PL226561B1 - Pochodna pirolidyny, kompozycja farmaceutyczna zawierająca ją oraz ich zastosowania - Google Patents

Pochodna pirolidyny, kompozycja farmaceutyczna zawierająca ją oraz ich zastosowania

Info

Publication number
PL226561B1
PL226561B1 PL373411A PL37341103A PL226561B1 PL 226561 B1 PL226561 B1 PL 226561B1 PL 373411 A PL373411 A PL 373411A PL 37341103 A PL37341103 A PL 37341103A PL 226561 B1 PL226561 B1 PL 226561B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
compound
phenyl
group
product
4alkyl
Prior art date
Application number
PL373411A
Other languages
English (en)
Other versions
PL373411A1 (pl
Inventor
Xiangdong Alan Wang
Li-Quang Sun
Li‑Quang Sun
Sing-Yuen Sit
Sing‑Yuen Sit
Ny Sin
Paul Michael Scola
Piyasena Hewawasam
Andrew Charles Good
Yan Chen
Jeffrey Allen Campbell
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=29584353&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL226561(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of PL373411A1 publication Critical patent/PL373411A1/pl
Publication of PL226561B1 publication Critical patent/PL226561B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/005—Enzyme inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/24—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0827—Tripeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku są w ogólności związki przeciwwirusowe, a dokładniej związki hamujące działanie proteazy NS3 kodowanej przez wirusa zapalenia wątroby typu C (HCV), kompozycje zawierające takie związki oraz sposoby hamowania funkcjonowania proteazy NS3.
HCV jest głównym patogenem ludzkim, infekującym na świecie, jak oszacowano, 170 milion osób - w przybliżeniu pięć razy więcej niż w przypadku ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu 1. U znacznej części osób zakażonych HCV rozwija się poważna postępująca choroba wątroby, w tym marskość i rak wątrobowokomórkowy. (Lauer, G. M.; Walker, B. D. N. Engl. J. Med. (2001), 345, 41-52).
Obecnie, najskuteczniejszy sposób leczenia HCV obejmuje podawanie kombinacji interferonu alfa i ribawiryny, prowadzący do uzyskania przedłużonej efektywności u 40% pacjentów. (Poynard, T. i in. Lancet (1998), 352, 1426-1432). Ostatnie wyniki badań klinicznych wykazują, że w przypadku monoterapii pegylowany interferon alfa jest lepszy niż niemodyfikowany interferon alfa (Zeuzem, S. i in. N. Engl. J. Med. (2000), 343, 1666-1672). Jednakże, nawet przy zastosowaniu eksperymentalnych reżimów terapeutycznych wymagających podawania kombinacji pegylowanego interferonu alfa i ribawiryny, u znacznej części pacjentów nie dochodzi do przedłużonego obniżenia liczby wirusów. Zatem, występuje jasna i od dawna odczuwana jest potrzeba opracowania skutecznych środków do leczenia infekcji wirusem HCV.
HCV jest wirusem RNA+. Opierając się na porównaniu wywnioskowanej sekwencji aminokwasowej i szerokiego podobieństwa nie ulegającego translacji regionu 5', HCV sklasyfikowano jako oddzielny rodzaj należący do rodziny Flaviviridae. U wszystkich wirusów z rodziny Flaviviridae występują wiriony w otoczkach, zawierające genom w postaci RNA+ hodujący wszystkie znane specyficzne dla wirusa białka, w przypadku którego translacja zachodzi przy pojedynczej, nieprzerwanej, otwartej ramce odczytu.
W genomie HCV występuje znaczna heterogeniczność w obrębie sekwencji nukleotydów i kodowanej przez nie sekwencji aminokwasowej. Scharakteryzowano co najmniej sześć głównych genotypów i opisano więcej niż 50 podtypów. Główne genotypy HCV różnią się występowaniem na świecie, a kliniczne znaczenie genetycznej heterogeniczności HCV pozostaje trudne do zdefiniowania pomimo licznych badań możliwego wpływu genotypów na patogenezę oraz leczenie.
Jednoniciowy RNA stanowiący genom HCV składa się w przybliżeniu z 9500 nukleotydów i ma pojedynczą otwartą ramkę odczytu (ORF) i koduje jedną dużą poliproteinę zbudowaną z około 3000 aminokwasów. W zainfekowanych komórkach, ta poliproteina cięta jest w wielu miejscach przez komórkowe i wirusowe proteazy dając białka strukturalne i niestrukturalne (NS). W przypadku HCV, dojrzałe niestrukturalne białka (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, i NS5B) powstają przy udziale dwóch proteaz wirusowych. Pierwsza proteza, do tej pory słabo scharakteryzowana, tnie w miejscu na połączeniu NS2-NS3; drugą proteazą jest proteaza serynowa zawarta w N-końcowym regionie NS3 (z tego względu nazywana proteazą NS3) i pośredniczy we wszystkich późniejszych przecięciach w dół od NS3, zarówno w konfiguracji cis, w miejscu cięcia NS3-NS4A, jak i w konfiguracji trans, w pozostałych miejscach NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B. Wydaje się, że NS4A białko ma wiele funkcji, działając jako kofaktor dla proteazy NS3 i prawdopodobnie asystuje w umieszczeniu w błonie NS3 oraz innych wirusowych składników replikazy. Konieczne do obróbki wydaje się powstanie kompleksu białka NS3 wraz z NS4A co zwiększa skuteczność proteolityczną na poziomie wszystkich tych miejsc. Białko NS3 wykazuje także aktywności nukleozydotrifosfatazy i helikazy RNA. NS5B jest zależną od RNA polimerazą RNA zaangażowaną w replikację HCV.
Wśród związków o udowodnionej efektywności w hamowaniu replikacji HCV, działających jako selektywne HCV inhibitory proteazy serynowych, znajdują się związki peptydowe ujawnione w opisie patentowym St. Zjedn. Ameryki nr 6323180.
Przedmiotem wynalazku jest podstawiona pochodna pirolidyny o wzorze
PL 226 561 B1 w którym:
(a) R1 oznacza C1-4alkil lub C3-4cykloalkil;
(b) m ma wartość 2;
(c) n ma wartość 1;
(d) R2 oznacza etyl lub winyl;
(e) R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C1-4alkoksykarbonyl, C1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, karboksymetyl, C3-6cykloalkiloC1-4alkil;
(f) Y oznacza atom wodoru lub metyl;
(g) B oznacza atom wodoru, grupę o wzorze R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
(h) R4 oznacza (i) C1-8alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil lub C4-8alkiloC3-6cykloalkil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową; (iii) fenyl lub fenyloC1-4alkil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową lub atom fluorowca; (iv) Het wybrany z grupy obejmującej tetrahydrofuran, pirazynę lub pierścień fenylowy skondensowany z grupą -O-CH2CH2-O-; (v) bicyklo[1.1.1]pentan;
(i) R5 oznacza atom wodoru; C1-2alkil lub metoksyl;
(j) X oznacza atom tlenu, siarki, grupę SO2, OCH2 lub NH;
(k) R' oznacza Het lub grupę fenylową lub naftylową ewentualnie podstawiony przez Ra;
(l) Ra oznacza C1-4alkil, cyklopropyl, C1-4alkoksyl -CF3, fluorowcometyl, grupę cyjanową, atom fluorowca, C1-4tioalkil, hydroksyl, grupę di(C1-4)alkiloamidową, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl wybrany z grupy obejmującej morfolinę, pirydynę, tiofen, furan, pirazynę, tiazol, oksazol, imidazol lub triazol;
przy czym Het oznacza 5- lub 7-czlonową heterocykliczną grupę monocykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu lub siarki albo 9- lub 10-członową heterocykliczną grupę bicykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu, azotu i siarki; z ograniczeniem, że Xa-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze
lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól.
Korzystnie, R1 oznacza C3-4cykloalkil.
Korzystnie, R2 oznacza grupę etylową lub winylową, korzystniej R2 oznacza grupę winylową.
Korzystnie, R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksyl, C1alkoksykarbonyl, fenyloC1-4alkil, korzystniej R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez C1-4alkoksyl.
Korzystnie, Y oznacza atom wodoru.
Korzystnie, B oznacza atom wodoru, R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-, korzystniej B oznacza R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-, najkorzystniej B oznacza R4O(C=O)i R4 oznacza C1-6alkil.
Korzystnie R4 oznacza (i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil, lub C4-8alkilocykloalklil; lub (iii) C6 lub C9aryloalkil, każdy ewentualnie podstawiony przez metyl lub atom fluorowca, korzystniej R4 oznacza (i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez 1-3 atomy fluorowca lub metoksyl; albo (ii) C4-5cykloalkil lub C3-6cykloalkiloC1-4alkil.
Korzystnie, R5 oznacza atom wodoru lub C1-2alkil, korzystniej R5 oznacza atom wodoru.
Korzystnie, X oznacza atom tlenu lub NH.
PL 226 561 B1
Korzystnie, R' oznacza Het; lub fenyl lub naftyl ewentualnie podstawiony przez Ra, korzystniej R' oznacza Het.
Korzystnie, heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu i ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu, korzystniej heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup takich jak
C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie Ra oznacza C1-4alkil, C3cykloalkil, C1-4alkoksyl, fluorowcoetyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie związkiem według wynalazku jest związek o wzorze
w którym:
(a) R1 oznacza C3-4cykloalkil;
(b) R2 oznacza etyl lub winyl;
(c) R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C1-4alkoksykarbonyl, C1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C3-6cykloalkiIoC1-4alkil;
(d) Y oznacza atom H;
(e) B oznacza atom wodoru, R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
(f) R4 oznacza (i) C1-8alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil lub C4-8alkilocykloalklil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową; (iii) fenyl lub fenyloC1-4alkil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową lub atom fluorowca; (iv) Het wybrany z grupy obejmującej tetrahydrofuran, pirazynę lub pierścień fenylowy skondensowany grupą o wzorze -O-CH2CH2-O-; (v) bicyklo[1.1.1]pentan;
(g) R5 oznacza atom wodoru lub etyl lub metoksyl;
(h) X oznacza atom tlenu lub NH;
(i) R' oznacza Het; lub fenyl lub naftyl ewentualnie podstawiony przez Ra; oraz (j) Ra oznacza C1-4alkil, cyklopropyl, C1-4alkoksyl, CF3, fluorowcometyl, grupę cyjanową, atom fluorowca, C1-4tioalkll, hydroksyl, grupę di(C1-4)alkiloamidową, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl wybrany z grupy obejmującej morfolinę, pirydynę, tiofen, furan, pirazynę, tiazol, oksazol, imidazol lub triazol;
przy czym Het oznacza 5- lub 7-członową heterocykliczną grupę monocykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu i siarki; albo 9- lub 10-członową heterocykliczną grupę bicykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu i siarki; z ograniczeniem, że Xa-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
PL 226 561 B1
Korzystnie, R' oznacza bicykliczny heterocykl, korzystniej heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu oraz ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu, albo heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup takich jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl oraz 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie, R' oznacza bicykliczny heterocykl zawierający 1 atom azotu i podstawiony przez metoksyl i co najmniej jedną z grup takich jak fenyl i 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie, R' oznacza monocykliczny heterocykl, korzystniej heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu i ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu, albo heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub naftyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie, R' oznacza monocykliczny heterocykl zawierający 1 lub 2 atomy azotu i podstawiony przez metoksyl i co najmniej jedną z grup takich jak C6aryl i 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie związkiem według wynalazku jest związek o wzorze
w którym:
(a) R1 oznacza C3-4cykloalkil;
(b) R2 oznacza winyl;
(c) R3 oznacza C1-4alkil;
(d) Y oznacza atom wodoru;
(e) B oznacza R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
(f) R4 oznacza C1-10alkil;
(g) R5 oznacza atom wodoru;
(h) R' oznacza bicykliczny heterocykl ewentualnie podstawiony przez Ra; oraz (i) Ra oznacza C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl; z ograniczeniem, że O-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
Korzystnie, oznacza cyklopropyl lub cyklobutyl. Korzystnie, R2 oznacza winyl.
Korzystnie, R3 oznacza t-butyl.
Korzystnie, R4 oznacza t-butyl.
PL 226 561 B1
Korzystnie, R' oznacza chinolinę lub izochinolinę nie podstawioną przez Ra.
Korzystnie, R1 oznacza cyklopropyl, R2 oznacza winyl, R3 oznacza t-butyl, R4 oznacza t-butyl oraz R' oznacza izochinolinę podstawioną przez Ra, korzystniej Ra oznacza C1-4alkoksyl, najkorzystniej
Ra ponadto obejmuje co najmniej grup takich jak fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
Przedmiotem wynalazku jest również związek jak określono stosowany do leczenia wirusowego zapalenia wątroby typu C u pacjenta lub hamowania proteazy NS3 wirusa HCV.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i substancję czynną, zawierająca jako substancję czynną związek jak określono powyżej lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól.
Wynalazek dotyczy także kompozycji farmaceutycznej jak określono powyżej stosowanej do leczenia wirusowego zapalenia typu C u pacjenta.
Zaletą wynalazku jest to, że umożliwia otrzymanie ulepszonych leków zawierających związki według wynalazku, które mogą być skuteczne w leczeniu pacjentów zakażonych wirusem HCV. Specyficznie, wynalazek dotyczy związków peptydowych mogących hamować działanie proteazy NS3, np. w połączeniu z proteazą NS4A.
Definicje stereochemiczne i stosowane tu konwencje na ogół zgodne są z McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms, S. P. Parker, wyd. McGraw-Hill Book Company, New York (1984) i Stereochemistry of Organic Compounds, Eliel, E. i Wilen, S., John Wiley & Sons, Inc., New York (1994). Wiele związków organicznych występuje w formach optycznie czynnych, tj. wykazują one zdolność do skręcania płaszczyzny światła spolaryzowanego. W opisie związku optycznie czynnego, przedrostki D i L lub R i S stosuje się do oznaczenia bezwzględnej konfiguracji cząsteczki wokół jego centrum (centrów) chiralności. Przedrostki d i 1 lub (+) i (-) stosuje się do oznaczenia kierunku obrotu płaszczyzny światła spolaryzowanego przez związek, (-) lub 1 oznacza, że związek jest lewoskrętny a (+) lub d oznacza, że związek jest prawoskrętny. Dla danej struktury chemicznej, związki te, nazwane stereoizomerami, są identyczne z tym wyjątkiem, że są one własnymi odbiciami lustrzanymi. Specyficzny stereoizomer z pary będącej odbiciami lustrzanymi można nazywać także enancjomerem, a mieszaninę takich izomerów nazywa się często mieszaniną enancjomerów.
Nomenklatura stosowana do opisu rodników organicznych, np. węglowodorów i podstawionych węglowodorów, na ogół zgodna jest ze standardową nomenklaturą znaną w dziedzinie, jeśli specyficznie nie określono tego inaczej. Kombinacje grup, np. alkiloalkoksyamina, obejmują wszystkie możliwe trwałe konfiguracje, jeśli specyficznie nie określono tego inaczej. Poniżej, dla celów ilustracyjnych, określono pewne rodniki i kombinacje.
Terminy „mieszanina racemiczna” i „racemat” oznaczają równomoIową mieszaninę dwóch enancjomerów, która nie jest optycznie czynna.
Termin „chiralny” odnosi się do cząsteczek, których lustrzane nie nakładają się na siebie, podczas gdy „chiralny” odnosi się do cząsteczek, których obrazy lustrzane nakładają się na siebie.
Termin „stereoizomery” oznacza związki, które mają identyczny skład chemiczny, lecz różnią się rozmieszczeniem atomów lub grup w przestrzeni.
Termin „diastereomer” oznacza stereoizomer, który nie jest enancjomerem np. stereoizomer o dwóch lub więcej centrach chiralności, którego cząsteczki nie są własnymi odbiciami lustrzanymi. Diastereomery wykazują różne właściwości fizyczne np. temperatury topnienia, temperatury wrzenia, właściwości spektralne oraz reaktywności. Mieszaniny diasteromerów można oddzielać przy zastosowaniu procedur analitycznych o wysokiej rozdzielczości, takich jak elektroforeza i chromatografia.
Termin „enancjomery” oznacza dwa stereoizomery związku będące swoimi nie nakładającymi się odbiciami lustrzanymi.
Termin „farmaceutycznie dopuszczalna sól” w zamierzeniu oznacza nietoksyczne sole związku zawierającego grupę zasadową lub kwasową wytworzone przy zastosowaniu typowych metod chemicznych. Na ogół, takie sole można wytworzyć poddając reakcji kwasy lub zasady w wolnej formie z odpowiednią zasadą lub kwasem, w stechiometrycznej ilości w wodzie lub w rozpuszczalniku organicznym lub w ich mieszaninie, na ogół, niewodnych odczynników, korzystnie takich jak eter, octan etylu, etanol, izopropanol lub acetonitryl. Listy odpowiednich soli przedstawiono w Reminton's Pharmaceutical Sciences, wydanie 18, Mack Publishing Company, Easton, PA, 1990, str. 1445. Związki według wynalazku są przydatne w formie wolnej zasady lub kwasu lub w postaci ich farmaceutycznie dopuszczalnej soli. Wszystkie formy mieszczą się w zakresie wynalazku.
Termin „terapeutycznie skuteczna ilość” oznacza całkowitą ilość każdego czynnego składnika wystarczającą do uzyskania znaczącej dla pacjenta korzyści np. przedłużonego zmniejszenia ilości
PL 226 561 B1 wirusów. W przypadku gdy stosuje się jeden czynny składnik, wówczas termin odnosi się do tego składnika. W przypadku gdy stosuje się kombinację, termin odnosi się do łącznej ilości aktywnych składników dających efekt terapeutyczny, niezależnie czy podaje się je w kombinacji seryjnie czy jednocześnie.
Termin „związki według wynalazku” oraz wyrażenia równoważne, oznaczają związki o wzorze I oraz farmaceutycznie dopuszczalne sole. Podobnie, termin związki pośrednie, oznacza również ich sole i solwaty, jeżeli wynika to z kontekstu. Odniesienia do związku według wynalazku obejmują także odniesienia do korzystnych związków o wzorze II i III.
Termin „pochodna” oznacza chemicznie zmodyfikowany związek, modyfikacje którego, fachowiec w dziedzinie chemii, uzna za rutynowe, takie jak przekształcanie w formę estru lub amidu kwasu, dołączenie grup zabezpieczających, takich jak grupa benzylowa w przypadku alkoholu lub tiolu, oraz tert-butoksykarbonylu w przypadku aminy.
Termin „solwat” oznacza fizyczne połączenie związku według wynalazku z jedną lub więcej cząsteczkami rozpuszczalnika, organicznego lub nieorganicznego. Takie połączenie obejmuje tworzenie wiązania wodorowego. W pewnych przypadkach solwat będzie można usunąć, np. gdy jedną lub więcej cząsteczek rozpuszczalnika wprowadzi się w siatkę krystaliczną ciała stałego. Termin „solwat” oznacza zarówno solwaty w fazie rozpuszczonej jak i dające się wydzielić. Przykładowe solwaty obejmują hydraty, etanolany, metanolany itp.
Stosowany tu termin „prolek” oznacza pochodne związków według wynalazku, posiadające grupy dające się usunąć chemicznie lub metabolicznie, które przekształcane w wyniku solwolizy lub w warunkach fizjologicznych, dają związki według wynalazku wykazujące in vivo aktywność farmaceutyczną. Prolek związku można w typowy sposób utworzyć z grupą funkcyjną związków, taką jak grupa aminowa hydroksylowa lub karboksylowa, o ile takie grupy występują. Pochodna forma często wykazuje korzystną rozpuszczalność, kompatybilność tkankową lub opóźnione uwalnianie w organizmie ssaka (patrz, Bundgard, H., Design of Prodrugs, str. 7-9, Elsevier, Amsterdam 1985). Proleki obejmują pochodne kwasu, dobrze znane fachowcom w dziedzinie, takie jak np. estry wytwarzane na drodze reakcji macierzystego związku kwasowego z odpowiednim alkoholem lub amidy wytworzone na drodze reakcji macierzystego związku kwasowego z odpowiednią aminą.
Termin „pacjent” obejmuje zarówno ludzi jak i inne ssaki.
Termin „kompozycja farmaceutyczna” oznacza kompozycję zawierającą związek według wynalazku w połączeniu z co najmniej jednym dodatkowym nośnikiem farmaceutycznym tj. substancją dodatkową, rozczynnikiem lub rozczynnikiem, takim rozcieńczalniki, środki konserwujące, wypełniacze, środki regulujące przepływ, środki rozdrabniające, środki zwilżające, środki emulgujące, środki rozpraszające, środki słodzące, środki smakowe, środki zapachowe, środki przeciwbakteryjne, środki przeciwgrzybicze, środki smarujące i środki rozsadzające, zależnie od własności sposobu podawania i postaci dawkowania. Można stosować składniki wyszczególnione np. w Remington's Pharmaceutical Sciences, wyd. 18, Mack Publishing Company, Easton, PA (1999).
Stosowany tu termin „farmaceutycznie dopuszczalny” dotyczy związków, substancji, kompozycji i/lub postaci dawkowania, które według oceny lekarza, są odpowiednie do zastosowania w kontakcie z tkankami pacjentów bez wywoływania nadmiernej toksyczności, podrażnienia, odpowiedzi alergicznej lub innego problemu lub powikłania, proporcjonalnie do rozsądnego stosunku ryzyko/korzyść.
Termin „leczenie” oznacza: (i) zapobieganie chorobie, zaburzeniu lub schorzeniu u pacjenta, który może być predysponowany do choroby, zaburzenia i/lub schorzenia, lecz nie zostały one jeszcze u niego zdiagnozowane; (ii) hamowanie choroby, zaburzenia lub schorzenia tj. zatrzymanie ich rozwoju; i (iii) złagodzenie choroby, zaburzenia lub schorzenia, tj. wywołanie cofania się choroby, zaburzenia i/lub schorzenia.
Stosowany tu termin „podstawiony” oznacza podstawienie od jednego do maksymalnej liczby możliwych miejsc wiążących na rdzeniu np. rodniku organicznym, z którym związany jest podstawnik, np. mono-, di-, tri- lub tetrapodstawiony, jeśli specyficznie nie stwierdzono inaczej.
Stosowany tu termin „fluorowco” oznacza podstawnik w postaci atomu fluorowca, wybrany spośród takich jak atom bromu, atom chloru, atom fluoru lub jodu. Termin „fluorowcoalkil” oznacza grupę alkilową podstawioną przez jeden lub więcej fluorowcowych podstawników.
Stosowany tu termin „alkil” oznacza acykliczne, podstawniki alkilowe o łańcuchu prostym lub rozgałęzionym i obejmuje np. metyl, etyl, propyl, butyl, tert-butyl, heksyl, 1-metyloetyl, 1-metylopropyl,
2-metylopropyl, 1,1-dimetyloetyl. Zatem, C1-6alkil oznacza grupę alkilową posiadającą od jednego do sześciu atomów węgla. Termin „niższy alkil” oznacza grupę alkilową posiadającą od jednego do sze8
PL 226 561 B1 ściu, korzystnie od jednego do sześciu atomów węgla. Termin „alkiloester” oznacza grupę alkilową dodatkowo zawierającą grupę estrową. Na ogół, wyszczególniony zakres liczbowy atomów węgla, np. C2-6alkiloester, oznacza wszystkie atomy węgla w rodniku.
Stosowany tu termin „alkenyl” oznacza alkil zawierający co najmniej jedno wiązanie podwójne np. etenyl (winyl) oraz alkil.
Stosowany tu termin „alkoksy” oznacza grupę alkilową o wskazanej liczbie atomów węgla, przyłączoną do atomu tlenu. Alkoksy obejmuje np. metoksy, etoksy, propoksy, 1-metyloetoksy, butoksy i 1,1-dimetyloetoksy. Ten ostatni rodnik nazywany jest dziedzinie tert-butoksy. Termin „alkoksykarbonyl” oznacza grupę alkoksy zawierającą dodatkowo grupę karbonylową.
Stosowany tu termin „cykloalkil” oznacza podstawnik cykloakilowy zawierający wskazaną liczbę atomów węgla i obejmuje np. cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl, cykloheptyl i grupy spirocykliczne, takie jak spirocyklopropyl i spirocyklobutyl. Stosowany tu termin „cykloalkoksy” oznacza cykloalkil związany z atomem tlenu, taki jak np. cyklobutyloksy lub cyklopropyloksy. Termin „alkilocykloalkil” oznacza cykloalkil związany z grupą alkilową. Wspomniany zakres liczbowy atomów węgla oznacza całkowitą liczbę atomów węgla w rodniku, jeśli specyficznie nie stwierdzono tego inaczej. Zatem C4-10alkilocykloalkil może zawierać od 1-7 atomów węgla w grupie alkilowej i od 3-9 atomów węgla w pierścieniu, np. cyklopropylometyl lub cykloheksyloetyl.
Stosowany tu termin „aryl” oznacza grupę aromatyczną zawierającą wskazaną liczbę atomów węgla, tak jak, między innymi fenyl, indanyl lub naftyl. Przykładowo, C6-10aryl oznacza grupę aromatyczną o od sześciu do dziesięciu atomach węgla, która może występować w postaci struktury monocyklicznej lub bicyklicznej. Stosowany tu termin „fluorowcoaryl” oznacza aryl mono-, di- lub tripodstawiony przez jeden lub więcej atomów fluorowca. Terminy „alkiloaryl”, „aryloalkil” i „aryloalalkil” oznaczają grupę arylową podstawioną przez jedną lub więcej grup alkilowych. Zatem, grupa C7-14alkiloarylowa może posiadać od 1-8 atomów węgla w grupie alkilowej w przypadku monocyklicznego związku aromatycznego i od 1-4 atomów węgla w grupie alkilowej w przypadku skondensowanego związku aromatycznego. Rodniki arylowe obejmują rodniki podstawione przez typowe podstawniki znane fachowcom w dziedzinie np. atom fluorowca, hydroksy, karboksy, karbonyl, nitro, sulfo, amino, cyjano, dialkiloamino, fluorowcoalkil, CF3, fluorowcoalkoksy, tioalkil, alkanoil, SH, alkiloamino, alkiloamid, dialkiloamid, ester karboksylowy, alkilosulfon, alkilosulfonamid i alkilo(alkoksy)amina. Przykłady grup alkiloarylowych obejmują benzyl, butylfenyl i 1-naftylometyl. Terminy „alkiloarylooksy” i „alkiloaryloester” oznaczają grupy alkiloarylowe zawierające odpowiednio atom tlenu i grupę estrową.
Stosowany tu termin „karboksyalkil” oznacza grupę karboksylową (COOH) związaną poprzez zdefiniowaną powyżej grupę alkilową i obejmuje np. kwas masłowy.
Stosowany tu termin „alkanoil” oznacza prostołańcuchowe lub rozgałęzione rodniki 1-oksoalkilowe zawierające wskazaną liczbę atomów węgla i obejmuje np. formyl, acetyl, 1-oksopropyl (propionyl), 2-metylo-1-oksopropyl, 1-oksoheksyl itp.
Stosowany tu termin „aminoaryloalkil” oznacza grupę aminową podstawioną przez grupę aryloalkilową, taką jak następujący aminoaryloalkil
Stosowany tu termin „alkiloamid” oznacza amid monopodstawiony przez alkil, taki jak
Stosowany tu termin „karboksyalkil” oznacza grupę karboksylową (COOH) związaną poprzez zdefiniowaną powyżej grupę alkilową i obejmuje np. kwas masłowy.
Stosowany tu termin „heterocykl”, występujący także pod nazwą „Het”, oznacza 7-12 członowy bicykliczny heterocykl oraz 5-7 członowy monocykliczny heterocykl.
PL 226 561 B1
Korzystnymi bicyklicznymi heterocyklami są 7-12 członowe skondensowane bicykliczne układy pierścieniowe (oba pierścienie dzielą sąsiednią parę atomów) zawierające od jednego do sześciu heteroatomów wybranych spośród takich jak atom azotu, tlenu i siarki, przy czym oba pierścienie heterocyklu są całkowicie nienasycone. Ewentualnie heteroatomy azotu i siarki mogą być utlenione. Bicykliczny heterocykl może zawierać heteroatomy w jednym lub obu pierścieniach. Bicykliczny heterocykl może także zawierać podstawniki na dowolnych atomach węgla w pierścieniu np. jeden do trzech podstawników. Przykłady odpowiednich podstawników obejmują C1-6alkil, C3-7cykloalkil, C1-6alkoksy, C3-7cykloalkoksy, fluorowco-C1-6alkil, CF3, mono- lub di-fluorowco-C1-6alkoksy, cyjano, atom fluorowca, tioalkil, hydroksy, alkanoil, NO2, SH, amino, C1-6alkiloamino, di(C1-6)alkiloamino, di(C1-6)alkiloamid, karboksy, (C1-6)ester karboksylowy, C1-6alkilosulfon, C1-6alkilosulfonamid, C1-6alkilosulfotlenek, di(C1-6)alkilo(alkoksy)amina, C6-10aryl, C7-14alkiloaryl i 5-7 członowy monocykliczny heterocykl. Gdy dwa podstawniki przyłącza się do sąsiednich atomów węgla w bicyklicznym heterocyklu, mogą się one łączyć z wytworzeniem pierścienia w np. pięcio-, sześcio- lub siedmioczłonowy układ pierścieniowy zawierający aż do dwóch heteroatomów wybranych atomów tlenu i azotu. Bicykliczny heterocykl można przyłączyć do jego grupy bocznej np. X we wzorze I, przy dowolnym atomie w pierścieniu a korzystnie atomu węgla.
Przykłady bicyklicznych heterocykli obejmują między innymi następujące układy pierścieniowe:
Korzystnymi monocyklicznymi heterocyklami są 5-7-członowe nasycone, częściowo nasycone lub całkowicie nienasycone układy pierścieniowe (ta ostatnia podgrupa oznacza nienasycony związek heteroaromatyczny) zawierające w pierścieniu od jednego do sześciu heteroatomów wybranych spośród takich jak atom azotu, atom tlenu i siarki, przy czym ewentualnie heteroatomy siarki i azotu mogą być utlenione. Monocykliczny heterocykl może także zawierać podstawniki na dowolnych atomach pierścienia, np. jeden do trzech podstawników. Przykłady odpowiednich podstawników obejmują C1-6alkil, C3-7cykloalkil, C1-6alkoksy, C3-7cykloalkoksy, fluorowco-C1-6alkil, CF3, mono- lub difluorowco-C1-6alkoksy, cyjano, atom fluorowca, tioalkil, hydroksy, alkanoil, NO2, SH, amino, C1-6alkiloamino, di(C1-6)alkiloamino, di(C1-6)alkiloamid, karboksy, (C1-6)ester karboksylowy, C1-6alkilosulfon, C1-6alkilosulfotlenek, C1-6alkilosulfonamid, di(C1-6)alkilo(alkoksy)amina, C6-10aryl, C7-14alkiloaryl i 5-7-członowy monocykliczny heterocykl. Monocykliczny heterocykl może być przyłączony do swojej grupy bocznej np. X we wzorze I, przy dowolnym atomie w pierścieniu.
Przykłady monocyklicznych heterocykli obejmują między innymi takie jak:
PL 226 561 B1
Fachowcy w dziedzinie rozpoznają, że heterocykl stosowany w związkach według wynalazku powinien być trwały. Na ogół, trwałymi związkami są te, które można zsyntetyzować, wydzielić i skomponować stosując techniki znane w dziedzinie bez degradacji związku.
Tam gdzie w nazewnictwie związków według wynalazku zastosowano oznaczenia „P1', P1, P2, P3 i P4”, określają one względne pozycje reszt aminokwasowych wiązania inhibitora proteazy w stosunku do wiązania naturalnego substratu rozerwania peptydu. W przypadku naturalnego substratu do rozerwania dochodzi pomiędzy P1 i P1' przy czym pozycje bez oznaczania prim wskazują aminokwasy rozpoczynając od C-końca naturalnego miejsca rozerwania peptydu w kierunku N-końca; podczas gdy, pozycje oznaczone prim rozpoczynają się od N-końca oznaczenia miejsca rozerwania i w kierunku C-końca. Przykładowo, P1' oznacza pozycję pierwszą po prawej stronie od C-końca miejsca rozerwania (tj. pierwsza pozycja N-końca); podczas gdy P1 rozpoczyna numerację od lewej strony C-końcowego miejsca rozerwania, P2: druga pozycja od C-końca itp.). (patrz Berger A. & Schechter I., Transactions of Royal London series (1970), B257, 249-264].
Zatem dla związków o wzorze I, części cząsteczki „P1' do P4” wskazano poniżej:
Stosowany tu termin „kwas 1-aminocyklopropylokarboksylowy” (Acca) oznacza związek o wzorze:
Stosowany tu termin „tert-butyloglicyna” oznacza związek o wzorze:
Termin „reszta” w odniesieniu do aminokwasu lub pochodnej aminokwasu oznacza rodnik pochodzący od odpowiedniego α-aminokwasu po eliminacji grupy hydroksylowej z grupy karboksylowej i jednego atomu wodoru z grupy α-aminokwasowej. Na przykład, terminy Gln, Ala, Gly, Ile, Arg, Asp, Phe, Ser, Leu, Cys, Asn, Sar i Tyr oznaczają odpowiednio „reszty” L-glutaminy, L-alaniny, glicyny, L-izoleucyny, L-argininy, kwasu L-asparaginowego, L-fenyloalaniny, L-seryny, L-leucyny, L-cysteiny, L-asparaginy, sarkozyny i L-tyrozyny.
Termin „łańcuch boczny” w odniesieniu do aminokwasu lub reszty aminokwasowej oznacza grupę przyłączoną do atomu węgla a a-aminokwasu. Przykładowo, łańcuchem bocznym grupy R gliPL 226 561 B1 cyny jest atom wodoru, w przypadku alaniny jest to metyl, w przypadku waliny jest to izopropyl. Dla specyficznych grup R lub łańcuchów bocznych α-aminokwasów odwołania literaturowe znajdują się w A.L. Lehninger's Text on Biochemistry (patrz rozdział 4).
Związki według wynalazku mają budowę przedstawioną wzorem
w którym:
(a) R1 oznacza C1-4alkil lub C3-4cykloalkil;
(b) m ma wartość 2;
(c) n ma wartość 1;
(d) R2 oznacza etyl lub winyl;
(e) R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C1-4alkoksykarbonyl, C1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, karboksymetyl, C3-6cykloalkiloC1-4alkil;
(f) Y oznacza atom wodoru lub metyl;
(g) B oznacza atom wodoru, grupę o wzorze R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
(h) R4 oznacza (i) C1-8alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil lub C4-8alkiloC3-6cykloalklil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową; (iii) fenyl lub fenyloC1-4alkil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową lub atom fluorowca; (iv) Het wybrany z grupy obejmującej tetrahydrofuran, pirazynę lub pierścień fenylowy skondensowany z grupą -O-CH2CH2-O-; (v) bicyklo[1.1.1]pentan;
(i) R5 oznacza atom wodoru; C1-2alkil lub metoksyl;
(j) X oznacza atom tlenu, siarki, grupę SO2, OCH2 lub NH;
(k) R' oznacza Het lub grupę fenylową lub naftylową ewentualnie podstawiony przez Ra;
(l) Ra oznacza C1-4alkil, cyklopropyl, C1-4alkoksyl, -CF3, fluorowcometyl, grupę cyjanową, atom fluorowca, C1-4-tioalkil, hydroksyl, grupę di(C1-4)alkiloamidową, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl wybrany z grupy obejmującej morfolinę, pirydynę, tiofen, furan, pirazynę, tiazol, oksazol, imidazol lub triazol;
przy czym Het oznacza 5- lub 7-członową heterocykliczną grupę monocykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu lub siarki albo 9- lub 10-członową heterocykliczną grupę bicykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu, azotu i siarki;
z ograniczeniem, że Xa-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze
lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól.
PL 226 561 B1
Korzystnie, R1 oznacza C3-4cykloalkil.
Korzystnie, R2 oznacza grupę etylową lub winylową, korzystniej R2 oznacza grupę winylową.
Korzystnie, R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksyl, C1-alkoksykarbonyl, fenyloC1-4alkil, korzystniej R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez C1-4alkoksyl.
Korzystnie, Y oznacza atom wodoru.
Korzystnie, B oznacza atom wodoru, R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O), korzystniej B oznacza R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-, najkorzystniej B oznacza R4O(C=O)- i R4 oznacza C1-6alkil.
Korzystnie R4 oznacza (i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil, lub C4-8alkilocykloalklil; lub (iii) C6 lub C9-aryloalkil, każdy ewentualnie podstawiony przez metyl lub atom fluorowca, korzystniej R4 oznacza (i) C1-10alkil ewentualnie przez 1-3 atomy fluorowca lub metoksyl; albo (ii) C4-5cykloalkil lub C3-6cykloalkilo-C1-4alkil.
Korzystnie, R5 oznacza atom wodoru lub C1-2alkil, korzystniej R5 oznacza atom wodoru.
Korzystnie, X oznacza atom tlenu lub NH.
Korzystnie, R' oznacza Het; lub fenyl lub naftyl ewentualnie podstawiony przez Ra, korzystniej R' oznacza Het.
Korzystnie, heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu i ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu, korzystniej heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup takich jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie Ra oznacza C1-4alkil, C3cykloalkil, C1-4alkoksyl, fluorowcoetyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
Podstawniki z każdego ugrupowania można wybierać indywidualnie i łączyć w dowolną kombinację, dzięki której zgodnie z wynalazkiem powstanie trwały związek. Dodatkowo, do rdzenia dostarczonej grupy można dołączyć więcej niż jeden podstawnik z każdej grupy pod warunkiem, że występuje wystarczająca liczba dostępnych miejsc wiążących. Przykładowo, do bicyklicznego heterocyklu R' można dołączyć każdy spośród następujących podstawników Ra C1-6alkoksy, C6aryl i 5-7-członowy monocykliczny heterocykl.
W korzystnym aspekcie, związki według wynalazku mają budowę opisaną wzorem II:
w którym:
(a) R1 oznacza C3-4cykloalkil;
(b) R2 oznacza etyl lub winyl;
(c) R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C1-4alkoksykarbonyl, C1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C3-6cykloalkiIoC1-4alkil;
(d) Y oznacza atom H;
(e) B oznacza atom wodoru, R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4N(R5)-C(=O)-;
(f) R4 oznacza (i) C1-8alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil lub C4-8alkilocykloalklil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową; (iii) fenyl lub fenylo-C1-4alkil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową lub atom fluorowca; (iv) Het wybrany z grupy obejmującej tetrahydrofuran, pirazynę lub pierścień fenylowy skondensowany grupą o wzorze -O-CH2CH2-O-; (v) bicyklo[1.1.1]pentan;
(g) R5 oznacza atom wodoru lub etyl lub metoksyl;
(h) X oznacza atom tlenu lub NH;
(i) R' oznacza Het; lub fenyl lub naftyl ewentualnie podstawiony przez Ra; oraz
PL 226 561 B1 (j) Ra oznacza C1-4alkil, cyklopropyl, C1-4alkoksyl, CF3, fluorowcometyl, grupę cyjanową, atom fluorowca, C1-4tioalkil, hydroksyl, grupę di(C1-4)alkiloamidową, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl wybrany z grupy obejmującej morfolinę, pirydynę, tiofen, furan, pirazynę, tiazol, oksazol, imidazol lub triazol;
przy czym Het oznacza 5- lub 7-członową heterocykliczną grupę monocykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu i siarki; albo 9- lub 10-członową heterocykliczną grupę bicykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu i siarki; z ograniczeniem, że Xa-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
Korzystnie, R' oznacza bicykliczny heterocykl, korzystniej heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu oraz ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu, albo heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup takich jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl oraz 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie, R' oznacza bicykliczny heterocykl zawierający 1 atom azotu i podstawiony przez metoksyl i co najmniej jedną z grup takich jak fenyl i 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie, R' oznacza monocykliczny heterocykl, korzystniej heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu i ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu, albo heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup takich jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub naftyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
Korzystnie, R' oznacza monocykliczny heterocykl zawierający 1 lub 2 atomy azotu i podstawiony przez metoksyl i co najmniej jedną z grup takich jak C6aryl i 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
W bardziej korzystnym aspekcie wynalazku, związki mają budowę opisaną wzorem III
w którym:
(a) R1 oznacza C3-4cykloalkil;
(b) R2 oznacza winyl;
(c) R3 oznacza C1-4alkil;
(d) Y oznacza atom wodoru;
(e) B oznacza R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
(f) R4 oznacza C1-10alkil;
PL 226 561 B1 (g) R5 oznacza atom wodoru;
(h) R' oznacza bicykliczny heterocykl ewentualnie podstawiony przez Ra; oraz (i) Ra oznacza C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl; z ograniczeniem, że O-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze
lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
Korzystnie, R1 oznacza cyklopropyl lub cyklobutyl.
Korzystnie, R2 oznacza winyl.
Korzystnie, R3 oznacza t-butyl.
Korzystnie, R4 oznacza t-butyl.
Korzystnie, R' oznacza chinolinę lub izochinolinę ewentualnie podstawioną przez Ra.
Korzystnie, R1 oznacza cyklopropyl, R2 oznacza winyl, R3 oznacza t-butyl, R4 oznacza t-butyl oraz R' oznacza izochinolinę podstawioną przez Ra, korzystniej Ra oznacza C1-4alkoksyl, najkorzystniej Ra ponadto obejmuje co najmniej jedną z grup takich jak fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
Związki według wynalazku, dzięki swojej grupie zasadowej, mogą tworzyć sole addycyjne z farmaceutycznie dopuszczalnym kwasem. Sole addycyjne z kwasami tworzy się, uzyskuje się ze związku o wzorze oraz farmaceutycznie dopuszczalnego kwasu nieorganicznego, w tym między innymi chlorowodorowego, bromowodorowego, jodowodorowego, siarkowego, fosforowego lub kwasu organicznego takiego jak p-toluenosulfonowy, metanosulfonowy, octowy, benzoesowy, cytrynowy, malonowy, fumarowy, maleinowy, szczawiowy, bursztynowy, amidosulfonowy lub winowy. Zatem, przykłady takich farmaceutycznie dopuszczalnych soli obejmują chlorek, bromek, jodek, siarczan, fosforan, metanosulfonian, cytrynian, octan, malonian, fumaran, amidosulfonian i winian.
Sole grupy aminowej mogą obejmować także czwartorzędowe sole amoniowe, przy czym atom azotu grupy aminowej niesie odpowiednia grupa organiczna taka jak alkil, alkenyl, alkinyl lub aryloalkil.
Związki według wynalazku podstawione przez grupę kwasową, mogą występować w formie soli utworzonych w wyniku dodania zasady. Takie sole addycyjne z zasadami obejmują sole pochodzące od zasad nieorganicznych, które obejmują np. sole z metalem alkalicznym (np. sodem i potasem), sole metali ziem alkalicznych (np. wapń i magnez), sole glinu i sole amoniowe. Ponadto, odpowiednie sole addycyjne z zasadami obejmują sole fizjologicznie dopuszczalnych zasad organicznych takich jak trimetyloamina, trietyloamina, morfolina, pirydyna, piperydyna, pikolina, dicykloheksyloamina, N,N'-dibenzyloetylenodiamina, 2-hydroksyetyloamina, bis-(2-hydroksyetylo)amina, tri(2-hydroksyetylo)amina, prokaina, dibenzylopiperydyna, N-benzylo-3-fenetyloamina, dehydroabietyloamina, N,N'-bis-hydroabietyloamina, glukamina, N-metyloglukozoamina, kolidyna, chinina, chinolina, etylenodiamina, ornityna, cholina, N,N'-benzylfenetyloamina, chloroprokaina, dietanoloamina, dietyloamina, piperazyna, tris(hydroksymetylo)aminometan i wodorotlenek tetrametyloamoniowy i zasadowych aminokwasów takich jak lizyna, arginina i N-metyloglutamina. Te sole można wytworzyć metodami znanymi w dziedzinie.
Pewne związki według ujawnienia i ich sole, mogą także występować w formie solwatów z wodą, np. hydratów lub z rozpuszczalnikami organicznymi, takimi jak metanol, etanol lub acetonitryl z wytworzeniem, odpowiednio metanolanu, etanolanu lub acetonitrylanu. Wynalazek ten obejmuje każdy solwat i ich mieszaniny.
Ponadto, związki według wynalazku lub ich sól lub solwat, mogą wykazywać polimorfizm.
Związki według wynalazku zawierają także dwa lub więcej centrów chiralnych. Przykładowo, związki mogą obejmować element cyklopropylowy P1 o wzorze
PL 226 561 B1
w którym każdy C1 i C2 oznacza asymetryczny atom węgla w pozycjach 1 i 2 pierścienia cyklopropylowego. Nie negując innych możliwych centrów asymetrii w innych segmentach związków, obecność tych dwóch centrów asymetrii oznacza, że związki mogą występować w postaci racemicznej mieszaniny diastereomerów, takich jak diastereomery, w których R2 jest w konfiguracji syn względem amidowej lub syn względem karbonylu, jak pokazano poniżej.
R2 występuje w konfiguracji syn względem karbonylu
R2 występuje w konfiguracji syn względem karbonylu
R2 występuje w konfiguracji syn względem amidu
R2 występuje w konfiguracji syn względem amidu
Wynalazek dotyczy zarówno enancjomerów jak i mieszanin enancjomerów takich jak mieszaniny racemiczne.
Enancjomery można rozdzielić metodami znanymi w dziedzinie, np. przez utworzenie diastereoizomerycznych soli, które można rozdzielić przez krystalizację, chromatografię gazowo-cieczową lub cieczową, przeprowadzenie selektywnej reakcji jednego enancjomeru z odczynnikiem specyficznym dla enancjomeru. Należy rozumieć, że jeśli to pożądane enancjomer przekształcany jest w inną jednostkę chemiczną przy zastosowaniu techniki rozdziału, po czym w celu uzyskania pożądanej formy enancjomerycznej niezbędny jest dodatkowy etap. Alternatywnie, specyficzne enancjomery można zsyntetyzować posługując się asymetryczną syntezą z zastosowaniem optycznie czynnych odczynników, substratów, katalizatorów lub rozpuszczalników lub poddając konwersji jeden enancjomer do innego metodą asymetrycznej transformacji.
Związki według ujawnienia mogą występować w postaci proleku. Korzystnymi prolekami są proste alifatyczne lub aromatyczne estry pochodzące od, gdy występują, kwasowych grup bocznych związków według wynalazku. W pewnych przypadkach pożądane jest wytworzenie proleków typu podwójnego estru, takich jak estry (acyloksy)alkilowe lub estry (alkoksy(karbonylo)oksy)alkilowe.
Pewne związki według wynalazku mogą występować także w różnych trwałych formach konformacyjnych, które można rozdzielić. Asymetria skręcania spowodowana ograniczoną możliwością obrotu wokół asymetrycznego wiązania pojedynczego, np. ze względu na przeszkodę przestrzenną lub napięcie pierścienia, może pozwolić na rozdzielenie różnych izomerów konformacyjnych. Wynalazek ten dotyczy każdego izomeru konformacyjnego tych związków i ich mieszanin.
PL 226 561 B1
Pewne związki według wynalazku mogą występować w formie jonu obojnaczego i wynalazek ten dotyczy każdej formy jonu obojnaczego tych związków i ich mieszanin.
Substancje wyjściowe przydatne do syntezy związków według wynalazku są znane w dziedzinie i można je łatwo przygotować lub są dostępne na rynku.
Związki według wynalazku można wytwarzać metodami znanymi w dziedzinie, patrz np. opis patentowy St. Zjedn. Ameryki nr 6323180 i zgłoszenie patentowe St. Zjedn. Ameryki nr 20020111313 A1. Metody przedstawione poniżej służą dla celów ilustracyjnych i w zamierzeniu nie ograniczają zakresu wynalazku. Można rozpoznać, że w celu przygotowania związku, w którym grupa funkcyjna jest zabezpieczona, korzystne lub konieczne może być zastosowanie typowej grupy zabezpieczającej i późniejsze usunięcie grupy zabezpieczającej z wytworzeniem związku według wynalazku. W dziedzinie znane są szczegóły dotyczące zastosowania grup zabezpieczających według wynalazku.
Związki według wynalazku można zsyntetyzować np. zgodnie z ogólną procedurą zilustrowaną na schemacie I (w którym CPG oznacza grupę zabezpieczającą grupę karboksylową, a APG oznacza grupę zabezpieczającą grupę aminową):
Schemat I
PI-► Pl-CPG + APG-P2 —“—► APG-P2-P1-CPG
APG-P3-P2-P1-CPG - P2-P1-CPG + APG-P3 d
▼
B-P3-P2-P1 ---► B-P3-P2-P1-P1'
W skrócie, P1, P2, i P3 można związać przy zastosowaniu dobrze znanych technik sprzęgania peptydów. Grupy P1, P2 i P3 można związać razem w dowolnej kolejności o ile końcowy związek odpowiada peptydom według wynalazku. Przykładowo, P3 można związać z P2-P1; lub P1 można związać z P3-P2.
Na ogół, peptydy wydłuża się odbezpieczając grupę α-aminową reszty N-końcowej i sprzęgając niezabezpieczoną grupę karboksylową następnego odpowiednio N-zabezpieczonego aminokwasu poprzez wiązanie peptydowe stosując opisane metody.
Procedurę odbezpieczania i sprzęgania powtarza się aż do uzyskania pożądanego efektu. Sprzęganie to można przeprowadzać stosując odpowiednią grupę aminokwasu stopniowo, jak to przedstawiono na schemacie I.
Sprzęganie pomiędzy dwoma aminokwasami, aminokwasem i peptydem lub dwoma peptydami można prowadzić stosując standardowe metody sprzęgania, takie jak metoda z zastosowaniem azydku, mieszaniny bezwodnika kwasu węglowego-karboksylowego (chloromrówczan izobutylu), karbodiimidu (dicykloheksylokarbodiimid, diizopropylokarbodiimid lub rozpuszczalny w wodzie karbodiimid), aktywnego estru (ester p-nitrofenylowy, ester N-hydroksybursztynoimidowy), reagenta K Woodward'a, karbonylodiimidazolu, reagentów fosforowych lub stosując metody utleniania-redukcji. Niektóre z tych metod (szczególnie z zastosowaniem karbodiimidu) można przyspieszyć dodając 1-hydroksybenzotriazol lub 4-DMAP. Te reakcje sprzęgania można przeprowadzać w roztworze (faza ciekła) lub w fazie stałej.
Dokładniej, etap sprzęgania obejmuje sprzęganie z dehydratacją wolnej grupy karboksylowej jednego reagenta z wolną grupą aminową drugiego reagenta w obecności środka sprzęgającego z wytworzeniem wiązania amidowego. Przykłady takich środków sprzęgających są ogólnie podane w podręczniku chemii peptydów, np. M. Bodanszky, „Peptide Chemistry”, wydanie 2, wydawca: Springer-Verlag, Berlin, Germany (1993). Przykłady odpowiednich środków sprzęgających obejmują N,N'-dicykloheksylokarbodiimid, 1-hydroksybenzotriazol w obecności N,N'-dicykloheksylokarbodiimidu lub N-etylo-N'-[(3-dimetyloamino)propylo]karbodiimidu. Praktyczny i użyteczny środek sprzęgający stanoPL 226 561 B1 wi dostępny w handlu heksafluorofosforan (benzotriazol-1-yloksy)tris-(dimetyloamino)fosfonowy, sam lub w obecności 1-hydroksybenzotriazolu albo 4-DMAP. Inny praktyczny i użyteczny środek sprzęgający stanowi dostępny w handlu tetrafluoroboran 2-(1H-benzotriazol-1-ylo)-N,N-N',N'-tetrametylouroniowy. Jeszcze inny praktyczny i użyteczny środek sprzęgający stanowi dostępny w handlu heksafluorofosforan O-(7-azabenzotriazol-1-ylo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowy. Reakcję sprzęgania prowadzi się w obojętnym rozpuszczalniku, takim jak dichlorometan, acetoniftryl lub dimetyloformamid. W celu utrzymania wartości pH mieszaniny reakcyjnej około 8 wprowadza się w nadmiarze trzeciorzędową aminę, taką jak diizopropyloetyloamina, N-metylomorfolina, N-metylopirolidyna lub 4-DMAP. Temperatura reakcji zazwyczaj mieści się w zakresie od 0°C do 50°C i czas reakcji zazwyczaj wynosi od 15 minut do 24 godzin.
Grupy funkcyjne wyjściowych aminokwasów w ogólności muszą być zabezpieczone podczas reakcji sprzęgania w celu uniknięcia niepożądanych reakcji ubocznych. Grupy zabezpieczające, które można stosować, wymieniono np. w Greene „Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley & Sons, New York (1981) i „The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology”, tom 3, Academic Press, New York (1981), które to ujawnienia załącza się tu na zasadzie odsyłacza.
Grupa a-aminowa każdego aminokwasu sprzęganego z wydłużanym łańcuchem peptydowym musi być zabezpieczona (APG). Można stosować dowolną grupę zabezpieczającą znaną w dziedzinie. Przykłady takich grup obejmują: 1) grupy acylowe takie jak formyl, trifluoroacetyl, ftalil i p-toluenosulfonyl; 2) aromatyczne grupy karbamimanowe taki jak benzyloksykarbonyl (Cbz lub Z) i podstawione benzyloksykarbonyle oraz 9-fluorenylometylooksykarbonyl (Fmoc); 3) alifatyczne grupy karbaminianowe takie jak tert-butyloksykarbonyl (Boc), etoksykarbonyl, diizopropylometoksykarbonyl i alliloksykarbonyl; 4) cykliczne alkilowe grupy karbaminianowe takie jak cyklopentyloksykarbonyl i adamantyloksykarbonyl; 5) grupy alkilowe takie jak trifenylometyl i benzyl; 6) trialkilosilil taki jak trimetylosilil; oraz 7) grupy zawierające tiole takie jak fenylotiokarbonyl i ditiasukcynoil.
Korzystną grupą zabezpieczającą grupę a-aminową stanowi Boc lub Fmoc. Na rynku znajduje się wiele pochodnych aminokwasów odpowiednio zabezpieczonych w celu syntezy peptydu. Grupę zabezpieczającą grupę a-aminową ostatniej wprowadzonej reszty aminokwasowej odcina się przed sprzęganiem następnego aminokwasu. Gdy stosuje się grupę Boc, można wybrać jedną z metod z zastosowaniem kwasu trifluorooctowego, samego lub w dichlorometanie albo HCl w dioksanie lub w octanie etylu. Uzyskaną sól amoniową następnie zobojętnia się przed sprzęganiem lub in situ, stosując zasadowe roztwory takie jak wodne bufory lub aminy trzeciorzędowe w dichlorometanie lub acetonitrylu albo dimetyloformamidzie. Gdy stosuje się grupę Fmoc, można wprowadzać następujące reagenty takie jak piperydyna lub podstawiona piperydyna w dimetyloformamidzie, lecz można zastosować dowolną aminę drugorzędową. Odbezpieczanie prowadzi się w zakresie temperatur 0°C do temperatury pokojowej (rt lub RT), zazwyczaj 20-22°C.
Dowolne aminokwasy posiadające grupy funkcyjne w łańcuchu bocznym muszą być zabezpieczone podczas wytwarzania peptydu z zastosowaniem dowolnej z powyżej opisanych grup. Dla fachowców w dziedzinie jest wiadome, że wybór i zastosowanie odpowiednich grup zabezpieczających dla tych grup funkcyjnych w łańcuchu bocznym zależy od aminokwasu i obecności innych grup zabezpieczających w peptydzie. Wybór takich grup zabezpieczających jest ważny z tego względu, że grupy nie można usuwać podczas odbezpieczania i sprzęgania grupy a-aminowej.
Przykładowo, gdy jako grupę zabezpieczającą grupę a-aminową stosuje się Boc, odpowiednie są następujące grupy zabezpieczające łańcuch boczny: p-toluenosulfonyl (tosyl) można stosować do zabezpieczania aminowych grup w łańcuchu bocznym aminokwasów takich jak Lys i Arg; acetamidometyl, benzyl (Bn) lub tert-butylosulfonyl można stosować do zabezpieczania siarczku w łańcuchu bocznym cysteiny; etery benzylowe (Bn) można stosować do zabezpieczania hydroksylowych grup w łańcuchach bocznych seryny, treoniny lub hydroksyproliny oraz estry benzylowe można stosować do zabezpieczania karboksylowych grup w łańcuchach bocznych kwasu asparaginowego i glutaminowego.
Gdy w celu zabezpieczenia grupy a-aminowej wybiera się Fmoc, dopuszczalne zazwyczaj są tert-butylowe grupy zabezpieczające. Na przykład, Boc można stosować w przypadku lizyny i argininy, eter tert-butylowy w przypadku seryny, treoniny i hydroksyproliny oraz ester tert-butylowy w przypadku kwasu asparaginowego i glutaminowego. Do zabezpieczania siarczku w łańcuchu bocznym cysteiny można stosować trifenylometyl (trityl).
Z chwilą wydłużenia peptydu usuwa się wszystkie grupy zabezpieczające. Gdy stosuje się syntezę w fazie ciekłej, grupy zabezpieczające usuwa się w dowolny sposób podyktowany wyborem grup zabezpieczających. Metody te są dobrze znane w dziedzinie.
PL 226 561 B1
Następnie, poniższe wskazówki można wziąć pod uwagę podczas wytwarzania związków według wynalazku. Przykładowo, przy wytwarzaniu związku, w którym R4-C(O)-, R4-S(O)2, zabezpieczony P3 lub cały peptyd albo fragment peptydu sprzęga się z odpowiednim chlorkiem acylu lub chlorkiem sulfonylu odpowiednio, takim, który jest dostępny w handlu lub którego synteza jest dobrze znana w dziedzinie. Przy wytwarzaniu związku, w którym R4O-C(O)-, zabezpieczony P3 lub cały peptyd albo fragment peptydu sprzęga się z odpowiednim chloromrówczanem dostępnym w handlu lub którego synteza jest dobrze znana w dziedzinie. W przypadku pochodnych Boc stosuje (Boc)2O.
Cyklopentanol traktuje się fosgenem w celu otrzymania odpowiedniego chloromrówczanu.
Chloromrówczan traktuje się pożądanym NH2-tripeptydem w obecności zasady takiej jak trietyloamina otrzymując cyklopentylokarbaminian.
Przy wytwarzaniu związku, w którym R4-N(R5)-C(O)- lub R4-NH-C(S)-, zabezpieczony P3 lub cały peptyd albo fragment peptydu traktuje się fosgenem, a następnie aminą jak opisano w SynLett, luty 1995; (2); 142-144 lub poddaje się reakcji z zastosowaniem dostępnego w handlu izocyjanianu i odpowiedniej zasady takiej jak trietyloamina.
Przy wytwarzaniu związku, w którym R4-N(R5)-S(O2), zabezpieczony P3 lub cały peptyd albo fragment peptydu traktuje się stosując świeżo przygotowany lub dostępny w handlu chlorek sulfamylu, a następnie aminę, jak przedstawiono w opisie patentowym Ger. Offen. (1998), str. 84 DE 19802350 lub międzynarodowym zgłoszeniu patentowym nr 98/3274.
Grupę α-karboksylową grupy C-końcowej zazwyczaj zabezpiecza się w postaci estru (CPG), który można później przekształcić w kwas karboksylowy. Grupy zabezpieczające, które można tu stosować obejmują: 1) estry alkilowe takie jak ester metylowy, trimetylosililoetylowy i t-butylowy, 2) estry aryloalkilowe takie jak ester benzylowy i podstawione estry benzylowe lub 3) estry, które można przekształcać stosując umiarkowane zasady lub łagodne środki redukujące takie jak estry trichloroetylowe i fenacylowe.
Uzyskany kwas α-karboksylowy (uzyskany po zastosowaniu łagodnego kwasu, umiarkowanej zasady lub łagodnych środków redukujących) sprzęga się stosując R1SO2NH2 [wytworzony przez traktowanie R1SO2Cl w roztworze tetrahydrofuranu nasyconym amoniakiem] w obecności peptydowego środka sprzęgającego takiego jak CDI lub EDAC w obecności zasady takiej jak 4-dimetyloaminopirydyna (4-DMAP) i/lub 1,8-diazabicyklo-[5,4,0]undek-7-en (DBU) w celu wprowadzenia grupy P1', skutecznie prowadząc do tripeptydu P1'-P1-P2-P3-APG. W tej metodzie zazwyczaj stosuje się 1-5 równoważników środków sprzęgających P1'.
Ponadto, jeśli usuwa się P3 grupę zabezpieczającą APG i zastępuje grupą B sposobami opisanymi powyżej, po czym uzyskany po przekształceniu kwas α-karboksylowy (uzyskany po zastosowaniu łagodnego kwasu, umiarkowanej zasady lub łagodnych środków redukujących) sprzęga się stosując R1SO2NH2 [wytworzony przez traktowanie R1SO2CI w roztworze tetrahydrofuranu nasyconym amoniakiem lub alternatywne opisane tu metody] w obecności peptydowego środka sprzęgającego takiego jak CDI lub EDAC w obecności zasady takiej jak 4-dimetyloaminopirydyna (4-DMAP) i/lub 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undek-7-en (DBU) w celu wprowadzenia grupy P1', otrzymuje się tripeptyd P1'-P1-P2-P3-B. W tej metodzie zazwyczaj stosuje się 1-5 równoważników środków sprzęgających P1'.
Związki według wynalazku można wytworzyć stosując wiele metod obejmujących te opisane w poniższych przykładach i przedstawione w opisie patentowym St. Zjedn. Ameryki nr 6323180 i nr 10/001850 złożonym 20 listopada 2001. Wskazania opisu patentowego St. Zjedn. Ameryki nr 6323180 i nr 10/001850 załącza się tu w całości na zasadzie odsyłacza.
PL 226 561 B1
Schemat II ponadto wskazuje ogólny sposób, według którego związki o wzorze I otrzymuje się przez sprzęganie tripeptydowego kwasu karboksylowego związku pośredniego (1) z zastosowaniem sulfonoamidu P1'. (Należy zwrócić uwagę, że grupy R6, R7, R8, R9, R10, R11 jak pokazano poniżej, oznaczają podstawniki układu heterocyklicznego). Wymieniona reakcja sprzęgania wymaga traktowania kwasu karboksylowego (1) z zastosowaniem reagenta sprzęgającego takiego jak diimidazol karbonylu w rozpuszczalniku takim jak THF, który można ogrzać do temperatury wrzenia, a następnie wprowadzić utworzoną pochodną związku (1) do sulfonoamidu P1', w rozpuszczalniku takim jak THF lub chlorek metylenu w obecności zasady takiej jak DBU.
Alternatywny sposób przygotowywania związków o wzorze I pokazano na schemacie III. W metodzie tej sulfonoamid P1' sprzęga się z ugrupowaniem P1 z zastosowaniem sposobu przedstawionego na schemacie I. Uzyskaną grupę P1-P1' można następnie odbezpieczyć na terminalnej grupie aminowej. W tym ogólnym przykładzie stosuje się grupę zabezpieczającą Boc, lecz fachowcy w dziedzinie wiedzą, że w tą metodę można wprowadzać wiele odpowiednich grup zabezpieczających grupy aminowe. Wymienioną grupę zabezpieczającą Boc można usunąć stosując kwas taki jak kwas trifluorooctowy w rozpuszczalniku takim jak dichloroetan z wytworzeniem odbezpieczonej aminy jak sól TFA. Wymienioną aminową sól TFA można bezpośrednio stosować w późniejszej reakcji sprzęgania lub jako alternatywną aminową sól TFA można najpierw przekształcić do aminowej soli HCl, po czym aminową sól HCl stosuje się w wymienionej reakcji sprzęgania, jak pokazano na schemacie III. Sprzęganie wymienionej aminowej soli HCl (3) z karboksylowymi grupami terminalnymi P4-P3-P2 związku pośredniego można osiągać stosując reagent sprzęgający, taki jak HATU, w rozpuszczalnikach takich jak dichlorometan z wytworzeniem związków o wzorze I (4).
Związki o wzorze 1
PL 226 561 B1
Alternatywny sposób przygotowywania związków o wzorze I pokazano na schemacie IV. W tym sposobie chlorowodorek terminalnej aminy P1-P1' (1) sprzęga się z wolną grupą karboksylową fragmentu P2 stosując środki sprzęgające takie jak PyBOP, w obecności zasady takiej jak diizopropyloamina oraz w rozpuszczalniku takim jak chlorek metylenu. Uzyskany związek pośredni P2-P1-P1' można przekształcić w związki o wzorze I w dwuetapowym procesie, w którym pierwszy etap stanowi odbezpieczenie terminalnej aminy P2 stosując kwas taki jak TFA w rozpuszczalniku takim jak chlorek metylenu. Uzyskaną sól kwasu trifluorooctowego można sprzęgać z terminalnymi grupami karboksylowymi fragmentu P4-P3 stosując standardowe środki sprzęgające, takie jak PyBop w obecności zasady, takiej jak diizopropyloamina, oraz stosując rozpuszczalniki takie jak chlorek metylenu z wytworzeniem związków o wzorze I (4).
Schemat IV
Sposób Pl-Pl' —-►P2-P1-P1' P4~P3—► P4-P3-P2-P1-P1’
(3)
Związki pośrednie P4-P3-P2 stosowane według powyższych schematów można przygotowywać, takie jak uprzednio opisano, z dalszymi modyfikacjami tego procesu przedstawionymi na schemacie V. W tym sposobie, wolne karboksylowe grupy terminalne związku pośredniego P4P3 (1), można sprzęgać z aminowymi grupami terminalnymi fragmentu P2 z wytworzeniem dipeptydu P4-P3-P2 (2). Karboksylowe grupy terminalne związku pośredniego P4-P3-P2 można odbezpieczać przez zmydlanie grupy estrowej z wytworzeniem P4-P3-P2 jako wolnego kwasu karboksylowego (3). Związki pośrednie (3) można przekształcić w związki o wzorze I stosując opisane tu metody.
PL 226 561 B1
Związki o wzorze I można także poddać konwersji do innych związków o wzorze I jak to tu opisano. Przykład takiej metody pokazano na schemacie VI, w którym związek o wzorze I (1), zawierający grupę Boc w pozycji P4, przekształca się do związku o wzorze I (3), przy czym wymieniony związek zawiera grupę mocznikową w pozycji P4. Przekształcenie związku (1) do związku (3) można prowadzić w dwuetapowym procesie, w którym najpierw przekształca się związek (1) do aminy (2), traktując związek (1) z zastosowaniem kwasu takiego jak TFA w rozpuszczalniku takim jak chlorek metylenu. Uzyskaną aminową sól TFA można potraktować izocyjanianem w obecności jednego równoważnika zasady z wytworzeniem związku o wzorze I (3), w którym grupę P3 sprzęga się z mocznikiem. Jak uprzednio wskazano, fachowcy w dziedzinie rozpoznają, że związek pośredni (2) można stosować jako substancje wyjściowe do wytwarzania związków o wzorze I, w którym grupa P3 jest sprzężona z amidem lub sulfonoamidem albo tiomocznikiem lub sulfamidem. Wymienione związki o wzorze I można uzyskać stosując standardowe warunki do wytwarzania wymienionych grup funkcyjnych P4 z aminy.
PL 226 561 B1
Przy przygotowywaniu związków o wzorze I, terminalne grupy P1' przyłącza się do cząsteczek stosując jeden spośród ogólnych sposobów powyżej przedstawionych i opisanych poniżej bardziej szczegółowo. W niektórych przykładach fragmenty P1', czyli cykloalkilo- lub alkilosulfonoamidy są dostępne na rynku lub można je wytworzyć stosując odpowiedni chlorek alkilo- lub cykloalkilosulfonylu, traktując wymieniony chlorek sulfonylu amoniakiem. Alternatywnie, te sulfonoamidy można zsyntetyzować stosując ogólny sposób przedstawiony na schemacie VII. Tutaj, dostępny w handlu chlorek
3-chloropropylosulfonylu (1) przekształca się do odpowiedniego zabezpieczonego sulfonoamidu jak np. przez traktowanie tert-butyloaminą. Otrzymany sulfonoamid (2) następnie przekształca się do odpowiedniego cykloalkilosulfonamidu przez traktowanie dwóch równoważników zasady takiej jak butylolit w rozpuszczalniku takim jak THF w niskiej temperaturze. Uzyskany cykloalkilosulfonamid można odbezpieczać przez traktowanie kwasem z wytworzeniem pożądanego niezabezpieczonego cykloalkilosulfoamidu.
Fragmenty P1 stosowane przy przygotowywaniu związków o wzorze I są w niektórych przypadkach dostępne na rynku, lub w innym przypadku syntetyzowane z zastosowaniem metod tu opisanych i później wprowadzane do związków o wzorze I stosując opisane tu metody. Podstawione cyklopropyloamino-kwasy; P1 można zsyntetyzować postępując według ogólnego sposobu przedstawionego na schemacie VIII.
Traktowanie dostępnej na rynku lub łatwo zsyntetyzowanej iminy (1) z zastosowaniem 1,4-difluorowcobutenu (2) w obecności zasady, prowadzi do iminy (3). Następnie hydroliza kwasowa związku 3 daje związek 4, który zawiera podstawnik allilowy syn względem grupy karboksylowej jako główny produkt. Grupę aminową związku 4 można zabezpieczać stosując grupę Boc z wytworzeniem całkowicie zabezpieczonego aminokwasu 5. Ten związek pośredni jest racematem, który można rozdzielać stosując proces enzymatyczny, w którym grupę estrową związku 5 odcina się z zastosowaniem proteazy otrzymując odpowiedni kwas karboksylowy. Bez wnikania w dowolną szczególną teorię, przyjmuje się, że reakcja ta jest selektywna pod tym względem, że jeden spośród enancjomerów ulega reakcji ze znacznie większą szybkością niż jego odbicie lustrzane prowadząc do kinetycznego rozdziału racematu. W przykładach tutaj cytowanych, bardziej korzystny stereoizomer do przekształcania do związków o wzorze I stanowi związek 5a, który odpowiada stereochemii (1R,2S). W obecności enzymu, enancjomer ten nie ulega rozerwaniu estru i tym samym enancjomer związku 5a odzyskuje się z mieszaniny reakcyjnej. Jednakże, mniej korzystny enancjomer 5b odpowiadający stereochemii (1S,2R) ulega rozerwaniu estru, czyli hydrolizie z wytworzeniem wolnego kwasu 6. Po zakończeniu tej reakcji, ester 5a można rozdzielać od kwasu 6 stosując standardowe metody takie jak np. wodna ekstrakcja lub chromatografia.
PL 226 561 B1
Sposoby wytwarzania związków pośrednich P2 i związków o wzorze I przedstawiono na poniższych schematach. Należy zwrócić uwagę, że w wielu przypadkach reakcje przedstawia się uwzględniając tylko jedną pozycję związku pośredniego. Jednakże, należy rozumieć, że takie reakcje można stosować w celu modyfikacji innych pozycji tego związku pośredniego. Ponadto, wymienione związki pośrednie, warunki reakcji i metody podane w specyficznych przykładach są odpowiednie w szerokim zakresie dla związków zawierających inne podstawniki. Ogólne schematy przedstawione poniżej dotyczą przedstawionych tutaj przykładów. Zarówno ogólne, jak i specyficzne przykłady nie stanowią ograniczenia, jak np. izochinolinę pokazano w części ogólnego schematu, schemat IX, jednakże, ten szlak stanowi użyteczną metodę przygotowywania alternatywnych podstawników heterocyklicznych jako zastąpienie ugrupowania izochinolinowego, takiego jak chinoliny lub pirydyny.
PL 226 561 B1
Schemat IX wskazuje sprzęganie N-zabezpieczonej C4-hydroksyproliny z heterocyklem z wytworzeniem związku pośredniego (4) i późniejszą modyfikację wymienionego związku pośredniego (4) do związku o wzorze I poprzez wydłużenie peptydu, jak to tu opisano. Należy zwrócić uwagę, że w pierwszym etapie, czyli przy sprzęganiu C4-hydroksyproliny z heteroarylem, stosuje się zasadę. Fachowiec w dziedzinie rozpozna, że sprzęganie można przeprowadzić stosując zasady takie jak tertbutanolan potasu lub wodorek sodu, w rozpuszczalniku, takim jak DMF lub DMSO albo THF. Sprzęganie do izochinolinowego układu pierścieniowego następuje w pozycji C1 (numerując izochinolinowy układ pierścieniowy jak pokazano dla związku pośredniego 2 na schemacie IX) i jest ukierunkowane przez atom chloru, który jest podstawiany w tej metodzie. Należy zwrócić uwagę, że w tej pozycji można stosować alternatywne grupy opuszczające takie jako atom fluoru, jak pokazano na schemacie. Wymienione fluorowe związki pośrednie (3) można otrzymać z odpowiednich chlorowych związków stosując opisane tu metody literaturowe. Należy rozumieć, że pozycja grupy opuszczającej (atom chloru lub atom fluoru) w danym układzie pierścieniowym może się zmieniać, co pokazano na schemacie X, w którym grupa opuszczająca (atom fluoru w tym przykładzie) znajduje się w C6 izochinolinowego układu pierścieniowego związku pośredniego (2).
Należy ponadto wskazać, że pozycja pierścienia z heteroatomem (heteroatomami) w związkach pośrednich typu (2) na schemacie IX i X stanowi także zmienną, zdefiniowaną opisanym tutaj terminem heterocykl. Na schemacie X związek pośredni (2) można sprzęgać z pochodną hydroksyproliny C4 z wytworzeniem fragmentu P2 (3). Tą pochodną podstawionej izochinoliny C6 można przekształcać w związki o wzorze I stosując opisane tu metody.
Alternatywny sposób opisanego powyżej sprzęgania C4-hydroksyproliny ze związkami aromatycznymi i heteroaromatycznymi, stanowi reakcja Mitsunobu, jak to przedstawia
Schemat XI
w etapie 1 według schematu XI. W tej ogólnej schematycznej reakcji pochodną C4-hydroksyproliny sprzęga się z chinazolinowym układem pierścieniowym. Reakcja ta umożliwia zastosowanie reagentów takich jak trifenylofosfina i DEAD (dietyloazodikarboksylan) w aprotonowych rozpuszczalnikach takich jak THF lub dioksan i można ją stosować w celu wytwarzania eterów arylowych i heteroarylowych. Należy zwrócić uwagę, że w przebiegu tej reakcji sprzęgania, stereochemia centrum chiralnego
PL 226 561 B1
C4 w pochodnej C4-hydroksyproiliny jest odwrócona i tym samym konieczne jest zastosowanie jako substancji wyjściowej pochodnej C4-hydroksyproliny o stereochemii (S) w pozycji C4 (jak pokazano na schemacie XI). Należy zwrócić uwagę, że w literaturze opisano liczne modyfikacje i ulepszenia reakcji
Mitsunobu, które to wskazania załącza się w tym opisie.
W części przykładów tu przedstawionych, izochinoliny wprowadza się do związków końcowych i specyficznie we fragmencie P2 wymienionych związków. Fachowiec w dziedzinie rozpozna, że niektóre z ogólnych metod są dostępne w syntezie izochinoliny. Ponadto, wymienione izochinoliny wytwarzane z zastosowaniem tych metod mogą być łatwo wprowadzane do końcowych związków o wzorze I z zastosowaniem opisanych tu metod. Jedną ogólną metodę syntezy izochinoliny pokazano na schemacie XII, w którym pochodne kwasu cynamonowego przedstawione zazwyczaj jako struktura (2)
przekształca się czteroetapową metodą do 1-chloroizochinoliny. Wymienione chloroizochinoliny można później użyć w reakcji sprzęgania pochodnych C4-hydroksyproliny, jak to tu opisano. Konwersja kwasów cynamonowych do chlorochinoliny polega na traktowaniu kwasu cynamonowego alkilochloromrówczanem w obecności zasady. Uzyskany bezwodnik następnie traktuje się azydkiem sodu, co prowadzi do powstawania acyloazydku (3), jak pokazano na schemacie. Alternatywne metody dostępne do wytwarzania acyloazydków z kwasów karboksylowych, jak np. wymieniony kwas karboksylowy można potraktować azydkiem difenylofosforylu (DPPA) w aprotonowym rozpuszczalniku takim jak chlorek metylenu w obecności zasady. W następnym etapie reakcji azydek acylu (3) przekształca się do odpowiedniego izochinolonu (4), jak pokazano na schemacie. Następnie azydek acylu ogrzewa się do temperatury w przybliżeniu 190°C w wysokowrzącym rozpuszczalniku takim jak difenylometan. Reakcja ta jest ogólna i zapewnia umiarkowane do dobrych wydajności podstawionego izochinolonu z odpowiednich pochodnych kwasu cynamonowego. Należy wskazać, że wymienione pochodne kwasu cynamonowego są dostępne na rynku lub można je otrzymać z odpowiedniej pochodnej benzaldehydu (1) przez bezpośrednią kondensację z zastosowaniem kwasu malonowego lub jego pochodnych i także stosując reakcję Wittig'a. Pośrednie izochinolony (4) na schemacie XII można przekształcić do odpowiedniej 1-chloroizochinoliny przez traktowanie z zastosowaniem tlenochlorku fosforu. Reakcja ta jest ogólna i można ją stosować dowolne izochinolony, chinolony lub dodatkowe heterocykle jak pokazano tutaj w przypadku przekształcania podstawnika hydroksylowego do odpowiedniego związku chlorowego, gdy wymieniona grupa hydroksylowa jest sprzęgana z atomem azotu w wymienionych heterocyklicznych układach pierścieniowych.
Alternatywną metodą syntezy izochinolinowego układu pierścieniowego stanowi procedura Pomeranz'a-Fritsh'a. Tę ogólną metodę przedstawiono na schemacie XIII. Proces rozpoczyna się przekształceniem benzaldehydowej pochodnej (1) do funkcjonalizowanej iminy (2). Wymienioną iminę przekształca się następnie do izochinolinowego układu pierścieniowego przez traktowanie kwasem w podwyższonej temperaturze.
PL 226 561 B1
Schemat XIII
(5)
Synteza Pomeranz'a-Fritsch'a
K. Hirao, R. Tsuchiya, Y. Yano, H. Tsue, Heterocycles 42(1) 1996, 415-422.
Ten schemat XIII syntezy izochinoliny jest ogólny i należy zwrócić uwagę, że proces ten jest szczególnie przydatny przy otrzymywaniu izochinolinowych związków pośrednich, które są podstawione w pozycji C8 (uwaga: w związku pośrednim (3) według schematu XIII pozycja C8 izochinolinowego pierścienia jest podstawiona przez podstawnik R11). Pośredni izochinolinowy związek (3) można przekształcić do odpowiedniej 1-chlorochinoliny (5) w dwuetapowym procesie, jak tutaj pokazano. W pierwszy etapie tej sekwencji otrzymuje się N-tlenek izochinoliny (4) przez traktowanie izochinoliny (3) kwasem meta-chloronadbenzoesowym w aprotonowym rozpuszczalniku takim jak dichlorometan. Związek pośredni (4) można przekształcić do odpowiedniej 1-chlorochinoliny przez traktowanie oksychlorkiem fosforu we wrzącym chloroformie. Należy zauważyć, że te dwa etapy metody są ogólne i można otrzymywać chloroizochinoliny i chlorochinoliny z odpowiednich izochinolin i chinolin.
Inną metodę syntezy izochinolinowego układu pierścieniowego pokazano na schemacie XIV. W tej metodzie pochodną orto-alkilobenzamidu (1) traktuje się silną zasadą
Schemat XIV
taką jak tert-butylolit w rozpuszczalniku takim jak THF w niskiej temperaturze. Do tej mieszaniny reakcyjnej dodaje się następnie pochodną nitrylu, która ulega reakcji addycji z anionem powstałym w wyniku deprotonowania (1), prowadząc w efekcie do wytworzenia związku (2). Reakcja ta jest ogólna i można ją stosować w celu otrzymywania podstawionych izochinolin. Związek pośredni (2) według schematu XIV można przekształcić do odpowiedniej 1-chlorochinoliny opisanymi tutaj sposobami.
Kolejną metodę syntezy izochinoliny pokazano na schemacie XV. Deprotonowanie związku pośredniego (1) z zastosowaniem tert-butylolitu przeprowadza się jak opisano powyżej. Jednakże w tej metodzie, wymieniony pośredni anion wiąże się z estrem, prowadząc w efekcie do wytworzenia związku pośredniego (2), jak pokazano poniżej. W późniejszej reakcji keton (2) poddaje się kondensacji z octanem amonu w podwyższonej temperaturze prowadząc do chinolonu (3). Reakcja ta jest ogólna i można ją stosować w celu wytworzenia podstawionych izochinolin, które można następnie poddać konwersji do odpowiedniej 1-chloroizochinoliny, jak to tu opisano.
PL 226 561 B1
Schemat XV
Schemat XVI przedstawia jeszcze inną metodę przygotowania izochinolin. W pierwszym etapie tego procesu pochodne orto-alkiloaryloiminowe, takie jak związek (1), poddaje się deprotonowaniu (sec-butylolit, THF) i do uzyskanego anionu
Schemat XVI
L. Flippin, J. Muchowski, JOC, 1993, 2631-2632 dodaje się aktywowaną pochodną kwasu karboksylowego taką jak amid Weinreb'a. Uzyskaną ketoiminę (2) można przekształcić do odpowiedniej izochinoliny na drodze kondensacji stosując octan amonu w podwyższonych temperaturach. Metoda ta jest ogólna i można ją stosować do syntezy podstawionych izochinolin. Wymienione izochinoliny można przekształcić opisanymi tutaj sposobami do odpowiedniej 1-chlorochinoliny.
Opisane tu heterocykle, które wprowadza się do związków o wzorze I można następnie funkcjonalizować. Dla fachowców w dziedzinie jest zrozumiałe, że dodatkową funkcjonalizację wymienionego heterocyklu można przeprowadzić przed lub po wprowadzeniu tych grup funkcyjnych do związków o wzorze I. Poniższe schematy ilustrują ten proces. Np. schemat XVII wskazuje przekształcanie
PL 226 561 B1 do odpowiedniej 1-chloro-6-alkoksyizochinoliny, a następnie traktowanie, w temperaturze pokojowej, związku (1) (równanie 1) z zastosowaniem alkoholanów sodu lub potasu w rozpuszczalniku alkoholowym, z którego pochodzi alkoholan. W pewnych przypadkach konieczne może być ogrzewanie mieszaniny reakcyjnej w celu przyśpieszenia zakończenia reakcji. Wymienioną chlorochinolinę można wprowadzać do związku o wzorze I stosując opisane tu sposoby. Modyfikacje heterocyklicznego fragmentu P2 można także przeprowadzać już po jej wprowadzeniu do związków o wzorze I, jak pokazano w (równanie 2) według schematu VXII. Specyficznie, związki takie jak związek (1) w (równaniu 2), które zawierają grupę opuszczającą w ugrupowaniu ftalazyny można podstawiać stosując nukleofil taki jak alkoholan, w rozpuszczalnikach takich jak odpowiedni alkohol, z którego pochodzi alkoholan. Te reakcje prowadzi się w temperaturze pokojowej, lecz w pewnych przypadkach może być konieczne ogrzewanie mieszaniny reakcyjnej w celu przyśpieszenia zakończenia reakcji.
Schemat XVIII przedstawia ogólny przykład modyfikacji zdefiniowanych tutaj heterocykli z zastosowaniem reakcji sprzęgania katalizowanych palladem. Wymienione reakcje sprzęgania można stosować w celu funkcjonalizowania heterocyklu w każdej pozycji układu pierścieniowego i zapewniając odpowiednie aktywowanie lub funkcjonalizowanie wymienionego pierścienia np. stosując chlorek, jak pokazano na schemacie. Sekwencję tę rozpoczyna się od 1-chloroizochinoliny (1), którą po traktowaniu z zastosowaniem kwasu metachloronadbenzoesowego można przekształcić do odpowiedniego N-tlenku (2). Wymieniony związek pośredni (2) można przekształcić do odpowiedniej 1,3-dichloroizochinoliny (3) przez traktowanie z zastosowaniem tlenochlorku fosforu we wrzącym chloroformie. Związek pośredni (3) można opisanymi tutaj sposobami sprzęgać z N-Boc-4-hydroksyproliną z wytworzeniem związku pośredniego (5), jak pokazano na schemacie. Związek pośredni (5) może ulegać sprzęganiu Suzuki'ego z zastosowaniem kwasu aryloboronowego, w obecności palladu i zasady oraz w rozpuszczalniku, takim jak THF lub toluen lub DMF z wytworzeniem pośredniej C3-arylizochinoliny (6). W tym procesie sprzęganie katalizowanym Pd można także stosować kwas heteroaryloboronowy uzyskując C3-heteroaryloizochinoliny. Związek pośredni (6) można opisanymi tutaj sposobami przekształcić do końcowych związków o wzorze I.
Sprzęgania katalizowane palladem układów heteroarylowych z zastosowaniem ugrupowań arylowych lub heteroarylowych można także stosować w późniejszym etapie syntezy podczas przygotowywania związków o wzorze I jak pokazano na schemacie IXX. Tutaj, tripeptydowy acylosulfonoamidowy związek pośredni (1) sprzęga się z 1-chloro-3-bromoizochinoliną (2), stosując uprzednio opisany proces podstawienia alkoholanów grupą heteroarylofluorowcową z wytworzeniem związku pośredniego (3). Sprzęganie związku (1) i związku (2) przebiega najbardziej efektywnie w obecności katalizatora takiego jak chlorek lantanu, jak to tu opisano. Izochinolinowy układ pierścieniowy związku pośredniego (3) można następnie funkcjonalizować stosując albo sprzęgania Suzuki'ego (sposób 1: poddanie związku (3) reakcji stosując kwas heteroarylo lub aryloboronowy w obecności katalizatora palladowego takiego jak tetra(trifenylofosfino)pallad i zasadę taką jak węglan cezu w rozpuszczalnikach takich
PL 226 561 B1 jak DMF) lub sprzęgania Stille'ego (sposób 2: poddanie związku (3) reakcji stosując pochodne heteroarylo lub arylocyny w obecności katalizatora palladowego takiego jak tetra(trifenylofosfino)pallad w rozpuszczalnikach takich jak toluen).
Schemat XIX
Reakcje z palladem można także stosować w celu sprzęgania fragmentów C4-aminoproliny z funkcjonalizowanymi heterocyklami. Schemat XX wskazuje sprzęganie związku pośredniego (1) z grupami funkcyjnymi izochinoliny w obecności katalizatora palladowego i zasady w rozpuszczalniku takim jak toluen. Związki pośrednie takie jak związek (3) można przekształcić w związki o wzorze I, stosując opisane tu metody.
Przygotowanie funkcjonalizowanych izochinolinowych układów pierścieniowych jest także możliwe z zastosowaniem reakcji cykloaddycji [4 + 2]. Np. (schemat XXI) zastosowanie izocyjanianów winylu (1) w reakcjach cykloaddycji z zastosowaniem prekursorów benzynowych (2) prowadzi do funkcjonalizowanych izochinolonów (3). Wymienione izochinoliny można wprowadzać do związków o wzorze I stosując opisane tu metody.
PL 226 561 B1
Przedmiotem wynalazku są także kompozycje zawierające związek według wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik. Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku zawierają związek według wynalazku w terapeutycznie skutecznej ilości lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, przy czym farmaceutycznie dopuszczalny nośnik stanowi rozczynnik lub rozcieńczalnik.
Czynny składnik czyli związek, w takich kompozycjach stanowi zazwyczaj od 0,1 procent wagowych do 99,9 procent wagowych kompozycji oraz często od około 5 do 95 procent wagowych.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie, pozajelitowo lub jako implant. Korzystne jest podawanie doustne lub w zastrzyku. W pewnych przypadkach, pH preparatu można uregulować stosując farmaceutycznie dopuszczalne kwasy, zasady lub bufory w celu wzmożenia trwałości przygotowanego związku lub jego postaci do dozowania. Stosowany tu termin pozajelitowo obejmuje zastrzyk podskórny, śródskórny, dożylny, domięśniowy, śródstawowy, wewnątrzmaziówkowy, dopniowy, dooponowy oraz do miejsc zmienionych patologicznie lub wlewy.
Kompozycje farmaceutyczne mogą występować w postaci sterylnego preparatu do wstrzykiwania, np. w postaci sterylnej wodnej lub oleistej zawiesiny do wstrzykiwania. Zawiesinę można komponować technikami znanymi w dziedzinie, stosując odpowiednie środki dyspergujące lub zwilżające oraz emulgatory. Szczegóły dotyczące wytwarzania takich związków są znane w dziedzinie.
W przypadku podawania doustnie, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać w dowolnej doustnie dopuszczalnej dawce obejmującej między innymi, kapsułki, tabletki i wodne zawiesiny oraz roztwory. W przypadku tabletek do zastosowania doustnie, nośniki, które stosuje się powszechnie, obejmują laktozę i skrobię kukurydzianą. Zazwyczaj dodaje się także środki smarujące, takie jak stearynian magnezu. W przypadku doustnego podawania kapsułek, przydatne rozcieńczalniki obejmują laktozę i osuszoną skrobię kukurydzianą. Gdy wodne zawiesiny podaje się doustnie, czynny składnik łączy się ze środkami emulgującym i emulgatorami. Jeśli to pożądane, można dodawać środki słodzące i/lub smakowe i/lub barwiące.
Inne odpowiednie nośniki w przypadku powyżej wskazanych kompozycji można znaleźć w standardowych farmaceutycznych opracowaniach jak np. w „Remington's Pharmaceutical Sciences”, wydanie 19, Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1995. Dalsze szczegóły dotyczące przygotowania i wytwarzania odpowiednich do dostarczania kompozycji farmaceutycznych według wynalazku są znane w dziedzinie.
Związki według wynalazku podaje się w dawkach od około 0,01 do około 1000 miligramów na kilogram („mg/kg”) masy ciała dziennie, korzystnie od około 0,5 do około 250 mg/kg masy ciała dziennie, i są one zazwyczaj stosowane w monoterapii w celu zapobiegania i leczenia choroby, w której pośredniczy HCV. Zazwyczaj, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku podaje się od około 1 do około 5 razy dziennie lub alternatywnie, jako ciągły wlew. Takie podawanie można stosować przy przewlekłym lub ostrym leczeniu. Ilość aktywnego składnika, który można łączyć z nośnikami w celu wytworzenia pojedynczej dawki, będzie się zmieniać zależnie od leczonego pacjenta i danego sposobu podawania.
Fachowcy zauważą, że mogą być konieczne mniejsze lub dawki niż te cytowane powyżej. Specyficzne reżimy dawkowania i leczenia dowolnego pacjenta będą zależały od rozmaitych czynników, obejmujących aktywność specyficznego stosowanego związku, wiek, masę ciała, ogólny stan zdrowia, płeć, dietę, czas podawania, szybkość wydalania, kombinację leku, stan zaawansowania i przebieg infekcji, skłonność pacjenta do infekcji oraz opinię lekarza prowadzącego. Na ogół, leczenie zaczyna się stosując małe dawki znacznie poniżej optymalnych dawek peptydu. Następnie, dawki zwiększa się
PL 226 561 B1 o nieznaczne ilości, aż do osiągnięcia optymalnego efektu w danym przypadku. Na ogół, najbardziej pożądane jest podawanie związku w stężeniu, które zazwyczaj daje przeciwwirusowe skuteczne wyniki bez wywoływania dowolnych szkodliwych lub szkodliwych efektów ubocznych.
Gdy kompozycje według ujawnienia obejmują kombinację związku według wynalazku i jeden lub więcej dodatkowych środków terapeutycznych lub profilaktycznych, zarówno związek, jak i dodatkowy środek, występują zazwyczaj w ilościach od około 10 do 100%, i korzystniej od około 10 do 80% dawki zazwyczaj podawanej przy monoterapii.
Gdy związki te lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole, solwaty lub proleki komponuje się razem z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem, uzyskaną kompozycję można podawać in vivo ssakom, takim jak człowiek, w celu hamowania proteazy NS3 wirusa HCV lub do leczenia lub zapobiegania wirusowej infekcji HCV. Takie leczenie można również przeprowadzać stosując związki według wynalazku w połączeniu ze środkami, które obejmują, lecz nie ograniczają się do nich: immunomodulatory, takie jak interferony; inne inhibitory przeciwwirusowe takie jak ribawiryna, amantadyna; inne inhibitory proteazy NS3 wirusa HCV; inhibitory innego przeznaczenia w cyklu życiowym HCV takie jak helikaza, polimeraza, metaloproteaza lub wewnętrzne miejsce wejścia rybosomu; albo też ich kombinacje. Dodatkowe środki można łączyć ze związkami według wynalazku w celu uzyskania pojedynczej dawki. Alternatywnie te dodatkowe środki można oddzielnie podawać ssakowi jako części wielokrotnych dawek.
Zgodnie z tym, inny aspekt wynalazku daje sposoby hamowania aktywności proteazy NS3 HVC u pacjentów poprzez podawanie związku według wynalazku lub jego farmaceutycznie dopuszczalnej soli, w którym podstawniki mają powyżej zdefiniowane znaczenia.
W korzystnym rozwiązaniu, metody te są przydatne do zmniejszenia aktywności proteazy NS3 wirusa HCV u pacjenta. Jeśli kompozycja farmaceutyczna zawiera jako czynny składnik tylko związek według wynalazku, metody takie mogą ponadto obejmować etap podawania wymienionemu pacjentowi środka wybranego spośród takich jak środek immunomodulacyjny, środek przeciwwirusowy, inhibitor proteazy HCV lub inhibitor innego przeznaczenia w cyklu życiowym HCV, taki jak np. helikaza, polimeraza lub metaloproteaza. Takie dodatkowe środki można podawać pacjentowi przed, jednocześnie z lub tuż po podaniu związków według wynalazku.
W alternatywnym korzystnym rozwiązaniu, metody te są przydatne do hamowania replikacji wirusa u pacjenta. Takie metody mogą być przydatne w leczeniu lub zapobieganiu chorobie HCV.
Związki według wynalazku można także stosować jako reagenty laboratoryjne. Związki te mogą być użyteczne jako narzędzia badawcze przy projektowaniu testów replikacji wirusa, testów oceny systemów zwierzęcia i w badaniach biologii strukturalnej do poszerzenia wiedzy o mechanizmach choroby HCV.
Związki według wynalazku można także stosować do leczenia lub zapobiegania zanieczyszczeniu substancji wirusem, a zatem zmniejszają ryzyko infekcji wirusowej w laboratorium lub personelu medycznego albo pacjentów, którzy stykają się z substancjami takimi jak np. krew, tkanka, przyrządy i ubiory chirurgiczne, przyrządy i ubiory laboratoryjne oraz zbiorniki na krew lub urządzenia i materiały do transfuzji.
P r z y k ł a d y
Poniższe specyficzne przykłady ilustrują syntezy związków według wynalazku, przy czym nie ograniczają one dziedziny lub zakresu wynalazku. Sposoby można odpowiednio modyfikować w celu wytworzenia związków objętych zakresem wynalazku, których nie ujawniono specyficznie. Ponadto, dla fachowców w dziedzinie zrozumiałe są też modyfikacje sposobów w celu wytworzenia takich samych związków odmiennym sposobem.
Zawartość procentowa roztworu wyraża stosunek wagi do objętości i stosunki roztworu wyrażają stosunek objętości do objętości, jeśli nie stwierdzono inaczej. Widma jądrowego rezonansu magnetycznego (NMR) rejestrowano stosując spektrometr typu Bruker 300, 400 lub 500 MHz; przesunięcia chemiczne (δ) wyrażono w częściach na milion. Szybką chromatografię prowadzono na żelu krzemionkowym (SiO2) zgodnie z szybką techniką chromatografii Still'a (W.C. Still i in., J. Org. Chem., (1978), 43, 2923).
Wszystkie analizy chromatografii cieczowej (LC) rejestrowano za pomocą cieczowego chromatografu typu Shimadzu LC-10AS stosując detektor UV-Vis model SPD-10AV i analizy spektrometrii masowej (MS) przeprowadzono stosując Mikromass Platform dla LC z elektrorozpylaniem (ES+).
Jeśli nie wskazano tego inaczej, w następujących przykładach każdy związek zanalizowano metodą LC/MS, stosując jedną spośród siedmiu metod, w następujących warunkach.
PL 226 561 B1
Kolumny:
(Metoda A) - YMC ODS S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda B) - YMC ODS-A S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda C) - YMC S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda D) - YMC Xterra ODS S7 3,0 x 50 mm (Metoda E) - YMC Xterra ODS S7 3,0 x 50 mm (Metoda F) - YMC ODS-A S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda G) - YMC C18 S5 4,6 x 50 mm
Gradient: 100% rozpuszczalnika A/0% rozpuszczalnika B do 0% rozpuszczalnika A/100% rozpuszczalnika B
Czas gradientu: 2 minuty (A, B, D, F, G); 8 minut (C, E)
Czas retencji: 1 minuta (A, B, D, F, G); 2 minuty (C, E)
Szybkość przepływu: 5 ml/minutę
Długość fali detektora: 220 nm
Rozpuszczalnik A: 10% MeOH / 90% H2O / 0,1% TFA
Rozpuszczalnik B: 10% H2O / 90% MeOH / 0,1% TFA.
Skróty stosowane w przedstawionym zgłoszeniu, w tym wymienione zwłaszcza w ilustrujących przykładach, są dobrze znane w dziedzinie. Niektóre z użytych skrótów mają następujące znaczenia:
rt temperatura pokojowa
Boc tert-butyloksykarbonyl
DMSO dimetylosulfotlenek
EtOAc octan etylu
t-BuOK t-butanolan potasu
Et2O eter dietylowy
TBME eter tert-butylometylowy
THF tetrahydrofuran
CDI karbonylodiimidazol
DBU 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undek-7-en
TFA kwas trifluorooctowy
NMM N-metylomorfolina
HATU O-7-azabenzotriazol-1-yl
HBTU heksafluorofosforan O-(1H-benzotriazol-1-ylo)-N,N,N',N'-tetrametylouroniowy
HOBT N-hydroksybenzotriazol
PyBrop heksafluorofosforan bromo-bis-pirolidynofosfoniowy
DMF dimetyloformamid
MeOH metanol
EDTA kwas etylenodiaminotetraoctowy
HRMS wysokorozdzielcza spektrometria masowa
DMAP 4-dimetyloaminopirydyna
DIPEA diizopropyloetyloamina
DCM dichlorometan
DCE dichloroetan
Związki i chemiczne związki pośrednie według wynalazku, opisane w następujących przykła-
dach, wytworzono według następujących metod. Należy zwrócić uwagę, że poniższe przykłady występują w sekcjach. Sekcje są zatytułowane sekcja A do K. Numery przykładów i związków nie są ciągłe w całej części zgłoszenia z przykładami, tak zatem każda sekcja wskazuje; „przerwanie” kolejności oznaczania. Numeracja w poszczególnych sekcjach jest na ogół ciągła. Sekcja L opisuje aktywność
PL 226 561 B1 biologiczną związków. Sekcja M przedstawia dodatkowe związki, które można przygotować stosując opisane tu metody.
Sekcja A:
Wytwarzania związków pośrednich:
Wytwarzanie związków pośrednich P1:
Związki pośrednie P1 opisane w tej sekcji można stosować w celu przygotowania związków o wzorze I, opisanymi tutaj sposobami.
I fragmenty P1:
1. Wytwarzanie racemicznego estru etylowego kwasu (1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego
Metoda A
Chlorowodorek estru etylowego glicyny (303,8 g, 2,16 mola) zawieszono w eterze tertbutylometylowym (1,6 l). Dodano benzaldehyd (231 g, 2,16 mola) i bezwodny siarczan sodu (154,6 g, 1,09 mola), po czym mieszaninę ochłodzono do temperatury 0°C w łaźni wody z lodem. Trietyloaminę (455 ml, 3,26 mola) dodawano kroplami w ciągu 30 minut i mieszaninę mieszano przez 48 godzin w temperaturze pokojowej. Reakcję następnie zatrzymano dodając wodę oziębioną lodem (1 l) i warstwę organiczną oddzielono. Fazę wodną ekstrahowano eterem tert-butylometylowym (0,5 l) i połączone fazy organiczne przemyto mieszaniną nasyconego wodnego roztworu NaHCO3 (1 l) i solanką (1 l). Roztwór osuszono nad MgSO4, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 392,4 g N-benzyloiminy w postaci gęstego żółtego oleju, który użyto bezpośrednio w następnym etapie.
1H NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 1,32 (t, J=7,1 Hz, 3H), 4,24 (q, J=7,1 Hz, 2H), 4,41 (d, J=1,1 Hz, 2H), 7,39-7,47 (m, 3H), 7,78-7,81 (m, 2H), 8,31 (s, 1H).
Do zawiesiny tert-butanolanu litu (84,06 g, 1,05 mola) w suchym toluenie (1,2 l) dodawano kroplami mieszaninę N-benzyloiminy estru etylowego glicyny (100,4 g, 0,526 mola) i trans-1,4-dibromo-2-butenu (107,0 g, 0,500 mola) w suchym toluenie (0,6 l) w czasie 60 minut. Po dodaniu całości, ciemnoczerwoną mieszaninę zatrzymano dodając wodę (1 l) i eter tert-butylometyiowy (TBME, 1 l). Fazę wodną oddzielono i ekstrahowano drugi raz stosując TBME (1 l). Fazy organiczne połączono, 1N HCl (1 l) dodano i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Fazę organiczną oddzielono i ekstrahowano wodą (0,8 l). Fazy wodne następnie połączono, nasycono solą (700 g), dodano TBME (1 l), po czym mieszaninę ochłodzono do temperatury 0°C. Mieszaną mieszaninę następnie zalkalizowano do wartości pH 14 dodając kroplami 10N roztwór NaOH, po czym warstwę orga34
PL 226 561 B1 niczną oddzielono, i fazę wodną ekstrahowano TBME (2 x 500 ml). Połączone ekstrakty organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono do objętości 1 l. Do tego roztworu wolnej aminy, dodano BOC2O lub ditert-butylodiwęglan (131,0 g, 0,6 mola) i mieszaninę mieszano 4 dni w temperaturze pokojowej. Do mieszaniny reakcyjnej wprowadzono dodatkową porcję di-tert-butylodiwęglanu (50 g, 0,23 mola), mieszaninę ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 3 godziny, a następnie pozostawiono do ochłodzenia do temperatury pokojowej przez noc. Mieszaninę reakcyjną osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 80 g surowej substancji. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (2,5 kg SiO2, eluowano przy 1% do 2% MeOH/CH2Cl2) uzyskując 57 g (53%) racemicznego estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego w postaci żółtego oleju, który zestalił się po oziębieniu w chłodziarce:
1H NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 1,26 (t, J=7,1 Hz, 3H), 1,46 (s, 9H), 1,43-1,49 (m, 1H), 1,76-1,82 (br m, 1H), 2,14 (q, J=8,6 Hz, 1H), 4,18 (q, J=7,2 Hz, 2H), 5,12 (dd J=10,3, 1,7 Hz, 1H), 5,25 (br s,
1H), 5,29 (dd, J=17,6, 1,7 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J=17,6, 10,3, 8,9 Hz, 1H);
MS m/z 254,16 (M-1).
Etap 3
Wytwarzanie racemicznego chlorowodorku estru etylowego kwasu (1R,2S)/(1S,2R) 1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego
Ester etylowy kwasu N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego (9,39 g, 36,8 mmola) rozpuszczono w 4 N HCl/dioksanie (90 ml, 360 mmoli) i mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną zatężono otrzymując chlorowodorek estru etylowego kwasu (1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego z ilościową wydajnością (7 g, 100%).
1H NMR (metanol-d4) δ 1,32 (t, J=7,1, 3H), 1,72 (dd, J=10,2, 6,6 Hz, 1H), 1,81 (dd, J=8,3, 6,6 Hz, 1H), 2,38 (q, J=8,3 Hz, 1H), 4,26-4,34 (m, 2H), 5,24 (dd, 10,3, 1,3 Hz, 1H) 5,40 (d, J=17,2, 1H), 5,69-5,81 (m, 1H).
Alternatywny sposób otrzymywania racemicznego chlorowodorku estru etylowego kwasu N-Boc-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego
Do roztworu tert-butanolan potasu (11,55 g, 102,9 mmola) w THF (450 ml) w temperaturze -78°C dodano dostępną na rynku N,N-dibenzyloiminę estru etylowego glicyny (25,0 g, 93,53 mmola) w THF (112 ml). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury 0°C, mieszano przez 40 minut, a następnie ochłodzono ponownie do temperatury -78°C. Do tego roztworu dodano trans-1,4-dibromo-2-buten (20,0 g, 93,50 mmola), po czym mieszaninę mieszano przez 1 godzinę w temperaturze 0°C i ochłodzono ponownie do temperatury -78°C. Dodano tert-butanolan potasu (11,55 g, 102,9 mmola), mieszaninę następnie ogrzano do temperatury 0°C, po czym mieszano przez jeszcze jedną godzinę i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt rozpuszczono w Et2O (530 ml), dodano 1N wodny roztwór HCl (106 ml, 106 mmola) i uzyskaną mieszaninę dwufazową mieszano przez 3,5 godziny w temperaturze pokojowej. Warstwy oddzielono i warstwę wodną przemyto Et2O (2x) i zalkalizowano stosując nasycony wodny roztwór NaHCO3. Pożądaną aminę ekstrahowano Et2O (3x) i połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką, osuszono (MgSO4), po czym zatężono pod zmniejszoPL 226 561 B1 nymi ciśnieniem uzyskując wolną aminę. Tę substancję potraktowano 4N roztworem HCl w dioksanie (100 ml, 400 mmoli) i zatężono uzyskując chlorowodorek estru etylowego kwasu (1 R,2S)/(1 S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego w postaci brunatnego ciała półstałego (5,3 g, wydajność 34%) identycznego z substancją otrzymaną według procedury A, z wyjątkiem zawartości niewielkiej ilości niezidentyfikowanych zanieczyszczeń aromatycznych (8%).
Rozdzielanie estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego
Do wodnego roztworu buforu fosforanu sodu (0,1 M, 4,25 litra („l”), pH 8) umieszczonego w 12 litrowym reaktorze z płaszczem, utrzymywanego w temperaturze 39°C, i mieszanego przy 300 rpm dodano 511 gramów Acalase 2.4 l (około 425 ml) (Novozymes North America Inc.). Gdy osiągnięto temperaturę mieszaniny około 39°C, wartość pH uregulowano do 8,0 dodając 50% NaOH w wodzie. Roztwór racemicznego estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego (85 g) w 850 ml DMSO następnie dodawano w czasie 40 minut. Temperaturę reakcji następnie utrzymywano około 40°C przez 24,5 godzin, podczas gdy wartość pH mieszaniny uregulowano do 8,0 po czasie 1,5 i 19,5 godziny stosując 50% roztwór NaOH w wodzie. Po 24,5 godzinach, określono nadmiar enancjomeryczny estru wynoszący 97,2% po czym mieszaninę reakcyjną ochłodzono do temperatury pokojowej (26°C) i mieszano przez noc (16 godzin), po czym ponownie określono nadmiar enancjomeryczny estru wynoszący 100%. Wartości pH mieszaniny reakcyjnej następnie uregulowano do 8,5 stosując 50% roztwór NaOH i uzyskaną mieszaninę ekstrahowano MTBE (2 x 2 l). Połączone ekstrakty MTBE przemyto następnie 5% roztworem NaHCO3 (3 x 100 ml), wodą (3 x 100 ml) i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując enancjomerycznie czysty ester etylowy kwasu N-Boc-(1R,2S)/-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego w postaci jasnożółtego ciała stałego (42,55 g; czystość: 97% @ w 210 nm, bez kwasu; 100% nadmiar enancjomeryczny („ee”).
Warstwę wodną po procesie ekstrakcji następnie zakwaszono do wartości pH 2 stosując 50% roztwór H2SO4 i ekstrahowano MTBE (2 x 2 l). Ekstrakt MTBE przemyto wodą (3 x 100 ml) i odparowano otrzymując kwas w postaci jasnożółtego ciała stałego (42,74 g; czystość: 99% @ w 210 nm, bez estru).
PL 226 561 B1
Ester Kwas
Wysoko rozdzielcza spektroskopia masowa (+) ESI, C13H22NO4, [M+H]+, obliczone 256,1549, znalezione 256,1542 (-) ESI, C11H16NO4, [M-H]-, obliczone 226,1079, znalezione 226,1089
Obserwowane przesunięcie chemiczne NMR Rozpuszczalnik: CDCI3 (proton δ 7,24 ppm, C-13 δ 77,0 ppm) Bruker DRX-500C: proton 500,032 MHz, węgiel 125,746 MHz
Pozycja Proton (wzór) ppm C-13 ppm Proton (wzór) ppm C-13 ppm
1 — 40,9 — 40,7
2 2,10 (q,J=9,0 Hz) 34,1 2,17 (q, J=9,0 Hz) 35,0
3a 1,76 (br) 23,2 1,79 (br) 23,4
3b 1,46 (br) 1,51, (br)
4 — 170,8 — 175,8
5 5,74 (ddd, J=9,0, 10,0, 17,0 Hz) 133,7 5,75 (m) 133,4
6a 5,25 (d, J=17,0 Hz) 117,6 5,28 (d, J=17,0 Hz) 118,1
6b 5,08 (dd, J=10,0, 1,5 Hz) 5,12 (d, J=10,5 Hz)
7 — 155,8 — 156,2
8 — 80,0 — 80,6
9 1,43 (s) 28,3 1,43 (s) 28,3
10 4,16 (m) 61,3 — —
11 1,23 (t, J=7,5 Hz) 14,2 — —
Rozdzielanie B
Do 0,5 ml 100 mM buforu Heps.Na (pH 8,5) w studzience 24-studzienkowej płytki (pojemność: 10 ml/studzienkę), dodano 0,1 ml Savinase 16.0 L (proteaza z Bacillus clausii) (Novozymes North America Inc.) i roztwór racemiczny estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklokarboksylowego (10 mg) w 0,1 ml DMSO. Płytkę uszczelniono, po czym inkubowano przy 250 rpm w temperaturze 40°C. Po 18 godzinach, określono nadmiar enancjomeryczny estru wynoszący 44,3% w następujący sposób: 0,1 ml mieszaniny reakcyjnej usunięto i starannie mieszano z 1 ml etanolu; po odwirowaniu, 10 mikrolitrów („μΓ) sklarowanej cieczy zanalizowano metodą chiralnej HPLC. Do pozostałej mieszaniny reakcyjnej, dodano 0,1 ml DMSO, po czym płytkę inkubowano dodatkowe 3 dni przy 250 rpm w temperaturze 40°C, i kolejno do studzienki dodano cztery ml etanolu. Po odwirowaniu, 10 μl sklarowanej cieczy zanalizowano metodą chiralnej HPLC i określono nadmiar enancjomeryczny estru wynoszący 100%.
Rozdzielanie C
Do 0,5 ml 100 mM buforu Heps.Na (pH 8,5) w studzience 24-studzienkowej płytki (pojemność: 10 ml/studzienkę), dodano 0,1 ml Esperase 8.0 L, (proteaza z Bacillus halodurans) (Novozymes North America Inc.) i dodano roztwór racemiczny estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego (10 mg) w 0,1 ml DMSO. Płytkę uszczelniono i inkubowano przy 250 rpm w temperaturze 40°C. Po 18 godzinach, określono nadmiar enancjomeryczny estru wynoszący 39,6% w następujący sposób: 0,1 ml mieszaniny reakcyjnej usunięto i starannie mieszano z 1 ml etanolu; po odwirowaniu, 10 μl sklarowanej cieczy zanalizowano metodą chiralnej HPLC. Do pozostałej mieszaniny reakcyjnej, dodano 0,1 ml DMSO, po czym płytkę inkubowano dodatkowe 3 dni przy 250 rpm w temperaturze 40°C, kolejno do studzienki dodano cztery mL etanolu. Po odwirowaniu, 10 μl sklarowanej cieczy zanalizowano metodą chiralnej HPLC i określono nadmiar enancjomeryczny estru wynoszący 100%.
PL 226 561 B1
Analizę próbek prowadzono w następujący sposób:
1) Przygotowanie próbki: około 0,5 ml mieszaniny reakcyjnej mieszano starannie z 10 ml EtOH. Po odwirowaniu, 10 μΙ sklarowanej cieczy wstrzykiwano na kolumnę HPLC.
2) Określanie stopnia przereagowania:
Kolumna: YMC ODS A, 4,6 x 50 mm, S-5 μM Rozpuszczalnik: A, 1 mM HCl w wodzie; B, MeCN
Gradient: 30% B przez 1 minutę; 30% do 45% B przez 0,5 minuty; 45% B przez 1,5 minuty; 45% do 30% B przez 0,5 minuty.
Szybkość przepływu: 2 ml/minutę Detekcja UV: 210 nm
Czas retencji: kwas, 1,2 minuty; ester, 2,8 minuty.
3) Określanie nadmiaru enancjomerycznego estru:
Kolumna: CHIRACEL OD-RH, 4,6 x 150 mm, S-5 μM Faza ruchoma: MeCN/50 mM HCIO4 w wodzie (67/33)
Szybkość przepływu: 0,75 ml/minutę.
Detekcja UV: 210 nm.
Czas retencji:
(13,2R) izomer jako kwas: 5,2 minuty;
Racemat: 18,5 minuty i 20,0 minut;
(1R,2S) izomer jako ester: 18,5 minuty.
2. Wytwarzanie estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-cyklopropylocyklopropanokarboksylowego
Roztwór kwasu N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego (255 mg, 1,0 mmol) w eterze (10 ml) potraktowano z zastosowaniem octanu palladu (5 mg, 0,022 mmola). Pomarańczowo/czerwony roztwór umieszczono w atmosferze N2. Diazometan w eterze w nadmiarze dodawano kroplami w czasie 1 godziny. Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Nadmiar diazometanu usunięto stosując strumień azotu. Uzyskany roztwór zatężono na wirówce obrotowej otrzymując surowy produkt. Po szybkiej chromatografii (10% EtOAc/heksan) otrzymano 210 mg (78%) estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-cyklopropylocyklopropanokarboksylowego w postaci bezbarwnego oleju. LC-MS (czas retencji: 2,13, podobnie do metody A z tym wyjątkiem, że: czas gradientu 3 minuty, kolumna Xterra MS C18 S7 3,0 x 50 mm), MS m/e 270 (M++1).
3. Kwas 1-tert-butoksykarbonyloaminocyklopropanokarboksylowy jest dostępny w handlu
4. Wytwarzanie chlorowodorku estru metylowego kwasu 1-aminocyklobutanokarboksylowego
PL 226 561 B1
Kwas 1-aminocyklobutanokarboksylowy (100 mg, 0,869 mmola) (Tocris) rozpuszczono w 10 ml
MeOH, gazowy HCl barbotowano w czasie 2 godzin. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 18 godzin, a następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując 144 mg żółtego oleju. Po rozcieraniu z 10 ml eteru uzyskano 100 mg tytułowego produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) δ 2,10-2,25 (m, 1H), 2,28-2,42 (m, 1H), 2,64-2,82 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 9,21 (br s, 3H).
5. Wytwarzanie racemicznego estru tert-butylowego kwasu (1R,2R)/(1S,2S) 1-amino-2-etylocyklopropanokarboksylowego pokazano poniżej.
etyl syn względem karboksy
Etap 1: Wytwarzanie di-estru tert-butylowego kwasu 2-etylocyklopropano-1,1-dikarboksylowego pokazano poniżej.
Do zawiesiny chlorku benzylotrietyloamonu (21,0 g, 92,2 mmola) w 50% wodnym roztworze NaOH (92,4 g w 185 ml H2O) dodano 1,2-dibromobutan (30,0 g, 138,9 mmola) i di-tert-butylomalonian (20,0 g, 92,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano energicznie przez 18 godzin w temperaturze pokojowej, a następnie dodano mieszaninę lodu i wody. Surowy produkt ekstrahowano CH2CI2 (3x) i kolejno przemyto wodą (3x), solanką i ekstrakty organiczne połączono. Warstwę organiczną osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszanym ciśnieniem. Uzyskaną pozostałość poddano szybkiej chromatografii (100 g SiO2, 3% Et2O w heksanie) uzyskując tytułowy produkt (18,3 g, 67,8 mmola, wydajność 73%), który użyto bezpośrednio w następnej reakcji.
Etap 2: Wytwarzanie racemicznego estru tert-butylowego kwasu 2-etylocyklopropano-1,1-dikarboksylowego pokazano poniżej.
Produkt uzyskany według etapu 1 (18,3 g, 67,8 mmola) dodano do zawiesiny tert-butanolanu potasu (33,55 g, 299,0 mmola) w suchym eterze (500 ml) w temperaturze 0°C, a następnie H2O (1,35 ml, 75,0 mmola) i mieszaninę mieszano energicznie przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną wlano do mieszaniny lodu i wody, po czym przemyto eterem (3x). Warstwę wodną zakwaszono 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego w temperaturze 0°C i ekstrahowano EtOAc (3x). Połączone warstwy organiczne przemyto wodą (2x), solanką, osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując tytułowy produkt w postaci jasnożółtego oleju (10 g, 46,8 mmola, wydajność 69%).
Etap 3: Wytwarzanie (1R,2R)/(1S,2S) estru tert-butylowego kwasu 2-etylo-1-(2-trimetylosilanyletoksykarbonyloamino)cyklopropanokarboksylowego pokazano poniżej.
Do zawiesiny produktu uzyskanego według etapu 2 (10 g, 46,8 mmola) i 3 g świeżo aktywowanych sit molekularnych 4A w suchym benzenie (160 ml), dodano Et3N (7,50 ml, 53,8 mmola) i DPPA
PL 226 561 B1 (111 ml, 10,21 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 3,5 godziny, a następnie dodano 2-trimetylosililoetanol (13,5 ml, 94,2 mmola) i mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez noc. Mieszaninę reakcyjną przesączono, rozcieńczono Et2O, przemyto 10% wodnym roztworem kwasu cytrynowego, wodą, nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, wodą (2x), solanką (2x), osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość zawieszono w 10 g poliizocyjanianowej żywicy Aldrich w 120 ml CH2CI2, mieszano w temperaturze przez noc i przesączono otrzymując tytułowy (8 g, 24,3 mmola; 52%) w postaci jasnożółtego oleju:
1H NMR (CDCI3) δ 0,03 (s, 9H), 0,97 (m, 5H), 1,20 (bm, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,40-1,70 (m, 4H), 4,16 (m, 2H), 5,30 (bs, 1H).
