NL192925C - Een antibacteriëel werkzaam cefalosporinederivaat. - Google Patents

Description

1 192925

Een antibacterieel werkzaam cefalosporinederivaat

De uitvinding heeft betrekking op een antibacterieel werkzaam cefalosporinederivaat.

Het Amerikaanse octrooischrift 4.390.534 van 28 juni 1983 (Tsutomu Teraji et al.) toont cefem- en 5 cefamverbindingen met formule 3, waarin, R1 amino of beschermd amino is; r2 waterstof, acyl, desgewenst gesubstitueerd aryi, gesubstitueerd alkyl, alkenyl, alkynyl, desgewenst gesubstitueerd cycloalkyl, cycloalke-nyl of een O- of S-bevattende heterocyclische 5-ring gesubstitueerd met een of meerdere oxogroepen is; R3 waterstof of alkyl is; R4 waterstof, acyloxyaikyl, acylthioalkyi, desgewenst gesubstitueerd pyridinioalkyl, desgewenst gesubstitueerd heterocyclylthioalkyl, aikyl, halogeen, hydroxy of desgewenst gesubstitueerd 10 thiazolioalkyl is; en R5 carboxy of beschermd carboxy is; met dien verstande dat R5 COO is wanneer R4 desgewenst gesubstitueerd pyridinioalkyl of desgewenst gesubstitueerd thiazolioalkyl is; en de onderbroken lijn een enkele of dubbele binding aangeeft. De feitelijke onderzochte verbindingen dragen op de 3-plaats een eventueel gesubstitueerd pyridiniomethyl- of thiazoliomethylgroep.

De op 6 augustus 1980 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 13.762 stemt hiermee overeen en heeft 15 een gelijke inhoud. De Amerikaanse octrooischriften 4.381.299 (26 april 1983), 4.331.665 (25 mei 1982) en 4.332.798 (1 juni 1982) zijn verleend op moederaanvragen van het Amerikaanse octrooischrift 4.390.534 en hebben een gelijke inhoud.

De op 13 oktober 1982 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 62.321 toont cefemverbindingen met formule 4, waarin R1 animo of beschermd amino is; R2 een desgewenst gesubstitueerde lage alifatische 20 koolwaterstofgroep of cycloalkenyl is; en de groep met formule 5 een desgewenst gesubstitueerde heterocyclische kationgroep die meer dan een stikstofatoom bevat voorstelt; en farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan. Ook worden tussenproducten beschreven met formule 6, waarin R1 en R2 zoals bovenstaand gedefinieerd zijn, R4 een beschermde carboxylgroep is en X een zuurrest is.

De op 23 maart 1983 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 74.653 toont cefemverbindingen met 25 formule 7, waarin R1 amino of beschermd amino is; R2 een desgewenst gesubstitueerde lagere alifatische koolwaterstofgroep, cyclo(lage)alkyl of cyclo(lage)alkenyl voorstelt; R3 (lage)alkylamino, N-beschermde(lage)alkylamino, di(lage)alkylamino, sulfo(lage)alkylamino, hydroxy(lage)alkylamino, N-beschermde hydroxy(lage)alkylamino, acyloxy(lage)alkyl, (lage)alkoxy(lage)alkoxy(lage)alkyl, di(lage)al-ky!amino(lage)alkyl, (lage)alkylthio(lage)alkyl, (lage)alkylthio, (lage)alkoxy, (lage)alkoxy(lage)alkoxy, 30 hydroxy(lage)a!koxy, acyl(lage)alkyl, hydroxy(lage)alkylthio, di(lage)alkylamino(lage)alkylthio, een N-bevattende onverzadigde heterocyclische 5-ring, een N-bevattende onverzadigde heterocyclicthio 5-ring, of N-bevattende onverzadigde heterocyclicthiothio(lage)alkyl 5- of 6-ring die met een of meerdere geschikte substituenten kan zijn gesubstitueerd, voorstelt; en R4 waterstof of (lage)alkyl is; of een zout daarvan.

Het Amerikaanse octrooischrift 4.332.800 van 1 juni 1983 (Tsutomu Teraji et al.), beschrijft onder andere 35 verbindingen met formule 8, waarin R1 amino of beschermd amino is; R2 (lage)alkyl is en X waterstof of carbamoyl is.

De op 24 maart 1982 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 47.977 toont cefemverbindingen met formule 9, waarin m gelijk is aan 0 of 1; Am desgewenst gesubstitueerde amino is; T een thiadiazolylgroep voorstelt (die met de andere groepen verbonden is door twee van zijn koolstof atomen); R2 waterstof, 40 desgewenst gesubstitueerd alkyl, cycloalkyl of desgewenst gesubstitueerd carbamoyl is; en Rn desgewenst gesubstitueerd thiazolio, desgewenst gesubstitueerd pyraolio, tri(lage)alkylammonio of een pyridiniogroep met formule 10 voorstelt, waarin Ra staat voor gesubstitueerd (lage)alkyl [waarin de substituent gevormd wordt door cycloalkyl, fenyl, hydroxy, alkoxy, halogeen, cyano, carbamoyl, carboxyl of sulfo], (lage)alkenyl, of carboxygesubstitueerde (lage)alkenyl, (lage)alkylthio of carboxy-gesubstitueerde (lage)alkylthio, amino of 45 monogesubstitueerde amino [waarin de subsituent gevormd wordt door (lage)alkyl, (lage)alkanoyl of aminobenzeensulfonyl], di(lage)alkylamino, gesubstitueerde carbamoyl [waarin de substituent gevormd wordt door (lage)alkyl, hydroxy(lage)alkyi, (lage)alkoxy, hydroxy of cyano], di(lage)alkylcarbamoyl, thiocarbamoyl, cycloalkyl, fenyl, hydroxy, (lage)alkoxy, halogeen, (lage)alkoxycarbonyl, (lage)alkanoyloxy, (lage)alkanoyl, carboxyl, sulfo, cyano, nitro of hydroxysulfo(lage)alkyl; Rb waterstof of carbamoyl is, of dezelfde betekenis 50 heeft als Ra; en Rc waterstof is of dezelfde betekenins heeft als Ra; en zouten daarvan.

Hoewel formeel zonder relatie, heeft de op 11 maart 1981 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 25.017 een gelijke inhoud.

De op 24 juni 1981 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 30.630 toont 3-vinylcefem-verbindingen met formule 11, waarin R1 staat voor een desgewenst beschermde amino-gesubstitueerde heterocyclische groep 55 die ook halogeen kan bevatten, of een groep met formule 12, waarin R3 (lage)alkyl is; R2 carboxy of beschermd carboxy is; en A staat voor lage alkyleen die een substituent kan bezitten gekozen uit amino, beschermd amino, hydroxy, oxo en een groep met de formule 13, waarin R4 waterstof, cyclo(lage)alkenyl, 192925 2 (lage)alkynyl, (lage)alkenyl [desgewenst gesubstitueerd döor carboxy of beschermd carboxy], (lage)alkyl [desgewenst gesubstitueerd door een of meerdere carboxy, beschermde carboxy, amino, beschermde amino, cyano fosfono, beschermde fosfono en een heterocyclische groep die zelf gesubstitueerd kan zijn] voorstelt; en zouten daarvan.

5 Deze aanvrage toont in het bijzonder verbindingen met formule 14, waarin OR4 methoxy, carboxyme-thoxy, tert. butoxycarbonylmethoxy of 1-tert.butoxycarbonylethoxy voorstelt.

De op 25 juni 1975 gepubliceerde Britse octrooipublicatie 1.399.086 toont in het algemeen een groot aantal cefalosporinen met formule 15, waarin R waterstof of een organische groep voorstelt, Ra een ether-vormende monovalente organische groep is welke met de zuurstof is verbonden via een koolstof-10 atoom, B staat voor S of S -> O, en P een organische groep is. In één uitvoeringsvorm kan P onder andere een vinylgroep met formule 16 zijn, waarin R3 en R4 onafhankelijk van elkaar kunnen staan voor waterstof, nitrile, (iage)alkoxycarbonyl, of gesubstitueerde of niet-gesubstitueerde alifatische, cycloalifatische, araiifatische of aromatische groepen. De 5-amino-1,2, 4-thiadiazol-3-yl-groep wordt echter niet als mogelijke R-substituent vermeld en ook wordt niet beschreven of gesuggereerd dat P een quatemaire ammonio-15 gesubstitueerde propenylgroep kan zijn. Het Amerikaanse octrooischrift 3.971.778 en de daarvan afgesplitste Amerikaanse octrooischriften 4.024.133; 4.024.137; 4.064.346; 4.033.950; 4.079.178; 4.091.209; 4.092.477 en 4.093.803 hebben een gelijke inhoud.

De op 14 september 1983 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 88.385 toont verbindingen met formule 17, waarin R1 (niet-gesubstitueerde)thiadiazolyl is; R2 carboxy(lage)alkyl of beschermd carboxy(la-20 gejalkyl is; R3 waterstof, halogeen of (lage)alkenyl is; en R4 carboxy of beschermd carboxy is. Hoewel 1- propenyl genoemd wordt als een van de mogelijke betekenissen van R3, geeft de aanvrager alleen voorbeelden van verbindingen waarin R3 waterstof, chloro of vinyl is.

Het Amerikaanse octrooischrift 4.037.233 van 22 december 1981 (Daniel Farge et al.) toont onder andere 3-vinylcefalosporine-derivaten met formule 18, Rs onder andere kan staan voor alkyl, vinyl, 25 cyanomethyl of een beschermende groep zoals 2-methoxyprop-2-yl, en R3 en R4 staan voor alkylgroepen (desgewenst gesubsititueerd door hydroxy, alkoxy, amino, alkylamino of dialkylamino) of fenylgroepen, of R3 en R4 samen met het stikstofatoom waarin ze gebonden zijn een verzadigde heterocyclische 5- of 6-ring kunnen vormen, die desgewenst een ander heteroatoom gekozen N, O en S bevat, en desgewenst door een alkyigroep is gesubstitueerd. De verbindingen zijn bruikbaar als tussenproducten in de bereiding van 30 3-thiovinyl-cefalosporine-derivaten. Er worden geen verbindingen beschreven of gesuggereerd met een 5-amino-1, 2, 4-thiadiazol-3-yl-groep in plaats van de 2-amino-thiazol-4-yl-substituent of met een quartemair ammoniogesubstitueerde propenylgroep in plaats van de 3-substituent. De gepubliceerde Britse octrooiaanvrage 2.051.062 stemt daarmee overeen en heeft een gelijke inhoud.

De op 9 juni 1982 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 53.537 toont onder andere 35 3-vinylcefalosporine-derivaten met formule 19, waarin Ras en Rb5 gelijke of verschillende groepen voorstellen en staan voor waterstof of alkyl, of samen een alkyleengroep vormen die 2 of 3 koolstofatomen bevat, R°5 een zuur-beschermende groep is, R2 een zuur-beschermende groep zoals ester is, R3 en R4 gelijk of verschillend zijn en staan voor waterstof, alkyl (desgewenst gesubstitueerd door hydroxy, alkoxy, amino, alkylamino of dialkylamino) of fenylgroepen, of R3 en R4 samen met het stikstofatoom waaraan ze gebonden 40 zijn, een verzadigde heterocyclische 5- of 6-ring kunnen vormen, welke desgewenst een ander heteroatoom bevat gekozen uit N, O en S, en desgewenst gesubstitueerd door een alkyigroep. De verbindingen zijn bruikbaar, ais tussenproducten in de bereiding van 3-thiovinyl-cefalosporine-derivaten. Er worden geen verbindingen beschreven of gesuggereerd met een 5-amino-1, 2, 4-thiadiazol-3-yl-groep in plaats van de 2- aminothiazo!-4-yl-substituent of met een quartemair ammoniogesubstitueerde propenylgroep in plaats van 45 de 3 sustituent.

Het Amerikaanse octrooischrift 4.423.214 stemt daarmee overeen en heeft een gelijke inhoud.

De op 2 juni 1982 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 53.074 toont in het algemeen een groot aantal 3-vinylcefalosporine-derivaten met formule 20, waarin R°1a (in één van meerdere uitvoeringsvormen) een groep met formule 21 kan zijn, waarin R5 onder andere kan staan voor waterstof, alkyl, vinyl, cyanome-50 thyl, een oxime-beschermende groep zoals trityl, enz., of een groep met formule 22, waarin RaRb5 gelijk of verschillend zijn en kunnen staan voor waterstof, alkyl of, tezamen genomen, een alkyleengroep met 2 of 3 koolstofatomen, en Rcs staat voor waterstof of een zuur-beschermende groep; R°2a staat voor waterstof of een zuur-beschermende groep zoals methoxymethyl; R° (in één van meerdere uitvoeringsvormen) een methylgroep kan zijn, gesubstitueerd door een aromatische heterocyclische 5- of 6-ring welke één enkel 55 heteroatoom bevat, zoals 2- of 3-pyridyl, 2- of 3-thiënyl of 2- of 3-furyl; en R3 een groep met de formule R4S020- is, waarin R4 alkyl, trihalomethyl of desgewenst gesubstitueerd fenyl is.

Deze verbindingen worden aangeduid als tussenproducten in de bereiding van verbindingen waarin de 3 192925 3-substituent een groep met formule 23 is, waarvan gezegd wordt dat ze antibacteriële werkzaamheid hebben.

Hoewel dit octrooischrift de mogelijkheid omvat dat R° een methylgroep is, gesubstitueerd door een N-bevattende heterocyclische ring, toont het voor zowel de tussenproducten als de eindproducten (waarbij 5 een heterocyclische gesubstitueerde propenylgroep wordt verkregen) alleen een binding van de heterocyclische ring via een van zijn koolstofatomen. Er is derhalve geen sprake van dat een quartemair ammonio-gesubstitueerde propenylgroep wordt gesuggereerd. In de voorbeelden is R° in zowel de tussenproducten als in de eindproducten alleen methyl. Verder moet de propenylgroep in zowel de tussenproducten als in het eindproduct een tweede substituent bevatten (respectievelijk -03SR4 of -SR).

10 Ook worden geen verbindingen beschreven of gesuggereerd met een 5-amino-1, 2, 4-thiadiazol-3-yl-groep in plaats van de 2-aminothiazol-4-yl-substituent.

De op 9 juni 1982 gepubliceerde Europese octrooiaanvrage 53.538 toont onder andere 3-vinylcefalosporine-tussenproducten met formule 24, waarin n staat voor 0 of 1, R5 staat voor waterstof, alkyl, vinyl, cyanomethyl of een oxime-beschermende groep, en R3 halogeen is. Er worden geen verbindin-15 gen beschreven of gesuggereerd met een 5-amino-1, 2, 4-thiadiazol-3-yl-groep in plaats van de 2-aminothiazol-4-yl-substituent, en met een 3-halogeen-1-propen-1-yl-substituent op de 3-positie.

De uitvinding verschaft nu een antibacteriee! werkzaam 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxy-iminioaceetamido]-3-[(3-quatemair ammonioalkyl)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat, dat voldoet aan de algemene formule 1 op het formuleblad, waarin +N=Q een groep is, gekozen uit: 20 a) een trimethylammoniogroep, b) een 1-methylpyrrolidiniogroep, c) een 3-pyridinïogroep, d) een 3-aminopyridiniogroep, e) een 4-carbamoylpyridiniogroep, 25 f) een 2-methylthiazoliogroep, en g) een 2-amino-5-thiazolio [4, 5-c]pyridiniogroep, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout, solvaat, hydraat, of fysiologisch hydrolyseerbare esters daarvan.

Zoals de structuurformule laat zien, hebben de verbindingen met formule 1 van het formuleblad de ”syn” of "z” configuratie met betrekking tot de alkoxyiminogroep. Omdat de verbindingen geometrische isomeren 30 zijn, kan ook een geringe hoeveelheid van het ’’anti” isomeer aanwezig zijn. De uitvinding omvat verbindingen met formule 1, die ten minste 90% van het ”syn” isomeer bevatten. Bij voorkeur zijn de verbindingen met formule 1 ”syn” isomeren die in essentie vrij zijn van de corresponderende ’’anti” isomeren.

Behalve dat met betrekking tot de alkoxyiminogroep geometrische isomeren mogelijk zijn, vormen de verbindingen met formule 1 (en de tussenproducten met de formules 31 en 32 ook geometrische (cis en 35 trans) isomeren om de dubbele binding van de propenylgroep. Zowel de cis (”Z”) als trans (”E”) isomeren van deze verbindingen worden specifiek door de uitvinding omvat.

De niet-toxische farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen van formule 1 omvatten zouten met anorganische zuren zoals waterstofchloride, waterstofbromide, fosforzuur en zwavelzuur, en met organische carbonzuren of sulfonzuren zoals azijnzuur, trifluorazijnzuur, citroenzuur, mierezuur, maleïne-40 zuur, oxaalzuur, bamsteenzuur, bezoëzuur, wijnsteenzuur, fumaarzuur, mandelzuur, ascorbinezuur, appelzuur, methaansulfonzuur, benzeensulfonzuur, p-tolueensulfonzuur en andere bekende en op het gebied van penicillinen en cefalosporinen gebruikte zuren. De bereiding van deze zuuradditiezouten wordt volgens conventionele technieken uitgevoerd.

