MX2011006890A - Analogos de nucleosidos. - Google Patents

Abstract

Se describe un compuesto purificado que tiene actividad contra virus de hepatitis C virus.

Description

ANÁLOGOS DE NUCLEÓSIDOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a análogos de nucleósidos y su uso como agentes para tratar enfermedades virales. Estos compuestos son inhibidores de la replicación de ARN viral dependiente de ARN y son útiles como inhibidores de HCV NS5B polimerasa, como inhibidores de la replicación de HCV y para el tratamiento de infección por hepatitis C en mamíferos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La infección con el virus de hepatitis C (VHC) es un problema de salud importante que lleva a la enfermedad hepática crónica, tal como cirrosis y carcinoma hepatocelular en una cantidad sustancial de individuos afectados, se estima que es de 2-15% de la población mundial. Existe un estimado de 4.5 millones de personas infectadas solo en los Estados Unidos, de acuerdo con el U. S. Center for Disease Control. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud, hay más de 200 millones de individuos infectados en el mundo, con al menos 3 a 4 millones de personas que se infectan por año. Una vez infectados, aproximadamente 20% de las personas eliminan el virus, pero el resto puede albergar el VHC el resto de sus vidas. Diez a veinte por ciento de los individuos infectados crónicamente finalmente desarrolla cirrosis o cáncer destructores de hígado. La enfermedad viral se transmite por vía parenteral con sangre contaminada y productos sanguíneos, agujas contaminadas o en forma sexual y vertical de madres infectadas o madres portadoras a . su descendencia. Los tratamientos actuales para la infección con VHC, que están restringidos a la inmunoterapia con interferón-a recombinante solo o en combinación con el análogo nucleosídico ribavirina, proporcionan beneficio clínico limitado. Más aún, no existe una vacuna establecida para VHC. En consecuencia, existe una necesidad urgente de mejores agentes terapéuticos que combatan efectivamente la infección crónica con VHC.

El virión de VHC es un virus de ARN de cadena positiva con una única secuencia genómica de oligorribonucleótidos de aproximadamente 9600 bases que codifica una poliproteína de aproximadamente 3010 aminoácidos. Los productos de la proteína del gen de VHC consisten en las proteínas estructurales C, El, y E2 , y las proteínas no estructurales NS2, NS3, NS4A y NS4B y NS5A y NS5B. Se considera que las proteínas no estructurales (NS) proporcionan la maquinaria catalítica para la replicación viral. La proteasa NS3 libera NS5B, ARN polimerasa dependiente de ARN de la cadena de la poliproteína. La polimerasa NS5B de VHC se necesita para la síntesis de un ARN bicatenario de un ARN viral de monocatenario que sirve como molde en el ciclo de replicación viral del VHC. En consecuencia, se considera que la polimerasa NS5B es un componente esencial del complejo de replicación de VHC (K. Ishi, et al, Hepatology, 1999, 29: 1227-1235; V. Lohmann, et al., Virology, 1998, 249: 108-118). La inhibición de la polimerasa NS5B del VHC impide la formación del ARN bicatenario del ARN de VHC y en consecuencia constituye un enfoque atractivo para el desarrollo de terapias antivirales específicas de VHC.

El VHC pertenece a una familia mucho mayor de virus que comparte muchos rasgos comunes.

Virus Flaviviridae La familia Flaviviridae de virus comprende al menos tres géneros diferentes: pestivirus, que causan enfermedades en ganado vacuno y cerdos; flavivirus, que son la causa principal de enfermedades tales como dengue y fiebre amarilla; y hepacivirus, cuyo único miembro es VHC. El género flavivirus incluye más de 68 miembros separados en grupos sobre la base del parentesco serológico (Calisher et al., J. Gen. Virol, 1993, 70, 37-43). Los síntomas clínicos varían e incluyen fiebre, encefalitis y fiebre hemorrágica (Fields Virology, Editors: Fields, B.N., Knipe, D. M . , y Howley, P. . , Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, PA, 1996, capítulo 31, 931-959) . Los flavivirus de interés global que se asocian con enfermedades humanas incluyen los virus de fiebre hemorrágica (DHF) , virus de fiebre amarilla, síndrome de shock y virus de encefalitis japonesa (Halstead, S. B., Rev. Infect. Dis., 1984, 6,251-264; Halstead, S. B., Science, 239: 476-481, 1988; Monath, T. P., New Eng. J. Med. 1988, 319, 641-643) .

El género pestivirus incluye virus de diarrea virál bovina (BVDV) , virus de fiebre porcina clásica (CSFV, también llamado virus de cólera del cerdo) y virus de la enfermedad de la frontera (BDV) de las ovejas (Moennig, V. et al. Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98). Las infecciones con pestivirus del ganado domesticado (vacuno, cerdos y ovejas) causa pérdidas económicas significativas en todo el mundo. BVDV causa la enfermedad de la mucosa en ganado vacuno y es de importancia económica significativa para la industria ganadera ( eyers, G. y Thiel, H. J. , Advances in Virus Research, 1996, 47, 53-118; Moennig V., et al., Adv. Vir. Res. 1992, 41, 53-98) . Los pestivirus humanos no se han caracterizado exhaustivamente como los pestivirus de animales. No obstante, los estudios serológicos indican una considerable exposición a pestivirus en los seres humanos.

Los pestivirus y hepacivirus son grupos virus estrechamente relacionados dentro de la familia Flaviviridae .

Otros virus estrechamente relacionados de la familia incluyen virus A de GB, agentes tipo virus A de GB, virus B de GB y virus C de GB (también llamado virus de hepatitis G, HGV) . El grupo hepacivirus (virus de hepatitis C; VHC) consiste en numerosos virus estrechamente relacionados pero genot picamente distinguibles que infectan los seres humanos . Existen al menos 6 genotipos de VHC y más de 50 subtipos. Debido a la semejanza entre los pestivirus y hepacivirus, combinado con la escasa capacidad de los hepacivirus para crecer en forma eficiente en cultivo celular, el virus de la diarrea bovina viral (BVDV) a menudo se usa como sucedáneo para estudiar el virus VHC.

La organización genética de los pestivirus y hepacivirus es muy similar. Estos virus de ARN de cadena positiva poseen un solo marco abierto de lectura grande (ORF) que codifica todas las proteínas virales necesarias para la replicación del virus. Estas proteínas se expresan como una poliproteína que se procesa en forma conjunta con la traducción o posterior a esta por las proteinasas celulares y codificadas por el virus para producir las proteínas virales maduras. Las proteínas virales responsables de la replicación del ARN genómico viral se localizan dentro de aproximadamente el carboxi-terminal . Dos tercios del ORF se denominan no proteínas (NS) . La organización genética y procesamiento de poliproteínas de la porción de la proteína no estructural de la ORF para los pestivirus y hepacivirus es muy similar. En los pestivirus como en los hepacivirus, las proteínas no estructurales (NS) maduras, en orden secuencial desde el extremo amino terminal de la región codificadora de la proteína hasta el extremo carboxi terminal de la ORF, consisten en p7 , NS2 , NS3, NS4A, NS4B , NS5A, y NS5B .

Las proteínas NS de los pestivirus y hepacivirus comparten dominios de secuencia que son característicos de funciones proteicas específicas. Por ejemplo, las proteínas NS3 de los virus en ambos grupos poseen motivos de secuencias de aminoácidos característicos de serina proteinasas y de helicasas (Gorbalenya, et al., Nature, 1988, 333, 22; Bazan y Fletterick, Virology, 1989, 171, 637-639; Gorbalenil, et al., Nucleic Acid Res., 1989, 17, 3889-3897). De modo similar, las proteínas NS5B de los pestivirus y hepacivirus tienen los motivos característicos de ARN polimerasas dirigidas a ARN (Koonin, E. V. y Dolja, V. V., Crit. Rev. Biochem. Molec. Biol., 1993, 28, 375-430).

Los roles y funciones reales de las proteínas NS de los pestivirus y hepacivirus del ciclo vital de los virus son directamente análogos. En ambos casos, la NS3 serina proteinasa es responsable de todo el procesamiento proteolítico de los precursores de la poliproteína corriente debajo de su posición en el ORF (Wiskerchen y Collett, Virology, 1991, 184, 341-350; Bartenschlager et al., J. Virol. 1993, 67, 3835-3844; Eckart et al., Biochem. Biophys . Res. Comm. 1993, 192, 399-406; Grakoui et al., J. Virol. 1993, 67, 2832-2843; Grakoui et al., Proc . Nati. Acad. Aci . USA, 1993, 909, 10583-10587; Hijikata et al., J. Virol. 1993, 67, 4665-4675; Tome et al., J. Virol., 1993, 67, 4017-4026). La proteína NS4A, en ambos casos, actúa como cofactor con la serina proteasa NS3 (Bartenschlager et al., J. Virol. 1994, 68, 5045-5055; Failla et al., J. Virol., 1994, 68, 3753-3760; Xu et al., J. Virol., 1997, 71, 5312-5322). La proteína NS3 de ambos virus también actúa como una helicasa (Kim et al., Biochem Biophys. Res. Comm., 1995, 215, "160-166; Jin y Peterson, Aren. Biochem. Biophys., 1995, 323, 47-53; Warrener y Collett, J. Virol., 1995, 69, 1720-1726). Finalmente, las proteínas NS5B de los pestivirus y hepacivirus presentan la actividad de ARN polimerasa dirigida al ARN predicha (Behrens et al., EMBO, 1996, 15, 12-22; Lechmann et al., J. Virol., 1997, 71, 8416-8428; Yuan et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 1997, 232, 231-235; Hagedorn PCT WO 97/12033; Zhong et al., J. Virol., 1998, 72, 9365-9369).

