41

FÓRMULAS QUíΜICAS

Lisboa, 30 de Maio de 2001

O AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL 42

Claims

' L-Cj REIVINDICAÇÕES

caracterizado por R1 ser hidroxilo, amina, hidroxiamina, trifluorometoxilo, (1-4C)alcoxilo, (1-4C)alquilamina, di--[(1-4C)alquil]amina, 1-aziridinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, morfolina, 1-piperazinilo, 4-(1-4C)alquil-l-piperazinilo, (1-4C)alquiltio, halogeno--(2-4C)alcoxilo, hidroxi-(2-4C)alcoxilo, (1-4C)alcoxi--(2-4C)alcoxilo, fenil-(1-4C)alcoxilo, halogeno-(2-4C)-alquilamina, hidroxi-(2-4C)alquilamina, (1-4C)alcoxi--(2-4C)alquilamina, fenil-(1-4C)alquilamina, (2-4C)-alcanoilamina, benzamida, 2-oxo-l-pirrolidinilo, 2-oxo-l--piperidinilo, halogeno-(2-4C)alcanoilamina, hidroxi--(2-4C)alcanoilamina, (1-4C)alcoxi-(2-4C)alcanoilamina, (3-4C)alcenoilamina, (3-4C)alcinoilamina, N-(1-4C)alquil--(2—4C)alcanoilamina, N-(1-4C)alquilbenzamida, N-(1-4C)-alquil-halogeno-(2-4C)alcanoilamina, N-(1-4C)alquil--hidroxi- (2-4C)alcanoilamina, N-(1-4C)alquil-(1-4C)alcoxi--(2-4C)alcanoilamina, N-(1-4C)alquil-(3-4C)alcenoilamina ou N-(1-4C)alquil-(3-4C)alcinoilamina, e em que o dito substituinte benzamida ou N-(1-4C)alquilbenzamida ou qualquer grupo fenilo num substituinte R1 pode opcionalmente possuir um ou dois substituintes halogénio, (1-4C)-alquilo ou (1-4C)alcoxilo; 1

u R3 ser halogénio e n ser o número inteiro 1, 2 ou 3 e cada R2 ser independentemente hidrogénio, hidroxilo, halogénio, trifluorometilo, amina, nitro, ciano, (1-4C)alquilo, (1-4C)alcoxilo ou (2-4C)alcanoilamina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável
2. Derivado de quinazolina da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser hidroxilo, amina, hidroxiamina, metilamina, etilamina, dimetilamina, dietilamina, 1-aziridinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, morfolina, 1-piperazinilo, 4-metil-l--piperazinilo, acetamida, propionamida, 2-oxo-l- -pirrolidinilo, 2-cloroacetamida, 3-cloropropionamida, 4-clorobutiramida, 2-hidroxiacetamida ou 2-metoxiacetamida/ R3 ser flúor ou cloro; e (R2)n ser 4'-flúor, 3'-cloro, 3'-bromo, 3',4'-dicloro, 3'--cloro-4'-flúor, 3'-trifluorometilo, 4'-fluoro-3'-trifluorometilo, 3'-nitro, 4'-cloro-3'-nitro, 4'-fluoro-3'--nitro ou 3'-metilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
3. Derivado de quinazolina da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser hidroxilo, amina, hidroxiamina, metilamina, etilamina, dimetilamina, dietilamina, 1-aziridinilo, 1-azetidinilo, 1-pirrolidinilo, piperidina, morfolina, 1-piperazinilo, 4-metil-l--piperazinilo, acetamida, propionamida, 2-oxo-l- -pirrolidinilo, 2-cloroacetamida, 3-cloropropionamida, 4-clorobuliiamida, 2-hidroxiacetamida, 2-metoxiacetamida, acrilamida, metacrilamida, N-metilacetamida, N-etilacetamida, N-metilpropionamida, 2-cloro-N- -metilacetamida ou 2-cloro-N-etilacetamida; 2 Γ u, t R3 ser flúor ou cloro; e (R2)n ser 4'-flúor, 3'-cloro, 3'-bromo, 3',4'-dicloro, 3'--cloro-4'-flúor, 3'-trifluorometilo, 4'-fluoro-3'-tri- fluorometilo, 3'-nitro, 4'-cloro-3'-nitro, 4'-fluoro-3'- -nitro ou 3'-metilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. Derivado de quinazolina da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser metoxilo, etoxilo, metiltio, 2-cloroetoxilo, 2-bromoetoxilo, 2-hidroxietoxilo ou 2-metoxietoxilo; R3 ser flúor ou cloro; e (R2)n ser 4'-flúor, 3'-cloro, 3'-bromo, 3' ,4'-dicloro, 3'--cloro-4'-flúor, 3'-trifluorometilo, 4'-fluoro-3'-tri- fluorometilo, 3'-nitro, 4'-cloro-3'-nitro, 4'-fluoro-3'- -nitro ou 3'-metilo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
5. Derivado de quinazolina da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser amina, hidroxiamina, metilamina, dimetilamina, acetamida, 2-oxo-l--pirrolidinilo, 2-cloroacetamida ou 4-clorobutiramida; R3 ser flúor ou cloro; e (R2)n ser 3'-cloro, 3',4'-dicloro, 3'-cloro-4'-flúor ou 3'--metilo; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.
Derivado de quinazolina da fórmula reivindicação 1, caracterizado 3 por I de acordo R1 com a ser amina 6. \

