FI84830C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva kefemderivat. - Google Patents

Description

1 84830

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten kefeemijohdannaisten valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää 7 —[2 — (5-amino-l,2,4-tia-5 diatsol-3-yyli )-2-(substituoitu)iminoasetamido]-3-[3-kva-ternaarinen ammonio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karbok-sylaattien valmistamiseksi, joilla on kaava N-n— C CONH-i r^S \ 10 li ί i n ]

RHlN s' N\ 2 0 CH=CH-CH2®N=Q

0R cocP ^1 ^ 15 jossa R1 ja R2 ovat jäljempänä määriteltyjä ja -^=Q on jäljempänä määritelty kvaternaarinen ammonioryhmä, ja niiden suolojen ja estereiden valmistamiseksi. Keksintö koskee myös menetelmässä käytettäviä välituoteyhdisteitä.

20 US-patentissa 4 390 534 (julkaistu kesäkuun 28.

päivänä 1983; Tsutomo Teraji et ai. ) esitetään kefeemi- ja kefaamiyhdisteitä, joilla on kaava 25 R1—-ff i-C-CONHT-R3 VI J-K4 ^2 5

OR R

30 joissa R1 on amino tai suojattu amino; R2 on vety, asyyli, -J": valinnaisesti substituoitu aryyli, substituoitu alkyyli, alkenyyli, alkynyyli, valinnaisesti substituoitu sykloal-kyyli, sykloalkenyyli tai happea tai rikkiä sisältävä 5-35 jäseninen heterosyklinen rengas, joka on substituoitu ok- 2 84830 soryhmällä (oksoryhmillä); R3 on vety tai alkyyli; R4 on vety, asyylioksialkyyli, asyylitioalkyyli, valinnaisesti substituoitu pyridinioalkyyli, valinnaisesti substituoitu heterosyklyylitioalkyyli, alkyyli, halogeeni, hydroksi tai 5 valinnaisesti substituoitu tiatsolioalkyyli; ja R5 on karb-oksi tai suojattu karboksi; edellyttäen, että R5 on COO', jos R4 on valinnaisesti substituoitu pyridinioalkyyli tai valinnaisesti substituoitu tiatsolioalkyyli; ja katkoviiva merkitsee joko yksinkertaista sidosta tai kaksoissidosta. 10 Eurooppalainen patenttihakemus 13 762 (julkaistu elokuun 6. päivänä 1980) vastaa edellä mainittua US-pa-tenttia.

US-patentit 4 381 299 (julkaistu huhtikuun 26. päivänä 1983), 4 331 665 (julkaistu toukokuun 25. päivänä 15 1982) ja 4 332 798 (julkaistu kesäkuun 1. päivänä 1982) on kukin julkaistu US-patentin 4 390 534 kantapatenttihake-musten yhteydessä ja ovat sisällöltään samanlaiset.

Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 62 321 (julkaistu lokakuun 23. päivänä 1982) esitetään kefeemiyhdis-20 teitä, joilla on kaava R1 jf ^C-CONHt-f S^i vi ,ΑΛ ” k* jossa R1 on amino tai suojattu amino; R2 on valinnaisesti 30 substituoitu alempi alifaattinen hiilivetyryhmä tai syklo-alkenyyli; ja ryhmä, jolla on kaava " \ -N © ‘ \ ' 3 84830 on valinnaisesti substituoitu heterosyklinen kationiryhmä, jossa on useampia kuin yksi typpiatomi; ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja. Esitetään myös välituo-teyhdisteitä, joilla on kaava 5

I 0 | CH -N φ I

* 2 *4 λ \ /

10 OR R

jossa R1 ja R2 ovat edellä määriteltyjä, R4 on suojattu 15 karboksyyliryhmä ja xP on happotähde.

Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 74 653 (julkaistu maaliskuun 23. päivänä 1983) esitetään kefeemiyh-disteitä, joilla on kaava r1-/~Vc-c°nhi—j^Svi 3

vh JXX

? 0 ^ ch2n OR2 COO" Ne=-^“R4 25 jossa R1 on amino tai suojattu amino; R2 on valinnaisesti substituoitu alempi alifaattinen hiilivetyryhmä, syklo-(alempi)alkyyli tai syklo(alempi)alkyenyyli; R3 on (alempi )alkyyliamino, N-suojattu (alempi)alkyyliamino, di(alem-30 pi)alkyyliamino, sulfo(alempi)alkyyliamino, hydroksi(alempi )alkyyliamino, N-suojattu hydroksi(alempi)alkyyliamino, asyylioksi(alempi)alkyyli, (alempi)alkoksi(alempi)alkok-si(alempi)alkyyli, di(alempi)alkyyliamino(alempi)alkyyli, (alempi)alkyylitio(alempi)alkyyli, (alempi)alkyylitio, 35 (alempi )alkoksi, (alempi )alkoksi(alempi )alkoksi, hydroksi- 4 84330 (alempi)alkoksi, asyyli(alempi)alkyyli, hydroksi(alempi)-alkyylitio, di(alempi)alkyyliamino(alempi)alkyylitio, typpeä sisältävä tyydyttymätön 5-jäseninen heterosyklinen ryhmä, typpeä sisältävä tyydyttymätön 5-jäseninen hetero-5 syklyylitio, tai typpeä sisältävä tyydyttymätön 5- tai 6-Jäseninen heterosyklyylitio(alempi)alkyyli, joka voi olla substituoitu sopivalla substituentilla (sopivilla substi-tuenteilla); ja R4 on vety tai (alempi)alkyyli; tai niiden suola.

10 US-patentissa 4 332 800 (julkaistu kesäkuun 1. päi vänä 1982; Tsutomo Teraji et ai.) esitetään mm. yhdisteitä, joilla on kaava OR2 C0°e 20 jossa R1 on amino tai suojattu amino; R2 on (alempi)alkyyli ja X on vety tai karbamoyyli.

Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 47 977 (julkaistu maaliskuun 24. päivänä 1982) esitetään kefeemiyh-disteitä, joilla on kaava ' - 25 (O) A m

Am-T-C-CONH-.-V.

0-R, COcP

-- 30 2 jossa m on 0 tai 1; Am on valinnaisesti substituoitu amino; T on tiadiatsolyyliryhmä (liittyneenä muihin ryhmiin kahden hiiliatominsa välityksellä); R2 on vety, valinnaisesti substituoitu alkyyli, sykloalkyyli tai valinnaisesti 35 substituoitu karbamoyyli; ja R1 on valinnaisesti substitu- 5 84830 oltu tiatsolio, valinnaisesti substituoitu pyratsolio, tri(alempi)alkyyliammonio tai pyridinioryhmä, jolla on kaava

Ra 5

Rc/^=^Rb jossa R* on substituoitu (alempi)alkyyli, jolloin substi-10 tuentti on sykloalkyyli, fenyyli, hydroksi, alkoksi, halogeeni, syaani, karbamoyyli, karboksyyli tai sulfo, (alempi )alkenyyli tai karboksisubstituoitu (alempi)alkenyyli, (alempi)alkyylitio tai karboksisubstituoitu (alempi)alkyy-litio, amino tai monosubstituoitu amino, jolloin substitu-15 entti on (alempi)alkyyli, (alempi)alkanoyyli tai amino-bentseenisulfonyyli, di(alempi)alkyyliamino, substituoitu karbamoyyli, jolloin substituentti on (alempi)alkyyli, hydroksi(alempi)alkyyli, (alempi)alkoksi, hydroksi tai syaani, di(alempi)alkyylikarbamoyyli, tiokarbamoyyli, syk-20 loalkyyli, fenyyli, hydroksi, (alempi)alkoksi, halogeeni, (alempi)alkoksikarbonyyli, (alempi)alkanoyyIloksi, (alempi )alkanoyyli, karboksyyli, sulfo, syaani, nitro tai hydr-oksisulfo(alempi)alkyyli; Rb on vety tai karbamoyyli, tai sillä on sama merkitys kuin Ra:lla; ja Rc on vety tai sillä 25 on sama merkitys kuin Ra:lla; ja niiden suoloja.

Eurooppalainen patenttihakemus 25 017 (julkaistu maaliskuun 11. päivänä 1981) on sisällöltään samanlainen, joskaan ei muodollisesti edelliseen liittyvä.

Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 30 630 (jul-30 kaistu kesäkuun 24. päivänä 1981) esitetään 3-vinyylike-feemiyhdisteitä, joilla on kaava R1-A-C0NHn-v.

- - 35 CT CH*CH2 R2 6 84830 jossa R1 on valinnaisesti suojattu aminosubstituoitu hete-rosyklinen ryhmä, jossa voi olla myös halogeeni, tai ryhmä, jolla on kaava

5 R3S02HN

<Q- 10 jossa R3 on (alempi)alkyyli; R2 on karboksi tai suojattu karboksi; ja A on alempi alkyleeni, jossa voi olla substi-tuenttina amino, suojattu amino, hydroksi, oksi ja ryhmä, jonka kaava on =Nn/0R4, jossa R4 on vety, syklo(alempi)-alkenyyli, (alempi)alkynyyli, (alempi)alkenyyli, jossa on 15 valinnaisesti substituenttina karboksi tai suojattu karboksi, (alempi)alkyyli, jossa on valinnaisesti substituent-teina yksi tai useampi karboksi-, suojattu karboksi-, amino-, suojattu amino-, syaani-, fosfono-, suojattu fosfono-ja heterosyklinen ryhmä, jossa itsessään voi olla substi-20 tuentteja; ja niiden suoloja.

Tämän patenttihakemuksen kohteena ovat erityisesti yhdisteet, joilla on kaava V 25 N--r— C-CONH-,-r^S ^

ΓΊΓ» Π JL

H2N^s^ Ns o N'Vj^sCH»CH2 OR4 *

COOH

30 jossa OR4 on metoksi, karboksimetoksi, tert.-butoksikarbo-nyylimetoksi tai 1-tert.-butoksikarbonyylietoksi.

GB-patenttijulkaisussa 1 399 086 (julkaistu kesä-35 kuun 25. päivänä 1975) esitetään yleisesti hyvin suuri 7 84830 määrä kefalosporiineja, joilla on kaava R-C-CO-NH—j-S B\ ss Jy., ORa „

COOH

jossa R on vety tai orgaaninen ryhmä, R“ on eetterin muodostava yksivalenssinen orgaaninen ryhmä, joka on sitoutu-10 nut happeen hiiliatomin välityksellä, B on >S tai >S->0, ja P on orgaaninen ryhmä. Eräässä suoritusmuodossa P voi olla mm. vinyyliryhmä, jolla on kaava /R3

15 -CH=C

V

jossa R3 ja R4 toisistaan riippumatta voivat olla vety, nitriili, (alempi)alkoksikarbonyyli tai substituoitu tai 20 substituoimaton alifaattinen, sykloalifaattinen, arali-faattinen tai aromaattinen ryhmä. 5-amino-l,2,4-tiadiat-sol-3-yyliryhmää ei kuitenkaan identifioida mahdollisena R-substituenttina eikä siinä esitetä eikä ehdoteta, että P voi olla kvaternaarinen ammoniosubstituoitu propenyyliryh-25 mä.

US-patentti 3 971 778 ja siitä lohkaistut patentit 4 024 133, 4 024 137, 4 064 346, 4 033 950, 4 079 178, 4 091 209, 4 092 477 ja 4 093 803 ovat sisällöltään samantyyppisiä.

30 Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 88 385 (jul kaistu syyskuun 14. päivänä 1983) esitetään yhdisteitä, joilla on kaava

R-C—CONH-i-r-SN

: 35 N

1r2 r4 8 84830 jossa R1 on (substituoimaton) tiadiatsolyyli; R2 on karbok-si(alempi)alkyyli tai suojattu karboksi(alempi)alkyyli; R3 on vety, halogeeni tai (alempi)alkenyyli; ja R4 on karboksi tai suojattu karboksi. Vaikkakin 1-propenyyli on mainittu 5 yhtenä mahdollisena R3:n merkityksistä, hakemuksessa on esimerkkinä kuvattu ainoastaan yhdisteitä, joissa R3 on vety, kloori tai vinyyli.

US-patentissa 4 307 233 (julkaistu juolukuun 22. päivänä 1981; Daniel Farge et ai.) esitetään mm. 3-vinyy-10 likefalosporiinijohdannaisia, joilla on kaava N-n— c — CONH-,-Ss \ I Γ il E? 1 / 1S B2nA's'' « O^-N C"-C»-n(

15 or5 I

COOH

Jossa R5 voi mm. olla alkyyli, vinyyli, syaanimetyyli tai 20 suojaava ryhmä, kuten 2-metoksiprop-2-yyli, ja R3 ja R4 ovat alkyyliryhmiä (joissa on valinnaisesti substituentti-na hydroksi, alkoksi, amino, alkyyliamino tai dialkyyli-amino) tai fenyyliryhmiä, tai R3 ja R4 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat sitoutuneina, voivat muodostaa tyy-25 dyttyneen heterosyklisen renkaan, jossa on 5 tai 6 jäsentä, ja jossa on valinnaisesti muu heteroatomi atomeista N, 0 ja S ja jossa on valinnaisesti substituenttina alkyyli-ryhmä. Yhdisteet ovat käyttökelpoisia välituoteyhdisteinä valmistettaessa 3-tienyylikefalosporiinijohdannaisia. Sii-30 nä ei esitetä eikä ehdoteta, että 2-aminotiatsol-4-yyli-substituentin paikalla olisi 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyliryhmä tai kvaternaarinen ammoniosubstituoitu propenyy-liryhmä 3-substituenttina.

Julkaistu GB-patenttihakemus 2 051 062 vastaa tätä 35 US-julkaisua ja on sisällöltään samanlainen.

9 84830

Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 53 537 (julkaistu kesäkuun 9. päivänä 1982) esitetään mm. 3-vinyyli-kefalosporiinijohdannaisia, joilla on kaava

5 N---C-CONH-,-r^S "S

hAXn 0XXAch=cH-<3 O-C-COOR 5 <i00R2 *4 R3 Rb R 5 R 5 10 jossa R% ja Rb5 ovat samoja tai erilaisia ja merkitsevät vetyä tai alkyyliä tai muodostavat yhdessä alkyleeniryh-män, jossa on 2 tai 3 hiiliatomia, Rc5 on hapon suojaryhmä, R2 on hapon suojaryhmä, kuten esteri, R3 ja R4 ovat samoja 15 tai erilaisia ja merkitsevät vetyä, alkyyli- (jossa on valinnaisesti substituenttina hydroksi, alkoksi, amino, al-kyyliamino tai dialkyyliamino) tai fenyyliryhmiä, tai R3 ja R4 yhdessä typen kanssa, johon ne ovat sitoutuneina, voivat muodostaa tyydyttyneen heterosyklisen renkaan, jossa on 5 20 tai 6 jäsentä, ja jossa on valinnaisesti muu heteroatomi atomeista N, 0 ja S ja jossa on valinnaisesti substituenttina alkyyliryhmä. Yhdisteet ovat käyttökelpoisia välituo-teyhdisteinä valmistettaessa 3-tiovinyylikefalosporiini-johdannaisia. Siinä ei esitetä eikä ehdoteta, että 2-ami-25 notiatsol-4-yylisubstituentin paikalla olisi 5-amino- 1,2,4-tiadiatsol-3-yyliryhmä tai kvaternaarinen ammonio-substituoitu propenyyliryhmä 3-substituenttina.

US-patenttijulkaisu 4 423 214 vastaa tätä hakemusta ja on sisällöltään samanlainen.

30 Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 53 074 (jul kaistu kesäkuun 2. päivänä 1982) esitetään yleisesti hyvin suuri määrä 3-vinyylikefalosporiinijohdannaisia, joilla on

kaava (OI

φ Xl : ;>35 R°la-NH-|-f S R°

CH=C—R J

C00R° 2a 10 84830 jossa R°la (eräässä useista suoritusmuodoista) voi olla N—-r— C—CO- i T i h9n^sx n

5 ‘N

0 or5 jossa R5 voi olla mm. vety, alkyyli, vinyyli, syaanimetyyli, oksiimisuojaryhmä, kuten trityyli jne., tai ryhmä, jolla on kaava 10 -C-COORc5 R%/ VRbs jossa Ra5 ja Rb5 ovat samoja tai erilaisia ja voivat olla vety, alkyyli tai yhdessä alkyleeniradikaali, jossa on 2 15 tai 3 hiiliatomia, ja Rc5 on vety tai happoa suojaava radikaali; R°2a on vety tai happoa suojaava radikaali, kuten metoksimetyyli; R° (eräässä useista suoritusmuodoista) voi olla metyyliryhmä, jossa voi olla substituenttina 5- tai 6-jäseninen aromaattinen heterosyklinen rengas, jossa on 20 yksi ainoa heteroatomi, kuten 2- tai 3-pyridyyli, 2- tai 3-tienyyli tai 2- tai 3-furyyli; ja R3 on ryhmä, jolla on kaava R4S020- 25 jossa R4 voi oli alkyyli, trihalogeenimetyyli tai valinnai sesti substituoitu fenyyli.

Näiden yhdisteiden on mainittu olevan välituoteyh-disteitä valmistettaessa yhdisteitä, joissa 3-substituent-ti on ryhmä, jolla on kaava 30 ·' R°

-CH=C-SR

joiden on mainittu omaavan bakteerien vastaista vaikutus-35 ta.

il 84830

Vaikkakin tämä patentti sulkee piiriinsä mahdollisuuden, että R° on metyyliryhmä, jossa on substituenttina typpeä sisältävä heterosyklinen rengas, sekä välituoteyh-disteissä että lopputuotteissa muodostaen täten heterosyk-5 lisellä ryhmällä substituoidun propenyyliryhmän, siinä mainitaan ainoastaan, että heterosyklinen rengas on sitoutunut yhden hiiliatominsa välityksellä. Täten siinä ei esiinny viittausta kvaternaarisellä ammonioryhmällä subs-tituoidusta propenyyliryhmästä. Viite julkaisun esimerkeis-10 sä R° välituoteyhdisteissä ja lopputuotteissa on ainoastaan metyyli. Lisäksi sekä välituoteyhdisteissä että lopputuotteessa propenyyliryhmässä on oltava toinen substituentti (-03SR4 tai vastaavasti -SR). Siinä ei myöskään esitetä tai ehdoteta, että 2-aminotiatsol-4-yylisubstituentin paikalla 15 olisi 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyliryhmä.

Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa 53 538 (julkaistu kesäkuun 9. päivänä 1982) esitetään mm. 3-vinyyli-kefalosporiinivälituoteyhdisteitä, joilla on kaava (o)n 20 t N C—CONH-i-j H2N<^V's'^ N\ s° Ν'νγί?ί^ CH=CH-R3 OR 1

COOR

25 jossa n on 0 tai 1, R5 on vety, alkyyli, vinyyli, syaanime-tyyli tai oksiimisuojaryhmä ja R3 on halogeeni. Siinä ei esitetä tai ehdoteta, että 2-aminotiatsol-4-yylisubstitu-entin paikalla olisi 3-halogeeni-l-propen-l-yylisubstitu-30 entti.

Esillä oleva patenttihakemus koskee menetelmää uusien kefalosporiinijohdannaisten valmistamiseksi, jotka ovat tehokkaita bakteerien vastaisia aineita. Täsmällisemmin sanoen se koskee menetelmää, jolla valmistetaan yhdis-35 teitä, joilla on kaava 12 8 4 830

n-1— c—comi-,—s'5 N

5 R1HN'^'s'' \ O CH=CH-CH®NsQ (I)

01,2 cocP

10 jossa R1 on vety tai tavallinen aminon suojaryhmä; R2 on 1 - 4 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 3-6 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä, propenyyli tai propargyyli tai

-CH2-CH=CH2 tai -CH2-C=CH

15

QsN-0 on kvaternaarinen ammonioryhmä, joka on tri(alempi alkyyli)ammonio, N-(alempi alkyyli)pyrrolidinio, 2-metyy-litiatsolio tai 2-amino-5-tiatsolo[4,5-c]pyridinio tai pyridinio. Joka on mahdollisesti substituoitu (alempi al-20 kyyli)-, amino-, formyyliamino-, karboksi-, karboksi(alempi alkyyli)tio-, hydroksi(alempi alkyyli)-, amino(alempi alkyyli)-, karbamoyyli- tai N-(alempi alkyyli)karbamoyyli-ryhmällä, tai 2,3-asemiin liittyneellä 3-5 hiiliatomia sisältävällä alkyleeniryhmällä, 25 ja niiden ei-myrkyllisten farmaseuttisesti hyväk syttävien suolojen ja fysiologisesti hydrolysoituvien esterien valmistamiseksi.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että 30 a) yhdiste, jolla on kaava (0) m N -r— C—CONH-t li "Il ] 1 B2HN'^\s^ n o CH=CHCH:,Z (VI1) 35 Nor2 I ! 2

υκ COOB

13 84830 jossa R2 on edellä määritelty, B1 on tavallinen karboksyy-lin suojaryhmä, B2 on vety tai tavallinen aminon suojaryh-mä, Z on kloori, bromi tai jodi, ja m on nolla tai yksi, saatetaan reagoimaan tertiaarisen amiinin Q=N (tai peräk-5 käin sekundaarisen amiinin RR'NH ja kaavan R"Z mukaisen yhdisteen) kanssa, ja, jos m on 1, sulfoksidi pelkistetään tavallisin keinoin, ja sen jälkeen poistetaan peräkkäin kaikki suojaryhmät tavallisin keinoin; tai b) yhdiste, jolla on kaava 10

H2NtO

N\j^n'CH=CHCH2(^N=Q (XI)

cocP

15 saatetaan reagoimaan hapon kanssa, jolla on kaava 20

2 /rrcooH

B2HN N\ 2 25 tai mainitun hapon asyloivan johdannaisen kanssa, jossa R2 on edellä määritelty, B1 on tavallinen karboksyylin suoja-ryhmä ja B2 on vety tai tavallinen aminon suojaryhmä, ja haluttaessa muutetaan kaavan I mukaiset yhdisteet ei-myr-kyllisiksi, farmaseuttisesti hyväksyttäviksi suoloikseen 30 tai fysiologisesti hydrolysoituviksi estereikseen.

Valmistettavien yhdisteiden piiriin kuuluvat myös kaavan I mukaisten yhdisteiden solvaatit (hydraatit mukaan lukien) samoin kuin kaavan I mukaisten yhdisteiden tauto-meeriset muodot, esim. 2-aminotiatsol-4-yyliryhmän 2-imi-: 35 notiatsolin-4-yylimuoto.

i4 84830

Keksinnön kohteena ovat myös mainitussa menetelmässä kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi käytettävät tietyt välituotteet.

Kuten rakennekaavassa on esitetty, kaavan I mukai-5 set yhdisteet voivat olla alkoksi-iminoryhmän suhteen "synH- tai "Z"-konfiguraation mukaisia. Koska nämä yhdisteet ovat geometrisia isomeerejä, myös vähän "anti-isomee-ria" voi muodostua. Tämän keksinnön mukaisesti valmistettavissa kaavan 1 mukaisissa yhdisteissä on ainakin 90 % 10 "syn"-isomeeriä. Edullisesti muodostuu kaavan I mukaisia yhdisteitä, jotka ovat "syn"-isomeerejä, joiden joukossa ei oleellisesti ole vastaavia "anti"-isomeerejä.

Alkoksi-iminoryhmän suhteen mahdollisten geometristen isomeerien lisäksi voi muodostua kaavan l mukaisia 15 yhdisteitä (ja kaavojen VIII ja IX mukaisia välituoteyh-disteitä), jotka ovat myös geometrisia (cis ja trans) isomeerejä propenyyliryhmän kaksoissidoksen kohdalla ja tällaisten yhdisteiden sekä cis ("Z") että trans ("E")-iso-meerit sisältyvät spesifisesti valmistettavien yhdisteiden 20 piiriin.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden ei-myrkyllisiä far maseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ovat suolat epäorgaanisten happojen, kuten kloorivedyn, bromivedyn, fosforiha-pon ja rikkihapon kanssa, tai orgaanisten karboksyylihap-25 pojen tai sulfonihappojen, kuten etikkahapon, trifluori-etikkahapon, sitruunahapon, muurahaishapon, maleiinihapon, oksaalihapon, meripihkahapon, bentsoehapon, viinihapon, fumaarihapon, mantelihapon, askorbiinihapon, omenahapon, p-tolueenisulfonihapon ja muiden tunnettujen ja penisil- 30 liinin ja kefalosporiinien yhteydessä käytettyjen happojen kanssa.

Esimerkkejä kaavan I mukaisten yhdisteiden fysiologisesti hydrolysoituvista estereistä ovat indalyyli-, fta-lidyyli-, metoksimetyyli-, asetoksimetyyli-, pivaloyyliok-35 simetyyli-, glysidyylioksimetyyli-, fenyyliglysidyylioksi- is 84830 metyyli-, 5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yylimetyylies-terit ja muut penisilliinin ja kefalosporiinien yhteydessä tunnetut ja käytetyt fysiologisesti hydrolysoituvat esterit.

5 Kaavan I mukaisilla yhdisteillä, joissa R1 on vety, on hyvin voimakas bakteerienvastainen vaikutus erilaisia gram-positiivisia ja gram-negatiivisia bakteereita vastaan ja ne ovat käyttökelpoisia hoidettaessa eläinten bakteeri-infektioita, ihmiset mukaan lukien.

10 Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan formuloida pa- renteraaliseen käyttöön soveltuviksi tavalliseen tapaan käyttämällä tunnettuja farmaseuttisia kantajia ja lisäaineita ja ne voivat olla annosyksikön muodossa tai monian-noksisissa säiliöissä. Koostumukset voivat olla liuosten, 15 suspensioiden tai emulsioiden muodossa öljy- tai vesipitoisissa väliaineissa ja ne voivat sisältää tavallisia dispergointi-, suspendointi- tai stabilointiaineita. Koostumukset voivat olla myös kuivan jauheen muodossa, joka soveltuu muodostettavaksi uudelleen ennen käyttöä, esim. 20 steriilin, pyrogeenittömän veden kanssa. Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan formuloida myös peräpuikkojen muotoon käyttämällä tavallisia peräpuikkomassoja, kuten kaakaovoi-ta tai muita glyseridejä. Keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voidaan haluttaessa antaa muiden anti-25 bioottien, kuten penisilliinien tai muiden kefalosporiinien yhteydessä.

Annosyksikkömuodoiksi saatettuina koostumukset sisältävät ensisijaisesti noin 50-1 500 mg kaavan I mukaista aktiivista ainetta. Kaavan I mukaisten yhdisteiden 30 annostus riippuu tekijöistä, kuten potilaan painosta ja iästä, samoin kuin sairauden erikoisluonteesta ja vakavuudesta, ja on lääkärin harkinnan varassa. Täysikasvuisen ihmisen hoitoon käytettävä annos on kuitenkin tavallisesti noin 500 - 5 000 mg päivää kohden riippuen antotiheydestä 35 ja antotiestä. Lihaksensisäisesti tai laskimonsisäisesti i6 84830 täysi-ikäiselle ihmiselle annettaessa riittävä kokonaisan-nos on tavallisesti noin 750 - 300 mg päivää kohden jaettuina annoksina, joskin eräiden yhdisteiden suuremmat annokset voivat olla toivottavia, kun kyseessä on Pseudomo-5 nas-infektiot.

Edullisia keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä ovat 1) 7—[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(trimetyyliammonio)-l-propen-l-yyli]-3- 10 kefeemi-4-karboksylaatti, 2) 7—[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] —3— [3— (1-metyylipyrrolidinio)-l-propen-l-yy-li]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 3) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 15 noasetamido]-3-[3-pyridinio-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4- karboksylaatti, 4) 7—[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] —3— [3—(3-aminopyridinio) -1-propen-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksylaatti, 20 5) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- noasetamido] -3-[3-(3-formyyliaminopyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 6) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(3-aminometyylipyridinio)-1-propen-l- 25 yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 7) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(3-karbamoyylipyridinio)-1-propen-l-yyli] -3-kefeemi-4-karboksylaatti, 8) 7-t2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 30 noasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-1-propen-l-yy li ] -3-kefeemi-4-karboksylaatti, 9) 7—[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [ 3- (2-metyylitiatsolio) -1 -propen-1 -yyli ] - 3-kefeemi-4-karboksylaatti, 35 10) 7—[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- i7 8 4 8 30 noasetamido]-3-[3-(2-amino-5-tiatsolo[4,5-c]pyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeerai-4-karboksylaatti, 11) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [3-( 4-hydroksimetyylipyrldinio)-1-propen- 5 1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 12) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [3- (3-hydroksimetyylipyridinio) -1-propen- 1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 13) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 10 noasetamido] -3-[3-( 4-N-metyylikarbamoyylipyridinio)-1-pro- pen-1-yyli] -3-kef eemi-4-karboksylaatti, 14) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(2,3-propyleenipyridinio)-1-propen-l-yyii]-3 -kefeemi-4-karboksylaatti, 15 15) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-etoksi-imi- noasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-propen-l-yy-li]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 16) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-syklopentyy-lioksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-1- 20 propen-1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 17) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propenyyli-oksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-1-pro-pen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 18) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propargyyli- 25 oksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-pro- pen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 19) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(4-karboksipyridinio)-1-propen-1-yyli]- 3-kefeemi-4-karboksylaatti, 30 20) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-etoksi-imi- noasetamido]-3-[3-(4-karboksipyridinio)-2-propen-l-yyli]- 3-kefeemi-4-karboksylaatti, 21) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [3 - (3-karboksimetyylipyridinio) -1-propen-35 1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti ja ie 84830 22) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3-[3-(4-karboksimetyylitiopyridinio)-l-pro-pen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti.

