MX2008012929A - Antagonistas de cinasa. - Google Patents

Abstract

La presente invención provee compuestos novedosos que son antagonistas de PI3-cinasa, PI3-cinasa y tirosina-cinasa, PI3-cinasa y mTOR, o PI3-cinasa, mTOR y tirosina-cinasa.

Description

ANTAGONISTAS DE CINASA INTERñEFERENCIA CON SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama el beneficio de la solicitud de patente provisional de EE. UU. No. 60/744,269, presentada el 4 abril de 2006, y la solicitud de patente provisional de EE. UU. No. 60/744,270, presentada el 4 de abril de 2006, ambas incorporadas aquí como referencia en su totalidad para todo propósito.

DECLARACION SOBRE DERECHOS DE INVENCIONES HECHAS BAJO INVESTIGACION Y DESARROLLO CON APOYO FEDERAL La presente invención fue apoyada por una subvención de National Institutes of Health de EE. UU. (AI44009). El gobierno de EE. UU. tiene algunos derechos sobre la invención.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Las fosfoinositida-3-cinasas (PI3-Ks) catalizan la síntesis de los segundos mensajeros de fosfatidilinositol (Pl), PI(3)P, PI(3,4)P2, y PI(3,4,5)P3 (PIP3) (Fruman y otros, 1998). En el contexto celular apropiado, estos tres lípidos controlan diversos procesos fisiológicos que incluyen crecimiento, supervivencia, diferenciación y quimiotaxis celular (Katso y otros, 2001 ). La familia de PI3-K comprende 15 cinasas con distintas especificidades de substrato, patrones de expresión y modos de regulación (Katso y otros, 2001 ). Las PI3-Ks de clase I (?1 10a, ?1 10ß, ?1 10d, y p1 10y) son activadas por tirosina cinasas o receptores acoplados con proteína G para generar PIP3, que se acopla con efectores finales tales como la ruta Akt/PDK1 , las cinasas de la familia Tec, y las GTPasas de la familia Rho. Las PI3-Ks de clase II y III desempeñan una función en el tráfico intracelular mediante la síntesis de PI(3)P y PI(3,4)P2. Las PIKKs son cinasas de proteína que controlan el crecimiento celular (mTORCI ) o monitorean la integridad genómica (ATM, ATR, DNA-PK, y hSmg-1 ). La importancia de estas enzimas en diversas patofisiologías ha hecho de la familia PI3-K el foco de mucho interés como una nueva clase de objetivos de fármaco (Ward y otros, 2003). Este interés se ha fomentado por el reciente descubrimiento de que frecuentemente la p1 10a está mutada en tumores primarios (Samuels y otros, 2004), y la evidencia de que la fosfatasa de lípido PTEN, un inhibidor de la señalización de PI3-K, es un supresor de tumor comúnmente inactivado (Cantley y Neel, 1999). Se han hecho esfuerzos para desarrollar inhibidores de PI3-K de molécula pequeña para el tratamiento de la inflamación y la enfermedad autoinmune (?1 10d, p1 10y y mTOR), trombosis (?1 0ß), infección viral (las PIKKs), y cáncer (p1 10a, mTOR, y otros). Recientemente fueron reportados los primeros inhibidores selectivos de estas enzimas (Camps y otros, 2005; Condliffe y otros, 2005; Jackson y otros, 2005; Knight y otros, 2004; Lau y otros, 2005; Sadhu y otros, 2003). Las tirosina cinasas de proteína, serina/treonina cinasas de proteína, y cinasas de lípido, son distintas clases de proteínas que tienen funciones críticas en la regulación y proliferación de la actividad celular. Las moléculas pequeñas que inhiben estas clases de proteínas tienen el potencial de interrumpir las rutas disfuncionales/patológicas en dos puntos distintos. Por ejemplo, se sabe que la señalización mediante los receptores de tirosina cinasa está descontrolada en varios tipos de cáncer. Esta ruta de señalización incluye proteínas finales tales como la PI3 cinasa. Se sabe que la señalización mediante la serina/treonina-cinasa de proteína mTOR (conocida también como el blanco de rapamicina de mamífero), regula el crecimiento celular, la proliferación celular, la motilidad celular, la supervivencia celular, la síntesis y transcripción de proteína. La interrupción de la ruta de mTOR está implicada como un factor contribuyente de varios procesos patológicos humanos, especialmente varios tipos de cáncer. Un inhibidor que bloquea la actividad de las enzimas tirosina-cinasa de proteína y PI3-cinasa, mTOR y PI3-cinasa, o mTOR, tirosina-cinasa de proteína y PI3-cinasa, tiene el potencial de detener la señalización aberrante en dos o tres puntos diferentes. La inhibición doble o triple con una molécula pequeña puede aumentar la potencia farmacológica aumentando el potencial terapéutico del compuesto. La presente invención cubre estas y otras necesidades suministrando una nueva clase de antagonistas de PI3-cinasa, antagonistas de PI3-cinasa y tirosina-cinasa, antagonistas de PI3-cinasa y mTOR, y antagonistas de PI3-cinasa, mTOR y tirosina-cinasa.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Se ha descubierto que algunos compuestos aquí descritos son potentes antagonistas de las enzimas PI3-cinasa, PI3-cinasa y tirosina-cinasa, PI3-cinasa y mTOR, o PI3-cinasa, mTOR y tirosina-cinasa. En un aspecto, la presente invención provee antagonistas de cinasa novedosos que son antagonistas de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa (por ejemplo, un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa). El antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa es un compuesto que contiene una porción de unión de la cavidad de afinidad de la PI3-cinasa. Los antagonistas de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de la presente invención, son compuestos de pirazolopirimidina sustituidos que contienen una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. Similarmente, los antagonistas de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de la presente invención, son compuestos de pirrolopirimidina sustituidos que contienen una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa.

En otro aspecto, la presente invención provee los antagonistas de cinasa novedosos de la fórmula (I) que se define más abajo. En otro aspecto, la presente invención provee métodos para reducir la actividad catalítica de una PI3-cinasa (por ejemplo, una cinasa p1105). El método incluye el paso de poner en contacto dicha PI3-cinasa con una cantidad reductora de actividad de un compuesto de la presente invención (es decir, antagonistas de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de fórmula I). En otro aspecto, la presente invención provee un método de tratamiento de una condición mediada por la actividad de PI3-cinasa, la actividad de PI3-cinasa y la actividad de tirosina-cinasa, la actividad de PI3-cinasa y mTOR, o la actividad de PI3-cinasa, la actividad de tirosina-cinasa y la actividad de mTOR, en un sujeto en necesidad de dicho tratamiento. El método incluye administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la presente invención (es decir, antagonistas de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o antagonistas de fórmula I).

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Las figuras 1A-1 D ilustran estructuras de inhibidores de PI3-K selectivos de isoforma. La figura 1A ilustra la estructura de ATP en el sitio activo de p1 10 , destacando diferentes regiones de la cavidad de unión de ATP. La figura 1 B ilustra una alineación de todas las estructuras reportadas de co-cristal del inhibidor de PI3-K. Met 804 adopta una conformación hacia arriba en todas las estructuras excepto en PIK-39. La figura 1 C ilustra estructuras o modelos de inhibidores de PI3-K selectivos de isoforma enlazados a p110y. La figura 1 D ilustra estructuras o modelos de inhibidores de PI3-K multidirigidos enlazados a p110y. Las figuras 2A y 2B ilustran el sondeo de selectividad y la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. La figura 2A ilustra la estructura de PIK-39 enlazada a p110K y sugiere un modelo para la unión de IC87114. PIK-293 y PIK-294 son análogos de pirazolopirimidina de IC87114. PIK-294 proyecta un m-fenol hacia la cavidad de afinidad, y este compuesto es más potente contra las PI3-K's de clase I. La figura 2B muestra: izquierda: la relación de valores de IC5o de los inhibidores de p110d entre mutante y tipo silvestre, e inhibidores de p110a /multidirigidos; centro: curvas de dosis-respuesta para la unión de dos inhibidores de ?110d para ?110d de tipo silvestre, M752I y M752V; derecha: modelos que sugieren el impacto de las mutaciones M752I y M752V en p110 d sobre la unión de las diferentes clases de inhibidores. La figura 3 indica la secuencia de una cinasa p110d humana. La figura 4 indica la secuencia de una cinasa p110y, humana. La figura 5 indica la secuencia de una cinasa p110a humana. La figura 6 indica la secuencia de una cinasa p110ß humana.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION I. Definiciones Las abreviaciones utilizadas en la presente tienen su significado convencional dentro del campo químico y biológico. Cuando se especifican grupos sustituyentes por medio de sus fórmulas químicas convencionales, escritas de izquierda a derecha, abarcan igualmente los sustituyentes químicamente idénticos que se originarían de escribir la estructura de derecha a izquierda, por ejemplo, -CH20- es equivalente a -OCH2-. El término "alquilo", solo o como parte de otro sustituyeme, significa, a menos que se indique de otra manera, un radical hidrocarburo de cadena recta (es decir, no ramificada) o ramificada, o cíclico, o combinaciones de los mismos, que puede estar completamente saturado, mono- o poliinsaturado, y puede incluir radicales divalentes y multivalentes, que tiene el número de átomos de carbono designado (es decir, C1-C10 significa de uno a diez carbonos). Ejemplos de radicales hidrocarburo saturados incluyen, sin limitación, grupos tales como metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, ciclohexilo, (ciclohexil)metilo, ciclopropilmetilo, homólogos e isómeros de los mismos, por ejemplo n-pentilo, n-hexilo, n-heptilo, n-octilo, etcétera. Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más enlaces dobles o enlaces triples. Los ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen, sin limitación, vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2- (butadien¡lo), 2,4-pentadienilo, 3-(1 ,4-pentad¡enilo), etinilo, 1 - y 3-propin¡lo, 3- butinilo, y los homólogos superiores e isómeros. El término "alquileno", solo o como parte de otro sustituyente, significa un radical divalente derivado de un alquilo, ejemplificado sin limitación por -CH2CH2CH2CH2-, -CH2CH=CHCH2-, -CH2C=CCH2-, -CH2CH2CH(CH2CH2CH3)CH2-. Típicamente, un grupo alquilo (o alquileno) tendrá de 1 a 24 átomos de carbono, siendo preferidos en la presente invención los grupos que tienen 10 átomos de carbono o menos. Un "alquilo inferior" o "alquileno inferior" es un grupo alquilo o alquileno de cadena más corta, que tiene generalmente ocho átomos de carbono o menos. El término "heteroalquilo", solo o en combinación con otro término, a menos que se indique de otra manera, significa un radical hidrocarburo estable de cadena recta o ramificada o cíclico, o combinaciones de los mismos, que consiste del número indicado de átomos de carbono y por lo menos un heteroátomo seleccionado del grupo que consiste de O, N, P, Si y S, y en donde opcionalmente los átomos de nitrógeno, fósforo y azufre pueden estar oxidados, y opcionalmente el heteroátomo nitrógeno puede estar cuaternizado. Los heteroátomos O, N, P, S y Si pueden estar colocados en cualquier posición interior del grupo heteroalquilo, o en la posición en la que el grupo alquilo está unido al resto de la molécula. Los ejemplos incluyen, sin limitación, -CH2-CH2-O-CH3, -CH2-CH2-NH-CH3, -CH2-CH2-N(CH3)-CH3j -CH2-S-CH2-CH3, -CH2-CH2, -S(O)-CH3, -CH2-CH2-S(O)2-CH3, -CH=CH-O-CH3, -Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3, -CH=CH-N(CH3)-CH3, -O-CH2-CH3, y -CN.

Pueden ser consecutivos hasta dos o tres heteroátomos, tal como por ejemplo -CH2-NH-OCH3 y -CH2-0-Si(CH3)3. Similarmente, el término "heteroalquileno", solo o como parte de otro sustituyente, significa un radical divalente derivado de heteroalquilo, ejemplificado sin limitación por -CH2-CH2-S-CH2CH2- y -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-. Para los grupos heteroalquileno, los heteroátomos también pueden ocupar cualquiera de los extremos de la cadena, o ambos (por ejemplo alquilenoxo, alquilendioxo, alquilenamino, alquilendiamino, etcétera). Además, para los grupos de enlace de alquileno y heteroalquileno no está implicada ninguna orientación del grupo de enlace por la dirección en la que se escribe la fórmula del grupo de enlace. Por ejemplo, la fórmula -C(0)OF representa tanto -C(0)OR' como R'OC(O)-. Como se describe arriba, los grupos heteroalquilo, como se usa aquí, incluyen los grupos que están unidos al resto de la molécula por medio de un heteroátomo, tales como, -C(0)R\ -C(0)NR\ -NR'R", -OR\ -SR', o -SO2R'. Cuando se cita "heteroalquilo", seguido por referencias a grupos heteroalquilo específicos tales como -NR'R" o similares, se entenderá que los términos heteroalquilo y -NR'R" no son redundantes ni mutuamente exclusivos. Más bien, los grupos heteroalquilo específicos se citan para dar más claridad. Así, el término "heteroalquilo" no se debe interpretar como excluyente de grupos heteroalquilo específicos tales como -NR'R", etcétera. Los términos "cicloalquilo" y "heterocicloalquilo", solos o en combinación con otros términos, a menos que se indique de otra manera, representan versiones cíclicas de "alquilo" y "heteroalquilo", respectivamente.

Adicionalmente, para heterocicloalquilo, un heteroátomo puede ocupar la posición en la que el heterociclo está unido al resto de la molécula. Los ejemplos de cicloalquilo incluyen, sin limitación, ciclopentilo, ciclohexilo, 1 -ciclohexenilo, 3-ciclohexenilo, cicloheptilo, etcétera. Los ejemplos de heterocicloalquilo incluyen, sin limitación, 1-(1 ,2,5,6-tetrahidropiridilo), 1 -piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo, 4-moriolinilo, 3-morfolinilo, tetrahidrofuran-2-ilo, tetrahidrofuran-3-ilo, tetrahidrotien-2-ilo, tetrahidrotien-3-ilo, 1 -piperazinilo, 2-piperazinilo, etcétera. Los términos "cicloalquileno" y "heterocicloalquileno" se refieren a los derivados divalentes de cicloalquilo y heterocicloalquilo, respectivamente. Los términos "halo" o "halógeno", solos o como parte de otro sustituyente, a menos que se indique de otra manera, significan un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Adicionalmente, los términos tales como "haloalquilo" incluyen monohaloalquilo y polihaloalquilo. Por ejemplo, el término "haloalquilo de C C4" incluye, sin limitación, trifluorometilo, 2,2,2-trifluoroetilo, 4-clorobutilo, 3-bromopropilo, etcétera. El término "arito", a menos que se indique de otra manera, significa un sustituyente hidrocarburo poliinsaturado aromático, que puede ser un solo anillo o múltiples anillos (preferiblemente de 1 a 3 anillos) que están fusionados entre sí (por ejemplo, naftilo), o están enlazados covalentemente. El término "heteroarilo" se refiere a grupos (o anillos) arilo que contienen de uno a cuatro heteroátomos seleccionados de N, O y S (en cada anillo separado en caso de múltiples anillos), en donde opcionalmente los átomos de nitrógeno y azufre están oxidados, y opcionalmente los átomos de nitrógeno están cuaternizados. Un grupo heteroarilo puede estar unido al resto de la molécula por medio de un carbono o un heteroátomo. Los ejemplos no limitativos de grupos arilo y heteroarilo incluyen fenilo, 1 -naftilo, 2-naftilo, 4-bifenilo, 1 -pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4-oxazolilo, 2-fenil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2-furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 5-benzotiazolilo, purinilo, 2-bencimidazolilo, 5-indolilo, 1-isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 3-quinolilo y 6-quinolilo. Así, el término "heteroarilo" incluye estructuras de anillos fusionados en las que por lo menos un anillo incluye por lo menos dos enlaces dobles. Los sustituyentes para cada uno de los sistemas de anillo arilo y heteroarilo arriba indicados se seleccionan del grupo de los sustituyentes aceptables que se describen mas abajo. Los términos "arileno" y "heteroarileno" se refieren a los radicales divalentes de arilo y heteroarilo, respectivamente. Por brevedad, el término "arilo", cuando se usa en combinación con otros términos (por ejemplo ariloxi, ariltioxo, arilalquilo) incluye anillos tanto arilo como heteroarilo como los que se definen arriba. De esta manera, el término "arilalquilo" incluye los radicales en los cuales un grupo arilo está unido a un grupo alquilo (por ejemplo, bencilo, fenetilo, piridilmetilo, etcétera), incluyendo los grupos alquilo en los cuales un átomo de carbono (por ejemplo un grupo metileno) ha sido reemplazado por ejemplo con un átomo de oxígeno (por ejemplo fenoximetilo, 2-piridiloxímetilo, 3-(1 -naftiloxi)prop¡lo, etcétera). Sin embargo, como se usa aquí, el término "haloarilo" se entiende que cubre solo los arilos sustituidos con uno o más halógenos. Cuando un heteroalquilo, heterocicloalquilo o heteroarilo incluye un número específico de miembros (por ejemplo, "de 3 a 7 miembros"), el término "miembro" se refiere a un carbono o heteroátomo. El término "oxo", como se usa aquí, significa un oxígeno que está unido por doble enlace con un átomo de carbono. Todos los términos anteriores (por ejemplo, "alquilo", "heteroalquilo", "cicloalquilo", "heterocicloalquilo", "arilo" y "heteroarilo", así como sus derivados radicales divalentes), incluyen formas tanto sustituidas como no sustituidas del radical indicado. A continuación se dan los sustituyentes preferidos para cada tipo de radical. Los sustituyentes para los radicales monovalentes o divalentes derivados de alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo (incluyendo los grupos referidos frecuentemente como alquileno, alquenilo, heteroalquileno, heteroalquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, cicloalquenilo y heterocicloalquenilo), pueden ser uno o más de una variedad de grupos seleccionados, sin limitación, de: -OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R", -SR\ -halógeno, -SiR'R"R"', -OC(0)R\ -C(0)R\ -C02R\ -C(0)NR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R\ -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)OR', -NR-C(NR'R")=NR"\ -S(0)R\ -S(0)2R\ -S(O)2NR'R", -NRSO2R\ -CN y -N02, en un número que varía de cero a (2m'+1 ), en donde m' es el número total de átomos de carbono en dicho radical. Cada uno de R\ R", R'" y R"" se refiere independientemente a hidrógeno, grupos heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido (por ejemplo, arilo sustituido con 1 -3 halógenos), alquilo sustituido o no sustituido, alcoxi o tioalcoxi, o grupos arilalquilo. Como se usa aquí, un grupo "alcoxi" es un alquilo unido al resto de la molécula por medio de un radical de oxígeno divalente. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada grupo R se selecciona independientemente como cada grupo R', R", R'" y R"" cuando está presente más de uno de estos grupos. Cuando R' y R" están unidos al mismo átomo de nitrógeno, se pueden combinar con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 4, 5, 6 o 7 miembros. Por ejemplo, -NR'R" incluye, sin limitación, 1 -pirrolidinilo y 4-morfolinilo. De los sustituyentes anteriormente expuestos, el experto en la materia entenderá que el término "alquilo" incluye grupos que incluyen átomos de carbono enlazados a grupos diferentes de hidrógeno, tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH2CF3) y acilo (por ejemplo, -C(O)CH3, -C(0)CF3, -C(O)CH2OCH3) etcétera). De forma similar a los sustituyentes descritos arriba para los radicales alquilo, los sustituyentes ejemplares para los grupos arilo y heteroarilo (y sus derivados divalentes) varían y se seleccionan por ejemplo de: halógeno, -OR', -NR'R", -SR', -halógeno, -S¡R'R"R"\ -OC(O)R', -C(0)R', -CO2R\ -C(O)NR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)OR', -NR-C(NR'R"R'")=NR"", -NR-C(NR'R")=NR"'( -S(O)R\ - S(0)2R\ -S(0)2NR'R", -NRSO2R', -CN y -NO2, -R', -N3, -CH(Ph)2, fluoro-alcoxi de CrC4> y íluoro-alquilo de C C4, en un número que varía de cero hasta el número total de valencias abiertas sobre el sistema de anillo aromático; y en donde R', R", R'" y R"", se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido y heteroarilo sustituido o no sustituido. Cuando un compuesto de la invención incluye más de un grupo R, por ejemplo, cada grupo R se selecciona independientemente como cada grupo R', R", R'" y R"" cuando está presente más de uno de estos grupos. Opcionalmente dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo, pueden formar un anillo de la fórmula -T-C(O)-(CRR')q-U-, en donde T y U son independientemente -NR-, -O-, -CRR'- o un enlace sencillo, y q es un entero de 0 a 3. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo opcionalmente pueden estar reemplazados con un sustituyente de la fórmula -A-(CH2)r-B-, en donde A y B son independientemente -CRR'-, -O-, -NR-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -S(O)2NR'- o un enlace sencillo, y r es un entero de 1 a 4. Uno de los enlaces sencillos del nuevo anillo así formado puede estar reemplazado opcionalmente con un doble enlace. Alternativamente, dos de los sustituyentes sobre átomos adyacentes del anillo de arilo o heteroarilo, opcionalmente pueden estar reemplazados con un sustituyente de la fórmula -(CRR')s-X'-(R"R'")d-, en donde s y d son independientemente enteros de 0 a 3, y X' es -O-, -NR\ -S-, -S(O)-, -S(0)2- o -S(0)2NR'-. Los sustituyentes R, R', R" y R'" se seleccionan independientemente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, y heteroarilo sustituido o no sustituido. Como se usa aquí, el término "heteroátomo" o "heteroátomo de anillo" significa oxígeno (O), nitrógeno (N), azufre (S), fósforo (P) y silicio (Si). Un "aminoalquilo", como se usa aquí, se refiere a un grupo amino enlazado covalentemente a un enlazador alquileno. El grupo amino es -NR'R", en donde R' y R" se seleccionan normalmente de hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. Un "grupo sustituyente", como se usa aquí, significa un grupo seleccionado de las siguientes porciones: (A) -OH, -NH2) -SH, -CN, -CF3) -NO2> oxo, halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, y (B) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo, sustituidos con al menos un sustituyente seleccionado de: (i) oxo, -OH, -NH2, -SH, -CN, -CF3, -NO2) halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, y (¡i) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo y heteroarilo, sustituidos con al menos un sustituyente seleccionado de: (a) oxo, -OH, -NH2, -SH, -CN, -CF3, -NO2, halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, heteroarilo no sustituido, y (b) alquilo, heteroalquilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo, o heteroarilo, sustituido con al menos un sustituyente seleccionado de oxo, -OH, -NH2, -SH, -CN, -CF3, -NO2, halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, y heteroarilo no sustituido. Un "sustituyente de tamaño limitado" o "grupo sustituyente de tamaño limitado" como se usa aquí, significa un grupo seleccionado de todos los sustituyentes anteriormente descritos para un "grupo sustituyente", en donde cada alquilo sustituido o no sustituido es un alquilo sustituido o no sustituido de C C2o, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido es un heteroalquilo sustituido o no sustituido de 2 a 20 miembros, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo sustituido o no sustituido de C4-C8, y cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 4 a 8 miembros. Un "sustituyente inferior" o "grupo sustituyente inferior", como se usa aquí, significa un grupo seleccionado de todos los sustituyentes anteriormente descritos para un "grupo sustituyente", en donde cada alquilo sustituido o no sustituido es un alquilo sustituido o no sustituido de C Ce, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido es un heteroalquilo sustituido o no sustituido de 2 a 8 miembros, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo sustituido o no sustituido de C5-C7> y cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo sustituido o no sustituido de 5 a7 miembros. Los compuestos de la presente invención pueden existir como sales. La presente invención incluye dichas sales. Los ejemplos de formas de sal aplicables incluyen clorhidratos, bromhidratos, sulfatos, metanosulfonatos, nitratos, maleatos, acetatos, citratos, fumaratos, tartratos (por ejemplo (+)-tartratos, (-) tartratos o mezclas de los mismos, incluyendo mezclas racémicas), succinatos, benzoatos y sales con aminoácidos como ácido glutámico. Estas sales se pueden preparar mediante los métodos conocidos. También se incluyen sales de adición de base tales como sal de sodio, potasio, calcio, amonio, amino orgánico, o magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen grupos funcionales relativamente básicos, se pueden obtener sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrocarbónico, fosfórico, monohidrofosfórico, dihidrofosfórico, sulfúrico, monohidrosulfúrico, yodhídrico o fosforoso, etcétera, así como también las sales derivadas de ácidos orgánicos como el ácido acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico, etcétera. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como el ácido glucurónico o galacturónico, etcétera. Algunos compuestos específicos de la presente invención contienen grupos funcionales tanto básicos como ácidos que permiten que los compuestos sean convertidos en sales de adición de base o ácido. Las formas neutras de los compuestos se pueden regenerar preferiblemente poniendo en contacto la sal con una base o ácido, y aislando el compuesto original de la manera convencional. La forma original del compuesto difiere de las diversas formas de sal en algunas propiedades físicas, tales como la solubilidad en disolventes polares. Algunos compuestos de la presente invención pueden existir en formas no solvatadas y también en formas solvatadas, que incluyen formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y se consideran abarcadas dentro del alcance de la presente invención. Algunos compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas son equivalentes para los usos contemplados por la presente invención y se consideran dentro del alcance de la presente invención. Algunos compuestos de la presente invención poseen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos o quirales) o dobles enlaces; los enantiómeros, racematos, diasterómeros, tautómeros, isómeros geométricos y formas estereoisoméricas que se pueden definir en función de su estereoquímica absoluta, tal como (R) o (S), o (D) o (L) para los aminoácidos, y los isómeros individuales, se consideran abarcados dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos de la presente invención no incluyen los que se sabe que son demasiado inestables para sintetizar o aislar. La presente invención incluye compuestos en forma racémica y ópticamente para. Los isómeros (R) y (S) o (D) y (L) ópticamente puros se pueden preparar usando síntesis quirales o reactivos quirales, o se pueden resolver usando las técnicas convencionales. Cuando los compuestos aquí descritos contienen enlaces olefínicos u otros centros de asimetría geométrica, y a menos que se especifique de otra manera, se considera que los compuestos incluyen isómeros geométricos tanto E como Z. El término "tautómero", como se usa aquí, se refiere a uno de dos o más isómeros geométricos que existen en el equilibrio y que son convertidos fácilmente de una forma isomérica a la otra. Será evidente para los expertos en la materia que algunos compuestos de esta invención pueden existir en formas tautoméricas, y todas estas formas tautoméricas de los compuestos están dentro del alcance de la invención. A menos que se indique de otra manera, las estructuras aquí representadas también incluyen todas las formas estereoquímicas de la estructura, esto es, las configuraciones R y S para cada centro asimétrico.