Lr

hidroxiamina, metilamina, dimetilamina, acetamida, 2-oxo-l--pirrolidinilo, 2-cloroacetamida, 4-clorobutiramida, acrilamida ou 2-cloro-N-metilacetamida; R3 ser flúor ou cloro; e (R2)n ser 3'-cloro, 3',4'-dicloro, 3' -cloro-4'-flúor ou 3'--metilo; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.
7. Derivado de quinazolina da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por R1 ser metoxilo ou etoxilo; R3 ser flúor ou cloro; e (R2)n ser 3'-cloro, 3',4'-dicloro, 3' -cloro-4'-flúor ou 3'--metilo; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.
8. Derivado de quinazolina da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de entre 6-amino-7-fluoro-4--(3'-metilanilino)quinazolina, 6-(2-cloroacetamido)-7-fluoro-4-(3' -metilanilino)-quinazolina, 6- amino-4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoroquinazolina, 7- cloro-6-metilamino-4-(3'-metilanilino)quinazolina, 7-cloro-6-(2-cloroacetamido)-4-(3' -metilanilino)quinazolina e O 7-cloro-6-(2-cloroacetamido)-4-(3', 4'-dicloroanilino)-quinazolina; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável. 4
9. Derivado de quinazolina da fórmula I de acordo com a reivindicação 1, seleccionado de entre 7-fluoro-6- -hidroxiamino-4-(3'-metilanilino)quinazolina, 4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino) -7-fluoro-6-hidroxiamino-quinazolina, 6-acrilamido-7-fluoro-4-(3'-metilanilino)quinazolina, 4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino)-7-fluoro-6-metilamino-quinazolina, 6-(2-cloroacetamido)-4-(3' -cloro-4' -fluoroanilino)-7--fluoro-quinazolina, 6-(4-clorobutiramido)-4-(3' -cloro-4'-fluoroanilino)-7--fluoro-quinazolina e 4-(3'-cloro-4'-fluoroanilino) -7-fluoro-6-(2-oxo-l--pirrolidinil)-quinazolina; ou um seu sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável
10. Processo para a preparação de um derivado de quinazolina da fórmula I, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por incluir:- (a) a reacção de uma quinazolina da fórmula II Z Γ

II em que Z é um grupo deslocável, com uma anilina da fórmula 5 III

(b) para a produção dos compostos da fórmula I, em que R1 e R2 são hidroxilo, a cisão de nm derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 ou R2 é (1-4C) alcoxilo; (c) para a produção dos compostos da fórmula I em que R1 é arnina ou hidroxiamina, a redução de um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 é nitro; (d) para a produção dos compostos da fórmula I em que R1 é (2-4C)alcanoilamina, (2-4C)alcanoilamina substituída, benzamida, (3-4C)alcenoilamina, (3-4C)alcinoilamina, N- (1-4C)alquil-(2-4C)alcanoilamina, N-(1-4C)alquil-(2-4C)-alcanoilamina substituída, N-(1-4C)alquil-(3-4C)-alcenoilamina, N-(1-4C)alquil-(2-4C)alcinoilamina ou N-(1-4C)alquilbenzamida, ou R2 é (2-4C)alcanoilamina, a acilação de um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 ou R2 é arnina; ou (e) para a produção dos compostos da fórmula I em que R1 é (1-4C)alcoxilo ou (1-4C)alcoxilo substituído ou R1 é (1-4C)alquilamina, di-[(1-4C)alquil]arnina ou (1-4C)-alquilamina substituída, a alquilação de um derivado de quinazolina da fórmula I em que R1 é hidroxilo ou arnina conforme for adequado; e quando se pretende obter um sal farmaceuticamente aceitável de um derivado de quinazolina da fórmula I, este pode ser obtido utilizando um procedimento convencional.
11. Composição farmacêutica que contém um derivado de quinazolina da fórmula I ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. 6
12. Utilização de um derivado de quinazolins da fórmula I ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, na preparação de um medicamento destinado à utilização para a produção de um efeito anticanceroso num animal de sangue quente. Lisboa, 30 de Maio de 2001 0 AGENTE OFICIAL DA PROPRIEDADE INDUSTRIAL

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