Etap 4: Wytwarzanie racemicznego estru tert-butylowego kwasu (1R,2R)/(1S,2S) 1-amino-2-etylocyklopropanokarboksylowego pokazano poniżej.
etyl syn względem karboksy
Do produktu uzyskanego według etapu 3 (3 g, 9 mmoli) dodano 1,0 M roztwór TBAF w THF (9,3 ml, 9,3 mmola) i mieszaninę ogrzano do temperatury wrzenia przez 1,5 godziny, ochłodzono do temperatury pokojowej i następnie rozcieńczono 500 ml EtOAc. Roztwór przemyto kolejno wodą (2 x 100 ml), solanką (2 x 100 ml), osuszono (MgSO4), zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując tytułowy związek pośredni.
II Fragmenty P1':
Fragmenty P1' wytworzone poniżej można stosować w celu przygotowania związków o wzorze I stosując opisane tu metody.
1. Wytwarzanie cyklopropylosulfonoamidu:
Etap 1: Wytwarzanie N-tert-butylo-(3-chloro)propylosulfonoamidu
Tert-butyloaminę (3,0 mole, 315,3 ml) rozpuszczono w THF (2,5 l). Roztwór ochłodzono do temperatury -20°C. Powoli dodawano chlorek 3-chloropropanosulfonylu (1,5 mola, 182,4 ml). Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez 24 godziny. Mieszaninę przesączono, po czym przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w CH2CI2 (2,0 l). Uzyskany roztwór przemyto 1N roztworem HCl (1,0 l), wodą (1,0 l), solanką (1,0 l) i osuszono nad Na2SO4. Zawiesinę przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując jasnożółte ciało stałe, które krystalizowano z heksanu otrzymując produkt w postaci białego ciała stałego (316,0 g, 99%).
1H NMR (CDCI3) δ 1,38 (s, 9H), 2,30-2,27 (m, 2H), 3,22 (t, J=7,35 Hz, 2H), 3,68 (t, J=6,2 Hz, 2H), 4,35 (b, 1H).
Etap 2: Wytwarzanie tert-butyloamidu kwasu cyklopropanosulfonowego
PL 226 561 B1
Do roztworu N-tert-butylo-(3-chloro)propylosulfonoamidu (2,14 g 10,0 mmola) w THF (100 ml) dodano n-BuLi (2,5M w heksanie, 8,0 ml, 20,0 mmola) w temperaturze -78°C. Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej w czasie 1 godziny. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość podzielono pomiędzy EtOAC i wodę (200 ml, 200 ml). Oddzielono fazę organiczną, przemyto solanką, osuszono nad Na2SO4, przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość krystalizowano z heksanu otrzymując pożądany produkt w postaci białego ciała stałego (1,0 g, 56%).
1H NMR (CDCl3) δ 0,98-1,00 (m, 2H), 1,18-1,19 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 2,48-2,51 (m, 1H), 4,19 (b, 1H).
Etap 3: Wytwarzanie cyklopropylosulfonoamidu ο
ο
Roztwór tert-butyloamidu kwasu cyklopropanosulfonowego (110,0 g, 0,62 mola) w TFA (500 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość krystalizowano z EtOAC/heksan (60 ml/240 ml) uzyskując pożądany produkt w postaci białego ciała stałego (68,5 g, 91%).
1H NMR (DMSO-d6) δ 0,84-0,88 (m, 2H), 0,95-0,98 (m, 2H), 2,41-2,58 (m, 1H), 6,56 (b, 2H).
2. Alternatywna metoda otrzymywania cyklopropylosulfonoamidu
Przez roztwór 100 ml THF ochłodzonego do temperatury 0°C barbotowano gazowy amoniak, aż do nasycenia. Do tego roztworu roztwór 5 g (28,45 mmola) chlorku cyklopropylosulfonylu (zakupiony w firmie Array Biopharma) w 50 ml THF, roztwór ogrzano do temperatury pokojowej przez noc i mieszano dodatkowy dzień. Mieszaninę zatężono aż do pozostałości 1-2 ml rozpuszczalnika, wprowadzono na 30 g masy SiO2 (eluowano z 30% do 60% EtOAc/heksany) uzyskując 3,45 g (100%) cyklopropylosulfonoamidu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (metanol-d4) δ 0,94-1,07 (m, 4H), 2,52-2,60 (m, 1H);
13C NMR (metanol-d4) δ 5,92, 33,01.
3. Wytwarzanie cyklobutylosulfonoamidu
Do roztworu 5,0 g (37,0 mmola) bromku cyklobutylu w 30 ml bezwodnego eteru dietylowego (Et2O) ochłodzonego do temperatury -78°C dodano 44 ml (74,8 mmola) 1,7M tert-butylolitu w pentanach i roztwór powoli ogrzano do -35°C w czasie 1,5 godziny. Mieszaninę wprowadzono powoli rurką do roztworu 5,0 g (37,0 mmola) świeżo destylowanego chlorku sulfurylu w 100 ml heksanów ochłodzonego do temperatury -40°C, kolejno ogrzano do temperatury 0°C w czasie 1 godziny i ostrożnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w Et2O, przemyto jednokrotnie wodą oziębioną lodem, osuszono (MgSO4) i powoli zatężono. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w 20 ml THF, dodawano kroplami do 500 ml nasyconego NH3 w THF i mieszano przez noc. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując surowe żółte ciało stałe i krystalizowano z minimalną ilością CH2Cl2 w heksanach i 1-2 kroplami MeOH otrzymując 1,90 g (38%) cyklobutylosulfonoamidu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) δ 1,95-2,06 (m, 2H), 2,30-2,54 (10, 4H), 3,86 (p, J=8 Hz, 1H), 4,75 (brs, 2H);
13C NMR (CDCI3) δ 16,43, 23,93, 56,29.
HRMS m/z (M-H)- obliczone dla C4H8NSO2: 134,027, znalezione 134,0282.
4. Wytwarzanie cyklopentylosulfonoamidu
PL 226 561 B1
Roztwór 18,5 ml (37,0 mmola) 2M chlorku cyklopentylomagnezu w eterze dodawano kroplami do roztworu 3,0 ml (37,0 mmola) świeżo destylowanego chlorku sulfurylu (otrzymano z firmy Aldrich) w 100 ml heksanach ochłodzonego do temperatury -78°C. Mieszaninę ogrzano do temperatury 0°C w czasie 1 godziny i następnie powoli zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w Et2O (200 ml), przemyto jednokrotnie wodą oziębioną lodem (200 ml), osuszono (MgSO4) i powoli zatężono. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w 35 ml THF, dodawano kroplami do 500 ml nasyconego NH3 w THF i mieszano przez noc. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując surowe żółte ciało stałe, pozostałość przesączono poprzez 50 g żelu krzemionkowego stosując 70% EtOAc-heksany jako eluent i roztwór następnie zatężono. Pozostałość krystalizowano z niewielką ilością CH2CI2 w heksanach z 1-2 kroplami MeOH otrzymując 2,49 g (41%) cyklopentylosulfonoamidu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) δ 1,58-1,72 (m, 2H), 1,74-1,88 (m, 2H), 1,94-2,14 (m, 4H), 3,48-3,59 (m, 1H), 4,80 (bs, 2H);
13CH NMR (CDCl3) δ 25,90, 28,33, 63,54;
MS m/e 148 (M-H)-.
5. Wytwarzanie cykloheksylosulfonoamidu
Roztwór 18,5 ml (37,0 mmola) 2M chlorku cykloheksylomagnezu (TCI Americas) w eterze dodawano kroplami do roztworu 3,0 ml (37,0 mmola) świeżo destylowanego chlorku sulfurylu w 100 ml heksanach ochłodzono do temperatury -78°C. Mieszaninę ogrzano do temperatury 0°C w czasie 1 godziny i następnie powoli zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w Et2O (200 ml), przemyto jednokrotnie wodą oziębioną lodem (200 ml), osuszono (MgSO4) i powoli zatężono. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w 35 ml THF, dodawano kroplami do 500 ml nasyconego roztworu NH3 w THF i mieszano przez noc. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując surowe żółte ciało stałe, pozostałość przesączono poprzez 50 g żelu krzemionkowego stosując 70% EtOAc-heksany jako eluent i zatężono. Pozostałość krystalizowano z niewielką ilością CH2CI2 w heksanach z 1-2 kroplami MeOH otrzymując 1,66 g (30%) cykloheksylosulfonoamidu w postaci białego ciała stałego:
1H NMR (CDCI3) δ 1,11-1,37 (m, 3H), 1,43-1,56 (m, 2H), 1,67-1,76 (m, 1H), 1,86-1,96 (m, 2H), 2,18-2,28 (m, 2H), 2,91 (tt, J=12, 3,5 Hz, 1H), 4,70 (bs, 2H);
13C NMR (CDCI3) δ 25,04, 25,04, 26,56, 62,74;
MS m/e 162 (M-1)-.
6. Wytwarzanie neopentylosulfonoamidu
Postępując według procedury przygotowywania cykloheksylosulfonoamidu, 49 mL (37 mmoli) 0,75M chlorku neopentylomagnezu (Alfa) w eterze przekształcono do 1,52 g (27%) neopentylosulfonoamidu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCl3) δ 1,17 (s, 9H), 3,12 (s, 2H), 4,74 (brs, 2H);
13C NMR (CDCl3) δ 29,46, 31,51, 67,38;
MS m/e 150 (M-1)-.
7. Wytwarzanie cyklobutylokarbinylosulfonoamidu ο
Roztwór 12,3 g (83 mmoli) bromku cyklobutylokarbinylu (Aldrich) i 13,7 g (91 mmoli) jodku sodu w 150 ml acetonu ogrzewano w temperaturze wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez noc i następnie ochłodzono do temperatury pokojowej. Nieorganiczne części stałe odsączono, po czym aceton i jodek
PL 226 561 B1 cyklopropylokarbinylu (8,41 g, 46%) oddestylowano odpowiednio w temperaturze pokojowej i pod ciśnieniem 150 torów w temperaturze 80°C.
Roztwór 4,0 g (21,98 mmola) jodku cyklobutylokarbinylu w 30 ml bezwodnego eteru dietylowego (Et2O) ochłodzony do temperatury -78°C wprowadzono rurką do roztworu 17 ml (21,98 mmola) 1,3M sec-butylolitu w cykloheksanach i roztwór mieszano przez 5 minut. Do tej mieszaniny wprowadzono rurką roztwór 3,0 g (21,98 mmola) świeżo destylowanego chlorku sulfurylu w 110 ml heksanów ochłodzony do temperatury -78°C, mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej w czasie 1 godziny i następnie powoli zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w Et2O, przemyto jednokrotnie wodą oziębioną lodem, osuszono (MgSO4) i powoli zatężono. Mieszaninę ponownie rozpuszczono w 30 ml THF, dodawano kroplami do 500 ml nasyconego roztworu NH3 w THF i mieszano przez noc. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując surowe żółte ciało stałe i krystalizowano z niewielką ilością CH2CI2 w heksanach z 1-2 kroplami MeOH otrzymując 1,39 g (42%) karbinylocyklobutylosulfonoamidu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCls) δ 1,81-2,03 (m, 4H), 2,14-2,28 (m, 2H), 2,81-2,92 (m, 1H), 3,22 (d, J=7 Hz, 2H), 4,74 (brs, 2H);
13C NMR (CDCI3) δ 19,10, 28,21, 30,64, 60,93;
MS m/e 148 (M-1)-, czas: 1,73, (metoda p), 8,18 (M++H).
8. Wytwarzanie cyklopropylokarbinylosulfonoamidu
Postępując według procedury stosowanej do otrzymywania cyklobutylokarbinylosulfonoamidu, cyklopropylokarbinylosulfonoamid wytworzono stosując bromek cyklopropylokarbinylu (Aldrich) (patrz także JACS 1981, 442-445).
1H NMR (CDCI3) δ 0,39-0,44 (m, 2H), 0,67-0,76 (m, 2H), 1,13-1,27 (m, 1H), 3,03 (d, J=7,3 Hz, 2H), 4,74 (brs, 2H);
13C NMR (CDCl3) δ 4,33, 5,61, 59,93;
MS m/e 134 (M-1).
III Heterocykle stosowane jako substancja wyjściowa w celu przygotowania fragmentów P2 dla późniejszego wprowadzania do związków o wzorze I.
1. Izochinoliny
PL 226 561 B1
Izochinolinę (1) i jej podstawione analogi, można wprowadzać do fragmentów P2 stosując dwie metody przedstawione powyżej i opisane tu szczegółowo. Wymienione fragmenty P2 (3) można następnie poddać konwersji do związków o wzorze I stosując metody analogiczne do tych tu opisanych w przypadku podobnych analogów izochinoliny.
Izoksazolopirydyna i oksazolopirydyna (1)
Heterocykle takie jak izoksazol i oksazol (1) i ich analogi można wytworzyć znanymi metodami i wprowadzać do związków o wzorze I stosując opisane tu dla podobnych związków pośrednich izoksazolopirydyny jak pokazano w sekcji B.
Sekcja B:
W Sekcji B do analizy LC/MS stosowano następujące warunki.
Kolumny:
Metoda A: YMC ODS-A C18 S7 (4,6 x 33 mm)
Metoda B: YMC Xterra ODS S7 (3,0 x 50 mm)
Metoda C: Xterra MS C18 (4,6 x 33 mm)
Metoda D: YMC ODS-A C18 S3 (4,6 x 33 mm)
Gradient: 100% rozpuszczalnika A/0% rozpuszczalnika B do 0% rozpuszczalnika A/100% rozpuszczalnika B
Czas gradientu: 3 minuty.
Czas retencji: 1 minuta.
Szybkość przepływu: 5 ml/minutę.
Długość fali detektora: 220 nm.
Rozpuszczalniki: Rozpuszczalnik A: 10% MeOH/90% woda/0,1% TFA. Rozpuszczalnik B: 90% MeOH/10% woda/0,1% TFA.
Następujące warunki stosowano w preparatywnym rozdziale HPLC.
Kolumny: Fenomenex-Luna 30 x 100 mm, S5
Gradient: 60% rozpuszczalnika A/40% rozpuszczalnika B do 0% rozpuszczalnika A/100% rozpuszczalnika B
Czas gradientu: 15 minut.
Czas retencji: 20 minut.
Szybkość przepływu: 30 ml/minutę.
Długość fali detektora: 220 nm.
Rozpuszczalniki: rozpuszczalnik A: 10% MeOH/90% woda/0,1% TFA, rozpuszczalnik B: 90% MeOH/10% woda/0,1% TFA.
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 1: sposób wytwarzania związku 1.
Schemat 1
Mieszaninę 3,5-dimetylo-4-nitroizoksazolu (1,42 g, 10,0 mmola), fenyloacetaldehydu (1,32 g, 11,0 mmola) w piperydynie (1 ml) i etanolu (10 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 16 godzin. Po oziębieniu do temperatury otoczenia, wytrącony produkt zebrano metodą filtracji. Placek filtracyjny przemyto starannie zimnym etanolem, uzyskując 1,20 g (53%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCis) δ 2,87 (s, 3H), 7,46-7,50 (m, 3H), 7,56 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,7-7,80 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,19 minuty, metoda B),
MS m/z 227 (M++H).
Etap 2:
Roztwór 4-tlenku 3-metylo-5-fenyloizoksazolo[4,5-b]pirydyny (1,100 g, 4,40 mmola) i POCI3 (2,71 g, 17,7 mmola) w chloroformie (10 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 1 godzinę. Po oziębieniu do temperatury otoczenia, końcowy roztwór rozcieńczono chloroformem (50 ml) i przemyto NaHCO3 (roztwór wodny) (dwie 50 ml porcje) oraz solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (4:1 heksan-EtOAc), uzyskując 790 mg (73%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) δ 2,72 (s, 3H), 7,46-7,54 (m, 3H), 7,91 (s, 1H), 8,00-8,03 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,76 minuty, metoda B),
MS m/z 245, 247 (M++H).
PL 226 561 B1
Schemat 2
Etap 3:
Do mieszaniny estru metylowego kwasu 4-hydroksy-pirolidyno-2-karboksylowego (H-Hyp-OMe HCl) (1,81 g, 10,0 mmola), HATU (5,70 g, 15,0 mmola), i N-Boc-t-butylo-L-glicyny (2,42 g, 10,5 mmola) w CH2CI2 (100 ml), w temperaturze 0°C, dodano DIPEA (3,47 g, 31,0 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze otoczenia przez 12 godzin, uzyskany roztwór rozcieńczono CH2CI2 (100 ml), przemyto 5% kwasem cytrynowym z lodem (wodny roztwór). Warstwę organiczną przemyto odpowiednio 5% kwasem cytrynowym, 1M NaOH, solanką, osuszono nad MgSO4 i przesączono. Przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 3,55 g (99%) pożądanego produktu w postaci białawej pianki. Produkt ten stosowano w następnej reakcji jako surowy, bez dalszego oczyszczania.
1H NMR (CD3OD) δ 1,04 (s, 9H), 1,43 (s, 9H), 1,99-2,03 (m, 1H), 2,20-2,30 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,70-3,79 (m, 2H), 4,28 (b, 1H), 4,46 (b, 1H), 4,74-4,80 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,28 minuty, metoda B),
MS m/z 359 (M++H).
Etap 4:
Mieszaninę produktu według etapu 3 (3,55 g, 9,9 mmola) w THF (50 ml), MeOH (50 ml) i monohydratu LiOH (0,83 g, 19,9 mmola w 50 ml H2O) mieszano w temperaturze otoczenia przez noc. Po usunięciu części lotnych pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w 0,1M NaOH (100 ml). Ten wodny roztwór przemyto eterem (50 ml), zakwaszono 1M HCl do pH 4 i ekstrahowano EtOAc (100 ml). Warstwę organiczną przemyto 5% kwasem cytrynowym i solanką, osuszono nad MgSO4 i odparowano do suchej masy, uzyskując 3,20 g (95%) pożądanego produktu w postaci białej pianki. Produkt ten stosowano w postaci surowej, bez dalszego oczyszczania.
1H NMR (CD3OD) δ 1,02 (s, 9H), 1,43 (s, 9H), 2,01-2,09 (m, 1H), 2,25-2,32 (m, 1H), 3,70-3,85 (m, 2H), 4,26-4,30 (m, 1H), 4,46-4,51 (m, 2H), 6,37-6,41 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,14 minuty, metoda B),
MS m/z 345 (M++H).
Etap 5:
Do roztworu produktu według etapu 4 (1,01 g, 2,93 mmola) w DMSO 1 (30 ml) dodano tertbutanolan potasu (1,02 g, 9,08 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze otoczenia przez 1 godzinę, po czym dodano 7-chloro-3-metylo-5-fenyloizoksazolo[4,5-b]pirydynę (0,75 g, 3,08 mmola). Końcowy roztwór mieszano przez 12 godzin. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę z lodem, mieszaninę zakwaszono 1M HCl do pH 4 i ekstrahowano EtOAc (dwie 200 ml porcje). Warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczo46
PL 226 561 B1 no metodą preparatywnej HPLC (60%B-100%B, gradient 15 minut), uzyskując 305 mg (19%) pożądanego produktu w postaci jasnożółtego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 1,02 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 2,37-2,47 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,85-2,93 (m, 1H), 4,00-4,08 (m, 1H), 4,14 (b, 1H), 4,49-4,55 (m, 1H), 4,62-4,71 (m, 1H), 5,70 (m, 1H), 7,45-7,53 (m, 3H), 7,56 (s, 1H), 8,03-8,06 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,89 minuty, metoda B),
MS m/z 553 (M++H).
Etap 6a
Jak opisano w części A.
Etap 6b:
Do roztworu estru etylowego kwasu 1(R)-tert-butoksykarbonyloamijno-2(S)-winylocyklopropanokarboksylowego, produktu według etapu 6a (3,28 g, 13,2 mmola) w THF (7 ml) i metanolu (7 ml) dodano zawiesinę LiOH (1,27 g, 53,0 mmola) w wodzie (14 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej i reakcję zatrzymano dodając 1N NaOH (15 ml) oraz wodą (20 ml). Uzyskaną mieszaninę przemyto EtOAc (20 ml) i fazę organiczną ekstrahowano 20 ml 0,5N NaOH. Połączone fazy wodne zakwaszono 1N HCl do pH 4 i ekstrahowano EtOAc (3 x 40 ml). Połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką i osuszono (MgSO4), uzyskując tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (2,62 g, 87%).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 1,22-1,26 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,50-1,52 (m, 1H), 2,05 (q, J=9 Hz, 1H), 5,04 (d, J=10 Hz, 1H), 5,22 (d, J=17 Hz, 1H), 5,64-5,71 (m, 1H), 7,18, 7,53 (s, NH (rotamery), 12,4 (br s, 1H));
LC-MS (czas retencji: 1,67 minuty, metoda B),
MS m/z 22 8 (M++H).
Etap 7:
Roztwór produktu według etapu 6 (2,62 g, 11,5 mmola) i CDI (2,43 g, 15,0 mmola) w THF (40 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia, w atmosferze azotu, przez 50 minut. Roztwór ochłodzono do temperatury pokojowej i przeniesiono stosując rurkę do roztworu cyklopropylosulfonoamidu
PL 226 561 B1 (1,82 g, 15,0 mmola) w THF (10 ml). Do uzyskanego roztworu dodano DBU (2,40 mL, 16,1 mmola) i mieszanie kontynuowano przez 20 godzin. Reakcję zatrzymano dodając 1N HCl do pH 1 i THF odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Zawiesinę ekstrahowano EtOAc (2 x 50 ml) i połączone ekstrakty organiczne osuszono (Na2SO4). Po oczyszczeniu przez krystalizację z mieszaniny heksanyEtOAc (1:1) uzyskano tytułowy związek (2,4 g) w postaci białego ciała stałego. Ług macierzysty oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40S (eluowano 9% acetonem w DCM), uzyskując drugą porcję tytułowego związku (1,1 g). Obie porcje połączono (wydajność całkowita; 92%).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,96-1,10 (m, 4H), 1,22 (dd, J=5,5, 9,5 Hz, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,70 (t, J=5,5 Hz, 1H), 2,19-2,24 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 5,08 (d, J=10 Hz, 1H), 5,23 (d, J=17 Hz, 1H), 5,45 (m, 1H), 6,85, 7,22 (s, NH (rotamery));
LC-MS (czas retencji: 1,70 minuty, metoda B),
MS m/z 331 (M++H).
Etap 8:
Roztwór produktu według etapu 7 (3,5 g, 10,6 mmola) w DCM (35 ml) i TFA (32 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 1,5 godziny. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość zawieszono w 1N HCl w eterze dietylowym (20 ml) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Tę procedurę powtórzono jednokrotnie. Uzyskaną mieszaninę roztarto z pentanem i przesączono, uzyskując tytułowy związek w postaci higroskopijnego, białawego ciała stałego (2,60 g, 92%).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 1,01-1,15 (m, 4H), 1,69-1,73 (m, 1H), 1,99-2,02 (m, 1H), 2,38 (q, J=9 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 5,20 (d, J=11 Hz, 1H), 5,33 (d, J=17 Hz, 1H), 5,52-5,59 (m, 1H), 9,17 (br s, 3H);
LC-MS (czas retencji: 0,24 minuty, metoda B),
MS m/z 231 (M++H).
Etap 9:
Do oziębionej lodem mieszaniny produktu według etapu 5, 70 mg, 0,13 mmola), chlorowodorku (1-amino-2-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu (1R,2S)-cyklopropanosulfonowego, produktu według etapu 8 (37 mg, 0,14 mmola) i HATU (72 mg, 0,19 mmola) w DCM (2 ml) dodano diizopropyloetyloaminę (50 mg, 0,39 mmola). Uzyskany roztwór pozostawiono do ogrzania do temperatury otoczenia na 12 godzin i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (60%B-100%B, gradient 15 minut), uzyskując 52 mg (54%) związku 1 w postaci szarego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 0,96-1,09 (m, 12H), 1,16-1,25 (m, 10H), 1,44-1,48 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,20-2,40 (m, 2H), 2,63-2,65 (m, 4H), 2,89-2,98 (m, 1H), 4,08-4,20 (m, 2H), 4,44-4,65 (m, 2H), 5,13 (d, J=11,7 Hz, 1H), 5,32 (d, J=15 Hz, 1H), 5,72-5,85 (b, 2H), 6,62 (d, J=15,0 Hz, 1H), 7,46-7,53 (m, 3H), 7,58 (s, 1H), 8,04-8,07 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,92 minuty, metoda B),
MS m/z 765 (M++H).
P r z y k ł a d 2: sposób wytwarzania związku 2
PL 226 561 B1
Etap 1:
Mieszaninę 2-amino-6-metylopirydyny (1,08 g, 10,0 mmola), benzoilooctanu etylu (2,30 g, 12,0 mmola) i kwasu polifosforowego (6,00 g, 61,2 mmola) ogrzewano w temperaturze 110°C przez 5 godzin. Po oziębieniu do temperatury otoczenia, mieszaninę wylano do wody z lodem (20 ml) i zobojętniono do pH 7 stosując 10M NaOH. Ekstrahowano CHCI3. Warstwę organiczną przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (1:1 heksan-EtOAc) uzyskując 510 mg (22%) pożądanego produktu w postaci jasnożółtego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) δ 3,08 (s, 3H), 6,64 (d, J=7,0 Hz, 1H), 6,71 (s, 1H), 7,42-7,52 (m, 5H), 8,048,06 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,21 minuty, metoda B),
MS m/z 237 (M++H).
Etap 2:
Roztwór 6-metylo-2-fenylopirydo[1,2a]pirymidyn-4-onu (489 mg, 2,07 mmola) w stopionym eterze difenylowym (5 ml) ogrzewano łagodnie w temperaturze refluksu przez 5 godzin. Po oziębieniu do temperatury otoczenia, utworzoną zawiesinę rozcieńczono eterem dietylowym (10 ml) i przesączono. Placek filtracyjny przemyto starannie eterem dietylowym, uzyskując 450 mg (92%) pożądanego produktu w postaci brunatnawego ciała stałego.
LC-MS (czas retencji: 1,25 minuty, metoda B),
MS m/z 237 (M++H).
Etap 3:
Zawiesinę 7-metylo-2-fenylo-1H-[1,8]naftyrydyn-4-onu (450 mg, 1,91 mmola) w POCI3 (10 ml) ogrzewano łagodnie w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość wylano do wody z lodem (20 ml) i zobojętniono do pH 10 stosując 10M NaOH. Ekstrahowano CHCI3. Warstwę organiczną przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (2:1 heksan-EtOAc), uzyskując 450 mg (92%) pożądanego produktu w postaci różowego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 2,80 (s, 3H), 7,54-7,56 (m, 3H), 7,61 (d, J=8,4 Hz, 1H), 8,25-8,30 (m, 3H), 8,58 (d, J=8,4 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,39 minuty, metoda B),
MS m/z (M++H).
Schemat 2
PL 226 561 B1
Związek 2
Etap 4
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano 4-chloro-7-metylo-2-fenylo-[1,8]naftyrydynę z przykładu 2, etap 3.
LC-MS (czas retencji: 1,55 minuty, metoda B),
MS m/z 563 (M++H).
Etap 5:
Związek 2 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 9, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 2, etap 4.
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,10 (m, 12H), 1,21-1,26 (m, 10H), 1,40-1,45 (m, 1H), 1,86-1,91 (m, 1H), 2,20-2,29 (m, 1H), 2,39-2,49 (m, 1H), 2,72-2,81 (m, 1H), 2,92-2,95 (m, 4H), 4,10-4,16 (m, 2H), 4,55-4,65 (m, 2H), 5,14 (d, J=12,0 Hz, 1H), 5,30 (d, J=15,0 Hz, 1H), 5,67-5,82 (m, 2H), 7,60-7,80 (m, 3H), 7,78 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 8,26-8,29 (m, 2H), 8,95 (d, J=8,4 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,62 minuty, metoda B),
MS m/z 775 (M++H).
P r z y k ł a d 3: sposób wytwarzania związku 3.
Związek 3
PL 226 561 B1
Etap 1:
Do roztworu alkoholu 4-metoksyfenetylowego (1,52 g, 10,0 mmola) w CH2CI2 (50 ml) w temperaturze 0°C w jednej porcji dodano reagent Dess'a-Martin'a (4,45 g, 10,5 mmola). Utworzoną mieszaninę pozostawiono w temperaturze otoczenia na okres 1 godziny. Przemyto odpowiednio nasyconym Na2S2O3 (wodny roztwór) i 1M NaOH oraz solanką. Osuszono nad MgSO4 i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 1,50 g (100%) pożądanego aldehydu w postaci lepkiego oleju. Produkt ten stosowano w postaci surowej bez żadnego oczyszczania.
Etap 2:
Roztwór 3,5-dimetylo-4-nitroizoksazolu (142 mg, 1,0 mmola), 4-metoksyfenyloacetaldehydu według przykładu 3, etap 1 (180 mg, 1,1 mmola) w piperydynie (0,1 ml) i etanolu (2 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 12 godzin. Po oziębieniu do temperatury otoczenia, wytrącony produkt zebrano metodą filtracji. Placek filtracyjny przemyto starannie zimnym etanolem, uzyskując 130 mg (51%) pożądanego produktu w postaci szarego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) δ 2,88 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 7,02 (d, J=8,5 Hz, 2H), 7,50 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,57 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,81 (d, J=8,5 Hz, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,24 minuty, metoda B),
MS m/z 257 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 3, etap 2.
1H NMR (CDCl3) δ 2,70 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 7,00-7,03 (m, 2H), 7,84 (s, 1H), 7,96-7,98 (m, 2H); LC-MS (czas retencji: 1,96 minuty, metoda B),
MS m/z 275, 277 (M++H).
Etap 4:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt według przykładu 3, etap 3.
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD) δ 1,02 (s, 9H), 1,18 (5, 9H), 2,39-2,43 (m, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,75-2,80 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 4,00-4,08 (m, 1H), 4,17 (b, 1H), 4,49-4,55 (m, 1H), 4,62-4,71 (m, 1H), 5,68 (b, 1H), 7,05 (d, J=8,5 Hz, 2H), 7,49 (s, 1H), 8,00 (d, J=8,5 Hz, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,89 minuty, metoda B),
MS m/z 583 (M++H).
Etap 5
Związek 3 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 9, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 3, etap 4.
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,09 (m, 12H), 1,17-1,26 (m, 10H), 1,44-1,47 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,20-2,40 (m, 2H), 2,63-2,65 (m, 4H), 2,89-2,98 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 4,08-4,20 (m, 2H), 4,44-4,65 (m, 2H), 5,13 (d, J=11,7 Hz, 1H), 5,32 (d, J=15,0 Hz, 1H), 5,72-5,85 (m, 2H), 7,05 (d, J=8,5 Hz, 2H), 7,06 (s, 1H), 8,01 (d, J=8,5 Hz, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,96 minuty, metoda B),
MS m/z 795 (M++H).
P r z y k ł a d 4: sposób wytwarzania związku 4.
Związek 4
Etap 1
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 3, etap 1 i 2, z tym wyjątkiem, że stosowano alkohol 4-fluorofenetylowy.
LC-MS (czas retencji: 1,18 minuty, metoda B),
MS m/z 245 (M++H).
Etap 2:
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 4, etap 1.
1H NMR (CDCl3) δ 2,71 (s, 3H), 7,17-7,20 (m, 2H), 7,86 (s, 1H), 8,00-8,02 (m, 2H); LC-MS (czas retencji: 1,71 minuty, metoda B),
MS m/z (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 4, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,91 minuty, metoda B),
MS m/z 571 (M++H).
Etap 4:
Związek 4 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 9, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 4, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,09 (m, 12H), 1,17-1,26 (m, 10H), 1,44-1,47 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,20-2,40 (m, 2H), 2,63-2,65 (m, 4H), 2,89-2,98 (m, 1H), 4,08-4,20 (m, 2H), 4,44-4,65 (m, 2H), 5,13 (d, J=11,7 Hz, 1H), 5,32 (d, J=15,0 Hz, 1H), 5,72-5,85 (m, 2H), 7,20-7,26 (m, 2H), 7,60 (s, 1H), 8,09-8,14 (m, 2H), 9,26 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,91 minuty, metoda B),
MS m/z 783 (M++H).
P r z y k ł a d 5: sposób wytwarzania związku 5.
Związek 5
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 3, etap 1 i 2, z tym wyjątkiem, że stosowano alkohol 3-metoksyfenetylowy.
LC-MS (czas retencji: 1,03 minuty, metoda B),
MS m/z 257 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 5, etap 1.
1H NMR (CDCl3) δ 2,72 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 7,00-7,02 (m, 1H), 7,41 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,55 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,59 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,89 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,89 minuty, metoda B),
MS m/z 275, 277 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 5, etap 2.
1H NMR (CD3OD) δ 1,02 (s, 9H), 1,18 (s, 9H), 2,37-2,47 (m, 1H), 2,64 (s, 3H), 2,85-2,93 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 4,00-4,08 (m, 1H), 4,14 (b, 1H), 4,49-4,55 (m, 1H), 4,62-4,71 (m, 1H), 5,71 (b, 1H), 7,02-7,04 (m, 1H), 7,40 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,58-7,62 (m, 3H);
LC-MS (czas retencji: 1,90 minuty, metoda B),
MS m/z 583 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 4:
Związek 5 wytworzono według procedury opisanej w przykładnie 1, etap 9, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt według przykładu 5, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,09 (m, 12H), 1,17-1,29 (m, 10H), 1,44-1,47 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,20-2,40 (m, 2H), 2,63-2,65 (m, 4H), 2,89-2,98 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 4,08-4,20 (m, 2H), 4,44-4,65 (m, 2H), 5,13 (d, J=11,7 Hz, 1H), 5,32 (d, J=15,0 Hz, 1H), 5,72-5,85 (m, 2H), 7,02-7,05 (m, 1H), 7,41 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,55-7,61 (m, 3H);
LC-MS (czas retencji: 1,96 minuty, metoda B),
MS m/z 795 (M++H).
P r z y k ł a d 6: sposób wytwarzania związku 6.
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 3, etap 1 i 2, z tym wyjątkiem, że stosowano alkohol 2-metoksyfenetylowy.
LC-MS (czas retencji: 1,10 minuty, metoda B),
MS m/z 257 (M++H).
Etap 2:
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 6, etap 1.
1H NMR (CDCl3) δ 2,721 (s, 3H), 3,88 (s, 3H), 7,03 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,11 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,41-7,44 (m, 1H), 7,79-7,81 (m, 1H), 8,04 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,92 minuty, metoda B),
MS m/z 275, 277 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 6, etap 2.
1H NMR (CD3OD) δ 1,02 (s, 9H), 1,20 (s, 9H), 2,37-2,47 (m, 1H), 2,63 (s, 3H), 2,85-2,93 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 4,00-4,08 (m, 1H), 4,14 (b, 1H), 4,49-4,55 (m, 1H), 4,62-4,71 (m, 1H), 5,56 (b, 1H), 7,09 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,15 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,41-7,44 (m, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,67 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,76 minuty, metoda B),
MS m/z 583 (M++H).
Etap 4:
Związek 6 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 9, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 6, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,08 (m, 12H), 1,17-1,26 (m, 10H), 1,44-1,47 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,20-2,40 (m, 2H), 2,63-2,65 (m, 4H), 2,89-2,98 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 4,08-4,12 (m, 1H), 4,19 (b, 1H), 4,44-4,65 (m, 2H), 5,13 (d, J=11,7 Hz, 1H), 5,32 (d, J=15,0 Hz, 1H), 5,59 (b, 1H), 5,725,80 (m, 1H), 7,09 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,15 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,41-7,45 (m, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,66-7,67 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,93 minuty, metoda B), MS m/z 795 (M++H).
P r z y k ł a d 7: sposób wytwarzania związku 7.
Związek 7
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-chlorochinolinę.
LC-MS (czas retencji: 1,73 minuty, metoda B),
MS m/z 472 (M++H).
Etap 2:
Związek 7 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 9, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 7, etap 1.
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,08 (m, 12H), 1,17-1,26 (m, 10H), 1,44-1,47 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,23-2,30 (m, 2H), 2,52-2,57 (m, 1H), 2,89-2,98 (m, 1H), 4,10-4,14 (m, 1H), 4,09-4,15 (m, 2H), 4,47-4,51 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,0 Hz, 1H), 5,73-5,78 (m, 1H), 5,92 (b, 1H), 6,90-6,92 (m, 1H), 7,42 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,64 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,78-7,82 (m, 2H), 8,13 (d, J=7,5 Hz, 1H), 9,18 (d, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,75 minuty, metoda B),
MS m/z 684 (M++H).
P r z y k ł a d 8: sposób wytwarzania związku 8.
Związek 8
PL 226 561 B1
mieszanina racemiczna 1(R)-2(S) i (S)-2(R) mieszanina 1(R)-2(S) i 1(S)-2(R)
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 6b do 8, bez przeprowadzenia etapu 6a, rozdzielania enzymatycznego.
LC-MS (czas retencji: 0,24 mm, metoda B),
MS m/z 231 (M++H).
Schemat 2
Etap 2:
Do ochłodzonej lodem mieszaniny N-Boc-4-transhydroksy-L-proliny (1,58 g, 6,83 mmola), chlorowodorku (1-amino-2-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 8, etap 1) (2,00 g, 7,52 mmola) i HATU (3,89 g, 10,2 mmola) w CH2CI2 (100 ml) dodano diizopropyloetyloaminę (4,41 g, 34,2 mmola). Uzyskany roztwór pozostawiono w temperaturze otoczenia na okres 12 godzin. Rozcieńczono EtOAc (200 ml), przemyto 5% H3PO4 i solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (gradient, 2:11:1 heksan-aceton), uzyskując 1,25 g (41%) pożądanego produktu.
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,00-1,08 (m, 4H), 1,34-1,40 (m, 1:2,10H), 1,62-1,70 (m, 1H), 1,76-1,87 (m, 1H), 2,02-2,21 (m, 2H), 2,81-2,95 (m, 1H), 3,20-3,45 (m, 2H), 4,04-4,09 (m, 1H), 4,26 (b, 1H), 5,08-5,12 (m, 1H), 5,26 (d, J=7,1 Hz, 1H), 5,59-5,69 (m, 1H), 8,59, 8,87 (rotamery, 1:2, 1H), 10,4811,15 (rotamery, 2:1, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,25 minuty, metoda B),
MS m/e 444 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 8, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 8, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,02 minuty, metoda B),
MS m/e 344 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 4:
Do ochłodzonej lodem mieszaniny N-Boc-4-trans-hydroksy-L-proliny (1,58 g, 6,83 mmola), chlorowodorku (1-amino-2-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 8, etap 3) (2,00 g, 7,52 mmola) i HATU (3,89 g, 10,2 mmola) w CH2CI2 (100 ml) dodano diizopropyloetyloaminę (4,41 g, 34,2 mmola). Uzyskany roztwór pozostawiono w temperaturze otoczenia na okres 12 godzin. Rozcieńczono EtOAc (200 ml), przemyto 5% H3PO4 i solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (gradient, 2:11:1 heksan-aceton), uzyskując 1,25 g (41%) pożądanego produktu.
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,07 (m, 11H), 1,35-1,44 (m, 13H), 1,75-1,87 (m, 1H), 2,09-2,22 (m, 2H), 2,88-2,94 (m, 1H), 3,74-3,82 (m, 2H), 4,28-4,30 (m, 1H), 4,33-4,38 (m, 1H), 4,48 (b, 1H), 5,11-5,13 (m, 1H), 5,30 (d, J=15,0 Hz, 1H), 5,70-5,78 (m, 1H), 6,53-6,61 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,26 minuty, metoda B),
MS m/e 557 (M++H).
Schemat 3
Związek 8
Etap 5:
Do roztworu produktu według przykładu 8, etap 4 (56 mg, 0,1 mmola) w DMSO (2 ml) dodano tert-butanolan potasu (49 mg, 0,44 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze otoczenia przez 1 godzinę, po czym dodano 4-chloro-7-metylo-2-trifluorometylo[1,8]naftyrydynę (P. Ferrarini i in., J Heterocyclic Chem, 1983, str. 1053) (30 mg, 0,12 mmola). Końcowy roztwór mieszano przez 12 godzin. Reakcję zatrzymano stosując wodę z lodem, zakwaszono 1M HCl do pH 4 i ekstrahowano EtOAc (20 ml, x 2). Warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 16 mg (21%) związku 8 w postaci różowego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 0,92-0,99 (m, 11H), 1,01-1,04 (m, 11H), 1,22-1,49 (m, 2H), 1,76-1,85 (m, 1H), 2,18-2,40 (m, 2H), 2,76 (s, 3H), 2,86-2,97 (m, 1H), 4,00-4,11 (m, 2H), 4,48-4,58 (m, 2H), 5,09-5,12 (m, 1H), 5,28-5,31 (m, 1H), 5,59 (b, 1H), 5,69-5,78 (m, 1H), 6,39-6,48 (m, 1H), 7,58-7,64 (m, 2H), 8,08 (s, 1H), 8,64-8,68 (m, 1H), 8,85-8,91 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,89 minuty, metoda B),
MS m/e 767 (M++H).
P r z y k ł a d 9: sposób wytwarzania związku 9.
H
N
Związek 9
PL 226 561 B1
Związek 9 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 8, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano 7-chloro-5-etylo-3-metyloizoksazolo[4,5-b]pirydynę (R. Nesi i in., Synth Comm. 1992,
22(16), 2349).
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,09 (m, 11H), 1,21-1,25 (m, 11H), 1,36 (t, J=7,8 Hz, 3H), 1,38-1,47 (m, 2H), 1,80-1,90 (m, 1H), 2,20-2,31 (m, 2H), 2,59 (s, 3H), 2,90-3,00 (m, 3H), 4,01-4,18 (m, 2H), 4,41-4,51 (m, 2H), 5,11-5,15 (m, 1H), 5,27-5,32 (m, 1H), 5,58 (b, 1H), 5,70-5,80 (m, 1H), 7,11 (s, 1H), 7,72, 7,98 (1:1, 1H), 9,00, 9,22 (1:1, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,75 minuty, metoda B),
MS m/e 717 (M++H).
P r z y k ł a d 10: sposób wytwarzania związku 10.
Związek 10 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 8, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano 7-chloro-5-fenylo-3-metyloizoksazolo[4,5-b]pirydynę (przykład 1, etap 2).
1H NMR (CD3OD) δ 1,00-1,09 (m, 12H), 1,16-1,25 (m, 10H), 1,44-1,48 (m, 1H), 1,79-1,89 (m, 1H), 2,20-2,40 (m, 2H), 2,64-2,66 (m, 4H), 2,89-2,98 (m, 1H), 4,08-4,20 (m, 2H), 4,44-4,55 (m, 2H), 5,11-5,16 (m, 1H), 5,27-5,31 (m, 1H), 5,72-5,74 (m, 2H), 7,20-7,35 (m, 1H), 7,46-7,51 (m, 2H), 7,55-7,68 (m, 1H), 8,05-8,06 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,97 minuty, metoda B),
MS m/z 765 (M++H).
P r z y k ł a d 11: sposób wytwarzania związku 11.
PL 226 561 B1
Etap 1:
Do roztworu kwasu 3-metoksycynamonowego (11,04 g, 62 mmole) i trietyloaminy (12,52 g, 124 mmole) w acetonie (80 ml), w temperaturze 0°C, wkroplono chloromrówczan etylu (w przybliżeniu
1,5 równoważnika). Po wymieszaniu w tej temperaturze przez 1 godzinę, wkroplono wodny roztwór NaN3 (6,40 g, 100 mmoli w 35 ml H2O) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin w temperaturze otoczenia. Do mieszaniny dodano wodę (100 ml) i części lotne usunięto pod zmniejszanym ciśnieniem. Uzyskaną rzadką zawiesinę ekstrahowano toluenem (3 x 50 ml) i połączone warstwy organiczne osuszono nad MgSO4. Ten osuszony roztwór dodano kroplami do ogrzanego roztworu difenylometanu (50 ml) i tributyloaminy (30 ml) w temperaturze 190°C. Dodano i oddestylowano toluen. Po całkowitym dodaniu, temperaturę mieszaniny reakcyjnej podwyższono do 210°C na okres 2 godzin. Po oziębieniu, wytrącony produkt zebrano metodą filtracji, przemyto heksanem (2 x 50 ml) i osuszono, uzyskując pożądany produkt w postaci białego ciała stałego (5,53 g, 51%) (Nicolas Briet i in., Tetrahedron, 2002, 5761-5766).
LC-MS (czas retencji; 0,82 minuty, metoda B),
MS m/z 176 (M++H).
Etap 6:
6-metoksy-2H-izochinolin-1-on (5,0 g, 28,4 mmola) w POCI3 (10 ml) ogrzewano łagodnie w temperaturze refluksu przez 3 godziny i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem (Nicolas Briet i in., Tetrahedron, 2002, 5761-5766). Pozostałość wylano do wody z lodem (20 ml) i zobojętniono do pH 10 stosując 10M NaOH. Ekstrahowano CHCI3. Warstwę organiczną przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii (1:1 heksan-EtOAc), uzyskując 4,41 g (80%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 3,98 (s, 3H), 7,34-7,38 (m, 2H), 7,69 (d, J=5,5 Hz, 1H), 8,10 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,23 (d, J=9,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,42 minuty, metoda B),
MS m/z 194 (M++H).
Związek 11
PL 226 561 B1
Etap 3
Do roztworu N-Boc-3-(R)-hydroksy-L-proliny (892 mg, 3,89 mmola) w DMSO (40 ml) w temperaturze otoczenia w jednej porcji dodano tert-butanolan potasu (1,34 g, 12,0 mmola). Utworzoną zawiesinę mieszano w tej temperaturze przez 30 minut, po czym ochłodzono do temperatury 10°C. Następnie w jednej porcji dodano 1-chloro-6-metoksyizochinolinę (przykład 11, etap 2) (785 mg, 4,05 mmola) w postaci ciała stałego i końcową mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze otoczenia przez 12 godzin. Reakcję zatrzymano stosując 5% kwas cytrynowy z lodem (wodny roztwór), ekstrahowano EtOAc (100 ml). Fazę wodną ponownie ekstrahowano EtOAc. Połączone warstwy organiczne przemyto odpowiednio 5% kwasem cytrynowym (wodny roztwór) oraz solanką, osuszono nad MgSO4 i przesączono. Przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem do suchej masy, uzyskując 1,49 g (99%) pożądanego produktu w postaci białawej pianki. Tę substancję użyto w następnym etapie w postaci surowej bez dalszego oczyszczania.
1H NMR (CD3OD) δ 1,42, 1,44 (rotamery, 9H), 2,38-2,43 (m, 1H), 2,66-2,72 (m, 1H), 3,80-3,87 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 4,44-4,52 (m, 1H), 5,73 (b, 1H), 7,16-7,18 (m, 2H), 7,24-7,25 (m, 1H), 7,87-7,88 (m, 1H), 8,07 (d, J=8,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,62 minuty, metoda B),
MS m/z 389 (M++H).
Etap 4:
Do mieszaniny produktu według przykładu 11, etap 3 (1,49 g, 3,84 mmola), HATU (2,19 g, 5,76 mmola) i chlorowodorku (1-(R)-amino-2-(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 1, etap 8 (1,12 g, 4,22 mmola) w CH2CI2 (50 ml), w temperaturze 0°C, dodano DlPEA (1,29 g, 11,5 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze otoczenia przez 12 godzin, uzyskany roztwór rozcieńczono CH2CI2 (50 ml) i przemyto 5% kwasem cytrynowym z lodem (wodny roztwór). Warstwę organiczną przemyto odpowiednio 5% kwasem cytrynowym (wodny roztwór) i solanką, osuszono nad MgSO4 i przesączono. Przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem do suchej masy. Pozostałość krystalizowano z metanolu, uzyskując 1,60 g (70%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 1,05-1,08 (m, 2H), 1,16-1,20 (m, 1H), 1,24-1,27 (m, 1H), 1,42-1,45 (m, 10H), 1,88 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,24-2,30 (m, 2H), 2,53-2,57 (m, 1H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,80 (d, J=12,5 Hz, 1H), 3,86-3,89 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,40-4,42 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,32 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,72-5,81 (m, 2H), 7,17-7,20 (m, 2H), 7,26 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,74 minuty, metoda B),
MS m/z 601 (M++H).
Etap 5:
Do oziębionego lodem roztworu produktu według przykładu 11, etap 4 (1,50 g, 2,50 mmola) w CH2CI2 (10 ml) dodano TFA (10 ml). Uzyskany roztwór pozostawiono w temperaturze otoczenia na okres 2 godzin. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszanym ciśnieniem. Pozostałość roztarto z 1M HCl w eterze. Przesączono i przemyto eterem, uzyskując 1,43 g (99,8%) pożądanego produktu w postaci higroskopijnego białego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 1,03-1,208 (m, 4H), 1,26-1,31 (m, 1H), 1,37-1,40 (m, 1H), 1,95-1,97 (m, 1H), 2,32-2,37 (m, 1H), 2,42-2,48 (m, 1H), 2,95-2,99 (m, 1H), 3,88 (d, J=12,5 Hz, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,40-4,42 (m, 1H), 5,16 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,33 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,62-5,69 (m, 1H), 5,97 (b, 1H), 7,30-7,34 (m, 2H), 7,47 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,90 (d, J=6,5 Hz, 1H), 8,34 (d, J=9,0 Hz, 1H), 9,14 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,12 minuty, metoda B),
MS m/z 501 (M++H).
Etap 6:
Do mieszaniny produktu według przykładu 11, etap 5 (1,49 g, 3,84 mmola), HATU (2,19 g, 5,76 mmola), i N-Boc-t-butylo-L-glicyny (1,12 g, 4,22 mmola) w CH2CI2 (50 ml), w temperaturze 0°C, dodano DIPEA (1,29 g, 11,5 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze otoczenia przez 12 godzin, uzyskany roztwór rozcieńczono CH2CI2 (50 ml) i przemyto 5% kwasem cytrynowym z lodem (wodny roztwór). Warstwę organiczną przemyto odpowiednio 5% kwasem cytrynowym (wodny roztwór) oraz solanką, osuszono nad MgSO4 i przesączono. Przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem do suchej masy. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (40%B do 100%B, gradient 15 minut), uzyskując 1,60 g (70%) związku 11 w postaci białego ciała stałego.
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD) δ 1,00-1,08 (m, 12H), 1,23-1,25 (m, 1H), 1,27 (s, 9H), 1,40-1,45 (m, 1H), 1,85-1,88 (m, 1H), 2,20-2,30 (m, 2H), 2,55-2,61 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,02-4,06 (m, 1H), 4,21-4,24 (m, 1H), 4,40-4,42 (m, 1H), 4,49-4,51 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,28 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,69-5,74 (m, 1H), 5,81 (b, 1H), 6,60 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,08-7,10 (m, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,25 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,09 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,75 minuty, metoda B),
MS m/z 714 (M++H);
Wartości obliczone dla C35H47N5O9S.0,5 H2O: C-58,16; H-6,69; N-9,69, znalezione: C-58,01; H-6,46; N-9,55.
Etap 7:
Do roztworu związku 11 (71 mg, 0,1 mmola) w CH2CI2 (5 ml) w temperaturze -78°C dodano 1M HCl w eterze (0,2 ml, 0,2 mmola). Po wymieszaniu w tej temperaturze przez 10 minut, części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem bez ogrzewania w łaźni. Pozostałość roztarto z eterem, przesączono, przemyto eterem i osuszono, uzyskując 61 mg (85%) pożądanego chlorowodorku związku 11 w postaci bardzo drobnego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 1,00-1,08 (m, 12H), 1,19 (s, 9H), 1,23-1,25 (m, 1H), 1,40-1,45 (m, 1H), 1,85-1,91 (m, 1H), 2,20-2,26 (m, 1H), 2,31-2,42 (m, 1H), 2,65-2,78 (m, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 4,10-4,16 (m, 2H), 4,51-4,64 (m, 2H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=18 Hz, 1H), 5,695,79 (m, 1H), 5,84 (b, 1H), 7,28 (d, J=9,3 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,55 (d, J=6,3 Hz, 1H), 7,89-7,92 (m, 1H), 8,29 (d, J=9,0 Hz, 1H), 9,21 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,75 minuty, metoda B),
MS m/z 714 (M++H).
Wartości obliczone dla C35H47N5O9S.1,0HCl: C-56,02; H-6,44; N-9,33; Cl, 4,72: S, 4,27.
Znalezione: C-55,80; H-6,42; N-9,15; Cl, 4,56: S, 4,09.
Etap 8:
ml 2 szyjną kolbę zaopatrzono w mieszadło, przegrodę i łącznik gazowego N2. Związek 11 (99,7 mg, 0,140 mmola) odważono i umieszczono w kolbie reakcyjnej. Kolbę przepłukano i umieszczono w atmosferze azotu. Dodano 850 μl acetonu, uzyskując: klarowny roztwór. Do tego roztworu w temperaturze pokojowej dodano 780 μl 0,179M roztworu KOH (roztwór wodny) otrzymanego przez rozpuszczenie stałego KOH (502,8 mg, 8,97 mmola) w 50 ml H2O. Po dodaniu KOH roztwór słabo ogrzano, lecz pozostawał klarowny. Klarowny roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Produkt wykrystalizowano z roztworu i wydzielono przez filtrację. Placek filtracyjny przemyto zimnym acetonem, uzyskując 42 mg (40%-owa wydajność) pożądanego produktu w postaci drobnych białych igieł:
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,52-0,65 (m, 2H), 0,66-0,82 (m, 2H), 0,96 (s, 9H), 1,21-1,24 (m, 10H), 1,44-1,63 (m, 1H), 1,72-1,92 (m, 1H), 2,30-2,42 (m, 1H), 2,46 (d, J=7,93 Hz, 1H), 2,60-2,85 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,93-4,05 (m, 1H), 4,07-4,24 (m, 1H), 4,41 (t, J=8,39 Hz, 1H), 4,79-4,95 (m, 1H),
PL 226 561 B1
4,97-5,17 (m, 1H), 5,71 (b, 1H), 5,80-6,10 (m, 1H) 6,64 (d, J=8,54 Hz, 1H), 7,10 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,24-7,37 (m, 2H), 7,90-7,96 (m, 1H), 7,99-8,04 (b, 1H), 8,06 (d, J=9,15 Hz, 1H).
Analiza elementarna dla C35H45KN5O9S.H2O; wartości obliczone: C-54,60; H-6,28; K, 5,08; N-9,10; znalezione: C-54,88; H-6,23; K, 5,05; N-9,01;
MS m/e 714 (MH+);
P r z y k ł a d 12: sposób wytwarzania związku 12
Związek 12 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 6, z tym wyjątkiem, że stosowano N-Boc-L-walinę.
1H NMR (CD3OD) δ 0,94-0,98 (m, 6H), 1,07-1,09 (m, 3H), 1,21-1,25 (m, 10H), 1,40-1,43 (m, 1H), 1,88-1,89 (m, 1H), 2,05-2,09 (m, 1H), 2,22-2,35 (m, 2H), 2,57-2,61 (m, 1H), 2,94-2,97 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,03-4,06 (m, 2H), 4,47-4,55 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,32 (d, J=18,1 Hz, 1H), 5,74-5,81 (m, 1H), 5,86 (b, 1H), 7,10 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,25 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,71 minuty, metoda B),
MS m/z 700 (M++H).
P r z y k ł a d 13: sposób wytwarzania związku 13
Związek 13 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 6, z tym wyjątkiem, że stosowano N-Boc-L-alloizoleucynę.
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD) δ 0,89-0,96 (m, 6H), 1,07-1,18 (m, 6H), 1,07-1,18 (m, 5H), 1,28 (s, 9H), 1,421,45 (m, 1H), 1,50-1,54 (m, 1H), 1,87-1,89 (m, 2H), 2,23-2,34 (m, 2H), 2,57-2,61 (m, 1H), 2,92-2,95 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,05-4,07 (m, 1H), 4,22-4,24 (m, 1H), 4,37-4,40 (m, 1H), 4,54-4,56 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,32 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,75-5,82 (m, 1H), 5,86 (b, 1H), 7,12 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,24 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,77 minuty, metoda B), MS m/z 714 (M++H).
P r z y k ł a d 14: sposób wytwarzania związku 14
Etap 1:
Mieszaninę związku 11 (150 mg, 0,21 mmola) i katalizatora Pearlmann'a (Pd(OH)2, 15 mg) w EtOAc (10 ml) umieszczono w wytrząsarce Parr'a na okres 20 minut, pod ciśnieniem 10 psi H2. Przesączono przez celit. Przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 67 mg (45%) związku 14 w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 0,96-0,99 (m, 4H), 1,04 (s, 9H), 1,07-1,09 (m, 2H), 1,21-1,24 (m, 2H), 1,27 (s, 9H), 1,51-1,65 (m, 4H), 2,25-2,27 (m, 1H), 2,55-2,61 (m, 1H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,02-4,06 (m, 1H), 4,21-4,24 (m, 1H), 4,40-4,42 (m, 1H), 4,49-4,51 (m, 1H), 5,81 (b, 1H), 6,59 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,08-7,10 (m, 1H), 7,18 (d, J=1,5 Hz, 1H), 7,24 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,08 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,76 minuty, metoda B),
MS m/z 716 (M++H).
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 15: sposób wytwarzania związku 15.
Związek 15 był produktem ubocznym, o nieznacznie dłuższym czasie retencji, otrzymanym z wydajnością 15% z tej samej mieszaniny reakcyjnej stosowanej do wytwarzania związku 14.
1H HMR (CD3OD) δ 0,92-1,10 (m, 17H), 1,26-1,36 (m, 13H), 1,64-1,72 (m, 1H), 1,90-1,96 (m, 1H), 2,30-2,40 (m, 1H), 2,63-2,67 (m, 1H), 2,96-3,00 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,03-4,07 (m, 1H), 4,24 (b, 1H), 4,40-4,42 (m, 1H), 4,49-4,51 (m, 1H), 5,83 (b, 1H), 7,08-7,11 (m, 1H), 7,19 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,89 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,0 Hz, 1H), 8,51 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,83 minuty, metoda B),
MS m/z 718 (M++H).
P r z y k ł a d 16: sposób wytwarzania związku 16.
Związek 16
PL 226 561 B1
Schemat 1
Związek 16
Etap 1:
Do roztworu związku 11 (420 mg, 0,59 mmola) w DCM (5 ml) w temperaturze 0°C dodano TFA (5 ml). Po wymieszaniu w tej temperaturze przez 2 godziny, części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość roztarto z 1M HCl w eterze (5 ml), przesączono, przemyto eterem i osuszono, uzyskując 360 mg (89%) pożądanego chlorowodorku w postaci bardzo drobnego ciała stałego.
LC-MS (czas retencji: 1,28 minuty, metoda B),
MS m/z 614 (M++H).
Etap 2:
Do zawiesiny produktu według przykładu 16, etap 1 (39 mg, 3,06 mmola) i DIPEA (20 mg, 0,18 mmola) w DCM (1 ml) w temperaturze 0°C dodano chloromrówczan metylu (6,8 mg, 0,072 mmola). Po wymieszaniu w tej temperaturze przez 2 godziny, części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 21 mg (58%) związku 16 w postaci białego kryształu.
1H MMR (CD3OD) δ 1,05-1,09 (m, 11H), 1,22-1,25 (m, 2H), 1,41-1,44 (m, 1H), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,22-2,32 (m, 2H), 2,59-2,63 (m, 1H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 4,06-4,10 (m, 1H), 4,31-4,33 (m, 1H), 4,38-4,40 (m, 1H), 4,50-4,52 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,71-5,80 (m, 1H), 5,85 (b, 1H), 6,95 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,13-7,16 (m, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,25 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,09 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,54 minuty, metoda B),
MS m/ z 672 (M++H).
P r z y k ł a d 17: sposób wytwarzania związku 17.
PL 226 561 B1
Związek 17 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 16, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano chloromrówczan izopropylu.
1H NMR (CD3OD) δ 1,00-1,09 (m, 15H), 1,13-1,16 (m, 2H), 1,24-1,26 (m, 2H), 1,40-1,45 (m, 1H), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,21-2,31 (m, 2H), 2,55-2,61 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,04-4,08 (m, 1H), 4,30 (b, 1H), 4,40 (d, J=10 Hz, 1H), 4,49-4,54 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,71-5,77 (m, 1H), 5,84 (b, 1H), 6,80 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,11 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,25 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,08 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,74 minuty, metoda B),
MS m/z 700 (M++H).
P r z y k ł a d 18: sposób wytwarzania związku 18.
Związek 18
Związek 18 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 16, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano chloromrówczan neopentylu.
1H NMR (CD3OD) δ 0,61 (b, 1H), 0,84 (s, 8H), 1,05-1,09 (m, 11H), 1,23-1,25 (m, 2H), 1,39-1,44 (m, 1H), 1,85-1,88 (m, 1H), 2,20-2,30 (m, 2H), 2,56-2,62 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 3,38 (d, J=9,0 Hz, 1H), 3,55 (d, J=9,0 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,02-4,06 (m, 1H), 4,32 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,41 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,49-4,51 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,28 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,69-5,74 (m, 1H), 5,81 (b, 1H), 6,90 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,08-7,10 (m, 1H), 7,08-7,10 (m, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,26 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,84 minuty, metoda B),
MS m/z 728 (M++H).
P r z y k ł a d 19: sposób wytwarzania związku 19.
Związek 19 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 16, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano chloromrówczan (S)-3-furanu (J. Campbell, A. Good, WO 20020808).
1H NMR (CD3OD) δ 1,03-1,08 (m, 11H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,38-1,46 (m, 1H), 1,64-1,71 (m, 1H), 1,85-1,90 (m, 2H), 2,20-2,30 (m, 2H), 2,55-2,61 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 3,66-3,72 (m, 4H), 3,93 (s, 3H), 4,05-4,09 (m, 1H), 4,27-4,29 (m, 1H), 4,40-4,42 (m, 1H), 4,55-4,59 (m, 1H),
PL 226 561 B1
4,75-4,77 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,28 (d, J=18 Hz, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 5,85 (b, 1H), 7,06 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,13 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,25 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,89 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,52 minuty, metoda B),
MS m/z 728 (M++H).
P r z y k ł a d 20: sposób wytwarzania związku 20.
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano 6-chloro-2H-izochinolin-1-on (Nicolas Briet i in., Tetrahedron, 2002, 5761-5766).
LC-MS (czas retencji: 1,07 minuty, metoda B),
MS m/z 180 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt według przykładu 20, etap 1.
1H NMR (CD3OD) δ 1,04 (s, 9H), 1,20 (s, 9H), 2,36-2,41 (m, 1H), 2,74-2,78 (m, 1H), 4,01-4,04 (m, 1H), 4,19-4,21 (m, 1H), 4,47-4,49 (m, 1H), 4,67-4,70 (m, 1H), 5,84 (b, 1H), 7,28 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,47 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 8,00 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,20 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,88 minuty, metoda B),
MS m/z 506 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 3:
Związek 20 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 1, etap 9, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 20, etap 2.
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,11 (m, 12H), 1,20-1,26 (m, 10H), 1,43-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,22-2,31 (m, 2H), 2,60-2,64 (m, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 4,06-4,08 (m, 1H), 4,21-4,23 (m, 1H),
4,45-4,47 (m, 1H), 4,53-4,56 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 5,88 (b, 1H), 6,58 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,29 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,47 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 8,01 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,18 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,94 minuty, metoda B),
MS m/z 118 (M++H).
P r z y k ł a d 21: sposób wytwarzania związku 21.
Etap 1:
Do mieszaniny produktu według przykładu 1, etap 4 (3,00 g, 8,72 mmola), HATU (4,97 g, 13,1 mmola) i produktu uzyskanego według przykładu 1, etap 8 (2,55 g, 9,59 mmola) w CH2CI2 (100 ml), w temperaturze 0°C, dodano DIPEA (3,02 g, 27,0 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze otoczenia przez 12 godzin, uzyskany roztwór rozcieńczono CH2CI2 (100 ml), przemyto 5% kwasem cytrynowym z lodem (wodny roztwór). Warstwę organiczną przemyto odpowiednio 5% kwasem cytrynowym (wodny roztwór) oraz solanką, osuszono nad MgSO4 i przesączono. Przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem do suchej masy. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (1:1 heksan:aceton), uzyskując 3,64 g (75%) pożądanego produktu w postaci pianki.
LC-MS (czas retencji: 1,41 minuty, metoda B),
MS m/z 557 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 2:
Do oziębionego lodem roztworu 6-bromoizochinoliny (4,16 g, 20 mmoli) w CH2CI2 (100 ml) dodano w jednej porcji mCPBA (9,38 g, 77% czystość, 42 mmole) w postaci ciała stałego. Po wymieszaniu w temperaturze otoczenia przez 12 godzin, roztwór rozcieńczono CH2CI2 (100 ml) i przemyto 1M NaOH (100 ml, x 2) oraz solanką. Warstwę organiczną osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano do suchej masy, uzyskując 3,83 g (86%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego. Tę substancję użyto w postaci surowej bez dalszego oczyszczania.
LC-MS (czas retencji: 0,77 minuty, metoda B),
MS m/z 224, 226 (M++H).
Etap 3:
Mieszaninę 2-tlenku 6-bromoizochinoliny (88 mg, 0,2 mmola), pirazolu (68 mg, 1,0 mmola), CuBr (57 mg, 0,4 mmoli) i węglanu cezu (130 mg, 0,4 mmola) w DMF (2 ml) ogrzewano w temperaturze 140°C przez 4 godziny w uszczelnionej rurce. Po filtracji, przesącz oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 41 mg (98%) pożądanego produktu w postaci białawego ciała stałego.
1H NMR (CDCl3) δ 6,58-6,59 (m, 1H), 7,82 (d, J=1,0 Hz, 1H), 7,89, (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,02 (d, J=9,0 Hz, 1H), 8,11 (d, J=2,5 Hz, 1H), 8,18-8,22 (m, 2H), 8,29 (d, J=7,0 Hz, 1H), 9,07 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,77 minuty, metoda B), MS m/z 212 (M++H).
Etap 4:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładnie 11, etap 2 w postaci białawego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 6-pirazoloizochinoliny.
1H NMR (CD3OD) δ 7,82-7,83 (m, 2H), 8,23-8,32 (m, 4H), 8,44-8,49 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,35 minuty, metoda B),
MS m/z 230, (M++H).
Etap 5:
Do roztworu produktu według przykładu 21, etap 1 (45 mg, 0,08 mmola) w DMSO (2 ml) dodano tert-butanolan potasu (41 mg, 0,37 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze otoczenia przez 30 minut, po czym dodano 1-chloro-6-pirazol-1-yloizochinolinę (17 mg, 0,07 mmola). Końcowy roztwór mieszano przez 12 godzin. Reakcję zatrzymano stosując wodę z lodem, zakwaszono 1M HCl do pH 4 i ekstrahowano EtOAc (20 ml, x 2). Warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 10 mg (16%) związku 21 w postaci różowego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 1,04-1,10 (m, 12H), 1,23-1,27 (m, 10H), 1,43-1,47 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,22-2,29 (m, 2H), 2,61-2,68 (m, 1H), 2,92-2,98 (m, 1H), 4,07-4,11 (m, 1H), 4,24 (b, 1H),
4,46-4,60 (m, 2H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=18 Hz, 1H), 5,70-5,83 (m, 1H), 5,89 (b, 1H),
PL 226 561 B1
6,59-6,61 (m, 1H), 7,40 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,80 (d, J=2,5 Hz, 1H), 8,01 (d, J=10,0 Hz, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,31 (d, J=15,0 Hz, 1H), 8,42 (d, J=4,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,77 minuty, metoda B),
MS m/z 750 (M++H).
P r z y k ł a d 22: sposób wytwarzania związku 22.
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 2 w postaci białawego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 6-bromoizochinoliny.
1H NMR (CD3OD) δ 7,73 (d, J=5,5 Hz, 1H), 7,85-7,91 (m, 1H), 8,22-8,31 (m, 3H);
LC-MS (czas retencji: 1,53 minuty, metoda B),
MS m/z 241, 243, 245 (M++H).
Etap 2:
Związek 22 wytworzono według procedury opisanej w przykładnie 21, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloro-6-bromoizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,09 (m, 12H), 1,22-1,27 (m, 10H), 1,40-1,47 (m, 1H), 1,86-1,91 (m, 1H), 2,20-2,34 (m, 2H), 2,57-2,66 (m, 1H), 2,90-2,97 (m, 1H), 4,05-4,09 (m, 1H), 4,21 (b, 1H), 4,44-4,57 (m, 2H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,70-5,82 (m, 1H), 5,88 (b, 1H), 7,29 (d, J=9,5 Hz, 1H), 7,60-7,63 (m, 1H), 8,00-8,12 (m, 3H);
LC-MS (czas retencji: 1,90 minuty, metoda B),
MS m/z 762, 7641 (M++H).
P r z y k ł a d 23: sposób wytwarzania związku 23.
Etap 1:
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładnie 11, etap 3 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloroizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 1,42, 1,44 (rotamery, 9H), 2,39-2,44 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,80-3,87 (m, 2H), 4,44-4,52 (m, 1H), 5,78 (b, 1H), 7,32-7,33 (m, 1H), 7,58 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,71 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,81 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,95 (d, J=6,0 Hz, 1H), 8,19 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,61 minuty, metoda B),
MS m/z 359 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 23, etap 1.
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,00-1,09 (m, 4H), 1,35-1,38 (m, 10H), 1,69-1,84 (m, 1H), 2,11-2,66 (m, 3H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,62-3,89 (m, 2H), 4,31 (t, J=8,1 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,27 (d, J=16,8 Hz, 1H), 5,58-5,70 (m, 1H), 5,76 (b, 1H), 7,43 (d, J=5,7 Hz, 1H), 7,66 (t, J=7,4 Hz, 1H), 7,79 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,92 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,02 (d, J=10,0 Hz, 1H), 8,13 (d, J=8,1 Hz, 1H), 9,02 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,72 minuty, metoda B),
MS m/z 571 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 23, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,16 minuty, metoda B),
MS m/z 471 (M++H).
Etap 4:
Związek 23 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 6 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 23, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 1,00-1,09 (m, 12H), 1,25-1,27 (m, 10H), 1,42-1,46 (m, 1H), 1,86-1,90 (m, 1H), 2,22-2,34 (m, 2H), 2,60-2,67 (m, 1H), 2,92-2,99 (m, 1H), 4,06-4,11 (m, 1H), 4,26 (b, 1H), 4,45-4,57 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,2 Hz, 1H), 5,27 (d, J=16,8 Hz, 1H), 5,70-5,82 (m, 1H), 5,88 (b, 1H), 7,32 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,52 (t, J=7,4 Hz, 1H), 7,70 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,80 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,97 (d, J=6 Hz, 1H), 8,20 (d, J=8,4 Hz, 1H), 9,18 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,80 minuty, metoda B),
MS m/z 684 (M++H).
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 24: sposób wytwarzania związku 24.
Etap 1:
Do roztworu N-Boc-3-(R)-hydroksy-L-proliny (6,22 g, 26,9 mmola) w DMF (250 ml) w temperaturze 0°C w kilku porcjach dodano NaH (60%, 3,23 g, 80,8 mmola). Utworzoną zawiesinę mieszano w tej temperaturze przez 30 minut. W jednej porcji dodano 1,3-dichloroizochinolinę (5,33 g, 26,9 mmola) w postaci ciała stałego i końcową mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze otoczenia przez godzin. Reakcję otrzymano stosując 5% kwas cytrynowy z lodem (wodny roztwór), mieszaninę ekstrahowano EtOAc (300 ml). Fazę wodną ponownie ekstrahowano EtOAc. Połączone warstwy organiczne przemyto odpowiednio 5% kwasem cytrynowym (wodny roztwór) oraz solanką, osuszono nad MgSO4 i przesączono. Przesącz odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem do suchej masy, uzyskując 10,53 g (99,8%) estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(6-metoksyizochinolin-1 -ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego w postaci białawej pianki. Tę substancję użyto w następnym etapie w postaci surowej bez dalszego oczyszczania.
1H NMR (CD3OD) δ 1,43, 1,44 (rotamery, 9H), 2,39-2,44 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,80-3,90 (m, 2H), 4,44-4,52 (m, 1H), 5,77 (b, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,58 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,71-7,78 (m, 2H), 8,16 (d, J=7,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,80 minuty, metoda B),
MS m/z 392 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 2:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 24, etap 1.
1H NMR (CD3OD) δ 1,02-1,08 (m, 2H), 1,18-1,26 (m, 2H), 1,44-1,41 (m, 10H), 1,84-1,91 (m, 1H), 2,22-2,36 (m, 2H), 2,57-2,60 (m, 1H), 2,95-2,99 (m, 1H), 3,81-3,93 (m, 2H), 4,38-4,41 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,31 (d, J=16,8 Hz, 1H), 5,75-5,82 (m, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,59 (t, J=7,4 Hz, 1H), 7,74-7,79 (m, 2H), 8,16 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,82 minuty, metoda B),
MS m/z 605 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 24, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,30 minuty, metoda B),
MS m/z 505 (M++H).
Etap 4:
Związek 24 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 6 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 24, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,09 (m, 12H), 1,22-1,29 (m, 10H), 1,42-1,46 (m, 1H), 1,86-1,90 (m, 1H), 2,21-2,34 (m, 2H), 2,62-2,66 (m, 1H), 2,92-2,99 (m, 1H), 4,06-4,11 (m, 1H), 4,26 (b, 1H),
4,46-4,56 (m, 2H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,2 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,89 (b, 1H), 7,40 (d, J=6,0 Hz, 1H), 7,52 (t, J=7,4 Hz, 1H), 7,72-7,76 (m, 2H), 8,18 (d, J=8,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1, 95 minuty, metoda B),
MS m/z 718 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 1:
Mieszaninę związku według przykładu 24, etap 1 (39 mg, 0,10 mmola), kwasu fenyloboronowego (14,6 mg, 0,12 mmola), tert-butanolanu sodu (38 mg, 0,40 mmola) i ((t-Bu)2POH)2PdCl2 (POPd) (5 mg, 0,01 mmola) w THF (2 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 4 godziny. Po oziębieniu, reakcję zatrzymano stosując 5% kwas cytrynowy (wodny roztwór) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc (20 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 36 mg (83%) pożądanego produktu w postaci białawej pianki.
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD) δ 1,43, 1,45 (rotamery, 9H), 2,51-2,56 (m, 1H), 2,74-2,82 (m, 1H), 3,88-3,92 (m, 1H), 3,98-4,01 (m, 1H), 4,50-4,57 (m, 1H), 5,95 (b, 1H), 7,36-7,39 (m, 1H), 7,45-7,48 (m, 2H), 7,55 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,70 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,84-7,89 (m, 2H), 8,14-8,17 (m, 3H), 9,05 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,97 minuty, metoda B),
MS m/z 435 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 25, etap 1.
1H NMR (DMSO-d6) δ 0,98-1,10 (m, 4H), 1,38-1,41 (m, 10H), 1,74-1,81 (m, 1H), 2,18-2,34 (m, 2H), 2,47-2,49 (m, 1H), 2,95-2,99 (m, 1H), 3,74-3,96 (m, 2H), 4,34-4,37 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,8 Hz, 1H), 5,75-5,82 (m, 1H), 5,95 (b, 1H), 7,41-7,45 (m, 1H), 7,51-7,54 (m, 2H), 7,61-7,64 (m, 1H), 7,78-7,82 (m, 1H), 7,98 (d, J=9,0 Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 8,13-8,14 (m, 1H), 8,18-8,20 (m, 2H), 9,05 (b, 1H), 10,34 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,99 minuty, metoda B),
MS m/z 647 (M++H).
Etap 3:
Produkt wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 25, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,55 minuty, metoda B),
MS m/z 547 (M++H).
Etap 4:
Związek 25 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 6 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 25, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,92-1,09 (m, 12H), 1,26-1,30 (m, 10H), 1,43-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,36-2,41 (m, 1H), 2,70-2,75 (m, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,18-4,30 (m, 2H), 4,46-4,48 (m, 1H), 4,55-4,58 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,725,79 (m, 1H), 6,10 (b, 1H), 7,37-7,40 (m, 1H), 7,46-7,49 (m, 3H), 7,70 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,85-7,89 (m, 2H), 8,16-8,20 (m, 3H);
LC-MS (czas retencji: 2,08 minuty, metoda B),
MS m/z 760 (M++H);
P r z y k ł a d 26: sposób wytwarzania związku 26.
Związek 26
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 25, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 4-metoksyfenyloboronowy.
1H NMR (CD3OD) δ 1,40, 1,45 (rotamery, 9H), 2,50-2,55 (m, 1H), 2,73-2,81 (m, 1H), 3,81-3,89 (m, 4H), 3,98-4,01 (m, 1H), 4,50-4,57 (m, 1H), 5,93 (b, 1H), 7,02 (d, J=9,0 Hz, 2H), 7,50 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,67 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,83 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,5 Hz, 2H), 8,15 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,00 minuty, metoda B),
MS m/z 465 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 26, etap 1.
1H NMR (CD3OD) δ 1,06-1,09 (m, 2H), 1,17-1,27 (m, 2H), 1,42-1,47 (m, 10H), 1,88-1,90 (m, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,33-2,39 (m, 1H), 2,61-2,65 (m, 1H), 2,95-2,99 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,86-3,90 (m, 1H), 3,99-4,00 (m, 1H), 4,43-4,45 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,31 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,77-5,80 (m, 1H), 5,99 (b, 1H), 7,02 (d, J=9,0 Hz, 2H), 7,51 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,68 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,84 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,5 Hz, 2H), 8,15 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,02 minuty, metoda B),
MS m/z 677 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 26, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,53 minuty, metoda B),
MS m/z 577 (M++H).
Etap 4:
Związek 26 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 26, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,93-1,09 (m, 12H), 1,26-1,30 (m, 10H), 1,44-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,36-2,41 (m, 1H), 2,70-2,75 (m, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,18-4,25 (m, 1H), 4,30 (b, 1H), 4,46-4,48 (m, 1H), 4,55-4,58 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 6,08 (b, 1H), 7,02 (d, J=9,0 Hz, 2H), 7,44 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,66 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,83 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,5 Hz, 2H), 8,15 (d, J=8,0Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,03 minuty, metoda B),
MS m/z 790 (M++H).
P r z y k ł a d 27: sposób wytwarzania związku 27.
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 25, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 4-pirydyloboronowy.
1H NMR (CD3OD) δ 1,43, 1,46 (rotamery, 9H), 2,53-2,56 (m, 1H), 2,80-2,89 (m, 1H), 3,90-3,93 (m, 1H), 4,00-4,05 (m, 1H), 4,50-4,57 (m, 1H), 6,00, 6,05 (rotamery, 1H), 7,80 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,87 (t, J=7,5 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,32 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,84 (d, J=6,0 Hz, 2H), 8,84 (d, J=6,5 Hz, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,39 minuty, metoda B),
MS m/z 436 (M++H).
Etap 2 :
Produkt wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 27, etap 1.
1H NMR (CD3OD) δ 1,06-1,09 (m, 2H), 1,17-1,27 (m, 2H), 1,42-1,46 (m, 10H), 1,88-1,90 (m, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,33-2,39 (m, 1H), 2,61-2,65 (m, 1H), 2,95-2,99 (m, 1H), 3,88-3,90 (m, 1H), 4,01-4,08 (m, 1H), 4,43-4,45 (m, 1H), 5,15 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,32 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,775,80 (m, 1H), 6,10 (b, 1H), 7,79 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,88 (t, J=7,5 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,31 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,79 (d, J=7,0 Hz, 2H), 8,86 (d, J=6,5 Hz, 2H);
PL 226 561 B1
LC-MS (czas retencji: 1,49 minuty, metoda 3), MS m/z 648 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 27, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 0,96 minuty, metoda B),
MS m/z 548 (M++H).
Etap 4:
Związek 27 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 27, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,94-1,09 (m, 12H), 1,22-1,26 (m, 10H), 1,44-1,49 (m, 1H), 1,88-1,92 (m, 1H), 2,22-2,25 (m, 1H), 2,41-2,44 (m, 1H), 2,70-2,75 (m, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 4,18-4,21 (m, 1H), 4,25 (b, 1H), 4,53-4,62 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,29 (d, J=20,0 Hz, 1H), 5,72-5,77 (m, 1H), 6,12 (b, 1H), 7,67 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,82 (t, J=7,5 Hz, 1H), 8,02 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,29 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,55 (d, J=7,0 Hz, 2H), 8,76 (d, J=6,5 Hz, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,49 minuty, metoda B),
MS m/z 761 (M++H).
P r z y k ł a d 28: sposób wytwarzania związku 2:
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 25, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 4-N,N-dimetyloaminofenyloboronowy.
LC-MS (czas retencji: 1,64 minuty, metoda B),
MS m/z 478 (M++H):
Etap 2:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 28, etap 1.
LC-MS (czas retencji: 1,70 minuty, metoda B),
MS m/z 690 (M++H).
Etap 3:
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 28, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,20 minuty, metoda B),
MS m/z 590 (M++H).
Etap 4:
Związek 28 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 28, etap 3.
1H NMR (d6-DMSO) δ 0,92-1,10 (m, 13H), 1,30 (s, 9H), 1,35-1,38 (m, 1H), 1,68-1,71 (m, 1H), 2,12-3,00 (m, 2H), 2,59-2,62 (m, 1H), 2,91-2,95 (m, 1H), 2,99 (s, 6H), 3,93-4,10 (m, 2H), 4,32-4,40 (m, 2H), 5,09 (d, J=11,5 Hz, 1H), 5,23 (d, J=19,0 Hz, 1H), 5,54-5,64 (m, 1H), 5,92 (b, 1H), 6,83 (d, J=9,0 Hz, 2H), 7,42 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,70 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,87 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,04 (d, J=9,0 Hz, 2H), 8,15 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,72 minuty, metoda B),
MS m/z 803 (M++H).
P r z y k ł a d 29: sposób wytwarzania związku 29.
Etap 1:
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 25, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 4-cyjanofenyloboronowy.
LC-MS (czas retencji: 1,87 minuty, metoda B),
MS m/z 460 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 29, etap 1.
LC-MS (czas retencji: 1,88 minuty, metoda B), MS m/z 612 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 29, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,41 minuty, metoda B),
MS m/z 572 (M++H).
Etap 4:
Związek 29 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 29, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,92-1,09 (m, 12H), 1,25-1,26 (m, 10H), 1,42-1,46 (m, 1H), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,20-2,22 (m, 1H), 2,33-2,34 (m, 1H), 2,68-2,71 (m, 1H), 2,93-2,95 (m, 1H), 4,13-4,28 (m, 2H), 4,49-4,60 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,28 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,71-5,80 (m, 1H), 6,09
PL 226 561 B1 (b, 1H), 7,56 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,74 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,83 (d, J=10,5 Hz, 2H), 7,93 (d, J=7,5 Hz, 1H), 8,01 (s, 1H), 8,22 (d, J=7,5 Hz, 1H), 8,37 (d, J=10,5 Hz, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,87 minuty, metoda B),
MS m/z 785 (M++H).
P r z y k ł a d 30: sposób wytwarzania związku 30.
Etap 1:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 25, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 3-furanoboronowy.
LC-MS (czas retencji: 1,85 minuty, metoda B),
MS m/z 425 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 30, etap 1.
PL 226 561 B1
LC-MS (czas retencji: 1,88 minuty, metoda B),
MS m/z 637 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 30, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,38 minuty, metoda B),
MS m/z 537 (M++H).
Etap 4:
Związek 30 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 30, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,95-1,09 (m, 12H), 1,23-1,30 (m, 10H), 1,43-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,21-2,23 (m, 1H), 2,30-2,34 (m, 1H), 2,64-2,70 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 4,11-4,29 (m, 2H), 4,41-4,44 (m, 1H), 4,54-4,56 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,71-5,80 (m, 1H), 6,02 (b, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,44 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,66 (t, J=7,0 Hz, 1H), 7,79 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,14-8,17 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 1,93 minuty, metoda B),
MS m/z 750 (M++H).
P r z y k ł a d 31: sposób wytwarzania związku 31.
PL 226 561 B1
Schemat 1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 21, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 3-bromoizochinolinę (Atkins i in., JOC, 1973, 400).
1H NMR (CDCl3) δ 7,60-7,62 (m, 2H), 7,71-7,73 (m, 2H), 8,12 (s, 1H), 8,99 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,78 minuty, metoda B),
MS m/z 224, 226 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 3-bromoizochinoliny.
1H NMR (CDCI3) δ 7,66-7,71 (m, 1H), 7,74-7,76 (m, 2H), 7,83 (s, 1H), 8,29 (d, J=8,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,55 minuty, metoda B),
MS m/z 242, 244 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 3 w postaci pianki, z tym wyjątkiem, że stosowano 3-bromo-1-chloroizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 1,43, 1,44 (rotamery, 9H), 2,41-2,47 (m, 1H), 2,69-2,72 (m, 1H), 3,80-3,84 (m, 1H), 3,88-3,90 (m, 1H), 4,46-4,52 (m, 1H), 5,16 (b, 1H), 1,51-7,61 (m, 2H), 1,13-1,15 (m, 2H), 8,15 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,79 minuty, metoda B),
MS m/z 437, 439 (M++H).
Etap 4:
Mieszaninę 2-tributylostannanylopirazyny (44 mg, 0,12 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)palladu(0) (12 mg, 0,01 mmola) i produktu uzyskanego według przykładu 31, etap 3 (44 mg, 0,1 mmola) w toluenie (1 ml) ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 3 godziny. Po usunięciu części lotnych pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 35 mg (80%) pożądanego produktu w postaci żółtego ciała stałego.
LC-MS (czas retencji: 1,77 minuty, metoda B),
MS m/z 437 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 5:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 31, etap 4.
LC-MS (czas retencji: 1,78 minuty, metoda B),
MS m/z 649 (M++H).
Etap 6:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowalno produkt uzyskany według przykładu 31, etap 5.
LC-MS (czas retencji: 1,26 minuty, metoda B),
MS m/z 549 (M++H).
Etap 7:
Związek 31 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 31, etap 6.
1H NMR (CD3OD) δ 0,95-1,10 (m, 12H), 1,24-1,27 (m, 10H), 1,44-1,47 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,19-2,22 (m, 1H), 2,38-2,44 (m, 1H), 2,71-2,76 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 4,18-4,28 (m, 2H), 4,50-4,61 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,71-5,80 (m, 1H), 6,12 (b, 1H), 7,60 (t, J=7,2 Hz, 1H), 7,77 (t, J=7,0 Hz, 1H), 7,97 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,26 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 9,61 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,84 minuty, metoda B),
MS m/z 762 (M++H).
P r z y k ł a d 32: sposób wytwarzania związku 32.
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten, 2-oksyizochinolino-3-karbonitryl, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 21, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 3-cyjanoizochinolinę.
1H NMR (DMSO-d6) δ 7,74 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,84 (t, J=8,2 Hz, 1H), 7,97 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,03 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,85 (s, 1H), 9,17 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,48 minuty, metoda B),
MS m/z 171 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten, 1-chloroizochinolino-3-karbonitryl, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 3-cyjanoizochinoliny.
1H NMR (CDCl3) δ 7,87-7,91 (m, 2H), 7,92-7,94 (m, 1H), 8,09 (s, 1H), 8,42-8,44 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,22 minuty, metoda B),
MS m/z 189 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 5, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloroizochinolino-3-karbonitryl.
1H NMR (CD3OD) δ 1,05 (s, 9H), 1.17 (s, 9H), 2,34-2,40 (m, 1H), 2,71-2,78 (m, 1H), 4,09-4,11 (m, 1H), 4,21 (b, 1H), 4,48-4,52 (m, 1H), 4,68-4,72 (m, 1H), 5,89 (b, 1H), 7,74 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,86 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,94-7,97 (m, 2H), 8,31 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,66 minuty, metoda B),
MS m/z 497 (M++H).
Etap 4:
Związek 32 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 9 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 32, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 1,04-1,09 (m, 12H), 1,20-1,27 (m, 10H), 1,39-1,45 (m, 1H), 1,85-1,88 (m, 1H), 2,20-2,30 (m, 2H), 2,63-2,71 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 4,09-4,13 (m, 1H), 4,23 (d, J=9,3 Hz, 1H), 4,49-4,58 (m, 2H), 5,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,28 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,69-5,81 (m, 1H), 5,92 (b, 1H), 6,60 (d, J=10,0 Hz, 1H), 7,72 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,86 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,96-7,99 (m, 2H), 8,29 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,75 minuty, metoda B),
MS m/z 714 (M++H).
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 33: sposób wytwarzania związku 33
Etap 1:
Produkt ten, 2-tlenek 3-metyloizochinoliny, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 21, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 3-metyloizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 2,64 (s, 3H), 7,64-7,72 (m, 2H), 7,88-7,95 (m, 2H), 9,05 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,61 minuty, metoda B),
MS m/z 160 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten, 1-chloro-3-metyloizochinolinę, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 3-metyloizochinoliny.
1H NMR (CDCI3) δ 2,65 (s, 3H), 7,25 (s, 1H), 7,61 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,69 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,74 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,27 (d, J=8,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,47 minuty, metoda B),
MS m/z 178 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloro-3-metyloizochinolinę.
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD) δ 1,05 (s, 9H), 1,23 (s, 9H), 2,51 (s, 3H), 2,34-2,40 (m, 1H), 2,72-2,78 (m, 1H), 4,05-4,12 (m, 1H), 4,26 (b, 1H), 4,41 (d, J=10 Hz, 1H), 4,62-4,67 (m, 1H), 5,90 (b, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,38 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,62 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,68 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,14 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,84 minuty, metoda B),
MS m/z 486 (M++H).
Etap 4:
Związek 33 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 9 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 33, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,09 (m, 12H), 1,23-1,25 (m, 10H), 1,41-1,45 (m, 1H), 1,86-1,90 (m, 1H), 2,21-2,31 (m, 2H), 2,52 (s, 3H), 2,58-2,61 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 4,28 (b, 1H), 4,40 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,50-4,55 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,30 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,71-5,81 (m, 1H), 5,93 (b, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,38 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,62 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,68 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,0 Hz, 1H), 9,12 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,85 minuty, metoda B),
MS m/z 698 (M++H).
P r z y k ł a d 34: sposób wytwarzania związku 34.
Etap 1:
Produkt ten, 2-tlenek 3-cyklopropyloizochinoliny, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 21, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 3-cyklopropyloizochinolinę (L. Flippin, J. Muchowski, J. O. C-1993, 2631-2632).
LC-MS (czas retencji: 0,95 minuty, metoda B),
MS m/z 186 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten, 1-chloro-3-cyklopropyloizochinolinę, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 3-cyklopropyloizochinoliny.
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD) δ 1,00-1,04 (m, 4H), 2,11-2,18 (m, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,61 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,72 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,83 (d, J=13,5 Hz, 1H), 8,27 (d, J=14,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,70 minuty, metoda B),
MS m/z 204 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloro-3-cyklopropyloizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 0,93-1,05 (m, 13H), 1,29 (s, 9H), 2,06-2,10 (m, 1H), 2,39-2,44 (m, 1H), 2,70-2,76 (m, 1H), 4,05-4,12 (m, 1H), 4,27 (b, 1H), 4,35 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,62-4,67 (m, 1H), 5,78 (b, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,38 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,61 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,96 minuty, metoda B),
MS m/z 512 (M++H).
Etap 4:
Związek 34 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 9 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 34, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,93-1,09 (m, 16H), 1,24-1,30 (m, 10H), 1,42-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,06-2,11 (m, 1H), 2,21-2,32 (m, 2H), 2,56-2,61 (m, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 4,08-4,12 (m, 1H), 4,28 (b, 1H), 4,32 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,48-4,53 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,72-5,77 (m, 1H), 5,82 (b, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,36 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,60 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,67 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,07 (d, J=8,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,00 minuty, metoda B),
MS m/z 724 (M++H).
P r z y k ł a d 35: sposób wytwarzania związku 35.
PL 226 561 B1
Etap 1:
Mieszaninę 3-hydroksyizochinoliny (725 mg, 5,0 mmola), węglanu cezu (4,89 g, 15,0 mmola) i Mel (781 mg, 5,5 mmola) w DMF (50 ml) mieszano w temperaturze otoczenia przez 12 godzin. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc (200 ml), przesączono, przemyto odpowiednio wodą (200 ml, x 2) oraz 1M NaOH (wodny roztwór) i solanką. Warstwę organiczną nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 120 mg (15%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCls) δ 4,03 (s, 3H), 6,99 (s, 1H), 7,36 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,56 (t, J=8,2 Hz, 1H), 7,68 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,87 (J=8,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,54 minuty, metoda B),
MS m/z 160 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten, 2-tlenek 3-metoksyizochinoliny, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 21, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 3-metoksyizochinolinę.
LC-MS (czas retencji: 0,83 minuty, metoda B),
MS m/z 176 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten, 1-chloro-3-metoksyizochinolinę wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 3-metoksyizochinoliny.
LC-MS (czas retencji: 1,62 minuty, metoda B),
MS m/z 194 (M++H).
Etap 4:
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloro-3-metoksyizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 1,05 (s, 9H), 1,23 (s, 9H), 2,35-2,43 (m, 1H), 2,72-2,79 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,01-4,11 (m, 1H), 4,26 (b, 1H), 4,48 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,62-4,67 (m, 1H), 5,83 (b, 1H), 6,61 (s, 1H), 7,25 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,54 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,63 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,4 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,82 minuty, metoda B),
MS m/z 502 (M++H).
Etap 5:
Związek 35 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 1, etap 9 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 35, etap 4.
1H NMR (CD3OD) δ 1,04-1,08 (m, 12H), 1,24-1,27 (m, 10H), 1,43-1,45 (m, 1H), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,30-2,34 (m, 1H), 2,62-2,66 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,09-4,12 (m, 1H), 4,27-4,28 (m, 1H), 4,46 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,51-4,58 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,72-5,76 (m, 1H), 5,88 (b, 1H), 6,62 (s, 1H), 7,26 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,65 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,06 (d, J=8,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,85 minuty, metoda B),
MS m/z 714 (M++H).
P r z y k ł a d 36: sposób wytwarzania związku 36.
PL 226 561 B1
Etap 1:
Mieszaninę kwasu 4-metoksy-2-metylobenzoesowego (5,00 g, 30,1 mmola) i chlorku tionylu (20,0 g, 0,17 mola) ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 30 minut. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Po przepompowaniu w ciągu nocy, lepki oleisty chlorek kwasowy stosowano w postaci surowej w następnej reakcji, bez żadnego oczyszczania.
Do roztworu chlorku 4-metoksy-2-metylobenzoilu w CH2CI2 (60 ml) w temperaturze 0°C wkroplono dietyloaminę. Utworzoną mieszaninę, mieszając ogrzewano w temperaturze otoczenia przez 2 godziny. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość roztarto z EtOAc (100 ml) i przesączono. Przesącz przemyto 1M HCl, 1M NaOH oraz solanką i osuszono nad MgSO4.
Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano 6,51 g (98%) pożądanego produktu w postaci lepkiego oleju.
LC-MS (czas retencji: 1,20 minuty, metoda B),
MS m/z 222 (M++H).
Etap 2:
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (221 mg, 1,0 mmola) w THF (2 ml) w temperaturze -78°C wkroplono n-BuLi (0,84 ml 2,5M roztworu w heksanie, 2,10 mmola). Utworzony pomarańczowy roztwór utrzymywano w tej temperaturze jeszcze przez 30 minut, po czym wkroplono benzonitryl (103 mg, 1,0 mmola). Końcowy roztwór pozostawiono, mieszając, do ogrzania do temperatury otoczenia przez noc. Reakcję zatrzymano stosując 5% kwas cytrynowy z lodem. Mieszaninę przesączono, przemyto wodą i osuszono. Po roztarciu z mieszaniną 2:1 heksan-EtOAc (5 ml) uzyskano 205 mg (82%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (d6-DMSO) δ 3,89 (s, 3H), 6,84 (s, 1H), 7,05-7,07 (m, 1H), 7,18 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,44-7,51 (m, 3H), 7,78 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,11 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (cza s retencji: 1,20 minuty, metoda B),
MS m/z 252 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten, 1-chloro-6-metoksy-3-fenyloizochinolinę, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 6-metoksy-3-fenylo-2Hizochinolin-1-on.
1H NMR (CDCl3) δ 3,97 (s, 3H), 7,12 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,23-7,26 (m, 1H), 7,40-7,42 (m, 1H), 7,46-7,50 (m, 2H), 7,89 (s, 1H), 8,08 (d, J=7,0 Hz, 2H), 8,21 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,90 minuty, metoda B),
MS m/z 270, 271 (M++H).
Etap 4:
Do roztworu produktu według przykładu 21, etap 1 (320 mg, 0,57 mmola) w DMSO (5 ml) dodano tert-butanolan potasu (321 mg, 2,87 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze otoczenia przez 30 minut, po czym dodano 1 -chloro-6-metoksy-3-fenyloizochinolinę (przykład 36, etap 3) (155 mg, 0,57 mmola). Końcowy roztwór mieszano przez 12 godzin. Reakcję zatrzymano stosując wodę z lodem, roztwór zakwaszano 1M HCl do pH 4, ekstrahowano EtOAc (20 ml, x 2). Warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4, przesączono i odparowano. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (40%B do 100%B, gradient 15 minut), uzyskując 289 mg (64%) związku 36 w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CD3OD) δ 0,95-1,05 (m, 12H), 1,24-1,32 (m, 10H), 1,44-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,20-2,26 (m,1H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,65-2,71 (m, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,124,28 (m, 2H), 4,38-4,52 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,0 Hz, 1H), 5,69-5,74 (m, 1H), 6,05 (b, 1H), 7,06-7,07 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,37-7,39 (m, 1H), 7,44-7,48 (m, 2H), 7,77 (s, 1H), 8,07 (d, J=9,0 Hz, 1H), 8,15 (d, J=8,5 Hz, 2H);
LC-MS (czas retencji: 2,02 minuty, metoda B),
MS m/z 790 (M++H).
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 37: sposób wytwarzania związku 37.
Etap 1:
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (633 mg, 2,9 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, wkroplono n-BuLi (2,3 ml 2,5M roztworu w heksanie, 5,74 mmola). Utworzony czerwony roztwór utrzymywano w tej temperaturze jeszcze przez 30 minut, przed wprowadzeniem za pomocą rurki do roztworu estru etylowego kwasu tiazolo-2-karboksylowego (A. Medici i in., Tetrahedron Lett. 1983, str. 2901) (450 mg, 2,9 mmola) w THF (5 ml) w temperaturze -78°C. Końcowy ciemny zielony roztwór utrzymywano mieszając w tej temperaturze przez 2 godziny. Reakcję zatrzymano stosując nasycony NH4CI (wodny roztwór) i ekstrahowano EtOAc (50 ml). Warstwę organiczną przemyto nasyconym NH4CI (wodny roztwór) oraz solanką, osuszono i oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej, eluując układem 2:1 EtOAc:heksan z uzyskaniem 405 mg (45%) pożądanego produktu w postaci białawego lepkiego oleju.
1H NMR (CDCI3) δ 1,08 (t, J=7,0 Hz, 6H), 3,22 (b, 2H), 3,44 (b, 2H), 3,79 (s, 3H), 4,59 (s, 2H), 6,79-6,81 (m, 1H), 6,86 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,16 (d, J=8,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J=3,0 Hz, 1H), 8,00 (d, J=3,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,30 minuty, metoda B),
MS m/z 333 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 2:
Mieszaninę N,N-dietylo-4-metoksy-2-(2-okso-2-tiazol-2-iloetylo)benzamidu (405 mg, 1,22 mmola) i NH4OAC (3,0 g, 38,9 mmola) ogrzewano w temperaturze 140°C w uszczelnionej rurce przez 1 godzinę. Stopiony roztwór wylano do wody z lodem, przesączono i placek filtracyjny przemyto starannie wodą. Osuszone brunatnawe ciało stałe (240 mg, 76%) stosowano w postaci surowej, bez dalszego oczyszczania w następnej reakcji.
LC-MS (czas retencji: 1,24 minuty, metoda B),
MS m/z 259 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten, 1-chloro-6-metoksy-3-tiazol-2-iloizochinolinę, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 6-metoksy-3-tiazol-2-ilo-2H-izochinolin-1-on.
1H NMR (CDCI3) δ 3,97 (s, 3H), 7,16 (d, J=4,0 Hz, 1H), 7,27-7,31 (m, 1H), 7,46 (d, J=5,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J=5,5 Hz, 1H), 8,22 (d, J=15,5 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,66 minuty, metoda B),
MS m/z 211 (M++H).
Etap 4:
Związek 37 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 36, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloro-6-metoksy-3-tiazol-2-iloizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 0,97-1,09 (m, 12H), 1,24-1,29 (m, 10H), 1,44-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,20-2,26 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,65-2,71 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,12-4,27 (m, 2H), 4,38-4,52 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,69-5,74 (m, 1H), 5,99 (b, 1H), 7,14 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,66 (d, J=3,5 Hz, 1H), 7,93 (d, J=3,0 Hz, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,11 (d, J= 9,0 Hz, 1H), 9,14 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,89 minuty, metoda B),
MS m/z 797 (M++H).
P r z y k ł a d 38: sposób wytwarzania związku 38.
PL 226 561 B1
Etap 1:
Mieszaninę estru metylowego kwasu 3-hydroksyizoksazolo-5-karboksylowego (5,72 g, 0,04 mola), jodku metylu (6,82 g, 0,044 mola) i węglanu cezu (39,1 g, 0,12 mola) w DMF (200 ml) mieszano w temperaturze otoczenia przez noc. Roztwór rozcieńczono EtOAc (1 l) i przesączono. Przesącz przemyto odpowiednio wodą (1 l, x 2), 1M NaOH i solanką, osuszono nad MgSO4 i odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 4,80 g (76%) pożądanego produktu w postaci białego ciała stałego. Otrzymany produkt stosowano w postaci surowej bez dalszego oczyszczania.
1H NMR (CDCl3) δ 3,92 (s, 3H), 4,00 (s, 3H), 6,51 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,69 minuty, metoda B),
MS m/z 158 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten, N,N-dietylo-4-metoksy-2-[2-(3-metoksyizoksazol-5-ylo)-2-oksoetylo]benzamid, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 37, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano ester metylowy kwasu 3-metoksyizoksazolo-5-karboksylowego.
LC-MS (czas retencji: 1,28 minuty, metoda B),
MS m/z 347 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten, 6-metoksy-3-(3-metoksyizoksazol-5-ylo)-2H-izochinolin-1-on, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 37, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano N,N-dietylo-4-metoksy-2-[2-(3-metoksyizoksazol-5-ylo)-2-oksoetylo]benzamid.
1H NMR (DMSO-d6) δ 3,89 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 7,01 (s, 1H), 7,14-7,16 (m, 2H), 7,43 (s, 1H), 8,13 (d, J=8,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,31 minuty, metoda B),
MS m/z 273 (M++H).
Etap 4:
PL 226 561 B1
Produkt ten, 1-chloro-6-metoksy-3-(3-metoksyizoksazol-5-ylo)chinolinę, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 6-metoksy-3-(3-metoksyizoksazolo-5-ylo)-2H-izochinolin-1-on.
1H NMR (CDCis) δ 3,97 (s, 3H), 4,04 (s, 3H), 6,60 (s, 1H), 7,17 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,31-7,33 (m, 1H), 8,02 (s, 1H), 8,23 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,73 minuty, metoda B),
MS m/z 291, 293 (M++H).
Etap 5:
Związek 38 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 36, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chioro-6-metoksy-3-(3-metoksyizoksazoio-5-yio)izochinolinę .
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,09 (m, 12H), 1,23-1,28 (m, 10H), 1,44-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,20-2,26 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,65-2,71 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 4,13-4,14 (m, 1H), 4,24-4,26 (m, 1H), 4,41-4,42 (m, 1H), 4,52-4,55 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,0 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,96 (b, 1H), 6,60 (s, 1H), 7,15-7,17 (m, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,10 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,95 minuty, metoda B),
MS m/z 811 (M++H).
P r z y k ł a d 39: sposób wytwarzania związku 39.
Etap 1:
Produkt ten, N,N-dietyio-4-metoksy-2-[2-(5-metoksyoksazoi-2-yio)-2-oksoetyio]benzamid, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 37, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano ester etylowy kwasu 5-metoksyoksazoio-2-karboksyiowego.
LC-MS (czas retencji: 1,24 minuty, metoda B),
MS m/z 347 (M++H).
PL 226 561 B1
Etap 2:
Produkt ten, 6-metoksy-3-(5-metoksyoksazol-2-ylo)-2H-izochinolin-1-on, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 37, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano N,N-dietylo-4-metoksy-2-[2-(5-metoksyoksazol-2-ylo)-2-oksoetylo]benzamid.
1H NMR (DMSO-d6) δ 3,94 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 6,34 (s, 1H), 6,99 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,12-7,14 (m, 1H), 7,25 (s, 1H), 8,32 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,22 minuty, metoda B),
MS m/z 274 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten, 1-chloro-6-metoksy-3-(5-metoksyoksazol-2-ylo)izochinolinę, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano 6-metoksy-3-(5-metoksyoksazolo-2-ylo)-2H-izochinolin-1-on.
1H NMR (CDCI3) δ 3,96 (s, 3H), 4,00 (s, 3H), 6,34 (s, 1H), 7,12 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,28-7,31 (m, 1H), 8,13 (s, 1H), 8,23 (d, J=9,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,58 minuty, metoda B),
MS m/z, 293 (M++H).
Etap 4:
Związek 39 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 36, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloro-6-metoksy-3-(3-metoksyizoksazolo-5-ylo)izochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,09 (m, 12H), 1,23-1,28 (m, 10H), 1,44-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,20-2,26 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,65-2,71 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,02 (s, 3H), 4,13-4,14 (m, 1H), 4,25 (b, 1H), 4,41-4,42 (m, 1H), 4,52-4,55 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,0 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 6,07 (b, 1H), 6,45 (s, 1H), 7,15-7,16 (m, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 8,10 (d, J=9,0 Hz, 1H), 9,11 (b, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,75 minuty, metoda B),
MS m/z 811 (M++H).
P r z y k ł a d 40: sposób wytwarzania związku 40.
100
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten, 2-tlenek 1-chloro-6-metoksyizochinoliny, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 21, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano 1-chloro-6-metoksyizochinolinę (produkt uzyskany według przykładu 11, etap 2).
1H NMR (CDCl3) δ 4,00 (s, 3H), 7,14 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,41-7,43 (m, 1H), 7,62 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,15 (d, J=9,5 Hz, 1H), 8,36 (d, J=7,0 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,85 minuty, metoda B),
MS m/z 210 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten, 1,3-dichloro-6-metoksyizochinolinę, wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 2, z tym wyjątkiem, że stosowano 2-tlenek 1-chloro-6-metoksyizochinoliny.
1H NMR (CDCI3) δ 3,94 (s, 3H), 6,98 (s, 1H), 7,25-7,26 (m, 1H), 7,52 (s, 1H), 8,16 (d, J=9,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,54 minuty, metoda B), MS m/z 228, 230 (M++H).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 24, etap 1 w postaci pianki, z tym wyjątkiem, że stosowano 1,3-dichloro-6-metoksyizochinolinę.
1H NMR (CD3OD) δ 1,43, 1,44 (rotamery, 9H), 2,39-2,44 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,80-3,90 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 4,79-4,82 (m, 1H), 5,71 (b, 1H), 7,10-7,14 (m, 2H), 7,26 (s, 1H), 7,99-8,01 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,79 minut metoda B),
MS m/z 422 (H++H).
Etap 4:
PL 226 561 B1
101
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 4, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 40, etap 3.
LC-MS (czas retencji: 1,83 minuty, metoda B),
MS m/z 635 (M++H).
Etap 5:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 40, etap 4.
LC-MS (czas retencji: 1,36 minuty, metoda B),
MS m/z 535 (M++H).
Etap 6:
Związek 40 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 40, etap 5.
1H NMR (CD3OD) δ 1,07-1,11 (m, 12H), 1,26-1,30 (m, 10H), 1,46-1,48 (m, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,21-2,34 (m, 2H), 2,62-2,66 (m, 1H), 2,94-2,99 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,06-4,11 (m, 1H),
4,26-4,28 (m, 1H), 4,46-4,56 (m, 2H), 5,15 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,0 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,89 (b, 1H), 6,63 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,08-7,09 (m, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 8,08 (d, J=9,5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,99 minuty, metoda B),
MS m/z 748 (M++H).
P r z y k ł a d 41: sposób wytwarzania związku 41
102
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 30, etap 1, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 40, etap 3.
LC-MS (czas retencji: 1,85 minuty, metoda B),
MS m/z 455 (M++H).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 4 w postaci pianki, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 41, etap 1.
LC-MS (czas retencji: 1,88 minuty, metoda B),
MS m/z 667 (M++H).
Etap 3:
PL 226 561 B1
103
Produkt ten wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 5 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 41, etap 2.
LC-MS (czas retencji: 1,38 minuty, metoda B),
MS m/z 567 (M++H).
Etap 4:
Związek 41 wytworzono metodą opisaną w przykładzie 11, etap 6 w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 41, etap 3.
1H NMR (CD3OD) δ 0,99-1,04 (m, 12H), 1,22-1,31 (m, 10H), 1,43-1,45 (m, 1H), 1,87-1,89 (m, 1H), 2,22-2,24 (m, 1H), 2,30-2,34 (m, 1H), 2,65-2,68 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,11-4,14 (m, 1H), 4,28-4,30 (m, 1H), 4,38-4,42 (m, 1H), 4,53-4,55 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,29 (d, J=18,0 Hz, 1H), 5,72-5,77 (m, 1H), 5,99 (b, 1H), 6,61 (d, J=5,0 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 6,997,02 (m, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,57 (d, J=5,0 Hz, 1H), 8,03 (d, J=10,0 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,92 minuty, metoda B),
MS m/z 780 (M++H).
P r z y k ł a d 42: sposób wytwarzania związku 42.
Wytworzono metodami według przykładu 11, z tym wyjątkiem, że zamiast kwasu 6-metoksycynamonowego jako substancję wyjściową dla elementu P2 stosowano kwas 6-etoksycynamonowy.
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 0,98-1,09 (m, 15H), 1,24-1,31 (m, 10H), 1,42-1,46 (m, 1H), 1,85-1,90 (m, 1H), 2,19-2,32 (m, 2H), 2,57-2,63 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 4,03-4,09 (m, 1H), 4,17 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,42 (d, J=11,3 Hz, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 5,12 (d, J=17,4 Hz, 1H), 5,72-5,78 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,07-7,10 (m, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,22 (d, J=5,8 Hz, 1H), 7,87 (d, J=5,8 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,8 Hz, 1H);
MS: (M+H)+ 728.
Część C:
104
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 45: sposób wytwarzania związku 45
Mieszanina izomerów (1R,2S) i (1S,2R) w stosunku 1:1 przy części P1 cząsteczki
Związek 45
Etap 1:
Do roztworu kwasu 2-bromo-5-metoksybenzoesowego (1,68 g, 7,27 mmola) w DMF (50 ml) w kolbie pod średnim ciśnieniem (Chemglass) dodano benzoamidynę (1,25 g, 8,00 mmola), K2CO3 (6,0 g, 43,6 mmola) i proszek miedzi (336 mg, 1,45 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 180°C przez 1 godzinę. Miedź i nadmiar K2CO3 usunięto przez odfiltrowanie pod silnie zmniejszonym ciśnieniem i przemyto MeOH. Przesącz zatężono i uzyskany surowy produkt oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 5% MeOH w DCM), uzyskując jasnozielone ciało stałe (1,55 g, wydajność 84%):
1H NMR (DMSO-d5) δ 3,84 (s, 3H), 7,26 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,46 (br s, 5H), 7,57 (s, 1H), 8,38 (br s, 1H);
MS m/z (MH+) 253.
Etap 2:
Do rzadkiej zawiesiny Boc-cis-hydroksyprolino-OMe (2,0 g, 8,15 mmola) i produktu uzyskanego według przykładu 45, etap 1 (2,26 g, 8,97 mmola) w THF (82 ml), w temperaturze 0°C, dodano Ph3P i azokarboksylan diizopropylu (1,98 g, 8,97 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 17 godzin, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc (100 ml) i przemyto H2O (50 ml). Warstwę wodną oddzielono i ekstrahowano EtOAc (2 x 50 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując lepki olej, który ponownie rozpuszczono w minimalnej ilości EtOAc i dodano heksany w celu zwiększenia wytrącania większości produktu ubocznego PH3PO. PH3PO usunięto przez odfiltrowanie pod silnie zmniejszonym ciśnieniem, a ciekły przesącz zatężono. Uzyskany lepki olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 4:1 heksan:EtOAc), z uzyskaniem produktu w postaci białego ciała stałego (1,76 g, wydajność 45%).
PL 226 561 B1
105 1H NMR (60/40 rotomery, CDCI3) δ 1,47 (s, 9H), 2,49-2,55 (m, 1H), 2,73-2,83 (m, 1H), 3,80 (s, 1,8H), 3,81 (s, 1,2H), 3,96 (s, 3H), 4,03-4,09 (m, 1H), 4,54 (t, J=8,0 Hz, 0,6H), 4,66 (t, J=7,8 Hz),
4,96-5,06 (m, 1H), 5,97 (br s, 0,6H), 6,04 (br s, 0,4H), 7,33 (dd, J=6,1, 2,7 Hz, 1H), 7,46-7,51 (m, 4H),
7,91 (d, J=9,2 Hz, 1H), 8,49 (t, J=8,5 Hz, 2H);
13C NMR, (rotomery, CDCI3) δ 21,7, 22,0, 28,3, 28,4, 35,8, 36,8, 52,3, 52,4, 52,6, 55,9, 57,9, 58,3, 74,5, 74,9, 80,6, 101,2, 101,3, 115,7, 125,8, 126,0, 128,1, 128,5, 129,7, 130,2, 137,9, 147,8, 153,8, 157,7, 158,0, 158,0, 164,8, 173,1, 173,3;
MS m/z (MH+) 480.
Etap 3:
Produkt uzyskany według przykładu 45, etap 2 (760,0 mg, 1,59 mmola) rozpuszczono w 50%
TFA w DCM i mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Rozpuszczalnik zatężono i uzyskany brunatny lepki olej suszono pod zmniejszonym ciśnieniem przez noc. Produkt stosowano bezpośrednio do następnej reakcji.
Etap 4:
Do roztworu produktu w postaci brunatnego lepkiego oleju uzyskanego według przykładu 45, etap 3 (963 mg, 1,59 mmola) i DTPEA (1,23 g, 9,54 mmola) w DCM (11 ml) dodano N-Boc-L-tBuGly (440 mg, 1,90 mmola), HBTU (902 mg, 2,38 mmola) i HOBt (364 mg, 2,38 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 14 godzin, rozpuszczalnik oraz nadmiar DIPEA zatężono i uzyskany brunatny lepki olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 4:1 heksan: EtOAc), z uzyskaniem białego ciała stałego (0,922 mg, 98%-owa wydajność w dwóch etapach):
106
PL 226 561 B1 1H NMR (CDCl3/MeOD) δ 0,94 (s, 9H), 1,15 (3, 9H), 2,38-2,42 (m, 1H), 2,60-2,73 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 4,08-4,17 (m, 2H), 4,25 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,69 (t, J=8,0 Hz, 1H), 5,99 (br s, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,38 (s, 5H), 7,80 (d, J=9,0 Hz, 1H), 8,32 (d, J=5,5 Hz, 1H);
13C NMR (CDCl3/MeOD) δ 29,6, 31,4, 31,6, 33,04, 38,2, 39,0, 55,8, 56,9, 59,2, 61,5, 62,1, 78,3, 83,1, 105,0, 119,0, 129,4, 131,9, 132,6, 133,8, 141,2, 151,0, 161,4, 161,6, 168,2, 175,2, 175,7;
MS m/z (MH+) 593.
Etap 5:
Do roztworu produktu według przykładu 45, etap 4 (409 mg, 0,69 mmola) w THF (10 ml) dodano 1N NaOH (2 ml). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 19 godzin, mieszaninę reakcyjną zakwaszono stężonym HCl do około pH 5 i ekstrahowano DCM (3 x 50 ml). Połączone warstwy organiczne osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując produkt w postaci żółtego ciała stałego (370 mg, wydajność 92%), który po osuszeniu pod zmniejszonym ciśnieniem stosowano bezpośrednio w następnej reakcji:
1H NMR (CDCI3) δ 1,05 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 2,76-2,83 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,23-4,27 (m, 2H), 4,41 (d, J=11,6 Hz, 1H), 4,92 (t, J=7,6 Hz, 1H), 5,20 (d, J=8,9 Hz, 1H), 6,08 (br s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,46-7,50 (m, 5H), 7,93 (d, J=9,15 Hz, 1H), 8,51 (d, J=7,3 Hz, 2H);
MS m/z (MH+) 579.
Etap 6:
Do roztworu kwasu N-Boc-winylocyklopropanokarboksylowego (1R,2S/1S,2R; mieszanina 1:1) (1,01 g, 4,46 mmola) w THF (20 ml) i DMSO (2 ml) dodano CDI (1,08 g, 6,69 mmola) i DMAP (817 mg, 6,69 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze 70°C przez 1 godzinę, mieszaninę reakcyjną ochłodzono do temperatury pokojowej i potraktowano izopropylosulfonoamidem (1,1 g, 8,92 mmola) oraz DBU (1,36 g, 8,92 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, po czym ją zatężono i oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 5% MeOH w DCM), uzyskując brunatny lepki olej (1,4 g, 98%-owa wydajność):
1H NMR (metanol-d4) δ 1,25 (m, 1H), 1,33 (d, J=6,7 Hz, 3H), 1,36 (d, J=6,7 Hz, 3H), 1,45 (s, 9H), 1,84 (dd, J=7,6, 5,2 Hz, 1H), 2,16 (d, J=7,6 Hz, 1H), 3,58 (br s, 1H), 5,08 (d, J=11,6 Hz, 1H), 5,27 (d, J=15,6 Hz, 1H), 5,58-5,66 (m, 1H);
MS m/z (MH+) 332.