Por lo tanto, están dentro del alcance de la invención los isómeros estereoquímicos individuales y las mezclas enantioméricas y diasteroméricas de los presentes compuestos. A menos que se indique de otra manera, las estructuras aquí representadas también incluyen compuestos que difieren solo por la presencia de uno o más átomos enriquecidos con isótopos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras, excepto por el reemplazo de un hidrógeno por deuterio o tritio, o por el reemplazo de carbono por carbono enriquecido con 13C o 1 C, están dentro del alcance de esta invención. Los compuestos de la presente invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o más de los átomos que constituyen dichos compuestos. Por ejemplo, los compuestos se pueden marcar radiactivamente con isótopos radioactivos tales como por ejemplo tritio(3H), yodo 125 (125l) o carbono 14 ( 4C). Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean radioactivas o no, se consideran abarcadas dentro del alcance de la presente invención. El término "sales farmacéuticamente aceptables" incluye las sales de los compuestos activos que se preparan con ácidos o bases relativamente inocuos, que dependen de los sustituyentes particulares encontrados en los compuestos que se describen. Cuando los compuestos de la presente invención contienen grupos funcionales relativamente ácidos, se pueden obtener sales de adición de base poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente de la base deseada, ya sea pura o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de base farmacéuticamente aceptables incluyen sales de sodio, potasio, calcio, amonio, de amino orgánico, o magnesio, o una sal similar. Cuando los compuestos de la presente invención contienen grupos funcionales relativamente básicos, se pueden obtener sales de adición de ácido poniendo en contacto la forma neutra de dichos compuestos con una cantidad suficiente del ácido deseado, ya sea puro o en un disolvente inerte adecuado. Los ejemplos de sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las derivadas de ácidos inorgánicos como el ácido clorhídrico, bromhídrico, nítrico, carbónico, monohidrocarbónico, fosfórico, monohidrofosfórico, dihidrofosfórico, sulfúrico, monohidrosulfúrico, yodhídrico o fosforoso, etcétera, así como también las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente inocuos tales como el ácido acético, propiónico, isobutírico, maleico, malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, itálico, bencenosulfónico, p-tolilsulfónico, cítrico, tartárico, metanosulfónico, etcétera. También se incluyen sales de aminoácidos tales como arginato y similares, y sales de ácidos orgánicos como el ácido glucurónico o galacturónico, etcétera (véase, por ejemplo, Berge y otros, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1 -19). Algunos compuestos específicos de la presente invención contienen grupos funcionales tanto básicos como ácidos que permiten convertir los compuestos en sales de adición de base o ácido.

Además de las formas de sal, la presente invención provee compuestos que están en una forma de profármaco. Los profármacos de los compuestos aquí descritos son los compuestos que pueden sufrir fácilmente cambios químicos bajo condiciones fisiológicas para proveer los compuestos de la presente invención. Adicionalmente, los profármacos pueden ser convertidos en los compuestos de la presente invención mediante métodos químicos o bioquímicos en un medio ex vivo. Por ejemplo, los profármacos se pueden convertir lentamente en los compuestos de la presente invención cuando se colocan en un depósito de parche transdérmico con una enzima o reactivo químico adecuado. Los términos "uno", "una," y "un", cuando se usan aquí con respecto a un grupo de sustituyentes, significan por lo menos uno. Por ejemplo, cuando un compuesto está sustituido con "un" alquilo o arilo, el compuesto está sustituido opcionalmente con al menos un alquilo o al menos un arilo. Además, cuando una porción está sustituida con un sustituyeme R, el grupo ser referido como "R-sustituido". Cuando una porción es R-sustituida, la porción está sustituida con al menos un sustituyente R, y opcionalmente cada sustituyente R es diferente. La descripción de los compuestos de la presente invención se limita por los principios de unión química conocidos para los expertos en la materia. Por consiguiente, cuando un grupo puede estar sustituido con uno o más de varios sustituyentes, tal sustitución se selecciona a fin de cumplir con los principios de la unión química y para dar los compuestos que no sean inherentemente inestables o que el experto en la materia sabría que son probablemente inestables bajo condiciones ambientales, tales como condiciones acuosas, neutras, y varias condiciones fisiológicas conocidas. Por ejemplo, un heterocicloalquilo o heteroarilo se une al resto de la molécula medio de un heteroátomo de anillo, de conformidad con los principios de unión química conocidos para los expertos en la materia, evitando compuestos inherentemente inestables. Los términos "tratar" o "tratamiento" se refieren a cualquier indicio de éxito en el tratamiento o alivio de una lesión, patología o condición, incluyendo cualquier parámetro objetivo o subjetivo, tal como abatimiento; remisión; disminución de los síntomas, o más tolerancia del paciente a la lesión, patología o condición; retardo de la velocidad de degeneración o declinación; o hacer menos debilitante el punto final de degeneración; o mejorar el bienestar físico o mental de un paciente. El tratamiento o alivio de los síntomas se puede basar en parámetros objetivos o subjetivos, incluyendo los resultados de un examen físico, exámenes neuropsiquiátricos, o una evaluación psiquiátrica. Por ejemplo, algunos métodos presentados en la presente tratan exitosamente el cáncer reduciendo la incidencia del cáncer o causando la remisión del cáncer. Una "cantidad efectiva" es una cantidad suficiente para contribuir al tratamiento, prevención o reducción de uno o más síntomas de una enfermedad. Una "cantidad efectiva" también puede ser referida como una "cantidad terapéuticamente efectiva". Una "reducción" de uno o más síntomas (y los equivalentes gramaticales de esta frase) significa disminuir la severidad o frecuencia de los síntomas, o limitación de los síntomas. Una "cantidad profiláctica efectiva" de un fármaco es una cantidad de fármaco que cuando se administra a un sujeto tiene el efecto profiláctico deseado, por ejemplo prevenir o retrasar el inicio (o recurrencia) de una enfermedad, o reducir la probabilidad del inicio (o recurrencia) de una enfermedad o sus síntomas. El efecto profiláctico completo no necesariamente ocurre con la administración de una dosis y puede ocurrir solo después de la administración de una serie de dosis. Por lo tanto, una cantidad profiláctica efectiva se puede administrar en una o más tomas. Una "cantidad reductora de actividad", como se usa aquí, se refiere a una cantidad de antagonista requerida para disminuir la actividad de una enzima con respecto a la ausencia del antagonista. Como se usa aquí, una "cantidad interruptora de función" se refiere a la cantidad de antagonista requerida para interrumpir la función de un osteoclasto o leucocito con respecto a la ausencia del antagonista. Como se usa aquí, "el antagonista" o "el compuesto de la presente invención" se refiere a un compuesto de fórmula (I), o un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de la PI3-cinasa (por ejemplo antagonistas de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa). Un "compuesto de fórmula (I)" incluye los compuestos de las fórmulas (l)-(X) que se describen más abajo.

II. Antagonistas de cinasa En un aspecto, la presente invención provee antagonistas de cinasa novedosos. Los antagonistas de cinasa pueden ser un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa (por ejemplo, un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa), o un compuesto de fórmula (I). Los antagonistas de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de la presente invención son compuestos que contienen una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. Los antagonistas de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de la presente invención son compuestos de pirazolopirimidina sustituidos que contienen una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. Similarmente, los antagonistas de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de la presente invención, son compuestos de pirrolopirimidina sustituidos que contienen una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. La porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa es un sustituyente que por contacto con una cinasa ?110a, ?110ß, p1 10?, o ?110d, llena el espacio dentro de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa correspondiente. En algunas modalidades, la porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa desplaza por lo menos una molécula de agua dentro de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. La porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa también puede interaccionar con uno o más aminoácidos que forman parte de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. Más abajo se da una descripción de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa y los métodos para determinar si un sustituyente llena el espacio dentro de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. En algunas modalidades, el antagonista de cinasa de la presente invención tiene la fórmula: En la fórmula (I), R es hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. R2 es halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. X es =N- o =C(H)-. R36 es halógeno, -NR37R38, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido. R37 y R38 son, independientemente, hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido. En algunas modalidades, R37 y R38 son, independientemente, hidrógeno, o alquilo no sustituido. R2 puede ser una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. En algunas modalidades, R36 es -NH2. De esta manera, el antagonista de cinasa puede tener la fórmula: En algunas modalidades, R1, R2 y X son como se define arriba en la fórmula (I). En algunas modalidades, X es =N-. En algunas modalidades de las fórmulas (I) y (II), R es hidrógeno, alquilo no sustituido o R3-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R3-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, arilo no sustituido o R3-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R3-sustituido. R2 es halógeno, arilo R -sustituido o heteroarilo sustituido o no sustituido; R3 es halógeno, -CN, -OR5, -S(0)nR6, -NR7R8, -C(O)R9, =N-NH2, -NR10-C(O)R11, -NR12-C(O)-OR13, -C(O)NR14R15, -NR16S(O)2R17, -S(0)2NR18, alquilo no sustituido o R19-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, arilo no sustituido o R 9-sustituido; o heteroarilo no sustituido o R19-sustituido. Entonces el símbolo n es un entero de 0 a 2. R4 es halógeno, -CN, -OR20, -S(0)qR21, -NR22R23, -C(0)R24, =N-NH2, -NR25-C(O)R26, -NR27-C(O)-OR28, -C(O)NR29R30, -NR31S(0)2R32, -S(0)2NR33, alquilo no sustituido o R34 -sustituido, heteroalquilo no sustituido o R3 -sustituido, cicloalquilo no sustituido o R34-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R34-sustituido, arilo no sustituido o R34-sustituido; o heteroarilo no sustituido o R34-sustituido. El símbolo q representa un entero de 0 a 2. p5 p6 p7 D8 p9 p10 p11 R12 R13 R14 R15 R16 R17 p18 p20 p , p , p , p , p , ? , n , p , p , ? , p , ? , p , p , p , R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32 y R33 son, independientemente, hidrógeno, alquilo no substituido o R35-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R35-sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R35-sustituido, arilo no sustituido o R35-sustituido; o heteroarilo no sustituido o R35-sustituido. R19 R34 y R35 son, independientemente, hidrógeno, halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, o heteroarilo no sustituido. En algunas modalidades, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, D p14 , D p 5 , D n16 , ? p17 , P p 8 , P?20 , P n21 , P p22 , R p23 , R n24 , R n25 , R p26 , R n27 , Rp28 , Rp29 , Rp30 , p R31 , R32 y R33 son, independientemente, hidrógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, o heteroarilo no sustituido. R20, R2 , R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32 y R33 pueden ser, independientemente, hidrógeno, alquilo no sustituido, o heteroalquilo no sustituido. R puede ser alquilo no sustituido o R3-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, o arilo no sustituido o R3-sustituido. R también puede ser alquilo no sustituido o R3-sustituido, o cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido. En algunas modalidades, R es alquilo de C1.C4 no sustituido o R3-sustituido, o cicloalquilo de C3-C6 no sustituido o R3-sustituido. En otras modalidades, R1 es alquilo de C1 -C4, no sustituido o R3-sustituido, o ciclopentilo no sustituido o R3-sustituido. R1 también puede ser metilo o alquilo de C3-C6 ramificado no sustituido (por ejemplo, isopropilo, isobutilo, etcétera). En algunas modalidades, R3 es alquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, o arilo no sustituido o R19-sustituido. R3 también puede ser alquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R 9-sustituido, o arilo no sustituido o R19-sustituido. En algunas modalidades, R3 es alquilo no sustituido o R19-sustituido, o cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido. R19 puede ser alquilo no sustituido o cicloalquilo no sustituido. En algunas modalidades, R19 es alquilo de C1-C4 no sustituido o ciclopentilo no sustituido. En algunas modalidades, R2 es arilo R4-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R -sustituido. R2 puede ser fenilo R4-sustituido, naftilo no sustituido o R4-sustituido, piridiniio no sustituido o R4-sustituido, pirimidinilo no sustituido o R4-sustituido, tiofenilo no sustituido o R4-sustituido, furanilo no sustituido o R4-sustituido, indolilo no sustituido o R4-sustituido, benzoxadiazolilo no sustituido o R4-sustituido, benzodioxolilo no sustituido o R4-sustituido, benzodioxanilo no sustituido o R -sustituido, tianaftanilo no sustituido o R4-sustituido, pirrolopiridinilo no sustituido o R4-sustituido, indazolilo no sustituido o R4-sustituido, tetrahidronaftalenilo no sustituido o R4-sustituido, quinolinilo no sustituido o R4-sustituido, quinoxalinilo no sustituido o R4-sustituido, piridopirazinilo no sustituido o R -sustituido, quinazolinonilo no sustituido o R -sustituido, cromenonilo no sustituido o R4-sustituido, benzoisoxazolilo no sustituido o R -sustituido, imidazopiridinilo no sustituido o R4-sustituido, benzofuranilo no sustituido o R4-sustituido, dihidrobenzofuranilo no sustituido o R -sustituido, dihidrobenzodioxinilo no sustituido o R4-sustituido, benzoimidazolilo no sustituido o R -sustituido, benzotiofenilo no sustituido o R4-sustituido. En algunas modalidades, R2 es fenilo R4-sustituido, pirrolopiridinilo no sustituido o R4-sustituido, quinolinilo no sustituido o R4-sustituido, indazolilo no sustituido o R4-sustituido, quinolinilindolilo no sustituido o R -sustituido, o naftilo no sustituido o R4-sustituido. R4 puede ser halógeno, CN, -OR20, o -NR22R23. También, R4 puede ser simplemente halógeno, u -OR20. En algunas modalidades, R2 tiene la fórmula: (III) En la fórmula (III), W1 , W2, W3 y W4 son independientemente =CH-,=CR4-, o =N-. Cada R4 es como se define arriba en la descripción de las fórmulas (I) y (II). El anillo A es un heteroarilo sustituido o no sustituido o heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. En algunas modalidades, el anillo A es un heterocicloalquilo de 6 o 7 miembros o un heteroarilo de 6 o 7 miembros. De esta manera, en algunas modalidades, el anillo A es un anillo de 6 o 7 miembros parcial o totalmente insaturado. R20 puede ser hidrógeno o alquilo de CrC10 no sustituido. En algunas modalidades, R20 es hidrógeno o alquilo de C C4 no sustituido. R20 también puede ser simplemente hidrógeno o metilo. En algunas modalidades, R2 tiene la fórmula: En las fórmulas (IV), (V) y (VI), R4 está ausente, es halógeno, alquilo de CrC4 no sustituido, u -OR20. El halógeno puede ser F, Cl o Br. En algunas modalidades, el halógeno es F o Cl. En otras modalidades, el halógeno es F. R20 puede ser hidrógeno o alquilo de d-C4 no sustituido. En algunas modalidades, R2 es 6-hidroxinaftilo, 7-azaindol no sustituido, indolilo no sustituido, indazolilo no sustituido, o quinolinilo no sustituido. En algunas modalidades, R2 tiene la fórmula: En las fórmulas (VII) y (VIII), R "es como se define arriba. Es de notar que, de acuerdo con la descripción anterior de R20, opcionalmente cada R20 es diferente. El símbolo z es un entero de 1 a 5 (por ejemplo, 1 o 2). En algunas modalidades, R20 es hidrógeno o alquilo de C Ci0 no sustituido (por ejemplo, alquilo de CrC5 tal como metilo o etilo). En algunas modalidades, R2 tiene la fórmula: En las fórmulas (IX) y (X) anteriores, R es como se define arriba, por ejemplo en la descripción de las fórmulas anteriores (I), (II), (VI) y (VII). En algunas modalidades, cada grupo sustituido anteriormente descrito para los compuestos de la presente invención, está sustituido con al menos un grupo sustituyente. Más específicamente, en algunas modalidades, cada alquilo sustituido, heteroalquilo sustituido, cicloalquilo sustituido, heterocicloalquilo sustituido, arilo sustituido, heteroarilo sustituido, aril-alquilo de CrC6, y heteroaril-alquilo de C C6 anteriormente descritos, está sustituido con al menos un grupo sustituyente. En otras modalidades, por lo menos uno o todos estos grupos están sustituidos por lo menos con un grupo sustituyente de tamaño limitado. Alternativamente, por lo menos uno o todos estos grupos están sustituidos con al menos un grupo sustituyente inferior. En otras modalidades de los compuestos anteriormente descritos, cada alquilo sustituido o no sustituido es un alquilo de C C2o sustituido o no sustituido, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido, es un heteroalquilo de 2 a 20 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo de C4-Ce sustituido o no sustituido, cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo de 4 a 8 miembros sustituido o no sustituido. Alternativamente, cada alquilo sustituido o no sustituido es un alquilo de C C8 sustituido o no sustituido, cada heteroalquilo sustituido o no sustituido es un heteroalquilo de 2 a 8 miembros sustituido o no sustituido, cada cicloalquilo sustituido o no sustituido es un cicloalquilo de C5-C7 sustituido o no sustituido, y cada heterocicloalquilo sustituido o no sustituido es un heterocicloalquilo de 5 a 7 miembros sustituido o no sustituido. En otra modalidad, los compuestos de fórmula (I) incluyen cualesquiera o todos los compuestos enlistados más abajo en el cuadro 1.