En la actualidad, existen limitadas opciones de tratamiento para los individuos infectados con el virus de hepatitis C. La opción terapéutica habitual aprobada es el uso de inmunoterapia con interferón-a recombinante solo o en combinación con el análogo nucleosídico ribavirina. Esta terapia es limitada en su efectividad clínica y solo 50% de los pacientes tratados responde a la terapia. En consecuencia, existe una necesidad significativa de nuevas terapias más efectivas para dirigirse a la necesidad médica insatisfecha planteada por la infección con VHC.

En la actualidad, se han identificado numerosos objetivos moleculares potenciales para el desarrollo de fármacos antivirales de acción directa que incluyen, pero sin limitación, la autoproteasa NS2-NS3, la proteasa N3 , la helicasa N3 y la polimerasa NS5B. La ARN polimerasa dependiente de ARN es absolutamente esencial para la replicación del genoma de ARN, monocatenario, de sentido positivo y esta enzima ha provocado un interés significativo entre los químicos farmacéuticos .

Se han examinado los inhibidores de NS5B de VHC como terapias potenciales para la infección con VHC: Tan, S. L. , et al., Nature Rev. Drug Discov. , 2002, 1, 867-881; Walker, M. P. et al., Exp . Opin. Investigational Drugs, 2003, 12, 1269-1280; Ni, Z-J., et al., Current Opinión in Drug Discovery and Development, 2004, 7, 446-459; Beaulieu, P. L. , et al., Current Opinión in Investigational Drugs, 2004, 5, 838-850; Wu, J., et al., Current Drug Targets-Infectious Disorders, 2003, 3, 207-219; Griffith, R. C. , et al . , Annual Reports in Medicinal C emistry, 2004, 39, 223-237; Carrol, S., et al . , Infectious Disorders-Drug Targets, 20-06, 6, 17-29. El potencial para la aparición de cepas de VHC resistentes y la necesidad de identificar agentes con amplia cobertura de genotipo respalda la necesidad de continuar con los esfuerzos para identificar nuevos y más efectivos nucleósidos como inhibidores de NS5B de VHC.

Los inhibidores nucleosídicos de polimerasa NS5b pueden actuar tanto como un sustrato no natural que producen la terminación de la cadena o como un inhibidor competitivo que compite con la unión de nucleótidos con la polimerasa. Para actuar como un terminador de cadena el análogo nucleosídico debe ser captado por la célula y convertido in vivo en un trifosfato para competir por el sitio de unión de la nucleótido polimerasa. Esta conversión al trifosfato está comúnmente mediada por quinasas celulares que imparten requerimientos estructurales adicionales sobre un potencial inhibidor nucleosídico de polimerasa. Lamentablemente, esto limita la evaluación directa de los nucleósidos como inhibidores de la replicación de HCV a ensayos celulares capaces de fosforilación in situ.

En algunos casos, la actividad biológica de un nucleósido es obstaculizado por sus características de mal sustrato para una o varias de las cinasas necesarias para convertirlo en la forma trifosfato activa. La formación del monofosfato por una nucleósido quinasa generalmente se visualiza como la etapa limitante de la velocidad de los tres eventos de fosforilación. Para obviar la necesidad de la etapa inicial de fosforilación en el metabolismo de un nucleósido al análogo trifosfato activo, se ha informado la preparación de profármacos fosfato estables. Se ha demostrado que los profármacos de fosforamidato de nucleósidos son precursores del trifosfato de nucleósidos activos e inhiben la replicación viral cuando se administran a célula enteras infectadas por virus (McGuigan, C, et al., J". Med. Chem. , 1996, 39, 1748-1753; Valette, G., et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 1981-1990; Balzarini, J. , et al., Proc . National Acad Sci USA, 1996, 93, 7295-7299; Siddiqui, A. Q. , et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 4122-4128; Eisenberg, E. J. , et al., Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids, 2001, 20, 1091-1098; Lee, W.A., et al., Antimicrobial Agents and Chemoterapy, 2005, 49, 1898); documento US 2006/0241064; y documento WO 2007/095269.

La utilidad de los nucleósidos como agentes terapéuticos viables también se ve limitada por sus propiedades fisicoquímicas y farmacocinéticas , que a veces pueden ser pobres. Estas pobres propiedades pueden limitar la absorción intestinal de un agente y limitar la absorción en tejido o célula blanco. Para mejorar sus propiedades, se emplearon profármacos de nucleósidos. Se ha demostrado que la preparación de fosforamidatos de nucleósidos mejora la absorción sistémica de un nucleósido y además se enmascara el resto fosforamidato de estos "pronucleótidos" con grupos lipofílicos neutros para obtener un coeficiente de partición adecuado para optimizar la captación y el transporte al interior de la célula para mejorar en forma notable la concentración intracelular del análogo de nucleósido monofosfato respecto de la administración del nucleósido original solo. La hidrólisis mediada por encimas del resto éster fosfato produce un nucleósido monofosfato en donde la fosforilación inicial limitante de la velocidad es innecesaria.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un compuesto purificado representado por la fórmula I o un compuesto purificado representado por la fórmula II: I II en donde R es OMe, OEt, -N(-CH2CH2CH2-) (azetidin-l-ilo) u OH; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, uno de sus hidratos, solvatos o una de sus formas cristalinas.

DEFINICIONES La frase "un" o "una" entidad tal como se usa en la presente se refiere a uno o varios de dicha entidad; por ejemplo, un compuesto se refiere a uno o varios compuestos o al menos un compuesto. Como tales, los términos "un" (o "una"), "uno o varios" y "al menos uno" se pueden usar indistintamente en la presente.

La frase "tal como se define en la presente con anterioridad" se refiere a la primera definición provista en la Síntesis de la invención.

El término "purificado" , tal como se describe en la presente, se refiere a la pureza de determinado compuesto. Por ejemplo, un compuesto está "purificado" cuando el compuesto dado es un componente principal de la composición, es decir, al menos 50% p/p puro. En consecuencia, "purificado" abarca al menos 50% p/p de pureza, al menos 60% p/p de pureza, al menos 70% de pureza, al menos 80% de pureza, al menos 85% de pureza, al menos 90% de pureza, al menos 92% de pureza, al menos 94% de pureza, al menos 96% de pureza, al menos 97% de pureza, al menos 98% de pureza y al menos 99% de pureza.

El término "metabolito" , tal como se describe en la presente, se refiere a un compuesto producido in vivo después de la administración a un sujeto que lo necesite.

El término "sal", tal como se describe en la presente, se refiere a un compuesto producido por la protonación de un resto que acepta protones y/o la desprotonación de un resto donante de protones. Cabe destacar que la protonación del resto que acepta protones da por resultado la formación de una especie catiónica en la cual la carga está equilibrada por la presencia de un anión fisiológico, donde la desprotonación del resto donante de protones da por resultado la formación de una especie aniónica en la cual la carga está equilibrada por la presencia de un catión fisiológico.

El término "P*" significa que el átomo de fósforo es quiral y que tiene una correspondiente designación de Cahn-Ingold-Prelog de "R" o "S" que tienen sus significados plenos aceptados. Se contempla que el nucleósido de fosforoamidato representado por la fórmula I y el nucleósido de fosfato cíclico representado por la fórmula II pueden existir como una mezcla de diastereómeros debido a la quiralidad del fósforo. Los solicitantes contemplan el uso de la mezcla de diastereómeros y/o los diastereómeros resueltos. En algunas instancias, no aparece un asterisco cerca del fosforoamidato o átomo de fósforo del fosfato cíclico. En estas instancias, se entiende que el átomo de fósforo es quiral y que un experto en el arte entiende esto de esta manera, a menos que los sustituyentes unidos al fósforo excluyan la posibilidad de quiralidad en el fósforo, como en P(0)C13.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un compuesto purificado representado por la fórmula I o un compuesto purificado representado por la fórmula II : I II en donde R es OMe, OEt, -N ( -CH2CH2CH2- ) (azetidin-l-ilo) u OH; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

Una primera forma de realización de la presente invención se refiere a un compuesto purificado representado por la fórmula I en donde R es OMe; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

Una primera forma de realización de la presente invención se refiere a un compuesto purificado representado por la fórmula I en donde R es OEt; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

Una tercera forma de realización de la presente invención se refiere a un compuesto purificado representado por la fórmula I en donde R es OH; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

Una cuarta forma de realización de la presente invención se refiere a un compuesto purificado representado por la fórmula I en donde R es -N(-CH2CH2CH2-) (azetidin-l-ilo) ; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

Una quinta forma de realización de la presente invención se refiere a un compuesto purificado representado por la fórmula II o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

DOSIS, ADMINISTRACIÓN Y USO Una sexta forma de realización de la presente invención se refiere a una composición para el tratamiento de cualquiera de los agentes virales descritos en la presente en donde dicha composición comprende un medio farmacéuticamente aceptable seleccionado entre un excipiente, un portador, diluyente o medio equivalente y un compuesto purificado representado por la fórmula I o un compuesto purificado representado por la fórmula II, o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas .

Se contempla que la formulación de la sexta forma de realización puede contener cualquiera de los compuestos purificados contemplados en la presente invención, ya sea solos o en combinación con otro compuesto purificado de la presente invención.

Los compuestos purificados de la presente invención se pueden formular en una amplia variedad de formas de dosificación y portadores para la administración oral. La administración oral puede ser en la forma de comprimidos, comprimidos recubiertos, cápsulas de gelatina dura y blanda, soluciones, emulsiones, jarabes o suspensiones. Los compuestos de la presente invención son eficaces cuando se administrar por administración en supositorios, entre otras vías de administración. La forma más conveniente de administración es generalmente oral usando un régimen de dosificación diario conveniente que se puede ajustar de acuerdo con la severidad de la enfermedad y la respuesta del paciente a la medicación antiviral.