Tässä käytetty numerointisysteemi erilaisten rea-5 genssien, välituoteyhdisteiden ja lopputuotteiden osalta on seuraava: [Roomalainen - Arabialainen numero Kirjain numero] (mikäli sopiva) (mikäli sopiva) 10 " J *-

Roomalainen numero merkitsee joko lopputuotetta [I] tai välituoteyhdistettä tai muuta reagenssia [kaikki muut roomalaiset numerot]. Arabialaisia numeroita ja kirjaimia 15 ei käytetä tapauksissa, joissa tarkoitetaan yhdisteiden yleisluokkaa (lajia).

Arabialainen numero tarkoittaa tiettyä substituen-tin R2 merkitystä. Jos tietyssä R2-ryhmässä on karboksyyli-ryhmä, joka on suojattu tavallisella karboksyylin suoja- 20 ryhmällä, arabialaisen numeron jäljessä tämän osoittamiseksi käytetään pilkkua (')· "Pilkkua" ei käytetä, jos karboksyyliryhmä on suojaamaton. "Pilkkua" käytetään myös yleisen R2-substituentin kanssa (so. R2') viitattaessa yleisesti R2-ryhmään, jossa on suojattu karboksyyliryhmä.

25 Kirjain yhdisteen numeron lopussa viittaa tiettyyn kvaternaarisen ammonioryhmän : Φ

-NhQ

30 merkitykseen.

Alla on esitetty mukavuussyistä arabialaiset numerot ja kirjaimet muutamien ensisijaisten R2-ryhmien ja kva-ternääristen ammonioryhmien osalta.

is 84830

Arabialainen numero_R*_ 1 = etyyli 2 = etyyli 3 = allyyli 5 4 propargyyli 5 = syklopentyyli

Kir j ain_-N=Q_ A 1-metyylipyrrolidinio 10 B pyridinio C = 2-amino-5-tiatsolo[4,5-c]- pyridinio D = trimetyyliammonio E = 3-aminopyridinio 15 F 3-formyyliaminopyridinio G = 3-karbamoyylipyridinio H = 4-karbamoyylipyridinio I = 3-aminometyylipyridinio J = 2-metyylitiatsolio 20 K 3-hydroksimetyylipyridinio L = 4-hydroksimetyylipyridinio M 4-(N-metyylikarbamoyyli)- pyridinio N = 4-karboksipyridinio 25 O 2,3-propyleenipyridinio P 3-karboksimetyylipyridinio Q 4-karboksimetyylipyridinio

Kaavan I mukaisten yhdisteiden primaarisen arvioin-30 nin yhteydessä yhdisteiden pienimmät inhiboivat konsent-raatiot (MIC-arvot) määritettiin kaksinkertaisena sarjana suoritetun agarlaimennusmenetelmän avulla Mueller-Hinton-agarissa 32 koeorganismilajia vastaan kuudessa ryhmässä. Näissä kokeissa määritetyt geometriset MIC-keskiarvot on 35 esitetty taulukossa 1.

2o 84830

Taulukko 1

Yhdiste Konfiguraa- Geometrinen MIC-keskiarvo (pg/ml)

n:° sidoksen°1S_ (G+)”Ia <G+)~Ib (G-)-Ia (G-)-Ib (G-)-II (G-)-III

kohdalla (5) (5) (5) (5) (5) (7) I-1A E/Z = 1/1 0,26 0,70 0,05 0,15 0,23 2,4 I-1A E/Z = 7/1 0,13 0,35 0,029 0,05 0,17 1,4 I-1B E 0,20 0,40 0,016 0,044 0,11 1,6 I-1B E/Z = 1/4 0,35 0,80 0,05 0,11 0,35 3,5 I-1C E 0,10 0,20 0,0071 0,033 0,087 3,8 I-1D E/Z = 1/1 0,61 1,4 0,10 0,26 0,46 2,4 I-1E E 0,20 0,40 0,0094 0,029 0,10 1,4 I-1F E 0,15 0,40 0,0094 0,033 0,099 1,2 I-1G E 0,20 0,35 0,094 0,033 0,10 1,4 I-1H E 0,20 0,40 0,013 0,043 0,10 0,97 I-1I E 0,80 1,6 0,10 0,20 0,69 3,1 I-1J E 0,17 0,35 0,025 0,076 0,15 1,6 I-1K E 0,35 0,80 0,029 0,044 0,20 3,5 I-1L E 0,26 0,61 0,029 0,088 0,15 2,6 I-1M E 0,35 0,70 0,029 0,10 0,17 2,3 I-1N E/Z = 7/1 1,2 1,6 0,013 0,066 0,30 5,7 I-IO E 0,17 0,35 0,029 0,033 0,11 14 I-2H E 0,20 0,40 0,014 0,057 0,15 1,4 I-2N E 1,2 2,1 0,016 0,11 0,35 4,7 I-2N Z 1,4 3,1 0,044 0,15 0,69 10 I-3H E 0,23 0,40 0,057 0,10 0,52 1,9 I-4H E 0,26 0,46 0,066 0,11 0,60 2,6 I-5H E 0,13 0,40 0,20 0,46 2,1 4,2 I-1P E 0,8 1,6 0,013 0,087 0,34 14 I-1Q E 0,7 0,92 0,0095 0,044 0,23 14 2i 84 8 30 (G+)-Ia : Penisilliiniherkkä S. aureus (5 kantaa) (G+)-Ib : Penisilliinin kestävä S. aureus (5 kantaa) (G-)-Ia : Kefalotiiniherkkä E. coli (2 kantaa), Kl. pneu moniae (1 kanta) ja Pr. mirabilis (2 kantaa) 5 (G-)-Ib : Kefalotiinin kestävä E. coli (3 kantaa) ja Kl.

pneumoniae (2 kantaa) (G-)-II : M. morganii (1 kanta), Ent. clocae (2 kantaa) ja Ser. marcescens (2 kantaa) (G-)-III : Ps. aeruginosa (7 kantaa) 10

Seuraava taulukko 2 ilmaisee suojaavan annoksen (PD50) hiirillä muutamien kaavan I mukaisten yhdisteiden osalta valittuja mikro-organismeja vastaan.

Taulukko 3 esittää erilaisten kaavan I mukaisten 15 yhdisteiden veriarvoja annettaessa koeyhdisteitä lihaksensisäisesti hiirille annoksena 20 mg/kg.

Taulukko 2 20 _PD50_ S. aureus E. coli P. aeruginosa

Yhdiste n:o_Smith_Juhl_A9843A_ I-1B 0,44 0,028 7,7

I-1B 0,65 0,072 NT

:'V 25 I-1C 0,22 0,013 NT

I-1G 0,96 0,021 5,92 I-1H 0,39 0,015 3,9

I-1J 0,35 0,029 NT

I-1K 0,53 NT NT

30 I-1M 0,96 NT NT

I-1N 2,0 NT NT

1-10 0,26 0,17 NT

I-2N 5,0 NT NT

- 35 NT = ei testattu 22 8 4 8 30

Taulukko 3

c~.. T1/2 AUC

Yhdiste n;o_(pg/ml) (min)_(pg t/ml) 5 I-1B 17 21 11 I-1C 21 32 18 I-1D 20 19 11 I-1H 23 16 14 I-1J 19 26 9,7 10 I-1K 24 14 14 I-1M 20 23 14 I-1N 24 19 18 1-10 28 32 17 I-2N 22 20 12 15 I-3H 19 47 25 I-4H 27 22 16 I-5H 22 32 18 20 Kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistus on esitet ty yksityiskohtaisesti alla olevissa reaktiokaavioissa la, Ib ja le sekä reaktiokaaviossa 2.

Lyhenne "Ph” esittää fenyyliryhmää. Täten -CH(Ph)2-osa on bentshydryyliryhmä, joka on edullisesti karboksyy-25 Iin suojaryhmä. Jos R2:ssa on karboksyyliryhmä, toivottavaa on, että karboksyyliryhmä suojataan tavallisella karboks-yylin suojaryhmällä, kuten t-butyyliryhmällä. Y merkitsee klooria, bromia tai jodia.

23 84830

Reaktiokaavio la

H _N ^ S

rr ί 0i-NY^CH2Cl COOCH(Ph)2

N--]—C-COOH

Il 11 II

H?N c^N N (111) \ N 2

OR

V

h il jpCONH—j "j H2N'J^S^N N\ CH2C1 0R COOCH(Ph)2

Nai tai KI N/

N--Γ— C-CONH--S' S ''N

: l| '{.Il > I P (Ph) -j S /N N ^— N /A. 3

: : : H2N \ O CH2I

f)D ^ ’ : COOCH (Ph) ~ (v) ; p (ph). / 3 ΙΔ v 24 84830 N --]- C-CONH -f S N. £) AS^N I j_N ^¢1 © IVI> H2N ° ^j^S'CH2P(Ph) 3 OR2 COOCH(Ph)2 emäs

'V

✓ S \ N-p- C-CONH —i-r ^ AS ^ -N\ (VII) H2N ö N^ 0 y^^CH=P(Ph)3 OR2 COOCH(Ph)2 C1CH2CH0

V

N---C-CONH —1-S' S N

AS-N I 0J_hvJs (VIII> H2N N^ 0 ^ CH=CHCH2C1 or2 COOCH(Ph)2

- Nai tai KI

V

25 S 4 o 3 O

S ^

N-- OCONH —-S

X '1 | M J αχ» H2N S 0 \ CH=CHCH2l OR2 COOCH(Ph)2 R \ / \ HN \ R' \ sekundaarinen amiini \

V

ii^r-rc0NHT~fSxi ,XI1 I J_M p tertiääri- h2n Νχ O ch=chch2-n^ nen amilni

OR2 COOCH(Ph) R

(X)

R"Y

V

r; ~n— rcoNH η—r ^ / H2^-N i OR2 COOCH(Ph)2 (XII) suojauksen poisto

V

N--j-C-CONH —-f Y

a.s-n i ® h2n N 0 oh=chch2-n=q \ 2 Θ

; OR COO

26 8 4 8 30

Reaktiokaavio la esittää kaksi keksinnön mukaista vaihtoehtoista keinoa päästä yhdisteestä IX yhdisteeseen XII.

Suora tie käyttämällä tertiääristä amiinia (XI) 5 soveltuu kaikkien kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseen.

Epäsuorassa tavassa yhdisteen X kautta käytetään reagenssina sekundaarista amiinia, ja kvaternointi tapahtuu seuraavassa vaiheessa. Sekundaarinen amiini RR'NH voi 10 olla asyklinen (esim. dimetyyliamiini) tai syklinen (esim. pyrrolidiini), ja tämä epäsuora menetelmä soveltuu sen vuoksi sellaisten kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseen, joissa kvaternaarinen ammoniumryhmä on asyklinen tai "sekoittunut" asyklinen/syklinen yhdistelmä. Tämä epä-15 suora tie ei sovellu sellaisten kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistamiseen, joissa kvaternaarinen typpi on täysin tyydyttymättömässä heterosyklisessä renkaassa (esim. pyridinio, tiatsolio, 2-amino-5-tiatsolo[4,5-c]pyridinio, ja näiden kaltaisissa renkaissa).

27 84830

Reaktiokaavio lb (II)

^ ^r- CHO

V

CH=N —^ > (XIII) QJ N\^^CH2C1 \ COOCH(Ph)2 \

Nai tai ΚΙ N.

V

CH;:;N-- QX- N\<^CH2I P (Ph) 3 <XIV) COOCH(Ph)2 P(Ph)3 / I / /”^)-CH=N—-γθ ^ -- -: ,_n A © (xv) 0^ CH2P(Ph)3 COOCH(Ph)2 ....: emäs

.-: V

O-™ Tj‘ X

A- N

: -. Ο CH=P (Ph) 3 COOCH (Ph) 2 28 84 830 Reaktiokaavio le

ft -CH=N-j-S S N

\ —/ I I (XVII) 0? N\>^CH=CH-CH2C1

COOCH(Ph)2 Nai tai KI

C^c^-pT5'] Ύ CH=CH-CH2I COOCH(Ph)2

/R 1 HN

^R'

sekundaarinen amiini V

\__ / CH N j ^ I (XI) ,vvX O CH=CHCH9-<R tertiaari- (XX) I 2 \R| nen amiini

.! R"Y

<^>-ch=n—|—^ /

: O^— CH=CHCH2?n=Q

(XXI) COOCH (Ph)2

V

:T: 1 © (XXII> QS?— N \^^CHC=CHCH2-N=Q : .·. COO© : : N-asylointi

yhdisteellä III

V

29 84830

η ~Π |C"C0NH Ί ΓS

«2“ S' \ N'ViJNCH=CHCH2-NHQ

OR2 coo0 10 Reaktiokaavio Ic on reaktiokaavion lb lisämuun- nelma.

Reaktiokaavioissa la ja lb 3-sivuketjun kvaternoin-ti on viimeinen vaihe, mutta reaktiokaaviossa le viimeinen vaihe on 7-aminoryhmän asylointi.

15 Reaktiokaavioiden la, Ib ja le välinen suhde on esitetty seuraavassa vuokaaviossa.

30 84830 y UI) COOCH (Ph) 2 \ / \ !b "f \i N--jT-C-CONH—-S S C- CH N J ζ h2A^\ 2JXAch2C1 (xiii) 0 \cn^ 2 OR2 I COOCH (Ph) .p (IV) COOCH(Ph)2 \/-lb la

:: . H2NtO

v 7-N asylointi^ Ο CH=CHCH„C1 S <------ I 2 N-jp-C-CONH—1-^ N (XVIII) COOCH (Ph) 2 H N ^ S ’Nv °^~ N V^OH=CHCH~Cl 2 \or2 T 2 (VIII) COOCH(Ph)2 :-. Kvaternointi Kvaternointi :.-. la Suojauksen Suojauksen lb poisto poisto :.-. ν'

Ψ S

H2N—Γ~ί ^ ;;;; Yhdiste z ^-..yiomti </- YkCH=CD ® lc coo® : (XXII) 3i 84830

Reaktiokaavioissa la, lb ja le bentshydryyliryhmä on esitetty ensisijaisena karboksyylin suojaryhmänä. Alan asiantuntijoille on täysin selvää, että tarkoitukseen voidaan käyttää muita alalla hyvin tunnettuja karboksyylin 5 suojaryhmiä.

Asylointihappoa III voidaan käyttää johdannaisen muodossa, kuten happohalogenidinsa, aktiivisen esterinsä, sekahappoanhydridinsä jne. muodossa, jotka kaikki ovat alalla hyvin tunnettuja. Suositeltavaa on sen käyttö hap-10 pokloridinaan. Myöskin asylointihapon III aminoryhmä voi olla suojattu millä tahansa yleisillä aminon suojaryhmil-lä, esim. N-trityylillä, N-formyylillä tai näiden kaltaisilla ryhmillä.

Emäs, jota käytetään fosfoniumjodidin (VI tai XV) 15 muuttamiseen fosforylidiksi (VII tai XVI), voi olla NaOH,

Na2C03, TRA-410 (OH")-hartsi, IRA (C03=)-hartsi tai näiden kaltainen emäs tai niiden seos.

Klooriasetaldehydi, jota käytetään fosforylidin VII muuttamiseen 3-klooripropenyyli-3-kefeemiyhdisteeksi VIII 20 (tai yhdisteen XVI muuttamiseen yhdisteeksi XVII), voi olla kaupan olevaa 40 - 50-%:ista vesiliuosta, tislattua liuosta (esim. 70 %) tai vedetöntä aldehydiä.

Todettiin, että yhdisteestä VII (kaavio la) valmistetun yhdisteen VIII tyypillinen Z:E-suhde propyleeni-kak-25 soissidoksen kohdalla oli noin 2:1. Toisaalta yhdisteestä XVIII (kaavio Ib) valmistettu yhdiste VIII oli tyypillisesti lähes yksinomaan z-isomeeria. Eroavuus ei voi johtua käytetystä tiestä, vaan olosuhteista, joita on käytetty Wittig-reaktiossa (VII --> VIII tai XVI --> XVII). Todet-30 tiin myös, että sopivan silyylireagenssin, kuten N,0-bis-(trimetyylisilyyli)asetamidin käyttö Wittig-reaktiossa (VII --> VIII kaaviossa la ja XVI —> XVII kaaviossa Ib) aiheutti yhdisteiden VIII ja XVIII saantojen ja puhtauden parantumista. Reaktio suoritetaan ensisijaisesti käyttä-35 mällä 2-5 ekvivalenttia silyylireagenssia.

32 8 4 8 30

Kun klooripropenyylikefeemiyhdisteen (VIII) annettiin reagoida Nai:n kanssa asetonissa jodipropenyylikefee-miyhdisteen (IX) saamiseksi, propenyyliryhmässä oleva kak-soissidos isomeroitui jodauksen aikana Z:sta E:ksi. Reak-5 tioajan ollessa lyhyt kantayhdisteen VIII konfiguraatio säilyi suuressa määrässä, pitkän reaktioajan tuottaessa ensisijaisesti yhdisteen IX E-isomeeria. Reaktioajan ollessa liian pitkä korkeassa lämpötilassa saadaan yhdistettä IX, kuitenkin vähemmän puhtaana. Todettiin, että noin 10 10 minuutin aikana 25 °C:ssa ja 2 tunnin aikana 5 °C:ssa saadaan puhdasta IX-yhdistettä hyvin saannoin. Käytettäessä reaktiokaaviota le todettiin, että jodattaessa yhdistettä XIV Nai:11a saadaan puhtaampaa yhdistettä, jos ase-toniliuosta laimennetaan CCl4:llä jodauksen ollessa pää-15 asiallisesti päättynyt, ja reaktioseoksen isomeroitu osa johdetaan asetoni-CCl4-seokseen.

Kun klooripropenyylikefeemiyhdisteen (XVII) jodaus jodipropenyylikefeemiyhdisteeksi (XIX) suoritettiin KI:lla DMF:ssa, kaksoissidoksen isomeroituminen Z:sta E:ksi ta-20 pahtui yhtä nopeasti kuin jodautuminenkin. Koko reaktio kulki loppuun 45 minuutissa huoneen lämpötilassa, jolloin saatiin puhdasta yhdistettä XIX laimentamatta reaktion aikana CC14: llä.

Yhdisteen XII suojaryhmä poistettiin normaalisti 25 puhdistamatta sitä ja lopputuote puhdistettiin käänteis-faasikolonnikromatografiän avulla käyttämällä lasikolon-nia, jossa oli Waters' Associates PreoPAK-500/C18 -patruunasta otettua täytettä.

‘ * 33 84 830

Reaktiokaavio 2 « —Π-C“C0NH -j-(XXIII)

R HN 0 XcH=CH-CH2I

OR2 COOCH(Ph)2 0 N —ίΓ~ C-C0NH -yX s "Ί (XXIV) R1HN'^V*S'' N Νν'γ·'''^ΟΗ<:Η-ΟΗ2Ι ^0R2 COOCH (Ph)2 V Ϊ N-!-C-CONH —I-( S ^ n ll I 1 <=, <xxv) R1HN/^'s''N N NY^ ch=ch-ch2n=q

Nvor2 COOCH (Ph)2 : · pelkistys Ψ N-1-C-CONH —i-{ > 3® || Il k I I φ <XXVI>

r1hnA-S-N \ 0<*— N'v^XcH-CH-CHjNSQ

'or2 COOCHlPh)2 suojauksen poisto ... ψ

: . · N--j-C-CONH —-S S 'N

ls,« t ® (I) h2n ö n o vv^ ^ch=ch2nsq >9 ö OR COtT' 34 8 4 8 30

Reaktiokaavio 2, joka on esitetty edellä lyhyen hahmotelman muodossa, on muuten samanlainen kuin reaktio-kaavio la, paitsi että yhdiste XXIII (vastaa yhdistettä IX reaktiokaaviossa la) muutetaan S-oksidikseen ennen kvater-5 nointia. Sen jälkeen yhdiste XXV pelkistetään, ja loppuosa reaktiokaaviosta 2 on reaktiokaavion la kaltainen. Reaktiokaaviossa 2 suositellaan ensisijaisesti 7-sivuketjun aminoryhmän suojaamista tunnetulla aminon suojaryhmällä, kuten trityyliryhmällä.

10 Tällöin käytettävät kaavan III mukaiset asylointi- hapot ovat joko tunnettuja yhdisteitä tai helposti valmistettavissa tunnetuin menetelmin.

Eurooppalaisessa patenttijulkaisussa 7 470, julkaistu lokakuun 12. päivänä 1980 (patenttihakemus julkais-15 tu helmikuun 6. päivänä 1980), mainitaan esimerkkinä kaavan III mukaisten yhdisteiden valmistus, joissa R2 on metyyli, etyyli, propyyli ja isopropyyli.

US-patentissa 4 390 534, viite edellä, tekniikan tason kuvauksessa mainitaan esimerkkinä hyvin erilaisten 20 kaavan III mukaisten yhdisteiden valmistus, joissa R2 on esimerkiksi syklopentyyli, 2-syklopenten-l-yyli, allyyli, 2- propynyyli,1-tert.-butyylioksikarbonyyli-l-metyylietyy-li, 1-tert.-butyylioksikarbonyyli-l-syklopentyyli, 1-etok-sikarbonyyli-l-metyylietyyli,tert.-butyylioksikarbonyyli- 25 metyyli, 1-tert.-butyylioksikarbonyyli-2-metyylipropyyli, trityyli ja näiden kaltainen ryhmä.

Tässä mainittu yhdiste II (7-amino-3-kloorimetyyli- 3- kefeemi-4-karboksylaatti), jota on käytetty lähtöaineena reaktiokaavioissa la, Ib ja le, on tunnettu yhdiste.

30 Kaavan XI mukaiset tertiaariset amiinit (ja sekun daariset amiinit RR'NH), joita on käytetty valmistettaessa kaavan I mukaisia kvaternaarisia ammonioyhdisteitä, ovat joko tunnettuja yhdisteitä tai ovat alan asiantuntijain helposti valmistettavissa. Monia amiineja on saatavissa 35 kaupallisina tuotteina.

35 84830

Keksinnön mukaisen menetelmän reaktiot suoritetaan vedettömässä orgaanisessa liuottimessa, kuten dimetyyli-sulfoksidissa, heksametyylifosforiamidissa, metyleeniklo-ridissa, kloroformissa, etyylieetterissä, heksaanissa, 5 etyyliasetaatissa, tetrahydrofuraanissa, asetonitriilissä ja näiden kaltaisessa liuottimessa, tai sellaisten liuottimien seoksissa. Reaktiot suoritetaan mukavasti lämpötilan ollessa noin -10 - +50 °C; tavallisesti suositellaan reaktioiden suorittamista huoneen lämpötilassa. Kvater-10 nointivaiheen aikana tertiääristä amiinia on käytettävä ainakin 1 mooli moolia kohden yhdistettä IX, XIX, XXIII tai XXIV; tavallisesti suositellaan käytettäväksi noin 25 - 100 % ylimäärin tertiääristä amiinia.

Karboksyylin suojaryhmät, jotka soveltuvat käytet-15 täviksi R1-ryhmänä edellä mainituissa reaktioissa, ovat alan asiantuntijain hyvin tuntemia ja niitä ovat aralkyy-liryhmät, kuten bentsyyli, p-metoksibentsyyli, p-nitro-bentsyyli ja difenyylimetyyli (bentshydryyli); alkyyliryh-mät, kuten t-butyyli; halogeenialkyyliryhmät, kuten 2,2,2-20 trikloorietyyli, ja muut kirjallisuudessa, esim. GB-pa- tenttijulkaisussa 1 399 086 selostetut karboksyylin suoja-ryhmät. Ensisijaisena pidetään sellaisten karboksyylin suojaryhmien käyttöä, jotka ovat helposti poistettavissa hapolla käsittelemällä. Erityisen edullisia karboksyylin - 25 suojaryhmiä ovat bentshydryyli ja t-butyyliryhmät.

. Aminon suojaryhmät, jotka soveltuvat käytettäviksi B2-ryhmänä, ovat myöskin alalla hyvin tunnettuja, ja niitä ovat trityyliryhmä ja asyyliryhmät, kuten klooriasetyyli, formyyli ja trikloorietoksikarbonyyli. Ensisijaisia ovat 30 sellaiset aminon suojaryhmät, jotka ovat helposti poistettavissa hapolla käsittelemällä, esim. trityyliryhmä.

Kun kefalosporiiniydintä käytetään 1-oksidin muodossa (m = 1), 1-oksidia valmistetaan tunnetuin menetelmin, kuten hapettamalla m-klooriperbentsoehapolla, per-35 etikkahapolla, natriumvolframaatilla jne. 1-oksidi voidaan 36 84830 sen jälkeen pelkistää tunnetuin menetelmin, esim. pelkistämällä vastaavaa alkoksisulfoniumsuolaa jodidi-ionilla vesipitoisessa väliaineessa. Alkoksisulfoniumsuolaa itseään valmistetaan helposti käsittelemällä 1-oksidia esi-5 merkiksi asetyylikloridin kanssa.

Keksintö koskee myös uusia välituoteyhdisteitä, joilla on kaava N-n— C -CONH-i- 10 Π N 11 j_N i

S-X N\ CH=CH-CH-Z

OR I 1

COOB

jossa R1 on vety tai tavallinen aminon suojaryhmä, R2 on 1 15 -4 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 3-6 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä, propenyyli tai propargyyli, B1 on vety tai tavallinen karboksyylin suojaryhmä ja Z on kloori, bromi tai jodi; tai sen suola, hydraatti, solvaat-ti tai esteri.

20 Tässä käytettynä termit "asyyliamino" ja "asyyliok- si" viittaavat asyloituun amino- tai asyloituun hydroksi-ryhmään, jossa asyyliosa on (alempi)alkanoyyli (esim. for-myyli, asetyyli, propionyyli, butyryyli, isobutyryyli, isovaleryyli jne.), aroyyli (esim. bentsoyyli jne.), 25 (alempi)alkaanisulfonyyli (esim. mesyyli, etaanisulfonyyli jne.) tai aryylisulfonyyli (esim. bentseenisulfonyyli, tosyyli jne.) Tässä käytettynä termit "(alempi)alkyyli", "(alempi )alkoksi", "(alempiJalkyylitio" (tai näiden kaltaiset 30 termit) tarkoittavat suora- tai sivuketjuista alkyyli-, alkoksi-, alkyylitioryhmiä (tai näiden kaltaisia ryhmiä), joissa on 1 - 6 hiiliatomia, nämä mukaan lukien. Samalla tavalla termit "(alempi)alkenyyli" ja "(alempi)alkynyyli" tarkoittavat alkenyyli- tai alkynyyliryhmiä, joissa on 35 2-6 hiiliatomia.

37 84830

Esimerkki 1 n-j-c-conh —-r'" S ^ i _N * 0/ ^ 5 h2n^s" \jX\Ch=ch-ch2-n^^ OCH3 COOe CH3 1-1A *Z/E = 1/1 10 7- [2-( 5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - 2-metoksi- iminoasetamido]-3-[3-(l-metyylipyrrolidinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1A) Liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-ami-no-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - 2-metoksi-iminoasetamido] -3-15 (3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (Z/E = 2/1)(150 mg, 0,21 mmol) etyyliasetaatissa (2 ml), lisättiin yhtenä eränä sekoittaen liuos, jossa oli 1-metyylipyrrolidonia (36 mg, 0,042 mol) etyyliasetaatissa (1 ml). Seosta sekoitettiin 15 minuuttia ja laimennettiin 20 isopropyylieetterillä (10 ml) sakan muodostamiseksi, joka koottiin talteen suodattamalla. Seosta, jossa oli kiinteätä ainetta (130 mg), muurahaishappoa (1 ml) ja väkevää HCl:a (0,1 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa. Tunnin kuluttua reaktioseos konsentroitiin vakuumissa, laimennet-25 tiin vedellä (20 ml) ja suodatettiin. Vesiliuos laskettiin käänteisfaasikolonnin läpi(PrepPAK-500/C18 -patruunatäyte, 100 ml) eluoimalla vedellä ja 10-%:isella CH30H:lla. Halutut fraktiot kerättiin talteen ja konsentroitiin vakuumissa pieneen tilavuuteen ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 30 13 mg (12 % otsikon yhdistettä (I-1A) (Z/E = 1/1), joka suli >280 °C:ssa (hajoten).

IR: KBr cm-1 \7make 3400, 1760, 1660 ja 1610.