III. La cavidad de la afinidad de PI3-cinasa El término "cavidad de la afinidad de PI3-cinasa", como se usa aquí, se refiere a una cavidad dentro de p110a, p110ß, p110 y ? 10d que corresponde a la región ligeramente sombreada que se muestra en las figuras 1A, 1C y 1 D, marcada como "cavidad de afinidad". Las figuras 1A, 1 C y 1 D ¡lustran un modelo de computadora de la estructura de cristal de p 10y. En p110 , la superficie de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa está unida, por lo menos en parte, con la cadena lateral de K833, D964, I879 y D841 (numeración de p110>,, véase la figura 4). La superficie de la cavidad correspondiente en ?110d está unida, por lo menos en parte, con la cadena lateral de K779, D911 , I825 y D787 (numeración de ?110d, véase la figura 3). La cavidad correspondiente dentro de p110a está unida, por lo menos en parte, con las cadenas laterales de K802, D933, I848 y D810 (numeración de p110a, véase la figura 5). La cavidad correspondiente dentro de ?110ß está unida, por lo menos en parte, con las cadenas laterales de K805, D937, 1851 y D813 (numeración de ?110ß, véase la figura 6). El ATP no tiene acceso a la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. La cavidad de afinidad de PI3-cinasa de ?1 10d puede ser referida aquí como la cavidad de afinidad de p1105. Similarmente, la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de p110y puede ser referida aquí como la cavidad de afinidad de p110r La cavidad de afinidad de PI3-cinasa incluye lisina 779, que de acuerdo con modelos de computadora, forma un enlace de hidrógeno con el nitrógeno de piridina de PIK-90 y el oxígeno de fenol de PI103 (figura 1 D), los dos siendo inhibidores de p1105. Basándose en estos resultados de modulación de computadora, se diseñó un antagonista novedoso basado en la estructura química de PIK-39 e IC87114, como se detalla más abajo. Como se muestra en la figura 1C, PIK-39 no contiene una porción de cavidad de unión de PI3-cinasa. Como se muestra en la figura 2A, IC87114 mantiene contacto con E880 y V882 en la región de unión de ATP de ?110d, pero también carece de una porción de cavidad de unión de PI3-cinasa. Insertando m-fenol (una porción de cavidad de unión de PI3-cinasa) en el C3 de la pirazolopirimidina de IC87114, se tiene acceso a la cavidad de afinidad de PI3-cinasa (figura 2A), dando como resultado un aumento de 60 veces en la potencia de inhibición de p1106. Como se describe arriba, una porción de cavidad de unión de PI3-cinasa es un sustituyente que después de hacer contacto con p1 10a, ?110ß, p110V o ?1 10d, llena el espacio dentro de la cavidad de unión de la PI3-cinasa correspondiente. Por ejemplo, una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa es un sustituyente que, después de hacer contacto con ?110d, llena el espacio dentro de la cavidad de afinidad de p1 10a. Similarmente, una porción de unión de la cavidad de afinidad de p110a es un sustituyente que, después de hacer contacto con p110a, llena el espacio dentro de la cavidad de afinidad de p110a. En algunas modalidades, la porción de la cavidad de unión de PI3-cinasa interacciona adicionalmente (por ejemplo, se enlaza con) un aminoácido que forma parte de la cavidad de unión de PI3-cinasa. En algunas modalidades relacionadas, la interacción es un enlace de hidrógeno, interacción de van der Waals, enlace iónico, enlace covalente (por ejemplo enlace disulfuro) o interacción hidrofóbica IV Determinación del llenado de espacio dentro de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa Para determinar si la porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa llena el espacio dentro de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, se usan técnicas de modelación de computadora. Un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de consulta (es decir, un compuesto de prueba), se acomoda en una imagen de computadora de p110y. La imagen de computadora de p110v se deriva de la estructura de co-cristal resuelta de la p110y humana enlazada a PIK-39. Se puede usar el sistema de gráficas moleculares PyMOL para generar la imagen. En la figura 2A se presenta un ejemplo en donde IC87114 y PIK-294 se construyen en la imagen de computadora de la cinasa p110y, derivada del co-cristal p110y,-PIK-39; véase Knight y otros, Ce// 125:733-745 (2006). Los modelos de computadora se analizan normalmente para impedir choques esféricos gruesos y para satisfacer enlaces de hidrógeno claves entre el antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de consulta y la proteína p110y (por ejemplo V882 y M804). En algunas modalidades, se realizan cálculos de minimización de energía para optimizar la energía de unión. Usando estas técnicas, el experto en la materia puede determinar fácilmente si un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de consulta incluye una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa que llene el espacio dentro de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa.

En algunas modalidades, el antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de consulta es analizado para determinar si por lo menos se forma un enlace (por ejemplo, un enlace de hidrógeno) entre el antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa de consulta y un aminoácido que forma parte de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. Usando una técnica de modelación de computadora como se describe arriba, se determina la distancia entre uno o más aminoácidos que forman parte de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, y un punto de contacto potencial sobre la porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. Basándose en esta distancia, el experto en la materia puede determinar si por lo menos se forma un enlace entre uno o más aminoácidos que forman parte de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, y una porción de unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa.

V. Síntesis generales Los compuestos de la invención se sintetizan mediante una combinación adecuada de métodos sintéticos generalmente muy conocidos. Las técnicas útiles para sintetizar los compuestos de la invención son muy evidentes y accesibles para los expertos en la técnica relevante. La discusión que se da más abajo se ofrece para ilustrar algunos de los diversos métodos disponibles para usarse en el ensamble de los compuestos de la invención. Sin embargo, la discusión no tiene la intención de definir el alcance de las reacciones o secuencias de reacción que son útiles para preparar los compuestos de la presente invención.

ESQUEMA I En el esquema I anterior, se realiza la yodación de la pirazolo- o pirrolo-pirimidina usando un reactivo de yodación adecuado, tal como N-yodo-succinamida. La elaboración de la posición 1 se puede realizar mediante desplazamiento de halógeno de un sustituyente bromado (por ejemplo un alquilbromuro sustituido o no sustituido). Después se usa acoplamiento cruzado catalizado por paladio entre el ácido organoborico y halogenuro de yodo (es decir, acoplamiento de Suzuki), para elaborar la posición 3. Desarrollos recientes de catalizadores y métodos han ampliado mucho las posibles aplicaciones del acoplamiento de Suzuki, de tal manera que los socios de reacción no se restringen a arilos. Se pueden usar triíluoroboratos de potasio y organoboranos o ésteres de boronato en lugar de los ácidos borónicos. También se pueden usar como socios de acoplamiento algunos pseudohalogenuros (por ejemplo, triflatos). Información adicional respecto al acoplamiento de Suzuki se puede encontrar por ejemplo en Kudo y otros, Angew. Chem. Int. Ed. 45: 1282-1284 (2006); Kirchhoffet y otros, J. Am. Chem. Soc, 124: 13662-13663 (2002); Wu y otros, J. Org. Chem., 68: 670- 673 (2003); y Molander y otros, J. Org. Chem., 67: 8424-8429 (2002).

VI. Métodos En otro aspecto, la presente invención provee métodos para reducir la actividad catalítica de una PI3-cinasa (por ejemplo, una cinasa p1 10a). El método incluye el paso de poner en contacto la PI3-cinasa con una cantidad reductora de actividad de un compuesto de la presente invención (es decir, un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa o el compuesto de la fórmula (I)). En algunas modalidades, el antagonista es capaz de reducir la actividad catalítica de una tirosina-cinasa. En algunas modalidades, el antagonista es un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. En algunas modalidades, el antagonista es específico para p1 10a con respecto a la acción antagonista contra p1 105, p1 10ß, o p1 10 . En algunas modalidades, la IC5o pa a p1 10a es por lo menos 1.5, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, o 1000 veces menor que la IC50 contra ?1 10d, p1 10ß, o p1 10K. En otras modalidades, la IC50 del antagonista contra p1 10a es menor de 100 µ?, 50 µ?, 40 µ?, 30 µ?, 20 µ?, 10 µ?, 5 µ?, 1 µ?, 0.5 µ?, 0.1 µ?, 50 ??, 10 ??, 1 ??, 0.5 ??, 0.1 ??, 50 ??, 10 ??, 10 ??, o 1 ??. En algunas modalidades, el antagonista es específico para p1 10a con respecto a la acción antagonista contra la tirosina-cinasa del receptor de insulina. En algunas modalidades, la IC50 para p110a es por lo menos 1.5, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, o 1000 veces menor que la IC5o contra la tirosina-cinasa del receptor de insulina. En otras modalidades, la IC50 del antagonista contra p110a es menor de 100 µ?, 50 µ?, 40 µ?, 30 µ?, 20 µ?, 10 µ?, 5 µ?, 1 µ?, 0.5 µ?, 0.1 µ?, 50 ??, 10 ??, 1 ??, 0.5 ??, 0.1 ??, 50 ??, 10 ??, o 1 ??. En algunas modalidades, el antagonista reduce, o es capaz de reducir la actividad catalítica de una tirosina-cinasa. En algunas modalidades, la IC50 del antagonista contra la tirosina-cinasa en menor de 100 µ?, 50 µ?, 40 µ?, 30 µ?, 20 µ?, 10 µ?, 5 µ?, 1 µ?, 0.5 µ?, 0.1 µ?, 50 ??, 10 ??, 1 ??, 0.5 ??, 0.1 ??, 50 ??, 10 ??, o 1 ??. Algunas tirosina-cinasas incluyen por ejemplo cinasas de proteína dependientes de ADN (número de registro de proteína de Pubmed (PPAN) AAA79184), tirosina-cinasa Ab1 (CAA52387), Bcr-Ab1 , cinasa de célula hematopoyética (PPAN CA119695), Src (PPAN CAA24495), receptor 2 del tactor de crecimiento endotelial vascular (PPAN ABB82619), receptor 2 del factor endotelial vascular (PPAN ABB82619), receptor del factor de crecimiento epidérmico (PPAN AG43241 ), receptor de EPH B4 (PPAN EAL23820), receptor del factor de célula madre (PPAN AAF22141), receptor de tirosina-cinasa de proteína TIE-2 (PPAN Q02858), tirosina-cinasa relacionada con fms3 (PPAN NP_004110), receptor alfa del factor de crecimiento derivado de plaqueta (PPAN NP_990080), RET (PPAN CAA73131), y mutantes funcionales de las mismas. En algunas modalidades, la tirosina-cinasa es Ab1 , Bcr-Abl, EGFR, o Flt-3.

En algunas modalidades, el antagonista reduce, o es capaz de reducir la actividad catalítica de mTOR (PPAN AAI17167). En algunas modalidades, la IC50 del antagonista contra mTOR es menor de 100 µ?, 50 µ?, 40 µ?, 30 µ?, 20 µ?, 10 µ?, 5 µ?, 1 µ?, 0.5 µ?, 0.1 µ?, 50 ??, 10 ??, 1 ??, 0.5 ??, 0.1 ??, 50 ??, 10 ??, o 1 ??. En algunas modalidades, el antagonista reduce, o es capaz de reducir, la actividad catalítica de mTOR y p 10a con una IC50 menor de 100 µ?, 50 µ?, 40 µ?, 30 µ?, 20 µ?, 10 µ?, 5 µ?, 1 µ?, 0.5 µ?, 0.1 µ?, 50 ??, 10 ??, 1 ??, 0.5 ??, 0.1 ??, 50 ??, 10 ??, o 1 ??. En otras modalidades, el antagonista reduce, o es capaz de reducir, la actividad catalítica de una tirosina-cinasa y p110a con una IC50 menor de 100 µ?, 50 µ?, 40 µ?, 30 µ?, 20 µ?, 10 µ?, 5 µ?, 1 µ?, 0.5 µ?, 0.1 µ?, 50 ??, 10 ??, 1 ??, 0.5 ??, 0.1 ??, 50 ??, 10 ??, o 1 ??. En otras modalidades, el antagonista reduce, o es capaz de reducir, la actividad catalítica de una tirosina-cinasa, mTOR y p110a, con una IC50 menor de 100 µ?, 50 µ?, 40 µ?, 30 µ?, 20 µ?, 10 µ?, 5 µ?, 1 µ?, 0.5 µ?, 0.1 µ?, 50 ??, 10 ??, 1 ??, 0.5 ??, 0.1 ??, 50 ??, 10 ??, o 1 ??. En otro aspecto, la presente invención provee un método de tratamiento de una enfermedad o condición mediada por la actividad de PI3-cinasa, la actividad de PI3-cinasa y la actividad de tirosina-cinasa, la actividad de PI3-cinasa y la actividad de mTOR, o la actividad de PI3-cinasa, la actividad de mTOR y la actividad de tirosina cinasa, en un sujeto en necesidad de dicho tratamiento. El método incluye administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un antagonista. El antagonista es un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa o el compuesto de fórmula (I). En algunas modalidades, el antagonista es un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa. La enfermedad también puede ser un trastorno de resorción de hueso, leucemia mielógena crónica, inflamación anormal, enfermedad autoinmune, trombosis, o asma. La enfermedad también puede ser un tipo de cáncer o metástasis de cáncer, incluyendo por ejemplo leucemia, carcinomas y sarcomas tales como cáncer del cerebro, seno, cerviz, colon, cabeza y cuello, hígado, riñon, pulmón, pulmón de célula no pequeña, melanoma, mesotelioma, cáncer del ovario, sarcoma, cáncer del estómago, útero y meduloblastoma. Los ejemplos adicionales incluyen enfermedad de Hodgkin, linfoma que no Hodgkin, mieloma múltiple, neuroblastoma, cáncer del ovario, rabdomiosarcoma, trombocitosis primaria, macroglobulinemia primaria, tumores del cerebro primarios, cáncer, insulinoma pancreático maligno, carcinoide maligno, cáncer de la vejiga urinaria, lesiones de la piel premalignas, cáncer testicular, linfomas, cáncer tiroideo, neuroblastoma, cáncer esofágico, cáncer del tracto genitourinario, hipercalcemia maligna, cáncer endometrial, cáncer cortical adrenal, neoplasmas del páncreas endocrinos y exocrinos, y cáncer de la próstata. En algunas modalidades, la enfermedad se selecciona de cáncer del hígado, cáncer del colon, cáncer del seno, melanoma, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, o cáncer de pulmón de célula no pequeña. En otro aspecto, la presente invención provee métodos para interrumpir la función de un leucocito o interrumpir la función de un osteoclasto. El método incluye poner en contacto el leucocito o el osteoclasto con una cantidad interruptora de función del antagonista. El antagonista es un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa o el compuesto de fórmula (I). En algunas modalidades, el antagonista es un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa.

VII. Formulaciones farmacéuticas En otro aspecto, la presente invención provee una composición farmacéutica que incluye un antagonista en mezcla con un excipiente farmacéuticamente aceptable. El experto en la materia reconocerá que las composiciones farmacéuticas incluyen las sales farmacéuticamente aceptables de los antagonistas de PI3-cinasa de la presente invención anteriormente descritos. En aplicaciones terapéuticas o diagnósticas, los compuestos de la invención se pueden formular para una variedad de modos de administración, que incluyen administración sistémica y tópica o localizada. Las técnicas y formulaciones se pueden encontrar en general en "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20a ed.) Lippincott, Williams & Wiikins (2000). Los compuestos de acuerdo con la invención son eficaces en una amplia escala de dosis. Por ejemplo, en el tratamiento de humanos adultos se pueden usar dosis de 0.01 mg a 1000 mg, de 0.5 mg a 100 mg, de 1 mg a 50 mg por día, y de 5 mg a 40 mg por día. Una dosis preferida es de 10 mg a 30 mg por día. La dosis exacta dependerá de la vía de administración, la forma en la que se administra el compuesto, el sujeto tratado, el peso corporal de sujeto tratado, y la preferencia y experiencia del médico a cargo. Las sales farmacéuticamente aceptables generalmente son muy conocidas para los expertos en la materia y pueden incluir, a manera de ejemplo y no de limitación, acetato, becenosulfonato, besilato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, citrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato (embonato), pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartrato, o teoclato. Otras sales farmacéuticamente aceptables se pueden encontrar por ejemplo en "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20a ed.), Lippincott, Williams & Wiikins (2000). Las sales farmacéuticamente aceptables preferidas incluyen, por ejemplo, acetato, benzoato, bromuro, carbonato, citrato, gluconato, bromhidrato, clorhidrato, maleato, mesilato, napsilato, pamoato (embonato), fosfato, salicilato, succinato, sulfato, o tartrato. Dependiendo de las condiciones específicas tratadas, dichos agentes se pueden formular en formas de dosis líquidas o sólidas y se pueden administrar por vía sistémica o local. Los agentes se pueden suministrar, por ejemplo, en una forma de liberación lenta, sostenida o controlada, como es conocido para el experto en la materia. Las técnicas de formulación y administración se pueden encontrar en "Remington: The Science and Practice of Pharmacy" (20a ed.), Lippincott, Williams & Wilkins (2000). Las vías adecuadas pueden incluir administración oral, bucal, inhalación de atomización, sublingual, rectal, transdérmica, vaginal, transmucosal, nasal, o intestinal; suministro parenteral que incluye inyección intramuscular, subcutánea, intramedular, así como también inyección intratecal, intraventricular directa, intravenosa, intraarticular, intraesternal, intrasinovial, intrahepática, intralesional, intracraneal, intraperitoneal, intranasal o infraocular, u otros modos de suministro. Para inyección, los agentes de la invención se pueden formular y diluir en soluciones acuosas tales como amortiguadores fisiológicamente compatibles como la solución de Hank, solución de Ringer, o solución salina fisiológica amortiguadora. Para administración transmucosal se usan en las formulaciones agentes auxiliares de penetración, adecuados para la barrera que se quiere penetrar. Tales auxiliares de penetración son generalmente conocidos. El uso de vehículos inertes farmacéuticamente aceptables para formular los compuestos aquí descritos para la práctica de la invención en dosis adecuadas para su administración sistémica, está dentro del alcance de la invención. Con la elección adecuada del vehículo y la práctica de fabricación adecuada, las composiciones de la presente invención, en particular las formuladas como soluciones, se pueden administrar por vía parenteral, por ejemplo por inyección intravenosa. Los compuestos se pueden formular fácilmente usando vehículos farmacéuticamente aceptables muy conocidos, en dosis adecuadas para administración oral. Tales vehículos permiten formular los compuestos de la invención como tabletas, pildoras, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones, etcétera, para ingestión oral a un sujeto que se quiere tratar (por ejemplo un paciente). Para suministro nasal o inhalación, los agentes de la invención también se pueden formular mediante los métodos conocidos y pueden incluir por ejemplo, sin limitación, sustancias de solubilización, dilución o dispersión, tales como solución salina, conservadores como alcohol bencílico, promotores de absorción y fluorocarburos. Las composiciones farmacéuticas adecuadas para usarse en la presente invención incluyen composiciones en donde los ingredientes activos están contenidos en una cantidad efectiva para lograr su propósito deseado. La determinación de las cantidades efectivas es del dominio de los expertos en la materia, especialmente a la luz de la descripción detallada aquí provista.

Además de los ingredientes activos, estas composiciones farmacéuticas pueden contener vehículos farmacéuticamente aceptables adecuados, que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que se pueden utilizar farmacéuticamente. Las preparaciones formuladas para administración oral pueden estar en forma de tabletas, grageas, cápsulas o soluciones. Las preparaciones farmacéuticas para uso oral se pueden obtener combinando los compuestos activos con excipientes sólidos, opcionalmente moliendo la mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después agregando otros auxiliares adecuados si fuera necesario, para obtener tabletas o núcleos de gragea. Los excipientes adecuados son en particular rellenos tales como azúcares, que incluyen lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol, preparaciones de celulosa tales como por ejemplo almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio (CMC) o polivinilpirrolidona (PVP, povidona). Si se desea, se pueden agregar agentes desintegrantes tales como polivinilpirrolidona entrelazada, agar, o ácido algínico o una sal del mismo, tal como alginato de sodio. Los núcleos de gragea se proveen con recubrimientos adecuados. Con este fin se pueden usar soluciones de azúcar concentrada que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol (PEG), o dióxido de titanio, soluciones de laca y disolventes orgánicos o mezclas de disolventes adecuados. Se pueden agregar colorantes o pigmentos a las tabletas o a los recubrimientos de gragea para identificar o caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuesto activo. Las composiciones farmacéuticas que se pueden usar oralmente incluyen cápsulas de ajuste a presión hechas de gelatina, así como también cápsulas selladas blandas hechas de gelatina y un plastificante tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas de ajuste a presión pueden contener los ingredientes activos en mezcla con un relleno tal como lactosa, aglutinantes como almidón, o lubricantes como talco o estearato de magnesio, y opcionalmente estabilizadores. En las cápsulas blandas, los compuestos activos se pueden disolver o suspender en líquidos adecuados tales como aceites grasos, parafina líquida, o polietilenglicoles (PEG's) líquidos. También se pueden agregar estabilizadores. Dependiendo de la condición particular o estado de la enfermedad por tratar o prevenir, junto con los inhibidores de esta invención se pueden administrar agentes terapéuticos adicionales que normalmente se administran para tratar o prevenir esa condición. Por ejemplo, con los inhibidores de esta invención se pueden combinar agentes quimioterapéuticos u otros agentes antiproliferativos para tratar enfermedades proliferativas y cáncer. Los ejemplos de agentes quimioterapéuticos conocidos incluyen, sin limitación, adriamicina, dexametasona, vincristina, ciclofosfamida, fluorouracilo topotecan, taxol, interferones, y derivados de platino.

Otros ejemplos de agentes que se puedne combinar con los inhibidores de esta invención incluyen, sin limitación, agentes antiinflamatorios tales como corticosteroides, bloqueadores de TNF, RA IL-1 , azatioprina, ciclofosfamida y sulfasalazina; agentes inmunomoduladores e ¡nmunosupresores tales como ciclosporina, tacrolimo, rapamicina, micofenolato mofetilo, interferones, corticosteroides, ciclofosfamida, azatioprina y sulfasalazina; factores neurotróficos tales como inhibidores de acetilcolinesterasa, inhibidores de MAO, interferones, anticonvulsivantes, bloqueadores de canales de iones, riluzol y agentes antiparkinsonianos; agentes para el tratamiento de la enfermedad cardiovascular tales como bloqueadores beta, inhibidores de ACE, diuréticos, nitratos, bloqueadores del canal de calcio y estatinas; agentes para tratar la enfermedad hepática tales como corticosteroides, colestiramina, interferones y agentes antivirales; agentes pata el tratamiento de trastornos de la sangre tales como corticosteroides, agentes antileucémicos y factores de crecimiento; agentes para el tratamiento de la diabetes tales como insulina, análogos de insulina, inhibidores de alfa-glucosidasa, biguanidas y sensibilizadores de insulina; y agentes para tratar trastornos de inmunodeficiencia tales como gamma-globulina. Estos agentes adicionales se pueden administrar separadamente de la composición, como parte de un régimen de dosificación múltiple. Alternativamente, estos agentes pueden ser parte de una sola forma de dosis, mezclados junto con el inhibidor en una sola composición.

El alcance de la presente invención no está limitado por las modalidades ejemplares que son ilustraciones de aspectos simples de la invención. En realidad, varias modificaciones de la invención, además de las aquí descritas, serán evidentes para los expertos en la materia partiendo de la descripción anterior. Dichas modificaciones se consideran dentro del alcance de la invención. Además, cualesquiera de una o más caracteristicas de cualquier modalidad de la invención se pueden combinar con cualquiera de una o más de otras caracteristicas de cualquier otra modalidad de la invención, sin apartarse del alcance de la invención. Por ejemplo, los antagonistas de PI3-cinasa anteriormente descritos de la presente invención son igualmente aplicables a los métodos de tratamiento y los métodos de inhibición de cinasas aquí descritos. Las referencias citadas en toda esta solicitud son ejemplos del dominio de la técnica y por lo tanto se incorporan aquí como referencia en su totalidad para todo propósito, ya sea que previamente se hayan incorporado o no específicamente.

