CN111269231B

CN111269231B - 一种选择性PI3Kδ抑制剂及其用途

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Publication number: CN111269231B
Application number: CN201811471591.5A
Authority: CN
Inventors: 刘青松; 刘静; 梁小飞; 李凤; 齐紫平; 蒋宗儒; 刘青旺; 余凯琳; 胡祯全; 王蓓蕾; 王黎
Original assignee: Anhui Zhongke Tuotuo Pharmaceutical Science Research Co ltd
Current assignee: Anhui Zhongke Tuotuo Pharmaceutical Science Research Co ltd
Priority date: 2018-12-04
Filing date: 2018-12-04
Publication date: 2023-06-09
Anticipated expiration: 2038-12-04
Also published as: EP3892619A1; WO2020113642A1; EP3892619A4; US20220024931A1; JP7330541B2; CN111269231A; JP2022511039A

Abstract

本申请涉及一种作为选择性的PI3Kδ激酶抑制剂的化合物，其包括下式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药：其中X、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅和R₆如说明书中定义。本申请还涉及使用这样的激酶抑制剂抑制PI3Kδ激酶活性或治疗或预防与PI3Kδ的酪氨酸激酶活性相关的疾病或病症的方法和用途。

Description

一种选择性PI3Kδ抑制剂及其用途

技术领域

本申请涉及一种作为选择性的PI3Kδ激酶抑制剂的化合物、以及使用这样的化合物抑制PI3Kδ激酶活性的方法和用途。

背景技术

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)是一种脂激酶家族成员，是PI3K/AKT/mTOR信号通路的重要组成部分，能够介导体内的磷酸化过程，从而影响细胞的生长、增殖、分化、迁移、凋亡等一系列过程。研究发现，PI3K通路的异常激活与多种疾病的发生发展密切相关，不同类型的PI3K发挥着不同的功能。PI3K家族I型激酶主要包括PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ。其中PI3Kα的突变与肿瘤的发生发展有关；PI3Kβ能够激活血小板，与血栓性疾病的发展有关，并且在PTEN缺失的肿瘤中，PI3Kβ会促进肿瘤的恶变；PI3Kγ和PI3Kδ主要与免疫系统和造血系统有关，与免疫、血液肿瘤以及炎症的发生密切有关。PI3Kδ是PI3K的一种亚型，主要存在于白细胞中。近年来，选择PI3Kδ为靶点，开发选择性PI3Kδ抑制剂，可治疗与B细胞相关的淋巴瘤、血液肿瘤。已有研究表明，抑制PI3Kδ对治疗血液肿瘤有效，因此PI3Kδ激酶成为治疗血液肿瘤的靶点，如：慢性淋巴细胞白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤(HL)、套细胞淋巴瘤(MCL)等。此外，PI3Kδ是B细胞发育中非常关键的蛋白，阻断PI3Kδ功能，就能影响B细胞的功能(Vivanco和Sawyers,Nature Reviews Cancer,2002,vol.2,issue7,489-501)。近年来研究表明，PI3Kδ的突变与诱发性呼吸道感染、损伤有关，而且有研究证实抑制PI3Kδ对治疗实验性关节炎有效，提示PI3Kδ可能是治疗自身免疫性疾病的一个靶点。因此，抑制PI3Kδ将在类风湿性关节炎(RA)、系统性红斑狼疮(SLE)和哮喘等相关的自身免疫性疾病的治疗中发挥作用(J.Immunol.,2007,178,2328-2335；Blood,2006,vol.107,issue 2,642-650)。PI3K抑制剂预期经由其在调节与呼吸道疾病，诸如哮喘、COPD和囊性纤维化关联的T-细胞介导的炎症反应中的作用提供治疗益处(J.Biol.Chem.,2005,vol.280,issue 44,36952)。

本发明人经过实验，发现了一种选择性的PI3Kδ激酶抑制剂，以及使用该激酶抑制剂抑制PI3Kδ激酶活性的方法和用途。

发明内容

本发明提供了一种选择性的PI3Kδ激酶抑制剂。

更具体地，本发明提供一种选择性的PI3Kδ激酶抑制剂，包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药：

其中，

X选自CH和N；

R₁和R₂各自独立地选自氢、卤素、和C_1-6卤代烷基；

R₃为C_3-8环烷基；

R₄选自氢和C_1-6烷基；

R₅选自氢、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_2-6烷酰胺基、和C_1-6烷基氨酰基；

R₆选自氢、羟基、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6烷氧基；

或者R₅和R₆一起形成苯基或二氧杂戊环基。

在优选的实施方式中，X为CH。

优选地，R₁和R₂各自独立地选自氢、氟、和甲基。

另外优选地，R₃选自环丙基、环丁基、环戊基、和环己基。

又优选地，R₄选自氢、甲基、和乙基。

另外优选地，R₅选自氢、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_2-3烷酰胺基、和C_1-3烷基氨酰基；特别优选地，R₅为甲氧基。

还优选地，R₆选自氢、羟基、卤素、C_1-3烷基、和C_1-3烷氧基；特别优选地，R₆选自氢、氟、和甲氧基。

本发明还涉及包括以上化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药的药物组合物，以及该化合物或药物组合物抑制PI3Kδ激酶活性的方法和用途，及其治疗、预防或改善由PI3Kδ激酶活性调节的或者受其影响的或者其中涉及PI3Kδ激酶活性的疾病、障碍或病症的方法和用途。

附图说明

图1a示出本发明的化合物9、溶媒、和生理盐水给药后对大鼠体重的影响。

图1b示出本发明的化合物9、溶媒、和生理盐水给药后对大鼠足爪肿胀度的影响。

具体实施方式

术语

除非另外定义，所有本文使用的科技术语都具有与要求保护的主题所属领域的技术人员一般理解相同的含义。

除非另有说明，本发明采用本领域技术范围内的质谱、NMR、HPLC、蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学等常规方法。除非提供具体的定义，否则与本文描述的分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学等化学上相关的命名和实验室操作和技术，是本领域技术人员已知的。一般而言，前述技术和步骤可以通过本领域众所周知的和在各种一般文献和更具体文献中描述的常规方法来实施，这些文献在本说明书中被引用和讨论。

术语“烷基”是指脂肪族烃基团，可以是支链或直链的烷基。根据结构，烷基可以是单价基团或双价基团(即亚烷基)。在本发明中，烷基优选是具有1-8个碳原子的烷基，更优选具有1-6个碳原子的“低级烷基”，甚至更优选具有1-4个碳原子的烷基。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基等。应理解，本文提到的“烷基”包括可能存在的所有构型和构象的该烷基，例如本文提到的“丙基”包括正丙基和异丙基，“丁基”包括正丁基、异丁基和叔丁基，“戊基”包括正戊基、异丙基、新戊基、叔戊基、和戊-3-基等。

术语“烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基如本文中定义。典型的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。

