KR102189731B1 - 피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트 - Google Patents

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Abstract

하기 화학식 I의 화합물 및 이의 염 및 용매화물:
Figure 112019107278289-pct00095

[여기서,
R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
여기서, R 및 R'은 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, C3-20 헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴기로부터 독립적으로 선택되고;
R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 선택되고;
R"는 C3-12 알킬렌기이고, 그 사슬이 하나 이상의 헤테로원자, 예를 들어, O, S, NRN2 (RN2이 H 또는 C1-4 알킬임), 및/또는 방향족 고리, 예를 들어, 벤젠 또는 피리딘에 의해 단절될 수 있고;
Y 및 Y'은 O, S, 또는 NH로부터 선택되고;
R6, R7, R9은 각각 R6, R7 및 R9와 동일한 기로부터 선택되고;
R11b은 OH, ORA로부터 선택되고, 여기서 RA는 C1-4 알킬이고; 그리고
RL은 세포 결합제와의 연결을 위한 링커이다].

Description

피롤로벤조디아제핀 컨쥬게이트
본 발명은 피롤로벤조디아제핀 및 관련 이량체(PBD)를 포함하는 컨쥬게이트, 및 이러한 컨쥬게이트를 제조하는데 사용되는 전구체 약물 링커에 관한 것이다.
일부의 피롤로벤조디아제핀 (PBD)은 DNA의 특이적 서열을 인식하고, 그에 결합하는 능력을 가지며; 바람직한 서열은 PuGPu이다. 최초의 PBD 항종양 항생제인 안트라마이신은 1965년에 발견되었다 [Lei㎎ruber 외, J. Am . Chem . Soc ., 87, 5793-5795 (1965); Lei㎎ruber 외, J. Am . Chem . Soc ., 87, 5791-5793 (1965)]. 그때 이후로, 다수의 천연적으로 존재하는 PBD가 보고되었으며, 10개 초과의 합성경로는 다양한 유사체를 개발하였다 [Thurston 외, Chem . Rev. 1994, 433-465 (1994). 패밀리 구성원에는 아베이마이신 (abbeymycin) [Hochlowski 외, J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)], 치카마이신 (chicamycin) [Konishi 외, J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)], DC-81 [일본 특허 58-180 487; Thurston 외, Chem . Brit ., 26, 767-772 (1990); Bose 외, Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)], 마제트라마이신 (mazethramycin) [Kuminoto 외, J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)], 네오트라마이신 (neothramycins) A 및 B [Takeuchi 외, J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)], 포로트라마이신 (porothramycin) [Tsunakawa 외, J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)], 프로트라카르신 (prothracarcin) [Shimiz 외, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley 및 Thurston, J. Org . Chem ., 52, 91-97 (1987)], 시바노마이신 (sibanomicin) (DC-102) [Hara 외, J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh 외, J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)], 시비로마이신 (sibiromycin) [Leber 외, J. Am. Chem . Soc ., 110, 2992-2993 (1988)] 및 토마마이신 (tomamycin) [Arima 외, J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)]이 포함된다. PBD는 하기의 일반 구조를 갖는다:
Figure 112019107278289-pct00001
이들은 치환체의 수, 종류 및 위치에서, 이들의 방향족 A 고리 및 피롤로 C 고리 둘 다에서, 및 C 고리의 포화도에 있어서 상이하다. B-고리에는 DNA를 알킬화하는데 책임이 있는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민 (N=C), 카비놀아민 (NH-CH(OH)), 또는 카비놀아민 메틸 에테르 (NH-CH(OMe))램이 존재한다. 공지된 천연 생성물은 모두 C 고리로부터 A 고리 쪽으로 볼 때 우측으로의 트위스트를 갖는 생성물을 제공하는 것으로 키랄 C11a 위치에서 (S)-배열을 갖는다. 이것은 이들에게, 결합 부위에서 적합한 스너그 (snug)를 유도하도록 B-형태 DNA의 작은 그루브 (minor groove)를 갖는 이소헬리시티 (isohelicity)를 위해서 적절한 삼차원 형상을 제공한다 [Kohn, In Antibiotics Ⅲ. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley 및 Needham-VanDevanter, Acc . Chem . Res ., 19, 230-237 (1986)]. 작은 그루브 내에 부가물을 형성하는 그들의 능력은 이들이 DNA 처리 (processing)를 저해하고, 따라서 이들의 용도가 항종양제가 될 수 있도록 한다.
이러한 분자의 생물학적 활성이 가요성 알킬렌 링커를 통해 이의 C8/C'-하이드록실 작용기 전반에서 2개의 PBD 단위를 함께 결합함으로써 증가될 수 있다는 것은 이전에 개시된 바 있다(문헌[(Bose, D.S., 등., J. Am. Chem . Soc ., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D.E., 등., J. Org . Chem ., 61, 8141-8147 (1996))]). PBD 이량체는 서열-선택적 DNA 손상, 예컨대 회문구조 5'-Pu-GATC-Py-3' 사슬간 가교결합을 형성하는 것으로 여겨지고 (문헌 [Smellie, M. 외, Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C. 외, Biochemistry, 44, 4135-4147]), 이는 이의 생물학적 활성과 주로 연관되는 것으로 여겨진다.
제1 이량체(Bose, D.S., 외, J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992))는 하기 일반식이였다:
Figure 112019107278289-pct00002
여기서 n은 3 내지 6이다. n이 3 및 5인 화합물은 시험관 내에서 유망한 세포독성을 나타내었다. 그러나 n=3 화합물(DSB-120)의 항종양 활성을 연구한 결과(Walton, M., 외, Cancer Chemother Pharmacol (1996) 38: 431. doi:10.1007/s002800050507), 이는 유망하지 않은 것으로 밝혀졌다. 이러한 유망성의 결여는 "생체 내에서 높은 단백질 결합 및/또는 광범위한 약물 대사의 결과로서 낮은 종양 선택성 및 약물 흡수의 결과"인 것으로 생각되었다.
이들 화합물을 개선하기 위해, 화합물은 "호스트 마이너 그루브의 윤곽을 따라야 하는 C2/C2' 치환체의 포함"으로 조사하였다 (Gregson, S.J., 외, Chem. Commun., 1999, 797-798. doi: 10.1039/A809791G). 이 화합물 SG2000 (SJG-136):
Figure 112019107278289-pct00003
은 "피코몰 영역에서 절묘한 세포 독성...DSB-120 보다 약 9000-배 더 강력함"을 갖는 것으로 밝혀졌다.
이 화합물(또한 Gregson, S. 외, J. Med . Chem ., 44, 737-748 (2001); Alley, M.C. 외, Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); 및 Hartley, J.A. 외, Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004)에 논의됨)은 급성 골수성 백혈병 및 만성 림프성 백혈병을 치료함에 있어서의 이의 용도를 조사하는 임상 실험에서 독립형 제제, 예를 들면, NCT02034227로서 수반되었다 (https://www.clinicaltrials.gov/ct2/show /NCT02034227를 참조한다).
하기의 SG2202 (ZC-207)와 같은, 엔도-불포화와 함께 C2 아릴 치환기를 갖는 이량체 PBD 화합물은 WO 2005/085251에 개시되어 있고,
Figure 112019107278289-pct00004
그리고 WO2006/111759에서, 예를 들어, 하기의 SG2285 (ZC-423)와 같은 이러한 PBD 화합물의 중아황산염이 개시되어 있다:
Figure 112019107278289-pct00005
이러한 화합물은 매우 유용한 세포독성제인 것으로 나타났다 (문헌[Howard, P.W. 외, Bioorg . Med . Chem . (2009), doi: 10.1016/j.bmcl.2009.09.012]).
ADC를 함유하는 PBD의 검토(Mantaj, J., 외, Angew . Chem . Int . Ed. (2016), 55, 2-29; DOI: 10.1002/anie.201510610)에서, PBD 이량체의 SAR이 논의된다. SAR의 요약은 도 3-B "C2-엑소 및 C1-C2/C2-C3 불포화는 활성을 향상시킨다"에 제시되어 있다. 보다 상세한 논의는 하기에 기재된 섹션 2.4에서 찾을 수 있다:
"DSB-120은 글루타티온과 같은 세포성 티올-함유 분자와의 높은 반응성으로 인해 부분적으로 생체 내에서 활성이 불량하다. 그러나, SJG-136에서와 같이 C2/C2'-엑소 불포화의 도입은 DNA-결합 친화도 및 세포독성의 전반적인 증가를 가져왔고, 더 많은 제제가 그의 표적 DNA에 도달할 수 있는 세포 친핵제에 대해 반응성이 더 낮다".
WO 2007/085930은 세포 결합제, 예컨대 항체에 연결하기 위한 링커기를 갖는 이량체 PBD 화합물의 제조에 관해 기재하고 있다. 링커는 이량체의 단량체 PBD 단위를 연결하는 브리지 내에 존재한다.
세포 결합제, 예컨대 항체에 연결하기 위한 링커기를 갖는 이량체 PBD 화합물은, WO 2011/130598에 기재되어 있다. 이들 화합물 중의 링커는 이용가능한 N10 위치 하나에 부착되고, 일반적으로 링커기 상의 효소 작용으로 절단된다. 이량체 PBD 화합물은 C-고리에서 엔도 또는 엑소 불포화를 갖는다.
WO2014/057074 및 WO 2015/052322는 하나의 단량체 상의 N10 위치를 통하여 결합되는 특이적 PBD 이량체 컨쥬게이트에 관해 기재되고 모든 이들 화합물은 C-고리에서 엔도 불포화를 갖는다.
WO2014/096365은 하기 화합물을 개시한다:
Figure 112019107278289-pct00006
여기서 C-고리에서 불포화의 결여는 딜락탐인 B-고리와 커플링되고 따라서 DNA에 공유 결합하는 능력을 갖지 않는다.
본 발명은 C-고리가 엔도- 또는 엑소- 불포화를 모두 가지지 않는 PBD 이량체 약물 링커 및 컨쥬게이트를 제공한다.
본 발명의 제1 측면은 하기 화학식 I 및 이의 염 및 용매화물을 갖는 화합물을 포함한다:
Figure 112019107278289-pct00007
식 중:
R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
여기서, R 및 R'는 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, C3-20 헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴기로부터 독립적으로 선택되고;
R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 선택되고;
R"는 C3-12 알킬렌기인데, 이의 사슬은 하나 이상의 헤테로원자, 예를 들어, O, S, NRN2 (여기서, RN2은 H 또는 C1-4 알킬임), 및/또는 방향족 고리, 예를 들어 벤젠 또는 피리딘에 의해 단절될 수 있고;
Y 및 Y'은 O, S, 또는 NH로부터 선택되고;
R6', R7', R9'은 각각 R6, R7 및 R9와 같은 기로부터 선택되고;
R11b은 OH, ORA로부터 선택되고(여기서 RA는 C1-4 알킬임); 그리고
RL은 세포 결합제와의 연결을 위한 링커이고, 이하로부터 선택된다:
(iiia):
Figure 112019107278289-pct00008
여기서
Q는
Figure 112019107278289-pct00009
이고, 여기서, QX는 Q가 아미노-산 잔기, 디펩티드 잔기 또는 트리펩티드 잔기가 되게 하는 것이고;
X는
Figure 112019107278289-pct00010
이고:
여기서, a = 0 내지 5이고, b = 0 내지 16이고, c = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고;
GL은 리간드 단위에 연결되기 위한 링커이고; 그리고
(iiib):
Figure 112019107278289-pct00011
여기서, RL1 및 RL2은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 이들이 결합되는 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌 기를 형성하고;
e은 0 또는 1이고;
하기 중 하나:
(a) R20은 H이고, R21은 OH 또는 ORA이며, 여기서 RA는 C1-4 알킬이거나; 또는
(b) R20 및 R21은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중 결합을 형성하거나; 또는
(c) R20은 H이고 R21은 SOzM이거나(여기서 z는 2 또는 3이고 M은 1가의 약제학적으로 허용가능한 양이온임); 또는
(d) R20은 H이고 R21은 H이거나; 또는
(e) R21은 OH 또는 ORA이고(여기서 RA는 C1-4 알킬임) R20은 하기로부터 선택된다:
Figure 112019107278289-pct00012
, 여기서 RZ는 하기로부터 선택된다:
Figure 112019107278289-pct00013
(z-ii) OC(=O)CH3;
(z-iii) NO2;
(z-iv) OMe;
(z-v) 글루코로나이드;
(z-vi) -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-RZC, 여기서 -C(=O)-X1-NH- 및 -C(=O)-X2-NH-는 천연 아미노산 잔기를 나타내고 RZC는 Me, OMe, OCH2CH2OMe로부터 선택된다.