Un compuesto purificado o varios compuestos purificados de la presente invención, así como sus sales farmacéuticamente aceptables, junto con uno o varios excipientes, portadores o diluyentes convencionales, se pueden colocar en la forma de composiciones farmacéuticas y dosis unitarias. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación unitarias pueden comprender los ingredientes convencionales en proporciones convencionales, con o sin compuestos activos adicionales y las formas de dosificación unitarias pueden contener cualquier cantidad efectiva adecuada del ingrediente activo adecuado para el rango de dosificación diaria a emplear. Las composiciones farmacéuticas se pueden emplear como sólidos, tales como comprimidos o cápsulas rellenas, semisólidos, polvos, formulaciones de liberación sostenida o líquidos tales como suspensiones, emulsiones o cápsulas rellenas para uso oral; o en la forma de supositorios para la administración rectal o vaginal. Una preparación típica contiene desde aproximadamente 5% hasta aproximadamente 95% de compuesto o compuestos activo/s (p/p) . El término "preparación" o "forma de dosificación" pretende incluir formulaciones sólidas y líquidas del compuesto activo y un experto en la técnica apreciará que un ingrediente activo puede existen el diferentes preparaciones según la dosis deseada y los parámetros farmacocinéticos .

El término "excipiente" tal como se usa en la presente se refiere a un compuesto que se usa para preparar una composición farmacéutica y generalmente es segura, no tóxica y no es indeseable biológicamente ni de ningún otro modo e incluyes excipientes que son aceptables para uso veterinario además de uso farmacéutico humano. Los compuestos purificados de la presente invención se pueden administrar solos pero generalmente se administran mezclados con uno o varios excipientes, diluyentes o portadores farmacéuticos adecuados seleccionados respecto de la vía de administración pretendida y la práctica farmacéutica estándar.

Una forma de "sal farmacéuticamente aceptable" de un compuesto purificado también puede conferir inicialmente una propiedad farmacocinética deseable sobre el ingrediente activo que está ausente en la forma no salina e incluso puede afectar positivamente la y farmacodinámica del ingrediente activo con respecto a su actividad terapéutica en el organismo. La frase "sal farmacéuticamente aceptable" de un compuesto purificado tal como se usa en la presente significa una sal que es farmacéuticamente aceptable y que posee la actividad farmacológica deseada del compuesto original. Dichas sales incluyen: (1) sales por adición de ácido, formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares; o formado con ácidos orgánicos tales como ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido 3- (4-hidroxibenzoil) benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metansulfónico , ácido etanosulfónico, ácido 1 , 2-etandisulfónico, ácido 2-hidroxietanosulfónico, ácido bencensulfónico, ácido 4-clorobencensulfónico, ácido 2-naftalensulfónico , ácido 4-toluensulfónico, ácido canforsulfónico, ácido laurilsulfúrico , ácido glucónico, ácido glutámico, ácido salicílico, ácido mucónico y similares o (2) sales por adición de base formadas con las bases conjugadas de cualquiera de los ácidos inorgánicos antes enumerados, en donde las bases conjugadas comprenden un componente catiónico seleccionado entre Na+, K+, Mg2+, Ca2+, NHgR ' ' ' 4-g+ , en donde R 1 1 ' es un alquilo Cl-3 y g es un número seleccionado entre 0, 1, 2, 3 ó 4. Se debe entender que todas las referencias a sales farmacéuticamente aceptables incluyen formas de adición de solvente (solvatos) o formas cristalinas (polimorfos) tales como se definen en la presente, de la misma sal por adición de ácido.

También se contempla que el compuesto representado por la fórmula I o el compuesto representado por la fórmula II abarca análogos deuterados . El término "análogos deuterados" significa un compuesto descrito en la presente o sus sales correspondientes, en donde un isótopo 1H, es decir, hidrógeno (H) , es sustituido por un isótopo 2H, es decir, deuterio (D) . La sustitución por deuterio puede ser parcial o completa. La sustitución parcial por deuterio significa que al un hidrógeno está sustituido por al menos un deuterio. Por ejemplo, para un compuesto representado por la fórmula 14, un experto en la técnica puede contemplar al menos los siguientes análogos deuterados parciales (donde "dn" representa n cantidad de átomos de deuterio, tales como para un grupo isopropilo n = 1-7, mientras que para un fenilo, un grupo n = 1-5) . Si bien los grupos metilo descritos a continuación se muestran como completamente deuterados, se reconocerá que las variaciones parcialmente deuteradas también son posibles, tales como, -CDH2 y -CD2H.

Estos son tan sólo unos pocos análogos deuterados que son sintéticamente accesibles mediante procedimientos y reactivos conocidos por los expertos en la técnica.

Las formas de preparaciones sólidas incluyen, por ejemplo, polvos, comprimidos, pildoras, cápsulas, supositorios y granulos dispersables . Un portador sólido puede ser uno o varias sustancias que también pueden actuar como diluyentes, agentes saborizantes , solubilizantes , lubricantes, agentes de suspensión, aglutinantes, conservantes, agentes desintegrantes de comprimido o un material encapsulante . En los polvos, el portador generalmente es un sólido finamente dividido que se mezcla con el componente finamente dividido. En los comprimidos, el componente activo generalmente se mezcla con el portador que tiene la capacidad aglutinante necesaria en las proporciones adecuadas y compactado en la forma y el tamaño deseados. Los portadores adecuados incluyen sin limitaciones carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica, una cera de baja fusión, manteca de cacao y similares. Las formas de preparaciones sólidas pueden contener, además del componente activo, colorantes, saborizantes , estabilizantes, buffer, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, agentes solubilizantes y similares. Los ejemplos de formulaciones sólidas se ejemplifican en los documentos EP 0524579; US 6,635,278; US 2007/0099902; US 7,060,294; US 2006/0188570; US 2007/0077295; US 2004/0224917; US 7,462,608; US 2006/0057196; US 6,267,985; US 6,294,192; US 6,569,463; US 6,923,988; US 2006/0034937; US 6,383,471; US 6,395,300; US 6,645,528; US 6,932,983; US 2002/0142050; US 2005/0048116; US 2005/0058710; US 2007/0026073; US 2007/0059360; y US 2008/0014228, cada uno de los cuales se incorpora por referencia .

Las formulaciones líquidas también son adecuadas para la administración oral e incluyen formulaciones líquidas que incluyen emulsiones, jarabes, elixires y suspensiones acuosas. Estas incluyen preparaciones en forma sólida que tienen por finalidad ser convertidas en preparaciones de forma líquida poco después del uso. Las emulsiones se pueden preparar en soluciones, por ejemplo, en soluciones acuosas de propilenglicol o pueden contener agentes emulsionantes tales como lecitina, monooleato de sorbitano o acacia. Las suspensiones acuosas se pueden preparar por medio de la dispersión del componente activo finamente dividido en agua con material viscoso, tal como gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa sódica y otros agentes de suspensión bien conocidos.

Los compuestos purificados de la presente invención se pueden formular para la administración como supositorios. Una cera de bajo punto de fusión, tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos o manteca de cacao se funde primer y el componente activo se dispersa homogéneamente, por ejemplo, por agitación. La mezcla homogénea fundida luego se vuelca en moldes de tamaño conveniente, se deja enfriar y solidificar.

Los compuestos purificados de la presente invención se pueden formular para administración vaginal. Pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o rocíos que contienen además del ingrediente activo tales portadores son conocidos en la técnica como apropiados.

Las formulaciones adecuadas junto con portadores, diluyentes y excipientes farmacéuticos se describen en Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, editado por E. . Martin, Mack Publishing Company, 19 "edición, Easton, Pennsylvania, que se incorpora así por referencia. Un científico experto en formulaciones puede modificar las formulaciones dentro de las enseñanzas de la memoria descriptiva para proveer numerosas formulaciones para una vía de administración particular sin transformar las composiciones de la presente invención en inestables o comprometer su actividad terapéutica.

La modificación de los presentes compuestos para hacerlos más solubles en agua u otro vehículo, por ejemplo, se puede lograr fácilmente con modificaciones menores (por ejemplo, la formulación de la sal) , lo cual está bien dentro de la experiencia común en la técnica. También se incluye en la pericia técnica común la modificación de la vía de administración y el régimen de dosificación de un compuesto particular a fin de manejar la farmacocinética de los presentes compuestos purificados para el máximo efecto beneficioso en los pacientes.

Además, los compuestos purificados de la presente invención se pueden formular en conjunción con liposomas o micelas. Respecto de los liposomas, se contempla que los compuestos purificados se pueden formular de una manera tal como se describe en las patentes de los Estados Unidos N.° 5,013,556; U.S. 5,213,804; 5,225,212; 5 , 891 , 468 ; 6 , 224 , 903 ; 6,180,134; 5,192,549; 5,316,771; 4,797,285; 5,376,380; 6,060,080; 6,132,763; 6,653,455; 6,680,068; 7,060,689; 7,070,801; 5,077,057; 5,277,914; 5,549,910; 5,567,434; 5,077,056; 5,154,930; 5,736,155; 5,827,533; 5,882,679; 6,143,321; 6,200,598; 6,296,870; 6,726,925; y 6,214,375, cada una de las cuales se incorpora por referencia. Respecto de las micelas, se contempla que los compuestos purificados se pueden formular en una forma tal como se describe en las patentes de los Estados Unidos Nos. 5,145,684 y 5,091,188, ambas incorporadas por referencia.