Etap 7:
Produkt uzyskany według przykładu 45, etap 6 (113 mg, 0,34 mmola) potraktowano 50% roztworem kwasu trifluorooctowego w DCM (10 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 1,4 godziny. Rozpuszczalnik oraz nadmiar kwasu triflurooctowego usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskany brunatny lepki olej osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem (1,3 g, 99%-owa wydajność) i stosowano bez dalszego oczyszczania:
PL 226 561 B1
107 1H NMR (DMSO-d6) δ 1,24 (d, J=6,7 Hz, 3H), 1,26 (d, J=6,7 Hz, 3H), 1,54 (dd, J=9,6, 6,6 Hz, 1H), 1,99 (t, J=6,9 Hz, 1H), 2,24 (d, J=8,5 Hz, 1H), 3,58-3,63 (m, 1H), 5,18 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,33 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,61-5,69 (m, 1H), 8,83 (br s, 3H);
13C NMR (DMSO-d6) δ 15,2, 15,9, 16,5, 29,9, 41,6, 52,1, 116,0, 118,9, 132,0, 158,2, 167,3;
MS m/z (MH+) 233.
Etap 8:
Do mieszaniny produktu według przykładu 45, etap 5 (117 mg, 0,338 mmola) i DIPEA (174 mg, 1,35 mmola) w DCM (5 ml) dodano HBTU (128 mg, 0,338 mmola), HOBt (52 mg, 0,338 mmola) i produkt uzyskany według przykładu 45, etap 7 (130 mg, 0,225 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, mieszaninę zatężono i uzyskany brunatny lepki olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 1:3 heksan:EtOAc, następnie 95:5 DCM:MeOH), uzyskując produkt w postaci białawego ciała stałego (150 mg, 84%-owa wydajność). Końcowy produkt, związek 45, jest mieszaniną izomerów; przy czym zmiana konfiguracji występuje przy winylocyklopropylowej części cząsteczki P1 (1R,2S/1S,2R; mieszanina 1:1):
1H NMR (metanol-d4) δ 0,92 (br s, 2H), 1,03 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 1,27-1,38 (m, 9H), 1,42-1,46 (m, 1H), 1,83 (dd, J=8,1, 5,3 Hz, 0,4H), 1,90 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 0,6H), 2,24-2,31 (m, 1H), 2,37-2,45 (m, 1H), 2,67-2,75 (m, 1H), 3,73-3,79 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 4,21 (dd, J=9,3, 6,0 Hz, 2H), 4,48 (d, J=11,3 Hz, 1H), 4,61 (q, J=8,9 Hz, 1H), 5,14 (t, J=9,0 Hz, 1H), 5,33 (t, J=17,9 Hz, 1H), 5,70-5,76 (m, 1H), 6,06 (d, J=11,9 Hz, 1H), 6,61 (d, J=8,9 Hz, 1H), 7,34 (d, J=2,8 Hz, 1H), 7,49 (br s, 5H), 7,87 (d, J=8,9 Hz, 1H), 8,46 (d, J=4,3 Hz, 2H);
13C NMR (metanol-d4) δ 15,7, 16,1, 16,5, 16,8, 23,9, 27,1, 28,6, 35,8, 36,0, 36,2, 36,3, 36,4,
42,6, 42,8, 54,7, 54,8, 55,5, 56,4, 61,1, 61,2, 80,5, 102,9, 117,0, 118,8, 118,9, 126,8, 129,4, 129,6, 130,2, 131,5, 134,4, 139,2, 148,8, 158,0, 159,3, 159,8, 166,3, 171,1, 175,1, 184,3;
MS m/z (MH+) 793.
P r z y k ł a d 46: sposób wytwarzania związku 46
Mieszanina izomerów (1R,2S) i (1S,2R) w stosunku 1:1 przy części P1 cząsteczki Związek 46
Związek 46 wytworzono postępując zgodnie z następującymi etapami 1 poprzez 5 do 8 przykładu 45 z tym wyjątkiem, że wprowadzono następujące modyfikacje:
Etap 1:
modyfikacje: jako substancje wyjściowe stosowano kwas 2-bromo-4,5-dimetoksybenzoesowy oraz chlorowodorek cyklopropylokarbamidyny.
Produkt:
108
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (DMSO-d6) δ 0,97-1,01 (m, 2H), 1,03-1,06 (m, 2H), 1,90-1,94 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 6,93 (s, 1H), 7,37 (s, 3H), 12,28 (s, 1H);
13C NMR (DMSO-d6) δ 9,03, 13,17, 55,47, 55,73, 104,81, 107,27, 113,26, 145,16, 147,48, 154,44, 157,21, 160,89;
MS m/z (MH+) 247.
Etap 2:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 46, etap 1 zamiast produktu według przykładu 45, etap 1.
Produkt:
Dane: 1H NMR (CDCi3) δ 1,00-1,04 (m, 2H), 1,07-1,11 (m, 2H), 1,43 (s, 5,4H), 1,46 (s, 3,6H), 2,17-2,21 (m, 1H), 2,37-2,43 (m, 1H), 2,62-2,69 (m, 1H), 3,75 (s, 1,8H), 3,78 (s, 1,2H), 3,92 (d, J=2,8 Hz, 1H), 4,00 (s, 3,6H), 4,01 (s, 2,4H), 4,48 (t, J=8,0 Hz, 0,6H), 4,59 (t, J=7,6 Hz, 0,4H), 5,7 (br s, 0,6H), 5,74 (br s, 0,4H), 7,18 (s, 1H), 7,20 (s, 1H);
13C NMR (CDCI3) δ 9,6, 9,7, 18,1, 28,3, 28,4, 35,8, 36,7, 52,2, 52,4, 56,3, 57,8, 58,2, 74,0, 74,5, 80,5, 80,6, 101,0, 101,1, 106,3, 108,6, 148,8, 149,1, 153,8, 155,4, 164,4, 165,9, 172,9, i 173,2;
LC-MS m/z (MH+) 474.
Etapy 3 i 4:
Jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 46, etap 2, zamiast produktu według przykładu 45, etap 2.
Produkt:
Dane: 1H NMR (metanoi-d4) δ 1,04 (s, 9H), 1,08-1,21 (m, 4H), 1,14 (s, 9H), 2,17-2,21 (m, 1H), 2,39-2,41 (m, 1H), 2,74-2,77 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 3,98 (m, 3H), 4,09 (dd, J=11,4,
3,8 Hz, 1H), 4,17 (d, J=8,9 Hz, 1H), 4,42 (d, J=11,3 Hz, 1H), 4,76 (t, J=8,2 Hz, 1H), 5,81 (br s, 1H), 6,43 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,14 (d, J=6,1 Hz, 1H), 7,27 (d, J=5,8 Hz, 1H);
13C NMR (metanoi-d4) δ 10,0, 10,3, 18,6, 26,9, 28,5, 28,8, 35,8, 36,1, 38,9, 52,8, 54,9, 56,7,
59,6, 60,5, 76,6, 80,4, 102,7, 106,2, 109,9, 149,8, 150,7, 157,6, 166,0, 167,3, 173,5, 173,6;
MS m/z (MH+) 587.
PL 226 561 B1
109
Etap 5:
Jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 46, etap 4, zamiast produktu według przykładu 45, etap 4.
Dane: 1H NMR (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,13 (s, 9H), 1,20-1,23 (m, 4H), 2,15-2,19 (m, 1H), 2,40-2,45 (m, 1H), 2,70-2,76 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,08 (dd, J=11,4, 3,8 Hz, 1H), 4,17 (d, J=5,8 Hz, 1H), 4,37 (d, J=11,3 Hz, 1H), 4,71 (t, J=8,1 Hz, 1H), 5,77 (br s, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,20 (s, 1H);
13C NMR (metanol-d4) δ 10,2, 10,5, 18,6, 26,9, 28,5, 28,8, 36,0, 36,3, 54,9, 56,8, 59,7, 60,4, 76,8, 80,4, 102,6, 105,9, 109,9, 126,9, 127,9, 149,3, 150,8, 157,65, 157,8, 166,1, 167,3, 173,3, 175,1;
MS m/z (MH+) 573.
Etap 8:
Jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 46, etap 5, zamiast produktu według przykładu 45, etap 5. Końcowy produkt, związek 46, jest mieszaniną izomerów; przy czym zmiana konfiguracji występuje przy winylocyklopropylowej części cząsteczki P1 (1R,2S/1S,2R, mieszanina 1:1).
Produkt:
Mieszanina izomerów (1R,2S) i (1S,2R) w stosunku 1:1 przy części P1 cząsteczki Związek 46
Dane: 1H NMR (metanol-d6) δ 1,03 (s, 9H), 1,05-1,09 (m, 4H), 1,16 (s, 4,5H), 1,17 (s, 4,5H), 1,19-1,22 (m, 1H), 1,31 (d, J=6,7 Hz, 2H), 1,33-1,38 (m, 7H), 1,18-1,89 (m, 1H), 2,15-2,20 (m, 2H), 2,35-2,44 (m, 1H), 3,23 (q, J=1,4 Hz, 1H), 3,70-3,75 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,98 (s, 3H), 4,08-4,13 (m, 2H), 4,16 (dd, J=8,9, 3,1 Hz, 1H), 4,38 (t, J=13,1 Hz, 1H), 4,58-4,62 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 5,29 (t, J=15,2 Hz, 1H), 5,83 (br s, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,27 (d, J=4,3 Hz, 1H);
MS m/z (MH+) 787.
110
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 47: sposób wytwarzania związku 47
Związek 47 wytworzono w etapach reakcji analogicznych do wytwarzania związku 45 według przykładu 45. Jako substancję wyjściową stosowano kwas orto-bromobenzoesowy zamiast chlorowodorku (1R-amino-2S-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego. Związek 47: MH+=761.
P r z y k ł a d 48: sposób wytwarzania związku 48
Związek 48 wytworzono postępując zgodnie z następującymi etapami 1 poprzez 5 do 8 przykładu 45 z tym wyjątkiem, że wprowadzono następujące modyfikacje:
Etap 1:
Modyfikacje: jako substancje wyjściowe stosowano chlorowodorek acetamidyny oraz kwas
2-bromo-5-metoksybenzoesowy.
Produkt:
PL 226 561 B1
111
Dane: 1H NMR (DMSO) δ 2,31 (s, 3H), 3,85 (s, 3H), 7,36 (d, J=6,2 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,51 (d, J=7,8 Hz, 1H), 12,15 (s, 1H);
13C NMR (DMSO) δ 21,11, 55,41, 105,57, 121,22, 123,59, 128,12, 143,34, 151,68, 157,00, 161,45;
LC-MS m/e (MH+) 191.
Etap 2:
Modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 48, etap 1, zamiast produktu według przykładu 45, etap 1.
Produkt:
Dane: 1H NMR (CDCl3) δ 1,43 (s, 5,4H), 1,45 (s, 3,6H), 2,38-2,45 (m, 1H), 2,62-2,71 (m, 1H), 2,66 (s, 1,8H), 2,68 (s, 1,2H), 3,77 (1,8H), 3,79 (s, 1,2H), 3,92 (s, 3H), 3,93-3,98 (m, 2H), 4,49 (t, J=8,0 Hz, 0,6H), 4,61 (t, J=7,8 Hz, 0,4H), 5,82 (t, J=2,1 Hz, 0,6H), 5,89 (t, J=2,3 Hz, 0,4H), 7,26 (dd, J=4,7, 3,2 Hz, 1H), 7,42 (dd, J=6,3, 2,8 Hz, 1H), 7,75 (d, J=9,15 Hz, 1H);
13C NMR (CDCI3) δ 26,1, 28,3, 28,4, 35,8, 36,7, 52,2, 52,2, 52,4, 52,5, 55,7, 55,8, 57,9, 58,2, 74,1, 74,7, 80,6, 101,0, 101,2, 114,9, 125,6, 125,9, 128,6, 147,3, 153,8, 154,5, 157,6, 157,6, 161,2,
164,6, 173,0, 173,3;
LC-MS m/e (MH+) 418.
Etapy 3 i 4:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 48, etap 2, zamiast produktu według przykładu 45, etap 2.
Produkt:
Dane: 1H NMR (MeOD) δ 1,03 (s, 9H), 1,07 (s, 9H), 2,38-2,42 (m, 1H), 2,68 (s, 3H), 2,80 (q, J=7,8 Hz, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 4,07 (dd, J=11,9, 3,4 Hz, 1H), 4,13 (br s, 1H), 4,55 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,78 (t, J=8,7 Hz, 1H), 5,93 (s, 1H), 7,37 (d, J=2,75 Hz, 1H), 7,48-7,51 (m, 2H), 7,70 (d, J=5,7 Hz, 1H);
13C NMR (MeOD) δ 25,6, 26,9, 28,4, 28,8, 35,9, 52,8, 55,0, 56,4, 59,7, 60,6, 77,2, 80,4, 102,9,
111,6, 116,5, 127,0, 128,4, 147,5, 162,7, 166,4, 173,6;
LC-MS m/e (MH+) 531.
Etap 5:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 48, etap 4, zamiast produktu według przykładu 45, etap 4.
112
PL 226 561 B1
Produkt:
Dane: 1H NMR (MeOD) δ 1,03 (s, 9H), 1,08 (s, 9H), 2,41-2,46 (m, 1H), 2,68 (s, 3H), 2,81 (q, J=8,1 Hz, 1H), 3,89 (s, 3H), 4,07 (dd, J=11,8, 3,2 Hz, 1H), 4,18 (d, J=5,5 Hz, 1H), 4,52 (d, J=11,9 Hz, 1H), 4,74 (t, J=8,7 Hz, 1H), 5,93 (br s, 1H), 7,37 (d, J=2,81 Hz, 1H), 7,49 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,71 (d, J=9,2 Hz, 1H);
13C NMR (MeOD) δ 25,7, 26,9, 28,5, 36,1, 55,0, 56,4, 59,7, 60,5, 77,1, 80,4, 103,0, 116,5, 127,0, 128,5, 147,7, 157,8, 159,6, 162,7, 166,4, 173,5, 174,9;
LC-MS m/e (M+H) 517.
P r z y k ł a d 48: sposób wytwarzania związku 48
Etap 8:
Do roztworu produktu według przykładu 48, etap 5 (45,8 mg, 0,089 mmola), chlorowodorku (1R-amino-2S-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (21,0 mg, 0,089 mmola) i DIEA (34,5 mg, 0,267 mmola) w DCM (1 ml) dodano HATU (44,0 mg, 0,116 mmola). Po wymieszaniu przez noc, mieszaninę reakcyjną przemyto 5% wodnym roztworem NaHCO3 (1 ml). Warstwę wodną ekstrahowano 2 x 2 ml DCM. Warstwę organiczną przemyto 5% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (1 ml) oraz solanką, osuszono nad MgSO4, zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych. Oczyszczanie prowadziło do utraty grupy zabezpieczającej N-Boc przy części P3 tert-leucyny:
1H NMR (MeOD) δ 1,07-1,12 (m, 2H), 1,14 (s, 2H), 1,14-1,16 (m, 2H), 1,17 (s, 9H) 1,20-1,30 (m, 3H), 1,45 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,56 (s, 1H), 1,92 (dd, J=8,20, 5,60 Hz, 1H), 2,25-2,31 (m, 1H), 2,39-2,45 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 2,76 (s, 3H), 2,93-2,97 (m, 1H), 3,94 (s, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,07 (s, 1H), 4,21 (d, J=3,97 Hz, 0,4H), 4,23 (d, J=3,97 Hz, 0,6H), 4,31 (m, 1H), 4,73 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1H), 5,15 (dd, J=10,38, 1,52 Hz, 1H), 5,32 (dd, J=17,1, 1,52 Hz, 1H), 5,71-5,78 (m, 1H), 6,11
PL 226 561 B1
113 (t, J=3,51 Hz, 1H), 7,46 (d, J=2,75 Hz, 1H), 7,67 (d, J=3,06 Hz, 0,4H), 7,69 (d, J=3,05 Hz, 0,6H), 7,82 (s, 0,6H), 7,84 (s, 0,4H).
P r z y k ł a d 49: sposób wytwarzania związku 49
Związek 49 wytworzono metodą opisaną dla otrzymywania związku 48, z tym wyjątkiem, że jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 46, etap 5 oraz chlorowodorek (1R-amino-2S-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego. Oczyszczanie metodą preparatywnej HPLC prowadziło do utraty grupy zabezpieczającej N-Boc przy części P3 tert-leucyny:
1H NMR (MeOD) δ 1,09 (m, 2H), 1,14 (d, J=3,97 Hz, 2H), 1,17 (s, 9H) 1,25 (m, 3H), 1,37 (m, 3H), 1,44 (dd, J=9,31, 5,65 Hz, 2H), 1,57 (s, 1H), 1,92 (dd, J=8,09, 5,65 Hz, 1H), 2,28 (dd, J=17,70, 8,55, 1H), 2,32 (m, 1H), 2,68 (dd, J=14,19, 7,78 Hz, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,06 (s, 3H), 4,08 (s, 1H), 4,22 (d, J=2,75 Hz, 1H), 4,70 (dd, J=9,77, 7,32 Hz, 1H), 5,15 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,32 (dd, J=17,40, 1,22 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,04 (m, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,37 (s, 1H).
P r z y k ł a d 50: sposób wytwarzania związku 50
Związek 50 wytworzono metodą opisaną dla otrzymywania związku 48, z tym wyjątkiem, że jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 45, etap 5 i chlorowodorek (1R-amino-2S-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego. Oczyszczanie metodą preparatywnej HPLC prowadziło do utraty grupy zabezpieczającej N-Boc przy części P3 tertleucyny:
1H NMR (MeOD) δ 1,10 (m, 2H), 1,14 (s, 1H), 1,15 (d, J=3,36 Hz, 1H), 1,17 (d, J=3,05 Hz, 9H), 1,22 (m, 1H), 1,27 (m, 2H), 1,46 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,56 (s, 1H), 1,93 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,29 (q, J=8,55 Hz, 1H), 2,48 (m, 1H), 2,78 (dd, J=13,89, 8,09 Hz, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,96 (s, 2H), 4,07 (s, 1H), 4,32 (d, J=2,14 Hz, 2H), 4,76 (d, J=7,02 Hz, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,86 (d, J=3,05 Hz, 1H),
114
PL 226 561 B1
5,32 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 6,24 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,45 (d, J=2,75 Hz, 1H), 7,52 (m, 3H), 7,61 (dd, J=9,16, 2,75 Hz, 1H), 7,96 (d, J=9,16 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 51: sposób wytwarzania związku 51
Mieszanina izomerów (1R,2S) i (1S,2R) w stosunku 1:1 przy części P1 cząsteczki Związek 51
Związek 51 wytworzono postępując zgodnie z etapami 1 oraz 5 do 8 przykładu 45 z tym wyjątkiem, że wprowadzono następujące modyfikacje:
Etap 1:
modyfikacje: jako substancje wyjściowe stosowano kwas 2-bromo-4,5-dimetoksybenzoesowy i trifluoroamidynę.
Produkt:
Dane: 1H NMR (DMSO) δ 3,92 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 7,33 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 13,40 (br s, 1H); 13C NMR (DMSO) 55,8, 56,1, 104,9, 108,7, 150,2, 155,0;
LC+MS m/e (MH+) 275.
Etap 2:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 51, etap 1, zamiast produktu według przykładu 45, etap 1.
Produkt:
Dane: 1H NMR (CDCl3) δ 1,42 (s, 3,6H), 1,44 (s, 5,4H), 2,42-2,49 (m, 1H), 2,67-2,73 (m, 1H),
3,37 (s, 1,2H), 3,78 (s, 1,8H), 3,97 (t, J=6,5 Hz, 1H), 4,02 (s, 2,4H), 4,04 (s, 3,6H), 4,48 (t, J=7,9 Hz, 0,6H), 4,60 (t, J=7,7 Hz, 0,4H), 5,86 (br s, 0,6H), 5,90 (br s, 0,4H), 7,27-7,29 (m, 1H), 7,38-7,44 (m, 1H);
13C NMR: (CDCI3) δ 8,2, 28,3, 35,7, 36,7, 52,1, 52,2, 52,4, 56,5, 57,8, 58,2, 75,5, 76,0, 80,7,
100,8, 107,6, 111,0, 119,7, 148,2, 150,2, 151,4, 153,8, 154,5, 156,4, 165,1, 172,7, 173,0;
LC-MS m/e (MH+) 502.
PL 226 561 B1
115
Etapy 3 i 4:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 51, etap 2, zamiast produktu według przykładu 45, etap 2.
Produkt:
Dane: 1H NMR (MeOD) δ 1,03 (s, 9H), 1,08 (s, 9H), 2,41-2,45 (m, 1H), 2,80-2,84 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,00 (s, 3H), 4,10-4,14 (m, 2H), 4,52 (d, J=11,6 Hz, 1H), 4,80 (t, J=8,7 Hz, 1H), 5,92 (br s, 1H), 7,35 (br s, 2H);
13C NMR (MeOD) δ 26,9, 28,4, 28,8, 35,7, 36,0, 52,8, 54,8, 56,9, 59,6, 60,7, 77,9, 80,3, 102,2,
107,9, 112,4, 120,3, 149,3, 153,2, 157,8, 158,3, 173,5;
LC-MS m/e (MH+) 615.
Etap 5:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 51, etap 4, zamiast produktu według przykładu 45, etap 4.
Produkt:
Dane: 1H NMR (MeOD) δ 1,03 (s, 9H), 1,09 (s, 9H), 2,44-2,49 (m, 1H), 2,80-2,84 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 4,01 (s, 3H), 4,10-4,24 (m, 3H), 4,50 (d, J=11,9 Hz, 1H), 4,76 (t, J=7,9 Hz, 1H), 5,93 (br s, 1H), 7,36 (br s, 2H);
13C NMR (MeOD) δ 26,9, 28,4, 28,8, 36,0, 36,1, 54,8, 56,9, 57,0, 60,6, 77,9, 80,3, 102,3, 108,0, 112,5, 120,3, 149,3, 151,3, 153,2, 158,2, 158,3, 166,7, 173,5;
LC-MS m/e (MH+) 601.
Etap 8:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 51, etap 5, zamiast produktu według przykładu 45, etap 5. Końcowy produkt, związek 51, oznacza mie116
PL 226 561 B1 szaniną izomerów; przy czym zmiana konfiguracji występuje przy winylocyklopropylowej części cząsteczki P1 (1R,2S/1S,2R, mieszanina 1:1).
Produkt:
Mieszanina izomerów (1R,2S) i (1S,2R) w stosunku 1:1 przy części P1 cząsteczki Związek 51
Dane: 1H NMR (DMSO) δ 0,23 (s, 4,5H), 0,23 (s, 4,5H), 0,35 (s, 4,5H), 0,36 (s, 4,5H), 0,45-0,59 (m, 8H), 0,63-0,66 (m, 1H), 1,04 (dd, J=8,2, 5,2 Hz, 1H), 1,10 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 1,47-1,53 (m, 1H), 1,58-1,61 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H) 2,95-3,01 (m, 1H), 3,17 (s, 1,5H), 3,18 (s, 1,5H), 3,22 (s, 3H), 3,37 (br s, 2H), 3,68 (q, J=5,9 Hz, 1H), 3,82 (q, J=8,6 Hz, 1H), 4,33-4,37 (m, 1H), 4,54 (t, J=16,5 Hz, 1H), 4,93 (q, J=8,9 Hz, 1H), 5,17 (d, J=15,9 Hz, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,58 (s, 1H);
13C NMR (DMSO) δ 12,8, 13,2, 13,7, 13,9, 19,5, 20,6, 21,1, 24,3, 25,6, 32,9, 33,1, 33,4, 33,6, 36,1, 39,7, 39,9, 51,8, 51,9, 52,4, 54,0, 54,2, 57,7, 57,7, 58,1, 58,3, 75,1, 75,3, 77,5, 84,1, 99,2, 105,2,
107,9, 109,5, 116,0, 116,1, 118,7, 123,9, 127,4, 131,5, 146,5, 148,6, 150,3, 155,1, 155,5, 163,7, 164,7, 168,2, 168,3, 170,7, 172,2;
LC-MS m/e (MH+) 815.
P r z y k ł a d 52: sposób wytwarzania związku 52
Związek 52 wytworzono metodą opisaną dla otrzymywania związku 48, z tym wyjątkiem, że jako substancję wyjściową stosowano produkt uzyskany według przykładu 51, etap 5 oraz chlorowodorek (1R-amino-2S-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego. Oczyszczanie metodą preparatywnej HPLC prowadziło do utraty grupy zabezpieczającej N-Boc przy części P3 tert-leucyny:
PL 226 561 B1
117 1H NMR (MeOD) δ 1,11 (m, 3H), 1,17 (s, 9H), 1,25 (m, 3H), 1,46 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,92 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,28 (q, J=8,95 Hz, 1H), 2,42 (m, 1H), 2,72 (dd, J=14,19, 7,17 Hz, 1H), 2,96 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 4,04 (m, 5H), 4,24 (m, 2H), 4,73 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1H), 5,15 (dd, J=10,53,
1,37 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 6,07 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,47 (s, 1H).
P r z y k ł a d 53: sposób wytwarzania związku 53
Etap 1:
Do roztworu (1R,2S/1S,2R, mieszanina 1:1) trifluorooctanu (1-amino-2-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (626 mg, 1,82 mmola) w DCM (17 ml) dodano i DIEA (555 mg, 4,29 mmola) w DCM (17 ml), HATU (754 mg, 1,98 mmola) i kwas (2S,4R)Fmoc-4-amino-1-boc-pirolidyno-2-karboksylowy (747 mg, 1,65 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 24 godziny, mieszaninę przemyto 1N HCl (10 ml) i 5% wodnym roztworem NaHCO3 (4 ml). Każdą warstwę wodną ekstrahowano DCM (25 ml). Połączone ekstrakty DCM osuszono nad MgSO4 i zatężono. Uzyskany brunatny lepki olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 95:5 DCM:MeOH), uzyskując żółte ciało stałe (822 mg, 75%-owa wydajność):
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,04-1,09 (m, 3H), 1,15-1,27 (m, 4H), 1,38-1,44 (m, 7H), 1,47 (s, 9H), 1,84 (dd, J=8,2, 5,2 Hz, 1H), 2,01-2,30 (m, 4H), 2,90-2,98 (m, 1H), 3,64-3,71 (m, 1H), 4,16-4,22
118
PL 226 561 B1 (m, 4H), 4,39 (bs, 2H), 5,13 (dd, J=10,7, 0,9 Hz, 1H), 3,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 7,31 (t, J=7,3 Hz, 3H), 7,38 (t, J=7,5 Hz, 3H), 7,64 (d, J=7,02 Hz, 3H), 7,79 (d, J=7,63 Hz, 3H);
LC-MS m/e (Na+MH+) 687.
Etap 2:
Produkt uzyskany według przykładu 53, etap 1 (500 mg, 0,752 mmola) potraktowano 50% TFA w DCM (10 ml). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 0,5 godziny, uzyskaną brunatną mieszaninę zatężono, uzyskując brunatne ciało stałe (489 mg, 84%-owa wydajność):
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,03-1,19 (m, 4H), 1,24-1,26 (m, 1H), 1,35 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,911,96 (m, 1H), 2,22-2,30 (m, 1H), 2,40 (bs, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,60 (bs, 1H), 4,21 (t, J=5,6 Hz, 2H), 4,47 (bs, 3H), 5,17 (d, J=9,2 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,64-5,67 (m, 1H), 7,31 (t, J=7,3 Hz, 3H), 7,39 (t, J=7,5 Hz, 3H), 7,63 (d, J=7,3 Hz, 2H), 7,80 (d, J=7,3 Hz, 2H);
LC-MS m/e (MH+) 565.
Etap 3:
Do roztworu produktu według przykładu 53, etap 2 (260 mg, 0,383 mmola) w DCM (4 ml) dodano DIPEA (218 mg, 1,69 mmola), HATU (165 mg, 0,422 mmola) i N-Boc-L-tBuGly (100 mg, 0,422 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 16 godzin, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono H2O (3 ml) i zakwaszono 1N HCl do pH=1. Warstwę wodną ekstrahowano DCM (2 x 15 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto 5% NaHCO3 (3 ml), solanką (5 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono. Uzyskany brunatny lepki olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 95:5 DCM:MeOH), uzyskując brunatne pianowate ciało stałe (281 mg, 94%-owa wydajność):
1H NMR (DMSO-d6) δ 0,96-1,08 (m, 4H), 1,05 (s, 9H), 1,15-1,26 (m, 2H), 1,35-1,38 (m, 5H), 1,42 (s, 9H), 1,85 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 2,07 (bs, 1H), 2,22 (q, J=8,7 Hz, 1H), 2,92-2,95 (m, 1H), 3,90 (bs, 1H), 4,20 (d, J=6,4 Hz, 3H), 4,29-4,39 (m, 5H), 5,13 (d, J=10,7, 1H), 5,31 (dd, J=18,0, 5,8 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 7,30 (t, J=7,3 Hz, 3H), 7,39 (t, J=7,3 Hz, 4H), 7,63 (dd, J=6,7, 2,8 Hz, 3H),
8,80 (d, J=7,63 Hz, 3H);
LC-MS m/z (MH+) 678.
Etap 4:
Produkt uzyskany według przykładu 53, etap 3 potraktowano 10% piperydyną w DMF (3,3 ml). Po wymieszaniu przez 14 godzin, rozpuszczalnik usunięto i uzyskany brunatny, lepki olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 95:5 DCM:MeOH) w celu oddzielenia czystego diastereomeru 1R,2S P1 o największej wartości współczynnika Rf w postaci jasnożółtego ciała stałego (31 mg). Z mieszaniny wydzielono inny izomer, którego nie użyto:
PL 226 561 B1
119
LC-MS m/z (MH+) 556.
Schemat 3
FmocHN
Związek 53
Etapy 5 i 6:
Do roztworu produktu według przykładu 53, etap 4 w DMF (2 ml) dodano poliwinylopirydynę (13 mg) i Fmoc-izotiocyjanian. Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 14 godzin, mieszaninę reakcyjną potraktowano piperydyną (172 mg, 2,02 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej jeszcze przez 6 godzin, po czym zatężono i suszono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem przez noc. Surową pozostałość rozpuszczono ponownie w DMF (2 ml), potraktowano 2-bromoacetofenonem i mieszano w temperaturze pokojowej przez jeszcze 14 godzin. Mieszaninę reakcyjną zatężono i uzyskaną pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 95:5 DCM:MeOH), uzyskując związek 53 w postaci jasnożółtego ciała stałego (21,9 mg, 50%-owa wydajność):
1H NMR (DMSO-d6) δ 0,87-0,92 (m, 1H), 1,05 (bs, 13H), 1,16-1,25 (m, 4H), 1,34-1,38 (m, 2H), 1,42 (s, 9H), 1,87 (t, J=6,6 Hz, 1H), 2,22-2,25 (m, 2H), 2,48 (t, J=10,7 Hz, 1H), 2,93 (bs, 1H), 3,04 (q, J=7,3 Hz, 1H), 3,30-3,31 (m, 2H), 3,43-3,49 (m, 1H), 4,01 (d, J=10,4 Hz, 1H), 4,07-4,12 (m, 1H), 4,27 (t, J=9,5 Hz, 1H), 4,44 (t, J=7,0 Hz, 1H), 4,58 (bs, 1H), 5,11 (d, J=10,1 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=16,8,
9,6 Hz, 1H), 5,73-5,78 (m, 1H), 6,69 (d, J=8,2 Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 7,25 (t, J=7,3 Hz, 1H), 7,35 (t, J=7,63 Hz, 2H), 7,82 (d, J=8,2 Hz, 2H);
LC-MS m/z (MH+) 715.
Metodę preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych dla związku 55 do 155 prowadzono w poniższych warunkach:
kolumna Waters Xterra Prep MS C18, 5 mm (co oznacza cząstki o wymiarze 5 mikronów), 30 mm x 100 mm rozpuszczalnik A: 10% MeOH, 90% H2O, 10 mM NH4OAc rozpuszczalnik B: 90% MeOH, 10% H2O, 10 mM NH4OAC szybkość przepływu 50 ml/minutę
Gradient: 0%B do 100%B w czasie 10 minut, przy czym 100%B utrzymywano przez 4 minuty
120
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 55: sposób wytwarzania związku 55
Schemat 1
Etap 1:
Do roztworu związku 11 (1,5 g, 2,10 mmola) w DCE (25 ml) dodano TFA (25 ml). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 15 minut, mieszaninę reakcyjną zatężono. Uzyskany czerwony lepki olej rozpuszczono ponownie w DCE (50 ml) i ponownie zatężono. Mieszaninę następnie ponownie rozpuszczono w DCM (15 mi) i potraktowano 1N roztworem HCi w Et2O (25 ml). Uzyskaną zawiesinę oziębiono w temperaturze 0°C, przesączono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem, przemyto Et2O i osuszono w piecu próżniowym, uzyskując produkt etapu 1 w postaci białego ciała stałego (1,4 g, 97%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,07-11,2 (m, 3H), 1,14 (t, J=4,12 Hz, 1H), 1,17 (s, 9H), 1,22 (dd, J=10,53, 4,43 Hz, 1H), 1,21-1,27 (m, 2H), 1,42 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,27 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,70 (dd, J=13,43, 6,71 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,09 (s, 1H), 4,14 (dd, J=12,21, 3,66 Hz, 1H), 4,32-4,35 (m, 1H), 4,69 (dd, J=10,53, 6,87 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,40, 1,22 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 5,90 (t, J=3,51 Hz, 1H), 7,24-7,27 (m, 1H), 7,29 (d, J=4,27 Hz, 1H), 7,39 (t, J=4,88 Hz, 1H), 7,90 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,19 (m, 1H), 9,22 (s, 1H).
Etap 2:
Do roztworu mieszaniny produktu uzyskanego według etapu 1, przykładu 55 (70,0 mg, 0,108 mmoia) i DIEA (41,8 mg, 0,323 moia) w DCM (2 mi) dodano bezwodnik octowy (33,0 mg, 0,323 mmoia). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 14 godzin, rozpuszczalnik usunięto i produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 55 (39,1 mg, 14%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,00-1,03 (m, 1H), 1,06 (s, 9H), 1,07-1,10 (m, 1H), 1,21-1,28 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,55, 5,49 Hz, 1H), 2,23 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,272,32 (m, 1H), 2,59 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,97 Hz, 1H), 4,35 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,51 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1H), 4,61 (dd, J=5,80, 3,05 Hz, 1H),
4,80 (d, J=4,27 Hz, 1H), 4,88 (d, J=3,96 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,38, 1,83 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,24,
1,37 Hz, 1H), 5,73-5,78 (m, 1H), 5,84 (t, J=3,66 Hz, 1H), 7,15 (dd, J=8,85, 2,44 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,06 (d, J=9,16 Hz, 1H);
PL 226 561 B1
121
LC-MS (czas retencji: 1,49 minuty),
MS m/z 656 (MH+).
P r z y k ł a d 56: sposób wytwarzania związku 56.
Związek 56 wytworzono według metody stosowanej dla związku 55, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano chlorek cyklopentanokarbonylu, z uzyskaniem związku 56 (18,0 mg, 24%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,00-1,03 (m, 1H), 1,05 (s, 9H), 1,06-1,10 (m, 2H), 1,24-1,27 (m, 2H), 1,25-1,61 (m, 9H), 1,80-1,83 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,22-2,31 (m, 2H), 2,582,65 (m, 2H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,10 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,35 (d, J=11,91 Hz, 1H), 4,52 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1H), 4,65 (d, J=9,46 Hz, 1H), 4,80 (d, J=5,49 Hz, 1H), 4,88 (d, J=5,19 Hz, 1H), 5,13 (dd, J=10,37, 1,83 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=16,80, 1,22 Hz, 1H), 5,73-5,78 (m, 1H), 5,84 (t, J=4,27 Hz, 1H), 7,11 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,05 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,71 minuty),
MS m/z 710 (MH+).
P r z y k ł a d 57: sposób wytwarzania związku 57
Związek 57 wytworzono według metody stosowanej dla związku 55, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano chlorek 2-etylobutyrylu, z uzyskaniem związku 57 (20,7 mg, 27%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,66 (t, J=7,32 Hz, 3H), 0,85 (t, J=7,32 Hz, 3H), 1,02-1,05 (m, 1H), 1,07 (s, 9H), 1,10-1,12 (m, 1H), 1,24-1,33 (m, 4H), 1,36-1,39 (m, 1H), 1,43 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,48-1,51 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,24, 5,19 Hz, 1H), 2,12-2,14 (m, 1H), 2,22 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,26-2,30 (m, 1H), 2,59 (dd, J=13,73, 6,71 Hz, 1H), 2,94-2,97 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,11 (dd, J=11,90,
122
PL 226 561 B1
3,66 Hz,1H), 4,40 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,50 (dd, J=10,68, 7,02 Hz, 1H), 4,75 (d, J=9,46 Hz, 1H), 4,81 (d, J=9,16 Hz, 1H), 4,89 (d, J=9,16 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,85 (t, J=3,66 Hz, 1H), 7,08 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,98 (d, J=9,16 Hz, 1H), 8,02 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,73 minuty),
MS m/z 713 (MH+).
P r z y k ł a d 58: sposób wytwarzania związku 58
według etapu ł przykładu 55
Do roztworu mieszaniny produktu uzyskanego według etapu 1, według przykładu 55 (70,0 mg, 0,108 mmola), DIEA (41,8 mg, 0,323 mmola) i kwasu cyklopropanooctowego (16,2 mg, 0,162 mola) w DCM (2 ml) dodano HATU (61,6 mg, 0,162 mmola). Po wymieszaniu mieszaniny reakcyjnej w temperaturze pokojowej przez noc, przemyto ją 5% wodnym roztworem NaHCO3 (1 ml). Warstwę wodną ekstrahowano 2 x 2 ml DCM. Połączone warstwy organiczne przemyto 5% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (2 ml) solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 58 (21,9 mg, 29%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,11-0,14 (m, 2H), 0,43-0,47 (m, 2H), 0,87-0,09 (m, 1H), 1,011,04 (m, 1H), 1,07 (s, 9H), 1,09-1,12 (m, 1H), 1,23-1,27 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,03 (d, J=7,32 Mz, 2H), 2,23 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,27-2,31 (m, 1H), 2,59 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,93 (m, 3H), 4,13 (dd, J=11,90, 3,97 Hz, 1H), 4,34 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1H), 4,66 (d, J=9,46 Hz, 1H), 4,81 (d, J=6,10 Hz, 1H), 4,89 (d, J=6,10 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,37, 1,52 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1H), 5,755,81 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,12 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,81 (d, J=9,46 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,06 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,63 minuty),
MS m/z 696 (MH+).
P r z y k ł a d 59: sposób wytwarzania związku 59.
Związek 59 wytworzono według metody stosowanej dla związku 58, wprowadzając następujące modyfikacje:
PL 226 561 B1
123 modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas metoksyoctowy z uzyskaniem związku (23,5 mg, 32%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 10,99-1,04 (m, 2H), 1,06 (s, 9H), 1,09-1,12 (m, 1H), 1,22-1,27 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,22 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,292,32 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,89, 6,87 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,35 (s, 3H), 3,70 (d, J=15,26 Hz, 1H), 3,84 (d, J=15,26 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,13 (dd, J=11,90, 1H), 4,32 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,54 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,81 (d, J=7,32 Hz, 1H), 4,89 (d, J=7,32 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,74-5,81 (m, 1H), 5,86 (t, J=3,36 Hz, 1H), 7,14 (dd, J=9,00, 2,59 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,26 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,89 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,04 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,54 minuty),
MS m/z 686 (MH+).
P r z y k ł a d 60: sposób wytwarzania związku 60.
Związek 60 wytworzono według metody stosowanej dla związku 58, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas (+)-metoksyoctowy, z uzyskaniem związku 60 (23,8 mg, 27%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,78 (d, J=7,02 Hz, 3H), 0,83-0,88 (m, 2H), 0,92 (t, J=7,17 Hz, 6H), 0,94-0,98 (m, 1H), 1,00-1,03 (m, 2H), 1,06 (s, 9H), 1,07-1,11 (m, 1H), 1,22-1,26 (m, 2H), 1,311,36 (m, 2H), 1,45 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,63-1,68 (m, 2H), 1,89 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,012,04 (m, 1H), 2,17-2,21 (m, 1H), 2,24 (q, J=9,00 Hz, 2H), 2,28-2,33 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,15-3,20 (m, 1H), 3,77 (d, J=15,26 Hz, 1H), 3,87 (d, J=15,26 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,32 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,56 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1H), 4,65 (d, J=9,77 Hz, 1H), 4,81 (d, J=5,80 Hz, 1H), 4,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 5,13 (dd, J=10,22, 1,68 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,09, 1,53 Hz, 1H), 5,75-5,79 (m, 1H), 5,85 (t, J=3,66 Hz, 1H), 7,14 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,26 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,52 (d, J=9,77 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,03 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,043 minuty),
MS m/z 810 (MH+).
P r z y k ł a d 61: sposób wytwarzania związku 61
Związek 61
124
PL 226 561 B1
Związek 61 wytworzono według metody stosowanej dla związku 58, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas (-)-metoksyoctowy z uzyskaniem związku 61 (26,4 mg, 30%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,78 (d, J=7,02 Hz, 3H), 0,82-0,84 (m, 1H), 0,88 (dd, J=8,39,
3,81 Hz, 1H), 0,91 (d, J=7,01 Hz, 3H), 0,92 (d, J=6,41 Hz, 3H), 0,94-0,99 (m, 2H), 1,00-1,03 (m, 2H), 1,06 (s, 9H), 1,08-1,10 (m, 1H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,30-1,37 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,62-1,68 (m, 2H), 1,89 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 1,98-2,02 (m, 1H), 2,13-2,16 (m, 1H), 2,24 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,28-2,32 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,08-3,13 (m, 1H), 3,63 (d, J=15,56 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,11 (dd, J=12,05, 3,81 Hz, 1H), 4,32 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,56 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 1H), 4,62 (d, J=9,46 Hz, 1H), 4,81 (d, J=6,41 Hz, 1H), 4,89 (d, J=6,72 Hz, 1H), 5,13 (dd, J=10,38, 1,83 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,09, 1,23 Hz, 1H), 5,76-5,80 (m, 1H), 5,85 (t, J=3,51 Hz, 1H), 7,14 (dd, J=9,00, 2,59 Hz, 1H), 7,20 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,26 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,52 (d, J=9,17 Hz, 1H), 7,89 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,04 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,05 minuty),
MS m/z 810 (MH+).
P r z y k ł a d 62: sposób wytwarzania związku 62
Związek 62 wytworzono według metody stosowanej dla związku 58, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas bicyklo[1.1.1]pentano-2-karboksylowy z uzyskaniem związku 62 (35,1, 45%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,03 (d, J=5,49 Hz, 1H), 1,06 (s, 9H), 1,08-1,11 (m, 3H), 1,231,29 (m, 3H), 1,37 (dd, J=7,02, 3,36 Hz, 13H), 1,46 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,65 (dd, J=9,77, 2,14 Hz, 1H), 1,69 (d, J=2,14 Hz, 1H), 1,72 (dd, J=7,32, 3,05 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,12 (dd, J=9,77, 3,05 Hz, 1H), 2,23 (d, J=8,85 Hz, 1H), 2,27-2,31 (m, 1H), 2,60 (t, J=6,87 Hz, 1H), 2,63 (d, J=1,83 Hz, 1H), 2,68 (d, J=7,63 Hz, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,23 (q, J=7,43 Hz, 2H), 3,70-3,75 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,11 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,35 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=10,53, 6,87 Hz, 1H), 4,71 (d, J=9,46 Hz, 1H), 4,79 (d, J=5,80 Hz, 2H), 4,87 (d, J=5,49 Hz, 2H), 5,13 (dd, J=10,38, 1,83 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,24, 1,37 Hz, 1H), 5,74-5,79 (m, 1H), 5,86 (t, J=3,20 Hz, 1H), 7,12 (dd, J=9,16, 2,44 H, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,72 (d, J=9,46 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,05 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,16 minuty),
MS m/z 708 (MH+).
PL 226 561 B1
125
P r z y k ł a d 63: sposób wytwarzania związku 63.
Związek 63 wytworzono według metody stosowanej dla związku 58, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas pirazyno-2-karboksylowy z uzyskaniem związku 63 (423, 54%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,00-1,04 (m, 3H), 1,05-1,09 (m, 1H), 1,10 (s, 9H), 1,15 (s, 1H), 1,18-1,22 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,17 (q, J=8,65 Hz, 1H), 2,37-2,42 (m, 1H), 2,64 (dd, J=13,73, 7,32 Hz, 1H), 2,91-2,95 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,93 (d, J=3,35 Hz, 1H), 4,13 (dd, J=11,90, 3,36 Hz, 1H), 4,46 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,61 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,80 (d, J=7,63 Hz, 1H), 4,88 (d, J=7,93 Hz, 1H), 5,09 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,77-5,83 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 6,85 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,08 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,90 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,57 (d, J=1,53 Hz, 1H), 8,73 (d, J=2,44 Hz, 1H), 8,81 (s, 1H).
P r z y k ł a d 64: sposób wytwarzania związku 64
Produkt uzyskany Związek 64 według etapu 1 przykładu 55
Do roztworu mieszaniny produktu uzyskanego według etapu 1, według przykładu 55 (70,0 mg, 0,108 mmola) i DIEA (41,8 mg, 0,323 mmola) w DCM (2 ml) dodano chloromrówczan benzylu (55,1 mg, 0,323 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 14 godzin, rozpuszczalnik usunięto i produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 64 (26,9 mg, 31%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,00 (d, J=2,14 Hz, 1H), 1,02 (d, J=5,80 Hz, 1H), 1,04 (s, 9H), 1,08-1,14 (m, 1H), 1,16 (d, J=6,71 Hz, 1H), 1,18-1,22 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,17-2,22 (m, 1H), 2,30-2,35 (m, 1H), 2,62 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H),
126
PL 226 561 B1
2,90-2,95 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 4,08 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 4,74 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,81 (d, J=6,10 Hz, 1H), 4,89 (d, J=5,79 Hz, 1H), 5,10 (d, J=9,16 Hz, 1H), 5,16 (s, 1H), 5,28 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,81 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,07 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,20 (d, J=7,32 Hz, 2H), 7,25 (t, J=5,65 Hz, 3H), 7,30-7,33 (m, 1H), 7,34-7,37 (m, 2H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,79 minuty),
MS m/z 748 (MH+).
P r z y k ł a d 65: sposób wytwarzania związku 65
Związek 65 wytworzono według metody stosowanej dla związku 64, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano chloromrówczan (+)-metylu z uzyskaniem związku 65 (28,8 mg, 36%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,72 (d, J=6,71 Hz, 3H), 0,80 (t, J=5,80 Hz, 6H), 0,87 (d, J=7,02 Hz, 4H), 0,90-0,95 (m, 6H), 0,98-1,02 (m, 5H), 1,05 (s, 9H), 1,07-1,12 (m, 2H), 1,18-1,23 (m, 2H), 1,32-1,38 (m, 3H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,46-1,48 (m, 1H), 1,63-1,71 (m, 5H), 1,85 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 1,89-1,93 (m, 1H), 2,00-2,03 (m, 1H), 2,15 (q, J=8,70 Hz, 1H), 2,34-2,38 (m, 1H), 2,61 (dd, J=13,73, 7,33 Hz, 1H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,73 (s, 2H), 3,92 (s, 3H), 4,10 (dd, J=11,60, 3,36 Hz, 1H), 4,33 (s, 1H), 4,41 (d, J=11,29 Hz, 1H), 4,46-4,52 (m, 1H), 4,54 (dd, J=9,76, 7,90 Hz, 1H), 4,81 (d, J=5,80 Hz, 1H), 4,89 (m, 1H), 5,08 (d, J=11,60 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,77-5,81 (m, 1H), 5,83 (d, J=3,97 Hz, 1H), 7,11 (dd, J=11,29, 1,83 Hz, 1H), 7,18 (d, J=1,83 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,06 minuty),
MS m/z 796 (MH+).
P r z y k ł a d 66: sposób wytwarzania związku 66.
Związek 66 wytworzono według metody stosowanej dla związku 64, wprowadzając następujące modyfikacje:
PL 226 561 B1
127 modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano chloromrówczan (-)-metylu z uzyskaniem związku 66 (26,9 mg, wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,35 (d, J=6,41 Hz, 1H), 0,51 (d, J=6,71 Hz, 2H), 0,68 (d, J=6,71 Hz, 1H), 0,73 (d, J=7,02 Hz, 2H), 0,77-0,82 (m, 4H), 0,88-0,98 (m, 10H), 1,0-1,03 (m, 2H), 1,05 (s, 9H), 1,09-1,18 (m, 3H), 1,25-1,29 (m, 1H), 1,3-1,41 (m, 3H), 1,60-1,71 (m, 3H), 1,82-1,89 (m, 3H), 2,00-2,04 (m, J=2,14 Hz, 1H), 2,10 (q, J=8,24 Hz, 1H), 2,39-2,43 (m, 1H), 2,61 (dd, J=14,04, 7,32 Hz, 1H), 2,87-2,91 (m, 1H), 3,73 (s, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,13 (dd, J=11,75, 3,51 Hz, 1H), 4,22-4,27 (m, 2H), 4,30 (s, 1H), 4,39 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,48-4,55 (m, 1H), 4,79 (d, J=5,19 Hz, 1H), 4,87 (d, J=4,27 Hz, 1H), 5,05 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,22 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,78-5,85 (m, 2H), 7,09 (dd, J=9,16, 1,83 Hz, 1H), 7,17 (d, J=1,83 Hz, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,05 minuty),
MS m/z 796 (MH+).
P r z y k ł a d 67: sposób wytwarzania związku 67.
Związek 67 wytworzono według metody stosowanej dla związku 64, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano diwęglan di-tert-amylu z uzyskaniem związku 67 (35,3 mg, 41%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,78 (t, J=7,17 Hz, 3H), 0,89-0,95 (m, 6H), 1,04 (s, 9H), 1,0051,09 (m, 3H), 1,15 (s, 1H), 1,22 (d, J=12,51 Hz, 6H), 1,40 (s, 2H) 1,42-1,46 (m, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,561,66 (m, 2H), 1,78 (q, J=7,63 Hz, 1H), 1,84 (q, J=7,53 Hz, 1H), 1,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 2,22 (d, J=8,55 Hz, 1H), 2,27-2,31 (m, 1H), 2,61 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,91-2,96 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,08 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,26 (d, J=9,16 Hz, 1H), 4,42 (d, J=11,29 Hz, 1H), 4,52 (t, J=7,93 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 6,57 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,09 (d, J=8,54 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,08 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,82 minuty),
MS m/z 728 (MH+).
P r z y k ł a d 68: sposób wytwarzania związku 68.
128
PL 226 561 B1
Związek 68 wytworzono według metody stosowanej dla związku 64, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano chloromrówczan 2,2,2-trichloro-1,1-dimetylu z uzyskaniem związku 68 (30,5 mg, 37%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,99 (s, 9H), 1,04 (s, 6H), 1,08-1,09 (m, 3H), 1,23-1,26 (m, 3H), 1,44 (s, 2H), 1,46 (d, J=5,80 Hz, 1H), 1,71 (s, 2H), 2,23-2,33 (m, 2H), 2,60-2,64 (m, 1H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,04-4,06 (m, 2H), 4,27 (d, J=9,16 Hz, 1H), 4,41 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,57 (d, J=10,98, 6,11 Hz, 1H), 5,14 (d, J=12,21 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,70 Hz, 1H), 5,75-5,80 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,10 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,26 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,90 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,95 minuty),
MS m/z 816 (MH+).
P r z y k ł a d 69: sposób wytwarzania związku 69
Do roztworu mieszaniny produktu uzyskanego według etapu 1, według przykładu 55 (102 mg, 0,149 mmola) i DIEA (48,2 mg, 0,373 mmola) w THF (2 ml) dodano węglan N,N'-disukcynoimidylu (57,1 mg, 0,223 mmola). Uzyskaną zawiesinę naświetlano mikrofalami w temperaturze 80°C przez 15 minut. Następnie dodano roztwór 1-metylocyklopentanolanu sodu w postaci rzadkiej zawiesiny, który wytworzono działając na roztwór 1-metylocyklopentanolu (149,2 mg, 1,49 mmola) o temperaturze 0°C w THF (1 ml) NaH (60% oleju, 59,6 mg, 1,49 mmola) przez 15 minut, w temperaturze pokojowej. Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 15 minut, reakcję zatrzymano nasyconym, wodnym roztworem chlorku amonu (3 ml) i ekstrahowano EtOAc (10 ml). Warstwę organiczną następnie przepuszczono przez kolumnę typu Celite Hydromatrix, zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 69 (49,0 mg, 44%):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,95-0,98 (m, 3H), 0,99-1,01 (m, J=12,51 Hz, 1H), 1,03 (s, 9H), 1,14-1,18 (m, 2H), 1,30 (s, 3H), 1,40-1,47 (m, 3H), 1,50-1,56 (m, 3H), 1,60-1,64 (m, 1H), 1,76-1,81 (m, 1H), 1,83-1,85 (m, 1H), 2,10-2,19 (m, 1H), 2,36-2,43 (m, 1H), 2,63 (dd, J=14,50, 7,17 Hz, 1H), 2,862,90 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,09 (d, J=12,51 Hz, 1H), 4,25 (d, J=1,53 Hz, 1H), 4,43 (d, J=10,99 Hz, 1H), 4,51-4,55 (m, 1H), 5,06 (d, J=11,60 Hz, 1H), 5,23 (d, J=16,78 Hz, 1H), 5,80-5,85 (m, J=12,67, 12,67 Hz, 2H), 7,09 (d, J=8,55 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,24 (d, J=5,49 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,87 minuty),
MS m/z 740 (MH+).
P r z y k ł a d 70: sposób wytwarzania związku 70
PL 226 561 B1
129
Związek 70 wytworzono według metody stosowanej dla związku 69, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano cyklopentanol z uzyskaniem związku 70 (85,1 mg, 40%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,98 (s, 1H), 1,00 (d, J=4,88 Hz, 1H), 1,03 (s, 9H), 1,06-1,10 (m, 2H), 1,24-1,29 (m, 3H), 1,36-1,40 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,31, 5,04 Hz, 2H), 1,57-1,62 (m, 5H), 1,691,73 (m, 2H), 1,88 (dd, J=8,09, 5,65 Hz, 1H), 2,22-29 (m, 2H), 2,59-2,62 (m, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,07 (dd, J=10,99, 2,44 Hz, 1H), 4,29 (s, 1H), 4,42 (dd, J=12,51, 1,53 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=9,77, 7,93 Hz, 1H), 4,68-4,71 (m, 1H), 4,81 (d, J=8,55 Hz, 1H), 4,89 (d, J=9,46 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,48 Hz, 1H), 5,73-5,78 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,12 (dd, J=9,15, 1,83 Hz, 1H), 7,20 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,27 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,81 minuty),
MS m/z 726 (MH+).
P r z y k ł a d 71: sposób wytwarzania związku 71.
Związek 71 wytworzono według metody stosowanej dla związku 69, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano cyklobutanol z uzyskaniem związku 71 (16,2 mg, 39%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,97 (s, 3H), 1,03 (s, 9H), 1,06-1,08 (m, 2H), 1,17-1,22 (m, 3H), 1,37-1,44 (m, 1H), 1,82-1,85 (m, 1H), 2,02-2,08 (m, 1H), 2,15-2,21 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,492,54 (m, 0,4H), 2,59-2,67 (m, 0,6H), 2,90-2,94 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,09 (dd, J=8,09, 4,73 Hz, 1H), 4,20 (d, J=10,68 Hz, 0,4H), 4,38 (d, J=10,68 Hz, 0,6H), 4,46 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 0,4H), 4,48-4,56 (m, 1H), 5,07-5,11 (m, 1H), 5,26 (d, J=17,24 Hz, 0,4H), 5,28 (d, J=17,24 Hz, 0,6H), 5,71-5,79 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,07 (dd, J=8,39, 2,90 Hz, 1H), 7,14 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,20 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,59 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (m, 1H), 8,00 (d, J=9,16 Hz, 0,4H), 8,07 (d, J=8,85 Hz, 0,6H);
LC-MS (czas retencji: 1,25 minuty),
MS m/z 712 (MH+).
P r z y k ł a d 72: sposób wytwarzania związku 72.
Związek 72
130
PL 226 561 B1
Związek 72 wytworzono według metody stosowanej dla związku 69, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano 2-fenylo-2-propanol z uzyskaniem związku (19,0 mg, 42%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,97 (m, 1H), 1,03 (s, 9H), 1,06-1,09 (m, 3H), 1,16-1,22 (m, 4H), 1,41-1,44 (m, 1H), 1,57 (s, 3H), 1,86 (t, J=7,80 Hz, 1H), 2,14-2,18 (m, 1H), 2,30-2,35 (m, 1H), 2,572,61 (m, 1H), 2,90-2,94 (m, 1H), 3,92 (d, J=4,27 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,04 (dd, J=10,99, 3,66 Hz, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,24 (d, J=10,99 Hz, 1H), 4,52 (s, 1H), 5,09 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,26 (d, J=14,95 Hz, 1H), 5,78-5,82 (m, 2H), 7,07-7,12 (m, 2H), 7,16-7,20 (m, 3H), 7,23 (d, J=5,19 Hz, 1H), 7,29 (d, J=7,02 Hz, 2H), 7,84 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,03 (d, J=9,46 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,84 minuty),
MS m/z 776 (MH+).
P r z y k ł a d 73: sposób wytwarzania związku 73.
Związek 73
Związek 73 wytworzono według metody stosowanej dla związku 69, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano 4-(trifluoroetylo)fenylodimetylokarbinol z uzyskaniem związku 73 (22,1 mg, 45%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,91 (s, 1H), 0, 97-1,00 (m, J=15,56 Hz, 4H), 1,04 (s, 9H), 1,071,10 (m, 2H), 1,16-1,20 (m, 3H), 1,30-1,31 (m, 1H),1,41 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,55 (d, J=7,32 Hz, 6H), 1,83-1,87 (m, 1H), 2,11-2,14 (m, 1H), 2,34-2,39 (m, 1H), 2,57-2,62 (m, 1H), 2,89-2,92 (m, J=11,60, 4,27 Hz, 1H), 3,92 (s, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,02-4,05 (m, 1H), 4,17 (s, 1H), 4,26 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,53 (t, J=8,85 Hz, 1H), 5,07 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,24 (d, J=18,01 Hz, 1H), 5,78-5,83 (m, 2H), 7,08 (d, J=7,02 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,22 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,45 (dd, J=13,74, 7,63 Hz, 3H), 7,60 (d, J=6,41 Hz, 1H), 7,67 (d, J=7,63 Hz, 1H), 7,84 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,02 (d, J=8,54 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,92 minuty),
MS m/z 844 (MH+).
P r z y k ł a d 74: sposób wytwarzania związku 74.
Produkt uzyskany Związek 74 według etapu l przykładu 55
PL 226 561 B1
131
Do roztworu mieszaniny produktu uzyskanego według etapu 1, według przykładu 55 (70,0 mg, 0,108 mmola) i DIEA (41,8 mg, 0,323 mmola) w DCM (2 ml) dodano izocyjanian t-butylu (32,0, 0,323 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez noc, mieszaninę reakcyjną zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 74 (42,3 mg, 55%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,96-1,00 (m, 1H), 1,04 (s, 9H) 1,08-1,10 (m, 3H), 1,19 (s, 9H) 1,22-1,31 (m, 2H), 1,30 (m, 1H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,202,29 (m, 2H), 2,61 (dd, J=14,04, 6,72 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,08 (dd, J=11,60, 3,97 Hz, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,47-4,52 (m, 2H), 4,81 (d, J=3,36 Hz, 1H), 4,88 (d, J=8,85 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,22, 1,68 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,09, 1,53 Hz, 1H), 5,72-5,76 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,08 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,12 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,70 min.),
MS m/z 713 (MH+).
P r z y k ł a d 75: sposób wytwarzania związku 75.
Związek 75
Związek 75 wytworzono według metody stosowanej dla związku 74, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano izocyjanian cyklopentylu z uzyskaniem związku 75 (38,5 mg, 49%):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,92 (d, J=7,63 Hz, 1H), 0,96 (s, 9H), 0,98-1,02 (m, 1H), 1,05 (s, 9H) 1,07-1,10 (m, 2H), 1,21-1,25 (m, 3H), 1,28-1,34 (m, 1H), 1,36-1,55 (m, 8H), 1,58-1,65 (m, 13H), 1,81 (m, 1H), 1,88 (m, 6H), 2,23 (dd, J=18,01, 8,85 Hz, 1H), 2,29 (m, 1H), 2,59 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,27 (d, J=1,83 Hz, 1H), 3,35 (d, J=1,53 Hz, 1H), 3,75 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,95 (d, J=6,41 Hz, 1H), 3,97 (s, 1H), 4,09 (m, 2H), 4,40 (s, 1H), 4,45 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,52 (dd, J=10,07, 7,02 Hz, 1H), 4,81 (d, J=7,02 Hz, 1H), 4,89 (d, J=7,02 Hz, 1H), 5,11 (m, 1H), 5,29 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,11 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,95 (m, 1H), 8,12 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,67 minuty),
MS m/z 725 (MH+).
P r z y k ł a d 76: sposób wytwarzania związku 76 .0
DSC,DIEA, THF,MW
Produkt uzyskany według etapu 1 przykładu 55
następnie NH2, Tf
132
PL 226 561 B1
Do roztworu mieszaniny produktu uzyskanego według etapu 1, według przykładu 55 (70 mg, 0,102 mmola) i DIEA (33,0 mg, 0,255 mmola) w THF (2 ml) dodano węglan N,N'-disukcynoimidylu (39,2 mg, 0,153 mmola). Uzyskaną zawiesinę naświetlano mikrofalami w temperaturze 80°C przez 15 minut. Następnie potraktowano tert-amyloaminą (88,9 mg, 1,02 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 15 minut, mieszaninę reakcyjną zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 76 (51 mg, 69%):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,76 (t, J=7,48 Hz, 4H), 0,97 (s, 1H), 1,04 (s, 9H), 1,13 (s, 6H), 1,22-1,25 (m, 2H), 1,41 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,53 (dd, J=13,89, 7,48 Hz, 1H), 1,58-1,62 (m, 1H), 1,87 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,20 (q, J=8,65 Hz, 1H), 2,27-2,31 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,73, 7,32 Hz, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,08 (dd, J=11,75, 3,81 Hz, 1H), 4,36 (s, 1H), 4,46 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,50 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,22, 1,37 Hz, 1H), 5,27 (dd, J=16,94, 1,07 Hz, 1H), 5,73-5,77 (m, 1H), 5,84 (t, J=3,51 Hz, 1H), 7,09 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H),
7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,11 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,753 minuty),
MS m/z 727 (MH+).
P r z y k ł a d 77: sposób wytwarzania związku 77
Związek 77 wytworzono według metody stosowanej dla związku 76, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano tert-butylometyloaminę z uzyskaniem związku 77 (160, 7 mg, 14%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,96-1,10 (m, 1H), 1,06 (s, 9H), 1,08-1,12 (m, J=5,80 Hz, 3H), 1,26 (s, 9H), 1,46 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,21 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,26-2,31 (m, 1H), 2,57-2,62 (m, 1H), 2,86 (s, 3H), 2,91-2,95 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,09 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,43 (s, 1H), 4,46 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,52 (dd, J=10,68, 7,02 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10, 22, 1,37 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,82 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,09 (dd, J=9,16, 2,14 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,76 minuty),
MS m/z 727 (MH+).
P r z y k ł a d 78: sposób wytwarzania związku 78.
PL 226 561 B1
133
Związek 78 wytworzono według metody stosowanej dla związku 76, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano chiorowodorek N,O-dimetyiohydroksyioaminy z uzyskaniem związku 78 (62,1 mg, 60%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,99 (t, J=6,10 Hz, 1H), 1,07 (s, 11H), 1,22-1,26 (m, J=3,97 Hz, 2H), 1,47 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,22 (d, J=8,54 Hz, 1H), 2,3-302,33 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,43, 7,02 Hz, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,93-2,96 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,34 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,44 (d, J=9,46 Hz, 1H), 4,54 (dd, J=10,53, 6,87 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,83 (m, 1H), 5,86 (t, J=3,97 Hz, 1H), 6,70 (d, J=9,77 Hz, 1H), 7,13 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,59 minuty),
MS m/z 701 (MH+).
P r z y k ł a d 79: sposób wytwarzania związku 79.
Związek 79 wytworzono według metody stosowanej dla związku 76, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano dietyloaminę z uzyskaniem związku 79 (56,5 mg, 54%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,03 (q, J=15,6 Hz, 4H), 1,06 (d, J=1,53 Hz, 9H), 1,05-1,10 (m, 3H), 1,13-1,23 (m, 4H), 1,46 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=7,93, 5,30 Hz, 1H), 2,17 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,32-2,36 (m, 1H), 2,60 (dd, J=14,04, 7,32 Hz, 1H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,16-3,24 (m, 4H), 3,92 (s, 3H), 4,14 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,37 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,51-4,55 (m, 2H), 5,09 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,55 (d, J=9,46 Hz, 1H), 5,79-5,84 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,11 (dd, J=8,85, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,08 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,68 minuty),
MS m/z 713 (MH+).
P r z y k ł a d 80: sposób wytwarzania związku 80
134
PL 226 561 B1
Związek 80 wytworzono według metody stosowanej dla związku 76, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano nasycony wodny roztwór chlorku amonu z uzyskaniem związku 76 (12,2 mg, 32%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,00-1,03 (m, 3H), 1,06 (s, 9H), 1,20-1,25 (m, 2H), 1,42 (dd, J=9,31, 5,34 Hz, 1H), 2,22 (d, J=9,77 Hz, 1H), 2,29-2,35 (m, 1H), 2,59 (dd, J=13,28, 6,87 Hz, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,92 (s, 1H), 4,14 (dd, J=11,75, 4,12 Hz, 1H), 4,38-4,43 (m, 1H), 4,51 (dd, J=9,92, 6,87 Hz, 1H), 5,11 (d, J=11,90 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,70 Hz, 1H), 5,72-5,79 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,15 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,75 Hz, 1H), 7,23 (d, Hz, 1H), 7,87 (d, J=7,87 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,43 minuty),
MS m/z 657 (MH+).
P r z y k ł a d 81: sposób wytwarzania związku 81
Związek 81 wytworzono według metody stosowanej dla związku 76, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano tert-oktyloaminę z uzyskaniem związku 81 (16,1 mg, 48%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,88 (s, 9H), 1,00 (d, J=9,77 Hz, 5H), 1,04 (s, 9H), 1,17 (s, 3H), 1,18-1,20 (m, 1H), 1,21 (s, 3H), 1,35 (d, J=2,44 Hz, 1H), 1,40-1,43 (m, 1H), 1,57 (d, J=14,95 Hz, 1H), 1,67 (d, J=14,65 Hz, 1H), 1,85 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,15 (d, J=8,24 Hz, 1H), 2,34-2,43 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,13, 7,02 Hz, 1H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,13 (dd, J=11,60, 3,97 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,50 (dd, J=9,77, 7,32 Hz, 1H), 5,07 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,24 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,81 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,09 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,92 minuty),
MS m/z 769 (MH+).
P r z y k ł a d 82: sposób wytwarzania związku 82
PL 226 561 B1
135
Związek 82 wytworzono według metody stosowanej dla związku 76, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano 1-(4-fluorofenylo)-2-metylo-2-propyloaminę z uzyskaniem 82 (14,8 mg, 42%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,88 (s, 9H), 1,00 (d, J=9,46 Hz, 6H), 1,04 (s, 9H), 1,17 (s, 3H), 1,21 (s, 3H), 1,32-1,37 (m, 2H), 1,39-1,43 (m, 1H), 1,57 (d, J=14,65 Hz, 1H), 1,67 (d, J=14,96 Hz, 1H), 1,82-1,86 (m, 1H), 2,15 (t, J=9,46 Hz, 1H), 2,33-2,43 (m, 2H), 2,58-2,62 (dd, J=14,50, 7,78 Hz, 1H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,97 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,43 (d, J=12,82 Hz, 1H), 4,49-4,52 (m, 1H), 5,24 (d, J=16,48 Hz, 1H), 5,76-5,82 (m, 1H), 5,83-5,85 (m, 1H), 7,09 (dd, J=9,00, 2,59 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H),
8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,40 minuty),
MS m/z 807 (MH+).
P r z y k ł a d 83: sposób wytwarzania związku 83
Związek 83 wytworzono według metody stosowanej dla związku 76, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kumyloaninę z uzyskaniem związku 83 (64,6 mg, 57%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,87-0,91 (m, 1H), 0,98 (d, J=9,46 Hz, 2H), 1,01 (s, 9H), 1,021,05 (m, 1H), 1,17-1,21 (m, 3H), 1,29 (s, 2H), 1,40 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,51 (d, J=3,05 Hz, 5H), 1,85 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,17 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,30-2,33 (m, 1H), 2,58 (dd, J=13,58, 7,48 Hz, 1H), 2,91-2,94 (m, 1H), 3,92 (d, J=2,14 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,05 (dd, J=11,60, 3,66 Hz, 1H), 4,32 (d, J=9,77 Hz, 1H), 4,51 (dd, J=9,92, 7,17 Hz, 1H), 5,09 (dd, J=11,59, 1,52 Hz, 1H), 5,27 (dd, J=16,71, 1,22 Hz, 1H), 5,74-5,78 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,05-7,09 (m, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H),
7,19 (d, J=7,33 Hz, 1H), 7,22 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,33 (d, J=7,63 Hz, 1H), 7,84 (d, J=5,80 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,76 minuty),
MS m/z 775 (MH+).
P r z y k ł a d 84: sposób wytwarzania związku 84
136
PL 226 561 B1
Do roztworu produktu według etapu 5, według przykładu 11 (77,0 mg, 0,136 mmola), DIEA (70,4 mg, 0,544 mola) i HATU (77,5 mg, 0,204 mmola) dodano Boc-MeIle-OH (43,4 mg, 0,177 mmola). Po wymieszaniu przez 14 godzin, mieszaninę reakcyjną przemyto 5% wodnym roztworem NaHCO3 (1 ml). Warstwę wodną ekstrahowano 2 x 2 ml DCM. Połączone warstwy organiczne przemyto 5% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (2 ml), solanką, osuszono nad MgSO4, zatężono i oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 97:3 DCM:MeOH), uzyskując związek 84 (68,4 mg, 69%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,89 (t, J=7,32 Hz, 3H), 0,94 (dd, J=5,95, 4,43 Hz, 3H), 1,07 (d, J=7,63 Hz, 3H), 1,13 (s, 5H), 1,16-1,20 (m, J=4,88 Hz, 2H), 1,23 (s, 3H), 1,28 (m, 1H), 1,34-1,38 (m, 1H), 1,41-1,47 (m, 1H), 1,55-1,60 (m, J=7,63 Hz, 1H), 1,87-1,91 (m, 1H), 2,22-2,26 (m, 2H), 2,362,38 (m, 1H), 2,56-2,62 (m, 1H), 2,81 (d, J=11,30 Hz, 2H), 2,94-2,99 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,05-4,12 (m, 2H), 4,48-4,57 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,32 (m, 1H), 5,75-5,82 (m, 1H), 5,84-5,88 (m, 1H), 7,09-7,13 (m, 1H), 7,16-7,20 (m, 1H), 7,23-7,27 (m, 1H), 7,88 (dd, J=5,95, 2,29 Hz, 1H), 8,04 (d, J=9,16 Hz, 0,6H), 8,09 (d, J=9,46 Hz, 0,4H);
LC-MS (czas retencji: 1,83 minuty),
MS m/z 728 (MH+).
P r z y k ł a d 85: sposób wytwarzania związku 85.
Związek 85 wytworzono według metody stosowanej dla związku 84, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-MeVal-OH z uzyskaniem związku 84 (72,1 mg, 74%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,84 (t, J=5,80 Hz, 3H), 0,96 (d, J=6,41 Hz, 3H), 1,08 (d, J=7,32 Hz, 2H), 1,13 (s, 6H), 1,16 (s, 4H), 1,18-1,21 (m, 1H), 1,23-1,29 (m, 1H), 1,44 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,88-1,92 (m, 1H), 2,24 (d, J=10,07 Hz, 1H), 2,32-2,39 (m, 2H), 2,58 (dd, J=13,89, 6,26 Hz, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,01 (dd, J=11,90, 3,36 Hz, 0,6H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 0,4H), 4,16 (d, J=11,29 Hz, 0,6H), 4,38 (d, J=10,99 Hz, 0,4H), 4,45 (d, J=10,68 Hz, 1H), 4,47 (d, J=10,69 Hz, 0,6H), 4,53 (dd, J=10,38, 7,02 Hz, 0,4H), 4,58 (dd, J=10,07, 7,02 Hz, 1H), 5,12 (d, J=4,28, 0,6H), 5,14 (d, J=4,27 Hz, 0,4H), 5,30 (d, J=7,32 Hz, 0,6H), 5,34 (d, J=7,32 Hz, 0,4H), 5,78-5,85 (m, 1H), 5,88 (t, J=3,05 Hz, 0,6H), 5,96 (t, J=3,97 Hz, 0,4H), 7,13 (dd, J=9,00, 2,29 Hz, 0,6H), 7,16 (dd, J=9,46, 2,44 Hz, 0,4H), 7,19 (m, 1H), 7,24 (d, J=6,10 Hz, 0,6H), 7,26 (d, J=6,10 Hz, 0,4H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,02 (d, J=9,16 Hz, 0,6H), 8,05 (d, J=9,16 Hz, 0,4H).
P r z y k ł a d 86: sposób wytwarzania związku 86
PL 226 561 B1
137
Związek 86 wytworzono według metody stosowanej dla związku 84, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-MeLeu-OH z uzyskaniem związku 85 (56,5 mg, 57%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,94-0,96 (m, 6H), 1,04-1,13 (m, 2H), 1,17 (s, 4,5H), 1,18 (s, 4,5H), 1,26-1,31 (m, 1H), 1,42 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,46-1,51 (m, 2H), 1,56-1,60 (m, 0,5H), 1,69-1,72 (m, 0,5H), 1,75-1,81 (m, 0,5H), 1,90 (q, J=7,50 Hz, 1H), 2,27 (dd, J=13,89, 7,78 Hz, 1H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,58 (dd, J=14,80, 7,48 Hz, 1H), 2,75 (s, 3H), 2,95-2,99 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,03 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,11-15 (m, 0,5H), 4,28 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,53 (t, J=8,50 Hz, 0,5H), 4,59 (t, J=8,55 Hz, 0,5H), 4,83-4,87 (m, J=6,41 Hz, 0,5H), 4,96 (m, 0,5H), 5,14 (dd, J=11,14, 4,73 Hz, 1H), 5,32 (dd, J=17,70, 6,41 Hz, 1H), 5,75-5,82 (m, 1H), 5,90 (s, 0,5H), 5,92 (s, 0,5H), 7,13-7,18 (m, 1H),
7,20 (s, 1H), 7,25-7,27 (m, 1H), 7,87 (t, J=4,40 Hz, 1H), 8,05 (d, J=8,85 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 87: sposób wytwarzania związku 87.
Związek 87 wytworzono według metody stosowanej dla związku 84, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-MeNle-OH z uzyskaniem związku 87 (82,3 mg, 83%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,90-0,96 (q, J=7,63 Hz, 3H), 1,05-1,10 (m, 2H), 1,18 (s, 4,5H)
1,20 (s, 4,5H), 1,24-1,30 (m, 3H), 1,31-1,38 (m, 1H), 1,42 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 2H), 1,72-1,81 (m, 2H), 1,88-1,92 (m, 1H), 2,22-2,29 (m, 1H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,58 (dd, J=13,89, 7,17 Hz, 1H), 2,72 (s, 3H), 2,94-2,99 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,02 (dd, J=9,77, 4,27 Hz, 1H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,35 Hz, 0,5H), 4,24 (dd, J=11,90, 0,6 Hz, 0,5H), 4,51-4,60 (m, 1H), 5,14 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,33 (dd, J=17,24, 4,73 Hz, 1H), 5,75-5,82 (m, 1H), 5,91 (s, 1H), 7,15 (dd, J=14,34, 7,63 Hz, 1H), 7,20 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (t, J=4,37 Hz, 1H), 8,05 (d, J=8,85 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 88: sposób wytwarzania związku 88
138
PL 226 561 B1
Związek 88 wytworzono według metody stosowanej dla związku 84, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-N-Me-NVa-OH z uzyskaniem związku (70,5 mg, 73%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,96 (d, J=6,41 Hz, 3H), 1,06-1,10 (m, 2H), 1,18 (s, 9H), 1,271,30 (m, 4H), 1,42 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,66-1,80 (m, 2H), 1,88-1,92 (m, 1H), 2,23-2,29 (m, 1H), 2,30-2,37 (m, 1H), 2,58 (dd, J=13,58, 7,17 Hz, 1H), 2,73 (s, 3H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,004,04 (m, 1H), 4,12 (d, J=12,82 Hz, 0,5H), 4,25 (d, J=12,21 Hz, 0,5H), 4,51-4,60 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,81 (m, 1H), 5,90 (s, 1H), 7,13-7,18 (m, 1H), 7,20 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 8,05 (d, J=9,16 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 89: sposób wytwarzania związku 89
Produkt uzyskany według etapu 5 przykładu 1L
Związek 89
Do roztworu produktu uzyskanego według etapu 5, według przykładu 11 (66,0 mg, 0,123 mmola), DIEA (63,7 mg, 0,492 mmola) i HATU (70,0 mg, 0,184 mmola) dodano kwas 2S-tert-butoksykarbonyloamino-3-hydroksy-3-metylomasłowy (34,0 mg, 0,147 mola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 14 godzin, mieszaninę reakcyjną przemyto 5% wodnym roztworem NaHCO3 (1 ml). Warstwę wodną ekstrahowano 2 x 2 ml DCM. Połączone warstwy organiczne przemyto 5% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (2 ml), solanką, osuszono nad MgSO4, zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 89 (36,1 mg, 41%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,07 (d, J=7,93 Hz, 2H), 1,18 (s, 1H), 1,20 (s, 9H), 1,24-1,27 (m, J=11,60 Hz, 3H), 1,30 (s, 3H), 1,43-1,48 (m, 10H), 1,59 (s, 1H), 1,65 (s, 1H), 1,87 (dd, J=8,24, 5,19 Hz, 1H), 2,24 (q, J=9,16 Hz, 1H), 2,33-2,36 (m, 1H), 2,63 (dd, J=12,97, 6,56 Hz, 1H), 2,94-2,99 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,93 (s, 1H), 4,12 (dd, J=11,60, 3,05 Hz, 1H), 4,27-4,31 (m, 1H), 4,54 (t, J=9,77 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,53, 1,37 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,79-5,83 (m, 1H), 5,85 (s, 1H),
7,11 (dd, J=8,55, 1,83 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,24 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,88 (m, 1H), 8,10 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,637 minuty),
MS m/z 716 (MH+).
P r z y k ł a d 91: sposób wytwarzania związku 91
//
HO
Związek 91
PL 226 561 B1
139
Związek 91 wytworzono według metody stosowanej dla związku 89, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-L-Thr-OH z uzyskaniem związku 91 (80,5 mg, 66%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,93 (dd, J=8,24, 2,14 Hz, 2H), 1,08-1,18 (m, 4H), 1,20 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,29 (s, 9H), 1,32 (dd, J=9,61, 5,04 Hz, 1H), 1,45 (d, J=4,27 Hz, 1H), 1,84 (dd, J=7,63, 5,19 Hz, 1H), 2,15 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,42-2,48 (m, 1H), 2,64 (dd, J=14,04, 7,63 Hz, 1H), 2,85-2,89 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,1-4,14 (m, 2H), 4,30 (d, J=4,88 Hz, 1H), 4,38 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,60 (t, J=8,55 Hz, 1H), 5,04 (dd, J=10,22, 1,68 Hz, 1H), 5,80-5,84 (m, 2H), 7,11 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,17 (d, J=1,83 Hz, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,560 minuty),
MS m/z 702 (MH+).
P r z y k ł a d 92: sposób wytwarzania związku 92
Związek 92
Związek 92 wytworzono według metody stosowanej dla związku 89, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-L-Thr(Me)-OH z uzyskaniem związku 92 (47,1 mg, 69%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,95 (d, J=4,27 Hz, 2H), 1,11-1,16 (m, 3H), 1,18 (d, J=6,10 Hz, 6H), 1,32 (s, 9H), 1,38 (dd, J=9,31, 5,04 Hz, 1H), 1,45 (s, 1H), 1,85 (dd, J=7,78, 5,04 Hz, 1H), 2,13 (d, J=9,15 Hz, 1H), 2,46-2,51 (m, 1H), 2,63 (dd, J=14,19, 7,78 Hz, 1H), 2,81-2,91 (m, 1H), 3,68-3,73 (m, 1H), 3,92 (s, 4H), 4,14 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,35 (d, J=5,80 Hz, 1H), 4,42 (d, J=11,29 Hz, 1H), 4,60 (t, J=8,70 Hz, 1H), 5,05 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,24 (dd, J=16,79, 0,92 Hz, 1H), 5,81-5,85 (m, 2H),
7,11 (dd, J=9,16, 0,92 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,55 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,660 minuty),
MS m/z 716 (MH+).
P r z y k ł a d 93: sposób wytwarzania związku 93
140
PL 226 561 B1
Związek 93 wytworzono według metody stosowanej dla związku 89, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-L-Thr(tBu)-OH z uzyskaniem związku (52,7 mg, 53%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,09 (dd, J=8,24, 2,44 Hz, 2H), 1,20-1,24 (m, 3H), 1,28 (s, 9H), 1,45 (s, 9H), 1,89 (dd, J=7,93, 5,19 Hz, 1H), 2,25 (q, J=8,34 Hz, 1H), 2,32-2,56 (m, 1H), 2,59 (dd, J=12,82, 6,41 Hz, 1H), 2,95-3,00 (m, 1H), 3,71 (s, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,93-3,99 (m, 1H), 4,10 (d, J=7,02 Hz, 1H), 4,15 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,22 (dd, J=6,10, 2,44 Hz, 2H), 4,40 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,54 (dd, J=10,01, 6,71 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,76-5,83 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 6,06 (d, J=9,46 Hz, 1H), 6,36 (d, J=7,02 Hz, 1H), 7,11 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,24 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,88 (m, 1H), 8,08 (d, J=9,16 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 94: sposób wytwarzania związku 94.
Związek 94 wytworzono według metody stosowanej dla związku 89, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas Boc-(2S,3S)-2-amino-3-metoksybutanowy z uzyskaniem związku 94 (150,2 mg, 80%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,04-1,13 (m, 3H), 1,17 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,20-1,24 (m, 2H), 1,27 (s, 9H), 1,44-1,48 (m, 2H), 1,86 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,65 Hz, 1H), 2,34-2,37 (m, 1H), 2,61 (dd, J=14,19, 7,17 Hz, 1H), 2,94-2,99 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,13 (dd, J=12,36, 3,81 Hz, 1H), 4,37 (dd, J=22,58, 10,99 Hz, 2H), 4,54 (dd, J=10,38, 7,63 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,77-5,82 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,12 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,25 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,673 minuty),
MS m/z 716 (MH+).
PL 226 561 B1
141
P r z y k ł a d 95: sposób wytwarzania związku 95
Etap 1:
Do mieszaniny H-allo-THr-OH (5,0 g, 41,98 mmola) i DIEA (10,9 g, 83,96 mmola) w DCM (150 ml) dodano diwęglan di-tert-butylu (13,7 g, 62,97 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 14 godzin, mieszaninę reakcyjną przemyto 3 x 100 ml DCM. Połączone warstwy organiczne osuszono nad MgSO4 i zatężono. Metodą LC/MS wykazano, że większość produktu pozostała w warstwie wodnej. Wodną warstwę zatężono. Produkt oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (SiO2, 90:10 DCM:MeOH), uzyskując Boc-allo-THr-OH;
LC-MS (czas retencji: 0,727 minuty),
MS m/z 242 (MNa+).
Etap 2:
Do roztworu produktu uzyskanego według etapu 5, według przykładu 11 (100,0 mg, 0,174 mmola), DIEA (67,6 mg, 0,522 mmola) i HATU (106,0 mg, 0,278 mmola) dodano produkt uzyskany według etapu 1 powyżej (57,3 mg, 0,262 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 3 godziny, mieszaninę reakcyjną przemyto 5% wodnym roztworem NaHCO3 (1 ml). Warstwę wodną ekstrahowano 2 x 2 ml DCM. Połączone warstwy organiczne przemyto 5% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (2 ml), solanką, osuszono nad MgSO4, zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 95 (39,1 mg, 32%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,02 (d, J=8,55 Hz, 1H), 1,18-1,23 (m, 3H), 1,25 (s, 9H), 1,38 (dd, J=9,15, 6,30 Hz, 1H), 1,84 (dd, J=7,93, 5,19 Hz, 1H), 2,19-2,24 (m, 1H), 2,38-2,43 (m, 1H), 2,65 (dd, J=14,19, 6,87 Hz, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,93 (s, 2H), 4,16-4,19 (m, 1H), 4,23 (d, J=8,24 Hz, 1H), 4,44 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,57-5,81 (m, 1H), 5,09 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,81 (m, 1H), 5,83-5,85 (m, 1H), 7,11 (d, J=10,38 Hz, 1H), 7,18 (d, J=1,83 Hz, 1H), 7,24 (d, J=6,41 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,11 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,583 minuty),
MS m/z 702 (MH+).
142
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 96: sposób wytwarzania związku 96
Związek 96
Związek 96 wytworzono według metody stosowanej dla związku 95, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje:
Etap 1:
Jako substancję wyjściową stosowano chlorowodorek kwasu (2S,3S)-2-amino-3-etoksybutanowego według etapu 1 z wytworzeniem kwasu Boc-(2S,3S)-2-amino-3-etoksybutanowego;
LC-MS (czas retencji: 1,067 minuty),
MS m/z 270 (M+Na+).
Etap 2:
Produkt uzyskany według etapu 1 następnie sprzężono taką samą metodą z produktem uzyskanym według etapu 5, według przykładu 11 z wytworzeniem związku 96 (55,3 mg, 44%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,94 (t, J=6,87 Hz, 1H), 0,97-1,03 (m, 2H), 1,08-1,11 (m, 2H), 1,13-1,15 (m, 2H), 1,17 (d, J=6,10 Hz, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,41-1,45 (m, 3H), 1,85 (dd, J=7,48, 5,34 Hz, 1H), 2,12-2,19 (m, 1H), 2,43-2,49 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,73, 6,80 Hz, 1H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,503,57 (m, 2H), 3,73-3,78 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,18 (d, J=8,85 Hz, 1H), 4,35 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,39 (d, J=8,55 Hz, 1H), 4,53 (t, J=7,78 Hz, 1H), 5,07 (d, J=9,16 Hz, 1H), 5,25 (d, J=18,01 Hz, 1H), 5,82 (t, J=9,85 Hz, 1H), 5,88 (t, J=9,80 Hz, 1H), 7,11 (d, J=5,19 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,743 minuty),
MS m/z 730 (MH+).
PL 226 561 B1
143
Związek 97 wytworzono według metody stosowanej dla związku 95, wprowadzając następujące modyfikacje:
Etap 1:
Jako substancję wyjściową stosowano H-allo-Thr(t-Eu)-OH według etapu 1 z wytworzeniem kwasu Boc-(2S,3S)-2-aminobutanowego;
LC-MS (czas retencji: 1,363 minuty),
MS m/z 298 (M+Na+).
Etap 2:
Produkt uzyskany według etapu 1 następnie sprzężono taką samą metodą z produktem uzyskanym według etapu 5, według przykładu 11 z wytworzeniem związku 97 (48,2 mg, 37%-owa wydajność:
LC-MS (czas retencji: 1,820 minuty),
MS m/z 758 (MH+).
P r z y k ł a d 99: sposób wytwarzania związku 99
Związek 99 wytworzono według etapu 1, przykładu 55, wprowadzając następujące modyfikacje: modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano związek 84 z uzyskaniem związku 99 (60,3 mg, 98%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,00 (q, J=7,12 Hz, 3H), 1,10-1,13 (m, 5H), 1,20-1,31 (m, 3H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,61-1,68 (m, 1H), 1,92 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,04-2,09 (m, 1H), 2,28 (q, J=8,55 Hz, 1H), 2,34-2,39 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,64-2,70 (m, 1H), 2,94-2,97 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,07-4,14 (dd, J=12,05, 3,81 Hz, 1H), 4,13 (d, J=6,10 Hz, 1H), 4,18 (d, J=5,80 Hz, 1H), 4,25 (d, J=12,21 Hz, 1H), 4,66-4,73 (m, 1H), 5,15 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,70-5,79 (m, 1H), 5,92 (t, J=3,66 Hz, 0,4H), 5,95 (t, J=3,66 Hz, 0,6H), 7,17 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,22
144
PL 226 561 B1 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=5,80, 3,36 Hz, 1H), 7,91 (dd, J=5,80, 4,27 Hz, 1H), 8,03 (d, J=8,85 Hz, 0,6H), 8,07 (d, J=9,16 Hz, 0,4H);
LC-MS (czas retencji: 1,33 minuty),
MS m/z 6,28 (MH+).
P r z y k ł a d 100: sposób wytwarzania związku 100
Związek 100
Do roztworu związku 94 (0,600 g, 0,838 mmola) w DCE (3 ml) dodano TFA (3 ml). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 15 minut, mieszaninę reakcyjną zatężono. Uzyskany lepki olej rozpuszczono ponownie w DCE (5 ml) i ponownie zatężono. Mieszaninę następnie ponownie rozpuszczono w DCM (2 ml) i potraktowano 1N roztworem HCl w Et2O (10 ml). Uzyskaną zawiesinę oziębiono do temperatury 0°C, przesączono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem, przemyto Et2O i osuszono w piecu próżniowym, uzyskując produkt, bis-chlorowodorek, w postaci białego ciała stałego (527,1 g, 91%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,08-1,15 (m, 2H), 1,21 (d, J=6,71 Hz, 4H), 1,28-1,33 (m, 1H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,91 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,28 (q, J=8,65 Hz, 1H), 2,34-2,37 (m, 1H), 2,68 (dd, J=13,12, 7,02 Hz, 1H), 2,81 (s, 3H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,96-4,00 (m, 1H), 4,16 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,27 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,59 (d, J=4,58 Hz, 1H), 4,69 (dd, J=10,07, 7,02 Hz, 1H), 5,14 (dd, J=10,53, 1,37 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 5,94 (t, J=3,66 Hz, 1H), 7,19 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,91 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,213 minuty),
MS m/z 616 (MH+).
P r z y k ł a d 101: sposób wytwarzania związku 101
Związek 101
Do roztworu mieszaniny związku 100 (80 mg, 0,116 mmola) i DIEA (31,5 mg, 0,244 mmola) w THF (2 ml) dodano węglan N,N'-disukcynoimidylu (44,6 mg, 0,174 mmola). Uzyskaną zawiesinę naświetlano mikrofalami w temperaturze 80°C przez 15 minut. Następnie potraktowano tertamyloaminą (84,8 mg, 1,16 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 15 minut, mieszaninę reakcyjną zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 101 (65,1 mg, 79%):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,03-1,08 (m, 3H), 1,16 (d, J=6,41 Hz, 3H), 1,19 (s, 9H), 1,211,25 (m, 2H), 1,27 (d, J=6,10 Hz, 1H), 1,45 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,85 (dd, J=8,24, 5,19 Hz, 1H), 2,23 (q, J=9,46 Hz, 1H), 2,34-2,41 (m, 1H), 2,61 (dd, J=14,34, 7,32 Hz, 1H), 2,94-2,97 (m, 1H), 3,583,63 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,15 (dd, J=12,05, 3,81 Hz, 1H), 4,39 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=9,92, 7,48 Hz, 1H), 5,11 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,77-5,83 (m, 1H), 5,86
PL 226 561 B1
145 (s, 1H), 7,12 (dd, J=9,00, 2,29 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,617 minuty),
MS m/z 715 (MH+).
P r z y k ł a d 102: sposób wytwarzania związku 102
Związek 102 wytworzono według metody stosowanej dla związku 101, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano tert-amyloaminę z uzyskaniem związku 102 (62,5 mg, 74%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,77 (t, J=7,48 Hz, 2H), 0,84 (t, J=7,48 Hz, 1H), 1,04-1,08 (m, 2H), 1,13 (d, J=1,22 Hz, 9H), 1,16 (d, J=6,41 Hz, 3H), 1,21 (s, 1H), 1,22-1,28 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,52-1,57 (m, 1H), 1,58-1,62 (m, 1H), 1,85 (dd, J=7,93, 5,19 Hz, 1H), 2,21-2,25 (m, 1H), 2,34-2,39 (m, 1H), 2,61 (dd, J=13,58, 7,17 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,59-3,64 (m, 1H), 4,15 (dd, J=11,75, 3,81 Hz, 1H), 4,38 (d, J=12,51 Hz, 1H), 4,50 (d, J=7,63 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=9,92, 7,78 Hz, 1H), 5,11 (d, J=9,77 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,77-5,83 (m, 1H), 5,86 (t, J=4,73 Hz, 1H), 7,12 (dd, J=8,85, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,24 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,690 minuty), MS m/z 729 (MH+).
P r z y k ł a d 103: sposób wytwarzania związku 103
Związek 103 wytworzono według metody stosowanej dla związku 101, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano cyklopentyloaminę z uzyskaniem związku 103 (56,4 mg, 67%-owa wydajność):
146
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,01-1,08 (m, 2H), 1,07 (d, J=6,10 Hz, 1H), 1,16 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,21-1,25 (m, 3H), 1,30-1,33 (m, 1H), 1,44 (dd, J=9,77, 5,19 Hz, 1H), 1,51-1,56 (m, 2H), 1,601,65 (m, 2H), 1,71-1,75 (m, 1H), 1,80-1,84 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,20-2,25 (m, 1H), 2,37-2,41 (m, 1H), 2,61 (dd, J=14,04, 7,32 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,60-3,65 (m, 1H), 3,75-3,80 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,17 (dd, J=12,05, 3,81 Hz, 1H), 4,37 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,55-4,59 (m, 2H), 5,10 (d, J=11,60 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,48 Hz, 1H), 5,78-5,83 (m, 1H), 5,85 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,13 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,607 minuty),
MS m/z 727 (MH+).
P r z y k ł a d 104: sposób wytwarzania związku 104
Do roztworu mieszaniny związku 100 (80 mg, 0,116 mmola) i DIEA (31,5 mg, 0,244 mmoia) w THF (2 ml) dodano węglan N,N'-disukcynoimidyiu (44,6 mg, 0,174 mmola). Uzyskaną zawiesinę naświetlano mikrofalami w temperaturze 80°C przez 15 minut. Następnie dodano roztwór cyklopentatlenku sodu w postaci rzadkiej zawiesiny, który wytworzono działając w temperaturze 0°C na roztwór cykiopentanoiu (110 mg, 1,28 mmoia) w THF (1 mi) NaH (60% oieju, 46,4 mg, 1,16 mmoia) przez minut. Po wymieszaniu przez 15 minut, reakcję zatrzymano nasyconym, wodnym roztworem chlorku amonu (1 ml) i ekstrahowano EtOAc (5 ml). Warstwę organiczną następnie przepuszczono przez kolumnę typu Celite Hydromatrix, zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 104 (38,2 mg, 45%):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,03-1,09 (m, 3H), 1,16 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,20-1,25 (m, 1H), 1,25-1,30 (m, J=10,22, 5,34 Hz, 1H), 1,40-1,45 (m, J=10,83, 3,81 Hz, 1H), 1,46 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,58-1,63 (m, 3H), 1,70-1,75 (m, 2H), 1,86 (dd, J=7,63, 5,49 Hz, 1H), 2,22-2,26 (m, 1H), 2,342,39 (m, 1H), 2,59-2,64 (m, 1H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,67 (dd, J=7,78, 6,56 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,13 (dd, J=10,83, 4,12 Hz, 1H), 4,37-4,42 (m, 1H), 4,56 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 4,71-4,76 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,31 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,80 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,13 (d, J=10,68 Hz, 1H), 7,19 (d, J=1,83 Hz, 1H), 7,25 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1, 697 minuty),
MS m/z 728 (MH+).
PL 226 561 B1
147
Do roztworu mieszaniny związku 100 (80,0 mg, 0,116 mmola) i DIEA (31,5 mg, 0,244 mmola) w DCM (2 ml) dodano diwęglan di-tert-amylu (57,1 mg, 0,232 mmola). Po wymieszaniu przez 14 godzin, rozpuszczalnik usunięto i produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 105 (62,5 mg, 74%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,79 (t, J=7,48 Hz, 3H), 1,04-1,08 (m, 3H), 1,17 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,19-1,23 (s, 3H), 1,24 (s, 3H), 1,39-1,43 (m, 1H), 1,46 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,60-1,65 (m, 2H), 1,86 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,22 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,35-2,40 (m, 1H), 2,61 (dd, J=14,04, 7,15 Hz, 1H), 2,94-3,00 (m, 1H), 3,64-4,00 (m, 1H), 3,92 (s, 4H), 4,14 (dd, J=11,90, 3,05 Hz, 1H), 4,35 (d, J=7,93 Hz, 1H), 4,40 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=9,31, 7,78 Hz, 1H), 5,11 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,79-5,83 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,12 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,86-7,90 (m, 1H), 8,09 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,740 minuty),
MS m/z 730 (MH+).
P r z y k ł a d 106: sposób wytwarzania związku 106
Związek 106 wytworzono według metody stosowanej dla związku 105, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano węglan pirydyn-2-ylo-2,2,2-trifluoro-1,1-dimetyloetylowy z uzyskaniem związku 106 (58,1 mg, 65%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,04-1,08 (m, 3H), 1,17 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,19-1,23 (m, 1H), 1,23-1,27 (m, 1H), 1,28 (s, 3H), 1,46 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 2H), 1,49 (s, 2H), 1,86 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,21 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,36-2,40 (m, 1H), 2,62 (dd, =13,74, 7,32 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 2H), 3,65-3,70 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,31 (d, J=8,24 Hz, 1H), 4,42 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,57 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 5,11 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,78-5,83 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,12 (dd, J=9,00, 2,29 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,89 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,85 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,770 minuty),
MS m/z 770 (M+)
P r z y k ł a d 107: sposób wytwarzania związku 107
Związek 107
148
PL 226 561 B1
Do roztworu produktu uzyskanego według etapu 3, przykładu 25 (100,0 mg, 0,116 mmola), DIEA (62,5 mg, 0,483 mmola) i HATU (92,0 mg, 0,242 mmola) dodano Boc-allo-Thr-OH (43,5 mg,
0,177 mmola). Po wymieszaniu przez 3 godziny, mieszaninę reakcyjną przemyto 5% wodnym roztworem NaHCO3 (1 ml). Warstwę wodną ekstrahowano 2 x 2 ml DCM. Połączone warstwy organiczne przemyto 5% wodnym roztworem kwasu cytrynowego (1 ml), solanką, osuszono nad MgSO4, zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 107 (62,5 mg, 52%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) 50,8-1,02 (m, 1H), 1,04-1,08 (m, 2H), 1,23-1,27 (m, 12H), 1,42 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,86 (t, J=6,26 Hz, 1H), 2,23-2,27 (m, 1H), 2,46-2,50 (m, 1H), 2,76 (dd, J=14,04, 6,71 Hz, 1H), 2,95-2,99 (m, 1H), 3,94-3,98 (m, 1H), 4,28 (d, J=7,32 Hz, 2H), 4,52 (d, J=12,51 Hz, 1H), 4,63 (t, J=9,00 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,31 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,77-5,83 (m, 1H), 6,09 (s, 1H), 7,36-7,41 (m, 1H), 7,47 (t, J=7,17 Hz, 3H), 7,52 (d, J=7,63 Hz, 1H), 7,70 (t, J=7,17 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,88 (d, J=8,24 Hz, 1H), 8,17 (d, J=7,93 Hz, 2H), 8,22 (d, J=7,63 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,937 minuty),
MS m/z 748 (MH+).
P r z y k ł a d 108: sposób wytwarzania związku 108
Związek 108 wytworzono według metody stosowanej dla 107, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas Boc-(2S,3S)-amino-3-metoksybutanowy z uzyskaniem związku 108 (75,1 mg, 51%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,80-1,02 (m, 4H), 1,18 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,28 (s, 9H), 1,44 (dd, J=9,77, 1,30 Hz, 1H), 1,45-1,50 (m, 1H), 1,85-1,90 (m, 1H), 2,14-2,18 (m, 1H), 2,55-2,59 (m, 1H), 2,72-2,76 (m, 1H), 2,91-2,95 (m, 1H), 3,34 (s, 3H), 3,65-3,69 (m, 1H), 4,32 (d, J=10,68 Hz, 1H), 4,40 (d, J=7,93 Hz, 1H), 4,46 (d, J=13,12 Hz, 1H), 4,60 (t, J=8,24 Hz, 1H), 5,07 (d, J=9,46 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,82-5,86 (m, 1H), 6,08 (s, 1H), 7,38 (dd, J=7,32, 6,10 Hz, 1H), 7,47 (t, J=7,02 Hz, 3H), 7,51 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,69 (t, J=6,56 Hz, 1H), 7,69 (t, J=6,56 Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,88 (d, J=7,63 Hz, 1H), 8,18 (d, J=8,24 Hz, 3H), 8,21 (d, J=9,16 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,973 minuty),
MS m/z 762 (MH+).
P r z y k ł a d 109: sposób wytwarzania związku 109
PL 226 561 B1
149
Związek 109 wytworzono według metody stosowanej dla związku 107, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano kwas Boc-(2S,3S)-amino-3-etoksybutanowy z uzyskaniem związku 109 (57,2 mg, 47%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,02-1,08 (m, 4H), 1,17 (d, J=6,10 Hz, 6H), 1,19 (s, 1H), 1,191,24 (m, 1H), 1,23-1,27 (m, J=3,97 Hz, 1H), 1,30 (s, 9H), 1,44 (dd, J=9,77, 5,50 Hz, 1H), 1,46 (s, 1H), 1,88 (dd, J=7,78, 5,95 Hz, 1H), 2,20-1,25 (m, 1H), 2,49-2,54 (m, 1H), 2,69-2,73 (m, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 3,53-3,57 (m, 2H), 3,75-3,80 (m, 1H), 4,34 (dd, J=11,75, 3,20 Hz, 1H), 4,42 (t, J=8,30 Hz, 2H), 4,57 (t, J=8,09 Hz, 1H), 5,11 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,78-5,83 (m, 1H), 6,09 (s, 1H), 7,38 (t, J=7,32 Hz, 1H), 7,47 (t, J=7,63 Hz, 2H), 7,52 (d, J=7,02 Hz, 1H), 7,70 (t, J=7,93 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,88 (d, J=7,93 Hz, 1H), 8,18 (d, J=7,32 Hz, 2H), 8,22 (d, J=8,24 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 2,030 minuty),
MS m/z /76 (MH+).
P r z y k ł a d 110: sposób wytwarzania związku 110
Związek 110 wytworzono według metody stosowanej dla związku 89, wprowadzając następujące modyfikacje:
modyfikacje: jako substancję wyjściową stosowano Boc-L-Thr(Bn)-OH z uzyskaniem związku 110 (49,8 mg, 48%-owa wydajność);
LC-MS (czas retencji: 1,857 minuty),
MS m/z 792 (MH+).
Część D:
P r z y k ł a d 120: sposób wytwarzania związku 120
150
PL 226 561 B1
Schemat 1
Etap 1:
Roztwór związku 23 (patrz przykład 23) (1,50 g, 2,19 mmola) w DCM (50 ml) i kwasu trifluorooctowego (50 ml) mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do uzyskania lepkiej pozostałości, a następnie rozpuszczono w 1,2-dichloroetanie i ponownie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując bis-trifluorooctan w postaci białawego, szklistego ciała stałego (wydajność ilościowa). Substancję bez oczyszczania stosowano bezpośrednio w następnym etapie.
Etap 2:
Do roztworu produktu według przykładu 120, etap 1 (118 mg, 0,146 mmola) w 1,2-dichloroetanie (3 ml) dodano chloromrówczan p-tolilu (32,4 mg, 0,190 mmola) i N,N-diizopropyloetyloaminę (94,5 mg, 0,731 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 72 godziny. Mieszaninę reakcyjną przemyto roztworem buforu o pH = 4 (3 x 3 ml) i popłuczyny ponownie ekstrahowano 1,2-dichloroetanem (3 ml). Fazy organiczne połączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt następnie rozpuszczono w MeOH i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych z uzyskaniem tytułowego związku (Związek 120) w postaci żółtego szklistego ciała stałego (64,2 mg, 61,1%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,06-1,10 (m, 3H), 1,12 (s, 9H), 1,24-1,28 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,31, 5,34 Hz, 1H), 1,89 (dd, J=7.93, 5,49 Hz, 1H), 2,21-2,28 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,62-2,66 (m, 1H), 2,93-2,99 (m, 1H), 4,12 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,42 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,57 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,76 (ddd, J=17,09, 9,77, 9,46 Hz, 1H), 5,87 (s, 1H), 6,79 (d, J=8,24 Hz, 2H), 7,07 (d, J=8,24 Hz, 2H), 7,30 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,40 (t, J=7,63 Hz, 1H), 7,68 (t, J=7,63 Hz, 1H), 7,79 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,93 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,17 (d, J=8,24 Hz, 1H);
MS m/z 718 (MH+).
PL 226 561 B1
151
P r z y k ł a d 121: sposób wytwarzania związku 121
Związek 121
Związek 121 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan fenylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 30 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu fenylu, otrzymano 89,0 mg produktu w postaci żółtego szklistego ciała stałego (50%-owa wydajność):
MS m/z 704 (MH+).
P r z y k ł a d 122: sposób wytwarzania związku 122
Związek 122
Związek 122 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan 4-fluorofenylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 33 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu 4-fluorofenylu, otrzymano 83,1 mg produktu w postaci lepkiego żółtego oleju (78,8%-owa wydajność):
MS m/z 722 (MH+).
152
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 123: sposób wytwarzania związku 123
Związek 123
Związek 123 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan 4-metoksyfenylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 35 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu 4-metoksyfenylu, otrzymano 70,2 mg produktu w postaci żółtego szklistego ciała stałego (65,4%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD): 1,06-1,10 (m, 3H), 1,11 (s, 9H), 1,24-1,28 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,89 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,31 (ddd, J=13,81, 10,30, 3,97 Hz, 1H), 2,62-2,66 (m, 1H), 2,94-2,98 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,60, 3,66 Hz, 1H), 4,42 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,57 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 6,80 (d, J=2,44 Hz, 4H), 7,30 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,42 (t, J=7,48 Hz, 1H), 7,69 (t, J=7,63 Hz, 1H), 7,80 (d, J=7,93 Hz, 1H), 7,93 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,18 (d, J=8,24 Hz, 1H);
MS m/z 734 (MH+).
P r z y k ł a d 124: sposób wytwarzania związku 124
Związek 124 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano ester 2-metoksyetylowy kwasu chlorometanowego.
PL 226 561 B1
153
Etap 2:
modyfikacje: użyto 26 mg (0,19 mmola) estru 2-metoksyetylowego kwasu chlorometanowego, otrzymano 87,4 mg produktu w postaci lepkiego żółtego oleju (87,2%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,96-1,02 (m, 3H), 1,05 (s, 9H), 1,16-1,18 (m, 2H), 1,40 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,85 (dd, J=7,93, 5,19 Hz, 1H), 2,15 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,40 (ddd, J=13,89, 10,07, 4,12 Hz, 1H), 2,65 (dd, J=13,58, 7,17 Hz, 1H), 2,90 (ddd, J=12,89, 8,16, 4,88 Hz, 1H), 3,27 (s, 3H), 3,36-3,44 (m, 2H), 3,81-3,84 (m, 1H), 3,92-3,96 (m, 1H), 4,12 (dd, J=11,60, 3,36 Hz, 1H), 4,44 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,57 (dd, J=9,46, 7,93 Hz, 1H), 5,07 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,25 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,80 (ddd, J=17,32, 9,77, 9,54 Hz, 1H), 5,87 (s, 1H), 7,32 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,32 Hz, 1H), 7,70 (t, J=7,48 Hz, 1H), 7,80 (d, J=7,93 Hz, 1H), 7,96 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,19 (d, J=8,24 Hz, 1H);
MS m/z 686 (MH+).
P r z y k ł a d 125: sposób wytwarzania związku 125
Związek 125 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan neopentylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 29 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu neopentylu, otrzymano 57,4 mg produktu w postaci żółtego szklistego ciała stałego (56,2%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,83 (s, 9H), 1,05 (d, J=2,44 Hz, 9H), 1,07-1,09 (m, 2H), 1,23-1,27 (m, 2H), 1,43-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,21-2,25 (m, 1H), 2,29-2,33 (m, 1H), 2,61-2,65 (m, 1H), 2,922,96 (m, 1H), 3,42 (d, J=10,07 Hz, 1H), 3,56 (d, J=10,07 Hz, 1H), 4,09-4,11 (m, 1H), 4,33 (d, J=9,16
Hz, 1H), 4,43 (d, J=11,29 Hz, 1H), 4,54-4,57 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 5,88 (s, 1H), 7,33 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,71 (t, J=6,87 Hz, 1H),
7,81 (d, J=7,93 Hz, 1H), 7,97 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,19 (d, J=7,63 Hz, 1H);
MS m/z 698 (MH+).
P r z y k ł a d 126: sposób wytwarzania związku 126
154
PL 226 561 B1
Związek 126 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan 2-fluoroetylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 24 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu 2-fluoroetylu, otrzymano 58,9 mg produktu w postaci żółtego szklistego ciała stałego (59,8%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,05 (d, J=2,14 Hz, 9H), 1,07-1,09 (m, 2H), 1,22-1,27 (m, 2H), 1,42-1,45 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,24 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,28-2,33 (m, 1H), 2,63 (dd, J=13,43, 6,41 Hz, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,92-4,10 (m, 3H), 4,31-4,37 (m, 2H), 4,42-4,46 (m, 2H), 4,54-4,57 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,71-5,79 (m, 1H), 5,88 (s, 1H), 7,33 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,55 (t, J=7,17 Hz, 1H), 7,71 (m, 1H), 7,81 (d, J=7,93 Hz, 1H), 7,96 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,19 (d, J=7,63 Hz, 1H);
MS m/z 674 (MH+).
P r z y k ł a d 127: sposób wytwarzania związku 127
Związek 127
Związek 127 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan 2-metoksyfenylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 35 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu 2-metoksyfenylu, otrzymano 97,6 mg produktu w postaci lepkiego żółtego oleju (91,0%-owa wydajność):
MS m/z 734 (MH+).
P r z y k ł a d 128: sposób wytwarzania związku 128
PL 226 561 B1
155
Związek 128 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan 2-(-)-(1R)-mentylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 42 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu (-)-(1R)-mentylu, otrzymano 69,1 mg produktu w postaci białego szklistego ciała stałego (61,7%-owa wydajność):
MS m/z 766 (MH+).
P r z y k ł a d 129: sposób wytwarzania związku 129
Związek 129 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 120, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chloromrówczanu p-tolilu stosowano chloromrówczan heksylu.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 31 mg (0,19 mmola) chloromrówczanu heksylu, otrzymano 66,7 mg produktu w postaci żółtego szklistego ciała stałego (64,1%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,87-0,99 (m, 5H), 1,05 (s, 9H), 1,07-1,09 (m, 2H), 1,22-1,23 (m, 6H), 1,431,48 (m, 3H), 1,88 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 2,44 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,28-2,33 (m, 1H), 2,63 (dd, J=14,34, 7,63 Hz, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,72 (dt, J=10,61, 6,60 Hz, 1H), 3,81-3,86 (m, 1H), 4,10 (dd, J=11,60, 3,36 Hz, 1H), 4,32 (d, J=8,85 Hz, 1H), 4,43 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=9,77, 7,32 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,76 (ddd, J=17,09, 10,07, 9,16 Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 7,33 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,54 (t, J=7,48 Hz, 1H), 7,69-7,72 (m, 1H), 7,81 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,97 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,20 (d, J=8,24 Hz, 1H);
MS m/z 712 (MH+).
P r z y k ł a d 130: sposób wytwarzania związku 130
156
PL 226 561 B1
Etap 1:
Roztwór związku 23 (patrz przykład 23) (1,50 g, 2,19 mmola) w DCM (50 ml) i kwas trifluorooctowy (50 ml) mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do uzyskania lepkiej pozostałości, a następnie rozpuszczono w 1,2-dichloroetanie i ponownie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując pożądany bistrifluorooctan w postaci białawego szklistego ciała stałego (wydajność ilościowa). Substancję bez oczyszczania stosowano bezpośrednio w następnym etapie.
Etap 2:
Mieszaninę produktu uzyskanego według etapu 1 (118 mg, 0,146 mmola), kwasu tertbutylooctowego (22 mg, 0,19 mmola), HATU (72 mg, 0,19 mmola) i N-metylomorfoliny (59 mg, 0,58 mmola) w 1,2-dichloroetanie mieszano przez 24 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną przemyto roztworem buforu o pH = 4 (3 x 3 ml) i popłuczyny ponownie ekstrahowano 1,2-dichloroetanem (3 ml). Fazy organiczne połączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt następnie rozpuszczono w MeOH i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując tytułowy związek (związek 130) w postaci słabo żółtego szklistego ciała stałego (43,4 mg, 43,5%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,82 (d, J=1,83 Hz, 9H), 1,06 (d, J=2,14 Hz, 9H), 1,07-1,10 (m, 2H), 1,221,28 (m, 2H), 1,43-1,46 (m, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 1,99 (d, J=1,83 Hz, 2H), 2,20-2,26 (m, 1H), 2,272,33 (m, 1H), 2,59-2,64 (m, 1H), 2,93-2,97 (m, 1H), 4,12-4,14 (m, 1H), 4,42 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,514,55 (m, 1H), 4,67 (dd, J=9,31, 1,98 Hz, 1H), 5,11-5,14 (m, 1H), 5,29 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 5,89 (d, J=1,83 Hz, 1H), 7,32 (dd, J=5,80, 2,14 Hz, 1H), 7,52-7,55 (m, 1H), 7,69-7,72 (m, 1H), 7,81 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,96 (dd, J=5,80, 1,83 Hz, 1H), 8,17 (d, J=8,24 Hz, 1H);
MS m/z 682 (MH+).
PL 226 561 B1
157
P r z y k ł a d 131: sposób wytwarzania związku 131
Związek 131 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 130, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast kwasu tert-butylooctowego stosowano kwas metoksyoctowy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 17 mg (0,19 mmola) kwasu metoksyoctowego, otrzymano 49,9 mg produktu w postaci słabo żółtego szklistego ciała stałego (52,0%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,05-1,08 (m, 11H), 1,24-1,26 (m, 2H), 1,45 (ddd, J=9,31, 5,34, 3,66 Hz, 1H), 1,88 (ddd, J=8,39, 5,19, 3,81 Hz, 1H), 2,21-2,27 (m, 1H), 2,29-2,35 (m, 1H), 2,60-2,64 (m, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 3,34 (d, J=3,66 Hz, 3H), 3,69 (dd, J=15,26, 3,66 Hz, 1H), 3,81-3,85 (m, 1H), 4,15 (dt, J=11,67, 3,62 Hz, 1H), 4,35 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,55 (ddd, J=10,30, 6,94, 1H), 4,66 (dd, J=9,61, 3,51 Hz, 1H), 5,11-5,14 (m, 1H), 5,28-5,32 (m, 1H), 5,73-5,81 (m, 1H), 5,90 (d, J=3,36 Hz, 1H), 7,33 (dd, J=5,65, 3,20 Hz, 1H), 7,54-7,58 (m, 1H), 7,69-7,73 (m, 1H), 7,80-7,82 (m, 1H), 7,95-7,97 (m, 1H), 8,15 (dd, J=8,39, 2,59 Hz, 1H);
MS m/z 656 (MH+).
P r z y k ł a d 132: sposób wytwarzania związku 132
158
PL 226 561 B1
Związek 132 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 130, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast kwasu tert-butylooctowego stosowano kwas metoksypropionowy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 20 mg (0,19 mmola) kwasu metoksypropionowego, otrzymano 50,0 mg produktu w postaci szklistego ciała stałego (51,1%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,06 (d, J=1,83 Hz, 9H), 1,07-1,09 (m, 2H), 1,23-1,27 (m, 2H), 1,44 (ddd, J=9,38, 5,26, 1,83 Hz, 1H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,21-2,27 (m, 1H), 2,29-2,33 (m, 2H), 2,40-2,46 (m, 1H), 2,59-2,64 (m, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 3,25 (d, J=1,83 Hz, 3H), 3,45-3,54 (m, 2H), 4,12-4,16 (m, 1H), 4,37 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,52-4,55 (m, 1H), 4,65 (dd, J=9,16, 1,83 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 5,89 (s, 1H), 7,33 (dd, J=5,65, 1,98 Hz, 1H), 7,54-7,58 (m, 1H), 7,69-7,73 (m, 1H), 7,81 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,96 (dd, J=6,10, 1,83 Hz, 1H), 8,18 (d, J=8,24 Hz, 1H);
MS m/z 670 (MH+).
P r z y k ł a d 133: sposób wytwarzania związku 133
Związek 133 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 130, z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast kwasu tert-butylooctowego stosowano kwas (S)-1,4-benzodioksano-2-karboksylowy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 35 mg (0,19 mmola) kwasu (S)-1,4-benzodioksano-2-karboksylowego, otrzymano 54,0 mg produktu w postaci słabo żółtego szklistego ciała stałego (49,5%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,83 (d, J=3,36 Hz, 9H), 1,05-1,08 (m, 2H), 1,20-1,25 (m, 1H), 1,26-1,31 (m, 1H), 1,45-1,49 (m, 1H), 1,86-1,90 (m, 1H), 2,21-2,25 (m, 1H), 2,28-2,34 (m, 1H), 2,59-2,65 (m, 1H), 2,90-2,94 (m, 1H), 4,12-4,17 (m, 2H), 4,32 (d, J=11,90 Hz, 1H) 4,35-4,39 (m, 1H), 4,55-4,61 (m, 3H), 5,11-5,14 (m, 1H), 5,28-5,32 (m, 1H), 5,75-5,83 (m, 1H), 5,90 (d, J=3,66 Hz, 1H), 6,80-6,89 (m, 3H), 7,03-7,07 (m, 1H), 7,32-7,34 (m, 1H), 7,55-7,58 (m, 1H), 7,68-7,72 (m, 1H), 7,80-7,82 (m, 1H), 7,96-7,98 (m, 1H), 8,15-8,18 (m, 1H);
MS m/z 746 (MH+).