Voorbeelden van fysiologisch hydrolyseerbare esters van de verbindingen met formule 1 omvatten 45 indanyl, ftalidyl, methoxymethyi, acetoxymethyl, pivaloyloxymetyl, glycyloxymethyl, fenylglycyloxymethyl, 5-methyl-2-oxo-1, 3-dioxolen-4-ylmethyl en andere fysiologische hydrolyseerbare esters die bekend en op het gebied van penicillinen en cefalosporinen gebruikt zijn. Dergelijke esters worden volgens op zichzelf bekende conventionele technieken bereid.

De verbindingen met formule 1, vertonen een hoge antibacteriële werkzaamheid tegen verscheidene 50 grampositieve en gram-negatieve bacteriën, en zijn bruikbaar in de behandeling van bacteriëie infecties bij dieren, met inbegrip van de mens. De verbindingen met formule 1 kunnen op conventionele wijze voor parenteraai gebruik worden samengesteld door gebruik te maken van bekende farmaceutische dragers en excipiëntia, en kunnen in de vorm van een doseringseenheid of in houders met meerdere doseringen worden gepresenteerd, de samenstellingen kunnen de vorm hebben van oplossingen, suspensies of 55 emulsies in olie-achtige of waterige dragers, en kunnen conventionele dispergeermiddelen, suspendeer-middelen of stabilisatiemiddelen bevatten. De samenstellingen kunnen ook de vorm hebben van een droog poeder om voor gebruik te worden gereconstitueerd, bijvoorbeeld met steriel, pyrogeenvrij water. De I 192925 4 verbindingen met formule 1 kunnen ook als zetpillen worden samengesteld door gebruik te maken van conventionele zetpilbases zoals cacaoboter of andere glyceriden. De verbindingen volgens de uitvinding kunnen desgewenst in combinatie met andere antibiotica zoals pencillines of andere cefalosporines worden toegediend.

5 Wanneer de samenstellingen in de vorm van doseringseenheden worden geleverd, zullen ze bij voorkeur ongeveer 50 tot ongeveer 1500 mg van de actieve ingrediënt met formule 1 bevatten. De dosering van de verbindingen met formule 1 hangt af van factoren zoals het gewicht en de leeftijd van de patiënt alsmede van de bepaalde aard en ernst van de ziekte, en zal door de arts moeten worden bepaald. Gewoonlijk zal echter de dosering voor de behandeling van volwassen mensen in het gebied van ongeveer 500 tot 10 ongeveer 5000 mg per dag liggen, afhankelijk van de toedieningsfrequentie en -route. Bij intramusculaire of intraveneuze toediening aan een volwassen mens, zal gewoonlijk een totale dosering van ongeveer 750 tot ongeveer 3000 mg per dag in verdeelde doses voldoende zijn, hoewel hogere dagelijkse doses van enkele van de verbindingen gewenst kunnen zijn in het geval van Pseudomonas infecties.

Meer in het bijzonder wordt de quartemaire ammoniogroep met formule 2 volgens de uitvinding gekozen 15 uit a) een trimethylammoniogroep, b) een 1-methylpyrrolidiniogroep, c) een 3-pyridiniogroep, d) een 3-aminopyridiniogroep, 20 e) een 4-carbamoylpyridiniogroep, f) een 2-methylthiazoliogroep, en g) een 2*amino-5-thiazolio [4, 5-c]pyridiniogroep.

De volledige namen van de verbindingen volgens de uitvinding zijn 1) 7-[2-(5-amino-1,2I4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(trimethylammonio)-1-propen-1-yl]-3 25 -cefem-4-carboxylaat, 2) 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(1 -methylpyrrolidinio)-1 -propen-1 -yl]-3-cefem-4-carboxylaat, 3) 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-pyridinio-1 -propen-1 -yi]-3-cefem-4-carboxylaat, 30 4) 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(3-aminopyridinio)-1 -propen-1 -yi]-3 -cefem-4-carboxylaat, 5) 7-[2-(5-amino-1,2,4-thidiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(4-carbamoylpyridinio)-1 -propen-1 -y l]-3-cefem-4-carboxylaat, 6) 7-2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(2-mehylthiazolio)-1 -propen-1 -yl]-3 35 -cefem-4--carboxylaat, 7) 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(2-amino-5-thiazolo[4, 5-c]pyridinio)-1 -propen-1 -yl-3-cefem-4-carboxylaat.

Het in deze beschrijving voor de verschillende reactanten, tussenproducten en eindproducten gebruikte nummeringssysteem is als volgt: 40 [Arabische cijfer] = Letter (indien van toepassing)

Het arabische cijfer verwijst naar de formules op het formuleblad. Wanneer de algemene klasse (het genus) van de verbindingen wordt bedoeld, volgen geen tweede arabische cijfer en letter.

De aan het einde gegeven letter duidt op de bepaalde betekenis van de quatemaire ammoniogroep met formule 2.

45 De betekenis van de letters voor de quatemaire ammoniogroepen wordt ter verduidelijking onderstaand gegeven.

Letter Groep met formule 2 A= 1-methylpyrrolidinio B = 3-pyridinio 50 C = 2-aminio-5-thiazolo[4, 5-c]pyridinio D = trimethylammonio E = 3-aminopyridinio H = 4-carbamoylpyridino J = 2-methylthiazolio

55 In de primaire evaluatie van de verbindingen volgens de uitvinding werden de minimum inhibitore concentraties (MIC-waarden) van de verbindingen bepaald door de tweevoudige seriegewijze agarverdun-ningsmethode in Mueller-Hinton agar tegen 32 stammen van testorganismen in zes groepen. In tabel A

5 192925 worden de geometrische gemiddelden van de in deze test bepaalde MIC-waarden getoond.

TABEL A

5 Verb. Contigu- Geometrisch gemiddelde van MIC (mcg/m1) ratie bij _ de (G+)-la (G+)-lb (G-)-la (G-)-lb (G-)-ll (G-)-lll dubbele binding <» <5> (5> (5) <5> (?) 10 - 1A E/Z=1/1 0.26 0.70 0.05 0.15 0.23 2.4 1A E/Z=7/1 0.13 0.35 0.029 0.05 0.17 1.4 1B E 0.20 0.40 0.016 0.044 0.11 1.6 1B E/Z=1/4 0.35 0.80 0.05 0.11 0.35 3.5 15 1C E 0.10 0.20 0.0071 0.033 0.087 3.8 1D E/Z=1/1 0.61 1.4 0.10 0.26 0.46 2.4 1D E/Z=10/1 0.30 0.53 0.05 0.076 0.26 1.3 1E E 0.20 0.40 0.0094 0.029 0.10 1.4 1H E 0.20 0.40 0.013 0.043 0.10 0.97 20 1J E 0.17 0.35 0.025 0.076 0.15 1.6 (G+)-la : Penicilline-gevoelige S.aureus (5 stammen) (G+)-lb : Penicilline-restistente S. areus (5 stammen) 25 (G-)-la : Cefalothine-gevoelige E. Coli (2 stammen), KL pneumoniae (1 stam) en Pr. mirabilis (2 stammen) (G-)-lb : Cefalothine-resistente E Coli (3 stammen) en KL pneumoniae (2 stammen) (G-)-ll : M^ morganii (1 stam), Ent, cloacae (2 stammen) en Ser. marcescens (2 stammen) (G-)-lll : Ps. aeruginosa (7 stammen) 30 Onderstaande tabel B toont de beschermende dosiSgo (PDso) in muizen voor een aantal verbindingen met formule 1 tegen geselecteerde microörganismen. Tabel C geeft de bloedspiegels van verschillende verbindingen met formule 1 na intramusculaire toediening van de testverbindingen aan muizen in een dosering van 20 mg/kg.

35 TABEL B

PDgo (mg/kg) S. aureus Ecoli P. aeruginosa

Verbinding Smith Juhl A9843A

40 - 1B 0.44 0.028 7.7

1B 0.65 0.072 NT

1C 0.22 0.013 NT

1H 0.39 0.015 3.9

45 1J 0.35 0.029 NT

NT=niet getest

TABEL C

50 -

Verbinding C max T1/2 AUC

(mcg/m1) (min) (mcg uur/ml 1-B 17 21 11 55 1-C 21 32 18 1-D 20 19 11 192925 6 TABEL C (vervolg)

Verbinding C max T1/2 AUC

(mcg/m1) (min) (mcg uur/ml 5 - 1-H 23 16 14 1-J 19 16 9,7 10 Hieronder worden werkwijzen voor het bereiden van de verbindingen met formule 1 beschreven. De geprefereerde procedures worden getoond in de reactieschema's 1a, 1b en 1c, terwijl een alternatieve procedure getoond wordt in reactieschema 2. De afkorting ”Ph" duidt op een fenylgroep. De -CH(Ph)2-groep is derhalve de benzhydrylgroep, die een geprefereerde carboxyl-beschermende groep is. Wanneer R2 een carboxylgroep bevat, is het gewenst dat de carboxylgroep wordt beschermd met een conventionele 15 carboxyl-beschermende groep zoals de tert.butylgroep. Y staat voor chloro, bromo of jodo.

Reactieschema 1a toont twee alternatieve methoden om van verbinding 32 te komen tot verbinding 35. De directe route, waarbij een tertiair amine met formule 34 wordt gebruikt, is bruikbaar voor de bereiding van alle verbindingen met formule 1. De indirecte route via de verbinding met formule 33, maakt gebruik van een secundair amine als reactant, en wordt in de volgende stap gequatemiseerd. Het secundaire amine 20 RR'NH kan acyclisch zijn (bijvoorbeeld dimethylamine) of cyclisch zijn (bijvoorbeeld pyrrolidine), en deze indirecte procedure is derhalve geschikt voor de bereiding van verbindingen met formule 1 waarin de quatemaire ammoniogroep acyclisch of ’’gemengd” acyclisch/cyclisch is. Deze indirecte route is niet geschikt voor de bereiding van verbindingen met formule 1, waarin de quatemaire stikstof zich bevindt in een volledig onverzadigde heterocyclische ring (bijvoorbeeld pyridinio, thiazolio, 2-amino-5-thiazolo [4, 5-c] 25 pyridinio, en dergelijke).

Reactieschema 1 b is een variatie van reactieschema 1 a waarbij de 7-aminogroep van het uitgangsmateriaal met formule 25 beschermd is in de vorm van een Schiff-base tijdens de meeste reactiestappen, en waarbij het gewenst zuur op de 7-zijketen later in de synthese wordt toegevoegd. Voor het overige is de algemene procedure gelijk.

30 Reactieschema 1c is een verdere variatie van reactieschema 1b. In de reactieschema’s 1a en 1b is quaternisering van de 3 zijketen de laatste stap, maar in reactieschema 1c is de laatste stap acylering van de 7-amino-groep. Het verband tussen de reactieschema’s 1a, 1b en 1c wordt getoond in het op het formuleblad weergegeven stroomschema.

in reactieschema’s 1a, 1b en 1c werd de benzhydrylgroep getoond als de geprefereerde carboxyl-35 beschermende groep. De deskundigen zullen echter begrijpen dat andere carboxyl-beschermende groepen, die op zichzelf welbekend zijn, gebruikt kunnen worden. Het acylerende zuur met formule 26 kan worden gebruikt in de vorm van een derivaat daarvan, zoals het zuurhalogenide, de geactiveerde ester, het gemengde zuuranhydride, enz., die alle op zichzelf welbekend zijn. Bij voorkeur wordt het gebruikt in de vorm van het zuurchloride. De aminogroep van het acylerende zuur met formule 26 kan ook beschermd zijn 40 door één van de gebruikelijke amino-beschermende groepen, bijvoorbeeld N-trityl, N-formyl en dergelijke.

De base die gebruikt wordt om het fosfoniumjodide (formules 29 en 30) om te zetten teneinde het fosforylide (formules 30 of 34) te verkrijgen, kan NaOH, Na2C03, IRA-410 (OH* hars, IRA(C032*) hars, en dergelijke zijn, of een mengsel daarvan. Het chloroacetaldehyde, dat gebruikt wordt om het fosforylide met formule 30 om te zetten in de 3-chioropropenyl-3-cefem-verbinding met formule 31 (of verbinding 39 om te 45 zetten in verbinding 40) kan de in de handel verkrijgbare 40-50%’s waterige oplossing zijn, een gedestilleerde oplossing zijn (bijvoorbeeld 70%) of het watervrije aldehyde zijn.

Gevonden is dat de uit de verbinding met formule 30 (schema 1a) bereide verbinding met formule 31 typerend een Z: E-verhouding van ongeveer 2 :1 had bij de propenyl dubbele binding. Anderzijds bestond de uit verbinding 41 (schema 1b) bereide verbinding met formule 31 typerend nagenoeg uitsluitend uit het 50 Z-isomeer. Het verschil hoeft niet aan de gebruikte route te liggen, maar kan veroorzaakt zijn door de in de Wittig-reactie gebruikte condities (30 in 31 of 39 in 40). Ook is gevonden dat het gebruik van een geschikt silyl-reagens zoals N,0-bis(trimethylsilyl)acetamide in de Wittig-reactie (30 in 31 in schema 1a en 39 in 40 in schema 1b) een verbetering van de opbrengsten en zuiverheid van de verbindingen met de formules 31 en j 40 veroorzaakte. De reactie wordt bij voorkeur uitgevoerd met 2-5 equivalenten van het silylreagens.

| 55 Wanneer het chloropropenyl-cefem met formule 31 in reactie werd gebracht mat Nal in aceton onder vorming van het jodopropenyl-cefem met formule 32, bleek de dubbele binding in de propenylgroep van Z naar E te isomeriseren tijdens de jodering. In geval van een korte reactieperiode bleef de configuratie van 7 192925 de uitgangsverbinding met formule 31 in grote mate behouden, terwijl in het geval van een lange reactie-periode primair het E-isomeer van de verbinding met formule 32 werd verkregen. Een buitensporige reactieduur bij hoge temperatuur geeft echter een verbinding met formule 32 van lagere zuiverheid. Gevonden is dat ongeveer 10 minuten bij 25°C en 2 uur bij 5°C een zuivere verbinding met formule 32 in 5 goede opbrengst geeft. Bij gebruik van reactieschema 1c is gevonden dat bij jodering van de verbinding met formule 37 met Nal, een zuiverder verbinding werd verkregen indien de aceton-oplossing met CCI4 wordt verdund wanneer de jodering in essentie voltooid is, en het isomerisatiegedeelte van de reactie wordt uitgevoerd in het aceton-CC14-mengsel. Wanneer jodering van het chloropropenyl-cefem met formule 40 tot het jodopropenyl-cefem met formule 42 uitgevoerd werd met KI in DMF, verliep de isomerisatie van de 10 dubbele binding van Z naar E even snei ais de jodering. De hele reactie was binnen 45 minuten bij kamertemperatuur voltooid onder vorming van een zuivere verbinding met formule 42 zonder verdunning met CC14 in de loop van de reactie.

De verbinding met formule 35 werd gewoonlijk gedeblokkeerd zonder zuivering, en het eindproduct met formule 1 werd gezuiverd door omgekeerde fase-kolomchromatografie gebruikmakend van een glazen 15 kolom met daarin de pakking, verwijderd uit een Waters’ Associates Pre-PAK-500/C18-patroon.

Reactieschema 2 is gelijk aan reactieschema 1a, behalve dat de verbinding met formule 46 (equivalent met verbinding 32 van reactieschema 1a) voorafgaande aan quatemisering wordt omgezet in het S-oxide.

De verbinding met formule 48 wordt vervolgens gereduceerd, en de rest van reactieschema 2 is als reactieschema 1a. in reactieschema 2 heeft het de voorkeur dat de aminogroep van de 7-zijketen 20 beschermd wordt met een bekende amino-beschermende groep zoals de tritylgroep.

De acylerende zuren met formule 26 zijn hetzij bekende verbindingen, hetzij gemakkelijk volgens gepubliceerde procedures te bereiden. De op 12 oktober 1983 gepubliceerde Europese octrooipublicatie 7.470 (de aanvrage was op 6 februari 1980 gepubliceerd) geeft de voorbeelden voor de bereiding van verbindingen met formule 26. Het eerder genoemde Amerikaanse octrooischrift 4.390.534 geeft eveneens 25 voorbeelden van de bereiding van verbindingen met formule 26.

De verbinding met formule 25 (17-amino-3-chloromethyl-3-cefem-4-carboxylaat), die in reactieschema's 1a, 1b en 1c als uitgangsmateriaal wordt gebruikt, is een bekende verbinding.

De tertiaire amines met de formule 34 (en de secundaire aines RR'NH) die gebruikt worden voor het bereiden van de quatemaire ammonio-verbindingen volgens de uitvinding, zijn hetzij bekende verbindingen, 30 hetzij gemakkelijk door deskundigen te bereiden. Veel van de amines zijn in de handel verkrijgbaar.