이러한 약물 링커는 항체와 같은 리간드 단위에 대해 즉시 컨쥬게이션되는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 제2 측면은 화학식 (II)의 컨쥬게이트를 제공한다:
L - (DL)p (II)
여기서 L은 리간드 단위 (즉, 표적화제)이고, DL은 화학식 I'의 약물 링커 단위이다:
Figure 112019107278289-pct00014
여기서 R6, R7, R9, R11b, Y, R", Y', R6', R7', R9', R20 및 R21은 본 발명의 제1 측면에서 정의한 바와 같고;
RLL은 하기로부터 선택된 세포 결합제와의 연결을 위한 링커이고:
(iiia):
Figure 112019107278289-pct00015
여기서, Q 및 X는 상기 제1 측면에서 정의한 바와 같고, GLL은 리간드 단위에 결합된 링커이고; 그리고
(iiib):
Figure 112019107278289-pct00016
여기서, RL1 및 RL2는 상기 제1 측면에서 정의한 바와 같고;
여기서 p는 1 내지 20의 정수이다.
이하에서 좀 더 상세히 설명되는 리간드 단위는, 표적 모이어티에 결합하는 표적화제이다. 리간드 단위는 예를 들어, 특히 세포 구성 요소 (세포 결합제) 또는 다른 관심 표적 분자에 결합할 수 있다. 리간드 단위는 예를 들어, 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드, 예컨대 항체, 항체의 항원-결합 절편, 또는 다른 결합제, 예컨대 Fc 융합 단백질일 수 있다.
이러한 컨쥬게이트는 높은 치료 지수로 이끄는 높은 내약성을 가짐으로써 임상 개발에 유망한 후보가 되는 것으로 밝혀졌다.
본 발명의 제3 측면은 증식성 질병 치료용 약제의 제조에 있어서 본 발명의 제2 측면의 컨쥬게이트의 용도를 제공한다. 제3 측면은 또한 증식성 질병의 치료 용도를 위해 본 발명의 제2 측면의 컨쥬게이트를 제공한다. 제3 측면은 또한 치료 유효량의 본 발명의 제2 측면의 컨쥬게이트를, 증식성 질병의 치료가 필요한 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 증식성 질병의 치료 방법을 제공한다.
당업자는 후보 컨쥬게이트가 어느 특정 세포 유형에 대해 증식성 질환을 치료할 것인지를 용이하게 결정할 수 있다. 예를 들어, 특정 화합물에 의해 제공되는 활성을 평가하는데 종래 사용될 수 있었던 검정 방법이 이하에서 예로서 기재된다.
본 발명의 제4 측면은 본 발명의 제1 측면의 화합물 (약물 링커)를 리간드 단위와 컨쥬게이팅하는 단계를 포함하는, 본 발명의 제2 측면의 컨쥬게이트의 합성을 제공한다.
정의
치환기
본원에서 사용된 어구 "선택적으로 치환된"은, 비치환 또는 치환될 수 있는 모 기(parent group)에 관한 것이다.
달리 특정된 바 없는 경우, 본원에서 사용된 용어 "치환된"은, 하나 이상의 치환기를 포함하는 모 기에 관한 것이다. 용어 "치환기"는 본원에서 종래의 의미로 사용되며, 모 기에 공유적으로 부착되거나, 적절한 경우 모 기에 융합된 화학적 모이어티를 지칭한다. 다양한 치환기가 잘 알려져 있는데, 이들의 형성 방법 및 다양한 모 기에 대한 도입 방법도 또한 잘 알려져 있다.
치환기의 예는 이하에서 더욱 상세하게 기재된다.
C1-12 알킬: 본원에서 사용된 용어 "C1-12 알킬"은, 1 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 이는 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화 (예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "C1-4 알킬"은, 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 이는 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화 또는 불포화 (예를 들어, 부분 불포화, 완전 불포화)될 수 있다. 따라서, 용어 "알킬"은 이하에서 논의되는 하위-유형 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬 등을 포함한다.
포화 알킬기의 예는 메틸 (C1), 에틸 (C2), 프로필 (C3), 부틸 (C4), 펜틸 (C5), 헥실 (C6) 및 헵틸 (C7)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포화 선형 알킬기의 예는 메틸 (C1), 에틸 (C2), n-프로필 (C3), n-부틸 (C4), n-펜틸 (아밀) (C5), n-헥실 (C6) 및 n-헵틸 (C7)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포화 분지형 알킬기의 예는 이소-프로필 (C3), 이소-부틸 (C4), sec-부틸 (C4), tert-부틸 (C4), 이소-펜틸 (C5), 및 네오-펜틸　(C5)을 포함한다.
C2-12 알케닐: 본원에서 사용된 용어 "C2-12 알케닐"은 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알케닐기의 예는 에테닐 (비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐 (-CH=CH-CH3), 2-프로페닐 (알릴, -CH-CH=CH2), 이소프로페닐 (1-메틸비닐, -C(CH3)=CH2), 부테닐 (C4), 펜테닐 (C5), 및 헥세닐 (C6)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
C2-12 알키닐: 본원에 사용된 용어 "C2-12 알키닐"은, 하나 이상의 탄소-탄소 3중 결합을 갖는 알킬기에 관한 것이다.
불포화 알키닐기의 예는 에티닐 (-C≡CH) 및 2-프로피닐 (프로파르길, -CH2-C≡CH)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
C3-12 사이클로알킬: 본원에서 사용된 용어 "C3-12 사이클로알킬"은, 또한 사이클릴 기이기도 한 알킬기에 관한 것으로; 즉, 사이클릭 탄화수소 (카보사이클릭) 화합물의 지환족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 1가 모이어티인데, 상기 모이어티는 3 내지 7개의 고리 원자를 포함하는 3 내지 7개의 탄소 원자를 갖는다.
사이클로알킬기의 예는 이하로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:
포화 단환 탄화수소 화합물:
사이클로프로판 (C3), 사이클로부탄 (C4), 사이클로펜탄 (C5), 사이클로헥산 (C6), 사이클로헵탄 (C7), 메틸사이클로프로판 (C4), 디메틸사이클로프로판 (C5), 메틸사이클로부탄 (C5), 디메틸사이클로부탄　(C6), 메틸사이클로펜탄　(C6), 디메틸사이클로펜탄　(C7) 및 메틸사이클로헥산　(C7);
불포화 단환 탄화수소 화합물:
사이클로프로펜　(C3), 사이클로부텐　(C4), 사이클로펜텐　(C5), 사이클로헥센　(C6), 메틸사이클로프로펜　(C4), 디메틸사이클로프로펜 (C5), 메틸사이클로부텐 (C5), 디메틸사이클로부텐 (C6), 메틸사이클로펜텐 (C6), 디메틸사이클로펜텐　(C7) 및 메틸사이클로헥센 (C7); 및
포화 다중 고리 탄화수소 화합물:
노르카란 (C7), 노르피난 (C7), 노르보르난 (C7).
C3-20 헤테로사이클릴: 본원에서 사용된 용어 "C3-20 헤테로사이클릴"은, 헤테로사이클릭 화합물의 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 1가 모이어티에 관한 것인데, 상기 모이어티는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖고, 이들 중 1 내지 10 개는 고리 헤테로원자이다. 바람직하게는, 각 고리는 3 내지 7개의 고리 원자를 갖고, 이들 중 1 내지 4개는 고리 헤테로원자이다.
이러한 맥락에서, 접두사 (예를 들어, C3-20, C3-7, C5-6 등)은 탄소 원자 또는 헤테로원자이든 간에, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본원에서 사용된 용어 "C5-6 헤테로사이클릴"은, 5개 또는 6개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릴기에 관한 것이다.
단환 헤테로사이클릴기의 예는 이하로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:
N1: 아지리딘 (C3), 아제티딘 (C4), 피롤리딘 (테트라히드로피롤) (C5), 피롤린 (예를 들어, 3-피롤린, 2,5-디히드로피롤) (C5), 2H-피롤 또는 3H-피롤 (이소피롤, 이소아졸) (C5), 피페리딘 (C6), 디히드로피리딘 (C6), 테트라히드로피리딘 (C6), 아제핀　(C7);
O1: 옥시란 (C3), 옥세탄 (C4), 옥솔란 (테트라히드로퓨란) (C5), 옥솔 (디히드로퓨란) (C5), 옥산 (테트라히드로피란) (C6), 디히드로피란 (C6), 피란 (C6), 옥세핀 (C7);
S1: 티이란 (C3), 테에탄 (C4), 티오란 (테트라히드로티오펜) (C5), 티안 (테트라히드로티오피란) (C6), 티에판 (C7);
O2: 디옥소란 (C5), 디옥산 (C6), 및 디옥세판 (C7);
O3: 트리옥산 (C6);
N2: 이미다졸리딘 (C5), 피라졸리딘 (디아졸리딘) (C5), 이미다졸린 (C5), 피라졸린 (디히드로피라졸) (C5), 피페라진 (C6);
N1O1: 테트라히드로옥사졸 (C5), 디히드로옥사졸 (C5), 테트라히드로이속사졸 (C5), 디히드로이속사졸 (C5), 모르폴린 (C6), 테트라히드로옥사진 (C6), 디히드로옥사진 (C6), 옥사진 (C6);
N1S1: 티아졸린 (C5), 티아졸리딘 (C5), 티오모르폴린　(C6);
N2O1: 옥사디아진 (C6);
O1S1: 옥사티올 (C5) 및 옥사티안 (티옥산) (C6); 및
N1O1S1: 옥사티아진 (C6).
치환된 단환 헤테로사이클릴기의 예는 고리 형태의 다당류로부터 유도된 것들, 예를 들어, 퓨라노스 (C5), 예컨대 아리비노퓨라노스, 릭소퓨라노스, 리보퓨라노스 및 자일로퓨라노스; 및 피라노스 (C6), 예컨대 알로피라노스, 알트로피라노스, 글루코피라노스, 만노피라노스, 굴로피라노스, 이도피라노스, 갈락토피라노스, 및 탈로피라노스를 포함한다.
C5-20 아릴: 본원에 사용된 용어 "C5-20 아릴"은, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 1가 모이어티에 관한 것이다, 상기 모이어티는 3 내지 20개의 고리 원자를 갖는다. 본원에 사용된 용어 "C5-7 아릴"은, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 상기 모이어티는 5 내지 7개의 고리 원자를 갖고, 본원에 사용된 용어 "C5-10 아릴"은, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 1가 모이어티에 관한 것으로, 상기 모이어티는 5 내지 10개의 고리 원자를 갖는다. 바람직하게는, 각 고리는 5 내지 7개의 고리 원자를 갖는다.
이러한 맥락에서, 접두사 (예를 들어, C3-20, C5-7, C5-6, C5-10 등)는 탄소 원자 또는 헤테로원자이든 간에, 고리 원자의 수, 또는 고리 원자의 수의 범위를 나타낸다. 예를 들어, 본원에 사용된 용어 "C5-6 아릴"은, 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는 아릴기에 관한 것이다.
고리 원자는 "카보아릴기"에서와 같이 모든 탄소 원자일 수 있다.