术语“烷氧基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的烷氧基取代。

术语“环烷基”是指单环或多环基，其仅含有碳和氢。环烷基包括具有3-12个环原子的基团。根据结构，环烷基可以是单价基团或双价基团(例如亚环烷基)。在本发明中，环烷基优选是具有3-8个碳原子的环烷基，更优选具有3-6个碳原子的“低级环烷基”。环烷基的例子包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和金刚烷基。

术语“烷基(环烷基)”或“环烷基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的环烷基取代。非限制性的环烷基烷基包括环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基等。

术语“芳香基”是指平面环具有离域的π电子系统并且含有4n+2个π电子，其中n是整数。芳香基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。芳香基可以是任选取代的。术语“芳香基”包括碳环芳基(例如苯基)和杂环芳基(或“杂芳基”或“杂芳香基”)基团(例如吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即共用相邻的碳原子对的环)基团。

本文使用的术语“芳基”是指芳香基环中每一个构成环的原子都是碳原子。芳基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。芳基可以是任选取代的。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、菲基、蒽基、芴基和茚基。根据结构，芳基可以是单价基团或双价基团(即亚芳基)。

术语“芳氧基”是指-O-芳基，其中芳基如本文中定义。

术语“杂芳基”是指芳基中包括一个或多个选自氮、氧和硫的环杂原子。含N“杂芳基”部分是指芳香基中环上至少有一个骨架原子是氮原子。根据结构，杂芳基可以是单价基团或双价基团(即亚杂芳基)。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基等。

术语“烷基(芳基)”或“芳烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的芳基取代。非限制性的烷基(芳基)包括苄基、苯乙基等。

术语“烷基(杂芳基)”或“杂芳基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的杂芳基取代。

本文使用的术语“杂烷基”是指本文定义的烷基中的一个或多个骨架链原子是杂原子，例如氧、氮、硫、硅、磷或它们的组合。所述杂原子(一个或多个)可以位于杂烷基内部的任意位置或在杂烷基与分子的其余部分相连的位置。

本文使用的术语“杂环烷基”或“杂环基”是指非芳香基环中一个或多个构成环的原子是选自氮、氧和硫的杂原子。杂环烷基环可以由三、四、五、六、七、八、九或多于九个原子构成。杂环烷基环可以是任选取代的。杂环烷基的实例包括但不限于内酰胺、内酯、环亚胺、环硫代亚胺、环氨基甲酸酯、四氢噻喃、4H-吡喃、四氢吡喃、哌啶、1,3-二噁英、1,3-二噁烷、1,4-二噁英、1,4-二噁烷、哌嗪、1,3-氧硫杂环己烷、1,4-氧硫杂环己二烯、1,4-氧硫杂环己烷、四氢-1,4-噻嗪、2H-1,2-噁嗪、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、巴比妥酸、硫代巴比妥酸、二氧代哌嗪、乙内酰脲、二氢尿嘧啶、吗啉、三噁烷、六氢-1,3,5-三嗪、四氢噻吩、四氢呋喃、吡咯啉、吡咯烷、咪唑烷，吡咯烷酮、吡唑啉、吡唑烷、咪唑啉、咪唑烷、1,3-二氧杂环戊烯、1,3-二氧杂环戊烷、1,3-二硫杂环戊烯、1,3-二硫杂环戊烷、异噁唑啉、异噁唑烷、噁唑啉、噁唑烷、噁唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷和1,3-氧硫杂环戊烷。根据结构，杂环烷基可以是单价基团或双价基团(即亚杂环烷基)。

术语“烷基(杂环烷基)”或“杂环烷基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的杂环烷基取代。

术语“烷氧基(杂环烷基)”或“杂环烷基烷氧基”是指本文定义的烷氧基被本文定义的杂环烷基取代。

术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。

术语“卤代烷基”、“卤代烷氧基”和“卤代杂烷基”包括烷基、烷氧基或杂烷基的结构，其中至少一个氢被卤原子置换。在某些实施方式中，如果两个或更多氢原子被卤原子置换，所述卤原子彼此相同或不同。

术语“羟基”是指-OH基团。

术语“氰基”是指-CN基团。

术语“酯基”是指具有式-COOR的化学部分，其中R选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳连接)和杂环基(通过环碳连接)。

术语“氨基”是指-NH₂基团。

术语“氨酰基”是指-CO-NH₂基团。

术语“烷基氨酰基”是指-CO-NH-R基团，其中R为本文定义的烷基。

术语“酰胺基”或“酰氨基”是指-NR-CO-R’，其中R和R’各自独立地为氢或烷基。

术语“烷基氨基”是指进一步被一个或两个烷基取代的氨基取代基，具体是指基团-NRR’，其中R和R’各自独立地选自氢或低级烷基，条件是-NRR’不是-NH₂。“烷基氨基”包括其中-NH₂的氮连接至少一个烷基基团的化合物的基团。烷基氨基基团的例子包括但不限于，甲基氨基、乙基氨基等。“二烷基氨基”包括其中-NH₂的氮连接至少两个其它烷基基团的基团。二烷基氨基基团的例子包括但不限于，二甲基氨基、二乙基氨基等。

术语“芳基氨基”和“二芳基氨基”是指进一步被一个或两个芳基取代的氨基取代基，具体是指基团-NRR’，其中R和R’各自独立地选自氢、低级烷基、或芳基，其中N分别连接至少一个或两个芳基基团。

术语“环烷基氨基”是指进一步被一个或两个本文所定义的环烷基取代的氨基取代基。

术语“杂烷基氨基”是指进一步被一个或两个本文所定义的杂烷基取代的氨基取代基。

本文的术语“芳烷基氨基”是指其中R是低级芳烷基且R’是氢、低级烷基、芳基或低级芳烷基的基团-NRR’。

术语“杂芳基氨基”是指进一步被一个或两个本文所定义的杂芳基取代的氨基取代基。

术语“杂环烷基氨基”是指本文定义的氨基被本文定义的杂环烷基取代。

术语“烷基氨基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的烷基氨基取代。

术语“氨基烷基”是指进一步被一个或多个氨基取代的烷基取代基。

术语“氨基烷氧基”是指进一步被一个或多个氨基取代的烷氧基取代基。

术语“羟烷基”或“羟基烷基”是指进一步被一个或多个羟基取代的烷基取代基。

术语“氰基烷基”是指进一步被一个或多个氰基取代的烷基取代基。

术语“酰基”是指有机或无机含氧酸去掉羟基后剩下的一价原子团，通式为R-M(O)-，其中M通常为C。

术语“羰基”是由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(C＝O)。

术语“烷酰基”或“烷基羰基”是指进一步被一个烷基取代的羰基。典型的烷酰基包括但不限于乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基等。

术语“芳基羰基”是指本文定义的羰基被本文定义的芳基取代。

术语“烷氧基羰基”是指进一步被一个烷氧基取代的羰基。

术语“杂环烷基羰基”是指进一步被一个杂环烷基取代的羰基。

术语“烷基氨基羰基”、“环烷基氨基羰基”、“芳基氨基羰基”、“芳烷基氨基羰基”、“杂芳基氨基羰基”分别是指本文定义的羰基分别被本文定义的烷基氨基、环烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、或杂芳基氨基取代。