Una séptima forma de realización de la presente invención se refiere al uso del compuesto representado por la fórmula I o el compuesto representado por la fórmula II o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cualquier condición patológica que sea el resultado de una infección por cualquiera de los siguientes agentes virales: virus de hepatitis C, virus del Nilo occidental, virus de la fiebre amarilla, virus del dengue, rinovirus, poliovirus, virus de hepatitis A, virus de diarrea viral bovina y virus de encefalitis japonesa.

El término "medicamento" significa una sustancia usada en un método de tratamiento y/o profilaxis de un sujeto que lo necesite, en donde la sustancia incluye, sin limitaciones, una composición, una formulación, una forma de dosificación y similares, que comprende el compuesto de la fórmula I. Se contempla que el uso del compuesto representado por la fórmula I en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de cualquiera de las condiciones antivirales descritas en la presente, ya sea solo o en combinación con otro compuesto de la presente invención. Un medicamento incluye, sin limitaciones, una cualquier de las composiciones contempladas por la séptima forma de realización de la presente invención.

Una octava forma de realización de la presente invención se refiere a un método de tratamiento y/o profilaxis en un sujeto que lo necesite, en donde dicho método comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto purificado representado por la fórmula I o el compuesto representado por la fórmula II o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas al sujeto.

Un primer aspecto de la octava forma de realización se refiere a un método de tratamiento y/o profilaxis en un sujeto que lo necesite, en donde dicho método comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos dos compuestos que pertenezcan al espectro del compuesto purificado representado por la fórmula I o el compuesto purificado representado por la fórmula II o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas al sujeto.

Un segundo aspecto de la octava forma de realización se refiere a un método de tratamiento y/o profilaxis en un sujeto que lo necesite, en donde dicho método comprende alternativamente o concurrentemente administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos dos compuestos que pertenecen al espectro del compuesto purificado representado por la fórmula I o el compuesto purificado representado por la fórmula II o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas al suj eto .

Se entiende que un sujeto que lo necesite es uno que padece cualquier condición patológica que sea el resultado de una infección por cualquiera de los agentes virales descritos en la presente, incluido, sin limitaciones, virus de hepatitis C, virus del Nilo occidental, virus de fiebre amarilla, virus de dengue, rinovirus, poliovirus, virus de hepatitis A, virus de diarrea bovina viral o virus de encefalitis japonesa, virus flaviviridae o pestivirus o hepacivirus o un agente viral que cause síntomas equivalentes o comparables con cualquiera de los virus antes mencionados.

El término "sujeto" significa un mamífero, lo cual incluye, sin limitaciones, bovinos, cerdos, ovejas, pollos, pavos, búfalos, llamas, avestruces, perros, gatos y humanos, con preferencia el sujeto es un humano. Se contempla que en el método para tratar un sujeto, la novena forma de realización puede ser cualquiera de los compuestos contemplados en la presente, ya sea solo o en combinación con otro compuesto de la presente invención.

La expresión "cantidad terapéuticamente efectiva" tal como se usa en la presente significa una cantidad requerida para reducir los síntomas de la enfermedad en un individuo. La dosis se ajusta a los requerimientos individuales en cada caso particular. La dosis puede variar dentro de amplios límites según numerosos factores tales como la severidad de la enfermedad tratada, la edad y la condición general de salud del paciente, otros medicamentos con los cuales es tratado el paciente, la vía y la forma de administración y las preferencias y experiencia del médico correspondiente. Para la administración oral, debería ser adecuada una dosis diaria de entre aproximadamente 0.001 y aproximadamente 10 g, incluso todos los valores intermedios, tales como 0.001, 0.0025, 0.005, 0.0075, 0.01, 0.025, 0.050, 0.075, 0.1, 0.125, 0.150, 0.175, 0.2, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9 y 9.5, por día en monoterapia y/o en terapia de combinación. Una dosis diaria particular es entre aproximadamente 0.01 y aproximadamente 1 g por día, incluso todos los valores en incremento de 0.01 g (es decir, 10 mg) intermedios, una dosis diaria preferida de aproximadamente 0.01 y aproximadamente 0.8 g por día, con mayor preferencia, aproximadamente 0.01 y aproximadamente 0.6 g por día y con máxima preferencia aproximadamente 0.01 y aproximadamente 0.25 g por día, cada una de las cuales con inclusión de todos los valores de incremento de 0.01 g intermedios. Generalmente, el tratamiento se inicia con una gran "dosis de carga" inicial, para reducir rápidamente o eliminar el virus, seguido de un reducción de la dosis hasta un nivel suficiente para impedir la resurgencia de la infección. Un experto en la técnica de tratar las enfermedades descritas en la presente podrá, sin indebida experimentación y basado en el conocimiento personal, su experiencia y las descripciones de la presente solicitud, determinar una cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos de la presente invención para una enfermedad y un paciente dados.

La eficacia terapéutica se puede determinar a partir de pruebas de la función hepática que incluyen, sin limitaciones los niveles de proteínas tales como proteínas séricas (por ejemplo, albúmina, factores de coagulación, fosfatasa alcalina, aminotransferasas (por ejemplo, alaninatransaminasa, aspartatotransaminasa) , 5 ' -nucleosidasa, ?-glutaminiltranspeptidasa, etc.), síntesis de bilirrubina, síntesis de colesterol y síntesis de ácidos biliares; una función metabólica hepática que incluya, sin limitaciones, el metabolismo de hidratos de carbono, el metabolismo de los aminoácidos y del amoníaco. Alternativamente, se puede monitorear la efectividad terapéutica mediante la medición de HCV-ARN . Los resultados de estas pruebas permitirán optimizar la dosis.

Un tercer aspecto de la octava forma de realización se refiere a un método de tratamiento y/o profilaxis en un sujeto que lo necesite, en donde dicho método comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto purificado representado por la fórmula I o el compuesto purificado representado por la fórmula II o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas y una cantidad terapéuticamente efectiva de otro agente antiviral; en donde la administración es concurrente o alternativa. Se entiende que el tiempo entre la administración alternativa puede variar entre 1-24 horas, lo cual incluyen cualquier subrango intermedio que incluye, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 y 23 horas. Los ejemplos de "otro agente antiviral" incluyen, sin limitaciones: inhibidores de HCV NS3 proteasa (ver los documentos WO 2008010921, WO 2008010921, EP 1881001, WO 2007015824, WO 2007014925, WO 2007014926, WO 2007014921, WO 2007014920, WO 2007014922, US 2005267018, WO 2005095403, WO 2005037214, WO 2004094452, US 2003187018, WO 200364456, WO 2005028502 y WO 2003006490); HCV NS5B Inhibidores (ver US 2007275947, US20072759300 , WO 2007095269, WO 2007092000, WO 2007076034, WO 200702602, US 2005-98125, WO 2006093801, US 2006166964, WO 2006065590, WO 2006065335, US 2006040927, US 2006040890, WO 2006020082, WO 2006012078, WO 2005123087, US 2005154056, US 2004229840, WO 2004065367, WO 2004003138, WO 2004002977, WO 2004002944, WO 2004002940, WO 2004000858, WO 2003105770, WO 2003010141, WO 2002057425, WO 2002057287, WO 2005021568, WO 2004041201, US, 20060293306, US 20060194749, US 20060241064, US 6784166, WO 2007088148, WO 2007039142, WO 2005103045, WO 2007039145, WO 2004096210 y WO 2003037895) ; los inhibidores de HCV NS4 (ver documentos WO 2007070556 y WO 2005067900) ; los inhibidores de HCV NS5a (ver documentos US 2006276511, WO 2006120252, WO 2006120251, WO 2006100310, O 2006035061); agonistas de receptor símil Toll (ver documento WO 2007093901) ; y otros inhibidores (ver documentos WO 2004035571, WO 2004014852, WO 2004014313, WO 2004009020, WO 2003101993, WO 2000006529); y compuestos descritos en la solicitud de patente de los Estados Unidos N.° 12/053015, presentada el 21 de marzo de 2008 (cuyos contenidos se incorporan por referencia) .

Un cuarto aspecto de la octava forma de realización se refiere a un método de tratamiento y/o profilaxis en un sujeto que lo necesite, en donde dicho método comprende administrar alternativamente o concurrentemente una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto purificado representado por la fórmula I o el compuesto purificado representado por la fórmula II o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas y otro agente antiviral al sujeto. Se entiende que el tiempo entre la administración alternativa puede variar entre 1-24 horas, lo cual incluyen cualquier subrango intermedio incluso, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 y 23 horas .

Se contempla que el otro agente antiviral puede ser tal como interferón- , interferón-ß , interferón-a pegilado, ribavirina, levovirina, viramidina, otro inhibidor de nucleósido HCV polimerasa, un inhibidor de no nucleósido HCV polimerasa, un inhibidor de HCV proteasa, un inhibidor de HCV helicasa o un inhibidor de HCV fusión. Cuando el compuesto activo o su derivado o sal se administran en combinación con otro agente antiviral, la actividad puede aumentar por encima del compuesto original . Cuando el tratamiento es una terapia de combinación, dicha administración puede ser concurrente o secuencial con respecto a la de los derivados de nucleósido. La "administración concurrente" tal como se usa en la presente en consecuencia incluye la administración de los agentes al mismo tiempo o en diferentes momentos. La administración de dos o more agentes al mismo tiempo se puede lograr por una única formulación que contiene dos o más ingredientes activos o por la administración sustancialmente simultánea de dos o más formas de dosificación con un único agente activo.