카보아릴기의 예는 벤젠 (즉, 페닐) (C6), 나프탈렌 (C10), 아줄렌 (C10), 안트라센 (C14), 페난트렌 (C14), 나프타센 (C18), 및 피렌 (C16)으로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
융합된 고리를 포함하며, 이들 중 적어도 하나는 방향족 고리인 아릴기의 예는, 인단 (예를 들어,　2,3-디히드로-1H-인덴) (C9), 인덴 (C9), 이소인덴 (C9), 테트랄린 (1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌 (C10), 아세나프텐 (C12), 플루오렌 (C13), 페날렌 (C13), 아세페난트렌 (C15), 및 아세안트렌 (C16)으로부터 유도된 군을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
대안적으로, 고리 원자는 "헤테로아릴기"에서와 마찬가지로, 하나 이상의 헤테로원자를 포함할 수 있다. 단환 헤테로아릴기의 예는 이하로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:
N1: 피롤 (아졸) (C5), 피리딘 (아진) (C6);
O1: 퓨란 (옥솔) (C5);
S1: 티오펜 (티올) (C5);
N1O1: 옥사졸 (C5), 이속사졸 (C5), 이속사진 (C6);
N2O1: 옥사디아졸 (퓨라잔) (C5);
N3O1: 옥사트리아졸 (C5);
N1S1: 티아졸 (C5), 이소티아졸 (C5);
N2: 이미다졸 (1,3-디아졸) (C5), 피라졸 (1,2-디아졸)　(C5), 피리다진 (1,2-디아진) (C6), 피리미딘 (1,3-디아진) (C6) (예를 들어, 시토신, 티민, 우라실), 피라진 (1,4-디아진) (C6);
N3: 트리아졸 (C5), 트리아진 (C6); 및
N4: 테트라졸 (C5).
융합된 고리를 포함하는 헤테로아릴의 예는, 이하의 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다:
벤조퓨란 (O1), 이소벤조퓨란 (O1), 인돌 (N1), 이소인돌　(N1), 인돌리진 (N1), 인돌린 (N1), 이소인돌린 (N1), 퓨린(N4) (예를 들어, 아데닌, 구아닌), 벤즈이미다졸 (N2), 인다졸 (N2), 벤족사졸 (N1O1), 벤즈이속사졸 (N1O1), 벤조디옥솔 (O2), 벤조퓨라잔 (N2O1), 벤조트리아졸 (N3), 벤조티오퓨란 (S1), 벤조티아졸 (N1S1), 벤조티아디아졸　(N2S)로부터 유도된 (2개의 융합된 고리를 갖는), C9;
크로멘 (O1), 이소크로멘 (O1), 크로만 (O1), 이소크로만 (O1), 벤조디옥산 (O2), 퀴놀린 (N1), 이소퀴놀린 (N1), 퀴놀리진 (N1), 벤족사진 (N1O1), 벤조디아진 (N2), 피리도피리딘 (N2), 퀴녹살린 (N2), 퀴나졸린 (N2), 신놀린 (N2), 프탈라진 (N2), 나프티리딘 (N2), 프페리딘 (N4)으로부터 유도된 (2개의 융합된 고리를 갖는), C10;
벤조디아제핀 (N2)으로부터 유도된 (2개의 융합된 고리를 갖는), C11;
카르바졸 (N1), 디벤조퓨란 (O1), 디벤조티오펜 (S1), 카르볼린 (N2), 페리미딘 (N2), 피리도인돌 (N2)로부터 유도된 (3개의 융합된 고리를 갖는), C13; 및
아크리딘 (N1), 잔텐 (O1), 티오잔텐 (S1), 옥산트렌 (O2), 페녹사티인 (O1S1), 페나진 (N2), 페녹사진 (N1O1), 페노티아진 (N1S1), 티안트렌 (S2), 페난트리딘 (N1), 페난트롤린 (N2), 페나진 (N2)으로부터 유도된 (3개의 융합된 고리를 갖는), C14.
상기 기는, 다른 치환기 단독 또는 이의 일부이든 간에, 이들 자체 및 이하에 열거된 추가적인 치환기로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 치환기에 의해 선택적으로 치환될 수 있다.
할로: -F, -Cl, -Br, 및 -I.
히드록시: -OH.
에테르: -OR, [여기서 R은 에테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기 (또한, 이하 C1-7 알콕시기라고도 함), C3-20 헤테로사이클릴기 (또한, C3-20 헤테로사이클릴옥시기라고도 함), 또는 C5-20 아릴기 (또한, C5-20 아릴옥시기라고도 함), 바람직하게는 C1-7 알킬기이다].
알콕시: -OR, [여기서 R은 알킬기, 예를 들어, C1-7 알킬기이다. C1-7 알콕시기의 예는 -OMe (메톡시), -OEt (에톡시), -O(nPr) (n-프로폭시), -O(iPr) (이소프로폭시), -O(nBu) (n-부톡시), -O(sBu) (sec-부톡시), -O(iBu) (이소부톡시), 및 -O(tBu) (tert-부톡시)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
아세탈: -CH(OR1)(OR2), [여기서 R1 및 R2은 독립적으로 아세탈 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이거나, 또는 "사이클릭" 아세탈 기의 경우, R1 및 R2는 이들이 부착된 2개의 산소 원자; 및 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 4 내지 8개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 아세탈기의 예는, -CH(OMe)2, -CH(OEt)2, 및 -CH(OMe)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
헤미아세탈: -CH(OH)(OR1), [여기서 R1는 헤미아세탈 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. 헤미아세탈기의 예는 -CH(OH)(OMe), 및 -CH(OH)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
케탈: -CR(OR1)(OR2), [여기서 R1 및 R2은 아세탈에 대해 정의한 바와 같고, R은 수소 이외의 케탈 치환기, 예를 들어 C1-7 알킬기, C3-20 헤테로시클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는C1 -7 알킬기이다. 케탈기의 예는, -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2, -C(Et)(OEt)2, 및 -C(Et)(OMe)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
헤미케탈: -CR(OH)(OR1), [여기서 R1은 헤미아세탈에 대해 정의한 바와 같고, R은 수소 이외의 헤미아세탈 치환기, 예를 들어 C1-7 알킬기, C3-20 헤테로시클릴기, 또는C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. 헤미아세탈기의 예는, -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt), 및 -C(Et)(OH)(OEt)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
옥소 (케토, -온): =O.
티온 (티오케톤): =S.
이미노 (이민): =NR, 여기서 R은 이미노 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이다. 에스테르기의 예는 =NH, =NMe, =NEt, 및 =NPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포르밀 (카바알데히드, 카보알데히드): -C(=O)H.
아실 [케토(keto)]: -C(=O)R, [여기서 R은 아실 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬아실 또는 C1-7 알카노일이라고도 지칭됨), C3-20 헤테로사이클릴기 (또한, C3-20 헤테로사이클릴아실라고도 지칭됨), 또는 C5-20 아릴기 (또한, C5-20 아릴아실라고도 지칭됨), 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. 아실기의 예는, -C(=O)CH3 (아세틸), -C(=O)CH2CH3 (프로피오닐), -C(=O)C(CH3)3 (t-부티릴), 및 -C(=O)Ph (벤조일, 페논)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
카르복시 (카르복실산): -C(=O)OH.
티오카르복시 (티오카르복실산): -C(=S)SH.
티올로카르복시 (티올로카르복실산): -C(=O)SH.
티오노카르복시 (티오노카르복실산): -C(=S)OH.
이미드산: -C(=NH)OH.
히드록삼산: -C(=NOH)OH.
에스테르 (카르복실레이트, 카르복실산 에스테르, 옥시카보닐): -C(=O)OR, 여기서 R은 에스테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. 에스테르 기의 예는, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3, 및 -C(=O)OPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아실옥시 (리버스 에스테르): -OC(=O)R, [여기서 R은 아실옥시 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. 아실옥시기의 예는 -OC(=O)CH3 (아세톡시), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph, 및 -OC(=O)CH2Ph를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
옥시카르복실옥시: -OC(=O)OR, [여기서 R은 에스테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. 에스테르기의 예는 -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3, 및 -OC(=O)OPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
아미노: -NR1R2, [여기서 R1 및 R2는 독립적으로 아미노 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬아미노 또는 디 C1-7 알킬아미노라고도 지칭함), C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬기이거나, 또는 "사이클릭" 아미노기의 경우, R1 및 R2는 이들이 부착된 질소 원자와 함께, 4 내지 8개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릭 고리를 형성한다. 아미노기는 1차 (-NH2), 2차 (-NHR1), 또는 3차 (-NHR1R2)일 수 있고, 양이온 형태로는 4차 (-+NR1R2R3)일 수 있다. 아미노기의 예는 -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, 및 -NHPh를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 사이클릭 아미노기의 예는 아지리디노, 아제티디노, 피롤리디노, 피페리디노, 피페라지노, 모르폴리노, 및 티오모르폴리노를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
아미도 (카바모일, 카르바밀, 아미노카보닐, 카르복사미드): -C(=O)NR1R2, [여기서 R1 및 R2는 아미노기에서 정의한 바와 같이, 독립적으로 아미노 치환기이다. 아미도기의 예는 -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3, 및 -C(=O)N(CH2CH3)2, 뿐만 아니라 아미도기 (R1 및 R2가 이들이 부착된 질소 원자와 함께 예를 들어, 피페리디노카보닐, 모르폴리노카보닐, 티오모르폴리노카보닐, 및 피페라지노카보닐에서와 같이 헤테로사이클릭 구조를 형성한다)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
티오아미도 (티오카르바밀): -C(=S)NR1R2, [여기서 R1 및 R2는 아미노기에서 정의한 바와 같이, 독립적으로 아미노 치환기이다. 아미도기의 예는 -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2 및 -C(=S)NHCH2CH3를 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
아실아미도 (아실아미노): -NR1C(=O)R2, [여기서 R1은 아미드 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이고, 그리고 R2는 아실 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이다. 아실아미드기의 예는, -NHC(=O)CH3 , -NHC(=O)CH2CH3, 및 -NHC(=O)Ph를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. R1　및 R2는 함께 예를 들어, 석신이미딜, 말레이미딜, 및 프탈이미딜에서와 같이 사이클릭 구조를 형성할 수 있다]:
Figure 112019107278289-pct00017
Figure 112019107278289-pct00018
Figure 112019107278289-pct00019
석신이미딜 말레이미딜 프탈이미딜
아미노카보닐옥시: -OC(=O)NR1R2, (여기서 R1 및 R2는 아미노기에 대해 정의한 바와 같이 아미노 치환기이다). 아미노카보닐옥시기의 예는, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2, 및 -OC(=O)NEt2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
우레이도: -N(R1)CONR2R3 (여기서, R2 및 R3 아미노기에 대해 정의한 바와 같이 아미노 치환기이고, R1은 우레이도 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 수소 또는 C1-7 알킬기이다). 우레이도기의 예는, -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2 및 -NMeCONEt2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
구아니디노: -NH-C(=NH)NH2.
테트라졸릴: 4개의 질소 원자 및 1개의 탄소 원자를 갖는 5원 방향족 고리,
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이미노: =NR, (여기서 R은 이미노 치환기, 예를 들어, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬기이다). 이미노기의 예는, =NH, =NMe, 및 =NEt를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아미딘 (아미디노): -C(=NR)NR2, (여기서 각각의 R은 아미딘 치환기, 예를 들어, 수소, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 H 또는 C1-7 알킬기이다). 아미딘기의 예는, -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2, 및 -C(=NMe)NMe2를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
니트로: -NO2.
니트로소: -NO.
아지도: -N3.
시아노 (니트릴, 카보니트릴): -CN.
이소시아노: -NC.
시아나토: -OCN.
이소시아나토: -NCO.
티오시아노 (티오시아나토): -SCN.
이소티오시아노 (이소티오시아나토): -NCS.
설프히드릴 (티올, 머캅토): -SH.
티오에테르 (설파이드): -SR, [여기서 R은 티오에테르 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬티오기라고도 지칭함), C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. C1-7 알킬티오기의 예는, -SCH3 및 -SCH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
디설파이드: -SS-R, [여기서, R은 디설파이드 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기 (또한, C1-7 알킬 디설파이드라고도 지칭됨)이다. C1-7 알킬 디설파이드기의 예는, -SSCH3 및 -SSCH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
설핀 (설피닐, 설폭시드): -S(=O)R, [여기서 R은 설핀 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다. 설핀기의 예는, -S(=O)CH3 및 -S(=O)CH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
설폰 (설포닐): -S(=O)2R, [여기서 R은 설폰 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이고, 예를 들어, 플루오르화 또는 퍼플루오르화 C1-7 알킬기를 포함한다). 설폰기의 예는, -S(=O)2CH3 (메탄설포닐, 메실), -S(=O)2CF3 (트리플릴), -S(=O)2CH2CH3 (에실), -S(=O)2C4F9 (노나플릴), -S(=O)2CH2CF3 (트레실), -S(=O)2CH2CH2NH2 (타우릴), -S(=O)2Ph (페닐설포닐, 베실), 4-메틸페닐설포닐 (토실), 4-클로로페닐설포닐 (클로실), 4-브로모페닐설포닐 (브로실), 4-니트로페닐 (노실), 2-나프탈렌설포네이트 (나프실), 및 5-디메틸아미노-나프탈렌-1-일 설포네이트 (단실)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
설핀산 (설피노): -S(=O)OH, -SO2H.