术语“烷基羰基烷基”或“烷酰基烷基”是指进一步被一个烷基羰基取代的烷基。

术语“烷基羰基烷氧基”或“烷酰基烷氧基”是指进一步被一个烷基羰基取代的烷氧基。

术语“杂环烷基羰基烷基”是指进一步被一个杂环烷基羰基取代的烷基。

术语“巯基”是指-SH基团。术语“烷硫基”是指本文所定义的巯基被本文所定义的烷基取代。

术语“砜基”或“磺酰基”是指磺酸失去羟基后的官能团，具体是指-S(＝O)₂-基团。

术语“亚砜基”或“亚磺酰基”是指-S(＝O)-。

术语“氨基砜基”或“氨基磺酰基”是指-S(＝O)₂-NH₂基团。

术语“烷基亚砜基”或“烷基亚磺酰基”是指烷基-S(＝O)-。

术语“烷基砜基”或“烷基磺酰基”是指-S(＝O)₂-R，其中R为烷基。

术语“烷基氨基砜基”是指本文定义的砜基被本文定义的烷基氨基取代。

术语“烷基砜基氨基”或“环烷基砜基氨基”是指本文定义的氨基被本文定义的烷基砜基或环烷基砜基取代。

术语“环烷基砜基”和“环烷基磺酰基”是指-S(＝O)₂-R，其中R为环烷基。

术语“烷基磺酰胺基”和“环烷基磺酰胺基”是指-NH-S(＝O)₂-R，其中R分别为烷基和环烷基。

术语“季铵基”是指-N⁺RR’R”，其中R、R’和R”各自独立地选自具有1-8个碳原子的烷基。

术语“任选”指后面描述的一个或多个事件可以发生或可以不发生，并且包括发生的事件和不发生的事件两者。术语“任选取代的”或“取代的”是指所提及的基团可以被一个或多个额外的基团取代，所述额外的基团各自并且独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、羟基、烷氧基、氰基、卤素、酰胺基、硝基、卤代烷基、氨基、甲磺酰基、烷基羰基、烷氧基羰基、杂芳基烷基、杂环烷基烷基、氨酰基、氨基保护基等。其中，氨基保护基优选选自新戊酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基、9-芴甲氧羰基、苄基、对甲氧苄基、烯丙氧羰基、和三氟乙酰基等。

本文使用的术语“酪氨酸激酶(tyrosine protein kinase，TPK)”是一类催化ATP上γ-磷酸转移到蛋白酪氨酸残基上的激酶，能催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化，在细胞生长、增殖、分化中具有重要作用。

本文使用的术语激酶的“抑制”、“抑制的”或“抑制剂”，是指磷酸转移酶活性被抑制。

本文公开的化合物的“代谢物”是当该化合物被代谢时形成的化合物的衍生物。术语“活性代谢物”是指当该化合物被代谢时形成的化合物的生物活性衍生物。本文使用的术语“被代谢”，是指特定物质被生物体改变的过程总和(包括但不限于水解反应和由酶催化的反应，例如氧化反应)。因此，酶可以产生特定的结构转变为化合物。例如，细胞色素P450催化各种氧化和还原反应，同时二磷酸葡萄糖甘酸基转移酶催化活化的葡萄糖醛酸分子至芳香醇、脂肪族醇、羧酸、胺和游离的巯基的转化。新陈代谢的进一步的信息可以从《ThePharmacological Basis of Therapeutics》，第九版，McGraw-Hill(1996)获得。本文公开的化合物的代谢物可以通过将化合物给予宿主并分析来自该宿主的组织样品、或通过将化合物与肝细胞在体外孵育并且分析所得化合物来鉴别。这两种方法都是本领域已知的。在一些实施方式中，化合物的代谢物是通过氧化过程形成并与相应的含羟基化合物对应。在一些实施方式中，化合物被代谢为药物活性代谢物。本文使用的术语“调节”，是指直接或间接与靶标相互作用，以改变靶标的活性，仅仅举例来说，包括增强靶标的活性、抑制靶标的活性、限制靶标的活性或者延长靶标的活性。

本文使用的术语“靶蛋白”是指能被选择性结合化合物所结合的蛋白质分子或部分蛋白质。在某些实施方式中，靶蛋白是酪氨酸激酶PI3Kδ(包括其野生型或各种突变或其组合)。

本文使用的GI₅₀是指使50％细胞生长被抑制所需的药物浓度，即药物使50％细胞(如癌细胞)的生长得到抑制或控制时的药物浓度。

本文使用的IC₅₀是指在测量效应的分析中获得最大效应的50％抑制的特定测试化合物的量、浓度或剂量。

本文使用的EC₅₀是指测定化合物的剂量、浓度或量，其引起特定测定化合物诱导、刺激或加强的特定反应的50％的最大表达的剂量依赖反应。

本发明的激酶抑制剂

本发明提供一种选择性的PI3Kδ激酶抑制剂，包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药：

其中，

X选自CH和N；

R₁和R₂各自独立地选自氢、卤素、和C_1-6卤代烷基；

R₃为C_3-8环烷基；

R₄选自氢和C_1-6烷基；

R₆选自氢、羟基、卤素、C_1-6烷基、和C_1-6烷氧基；

或者R₅和R₆一起形成苯基或二氧杂戊环基。

在优选的实施方式中，X为CH。

优选地，R₁和R₂各自独立地选自氢、氟、和甲基；更优选R₁和R₂均为氢，或一个为氢，另一个为氟。

另外优选地，R₃为C_3-6环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、或环己基。

又优选地，R₄选自氢、甲基、和乙基。

另外优选地，R₅选自氢、C_1-3烷基(例如甲基、乙基、异丙基)、C_1-3烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、异丙氧基)、C_2-3烷酰胺基(例如乙酰胺基-NH-(C＝O)-CH₃)、和C_1-3烷基氨酰基(例如甲基氨酰基-(C＝O)-NH-CH₃)；特别优选地，R₅为甲氧基。

还优选地，R₆选自氢、羟基、卤素(例如氟、氯)、C_1-3烷基(例如甲基)、和C_1-3烷氧基(例如甲氧基)；特别优选地，R₆选自氢、氟、和甲氧基。

在优选的实施方式中，R₅和R₆不同时为氢。

在本发明中，特别优选的式(I)的化合物选自以下表1的化合物。

表1

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发明还涉及包括以上化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前药的药物组合物，以及该化合物或药物组合物抑制酪氨酸激酶(野生型或各种突变或其组合)活性的方法和用途，及其治疗、预防或改善由酪氨酸激酶活性调节的或者受其影响的或者其中涉及酪氨酸激酶活性的疾病、障碍或病症的方法和用途，其中酪氨酸激酶可以为PI3Kδ。

对于各个变量，上述基团的任意组合也在本文考虑之中。可以理解的是：本文所提供的化合物上的取代基和取代模式可以由本领域技术人员进行选择，以便提供化学上稳定的且可以使用本领域已知的技术以及本文阐述的技术合成的化合物。