UV: <^maks (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1*1 cm) 236 (372),

288 (322). _1_H

35 NMR: D20 δ ppm: 2,31 (4H, m, N ), 3,12 (3H, s, 38 84 3 30 N-CH3), 3,6 (5H, m, 2-H & | ), 3,79 (1H, s, 2-H), 4,1 (2H, d, J = 8, CH2N), 4,2 (3hT^s, OCH3), 5,36 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,95 (3H, m. 7-H & 3-CH=CH), 6,66 (1/2H, d, J = 5 10, 3-CH cis) ja 7,10 (1/2H, d, J = 16, 3-CH trans).

Esimerkki 2 N-j-C-CONH —J—r η J| N II J1 A * 10 i,2n^s" N 0 ch-ch-ch2-n^ 0CH3 COOe

I-1B *E

7— [2— ( 5-amino-l, 2,4-tladlatsol-3-yyli )-2-metoksi-15 iminoasetamido]-3-[3-pyridinio-l-propen-l-yyli]-3- kefeemi-4-karboksylaatti (I-1B)

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino- 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi-iminoasetamido] -3-(3-jodi-1-propen-1-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) 20 (E, 716 mg, 1 mmol), pyridiiniä (158 mg, 2 mmol) dimetyy- lisulfoksidissa (DMSO) (1 ml), sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Seokseen lisättiin etyyliasetaattia (20 ml) kiinteän aineen (620 mg) saostamiseksi, joka lisättiin muurahaishappoon (6 ml), jossa oli natriumvetysul-25 fiittia (60 mg). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia 40 °C:ssa ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin veteen (40 ml) ja jäljelle jäi hiukan liukenematonta ainetta. Vesi-liuos vietiin käänteisfaasikolonniin (PrepPAK-500/Cie, 100 ml), eluoitiin vedellä (300 ml) ja 5-%:isella CH30H:n vesi-30 liuoksella (800 ml) ja eluaattia tarkkailtiin UV:n (254 nm) ja HPLC:n avulla. Fraktiot (5-%:inen CH30H:n vesi-liuos), jotka sisälsivät haluttua tuotetta, yhdistettiin, haihdutettiin pieneen tilavuuteen ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 40 mg (8 %) otsikon yhdistettä (I-1B), joka 35 suli >200 °C:ssa (hajoten).

39 84 330 IR: KBr cm'1 Vmake 3350, 1760, 1660 ja 1600.

UV: ^make. (fosfaattipuskuri, pH 7) run (E1 \ cm) 240 (352), 258 (366), 267 (279) ja 290 (469).

NMR: D20 + DMS0-d6 δ ppm 3,74 (2H, br - s, 2-H), 4,20 (3H, 5 s, OCH3), 5,92 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,15 (1H, m, 3-CH=CH), 7,094 (1H, d, J = 16, 3-CH trans), 8,2 (2H, m, Py-H4) ja 8,97 (2H, m, Py-H26).

Esimerkki 3 10 N-η-C-CONH -]-f S ^ h2(As'N o-LnY^ch.ch-ch2®^> 0CH3 COO® I-IB *Z/E = 4/1 15 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-pyridinio-l-propen-2-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1B)

Klooripropenyyliyhdiste, difenyylimetyyli-7-[2-(5-20 amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamidoj- 3-(3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (VIII-1) (Z, 937 mg, 1,5 mmol) lisättiin sekoitettuun liuokseen, jossa oli pyridiiniä (237 mg, 3 mmol) DMSOrssa (3 ml), jossa oli Nai:a (11 mg, 0,075 mmol). Seoksen an-25 nettiin seistä yön ajan huoneen lämpötilassa pimeässä.

Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (10 ml) ja kuivattiin, jolloin saatiin 350 mg suojattua tuotetta. Sakkaa käsiteltiin muurahaishapolla (3,4 ml), jossa oli natrium-vetysulfiittia (34 mg), 30 minuuttia 40 °C:ssa. Muurahais-30 hapon poistamisen jälkeen jäännös puhdistettiin käänteis-faasikolonnissa kromatografoimalla (täyte PrepPAK-500/Cie patruuna, 100 ml) eluoiden 5-%:isella CH3OH:n vesiliuoksella. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin HPLC-analyysin perusteella, haihdutettiin kuiviin vakuu-35 missä ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 41 mg (5,5 %) 4o 84 8 30 otsikon yhdistettä (I-1B) (Z/E = 4/1). Sp. >200 °C (hajoten) .

IR: KBr cm-1 N?maks 3300, 1760, 1660 ja 1600.

UV; Amaks (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1 *a cm) 237 (386), 5 250 (377), 258 (369), 265 (347) ja 280 (311).

NMR: D20 δ ppm 3,45 & 3,76 (kumpikin 1H, d, J = 16, 2-H), 4,18 (3H, d, OCH3), 5,34 (3H, m, CH=CH-CH2 & 6-H), 5,92 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,58 (4/4H, d, J = 11, 3-CH cis), 7,03 (1/5H, d, J = 16, 3-CH trans), 8,12 (2H, m, Py-H35), 10 8,56 (1H, m, Py-H4) ja 8,82 (2H, m, Py-H26).

Esimerkki 4 .S.

N-p- C-CONH -j-p ^ 15 Η2Η^3·'Ν t 0J—l)vyACH,CH-CH2V^j—» XOCH3 coo0 k^X*S‘S>NlH2

I-1C *E

20 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi- iminoasetamido]-3-[3-(2-amino-5-tiatsolo[4,5-c]py-r idinio) -1 -propen-1 -yyli ] -3-kef eemi-4-karboksylaat-? ti (I-1C) : Sekoitettua liuosta, jossa oli difenyylimetyyli-7- - 25 [2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoaset- amido]-3-(3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksy-laattia (IX-1) (E-isomeeri, 714 mg, 1 mmol), 2-aminotiat-solo[4,5-c]pyridiiniä [valmistettu T. Hakahashi et al.:n menetelmän mukaisesti; Pharm. Bull (Japan) 2 (1954), s. 30 34] ja kuivaa DMS0:a (1 ml), pidettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Reaktioseokseen lisättiin etyyliasetaattia (20 ml), jolloin saatiin keltaista jauhetta (710 mg). Jau-heen joukkoon (700 mg) lisättiin muurahaishappoa (7 ml) ja natriumvetysulfiittia (70 mg) ja seosta sekoitettiin 30 35 minuuttia 40 - 45 °C;ssa. Kuiviin haihduttamisen jälkeen 4i 84 8 30 jäännöstä trlturoitiin veden kanssa (40 ml). Liukenematon aines suodatettiin pois ja suodos kromatografoitiin kään-teisfaasikolonnissa (PrepPAK-5OO/C10, 100 ml) veden ja 10-%risen CH30H:n ollessa eluenttina. Haluttua tuotetta 5 sisältävät fraktiot yhdistettiin ja luotin poistettiin va-kuumissa. Kylmäkuivaamalla saatiin haluttua tuotetta (Ι-Ιο) värittömänä amorfisena E-isomeerijauheena. Saanto 110 mg (19 %). Sp. >200 °C (hajoten.

IR: KBr cm’1 V>maks 3300, 1760, 1660, 1630 ja 1600.

10 UV: Anaks. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1,llcm) 245 (499) ja 285 (286).

NMR: DMS0-d6 + D20 δ ppm 3,86 (3H, s, 0CH3), 4,98 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,2 (2H, m, CH=CH-CH2), 5,57 (1H, m, 3-CH=CH), 5,96 (1H, m, 7-H), 7,16 (1H, d, J - 16, 3-CH trans), 8,36 15 & 8,45 (kumpikin 1H, d, J = 7, Py-H) ja 8,92 (1H, s,

Py-H).

Esimerkki 5

N -C-CONH —1-S S

20 ^ * ® H„N N 0 ^ ^CH=CH-CH_-N(CH,) _ noch I θ 33 3 cooö I-1D *Z/E - 1/1 ·:· 25 7— [ 2 — ( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi- lminoasetamido]-3-(3-trimetyyllammonio-l-propen-1-yyli)-3-kefeeml-4-karboksylaatti (I-1D)

Liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3-30 (3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (Z/E = 2/1; 490 mg, 0,68 mmol) etyyliasetaatissa (14 ml), lisättiin 0,1 M trimetyyliamiinin eetteriliuosta (13,6 ml) yhtenä eränä. Seosta sekoitettiin 10 minuuttia ja haihdutettiin kuiviin ja jäännös trituroitiin eetterin 35 kanssa (20 ml). Muodostunut kiinteä aine (490 mg) lisät- 42 84S30 tiin trifluorietikkahappoon (0,2 ml), jossa oli yksi pisara anisolia. 1,5 tunnin sekoittamisen jälkeen seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäljelle jäänyttä öljyä tri-turoitiin eetterin (20 ml) kanssa. Saatu sakka koottiin 5 talteen suodattamalla ja liuotettiin veteen (20 ml). Vähäinen kiinteä aines poistettiin ja vesiliuos eluoitiin C18-käänteisfaasikolonnissa (täyte PrepPAK-500/C18 -patruuna; Waters; 30 ml) käyttämällä eluenttina vettä. Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdistettiin ja konsentroi-10 tiin pieneen tilavuuteen ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 30 mg (9,2 %) otsikon yhdistettä (I-1D) (Z/E = 1/1) värittömänä amorfisena jauheena, joka suli >150 °C:ssa (hajoten ).

IR: KBr cm'1 Vmaks 3300, 1770, 1670 ja 1605.

15 UV: Aaek·. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1,;lcm) 236 (389) ja 287 (343).

NMR: D,0 δ ppm 3,45 & 3,7 (1H, d, J = 16, 2-H), 3,81 (1H, © s, 2-H), 4,1 (2H, d, J = 8, -CH2N), 4,21 (3H, s, 0CH3), 5,39 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,95 (2H, m, 3-CH=CH & 7-H), 20 6,61 (1/2H, d, J = 11, 3-CH cis) ja 7,05 (1/2H, d, J * 16, 3-CH trans).

Esimerkki 6 N-n-C-C0NH -j-S S ^ v - Ajl I '

0CH3 COO® W

I-1E *E

30 7— [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi- iminoasetamido] -3-[3-( 3-aminopyridinio)-l-propen-.1-yyll] -3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1E)

Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3- (3-jodi-l-propen-l-yy-35 li)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (IX-1) (E; 716 mg, 1 mmol) 43 84830 lisättiin sekoitettuun liuokseen, jossa oli 3-aminopyri-diiniä (188 mg, 2 mmol) DMSOrssa (1 ml). Seosta sekoitettiin tunnin ajan ja laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml). Muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla, 5 pestiin etyyliasetaatilla ja kuivattiin, jolloin saatiin 520 mg keltaista jauhetta. Seosta, jossa oli jauhetta (500 mg), muurahaishappoa (5 ml) ja natriumvetysulfiittia (50 mg), sekoitettiin 30 minuuttia 40 °C:ssa. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, liuotettiin veteen (40 ml) ja 10 suodatettiin liukenemattoman aineksen poistamiseksi. Vesi-liuos kromatografoitiin käänteisfaasikolonnissa (täyte PrepPAK-500/C18, 100 ml) eluoimalla 7,5-%:isella CH30H:n vesiliuoksella. Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot haihdutettiin kuiviin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 15 otsikon yhdistettä (I-1E) (7 mg, 1,4 %), joka suli >185 °C:ssa (hajoten).

IR: KBr cm'1 \?„ake 3400, 1765, 1675, 1620 ja 1600.

UV; ÄmakB. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1,slcm) 246 (403) ja 290 (468).

20 NMR: D20 δ ppm 3,72 (2H, m, 2-H), 4,14 (3H, s, OCH3), 5,35 (3H, m, 6-H & CH=CH-CH2), 5,9 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,1 (1H, m, 3-CH=CH), 7,05 (1H, d, J = 16, 3-CH trans), 8,1 (1H, m, Py-H5), 8,54 (1H, br-s, Py-H6), 8,68 (1H, m, y Py-H4) ja 9,4 (1H, m, Py-H2).

25 Käsittelemällä yhdistettä IX-1 (716 mg, 1 mmol) 3-t-butoksikarbonyyliaminopyridiinillä (324 mg, 1 mmol) samanlaisella menetelmällä, jota on selostettu edellä, saatiin 12 mg (2,3 %) yhdistettä I-1E.

Esimerkki 7 30 N ΓΪ-C-CONH —I Γ ^ ΝΗ, i '1 li J_1 i * ®>r<

H,N ^ Nv O^X-Y^CH-CH-CHj-N J

:T: «»s ClxP

35 I-1E *X/E = 1/1 44 84 830 7-[2-(5-amino-l,24-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamidoj-3-[3-(3-amino-l-pyridinio)-1-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1E) Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-5 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3-(3- jodi-1-propen-1-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (Z/E = 3/2; 500 mg, 0,7 mmol) ja 3-aminopyridiiniä (66 mg, 0,7 mmol) dimetyylisulfoksidissa (1 ml), sekoitettiin 20 minuuttia huoneen lämpötilassa. Seos laimennettiin etyyli-10 asetaatilla (10 ml) ja eetterillä (10 ml) ja muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla, pestiin eetterillä (10 ml) ja kuivattiin. Kvaternoitu suola liuotettiin muurahaishappoon (3 ml), jossa oli väkevää HCl:a (0,3 ml) ja sekoitettiin 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa. Seos haihdu-15 tettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin 2-%:iseen HCliiin (10 ml) ja suodatettiin. Vesikerros kromatografoi-tiin käänteisfaasikolonnissa (PrepPAK-500/C18, 100 ml). Vedellä (500 ml) pesemisen jälkeen kolonni eluoitiin 5-%:isella CH30H:n vesiliuoksella. Otsikon yhdistettä si-20 sältävät fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 15 mg (4,2 %) otsikon yhdistettä (I-1E) (Z/E = 1/1) värittömänä amorfisena jauheena. Sp. >160 °C (hajoten).

IR: KBr cm"1 v?ake 3400, 1765, 1675, 1620 ja 1600.

25 UV: <^mak8 (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1 cro) 244 (434) ja 287 (333).

NMR: DMS0-d6 + D20 δ ppm 3,73 (2H, m), 4,14 (3H, s, 0CH3), 5,35 (3H, m, 6-H & CH=CH-CH2), 6,0 (2H, m, 7-H & 3-CH=CH), 6,6 (1/2H, d, J = 11, 3-CH cis), 7,05 (1/2H, d, J = 16, 30 3-CH trans), 8,08 (1H, m, Py-Hs), 8,6 (2H, m, Py-H46) ja 9,4 (1H, m, Py-H2).

45 84830

Esimerkki 8

N τι-C-CONH —i ( ^ NHCHO

Ji ’i I __' A * »/r\ 5 h,n-^s" k 0^—N\^CH-CH-CH2-N ^ och3 cöo®

I-1F *E

7— C2 — (5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-10 iminoasetamido]-3-[3-(3-formyyliaminopyridinio)- propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1F) Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino- 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-(3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) 15 (E, 716 mg, 1 mmol) ja 3-formyyliaminopyridiiniä [valmis tettu N. Enomoto et ai.:n menetelmän mukaisesti; Bull. Chem. Soc. Japan, 45 (1972), s. 2665] (244 mg, 2 mmol) DMS0:ssa (2 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan, ja kaadettiin etyyliasetaattiin (20 ml). Sakka koot-20 tiin talteen suodattamalla, pestiin hyvin etyyliasetaatilla ja kuivattiin. Seosta, jossa oli kvaternoitua suolaa (500 mg) ja natriumvetysulfiittia (50 mg) HC00H:ssa (5 ml), sekoitettiin 40 - 50 °C:ssa 80 minuuttia ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös liuotettiin veteen (40 25 ml), neutraloitiin NaHC03:lla ja sitten suodatettiin liukenemattoman aineksen poistamiseksi. Kirkas suodos kromato-grafoitiin käänteisfaasikolonnissa (PrepPAK-500/C18, 100 ml), vedellä ja 5-%:isella CH3OH:lla, 10-%:-isella CH30H:11a, 20-%:isella CH30H:lla ja 30-%:isella CH30H:lla. 30 Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 16 mg (2,9 %) otsikon yhdistettä (I-1F) (E) kullanruskeana jauheena. Sp. >170 °C (hajoten).

IR: KBr cm’1 \>maks 3340 (br), 1760, 1670, 1620 (br) ja 1590.

46 8 4 8 30 UV: A.„akB. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1^,.,,) 218 (428), 248 (362) ja 290 (474).

NMR: D20 + NaHC03 δ ppm 3,68 (2H, br, 2-H), 4,15 (3H, s, 0CH3), 5,91 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,25 (1H, m, CH=CH-CH2), 5 6,98 (1H, d, J = 16, 3-CH trans), 8,8 - 7,9 (4H, m, Py-H) ja 9,38 (1H, br, NHCHO).

Esimerkki 9 N “Ti- ,C"C0NH T“f 8 Ί —rC0NH 2 10 il N 1_N ,^1 * ^ ' 0^—n\^NCi..ch-ch2-n 0CH3 coo®

I-1G *E

15 7-[2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi- iminoasetamido]-3-[3-(3-karbamoyylipyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1G) Liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-20 (3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (E; 716 mg, 1 mmol) DMS0:ssa (2 ml), lisättiin nikotiiniamidia (244 mg, 2 mmol) ja seosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 1,5 tuntia ja kaadettiin sekoittaen etyyliasetaattiin (200 ml). Muodostunut sakka koottiin 25 talteen suodattamalla. Kvaternoitu suola (500 mg) liuotet-: V tiin HCOOHrhon ( 5 ml) natriumvetysulfiitin (50 mg läsnäol lessa ja seosta lämmitettiin 40 - 50 °C:ssa 40 minuuttia sekoittaen ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin veteen (40 ml) ja liukenematon aines suodatettiin erilleen 30 ja pestiin pienellä määrällä vettä. Suodos ja pesuvesi yhdistettiin ja kromatografoitiin käänteisfaasikolonnissa (PrepPAK-500/C18, 100 ml). Sen jälkeen kun oli eluoitu peräkkäin vedellä ja 5-, 10- ja 20-%:isillä CH30H:n vesi-liuoksilla, haluttua ainetta sisältävät fraktiot yhdistet-35 tiin, haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja kylmäkuivattiin, 47 8 4 8 30 jolloin saatiin 21 mg (3,8 %) otsikon yhdistettä (I-1G) (E) keltaisena jauheena. Sp. >175 °C (hajoten).

IR: KBr cm*1 3340 (br), 1760, 1670 ja 1600.

UV: «^makE (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1 C01) 235 (326), 5 274 (sh, 405) ja 290 (446).

NMR: D20 + NaHCOj δ ppm 3,68 (2H, br, 2-H), 4,15 (3H, s, 0CH3), 5,32 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,45 (1H, d, J = 7, CH=CH-CH2), 5,88 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,15 (1H, d - t, J = 16 & 7, 3-CH=CH), 7,00 (1H, d, J = 16, 3-CH trans), 8,23 10 (1H, m, Py-H5), 9,03 (2H, m, Py-H4a6) ja 9,34 (1H, s,

Py-H2).

Esimerkki 10 N -j-C-CONH -T-f S ^ 15 li| „ : JL * „ N'^'sx n n\^^ch=ch-ch2-n Vconh2 2 N°CH3 COO®

I-1H *E

20 7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi- iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio) -1-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1H) Sekoitettuun liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli- 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imino-25 asetamido]-3-(3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karbok- sylaattia (IX-1) (E; 716 mg, 1 mmol) kuivassa DMS0:ssa (2 ml), lisättiin isonikotiiniamidia (244 mg, 2 mmol). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan ja sitten se kaadettiin etyyliasetaattiin (200 ml). Muodostunut sakka 30 koottiin talteen suodattamalla, pestiin hyvin etyyliase taatilla ja kuivattiin. Sekoitettua seosta, jossa oli kva-ternoitu aine (400 mg) ja natriumvetysulfiittia (40 mg) HC00H:ssa (4 ml), lämmitettiin 40 - 50 °C:ssa tunnin ajan ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Raaka kiinteä aines 35 liuotettiin veteen (40 ml). Sen jälkeen kun liukenematon 48 8 4 8 30 aine oli suodatettu pois, suodos kromatografoitiin kään-teisfaasikolonnissa (täyte PrepPAK/C18, 100 ml) käyttämällä eluenttina vettä ja 5-, 10-, 20- ja 30-%:isiä CH3OH:n vesi-liuoksia. Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdis-5 tettiin, haihdutettiin kuiviin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 21 mg (3,8 %) otsikon yhdistettä (I-1H) (E) vaaleankeltaisena jauheena. Sp. >180 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 3340 (br), 1760, 1670 ja 1600.

UV: ^maka. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1 %1 ca) 222 (362) ja 10 285 (452).

NMR: D20 + NaHC03 δ ppm 3,68 (2H, br, 2-H), 4,15 (3H, s, 0CH3), 5,33 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,46 (2H, d, J = 7, CH*CH-CH2), 5,90 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,17 (1H, d - t, J * 16 & 7, 3-CH=CH), 7,02 (1H, d, J = 16, 3-CH trans) ja 15 8,43 & 9,09 (kumpikin 2H, d, 3 = 7, Py-H).

Esimerkki 11 N-j-j-C-CONII —-Γ ^ 9H2NH2

H2N^S"N L

20 OCHj \==/

I-1I *E

7- [2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido] -3- [3 - (3-aminometyylipyridinio) -1-25 propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1I)

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino- l,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3-(3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (E, 716 mg, 1 mmol) ja 3-(t-butyylioksikarbonyyliaminome-30 tyyli)pyridiiniä (526 mg, 2 mmol) DMSOtssa (2 ml), sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 30 minuuttia. Seos kaadettiin etyyliasetaattiin (200 ml) ja sakka koottiin talteen suodattamalla, pestiin hyvin etyyliasetaatilla ja kuivattiin. Seosta, jossa oli kvaternoitu suola (500 mg) ja nat-35 riumvetysulfiittia (50 mg) HCOOHtssa (5 ml), sekoitettiin 49 84 8 30 40 - 50 °C:ssa 80 minuuttia ja haihdutettiin kuiviin vakuu-missa. Jäljelle jäänyt kiinteä aine liuotettiin veteen (40 ml) ja seos neutraloitiin NaHC03:lla. Liukenematon aine suodatettiin pois ja suodos kromatografoitiin käänteisfaa-5 sikolonnissa (täyte PrepPAK-500/Cie -patruuna, 100 ml) elu-oimalla peräkkäin vedellä ja 5-, 10-, 20- ja 30-%:isilla CH3OH:n vesiliuoksilla. Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin ja kylmäkuivatuin, jolloin saatiin 10 mg (1,8 %) otsikon yhdistettä 10 (I-1I) (E) kullanruskeana jauheena.

IR: KBr cm'1 V>maka 3380 (br), 1760, 1650 (sh) ja 1620 (sh). UV: Amaka (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1 em) 235 (sh, 260) ja 286 (370).

NMR: D20 + NaHC03 δ ppm 3,68 (2H, b2, 2-H), 4,16 (3H, s, 15 0CH3), 6,98 (1H, d, J = 16, 3-CH trans), 8,05 (1H, m,

Py-H5), 8,50 (1H, m, Py-H4) ja 8,80 (2H, m, Py-H26). Esimerkki 12 N-n-C-CONiI -T-S S ^1 20 11N^S^N n o^«Y<ch:ch-ch^coNh2 0CH3 C00®

Ι-1Η *E

25 7 — [ 2— ( 5-amlno-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi- iminoasetamido]—3—[3—(4-karbamoyylipyridinio)-1-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1H) Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino- 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi-iminoasetamido] - 3-(3-30 jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (E-isomeeri; 4,1 g, 5,7 mmol) ja isonikotiiniamidia (1,4 g, 11 mmol) kuivassa DMSOrssa (6 ml), sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa tarkkailemalla TLC:n avulla sili-kageelilevyllä (CHC13CH30H = 3:1). Reaktioseos laimennet-35 tiin etyyliasetaatilla (100 ml) keltaisen hartsin erotta- so 84 830 miseksi, jota käsiteltiin muurahaishapolla (40 ml) ja nat-riumvetysulfUtilla (390 mg) 30 minuuttia 45 °C:ssa. Saatu liuos haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin veteen (100 ml) ja liukenematon aines poistettiin suodattamalla. 5 Yhdistetyt suodos ja pesuvesi pantiin kolonnin yläpäähän, jossa oli käänteisfaasitäyte (PrepPAK-500/C18, 1120 ml). Kolonni eluoitiin vedellä. Eluaattia kerättiin 300 ml:n fraktioin ja tarkkailtiin UV:n (254 nm) ja HPLC:n avulla (Lichrosorb RP-18; 4 x 300 mm, 0,01 M ammoniumfosfaattipus-10 kuri, pH 7,2, jossa oli 20 % CH30H:a). Fraktiot numerot 4 ja 5 yhdistettiin ja haihdutettiin pieneen tilavuuteen. Kylmäkuivaamalla saatiin 250 mg (8,1 %) otsikon yhdistettä (I-1H), joka suli >180 °C:ssa (hajoten).

Spektrit osoittivat, että tuote oli identtinen esi-15 merkissä 10 saadun tuotteen kanssa.

Hydrokloridin valmistus

Suspensioon, jossa oli yhdistettä I-1H (98 mg, 0,18 mmol) CH30H:ssa (1 ml), lisättiin 10-%:ista HCl:a (0,1 ml) ja seosta sekoitettiin 5 minuuttia. Muodostuneeseen kel-20 täiseen liuokseen lisättiin asetonia (100 ml), jolloin muodostui sakkaa, joka koottiin talteen suodattamalla, pestiin asetonilla (2 x 10 ml) ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin yhdisteen I-1H hydrokloridisuolaa värittömänä jauheena. Saanto 88 mg (79 %). Sp. >190 °C (hajoten). 25 IR: KBr cm’1 V>maks 3300, 1770, 1680 ja 1620.

UV: <Amake. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1*!^) 227 (385) ja 286 (374).

NMR: D20 δ ppm 2,32 (1H, s, asetoni-H), 3,79 (2H, br - s, 2- H), 4,17 (3H, s, OCH3), 5,34 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,49 30 (2H, d, J = 7, CH=CH-CH2), 5,93 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,28 (1H, d - t, J = 16 & 7, 3-CH=CH), 7,15 (1H, d, J = 16, 3- CH) ja 8,43 & 9,1 (kumpikin 2H, d, J = 7, Py-H).

51 84830

Esimerkki 13 . S .

N--j-C-CONH —i-r ^ 5 I J— * © H2N^^S N 0 "Y^CH^H-CH^N-n X°CH3 COO0 H3C —g '

I-1J *E

10 7-[2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi-iminoasetamido] -3-[3-(2-metyylitiatsolio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1J)

Seokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-15 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli) -2-metoksi-iminoasetamido] -3-(3- jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (E; 714 mg, 1 mmol) ja 2-metyylitiatsolia [valmistettu menetelmän mukaisesti, jonka ovat esittäneet R. P. Kurkjy ja E. V. Brown; J. Am. Chem. 74 (1952), s. 5778] (198 mg, 20 2 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (10 ml), lisättiin AgBF4;a (puh taus 90 %; 217 mg, 1 mmol) -20 °C:ssa. Seosta sekoitettiin ... 30 minuuttia huoneen lämpötilassa ja suodatettiin. Sakka uutettiin 10-%:isella CH30H/CHC13-seoksella (3 x 20 ml).

. Yhdistetyt uutteet pestiin suolaliuoksella (2 x 5 ml), •25 kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin keltaista jäännöstä, jota trituroitiin isopropyyli-eetterin kanssa ja suodatettiin, jolloin saatiin 350 mg kvaternoitua tuotetta. Seosta, jossa oli tämä kiinteä aine, natriumvetysulfiittia (35 mg) ja muurahaishappoa (3,5 - 30 ml), sekoitettiin 40 °C:ssa 30 minuuttia. Seos konsentroi-.·*.. tiin muurahaishapon poistamiseksi ja jäännös laimennettiin vedellä (40 ml). Vähäinen liukenematon aines poistettiin suodattamalla. Suodos pantiin käänteisfaasikolonniin *...* (PrepPAK-500/C18, 100 ml). Kolonni eluoitiin peräkkäin ve- ".‘35 dellä (200 ml), 5-%:isella CH30H:n vesiliuoksella (400 ml) 52 84 8 30 ja 10-%:isella CH3OH:n vesiliuoksella (300 ml). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin HPLC-analyysin perusteella (Lichrosorb RP-18; 4 x 300 mm, 0,01 M ammo-niumsulfaattipuskuri, pH 7,2, jossa oli 20 % CH30H:a). Yh-5 distetty liuos konsentroitiin pieneen tilavuuteen ja kyl mäkuivatuin, jolloin saatiin 40 mg (7,7 %) otsikon yhdistettä (I-1J) (E). Sp. >195 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 3300, 1760, 1660 ja 1600.

UV; Aeake. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1*^,,,) 238 (442) ja 10 292 (421).