VIII. EJEMPLOS Los siguientes ejemplos ilustran algunas modalidades de la invención y no limitan el alcance de la misma.

Métodos generales. Todos los agentes químicos, reactivos y disolventes usados se compraron y se usaron como se recibieron. H2O-d se refiere a agua desionizada. La evaporación de los disolventes se efectuó en un evaporador rotativo bajo presión reducida. Los compuestos se purificaron por cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC) eluyendo con H20-d: MeCN: ácido trifluroacético, 50:50:0.1 , a menos que se indique de otra manera. El análisis de los productos se efectuó en un espectrómetro de masa de cromatografía de líquidos (LCMS) usando como eiuente MeCN /ácido fórmico al 0.1 % (relaciones variables).

A. Procedimientos de reacción seleccionados Síntesis de 1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA18). Una solución de 250 mL de formamida y 3-amino-4-pirazolcarbonitrilo (25 g, 0.231 mol) se calentó a 180°C durante la noche bajo una atmósfera de argón. La reacción se enfrió y se le agregaron 400 mL de H2O-d. El sólido resultante se filtró y se enjuagó con H20-d fría. El precipitado sólido blanco se recogió y se secó al vacío durante la noche para producir BA18 (39 g, 100% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 136.1 , encontrado 136.1. Síntesis de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA19). Una solución de 3H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 g, 0.074 mol) y n-yodo-succinamida (25 g, 0.111 mol) en DMF (80 mL), se calentó a 80°C durante la noche bajo una atmósfera de argón. El sólido resultante se filtró y se enjuagó con EtOH frío. El producto se secó al vacío durante la noche para producir BA19 (24 g, 100% de rendimiento).

ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 262.0, encontrado 262.0. Síntesis de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA12). Una solución de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (2 g, 0.0077 mol) y K2CO3 (4.2 g, 0.031 mol) en DMF (50 mL), se llevó a 80°C bajo una atmósfera de argón. Se le agregó bromuro de isopropilo (1 .0 g, 0.0084 mol) con una jeringa. La reacción se puso en reflujo bajo una atmósfera de argón durante 2 horas. Se removió el K2CO3 sólido por filtración. El disolvente se removió parcialmente al vacío. Se le agregó citrato de sodio (50 mL) y la reacción se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas se concentraron al vacío y el producto combinado se purificó usando cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 5:95], produciendo BA12 (1 .68 g, 72% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 304.0, encontrado 304.1.

Acoplamiento general de Suzuki. Preparación de productos finales (consultar el cuadro 1 para ver los nombres y estructuras de los productos) Se disolvió 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol, 1 equivalente) en DME (12 mi). Se disolvió ácido borónico (1 .1 equivalentes) en EtOH (3.3 mi) y se agregó a la mezcla de reacción. A la mezcla de reacción se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.026 mmol, 0.2 equivalentes) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi); se calentó a 80°C bajo argón y se puso a reflujo durante 8 horas. Después de enfriar, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el disolvente se removió. El sólido (o aceite) resultante se disolvió en H20-d: MeCN: ácido trifluroacético, 50:50:0.1 , y se purificó por HPLC. El producto purificado (rendimientos variables) se confirmó mediante LCMS. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-bencenosulfonamida (BA14). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de éster de pinacol del ácido bencenosulfonamida-4-borónico (23 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80°C bajo una atmósfera de argón durante la noche. Después de enfriar, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA14 (2.2 mg, 10% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ má cale. 333.1 , encontrado 333.1. Síntesis de 1 -isopropil-3-(3-metoxi-4-metilfenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA15). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de 2 metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3-2-dioxaborolan-2-il)-fenol (19 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80°C bajo una atmósfera de argón durante la noche. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1%), para producir BA15 (4.3 mg, 20% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 300.1 , encontrado 300.2. Síntesis de 6-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)naftalen-2-ol (BA17). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3, 4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 6-hidroxinaftalen-2-il-2-borónico (15 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mL) y la reacción se calentó a 80°C bajo una atmósfera de argón durante la noche. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA15 (4.8 mg, 23% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 320.1 , encontrado 320.1 . Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-metoxifenilcarbamato de ter-butilo (BA20). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.18 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 4 4-N-Boc-amino-3-metoxi-bencenoborónico (48 mg, 0.18 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (40 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C bajo una atmósfera de argón durante la noche. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA20. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 399.2, encontrado 399.1 . Síntesis de 3-(4-amino-3-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA20d). Una solución de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-metoxifenilcarbamato de ter-butilo (BA20) (20 mg, 0.05 mmol) en CH2CI2) TFA, S(CH2)2, H2O (45:45:5:5) (1 mL), se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se le agregó NaHCO3 (2 mL) hasta que la reacción se hizo alcalina. La reacción se extrajo con H20 y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío, y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA20d. Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)piridin-2-carbonitrilo (BA21 ). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de éster de pinacol del ácido 2-cianopiridin-5-borónico (18 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C bajo una atmósfera de argón durante la noche. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA21 (2.5 mg, 14% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 280.1 , encontrado 280.1 . Síntesis de 3-(3-(benciloxi)-5-fluorofenil)-1 -isoprop¡l-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina. A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido (3-benciloxi-5-fluorofenil)borónico (29 mg, 5.80 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C bajo una atmósfera de argón durante la noche. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA22 (15.6 mg, 60% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 378.1 , encontrado 378.0. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-5-fluorofenol (BA22). Una solución de (3-(benciloxi)-5-fluorofenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (15 mg, 0.04 mmol) en MeOH (0.9 mL), se purgó con argón. Se le agregó cuidadosamente Pd sobre carbón activado (10 mL) manteniendo la reacción bajo una atmósfera de argón. La reacción se purgó con gas H2 y se dejó bajo una atmósfera de H2 durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se filtró a través de celite y se enjuagó con MeOH para producir BA22 (15 mg, 100% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 288.1 , encontrado 288.1.

Síntesis de 1 -isopropil-3-(3,4-dimetoxifen¡l)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA23). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 ml_), se le agregó una solución de ácido 3,4-dimetoxifenilborónico (24 mg, 0.13 mmol) en EtOH (3.3 ml_). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1.9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA23 (13.1 mg, 60% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 314.0, encontrado 314.1. Síntesis de (3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)metanol (BA26). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido (3-hidroximetilfenil)borónico (24 mg, 0.13 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA26 (8.4 mg, 42% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ má cale. 283.1 , encontrado 284.2.

Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-N-(4,5-dihidrotiazol-2-il)benzamida (BA30). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido [3-((4,5-dihidrotiazol-2-il)carbamoil)fenil]borónico (19 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3) (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA30 (17.8 mg, 67% de rendimiento). Síntesis de 1 -(4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)etanona (BA31 ). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 4-acetilfenilborónico (12.7 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA31 (12.9 mg, 62% de rendimiento). Síntesis de (3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3- il)fenil)metanol (BA32). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido (4-aminocarbonil-3-clorofenil)borónico (16 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de entriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA32 (9.7 mg, 42% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 331.1 , encontrado 331 .1. Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-3-metiltiofeno-2-carbaldehído (BA34). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 5-formil-3-metiltiofeno-2-borónico (26 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA34 (14.7 mg, 38% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 302.1 , encontrado 302.0.

Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)furan-3-carbaldehído (BA35). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 4-formilfuran-2-borónico (20 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA35 (13.5 mg, 39% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m calc. 272.1 , encontrado 272.1. Síntesis de N-[3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-fenil]-metanosulfonamida (BA38). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 3-metanosulfonilaminofenilborónico (32 mg, 0.15 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA38 (24.3 mg, 54% de rendimiento).

ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 347.1 , encontrado 347.0. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzonitrilo (BA39). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3, 4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 3-cianofenilborónico (23 mg, 0.15 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1.9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA39 (14.9 mg, 41 % de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 279.1 , encontrado 279.0. Síntesis de N-[4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-fenil]-metanosulfonamida (BA40). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 4-metanosulfonilaminofenilborónico (24 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA40 (0.9 mg, 3% de rendimiento).

ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 347.1 , encontrado 347.0. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-bencenosulfonamida (BA41 ). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución del éster de pinacol del ácido bencenosulfonamida-3-borónico (31 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA41 (9.2 mg, 28% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 333.1 , encontrado 333.0. Síntesis de 2-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[b]tiofeno-5-carbaldehído (BA42). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución del éster de pinacol del ácido 5-formilbenzo[b]tiofeno-2-borónico (31 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA42 (15.2 mg, 45% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 338.1 , encontrado 338.0. Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1 H-indol-3-carbaldehído (BA43). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 ml_), se le agregó una solución del éster de pinacol del ácido N-Boc-3-formil-5-indolborónico (40 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %). El TFA de la purificación hidrolizó el Boc para producir BA43. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 321.1 , encontrado 321 .0. Síntesis de 3-(benzo[c][1 ,2,5]oxadiazol-6-¡l)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA44). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido benzo[c][1 ,2,5]oxadiazol-5-borónico (18 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA44. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 296.1 , encontrado 296.1 . Síntesis de 2-(4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)acetonitrilo (BA45). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido (4-cianometilfenil)borónico (18 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA45. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 293.1 , encontrado 293.1. Síntesis de 2-(3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)acetonitrilo (BA46). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido (3-cianometilfenil)borónico (18 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA45.

ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 293.1 , encontrado 293.1. Síntesis de 1 -isopropil-3-(4-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA48). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 4-metoxifenilborónico (17 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA48 (4.5 mg, 16% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 284.1 , encontrado 284.1. Síntesis de 1 -isopropil-3-(3-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA49). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 3-metoxifenilborónico (17 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA49.

ESI-MS (M+H)+ m/ calc. 284.1 , encontrado 284.0. Síntesis de 1 -isopropil-3-(piridin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA52). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 3-piridinilborónico (15 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (15 mg, 0.015 mmol) y solución saturada de Na2CO3 ( 1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O), para producir BA52. ESI-MS (M+H)+ m/ calc. 255.1 , encontrado 255.0. Síntesis de 1 -isopropil-3-(pirimidin-5-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA53). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 5-pirimidinilborónico (15 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (15 mg, 0.015 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O), para producir BA53. ESI-MS (M+H)+ nVz calc. 256.1 , encontrado 256.1.

Síntesis de 3-(2,3-dihidrobenzo[b][1 ,4]dioxin-6-¡l)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA54). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 ml_), se le agregó una solución de ácido 2,3-dihidro-1 ,4-benzodioxin-6-ilborónico (26 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 ml_). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA54 (6 mg, 15% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 312.1 , encontrado 312.0. Síntesis de 1 -(3-(4-amino- 1 -isopropil- 1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)etanona (BA55). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 3-acetilfenilborónico (23 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3-mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA55 (7 mg, 18% de rendimiento).

ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 296.1 , encontrado 296.1. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenol (BA56). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mL), se le agregó una solución de ácido 4-hidroxifenilborónico (30 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mL). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mL) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA56 (12 mg, 32% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 270.1 , encontrado 270.1.

Síntesis de inhibidores dobles de PI3-K /Tirosina cinasa Síntesis de 1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA18). Una solución de 250 mi de formamida y 3-amino-4-pirazolcarbonitrilo (25 g, 0.231 mol) se calentó a 180 °C durante la noche bajo una atmósfera de argón. La reacción se enfrió y se le agregaron 400 mi de H2O-d. El sólido resultante se filtró y se enjuagó con H2O-d fría. Se recogió un precipitado sólido blanco que se secó al vacío durante la noche para producir BA18 (39 g, 100% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 136.1 , encontrado 136.1 .

Síntesis de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA19). Una solución de 3H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (10 g, 0.074 mol) y n-yodo-succinamida (25 g, 0.1 1 1 mol) en DMF (80 mi), se calentó a 80 °C durante la noche bajo una atmósfera de argón. El sólido resultante se filtró y se enjuagó con EtOH. El producto se secó al vacío durante la noche para producir BA19 (24 g, 100% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 262.0, encontrado 262.0 Síntesis de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirim¡din-4-amina (BA12). Una solución de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (2 g, 0.0077 mol) y K2CO3 (4.2g, 0.031 mol) en DMF (50 mi), se llevó a 80 °C bajo una atmósfera de argón. Se le agregó bromuro de isopropilo (1 .0 g, 0.0084 mol) con una jeringa. La reacción se puso a reflujo bajo una atmósfera de argón durante 2 horas. El K2CO3 sólido se removió por filtración. El disolvente se removió parcialmente al vacío. Se le agregó citrato de sodio (50 mi) y la reacción se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas se concentraron al vacío y el producto se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 5:95], produciendo BA12 (1 .68 g, 72% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 304.0, encontrado 304.1. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-¡l)-bencenosulfonamida (BA14). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de éster de pinacol del ácido bencenosulfonamida-4-borónico (23 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA14 (2.2 mg, 10% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 333.1 , encontrado 333.1 . Síntesis de 1 -isopropil-3-(3-metoxi-4-metilfenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA15). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi) se le agregó una solución de 2 metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3-2-dioxaborolan-2-il) fenol (19 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA15 (4.3 mg, 20% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 300.1 , encontrado 300.2. Síntesis de 6-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)naftalen-2-ol (BA17). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimid¡n-4-am¡na (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 6-hidroxinaftalen-2-il-2-borónico (15 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA15 (4.8 mg, 23% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 320.1 , encontrado 320.1. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-metox¡fenilcarbamato de ter-butilo (BA20). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.18 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 4-4-N-Boc-amino-3-metoxi-bencenoborónico (48 mg, 0.18 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (40 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA20. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 399.2, encontrado 399.1 . Síntesis de 3-(4-amino-3-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA20d). Una solución de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-metoxifenilcarbamato de ter-butilo (BA20) (20 mg, 0.05 mmol) en CH2CI2, TFA, S(CH2)2, H2O (45:45:5:5) (1 mi), se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se le agregó NaHCO3 (2 mi) hasta que la reacción se hizo alcalina. La reacción se extrajo con H2O y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA20d. Síntesis de 2-amino-5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-3-il)fenol (BA20dd). BA20 (4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-metoxifenilcarbamato de ter-butilo, 7 mg, 0.018 mmol) se disolvió en CH2CI2 (2.5 mi) y se agitó bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente. Lentamente, se le agregó BBr3 (0.500 mi) con una jeringa. La mezcla de reacción se agitó durante la noche bajo argón a temperatura ambiente. El BBr3 se removió al vacío y el sólido remanente se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA20dd. Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)piridin-2-carbonitrilo (BA21 ). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de éster de pinacol del ácido 2-cianopiridin-5-borónico (18 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA21 (2.5 mg, 1 % de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/ calc. 280.1 , encontrado 280.1 . Síntesis de 3-(3-(benciloxi)-5-fluorofenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d)pirimidin-4-amina. A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido (3-benciloxi-5-fluorofenil)borónico (29 mg, 5.80 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA22 (15.6 mg, 60% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 378.1 , encontrado 378.0. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-5-fluorofenol (BA22). Una solución de (3-(benciloxi)-5-fluorofenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (15 mg, 0.04 mmol) en MeOH (0.9 mi) se purgó con argón. Se le agregó cuidadosamente Pd sobre carbón (10 mi) manteniendo la reacción bajo una atmósfera de argón. La reacción se purgó con gas H2 y se dejó bajo atmósfera de H2 durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se filtró a través de celite y se enjuagó con MeOH para producir BA22 (15 mg, 100% de rendimiento).

ESI-MS (M+H)+ m/ calc. 288.1 , encontrado 288.1 . Síntesis de 1 -isopropil-3-(3,4-dimetoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA23). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3,4-dimetoxiíenilborónico (24 mg, 0.13 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA23 (13.1 mg, 60% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 314.0, encontrado 314.1. Síntesis de 2-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazololS^-djpirimidin-S-il)-5-(benciloxi)-1 H-indol-1 -carboxilato de ter-butilo (BA24). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0.33 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 5-benciloxi-1 -BOC-indol-2-borónico (303 mg, 0.83 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [EtOAc-hexano, 5:95] para producir BA24. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 499.2, encontrado 499.2. Síntesis de 2-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1 H-indol-5-ol (BA24dd). Se disolvió BA24 (3-(4-fluoro-3-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina, 30 mg, 0.10 mmol) en una solución de ácido fórmico (4.5 mi, 10 equivalentes) y HCI (0.45 mi, 1 equivalente). La reacción se calentó y se agitó una hora bajo una atmósfera de argón. Después se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA24dd. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 309.1 , encontrado 309.1. Síntesis de (3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)metanol (BA26). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido (3-hidroximetilfenil)borónico (24 mg, 0.13 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA26 (8.4 mg, 42% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 283.1 , encontrado 284.2. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimídin-3-il)-N-(4,5-dihidrotiazol-2-il)benzamida (BA30). A una solución de 3-yodo-1 - ¡soprop¡l-1 H-p¡razolo[3,4-d]p¡r¡mid¡n-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido [3-((4,5-dihidrotiazol-2-il)-carbamoil)fenil]borónico (19 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3) (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA30 (17.8 mg, 67% de rendimiento). Síntesis de 1 -(4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]p¡rimidin- 3-il)fenil)etanona (BA31 ). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 4-acetilfenilborónico (12.7 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA31 (12.9 mg, 62% de rendimiento). Síntesis de (3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)metanol (BA32). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3, 4-d]pirimidin-4-amina (20 mg, 0.07 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido (4-aminocarbonil-3-clorofenil)borónico (16 mg, 0.08 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA32 (9.7 mg, 42% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ má cale. 331.1 , encontrado 331 .1. Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimid¡n-3-il)-3-metiltiofeno-2-carbaldehído (BA34). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 5-formil-3-metiltiofeno-2-borónico (26 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA34 (14.7 mg, 38% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 302.1 , encontrado 302.0. Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)furan-3-carbaldehído (BA35). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 4-formilfuran-2-borónico (20 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA35 (13.5 mg, 39% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 272.1 , encontrado 272.1. Síntesis de N-[3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-fenil]-metanosulfonamida (BA38). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimid¡n-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3-metanosulfonilaminofenilborónico (32 mg, 0.15 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (16 mg, 0.014 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA38 (24.3 mg, 54% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 347.1 , encontrado 347.0. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3- ¡l)benzonitr¡lo (BA39). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirim¡din-4-am¡na (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3-cianofenilborónico (23 mg, 0.15 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA39 (14.9 mg, 41 % de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 279.1 , encontrado 279.0. Síntesis de N-[4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-fenil]-metanosulfonamida (BA40). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 4-metanosulfonilaminofenilborónico (24 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA40 (0.9 mg, 3% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 347.1 , encontrado 347.0. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3- il)-bencenosulfonamida (BA41 ). A una solución de 3-yodo-1 -¡sopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de éster de pinacol del ácido bencenosulfonamida-3-borónico (31 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA41 (9.2 mg, 28% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ má cale. 333.1 , encontrado 333.0. Síntesis de 2-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)benzo[b]tiofeno-5-carbaldehído (BA42). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de éster de pinacol del ácido 5-formilbenzo[b]tiofeno-2-borónico (31 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA42 (15.2 mg, 45% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 338.1 , encontrado 338.0.

Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1 H-indol-3-carbaldehído (BA43). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de éster de pinacol del ácido N-Boc-3-formil-5-indolborónico (40 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). El TFA de la purificación hidrolizó el Boc para producir BA43. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 321.1 , encontrado 321 .0. Síntesis de 3-(benzo[c][1 ,2, 5]oxadiazol-6-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA44). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido benzo[c][1 ,2,5]oxadiazol-5-borónico (18 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA44. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 296.1 , encontrado 296.1 .

Síntesis de 2-(4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)íenil)acetonitrilo (BA45). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido (4-cianometilfenil)borónico (18 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1%), para producir BA45. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 293.1 , encontrado 293.1 . Síntesis de 2-(3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)acetonitrilo (BA46). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido (3-cianometilfenil)boróníco (18 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA45. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 293.1 , encontrado 293.1. Síntesis de 1 -isopropil-3-(4-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4- d]pirimidin-4-amina (BA48). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido (4-metoxifenil)borónico (17 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA48 (4.5 mg, 16% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 284.1 , encontrado 284.1. Síntesis de 1 -isopropil-3-(3-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA49). A una solución de 3-yodo-1 -isopropíl-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.10 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3-metoxifenilborónico (17 mg, 0.1 1 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA49. ESI-MS (M+H)+ m/z ca\c. 284.1 , encontrado 284.0. Síntesis de 1 -isopropil-3-(piridin-3-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 4-am¡na (BA52). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3-piridinilborónico (15 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (15 mg, 0.015 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O), para producir BA52. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 255.1 , encontrado 255.0. Síntesis de 1 -isopropil-3-(pirimidin-5-il)-1 H-pirazolo[3,4-d)-pirimidin-4-amina (BA53). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 5-pirimidinilborónico (15 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (15 mg, 0.015 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O), para producir BA53. ESI-MS (M+H)+ nVz calc. 256.1 , encontrado 256.1. Síntesis de 3-(2,3-dihidrobenzo[b][1 ,4]dioxin-6-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA54). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil- 1 H-p¡razolo[3,4-d]pir¡midin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 2,3-dihidro-1 ,4-benzodioxin-6-ilborónico (26 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacio y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA54 (6 mg, 15% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 312.1 , encontrado 312.0. Síntesis de 1 -(3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)etanona (BA55). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3-acetilfenilborónico (23 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3) (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA55 (7 mg, 18% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 296.1 , encontrado 296.1 . Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3- il)fenol (BA56). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3, 4-d]pirimidin-4-amina (40 mg, 0.13 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 4-hidroxifenilborónico (30 mg, 0.14 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 ( 1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA56 (12 mg, 32% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 270.1 , encontrado 270.1. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-fluorofenol (BA59). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0.33 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3-fluoro-4-hidroxifenilborónico (103 mg, 0.66 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía de fase inversa usando una columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98], para producir BA59 (26 mg, 27% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 288, encontrado 288. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3- il)-3-metilfenot (BA60). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0.33 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 4-hidroxi-2-metilfenilborónico (1 10 mg, 0.66 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98] para producir BA60 (42 mg, 22% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 284, encontrado 284. Síntesis de 3-(4-fluoro-3-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA62). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (90 mg, 0.30 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 4-fluoro-3-metoxifenilborónico (61 mg, 0.36 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98], para producir BA62 (40 mg, 44% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ nVz calc. 302, encontrado 302.

Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-fluorofenol (BA62d). Una solución de BA62 (3-(4-fluoro-3-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina, 30 mg, 0.10 mmol) se disolvió en CH2CI2 (5 mi) y se agitó bajo una atmósfera de argón. Se le agregó lentamente BBr3 (500 uL, 0.5 mol) con una jeringa, con agitación. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y después se concentró al vacío y se purificó, usando cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98], para producir BA62d (23 mg, 44% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 288.1 , encontrado 288.1. Síntesis de 3-(2,5-difluoro-4-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA63). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (54 mg, 0.18 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 2,5-difluoro-4-metoxifenilborónico (84 mg, 0.45 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98], para producir BA63 (50 mg, 17% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 320.1 , encontrado 320.0. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2,5-difluorofenol (BA93). Se disolvió 3-(2,5-difluoro-4-metoxifenil)-1 - ¡sopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimid¡n-4-amina (BA63) (20 mg, 0.06 mmol) en CH2CI2 (2 mi) y se le agregó lentamente BBr3 (0.630 ml_, 0.63 mmol) con una jeringa, con agitación. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche y después se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA93 (6.7 mg, 35% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 306.1 , encontrado 306.0. Síntesis de 1 -isopropil-3-(3,4,5-trimetoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA64). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg, 0.23 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 3,4,5-trimetoxifenilborónico (123 mg, 0.58 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98], para producir BA64 (70 mg, 89% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 344.1 , encontrado 344.0. Síntesis de 1 -isopropil-3-(2,3-dimetoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA65). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg, 0.23 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 2,3-dimetoxifenilborónico (105 mg, 0.58 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98], para producir BA65 (63 mg, 88% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 314.1 , encontrado 314.1 . Síntesis de 1 -isopropil-3-(2,4-dimetoxipirimidin-5-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA66). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (70 mg, 0.23 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de ácido 2,4-dimetoxipirimidin-5-il-5-borónico (106 mg, 0.58 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 2:98], para producir BA66. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 316.1 , encontrado 316.0. Síntesis de 1 -ciclopentil-3-(3-fluoro-5-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA79). Se agitó ácido 3-fluoro-5-metoxibenzoico (5 g, 0.029 mol) en CH2CI2 (50ml) a 0 °C y bajo una atmósfera de argón. Se le agregó DMF (9 gotas, catalítica), seguida por cloruro de oxalilo (12.7 mi, 0.147 mol). La reacción se calentó a temperatura ambiente y después se agitó bajo argón durante una hora. La reacción se concentró al vacío para producir cloruro de 3-fluoro-5-metox¡benzoilo (BA67). Una solución de malononitrilo (2.87 g, 0.044 mmol) en THF seco (50 mi) se agitó a 0 °C bajo una atmósfera de argón. A la solución se le agregó por partes NaH en aceite de parafina (4.64 g, 0.1 16 mol). Se disolvió cloruro de 3-fluoro-5-metoxibenzoilo (BA67, 0.029 mol) en 50 mi de THF seco y esto se le agregó lentamente a la reacción. La reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó bajo argón durante 24 horas. Lentamente, se le agregó HCI 1 N (200 mi) y después la mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se secó con sulfato de magnesio y después se concentró al vacío para producir 2-((3-fluoro-5-metoxifenil)(metoxi)metilen)malononitrilo (BA69). El 2-((3-fluoro-5-metoxifenil)(metoxi)metilen)malononitrilo (BA69, 0.029 mol) se agitó en EtOH (20 mi) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Se le agregó hidrazina ( .4 mi, 29 mmol) y la reacción se dejó agitando 90 minutos. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se secó en una bomba de vacío durante la noche para producir el intermediario 5-amino-3-(3-fluoro-5-metoxifenil)-1 H-pirazol-4-carbonitrilo (BA73). Se le agregó formamida (20 mi) y la reacción se calentó a 180 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. La reacción se enfrió y se le agregó H2O-d (40 mi) formando un precipitado blanco. El precipitado se recogió y se lavó con H20-d. El sólido se secó y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2) 10:90], para producir 3-(3-fluoro-5-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA75). La 3-(3-fluoro-5-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA75, 100 mg, 0.386 mmol) se disolvió en DMF (10 mi). Se le agregó K2C03 (250 mg, 1 .54 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Se le agregó yodociclopentano (0.134 mi, 1.16 mmol) con una jeringa y la reacción se agitó 2 horas. El K2CO3 se removió por filtración. El disolvente se removió parcialmente al vacío. Se le agregó citrato de sodio (50 mi) y la reacción se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA79. Síntesis de 1 -ciclopentil-3-(3-fluoro-5-metoxifenil)-1 H-pirazolo-[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA79d). La 1 -ciclopentil-3-(3-fluoro-5-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA79, 0.386 mmol) se disolvió en CH2CI2 (2 mi). Se le agregó lentamente BBr3 (4 mL, 4 mol) con una jeringa, con agitación. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y después se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA79 (69 mg, 57% de rendimiento). Síntesis de 1 -ciclopentil-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA80). Una solución de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (400 mg, 1 .53 mmol) y K2C03 (1 g, 6 mmol) en DMF (5 mi) se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Se le agregó yodociclopentano (1 .0 g, 0.0084 mol) con una jeringa. La reacción se puso en reflujo bajo una atmósfera de argón durante 2 horas. El K2CO3 sólido se removió por filtración. El disolvente se removió parcialmente al vacío. Se le agregó citrato de sodio (50 mi) y la reacción se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2( 5:95], produciendo BA80 (300 mg, 60% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 330.0, encontrado 330.0. Síntesis de 1 -(3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenil)etanona (BA81 , BA81 d y BA81 dd). A una solución de 1 -ciclopentil-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA80, 100 mg, 0.30 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de 2-metoxi-4-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)fenilcarbamato de ter-butilo (200 mg, 0.76 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2Cl2, 5:95], produciendo BA81 . BA81 se disolvió en CH2CI2:TFA 50:50 y se agitó una hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA81 d. BA81 d se disolvió en CH2CI2 (2 mi) y se le agregó lentamente BBr3 (4 mL, 4 mol) con una jeringa, con agitación. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y después se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA81 dd. Síntesis de 3-(3-bromo-5-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA85). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (65 mg, 0.216 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de 2-(3-bromo-5-metoxifenil)-4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolano (137 mg, 0.43 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA85 (28 mg, 36% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 362.1 , encontrado 362.0. Síntesis de 3-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-5-bromofenol (BA87). La 3-(3-bromo-5-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA85, 0.1 mmol) se disolvió en CH2CI2 (1 mi) y se le agregó lentamente BBr3 (1 mL, 1 mol) con una jeringa, con agitación. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 35 minutos y después se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA87 (10.7 mg, 31 % de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 348.0, encontrado 348.0. Síntesis de 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3- H-indol-1 -carboxilato de ter-butilo (BA86). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (75 mg, 0.25 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de 5-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-indol-1 -carboxilato de ter-butilo (212 mg, 0.61 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1 .9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O), para producir BA86 (9.3 mg, 9% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 362.1 , encontrado 362.0. Síntesis de 3-(1 H-indol-5-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA89). El 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-3-il)-1 H-indol-1 -carboxilato de ter-butilo (BA86, 9 mg, 0.022 mmol) se disolvió en CH2CI2:TFA 50:50 y se agitó hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA89 (4.8 mg, 75% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 293.1 , encontrado 293.0. Síntesis de 5-(4-amino-1 -ciclopentil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1 H-indol-1 -carboxilato de ter-butilo (BA88). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.15 mmol) en DME (12 mi), se le agregó una solución de 5-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-il)-1 H-indol-1 -carboxilato de ter-butilo (130 mg, 0.38 mmol) en EtOH (3.3 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (1.9 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O), para producir BA88. ESI- S (M+H)+ m/z cale. 419.2, encontrado 419.1. Síntesis de 3-(1 H-indol-5-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA94). El 5-(4-amino-1 -ciclopentil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-1 H-indol-1 -carboxilato de ter-butilo (BA88) se disolvió en CH2CI2:TFA 50:50 y se agitó una hora a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA89 (6.3 mg). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 319.1 , encontrado 319.2. Síntesis de 1 -ciclopentil-3-(3,4-dimetoxifenil)-1 H-ptrazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA90). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.09 mmol) en DME (6 mi), se le agregó una solución de ácido 3,4-dimetoxifenilborónico (41 mg, 0.23. mmol) en EtOH (1 .65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2C03 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O), para producir BA90 (8.4 mg, 28% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 340.2, encontrado 340.1 . Síntesis de 3-(1 H-indol-4-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA91 ). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.1 mmol) en DME (6 mi), se le agregó una solución de ácido 1 H-indol-4-il-4-borónico (40 mg, 0.25 mmol) en EtOH (1 .65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA91 (14.6 mg, 50% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 293.1 , encontrado 293.1. Síntesis de 1 -ciclopentil-3-(1 H-indol-4-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA92). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (25 mg, 0.076 mmol) en DME (6 mi), se le agregó una solución de ácido 1 H-indol-4-il-4-borónico (30 mg, 0.19 mmol) en EtOH (1 .65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA92 (23 mg, 95% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z ca\c. 319.2, encontrado 319.1 . Síntesis de 3-(2,3-dihidrobenzofuran-5-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA95). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.1 mmol) en DME (6 mi), se le agregó una solución de ácido 2,3-dihidro-1 -benzofuran-5-ilborónico (38 mg, 0.23 mmol) en EtOH (1 .65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA95 (15.7 mg, 59% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m z calc. 296.1 , encontrado 296.1. Síntesis de 3-(benzofuran-5-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (BA96). A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (30 mg, 0.1 mmol) en DME (6 mi), se le agregó una solución de 5-(4,4,5,5-tetrametil-1 ,3,2-dioxaborolan-2-¡l)-1 -benzofurano (56 mg, 0.23 mmol) en EtOH (1.65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (30 mg, 0.03 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 80 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA96 (19 mg, 72% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 296.1 , encontrado 296.1. Síntesis de 5-(4-amino-1 -ciclopentil-1 H-pirazolo[3,4-d]p¡rimidin-3-il)-2-etoxifenol (BA98). El 1 -ciclopentil-3-(4-etoxi-3-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK359, 25 mg, 0,071 mmol) se disolvió en CH2CI2 (5 mi) y se agitó a -10 °C bajo una atmósfera de argón. Después de 30 minutos, la reacción se llevó a 0 °C y se agitó durante 2.5 horas. La reacción se agitó 4 horas más a temperatura ambiente y después se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA98 (3 mg, 13% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 340.1 , encontrado 340.1 . Síntesis de 2-(4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-metoxifenilamino)propan-1 -ol (BA99). La 3-(4-amino-3-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amína (BA20d) (30 mg, 0.10 mmol) se disolvió en DMF (0.400 mi). Se le agregó K2CO3 (55 mg, 0.4 mmol) y la reacción se agitó a 70 °C. Se le agregó 3-bromo-1 -propanol (0.050 mi, 0.6 mmol) y la reacción se agitó durante la noche. El K2CO3 sólido se removió por filtración. El disolvente se removió parcialmente al vacío. Se le agregó citrato de sodio (50 mi) y la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. La fase orgánica se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %) para producir BA99 (8.4 mg, 24% de rendimiento).

ESI-MS (M+H)+ m calc. 357.2, encontrado 357.1 . Síntesis de 3-yodo-1 -metil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA109). Una solución de 3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (2 g, 7.69 mmol) y K2CO3 (4.25 g, 30.8 mmol) en DMF (5 mi) se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón. Se le agregó yodometano (1 .17 mi, 7.69 mmol) con una jeringa. La reacción se agitó bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente durante 2 horas. El K2CO3 sólido se removió por filtración. El disolvente se removió parcialmente al vacío. Se le agregó citrato de sodio (50 mi) y la reacción se extrajo con EtOAc. La fase orgánica se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice [MeOH-CH2CI2, 5:95], produciendo BA109 (212 mg, 10% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 275.9, encontrado 275.9 Esquema general de síntesis para BA102, BA105-108, BA1 10, BA 18, BA128-BA135, BA137, BA139-140, BA143, BA147, BA149-BA152, BA156, BA158, BA160-BA162. A una solución de 3-yodo-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA12, 1 equivalente) en DME (6 mi), se le agregó una solución de ácido borónico (2.5 equivalentes) en EtOH (1 .65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 ( 5 mg, 0.15 mmol) y solución saturada de Na2C03 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 90 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1%), para producir los productos deseados. Los productos se analizaron por LC-MS. Esquema general de síntesis para BA112, BA1 15, BA121 , BA122, BA124, BA136, BA138. BA141 , y BA 44. A una solución de 1 -ciclopentil-3-yodo-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA80, 1 equivalente) en DME (6 mi), se le agregó una solución de ácido borónico (2.5 equivalentes) en EtOH (1.65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (15 mg, 0.15 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 90 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1%), para dar los productos deseados. Los productos se analizaron por LC-MS. Esquema general de síntesis para BA111 , BA114, BA1 16, BA1 17, BA119, y BA120. A una solución de 3-yodo-1 -metil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA109, 1 equivalente) en DME (6 mi), se le agregó una solución de ácido borónico (2.5 equivalentes) en EtOH (1.65 mi). Se le agregó Pd(PPh3)4 (15 mg, 0.15 mmol) y solución saturada de Na2CO3 (0.95 mi) y la reacción se calentó a 90 °C durante la noche, bajo una atmósfera de argón. Después de enfriarse, la reacción se extrajo con solución saturada de NaCI y CH2CI . Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para dar los productos deseados. Los productos de analizaron por LC-MS.

Síntesis de 6-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)quinolin-2-amina (BA146). Se combinaron 3-(2-cloroquinolin-6-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA130, 50 mg, 0.15 mmol), acetamida (174 mg, 3.0 mmol) y K2CO3 (104 mg, 0.75 mmol), y se calentaron a 200 °C bajo una atmósfera de argón durante una hora. La reacción se enfrió y después se extrajo con H2O y CH2CI2. Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA146 (22 mg, 46% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 320.2, encontrado 320.4. Síntesis de 3-(3-amino-1 H-indazol-6-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA154). El 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-fluorobenzonitrilo (BA150, 20 mg, 0.07 mmol) se disolvió en n-BuOH (2 mi). Se le agregó hidrazina monohidratada (0.400 mi) y la reacción se calentó a 1 10 °C bajo una atmósfera de argón, y se dejó agitando durante la noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA154 (15 mg, 70% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ má cale. 309.2, encontrado 309.4. Síntesis de 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-hidroxibenzonitrilo (BA155_2). El 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirim¡din-3-il)-2-fluorobenzonitrilo (BA150, 25 mg, 0.1 mmol) se disolvió en DMF (1 mi). Se le agregó t-BuOK (24 mg, 0.21 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después la reacción se calentó a 150 °C durante 24 horas. Después, la reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA155_2 (21 mg, 89% de rendimiento). ESI-MS ( +H)+ m/z cale. 295. , encontrado 295.4. Síntesis de 3-(3-aminobenzo[d]isoxazol-5-il)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA157_2) y 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-hidroxibenzonitrilo (BA157_3). El 5-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2-fluorobenzonitrilo (BA151 , 20 mg, 0.07 mmol) se disolvió en DMF (1 mi). Se le agregó t-BuOK (24 mg, 0.21 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Después, la reacción se calentó a 150 °C durante 24 horas. Después, la reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir BA157_2 (7 mg): ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 295.1 , encontrado 295.4. y BA157_3 (8 mg): ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 310.1 , encontrado 310.4. Síntesis de 3-(3-amino-1 H-indazol-6-il)-1 -isopropíl-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (BA159). El 4-(4-amino-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)-2,6-difluorobenzaldehído (BA149, 20 mg, 0.063 mmol) se disolvió en n-BuOH (1 mi). Se le agregó hidrazina monohidratada (0.400 mi) y la reacción se calentó a 100 °C bajo una atmósfera de argón y se dejó agitando 2.5 horas. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %), para producir BA159 (15 mg, 77% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 312.1 , encontrado 312.4. Síntesis de 4-cloro-7-metil-5-(naftalen-2-il)-7H-pirrolo[2,3-d]-pirimidina (ZK102). Una solución de 4-cloro-5-yodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]-pirimidina (19 mg, 0.065 mmol), ácido naftalen-2-il-2-borónico (12.2 mg, 0.071 mmol), Na2CO3 (68.9 mg, 0.65 mmol) y PdCI2(dppf) (26.5 mg, 0.00325 mmol) en THF (3 mL), se calentó a reflujo durante la noche bajo una atmósfera de argón. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %) para producir ZK102 (5 mg, 26% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m z calc. 294.1 , encontrado 294.3. Síntesis de 4-cloro-7-metil-5-(3-bifenil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (ZK103). Una solución de 4-cloro-5-yodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (10 mg, 0.034 mmol), ácido 3-bifenil-borónico (7.4 mg, 0.038 mmol), Na2C03 (36.1 mg, 0.34 mmol) y PdCI2(dppf) (1 .4 mg, 0.0017 mmol) en THF (10 mL), se calentó a reflujo durante la noche bajo una atmósfera de argón. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir ZK103 (3 mg, 28% de rendimiento). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 320.1 , encontrado 320.0. Síntesis de 3-(4-ter-butilfenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK125). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.1 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(4-ter-butilfenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina y se calentó a reflujo 2 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %), para producir ZK125 (cuant.). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 268.2, encontrado 268.4. Síntesis de 3-(3-íenoxiíenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK126). En una solución de ácido fórmico (5 mL) y HCI conc. (0.1 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(3-fenoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.16 mmol) y se calentó a reflujo durante 2.5 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ nVz calc. 304.1 , encontrado 304.3. Síntesis de 3-m-tolil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK127). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.3 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-m-tolil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (23 mg, 0.1 mmol) y se calentó a reflujo durante 2.5 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 226.1 , encontrado 226.3. Síntesis de 3-(3-nitrofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK128). En una solución de ácido fórmico (5 mL) y HCI conc. (0.1 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(3-nitrofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (23 mg, 0.055 mmol) y se calentó a reflujo durante 2 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z calc. 257.1 , encontrado 257.3. Síntesis de 3-(benzo[d][1 ,3]dioxol-6-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (ZK129). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(benzo[d][1 ,3]dioxol-6-il)-1 H- pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (21 mg, 0.082 mmol) y se calentó a reflujo durante 2 horas. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 256.1 , encontrado 256.3. Síntesis de 3-(4-nitrofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK130). En una solución de ácido fórmico (2 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(4-nitrofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (21 mg, 0.082 mmol) y se calentó a reflujo durante 30 min. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 257.1 , encontrado 257.3. Síntesis de 3-(3-(2,6-diclorobenciloxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (ZK131 ). En una solución de ácido fórmico (2 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(3-(2,6-diclorobenciloxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (19.5 mg, 0.05 mmol) y se calentó a reflujo durante 30 min. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 386.1 , encontrado 386.2. Síntesis de 3-(2,3-dimetilfenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK132). En una solución de ácido fórmico (2 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(2,3-dimetilfenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (34 mg, 0.14 mmol) y se calentó a reflujo durante 30 min. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 240.1 , encontrado 240.4.

Síntesis de 2-(4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenol (ZK133). En una solución de ácido fórmico (2 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-2-(4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3-il)fenol (5 mg, 0.014 mmol) y se calentó a reflujo durante 30 min. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 228.1 , encontrado 228.3. Síntesis de 3-o-tolil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK134). En una solución de ácido fórmico (2 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-o-tolil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina y se calentó a reflujo durante 30 min. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z ca\c. 226.1 , encontrado 226.3. Síntesis de 3-(3-aminofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK135). En una solución de ácido fórmico (2 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(3-aminofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina y se calentó a reflujo durante 30 min. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ nVz calc. 227.1 , encontrado 227.3. Síntesis de 3-(3-(benciloxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK136). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.1 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(3-(benciloxi)fenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (19 mg, 0.052 mmol) y se calentó a reflujo durante 30 min. La reacción produjo una mezcla de ZK136 y 3-(4-amino-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-3- ¡l)fenol (ZK138). La reacción se concentró al vacío y los productos se purificaron por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ZK136: ESI-MS (M+H)+ nVz calc. 318.1 , encontrado 318.3. ZK138: ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 228.1 , encontrado 228.3. Síntesis de 3-(4-aminofenil)- H-pirazolo[3)4-d]pirimidin-4-amina (ZK137). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.2 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(4-aminofenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (9 mg, 0.032 mmol) y se calentó a reflujo. La reacción se dejó proceder 30 min, después se concentró al vacío y los productos se purificaron por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 227.1 , encontrado 227.3. Síntesis de 3-(1 ,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (ZK139). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.1 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(1 ,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pir¡midin-4-amina (9 mg, 0.029 mmol) y se calentó a reflujo. La reacción se dejó proceder 30 min y después se concentró al vacío; los productos se purificaron por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1%). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 266.1 , encontrado 266.4. Síntesis de 5-yodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (ZK140). Se tomó 4-cloro-5-yodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (90 mg, 0.31 mmol) en NH3 7N /MeOH y se calentó en un tubo sellado a 1 10 °C durante la noche. La reacción se concentró al vacío para dar un sólido pardo/blanquizco.