P r z y k ł a d 134: sposób wytwarzania związku 134
PL 226 561 B1
159
Etap 1:
Mieszaninę produktu według przykładu 11, etap 5 (100 mg, 0,172 mmola), N-a-tertbutoksykarbonylo-L-fenyloglicyny (45,3 mg, 0,180 mmola), HATU (84,9 mg, 0,223 mmola) i N-metylomorfoliny (87,0 mg, 0,859 mmola) w DMF (1,0 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Mieszaninę oczyszczono bezpośrednio metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując 29,7 mg (23,6%-owa wydajność) związku 134 w postaci białego proszku:
1H NMR (CD3OD) δ 0,97-1,07 (m, 2H), 1,12-1,17 (m, 1H), 1,22-1,32 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,90 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,20-2,28 (m, 2H), 2,54 (dd, J=13,58, 6,56 Hz, 1H), 2,85-2,89 (m, J=8,24 Hz, 1H), 3,50 (d, J=10,99 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,11 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,63 (dd, J=9,46, 7,32 Hz, 1H), 5,13 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,47 (s, 1H), 5,74-5,84 (m, 2H), 7,167,19 (m, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,32-7,43 (m, 6H), 7,86 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,13 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 734 (MH+).
P r z y k ł a d 135: sposób wytwarzania związku 135
Związek 135 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 134 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast N-a-tert-butoksykarbonylo-L-fenyloglicyny użyto N-a-tert-butoksykarbonyloerytro-DL-3-metylofenyloalaninę. Związek 135 wytworzono z mieszaniny
160
PL 226 561 B1
N-a-tert-butoksykarbonyloerytro-DL^-metylofenyloalaniny i uzyskane dwa diastereomery oddzielono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych. Związek, który eluował najpierw z kolumny preparatywnej HPLC jest pojedynczym izomerem. Dokładna konfiguracja stereochemiczna przy β-metylofenyloalaninowej części cząsteczki jest nieznana.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 50,4 mg (0,180 mmola) N-a-tert-butoksykarbonyloerytro-DL-3-metylofenyloalaniny, otrzymano 29,7 mg produktu w postaci białego proszku (22,7%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,11 (d, J=7,93 Hz, 2H), 1,15 (d, J=6,10 Hz, 3H), 1,24-1,32 (m, 11H), 1,44 (dd, J=9,16, 5,19 Hz, 1H), 1,90-1,94 (m, 1H), 2,25-2,29 (m, 1H), 2,36 (t, J=13,28 Hz, 1H), 2,62 (dd, J=13,58, 7,17 Hz, 1H), 2,98-3,02 (m, 1H), 3,20-3,24 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 4,11 (dd, J=11,60, 3,05 Hz, 1H), 4,51 (d, J=10,68 Hz, 1H), 4,57 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 4,63 (d, J=12,21 Hz, 1H), 5,14 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,32 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,76-5,84 (m, 1H), 5,88 (s, 1H), 7,08 (dd, J=8,70, 1,68 Hz, 1H), 7,16-7,18 (m, 2H), 7,23-7,27 (m, 5H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=9,46 Hz, 1H);
MS m/z 762 (MH+).
P r z y k ł a d 136: sposób wytwarzania związku 136
Związek 136
Związek 136 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 134 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast N-a-tert-butoksykarbonylo-L-fenyloglicyny użyto N-a-tert-butoksykarbonyloerytro-DL-3-metylofenyloalaninę. Związek 136 wytworzono z mieszaniny N-tert-butoksykarbonyloerytro-DL-3-metylofenyloalaniny i uzyskane dwa diastereomery oddzielono metodą preparatywnej HPLC w układzie kolumny faz odwróconych. Związek, który eluował jako drugi z preparatywnej HPLC jest pojedynczym izomerem. Dokładna konfiguracja stereochemiczna przy β-metylofenyloalaninowej części cząsteczki jest nieznana.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 50,4 mg (0,180 mmola) N-a-tert-butoksykarbonyloerytro-DL^-metylofenyloalaniny, otrzymano 26,3 mg produktu w postaci białego proszku (20,1%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,04 (s, 1H), 1,13 (d, J=6,71 Hz, 3H), 1,12-1,17 (m, 2H), 1,30 (s, 9H), 1,331,36 (m, 1H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=7,78, 5,34 Hz, 1H), 2,29 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,36 (ddd, J=13,81, 9,99, 4,27 Hz, 1H), 2,54 (dd, J=13,58, 7,17 Hz, 1H), 3,00-3,04 (m, 1H), 3,05-3,08 (m, 1H), 3,80 (d, J=11,90 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,10 (dd, J=12,05, 3,81 Hz, 1H), 4,53-4,57 (m, 1H), 4,59 (d, J=8,24 Hz, 1H), 5,14 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,34 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,78-5,85 (m, 2H), 6,75 (t, J=7,32 Hz, 1H), 7,03 (t, J=7,48 Hz, 2H), 7,12 (s, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,19 (dd, J=9,31, 1,68 Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,28 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,03 (d, J=8,85 Hz, 1H);
MS m/z 762 (MH+).
PL 226 561 B1
161
P r z y k ł a d 137: sposób wytwarzania związku 137
Etap 1:
Mieszaninę produktu według przykładu 11, etap 5 (100 mg, 0,172 mmola), estru 4-benzylowego kwasu N-a-tert-butoksykarbonylo-L-asparaginowego (59,5 mg, 0,180 mmola), HATU (84,9 mg, 0,223 mmola) i N-metylomorfoliny (87,0 mg, 0,859 mmola) w DCM (3,0 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin. Mieszaninę reakcyjną przemyto roztworem buforu o pH = 4 (3 x 3 ml), i popłuczyny ponownie ekstrahowano DCM (3 ml). Fazy organiczne połączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt następnie rozpuszczono w MeOH i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 137 w postaci lekko białawego szklistego ciała stałego (26,0 mg, 18,8%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,95-1,01 (m, 2H), 1,16 (s, 9H), 1,22-1,29 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=7,93, 5,19 Hz, 1H), 2,26 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,32-2,37 (m, 1H), 2,61 (dd, J=13,73, 7,32 Hz, 1H), 2,66 (dd, J=16,48, 6,10 Hz, 1H), 2,89 (ddd, J=12,67, 8,09, 4,88 Hz, 1H), 3,05 (dd, J=16,63, 8,39 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,04-4,07 (m, 1H), 4,47 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,52-4,56 (m, 1H), 4,75 (dd, J=8,24, 6,41 Hz, 1H), 5,12-5,14 (m, 1H), 5,14 (s, 2H), 5,31 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,82
162
PL 226 561 B1 (m, 2H), 7,12 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,31-7,33 (m, 1H),
7,36 (t, J=7,32 Hz, 2H), 7,39 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 806 (MH+).
P r z y k ł a d 138: sposób wytwarzania związku 138
Związek 138 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 137 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast estru 4-benzylowego kwasu N-a-tert-butoksykarbonylo-L-asparaginowego użyto ester 4-metylowy kwasu N-tert-butoksykarbonylo-L-asparaginowego.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 45,5 mg (0,180 mmola) estru 4-metylowego kwasu N-tert-butoksykarbonyloL-asparaginowego, otrzymano 93,5 mg produktu w postaci białawego szklistego ciała stałego (74,6%owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,07-1,09 (m, 2H), 1,17 (s, 9H), 1,20-1,29 (m, 2H), 1,41-1,44 (m, 1H), 1,841,86 (m, 1H), 2,26 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,33-2,38 (m, 1H), 2,58-2,64 (m, 2H), 2,92-3,02 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 4,15 (dd, J=11,44, 2,29 Hz, 1H), 4,49-4,56 (m, 2H), 4,72-4,76 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,32 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,74-5,82 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 7,12 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=5,80, 0,92 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,85 Hz, 1H);
MS m/z 730 (MH+).
P r z y k ł a d 139: sposób wytwarzania związku 139
PL 226 561 B1
163
Związek 139 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 137 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast estru 4-benzylowego kwasu N-a-tertbutoksykarbonylo-L-asparaginowego użyto ester 4-tert-butylowy kwasu N-tert-butoksykarbonylo-Lasparaginowego.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 52,2 mg (0,180 mmola) estru 4-tert-butylowego kwasu N-tert-butoksykarbonylo-L-asparaginowego, otrzymano 125 mg produktu w postaci białawego szklistego ciała stałego (99,8%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,08-1,10 (m, 2H), 1,17 (s, 9H), 1,21-1,29 (m, 2H), 1,46 (s, 10H), 1,82 (dd,
J=7,78, 5,34 Hz, 1H), 2,26 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,51 (dd, J=16,33, 7,17 Hz, 1H),
2,63 (dd, J=14,04, 7,02 Hz, 1H), 2,89 (dd, J=16,48, 7,63 Hz, 1H), 2,92-2,98 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,15 (dd, J=11,60, 3,05 Hz, 1H), 4,50-4,57 (m, 2H), 4,70-4,75 (m, 1H), 5,13 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H),
5,32 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,76-5,83 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 7,13 (dd, J=8,85, 1,53 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 772 (MH+).
P r z y k ł a d 140: sposób wytwarzania związku 140
Związek 138 (50,0 mg, 0,0685 mmola) rozpuszczono w mieszaninie THF (1 ml), MeOH (1 ml) i 1,0M wodnym roztworze NaOH (0,137 ml, 0,137 mmola). Po upływie 3 godzin, mieszaninę reakcyjną zobojętniono przez dodanie 1,0M wodnego roztworu HCl (0,137 ml, 0,137 mmola). Surową mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, następnie dodano roztwór buforu o pH = 4 (3 ml) oraz DCM (3 ml) i mieszaninę wytrząsano. Warstwy oddzielono i warstwę wodną następnie ekstrahowano DCM (2 x 1 ml). Fazy organiczne połączono, osuszono nad bezwodnym MgSO4, odsączono i zatężo164
PL 226 561 B1 no pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 48,0 mg (97,9%-owa wydajność) związku 140 w postaci białawego szklistego ciała stałego:
1H NMR (CD3OD) δ 1,04-1,07 (m, 2H), 1,17 (s, 9H), 1,22-1,25 (m, 2H), 1,38 (dd, J=9,31, 5,34 Hz, 1H), 1,78 (dd, J=7,78, 5,34 Hz, 1H), 2,30 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,37-2,42 (m, 1H), 2,48 (dd, J=15,87, 4,58 Hz, 1H), 2,72 (dd, J=13,12, 7,63 Hz, 1H), 2,88 (dd, J=15,72, 10,53 Hz, 1H), 2,90-2,95 (m, 1H),
3,92 (s, 3H), 4,21 (dd, J=11,44, 2,90 Hz, 1H), 4,57 (t, J=8,70 Hz, 1H), 4,62-4,65 (m, 2H), 5,10 (d, J=10,68 Hz, 1H), 5,34 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,69-5,76 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,10 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,23 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,85 Hz, 1H);
MS m/z 716 (MH+).
P r z y k ł a d 141: sposób wytwarzania związku 141
PL 226 561 B1
165
Etap 1:
Produkt uzyskany według przykładu 55, etap 1 (65 mg, 0,0947 mmola), węglan N,N'-disukcynoimidylu (41,0 mg, 0,142 mmola) i N,N-diizopropyloetyloaminę (30,6 mg, 0,237 mmola) połączono z bezwodnym THF (1 ml) i uzyskaną zawiesinę ogrzewano w temperaturze 80°C w reaktorze mikrofalowym przez 15 minut. Po oziębieniu do temperatury pokojowej, surową mieszaninę stosowano bezpośrednio w następnym etapie.
Etap 2:
Surową mieszaninę reakcyjną uzyskaną według etapu 1 potraktowano mieszaniną chlorowodorku estru metylowego L-waliny (159 mg, 0,947 mmola) i N,N-diizopropyloetyloaminy (122 mg, 0,947 mmola) w bezwodnym THF (2 ml). Uzyskaną mieszaninę reakcyjną mieszano przez 18 godzin w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość rozpuszczono w DCM (2 ml) i przemyto roztworem buforu o pH = 4 (3 x 2 ml). Popłuczyny buforu połączono i ponownie ekstrahowano DCM (2 ml). Połączone fazy DCM zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskaną pozostałość rozpuszczono w MeOH i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując 38,1 mg (52,2%-owa wydajność) związku 141 w postaci białego proszku:
1H NMR (CD3OD) δ 0,83 (dd, J=6,87, 3,81 Hz, 6H), 1,06 (s, 11H), 1,21-1,26 (m, 2H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 1,95-2,02 (m, 1H), 2,21 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,29 (ddd, J=13,89, 9,92, 4,27 Hz, 1H), 2,60 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,91-2,97 (m, 1H), 3,67 (s, 3H),
3,93 (s, 3H), 4,00 (d, J=5,49 Hz, 1H), 4,09 (dd, J=11,90, 3,97 Hz, 1H), 4,40-4,43 (m, 2H), 4,52 (dd, J=10,07, 7,02 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1H), 5,75 (ddd, J=17,17, 10,15, 9,00 Hz, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,11 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H),
7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,85 Hz, 1H);
MS m/z 771 (MH+).
P r z y k ł a d 142: sposób wytwarzania związku 142
Związek 142 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru metylowego D-waliny.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 159 mg (0,947 mmola) chlorowodorku estru metylowego D-waliny, otrzymano 23,0 mg produktu w postaci białego proszku (31,5%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,88 (pd, J=13,89, 6,87 Hz, 6H), 1,06 (s, 9H), 1,07-1,09 (m, 2H), 1,23-1,27 (m, 2H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,01-2,07 (m, 1H), 2,23 (q, J=9,05 Hz, 1H), 2,31 (ddd, J=14,11, 9,99, 4,27 Hz, 1H), 2,63 (dd, J=13,89, 7,17 Hz, 1H), 2,93-2,98 (m, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 4,03 (d, J=5,19 Hz, 1H), 4,09 (dd, J=11,75, 3,81 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,48-4,54 (m, 2H), 5,12 (dd, J=10,38, 1,22 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,24, 1,07 Hz, 1H), 5,70-5,77 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,22 (dd, J=9,00, 2,59 Hz, 1H), 7,25 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,35 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,87 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,16 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 111 (MH+).
166
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 143: sposób wytwarzania związku 143
Związek 143 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 137 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast estru 4-benzylowego kwasu N-a-tert-butoksykarbonylo-L-asparaginowego stosowano N-tert-butoksykarbonylo-L-cykloheksyloglicynę.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 46,2 mg (0,180 mmola) N-tert-butoksykarbonylo-L-cykloheksyloglicyny, otrzymano 93,9 mg w postaci białego proszku (73,8%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,04-1,08 (dd, J=7,78, 2,29 Hz, 4H), 1,19-1,26 (m, 4H), 1,25 (s, 9H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,63-1,82 (m, 7H), 1,88 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,22 (q, J=9,05 Hz, 1H), 2,32-2,37 (m, 1H), 2,59 (dd, J=13,58, 6,87 Hz, 1H), 2,91-2,96 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,05 (dd, J=11,75, 3,20 Hz, 1H), 4,09 (d, J=8,85 Hz, 1H), 4,47 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=10,22, 7,17 Hz, 1H), 5,11 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,79 (ddd, J=16,86, 9,92, 9,54 Hz, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,10 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,17 (d, J=1,53 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,85 Hz, 1H);
MS m/z 740 (MH+).
P r z y k ł a d 144: sposób wytwarzania związku 144
PL 226 561 B1
167
Związek 144 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru metylowego glicyny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu, 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 183 mg (1,46 mmola) chlorowodorek estru metylowego glicyny, 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 56,3 mg produktu w postaci białego proszku (52,9%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,01-1,04 (m, 2H), 1,05 (s, 9H), 1,17-1,21 (m, 2H), 1,40 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,85 (dd, J=7,78, 5,34 Hz, 1H), 2,18 (q, J=8,55 Hz, 1H), 2,33 (ddd, J=13,89, 9,92, 4,27 Hz, 1H), 2,61 (dd, J=13,73, 7,32 Hz, 1H), 2,89-2,94 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,69-3,77 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 4,10 (dd, J=11,75, 3,81 Hz, 1H), 4,40-4,42 (m, 2H), 4,53 (dd, J=9,92, 7,17 Hz, 1H), 5,08 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J=17,09, 10,22, 9,00 Hz, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,13 (dd, J=8,85, 2,44 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,85 Hz, 1H);
MS m/z 729 (MH+).
P r z y k ł a d 145: sposób wytwarzania związku 145
Związek 145 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru metylowego L-alaniny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu, 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 203 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru metylowego L-alaniny, 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 64,3 mg produktu w postaci proszku (59,3%owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,97-1,02 (m, 2H), 1,05 (s, 9H), 1,19 (d, J=7,02 Hz, 3H), 1,18-1,22 (m, 2H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,19 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,32 (ddd, J=13,81, 9,84, 4,43 Hz, 1H), 2,61 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,93 (ddd, J=12,82, 8,09, 4,73 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 3,99 (q, J=7,22 Hz, 1H), 4,08 (dd, J=11,75, 3,81 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,42 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 5,09 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,27 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J=17,09, 10,07, 9,16 Hz, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,13 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 743 (MH+).
168
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 146: sposób wytwarzania związku 146
Związek 146 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru metylowego L-tert-leucyny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu, 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 265 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru metylowego L-tert-leucyny, 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 68,3 mg produktu w postaci białego proszku (59,6%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,88 (s, 9H), 0,97-1,03 (m, 2H), 1,06 (s, 9H), 1,18-1,24 (m, 2H), 1,41 (dd, J=9,46, 5,49 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,19 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,30 (ddd, J=13,89, 10,07, 4,43 Hz, 1H), 2,60 (dd, J=13,73, 7,32 Hz, 1H), 2,91-2,96 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,91 (s, 1H),
3,93 (s, 3H), 4,09 (dd, J=11,60, 3,97 Hz, 1H), 4,38 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,51 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,27 (dd, J=17,24, 1,37 Hz, 1H), 5,76 (ddd, J=17,09, 10,07, 9,16 Hz, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,12 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,14 Hz, 1H),
7,24 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,87 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,11 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 785 (MH+).
P r z y k ł a d 147: sposób wytwarzania związku 147
PL 226 561 B1
169
Związek 147 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru metylowego L-histydyny, oraz ilość N,N-diizopropyloetyloaminy użytej w etapie 2 podwojono.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu, 47,0 mg (0,364 mmola) N,N'-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 352 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru metylowego L-histydyny, 377 mg (2,91 mmola) N,N-diizopropyloaminy, otrzymano 51,0 mg produktu w postaci proszku (43,2%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 1,04 (s, 11H), 1,20-1,22 (m, 2H), 1,41 (ddd, J=9,46, 5,34, 1,07 Hz, 1H), 1,86-1,88 (m, 1H), 2,23 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,28-2,33 (m, 1H), 2,60 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,92 (d, J=6,41 Hz, 2H), 2,92-2,96 (m, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,91 (d, J=1,53 Hz, 3H), 4,04 (dd, J=11,90, 3,66 Hz, 1H), 4,35 (s, 1H), 4,36-4,41 (m, 2H), 4,53 (dd, J=9,77, 7,63 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,73-5,78 (m, 1H), 5,81 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 7,06-7,09 (m, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,87 (dd, J=5,80, 1,22 Hz, 1H), 8,08 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 809 (MH+).
P r z y k ł a d 148: sposób wytwarzania związku 148
Związek 148 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru etylowego L-waliny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-sukcynoimidylu i 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 265 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru etylowego L-waliny, 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 69,2 mg produktu w postaci proszku (60,4%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,83 (dd, J=6,71, 5,19 Hz, 6H), 1,01-1,03 (m, 2H), 1,06 (s, 9H), 1,17-1,22 (m, 2H), 1,23 (t, J=7,17 Hz, 3H), 1,40 (dd, J=9,46, 5,19 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 1,952,02 (m, 1H), 2,18 (q, J=9,05 Hz, 1H), 2,33 (ddd, J=13,89, 9,92, 4,27 Hz, 1H), 2,60 (dd, J=13,89, 7,17 Hz, 1H), 2,92 (ddd, J=12,82, 8,09, 4,73 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,98 (d, J=5,19 Hz, 1H), 4,08-4,17 (m, 3H), 4,41 (s, 1H), 4,41-4,43 (m, 1H), 4,52 (dd, J=10,07, 7,32 Hz, 1H), 5,09 (dd, J=10,38, 1,53 Hz, 1H), 5,26 (dd, J=17,09, 1,22 Hz, 1H), 5,77 (ddd, J=17,09, 10,07, 9,16 Hz, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,12 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,23 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,87 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 785 (MH+).
170
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 149: sposób wytwarzania związku 149
Związek 149 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 137 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast estru 4-benzylowego kwasu N-a-tert-butoksykarbonylo-Lasparaginowego użyto N-tert-butoksykarbonylo-L-cyklopentylglicynian dicykloheksyloaminy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 76,2 mg (0,180 mmola) N-tert-butoksykarbonylo-L-cyklopentylglicynianu dicykloheksyloaminy, otrzymano 111 mg produktu w postaci białego proszku (89,3%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,98 (d, J=8,24 Hz, 2H), 1,15-1,18 (m, 2H), 1,24 (s, 9H), 1,29-1,32 (m, J=18,01 Hz, 2H), 1,38-1,40 (m, 1H), 1,44 (dd, J=4,88, 1,53 Hz, 1H), 1,49-1,55 (m, 2H), 1,62-1,67 (m, 2H), 1,74-1,80 (m, 1H), 1,85-1,88 (m, 1H), 2,16 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,42 (t, J=11,90 Hz, 1H), 2,60-2,64 (m, 1H), 2,89-2,93 (m, 1H), 3,92 (d, J=1,53 Hz, 3H), 4,06-4,11 (m, 2H), 4,51-4,57 (m, 2H), 5,07 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,25 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,78-5,85 (m, 2H), 7,10 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,23 (d, J=4,27 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=5,95, 1,68 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 726 (MH+).
P r z y k ł a d 150: sposób wytwarzania związku 150
Związek 150 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru benzylowego L-waliny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu i 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
PL 226 561 B1
171
Etap 2:
modyfikacje: użyto 356 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru benzylowego L-waliny i 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 41,0 mg produktu w postaci białego proszku (33,2%-owa wydajność):
MS m/z 848 (MH+).
P r z y k ł a d 151: sposób wytwarzania związku 151
Związek 151
Związek 151 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru metylowego L-izoleucyny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu i 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 265 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru metylowego L-izoleucyny i 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 75,5 mg produktu w postaci białego proszku (65,9%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,78-0,80 (m, 3H), 0,83-0,84 (m, 3H), 0,90-0,95 (m, 1H), 1,01-1,03 (m, 2H), 1,06 (d, J=3,05 Hz, 9H), 1,17-1,21 (m, 2H), 1,32-1,42 (m, 2H), 1,68-1,72 (m, 1H), 1,84-1,87 (m, 1H), 2,14-2,20 (m, 1H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,57-2,62 (m, 1H), 2,90-2,93 (m, 1H), 3,66 (d, J=2,75 Hz, 3H), 3,92 (d, J=2,75 Hz, 3H), 4,05-4,12 (m, 2H), 4,39-4,42 (m, 2H), 4,50-4,53 (m, 1H), 5,07-5,10 (m, 1H), 5,23-5,28 (m, 1H), 5,73-5,79 (m, 1H), 5,81-5,83 (m, 1H), 7,10-7,13 (m, 1H), 7,17 (t, J=2,44 Hz, 1H), 7,22-7,24 (m, 1H), 7,85-7,87 (m, 1H), 8,10 (dd, J=9,16, 2,75 Hz, 1H);
MS n/z 785 (MH+).
P r z y k ł a d 152: sposób wytwarzania związku 152
172
PL 226 561 B1
Związek 152 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru tert-butylowego L-waliny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu i 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 306 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru tert-butylowego L-waliny i 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 93,5 mg produktu w postaci białego proszku (78,8%-owa wydajność):
MS m/z 814 (MH+).
P r z y k ł a d 153: sposób wytwarzania związku 153
Związek 153 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano (S)-(+)-1-metoksy-2-propyloaminę.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu i 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 130 mg (1,46 mmola) (S)-(+)-1-metoksy-2-propyloaminy, 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 50,3 mg produktu w postaci białego proszku (47,3%owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,96 (d, J=7,02 Hz, 3H), 0,99-1,01 (m, 2H), 1,04 (s, 9H), 1,15-1,18 (m, 2H), 1,39 (dd, J=9,61, 5,34 Hz, 1H), 1,84 (dd, J=7,93, 5,19 Hz, 1H), 1,93 (s, 3H), 2,15 (q, J=9,05 Hz, 1H), 2,37 (ddd, J=13,96, 9,84, 4,58 Hz, 1H), 2,61 (dd, J=14,04, 7,32 Hz, 1H), 2,90 (ddd, J=12,89, 8,16, 4,88 Hz, 1H), 3,19-3,28 (m, 2H), 3,64-3,67 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,12 (dd, J=11,60, 3,97 Hz, 1H), 4,40 (s, 1H), 4,44 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=9,77, 7,32 Hz, 1H), 5,07 (dd, J=10,22, 1,68 Hz, 1H),
5,24 (dd, J=17,24, 1,37 Hz, 1H), 5,76-5,81 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,10 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,23 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 729 (MH+).
PL 226 561 B1
173
P r z y k ł a d 154: sposób wytwarzania związku 154
Związek 154 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 141 z tym wyjątkiem, że proces przeprowadzono w większej skali, a w etapie 2 zamiast chlorowodorku estru metylowego L-waliny stosowano chlorowodorek estru metylowego N-metylo-L-waliny.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 100 mg (0,146 mmola) produktu według przykładu 55, etap 1; 62,2 mg (0,219 mmola) węglanu N,N'-disukcynoimidylu i 47,0 mg (0,364 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 265 mg (1,46 mmola) chlorowodorku estru metylowego N-metylo-L-waliny, 188 mg (1,46 mmola) N,N-diizopropyloetyloaminy, otrzymano 68,2 mg produktu w postaci białego proszku (59,5%-owa wydajność):
1H NMR (CD3OD) δ 0,70 (dd, J=6,71, 2,14 Hz, 3H), 0,89 (dd, J=6,41, 2,44 Hz, 3H), 0,96-0,98 (m, 1H), 1,02-1,04 (m, 2H), 1,07 (d, J=2,14 Hz, 9H), 1,18-1,22 (m, 2H), 1,43-1,47 (m, 1H), 1,84-1,87 (m, 1H), 2,11-2,19 (m, 2H), 2,31-2,37 (m, 1H), 2,58-2,63 (m, 1H), 2,87 (d, J=2,44 Hz, 3H), 2,90-2,94 (m, 1H), 3,65 (d, J=2,14 Hz, 3H), 3,92 (d, J=2,14 Hz, 3H), 4,10-4,14 (m, 1H), 4,25 (dd, J=10,07, 1,22 Hz, 1H), 4,48 (d, J=2,44 Hz, 1H), 4,50-4,54 (m, 1H), 5,08-5,10 (m, 1H), 5,25-5,28 (dd, J=17,09, 1,53 Hz, 1H), 5,78-5,85 (m, 2H), 7,10-7,13 (m, 1H), 7,18-7,19 (m, 1H), 7,24 (dd, J=5,95, 2,59 Hz, 1H), 7,87-7,89 (m, 1H), 8,10 (dd, J=9,00, 2,59 Hz, 1H);
MS m/z 785 (MH+).
P r z y k ł a d 155: sposób wytwarzania związku 155
174
PL 226 561 B1
Etap 1:
Do roztworu produktu według przykładu 55, etap 1 (100 mg, 0,146 mmola) w bezwodnym THF (2 ml) dodano ester pirydyn-2-ylowy ester 2,2,2-trifluoro-1,1-dimetyloetylowy kwasu węglowego (44,0 mg, 0,175 mmola) i N-metylomorfolinę (59 mg, 0,58 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 24 godziny. Mieszaninę reakcyjną przemyto, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość rozpuszczono w DCM (2 ml). Roztwór przemyto roztworem buforu o pH=4 (3 x 3 ml) i popłuczyny ponownie ekstrahowano DCM (3 ml). Fazy organiczne połączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt następnie rozpuszczono w MeOH i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC w układzie faz odwróconych, uzyskując związek 155 w postaci białego proszku (38,5 mg, 34,3%-owa wydajność):
1H NMR δ 1,04 (s, 11H), 1,19-1,22 (m, 2H), 1,23 (s, 3H), 1,43 (dd, J=9,31, 5,34 Hz, 1H), 1,46 (s, 3H), 1,87 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,19 (q, J=8,85 Hz, 1H), 2,34 (m, 1H), 2,62 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,92 (ddd, J=12,67, 8,09, 4,88 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,06 (dd, J=11,90, 3,36 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,56 (dd, J=10,38, 7,32 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75-5,80 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,10 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,25 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,07 (d, J=9,16 Hz, 1H);
MS m/z 768 (MH+).
Część E:
warunki prowadzenia LC-MS dla części E „metoda A”: 3,0 x 50 mm Xterra, gradient w czasie 4 minut, szybkość przepływu 4 ml/minutę „metoda B”: 3,0 x 50 mm Xterra, gradient w czasie 3 minut, szybkość przepływu 4 ml/minutę „metoda C”: 4,6 x 50 mm Xterra, gradient w czasie 4 minut; szybkość przepływu 4 ml/minutę „metoda D”: 4,6 x 50 mm Xterra, gradient w czasie 3 minut, szybkość przepływu 4 ml/minutę
P r z y k ł a d 180: sposób wytwarzania związku 180
Ogólny schemat syntezy
PL 226 561 B1
175
Przykład 180
Związki 180 do 183 wytworzono postępując według przedstawionego powyżej ogólnego schematu syntezy. Poszczególne reakcje opisano szczegółowo gdzie indziej. Za wyjątkiem pierwszego etapu alkilowania, w którym tert-butanolan potasu w THF (dostarczony przez firmę Aldrich Chemicals) w DMF zapewniał bardziej dogodną procedurę postępowania, z chwilą zakończenia alkilowania większość rozpuszczalnika DMF wymyto jednorazowo wodą.
Związek 180: Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-trifluorometylochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1-(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan, otrzymano w postaci białej pianki z 61% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda A]: 3,35 (774).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 13H), 1,21 (s, 9H), 1,42 (dd, J=9,17, 5,26 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,21 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,64 (dd, J=13,94, 6,60 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,09 (dd, J=11,49, 2,69 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,52 (m, 1H), 4,56 (d, J=12,23 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,39, 1,59 Hz, 1H), 5,27 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,58 (s, 1H), 5,72 (m, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,61 (t, J=7,70 Hz, 1H), 7,83 (t, J=7,34 Hz, 1H), 8,07 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,26 (d, J=8,56 Hz, 1H).
176
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 181: sposób wytwarzania związku 181
Boo-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2,8-bistrifluorometylochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan, otrzymano w postaci białej pianki z 52% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda A]: 3,60 (843).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 11H), 1,16 (s, 9H), 1,22 (m, 2H), 1,42 (dd, J=9,29, 5,38 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,21 (q, J=8,97 Hz, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,65 (dd, J=13,94, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,07 (dd, J=11,98, 2,69 Hz, 1H), 4,17 (s, 1H), 4,52 (dd, J=10,52, 6,85 Hz, 1H), 4,58 (d, J=11,98 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,60 (s, 1H), 5,72 (m, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,69 (t, J=7,83 Hz, 1H), 8,18 (d, J=7,34 Hz, 1H), 8,50 (d, J=8,31 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 182: sposób wytwarzania związku 182
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-trifluorometylo-8-triflurometoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1-(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan, otrzymano w postaci białej pianki z 99% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda A]: 3,62 (858).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 11H), 1,21 (m, 11H), 1,42 (dd, J=9,05, 5,14 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,21 (q, J=8,64 Hz, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,64 (dd, J=13,94, 6,60 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,08 (dd, J=11,98, 2,69 Hz, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,51 (dd, J=10,52, 6,85 Hz, 1H), 4,57 (d, J=12,23 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,52, 1,22 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,59 (s, 1H), 5,72 (m, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,63 (t, J=8,07 Hz, 1H), 7,78 (d, J=7,58 Hz, 1H), 8,24 (d, J=8,56 Hz, 1H).
PL 226 561 B1
177
P r z y k ł a d 183: sposób wytwarzania związku 183
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-trifluorometylo-8-chlorochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan, otrzymano w postaci białej pianki z 64% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda A]: 3,52 (808).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 (m, 11H), 1,21 (m, 11H) 1,41 (dd, J=9,41, 5,50 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,20 (q, J=8,80 Hz, 1H), 2,32 (m, 1H), 2,63 (dd, J=13,82, 6,72 Hz, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,07 (dd, J=12,10, 2,81 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,50 (dd, J=10,52, 6,85 Hz, 1H), 4,56 (d, J=11,98 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,57 (s, 1H), 5,72 (m, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,52 (t, J=8,07 Hz, 1H), 7,93 (d, J=7,58 Hz, 1H), 8,19 (d, J=8,56 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 184: ogólna procedura alkilowania tripeptydu (związek 184) i P2*
Ogólny schemat - wytwarzanie związku według przykładu 184 (związek 184)
Wytwarzanie składnika tripeptydowego, przykład 184, osiągnięto przez kolejne sprzęganie amidu z zastosowaniem HATU jako środka sprzęgającego. Zrozumiałe jest, że zgodnie z poniższym schematem można stosować wiele standardowych środków sprzęgających.
Sposób wytwarzania związku pośredniego według przykładu 184a:
W osuszonej płomieniem kolbie, w temperaturze pokojowej, umieszczono mieszaninę HATU (820 mg, 2,2 mmola) według 180a (Boc-4R-hydroksyprolina, 417 mg, 1,8 mmola) oraz przykładu 180c (chlorowodorek (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego, 490 mg, 1,8 mmola) i dodano suchy CH2CI2 (8 ml). Mieszaninę utrzymywano w atmosferze suchego N2, po czym oziębiono do temperatury -78°C. W ciągu 5 minut powoli dodano zasadę Hunig'a (diizopropyloetyloamina, 625 μ|, 3,6 mmola) i powstała jasnopomarańczowa zawiesina. Mieszanie kontynuowano przez godzinę, czemu towarzyszył wzrost temperatury do temperatury otoczenia. LC/MS wykazały całkowitą konwersję do pożądanego produktu 184a. Surową mieszaninę poddano zwykłej obróbce, przemyto trzema porcjami (5 ml) wody, organiczne pozostałości ekstrahowano octanem etylu
178
PL 226 561 B1 (3 x 5 ml). Surowy produkt otrzymano przez usunięcie organicznych rozpuszczalników pod zmniejszonym ciśnieniem. Substancję stosowano w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.
Sposób wytwarzania związku pośredniego według przykładu 184b:
Osuszone ciało stałe z poprzedniego etapu, w temperaturze pokojowej, rozpuszczono w 9 ml CH2Cl2. Do tego roztworu dodano 3 ml kwasu trifluorooctowego, tworząc jasnożółty roztwór. Mieszanie kontynuowano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Metoda LC/MS wykazała brak substancji wyjściowej 184a, podczas gdy pożądanemu produktowi 184b odpowiadał główny sygnał wraz z sygnałem odpowiadającym produktowi ubocznemu przenoszonemu z HATU we wcześniejszym etapie. Rozpuszczalniki odparowano i pozostałe ciało stałe bezpośrednio stosowano w następnym etapie bez dalszego oczyszczania.
Wytwarzanie tripeptydu, związku 184:
Boq-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-hydroksy-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan [uwaga 46877-128]
Surowy produkt z poprzedniego etapu (przykład 184b, 1,8 mmola) mieszano z HATU (700 mg,
1,8 mmola) i Boc-L-tert-leucyną (przykład 180f, Fluka Chemicals, 420 mg, 1,8 mmola) w CH2Cl2 (10 ml) w temperaturze pokojowej. Do tej zawiesiny dodano zasadę Hunig'a (1 ml, nadmiar) z uzyskaniem dość rzadkiej, pomarańczowej zawiesiny. Metoda LC/MS wykazała pewną konwersję do związku 184. Całkowitą konwersję do pożądanego produktu 184 obserwowano po wymieszaniu przez dwa dni w temperaturze pokojowej. Surową mieszaninę reakcyjną odparowano do suchej masy. Pozostałość rozpuszczono w octanie etylu. Większość pozostałości HATU usunięto przez ekstrakcję półnasyconym, świeżo przygotowanym roztworem wodorowęglanu sodu. Ostatnie ślady pozostałości HATU (1-hydroksy-7-azabenzotriazol) usunięto przez przemycie dejonizowaną wodą. Po odparowaniu rozpuszczalników uzyskano 990 mg (98%) pożądanego produktu w postaci białej pianki. Ta substancja, bezpośrednio bez dalszego oczyszczania, była odpowiednia do późniejszego alkilowania z zastosowaniem związków elektrofilowych, takich jak chinoliny i izochinoliny.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda A]: 2,65 (579).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,95 (s, 2H), 0,99 (s, 9H), 1,05 (m, 2H), 1,21 (m, 1H), 1,39 (m, 9H), 1,84 (dd, J=8,31, 5,38 Hz, 1H), 1,96 (m, 1H), 2,11 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,91 (m, 1H), 3,80 (m, 2H), 4,28 (d, J=9,78 Hz, 1H), 4,35 (dd, J=9,90, 6,97 Hz, 1H), 4,47 (s, 1H), 5,11 (m, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H).
Alkilowanie tripeptydu (związku 184) z zastosowaniem związków elektrofilowych:
ml osuszoną płomieniem okrągłodenną kolbę napełniono związkiem 184, (0,5-1,0 mmola), podstawioną 4-chlorochinoliną (1,0 równoważnika) i chlorkiem lantanu (bezwodne krople LaCI3, stosowane w postaci dostarczonej przez Aldrich, M.W. 245 g/mol; 1,0 równoważnika. Uwaga: wprowadzenie takiego dodatku w pewnych przypadkach jest pomocne, szczególnie przy mniej reaktywnych związkach elektrofilowych. Ten reagent można czasem pominąć, jeśli związki elektrofilowe są dostatecznie reaktywne względem alkilowania anionowego) w 2 ml suchego DMF. Nieorganiczna sól była trudno rozpuszczalna w DMF w temperaturze pokojowej. Mieszaninę oziębiono, mieszając w atmosferze azotu, do temperatury -78°C (łaźnia suchy lód/aceton). Do ochłodzonej mieszaniny dodano roztwór THF i tert-butanolanu potasu (1,0M, użyto w postaci dostarczonej przez Aldrich, 5,5 równoważnika), a zabarwienie mieszaniny uległo zmianie z bezbarwnej na jasnożółtego lub zielonkawe. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze -78°C w okresie czasu zależnym od reaktywności 4-chlorochinoliny (od kilku godzin w temperaturze -78°C do całej nocy w temperaturze pokojowej). Nieorganiczna sól także zmieniła się w drobną emulsję pod koniec. Reakcję zatrzymano półnasyconym wodnym roztworem NH4CI (2 ml). Organiczne substancje ekstrahowano octanem etylu (10 ml x 3). Warstwy organiczne połączono, ponownie przemyto dejonizowaną wodą (10 ml x 2). Po odparowaniu organicznej frakcji uzyskano surową mieszaninę wzbogaconą w pożądany produkt, co określono mePL 226 561 B1
179 todą LC/MS. Pożądany produkt wydzielono metodą preparatywnej HPLC stosując standardowe parametry rozdzielania (typowo: 3,0 x 50 mm kolumna Xterra, gradient w czasie 4 minut i szybkość przepływu 4 ml/minutę), uzyskując analitycznie czysty pożądany produkt. Alkilowanie 1-fluorowcochinoliny prowadzono dokładnie w taki sam sposób.
P r z y k ł a d 185: sposób wytwarzania związku 185
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu opisanej w przykładzie 184, otrzymano Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2((4R)-(7-trifluorometylochinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winyloAcca)-CONHSO2-cyklopropan w postaci białej pianki z 50% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda B]: 2,32 (752).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 (s, 9H), 1,06 (m, 11H), 1,22 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,41, 5,26 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,23 (q, J=8,80 Hz, 1H), 2,42 (m, 1H), 2,75 (dd, J=14,06, 6,48 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,10 (m, 2H), 4,61 (m, 2H), 5,12 (dd, J=10,39, 1,59 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,72 (m, 2H), 7,61 (d, J=6,36 Hz, 1H), 7,96 (d, J=8,80 Hz, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,59 (d, J=8,56 Hz, 1H), 9,14 (d, J=6,36 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 186: sposób wytwarzania związku 186
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu opisanej w przykładzie 184, otrzymano Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(8-trifluorometylochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan w postaci białej pianki z 50% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda B]: 2,48 (752).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 (s, 9H), 1,05 (m, 2H), 1,13 (s, 9H), 1,23 (m, 2H), 1,42 (dd, J=8,68, 5,50 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,21 (q, J=8,80 Hz, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,69 (dd, J=14,06, 6,97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,08 (dd, J=11,98, 2,93 Hz, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,54 (dd, J=10,52, 7,09 Hz, 1H), 4,60 (d, J=12,47 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,52, 1,71 Hz, 1H), 5,28 (d, J=15,90
180
PL 226 561 B1
Hz, 1H), 5,58 (s, 1H), 5,72 (m, 1H), 7,32 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,69 (t, J=7,95 Hz, 1H), 8,22 (d, J=7,09
Hz, 1H), 8,55 (d, J=8,07 Hz, 1H), 8,88 (d, J=5,62 Hz, 1H).
Wytwarzanie związków pośrednich izochinoliny w celu zbudowania bloków 6-F, 6-etyl, 6-izopropyl i 6-tert-butyloizochinoliny P2*.
Na ogół, 6-fluoro i 6-alkiloizochinoliny stosowane w następującymi doświadczeniami wytworzono stosując przedstawioną poniżej syntezę Pomeranz'a-Fritsch'a (typowa procedura: wytwarzanie optycznie aktywnej 8,8-dipodstawionej 1,1-biizochinoliny, K. Hirao, R. Tsuchiya, Y. Yano, H. Tsue, Heterocyeles 42 (1) 1996, 415-422). Produkty przekształcono w 1-chloro pochodne z zastosowaniem opisanych gdzie indziej pośrednich związków N-tlenkowych.
Reagenty i warunki reakcji: (a) refluks w benzenie, azeotropowe usunięcie wody; (b) pierwszy etap: chloromrówczan etylu, trimetylofosoforyn w THF, drugi etap: tetrachlorek tytanu w chloroformie; (c) MCPBA w CH2CI2; (d) POCI3 w benzenie.
R Izochinolina, wydajność 1-chlorek, połączona wydajność
F 20 43
Et 76 65
i-Pr 14 18
t-Bu 47 55
P r z y k ł a d 187: sposób wytwarzania związku 187
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-fluoroizochinolino-1-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 12% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda C]: 3,81 (724).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 13H), 1,22 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 2,21 (m, 2H), 2,61 (dd, J=13,69, 6,60 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,05 (d, J=13,69 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,49
PL 226 561 B1
181 (m, 2H), 5,11 (d, J=10,03 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,61 Hz, 1H), 5,72 (m, 1H), 5,86 (d, J=4,40 Hz, 1H),
7,31 (m, 2H), 7,48 (d, J=8,31 Hz, 1H), 7,97 (d, J=6,36 Hz, 1H), 8,26 (d, J=6,11 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 188: sposób wytwarzania związku 188
Po przeprowadzeniu opisanego powyżej alkilowania uzyskano 1-chloroizochinolinę jako większość produktu: Boc-NH-P3(L-re/t-BuGly)-P2[(4R)-(1-chloroizochinolino-6-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan w postaci białej pianki, z 40,2% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 3,81 (718).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,25 (s, 11H), 1,41 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,54 (dd, J=12,96, 6,60 Hz, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,06 (dd, J=11,98, 2,69 Hz, 1H), 4,20 (s, 1H), 4,31 (d, J=11,7 Hz, 1H), 4,45 (dd, J=9,78, 7,58 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,36, 1,47 Hz, 1H), 5,36 (s, 1H), 5,74 (m, 1H), 7,35 (d, J=9,29 Hz, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,70 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,13 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,25 (d, J=9,29 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 189: sposób wytwarzania związku 189
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-etyloizochinolino-1-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki w 4,6 mg żółtego ciała stałego (4,2%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda B]: 2,70 (712).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,22 (m, 11H), 1,28 (t, J=7,91 Hz, 3H), 1,41 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,60 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,80 (q, J=7,66 Hz, 2H), 2,93 (m, 1H), 4,02 (d, J=31,06 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,25 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,90 (d, J=6,24 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,56 Hz, 1H).
182
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 190: sposób wytwarzania związku 190
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-izopropyloizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 69% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda B]: 2,76 (749).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 13H), 1,20 (m, 9H), 1,31 (d, J=6,85 Hz, 6H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,26 (m, 2H), 2,62 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,07 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,52 (m, 2H), 5,11 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,32 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,46 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,90 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,13 (d, J=8,56 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 191: sposób wytwarzania związku 191
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-tert-butyloizochino-1-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winyloAcca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 81% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda B]: 2,84 (740).
1H MR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,18 (s, 9H), 1,22 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,63 (dd, J=13,57, 6,97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 4,20 (s, 1H), 4,52 (m, 2H), 5,10 (d, J=11,49 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,36 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,66 (dd, J=8,80, 1,22 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,91 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,15 (d, J=8,80 Hz, 1H).
Wytwarzanie związków pośrednich 6-izopropoksy i 6-tert-butoksyizochinoliny:
Pewne 6-alkoksylo-1-chloroizochinoliny wytworzono przez bezpośrednie podstawienie ipso 6-fluoro-1-chloroizochinoliny odpowiednimi jonami alkoholanu metalu, takiego jak tert-butanolan potasu (53%) i izopropanolan sodu (54%).
PL 226 561 B1
183
Ogólny schemat syntezy
R = aniony alkoholanu, takie jak tert-Bu, izo-Pr
6-fluoro-1-chloroizochinolinę poddano aromatycznemu podstawieniu nukleofilowemu z zastosowaniem izopropanolanu sodu i tert-butanolanu potasu w DMF, uzyskując odpowiedni 6-izopropoksy (54%):
1H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ ppm 1,43 (d, J=6,11 Hz, 6H), 4,76 (m, J=6,11 Hz, 1H), 7,08 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,29 (dd, J=9,29, 2,45 Hz, 1H), 7,50 (d, J=5,62 Hz, 1H), 8,18 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,24 (d, J=9,29 Hz, 1H), i 6-tert-butoksyo-1-chloroizochinoliny (55%):
1H NMR (400 MHz, chloroform-d) δ ppm 1,48 (s, 9H), 7,31 (m, 2H), 7,47 (d, J=5,62 Hz, 1H), 8,18 (d, J=5,62 Hz, 1H), 8,21 (d, J=9,78 Hz, 1H), jako większość produktu. 6-alkoksylo-1-chloroizochinolinami alkilowano tripeptyd według opisu w przykładzie 184, uzyskując pożądane produkty przedstawione poniżej.
P r z y k ł a d 192: sposób wytwarzania związku 192.
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-izopropoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 59% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 3,87 (742).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 (s, 11H), 1,06 (m, 2H), 1,21 (s, 9H), 1,37 (d, J=5,87 Hz, 6H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,61 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,04 (dd, J=11,86, 3,30 Hz, 1H), 4,21 (br s, 1H), 4,49 (m, 2H), 4,78 (h, J=5,87 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,39, 1,35 Hz, 1H), 5,28 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,79 (d, J=11,25 Hz, 1H), 7,07 (dd, J=9,05, 1,96 Hz, 1H), 7,18 (d, J=2,20 Hz, 1H), 7,26 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,85 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,05 Hz, 1H).
184
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 193: sposób wytwarzania związku 193
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-tert-butoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 39% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 3,99 (756).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 (br s, 13H), 1,19 (s, 9H), 1,42 (m, 10H), 1,86 (dd, J=7,83, 5,62 Hz, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,60 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,04 (dd, J=11,49, 2,93 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,49 (m, 2H), 5,10 (d, J=11,25 Hz, 1H), 5,27 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,81 (s, 1H), 7,13 (dd, J=8,80, 1,47 Hz, 1H), 7,25 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,33 (d, J=2,20 Hz, 1H), 7,87 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,05 Hz, 1H).
Wytwarzanie pochodnych ftalazyny P2*:
Na ogół, zarówno 1-chloroftalazyna i 1,4-dichloroftalazyna ulega łagodnie alkilowaniu z wytworzeniem pożądanych produktów. Jednakże, dostępne na rynku 1-chloroftalazyna i 1,4-dichloroftalazyna są często zanieczyszczone pewnymi zhydralizowanymi substancjami. Wstępne traktowanie POCI3, a następnie bezpośrednie alkilowanie umożliwia uzyskanie bardziej powtarzalnych wyników.
Ogólny schemat syntezy
Warunki reakcji: (a) POCI3 w DCE; (b) alkilowanie tripeptydu; (c) sodowe pochodne imidazolu (R = CH), triazol (R = N)
PL 226 561 B1
185
P r z y k ł a d 194: sposób wytwarzania związku 194
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(ftalazyno-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 41% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda B]: 2,07 (707).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 (m, 9H), 1,06 (m, 4H), 1,14 (s, 9H), 1,20 (m, 1H), 1,43 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,80 Hz, 1H), 2,38 (m, 1H), 2,76 (dd, J=14,18, 7,09 Hz, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,11 (m, 2H), 4,62 (m, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,12, 1,22 Hz, 1H), 5,72 (m, 1H), 5,96 (s, 1H), 8,26 (m, 2H), 8,46 (m, 2H), 9,84 (s, 1H).
P r z y k ł a d 195: sposób wytwarzania związku 195
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(4-chloroftalazyno-1-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 23% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda C]: 3,52 (742).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 11H), 1,06 (m, 2H), 1,14 (s, 9H), 1,22 (m, 1H), 1,43 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 2,21 (m, 1H), 2,35 (m, J=10,27 Hz, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,05 (d, J=3,42 Hz, 1H), 4,58 (m, 2H), 5,11 (dd, J=10,39, 1,10 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,93 (s, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,07 (t, J=7,70 Hz, 1H), 8,26 (dd, J=8,19, 2,32 Hz, 2H).
Wytwarzanie pochodnych 4-(imidaz-1-ylo)ftalazyny i 4-(1,2,4-triaz-1-ylo)ftalazyny P2*:
Produkt, powyższy związek 195, Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(4-chloroftalazyno-1-okso)S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan, poddano podstawieniu anionami typowych azolei, takich jak imidazol i triazol z wytworzeniem przedstawionych poniżej 4-azolo podstawionych pochodnych ftalazyny.
186
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 196: sposób wytwarzania związku 196
Związek wytworzono przez wyparcie 4-chloroftalazyny (związku 195) solą sodową imidazolu w DMF, w temperaturze 55-65°C.
BOC-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(4-(imidaz-1-ylo)ftalazyno-1-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 23% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda B]: 1,94 (773).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,20 (m, 9H), 1,24 (m, 1H), 1,41 (m, 2H), 1,88 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,23 (m, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,75 (m, J=14,92 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,14 (m, 2H), 4,60 (dd, J=10,15, 6,97 Hz, 2H), 5,12 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,24, 1,35 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,09 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,94 (m, 1H), 8,10 (m, 2H), 8,43 (m, 1H), 9,17 (s, 1H), 9,46 (s, 1H).
Podczas reakcji podstawienia, wydzielono także małą ilość produktu pośredniego de-Boc (związek 197):
NH2-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(4-(imidaz-1-ylo)ftalazyno-1-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CON-HSO2-cyklopropan w postaci białej pianki z 17% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda B]: 1,22 (651).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,16 (s, 9H), 1,23 (m, 2H), 1,42 (dd, J=9,41, 5,50 Hz, 1H), 1,89 (m, 1H), 2,26 (q, J=8,97 Hz, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,78 (dd, J=14,06, 7,21 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H),
PL 226 561 B1
187
3,74 (m, 1H), 4,11 (s, 1H), 4,22 (dd, J=12,23, 3,91 Hz, 1H), 4,47 (m, 2H), 4,71 (dd, J=10,27, 7,09 Hz,
1H), 5,12 (m, 1H), 5,29 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,71 (m, 1H), 6,13 (t, J=3,67 Hz, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,97 (m, 1H), 8,14 (m, 3H), 8,41 (m, 1H), 9,47 (s, 1H).
P r z y k ł a d 198: sposób wytwarzania związku 198
Związek wytworzono przez wyparcie 4-chloroftalazyny (związku 195) solą sodową 1,2,4-triazolu w DMF w temperaturze 55-65°C.
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(4-(1,2,4-triaz-1-ylo)-ftalazyno-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 62% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda C]: 3,35 (774).
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 0,97 (s, 9H), 1,01 (m, 2H), 1,10 (s, 9H), 1,16 (m, 1H), 1,37 (m, 2H), 1,82 (m, 1H), 2,18 (d, J=8,55 Hz, 1H), 2,32 (m, 1H), 2,69 (dd, J=13,58, 6,87 Hz, 1H), 2,88 (br s, 1H), 4,06 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,13 (s, 1H), 4,53 (m, J=9,16 Hz, 1H), 4,61 (d, J=11,90 Hz, 1H), 5,06 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,23 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,68 (m, 1H), 5,98 (s, 1H), 7,97 (m, 2H), 8,30 (m, J=11,90 Hz, 2H), 8,44 (d, J=7,63 Hz, 1H), 9,14 (s, 1H).
Wytwarzanie pochodnych 4-hydroksy i 4-alkoksyftalazyny P2*
Warunki reakcji: (a) alkoholany sodu takie jak metanolan, etanolan i izopropanolan sodu.
188
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 199: sposób wytwarzania związku 199
4-chloroftalazynę (przykład 195) rozpuszczono w suchym alkoholu izopropylowym w temperaturze pokojowej i dodano 1,0 równoważnika izopropanolan sodu, otrzymaną zawiesinę ogrzano do temperatury wrzenia pod chłodnicą zwrotną. Otrzymano pożądany produkt, 4,5 mg żółtego ciała stałego (20,0%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,68 (743) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 (m, 11H), 1,20 (m, 11H), 1,42 (m, 1H), 1,49 (d, J=6 Hz, 6H), 1,87 (dd, J=7,95, 5,50 Hz, 1H), 2,21 (m, 1H), 2,23 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,08 (q, J=7,09 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,55 (m, 2H), 5,11 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,61 Hz, 1H), 5,48 (m, 1H), 5,70 (d, J=10,03 Hz, 1H), 5,81 (m, 1H), 7,90 (m, 2H), 8,16 (m, 2H).
P r z y k ł a d 200: sposób wytwarzania związku 200
Podobnie, wytworzono 4-etoksy pochodną: Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-etoksyftalazyno-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
Otrzymano 4,0 mg żółtego ciała stałego (16,0%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,52 (729) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,16 (s, 9H), 1,24 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,78, 5,14 Hz, 1H), 1,53 (t, J=6,97 Hz, 3H), 1,87 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,22 (q, J=8,97 Hz, 1H), 2,32 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,06 (d, J=8,56 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,56 (m, 4H), 5,10 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,94 (m, 2H), 8,16 (d, J=7,83 Hz, 1H), 8,21 (m, 1H).
PL 226 561 B1
189
P r z y k ł a d 201: sposób wytwarzania związku 201
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-metoksyftalazyno-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan wytworzono z 30,2% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,42 (715) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,96 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,20 (m, 11H), 1,43 (dd, J=9,29, 5,38 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,22 (q, J=8,80 Hz, 1H), 2,31 (m, 1H), 2,66 (d, J=8,07 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,06 (dd, J=11,98, 3,18 Hz, 1H), 4,19 (d, J=3,42 Hz, 4H), 4,54 (m, 2H), 5,11 (m, 1H), 5,28 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 8,19 (m, 2H).
P r z y k ł a d 202: sposób wytwarzania związku 202
Próba podstawienia Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(4-chloroftalazyno-1 -okso)-5-prolino]-P1 (1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu (przykład 195) solą sodową tetrazolu dawała przeważnie 4-hydroksy zhydrolizowaną substancję.
Otrzymano Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-hydroksyftalazyno-1-okso)-S-prolino]P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan (44,2%) w postaci jasnokremowego ciała stałego.
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,18 (701) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,05 (m, 2H), 1,23 (m, 11H), 1,42 (dd, J=9,29, 5,38 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,21 (m, 2H), 2,63 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,00 (s, 1H), 4,20 (s, 1H), 4,50 (m, 2H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,59 (s, 1H), 5,73 (m, 1H), 7,86 (dd, J=5,75, 3,30 Hz, 2H), 8,01 (dd, J=5,87, 3,42 Hz, 1H), 8,29 (dd, J=5,87, 3,42 Hz, 1H).
Wytwarzanie 5,6-dipodstawionych pochodnych izochinoliny P2* poprzez alkilowanie.
190
PL 226 561 B1
Ogólny schemat syntezy
Warunki reakcji: (a) LDA w THF; (b) disiarczek alkilu taki jak (n-PrS)2; (c) alkoholan sodu taki jak MeONa; (d) 2-karboaldehyd tiofenu; (e) MnO2 w benzenie
P r z y k ł a d 203: sposób wytwarzania 1-chloro-5-propylo-6-fluoroizochinoliny:
Do oziębionego (-78°C) roztworu 1-chloro-6-fluoroizochinoliny (59 mg, 0,32 mmola) w 2 ml THF dodano roztwór LDA w cykloheksanie (1,5 M, 0,23 ml, 0,35 mmola). Pomarańczowy roztwór mieszano przez 2 godziny, po czym potraktowano go disiarczkiem n-propylu (60 μ!, czysty materiał, nadmiar). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Reakcję zatrzymano stosując półnasycony roztwór NH4Cl, organiczne pozostałości ekstrahowano octanem etylu.
Analiza LC-MS wykazała około 50% konwersję do pożądanego produktu wraz z główną substancją wyjściową. Pożądany produkt oczyszczono w krótkiej kolumnie (4 cm x 2 cm, żel krzemionkowy typ-H) i eluowano 5% eterem w heksanach, otrzymując 29 mg (36%-owa wydajność) pożądanego produktu.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 3,79 (256).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 0,96 (t, J=7,34 Hz, 3H), 1,52 (m, 2H), 2,86 (m, 2H), 7,45 (dd, J=9,29, 8,56 Hz, 1H), 8,34 (d, J=0,73 Hz, 2H), 8,37 (m, 1H).
Ten związek użyto do alkilowania tripeptydów według procedury opisanej w przykładzie 184 z wytworzeniem następującego związku.
P r z y k ł a d 204: sposób wytwarzania związku 204
Przedstawiony poniżej Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1-chloro-5-propylotioizochinolino-6-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
PL 226 561 B1
191
Postępując według ogólnej procedury, otrzymano 4,6 mg żółtego ciała stałego (3,2%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,73 (792) (Metoda B).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,93 (t, J=7,34 Hz, 3H), 0,97 (s, 9H), 1,08 (m, 2H), 1,24 (m, 11H), 1,43 (m, 3H), 1,86 (m, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,56 (m, 1H), 2,78 (q, J=7,09 Hz, 2H), 2,92 (m, 1H), 4,01 (d, J=9,29 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,29 (s, 1H), 4,59 (d, J=6,85 Hz, 1H), 5,11 (d, J=10,76 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,49 (s, 1H), 5,74 (m, 1H), 7,66 (d, J=9,29 Hz, 1H), 8,18 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,41 (m, 2H).
P r z y k ł a d 205: wytwarzanie pochodnych 5-propylotio-6-etoksyizochinoliny P2*.
Następująca procedura jest równie odpowiednia do otrzymania innej 5-alkilotio-6-alkoksyizochinoliny poprzez zmianę reagentów. Do roztworu 1-chloro-6-fluoroizochinoliny (88 mg, 0,48 mmola) w 2,0 ml THF w atmosferze azotu, w temperaturze -78°C dodano LDA (1,5 M w cykloheksanie, 0,42 ml, 0,63 mmola), tworząc ciemnobrunatnawy roztwór. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze -78°C przez 30 minut, po czym wprowadzono czysty disiarczek n-propylu (85 μ|, nadmiar). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Reakcję zatrzymano stosując półnasycony roztwór NH4CI, organiczne pozostałości ekstrahowano octanem etylu. Warstwy organiczne połączono i osuszono pod zmniejszonym ciśnieniem do 50 mikronów słupa Hg. Surowy produkt dodano do 2 ml THF, ochłodzono do temperatury -78°C, dodano etanolan potasu w nadmiarowej ilości (60 mg). Związek pośredni izochinoliny na koniec oczyszczono stosując kolumnę wypełnioną żelem krzemionkowym (typ-H, Merck) i eluowano mieszaniną eter-heksany, otrzymując 32,2 mg (24%) czystego związku.
LC-MS wykazała obecność 1-chloro-5-propylotio-6-etoksyizocholiny przy Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 3,77 (282).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 0,94 (t, J=7,34 Hz, 3H), 1,46 (m, 2H), 1,55 (t, J=6,97 Hz, 3H), 2,83 (t, J=7,21 Hz, 2H), 4,32 (q, J=6,85 Hz, 2H), 7,36 (d, J=9,29 Hz, 1H), 8,22 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,32 (d, J=9,29 Hz, 1H), 8,35 (d, J=6,11 Hz, 1H).
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu (przykład 184), stosowano 1-chloro-5-propylotio-6-etoksyizochinolinę, uzyskując 40,7 mg (44,8%) przedstawionego poniżej pożądanego produktu.
192
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 206: sposób wytwarzania związku 206
NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-etoksy-5-propylotioizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
LC-MS Rt (minuty) (MH+): 2,93 (803) [metoda B].
1H NMR, (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,93 (t, J=7,34 Hz, 3H), 1,01 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,21 (m, 11H), 1,41 (m, 3H), 1,48 (t, J=6,85 Hz, 3H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,60 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,81 (q, J=6,97 Hz, 2H), 2,93 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,27 (q, J=7,09 Hz, 2H), 4,43 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,76 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,30 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,92 (d, J=6,36 Hz, 1H), 7,97 (m, 1H), 8,22 (d, J=9,05 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 207: sposób wytwarzania związku 207
Taką samą procedurę stosowano do wytworzenia Boc-NH-P3-(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-metoksy-5-metylotioizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu.
Do roztworu 100 mg 1-chloro-6-fluoroizochinoliny (0,55 mmola) w 2 ml suchego THF w temperaturze -78°C dodano LDA w THF (1,3 równoważnika). Do utworzonego ciemnobrunatnego roztworu następnie dodano disiarczek, czemu towarzyszyła zmiana zabarwienia roztworu na zielonkawe, a następnie jasnobrunatne. Reakcję zatrzymano stosując 2 ml wody i 2 ml NH4CI, ekstrahowano octanem etylu i osuszono nad siarczanem sodu. Rozpuszczalnik odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymaną pozostałość stosowano w postaci surowej.
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,23 (228) [metoda B]. Surową substancję ponownie rozpuszczono w 2 ml suchego THF w temperaturze -78°C i dodano 1,3 równoważnika KOMe, a następnie mieszaniPL 226 561 B1
193 nę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono octanem etylu, przemyto solanką i osuszono nad siarczanem sodu. Otrzymano 104 mg produktu (79%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,04 (240) [metoda B].
Związek pośredni, 1-chloro-5-metylotio-6-metoksyizochinolinę użyto do opisanego powyżej alkilowania tripeptydu. Postępując według ogólnej procedury, otrzymano 70,0 mg żółtego ciała stałego (42,7%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,65 (760) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 0,94 (m, 11H), 1,17 (s, 9H), 1,26 (m, 2H), 1,39 (m, 1H), 1,83 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,01 (m, 2H), 2,23 (s, 3H), 2,45 (m, 1H), 2,79 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,97 (d, J=3,91 Hz, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,25 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,36 (dd, J=9,66, 7,21 Hz, 1H), 4,99 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,12 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,69 (m, 1H), 5,74 (s, 1H), 7,08 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,83 (m, 2H), 8,06 (d, J=9,05 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 208: sposób wytwarzania 1-chloro-6-metoksyizochinolin-5-ylotiofen-2-ylometanonu
Postępując według opisanej powyżej procedury odprotonowania LDA (sposób wytwarzania według przykładu 203) 1-chloro-6-fluoroizochinoliny, wyjściowy anion poddano reakcji z 2-tiofenkarboaldehydem, uzyskując 1-chloro-6-fluoroizochinolin-5-ylotiofen-2-ylometanolu. Substancję utleniono do 1-chloro-6-fluoroizochinolin-5-ylotiofen-2-ylometanonu, stosując MnO2 w benzenie, z 49,6% ogólną wydajnością, po chromatograficznym oczyszczaniu.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 2,98 (292).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 7,12 (dd, J=4,89, 3,91 Hz, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,56 (dd, J=5,87, 0,73 Hz, 1H), 7,82 (dd, J=5,01, 1,10 Hz, 1H), 8,27 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,54 (ddd, J=9,29, 5,38, 0,73 Hz, 1H).
Przeprowadzono nukleofilową aromatyczną zamianę ipso atomu fluoru w roztworze metanolanu potasu w nadmiarowej ilości, z wytworzeniem, głównie 1-chloro-6-metoksyizochinolin-5-ylotiofen-2-ylometanonu wraz z 25-33% 1 ,6-dimetoksyizochinolin-5-ylotiofen-2-ylometanonem. Surową substancję (77 mg) stosowano bez dalszego oczyszczania w etapie alkilowania tripeptydu.
P r z y k ł a d 209: sposób wytwarzania związku 209
194
PL 226 561 B1
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu (przykład 184), otrzymano 35,3 mg
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-6-metoksy-5-(tiofeno-2-karbonylo)izochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,-2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu jasnego ciała stałego (26,5%).
LC/MS Rt (minuty) 2,54 (825) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 51,02 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,22 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,43 (m, 1H), 1,87 (dd, J=7,95, 5,50 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,62 (dd, J=13,82 Hz, 6,97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 4,07 (dd, J=11,62 Hz, 3,06 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,43 (m, 1H), 4,55 (dd, J=9,78, 7,34 Hz, 1H), 5,09 (m, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 6,93 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,32 (dd, J=3,91, 0,98 Hz, 1H), 7,46 (d, J=9,29 Hz, 1H), 7,86 (t, J=6,72 Hz, 1H), 7,91 (dd, J=4,89, 1,22 Hz, 1H), 8,39 (d, J=9,29 Hz, 1H).
Wytwarzanie P2* z zastosowaniem pochodnych kwasu cynamonowego. Przedstawioną poniżej ogólną procedurę opisano obszernie gdzie indziej.
Ogólny schemat syntezy
P r z y k ł a d 210: sposób wytwarzania związku 210
10,0 g kwasu meta-toliloakrylowego (61,7 mmola) zawieszono w 50 ml benzenu, dodano
12,6 ml DPPA (0,95 równoważnika), a następnie 10,3 ml trietyloaminy (1,2 równoważnika). Otrzymany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i azydek meta-toliloakryloilu oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, uzyskując 11,5 g czystego związku (wydajność ilościowa). Tę substancję w 100 ml difenylometanu, wprowadzono kroplami do 100 ml uprzednio ogrzewanego w czasie godziny w temperaturze do 200°C difenylometanu. Otrzymany roztwór utrzymywano w tej temperaturze przez jeszcze 4 godziny, a następnie ochłodzono do temperatury pokojowej. Powstały biały osad odsączono. Ciało stałe trzy razy przemyto heksanami i osuszono. Przesącz rozcieńczono 200 ml heksanów i roztwór pozostawiono do odstania przez noc, aby umożliwić rozdzielanie drugiego rzutu. Substancje połączono, uzyskując 4,2 g 6-metyloizochinolin-1-olu (50%).
LC MS Rt (minuty) (MH+): 1,31 (160) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2,49 (s, 3H), 6,61 (d, J=7,32 Hz, 1H), 7,13 (d, J=7,02 Hz, 1H), 7,36 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,45 (s, 1H), 8,18 (d, J=8,24 Hz, 1H).
Substancję zawieszono w 15 ml POCI3 i ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Po usunięciu POCI3 pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość podzielono pomiędzy EtOAc (1 l) i zimny wodny roztwór NaOH (wytworzony z 200 ml 1,0N NaOH i 20 ml 10,0N NaOH) oraz mieszano przez 15 minut. Warstwę organiczną przemyto wodą (2 x 200 ml), solanką (200 ml), (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 1-chloro-6-metyloizochinolinę (67,4%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 1,92 (178) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 2,53 (s, 3H), 7,47 (d, J=6,11 Hz, 2H), 7,56 (s, 1H), 8,18 (m, 2H).
Końcowe alkilowanie tripeptydu z zastosowaniem 1-chloro-6-metyloizochinoliny prowadzono według opisanej uprzednio procedury (przykład 184).
PL 226 561 B1
195
Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-metyloizochinolmo-1-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan otrzymano w postaci białej pianki z 18% wydajnością.
LC/MS Rt (minuty) (MNa+) [metoda B]: 2,64 (720).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 13H), 1,23 (m, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=7,95, 5,50 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,61 (dd, J=13,82, 6,48 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,05 (dd, J=11,86, 3,30 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,10 (d, J=11,49 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,24 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,35 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,89 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,07 (d, J=8,56 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 211: sposób wytwarzania związku 211
Postępując według opisanej powyżej ogólnej procedury, otrzymano 51,0 mg Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1,3-dioksa-7-aza-cyklopenta[a]naftalen-6-olo)-6-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CON-HSO2-cyklopropan, w postaci jasnego ciała stałego (64,9%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,57 (728) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,18 (m, 11H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,23 (m, 2H), 2,59 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,04 (dd, J=11,74, 2,20 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,51 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 6,18 (s, 2H), 7,13 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,19 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,81 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,85 (d, J=6,11 Hz, 1H).
Wytwarzanie 5,6,7-tripodstawionych pochodnych izochinoliny P2*:
Warunki reakcji: (a) LDA w THF; (b) N-fluorobenzenosulfonoimid (NFSI) dla R = F, lub siarczek dimetylu (MeS)2, dla R = SMe.
Wytworzoną powyżej 5,6-metylenodioksy-1-chloroizochinolinę odprotonowano bezpośrednio w obecności mocnej zasady takiej jak LDA z wytworzeniem odpowiedniego 7-anionu bez zakłócenia poprzez atom chloru w pozycji 1. 7-anion poddano działaniu związków elektrofilowych, takich jak NFSI
196
PL 226 561 B1 (N-fluorobenzenosulfonoimid) i dimetylosulfid w celu wytworzenia odpowiedniego 7-podstawionego pierścieniowego układu izochinolinowego.
P r z y k ł a d 212: sposób wytwarzania związku 212
Etap 1:
Wytwarzanie 5,6-metylenodioksy-7-fluoro-1-chloroizochinoliny. Do roztworu 5,6-metylenodioksy-1-chloroizochinoliny (126 mg, 0,61 mmola) w 4 ml THF, w atmosferze azotu, w temperaturze -78°C dodano roztwór LDA w cykloheksanie (1,5M, 0,65 ml, 0,98 mmola). Jasnobrunatnawy roztwór mieszano przez 15 minut, po czym potraktowano go N-fluorobenzenosulfonoimidem (NFSI, 0,3 g, 1,5 równoważnika). Analizy TLC wykazały powstanie nowej plamy, oprócz plamy dla nieprzereagowanej substancji wyjściowej. Po obróbce wodą, a następnie ekstrakcji octanem etylu uzyskano oleisty surowy produkt, który oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 52 mg substancji (38%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 3,09 (226).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 6,33 (s, 2H), 7,52 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,71 (d, J=10,51 Hz, 1H), 8,16 (d, J=5,87 Hz, 1H).
Etap 2: alkilowanie 5,6-metylenodioksy-7-fluoro-1-chloroizochinoliny tripeptydem prowadzono według powyższego opisu (przykład 184), uzyskując główny produkt w wyniku podstawienia atomem fluoru.
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-chloro-1,3-dioksa-7-aza-cyklopenta[a]naftaleno-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
Postępując według ogólnej procedury, otrzymano 24,3 mg żółtego ciała stałego (24,3%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,54 (763) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,20 (m, 2H), 1,29 (s, 9H), 1,42 (dd, J=9,41, 5,26 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,54 (dd, J=13,57, 6,48 Hz, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,04 (dd, J=12,10, 2,81 Hz, 1H), 4,20 (d, J=7,34 Hz, 1H), 4,33 (d, J=12,23 Hz, 1H), 4,47 (dd, J=10,52, 6,85 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,39, 1,59 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,12, 1,22 Hz, 1H), 5,46 (d, J=5,87 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,29 (m, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,56 (m, 1H), 8,01 (d, J=5,62 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 213: sposób wytwarzania związku 213
Do roztworu 5,6-metylenodioksy-1-chloroizochinoliny (84 mg, 0,41 mmola) w 4 ml THF w atmosferze azotu, w temperaturze -78°C dodano roztwór LDA w cykloheksanie (1,5M, 0,60 ml, 0,9 mmola). Jasnobrunatnawy roztwór mieszano przez 15 minut w temperaturze -78°C, po czym potraktowano go disiarczkiem metylu (50 μΙ czystego reagentu, 1,4 równoważnika). Analizy TLC wykazały powstawanie nowych plam, oprócz plam dla nieprzereagowanej substancji wyjściowej. Po obróbce wodą, a następnie ekstrakcji octanem etylu uzyskano oleisty surowy produkt, który oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując 51 mg substancji (49%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 3,39 (254).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 2,64 (s, 3H), 6,29 (s, 2H), 7,49 (d, J=4,89 Hz, 1H),
7,71 (s, 1H), 8,11 (d, J=5,87 Hz, 1H).
Alkilowanie tripeptydu z zastosowaniem 5,6-metylenodioksy-7-metylotio-1-chloroizochinoliny prowadzono według wcześniejszego opisu (przykład 184), uzyskując przedstawiony poniżej pożądany produkt:
PL 226 561 B1
197
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-metylotio-1,3-dioksa-7-aza-cykloopenta[a]naftalen-6-ylooksy)-S-prolino]-P1(1R,2S-wynylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan
Postępując według ogólnej procedury, otrzymano 59,6 mg żółtego ciała stałego (42,2%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,70 (774) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 1,02 (m, 11H), 1,16 (s, 9H), 1,32 (s, 2H), 1,45 (m, 1H), 1,94 (m, 1H), 2,12 (d, J=8,56 Hz, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,62 (m, 2H), 2,90 (d, J=4,40 Hz, 1H), 4,15 (d, J=7,83 Hz, 2H), 4,48 (d, J=12,47 Hz, 1H), 4,62 (t, J=7,83 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,74 (d, J=16,38 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 6,28 (s, 2H), 7,41 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,85 (d, J=6,11 Hz, 1H).
Wytwarzanie 3,4-dipodstawionych pochodnych izochinoliny P2*
P r z y k ł a d 215: sposób wytwarzania związku 215
Przedstawiony poniżej Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(1R)-(2,3-dihydro-1H-4-aza-cyklopenta[a]naftalen-5-ylooksy)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan, wytworzono postępując według poniższego schematu.
Ogólny schemat syntezy izochinolinowego związku 214
198
PL 226 561 B1
Uwagi:
Syntezę nowej 1-fluoro P2* przeprowadzono z powodzeniem stosując techniki według opisów:
(1) Rigby, James H.; Holsworth, Daniel D.; James, Kelly. Winyl Isocyanates In Synthesis. [4 + 2] Cycloaddition Reactions With Benzyne Addends. Journal Of Organic Chemistry (1989), 54(17), 4019-20 (2) Uchibori, Y.; Umeno, M.; Yoshiokai, H.; Heterocycles, 1992, 34(8), 1507-1510
P r z y k ł a d 214: sposób wytwarzania związku 214, 5-chloro-2,3-dihydro-1H-4-azacyklopenta[a]naftalenu, i związku 215 według przykładu 215
Przykład 184 Przykład 215
2,3-dihydro-1H-4-aza-cyklopenta[a]naftalen-5-ol wytworzono zgodnie z metodą Rigby'ego opisaną w cytowanym powyżej odsyłaczu literaturowym 1. Związek 214 zsyntetyzowano z wydajnością 59,8% (430 mg) stosując POCI3 jak opisano w innym miejscu.
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,29 (204) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 2,28 (m, 2H), 3,19 (q, J=7,74 Hz, 4H), 7,58 (m, 1H),
7,71 (m, 2H), 8,32 (d, J=8,56 Hz, 1H).
Chlorek jest wystarczająco reaktywny do alkilowania tripeptydu według procedury przykładu 184, z wytworzeniem pożądanego produktu, związku 215. Jednakże ogólną wydajność można podwoić jeśli zamiast chlorku użyje się fluorku według sposobu według Uchibori'ego opisanego w odsyłaczu literaturowym 2. Tak więc wydzielono 17,0 mg związku 215 w postaci jasnożółtego ciała stałego (23,6%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,80 (724) [metoda B].
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 (s, 9H), 1,09 (m, 2H), 1,24 (m, 11H), 1,44 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=7,93, 5,49 Hz, 1H), 2,25 (m, 4H), 2,63 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,05 (m, 2H), 3,10 (m, 2H), 4,08 (dd, J=11,60, 2,75 Hz, 1H), 4,24 (d, J=20,45 Hz, 1H), 4,45 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,54 (dd, J=9,46, 7,63 Hz, 1H), 5,11 (m, 1H), 5,30 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 7,44 (t, J=7,02 Hz, 1H), 7,69 (m, 2H), 8,18 (d, J=8,24 Hz, 1H).
Wytwarzanie 3,4-dihydrofuranylu i furanyloizochinoliny P2*, przykłady 217 i 218.
P r z y k ł a d 217: sposób wytwarzania związku 217, 5-chloro-2,3-dihydro-1-oksa-4-azacyklopenta[a]naftalenu i związku 218, 5-chloro-1-oksa-4-azacyklopenta[a]naftalenu.
PL 226 561 B1
199
Syntezę przeprowadzono z zastosowaniem technik opisanych, częściowo, w następujących odsyłaczach literaturowych:
(1) Hojo, Masaru; Masuda, Ryoichi; Sakaguchi, Syuhei; Takagawa, Makoto, Synthesis (1986), (12), 1016-17 (2) Rigby, James H.; Holsworth, Daniel D.; James, Kelly. Winyl Isocyanates In Synthesis. [4 + 2] Cycloaddition Reactions With Benzyne Addends. Journal Of Organic Chemistry (1989), 54(17), 4019-20 (3) Uchibori, Y.; Umeno, M.; Yoshiokai, H.; Heterocycles, 1992, 34(8), 1507-1510.
Przeprowadzając metody opisane w odsyłaczach literaturowych 1 i 2, wytworzono zarówno 2,3-dihydro-1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalen-5-ol jak i 1-oksa-4-azacyklopenta[a]naftalen-5-ol. Konwersję obu tych związków do ich chloro pochodnych przeprowadzono stosując POCI3: surowe produkty hydroksylowe (około 2 g, jasnożółty olej) potraktowano 15 ml POCI3 i mieszaninę ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Po usunięciu POCI3 pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość mieszano z EtOAc (1 l) i zimnym wodnym roztworem NaOH (220 ml, 1,0N) przez 15 minut. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto wodą (2 x 200 ml), solanką (200 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując po rozdzieleniu metodą chromatografii na żelu krzemionkowym 300 mg związku według przykładu 217, 5-chloro-2,3-dihydro-1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalenu (13,2%) i 100 mg związku według przykładu 218, 5-chloro-1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalenu (4,4%), w postaci jasnobrunatnego ciała stałego. Związek 217:
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,05 (206) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 3,46 (t, J=9,05 Hz, 2H), 4,82 (t, J=9,17 Hz, 2H), 7,58 (m, 1H), 7,66 (m, 1H), 7,85 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,21 (d, J=8,56 Hz, 1H).
Związek 218: LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,16 (204) [metoda B].
1H MMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 7,15 (d, J=2,20 Hz, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,89 (m, 2H), 8,27 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,44 (d, J=8,80 Hz, 1H).
Wytwarzanie 5-fluoro-2,3-dihydro-1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalenu i produktów końcowego sprzęgania P2*.
Wymianę chlorek/fluorek osiągnięto sposobem opisanym w cytowanym powyżej odsyłaczu literaturowym 3. 90 mg 5-chloro-2,3-dihydro-1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalenu (przykład 217) zawieszono w 1,5 ml BU4PHF2 i poddawano działaniu mikrofal (reaktor Smith'a) w temperaturze około 120°C przez 2 godziny. Po obróbce wodą i oczyszczaniu w kolumnie otrzymano 22 mg fluorku (26,9%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 1,91 (190) [metoda B].
Pochodna furanu (przykład 218), 5-chloro-1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalen była dostatecznie reaktywna do bezpośredniego alkilowania tripeptydu bez aktywacji fluorkiem.
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(2,3-dihydro-1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalen-5-ylooksy)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan. Postępując według ogólnej procedury alkilowania, otrzymano 22,0 mg żółtego ciała stałego (26,3%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,65 (726) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,20 (m, 11H), 1,40 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,21 (dd, J=17,48, 8,93 Hz, 2H), 2,60 (dd, J=13,45, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,34 (m, 2H), 4,04 (dd, J=11,74, 3,18 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,41 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,74 (t, J=9,05 Hz, 2H), 5,11 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,78 (s, 1H), 7,43 (m, 1H), 7,65 (t, J=7,46 Hz, 1H), 7,74 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,56 Hz, 1H).
200
PL 226 561 B1
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1-oksa-4-aza-cyklopenta[a]naftalen-5-ylooksy)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan. Postępując według ogólnej procedury alkilowania, otrzymano 13,0 mg żółtego ciała stałego (20%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+): 2,70 (724) [metoda B].
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,09 (m, 2H), 1,22 (s, 9H), 1,27 (m, 2H), 1,46 (m, 1H), 1,89 (dd, J=7,78, 5,65 Hz, 1H), 2,24 (d, J=8,55 Hz, 1H), 2,33 (t, J=9,92 Hz, 1H), 2,68 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 2,95 (m, 1H), 4,14 (m, 1H), 4,26 (s, 1H), 4,50 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,57 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,93 (s, 1H), 6,97 (d, J=2,14 Hz, 1H), 7,51 (t, J=7,32 Hz, 1H), 7,81 (t, J=7,48 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 8,13 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,28 (d, J=8,24 Hz, 1H).
Wytwarzanie 3-fluorowco, 3-heteroarylo, 4-alkoksy i 4-hydroksy-pochodnych izochinoliny P2*
Ogólny schemat syntezy
Warunki reakcji: (1) MeOK w DMPU; (2) NBS w dichloroetanie; (3) MCPBA w CH2Cl2; (4) POCI3 w dichloroetanie; (5) BBr3 w CH2Cl2; (6) chlorek SEM i zasada Hunig'a w CH2Cl2
4-metoksyizochinolinę (przykład 222a) wytworzono z 4-bromoizochinoliny według nowej i dogodnej procedury z zastosowaniem zwykłego sprzętu laboratoryjnego oraz reagentów. Po regioselektywnym bromowaniu NBS otrzymano 3-bromo-4-metoksyizochinolinę (przykład 222b) w dobrej wydajności. Utlenianie MCPBA przebiegło bez powikłań z uzyskaniem odpowiedniego N-tlenku (przykład 222c), który izomeryzowano do 1-chloro-3-bromo-4-metoksyizochinoliny (przykład 222d) stosując typową procedurę z wykorzystaniem POCI3. 4-metoksyizochinolinę użyto do alkilowania tripeptydu z wytworzeniem odpowiedniej do sprzęgania Stille'ego i Suzuki'ego 3-bromo-4-metoksy pochodnej
PL 226 561 B1
201
P2*. Alternatywnie 4-metoksyizochinolinę demetylenowano w BBr3 z wytworzeniem 4-hydroksy-3-bromo-1-chloroizochinoliny (przykład 222e). Grupę 4-hydroksylową ponownie zabezpieczono chlorkiem SEM z wytworzeniem 4-SEM zabezpieczonego związku pośredniego według przykładu 222. Związek 4-hydroksylowy ponownie wytworzono z chwilą przeprowadzenia sprzężenia w obecności kwasu lub zgodnie z metodą odbezpieczania.
P r z y k ł a d 222d: wytwarzanie 1-chloro-3-bromo-4-metoksyizochinoliny
Etap 1:
Do roztworu 4-bromoizochinoliny (15 g, 73 mmole, substancja dostępna na rynku) w 200 ml dimetylo-3,4,5,6-tetrahydro-2(1H)-pirymidynonu (DMPU, Aldrich) dodano stały metanolan potasu (5,6 g, 80 mmoli). Naczynie reakcyjne zanurzono w łaźni olejowej w temperaturze 105°C na czas 20 minut. Bezpośrednio po ogrzaniu zabarwienie mieszaniny szybko zmieniło się z początkowego bardzo jasnego do ciemnozielonobrunatnego. Naczynie reakcyjne usunięto z łaźni olejowej i mieszaninę rozcieńczono wodą, organiczne pozostałości oddzielono w eterze poprzez wielokrotną ekstrakcję porcjami eteru. Analizy TLC wykazały występowanie 2 nowych plam o prawie równych rozmiarach (1:1 objętościowo mieszanina heksanów i octanu etylu jako eluent). Te związki oddzielono w kolumnie wypełnionej żelem krzemionkowym (Merck, typu H) eluując prostołańcuchowymi heksanami, a następnie stopniowo dodając eter do fazy ruchomej. Po odparowaniu rozpuszczalników wydzielono pożądany produkt, 4-metoksyizochinolinę (4,1 g, 35,3%). Wydzielono także inny produkt przez redukcję produktu pośredniego izochinoliny. Identyczność produktów pośrednich potwierdzono metodą NMR porównując z substancją oryginalną. Przykład 222a:
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 1,16 (160).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ 4,07 (s, 3H), 7,61 (m, 1H), 7,69 (m, 1H), 7,93 (d, J=8,07 Hz, 1H), 8,08 (s, 1H), 8,19 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,89 (s, 1H).
[Uwaga: ten związek uprzednio wytworzono jak podał Zoltewicz, John A.; Oestreich, Terence M.; Sale, Alan A, Journal of the American Chemical Society (1975), 97(20), 5889-96 w „Monel Bomb”, oraz później przez „focused microwave” zapoczątkowana procedura w Cherng, Yie-Jia, Tetrahedron (2002), 58(6), 1125-1129. Przedstawiona procedura nie wymagała stosowania ani specjalnego urządzenia wysokociśnieniowego, ani mikrofalowego dla skali preparatywnej].
Etap 2:
Substancję (przykład 222a) poddano bromowaniu NBS, na 4-metoksyizochinolinę (przykład 222a, 2,1 g, 13,2 mmola) w 1,2-dichloroetanie (DCE, 150 ml) działano N-bromosukcynoimidem (NBS, 1,5 g, 8,4 mmola, 0,6 x) w temperaturze 70°C przez godzinę, a następnie dodano drugą część 1,5 g NBS. Ciemnobrunatnawą mieszaninę reakcyjną mieszano przez jeszcze godzinę, po czym dodano trzecią część 1,0 g NBS. Bromowanie monitorowano metodą LC-MS do momentu zużycia substancji wyjściowej. Surową mieszaninę odparowano do suchej masy i pożądany produkt przesączono przez cienkie złoże żelu krzemionkowego (typ H, Merck, średnica 3 cm, wysokość 1,5 cm), eluowano prostołańcuchowymi heksanami, następnie stopniowo zwiększając ilość eteru. Pożądany produkt (przykład 222b) wydzielono w postaci oleistej substancji (1,7 g, 54%).
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 2,65 (238).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 4,04 (s, 3H), 7,64 (t, J=7,58 Hz, 1H), 7,76 (t, J=7,09 Hz, 1H), 7,99 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,11 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,85 (s, 1H).
[3-bromo-4-metoksyizochinolinę wytworzono wcześniej stosując różne procedury: Finkentey, Christel; Langhals, Elke; Langhals, Heinz. Chemische Berichte (1983), 116(6), 2394-7. Wyniki analizy NMR dla produktu były identyczne z opisanymi].
Etap 3:
Produkt bromowania NBS poddano utlenianiu MCPBA w chlorku metylenu w temperaturze pokojowej. MCPBA (1,80 g, 77%, 8,0 mmola) dodano do roztworu 3-bromo-4-metoksyizochinoliny (przykład 222b, 1,65 g, 6,9 mmola) w 35 ml CH2Cl2. Roztwór mieszano przez 4 godziny z utworzeniem białej zawiesiny. Do mieszaniny dodano roztwór wodorowęglanu sodu, (5%, świeżo wytworzony, 20 ml), a organiczne pozostałości ekstrahowano CH2Cl2. (10 x 25 ml). W celu odzyskania wodnego roztworu N-tlenku konieczne było przeprowadzenie wielokrotnej ekstrakcji w organicznym rozpuszczalniku. Surową substancję otrzymano po odparowaniu rozpuszczalników, a następnie oczyszczono metodą filtracji z zastosowaniem żelu krzemionkowego, uzyskując 1,36 g (5,4 mmola, 78%) N-tlenku (przykład 222c) w postaci woskowego ciała stałego.
LC/MS Rt (minuty) (MH+) [metoda C]: 1,79 (254).
202
PL 226 561 B1 1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 4,07 (s, 3H), 7,63 (m, 2H), 7,72 (m, 1H), 8,00 (m, 1H),
8,86 (s, 1H).
Etap 4:
Przegrupowanie końcowego N-tlenku przeprowadzono zwyczajnie w POCI3, stosując procedurę opisaną w innym miejscu. Wydajność związku według przykładu 222d była ilościowa.
LC/MS rt (minuty) (MH+); metoda D]: 2,69 (272).
1H NMR dla chlorowodorku, (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 4,07 (s, 3H), 7,81 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,17(d, J=8,31 Hz, 1H), 8,34 (d, J=8,31 Hz, 1H).
1H NMR dla wolnej zasady, (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 4,03 (s, 3H), 7,72 (m, 1H), 7,81 (m, 1H), 8,12 (d, J=8,56 Hz, 1H: 8,28 (d, J=8,56 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 223: sposób wytwarzania związku 223
Otrzymany w poprzednim etapie fragment tripeptydu w postaci wolnej zasady (przykład 222d) alkilowano według protokołu alkilowania (przykład 184) opisanego w innym, miejscu, z wytworzeniem 79% pożądanego produktu w postaci białego, papierowego ciała stałego.
LC/MS rt (minuty) (MNa+)]: [metoda C]: 3,91 (814).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 (s, 9H), 1,06 (dd, J=8,07, 1,47 Hz, 2H), 1,22 (m, 11H), 1,42 (dd, J=9,78, 5,14 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,22 (dd, J=18,10, 9,29 Hz, 1H), 2,28 (m, 1H), 2,61 (dd, J=13,57, 6,97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,06 (dd, J=11,86, 2,81 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,51 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,28 (d, J= 17,12 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,81 (s, 1H), 7,56 (t, J=7,58 Hz, 1H), 7,78 (t, J=7,58 Hz, 1H), 8,00 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,16 (d, J=8,56 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 224 i 225: wytwarzanie związku 224 oraz związku 225
Opisaną uprzednio grupę 4-metoksy w 1-chloro-3-bromo-4-metoksyizochinolinie (przykład 222d) przekształcono do grupy a-trimetylosililoetoksymetylowej (3EM), stosując następującą procedurę. 1-chloro-3-bromo-4-metoksyizochinolinę (przykład 222d) demetylenowano stosując BBr3 (po końcowej regulacji stężenie wynosiło 0,2-0,3M BBr3) w temperaturze pokojowej przez 12 godzin. Stwierdzono, że wysokie stężenie BBr3 przy demetylowaniu jest konieczne i efektywne. Surową mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 50 objętościami bezwodnego metanolu, po czym odparowano do suchej masy. Demetylowanie przebiegło ilościowo. Przykład 222e: LC/MS rt (minuty) (MH+) [metoda D]: 2,32 (258).
1H NMR wolnego chlorowodorku (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 5,83 (br, s, 1H), 7,73 (t, J=7,70 Hz, 1H), 7,79 (t, J=7,58 Hz, 1H), 8,22 (m, 2H), 4-hydroksy-3-bromo-1-chloroizochinolinę (przykład 222e) ponownie zabezpieczono stosując chlorek 2-(trimetylosililo)etoksymetylu (SEM-Cl). Wytworzoną wcześniej surową wolną zasadę osuszano pod ciśnieniem 40 mikronów słupa Hg, w temperaturze pokojowej, po czym ponownie zabezpieczono chlorkiem SEM. Do roztworu związku 4-hydroksy (przykład 222e, 1,33 g, 5,2 mmola) w chlorku metylenu (50 ml) w temperaturze 0°C dodano kolejno diizopropyloetyloaminę (2 ml, 11,5 mmola) i chlorek SEM (1,8 ml, 10 mmoli). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 10 minut, po czym przemyto świeżo wytworzonym roztworem NaHCO3 (5%, 100 ml). Organiczne pozostałości ekstrahowano kilkoma porcjami chlorku metylenu, a połączone warstwy organiczne przemyto 20 ml dejonizowanej wody, następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Zabezpieczenie SEM przeprowadzono ilościowo. Przykład 222: LC/MS rt (minuty) (MH+). [metoda D]: 3,40 (410).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 0,03 (s, 9H), 0,99 (m, 2H), 3,98 (m, 2H), 5,33 (s, 2H),
7,72 (m, 1H), 7,80 (m, 1H), 8,17 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,27 (d, J=8,07 Hz, 1H). Po alkilowaniu tripeptydu z użyciem 4-SEM zabezpieczonej izochinoliny wytworzono związek 224 i związek 225, postępując
PL 226 561 B1
203 według takiej samej reakcji alkilowania tripeptydu. Związek 4-hydroksy (związek 224) powstaje najprawdopodobniej z uwagi na obecność TFA podczas oczyszczania metodą preparatywnej HPLC.
P r z y k ł a d 224 (15,4%): LC/MS rt (minuty) (MNa+) [metoda D]: 2,87 (800).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 (s, 9H), 1,06 (d, J=8,31 Hz, 2H), 1,25 (s, 9H), 1,42 (s,
2H),1,86 (m, 1H), 2,23 (m, 2H), 2,60 (dd, J=13,21, 7,34 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,06 (d, J=11,00 Hz, 1H), 4,24 (m, 2H), 4,38 (d, J=11,98) Hz, 1H), 4,49 (dd, J=9,78, 7,09 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10,03 Hz,1H), 5,28 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,72 (m, 1H), 5,76 (s, 1H), 7,52 (t, J=7,46 Hz, 1H), 7,71 (t, J=7,09 Hz, 1H), 8,09 (d, J=4,40 Hz, 1H), 8,11 (d, J=4,16 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 225 (8,0%): LC/MS rt (minuty) ([M-BOC]+) [metoda D]: 3,46 (808) 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,01(s 9H), 0,96 (m, 2H), 1,02 (s, 11H), 1,06 (d, J=6,60 Hz,
2H), 1,24 [s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=7,83, 5,38 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,62 (dd, J=13,69, 7,34 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,97 (m, 2H), 4,07 (dd, J=10,88, 3,55 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,25 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,76 Hz, 1H), 5,25 (m, 3H), 5,74 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,77 (t, J=7,83 Hz, 1H), 8,06 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,16 (d J=8,31 Hz, 1H).
(Wytwarzanie P2* pochodnych 4H-[1,3]dioksyno[5,4-c]izochinoliny Ogólny schemat syntezy
204
PL 226 561 B1
Warunki reakcji (1) MeOK w DMPU; (2) MCPBA w CH2CI2; (3) POCl3 w DCE; (4) BBr3 w CH2CI2; (5) roztwór HCHO w 40% H2SO4 z zastosowaniem procedury syntezy 1,3-oksazyno-[5,6-c]izochinoliny oraz związków pokrewnych. Miyoko Toyama i Hirotaka Otomasu, Chem. Pharm. Bull.
33(12), 5543-5546, 1985; (6); procedura fluorowania, Uchibori, Y.; Umeno, M.; Yoshiokai, H.; Heterocycles, 1992, 34(8), 1507-1510
P r z y k ł a d 227: sposób wytwarzania związku 227.
O o'
6-chloro-1,3-oksazyno[5,6-c]izochinolinę wytworzono stosując procedurę Miyoko Toyama'ego oraz Hirotaka Otomasu'ego, wychodząc z 1-chloro-4-hydroksyizochinoIiny. Substancję wyjściową, 1-chloro-4-hydroksyizochinolinę (przykład 226c), wytworzono stosując opisaną powyżej sekwencję syntez. Utlenianie 4-metoksyizochinoliny (przykład 222a) za pomocą MCPBA prowadzono zwyczajnie z wytworzeniem 79,1% odpowiedniego N-tlenku (przykład 226a). Substancję przekształcono do 1-chloropochodnej, bezpośrednio potem do POCl3 z wytworzeniem chlorkiem (przykład 226b) z wydajnością ilościową. Surową 1-chloro-4-metoksyizochinolinę demetylenowano w BBr3 w temperaturze pokojowej z wytworzeniem odpowiedniej 1-chloro-4-hydroksyizochinoliny (przykład 226c), a następnie działano mieszaniną surowego BBr3 i bezwodnym metanolem w temperaturze pokojowej i odparowano w celu usunięcia pozostałości boranu. Po przeprowadzeniu reakcji Miyojko Toyama'ego i Hirotaka Otomasu'ego uzyskano 266 mg 6-chloro-1,3-oksazyno[5,6-c]izochinoliny (przykład 226d, 62,3%), ogólna wydajność z 300 mg 4-metoksyizochinoliny w 4 etapach.
LC/MS rt (minuty) ([M-HCHO]H+) [metoda D]: 2,45 (192).
1H NMR (400 MHz, chloroform-D) δ ppm 5,02 (s, 2H), 5,41 (s, 2H), 7,68 (m, 1H), 7,77 (ddd, J=8,25, 6,91, 1,22 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,26 (d, J=8,56 Hz, 1H).
Odkryto, że chlorek był niereaktywny według protokołu alkilowania według przykładu 184. Odpowiednią 6-fluoro-1,3-oksazyno[5,6-c]izochinolinę (przykład 226) wytworzono cytowanym wcześniej sposobem [Uchibori, Y.; Umeno, M.; Yoshiokai, H.; Heterocyles, 1992, 34 (8), 1507-1510]. Reakcji nie przeprowadzono do końca i surową mieszaninę reakcyjną odzyskano jako mieszaninę w stosunku 1:2,4 (Cl:F). Bez dalszego oczyszczania, mieszaninę chlorek/fluorek użyto do alkilowania tripeptydu, stosując procedurę według przykładu 184, po oczyszczeniu metodą preparatywnej HPLC, otrzymując mg (50,0%) Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(1,3-oksazyno[5,6-c]izochinolino-6-okso)-S-prolino]P1,(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu.
LC/MS rt (minuty) (MNa+) [metoda D] : 303 (764).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,06 (dd, J=8,07, 1,96 Hz, 2H), i 1,22 (s, 10H), 1,34 (d, J=6,11 Hz, 1H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,23 (m, 2H), 2,59 (dd, J=13,82, 6,97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,03 (dd, J=11,86, 3,06 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,41 (d, J=11,98 Hz, 1H), 4,50 (dd, J=9,66, 6,97 Hz, 1H), 4,87 (m, 2H), 5,11 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,34 (s, 2H), 5,74 (m, 2H), 7,51 (t, J=7,46 Hz, 1H), 7,70 (t, J=7,58 Hz, 1H), 7,95 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,31 Hz, 1H).
Wytwarzanie P2* pochodnych 4-metoksy-3-heteroarylu i 3-azoiloizochinoliny poprzez reakcje sprzęgania Suzuki'ego oraz Stille'ego
PL 226 561 B1
205
Przedstawione poniżej techniki sprzęgania wykazują ogólną użyteczność bromopochodnej według przykładu 223. Zrozumiałe jest, że podobny protokół jest równie odpowiedni dla innych kombinacji reagentów sprzęgających oraz katalizatorów innych niż bor i cyna.
P r z y k ł a d 229: sposób wytwarzania związku 229
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-furan-3-ylo-4-metoksyizochlinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan poddano przedstawionej poniżej reakcji sprzęgania Suzuki'ego.
mg (0,028 mmola) związku według przykładu 223 rozpuszczono w 1 ml DMF i dodano 9,4 mg dostępnego w handlu kwasu boronowego (3 równoważniki, 3 mg katalizatora (10% mmolowo)) oraz 18 mg węglanu cezu. Mieszaninę dwukrotnie odgazowano, a następnie ogrzewano w temperaturze 110°C przez 3 godziny. Końcowy produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, otrzymując
13,6 mg żółtego ciała stałego (64,0%). LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,85 (780) [metoda B].
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,09 (m, 11H), 1,26 (m, 12H), 1,68 (m, 1H), 2,27 (s, 1H), 2,64 (m, 2H), 2,97 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,15 (d, J=10,38 Hz, 1H), 4,28 (s, 1H), 4,43 (d, J=10,99 Hz, 1H), 4,56 (m, 1H), 5,11 (m, 2H), 5,63 (m, 1H), 5,99 (s, 1H), 7,20 (s, 1H), 7,51 (m, 1H), 7,61 (m, 1H), 7,75 (t, J=7,17 Hz, 1H), 8,03 (d, J= 8,24 Hz, 1H), 8,16 (d, J=8,24 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H).
P r z y k ł a d 230: sposób wytwarzania związku 230
Boc-NH-P3(L-NBuGly)-P2[(4R)-(3-furan-2-ylo-4-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan zsyntetyzowano przeprowadzając przedstawioną poniżej reakcję sprzęgania Stille'ego:
mg (0,05 mmola) związku według przykładu 223, 4 mg katalizatora (5% mmolowo) i 100 μl (4 równoważniki) dostępnej w handlu cyny rozpuszczono w 1 ml toluenu, mieszaninę odgazowano dwukrotnie, a następnie ogrzewano w temperaturze 90°C przez noc. Po rozdzieleniu metodą preparatywnej HPLC, otrzymano 19,6 mg zielonkawego ciała stałego (50,0%). LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,76 (780) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,94 (m, 2H), 0,98 (s, 9H), 1,09 (m, 2H), 1,25 (s, 9H), 1,39 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,48 (m, 1H), 2,74 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 4,14 (m, 1H), 4,22 (d, J=4,16 Hz, 1H), 4,41 (s, 1H), 4,69 (m, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,35 (m, 1H), 5,93 (s, 1H), 6,03 (m, 1H), 6,61 (m, 1H), 7,16 (d, J=3,18 Hz, 1H), 7,50 (d, J=7,58 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,73 (t, J=7,34 Hz, 1H), 8,04 (m, 1H), 8,17 (d, J=8,31 Hz, 1H).
206
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 231: sposób wytwarzania związku 231
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-pirazyno-2-ylo-4-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan wytworzono podobnie metodą sprzęgania Stille'ego z 7,1% wydajnością.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,51 (792) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,98 (m, 9H), 1,11 (m, 2H), 1,19 (s, 9H), 1,27 (m, 2H), 1,42 (m, 1H), 2,37 (m, 1H), 2,48 (m, 2H), 2,81 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 4,07 (s, 1H), 4,20 (d, J=4,16 Hz, 1H), 4,54 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,72 (m, 1H), 5,27 (m, 1H), 5,39 (m, 1H), 5,96 (s, 1H), 6,04 (m, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,60 (d, J=2,20 Hz, 1H), 8,76 (d, J=2,20 Hz, 1H), 9,33 (s, 1H).
P r z y k ł a d 232: sposób wytwarzania związku 232
Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-metoksy-3-tiazol-2-ilo-izochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2Swinyio-Acca)-CONHSO2-cyklopropan wytworzono podobnie metodą sprzęgania Stille'ego z 32,2% wydajnością.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,42 (797) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,13 (s, 9H), 1,22 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,78, 5,14 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,23 (q, J=8,97 Hz, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,10 (s, 3H), 4,15 (m, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,53 (d, J=25,92 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=10,27, 7,09 Hz, 1H), 5,12 (m, 1H), 5,29 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 6,09 (s, 1H), 7,74 (t, J=7,58 Hz, 1H), 7,91 (t, J=7,70 Hz, 15 1H), 8,00 (d, J=3,42 Hz, 1H), 8,18 (d, J=3,18 Hz, 1H), 8,22 (d, J= 8,31 Hz, 1H), 8,29 (d, J=8,31 Hz, 1H).
PL 226 561 B1
207
P r z y k ł a d 233: sposób wytwarzania związku 233
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnej w handlu 4-chlorofuro[3,2-c]pirydyny, otrzymano 5,7 mg żółtego ciała stałego (8,2%). LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,32 (674) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,21 (m, 11H), 1,41 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H, 2,22 (dd, J=17,61, 9,05 Hz, 2H), 2,54 (dd, J=13,69, 7,09 Hz, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,49 (m, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,36, 1,22 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,81 (s, 1H), 6,83 (d, J=1,22 Hz, 1H), 7,19 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,76 (d, J=1,22 Hz, 1H), 7,97 (d, J=5,87 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 235: sposób wytwarzania związku 23
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnej w handlu 4-chlorotieno[3,2-c]pirydyny, otrzymano 20,0 mg żółtego ciała stałego (28,1%). LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,50 (690) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,21 (m, 11H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,24 (m, 2 H), 2,57 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,05 (dd J= 11,98, 3,18 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,39 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,50 (dd, J=9,90, 7,21 Hz, 1H), 5,10 (dd, J=10,39, 1,34 Hz 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,81 (s, 1H), 7,45 (d, J=5,62 Hz, 1H), 7,53 (m, 2H), 7,94 (d, J=5,87 Hz, 1H).
208
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 236: sposób wytwarzania związku 236
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnego w handlu 3,5-dichloro-1,2,4-tiadiazolu, otrzymano 8,0 mg żółtego ciała stałego (11,9%). LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,37 (697) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,22 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,60 (dd, J=14,18, 6,85 Hz, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,03 (dd, J=12,47, 3,18 Hz, 1H), 4,17(s, 1H), 4,42 (m, 2H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,12, 1,47 Hz, 1H), 5,68 (s, 1H), 5,74 (m, 1H).
P r z y k ł a d 237: sposób wytwarzania związku 237
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(chinoksalino-2-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
Postepując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnej w handlu 2-chlorochinoksaliny, otrzymano 113,0 mg żółtego ciała stałego (19,2%). LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,48 (707) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,22 (m, 11H), 1,42 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,24 (m, 1H), 2,31 (m, 1H), 2,57 (dd, J=13,57, 6,97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,09 (dd, 11,98, 3,18 Hz, 1H), 4,17 (s, 1H), 4,38 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,50 (dd, J=10,27, 7,09 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,12, 1,47 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 7,62 (t, J=7,46 Hz, 1H), 7,73 (t, J=7,70 Hz, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,96 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,42 (s, 1H).
P r z y k ł a d 238: sposób wytwarzania związku 238
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R-(2-trifluoro-6-fluorochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
PL 226 561 B1
209
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnej w handlu 2-trifluoro-metylo-4-chloro-6-fluorochinoliny, otrzymano 17,0 mg żółtego ciała stałego (23,2%). LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,66 (792) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,17 (s, 9H), 1,23 (m, 2H), 1,42 (m, 1H), 1,86 dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,21 (q, J=8,64 Hz, 1H), 2,32 (m, 1H), 2,63 (dd, J=13,94, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,53 (m, 2H), 5,10 (m, 1H), 5,27 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,58 (s, 1H), 5,72 (m, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,83 (dd, J=9,29, 2,69 Hz, 1H), 8,12 (dd, J=9,29, 5,14 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 239: sposób wytwarzania związku 239
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-fluorochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R, 2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnej w handlu 4-chloro-6-fluorochinoliny, otrzymano 26,0 mg żółtego ciała stałego (39,0%).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,98 (702) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 (m, 11H), 1,14 (s, 9H), 1,23 (m, 2H), 1,42 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,23 (q, J=8,80 Hz, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,75 (dd, J=14,43, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,09 (s, 1H), 4,12 (d, J=2,69 Hz, 1H), 4,61 (m, 2H), 5,11 (dd, J=10,39, 1,59 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,24, 1,34 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 5,75 (s, 1H), 7,62 (d, J=6,60 Hz, 1H), 7,93 (m, 1H), 8,06 (dd, J=8,68, 2,57 Hz, 1H), 8,20 (dd, J=9,29, 4,40 Hz, 1H), 9,06 (d, J=6,60 Hz, 1H). Z uwagi na F-podstawienie wydzielono także małą ilość produktu ubocznego i oddzielono metodą preparatywnej HPLC.
P r z y k ł a d 240: wydzielanie związku 240
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-chlorochinolino-6-okso)-S-prolino]P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
210
PL 226 561 B1
Produkt uboczny, otrzymano 8,0 mg żółtego ciała stałego (11,7%). LC/MS rt (minuty) (MNa+) : 2,240 (740) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,23 (m, 11H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,29 (m, 1H), 2,55 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,46 (dd, J=10,27, 6,85 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,36, 1,47 Hz, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,74 (m, 1H), 7,60 (dd, J=9,29, 2,45 Hz, 1H), 1,64 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,81 (d, J=4,89 Hz, 1H), 8,06 (d, J=9,29 Hz, 1H), 8,72 (d, J=5,14 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 241: sposób wytwarzania związku 241
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(8-fluorochinolino-4-okso)-S-prolino]P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnej w handlu 4-chloro-8-fluorochinoliny, otrzymano 10,3 mg żółtego ciała stałego (14,7%).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,95 (702) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,98 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,14 (s, 9H), 1,22 (m, 2H), 1,42 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,22 (q, J=8,72 Hz, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,74 (dd, J=14,06, 6.97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,11 (m, 2H), 4,57 (dd, J=10,39, 6.97 Hz, 1H), 4,66 (d, J=12,23 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,27,1,22 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,71 (m, 2H), 7,59 (d, J=6,36 Hz, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,86 (m, 1H), 8,23 (d, J=8,56 Hz, 1H), 9,02 (d, J=6,36 Hz, 1H). Podczas oczyszczania metodą preparatywnej HPLC, wydzielono także produkt uboczny. Pochodna 4-chlorochinolino-8-oksochinoliny powstała w wyniku podstawienia atomu fluoru zamiast opuszczającego atomu chloru.
P r z y k ł a d 242: wydzielanie związku 242
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(4-chlorochinolino-8-okso)-S-prolino]-P1(1R, 2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
PL 226 561 B1
211
Produkt uboczny, otrzymano 9,0 mg żółtego ciała stałego (13,2%). LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,37 (718) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,12 (s, 9H), 1,23 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,41, 5,50 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,25 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,67 (dd, J=13,94, 7,09 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,10 (m, 1H), 4,13 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,98 Hz, 1H), 4,65 (dd, J=10,03, 7,09 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,12, 1,22 Hz, 1H), 5,51 (s, 1H), 5,75 (m, 1H), 7,61 (d, J=7,83 Hz, 1H), 7,88 (t, J=8,19 Hz, 1H), 8,04 (m, 2H), 8,91 (d, J=5,38 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 243: sposób wytwarzania związku 243
Poniżej przedstawiono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-hydroksychinoksalino-2-okso)-Sprolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
Postępując według ogólnej procedury alkilowania tripeptydu z zastosowaniem dostępnej w handlu 2,3-dichlorchinoksaliny, samorzutnie zhydrolizowano produkt mono alkilowania, z wytworzeniem 8,0 mg jasnożółtego ciała stałego (11,4%).
LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,42 (723) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 (s, 9H), 1,05 (m, 2H), 1,24 (s, 9H), 1,40 (m, 3H), 1,86 (m, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,53 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 4,06 (m, 1H), 4,16 (s, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,55 (dd, J=10,39, 6,97 Hz, 1H), 5,11 (m, 1H), 5,29 (m, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,78 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,26 (m, 2H), 7,36 (t, J=7,83 Hz, 1H), 7,61 (d, J=8,07 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 244: sposób wytwarzania związku 244
Stosując kombinację sprzęgania z zastosowaniem Pdo oraz, krok po kroku, procedurę wychodząc z 6-bromo-1-chloroizochinoliny, wytworzono Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(6-karboksydimetyloamidizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1{1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
212
PL 226 561 B1
LC/MS rt (minuty) (MNa+) : 2,34 (777) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,98 m, 11H), 1,23 (m, 11H), 1,35 (m, 1H), 1,91 (m, 1H), 2,29 (m, 2H), 2,47 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 2,97 (s, 3H), 3,11 (s, 3H), 4,09 (m, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,61 (m, 1H), 5,16 (m, 2H), 5,57 (m, 1H), 5,90 (s, 1H), 7,38 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,50 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,86 (s, 1H), 8,03 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,27 (d, J=8,56 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 245: sposób wytwarzania związku 245
Podczas jednego spośród sposobów wytwarzania z zastosowaniem sprzęgania Stille'ego katalizowanego Pdo (przykład 230), wydzielono drugorzędny produkt uboczny, który później zidentyfikowano jako przedstawiony poniżej Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(3-chloro-4-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan.
LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,62 (770) [metoda B].
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (s, 9H), 1,08 (m, 2H), 1,18 (s, 9H), 1,27 (m, 2H), 1,37 (m, 1H), 1,62 (m, 1H), 2,36 (m, 2H), 2,73 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,02 (m, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,66 (m, 1H), 5,30 (m, 2H), 5,78 (s, 1H), 6,04 (m, 1H), 7,53 (t, J=7,70 Hz, 1H), 7,77 (t, J=7,58 Hz, 1H), 8,00 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,19 (d, J=8,07 Hz, 1H).
PL 226 561 B1
213
Część F:
P r z y k ł a d 250: sposób wytwarzania związku 250
Związek 250
Schemat 1
Związek 250
214
PL 226 561 B1
Etap 1:
Roztwór kwasu 3-fenylobut-2-enowego (16,2 g), azydku difenylofosforylu (27,5 g) i trietyloaminy (10,1 g) w benzenie (100 ml) mieszano przez 1 godzinę. Po filtracji przez warstwę żelu krzemionkowego, przemyciu benzenem i zatężeniu, pozostałość rozpuszczono w difenylometanie (80 ml) i ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Po oziębieniu do temperatury pokojowej, części stałe zebrano przez odsączenie, przemyto benzenem i osuszono, uzyskując 10 g (63%) pożądanego produktu w postaci ciała stałego.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2,30 (s, 3H), 7,00 (s, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,77 (m, 2H), 8,33 (d, J=7,34 Hz, 1H).
Etap 2
Roztwór 4-metylo-2H-izochinolin-1-onu (4,8 g) w POCI3 (50 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Pc oziębieniu i zatężeniu, pozostałość zalkalizowano 5N NaOH i ekstrahowano CH2CI2. Warstwę organiczną przemyto solanką i osuszono nad MgSO4. Po zatężeniu i oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii w kolumnie Biotage z zastosowaniem 5% octanu etylu w heksanach, uzyskano 4,8 g (90%) pożądanego produktu w postaci ciała stałego.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 2,59 (s, 3H), 7,68 (t, J=7,70 Hz, 1H), 7,78 (m, 1H), 7,94 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,11 (s, 1H), 8,35 (d, J=8,31 Hz, 1H).
Etap 3:
Roztwór Boc-Hyp-OH (231 mg) i tert-BuOK (336 mg) w DMSO (10 ml) mieszano przez 0,5 godziny. Do roztworu dodano 1-chloro-4-metyloizochinolinę (178 mg) i uzyskaną mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 dzień. Reakcję zatrzymano 5% kwasem cytrynowym i mieszaninę ekstrahowano octanem etylu. Warstwę organiczną przemyto solanką i osuszono nad MgSO4. Po zatężeniu uzyskano 350 mg (94%) pożądanego produktu w postaci ciała stałego, które bez dalszego oczyszczania stosowano w następnym etapie.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,39, 1,43 (2s, 9H, rotamery), 2,40 (dd, J=17,97, 4,52 Hz, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,68 (m, 1H), 3,84 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 5,71(s, 1H), 7,58 (t, J=7,70 Hz, 1H), 7,75 (m, 2H), 7,91 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,19 (m, 1H); MS: (M+Na)+ 396.
Etap 4:
Roztwór estru 1-tertbutylowego kwasu 4-(4-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2dikarboksylowego (74 mg), chlorowodorku (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (59 mg), PyBOP (114 mg) i i-Pr2NEt (0,2 ml) w CH2CI2 (2 ml) mieszano przez 2 godziny. Po oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii w kolumnie Biotage z zastosowaniem 5% MeOH w octanie etylu uzyskano 105 mg (90%) pożądanego produktu.
1H NMR (400 MHz, metanol-D4) δ ppm 1,18 (m, 5H), 1,39 (s, 9H), 1,87 (dd, J=8, 2, 5,3 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,54 (m, 4H), 2,95 (m, 1H), 3,86 (m, 2H), 4,40 (dd, J=9,8, 6,9 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,6 Hz, 1H), 5,79 (m, 2H), 7,60 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,78 (m, 2H), 7,93 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,20 (d, J=8,1 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 607.
Etap 5:
Roztwór estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(4-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego (100 mg) i TFA (3 ml) w CH2CI2 (3 ml) mieszano przez 1 godzinę. Po zatężeniu, pozostałość rozpuszczono w CH2CI2 (2 ml) i dodano Boc-L-tert-leucynę (40 mg), PyBOP (104 mg) oraz i -P r2NEt (0,2 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę. Po obróbce i oczyszczeniu metodą preparatywnej HPLC uzyskano 60 mg (52%) pożądanego produktu, związku 250, w postaci ciała stałego.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 (m, 12H), 1,26 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,5, 5,1 Hz, 1H),
1,88 (dd, J=8,1, 5,4 Hz, 1H), 2,2 6 (m, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,62 (dd, J=13,7, 7,1 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H),
4,06 (dd, J=12,0, 3,4 Hz, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,45 (d, J=11,3 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=10,3, 6,6Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,77 (m, 2H), 6,63 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,53 (t, J=7,8
Hz, 1H), 7,76 (t, J=8,1 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,91 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,22 (d, J=8,3 Hz, 1H);
MS: (M+Na)+ 720.