NMR: D20 + DMSO-d6 δ ppm 3,06 (3H, s, tiatsoli-CH3), 3,74 (2H, br - s, 2-H), 4,19 (3H, s, 0CH3), 5,92 (1H, d, J * 4,5, 7-H), 6,1 (1H, m, 3-CH=CH), 6,8 (1H, d, J = 16, 3-CH trans) ja 8,04 & 8,23 (kumpikin 1H, d, J = 4, tiatsoli-H). 15 Esimerkki 14 N----C-CONH -|-f S ^ u N^s'N \ —^ch=ch-ch2^ch2oh 20 0CH3 C00®

I-1L *E

7- [ 2- (5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-; ‘ imlnoasetamldo]-3-[3-(4-hydroksimetyylipyridinio)- ' ‘ 25 1-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1L) • Seosta, jossa oli difenyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4- tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-(3-jodi-1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (E-iso-meeri; 1,07 g, 1,5 mmol), 4-hydroksimetyylipyridiiniä (818 30 mg, 7,5 mmol) CH3NCN:ssa (4,5 ml) ja CH30H:ssa (3 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa N2-atmosfäärin suojaamana tunnin ajan. Haihduttamalla suoritetun liuottimien poistamisen jälkeen jäljelle jäänyttä öljyä trituroitiin isopro-pyylieetterin kanssa, sakka kerättiin talteen suodattamal-:..35 la ja pestiin isopropyylieetterin ja metanolin seoksella 53 84 830 (3:1; 10 ml), jolloin saatiin 1,28 g kvaternoitua kefeemi-esteriä keltaisen jauheena. Liuosta, jossa oli kvaternoitua esteriä (1,25 g) ja natriumvetysulfiittia (600 mg) 85-%:isessa HCOOHrssa (10 ml), sekoitettiin huoneen lämpö-5 tilassa N2-atmosfäärin suojaamana tunnin ajan. Sen jälkeen kun oli lisätty 85-%:ista HCOOHrta (5 ml), seosta sekoitettiin samoissa olosuhteissa vielä tunnin ajan. Lisättiin tolueenia ja reaktioseos haihdutettiin kuiviin atseotroop-pisesti vakuumissa. Jäännöstä trituroitiin asetonin kansio sa, jolloin saatiin 1,17 g otsikon yhdisteen raakaa formi-aattia. Tämän yhdisteen (1,15 g) suspensio vedessä (100 ml) suodatettiin liukenemattoman aineksen poistamiseksi, joka pestiin vedellä (2 x 10 ml). Suodos ja pesunesteet yhdistettiin ja kromatografoitiin käänteisfaasikolonnissa. 15 Kolonni, jossa oli täytteenä täyte, joka oli otettu

PrepPAK-500/C18 -patruunakolonnista (Waters) (60 ml), kehitettiin peräkkäin vedellä, 5-%:isella metanolilla ja 10-%:isella metanolilla. Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdistettiin, konsentroitiin vakuumissa ja saos-20 tettiin lisäämällä asetonia, jolloin saatiin 100 mg otsikon yhdistettä (I-1L) vaaleankeltaisena jauheena.

Suspensioon, jossa oli jauhetta (90 mg) metanolissa (9 ml), lisättiin 1 M HCl:n CH3OH-liuosta (0,5 ml) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa ja konsentroitiin 25 vakuumissa. Konsentraattiin lisättiin isopropanolia, jol loin saostui 77 mg otsikon yhdisteen hydrokloridia. Vaaleankeltaista jauhetta. Sp. >190 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 V3^ 1775, 1670, 1635 ja 1530.

UV:^-mak». (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (£ ), 230 (22 600) ja 30 264 (sh, 16 300).

NMR: D20 δ ppm 3,83 (2H, br, 2-CH), 4,17 (3H, s, 0CH3, 5,06 (2H, s, O CH20H), 5,36 (1H, d, J * 4,5 Hz, 6-H), 5,41 : — : 35 (2H, d, J = 7 Hz, CH«CH-CH2), 5,94 (1H, d, J - 4,5 Hz, 54 84830 7-H), 6,36 (1H, d - t, J = 16 ja 7 Hz, CH=CHCH2), 7,13 (1H, d, J = 16 Hz, CH=CH-CH2), 8,08 ja 8,83 (kumpikin 2H, d, J = 7 Hz, Py-H).

Esimerkki 15 5 N-^-C-CONH —r > XOC„Hc ' © \=/

2 5 COO

10 I-2H *E

7 - [ 2-(5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-etoksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-1-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-2H) 15 Liuokseen, jossa oli 200 mg 7-amino-3-[3-(4-karba moyylipyridinio )-1 -propen- 1-yyli] -3-kef eemi-4-karboksy-laatti-hdyrokloridia (E-isomeeri) 5 ml.ssa 50-%:ista asetonin vesiliuosta, lisättiin annoksittain 190 mg 2-etoksi-imino-2-(5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)asetyylikloridi-20 hydrokloridia [valmistettu menetelmän mukaisesti, jota on selostettu julkaistussa japanilaisessa patenttihakemuksessa JP (Kokai 57-24 389 (2.8.1982)] ja seoksen pH säädettiin arvoon 6,5 - 7,0 2 N Na2C03:lla (noin 1 ml). Reaktio-seosta sekoitettiin 10 °C:ssa tunnin ajan, tehtiin happa-25 meksi pH-arvoon 2 1 N HClrlla ja konsentroitiin HP-20 -kolonnissa, jota eluoitiin peräkkäin 500 ml:11a vettä ja 25-%:ista isopropanolin vesiliuosta. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Öljymäistä jäännöstä käsiteltiin isopropano-30 lilla (20 ml), jolloin saatiin 263 mg (93 %) otsikon yh-distettä (I-2H). Sp. 170 °C (hajoten).

Sekoitettuun suspensioon, jossa oli 225 mg (0,40 mmol) edellä mainittua kahtaisionia 10 ml:ssa metanolia, lisättiin 1 ml 1 N HCl:n metanoliliuosta ja seosta sekoi-35 tettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännökseen lisät- 55 84830 tiin 15 ml isopropyylialkoholia ja muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon yhdistettä hydrokloridinaan. Saanto 146 mg (57 %). Sp. 160 °C (hajoten). Arvioitu puhtaus 65 %.

5 IR: KBr cm'1 V>maks 3300, 1780, 1680 ja 1620.

UV: Amakli (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (£), 227 (22 300) ja 288 (22 800).

NMR: D20 δ ppm 1,44 (3H, t, J = 7 Hz, OCH2-CH3), 3,74 (2H, br, s, 2-H), 4,45 (2H, q, J = 7 Hz, OCH2-CH3), 5,36 (1H, d, 10 J = 4,5 Hz, 6-H), 5,46 (2H, d, J = 7 JHz, 3-CH=CH-CH2), 5,92 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,20 (1H, m, 3-CH=CH), 7,04 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH=CH), 8,43 (2H, d, J = 7 Hz,

Py-HÄ) ja 9,10 (2H, d, J = 7 Hz, Py-HB).

Esimerkki 16 15 7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi- iminoasetamidoj-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1H) (E-isomeeri) Tämä esimerkki esittää yhdisteen I-1H valmistamista 20 reaktiokaavioiden la tai Ib muutamien viimeisten vaiheiden kautta, jolloin väliyhdiste benshydryyli-7-[2-(5-amino- 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi-iminoasetamido] -3- [3-(4-karbamoyylipyridinio)-1-propen-1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaattiformiaatti (XXVII-1H) eristetään.

25 A. Bentshydryyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsoli-3- yyli-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamo-yyli-l-pyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeeml-4-: karboksylaatti-formiaatti (E-isomeeri) (XXVII-1H)

Liuos, joss aoli yhdistettä XII-1H (Y‘ = 1*; E-iso-30 meeri) (34 g; puhtaus 75 %) asetonin ja CH30H:n seoksessa 1/1, 200 ml), vietiin Amberlite IRA-140 -kolonniin (formi-aattimuoto, 340 ml). Kolonni eluoitiin samalla liuotin-seoksella. Ensimmäinen fraktio (1 litra) haihdutettiin tilavuudeltaan noin 100 ml:ksi ja ruskeata jäännöstä tri-35 turoitiin isopropyylieetterin (400 ml) kanssa. Muodostunut 56 84 830 jauhe koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuu-missa, jolloin saatiin 29 g (puhtaus HPLC:n perusteella 75 %) otsikon yhdistettä XXVII-1H (E-isomeeria) ruskeana jauheena, joka suli >150 °C:ssa (hajoten).

5 IR: KBr cm'1 \?nakB 3300, 1780, 1680, 1630 ja 1600.

UV: EtOH Amaks nm (E1 * 3 cJ 282 (186).

NMR: asetoni-d6/CH3OH-d4 (1:1) δ ppm 4,0 (3H, s, 0CH3), 5,26 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,43 (2H, d, J = 7 Hz, CH2N*), 5,99 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,5 (1H, m, 3-CH=CH), 6,92 10 (1H, s, CHPh2), 7,1 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH), 7,35 (10H, m,

Ph-H), 8,36 (1H, s, HCOO) ja 8,46 & 9,12 (kumpikin 2H, d, J = 8 Hz, Py-H).

B. 7-[(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi- iminoasetamido] -3-[3-( 4-karbamoyyli-l-pyridinio)-15 1-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1H) (E-isomeeri)

Seosta, jossa oli vaiheessa A saatua yhdistettä XXVII-1H (E-isomeeri; 29 g; puhtaus 75 %) ja 85-%:ista muurahaishappoa (290 ml), sekoitettiin 2 tuntia huoneen 20 lämpötilassa. Haihduttamalla seos kuiviin saatiin ruskeata öljyä, joka trituroitiin asetonin (500 ml) kanssa. Jauhe koottiin talteen suodattamalla, pestiin asetonilla (2 x 100 ml) ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 24 g (HPLC:n perusteella puhtaus 50 %) raakaa otsikon yhdistet-; ” 25 tä. Ruskeaa kiinteätä ainetta käsiteltiin kahdesti 2 N

HCl:n (1 litran ja 0,5 litran) kanssa. Vesiuutteet yhdistettiin ja pantiin kolonniin, jossa oli täytteenä valmistetta Diaion HP-20 (1,5 litraa). Kolonni pestiin vedellä (8 1) ja eluoitiin 30-%:isella CH30H:lla. Haluttua tuotetta 30 sisältävä fraktio haihdutettiin noin 30 ml:ksi. Konsent-raattia käsiteltiin asetonilla (200 ml), jolloin saatiin sakkaa, joka koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin ; vakuumissa, jolloin saatiin 10,1 g (puhtaus 85 %) otsikon yhdistettä (kahtaisionin muodossa) keltaisena jauheena.

35 Suspensioon, jossa tämä tuote oli CH30H:ssa (100 ml), li- 5? 84830 sättiin 1 N HCl:n CH3OH-liuosta (55 ml) huoneen lämpötilassa ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Muodostunut kirkas liuos suodatettiin liukenemattoman aineksen poistamiseksi, konsentroitiin noin 50 ml:n tilavuiseksi ja saostettiin 5 isopropanolilla (200 ml). Muodostunut jauhe koottiin talteen, pestiin isopropanolilla (50 ml) ja kuivattiin vakuu-missa, jolloin saatiin 10,5 g (puhtaus 85 %) otsikon yhdistettä I-1H (E-isomeeria) (HCl-suolaa), joka suli >180 °C:ssa (hajoten). Vaaleankeltaista jauhetta.

10 Esimerkki 17 7- [ 2- ( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1H) (E-isomeeri) 15 Tämä esimerkki esittää yhdisteen I-1H valmistamista reaktiokaavioiden la tai Ib muutamien viimeisten vaiheiden kautta, jolloin väliyhdistettä XXVII-1H (formiaattia) ei eristetä.

Liuosta, jossa oli yhdistettä IX-1 (E-isomeeria; 20 27,6 g, 38,5 mmol) ja isonikotiiniamidia (22,8 g, 187 mmol) CH3CN:n (120 ml) ja CH30H:n (100 ml) seoksessa, sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan typpiatmosfää-rin suojaamana. Orgaanisten liuottimien haihduttamisen jälkeen öljymäistä jäännöstä trituroitiin isopropyylieet-25 terin kanssa, jolloin saatiin 50,5 g kvaternoidun suolan ja isonikotiiniamidin seosta. Liuosta, jossa oli seosta (50,3 g) ja natriumvetysulfiittia (16 g) 85-%:isessa HCOOH:ssa (160 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 minuuttia ja sen jälkeen 40 °C:ssa tunnin ajan N2:n suojaa-30 mana. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäljelle jäänyt öljy sekoitettiin tolueeniin (50 ml), haihdutettiin kuiviin atseotrooppisesti ja trituroitiin asetonin (400 ml) kanssa, jolloin saatiin 27,8 g raakaa otsikon yhdistettä. Tätä ainetta käsiteltiin kahdesti 2 N HCl:lla (1 1 35 ja 0,5 1). Happouutteet yhdistettiin ja vietiin kolonniin, 58 84830 jossa oli HP-20-hartsia (1,5 1). Kolonni eluoitiin vedellä (9 1) ja 30-%:isella metanolilla (10 1). Haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin saatiin keltaista öljyä, jota trituroi-5 tiin asetonin (300 ml) kanssa, jolloin saatiin 9,35 g kah-taisionin muodossa olevaa otsikon yhdistettä.

Suspensioon, jossa tuotetta (9,3 g) oli CH30H:ssa (180 ml), lisättiin 1 N HCl:n CH3OH-liuosta (55 ml), jolloin saatiin kirkasta liuosta. Liuos konsentroitiin noin 10 100 ml:ksi ja laimennettiin isopropanolilla, jolloin saos tui 9,50 g (puhtaus 75 %) otsikon yhdistettä I-1H (E-iso-meeria) hydrokloridinaan. Vaaleankeltaista amorfista jauhetta. Sp. >195 °C (hajoten).

Esimerkki 18 15 7-[2-(5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi- iminoasetamldo]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1H) (E-isomeeri) Tämä esimerkki esittää yhdisteen I-1H valmistamista 20 reaktiokaavion le viimeisen vaiheen (7-N-asylointi) kautta.

Jäissä jäähdytettyyn suspensioon, jossa oli 7-ami---- no-kefeemi-hydrokloridia XXII-H (E-isomeeri; 5,0 g, 12,6 mmol) 50-%:isessa asetonin vesiliuoksessa (100 ml), lisät-25 tiin pienin erin natriumvetykarbonaattia. Seoksen pH:ta tarkkailtiin koko reaktion ajan pH-mittarin avulla. Kylmään neutraloituun liuokseen (pH noin 7) lisättiin 2-(5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetyyliklo-ridihydrokloridia (4,02 g, 15,6 mmol) pienin erin tunnin 30 aikana ja reaktioseoksen pH pidettiin arvossa 6,8 - 7,5 lisäämällä ajoittain natriumvetykarbonaattia. Reaktiota tarkkailtiin myös TLC:n avulla. Kun yhdiste XXII-H oli kulunut kokonaisuudessaan, seos tehtiin happamaksi pH-ar-* ' voon 3 lisäämällä 2 N kloorivetyhappoa. Seos suodatettiin 35 ja suodos konsentroitiin vakuumissa. Jäännös laimennettiin 59 84 8 30 asetonilla (400 ml) sakan erottamiseksi, joka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 9,59 g raakaa otsikon yhdistettä vaaleankeltaisena jauheena. Arvioitu puhtaus oli HPLC:n perusteella 40 %. Suspensio, jossa oli 5 raakatuotetta (9,5 g) 2 N kloorivetyhapossa (150 ml), suodatettiin ja suodos adsorboitiin kolonniin, jossa oli HP-20-hartsia (500 ml). Vedellä (1,5 1) pesemisen jälkeen ko-lonni eluoitiin 29-%:isella isopropyylialkoholin vesi-liuoksella ja eluaattia kerättiin 100 ml:n fraktioin. Ha-10 lutut fraktiot yhdistettiin, tehtiin happamaksi 2 N kloo-rivetyhapolla (10 ml) ja haihdutettiin kuiviin. Jäljelle jäänyttä öljyä trituroitiin isopropyylialkoholin (200 ml) kanssa ja sakka koottiin talteen suodattamalla, Fosfori-pentoksidilla kuivaamisen jälkeen saatiin 5,18 g otsikon 15 yhdisteen I-1H (E-isomeerin) hydrokloridia keltaisena amorfisena jauheena. Sp. >190 °C (hajoten). Arvioitu puhtaus 75 %.

Esimerkki 19

Yhdisteen I-1H (E-isomeerin) puhdistus ja kiteytys 20 Esimerkissä 16 saatu yhdisteen I-1H hydrokloridi oli vaaleankeltaista amorfista jauhetta, jonka puhtaus oli 85 %.

Menetelmä 1 6 g 85-%:isesti puhdasta hydrokloridia liuotettiin 25 20 ml:aan vettä ja suodatettiin Celite-patjan läpi. Kul lanruskean värinen suodos (pH 2) laskettiin käänteisfaasi-kolonnin läpi (täyte PrepPAK-500/C18 -patruunasta; Waters; 120 ml), jota eluoitiin vedellä. Eluaattia kerättiin 120 ml:n fraktioin tarkkailemalla HPLC:n avulla [kolonni Lich-30 rosorb RP-18, 4 x 300 mm; liikkuva faasi, 0,01 M fosfaattipuskuri (pH 7,2)/CH3OH = 85:15; osoittaminen, UV (254 nm)]. Fraktiot numero 3-5 yhdistettiin, konsentroitiin noin 10 ml:ksi ja seostettiin asetonilla (100 ml), jolloin saatiin 3,3 g yhdisteen I-1H kahtaisionimuotoa (vaalean--- 35 keltaista amorfista jauhetta; arvioitu puhtaus 95 %).

60 84830

Suspensioon, jossa oli puhtaudeltaan 95-%:ista jauhetta (3,2 g) CHjOH: ssa (32 ml), lisättiin 1 N HCl:n CH3OH-liuosta (18 ml) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa, kunnes oli saatu kirkas liuos. Liuos suodatettiin 5 ja suodos konsentroitiin noin 10 ml:ksi. Konsentraattiin lisättiin isopropanolia (100 ml) vaaleankeltasen sakan erottamiseksi, joka koottiin talteen suodattamalla, pestiin isopropanolilla (5 ml) ja kuivattiin, jolloin saatiin 2,6 g HCl-suolaa (amorfista jauhetta; arvioitu puhtaus 95 10 %).

Puhtaudeltaan 95-%:ista hydrokloridia (1 g) vedessä (4 ml) sisältävän liuoksen pH säädettiin NaHC03;lla (200 mg) arvoon 6,5 ja sekoitettiin 30 minuuttia. Sekoittamisen aikana erottuneet kiteet koottiin talteen suodattamalla, 15 jolloin saatiin 710 mg yhdistettä I-1H (kahtaisionin muodossa) vaaleankeltaisina prismoina. Sp. >185 °C (hajoten). Mikroanalyysi osoitti sen olevan trihydraattia.

IR: KBr cm _1 ^makB 1780, 1695, 1660, 1630 ja 1610.

UV; Amaks (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (£ ) 227 (22 000) ja 20 290 (23 000).

NMR: DMS0-d6 + D20 δ ppm 3,45 (2H, br, s, 2-H), 3,9 (3H, s, 0CH3), 4,99 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,16 (2H, d, J = 7 Hz, CH2N+), 5,61 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 5,8 (1H, d - t, J = 16 & 7 Hz, 3-CH=CH), 6,93 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH) ja : ” 25 8,18 & 8,89 (kumpikin 2H, d, J = 7 Hz, Py-H).

: V Analyysi yhdisteelle C21H20N8O6S2*3H2O: laskettu; C 42,14 H 4,38 N 18,72 S 10,71 saatu: C 42,41 H 4,35 N 18,86 S 11,00

Menetelmä 2 30 Sen jälkeen kun menetelmällä 1 oli saatu kiteistä yhdistettä I-1H, yhdisteen I-1H kiteistä kahtaisionimuotoa voitiin saada suoraan raa'asta I-lH-hydrokloridista lisäämällä siemeneksi muutama kide puhdasta yhdistettä I-1H.

- Liuosta, jossa oli 85-%:isesti puhdasta hydroklori- 35 dia (250 mg) vedessä (1 ml), käsiteltiin puuhiilen kanssa.

ei 84830

Liuoksen pH säädettiin arvoon 6,5 NaHC03:lla (60 mg) ja tehtiin värittömäksi puuhiilellä. Suodokseen lisättiin siemeneksi muutama kappale menetelmällä 1 saaduista kiteistä ja sekoitettiin yön ajan huoneen lämpötilassa.

5 Erottuneet kiteet koottiin talteen suodattamalla, pestiin vedellä (2 x 2 ml) ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 170 mg (saatu takaisin 80 %) vaaleankeltaisia yhdisteen I-1H (kahtaisionimuotoa) prismoja, jotka sulivat >185 °C:ssa (hajoten); joka yhdiste oli identtinen menetelmällä 10 1 saadun yhdisteen kanssa (kuten IR-, UV- ja NMR-arvot osoittivat).

Yhdisteen I-1H kiteinen kahtaisionimuoto oli lievästi vesiliukoinen (6 mg/ml suolaliuoksessa 23 °C:ssa). Esimerkki 20

15 S

ii-T-r°"-rr Ί ^ch2°h 0CH3 C00® X==/

20 I-1K *E

.· : 7- [2-(5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi- iminoasetamido]-3-[3-(3-hydroksimetyylipyridinlo)-•: 1-propenyyli]-3-kefeeml-4-karboksylaatti (I-1K) *:·; 25 (E-lsomeeri) A. Difenyylimetyyli-7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol- 3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido3 -3-[3-(3-hydroksi-metyylipyridinio)-l-propenyyli] -3-kefeeml-4-karbok-sylaattijodidi (E-isomeerl) (XII-1K) 30 Liuokseen, jossa oli yhdistettä IX-1 (E-isomeeria; 1,79 g, 2,5 mmol) 2,5 mlrssa CH30H:a ja 7,5 ml:ssa CH3CN;a, lisättiin 3-hydroksimetyylipyridiiniä (545 mg, 5 mmol) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Reak-tioseos kaadettiin etyyliasetaattiin (100 ml) voimakkaasti 35 sekoittaen. Muodostunut sakka koottiin talteen suodatta- 62 8 4 830 maila, pestiin pienellä tilavuusmäärällä etyyliasetaattia Ja kuivattiin, jolloin saatiin 2,06 g (100 %) otsikon yhdistettä XII-1K kullanruskeana jauheena. Sp. 170 - 180 °C (hajoten).

5 IR: KBr οη'1^, 1780, 1725, 1675, 1615, 1530, 1385, 1225, 1040, 750 ja 700.

UV: (C2H5OH) λmak8 nm (E1 \ cm) 290 (196).

NMR: DMS0 + D20 δ ppm 3,7 (2H, br, s, 2-H), 3,91 (3H, s, 0CH3), 4,70 (2H, s, Py-CH2-0H), 5,28 (2H, m, CH2N+), 5,23 10 (1H, d, J = 5 Hz, 6-H), 5,90 (1H, de, J = 5 Hz, 7-H), 6,34 (1H, m, 3-CH=CH), 6,86 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH), 6,89 (1H, s, CHPh2), 7,35 (10H, m, Ph-H) ja 7,9 - 8,9 (4H, m, Py-H). B. 7-[2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-imlnoasetamido]-3-[3-(3-hydroksimetyylipyridinio)-15 1-propenyyli]-3-kefeeml-4-karboksylaatti (I-1K) (E-isomeeri)

Seosta, jossa oli yhdistettä XII-1J (E-isomeeri; 2,0 g, 2,4 mmol) ja natriumvetysulfiittia (1 g) 85-%:ises-sa HC00H:ssa (10 ml), sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpö-20 tilassa. Reaktioseos konsentroitiin noin 5 ml:ksi vakuu-missa. Öljymäinen jäännös kaadettiin asetoniin (100 ml) voimakkaasti sekoittaen. Sakka koottiin talteen suodattamalla, pestiin pienellä määrällä asetonia ja kuivattiin, jolloin saatiin 1,1 g kullanruskeata jauhetta, joka puh-25 distettiin kromatografoimalla kolonnissa [käyttäen täytettä PrepPAK-500/Cie -patruuna (Waters)], jolloin saatiin 283 mg (22 %) yhdistettä I-1K amorfisena jauheena. Jauhe kiteytettiin 4 N H2S04:sta ja asetonista, jolloin saatiin 144 mg otsikon yhdistettä I-1K värittöminä neulasina. Sp. 30 185 - 188 °C (hajoten).

IR: KBr cm*1 \?make 1775, 1680 (sh), 1660, 1630, 1225, 1045 ja 850.

(fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1,!1cb) 236,5 (283), : 275 (sh) (280) ja 292,5 (330).

63 84830 NMR: DzO δ ppm 3,75 (2h, s, 2-H), 4,18 (3H, s, OCH3), 4,97 (2H, s, Py-CH2OH), 5,35 (1H, d, J = 4 Hz, 6-H), 5,43 (2H, d, J = 6,5 Hz, CH2N+), 5,92 (1H, d, J = 4 Hz, 7-H), 6,18 (1H, d - t, J = 16 Hz, J = 6,5 Hz, 3-CH=CH-), 6,97 (1H, d, 5 J = 16 Hz, 3-CH), 8,13 (1H, d-d, J = 8 Hz, J = 6 Hz, Py-H), 8,60 (1H, d, J = 8 Hz, Py-H), 8,84 (1H, d, J = 6 Hz, Py-H) ja 8,90 (1H, s, Py-H).

Esimerkki 21

10 n~n~~rC0t,HT~O

As/11 N -Ns. ® ft \ H2N b N 0 CH=CH-CH2-N y- CONHCH3

N°CH3 COO© W

I-1M *E

15 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(Z)-metok-si-iminoasetamido]-3-[3-(4-N-metyylikarbamoyylipy-ridinio) -1-propenyyli] -3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1M) (E-isomeeri) 20 Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino- 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3-(3-jodi-1-propenyyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (E-isomeeri; 450 mg, 0,62 mmol) ja 4-N-metyylikarbamoyylipy-ridiiniä [valmistettu M. Samejima'n menetelmän mukaisesti; 25 Yakugaku Zasshi 80 (1960) s. 1706] (215 mg, 1,58 mmol) asetonitriilissä (2 ml), sekoitettiin typpiatmosfäärin suojaamana 5 tuntia huoneen lämpötilassa. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännöstä trituroitiin eetterin kanssa, jolloin saatiin 530 mg kvaternaarista suolaa.

30 Seosta, jossa oli kiinteää ainetta ja natriumvetysulfiit-tia (150 mg) 85-%:isessa muurahaishapossa (2 ml), sekoitettiin 4 tuntia ja sitten lämmitettiin 40 °C:ssa 30 minuuttia. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä trituroitiin asetonin kanssa ja raaka tuote koottiin tal- 35 teen suodattamalla. Raaka tuote kromatografoitiin HP-20- 6« 84830 kolonnissa (1,5 x 18 cm) ja kolonni eluoitiin vedellä ja 30-%:isella metanolin vesiliuoksella. Metanolipitoinen eluaatti haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös kyl-mäkuivattiin, jolloin saatiin 140 mg amorfista jauhetta, 5 jota puhdistettiin edelleen (HPLC-kolonnissa; Lichrosorb RP-18, liuotin: 15-%:inen CH30H) ja HPLC-eluaatti kylmäkui-vattiin, jolloin saatiin 60 mg (18 %) otsikon tuotetta I-1M. Sp. 180 - 183 °C (hajoten). Arvioitu puhtaus 80 %. IR: KBr cm'1 v?maks 1760, 1660 ja 1600.

10 UV: <^maks (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (6 ) 230 (22 100) ja 286 (22 100).

NMR: D20 δ ppm 3,08 (3H, s, C0NHCH3), 3,72 (2H, s, 2-H), 4,16 (3H, s, 0CH3), 5,35 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,95 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 7,00 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH), 15 8,35 (2H, d, J = 6 Hz, pyridiini-H) jka 9,05 (2H, d, J = 16 Hz, pyridiini-H).