Síntesis de 3-p-tolil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK141 ). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.1 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-p-tolil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina y se calentó a reflujo. La reacción se dejó proceder 30 min y después se concentró al vacío; los productos se purificaron por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 226.1 , encontrado 226.3. Síntesis de 3-(4-bifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK142). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. se disolvió 1 -ter-butil-3-(4-bifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (22 mg, 0.066 mmol) (0.1 mL) y se calentó a reflujo. La reacción se dejó proceder 30 min y después se concentró al vacío; los productos se purificaron por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 288.1 , encontrado 288.3. Síntesis de 3-(4-fenoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK143). En una solución de ácido fórmico (1 mL) y HCI conc. (0.1 mL) se disolvió 1 -ter-butil-3-(4-fenoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (19 mg, 54.1 mmol) y se calentó a reflujo. La reacción se dejó proceder 30 min y después se concentró al vacío; los productos se purificaron por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 304.1 , encontrado 304.3. Síntesis de 1 -bencil-3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK147). Se disolvió 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (1 10 mg, 0.42 mmol) en DMF (2 mL) y K2CO3 (220 mg, 1 .6 mmol), y se le agregó bromuro de bencilo (71 .8 mg, 0.42 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante la noche y después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 ml_). El precipitado se recogió por filtración y después se purificó por cromatografía de gel de sílice (MeOH 5% /CH2CI2), para producir un sólido blanco. Síntesis de 5-(4-(benciloxi)fenil)-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (ZK150). Una solución de 5-yodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (5 mg, 0.018 mmol), ácido 4-(benciloxi)fenilborónico (21 mg, 0.091 mmol), K3PO4 (19.3 mg, 0.091 mmol) y Pd(PPh3) (12.5 mg, 0.01 1 mmol) en DMF (3 ml_), se calentó a 60 °C bajo una atmósfera de argón. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 331.1 , encontrado 331 .3. Síntesis de 5-(3-bifenil)-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (ZK151 ). Una solución de 5-yodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-amina (5 mg, 0.018 mmol), ácido 3-bifenilborónico (18 mg, 0.091 mmol), K3PO4 (19.3 mg, 0.091 mmol) y Pd(PPh3)4 (12.5 mg, 0.01 1 mmol) en DMF (3 mL), se calentó a 60 °C bajo una atmósfera de argón. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H2O:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 301.1 , encontrado 301 .3. Síntesis de 5-(benzo[b]tiofen-2-il)-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]-pirimidin-4-amina (ZK152). Una solución de 5-yodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]-pirimidin-4-amina (5 mg, 0.018 mmol), ácido benzo[b)tiofen-2-il-2-borónico (16 mg, 0.091 mmol), KaPO4 (19.3 mg, 0.091 mmol) y Pd(PPh3)4 (12.5 mg, 0.01 1 mmol) en DMF (3 ml_), se calentó a 60 °C bajo una atmósfera de argón. La reacción se concentró al vacío y se purificó por RP-HPLC (MeCN:H20:TFA 0.1 %). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 281 .1 , encontrado 281 .3. Síntesis de 3-(naftalen-2-il)-1 -fenetil-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 4-amina (ZK155). Se disolvió 2-(metoxi(naftalen-6-il)metilen)malononitrilo (100 mg, 0.43 mmol) y cloruro ácido de fenetilhidrazina (58.5 mg, 0.43 mmol) en EtOH (3 mL) y TEA (60 pL, 0.43 mmol), y se calentó a reflujo una hora. El producto se extrajo con éter dietílico y se concentró al vacío. Este concentrado se disolvió en formamida (10 mL) y se calentó a 160-180 °C durante la noche. Al día siguiente, la reacción se enfrió, se vació en agua, y el producto precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 366.2, encontrado 366.2. Síntesis de 1 -isopropil-3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (ZK156). Se disolvió 2-(metoxi(naftalen-6-il)metilen)malononitrilo (100 mg, 0.43 mmol) y cloruro ácido de isopropilhidrazina (47.3 mg, 0.43 mmol) en EtOH (3 mL) y TEA (1 eq.), y se calentó a reflujo una hora. El producto se extrajo con éter dietílico y se concentró al vacío. Este concentrado se disolvió en formamida (10 mL) y se calentó a 160-180 °C durante la noche. Al día siguiente, la reacción se enfrió, se vació en agua, y el producto precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 304.2, encontrado 304.2. Síntesis de 1 -etil-3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4- amina (ZK157). La 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0.42 mmol) se disolvió en DMF (3 mL) y se le agregó K2CO3 (220 mg, 1 .6 mmol) y yoduro de etilo (37 pL, 0.46 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 290.1 , encontrado 290.2. Síntesis de 1 -ciclopentil-3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (ZK158). La 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0.42 mmol) se disolvió en DMF (3 mL) y se le agregó K2CO3 (220 mg, 1 .6 mmol) y bromuro de ciclopentilo (49.5 pL, 0.46 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 330.2, encontrado 330.2. Síntesis de 1 -alil-3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK159). La 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.21 mmol) se disolvió en DMF (1.5 mL) y se le agregó K2C03 (1 10 mg, 0.8 mmol) y yoduro de alilo (23 pL, 0.25 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 302.1 , encontrado 302.2. Síntesis de 2-(4-amino-3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-1 -il)acetamida (ZK162). La 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (50 mg, 0.21 mmol) se disolvió en DMF (1 .5 mL) y se le agregó K2CO3 (1 10 mg, 0.8 mmol) y yodoacetamida (46 mg, 0.25 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 319.1 , encontrado 319.2. Síntesis de 1 -(ciclopropilmetil)-3-(naftalen-2-il)-1 H-p¡razolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK165). La 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.21 mmol) se disolvió en DMF (1 .5 mL) y se le agregó K2C03 (1 10 mg, 0.8 mmol) y bromuro de ciclopropilmetilo (22 pL, 0.25 mmol). La reacción se calentó a 60 °C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 316.2, encontrado 316.2. Síntesis de 1 -isopentil-3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (ZK161 ). La 3-(naftalen-2-il)- H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.21 mmol) se disolvió en DMF (1 .5 mL) y se le agregó K2CO3 (1 10 mg, 0.8 mmol) y bromuro de isobutilo. La reacción se calentó a 60 °C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 332.2, encontrado 332.3. Síntesis de 3-(naftalen-2-il)-1 -((E)-3-fenilprop-1 -enil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (ZK167). La 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.21 mmol) se disolvió en DMF (1 .5 mL) y se le agregó K2C03 (1 10 mg, 0.8 mmol) y 1 -((E)-3-bromoprop-1 -enil)benceno. La reacción se calentó a 60 °C durante la noche, después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 378.2, encontrado 378.2. Síntesis de 3-(naftalen-2-il)-1 -(prop-2-in¡l)-1 H-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-amina (ZK168). La 3-(naftalen-2-il)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-amina (50 mg, 0.21 mmol) se disolvió en DMF (1 .5 mL) y se le agregó K2CO3 (1 10 mg, 0.8 mmol) y bromuro de propargilo. La reacción se calentó a 60 °C durante la noche; después se enfrió a temperatura ambiente y se vació en agua (30 mL). El precipitado se recogió por filtración. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 300.1 , encontrado 300.2 Síntesis de cloruro de 3-etoxi-4-metoxibenzoilo (ZK299). A una solución de CH2CI2 (40 mL) y benceno (20 mL) en un matraz de fondo redondo de 150 mL secado a la flama, se le agregó ácido 3-etox¡-4-metoxibenzoico (5 g, 25.5 mmol). Se le agregó DMF anhidra (9 gotas) y la solución se enfrió sobre hielo. Se le agregó a gotas cloruro de oxalilo (1 1 mL, 128 mmol) y después la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 90 minutos y después se concentró al vacío para producir un sólido blanquecino. El sólido se puso en la línea de alto vacío durante 2 horas y después se tomó para el siguiente paso sin mayor caracterización. Síntesis de 2-((3-etoxi-4-metoxifenil)(hidroxi)metilen)malononitrilo (ZK301 ). A una solución de malononitrilo (1.85 g, 28 mmol) en THF (30 mL) sobre hielo, se le agregó NaH (2.2 g, 56 mmol, dispersión al 60% en aceite de parafina). Se disolvió cloruro de 3-etoxi-4-metoxibenzoilo (25.5 mmol) en THF (50 mL) y esta solución se añadió a la primera solución, gota a gota, por medio de una jeringa, a 0 °C. Después se retiró el hielo y la reacción se dejó proceder a temperatura ambiente durante 60 min. Se le agregó HCI 1 N (100 mL) y la solución se extrajo tres veces con EtOAc. La fase orgánica se secó con MgSO , se filtró y se concentró al vacío, para dar un sólido anaranjado que se tomó para el siguiente paso sin mayor caracterización. Síntesis de 2-((3-etoxi-4-metoxifenil)(metoxi)metilen)malononitrilo (ZK302). En una solución de 1 ,4-dioxano (48 mL) y agua (8 mL) se combinaron 2-((3-etoxi-4-metoxifenil)(hidroxi)metilen)malononitrilo (25.5 mmol) y bicarbonato de sodio (17 g, 204 mmol). Se le agregó lentamente sulfato de dimetilo (17 mL, 178 mmol) y la reacción se calentó a 80-90 °C durante 2 horas. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se le añadió agua, y la fase acuosa se extrajo tres veces con EtOAc (200 mL). Las fases orgánicas se combinaron y el producto combinado se secó con MgSO4 y se filtró para dar un aceite rojo. El aceite se purificó por cromatografía de gel de sílice (EtOAc 10% /hexano, Rt -0.1 ), para dar un sólido blanco (3.59 g, 54.5% de rendimiento de los tres pasos). ESI-MS (M+H)+ m/z ca\c. 259.1 , encontrado 259.0. Síntesis de 5-amino-3-(3-etoxi-4-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazol-4-carbonitrilo (ZK303). Se combinaron 2-((3-etoxi-4-metoxifenil)(metoxi)metilen)malononitrilo (200 mg, 0.78 mmol), cloruro ácido de isopropilhidrazina (86 mg, 0.78 mmol) y trietilamina (0.10 mL, 0.78 mmol) en etanol (5 mL), y se calentó a reflujo durante 90 minutos. La reacción se enfrió entonces a temperatura ambiente, se le agregó agua y la fase acuosa se extrajo tres veces con EtOAc. La fase orgánica se concentró y se llevó al siguiente paso sin mayor caracterización. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 301.1 , encontrado 301 .0 Síntesis de 3-(3-etoxi-4-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazolo[3,4-d]pir¡midin-4-amina (ZK305). El 5-amino-3-(3-etoxi-4-metoxifenil)-1 -isopropil-1 H-pirazol-4-carbonitrilo se disolvió en formamida (20 mL) y se calentó a 180 °C durante la noche. Al día siguiente, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se le agregó agua y el precipitado se recogió por filtración. Después, el precipitado se disolvió en CH2CI2/MeOH y se pasó a través de un tapón se sílice. Después, el producto se liofilizó de benceno para producir un sólido blanquecino (48 mg, 19% en los dos pasos). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 328.2, encontrado 328.0. Síntesis de 5-amino-3-(3-etoxi-4-metoxifenil)-1 -(2-hidroxietil)-1 H-pirazol-4-carbonitrilo (ZK304). Se combinaron 2-((3-etoxi-4-metoxifenil)(metoxi)metilen)malononitrilo (200 mg, 0.78 mmol), 2-hidroxietilhidrazina (0.056 mL, 0.78 mmol) y trietilamina (0.10 mL, 0.78 mmol) en etanol (5 mL), y se calentó a reflujo durante 90 minutos. Después, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se le agregó agua, y la fase acuosa se extrajo tres veces con EtOAc, CH2CI2 y CHCI3. La fase orgánica se concentró y se llevó al siguiente paso sin mayor caracterización. ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 303.1 , encontrado 303.0. 2-(4-Amino-3-(3-etoxi-4-metoxifenil)-1 H-pirazolo[3,4-d]pirimidin- 1 -il)etanol (ZK306). Se disolvió 5-amino-3-(3-etoxi-4-metoxifenil)-1 -(2-hidroxietil)-1 H-pirazol-4-carbonitrilo en formamida (20 ml_) y se calentó a 180 °C durante la noche. Al día siguiente, la reacción se enfrió a temperatura ambiente, se le agregó agua, y el precipitado se recogió por filtración. El precipitado se disolvió entonces en CH2CI2/MeOH y se pasó a través de un tapón de sílice. El producto se liofilizó de benceno para producir un sólido pardo (6.4 mg, 2.5% los dos pasos). ESI-MS (M+H)+ m/z cale. 330.1 , encontrado 330.0.

B. Estudios estructurales Se han reportado las estructuras de cristal de ?1 10? sola o en complejo con ATP o inhibidores panespecíficos tales como LY294002 y wortmanina (Walker y otros, 2000; Walker y otros, 1999). Para explorar la potencia y selectividad de la unión de los inhibidores, se determinaron las estructuras de cristal de inhibidores de PI3-K de tres quimiotipos enlazados a ?1 10? humana, a una resolución de 2.5-2.6 Á: la quinazolinpurina PIK-39, la imidazopiridina PIK-90 y el feniltiazol PIK-93 (figuras 1 A-1 D). Basándose en estas estructuras de co-cristal y un modelo de farmacóforo de arilmorfolina, se generaron modelos estructurales para tres quimiotipos adicionales enlazados a ?1 10?: la piridinilfuranopirimidina PI-103, la morfolinocromona PIK-108, y la morfolinopiranona KU-55933 (figuras 1A-1 D). La construcción de modelo para estos inhibidores fue guiada por la observación de que cada compuesto contiene el farmacóforo clave arilmorfolina encontrado en LY294002. A continuación se ilustran las estructuras de compuestos representativos de once quimiotipos de inhibidores de PI3-K.

KU-55933 PIK-75 LY294002 (TGX-115, PK-108) PK-90 Mortolinopiranona tnidazopiridina Mortolinocromona Imidazoquinazolina AMA-37 (C60211 , C86621) PI -39 (IC871 14, PK-23) TGX-288 Morlolinotenol Quinazolinonpurina Piridinílcromona La PIK-39 es una isoquinolinpurina que inhibe ?1 10d a concentraciones nanomolares medias, ?1 10? y ?1 10ß a concentraciones -100 veces más altas, y no muestra actividad contra ningún otro miembro de la familia de PI3-K, incluyendo p1 10a, a concentraciones de hasta 100 µ? (cuadro A). La selectividad bioquímica de este compuesto se obtiene por medio de un modo de unión inusual revelado en su estructura de co-cristal con ?1 10? (figura 1 C). Solo la porción de mercaptopurina de PIK-39 hace contacto en el interior de la cavidad de unión de ATP, y este sistema de anillo gira -100° y se tuerce -35° fuera del plano con respecto a la adenina del ATP. En esta orientación, satisface los enlaces de hidrógeno para las amidas de esqueleto de Val 882 y Glu 880 (recapitulando así los enlaces de hidrógeno hechos por N1 y N6 de adenina).

CUADRO A Valores de IC50 (uM) de inhibidores de PI3-K seleccionados contra cinasas de lípido PIK23 TGX 1 15 AMA37 PIK39 ICB71 14 TGX28Í PIK75 PIK90 PIK83 PIK108 PI-103 PIK124 KU-8539 PI3Ks P1 10a >200 61 32 >200 >200 4.5 0.0058 0.01 1 0.039 2.6 0.008 0.023 3.3 ?1 10ß 42 0.13 3.7 1 1 .16 0.12 1.3 0.35 0.59 0.057 0.008 1 .1 1.2 P1 105 0.097 0.63 22 0.18 0.13 1 0.51 0.058 0.12 0.26 0.048 0.34 0.72 ?1 10? 50 100 100 17 61 10 0.076 0.018 0.016 4.1 0.15 0.054 9.9 PI3KC2a >100 >100 >100 >100 >100 >100 -10 0.047 -16 -100 -1 0.14 ND ??3?02ß 100 50 >100 100 >100 -100 -1 0.064 0.14 -20 0.026 0.37 ND ??3?02? >100 100 50 100 >100 ND ND ND ND ND ND ND ND hsVPS3-4 -50 5.2 >100 >100 >100 3.1 2.6 0.83 0.32 -5 2.3 1 D -10- P14ks P14Küa >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 O P14Kllla >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 0.83 1 .1 -50 >100 >100 >100 ?14????ß >100 >100 >100 >100 >100 >100 -50 3.1 0.019 >100 -50 >100 >100 PIKKS ATR >100 >100 >100 >100 >100 >100 21 15 17 >100 0.85 2 20 ATM >100 20 ND >100 >100 >100 2.3 0.61 0.49 35 0.92 3.9 0.005 DNA-PK >100 1 .2 0.27 >100 >100 -50 0.002 0.013 0.054 0.12 0.002 1.5 10 mTORCI >100 >100 >100 >100 >100 >100 -1 1 .05 1 .38 -10 0.02 9 -20 mTORC2 >101 >100 >100 >100 >100 ND -10 ND ND ND 0.083 ND >100 PIPKs P14P5KIC >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 > 00 >100 >100 >100 ?14?5??ß >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 ?15?4???ß >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 ND CUADRO B Inhibición de proteína-cinasas mediante inhibidores de PI3-K TGX11S AMA37 PIK39 IC87114 TGX286 PIK75 PIK90 PIK93 PI103 PIK124 KU55933 Abl 121.2 128.5 99.9 103.6 100.0 97.9 103.4 99.6 100.8 109.1 100.3 Ahí IT315I) 141.2 127.4 110.5 99.4 108.5 121.6 111.3 128.0 108.1 87.5 105.3 Akll 126.6 125.7 136.4 122.2 114.0 (10) 140.2 112.6 108.5 94.8 114.0 Akn(fiPH) 91.4 77.3 81.0 89.6 94.7 (10) 122.4 122.2 123.1 93.3 116.5 Akt2 98.8 115.0 110.5 116.5 109.7 80.7 119.8 117.4 114.7 114.7 98.2 104.4 94.4 11.3 117.8 117.3 95.0 108.5 110.7 112.6 98.7 100.2 Akt3 97.6 106.6 94.2 111.0 102.9 (29) 11.3 96.4 103.5 93.0 95.1 Cam II 111.4 121.9 122.1 115.4 118.8 119.8 116.1 120.4 127.6 135.5 121.8 COKi/cyc.B 103.0 114.0 115.5 116.0 120.3 61.6 126.6 124.5 42.3 110.7 101.2 CDK2/cyc.A 105.3 99.7 105.6 102.4 103.1 (1.2) 100.9 98.1 98.5 104.9 97.4 C ki 119.9 104.0 105.2 103.0 104.1 98.4 102.9 99.7 92.3 107.9 81.4 CKi 99.7 99.2 100.1 98.1 91.3 (3.0) 97.8 100.2 84.8 104.6 94.1 103.3 106.6 99.5 111.7 111.2 82.2 103.1 113.2 108.1 78.5 105.4 Er 96.7 99.3 97.6 93.7 99.0 77.9 98.8 98.6 92.0 97.8 104.6 Erk2 107.7 102.5 109.2 104.7 106.9 94.3 102.0 103.2 98.8 98.0 102.1 FAK 105.5 105.5 106.4 110.1 102.8 (10) 100.0 101.8 101.8 102.8 107.3 Fyn 145.7 131.3 115.7 105.3 111.3 (10) 126.1 127.2 114.2 113.4 116.0 GRK2 113.5 117.3 112.6 118.7 118.1 115.6 120.2 110.9 10.3 87.8 108.6 GS 3P 114.0 107.3 101.5 104.7 96.1 (4.4) 85.6 104.0 105.5 97.6 102.0 Hck 104.9 102.2 101.1 93.0 84.9 (10) 94.7 94.9 94.9 87.2 104.1 Insullin R. 108.4 113.4 113.6 115.7 112.1 99.5 102.8 109.8 106.0 109.9 109.7 JNKlnl 99.9 95.5 92.1 88.5 93.8 97.8 94.2 87.2 83.8 96.9 99.8 JNK2n1 104.8 104.8 116.7 107.1 88.1 88.1 90.5 88.1 81.0 85.7 85.7 JN 2o2 95.4 101.6 90.8 87.7 89.3 86.2 83.1 98.5 76.9 89.3 95.4 IRAK4 112.7 98.9 100.1 93.1 95.0 (0.9) 94.9 95.9 105.6 175.4 74.2 NE 2 125.2 99.1 98.6 114.3 126.4 106.9 103.4 110.1 120.0 118.5 108.6 PKA 105.4 94.0 108.1 108.6 107.3 (10) 103.1 105.6 102.5 104.3 104.1 PKC6 103.9 104.9 103.9 104.6 104.9 114.3 100.7 103.7 101.2 105.5 103.7 Cc 108.9 111.9 111.9 114.1 111.5 (10) 105.2 103.4 103.4 106.0 104.8 PDK1 111.2 101.9 97.4 113.4 114.4 111.0 110.4 118.7 107.5 109.4 130.7 PLK1 122.7 118.9 117.4 109.6 107.6 93.7 107.6 111.1 106.2 96.0 84.9 p38 101.2 102.8 108.5 104.1 100.9 100.3 98.5 102.9 99.8 102.6 101.4 Src 111.7 109.0 109.6 113.3 96.4 (10) 103.7 116.1 100.6 102.7 114.7 Sic (T338I) 112.8 101.3 97.9 95.7 96.4 80.4 109.5 111.5 113.4 112.5 113.0 WNK1 107.5 108.0 109.6 109.0 119.3 101.1 108.6 110.0 104.1 108.3 104.7 2ap70 123.8 121.1 130.4 110.5 130.0 179.5 115.8 115.4 117.7 100.4 99.3 Los valores del cuadro B representan el porcentaje de actividad remanente en presencia de 10 µ? de inhibidor. Los valores son el promedio de mediciones por triplicado. Los valores de IC50 están entre paréntesis en las partes apropiadas (µ?).

En contraste con otras estructuras de inhibidor de PI3-K, PIK-39 no ingresa a la profundidad de la cavidad en el interior del sitio activo (figura 1 C, área ligeramente sombreada marcada como "cavidad de afinidad"). Más bien, la porción aril-isoquinolina de PIK-39 se extiende afuera hacia la entrada de la cavidad de unión de ATP (figura 1 B). En esta región, la cinasa acomoda el inhibidor experimentando un reordenamiento conformacional en el cual Met 804 cambia de una posición "hacia arriba", en la que forma el techo de la cavidad de unión de ATP, a una posición "hacia abajo", en la cual se empaqueta contra la porción de ¡soquinolina. El efecto de este movimiento, que es único para la estructura de PIK-39 (figura 1 B), es crear una cavidad hidrofóbica novedosa entre Met 804 y Trp 812 en la entrada al sitio de unión de ATP. Esta cavidad de ajuste inducido oculta -180 Á2 de área de superficie de inhibidor accesible a disolvente, permitiendo que PIK-39 logre una afinidad nanomolar a pesar del contacto limitado dentro del núcleo del sitio activo. Se determinaron las estructuras de co-cristal de los compuestos PIK-90 y PIK-93 enlazados a ?110?. PIK-90 y PIK-93 formaron un enlace de hidrógeno con el nitrógeno de amida de esqueleto de Val 882 (figura 1 D), una interacción conservada entre todos los inhibidores conocidos de PI3-K (Waiker y otros, 2000). Además de este enlace de hidrógeno, PIK-93 hace un segundo enlace de hidrógeno con el carbonilo de esqueleto de Val 882 y un tercero entre su porción de sulfonamida y la cadena lateral de Asp 964. El PIK-93 es uno de los inhibidores más polares del panel de los presentes autores (clogP=1.69), y estas interacciones polares extendidas pueden compensar su área de superficie hidrofóbica limitada. PIK-90 se une de un modo similar a PIK-93, aunque este compuesto más grande hace interacciones hidrofóbicas más extensas, ocultando 327 Á2 de área de superficie accesible a disolvente. Para lograr esto, PIK-90 proyecta su anillo de piridina a una cavidad más profunda a la que PIK-93 tiene acceso parcialmente pero no es ocupada por ATP (figura 1 D, circulo ligeramente sombreado). En esta región, el anillo de piridina de PIK-90 es estabilizado para hacer un enlace de hidrógeno con Lys 833, y los presentes autores encontraron que el reemplazo de este nitrógeno de piridina con carbono da como resultado una pérdida de 100 veces en la afinidad (PIK-95, véase el esquema A más abajo). PI-103, un tercer inhibidor de PI3K multidirigido proyecta un fenol hacia la misma cavidad basada en un modelo de farmacóforo de arilmorfolina (figura 1 D).