PL 226 561 B1
215
P r z y k ł a d 251: sposób wytwarzania związku 251
Związek 251 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas 3-metoksy-3-fenyloakrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 15 g kwasu 3-metoksy-3-fenyloakrylowego, otrzymano 250 mg produktu (2%-owa wydajność).
Produkt:
1H NMR (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 3,85 (s, 3 H), 6,96 (s, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,71 (m, 1H), 7,86 (d, J=8,07 Hz, 1H), 8,31 (d, J=8,07 Hz, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 200 mg 4-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 150 mg produktu (68%-owa wydajność).
Produkt:
1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 4,05 (3, 2H), 7,71 (m, 1H), 7,72 (m, 2H), 7,80 (s, 1H), 8,23 (dd, J=18,71, 7,7 0 Hz, 2H)
Etap 3:
modyfikacje: użyto 122 mg 1-chloro-4-metoksyizochinoliny, otrzyamno 218 mg produktu (89%-owa wydajność).
216
PL 226 561 B1
Produkt:
MS: (M+Na)+
Etap 4:
modyfikacje: użyto 194 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(4-metoksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 298 mg produktu (99%-owa wydajność).
Produkt:
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,17 (m, 5H), 1,42 (s, 9H), 1,87 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,54 (dd, J=13,3, 6,2 Hz, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 4,39 (dd, J=9,8, 6,9 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,76 (m, 2H), 7,52 (s, 1H), 7,62 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,74 (z, J=1,2 Hz, 1H), 8,12 (t, J=8,3 Hz, 2H).
Etap 5:
modyfikacje: użyto 190 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(4-metoksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 270 mg produktu (51%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
217
Dane: 1H NMR 500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,26 (m, 10H), 1,43 (dd, J=8,6, 4,6 Hz, 1H), 1,88 (dd; J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,61 (dd, J=13,6, 6,9 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 4,06 (dd, J=11,3, 3,1 Hz, 1H), 4,25 (d, J=8,9 Hz, 1H), 4,43 (d, J=11,3 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,1 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,75 (m, 2H), 6,60 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,71 (t, J=7,3 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,2 Hz, 1H), 8,14 (d, J=8,2 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 736.
P r z y k ł a d 252: sposób wytwarzania związku 252
Związek 252 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego stosowano kwas 2-metylocynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 20 g kwasu 2-metylocynamonowego, otrzymano 14,3 g produktu (72%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2,54 (s, 1H), 6,69 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,23 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,39 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,50 (d, J=7,1 Hz, 1H), 8,30 (d, J=8,1Hz, 1H), 11,62 (s, 1H); MS: (M+H)+ 160.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 14,4 g 5-metylo-2H-izochinoIin-1-onu, otrzymano 10,6 g produktu (66%-owa wydajność).
Produkt:
218
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 2,67 (s, 3H), 7,55 (m, 2H), 7,70 (dd, J=5,9, 1,0 Hz,
1H), 8,19 (m, 1H), 8,28 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 178.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 533 mg 1-chloro-5-metyloizochinoliny, otrzymano 1116 mg produktu (100%-owa wydajność).
Produkt:
Dane Boc: MS: (M+H)+ 373.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 372 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(5-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 551 mg produktu (94%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+Na)+ 607.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 551 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo}-4-(5-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 274 mg produktu (44%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
219
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (m, 12 H), 1,23 (m, 10H), 1,44 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,1, 5,4 Hz, 1H), 2,26 (m, 2H), 2,62 (m, 4H), 2,94 (m, 1H), 4,07 (dd, J=11,9, 3,3 Hz, 1H), 4,25 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,46 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=10,3, 7,1 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,9 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 6,62 (d, J=9,3 Hz, 1H), 7,39 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,44 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,53 (d, J=7,1 Hz, 1H), 8,00 (d, J=6,1 Hz, 1H), 8,06 (d, J=8,3 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 698.
P r z y k ł a d 253: sposób wytwarzania związku 253
Związek 253 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego stosowano kwas 2-metoksycynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 10 g kwasu 2-metoksycynamonowego, otrzymano 5,3 g produktu (53%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,95 (s, 3H), 6,94 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,03 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,14 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,43 (t, J=8,1 Hz, 1H), 7,99 (d, J=8,1 Hz, 1H), 10,92 (s, 1H); MS: (M+H)+ 176.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 5,3 g 5-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 5,38 g produktu (92%-owa wydajność).
Produkt:
220
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 4,01 (s, 3H), 7,04 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,57 (t, J=8,1 Hz,
1H), 7,88 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,97 (d, J=5, 9 Hz, 1H), 8,25 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 194.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 581 mg 1-chloro-5-metoksyizochinoliny, otrzymano 1163 mg produktu (100%-owa wydajność).
Produkt:
Dane Boc: MS: (M+H)+ 389.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 117 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(5-metoksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 130 mg produktu (100%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 601.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 177 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(5-metoksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 63 mg produktu (44%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
221
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,00 (m, 12H), 1,21 (m, 10H), 1,38 (m, 1H), 1,82 (dd, J=8,1, 5,6 Hz, 1H), 2,20 (m, 2H), 2,56 (dd, J=13,6, 6,7 Hz, 1H), 2,88 (m, 1H), 3,08 (m, 2H), 3,93 (s, 3H), 4,01(dd, J=11,9, 3,3 Hz, 1H), 4,20 (d, J=9,1 Hz, 1H), 4,39 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,47 (dd J= 9,7, 7,0 Hz, 1H), 5,06 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,23 (d J=16,9 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 5,79 (s, 1H), 6,55 (d, J=9,5 Hz 1H), 7,08 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,37 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,54 (d J=5,9 Hz, 1H), 7,68 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 714.
P r z y k ł a d 254: sposób wytwarzania związku 254
Związek 254 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego stosowano kwas 2-chlorocynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 25 g kwasu 2-chlorocynamonowego, otrzymano 14,6 g produktu (59%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,22 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,42 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,73 (d, J=7,8 Hz, 1H), 8,34 (d, J=8,1 Hz, 1H), 10,61 (s, 1H); MS: (M+H)+ 180.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 14,2 g 5-chloro-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 8,28 g produktu (53%-owa wydajność).
Produkt
222
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,60 (dd, J=8,6, 7,6 Hz, 1H), 7,83 (m, 1H), 8,00 (d, J=5,9 Hz, 1H), 8,29 (dt, J=8,9, 1,0 Hz, 1H), 8,38 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 198.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 594 mg 1,5-dichloroizochinoliny, otrzymano 1174 mg produktu (100%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 393.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 118 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(5-chloroizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 154 mg produktu (85%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 605.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 150 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(5-chloroizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 91 mg produktu (51%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
223
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,97 (m, 12H), 1,17 (m, 10H), 1,38 (dd, J=9,4, 5,3 Hz,
1H), 1,82 (dd, J=8,0, 5,5 Hz, 1H), 2,21 (m, 2H), 2,58 (dd, J=13,8, 7,0 Hz, 1H), 2,88 (m, 1H), 4,01 (dd,
J=11,9, 2,8 Hz, 1H), 4,16 (d, J=9,3 Hz, 1H), 4,47 (m, 2H), 5,06 (d, J=10,3 Hz, 1H), 5,24 (d, J=16,9 Hz,
1H), 5,70 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 6,52 (d, J=9,3 Hz, 1H), 7,42 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,57 (d, J=6,1 Hz, 1H),
7,76 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,05 (d, J=6,1 Hz, 1H), 8,13 (d, J=8,3 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 718.
P r z y k ł a d 255: sposób wytwarzania związku 255 F
Związek 255 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas
2-fluorocynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 16,6 g kwasu 2-fluorocynamonowego, otrzymano 8,55 g produktu (51%-owa wydajnoś).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 6,62 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,47 (m, 2H), 8,09 (m, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 8,4 g 5-fluoro-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 7,5 g produktu (80%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,43 (ddd, J=9,7, 7,8, 0,9 Hz, 1H), 7,62 (td, J=8,2, 5,4 Hz, 1H), 7,84 (d, J=5,6 Hz, 1H), 8,14 (d, J=8,6 Hz, 1H), 8,33 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 182.
224
PL 226 561 B1
Etap 3:
modyfikacje: użyto 203 mg 1-chloro-5-fluoroizochinoliny, otrzymano 384 mg produktu (90%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3SOCD3) δ ppm 1,34, 1,36 (2s, 9H, rotamery), 2,35 (m, 1H), 2,61 (m, 1H), 3,65 (d, J=12,23 Hz, 1H), 3,80 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 5,70 (s, 1H), 7,48 (d, J=6,11 Ha, 1H), 7,63 (m, 2H), 7,99 (m, 1H), 8,10 (d, J=5,87 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 399.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 76 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(5-fluoroizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 116 mg produktu (99%-owa wydajność).
Produkt:
Etap 5:
modyfikacje: użyto 110 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1 -cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(5-fluoroizochmolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 39 mg produktu (30%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
225
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05;m, 1,25 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,5, 5,4 Hz, 1H),
1,88 (dd, J=8,1, 5,4 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,63 (dd, J=13,8, 7,0 Hz, 2,94 (m, 1H), 4,07 (dd, J=11,9,
3,1 Hz, 1H), 4,23 (d, J=9,3 Hz, 1H), 4,52 (m, 2H), 5,12 (dd, J=10,3, 1,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,4 Hz,
1H), 5,75 (m, 1H), 5,89 (s, 1H), 6,59 (d, J=9,1H), 7,47 (m, 3H), 8,02 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,06 (d, J=6,1
Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 724.
P r z y k ł a d 256: sposób wytwarzania związku 256
Związek 256 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas
2-difluorometoksycynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 10,7 g kwasu 2-difluorometoksycynamonowego, otrzymano 2 g produktu (18%-owa wydajność).
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3SOCD3) δ ppm 6,06 (m, 2H), 6,42 (m, 2H), 6,71 (s, 2H), 7,35 (s, 1H); MS: (M+H)+ 212.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 300 mg 5-difluorometoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 300 mg produktu (92%-owa wydajność).
Produkt:
226
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 6,70 (t, J=72,87 Hz, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,64 (m, 1H),
7,92 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,21 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,35 (d, J=5,62 Hz, 1H).
Etap 3:
modyfikacje: użyto 230 mg 1-chloro-5-difluorometoksyizochinoliny, otrzymano 360 mg produktu (96%-owa wydajność).
Produkt:
Etap 4:
modyfikacje: użyto 37 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(5-hydroksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 57 mg produktu (99%-owa wydajność).
Produkt:
Etap 5:
modyfikacje: użyto 57 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(5-hydroksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 10 mg produktu (15%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
227
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,93 (m, 4H), 1,13 (s, 9H), 1,31 (m, 1H), 1,49 (s, 9H),
1,89 (dd, J=7,8, 5,4 Hz, 2,16 (q, J=8,8 Hz, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 3,76 (m, 2H),
4,30 (m, 1H), 4,59 (dd, J=10,2, 7,7 Hz, 1H), 5,07 (dd, J=10,3, 1,7 Hz, 1H), 5,26 (dd, J=17,2, 1,3 Hz,
5,77 (dt, J=17,2, 9,6 Hz, 1H), 5,93 (s, 1H), 7,24 (d, J=8,6 Hz, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,63 (t, J=8,0 Hz, 1H),
7,98 (d, J=6,1 Hz, 1H), 8,24 (d, J=8,3 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 700.
P r z y k ł a d 257: sposób wytwarzania związku 257
Związek 257 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas 4-fluorocynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 16,6 g kwasu 4-fiuorocynamonowego, otrzymano 3,2 g produktu (49%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 6, 57 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,21 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,72 (dd, J=8,68, 5,26 Hz, 1H), 7,90 (dd, J=9,54, 2,93 Hz, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 8,15 g 7-fluoro-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 7,6 g produktu (84%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,52 (td, J=8,6, 2,6 Hz, 1H), 7,59(d, J=5,6 Hz, 1H), 7,86 (dd, J=9,1, 5,4 Hz, 1H), 7,95 (dd, J=9,5, 2,5 Hz, 1H), 8,26 (d, J=5,6 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 182.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 191 mg 1-chloro-7-fluoroizochinoliny, otrzymano 350 mg produktu (93%-owa wydajność).
228
PL 226 561 B1
Produkt:
Dane: MS: (M+Na)+ 399.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 75 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(7-fluoroizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 100 mg produktu (85%-owa wydajność)
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,16 (m, 4H), 1,41 (m, 10H), 1,88 (dd, J=8,1, 5,4 Hz, 1H), 2,23 (m, 2H), 2,56 (m, 1H) 2,94 (m, 1H), 3,87(m, 2H), 4,41 (dd, J=9,7, 7,0 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,78 (m, 2H), 7,36 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,54 (m, 1H), 7,78 (dd, J=9,3, 2,5 Hz, 1H), 7,90 (dd, J= 9,1, 5,1 Hz, 1H), 7,96 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 611.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 95 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(7-fluoroizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 55 mg produktu (44%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
229
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 12H), 1,22 (m, 10H), 1, 44 (dd, J=9,3, 5,4 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,63 (dd, J=13,8, 7,0 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,07 (dd, J=11,5, 3,2 Hz, 1H), 4,22 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,47 (d, J= 11,7 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=10,6, 7,5 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,3 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 6,61 (d, J=9,5 Hz, 1H), 7,36 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,52 (td, J=8,9, 2,5 Hz, 1H), 7,79 (dd, J=9,4, 2,6 Hz, 1H), 7,88 (dd, J=8,7, 5,5 Hz, 1H), 7,96 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 724.
Przykład 258: sposób wytwarzania związku 258
Związek 258 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas 4-chlorocynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 9,13 g kwasu 4-chlorocynamonowego, otrzymano 4 g produktu (44%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3SOCD3) δ ppm 6,58 (d, J=7,1 Hz, 1H), 7,20 (dd, J=7,1, 5,9 Hz, 1H), 7,72 (m, 2H), 8,10 (m, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 3,5 g 7-chloro-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 2,8 g produktu (72%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (500 500 MHz, CDCI3) δ ppm 7,59 (d, J=5,5 Hz, 1H), 7,69 (dd, J=8,9, 2,1 Hz, 1H), 7,80 (d, J=8,6 Hz, 1H), 8,29 (d, J=5,5 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H); MS: (M+H)+ 198.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 208 mg 1,7-dichloroizochinoliny, otrzymano 350 mg produktu (89%-owa wydajność).
230
PL 226 561 B1
Produkt:
Dane: MS: (M+Na)+ 415.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 79 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(7-chloroizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 119 mg produktu (99%-owa wydajność}.
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,17 (m, 4H), 1,43 (m, 10H), 1,88 (dd, J=8,31 5,4 Hz, 1H), 2,29 (m, 2H), 2,57 (dd, J=13,7, 6,9 Hz, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,87 (m, 2H), 4,42 (dd, J= 9,9, 6,9 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,3 Hz, 1H), 5,31 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,78 (m, 2H), 7,35 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,69 (dd, J=8,7, 2,1 Hz, 1H), 7,84 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,99 (d, J=5,9 Hz, 1H), 8,12 (d, J=1,7 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 627.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 115 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(7-chloroizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 36 mg produktu (25%-owa wydajność).
Produkt:
Związek 258
Dane: MS: (M+Na)+ 740.
PL 226 561 B1
231
P r z y k ł a d 259: sposób wytwarzania związku 259
Związek 259 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas 4-metylocynamonowy.
Etap 1 :
modyfikacje: użyto 25 g kwasu 4-metylocynamonowego, otrzymano 15,3 g produktu (62%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2,50 (s, 3H), 6,54 (d, J=7,1 Hz, 1H), 7,13 (d, J=7,1 Hz, 1H), 7,49 (m, 2H), 8,22 (s, 1H), 11,49 (s, 1H); MS: (M+H)+ 160.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 15,3 g 7-metylo-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 5,15 g produktu (30%-owa wydajność).
Produkt:
Cl
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 2,58 (s, 3H), 7,56 (m, 2H), 7,73 (d, J=8,3 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H), 8,20 (d, J=5, 6 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 178.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 205 mg 1-chloro-7-metyloizochinoliny, otrzymano 350 mg produktu (89%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 373
232
PL 226 561 B1
Etap 4:
modyfikacje: użyto 75 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(7-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 107 mg produktu (95%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+Na)+ 607.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 107 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(7-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 53 mg produktu (41%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,02 (m, 12H), 1,18 (s, 9H), 1,24 (m, 1H), 1,45 (dd, J=9,4, 5,5 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,2, 5,5 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,61 (dd, J=13,8, 6,7 Hz, 1H), 3,34 (s, 1H), 4,09 (dd, J=11,7, 3,2 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,42 (d, J=12,0 Hz, 1H), 4,57 (dd, J=10,0, 7,1 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,3, 1,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,87(s, 1H), 7,28 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,55 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,71 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,93 (s, 1H); MS: (M+H)+ 698.
P r z y k ł a d 260: sposób wytwarzania związku 260
PL 226 561 B1
233
Związek 260 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas
4-metoksycynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 33 g kwasu 4-metoksycynamonowego, otrzymano 7 g produktu (33%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (500 MHz, CD3COCD3) δ ppm 3,90 (s, 3H), 6,49 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,10 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,28 (dd, J=8,6, 2,8 Hz, 1H), 7,57 (d, J=8,9 Hz, 1H), 7,71 (d, J=2,8 Hz, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 4g 7-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 3 g produktu (68%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 3,98 (s, 3H), 7,38 (dd, J= 8,9, 2,6 Hz, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,73 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,16 (d, J=5,4 Hz, 1H).
Etap 3:
modyfikacje: użyto 533 mg 1-chloro-7-metoksyizochinoliny, otrzymano 1115 mg produktu (100%-owa wydajność).
Produkt:
Etap 4:
modyfikacje: użyto 78 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(7-metoksyizochinolin-1ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 108 mg produktu (99%-owa wydajność).
Produkt:
234
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,17 (m, 4H), 1,40 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,85 (dd, J=8,1, 5,4 Hz, 1H), 2,21 (m, 2H), 2,51 (dd, J=13,7, 6,6 Hz, 1H), 2,93 (s, 1H), 3,80 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,41 (dd, J=10,0, 6,6 Hz, 1H), 4,57 (s, 1H), 5,11 (d, J=11,3 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,77 (m, 2H), 7,01 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,22 (d, J=5,6 Hz, 1H), 7,32 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,58 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,87(d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 601.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 100 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(7-metoksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 30 mg produktu (25%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3SOCD3) δ ppm 0,90 (m, 2H), 0,95 (s, 9H), 1,05 (m, 1H), 1,12 (s, 9H), 1,35 (m, 2H), 1,70 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,00 (m, 2H), 4,27 (d, J=12,0 Hz, 1H), 4,45 (t, J=8,6 Hz, 1H), 5,09 (d, J=10,8 Hz, 1H), 5,23 (d, J=16,9 Hz, 1H), 5,62 (m, 1H), 5,79 (s, 1H), 6,55 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,35 (d, J=6,6 Hz, 1H), 7,39 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,43 (dd, J=8,8, 2,2 Hz, 1H), 7,84 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 714.
P r z y k ł a d 261 i 262: sposób wytwarzania związków 261 i 262
Związek 261
Związek 262
Związki 261 i 262 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego stosowano kwas
4-fluoro-3-metoksycynamonowy.
PL 226 561 B1
235
Etap 1:
modyfikacje: użyto 19,6 g kwasu 4-fluoro-3-metoksycynamonowego, otrzymano 9,5 g produktu (48%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3COCD3) δ ppm 4,00 (s, 1H), 6,49 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,19 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,29 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,86 (d, J=11,74 Hz, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 9 g 7-fluoro-6-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 7 g produktu (70%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4,04 (s, 3H), 7,17 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,48 (d, J=5,62 Hz, 1H), 7,94 (d, J=11,49 Hz, 1H), 8,20 (d, J=5,62 Hz, 1H).
Etap 3:
modyfikacje: użyto 222 mg 1-chloro-7-fluoro-6-metoksyizochinoliny, otrzymano 406 mg produktów.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 400 mg mieszaniny estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(7-fluoro-6-metoksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego oraz estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(1-chloro-6-metoksyizochinolin-7-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, otrzymano 700 mg produktów.
Produkty:
236
PL 226 561 B1
Etap 5:
modyfikacje: użyto 700 mg mieszaniny estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonyIo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(7-fluoro-6-metoksyizochinolin-1-ylooksy) pirolidyno-1-karboksylowego oraz estru tert-butylowego kwasu 4-(1-chloro-6-metoksyizochinolin-7-ylooksy)-2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropyokarbamoilo)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 79 mg związku 261 oraz 80 mg związku 262.
Produkty:
Związek 261
N
Związek 262
Dane związku 261: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,07 (m, 12H), 1,25 (m, 10H), 1,44 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,1, 5,6 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,60 (dd, J=13,7, 6,9 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,02 (m, 4H), 4,22 (s, 1H), 4,43 (d, J=12,2 Hz, 1H), 4,53 (dd, J=10,3, 6,6 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,6 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,84 (s, 1H), 7,28 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,37 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,75 (d, J=11,7 Hz, 1H), 7,91 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 754.
Dane związku 262: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,07 (m, 12H), 1,25 (m, 10H), 1,44 (m, J=9,41, 5,26 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,31, 5,38 Hz, 1H), 2,24 (q, J=8,72 Hz, 2H), 2,57 (dd, J=13,82, 7,21 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,97 (d, J=5,14 Hz, 3H), 4,09 (m, J=11,00 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,50 (m, J=16,87 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,52, 1,71 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,12, 1,47 Hz, 1H), 5,38 (s, 1H), 5,76 (m, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,66 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,07 (d, J=5,62 Hz, 1H); MS:(M+H)+ 732.
P r z y k ł a d 263: sposób wytwarzania związku 263
Związek 263 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, za wyjątkiem etapu 1 i 2.
PL 226 561 B1
237
Etap 3:
modyfikacje: użyto 17 6 mg 1-chloro-8-metyIoizochinoliny, otrzymano 370 mg produktu (wydajność 100%).
Produkt:
Etap 4:
modyfikacje: użyto 149 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 8-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego, 230 mg produkt otrzymano (99%-owa wydajność)
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,13 (m, 4H), 1,42 (m, 10H), 1,87 (dd, J=8,2, 5,3 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,58 (dd, J=13,9, 6,9 Hz, 1H), 2,83 (s, 3H), 2,96 (m, 1H), 3,85 (m, 2H), 4,38 (dd, J=10,2, 6,7 Hz, 1H), 5,12 (dd, J=10,4, 1,6 Hz, 1H), 5,30 (dd, J=17,1, 1,2 Hz, 1H), 5,76 (m, 2H), 7,28 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,36 (d, J=6,9 Hz, 1H), 7,53 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,88 (d, J=5,6 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 607.
Etap 5:
modyfikacje: użyto 220 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(8-metyloizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 90 mg produktu (35%-owa wydajność).
Produkt:
238
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,3, 5,4 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,1, 5,5 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,60 (dd, J=13,9, 7,3 Hz, 1H), 2,77 (s, 3H), 2,94 (m, 1H), 4,04 (dd, J=11,9, 3,1 Hz, 1H), 4,27 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,42 (d, J=12,0 Hz, 1H), 4,54 (dd, J=10,8, 7,1 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,3 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,95 (s, 1H), 6,63 (d, J=9,1 Hz, 1H), 7,28 (m, 2H), 7,50 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,60 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,6 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 720.
P r z y k ł a d 264: sposób wytwarzania związku 264
Związek 264 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, za wyjątkiem etapu 1 i 2.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 203 mg 1-chloro-8-metoksyizochinoliny, otrzymano 340 mg produktu (85%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3SOCD3) δ ppm 1,34, 1,36 (2s, 9H, rotamery), 2,26 (m, 1H), 2,49(m, 1H), 3,67 (m, 2H), 3,86 (s, 3H), 4,31 (m, 1H), 5,67 (br s, 1H), 7,04 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,30 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,38 (d, J=8,1 Hz, 1H), 7,62 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,93 (d, J=5,6 Hz, 1H), 12,64 (s, 1H); MS: (M+Na)+ 411.
Etap 4:
modyfikacje: użyto 78 mg estru 1-tert-butylowego kwasu 8-metoksyizochinolin-1-ylooksy) pirolidyno-1, 2-dikarboksylowego, otrzymano 115 mg produktu (96%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
239
Etap 5:
modyfikacje: użyto 110 mg estru tert-butylowego kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(8-metoksyizochinolin-1-ylooksy)pirolidyno-1-karboksylowego, otrzymano 45 mg produktu (34%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 714.
P r z y k ł a d 265 i 266: sposób wytwarzania związków 265 i 266
Związki 265 i 266 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas 3-(2,3-dihydrobenzofuran-7-ylo)akrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 3,8 g kwasu 3-(2 ,3-dihydrobenzofuran-7-ylo)akrylowego, otrzymano 2 g produktu (53%-owa wydajność).
Produkt:
240
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,37 (t, J=9,05 Hz, 1H), 4,73 (t, J=9,05 Hz, 2H), 6,67 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,10 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,37 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,81 (d, J=8,07 Hz, 1H);
MS: (M+H)+ 188.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 1,87 g 2,3-dihydro-7H-furo[2,3-f]izochinolin-6-onu, otrzymano 1,84 g produktu (90%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 3,43 (t, J=9,05 Hz, 2H), 4,82 (t, J=9,05 Hz, 2H), 7,52 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,66 (d, J=5,62 Hz, 1H), 7,84 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,19 (d, J=5,62 Hz, 10 1H); MS (M+H)+ 206.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 206 mg 6-chloro-2,3-dihydrofuro-[2,3-f]izochinoliny, otrzymano 300 mg mieszaniny produktów.
Produkty:
Etap 4:
modyfikacje: użyto 240 mg mieszaniny produktów z etapu 3, otrzymano 350 mg mieszaniny produktów.
Produkty:
PL 226 561 B1
241
Etap 5:
modyfikacje: użyto 331 mg mieszaniny produktów z etapu 4, otrzymano 240 mg związku 265 i 24 mg związku 266.
Produkty:
Dane związku 265: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 0,99 (m, 12H), 1,16 (m, 10H), 1,36 (m, 1H), 1,81 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,18 (m, 2H), 2,54 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,87 (m, 1H), 3,31 (t, J=9,05 Hz, 2H), 4,01 (m, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,36 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,46 (dd, J=10,15, 7,21 Hz, 1H), 4,70 (m, 2H), 5,05 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,23 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,70 (m, 2H), 7,23 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,31 (d, J=8,31 Hz, 1H), 7,63 (d, J=8,31 Hz, 1H), 7,82 (d, J=5,87 Hz, 1H); MS (M+H)+ 726.
Dane związku 266: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,44 (dd, J=10,03, 5,14 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=7,83, 5,38 Hz, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,65 (dd, 12,96, 6,36 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,08 (dd, 12,35, 3,30 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,54 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,91 (s, 1H), 7,05 (d, J=1,96 Hz, 1H), 7,72 (m, 2H), 8,02 (m, 2H), 8,11 (d, J=5,87 Hz, 1H), 9,19 (s, 1H); MS: (M+H)+ 724.
P r z y k ł a d 267 i 268: sposób wytwarzania związków 267 i 268.
Związek 267 Związek 268
Związki 267 i 268 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 1 przykładu 250, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 3-fenylobut-2-enowego użyto kwas 3-(2,3-dihydrobenzofuran-4-ylo)akrylowy.
242
PL 226 561 B1
Etap 1:
modyfikacje: użyto 1,14 g kwasu 3-(2,3-dihydrobenzofuran-4-ylo)akrylowego, otrzymano 600 mg produktu (52%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3CD) δ ppm 3,35 (t, J=8,93 Hz, 2H), 4,74 (t, J=8,93 Hz, 2H), 6,49 (d, J=7,09 Hz, 1H), 6,95 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,25 (d, J=7,09 Hz, 1H), 8,13 (d, J=8,80 Hz, 1H); MS (M+H)+ 188.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 560 mg 1,7-dihydro-2H-furo[3,2-f]izochinolin-6-onu, otrzymano 380 mg produktu (48%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 3,47 (t, J=9,05 Hz, 2H), 4,84 (t, J=9,05 Hz, 2H), 7,24 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,33 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,20 (m, 2H); MS (M+H)+ 206.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 105 mg 6-chloro-1,2-dihydrofuro[3,2-f]izochinoliny, otrzymano 390 mg mieszaniny produktów.
Produkty:
Etap 4:
modyfikacje: użyto 216 mg mieszaniny produktów z etapu 3, otrzymano 330 mg mieszaniny produktów.
PL 226 561 B1
243
Produkty:
Etap 5:
modyfikacje: użyto 330 mg mieszaniny produktów z etapu 4, otrzymano 140 mg związku 267 i 25 mg związku 268.
Produkty:
Związek 267 Związek 268
Dane związku 267: 1H NMR (400 Hz, CD3CD) δ ppm 1,07 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,43 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,26 (m, 2H), 2,61 (dd, J=13,69, 7,09 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,42 (t, J=9,05 Hz, 2H), 4,05 (dd, J=11,86, 3,55 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,50 (m, 2H), 4,77 (t, J=8,93 Hz, 2H), 5,12 (m, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,76 (m, 2H), 7,03 (d, J=8,80 Hz, 1H), 7,12 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,91(d, J=5,87 Hz, 1H), 8,06 (d, J=8,80 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 726.
Dane związku 268: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,19 (s, 9H), 1,26 (m, 1H), 1,44 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,24 (d, J=8,56 Hz, 2H), 2,64 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 4,07 (m, J=3,42 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,54 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,91 (s, 1H), 7,39 (d, J=1,47 Hz, 1H), 7,68 (m, 2H), 7,96 (d, J=1,96 Hz, 1H), 8,12 (m, 2H); MS: (M+H)+ 724.
244
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 269: sposób wytwarzania związku 269
F
Związek 269
Schemat 2
Etap 1:
Roztwór kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego (11,6 g), azydku difenylofosforylu (13,75 g) i trietyloaminy (7,07 g) w benzenie (50 ml) mieszano przez 1 godzinę. Po filtracji przez warstwę żelu krzemionkowego, przemyciu benzenem, i zatężeniu, pozostałość rozpuszczono w difenylometanie (80 ml) i ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Po oziębieniu do temperatury pokojowej, części stałe zebrano przez odsączenie, przemyto benzenem i osuszono, uzyskując 5,1 g (44%) pożądanego produktu w postaci ciała stałego.
PL 226 561 B1
245 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 6,79 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,29 (d, J=7,3 Hz, 1H), 7,57 (t, J=8,1
Hz, 1H), 7,70 (d, J=7,8 Hz, 1H), 8,30 (d, J=8,1 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 230.
Etap 2:
Roztwór 5-trifluorometoksy-2H-izochinolin-1-onu (4,58 g) w POCl3 (50 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Po oziębieniu i zatężeniu, pozostałość zalkalizowano 5N NaOH i ekstrahowano CH2CI2. Warstwę organiczną przemyto solanką i osuszono nad MgSO4. Po zatężeniu i oczyszczeniu metodą szybkiej chromatografii w kolumnie Biotage z zastosowaniem 5% octanu etylu w heksanach 4,347 g (88%) pożądanego produktu w postaci ciała stałego.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,66 (m, 2H), 7,87 (d, J=5,9 Hz, 1H), 8,31 (m, 1H), 8,37 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 248.
Etap 3:
Do zawiesiny estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cykIopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego (56 mg), 1-chloro-5-trifluorometoksyizochinoliny (25 mg) i LaCl3 (25 mg) w DMF (1 ml), w temperaturze
-78°C, dodano ter-BuOK (0,5 ml, 1M w THF) i ogrzano do temperatury pokojowej. Po wymieszaniu przez 30 minut, reakcję zatężono nasyconym roztworem NH4CI i mieszaninę ekstrahowano octanem etylu. Po zatężeniu i oczyszczeniu metodą preparatywnej HPLC uzyskano 35 mg (46%) pożądanego 269 w postaci ciała stałego.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,03 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,7, 5,3 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,1, 5,6 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,64 (dd, J=13,7, 7,1 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 4,21 (d, J=9,3 Hz, 1H), 4,53 (m, 2H), 5,12 (d, J=11,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,92 (m,1H), 6,60 (d, J=9,5 Hz, 1H), 7,49 (d, J=6,1 Hz, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,69 (d, J=7,3 Hz, 1H), 8,11 (d, J=6,1 Hz, 1H), 8,22 (d, J=8,3 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 790.
P r z y k ł a d 270: sposób wytwarzania związku 270
Związek 270 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 2-trifluorometylocynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 10 g kwasu 2-trifluorometylocynamonowego, otrzymano 5 g produktu (50%-owa wydajność).
Produkt:
246
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 6,83 (m, 1H), 7,33 (d, J=7,58 Hz, 1H), 7,63 (t, J=7,83
Hz, 1H), 8,09 (d, J=7,58 Hz, 1H), 8,57 (d, J= 8,07 Hz, 1H)
Etap 2:
modyfikacje: użyto 4,4 g 5-trifluoronetylo-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 3,5 g produktu (73%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,75 (t, J=7,95 Hz, 1H), 7,90 (m, 1H), 8,12 (d, J=7,34 Hz, 1H), 8,41 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,60 (d, J=8,56 Hz, 1H).
Etap 3:
modyfikacje: użyto 46 mg 1-chloro-5-trifluorometyloizochinoliny i 111 mg estru tert-butylowego kwasu {(1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 70 mg produktu (47%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,23 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,54, 5,38 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,65 (dd, J=13,82, 6,97 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,56 (m, 2H), 5,12 (m, 1H), 5,30 (d, 17,12 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,90 (s, 1H), 6,59 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,53 (d, J=4,40 Hz, 1H), 7,65 (t, J=7,83 Hz, 1H), 8,12 (d, J=7,09 Hz, 1H), 8,15 (d, J=6,36 Hz, 1H), 8,50 (d, J=8,31 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 774.
P r z y k ł a d 271: sposób wytwarzania związku 271
PL 226 561 B1
247
Związek 271 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 2-chlorocynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 7 g kwasu 2-chlorocynamonowego, otrzymano 5 g produktu (71%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,02 (m, 4H), 3,91 (m, 4H), 6,97 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,18 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,44 (m, 2H), 8,02 (d, J=7,83 Hz, 1H); MS (M+H)+ 231.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 2,2 g 5-morfolin-4-ylo-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 2,1 g produktu (87%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CCl3D) δ ppm 3,09 (m, 4H), 3,97 (m, 4H), 7,32 (d, J=7,58 Hz, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,91 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,06 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,26 (d, J=5,87 Hz, 1H),
Etap 3:
modyfikacje: użyto 50 mg 1-chloro-5-morfolin-4-ylo-izochinoliny i 111 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 40 mg produktu (26%-owa wydajność).
Produkt:
248
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ ppm 1,07 (m, 12H), 1,26 (m, 10H), 1,44 (d, J=7,93 Hz, 1H), 1,88(dd, J=7,93 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=7,9, 5,19 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,62 (dd, J=13,73, 76,02 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,06 (d, J=3,97 Hz, 4H), 3,94 (m, 4H), 4,07 (d, J=14,04 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,95 (s, 1H), 7,34 (d, J=7,32 Hz, 1H), 7,45 (t, J=7,78 Hz, 1H), 7,59 (d, J=6,10 Hz, 1H), 7,91 (d, J=7,63 Hz, 1H), 7,97 (d, J=5,80 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 272: sposób wytwarzania związku 272
Związek 272 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluoronetoksycynamonowego użyto kwas 2,3-dimetoksycynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 10,4 g kwasu 2,3-dimetoksycynamonowego, otrzymano 4,1 g produktu (40%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 3,86 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 6,82 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,10 (d, J=7,2 Hz, 1H), 7,28 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,07 (d, J=8,8 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 206.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 4,1 g 5,6-dimetoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 4,03 g produktu (90%-owa wydajność)
Produkt:
PL 226 561 B1
249
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,97 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 7,65 (d, J=9,29 Hz, 1H),
7,90 (dd, J=5,87, 0,98 Hz, 1H), 8,12 (m, 2H).
Etap 3:
modyfikacje: użyto 22 mg 1-chloro-5,6-dimetoksyizochinoliny i 56 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}-karbaminowego, otrzymano 31 mg produktu (42%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (500 MHz, CD3CD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,26 (m, 10H), 1,44 (s, 1H), 1,88 (d, J=7,32 Hz, 1H), 2,24 (s, 2H), 2,60 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,99 (s, 3H), 4,06 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,43 (d, J=10,68 Hz, 1H), 4,53 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,77 (m, 2H), 7,35 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,46 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,97 (d, J=8,85 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 273: sposób wytwarzania związku 273
Związek 273 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 4-chloro-3-metoksycynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje użyto 2,5 g kwasu 4-chloro-3-metoksycynamonowego, otrzymano 1,2 g produktu (48%-owa wydajność).
250
PL 226 561 B1
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4,00 (s, 3H), 6,64 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,15 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 8,22 (s, 1H).
Etap 2 :
modyfikacje: użyto 1,05 g 7-chloro-6-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 0,8 g produktu (70%-owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 4,05 (s, 3H), 7,13 (s, 1H), 7,48 (d, J=5,38 Hz, 1H), 8,21 (d, J=5,62 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H); MS: (M+H)+ 229 .
Etap 3:
modyfikacje: użyto 44 mg 1,7-dichloro-6-metoksyizochinoliny i 113 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 25 mg produktu (17%-owa wydajność)
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,07 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,54, 5,38 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,60 (m, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,94 (m, 2H), 3,98 (s, 3H), 4,06 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,42 (d, J=12,23 Hz, 1H), 4,57 (m, 1H), 5,12 (d, J=11,74 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,28 (d, J=5,62 Hz, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,92 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,09 (s, 1H); MS: (M+H)+ 749.
PL 226 561 B1
251
P r z y k ł a d 274: sposób wytwarzania związku 274
Związek 274 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego stosowano kwas 2-fluoro-3-cynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 3,92 g kwasu 2-fluoro-3-cynamonowego, otrzymano 2,4 g produktu (61%owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4,0 (s, 3H), 6,72 (m, 1H), 7,16 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,35 (t, J=8,44 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,80 Hz, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 1,93 g 5-fluoro-6-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 1,688 g produktu (80%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (CDCI3) δ ppm 4,08 (s, 3H), 7,44 (dd, J=9,29, 7,83 Hz, 1H), 7,75 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,12 (d, J=9,29 Hz, 1H), 8,22 (d, J=5,87 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 212.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 41 mg 1-chloro-5-fluoro-6-metoksyizochinoliny i 133 mg estru tert-butylowego kwasu {1-2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4252
PL 226 561 B1
-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 70 mg produktu (48%-owa wydajność).
Produkt:
F
Związek 274
Dane: 1H NMR (CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 13H), 1,21 (s, 9H), 1,44 (dd, J=9,78, 5,38 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,24 (d, J=9,29 Hz, 2H), 2,62 (d, J=13,94 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,05 (m, 4H), 4,22 (d, J=9,29 Hz, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,54 (dd, J=9,66, 7,21 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,30 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,95 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,00 (d, J=9,29 Hz, 1H).
P r z y k ł a d 275: sposób wytwarzania związku 275
Związek 2 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego stosowano kwas 2-chloro-3-metoksycynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 658 mg kwasu 2-chloro-3-metoksycynamonowego, otrzymano 360 mg produktu (54%-owa wydajność).
PL 226 561 B1
253
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4,02 (s, 3H), 6,91 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,23(d, J=7,58 Hz, 1H), 7,35 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,27 (d, J=9,05 Hz, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 350 mg 5-chloro-6-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 300 mg produktu (80%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ ppm 4,09 (s, 3H), 7,43 (d, J=9,29 Hz, 1H), 7,93 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,30 (m, 2H); MS (M+H)+ 229.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 68 mg 1,5-dichloro-6-metoksyizochinoliny i 167 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 130 mg produktu (60%-owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,25 (M, 10H), 1,46 (d, J=5,62 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,62 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,05 (m, 4H), 4,22 (d, =9,05 Hz, 1H), 4,46 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,54 (dd, J=9,78, 6,36 Hz, 1H), 5,13 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,30 (d, J=15,89 Hz, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,40 (d, J=9,29 Hz, 1H), 7,55 (d, J=6,36 Hz, 1H), 8,01 (d, J=6,36 Hz, 1H), 8,20 (d, J=9,29 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 749.
254
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 276: sposób wytwarzania związku 276
Związek 276 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego stosowano kwas 3-chloro-2-metoksycynamonowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 4,24 g kwasu 3-chloro-2-metoksycynamonowego, otrzymano 2,4 g produktu (57%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,93 (s, 1H), 6,85 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,24 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,52 (d, J=8,80 Hz, 1H), 8,03 (d, J=8,80 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 210.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 2,09 g 6-chloro-5-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 1,9 g produktu (83%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 4,03 (s, 2H), 7,63 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,86 (d, J=5,14 Hz, 1H), 8,06 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,32 (d, J=5,62 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 229.
PL 226 561 B1
255
Etap 3:
modyfikacje: użyto 91 mg 1,6-dichloro-5-metoksyizochinoliny i 226 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 114 mg produktu (38%-owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD30D) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,23 (m, 10H), 1,44 (t, J=6,72 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=7,95, 5,26 Hz, 1H), 2,25 (m, 2H), 2,62 (dd, J=13,33, 6,48 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 4,03 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,51 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,32 (s, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,87 (s, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,95 (d, J=8,80 Hz, 1H), 8,06 (d, J=5,87 Hz, 1H); MS (MH+) 749.
P r z y k ł a d 277: sposób wytwarzania związku 277
Związek 277 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego stosowano kwas 3-(4-chlorofenylo)-3-metoksyakrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 4,24 g kwasu 3-(4-chlorofenylo)-3-metoksyakrylowego, otrzymano 130 mg produktu (3%-owa wydajność).
256
PL 226 561 B1
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,96 (s, 3H), 7,19 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1H), 7,28 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 8,25 (d, J=9,05 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 210.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 105 mg 7-chloro-4-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 60 mg produktu (71%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 4,05 (s, 3H), 1,61 (dd, J=8,80, 1,96 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 8,16 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,24 (d, J=1,96 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 229.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 46 mg 1,7-dichloro-4-metoksyizochinoliny i 113 mg estru tert-butylowego kwasu {1-2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 50 mg produktu (31%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 11H), 1,16 (s, 9H), 1,24 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,54, 5,38 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,59 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 4,05 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,56 (dd,
PL 226 561 B1
257
J=10,03, 6,85 Hz, 1H), 5,12 (d, J=11,49 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,76 (m, 2H), 7,57 (s, 1H),
7,67 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,04 (s, 1H), 8,08 (d, J=8,80 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 748.
P r z y k ł a d 278: sposób wytwarzania związku 278
Związek 278 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 za wyjątkiem etapu 1.
Etap 1:
modyfikacje: mieszaninę 6-metoksy-2H-izochinolin-1-onu (700 mg) i NCS (532 mg) w MeCN (10 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Po odsączeniu uzyskano 600 mg (72%) pożądanego produktu w postaci ciała stałego.
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3,96 (s, 1H), 7,19 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1H), 7,28 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 8,25 (d, J=9,05 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 210.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 500 mg 4-chloro-6-metoksy-2H-izochinolin-1onu, otrzymano 400 mg produktu. Produkt :
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 4,01 (s, 3H), 7,35 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,41 (d,J=2,45 Hz, 1H), 8,24 (d, J=9,29 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H); MS: (M+H)+ 229.
258
PL 226 561 B1
Etap 3:
modyfikacje: użyto 42 mg 1,4-dichloro-6-metoksyizochinoliny i 117 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 70 mg produktu (47%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 12H), 1,25 (m, 10H), 1,44 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,61 (dd, J=13,82, 6,72 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 4,04 (dd, J=11,74, 2,69 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,49 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,75 (m, 2H), 7,19 (d, J=8,80 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 8,13 (d, J=9,05 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 749.
P r z y k ł a d 279: sposób wytwarzania związku 279
Związek 279 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego stosowano kwas 3-metoksy-3-(3-metoksyfenylo)akrylowy.
PL 226 561 B1
259
Etap 1:
modyfikacje: użyto 4,24 g kwasu 3-metoksy-3-(3-metoksyfenylo)akrylowego, otrzymano 400 mg produktu (10%-owa wydajność).
Produkt:
Etap 2:
modyfikacje: użyto 400 mg 4,6-dimetoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 300 mg produktu (69%-owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 3,97 (s, 3H), 4,05 (s, 3H), 7,31 (dd, J= 9,17, 2,57 Hz, 1H), 7,45 (d, J=2,69 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 8,16 (d, J=9,29 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 224.
Etap 3 :
modyfikacje: użyto 89 mg 1-chloro-4,6-dimetoksyizochinoliny i 223 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 160 mg produktu (54%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,07 (m, 12H), 1,21 (m, 10H), 1,43 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,58 (dd, J=13,57, 6,97 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,99
260
PL 226 561 B1 (s, 3H), 4,04 (dd, J=11,74, 2,93 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,39 (d, J=11,98 Hz, 1H), 4,50 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,75 (m, 2H), 7,12 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,40 (d, J=2,20
Hz, 1H), 7,48 (s, 1H), 8,04 (d, J=9,05 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 744.
P r z y k ł a d 280: sposób wytwarzania związku 280
Związek 280 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 3-(3-difluorometoksyfenylo)akrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 4,28 g kwasu 3-(3-difluorometoksyfenylo)akrylowego, otrzymano 3,1 g produktu (72%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 212.
Etap 2 :
modyfikacje: użyto 2 g 6-difluorometoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 1,5 g produktu (61%owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 6,69 (t, J=72,75 Hz, 1H), 7,49 (m, 2H), 8,28 (d, J=5,62 Hz, 1H), 8,36 (d, J=9,05 Hz, 1H); MS : (M+H)+ 230.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 46 mg 1-chloro-6-difluorometoksyizochinoliny i 113 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 8 mg produktu (5%-owa wydajność).
PL 226 561 B1
261
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 12H), 1,23 (m, 10H), 1,44 (m, 2H), 1,88 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,30 (m, 2H), 2,67 (d, J=13,94 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,07 (d, J=10,27 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,53 (d, J=6,85 Hz, 2H), 5,13 (m, 1H), 5,31 (s, 1H), 5,76 (d, J=47,93 Hz, 2H), 7,11 (m, 2H), 7,26 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,81 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,16 (m, 1H); MS: (M+H)+ 700.
P r z y k ł a d 281: sposób wytwarzania związku 281
Związek 281 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 3-chloro-3-fenyloakrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 11 g kwasu 3-chloro-3-fenyloakrylowego, otrzymano 3,1 g produktu (29%owa wydajność).
Produkt :
262
PL 226 561 B1
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7,34 (s, 1H), 7,52 (t, J=7,58 Hz, 1H), 7,77 (t, J=7,46
Hz, 1H), 7,90 (d, J=8,07 Hz, 1H), 8,39 (d, J=8,07 Hz, 1H), 11,37 (s, 1H); MS:(M+H)+ 180.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 3,1 g 4-chloro-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 2,3 g produktu (66%-owa wydajność)
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,77 (ddd, J=8,31, 7,09, 1,22 Hz, 1H), 7,88 (ddd, J=8,31, 7,09, 1,22 Hz, 1H), 8,23 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,36 (d, J=8,56 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 198.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 20 mg 1,4-dichloroizochinolinu i 56 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 33 mg produktu (30%-owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,41, 5,26 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=7,83, 5,62 Hz, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,63 (dd, J=13,82, 6,97 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,06 (dd, J=11,49, 2,45 Hz, 1H), 4,22 (d, J=9,29 Hz, 1H), 4,53 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,76 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,85 (s, 1H), 6,60 (d, J=8,80 Hz, 1H), 7,63 (t, J=7,58 Hz, 1H), 7,86 (t, J=7,70 Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 8,11 (d, J=8,56 Hz, 1H), 8,25 (d, J=8,31 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 718.
PL 226 561 B1
263
P r z y k ł a d 282: sposób wytwarzania związku 282
Związek 2 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifuorometoksycynamonowego użyto kwas
3-chloro-3-fenyloakrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 20 g kwasu 3-chloro-3-fenyloakrylowego, otrzymano 2 g produktu (8%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 230.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 2 g 6-trifluorometoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 0,7 produktu (33%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 7,51 (d, J=9,29 Hz, 1H), 7,59 (d, J=5,62 Hz, 1H), 7,64 (s, 1H), 8,31 d, J=5,62 Hz, 1H), 8,40 (d, J=9,05 Hz, 1H); MS: M+H)+ 248.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 50 mg 1-chloro-6-trifluorometoksyizochinoliny i 113 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 42 mg produktu (27%-owa wydajność).
264
PL 226 561 B1
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,44 (dd, J=9,17, 5,50 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,63 (dd, J=13,45, 7,09 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,06 (dd, J=11,25, 2,45 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,53 (m, 2H), 5,13 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,89 (s, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,72 (s, 1H), 8,05 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,31 (d, J=9,05 Hz, 1H), 9,18 (s, 1H); MS: (M+H)+ 768.
P r z y k ł a d 283: sposób wytwarzania związku 283
Związek 283 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 3-(4-fluorofenylo)-3-metoksyakrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: żyto 3,82 g kwasu 3-(4-fluorofenylo)-3-metoksyakrylowego, otrzymano 198 mg produktu (5%-owa wydajność).
PL 226 561 B1
265
Produkt:
Dane: MS: (M+H)+ 194.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 193 mg 7-fluoro-4-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 199 mg produktu (94%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ ppm 4,05 (s, 3H), 7,49 (m, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,86 (dd, J=9,66, 2,57 Hz, 1H), 8,23 (dd, J=9,29, 5,38 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 212.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 42 mg 1-chloro-7-fluoro-4-metoksyizochinoliny i 112 mg estru tertbutylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 40 mg produktu (14%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,42 (m, 1H), 1,87 (dd, J=7,95, 5,50 Hz, 1H), 2,23 (m, 2H), 2,55 (dd, J=13,08, 6,48 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,09 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,30 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,46 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 5,76 (m, 1H), 7,46 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,56 (d, J=2,20 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 8,18 (d, J=9,05 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 749.
266
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 284: sposób wytwarzania związku 284
Związek 284 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 za wyjątkiem etapu 1.
Etap 1:
modyfikacje: mieszaninę 7-metoksy-2H-izochinolin-1-onu (876 mg) i NCS (665 mg) w MeCN (10 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny. Po odsączeniu uzyskano 500 mg (47%) pożądanego produktu w postaci ciała stałego.
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4,00 (s, 3H), 7,58 (m, 2H), 8,14 (d, J=10,03 Hz, 1H), 8,17(s, 1H).
Etap 2:
modyfikacje: użyto 418 mg 4-chloro-7-metoksy-2H-izochinolin-1-onu, otrzymano 410 mg produktu (90%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ ppm 4,00 (s, 3H), 7,49 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,55 (d, J=2,44 Hz, 1H), 8,12 (d, J=9,16 Hz, 1H), 8,21 (s, 1H); MS: (M+H)+ 229.
PL 226 561 B1
267
Etap 3:
modyfikacje: użyto 42 mg 1,4-dichloro-7-metoksyizochinoliny i 117 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 50 mg produktu (33%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,05 (m, 20H), 124 (m, 2H), 1,44 (m, 1H), 1,89 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,28 (m, 2H), 2,62 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,07 (dd, J=11, 98, 3,42 Hz, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,44 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,58 (dd, J=10,27, 7,09 Hz, 1H), 5,12 (m, 1H), 5,31 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,78 (m, 2H), 7,49 m, 2H), 7,91 (s, 1H), 8,02 (m, 1H); MS: (M+H)+ 749.
P r z y k ł a d 285: sposób wytwarzania związku 285
Związek 285 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykłądu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 stosowano kwas 2-difluorometoksycynamonowy zamiast 2-trifluorometoksycynamonowego.
Etap 1 i etap 2:
patrz związek 256
268
PL 226 561 B1
Etap 3:
modyfikacje: użyto 46 mg 1-chloro-5-difluorometoksyizochinoliny i 111 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 40 mg produktu (27%-owa wydajność).
Produkt :
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,25 (m, 10H), 1,44 (m, 1H), 1,89 (m, 1H), 2,22 (m, 2H), 2,62 (m, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,23 (d, J=9,54 Hz, 1H), 4,52 (m, 2H), 5,12 (d, J=10,76 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,61 Hz, 1H), 5,75 (m, J=10,03 Hz, 1H), 5,88 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 7,02 (t, J=73,48 Hz, 1H), 7,52 (m, 3H), 8,07 (m, J=5,75, Hz, 2H);
MS: (M+Na)+ 772.
P r z y k ł a d 286: sposób wytwarzania związku 286
Związek 286 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego stosowano kwas 3-(2,3-dihydrobenzo[1,4]dioksyn-5-ylo)akrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 4,12 g kwasu 3-(2,3-dihydrobenzo-[1,4]dioxin-5-ylo)akrylowego, otrzymano 2,2 g produktu (53%-owa wydajność).
PL 226 561 B1
269
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4,37 (m, 4H), 6,83 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,02 (d, J=8,80 Hz, 1H), 7,12 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,79 (d, J= 8,80 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 204
Etap 2:
modyfikacje: użyto 2,05 g 2,3-dihydro-7H-1 ,4-dioksa-7-aza-fenantren-8-onu, otrzymano 1,5 g produktu (68%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCl3) δ ppm 4,42 (m, 4H), 7,24 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,77 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,84 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,18 (d, J=5,87 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 222.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 88 mg 8-chloro-2,3-dihydro-1 ,4-dioksa-7-aza-fenantrenu i 223 mg estru tert-butylowego kwasu (1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 140 mg produktu (47%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,24 (m, 10H), 1,43 (dd, J= 9,05, 5,14 Hz, 1H), 1,87 (m, 1H), 2,22 (d, J=9,29 Hz, 2H), 2,60 (dd, J=13,45, 7,09 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 4,05 (dd, J=11, 62, 2,81 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,44 (m, 6H), 5,13 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,75 (m, 2H), 7,04 (d, J= 9,29 Hz, 1H), 7,44 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,69 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,11 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 742.
270
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 287: sposób wytwarzania związku 287
Związek 287 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 3-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioksol-4-ylo)akrylowy.
Etap 1:
modyfikacje: użyto 4,56 g kwasu 3-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioksol-4-ylo)akrylowego, otrzymano 2,2 g produktu (55%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3DOD) δ ppm 6,63 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,29 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,40 (d, J=8,80 Hz, 1H), 8,19 (d, J=8,80 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 226.
Etap 2:
modyfikacje: użyto 2,2 g 2,2-difluoro-7H-1,3-dioksa-7-aza-cyklopenta[a]naftalen-6-onu, otrzymano 2,1 g produktu (87%-owa wydajność).
Produkt:
PL 226 561 B1
271
Dane: 1H NMR (500 Hz, CDCI3) ppm 7,51 (d, J=9,29 Hz, 1H), 7,65 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,22 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,32 (d, J=5,87 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 244.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 48 mg 6-chloro-2,2-difluoro-1,3-dioksa-7-aza-cyklopenta[a]naftalenu i 113 mg estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 40 mg produktu (27%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,02 (s, 12H), 1,24 (m,10H), 1,43 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,32 (d, J=3,67 Hz, 2H), 2,64 (d, J=13,45 Hz, 1H), 2,95 (m, 1H), 4,05 (d, J=11,49 Hz, 1H), 4,19 (d, J=9,29 Hz, 1H), 4,53 (m, 2H), 5,12 (d, J=9,78 Hz, 1H), 5,32 (s, 1H), 5,77 (m, 2H), 7,34 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,46 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,11 (m, 2H); MS: (M+H)+ 764.
P r z y k ł a d 288: sposób wytwarzania związku 288
Związek 288 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 269 z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-trifluorometoksycynamonowego użyto kwas 3-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioksol-5-ylo)akrylowy.
272
PL 226 561 B1
Etap 1:
modyfikacje: użyto 1 g kwasu 3-(2,2-difluorobenzo[1,3]dioksol-5-ylo)akrylowego, otrzymano 0,55 g produktu.
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 6,69 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,19 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,98 (s, 1H); MS: (M+H)+ 226.
Etap 2 :
modyfikacje: użyto 0,5 g 2,2-difluoro-6H-[1,3]dioksolo[4,5-g]izochinolin-5-onu, otrzymano 0,4 g produktu.
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CDCI3) δ 7,41 (s, 1H), 7,57 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 8,27 (d, J=5,80 Hz, 1H); MS (M+H)+ 244.
Etap 3:
modyfikacje: użyto 48 mg 5-chloro-2,2-difluoro[1,3]dioksolo[4,5-g]izochinoliny i 112 mg estru tertbutylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego, otrzymano 30 mg produktu.
Produkt:
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,06 (m, 12H), 1,25 (m, 10H), 1,42 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,62 Hz, 1H), 2,26 (m, 2H), 2,61 (dd, J=13,57, 6,97 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,07 (dd, J=11,86, 2,81 Hz, 1H), 4,22 (m, 1H), 4,40 (d, J=11,98 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,11 (d, J=10,52 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,37 (s, 1H), 5,74 (m, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,63 (d, J=5,62 Hz, 1H), 7,99 (d, J=5,62 Hz, 1H).
PL 226 561 B1
273
P r z y k ł a d 289: sposób wytwarzania związku 289
Zawiesinę związku 287 (15 mg) i Pt(S)/C (5%, 5 mg) w octanie etylu (5 ml) uwodorniano pod cieśnieniem 10 psi przez 30 minut. Po filtracji, ilościowym zatężeniu uzyskano 15 mg związku 289 w postaci ciała stałego.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,09 (m, 26H), 1,57 (m, 4H), 2,30 (m, 1H), 2,61 (m, J=13,82, 7,21 Hz, 1H), 2,96 (m, 1H), 4,05 (m, J=13,94 Hz, 1H), 4,19 (d, J=9,54 Hz, 1H), 4,53 (m,2H), 5,89 (s, 1H), 7,34 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,46 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,09 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,80 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 766.
274
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 290: sposób wytwarzania związku 290
Związek 290 (15 mg, 100%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 15 mg związku 286.
Dane: 1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 1,02 (m, 14H), 1,23 (m, 12H), 1,58 (m, 4H), 2,25 (m, 1H), 2,58 (dd, J=13,82, 7,21 Hz, 1H), 2,96 (m, 1H), 4,05 (m, J=11,25, 2,93 Hz, 1H), 4,25 (d, J=9,54 Hz, 1H), 4,39 (m, 5H), 4,52 (m, J=10,03, 7,34 Hz, 1H), 5,81 (s, 1H), 7,03 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,43 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,69 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,88 (d, J=6,11 Hz, 1H); MS: (M+H)+ 744.
P r z y k ł a d 291: sposób wytwarzania związku 291
Związek 291 (28 mg, 100%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 28 mg związku 251.
Dane: 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (m, 15H), 126 (m, 11H), 137 (m, 1H), 1,58 (m, 3H), 2,25 (m, 1H), 2,58 (dd, J=13,6, 7,0 Hz, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,06 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,53 (dd, J=10,3, 7,6 Hz, 1H), 5,78 (s, 1H), 6,64 (d, J=9,8 Hz, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,71 (t, J=7,3 Hz, 1H), 8,09 (d, J=8,6 Hz, 1H), 8,14 (d, J=8,1 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 738.
PL 226 561 B1
275
P r z y k ł a d 292: sposób wytwarzania związku 292
Związek 292 (16 mg, 84%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 19 mg związku 253.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0, 90 (m, 15H), 1,15 (m, 12H), 1,48 (m, 3H), 2,18 (m, 1H), 2,51 (dd, J=13,7, 6,9 Hz, 1H), 2,88 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,98 (dd, J=11,6, 3,1 Hz, 1H), 4,18 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,36 (d, J=11,0 Hz, 1H), 4,45 (dd, J=10,2, 7,2 Hz, 1H), 5,76 (s, 1H), 6,56 (d, J=9,3 Hz, 1H), 7,05 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,34 (t, J=8,1 Hz, 1H), 7,51 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,65 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,86 (d, J=6,1 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 738.
P r z y k ł a d 293: sposób wytwarzania związku 293
Związek 293
Związek 293 (7 mg, 35%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 20 mg związku 252.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 (m, 15H), 1,27 (m, 12H), 1,58 (m, 3H), 2,27 (m, 1H), 2,60 (m, 4H), 2,96 (m, 1H), 4,07 (dd, J=11,7, 2,9 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,46 (d, J=12,0 Hz, 1H), 4,54 (dd, J=10,0, 7,6 Hz, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,39 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,44 (d, J=5,9 Hz, 1H), 7,53 (d, J=6,9 Hz, 1H), 8,00 (d, J=6,1 Hz, 1H), 8,06 (d, J=8,6 Hz, 1H); MS:(M+H)+ 700.
276
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 294: sposób wytwarzania związku 294
Związek 294 (14 mg, 78%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 18 mg związku 254.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,94 (m, 15H), 1,13 (m, 10H), 1,20 (m, 2H), 1,50 (m, 3H), 2,21 (m, 1H), 2,53 (dd, J=13,8, 7,0 Hz, 1H), 2,88 (m, 1H), 3,99 (dd, J=11,4, 2,6 Hz, 1H), 4,14 (d, J=9,3 Hz, 1H), 4,45 (m, 2H), 5,79 (s, 1H), 6,53 (d, J=9,1 Hz, 1H), 7,40 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,54 (d, J=5,9 Hz, 1H) 7,73 (d, J=7,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J=6,1 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,6 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 742.
P r z y k ł a d 295: sposób wytwarzania związku 295
Związek 295 (30 mg, 100%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 30 mg związku 270. MS: (M+Na)+ 776.
PL 226 561 B1
277
P r z y k ł a d 296: sposób wytwarzania związku 296
Związek 296
Związek 296 (6,3 mg, 33%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 20 mg związku 259.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,04 (m, 15H), 1,24 (m, 12H), 1,59 (m, 3H), 2,29 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,60 (dd, J=13,69, 6,85 Hz, 1H), 2,97 (m, 1H), 4,09 (dd, J=11,74, 2,93 Hz, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,43 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=10,27, 6,85 Hz, 1H), 5,87 (s, 1H), 7,30 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,57 (dd, J=8,31, 1,47 Hz, 1H), 7,72 (d, J=8,31 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,87 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H); MS: (M+H)+ 700.
P r z y k ł a d 297: sposób wytwarzania związku 297
Związek 297 (40 mg, 100%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 40 mg związku 263.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,98 (m, 13H), 1,07 (m, 2H), 1,27 (m, 12H), 1,57 (m, 3H), 2,27 (m, 1H), 2,58 (dd, J=14,7, 7,1 Hz, 1H), 2,77 (s, 3H), 2,96 (m, 1H), 4,04 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,42 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,55 (dd, J=10,6, 7,0 Hz, 1H), 5,94 (s, 1H), 6,65 (d, J=9,5 Hz, 1H), 7,28 (m, 2H), 7,50 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,60 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,89 (d, J=5,6 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 722.
278
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 298: sposób wytwarzania związku 298
Związek 298 (29 mg, 100%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 29 mg związku 261.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0,99 (m, 15H), 1,25 (m,12H), 1,60 (m, 3H), 2,28 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 4,02 (m, 4H), 4,22 (dd, J=8,8, 4,4 Hz, 1H), 4,48 (m, 2H), 5,83 (s, 1H), 7,27 (d, J=5,6 Hz, 1H), 7,36 (d, J=8,8 Hz, 1H), 7,75 (d, J=11,3 Hz, 1H), 7,90 (d, J=5,9 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 756.
Związek 299 (34 mg, 97%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 35 mg związku 274.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,01 (m, 16H), 1,28 (m, 12H), 1,58 (m, 2H), 2,27 (s, 1H), 2,59 (dd, J=13,82, 6,97 Hz, 1H), 2,96 (m, 1H), 4,02 (s, 3H), 4,07 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,44 (m,J=11,98 Hz, 1H), 4,55 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,85 (s, 1H), 7,39 (m, 2H), 7,95 (d, J=6,11 Hz, 1H), 8,00 (d, J=9,29 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 756.
PL 226 561 B1
279
P r z y k ł a d 300: sposób wytwarzania związku 300
Związek 300 (30 mg, 100%) wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 3 przykładu 289, z zastosowaniem 30 mg związku 262.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 1,27 (m, 30H), 2,25 (s, 1H), 2,54 (s, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 4,20 (m, 3H), 4,51 (m, J=10,52, 6,85 Hz, 1H), 5,37 (s, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,65 (d, J=5,38 Hz, 1H), 8,06 (d, J=5,62 Hz, 1H); MS: (M+Na)+ 773.
Część G:
W części G stosowano następujące parametry metody LC/MS: 4,6 x 50 mm Xterra, gradient w czasie 3 minut i szybkość przepływu 4 ml/minutę.
Schemat 1: (ogólny schemat)
Schemat 2: (ogólny schemat)
280
PL 226 561 B1
PL 226 561 B1
281
P r z y k ł a d 320: sposób wytwarzania związku 320
Związek 320 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższych schematach 1 oraz 3.
Etap 1 (schemat 1):
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (332 mg, 1,5 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-BuLi (1,7M roztwór w pentanie, 1,3 ml, 2,25 mmola). Uzyskany czerwony roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 10 minut, po czym dodano 2-cyjanopirydynę (156 mg, 1,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Reakcję zatrzymano nasyconym roztworem NH4CI i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono. Surowy produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując żółtawe ciało stałe w postaci TFA. (85 mg, 15%-owa wydajność) 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3,91 (m, 3H), 7,09 (dd, J=9,05, 2,45 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,37(s, 1H), 7,42 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,08 (d, J=8,07 Hz, 1H), 8,18 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,65 (d, J=4,89 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,14 minuty), MS m/z 253 (MH+).
Trifluorooctan 6-metoksy-3-pirydyn-2-ylo-2H-izochinolin-1-onu (85 mg, 0,232 mmola) ogrzewano z POCI3 (3,0 ml) w temperaturze refluksu przez 2 dni. Następnie POCI3 oddestylowano i pozosta282
PL 226 561 B1 łość ochłodzono lodem. Mieszaninę następnie zobojętniono 10N roztworem NaOH i czysty produkt zebrano w postaci brunatnego ciała stałego. (62 mg, 99%-owa wydajność)
LC-MS (czas retencji: 2,063 minuty), MS m/z 271 (MH+).
Etap 3 (schemat 3, etap 2):
Do roztworu estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego (82 mg, 0,148 mmola) i LaCl3 (36 mg, 0,148 mmola) w DMF (1,5 ml), w temperaturze -78°C, dodano tbutanolan potasu (1,0M roztwór w THF, 0,74 ml, 0,74 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, a następnie dodano 1-chloro-6-metoksy-3-pirydyn-2-yloizochinolinę (40 mg, 0,148 mmola).
Mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i roztwór przesączono. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci białawego ciała stałego (związek 320). (23 mg, 20%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 0,87-1,08 (m, 11H), 1,20-1,30 (m, 1H), 1,43 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,16 (m, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,56 (m, 1H), 5,10 (d, J=11,3 Hz, 1H), 5,27 (d, J=15,9 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,07 (s, 1H), 7,12 (d, J=7,33 Hz, 1H), 7,31 (d, J=1,96 Hz, 1H), 7,40 (m,1H), 7,94 (dd, J=7,8 Hz, 1,5 Hz, 1H), 8,11 (d, J=9,29 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,45 (d, J=8,07 Hz, 1H), 8,62 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,393 minuty), MS m/z 791 (MH+).
P r z y k ł a d 321: sposób wytwarzania związku 321
PL 226 561 B1
283
Po kondensacji bromopirogronianu etylu z tiomocznikiem etylu we wrzącym dioksanie uzyskano monoalkiloaminotioazol w postaci bromowodoru z ilościową wydajnością. Po alkilowaniu estru etylowego kwasu 2-etyloaminotiazolo-4-karboksylowego z zastosowaniem EtI w DMF otrzymano ester etylowy kwasu 2-dietyloaminotiazolo-4-karboksylowego.
LC/MS m/z 229 (MH)+
MeO
Związek 321
Związek 321 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższym schemacie 2 oraz 3 z zastosowaniem estru etylowego kwasu 2-dietyloaminotiazolo-4-karboksylowego użytego w etapie 1, schemat 2.
LC/MS (czas retencji 2,76 minuty): m/z 868 (MH+).
P r z y k ł a d 322: sposób wytwarzania związku 322
Związek 322 wytworzono postępując według przykładu 321, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 schematu 2 zamiast estru etylowego kwasu 2-dimetyloaminotiazolo-4-karboksylowego użyto ester etylowy kwasu 2-dimetyloaminotiazolo-4-karboksylowego (wytworzony według schematu 5, z tym wyjątkiem, że zamiast tiomoczniku etylu i jodku etylu użyto tiomocznik metylu i jodek metylu).
LC/MS (czas retencji 2,56 min): m/z 840 (MH+)
284
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 323: sposób wytwarzania związku 323
Związek 323 wytworzono postępując według etapu 3 przykładu 324, z tym wyjątkiem, że zamiast 1-chloro-6-metoksy-3-pirydyn-2-yloizochinoliny użyto 3-chloro-6-metoksybenzo[d]izoksazolu.
MS m/z 702 (M-H)-
P r z y k ł a d 324: sposób wytwarzania związku 324
Związek 324 wytworzono postępując według etapu 3 przykładu 324, z tym wyjątkiem, że zamiast 1-chloro-6-metoksy-3-pirydyn-2-yloizochinoliny użyto 3-chlorobenzo[d]izotiazolu.
LC/MS (czas retencji 1,83 minuty): m/z 688 (M-H)-
P r z y k ł a d 325: sposób wytwarzania związku 325
PL 226 561 B1
285
Związek 325 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższych schematach 1 oraz 3.
Etap 1 (schemat 1):
ο
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (332 mg, 1,5 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-BuLi (1,7M roztwór w pentanie, 1,3 ml, 2,25 mmola). Uzyskany czerwony roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 10 minut, a następnie dodano 4-cyjanopirydynę (164 mg, 1,575 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Reakcję zatrzymano nasyconym roztworem NH4CI i czysty produkt zebrano w postaci żółtego osadu. (145 mg, 38%-owa wydajność) 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 3,91 (s, 3H), 7,18 (dd, J=8,8 Hz, 2,8 Hz, 1H), 7,26 (m, 2H), 8,06 (d, J=6,0 Hz, 2H), 8,16 (d, J=8,8 Hz, 1H), 8,84 (d, J=6,0 Hz, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,300 minuty), MS m/z 253 (MH+).
Etap 2 (schemat 3, etap 1):
6-metoksy-3-pirydyn-4-ylo-2H-izochinolin-1-on (134 mg, 0,531 mmola) ogrzewano z POCI3 (6,0 ml) w temperaturze refluksu przez 5 dni. Następnie POCI3 oddestylowano i pozostałość ochłodzono lodem. Mieszaninę następnie zobojętniono nasyconym roztworem NaHCO3 i czysty produkt zebrano w postaci brunatnego ciała stałego. (125 mg, 87%-owa wydajność).
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 3,99 (s, 3H), 7,53 (dd, J=9,04 Hz, 2,44 Hz, 1H), 7,59 (d, J=2,69 Hz, 1H), 8,26 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,30 (d, J=5,38 Hz, 2H), 8,73 (s, 1H), 8,85 (d, J=6,36 Hz, 2H).
LC-MS (czas retencji: 2,027 minuty), MS m/z 271 (MH+).
Etap 3 (schemat 3, etap 2):
BOCf
O
Związek 325
286
PL 226 561 B1
Do roztworu estru tert-butylowego kwasu {1 -[2-(1 -cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego (83,5 mg, 0,15 mmola) i LaCl3 (36,8 mg, 0,15 mmola) w DMF (1,5 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-butanolan potasu (1,0M roztwór w THF, 0,75 ml, 0,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, a następnie dodano 1-chloro-6-metoksy-3-pirydyn-4-yloizochinolinę (40,6 mg, 0,15 mmola). Mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i roztwór przesączono. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci białawego ciała stałego (związek 325). (1,6 mg, 1,3%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 0,90 (m, 2H), 1,02 (s, 9H), 1,17-1,31 (m, 11H), 1,42 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 2,23 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,15 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,56 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,76 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,61 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,06 (s, 1H), 7,14 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 8,12 (d, J=8,81 Hz, 1H), 8,19 (d, J=6,12 Hz, 2H), 8,61 (d, J=5,63 Hz, 2H).
LC-MS (czas retencji: 2,523 minuty), MS m/z 791 (MH+)
P r z y k ł a d 326: sposób wytwarzania związku 326
Związek 326 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższych schematach 1 oraz 4.
Etap 1 (schemat 1):
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (332 mg, 1,5 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-BuLi (1,7M roztwór w pentanie, 1,3 ml, 2,25 mmola).
Uzyskany czerwony roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 10 minut, a następnie dodano 4-dimetyloaminobenzonitryl (219 mg, 1,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Reakcję zatrzymano nasyconym roztworem NH4CI, zebrano żółty osad, który roztarto z eterem, uzyskując czysty produkt w postaci białawego ciała stałego. (247 mg, 56%-owa wydajność).
PL 226 561 B1
287 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 2,97 (s, 6H), 3,87 (s, 3H), 6,72 (s, 1H), 6,78 (d, J=8,80 Hz, 2H), 6,97 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1H), 7,10 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,65 (d, J=8,80 Hz, 2H), 8,05 (d, J=8,80 Hz,
1H), 11,11 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,023 minuty), MS m/z 295 (MH+).
Etap 2 (schemat 4, etap 1):
3-(4-dimetyloaminofenylo)-6-metoksy-2H-izochinolin-1-on (245 mg, 0,83 mmola) ogrzewano z POCl3 (10,0 ml) w temperaturze refluksu przez 2 dni. Nastepnie POCl3 oddestylowano i pozostałość ochłodzono lodem. Mieszaninę następnie zobojętniono 10N roztworem NaOH i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci pomarańczowego ciała stałego (215 mg, 83%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3,01 (s, 6H), 3,96 (s, 3H), 6,88 (d, J=9,05 Hz, 2H), 7,20 (dd, J=9,17. 2,57 Hz, 1H), 7,28 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,94 (s, 1H), 7,96 (d, J=9,05 Hz, 2H), 8,13 (d, J=9,29 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,543 minuty), MS m/z 313 (MH+).
Etap 3 (schemat 4, etap 2)
F
Mieszaninę [4-(1-chloro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)fenylo]dimetyloaminy (110 mg, 0,35 mmola) i difluorowodorku tetrabutylofosfoniowego (0,5 g) ogrzewano w temperaturze 140°C w reaktorze mikrofalowym Smith'a przez 20 minut. Następnie dodano wodę i mieszaninę ekstrahowano octanem etylu. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto wodą i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci brunatnawego ciała stałego. (85 mg, 82%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,320 minuty), MS m/z 297 (MH+).
Etap 4 (schemat 4, etap 3):
288
PL 226 561 B1
Do roztworu estru tert-butylowego kwasu {1 -[2-(1 -cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego (111 mg, 0,2 mmola) i LaCl3 (49 mg, 0,2 mmola) w DMF (2,0 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-butanolan potasu (1,0M roztwór w THF, 1,0 ml, 1,0 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, a następnie dodano [4-(1-fluoro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)fenylo]dimetyloaminę (59 mg, 0,2 mmola). Mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i roztwór przesączono. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci żółtawego ciała stałego (związek 326) (17,5 mg, 11%owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 0,97-1,08 (m, 11H), 1,23 (m, 2H), 1,31 (s, 9H), 1,44 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,34 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 2,99 (m, 6H), 3,91 (s, 3H), 4,17 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,76 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,11 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,03 (s, 1H), 6,93 (m, 2H), 6,95 (m, 1H), 7,16 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 8,01 (m, 3H).
LC-MS (czas retencji: 2,850 minuty), MS m/z 834 (MH+).
P r z y k ł a d 327: sposób wytwarzania związku 327
Związek 327 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższych schematach 1 oraz 4.
Etap 1 (schemat 1):
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (332 mg, 1,5 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-BuLi (1,7M roztwór w pentanie, 1,3 ml, 2,25 mmola). Uzyskany czerwony roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 10 minut, po czym dodano 4-dietyloaminobenzonitryl (261 mg, 1,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Reakcję zatrzymano nasyconym roztworem NH4CI i czysty produkt zebrano w postaci żółtego osadu. (215 mg, 44%-owa wydajność.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,12 (m, 6H), 3,39 (m, 4H), 3,87 (s, 3H), 6,69 (s, 1H), 6,72 (d, J=9,05 Hz, 2H), 6,96 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1H), 7,09 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,61 (d, J=9,05 Hz, 2H), 8,04 (d, J=8,80 Hz, 1H), 11,06 (s, 1H).
PL 226 561 B1
289
LC-MS (czas retencji: 1,883 minuty), MS m/z 323 (MH+). Etap 2 (schemat 4, etap 1):
3-(4-dietyloaminofenylo)-6-metoksy-2H-izochinolin-1-on (207 mg, 0,642 mmola) ogrzewano z POCI3 (8,0 ml) w temperaturze refluksu przez jeden dzień. Następnie POCI3 oddestylowano i pozostałość ochłodzono lodem. Mieszaninę następnie zobojętniono nasyconym roztworem NaHCO3 i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci brunatnawego ciała stałego. (180 mg, 82%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,397 minuty), MS m/z 341 (MH+).
Etap 3 (schemat 4, etap 2):
Mieszaninę [4-(1-chloro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)-fenylo]dietyloaminy (90 mg, 0,264 mmola) i difluorowodorku tetrabutylofosfoniowego (0,5 g) ogrzewano w temperaturze 140°C w reaktorze mikrofalowym Smith'a przez 20 minut. Następnie dodano wodę i mieszaninę ekstrahowano octanem etylu. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto wodą i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci żółtawego oleju. (70 mg, 82%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,253 minuty), MS m/z 325 (MH+).
Etap 4 (schemat 4, etap 3):
290
PL 226 561 B1
Do roztworu estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego (100 mg, 18 mg, 0,18 mmola) i LaCl3 (66 mg, 0,27 mmola) w DMF (2,0 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-butanolan potasu (1,0M roztwór w THF, 0,9 ml, 0,9 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym dodano [4-(1-fluoro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)fenylo]dietyloaminę (70 mg, 0,216 mmola). Mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i roztwór przesączono. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci białego ciała stałego (związek 327). (18 mg, 12%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 10,95-1,07 (m, 11H), 1,18 (m, 6H), 1,25-1,38 (m, 11H), 1,58 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 2,34 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 3,42 (m, 4H), 3,90 (s, 3H), 4,16 (m, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 5,07 (d, J=11,0 Hz, 1H), 5,25 (d, J=17,36 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,99 (s, 1H), 6,77 (d, J=8,8 Hz, 2H), 6,94 (d, J=9,05 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,95-8,02 (m, 3H).
LC-MS (czas retencji: 2,690 minuty), MS m/z 862 (MH+).
P r z y k ł a d 328: sposób wytwarzania związku 328
Związek 328 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższym schemacie 2 oraz 3.
Etap 1 (schemat 2, etap 1):
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (332 mg, 1,5 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-BuLi (1,7M roztwór w pentanie, 2,12 ml, 3,6 mmola). Uzyskany czerwony roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 10 minut, po czym dodano nikotynian metylu (206 mg, 1,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze -78°C przez 2 godziny. Następnie reakcję zatrzymano nasyconym roztworem NH4CI i mieszaninę dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono. Surowy produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawego gęstego oleju. (124 mg, 19%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 1,740 minuty), MS m/z 349 (M+Na+).
PL 226 561 B1
291
Etap 2 (schemat 2, etap 2);
N,N-dietylo-4-metoksy-2-(2-okso-2-pirydyn-3-yloetylo)benzamid (120 mg, 0,272 mmola) ogrzewano z octanem amonu (1 g) przez 3 godziny. Następnie mieszaninę ochłodzono i dodano wodę. Ekstrahowano octanem etylu i warstwę organiczną oddzielono, następnie osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując produkt w postaci brunatnawego ciała stałego. (65 mg, 95%-owa wydajność) 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,89 (s, 3H), 6,93 (s, 1H), 7,10 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1H), 7,19 (d, J=2,45 Hz, 1H), 1,52 (dd, J=7,46, 4,77 Hz, 1H), 8,15 (m, 2H), 8,64 (dd, J=4,89, 1,47 Hz, 1H), 8,96 (d, J=1,71 Hz, 1H), 11,51 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,377 minuty), MS m/z 253 (MH+).
Etap 3 (schemat 3, etap 1);
6-metoksy-3-pirydyn-3-ylo-2H-izochinolin-1-on (65 mg, 0,258 mmola) ogrzewano z POCI3 (2,5 ml) w temperaturze refluksu przez 7 dni. Następnie POCI3 oddestylowano i pozostałość ochłodzono lodem. Mieszaninę następnie zobojętniono 10N roztworem NaOH i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując produkt w postaci żółtego ciała stałego. (27 mg, 39%-owa wydajność)
LC-MS (czas retencji: 2,090 minuty), MS m/z 271 (MH+).
Etap 4 (schemat 3, etap 2):
Do roztworu estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego (56 mg, 0,10 mmola) i LaCl3 (25 mg, 0,10 mmola) w DMF (1,5 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-butanolan potasu (1,0M roztwór w THF, 0,5 ml, 0,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym dodano 1-chloro-6-metoksy-3-pirydyn-3-yloizochinolinę (27 mg, 0,10 mmola).
292
PL 226 561 B1
Mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i roztwór przesączono. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci białego ciała stałego (związek 328). (17 mg, 21%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 0,95 (m, 2H), 1,02 (s, 9H), 1,20-1,30 (m, 11H), 1,41 (m,1H), 1,86 (m, 1H), 2,21 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 2,67 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,93 (s, 3H), 4,14 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,47 (d, J=11,99 Hz, 1H), 4,55 (m, 1H), 5,09 (d, J=10,02 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,85 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,07 (s, 1H), 7,09 (m, 1H), 7,29 (d, J=1,96 Hz, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,86 (s, 1H), 8,09 (d, J=9,05 Hz, 1H), 8,50-8,58 (m, 2H), 9,28 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,453 minuty), MS m/z 791 (MH+).
P r z y k ł a d 329: sposób wytwarzania związku 329
Związek 329 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższym schemacie 2 oraz 4.
Etap 1 (schemat 2, etap 1):
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (332 mg, 1,5 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-BuLi (1,7M roztwór w pentanie, 2,2 ml, 3,75 mmola). Uzyskany czerwony roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 10 minut, po czym dodano ester metylowy kwasu N,N-dimetyloantranilowego (269 mg, 1,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze -78°C przez 2 godziny. Następnie reakcję zatrzymano nasyconym roztworem NH4CI i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono. Surowy produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci żółtawego gęstego oleju. (256 mg, 46%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 0,99-1,13 (m, 6H), 3,23-3,31 (m, 8H), 3,39 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 4,35 (s, 2H), 6,91 (dd, J=8,44, 2,57 Hz, 1H), 6,99 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,22 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,69 (t, J=7,70 Hz, 1H), 7,84 (m, 1H), 7,96 (d, J=8,31 Hz, 1H), 8,18 (d, J=7,83 Hz, 1H)
LC-MS (czas retencji: 1,557 minuty), MS m/z 369 (MH+).
PL 226 561 B1
293
Etap 2 (schemat 2, etap 2);
2-[2-(2-dimetyloaminofenylo)-2-oksoetylo]-N,N-dietylo-4-metoksybenzamid (250 mg, 0,678 mmola) ogrzewano z octanem amonu (1,5 g) przez 2 godziny. Następnie mieszaninę ochłodzono i dodano wodę. Ekstrahowano octanem etylu i warstwę organiczną oddzielono, po czym osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując produkt w postaci żółtawego ciała stałego. (125 mg, 63%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2,95 (s, 6H), 3,92 (s, 3H), 6,92 (s, 1H), 7,12 (dd, J=8,80, 2,45 Hz, 1H), 7,16 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,55 (m, 2H), 7,63 (d, J=7,83 Hz, 1H), 8,20 (d, J=9,05 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,097 minuty), MS m/z 295 (MH+).
Etap 3 (schemat 4, etap 1);
Cl
3-(2-dimetyloaminofenylo)-6-metoksy-2H-izochinolin-1-on (125 mg, 0,425 mmola) ogrzewano z POCI3 (4,0 ml) w temperaturze refluksu przez jeden dzień. Następnie POCI3 oddestylowano i pozostałość ochłodzono lodem. Mieszaninę zobojętniono 10N roztworem NaOH i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci brunatnawego ciała stałego (82 mg, 62%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,040 minuty),
MS m/z 313 (MH+).
Etap 4 (schemat 4, etap 2);
F
Mieszaninę [2-(1-chloro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)fenylo]dimetyloaminy (82 mg, 0,262 mmola) i difluorowodorku tetrabutylofosfoniowego (1,0 g) ogrzewano w temperaturze 140°C w reaktorze mikrofalowym Smith'a przez 20 minut. Następnie dodano wodę i mieszaninę ekstrahowano octanem etylu. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto wodą i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano surowy produkt, który oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci żółtawego oleju. (85 mg).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3,41(s, 6H), 4,00 (s, 3H), 7,42 (dd, J=9,05, 2,45 Hz, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,99 (m, 1H), 8,16 (m, 2H), 8,31 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,873 minuty), MS m/z 297 (MH+).
294
PL 226 561 B1
Etap 5 (schemat 4, etap 3):
Do roztworu estru tert-butylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo}karbaminowego (56 mg, 0,1 mmola) i LaCl3 (25 mg, 0,1 mmola) w DMF (1,0 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-butanolan potasu (1,0M roztwór w THF, 0,5 ml, 0,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym dodano [2-(1 -fluoro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)fenylo]dimetyloaminę (30 mg,
0,1 mmola). Mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i roztwór przesączono. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci białego ciała stałego (związek 329). (4,0 mg, 5%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 0,98-1,08 (m, 11H), 1,16-1,32 (m, 11H), 1,40 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 2,16-2,32 (m, 2H), 2,60-2,71 (m, 7H), 2,92 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 4,08 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,28 (d, J=18,09 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 5,89 (s, 1H), 7,05 (d, J=6,85 Hz, 1H), 7,10-7,20 (m, 2H), 7,29 (m, 1H), 7,63 (d, J=7,58 Hz, 1H), 7,78 (s, 1H), 8,07 (d, J=8,56 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,550 minuty), MS m/z 834 (M+H+).
P r z y k ł a d 330: sposób wytwarzania związku 330
Związek 330 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na powyższym schemacie 2 oraz 4.
PL 226 561 B1
295
Etap 1 (schemat 2, etap 1):
Ν' \
Do roztworu N,N-dietylo-4-metoksy-2-metylobenzamidu (332 mg, 1,5 mmola) w THF (15 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-BuLi (1,7M roztwór w pentanie, 2,2 ml, 3,75 mmola). Uzyskany czerwony roztwór mieszano w temperaturze -78°C przez 10 minut, po czym dodano ester metylowy kwasu (3-dimetyloamino)benzoesowego (269 mg, 1,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze -78°C przez 2 godziny. Następnie reakcję zatrzymano nasyconym roztworem NH4CI i mieszaninę dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono. Surowy produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawego gęstego oleju. (245 mg, 33%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1,01 (t, J=6,85 Hz, 3H), 1,09 (m, 3H) 3,11 (s, 6H), 3,21 (m, 2H), 3,40 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 4,39 (s, 2H), 6,84-6,91 (m, 2H), 7,19 (d, J=8,32 Hz, 1H), 7,35 (m, 1H), 7,49 (t, J=8,07 Hz, 1H), 7,66-7,71 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,930 minuty), MS m/z 369 (MH+).
Etap 2 (schemat 2, etap 2);
O
2-[2-(3-dimetyloaminofenylo)-2-oksoetylo]-N,N-dietylometoksybenzamid (240 mg, 0,497 mmola) ogrzewano z octanem amonu (2,0 g) przez 2,5 godziny. Następnie mieszaninę ochłodzono i dodano wodę. Czysty produkt zebrano w postaci brunatnawego ciała stałego. (95 mg, 65%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2,98 (s, 6H), 3,88 (s, 3H), 6,74-6,87(m, 2H), 7,01-7,07 (m, 3H), 7,18 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,28 (t, J= 7,82 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,80 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,773 minuty), MS m/z 295 (MH+).
Etap 3 (schemat 4, etap 1);
Cl
3-(3-dimetyloaminofenylo)-6-metoksy-2H-izochinolin-1-on (92 mg, 0,312 mmola) ogrzewano z POCI3 (3,0 ml) w temperaturze refluksu przez 2 dni. Następnie POCI3 oddestylowano i pozostałość ochłodzono lodem. Mieszaninę następnie zobojętniono nasyconym roztworem NaHCO3 i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci brunatnawego gęstego oleju. (72 mg, 74%-owa wydajność).
296
PL 226 561 B1
LC-MS (czas retencji: 2,297 minuty), MS m/z 313 (MH+). Etap 4 (schemat 4, etap 2);
Mieszaninę [3-{1-chloro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)fenylo]dimetyloaminy (72 mg, 0,23 mmola) i difluorowodorku tetrabutylofosfoniowego (0,5 g) ogrzewano w reaktorze mikrofalowym Smith'a, w temperaturze 140°C, przez 20 minut. Następnie dodano wodę i mieszaninę ekstrahowano octanem etylu. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto wodą i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci brunatnawego oleju. (58 mg, 85%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,193 minuty), MS m/z 297 (MH+).
Etap 5 (schemat 4, etap 3);
Do roztworu estru tert-butylowego kwasu (1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2,2-dimetylopropylo)karbaminowego (86 mg, 0,155 mmola) i LaCl3 (57 mg, 0,233 mmola) w DMF (1,5 ml), w temperaturze -78°C, dodano t-butanolan potasu (1,0M roztwór w THF, 0,5 ml, 0,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym dodano [3-(1-fluoro-6-metoksyizochinolin-3-ylo)fenylo]dimetyloaminę (55 mg, 0,185 mmola). Mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i roztwór przesączono. Przesącz zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci białawego ciała stałego (związek 330). (8,0 mg, 6%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 0,99-1,09 (m, 11H), 1,23 (m, 2H), 1,29 (s, 9H), 1,42 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 2,21 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,70 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,00 (s, 6H), 3,92 (s, 3H), 4,14 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 4,44-4,57 (m, 2H), 5,10 (d, J=11,00 Hz, 1H), 5,27 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 6,01 (s, 1H), 6,63 (d, J=8,80 Hz, 1H), 7,03 (d, J=6,85 Hz, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,28 (t, J=8,07 Hz, 1H), 7,45 (d, J=7,82 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 8,05 (d, J=8,80 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,707 minuty), MS m/z 834 (MH+).
PL 226 561 B1
297
P r z y k ł a d 331: sposób wytwarzania związku 331
MeO
Związek 331
Związek 331 wytworzono opisanymi tu metodami.
P r z y k ł a d 334: sposób wytwarzania związku 334
Związek 334
Zwiazek 334 wytworzono w następujący sposób:
Etap 1:
Do roztworu Boc-cis-HYP-OMe (122,6 mg, 0,5 mmola) w THF (15 ml) w temperaturze 0°C, dodano trifenylofosfinę (196,7 mg, 0,75 mmola)i benzo[d]izoksazol-3-ol (81 mg, 0,6 mmola). Następniedodano DEAD (0,118 ml, 0,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej
298
PL 226 561 B1 i mieszano przez 3 godziny. Następnie rozpuszczalnik odparowano i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując bezbarwny gęsty olej. (117 mg, 54%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1,41 (m, 9H), 2,38 (m, 1H), 2,75 (m, 1H), 3,75 (m, 3H), 3,81 (m, 1H), 3,90 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 5,44 (m, 1H), 7,31 (t, J=7,46 Hz, 1H), 7,47 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,59 (t, J=7,83 Hz, 1H), 7,66 d, J=8,07 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,65 minuty), MS m/z 363 (MH+).
Część produktu sprzęgania (85 mg, 0,235 mmola) rozpuszczono następnie w 4N HCl w dioksanie (1,5 ml) i mieszano przez 3 godziny. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano chlorowodorek w postaci żółtego oleju. (85 mg, >100%-owa wydajność)
LC-MS (czas retencji: 1,327 minuty), MS m/z 263 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu chlorowodorku estru metylowego kwasu 4-(benzo[d]izoksazol-3-ylooksy)pirolidyno-2-karboksylowego (85 mg, 0,285 mmola) w CH3CN (10 ml) dodano N-boc-L-t-leucynę (99 mg, 0,427 mmola), DIEA (0,25 ml, 1,425 mmola), czynnik sprzęgający HOBt (65 mg, 0,427 mmola) oraz HBTU (162 mg, 0,427 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując produkt w postaci bezbarwnego gęstego oleju. (63 mg, 46%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1,01 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 2,34 (m, 1H), 2,78 (dd, J=14,13, 7,83 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 4,00 (dd, J=12,22, 3,42 Hz, 1H), 4,19 (s, 1H), 4,57 (d,J=12,23 Hz, 1H), 4,68 (m, 1H), 5,51 (m, 1H), 7,27 (m, 1H), 7,47 (d, J=8,56 Hz, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,63 (d, J=8,07 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,737 minuty), MS m/z 498 (M+Na+).
Etap 3:
PL 226 561 B1
299
Do roztworu estru metylowego kwasu 4-(benzo[d]izoksazol-3-ylooksy)-1-(2-tert-butoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)pirolidyno-2-karboksylowego (63 mg, 0,132 mmola) w THF (3,5 ml), metanolu (2,0 ml) i wody (0,5 ml) dodano monohydrat wodorotlenku litu (83 mg, 1,89 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3 do 5 i zatężono. Ekstrahowano octanem etylu (2 x 30 ml), warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtawy olej do użycia w następnym etapie. (61 mg, 100%-owa wydajność).
Do roztworu powyższego związku (61 mg, 0,132 mmola) w CH3CN (8 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (42 mg,
0,158 mmola), DIEA (0,115 ml, 0,66 mmola) oraz czynnik sprzęgający HOBt (30 mg, 0,198 mmola) oraz HBTU (75 mg, 0,198 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując końcowy produkt w postaci żółtej warstwy (związek 334). (24 mg, 27%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1,01 (s, 9H), 1,05 (m, 2H), 1,12-1,26 (m, 11H), 1,43 (m, 1H),1,86 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,17-2,33 (m, 2H), 2,67 (dd, J=12,96, 5,87 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 4,49 (m, 2H), 5,11 (d, J= 10,21 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,55 (s, 1H), 5,74 m, 1H), 7,29 (m, 1H), 7,48 (d, J=8,32 Hz, 1H), 7,54-7,64 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 2,767 minuty), MS m/z 696 (M+Na+).
P r z y k ł a d 335: sposób wytwarzania związku 335.
Schemat 1
Związek pośredni 2
300
PL 226 561 B1
Schemat 2
Etap 1: (schemat 1, etap 1)
Do roztworu estru 1-tert-butylowego kwasu (2S,4R)-4-hydroksypirolidyn-1,2-dikarboksylowego (0,25 g, 1,08 mmola) w CH3CN (10 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (0,346 g, 1,30 mmola), DIEA (0,94 ml, 5,41 mmola), czynnik sprzęgający HOBt (0,248 g, 1,62 mmola) oraz HBTU (0,615 mg, 1,62 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółty olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano bezbarwny gęsty olej, który następnie rozpuszczono w 4N HCl w dioksanie (5 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci białego ciała stałego do użycia w następnym etapie. (200 mg, 49%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 0,647 minuty), MS m/z 344 (MH+).
Etap 2: (schemat 1, etap 2)
Do roztworu powyższego związku (200 mg, 0,527 mmola) w CH3CN (10 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (0,15 g, 0,79 mmola), DIEA (0,46 ml, 2,63 mmola), czynnik sprzęgający HOBt (0,121 g, 0,79 mmola) oraz HBTU (0,30 g, 0,79 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółtawy olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano produkt końcowy w postaci białego ciała stałego (związek pośredni 2). (145 mg, 54%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD), 500 MHz) δ 0,99-1,10 (m, 11H), 1,24 (m, 2H), 1,41 (dd, J=9,5, 5,5 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 1,97 (m, 1H), 2,13 (m, 1H), 2,24 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,77-3,88 (m, 2H), 4,33-4,39 (m, 2H), 4,49 (m, br, 1H), 5,13 (d, J=10,4 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,76 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,590 minuty), MS m/z 515 (MH+).
PL 226 561 B1
301
Etap 3: (schemat 2)
Do roztworu 2,4-dichloropirymidyny (149 mg, 1 mmol) w THF (5 ml), dodano tetrakis(trifenylofosfino)pallad (23 mg, 2% molowo) i 0,5M roztwór bromku fenylocynku (2,1 ml, 1,05 mmola) w THF. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 50°C przez noc. Następnie dodano nasycony roztwór chlorkiem amonu i mieszaninę ekstrahowano dwukrotnie EtOAc. Warstwy organiczne połączono, przemyto wodą i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtą pozostałość, którą oczyszczono metodą preparatywnej HPLC z uzyskaniem 2-chloro-4-fenylopirymidyny w postaci żółtawego oleju do użycia w następnym etapie.
Do roztworu związku pośredniego 2 (20 mg, 0,039 mmola) w DMF (3 ml), w temperaturze 0°C, dodano NaH (3,9 mg, 60% dyspersji w oleju mineralnym, 0,0975 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 1 godzinę. Następnie dodano wytworzoną powyżej 2-chloro-4-fenylopirymidynę (18 mg, w postaci surowej). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtawy olej, który następnie oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując końcowy produkt, trifluorooctan, w postaci gęstego bezbarwnego oleju (związek 335), (5,5 mg, 18%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ 0,92-1,12 (m, 11H), 1,25 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,2, 5,5 Hz, 1H), 1,89 (dd, J=8,1, 5,5 Hz, 1H), 2,17-2,37 (m, 2H), 2,57 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 4,14 (m, 1H), 4,24-4,38 (m, 2H), 4,51 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,2 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17,2 Hz, 1H), 5,77 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,48-7,60 (m, 3H), 7,66 (d, J=5,3 Hz, 1H), 8,18 (m, 2H), 8,60 (d, J=5,1 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,947 minuty), MS m/z 669 (MH+).
P r z y k ł a d 336: sposób wytwarzania związku 336
Etap 1
Do roztworu 2,4-dichloropirymidyny (149 mg, 1 mmol) w THF (5 ml), dodano tetrakis(trifenylofosfino)pallad (58 mg, 5% molowo) i 0,5M roztwór bromku 2-pirydynylocynku (2,4 ml, 1,2 mmola) w THF. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 50°C przez noc. Następnie dodano nasycony roztwór chlorku amonu i dwukrotnie ekstrahowano EtOAc. Warstwy organiczne połączono, przemyto wodą i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtą pozostałość, którą
302
PL 226 561 B1 oczyszczono metodą preparatywnej HPLC z uzyskaniem produktu w postaci żółtawego oleju. (11 mg, 3,6%-owa wydajność).
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7,61 (m, 1H), 8,07 (m, 1H), 8,36 (d, J=5,19 Hz, 1H), 8,50 (d, J=7,94 Hz, 1H), 8,75 (d, J=3,97 Hz, 1H), 8,82 (d, J=5,19 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,440 minuty), MS m/z 192 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu związku pośredniego 2 według przykładu 335 (15 mg, 0,029 mmola) w DMF (3 ml), w temperaturze 0°C, dodano NaH (1,75 mg, 60% dyspersji w oleju mineralnym, 0,0728 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 1 godzinę. Dodano 2-chloro-4-pirydyn-2-ylopirymidynę (9,5 mg, 0,0311 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtawy olej, który następnie oczyszczono metodą preparatywnej
HPLC, uzyskując końcowy produkt, trifluorooctan, w postaci żółtawej warstwy (związek 336). (3,5 mg, 15%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD), 500 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,08 (m, 2H), 1,24 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,77, 5,50 Hz, 1H), 1,89 (m,1H), 2,24 (m, 1H), 2,31 (m, 1H), 2,57 (m, 1H), 2,95 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 4,13 (m, 1H), 4,29 (s, 1H), 4,36 (d, J=11,91 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,13 (d, J=10,08 Hz, 1H), 5,31 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,76 (m, 1H), 5,88 (m, 1H), 7,64 (m, 1H), 8,06-8,13 (m, 2H), 8,54 (d, J=7,93 Hz, 1H), 8,738,76 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,787 minuty), MS m/z 670 (MH+).
P r z y k ł a d 337: sposób wytwarzania związku 337
Etap 1
NaH, DMF
->.
HO
PL 226 561 B1
303
Etap 1:
Do roztworu 2,4-dichloropirymidyny (149 mg, 1 mmol) w DMF (5 ml), dodano dichloro-bis-(trifenylofosfino)pallad (II) (35 mg, 5% molowo) i 2-(tributylostannylo)tiofen (0,38 ml, 1,2 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 70°C przez 3 godziny. Następnie dodano nasycony roztwór KF w metanolu (20 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Mieszaninę reakcyjną zatężono żelem krzemionkowym w małej ilości, a pozostałość przesączono przez bibułę filtracyjną i przemyto EtOAc. Przesącz następnie zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci białawego ciała stałego. (110 mg, 35%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,20 (dd, J=5,01, 3,79 Hz, 1H), 7,74 (dd, J=5,01, 1,10 Hz, 1H), 7,77 (d, J=5,38 Hz, 1H), 7,98 (dd, J= 3,79, 1,10 Hz, 1H), 8,55 (d, J=5,38 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,453 minuty), MS m/z 197 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu związku pośredniego 2 według przykładu 335 (20 mg, 0,039 mmola) w DMF (3 ml), w temperaturze 0°C, dodano NaH (7,8 mg, 60% dyspersji w oleju mineralnym, 0,195 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 1 godzinę. Dodano 2-chloro-4-tiofen-2-ylopirymidynę (16,9 mg, 0,0544 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtawy olej, który następnie oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując dwa produkty (związek 337 oraz związek pośredni 3).
Związek 337: (żółtawa warstwa, 3,0 mg, 11%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,98-1,07 (m, 11H), 1,22 (m, 2H), 1,41 (dd, J=9,54, 5,62 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,32, 5,63 Hz, 1H), 2,19-2,31 (m, 2H), 2,52 (m, 1H), 2,92 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 4,09 (m, 1H), 4,25-4,32 (m, 2H), 4,47 (dd, J=10,03, 7,34 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,11, 1,46 Hz, 1H), 5,69-5,79 (m, 2H), 7,20 (dd, J=4,89, 3,66 Hz, 1H), 7,51 (d, J=5,38 Hz, 1H), 7,70 (d, J=4,89 Hz, 1H), 7,95 (d, J=3,67 Hz, 1H), 8,54 (d, J=5,14 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,787 minuty), MS m/z 696 (M+Na+).
Związek pośredni 3: (10 mg, 35%-owa wydajność)
LC-MS (czas retencji: 1,477 minuty), MS m/z 617 (MH+).
P r z y k ł a d 338: sposób wytwarzania związku 338
Do roztworu (1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)amidu kwasu 1-(2-amino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(4-tiofen-2-ylopirymidyn-2-ylooksy)pirolidyno-2-karboksylowego (10 mg,
0,0137 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano kwas cyklopropylooctowy (2,1 mg, 0,0205 mmola), DIEA (0,012 ml, 0,742 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (3,1 g, 0,0205 mmola) oraz HBTU (7,8 mg, 0,0205 mmola]. Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółty olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano trifluorooctan w postaci żółtawej warstwy (związek 338). (4,6 mg, 41%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 0,12 (m, 2H), 0,48 (m, 2H), 0,90 (m, 1H), 1,01-1,09 (m, 11H), 1,23 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,29, 5,38 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,31, 5,62 Hz, 1H), 2,06 (m, 2H), 2,19-2,31
304
PL 226 561 B1 (m, 2H), 2,52 (dd, J=13,45, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,12 (dd, J=11,98, 3,91 Hz, 1H), 4,27 (d, J=11,74 Hz, 1H), 4,47 (dd, J=10,27, 6,85 Hz, 1H), 4,63 (s, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,12, 1,47 Hz, 1H), 5,71-5,80 (m, 2H), 7,20 (dd, J=4,89, 3,67 Hz, 1H), 7,51 (d, J=5,38 Hz, 1H), 7,70 (d, J=5,20 Hz, 1H), 7,95 (d, J=3,67 Hz, 1H), 8,48 (d, J=5,13 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,833 minuty), MS m/z 699 (MH+).
P r z y k ł a d 339: sposób wytwarzania związku 339
Związek 342 wytworzono postępując według schematów przykładu 337 i przykładu 338, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 przykładu 337 zamiast 2-(tributylostannylo)tiofenu stosowano 2-(tributylostannylo)furan.
Etap 1:
Do roztworu 2,4-dichloropirymidyny (149 mg, 1 mmol) w DMF (5 ml), dodano dichloro-bis(trifenylofosfino)pallad (II) (35 mg, 5% molowo) i 2-(tributylostannylo)furan (0,35 ml, 1,1 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 70°C przez 3 godziny. Następnie dodano nasycony roztwór KF w metanolu (20 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Mieszaninę reakcyjną zatężono żelem krzemionkowym w małej ilości, a pozostałość przesączono przez bibułę filtracyjną i przemyto EtOAc. Przesącz następnie zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci brunatnawego ciała stałego. (80 mg, 27%-owa wydajność).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6,68 (dd, J=3,67, 1,71 Hz, 1H), 7,42 (d, J=3,67 Hz, 1H), 7,67 (d, J=5,13 Hz, 1H), 7,30 (d, J=1,71 Hz, 1H), 8,62 (d, J=5,14 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,233 minuty), MS m/z 181 (MH+).
PL 226 561 B1
305
Etap 2:
Do roztworu estru metylowego kwasu {1-[2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-hydroksypirolidyno-1-karbonylo]-2, 2-dimetylopropylo}karbaminowego (20 mg, 0,039 mmola) w DMF (3 ml), w temperaturze 0°C, dodano NaH (7,8 mg, 60% dyspersji w oleju mineralnym, 0,195 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 1 godzinę. Następnie dodano 2-chloro-4-tiofen-2-ylopirymidynę (16,0 mg, 0,0544 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym reakcję zatrzymano dodając wodę i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtawy olej, który następnie oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując odbezpieczony produkt sprzęgania. (3 mg, 11%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 1,420 minuty), MS m/z 601 (MH+).
Etap 3:
Do roztworu (1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)amidu kwasu 1-(2-amino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(4-furan-2-ylopirymidyn-2-ylooksy)pirolidyno-2-karboksylowego (3 mg, 0,0042 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano kwas cyklopropylooctowy (0,6 mg, 0,0063 mmola), DIEA (0,004 ml, 0,021 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (1,0 g, 0,0063 mmola) oraz HBTU (2,4 mg, 0,0063 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółty olej, który oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawej warstwy (związek 339). (1,0 mg, 30%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 0,12 (m, 2H), 0,48 (m, 2H), 0,90 (m, 1H), 0,99-1,09 (m, 11H), 1,23 (m, 2H), 1,43 (dd, J=9,05, 5,31 Hz, 1H), 1,87 (m, 1H), 2,05 (m, 2H), 2,19-2,29 (m, 2H), 2,50 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,10 (dd, J=12,23, 3,91 Hz, 1H), 4,25 (d, J=11,99 Hz, 1H), 4,47 (dd, J=10,52, 7,09 Hz, 1H), 4,63 (s, 1H), 5,11 (dd, J=10,52, 1,71 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,12, 1,47 Hz, 1H), 5,71-5,79 (m, 2H), 6,65 (dd,
306
PL 226 561 B1
J=3,67, 1,96 Hz, 1H), 7,38 (d, J=3,67 Hz, 1H), 7,40 (d, J=5,38 Hz, 1H), 7,76 (m,1H), 8,54 (d, J=5,38
Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,790 minuty), MS m/z 683 (MH+).
P r z y k ł a d 340: sposób wytwarzania związku 340
Etap 1:
Do roztworu 2,4-dichloropirymidyny (149 mg, 1 mmol) w DMF (5 ml), dodano dichloro-bis(trifenylofosfino)pallad (II) (35 mg, 5% molowo) i 2-(tributylostannylo)tiazol (412 mg, 1,1 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 80°C przez 3 godziny. Następnie dodano nasycony roztwór KF w metanolu (20 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Mieszaninę reakcyjną zatężono żelem krzemionkowym w małej ilości, a pozostałość przesączono przez bibułę filtracyjną i przemyto EtOAc. Przesącz następnie zatężono i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci brunatnawego ciała stałego. (9 mg, 3%-owa wydajność).
452 LC-MS (czas retencji: 1,320 minuty), MS m/z 198 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu (1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)amidu kwasu 1-[2-(2-cyklopropyloacetyloamino)-3,3-dimetylobutyrylo]-4-hydroksypirolidyno-2-karboksylowego (12,5 mg, 0,0232 mmola) w DMF (3 ml), w temperaturze 0°C, dodano NaH (3,7 mg, 60% dyspersji w oleju mineralnym, 0,0928 mmola). Mieszaninę reakcyjną następnie ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 1 godzinę. Następnie dodano 2-chloro-4-tiazol-2-ilopirymidynę (9,0 mg, 0,0289 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto solanką
PL 226 561 B1
307 i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano surowy produkt, który następnie oczyszczono metodą preparatywnej HPLC z uzyskaniem końcowego produktu w postaci białego ciała stałego (związek 340). (2,8 mg, 17%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD), 400 MHz) δ 0,12 (m, 2H), 0,47 (m, 2H), 0,89 (m, 1H), 1,00-1,09 (m, 1H), 1,22 (m, 2H), 1,44 (dd, J=9,54, 5,38 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,07, 5,38 Hz, 1H), 2,06 (m, 2H), 2,20-2,32 (m, 2H), 2,52 (dd, J=13,70, 6,85 Hz, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,13 (dd, J=11,98, 3,91 Hz, 1H), 4,30 (d, J=11,98 Hz, 1H), 4,48 (dd, J=10,51, 7,09 Hz, 1H), 4,63 (d, J=9,54 Hz, 1H),, 5,11 (d, J=10,51 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H),5,73-5,80 (m, 2H), 7,81 (d, J=5,14 Hz, 1H), 7,84 (d, J=3,18 Hz, 1H), 8,03 (d, J=2,93 Hz, 1H), 8,68 (d, J=5,13 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,710 minuty), MS m/z 700 (MH+).
P r z y k ł a d 341: sposób wytwarzania związku 341
Schemat 2
Związek 341
308
PL 226 561 B1
Etap 1 (schemat 1, etap 1):
Do roztworu Boc-HYP-OH (1,0 g, 4,324 mmola) w DMF (20 ml), w temperaturze 0°C, dodano NaH (0,38 g, 60% dyspersji w oleju mineralnym, 9,513 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, po czym dodano 2,4-dichloropirymidynę (0,709 g, 0,0289 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając 1N roztwór HCl i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną oddzielono, przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano surowy produkt, który następnie oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci bezbarwnego oleju. (0,4 g, 27%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ 1,13 (m, 9H), 2,37 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 3,70-3,84 (m, 2H), 4,38 (m, 1H), 5,65 (m, 1H), 6,88 (d, J=5,86 Hz, 1H), 8,37 (d, J=5,86 HZ, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,370 minuty), MS m/z 344 (MH+).
Etap 2: (schemat 1, etap 2)
Do roztworu estru 1-tert-butylowego kwasu (2S,4R)-4-(2-chloropirymidyn-4-ylooksy)-pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (0,34 g, 0,99 mmola) w CH3CN (20 ml) dodano kwas (1R,2S)/(1S,2R)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowy (0,511 g, 1,48 mmola), DIEA (0,86 ml, 4,95 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (0,226 g, 1,48 mmola) oraz HBTU (0,561 g, 1,48 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej
HPLC, uzyskując żółte ciało stałe (związek pośredni 4). (0,33 g, 41%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ mieszanina diasteoromerów.
LC-MS (czas retencji: 2,907 minuty), MS m/z 655 (MH+).
Etap 3: (schemat 2, etap 1)
Do roztworu związku pośredniego 4 (50 mg, 0,061 mmola) w CH2CI2 (2,5 ml), dodano 1 ,2,3,4-tetrahydroizochinolinę (0,011 ml, 0,0915 mmola) i Et3N (0,021 ml, 0,153 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc i w temperaturze 40°C przez 1 dzień. Rozpuszczalnik usunięto i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując bezbarwny olej, który następnie rozpuszczono w 4N HCl w dioksanie (1 ml) i mieszano przez noc. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano chlorowodorek w postaci bezbarwnego oleju. (20 mg, 52%-owa wydajność)
LC-MS (czas retencji: 1,160 minuty), MS m/z 553 (MH+).
Etap 4: (schemat 2, etap 2)
Do roztworu chlorowodorku (1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)amidu kwasu 4-[2-(3,4-dihydro-1H-izochinolin-2-ylo)pirymidyn-4-ylooksy]pirolidyno-2-karboksylowego (20 mg, 0,032 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (9,1 mg, 0,048 mmola), DIEA (0,028 ml, 0,16 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (7,3 mg, 0, 048 mmola) oraz HBTU (18,2 mg, 0,048 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółtawy olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano trifluorooctan w postaci bezbarwnego oleju (związek 341) (16 mg, 60%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 0,98-1,06 (m, 13H), 1,13 (m, 1H), 1,22-1,32 (m, 1H), 1,35-1,44 (m, 1H), 1,82 (dd, J=8,24, 5,19 Hz, 0,5H), 1,90 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 0,5H), 2,26 (m, 1H), 2,32-2,43 (m, 1H), 2,56 (m, 1H), 2,96 (m, 1H), 3,11 (m, br, 2H), 3,56 (s, 3H), 4,14 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 5,75 (m, 1H), 5,94 (s, 1H), 6,47 (d, J=7,02 Hz, 1H), 7,29 (s, 4H), 7,49 (m, 1H), 7,56 (m, 1H), 7,74 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,88 (d, J=8,24 Hz, 1H), 8,11 (d, J=7,02 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,517 minuty), MS m/z 724 (MH+).
PL 226 561 B1
309
P r z y k ł a d 342: sposób wytwarzania związku 342
Związek 342 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 341, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 schematu 2 zamiast 1 ,2,3,4-tetrahydroizochinoliny użyto izoindolinę.
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 4 według przykładu 341 (50 mg, 0,061 mmola) w CH2CI2 (2,5 ml), dodano izoindolinę (0,013 ml, 0,115 mmola) i Et3N (0,026 ml, 0,19 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 dni. Rozpuszczalnik usunięto i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując bezbarwny olej, który następnie rozpuszczono w 4N HCl w dioksanie (1 ml) i mieszano przez noc. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano surowy produkt, który oczyszczono ponownie metodą preparatywnej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawego ciała stałego. (8,5 mg, 14%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 1,860 minuty), MS m/z 539 (MH+).
Etap 2
310
PL 226 561 B1
Do roztworu chlorowodorku (1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)amidu kwasu 4-[2-(1,3-dihydroizoindol-2-ylo)pirymidyn-4-ylooksy]pirolidyno-2-karboksylowego (8,5 mg, 0,0104 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (3,0 mg, 0,0156 mmola), DIEA (0,009 ml, 0,052 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (2,4 mg, 0,0156 mmola) oraz HBTU (5,9 mg, 0,0156 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółtawy olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano trifluorooctan w postaci bezbarwnego oleju (związek 342). (3 mg, 35%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 300 MHz) δ mieszanina diasteoromerów.
LC-MS (czas retencji: 2,547 minuty), MS m/z 710 (MH+).
P r z y k ł a d 343: sposób wytwarzania związku 343
Związek 342 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 341, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 schematu 2 zamiast 1,2,3,4-tetrahydroizochinoliny stosowano morfolinę
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 4 według przykładu 341 (50 mg, 0,061 mmola) w CH2CI2 (2,5 ml), dodano morfolinę (0,008 ml, 0,0915 mmola) i Et3N (0,021 ml, 0,153 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc i w temperaturze 40°C przez 1 dzień. Rozpuszczalnik usunięto i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując bezbarwny olej, który następnie rozpuszczono w 4N HCl w dioksanie (1 ml) i mieszano przez noc. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano chlorowodorek w postaci bezbarwnego oleju. (12,6 mg, 36%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 0,810 minuty), MS m/z 507 (MH+).
PL 226 561 B1
311
Etap 2:
Do roztworu chlorowodorku (1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)amidu kwasu 4-(2-morfolin-4-ylopirymidyn-4-ylooksy)pirolidyno-2-karboksylowego (12,6 mg, 0,0217 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (6,2 mg, 0,0326 mmola), DIEA (0,019 ml, 0,1085 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (5,0 mg, 0,0326 mmola) oraz HBTU (12,4 mg, 0,0326 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółtawy olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano trifluorooctan w postaci bezbarwnego oleju (związek 343).
(7 mg, 41%-owa wydajność).
1
H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ mieszanina diasteoromerów.
LC-MS (czas retencji: 1,280 minuty), MS m/z 678 (MH+).
P r z y k ł a d 344: sposób wytwarzania związku 344
312
PL 226 561 B1
Etap 1: (schemat 1)
Do roztworu estru 1-tert-butylowo-2-metylowego kwasu 4-p-tolilsulfanylokarbonylopirolidyno-1,2-dikarboksylowego (3,0 g, 7,91 mmola) w etanolu (15 ml) i THF (30 ml), dodano borowodorek sodu (0,6 g, 15,8 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto 1N roztworem HCl i ekstrahowano EtOAc trzy razy. Warstwy organiczne połączono, przemyto nasyconym roztworem NaHCO3 i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano żółtawy olej, który oczyszczono metodą szybkiej chromatografii kolumnowej (żel krzemionkowy, 3:1 EtOAc: heksany), uzyskując produkt w postaci bezbarwnego oleju (związek pośredni 5). (1,77 g, 86%-owa wydajność).
PL 226 561 B1
313 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,43 (m, 9H), 2,00-2,13 (m, 2H), 2,46 (m, 3H), 3,19 m, 1H), 3,473,53 (m, 2H), 3,61 (m, 1H), 3,73 (m, 3H), 4,31 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,240 minuty), MS m/z 282 (M+Na+).