本文描述的是新型的激酶抑制剂。本文也描述了此化合物的药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、药物活性代谢物和前药。

在另外的或近一步的实施方式中，将本文描述的化合物给予有需要的生物体后在其体内代谢产生代谢物，所产生的代谢物然后用于产生期望的效果，包括期望的治疗效果。

本文描述的化合物可以被制成和/或被用作药学可接受的盐。药学可接受的盐的类型包括但不限于：(1)酸加成盐，其通过将化合物的游离碱形式与药学可接受的无机酸反应形成，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；或将化合物的游离碱形式与有机酸反应形成，所述有机酸如乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、马来酸、酒石酸、反丁烯二酸、三氟乙酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、4-甲基双环-[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、2-萘磺酸、叔丁基乙酸、葡庚糖酸、4,4'-亚甲基双-(3-羟基-2-烯-1-甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、水杨酸、羟基萘酸、硬脂酸、粘康酸等；(2)碱加成盐，其在母体化合物中的酸性质子被金属离子置换时形成，例如碱金属离子(例如锂、钠、钾)、碱土金属离子(例如镁或钙)或铝离子；或与有机碱或无机碱配位，可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三甲胺、N-甲基葡萄糖胺，等等；可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。

药学可接受的盐的相应的平衡离子可以使用各种方法分析和鉴定，所述方法包括但不限于离子交换色谱、离子色谱、毛细管电泳、电感耦合等离子体、原子吸收光谱、质谱或它们的任何组合。

使用以下技术的至少一种回收所述盐：过滤、用非溶剂沉淀接着过滤、溶剂蒸发，或水溶液的情况下使用冻干法。

筛选和表征药学可接受的盐、多晶型和/或溶剂化物可以使用多种技术完成，所述技术包括但不限于热分析、X射线衍射、光谱、显微镜方法、元素分析。使用的各种光谱技术包括但不限于Raman、FTIR、UVIS和NMR(液体和固体状态)。各种显微镜技术包括但不限于IR显微镜检术和拉曼(Raman)显微镜检术。

本发明的药物组合物

本申请还提供药物组合物，其包含至少一种式(I)的化合物或所述化合物的药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、药物活性代谢物或前药，以及药学可接受的载体或赋形剂，以及任选的其它治疗剂。

在治疗过程中，可以根据情况单独或与一种或多种其它的治疗剂组合使用。可以通过注射、口服、吸入、直肠和经皮施用中的至少一种将包含本发明化合物的药物施用给患者。

其它的治疗剂可以选自以下药物：免疫抑制剂(例如他克莫司、环孢菌素、雷帕霉素、甲氨蝶呤、环磷酰胺、硫唑嘌呤、巯嘌呤、麦考酚酯或FTY720)、糖皮质激素类药(例如泼尼松、醋酸可的松、泼尼松龙、甲泼尼龙、地塞米松、倍他米松、曲安西龙、氟羟强的松龙、倍氯米松、醋酸氟氢可的松、醋酸脱氧皮质酮、醛固酮)、非甾体抗炎药(例如水杨酸盐、芳基烷酸、2-芳基丙酸、N-芳基邻氨基苯甲酸、昔康类、考昔类或硫酰替苯胺)、变态反应疫苗、抗组胺药、抗白三烯药、β-激动剂、茶碱、抗胆碱药或其它选择性激酶抑制剂(例如mTOR抑制剂、c-Met抑制剂)或her2抗体-药物。另外，所提及的其它治疗剂还可以是雷帕霉素(Rapamycin)、克唑替尼(Crizotinib)、他莫昔芬、雷洛昔芬、阿那曲唑、依西美坦、来曲唑、赫赛汀^TM(曲妥珠单抗)、格列卫^TM(甲磺酸伊马替尼)、紫杉醇^TM(紫杉醇)、环磷酰胺、洛伐他汀、美诺四环素(Minosine)、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤(MTX)、紫杉特尔^TM(多西他赛)、诺雷德^TM(戈舍瑞林)、长春新碱、长春碱、诺考达唑、替尼泊苷、依托泊苷、健择^TM(吉西他滨)、埃博霉素(Epothilone)、诺唯本、喜树碱、柔红霉素(Daunonibicin)、更生霉素、米托蒽醌、安吖啶、多柔比星(亚德里亚霉素)、表柔比星或伊达比星。或者，其它治疗剂也可以是细胞因子，例如G-CSF(粒细胞集落刺激因子)。或者，其它治疗剂也可以是，例如但不限于，CMF(环磷酰胺、甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶)、CAF(环磷酰胺、亚德里亚霉素和5-氟尿嘧啶)、AC(亚德里亚霉素和环磷酰胺)、FEC(5-氟尿嘧啶、表柔比星和环磷酰胺)、ACT或ATC(亚德里亚霉素、环磷酰胺和紫杉醇)或CMFP(环磷酰胺、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和泼尼松)。

在本发明的实施方式中，在根据本发明对患者进行治疗时，给定药物的量取决于诸多因素，如具体的给药方案、疾病或病症类型及其严重性、需要治疗的受治疗者或宿主的独特性(例如体重)。但是，根据特定的周围情况，包括例如已采用的具体药物、给药途径、治疗的病症、以及治疗的受治疗者或宿主，施用剂量可由本领域已知的方法常规决定。通常，就成人治疗使用的剂量而言，施用剂量典型地在0.02-5000mg/天，例如约1-1500mg/天的范围。该所需剂量可以方便地被表现为一剂、或同时给药的(或在短时间内)或在适当的间隔的分剂量，例如每天二、三、四剂或更多分剂。本领域技术人员可以理解的是，尽管给出了上述剂量范围，但具体的有效量可根据患者的情况并结合医师诊断而适当调节。

本发明的药物的用途

本发明的“治疗”可以是治疗性的(如对症治疗)和/或预防性的。

优选用于治疗增殖性疾病的用途，所述的增殖性疾病选自良性或恶性肿瘤，包括但不限于：脑癌、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、乳腺癌、淋巴癌、胃癌、胃肿瘤、食道癌、卵巢癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、阴道癌、膜腺癌、甲状腺癌、颈癌、CNS癌症、恶性胶质瘤、骨髓增生病、肉瘤、成胶质细胞瘤、多发性骨髓瘤、胃肠癌、结肠直肠癌、头颈肿瘤、脑瘤、表皮过度增生、银屑病、前列腺增生、瘤形成、上皮特征的瘤形成、淋巴瘤、乳腺癌或白血病。其它疾病包括考登综合征(Cowden syndrome)、莱尔米-杜伯斯(Lhermitte-Dudos)疾病和Bannayan-Zonana综合征或其中PI3K/PKB通路被异常激活的疾病。优选地治疗淋巴瘤和血液肿瘤，特别优选治疗慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、或类似疾病。