Se debe notar que para los compuestos purificados descritos en la presente se pueden formar metabolitos después de la administración a un sujeto que lo necesita. Por ejemplo, el resto de fosforoamidato se puede someter a hidrólisis para formar un derivado de monofosfato que luego se puede someter a fosforilación para proporcionar el derivado de difosfato y trifosfato, que en condiciones fisiológicas estará presente en forma de sales fisiológicas. Como en la presente se contemplan metabolitos o sales de metabolitos, también se contempla como una forma de realización alternativa un método de tratamiento en un paciente que lo necesita para poner en contacto al menos un metabolito obtenido del compuesto purificado representado por la fórmula I o al menos un metabolito obtenido del compuesto purificado representado por la fórmula II con al menos una célula infectada por virus de hepatitis C.

Se entenderá que las referencias en la presente a un tratamiento se extienden a la profilaxis así como al tratamiento de las condiciones existentes. Además, el término "tratamiento" de una infección por HCV, tal como se usa en la presente, también incluye el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o una condición patológica asociada con o mediada por infección por HCV o sus síntomas clínicos correspondientes.

EJEMPLOS Una mayor comprensión de las formas de realización descritas se apreciará en consideración de los siguientes ejemplos, los cuales sólo intentan se ilustrativos y no limitantes de la invención descrita.

Se registraron los valores de 1H-RMN descritos en un instrumento Varían AS-400. Se obtuvieron datos de espectros de masa usando ya sea Micromass-Quattromicro API o Waters Acquit .

Análisis de UPLC: columna Acquity UPLC BEH C18 1.7 µ?? 2.1x50 mm; 0 a 2 min, 5 a 95% (0.1% de ácido fórmico en acetonitrilo) en 0.1% de ácido fórmico en agua; 2 a 2.4 min, 95 a 5% (0.1% de ácido fórmico en acetonitrilo) en 0.1% de ácido fórmico en agua; 2.4 a 3 min, 5% (0.1% de ácido fórmico en acetonitrilo) en 0.1% de ácido fórmico en agua.

El siguiente esquema pretende servir como ayuda visual para la siguiente discusión y no pretende limitar el alcance de las reivindicaciones anexas. Un procedimiento general para preparar nucleósidos de fosforoamidato se describe en la solicitud de patente U. S. N° 12/053015, presentada el 21 de marzo de 2008, en las páginas 651-655, cuyos contenidos se incorporan por referencia.

El compuesto (1) se puede obtener por un proceso descrito en la página 5 de la solicitud publicada U.S. N.° 2008/0139802 (que corresponde al documento WO 2008/045419) , en las páginas 11-13 del documento WO 2006/012440 y en las páginas 20-22 y 30-31 del documento WO 2006/031725, cada uno de los cuales se incorpora así por referencia.

Síntesis de benzoato de ( (2R, 3R, 4R, 5R) -3- (benzoiloxi) -4-fluoro-5-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metilo (2) A un recipiente de base redonda de tres bocas seco de 5 L equipado con un agitador mecánico, embudo de adición y termómetro, se cargó la lactona (benzoato de ( 2R, 3R, 4R) -3-( enzoiloxi) -4-fluoro-4-metil-5-oxotetrahidrofuran-2-il) metió) (1, 379 g, 1.018 mol) . El sólido se disolvió en THF anhidro (1.75 L) y se enfrió hasta -30 °C bajo una atmósfera de nitrógeno. Una solución de hidruro de tri-ter-butoxialuminio y litio (1.0 M en THF, 1.527 L) se añadió a la solución de lactona mientras se agitaba durante 1 h y se mantenía la temperatura de -30 °C. Una vez terminada la adición, la temperatura se aumentó lentamente y se controló la reacción con TLC (lactol Rf 0.4, 30% de EtOAc en hexanos) . La reacción estaba completa después de 1 h 15 min (la temperatura alcanzó -10 °C) . La reacción se neutralizó por adición de acetato de etilo (900 mL) por medio de un embudo de adición. Se añadió NH4C1 saturado (40 mL) a 0 °C. La mezcla turbia se decantó en un recipiente de base redonda de 10 L. El residuo sólido dejado atrás se filtró y se lavó con acetato de etilo (2x200 mL) . El filtrado se combinó con la solución decantada y la solución combinada se concentró a presión reducida. El residuo oleoso se disolvió en acetato de etilo (2 L) y se lavó con HC1 3 N (600 mL) . La capa acuosa se reextrajo con acetato de etilo (3x400 mL) . La capa orgánica combinada se lavó con agua (3x800 mL) , NaHC03 sat . (400 mL) y salmuera (400 mL) . La solución orgánica se secó sobre MgS04 , se filtró y se concentró a presión reducida para obtener un residuo oleoso marrón claro. El residuo se purificó por columna con tapón (2.2 kg de gel de sílice de 40-63 micrones, empaquetada en un embudo de vidrio sinterizado de 6 L, 22 cm de largo de gel de sílice, diámetro 15 cm) usando succión y un gradiente en etapas de 5%, 10%, 20% y 30% de acetato de etilo en hexanos -aproximadamente 5 L cada uno) . El producto con fracciones se combinó y se concentró a presión reducida en un líquido incoloro muy espeso (310.4 g) .

El líquido se solidificó lentamente después de añadir producto beta cristalino como semillas (aproximadamente 100 mg de dispersión) al vacío (0.2 mmHg) a 50 °C. El proceso de solidificación estaba completo en 20 horas a 50 °C con o sin vacío. El sólido blanco así recogido (293.8 g, 77%) tiene un punto de fusión de 79-80 °C y la relación de ß/a es 20:1 en base a RMN. 1H-RMN (DMSO-d6) ß-isómero, d = 5.20 (dd, 1 H, OH); a-isómero, d = 5.40 (dd, 1 H, OH). (ß-lactol). (DMSO-d6) : d 7.99 (m, 2 H, arom . ) , 7.93 (m, 2 H, arora.) , 7.70 (m, 1 H, arom.), 7.61 (m, 1 H, arom.), 7.55 (m, 2 H, arom.), 7.42 (m, 2 H, arom.), 7.32 (dd, 1 H, Cl-H) , 5.54 (dd, 1 H, C3-H) , 5.20 (dd, 1 H , OH), 4.55-4.50 (m, 1 H, C5-Ha) , 4.46-4.40 (m, 2 H, C5-Hb y C4-H) , 1.42 (d, 3 H, CH3 ) .

Síntesis de benzoato de ( (2R, 3R, 4R, 5R) -3- (benzoiloxi) -5-bromo-4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metilo (3) El diclorometano anhidro (5.6 L) se cargó en un reactor y se enfrió hasta -22 °C o menos. Se añadió trifenilfosfina (205.4 g, 0.783 mol) al solvente frío y la suspensión se agitó para formar una solución. El lactol (2, 209.4 g, 0.559 mol) en forma sólida se añadió a la solución fría y se agitó durante 15 min. Se agregó tetrabromuro de carbono (278.2 g, 0.839 mol) en porciones mientras se mantenía la temperatura de la solución entre -22 °C a -20 °C bajo una corriente de gas nitrógeno (aproximadamente 30 min) . Una vez terminada la adición de CBr4 , la temperatura se elevó lentamente hasta -17 °C durante 20 min. Se consideró que la reacción era >95% completa con TLC (Rfs 0.61 (a), 0.72 (ß), 0.36 lactol; 20% de EtOAc en hexanos) . La solución de reacción se transfirió inmediatamente a un recipiente con 230 g de gel de sílice de grado de cromatografía flash (40-63 micrones) . La mezcla agitada se pasó de inmediato a través de un taco de gel de sílice (680 g) en un embudo de Buchner de vidrio sinterizado de 2.5 L. El filtrado se concentró a presión reducida hasta aproximadamente 800 mL y la relación de isómeros a/ß del producto crudo era 10:1 tal como se determinó con 1H-RMN (CDC13) d = 6.35, (s, a Cl-H) , 6.43, (d, ß Cl-H) . El residuo se purificó por cromatografía de columna con tapón usando 2.1 kg de gel de sílice en un embudo de Buchner de vidrio sinterizado de 6 L y se eluyó (por succión) con una elución de gradiente en etapas de 1%, 5%, 8% 12% de EtOAc en hexano (cada uno 4 L) para eliminar las impurezas no polares por 12%, 25% de EtOAc en hexano (6 L total) para eluir el producto. El producto con fracciones se combinaron en dos fracciones, se concentró a presión reducida, se secó al vacío (0.1 mmHg, temperatura ambiente, 20 h) en aceites incoloros. Fracción principal (197 g, 89% a/ß = 20:1). El isómero alfa cristalizó en una pequeña porción del aceite en reposo a 0 °C durante varias semanas para dar placas finas largas, punto de fusión 59-61 °C. El isómero beta puro cristalizó en una mezcla de producto oleoso alfa y beta de una corrida anterior menos selectiva para dar agujas, punto de fusión 77-79 °C. 1H-RMN (ß-bromuro) (CDC13): d = 8.08 (m, 2 H, arom. ) , 8.04 (m, 2 H, arom.), 7.62 (m, 1 H, arom.), 7.54-7.45 (m, 3 H, arom.) , 7.35 (m, 2 H, arom.), 6.43 (d, 1 H, Cl-H) , 6.04 (dd, 1 H, C3-H) , 4.78-4.73 (m, 2 H, C4-H y C5-Ha) , 4.63-4.58 (m, 1 H , C5-Hb) , 1.76 (d, 3 H, CH3) . a-bromuro, a/ß = 20:1) (CDC13) : d 8.13 (m, 2 H, arom. ) , 8.02 (m, 2 H , arom. ) , 7.63-7.56 (m, 2 H, arom.) , 7.50-7.42 (m, 4 H , arora.) , 6.34 (s, 1 H , Cl-H) , 5.29 (dd, 1 H , C3-H) , 4.88 (m, 1 H, C4-H) , 4.78 (dd, 1 H , C5-Ha) , 4.63 (dd, 1 H , C5-Hb) , 1.72 (d, 3 H, CH3 ) .