설폰산 (설포): -S(=O)2OH, -SO3H.
설피네이트 (설핀산 에스테르): -S(=O)OR; (여기서, R은 설피네이트 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다). 설피네이트기의 예는, -S(=O)OCH3 (메톡시설피닐; 메틸 설피네이트) 및 -S(=O)OCH2CH3 (에톡시설피닐; 에틸 설피네이트)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설포네이트 (설폰산 에스테르): -S(=O)2OR, (여기서, R은 설포네이트 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다). 설포네이트기의 예는, -S(=O)2OCH3 (메톡시설포닐; 메틸 설포네이트) 및 -S(=O)2OCH2CH3 (에톡시설포닐; 에틸 설포네이트)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설피닐옥시: -OS(=O)R, (여기서 R은 설피닐옥시 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다). 설피닐옥시기의 예는, -OS(=O)CH3 및 -OS(=O)CH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설포닐옥시: -OS(=O)2R, (여기서, R은 설포닐옥시 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다). 설포닐옥시기의 예는, -OS(=O)2CH3 (메실레이트) 및 -OS(=O)2CH2CH3 (에실레이트)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설페이트: -OS(=O)2OR; (여기서, R은 설페이트 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다). 설페이트 기의 예는, -OS(=O)2OCH3 및 -SO(=O)2OCH2CH3을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설파밀 (설파모일; 설핀산 아미드; 설핀아미드): -S(=O)NR1R2, (여기서, R1 및 R2는 아미노기에 대해 정의한 바와 같이 아미노 치환기이다). 아밀기의 예는 -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2 및 -S(=O)NHPh을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설폰아미도 (설핀아모일; 설폰산 아미드; 설폰아미드): -S(=O)2NR1R2 (여기서, R1 및 R2은 아미노기에 대해 정의한 바와 같이 아미노 치환기이다). 설폰아미도 기의 예는 -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2 및 -S(=O)2NHPh을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설파미노: -NR1S(=O)2OH (여기서, R1은 아미노기에서 정의한 바와 같은 아미노 치환기이다). 설파미노기의 예는 -NHS(=O)2OH 및 -N(CH3)S(=O)2OH을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설폰아미노: -NR1S(=O)2R (여기서, R1은 아미노기에서 정의한 바와 같은 아미노 치환기이고, R은 설폰아미노 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다). 설폰아미노기의 예는 -NHS(=O)2CH3 및 -N(CH3)S(=O)2C6H5을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
설핀아미노: -NR1S(=O)R, (여기서, R1은 아미노기에서 정의한 바와 같은 아미노 치환기이고, R은 설핀아미노 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기이다). 설핀아미노기의 예는 -NHS(=O)CH3 및 -N(CH3)S(=O)C6H5을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스피노 (포스핀): -PR2 [여기서, R은 포스피노 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다). 포스피노기의 예는, -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2, 및 -P(Ph)2을 포함하나, 이에 제한되지 않는다].
포스포: -P(=O)2.
포스피닐 (포스핀 옥사이드): -P(=O)R2 (여기서, R은 포스피닐 치환기, 예를 들어, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 C1-7 알킬기 또는 C5-20 아릴기이다). 포스피닐기의 예는 -P(=O)(CH3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-Bu)2, 및 -P(=O)(Ph)2을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스폰산 (포스포노): -P(=O)(OH)2.
포스포네이트 (포스포노 에스테르): -P(=O)(OR)2, (여기서, R은 포스포네이트 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다). 포스포네이트기의 예는, -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2, 및 -P(=O)(OPh)2을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
인산(phosphoric acid) (포스포노옥시): -OP(=O)(OH)2.
포스페이트 (포스포노옥시 에스테르): -OP(=O)(OR)2 (여기서, R은 포스페이트 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다). 포스페이트 기의 예는, -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2, 및 -OP(=O)(OPh)2을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
아인산(phosphorous acid): -OP(OH)2.
포스파이트: -OP(OR)2, (여기서, R은 포스파이트 치환기, 예를 들어, -H, C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다). 포스파이트 기의 예는, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2, 및 -OP(OPh)2을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스포르아미다이트: -OP(OR1)-NR2 2 [여기서, R1 및 R2는 포스포르아미다이트 치환기, 예를 들어, -H, (선택적으로 치환된) C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스포르아미다이트기의 예는, -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
포스포르아미데이트: -OP(=O)(OR1)-NR2 2, [여기서, R1 및 R2는 포스포르아미데이트 치환기, 예를 들어, -H, (선택적으로 치환된) C1-7 알킬기, C3-20 헤테로사이클릴기, 또는 C5-20 아릴기, 바람직하게는 -H, C1-7 알킬기, 또는 C5-20 아릴기이다]. 포스포르아미데이트 기의 예는 -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, 및 -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
알킬렌
C3-12 알킬렌: 본원에 사용된 용어 "C3-12 알킬렌"은, (달리 특정된 바 없는 경우), 지방족 또는 지환족일 수 있고, 포화, 부분 불포화, 또는 완전 불포화될 수 있는 3 내지 12개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 화합물의 동일한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 모두 제거하거나, 또는 2개의 상이한 탄소 원자 각각으로부터 하나의 수소 원자를 제거함으로서 수득되는 2자리(bidentate) 모이어티에 관한 것이다. 따라서, 용어 "알킬렌"은 이하에서 논의될 하위-유형 알케닐렌, 알키닐렌, 사이클로알킬렌 등을 포함한다.
선형 포화 C3-12 알킬렌기의 예는, -(CH2)n- (여기서, n은 3 내지 12의 정수임), 예를 들어, -CH2CH2CH2- (프로필렌), -CH2CH2CH2CH2- (부틸렌), -CH2CH2CH2CH2CH2- (펜틸렌) 및 -CH2CH2CH2CH-2CH2CH2CH2- (헵틸렌)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
분지형 포화 C3-12 알킬렌기의 예는, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2-, 및 -CH2CH(CH2CH3)CH2-을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
선형 부분 불포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 알케닐렌, 및 알키닐렌 기)의 예는, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-, -CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-, 및 -CH2-C≡C-CH2-을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
분지형 부분 불포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 알케닐렌 및 알키닐렌 기)의 예는, -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- 및 -C≡C-CH(CH3)-을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
지환족 포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 사이클로알킬렌)의 예는, 사이클로펜틸렌 (예를 들어, 사이클로펜트-1,3-일렌), 및 사이클로헥실렌 (예를 들어,　사이클로헥스-1,4-일렌)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
지환족 부분 불포화 C3-12 알킬렌기 (C3-12 사이클로알킬렌)의 예는, 사이클로펜테닐렌 (예를 들어, 4-사이클로펜텐-1,3-일렌), 사이클로헥세닐렌 (예를 들어, 2-사이클로헥센-1,4-일렌; 3-사이클로헥센-1,2-일렌; 2,5-사이클로헥사디엔-1,4-일렌)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
C3-12 알킬렌기가 헤테로원자에 의해 절단되는 경우, 첨자는 헤테로원자를 포함하는 사슬 내의 원자의 수를 지칭한다. 예를 들어, 사슬 -C2H4-O-C2H4-은 C5 기일 것이다.
C3-12 알킬렌기는 헤테로원자에 의해 절단되는 경우, 첨자는 방향족 고리를 포함하는 사슬에서 직접 원자의 수를 지칭한다. 예를 들어, 사슬
Figure 112019107278289-pct00021
는 C5 기일 것이다.
리간드 단위
리간드 단위는 임의의 종류의 것일 수 있고, 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드 및 비-펩타이드 제제 (이는 표적분자에 특이적으로 결합됨)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 리간드 단위는 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 리간드 단위는 환형 폴리펩타이드일 수 있다. 이들 리간드 단위는 적어도 하나의 표적분자-결합 부위, 림포카인, 호르몬, 성장 인자, 또는 표적에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 다른 세포 결합분자 또는 물질을 포함하는 항체 또는 항체의 절편을 포함할 수 있다.
용어 "특이적으로 결합함" 및 "특이적 결합"은, 예정된 분자 (예를 들면, 항원)에 대한 항체 또는 다른 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 결합을 지칭한다. 전형적으로, 항체 또는 다른 분자는 적어도 약 1×107 M-1의 친화도로 결합되고, 예정된분자 또는 밀접하게 관련된 분자 이외의 비-특이적분자 (예를 들면, BSA, 카세인)에 대한 결합의 친화도보다 적어도 2배 더 큰 친화도로 예정된 분자에 결합된다.
리간드 단위의 예는 본원에 포함된 WO　2007/085930에서 용도에 대해 기재된 제제를 포함한다.
일부 구현예에서, 리간드 단위는 세포 상의 세포외 표적에 결합하는 세포 결합제이다. 그와 같은 세포 결합제는 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드 또는 비-펩타이드 제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 결합제는 단백질, 폴리펩타이드 또는 펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 결합제는 환형 폴리펩타이드일 수 있다. 또한, 세포 결합제는 항체 또는 항체의 항원-결합 단편일 수 있다. 따라서, 일 구현예에서, 본 발명은 항체-약물 컨쥬게이트 (ADC)를 제공한다.
세포 결합제
세포 결합제는 임의의 종류일 수 있고, 비펩티드 및 펩티드를 포함할 수 있다. 이들은 적어도 하나의 결합 위치를 포함하는 항체 또는 항체의 단편, 림포카인, 호르몬, 호르몬 유사물, 비타민, 성장 인자, 영양소-운반 분자 또는 임의의 기타 세포 결합 분자 또는 물질을 포함할 수 있다.
펩티드
일 구현예에서, 상기 세포 결합제는 4-30개, 바람직하게는 6-20개의 인접 아미노산 잔기를 포함하는 선형 또는 고리형 펩티드이다. 상기 구현예에서, 바람직하게는, 1종의 세포 결합제가 한 개의 단량체 또는 이량체 피롤로벤조디아제핀 화합물에 연결된다.
일 구현예에서, 상기 세포 결합제는 인테그린 αvβ6와 결합하는 펩티드를 포함한다. 상기 펩티드는 XYS에 비해 αvβ6에 선택적일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 세포 결합제는 A20FMDV-Cys 폴리펩티드를 포함한다. 상기 A20FMDV-Cys는 서열 NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC를 갖는다. 대안적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 잔기가 다른 아미노산 잔기로 치환된 A20FMDV-Cys 서열의 변이체가 사용될 수 있다. 또한, 상기 폴리펩티드는 서열 NAVXXXXXXXXXXXXXXXRTC를 가질 수 있다.
항체
본 명세서에서 용어 "항체"는 최광의 개념으로 사용되고, 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 구체적으로 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 이량체, 다량체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 포함한다 (Miller 외 (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). 항체들은 쥐 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체 또는 기타 종류로부터 유래된 항체일 수 있다. 항체는 특이적 항원을 인식 및 결합할 수 있는 면역계에 의해 생성된 단백질이다 (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology , 5판, Garland Publishing, New York). 표적 항원은 일반적으로 다중 항체에서 CDR에 의해 인식되는 많은 결합 위치 (이른바, 에피토프)를 갖는다. 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 각각의 항체는 상이한 구조를 갖는다. 따라서, 1종의 항원은 1종 이상의 대응 항체를 가질 수 있다. 항체는 전장의 면역글로불린 분자 또는 전장의 면역글로불린 분자의 면역 활성 부분, 즉 목적 표적 항원 또는 이의 일부에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 위치를 포함하는 분자를 포함하고, 상기 표적은, 이들로 제한하는 것은 아니나, 자가면역 질환과 관련된 자가면역 항체를 생산하는 암세포 또는 세포들을 포함한다. 면역글로불린은 임의의 종류 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 면역글로불린 분자의 부류 (예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위 부류일 수 있다. 상기 면역글로불린은 인간, 쥐 또는 토끼 기원을 비롯한 임의의 종류로부터 유래될 수 있다.