本发明的物质可用于治疗炎性或阻塞性气道疾病，导致例如组织损伤、气道炎症、支气管反应过度、重塑或疾病发展的减轻。本发明适用的炎性或阻塞性气道疾病包括任何类型或起因的哮喘，包括内源性(非变应性)哮喘和外源性(变应性)哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、支气管炎性哮喘、运动诱发的哮喘、职业性哮喘和细菌感染后诱发的哮喘。哮喘的治疗还应理解为包括对个体的治疗，例如小于4或5岁的个体，其显示出喘鸣症状，被诊断为或可诊断为“喘鸣婴儿(wheezy infant)”，这是一种已确定的主要医疗关注中的患者分类，现在通常鉴定为初期或早期哮喘。为方便，这种特殊的哮喘病症被称为“喘鸣婴儿综合征”。

在哮喘治疗中的预防功效将表现为症状发作频率的减少或严重程度的减轻例如急性哮喘或支气管收缩发作频率的减少或严重程度的减轻、肺功能改善或气道过度活动改善。所述功效还表现为对其它症状治疗需求的减少，所述的其它症状治疗即用于或旨在在其发生时限制或中止症状发作的治疗，例如抗炎药(例如皮质类固醇)或支气管扩张药。在有“晨降(morning dipping)”倾向的个体中对哮喘的预防益处可能特别明显。“晨降”是一种公认的哮喘综合征，通常在哮喘中占很大比例，其特征是例如在早晨约4至6点之间发作，即，通常在距离以前施用的任意针对哮喘症状的治疗较远的时间发作。

本发明适用的其它炎性或阻塞性气道疾病和病症包括急性肺损伤(ALI)、成人型/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、慢性阻塞性肺病、气道或肺疾病(COPD、COAD或COLD)，包括慢性支气管炎或与之有关的呼吸困难、肺气肿，以及由其它药物治疗、特别是其它吸入药物治疗导致的气道过度活动恶化。本发明的药物特别适用于治疗选自慢性阻塞性肺病和哮喘的疾病。

本发明还适于治疗任何类型或起因的支气管炎，包括例如急性支气管炎、花生仁吸入性支气管炎、卡他性支气管炎、纤维蛋白性支气管炎、慢性支气管炎或结核性支气管炎。本发明适用的其它炎性或阻塞性气道疾病包括任何类型或起因的尘肺(一种炎性、通常为职业性的肺病，不论是慢性还是急性的经常伴有气道阻塞，且由重复吸入灰尘引起)，包括例如矾土肺、炭肺、石棉肺、石末肺、驼鸟毛尘肺、铁沉肺、矽肺、烟尘肺和棉尘肺。

本发明的物质还用于治疗由磷脂酰肌醇3-激酶介导的下述疾病、障碍或病症：呼吸系统疾病、变态反应、类风湿性关节炎、骨关节炎、风湿性病症、银屑病、溃疡性结肠炎、局限性回肠炎、败血症性休克、增殖性病症、动脉粥样硬化、移植后的同种异体移植物排斥反应、糖尿病、中风、肥胖症或再狭窄、白血病、间质瘤、甲状腺癌、系统性肥大细胞病、嗜酸性粒细胞增多综合征、纤维变性、类风湿性关节炎、多关节炎、硬皮病、红斑狼疮、移植物抗宿主病、神经纤维瘤、肺高压、阿尔茨海默病、精原细胞瘤、无性细胞瘤、肥大细胞肿瘤、肺癌、支气管癌、无性细胞瘤、睾丸上皮内瘤形成、黑色素瘤、乳癌、神经母细胞瘤、乳头状/滤泡型甲状腺癌、恶性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、2型多发性内分泌瘤形成、嗜铬细胞瘤、甲状腺癌、甲状旁腺增生/腺瘤、结肠癌、结肠直肠腺瘤、卵巢癌、前列腺癌、成胶质细胞瘤、脑肿瘤、恶性神经胶质瘤、胰腺癌、恶性胸膜间皮瘤、成血管细胞瘤、血管瘤、肾癌、肝癌、肾上腺癌、膀胱癌、胃癌、直肠癌、阴道癌、宫颈癌、子宫内膜癌、多发性骨髓瘤、颈和头部肿瘤、瘤形成以及其他增生性或增殖性疾病、或其组合。本发明的药物特别适用于治疗选自类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮的疾病。

本发明的物质还可用于治疗与嗜酸粒细胞相关的病症，例如嗜酸粒细胞增多，特别是与嗜酸粒细胞相关的气道病症(例如涉及病态嗜酸粒细胞浸润的肺组织)，包括嗜酸细胞过多，因为其影响气道和/或肺，以及例如由勒夫勒综合征、嗜酸细胞性肺炎、寄生虫(特别是后生动物)侵染(包括热带嗜酸粒细胞增多症)、支气管肺曲霉病、结节性多动脉炎(包括丘-斯综合征)、嗜酸细胞肉芽肿引起的或与其相并行的与嗜酸粒细胞相关的气道病症，和药物反应导致的影响气道的与嗜酸粒细胞相关的病症。

本发明的物质还可用于治疗皮肤的炎性或变应性病症，例如银屑病、接触性皮炎、特应性皮炎、局限性脱发、多形红斑、疱疹样皮炎、硬皮病、白斑、变应性血管炎、荨麻疹、大疱性类天疱疮、红斑狼疮、天疱疮(pemphisus)、获得性大疱性表皮松解症和其它皮肤的炎性或变应性病症。

本发明的物质还可用于治疗其它疾病或病症，特别是具有炎性成份的疾病或病症，例如治疗眼的疾病和病症，如结膜炎、干燥性角膜结膜炎和春季结膜炎；影响鼻的疾病，包括变应性鼻炎；以及其中涉及自身免疫反应或具有自身免疫性成份或病因学的炎性疾病，包括自身免疫性血液学病症(例如溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞贫血和特发性血小板减少)、系统性红斑狼疮、多发性软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、斯-约综合征、特发性口炎性腹泻、自身免疫性炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和局限性回肠炎)、内分泌性眼病、格雷夫斯病、结节病、肺泡炎、慢性变应性肺炎、多发性硬化症、原发性胆汁性肝硬化、眼色素层炎(前眼色素层炎和后眼色素层炎)、干燥性角膜结膜炎和春季角膜结膜炎、间质性肺纤维化、银屑病关节炎和肾小球肾炎(伴有和不伴有肾病综合征，例如包括特发性肾病综合征或微小病变肾病)。

其它可以用本发明的物质治疗的疾病或病症包括败血症性休克、类风湿性关节炎、骨关节炎、增殖性疾病如癌、动脉粥样硬化、移植后的同种异体移植物排斥反应、中风、肥胖症、再狭窄、糖尿病例如I型糖尿病(幼年型糖尿病)和II型糖尿病、腹泻疾病、局部缺血/再灌注损伤、视网膜病变如糖尿病性视网膜病变或高压氧诱发的视网膜病变，以及以眼内压升高或眼房水分泌为特征的病症，如青光眼。