Esimerkki 22

N rt-C-CONH —j-{ S N

20 II N | J_N A * Φ/?-^

H t) S" N CM=CH-CH 2-N V COOH

NoCH3 COO® W

I-1N *E/Z = 7/1 25 7-[2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi- imlnoasetamido]-3-[3-(4-karboksipyridinio)-l-prop-enyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1N) Sekoitettuun suspensioon, jossa oli isonikotiini-happoa (340 mg, 2,8 mmol) kuivassa DMF:ssa (3,5 ml), li-30 sättiin typpiatmosfäärin suojaamana N,0-bis(trimetyylisi-lyyli)asetamidia (0,7 ml, 3,8 mmol). Muodostuneeseen kirkkaaseen liuokseen lisättiin yhtenä eränä difenyylimetyyli- 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imino-asetamido] -3-( 3-jodi-l-propenyyli )-3-kefeemi-4-karboksy-35 laattia (IX-1) (E-isomeeri; 720 mg, 1 mmol) ja punaista 65 84 8 30 liuosta sekoitettiin 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseos lisättiin tipoittain sekoitettuun kyllästettyyn natriumkloridiliuokseen (50 ml), jossa oli natrium-tiofosfaattia (150 mg). Keltainen sakka koottiin talteen 5 suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin, jolloin saatiin 722 mg vaaleankeltaista jauhetta. Jauhe (700 mg) ja natriumvetysulfiittia (70 mg) liuotettiin 85-%:iseen muurahaishappoon (5 ml) ja konsentroitiin. Jäännöstä tri-turoitiin asetonin kanssa (70 ml) ja sakka eristettiin 10 suodattamalla, jolloin saatiin 421 mg keltaista jauhetta. Tämä raaka jauhe (400 mg) suspendoitiin veteen (2 ml) ja suspensioon lisättiin natriumvetykarbonaattia. Muodostunut tumma liuos adsorboitiin kolonniin, jossa oli täytteenä (50 ml) PrepPAK/C18-panos (Waters’ System 500), ja kolonni elu-15 oltiin vedellä (200 ml). Eluaatti jaettiin 10 fraktioon (kussakin 20 ml) ja halutut fraktiot (fraktiot numero 4 -7) yhdistettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 3 2 N kloo-rivetyhapolla ja haihdutettiin kuiviin. Jäännöstä tritu-roitiin asetonin (30 ml) kanssa ja sakka koottiin talteen 20 suodattamalla, jolloin saatiin 201 mg (37 %) otsikon yhdistettä I-1N keltaisena jauheena. E/Z 0 7/1; puhtaus 80 %. Sp. >189 °C (hajoten).

IR: KBr cm"1 v^, 1770, 1665 ja 1600.

UV: (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (&) 227 (22 500) ja 25 290 (22 100).

NMR: D20 + NaHC03 6 ppm 3,7 (2H, br, s), 4,15 (3H, s), 5,32 (1H, d, J = 4 Hz), 6,14 (1H, d - t, J = 15,5 ja 6 Hz), 7,03 (1H, d, J * 15,5 Hz), 8,31 (2H, d, J - 7 Hz) ja 8,94 (2H, d, J = 7 Hz).

66 84830

Esimerkki 23

N--C-CONH -T-f S N

5 H2^S^ l oJ-^CH:CH-cH^f3 0CH3 COO0 I (

I-IO *E

10 7-[2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(Z)-metok- si-iminoasetamido] -3- [ 3- (2,3-syklopenteenopyridi-nlo)-l-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (1-10) (E-isomeeri)

Seosta, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-15 1,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3-(3-

Jodi-l-propenyyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (e-isomeeri; 450 mg, 0,62 mmol) ja 2,3-syklopenteenipyridii-niä (217 mg, 1,83 mmol) asetonitriilissä (2 ml), sekoitettiin typpiatmosfäärin suojaamana 4 tuntia huoneen lämpöti-20 lassa. Vakuumissa haihduttamisen jälkeen seosta trituroi-tiin eetterin kanssa, jolloin saatiin 560 mg kvaternaaris-ta suolaa. Seosta, jossa oli kiinteää ainetta ja 85-%:ista muurahaishappoa (2 ml), sekoitettiin typen suojaamana 3 tuntia huoneen lämpötilassa ja sitten lämmitettiin 30 mi-25 nuuttia 40 °C:ssa. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännöstä trituroimalla saatiin 391 mg raakaa tuotetta, : joka puhdistettiin kromatografoimalla HP-20-kolonnissa (1,5 x 18 cm). Kolonni eluoitiin vedellä ja 30-%:isella metanolin vesiliuoksella. Haihduttamalla metanolipitoinen .....30 eluaatti kuiviin vakuumissa ja kylmäkuivaamalla sen jälkeen, saatiin 160 mg amorfista jauhetta, jota puhdistettiin edelleen HPLC:tä käyttäen (kolonni: Lichrosorb; liuotin: 10-%:inen CH30H). HPLC-eluaatti kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 50 mg (15 %) otsikon tuotetta 1-10. Sp. >190 35 °C (hajoten). Arvioitu puhtaus 75 %.

67 84 830 IR: KBr cm'1 ^maks. 1765, 1670 ja 1600.

UV: A«aks. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (6-) 235 (20 000) ja 283 (25 000).

NMR: D20 + NaHCOj δ ppm 2,2 - 2,6 (2H, m, -CH2-), 3,1 - 3,6 5 (4H, m, -CH2-), 3,72 (2H, s, 2-H), 4,17 (3H, OCH3), 5,33 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,90 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,75 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH) ja 7,65 - 8,2 (3H, m, pyri-diini-H).

Esimerkki 24 10 ^ S .

N-j-j-C-CONH —|-S ^

H2N^S^ \ ° N'V^Vs CH=CH-CH ?N^~\-COOH

? Lp w C2Hc

15 25 I-2N

7-[2-(5-amlno-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(Z)-etok-si-iminoasetamido]-3-[3-(4-karboksipyridinio)-l-propenyyli]-3-kefeeml-4-karboksylaatti (I-2N) (E-isomeeri) 20 ja 7-[2-( 5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(Z)-etok-si-imlnoasetamido]-3-[3-(4-karboksipyridinio)-l-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-2N) (Z-lsomeeri) Jäähdytettyyn seokseen, jossa oli BSA:ta (1,0 ml, 25 4,12 mmol) ja isonikotiinihappoa (506 mg, 4,12 mmol), li sättiin yhdistettä IX-2 (saatu valmisteesta n:o 21) (1,0 g, 1,37 mmol) ja seosta sekoitettiin typen suojaamana huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Seos kaadettiin 10-%:iseen Na2S203-liuokseen (20 ml), jolloin saostui 1,3 g kvaternaa-30 rlsta suolaa, joka koottiin talteen suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin. Seosta, jossa oli kiinteä aine ja natriumvetysulfiittia (0,3 g) muurahaishapossa (98 %; 5 ml), lämmitettiin 40 °C:ssa tunnin ajan ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä trituroitiin asetonin kanssa 35 ja suodatettiin, jolloin saatiin 900 mg raakatuotetta (E- 68 8 4 830 propenyyli-isomeeri/Z-propenyyli-isomeeri = 2:1). Isomeerien erottaminen suoritettiin HPLCrn avulla (kolonni: Lichrosorb; liuotin: 15-%:inen CH3OH). Nopeammin liikkuvat HPLC-fraktiot koottiin talteen, haihdutettiin kuiviin va-5 kuumissa ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin yhdisteen I-2N E-propenyyli-isomeeriä (44 mg; saanto 6 %).

Hitaammin liikuvista fraktioista saatiin yhdisteen I-2N Z-propenyyli-isomeeria (32 mg; saanto 4 %) samalla menetelmällä.

10 I-2N, E-isomeeri

Sp. >200 °C (hajoten).

IR: KBr cm·1 ^maks. 1765, 1660, 1620 ja 1380.

UV: (vesi) nm ( £ ) 228 (22 00) ja 291 (23 600).

NMR: D20 6 ppm 1,45 (3H, t, J = 6 Hz, CH2CH3), 3,72 (2H, S, 15 2-H), 4,45 (2H, q, CH2CH3), 5,40 (1H, d, J = 4 Hz, 6-H), 5,90 (1H, d, J - 4 Hz, 7-H), 7,05 (1H, d, J = 15 Hz, 3-CH), 7,05 (1H, d, J = 15 Hz, 3-CH),m 8,30 (2H, d, J = 6 Hz, Py-H) ja 8,95 (2H, d, J = 6 Hz, Py-H).

I-2N, Z-isomeeri 20 Sp. >200 °C (hajoten).

IR: KBr cm*1 V3„ak,. 1765, 1660 (sh), 1620 ja 1370.

UV: ^1ÄI (fosfaattipuskuri, pH 7) nm ( £, ) 225 (22 400) ja 275 (sh) (16 000).

NMR: D20 6 ppm 1,45 (3H, t, J « 7 Hz, CH2CH3), 3,50 (1H, d, ' '25 J - 17 Hz, 2-H), 3,75 (1H, d, J = 17 Hz, 2-H), 5,38 (1H, d, J - 4Hz, 6-H), 5,95 (1H, d, J » 4 Hz, 7-H), 6,62 (1H, d, J - 11 Hz, 3-CH-, 8,35 (2H, d, J = 6Hz, Py-H) ja 8,92 (2H, d, J = 6Hz, Py-H).

Esimerkki 25 : 30 N -C-CONH —i-p 2 ch2-ch=ch2 (100©

-•••35 I-3H *E

69 84 830 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadlatsol-3-yyli)-2-propen-3-yylioksi~imino)asetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyri-dinio)-l-propenyyli]-3-kefeemi-4-kabroksylaattl (I-3H) (E-lsomeeri) 5 Liuokseen, jossa oli 35 mg (0,08 mol) 7-amino-3- [3 - (4-karbamoyylipyridinio) -1 - (E) -propenyyli] -3-kef eemi- 4-karboksylaattihydrokloridia 2 mlrssa 50-%:ista asetonin vesiliuosta, lisättiin 52 mg 2-[5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli] -2-(propen-3-yylioksi-imino Jasetyylikloridihydro-IO kloridia (valmisteesta n:o 25) ja seoksen pH säädettiin arvoon 6,5 - 7,0 2 N Na2C03-liuoksella. Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 1 N HClrlla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös kromatografoitiin HP-20-hartsikolonnissa, jota 15 eluoitiin 300 mlrlla vettä ja 30-%:ista CH3OH/vesiliuosta. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös (73 mg) puhdistettiin kään-teisfaasikolonnissa kantajalla, joka oli otettu PrepPAK-500/C18 -patruunasta (Waters; 30 ml). Kolonni eluoitiin 20 peräkkäin vedellä, 5-%:isella CH30H:lla, 10-%:isella CH30H:lla ja 20-%:isella CH30H:lla. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 26 mg (62 %) otsikon tuotetta I-3H. Sp. 160 °C (hajoten), i'·'; IR: KBr cm'1 V>ek, 3400, 1765, 1680, 1605 ja 1400.

--: 25 UV; ^aake (fosfaattipuskuri, pH 7) nm ( €-) 226 (24 600) ja 288 (22 800).

NMR; D20 δ ppm 3,75 (2H, s, 2-H), 5,41 (1H, d, J * 5 Hz, 6-H), 5,50 (4H, m, CH2N* & CH=CH2), 5,98 (1H, d, J = 5 Hz, 7-H), 6,20 (1H, m, 3-CH=CH), 7,09 (1H, d, J - 17 Hz, ‘ 30 3-CH), 8,50 (2H, d, J = 7 Hz, Py-H) ja 9,16 (2H, d, J « 7

Hz, Py-H).

70 84830

Esimerkki 26 ^ s \ N p-C-CONH —I-S ^ sKss" I J__N. * @/?~\ 5 h2n d o nch=ch-ch2-n Vconh2 I COO^

CH2C=CH

I-4H *E

10 7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propargyy- lioksi-imlnoasetamido] -3-[3-(4-karbamoyylipyridi-nio)-1-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-4H) (E-isomeeri)

Liuokseen, jossa oli 86 mg ( 0,19 mmol) 7-amino-3-15 [3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-( E )-propenyyli] -3-kefeemi- 4-karboksylaattihydrokloridia (XXII-H) 2 mlrssa 50-%:ista asetonin vesiliuosta, lisättiin 63 mg 2-propargyylioksi-imino-2-( 5-amino-l, 2,4~tiadiatsol-3-yyli )-asetyylikloridi-hydrokloridia (valmisteesta n:o 26). Suspension Ph pidet-20 tiin arvossa 6,5 - 7,0 2 N Na2C03-liuoksella ja sitten sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan. Reaktioseos tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 1 N HClrlla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös laimennettiin 30 ml:11a vettä, neutraloitiin NaHC03:lla ja suodatettiin. Suodos 25 siirrettiin kolonnin yläpäähän, jossa oli täytteenä kään-teisfaasikantajaa (30 ml), joka oli otettu PrepPAK-500/C18 -patruunasta (Waters). Kolonni eluoitiin peräkkäin vedellä, 5-%:isella CH30H:lla, 10-%:isella CH3OH:lla ja 20-%:isella CH3OH:lla. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdis-30 tettiin ja kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 13 mg (12 %) otsikon tuotetta I-4H. Arvioitu puhtaus 70 %. Sp. 160 °C. IR: KBr cm'1 naks 3400, 2120, 1765, 1680 ja 1610.

UV:?\Bak·. (fosfaattipuskuri, pH 7) nm ( £ ) 229 (24 000) ja 288 (21 200).

35 NMR: D20 δ ppm 3,78 (2H, s, 2-H), 5,15 (2H, d, J = 1 Hz, -CH2-C=CH), 5,40 (1H, d, J = 5 Hz, 6-H), 5,50 (2H, m, CH-N*), 5,98 (1H, d, J = 5 Hz, 7-H), 6,20 (1H, m, 3-CH=CH), 71 84830 7,05 (1H, d, J = 17 Hz, 3-CH), 8,50 (2H, d, J = 7 Hz, Py-H)ja 9,16 (2H, d, J = 7 Hz, Py-H).

Esimerkki 27 . s \ 5 N-j-|-C-CONH η-T ^ „2m-^s^n \ 0^— ch’ch-ch2®/^~\-conh2 V coo0

[ j I-5H *E

10 7- [2-( 5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-syklopent-yylioksi-iminoasetamido] -3- [3- (4-karbamoyylipyrldi-nio)-l-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-5H) (E-isomeeri) 15 Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 139 mg (0,31 mmol)7-amino-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-propenyyli]- 3-kefeemi-4-karboksylaattihydrokloridia 3,5 ml:ssa 50-%:ista asetonin vesiliuosta jääkylmässä hauteessa, lisättiin annoksittain 120 mg (0,44 mmol) 2-(5-amino-l,2,4-20 tiadiatsol-3-yyli )-2-syklopentyylioksi-iminoasetyyliklori- dihydrokloria (valmisteesta n:o 27). Seoksen pH säädettiin arvoon 6,5 - 7,0 2 N Na2C03-liuoksella (0,9 ml) ja sekoitettiin tunnin ajan 10 °C:ssa. Reaktioseos tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 1 N HCl:lla ja haihdutettiin kuiviin 25 vakuumissa. Jäännös kromatografoitiin HP-20-hartsikolon- : nissa (20 ml) ja eluoitiin peräkkäin 300 ml :11a vettä ja 30-%:ista CH30H/vesiliuosta. Tuotetta sisältävät fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä käsiteltiin 60 ml:11a asetonia, jolloin saatiin 111 mg 30 (83 %) otsikon yhdistettä I-5H. Sp. 160 °C (hajoten). Ar vioitu puhtaus 70 %.

IR: KBr cm"1 3400, 1770, 1680, 1605 ja 1530.

UV: ^maks (fosfaattipuskuri, pH 7) nm ( £,) 224 (23 300) ja 286 (24 600).

72 8 4 830 NMR: DMSO-d6 6 ppm 1,70 (8H, br, s, H-(Q), 4,68 (1H, br,

H

s, ^J), 5,05 (1H, d, J = 5 Hz, 6-H), 5,30 (2H, m, CH2N*), 5 0 5,67 (1H, d-d, J = 5 Hz & 7 Hz, 7-H), 6,20 (1H, m, 3-CH=CH), 7,08 (1H, d, J = 17 Hz, 3-CH), 8,34 (2H, d, J = 7 Hz, Py-H), 9,100 (2H, d, J = 7 Hz, Py-H) ja 9,38 (1H, d, J = 7 Hz, 7-NH).

10 Esimerkki 28

N-s-C-CONH —-f^SNV] CH2COOH

15 0CH3 COO®

I-1P *E

7- [2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-(3-karboksimetyylipyridinio)-20 1-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1P) (E-isomeeri) A. Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-( 3-karboksimetyylipyridinio)-1-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksy-25 laatti (XII-1P; jodidi) (E-isomeeri)

Suspensioon, jossa oli 3-karboksimetyylipyridiini-hydrokloridia (0,89 g, 5 mmol) 10 ml:ssa CH2Cl2:a, lisättiin N,0-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia (4,97 ml, 18 mmol) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa, kunnes 30 oli saatu kirkas liuos. Liuokseen lisättiin yhdistettä IX-1 (1,79 g, 2,5 mmol) ja seoksen annettiin olla paikoillaan huoneen lämpötilassa. 3 tunnin kuluttua lisättiin 3 ml CH30H:a jäähtyneeseen seokseen ja liuos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin öljyä, jota trituroi-35 tiin etyyliasetaatin kanssa, jolloin saatiin 2,28 g otsi- 73 8 4 8 3 0 kon yhdistettä XII-1P kullanruskeana jauheena. Sp. 161 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 ^maks 1780, 1720, 1675, 1630, 1530, 1385, 1225, 1045, 755 ja 700.

5 UV: Aerte. (C2H5OH) nm (E1%lcm) 295 (188).

NMR: DMSO + D20 δ ppm 3,70 (2H, br, s, 2-H), 3,90 (5H, s, OCH3 & Py-CH2CO), 5,25 (3H, m, -CH2N* & 6-H), 5,92 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,35 (1H, m, 3-CH=CH-), 690 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH=CH-), 6,90 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH), 6,92 (1H, 10 s, CHPh2), 7,35 (10H, m, Ph-H) ja 8,8 - 9,0 (4H, m, Py-H).

B. 7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi- iminoasetamidoj-3-[3-(3-karbokslmetyylipyridinio)-1-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1P) (E-isomeeri) 15 Seosta, jossa oli yhdistettä XII-1P (jodidia) (2,28 g) ja natriumvetysulfiittia (1,1 g) 85-%:isessa HCOOH:ssa (10 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Reak-tioseos konsentroitiin noin 5 ml:ksi vakuumissa. öljymäistä jäännöstä trituroitiin asetonin (100 ml) kanssa, jol-20 loin saatiin 1,22 g raakaa tuotetta, joka puhdistettiin kromatografoimalla kolonnissa (HP-20; 420 ml), jolloin saatiin 533 mg otsikon yhdistettä I-1P (38 %, yhdisteestä IX-1) vaaleankeltaisena amorfisena jauheena. Sp. 165 °C (hajoten).

25 IR: KBr cm'1 V>maka 1770, 1670, 1600, 1530, 1385, 1140 ja 1040.

UV:ABak8 (fosfaattipuskuri, pH 6,2) nm (E1 \ CB) 234 (374), 277 (sh) (390) ja 290 (402).

NMR: D20 + NaHCOj δ ppm 3,78 (2H, s, 2-H), 3,92 (2H, s, 30 Py-CH2C0), 4,22 (3H, s, 0CH3), 5,40 (1H, d, J - 4 Hz, 6-H), 5,44 (2H, d, J =6,5 Hz, -CH2-N*), 5,97 (1H, d, J = 4 Hz, 7-H), 6,20 (1H, d - t, J = 4 Hz, 7-H), 6,20 (1H, d -t, J = 16 & 6,5 Hz, 3-CH=CH), 7,08 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH), 8,11 (1H, d - d, J = 8 & 7 Hz, Py-H5), 8,53 (1H, d, J 35 =8 Hz, Py-H4), 8,82 (1H, d, J = 7Hz, Py-H6) ja 8,86 (1H, s, Py-H2).

74 84830

Esimerkki 29 . S \ N —-C-CONH —-r ^

As.» I „J_. A *

5 H N b N 0 nCH=CH-CH2-N 'Vs-CH2COOH

S°CH3 COO© W

I-1Q *E

7—[2—(5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-10 iminoasetamido] -3- [3- ( 4-karboksimetyylitiopyridi- nio)-l-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1Q) (E-isomeerl) A. Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadlatsol- 3-yyli )-2-metoksi-iniinoasetamido]-3-[3-(4-karboksl-15 metyylitiopyridinio)-1-propenyyli]-3-kefeemi-4- karboksylaatti (XXI-1Q, jodidi) (E-isomeeri) Suspensioon, jossa oli 4-karboksimetyylitiopyridii-niä (0,88 g, 5 mmol) 10 ml:ssa CH2Cl2:a, lisättiin N,0-bis-(trimetyylisilyyli)asetamidia (5 ml, 18 mmol) ja seosta 20 sekoitettiin huoneen lämpötilassa, kunnes oli saatu kirkas liuos. Liuokseen lisättiin yhdistettä IX-1 (E-isomeeri; 1,79 g, 2,5 mmol) ja seoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa. Kolmen tunnin kuluttua kylmään seokseen lisättiin 3 ml CH30H:a ja liuos haihdutettiin kuiviin vakuumis-25 sa, jolloin saatiin öljymäistä jäännöstä, jota trituroi-tiin etyyliasetaatin kanssa, jolloin saatiin 2,43 g otsikon yhdistettä XII-1Q (jodidia) kullanruskeana jauheena.

Sp. 155 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 ^make 1780, 1720, 1670, 1625, 1525, 1385, 1225, 30 1115, 1040, 755 ja 700.

UV: λββΙΐΒ (C2H5OH) nm (E1S!lcJ 312 (299).

; NMR: DMS0-d6 + D20 δ ppm 3,70 (2H, br, s, 2-H), 3,93 (3H, s, 0CH3), 5,07 (2H, m, CH2-N*), 5,23 (1H, d, J * 5 Hz, 6-H), 5,90 (1H, d, J = 5Hz, 7-H), 6,29 (1H, m, 3-CH-CH), ' 35 6,87 (1H, d, J = 16 Hz, 3-CH), 6,91 (1H, s, CHPh2), 7,35 75 84830 (10 H, m, Ph-H) ja 7,88 - 8,58 (kumpikin 2H, d, J = 6 Hz, Py-H).

B. 7— [2— ( 5-amino-l, 2,4-tladiatsol-3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3- [3-( 4-karboksimetyylitiopyridi-5 nio)-l-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1Q) (E-isomeeri)

Seosta, jossa oli yhdistettä XXI-1Q (jodidia; 2,43 g) ja natriumvetysulfiittia (1,1 g) 85-%:isessa HCOOHrssa (10 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Reak-10 tioseos konsentroitiin noin 5 ml:ksi vakuumissa. Öljymäistä jäännöstä trituroitiin asetonin (100 ml) kanssa, suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin raakaa tuotetta (1,39 g), joka puhdistettiin kromatografoimalla kolonnissa (HP-20; 20 ml), jolloin saatiin 577 mg otsikon yhdistettä 15 I-1Q (39 % yhdisteestä IX-1) vaaleankeltaisena amorfisena jauheena. Sp. 188 °C (hajoten).

IR: KBr cm1 v>maka 1765, 1670, 1625, 1530, 1380, 1110 ja 1035.

UV: AmakB (fosfaattipuskuri, pH 6,2) nm (E1,(lclI1) 234 (459) 20 ja 310 (678).

NMR: D20 + NaHCOj δ ppm 3,79 (2H, br, s, 2-H), 4,10 (2H, s, S-CH2), 4,23 (3H, s, 0CH3), 5,25 (2H, d, J = 6,5 Hz, CH2-N+), 5,39 (1H, d, J * 4,0 Hz, 6-H), 5,97 (1H, d, J = 4 Hz, 7-H), 6,18 (1H, d - t, J = 15,5 Hz & 6,5 Hz, 3-CH=CH), 25 7,05 (1H, d, J = 15,5 Hz, 3-CH) ja 7,84 & 8, 55 (kumpikin 2H, d, J = 7 Hz, Py-H).

Esimerkki 30 . S .

N -j-C-CONH —i-S

As'” I 0J

H2N & N 0 X CH=CH-CH2-N I

0CH3 C00® I-1A *E/Z = 7/1 76 84 8 30 7-[2-(5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-(1-metyylipyrrolidinio)-1-propenyyll]-3-kefeemi-4-karboksylaattisulfaatti (I-1A; sulfaatti) 5 A. Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli )-2-metoksi-iniinoasetamido] -3-( 1-metyyli-pyrrolidinio)-l-propenyyli] -3-kefeemi-4-karboksy-laatti (XII-1A; jodidi)

Kylmään liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-[2-10 (5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetami- do]-3-(3-jodipropenyyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattia (IX-1) (valmisteesta n:o 14) (21,5 g, 30 mmol) etyyliasetaatissa (300 ml), lisättiin tipoittain liuos, jossa oli 1-metyylipyrrolidiinia (2,55 g, 30 mmol) etyyliasetaatissa 15 (30 ml) tunnin aikana -5-0 °C:ssa sekoittaen. Sen jälkeen kun oli sekoitettu vielä 10 minuuttia, muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla ja pestiin kloroformilla (200 ml), jolloin saatiin 23,0 g (95,8 %) otsikon yhdistettä (IX-1X; jodidia), joka suli >175 °C:ssa (hajoten).

20 IR: KBr cm'1 >?ak8 3300, 1780, 1730, 1685 ja 1615.

UV: λβΛ,. (C2H50H) nm (E1 \ cm) 218 (435) ja 295 (188).

B. Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadlatsol- 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-(1-metyyli-pyrrolidinio)-l-propenyyli] -3-kefeemi-4-karboksy-• 25 laatti (XXI-1A; kloridi)

Yhdiste (XII-1A; jodidi)(23 g, 28,7 mmol) liuotettiin seokseen, jossa oli asetonia ja metanolia (1:1; 230 ml), ja vietiin Amberlite IRA-410 -kolonniin (kloridimuo-to; 230 ml), jota esikäsiteltiin samalla liuotinseoksella. 30 Kolonni kehitettiin liuottimena ja haluttua yhdistettä sisältävät fraktiot yhdistettiin ja konsentroitiin öljy-mäiseksi jäännökseksi, jota trituroitiin etyyliasetaatin (300 ml) kanssa, jolloin saatiin 17,9 g (87,7 %) otsikon yhdistettä (XXI-1A; kloridia), joka suli 190 °C:ssa (hajo-: : 35 ten).

77 84830 IR: KBr cm’1 V>mak> 3380, 1780, 1680 ja 1620.

UV: <*maks. (C2H5OH) nm (E1 \ cm) 220 (369) ja 290 (232).

C. 7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi-iminoasetamido] -3- [3-( 1-nietyyllpyrrolidinio)-1-5 propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaattisulfaatti (I-1A; sulfaatti)

Seosta, jossa oli yhdistettä (XII-1A; kloridi) (17,8 g, 25 mmol) 85-%:isessa muurahaishapossa (178 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia typpiatmosfää-10 rin suojaamana. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja öljymäistä jäännöstä trituroitiin asetonin kanssa, jolloin saatiin 9,80 g raakaa yhdistettä I-1A. Haihduttamalla kuiviin suodos ja asetonipesunesteet saatiin vielä 2,95 g raakaa yhdistettä I-1A. Raaka-aineen kaksi erää yhdistet-15 tiin ja uutettiin 2 N HCl:lla (1 1 ja 0,5 1). Yhdistetyt uutteet adsorboitiin Diaion HP-20-hartsille (kolonni 1,5 1), jota eluoitiin vedellä ja 30-%:isella metanolin vesiliuoksella. Halutut fraktiot koottiin talteen ja haihdutettiin vakuumissa öljymäiseksi jäännökseksi, jota tri-20 turoitiin peräkkäin isopropanolin (200 ml) ja asetonin (200 ml) kanssa, jolloin saatiin 7,09 g vaaleankeltaista ' jauhetta. Tämä aine (6,90 g) liuotettiin veteen (20 ml) ja sitten sitä käsiteltiin kromatografoimalla kolonnissa, jossa oli PrepPAK-500/C18 -patruunatäytettä (90 ml), käyt-- . 25 täen eluenttina vettä ja 10-%:ista metanolin vesiliuosta.

Eluaattia kerättiin 20 ml:n fraktioin tarkkailemalla HPLCrn avulla [kolonni: Nucleocil SSC-ODS-262, 8 x 100 mm; liikkuva faasi: 0,01 m fosfaattipuskuri (pH 7,2)/CH3OH 90:10; osoittaminen: UV (254 nm)]. Fraktiot numero 4-10 30 yhdistettiin, haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja kylmä-kuivattiin, jolloin saatiin 2,28 g keltaista jauhetta [E/Z --- = 7/1; puhtaus 70 % (erä 1)]. Fraktiot numero 11 - 85 jat- kokäsiteltiin samalla tavalla kuin edellä on selostettu, : jolloin saatiin 3,27 g keltaista jauhetta [E/Z * 5/1; puh- 35 taus 70 % (erä 2)]. Osa erästä 1 (1,0 g) puhdistettiin 78 84830 kromatografoimalla uudelleen PrepPAK-500/C18 -patruunatäyt-teellä (90 ml). Kolonni eluoitiin peräkkäin vedellä ja 5-%:isella metanolin vesiliuoksella. Haluttua yhdistettä sisältävä eluaatti haihdutettiin kuiviin ja kylmäkuivat-5 tiin, jolloin saatiin 638 g (E/Z = 7:1; puhtaus 80 %) keltaista jauhetta. Toista erän 1 osaa (1,14 g) jatkokäsitel-tiin samalla tavalla, jolloin saatiin 880 mg (E/Z = 7/1; puhtaus 80 %) keltaista jauhetta. Nämä kaksi puhdistettua näytettä yhdistettiin ja osa (1,45 g) liuotettiin 1 N rik-10 kihappoon (5 ml). Liuos laimennettiin asetonilla (315 ml) sekoittaen. Kermanvärinen sakka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 1,48 g otsikon yhdistettä (I-1A; sulfaatti) (E/Z = 7/1; puhtaus 80 %), joka suli >185 °C:ssa (haj oten).