De reacties worden uitgevoerd in een niet-waterig organisch oplosmiddel zoals dimethylsulfoxyde, hexamethylfosforamide, methyleenchloride, chloroform, ethylether, hexaan, ethylacetaat, tetrahydrofuran, acetonitrile en dergelijke, of mengsels van dergelijke oplosmiddelen. De reacties worden geschikt uitgevoerd bij een temperatuur van ongeveer -10°C tot ongeveer +50°C; gewoonlijk wordt geprefereerd om de racties 35 bij kamertemperatuur uit te voeren. Tijdens de quatemiseringsstap, dient bij voorkeur ten minste 1 mol van het tertiaire amine te worden gebruikt per mol van de verbindingen met de formules 32, 42, 46 of 42; gewoonlijk heeft het de voorkeur dat ongeveer 25 tot 100% overmaat van het tertiaire amine wordt gebruikt.

Wanneer de cefalosporinekem gebruikt wordt in de vorm van het 1-oxyde (m = 1), wordt het 1-oxyde volgens bekende procedures bereid, bijvoorbeeld door oxydatie met m-chloroperbenzoëzuur, perazijnzuur, 40 natriumwolframaat enz. Het 1-oxyde kan vervolgens volgens bekende procedures worden gereduceerd, bijvoorbeeld door reductie van het overeenkomstige alkoxysulfoniumzout met jodide-ionen in een waterig medium. Het alkoxysulfoniumzout zelf kan gemakkelijk worden bereid door behandeling van het 1-oxyde met bijvoorbeeld acetylchloride.

De hierin gebruikte termen acylamino en acyloxy duiden op een geacyleerde amino- of geacyleerde 45 hydroxygroep waarin de acyigroep (lage)alkanoyl (b.v. formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, isovaleryl, enz.), aroyl (b.v. benzoyl, enz), (iage)alkaansulfonyl, (b.v.) mesyl, ethaansulfonyl, enz.) of arylsulfonyl (b.v. benzeensulfonyl, tosyl, enz.) is.

De hierin gebruikte termen ’’(lage)alkyr, ’’(lage)alkoxy”, ’’(lage)alkylthio” en dergelijke duiden op rechte of vertakte alkyl-, alkoxy-, alkylthio- (en dergelijke) groepen met 1 tot 6 koolstofatomen. De termen (lage)alke-50 nyl en (lage)alkynyl duiden op alkenyl of alkynyl groepen met 2 tot 6 koolstofatomen.

Voorbeeld I

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(1-methylpyrrolidinio)-1-propen-1-yl ]-3-cefem-4-carboxylaat (1-A met formule 50) 55 Aan een oplossing van difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodo-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat 32 (Z/E = 2/1,150 mg, 0,21 mmol) in 2 ml ethylacetaat werd in één portie onder roeren een oplossing van 1-methylpyrrolidine (36 mg, 0,42 mmol) in 1 ml ethylacetaat 192925 8 toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 15 min. geroerd en met 10 ml isopropylether verdund waarbij een neerslag werd gevormd, dat door filtratie werd verzameld. Een mengsel van de vaste stof (130 mg), mierezuur (1 ml) en geconcentreerd HCI (0,1 ml) werd bij kamertemperatuur geroerd. Na 1 uur werd het reactiemengsel onder verminderde druk geconcentreerd, met 20 ml water verdund en gefiltreerd. De 5 waterige oplossing werd door een omgekeerde fasekolom geleid (de pakking van PrepPAK-500/C18patroon, 100 ml), waarbij met water en 10% CH3OH werd geëlueerd. De gewenste fracties werden verzameld, en onder verminderde druk geconcentreerd tot een klein volume en gevriesdroogd. Men verkreeg 13 mg (12%) van de titelverbinding (1-A) (Z/E = 1/1), smeltpunt boven 280°C (ontleding).

IR: v κβγ cm'1 3400, 1760, 1660, 1610.

10 UV: X[^aatbuffer(pH 7) nm (Ei* ) 236 (372), 288 (322).

y-Hl NMR: δ 2,31 (4H, m,t^ [ 3,12 (3H, s, N-CH3 ), 3,6 (5H, m, 15 2- H & I N), 3,79 (1H, s, 2-H), 4,1 (2H, d, J=8, CH^N), 4,2 (3H, S, OCH3), 5,36 (1H, d, J=4,5, 6-H), 5,95 (3H, m, 7-H & 3-CH=CH), 6,66 (1/2H, d, J=10, 3-CH cis), 20 7,0 (1/2H, d, J=16, 3-CH trans).

Voorbeeld II

7-[2-5(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-pyridinio-1 -propen-1 -yl]-3-cefem-4-25 carboxylaat (1-B met formule 51)

Een mengsel van defenyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thidiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodo-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (32) (E, 716 mg, 1 mmol), pyridine (158 mg, 2 mmol) in 1 ml dimeethylsulfoxyde (DMSO) werd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Aan het mengsel werd 20 ml ethylacetaat toegevoegd om een vaste stof (620 mg) neer te slaan, die aan 6 ml mierezuur dat 60 mg natriumbisulfiet 30 bevatte, werd toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 30 min bij 40°C geroerd en drooggedampt. Het residu werd opgelost in 40 ml water en onoplosbare stof werd verwijderd. De waterige oplossing werd op een kolom van omgekeerde fase (prepPAK-500/C18,100 ml) gebracht, waarbij geëlueerd werd met 300 ml water en 800 ml 5%’s waterig CH3OH, en het eluaat werd gevolgd met uv (254 nm) en HPLC. De fracties (5% waterig CH3OH) die het gewenste product bevatten, werden gecombineerd, tot een klein volume 35 geconcentreerd en gelyofiliseerd. De opbrengst bedroeg 40 mg (8%) van de titelverbinding (1-B), met een smeltpunt boven 200°C (ontleding).

IR: v I®' cnrr1 3350, 1760, 1660, 1600.

max * ’ UV: λ fosfaatbuffer(pH 7) nm (Ei* ) 240 (352), 258 (366), 267 (279), 290 (469).

NMR: 8 ^cn-dmso^ 3 74 (2H, br-s, 2-H, 4,20 (3H, s, OCH*3), 5,92 (1H, d, J=4,5, 7-H), 6,15 (1H, m, 40 3-CH=CR), 7,04 (1H, d, J=16, 3-CH trans), 8,2 (2H, m, Py-H35), 8,62 1H, m, Py-H4), 8,97 (2H, m, Py-H26).

Voorbeeld III

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido-3-[3-pyridinio-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (1-B met formule 52) 45 De chloropropenyl-verbinding, difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]- 3- (3-chloro-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat 31) (Z, 937 mg, 1,5 mmol) werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van pyridine (237 mg, 3 mmol) in 3 ml DMSO, welke Nal bevatte (11 mg, 0,075 mmol). Men liet het mengsel gedurende een nacht bij kamertemperatuur in het donker staan. Het mengsel werd verdund met 30 ml ethylacetaat om een neerslag af te scheiden dat vervolgens door filtratie werd verza- 50 meld, met 10 ml ethylacetaat werd gewassen en gedroogd werd onder vorming van 350 mg van het geblokkeerde product. Het neerslag werd behandeld met 3,4 ml mierezuur, dat 34 mg natriumbisulfiet bevatte, gedurende 30 min bij 40°C. Na verwijdering van het mierezuur, werd het residu gezuiverd door omgekeerde fase-kolomchromatografie (pakking van PrepPAK-500/C1fl patroon, 100 ml) door te eluëren met 5%’s waterig CH3OH. De fracties die het gewenste product bevatten, werden gecombineerd op basis van 55 HPLC-analyse, onder verminderde druk verdampt en gelypfiliseerd. Men verkreeg 41 mg (5,5%) van de titelverbinding (1-B) (Z/E= 4/1). Smeltpunt boven 200°C (ontleding).

IR: v K8r cm*1 3300,1760,1660,1600.

max 9 * 9 9 192925 UV: λ «osfaaibufter (PH 7) nm (Ε]% ) 237 (386), 250 (377), 258 (369), 265 (347), 280 (311).

NMR: δ%ο 3,45 & 3,76 (elk 1H? d, J=16, 2-Η), 4,18 (3Η, 3, OCH2), 5,34 (3Η, m, CH=CH-CH2 & 6-H), 5,92 (1H, d, 1-1=4,5, 7-H), 6,58 (4/5H, d, J=11, 3-CH cis), 7,03 (1/5H, d, J=16, 3-CH trans), 8,12 (2H, m, Py-H35), 8,56 (1H, m, Py-H4), 8,82 (2H, m, Py-H26).

5

Voorbeeld IV

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(2-amino-5~thiazolo[4,5-c]pyridinio)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-C met formule 53)

Een geroerde oplossing van difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-10 (3-jodo-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat 32) (E-isomeer, 714 mg, 1 mmol), 2-aminothiazolo-[4,5-c]pyridine [bereid volgens de procedure van T. Takahasi et al. Pharm. Buil (Japan), 2, 34 (1954)] en 1 ml droog DMSO werd gedurende 1 uur op kamertemperatuur gehouden. Aan het reactiemengsel werd 20 ml ethylacetaat toegevoegd waarbij een geel poeder (710 mg) werd verkregen. Men voegde aan het poeder (700 mg) 7 ml mierezuur en 70 mg natriumbisulfiet toe, en roerde het mengsel gedurende 30 min bij 15 40-45°C. Na verdamping werd het residu met 40 ml fijngewreven. Onoplosbare stof werd afgefiltreerd, en het filtraat werd chromatografisch behandeld over een omgekeerde fasekolom (PrepPAK-500/C18,100 ml), met water en 10% CH3OH als eluens. De fracties die het gewenste product bevatten werden gecombineerd, en het oplosmiddel werd onder verminderde druk verwijderd. Lyofilisatie gaf het gewenste product (1-C) als een kleurloos amorf poeder van het E-isomeer. De opbrengst bedroeg 110 mg (19%). Smeltpunt lag boven 20 200°C (ontleding).

IR: v κβγ cm'1 3300, 1760, 1660, 1630, 1600.

max I*** UV: λ fosfaatbuHer (pH 7) nm (E]% ) 245 (499), 285 (286).

NMR: δ DMS0-d,+Dj0 386 (3H, s, OCHg), 4,98 (1H, d, J=4,5, 6-H, 5,2 (2H, m, CH=CH·^), 5,57 (1H, m, 3-CH=C^ 5,96 (1H, m, 7-H), 7,16 (1H, d, J=16, 3-CH trans), 8,36 & 8,45 (elk 1H, d, J=7, Py-H), 8,92 (1H, 25 S, Py-H).

Voorbeeld V

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido)-3-(3-trimethylammonio-1 -propen-1 -yl)-3-cefem-4-carboxylaat (1-D met formule 54) 30 Aan een oplossing van difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodo-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (32) (Z/E=2/1, 490 mg, 0,68 mmol) in 14 ml ethylacetaat werd in een portie een oplossing van 0,1 M trimethylamine in 13,6 ml ether toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 10 min geroerd en drooggedampt, en het residu werd met 20 ml ether fijngewreven. Het verkregen vaste stof (490 mg) werd aan 0,2 mi trifluoroazijnzuur toegevoegd, dat een druppel anisol 35 bevatte. Na 1,5 uur roeren werd het mengsel drooggedampt onder verminderde druk en werd de resterende olie met 20 ml ether fijngewreven. Het verkregen neerslag werd door filtratie verzameld en in 20 ml water opgeiost. Wat onoplosbare stof werd verwijderd en de waterige oplossing werd geëlueerd op een C18 omgekeerde fase-kolom (de pakking van PrepPAK-500/C18 patroon, Waters’ 30 ml) met water als eluens. Fracties die de gewenste verbinding bevatten werden gecombineerd en geconcentreerd op een klein 40 volume en gelyofiliseerd. Men verkreeg 30 mg (9,2%) van de titelverbinding (1-D) /Z/E = 1/1) als een kleurloos amorf poeder met smeltpunt boven 150°C (ontleding).

IR: v Kjj|r cm -1 3300, 1770,1670,1605.

UV: (pH 7) nm (¾) 236 (389)· 287 (343> NMR: δ%° 3,45 & 2,7 (1H, d?J=16, 2-H), 3,81 (1H, S, 2-H), 4,1 (2H, d, J=8, -CH.2N, 4,21 (3H, s, OCH3), 45 5,39 (1 Ka, J=4,5, 6-H), 5,95 (2H, m, 3-CH=CH & 7-H), 6,61 (1/2H, d, J=11, 3-H cis), 7,05 (1/2H, d, J=16, 3-CH trans).

Voorbeeld VI

7-[2-(5-Amino-1,2,4-tbiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[-3-aminopyridinio)-1 -propen-1-yl]-3-cefem-50 4-carboxylaat (1-E met formule 55)

Difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido)-3(3-jodo-1 -propen-1 -yl]-3-cefem-4-carboxylaat (32), (E, 716 mg, 1 mmol) werd toegevoegd aan een geroerde oplossing van 3-aminopyndine (188 mg, 2 mmol) in 1 ml DMSO. Het mengsel werd gedurende 1 uur geroerd en met 20 ml ethylacetaat verdund. Het verkregen neerslag werd door filtratie verzameld, met ethylacetaat 55 gewassen en gedroogd, waarbij 520 mg van een geel poeder werd verkregen. Een mengsel van het poeder (500 mg) mierezuur (5 ml) en natriumbisulfiët (50 mg) werd gedurende 30 min bij 40°C geroerd. Het mengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd, opgelost in 40 ml water en gefiltreerd om onoplos- 192925 10 bare stoffen te verwijderen. De waterige oplossing werd chromatografisch behandeld op een kolom van omgekeerde fase (pakking PrepPAK 500/C16,100 ml) met 7,5%’s waterig CH3OH-elutie. De fracties die de gewenste verbinding bevatten werden verdampt en gelyofiliseerd. Men verkreeg de titelverbinding (1-E) in een hoeveelheid van 7 mg, 1,4%. Hij smolt boven 185°C (ontleding).

5 IR: v KBr cm'1 3400, 1765, 1675, 1620, 1600.

UV: λ ^aatouffer (PH 7) nm (E]%) 246 (403), 290 (468).

NMR: 5¾ 3,72 (2H, m, 2-H)?4,14 (3H, s, 0CH3), 5,35 (3H, m, 6-H & CH=CH-CHa), 5,9 (1H, d, J=4,5, 7-H), 6,1 (1H, m, 3-CH=CH), 7,05 (1H, d, J=16, 3-CH, trans), 8,1 (1H, m, Py-H5), 8,54 (1H, br-s, Py-H6), 8,68 (1H, m, Py-H4), 9,4 (1H, m, Py-H2).

10 Behandeling van verbinding 69-1 (716 mg, 1 mmol) met 3-tert.butoxycarbonylaminopyridine (324 mg, 2 mmol) volgens een soortgelijke procedure als bovenstaand beschreven gaf 12 mg (2,3%) van de verbinding 1-E.

Voorbeeld VII

15 7-[2-(5-Amino-l,2,4-th!adiazol-3-yl-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-amino-1-pyridinio-1-propen-1-yl]-3-cef em-4-carboxylaat (1-E met formule 55)

Een mengsel van difenylmethyl 7-[2-animo-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodo-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (32) (Z/E=2/1, 500 mg, 0,7 mmol) en 3-aminopyridine (66 mg, 0,7 mmoi) in 1 mi dimethylsulfoxyde werd gedurende 20 min bij kamertemperatuur geroerd. Het mengsel werd met 10 20 ml ethylacetaat en 10 ml ether verdund, en het verkregen neerslag werd door filtratie verzameld, met 10 ml ether gewassen en gedroogd. Het gequatemiseerde zout werd opgelost in 3 ml mierezuur dat 0,3 ml geconcentreerd HCI bevatte en gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het mengsel werd onder verminderde druk drooggedampt. Het residu werd opgelost in 10 ml 2%’s HCI en gefiltreerd. De waterlaag werd chromatografisch behandeld op een omgekeerde fase-kolom (prepPAK-500/c18,100 ml). Na wassen 25 met 500 ml water werd de kolom geëlueerd met 5%’s waterig CH3OH. De fracties die de titelverbinding bevatten werden gecombineerd, onder verminderde druk geconcentreerd en gevriesdroogd. Men verkreeg 15 mg (4,2%) van de titeiverbinding (1-E) (Z/E=1/1) als kleurloos amorf poeder. Het smeltpunt lag boven 160°C (ontleding).

IR: v KBr cm '1 3400, 1765, 1675, 1620, 1600.

max 30 UV: λ fosfaatbuffer (pH 7) nm (Ei%J 244 (434), 287 (333).

NMR: δ DMSCMe+D2o 3,73 (2H, m), 4,14 (3H, s, OCH3), 5,35 (3H, m, 6-H & CH^H-CHg), 6,0 (2H, m, 7-H & 3-CH=C§)T 6,6 (1/2H, d, J=11, 3-CH cis), 7,05 (1/2H, d, J=16, 3-CH trans), 8,08 (1H, m, Py-H5), 8,6 (2H, m, Py-H4.6). 9,4 (1H, m, Py-H2).