本发明的物质在抑制炎性病症例如炎性气道疾病方面的有效性可以在动物模型中得到证明，例如气道炎症或其它炎性病症的小鼠或大鼠模型，例如如Szarka等,J.Immunol.Methods(1997)202:49-57；Renzi等,Am.Rev.Respir.Dis.(1993)148:932-939；Tsuyuki等,J.Clin.1nvest.(1995)96:2924-2931；和Cernadas等,Am.J.Respir.CellMol.Biol.(1999)20:1-8中所述。

化合物的制备

使用本领域技术人员已知的标准合成技术或使用本领域已知的方法与本文描述的方法组合，可以合成式(I)的化合物。另外，本文给出的溶剂、温度和其它反应条件可以根据本领域技术而改变。作为进一步的指导，也可以利用以下的合成方法。

所述反应可以按顺序使用，以提供本文描述的化合物；或它们可以用于合成片段，所述片段通过本文描述的方法和/或本领域已知的方法随后加入。

在某些实施方式中，本文提供的是本文描述的酪氨酸激酶抑制剂化合物的制备方法及其使用方法。在某些实施方式中，本文描述的化合物可以使用以下合成的方案合成。可以使用与下述类似的方法，通过使用适当的可选择的起始原料，合成化合物。

用于合成本文描述的化合物的起始原料可以被合成或可以从商业来源获得。本文描述的化合物和其它相关具有不同取代基的化合物可以使用本领域技术人员已知的技术和原料合成。制备本文公开的化合物的一般方法可以来自本领域已知的反应，并且该反应可以通过由本领域技术人员所认为适当的试剂和条件修改，以引入本文提供的分子中的各种部分。

如果需要，反应产物可以使用常规技术分离和纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等方法。这些产物可以使用常规方法表征，包括物理常数和图谱数据。

实施例1：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(A2)：在圆底烧瓶中加入3-碘-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(2.0克)后加入1,4-二氧六环(30毫升)、水(10毫升)、(3-氟-4-甲氧基苯基)硼酸(5.2克)、Pd(PPh₃)₄(1.8克)、碳酸钾(2.1克)。反应体系在氩气保护下130℃反应24小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后过滤。过滤后的固体所得物经二氯甲烷洗涤后得粗品A2。LC/MS：M+H 260.09。

2-氟-6-硝基苯甲酰氯(B2)：在在圆底烧瓶中加入2-氟-6-硝基苯甲酸(14.0克)后加入四氢呋喃(50毫升)、N,N-二甲基甲酰胺(0.5毫升)，然后用冰水浴使体系冷却到0℃，接着缓慢加入草酰氯(7.7毫升)。反应体系在0℃搅拌一小时，随后恢复室温，继续反应14小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，得到油状粗品B2。LC/MS：M+H 203.99。

N-环丁基-2-氟-6-硝基苯甲酰胺(B3)：在圆底烧瓶中加入环丁胺(9.8毫升)后加入四氢呋喃(50毫升)、N,N-二异丙基乙胺(39毫升)，然后用冰水浴使体系冷却到0℃，接着缓慢加入2-氟-6-硝基苯甲酰氯(15.4克)。反应体系在0℃搅拌一小时，随后恢复室温，继续反应12小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后用乙酸乙酯萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物B3。LC/MS：M+H 239.09。

N-环丁基-2-氟-6-硝基-N-丙酰基苯甲酰胺(B4)：在微波反应器中加入N-环丁基2-氟-6-硝基苯甲酰胺(6克)后加入丙酸酐(50毫升)。反应体系在140℃，150瓦条件下反应3小时。反应结束后，体系加入甲醇稀释减压蒸干得黑色油状粗品B4。LC/MS：M+H 295.11。

3-环丁基-2-乙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮(B5)：在圆底烧瓶中加入N-环丁基-2-氟-6-硝基-N-丙酰基苯甲酰胺(7.4克)后加入冰乙酸(50毫升)，然后用冰水浴使体系冷却到0℃，接着缓慢加入锌粉(8.2克)。反应体系在0℃搅拌一小时，随后恢复室温，继续反应5小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用饱和碳酸氢钠稀释后用乙酸乙酯萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物B5。LC/MS：M+H 247.13。

2-(1-溴乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮(B6)：在圆底烧瓶中加入3-环丁基-2-乙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮(1.3克)后加入四氯化碳(30毫升)、N-溴代丁二酰亚胺(1.9克)和偶氮二异丁腈(0.9克)。反应体系在氩气保护下在100℃反应8小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后用二氯甲烷萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物B6。LC/MS：M+H 325.04。

2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮(1)：在圆底烧瓶中加入2-(1-溴乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮(120毫克)后加入N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)、3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(96毫克)和碳酸钾(100毫克)。反应体系在氩气保护下室温反应8小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后用二氯甲烷萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物1。LC/MS：M+H 504.20。

实施例2：2-((4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-环己基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例2化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：518.21。

实施例3：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环己基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例3化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：532.23。

实施例4：2-((4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉--4(3H)-酮

实施例4化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：504.20。

实施例5：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例5化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：518.21。

实施例6：2-((4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例6化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：476.17。

实施例7：2-((4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例7化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：490.18。

实施例8：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例8化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：490.18。

实施例9：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例9化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：504.20。

实施例10：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例10化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：472.19。

实施例11：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例11化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：486.21。

实施例12：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例12化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：488.20。

实施例13：2-(1-(4-氨基-3-苯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例13化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：470.21。

实施例14：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例14化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：500.22。

实施例15：2-(1-(4-氨基-3-(4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例15化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：528.25。

实施例16：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例16化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：474.19。

实施例17：2-(1-(4-氨基-3-苯基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例17化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：456.20。

实施例18：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例18化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：546.25。

实施例19：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例19化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：486.21。

实施例20：2-(1-(4-氨基-3-(4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例20化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：514.24。

实施例21：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-异丙氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例21化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：532.23。

实施例22：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例22化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：490.18。

实施例23：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例23化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：504.20。

实施例24：2-(1-(4-氨基-3-(4-异丙基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例24化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：512.26。

实施例25：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例25化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：502.22。

实施例26：2-(1-(4-氨基-3-(喹啉-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例26化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：521.22。

实施例27：2-(1-(4-氨基-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例27化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：516.22。

实施例28：2-(1-(4-氨基-3-(4-异丙基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例28化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：498.24。

实施例29：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-8-氯-3-环丁基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例29化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：520.17。

实施例30：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-8-氯-3-环戊基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例30化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：534.18。

实施例31：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-8-氯-3-环戊基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例31化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：516.19。

实施例32：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-8-氯-3-环戊基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例32化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：530.21。

实施例33：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-6-氟喹唑啉-4-(3H)-酮

实施例33化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：518.21。

实施例34：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例34化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：500.22。

实施例35：2-(1-(4-氨基-3-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例35化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：500.19。

实施例36：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例36化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：514.24。

实施例37：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例37化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：468.22。

实施例38：2-(1-(4-氨基-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例38化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：498.23。

实施例39：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例39化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：482.23。

实施例40：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例40化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：486.21。

实施例41：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4-(3H)-酮

实施例41化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：486.21。

实施例42：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例42化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：472.19。