"항체 단편"은 일반적으로 이의 항원 결합 또는 가변 영역인 전체 길이 항체의 일부분을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 scFv 단편; 디아바디 (diabodies); 선형 항체; 암세포 항원, 바이러스 항원 또는 미생물 항원에 면역특이적으로 결합하는 Fab 발현 라이브러리에 의해서 생산된 단편, 항-이디오타입 (안티-Id) 항체, CDR (상보성 결정 영역), 및 상기한 것 중의 어떤 것의 에피토프-결합 단편, 단일-쇄 항체분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체가 포함된다.
본 발명에서 사용된 것으로서 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 즉 소량으로 존재할 수 있는 천연적으로 존재하는 가능한 돌연변이를 제외하고는 동일한 집단을 포함하는 개별적인 항체를 나타낸다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 유도되는 것으로서 매우 특이적이다. 더구나, 상이한 결정인자 (에피토프)에 대해 유도되는 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 대해 유도된다. 그들의 특이성 이외에도, 모노클로날 항체는 이들이 다른 항체에 의해서 오염되지 않고 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 수식어구 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균일한 집단으로부터 수득된 것으로서의 항체의 특징을 나타내며, 어떤 특별한 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되지는 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 코흘러 (Kohler) 등에 의해서 최초로 기술된 하이브리도마 방법 [Kohler 등 (1975) Nature 256:495]에 의해서 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (참조: US 4816567)에 의해서 제조될 수 있다. 또한, 모노클로날 항체는 문헌 [Clackson 등 (1991) Nature, 352:624-628; Marks 등 (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597]에 개시된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 또는 인간 면역글로불린 시스템 전체를 보유하는 형질변환 마우스 (Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459)로부터 분리할 수 있다.
본 발명에서 모노클로날 항체는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특별한 종으로부터 유도되거나 특별한 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 한편 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유도되거나 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 "키메라" 항체뿐만 아니라, 이들이 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 포함한다 [US 4816567; 그리고 Morrison 외 (1984) Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 81:6851-6855]. 키메라 항체는 비-인간 영장류로부터 유도된 가변 영역 항원-결합 서열 및 인간 불변 영역 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체를 포함한다.
본 발명에서 "무손상 항체"는 VL 및 VH 도메인뿐만 아니라 경쇄 불변 도메인 (CL) 및 중쇄 불변 도메인 CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 것이다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 무손상 항체는 항체의 Fc 영역 (천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 이들 생물학적 활성을 나타내는 하나 또는 그 이상의 "효과기 기능"을 가질 수 있다. 항체 효과기 기능의 예로는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC); 식세포작용; 및 B 세포 수용체 및 BCR과 같은 세포 표면 수용체의 하향 조절이 포함된다.
그들의 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라서, 무손상 항체는 상이한 "클래스"로 지정될 수 있다. 무손상 항체에는 5 가지의 주된 클래스 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM가 있으며, 이들 중의 몇 가지는 "서브클래스" (이소타입), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 더분류될 수 있다. 항체의 상이한 클래스에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, υ 및 μ로 불린다. 면역글로불린의 상이한 클래스의 서브유니트 구조 및 삼차원 배열은 잘 알려져 있다.
인간화
비인간 항체 또는 항체 단편의 생체내 면역원성을 저하시키는 기술은 용어 "인간화"에 속하는 것을 포함한다.
"인간화된 항체"는 인간 항체의 변형된 가변 영역의 적어도 일부를 포함하는 폴리펩티드를 의미하고, 여기서 가변 영역의 일부, 바람직하게는 전체 인간 가변 도메인 보다 실질적으로 작은 부분은 비인간 종으로부터 해당 서열에 의해 치환되고, 변형된 가변 영역은 다른 단백질의 적어도 또 따른 부분에, 바람직하게는 인간 항체의 불변 영역에 연결된다. 표현 "인간화된 항체"는 하나 이상의 상보적 결정 영역 ("CDR") 아미노산 잔기 및/또는 하나 이상의 프레임워크 영역 ("FW" 또는 "FR") 아미노산 잔기가 설치류 또는 다른 비인간 항체의 유사한 위치에서 아미노산 잔기에 의해 치환된 인간 항체를 포함한다. 표현 "인간화된 항체"는 또한 면역글로불린 아미노산 서열 변이체, 또는 실질적으로 비인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 CDR, 및 실질적으로 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 FR을 포함하는 이의 단편을 포함한다.
비인간 (예를 들어, 쥐) 항체의 "인간화된" 형태는, 비인간 면역글로불린으로부터 유래하는 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다. 또는, 다른 관점에서 봤을 때, 인간화된 항체는 인간 서열 자리에 비인간 (예를 들어, 쥐) 항체로부터의 선택된 서열을 또한 포함하는 인간 항체이다. 인간화된 항체는 그 결합 활성 및/또는 생물학적 활성이 현저하게 변하지 않은 동일하거나 다른 종으로부터의 보존적 아미노산 치환 또는 비천연 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 항체는 비인간 면역글로불린으로부터 유래하는 최소 서열을 포함하는 키메라 항체이다.
인간화 기술에는 'CDR 이식방법', '유도 선택', '탈면역화', '재표면화 (resurfacing)'['베니어링 (veneering)'으로 알려짐], '복합 항체', '인간 스트링 콘텐츠 최적화 (인간 String Content Optimisation)' 및 프레임워크 셔플링 (framework shuffling)이 포함된다.
CDR 이식( grafting )
이 기술에서, 인간화된 항체는, 수여자 항체의 상보적 결정 영역 (CDR) 유래의 잔기가 목적 특성을 가진 마우스, 래트, 낙타, 소, 염소 또는 토끼와 같은 비인간 종 (공여자 항체)의 CDR 유래의 잔기에 의해 교체된다 (결과적으로, 비인간 CDR이 인간 프레임워크로 이식됨). 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역 (FR) 잔기는 대응하는 비인간 잔기에 의해 대체된다 (이것은 예를 들어 특정 FR 잔기가 항원 결합에 현저한 영향을 갖는 경우, 일어날 수 있음).
또한, 인간화된 항체는 도입된 CDR 또는 프레임워크 서열 또는 수용 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 추가로 정제하고 항체 성능을 극대화하기 위한 변형이 이루어진다. 따라서, 일반적으로 인간화된 항체는, 적어도 하나, 일 측면에서는 두 개의 가변 도메인 전부를 포함할 것이고, 이는 초과변 루프의 전부 또는 실질적으로 전부가 비인간 면역글로불린에 해당하고, FR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부가 인간 면역글로불린 서열이다. 인간화된 항체는 또한 선택적으로, 인간 면역글로불린 또는 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다.
유도된 선택
이 방법은, 인간 VH 또는 VL 라이브러리와 특정 에피토프에 특이적인 주어진 비인간 항체의 VH 또는 VL 도메인을 조합시키는 단계로 구성되고, 특이적 인간 V 도메인을 목적 항원에 대해 선택한다. 그후 이렇게 선택된 인간 VH를 VL 라이브러리와 조합시켜서, 완전한 인간 VH×VL 조합을 생성시킨다. 이 방법은 문헌 [Nature Biotechnology (N.Y.) 12, (1994) 899-903]에 개시되어 있다.
복합 항체
이 방법에서, 인간 항체 유래의 아미노산 서열의 2 이상의 절편을 최종 항체분자 내에서 조합시킨다. 이것은 최종 복합 항체 V 영역에서 인간 T 세포 에피토프를 제한하거나 회피하는 조합에서, 다중 인간 VH 및 VL 서열 절편을 조합시킴으로써 작제된다. 필요한 경우, T 세포 에피토프를 회피하는 대안적 절편으로 T 세포 에피토프를 인코딩하거나 그 원인이 되는 V 영역 절편을 교환함으로써, T 세포 에피토프를 제한하거나 회피한다. 이 방법은 US 2008/0206239 A1에 개시되어 있다.
탈면역화
이 방법은 치료 항체 (또는 다른분자)의 V 영역으로부터 인간 (또는 다른 제2 종)의 T-세포 에피토프의 제거 단계를 포함한다. 치료 항체 V-영역 서열은, 예를 들어 MHC-결합 모티프의 데이타 베이스와 비교하여, MHC 클래스 Ⅱ-결합 모티프의 존재에 대해분석한다 (이러한 "모티프" 데이타베이스는 www.wehi.edu.au에서 관리함). 대안적으로, MHC 클래스 Ⅱ-결합 모티프는 문헌 [Altuvia 등. (J. Mol. Biol. 249 244-250 (1995))]에서 Altuvia 등에 의해 고안된 것과 같은 컴퓨터 스레딩 (threading) 방법을 사용하여 확인할 수 있다; 이들 방법에서, V-영역 서열로부터의 연속 중첩 펩티드를 MHC 클래스 Ⅱ 단백질에 대한 결합 에너지에 대해 시험한다. 그후 이 데이타는 양쪽친매성, 로트바드(Rothbard) 모티프 및 카텝신 B 및 다른 처리 효소의 절단 부위와 같이, 성공적으로 제공된 펩티드와 관련된 다른 서열 특성에 대한 정보와 결합시킬 수 있다.
가능한 제2종 (예를 들어, 인간) T-세포 에피토프가 확인된 경우, 이것은 하나 이상의 아미노산 변경에 의해 제거된다. 변형된 아미노산은 일반적으로 T-세포 에피토프 자체 내에 존재하고, 상기 단백질의 일차 또는 이차 구조의 관점에서 에피토프에 인접 위치할 수 있다 (그리고 따라서, 일차 구조에서 인접할 수 없음). 가장 일반적으로는, 상기 변경은 치환 방식에 의하나, 일부 경우, 아미노산 부가 또는 결실이 더욱 적절할 수 있다.
모든 변경은 재조합 DNA 기술에 의해 성취될 수 있으며, 이에 따라 위치 선택적 돌연변이와 같은 잘 성취된 방법을 이용하여 재조합 숙주로부터 발현에 의해 최종분자를 제조할 수 있다. 그러나, 단백질 화학 또는 분자성 변경의 임의의 다른 방법이 또한 가능하다.
재표면화 (Resurfacing)
이 방법은:
(a) 비인간 항체 가변 영역의 3차원 모델을 작제함으로써, 비인간 (예를 들어, 설치류) 항체 (또는 이의 단편)의 가변 영역의 형태 구조를 결정하는 단계;
(b) 중쇄 및 경쇄 프레임워크 위치의 일 세트를 제공하기 위해, 상당수의 비인간 및 인간 항체 가변 영역 중쇄 및 경쇄의 x-선 결정 구조로부터의 접근성 상대분포를 사용하여 서열 정렬을 생성하는 단계로서, 정렬 위치가 상당수의 비인간 항체 중쇄 및 경쇄의 98%에서 확인되는 것인 단계;
(c) 단계 (b)에서 생성된 프레임워크 위치 세트를 이용하여 경쇄 및 중쇄 표면 노출 아미노산 잔기의 일 세트를 인간화될 비인간 항체에 대해 정의하는 단계;
(d) 단계 (c)에서 정의된 표면 노출 아미노산 잔기의 세트와 가장 근접하게 동일한 중쇄 및 경쇄 표면 노출 아미노산 잔기의 일 세트를 인간 항체 아미노산 서열로부터 확인하는 단계로서, 인간 항체로부터의 중쇄 및 경쇄가 자연적으로 쌍을 이루거나 또는 이루지 않는 것인, 단계;
(e) 인간화될 비인간 항체의 아미노산 서열에서, 단계 (c)에서 확인된 중쇄 및 경쇄 표면 노출 아미노산 잔기의 세트를 단계 (d)에서 확인된 중쇄 및 경쇄 표면 노출 아미노산 잔기의 세트와 치환하는 단계;
(f) 단계 (e)에서 구현된 치환에 의해 생성된 비인간 항체의 가변 영역의 3차원 모델을 작제하는 단계;
(g) 단계 (a) 및 (f)에서 작제된 3차원 모델을 비교함으로써, 인간화될 비인간 항체의 상보성 결정 영역의 임의의 잔기의 임의의 원자의 5 옹스트롬 내인 단계 (c) 또는 (d)에서 확인된 세트로부터의 임의의 아미노산 잔기를 확인하는 단계; 및
(h) 단계 (g)에서 확인된 임의의 잔기를 인간으로부터 본래의 비인간 아미노산 잔기로 변경하여, 표면 노출 아미노산 잔기의 비인간 항체 인간화 세트를 정의하는 단계로서; 단, 단계 (a)를 첫 번째로 수행할 필요는 없으나, 단계 (g) 전에는 수행해야 하는 것인, 단계를 포함한다.