35 Voorbeeld VIII

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl-2-methoxyiminoacetamido-3-[3-(4-carbamoylpyndinio)-1-propen-1-yl]-3-cefem~4-carboxylaat (1-H met formule 56)

Aan een geroerde oplossing van difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]--3-(3-jodo-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (32) (E, 716 mg, 1 mmol) in 2 ml droog DMSO werd 40 isonicotinamide (244 mg, 2 mmol) toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd en daarna in 200 ml ethylacetaat uitgegoten. Het verkregen neerslag werd door filtratie verzameld, goed gewassen met ethylacetaat en gedroogd. Een geroerd mengsel van het gequatemiseerde materiaal (400 mg) en natriumbisulfiet (40 mg) in 4 ml mierezuur werd gedurende 1 uur op 40-50°C verwarmd, en onder verminderde druk drooggedampt. De ruwe vaste stof werd in 40 ml water opgelost. Na filtratie van 45 een onoplosbaar materiaal werd het filtraat chromatografisch behandeld op een omgekeerde fase-kolom (pakking van PrepPAK/C18, 100 ml) met gebruikmaking van water en 5%’s, 10%’s, 20%’s en 30%’s waterige CH3OH als eluens. De fracties die de gewenste verbinding bevatten werden gecombineerd, verdampt en gelyofiliseerd. Men verkreeg 21 mg (3,8%) van de titelverbinding (1-H) (E) als een lichtgeel poeder. Het smeltpunt lag boven 180°C (ontleding).

50 IR: v ** cm’1 3340(br), 1760, 1670, 1600.

UV: λΈΤ^βΓ (PH 7) nm (¾) 222 (363), 285 (452).

NMR: S^o+NaHCOa 3,68 (2H, br, 2-H), 4,15 (3H, S, OCH3), 5,33 (1H, d, J=4,5, 6-H), 5,46 (2H, d, J=7, CH=CH-^), 5,90 (1H, d, J=4,5, 7-H), 6,17 (1H, d-t, H=16 & 7, 3-CH=CH), 7,02 (1H, d, J=16, 3-CH trans), 8,43 & 9,09 (elk 2H, d, J=7, Py-H).

11 192925

Voorbeeld IX

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(4-carbamoylpyridinio)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-H met formule 56

Een mengsel van difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodo-1-5 propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (32) (E isomeer, 4,1 g, 5,7 mmol) en isonicotinamide (1,4 g, 11 mmol) in 6 ml droge DMSO werd gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geroerd terwijl de reactie gevolgd werd met TLC (silicageiplaat, CHCI3:CH3OH = 3 : 1). Het reactiemengsel werd verdund met 100 ml ethylacetaat waarbij een gele gom werd afgescheiden, die gedurende 30 min bij 45°C werd behandeld met 40 ml mierezuur en 390 mg natriumbisulfiet. De verkregen oplossing werd drooggedampt. Het residu werd 10 opgelost in 100 ml water en onoplosbare stof werd door filtratie verwijderd. Het gecombineerde filtraat en als wasvloeistof gebruikte water werden boven op een kolom gebracht die een omgekeerde fase-pakking (PrepPAK-5OO/C10,120 ml) bevatte. De kolom werd geëlueerd met water. Het eluaat werd verzameld in 300 ml fracties en gevolgd met uv (254 nm) en HPLC (Uchrosorb RP-18, 4 x 300 mm, 0,01 M ammonium-fosfaatbuffer, pH 7,2 bevattende 20% CH3OH). De fracties 4 en 5 werden gecombineerd en tot een klein 15 volume geconcentreerd. Lyofilisatie gaf 250 mg (8,1%) van de titelverbinding 1-H, smeltpunt boven 108°C (ontleding).

De spectra lieten zien dat het product identiek was aan het product dat in voorbeeld X was verkregen. Bereiding van het hydrochloride. - Aan een suspensie van de verbinding 1-H (98 mg, 0,18 mmol) in 1 ml CH3OH werd 0,1 ml 10%’s HCI toegevoegd, en het mengsel werd gedurende 5 min geroerd. Aan de 20 verkregen gele oplossing werd 100 ml aceton toegevoegd waarbij een neerslag werd verkregen dat door infiltratie werd verzameld, met 2 x 10 ml aceton werd gewassen en onder verminderde druk werd gedroogd. Men verkreeg het hydrochioridezout van 1-H in de vorm van een kleurloos poeder. De opbrengst was 88 mg (79%). Het smeltpunt lag boven 190°C (ontleding).

IR: v KBr cm -1 3300, 1770, 1680, 1620.

ΠΊ&Χ 25 UV: λ foeteatbuffer (pH 7) nm (E]% ) 227 (385), 286 (374).

NMR: 2,32 (1H- s’ aceton-H)· 3,79 (2H, br-s, 2-H), 4,17 (3H, S, OCH3), 5,34 (1H, d, J=4,5, 6-H), 5,49 (2H, d, J=7, CH=CH-CH2), 5,93 (1H, d, J=4,5, 7-H), 6,28 (1H, d-t, J=16 & 7, 3-CH=CH, 7,15 (1H, d. J=16, 3-CH), 8,43 & 9,1 (elk 2H, d, J=7, Py-H).

30 Voorbeeld X

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido-3-[3-(2-methylthiazoUo)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-J met formule 57)

Aan een mengsel van difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodo-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (32) (E, 714 mg, 1 mmol) en 2-methylthiazool [bereid volgens de 35 procedure van R.P. Kurkjy, E.V. Brown, J.Am. Chem.Soc., 74, 5778 (1952)] (198 mg, 2 mmol) in 10 ml droog CH2CI2 werd AgBF4 (90% zuiver, 217 mg, 1 mmol) toegevoegd bij -20°C. Het mengsel werd gedurende 30 min bij kamertemperatuur geroerd en gefiltreerd. Het neerslag werd met 3 x 20 ml 10%’s CH3OH-CHCI3 geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden met 2 x 5 ml zoutoplossing gewassen, gedroogd boven MgS04 en drooggedampt waarbij een geel residu werd verkregen, dat met isopropyiether 40 werd fijngewreven en gefiltreerd werd. Men verkreeg 350 mg van het gequaterniseerde product. Een mengsel van deze vaste stof, 35 mg natriumbisulfiet en 3,5 ml mierezuur werd gedurende 30 min bij 40°C geroerd. Het mengsel werd geconcentreerd waarbij het mierezuur werd verwijderd, en het residu werd met 40 ml water verdund. Wat vaste stof werd door filtratie verwijderd. Het filtraat werd op een omgekeerde fase-kolom (PrepPAK-500/C18,100 ml) geplaatst. De kolom werd achtereenvolgens met 200 ml water, 400 45 ml 5%’s waterig CH3OH en 300 ml 10%’s waterig CH3OH geëlueerd. De fracties die het gewenste product bevatten werden op basis van HPLC-analyse (Uchrosorb RP-18, 4 x 300 mm, 0,01 M ammoniumfosfaat-buffer pH 7,2, bevattend 20% CH3OH) samengevoegd. De gecombineerde oplossing werd tot een klein volume geconcentreerd en gelyofiliseerd. Men verkreeg 40 mg (7,7%) van de titelverbinding (1 -J) (E). Het smeltpunt lag boven 195°C (ontleding).

50 IR: v KBr cm'1 3300, 1760, 1660,1600.

max UV: λ fosfaatbutfer (pH 7) nm (Ej^) 238 (442), 292 (421).

NMR: 8d2o+dmso^3,06 (3H, sTthiazool-Chy, 3,74 (2H, br-s, 2-H), 4,19 (3H, s, OCH3), 5,92 (1H, d, J=4,5, 7-H), 6,lTm, m, 3-CH=CH, 6,8 (1H, d, J=16, 3-CH trans), 8,04 & 8,23 (elk 1H, d, J=4,thiazool-H).

192925 12

Voorbeeld XI

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(4-carbamoylpyridinio)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-H met formule 56, E isomeer)

Dit voorbeeld toont de bereiding van de verbinding 1-1H via de laatste paar stappen van reactieschema 1a 5 of 1 b, waarbij het tussenproduct benzhydryl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(4-carbamoylpyridinio-1 -propen-1 -yl]-3-cefem-4-carboxylaat-formiaat wordt geïsoleerd.

A. Benzhydryl 7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamino]-3-[3-(4-carbamoyl-1 -pyridinio-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat-formiaat (E isomeer)

Een oplossing van 22-1H (y® = I®, E isomeer) (34 g, 75% zuiver) in een mengsel van aceton en CH3OH 10 (1/1, 200 ml) werd op een kolom van Amberiite iRA-410 (formiaat-vorm 340 ml) geplaatst. De kolom werd met hetzelfde oplosmiddelsysteem geëlueerd. De eerste fractie (1 I) werd verdampt tot ongeveer 100 ml van het volume en het bruine residu werd met 400 ml isopropylether fijngewreven. Het verkregen poeder werd door filtratie verzameld en onder verminderde druk gedroogd waarbij 29 g (75% zuiver volgens HPLC) van de titelverbinding (E isomeer) werd verkregen als een bruin poeder met een smeltpunt boven 150°C 15 (ontleding).

IR: v «Br cm'1 3300, 1780, 1680, 1630, 1600.

max tirt UV: λ fosfaatbufler 282 (186). max ' ' NMR: δ aceton-cyc^OH-^ti/n^o (3H, s, 0CH3), 5,26 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,43 (2H, d, J=7 Hz, Cl·^), 5,99 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,5 (1H, m, 3-CH=CH, 6,92 (1H, S, CHPh2), 7,1 (1H, d, J=16 Hz, 3-CH), 7,35, (10H, 20 m, Ph-H, 8,36 (1H, s, HCOO), 8,46 & 9,12 (2H elk, d, J=8 Hz, Py-H).

B. 7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(4-carbamoyl-1-pyridinio)-1-propen -1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-H met formule 56, E isomeer)

Een mengsel van het in stap A verkregen E isomeer (29 g, 75% zuiver) en 290 ml 85%’s mierezuur werd gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geroerd. Verdamping van het mengsel gaf een bruine olie die met 25 500 ml aceton werd fijngewreven. Het poeder werd door filtratie verzameld, met 2 x 100 ml aceton gewassen en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 24 g (50% zuiver volgens HPLC) van de ruwe titelverbinding. De bruine vaste stof werd 2 keer met 2 N HCI behandeld (1 I en 0,5 I). De water-extracten werden gecombineerd en op een kolom gebracht, die gepakt was met Diaion HP-20 (1,5 I). De kolom werd met 8 I water gewassen en met 51 30%’s CH3OH geëlueerd. De fractie die het gewenste 30 product bevatte werd tot ongeveer 30 ml verdampt. Het concentraat werd met 200 ml aceton behandeld waarbij een neerslag werd verkregen, dat door filtratie werd verzameld en onder verminderde druk werd gedroogd. Men verkreeg 10,1 g (85% zuiver) van de titelverbinding (in de vorm van het zwitterion) als een geel poeder. Aan een suspensie van dit product in 100 ml CH3OH werd N HCI in 55 ml CH3OH toegevoegd bij kamertemperatuur en het mengsel werd gedurende 30 min geroerd. De verkregen heldere oplossing 35 werd gefiltreerd om onoplosbare stoffen te verwijderen, geconcentreerd tot ongeveer 50 mi van het volume en met 200 ml isopropanol neergeslagen. Het verkregen poeder werd verzameld, gewassen met 50 ml iso-propanol en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 10,5 g (85% zuiver) van de titelverbinding 1-H (E isomeer) (HCI zout), met een smeltpunt boven 180°C (ontleding). Het was een lichtgeel poeder.

40 Voorbeeld XII

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-y!)-2-methoxyiminoacetamido-3-[3-(4-carbamoylpyndinio)- 1-propen-1 -yl ]-3-cefem-4-carboxylaat (1-H (E isomeer)

Dit voorbeeld toont de bereiding van de verbinding 1-H via de laatste paar stappen van reactieschema 1a of 1 b, waarbij het tussenproduct (het eerder genoemde formiaat) niet wordt geïsoleerd.

45 Een oplossing van 32 (E isomeer) (27,6 g 38,5 mmol) en isonicotinamide (22,8 g 187 mmol) in een mengsel van 120 ml CH3CN en 100 ml CH3OH werd gedurende 1 uur onder een stikstofatmosfeer bij kamertemperatuur geroerd. Na verdamping van de organische oplosmiddelen werd het olieachtige residu met isopropylether fijngewreven waarbij 50,5 g van een mengsel van het gequatemiseerde zout en isonicotinamide werd verkregen. Een oplossing van het mengsel (50,3 g) en 16 g natriumbisulfiet in 160 ml 50 85%’s mierezuur werd gedurende 40 min bij kamertemperatuur en vervolgens 1 uur bij 40°C onder stikstof geroerd. Het mengsel werd onder verminderde druk verdampt. De overblijvende olie werd gemengd met 50 ml tolueen, azeotroop verdampt en met 400 ml aceton fijngewreven. Men verkreeg 27,8 g van de ruwe titelverbinding. Dit materiaal werd 2 keer behandeld met 2 N HCI (1 I en 0,5 I). De zure extracten werden gecombineerd en op een kolom van HP-20 hars (1,5 I) gebracht. De kolom werd geëlueerd met 9 I water en 55 10 1 30%’s methanol. De fracties die de gewenste verbinding bevatten werden gecombineerd en geconcentreerd waarbij een gele olie werd verkregen die met 330 ml aceton werd fijngewreven. Men verkreeg 9,35 g van de zwitterion-vorm van de titelverbinding.

13 192925

Aan een suspensie van het product (9,3 g) in 180 ml CH30H werd 1 N HCI in 55 ml CH3OH toegevoegd, waarbij een heldere oplossing werd verkregen. De oplossing werd geconcentreerd tot ongeveer 100 ml en verdund met isopropanol waarbij 9,50 g (zuiverheid 75%) van de titelverbinding 1-H (E isomeer) als het hydrochloride neersloeg. Het was een lichtgeel amorf poeder. Het smeltpunt lag boven 195°C (ontleding) 5

Voorbeeld XIII

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-H) (E isomeer)

Dit voorbeeld toont de bereiding van de verbinding 1-H via de laatste stap (7-N-acylering) van reactie-schema 1c.

10 Aan een met ijs gekoelde suspensie van het 7-amino-cefem-hydrochloride 45-H (E isomeer, 5,0 g, 12,6 mmol) in 50% waterig aceton (100 ml) werd in kleine porties natriumcarbonaat toegevoegd. De pH van het mengsel werd met een pH-meter tijdens de reactie gevolgd. Aan de koude geneutraliseerde oplossing (pH ongeveer 7) werd in een periode van 1 uur in kleine porties 2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetyl-chloride-hydrochloride (4,02 g, 15,6 mmol) toegevoegd en de pH van het reactie-15 mengsel werd door af en toe natriumbicarbonaat toe te voegen gehouden in het gebied van 6,8-7,5. De reactie werd ook met ylc gevolgd. Nadat de verbinding 45-H volledig was verbruikt, werd het mengsel door de toevoeging van 2 N zoutzuur op een pH van 3 aangezuurd. Het mengsel werd gefiltreerd en het filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd. Het residu werd met 400 ml aceton verdund waarbij een neerslag werd afgescheiden, dat door filtratie werd verzameld. Men verkreeg 9,59 g van de ruwe titel-20 verbinding als een lichtgeel poeder. De geschatte zuiverheid was 40% volgens HPLC. Een suspensie van het ruwe product (9,5 g) in 150 ml 2 N zoutzuur werd gefiltreerd, en het filtraat werd op een kolom van HP-20 hars (500 ml) geabsorbeerd. Na wassen met 1,5 I water werd de kolom geëlueerd met 25%’s waterig isopropylalcohol en het eluaat werd in fracties van 100 ml verzameld. De gewenste fracties werden samengevoegd, met 10 ml 2 N zoutzuur aangezuurd en geconcentreerd. De resterende olie werd met 200 25 ml isopropylalcohol fijngewreven en het neerslag werd door filtratie verzameld. Na drogen boven fosforpent-oxyde werd 5,18 g van de titelverbinding 1-H (E-isomeer) hydrochloride verkregen als een geel amorf poeder. Het smeltpunt iag boven 190°C (ontleding). De geschatte zuiverheid was 75%.

Voorbeeld XIV

30 Zuivering en kristallisatie van de verbinding 1-H (E isomeer)

Het in voorbeeld XI verkregen hydrochloride van de verbinding 1-1H was een lichtgeel amorf poeder met een zuiverheid van 85%.

Procedure 1 35 6 g van het 85% zuivere hydrochloride werd opgelost in 20 ml water en gefiltreerd door een celite-kussen. Het amberkleurige filtraat (pH 2) werd door een omgekeerde fasekolom gevoerd (de pakking van prepPAK-500/C18 patroon, Waters; 120 ml), welke met water werd geëlueerd. Het eluaat werd verzameld in fracties van 120 ml terwijl het verloop gevolgd werd met HPLC (kolom Lichrosorb RP-18,4 x 300 mm: mobiele fase, 0,01 M fosfaatbuffer (pH 7,2)/CH3OH = 85/15: detectie, uv (254nm)). Fractie nr. 3 t/m fractie nr. 5 werden 40 gecombineerd en geconcentreerd tot ongeveer 10 ml, en met 100 ml aceton neergeslagen waarbij 3,3 g van de zwitterion-vorm van 1-H werd verkregen (lichtgeel amorf poeder; geschatte zuiverheid 95).