Síntesis de benzoato de (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il) -2- (benzoiloximetil) -4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-ilo (4) A un recipiente de base redonda de tres bocas de 12 L se cargó 6-cloro-2-aminopurina (225.4 g, 1.329 mol). Se añadió ter-BuOH anhidro (4.5 L) y la solución se agitó con un agitador mecánico a temperatura ambiente. Se añadió ter-butóxido de potasio (sólido, 151.6 g, 1.35 mol) en porciones bajo una corriente de gas nitrógeno mientras se agitaba. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min más. A un recipiente de base redonda de 5 L se cargó el a-bromuro (3, 197 g, 0.451 mol) y 3 L de acetonitrilo anhidro a temperatura ambiente. La solución de bromuro se añadió a la suspensión de base de purina durante 1 min a temperatura ambiente. El recipiente de 5 L se enjuagó con acetonitrilo (2xlL) para transferir el bromuro por completo a la mezcla de reacción. La mezcla se calentó gradualmente hasta 50 °C durante 2 h con una camisa de calentamiento y controlador y se agitó durante 20 h. La reacción estaba casi completa, tal como se mostró con TLC beta (Rí 0.28, 30% de EtOAc en hexanos) . La reacción se neutralizó con la adición de NH4C1 sat . (200 mL) para formar una suspensión. El sólidol suspendido se eliminó por filtración a través de un taco de 3 cm de Celite en un embudo de Buchner de porcelana de 2.5 L. El sólido se lavó con tolueno (3x100 mL) . El filtrado combinado se neutralizó añadiendo solución 6 N de HCl hasta pH 7 (aproximadamente 220 mL) . La mezcla se concentró a presión reducida. Cuando el volumen de la mezcla se redujo hasta aproximadamente un tercio del volumen, se eliminó el sólido precipitado adicional por filtración de una manera similar. El filtrado luego se concentró hasta un volumen de aproximadamente 800 mL. El residuo se cargó en una columna con tapón (1.6 kg de gel de sílice de grado flash en un embudo de Buchner de vidrio sinterizado de 6 L) y se eluyó (por succión) con un gradiente de 10% de acetato de etilo en hexanos (6 L) para eliminar las impurezas no polares, 30% de acetato de etilo en hexanos para obtener una pequeña cantidad de lactol (6 L) y luego 40%~45% de acetato de etilo en hexanos (4 L) para eluir la cantidad principal de producto. El producto que contenía fracciones se combinó, se concentró a presión reducida y se secó al vacío (0.2 mmHg, 24 h, temperatura ambiente) para dar un sólido espumoso blanco (150.7 g, ß/a = 14:1 con RM . 1H-RMN (CDC13) beta: d = 1.33 (d, 22.4 Hz, 2'-C-CH3), alfa: 1.55 (d, 22 Hz, 2'-C-CH3).

La espuma de mezcla producida se disolvió en metanol (700 mL) a temperatura ambiente. Después de reposar, se formó lentamente un sólido durante 2 h. La suspensión se enfrió en un congelador hasta -5 °C durante 17 h. El sólido blanco resultante se recogió por filtración y se lavó con MeOH frío (-5 °C, 3x60 mL) y éter etílico (3x100 mL) . El sólido se secó al vacío (0.2 mmHg, 24 h, temperatura ambiente) para obtener 110.5 g de producto ß con excelente (ß/a 99.8:1 por HPLC) . El filtrado se concentró parcialmente (aproximadamente 400 mL) y luego se diluyó con más MeOH (400 mL) mientras se calentaba hasta 60 °C. La solución se enfrió hasta temperatura ambiente, se sembró y se enfrió hasta -5 °C. El segundo lote se recogió, se lavó y se secó de una manera similar para dar más producto como un sólido blanco (12.26 g) con una pureza diastereomérica similar. El licor madre se concentró hasta sequedad a presión reducida (aprox. 25 g) . El residuo era una mezcla de isómeros ß y a. Se sometió a una cromatografía en columna de gel de sílice automatizada (Analogix, cartucho de 240 g, 40% a 50% acetato de etilo en hexanos) para obtener 14.52 g de espuma de producto que se recristalizó en MeOH, se lavó y se secó de una manera similar para obtener 8.46 g adicionales de producto con alta pureza.

Los tres sólidos se juzgaron con pureza similar y se combinaron para dar 131.2 g de producto cristalino blanco 4, (55% de bromoazúcar, 49% de lactol) . Punto de fusión 160.5-162.0 °C. Pureza de HPLC 99.5% incluyendo 0.20% de alfa. 1H-R N (anómero ß puro, CDC13) : d = 8.03 (ra, 2 H, arom.) , 7.93 (m, 2 H, arom. ) , 7.88 (s, 1 H, C8-H) , 7.60 (m, 1 H, arom.) , 7.50 (m, 1 H, arom.) , 7.44 (m, 2 H, arom.) , 7.33 (m, 2 H, arom.) , 6.44 (dd, 1 H, Cl'-H) , 6.12 (d, 1 H, C3'-H) , 5.35 (S, 2 H, NH2) , 5.00 (dd, 1 H, C5 ' -Ha) , 4.76 (m, 1 H, C4'-H), 4.59 (dd, 1 H, C5'-Hb), 1.33 (d, 3 H, CH3) . 1H-RMN (isómero a, CDC13) : d = 8.11-8.09 (m, 3 H, arom. y C8-H) , 8.01 (m, 2 H, arom.) , 7.63 (m, 1 H, arom.) , 7.55 (m, 1 H, arom.), 7.48 (m, 2 H, arom.) , 7.39 (m, 2 H, arom.) , 6.35 (d, 1 H, Cl'-H), 5.76 (dd, 1 H, C3'-H) , 5.18 (s, 2 H, NH2) , 4.93-4.89 (m, 1 H, C41 -H) , 4.75-4.71 (m, 1 H, C5'-Ha) , 4.58-4.54 (m, 1 H, C5 ' -Hb) , 1.55 (d, 3 H, CH3 ) .

Síntesis de (2R, 3R, 4 , 5R) -5- (2-amino-6- (azetidin-l-il) -9H-purin-9-il) -4-fluoro-2- (hidroximetil) -4-metiltetrahidrofuran-3-ol (5) A un recipiente de 350 mL a presión sellado seco (Chemglass) se añadieron benzoato de (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il) -2- (benzoiloximetil ) -4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-ilo (4, 3.6 g, 6.85 mmol) y 150 mL de etanol absoluto. Se añadió clorhidrato de azetidina (2.56 g, 27.4 mmol) seguido por trietilamina (4.16 g, 41.1 mmol) . La suspensión se agitó y se calentó hasta 70 °C mientras se sellaba durante 5 horas. Todo el material de partida se consumió pero los grupos benzoilo quedaron tal como indicó la TLC. Se añadió metóxido de sodio (7.8 mL, 34.3 mmol, solución al 25% en metanol) a la mezcla y se calentó a 50 °C. La reacción estaba completa después de 3.5 h. La mezcla de reacción se dejó enfriar hasta temperatura ambiente y se neutralizó por adición de ácido acético glacial- (0.41 g, 6.85 mmol) . La mezcla se concentró a presión reducida y luego el residuo se trituró con acetato de etilo. El sólido resultante se eliminó por filtración y el sólido se lavó con EtOAc (2x 15 mL) . El filtrado se concentró a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna (Analogix, cartucho de 120 g, gradiente de 0 a 15% de MeOH en DCM) . El producto puro que contenía fracciones se combinó, se concentró a presión reducida y se secó (50 °C, 0.2 mmHg, 17 h) en un sólido espumoso de color rosa claro (2.15 g, 6.35 mmol, 93%) . 1H-RMN (DMS0-d6) d = 8.00 (s, 1 H, C8-H) , 6.03 (s, 2 H, NH2), 6.00 (d, 1 H, Cl'-H), 5.64 (d, 1 H, 3 ' -OH) , 5.24 (t, 1 H, 5--OH), 4.24-4.10 (m, 5 H, N-CH2 de azetidina, C3 ' -H) , 3.90-3.81 (m, 2 H, C4 ' -H y C5'-Ha), 3.69-3.64 (m, 1 H, C5 ' -Hb) , 2.37 (penta, 2 H, centro CH2 de azetidina), 1.05 (d, 3 H , C2 --CH3) .