15 IR: KBr cm'1 V?aks 3380, 3000, 1765, 1675, 1630, 1535, 1390 ja 1115.

UV: ÄBaks (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (ε ) 236 (19 900) ja 291,5 (22 500). ^—«ςΗ NMR: D20 + NaHC03 δ ppm 2,36 (4H, br, N ), 3,15 (3H, s, 20 j- _ ' \ CH3±N ), 3,62 (5H, br, 2-H N ), 3,83 (1H, br, 2-H), -v- 4,13 (2H, d, J = 8 Hz, CH2N*), 4,22 (3H, s, 0CH3), 5,39 (1H, I’'·· d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,96 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,00 25 (1H, m, 3-CH=CH), 6,67 (1/8H, d, J = 10 Hz, 3-CH cis) ja 7,04 (7/8H, d, J = 16 Hz, 3-CH trans).

Esimerkki 31

N -j-C-CONH —|-f S N

30 n i \ N * © H X n CH=CH-CH2-N (CH3) 3 2 \ * » och3 COO^ I-lD *E/Z = 10/1 79 84 330 7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) -2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-trimetyyliammonio-l-propenyy-li]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1D) A. Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-5 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-(3-trimetyyli- ammonio-l-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (XII-ID; jodidi)

Liuokseen, jossa oli 13,0 g (19 mmol) difenyylimetyyli-7- [2-( 5-amino-l, 2, 4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-10 iminoasetamido] -3-(3-jodipropenyyli )-3-kefeemi-4-karboksy-laattia (IX-1; valmisteesta n:o 10) 38 ml:ssa kuivaa etyyliasetaattia, lisättiin 1,75 ml (19,1 mmol) 1,1 N trime-tyyliamiinin etyyliasetaattiliuosta -5 °C:ssa ja seosta sekoitettiin tunnin ajan -5 °C:ssa. Muodostunut sakka suo-15 datettiin erilleen, pestiin hyvin CHCl3:lla ja kuivattiin, jolloin saatiin 12,5 g (88 %) otsikon yhdistettä (XII-1D) jodidina.

IR: KBr cm'1 v'7maks 3300, 1765, 1720 ja 1665.

UV: ^make. (C2H5OH) nm ( & ) 300 (18 400).

20 B. Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-(3-trimetyyli-ammonio-l-propenyyll)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (XII-1D; kloridi)

Jodidi (XII-1D; 12,5 g) liuotettiin 60 mlraan CH30H-25 /asetoni-liuosta (1:1) ja laskettiin ioninvaihtohartsiko- lonnin läpi [IRA-410 (Cl'); 125 ml]. Kolonni eluoitiin 300 ml:11a CH3OH/asetoni-liuosta (1:1) ja eluaatti haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja trituroitiin 300 ml:n kanssa isopropyyli/eetteri-liuosta, jolloin saatiin 10,4 g (91 %) 30 kvaternaarista suolaa (XII-1D; kloridi).

IR: KBr cm'1 3300, 1765, 1710 ja 1665.

UV: ABaks. (C2H5OH) nm ( £ ) 298 (15 100).

so 8 4 830 C. 7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tladiatsol-3-yyli ) -2-metoksi-iminoasetamido]-3-[3-trimetyyliammonio-l-propenyy-li]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1D; sulfaatti) (E-lsomeeri) 5 Liuokseen, jossa oli 10,4 g (16,9 mmol) yhdistettä XII-1D (kloridia) 20,8 ml:ssa 85-%:ista muurahaishappoa, annettiin seistä 3 tuntia huoneen lämpötilassa ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä käsiteltiin 210 ml:n kanssa isopropanolia ja sakka suodatettiin erilleen. 10 Kiinteää ainetta (120,1 g) trituroitiin 210 ml:n kanssa vettä ja neutraloitiin natriumvetykarbonaatilla. Suspensio suodatettiin ja suodos kromatografoitiin HP-20-kolonnissa (300 ml), jota eluoitiin peräkkäin vedellä (1 000 ml), 10-%: isella CH3OH:lla (200 ml) ja 30-%:isella CH30H:lla 15 (150 ml). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot yhdistet tiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin käänteisfaasikromatografiän avulla. Kolonni oli täytetty PrepPAK-500/C18 -patruunasta saadulla täytteellä (Waters; 200 ml). Eluoimalla peräkkäin vedellä (600 ml) 20 ja 30-%:isella CH30H:lla (200 ml) ja haihduttamalla sen jälkeen haluttua tuotetta sisältävät fraktiot kuiviin, saatiin 2,52 g (18 %) otsikon yhdistettä. Liuos, jossa oli kahtaisionituotetta (1,5 g) 1 N H2S04:ssa (5 ml), lisättiin annoksittain 300 ml:aan asetonia ja muodostunut sakka suo-: : 25 datettiin erilleen ja kuivattiin. Yhdisteen I-1D sulfaatin saanto oli 1,42 g (80 %). Suhde E/Z oli suunnilleen 10/1 HPLCrn perusteella.

IR: KBr cm'1 V>nake 3380, 1765 ja 1665.

UV: Am(lke (fosfaattipuskuri, pH 7) nm ( £ ) 237 (19 500) ja 30 293 (22 400).

NMR: D20 δ ppm 3,25 (9H, s, N*-CH3), 3,94 (2H, s, 2-H), 4,14 (2H, d, J = 7 Hz, CH2N*), 4,23 (3H, s, 0-CH3), 5,42 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 6,00 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,23 (1H, d - t, J = 7 & 16 Hz, 3-CH=CH) ja 7,23 (1H, d, J = 16 Hz, . ’ 35 3-CH).

81 84830

Esimerkki 32 N--j-C-CONH -|-f S ^ 5 H2N-^S"N O Cli*CH-CH ®/^>- CONH2 0CH3 COO®

I-1H *E

7- [2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-metoksi-10 iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-1- propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (I-1H) (E-isomeeri)

Seokseen, jossa oli 7-amino-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio ) -1- (E) -propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-15 hydrokloridia (XXII-H; 397 mg, 1 mmol) ja NaHC03:a (168 mg, 2 mmol) vesipitoisessa DMF:ssa (vettä 3,5 ml ja DMF:a 7,5 ml), lisättiin bentsotriatsol-l-yyli-2-( 5-amino-l, 2,4-tia-diatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetaattia (479 mg, 1,5 mmol) (valmisteesta n:o 28). Seosta sekoitettiin huoneen 20 lämpötilassa 3,5 tuntia. Reaktioseoksen pH säädettiin arvoon 3 - 4 3 N HCl:lla ja seos laimennettiin 200 ml:11a asetonia, jolloin saatiin sakkaa, joka koottiin talteen suodattamalla. Raaka tuote liuotettiin pieneen tilavuus-määrään THF:n vesiliuosta ja liuoksen pH säädettiin arvoon 25 6,8 NaC03:11a, käsiteltiin värinpoistohiilellä, konsentroi tiin noin 1 ml:ksi ja siemeneksi lisättiin muutama palanen kiteistä yhdistettä I-1H. Yön yli seisottamisen jälkeen kiteinen sakka kerättiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä I-1H (kahtaisionimuotoa). Saan-30 to 83 mg (16 %). Sp. >185 °C (hajoten). Tämän tuotteen fy-sikaalis-kemialliset arvot olivat identtiset esimerkin 10 yhdisteen arvojen kanssa.

82 84830

Valmistus 1

Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli)-2-metoksi-imlnoasetamido]-3-kloorimetyyli- 3-kefeemi-4-karboksylaatti (IV-1) 5 Sekoitettuun suspensioon, jossa oli 2-(5-amino- l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoetikkahappoa (111-1)(2,1 g, 10 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (50 ml), lisättiin PCl5:a (2,09 g, 10 mmol) -30 °C:ssa ja seosta sekoitettiin 20 minuuttia -15 - -20° C:ssa. Edellä mainittuun 10 happokloridiliuokseen lisättiin -30 °C:ssa liuos, jossa oli difenyylimetyyli-7-amino-3-kloorimetyyli-3-kefeemi-4-karb-oksylaattihydrokloridia (II) (4,5 g, 10 mmol) CH2Cl2:ssa (50 ml), jossa oli N,0-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia (10 g, 50 mmol). Tunnin sekoittamisen jälkeen -10 °C:ssa 15 seos konsentroitiin CH2Cl2:n poistamiseksi ja laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml). Seos pestiin peräkkäin 10-%:isella NaHC03:n vesiliuoksella (2 x 40 ml), vedellä (2 x 20 ml) ja suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin MgS04:lla. Liuotin haihdutettiin pois vakuumissa ja muodos-20 tunut öljymäinen jäännös (10 g) liuotettiin CHCl3:een (20 ml) ja kromatografoitiin silikageelillä (Wako gel C-200; 100 g, jossa oli 10 ml 1/1,5 M fosfaattipuskuria, pH 7) käyttämällä 1 - 3-%:ista CH3OH/CHCl3-seosta. Otsikon yhdistettä sisältävät fraktiot haihdutettiin kuiviin, jolloin 25 saatiin 5,7 g (95 %) yhdistettä IV-1 keltaisena amorfisena jauheena. Sp. >140 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 3300, 1780, 1720, 1680, 1620.

UV: <^-ak.. nm ( £ ) 245 (1 800) ja 280 (9 900).

NMR: DMSO-d6 δ ppm 3,53 (2H, ABq, 2-H), 3,94 (3H, s, 0CH3), : 30 4,42 (2H, s, 3-CH2), 5,22 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,92 (1H, d - d, J = 4,5 & 6, 7-H), 6,93 (1H, s, CHPh2), 7,36 (10H, m. Ph-H), 8,1 (2H, br - s, NH2), 9,58 (1H, d, J = 6, 7-NH).

83 8 4 8 3 0

Valmistus 2

Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-jodimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaatti (V-l) 5 Seosta, jossa oli yhdistettä IV-1 valmistuksesta 1 (5,7 g, 9,5 mmol) ja Nai:a (4,3 g, 29 mmol) kuivassa asetonissa (50 ml), sekoitettiin 5 minuuttia huoneen lämpötilassa. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja saatua öljyä ravisteltiin etyyliasetaatin (100 ml) ja veden (10 ml) 10 seoksen kanssa. Orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin peräkkäin 10-%:isella (paino/tilavuus) natriumtiosulfaat-tiliuoksella ja suolaliuoksella. Kuivaamisen jälkeen etyyliasetaatti poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin 6,1 g (93 %) otsikon yhdistettä (V-l) keltaisena amorfisena jau-15 heena, joka suli >120 °C:ssa (hajoten).

IR: KBr cm’1 Vnakg 3300, 1780, 1725, 1680 ja 1620.

UV: Amaks (EtOH) nm (£ ) 245 (17 000) ja 282 (12 000). NMR: DMS0-d6 δ ppm 3,.72 (ABq, 2-H), 3,94 (3H, s, 0CH3), 4,23 (2H, s, 3-CH2), 5,21 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,89 (1H, 20 d - d, J = 4,5 & 6, 7-H), 6,94 (1H, s, CHPh2), 7,35 (10H, m, Ph-H), 8,12 (2H, br - s, NH2) ja 9,65 (1H, d, J = 6, 7-NH).

Valmistus 3

Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-25 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-trifenyylifos- foniometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaattijodidi (VI-1)

Seosta, jossa oli yhdistettä V-l valmistuksesta 2 (690 mg, 1 mmol) ja trifenyylifosfiinia (786 mg, 3 mmol) 30 etyyliasetaatissa (20 ml), sekoitettiin yön ajan huoneen lämpötilassa. Erottunut kiinteä aine koottiin talteen, pestiin etyyliasetaatilla (2 x 10 ml) ja kuivattiin, jolloin saatiin 950 mg (100 % fosfoniumjodidia VI-1). Sp.

186 °C (hajoten).

35 IR: KBr cm'1 3300, 1780, 1710, 1680 ja 1610.

84 84830 UV: Amaka (EtOH) nm ( ε ) 268 (15 000), 275 (13 000) ja 300 (7 300).

NMR: DMSO-d6 6 ppm 3,52 (2H, br - s, 2H), 3,94 (3H, s, 0CH3), 5,34 (1H, d, J = 4,5, 6-H), 5,9 (1H, m, 7-H), 6,3 5 (1H, s), 7,3 (10H, m, Ph-H) ja 7,8 (15H, m, Ph-H).

Valmistus 4

Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3- [ (trifenyyli-fosforanylideeni )metyyli] -3-kefeeml-4-karboksylaat-10 ti (VII-1)

Seosta, jossa oli yhdistettä VI-1 valmistuksesta 3 (952 mg, 1 mmol), Aberlite IRA-410:tä (0T'~muoto; 500 mg) ja 1 N NaOH:ä (4 ml) CH2Cl2:ssa (10 ml), sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Seos suodatettiin ja ero-15 tettu orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:llä ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Saatua öljyä trituroitiin etyyliasetaatin kanssa ja saatu keltainen sakka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 740 mg (90 %) otsikon yhdistettä VII-1. Sp. >180 °C (hajoten).

20 IR: KBr cm'1 3400, 1750 ja 1630.

UV: Aeakii (EtOH) nm ( & ) 268 (12 000), 276 (10 000) ja 384 (23 000).

Valmistus 5

Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-25 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamldo]-3-(3-kloori-1- propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (VIII-1)

Liuokseen, jossa oli yhdistettä VII-1 valmistuksesta 4 (6,9 g, 8,4 mmol), lisättiin MgS04:a (3 g) ja .... 30 40-%:ista klooriasertaldehydiä (810 mg, 8,4 mmol). Seosta sekoitettiin 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa ja sitten suodatettiin. Suodos eluoitiin silikageelillä (Wako gel C-200; 100 g, jossa oli 10 ml 1/1,5 M fosfaattipuskuria) kolonnissa käyttämällä CHCl3:a ja CHCl3:a, jossa oli 35 CH30H:a. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot (0,5 - 1 % 85 84S30 CH30H/CHC13) haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 1,6 g (30 %) otsikon yhdistettä VIII-1 keltaisena amorfisena jauheena, joka oli Z- ja E-isomeerien seosta klooripropenyyliosan suhteen (Z/E = 2/1, NMR:n perusteel-5 la).

IR: KBr cm"1 v?meke 3300, 1780, 1725, 1680 ja 1620.

UV: cA„kB. (EtOH) nm (£ ) 240 (20 000) ja 286 (12 000). NMR: DMS0-d6 + D20 6 ppm 3,56 & 3,8 (m, 2-H), 3,94 (3H, s, 0CH3), 4,16 (d, J = 7,5, CH2C1), 5,26 (1H, d, J = 4,5, 10 6-H), 5,87 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,28 (2/3H, d, J = 11, 3-CH cis-H), 6,72 (1/3H, d, J = 16, 3-CH trans-H), 6,81 (2/3H, s, CHPh2), 6,92 (1/3H, s, CHPh2) ja 7,4 (10H, m, Ph-H).

Valmistus 6 15 Difenyylimetyyli-7-bentsylldeeniamino-3- (trifenyy- lifosforanylideeni )metyyli] —3-kefeemi-4-karboksy-laatti (XVI)

Liuokseen, jossa oli difenyylimetyyli-7-bentsyli-deeniamino-3-[(trifluorifenyylifosfonio)metyyli]-3-kefee-20 mi-4-karboksylaattijodidia (XV) [valmistettu menetelmän mukaisesti, joka on julkaistu JP-patenttihakemuksessa (Ko-kai) 56-86187 (31.7.1981)] (60 g, 70 mmol) CH2Cl2:ssa (350 ml) lisättiin 1 N NaOH:ä (140 ml) Amberlite IRA-410:tä (0H"-muotoa; 35 g) 5 °C:ssa. Seosta sekoitettiin tunnin 25 ajan 5 °C:ssa ja suodatettiin. Orgaaninen kerros erotet- ____ tiin, kuivattiin MgS04:lla, konsentroitiin tilavuudeltaan noin 100 ml:ksi ja seostettiin etyyliasetaatilla (500 ml). Muodostunut keltainen kiinteä aine koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 48 g 30 (94 %) otsikon yhdistettä XVI, joka suli 195 - 198 °C:ssa (hajoten).

IR: KBr cm'1 1770 ja 1620.

86 84330

Valmistus 7

Difenyylimetyyli-7-bentsylideeniamino-3-(3-kloori- 1-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti(XVIII) Sekoitettuun liuokseen, jossa oli yhdistettä XVI 5 valmistuksesta 6 (2,9 g, 4 mmol) CH2Cl2:n (40 ml) ja veden (10 ml) seoksessa, lisättiin vedetöntä klooriasetaldehydiä (800 mg) huoneen lämpötilassa. Seokseen lisättiin vielä 800 mg klooriasetaldehydiä kolmena eränä tunnin aikana ja pitämällä seoksen pH arvossa 6-9 lisäämällä 1 N NaOH:ä. 10 15 minuutin kuluttua vesikerros poistettiin ja orgaaninen kerros kuivattiin MgS04:lla. Haihduttamalla liuotin pois saatiin punaista öljyä, joka liuotettiin etyyliasetaatin ja isopropyylieetterin seokseen (1:2; 80 ml). Liuos pestiin peräkkäin kyllästetyllä NaHC03:n vesiliuoksella (10 15 ml) ja vedellä (10 ml). MgS04:lla kuivaamisen jälkeen ja poistamalla liuotin, saatiin 3,3 g keltaista öljyä. Liuos, jossa öljy oli CH2Cl2:ssa (50 ml), suodatettiin silikagee-lin avulla (12 g; Wako gel C-200), jossa oli 1/1,5 M fosfaattipuskuria (1,2 ml; pH 6,4) ja silikageeli pestiin 20 CH2Cl2:lla (50 ml). Suodos ja pesuneste yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännöstä trituroitiin n-heksaanin kanssa, jolloin saatiin 1,7 g (80 %) otsikon yhdistettä (XVII) keltaisena jauheena. NMR-spektri osoitti, että klooripropenyyliosa oli Z-konfiguraation mukainen. Sp. >50 25 °C (hajoten).

IR: KBr cm’1 s?Baka< 3400, 1775, 1720 ja 1630.

uv: A Baka. (EtOH) nm (£) 253 (11 000), 258 (11 000), 265 (10 000), 273 (8 300), 281 (7 000) ja 290 (6 300).

NMR: DMSO-d6 δ ppm 3,63 (2H, br - s, 2H), 4,0 (2H, m, 30 CH2-C1), 5,42 (2H, m, 6-H S 3-CH=CH), 5,72 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,27 (1H, d, J = 11, 3-CH), 6,85 (1H, s, CHPh2) ja 7,33 (10H, m, Ph-H).

Vedettömän klooriasetaldehydin valmistus Vedetöntä kalsiumkloridia lisättiin sekoittaen , : 35 jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli 50-%:ista klooriasetal- 87 84830 dehydin vesiliuosta (50 ml), seoksen erottuessa kahdeksi kerrokseksi. Klooriasetaldehydihydraattikerros [R. P. Kurkju ja E. V. Brown; J. Amer. Chem. Soc. 74 (1952), s. 5778] (ylempi kerros) erotettiin ja laimennettiin CHCl3;lla 5 (100 ml), sekoitettiin MgS04:n (20 g) kanssa, lämmitettiin kiehuttaen 5 minuuttia ja suodatettiin. Liuotin ja vesi poistettiin tislaamalla atseotrooppisesti (kp. 56 - 64 °C) [S. Trippett ja D. M. Walker; J. Chem. Soc. (1961), s. 1266], ja jäännös tislattiin, jolloin saatiin vedetöntä 10 klooriasetaldehydiä [H. O. House, V. K. Jones ja G. A. Frank; J. Org. Chem. 29 (1964), s. 3327], kp. 70 - 82 °C/760 mm.

IR: kalvo cm"1 ^maks 1720.

Valmistus 8 15 Difenyylimetyyli-7-amino-3-(3-kloori-1-propen-l- yyll)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (XVIII)

Liuos, jossa oli yhdistettä XVII valmistuksesta 7 (180 mg, 9,34 mmol) etyyliasetaatissa (10 ml), lisättiin 5 °C:ssa liuokseen, jossa oli Girard Reagent T:tä [(karboksi-20 metyyli)trimetyyliammoniumkloridihydratsidia] (251 mg, 1,5 mmol) CH30H:ssa (10 ml), jossa oli etikkahappoa (0,25 ml). 30 minuutin sekoittamisen jälkeen 5 °C:ssa seos haihdutettiin kuiviin CH3OH:n poistamiseksi ja sitten lisättiin etyyliasetaattia (20 ml). Etyyliasetaattiliuos pestiin pe-25 räkkäin vedellä (2 x 5 ml), kyllästetyllä NaHC03:n vesi-liuoksella (5 ml) ja suolaliuoksella (5 ml) ja kuivattiin MgS04:lla. Haihduttamalla liuotin pois saatiin 145 mg (97 %) otsikon yhdistettä XVIII (Z-isomeeria) keltaisena jauheena. Sp. >100 °C (hajoten).

30 IR: KBr cm’1 v>eak. 3400, 1770 ja 1720.

UV: A„ake. (EtOH) nm ( £ ) 252 (3 700), 258 (3 800), 260 (4 000), 274 (4 000) ja 285 (4 000).

88 84 830

Valmistus 9

Difenyyllmetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-(3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (VIII-1) 5 Seosta, jossa oli 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3- yyli)-2-metoksi-iminoetikkahappoa (III-l) (10,1 g, 50 mmol) ja PCl5:a (10,4 g, 50 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (100 ml), sekoitettiin -7 - -15 °C:ssa 2 tuntia. Kirkas liuos kaadettiin n-heksaaniin (500 ml), jolloin saatiin sakkaa. 10 Orgaaninen kerros hylättiin dekantoimalla ja jäljelle jäänyttä kiinteää ainetta trituroitiin n-heksaanin (100 ml) kanssa. Keltainen sakka koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 12,5 g (99 %) hap-pokloridia, joka suli 80 °C:ssa (hajoten).

15 IR: Nujol cm'1 v^aks 1770.

Happokloridi (25 mg, 0,1 mmol) lisättiin huoneen lämpötilassa sekoittaen liuokseen, jossa oli yhdistettä XVIII (Z-isomeeria) valmisteesta n:o 8 (44 mg, 0,1 mmol) kuivassa CH2Cl2:ssa (5 ml). 30 minuutin kuluttua seos haih-20 dutettiin kuiviin vakuumissa ja laimennettiin etyyliasetaatilla (20 ml) ja kyllästetyllä NaHC03:n vesiliuoksella (5 ml). Orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä NaHC03:n vesiliuoksella (5 ml), suolaliuoksella (5 ml), 10-%:isella HCl:lla (5 ml) ja haihdutettiin sitten kuiviin, jolloin 25 saatiin tuotetta keltaisena vaahtomaisena aineena. Vaahto-mainen aine puhdistettiin kromatografoimalla silikageeli-kolonnissa (Wako gel C-200; 1 g, jossa oli 0,1 ml 1/1,5 M fosfaattipuskuria, pH 6,4) eluoiden CH2Cl2/CH2OH-seoksella (100:1), jolloin saatiin 31 mg (50 %) otsikon yhdistettä 30 VIII-1 (Z-isomeeria) keltaisena jauheena. Sp. >150 °C (ha-joten).

IR: KBr cm'1 v*mak8 3400, 1775, 1720, 1675 ja 1630.

UV: Afflak.. (EtOH) nm ( ε ) 240 (17 000) ja 280 (10 000).

89 84830 NMR: DMS0-d6 6 ppm 3,6 (2H, m, 2-H), 3,92 (3H, s, 0-CH3), 4,0 (2H, m, CH2C1), 5,27 (2H, m, 6-H & 3-CH=CH), 5,83 (1H; d-d, J = 4,5 & 10, 7-H), 6,25 (1H; d, J = 11, 3-CH), 6,83 (1H, s, CHPh2), 7,33 (10H, m, Ph-H), 8,0 (2H, br - s, 5 NH2) ja 9,57 (1H, d, J = 10, 7-NH).

Valmistus 10

Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido3-3-(3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti (IX-1) 10 Liuosta, jossa oli yhdistettä VIII-1 valmistuksesta 5 (Z/E = 2/1; 480 mg, 0,77 mmol) kuivassa asetonissa (10 ml), jossa oli Nai:a (346 mg, 2,3 mmol), sekoitettiin 30 minuuttia ympäristön lämpötilassa. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Muodostunut öljy jaettiin etyyli-15 asetaattiin (50 ml) ja veteen (10 ml) liukeneviin osiin. Ylempi kerros pestiin peräkkäin 10-%:isella (paino/tila-vuus) natriumtiosulfaatin vesiliuoksella (10 ml) ja suolaliuoksella (10 ml) ja kuivattiin MgS04:lla. Haihduttamalla liuotin pois saatiin 540 mg (98 %) otsikon yhdistettä 20 IX-1 (Z/E = 1/1) punertavana amorfisena kiinteänä aineena, joka suli >120 °C:ssa (hajoten).

IR: KBr cm'1 Vmake 3300, 1780, 1720, 1680 ja 1620.

UV: Amaks. (EtOH) nm (£) 240 (21 000) ja 290 (12 000).

NMR: DMSO + D20 δ ppm 3,67 (2H, m, 2-H), 5,29 (1H, d, J = 25 4,5, 6-H), 5,95 (1H, d, J = 4,5, 7-H), 6,27 (1/2H, d, J = 11, 3-CH cis), 6,72 (1/2H, d, J = 16, 3-CH trans), 6,87 & 6,96 (kumpikin 1/2H, s, CHPh2) ja 7,4 (10H, m, Ph-H). Valmistus 11

Dlfenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-30 3-yyll)-2-metoksi-iminoasetamldo]-3-(3-jodi-1- propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaattl (IX-1) Seosta, jossa oli yhdistettä VIII-a (Z-isomeeria valmistuksesta 9) (5,6 g, 9 mmol) ja Nal:a (4 g, 27 mmol) kuivassa asetonissa (100 ml), sekoitettiin 1,5 tuntia huo-35 neen lämpötilassa. Seos haihdutettiin kuiviin ja saatu 90 84 830 öljy laimennettiin etyyliasetaatilla (90 ml). Etyyliase-taattikerros pestiin 10-%:isella (paino/tilavuus) natrium-tiosulfaatin vesiliuoksella (10 ml) ja vedellä (10 ml). Poistamalla kuivattu (MgS04:lla) liuotin, saatiin keltaista 5 öljyä, joka muuttui kiinteäksi trituroitaessa isopropyyli-eetterin kanssa. Suodattamalla sakka erilleen saatiin 4,3 g (67 %) otsikon yhdistettä IX-1 E-isomeerina. Sp. >165 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 Vmaks 3400, 1780, 1725, 1680 ja 1610.

10 UV: Ληβκβ. (EtOH) nm (£) 240 (18 000) ja 297 (11 000).

NMR: DMS0-d6 + Dz0 δ ppm 3,90 (3H, s, 0CH3), 5,25 (1H, m, 6-H), 5,95 (1H, m, 7-H), 6,72 (d, J = 16, 3-CH trans), 6,96 (1H, s, CH-Ph2) ja 7,4 (10H, m, Ph-H).

Valmistus 12 15 Bentshydryyli-7-amino-3-[3-kloori-l-propen-l-yyli] - 3-kefeemi-4-karboksylaatti (Z-lsomeeri) (XVIII) Yhdiste XVIII on yleinen reaktiokaavioissa Ib ja le käytetty väliyhdiste.

A. Bentshydryyl i-7-bentsylideeniamlno-3-trifenyylifos- 20 foniometyyli-3-kefeemi-4-karboksylaattikloridi(XV)

Suspensioon, jossa oli bentshydryyli-7-amino-3-kloorimetyyli-3-kefeemi-4-karboksylaattihydrokloridia (II hydrokloridi) (200 g, 0,44 mol) CH2Cl2:ssa (940 ml), lisättiin huoneen lämpötilassa 1 N Na0H:ä (440 ml). Seosta 25 ravisteltiin 10 minuuttia ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaniseen kerrokseen lisättiin MgS04:a (75 g) ja bentsal-dehydiä (51 g, 0,48 mol) ja seoksen annettiin seistä 3 tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja liukenematon aines pestiin CH2Cl2:lla (200 ml). Yhdistettyihin suodokseen ja 30 pesunesteisiin lisättiin trifenyylifosfiinia (126 g, 0,48 mol). Seos konsentroitiin noin 400 ml:ksi ja annettiin seistä 4 päivää. Muodostunut viskoosinen öljy laimennettiin etyyliasetaatilla (1 1) ja trituroitiin otsikon yhdisteen XV erottamiseksi vaaleankeltaisena kiteisenä jau-35 heena, joka koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin 9i 84830 vakuumissa. Saanto 322 g (96 %). Sp. 185 - 190 °C (hajoten) .

IR: KBr cm"1 ^makB 1780, 1720 ja 1630.

UV: ^makB. (CH2C12) nm ( £ ) 260 (24 100).