초인간화 ( Superhumanization )
이 방법에서는 기능성 인간 생식세포 유전자 레퍼토리를 비인간 서열과 비교한다. 비인간 서열과 동일하거나 또는 매우 유사한 표준 구조를 인코딩하는 인간 유전자를 선택한다. CDR 내의 상동성이 큰 이렇게 선택된 인간 유전자를 FR 기증체로 선택한다. 마지막으로, 비인간 CDR을 인간 FR에 이식한다. 이 방법은 특허 WO 2005/079479 A2에 개시되어 있다.
인간 스트링 콘텐츠 최적화
이 방법에서는 인간 생식세포 유전자의 레퍼토리와 비인간 (예를 들어, 마우스) 서열을 비교하고, 인간 스트리밍 콘텐츠 (HSC)로서 차이를 기록하는데, 이로서 가능한 MHC/T-세포 에피토프의 수준에서 서열을 정량화한다. 그후, 전역 동일성 측정을 사용하기보다는 HSC를 극대화함으로써 표적 서열을 인간화하여, 다중 다기능 인간화 변이체를 생성시킨다 (문헌 [Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998]에 개시됨).
프레임워크 셔플링
비인간 항체의 CDR을 모든 공지된 중쇄 및 경쇄 인간 생식세포 유전자 프레임워크를 포함하는 cDNA 풀로 프레임내 (in-frame) 융합시킨다. 그후 예를 들어, 파지 디스플레이 항체 라이브러리의 패닝 (panning)에 의해 인간화된 항체를 선택한다. 이것은 문헌 [Methods 36, 43-60 (2005)]에 개시되어 있다.
세포 결합제의 예는 본 명세서에 포함되는 WO　2007/085930에서 사용하기 위해 기술된 제제를 포함한다.
본 발명의 실시형태에서 사용하기 위한 종양-관련 항원 및 동족 항체가 하기에서 제시된다.
종양-관련 항원 및 동족 항체
(1) BMPR1B (뼈 형태 형성 단백질 수용체-유형 IB )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001203
유전자은행 버전 NM_001203.2 GI:169790809
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:06 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001194
유전자은행 버전 NP_001194.1 GI:4502431
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:06 PM
교차 참조
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(2) E16 ( LAT1 , SLC7A5 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_003486
유전자은행 버전 NM_003486.5 GI:71979931
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 27일 12:06 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_003477
유전자은행 버전 NP_003477.4 GI:71979932
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 27일 12:06 PM
교차 참조
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(3) STEAP1 (전립샘의 6개의 막투과성 상피 항원)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_012449
유전자은행 버전 NM_012449.2 GI:22027487
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 9일 02:57 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_036581
유전자은행 버전 NP_036581.1 GI:9558759
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 9일 02:57 PM
교차 참조
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(4) 0772P (CA125, MUC16 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF361486
유전자은행 버전 AF361486.3 GI:34501466
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 07:56 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAK74120
유전자은행 버전 AAK74120.3 GI:34501467
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 07:56 AM
교차 참조
J. Biol . Chem . 276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004/045553 (청구항 14); WO2002/92836 (청구항 6; 도 12); WO2002/83866 (청구항 15; 페이지 116-121); US 2003/124140 (실시예 16); GI:34501467;
(5) MPF ( MPF , MSLN , SMR , 거핵세포 효력 증가 인자, 메소텔린 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_005823
유전자은행 버전 NM_005823.5 GI:293651528
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:47 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_005814
유전자은행 버전 NP_005814.2 GI:53988378
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:47 PM
교차 참조
Yamaguchi, N., 등 Biol . Chem . 269 (2), 805-808 (1994), Proc . Natl . Acad. Sci. U.S.A. 96 (20):11531-11536 (1999), Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 93 10 (1):136-140 (1996), J. Biol . Chem . 270 (37):21984-21990 (1995)); WO2003/101283 (청구항 14); (WO2002/102235 (청구항 13; 페이지 287-288); WO2002/101075 (청구항 4; 페이지 308- 309); WO2002/71928 (페이지 320-321); WO94/10312 (페이지 52-57); IM:601051.
(6) Napi3b ( NAPI -3B, NPTⅡb, SLC34A2 , 용질 담체 패밀리 34 (소듐 포스페이트), 구성원 2, 유형 Ⅱ 나트륨-의존적 인산염 수송체 3b)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_006424
유전자은행 버전 NM_006424.2 GI:110611905
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 22일 03:39 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_006415
유전자은행 버전 NP_006415.2 GI:110611906
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 22일 03:39 PM
교차 참조
J. Biol . Chem . 277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., 등 (1999) Biochem . Biophys . Res . Commun . 258 (3):578-582); WO2004/022778 (청구항 2); EP1394274 (실시예 11); WO2002/102235 (청구항 13; 페이지 326); EP0875569 (청구항 1; 페이지 17-19); WO2001/57188 (청구항 20; 페이지 329); WO2004/032842 (실시예 IV); WO2001/75177 (청구항 24; 페이지 139-140); MIM:604217.
(7) 세마 5b ( FLJ10372 , KIAA1445 , Mm.42015, SEMA5B , SEMAG , 세마포린 5b Hlog, 세마 도메인, 7개의 트롬보스폰딘 반복체 (유형 1 및 유형 1-형), 막투과성 도메인 ( TM ) 및 짧은 세포질 도메인, ( 세마포린 ) 5B)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AB040878
유전자은행 버전 AB040878.1 GI:7959148
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2006년 8월 2일 05:40 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 BAA95969
유전자은행 버전 BAA95969.1 GI:7959149
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2006년 8월 2일 05:40 PM
교차 참조
Nagase T., 등 (2000) DNA Res . 7 (2):143-150); WO2004/000997 (청구항 1); WO2003/003984 (청구항 1); WO2002/06339 (청구항 1; 페이지 50); WO2001/88133 (청구항 1; 페이지 41-43, 48-58); WO2003/054152 (청구항 20); WO2003/101400 (청구항 11); 수탁번호: Q9P283; Genew; HGNC:10737
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 유전자)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AY358628
유전자은행 버전 AY358628.1 GI:37182377
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2009년 12월 1일 04:15 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAQ88991
유전자은행 버전 AAQ88991.1 GI:37182378
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2009년 12월 1일 04:15 AM
교차 참조
Ross 등 (2002) Cancer Res . 62:2546-2553; US 2003/129192 (청구항 2); US 2004/044180 (청구항 12); US 2004/044179 (청구항 11); US 2003/096961 (청구항 11); US 2003/232056 (실시예 5); WO2003/105758 16 (청구항 12); US 2003/206918 (실시예 5); EP1347046 (청구항 1); WO2003/025148 (청구항 20); GI:37182378.
(9) ETBR ( 엔도텔린 유형 B 수용체)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AY275463
유전자은행 버전 AY275463.1 GI:30526094
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 02:26 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAP32295
유전자은행 버전 AAP32295.1 GI:30526095
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 02:26 AM
교차 참조
Nakamuta M., 등 Biochem . Biophys . Res . Commun . 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., 등 Biochem . Biophys . Res . Commun . 178, 248-255, 1991; Arai H., 등 Jpn . Circ. J. 56, 1303-1307, 1992; Arai H., 등 J. Biol . Chem . 268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., 등 Biochem . Biophys . Res . Commun . 178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., 등 J. Biol . Chem . 268, 3873-3879, 1993; Haendler B., 등 J. Cardiovasc . Pharmacol . 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., 등 Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., 등 J. Clin . Endocrinol . Metab . 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., 등 Biol . Chem . 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., 등 Am . J. Med . Genet . 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., 등 Eur . J. Hum . Genet . 5, 180-185, 1997; Puffenberger 예를 들어, 등 Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., 등, Hum . Mol . Genet . 4, 2407 2409, 1995; Auricchio A., 등 Hum . Mol . Genet . 5:351-354, 1996; Amiel J., 등 Hum . Mol . Genet . 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., 등 Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J., 등 Hum. Genet. 103, 145-148, 1998; Fuchs S., 등 Mol . Med . 7, 115-124, 2001; Pingault V., 등 (2002) Hum . Genet . 111, 198-206; WO2004/045516 (청구항 1); WO2004/048938 (실시예 2); WO2004/040000 (청구항 151); WO2003/087768 (청구항 1); WO2003/016475 (청구항 1); WO2003/016475 (청구항 1); WO2002/61087 (도 1); WO2003/016494 (도 6); WO2003/025138 (청구항 12; 페이지 144); WO2001/98351 (청구항 1; 페이지 124-125); EP0522868 (청구항 8; 도 2); WO2001/77172 (청구항 1; (페이지 297-299); US 2003/109676; US6518404 (도 3); US5773223 (청구항 1a; Col 31-34); WO2004/001004.
(10) MSG783 (RNF124, 가상 단백질 FLJ20315)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_017763
유전자은행 버전 NM_017763.4 GI:167830482
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 22일 12:34 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_060233
유전자은행 버전 NP_060233.3 GI:56711322
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 22일 12:34 AM
교차 참조
WO2003/104275 (청구항 1); WO2004/046342 (실시예 2); WO2003/042661 (청구항 12); WO2003/083074 (청구항 14; 페이지 61); WO2003/018621 (청구항 1); WO2003/024392 (청구항 2; 도 93); WO2001/66689 (실시예 6); LocusID:54894.
(11) STEAP2 ( HGNC _8639, IPCA -1, PCANAP1 , STAMP1 , STEAP2 , STMP , 전립샘 암 관련 유전자 1, 전립샘 암 관련 단백질 1, 전립샘 2의 6개의 막투과성 상피 항원, 6개의 막투과성 전립샘 단백질)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF455138
유전자은행 버전 AF455138.1 GI:22655487
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 01:54 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAN04080
유전자은행 버전 AAN04080.1 GI:22655488
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 01:54 AM
교차 참조
Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); WO2003/087306; US 2003/064397 (청구항 1; 도 1); WO2002/72596 (청구항 13; 페이지 54-55); WO2001/72962 (청구항 1; 도 4B); WO2003/104270 (청구항 11); WO2003/104270 (청구항 16); US 2004/005598 (청구항 22); WO2003/042661 (청구항 12); US 2003/060612 (청구항 12; 도 10); WO2002/26822 (청구항 23; 도 2); WO2002/16429 (청구항 12; 도 10); GI:22655488.
(12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041 , TRPM4 , TRPM4B , 일과성 수용체 전위 양이온 채널, 서브패밀리 M, 구성원 4)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_017636
유전자은행 버전 NM_017636.3 GI:304766649
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 29일 11:27 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_060106
유전자은행 버전 NP_060106.2 GI:21314671
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 29일 11:27 AM
교차 참조
Xu, X.Z., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol . Chem . 278 (33):30813-30820 (2003)); US 2003/143557 (청구항 4); WO2000/40614 (청구항 14; 페이지 100-103); WO2002/10382 (청구항 1; 도 9A); WO2003/042661 (청구항 12); WO2002/30268 (청구항 27; 페이지 391); US 2003/219806 (청구항 4); WO2001/62794 (청구항 14; 도 1A-D); MIM:606936.
(13) CRIPTO ( CR , CR1, CRGF , CRIPTO , TDGF1 , 기형암종 -유래 성장 인자)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_003212
유전자은행 버전 NM_003212.3 GI:292494881
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:27 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_003203
유전자은행 버전 NP_003203.1 GI:4507425
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:27 PM
교차 참조
Ciccodicola, A., 등 EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am . J. Hum . Genet. 49 (3):555-565 (1991)); US 2003/224411 (청구항 1); WO2003/083041 (실시예 1); WO2003/034984 (청구항 12); WO2002/88170 (청구항 2; 페이지 52-53); WO2003/024392 (청구항 2; 도 58); WO2002/16413 (청구항 1; 페이지 94-95, 105); WO2002/22808 (청구항 2; 도 1); US5854399 (실시예 2; Col 17-18); US5792616 (도 2); MIM:187395.