Síntesis de (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6- (benciloxi) -9H-purin-9-il) -4-fluoro-2- (hidroximetil) -4-metiltetrahidrofuran-3-ol (6) A un recipiente de base redonda seco de 500 mL se añadieron benzoato de (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6-cloro-9H-purin-9-il) -2- (benzoiloximetil) -4-fluoro-4-metiltetrahidrofuran-3-ilo (4, 8.0 g, 15.2 mmol) y alcohol bencílico anhidro (128 mL) . A otros 250 mL de recipiente de base redonda seco se cargaron NaH (60% en aceite mineral, 2.44 g, 60.8 mmol) y DMF anhidra (40 mL) . La suspensión se agitó a 0 °C en un baño de agua y hielo. Se añadió alcohol bencílico (27 mL) gota a gota por medio de una jeringa. Una solución se formó lentamente y se transfirió a la suspensión de nucleósido rápidamente bajo una atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. La mezcla se calentó hasta 50 °C y se agitó. La reacción estaba completa después de 3 h y se enfrió hasta temperatura ambiente. Se neutralizó por adición de HC1 4 N hasta aproximadamente pH = 7 (12 mL) . La solución se concentró a presión reducida (4 mbar, baño a 90 °C) . El residuo turbio se diluyó con diclorometano (100 mL) y se lavó con agua (3x 30 mL) , salmuera (30 mL) y se secó sobre Na2S04. La suspensión se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida para dar un residuo oleoso. Esto se purificó por cromatografía en columna (Analogix, 0 a 8% de gradiente de MeOH en DCM) . El producto se eluyó a 4% de eOH en DCM. El producto que contenía fracciones se combinó, se concentró a presión reducida y se secó (50 °C, 0.2 mmHg, 17 h) para dar un sólido espumoso blanco (4.57 g, 11.7 mmol, 77.2%) . 1H-RMN (DMSO-d6) d = 8.18 (s, 1 H, 8-H) , 7.53-7.51 (m, 2 H, H arom.), 7.43-7.34 (m, 3 H, H arom.), 6.66 (s, 2 H, NH2 ) , 6.05 (d, 1 H, Cl'-H), 5.67 (d, 1 H, 3' -OH), 5.48 (dd, 2 H, CH2 de bencilo) , 5.25 (t, 1 H, 5' -OH), 4.18 (dt, 1 H, C3'-H), 3.92-3.82 (m, 2 H, C4 ' -H y C5'-Ha), 3.71-3.66 (m, 1 H, C5 ' -Hb) , 1.07 (d, 3 H, C2'-CH3) .

Síntesis de (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6-metoxi-9H-purin-9-il) -4-fluoro-2- (hidroximetil) -4-metiltetrahidrofuran-3-ol (7) A una suspensión de 4 (500 mg, 0.951 mmol) en MeOH (10 mi) se añadió NaOMe en MeOH (25%, 0.90 mi). La mezcla se calentó hasta 50 °C durante 3 h. A continuación, se neutralizó con AcOH. Se concentró y se añadió EtOAC (30 mi) . El sólido insoluble se filtró. El filtrado se concentró y se purificó por cromatografía flash en columna en gel de sílice usando 0 a 15% de MeOH en CH2C12 como eluyentes. El compuesto 7 (203 mg, 68.3%) se obtuvo en forma de un sólido blanco: 1H RMN (400 MHz , DMSO-d6) d 8.17 (s, 1H) , 6.61 (s, 2H) , 6.05 (d, J = 17.6 Hz, 1H) , 5.67 (d, J = 7.2 Hz , 1H) , 5.25 (t, J = 4.8 Hz, 1H) , 4.18 (dt, J = 25.6, 8.0 Hz , 1H) , 3.96 (s, 3H) , 3.91 (dm, J = 9.2 Hz, 1H) , 3.85 (ddd, J = 2.0, 5.2, 12.8 Hz, 1H) , 3.69 (ddd, J = 2.8, 3.2, 12.0 Hz, 1H) , 1.06 (d, J = 22.8 Hz , 3H) ; tR = 0.52 (99.1%); LRMS (ESI) [M+H] + calculado para C12H17FN504 314.3, exp . 314.2.

Síntesis de 2- ( ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6- (azetidin-1-il) -9H-purin-9-il) -4-fluoro-3- idroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoxi) (fenoxi) fosforilamino)propanoato de (2S) -metilo (8) A un recipiente de base redonda seco de 100 mL se añadieron diclorofosfato de fenilo (1.72 g, 8.15 mmol) y diclorometano anhidro (17 mL) . El aminoéster (1.42 g, 10.2 mmol) se añadió y la suspensión se enfrió hasta -5 °C. Se añadió N-metilimidazol (3.34 g, 40.7 mmol) por medio de una jeringa en una porción y la solución se agitó a -5 °C durante 1 h bajo una atmósfera de nitrógeno. El nucleósido (5, 1.38 g, 4.07 mmol) (sólido espumoso) luego se añadió en una porción y la solución se dejó calentar durante 1 h hasta temperatura ambiente. Después de 4 h a temperatura ambiente, la TLC (5% de eOH en DCM) indicó una reacción incompleta (quedó aproximadamente el 30% de S ) pero también una impureza menos polar. La reacción se neutralizó con la adición de NH4C1 saturado (20 mL) y se diluyó con diclorometano (20 mL) . La capa orgánica se separó y se lavó con agua (5x 30 mL) , salmuera (20 mL) y se secó sobre Na2S04. El producto que contenía solución se filtró y se concentró a presión reducida en un residuo oleoso crudo, 3.26 g. Esto se purificó por cromatografía en columna (Analogix, cartucho de 40 g, gradiente de MeOH en DCM de 0% a 10%) . El producto se eluyó a 4% de MeOH en DCM. El producto puro que contenía fracciones se combinó, se concentró a presión reducida y se secó (50 °C, 0.2 mmHg, 17 h) para dar un sólido espumoso blanco (1.322 g, 2.28 mmol, 56%) . Pureza de HPLC 99.25%. Los espectros de RMN del producto mostraron que es una mezcla de dos diastereoisómeros con una relación de 55:45. 1H-RMN (DMSO-d6) d = 7.80 (s, 1 H, 8-H de un isómero) , 7.80 (s, 1 H, 8-H de otro isómero) , 7.38-7.33 (m, 2 H, H arom.), 7.22-7.14 (m, 3 H, H arom.) , 6.09 (s, 2 H, NH2) , 6.12-6.02 (m, 2 H, Cl ' -H y NH) , 5.83 (d, 1 H, 3 ' -OH de un isómero) , 5.77 (d, 1 H, 3 ' -OH de otro isómero), 4.46-4.05 (m, 8 H, NCH2 de azetidina, a-H de aminoéster, C3'-H, C4--H, C5 ' -Ha) , 3.89-3.79 (m, 1 H, C5'-Hb), 3.56 (s, 3 H, 0CH3 de aminoéster en un isómero) , 3.54 (s, 3 H, 0CH3 de aminoéster en otro isómero), 2.37 (penta, 2 H, center CH2 de azetidina), 1.21 (d, 3 H, a-CH3 de aminoéster en un isómero), 1.19 (d, 3 H, -CH3 de aminoéster en otro isómero), 1.08 (d, 3 H, C21 -CH3) . 31P RMN (DMS0-d6) : d 4.85 (un isómero), 4.77 (otro isómero) .

Síntesis de 2- ( ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6- (benciloxi) -9H-purin-9-il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metoxi) (fenoxi) fosforilamino) propanoato de (2S) -metilo (9) A un recipiente de base redonda seco de 100 mL se cargan diclorofosfato de fenilo (3.29 g, 15.58 mmol) y diclorometano anhidro (24 mL) . El tosilato de aminoéster (polvo blanco) se añade y la solución se enfría hasta -5 °C bajo nitrógeno. Se añade iV-metilimidazol (4.92 g, 59.94 mmol) por medio de una jeringa seca en una porción y la solución clara incolora resultante se agita' a -5 °C durante una hora. Luego se añade el nucleósido (6) sólido (2.334 g, 5.99 mmol) a la solución bajo nitrógeno en una porción y la mezcla se deja calentar hasta temperatura ambiente para dar una solución incolora. El progreso de la reacción se controló con TLC (5% de metanol en diclorometano) . La reacción se neutralizó con la adición de diclorometano (30 mL) y HC1 1 N (60 mL) . La capa orgánica se separa y la capa acuosa se extrae con diclorometano (2x20 mL) . La capa orgánica combinada se lava con agua (2x40 mL) , NaHC03 sat (30 mL) , agua y salmuera. La capa orgánica se seca sobre Na2S04. Después de eliminar el sólido por filtración, el filtrado se concentra a presión reducida para dar un residuo gomoso (7.28 g) . El residuo se purifica por cromatografía en columna (Analogix, cartucho de 80 g, gradiente de 0 a 10% de MeOH en DCM) . El producto se eluye a 2% de MeOH en DCM. El producto que contiene fracciones se combina, se concentra a presión reducida y se seca (50 °C, 0.2 mmHg, 17 h) para dar un sólido espumoso blanco. También se recupera una porción del nucleósido de partida (0.257 g) . El rendimiento se basa en el material de partida consumido.

Síntesis de 2- ( ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6-hidroxi-9H-purin-9-il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metoxi) (fenoxi) fosforilamino) ropanoato de (2S)-metilo (14) A un recipiente de 250 mL de base redonda seco con material de partida (9, 1.92 g, 2.8 mmol) se añade etanol absoluto anhidro (50 mL) . Se añade paladio sobre carbón (10%, 120 mg) . La atmósfera en el recipiente se intercambia con hidrógeno y la mezcla se agita bajo 1 atm de gas hidrógeno durante 3.5 h a temperatura ambiente. La reacción se juzga completa por TLC y el Pd sobre carbón se elimina por filtración y se lava con etanol (2x 10 mL) . El filtrado se concentra a presión reducida en un residuo sólido. El sólido se mezcla con gel de sílice (10 g) y se purifica por cromatografía en columna (Analogix, cartucho de 40 g, gradiente de 1% a 16% de MeOH en DCM) . El producto que contiene fracciones se combina, se concentra a presión reducida y se seca (50 °C, 0.2 mmHg, 17 h) en un polvo blanco (1.43 g, 86%) . Pureza de HPLC 99.55%.