Aan een suspensie van het 95%’s zuivere poeder (3,2 g) in 32 ml CH3OH werd N HCI in HC3OH (18ml) toegevoegd, en het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd totdat een heldere oplossing was verkregen. De oplossing werd gefiltreerd en het filtraat werd tot ongeveer 10 ml geconcentreerd. Aan het 45 concentraat werd 100 ml isopropanol toegevoegd waarbij zich een lichtgeel neerslag afscheidde, dat door filtratie werd verzameld, met 5 ml isopropanol werd gewassen en werd gedroogd. Men verkreeg 2,6 g van het HCI-zout (amorf poeder; geschatte zuiverheid 95%).

Een oplossing van het 95% zuivere hydrochloride (1 g) in 4 ml water werd met 200 ml NaHC03 ingesteld op een pH van 6,5 en gedurende 30 min geroerd. De kristallen die zich tijdens het roeren afscheidden, 50 werden door filtratie verzameld, met 2 x 5 ml water gewassen en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 710 mg van 1-H (zwitterion-vorm) als lichtgele prisma’s. Het smeltpunt lag boven 185°C (ontleding). Microanalyse liet zien dat het trihydraat betrof.

IR: v ™ cm'1 1780> 1695>1660· 163°-1610· UV: λ tetaattxjffer (pH 7) nm (e) 227 (22000), 290 (23000).

55 NMR: 8^^=0,03,45 (2H, br, s, 2-H), 3,9 (3H, s, OCHg), 4,99 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,16 (2H, d, J=7

Hz, 0^,^),5,61 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,8 (1H, d-t, J=16 & 7 Hz, 3-CH=CH, 6,93 (1H, d, J=16 Hz, 3-CH), 192925 14 8,18 & 8,89 (elk 2H, d, J=7 Hz, Py-H).

Analyse berekend voor C21H20NeO6S2.3H2O: C 42,14; H 4,38; N 18,72; S 10,71. gevonden : C 42,41; H 4,35; N 18,86; S 11,00.

5 Procedure 2

Nadat eenmaal kristallijn 1-H was verkregen met procedure 1, was het mogelijk om de kristallijne zwitterion-vorm van 1-1H direct te verkrijgen uit het ruwe 1-H-hydrochloride door te enten met een paar kristallen van het zuivere 1 -H.

Een oplossing van het 85% zuivere hydrochloride (250 mg) in 1 ml water werd met houtskool behandeld. 10 De oplossing werd met 60 mg NaHC3 op een pH van 6,5 ingesteld en met houtskool ontkleurd. Het filtraat werd geënt met een paar stukjes van de bij procedure 1 verkregen kristallen en gedurende een nacht bij kamertemperatuur geroerd. De afgescheiden kristallen werden door filtratie verzameld, gewassen met 2x2 ml water en gedroogd onder verminderde druk. Men verkreeg 170 mg (80% opbrengst) lichtgele prisma’s van 1-H (zwitterion-vorm) met een smeltpunt boven 185°C (ontleding), identiek aan het product dat met 15 procedure 1 was verkregen (zoals bleek uit de IR, UV en NMR spectra).

De kristallijne zwitterion-vorm van verbinding 1-H was licht oplosbaar in water (6 mg/ml in zoutoplossing bij 23°C).

Voorbeeld XV

20 7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido-3-[3-( 1 -methylpyrrolidinio)-1 -propenyl]-3-cefem-4-carboxylaat-sulfaat (1-A met formule 58 sulfaat) A. Difenylmethyl 7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido}-3-[3-(1-methylpyrrolidinio)-1-propenyl]-3-cefem-4-caboxylaat (35 A, jodide)

Aan een koude oplossing van difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-25 (3-jodopropenyl)-3-cefem-4-carboxylaat (32) (van bereiding nr. 14) (21,5 g, 30 mmol) in 300 ml ethylacetaat werd druppelsgewijze een oplossing van 1 -methylpyrrolidine (2,55 g, 30 mmol) in 30 ml ethylacetaat toegevoegd in een periode van 1 uur bij -5 tot 0°C, terwijl geroerd werd. Na nog eens 10 min roeren werd het verkregen neerslag door filtratie verzameld en gewassen met 200 ml chloroform. Men verkreeg 23,0 g (95,8%) van de titelverbinding (32-A jodide), smeltpunt boven 175°C (ontleding).

30 IR: v ^ (KBr) in cm'1 3300, 1780, 1685, 1615.

UV: λ max (C2H50H) in nm (E^) 218 (435), 295 (188).

B. Difenylmetyl 7-[2-(5-Amino-1.2.4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(1-methylpynodinio)-1-propenyl]-3-cefem-4-carboxylaat (35-A, chloride)

De verbinding 35-A, jodide (23 g, 28,7 mmol) werd opgelost in een mengsel van aceton en methanol 35 (1:1, 230 ml) en aangebracht op een Amberlite IRA-410 (chloride-vorm, 230 ml) kolom die tevoren met hetzelfde gemengde oplosmiddel was behandeld. De kolom werd ontwikkeld met het oplosmiddel en de fracties die de gewenste verbinding bevatten werden gecombineerd en geconcentreerd op een olieachtig residu. Dit werd met 300 ml ethylacetaat fijngewreven waardoor men 17,9 g (87,7%) van de titelverbinding 35-A, chloride verkreeg met een smeltpunt bij 190°C (ontleding).

40 IR: v (KBr) in cm’1 3380, 1780, 1680, 1620.

UV: λ max (C2H5OH) in nm (E]% ) 220 (369), 290 (232).

C. 7-[2-(5-Amino-1, 2, 4-thiadiazo!-3-yl-2-methoxyimino-acetamido]-3-[3-(1 -methylpyrrolidinio)-1 -property!]-3-cefem-4-carboxylaat-sulfaat (1-A met formule 58, sulfaat

Een mengsel van de verbinding 35-A chloride (17,8 g 25 mmol) in 178 ml 85%’s mierezuur werd I 45 gedurende 2 uur bij kamertemperatuur onder een stiksofatmosfeer geroerd. Het mengsel werd onder verminderde druk verdampt en het olieachtige residu werd met aceton fijngewreven waarbij 9,80 g van ruw 1-A werd verkregen. Concentratie van het filtraat en de aceton-wasvloeistoffen gaf nog eens 2,95 g ruw 1-A. Twee oogsten van het ruwe materiaal werden gecombineerd en geëxtraheerd met 2N HCI (1 I en 0,5 I). De gecombineerde extracten werden geadsorbeerd op een Dianion HP-20 hars (1,5 I kolom), die met water en 50 30%’s waterig methanol werd geëlueerd. De gewenste fracties werden verzameld en onder verminderde druk verdampt tot een olieachtig residu, dat met 200 ml isopropanol en vervolgens 200 ml aceton werd fijngewreven, waarbij 7,09 g van een lichtgeel poeder werd verkregen. Dit materiaal (6,80 g) werd opgelost in 20 ml water en daarna aan kolomchromatografie onderworpen over de pakking van PrepPAK-500/C18 patroon (90 ml), waarbij water en 10%’s waterig methanol als eluens werden gebruikt. Het eluaat werd 55 verzameld in 20 ml fracties waarbij het verloop gevolgd werd met HPLC. [Kolom, Nucleocil SSC-ODS-262, 8 x 100 mm; Mobiele fase, 0,01 M fosfaatbuffer (pH 7,2)/CH3OH = 90 : 10; Detectie, UV (254 nm)]. De 15 192925 fracties 4 t/m 10 werden gecombineerd, onder verminderde druk verdampt en gelyofiliseerd. Men verkreeg 2,28 g van een geel poeder (E/Z = 7/1, 70% zuiver) [oogst 1}. De fracties 11 t/m 85 werden op dezelfde wijze opgewerkt als bovenstaand beschreven, waarbij 3,27 g van een geel poeder werd verkregen (E/Z = 5/1, 70% zuiver) [oogst 2}. Een deel van oogst 1 (1.0 g) werd door hernieuwde chromatografische 5 behandeling gezuiverd op de pakking van PrepPAK-500/C18 patroon (90 ml). De kolom werd met water en vervolgens 5% waterig methanol geëlueerd. Het eluaat dat de gewenste verbinding bevatte werd geconcentreerd en gelyofiliseerd. Men verkreeg 638 mg (E/Z = 7/1, 80% zuiver) van een geel poeder. Een tweede deel van oogst 1 (1,14 g) werd op dezelfde wijze opgewerkt waarbij 880 mg (E/Z = 7/1, 80% zuiver) van een geel poeder werd verkregen. De twee gezuiverde monsters werden gecombineerd en een deel (1,45 g) 10 werd opgelost in 5 ml 1N zwavelzuur. De oplossing werd verdund met 315 ml aceton terwijl geroerd werd. Het crèmekleurige neerslag werd verzameld door filtratie waarbij 1,48 g van de titelverbinding 1-A, sulfaat werd verkregen (E/Z = 7/1, 80% zuiver), smeltpunt boven 185°C (ontleding).

IR: v «Br) jn cm-i 3380, 1765, 1675, 1630. 1535, 1390, 1115.

max UV: λ (fosfaattxjffer, pH 7) in nm (e) 236 (19900), 291,5 (22500).

15 NMR: δ (D20 + NaHC03) in ppm 2,36 (4H, br., ^ ), 3,15 (3Hc, s, CH3±N c ), 3,62 (5H, br., 2-H 20 en j ), 3,83 (1H, br., 2-H), 4,13 (2H, d, J=8Hz, CH2N+), 4,22 (3H, s, OCH3), 5,39 41H, d, J=4,5Hz, 6- H), 5,96 (1H, d, J=4,5Hz, 7-H), 6,00 (1H, m, 3-CH=CH), 6,67 (1/8H, d, J=10Hz, 3-CH, cis), 7,04 (7/8H, d, J=16Hz, 3-CH, trans).

25

Voorbeeld XVI

7- [2-(5-Amino-1, 2, 4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-trimethylammonio-1 -propenyl]-3-cefem- 4-carboxylaat (1-D met formule 54) A. Difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-trimethylammonio-1-30 propenyl)-3-cefem-4-carboxylaat (35-D jodide)

Aan een oplossing van 13,0 g (19 mmol) difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodopropenyl-3-cefem-4-carboxylaat (69-1, van bereiding nr. 10) in 38 ml droog ethylacetaat werd 1,75 ml (19,1 mmol) 1,1N trimethylamine in ethylacetaat toegevoegd bij -5°C, en het mengsel werd gedurende 1 uur bij -5°C geroerd. Het verkregen neerslag werd afgefiltreerd, goed 35 gewassen met CHCI3 en gedroogd. Men verkreeg 1 2,5 g (88%) van de titelverbinding 35-D als het jodide.

IR: v ilS[)in cm_1 3300> 1765,172°- 1665· UV; λ"ΐ£5θΗ) in nm (e) 300 (18400).

B. Difenylmethyl 7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-trimethylammonio-1-propenyl)-3-cefem-4-carboxylaat 35-D, chloride) 40 Het jodide 35-D (12,5 g) werd opgelost in 60 ml CH3OH-aceton (1 : 1) en gevoerd door een kolom van een ionen-uitwisselingshars [IRA-410 (Cl·), 125 ml]. De kolom werd geëlueerd met 300 ml CH3OH-aceton (1 : 1), en het eluaat werd onder verminderde druk verdampt en fijngewreven met 300 ml isopropyl-ether. Men verkreeg 10,4 g (91%) van het quatemaire zout 35-D, chloride.

IR: v «Br) in cm-i 3300, 1765, 1710, 1665.

45 UV: λ (WH) in nm (e) 298 (15100).

C. 7-[2-(5-Amino-1, 2, 4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyimino-acetamido]-3-[3-trimethylammonio-1-propenyl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-D met formule 59, sulfaat, E isomeer)

Een oplossing van 10,4 g (16,0 mmol) van 35-D (chloride) in 20,8 ml 85%’s mierezuur liet men gedurende 3 uur bij kamertemperatuur staan en concentreerde men onder verminderde druk. Her residu 50 werd behandeld met 210 ml isopropanol en het neerslag werd afgefiltreerd. De vaste stof (10,1 g) werd fijngewreven met 210 ml water en geneutraliseerd met natriumcarbonaat. De suspensie werd afgefiltreerd en het filtraat werd chromatografisch behandeld op een kolom van HP-20 (300 ml) die achtereenvolgens met 1000 ml water, 200 ml 10%’s CH2OH en 150 ml 30%’s CH3OH werd geëlueerd. Fracties die het gewenste product bevatten werden gecombineerd en geconcentreerd onder verminderde druk. Het residu 55 werd door omgekeerde fase-chromatografie gezuiverd. De kolom was gepakt met een pakking verkregen uit een PrepPAK-500/c18 patroon (Waters, 200 ml). Elutie met 600 ml water en vervolgens 200 ml 30%’s 192925 16 CH30H, gevolgd door concentraties van fracties die het gewenste product bevatten, gaf 2,52 g (18%) van de titelverbinding. Een oplossing van het zwitterion-product (1,5 g) in 5 ml 1N H2S04 werd in porties toegevoegd aan 300 ml aceton en het derde verkregen neerslag werd afgefiltreerd en gedroogd. De opbrengst aan 1-D sulfaat bedroeg 1,42 g (80%). De E/Z verhouding was ongeveer 10/1, gebaseerd op 5 HPLC.

IR: v (KW in cm-1 3380, 1765, 1665.

UV: λ (fosfaatbutfer. pH 7) in nm (e) 237 (19500), 293 (22400).

NMR: Γρ20)ιη ppm 3,25 (9H, s, N+-CH3), 3,94 (2H, s, 2-H), 4,14 2H, d, J=7Hz, CH2N+-), 4,23 (3H, s, 0-CH3), 5,42 (1H, d, J=4,5Hz, 6-H), 6,00 (1H, d, J=4,5Hz, 7-H), 6,23 (1H, d-t, J=7 & 16Hz, 3-CH=CH), 7,23 10 (1H, d, J=16Hz, 3-CH).

Voorbeeld XVII

7-[2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-[3-(4-carbamoylpyridinio)-1 -propenyl]-3-cefem-4-carboxylaat (1-H met formule 56, E isomeer) 15 Aan een mengsel van 7-amino-3-[3-(4-carbamoylpyridinio)-1-(E)-propenyl]-3-cefem-4-carbonzuur-hydrochloride (82-H, 397 mg, 1 mmol) en NaHC03 (168 mg, 2 mmol) in waterig DFM (water, 3,5 ml en DMF, 7,5 ml) werd benzotriazol-1-yI-2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetaat (479 mg, 1,5 mmol) (van bereiding nr. 28) toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 3,5 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd met 3N HCI ingesteld op een pH van 3-4 en met 200 ml aceton verdund 20 waarbij een neerslag werd gevormd, dat door filtratie werd verzameld. Het ruwe product werd opgelost in een klein volume waterig THF en de oplossing werd met NaHCOs ingesteld op een Ph van 6,8 behandeld met ontkleuringskool, geconcentreerd tot ongeveer 1 ml en geënt met enkele stukjes kristallijn 1-H. Na een nacht roeren werd het kristallijne neerslag verzameld door filtratie waarbij de titeiverbinding 1-H (zwitterion-vorm) werd verkregen. De opbrengst bedroeg 83 mg (16%). Het smeltpunt lag boven 185°C (ontleding).

25 Fysisch-chemische gegevens van dit product waren identiek aan die van de verbinding van voorbeeld X.

Bereiding nr. 1

Difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)~2-methoxyiminoacetamido]-3-chloromethyl-3-cefem-4-carboxylaat (22) 30 Aan een geroerde suspensie van 2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoazijnzuur 26; 2,1 g, 10 mmol) in 50 ml droog CH2CI2 werd 2,9 g, 10 mmol PCI5 toegevoegd bij -30°C, en het mengsel werd gedurende 20 minuten bij -15 tot-20°C geroerd. Aan de bovenstaande beschreven zuurchloride-oplossing werd een oplossing toegevoegd van difenylmethyl 7-amino-3-chloromethyl-3-cefem-4-carboxylaat hydrochloride 25; 4,5 g, 10 mmol) in 50 ml CH2CL2, welke 10 g, 50 mmol N,0-bis-(trimethyisilyi) acetamide bevatte, 35 bij -30°C. Na een uur roeren bij -10°C werd het mengsel geconcentreerd om het CH2CL2 te verwijderen en met 200 ml ethylacetaat verdund. Het mengsel werd achtereenvolgens gewassen met 2 x 40 ml 10%’s waterig NaHC03, 2 x 20 ml water en 10 ml zoutoplossing, en gedroogd boven MgS04. Het oplosmiddel werd onder verminderde druk verdampt en het resulterende olieachtige residu (10 g) werd opgelost in 20 ml CHCI3 en chromatografisch behandeld op een sillicagel (Wako gel C-200, 100 g bevattende 10 ml 1/1,5 M 40 pH 7 fosfaatbuffer) waarbij 1-3% CH3OH-CHCI3 werd gebruikt. Fracties die de titeiverbinding bevatten werden verdampt waarbij 5,7 g (95%) van de verbinding 27 werd verkregen als een geel amorf poeder. Smeltpunt boven 140°C (ontleding).