(14) CD21 (CR2 ( 보체 수용체 2) 또는 C3DR ( C3d / 앱스타인 바( Epstein Barr) 바이러스 수용체) 또는 Hs.73792)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M26004
유전자은행 버전 M26004.1 GI:181939
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA35786
유전자은행 버전 AAA35786.1 GI:181940
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
교차 참조
Fujisaku 등 (1989) J. Biol . Chem . 264 (4):2118-2125); Weis J.J., 등 J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 84, 9194-9198, 1987; Barel M., 등 Mol . Immunol . 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., 등 (1993) J. Immunol . 150, 5311-5320; WO2004/045520 (실시예 4); US 2004/005538 (실시예 1); WO2003/062401 (청구항 9); WO2004/045520 (실시예 4); WO91/02536 (도 9.1-9.9); WO2004/020595 (청구항 1); 수탁: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786.1.
(15) CD79b ( CD79B , CD79β IGb ( 면역글로불린 관련 베타), B29)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_000626
유전자은행 버전 NM_000626.2 GI:90193589
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일 01:53 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_000617
유전자은행 버전 NP_000617.1 GI:11038674
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일, 01:53 PM
교차 참조
Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller 등 (1992) Eur . J. Immunol . 22 (6):1621-1625); WO2004/016225 (청구항 2, 도 140); WO2003/087768, US 2004/101874 (청구항 1, 페이지 102); WO2003/062401 (청구항 9); WO2002/78524 (실시예 2); US 2002/150573 (청구항 5, 페이지 15); US5644033; WO2003/048202 (청구항 1, 페이지 306 및 309); WO 99/58658, US6534482 (청구항 13, 도 17A/B); WO2000/55351 (청구항 11, 페이지 1145-1146); MIM:147245
(16) FcRH2 ( IFGP4 , IRTA4 , SPAP1A (SH2 도메인 함유 포스파타아제 앵커 단백질 1a), SPAP1B, SPAP1C)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_030764
유전자은행 버전 NM_030764.3 GI:227430280
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 30일 12:30 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_110391
유전자은행 버전 NP_110391.2 GI:19923629
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 30일 12:30 AM
교차 참조
AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., 등 (2001) Biochem . Biophys . Res . Commun. 280 (3):768-775; WO2004/016225 (청구항 2); WO2003/077836; WO2001/38490 (청구항 5; 도 18D-1-18D-2); WO2003/097803 (청구항 12); WO2003/089624 (청구항 25); MIM:606509.
(17) HER2 ( ErbB2 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M11730
유전자은행 버전 M11730.1 GI:183986
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA75493
유전자은행 버전 AAA75493.1 GI:306840
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
교차 참조
Coussens L., 등 Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., 등 Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., 등 J. Cell Biol . 165, 869 880, 2004; Kuhns J.J., 등 J. Biol . Chem . 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., 등 Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., 등 (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004/048938 (실시예 2); WO2004/027049 (도 1I); WO2004/009622; WO2003/081210;
WO2003/089904 (청구항 9); WO2003/016475 (청구항 1); US2003/118592; WO2003/008537 (청구항 1); WO2003/055439 (청구항 29; 도 1a-b); WO2003/025228 (청구항 37; 도 5c);
WO2002/22636 (실시예 13; 페이지 95-107); WO2002/12341 (청구항 68; 도 7);
WO2002/13847 (페이지 71-74); WO2002/14503 (페이지 114-117); WO2001/53463 (청구항 2; 페이지 41-46); WO2001/41787 (페이지 15); WO2000/44899 (청구항 52; 도 7); WO2000/20579 (청구항 3; 도 2); US5869445 (청구항 3; Col 31-38); WO9630514 (청구항 2; 페이지 56-61);
EP1439393 (청구항 7); WO2004/043361 (청구항 7); WO2004/022709; WO2001/00244
(실시예 3; 도 4); 수탁: P04626; EMBL; M11767; AAA35808.1. EMBL; M11761;
AAA35808.1
항체
Abbott: US 20110177095
예를 들어, 서열 번호 3 (CDR-H1), 서열 번호 4 (CDR-H2), 서열 번호 5 (CDR-H3), 서열 번호 104 및/또는 서열 번호 6 (CDR-L1), 서열 번호 7 (CDR-L2), 및 서열 번호 8 (CDR-L3)의 아미노산 서열을 갖는 CDR에 전체적으로 적어도 80% 서열 동일성을 갖는 CDR 포함 항체, 여기서 항-HER2 항체 또는 항-HER2 결합 단편은 서열 번호 1의 VH 및 서열 번호 2의 VL을 갖는 항체와 비교하여, 감소된 면역원성을 갖는다.
Biogen: US 20100119511
예를 들어, ATCC 수탁 번호: PTA-10355, PTA-10356, PTA-10357, PTA-10358
예를 들어, BⅡB71F10 (서열 번호 11, 13), BⅡB69A09 (서열 번호 15, 17); BⅡB67F10 (서열 번호19, 21); BⅡB67F11 (서열 번호 23, 25), BⅡB66A12 (서열 번호 27, 29), BⅡB66C01 (서열 번호 31, 33), BⅡB65C10 (서열 번호 35, 37), BⅡB65H09 (서열 번호 39, 41) 및 BⅡB65B03 (서열 번호 43, 45)로 이루어진 군으로부터 선택되는 항체로부터의 모두 6개의 CDR 또는 상기 CDR로부터 2개 이하의 변경을 갖거나 또는 동일한 CDR을 포함하는 HER2에 결합하는 정제된 항체분자.
헤르셉틴 (Genentech) - US 6,054,297; ATCC 수탁 번호 CRL-10463 (Genentech)
페르투주맙 (Genentech)
US 20110117097
예를 들어, 서열 번호 15&16, 서열 번호 17&18, 서열 번호 23&24 & ATCC 수탁 번호 HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12697 참조.
US 20090285837
US 20090202546
예를 들어, ATCC 수탁 번호: HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12698.
US 20060088523
- 예를 들어, ATCC 수탁 번호: HB-12215, HB-12216.
- 예를 들어, 각각 서열 번호 3 및 4의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체.
- 예를 들어, 서열 번호 16 및 24로부터 선택되는 중쇄 아미노산 서열 및 서열 번호 15 및 23으로부터 선택되는 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체.
US 20060018899
- 예를 들어, ATCC 수탁 번호: (7C2) HB-12215, (7F3) HB-12216, (4D5) CRL-10463, (2C4) HB-12697.
- 예를 들어, 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 이의 탈아미드화 및/또는 산화 변이체.
US 2011/0159014
- 예를 들어, 서열 번호 1의 초가변 영역을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체.
- 예를 들어, 서열 번호 2의 초가변 영역을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는 항체.
US 20090187007
글리코토프: TrasGEX 항체 http://www.glycotope.com/pipeline
예를 들어, 문헌 [International Joint　Cancer　Institute and Changhai Hospital　Cancer　Cent: HMTI-Fc Ab - Gao J., 등 BMB Rep. 2009 Oct 31;42(10):636-41] 참조.
Symphogen: US 20110217305
Union Stem cell & Gene Engineering, China - Liu HQ., 등 Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 2010 May; 26(5):456-8.
(18) NCA ( CEACAM6 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M18728
유전자은행 버전 M18728.1 GI:189084
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:48 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA59907
유전자은행 버전 AAA59907.1 GI:189085
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:48 AM
교차 참조
Barnett T., 등 Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., 등 Biochem . Biophys. Res. Commun. 150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99:16899-16903, 2002; WO2004/063709; EP1439393 (청구항 7); WO2004/044178 (실시예 4); WO2004/031238; WO2003/042661 (청구항 12); WO2002/78524 (실시예 2); WO2002/86443 (청구항 27; 페이지 427); WO2002/60317 (청구항 2); 수탁: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915.1.
EMBL; M18728.
(19) MDP ( DPEP1 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 BC017023
유전자은행 버전 BC017023.1 GI:16877538
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 3월 6일 01:00 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAH17023
유전자은행 버전 AAH17023.1 GI:16877539
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 3월 6일 01:00 PM
교차 참조
Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003/016475 (청구항 1); WO2002/64798 (청구항 33; 페이지 85- 87); JP05003790 (도 6-8); WO99/46284 (도 9); MIM:179780.
(20) IL20R -알파 ( IL20Ra , ZCYTOR7 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF184971
유전자은행 버전 AF184971.1 GI:6013324
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 10:00 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAF01320
유전자은행 버전 AAF01320.1 GI:6013325
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 10:00 PM
교차 참조
Clark H.F., 등 Genome Res . 13, 2265-2270, 2003; Mung모든A.J., 등 Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., 등 Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., 등 J. Immunol . 167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J., 등 J. Biol . Chem . 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., 등 (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., 등 (2004) J. Immunol . 172, 2006-2010; EP1394274 (실시예 11); US 2004/005320 (실시예 5); WO2003/029262 (페이지 74-75); WO2003/002717 (청구항 2; 페이지 63); WO2002/22153 (페이지 45-47); US 2002/042366 (페이지 20-21); WO2001/46261 (페이지 57-59); WO2001/46232 (페이지 63-65); WO98/37193 (청구항 1; 페이지 55-59); 수탁: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320.1.
(21) 브레비칸 ( BCAN , BEHAB )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF229053
유전자은행 버전 AF229053.1 GI:10798902
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 12:58 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAG23135
유전자은행 버전 AAG23135.1 GI:10798903
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 12:58 AM
교차 참조
Gary S.C., 등 Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., 등 Genome Res . 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99, 16899-16903, 2002; US 2003/186372 (청구항 11); US 2003/186373 (청구항 11); US 2003/119131 (청구항 1; 도 52); US 2003/119122 (청구항 1; 도 52); US 2003/119126 (청구항 1); US 2003/119121 (청구항 1; 도 52); US 2003/119129 (청구항 1); US 2003/119130 (청구항 1); US 2003/119128 (청구항 1; 도 52); US 2003/119125 (청구항 1); WO2003/016475 (청구항 1); WO2002/02634 (청구항 1)
(22) EphB2R ( DRT , ERK , Hek5 , EPHT3 , Tyro5 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_004442
유전자은행 버전 NM_004442.6 GI:111118979
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 8일 04:43 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_004433
유전자은행 버전 NP_004433.2 GI:21396504
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 8일 04:43 PM
교차 참조
Chan,J. 및 Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (청구항 12); WO200053216 (청구항 1; 페이지 41); WO2004065576 (청구항 1); WO2004020583 (청구항 9); WO2003004529 (페이지 128-132); WO200053216 (청구항 1; 페이지 42); MIM:600997.
(23) ASLG659 ( B7h )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AX092328
유전자은행 버전 AX092328.1 GI:13444478
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 1월 26일 07:37 AM
교차 참조
US 2004/0101899 (청구항 2); WO2003104399 (청구항 11); WO2004000221 (도 3); US 2003/165504 (청구항 1); US 2003/124140 (실시예 2); US 2003/065143 (도 60); WO2002/102235 (청구항 13; 페이지 299); US 2003/091580 (실시예 2); WO2002/10187 (청구항 6; 도 10); WO2001/94641 (청구항 12; 도 7b); WO2002/02624 (청구항 13; 도 1A-1B); US 2002/034749 (청구항 54; 페이지 45-46); WO2002/06317 (실시예 2; 페이지 320-321, 청구항 34; 페이지 321-322); WO2002/71928 (페이지 468-469); WO2002/02587 (실시예 1; 도 1); WO2001/40269 (실시예 3; 페이지 190-192); WO2000/36107 (실시예 2; 페이지 205-207); WO2004/053079 (청구항 12); WO2003/004989 (청구항 1); WO2002/71928 (페이지 233-234, 452-453); WO 01/16318.