实施例43：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4-(3H)-酮

实施例43化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：474.19。

实施例44：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例44化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：468.22。

实施例45：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例45化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：454.20。

实施例46：2-(1-(4-氨基-3-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环戊基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例46化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：514.20。

实施例47：2-(1-(4-氨基-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例47化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：516.22。

实施例48：4-(4-氨基-1-(1-(3-环丙基-5-氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-甲基苯甲酰胺

实施例48化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：513.22。

实施例49：N-(4-(4-氨基-1-(1-(3-环丙基-5-氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酰胺

实施例49化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：513.22。

实施例50：2-(1-(4-氨基-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例50化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：487.20。

实施例51：2-(1-(4-氨基-3-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例51化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：500.18。

实施例52：4-(4-氨基-1-(1-(3-环丁基-5-氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶吡啶-3-基)-N-甲基苯甲酰胺

实施例52化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：513.21。

实施例53：N-(4-(4-氨基-1-(1-(3-环丁基-5-氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酰胺

实施例53化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：513.21。

实施例54：2-(1-(4-氨基-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例54化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：487.20。

实施例55：2-(1-(4-氨基-3-(4-乙基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例55化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：484.22。

实施例56：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-6,7-二氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例56化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：522.18。

实施例57：4-(4-氨基-1-(1-(3-环丙基-6,7-二氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-甲基苯甲酰胺

实施例57化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：531.20。

实施例58：2-(1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-7-(三氟甲基)喹唑啉-4(3H)-酮

实施例58化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：540.17。

实施例59：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-7-(三氟甲基)喹唑啉-4(3H)-酮

实施例59化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：522.18。

实施例60：2-(1-(4-氨基-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-7-(三氟甲基)喹唑啉-4(3H)-酮

实施例60化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：552.53。

实施例61：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基-3-甲基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例61化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：500.22。

实施例62：N-(4-(4-氨基-1-(1-(3-环丙基-6,7-二氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酰胺

实施例62化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：531.20。

实施例63：2-(1-(4-氨基-3-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例63化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：486.20。

实施例64：2-(1-(4-氨基-3-(3,4-二甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例64化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：516.21。

实施例65：4-(4-氨基-1-(1-(3-环丙基-6-氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-甲基苯甲酰胺

实施例65化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：513.21。

实施例66：N-(4-(4-氨基-1-(1-(3-环丙基-6-氟-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)丙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酰胺

实施例66化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：513.21。

实施例67：2-(1-(4-氨基-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4-(3H)-酮

实施例67化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：487.20。

实施例68：4-(4-氨基-1-(1-(3-环丁基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-N-甲基苯甲酰胺

实施例68化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：495.22。

实施例69：N-(4-(4-氨基-1-(1-(3-环丁基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2-基)乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)苯基)乙酰胺

实施例69化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：495.22。

实施例70：2-(1-(4-氨基-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例70化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：469.21。

实施例71：2-(1-(4-氨基-3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例71化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：468.21。

实施例72：2-(1-(4-氨基-3-(3-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例72化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：454.20。

实施例73：2-(1-(4-氨基-3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例73化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：486.20。

实施例74：2-(1-(4-氨基-3-(3-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例74化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：472.19。

实施例75：2-(1-(4-氨基-3-(3-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例75化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：458.17。

实施例76：2-(1-(4-氨基-3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基-6-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例76化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：472.19。

实施例77：2-(1-(4-氨基-3-(3-羟基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例77化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：440.18。

实施例78：2-(1-(4-氨基-3-(3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丙基喹唑啉-4(3H)-酮

实施例78化合物的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：454.20。

实施例79：2-((S)-1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

(R)-2-氯丙酰氯(C2)：在圆底烧瓶中加入(R)-2-氯丙酸(1.5克)后加入四氢呋喃(20毫升)、N,N-二甲基甲酰胺(0.5毫升)，然后用冰水浴使体系冷却到0℃，接着缓慢加入草酰氯(1.4毫升)。反应体系在0℃搅拌一小时，随后恢复室温，继续反应14小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，得到油状粗品C2。LC/MS：M+H 126.97。

2-氨基-N-环丁基-6-氟苯甲酰胺(D2)：在圆底烧瓶中加入2-氨基-6-氟苯甲酸(1.0克)后加入四氢呋喃(20毫升)、N,N-二异丙基乙胺(2.3毫升)、HATU(2.9克)和环丁基胺(0.66毫升)，然后用冰水浴使体系冷却到0℃。反应体系在0℃搅拌一小时，随后恢复室温，继续反应12小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后用乙酸乙酯萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物D2。LC/MS：M+H 209.11。

(R)-2-(2-氯丙酰胺基)-N-环丁基-6-氟苯甲酰胺(D3)：在圆底烧瓶中加入2-氨基-N-环丁基-6-氟苯甲酰胺(1.3克)后加入四氢呋喃(30毫升)、N,N-二异丙基乙胺(3.4毫升)，然后用冰水浴使体系冷却到0℃，接着缓慢加入(R)-2-氯丙酰氯(0.88克)。反应体系在0℃搅拌一小时，随后恢复室温，继续反应12小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后用乙酸乙酯萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物D3。LC/MS：M+H299.09。

2-((S)-2-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙酰胺基)-N-环丁基-6-氟苯甲酰胺(D4)：在圆底烧瓶中加入(R)-2-(2-氯丙酰胺基)-N-环丁基-6-氟苯甲酰胺(100毫克)后加入N,N-二甲基甲酰胺(2毫升)、3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(174毫克)和碳酸钾(93毫克)。反应体系在氩气保护下室温反应8小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后用二氯甲烷萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物D4。LC/MS：M+H 522.20。

2-((S)-1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮(79)：在圆底烧瓶中加入2-((S)-2-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙酰胺基)-N-环丁基-6-氟苯甲酰胺(100毫克)后加入乙腈(2毫升)、氯化锌(102毫克)和六甲基二硅氮烷(132微升)。反应体系在氩气保护下回流反应8小时。反应结束后，体系在减压下蒸干溶剂，所得物用水稀释后用二氯甲烷萃取。有机相分别用水、饱和食盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。有机相经过滤，减压蒸干后得粗品。粗品经加压硅胶柱层析提纯后得化合物79。LC/MS：M+H 504.19。

实施例80：2-((R)-1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基)-3-环丁基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例80化合物的合成通过使用类似于实施例79中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：504.19。

实施例81：2-((S)-1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例81化合物的合成通过使用类似于实施例79中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：504.19。

实施例82：2-((R)-1-(4-氨基-3-(3-氟-4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)丙基)-3-环丙基-5-氟喹唑啉-4(3H)-酮

实施例82化合物的合成通过使用类似于实施例79中所述的步骤完成。MS(ESI)m/z(M+1)+：504.19。

实施例83：体外抑制活性(酶活)测定

体外酶活实验测定化合物对PI3K家族Ⅰ型激酶(PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ、PI3Kδ)、Ⅱ型激酶(PIK3C2A、PIK3C2B)的IC₅₀值。蛋白激酶PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PIK3C2A、PIK3C2B均购自Invitrogen(美国)；蛋白激酶PI3Kβ购自sigma(美国)；三种底物PIP2:PS、PI和PI:PS均购自Invitrogen(美国)。