IR: v KBr Cm-1 3300, 1780, 1720. 1680, 1620.

max * 1 UV: λ öoh nm (€) 245 (1800, 280 (9900).

45 NMR: §DM«W.3f53 (2H, ABq, 2-H), 3,94 (3H, s, OCH'3), 4,42 (2H, s, 3-CH2), 5,22 (1H, d, J=4,5, 6-H), 5,92 (1H, d-dfjU.e & 6, 7-H), 6,93 (1H, s, CHph2), 7,36 (10H, m, Ph-H), 8,1 (2H, br-s, NH2), 9,58 (1H, d, J=6, 7-NH).

Bereiding nr. 2 50 Difenylmethyl 7-{2-(5-amino- 1,2,4-thiadiazo!-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido-3-jodomethyl-3-cefem~4-carboxylaat (28)

Een mengsel van 27 verkregen uit bereiding nr. 1 (5,7 g, 9,5 mmol) en Nal (4,3 g 29 mmol) in 50 ml droge aceton werd gedurende 5 min bij kamertemperatuur geroerd. Het mengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd en resulterende olie werd geschud met een mengsel van 100 ml ethylacetaat en 10 ml H20. 55 De organische laag werd afgescheiden en gewassen met achtereenvolgens 10% w/v natriumthiosulfaat en zoutoplossing. Na het drogen werd het ethylacetaat onder verminderde druk verwijderd waarbij 6,1 g (93%) van de titeiverbinding 26 werd verkregen als een geel amorf poeder met een smeltpunt boven 120°C

17 192925 (ontleding).

IR: v κβγ cm-1 3300, 1780, 1725, 1680, 1620.

max UV: λ boh nm (e) 245 (17000), 282, (12000).

NMR: 8DMSo-<fe 3,72 (2H, ABq, 2-H), 3,94 (3H, s, 0CH3), 4,23 (2H, S, 3-CH2), 5,21 (1H, d, J=4,5 6-H), 5,89 5 (1H, d-d!*J=4,5 & 6, 7-H), 6,94 (1H, S, CHPh2, 7,35 (10H, m, Ph-H), 8,12 (2H, br-s, NH2), 9,65 (1H, d, J=6, 7-NH).

Bereiding nr. 3

Difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyimnoacetamido]-3-trifenylfosfoniomethyl-3-cefem-10 4-carboxylaat-jodide (29)

Een mengsel van 28 verkregen met bereiding nr. 2 (690 mg, 1 mmol) en trifenylfosfine (786 mg, 3 mmol) in 20 ml ethylacetaat werd gedurende een nacht bij kamertemperatuur geroerd. De vaste stof die zich afscheidde werd verzameld, gewassen met 2 x 10 ml ethylacetaat en gedroogd. Men verkreeg 950 mg (100%) van het fosfoniumjodide 29. Smeltpunt 186°C (ontleding).

15 IR: v ««r cm-1 3300, 1780,1710, 1680, 1610.

max UV: λ sou nm (e) 268 (15000), 275 (13000), 300 (7300).

NMR: 3,52 (2H, br-s, 2H), 3,94 (3H, s, OCHg), 5,34 (1H, d, J=4,5, 6-H), 5,9 (1H, m, 7-H), 6,3 (1H, s, 7,3 (10H), m, Ph-H), 7,8 (15H, m, Ph-H).

20 Bereiding nr. 4

Difenylmethyl 7-[2-(amino-1,2l4-thiadiazol-3-yl-2-methoxyiminoacetamidol-3-[trifenylfosforanyliden)methyl]-3-cefem-4-carboxylaat (25)

Een mengsel van 29 verkregen volgens bereiding nr. 3 (925 mg, 1 mmol), Amberlite IRA-410 (OH- vorm, 500 mg) en 4 ml N NaOH in 10 ml CH2CI2 werd gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het 25 mengsel werd gefiltreerd en de afgescheiden organische laag werd gedroogd boven MgS04 en geconcentreerd onder verminderde druk. De verkregen olie werd met ethylacetaat fijngewreven en het verkregen gele neerslag werd door filtratie verzameld. Men verkreeg 740 mg (90%) van de titelverbinding 30. Het smeltpunt lag boven 180°C (ontleding).

IR: v κβγ cm-i 3400, 1750, 1630.

max 30 UV: λ boh nm (e) 268 (12000), 276 (10000), 384 (23000).

Bereiding nr. 5

Difenylmethyl 7-[2-(5-amino- 1,2,4-thiadiazol-3-yl-2-methoxyiminoacetamido)-3-(3-chloro-1 -propen-1 -yl)-3-cefem-4-carboxylaat (31) 35 Aan een oplossing van 30, verkregen volgens bereiding nr. 4 (6,9 g, 8,4 mmol) werden 3 g MgS04 en 810 mg, 8,4 mmol 40%’s chloroacealdehyde toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur geroerd en daarna gefiltreerd. Het filtraat werd geëuieerd op silicagel (Wakogel C-200,100 g bevattende 10 ml 1/1,5 M fosfaatbuffer) kolom waarbij CHCI3, alsmede CHCI3 dat CH3OH bevatte, werden gebruikt. Fracties die het gewenste product bevatten (0,5-1% CH3OH-CHCI3) werden onder verminderde 40 druk verdampt waarbij 1,6 g (30%) van de titelverbinding 31 werd verkregen als een geel amorf poeder, dat een mengsel was van de Z en E isomeren met betrekking tot de chloropropenylgroep (Z/E=2/1, volgens nmr). Het smeltpunt lag boven 130°C (ontleding).

IR: v kbt cm-i 3300, 1780, 1725, 1680, 1620.

UV: λΒΟΗ nm (€) 240 (20000), 286 (12000).

45 NMR: 3i56 & 3i8 (m, 2-H), 3,94 (3H, s, OCH3), 4,16 (d, J=7,5, CI^CI), 5,26 (1H, d, J=4,5, 6-H), 5,87 (1hTd, J=4,5, 7-H), 6,28 (2/3H, d, J=11, 3-CH cis-H), 6,72 1/3H, d, J=16, 3-CH trans-H), 6,81 (2/3H, s, CHPh2), 6,92 (1/3H, s, CHPh2), 7,4 (10H, m. Ph-H).

Bereiding nr. 6 50 Difenylmethyl 7-benzylideenamino-3-[(trifenylfosforanylideen)methyl]-3-cefem-4-carboxylaat (39)

Aan een oplossing van difenylmethyl 7-benzylideenanimo-3-[(trifenylfosfonio)methyl]-3-cefem-4-carboxylaat-jodide [38; bereid volgens de procedure van de gepubliceerde Japanse octrooiaanvrage (Kokai) 5.686.187 (7/31/81); (60 g, 70 mmol)] in 350 ml C^CLa werden bij 5°C 140 ml N NaOH en 35 g Amberlite IRA-410 (OH- vorm) toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 1 uur bij 5C geroerd en gefiltreerd. De organische 55 laag werd afgescheiden, gedroogd boven MgS04, geconcentreerd tot een volume van ongeveer 100 ml en neergeslagen met 500 ml ethylacetaat. De resulterende gele vaste stof werd door filtratie verzameld en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 48 g (94%) van de titeiverbinding 39 met een smeltpunt 192925 18 van 195-198°C (ontleding).

IR: v “Br cm-1 1770, 1620.

max

Bereiding nr. 7 5 Difenylmethyl 7-benzylideenamino-3-(3-chloro-1 -propen- 1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (40)

Aan een geroerde oplossing van 39 verkregen volgens bereiding nr. 6 (2,9, g, 4 mmol) in een mengsel van 40 ml CH2CL2 en 10 ml H20 werd bij kamertemperatuur 800 mg watervrij chloroacetaldehyde toegevoegd. Aan het mengsel werd nog eens 800 mg chloroacetaldehyde toegevoegd in drie porties in een periode van 1 uur, terwijl de pH van het mengsel door toevoeging van N NaOH tussen 6 en 9 werd gehouden. Na 15 10 min werd de waterlaag verwijderd en werd de organische laag boven MgSo4 gedroogd. Verdamping van het oplosmiddel gaf een rode olie die in een mengsel van ethylacetaat en isopropylether (1/2, 80 ml) werd opgelost. De oplossing werd achtereenvolgens gewassen met 10 ml verzadigde waterige NaHC03 en 10 ml H20. Na drogen boven MgS04 gaf verwijdering van het oplosmiddel 3,3 gele olie. Een oplossing van de olie in 50 ml CH2CI2 werd gefiltreerd met behulp van silicagel (12 g, Wakogel C-200), die 1/1,5 M fosfaatbuffer 15 (1,2 ml pH 6,4) bevatte en de silcagel werd gewassen met 50 ml CH2CI2. Het filtraat en de wasvloeistof werd gecombineerd en drooggedampt. Het residu werd fijngewreven met n-hexaan waarbij 1,7 g (80%) van de titelverbinding 40 werd verkregen als een geel poeder. Het nmr-spectrum liet zien dat de chloropropenyl-groep de z-configuratie had. Het smeltpunt lag boven 50°C (ontleding).

IR: v κβγ cm-1 3400, 1775, 1720, 1630.

max 20 UV: λ |=*oh nm (c) 253 (11000), 258 (11000), 265 (10000), 273 (8300), 281 (7000), 290 (6300).

NMR: 3,63 (2H, br-s, 2-H), 4,0 (2H, m, ChL-CI), 5,42 (2H, m, 6-H & 3-CH=CH), 5,72 (1H, d, J=4,5, 7-H), 6,27 (1H, d, J=11, 3-CH), 6,85 (1H, s, CHPh2), 7,33 (10H, m, Ph-H).

Bereiding van watervrije chloroacetaldehyde 25 Watervrije calciumchloride werd onder roeren toegevoegd aan een gekoelde oplossing van 50%’s waterig chloroacetaldehyde (50 ml), waarbij dit in twee lagen werd gescheiden. De chloroacetaldehyde-hydraatlaag(1) (de bovenste laag) werd afgescheiden en verdund met 100 ml CHCI3, gemengd met 20 g MgS04, gedurende 5 mln onder terugvloeikoeling gekookt, en gefiltreerd. Het oplosmiddel en water werden azeotroop verwijderd (kookpunt 56-64°C)<2), en het residu werd gedestilleerd waarbij watervrij chloroactalde-30 hyde werd verkregen<3), kookpunt 70-82°C/760 mm.

IR: v κβγ cm'1 1720.

max (1) R.P. Kurkjy, E.V. Brown, J.Amer.Chem.Soc., 74, 5778 (1952).

(2) S. Trippett, D.M. Walker, J.Chem.Soc., 1961 1266.

(3) H.O. House, V.K. Jones, G.A. Frank, J.Org. Chem., 29, 3327 (1964).

35

Bereiding nr. 8

Difenylmethyl 7-amino-3-(3-chioro-1 -propen- 1-yl)-3-cegem-4-carboxylaat (41)

Een oplossing van 40, verkregen volgens bereiding nr. 7 (180 mg, 0,34 mmol) in 10 ml ethylacetaat werd bij 5°C toegevoegd aan een oplossing van Girard reagens T [(carboxymethyl)trimethylammonium-chloride-40 hydrazide] (251 mg, 1,5 mmol) in 10 ml CH3OH, dat 0,25 ml azijnzuur bevatte. Na 30 min roeren bij 5°C werd het mengsel geconcentreerd om het CH3OH te verwijderen en daarna werd 20 ml ethylacetaat toegevoegd. De ethylacetaat-oplossing werd achtereenvolgens gewassen met 2 x 5 ml H20, 5 ml verzadigde waterige NaHC03 en 5 ml zoutoplossing, en gedroogd boven MgS04. Verdamping van het oplosmiddel gaf 145 mg (97%) van de titelverbinding 41 (Z isomeer) als een geel poeder. Smeltpunt boven 100°C 45 (ontleding).

IR: v κβγ cm-i 34oo, 1770, 1720.

UV: λ ^Hnm (e) 252 (3700), 258 (3800), 260 (4000), 274 (4000), 285 (4000).

Bereiding nr. 9 50 Difenylmethyl 7-[2-(5-amino-1.2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxy-iminoacetamido]-3-(3-chloro-1-propen-1-yl)-3-cefem-4-carboxylaat (31)

Een mengsel van 2-(5-amino-1,2,4-thiadiazo!-3-yl)-2-methoxyiminoazijnzuur (26; 10,1 g, 50 mmol) en PCI5 (10,4 g, 50 mmol) in 100 ml droog CH2CI2 werd gedurende 2 uur bij -5 tot -15°C geroerd. De heldere oplossing werd in 500 ml n-hexaan uitgegoten waarbij een neerslag werd verkregen. De organische laag 55 werd door decanteren verwijderd en de resterende vaste stof werd met 100 ml n-hexaan fijngewreven. Het gele neerslag werd door filtratie verzameld en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 12,5 g (99%) van het zuurchioride met een smeltpunt bij 80°C (ontleding).

19 192925 IR: v πυί°* cm-1 1770.

max

Het zuurchloride (25 mg, 0,1 mmol) werd toegevoegd aan een oplossing van de verbinding 41 (Z isomeer), verkregen volgens bereiding nr. 8 (44 mg 0,1 mmol) in 5 ml droog CH2CI2 bij kamertemperatuur, terwijl geroerd werd. Na 30 min werd het mengsel onder verminderde druk geconcentreerd en verdund met 5 20 ml ethylactaat en 5 ml verzadigd waterig NaHC03. De organische laag werd gewassen met 5 ml verzadigd waterig NaHC03, 5 ml zoutoplossing, 5 ml 10%’s HCI en 5 ml zoutoplossing. Het oplosmiddel werd boven MgS04 gedroogd en daarna drooggedampt waarbij het product werd verkregen als een geel schuim. Het schuim werd gezuiverd dor silicagel (Wakogel C-200, 1 g, bevattende 0,1 ml 1/1,5 M fosfaat-buffer pH 6,4) kolomgromatografie door elutie met CH2CI2-CH3OH (100 :1), waarbij 31 mg (50%) van de 10 titelverbinding 31 (Z isomeer) werd verkregen als een geel poeder. Het smeltpunt lag boven 105°C (ontleding).

IR: v er cm"1 3400, 1775, 1720, 1675, 1630.

max UV: λ ffi» nm W 240 (17000), 280 (10000).

NMR: ÖDMso-de 3,6 (2H, m, 2-H), 3,92 (3H, s, 0-CH3), 4,0 (2H, m, CHjCI), 5,27 (2H, m, 6-H & 3-CH=CH), 15 5,83 (1 l-fTd-d, J=4,5 & 10, 7-H), 6,25 (1H, d, J=11, 3-CH), 6,83 (1H, S, CHPh2), 7,33 (10H, m, Ph-H), 8,0 (2H, br-s, NH2), 9,57 (1H, d, J=10, 7-NH).

Bereiding nr. 10

Difenyimethyi 7-[2-(5-amino- 1,2,4-thiadiazoi-3-yi)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(-jodo-1 -propen-1-yi)-3-cefem-20 4-carboxylaat (32)

Een oplossing van 31, verkregen volgens bereiding nr. 5 (Z/E = 2/1, 480 mg, 077 mmol) in 10 ml droog aceton dat 346 mg, 2,3 mmol Nal bevatte, werd gedurende 30 min bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd onder verminderde druk verdampt. De resulterende olie werd verdeeld over 50 ml ethylacetaat en 10 ml water. De bovenste laag werd gewassen met achtereenvolgens 10 ml 10% w/v 25 waterige natriumthiosulfaat-oplossing en 10 ml zoutoplossing, en gedroogd boven MgS04. Verdamping van het oplosmiddel gaf 540 mg (98%) van de titelverbinding 32 (Z/E= 1/1) als een roodachtige amorfe vaste stof met een smeltpunt boven 120°C (ontleding).

IR: v KBr cm"1 3300,1780, 1720, 1680, 1620.

max UV: λ B°Hnm (e) 240 (21000), 290 (12000).

30 NMR: 3,67 (2H, m, 2-H), 5,29 (1H, d, J=4,5, 6-H), 5,95 (1H, d, J=4,5, 7-H), 6,27 (1/2H, d, J=11, 3-CH dsjT6,72 (1/2H, d, J=16, 3-CH trans), 6,78 & 6,96 (elk 1/2H, s, CHPh2), 7,4 (10H, m, Ph-H).