5 B. Bentshydryyll-7-bentsylideenlamlno-3-[(trifenyyll- fosforanylideenl )metyyli] -3-kefeemi-4-karboksylaat-ti (XVI)

Seosta, jossa oli yhdistettä XV (322 g, 0,42 mol) ja 5 N Na2C03:a (252 ml) CH2Cl2:ssa (1,6 1), sekoitettiin 10 voimakkaasti 15 minuuttia huoneen lämpötilassa. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin MgS04:lla ja konsentroitiin tilavuudeltaan noin 500 ml:ksi. Konsentraatti lisättiin asetoniin (1 1) sekoittaen, jolloin saatiin vaaleankeltaista kiteistä jauhetta, joka koottiin talteen suodatta-15 maila, jolloin saatiin 237 g (78 %) yhdistettä XVI, joka suli 195 - 198 °C:ssa (hajoten).

IR: KBr cm*1 V>make 1770 ja 1620.

UV: Amake. (CH2C12) nm ( £ ) 254 (23 000) ja 389 (22 000).

NMR: CDC13 δ ppm 2,56 & 3,16 (2H, ABq), 5,00 (lh; d, J = 4 20 Hz), 5,23 (1H, d, J = 4 Hz), 5,47 (1H, d, J = 22 Hz), 6,95 (1H, s), 7,2 - 7,8 (30H, m) ja 8,55 (1H, s).

C. Bentshydryyli-7-amino-3-[kloori-1-propen-l-yyli] - 3-kefeemi-4-karboksylaattihydrokloridi (z-isomeeri) (XVIII; hydrokloridi) 25 Kiehuvaan liuokseen, jossa oli yhdistettä XVI (214 ‘ g, 0,294 mol) ja N,0-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia (40 ml, 0,15 mol) kuivassa CH2Cl2:ssa (2,9 1), lisättiin tipoittaan ja sekoittaen 50-%:inen liuos, jossa oli kloori-asetaldehydiä (93 g, 0,59 mol) CHCl3:ssa 15 minuutin ku-30 luessa. Seoksen seistyä 30 minuuttia se haihdutettiin kui-viin. Jäännösöljyyn lisättiin CH2Cl2:a (1,5 1), Grignard Reagent T:tä (99 g, 0,59 mol) ja 10-%:ista HCl:n vesi-liuosta (300 ml) ja seosta sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Orgaaninen kerros pestiin vedellä (200 35 ml) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella (200 ml), kuivattiin 92 84830

MgS04:lla, käsiteltiin puuhiilen (5 g) kanssa ja suodatettiin. Suodos jäähdytettiin -10 °C:seen ja sitä käsiteltiin 1 N HClrlla CH3OH:ssa (300 ml). Seosta sekoitettiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa ja konsentroitiin noin 300 5 mlrksi. Konsentraatti laimennettiin etyyliasetaatilla (400 ml) ja siemeneksi lisättiin muutama kide XVIII-hydroklori-dia. 2 tunnin kuluttua erottuneet kiteet koottiin talteen suodattamalla, pestiin etyyliasetaatilla (200 ml) ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 74 g (53 %) otsikon 10 yhdistettä XVIII hydrokloridina, joka suli >185 °C:ssa (hajoten). Vaaleankeltaisia neulasia.

IR: KBr cm'1 \?aks 2830, 1780 ja 1720.

UV: λ (EtOH) nm (£) 286 (8 800).

NMR: DMS0-d6 δ ppm 3,73 (2H, br, s, 2-H), 3,97 (2H, m, 15 CH2C1), 5,22 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-h), 5,37 (1H, d, J = 4,5

Hz, 7-H), 5,77 (1H, m, 3-CH=CH), 6,45 (1H, d, J = 11 Hz, 3-CH), 6,88 (1H, s, CHPh2) ja 7,33 (10H, br, s, Ph-H). Analyysi yhdisteelle C23H21N203SC1 »HCl laskettu: C 57,87 H 4,65 N 5,87 S 6,72 Cl 14,85 20 saatu: C 57,62 H 4,53 N 5,70 S 6,64 Cl 14,89

Valmistus 13

Bentshydryyll-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetamido]-3-[-kloori-1-propen-l-yyll]-3-kefeemi-4-karboksylaatti 25 (Z-isomeeri) (VIII-1)

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli yhdistettä XVIII (Z-isomeeria) (20 g, 42 mmol) CH2Cl2:ssa (420 ml), jossa oli N,0-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia (34 ml, 125 mmol) lisättiin 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-30 iminoasetyylikloridihydrokloridia (15,2 g, 59 mmol) kolme-: na eränä 40 minuutin aikana -10 - 0 °C:ssa. Seosta sekoi- tettiin 30 minuuttia 0-5 °C:ssa ja haihdutettiin kuiviin ·.. vakuumissa. Jäljelle jäänyt ruskea öljy liuotettiin etyy liasetaattiin (420 ml) ja liuos pestiin peräkkäin kylläs-35 tetyllä NaHC03:n vesiliuoksella (3 x 15 ml), kyllästetyllä 93 84 830

NaClrn vesiliuoksella (15 ml) ja konsentroitiin tilavuudeltaan noin 50 ml:ksi. Konsentraattiin lisättiin n-hep-taania (200 ml), jolloin saatiin 28,5 g (puhtaus 90 %) otsikon yhdistettä VIII-1 (Z-isomeeria) värittömänä jau-5 heena. Sp. >150 °C (hajoten).

IR: KBr cm "a V>roake 3400, 1780, 1720, 1680 ja 1620.

UV: ABake. (EtOH) nm (1) 240 (20 000) ja 283 (12 000).

NMR: asetoni-d6 6 ppm 3,6 (2H, m, 2-H), 3,95 (3H, s, 0CH3), 4,0 (2H, m, CH2C1), 5,32 (1H, d, J = 4,5 Hz, 6-H), 5,62 10 (1H, m, 3-CH=CH), 6,03 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 6,32 (1H, d, J = 11 Hz, 3-CH), 6,87 (1H, s, CHPh2), 7,33 (10H, br, s, Ph-H).

Valmistus 14

Bentshydryyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-15 yyli )-2-metoksi-iminoasetamido] -3- [3-jodl-l-propen- 1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (E-isomeeri) (IX-1)

Seosta, jossa oli yhdistettä VIII-1 (Z-isomeeria) (28,5 g; puhtaus 90 %) ja natriumjodidia (19 g) kuivassa 20 asetonissa (420 ml), sekoitettiin 10 minuuttia huoneen lämpötilassa ja annettiin seistä 5 °C:ssa 2 tuntia. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia (420 ml) ja 10-%:ista (paino/tilavuus) natriumtiosulfaatin vesiliuosta (30 ml) ja seosta ravis-\ 25 teltiin. Orgaaninen kerros pestiin vedellä (30 ml), kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin tilavuudeltaan noin 50 ml:ksi. Konsentraatti laimennettiin n-heptaanilla (200 ml), jolloin saatiin 30,6 g (puhtaus 95 %) otsikon yhdistettä IX-1 (E-isomeeria) keltaisena jauheena, joka suli 30 >120 °C:ssa (hajoten).

: IR: KBr cm'1 V>,ak. 3400, 1780, 1725, 1680 ja 1620.

UV: λββ1ί,. (EtOH) nm ( £,) 306 (15 000).

NMR: asetoni-d6 δ ppm 3,71 (2H, m, 2-H), 3,97 (3H, s, 0CH3), 4,0 (2H, d, J = 8 Hz, CH2I), 5,26 (1H, d, J = 4,5 : : 35 Hz, 6-H), 6,03 (1H, d - d, J = 4,5 & 8 Hz, muuttuvat dub- 94 8 4 830 leteiksi, J = 4,5 Hz D20:n vaikutuksesta, 7-H), 6,32 (1H, d - t, J = 15 & 8 Hz, 3-CH=CH), 6,79 (1H, d, J = 15 Hz, 3-CH), 6,98 (1H, s, CHPh2), 7,35 (10H, m, Ph-H), 7,63 (2H, br, s, katosi D20:n vaikutuksesta, NH2) ja 8,52 (1H, d, J 5 =8 Hz, katosi D20:n vaikutuksesta, 7-H).

Valmistus 15

Bentshydryyll-7-[2-(5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyll )-2-metoksi-iminoasetamido3-3-[3-(4-karbamoyy- li-l-pyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karb-10 oksylaattijodidi (E-isomeeri) (XII-1H)

Suspensioon, jossa oli yhdistettä IX-1 (E-isomee-ria) (30,5 g) ja isonikotiiniamidia (26 g, 212 mmol) CH3CN:.ssa (120 ml), lisättiin CH30H:a (100 ml), kunnes seos tuli kirkkaaksi. Liuosta sekoitettiin 2 tuntia typpi-15 atmosfäärin suojaamana huoneen lämpötilassa ja konsentroitiin noin 100 ml:ksi vakuumissa. Jäljelle jäänyttä puoli-kiinteätä ainetta trituroitiin isopropyylieetterin (200 ml) kanssa. Liuotin poistettiin dekantoimalla ja jäljelle jäänyt keltainen jauhe pestiin isopropyylieetterin ja 20 CH3OH:n seoksella (3:1; 120 ml), Jauhe koottiin talteen suodattamalla ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 36 g (puhtaus HPLC:n perusteella arvioiden 75 %) otsikon yhdistettä XII-1H (E-isomeeria) vaaleankeltaisena jauheena, joka suli >150 °C:ssa (hajoten).

25 IR: KBr cm'1 3300, 1780, 1720, 1680 ja 1620.

UV: <Aeake (EtOH) nm (E1,Hlai) 282 (170).

NMR: DMS0-d6 δ ppm 3,72 (2H, m, 2-H), 3,90 (3H, s, 0CH3),

5,25 (3H, m, 6-H & CH2N*), 5,9 (1H, d - d, J = 4,5 & 8 Hz, muuttui dubleteiksi, J = 4,5 Hz lisättäessä D20:ta, 7-H), 30 6,35 (1H, m, 3-CH=CH), 6,89 (1H, s, CHPh2), 6,9 (1H, d, J

- 16 Hz, 3-CH), 7,35 (10H, m, Ph-H), 8,06 (1H, br, s, katosi DzO:n vaikutuksesta, NH2), 8,21 (2H, br, s, katosi lisättäessä D20:ta, NH2), 8,36 & 9,07 (kumpikin 2H, d, J * 6 Hz, Py-H) ja 9,57 (1H, d, J = 8 Hz, katosi lisättäessä 35 D20:ta, 7-NH).

95 84830

Valmistus 16

Benshydryyli-7-bentsylideeniamino-3- [3-kloori-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (XVIII) (Z-isomeeri 5 Jääkylmään seokseen, jossa oli kiteistä 7-amino- kefeemi-väliyhdistettä XVIII (Z-isomeeria) (13,4 g, 28 mmol) ja bentsaldehydiä (3,3 g, 31 mmol) etyyliasetaatissa (150 ml), lisättiin tipoittain 20 minuutin kuluessa 0,5 N natriumhydroksidia (56 ml, 28 mmol) pitäen reaktioseoksen 10 lämpötila 10 °C:n alapuolella. Seosta sekoitettiin jäähdyttäen vielä toiset 15 minuuttia ja orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella (2 x 100 ml) ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Kuivattuun liuokseen lisättiin pieni määrä puuhiillä tä ja seos suodatettiin. Seos haihdutettiin kuiviin. Jäljelle jäänyt öljy liuotettiin hiilitetrakloridiin (50 ml) ja haihdutettiin uudelleen kuiviin. Tämä menettely uusittiin 3 kertaa ja seosta tarkkailtiin käänteisfaasi-TLC:n avulla, jotta voitiin todeta kaiken lähtöaineen (7-amino-20 kefalosporiinin) muuttuneen Schiffin emäkseksi. Poistamalla liuotin vakuumissa saatiin 16,45 g otsikon yhdistettä XVII (Z-isomeeria) vaaleankeltaisena jauheena (arvioitu puhtaus 85 %); sp. 74 °C (hajoten); jota käytettiin puhdistamatta seuraavassa vaiheessa.

25 IR; KBr cm'1 V5^ 1780, 1725 ja 1635.

UV: ^„ak8. (CH2C12) nm (E1 CB) 257 (400).

NMR: CDC13 δ ppm 6,18 (1H, d, J - 11 Hz).

Valmistus 17

Bentshydryyli-7-bentsylideeniamino-3-[3-(4-karbamo-30 yyli-l-pyridinio)-l-propen-l-yyli3-3-kefeemi-4- karboksylaattijodidi (XXI-H) (E-isomeeri) Jäähdytettyyn seokseen, jossa oli 3-klooripropenyy-likefeemi-yhdistettä XVII (Z-isomeeria) (16,4 g) asetonissa (5 ml), lisättiin tipoittain 10 minuutin aikana typpi-35 atmosfäärin suojaamana liuos, jossa oli natriumjodidia 96 84830 (6,3 g, 42 mmol) asetonissa (30 ml), ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa. Reaktiota tarkkailtiin UV-ab-sorptiosuhteen avulla [E1 *1CB (255 nm)/Ex*lcin (320 nm)]. Suhteen saavutettua arvon, joka oli pienempi kuin 1,30 (45 5 minuutin kuluttua), seos laimennettiin hiilitetrakloridil-la (400 ml) ja sen annettiin seistä huoneen lämpötilassa. Suhteen savutettua arvon, joka oli pienempi kuin 1,10 (3 tunnin kuluttua), seos konsentroitiin puoleen tilavuudestaan. Konsentraattia käsiteltiin pienellä määrällä puu-10 hiiltä ja piimaata ja suodatettiin. Suodatinkakku pestiin seoksella, jossa oli suhteessa 1:1 metyleenikloridia ja hiilitetrakloridia (100 ml). Yhdistettyihin suodosliuok-seen ja pesunesteisiin lisättiin liuos, jossa oli isoniko-tiiniamidia (3,5 g, 28,7 mmol) dimetyyliformamidissa (20 15 ml) ja seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Konsentraatin annettiin seistä huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia ja pestiin sitten isopropyylieetterillä (3 x 100 ml). Jäljelle jäänyt ruskea puolikiinteä aine liuotettiin metyleeni-kloridiin (50 ml) ja liuos lisättiin tipoittain sekoittaen 20 etyyliasetaattiin (1,5 1). Muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla ja pestiin etyyliasetaatilla (200 ml). Fosforipentoksidilla vakuumissa kuivaamisen jälkeen saatiin 17 g otsikon yhdistettä XXI-H (E-isomeeria). Keltaista amorfista jauhetta. Sp. 150 - 155 °C (hajoten). Arvioitu 25 puhtaus NMR:n perusteella 80 %.

IR: KBr cm'1 v^, 1775, 1725, 1690 ja 1635.

UV: ^mak.. (CH2C12) nm (E1 \ „) 258 (335) ja 298 (255).

NMR: DMSO-d6 δ ppm 3,4 - 3,8 (2H, br), 5,35 (2H, br), 5,41 (1H, d, J = 4 Hz), 5,73 (1H, d, J = 4 Hz), 6,93 (1H, s), 30 6,97 (1H, d, J = 16 Hz), 7,3 - 7,5 (15H, br, s), 8,40 (2H, d, J = 6,5 Hz) ja 9,15 (2H, d, J = 6,5 Hz).

97 84 830

Valmistus 18 7-amino-3- [3-4-karbamoyyli-l-pyridinio )-l-propen- 1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (XXII-H) (E-isomeeri) 5 Suspensioon, jossa oli kvaternoitua kefeemi-yhdis- tettä XXI-H (17 g) 85-%:isessa muurahaishapossa (25 ml), lisättiin tipoittain väkevää suolahappoa (5 ml) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia ja käsiteltiin pienellä määrällä puuhiiltä. Seos suodatettiin ja 10 pestiin 85-%:isella muurahaishapolla (5 ml). Suodos yhdistettiin pesunesteen kanssa ja kaadettiin sekoittaen asetoniin (1 1). Muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 9,52 g keltaiseksi värjäytynyttä raakatuotetta. Suspensioon, jossa raaka aine (9,5 g) oli 15 vedessä (50 ml), lisättiin pieni määrä puuhiiltä ja seos suodatettiin. Suodos lisättiin tipoittain sekoittaen iso-propyylialkoholiin (700 ml). Muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla, pestiin pienellä määrällä metanolia (30 ml) ja kuivattiin, jolloin saatiin 7,58 g otsikon yh-20 distettä XXII-H (E-isomeeria) hydrokloridina. Vaaleankeltaista jauhetta. UV:n perusteella arvioitu puhtaus 85 %. Sp. 173 - 188 °C (hajoten).

IR: KBr cm*1 \?make 1795, 1680, 1620, 1575 ja 1540.

UV: Amak(i (fosfaattipuskuri, pH 7) nm (E1*lcm) 294 (457). 25 NMR: D20 + DC1 δ ppm 3,82 (2H, s), 5,17 (1H, d, J = 5 Hz), 5,33 (2H, d, J * 7 Hz), 5,43 (1H, d, J - 5 Hz), 6,37 (1H, d - t, J = 16 & 7 Hz), 7,23 (1H, d, J - 16 Hz), 8,34 (2H, d, J = 7 Hz) ja 9,00 (2H, d, J - 7 Hz).

Valmistus 19 30 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksl- iminoasetyylikloridihydrokloridi (II-l; happo-kloridl-hydrokloridinaan) A. 2-syaani-2-metoksi-lminoasetamidi

Sekoitettuun seokseen, jossa oli a-syaaniasetamidia 35 (252 g, 3 mol) ja natriumnitriittiä (414 g, 6 mol) vedessä ββ 84830 (600 ml), lisättiin etikkahappoa (371 ml, 10 mol) -5 - 10 °C:ssa 1,5 tunnin aikana. Seosta sekoitettiin toiset 1,5 tuntia ja pH säädettiin 6 N NaOHrlla arvoon 8,5. Seokseen lisättiin dimetyylisulfaattia (568 ml, 6 mol) 15 - 20 5 °C:ssa ja seosta sekoitettiin 45 °C:ssa 1,5 tuntia. Reak-tioseoksen pH säädettiin 6 NaOH:lla arvoon 8,5 ja sen annettiin seistä yön ajan 5 °C:ssa, jolloin erottui sakkaa, joka koottiin talteen suodattamalla, pestiin kylmällä vedellä ja kuivattiin ilmassa, jolloin saatiin 292 g (77 %) 10 otsikon yhdistettä ruskeina neulasina, jotka sulivat 170 -172 °C:ssa.

IR: KBr cm'1 V>make 3400, 3180, 1720 (sh), 1715, 1690, 1615 ja 1570.

UV: (H20) nm {f.) 238,5 (8 290) ja 268 (sh, 3 870).

15 NMR: DMS0-d6 6 ppm 4,20 (3H, s, OCH,), 7,85 (2H, br, NH2) . Analyysi yhdisteelle C4H5N302:

Laskettu: C 37,80 H 3,97 N 33,06

Saatu: C 37,43 H 3,75 N 32,51 B. 2-metoksi-iminopropaanidlnitrilli 20 Sekoitettua seosta, jossa oli 2-syaani-2-metoksi- iminoasetamidia (88,9 g, 0,7 mol), natriumkloridia (70 g) ja fosforioksikloridia (97 ml, 1,05 mol) kuivassa 1,2-di-kloorietaanissa (350 ml), kiehutettiin 16 tuntia. Liukenematon aines suodatettiin erilleen dicalite-patjan läpi ja 25 pestiin dikloorietaanilla. Suodos ja pesuneste yhdistettiin ja kaadettiin sekoitettuun jää/vesi-seokseen (1,5 1) ylimääräisen fosforioksikloridin hajottamiseksi. Orgaaninen faasi pestiin 10-%:isella NaHC03:lla (500 ml), vedellä (3 x 500 ml) ja kyllästetyllä NaCl-liuoksella (500 ml) ja 30 kuivattiin MgS04:11a. Suodos tislattiin vakuumissa, jolloin saatiin 61,5 g (81 %) otsikon yhdistettä, joka kiehui 62 °C:ssa/24 mmHg (kirj., kp.- 47 - 48 °C/12 mmHg).

IR: Nestekalvo cm'1 ^maks. 3020, 2960, 2245, 2020, 1530, 1455 ja 1080.

35 NMR: CDC13 δ ppm: 4,35 (3H, s, 0CH3).

99 8 4 8 3 0 C. 2-syaani-2-metoksi-iminoasetamidiniumasetaatti

Liuokseen, jossa oli anunoniumkloridia (28,4 g, 0,53 mol) 28-%:isessa ammoniakin vesiliuoksessa (355 ml) ja etanolissa (180 ml), lisättiin sekoittaen ja tipoittain 5 -15 - -10 °C:ssa 30 minuutin aikana liuos, jossa oli 2-me- toksi-iminopropaanidinitriiliä (58,0 g, 0,53 mol) etanolissa (120 ml). Seosta sekoitettiin -10 °C:ssa yön ajan ja sitten ympäristön lämpötilassa (20 - 25 °C:ssa) yksi päivä. Reaktioseos jaettiin veteen (350 ml) ja CH2Cl2:iin (350 ml) 10 liukeneviin osiin ja vesifaasi kyllästettiin natriumklo-ridilla ja uutettiin jälleen CH2Cl2:lla (300 ml). Orgaaniset uutteet yhdistettiin, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöksen etyyliasetaatti-liuoksen (1,6 1) pH säädettiin etikkahapolla arvoon 3-4, 15 jolloin otsikon yhdiste saostui kiteinä, jotka koottiin talteen suodattamalla ja pestiin etyyliasetaatilla. Saanto 67,6 g (69 %). Sp. 152 - 154 °C (hajoten) [kirj., sp. 150 -155 °C (hajoten)].

IR: KBr cm1 \?ake 3160, 2900, 2360, 2235, 2000, 1665, 1555, 20 1495 ja 1415.

UV: (EtoH) nm ( £,) 243 (8 500), 265 (sh, 5 380), 305 (sh, 1 400).

NMR: DMSO-d6 6 ppm 1,88 (3H, s, CH3COOH), 4,15 (3H, s, OCH3) ja 7,60 (4H, br).

25 Analyysi yhdisteelle C4H6N40 · CH3C00H

Laskettu: C 38,71 H 5,41 N 30,09

Saatu: C 38,71 H 5,59 N 29,51 D. 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetonitriili 30 Suspensioon, jossa oli 2-syaani-2-metoksi-imino- asetamidiniumasetaattia (125 g, 0,672 mol) CH3OH:ssa (1,25 1) lisättiin -10 °C:ssa tipoittain trietyyliamiinia (234 ml, 1,68 mol) ja sen jälkeen Br2:a (41,6 ml, 0,806 mol) 20 minuutin aikana -15 - 10 °C:ssa ja seosta sekoitet-35 tiin 20 minuuttia. Seokseen lisättiin tipoittain -15 - 100 8 4 8 3 0 -10 °C:ssa tunnin aikana liuos, jossa oli KSCN:a (78,3 g, 0,806 mol) CH30H:ssa (550 ml). Tunnin ajan 0 - 5 °C:ssa sekoittamisen jälkeen seos kaadettiin jää/vesi-seokseen (12 1), jolloin muodostui kiteistä sakkaa, joka koottiin 5 talteen suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin ilmassa, jolloin saatiin 120 g (98 %) otsikon yhdistettä. Sp. 263 - 265 °C (hajoten). Valmistetun yhdisteen sp. on noin 60 °C korkeampi kuin kirjallisuudessa ilmoitettu [Japan Kokai 57 -158768, julkistettu syyskuun 30. päivänä 10 1982, Fujisawa (GB-hakemus 3/6/81); sp. 210 - 215 °C (ha joten)], mutta spektri- ja mikroanalyyttiset arvot ovat yhtäpitävät rakenteen kanssa.

IR: KBr cm'1 ^mak8 3435, 3260, 3120, 2960, 2245, 2020, 1630, 1545, 1455 ja 1415.

15 UV: ABak8 (EtOH) nm ( S ) 248 (13 300) ja 310 (3 470).

NMR: DMS0-d6 δ ppm 4,21 (3H, s, 0CH3), 8,30 (2H, br, NH2). Analyysi yhdisteelle C5H5N50S

Laskettu: C 32,78 H 2,75 N 38,23 S 17,50

Saatu: C 32,76 H 2,51 N 38,02 20 E. 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksl- iminoetikkahappo (111-1)

Seosta, jossa oli 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-iminoasetonitriiliä (18,3 g, 0,1 mol) 4 N NaOH:ssa (250 ml), lämmitettiin 50 - 55 °C:ssa sekoittaen 25 3 tuntia. Reaktioseoksen pH säädettiin H3P04:lla arvoon 1 ja seos pestiin etyyliasetaatilla (100 ml), kyllästettiin NaCl:lla ja uutettiin 3 kertaa etyyliasetaatin ja tetra-hydrofuraanin seoksella 3:1 (2 x 300 ml ja 1 x 200 ml). Uutteet yhdistettiin, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin 30 kuiviin vakuumissa. Jäännöstä trituroitiin isopropyylieetterin kanssa, jolloin saatiin vaaleankeltaisia otsikon hapon kiteitä. Saanto 16,8 g (83 %). Sp. 184 - 185 °C (hajoten) [kirj.; Japan Kokai 57 -158768, julkistettu syyskuun 30. päivänä 1982, Fujisawa (GB-hakemus 3/6/81); sp. 35 180 - 182 °C (hajoten)].

!οι 84830 IR: KBr cm'1 3460, 3260, 3140, 1725, 1620, 1605 ja 1545.

UV: (H2°) n® (^) 234 (13 200) ja 288 (sh, 3 620).

F. 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-5 iminoasetyyliklorldlhydrokloridi

Suspensioon, jossa oli 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli)-2-metoksi-iminoetikkahappoa (III-l) (40,4 g, 0,2 mol) kuivassa CH2Cl2:ssa (400 ml), lisättiin PCl5:a (41,6 g, 0,2 mol) yhtenä eränä -50 °C:ssa. Seosta sekoitettiin 4 10 tuntia -20 - -5 °C:ssa ja kaadettiin seokseen, jossa oli n-heptaania ja isopropyylieetteriä (2:1; 2 1). Keltainen sakka koottiin talteen suodattamalla, pestiin samalla liuotinseoksella ja kuivattiin K0H:lla vakuumissa, jolloin saatiin 46,0 g (90 %) otsikon happokloridia.

15 IR: (Nujol) cm"1 Vmake 1775.

Valmistus 20

N -j-C-CONH —I-S S N

ÄS-N I J_ * 20 H2N ö 0 "γ- ^ CH=CHCH2C1 0R2 COOCH(Ph)2

VIII-2 *Z

25 Difenyylimetyyli-7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli )-2-( Z )-etoksi-iminoasetamido] -3- [3-kloori- 1-propenyyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti (VIII-2; Z-isomeeri)

Seokseen, jossa oli N,0-bis(trimetyylisilyyli)aset-30 amidia (2,3 ml, 9 mmol) ja kiteistä difenyylimetyyli-7- amino-3-[3-kloori-l-( Z )-propen-l-yyli] -3-kefeemi-4-karbok-sylaattihydrokloridia (XVIII) [1,338 g, 2,8 mmol (valmistuksesta 12)] metyleenikloridissa (10 ml), lisättiin 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(Z)-etoksi-iminoaset-35 yylikloridihydrokloridia (800 mg, 2,95 mmol) annoksittain 102 8 4 8 3 0 -10 °C:ssa sekoittaen ja seoksen annettiin seistä 0 °C:ssa 2 tuntia. Seos laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml), pestiin vedellä ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Tri-turoimalla jäännöstä isopropyylieetterin kanssa saatiin 5 otsikon tuotetta VIII-2 amorfisena jauheena. Saanto 1,70 g (95 %). Sp. >150 °C (hajoten).

IR: KBr cm'1 \P>mak8 3300, 1780, 1720, 1690, 1380 ja 1220.

UV: AmakB (C2H5OH) nm (£) 285 (11 000).

NMR: DMS0-d6 δ ppm 1,26 (3H, t, J = 7 Hz, CH2CH3), 4,25 (2H, 10 q, J = 7 Hz, CH2CH3), 590 (1H, d - d, J = 4 & 8 Hz, 7-H), 6,26 (1H, d, J = 11 Hz, 3-CH), 6,85 (1H, s, CHPh2) ja 9,53 (1H, d, J = 8 Hz, 7-NH).

Valmistus 21

15 N-p-C-CONH —-^ S N

H \ 0J ch=ch-ch2-i ° COOCH(Ph)? C2H5 20 IX-2 *E- ja Z-isomeerien seos

Difenyylimetyyli-7-[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(Z)-etoksi-iminoasetamido]-3-[3-jodi-l-25 propenyyli]-3-kefeeml-4-karboksylaatti (IX-2)

Seosta, jossa oli yhdistettä VIII-2 (1,90 g, 3 mmol) (valmistuksesta 20) ja natriumjodidia (1,4 g, 9 mmol) asetonissa (20 ml), sekoitettiin 10 minuuttia huoneen lämpötilassa ja sitten sen annettiin seistä 5 °C:ssa 30 3 tuntia. Seos haihdutettiin kuiviin vakuumissa, laimen nettiin etyyliasetaatilla (100 ml), pestiin 10-%:isella natriumtiosulfaatilla ja vedellä ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Trituroimalla jäännöstä isopropyylieetterin kanssa saatiin 1,82 g (84 %) otsikon tuotetta IX-2 vaa-35 leanruskeana amorfisena jauheena.