Esquema A Estructuras de inhibidores de PI3-K adicionales y análogos inactivos PIK-90 PIK-95 Dos características estructurales distinguen estos potentes inhibidores multidirigidos de los compuestos más selectivos del panel de los presentes autores. En primer lugar, estos compuestos adoptan una conformación plana en la cavidad de unión de ATP, mientras que los inhibidores altamente selectivos se proyectan fuera de plano ocupado por ATP (figuras 1 A-1 D). En segundo lugar, los inhibidores más potentes se proyectan hacia una cavidad de unión más profunda a la que no tiene acceso ATP (figura 1A). La cadena lateral de Ile879 contribuye mucho a la superficie de esta cavidad de afinidad. La mercaptopurina de la estructura de PIK-39 fue reemplazada con adenina para producir un modelo de IC871 14 (figura 2A). Esta sustitución suministró la adenina de IC871 14 en la orientación correcta para hacer los mismos enlaces de hidrógeno que la mercaptopurina de PIK-39, aunque estos dos sistemas de anillo giran 1 10° uno con respecto al otro. A diferencia de otros quimiotipos de inhibidor, PIK-39 no aprovecha la cavidad de afinidad de PI3-cinasa (figura 1 C). Entonces se probó la inhibición de las PI3-Ks de clase I con el análogo de pirazolopirimidina de IC871 14 (PIK-239) y un análogo novedoso que contenía un m-fenol (PIK-294, figura 2A). El PIK-294 fue hasta 60 veces más potente que PIK-293 (figura 2A). La estructura de PIK-39 enlazado a ?1 10? revela un reordenamiento conformacional de Met 804 que crea una cavidad inducida, y los presentes autores han formulado la hipótesis de que este reordenamiento conformacional sustenta la selectividad de PIK-39 por ?110d. Una predicción de este modelo es que la mutación de Met 804 debe perturbar la unión de los inhibidores selectivos de ?110d (que ingresan a la cavidad inducida), pero no afecta otras clases de inhibidores (que no ingresan a esta cavidad). La modelación sugiere que la mutación de Met 804 a un aminoácido ß-ramificado (tal como valina o isoleucina) debe restringir la cavidad formada por el reordenamiento de ese residuo (figura 2B, derecha). Por lo tanto, los presentes autores mutaron el residuo correspondiente en ?110d (Met 752) a valina o isoleucina; expresaron y purificaron estas cinasas, y probaron su sensibilidad a los inhibidores de PI3-K (figura 2B). Encontraron que ?110d M752I y M752V es resistente a los inhibidores selectivos de ?110d PIK-39 e IC87114, pero retienen la sensibilidad a los inhibidores de p110a/multidirigidos PIK-90, PIK-93 y PI-103. Esta resistencia específica de quimiotipo apoya la función única de Met 752 en el control de acceso de una cavidad de selectividad inducible. Se realizó modelación de antagonista usando el sistema de gráfica molecular PyMOL. Todas las estructuras de cristal de ?110? (códigos PDB entre paréntesis), incluyendo las formas enlazadas de Apo (1 E8Y), ATP (1 E8X), Wortmanina (1 E7U), LY294002 (1 E7V), quercetina (1 E8W), miricetina (1 E90), y estaurosporina (1 E8Z), PIK-90, PIK-93 y PIK-39, se alinearon estructuralmente usando la función de alineación de PyMOL. Se construyeron modelos para los inhibidores PIK-108, KU-55933 y PI-103 en la parte superior del armazón de arilmorfolina de LY294002 (1 E7V), usando la función de construcción del fragmento de PyMOL Similarmente se construyó un modelo para el inhibidor IC871 14 en la parte superior del armazón de aril-isoquinolina de PIK39. El modelo para PI-103 se construyó en la estructura de proteína de ?1 10? enlazada a PIK-90, porque la estructura de PIK-90 contiene la cavidad de afinidad agrandada que es necesaria para acomodar la porción fenólica de ???-103's (de otra manera la estructura de PIK-90 ?1 10? no exhibe diferencia conformacional alguna en la región de unión de arilmorfolina, en comparación con la estructura de ?1 10? enlazada con LY294002). Los modelos para PIK-108, KU-55933 e IC871 14 se construyeron en la estructura de proteína de ?1 10? enlazada a PIK-39 porque estos inhibidores poseen grupos voluminosos que se proyectan hacia fuera del plano de la adenina y probablemente aprovechan la única cavidad de ajuste inducido "Met 804 hacia abajo". En todos los modelos de inhibidor, la elección de la estructura de proteína y el modo de unión del inhibidor se basa en SAR bioquímico extenso y también en la geometría del inhibidor. Las estructuras de proteína y los modelos de inhibidor no se han minimizado para optimizar la energía de unión, pero se tuvo cuidado de impedir cualquier choque estérico grueso y de satisfacer los enlaces de hidrógeno claves.

C. Prueba de ?1 10a/?85a, ?1 0ß/?85a, ?1 10d/?85a y p1 10y Las PI3-Ks de clase I se compraron (?1 10a/?85a, ?1 10ß/?85a, ?1 10d/?85a, de Upstate, y ?1 10? de Sigma), o se expresaron como se describe anteriormente (Knight y otros, 2004). Los valores de IC50 se midieron usando una prueba de TLC estándar para actividad de cinasa de lípido (que se describe más abajo), o una prueba de captura de membrana de alto rendimiento. Las reacciones de cinasa se realizaron preparando una mezcla de reacción que contiene cinasa, inhibidor (concentración final de 2% de DMSO), amortiguador (25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2), y fosfatidilinositol recién sometido a sonicación (100 pg/ml). Las reacciones se iniciaron con la adición de ATP que contiene 10 pCi de ?-32?-???, a una concentración final de 10 µ? o 100 µ?, como se indica en el cuadro A, y se dejaron proceder durante 5 minutos a temperatura ambiente. Para análisis de TLC, las reacciones se terminaron entonces con la adición de 105 µ? de HCI 1 N, seguido por 160 µ? de CHCI3:MeOH (1 :1 ). La mezcla bifásica se agitó por vórtice, se centrifugó brevemente, y la fase orgánica se transfirió a un tubo nuevo usando la punta de una pipeta cargada con gel precubierta con CHCI3. Este extracto se aplicó sobre placas de TLC y se desarrollaron durante 3-4 horas en una solución 65:35 de n-propanol : ácido acético 1 M. Después, las placas de TLC se secaron, se expusieron a una pantalla de Phosphoimager (Storm, Amersham), y se cuantificaron. Para cada compuesto se midió la actividad de cinasa a 10-12 concentraciones de inhibidor, que representan diluciones de dos veces de la concentración más alta probada (normalmente 200 µ?). Para compuestos que muestran actividad significativa, se repitieron las determinaciones de IC5o de 2 a 4 veces, y el valor reportado es el promedio de estas mediciones independientes.

Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 2.

D. Prueba de Ab1 Los inhibidores (concentración final: 10 µ?) se analizaron por triplicado contra Ab1 recombinante de longitud completa o Ab1 (T315l) (Upstate) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 200 µ? de ATP (2.5 pCi de ?-32?-???), y 0.5 mg/mL de BSA. El substrato de péptido Ab1 optimizado EAIYAAPFAKKK se usó como aceptor de fósforo (200 µ?). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre láminas de fosfocelulosa, que se lavaron con ácido fosfórico a 0.5% (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantificó por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 3.

E. Prueba de Hck Hck: Los inhibidores (concentración final: 10 µ?) se probaron por triplicado contra Hck recombinante de longitud completa en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2l 200 µ? de ATP (2.5 C\ de ?-32?-???), y 0.5 mg/mL de BSA. El substrato de péptido de cinasa de la familia Src optimizado, EIYGEFKKK, se usó como aceptor de fósforo (200 µ?). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre láminas de fosfocelulosa, que se lavaron con ácido fosfórico al 0.5% (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantificó por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 3.

F. Prueba de receptor de insulina (Rl) Los inhibidores (concentración final: 10 µ?) se probaron por triplicado contra el dominio recombinante de cinasa del receptor de insulina (Upstate) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 10Mm de MnCI2, 200 µ? de ATP (2.5 pCi de ?-32?-???), y 0.5 mg/mL de BSA. Se usó como substrato Poly E-Y (Sigma; 2mg/mL). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre nitrocelulosa, que se lavó con NaCI 1 M /ácido fosfórico al 1 % (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantificó por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 4.

G. Prueba de Src Src, Src(T3381 ): Los inhibidores (concentración final: 10 µ?) se probaron por triplicado contra Src recombinante de longitud completa o Src(T3381 ) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 200 µ? de ATP (2.5 pCi de ?-32?-???), y 0.5 mg/mL de BSA. El substrato de péptido de cinasa de la familia Src optimizado, EIYGEFKKK, se usó como aceptor de fósforo (200 µ?). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre láminas de fosfocelulosa, que se lavaron con ácido fosfórico al 0.5% (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantificó por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 3.

H. Prueba de DNA-PK (DNAK) Se compró DNA-PK de Promega y se analizó usando el sistema de prueba DNA-PK (Promega) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los resultados se muestran en el cuadro 2.

I. Prueba de mTOR Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra mTOR recombinante (Invitrogen) en una prueba que contenía 50 mM de HEPES, pH 7.5, 1 mM de EGTA, 10 mM de MgCI2, 2.5 mM de Tween 0.01 %, 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 µg/mL de BSA. Se usó como substrato PHAS-1/4EBP1 recombinante de rata (Calbiochem; 2 mg/mL). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre nitrocelulosa, que se lavó con NaCI 1 M /ácido fosfórico al 1 % (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantifico por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 4.

J. Receptor del crecimiento endotelial vascular Receptor de crecimiento endotelial vascular (KDR) 2: Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa del receptor KDR (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 0.1 % de BME, 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 g/mL de BSA. Se usó como substrato Poly E-Y (Sigma; 2 mg/mL). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre nitrocelulosa, que se lavó con NaCI 1 M /ácido fosfórico al 1 % (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantifico por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 3.

K. Prueba del receptor de efrin B4 (EphB4) Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ? -0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa del receptor de efrin B4 (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2l 0.1 % de BME, 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 yg/mL de BSA. Se usó como substrato Poly E-Y (Sigma; 2 mg/mL). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre nitrocelulosa, que se lavó con NaCI 1 M /ácido fosfórico al 1 % (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantifico por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 3.

L. Prueba del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa del receptor de EGF (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 0.1 % de BME, 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 pg/mL de BSA. Se usó como substrato Poly E-Y (Sigma; 2 mg/mL). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre nitrocelulosa, que se lavó con NaCI 1 M /ácido fosfórico al 1 % (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantifico por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 3.

M. Prueba de KIT Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa KIT (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 1 mM de DTT, 10 mM de MnCI2l 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 g/mL de BSA. Se usó como subslrato Poly E-Y (Sigma; 2 mg/mL). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre nitrocelulosa, que se lavó con NaCI 1 M /ácido fosfórico al 1 % (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantifico por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 4.

N. Prueba de RET Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa de RET (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 2.5 mM de DTT, 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 pg/mL de BSA. Se usó como aceptor de fósforo el substrato de péptido Ab1 optimizado EAIYAAPFAKKK (200 µ?). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre láminas de fosfocelulosa, que se lavaron con ácido fosfórico al 0.5% (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantifico por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 4.

O. Prueba del receptor del factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGFR) Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa del receptor de PDG (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2> 2.5 mM de DTT, 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 pg/mL de BSA. Se usó como aceptor de fósforo el substrato de péptido Ab1 optimizado EAIYAAPFAKKK (200 µ?). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre láminas de fosfocelulosa, que se lavaron con ácido fosfórico al 0.5% (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantificó por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 4.

P. Prueba de tirosina-cinasa relacionada con FMS 3 (FLT-3) Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa de FLT-3 (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 2.5 mM de DTT, 10 µ? de ATP (2.5 \JC de µ-32?-???), y 3 µg/mL de BSA. Se usó como aceptor de fósforo el substrato de péptido Ab1 optimizado EAIYAAPFAKKK (200 µ?). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre láminas de fosfocelulosa, que se lavaron con ácido fosfórico al 0.5% (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantificó por medio del instrumento Phosphoimager.

Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 4.

Q. Prueba de tirosina-cinasa del receptor de TEK (TIE2) Los inhibidores (concentraciones finales: 50 µ?-0.003 µ?) se probaron contra el dominio recombinante de cinasa de TIE2 (Invitrogen) en una prueba que contenía 25 mM de HEPES, pH 7.4, 10 mM de MgCI2, 2 mM de DTT, 10 mM de MnCI2, 10 µ? de ATP (2.5 pCi de µ-32?-???), y 3 pg/mL de BSA. Se usó como substrato Poly E-Y (Sigma; 2 mg/mL). Las reacciones se terminaron aplicándolas sobre nitrocelulosa, que se lavó con NaCI 1 M /ácido fosfórico al 1 % (aproximadamente 6 veces, 5-10 minutos cada una). Las láminas se secaron y la radioactividad transferida se cuantificó por medio del instrumento Phosphoimager. Los resultados se exponen más abajo en el cuadro 4.

R. Resultados En el cuadro 1 , los compuestos tienen la fórmula: R1 y R2 son como se define en el cuadro 1 . X es =N excepto en donde se indica. R36 es -NH2 excepto en donde se indica.