Bereiding nr. 11

Difenyimethyi 7-[2-(5-amino-1,2,4‘thiadaizol-3-yl)-2-methoxyiminoacetamido]-3-(3-jodo-1 -propen-1-yl)-3-35 cefem-4-carboxylaat (32)

Een mengsel van 31 (Z isomeer), verkregen volgens bereiding nr. 9 (5,6 g, 9 mmol) en 4 g, 27 mmol Nal in 100 ml droog aceton werd gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het mengsel werd verdampt en de resulterende olie werd verdund met 90 ml ethylacetaat. De ethylacetaatlaag werd gewassen met 10 ml 10% w/v waterige natrium-thiosulfaat-oplossing en 10 ml H20. Verwijdering van het boven MgS04 40 gedroogde oplosmiddel gaf een gele olie, die door fijnwrijven met isopropylether vast werd. Filtratie van het neerslag gaf 4,3 g (67%) van de titelverbinding 32 als het E isomeer. Het smeltpunt lag boven 165°C (ontleding).

IR: v KBr cm-1 3400, 1780, 1725, 1680, 1610.

max ’ * UV: λ ™nm (e) 240 (18000), 297 (11000).

45 NMR: a^Mso-d^o 3,90 (3H, s, OCH3), 5,25 (1H, m, 6-H), 5,95 (1H, m, 7-H), 6,72 (d, J=16, 3-CH trans), 6,96 (1hiTs, CH-Ph2) 7,4 (10H, m, Ph-H).

Bereiding nr. 12

Benzhydryl 7 amino-3-[3-chloro-1 -propen-1 -yl)-3-cefem-4-carboxylaat (Z isomeer) (41) 50 Verbinding 41 is het gemeenschappelijke tussenproduct dat in de reactieschema’s 1b en 1c wordt gebruikt.

A. Benzhydryl 7-benzylideenanimo-3-trifenylfosfoniomethyl-3-cefem-4-carboxyiaat-chloride (36)

Aan een suspensie van benzhydryl 7-amino-3-chloromethyl-3-cefem-4-caboxylaat-hydrochloride (25, hydrochloride; 200 g, 0,44 mol) in 940 ml CH2CI2 werd bij kamertemperatuur 440 ml 1N NaOH toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 10 min geschud en de organische laag werd afgescheiden. Aan de organi-55 sche laag werden 75 g MgSO4 en 51 g, 0,48 mol benzaidehyde toegevoegd en het mengsel liet men gedurende 3 uur staan. Het reactiemengsel werd gefiltreerd en de onoplosbare stof werd met 200 ml CH2CI2 gewassen. Aan de gecombineerde filtraat en wasvloeistof werd 126 g, 0,48 mol trifenylfosfine 192925 20 toegevoegd. Men concentreerde het mengsel tot ongeveer 400 ml en liet het gedurende 4 dagen staan. De resulterende visceuze olie werd met 1 I ethylacetaat verdund en fijngewreven waarbij de titelverbinding 38 zich afscheidde als een lichtgeel kristallijn poeder dat door filtratie werd verzameld en onder verminderde druk werd gedroogd. De opbrengst bedroeg 322 g (96%). Het smeltpunt was 185-190°C (ontleding).

5 IR: v *®r cm"1 1780, 1720, 1630.

max UV: λ ch2ci2 nm (e) 260 (24100).

B. Benzhydryl 7-benzylideenanimo-3-[(trifenylfosforanylideen)methyl]-3-cefem-4-carboxylaat (39)

Een mengsel van 38 (322 g, 0,42 mol) en 5 N Na2C03 (252 ml) in CH2CI2 (1,6 I) werd gedurende 15 min heftig bij kamertemperatuur geroerd. De organische laag werd afgescheiden, gedroogd boven MgSO4, en 10 geconcentreerd tot een volume van ongeveer 500 ml. Het concentraat werd onder roeren aan 1 I aceton toegevoegd, waarbij een lichtgeel kristallijn poeder werd verkregen dat door filtratie werd verzameld. Men verkreeg een opbrengst van 237 g (78%) van de verbinding met formule 39, welke smolt bij 195-198°C (ontleding).

IR: v κβγ cm-1 1770,1620.

max 15 UV: λ cjv* (e) 254 (23000), 389 (22000).

NMR: δ&«'3 2,56 & 3,16 (2H, ABq), 5,00 (1H, d, J=4 Hz), 5,23 (1H, d, J=4 Hz), 5,47 (1H, d, J=22 Hz), 6,95 (1H, s), 7^2-7,8 (30H, m), 8,55 (1H, s).

C. Benzhydryl 7-amino-3-[chloro-1-propen-1 -yl]-3-cefem-4-carboxylaat-hydrochloride (Z isomeer) (41-hydrochloride) 20 Aan een onder terugvloeikoeling kokende oplossing van de verbinding met formule 39 (214 g, 0,294 mol) en N,0-bis-(trimethylsilyl)-acetamide (40 ml, 0,15 mol) in 2,9 I CH2CI2 werd onder roeren druppelsgewijze een 50%’s oplossing van chloroacetaldehyde (93 g, 0,59 mol) in CHCI3 toegevoegd in een periode van 15 min. Na 30 min staan werd het mengsel drooggedampt. Aan de resterdende olie werden 1,5 I CH2CI2, 99 g, 0,59 mol Girard-reagens T en 300 ml 10%’s waterig HCI toegevoegd, en het mengsel werd gedurende 1 uur 25 bij kamertemperatuur geroerd. De organische laag werd gewassen met 200 ml water en 200 ml van een verzadigde NaCI-oplossing, gedroogd boven MgS04, behandeld met 5 g houtskool en gefiltreerd. Het filtraat werd gekoeld tot -10°C en behandeld met 1N HCI in 300 ml CH3OH. Het mengsel werd gedurende 30 min bij kamertemperatuur geroerd en tot ongeveer 300 ml geconcentreerd. Het concentraat werd verdund met 400 ml ethylacetaat en geënt met een paar kristallen van 41-hydrochloride. Na 2 uur werden de afgeschei-30 den kristallen door filtratie verzameld, gewassen met 200 ml ethylacetaat en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 74 g (53%) van de titelverbinding 41 in de vorm van zijn hydrochloride met een smeltpunt boven 185°C (ontleding). Het waren lichtgele naalden.

IR: v κβγ cm-1 2830, 1720.

UV: λ EK>nnm (e) 286 (8800).

35 NMR: 6^MS°-de 3,73 (2H, br, s, 2-H), 3,97 (2H, m, CH2CI), 5,22 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,37 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,77 (1H, m, 3-CH=CH). 6,45 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH), 6,88 (1H, s, CHPh2), 7,33 (10H, br, s,

Ph-H).

Analyse berekend voor C23H21N203SCI HCI: C 57,87; H4.65; N 5,87; S 6,72; Cl 14,85 gevonden : C 57,62; H 4,53; N 5,70; S 6,64; Cl 14,89.

40

Bereiding nr. 13

Benzhydryl 7-[2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyimino-acetamido]-3-[3-chloro-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (Z isomeer) (31)

Aan een geroerde oplossing van 78 (Z isomeer; 20 g, 42 mmol) in 420 ml CH2CI2, welke 34 ml, 125 mmol 45 Ν,Ο-bis (trimethylsilyl)-acetamide bevatte, werd in een periode van 30 min bij -10 tot 0°C in drie porties 15,2 g, 59 mmol 2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyimino-acetylchloride-hydrochloride toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 30 min bij 0-5°C geroerd en onder verminderde druk geconcentreerd. De resterende bruine olie werd in 420 ml ethylacetaat opgelost en de oplossing werd achtereenvolgens gewassen met 3 x 15 ml verzadigd waterif NaHC03, 15 ml verzadigd waterig NaCI, 15 ml 10%’s HCI en 15 50 ml verzadigd waterig NaCI en geconcentreerd tot een volume van ongeveer 50 ml. Aan het concentraat werd 200 ml n-heptaan toegevoegd, waarbinnen 28,5 g (90% zuiver) van de titelverbinding 31 (Z-isomeer) werd verkregen als een kleurloos poeder. Het smeltpunt lag boven 150°C (ontleding).

IR: v «r cm"1 3400, 1780, 1680, 1620.

mex UV: λ ®°Hnm (e) 240 (20000), 283 (12000).

55 NMR: 3,6 (2H, m, 2-H), 3,95 (3H, s, OCH3), 4,0 (2H, m, CH2Ci), 5,32 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H, 5,62 (1H, m, 3-CH-CH), 6,03 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,32 (1H, d, J=11 Hz, 3-CH), 6,87 (1H, s, CHPh2), 7,33 21 192925 (10H, br, s, Ph-H).

Bereiding nr. 14

Benzhydryi 7-[2-(5-amino-1,2l4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyimino-acetamido]-3-[3-jodo-1 -propen-1 -yi]-3-cefem-5 4-carboxylaat (E isomeer) (32)

Een mengsel van 31 (Z isomeer; 28,5 g, 90% zuiver) en 19 g natriumjodide in 420 ml droog aceton werd gedurende 10 min bij kamertemperatuur geroerd en liet men gedurende 2 uur bij 5°C staan. Het mengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd. Aan het residu werd 420 ml ethylacetaat en 30 ml 10%’s wN waterig natriumthiosulfaatoplossing toegevoegd, en het mengsel werd geschud. De organische laag werd 10 met 30 ml water gewassen, boven MgS04 gedroogd en verdampt tot een volume van ongeveer 50 ml. Het concentraat werd verdund met 200 ml n-heptaan, waarbij men een opbrengst van 30,6 g (95% zuiver) van de titelverbinding 32 (E isomeer) verkreeg als een geel poeder met een smeltpunt boven 120°C (ontleding). IR: v KBr Cm-1 3400, 1780, 1725, 1680, 1620.

max UV: λ S£Hnm ® 306 (15000).

15 NMR: Hcetorwie 3,71 (2H, m, 2-H), 3,97 (3H, s, OCH3), 4,0 (2H, d, J=8 Hz, CH^I), 5,26 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 6,($3 (1H, d-d, J=4,5 & 8 Hz, veranderde in doublet J=4,5 Hz door D20, 7-H), 6,32 (1H, d-t, J=15 & 8 Hz, 3-CH=CH), 6,79 (1H, d, j=15 Hz, 3-CH), 6,98 (1H, s, CHPh2), 7,35 (10H,m, Ph-H, 7,63 (2H, br, s, verdween door DzO, NH^, 8,52 (1H, d, J=8 Hz, verdween door D20, 7-NH).

20 Bereiding nr. 15

Benzhydryi 7-[2-(5-amino- 1,2,4-thiadiazoi-3-yl)-2-methoxyimino-acetamido]~3-[3-(4-carbamoyl-1 -pyrridinio)-1 -propen-1 -yl]-3-cefem-4-carboxylaat-jodide (E isomeer) (35-H)

Aan een suspensie van 32 (E isomeer, 30,5 g) en 26 g, 212 mmol isonicotinamide in 120 ml CH3CN werd 100 ml CH3OH toegevoegd totdat het mengsel helder werd. De oplossing werd gedurende 2 uur onder een 25 stikstofatmosfeer bij kamertemperatuur geroerd en geconcentreerd onder verminderde druk tot ongeveer 100 ml. De resterende semi-vaste stof werd met 200 ml isopropylether fijngewreven. Het oplosmiddel werd door decanteren verwijderd en het resterende gele poeder werd gewassen met een mengsel van isopropyl-ether en CH3OH (3/1, 120 ml). Het poeder werd door filtratie verzameld en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 36 g (75% zuiver geschat volgens HPLC) van de titelverbinding 35-H (E isomeer) 30 als een lichtgeel poeder met een smeltpunt boven 150°C (ontleding).

IR: v κβγ cm-1 3300, 1780, 1720, 1680, 1620 max » » » i υν:λΒ0Η nm(E|^ 282(170) NMR: 8 DSMO-de 3,72 (2H, m, 2-H), 3,90 (3H, s, OC(H3), 5,25 (3H, m, 6-H & CH^N*), 5,9 (1H, d-d, J=4,5 & 8 Hz, veranderde in een doublet J=4,5 Hz door D20 toevoeging, 7-H, 6,35 (1H, m, 3-CH=CH), 6,89 (1H, s, 35 CHPh2), 6,9 (1H, d, J=16 Hz, 3-CH), 7,35 (10H, m, Ph-H), 8,06 (2H, br, s, verdween door DzO, NHg), 8,21 (2H, br, s, verdween door D20 toevoeging, NH2), 8,36 & 9,07 (elk 2H, d, J=6 Hz, Py-H), 9,57 (1H, d, J=8 Hz, verdween door DaO toevoeging, 7-NH).

Bereiding nr. 16 40 Benzhydryi 7-benzylideenamino-3-[3-chloro-1 -propen-1 -yl)-3-cefem-4-carboxylaat (40, Z isomeer)

Aan een met ijs gekoeld mengsel van het kristallijne 7-amino-cefem tussenproduct met formule 41 (Z isomeer, 13,4 g, 28 mmol) en 3,3 g, 31 mmol benzaldehyde in 150 ml ethylacetaat werd in een periode van 20 min druppelsgewijze 56 ml, 28 mmol 0,5 N natriumhydroxyde toegevoegd, waarbij de temperatuur van het reactiemengsel beneden 10°C werd gehouden. Het mengsel werd gedurende nog eens 15 min onder 45 koeling geroerd, en de organische laag werd afgescheiden, gewassen met 2 x 100 ml verzadigde waterige natriumcarbonaat en boven magnesiumsulfaat gedroogd. Aan de gedroogde oplossing werd een kleine hoeveelheid houtskool toegevoegd en het mengsel werd gefiltreerd. Het filtraat werd drooggedampt. De resterende olie werd opgelost in 50 ml koolstof-tetrachloride, en opnieuw geconcentreerd. Deze procedure werd 3 keer herhaald, en het mengsel werd gevolgd met omgekeerde fase tic om te bevestigen dat al het 50 als uitgangsmateriaal gebruikte 7-amino-cefalosporine was omgezet in de Schiffs base. Verwijdering van het oplosmiddel onder verminderde druk gaf 16,45 g van de titelverbinding 40 (Z isomeer) als een lichtgeel poeder (geschatte zuiverheid 85%; smeltpunt 74°C (ontleding), dat zonder zuivering voor de volgende stap werd gebruikt.

IR: v κβγ cm"1 1780, 1725,1635.

max 55 UV: λ CHiCi, (E J % 257 (400).

max v 1 cm ' ' NMR: 6 ^6,18 (1H, d, J=11 Hz).

192925 22

Bereiding nr. 17

Benzhydryl 7-benzylideenanimo-3-[3-(4-carbamoyl-1 -pyridinio)-1 -propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat jodidi (44-H) (E isomeer)

Aan een afgekoeld mengsel van 16,4 g van het 3-chloropropenylcefem met formule 40 (Z isomeer) in 5 ml 5 aceton werd in de loop van 10 mln onder een stikstofatmosfeer druppelsgewijze een oplossing van 6,3 g, 42 mmol natriumjodide in 30 ml aceton toegevoegd, en het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd. De reactie werd gevolgd door de verhouding van uv absorptie [Ej ^ (255 nm)/Ej ^ (320 nm)]. Toen de verhouding een waarde beneden 1,30 bereikte (na 45 min), werd het mengsel verdund met 400 ml koolstoftetrachloride en liet men het bij kamertemperatuur staan. Toen de verhouding op een waarde 10 beneden 1,10 kwam (na 3 uur) werd het mengsel geconcentreerd tot de helft van zijn volume. Het concentraat werd behandeld met een kleine hoeveelheid houtskool en diatomeeënaarde, en gefiltreerd. De filterkoek werd gewassen met 100 ml van een 1 :1 mengsel van methyleenchloride en koolstoftetrachloride. Aan de gecombineerde oplossing van het filtraat en de wasvloeistof werd een oplossing toegevoegd van 3,5 g, 28,7 mmol isonicotinamide in 20 ml dimethylformamide en het mengsel werd onder verminderde druk 15 geconcentreerd. Men liet het concentraat gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur staan en waste het met 3 x 100 ml isopropylether. De resterende bruine semi-vaste stof werd opgelost in 50 ml methyleenchloride en de oplossing werd druppelsgewijze onder roeren toegevoegd aan 1,5 I ethylacetaat. Het verkregen neerslag werd door filtratie verzameld en met 200 ml ethylacetaat gewassen. Na drogen boven fosforpentoxyde onder verminderde druk, werd 17 g van de titelverbinding 44-H (E isomeer) verkregen. Het was een geel 20 amorf poeder met een smeltpunt van 150-155°C (ontleding). De geschatte zuiverheid was 80% volgens nmr.

IR: v κβγ cm-i 1775 1725, 1690,1635.

UV: λ «JA nm (EJ *) 258 (335), 298 (255).

NMR: 3,4-3,8 (2H, br.), 5,35 (2H, br.), 5,41 1H, d, J=4Hz), 5,73 (1H, d, J=4 Hz), 6,93 (1H, s), 6,97 25 (1H, d, J=16 Hz), 7,3-7,5 (15H, br. s), 8,40 (2H, d, J= 6.5 Hz), 9,15 (2H, d, J=6,5 Hz).