分别取稀释至一定浓度的蛋白激酶PI3Kα5.4μL(终浓度为0.16ng/μL)、PI3Kβ5.4μL(终浓度为6ng/μL)、PI3Kδ5.4μL(终浓度为1ng/μL)、PI3Kγ5.4μL(终浓度为5ng/μL)、PIK3C2A 5.4μL(终浓度为5ng/μL)、PIK3C2B 5.4μL(终浓度为10ng/μL)，分别与梯度稀释的药物化合物各1μL室温反应1小时(药物终浓度分别为10μM、1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM、0.003μM、0.001μM)。

向上述PI3K家族Ⅰ型激酶各反应管中加入ATP(Promega，美国)和底物PIP2:PS混合物共6μL(激酶PI3Kα、PI3Kβ反应体系中ATP终浓度为10μM，激酶PI3Kδ、PI3Kγ反应体系中ATP终浓度为50μM，底物PIP2:PS终浓度均为50μM)，37℃反应1小时。反应缓冲液为50mMHepes(pH 7.5)(Promega，美国)、3mM MgCl₂、1mM EGTA(Promega，美国)、100mM NaCl、0.03％CHAPS(Promega，美国)。

向上述PI3K家族Ⅱ型激酶各反应管中加入ATP和底物PI混合物共6μL(终浓度分别为50μM和100μM)，37℃反应1小时。反应缓冲液为50mM Hepes(pH 7.5)、3mM MgCl₂、1mMEGTA、100mM NaCl、0.03％CHAPS。

取5μL反应后的激酶溶液置于384孔板(Corning，美国)中，加入5μL ADP-Glo^TM试剂(Promega，美国)，室温反应40分钟以终止激酶反应并消耗完剩余的ATP；加入10μL激酶检测试剂将ADP转化成ATP，使用偶联的萤光素酶/萤光素反应检测新合成的ATP，利用Envision读数后作图，计算Graphpad IC₅₀值，实验结果见表2和表3。

实验表明，本发明的化合物是PI3Kδ的选择性抑制剂，针对PI3Kδ具有很强的抑制活性，并且相对于其他PI3K家族激酶具有优异的选择性，特别是相对于PI3Kγ的抑制活性的选择性达到10倍以上，更优选达到20倍以上。PI3Kδ和PI3Kγ主要在淋巴细胞中表达，但是有文献报道PI3Kγ同时也在心肌细胞中表达，如果同时抑制PI3Kγ，会影响心脏功能，例如可能会影响到缺血性心脏病患者新生血管形成(Circ Res.2010March 5；106(4):757–768)。因此选择性地抑制PI3Kδ活性而不对PI3Kγ产生抑制作用或抑制作用相对较低，具有临床上的意义。与对照化合物TGR1202(MedChemExpress，中国)相比，本发明的化合物对PI3Kδ的活性提高了14倍，相对于PI3Kγ的选择性提高了38倍。

表2

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表3

IC50/nM

PIK3α

PIK3β

PIK3δ

PIK3γ

PI3KC2A

PI3KC2B

化合物9

3354

1159

17.3

685.4

>10000

9961

TGR1202

>10000

260

362

实施例84：大鼠类风湿性关节炎模型中药效检测

在本实施例中，测试化合物9在大鼠佐剂性关节炎模型中的实验结果。

实验步骤如下：

(1)从北京维通利华实验动物有限责任公司购买Sprague-Dawley(SD)大鼠，雌性，体重180g±20g，饲养于SPF级实验室中，饮水及垫料均经高压消毒无菌处理，有关小鼠的所有操作均在无菌条件下进行。

(2)溶媒组和给药组于第0天将10.0mg/ml CFA(完全弗氏佐剂，购自美国Sigma)充分混匀，于每只大鼠右后足跖皮内注射CFA 0.1ml致炎；正常组用生理盐水同法注射。

(3)造模后每3或4天进行1次体重和足爪肿胀度的测量。根据足爪肿胀度，于第20天全身炎症明显后将造模成功的雌性SD大鼠随机分为2组，每组5只，即溶媒组(0.5％甲基纤维素溶液，0.05ml/kg/天，购自中国国药)和化合物9给药组(25mg/kg/天剂量)；正常组小鼠5只，每只给予生理盐水(0.05ml/kg/天)。各组口服灌胃给药，每天1次，用药14天。

(4)给药后每两天进行一次体重和足爪肿胀度的测量，用足爪肿胀仪测量足爪肿胀度。致炎前用足容积测量仪测量每个大鼠左后足(非致炎侧)容积，致炎后测量左后足容积，求出继发侧足爪肿胀度(Δml＝︱注射后的足爪容积－注射前的足爪容积︱)。

实验结果如图1a、1b所示。化合物9在大鼠佐剂性关节炎模型中，对大鼠体重没有明显影响，如图1a所示。化合物9在给药14天后大鼠足爪肿胀度与溶媒组相比明显减轻，这说明本发明的化合物对类风湿性关节炎具有治疗作用。

工业应用性

本发明提供一种一种作为选择性的PI3Kδ激酶抑制剂，其可以用于抑制PI3Kδ激酶活性，及其治疗、预防或改善由PI3Kδ激酶活性调节的或者受其影响的或者其中涉及PI3Kδ激酶活性的疾病、障碍或病症。因而，可将本发明的化合物制成相应的药物，适于工业应用。

Claims

1.一种激酶抑制剂，其包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐：

其中，

X为CH；

R₁和R₂各自独立地选自氢和卤素；

R₃选自环丙基、环丁基、和环戊基；

R₄选自氢和C_1-6烷基；

R₅为甲氧基；

R₆选自氢、卤素、和C_1-6烷氧基。

2.根据权利要求1所述的激酶抑制剂，其中R₁和R₂各自独立地选自氢和氟。

3.根据权利要求1所述的激酶抑制剂，其中R₄选自氢、甲基、和乙基。

4.根据权利要求1所述的激酶抑制剂，其中R₆选自氢、卤素、和C_1-3烷氧基。

5.根据权利要求1所述的激酶抑制剂，其中R₆选自氢、氟、和甲氧基。

6.根据权利要求1所述的激酶抑制剂，其中式(I)的化合物选自：

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7.一种药物组合物，其包括如权利要求1-6中任一项所述的激酶抑制剂、和药学上可接受的载体或赋形剂、以及任选的其它治疗剂。

8.根据权利要求1-6中任一项所述的激酶抑制剂在制备用于抑制PI3Kδ的酪氨酸激酶活性的药物中的用途。

9.根据权利要求1-6中任一项所述的激酶抑制剂在制备用于治疗或预防与PI3Kδ的酪氨酸激酶活性相关的疾病或病症的药物中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其中所述疾病或病症选自慢性淋巴细胞白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、慢性阻塞性肺病、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和哮喘。