Síntesis de 2- ( ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6-metoxi-9H-purin-9-il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metoxi) (fenoxi) fosforilamino) -propanoato de (2S)-isopropilo (11) A una solución de 7 (50 mg, 0.16 mmol) y iV-metilimidazol (0.10 mi, 1.3 mmol) en THF (1.5 mi) se añadió el fosforocloridato en THF (1.0 M, 0.48 mi) a 0 °C gota a gota. La reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. Luego se añadieron agua (0.1 mi) y EtOAc (5 mi) . La solución orgánica se lavó con citrato monobásico de sodio acuoso saturado (2 mi x 2), NaHC03 sat . ac . (2 mL x 1), se secó (MgS04) y se concentró. El aceite crudo se purificó por cromatografía flash en columna en gel de sílice usando 0 a 8% de iPrOH en CH2C12 como eluyentes para dar el fosforoamidato (36 mg, 39%, mezcla 2:1 de diastereómeros ) en forma de un sólido blanco: 1H RMN (400 MHz , D S0-d6) d 7.97 (s, 0.66H), 7.95 (s, 0.34H), 7.39-7.30 (m, 2H) , 7.25-7.13 (m, 3H) , 6.63 (bs, 2H) , 6.11 (d, J = 18.8 Hz, 0.34H), 6.09 (d, J = 19.2 Hz , 0.66H), 6.06-5.88 (ra,. 1H) , 5.90-5.78 (m, 1H) , 4.80 (septeto, J = 6.8 Hz, 1H) , 4.45-4.24 (m, 3H) , 4.16-4.05 (ra, 1H) , 3.96 (s, 3H) , 3.84-3.70 (m, 1H) , 1.28-1.03 (m incluyendo d a 1.20 con J" = 7.2 Hz, 12H) ; 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) d 4.91, 4.72; tR = 1.16 (33.1%), 1.18 (63.9%); LRMS (ESI) [M + H] + calculado para C24H33FN608P 583.5, exp. 583.4.

Síntesis de ácido (2S) -2- ( ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6- (azetidin-l-il) -9H-purin-9-il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-iDmetoxi) (hidroxi) fosforilamino) propanoico (12) 1 ? Se suspendió el compuesto 8 (150 mg, 0.269 mmol) en trietilaraina (2 mL) y agua (0.5 mL) , y se calentó a 60 °C durante 20 h. Los componentes volátiles luego se evaporaron a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía flash en columna en gel de sílice usando 0 a 15% de NH40H en iPrOH como eluyentes. El producto se obtuvo en forma de un sólido blanco (101 mg, 80%) : 1H R N (400 MHz, DMS0-d6) d 7.93 (s, 1H) , 6.10 (bs, 2H) , 5.97 (d, J = 17.2 Hz, 1H) , 4.44-3.86 (m, 10H) , 2.37 (quinteto, J = 7.6 Hz, 2H) , 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H) , 1.05 (d, J = 22.4 Hz, 3H) ; 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) d 8.72; tR = 0.55 (97.4%); LRMS (ESI) [M + H] + calculado para C17H26FN707P 490.4, exp .. 490.4.

Síntesis de ácido (2S) -2- ( ( ( (2R, 3R, R, 5R) -5- (2-amino-6-hidroxi-9H-purin-9-il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il)metoxi) (hidroxi) fosforilamino) propanoico (13) Se suspendió el compuesto 10 (110 mg, 0.204 mmol) en trietilamina (2 mL) y agua (0.5 mL) , y se calentó a 60 °C durante 20 h. Los componentes volátiles luego se evaporaron a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía flash en columna en gel de sílice usando 0 a 20% de NH40H en iPrOH como eluyentes. El producto se obtuvo en forma de un sólido blanco (74 mg, 81%) : 1H RMN (400 MHz, DMS0-d6) d 7.88 (s, 1H) , 6.68 (bs, 2H) , 5.93 (d, J" = 18.0 Hz, 1H) , 4.42-3.83 (m, 6H) , 1.11 (d, J = 7.2 Hz , 3H) , 1.07 (d, J = 22. Hz, 3H) ; 31P RMN (162 MHz , DMSO-d6) d 8.90; tR = 0.50 (98.7%) ; LRMS (ESI) [M + H] + calculado para C14H21FN608P 451.3, exp. 451.3.

Síntesis de ácido (2S) -2- ( ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2-amino-6-metoxi-9H-purin-9-il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metoxi) (hidroxi) fosforilamino) ropanoico (14) Se suspendió el compuesto 11 (110 mg, 0.189 mmol) en trietilamina (2 mL) y agua (0.5 mL) y se calentó a 60 °C durante 48 h. Los componentes volátiles luego se evaporaron a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía flash en columna en gel de sílice usando 0 a 20% de NH40H en iPrOH como eluyentes . El producto se obtuvo en forma de un sólido blanco (88 mg, 97%) : 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d 8.08 (s, 1H) , 6.67 (bs, 2H) , 6.03 (d, J = 18.0 Hz , 1H) , 4.44-3.70 (m incluyendo s a 3.96, 8H) , 3.39 (m, 1H) , 1.10 (d, J = 7.2 Hz, 3H) , 1.05 (d, J = 22.8 Hz, 3H) ; 31P RMN (162 MHz , DMSO-d6) d 8.52; tR = 0.61 (96.3%); LRMS (ESI) [M + H] + calculado para C15H23FN608P 465.3, ex . 465.3.

Síntesis de ácido (2S) -2- ( ( ( (2R, 3R, R, 5R) -5- (2-amino-6-etoxi-9H-purin-9-il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metoxi) (hidroxi) fosforilamino) ropanoico (15) Se contempla que el compuesto 15 se prepara de una manera análoga al compuesto 14.

Síntesis de ácido (2S) -2- ( ( ( (2R, 3R, R, 5R) -5- (2 , 4-dioxo-3,4-dihidropirimidin-l (2H) -il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahidrofuran-2-il) metoxi) (hidroxi) fosforilamino) propanoico (17) 16 17 Se preparó el compuesto 16 (2- ( ( ( (2R, 3R, 4R, 5R) -5- (2 , 4-dioxo-3 , 4-dihidropirimidin-l (2H) -il) -4-fluoro-3-hidroxi-4-metiltetrahydrofuran-2-yi) metoxi) (fenoxi) fosforilamino) propanoato de ( 2S) -isopropilo) de acuerdo con los procedimientos descritos en las páginas 652-669 de la solicitud de patente U. S. N.° 12/053,015 (expediente . ° 60137.0034USU1) presentada el 21 de marzo de 2008, cuyo objeto identificado se incorpora por referencia en su totalidad. (El compuesto 16 se identifica como compuesto 25 en la página 674 de 12/053015.) El compuesto 17 se sintetizó del compuesto 15 por medio del siguiente procedimiento. El compuesto 16 (300 mg, 0.57 mmol) se suspendió en trietilamina (6 mL) y agua (1.5 mL) , y se calentó a 60 °C durante 30 h. Los componentes volátiles se evaporaron luego a presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía flash en columna en gel de sílice usando 50-70% de alcohol isopropílico en diclorometano seguido de 0-20% de hidróxido de amonio en alcohol isopropílico como eluyentes . El producto (2) se obtuvo en forma de un sólido blanco (210 mg, 92% de rendimiento) : 1H RMN (400 MHz, DMS0-d6) d 8.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 5.97 (d, J = 18.8 Hz, 1H) , 5.55 (d, J = 8.0 Hz, 1H) , 4.02-3.80 (m, 4H) , 3.34 (dq, J = 7.2, 10.4 Hz , 1H) , 1.25 (d, J = 22.4 Hz , 3H) , 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 3H) ; 31P RMN (162 MHz, DMSO-d6) d 7.91; MS (ESI) (M + H)+ 412.3.

Se contempla que los compuestos purificados descritos en la presente sean activos contra el virus de la hepatitis C.

Los contenidos de la solicitud de patente de los Estados Unidos N.° 12/053015, presentada el 21 de marzo de 2008 (ver también el documento WO 2008/121634), la solicitud de patente de los Estados Unidos N.° 12/479075, presentada el 5 de junio de 2009 y las solicitudes provisorias de patente de los Estados Unidos N.° 61/060683, presentada el 11 de junio de 2008, 61/140423 y 61/140317, cada una presentada el 23 de diciembre de 2008 se incorporan así por referencia en su totalidad. Además, las referencias de patentes y no patentes descritas en la presente se incorporan por referencia. En el caso de que el objeto incorporado contuviera un término en conflicto con un término descrito en el texto de la presente solicitud, el significado del término contenido en la presente solicitud prevalece siempre que el sentido general del objeto incorporado no se pierda.

Claims (10)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la invención como antecede, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES

1. Un compuesto purificado representado por la fórmula I o un compuesto purificado representado por la fórmula II, una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas: II en donde R es OMe, OEt, -Ñ ( -CH2CH2CH2- ) (azetidin-l-ilo) u OH; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

2. Un compuesto purificado representado por la fórmula I en donde R es O e; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

3. Un compuesto purificado representado por la fórmula I en donde R es OEt; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

4. Un compuesto purificado representado por la fórmula en donde R es OH; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

5. Un compuesto purificado representado por la fórmula I I en donde R es -N (-CH2CH2CH2-) (azetidin-l-ilo) ; o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

6. Un compuesto purificado representado por la fórmula II „ o una de sus sales, sales farmacéuticamente aceptables, hidratos, solvatos o formas cristalinas.

7. Una composición para el tratamiento y/o la prevención de cualquiera de los agentes virales descritos en la presente, que comprende un medio farmacéuticamente aceptable seleccionado de entre un excipiente, portador, diluyente y medio equivalente y el compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6.

8. Un uso del compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de cualquier condición resultante de una infección por virus de hepatitis C, virus del Nilo Occidental, virus de fiebre amarilla, virus del dengue, rinovirus, poliovirus, virus de hepatitis A, virus de diarrea viral bovina o virus de encefalitis japonesa.

9. Un método de tratamiento en un sujeto que lo necesita, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6.

10. Un método de tratamiento en un sujeto que lo necesita, que comprende poner en contacto al menos un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-6 con al menos una célula infectada por el virus de la hepatitis C.