Bereiding nr. 18 7-Amino-3-[3-(4-carbamoyl-1-pyridinio)-1-propen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat (45-H, E isomeer)

Aan een suspensie van het gequatemiseerde cefem 44-H 17 g) in 25 ml 85%’s mierezuur werd druppelsge-30 wijze 5 ml geconcentreerd zoutzuur toegevoegd, en het mengsel werd gedurende 1,5 uur bij kamertemperatuur geroerd en behandeld met een kleine hoeveelheid houtskool. Het mengsel werd gefiltreerd en gewassen met 5 ml 85%’s mierezuur. Het filtraat werd gecombineerd met de wasvloeistof en onder roeren uitgegoten in 1 I aceton. Het verkregen neerslag werd door filtratie verzameld waarbij men 9,52 g geel gekleurd ruw product verkreeg. Aan een suspensie van het ruwe materiaal (9,5 g) in 50 ml water werd een 35 kleine hoeveelheid houtskool toegevoegd, en het mengsel werd gefiltreerd. Het filtraat werd onder roeren druppelsgewijze toegevoegd aan 700 ml isopropylalcohol. Het verkregen neerslag werd door filtratie verzameld, gewassen met een kleine hoeveelheid methanol van 30 ml, en gedroogd. Men verkreeg 7,58 g van de titelverbinding 45-H (E isomeer) als het hydrochloride. Het was een lichtgeel poeder. De geschatte zuiverheid was 85% volgens UV. Het smeltpunt bedroeg 173-188°C (ontleding).

40 IR: v kbt cm-1 1795, 1680, 1620, 1575, 1540.

UV: XterfaattxiffertpH?) ΠΓΤΐ(Ε] * ) 294 (457).

NMR: 5 3|82 (2H, s), 5,17 (1H, d, J=5 Hz), 5,33 (2H, d, J= 7Hz), 5,43 (1H, d, J=5Hz), 6,37 (1H, d-t, J=16 & 7Hz), 7,23 (1H, d, J=16 Hz), 8,34 (2H, d, J=7 Hz), 9,00 (2H, d, J=7 Hz).

45 Bereiding nr. 19 2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoacetylchloride-hydrochloride (26 als het zuurchioride-hydrochloride) A. 2-cyano-2-methoxyiminoacetamide

Aan een geroerd mengsel van 252 g, 3 mol α-cyanoacetamide en 414 g, 6 mol natriumnitriet in 600 ml 50 water werd in 1,5 uur bij 5-10°C 371 ml, 10 mol azijnzuur toegevoegd. Het mengsel werd gedurende nog eens 1,5 uur geroerd en met 6 N NaOH op een pH van 8,5 ingesteld. Aan het mengsel werd bij 15-20°C 568 ml, 6 mol dimethylsulfaat toegevoegd en het mengsel werd gedurende 1,5 uur bij 45°C geroerd. Het reactiemengsel werd met 6 N NaOH op een pH van 8,5 ingesteld en men liet het gedurende een nacht bij 5°C staan waarbij zich een neerslag afscheidde dat door filtratie werd verzameld, met koud water werd 55 gewassen en aan de lucht werd gedroogd. Men verkreeg 292 g (77%) van de titelverbinding als bruine naalden met een smeltpunt van 170-172°C.

IR: v ^ cm-1 3400, 3180, 1720(sh), 1715, 1690, 16,15, 1570.

23 192925 UV: λ Hg nm (e) 238,5 (8290), 268 (sh, 3870).

NMR: δ^^ο-* 4j20 (3H, s.) OCH3), 7,85 (2H, br. NH2).

Analyse berekend voor C4H5N302: C 37,80; H 3,97; N 33,06 gevonden: C 37,43; H 3,75; N 32,51.

5 B. 2-Methoxyiminopropaandinitrile

Een geroerd mengsel van 88,9 g, 0,7 mol 2-cyano-2-methoxyiminoacetamide, 70 g natriumchloride en 97 ml 1,05 mol fosforoxychloride in 350 ml droog 1,2-dichloroethaan werd gedurende 16 uur onder terugvloei-koeling gekookt. De onoplosbare stof werd afgefiltreerd door een dicalite kussen en gewassen met 10 dichloroethaan. Het filtraat en de wasvloeistof werden gecombineerd, en uitgegoten in 1,5 1 geroerd ijswater om de overmaat fosforoxychloride te ontleden. De organische fase werd met 500 ml 10%’s NaHC03, 3 x 500 ml water en 500 I van het verzadigde NaC1-oplossing gewassen en boven MgSO4 gedroogd. Het filtraat werd onder verminderde druk gedestilleerd waarbij 61,5 g (81%) van de titelverbinding werd verkregen welke kookte bij 62°C/24 mm Hg. (Lit., kpt. 47-48°C/12 mm Hg).

15 IR: v vtoeistoffilm cnr1 3020, 2960, 2245, 2020, 1530,1455, 1080.

max r NMR: δ cDcia 4,35 (3H, s, OCH3).

ppm C. 2-Cyano-2-methoxyiminoacetamidiniumacetaat

Aan een oplossing van 28,4 g, 0,53 mol ammoniumchloride in 355 ml 28%’s waterig ammonia en 180 ml 20 ethanol werd druppelsgewijze in de loop van een periode van 30 min onder roeren bij -15 tot -10°C een oplossing van 58,0 g 0,53 mol 2-methoxyiminopropaandinitrile in 120 ml ethanol toegevoegd. Het mengsel werd gedurende een nacht bij -10°C geroerd en daarna gedurende 1 dag bij kamertemperatuur (20-25°C). Het reactiemengsel werd verdeeld over 350 ml water en 350 ml CH2CI2, en de waterfase werd verzadigd met natriumchloride en opnieuw met 300 ml CH2CI2 geëxtraheerd. De organische extracten werden 25 gecombineerd, gedroogd boven MgS04 en onder verminderde druk verdampt. Een oplossing van het residu in 1,6 I ethylacetaat werd met azijnzuur op een pH van 3-4 ingesteld waarbij de titelverbinding neersloeg in de vorm van kristallen, die door filtratie werden verzameld en met ethylacetaat werden gewassen. De opbrengst was 67,6 g (69%). Het smeltpunt 152-154°C (ontleding). [Lit., smeltpunt 150-155°C (ontleding)].

IR: v 'SSL cm"1 3160> 290°- 236°- 2235> 200°- 1665- 1555> 1495· 1415· 30 UV: λ *Hnm (e) 243 (8500), 265 (sh, 5380), 305 (sh, 1400).

NMR: Sdmso* 1,88 (3H, s, CHgCOOH), 4,15 (3H, s, OCH3), 7,60 (4H, br.).

Analyse berekend voor C4H6N4O.CH4COOH: C 38,71; H 5,41; N 30,09 gevonden: C 38,71; H 5,59; N 29,51.

35 D. 2-(5-Amino- 1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyimino-acetonitrile

Aan een suspensie van 2-cyano-2-methoxyiminoacetamidinium-acetaat (125 g, 0672 mol) in 1,25 I CHgOH werd bij -10°C druppelsgewijze 234 ml, 1,68 mol triëthylamine toegevoegd, en vervolgens in 20 min bij -15 tot -10°C 41,6 ml, 0,806 mol) Br2. Het mengsel werd gedurende 20 min geroerd. Aan het mengsel werd in 1 uur bij -15 tot -10°C druppelsgewijze een oplossing van 78,3 g, 0,806 mol KSCN in 550 ml 40 CH3OH toegevoegd. Na 1 uur roeren bij 0-5°C werd het mengsel in 12 I ijswater uitgegoten waarbij zich een kristallijn neerslag vormde, dat door filtratie werd verzameld, met water werd gewassen en aan de lucht werd gedroogd. Men verkreeg 120 g (98%) van de titelverbinding. Het smeltpunt was 263-265°C (ontleding). Het smeltpunt van de aldus bereide verbinding is ongeveer 60°C hoger dan het in de literatuur vermelde smeltpunt (Japanse octrooiaanvrage Kokai 57-158.769, gepubliceerd op 30 september 1982, van 45 Fujisawa, Britse aanvrage van 3/6/81; smeltpunt 210-215°C (ontleding)), maar de onderstaande spectraal en microanalytische gegevens zijn consistent met de structuur.

IR: v kbi cm"1 3435, 3260, 3120, 2960, 2245, 2020, 1630, 1545, 1455, 1415.

UV: λ nm (e) 248 (13300), 310 (3470).

NMR: δ 4,21 (3H, s, OCH3), 8,30 (2H, br. NH2).

50 Analyse berekend voor C5H5NsOS: C 32,78; H 2,75; N 38,23; S 17,50 gevonden: C 32,76; H 2,51; N 38,02; S, 17,50.

E. 2-(5-Amino-1,2,4-thiadiozal-3-yl)-2-methoxyiminoazijnzuur (26)

Een mengsel van 2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl-2-methoxyiminoacetonitrile (18,3 g, 0,1 mol) in 250 mol 55 4 N NaOH werd onder roeren gedurende 3 uur bij 50-50°C verwarmd. Het reactiemengsel werd met H3P04 op een pH van 1 ingesteld, en gewassen met 100 ml ethylacetaat, verzadigd met NaCI, en drie keer geëxtraheerd met een mengsel van ethylacetaat en tetrahydrofuran (3 :1, 2 x 300 ml, en 1 x 200 ml). De 192925 24 extracten werden gecombineerd, gedroogd boven MgS04 en onder verminderde druk geconcentreerd. Het residu werd met isopropylether fijngewreven waarbij men lichtgele kristallen verkreeg van het in de titel vermelde zuur. De opbrengst was 16,8 g (83%). Smeltpunt 184-185°C (ontleding). [Lit.*, smeltpunt 18Q-182°C (ontleding] (* Japan Kokai 57-158.769, gepubliceerd 30 september 1982, van Fujisawa, Britse 5 aanvrage van 3/6/81).

!R: v £ cm-1 3460, 3260, 3140, 1725, 1620, 1605, 1545.

UV: λ h*° nm (e) 234 (13200), 288 (sh, 3620).

F. 2-(5-Amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2methoxyiminoacetyi-chloride-hydrochloride 10 Aan een suspensie van 2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2-methoxyiminoazijnzuur (63-1, 40,4 g, 0,2 mol) in 400 ml droog CH2CI2 werd bij -50°C in een portie 41,6 g, 0,2 mol PCIS toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 4 uur bij -20 tot -5°C geroerd en in een mengsel van n-heptaan en isopropylether (2:1,2 I) uitgegoten. Het gele neerslag werd door filtratie verzameld met hetzelfde oplosmiddelmengsel gewassen, en met KOH onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 46,0 g (90%) van het in de titel vermelde 15 zuurchloride.

IR: v ΝΦΐ cm-1 1775 max

Bereiding nr. 20

Difenylmethyl 7-benzylideenamino-3-[(E)-3-(4-carbamoyl-pyridinio)-1 -propenyl]-3-cefem-4-carboxylaat (44-H 20 jodide, E isomeer met formuie 60)

Aan een gekoelde oplossing van het 3-chloropropenyl-cefem (40, Z isomeer, verkregen met bereiding nr.

16; 42,8 g, 90 mmol) in 80 ml droog DMF werd in een portie 20 g, 120 mmol KI toegevoegd, en het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd. De ractie werd gevolgd door de verhouding van UV absorptie (E] ^ (250 nm)/(E] %i(320nm)]. Toen de verhouding beneden 1,10 kwam (na 45 min), werd het mengsel met 25 800 ml methyleenchloride verdund, met 4 g actieve koolstof behandeld en gefiltreerd. De filterkoek werd met 100 ml CH2CI2 gewassen. Aan het gecombineerde filtraat en wasvloeistof werd 14,64 g isonicotinamide toegevoegd en het mengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd. Het concentraat werd gedurende 1,5 uur op kamertemperatuur gehouden en gewassen met een mengsel van tolueen en n-heptaan (1:1, 600 ml). De overblijvende bruine semi-vaste stof werd opgelost in 100 ml CH2CI2 en de oplossing werd 30 druppelsgewijze onder heftig roeren toegevoegd aan 31 ethylacetaat. Na onder verminderde druk drogen boven P2Os, werd 57,37 g (88%) van het gequatemiseerde titelproduct 44-H als het jodide verkregen. Het was een geel amorf poeder met een smeltpunt van 150-155°C (ontleding). Dit product was identiek aan het product dat verkregen werd door jodering met Nal (bereiding nr. 17).

35 Bereiding nr. 21

Difenylmethyl 7-amino-3-(3-chloro-1-propenyl)-3-cefem-4-carboxylaat-hydrochloride (Z isomeer, 41-hydrochloride met formule 61)

Een 25%’s oplossing van 69 g, 0,22 mol chloroacetaldehyde in CHIS werd bij -10°C in een portie toegevoegd aan een oplossing van de verbinding met de formule 39 (80 g, 0,11 mol) in 1,1 1 CH2CI2, dat 16,2 40 mi, 0,06 mol Ν,Ο-bis (trimethylsilyl)acetamide bevatte, en het mengsel liet men gedurende een nacht bij 5°C staan. Het mengsel werd geconcentreerd tot ongeveer 0,3 1, verdund met een gemengd oplosmiddel van ethylacetaat en isopropylether (1/2, 0,6 1), behandeld met silicagel (Wakogel C-100, 60 g) en gefiltreerd door een decalite kussen. De filterkoek werd met hetzelfde oplosmiddelsysteem (0,2 1) gewassen. De gecombineerde filtraat en wasvloeistof werden geconcentreerd tot ongeveer 0,2 1, behandeld met 60 g, 45 0,26 mol Girard reagens T en 220 ml 4N HCI, en geënt met een paar kristallen van het hydrochloride van de verbinding met formule 41. Na 3 uur roeren werden de verkregen kristallen door filtratie verzameld, met 0,5 I water en 0,5 I ethylacetaat gewassen en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 37 g (70%) van de titelverbinding 41-hydrochloride, welke smolt boven 185°C (ontleding). Het waren lichtgele naalden. Dit product was identiek aan het product dat in bereiding nr. 12 was verkregen.

50

Bereiding nr. 22

Difenylmethyl 7-amino-3-(3-chloro-1-propenyl)-3-cefem-4-carboxylaat-hydrochloride (Z isomeer, 41-hydrochloride met formule 61)

Aan een oplossing van chloroacetaldehyde (25%’s oplossing in CHCI3, 628 mg, 2 mmol) in 10 ml CH2CI2 55 werden achtereenvolgens bij 5°C 0,135 ml, 0,5 mmol N,0-bis-(trimethylsilyl)acetamide en 728 mg, 1 mmol van de verbinding met formule 39 toegevoegd. Men liet het mengsel gedurende een nacht bij 5°C staan.

Het mengsel werd verdampt en verdund met een mengsel van ethylacetaat en isopropylether (1/2,10 ml).

Claims (1)

1. 25 192925 Onoplosbare stof werd door filtratie verwijderd en het filtraat werd tot ongeveer 5 ml geconcentreerd. Het concentraat werd behandeld met 2 ml 4N HCI, geënt met het hydrochloride van verbinding 41 en gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. De kristallen werden door filtratie verzameld, met 10 ml ethylacetaat en 10 ml water gewassen en onder verminderde druk gedroogd. Men verkreeg 384 mg (80%) van de 5 titelverbinding 41-hydrochloride, smeltend boven 185°C (ontleding). Het waren lichtgele naalden. Dit product was identiek aan het product dat met bereiding nr. 12 was verkregen. Bereiding nr. 23 Benzotriazol-1-yl-2-(5-amino-1,2,4-thiadiazol-3-yl)-2~metoxy-iminoacetaat 10 Een mengsel van 2,7 g, 20 mmol 1-hydroxybenzotriazol en 4,12 g, 20 mmol dicyclohexylcarbodifimide en 65 ml DMF werd bij kamertemperatuur geroerd. Na 15 min werd verbinding 63-1 (4,04 g, 20 mmol) bij 0°C aan het geroerde mengsel toegevoegd, en werd het roeren gedurende 3 uur voortgezet. Het reactiemengsel werd gefiltreerd om het onoplosbare ureum te verwijderen. De filterkoek werd gewassen met een kleine volumehoeveelheid DMF. De filtraat en wasvloeistof werden gecombineerd en uitgegoten in 800 ml ijswater. 15 Het neerslag werd door filtratie verzameld. Men verkreeg 5,24 g (82%) van de titelverbinding als een licht-grijs poeder. Het smeltpunt was 189-192°C (ontleding). IFt: vj^in cnr11815,1620, 1540, 1415, 1090, 1060, 1005, 945, 865, 740. IIV: λ ^ (C2H5OH) in nm (EJ*) 246 (580), 283sh (228). 20 Een antibacterieel werkzaam 7-[2-(5-amino-1,2,4-thidiazol-3-yl)-2-methoxyiminoaceetamidol]-3-[(3-quatemair ammonioalkyl)-1-propeen-1-yl]-3-cefem-4-carboxylaat, dat voldoet aan de algemene formule 1 op het 25 formuleblad, waarin + N-Q een groep is, gekozen uit: a. een trimethylammoniogroep, b. een 1-methylpyrrolidiniogroep, c. een 3-pyridiniogroep, 30 d. een 3-aminopyridiniogroep, e. een 4-carbamoylpyridiniogroep, f. een 2-methylthiazoliogroep, en g. een 2-amino-5-thiazolio [4,5-c]pyridiniogroep, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout, solvaat, hydraat of fysiologisch hydrolyseerbare ester daarvan. Hierbij 16 bladen tekening