CUADRO 1 CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 2 Comp. 110a 110ß 110d 110? DPK Comp. 110a 110ß 1105 110? DPK KS167 ++ + ++ ++ ++ BA46 ++ ++ +++ ++ +++ ZK141 ++ ++ ++ ++ +++ BA45 ++ + ++ ++ ++ KS84 ++ + ++ + +++ BA39 ++ +++ ++ ++ ZK127 ++ ++ ++ ++ +++ BA150 ++ + ++ ++ ++ ZK134 ++ + ++ ++ +++ BA151 ++ + ++ ++ ++ ZK132 ++ ++ ++ ++ +++ BA21 ++ ++ ++ ++ ZK125 ++ + ++ ++ +++ BA52 ++ ++ ++ ++ ++ BA56 +++ +++ +++ +++ +++ BA53 ++ + + + ++ ZK138 ++ ++ ++ ++ +++ BA31 ++ ++ +++ +++ ++ KS287 ++ ++ ++ ++ ++ BA152 ++ ++ +++ ++ +++ KS288 + + + +++ BA149 ++ ++ ++ ++ + KS284 +++ ++ +++ ++ +++ BA32 ++ ++ +++ +++ BA60 ++ ++ +++ ++ +++ BA55 ++ ++ +++ ++ ++ ZK318 ++ + ++ ++ ++ BA35 ++ +++ +++ +++ ZK320 ++ ++ +++ +++ ++ BA34 ++ ++ +++ ++ +++ ZK333 +++ ++ +++ +++ +++ BA38 ++ +++ +++ +++ ZK323 +++ ++ +++ +++ +++ BA40 ++ ++ ++ +++ ZK327 +++ ++ +++ +++ +++ BA41 ++ ++ +++ +++ +++ BA77d ++ ++ +++ ++ ++ BA14 ++ ++ +++ ++ +++ BA78d ++ ++ +++ ++ +++ BA12 ++ ++ +++ ++ ++ BA22 +++ +++ +++ +++ +++ BA30 ++ ++ +++ +++ +++ BA79d +++ +++ +++ +++ +++ ZK149 + ++ ++ ++ + BA85 ++ ++ ++ ++ +++ ZK126 ++ + ++ + ++ BA87 +++ +++ +++ +++ +++ ZK143 + + + + + ZA502 ++ ++ +++ ++ +++ ZK150 ++ + + + ++ Z 489 +++ +++ +++ +++ +++ ZK136 ++ + + ++ +++ ZK487 +++ +++ +++ +++ +++ ZK131 + + + + + ZK491 +++ +++ +++ +++ ++ ZK151 + + + + +++ ZK493 +++ +++ +++ +++ +++ ZK142 + + + + + BA62d +++ +++ +++ +++ ++ ZK139 + + + ++ ++ ZK450 ++ ++ ++ +++ + KS207 ++ + +++ +++ +++ ZK454 ++ ++ ++ +++ +++ KS208 ++ ++ ++ +++ +++ ZK469 +++ +++ ++ +++ +++ ZK102 + + + + +++ ZK471 +++ +++ +++ +++ ++ ZK157 +++ +++ ZK461 +++ ++ +++ ++ ++ ZK159 ++ ++ ++ ++ +++ ZK413 ++ +++ +++ +++ +++ ZK156 ++ ++ ++ ++ +++ ZK379 +++ ++ +++ +++ +++ KS63 + + + + +++ ZK421 +++ ++ +++ +++ +++ ZK158 ++ ++ ++ ++ +++ ZK403 ++ +++ +++ +++ ++ ZK147 + ++ ++ ++ ++ ZK405 ++ ++ +++ ++ +++ ZK155 ++ ++ ++ ++ +++ ZK432 +++ ++ +++ +++ +++ ZK162 ++ + ++ ++ +++ ZK434 +++ +++ +++ +++ +++ ZK165 ++ + ++ ++ +++ ZK465 +++ + +++ +++ +++ ZK161 ++ + ++ ++ ++ ZK377 ++ ++ ++ ++ +++ ZK167 ++ ++ ZK399 ++ ++ +++ ++ +++ ZK168 ++ +++ ZK401 ++ + ++ + +++ BA116 + ++ ++ ++ +++ CUADRO 2 (Continuación) Comp. 110a 110ß 110d 110? DPK Comp. 110a 110p 1106 110? DPK BA62 +++ ++ +++ +++ +++ BA17 +++ ++ +++ ++ +++ ZK358 +++ ++ +++ +++ +++ BA134 ++ + ++ + ++ ZK452 ++ ++ ++ +++ +++ BA155 ++ ++ +++ ++ +++ ZK456 +++ ++ ++ +++ +++ BA122 ++ ++ +++ ++ +++ ZK463 +++ ++ +++ +++ +++ BA111 +++ ++ +++ +++ +++ ZK371 +++ +++ +++ +++ +++ BA102 +++ +++ +++ +++ +++ ZK409 +++ +++ +++ +++ +++ BA1 12 +++ ++ +++ +++ +++ ZK428 +++ +++ +++ +++ +++ BA1 18 +++ ++ +++ +++ +++ ZK430 +++ +++ +++ +++ +++ BA130 +++ ++ +++ +++ +++ ZK837 ++ ++ ++ ++ +++ BA132 +++ +++ +++ +++ +++ ZK389 ++ +++ +++ ++ +++ BA139 ++ ++ +++ + ++ ZK369 ++ + ++ ++ ++ BA158 +++ +++ +++ +++ +++ ZK385 ++ ++ +++ ++ +++ BA140 + ++ + + ++ ZK391 ++ ++ +++ ++ +++ BA141 + + + + + BA155_2 +++ +++ +++ +++ +++ BA1 6 +++ +++ +++ +++ +++ BA157_2 +++ +++ +++ +++ +++ BA142 +++ ++ ++ +++ +++ BA59 +++ ++ +++ +++ +++ BA145 ++ ++ ++ ++ ++ BA63 ++ +++ +++ BA1 7 ++ ++ ++ ++ ++ BA93 +++ ++ +++ +++ +++ BA148 ++ ++ ++ ++ +++ BA49 ++ + ++ ++ ++ BA143 ++ ++ ++ ++ +++ BA15 +++ ++ +++ +++ +++ BA144 +++ ++ +++ +++ +++ ZK321 ++ ++ +++ +++ +++ BA129 ++ + ++ + ++ ZK337 +++ +++ +++ +++ +++ BA131 +++ ++ +++ +++ +++ ZK347 +++ +++ +++ +++ +++ BA133 +++ +++ +++ +++ +++ ZK325 +++ +++ +++ +++ +++ BA120 +++ ++ +++ +++ +++ ZK349 +++ +++ +++ +++ +++ BA108 +++ ++ +++ ++ +++ ZK423 +++ +++ +++ +++ +++ BA121 +++ ++ +++ ++ +++ ZK41 1 ++ +++ +++ +++ +++ BA89 +++ ++ +++ +++ +++ ZK407 ++ +++ +++ ++ ++ BA94 +++ ++ +++ +++ +++ BA98 +++ +++ +++ +++ +++ BA135 +++ +++ +++ +++ +++ S1 ++ + ++ + + BA136 +++ ++ +++ ++ +++ BA23 +++ +++ +++ +++ +++ BA137 +++ +++ +++ +++ +++ ZK485 +++ +++ +++ ++ ++ BA138 +++ ++ +++ +++ +++ Z 495 +++ ++ +++ ++ +++ BA160 ++ ++ +++ +++ +++ ZK496 ++ ++ +++ ++ +++ BA157_3 +++ ++ +++ +++ +++ ZK494 +++ +++ +++ +++ +++ BVA154 +++ +++ +++ +++ +++ BA90 +++ +++ +++ +++ +++ BA110 +++ ++ +++ +++ +++ ZK341 ++ ++ +++ +++ ++ BA115 +++ ++ +++ +++ +++ ZK343 +++ ++ +++ ++ +++ BA159 +++ +++ +++ +++ ++ ZK361 ++ ++ +++ +++ +++ BA119 ++ ++ +++ ++ +++ KZ359 +++ +++ +++ +++ +++ BA107 ++ ++ +++ ++ +++ ZK362 +++ +++ +++ +++ ++ BA124 ++ ++ +++ ++ +++ BA64 + + ++ + ++ BA161 + + + + +++ CUADRO 2 (Continuación) Comp. 110a 110ß 110d 110? DPK Comp. 110a 110ß 110d 110? DPK BA65 + + ++ + ++ BA162 ++ ++ ++ ++ +++ ZK305 +++ +++ +++ +++ +++ BA24dd ++ ++ +++ ++ +++ ZK306 ++ + ++ ++ ++ BA43 +++ +++ +++ +++ BA66 ++ ++ +++ ++ +++ BA91 ++ ++ ++ ++ +++ BA48 ++ ++ +++ ++ +++ BA92 ++ ++ +++ ++ +++ ZK133 + + + ++ ++ BA86 ++ ++ ++ +++ +++ BA20dd ++ ++ ++ ++ +++ BA88 + + ++ +++ +++ BA20d ++ ++ +++ +++ +++ BA96 ++ + +++ +++ +++ BA20 ++ ++ ++ ++ BA97 ++ ++ +++ +++ +++ BA99 ++ + ++ + ++ BA44 ++ +++ ++ ++ ++ BA81 dd +++ ++ +++ +++ + BA156 ++ ++ ++ ++ +++ BA81 d +++ ++ +++ +++ +++ BA95 ++ ++ +++ +++ +++ ZK137 ++ + ++ ++ +++ ZK129 ++ ++ ++ ++ +++ Z 135 ++ + + ++ ++ BA54 ++ ++ ++ ++ +++ ZK130 + + + + + ZK152 ++ ++ ++ ++ +++ ZK128 ++ + ++ ++ ++ BA42 ++ ++ ++ ++ +++ BA26 ++ ++ +++ +++ ++ PIK294 ++ +++ +++ +++ ++ SU11248 ++ + ++ ++ + Iressa + + + + BAY43- ++ + + + + PIK103 +++ +++ +++ +++ +++ 9006 Dasatinib ++ + ++ + ++ P¡k90 +++ +++ +++ +++ +++ CUADRO 3 Comp. Ab1 Hck Src Src (T/l) VEGFR EGFR EphB4 KS84 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA56 ++ +++ +++ ++ ++ +++ ++ KS284 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA60 ++ +++ +++ +++ ++ + ++ ZK318 ++ ++ +++ ++ + ++ ZK320 +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ KZ333 +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ ZK323 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ KZ327 +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ BA77d +++ +++ +++ ++ ++ ++ +++ BA78d +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ BA22 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA79d +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA85 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA87 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ ZK502 +++ +++ +++ ++ ++ ++ + ZK489 +++ +++ +++ + ++ + ++ ZK487 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ Zk491 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ Zk493 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA62d +++ +++ +++ +++ +++ ++ +++ ZK450 +++ +++ +++ + ++ + ++ ZK454 +++ ++ +++ + ++ ++ + ZK469 +++ +++ +++ + ++ ++ ++ ZK471 +++ +++ +++ + ++ ++ + ZK461 +++ +++ +++ + +++ ++ ++ ZK413 +++ +++ +++ + ++ ++ ZK379 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ ZK421 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ ZK403 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK405 +++ +++ +++ ++ ++ ++ + ZK432 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK434 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK465 +++ +++ +++ + +++ +++ +++ ZK377 ++ ++ +++ + ++ + + ZK399 +++ +++ +++ + + + ++ ZK401 +++ +++ +++ + + + + BA62 +++ +++ +++ + + ++ +++ ZK358 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ ZK452 +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ ZK456 +++ +++ +++ + ++ ++ ++ ZK463 +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ ZK371 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ ZK409 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK428 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK430 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK387 +++ +++ +++ + ++ ++ ++ CUADRO 3 (Continuación) Comp. Ab1 Hck Src Src (T/l) VEGFR EGFR EphB4 ZK389 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK369 ++ ++ +++ + ++ ++ + XK385 ++ +++ +++ + ++ + ++ ZK391 ++ +++ +++ + ++ ++ ++ BA155_2 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA157_2 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ BA59 +++ +++ +++ +++ ++ ++ +++ BA63 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA93 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA49 ++ +++ +++ ++ + ++ +++ BA15 ++ +++ +++ ++ + +++ ++ ZK321 +++ +++ +++ ++ ++ + ++ ZK337 +++ +++ +++ + ++ ZK347 +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ ZK325 +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ZK349 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ ZK423 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ ZK41 1 ++ ++ +++ + ++ ++ ++ ZK407 ++ +++ +++ + +++ ++ + BA98 +++ +++ +++ ++ +++ +++ ++ S1 +++ + ++ + + + + +BA23 ++ ++ +++ ++ + ++ ++ ZK485 ++ +++ +++ + + ++ ++ ZK495 ++ +++ ++ ++ + ++ ++ ZK496 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ZK494 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA90 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ZK341 ++ ++ + + + + + ZK343 ++ +++ +++ + ++ ++ ++ ZK361 ++ ++ ++ + + ++ + ZK359 +++ +++ +++ ++ ++ ++ +++ ZK362 ++ +++ +++ + + ++ + BA64 +++ +++ +++ ++ + ++ +++ BA65 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ ZK305 ++ ++ ++ ++ + + ++ ZK306 + ++ ++ ++ ++ ++ + BA66 ++ ++ ++ + + ++ BA48 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA20dd +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA20d +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA20 +++ +++ +++ +++ ++ +++ + BA99 ++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ BA81 dd +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA81 d +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA26 ++ ++ +++ ++ + + + BA46 ++ ++ ++ + ++ ++ ++ BA45 ++ +++ +++ ++ ++ ++ + CUADRO 3 (Continuación) Comp. Ab1 Hck Src Src (T/l) VEGFR EGFR EphB4 BA39 ++ ++ ++ ++ ++ + ++ BA150 ++ ++ ++ + ++ + ++ BA151 A ++ ++ ++ + + ++ ++ BA21 ++ ++ ++ + + + + BA52 ++ ++ ++ + + + + BA53 ++ ++ ++ + + + + BA31 ++ ++ ++ + + ++ + BA152 +++ +++ +++ + ++ ++ ++ BA149 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA32 ++ ++ ++ + + + ++ BA55 ++ ++ ++ + + ++ ++ BA35 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ BA34 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ BA38 ++ ++ ++ ++ + + + BA40 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + BA41 ++ ++ ++ ++ ++ + ++ BA1 ++ ++ ++ ++ + + ++ BA12 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ BA30 ++ ++ ++ ++ ++ +++ ++ KS208 ++ +++ ++ ++ ++ +++ ++ BA1 16 ++ +++ ++ +++ ++ ++ BA17 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ BA134 ++ ++ ++ ++ + + ++ BA105 ++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ BA122 +++ +++ +++ ++ ++ +++ +++ BA111 + + ++ ++ ++ ++ ++ BA102 +++ +++ +++ ++ +++ +++ +++ BA1 12 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA1 18 ++ ++ + ++ ++ + ++ BA130 ++ +++ ++ ++ +++ + ++ BA132 ++ +++ ++ + ++ ++ ++ BA139 ++ ++ ++ + ++ ++ + BA158 +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA140 ++ ++ ++ ++ + ++ ++ BA141 + ++ + + + ++ + BA146 ++ ++ ++ + ++ ++ ++ BA1 2 ++ ++ +++ + ++ ++ ++ BA1 5 + ++ ++ + + + ++ BA147 ++ ++ ++ + ++ + ++ BA148 + ++ ++ + + ++ + BA143 ++ ++ ++ ++ + ++ ++ BA144 ++ ++ +++ + ++ + ++ BA129 ++ + +++ + ++ ++ ++ BA131 ++ ++ 1 1 + ++ + ++ BA133 ++ ++ +++ + + ++ ++ CUADRO 3 (Continuació) Comp. Ab1 Hck Src Src (T/l) VEGFR EGFR EphB4 BA120 +++ +++ +++ ++ +++ ++ ++ BA108 +++ ++4 +++ +++ +++ +++ +++ BA121 +++ ++ + +++ +++ +++ +++ +++ BA89 +++ ++ + +++ +++ +++ +++ +++ BA94 +++ ++ + +++ +++ +++ +++ +++ BA135 +++ ++ + +++ ++ +++ +++ + BA136 +++ ++ + +++ ++ +++ ++ BA137 +++ ++ + +++ +++ +++ ++ ++ BA138 +++ ++ + +++ +++ +++ +++ ++ BA160 +++ ++ + +++ ++ ++ +++ ++ BA157_3 ++ ++ + +++ ++ + ++ ++ BA154 +++ ++ + +++ ++ ++ ++ ++ BA1 10 +++ + + + +++ ++ +++ ++ ++ BA1 15 +++ ++ + +++ +++ +++ +++ BA159 +++ + + + +++ ++ +++ ++ ++ BA1 19 ++ + + + +++ ++ ++ ++ ++ BA107 +++ + + + +++ ++ +++ +++ +++ BA124 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ BA161 ++ + ++ + + ++ + BA162 ++ ++ ++ + + ++ ++ BA24dd ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ BA43 ++ +++ ++ ++ ++ ++ ++ BA91 ++ + + +++ ++ ++ ++ ++ BA92 ++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ BA86 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ BA88 +++ ++ + +++ +++ +++ +++ +++ BA96 +++ +++ +++ ++ ++ +++ +++ BA97 +++ ++ + +++ ++ ++ +++ +++ BA44 ++ ++ ++ ++ + ++ + BA156 ++ ++ ++ ++ ++ +++ ++ BA95 ++ ++ + ++ + + ++ ++ BA54 ++ ++ +++ ++ ++ ++ ++ BA42 + ++ ++ ++ ++ + ++ SU1 1248 +++ +++ +++ +++ +++ ++ + BAY43- +++ ++ + +++ +++ +++ + ++ 9006 Dasatinib ++ + ++ Iressa ++ +++ +++ ++ ++ ++ PIK103 + + + + + + + PIK90 + + + + + + + PI 294 ++ + ++ + + + + CUADRO 4 En los cuadros 2-4 anteriores, +++ indica una IC50 menor de 1 µ?; ++ indica una IC50 de 1 µ? a 50 µ?; y + indica una IC50 mayor de 50 µ?.

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"Identification and quantification of polyphosphoinositides produced in response to platelet-derived growth factor stimulation". Methods Enzymol 198, 78-87.

Claims (46)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto que tiene la fórmula: en donde: X es =N- o =C(H)-; R es hidrógeno, alquilo no sustituido o R3-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R3-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, heterocicioalquilo no sustituido o R3-sustituido, arilo no sustituido o R3-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R3-sustituido; R2 es halógeno, arilo R -sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R3 es halógeno, -CN, -OR5, -S(O)nR6, -NR7R8, -C(O)R9, =N-NH2, -NR10-C(O)R11, -NR12-C(0)-OR13, -C(O)NR14R15, -NR16S(O)2R17, -S(0)2NR18, alquilo no sustituido o R19-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, heterocicioalquilo no sustituido o R19-sustituido, arilo no sustituido o R 9-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R 9-sustituido, en donde n es un entero de 0 a 2; R36 es -NR37R38 o halógeno; R4 es halógeno, -CN, -OR20, -S(O)qR21, -NR22R23, -C(O)R24, =N-NH2, -NR25-C(O)R26, -NR27-C(O)-OR28, -C(O)NR29R30, -NR31S(O)2R32, -S(O)2NR33, alquilo no sustituido o R3 -sustituido, heteroalquilo no sustituido o R -sustituido, cicloalquilo no sustituido o R -sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R34-sustituido, arilo no sustituido o R3 -sustituido, o heteroarilo no sustituido o R3 -sustituido, en donde q es un entero de 0 a 2; R5, R6, R7, R8,

D9 d10 R11 R12 R13 r14 r15 p16 r17 R18 R20 R21 R22 R23 5 d26 p , p , p , p , p , ? , p , ? , ? , ? , p , ? , p , p , R24 q2 ? , p , p , R27, R28, R29, R30, R31, R32 y R33 son, independientemente, hidrógeno, alquilo no substituido o R35-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R35-sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R35-sustituido, arilo no sustituido o R35-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R35-sustituido; R19 R34 y R35 son, independientemente, hidrógeno, halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, o heteroarilo no sustituido; y R37 y R38 son hidrógeno, halógeno o alquilo no sustituido. 2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 es: en donde W1, W2, W3 y W4 son, independientemente, =CH-,=CR4-, o =N-; y el anillo A es un anillo de 6 o 7 miembros parcial o totalmente ¡nsaturado.

3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R 2, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R20, R2 , R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32 y R33 son, independientemente, hidrógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, o heteroarilo no sustituido.

4. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32 y R33 son, independientemente, hidrógeno, alquilo no sustituido, o heteroalquilo no sustituido.

5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es alquilo no sustituido o R3-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, o arilo no sustituido o R3-sustituido.

6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es ser alquilo no sustituido o R3-sustituido, o cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido.

7. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es alquilo de Ci-C4 no sustituido o R3-sustituido, o cicloalquilo de C3-C6 no sustituido o R3-sustituido.

8. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es alquilo de CrC4 no sustituido o R3-sustituido, o ciclopentilo no sustituido o R3-sustituido.

9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es metilo o alquilo de C3-C6 ramificado no sustituido.

10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 es isopropilo.

11.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 es alquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, o arilo no sustituido o R19-sustituido.

12.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 es alquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, o arilo no sustituido o R 9-sustituido.

13. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3 es alquilo no sustituido o R19-sustituido, o cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido.

14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R19 es alquilo no sustituido o cicloalquilo no sustituido.

15. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R19 es alquilo de C C4 no sustituido o ciclopentilo no sustituido.

16. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 es arilo R -sustituido, o heteroarilo no sustituido o R4-sustituido.

17.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 es fenilo R -sustituido, naftilo no sustituido o R4-sustituido, piridinilo no sustituido o R4-sustituido, pirimidinilo no sustituido o R -sustituido, tiofenilo no sustituido o R -sustituido, furanilo no sustituido o R4- sustituido, indolilo no sustituido o R4-sustituido, benzoxadiazolilo no sustituido o R4-sustituido, benzodioxolilo no sustituido o R -sustituido, benzodioxanilo no sustituido o R4-sustituido, tianaftanilo no sustituido o R4-sust¡tuido, pirrolopiridinilo no sustituido o R4-sustituido, indazolilo no sustituido o R4-sustituido, tetrahidronaftalenilo no sustituido o R4-sustituido, quinolinilo no sustituido o R -sustituido, quinoxalinilo no sustituido o R4-sustituido, piridopirazinilo no sustituido o R4-sustituido, quinazolinonilo no sustituido o R4-sustituido, cromenonilo no sustituido o R4-sustituido, benzoisoxazolilo no sustituido o R -sustituido, imidazopiridinilo no sustituido o R4-sustituido, benzoturanilo no sustituido o R4-sustituido, dihidrobenzofuranilo no sustituido o R4-sustituido, dihidrobenzodioxinilo no sustituido o R4-sustituido, benzoimidazolonilo no sustituido o R -sustituido, o benzotiofenilo no sustituido o R4-sustituido.

18. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 es fenilo R -sustituido, pirrolopiridinilo no sustituido o R4-sustituido, quinolinilo no sustituido o R -sustituido, indazolilo no sustituido o R -sustituido, quinolinilindolilo no sustituido o R -sustituido, o naftilo no sustituido o R -sustituido.

19. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque R4 es halógeno, -CN, -OR20, o -NR22R23.

20. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque R4 es halógeno, u -OR20.

21. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque R es hidrógeno o alquilo de C Ci0 no sustituido.

22. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque R20 es hidrógeno o alquilo de C C4 no sustituido.

23. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque R20 es hidrógeno o metilo.

24. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 tiene la fórmula: en donde R4 está ausente, o es halógeno, alquilo de C1 -C4 no sustituido, u -OR20, en donde R20 es alquilo de C C4 no sustituido.

25. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 es 6-hidroxinaftilo, 7-azaindol no sustituido, indolilo no sustituido, indazolilo no sustituido, o quinolinilo no sustituido.

26. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque X es =N-.

27. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R36 es -NH2.

28. - Una composición farmacéutica que comprende el compuesto que se reclama en la reivindicación 1 , y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

29. - Un método para reducir la actividad catalítica de una PI3-cinasa, el método comprendiendo el paso de poner en contacto dicha PI3-cinasa con una cantidad reductora de actividad de un antagonista, en donde dicho antagonista es un antagonista de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa.

30. - El método que se reclama en la reivindicación 29, en donde dicho antagonista es un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa.

31. - El método que se reclama en la reivindicación 29, en donde dicho antagonista es capaz de reducir la actividad catalítica de una tirosina-cinasa.

32. - El método que se reclama en la reivindicación 29, en donde dicho antagonista es capaz de reducir la actividad catalítica de una mTOR.

33. - El método que se reclama en la reivindicación 29, en donde dicho antagonista es capaz de reducir la actividad catalítica de una mTOR y una tirosina-cinasa.

34. - El método que se reclama en la reivindicación 29, en donde dicha PI3-cinasa es p110a.

35. - Un método para reducir la actividad catalítica de una PI3-cinasa, que comprende el paso de poner en contacto dicha PI3-cinasa con una cantidad reductora de actividad de un antagonista, en donde dicho antagonista es de la fórmula: en donde: X es =N- o =C(H)-; R1 es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R2 es halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R36 es halógeno, -NR37R38, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R37 y R38 son, independientemente, hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido.

36.- El método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque: R1 es hidrógeno, alquilo no sustituido o R3-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R3-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, arilo no sustituido o R3-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R3-sustituido; R2 es halógeno, arilo R4-sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R3 es halógeno, -CN, -OR5, -S(0)nR6, -NR7R8, -C(O)R9, =N-NH2, -NR10-C(O)R11, -NR1 -C(O)-OR13, -C(0)NR1 R15, -NR16S(0)2R17, -S(O)2NR18, alquilo no sustituido o R19-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, arilo no sustituido o R19-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R19-sustituido, en donde n es un entero de 0 a 2; R36 es -NR37R38 o halógeno; R4 es halógeno, -CN, -OR20, -S(O)qR21, -NR 2R23, -C(O)R24, =N-NH2> -NR25-C(O)R26, -NR27-C(O)-OR28, -C(O)NR29R30, -NR31S(O)2R32, -S(O)2NR33, alquilo no sustituido o R34-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R34-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R34-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R34-sustituido, arilo no sustituido o R3 -sustituido, o heteroarilo no sustituido o R34-sustituido, en donde q es un entero de 0 a 2; R5, R6, R7, R8, R9, R10, R , D12 P13 R 4 D15 n16 R17 R1 8 R20 n21 P22 R23 R24 R25 R26 R27 P28 R29 R30, R3 , R32 y R33 son, independientemente, hidrógeno, alquilo no substituido o R35-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R35-sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R35-sustituido, arilo no sustituido o R35-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R35-sustituido; R19 R34 y R35 son, independientemente, hidrógeno, halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, o heteroarilo no sustituido; y R37 y R38 son hidrógeno, halógeno o alquilo no sustituido.

37. - El método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque R36 es -NH2.

38. - El método de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque R2 tiene la fórmula: en donde W1, W2, W3 y W4 son, independientemente, =CH-,=CR4-, o =N-; y el anillo A es un anillo de 6 o 7 miembros parcial o totalmente insaturado.

39. - El uso de un antagonista, en donde dicho antagonista es un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, en la fabricación de un medicamento útil para tratamiento de una enfermedad mediada por la actividad de PI3-cinasa, o por la actividad de PI3-cinasa y la actividad de tirosina-cinasa, en un sujeto.

40. - El uso que se reclama en la reivindicación 39, en donde dicha enfermedad es cáncer del hígado, cáncer del colon, cáncer del seno, melanoma, leucemia mielogena aguda, leucemia mielogena crónica, o cáncer de pulmón de célula no pequeña.

41. - El uso de un antagonista, en donde dicho antagonista tiene la fórmula: en donde: X es =N- o =C(H)-; R1 es hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R2 es halógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R36 es halógeno, -NR37R38, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R37 y R38 son, independientemente, hidrógeno, alquilo sustituido o no sustituido, heteroalquilo sustituido o no sustituido, cicloalquilo sustituido o no sustituido, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido, en la fabricación de un medicamento útil para tratamiento de una enfermedad mediada por la actividad de PI3-cinasa, o por la actividad de PI3-cinasa y la actividad de tirosina-cinasa, en un sujeto.

42.- El uso que se reclama en la reivindicación 41 , en donde: R1 es hidrógeno, alquilo no sustituido o R3-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R3-sust¡tu¡do, cicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R3-sustituido, arilo no sustituido o R3-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R3-sustituido; R2 es halógeno, arilo R4-sustituido, o heteroarilo sustituido o no sustituido; R3 es halógeno, -CN, -OR5, -S(O)nR6, -NR7R8, -C(O)R9, =N-NH2, -NR10-C(O)R11, -NR 2-C(O)-OR13, -C(O)NR14R15, -NR 6S(0)2R17, -S(O)2NR18, alquilo no sustituido o R19-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R19-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R19-sustituido, arilo no sustituido o R19-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R19-sustituido, en donde n es un entero de 0 a 2; R36 es -NR37R38 o halógeno; R4 es halógeno, -CN, -OR20, -S(O)qR21, -NR22R23, -C(O)R24, =N-NH2) -NR 5-C(O)R26, -NR27-C(O)-OR28, -C(O)NR29R30, -NR31S(O)2R32, -S(O)2NR33, alquilo no sustituido o R34-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R34-sustituido, cicloalquilo no sustituido o R34-sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R34-sustituido, arilo no sustituido o R34-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R3 -sustituido, en donde q es un entero de 0 a 2; R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27, R28, R29, R30, R31, R32 y R33 son, independientemente, hidrógeno, alquilo no substituido o R35-sustituido, heteroalquilo no sustituido o R35-sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido o R35-sustituido, arilo no sustituido o R35-sustituido, o heteroarilo no sustituido o R35-sustituido; R19 R34 y R35 son, independientemente, hidrógeno, halógeno, alquilo no sustituido, heteroalquilo no sustituido, cicloalquilo no sustituido, heterocicloalquilo no sustituido, arilo no sustituido, o heteroarilo no sustituido; y R y R son hidrógeno, halógeno o alquilo no sustituido.

43.- El uso que se reclama en la reivindicación 41 , en donde R36 es -NH2.

44.- El uso que se reclama en la reivindicación 41 , en donde R2 tiene la fórmula: en donde W1, W2, W3 y W4 son, independientemente, =CH- ,=CR4-, o =N-; y el anillo A es un anillo de 6 o 7 miembros parcial o totalmente insaturado.

45. - El uso que se reclama en la reivindicación 40, en donde dicha enfermedad es cáncer del hígado, cáncer del colon, cáncer del seno, melanoma, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, o cáncer de pulmón de célula no pequeña.

46. - Un método para interrumpir la función de un leucocito o interrumpir la función de un osteoclasto, que comprende poner en contacto dicho leucocito o dicho osteoclasto con una cantidad interruptora de función del antagonista, en donde dicho antagonista es un antagonista de pirazolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa, o un antagonista de pirrolopirimidina de la unión de la cavidad de afinidad de PI3-cinasa.