Etap 2: (schemat 2, etap 1)
Do roztworu związku pośredniego 5 (80 mg, 0,309 mmola) w THF (10 ml) w temperaturze 0°C, dodano trifenylofosfinę (121,4 mg, 0,463 mmola) i 4-hydroksychinolinę (67,2 mg, 0,463 mmola), a następnie DEAD (80,6 mg, 0,463 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 2 dni. Następnie rozpuszczalnik odparowano i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując bezbarwny olej, który rozpuszczono w 4N HCl w dioksanie (3 ml) i mieszano przez 2 godziny. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano bis-chlorowodorek w postaci bezbarwnego gęstego oleju. (110 mg, 99%-owa wydajność).
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 2,52 (m, 1H), 2,60 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 3,45 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,86 (m, 1H), 4,61-4,75 (m, 3H), 7,56 (d, J=6,7 Hz, 1H), 7,94 (t, J=7,3 Hz, 1H), 8,10-8,20 (m, 2H), 8,55 (d, J=8,2 Hz, 1H), 9,07 (d, J=6,7 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 0,570 minuty), MS m/z 287 (MH+).
Etap 3: (schemat 2, etap 2)
Do roztworu bis-chlorowodorku estru metylowego kwasu 4-(chinolin-4-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego (110 mg, 0,306 mmola) w CH3CN (10 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (87 mg, 0,46 mmola), DIEA (0,27 ml, 1,53 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (70 mg, 0,46 mmola) oraz HBTU (174 mg, 0,46 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółtawy olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano trifluorooctan w postaci bezbarwnego oleju. (105 mg, 60%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,07 (s, 9H), 2,34 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 3,14 (m, 1H), 3,27 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,57-4,63 (m, 2H), 4,73 (m, 1H), 7,53 (d, J=6,7 Hz, 1H), 7,91 (t, J=7,6 Hz, 1H), 8,06-8,16 (m, 2H), 8,43 (d, J=8,6 Hz, 1H), 9,02 (d, J=6,4 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,250 minuty), MS m/z 458 (MH+).
Etap 4:(schemat 2, etap 3)
Do roztworu estru metylowego kwasu 1 -(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(chinolin-4-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego (100 mg, 0,175 mmola) w THF (6 ml), metanolu (3,25 ml) i wody (1,0 ml), dodano monohydrat wodorotlenku litu (110 mg, 2,62 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3 do 5 i zatężono. Ekstrahowano octanem etylu (3 x 40 ml) i warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano gęsty bezbarwny olej do użycia w następnym etapie (25 mg, 32%-owa wydajność).
Do roztworu powyższego związku (25 mg, 0,056 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (22,5 mg, 0,085 mmola), DIEA (0,05 ml, 0,28 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (12,9 mg, 0,085 mmola) oraz HBTU (32 mg, 0,085 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółty olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano trifluorooctan w postaci bezbarwnego gęstego oleju (związek 344). (20 mg, 46%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,02-1,10 (m, 11H), 1,24 (m, 2H), 1,40 (dd, J=9,2, 5,5 Hz, 1H), 1,90 (dd, J=7,9, 5,5 Hz, 1H), 2,19-2,38 (m, 3H), 2,95 (m, 1H), 3,19 (m, 1H), 3,28 (s, 3H), 4,10 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,55 (m, 1H), 4,62 (d, J=4,6 Hz, 2H), 5,15 (d, J=10,7 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,72 (m, 1H), 7,54 (d, J=6,7 Hz, 1H), 7,93 (m, 1H), 8,07-8,18 (m, 2H), 8,41 (d, J=8,6 Hz, 1H), 9,03 (d, J=6,7 Hz, 1H), 9,09 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,617 minuty), MS m/z 656 (MH+).
314
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 345: sposób wytwarzania związku 345
Związek 345 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 przykładu 344, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 schematu 2 zamiast 4-hydroksychinoliny stosowano 3-bromofenol.
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 5 według przykładu 344 (150 mg, 0,578 mmola) w THF (15 ml) w temperaturze 0°C, dodano trifenylofosfinę (228 mg, 0,868 mmola) i 3-bromofenol (150 mg, 0,868 mmola), a następnie DEAD (0,14 ml, 0,868 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 2 dni, po czym rozpuszczalnik odparowano i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci bezbarwnego oleju. (105 mg, 44%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,023 minuty), MS m/z 436 (M+Na+).
Etap 2:
PL 226 561 B1
315
Ester 1-tert-butylowo-2-metylowy kwasu 4-(3-bromofenoksymetylo)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (35 mg, 0,085 mmola) rozpuszczono w 4N HCl w dioksanie (1,5 ml) i mieszano przez 2 godziny. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano gęsty bezbarwny olej. Do roztworu tego oleju w CH3CN (10 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (21,9 mg, 0,1155 mmola), DIEA (0,067 ml, 0,385 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (17,7 mg, 0,1155 mmola) oraz HBTU (43,8 mg, 0,1155 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując produkt w postaci bezbarwnego oleju. (20 mg, 49%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 2,15 (m, 1H), 2,24 (m, 1H), 2,83 (m, 1H), 3,54 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,87 (m, 1H), 3,91-3,98 (m, 3H), 4,31 (s, 1H), 4,59 (dd, J=8,80, 5,38 Hz, 1H), 6,89 (d, J=8,32 Hz, 1H), 7,03-7,10 (m, 2H), 7,15 (t, J=8,07 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,943 minuty), MS m/z 485 (MH+).
Etap 3:
Br
Związek 345
Do roztworu estru metylowego kwasu 4-(3-bromofenoksymetylo)-1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)pirolidyno-2-karboksylowego (17 mg, 0,035 mmola) w THF (1,5 ml), metanolu (0,8 ml) i wody (0,25 ml), dodano monohydrat wodorotlenku litu (22 mg, 0,525 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 dni, po czym zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3 do 5 i zatężono. Ekstrahowano octanem etylu (2 x 20 ml), a warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano gęsty bezbarwny olej do użycia w następnym etapie (15 mg, 91%-owa wydajność).
Do roztworu powyższego kwasu (15 mg, 0,0318 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (12,7 mg, 0,0477 mmola), DIEA (0,028 ml, 0,159 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (7,3 mg, 0,0477 mmola) oraz HBTU (18,1 mg, 0,0477 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując końcowy produkt w postaci bezbarwnego gęstego oleju (związek 345). (14 mg, 64%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,00-1,06 (m, 11H), 1,21 (m, 2H), 1,37 (dd, J=9,53 Hz, 5,62 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07 Hz, 5,62 Hz, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,14-2,24 (m, 2H), 2,81-2,94 (m, 2H), 3,53 (s, 3H), 3,91-3,97 (m, 4H), 4,33 (s, 1H), 4,38 (m, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,12, 1,22 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 6,89 (m, 1H), 7,05-7,11 (m, 2H), 7,16 (t, J=8,07 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 3,500 minuty), MS m/z 683 (MH+).
316
PL 226 561 B1
Ε3 fQ
P r z y k ł a d 346: sposób wytwarzania związku 346
PL 226 561 B1
317
Etap 1: (schemat 1, etap 1)
Do roztworu estru 1-tert-butylowo-2-metylowego kwasu 4-hydroksymetylopirolidyno-1,2-dikarboksylowego (300 mg, 1,157 mmola) w THF (15 ml) w temperaturze 0°C, dodano trifenylofosfinę (455 mg, 1,735 mmola) i 5-bromopirydyn-3-ol (wytworzono według F.E.Ziegler i in., J.Am.Chem.Soc., (1973), 95, 7458) (302 mg, 1, 735 mmola). Następnie dodano DEAD (0,273 ml, 1,735 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 2 dni. Następnie rozpuszczalnik odparowano i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC z uzyskaniem żółtawego oleju, który następnie rozpuszczono w 4N roztworze HCl w dioksanie (3,0 ml) i mieszano przez 4 godziny. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano surowy produkt, który następnie oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawego oleju. (70 mg, 11%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 0,890 minuty), MS m/z 315 (MH+).
Etap 2: (schemat 1, etap 2)
Do roztworu estru metylowego kwasu 4-(5-bromopirydyn-3-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego (70 mg, 0,129 mmola) w CH3CN (10 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (36,5 mg, 0,193 mmola), DIEA (0,135 ml, 0,744 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (30 mg, 0,193 mmola) oraz HBTU (73 mg, 0,193 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując produkt w postaci bezbarwnego oleju. (80 mg, 100%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 2,17 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,87 (m, 1H), 3,50 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,88-3,98 (m, 2H), 4,04-4,12 (m, 2H), 4,28 (s, 1H), 4,60 (dd, J=9,05, 5,87 Hz, 1H), 7,86 (m, 1H), 8,31-8,35 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,697 minuty), MS m/z 486 (MH+).
Etap 3: (schemat 1, etap 3)
Do roztworu estru metylowego kwasu 4-(5-bromopirydyn-3-ylooksymetylo)-1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)pirolidyno-2-karboksylowego (80 mg, 0,133 mmola) w THF (5,6 ml), metanolu (3 ml) i wody (1 ml), dodano monohydrat wodorotlenku litu (84 mg, 2,0 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 dni. Następnie zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3 do 5. Ekstrahowano octanem etylu (2 x 20 ml), a warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci bezbarwnego gęstego oleju (związek pośredni 6) (50 mg, 80%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 2,16-2,30 (m, 2H), 2,88 (m, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,92 (m, 2H), 4,07 (m, 2H), 4,29 (s, 1H), 4,57 (dd, J=8,56, 5,87 Hz, 1H), 7,79 (m, 1H), 8,29 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,590 minuty), MS m/z 472 (MH+).
Etap 4: (schemat 2)
Do roztworu kwasu 4-(5-bromopirydyn-3-ylooksymetylo)-1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)pirolidyno-2-karboksylowego (5 mg, 0,0106 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (4,2 mg, 0,0159 mmola), DIEA (0,009 ml, 0,053 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (2,4 mg, 0,0159
318
PL 226 561 B1 mmola) oraz HBTU (6,0 mg, 0,0159 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując końcowy produkt w postaci bezbarwnego gęstego oleju (związek 346). (2 mg, 24%-owa wydajność).
1H NMR CD3OD, 400 MHz) (1,00-1,07 (m, 11H), 1,30 (m, 2H), 1,37 (dd, J=9,29 Hz, 5,14 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07 Hz, 5,38 Hz, 1H), 2,08 (m, 1H), 2,15-2,25 (m, 2H), 2,87-2,94 (m, 2H), 3,51 (s, 3H), 3,92-3,97 (m, 2H), 4,02-4,07 (m, 2H), 4,31 (s, 1H), 4,39 (m, 1H), 5,10 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,12, 1,46 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 7,68 (m, 1H), 8,24 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,727 minuty), MS m/z 684 (MH+).
P r z y k ł a d 347: sposób wytwarzania związku 347
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 6 według przykładu 346 (16 mg, 0,0339 mmola) w DMF (1 ml), dodano kwas 3-tiofenoboronowy (5,6 mg, 0,044 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)pallad (2,0 mg, 0,0017 mmola) i 2M roztwór Na2CO3 (0,051 ml, 0,1017 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 110°C przez 4 godziny. Następnie przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci brunatnawego oleju. (6 mg, 37%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,05 (s, 9H), 2,21-2,30 (m, 2H), 2,95 (m, 1H), 3,42 (s, 3H), 3,93 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,20-4,30 (m, 3H), 4,60 (dd, J=8,56, 5,87 Hz, 1H), 7,64 (m, 2H), 8,12 (m, 1H), 8,37 (m, 1H), 8,45 (m, 1H), 8,75 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,353 minuty), MS m/z 476 (MH+).
PL 226 561 B1
319
Etap 2:
Do roztworu kwasu 1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(5-tiofen-3-ylopirydyn-3-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego (6 mg, 0,0126 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (5,0 mg, 0,0189 mmola), DIEA (0,011 ml, 0,063 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (2,9 mg, 0,0189 mmola) oraz HBTU (7,2 mg, 0,0189 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawej warstwy (związek 347). (2,2 mg, 22%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,01-1,07 (m, 11H), 1,19 (m, 2H), 1,36 (m, 1H), 1,88 (dd, J=8,07 Hz, 5,62 Hz, 1H), 2,09-2,24 (m, 3H), 2,91 (m, 1H), 3,00 (m, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,98 (d, J=5,86 Hz, 2H), 4,20-4,31 (m, 3H), 4,43 (m, 1H), ,12 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,29 (dd, J=17,12, 1,22 Hz, 1H), 5,69 (m, 1H), 7,64 (m, 2H), 8,11 (m, 1H), 8,31 (m, 1H), 8,43 (m, 1H), 8,75 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,540 minuty), MS m/z 688 (MH+).
P r z y k ł a d 348: sposób wytwarzania związku 348
320
PL 226 561 B1
Etap 1: (schemat 1)
Do roztworu związku pośredniego 5 według przykładu 344 (700 mg, 2,7 mmola) w THF (90 ml), metanolu (50 ml) i wody (12 ml), dodano monohydrat wodorotlenku litu (1700 mg, 2,0 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3 do 5. Ekstrahowano octanem etylu (2 x 20 ml) i warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano produkt w postaci bezbarwnego gęstego oleju (związek pośredni 7) (0,58, 88%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,42 (m, 9H), 2,00-2,09 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 3,17 (m, 1H), 3,49 (m, 2H), 3,59 (m, 1H), 4,24 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,08 minuty), MS m/z 268 (M+Na+).
Etap 2: (schemat 2, etap 1)
Do roztworu związku pośredniego 7 (270 mg, 1,1 mmola) w DMSO (10 ml), doano t-butanolan potasu (309 mg, 2,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Następnie dodano 2-bromo-4-chloropirydynę (254 mg, 1,32 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i mieszaninę przemyto octanem etylu. Warstwę wodną oddzielono i zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3. Dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu i warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4).
Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano pomarańczowy olej, który następnie rozpuszczono w metanolu i w temperaturze -78°C, przez 2 minuty barbotowano HCl (gaz). Następnie mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano surowy produkt w postaci pomarańczowego oleju do użycia w następnym etapie.
473 LC-MS (czas retencji: 0,65 minuty), MS m/z 315 (MH+).
PL 226 561 B1
321
Etap 3: (schemat 2, etap 2)
Do roztworu surowego estru metylowego kwasu 4-(2-bromopirydyn-4-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego w CH3CN (20 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (312 mg, 1,65 mmola), DIEA (1,15 ml, 6,6 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (252 mg, 1,65 mmola) oraz HBTU (626 mg, 1,65 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując produkt w postaci bezbarwnego oleju. (270 mg, 41%-owa wydajność w dwóch etapach).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 2,13-2,19 (m, 2H), 2,87 (m, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,93 (d, J=6,36 Hz, 2H), 4,11 (m, 2H), 4,27 (s, 1H), 4,60 (dd, J=8,80, 5,87 Hz, 1H), 7,06 (d, J=5,87, 2,20 Hz, 1H), 7,32 (d, J=2,20 Hz, 1H), 8,18 (d, J=6,11 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,657 minuty), MS m/z 486 (MH+).
Etap 4: (schemat 2, etap 3)
Do roztworu estru metylowego kwasu 4-(2-bromopirydyn-4-ylooksymetylo)-1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)pirolidyno-2-karboksylowego (270 mg, 0,45 mmola) w THF (18 ml), metanolu (10 ml) i wody (3,3 ml), dodano monohydrat wodorotlenku litu (283 mg, 6,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono i zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3 do 5. Produkt zebrano w postaci białawego ciała stałego (związek pośredni 8) (180 mg, 85%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 2,20-2,29 (m, 2H), 2,89 (m, 1H), 3,54 (s, 3H), 3,92 (d, J=6,4 Hz, 2H), 4,06-4,13 (m, 2H), 4,31 (d, J=8,85 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=8,85, 5,50 Hz, 1H), 7,00 (dd, J=6,10, 2,24 Hz, 1H), 7,22 (d, J=1,83 Hz, 1H), 8,12 (d, J=5,80 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,113 minuty), MS m/z 472 (MH+).
Etap 5: schemat 3)
Do roztworu związku pośredniego 8 (10 mg, 0,0212 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (8,5 mg, 0,00318 mmola), DIEA (0,018 ml, 0,106 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (4,9 mg, 0,0318 mmola) oraz HBTU (12,1 mg, 0,0318 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując końcowy produkt w postaci bezbarwnego gęstego oleju (związek 348) (9 mg, 53%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,00-1,06 (m, 11H), 1,20 (m, 2H), 1,36 (dd, J=9,54 Hz, 5,38 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,07 Hz, 5,38 Hz, 1H), 2,04-2,24 (m, 3H), 2,88-2,94 (m, 2H), 3,52 (s, 3H), 3,93 (d, J=5,87 Hz, 2H), 4,09 (m, 2H), 4,30 (s, 1H), 4,38 (t, J=7,58 Hz, 1H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,12, 1,47 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 7,00 (dd, J=5,87, 2,20 Hz, 1H), 7,24 (d, J=2,20 Hz, 1H), 8,14 (d, J=5,87 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,670 minuty), MS m/z 684 (MH+).
P r z y k ł a d 349: sposób wytwarzania związku 349
Związek 349
322
PL 226 561 B1
Związek 349 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie przykładu 347, z tym wyjątkiem, że związek w etapie 1 zamiast związku pośredniego 6 według przykładu
346 stosowano związek pośredni 8 według przykładu 348.
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 8 (20 mg, 0,0423 mmola) w DMF (1 ml), dodano kwas 3-tiofenoboronowy (7,0 mg, 0,055 mmola), tetrakis(trifenylo-fosfino)pallad (2,4 mg, 0,00212 mmola) i 2M roztwór Na2CO3 (0,063 ml, 0,127 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 110°C przez 30 godzin, po czym przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci brunatnawego oleju. (10,5 mg, 42%owa wydajność) (50177-165).
LC-MS (czas retencji: 1,690 minuty), MS m/z 476 (MH+)
Etap 2:
Do roztworu kwasu 1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(2-tiofen-3-ylopirydyn-4-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego (10 mg, 0,017 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chloro wodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (6,8 mg, 0,0254 mmola), DBEA (0,015 ml, 0,085 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (3,9 mg, 0,0254 mmola) oraz HBTU (9,6 mg, 0,0254 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci brunatnawej warstwy (związek 349). (2,2 mg, 16%-owa wydajność) . (50177-172).
PL 226 561 B1
323 1H NMR (CD3OD), 400 MHz) δ 1,00-1,07 (m, 11H), 1,20 (m,2H), 1,37 (dd, J=9,04, 5,38 Hz, 1H), 1,88 (dd, J=8,07 Hz, 5,38 Hz, 1H), 2,10-2,25 (m, 3H), 2,90 (m, 1H), 3,04 (m, 1H), 3,47 (s, ,3H), 3,934,02 (m, 2H), 4,29 (s, 1H), 4,35-4,45 (m, 3H), 5,12 (d, J=10,51 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,61 Hz, 1H), 5,69 (m, 1H), 7,40 (dd, J=6,84, 2,44 Hz, 1H), 7,71-7,80 (m, 3H), 8,38 (m, 1H), 8,51 (d, J=7,09 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,443 minuty), MS m/z 688 (MH+).
P r z y k ł a d 350: sposób wytwarzania związku 350
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 8 według przykładu 348 (20 mg, 0, 0423 mmola) w DMF (2 ml), dodano kwas 2-tiofenoboronowy (7,0 mg, 0,055 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)pallad (2,4 mg, 0,00212 mmola) i wodorotlenek baru (40 mg, 0,127 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 150°C w reaktorze mikrofalowym Smith'a przez 110 minut. Następnie mieszaninę przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci żółtawego oleju. (5,0 mg, 20%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,137 minuty), MS m/z 476 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu powyższego kwasu karboksylowego (5,0 mg, 0,0085 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1 R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (3,4 mg, 0,0127 mmola), DIEA (0,007 ml, 0,0424 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (1,9 mg, 0,0127 mmola) oraz HBTU (4,8 mg, 0,0127 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę
324
PL 226 561 B1 następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawego oleju (związek 350). (2,6 mg, 38%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 0,99-1,07 (m, 11H), 1,19 (m, 2H), 1,37 (dd, J=9,54, 5,63 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,07 Hz, 5,38 Hz, 1H), 2,10-2,25 (m, 3H), 2,91 (m, 1H), 3,03 (m, 1H), 3,48 (s, 3H), 3,924,02 (m, 2H), 4,30 (s, 1H), 4,32-4,45 (m, 3H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,22 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,11 Hz, 1H), 5,69 (m, 1H), 7,30-7,38 (m, 2H), 7,66 (d, J=2,45 Hz, 1H), 7,92 (m, 1H), 7,95 (m, 1H), 8,48 (d, J=6,85 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,067 minuty), MS m/z 688 (MH+).
P r z y k ł a d 351: sposób wytwarzania związku 351
Związek 351 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie przykładu 350, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast kwasu 2-tiofenoboronowego stosowano kwas
3-furanoboronowy.
Etap 1
Do roztworu związku pośredniego 8 według przykładu 348 (20 mg, 0, 0423 mmola} w DMF (2 ml), dodano kwas 3-furanoboronowy (6,2 mg, 0,055 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)pallad (2,4 mg, 0,00212 mmola) i wodorotlenek baru (40 mg, 0,127 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 150°C w reaktorze mikrofalowym Smith'a przez 30 minut, po czym przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci żółtawego oleju. (12 mg, 49%-owa wydajność)
PL 226 561 B1
325
LC-MS (czas retencji: 1,937 minuty), MS m/z 460 (MH+). Etap 2:
Związek 351
Do roztworu powyższego kwasu karboksylowego (5,0 mg, 0,0209 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (8,4 mg, 0,0314 mmola), DIEA (0,018 ml, 0,1046 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (4,8 mg, 0,0314 mmola) oraz HBTU (11,9 mg, 0,0314 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawego oleju (związek 351). (4,0 mg, 24%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,00-1,08 (m, 11H), 1,21 (m, 2H), 1,37 (dd, J=8,80, 5,62 Hz, 1H), 1,87 (dd, J=8,32 Hz, 5,38 Hz, 1H), 2,11-2,24 (m, 3H), 2,91 (M, 1H), 3,03 (m, 1H), 3,49 (s, 3H), 3,914,03 (m, 2H), 4,29 (s, 1H), 4,35-4,46 (m, 3H), 5,12 (dd, J=10,27, 1,47 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,69 (m, 1H), 7,11 (m, 1H), 7,38 (dd, J=7,10, 2,69 Hz, 1H), 7,71 (d, J=2,69 Hz, 1H), 7,81 (m, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,50 (d, J=7,09 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,410 minuty), MS m/z 612 (MH+).
P r z y k ł a d 352: sposób wytwarzania związku 352
326
PL 226 561 B1
Związek 352 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 2 oraz schemacie 3 przykładu 348, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 schematu 2 zamiast 2-bromo- 4-chloropirydyny stosowano 2,6-dibromopirydynę.
Etap 1: (schemat 2, etap 1)
Do roztworu związku pośredniego 7 według przykładu 348 (270 mg, 1,1 mmola) w DMSO (10 ml), dodano t-butanolan potasu (309 mg, 2,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, po czym dodano 2,6-dibromopirydynę (313 mg, 1,32 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie reakcję zatrzymano dodając wodę i mieszaninę przemyto octanem etylu. Warstwę wodną oddzielono i zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3, dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu i warstwy organiczne połączono i osuszono (MgSO4). Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano pomarańczowy olej, który następnie rozpuszczono w metanolu i w temperaturze -78°C przez 2 minuty barbotowano HCl (gaz). Następnie mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez noc. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano surowy produkt w postaci pomarańczowego oleju do użycia w następnym etapie.
LC-MS (czas retencji: 1,480 minuty), MS m/z 315 (MH+).
Etap 2: (schemat 2, etap 2)
Do roztworu surowego estru metylowego kwasu 4-(6-bromopirydyn-2-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego w CH3CN (20 ml) dodano kwas 2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowy (312 mg, 1,65 mmola), DIEA (1,15 ml, 6,6 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (252 mg, 1,65 mmola) oraz HBTU (626 mg, 1,65 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą
PL 226 561 B1
327 szybkiej chromatografii kolumnowej (żel krzemionkowy, 1:1 heksany: octan etylu), uzyskując produkt w postaci bezbarwnego oleju. (340 mg, 63%-owa wydajność w dwóch etapach).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 2,10-2,24 (m, 2H), 2,84 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,83 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 4,20-4,29 (m, 2H), 4,31 (s, 1H), 4,59 (dd, J=8,80, 5,13 Hz, 1H), 6,76 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,11 (d, J=7,58 Hz, 1H), 7,53 (t, J=7,83 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,820 minuty), MS m/z 486 (MH+).
Do roztworu estru metylowego kwasu 4-(6-bromopirydyn-2-ylooksymetylo)-1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)pirolidyno-2-karboksylowego (330 mg, 0,679 mmola) w THF (28 ml), metanolu (15 ml) i wody (5 ml), dodano monohydrat wodorotlenku litu (427 mg, 10,18 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 dni, po czym zatężono i zakwaszono 1N roztworem HCl do pH=3 do 5. Produkt zebrano w postaci białego ciała stałego (związek pośredni 9) (310 mg, 97%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 2,18-2,25 (m, 2H), 2,88 (m, 1H), 3,57 (s, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,28-4,35 (m, 2H), 4,58 (m, 1H), 6,79 (d, J=7,94 Hz, 1H), 7,13 (d, J=7,32 Hz, 1H), 7,55 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 3,030 minuty), MS m/z 472 (MH+).
Etap 4: (schemat 3)
Br
Związek 352
Do roztworu związku pośredniego 9 (10 mg, 0,0212 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego
328
PL 226 561 B1 (8,5 mg, 0,00318 mmola), DIEA (0,018 ml, 0,106 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (4,9 mg, 0,0318 mmola) oraz HBTU (12,1 mg, 0,0318 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawej warstwy (związek 352). (10,2 mg, 60%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,00-1,06 (m, 11H), 1,20 (m, 2H), 1,37 (dd, J=9,54 Hz, 5,63 Hz, 1H), 1,86 (dd, J=8,07 Hz,5,38 Hz, 1H), 2,05 (m, 1H), 2,12-2,25 (m, 2H), 2,86-2,94 (m, 2H), 3,54 (s, 3H), 3,87 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 4,18-4,27 (m, 2H), 4,33 (s, 1H), 4,37 (m, 1H), 5,11 ( dd, J=10,27, 1,72 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,12, 1,47 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 6,76 (d, J=8,32 Hz, 1H), 7,11 (d, J=7,33 Hz, 1H), 7,53 (t, J=7,82 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,837 minuty), MS m/z 684 (MH+).
P r z y k ł a d 353: sposób wytwarzania związku 353
Związek 353 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie przykładu 347, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast związku pośredniego 6 według przykładu 346 stosowano związek pośredni 9 według przykładu 352.
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 9 (25 mg, 0,053 mmola) w DMF (1 ml), dodano kwas 3-tiofenoboronowy (8,8 mg, 0,0688 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)pallad (3,1 mg, 0,00265 mmola) i 2M rozPL 226 561 B1
329 twór Na2CO3 (0,080 ml, 0,159 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 110°C przez noc, po czym przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci brunatnawego oleju. (15 mg, 48%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 2,20-2,31(m, 2H), 2,94 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,91 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,37-4,46 (m, 2H), 4,61 (dd, J=8,85, 5,19 Hz, 1H), 6,77 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,39 (d, J=7,32 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=5,19, 3,05 Hz, 1H), 7,68 (dd, J=4,88, 1,22 Hz, 1H), 7,77 (t, J=7,93 Hz, 1H), 8,04 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,857 minuty), MS m/z 476 (MH+).
Etap 2 :
Do roztworu kwasu 1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(6-tiofen-3-ylopirydyn-2-ylooksymetylo)piroli dyno-2-karboksylowego (15 mg, 0,0254 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (10,2 mg, 0,0382 mmola), DIEA (0,022 ml, 0,127 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (5,8 mg, 0,0382 mmola) oraz HBTU (14,5 mg, 0,0382 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawej warstwy (związek 353). (6 mg, 29%-owa wydajność)
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,00-1,06 (m, 11H), 1,20 (m, 2H), 1,36 (dd, J=9,29, 5,38 Hz, 1H),
1,86 (dd, J=8,07 Hz, 5,38 Hz, 1H), 2,07 (m, 1H), 2,16-2,25 (m, 2H), 2,87-2,99 (m, 2H), 3,54 (s, 3H), 3,87-3,99 (m, 2H), 4,31-4,44 (m, 4H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,46 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 6,67 (d, J=8,31 Hz, 1H), 7,33 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,44 (dd, J=4,89, 2,93 Hz, 1H), 7,63-7,70 (m, 2H), 7,99 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,770 minuty), MS m/z 688 (MH+).
P r z y k ł a d 354: sposób wytwarzania związku 354
330
PL 226 561 B1
Związek 354 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie przykładu 347, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast związku pośredniego 6 według przykładu 346 stosowano związek pośredni 9 według przykładu 352 i zamiast kwasu 3-tiofenoboronowego stosowano kwas fenyloboronowy.
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 9 (20 mg, 0,0423 mmola) w DMF (1 ml), dodano kwas fenyloboronowy (6,7 mg, 0,0688 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)pallad (2,4 mg, 0,00212 mmola) i Cs2CO3 (41 mg,
0,127 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 110°C przez noc, po czym przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci żółtawego oleju. (12 mg, 49%-owa wydajność).
LC-MS (czas retencji: 2,733 minuty), MS m/z 470 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu kwasu 1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(6-fenylopirydyn-2-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego (12 mg, 0,0206 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (8,2 mg, 0,0308 mmola), DIEA (0,018 ml, 0,1028 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (4,7 mg, 0,0308 mmola) oraz HBTU (11,7 mg, 0,0308 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci białego ciała stałego (związek 354). (1,5 mg, 9%-owa wydajność).
PL 226 561 B1
331 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,00-1,07 (m, 11H), 1,20 (m, 2H), 1,36 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 2,09 (m, 1H), 2,17-2,25 (m, 2H), 2,87-3,00 (m, 2H), 3,52 (s, 3H), 3,84-4,00 (m, 2H), 4,33-4,44 (m, 4H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,28 (d, J=17,12, 1,22 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 6,71 (d, J=8,31 Hz, 1H), 6,78 (m, 1H), 7,34-7,44 (m, 3H), 7,74 (m, 1H), 7,95 (m, 1H), 8,01 (d, J=8,31 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 3,553 minuty), MS m/z 682 (MH+).
P r z y k ł a d 355: sposób wytwarzania związku 355
Związek 355
Związek 354 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie 347, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast związku pośredniego 6 według przykładu 346 stosowano związek pośredni 9 według przykładu 352 i zamiast kwasu 3-tiofenoboronowego stosowano kwas 3-furanoboranowy.
Etap 1:
Do roztworu związku pośredniego 9 (20 mg, 0,0423 mmola) w DMF (1 ml), dodano kwas 3-furanoboronowy (6,2 mg, 0,055 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)pallad (2,4 mg, 0,002115 mmola) i 2M roztwór Na2CO3 (0, 064 ml, 0,127 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 110°C przez 2 dni, po czym przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci żółtawego oleju. (7,0 mg, 29%-owa wydajność.)
332
PL 226 561 B1
Etap 2
Z wr i ą z e k 355
Do roztworu powyższego kwasu karboksylowego (6,0 mg, 0,0109 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (4,4 mg, 0,0163 mmola), DIEA (0,009 ml, 0,0544 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (2,5 mg, 0,0163 mmola) oraz HBTU (6,2 mg, 0,0163 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, po czym zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawej warstwy (związek 355). (1,5 mg, 18%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 0,98-1,07 (m, 11H), 1,20 (m, 2H), 1,35 (dd, J=9,54, 5,87 Hz, 1H),
1,86 (dd, J=8,07 Hz, 5,62 Hz, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,15-2,25 (m, 2H), 2,85-2,98 (m, 2H), 3,55 (s, 3H), 3,89 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 4,28-4,42 (m, 4H), 5,11 (dd, J=10,27, 1,71 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,12, 1,22 Hz, 1H), 5,69 (m, 1H), 6,63 (d, J=8,07 Hz, 1H), 6,90 (m, 1H), 7,16 (d, J=7,33 Hz, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,63 (m, 1H), 8,08 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 3,340 minuty), MS m/z 672 (MH+).
P r z y k ł a d 356: sposób wytwarzania związku 356
Związek 356
Związek 356 wytworzono postępując zgodnie z procedurą przedstawioną na schemacie przykładu 350, z tym wyjątkiem, że w etapie 1 zamiast związku pośredniego 8 według przykładu 343 stosowano związek pośredni 9 według przykładu 352.
PL 226 561 B1
333
Etap 1
Do roztworu związku pośredniego 9 (20 mg, 0,0423 mmola) w DMF (2 ml), dodano kwas 2-tiofenoboronowy (7,0 mg, 0,055 mmola), tetrakis(trifenylofosfino)pallad (2,4 mg, 0,00212 mmola) i wodorotlenek baru (40 mg, 0,127 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 150°C w reaktorze mikrofalowym Smith'sa przez 30 minut, po czym przesączono i przemyto metanolem. Przesącz zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci brunatnawego oleju. (13,0 mg, 52%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 2,18-2,25 (m, 2H), 2,93 (m, 1H), 3,55 (s, 3H), 3,83 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,38 (m, 2H), 4,58 (dd, J=8,05, 5,14 Hz, 1H), 6,63 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,07 (dd, J=4,89, 3,67 Hz, 1H), 7,33 (d, J=7,34 Hz, 1H), 7,42 (d, J=5,14 Hz, 1H), 7,60-7,66 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 3,393 minuty), MS m/z 476 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu kwasu 1-(2-metoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(6-tiofen-2-ylopirydyn-2-ylooksymetylo)pirolidyno-2-karboksylowego (11,5 mg, 0,0195 mmola) w CH3CN (5 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2S)(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karba334
PL 226 561 B1 minowego (7,8 mg, 0,0293 mmola), DIEA (0,017 ml, 0,0975 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (4,5 mg, 0,0293 mmola) oraz HBTU (11,1 mg, 0,0293 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Mieszaninę następnie oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci białawego ciała stałego (związek 356). (8,5 mg, 54%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 0,99-1,06 (m, 11H), 1,21 (m, 2H), 1,36 (dd, J=9,54, 5,38 Hz, 1H),
1,86 (dd, J=8,07 Hz, 5,62 Hz, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,15-2,25 (m, 2H), 2,87-2,99 (m, 2H), 3,54 (s, 3H), 3,89 (m, 1H), 3,96 (m, 1H), 4,30-4,44 (m, 4H), 5,11 (dd, J=10,51, 1,71 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=17,11, 1,22 Hz, 1H), 5,70 (m, 1H), 6,62 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,07 (dd, J=4,89, 3,66 Hz, 1H), 7,33 (d, J=7,59 Hz, 1H), 7,42 (d, J=4,89 Hz, 1H), 7,60-7,66 (m, 2H).
LC-MS (czas retencji: 1,967 minuty), MS m/z 688 (MH+).
P r z y k ł a d 357: sposób wytwarzania związku 357
PL 226 561 B1
335
Etap 1:
.OH
Do roztworu kwasu (2S,4R)Fmoc-4-amino-1-boc-pirolidyno-2-karboksylowego (400 mg, 0,884 mmola) w acetonitrylu (15 ml), dodano pięć kropel pirolidyny. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny, po czym zatężono i poddano działaniu wysokiego ciśnienia, uzyskując surowy kwas 4-amino-1-boc-pirolidyno-2-karboksylowy. W innej okrągłodennej kolbie, w temperaturze pokojowej, w czasie 1 godziny, w atmosferze azotu, w odgazowanym toluenie (8 ml) mieszano roztwór Pd2dba3 (40 mg, 5% molowo) i racemiczny BINAP (56 mg, 10% molowo). Następnie dodano 1-chloroizochinolinę (216 mg, 1,326 mmola) i t-butanolan sodu (340 mg, 3,536 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minut. Następnie dodano kwas 4-amino-1-boc-pirolidyno-2-karboksylowy i mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze refluksu przez 1 godzinę. Reakcję zakończono dodając wodę, warstwę wodną oddzielono i przesączono przez bibułę filtracyjną, po czym zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując sprzężony produkt, trifluorooctan. (165 mg, 40%-owa wydajność).
1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,44 (m, 9H), 2,51-2,74 (m, 2H), 3,64 m, 1H), 4,01 (m, 1H), 4,49 (m, 1H), 4,64 (m, 1H), 7,30 (d, J=6,85 Hz, 1H), 7,58 (d, J=6,85 Hz, 1H), 7,79 (m, 1H), 7,91-7,99 (m, 2H), 8,56 (d, J=8,56 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,707 minuty), MS m/z 358 (MH+).
Etap 2:
Do roztworu estru 1-tert-butylowego kwasu 4-(izochinolin-1-yloamino)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (115 mg, 0,244 mmola) w CH3CN (10 ml) dodano chlorowodorek kwasu (1R,2 S) (1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylo)karbaminowego (97 mg, 0,366 mmola), DIEA (0,255 ml, 1,464 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (56 mg, 0,366 mmola) oraz HBTU (139 mg, 0,366 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółty olej, który oczyszczono metodą preparatywnej kolumnowej HPLC, uzyskując trifluorooctan w postaci żółtawego ciała stałego (112 mg, 67%-owa wydajność).
336
PL 226 561 B1 1H NMR (CD3OD, 400 MHz) δ 1,05 (m, 2H), 1,20 (m, 2H), 1,40-1,48 (m, 10H), 1,87 (dd, J=8,19, 5,50 Hz, 1H), 2,23 (m, 1H), 2,39 (m, 1H), 2,50 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,33 (t, J=7,09 Hz, 1H), 4,69 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,27 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,12 Hz, 1H), 5,74 (m, 1H), 7,31 (d, J=6,85 Hz, 1H), 7,60 (d, J=7,09 Hz, 1H), 7,80 (m, 1H), 7,93-8,00 (m, 2H), 8,56 (d, J=8,19 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,023 minuty}, MS ra/z 570 (MH+).
Etap 3:
Ester tert-butylowy kwasu 2-(1-cyklopropanosulfonyloaminokarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(izochinolin-1-yloamino)pirolidyno-1-karboksylowego (31 mg, 0,0453 ramola) rozpuszczono w 4N HCl w dioksanie (1,5 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Po odparowaniu rozpuszczalnika uzyskano bis-chlorowodorek w postaci żółtawego oleju. Do roztworu bischlorowodorku w CH3CN (5 ml) dodano N-boc-L-t-leucynę 11,5 mg, 0,0498 mmola), DIEA (0,047 ml, 0,272 mmola) i czynnik sprzęgający HOBt (10,4 mg, 0,068 mmola) oraz HBTU (25,8 mg, 0,068 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, następnie zatężono, przemyto wodą i dwukrotnie ekstrahowano octanem etylu. Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując żółtawy olej. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej kolumnowej HPLC uzyskano końcowy produkt w postaci białawego ciała stałego (związek 357). (9 mg, 29%-owa wydajność) 1H NMR (CD3OD), 400 MHz) δ 0,98 (m, 2H), 1,05 (s, 9H), 1,20 (m, 2H), 1,36-1,43 (m, 10H), 1,84 (m, 1H), 2,10-2,30 (m, 2H), 2,52 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 4,17-4,27 (m, 2H), 4,47 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 5,07 (d, J=9,29 Hz, 1H), 5,24 (d, J=16,87 Hz, 1H), 5,72 (m, 1H), 6,62 (m, 1H), 6,98 (d, J=6,11 Hz, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,69 (d, J=8,07 Hz, 1H), 7,84 (d, J=5,87 Hz, 1H), 8,20 (d, J=8,56 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,043 minuty), MS m/z 683 (MH+).
Część H:
Warunki prowadzenia LC-MS dla części H:
Kolumny:
(Metoda (A) - YMC ODS S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda (B) - YMC ODS-A S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda C) - YMC S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda D) - YMC Xterra ODS S7 3,0 x 50 mm (Metoda E) - YMC Xterra ODS S7 3,0 x 50 mm (Metoda F) - YMC ODS-A S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda H) - Xterra S7 3,0 x 50 mm (Metoda I) - Xterra S7 C18 3,0 x 50 mm (Metoda G) - YMC C18 S5 4,6 x 50 mm (Metoda J) - Xterra ODS S7 3,0 x 50 mm (Metoda K) - YMC ODS-A S7 C18 3,0 x 50 mm
Gradient: 100% rozpuszczalnik A/0% rozpuszczalnik B do 0% rozpuszczalnik A/100% rozpuszczalnik B, czas gradientu: 2 minuty, (A, B, D, F, G, H-I); 8 minut, (C, E); 4 minuty, (J); 3 minuty, (K).
PL 226 561 B1
337
Czas retencji: 1 minuta, (A, B, D, F, G, H, I, J, K; 2 minuty, (C, E)
Szybkość przepływu: 5 ml/minutę (A, B, C, D, E, F, G)
Szybkość przepływu: 4 ml/minutę (J, K)
Detektor długości fal: 220 nm
Rozpuszczalnik A: 10% MeOH / 90% H2O / 0,1% TFA Rozpuszczalnik B: 10% H2O / 90% MeOH / 0,1% TFA.
P r z y k ł a d 370: sposób wytwarzania związku 370
Etap 1:
Roztwór chlorowodorku estru etylowego kwasu (1R,2S)/(1S,2R)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego (2,54 g, 12 mmoli) w CH3CN (70 ml) potraktowano roztworem diizopropyloetyloaminy (9,5 ml, 67 mmoli), [(4R)-(2-metoksykarbonylo-7-metoksychinolino-4-okso)-5-proliny] (5,9 g, 13,2 mmola) i TBTU (3,89 g, 12,21 mmola) w CH3CN (50 ml) . Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 14 godzin i zatężono. Pozostałość rozpuszczono w EtOAc, wielokrotnie przemyto NaHCO3 (roztwór wodny), solanką, osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage
65M (EtOAc/heksan: 45-100%), z uzyskaniem stereoizomeru o dużej wartości współczynnika Rf, estru etylowego kwasu (Boc-P2[(4R)-(2-metoksykarbonylo-7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca), 2,0 g (52%) w postaci białego ciała stałego:
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,24 (t, J=7,02 Hz, 3H), 1,38 (m, 11H), 1,76 (m, 1H), 2,21 (m, 1H), 2,45 (m, 1H), 2,71 (m, 1H), 3,92 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,03 (s, 3H), 4,16 (q, J=7,22 Hz, 2H), 4,42 (m, 1H), 5,10 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,77 (m, 1H), 7,27 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,48 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 8,05 (s, 1H).
338
PL 226 561 B1
Etap 2:
Roztwór produktu o dużej wartości współczynnika Rf (3,16 g, 5,40 mmola) według etapu 1, przykładu 370, {Boc-P2[(4R)-(2-metoksykarbonylo-7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)COOEt}, w temperaturze 0°C rozpuszczono w MeOH/THF (1/1, 13,2 ml) potraktowano wodnym 1,0N roztworem NaOH (5,5 ml, 5,5 mmola), mieszano przez 1 godzinę i zobojętniono dodając AcOH. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość ponownie rozpuszczono w THF/CH2CI2 (1/1/ 150 ml), osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując produkt, który bezpośrednio stosowano w następnym etapie: LC-MS (czas retencji: 1,53, metoda D), MS m/z 570 (M++1).
Etap 3:
Do rozpuszczonego w THF (35 ml) roztworu produktu (przyjmując 5,4 mmola) według etapu 2, przykładu 370, w temperaturze 0°C, dodano roztwór świeżo wytworzonego CH2N2 (30 mmoli) w Et2O (80 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano w tej temperaturze przez 0,5 godziny i mieszano w temperaturze pokojowej przez 18,5 godzin. Po barbotowaniu azotu przez mieszaninę reakcyjną przez 1 godzinę, roztwór odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość ponownie rozpuszczono w EtOAc (1 l), przemyto nasyconym NaHCO3 (roztwór wodny), (2 x 200 ml), solanką (100 ml) i osuszono (MgSO4). Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując produkt, 3,10 g (97% w dwóch etapach):
LC-MS (czas retencji: 3,06, metoda J), MS m/z 594 (M++1).
Etap 4:
Do rozpuszczonego w THF (110 ml) roztworu produktu (3,03 g, 5,10 mmola) według etapu 3 przykładu 370, {Boc-P2[(4R)-(2-diazoacetylo-7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)COOEt}, w temperaturze 0°C, dodano 2 ml 48% HBr. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1 godzinę, podzielono pomiędzy EtOAc (500 ml) i nasycony NaHCO3 (roztwór wodny) (100 ml). Warstwę EtOAc oddzielono i osuszono (MgSO4). Rozpuszczalnik usunięto, uzyskując produkt (3,12 g, 95%):
LC-MS (czas retencji: 1,56, metoda D). MS m/z 648 (M++1), MS m/z 646 (M--1).
PL 226 561 B1
339
Etap 5:
Na produkt (1,0 g, 1,54 mmola) według etapu 4, przykładu 370, {BOC-P2[(4R)-(2-bromoacetylo-7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)COOEt}, działano izopropylotiomocznikiem (0,365 g, 3,09 mmola) w alkoholu izopropylowym (57 ml) przez 2 godziny, a następnie rozpuszczalnik usunięto. Pozostałość rozpuszczono w wodnym 1,0N roztworze HCl (30 ml) oraz EtOAc (200 ml), pH uregulowano do 7 dodając 1,0N NaOH (roztwór wodny). Warstwę wodną ekstrahowano EtOAc (2 x 100 ml) i połączone ekstrakty osuszono (MgSO4) oraz zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40+M (EtOAc heksany: 30-100%), z uzyskaniem 870 mg produktu (84%), stosowanego w następnym etapie.
Etap 6:
Na produkt (0,250 g, 0,375 mmola) według etapu 5, przykładu 370, (Boc-P2{(4R)-[2-(2-izopropyloaminotiazol-4-ylo)-7-metoksychinolino-4-okso]-5-prolina}-P1(1R,2S-winylo-Acca)COOEt}, działano mieszaniną 4N HCl/dioksan (2,5 ml, 10 mmoli) przez 2,5 godziny, po czym mieszaninę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Do pozostałości dodano N-metylomorfolinę (0,206 ml, 1,875 mmola) w DMF (3 ml), N-Boc-L-tert- leucynę (0,117 g, 0,506 mmola) i HATU (0,192 g, 0,506 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i podzielono pomiędzy EtOAc i bufor o pH 4,0. Warstwę EtOAc przemyto wodą, NaHCO3 (roztwór wodny), osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40M (MeOH-CH2Cl2: 0-8%), z uzyskaniem 0,289 g produktu (99%):
LC-MS (czas retencji: 2,53, metoda K), MS m/z 779 (M++1).
Etap 7:
Do zawiesiny produktu według etapu 6, przykładu 370 (274 mg, 0,352 mmola), {Boc-NH-P3(L-tBuGly)-{[2-(2-izopropyloaminotiazol-4-ylo)-7-metoksychinolino-4-okso]-S-prolina}-P1(1R,2S-winyloAcca)-COOEt}, w THF (10,6 ml) w CH3OH (2,6 ml) i H2O (5,3 ml) dodano LiOH (0,068 g, 2,86 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 24 godziny, pH uregulowano do 6 i pod zmniejszonym ciśnieniem usunięto organiczne rozpuszczalniki. Wodną pozostałość zakwaszono do pH 4 i wielokrotnie ekstrahowano CH2CI2. Połączone organiczne rozpuszczalniki osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 255 mg pożądanego produktu (95%): LC-MS (czas retencji: 2,58, metoda K), MS m/z 751 (M++1).
Etap 8 :
Roztwór CDI (0,024 g, 0,15 mmola) i produktu według etapu 7, przykładu 370 (0,0683 g, 0,09 mmola), {Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-{[2-(2-izopropyloaminotiazol-4-ylo)-7-metoksychinolino-4-okso]-S-prolina}-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOH}, w THF (2 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 60 minut, po czym ochłodzono do temperatury pokojowej. Dodano cyklopropanosulfonoamid (0,022 g, 0,18 mmola), a następnie czysty DBU (0,027 ml, 0,18 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, rozcieńczono EtOAc, przemyto buforem o pH 4,0, osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono wielokrotnie metodą preparatywnej HPLC (0-100% rozpuszczalnik B) i metodą preparatywnej TLC z zastosowaniem 1000 μm płytki z firmy Analtech (20 x 40 cm), z uzyskaniem 0,0032 g (4%) pożądanego produktu (związek 370) w postaci jasnożółtej pianki: LC-MS (czas retencji: 1,71, metoda I) MS m/z 854 (M++1).
340
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 371: sposób wytwarzania związku 371
Etap 1:
Do ochłodzonej do temperatury 0°C zawiesiny estru metylowego N-Boc-cis-L-4-hydroksyproliny (10 g, 40,7 mmola) i 7-chlorochinolin-4-olu (8,73 g, 49,0 mmola) w THF (200 ml) dodano PPh3 (12,82 g, 48,9 mmola) i DIAD (8,80 g, 42,13 mmola). Mieszaninę pozostawiono na noc w temperaturze pokojowej, mieszano w tej temperaturze w sumie 30 godzin. Mieszaninę rozpuszczono w EtOAc (800 ml), przemyto 1N wodnym roztworem HCl, 5% wodnym roztworem K2CO3 (3 x 100 ml), solanką (2 x 100 ml), osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono kilka razy z zastosowaniem kolumny Biotage 65M (MeOH-CH2Cl2: 0-10%), uzyskując w sumie 10,57 g (68%) pożądanego produktu w postaci szklistej:
1H NMR (CDCI3) δ 1,40 (s, 9H), 2,33-2,42 (m, 1H), 2,61-2,72 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,91 (m, 2H), 4,45-4,59 (m, 1H), 5,13 (m, 1H), 6,61-6,64 (m, 1H), 7,41 (dd, J=9,2 Hz, 1H), 7,98 (d, J=2 Hz, 1H), 8,03 (d, J=9 Hz, 1H), 8,67-8,71 (m, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,39, metoda D) , MS m/e 407 (M++1).
Etap 2:
Do rozpuszczonego w MeOH (800 ml), ochłodzonego do temperatury 0°C, roztworu produktu (10,57 g, 26,0 mmola) według etapu 1, przykładu 371, estru metylowego Boc-N-P2-[(4R)-(7-chlorochinolino-4-okso)proliny], dodano 1N wodny roztwór NaOH (44,5 ml, 44,5 mmola). Po upływie 6 godzin mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej, mieszano przez noc i pH uregulowano do 7 stosując 1,0N wodny roztwór HCl. Roztwór zatężono do wodnej warstwy, pH uregulowano do 4 stosując 6N wodny roztwór HCl i mieszaninę ekstrahowano wielokrotnie EtOAc (3 x 500 ml). Połączone
PL 226 561 B1
341 warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując 10,16 g (100%) produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,32, 1,34 (dwa s (rotamery) 9H), 2,31-2,40 (m, 1H), 2,58-2,69 (m, 1H), 3,65-3,81 (m, 2H), 4,33-4,40 (m, 1H), 5,34 (m, 1H), 7,10-7,11 (m, 1H), 7,57 (d, J=9 Hz, 1H), 7,98 (s, 1H), 8,09-8,14 (m, 1H), 8,75 (d, J=5 Hz, 1H) 12,88 (brs, 1H).
13C NMR (DMSO-d6) δ 27,82, 35,84, 51,52, 57,75, 76,03, 79,33, 102,95, 119,54, 123,86, 126,34, 127,24,134,49, 149,32, 152,88,153,25, 159,08, 173,74.
LC-MS (czas retencji: 1/48, metoda D), MS m/e 393 (M++1).
Etap 3:
Do roztworu produktu (5,11 g, 13 mmoli) według etapu 2, przykładu 371, {Boc-4(R)-(7-chlorochinolino-4-okso)prolina), chlorowodorku (3,48 g, 18,2 mmola)winylo-Acca (mieszanina 1:1 diastereoizomerów (1R, 2S/1S,2R), przy czym grupa cyklopropylokarboksyetylowa występuje w konfiguracji syn względem grupy-winylowej ) i NMM (7,1 ml, 65 mmoli) w DMF (30 ml) dodano HATU (6,92 g, 18,2 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 3 dni, po czym rozcieńczono EtOAc (180 ml) i rozdzielono stosując bufor o pH 4,0 (3 x 100 ml). Warstwę organiczną przemyto nasyconym, wodnym roztworem NaHCO3 (2 x 50 ml), wodą (2 x 50 ml) i solanką (2 x 50 ml). Roztwór organiczny osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40M (EtOAc-heksany: 50% do 100%), z uzyskaniem 2,88 g produktu w formie diastereomerycznej mieszaniny. Mieszaninę częściowo rozdzielono stosując kolumnę Biotage 65M (MeOH-EtOAc: 0% do 9%), z uzyskaniem Boc-NH-P2[(4R)-(7-chlorochinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca P1)-COOEt w postaci początkowo eluowanego izomeru o dużej wartości współczynnika Rf (1,20 g, 17,4%).
1H NMR (CDCl3/metanol-d4) δ 1,16 (t, J=7 Hz, 3H), 1,35 (s, 9H), 1,37-1,43 (m, 1H), 1,76-1,84 (m, 1H), 2,06-2,11 (m, 1H), 2,35-2,45 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 3,72-3,93 (m, 2H), 4,02-4,15 (m, 1H), 4,33-4,40 (m, 1H), 5,06 (d, J=9 Hz, 1H), 5,16 (m, 1H), 5,24 (d, J=17 Hz, 1H), 5,63-5,70 (m, 1H), 6,74 (m, 1H), 7,39 (dd, J=9,2 Hz, 1H), 7,74-7,78 (m, 1H), 7,89 (d, J=2 Hz, 1H), 7,97 (d, J=9 Hz, 1H), 8,60 (d, J=5 Hz, 1H).
1H NMR (metanol-d4, 60/40 rotomery) δ 1,24 (t, J=7 Hz, 3H), 1,39, 1,43 (2s, 9H, ratio 4:6), 1,71-1,74 (m, 0,4H), 1,78-1,81 (m, 0,6H), 2,18-2,23 (m, 1H), 2,65-2,69 (m, 0,4H), 2,71-2,76 (m, 0,6H), 3,88-3,96 (m, 2H), 4,11-4,18 (m, 2H), 4,39-4,45 (m, 1H), 5,09-5,13 (m, 1H), 5,28-5,33 (m, 1H), 5,37 (m, 1H), 5,73-5,81 (m, 1H), 7,05 (d, J=5 Hz, 1H), 7,53 (d, J=8,9 Hz, 1H), 7,92 (s, 1H), 8,12 (d, J=8,9 Hz, 1H), 8,70 (d, J=5 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,54, metoda A) MS m/z 530 (M++1).
Pozostałość (około 1,66 g, 24%) stanowiła zmieszane frakcje znacznie wzbogacone w izomer o mniejszej wartości współczynnika Rf.
Schemat 2
Związek 37
342
PL 226 561 B1
Etap 4:
Produkt (0,65 g, 1,22 mmola) według etapu 3 przykładu 371, {BOC-P2[(4 R)-(7-chlorochinolino-4-okso}-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca-CO2Et}, rozpuszczono w mieszaninie 4N HCl/dioksan (4,5 ml, 18 mmoli) i mieszano przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną zatężono i surowy produkt bezpośrednio stosowano w następnym etapie: LC-MS (czas retencji: 0,94, metoda A)
LC-MS m/z 430 (M++1).
Etap 5:
Do zawiesiny produktu (1/22 mmola) według etapu 4, przykładu 371 {bis-chlorowodorku NH2P2[(4R)-(7-chlorochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOEt) N-Boc-L-tert-leucyny (BOC
L-tBuGly) (0,34 g, 1,47 mmola), DIPEA (1,0 ml, 5,74 mmola), HOBT.H2O (0,22 g, 1,47 mmola) w CH2CI2 (15 ml), w temperaturze pokojowej, dodano HBTU (0,56 g, 1,47 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, rozcieńczono CH2CI2 (50 ml), przemyto buforem o pH 4,0 (2 x 20 ml), nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 (50 ml), solanką (50 ml), osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono z zastosowaniem kolumny Biotage 40M (EtOAc-heksany: 15% do 60%), uzyskując 607 mg (77%) produktu w postaci pianki.
1H NMR (CDCl3-metanol-d4) δ 1,00 (s, 9H), 1,19 (t, J= 7Hz, 1H), 1,30 (s, 9H), 1,38 (m, 1H), 1,78-1,83 (m, 1H), 2,01-2,46 (m, 2H), 2,73-2,82 (m, 1H), 3,96-4,03 (m, 1H), 4,04 (d, J=10 Hz, 11H), 4,11 (q, J=7 Hz, 2H), 4,42 (d, J=12 Hz, 1H), 4,68-4,73 (m, 1H), 5,09-5,13 (m, 1H), 5,23-5,31 (m, 2H), 5,67-5,79 (m, 1H), 6,78 (d, J=9 Hz, 1H), 7,38 (d, J=9 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 8,08 (d, J=9 Hz, 1H), 8,68 (d, J=5 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,64, metoda A), MS m/z 643 (M++1).
Etap 6:
Do zawiesiny produktu (207 mg, 0,32 ramola) według etapu 5, przykładu 371, {Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-7-chlorochinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CO2Et} w THF (14 ml), CH3OH (2 ml) i H2O (8 ml) dodano LiOH (62 mg, 2,60 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez jeden dzień, zobojętniono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do warstwy wodnej. Uzyskaną wodną pozostałość zakwaszono do pH 4,0 dodając 1,0N wodny roztwór HCl i następnie nasycono stałym NaCl. Wodną mieszaninę ekstrahowano wielokrotnie EtOAc (3 x 60 ml), połączone rozpuszczalniki organiczne osuszono (Mg2SO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 107 mg (54%) produktu, (Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-chlorochinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CO2H}, w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCI3) δ 1,06 (s, 9H), 1,23 (2s, 9H), 1,31-1,43 (m 1H), 1,63-1,70 (m, 1H), 1,85-1,89 (m, 1H), 2,19 (m, 1H), 2,65-2,78 (m, 1H), 4,03-4,10 (m, 1H), 4,18-4,21 (m, 1H), 4,55-4,62 (m, 1H), 5,03-5,12 (m, 1H), 5,23-5,31 (m, 1H), 5,51 (m, 1H), 5,88-5,95 (m, 1H), 7,12 (m, 1H), 7,47-7,50 (m, 1H), 7,96 (m, 1H), 8,26 (d, J=9 Hz, 1H), 8,75 (d, J=5 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,46, metoda A), MS m/z 615 (M++1).
Etap 7:
Do roztworu kwasu tripeptydowego (0,0453 g, 0,074 mmola) według etapu 6, przykładu 371, {Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-chlorochinolino-4-okso)-5-prolino]-P1 (1 R,2S-winylo-Acca)-CO2H}, w THF (4 ml) dodano CDI (17 mg, 0,10 mmola) i uzyskany roztwór ogrzewano w temperaturze refluksu przez 45 minut, po czym ochłodzono do temperatury pokojowej. W jednej porcji dodano cyklopropylosulfonoamid (0,013 g, 0,10 mmola), a następnie czysty DBU (0,015 ml, 0,10 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 18 godzin, rozcieńczono EtOAc (200 ml) i przemyto buforem o pH 4,0 (3 x 30 ml), wodą (2 x 30 ml), solanką (30 ml), osuszono (MgSO4) i oczyszczono stosując jedną płytkę PTLC 20 x 40 cm 1000 firmy Analtech (MeOH-CH2Cl2: 0 do 2%), z uzyskaniem pożądanego produktu (związek 371) w postaci pianki (0,040 g, 76%):
1H NMR (0,95-1,23 (m, 4H), 1,03 (s, 9H), 1,19 (s, 9H), 1,40-1,43 (m, 1H), 1,85 (dd, J=8,5 Hz, 1H), 2,12-2,20 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 2,82 (m, 1H), 4,07-4,19 (m, 2H), 4,51-4,57 (m, 2H), 5,07 (d, J=10 Hz, 1H), 5,25 (d, J=17 Hz, 1H), 5,85 (m, 1H), 5,48 (s, 1H), 7,09 (d, J=5 Hz, 1H, 7,45 (d, J=9 Hz, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,20 (d, J=9 Hz, 1H), 8,72 (d, J=5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,52, metoda B), MS m/z 718 (M++1).
HRMS m/z (M+H)+, obliczone dla C41H51N5SO9: 718,2677, znalezione 718,2674.
PL 226 561 B1
343
P r z y k ł a d 372: sposób wytwarzania związku 372
Związek 372
Schemat i
Etap 1:
Do rozpuszczonego w CH3CN (50 ml) roztworu L-tert-leucyny (2 g, 15,25 mmola) dodano TMSCN (7,06 ml, 56,41 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 15 minut, po czym ogrzewano w temperaturze 75°C przez 30 minut. Dodano chloromrówczan cyklopentylu (2,83 g, 19,06 mmola) i mieszaninę ogrzewano w temperaturze 80°C przez noc, po czym 10 zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość potraktowano MeOH (40 ml), mieszano przez 10 minut i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. pH pozostałości uregulowano do 8,5 i mieszaninę ekstrahowano Et2O (2 x 200 ml). Warstwę wodną zakwaszono do pH 3 i ekstrahowano CH2CI2 (2 x 200 ml). Połączone ekstrakty osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość krystalizowano układem Et2O/heksany w minimalnej ilości, z wytworzeniem 3,48 g produktu (94%):
344
PL 226 561 B1 1H NMR (500 MHz, metanol-d4) δ ppm 1,00 (s, 9H), 1,59 (m, 2H), 1,73 (m, 4H), 1,84 (dd,
J=5,95, 3,20 Hz, 2H), 3,98 (s, 1H), 5,02 (m, 1H).
Etap 2:
Do roztworu produktu (530,1 mg, 1,04 mmola) według etapu 4, przykładu 371, {chlorowodorku P2((4R)-7-chlorochinolino- 4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)COOEt}, produktu (328 mg, 1,35 mmola) według etapu 1, przykładu 372, kwasu {(L)-2-cyklopentylooksykarbonyloamino-3,3-dimetylomasłowego}, HOBT (146 mg, 1,08 mmola) i diizopropyloetyloaminy (0,755 ml, 4,32 mmola) w CH2CI2 (7 ml) dodano HBTU (512 mg, 1,35 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i podzielono pomiędzy CH2CI2 i bufor o pH 4,0. Warstwę CH2CI2 przemyto wodą, nasyconym NaHCO3 (roztwór wodny), osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40M (EtOAc-heksany: 35-100%), z uzyskaniem 640 mg (92%) produktu:
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,02 (s, 9H), 1,26 (m, 4H), 1,56 (m, 10H), 2,19 (q, J=8,75 Hz, 1H), 2,41 (m, 1H), 2,70 (dd, J=14,19, 8,09 Hz, 1H), 4,01(dd, J=11,90, 3,05 Hz, 1H),4,13 (m, 2H), 4,20 (s, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,62 (m, 1H), 5,09 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,26 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,47 (m, 1H), 5,77 (m, 1H), 7,07 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 8,20 (d, J=8,85 Hz, 1H), 8,72 (d, J=5,49 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,71, metoda B), MS m/z 655 (M++1).
Etap 3:
Kwas tripeptydowy wytworzono postępując według etapu 7 schematu 2 przykładu 370, z tym wyjątkiem, że zamiast produktu według etapu 6, przykładu 370 stosowano cyklopenooksykarbonylo-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(7-chlorochinolino- 4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOEt.
Modyfikacje: użyto 0,636 g (0,97 mmola) produktu według etapu 2, przykładu 372, otrzymano 0,424 g produktu (69%-owa wydajność).
Produkt:
Dane: 1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,02 (s, 9H), 1,57 (m, 11H), 2,14 (q, J=9,03 Hz, 1H), 2,46 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 4,02 (dd, J=11,89, 3,11 Hz, 1H), 4,19 (m, 1H), 4,50 (d, J=26,35 Hz, 1H), 4,64 (t, J=8,42 Hz, 1H), 5,04 (m, 1H), 5,25 (d, J=17,20 Hz, 1H), 5,44 (s, 1H), 5,87 (m, 1H), 7,05 (d, J=5,12 Hz, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,18 (d, J=8,78 Hz, 1H), 8,71 (d, J=5,49 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,32, metoda A), MS m/z 627 (M++1).
PL 226 561 B1
345
Etap 4:
Roztwór CDI (0,021 g, 0,13 mmola) i produktu według etapu 3, przykładu 372 (0,058 g, 0,09 mmola), {Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-7-Chlorochinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CO2H}, w THF (2 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 40 minut, po czym ochłodzono do temperatury pokojowej. Dodano ogółem 0,016 g (0,13 mmola) cyklopropanosulfonoamidu, a następnie czysty roztwór DBU (0,019 ml, 0,13 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, następnie rozcieńczono EtOAc (100 ml) i przemyto buforem o pH 4,0 (2x), osuszono (MgSO4), zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej TLC z zastosowaniem trzech 1000 μm płytek z firmy Analtech (20 x 40 cm, eluowano kolejno 50% do 0% do 2% MeOH w CH2CI2), z uzyskaniem 27,3 mg (40%) produktu (związek 372):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 0,94 (m, 2H), 1,02 (s, 9H), 1,14 (m, 1H), 1,49 (m, 11H), 1,86 (m, 1H), 2,14 (m, 1H), 2,49 (m, 1H), 2,68 (dd, J=13,89, 7,48 Hz, 1H), 2,78 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 4,22 (s, 1H), 4,55 (m, 2H), 5,05 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,22 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,46 (m, 1H), 5,86 (m, 1H), 7,07 (d, J=5,19 Hz, 1H), 7,46 (d, J=8,55 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 8,18 (d, J=8,85 Hz, 1H), 8,72 (d, J=5,19 Hz, 1H).
[LC-MS (czas retencji: 1,52, metoda I), MS m/z 730 (M++1).
P r z y k ł a d 373: sposób wytwarzania związku 373.
Związek 373
Schemat 1
346
PL 226 561 B1
Etap 1:
Rozpuszczony w CH2CI2 (100 ml) roztwór 2-amino-4-metoksyacetofenonu (4,45 g, 26,94 mmola), w temperaturze 0°C, potraktowano chlorkiem cyklopropanokarbonylu (3,1 ml, 33,68 mmola), diizopropyloetyloaminą (19 ml, 107,8 mmola) i DMAP (0,780 g, 6,4 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w CH2CI2 (500 ml), przemyto wodnym 1N roztworem HCl, wodą, NaHCO3 (roztwór wodny) i osuszono (MgSO4). Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałe ciało stałe potraktowano mieszaniną EtOAc/heksany (1/1), z uzyskaniem produktu (5,35 g, 85%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 0,94 (m, 4H), 1,69 (m, J=3,97 Hz, 1H), 2,60 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 6,69 (d, J=7,93 Hz, 1H), 7,98 (d, J=8,85 Hz, 1H), 8,23(s, 1H).
Etap 2 :
Roztwór produktu (5,35 g, 22,72 mmola) według etapu 1, przykładu 373, {(2-acetylo-5-metoksyfenylo)amid kwasu cyklopropanokarboksylowego} i tert-BuOK (5,45 g, 48,6 mmola) w tertbutanolu (130 g) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 6 godzin. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono, wylano do ochłodzonego lodem buforu, pH uregulowano do 7 i przesączono. Zebrane ciało stałe krystalizowano z MeOH/Et2O uzyskując produkt (1 g, 20%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 0,96 (m, 2H), 1,15 (m, 2H),1,94 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 5,86 (m, 1H), 6,93 (m, 2H), 8,04 (d, J=8,85 Hz, 1H).
Etap 3:
Do rozpuszczonego w THF (25 ml) roztworu N-Boc-L-3-hydroksyproliny (1,06 g, 4,32 mmola) i trifenylofosfiny (2,27 g, 8,64 mmola), w temperaturze 0°C, w czasie 30 minut dodawano roztwór produktu (0,93 g, 4,32 mmola) według etapu 2, przykładu 373, {2-cyklopropylo-7-metoksychinolin-4-ol} i DEAD (1,50 g, 8,64 mmola) w THF (25 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i zatężono. Pozostałość oczyszczono dwukrotnie z zastosowaniem kolumny Biotage 40+M (EtOAc-heksany: 20-65%}, uzyskując 1,74 g produktu (90%): LC-MS (czas retencji: 2,56, metoda J), MS m/z 443 (M++1).
Etap 4 :
Do zawiesiny (1,70 g, 3,86 mmola) produktu według etapu 3, przykładu 373, estru metylowego (Boc-(4R)-(2-cyklopropylo-7-metoksy-chinolino-4-okso)-S-proliny}, w THF (91 ml), CH3OH (18,2 ml) i H2O (27 ml) dodano LiOH (0,73 g, 30 mmoli). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin, pH uregulowano do 6 i organiczny rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość zakwaszono do pH 4 i ekstrahowano EtOAc (4 x 100 ml). Połączone organiczne ekstrakty osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 11,64 g produktu (100%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,32 (m, 13H), 2,37 (m, 2H), 2,71 (m, 1H), 3,86 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,14 (m, 1H), 4,43 (m, 1H), 5,41 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 7,19 (m, 1H), 7,30 (m, 1H), 8,02 (dd, J=12,63, 9,33 Hz, 1H).
Etap 5 :
Produkt (1,61 g, 2,79 mmola) według etapu 4, przykładu 373, {BOC-P2{(4R)-[2-cyklopropylo-7-metoksychinolino-4-okso]-S-prolina}-P1(1R,2S-winylo-Acca)COOEt}, rozpuszczono w układzie HCl/dioksan (15 ml; 60 mmoli) i mieszano przez 3 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną zatężono i oddestylowano azeotropowo, stosując suchy THF z uzyskaniem produktu (1,58 g, 100%):
LC-MS (czas retencji: 2,12, metoda K), MS m/z 566 (M++1).
Schemat 2
Etap 6:
Do zawiesiny produktu (1,58 g, 2,79 mmola) według etapu 5, przykładu 373, {bis-chlorowodorku P2{(4R)-[2-cyklopropylo-7-metoksychinolino-4-okso]-S-prolina}-P1 (1 R,2S-winylo-Acca)-COOEt}, diizopropyloetyloaminy (1,65 ml, 9,25 mmola), N-Boc-L-tert-leucyny (0,775 g, 3,35 mmola),
PL 226 561 B1
347
HOBT.H2O (0,515 g, 3,36 mmola) w CH2CI2 (13 ml) dodano HBTU (1,28 g, 3,36 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 14 godzin i podzielono pomiędzy EtOAc i bufor o pH 4,0. Warstwę EtOAc osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40+M (EtOAcheksany: 20-100%, następnie MeOH) i następnie oczyszczono z zastosowaniem płytki PTLC 20 x 40 cm 1000 z firmy Analtech (MeOH-CH2Cl2 2%), z uzyskaniem 1,4 g produktu (63%).
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,04 (s, 9H), 1,20 (m, 5H), 1,28 (s, 9H), 1,39 (m, 2H), 1,69 (m, 1H), 2,19 (m, 2H), 2,36 (m, 1H), 2,63 (dd, J=13,54, 7,68 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H), 4,08 (m, 4H), 4,19 (d, J=11,34 Hz, 1H), 4,47 (d, J=11,71 Hz, 1H), 4,56 (t, J=8,60 Hz, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,24 (m, 1H), 5,39 (s, 1H), 5,78 (m, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,96 (dd, J=9,15, 2,20 Hz, 1H), 7,21 (d, J=2,56 Hz, 1H), 7,97 (d, J=9,15 Hz, 1H),
LC-MS (czas retencji: 2,34, metoda K), MS m/z 679 (M++1).
Etap 7:
Do zawiesiny produktu według etapu 6, przykładu 373 (1,28 g, 1,89 mmola), Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-cyklopropylo-7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOEt, w THF(93 ml), CH3OH (23 ml) i H2O (45 ml) dodano LiOH (0,491 g, 20,4 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 18,5 godzin, pH uregulowano do 4 i pod zmniejszonym ciśnieniem usunięto organiczny rozpuszczalnik. Pozostałość ekstrahowano EtOAc (5 x 100 ml). Połączone organiczne rozpuszczalniki osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 1,17 g pożądanego produktu (97%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,04 (s, 9H), 1,24 (s, 9H), 1,27 (m, 3H), 1,42 (m, 2H), 1,68 (dd, J=8,05, 5,12 Hz, 1H), 2,17 (m, 1H), 2,33 (m, 1H), 2,47 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,09 (m, 2H), 4,51 (d, J=11,71 Hz, 1H), 4,59 (t, J=8,60 Hz, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,52 (s, 1H), 5,85 (m,1H), 6,69 (s, 1H), 7,10 (dd, J=9,15, 2,20 Hz, 1H), 7,27 (d, J=2,20 Hz, 1H), 8,10 (d, J=9,15 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 2,21, metoda K), MS m/z 651 (M++1).
Etap 8 :
Roztwór CDI (0,058 g, 0,344 mmola) i produktu według etapu 7, przykładu 373 (0,160 g, 0,246 mmola), {Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(2-cyklopropylo-7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOH}, w THF (2 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 60 minut, po czym ochłodzono do temperatury pokojowej. Dodano cyklopropanosulfonoamid (0,041 g, 0,344 mmola), a następnie czysty DBU (0,051 ml, 0,344 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 24 godziny i poddano obróbce, dzieląc mieszaninę reakcyjną pomiędzy bufor o pH 4,0 i EtOAc. Warstwę organiczną osuszono (MgSO4), zatężono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (0-100% rozpuszczalnika B) z uzyskaniem 0,086 g (46%) produktu (związek 373):
1H NMR (kwas trifluorooctowy-D) δ ppm 1,04 (s, 9H), 1,21 (m, 16H), 1,41 (m, 1H), 1,87 (dd, J=8,05, 5,49 Hz, 1H), 2,26 (m, 3H), 2,61 (dd, J=12,99, 6,77 Hz, 1H), 2,93 (m,1H), 3,92 (s, 3H), 4,09 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 4,49 (m, 2H), 5,11 (d, J=11,71 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,20 Hz, 1H), 5,46 (s, 1H), 5,76 (m, 1H), 6,62 (m, 2H), 7,01 (dd, J=8,97, 2,0 Hz, 1H), 7,23 (d, J=2,56 Hz, 1H), 8,00 (d, J=8,78 Hz, 1H).
348
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 374: sposób wytwarzania związku 374.
Schemat 1
Etap
stosowany w pozostającej sekwencji Izomer o małym Rf
Etap 1:
Do roztworu m-anizydyny (58 g, 471 mmoli) w 800 ml CH3CN dodano kwas Meldrum'a (75 g,
518 mmoli) i mrówczan trimetylu (60 g, 565 mmoli). Heterogeniczną mieszaninę ogrzewano w temperaturze refluksu przez 2 godziny. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, dodano MeOH (30 ml) i uzyskany osad odsączono i przemyto 10-15 ml MeOH. Procedurę dodanie MeOH /odsączenie powtórzono na zatężonym ługu macierzystym. Uzyskane połączone ciało stałe osuszono (około 20 torrów, 45°C, przez noc), uzyskując 117,6 g (90%) związku pośredniego, 5-[(3-metoksyfenyloamino)metyleno]-2,2-dimetylo[1,3]dioksano-4,6-dionu.
PL 226 561 B1
349
Etap 2:
Do ogrzanego do temperatury 250°C roztworu Ph2O (500 g) dodawano porcjami, w czasie 30 minut, 108,7 g (392 mmole 5-[(3-metoksyfenyloamino)metyleno]-2,2-dimetylo[1,3]dioksano-4,6-dion. Mieszaninę ogrzewano jeszcze przez 15 minut, ochłodzono do temperatury pokojowej, rozcieńczono heksanami (800 ml) i uzyskaną rzadką zawiesinę mieszano przez noc. Heksany zdekantowano, pozostałe ciało stałe rozpuszczono w 600 ml MeOH w temperaturze wrzenia, ochłodzono do temperatury pokojowej, a uzyskane ciało stałe odsączono i przemyto CH2CI2 w minimalnej ilości. Po przeprowadzeniu analogicznej procedury rekrystalizacji uzyskano ogółem 20,73 g (30%) 7-metoksychinolin-4-olu w postaci jasnobrunatnego ciała stałego.
1H NMR (metanol-d4) δ 3,87 (s, 3H), 6,23 (d, J=7,3 Hz, 1H), 6,68 (d, J=2,4 Hz, 1H), 6,96 (dd, J=9,0, 2,4 Hz, 1H), 8,11 (d, J=9 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 0,77, metoda D) , MS m/z 176 (M++1).
Etap 3:
Do ochłodzonego do temperatury 0°C roztworu estru metylowego N-Boc-cis-L-4-hydroksyproliny (12,24 g, 49,8 mmola) i PPh3 (26,14 g, 99,7 mmola) w THF (200 ml) dodawano w czasie 45 minut roztwór DEAD (17,36 g, 99,7 mmola) i 7-metoksychinolin-4-ol (8,73 g, 49,8 mmola) w (THF 700 ml). Mieszaninę pozostawiono na noc w temperaturze pokojowej, po czym zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 65M (MeOH-EtOAc: 0-10%), z uzyskaniem 12,78 g (64%) produktu w postaci bezbarwnego szkła:
1H NMR (CDCI3) δ 1,36 (s, 9H), 2,26-2,35 (m, 1H), 2,57-2,68 (m, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,75-3,92 (m, 2H), 3,86, 3,87 (dwa s (rotamery) 3H), 4,41-4,53 (m, 1H), 5,09 (m, 1H), 6,52 (d, J=5,5 Hz, 1H), 7,06-7,09 (m, 1H), 7,24-7,26 (m, 1H), 7,94 (d, J=9,1 Hz, 1H), 8,50-8,56 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,34, metoda D), MS m/e 403 (M++1).
Etap 4:
Do roztworu produktu (8,54 g, 21,2 mmola) według etapu 3, przykładu 374, estru metylowego {EOC-N-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)proliny} w 600 ml mieszaniny 5:1 THF/MeOH dodano roztwór LiOH (4,0 g, 167 mmoli) w 150 ml wody. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, pH uregulowano do 7 stosując 6N wodny roztwór HCl i roztwór zatężono do warstwy wodnej. pH pozostałości uregulowano do 4 stosując 1N wodny roztwór HCl, w celu nasycenia mieszaniny dodano NaCl i ekstrahowano wielokrotnie najpierw EtOAc, a następnie THF z uzyskaniem rozpuszczalnego w wodzie produktu. Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując 8,18 g (99%) produktu w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (CDCl3-metanol-d4) δ 1,42 (s, 9H), 2,40-2,49 (m, 1H), 2,68-2,77 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,41-4,53 (m, 1H), 5,32 (m, 1H), 6,86-6,92 (m, 1H), 7,21 (dd, J=9,2 Hz, 1H), 7,30 (d, J=2 Hz, 1H), 8,05-8,10 (m, 1H), 8,62 (d, J=6 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji 1,20, metoda A), MS m/z 389 (M++1).
Etap 5:
Do roztworu produktu (4,50 g, 11,60 mmola) według etapu 4, przykładu 374, (Boc-4(R)-(7metoksychinolino-4-okso)proliny}, 2,66 g (13,9 mmola) chlorowodorku-winylo-Acca (w postaci mieszaniny 1:1 diastereoizomerów (1R,2S/1S,2R), przy czym grupa cyklopropylokarboksyetylowa występuje w konfiguracji syn względem grupy winylowej), 10 ml (57,4 mmola) DIPEA i 2,13 g (13,9 mmola) HOBT.H2O w 150 ml CH2CI2 dodano 5,27 g (13,9 mmola) HBTU i mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc. Roztwór rozcieńczono 200 ml CH2CI2 i oddzielono stosując bufor o pH 4,0 (2 x 50 ml). Warstwę organiczną przemyto nasyconym, wodnym roztworem NaHCO3 (2 x 50 ml), wodą (2 x 50 ml) i solanką (2 x 50 ml). Organiczny roztwór osuszono (MgSO4), zatężono i oczyszczono stosując kolumnę Biotage 65M (eluowano układem 0-9% MeOH/EtOAc), z uzyskaniem Boc-NH-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca P1)-COOEt jako początkowo eluowany izomer (2,21 g, ogółem 36%), a następnie 1,13 g (19%) czystego izomeru o mniejszej wartości współczynnika Rf, Boc-NH-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1S,2R-winylo-Acca P1)-CO2Et. Otrzymano także mieszane frakcje. Dane dla BOCN-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-Sprolino]-P1(1R,2S)-(winylo-Acca)-COOEt:
1H NMR (CDCl3) δ 1,16 (t, J=1 Hz, 3H), 1,35 (s, 9H), 1,37-1,47 (m, 1H), 1,74-1,88 (m, 1H), 2,042,13 (m, 1H), 2,32-2,46 (m, 1H), 2,58-2,69 (m,1H), 3,76 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 4,02-4,13 (m, 2H), 4,304,44 (m, 1H), 5,05-5,19 (m, 2H), 5,24 (d, J=17 Hz, 1H), 5,63-5,71 (m, 1H), 6,61 (m, 1H), 7,07 (dd, J=9,2 Hz, 1H), 7,22 (d, J=2 Hz, 1H), 7,76-7,83 (m, 1H), 7,92 (d, J=9 Hz, 1H), 8,50 (d, J=5 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,38, metoda A), MS m/z 526 (M++1).
350
PL 226 561 B1
Schemat 2
Związek 374
Etap 6:
Całość produktu (1,35 g, 2,90 mmola) według etapu 5, przykładu 374, {Boc-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOEt}, rozpuszczono w mieszaninie 4N HCl/dioksan (15 ml, 60 mmoli) i mieszano przez 2,5 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 1,3 g (100%) produktu w postaci brązowego ciała stałego, które bezpośrednio stosowano w następnym etapie.
1H NMR (metanol-d4) δ 1,25 (t, J=7 Hz, 1H), 1,47-1,52 (m, 1H), 1,78 (dd, J=8,5 Hz, 1H), 2,212,32 (m, 1H), 2,55-2,64 (m, 1H), 2,99 (dd, J=15,7 Hz, 1H), 3,96 (s, 2H), 4,06 (s, 3H), 4,14 (q, J=7 Hz, 2H), 4,69-4,75 (m, 1H), 5,13 (d, J=10 Hz, 1H), 533 (d, J=17 Hz ,1H), 5,71-5,83 (m, 1H), 5,89 (m, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,49-7,52 (m, 1H), 8,51-8,55 (m, 1H), 8,94-8,96 (m, 1H);
13C NMR (metanol-d4) δ 14,62, 23,08, 30,89, 34,73, 36,97, 41,03, 52,42, 57,11, 60,17, 62,70, 81,13, 100,06, 103,07, 117,02, 118,53, 122,70, 126,86, 134,74, 143,15, 146,75, 166,62, 167,71, 169,37, 171,18.
LC-MS (czas retencji: 0,94, metoda D), MS m/z 426 (M++1)
Etap 7:
Do zawiesiny produktu (1,3 g, 2,61 mmola) według etapu 6, przykładu 374, bis-chlorowodorku {NH2-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)COOEt), N-Boc-L-tertleucyny (BOC L-tBuGly) (0,94 g, 4,25 mmola), NMM (1,7 ml, 15,5 mmola) w DMF (20 ml), w temperaturze pokojowej, dodano HATU (1,55 g, 3,40 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, rozcieńczono układem 75% EtOAc-THF (300 ml), przemyto buforem o pH 4,0 (2 x 50 ml), nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 (50 ml) , solanką (50 ml), osuszono (MgSO4), oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40M (eluowano układem 15% do 100% EtOAc w heksanach) z uzyskaniem 0,702 g (42%) produktu, {Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1-CO2Et}, w postaci pianki.
1H NMR (metanol-d4) δ 1,06 (s, 9H), 1,22-1,32 (m, 3H), 1,28 (s, 9H), 1,42-1,46 (m, 1H), 1,73 (dd, J=8,5 Hz, 1H), 2,19-2,25 (m, 1H), 2,67-2,72 (m, 1H), 3,95 (s, 3H), 4,03-4,07 (m, 1H), 4,10-4,18 (m, 2H), 4,20-4,24 (m, 1H), 4,54 (d, J=12 Hz, 1H), 4,60-4,63 (m, 1H), 5,11 (dd, J=10,2 Hz, 1H), 5,285,30 (m, 1H), 5,43 (m, 1H), 5,76-5,83 (m, 1H), 6,50 (d, J=9 Hz, NH), 6,93 (d, J=5 Hz, 1H), 7,10 (dd, J=9,2 Hz, 1H), 7,28 (m, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,11 (d, J=9 Hz, 1H), 8,62 (d, J=5H);
LC-MS m/z 639 (czas retencji: 1,53 metoda D).
Etap 8:
Do zawiesiny produktu (702 mg, 1,1 mmola) według etapu 7, przykładu 374, {Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOEt}, w THF (50 ml), CH3OH (7 ml) i H2O (22 ml) dodano LiOH (211 mg, 8,80 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano
PL 226 561 B1
351 przez jeden dzień, zobojętniono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do warstwy wodnej. Uzyskaną wodną pozostałość zakwaszono do pH 4,0 dodając 1,0N wodny roztwór HCl i następnie nasycono stałym NaCl. Wodną mieszaninę ekstrahowano wielokrotnie EtOAc i THF, połączone rozpuszczalniki organiczne przemyto solanką (50 ml), osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem z uzyskaniem 631 mg (92%) produktu, BOC-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CO2H, w postaci ciała stałego.
1H NMR (metanol-d4) δ 1,04 (s, 9H), 1,22 (s, 9H), 1,34-1,39 (m, 1H), 1,67 (dd, J=8,5 Hz, 1H), 2,03-2,13 (m, 1H), 2,43-2,49 (m, 1H), 2,67-2,73 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,00-4,05 (m, 1H), 4,15-4,21 (m, 1H), 4,56-4,62 (m, 2H), 5,02 (d, J=10 Hz, 1H), 5,20 (d, J=17 Hz, 1H), 5,52 (m, 1H), 5,87-5,99 (m, 1H), 6,47 (d, J=8 Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,12 (d, J=5 Hz, 1H), 7,19 (dd, J=9,2 Hz, 1H), 7,31 (d, J=2 Hz, 1H), 8,22 (d, J=9 Hz, 1H), 8,72 (d, J=5 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,44, metoda D), MS m/z 611 (M++1).
Etap 9:
Do roztworu kwasu tripeptydowego (0,120 g, 0,195 mmola) według etapu 8, przykładu 374 w THF (2 ml) dodano CDI (44,3 mg, 0,27 mmola) i uzyskany roztwór ogrzewano w temperaturze refluksu przez 60 minut, po czym ochłodzono do temperatury pokojowej. W jednej porcji dodano cyklobutylosulfonoamid (0,037 g, 0,273 mmola), po czym czysty DBU (0,041 ml, 0,273 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 24 godziny, dodano jeszcze jeden równoważnik CDI oraz cyklobutylosulfonoamid i mieszaninę reakcyjną mieszano jeszcze przez 48 godzin. Mieszaninę rozcieńczono układem 50% THF/EtOAc (200 ml) i przemyto solanką, nasyconym buforem o pH 4,0 (30 ml), osuszono (MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w 2 ml 50% THF-CH2CI2, dodano 75 mg (0,39 mmola) EDAC, 48 mg (0,39 mmola) 4-DMAP, 58 ml (0,39 mmola) DBU i 53 mg (0,39 mmola) cyklobutylosulfonoamidu, po czym mieszaninę reakcyjną mieszano przez 4 dni. Następnie mieszaninę oczyszczono metodą PTLC z zastosowaniem jednej płytki 1000 μm z firmy Analtech (20 x 40 cm, eluowano 2% MeOH w CH2CI2) z uzyskaniem 2 mg (2%) pożądanego produktu, związku 374, Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklobutanu, w postaci pianki:
1H NMR (metanol-d4) δ 1,07, 1,08 (dwa s (rotamery) 9H), 1,20, 1,21 (dwa s (rotamery) 9H),1,41-1,48 (m, 1H), 1,64-1,70 (m, 1H), 1,72-1,91 (m, 2H), 1,95-2,11 (m, 2H), 2,23-2,37 (m, 2H), 2,40-2,58 (m, 2H), 2,72-2,75 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 4,12-4,17 (m, 2H), 4,35-4,38 (m, 1H), 4,58-4,62 (m, 1H), 4,65-4,70 (m, 1H), 5,16-5,18 (m, 1H), 5,24-5,37 (m, 1H), 5,69-5,76 (m, 2H), 7,40-7,46 (m, 3H), 8,35-8,40(m, 1H), 8,92(d, J=7 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,58 metoda B), MS m/z 728 (M++1).
P r z y k ł a d 375: sposób wytwarzania związku 375
352
PL 226 561 B1
Schemat 1
Związek 375
Etap 1:
Do roztworu produktu (794 mg, 1,51 mmola) według etapu 5, przykładu 374, {N-Boc-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CO2Et}, w 68 ml mieszaniny 12% MeOH/THF dodano roztwór 218 mg (9,08 mmola) wodorotlenku litu w 30 ml wody i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin. Roztwór zobojętniono dodając 6N wodny roztwór HCl, zatężono, pH uregulowano do 4 stosując wodny 1N roztówr HCl i następnie ekstrahowano układem 50% THF-EtOAc (5 x 200 ml porcji). Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując 752 mg (100%) produktu, {N-Boc-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)CO2H}:
1H NMR (metanol-d4) δ 1,37-1,43 (m, 1H), 1,39 (s, 9H), 1,69-1,78 (m, 1H), 2,16-2,24 (m, 1H), 2,44-2,54 (m, 1H), 2,64-2,74 (m, 1H), 3,89-3,94 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 4,40-4,43 (m, 1H), 5,11 (d, J=10 Hz, 1H), 5,31 (d, J=17 Hz, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,79-5,87 (m, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,04 (d, J=6 Hz, 1H), 7,25 (dd, J= 9,1, 2 Hz, 1H), 7,29 (m, 1H), 8,09 (d, J=9,1 Hz, 1H), 8,66 (d, J=6 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,05, metoda H). MS m/z 498 (M++1).
Etap 2:
Roztwór produktu (399,5 mg, 0,668 mmola) według etapu 1, przykładu 375, {N-Boc-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CO2H}, w THF (4 ml) i CDI (434 mg,
2,68 mmola) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 60 minut, po czym ochłodzono do temperatury pokojowej. W jednej porcji dodano cyklopropylosulfonoamid (406 mg, 3,35 mmola), po czym czysty
DBU (0,50 ml, 3,35 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin, rozcieńczono układem 50% THF-EtOAc (200 ml) i przemyto solanką oraz nasyconym buforem o pH 4,0 (2 x 40 ml). Warstwę organiczną osuszono (MgSO4), zatężono i oczyszczono z zastosowaniem kolumny Biotage 25M (MeOH w CH2Cl2, 0% do 15%) z uzyskaniem 217 mg (54%) pożądanego produktu, {N-Boc-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropan}:
1H NMR (metanol-d4) δ 1,01-1,10 (m, 2H), 1,11-1,18 (m, 1H), 1,20-1,27 (m, 1H), 1,39-1,48 (m, 1H), 1,44 (s, 9H), 1,87 (dd, J=8,5 Hz, 1H), 2,01-2,38 (m, 2H), 2,57 (dd, J=14,7 Hz, 1H), 2,91-2,96 (m, 1H), 3,83-3,92 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 4,36-4,39 (m, 1H), 5,11 (d, J=10 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17 Hz, 1H), 5,38 (m, 1H), 5,74-5,m81 (m, 1H), 6,91 (d, J=5,5 Hz, 1H), 7,20 (dd, J=9,2, 2,4 Hz, 1H), 7,29 (m, 1H), 8,07 (d, J=9,2 Hz, 1H), 8,60 (d, J=5,5 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,28, metoda I): MS m/z 601 (M++1).
Etap 3:
Całość produktu (198 mg, 0,33 mamola) według etapu 2, przykładu 375, {Boc-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu}, rozpuszczono w układzie 4N HCl/dioksan (4 ml, 16 mmoli) i mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną zatężono, uzyskując surowy produkt w postaci brązowego ciała stałego, które użyto bezpośrednio w następnej reakcji.
Etap 4:
PL 226 561 B1
353
Surowy produktu według etapu 3, przykładu 375, bis-chlorowodorek {HN-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu, zawieszono w 10 ml dichlorometanu. Do tej mieszaniny w temperaturze pokojowej dodano N-Boc-L-tert-leucynę (BOC
L-tBuGly) [120 mg, 0,52 mmola], HOAT (30 mg, 0,20 mmola), DIPEA (0,29 ml, 1,65 mmola) i HATU (160 mg, 0,43 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin, rozcieńczono układem 50% EtOAc-THF (300 ml), przemyto solanką oraz nasyconym buforem o pH 4 (3 x 50 ml), osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Isco 35 g (eluowano 0% do 15% MeOH w CH2CI2) z uzyskaniem produktu (130,1 mg, 47%) w postaci zasadowej soli Running'a (związek 375):
1H NMR metanol-d4) δ ppm 1,00-1,48 (m, 29H), 1,47 (s, 9H), 1,89 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 2,36 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,97 (m, 1H), 3,25 (q, J=7,43 Hz, 2H), 3,74 (m, 2H), 3,97 (s, 3H), 4,10 (m, 1H), 4,23 (dd, J=19,68, 9,92 Hz, 1H), 4,57 (m, 2H), 5,15 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 5,50 (s, 1H), 5,77 (m, 1H), 7,01 (t, J=5,34 Hz, 1H), 7,16 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,31 (d, J=1,83 Hz, 1H), 8,14 (m, 1H), 8,67 (d, J=5,49 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,49 Metoda d), MS m/z 714 (M++1).
P r z y k ł a d 376: sposób wytwarzania związku 376.
Etap 1:
Związek 375 (130 mg) rozpuszczono w EtOAc, przemyto jeszcze raz buforem o pH 4, solanką i następnie osuszono (MgSO4). Surową mieszaninę oczyszczono metodą PTLC, stosując dwie płytki
1000 ąm firmy Analtech (20 x 40 cm, eluowano 3% MeOH w CH2CI2) z uzyskaniem 54 mg produktu (związek 376) 23%-owa wydajność wychodząc z kwasu tripeptydowego):
1H NMR (metanol-d4) δ 0,88-1,00 (m, 2H), 1,01-1,14 (m, 2H), 1,03 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 1,34 (dd, J=9,5 Hz, 1H), 1,81-1,89 (m, 1H), 2,06-2,13 (m, 1H), 2,45-2,50 (m, 1H), 2,65-2,75 (m, 1H), 3,91
354
PL 226 561 B1 (s, 3H), 3,98-4,11 (m, 1H), 4,21-4,22 (m, 1H), 4,46-4,50 (m, 1H), 4,54-4,57 (m, 1H), 4,97-5,02 (m, 1H), 5,14-5,22 (m, 1H), 5,33-5,41 (m, 1H), 5,81-5,99 (m, 1H), 6,87-6,95 (m, 1H), 77,06-7,09 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 8,07-8,10 (m, 1H), 8,59 (d, J=5,2 Hz, 1H).
HRMS m/z (M-H)- obliczone dla C35H46N5O9S: 712,3016, znalezione: 712,3024;
LC-MS m/e 714 (czas retencji: 1,42, metoda I).
P r z y k ł a d 377: sposób wytwarzania związku 377.
Schemat 1
2wiązek 377
Etap 1 :
Całość (1,0 mmola) produktu według etapu 2, przykładu 375, {bis-chlorowodorku HN-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-5-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu}, zawieszono w 20 ml dichlorometanu, w temperaturze pokojowej, dodano 352 mg (1,30 mmola) kwasu 2-(S)-tert-butoksykarbonyloamino-8-nonenowego z firmy RSP Amino Acids, HOAT (82 mg, 0,60 mmola), DIPEA (0,74 ml, 5,0 mmola) i HATU (494 mg, 1,30 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin i większość CH2CI2 usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Mieszaninę rozcieńczono nasyconym buforem o pH 4,0 (150 ml) i ekstrahowano EtOAc (4 x 200 ml). Połączone warstwy organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40M (eluowano 0% do 15% MeOH w CH2CI2), z uzyskaniem 574 mg (76%) produktu (związek 377):
LC-MS m/z 754 (czas retencji: 1,64, metoda I).
PL 226 561 B1
355
P r z y k ł a d 378: sposób wytwarzania związku 378.
Etap 1 :
Całość (0,34 mmola) produktu według etapu 2, przykładu 375, {bis-chlorowodorku HN-P2[(4R)-(7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu}, zawieszono w 3 ml dichlorometanu. Do tej mieszaniny, w temperaturze pokojowej, dodano N-Boc-L-walinę (L-Val) (120 mg, 0,55 mmola), HOAT (30 mg, 0,20 mmola), DIPEA (0,29 ml, 1,65 mmola) i HATU (160 mg, 0,43 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 16 godzin, rozcieńczono nasyconym buforem o pH 4,0 (150 ml) i ekstrahowano EtOAc (3 x 200 ml). Połączone warstwy organiczne przemyto solanką, osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Isco 35 g (MeOH w CH2CI2: 0% do 15%). Tę substancję oczyszczono następnie metodą PTLC z zastosowaniem dwóch δ płytek z firmy Analtech (20 x 40 cm, eluowano 3% MeOH w CH2CI2), z uzyskaniem 104,1 mg (44%) produktu, związku 378: HRMS m/z (M-H)- obliczone dla C34H44N5O9S: 698,2860, znalezione: 698,2865.
LC-MS m/e 700 (czas retencji: 1,60, metoda D).
P r z y k ł a d 379: sposób wytwarzania związku 379
356
PL 226 561 B1
Schemat 1
Związek 379
Etap 1 :
Do rozpuszczonej w pirydynie (150 ml) zawiesiny kwasu 2-pikolinowego (3,73 g, 30,3 mmola) i 2-amino-4-metoksybenzofenonu (5,0 g, 30,3 mmola), w temperaturze -30°C, w czasie 5 minut dodawano POCI3 (3,7 ml, 45,4 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 3 godziny w temperaturze ... i mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Mieszaninę reakcyjną wylano do zimnej wody i ekstrahowano EtOAc (3x). Połączone ekstrakty osuszono z uzyskaniem produktu (7,67 g, 93%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 2,65 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 6,78 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 8,00 (m, 1H), 8,06 (m, 1H), 8,21 (d, J=7,63 Hz, 1H), 8,59 (t, J=2,29 Hz, 1H), 8,76 (d, J=3,97 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,56, metoda D), MS m/z 271 (M++1).
Etap 2:
Do zawiesiny (2-acetylo-5-metoksyfenylo)amidu kwasu pirydyno-2-karboksylowego (2,90 g,
10.7 mmola) w THF (50 ml) dodano t-BuOK/THF (1M, 24 ml, 24 mmole). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 70°C przez 3 godziny i mieszano przez noc. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Do pozostałości dodano zimną wodę i pH uregulowano do 4,6 stosując wodny 1,0N roztwór HCl i przesączono. Pozostałe ciało stałe oczyszczono stosując kolumnę Biotage 65M (MeOH/CH2Cl2: 0-15%), z uzyskaniem produktu (2,26 g, 84%): LC-MS (czas retencji: 1,19, metoda D), MS m/z 253 (M++1).
Etap 3:
Mieszaninę 7-metoksy-2-pirydyn-2-ylochinolin-4-olu (2,2 g, 8,71 mmola) w POCI3 (92 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 3 godziny i następnie rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Do pozostałości dodano wodę z lodem, pH uregulowano powyżej 10 stosując 1,0N roztwór NaOH i ekstrahowano EtOAc (2x). Połączone ekstrakty przemyto wodą, solanką, osuszono (MgSO4) i rozpuszczalnik usunięto z uzyskaniem produktu w postaci żółtego ciała stałego (89%, 1,1 g): DMSO-D6) δ ppm 3,97 (s, 3H), 7,40 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,53 (m, 1H), 8,01 (m, 1H), 8,09 (d, J=9,16 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,56 (d, J=7,93 Hz, 1H), 8,74 (d, J=3,97 Hz, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,50, metoda D), MS m/z 271 (M++1).
Etap 4:
Do roztworu N-Boc-4-hydroksyproliny (1,6 g, 6,7 mmola) w DMSO (20 ml) dodano t-BuOK (1,9 g,
16.8 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny, po czym dodano 4-chloro-7PL 226 561 B1
357
-metoksy-2-pirydyn-2-ylochinolinę (2,0 g, 7,4 mmola) i DMSO (10 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 38 godzin, rozcieńczono zimną wodą i ekstrahowano układem EtOAc/eter (1/4, 2x). Warstwę wodną zakwaszono do pH 4 i ekstrahowano EtOAc/THF (5x). Połączone ekstrakty osuszono (Na2SO4/MgSO4), rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (0-80% rozpuszczalnika B), uzyskując produkt (1,6 g, 50%): LC-MS (czas retencji: 1,23, metoda I), MS m/z 466 (M++1).
Etap 5:
Roztwór produktu (0,21 g, 0,65 mmola) według etapu 4, przykładu 379, estru etylowego kwasu N-Boc-(1R,2S)-1-amino-2-winylocyklopropanokarboksylowego, w układzie HCl/dioksan (4M, 5 ml, 20 mmoli) mieszano przez 3 godziny i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Do pozostałości dodano CH2CI2 (10 ml), diizopropyloetyloaminę (0,4 ml, 3,23 mmola), HOBT (0,20 g, 1,35 mmola), Boc-(4R)-(2-cyklopropylo-7-metoksychinolino-4-okso)-S-prolinę (0,20 g, 0,5 mmola) i HATU (0,415 g, 1,07 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, rozcieńczono buforem o pH 4,0 i ekstrahowano EtOAc. Ekstrakt osuszono (MgSO4) i oczyszczono z zastosowaniem kolumny Biotage 40M, jako eluent stosując MeOH/CH2Cl2 (0 do 15%) z uzyskaniem produktu (204,7 mg, 70%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 0,64 (m, 1H), 0,96 (m, 2H), 1,33 (m, 8H), 1,39 (m, 9H), 1,90 (m, 2H), 2,18 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 4,01 (m, 5H), 4,44 (d, J=28,99 Hz, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 5,57 (s, 1H), 6,03 (m, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,27 (d, J=8,24 Hz, 1H), 7,64 (m, 1H), 7,92 (m, 1H), 8,14 (m, 2H), 8,66 (s, 1H), 8,74 (s, 1H).
Etap 6:
Rzadką zawiesinę P2 Boc-(4R)-(7-metoksy-2-pirydyn-2-ylo-chinolino-4-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2 (1-cyklopropylometylocyklopropan-1-ylu) (etap 5, przykład 379) (203 mg, 0,3 mmola) w układzie 4M HCl/dioksan (3,5 ml, 14 mmoli) mieszano przez 2 godziny i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Do pozostałości dodano CH2CI2 (2 ml), diizopropyloetyloaminę (0,63 ml, 3,6 mmola), Boc-L-tert-leucynę (83 mg, 0,36 mmola), HOAt (41 mg, 0,3 mmola) i HATU (148 mg, 0,39 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 7 godzin i rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (35-85% rozpuszczalnik B), uzyskując pożądany produkt (związek 379) 25,1 mg (11%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm -0,05 (m, 1H), 0,30 (m, 1H), 0,66 (m, 1H), 0,91 (m, 2H), 1,05 (s, 9H),
1,28 (s, 9H), 1,67 (m, 8H), 2,15 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 2,77 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 4,19 (d, J=40,25 Hz, 2H), 4,51 (d, J=16,47 Hz, 2H), 4,95 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,53 (s, 1H), 5,89 (dd, J=16,65, 9,33 Hz, 1H), 7,09 (d, J=8,42 Hz, 1H), 7,43 (d, J=1,83 Hz, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,99 (m, 1H), 8,10 (d, J=9,15 Hz, 1H), 8,48 (d, J=7,68 Hz, 1H), 8,72 (s, 1H).
LC-MS (czas retencji: 1,59, metoda I), MS m/z 791 (M++1).
P r z y k ł a d 380: sposób wytwarzania związku 380.
ο.
Η
Związek 380
358
PL 226 561 B1
Etap 1:
Substancję wyjściową według schematu 1 niniejszego przykładu wytworzono przez sprzężenie produktu według etapu 3, przykładu 11, część B z zakończoną aminą grupą P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOEt. Rzadką zawiesinę produktu sprzęgania, P2 Boc-(4R)-{6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-COOEt (7,88 g, 14,99 mmola) w układzie 4M HCl/dioksan (120 ml, 480 mmoli) mieszano przez 2 godziny, rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i oddestylowano azeotropowo, z zastosowaniem suchego dioksanu. Do pozostałości dodano DMF (75 ml), N-metylomorfolinę (6,27 ml, 57,07 mmola), Boc-L-tert-leucynę (5,20 g, 22,49 mmola) i HATU (8,53 g, 22,49 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc, wylano do wody z lodem, pH uregulowano do 5 stosując wodny 1,0N roztwór HCl i ekstrahowano EtOAc. Ekstrakt przemyto NaHCO3 (roztwór wodny), solanką, osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując kolumnę Biotage 65M (EtOAc-heksany: 5-100%) z uzyskaniem produktu (8,07 g, 84%): czas retencji: 1,88, metoda I) MS m/z 639 (M++1).
Etap 2 :
Do zawiesiny produktu (4,0 g, 6,26 mmola) według etapu 1, przykładu 384, {Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)-P2[(4R)-(6-metoksyizochinolino-1 -okso)-5-prolino]-P1 (1 R,2S-winylo-Acca)-COOEt}, w THF (250 ml), CH3OH (31 ml) i H2O (125 ml) dodano LiOH (2,4 g, 100,2 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i następnie pH uregulowano do 7 stosując 1,0N wodny roztwór HCl. Organiczne rozpuszczalniki usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Wodną pozostałość zakwaszono do pH 4 ekstrahowano EtOAc (2x). Połączone rozpuszczalniki organiczne osuszono (Na2SO4/MgSO4) i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując produkt (3,79 g, 99%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,05 (s, 9H), 1,25 (m, 1H), 1,29 (s, 9H), 1,46 (m, 1H), 1,72 (dd, J=8,24, 5,19 Hz, 1H), 2,23 (q, J=8,55 Hz, 1H), 2,68 (dd, J=13,89, 7,78 Hz, 1H), 3,94 (s, 3H), 4,05 (dd, J=11,60, 3,05 Hz, 1H), 4,23 (d, J=8,85 Hz, 1H), 4,46 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,63 (t, J=8,39 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,85 (m, 2H), 7,10 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,26 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,91 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,12 (d, J=9,16 Hz, 1H). Czas retencji: 1,81, metoda I) MS m/z 611 (M++1).
Etap 3:
Roztwór CDI (0,052 g, 0,32 mmola) i produktu (0,130 g, 0,21 mmola) według etapu 2, przykładu 384, {Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2[(4R)-6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CO2H}, w THF (2 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 60 minut, po czym ochłodzono do temperatury pokojowej. Dodano cyklobutansulfonoamid (0,043 g, 0,32 mmola), a następnie czysty roztwór DBU (0,048 ml, 0,32 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, następnie przesąPL 226 561 B1
359 czono przez strzykawkę filtrującą i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (30% do 100% rozpuszczalnika B), z uzyskaniem 0, 1422 mg pożądanego produktu (92%):
1H NMR (metanol-d4} δ ppm 1,04 (s, 9H), 1,26 (d, J=13,43 Hz, 9H), 1,39 (m, 1H), 1,85 (dd, J=7,63, 5,19 Hz, 1H), 1,98 (m, 2H), 2,26 (m, 4H), 2,50 (m, 2H), 2,61 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,33 (m, 1H), 4,43 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,13 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 5,71 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,08 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (m, 1H), 8,08 (d, J=9,16 Hz, 1H). Czas retencji: 1,89, metoda I) MS m/z 728 (M++1).
Schemat 2
Związek 380
Etap 4:
Produkt według przykładu 380, etapu 3 (0,196 mg, 0,27 mmola), {(Boc-NH-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R-(6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklobutyl}, rozpuszczono w układzie HCl/dioksan (5 ml; 20 mmoli) i mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując 100% tytułowego produktu (0,1887 g), który stosowano bezpośrednio w następnym etapie.
Etap 5:
Do mieszaniny produktu (0,037 g, 0,053 mmola) według etapu 4, przykładu 380, {chlorowodorku
NH2-P3(L-t-BuGly)-P2(4R)-(6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklobutylu} i diizopropyloetyloaminy {0/046 ml), 0,26 mmola) w CH2CI2 (2 ml) dodano chloromrówczan cyklopentylu (0,7M, 0,151 ml, 0,069 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (30% do 100% rozpuszczalnika B), z uzyskaniem pożądanego produktu (związek 380) (0,0303 g, 77%):
1H NMR {metanol-d4) δ ppm 1,03 (s, 9H), 1,48 (m, 9H), 1,86 (dd, J=8,24, 5,49 Hz, 1H), 1,99 (m, 2H), 2,27 (m, 4H), 2,51 (m, 2H), 2,60 (dd, J=13,89, 6,87 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,05 (dd, J=12,21, 3,97 Hz, 1H), 4,32 (m, 2H), 4,41 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,53 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,38 Hz, 1H),
5,29 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,71 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,11 (d, J=9,46 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,25 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,08 (d, J=9,16 Hz, 1H).
Czas retencji: 1,85 metoda H), MS m/z 740 (M++1).
360
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 381: sposób wytwarzania związku 381.
Etap 1:
Do mieszaniny produktu (0,037 g, 0,053 mmola) według etapu 4, przykładu 380, {chlorowodorku NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklobutylu} i izopropyloetyloaminy (0,046 ml), 0,26 mmola) w CH2CI2 (2 ml) dodano jeszcze chloromrówczan pentylu (0,012 ml, 0,069 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc, po czym oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (30% do 100% rozpuszczalnika B), z uzyskaniem pożądanego produktu (związek 381) (0,0252 g, 64%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 0,84 (s, 9H), 1,05 (s, 9H), 1,40 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 2,00 (m, 2H), 2,28 (m, 4H), 2,51 (m, 2H), 3,39 (d, J=10,07 Hz, 1H), 3,55 (d, J=10,38 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,33 (m, 2H), 4,41 (d, J=11,29 Hz, 1H), 4,53 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,09 Hz, 1H), 5,11 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,10 (d, J=9,16 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 125 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H),7,97 (s, 1H), 8,07 (d, J=8,85 Hz, 1H). Czas retencji: 1,89, metoda H), MS m/z 742 (M++1).
P r z y k ł a d 382: sposób wytwarzania związku 382.
PL 226 561 B1
361
Etap 1 :
Do mieszaniny produktu (0,037 g, 0,053 mmola) według etapu 4, przykładu 380 {chlorowodorku NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2cyklobutylu} i diizopropyloetyloaminy (0,046 ml), 0,26 mmola) w CH2CI2 (2 ml) dodano diwęglan di-t-amylu (0,0169 g, 0,069 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i bezpośrednio oczyszczono metodą HPLC (30% do 100% rozpuszczalnika B), z uzyskaniem pożądanego produktu (związek 382) (0,0175 g, 44%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 0,79 (t, J=6,87 Hz, 3H), 1,04 (s, 8H), 1,21 (s, 3H), 1,23 (s, 3H), 1,41 (m, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,83 (m, 1H), 2,00 (m, 2H), 2,26 (m, 4H), 2,51 (m, 2H), 2,60 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,07 (m, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,33 (m, 1H), 4,43 (d, J=11,60 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,13 (m, 1H),
5,29 (m, 1H), 5,71 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,09 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,25 (d, J=5,49 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,08 (d, J=8,85 Hz, 1H). Czas retencji: 1,90, metoda H), MS m/z 742 (M++1).
P r z y k ł a d 383: sposób wytwarzania związku 383.
362
PL 226 561 B1
Etap 1
Do mieszaniny produktu (0,037 g, 0,053 mmola) według etapu 4, przykładu 380 {chlorowodorku
NH2-3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklobutylu} i izopropyloetyloaminy (0,046 ml), 0,26 mmola) w CH2CI2 (2 ml) dodano t-butyloizocyjanian (0,008 ml, 0,069 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i bezpośrednio oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (30% do 100% rozpuszczalnika B), z uzyskaniem pożądanego produktu (związek 383) (0,024 g, 62%):
1H NMR (metanol-d4): δ ppm 1,05 (s, 9H), 1,19 (s, 9H), 1,37 (m, 1H), 1,85 (dd, J=8,09, 5,34 Hz, 1H), 2,00 (m, 2H), 2,26 (m, 4H), 2,50 (m, 2H), 2,58 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,06 (m, 1H), 4,32 (m, 2H), 4,49 (m, 2H), 5,11 (d, J= 10,38 Hz, 1H), 5,27 (d, J=17,40 Hz, 1H), 5,69 (m, 1H), 5,83 (s, 1H), 7,08 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,17 (d, J=2,44 Hz, 1H), 7,24 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,87 (d, J=6,10 Hz, 1H), 8,12 (d, J=8,85 Hz, 1H). Czas retencji: 1,77, metoda H), MS m/z 727 (M++1).
P r z y k ł a d 384: sposób wytwarzania związku 384
Etap 1
Zawiesinę diizopropyloetyloaminy (0,031 ml, 0,018 mmola), węglanu N,N'-disukcynoimidylu (0,0274 g, 0,107 mmola) i produktu (0,050 g, 0,0714 mmola) według etapu 4, przykładu 380, {chlorowodorku NH2-P3(L-t-BuGly)-P2-(4R)-(6-metoksyizochinolino-1-okso)-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)
CONHSO2-cyklobutylu} w THF (2 ml) sonikowano w temperaturze 80°C przez 15 minut. Dodano KH (0,046 g, 1,14 mmola) i 1-metylocyklopentanol (0,079 ml, 0,714 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 20 minut i rozcieńczono zimną wodą, pH uregulowano do 4 i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Ekstrakt osuszono (MgSO4) i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (30% do 100% rozpuszczalnika B), z uzyskaniem pożądanego produktu (związek 384) (0,018 g, 33%): (metanol-d4) δ ppm 1,04 (s, 9H), 1,29-1,79 (m, 10H), 1,84 (m, 2H), 1,99 (m, 3H), 2,26 (m, 4H), 2,49 (m, 2H),
PL 226 561 B1
363
2,60 (dd, J=13,73, 7,02 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,05 (dd, J=11,29, 2,44 Hz, 1H), 4,26 (s, 1H), 4,32 (m, 1H), 4,44 (d, J=11,90 Hz, 1H), 4,52 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,07 Hz, 1H), 5,28 (d, J=16,79 Hz, 1H), 5,71 (m, 1H), 5,82 (s, 1H), 7,10 (d, J=8,85 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,26 (d, J=5,80 Hz, 1H), 7,88 (d, J=5,80 Hz, 1H), 8,08 (d, J=9,16 Hz, 1H).
LC-MS czas retencji: 1,91 metoda H), MS m/z 754 (M++1).
P r z y k ł a d 385: sposób wytwarzania związku 385.
Etap 1:
Zawiesinę estru metylowego kwasu 2-cyjanometylo-4-metoksybenzoesowego (1,9 g i TsOH.H2O (0,15 g, mmol) w morfolinie, 5 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 4 godziny i rozpuszcza lnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość krystalizowano z układu EtOAc/heksany z kroplami MeOH, uzyskując produkt (0,43 g, 17%): LC-MS czas retencji: 1,07 metoda H), MS m/z 266 (M++1).
Etap 2:
Mieszaninę 6-metoksy-3-morfolin-4-yloizochinolin-1-ol (0, 298 g, 1,15 mmola) w POCI3 (20 ml) ogrzewano w temperaturze refluksu przez 2 godziny, rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i dodano zimną wodę. pH uregulowano powyżej 11 dodając 1,0N roztwór NaOH. Warstwę wodną ekstrahowano EtOAc. Ekstrakt osuszono (MgSO4), rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskując produt (0,299 g, 94%):
LC-MS czas retencji: 1,68, metoda H), MS m/z 279 (M++1).
364
PL 226 561 B1
Etap 3:
Mieszaninę 1-chloro-6-metoksy-3-morfolin-4-yloizochinoliny (0,050 g, 0,18 mmola) i wodorofluorek tetrabutylofosfoniowy (0,8 g, 2,8 mmola) [Synlett 1992, (4), 345-6] ogrzewano w temperaturze
140°C, stosując mikrofale, przez 10 minut. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono EtOAc i przesączono przez kolumnę ISCO 25 g z warstwą żelu krzemionkowego na szczycie i rozpuszczalnik usunięto, uzyskując produkt (0,037 mg, 77%):
1H NMR (chloroform-D) δ ppm 3,48 (m, 4H), 3,84 (m, 4H), 3,89 (s, 3H), 6,46 (d, J=1,22 Hz, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,90 (dd, J=9,16, 2,44 Hz, 1H), 7,82 (d, J=8,85 Hz, 1H).
LC-MS czas retencji: 1,56, metoda H), MS m/z 263 (M++1).
Etap 4:
Mieszaninę 1-floro-6-metoksy-3-morfolin-4-yloizochinoliny (0,037 g, 0,14 ramola), LaCl3 (0,020 g, 0,8 mmola), t-BuOK (1M/THF, 0,32 ml, 0,32 mmola) i Boc-NH-P3(L-tert-BuGly)P2[(4R)-4-hydroksy-S-prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-CONHSO2-cyklopropanu (0,045 g, 0,08 mmola) w THF (3 ml) mieszano przez 3 dni. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono metanolem, przesączono przez strzykawkę filtrującą i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC, uzyskując produkt w postaci jasnożółtej pianki (0,0158 g, 24%):
1H NMR (metanol-d4) δ ppm 1,03 (s, 9H), 1,24 (m, 4H), 1,31 (s, 9H), 1,43 (m, 2H), 1,88 (m, 1H), 2,24 (m, 2H), 2,59 (dd, J=13,43, 6,71 Hz, 1H), 2,94 (m, 1H), 3,47 (m, 4H), 3,83 (m, 4H), 3,86 (s, 3H), 4,08 (m, 1H), 4,28 (s, 1H), 4,48 (m, 1H), 5,12 (d, J=10,38 Hz, 1H), 5,29 (d, J=16,48 Hz, 1H), 5,76 (m, 2H), 6,74 (d, J=9,16 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,85 (d, J=8,85 Hz, 1H), 9,19 (s, 1H).
Czas retencji: 1,86, metoda H), MS m/z 799 (M++1).
P r z y k ł a d 386: sposób wytwarzania związku 386.
Związki 386 wytworzono stosując metody tu opisane.
Część I:
Wszystkie związki w części I zanalizowano metodą LC/MS, w następujących warunkach.