103 84830 IR: KBr cm-1 \?make< 3290, 1770, 1720, 1670, 1530, 1370 ja 1220.

UV: ^maks. (C2H5OH) nm (E1 \ cm) 340 (199).

Valmistus 22 ch"n —]—cs 'ί ^ o^N^ch:ch-ch®N^cok„2 COOCH(Ph)2 10

XXI-H; jodidi *E

Difenyyllmetyyli-7-bentsylldeenlamlno-3-[(E)-3-(4-karbamoyylipyridinlo-l-propenyyll]-3-kefeeml-4-15 karboksylaattl (XXI-H; jodidi) (E-isomeerl Jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli 3-klooripropen-yylikefeemi-yhdistettä (XVIII, Z-isomeeria; 42,8 g, 90 mmol) (valmistuksesta 16) kuivassa DMF:ssa (80 ml), lisättiin yhtenä eränä KI:a (20 g, 120 mol) ja seosta sekoitet-20 tiin huoneen lämpötilassa. Reaktiota tarkkailtiin UV-ab-sorptiosuhteen avulla [E1 \ cn (255 ηπΟ/E1 ca (320 nm)]. Suhteen saavutettua arvon, joka oli pienempi kuin 1,10 (45 minuutin kuluttua), seos laimennettiin 800 ml:11a metylee-nikloridia, käsiteltiin aktiivihiilen (4 g) kanssa ja suo-25 datettiin. Suodatinkakku pestiin 100 ml:11a CH2Cl2:a. Yhdistettyihin suodokseen ja pesunesteisiin lisättiin isoni-kotiiniamidia (14,64 g) ja seos haihdutettiin kuiviin va-kuumissa. Konsentraattia pidettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia ja pestiin tolueenin ja n-heptaanin seoksella 30 (1:1; 600 ml). Jäljelle jäänyt ruskea puolikiinteä aine liuotettiin CH2Cl2:iin (100 ml) ja liuos lisättiin tipoit-tain ja voimakkaasti sekoittaen etyyliasetaattiin (3 1). P205:n päällä vakuumissa kuivamisen jälkeen saatiin 57,37 g (88 %) kvaternoitua otsikon tuotetta XXI-H jodidina.

35 Keltaista amorfista jauhetta. Sp. 150 - 155 °C (hajoten).

104 84 830 Tämä tuote oli identtinen tuotteen kanssa, joka oli saatu jodaamalla Nairn kanssa (valmiste 17).

Valmistus 23 5 HC1.H2N-^ N ^^S'CH=CH-CH2-C1 COOCH(Ph)2 XVIII *z 10

Dif enyylimetyyli-7-amino-3- (3-kloori-l-propenyyli) - 3-kefeemi-4-karboksylaattihydroklorldi (Z-isomeeri) (XVIII; hydrokloridi) 25-%:inen liuos, jossa oli klooriasetaldehydiä (69 15 g, 0,22 mmol) CHCl3:ssa, lisättiin -10 °C:ssa yhtenä eränä liuokseen, jossa oli yhdistettä XVI (80 g, 0,11 mol) CH2Cl2:ssa (1,1 1), jossa oli N,0-bis(trimetoksisilyyli)-asetamidia (16,2 ml, 0,06 mol), ja seoksen annettiin seistä yön ajan 5 °C:ssa. Seos konsentroitiin noin 0,3 litrak-20 si, laimennettiin liuotinseoksella, jossa oli etyyliasetaattia ja isopropyylieetteriä (1:2; 0,6 1), käsiteltiin silikageelilla (Wako gel C-100; 60 g) ja suodatettiin di-calite-patjan läpi. Suodatinkakku pestiin samalla liuotinseoksella (0,2 1). Yhdistetyt suodos ja pesuneste konsent-25 roitiin noin 0,2 litraksi, käsiteltiin Girard Reagent

Tiliä (60 g, 0,26 mol) ja 4 N HClrlla (220 ml) ja siemeneksi lisättiin muutama yhdisteen XVIII hydrokloridikide. 3 tunnin sekoittamisen jälkeen muodostuneet kiteet koottiin talteen suodattamalla, pestiin vedellä (0,5 1) ja 30 etyyliasetaatilla (0,5 1) ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 37 g (70 %) otsikon yhdistettä XVIII (hydro-kloridia), joka suli >185 °C:ssa (hajoten). Vaaleankeltaisia neulasia. Tämä tuote oli identtinen valmistuksen 12 tuotteen kanssa.

105 84830

Valmistus 24 HCI-HjN-1-Ss > Q-S— N CH=CH-CH2-C1 5 COOCH(Ph)2

XVIII *Z

Difenyylimetyyli-7-amino-3-( 3-kloori-l-propenyyli)- 3-kefeemi-4-karboksylaattihydrokloridi(Z-isomeerl) 10 (XVIII; hydrokloridi)

Liuokseen, jossa oli klooriasetaldehydiä (25-%:inen liuos CHCl3:ssa; 628 mg, 2 mmol) CH2Cl2:ssa (10 ml), lisättiin peräkkäin 5 °C:ssa N,0-bis( trietyylisilyyli )asetamidia (0,135 ml, 0,5 mmol) ja yhdistettä XVI (728 mg, 1 mmol). 15 Seoksen annettiin seistä yön ajan 5 °C:ssa. Seos haihdutettiin kuiviin ja laimennettiin etyyliasetaatin ja isoprop-yylieetterin seoksella (1:2; 10 ml). Liukenematon aines poistettiin suodattamalla ja suodos konsentroitiin noin 5 ml:ksi. Konsentraattia käsiteltiin 4 N HCl:lla (2 ml), 20 lisättiin siemeneksi XVIII-hydrokloridia ja sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Kiteet koottiin talteen suodattamalla, pestiin etyyliasetaatilla (10 ml) ja vedellä (10 ml) ja kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin 384 mg (80 %) otsikon yhdistettä XVIII (hydrokloridia), joka ‘,25 suli >185 °C:ssa (hajoten). Vaaleankeltaisia neulasia. Tämä tuote oli identtinen tuotteen kanssa, joka oli saatu valmistuksessa 12.

Valmistus 25 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(propen-3-30 yylioksi-imino)asetyylikloridihydrokloridi (III-3; happokloridi-hydrokloridinaan) A. Metyyli-2-(5-t-butokslkarbonyyliamino-l,2,4-tia-diatsol-3-yyli) -2-propen-3-yylioksi-imino )asetaatti Seosta, jossa oli 685 mg (3,37 mmol) N-propen-3-; 35 yylioksi)ftaali-imidiä [valmistettu E. Grochosaki'n ja J.

106 84 830

Jurczak'in menetelmän mukaisesti; Synthesis 1976:682] ja 175 mg (3,35 mmol) hydratsiinihydraattia 5 ml:ssa C2H5OH:a, sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Muodostunut sakka suodatettiin erilleen ja suodos ja pesunesteet yh-5 distettiin. Liuokseen lisättiin 967 mg (3,37 mmol) metyy- li-2- ( 5-t-butoksikarbonyyliamino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - 2-oksoasetaattia ja seoksen annettiin seistä tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja haihdutettiin sitten kuiviin kier-tohaihdutinta käyttäen. Jäännös puhdistettiin kromatogra-10 foimalla silikageelillä. Kolonni eluoitiin n-heksaani/- etyyliasetaatti-seoksella (4:1) ja fraktiot, jotka sisälsivät runsaasti tuotetta, yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Saanto 514 mg (46 %). Sp. 83 - 86 °C. IR: KBr cm'1 vBak, 3100, 1745, 1710 ja 1620.

15 UV: ÄmakB. (C2H5OH) nm ( £ ) 223 (9 700) ja 242 (10 000).

NMR: CDClj 6 ppm 1,55 (9H, s, BOC-H), 4,40 (2H, d, J = 5 Hz, 0-CH2), 5,21 (2H, m, CH2=CH), 5,90 (1H, m, -CH=CH2) ja 9,50 (1H, br, s, NH).

B. 2-(5-t-butoksikarbonyyliamino-l,2,4-tiadiatsol-20 3-yyli)-2-(propen-3-yylioksi-imino)etikkahappo [I. Csendes et ai.; J. Antibiotics 36 (1983), s.

1020]

Liuosta, jossa oli 770 mg (2,3 mmol) metyyli-2-(5-t-butoksikarbonyyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-(prop-25 en-3-yylioksi-imino)asetaattia ja 3,5 ml 2 N NaOH-liuosta (7,0 mmol) 15 ml:ssa CH30H:a, kiehutettiin 30 minuuttia. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja laimennettiin 10 ml:11a etyyliasetaatti/vesi-seosta (1:1). Vesiker-ros erotettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 6 N HCl:lla 30 ja uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 10 ml). Etyyliasetaat-tiliuos kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin kier-tohaihdutinta käyttäen, jolloin saatiin 596 mg (81 %) otsikon yhdistettä. Sp. 134 - 135 °C [kirj. (viite edellä): sp. 135 - 136 °C] .

35 IR: (Nujol) cm'1 3150, 1745, 1720 ja 1550.

107 84 830 UV: AeekB (C2H5OH) nm ( £ ) 223 (11 000) ja 242 (11 300). NMR: DMSO-d6 6 ppm 1,55 (9H, s, BOC-H), 4,77 (2H, d, J = 5 Hz, 0-CH2), 5,22 (2H, m, CH2=CH) ja 6,0 (1H, m, CH=CH2).

C. 2-(5-amino-l,2,4-tladlatsol-3-yyli)-2-(propen-3- 5 yylioksi-imino)etikkahappo (III-3) [Japan Kokai 57-112 396 (7/13/82; Fujisawa); GB-patenttihakemus 7 935 3538 (10/12/79)]

Liuokseen, jossa oli 570 mg (1,74 mmol) 2-(5-t-but-oksikarbonyyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(propen-3-10 yylioksi-imino)etikkahappoa 6 ml:ssa trifluorietikkahap-poa, annettiin seistä tunnin ajan ympäristön lämpötilassa. Haihduttamalla kuiviin ja trituroimalla sen jälkeen 30 ml:n kanssa isopropyylieetteriä saatiin 376 mg (95 %) otsikon yhdistettä. Sp. 109 °C (hajoten).

15 IR: (Nujol) cm'1 ^make 3180, 1710, 1545 ja 1460.

UV: ABakB. (C2H5OH) nm ( £ ) 245 (13 500).

NMR: DMS0-d6 6 ppm 4,77 (2h, D, J = 5 Hz, 0-CH2), 5,20 (2H, m, CH*CH) ja 6,0 (1H, m, CH=CH2).

D. 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-(propen-3- 20 yylioksi-imino)asetyyliklorldlhydrokloridi

Liuosta, jossa oli 350 mg (1,54 mmol) yhdistettä III-3 ja 410 mg (197 mmol) fosforipentakloridia dikloori-metaanissa (5 ml), sekoitettiin tunnin ajan 25 °C:ssa. Reaktioseos kaadettiin 60 ml:aan n-heksaania ja sakka suo-25 datettiin erilleen. Saanto 323 mg.

IR: (Nujol) cm'1 V?Bakg 1765.

Valmistus 26 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyll)-2-propargyyli-oksl-imlnoasetyyliklorldihydroklorldl (III-4; 30 happokloridihdyroklorldinaan A. Metyyli-2-(5-t-butokslkarbonyyliamino-l,2,4-tia-diatsol-3-yyli)-2-propargyylioksi-iminoasetaatti Suspensiota, jossa oli 870 mg (4,32 mmol) N-propar-gyylioksiftaali-imidiä [saatavissa kaupallisena tuotteena; 35 Aldrich) ja 200 mg (4,0 mmol) hydratsiinihydraattia 5 108 84830 ml:ssa etanolia, sekoitettiin 25 °C:ssa tunnin ajan ja suodatettiin. Yhdistettyihin suodokseen ja pesunesteisiin lisättiin 1,0 g (3,86 mmol) metyyli-2-(5-t-butoksikarbo-nyyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-oksoasetaattia 5 [I. Csendes et ai.; J. Antibiotics 36 (1983), s. 1020].

Liuoksen annettiin seistä tunnin ajan ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Puhdistamalla silikageelillä kromato-grafoiden ja haihduttamalla sen jälkeen kuiviin, saatiin 319 mg (27 %) otsikon tuotetta. Sp. 72 - 75 °C.

10 IR: KBr cm*1 3200, 2380, 1745, 1710 ja 1610.

UV: Anak. (C2H5OH) nm ( £ ) 235 (12 200).

NMR: DMSO-d6 δ ppm 1,56 (9H, s, B0C-H), 3,55 (1H, t, J = 2 Hz, CsCH), 4,85 (2H, d, J = 2 Hz, -CH2-ChCH) ja 8,9 1H, br, S, NH).

15 B. 2-(5-t-butoksikarbonyyliamlno-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli)-2-propargyylioksl-iminoetikkahappo Liuosta, jossa oli 490 mg (1,4 mmol) metyyli-2-(5-t-butoksikarbonyyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-prop-argyylioksi-iminoasetaattia ja 2,2 ml 2 N NaOH:n vesi-20 liuosta (4,4 mmol) 14 ml:ssa CH30H:a, kiehutettiin 30 minuuttia. Reaktioseos konsentroitiin vakuumissa ja liuokseen lisättiin 10 ml etyyliasetaatti/vesi-seosta (1:1). Erotettu vesikerros tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 6 N HCl:lla ja uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 10 ml). Kui-25 vaarnalla MgS04:lla ja haihduttamalla orgaaninen kerros sen jälkeen kuiviin, saatiin 149 mg (89 %) otsikon tuotetta. Sp. 135 °C (hajoten).

IR: (Nujol) cm*1 ^roaks 3350, 1720, 1670 ja 1550.

UV: ^nak.. (C2H5OH) nm ( & ) 233 (11 500).

30 NMR: DMS0-d6 δ ppm 1,55 (9H, s, B0C-H9, 3,55 (1H, t, J = 2 Hz, C=CH), 4,89 (2H, d, J = 2 Hz, CH2CsCH) ja 9,0 (1H, s, NH).

109 84830 C. 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propargyyli-oksi-iminoetikkahappo (III-4 ) [Japan Kokai 57-112396 (7/13/82; Fujisawa); GB-pa-tenttihakemus 7 935 538 (10/12/79)] 5 Liuokseen, jossa oli 410 mg (1,26 mmol) 2-(5-t-but- oksikarbonyyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propargyy-lioksi-iminoetikkahappoa 5 mlrssa trifluorietikkahappoa, annettiin seistä tunnin ajan 25 °C:ssa. Haihduttamalla kuiviin ja trituroimalla sen jälkeen jäännös 25 ml;n kanssa 10 isopropyylieetteriä, saatiin 204 mg (72 %) otsikon yhdistettä. Sp. 156 - 158 °C (hajoten).

IR; (Nujol) cm"1 make 3300, 2480, 1730 ja 1610.

UV: imakE. (C2H5OH) nm ( r.) 234 (12 000).

NMR: DMS0-d6 δ ppm 3,52 (1H, t, J = 2 Hz, CeCH), 4,86 (2H, 15 d, J = 2 Hz, CH2-C=CH) ja 8,10 (2H, br, s, NH2).

D. 2-(5-amlno-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propargyyli-oksi-iminoasetyylikloridlhydrokloridi Seosta, jossa oli 175 mg (0,07 mmol) yhdistettä III-4 ja 182 mg (0,88 mmol) fosforipentakloridia dikloori-20 metaanissa (2 ml), kaadettiin 30 ml:aan n-heksaania ja sakka suodatettiin erilleen. Saanto 65 mg (34 %).

IR: (Nujol) cm-VBaks. 1770.

Valmistus 27 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-syklopentyy-25 lioksi-iminoasetyylikloridihydrokloridi (II1-5; happokloridihydrokloridinaan) A. Metyyli-2-(5-t-butoksikarbonyyliamino-l,2,4-tia- diatsol-3-yyli)-2-syklopentyylioksi-iminoasetaatti Suspensiota, jossa oli 860 mg (3,7 mmol) N-(syklo-30 pentyylioksi)ftaali-imidiä [US-patentti 3 971 778 (7/12/76; Glaxo); GB-patenttihakemus 49 255 (10/25/72)] ja 185 mg (3,7 mmol) hydratsiinihydraattia 5 ml:ssa C2H5OH:a, sekoitettiin tunnin ajan ympäristön lämpötilassa ja suodatettiin. Suodos ja pesunesteet yhdistettiin ja lisättiin 35 1,06 g:aan (3,7 mmol) metyyli-2-(5-t-butoksikarbonyyliami- no 84830 no-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-oksoasetaattia [I. Csendes et ai.; J. Antibiotics 36 (1983), s. 1 020]. Liuoksen annettiin seistä tunnin ajan huoneen lämpötilassa ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännös puhdistettiin kromato-5 grafoimalla silikageelikolonnissa. Eluoimalla n-heksaani/-etyyliasetaatti-seoksella (4:1) ja haihduttamalla sen jälkeen kuiviin, saatiin otsikon tuotetta. Saanto 906 mg (81 %). Sp. 115 - 118 °C.

IR: KBr cm'1 ^make 3200, 1745, 1720 ja 1550.

10 UV: A make. (C2H5OH) nm ( ^ ) 217 (1 800) ja 252 (7 600).

NMR: CDClj δ ppm 1,51 (9H, s, BOC-H), 1,60 8H, br, s,

H

H-Q), 3,88 (3H, s, 0CH3), 4,90 (1H, br, s, XJ-8,70 (1H, br, s, NH). 0 15 B. 2-(5-t-butoksikarbonyyliamino-l,2,4-tladiatsol- 3-yyli)-2-syklopentyylioksl-iminoetlkkahappo Liuosta, jossa oli 500 mg (1,34 mmol) metyyli-2-(5-t-butoksikarbonyyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli )-2-syklo-pentyylioksi-iminoasetaattia ja 2 N NaOH-liuosta (2 ml, 4 20 mmol) 15 ml:ssa CH30H:a, kiehutettiin 30 minuuttia. Reak-tioseos haihdutettiin kuiviin ja liuokseen lisättiin 10 ml etyyliasetaatti/vesi-seosta (1:1). Vesikerros erotettiin, tehtiin happamaksi pH-arvoon 2 6 N HCl:lla ja uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 10 ml). Orgaaninen kerros pestiin 25 suolaliuoksella, kuivattiin MgS04:lla ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa, jolloin saatiin 377 mg (78 %) otsikon yhdistettä. Sp. 185 °C (hajoten).

IR: KBr cm*1 V>eak. 3160, 1720 ja 1550.

UV: Aeak, (C2H50H) nm (£) 238 (13 300).

30 NMR: DMSO 6 ppm 1,51 (9H, s, BOC-H), 1,70 (8H, br, s,

H

Η-ΖΠ) ja 4,82 (1H, m, VH).

0 '— 111 84830 C. 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-syklopentyy-lioksl-iminoetikkahappo (III-5; Z-isomeeri) [Japan Kokai 57-158769 (9/30/82; Fujisawa); GB-pa-tenttihakemus 8 107 134 (3/6/81)] 5 Liuokseen, jossa oli 348 mg (0,97 mmol) 2-(5-t-but- oksikarbonyyliamino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-3-syklopent-yylioksi-iminoetikkahappoa 2 mlrssa trifluorietikkahappoa, annettiin seistä tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Reak-tioseos haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Jäännöstä tritu-10 roitiin 5 ml:n kanssa isopropyylieetteriä ja 10 ml:n kanssa heksaania, jolloin saatiin 215 mg (86 %) otsikon yhdistettä. Sp. 162 - 165 °C (hajoten, [kirj. (viite edellä): sp. 160 - 165 °C (hajoten)].

IR: (Nujol) cm"1 V?nieklI_ 3290, 3200, 1710, 1615 ja 1600.

15 UV: Amaks. (C2H5OH) nm (£) 238 (13 300).

NMR: DMS0-d6 δ ppm 1,17 - 2,10 (8H, m), 4,60 - 4,98 (1H, m) ja 8,22 (2H, s).

D. 2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-syklopentyy-lioksi-lminoasetyylikloridihydroklorldl 20 Liuosta, jossa oli 190 mg (0,74 mmol) yhdistettä III-5 ja 219 mg (1,0 mmol) fosforipentakloridia dikloori-metaanissa (5 ml), sekoitettiin tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Reaktioseos kaadettiin 50 ml:aan n-heksaania. Muodostunut sakka koottiin talteen suodattamalla. Saanto 25 122 mg (60 %).

IR: (Nujol) cm'1 1760.

Valmistus 28

Bentsotriatsol-l-yyli-2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol- 3-yyli)-2-metoksi-iminoasetaatti 30 Seosta, jossa oli 1-hydroksibentsotriatsola (2,7 g, 20 mmol) ja disykloheksyylikarbodi-imidiä (4,12 g, 20 mmol) 65 ml:ssa DMF:a, sekoitettiin huoneen lämpötilassa. 15 minuutin kuluttua sekoitettuun seokseen lisättiin 0 °C:ssa yhdistettä III-l (4,04 g, 20 mmol) ja sekoittamista 35 jatkettiin 3 tuntia. Reaktioseos sudoatettiin liukenemat- 112 84830 toman urean poistamiseksi ja suodatinkakku pestiin pienellä tilavuusmäärällä DMF:a. Suodos ja pesunesteet yhdistettiin ja kaadettiin 800 ml:aan jäävettä. Sakka koottiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 5,24 g (82 %) otsi-5 kon yhdistettä vaaleanharmaana jauheena. Sp. 189 - 192 °C (hajoten).

IR: KBr cm*1 )?maka. 1815, 1620, 1540, 1415, 1090, 1060, 1005, 945, 865 ja 740.

UV: Amaka (C2H5OH) nm (E1 \ cm) 246 (580) ja 283 (sh) (228).

Claims (4)

113 84830

1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten kefeemi-johdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava 5 N-_C-CONH-j-rS. r1«n s' \ 0^-nnAch=ch-ch,®NsQ 10 0R C0<P (I) 15 jossa R1 on vety tai tavallinen aminon suojaryhmä; R2 on 1 - 4 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 3-6 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä, propenyyli tai propargyyli tai

20 -CH2-CH=CH2 tai -CH2-C=CH Q=N-£j on kvaternaarinen ammonioryhmä, joka on tri(alempi alkyyli)ammonio, N-(alempi alkyyli)pyrrolidinio, 2-metyy-litiatsolio tai 2-amino-5-tiatsolo[4,5-c]pyridinio tai 25 pyridinio, joka on mahdollisesti substituoitu (alempi alkyyli)-, amino-, formyyliamino-, karboksi-, karboksi-(alempi alkyyli)tio-, hydroksi(alempi alkyyli)-, amino-(alempi alkyyli)-, karbamoyyli- tai N-(alempi alkyyli)kar-bamoyyliryhmällä, tai 2,3-asemiin liittyneellä 3-5 hii-30 liatomia sisältävällä alkyleeniryhmällä, ja niiden ei-myrkyllisten farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja fysiologisesti hydrolysoituvien esterien valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jolla on kaava 114 84830 <0)m N-rr— C-CONH-.-S’ S\

5. J n II X-N . BHNV \ 2° Y^ch=chch2z (vii) °R COOB1 10 jossa R2 on edellä määritelty, B1 on tavallinen karboksyy-lin suojaryhmä, B2 on vety tai tavallinen aminon suojaryh-mä, Z on kloori, bromi tai jodi, ja m on nolla tai yksi, saatetaan reagoimaan tertiaarisen amiinin Q=N (tai peräk- 15 käin sekundaarisen amiinin RR'NH ja kaavan R"Z mukaisen yhdisteen) kanssa, ja, jos m on 1, sulfoksidi pelkistetään tavallisin keinoin, ja sen jälkeen poistetaan peräkkäin kaikki suojaryhmät tavallisin keinoin, tai b) yhdiste, jolla on kaava 20 H2N-pfSx

0. N\5i;^'CH-CHCH2®N»Q V' 25 cooe (XI) 30 saatetaan reagoimaan hapon kanssa, jolla on kaava N-rt-C — COOH h A II 2. f N B2HN \or2 115 84830 tai mainitun hapon asyloivan johdannaisen kanssa, jossa R2 on edellä määritelty, B1 on tavallinen karboksyylin suoja-ryhmä ja B2 on vety tai tavallinen aminon suojaryhmä, ja haluttaessa muutetaan kaavan I mukaiset yhdisteet ei-myr-5 kyllisiksi, farmaseuttisesti hyväksyttäviksi suoloikseen tai fysiologisesti hydrolysoituviksi estereikseen.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan seuraavat yhdisteet: 10 1) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- noasetamido]-3-[3-(trimetyyliammonio)-1-propen-1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 2) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [3-( 1-metyylipyrrolidinio)-l-propen-l-yy- 15 li]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 3) 7—[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-pyridinio-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 4) 7—[2—(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 20 noasetamido] -3-[3-(3-aminopyridinio)-l-propen-l-yyli]-3- kefeemi-4-karboksylaatti, 5) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [ 3- (3-formyyliaminopyridinio) -1 -propen-1 -yy 1i]-3-ke feemi-4-karboksy1aatti, 25 6) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- noasetamido]-3-[3-(3-aminometyylipyridinio)-l-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 7) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(3-karbamoyylipyridinio)-l-propen-l-yy- 30 li]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 8) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-propen-1-yyli] -3-kefeemi-4-karboksylaatti, 9) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 35 noasetamido]-3-[3-( 2-metyylitiatsolio )-l-propen-l-yyli] - 116 84830 3-kefeemi-4-karboksylaatti, 10) 7-[2-( 5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(2-amino-5-tiatsolo[4,5-c]pyridinio)-1-propen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 5 11) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- noasetamido] -3- [3-( 4-hydroksimetyylipyridinio)-1-propen-l~yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 12) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3 - [3-( 3-hydroksimetyylipyridinio)-1-propen- 10 1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 13) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [3-( 4-N-metyylikarbamoyylipyridinio )-l-pro-pen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 14) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 15 noasetamido)-3-[3-(2,3-propyleenipyridinio)-1-propen-1- yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 15) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-etoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-1-propen-1-yy- 11] -3-kefeemi-4-karboksylaatti, 20 16) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-syklopentyy- lioksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-1-propen-1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 17) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propenyyli-oksi-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyylipyridinio)-l-pro- 25 pen-1-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 18) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-propargyyli-oks i-iminoasetamido]-3-[3-(4-karbamoyy1ipyridinio)-1-pro-pen-l-yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 19) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 30 noasetamido]-3-[3-(4-karboksipyridinio)-1-propen-l-yyli]- 3-kefeemi-4-karboksylaatti, 20) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-etoksi-imi-noasetamido]-3-[3-(4-karboksipyridinio)-2-propen-1-yyli]- 3-kefeemi-4-karboksylaatti, 117 84830 21) 7-[2-(5-amino-1,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi-noasetamido] -3- [3-( 3-karboksimetyylipyridinio)-1-propen- 1- yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, 22) 7-[2-(5-amino-l,2,4-tiadiatsol-3-yyli)-2-metoksi-imi- 5 noasetamido] -3- [3-( 4-karboksimetyylitiopyridinio )-1 -pro pen-1 -yyli]-3-kefeemi-4-karboksylaatti, tai niiden ei-myrkyllistä, farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, solvaattia, hydraattia tai fysiologisesti hydrolysoituvaa esteriä.

3. Yhdiste, jolla on kaava N-rr-C -CONH-T-S S N

15 Jj N 11 LH 1 R1HN^VSy' ,° CH-CH-CH2Z OR I 1 COOB 20 jossa R1 on vety tai tavallinen aminon suojaryhmä, R2 on 1 - 4 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 3-6 hiiliatomia sisältävä sykloalkyyliryhmä, propenyyli tai propargyyli, B1 25 on vety tai tavallinen karboksyylin suojaryhmä ja Z on kloori, bromi tai jodi; tai sen suola, hydraatti, solvaat-ti tai esteri.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on 30 difenyylimetyyli-7-[2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )- 2- metoksi-iminoasetamido]-3-(3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti, difenyylimetyyli-7- [2— ( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - 2-etoksi-iminoasetamido]-3-(3-jodi-l-propen-l-yyli)-3-ke-35 feemi-4-karboksylaatti, 118 84830 difenyylimetyyli-7- [2-( 5 - amino -1,2,4-tiadiatsol-3-yyli ) - 2-metoksi-iminoasetamido]-3-(3-kloori-l-propen-1-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti tai difenyylimetyyli-7-[2-( 5-amino-l, 2,4-tiadiatsol-3-yyli )-5 2-etoksi-iminoasetamido] -3-(3-kloori-l-propen-l-yyli)-3-kefeemi-4-karboksylaatti tai sen suola, hydraatti, solvaatti tai esteri. 119 84830