Metoda A: Xterra C18 S7 3,0 x 50 mm
Gradient: 100% rozpuszczalnika A/0% rozpuszczalnika B do 0% rozpuszczalnika A/100% rozpuszczalnika B
Czas gradientu: 3 minuty.
Czas retencji: 1 minuta.
Szybkość przepływu: 4 ml/minutę.
Długość fali detektora: 220 nm
Rozpuszczalnik A: 10% MeOH/90% H2O/0,1% TFA Rozpuszczalnik B: 10% H2O/90% MeOH/0,1% TFA
PL 226 561 B1
365
P r z y k ł a d 410: sposób wytwarzania związku 410
Związek 410
Schemat 1
366
PL 226 561 B1
Etap 1:
Do roztworu Boc-L-hydroksyproliny (0,723 g, 3,13 mmola) w DMSO, w atmosferze azotu, dodano KOtBu (0, 808 g, 7,2 mmola). Zawiesinę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1,5 godziny i w dwóch porcjach dodano 4-chloro-6-metylo-2-(trifluorometylo)chinolinę (0,916 g, 3,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez trzy godziny, po czym mieszaninę zobojętniono stosując 1,3 równoważnika HCl (1N). Dodano bufor o pH 4,0 i pH uregulowano do 4-5. Warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu, (3 x 5 ml), połączone warstwy organiczne przemyto solanką (20 ml) i osuszono nad MgSO4, uzyskując tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (wydajności nie obliczono). Surowy produkt stosowano w następnym etapie.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,48 (441,5) (metoda A).
Etap 2:
Roztwór surowego produktu uzyskanego według etapu 1, estru 1-tert-butylowego kwasu 4-6-metylo-2-trifluorometylochinolin-4-ylooksy)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (przyjęto 3,13 mmola), w THF (10 ml) i metanolu (10 ml) ochłodzono do temperatury 0°C. Do mieszanego w atmosferze azotu roztworu powoli dodawano 2M roztwór TMSCN2 w heksanach (około 1,3 równoważnika), do momentu zakończenia wydzielania gazu z roztworu. Po zakończeniu reakcji roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, oczyszczono z zastosowaniem kolumny 40M firmy Biotage (eluowano 10%-30% roztworem octanu etylu w heksanach), uzyskując czysty tytułowy związek w postaci białej pianki (976 mg, 69% w etapie 1 i 2).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,60 (477) (metoda A).
Etap 3:
Roztwór produktu uzyskanego według etapu 2 (0,976 g, 2,15 mmola) w DCM (7 ml) i TFA (6,62 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość zawieszono w 1N roztworze HCl w eterze dietylowym (8 ml), łagodnie mieszano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Procedurę tę powtórzono i uzyskany produkt osuszono z zastosowaniem pompy olejowej przez noc z wytworzeniem białego ciała stałego z ilościową wydajnością.
1H NMR: (DMSO-dg) δ 2,50 (s, 3H), 2,57-2,6 (m, 1H), 2,66-2,71 (m, 1H), 3,62-3,65 (br d, J=15 Hz, 1H), 3,80-3,81 (m, 4H), 4,8 (br s, 1H), 5,7 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,72-7,75 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,98-7,8(d, J=8,5 Hz, 1H), 8,24 (s, 1H), 9,54 (br s, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,61 (355) (metoda A).
Etap 4:
Produkt wytworzony według etapu 3 (przyjęto wydajność ilościową, 2,746 mmola) dodano do roztworu Boc-t-butylo-L-glicyny (0,635 g, 2,746 mmola) w DCM (20 ml) w atmosferze azotu. Następnie dodano HOBt (0,408 g, 3,02 mmola), DIPEA (3,35 ml, 19,2 mmola) oraz HBTU (1,56 g, 4,12 mmola). Roztwór natychmiast zabarwił się na kolor brzoskwiniowy i całość mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Następnie do mieszaniny dodano 10 ml DCM w celu zwiększenia objętości i reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 (25 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4,5 stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3 x 20 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (20 ml), nasyconym roztworem NaOH (25 ml) i solanką (20 ml), po czym osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę 40M firmy Biotage (eluowano 10%-40% roztworem octanu etylu w heksanach). Po oczyszczaniu uzyskano czysty związek tytułowy w postaci białego ciała stałego (1,11 g, 89%).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,96-1,02 (rotamery, 3:2, s, 18H), 2,27-2,33 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 4,02-4,04 (m, 1H), 4,43-4,45 (br d, J=15 Hz, 2H), 4,58-4,61 (t, 1H), 5,60 (br s, 1H), 6,72-6,74 (br d, J=15 Hz, 1H), 7,38 (s, 1H), 7,68-7,73 (m, 1H), 7,95-7,97 (m, 2H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,61 (590) (metoda A).
Etap 5:
Stosując ogrzewanie i sonikowanie rozpuszczono w wodzie (10 ml) LiOH (0,138 g, 5,78 mmola). Roztwór LiOH i MeOH (10 ml) dodano do roztworu czystego produktu uzyskanego według etapu 4 (1,09 g, 1,93 mmola) w THF (10 ml). Mieszanina natychmiast zmieniła zabarwienie na intensywne niebieskie. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny i następnie zakwaszono 1N HCl (5,78 ml, 5,78 mmola). Reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 i pH uregulowano do 4,5, stosując 1N wodny roztwór NaOH. Warstwę wodną ekstrahowano EtOAc (3 x 25 ml), przemyto solanką (20 ml) i osuszono nad MgSO4. Przesączony roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostawiono w pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na noc. Surowy produkt (957 mg, wydajność 90%) stosowano w kolejnym etapie. LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,51 (577) (metoda A).
PL 226 561 B1
367
Etap 6:
Surowy produkt wytworzony według etapu 5 (60 mg, 0,11 mmola) rozpuszczono w DCM (5 ml) i dodano chlorowodorek (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 1, etap 8) (0,029 g, 0,11 mmola). Następnie w atmosferze azotu dodano DIPEA (0,094 ml, 0,541 mmola) i później HATU (0,0575, 0,151 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez około 8 godzin. W celu zwiększenia objętości, do roztworu dodano 10 ml DCM i reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 (10 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4-5, stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3 x 20 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (10 ml) i solanką (10 ml), po czym osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę Biotage 12M (eluowano 10%-40% roztworem acetonu w heksanach). Po oczyszczeniu uzyskano związek 410 w postaci białego proszku (29 mg, 35%).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,976-1,12 (m, 24H), 1,36-1,39 (m, 1H), 1,70-1,72 (m, 1H), 2,15-2,25 (m, 2H), 2,50-2,52 (m, 4H), 2,91-2,96 (m, 1H), 3,97-4,01 (m, 2H), 4,40-4,47 (m, 2H), 5,09-5,11 (d, J=10 Hz, 1H), 5,21-5,24 (d, J=15 Hz, 1H), 5,59-5,66 (m, 2H), 6,65-6,67 (d, NH), 7,43 (s, 1H), 7,72-7,74 (d, J=10 Hz, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,98-8,0 (d, J=10 Hz, 1H), 8,87 (s, NH), 10,35 (s, NH);
LC/MS (minuty) (MH+): 2,65 (789,61) (metoda A).
P r z y k ł a d 411: sposób wytwarzania związku 411.
Etap 1:
Do roztworu Boc-L-hydroksyproliny (2,00 g, 8,65 mmola) w THF (25 ml) w atmosferze azotu dodano NaH (0,795 g, 19,87 mmola). Zawiesinę mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 minut, po czym w dwóch porcjach dodano dichloropirymidynę (2,58 g, 17,30 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę i w celu zobojętnienia reakcji dodano 1,3 równoważnika HCl (1N). Następnie dodano bufor o pH 4,0 i pH uregulowano do 5. Fazę wodną ekstrahowano octanem etylu (3 x 25 ml), warstwy organiczne przemyto solanką (20 ml) i osuszono nad
368
PL 226 561 B1
MgSO4 z wytworzeniem tytułowego związku w postaci białego ciała stałego (wydajności surowego produktu nie obliczono). Surowy produkt stosowano w kolejnym etapie.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,91 (366,2) (metoda A).
Etap 2:
Roztwór surowego produktu wytworzonego według etapu 1, (przyjęto 8,65 mmola), w THF (40 ml) i metanolu (40 ml) ochłodzono do temperatury 0°C. Następnie, mieszając roztwór w atmosferze azotu, powoli dodawano 2M roztwór TMSCN2 w heksanach (około 1,3 równoważnika), do momentu zakończenia wydzielania gazu z roztworu. Po zakończeniu rekcji roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, oczyszczono z zastosowaniem kolumny 40M firmy Biotage (eluowano 20%-40% roztworem octanu etylu w heksanach), uzyskując czysty związek tytułowy w postaci białej pianki (497 mg, 16% w etapach 2a-2b).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 1,34-1,38 (rotamery, 2:1, 9H), 2,25-2,29 (m, 1H), 2,53-2,56 (m, 1H), 3,58-3,75 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 4,28-4,33 (m, 1H), 5,59 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 8,69 (s, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,08 (380,14) (metoda A).
Etap 3:
Roztwór czystego produktu uzyskanego według etapu 2 (472 mg, 1,83 mmola) w DCM (3 ml) i TFA (5,65 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, pozostałość zawieszono w 1N roztworze HCl w eterze dietylowym (7,33 ml), łagodnie mieszano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Procedurę tę powtórzono i uzyskany produkt suszono z zastosowaniem pompy olejowej przez noc, z uzyskaniem białego ciała stałego z wydajnością ilościową.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 0,55 (258,35) (metoda A).
Etap 4:
PL 226 561 B1
369
Produkt wytworzony według etapu 3 (przyjęto wydajność ilościową, 1,83 mmola) dodano do roztworu Boc-t-butylo-L-glicyny (0,424 g, 1,83 mmola) w DCM (11 ml) w atmosferze azotu. Następnie dodano HOBt (0,272 g, 2,02 mmola), DIPEA (2,23 ml, 12,82 mmola) oraz HBTU (1,04 g, 2,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 godzin. W celu zwiększenia objętości, do roztworu dodano 15 ml DCM i reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 (15 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4,5, stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3x 20 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (20 ml), nasyconym roztworem NaOH (25 ml), solanką (20 ml) i osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę Biotage 40S (eluowano 20%-50% roztworem octanu etylu w heksanach). Po oczyszczaniu uzyskano czysty związek tytułowy w postaci białego ciała stałego (454 mg, 53%).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 10,94 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 2,21-2,27 (m, 1H), 2,48-2,55 (m, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,86-4,02 (m, 2H), 4,29-4,31 (d, J=10 Hz, 1H), 4,46-4,49 (t, 1H), 5,75 (br ,s, 1H), 6,72-6,74 (d, 1H), 7,12 (s, 1H), 8,71 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+); 2,27 (493,5) (metoda A).
Etap 5
Stosując ogrzewanie i sonikowanie rozpuszczono w wodzie (7,5 ml) LiOH (0,0141 g, 0,589 mmola). Do roztworu czystego produktu uzyskanego według etapu 4 (252 mg, 0,535 mmola) w THF (7,5 ml) dodano roztwór LiOH i pozostawiono mieszając w temperaturze pokojowej. Reakcja zakończyła się po upływie 3 godzin. Reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,0 i zakwaszono do pH w przybliżeniu 4,5 stosując 1N roztwór HCl. Fazę wodną ekstrahowano EtOAc (3 x 25 ml), fazę organiczną przemyto solanką (20 ml) i osuszono nad MgSO4. Przesączony roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostawiono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na noc. Surowy produkt (231 mg, wydajność 95%) stosowano w kolejnym etapie.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,94 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 2,14-2,22 (m, 1H), 2,50-2,54 (m, 1H), 3,843,876 (d, J=150 Hz, 1H), 3,97-3,99 (d, J=10 Hz, 1H), 4,27-4,30 (d, J=15 Hz, 1H), 4,37-4,40 (t, 1H), 5,63 (br s, 1H), 6,69-6,71 (d, NH), 7,12 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 12,56 (br s, OH);
LC/MS (minuty) (MH+): 2,24 (479,5) (metoda A).
Etap 6:
370
PL 226 561 B1
Czysty produkt wytworzony według etapu 5 (80 mg, 0,146 mmola) i kwas fenyloboronowy (0,0178 g, 0,146 mmola) solwatowano w DMF (2 ml). Roztwór umieszczono w atmosferze azotu i dodano 2M wodny roztwór Na2CO3 (0,146 ml, 0,292 mmola). Następnie dodano 5% molowych tetrakis-(trifenylo)fosfino)palladu(0) (8,44 mg, 0,0073 mmola) i całość ogrzewano mikrofalami, stosując Personal Chemistry Emrys Optimizer przez 50 minut w temperaturze 140°C. Po zakończeniu reakcji wytrąciła się czerń palladowa. Mieszaninę zakwaszono jednym równoważnikiem 1N HCl i przesączono przez strzykawkę, stosując MeOH do ekstrahowania produktu. Produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna - 4 Xterra S5 30 x 75 mm, rozpuszczalnik - 70% A/30% B - 30% A/70% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA i rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 15 minut, czas retencji - 1 minuta, szybkość przepływu - 40 ml/minutę, czas retencji czystego produktu - 10,45-11,37). Frakcje zawierające pożądany produkt zobojętniono dodając 1N NaOH i umieszczono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na okres około 4 godzin. Frakcje połączono i dodano bufor o pH 4,0 (15 ml). pH uregulowano do 4-5, stosując 1N HCl, po czym warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu (3 x 20 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką (15 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Produkt suszono z zastosowaniem pompy olejowej przez noc i uzyskano lepki olej (37 mg, 50%).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,37 (499,3) (metoda A).
Etap 7:
Produkt uzyskany według przykładu 411, etap 6 (36,7 mg, 0,061 mmola) rozpuszczono w DCM (4 ml) i dodano chlorowodorek (1(R)-amino-2-(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 1, etap 8) (0,0164 g, 0,161 mmola). Następnie w atmosferze azotu dodano DIPEA (0,0534 ml, 0,307 mmola) i HATU (0,0326, 0,0858 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godziny. W celu zwiększenia objętości, do roztworu dodano 10 ml DCM i reakcję zatrzymano buforem o pH 4,00 (10 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4-5 stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3 x 15 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (10 ml) i solanką (10 ml), po czym osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę 12M firmy Biotage (eluowano 20%-40% roztworem acetonu w heksanach). Po oczyszczaniu uzyskano czysty związek 411 w postaci białego proszku (7 mg, 15%).
1H NMR: δ 1,07-1,46 (m, 24H), 1,87-1,90 (m, 1H), 2,22-2,32 (m, 2H), 2,51-2,55 (m, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 4,04-4,07 (d, J=15 Hz, 1H), 4,20-4,22 (d, J=10 Hz, 1H), 4,36-4,38 (d, J=10 Hz, 1H), 4,47-4,50 (t, 1H), 5,12-5,14 (d, J=10 Hz, 1H), 5,29-5,33 (d, J=20 Hz, 1H), 5,73-5,82 (m, 2H), 6,59-6,60 (d, NH), 7,29 (s, 1H), 7,50-7,51(m, 3H), 8,03-8,05 (m, 2H), 8,81 (s, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,50 (711,4) (metoda A).
P r z y k ł a d 412: sposób wytwarzania związku 412.
PL 226 561 B1
371
Etap 1:
Produkt uzyskany według przykładu 411, etap 5 (80 mg, 0,146 mmola) solwatowano w DMF (2 ml) i dodano do roztworu kwas 2-tiofenoboronowy (0,028 g, 0,219 mmola). Mieszaninę reakcyjną umieszczono w atmosferze azotu, dodano 2M wodny roztwór Na2CO3 (0,146 ml, 0,292 mmola) i 5 procent molowych tetrakis(trifenylo)fosfino)palladu(0) (8,44 mg, 0,0073 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano mikrofalami, stosując Personal Chemistry Emrys Optimizer przez 30 minut w temperaturze 150°C. Po zakończeniu reakcji wytrąciła się czerń palladowa. Mieszaninę zakwaszono jednym równoważnikiem 1N HCl i przesączono przez strzykawkę, stosując MeOH do ekstrahowania produktu. Produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna - 4 Xterra S5 30 x 75 mm, rozpuszczalnik - 70% A/30% B - 30% A/70% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA i rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 15 minut, czas retencji - 1 minuta, szybkość przepływu - 40 ml/minutę, czas retencji czystego produktu 10,45-11,37). Frakcje zawierające pożądany produkt zobojętniono dodając 1N NaOH i umieszczono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na okres około 4 godzin. Frakcje następnie połączono i dodano bufor o pH 4,0 (15 ml). pH uregulowano do 4-5 stosując 1N HCl i warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu (3 x 20 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką (15 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Produkt suszono z zastosowaniem pompy olejowej przez noc i uzyskano oleistą ciecz (37 mg, 50%).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,37 (499,3) (metoda A).
Etap 2 :
Produkt uzyskany według przykładu 412, etap 1 (39 mg, 0, 0773 mmola) rozpuszczono w DCM (4 ml) i dodano chlorowodorek (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 1, etap 8) (0,0206 g, 0,0773 mmola). Następnie w atmosferze azotu dodano DIPEA (0,015 ml, 0,387 mmola) i później HATU (0,0411 g, 0,108 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 godzin. W celu zwiększenia objętości, do roztworu dodano 10 ml DCM i reakcję zatrzymano buforem o pH 4,00 (10 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4-5 stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3 x 15 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (10 ml) i solanką (10 ml), po czym osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę 12M firmy Biotage (eluowano 20%-50% roztworem acetonu w heksanach). Po oczyszczaniu uzyskano czysty związek 412 w postaci białego proszku (4 mg, 7%).
1H NMR: δ 1,04-1,29 (m, 24H), 1,45-1,47 (m, 1H), 1,89-1,91 (m, 1H), 2,26-2,31 (m, 2H), 2,512,53 (m, 1H), 2,92-2,95 (m, 1H), 4,05-4,07 (d, J=10 Hz, 1H), 4,22-4,24 (d, J=10 Hz, 1H), 4,38-4,40 (d, J=10 Hz, 1H), 4,48-4,52 (m, 1H), 5,15-5,17 (d, J=10 Hz, 1H), 5,32-5,36 (d, J=20 Hz, 1H), 5,76-5,83 (m, 2H), 6,65-6,67 (d, NH), 7,19-7,21 (m, 2H), 7,66-7,67 (d, J=5 Hz, 1H), 7,86-7,87 (d, J=5 Hz, 1H), 8,69 (s, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,45 (739,4) (metoda A).
372
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 413: sposób wytwarzania związku 413
Etap 1:
W mieszaninie EtOH, toluenu i wody (2:1:1; 120 ml) solwatowano 2-bromo-6-chloropirydynę (3,0 g, 15,55 mmola) i kwas fenyloboronowy (1,896 g, 15,55 mmola). Następnie w atmosferze azotu dodano 1M roztwór wodny Na2CO3 (15,55 ml, 31,10 mmola) i 5% molowych tetrakis(trifenylo)fosfino)palladu(0) (0,896 g, 0,775 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze refluksu 90°C przez jedną godzinę. Następnie, w celu zakończenia reakcji dodano wodę (20 ml) i warstwę wodną ekstrahowano eterem dietylowym (4 x 25 ml). Warstwę organiczną przemyto następnie solanką, osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surową mieszaninę oczyszczono stosując kolumnę 40S firmy Biotage (eluowano 2% - 10% roztworem octanu etylu w heksanach) z uzyskaniem czystego tytułowego związku (1,45 g, 74%).
1H NMR: δ 7,24-7,26 (m, 1H), 7,42-7,48 (m, 3H), 7,63-7,70 (m, 2H), 7,98-8,00 (m, 2H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,04 (190,18) (metoda A)
Etap 2:
Do czystego produktu w postaci stałej otrzymanego według etapu 1, dodano TFA (20 ml) (3,27 g, 17,24 mmola). Następnie, mieszając roztwór w atmosferze azotu, powoli dodawano kroplami 30% roztwór H2O2 (5,55 ml, 48,9 mmola). Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze wrzenia, 100°C, przez 3 godziny i do roztworu dodano jeszcze 0,5 równoważnika H2O2 (2,27 ml, 25 mmoli). Mieszanie kontynuowano w temperaturze 100°C przez kolejne 2 godziny. Następnie kolbę ochłodzono do temperatury pokojowej, po czym roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do w przybliżeniu połowy objętości wyjściowej. W celu zakończenia reakcji dodano wodę (40 ml) i warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu (5 x 30 ml). Warstwę organiczną przemyto jednokrotnie solanką (20 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt oczyszczono stosując kolumnę 40M firmy Biotage (eluowano 10%-75% roztworem octanu etylu w heksanach), uzyskując jasnożółtą ciecz (0,81 g, 23%). Odzyskano również czystą substancję wyjściową do dalszego zastosowania (1,895 g, 58%).
1H NMR: δ 7,40-7,42 (t, 1H), 7,49-7,50 (m, 3H), 7,59-7,61 (d, J=10 Hz, 1H), 7,77-7,82 (m, 3H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,12 (206,37) (metoda A).
PL 226 561 B1
373
Etap 3:
Oczyszczony produkt wytworzony według etapu 2 (0,81 g, 3,94 mmola) dodano do roztworu SOCI2 (25 ml) i mieszano w temperaturze 60°C przez 2 godziny. Temperaturę następnie podwyższono do 80°C w celu zakończenia reakcji i całość ogrzewano jeszcze przez 30 minut. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i reakcję zatrzymano ostrożnie dodając lód. Wartość pH uregulowano do 4-5, stosując 10N NaOH, utrzymując kolbę w łaźni lodowej. Fazę wodną ekstrahowano eterem (4 x 25 ml), warstwę organiczną przemyto solanką (20 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surową, żółtą ciecz oczyszczono stosując kolumnę 40S firmy Biotage (eluowano 2%-10% roztworem octanu etylu w heksanach). Otrzymano lekko żółtą, lepką ciecz (538 mg, 61%).
1H NMR^ 7,52-7,55 (m, 3H), 7,73 (s, 1H), 8,10-8,11 (m, 2H), 8,17 (s, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,62 (225,33) (metoda A).
Etap 4:
Do roztworu Boc-L-hydroksyproliny (555 mg, 2,40 mmola) w DMSO (4 ml), w atmosferze azotu dodano KOtBu (0,619 g, 5,52 mmola). Zawiesinę mieszano w temperaturze pokojowej przez 45 minut i w dwóch porcjach dodano 2,4-dichlorofenylopirydynę (oczyszczoną według etapu 3) (538 mg, 2,40 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez dwie godziny, po czym, w celu zobojętnienia reakcji, dodano 1,3 równoważnika HCl (1N). Następnie dodano bufor o pH 4,0 i pH uregulowano do 4-5. Fazę wodną ekstrahowano octanem etylu, (3 x 25 ml), uzyskaną fazę organiczną przemyto solanką (20 ml) i osuszono nad MgSO4, uzyskując tytułowy związek w postaci białego ciała stałego (wydajność surowego produktu = 962 mg). W kolejnym etapie stosowano surowy produkt.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,55 (419,27) (metoda A).
Etap 5:
374
PL 226 561 B1
Roztwór surowego produktu wytworzonego według etapu 4 (przyjęto 2,4 mmola) w THF (10 ml) i metanolu (10 ml) ochłodzono do temperatury 0°C. Do mieszanego w atmosferze azotu roztworu powoli dodawano 2M roztwór TMSCN2 w heksanach (około 1,3 równoważnika), do momentu zakończenia wydzielania gazu z roztworu. Po zakończeniu rekcji roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę 25S firmy Biotage (eluowano 10%-50% roztworem octanu etylu w heksanach), w wyniku czego uzyskano czysty związek tytułowy w postaci białej pianki (503 mg, 48% w etapach 4d-4e).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 1,35-1,38 (rotamery, 3:2, 9H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,50-2,58 (m, 1H), 3,67-3,70 (m, 5H), 4,26-4,34 (m, 1H), 5,35 (br s, 1H), 7,14-7,15 (m, 1H), 7,47-7,55 (m, 4H), 8,05-8,09 (m, 2H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,69 (455,52) (metoda A).
Etap 6:
Roztwór czystego produktu uzyskanego według etapu 5 (503 mg, 1,16 mmola) w DCM (2,5 ml) i TFA (3,58 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez jedną godzinę. Rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość zawieszono w 1N roztworze HCl w eterze dietylowym (6 ml), łagodnie mieszano i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Procedurę tę powtórzono i uzyskany produkt suszono z zastosowaniem pompy olejowej, uzyskując białe ciało stałe z wydajnością ilościową. Surowy produkt stosowano w kolejnym etapie.
Etap 7:
Produkt wytworzony według etapu 6 (przyjęto wydajność ilościową, 1,83 mmola) dodano do roztworu Boc-t-butylo-L-glicyny (0,424 g, 1,83 mmola) w DCM (11 ml) w atmosferze azotu. Następnie dodano HOBt (0,272 g, 2,02 mmola), DIPEA (2,23 ml, 12,82 mmola) oraz HBTU (1,04 g, 2,75 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 godzin. W celu zwiększenia objętości, do roztworu dodano 15 ml DCM i reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 (15 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4,5 stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3 x 20 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (20 ml), nasyconym roztworem NaOH (25 ml), solanką (20 ml) i osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszPL 226 561 B1
375 czono stosując kolumnę Biotage 40S (eluowano 20%-50% roztworem octanu etylu w heksanach). Po oczyszczaniu uzyskano czysty związek tytułowy w postaci białego ciała stałego (454 mg, 53%).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,96 (s, 9H), 1,19 (s, 9H), 2,17-2,29 (m, 1H), 2,48-2,58 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,81-3,89 (m, 1H), 4,05-4,08 (m, 1H), 4,21-4,26 (m, 1H), 4,44-4,50 (t, 1H), 5,45 (br s, 1H), 6,72-6,75 (d, J=15 Hz, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,46-7,51 (m, 4H), 8,02-8,06 (m, 2H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,27 (493,5) (metoda A).
Etap 8:
Stosując ogrzewanie i sonikowanie rozpuszczono w wodzie (10 ml) LiOH (0,0233 g, 0,973 mmola). Roztwór LiOH dodano do roztworu czystego produktu uzyskanego według etapu 7 (483 mg, 0,885 mmola) w THF (10 ml) i mieszanina natychmiast przyjęła jasnobrzoskwiniowe zabarwienie. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę i zakwaszono 1N HCl (0,973 ml, 0,974 mmola). Reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 i wartość pH uregulowano do pH 4-5. Warstwę wodną ekstrahowano EtOAc (3 x 20 ml), przemyto solanką (15 ml) i osuszono nad MgSO4. Przesączony roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostawiono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na noc. Surowy produkt (480 mg, wydajność >95%) stosowano w kolejnym etapie.
1H NMR: ( DMSO-d6) δ 0,94 (s, 9H), 1,20 (s, 9H), 1,32-1,34 (m, 1H), 2,12-2,4 (m, 1H), 2,51-2,55 (m, 1H), 3,81-3,83 (d, J=10 Hz, 1H), 4,21-4,23 (d, J=10 Hz, 1H), 4,32-4,35 (t, 1H), 5,4 (br s, 1H), 6,636,65 (d, NH), 7,09 (s, 1H), 7,47-7,49 (m, 4H), 8,03-8,06 (m, 2H), 12,56 (s, 1H).
Etap 9:
Uzyskany według etapu 8 dipeptyd (100 mg, 0,188 mmola) i kwas 2-tiofenoboronowy (0,0481 g, 0,376 mmola) solwatowano w DMF (2 ml). Roztwór umieszczono w atmosferze azotu i dodano 2M
376
PL 226 561 B1 wodny roztwór KF (0,282 ml, 0,376 mmola). Dodano 5% molowych tetrakis(trifenylo)fosfino)palladu(0) (0,011 mg, 0,0094 mmola) i mieszaninę ogrzewano mikrofalami, stosując Personal Chemistry Emrys Optimizer przez 30 minut w temperaturze 150°C. Po zakończeniu reakcji wytrąciła się czerń palladowa. Mieszaninę zakwaszono jednym równoważnikiem 1N HCl i przesączono przez strzykawkę, stosując MeOH do ekstrahowania produktu. Produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna 4 Xterra S5 5um 30 x 75 mm, rozpuszczalnik - 85% A/15% B - 10% A/90% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA i rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 15 minut, czas retencji - 1 minuta, szybkość przepływu - 40 ml/minutę, czas retencji czystego produktu - 16,23). Frakcje zawierające pożądany produkt zobojętniono dodając 1N NaOH i umieszczono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na około 2 godziny. Frakcje połączono i dodano bufor o pH 4,0 (15 ml). pH uregulowano do 4-5 stosując 1N HCl i warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu (3 x 20 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką (15 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Produkt suszono z zastosowaniem pompy olejowej przez noc z uzyskaniem jasnożółtego oleju (44 mg, 40%).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,7 (580,54) (metoda A).
Etap 10:
Produkt uzyskany według przykładu 413, etapu 9 (43 mg, 0,0742 mmola) rozpuszczono w DCM (2 ml) i dodano chlorowodorek (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 1, etap 8) (0,0198 g, 0,0742 mmola). Następnie w atmosferze azotu dodano DIPEA (0,0646 ml, 0,371 mmola) i HATU (0,039 g, 0,0104 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 4,5 godziny. W celu zwiększa objętości do roztworu dodano 10 ml DCM i reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 (10 ml) . Mieszaninę zakwaszono do pH 4-5 stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3 x 15 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (10 ml) i solanką (10 ml), a następnie osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę Biotage 12S (eluowano 10%-50% roztworem acetonu w heksanach). Związek wydzielono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna - YMC ODS-A 20 x 50 mm s5, rozpuszczalnik - 60% A/40% B - 10% A/90% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 8 minut, czas retencji - 2 minuty, szybkość przepływu - 25 ml/minutę, czas retencji czystego produktu - 8,702). Po oczyszczaniu uzyskano czysty związek 413 w postaci jasnopomarańczowego oleju (22,3 mg, 38%) 1H NMR: δ 1,02-1,29 (m, 24H), 1,42-1,45 (m, 1H), 1,87-1,89 (m, 1H), 2,24-2,30 (m, 2H), 2,532,57 (m, 1H), 2,92-2,97 (m, 1H), 4,06-4,08 (d, J= 10 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,31-4,33 (d, J=10 Hz, 1H), 4,45-4,49 (t, 1H), 5,12-5,14 (d, J=10Hz, 1H), 5,29-5,32 (d, J=15 Hz, 1H), 5,46 (br s, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 7,13-7,15 (m, 1H), 7,29-7,30 (d, J= 5 Hz, 2H), 7,42-7,53 (m, 4H), 7,75-7,56 (d, J= 5 Hz, 1H), 8,07-8,09 (d, J= 10 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,79 (792,72) (metoda A)
P r z y k ł a d 414: sposób wytwarzania związku 414.
PL 226 561 B1
377
Etap 1:
Czystą substancję według przykładu 413, etapu 8 (100 mg, 0,188 mmola) i kwas 4-metoksyfenyloboronowy (0,0429 g, 0,282 mmola) solwatowano w DMF (2,5 ml). Roztwór umieszczono w atmosferze azotu i dodano 2M wodny roztwór Na2CO3 (0,188 ml, 0,376 mmola). Następnie dodano 5% molowych tetrakis(trifenylo)fosfino)palladu(0) (0,011 mg, 0,0094 mmola) i mieszaninę ogrzewano mikrofalami, stosując Personal Chemistry Emrys Optimizer przez 30 minut w temperaturze 150°C. Po zakończeniu reakcji wytrąciła się czerń palladowa. Mieszaninę zakwaszono jednym równoważnikiem 1N HCl i przesączono przez strzykawkę, stosując MeOH do ekstrahowania produktu. Produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna - Xterra MS C18 5um 30 x 50 mm, rozpuszczalnik 90% A/10% B -10% A/90% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA i rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 15 minut, czas retencji - 1 minuta, szybkość przepływu - 45 ml/minutę, czas retencji czystego produktu -13,72). Frakcje zawierające pożądany produkt zobojętniono dodając 1N NaOH i umieszczono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na czas około 2 godzin. Frakcje połączono i dodano bufor o pH 4,0 (15 ml). pH uregulowano do 4-5 stosując 1N HCl i warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu (3 x 20 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką (15 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Produkt suszono z zastosowaniem pompy olejowej przez noc, uzyskując lepki olej (44 mg, 50%).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,23 (604,61) (metoda A).
Etap 2:
Produkt uzyskany według przykładu 414, etap 1 (43 mg, 0,0712 mmola) rozpuszczono w DCM (2 ml) i dodano chlorowodorek (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 1, etap 8) (0,01899 g, 0,0712 mmola). Następnie w atmosferze azotu dodano DIPEA (0,062 ml, 0,356 mmola) oraz HATU (0,038 g, 0,0997 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 4,5 godziny. W celu zwiększenia objętości do roztworu dodano 10 ml DCM i reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4,00 (10 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4-5 stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (3 x 15 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (10 ml) i solanką (10 ml) i następnie osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę Biotage 12S (eluowano 20%-50% roztworem acetonu w heksanach). Związek wydzielono i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna - YMC ODS-A 20 x 50 mm s5, rozpuszczalnik - 60% A/40% B - 10% A/90% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA i rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 10 minut, czas retencji - 2 minuty, szybkość przepływu - 25 ml/minutę, czas retencji czystego produktu - 7,43-8,24). Po oczyszczaniu uzyskano czysty związek 414 w postaci jasnopomarańczowego oleju (19,4 mg, 34%).
1H NMR: δ 1,02-1,23 (m, 24H), 1,29-1,44 (m, 1H), 1,89-1,95 (m, 1H), 2,24-2,30 (q, 1H), 2,32-2,40 (m, 1H), 2,59-2,62 (m, 1H), 3,90 (s, 3H), 4,10-4,12 (d, J=10 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,42-4,56 (m, 2H), 5,12-5,14 (d, J=10 Hz, 1H), 5,28-5,31 (d, J=15 Hz, 1H), 5,61 (br s, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 7,14-7,16 (d, J=10 Hz, 2H), 7,52-7,54 (d, J=10 Hz, 2H), 7,61-7,62 (m, 2H), 7,95-7,98 (m, 4H);
LC/MS rt (miuty) (MH+): 2,35 (816,76) (metoda A).
378
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 415: sposób wytwarzania związku 415.
Etap 1:
Dipeptyd według przykładu 413, etapu 8 (174 mg, 0,327 mmola) i kwas fenyloboronowy (0,06 g, 0,491 mmola) solwatowano w DMF (4 ml). Roztwór umieszczono w atmosferze azotu i dodano 2M wodny roztwór NaCO3 (0,33 ml, 0,654 mmola). Następnie dodano 5% molowych tetrakis(trifenylo)fosfino)palladu(0) (0,019 mg, 0,0164 mmola) i mieszaninę ogrzewano mikrofalami, stosując Personal Chemistry Emrys Optimizer przez 30 minut w temperaturze 150°C. Po zakończeniu reakcji wytrąciła się czerń palladowa. Mieszaninę zakwaszono jednym równoważnikiem 1N HCl i przesączono przez strzykawkę, stosując MeOH do ekstrahowania produktu. Produkt oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna-5 Xterrac-18 5um 30 x 100 mm, rozpuszczalnik - 80% A/20% B -0% A/100% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA i rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 20 minut, czas retencji - 1 miuta, szybkość przepływu - 40 ml/minutę, czas retencji czystego produktu 11,28-11,72). Frakcje zawierające pożądany produkt zobojętniono dodając 1N NaOH i umieszczono pod silnie zmniejszonym ciśnieniem na czas około 2 godzin. Frakcje połączono i dodano bufor o pH 4,0 (15 ml). pH uregulowano do 4-5 stosując 1N HCl i warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu (4 x 15 ml). Warstwę organiczną przemyto solanką (15 ml), osuszono nad MgSO4 i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Produkt suszono z zastosowaniem pompy olejowej do postaci suchej przez noc. (31,5 mg, 17%).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,54 (574,37) (metoda A).
PL 226 561 B1
379
Etap 2:
Produkt uzyskany według przykładu 415, etap 1 (31,5 mg, 0,055 mmola) rozpuszczono w DCM (3 ml) i dodano chlorowodorek (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego (przykład 1, etap 8) (0,0147 g, 0,055 mmola). Następnie w atmosferze azotu dodano DIPEA (0,048 ml, 0,275 mmola) oraz HATU (0,029 g, 0,077 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 3,5 godziny, po czym dodano jeszcze 0,3 równoważnika chlorowodorku (1(R)-amino-2(S)-winylocyklopropanokarbonylo)amidu kwasu cyklopropanosulfonowego. Mieszaninę reakcyjną mieszano jeszcze przez 8 godzin. W celu zwiększa objętości do roztworu dodano 10 ml DCM i reakcję zatrzymano dodając bufor o pH 4,00 (10 ml). Mieszaninę zakwaszono do pH 4-5 stosując 1N HCl i fazę wodną ekstrahowano DCM (4 x 10 ml). Fazę organiczną przemyto dwukrotnie buforem o pH 4,00 (10 ml) i solanką (10 ml) i następnie osuszono nad MgSO4. Uzyskany roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (kolumna - YMC ODS-A 30 x 50 mm, rozpuszczalnik - 80% A/20% B - 10% A/90% B (gdzie rozpuszczalnik A stanowi 10% MeOH, 90% H2O, 0,1% TFA i rozpuszczalnik B stanowi 90% MeOH, 10% H2O, 0,1% TFA), czas gradientu - 20 minnut, czas retencji - 3 minuty, szybkość przepływu - 30 ml/minutę, czas retencji czystego produktu - 19,6). Po oczyszczeniu nie uzyskano czystego związku, więc produkt ponownie oczyszczono z zastosowaniem kolumny Biotage 12S (eluowano 10%-50% roztworem acetonu w heksanach), w wyniku czego uzyskano czysty związek tytułowy w postaci jasnopomarańczowego oleju (22,3 mg, 38%).
1H NMR: δ 1,02-1,45 (m, 24H), 1,85-1,86 (m, 1H), 2,03-2,11 (m, 2H), 2,42-2,46 (m, 1H), 2,77-2,85 (m, 1H), 4,10-4,12 (m, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,31-4,33 (d, J=10 Hz, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 5,03-5,05 (d, J=10 Hz, 1H), 5,20-5,24 (d, J=20 Hz, 1H), 5,44 (br s, 1H), 5,82-5,94 (m, 1H), 7,33 (s, 2H), 7,43-7,50 (m, 6H), 8,09-8,10 (d, J=5 Hz, 4H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,37 (786,37) (metoda A).
Część J:
W części J dla metody LC/MS stosowano następujące warunki :
Kolumny:
Metoda A: YMC ODS-A C18 S7 (4,6 x 33 mm)
Metoda B: YMC Xterra ODS S7 (3,0 x 50 mm)
Metoda C: Xterra ms C18 (4,6 x 33 mm)
Metoda D: YMC ODS-A C18 S3 (4,6 x 33 mm)
Gradient: 100% rozpuszczalnika A/ 0% rozpuszczalnika B do 0% rozpuszczalnika A/100% rozpuszczalnika B. Czas gradientu: 3 minuty. Czas retencji: 1 minuta. Szybkość przepływu: 5 ml/minutę.
Długość fali detektora: 220 nm.
Rozpuszczalniki: rozpuszczalnik A: 10% MeOH/ 90% woda/0,1% TFA. Rozpuszczalnik B: 90% MeOH/ 10% woda/0,1% TFA.
P r z y k ł a d 420: sposób wytwarzania związku 420
380
PL 226 561 B1
Etap 1:
Do roztworu PPh3 (16,8 g, 63,9 mmola) w THF (150 ml) dodano kroplami DEAD (10,1 ml, 63,9 mmola) i roztwór mieszano przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Powoli dodano roztwór Boc-cis-(L)-Hyp-OMe (10,5 g, 42,6 mmola) w THF (50 ml), a następnie, porcjami, 5-bromopirydyn-3-ol (wytworzono według F.E. Ziegler i in., J. Am. Chem. Soc., (1973), 95, 7458) (8,90 g, 51,1 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze 45°C przez 18 godzin. Roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość podzielono pomiędzy eter dietylowy (200 ml) i 1N NaOH (50 ml). Fazę organiczną osuszono (MgSO4) i eterowy roztwór po filtracji zatężono do połowy objętości. Utworzony osad usunięto metodą filtracji. Przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i oczyszczono stosując kolumnę Biotage 65 M (eluowano układem heksany - EtOAc 2:1, 3:2, 1:1), z uzyskaniem tytułowego związku (11,9 g, 69%) w postaci czerwonego oleju.
1H NMR: (CDCI3) δ 1,42, 1,45 (s, 9H (rotamery), 2,25-2,30 (m, 1H), 2,49-2,58 (m, 1H), 3,75, 3,81 (s, 3H (rotamery), 3,66-3,81(m, 2H (zamaskowany), 4,42, 4,50 (t, J=8 Hz, 1H (rotamery)), 4,92 (m, 1H), 7,36 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,32 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,26 (401, 403) (metoda B).
Etap 2:
Produkt według etapu 1 (2,34 g, 5,83 mmola) rozpuszczono w DCM (20 ml) oraz TFA (18 ml, 0,23 mola) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość podzielono pomiędzy EtOAc oraz wodę. Fazę organiczną ekstrahowano 1N HCl (25 ml) i połączone wodne ekstrakty zobojętniono nasyconym roztworem NaHCO3 (40 ml). Fazę wodną ekstrahowano EtOAc (dwukrotnie), połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką i osuszono (MgSO4), uzyskując tytułowy związek (1,02 g, 58%, wolna zasada) w postaci bezbarwnego oleju.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 2,12-2,20 (m, 2H), 2,94 (d, J=12 Hz, 1H), 3,19 (dd, J=4,5, 12 Hz, 1H),
3,64 (s, 3H), 3,90 (t, J=8 Hz, 1H), 5,07 (m, 1H), 7,69 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 8,29 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 0,78 (301, 302) (metoda B).
Etap 3:
Do zawiesiny produktu wytworzonego według etapu 2 (1,02 g, 3,39 mmola), N-Boc-L-tert-leucyny (862 mg, 3,73 mmola) i HOBt (458 mg, 3,39 mmola) w DCM (15 ml) dodano DIPEA (2,36 ml, 13,6 mmola), a następnie HBTU (1,61 g, 4,24 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 godzin i reakcję zatrzymano stosując DCM, bufor o pH 4 oraz 1N HCl aby pH uregulować do 4-5. Fazę organiczną przemyto buforem o pH 4, nasyconym NaHCO3 (dwukrotnie), solanką i osuszono
PL 226 561 B1
381 (MgSO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 40M (eluowano układem heksan - EtOAc 3:2, 1:1) uzyskano tytułowy związek (1,48 g, 85%) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (DMSO-d6) δ0,94 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 2,16-2,21 (m, 1H), 2,50 (m, (zamaskowany), 1H),
3,64 (s, 3H), 3,82 (d, J=12 Hz, 1H), 4,06 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,16 (d, J=12 Hz, 1H), 4,45 (dd, J=8, 9,5 Hz, 1H), 5,26 (m, 1H), 6,71 (d, J=9 Hz, NH), 7,75 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,32 (s, 1H). LC/MS rt (minuty) (MH+):
2.35 (514, 516) (metoda B).
Etap 4:
Do mieszaniny produktu według etapu 3 (98 mg, 0,19 mmola), Pd(PPh3)4 (6,6 mg, 0,00573 mmola), 2M wodnego roztworu Na2CO3 (0,191 ml, 0,381 mmola) w toluenie (2 ml) dodano roztwór kwasu fenyloboronowego (29 mg, 0,24 mmola) w metanolu (0,1 ml). Roztwór ogrzewano, w atmosferze azotu, w temperaturze 85°C przez 6 godzin. Po oziębieniu do temperatury pokojowej reakcję zatrzymano, dodając bufor o pH 4, ekstrahowano EtOAc (2 x 10 ml) i osuszono (Na2SO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 12 M (eluowano układem heksan - EtOAc 2:3) uzyskano tytułowy związek (72 mg, 74%) w postaci bezbarwnego oleju.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,05 (s, 9H), 1,31 (s, 9H), 2,29-2,35 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 4,00 (d, J=12 Hz, 1H), 4,24 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,41 (d, J=12 Hz, 1H), 4,67 (dd, J=7,5, 10 Hz, 1H),
5.36 (m, 1H), 6,51 (d, J=9,5 Hz, NH), 7,79-7,85 (m, 3H), 8,39 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,67-8,68 (m, 2H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,16 (512) (metoda B).
Etap 5 :
Do roztworu produktu według etapu 4 (150 mg, 0,293 mmola) w THF (2 ml) i metanolu (2 ml) dodano LiOH (14 mg, 0,59 mmola) w wodzie (2 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej i reakcję zatrzymano, dodając 1N HCl do zobojętnienia pH. Organiczne części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i do pozostałości dodano bufor o pH 4. Produkt ekstrahowano EtOAc (3 x 10 ml), przemyto solanką, buforem o pH 4, osuszono (MgSO4) i po roztarciu z pentanem uzyskano tytułowy związek (wydajność ilościowa) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,05 (s, 9H), 1,32 (s, 9H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,69-2,74 (m, 1H), 3,99 (dd, J=3,12 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,40 (d, J=12 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=7,5, 9,5 Hz, 1H), 5,36 (m, 1H), 7,85-7,87 (m, 3H), 8,40 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,69-8,70 (m, 2H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,03 (499) (metoda B).
Etap 6:
Do zawiesiny produktu wytworzonego według etapu 5 (93 mg, 0,19 mmola) i produktu uzyskanego według przykładu 1, etapu 8 (50 mg, 0,19 mmola) w DCM (2 ml) dodano DIPEA (0,163 ml, 0,935 mmola), a następnie HATU (92 mg, 0,243 mmola). Uzyskaną mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 18 godzin, reakcję zatrzymano DCM i buforem o pH 4 oraz dodano 1N HCl aby pH uregulować do 4-5. Warstwy oddzielono, fazę wodną ekstrahowano DCM (10 ml) i osuszono (Na2SO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 12 M (eluowano gradientem heksan aceton 20-60%) uzyskano tytułowy związek (65 mg, 49%) w postaci białego proszku.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,03-1,05 (m, 2H), 1,08-1.10 (m, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,361,39 (m, 1H), 1,69-1,72 (m, 1H), 2,09-2,21 (m, 2H), 2,41-2,45 (m, 1H), 2,92-2,94 (m, 1H), 3,91 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,08 (d, J=7,5 Hz, 1H), 4,16 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,36 (t, J-8,5 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10 Hz, 1H), 5,23 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,38 (m, 1H), 5,59-5,67 (m, 1H), 6,54 (s, NH), 7,41-7,46 (m, 1H), 7,50-7,53 (m, 2H), 7,65 (s, 1H), 7,74-7,74 (m, 2H), 8,28 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,92 (s, NH).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,08 (710) (metoda B).
P r z y k ł a d 421: sposób wytwarzania związku 421.
382
PL 226 561 B1
Etap 1:
Do zimnego (-5°C) 48% wodnego roztworu HBr (35 ml) dodano 4-chloropirydyn-2-yloaminę (4,18 g, 32,5 mmola; wytworzono według K.S. Gudmundsson i in.; Synth. Commun. (1997), 27, 861), a następnie powoli dodano brom (6,7 ml, 0,13 mola). Po upływie 20 minut, w tej samej temperaturze dodano azotyn sodu (8,63 g, 0,125 mola) w wodzie (40 ml) i mieszanie kontynuowano przez 30 minut. Reakcję zatrzymano, oziębiając mieszaninę lodem i dodając 10N roztwór NaOH (około 40 ml) do alkalicznego pH. Produkt ekstrahowano EtOAc (2 x 100 ml) i osuszono (Na2SO4). Surową substancję oczyszczono stosując kolumnę 40M firmy Biotage (eluowano 10% roztworem EtOAc w heksanach), uzyskując tytułowy związek (2,50 g, 40%) w postaci bezbarwnego oleju, który zestalił się po odstaniu.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 7,64 (dd, J=1,5, 5,5 Hz, 1H), 7,94 (d, J=1,5 Hz, 1H), 8,40 (d, J=5,5 Hz, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,65 (192, 194, 196) (metoda B).
Etap 2:
Do roztworu N-Boc-trans-L-Hyp-OH (3,22 g, 13,9 mmola) w DMSO (30 ml), w temperaturze pokojowej, w atmosferze azotu, porcjami dodano tert-butanolan potasu (3,90 g, 34,8 mmola). Po upływie 1,5 godziny dodano produkt według etapu 1 w DMSO (5 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc i reakcję zatrzymano dodając wodę (150 ml). Roztwór przemyto EtOAc (100 ml). Fazę wodną zakwaszono do pH 4 stosując 1N HCl. Surowy kwas karboksylowy ekstrahowano EtOAc (trzykrotnie) i osuszono (MgSO4). Pozostałość, w postaci brunatnego ciała stałego, zawieszono w THF (20 ml) oraz MeOH (20 ml) i ochłodzono do temperatury 0°C. Kroplami dodano roztwór trimetylosililodiazometanu (2M w heksanie, 12 ml) i po upływie 15 minut roztwór zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 40M (eluowano układem heksany - EtOAc 2:1, 1:1) uzyskano tytułowy związek (3,47 g, 62%) w postaci białawego proszku.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 1,34, 1,38 (s, 9H (rotamery)), 2,24-2,29 (m, 1H), 2,43-2,50 (m, 1H), 3,57 (d, J= 12,5 Hz, 1H), 3,64-3,68 (m, 1H), 3,66, 3,69 (s, 3H (rotamery)), 4,27-4,34 (m, 1H), 5,21 (m, 1H), 7,06 (d, J=6Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 8,20 (d, J=6 Hz, 1H):
LC/MS rt (minuty) (MH+): .2,59 (401, 403) (metoda B).
PL 226 561 B1
383
Etap 3 :
Produkt według etapu 2 (2,00 g, 4,98 mmola) zawieszono w 4N HCl w dioksanie (10 ml) oraz w 1N HCl w eterze dietylowym (40 ml) i mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Uzyskaną zawiesinę zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość roztarto z pentanem z uzyskaniem tytułowego związku (wydajność ilościowa) w postaci białego proszku.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 0,24 (301, 303) (metoda B).
Etap 4:
Do zawiesiny produktu wytworzonego według etapu 3 (przyjęto 4,98 mmola), N-cyklopentylooksykarbonylo-L-tert-leucyny (1,24 g, 5,10 mmola) i HOBt (673 mg, 4,98 mmola) w DCM (25 ml) dodano DIPEA (4,34 ml, 24,9 mmola), a następnie HBTU (2,36 g, 6,23 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 15 godzin, reakcję zatrzymano stosując DCM i bufor o pH 4 oraz 10 ml 1N HCl aby pH uregulować do 4. Fazę wodną ekstrahowano DCM (dwukrotnie). Połączone ekstrakty organiczne przemyto nasyconym roztworem NaHCO3 (dwukrotnie), solanką i osuszono (MgSO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 40M (eluowano układem heksan EtOAc 3:2,1:1) uzyskano tytułowy związek (2,09 g, 80%) w postaci białej pianki.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,94 (s, 9H), 1,43-1,74 (m, 8H), 2,18-2,23 (m, 1H), 2,46-2,49 (m, 1H),
3,64 (s, 3H), 3,87 (d, J=12 Hz, 1H), 4,08-4,13 (m, 1H), 4,42 (dd, J=7,5, 9,5 Hz, 1H), 4,78 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 7,03-7,05 (m, 1H), 7,24 (s, 1H), 8,120 (d, J=6 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,34 (526, 528) (metoda C).
Etap 5:
Do roztworu produktu według etapu 4 (206 mg, 0,391 mmola) w THF (2 ml) i metanolu (2 ml) dodano LiOH (28 mg, 1,2 mmola) w wodzie (2 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej i reakcję zatrzymano, dodając 1N HCl do zobojętnienia pH. Organiczne części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i do pozostałości dodano bufor o pH 4. Produkt ekstrahowano EtOAc (2 x 20 ml) i osuszono (MgSO4), uzyskując tytułowy związek (196 mg, 100%) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,05 (s, 9H), 1,60-1,85 (m, 8H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,62-2,67 (m, 1H), 3,97 (d, J=12 Hz, 1H), 4,26 (s, 1H), 4,32 (d, J=12 Hz, 1H), 4,58 (dd, J=7,5, 9,5 Hz, 1H), 4,89 (m (zamaskowany), 1H), 5,29 (m, 1H), 7,03-7,05 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 8,19 (d, J=6 Hz, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,17 (512, 514) (metoda B).
Etap 6:
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 4 (czas reakcji - 20 godzin) z 20% wydajnością, wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 421, etapu 5.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,45-1,74 (m, 8H), 2,31-2,37 (m, 1H), 2,65-2,69 (m,
1H), 3,99 (dd, J=12, 3,0 Hz, 1H), 4,26 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,33 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,60 (dd, J=8,0, 9,5 Hz, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,35 (m, 1H), 6,72 (d, J=9,0 Hz, NH), 7,02 (dd, J=2,5, 6,0 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,50 (m, 3H (zamaskowany)), 7,91 (d, J=6,5 Hz, 1H), 8,46 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,03 (510) (metoda A).
Etap 7:
Związek 421 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 z 68% wydajnością, wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 421, etapu 6.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,06-1,09 (m, 2H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,43 (dd, J=5,5, 9,5 Hz, 1H), 1,47-1,77 (m, 8H), 1,88 (dd, J=5,5, 8,5 Hz, 1H), 2,21-2,29 (m, 2H), 2,50-2,54 (m, 1H), 2,912,96 (m, 1H), 4,06 (dd, J=3,0, 11,5 Hz, 1H), 4,28-4,30 (m, 2H), 4,44 (dd, J=7,0, 10,5 Hz, 1H), 4,82 (m, 1H (zamaskowany)), 5,12 (d, J= 10 Hz, 1H), 5,30 (d, J= 17 Hz, 1H), 5,37 (m, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 6,92 (d, J=9,5 Hz, NH), 6,98 (dd, J=5,5, 2,0 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,43-7,50 (m, 3H), 7,90 (d, J=7,0 Hz, 1H), 8,45 (d, J= 5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+) : 2,37 (723) (metoda A)
384
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 422: sposób wytwarzania związku 422.
Etap 1:
Do mieszaniny produktu według przykładu 420, etapu 3 (102 mg, 0,198 mmola) i Pd(PPh3)4 (23 mg, 0,0198 mmola) w toluenie (2 ml) dodano 4-tributylostannanylopirydynę (87 mg, 0,24 mmola). Roztwór ogrzewano w temperaturze 105°C, w atmosferze azotu, przez 20 godzin. Po oziębieniu do temperatury pokojowej reakcję zatrzymano, dodając nasycony roztwór NaHCO3, ekstrahowano EtOAc (2 x 10 ml) i osuszono (Na2SO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 12M (eluowano gradientem heksan-aceton 20-60%) uzyskano tytułowy związek (49 mg, 49%) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (metanol-d6) δ 1,05 (s, 9H), 1,31 (s, 9H), 2,29-2,35 (m, 1H), 2,68-2,72 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 4,00 (d, J=12 Hz, 1H), 4,24 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,41 (d, J=12 Hz, 1H), 4,67 (dd, J=7,5, 10 Hz, 1H),
5,36 (m, 1H), 6,51 (d, J=9,5 Hz, NH), 7,79-7,85 (m, 3H), 8,39 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,67-8,68 (m, 2H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,77 (514) (metoda).
Etap 2:
PL 226 561 B1
385
Produkt ten wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 420, etap 5 (wydajność ilościowa), z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 422, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,05 (s, 9H), 1,32 (s, 9H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,69-2,74 (m, 1H), 3,99 (dd, J=3,12 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4, 40 (d, J=12 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=7,5, 9,5 Hz, 1H), 5,36 (m, 1H), 7,85-7,87 (m, 3H), 8,40 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,69-8,70 (m, 2H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,57 (500) (metoda B).
Etap 3:
Związek 422 wytworzono według procedury opisanej w przykładzie 420, etap 6 (wydajność 51%) w postaci białego ciała stałego, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 422, etapu 2.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,03 (m, 1H), 1,08 (m, 1H), 1,23 (s, 9H), 1,34-1,37 (m, 1H), 1,68-1,70 (m, 1H), 2,12-2,18 (m, 2H), 2,41-2,45 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,90 (d, J=11 Hz, 1H), 4,06 (d, J= 9Hz, 1H), 4,17 (d, J=11 Hz, 1H), 4,36 (dd, J=7, 10 Hz, 1H), 5,10 (d, J=12 Hz, 1H), 5,23 (d, J=16,5 Hz, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,59-5,66 (m, 1H), 6,60 (d, J=9 Hz, NH), 7,81-7,82 (m, 3H), 8,38 (s, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,68-8,70 (m, 2H), 8,93 (s, NH), 10,4 (s, NH).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,14 (711) (metoda D).
P r z y k ł a d 423: sposób wytwarzania związku 423.
Etap 1:
Do roztworu produktu według przykładu 420, etapu 3 (1,00 g, 1,94 mmola) w THF (5 ml) i metanolu (5 ml) dodano LiOH (140 mg, 5,83 mmola) w wodzie (5 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej i reakcję zatrzymano, dodając 1N HCl do zobojętnienia pH. Organiczne części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, dodano bufor o pH 4, produkt eks386
PL 226 561 B1 trahowano EtOAc (3 x 25 ml) i osuszono (MgSO4), uzyskując tytułowy związek (1,0 g, 100%) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 2,14-2,19 (m, 1H), 2,47-2,50 (m, 1H), 3,80 (d, J=11,5 Hz, 1H), 3,99-4,07 (m, 2H), 4,15 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,36 (dd, J=8,10 Hz, 1H), 5,25 (m, 1H), 6,66 (d, J=9 Hz, NH), 7,75 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 12,5 (s, 1H).
LC/MS (minuty) (MH+): 2,47 (500, 502) (metoda A).
Etap 2:
Związek 423 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (52% wydajność), wychodząc z produktów według przykładu 423, etapu 1 oraz przykładu 8, etapu 3 (racemiczny P1,(1R,2S) i (15, 2R)).
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,93, 0,95 (s, 3H), 1,00-1,09 (m, 4H), 1,28-1,29 (s, 9H), 1,37-1,39 (m, 1H), 1,69-1,72 (m, 1H), 2,09-2,22 (m, 2H), 2,36-2,46 (m, 1H), 2,88-2,94 (m, 1H), 3,82-3,87 (m, 1H), 4,02-4,04 (m, 1H), 4,10-4,15 (m, 1H), 4,31-4,34 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,22-5,28 (m, 1H), 5,54-5,66 (m, 1H), 6,56, 6,60 (d, J=9,5 Hz, NH), 7,74, 7,76 (s, 1H), 8,28-8,29 (m, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,79-8,89 (s, 1H).
LC/MS (minuty) (MH+): 2,42 (712, 714) (metoda B).
P r z y k ł a d 424: sposób wytwarzania związku 424
Etap 1:
Do roztworu produktu według przykładu 423, etapu 1 (91 mg, 0,18 mmola), Pd(PPh3)4 (10,5 mg, 0,0091 mmola) i kwasu 3-furyloboronowego (25,4 mg, 0,227 mmola) w DMF (2 ml) dodano 2M wodny roztwór Na2CO3 (0,273 ml, 0, 546 mmola). Mieszaninę ogrzewano w atmosferze azotu, w temperatuPL 226 561 B1
387 rze 110°C przez 2,5 godziny. Po oziębieniu do temperatury pokojowej ciało stałe usunięto przez filtrację i przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (gradient 30-80% B), uzyskując tytułowy związek (64 mg, 72%) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 2,17-2,21 (m, 1H), 2,50 (m (zamaskowany), 1H), 3,84-3,86 (m, 1H), 4,09-4,15 (m, 2H), 4,37 (t, J=9 Hz, 1H), 5,28 (m, 1H), 6,67 (d, J=9 Hz, NH), 7,08 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 12,6 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,60 (488) (metoda B).
Etap 2:
Związek 424 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (55% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 424, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,02 (s, 9H), 1,05-1,09 (m, 2H), 1,22-1,25 (m, 2H), 1,34 (s, 9H), 1,421,45 (m, 1H), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,21-2,26 (m, 1H), 2,48-2,52 (m, 1H), 2,91-2,96 (m, 1H), 4,02 (d, J=12 Hz, 1H), 4,24-4,29 (m, 2H), 4,43-4,47 (dd, J=7,5, 10,5 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,285,32 (m, 1H), 5,73-5,81 (m, 1H), 6,63 (d, J=9 Hz, NH), 6,90 (s, 1H), 7,60-7,62 (m, 2H), 8,07 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 8,39.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,30 (700) (metoda E).
P r z y k ł a d 425: sposób wytwarzania związku 425.
Związek 425 wytworzono według przykładu 421, etapu 7 (45% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 421, etapu 5.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, (H0, 1,03-1,04 (m, 1H), 1,08-1,09 (m, 1H), 1,33-1,36 (m, 1H), 1,46-1,75 (m, 9H), 2,08-2,12 (m, 1H), 2,17 (q, J=9 Hz, 1H), 2,35-2,38 (m, 1H), 2,88-2,93 (m, 1H), 3,91 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,05-4,10 (m, 2H), 4,27 (dd, J=10, 7 Hz, 1H), 4,80 (m, 1H), 5,10 (d, J=12 Hz, 1H), 5,23 (d, J=16,5 Hz, 1H), 5,32 (m, 1H), 5,58-5,66 (m, 1H), 6,94 (d, J= 9 Hz, NH), 7,03-7,05 (m, 1H), 7,26 (s, 1H), 8,21 (d, J=6 Hz, 1H), 8,86 (s, NH), 10,4 (s, NH).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,56 (724, 726) (metoda D).
P r z y k ł a d 426: sposób wytwarzania związku 426.
388
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 6 (65% wydajność), z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 3-furanoboronowy.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,49-1,76 (m, 8H), 2,30-2,35 (m, 1H), 2,63-2,67 (m, 1H), 3,98 (d, J=12 Hz, 1H), 4,26 (t, J=9 Hz, 1H), 4,31 (d, J=12 Hz, 1H), 4,58 (t, J=8,0 Hz, 1H), 5,32 (m, 1H), 6,71(d, J=9,5 Hz, NH), 6,92 (dd, J=2,5, 6,0 Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,25 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,60 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,35 (d, J-5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,94 (500) (metoda D).
Etap 2:
Związek 426 wytworzono według przykładu 421, etapu 7 (57% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 426, etapu 1.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,03-1,04 (m, 2H), 1,08-1,09 (m, 2H), 1,34-1,71 (m, 8H), 2,09-2,20, (m, 2H), 2,37-2,41 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 3,96 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,07-4,11 (m, 2H), 4,29 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,23 (d, J=17 Hz, 1H), 5,34 (m, 1H), 5,59-5,66 (m, 1H), 6,87-6,91 (m, 2H), 7,08 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,39 (d, J=6 Hz, 1H), 8,90 (s, NH), 10,4 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,38 (712) (metoda D).
P r z y k ł a d 427: sposób wytwarzania związku 427.
Związek 427
PL 226 561 B1
389
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 6 (86% wydajność), z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 4-fluorofenyloboronowy.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,44-1,75 (m, 8H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,64-2,69 (m, 1H), 3,99 (dd, J=12, 3,5 Hz, 1H), 4,26 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,32 (d, J=12 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=8,0, 9,5 Hz,
1H), 4,81 (m, 1H), 5,34 (m, 1H), 6,73 (d, J=9,5 Hz, NH), 6,99 (dd, J=2,5, 6,0 Hz, 1H), 7,20 (t, 2H (zamaskowany)), 7,36 (s, 1H (zamaskowany)), 7,94-7,97 (m, 2H), 8,44 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,22 (528) (metoda A).
Etap 2:
Związek 427 wytworzono według przykładu 421, etapu 7 (53% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 427, etap 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,06-1,09 (m, 2H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,43 (dd, J=5,0, 9,5 Hz, 1H), 1,47-1,78 (m, 8H), 1,88 (dd, J=5,5, 8,0 Hz, 1H), 2,21-2,29 (m, 2H), 2,49-2,53 (m, 1H),
2,91-2,96 (m, 1H), 4,05 (dd, J=3,0, 11,5 Hz, 1H), 4,27-4,29 (m, 2H), 4,44 (dd, J=7,0, 10,5 Hz, 1H), 4,83 (m, 1H (zamaskowany)), 5,12 (d, J=10 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17 Hz, 1H), 5,37 (m, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 6,93 (d, J=9,5 Hz, NH), 6,98 (m, 1H), 7,21 (t, J=9,0 Hz, 2H), 7,36 (s, 1H), 7,94-76,97 (m, 2H), 8,44 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,42 (741) (metoda A).
P r z y k ł a d 428: sposób wytwarzania związku 428.
Związek 428
390
PL 226 561 B1
Etap 1
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 6 (37% wydajność), z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 4-metoksyfenyloboronowy.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,45-1,74 (m, 8H), 2,31-2,36 (m, 1H), 2,64-2,68 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,98 (dd, J=12, 3,5 Hz, 1H), 4,25 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,33 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,59 (dd, J=8,0, 10 Hz, 1H), 4,77 (m, 1H), 5,36 (m, 1H), 6,72 (d, J=9,0 Hz, NH), 7,01 (m, 1H), 7,04 (d, J=9,0 Hz, 2H), 7,37 (d, J=2,0 Hz), 7,86 (d, J=9,0 Hz, 2H), 8,42 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,09 (540) (metoda A).
Etap 2 :
Związek 428 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (72% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 428, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,06-1,09 (m, 2H), 1,23-1,25 (m, 2H), 1,43 (dd, J=5,5, 9,5 Hz, 1H), 1,48-1,77 (m, 8H), 1,88 (dd, J=5,0, 8,0 Hz, 1H), 2,21-2,28 (m, 2H), 2,50-2,54 (m, 1H), 2,912,96 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 4,05 (d, J=12 Hz, 1H), 4,27-4,29 (m, 2H), 4,44 (dd, J=7,0, 10,5 Hz, 1H), 4,84 (m, 1H (zamaskowany)), 5,12 (d, J=10 Hz, 1H), 5,30 (d,J=17 Hz, 1H), 5,37 (m, 1H), 5,72-5,80 (m, 1H), 6,89 (d, J=9,5 Hz, 1H), 6,95 (dd, J=2,5, 6,0 Hz, 1H), 7,03 (d, J=9,0 Hz, 1H), 7,33 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,86 (d, J=9,0 Hz, 2H), 8,41 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,40 (753) (metoda A).
P r z y k ł a d 429: sposób wytwarzania związku 429.
Związek 429
PL 226 561 B1
391
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 6 (22% wydajność), z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 2-tiofenoboronowy.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,46-1,74 (m, 8H), 2,29-2,35 (m, 1H), 2,63-2,67 (m, 1H),
3,97 (d, J=12 Hz, 1H), 4,26 (d, J=8,5 Hz, 1H), 4,31 (d, J=12 Hz, 1H), 4,60 (t, J=8,5 Hz, 1H), 4,81 (m, 1H (zamaskowany)), 5,31 (m, 1H), 6,87-6,89 (m, 2H), 7,13 (d, J=5,0 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H (zamaskowany)), 7,70 (d, J=2,5 Hz, 1H), 8,32 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+1): 1,96 (516) (metoda A).
Etap 2:
Związek 429 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (57% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 429, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,02 (s, 9H), 1,07 (m, 2H), 1,24 (m, 2H), 1,43 (dd, J=5,5, 9,5 Hz, 1H), 1,53-1,78 (m, 8H), 1,88 (dd, J=5,5, 8,0 Hz, 1H), 2,21-2,28 (m, 2H), 2,49-2,53 (m, 1H), 2,92-2,96 (m, 1H), 4,04 (d, J=10 Hz, 1H), 4,26-4,29 (m, 2H), 4,43 (t, J=9,0 Hz, 1H), 4,82 (m, 1H (zamaskowany)), 5,12 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,35 (m, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 6,89 (d, J=4,5 Hz, 1H), 6,92 (d, J=4,5 Hz, NH), 7,13 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,51 (d, J=4,5 Hz. 1H), 7,70 (s, 1H), 8,32 (d, J=5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,37 (728) (metoda A).
P r z y k ł a d 430: sposób wytwarzania związku 430.
Związek 430
392
PL 226 561 B1
Etap 1
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 6 (17% wydajność), z tym wyjątkiem, że stosowano kwas 3-tiofenoboronowy.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,43-1,74 (m, 8H), 2,30-2,36 (m, 1H), 2,64-2,68 (m, 1H),
3,98 (dd, J=11,5, 3,0 Hz, 1H), 4,25 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,32 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,60 (dd, J=8,0, 9,5 Hz, 1H), 4,80 (m, 1H (zamaskowany)), 5,33 (m, 1H), 6,96 (dd, J=2,5, 6,0 Hz, 1H), 7,36 (s, 1H (zamaskowany)), 7,51 (s, 1H (zamaskowany)), 7,67 (d, J=5,0 Hz, 1H), 8,03 (s, 1H), 8,39 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,94 (516) (metoda A).
Etap 2:
Związek 430 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (45% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 430, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,02 (s, 9H), 1,06 (m, 2H), 1,29 (m, 2H), 1,43 (dd, J=5,5, 9,5 Hz, 1H), 1,43-1,75 (m, 8H), 1,87 (dd, J=6,0, 7,5 Hz, 1H), 2,20-2,27 (m, 2H), 2,49-2,53 (m, 1H), 2,93-2,95 (m, 1H), 4,05 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,27-4,29 (m, 2H), 4,42-4,45 (m, 1H), 4,85 (m, 1H (zamaskowany)), 5,12 (d,J=10,0 Hz, 1H), 5,29 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,36 (m, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 6,92-6,94 (m, 2H), 7,35 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,66 (d, J=4,5 Hz, 1H), 8,00 (s, 1H), 8,38 (d, J=5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,36 (728) (metoda A).
P r z y k ł a d 431: sposób wytwarzania związku 431.
Związek 431
PL 226 561 B1
393
Etap 1:
.s.
Do mieszaniny produktu według przykładu 421, etapu 5 (100 mg, 0,195 mmola) i Pd(PPh3)4 (23 mg, 0,0195 mmola) w dioksanie (3 ml) dodano 2-tributylostannnylotiazol (95 mg, 0,254 mmola) i trietyloaminę (82 ąl, 0,585 mmola). Roztwór ogrzewano w temperaturze 95°C przez 5 godzin w atmosferze azotu, a następnie w temperaturze 105°C przez 15 godzin. Po oziębieniu do temperatury pokojowej mieszaninę przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (gradient 30-80% B). Połączone frakcje podzielono pomiędzy bufor o pH 4 i dichlorometan. Fazę wodną ekstrahowano dichlorometanem, a połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Otrzymano tytułowy związek (31 mg) w postaci bezbarwnego oleju, znacznie zanieczyszczonego pozostałością tributylostannylu.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,4 (m, 8H (zamaskowany)), 2,32-2,36 (m, 1H), 2,64-2,68 (m, 1H), 4,00 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,33 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,60 (t, J=8,5 Hz, 1H), 4,80 (m, 1H (zamaskowany)), 5,33 (m, 1H), 7,03 (br s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 8,41 (d, J=5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,25 (517) (metoda A).
Związek 431 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (41% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 431, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4): 1,02 (s, 9H), 1,06-1,70 (m, 13H), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,22-2,31 (m, 2H), 2,51-2,55 (m, 1H), 2,92-2,94 (m, 1H), 4,06 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,23-4,32 (m, 2H), 4,44-4,47 (m, 1H), 4,82 (m, 1H (zamaskowany)), 5,12 (, J=11 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17 Hz, 1H), 5,36 (m, 1H), 5,73-5,81 (m, 1H), 6,90 (d, J=9,0 Hz, NH), 7,04 (m, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,93 (s, 1H), 8,42 (d, J=5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,46 (729) (metoda A).
P r z y k ł a d 432: sposób wytwarzania związku 432.
Związek 432
394
PL 226 561 B1
Etap 1:
Do mieszaniny produktu według przykładu 423, etapu 1 (102 mg, 0204 mmola) i Pd(PPh3)4 (24 mg, 0,0204 mmola) w dioksanie (3 ml) dodano 2-tributylostannylotiazol (99 mg, 0,265 mmola) i Metyloaminę (85 μ|, 0,612 mmola). Ropztwór ogrzewano w temperaturze 95°C przez 5 godzin w atmosferze azotu, a nastepnie w temperaturze 105°C przez 15 godzin. Po oziębieniu do temperatury pokojowej mieszaninę przesączono i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (gradient 30-80% B). Połączone frakcje zobojętniono stężonym roztworem amoniaku i zatężono. Pozostałość podzielono pomiędzy bufor o pH 4 i dichlorometan. Fazę wodną ekstrahowano dichlorometanem i połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką oraz osuszono (MgSO4). Otrzymano tytułowy związek (33 mg) w postaci bezbarwnego oleju, znacznie zanieczyszczonego pozostałością tributylostannylu.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,30 (s, 9H), 2,28-2,32 (m, 1H), 2,62-2,67 (m, 1H), 3,98 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,34 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,58 (t, J=9,0 Hz, 1H), 5,31 (m, 1H), 7,71 (d, J=2,5 Hz, 1H), 7,94-7,96 (m, 2H), 8,33 (s, 1H), 8,73 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+-Boc): 2,21 (405) (metoda A).
Etap 2:
Związek 432 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (42% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 432, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,02 (s, 9H), 1,07-1,08 (m, 2H), 1,24 (m, 2H), 1,32 (s, 9H), 1,44 (m, 1H (zamaskowany)), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,21-2,29 (m, 2H), 2,51-2,55 (m, 1H), 2,93-2,95 (m, 1H), 4,04 (d, J=12 Hz, 1H), 4,23 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,33 (d, J=12 Hz, 1H), 4,47 (t, J=9,5 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,30 (d, J=18 Hz, 1H), 5,36 (m, 1H), 5,72-5,81 (m, 1H), 6,62 (d, J=8,5 Hz, NH), 7,73 (s, 1H), 7,96 (m, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,74 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,42 (717) (metoda A).
P r z y k ł a d 433: sposób wytwarzania związku 433.
PL 226 561 B1
395
Etap 1:
Do mieszaniny produktu według przykładu 420, etapu 3 (1,00 g, 1,94 mmola) i Pd(PPh3)4 (112 mg, 0, 097 mmola) w dioksanie (15 ml) dodano tributylo-(1-etoksywinylo)cynę (876 mg, 2,43 mmola). Roztwór ogrzewano w atmosferze azotu, w temperaturze 105°C przez 6 godzin. Po oziębieniu do temperatury pokojowej mieszaninę przesączono i zatężono. Pozostałość podzielono pomiędzy nasycony roztwór NaHCO3 i octan etylu. Fazę wodną ekstrahowano octanem etylu i połączone ekstrakty organiczne przemyto 5% wodnym roztworem KF oraz solanką i osuszono (MgSO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 40M (eluowano gradientem heksan - EtOAc 40-70%) uzyskano tytułowy związek (624 mg, 64%) w postaci żółtego oleju.
1H NMR (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 1,35 (t, J=7,0 Hz, 3H), 2,16-2,21 (m, 1H), 2,50 (m, 1H (zamaskowany)), 3,64 (s, 3H), 3,85 (d, J=11 Hz, 1H), 3,90 (q, J=7,0 Hz, 2H), 4,09 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,13 (d, J=11 Hz, 1H), 4,40 (d, J= 2,5 Hz, 1H), 4,45 (t, J=8,0 Hz, 1H), 4,91 (d, J=2,5 Hz, 1H), 5,27 (m, 1H), 6,69 (d, J=9,0 Hz, NH), 7,48 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 8,46 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty): 2,14 (507) (metoda B).
Etap 2:
Do roztworu produktu według przykładu 433, etapu 1 (125 mg, 0,247 mmola) w THF (3 ml) i wody (111 μ!, 6,18 mmola) dodano NBS (44 mg, 0,247 mmola). Po wymieszaniu w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Mieszaninę zatężono i podzielono pomiędzy octan etylu i solankę. Fazę organiczną osuszono (MgSO4), uzyskując związek pośredni, bromomrtyloketon. Ten związek pośredni rozpuszczono w DMF i potraktowano tioacetamidem (24 mg, 0,321 mmola) oraz NaHCO3 (31 mg,0,371 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, zatężono i zawieszono w nasyconym roztworze NaHCO3. Produkt ekstrahowano octanem etylu (2x), przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage12 M (eluowano gradientem heksan - EtOAc 50-70%) uzyskano tytułowy związek (50 mg, 38%) w postaci jasnego oleju.
396
PL 226 561 B1 1H NMR: (metanol-d4) δ 1,02 (s, 9H), 1,31 (s, 9H), 2,27-2,31 (m, 1H), 2,63-2,67 (m, 1H), 2,77 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,98 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,22 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,34 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,64 (t, J=9,0 Hz, 1H), 5,29 (m, 1H), 6,38 (s, NH), 7,87 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,71 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,96 (533) (metoda B).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 5, z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 433, etapu 2.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,96 (s, 9H), 1,25 (s, 9H), 2,18-2,23 (m, 1H), 2,50 (m, 1H (zamaskowany)), 2,73 (s, 3H), 3,86 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,10 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,14 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,39 (t, J=8,5 Hz, 1H), 5,30 (m, 1H), 6,60 (br s, NH), 7,84 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,78 (s, 1H).
LC/MS rt (minuuty) (MH+): 1,84 (519) (metoda B).
Etap 4:
Związek 433 wytworzono, według przykładu 420, etapu 6 (46% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 433, etapu 3.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,05 (s, 9H), 1,09-1,11 (m, 2H), 1,26-1,29 (m, 2H), 1,36 (s, 9H), 1,451,48 (m, 1H), 1,89-1,92 (m, 1H), 2,25-2,30 (m, 2H), 2,53-2,57 (m, 1H), 2,80 (s, 3H), 2,94-3,00 (m, 1H), 4,06 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,27 (s, 1H), 4,32 (d, J=12 Hz, 1H), 4,48 (dd, J=10,5, 7,0 Hz, 1H), 5,15 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,33 (d, J=17 Hz, 1H), 5,35 (m, 1H), 5,76-5,83 (m, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,95 (m, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,74 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,21 (metoda B).
P r z y k ł a d 434: sposób wytwarzania związku 434.
PL 226 561 B1
397
Etap 1:
Do roztworu produktu według przykładu 421, etapu 1 (300 mg, 1,56 mmola) i Pd(PPh3)4 (90 mg, 0, 078 mmoła) w DMF (6 ml) dodano 1-metylo-2-(tributylostannylo)-1H-pirol (750 mg, 2,03 mmola) i trietyloaminę (0,435 ml, 3,12 mmola). Roztwór ogrzewano w mikrofalówce, w atmosferze azotu, w temperaturze 150°C przez 30 minut (Emrys, Personal Chemistry). Po oziębieniu do temperatury pokojowej mieszaninę rozcieńczono eterem dietylowym oraz 5% wodnym roztworem KF i przesączono. Fazę wodną ekstrahowano eterem dietylowym (2x). Połączone ekstrakty organiczne przemyto 5% wodnym roztworem KF, wodą i solanką oraz osuszono (MgSO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 25 S (eluowano gradientem heksan - eter dietylowy 0-5%) uzyskano tytułowy związek (169 mg, 56%) w postaci bezbarwnego oleju.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 3,94 (s, 3H), 6,10 (s, 1H), 6,77 (d, J=2,0 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 7,27 (d, J=4,0 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 8,49 (d, J=5,0 Hz, 1H);
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,15 (193, 195) (metoda B).
Etap 2:
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 2 (39% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 434, etapu 1.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,42,1,43 (s, 9H (rotamery)), 2,27-2,34 (m, 1H), 2,55-2,62 (m, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,76, 3,74 (s, 3H (rotamery)), 3,84 (s, 3H), 4,39-4,45 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 6,10 (m, 1H), 6,49 (m, 1H), 6,78 (s, 1H), 6,80-6,82 (m, 1H), 7,07 (s, 1H), 8,35 (d, J=6,0 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+, kwas karboksylowy): 1,49 (389) (metoda B).
Etap 3:
398
PL 226 561 B1
Produkt uzyskany według przykładu 434, etapu 2 (90 mg, 0,22 mmola) rozpuszczono w dichlorometanie (1,5 ml) i TFA (1,0 ml, 9,0 mmola). Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 45 minut, po czym zatężono. Pozostałość potraktowano 1N roztworem HCl w eterze dietylowym (5 ml) i zatężono. Otrzymano tytułowy związek (wydajność ilościowa) w postaci jasnego oleju.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 0,32 (302) (metoda B).
Etap 4:
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 3 (80% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 434, etapu 3.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,02 (s, 9H), 1,31 (s, 9H) 2,25-2,31 (m, 1H), 2,61-2,64 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 3,97-3,99 (m, 1H), 4,22 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,32 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,61 (t, J=7,5 Hz, 1H), 5,27 (m, 1H), 6,10 (m, 1H), 6,42 (br d, J=9,0 Hz, NH), 6,49 (m, 1H), 6,78 (m, 1H), 6,81 (m, 1H), 7,07 (s, 1H), 8,34 (d, J=5,5Hz, 1H),
LC/MS rt (m 1Nuty) (MH+): 1,81 (516) (metoda B).
Etap 5:
Do roztworu produktu według przykładu 434, etapu 4 (92 mg, 0,179 mmola) w THF (1 ml) i metanolu (1 ml) dodano LiOH (13 mg, 0,536 mmola) w wodzie (1 ml). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 1,5 godziny w temperaturze pokojowej i reakcję zatrzymano, dodając 1N HCl do zobojętnienia pH. Organiczne części lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem i pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (gradient 10-80% B). Połączone frakcje zobojętniono stężonym roztworem amoniaku i zatężono. Pozostałość podzielono pomiędzy bufor o pH 4 i octan etylu. Fazę wodną eksPL 226 561 B1
399 trahowano octanem etylu i połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką oraz osuszono (MgSO4). Otrzymano tytułowy związek (56 mg, 62%) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,03 (s, 9H), 1,32 (s, 9H), 2,31- 2,35 (m, 1H), 2,62-2,67 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,98 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,21-4,23 (m, 1H), 4,33 (d, J=11,5 Hz, 1H), 4,58 (t, J=8,0 Hz, 1H), 5,31 (m, 1H), 6,12 (m, 1H), 6,40 (br d, J=8,0 Hz, NH), 6,52 (m, 1H), 6,82 (m, 1H), 6,87 (m, 1H), 7,12 (s, 1H), 8,36 (d, J=5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,73 (502) (metoda B)
Etap 6
Związek 434 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 z 68% wydajnością, wychodząc z produktów według przykładu 434, etapu 5.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,02 (s, 9H), 1,06-1,09 (m, 2H), 1,23-1,26 (m, 2H), 1,33 (s, 9H), 1,421,45 (m, 1H), 1,86-1,89 (m, 1H), 2,21-2,27 (m, 2H), 2,47-2,51 (m, 1H), 2,91-2,96 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 4,04 (d, J=12 Hz, 1H), 4,24 (d, J=10,0 Hz, 1H), 4,28 (d, J=12Hz, 1H), 4,43 (dd, J=10,0, 7,0 Hz, 1H), 5,12 (d, J=10,0 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17 Hz, 1H), 5,32 (m, 1H), 5,73-5,80 (m, 1H), 6,10 (m, 1H), 6,49 (m, 1H), 6,64 (br d, J=9,0 Hz, NH), 6,79 (m, 1H), 6,82 (m, 1H), 7,08 (s, 1H), 8,35 (d, J=5,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,08 (714) (metoda B).
P r z y k ł a d 435: sposób wytwarzania związku 435.
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 2 (74% wydajność), wychodząc z 2,6-dibromopirydyny.
1H NMR: (DMSO-d6), δ 1,34, 1,38 (s, 9H) (rotamery)), 2,23-2,31 (m, 1H), 2,43-2,47 (m, 1H (zamaskowany)), 3,53 (d, J=12 Hz, 1H), 3,66, 3,69 (s, 3H (rotamery)), 3,72-3,75 (m, 1H), 4,29-4,34 (m, 1H), 5,42 (m, 1H), 6,89 (d, J=7,5Hz, 1H), 7,26 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,68 (t, J=7,5 Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,62 (523, 425) (metoda A).
400
PL 226 561 B1
Etap 2 :
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 2 z wydajnością ilościową, wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 435, etapu 1.
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,42 (301, 303) (metoda B).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 3 (96% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 435, etapu 2.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,28 (s, 9H), 2,20-2,26 (m, 1H), 2,45-2,48 (m, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,94 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,01-4,08 (m, 2H), 4,45 (t, J=8,5 Hz, 1H), 5,53 (m, 1H), 6,66 (d, J=7,0 Hz, 1H), 6,82 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,25 (d, J=7,0 Hz, 1H), 7,64-7, 69 (m, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,73 (514, 516) (metoda A).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 5 z wydajnością ilościową, wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 435, etapu 2.
PL 226 561 B1
401 1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,28 (s, 9H), 2,19-2,25 (m, 1H), 2,43-2,47 (m, 1H), 3,94 (m, 1H), 4,01-4,08 (m, 2H), 4,36 (t, J=8,5 Hz, 1H), 5,52 (m, 1H), 6,65 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,82 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,25 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,67 (t, J=7,5 Hz, 1H), 12,6 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,51 (522, 524) (metoda B).
Etap 4:
Do roztworu produktu według przykładu 435, etapu 3 (125 mg, 0, 250 mmola), Pd(PPh3)4 (14,4 mg, 0,125 mmola) i kwasu 3-furyloboronowego (35 mg, 0,313 mmola) w DMF (2 ml) i wody (0,025 ml) dodano Cs2CO3 (244 mg, 0,750 mmola). Mieszaninę ogrzewano w atmosferze azotu, w temperaturze 105°C przez 3 godziny. Po oziębieniu do temperatury pokojowej ciało stałe usunięto przez filtrację i przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (gradient 30-100% B). Połączone frakcje zobojętniono stężonym roztworem amoniaku i zatężono. Pozostałość podzielono pomiędzy bufor o pH 4 i dichlorometan. Fazę wodną ekstrahowano dichlorometanem i połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką oraz osuszono (MgSO4). Otrzymano tytułowy związek (90 mg, 76%) w postaci białej pianki.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,06 (s, 9H), 1,39 (s, 9H), 2,36-2,42 (m, 1H), 2,61-2,65 (m, 1H), 4,12 (dd, J=4,0, 11 Hz, 1H), 4,19 (d, J=11 Hz, 1H), 4,28 (s, 1H), 4,62 (t, J=8,5 Hz, 1H), 5,79 (m, 1H), 6,64 (d, J=8,0 Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,22 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,58 (m, 1H), 7,66 (t, J=8,0 Hz, 1H), 8,13 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,53 (511) (metoda B)
Etap 5:
Związek 435 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (57% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 435, etapu 4.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,96 (s, 9H), 1,02-1,05 (m, 2H), 1,09-1,11 (m, 2H), 1,19 (s, 9H), 1,351,38 (m, 1H), 1,71 (dd, J=5,5, 8,0 Hz, 1H), 2,15-2,22 (m, 2H), 2,37-2,41 (m, 1H), 2,93 (br m, 1H), 4,034,08 (m, 3H), 4,35 (br t, 1H), 5,10 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,24 (d, J=17 Hz, 1H), 5,60-5,67 (m, 1H), 5,73 (m, 1H), 6,47 (br s, 1H), 6,64 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 7,31 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,72 (t, J=7,5 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,92 (s, NH), 10,4 (s, NH).
LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,64 (723) (metoda B).
P r z y k ł a d 436: sposób wytwarzania związku 436.
402
PL 226 561 B1
Etap 1:
Produkt ten wytworzono według przykładu 435, etapu 4 (73% wydajność), z tym wyjątkiem, że stosowano kwas fenyloboronowy.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,06 (s, 9H), 1,39 (s, 9H), 2,39-2,45 (m, 1H), 2,65-2,77 (m, 1H), 4,184,30 (m, 3H), 4,64 (t, J=8,0 Hz, 1H), 5,72 (m, 1H), 6,74 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,44-7,55 (m, 4H), 7,75 (t, J=8,0 Hz, 1H), 8,07 (d, J=7,5 Hz, 2H).
LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,72 (521) (metoda B).
Etap 2:
Związek 436 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (66% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego Wed ług przykładu 436, etapu 1.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,96 (s, 9H), 1,04-1,05 (m, 2H), 1,09 (m, 2H), 1,30 (s, 9H), 1,36-1,39 (m, 1H), 1,71 (t, J=7,5 Hz, 1H), 2,16-2,24 (m, 2H), 2,41-2,45 (m, 1H), 2,93 (m, 1H), 4,06-4,09 (m, 3H), 4,38 (br t, 1H), 5,10 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,30 (d, J=17 Hz, 1H), 5,60-5,67 (m, 1H), 5,80 (m, 1H), 6,49 (br s, 1H), 6,75 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,43-7,51 (m, 3H), 7,59 (d, J=7,5 Hz, 1H), 7,81 (t, J=7,5 Hz, 1H), 8,09 (d, J=7,0 Hz, 2H), 8,91 (s, NH), 10,4 (s, NH).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,77 (711) (metoda B).
P r z y k ł a d 437: sposób wytwarzania związku 437.
Etap 1:
PL 226 561 B1
403
Do roztworu 2-bromo-6-metylopirydyny (7,65 g, 44,4 mmola) w dichlorometanie (50 ml) dodano roztwór mCPBA (77%, 12,9 g, 57,7 mmola) w dichlorometanie (100 ml). Roztwór mieszano przez 18 godzin w temperaturze otoczenia. Mieszaninę zobojętniono stałym Na2CO3 i dodano wodę. Fazę wodną ekstrahowano dichlorometanem (2x). Połączone frakcje organiczne przemyto 5% Na2S2O3, 5% Na2CO3, solanką i osuszono (MgSO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 40M (eluowano gradientem heksan - octan etylu 40-70%) uzyskano tytułowy związek (5,0 g, 60%) w postaci bezbarwnego oleju, który zestalił się po odstaniu.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 2,43 (s, 3H), 7,15 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,78 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 0,32 (188, 190) (metoda B).
Etap 2:
Do roztworu produktu według przykładu 437, etapu 1 (4,5 g, 24 mmole) w DMF (20 ml) porcjami dodano POBr3 (8,2 g, 29 mmoli). Nastąpiła silna reakcja egzotermiczna i utworzył się osad. Mieszaninę pozostawiono na 2 godziny w temperaturze otoczenia. Reakcję zatrzymano dodając wodę i dodano nasycony roztwór NaHCO3 do zobojętnienia pH. Fazę wodną ekstrahowano eterem dietylowym (2x). Połączone frakcje organiczne przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Po oczyszczeniu z zastosowaniem kolumny Biotage 40M (eluowano gradientem heksan - eter dietylowy 0-10%) uzyskano tytułowy związek (1,78 g, 30%) w postaci bezbarwnego oleju.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 2,45 (s, 3H), 7,64 (s, 1H), 7,80 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,85 (250, 252, 254) (metoda B).
Etap 3:
Produkt ten wytworzono według przykładu 421, etapu 2 (46% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 437, etapu 1.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 1,34,1,38 (s, 9H (rotamery)), 2,20-2,27 (m, 1H), 2,38 (s, 3H), 2,43-2,50 (m, 1H), 3,55 (d, J=12,5 Hz, 1H), 3,64-3,67 (m, 1H), 3,66, 3,69 (s, 3H (rotamery)), 4,26-4,32 (m, 1H), 5,17 (m, 1H), 6,93 (s, 1H), 7,08 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,17 (415, 417) (metoda B).
Etap 4:
404
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 3 z wydajnością ilościową, wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 437, etapu 3.
Etap 4:
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 3 (75% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 437, etapu 3.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,94 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 2,16-2,21 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,48 (m, 1H (zamaskowany)), 3,64 (s, 3H), 3,83 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,06 (d, J=8,5 Hz, 1H), 4,14 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,42 (t, J=9,0 Hz, 1H), 5,27 (m, 1H), 6,68 (br s, NH), 6,88 (s, 1H), 7,03 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,19 (528, 530) (metoda B).
Etap 5:
Produkt ten wytworzono według przykładu 420, etapu 5 z wydajnością ilościową, wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 437, etapu 4.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,95 (s, 9H), 1,27 (s, 9H), 2,15-2,19 (m, 1H), 2,36 (s, 3H), 2,44-2,48 (m, 1H), 3,81 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,04-4,06 (m, 1H), 4,13 (d, J=10,5 Hz, 1H), 4,33 (t, J=8,5 Hz, 1H), 5,26 (m, 1H), 6,66 (br d, J=9,0 Hz, NH), 6,88 (s, 1H), 7,03 (s, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MNa+): 2,14 (536, 538) (metoda B).
Etap 6:
PL 226 561 B1
405
Do roztworu produktu według przykładu 437, etapu 5 (101 mg, 0,196 mmola), Pd(PPh3)4 (11,3 mg, 0,0098 mmola) i kwasu fenyloboronowego (34 mg, 0,275 mmola) w DMF (2 ml) dodano 2M wodny roztwór Na2CO3 (0,294 ml, 0,588 mmola). Rurkę uszczelniono i ogrzewano w piecu mikrofalowym (Emrys, Personal Chemistry), w atmosferze azotu, w temperaturze 150°C przez 15 minut. Po oziębieniu do temperatury pokojowej mieszaninę zakwaszono 1N HCl (0,5 ml). Ciało stałe usunięto przez filtrację i przesącz zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (gradient 20-80% B). Połączone frakcje zobojętniono stężonym roztworem amoniaku i zatężono. Pozostałość podzielono pomiędzy bufor o pH 4 i octan etylu. Fazę wodną ekstrahowano octanem etylu (2x), połączone ekstrakty organiczne przemyto solanką i osuszono (MgSO4). Otrzymano tytułowy związek (115 mg, >100%) w postaci białego ciała stałego.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,06 (s, 9H), 1,30 (s, 9H), 2,36-2,41 (m, 1H), 2,69 (s, 3H), 2,65-2,76 (m, 1H), 4,01 (dd, J=3,0, 12 Hz, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,44 (d, J=12 Hz, 1H), 4,64 (dd, J=8,0, 10 Hz, 1H), 5,46 (m, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,39 (m, 3H), 7,57 (d, J=7,5 Hz, 2H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,84 (513) (metoda B).
Etap 7:
Związek 437 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (31% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 437, etapu 6.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,93 (s, 9H), 0,99-1,04 (m, 4H), 1,25 (s, 9H), 1,34-1,37 (m, 1H), 1,691,71 (m, 1H), 2,11-2,20 (m, 2H), 2,39-2,43 (m, 1H), 2,48 (s, 3H), 2,93 (m, 1H), 3,92 (d, J=8,5 Hz, 1H), 4,07 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,11 (d, J= 12 Hz, 1H), 4,32 (t, J=7,0 Hz, 1H), 5,10 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,23 (d, J=17,5 Hz, 1H), 5,39 (m, 1H), 5,60-5,67 (m, 1H), 6,58 (d, J=8,5 Hz, 1H), 6,83 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 7,40-7,48 (m, 3H), 8,04-8,06 (m, 2H), 8,92 (s, NH), 10,4 (s, NH).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,10 (725) (metoda B).
P r z y k ł a d 438: sposób wytwarzania związku 438.
Etap 1:
406
PL 226 561 B1
Produkt ten wytworzono według przykładu 437, etapu 6 z wydajnością ilościową, wychodząc z kwasu 2-tiofenoboronowego.
1H NMR: (metanol-d4) δ 1,05 (s, 9H), 1,32 (s, 9H), 2,32-2,38 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 2,66-2,70 (m, 1H), 3,99 (dd, J=3,0, 12 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,36 (d, J=12 Hz, 1H), 4,61 (t, J=8,5 Hz, 1H), 5,35 (m, 1H), 5,86 (s, 1H), 7,16-7,18 (m, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,56 (m, 1H), 7,72 (d, J=3,0Hz, 1H).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 1,80 (519) (metoda B).
Etap 2:
Związek 438 wytworzono według przykładu 420, etapu 6 (41% wydajność), wychodząc z produktu uzyskanego według przykładu 438, etapu 1.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 0,91 (s, 9H), 0,99-1,04 (m, 4H), 1,20 (s, 9H), 1,35-1,37(m, 1H), 1,69-1,71 (m, 1H), 2,09-2,20 (m, 2H), 2,33 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,93 (m, 1H), 3,92 (d, J=8,5 Hz, 1H), 4,07-4,11 (m, 2H), 4,29-4,32 (m, 1H), 5,10 (d, J=10,5 Hz, 1H), 5,23 (d, J=17,0 Hz, 1H), 5,36 (m, 1H), 5,60-5,67 (m, 1H), 6,58 (d, J=8,5 Hz, 1H), 6,75 (s, 1H), 7,14 (t, J=4,5 Hz, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,59 (d, J=5,5 Hz, 1H), 7,80 (d, J=3,5 Hz, 1H), 8,92 (s, NH), 10,4 (s, NH).
LC/MS rt (minuty) (MH+): 2,06 (731) (metoda B).
Część K:
P r z y k ł a d 450: sposób wytwarzania związku 450.
Związek 450 wytworzono według przykładu 8, etapu 5, z tym wyjątkiem, że stosowano 4-chloro-6-fluoro-2-trifluorometylochinolinę.
1H NMR: (CD3OD) δ 0,97-1,04 (m, 12H), 1,17-1,24 (m, 10H), 1,39-1,46 (m, 1H), 1,82-1,87 (m, 1H), 2,20-2,23 (m, 1H), 2,35-2,39 (m, 1H), 2,55-2,65 (m, 1H), 2,91-2,96 (m, 1H), 4,09-4,11 (m, 1H), 4,18-4,21 (m, 1H), 4,56 (b, 2H), 5,10-5,14 (m, 1H), 5,28-5,31 (m, 1H), 5,60 (b, 1H), 5,70-5,80 (m, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,65-7,68 (m, 1H), 7,86 (s, 1H), 8,13-8,15 (m, 1H).
P r z y k ł a d 451: sposób wytwarzania związku 451.
PL 226 561 B1
407
Schemat 1
Etap 1:
Tosylan wytworzono według opisu w litraturze (Patchett, A. A.; Witkof, B. J. Ara. Chem. Soc.
1957, 185-192) i stosowano bez dalszego oczyszczania.
Do rzadkiej zawiesiny NaH (76 mg, 1,90 mmola) w DMF (20 ml) dodano 1 -tionaftol (0,29 mg, 1,80 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minNut. Dodano roztwór tosylanu (0,61 g, 1,80 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 23°C przez 12 godzin. Mieszaninę zatężono i pozostałość podzielono pomiędzy EtOAc/H2O. Ekstrakty organiczne osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą kolumnowej chromatografii (eluowano układem 5% EtOAc/heksany do 30% EtOAc/heksany), uzyskując 261 mg (38%) produktu w postaci żółtego oleju.
1H NMR: (CDCl3, 3:2 mieszanina rotamerów) δ 1,41 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 2,25-2,29 (m, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,35-3,42 (m, 1H), 3,51-3,53 (m, 1H), 3,80-3,86 (m, 2H), 4,38-4,39 (m, 1H), 4,46-4,48 (m, 1H), 7,41-7,46 (m, 1H), 7,42-7,54 (m, 1H), 7,57-7,59 (m, 1H), 7,58 (d, J=4 Hz, 1H), 7,82-7,88 (m, 2H), 8,46 (d, J= 5 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,93), MS m/z 388 (M++1).
Etap 2:
Mieszaninę estru 1-tert-butyIowo-2-metylowego kwasu 4-(naftalen-1 -ylosulfanylo)pirolidyno-1 ,2-dikarboksylowego (0,38 g, 0,98 mmola) i 4N HCl (1,0 ml) mieszano w temperaturze 23°C przez 2 godziny. Rozpuszczalnik usunięto, pozostałość rozpuszczono w CH3CN (20 ml) i potraktowano kwasem (0,37 g, 2,16 mmola), TBTU (0,23 g, 0,98 mmola) oraz DIPEA (0,37 g, 2,16 mmola) i mieszano przez 12 godzin. Mieszaninę zatężono, pozostałość rozpuszczono w EtOAc i przemyto 1N HCl oraz
408
PL 226 561 B1 nasyconym NaHCO3, a następnie osuszono nad MgSO4 i zatężono. Pozostałość stosowano bez dalszego oczyszczania.
1H NMR (CDCI3, 1:1 mieszanina rotamerów) δ 0,99 (s, 9H), 1,02 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 1,46 (s, 9H), 2,2-2,25 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,82-3,86 (m, 1H), 3,89-3,92 (m, 2H), 4,26 (s, 1H), 4,28 (s, 1H), 4,70-4,75 (m, 1H), 7,40-7,48 (m, 1H), 7,54-7,55 (m, 1H), 7,59-7,62 (m, 1H), 7,72-7,74 (m, 1H), 7,86-7,89 (m, 2H), 8,48-8,50 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,59), MS m/z 523 (M+Na).
Etap 3:
Do mieszaniny estru metylowego kwasu 1-(2-tert-butoksykarbonyloamino-3,3-dimetylobutyrylo)-4-(naftalen-1-ylosulfanylo)pirolidyno-2-karboksylowego (przykład 451, etap 2) (0,49 g, 0,98 mmola), w THF/H2O (2:1) dodano hydrat LiOH (0,20 g, 4,9 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 12 godzin. Roztwór zatężono i przemyto EtOAc. Warstwę wodną zakwaszono stosując 1N HCl i ekstrahowano EtOAc. W pierwszym ekstrakcie EtOAc obserwowano obecność produktu. Pierwszy organiczny ekstrakt osuszono nad MgSO4 i zatężono do 328 mg (71%) brązowego ciała stałego.
1H NMR: (DMSO-d6) δ, 2:1 mieszanina rotamerów) δ 0,88 (s, 9H), 0,92 (s, 9H), 1,34 (s, 9H), 1,38 (s, 9H), 2,18-2,25 (m, 2H), 3,66-3,75 (m, 1H), 3,89-4,00 (m, 2H), 4,10-4,13 (m, 1H), 4,25-4,32 (m, 1H), 7,45-7,7,51 (m, 1H), 7,56-7,61 (m, 2H), 7,65-7,7,69 (m, 1H), 7,88-7,91 (m, 1H), 7,97 (d, J=4,8 Hz, 1H), 8,27-8,35 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,52), MS m/z 486 (M+1).
Etap 4
Do roztworu kwasu (przykład 451, etap 3) (0,32 g, 0,87 mmola) w CH3CN (10 ml) i DMF (2 ml) dodano diastereomeryczną mieszaninę chlorowodorku estru etylowego kwasu 1(R)-2(S) i 1-(S)-2(R) 1-amio-2-winylocyklopropanokarboksylowego (240 mg, 0,87 mmola), TBTU (201 mg, 0,87 mmola) oraz DIPEA (0,32 ml, 0,742 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 23°C przez 12 godzin. Mieszaninę zatężono i pozostałość podzielono pomiędzy EtOAc i wodę. Warstwę organiczną oddzielono, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Pozostałość poddano chromatografii stosując układ 30% EtOAc/heksany jako eluant, uzyskując 240 mg (38%) jasnożółtego ciała stałego.
1H NMR: (DMSO-d6) , mieszanina rotamerów i diasteromerów) δ 0,87 (s, 9H), 0,88 (s, 9H), 0,97-1,04 (m, 3H), 1,33 (s, 9H), 1,38 (s, 9H), 2,11-2,20 (m, 2H), 3,74-3,85 (m, 1H), 3,89-3,96 (m, 2H), 3,98-4,03 (m, 4H), 4,00-4,09 (m, 1H), 4,40-4,42 (m, 1H), 5,04-5,09 (m, 1H), 5,17-5,29 (m, 2H), 5,505,70 (m, 1H), 6,60-6,62 (m, 1H), 6,72-6,75 (m, 1H), 7,50-7,56 (m, 1H), 7,56-7,72 (m, 2H), 7,70-7,80 (m, 1H), 7,92-8,00 (m, 1H), 8,00-8,06 (m, 1H), 8,29-8,40 (m, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,79 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,59), MS m/z 623 (M+1).
Etap 5:
Kwas wytworzono według wcześniejszego opisu w przykładzie 451, etap 3, z zastosowaniem LiOH w THF/MeOH/H2O (4/2/1), z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 451, etap 4.
1H NMR (DMSO-d4) mieszanina rotamerów i diastereomerów) δ 0,90 (s, 9H), 1,17-1,23 (m, 2H), 1,32-1,37 (m, 9H), 2,10-2,12 (m, 1H), 2,20-2,31 (m, 2H), 3,97-4,05 (m, 2H), 4,10-4,12 (m, 1H), 4,324,40 (m, 1H), 4,55-4,61 (m, 1H), 4,80-4,98 (m, 2H), 5,03-5,08 (m, 1H), 5,10-5,20 (m, 1H), 5,75-5,90 (m, 1H), 6,55-6,70 (m, 1H), 7,42-7,57 (m, 1H), 7,60-7,64 (m, 2H), 7,70-7,72 (m, 1H), 7,80-7,97 (m, 1H), 7,96-7,99 (m, 1H), 8,20-8,50 (m, 2H);
LC-MS (czas retencji: 152), MS m/z 595 (M+1).
Etap 6:
Mieszanine kwasu (przykład 451, etap 5) δ 172 mg, 0,29 mmola), metanosulfonoamidu (110 mg, 1,16 mmola), EDAC (110 mg, 0,58 mmola) i DMAP (71 mg, 058 mmola) rozpuszczono w THF (10 ml) i mieszano przez 12 godzin. Dodano DBU (0,087 ml, 0,58 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 48 godzin. Rozpuszczalnik usunięto, pozostałość rozpuszczono w EtOAc, przemyto wodą i 1N HCl, osuszono nad MgSO4 oraz zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej chromatografii cienkowarstwowej, uzyskując 15 mg (8%) związku 451 w postaci brązowego ciała stałego.
1H NMR (DMSO-d6, mieszanina rotamerów i diastereomerów) δ 0,98 (s, 9H), 1,27-1,42 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,76-1,79 (m, 1H), 1,83-1,86 (m, 1H), 1,92-2,10 (m, 1H), 2,16-2,25 (m, 2H), 3,01-3,10 (m, 1H), 3,80-3,83 (m, 1H), 3,86-3,89 (m, 1H), 3,98-3,99 (m, 1H), 3,99-4,05 (m, 1H), 4,24-4,29 (m, 1H), 4,444,53 (m, 1H), 4,86 (s, 3H), 5,08-5,15 (m, 1H), 5,25-5,29 (m, 1H), 5,65-5,85 (m, 1H), 6,5-6,8 (m, 1H), 7,48
PL 226 561 B1
409 (t, J=7,7 Hz, 1H), 7,54 (t, J=7,1 Hz, 1H), 7,59 (t, J=7,1 Hz, 1H), 7,75-7,77 (m, 1H), 7,88-7,91 (m, 2H),
8,46 (d, J=8,25 Hz, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,52), Ms m/z 672 (M+1 mniejszościowy), m/z 693 (M+Na główny).
P r z y k ł a d 452: sposób wytwarzania związku 452
Etap 1:
Do rzadkiej zawiesiny NaH (76 mg, 1,90 mmola) w DMF (20 ml) dodano 2-tionaftol (0,29 g, 1,80 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 minut. Dodano roztwór tosylanu (przykład 451, etap 1) (0,61 g, 1,79 mmola) w DMF (2 ml) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 23°C przez 12 godzin. Mieszaninę zatężono, a następnie podzielono pomiędzy EtOAc/H2O. Warstwę organiczną przemyto nasyconym roztworem NaHCO3, osuszono (MgSO4) i zatężono. Pozostałość poddano chromatografii stosując układ 5% EtOAc/heksany, a następnie 30% EtOAc/heksany z uzyskaniem 261 mg (38%) produktu w postaci klarownego oleju.
1H NMR: (DMSO-d6) δ 1,32 (s, 9H), 2,29-2,35 (m, 2H),3,33-3,47 (m, 2H), 3,66 (s, 3H), 3,71-3,81 (m, 1H), 4,29-4,32 (s, 1H), 7,49-7,55 (m, 3H), 7,70-7,80 (m,1H), 7,81-7,97 (m, 3H);
LC-MS (czas retencji: 1,54), MS m/z 387 (M+1).
Etap 2 :
410
PL 226 561 B1
Mieszaninę estru 1-tert-butylowo-2-metylowego kwasu 4-(naftalen-2-ylosulfanylo)pirolidyno-1,2-dikarboksylowego (310 mg, 0,80 mmola) i 4N HCl w dioksanie (1,49 ml, 2,69 mmola) mieszano w temperaturze 23°C przez 2 godziny, a następnie zatężono. Pozostałość rozpuszczono w CH3CN (10 ml) i dodano N-Boc-t-butylglicynę (196 mg, 0,85 mmola), TBTU (0,27 g, 0,85 mmola) oraz DIPEA (0,32 ml, 1,85 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc. Następnie mieszaninę zatężono i pozostałość rozpuszczono w EtOAc, przemyto 1N HCl, nasyconym roztworem NaHCO3, osuszono i zatężono, uzyskując 300 mg (90%) produktu w postaci żółtego oleju.
1H NMR (metanol-d4) δ 0,99 (s, 9H), 1,44 (s, 9H), 2,20-2,35 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,92-4,08 (m, 2H), 4,26 (d, J=9,4 Hz, 1H), 4,57 (t, J=9,5 Hz, 1H), 6,46 (d, J=9,5 Hz, 1H), 7,48-7,60 (m, 3H), 7,837,90 (m, 3H), 8,02 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,98), MS m/z 523 (M+Na).
Etap 3:
Roztwór estru 1-tert-butylowo-2-metylowego kwasu 4-(naftalen-2-ylosulfanylo)pirolidyno-1 ,2-dikarboksylowego (0,48 g, 0,96 mmola) rozpuszczono MeOH (20 ml) i mieszano z LiOH (0,2 g, 4,8 mmola) przez 12 godzin. Roztwór zatężono, zakwaszono i ekstrahowano EtOAc. Organiczny ekstrakt osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując 418 mg (91%) żółtego ciała stałego.
1H NMR: (DMSO-d6) 1:2 mieszanina rotamerów) δ, 0,86, 0,93 (s, 9H) (1:2 mieszanina rotamerów), 1,35, 1,38 (s, 9H) δ 1:2 mieszanina rotamerów), 2,01-2,18, 2,25-2,35 (m, 2H), 3,25-3,40 (m, 2H), 3,70-3,80 (m, 1H), 4,00-4,20 (m, J=9,4 Hz, 2H), 4,30-4,40 (s, 1H), 5,61-5,70, 6,42-6,50 (m, 1H), (1:2 mieszanina rotamerów), 7,50-7,54 (m, 3H), 7,87-7,89 (m, 3H), 7,98 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,93), MS m/z 487 (M+1).
Etap 4:
(1R,2S/1S,2R) diastereomeryczna mieszanina P1.
Roztwór estru etylowego kwasu 1-tert-butoksykarbonyloamino-2-winylocyklopropanokarboksylowego (4,3 g, 17,8 mmola) w MeOH (50 ml) potraktowano LiOH (0,84 g, 20,0 mmola) oraz wodą (5 ml) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 12 godzin. Rozpuszczalnik usunięto, pozostałość zakwaszono i ekstrahowano EtOAc. Warstwy organiczne osuszono nad MgSO4, przesączono i zatężono, uzyskując 2,1 g kwasu (52%) w postaci żółtego oleju. Kwas (2,1 g, 9,25 mmola) rozpuszczono w THF, potraktowano CDI (7,25 g, 13,8 mmola) i ogrzewano w temperaturze wrzenia przez 3 godziny, a następnie ochłodzono do temperatury 23°C. Dodano metanosulfonoamid (1,76 g, 18,5 mmola), a następnie DBU (2,77 ml, 18,5 mmola) i mieszano w temperaturze 23°C przez 72 godziny. MieszaniPL 226 561 B1
411 nę zatężono, pozostałość zakwaszono do pH 4 (1N HCl) i ekstrahowano EtOAc. Ekstrakty organiczne osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując 1,99 g (71%) żółtego oleju, który zestalił się po odstaniu.
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,16-1,23 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 1,65-1,75 (m, 1H), 2,15-2,25 (m, 2H), 3,16 (s, 3H), 5,08 (d, J=9,9 Hz, 1H), 5,22 (d, J=17,1 Hz, 1H), 5,40-5,52 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,14), MS m/z 304 (M+1).
Etap 5:
Roztwór produktu według przykładu 452, etapu 4 w układzie dioksan/4N HCl (2 ml) mieszano przez 2 godziny, a następnie zatężono. Pozostałość rozpuszczono w CH3CN (5 ml), dodano do mieszaniny kwasu (przykład 452, etap 3) (120 mg, 0,25 mmola), TBTU (58 mg, 0,25 mmola) i DIPEA (0,06 ml, 0,35 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez 12 godzin. Rozpuszczalnik usunięto, pozostałość rozpuszczono w EtOAc i przemyto 1N HCl, nasyconym roztworem NaHCO3, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej TLC (Analtech 20 x 40 cm, 1000 μm SiO2), z uzyskaniem 128 mg (70%) związku 452 w postaci brązowego ciała stałego.
1H NMR (DMSO-d6) mieszanina diasteromerów) δ 0,97, 0,99 (s, 9H), 1,23-1,43 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,82-1,83 (m, 1H), 2,00-2,51 (m, 2H), 2,90-2,99 (m, 1H), 3,33 (s, 3H), 3,90-3,99 (m, 1H), 4,01-4,20 (m, 2H), 4,25-4,30 (m, 1H), 4,45-4,55 (m, 1H), 4,95-5,10 (m, 1H), 5,12-5,25 (m, 1H), 5,71-5,85 (m, 1H), 6,4-6,8 (br m, 1H), 7,46-7,53 (m, 3H), 7,80-7,86 (m, 3H), 7,98-7,99 (m, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,95), MS m/z 672 (M+1).
P r z y k ł a d 453: sposób wytwarzania związku 453.
Etap 1:
Mieszaninę związku według przykładu 452, etapu 3 (110 mg, 0,23 mmola) w DCM (20 ml), kwasu 3-chloronadbenzoesowego (121,6 mg, 0,57 mmola, 85% nadkwasu), KHPO4 (0,13 g, 0,94
412
PL 226 561 B1 mmola) i K2HPO4 (0,18 g, 1,05 mmola) mieszano w temperaturze 23°C przez 12 godzin. Roztwór rozcieńczono DCM, przemyto wodą, nasyconym roztworem NaHCO3, osuszono nad MgSO4 i zatężono, uzyskując 110 mg produktu (92%) w postaci klarownego oleju.
1H NMR (DMSO-d6) δ 0,91 (s, 9H), 1,48 (s, 9H), 2,23-2,28 (m, 1H), 2,65-2,80 (m, 1H), 3,88-3,90 (m, 1H), 4,12 (t, J=8,0 Hz, 1H), 4,20 (d, J=9,5 Hz, 1H), 4,27 (d, J=9,9 Hz, 1H), 6,76 (d, J=9,3 Hz, 1H), 7,70-7,80 (m, 2H), 7,88-7,95 (m, 1H), 8,11 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,17 (d, J=8,6 Hz, 1H), 8,26 (d, J=8,1 Hz, 1H), 8,71 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,72), MS m/z 519 (M+1).
Etap 2:
Mieszaninę produktu według przykładu 453, etapu 1 (110 mg, 0,212 mmola), aminy (przykład 452, etap 5a) (0,65 mg, 0,212 mmola), TBTU (48,5 mg, 0,21 mmola) oraz DIPEA (60,8 ml, 0,35 mmola) mieszano w temperaturze 23°C przez 12 godzin. Rozpuszczalnik usunięto, pozostałość rozpuszczono w EtOAc, przemyto 1N HCl, nasyconym roztworem NaHCO3, osuszono nad MgSO4 i zatężono. Pozostałość oczyszczono metodą preparatywnej TLC (eluowano układem 10% MeOH/CH2Cl2), z uzyskaniem 25 mg (17%) związku 453 w postaci białego ciała stałego.
1H NMR (DMSO-d6) mieszanina diastereomerów) δ 0,93, 0,96 (s, 9H), 1,38-1,45 (m, 2H), 1,53, 1,55 (m, 9H), 1,76-1,85 (m, 1H), 2,21-2,40 (m, 2H), 3,13-3,15 (m, 2H), 3,34 (s, 3H), 3,91-3,99 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 5,09-5,12 (m, 1H), 5,26-5,31 (m, 1H), 5,72-5,76 (m, 1H), 6,65-6,68 (m, 1H), 6,71-6,76 (m, 1H), 7,67-7,76 (m, 2H), 7,91-7,95 (m, 1H), 8,03 (d, J=7,8 Hz, 1H),
8,13 (d, J=8,5 Hz, 1H), 8,20 (d, J=7,6 Hz, 1H), 8,7 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,76), MS m/z 705 (M+1).
P r z y k ł a d 454: sposób wytwarzania związku 454.
Etap 1:
Do rzadkiej zawiesiny wodorku sodu (0,91 g, 22,7 mmola) w THF (50 ml) dodano N-Boc-trans-4(R)-hydroksy-L-prolinę (2,5 g, 10,8 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 23°C przez 1 godzinę. Dodano 2-chlorometylonaftalen (1,9 g, 10,8 mmola) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 12 godzin. Rozpuszczalnik usunięto, pozostałość wylano do wody i przemyto heksanami. Warstwę wodną zakwaszono (1N HCl) i ekstrahowano EtOAc. Warstwę EtOAc
PL 226 561 B1
413 oddzielono, osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując jasnożółtą pozostałość. Olej oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, stosując układ 1:1 EtOAc/heksany i dodano 1% kwas octowy, uzyskując
1,56 g (39%) pożądanego produktu w postaci gęstego oleju.
1
H NMR (DMSO-d6, 3:1 mieszanina rotamerów) δ 1,35, 1,37 (s, 9H, odpowiednio główny i mniejszościowy), 1,92-2,02, 2,15-2,20 (m, 2H, odpowiednio główny i mniejszościowy), 2,35-2,50 (m, 2H), 3,41-3,49 (m, 2H), 4,12-4,16, 4,20-4,21 (m, 2H), 4,65-4,68 (m, 2H), 7,46-7,52 (m, 3H), 7,74-7,91 (m, 4H), (Kwas OH nie zaobserwowano;
LC-MS (czas retencji: 1,44, YMC ODS-A C18 S7 3,0 x 50 mm, gradient 10% MeOH/H2O 0,1%TFA do 90% MeOH/H2O 0,1% TFA), MS m/z 394 (M++1+Na).
Etap 2;
Do roztworu mieszaniny chlorowodorku diastereoizomerów (1R,2S/1S,2R przy czym grupa karboksylowa występuje w konfiguracji syn względem grupy winylowej) estru tert-butylowego kwasu 2-(1-etoksykarbonylo-2-winylocyklopropylokarbamoilo)-4-(naftalen-2-ylometoksy)pirolidyno-1-karboksylowego (0,54 g, 1,3 mmola) w stosunku 1:1 [wytworzono przez mieszanie N-Boc-aminy z HCl (4N) w dioksanie przez 1 godzinę, a następnie usunięcie rozpuszczalnika pod zmniejszonym ciśnieniem] w CH3CN (50 ml) dodano Boc-4(R)-(2-metylonaftylo)prolinę (0,5 g, 1,3 mmola), TBTU (0,45 g, 1,4 mmola oraz DIPEA (0,78 ml, 4,5 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 12 godzin i zatężono. Pozostałość rozpuszczono w EtOAc/H2O i przemyto nasyconym roztworem NaHCO3, nasyconym roztworem NaCl, osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując produkt jako mieszaninę diastereomerów (0,6 g, 91%) w postaci gęstego żółtego oleju.
1H NMR (DMSO-d6) δ: 1,08-1,22 (m, 7H), 1,23-1,39 (m, 9H), 2,02-2,18 (m, 1H), 2,25-2,35 (m, 1H), 3,33-3,53 (m, 2H), 3,90-4,14 (m, 4H), 4,45-4,70 (m, 2H), 5,07-5,11 (m, 1H), 5,24-5,30 (m, 1H), 5,58-5,63 (m, 1H), 7,43-7,51 (m, 4H), 7,84-7,96 (m, 3H); MS m/z 531 (M++1+Na).
Etap 3:
414
PL 226 561 B1
Roztwór produktu uzyskanego według przykładu 454, etapu 2 (600 mg, 1,18 mmola) mieszano z HCl (4N, 3 ml, 11,8 mmola) w dioksanie przez 1 godzinę, a następnie rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość rozpuszczono w CH3CN (10 ml), potraktowano Boc-L-t-Bu-Gly (0,42 g, 1,38 mmola), TBTU (0,27 g, 1,18 mmola), a następnie DIPEA (0,71 ml, 4,1 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 12 godzin i zatężono. Pozostałość rozpuszczono w układzie EtOAc/H2O i przemyto 1N HCl, nasyconym roztworem NaHCO3, nasyconym roztworem NaCl, osuszono (MgSO4) i zatężono, uzyskując gęsty żółty olej. Produkt oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, eluując gradientem 5% EtOAc/heksany 10% EtOAc/heksany oraz 30% EtOAc/heksany uzyskując produkt jako mieszaninę diastereomerów i rotamerów w postaci gęstego oleju (0,243 g, 33%).
1H NMR (DMSO-d6) δ 0,83-1,00 (m, 10H), 1,34 (s, 9H), 1,58-1,59, 1,65-1,67 (m, 2H), 1,95-1,99, 2,04-2,06, 2,10-2,19, 2,24-2,56 (m, 2H), 3,97-4,04 (m, 3H), 4,08-4,17 (m, 3H), 4,29-4,31 (m, 2H), 4,59-4,72 (m, 3H), 5,06-5,10 (m, 1H), 5,18-5,30 (m, 1H), 5,60-5,63 (m, 1H), 6,59-6,65, 6,70-6,74 (m, 1H), 7,43-7,51 (m, 4H), 7,84-7,96 (m, 3H), 8,66, 8,76 (s, 1H);
MS m//z 531 (M++1+Na).
Etap 4:
ΌΗ
Do zawiesiny produktu według przykładu 454, etapu 3 (240 mg, 0,39 ramola) w THF (15 ml) i H2O (2 ml) dodano LiOH (82 mg, 1,95 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 12 godzin, a następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem do warstwy wodnej. Uzyskaną wodną pozostałość zakwaszono do pH 3,0 dodając 1,0N wodny roztwór HCl i ekstrahowano EtOAc (2 x 80 ml). Połączone ekstrakty organiczne osuszono (MgSO4), przesączono i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując produkt w postaci brązowego ciała stałego (200 mg, 0,33 mmola, 85%):
1H NMR (DMSO-d6) δ: 0,86, 0,94 (s, 9H odpowiednio mniejszościowy i główny), 1,23-1,42 (m, 2H), 1,34 (s, 9H), 1,8-2,1 (m, 2H), 2,18-2,30 (m, 1H), 3,59-3,73 (m, 3H), 4,0-4,09 (m, 1H), 4,18-4,34 (m, 3H), 4,56-4,62 (m, 1H), 4,66-4,67 (m, 1H), 4,82-4,92 (m, 1H), 5,0-5,20 (m, 1H), 5,91-6,08 (m, 1H), 6,5-6,7 (m, 1H), 7,45-7,59 (m, 3H), 7,82-7,97 (m, 4H), 8,2-8,3, 8,3-8,4 (s, 1H);
LC-MS (czas retencji: 1,50), MS m/z 593 (M++1).
Etap 5:
Do roztworu produktu według przykładu 454, etapu 4 (190 mg, 0,32 mmola) i EDAC (122 mg, 0,64 mmola) oraz 4-DMAP (78 mg, 0,64 mmola) w THF (20 ml) dodano dostępny w handlu metanosulfonoamid (122 mg, 1,28 mmola). Uzyskany roztwór mieszano przez 2 dni, a następnie dodano
DBU (95 μ|, 0,64 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 24 godziny, po czym zatężono. Pozostałość podzielono pomiędzy EtOAc (80 ml) oraz wodę i przemyto 1N HCl, wodnym roztworem NaHCO3 (2 x 30 ml), osuszono (MgSO4) i oczyszczono metodą preparatywnej HPLC (65-90% MeOH woda/0,1% TFA), uzyskując 56 mg mieszaniny produktu i substancji, w której usunięto grupę Boc. Substancję oczyszczono następnie metodą preparatywnej TLC (eluowano układem 10% MeOH/CH2Cl2 stosując płytki 20 x 40 cm z firmy Analtech), z uzyskaniem związku 454 w postaci brązowego ciała stałego (12 mg, 6%).
1H NMR (MeOD-d4) 50/50 mieszanina diastereomerów P1) δ 0,88-0,99 (m, 2H), 1,01, 1,02 (s, 9H odpowiednio diastereomer mniejszościowy i główny), 1,23-1,42 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,72-1,79 (m, 1H), 1,86-1,88 (m, 1H), 2,00-2,10 (m, 2H), 2,10-2,23 (m, 1H), 2,3-2,5 (m, 1H), 3,12, 3,17 (s, 3H), 3,72-3,79 (m, 1H), 4,26-4,41 (m, 3H), 4,72 (d, J=8,2 Hz, 1H), 4,76 (d, J=8,2 Hz, 1H), 5,09-5,12 (t, J=9,3 Hz, 1H), 5,28 (dd, J=3,5, 17,6 Hz, 1H), 5,7-5,8 (m, 1H), 6,55-6,80 (m, 1H), 7,45-7,47 (m, 3H), 7,79-7,83 (m, 4H);
LC-MS (czas retencji: 1,48), MS m/z 670 (M++1).
PL 226 561 B1
415
P r z y k ł a d 470: sposób wytwarzania związku 470
Etap 1:
Do roztworu dostępnej w handlu N-Boc-(4S)-(cis)-hydroksyproliny-OMe (200 mg, 0,82 mmola), trifenylofosfiny (320 mg, 1,22 mmola) i 1 -naftolu (176 mg, 1,22 mmola) w 2,5 ml tetrahydrofuranu, w czasie 10 minut, dodawano kroplami roztwór diazodikarboksylanu dietylu (190 μ!, 1,22 mmola) w 1,0 ml THF. Po wymieszaniu przez 5,5 dnia, mieszaninę reakcyjną zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy żółty olej poddano chromatografii metodą preparatywnej TLC z zastosowaniem płytki 20 x 40 cm (Analtech SiO2) eluując układem 6-1 heksany-octan etylu z uzyskaniem pożądanego produktu w postaci jasnożółtego oleju (150 mg, 33%).
1H NMR (CDCI3, 500 MHz) δ 1,44 (s, 9H), 2,33 (1H, m), 2,72 (1H, m), 3,77 i 3,38 (2s, 3H, rotamery), 3,88 (dd, 1H, J=4,3, 12,4 Hz), 3,97 (bd, 1H), 4,53 i 4,62 (2t, 1H, J=7,8 Hz, rotamery), 5,10 (bd, 1H), 6,76 (t, 1H, J=9,5 Hz), 7,37 (m, 1H), 7,46 (m, 3H), 7,80 (d, 1H, J=7,7 Hz), 8,18 (m, 1H);
LC-MS A (czas retencji: 1,86; MS m/z 394 (M+Na)+
416
PL 226 561 B1
Etap 2:
Do mieszanego roztworu Boc-(4R)-naftalo-1-okso-Pro-OEt (150 mg, 0,40 mmola) w 1,5 ml THF i 0,5 ml wody dodano wodorotlenek litu (10 mg). Roztwór mieszano przez 21 godzin w temperaturze pokojowej i następnie rozcieńczono 0,5N NaHCO3. Zasadowy roztwór ekstrahowano octanem etylu i następnie warstwę wodną zakwaszono do pH 2, przez wkroplenie stężonego roztworu HCl. Zakwaszoną warstwę następnie ekstrahowano ponownie octanem etylu. Drugą warstwę octanu etylu osuszono siarczanem magnezu, przesączono i następnie zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując Boc-(4R)-naftalo-1-okso- Pro-OH w postaci jasnoróżowych kryształów (147 mg, 100%).
1H NMR (CDCis, 500 MHz) δ 1,47 i 1,48 (2s, 9H, rotamery), 2,40 i 2,52 (2,m, 1H), 2,68 i 2,78 (2m, 1H), 3,78-4,07 (m, 2H), 4,57 i 4,69 (2t, 1H, J=7,6 i 8,0 Hz, rotamery), 5,12 (bd, 1H), 6,77 (dd, 1H, J=7,6, 21,2 Hz), 7,37 (m, 1H), 7,46 (m, 3H), 7,81 (t, J=5,8 Hz), 8,19 (m, 1H);
LC-MS A (czas retencji: 1,79; MS m/z 358 (M+H)+
Etap 3:
Do roztworu Boc-((4R)-naftaio-1-okso)-Pro-OH (147 mg, 0,41 mmoia) i racemicznego chiorowodorku estru etyiowego kwasu (1R/2S)/(1S/2R)-1-amino-2-winyiocykiopropanokarboksyiowego (79 mg, 0,41 mmola) w 2,8 mi chlorkiem metylenu dodano DIPEA (250 μΐ, 1,44 mmola) i TBTU (158 mg, 0,49 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w atmosferze azotu przez 20 godzin i następnie rozcieńczono 40 ml chlorku metylenu. Warstwę organiczną przemyto wodą, 1N NaHCO3, 1N HCl, wodą i solanką. Roztwór następnie osuszono siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Po oczyszczeniu metodą preparatywnej TLC uzyskano dwa oddzielne diastereomery, diastereomer A o większej wartości współczynnika Rf, (P2 [Boc(4R)-(naftalo-1-okso)prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)OEt, 78 mg, 38%) i diastereomer B o niższej wartości współczynnika Rf, (P2[Boc(4R)-(naftalo-1 -okso)prolino]-P1(1S,2R-winylo-Acca)-OEt, 91 mg, 45%) w postaci białawych części stałych.
Diastereomer A: P2[Boc(4R)-(naftalo-1-okso)prolino]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-OEt:
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 1,24 (t, 3H), 1,43 (s, 9H), 1,52 (m, 1H), 1,84 (m, 1H), 2,02 (m, 1H),
2,14 (m, 1H), 2,81 (m, 1H), 3,88 (m, 2H), 4,11 (q, 1H, J=7,15), 4,19 (m, 1H), 4,54 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,31 (dd, 1H, J=17, 0,8 Hz), 5,77 (m, 1H), 6,83 (m, 1H), 7,36 (t, 1H, J=7,8 Hz), 7,46 (m, 3H), 7,78 (d, 1H, J=7,6 Hz), 8,14 (d, 1H, J=8,15 Hz);
LC-MS B (czas retencji: 1,85; MS m/z 495 (M+H)+
Diastereomer B, przykład 10B: P2[Boc(4R)-(naftalo-1-okso)prolino]-P1(1S,2R-winylo-Acca)-OEt:
1H NMR (d1-CHCl3, 500 MHz) δ 1,24 (t, 3H), 1,42 (s, 9H), 1,85 (m, 1H), 2,15 (q, 1H, J=8,9Hz), 2,40 (m, 1H), 2,78 (m, 1H), 3,78 (m, 1H), 4,12 (m, 2H), 4,52 (m, 1H), 5,15 (m, 1H), 5,31 (m, 1H), 5,79 (m, 1H), 6,80 (m, 1H), 7,35 (t, 1H, J=7,6 Hz), 7,46 (m, 3H), 7,78 (d, 1H, J=7,6 Hz), 8,14 (d, 1H, J=8,10 Hz).
LC-MS B (czas retencji: 1,85 ; MS m/z 495 (M+H)+)
PL 226 561 B1
417
Etap 4 :
Do P2 [Boc(4R)-(naftalo-1 -okso)prolino]-P1 (1 R,2S-winylo-Acca)-OEt (A, większa wartość współczynnika Rf) (78 mg, 0,16 mmola) dodano 4N HCl w dioksanie (2,0 ml) i roztwór mieszano przez 30 minut. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskano chlorowodorek P2[(4R) -(naftal-4-okso)prolino)]-P1(1R,2S-winylo-Acca)OEt w postaci żółtego oleju, który bez dalszego oczyszczania stosowano bezpośrednio w następnym etapie. Do roztworu Boc-L-tBuGly (73 mg, 0,32 mmola) i chlorowodorku P2[(4R)-(naftal-4-okso)prolina)]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-OEt (0,16 mmola) w 11 ml acetonitrylu dodano DIPEA (140 μ^ 0,79 mmola) oraz HATU (132 mg, 0,35 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w atmosferze azotu przez 17 godzin i następnie rozcieńczono 100 ml octanu etylu. Warstwę organiczną przemyto wodą, 1N NaHCO3, 1N HCl, wodą i solanką. Roztwór następnie osuszono siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując tytułowy związek w postaci jasnożółtej oleistej warstwy (92 mg, 96%).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 1,06 (s, 9H), 1,22 (t, 3H, J=7,1), 1,38 (s, 9H), 1,41 (m, 1H), 1,82 (m, 1H), 2,13 (m, 1H), 2,42 (m, 1H), 2,79 (m, 1H), 3,92-4,2 (m, 1H), 4,12 (q, 2H, J=6,6 Hz), 4,38 (bt, 1H), 5,12 (d, 1H, J=10,3 Hz), 5,2-5,39 (m, 3H), 5,75 (m, 1H), 6,82 (d, J=1H, J=7,5 Hz), 7,34-7,46 (m, 4H), 7,59 (bs, 1H, NH), 7,76 (d, 1H, J=7,9 Hz), 8,13 (d, 1H, J=8,3 Hz);
LC-MS C (czas retencji: 2,82; MS m/z 608 (M+H)+.
Etap 5:
Do roztworu produktu według przykładu 470, etapu 4 (92 mg, 0,15 mmola) w 750 ml tetrahydrofuranu i 250 ml wody dodano wodorotlenek litu (4 mg). Uzyskany roztwór mieszano przez 28,5 godziny, poddano typowej obróbce i następnie poddano takim samym warunkom z tym wyjątkiem, że dodano wodorotlenek litu w podwójnej ilości (8 mg). Po upływie 24 godzin mieszaninę reakcyjną rozcieńczono octanem etylu i przemyto wodą. Warstwę organiczną osuszono siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Uzyskaną półstałą substa ncję oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, eluując układem 3-1 heksany-octan etylu z uzyskaniem Boc-NHP3(t-BuGly)-P2[(Boc(4R)-(naftalo-1-okso)-prolino)]-P1(1R,2S-winylo-Acca)-OH w postaci klarownej substancji półstałej (30 mg, 34%).
1H NMR (d4-MeOH, 500 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,24 (t, 1H, J=3,9 Hz), 1,32 (s, 9H), 1,66 (m, 1H), 2,07 (m, 1H), 2,40 (m, 1H), 2,71 (m, 1H), 4,04-4,07 (m, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,55 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 5,18-5,29 (m, 2H), 5,90 (m, 1H), 6,54 (m, 1H), 6,92 (m, 1H), 4,26 (m, 4H), 7,77 (m, 1H), 8,15 (m, 1H);
LC-MS C (czas retencji: 2,65; MS m/z 580 (M+H)+
Etap 6:
Do roztworu Boc-NH-P3(t-BuGly)-P2[(Boc(4R)-(naftalo-1-okso)prolino)]-P1(1R,2S-winyloAcca)-OH (przykład 470, etap 5) (65 mg, 0,11 mmola) w 3,7 ml tetrahydrofuranu dodano 1,1'-karbonylodiimidazol (22 mg, 0,135 mmola). Uzyskaną mieszaninę ogrzewano w temperaturze refluksu przez 30 minut i następnie ochłodzono do temperatury pokojowej. Dodano metanosulfonoamid (27 mg, 0,28 mmola) i DBU (34 l, 0,224 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 dni, po czym dodano jeszcze DBU (10 l) i metanosulfonoamid (9 mg). Po upływie 24 godzin, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 50 ml octanu etylu i przemyto 50 ml 0,25N HCl oraz 50 ml solanki. Roztwór osuszono siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surową substancję oczyszczono metodą preparatywnej TLC (układ 3-2 octan etylu-heksany), z uzyskaniem związku 470 (21 mg, 28%) w postaci warstewki białego ciała stałego.
1H NMR (d4-MeOH, 500 MHz) δ 1,04 (s, 9H), 1,36 (s, 9H), 1,88 (t, 1H), 2,18 (m, 1H), 2,31 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 3,11 (bs, 3H), 4,076 (m, 1H), 4,30 (bd, 1H), 4,41 (bd, 1H), 4,52 (apparent t, 1H), 5,07 (m, 1H), 5,24-5,30 (m, 2H), 5,80 (m, 1H), 6,92 (d, 1H, J=7,45 Hz), 7,35-7,46 (m, 4H), 7,76 (d, 1H, J=8,1 Hz), 8,13 (d, 1H, J=8,3 Hz);
LC-MS C (czas retencji: 2,57; MS m/z 657 (M+H)+
418
PL 226 561 B1
P r z y k ł a d 471: sposób wytwarzania związku 471.
Związek 471
Schemat 2
Etap 1:
Do P2[Boc(4R)-(naftalo-1-okso)prolino]-P1(1S,2R-winylo-Acca)-OEt (przykład 470, etap 3, niższa wartość współczynnika Rf) (91 mg, 0,18 mmola) dodano 4N HCl w dioksanie (2,0 ml) i roztwór mieszano przez 30 minut. Po zatężeniu pod zmniejszonym ciśnieniem uzyskano chlorowodorek P2[(4R)-(naftalo-1-okso)prolino)]-P1(1S,2R-winylo-Acca)-OEt w postaci żółtego oleju, który bez dalszego oczyszczania stosowano bezpośrednio w następnym etapie.
Do roztworu N-Boc-L-tert-leucyny-OH lub Boc-L-tBuGly (85 mg, 0,37 mmola) i chlorowodorku P2[(4R)-(naftalo-1-okso)prolino)]-P1(1S,2R-winylo-Acca)-OEt (produkt otrzymano w powyższej reakcji) (0,18 mmola) w 13 ml acetonitrylu dodano DEPEA (160 μ!, 0,92 mmola) oraz HATU (154 mg, 0,41
PL 226 561 B1
419 mmola). Uzyskany roztwór mieszano w atmosferze azotu przez 17 godzin i następnie rozcieńczono
100 ml octanu etylu. Warstwę organiczną przemyto wodą, 1N NaHCO3, 1N HCl, wodą i solanką. Roztwór następnie osuszono siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując tytułowy związek w postaci przezroczystej warstwy (53 mg, 47%).
1H NMR (d1-CHCl3, 500 MHz) δ 1,02 (s, 9H), 1,22 (t, 3H, J=7,0 Hz), 1,39 (s, 9H), 1,47 (m, 1H), 1,88 (dd, 1H, J=8,0, 5,5 Hz), 2,07 (m, 1H), 2,42 (m, 1H), 2,80 (dt, J=13,8, 6,0 Hz, 1H), 3,96 (m, 1H),
4.14 (m, 2H), 4,34 (m, 2H), 4,77 (t, 1H, J=7,2 Hz), 5,09-5,33 (m, 3H), 5,72 (m, 1H), 6,82 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,34-7,50 (m, 4H), 7,77 (d, 1H, J=8,0 Hz), 8,15 (d, 1H, J=8,25 Hz);
LC-MS C (czas retencji: 2,81; MS m/z 608 (M+H)+
Etap 2:
Produkt ten wytworzono postępując według procedury opisanej w przykładzie 470, etap 5 (5 mg, 10%), z tym wyjątkiem, że stosowano produkt uzyskany według przykładu 471, etapu 1.
1H NMR (d4-MeOH, 500 MHz) δ 0,99 (s, 9H), 1,28 (m, 1H), 1,37 (s, 9H), 1,60 (m, 1H), 2,06 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 2,66 (m, 1H), 3,91 (m, 1H), 4,33 (m, 2H), 4,61 (bt, 1H), 4,97 (d, 1H, J=11,0 Hz), 5,19 (m 2H), 6,09 (m, 1H), 6,88 (d, 1H, J=7,1 Hz), 7,35-7,46 (m, 4H), 7,78 (d, 1H, J=8,2 Hz), 8,12 (d, 1H, J=8,3 Hz);
LC-MS C (czas retencji: 2,60; MS m/z 580 (M+H)+
Etap 3:
Do roztworu BocN-P3(L-tBuGly)-P2[(Boc(4R)-(naftalo-1-okso))prolino)]-P1(1S,2R-winylo-Acca)-COOH (38 mg, 0,066 mmola) (przykład 471, etap 2) w 2,2 ml tetrahydrofuranu dodano 1,1'-karbonylodiimidazol (13 mg, 0, 079 mmola). Uzyskaną mieszaninę ogrzewano w temperaturze refluksu przez 30 minut i następnie ochłodzono do temperatury pokojowej. Dodano metanosulfonoamid (16 mg, 0,16 mmola) oraz DBU (20 μ|, 0,13 mmola). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 dni, po czym dodano jeszcze DBU (10 μΐ) i metanosulfonoamid (9 mg). Po upływie 24 godzin, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 50 ml octanu etylu i przemyto 50 ml 0,25N HCl i 50 ml solanki. Roztwór osuszono siarczanem sodu i zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem. Surowy produkt oczyszczono metodą preparatywnej TLC stosując jedną płytkę 20 x 40 cm z firmy Analtech (eluent 3-2 octan etylu-heksany), z uzyskaniem związku 471 (25 mg, 58%) w postaci warstewki białego ciała stałego.
1H NMR (d4-MeOH, 500 MHz) δ 1,03 (s, 9H), 1,34 (s, 9H), 1,80 (m, 1H), 2,18 (m, 1H), 2,31 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 3,09 (bs, 3H), 4,04 (m, 1H), 4,20-4,44 (m, 2H), 4,51 (apparent t, 1H), 5,08 (m, 1H), 5,25-5,31 (m, 2H), 5,77 (m, 1H), 6,93 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,36-7,45 (m,4H), 7,77 (d, 1H, J=8,0 Hz),
8.15 m, 1H);
LC-MS C (czas retencji: 2,57 ; MS m/z 657 (M+H)+
Sekcja L:
P r z y k ł a d 472: Badania biologiczne
Test kompleksu rekombinowanych proteaz NS3/4A HCV z zastosowaniem peptydu FRET
Celem tego testu in vitro było określenie hamowania kompleksów proteaz NS3 wirusa HCV, pochodzących od opisanych poniżej szczepów BMS, H77C lub J416S, przez związki według wynalazku. Test umożliwia ocenę jak skutecznie związki według wynalazku hamowałyby aktywność proteolityczną HCV.
Osocze pacjenta zainfekowanego wirusem HCV otrzymano od Dr. T. Wright'a, San Francisco Hospital. Przy pomocy inżynierii genetycznej z fragmentów DNA otrzymanych przy zastosowaniu PCR z odwrotną transkrypcją (RT-PCR) osoczowego RNA (kwas rybonukleinowy) i stosując startery wybrane na podstawie homologii pomiędzy innymi szczepami o genotypie 1a skonstruowano matrycę genomu HCV (szczep BMS) o pełnej długości cDNA (komplementarny kwas deoksyrybonukleinowy). Opierając się na oznaczeniu sekwencji całego genomu, genotyp 1a przypisano do izolatu HCV zgodnie z klasyfikacją Simmonds'a i in. (Patrz P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BC Dow, EA Follet, PL Yap i H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493-1503 (1993)). Wykazano, że sekwencja aminokwasowa niestrukturalnego regionu NS2-5B, jest >97% identyczna z genotypem 1a HCV (H77C) i 87% identyczna z genotypem 1b (J4L6S). Klony zakaźne, H77C (genotyp 1a) i J4L6S (genotyp 1b) otrzymano od R. Purcell'a (NIH) a sekwencje opublikowano w Genbanku (AAB67036, patrz Yanagi, M. Purcell, R.H., Emerson,S.U. i Bukh, J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94 (16), 8738-8743 (1997); AF054247, patrz Yanagi, M., St Claire, M., Shapiro, M., Emerson. S.U., Purcell, R.H. i BukhJ, Virology 244 (1), 161-172. (1998)).
Szczepy BMS, H77C i J4L6S użyto do uzyskania kompleksów rekombinowanych proteaz NS3/4A. DNA kodujące kompleks rekombinowanych proteaz NS3/4A HCV w przypadku tych szcze420
PL 226 561 B1 pów (aminokwasy 1027 do 1711) poddano zabiegom opisanym przez P. Gallinari'ego i in. (patrz Gallinari P, Paolini C-Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38 ( 17): 5620-32, (1999)). W skrócie, do 3'-końca regionu kodującego NS4A dołączono rozpuszczalny ogon zbudowany z trzech lizyn. Cysteinę na pozycji P1 miejsca rozerwania NS4A-NS4B (aminokwas 1711) zmieniono na glicynę w celu uniknięcia rozerwania proteolitycznego znacznika lizynowego. Ponadto, w celu zapobiegnięcia autolitycznego rozerwania w domenie NS3 helikazy stosując technikę PCR w pozycji aminokwasu 1454 wprowadzono mutację zamieniającą cysteinę na serynę. Fragment wariantu DNA sklonowano na bakteryjny wektor ekspresyjny pET21b (Novagen) a kompleks NS3/4A eksprymowano w szczepie BL21 (DE3) Escherichia coli (Invitrogen) zgodnie z procedurą opisaną przez P. Gallinari'ego i in. (patrz Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R. J Virol. 72 (8): 6758-69 (1998)) przy zastosowaniu modyfikacji. W skrócie, ekspresję NS3/4A uzyskano stosując 0,5 mM izopropylo-3-D-1-tiogalaktopiranozyd (IPTG) przez 22 godziny w temperaturze 20°C. W wyniku typowej fermentacji (10 l) uzyskano w przybliżeniu 80 g mokrej pasty komórkowej. Komórki zawieszono ponownie w buforze do lizy (10 ml/g) składającym się z 25 mM N-(2-hydroksyetyl)piperazyna-N'-(kwas 2-etanosulfonowy) (HEPES), pH 7,5, 20% glicerolu, 500 mM chlorku sodu (NaCl), 0,5% Triton-X100, 1 ąg/ml lizozymu, 5 mM chlorku magnezu (MgCl2), 1 ąg/ml DNazyl, 5 mM β-merkaptoetanolu (3ME), inhibitora proteazy - kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA) w wolnej postaci (Roche), shomogenizowano i inkubowano przez 20 minut w temperaturze 4°C. Homogenat sonikowano i sklarowano w ultrawirówce przy 235000 g przez 1 godzinę w temperaturze 4°C. Do sklarowanej cieczy dodano imidazol od uzyskania stężenia końcowego 15 mM a pH uregulowano do wartości 8,0. Ekstrakt nieoczyszczonego białka wprowadzono na kolumnę wypełnioną niklem - kwasem nitrylotrioctowym (Ni-NTA) zrównoważoną wstępnie buforem B (25 mM HEPES, pH 8,0, 20% glicerol, 500 mM NaCl, 0,5% Triton-X100, 15 mM imidazol, 5 mM βΜΕ). Próbkę wprowadzono przy szybkości przepływu 1 ml/minutę. Kolumnę przemyto buforem C w ilości równej 15 objętościom kolumny (bufor taki sam jak bufor B lecz bez 0,2% Triton-X100). Białko eluowano buforem D w ilości równej 5 objętościom kolumny (bufor taki sam jak bufor C lecz bez 200 mM imidazolu).
Frakcje zawierające kompleks proteaz NS3/4A połączono i wprowadzono na kolumnę odsalającą Superdex-S200 zrównoważoną wstępnie buforem D (25 mM HEPES, pH 7,5, 20% glicerol, 300 mM NaCl, 0,2% Triton-X100, 10 mM βΜΕ). Próbkę wprowadzono przy szybkości przepływu 1 ml/minutę. Frakcje zawierające kompleks proteaz NS3/4A połączono i zatężono do około 0,5 mg/ml. Przeprowadzając analizy SDS-PAGE i spektrometrię masową czystość kompleksów proteaz NS3/4A, pochodzących od szczepów BMS, H77C i J4L6S, oceniono na powyżej 90%.
Enzym przechowywano w temperaturze -80°C, stopniono na lodzie i rozcieńczono buforem testowym przed użyciem. Substratem użytym do testu z zastosowaniem proteaz NS3/4A był RET S1 (Rezonance Energy Transfer Depsipeptyd Substrate; AnaSpec, Inc. nr kat. 22991) (peptyd FRET), opisany przez Taliani'ego i in. w Anal. Biochem. 240(2):60-67 (1996). Sekwencja tego peptydu zbliżona do naturalnego miejsca rozerwania NS4A/NS4B z tym wyjątkiem, że w miejscu rozerwania występuje raczej wiązanie estrowe niż wiązanie amidowe. Substrat peptydowy inkubowano z jednym spośród trzech zrekombinowanych kompleksów NS3/4A, bez lub ze związkiem według wynalazku a powstawanie fluorescencyjnego produktu reakcji śledzono w czasie rzeczywistym stosując urządzenie Cytofluor Series 4000.
Zastosowano odczynniki takie jak następuje: HEPES i glicerol (Ultrapure) otrzymane z firmy GEBCO-BRL. Sulfotlenek dimetylu (DMSO) otrzymano z firmy Sigma, β-merkaptoetanol otrzymano z firmy Bio Rad.
Bufor testowy: 50 mM HEPES, pH 7,5; 0,15 M NaCl; 0,1% Triton; 15% glicerol; 10 mM βME. Substrat: stężenie końcowe 2 ąM (z 2 mM roztworu podstawowego w DMSO przechowywanego w temperaturze -20°C). HCV NS3/4A typ 1a (1b), stężenie końcowe 2-3 nM (z 5 ąM roztworu podstawowego w 25 mM HEPES, pH 7,5, 20% glicerol, 300 mM NaCl, 0,2% Triton-X100, 10 mM βME).
Test przeprowadzono w 96-studzienkowej polistyrenowej czarnej płytce firmy Falcon. Każda studzienka zawierała 25 ąl kompleksu proteaz NS3/4A w buforze testowym, 50 ąl związku według wynalazku w 10% DMSO/buforze testowym i 25 ąl substratu w buforze testowym. Na takiej samej płytce testowej przygotowano także kontrolę (nie zawierającą związku). Kompleks enzymów mieszano z roztworem związku lub roztworem kontrolnym na 1 minutę przed rozpoczęciem reakcji enzymatycznej przez dodanie substratu. Płytkę testową odczytano bezpośrednio stosując urządzenie Cytofluor Series 4000 (Perspective Biosystems). Urządzenie ustawiono na odczyt emisji 340 nm i wzbudzenia 490 nm w temperaturze 25°C. Reakcje na ogół śledzono przez około 15 minut.
PL 226 561 B1
421
Procent hamowania obliczono z następującego równania:
100-^Finh^Fstęż) x 100] w którym δF oznacza zmianę we fluorescencji w liniowym zakresie krzywej. W przypadku danych zależności hamowania od stężenia zastosowano nieliniowe dopasowanie krzywych, a 50% stężenie skuteczne (IC50) obliczono posługując się oprogramowaniem Excel X1-fit stosując równanie, y=A+((B-A)/(1+((C/x)AD))).
Stwierdzono, że wszystkie badane związki wykazują IC50 10 μΜ lub mniejsze. Dalej, stwierdzono, że związki według wynalazku badane przeciwko więcej niż jednemu typowi kompleksu NS3/4A, mają podobne właściwości hamujące chociaż związki stale wykazywały większą moc przeciwko szczepom 1b w porównaniu ze szczepami 1a.
Testy specyficzności
Testy specyficzności przeprowadzono w celu wykazania selektywności związków według wynalazku w przypadku hamowania proteazy NS3/4A HCV w porównaniu z innymi proteazami serynowymi lub cysteinowymi.
Specyficzności związków według wynalazku określono wobec wielu różnych proteaz serynowych: ludzkiej elastazy leukocytarnej (HLE), świńskiej elastazy trzustkowej (PPE) i ludzkiej chymotrypsyny trzustkowej oraz jednej proteazy cysteinowej: ludzkiej wątrobowej katepsyny B. We wszystkich przypadkach posłużono się protokołem z zastosowaniem 96-studzienkowych płytek stosując kolorymetryczny substrat p-nitroanilinę (pNA) specyficzny dla każdego enzymu, tak jak to opisano uprzednio (międzynarodowe zgłoszenie patentowe nr 00/09543) z pewnymi modyfikacjami w przypadku testów dla proteazy serynowej. Wszystkie enzymy zakupiono od firmy Sigma natomiast substraty od firmy Bachem.
W przypadku każdego testu przeprowadzano 2-godzinną inkubację wstępną enzymu z inhibitorem w temperaturze pokojowej po czym dodawano substrat i hydrolizowano do uzyskania ~30% konwersji oszacowanej przy zastosowaniu czytnika do mikropłytek Spectramax Pro. Stężenia związków zmieniały się od 100 do 0,4 μΜ zależnie od ich mocy.
Warunki końcowe dla każdego testu były takie jak następuje:
mM chlorowodorku Tris(hydroksymetylo)aminometanu (Tris-HCl) pH 8, 0,5 M siarczanu sodu (Na2SO4), 50 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 0,01% Tween-20 wraz z:
133 μΜ succ-AAA-pNA i 20 nM HNE lub 8 nM PPE; 133 μΜ succ-AAV-pNA i 15 nM RLE; 100 μΜ succ-AAPF-pNA i 250 pM chymotrypsyny.
100 mM NaHPO4 (wodorofosforan sodu) pH 6, 0,1 mM EDTA, 3% DMSO, 1 mM TCEP (chlorowodorek Tris(2-karboksyetylo)fosfiny), 0,01% Tween-20, 30 μM Z-FR-pNA i 5 nM katepsyny B (roztwór podstawowy enzymu aktywowanego przed użyciem w buforze zawierającym 20 mM TCEP).
Procent hamowania obliczono stosując wzór:
[1-((UVinh-UVślepej próby)/(UVkontroli-UVślepej próby))] x 100
Do danych zależności hamowania od stężenia zastosowano nieliniowe dopasowanie krzywych, a 50% stężenie skuteczne (IC50) obliczono posługując się oprogramowaniem Excel Xl-fit.
Test komórkowy z zastosowaniem replikonu HCV
Cały system komórkowy replikonu HCV ustalono w sposób opisany: Lohmann V, Komer F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424): 110-3 (1999). System ten umożliwił autorom wynalazku ocenę wpływu proteaz HCV według wynalazku na replikację RNA HCV. W skrócie, stosując sekwencję szczepu 1B HCV opisaną w publikacji Lohmann'a (numer dostępu: AJ238799), uzyskano cDNA HCV kodujące 5' wewnętrzne miejsce wejścia rybosomu (1RES), gen oporności na neomycynę, EMCV (wirus zapalenia mózgu i mięśnia sercowego) IRES i niestrukturalne białka HCV, NS3-NS5B oraz nie ulegający translacji region 3' (NTR). Transkryptami cDNA transfekowano in vitro ludzką linię komórek wątrobiaka, Huh7. Stosując selekcyjny znacznik, neomycynę (G418) wyselekcjonowano komórki konstytutywnie eksprymujące replikon HCV. Uzyskane linie komórkowe charakteryzowano pod kątem produkcji nici RNA o dodatniej i negatywnej polarności oraz produkcji białka w czasie.
Komórki Huh7, konstytutywnie eksprymujące replikon HCV, hodowano w podłożu Eagle'a w modyfikacji Dulbecco (DMEM) zawierającym 10% płodową surowicę cielęcą (FCS) i 1 mg/ml G418 (Gibco-BRL). Komórki wysiano na noc przed przeprowadzeniem testu (1,5 x 104 komórek/studzienkę) w 96-studzienkowych jałowych płytkach do hodowli tkankowej. Kontrole zawierające i nie zawierające związku przygotowano w DMEM zawierającym 4% FCS, 1:100 penicylinę/streptomycynę, 1:100 L-glutaminę i 5% DMSO w płytce do rozcieńczeń (stężenie końcowe DMSO w teście 0,5%). Mieszani422
PL 226 561 B1 ny związek/DMSO dodano do komórek i przez 4 dni w temperaturze 37°C prowadzono inkubację. Po 4 dniach, płytki przepłukano starannie solanką buforowaną fosforanem (PBS) (3 razy 150 μ^. Komórki lizowano stosując 25 μl odczynnika testowego do lizy zawierającego peptyd FRET (RET S1, jak opisano w teście enzymatycznym in vitro). Odczynnik testowy do lizy przygotowano z 5X odczynnikiem do lizy hodowli komórkowej zawierającym lucyferazę (Promega nr E153A) rozcieńczonym do 1X wodą destylowaną, dodano NaCl do końcowej wartości 150 mM, peptyd FRET rozcieńczono do wartości końcowej 10 μΜ wychodząc z roztworu podstawowego 2 mM w 100% DMSO. Dalej, płytkę umieszczono w urządzeniu Cytofluor 4000 ustawionym na wzbudzenie 340 nm/emisja 490 nm, tryb automatyczny na 21 cykli, a płytkę odczytano w trybie kinetycznym. Oznaczenia EC50 przeprowadzono tak jak opisano dla oznaczeń IC50.
Jako test wtórny, oznaczenia EC50 z testu replikonu przy zastosowaniu FRET potwierdzono w ilościowym teście RNA. Komórki zlizowano stosując zestaw Rneasy (Qiagen). Oczyszczone całkowite RNA znormalizowano stosując RyboGreen (Jones LJ, Yue ST, Cheung CY, Singer VL, Anal. Chem., 265(2): 368-74 (1998)), a względne oznaczenie ilościowe ekspresji RNA HCV oszacowano posługując się procedurą Taqman'a (Kolykhalov AA, Mihalik K, Feinstone SM, Rice CM, Journal of Virology 74, 2046-2051 (2000)) oraz zestawem Platinum Quantitative RT-PCR Thermoscript One-Step (Invitrogen nr kat. 11731-015). W skrócie, przygotowano RNA w objętości 5 μl (< 1 ng) i dodano do 20 μl mieszaniny Ready-Mix zawierającej następujące składniki: 1,25X mieszanina reakcyjna Thermoscript (zawierająca siarczan magnezu i 5'-trifosforany 2-deoksynukleozydów (dNTP)), 3 mM dNTP, 200 nM starter forward (sekwencja: 5'-gggagagccatagtggtctgc-3') 600 nM starter reverse (5'-cccaaatctccaggcattga-3'), 100 nM sonda (5'-6-FAM-cggaattgccaggacgaccgg-BHQ-1-3') (FAM: aminoheksyloamidyn fluoresceiny; BHQ: Black Hole Quencher), 1 μM barwnik odniesienia Rox (Invitrogen nr kat. 12223-012) i mieszanina polimerazy Thermoscript Plus Platinum Taq. Wszystkie startery zaprojektowano z zastosowaniem oprogramowania ABI Prism 7700 i otrzymano z firmy Biosearch Technologies, Novato, CA. Próbki zawierające znane stężenia transkryptu RNA HCV zastosowano w teście jako standardy. Posługując się następującą procedurą cykli (50°C, 30 minut; 95°C, 5 minut; 40 cykli w temperaturze 95°C, 15 sekund, 60°C, 1 minuta), ekspresję RNA HCV określono ilościowo w sposób opisany w podręczniku Perkin Elmer stosując detektor sekwencji ABI Prism 7700 Sequence Detector.
Przykłady biologiczne
Reprezentatywne związki według wynalazku oszacowano posługując się komórkowym testem replikonu HCV i/lub kilkoma przedstawionymi testami specyficzności. Przykładowo stwierdzono, że w teście enzymatycznym NS3/4A szczepu BMS związek 34 wykazuje IC50 w wielkości 23 nanomoli (nM). Podobne wartości mocy otrzymano przy zastosowaniu opublikowanych szczepów H77C (IC50 3 nM) i J4L6S (IC50 2,9 nM). Wartość EC50 w teście replikonu wynosiła 166 nM.
W testach specyficzności stwierdzono, że taki sam związek wykazuje aktywność taką jak następuje: HLE > 100 μM; PPE > 200 μM; chymotrypsyna > 200 μM; katepsyna B > 200 μM. Wyniki te wskazują, że te rodziny związków są bardzo specyficzne względem proteazy NS3 a wiele ze związków z tej rodziny hamuje replikację replikonu HCV.
Stwierdzono, że badane związki według wynalazku wykazują aktywności mieszczące się w następujących zakresach:
Zakresy aktywności IC50 (szczep BMS NS3/4A): A wynosi 10-100 mikromoli ^M); B wynosi 1-10 μM; C wynosi 0,1-1 μM; D wynosi <0,1 μM
Zakresy aktywności EC50 (dla badanych związków): A wynosi 10-100 μM; B wynosi 1-10 μM; C wynosi 0,1-1 μM; D wynosi < 0,1 μM
Należy zwrócić uwagę, że wzory związków można znaleźć posługując się numerem przykładu patentu oraz numerem związku patentu przedstawionymi w tablicy.
Zgodnie z wynalazkiem, związki wykazują korzystnie aktywność biologiczną (EC50) 10 μM lub mniejszą, korzystniej 1 μΜ lub mniejszą, a najkorzystniej 100 nM lub mniejszą.
T a b l i c a 1 Aktywność biologiczna
Zakres IC50 Zakres EC50 Nr przykładu wg patentu Nr związku wg patentu
1 2 3 4
D D 1 1
D C 2 2
PL 226 561 B1
423 cd. tablicy 1
1 2 3 4
D D 3 3
D D 4 4
D D 5 5
C C 6 6
D C 7 7
C B 8 8
D C 9 9
D D 10 10
D D 11 11
D D 12 12
D D 13 13
D D 14 14
C B 15 15
D C 16 16
D D 17 17
D D 18 18
D D 19 19
D C 20 20
D D 21 21
D C 22 22
D D 23 23
D D 24 24
D D 25 25
D D 26 26
D D 27 27
D D 28 28
D D 29 29
D D 30 30
D D 31 31
D D 32 32
D D 33 33
D C 34 34
D D 35 35
D D 36 36
D D 37 37
D D 38 38
D D 39 39
D C 40 40
424
PL 226 561 B1 cd. tablicy 1
1 2 3 4
D D 41 41
D D 42 42
C B 45 45
C B 46 46
D C 47 47
B 48 48
B 49 49
C B 50 50
B 52 52
C B 53 53
D C 55 55
D D 56 56
D C 57 57
D D 58 58
D C 59 59
D B 60 60
C B 61 61
D D 62 62
D B 63 63
D D 64 64
D C 65 65
D C 66 66
D D 67 67
D D 68 68
D D 69 69
D D 70 70
D D 71 71
D C 72 72
D C 73 73
D D 74 74
D D 75 75
D D 76 76
D C 77 77
D B 78 78
D C 79 79
D B 80 80
D C 81 81
PL 226 561 B1
425 cd. tablicy 1
1 2 3 4
D C 82 82
D C 83 83
D C 84 84
C B 85 85
B A 86 86
B A 87 87
B A 88 88
D D 89 89
D C 91 91
D D 92 92
C C 93 93
D D 94 94
D C 95 95
D D 96 96
D D 97 97
B 99 99
C B 100 100
D D 101 101
D D 102 102
D D 103 103
D D 104 104
D D 105 105
D D 106 106
D C 107 107
D D 108 108
D D 109 109
D C 110 110
D C 120 120
D C 121 121
D C 122 122
D C 123 123
C B 124 124
D D 125 125
D C 126 126
D C 127 127
D C 128 128
C C 129 129
D C 130 130
426
PL 226 561 B1 cd. tablicy 1
1 2 3 4
C B 131 131
D B 132 132
C B 133 133
D C 134 134
D C 135 135
D C 136 136
D D 137 137
D D 138 138
D C 139 139
D B 140 140
D D 141 141
D D 142 142
D D 143 143
D C 144 144
D C 145 145
D D 146 146
D B 147 147
D D 148 148
D D 149 149
D D 150 150
D D 151 152
D D 152 152
D D 153 153
D C 154 154
D D 155 155
D C 180 180
D C 181 181
D C 182 182
D D 183 183
D D 185 185
D D 186 186
D C 187 187
D C 188 188
D C 189 189
D C 190 190
D C 191 191
D D 192 192
PL 226 561 B1
427 cd. tablicy 1
1 2 3 4
D C 193 193
D C 194 194
D D 195 195
D B 196 196
C A 197 197
D C 198 198
D C 199 199
D D 200 200
D D 201 201
D B 202 202
D C 204 204
D D 206 206
D D 207 207
D C 209 209
D D 210 210
D D 211 211
D D 212 212
D D 213 213
D D 215 215
D D 219 219
D D 220 220
D D 223 223
D C 224 224
D C 225 225
D D 227 227
D D 229 229
C C 230 230
B 231 231
D D 232 232
C C 233 233
D C 235 235
D C 237 237
D C 238 238
D D 239 239
D D 240 240
D D 241 241
D B 242 242
C A 243 243
428
PL 226 561 B1 cd. tablicy 1
1 2 3 4
D A 244 244
C 245 245
D D 250 250
D D 251 251
D D 252 252
D D 253 253
D D 254 254
D C 255 255
A 256 256
D D 257 257
D D 258 258
D D 259 259
D C 260 260
D D 261 261
D D 262 262
C C 263 263
C B 264 264
D D 265 265
D D 266 266
D D 267 267
D D 268 268
D C 269 269
D C 270 270
D C 271 271
D D 272 272
D D 273 273
D C 274 274
D D 275 275
D D 276 276
D D 277 277
D D 278 278
D D 279 279
D D 280 280
D D 281 281
D C 282 282
D C 283 283
C A 284 284
PL 226 561 B1
429 cd. tablicy 1
1 2 3 4
D D 285 285
D D 286 286
D C 287 287
D B 288 288
D C 289 289
D D 290 290
D D 291 291
D C 292 292
D C 293 293
D C 294 294
C B 295 295
D C 296 296
C B 297 297
D D 298 298
D C 299 299
D C 300 300
D D 320 320
D C 321 321
D D 322 322
D C 323 323
D C 324 324
D D 325 325
D D 326 326
D D 327 327
D D 328 328
D D 329 329
D D 330 330
D 331 331
C C 334 334
D B 335 335
C B 336 336
C B 337 337
D B 338 338
D B 339 339
D A 340 340
B 341 341
B 342 342
430
PL 226 561 B1 cd. tablicy 1
1 2 3 4
B 343 343
C 344 344
B A 345 345
B 346 346
C A 347 347
A 348 348
B 349 349
C A 350 350
B 351 351
A 352 352
A 353 353
B 354 354
C A 355 355
C B 356 356
D C 357 357
C B 370 370
D D 371 371
D D 372 372
D D 373 373
D C 374 374
D D 375 375
D D 376 376
D C 377 377
D D 378 378
D D 379 379
D C 380 380
D C 381 381
D C 382 382
D D 383 383
D D 384 384
D D 385 385
C B 386 386
D D 410 410
D C 411 411
D D 412 412
D D 413 413
PL 226 561 B1
431 cd. tablicy 1
1 2 3 4
D D 414 414
D D 415 415
D C 420 420
D C 421 421
D B 422 422
C 423 423
D C 424 424
C B 425 425
D C 426 426
D C 427 427
D C 428 428
D D 429 429
D C 430 430
D C 431 431
D C 432 432
C B 433 433
D C 434 434
D C 435 435
D C 436 436
D C 437 437
D C 438 438
D C 450 450
B 451 451
B 452 452
453 453
C B 454 454
C 470 470
B 471 471
Sekcja M:
T a b l i c a 2
Następujce związki, które można wytworzyć stosując opisane tu metody, a specyficznie w sekcjach A do K w przykładach, a dokładniej w sekcjach B, E, F i G. Ponadto powinno być oczywiście, że każda z grup B, R3, R2 i R1 pokazanych poniżej, może być zastąpiona przez dowolną grupę przedstawioną przykładowo w sekcjach A do K i w innych miejscach tego opisu lub wskazanych we wzorze I. Np., grupe R3 w Tablicy 2 pokazano jako grupę t-butylową, lecz fachowcy w dziedzinie rozpoznają, że w każdym poniżej cytowanym przypadku grupa ta może być zastąpiona przez grupę izopropylową lub C1-6alkil podstawiony przez alkoksy. Ponadto grupa B przedstawiona poniżej może być zastąpiona grupą tert-butylomocznikową, dla każdego poniżej cytowanego przypadku.
432
PL 226 561 B1
Ozna- cze- nie B R3 X R' *2 Stereo- chemia C(l,2)- cyklopro- panu Ri
A Λ > 0 A. JL. 'p pp CK >ζ> (IR,2S) iz
B -Λ j 0 OMe fi >o (IR,2S) iz
C 0 Me Cl X- J >o> (IR,2S) iz
D 0 kuA-N (IR,2S) iz
E o 0 N^=\ .'•'eO, λ, „fik /z μ γ iZ (IR,2S) iz
PL 226 561 B1
433
434
PL 226 561 B1
0. -οΛ 0 ΐΗ ΪΛ X> (1R,2S) xv
R -°Λ 0 KeO OH S^\ 0<- (IR,2S) tz
y. ''ϊΐ I1’ .-Xy’
S A 0 Γ ί'Λ (1R,2S) tz
o y>N
T Λ 0 ye OH N^\ (IR,2S) tz
j ^eO. zx γ^Α/
U ρ< 0 ł-iO. /x Ν'ϊ^Χ o -NS (IR,23) \z
j y. XJ
V Λ j 0 McC ~ n (IR,23) tz
aj
w οΛ j 0 MeO. ,π y%zM JL^n x>.. (1R,2S) tz
X p< 0 MeO, ^rN >ζ^ (IR,23) tz
GT
Y Λ > 0 MeO^ N-s?\ X> (1R,2S) *v
Q
z Λ j 0 i—° u >ζ> (IR, 2.S) \v
Xr'h
PL 226 561 B1

Claims (30)

1. Podstawiona pochodna pirolidyny o wzorze w którym:
a) R1 oznacza C1-4alkil lub C3-4cykloalkil;
b) m ma wartość 2;
c) n ma wartość 1;
d) R2 oznacza etyl lub winyl;
e) R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C1-4alkoksykarbonyl, C1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, karboksymetyl, C3-6cykloalkiloC1-4alkil;
f) Y oznacza atom wodoru lub metyl;
PL 226 561 B1
437
g) B oznacza atom wodoru, grupę o wzorze R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
h) R4 oznacza (i) C1-8alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil lub C4-8alkiloC3-6cykloalklil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową; (iii) fenyl lub fenyloC1-4alkil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową lub atom fluorowca; (iv) Het wybrany z grupy obejmującej tetrahydrofuran, pirazynę lub pierścień fenylowy skondensowany z grupą -O-CH2CH2-O-; (v) bicyklo[1.1.1]pentan;
i) R5 oznacza atom wodoru; C1-2alkil lub metoksyl;
j) X oznacza atom tlenu, siarki, grupę SO2, OCH2 lub NH;
k) R' oznacza Het lub grupę fenylową lub naftylową ewentualnie podstawiony przez Ra;
l) Ra oznacza C1-4alkil, cyklopropyl, C1-4alkoksyl -CF3, fluorowcometyl, grupę cyjanową, atom fluorowca, C1-4tioalkil, hydroksyl, grupę di(C1-4)alkiloamidową, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl wybrany z grupy obejmującej morfolinę, pirydynę, tiofen, furan, pirazynę, tiazol, oksazol, imidazol lub triazol;
przy czym Het oznacza 5- lub 7-czlonową heterocykliczną grupę monocykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu lub siarki albo 9- lub 10członową heterocykliczną grupę bicykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu, azotu i siarki; z ograniczeniem, że Xa-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze lub jej farmaceutycznie dopuszczalna sól.
2. Związek według zastrz. 1, w którym R1 oznacza C3-4cykloalkil.
3. Związek według zastrz. 1, w którym R2 oznacza grupę etylową lub winylową.
4. Związek według zastrz. 3, w którym R2 oznacza grupę winylową.
5. Związek według zastrz. 1, w którym, R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksyl, C1-alkoksykarbonyl, fenyloC1-4alkil.
6. Związek według zastrz. 5, w którym R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez C1-4alkoksyl.
7. Związek według zastrz. 1, w którym Y oznacza atom wodoru.
8. Związek według zastrz. 1, w którym B oznacza atom wodoru, R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-.
9. Związek według zastrz. 8, w którym B oznacza R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-.
10. Związek według zastrz. 9, w którym B oznacza R4O(C=O)- i R4 oznacza C1-6alkil.
11. Związek według zastrz. 1, w którym R4 oznacza (i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil, lub C4-8alkilocykloalkil; lub (iii) C6 lub C9-aryloalkil, każdy ewentualnie podstawiony przez metyl lub atom fluorowca.
12. Związek według zastrz. 11, w którym R4 oznacza (i) C1-10alkil ewentualnie podstawiony przez 1-3 atomy fluorowca lub metoksyl; albo (ii) C4-5cykloalkil lub C3-6cykloalkiloC1-4alkil.
13. Związek według zastrz. 1, w którym R5 oznacza atom wodoru lub C1-2alkil.
14. Związek według zastrz. 13, w którym R5 oznacza atom wodoru.
15. Związek według zastrz. 1, w którym X oznacza atom tlenu lub NH.
16. Związek według zastrz. 1, w którym, R' oznacza Het; lub fenyl lub naftyl ewentualnie podstawiony przez Ra.
438
PL 226 561 B1
17. Związek według zastrz. 16, w którym R' oznacza Het.
18. Związek według zastrz. 1, w którym heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu i ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu.
19. Związek według zastrz. 18, w którym heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup takich jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
20. Związek według zastrz. 1, w którym Ra oznacza C1-4alkil, C3cykloalkil, C1-4alkoksyl, fluorowcoetyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
21. Związek według zastrz. 1, będący związkiem o wzorze
a) R1 oznacza C3-4cykloalkil;
b) R2 oznacza etyl lub winyl;
c) R3 oznacza C1-4alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, C1-4alkoksyl, karboksyl, hydroksyl, fenyloC1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil, C1-4alkoksykarbonyl, C1-4alkoksykarbonyloC1-4alkil,
C3-6cykloalkiIoC1-4alkil;
d) Y oznacza atom H;
e) B oznacza atom wodoru, R4-(C=O)-, R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
f) R4 oznacza (i) C1-8alkil ewentualnie podstawiony przez fenyl, karboksyl, 1-3 atomy fluorowca, metoksyl; (ii) C4-5cykloalkil lub C4-8alkilocykloalklil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową; (iii) fenyl lub fenyloC1-4alkil, każdy ewentualnie podstawiony przez grupę metylową lub atom fluorowca; (iv) Het wybrany z grupy obejmującej tetrahydrofuran, pirazynę lub pierścień fenylowy skondensowany grupą o wzorze -O-CH2CH2-O-; (v) bicyklo[1.1.1]pentan;
g) R5 oznacza atom wodoru lub etyl lub metoksyl;
h) X oznacza atom tlenu lub NH;
i) R' oznacza Het; lub fenyl lub naftyl ewentualnie podstawiony przez Ra; oraz
j) Ra oznacza C1-4alkil, cyklopropyl, C1-4alkoksyl, CF3, fluorowcometyl, grupę cyjanową, atom fluorowca, C1-4tioalkll, hydroksyl, grupę di(C1-4)alkiloamidową, fenyl lub 5-6 członowy monocykliczny heterocykl wybrany z grupy obejmującej morfolinę, pirydynę, tiofen, furan, pirazynę, tiazol, oksazol, imidazol lub triazol;
przy czym Het oznacza 5- lub 7-członową heterocykliczną grupę monocykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu i siarki; albo 9- lub 10-członową heterocykliczną grupę bicykliczną zawierającą 1-3 heteroatomów wybranych spośród atomu tlenu azotu i siarki; z ograniczeniem, że Xa-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze
PL 226 561 B1
439 lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
22. Związek według zastrz. 21, w którym R' oznacza bicykliczny heterocykl.
23. Związek według zastrz. 22, w którym heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu i ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu.
24. Związek według zastrz. 22, w którym heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub naftyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
25. Związek według zastrz. 21, w którym R' oznacza bicykliczny heterocykl zawierający 1 atom azotu i podstawiony przez metoksyl i co najmniej jedną z grup takich jak fenyl i 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
26. Związek według zastrz. 21, w którym R' oznacza monocykliczny heterocykl.
27. Związek według zastrz. 26, w którym heterocykl zawiera 1 lub 2 atomy azotu i ewentualnie atom siarki lub atom tlenu w pierścieniu.
28. Związek według zastrz. 26, w którym heterocykl jest podstawiony przez co najmniej jedną z grup takich jak C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub naftyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
29. Związek według zastrz. 21, w którym R' oznacza monocykliczny heterocykl zawierający 1 lub 2 atomy azotu i podstawiony przez metoksyl i co najmniej jedną z grup takich jak C6aryl i 5-6 członowy monocykliczny heterocykl.
30. Związek według zastrz. 1, bedący związkiem o wzorze w którym:
a) R1 oznacza C3-4cykloalkil;
b) R2 oznacza winyl;
c) R3 oznacza C1-4alkil;
d) Y oznacza atom wodoru;
e) B oznacza R4O(C=O)- lub R4-N(R5)-C(=O)-;
f) R4 oznacza C1-10alkil;
g) R5 oznacza atom wodoru;
h) R' oznacza bicykliczny heterocykl ewentualnie podstawiony przez Ra; oraz
440
PL 226 561 B1
i) Ra oznacza C1-4alkil, C1-4alkoksyl, atom fluorowca, fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl; z ograniczeniem, że O-R' ma wyżej określone znaczenie z wyjątkiem grupy o wzorze lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól.
Związek według zastrz. 30, w którym R1 oznacza cyklopropyl lub cyklobutyl.
Związek według zastrz. 30, w którym R2 oznacza winyl.
Związek według zastrz. 30, w którym R3 oznacza t-butyl.
Związek według zastrz. 30, w którym, R4 oznacza t-butyl.
Związek według zastrz. 30, w którym R' oznacza chinolinę lub izochinolinę ewentualnie podstawiona przez Ra.
Związek według zastrz. 30, w którym R1 oznacza cyklopropyl, R2 oznacza winyl, R3 oznacza t-butyl, R4 oznacza t-butyl oraz R' oznacza izochinolinę podstawioną przez Ra.
Związek według zastrz. 36, w którym Ra oznacza C1-4alkoksyl.
Związek według zastrz. 37, w którym Ra ponadto obejmuje co najmniej jedną z grup takich jak fenyl lub 5-6-członowy monocykliczny heterocykl.
Związek jak określono w zastrz. 1 stosowany do leczenia wirusowego zapalenia wątroby typu C u pacjenta lub hamowania proteazy NS3 wirusa HCV.
Kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalny nośnik i substancję czynną, znamienna tym, że zawiera jako substancję czynną związek jak określono w zastrz. 1 lub jego farmaceutycznie dopuszczalną sól.
Kompozycja farmaceutyczna jak określono w zastrz. 40 stosowana do leczenia wirusowego zapalenia wątroby typu C u pacjenta.
PL373411A 2002-05-20 2003-05-20 Pochodna pirolidyny, kompozycja farmaceutyczna zawierająca ją oraz ich zastosowania PL226561B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US38205502P 2002-05-20 2002-05-20
US60/382,055 2002-05-20
PCT/US2003/015755 WO2003099274A1 (en) 2002-05-20 2003-05-20 Hepatitis c virus inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL373411A1 PL373411A1 (pl) 2005-08-22
PL226561B1 true PL226561B1 (pl) 2017-08-31

Family

ID=29584353

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL373411A PL226561B1 (pl) 2002-05-20 2003-05-20 Pochodna pirolidyny, kompozycja farmaceutyczna zawierająca ją oraz ich zastosowania

Country Status (34)

Country Link
US (9) US6995174B2 (pl)
EP (2) EP2340830A3 (pl)
JP (1) JP4312710B2 (pl)
KR (2) KR20100093140A (pl)
CN (3) CN1974596B (pl)
AR (3) AR040080A1 (pl)
AT (1) ATE506104T1 (pl)
AU (1) AU2003241510B2 (pl)
BR (1) BR0311132A (pl)
CA (1) CA2486308C (pl)
CO (1) CO5640083A2 (pl)
CY (1) CY1112108T1 (pl)
DE (1) DE60336807D1 (pl)
DK (1) DK1505963T3 (pl)
ES (1) ES2363131T3 (pl)
GE (1) GEP20063938B (pl)
HK (1) HK1070287A1 (pl)
HR (1) HRP20041085B1 (pl)
IL (1) IL164987A (pl)
IS (1) IS7530A (pl)
MX (1) MXPA04011440A (pl)
MY (1) MY140680A (pl)
NO (1) NO332427B1 (pl)
NZ (1) NZ536539A (pl)
PE (1) PE20040517A1 (pl)
PL (1) PL226561B1 (pl)
PT (1) PT1505963E (pl)
RS (1) RS52407B (pl)
RU (3) RU2298001C2 (pl)
SI (1) SI1505963T1 (pl)
TW (1) TWI306452B (pl)
UA (1) UA80973C2 (pl)
WO (1) WO2003099274A1 (pl)
ZA (1) ZA200409162B (pl)

Families Citing this family (279)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY140680A (en) * 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
US20060199773A1 (en) * 2002-05-20 2006-09-07 Sausker Justin B Crystalline forms of (1R,2S)-N-[(1,1-dimethylethoxy)carbonyl]-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-[(6-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy]-L-prolyl-1-amino-N-(cyclopropylsulfonyl)-2-ethenyl-cyclopropanecarboxamide, monopotassium salt
EP1601685A1 (en) * 2003-03-05 2005-12-07 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibiting compounds
DE602004029866D1 (de) * 2003-03-05 2010-12-16 Boehringer Ingelheim Pharma Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c
ATE422895T1 (de) * 2003-04-16 2009-03-15 Bristol Myers Squibb Co Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus
US7176208B2 (en) 2003-04-18 2007-02-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
PT1654261E (pt) 2003-05-21 2008-01-18 Boehringer Ingelheim Int Compostos inibidores da hepatite c
US7273851B2 (en) 2003-06-05 2007-09-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tri-peptide hepatitis C serine protease inhibitors
US7491794B2 (en) * 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7309708B2 (en) 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7135462B2 (en) * 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2549851C (en) 2004-01-21 2012-09-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
AR048401A1 (es) 2004-01-30 2006-04-26 Medivir Ab Inhibidores de la serina-proteasa ns3 del vhc
SE0400199D0 (sv) * 2004-01-30 2004-01-30 Medivir Ab HCV Protease inhbitors
US7582770B2 (en) 2004-02-20 2009-09-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
RU2006136084A (ru) * 2004-03-15 2008-04-27 БЕРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ИНТЕРНАЦИОНАЛЬ ГмбХ (DE) Способ получения микроциклических соединений
BRPI0509467A (pt) * 2004-03-30 2007-09-11 Intermune Inc compostos macrocìclicos como inibidores de replicação viral
JP5156374B2 (ja) 2004-05-25 2013-03-06 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 非環式ｈｃｖプロテアーゼインヒビターの調製方法
CA2556669C (en) * 2004-06-28 2012-05-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
CN101022803B (zh) 2004-07-09 2011-11-23 药物合成技术公司 治疗化合物和治疗
AR050174A1 (es) 2004-07-16 2006-10-04 Gilead Sciences Inc Derivados de fosfonatos con actividad antiviral. composiciones farmaceuticas
UY29016A1 (es) 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
EP1771454B1 (en) * 2004-07-20 2011-06-15 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibitor peptide analogs
US7550559B2 (en) * 2004-08-27 2009-06-23 Schering Corporation Acylsulfonamide compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
ES2442678T3 (es) 2004-08-28 2014-02-12 Astrazeneca Ab Derivados de pirimidín sulfonamidas como moduladores del receptor de quimioquina
US7846915B2 (en) 2004-10-20 2010-12-07 Resverlogix Corporation Stilbenes and chalcones for the prevention and treatment of cardiovascular diseases
US7323447B2 (en) 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7402596B2 (en) 2005-03-24 2008-07-22 Renovis, Inc. Bicycloheteroaryl compounds as P2X7 modulators and uses thereof
US7879797B2 (en) 2005-05-02 2011-02-01 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US7592336B2 (en) * 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
TWI389908B (zh) 2005-07-14 2013-03-21 Gilead Sciences Inc 抗病毒化合物類
EP1910378B1 (en) * 2005-07-20 2012-06-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibitor peptide analogs
TWI387603B (zh) 2005-07-20 2013-03-01 Merck Sharp & Dohme Ｈｃｖ ｎｓ３蛋白酶抑制劑
JP5249028B2 (ja) 2005-07-25 2013-07-31 インターミューン・インコーポレーテッド Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規大環状阻害剤
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
PE20070343A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
TWI375670B (en) 2005-07-29 2012-11-01 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
ATE496042T1 (de) 2005-07-29 2011-02-15 Tibotec Pharm Ltd Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
AU2006275514B2 (en) 2005-07-29 2012-04-05 Resverlogix Corp. Pharmaceutical compositions for the prevention and treatment of complex diseases and their delivery by insertable medical devices
KR20080036598A (ko) 2005-08-01 2008-04-28 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드 Ｈｃｖ ｎｓ３ 프로테아제 억제제로서의 마크로사이클릭펩티드
EP1915378A4 (en) 2005-08-12 2009-07-22 Boehringer Ingelheim Int VIRUS POLYMERASE INHIBITORS
DE602006019323D1 (de) 2005-10-11 2011-02-10 Intermune Inc Verbindungen und verfahren zur inhibierung der replikation des hepatitis-c-virus
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7816348B2 (en) 2006-02-03 2010-10-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
TWI464148B (zh) 2006-03-16 2014-12-11 Evotec Us Inc 作為ｐ２ｘ7調節劑之雙環雜芳基化合物與其用途
ES2543840T3 (es) * 2006-04-11 2015-08-24 Novartis Ag Inhibidores espirocíclicos del VHC/VIH y sus usos
GB0609492D0 (en) 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
US7728148B2 (en) * 2006-06-06 2010-06-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US20080187516A1 (en) * 2006-06-06 2008-08-07 Ying Sun Acyclic oximyl hepatitis c protease inhibitors
GB0612423D0 (en) 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
UY30437A1 (es) * 2006-06-26 2008-01-31 Enanta Pharm Inc Quinoxalinil macroceclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c
KR20090024834A (ko) * 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
WO2008008776A2 (en) 2006-07-11 2008-01-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EA017448B1 (ru) 2006-07-13 2012-12-28 Ачиллион Фармасьютикалз, Инк. 4-амино-4-оксобутаноиловые пептиды как ингибиторы вирусной репликации
US7635683B2 (en) * 2006-08-04 2009-12-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors
US20090035267A1 (en) * 2007-07-31 2009-02-05 Moore Joel D Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors
US20090098085A1 (en) * 2006-08-11 2009-04-16 Ying Sun Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
US7687459B2 (en) * 2006-08-11 2010-03-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors
US20080038225A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Ying Sun Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
RU2009109355A (ru) 2006-08-17 2010-09-27 БЕРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ИНТЕРНАЦИОНАЛЬ ГмбХ (DE) Ингибиторы вырусной полимеразы
US8138164B2 (en) 2006-10-24 2012-03-20 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
WO2008051514A2 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
AU2007309546A1 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. HCV NS3 protease inhibitors
CN101568346B (zh) 2006-10-27 2015-11-25 默沙东公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
CA2667031C (en) * 2006-10-27 2013-01-22 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
US20080107623A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of Hepatitis C Virus
US20080107625A1 (en) * 2006-11-01 2008-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of Hepatitis C Virus
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
US20080108632A1 (en) * 2006-11-02 2008-05-08 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US7772180B2 (en) 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2008070358A2 (en) * 2006-11-16 2008-06-12 Phenomix Corporation N-cyclopropyl-hydroxyproline-based tripeptidic hepatitis c serine protease inhibitors containing an isoindole, pyrrolopyridine, pyrrolopyrimidine or pyrrolopyrazine heterocycle in the side chain
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7888464B2 (en) * 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US9828597B2 (en) 2006-11-22 2017-11-28 Toyota Motor Engineering & Manufacturing North America, Inc. Biofunctional materials
GB0625345D0 (en) 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
AU2007335962B2 (en) 2006-12-20 2012-09-06 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Antiviral indoles
GB0625349D0 (en) 2006-12-20 2007-01-31 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic compounds
US8236950B2 (en) 2006-12-20 2012-08-07 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
US20080161254A1 (en) * 2007-01-03 2008-07-03 Virobay, Inc. Hcv inhibitors
WO2008095058A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-07 Taigen Biotechnology Co. Ltd. Hcv protease inhibitors
CN101641339B (zh) 2007-02-01 2013-07-17 雷斯韦洛吉克斯公司 用于预防和治疗心血管疾病的化合物
EP2118091B1 (en) 2007-02-08 2015-04-15 Janssen Sciences Ireland UC Pyrimidine substituted macrocyclic hcv inhibitors
EP2495249A1 (en) * 2007-02-26 2012-09-05 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Tertiary amine substituted peptides useful as inhibitors of HCV replication
US20080317712A1 (en) * 2007-04-26 2008-12-25 Deqiang Niu Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
US20080267917A1 (en) * 2007-04-26 2008-10-30 Deqiang Niu N-functionalized amides as hepatitis c serine protease inhibitors
US8377872B2 (en) 2007-04-26 2013-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cyclic P3 tripeptide hepatitis C serine protease inhibitors
US7910587B2 (en) * 2007-04-26 2011-03-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl dipeptide hepatitis C virus inhibitors
US20080292587A1 (en) * 2007-04-26 2008-11-27 Ying Sun Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors
EP2177523A1 (en) * 2007-05-03 2010-04-21 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
JP2010526834A (ja) * 2007-05-10 2010-08-05 インターミューン・インコーポレーテッド Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規ペプチド阻害剤
US20090005387A1 (en) * 2007-06-26 2009-01-01 Deqiang Niu Quinoxalinyl macrocyclic hepatitis c virus serine protease inhibitors
AR067180A1 (es) * 2007-06-29 2009-09-30 Gilead Sciences Inc Compuestos antivirales
US8513186B2 (en) 2007-06-29 2013-08-20 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
EP2162431B1 (en) 2007-06-29 2017-06-07 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
EP2178885A1 (en) 2007-07-17 2010-04-28 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic indole derivatives for the treatment of hepatitis c infections
WO2009010804A1 (en) 2007-07-19 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic compounds as antiviral agents
US8242140B2 (en) 2007-08-03 2012-08-14 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
CA2700383A1 (en) 2007-09-24 2009-04-02 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Urea-containing peptides as inhibitors of viral replication
US8419332B2 (en) * 2007-10-19 2013-04-16 Atlas Bolt & Screw Company Llc Non-dimpling fastener
WO2009055335A2 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US8383583B2 (en) 2007-10-26 2013-02-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic, pyridazinone-containing hepatitis C serine protease inhibitors
CL2008003384A1 (es) * 2007-11-14 2009-12-11 Enanta Pharm Inc Compuestos derivados de quinoxalina macrocíclica, inhibidores de serina proteasa; composicion farmaceutica que los comprende; y su uso en el tratamiento de la hepatitis c.
WO2009064955A1 (en) 2007-11-14 2009-05-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic tetrazolyl hepatitis c serine protease inhibitors
WO2009070692A1 (en) * 2007-11-29 2009-06-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. C5-substituted, proline-derived, macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2009070689A1 (en) * 2007-11-29 2009-06-04 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic, c5-substituted proline derivatives as inhibitors of the hepatitis c virus ns3 protease
WO2009076173A2 (en) 2007-12-05 2009-06-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Fluorinated tripeptide hcv serine protease inhibitors
US8361958B2 (en) * 2007-12-05 2013-01-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Oximyl HCV serine protease inhibitors
CN101932242A (zh) 2007-12-05 2010-12-29 益安药业 喹喔啉基衍生物
WO2009079353A1 (en) 2007-12-14 2009-06-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazole-containing macrocyclic hcv serine protease inhibitors
MX2010006518A (es) 2007-12-14 2010-08-10 Enanta Pharm Inc Inhibidores de serina proteasa de hepatitis c de oximil macrociclica.
US8476257B2 (en) 2007-12-19 2013-07-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
CA2709535A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-02 Avila Therapeutics, Inc. Hcv protease inhibitors and uses thereof
AU2013231052B2 (en) * 2007-12-21 2015-09-10 Bristol-Myers Squibb Holdings Ireland Unlimited Company Crystalline forms of n-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-l-valyl-(4r)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-n-((1r,2s)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-l-prolinamide
US8309685B2 (en) 2007-12-21 2012-11-13 Celgene Avilomics Research, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
WO2009082701A1 (en) 2007-12-21 2009-07-02 Avila Therapeutics, Inc. Hcv protease inhibitors and uses thereof
US8293705B2 (en) 2007-12-21 2012-10-23 Avila Therapeutics, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
US8202996B2 (en) 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
US8101567B2 (en) * 2008-01-24 2012-01-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Heteroaryl-containing tripeptide HCV serine protease inhibitors
CN102036966A (zh) * 2008-01-24 2011-04-27 益安药业 作为hcv丝氨酸蛋白酶抑制剂的二氟化三肽
EP2250174B1 (en) 2008-02-04 2013-08-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors
CN102015652A (zh) 2008-03-20 2011-04-13 益安药业 作为丙型肝炎病毒抑制剂的氟化大环化合物
SG175692A1 (en) * 2008-04-15 2011-11-28 Intermune Inc Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
US8163921B2 (en) 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CA2720850A1 (en) 2008-04-28 2009-11-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
US20090285773A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US20090285774A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
CN101580535B (zh) * 2008-05-16 2012-10-03 太景生物科技股份有限公司 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂
US7964560B2 (en) 2008-05-29 2011-06-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
JP5529120B2 (ja) 2008-05-29 2014-06-25 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
KR101629356B1 (ko) 2008-06-26 2016-06-13 리스버로직스 코퍼레이션 퀴나졸리논 유도체의 제조방법
TW201004632A (en) 2008-07-02 2010-02-01 Idenix Pharmaceuticals Inc Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
PL2310095T3 (pl) 2008-07-22 2013-03-29 Msd Italia Srl Makrocykliczne związki chinoksaliny jako inhibitory proteazy NS3 HCV
US8188137B2 (en) 2008-08-15 2012-05-29 Avila Therapeutics, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
US8748650B2 (en) 2008-08-29 2014-06-10 Jsr Corporation Method for production of N-carboxy amino acid anhydride and amino acid carbamate compound
US8207341B2 (en) * 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines
UY32099A (es) 2008-09-11 2010-04-30 Enanta Pharm Inc Inhibidores macrocíclicos de serina proteasas de hepatitis c
US8044087B2 (en) 2008-09-29 2011-10-25 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8563505B2 (en) 2008-09-29 2013-10-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20100080770A1 (en) * 2008-09-29 2010-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US8383094B2 (en) * 2008-10-01 2013-02-26 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20100272674A1 (en) * 2008-12-04 2010-10-28 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
SI2364309T1 (sl) * 2008-12-10 2015-03-31 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Novi 4-amino-4-oksobutanoil peptidi kot inhibitorji virusne replikacije
CA2746265A1 (en) * 2008-12-10 2010-06-17 Achillion Pharmaceuticals, Inc. 4-amino-4-oxobutanoyl peptide cyclic analogues, inhibitors of viral replication
US8283310B2 (en) 2008-12-15 2012-10-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP2379579A1 (en) 2008-12-19 2011-10-26 Gilead Sciences, Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
JP2012513397A (ja) 2008-12-22 2012-06-14 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 抗ウイルス化合物
SG172848A1 (en) 2009-01-07 2011-08-29 Scynexis Inc Cyclosporine derivative for use in the treatment of hcv and hiv infection
AU2010204106B2 (en) 2009-01-08 2014-05-08 Resverlogix Corp. Compounds for the prevention and treatment of cardiovascular disease
CA2751892A1 (en) 2009-01-15 2010-07-22 Rutgers, The State University Of New Jersey Benzo [c] phenanthridines as antimicrobial agents
US8102720B2 (en) * 2009-02-02 2012-01-24 Qualcomm Incorporated System and method of pulse generation
TWI438200B (zh) 2009-02-17 2014-05-21 必治妥美雅史谷比公司 Ｃ型肝炎病毒抑制劑
AR075584A1 (es) * 2009-02-27 2011-04-20 Intermune Inc COMPOSICIONES TERAPEUTICAS QUE COMPRENDEN beta-D-2'-DESOXI-2'-FLUORO-2'-C-METILCITIDINA Y UN DERIVADO DE ACIDO ISOINDOL CARBOXILICO Y SUS USOS. COMPUESTO.
JP5690286B2 (ja) 2009-03-04 2015-03-25 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド ホスホチオフェン及びホスホチアゾールｈｃｖポリメラーゼ阻害剤
MX2021012876A (es) 2009-03-18 2022-06-23 Resverlogix Corp Nuevos agentes anti-inflamatorios.
US8796466B2 (en) 2009-03-30 2014-08-05 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8377962B2 (en) 2009-04-08 2013-02-19 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors
ES2821018T3 (es) 2009-04-22 2021-04-23 Resverlogix Corp Nuevos agentes antiinflamatorios
WO2010127307A1 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Rutgers, The State University Of New Jersey Antimicrobial agents
EP2429568B1 (en) 2009-05-13 2016-08-17 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
US8232246B2 (en) * 2009-06-30 2012-07-31 Abbott Laboratories Anti-viral compounds
WO2011014487A1 (en) 2009-07-30 2011-02-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
AR077712A1 (es) 2009-08-05 2011-09-14 Idenix Pharmaceuticals Inc Inhibidores de serina proteasa macrociclica
US8389560B2 (en) 2009-09-15 2013-03-05 Taigen Biotechnology Co., Ltd. HCV protease inhibitors
CA2775697A1 (en) * 2009-09-28 2011-03-31 Intermune, Inc. Cyclic peptide inhibitors of hepatitis c virus replication
US8415374B2 (en) * 2009-10-12 2013-04-09 Bristol-Myers Squibb Company Combinations of hepatitis C virus inhibitors
WO2011049908A2 (en) * 2009-10-19 2011-04-28 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bismacrokyclic compounds as hepatitis c virus inhibitors
US20110269956A1 (en) 2009-11-11 2011-11-03 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US20110274648A1 (en) 2009-11-11 2011-11-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
US20110281910A1 (en) 2009-11-12 2011-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C Virus Inhibitors
WO2011063076A1 (en) 2009-11-19 2011-05-26 Itherx Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis c virus with oxoacetamide compounds
US8377980B2 (en) 2009-12-16 2013-02-19 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
MY159958A (en) * 2009-12-18 2017-02-15 Idenix Pharmaceuticals Inc 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitors
US8362020B2 (en) 2009-12-30 2013-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
EP2552203B1 (en) 2010-04-01 2017-03-22 Idenix Pharmaceuticals LLC. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
CA2810162A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Rutgers, The State University Of New Jersey Antimicrobial agents
US9121016B2 (en) 2011-09-09 2015-09-01 Toyota Motor Engineering & Manufacturing North America, Inc. Coatings containing polymer modified enzyme for stable self-cleaning of organic stains
US11015149B2 (en) 2010-06-21 2021-05-25 Toyota Motor Corporation Methods of facilitating removal of a fingerprint
US10988714B2 (en) 2010-06-21 2021-04-27 Regents Of The University Of Minnesota Methods of facilitating removal of a fingerprint from a substrate or a coating
US8796009B2 (en) 2010-06-21 2014-08-05 Toyota Motor Engineering & Manufacturing North America, Inc. Clearcoat containing thermolysin-like protease from Bacillus stearothermophilus for cleaning of insect body stains
US9388370B2 (en) * 2010-06-21 2016-07-12 Toyota Motor Engineering & Manufacturing North America, Inc. Thermolysin-like protease for cleaning insect body stains
WO2011163610A2 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Rutgers, The State University Of New Jersey Antimicrobial agents
US20120196794A1 (en) * 2010-08-06 2012-08-02 Bristol-Myers Squibb Company Combinations of Hepatitis C Virus Inhibitors
PE20140015A1 (es) 2010-09-21 2014-02-16 Enanta Pharm Inc Inhibidores de las proteasas de serina del vhc derivados de prolinas macrociclicas
BR112013008148A2 (pt) 2010-09-24 2016-08-09 Bristol Myers Squibb Co "inibidores do vírus da hepatite c".
CA2815855C (en) 2010-11-01 2016-02-02 Rfs Pharma, Llc Novel specific hcv ns3 protease inhibitors
EP2651884A2 (en) * 2010-12-14 2013-10-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Process and intermediates for preparing macrolactams
WO2012087833A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 Abbott Laboratories Hepatitis c inhibitors and uses thereof
MX2013007677A (es) 2010-12-30 2013-07-30 Abbvie Inc Inhibidores macrociclicos de serina proteasa de hepatitis.
AU2011352145A1 (en) 2010-12-30 2013-07-18 Abbvie Inc. Phenanthridine macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
WO2012109398A1 (en) 2011-02-10 2012-08-16 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors, pharmaceutical compositions thereof, and their use for treating hcv infections
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
US20120252721A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating drug-resistant hepatitis c virus infection with a 5,5-fused arylene or heteroarylene hepatitis c virus inhibitor
EP2691409B1 (en) 2011-03-31 2018-02-21 Idenix Pharmaceuticals LLC. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8957203B2 (en) 2011-05-05 2015-02-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US10201584B1 (en) 2011-05-17 2019-02-12 Abbvie Inc. Compositions and methods for treating HCV
WO2012166459A1 (en) * 2011-05-27 2012-12-06 Bristol-Myers Squibb Company Tripeptides incorporating deuterium as inhibitors of hepatitis c virus
MX349079B (es) * 2011-05-27 2017-07-07 Achillion Pharmaceuticals Inc Alifanos, ciclofanos, heterafanos, heterofanos, hetero-heterafanos y metalocenos sustituidos utiles para tratar infecciones por el vhc.
US8691757B2 (en) 2011-06-15 2014-04-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN102911254A (zh) * 2011-08-02 2013-02-06 上海唐润医药科技有限公司 Hcv蛋白酶抑制剂
US8951985B2 (en) 2011-09-12 2015-02-10 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2755983B1 (en) 2011-09-12 2017-03-15 Idenix Pharmaceuticals LLC. Substituted carbonyloxymethylphosphoramidate compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8507460B2 (en) 2011-10-14 2013-08-13 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Substituted 3′,5′-cyclic phosphates of purine nucleotide compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
GB2515941A (en) 2011-10-21 2015-01-07 Abbvie Inc Methods for treating HCV comprising at least two direct acting antiviral agent, ribavirin but not interferon
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
EA201490836A1 (ru) 2011-10-21 2014-11-28 Эббви Инк. Комбинационное лечение (например, с abt-072 или abt-333) с помощью daa для применения при лечении hcv
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
PT2773354T (pt) 2011-11-01 2019-07-17 Resverlogix Corp Formulações orais de libertação imediata para quinazolinonas substituídas
EP2780026B1 (en) 2011-11-15 2019-10-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Hcv ns3 protease inhibitors
EP2785184B1 (en) 2011-11-30 2020-06-10 Emory University Compositions comprising jak inhibitors and haart drugs for use in the prevention or treatment of hiv
MX355102B (es) 2012-01-11 2018-04-05 Abbvie Ireland Unlimited Co Procesos para hacer los inhibidores de la proteasa del hcv.
US9040479B2 (en) 2012-01-12 2015-05-26 Cocrystal Pharma, Inc. HCV NS3 protease inhibitors
WO2013106756A2 (en) 2012-01-13 2013-07-18 Rutgers, The State University Of New Jersey Antimicrobial agents
WO2013133927A1 (en) 2012-02-13 2013-09-12 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions of 2'-c-methyl-guanosine, 5'-[2-[(3-hydroxy-2,2-dimethyl-1-oxopropyl)thio]ethyl n-(phenylmethyl)phosphoramidate]
AU2013229229B2 (en) 2012-03-07 2017-10-19 Institute Of Cancer Research: Royal Cancer Hospital (The) 3-aryl-5-substituted-isoquinolin-1-one compounds and their therapeutic use
US9475783B2 (en) 2012-03-21 2016-10-25 Rutgers, The State University Of New Jersey Antimicrobial agents
US20130302414A1 (en) 2012-05-07 2013-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Solubilized capsule formulation of 1,1-dimethylethyl [(1s)-1-carbamoyl)pyrrolidin-1-yl]carbonyl}-2,2-dimethylpropyl]carbamate
JP2015516421A (ja) 2012-05-07 2015-06-11 ブリストル−マイヤーズ・スクイブ・ホールディングス・アイルランドＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｈｏｌｄｉｎｇｓ Ｉｒｅｌａｎｄ １，１−ジメチルエチル［（１ｓ）−１−｛［（２ｓ，４ｒ）−４−（７−クロロ−４メトキシイソキノリン−１−イルオキシ）−２−（｛（１ｒ，２ｓ）−１−［（シクロプロピルスルホニル）カルバモイル］−２−エテニルシクロプロピル｝カルバモイル）ピロリジン−１−イル］カルボニル｝−２，２−ジメチルプロピル］カルバメートの経口固形製剤
US9296778B2 (en) 2012-05-22 2016-03-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′,5′-cyclic phosphate prodrugs for HCV infection
EP2852604B1 (en) 2012-05-22 2017-04-12 Idenix Pharmaceuticals LLC 3',5'-cyclic phosphoramidate prodrugs for hcv infection
AU2013266393B2 (en) 2012-05-22 2017-09-28 Idenix Pharmaceuticals Llc D-amino acid compounds for liver disease
UA119315C2 (uk) 2012-07-03 2019-06-10 Гіліад Фармассет Елелсі Інгібітори вірусу гепатиту с
ES2773272T3 (es) * 2012-08-08 2020-07-10 Merck Patent Gmbh Derivados de (aza-)isoquinolinona
ES2674980T3 (es) 2012-10-08 2018-07-05 Idenix Pharmaceuticals Llc Análogos de 2'-cloro nucleósidos para infección por VHC
MX360452B (es) 2012-10-19 2018-11-01 Bristol Myers Squibb Co Inhibidores del virus de la hepatitis c.
EP2909223B1 (en) 2012-10-19 2017-03-22 Idenix Pharmaceuticals LLC Dinucleotide compounds for hcv infection
US10723754B2 (en) 2012-10-22 2020-07-28 Idenix Pharmaceuticals Llc 2′,4′-bridged nucleosides for HCV infection
US9643999B2 (en) 2012-11-02 2017-05-09 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014071007A1 (en) 2012-11-02 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US9598433B2 (en) 2012-11-02 2017-03-21 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2014070974A1 (en) 2012-11-05 2014-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US20140140951A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-Alanine Ester of Rp-Nucleoside Analog
WO2014078436A1 (en) 2012-11-14 2014-05-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-alanine ester of sp-nucleoside analog
CN103804208B (zh) * 2012-11-14 2016-06-08 重庆博腾制药科技股份有限公司 一种丙肝药物中间体的制备方法
WO2014080291A2 (en) 2012-11-21 2014-05-30 Rvx Therapeutics Inc. Biaryl derivatives as bromodomain inhibitors
US9073878B2 (en) 2012-11-21 2015-07-07 Zenith Epigenetics Corp. Cyclic amines as bromodomain inhibitors
EP2935304A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. 4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
AU2013365926B9 (en) 2012-12-21 2019-01-17 Zenith Epigenetics Ltd. Novel heterocyclic compounds as bromodomain inhibitors
US9309275B2 (en) 2013-03-04 2016-04-12 Idenix Pharmaceuticals Llc 3′-deoxy nucleosides for the treatment of HCV
US9339541B2 (en) 2013-03-04 2016-05-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Thiophosphate nucleosides for the treatment of HCV
WO2014137869A1 (en) 2013-03-07 2014-09-12 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EA201591722A1 (ru) 2013-03-14 2016-02-29 Ачиллион Фармасьютикалз, Инк. Новые способы получения совапревира
US11484534B2 (en) 2013-03-14 2022-11-01 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
WO2014145600A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Ach-0142684 sodium salt polymorphs, composition including the same, and method of manufacture thereof
US9006423B2 (en) 2013-03-15 2015-04-14 Achillion Pharmaceuticals Inc. Process for making a 4-amino-4-oxobutanoyl peptide cyclic analogue, an inhibitor of viral replication, and intermediates thereof
KR20160005686A (ko) 2013-03-15 2016-01-15 아칠리온 파르마세우티칼스 인코포레이티드 소바프레비르 다형체들 및 이의 제조 방법
WO2014165542A1 (en) 2013-04-01 2014-10-09 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 2',4'-fluoro nucleosides for the treatment of hcv
US10005779B2 (en) 2013-06-05 2018-06-26 Idenix Pharmaceuticals Llc 1′,4′-thio nucleosides for the treatment of HCV
EP3027636B1 (en) 2013-08-01 2022-01-05 Idenix Pharmaceuticals LLC D-amino acid phosphoramidate pronucleotides of halogeno pyrimidine compounds for liver disease
NO3044221T3 (pl) 2013-09-11 2018-07-21
US20160229866A1 (en) 2013-09-20 2016-08-11 Idenix Pharmaceuticals Inc. Hepatitis c virus inhibitors
WO2015061683A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Idenix Pharmaceuticals, Inc. D-amino acid phosphoramidate and d-alanine thiophosphoramidate pronucleotides of nucleoside compounds useful for the treatment of hcv
EP3063165A1 (en) 2013-11-01 2016-09-07 Idenix Pharmaceuticals LLC D-alanine phosphoramidate pronucleotides of 2'-methyl 2'-fluoro guanosine nucleoside compounds for the treatment of hcv
US9458150B2 (en) 2013-11-08 2016-10-04 Rutgers, The State University Of New Jersey Antimicrobial agents
EP3074399A1 (en) 2013-11-27 2016-10-05 Idenix Pharmaceuticals LLC 2'-dichloro and 2'-fluoro-2'-chloro nucleoside analogues for hcv infection
WO2015095419A1 (en) 2013-12-18 2015-06-25 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 4'-or nucleosides for the treatment of hcv
EP3089757A1 (en) 2014-01-03 2016-11-09 AbbVie Inc. Solid antiviral dosage forms
EP3114122A1 (en) 2014-03-05 2017-01-11 Idenix Pharmaceuticals LLC Solid forms of a flaviviridae virus inhibitor compound and salts thereof
WO2015134561A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a 5,5-fused heteroarylene flaviviridae inhibitor and their use for treating or preventing flaviviridae infection
WO2015134780A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Solid prodrug forms of 2'-chloro-2'-methyl uridine for hcv
WO2015161137A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3'-substituted methyl or alkynyl nucleosides for the treatment of hcv
WO2015200305A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US10111885B2 (en) 2015-03-13 2018-10-30 Resverlogix Corp. Compositions and therapeutic methods for the treatment of complement-associated diseases
AU2016333987A1 (en) 2015-10-05 2018-05-10 Ny State Psychiatric Institute Activators of autophagic flux and phospholipase D and clearance of protein aggregates including tau and treatment of proteinopathies
US10513528B2 (en) 2016-02-25 2019-12-24 Taxis Pharmaceuticals, Inc. Synthetic processes and intermediates
CN109689063A (zh) 2016-04-28 2019-04-26 埃默里大学 含有炔烃的核苷酸和核苷治疗组合物及其相关用途
CN107641099A (zh) * 2016-07-20 2018-01-30 广东东阳光药业有限公司 取代的4‑羟基喹啉类化合物的制备方法
WO2018026877A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Calitor Sciences, Llc Process for preparing substituted quinolin-4-ol compounds
US10774093B2 (en) 2017-03-30 2020-09-15 Taxis Pharmaceuticals, Inc. Synthetic processes and synthetic intermediates
US11472778B2 (en) * 2017-06-20 2022-10-18 University Of Massachusetts Hepatitis C virus NS3/4A protease inhibitors
CN110156684A (zh) * 2019-06-28 2019-08-23 珠海市柏瑞医药科技有限公司 一种去甲乌药碱及其药用盐的合成工艺
US20230218644A1 (en) 2020-04-16 2023-07-13 Som Innovation Biotech, S.A. Compounds for use in the treatment of viral infections by respiratory syndrome-related coronavirus
CN113402450B (zh) * 2021-01-13 2023-11-24 上海睿腾医药科技有限公司 一种2-溴-4-氯吡啶的纯化方法
WO2023239729A1 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Xenon Pharmaceuticals Inc. Pyridinamine derivatives and their use as potassium channel modulators

Family Cites Families (182)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US185001A (en) 1876-12-05 Improvement in measuring-faucets
JPS57123181A (en) 1981-01-23 1982-07-31 Mitsubishi Paper Mills Ltd Preparation of pyrazolo (1,5-a) pyridine derivative
EP0475255A3 (en) 1990-09-12 1993-04-14 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for the preparation of optically pure (s)-alpha-((tert-butylsulfonyl)methyl)hydro cinnamic acid
US5610054A (en) * 1992-05-14 1997-03-11 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecule targeted against Hepatitis C virus
US5500208A (en) 1994-06-07 1996-03-19 The Procter & Gamble Company Oral compositions comprising a novel tripeptide
MY147327A (en) * 1995-06-29 2012-11-30 Novartis Ag Somatostatin peptides
GB9517022D0 (en) 1995-08-19 1995-10-25 Glaxo Group Ltd Medicaments
US5633388A (en) * 1996-03-29 1997-05-27 Viropharma Incorporated Compounds, compositions and methods for treatment of hepatitis C
AU2933797A (en) 1996-05-10 1997-12-05 Schering Corporation Synthetic inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
JP4080541B2 (ja) * 1996-10-18 2008-04-23 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ、特にｃ型肝炎ウイルスｎｓ３プロテアーゼの阻害因子
GB9623908D0 (en) 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
PL334846A1 (en) 1997-01-23 2000-03-27 Hoffmann La Roche Sulphamidic inhibitors of metaloproteases
AU7127298A (en) 1997-04-14 1998-11-11 Emory University Serine protease inhibitors
GB9707659D0 (en) 1997-04-16 1997-06-04 Peptide Therapeutics Ltd Hepatitis C NS3 Protease inhibitors
ES2241157T3 (es) 1997-08-11 2005-10-16 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Peptidos inhibidores de la hepatitis c.
EP1012180B1 (en) 1997-08-11 2004-12-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor peptide analogues
IT1299134B1 (it) 1998-02-02 2000-02-29 Angeletti P Ist Richerche Bio Procedimento per la produzione di peptidi con proprieta' inibitrici della proteasi ns3 del virus hcv, peptidi cosi' ottenibili e peptidi
ES2281170T3 (es) 1998-03-31 2007-09-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibidores de serina proteasas, particularmente proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.
GB9812523D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Angeletti P Ist Richerche Bio Peptide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US6492423B1 (en) 1998-07-27 2002-12-10 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare Pangeletti Spa Diketoacid-derivatives as inhibitors of polymerases
US6323180B1 (en) * 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
AR022061A1 (es) * 1998-08-10 2002-09-04 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Peptidos inhibidores de la hepatitis c, una composicion farmaceutica que los contiene, el uso de los mismos para preparar una composicion farmaceutica, el uso de un producto intermedio para la preparacion de estos peptidos y un procedimiento para la preparacion de un peptido analogo de los mismos.
CN1325309A (zh) 1998-08-21 2001-12-05 维洛药品公司 用于治疗或预防病毒感染和相关疾病的化合物、组合物和方法
AU751201B2 (en) 1998-09-04 2002-08-08 Viropharma Incorporated Methods for treating or preventing viral infections and associated diseases
AU751457B2 (en) 1998-09-25 2002-08-15 Viropharma Incorporated Methods for treating or preventing viral infections and associated diseases
UA74546C2 (en) 1999-04-06 2006-01-16 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Macrocyclic peptides having activity relative to hepatitis c virus, a pharmaceutical composition and use of the pharmaceutical composition
EP1225899A2 (en) 1999-11-04 2002-07-31 Virochem Pharma Inc. Method for the treatment or prevention of flaviviridae viral infection using nucleoside analogues
TR200103147T1 (tr) 1999-12-27 2002-06-21 Japan Tobacco Inc. Kaynaşık halkalı bileşikler ve bunların ilaç olarak kullanımı.
JP2004509066A (ja) 2000-05-10 2004-03-25 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 新規抗感染症薬
EP1299498A1 (en) 2000-06-23 2003-04-09 General Electric Company Silicone pressure sensitive adhesive composition
US6448281B1 (en) 2000-07-06 2002-09-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Viral polymerase inhibitors
GB0017676D0 (en) 2000-07-19 2000-09-06 Angeletti P Ist Richerche Bio Inhibitors of viral polymerase
US7012066B2 (en) 2000-07-21 2006-03-14 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
PE20020506A1 (es) 2000-08-22 2002-07-09 Glaxo Group Ltd Derivados de pirazol fusionados como inhibidores de la proteina cinasa
HUP0500456A3 (en) * 2000-11-20 2012-05-02 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c tripeptide inhibitors, pharmaceutical compositions comprising thereof and their use
JP2004525150A (ja) 2001-03-30 2004-08-19 スミスクライン ビーチャム コーポレーション 治療用化合物としてのピラゾロピリジン類の使用
US6867185B2 (en) 2001-12-20 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
CA2369711A1 (en) 2002-01-30 2003-07-30 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
CA2370396A1 (en) 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) * 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
CA2369970A1 (en) * 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US6828301B2 (en) 2002-02-07 2004-12-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors
US20060199773A1 (en) * 2002-05-20 2006-09-07 Sausker Justin B Crystalline forms of (1R,2S)-N-[(1,1-dimethylethoxy)carbonyl]-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-[(6-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy]-L-prolyl-1-amino-N-(cyclopropylsulfonyl)-2-ethenyl-cyclopropanecarboxamide, monopotassium salt
ATE481106T1 (de) * 2002-05-20 2010-10-15 Bristol Myers Squibb Co Heterocyclische sulfonamid-hepatitis-c-virus- hemmer
ES2315568T3 (es) * 2002-05-20 2009-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c basados en cicloalquilo p1' sustituido.
MY140680A (en) * 2002-05-20 2010-01-15 Bristol Myers Squibb Co Hepatitis c virus inhibitors
EP1506172B1 (en) * 2002-05-20 2011-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
US20040033959A1 (en) 2002-07-19 2004-02-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions for hepatitis C viral protease inhibitors
US20050075279A1 (en) 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
KR20050065661A (ko) 2002-11-01 2005-06-29 비로파마 인코포레이티드 벤조푸란 화합물, 조성물 및 ｃ형 간염 바이러스 감염 및관련 질병의 치료 및 예방 방법
US7601709B2 (en) * 2003-02-07 2009-10-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
KR100940619B1 (ko) 2003-02-07 2010-02-05 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 마크로사이클릭 씨형 간염 세린 단백효소 억제제
EP1601685A1 (en) 2003-03-05 2005-12-07 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibiting compounds
DE602004029866D1 (de) 2003-03-05 2010-12-16 Boehringer Ingelheim Pharma Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c
KR20050108420A (ko) 2003-04-02 2005-11-16 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 Ｃ형 간염 바이러스 프로테아제 억제제를 위한 약제학적조성물
ATE422895T1 (de) 2003-04-16 2009-03-15 Bristol Myers Squibb Co Makrocyclische isochinolinpeptidinhibitoren des hepatitis-c-virus
PT1615613E (pt) 2003-04-18 2010-02-09 Enanta Pharm Inc Inibidores da serina protease da hepatite c macrocíclicos de quinoxalinilo
PT1654261E (pt) 2003-05-21 2008-01-18 Boehringer Ingelheim Int Compostos inibidores da hepatite c
WO2004113365A2 (en) 2003-06-05 2004-12-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c serine protease tri-peptide inhibitors
US7125845B2 (en) 2003-07-03 2006-10-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Aza-peptide macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
DE602004031645D1 (de) 2003-09-22 2011-04-14 Boehringer Ingelheim Pharma Makrozyklische peptide mit wirkung gegen das hepatitis-c-virus
CA2541634A1 (en) 2003-10-10 2005-04-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
DK1680137T3 (da) 2003-10-14 2013-02-18 Hoffmann La Roche Makrocyklisk carboxylsyre- og acylsulfonamidforbindelse som inhibitor af HCV-replikation
US7132504B2 (en) * 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7135462B2 (en) 2003-11-20 2006-11-14 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7309708B2 (en) * 2003-11-20 2007-12-18 Birstol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP1689770A1 (en) 2003-11-20 2006-08-16 Schering Corporation Depeptidized inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
CA2549851C (en) 2004-01-21 2012-09-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
AR048401A1 (es) 2004-01-30 2006-04-26 Medivir Ab Inhibidores de la serina-proteasa ns3 del vhc
RU2006136084A (ru) 2004-03-15 2008-04-27 БЕРИНГЕР ИНГЕЛЬХАЙМ ИНТЕРНАЦИОНАЛЬ ГмбХ (DE) Способ получения микроциклических соединений
BRPI0509467A (pt) 2004-03-30 2007-09-11 Intermune Inc compostos macrocìclicos como inibidores de replicação viral
WO2006016930A2 (en) 2004-05-14 2006-02-16 Intermune, Inc. Methods for treating hcv infection
JP5156374B2 (ja) 2004-05-25 2013-03-06 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 非環式ｈｃｖプロテアーゼインヒビターの調製方法
CA2556669C (en) 2004-06-28 2012-05-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
US7868037B2 (en) 2004-07-14 2011-01-11 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating hepatitis C
AR050174A1 (es) 2004-07-16 2006-10-04 Gilead Sciences Inc Derivados de fosfonatos con actividad antiviral. composiciones farmaceuticas
UY29016A1 (es) 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
EP1771454B1 (en) 2004-07-20 2011-06-15 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibitor peptide analogs
US7550559B2 (en) 2004-08-27 2009-06-23 Schering Corporation Acylsulfonamide compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
JP2008513454A (ja) 2004-09-17 2008-05-01 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 大環状ｈｃｖプロテアーゼインヒビターの調製方法
WO2007001406A2 (en) 2004-10-05 2007-01-04 Chiron Corporation Aryl-containing macrocyclic compounds
CA2583152A1 (en) 2004-10-21 2006-04-27 Pfizer Inc. Inhibitors of hepatitis c virus protease, and compositions and treatments using the same
US7323447B2 (en) 2005-02-08 2008-01-29 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
CN101160317B (zh) 2005-03-08 2013-03-27 贝林格尔·英格海姆国际有限公司 制备大环化合物的方法
US7879797B2 (en) 2005-05-02 2011-02-01 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
US7592336B2 (en) 2005-05-10 2009-09-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20060276404A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Anima Ghosal Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor
US20070021351A1 (en) 2005-06-02 2007-01-25 Schering Corporation Liver/plasma concentration ratio for dosing hepatitis C virus protease inhibitor
US20070004635A1 (en) 2005-06-02 2007-01-04 Schering Corporation Method of treating interferon non-responders using HCV protease inhibitor
US20060287248A1 (en) 2005-06-02 2006-12-21 Schering Corporation Asymmetric dosing methods
NZ563365A (en) 2005-06-02 2011-02-25 Schering Corp Combination of HCV protease inhibitors with a surfactant
US20060281689A1 (en) 2005-06-02 2006-12-14 Schering Corporation Method for modulating activity of HCV protease through use of a novel HCV protease inhibitor to reduce duration of treatment period
WO2006130607A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Controlled-release formulation useful for treating disorders associated with hepatitis c virus
US20060276405A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Methods for treating hepatitis C
WO2006130554A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Methods of treating hepatitis c virus
US20060276406A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Methods of treating hepatitis C virus
US8119602B2 (en) 2005-06-02 2012-02-21 Schering Corporation Administration of HCV protease inhibitors in combination with food to improve bioavailability
US7601686B2 (en) 2005-07-11 2009-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
TWI389908B (zh) 2005-07-14 2013-03-21 Gilead Sciences Inc 抗病毒化合物類
TW200738742A (en) 2005-07-14 2007-10-16 Gilead Sciences Inc Antiviral compounds
TWI387603B (zh) 2005-07-20 2013-03-01 Merck Sharp & Dohme Ｈｃｖ ｎｓ３蛋白酶抑制劑
EP1910378B1 (en) 2005-07-20 2012-06-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Hepatitis c inhibitor peptide analogs
JP5249028B2 (ja) 2005-07-25 2013-07-31 インターミューン・インコーポレーテッド Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規大環状阻害剤
TWI375670B (en) 2005-07-29 2012-11-01 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
CN101273042B (zh) 2005-07-29 2013-11-06 泰博特克药品有限公司 丙型肝炎病毒的大环抑制剂
PE20070343A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c
CN101273030B (zh) 2005-07-29 2012-07-18 泰博特克药品有限公司 丙型肝炎病毒的大环抑制剂
JO2768B1 (en) 2005-07-29 2014-03-15 تيبوتيك فارماسيوتيكالز ليمتد Large cyclic inhibitors of hepatitis C virus
TW200745061A (en) 2005-07-29 2007-12-16 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis C virus
RU2419619C2 (ru) 2005-07-29 2011-05-27 Медивир Аб Макроциклические ингибиторы вируса гепатита с
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
ATE496042T1 (de) 2005-07-29 2011-02-15 Tibotec Pharm Ltd Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
MX2008001402A (es) 2005-07-29 2008-04-04 Tibotec Pharm Ltd Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c.
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
JP2009503084A (ja) 2005-08-01 2009-01-29 フェノミックス コーポレーション Ｃ型肝炎セリンプロテアーゼ阻害剤およびその使用
KR20080036598A (ko) 2005-08-01 2008-04-28 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드 Ｈｃｖ ｎｓ３ 프로테아제 억제제로서의 마크로사이클릭펩티드
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
DE602006019323D1 (de) 2005-10-11 2011-02-10 Intermune Inc Verbindungen und verfahren zur inhibierung der replikation des hepatitis-c-virus
US7772183B2 (en) 2005-10-12 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7741281B2 (en) 2005-11-03 2010-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2007082131A1 (en) 2006-01-09 2007-07-19 Bristol-Myers Squibb Company Process for the preparation of hydroxy substituted heterocycles
WO2007106317A2 (en) 2006-03-03 2007-09-20 Schering Corporation Pharmaceutical combinations of hcv-protease and -ires inhibitors
GB0609492D0 (en) 2006-05-15 2006-06-21 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
US8268776B2 (en) 2006-06-06 2012-09-18 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocylic oximyl hepatitis C protease inhibitors
US20070281884A1 (en) 2006-06-06 2007-12-06 Ying Sun Macrocyclic oximyl hepatitis C protease inhibitors
GB0612423D0 (en) 2006-06-23 2006-08-02 Angeletti P Ist Richerche Bio Therapeutic agents
UY30437A1 (es) 2006-06-26 2008-01-31 Enanta Pharm Inc Quinoxalinil macroceclicos inhibidores de serina proteasa del virus de la hepatitis c
KR20090024834A (ko) 2006-07-05 2009-03-09 인터뮨, 인크. Ｃ형 간염 바이러스 복제의 신규 억제제
WO2008008776A2 (en) 2006-07-11 2008-01-17 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
EA017448B1 (ru) 2006-07-13 2012-12-28 Ачиллион Фармасьютикалз, Инк. 4-амино-4-оксобутаноиловые пептиды как ингибиторы вирусной репликации
WO2008019289A2 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tetrazolyl macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7635683B2 (en) 2006-08-04 2009-12-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Quinoxalinyl tripeptide hepatitis C virus inhibitors
WO2008019303A2 (en) 2006-08-04 2008-02-14 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US20090035267A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 Moore Joel D Acyclic, pyridazinone-derived hepatitis c serine protease inhibitors
US20090035268A1 (en) 2007-08-01 2009-02-05 Ying Sun Tetrazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7687459B2 (en) * 2006-08-11 2010-03-30 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis C virus protease inhibitors
US7582605B2 (en) 2006-08-11 2009-09-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Phosphorus-containing hepatitis C serine protease inhibitors
US20080038225A1 (en) 2006-08-11 2008-02-14 Ying Sun Triazolyl acyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2008022006A2 (en) 2006-08-11 2008-02-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Arylalkoxyl hepatitis c virus protease inhibitors
WO2008021960A2 (en) 2006-08-11 2008-02-21 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Triazolyl macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US7605126B2 (en) 2006-08-11 2009-10-20 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Acylaminoheteroaryl hepatitis C virus protease inhibitors
WO2008051514A2 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
US8138164B2 (en) 2006-10-24 2012-03-20 Merck Sharp & Dohme Corp. HCV NS3 protease inhibitors
AU2007309546A1 (en) 2006-10-24 2008-05-02 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. HCV NS3 protease inhibitors
CN101568346B (zh) 2006-10-27 2015-11-25 默沙东公司 Hcv ns3蛋白酶抑制剂
CA2667031C (en) 2006-10-27 2013-01-22 Merck & Co., Inc. Hcv ns3 protease inhibitors
US8343477B2 (en) 2006-11-01 2013-01-01 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus
US20080107625A1 (en) 2006-11-01 2008-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of Hepatitis C Virus
US20080107623A1 (en) 2006-11-01 2008-05-08 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of Hepatitis C Virus
US20080108632A1 (en) 2006-11-02 2008-05-08 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
US7772180B2 (en) * 2006-11-09 2010-08-10 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7888464B2 (en) 2006-11-16 2011-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US8003604B2 (en) 2006-11-16 2011-08-23 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US7763584B2 (en) 2006-11-16 2010-07-27 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
WO2008070358A2 (en) 2006-11-16 2008-06-12 Phenomix Corporation N-cyclopropyl-hydroxyproline-based tripeptidic hepatitis c serine protease inhibitors containing an isoindole, pyrrolopyridine, pyrrolopyrimidine or pyrrolopyrazine heterocycle in the side chain
WO2008059046A1 (en) 2006-11-17 2008-05-22 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
CN105037347B (zh) 2007-02-01 2018-06-01 泰博特克药品有限公司 Hcv巨环抑制剂的多晶形
PT2121674E (pt) 2007-02-01 2010-09-03 Tibotec Pharm Ltd Processos e intermediários para a preparação de um inibidor macrocíclico da protease do hcv
WO2008095058A1 (en) 2007-02-01 2008-08-07 Taigen Biotechnology Co. Ltd. Hcv protease inhibitors
EP2118091B1 (en) 2007-02-08 2015-04-15 Janssen Sciences Ireland UC Pyrimidine substituted macrocyclic hcv inhibitors
WO2008096001A1 (en) 2007-02-08 2008-08-14 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hcv inhibiting macrocyclic phenylcarbamates
WO2008096002A1 (en) 2007-02-08 2008-08-14 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hcv inhibiting macrocyclic phosphonates and amidophosphates
WO2008098368A1 (en) 2007-02-16 2008-08-21 Boehringer Ingelheim International Gmbh Inhibitors of hepatitis c ns3 protease
AU2008217187A1 (en) 2007-02-20 2008-08-28 Novartis Ag Macrocyclic compounds as HCV NS3 protease inhibitors
EP2495249A1 (en) 2007-02-26 2012-09-05 Achillion Pharmaceuticals, Inc. Tertiary amine substituted peptides useful as inhibitors of HCV replication
AU2008240834B2 (en) 2007-04-24 2012-08-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Process for HCV protease inhibitor intermediate
WO2008134395A1 (en) 2007-04-26 2008-11-06 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Aza-peptide macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
WO2008134397A1 (en) 2007-04-26 2008-11-06 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Aza-tripeptide hepatitis c serine protease inhibitors
US20080279821A1 (en) 2007-04-26 2008-11-13 Deqiang Niu Arylpiperidinyl and arylpyrrolidinyl macrocyclic hepatitis c serine protease inhibitors
US20080292587A1 (en) 2007-04-26 2008-11-27 Ying Sun Oximyl dipeptide hepatitis c protease inhibitors
EP2177523A1 (en) 2007-05-03 2010-04-21 Intermune, Inc. Novel macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus replication
JP2010526834A (ja) 2007-05-10 2010-08-05 インターミューン・インコーポレーテッド Ｃ型肝炎ウイルス複製の新規ペプチド阻害剤
US8513186B2 (en) 2007-06-29 2013-08-20 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
EP2162431B1 (en) * 2007-06-29 2017-06-07 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
WO2009010804A1 (en) 2007-07-19 2009-01-22 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Macrocyclic compounds as antiviral agents
WO2009014730A1 (en) 2007-07-26 2009-01-29 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors
US8202996B2 (en) * 2007-12-21 2012-06-19 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of N-(tert-butoxycarbonyl)-3-methyl-L-valyl-(4R)-4-((7-chloro-4-methoxy-1-isoquinolinyl)oxy)-N- ((1R,2S)-1-((cyclopropylsulfonyl)carbamoyl)-2-vinylcyclopropyl)-L-prolinamide
EP2250174B1 (en) * 2008-02-04 2013-08-28 IDENIX Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic serine protease inhibitors
US8163921B2 (en) * 2008-04-16 2012-04-24 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
PL2310095T3 (pl) * 2008-07-22 2013-03-29 Msd Italia Srl Makrocykliczne związki chinoksaliny jako inhibitory proteazy NS3 HCV
US8207341B2 (en) * 2008-09-04 2012-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Process or synthesizing substituted isoquinolines

Also Published As

Publication number Publication date
US8889871B2 (en) 2014-11-18
EP1505963A4 (en) 2008-12-24
RU2298001C2 (ru) 2007-04-27
HK1070287A1 (en) 2005-06-17
EP1505963A1 (en) 2005-02-16
US8507722B2 (en) 2013-08-13
US8299094B2 (en) 2012-10-30
PE20040517A1 (es) 2004-08-25
US6995174B2 (en) 2006-02-07
TW200403993A (en) 2004-03-16
EP1505963B1 (en) 2011-04-20
AR090649A2 (es) 2014-11-26
ATE506104T1 (de) 2011-05-15
US20120330019A1 (en) 2012-12-27
RS52407B (en) 2013-02-28
AU2003241510A1 (en) 2003-12-12
NO332427B1 (no) 2012-09-17
KR20100093140A (ko) 2010-08-24
EP2340830A3 (en) 2011-12-28
DE60336807D1 (en) 2011-06-01
RU2315039C1 (ru) 2008-01-20
IL164987A (en) 2011-06-30
SI1505963T1 (sl) 2011-10-28
CN101024671A (zh) 2007-08-29
US7915291B2 (en) 2011-03-29
RU2004137480A (ru) 2005-08-10
RS100504A (en) 2007-02-05
RU2317303C1 (ru) 2008-02-20
US20110311482A1 (en) 2011-12-22
RU2315039C9 (ru) 2014-02-10
PL373411A1 (pl) 2005-08-22
UA80973C2 (uk) 2007-11-26
US20040106559A1 (en) 2004-06-03
EP1505963B9 (en) 2011-09-21
KR101005958B1 (ko) 2011-01-05
AU2003241510B2 (en) 2006-11-02
CN101024671B (zh) 2010-08-18
TWI306452B (en) 2009-02-21
NZ536539A (en) 2007-02-23
GEP20063938B (en) 2006-10-10
US20060172950A1 (en) 2006-08-03
CA2486308A1 (en) 2003-12-04
US8710229B2 (en) 2014-04-29
NO20044807L (no) 2004-12-16
DK1505963T3 (da) 2011-08-08
ES2363131T3 (es) 2011-07-21
JP4312710B2 (ja) 2009-08-12
AR087051A2 (es) 2014-02-12
MXPA04011440A (es) 2005-02-14
CA2486308C (en) 2012-04-10
AR040080A1 (es) 2005-03-16
US9227940B2 (en) 2016-01-05
KR20040111656A (ko) 2004-12-31
US20150005342A1 (en) 2015-01-01
BR0311132A (pt) 2005-03-08
CN1668297A (zh) 2005-09-14
US20140163231A1 (en) 2014-06-12
ZA200409162B (en) 2006-02-22
WO2003099274A1 (en) 2003-12-04
HRP20041085B1 (hr) 2014-01-31
MY140680A (en) 2010-01-15
CO5640083A2 (es) 2006-05-31
US20160067302A1 (en) 2016-03-10
IS7530A (is) 2004-11-16
US7449479B2 (en) 2008-11-11
EP2340830A2 (en) 2011-07-06
US20130267713A1 (en) 2013-10-10
CN1299677C (zh) 2007-02-14
CN1974596B (zh) 2010-07-28
US20090274656A1 (en) 2009-11-05
CY1112108T1 (el) 2015-11-04
US9636375B2 (en) 2017-05-02
HRP20041085A2 (en) 2005-08-31
JP2005533028A (ja) 2005-11-04
CN1974596A (zh) 2007-06-06
IL164987A0 (en) 2005-12-18
PT1505963E (pt) 2011-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9636375B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors
JP4271148B2 (ja) 置換シクロアルキルｐ１’ｃ型肝炎ウイルスインヒビター
JP4688815B2 (ja) Ｃ型肝炎ウイルスインヒビター
AU2006233208B2 (en) Hepatitis C virus inhibitors