(24) PSCA (전립샘 줄기 세포 항원 전구체)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AJ297436
유전자은행 버전 AJ297436.1 GI:9367211
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 1일 11:25 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CAB97347
유전자은행 버전 CAB97347.1 GI:9367212
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 1일 11:25 AM
교차 참조
Reiter R.E., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 95, 1735-1740, 1998; Gu Z., 등 Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem . Biophys . Res . Commun . (2000) 275(3):783-788; WO2004/022709; EP1394274 (실시예 11); US 2004/018553 (청구항 17); WO2003/008537 (청구항 1); WO2002/81646 (청구항 1; 페이지 164); WO2003/003906 (청구항 10; 페이지 288); WO2001/40309 (실시예 1; 도 17); US 2001/055751 (실시예 1; 도 1b); WO2000/32752 (청구항 18; 도 1); WO98/51805 (청구항 17; 페이지 97); WO98/51824 (청구항 10; 페이지 94); WO98/40403 (청구항 2; 도 1B); 수탁: O43653; EMBL; AF043498; AAC39607.1
(25) GEDA
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AY260763
유전자은행 버전 AY260763.1 GI:30102448
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 02:24 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAP14954
유전자은행 버전 AAP14954.1 GI:30102449
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 02:24 AM
교차 참조
AP14954 지방종 HMGIC 융합-상대유사(partnerlike) 단백질 /pid=AAP14954.1 - Homo sapiens (인간); WO2003/054152 (청구항 20); WO2003/000842 (청구항 1); WO2003/023013 (실시예 3, 청구항 20); US 2003/194704 (청구항 45); GI:30102449;
(26) BAFF -R (B 세포 -활성 인자 수용체, BLyS 수용체 3, BR3)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF116456
유전자은행 버전 AF116456.1 GI:4585274
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 09:44 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAD25356
유전자은행 버전 AAD25356.1 GI:4585275
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 09:44 PM
교차 참조
BAFF 수용체 /pid=NP_443177.1 - Homo sapiens: Thompson, J.S., 등 Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (실시예; 페이지 32-33); WO2003/014294 (청구항 35; 도 6B); WO2003/035846 (청구항 70; 페이지 615-616); WO2002/94852 (Col 136-137); WO2002/38766 (청구항 3; 페이지 133); WO2002/24909 (실시예 3; 도 3); MIM:606269; NP_443177.1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (B-세포 수용체 CD22-B 동형 단백질, BL -CAM, Lyb -8, Lyb8 , SIGLEC-2, FLJ22814 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AK026467
유전자은행 버전 AK026467.1 GI:10439337
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2006년 9월 11일 11:24 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 BAB15489
유전자은행 버전 BAB15489.1 GI:10439338
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2006년 9월 11일 11:24 PM
교차 참조
Wilson 등 (1991) J. Exp . Med . 173:137-146; WO2003/072036 (청구항 1; 도 1); IM:107266; NP_001762.1; NM_001771_1.
(27a) CD22 ( CD22분자 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 X52785
유전자은행 버전 X52785.1 GI:29778
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:09 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CAA36988
유전자은행 버전 CAA36988.1 GI:29779
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:09 AM
교차 참조
Stamenkovic I. 등., Nature 345 (6270), 74-77 (1990)
기타 정보
공식 기호:　CD22
기타 별칭:　SIGLEC-2, SIGLEC2
기타 명칭:　B-세포 수용체　CD22; B-림프구 세포 부착분자; BL-CAM;　CD22　항원; T-세포 표면 항원 Leu-14; 시알산 결합 Ig-형 렉틴 2; 시알산-결합 Ig-형 렉틴 2
항체
G5/44 (이노투주맙): DiJoseph JF.,등 Cancer Immunol Immunother . 2005 Jan;54(1):11-24.
에프라투주맙- Goldenberg DM., 등 Expert Rev Anticancer Ther . 6(10): 1341-53, 2006.
(28) CD79a ( CD79A , CD79알파 ), 면역글로불린-관련 알파, B 세포-특이적 단백질(Ig 베타 ( CD79B )와 공유적으로 상호작용하고, 표면에서 Ig M 분자와 복합체 형성하고, B-세포분화에 관여하는 신호를 전달함), pI: 4.84, MW: 25028 TM: 2
[P] 유전자 염색체: 19q13 .2).
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001783
유전자은행 버전 NM_001783.3 GI:90193587
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일 01:48 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001774
유전자은행 버전 NP_001774.1 GI:4502685
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일 01:48 PM
교차 참조
WO2003/088808, US 2003/0228319; WO2003/062401 (청구항 9); US 2002/150573 (청구항 4, 페이지 13-14); WO99/58658 (청구항 13, 도 16); WO92/07574 (도 1); US5644033; Ha 등 (1992) J. Immunol . 148(5):1526-1531; Muller 등 (1992) Eur . J. Immunol. 22:1621-1625; Hashimoto 등 (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme 등 (1992) Clin . Exp . Immunol . 90(1):141-146; Yu 등 (1992) J. Immunol . 148(2) 633-637; Sakaguchi 등 (1988) EMBO J. 7(11):3457-3464
(29) CXCR5 ( 버킷 림프종 수용체 1, G 단백질-결합 수용체( CXCL13 케모카인 에 의해 활성화, 림프구 이동 및 체액성 방어에서 기능, HIV -2 감염 및 아마도 AIDS , 림프종, 골수종, 및 백혈병의 진행에서 역할 수행); 372 aa , pI : 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P] 유전자 염색체: 11q23 .3,
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001716
유전자은행 버전 NM_001716.4 GI:342307092
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:49 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001707
유전자은행 버전 NP_001707.1 GI:4502415
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:49 PM
교차 참조
WO2004/040000; WO2004/015426; US 2003/105292 (실시예 2); US6555339 (실시예 2); WO2002/61087 (도 1); WO2001/57188 (청구항 20, 페이지 269); WO2001/72830 (페이지 12-13); WO2000/22129 (실시예 1, 페이지 152-153, 실시예 2, 페이지 254-256); WO99/28468 (청구항 1, 페이지 38); US5440021 (실시예 2, col 49-52); WO94/28931 (페이지 56-58); WO92/17497 (청구항 7, 도 5); Dobner et a (1992) Eur . J. Immunol . 22: 2795-2799; Barella 등 (1995) Biochem . J. 309:773-779
(30) HLA - DOB (베타 서브유니트의 MHC 클래스 Ⅱ분자 ( Ia 항원) (펩티드에 결합하고, CD4+ T 림프구 제공); 273 aa , pI : 6.56, MW: 30820.TM : 1 [P] 유전자 염색체: 6p21 .3)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_002120
유전자은행 버전 NM_002120.3 GI:118402587
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 8일 04:46 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_002111
유전자은행 버전 NP_002111.1 GI:4504403
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 8일 04:46 PM
교차 참조
Tonnelle 등 (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson 등 (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck 등 (1992) J. Mol . Biol . 228:433-441; Strausberg 등 (2002) Proc . Natl . Acad . Sci USA 99:16899- 16903; Servenius et a (1987) J. Biol . Chem . 262:8759-8766; Beck 등 (1996) J. Mol . Biol . 255:1-13; Naruse 등 (2002) Tissue Antigen 59:512-519; WO99/58658 (청구항 13, 도 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara 등 (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar 등 (1985) J. Biol . Chem. 260(26):14111-14119
(31) P2X5 (퓨린 수용체 P2X 리간드- 게이트 이온 채널 5, 세포 등ATP에 의한 게이트 이온 채널은 시냅스 전달 및 신경 발생에 포함될 수 있고, 결함은 특발 성 배뇨근 불안정을 초래할 수 있음); 422 aa), pI : 7.63, MW: 47206 TM : 1 [P] 유전자 염색체: 17p13.3).
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_002561
유전자은행 버전 NM_002561.3 GI:325197202
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 27일 12:41 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_002552
유전자은행 버전 NP_002552.2 GI:28416933
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 27일 12:41 AM
교차 참조
Le 등 (1997) FEBS Lett . 418(1-2):195-199; WO2004/047749; WO2003/072035 (청구항 10); Touchman 등 (2000) Genome Res . 10:165-173; WO2002/22660 (청구항 20); WO2003/093444 (청구항 1); WO2003/087768 (청구항 1); WO2003/029277 (페이지 82)
(32) CD72 (B-세포분화 항원 CD72, Lyb -2); 359 aa, pI : 8.66, MW: 40225, TM: 1 [P] 유전자 염색체: 9p13 .3).
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001782
유전자은행 버전 NM_001782.2 GI:194018444
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일 01:43 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001773
유전자은행 버전 NP_001773.1 GI:4502683
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일 01:43 PM
교차 참조
WO2004042346 (청구항 65); WO2003/026493 (페이지 51-52, 57-58); WO2000/75655 (페이지 105-106); Von Hoegen 등 (1990) J. Immunol . 144(12):4870-4877; Strausberg 등 (2002) Proc . Natl . Acad . Sci USA 99:16899-16903.
(33) LY64 (림프구 항원 64 (RP105), 류신 풍부 반복체 ( LRR ) 패밀리의 유형 I 막 단백질은 B-세포 활성 및 세포사멸을 조절하고, 기능의 손실은 전신 홍반성 낭창 환자에서 질환 활성의 증가와 관련됨); 661 aa, pI : 6.20, MW: 74147 TM : 1 [P] 유전자 염색체: 5q12).
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_005582
유전자은행 버전 NM_005582.2 GI:167555126
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:50 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_005573
유전자은행 버전 NP_005573.2 GI:167555127
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:50 PM
교차 참조
US 2002/193567; WO97/07198 (청구항 11, 페이지 39-42); Miura 등 (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura 등 (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003/083047; WO97/44452 (청구항 8, 페이지 57-61); WO2000/12130 (페이지 24-26).
(34) FcRH1 ( Fc 수용체-형 단백질 1, C2 유형 Ig-형 및 ITAM 도메인을 포함하는 면역글로불린 Fc 도메인의 추정 수용체는 B-림프구 분화에서 역할을 가질 수 있음); 429 aa , pI : 5.28, MW: 46925 TM : 1 [P] 유전자 염색체: 1q21 - 1q22 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_052938
유전자은행 버전 NM_052938.4 GI:226958543
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:43 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_443170
유전자은행 버전 NP_443170.1 GI:16418419
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:43 PM
교차 참조
WO2003/077836; WO2001/38490 (청구항 6, 도 18E-1-18-E-2); Davis 등 (2001) Proc. Natl . Acad . Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003/089624 (청구항 8); EP1347046 (청구항 1); WO2003/089624 (청구항 7).
(35) IRTA 2 (면역글로불린 슈퍼패밀리 수용체 전좌 관련 2, B 세포 발달 및 림프종 발달에서 가능한 역할을 갖는 추정 면역수용체; 전좌에 의한 유전자의 규제완화가 일부 B 세포 악성종양에서 발생함); 977 aa , pI : 6.88, MW: 106468, TM : 1 [P] 유전자 염색체: 1q21 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF343662
유전자은행 버전 AF343662.1 GI:13591709
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 01:16 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAK31325
유전자은행 버전 AAK31325.1 GI:13591710
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 01:16 AM
교차 참조
AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; 마우스: AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571.1; WO2003/024392 (청구항 2, 도 97); Nakayama 등 (2000) Biochem . Biophys . Res . Commun. 277(1):124-127; WO2003/077836; WO2001/38490 (청구항 3, 도 18B-1-18B-2).
(36) TENB2 ( TMEFF2 , 토모레귤린 , TPEF , HPP1 , TR, 추정 막투과성 프로테오글리칸 , 폴리스타틴 및 성장 인자의 EGF / 헤레굴린 패밀리 관련); 374 aa )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF179274
유전자은행 버전 AF179274.2 GI:12280939
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 01:05 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAD55776
유전자은행 버전 AAD55776.2 GI:12280940
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 11일 01:05 AM
교차 참조
NCBI 수탁: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI 유전자: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO2004/074320; JP2004113151; WO2003/042661; WO2003/009814; EP1295944 (페이지 69-70); WO2002/30268 (페이지 329); WO2001/90304; US 2004/249130; US 2004/022727; WO2004/063355; US 2004/197325; US 2003/232350; US 2004/005563; US 2003/124579; Horie 등 (2000) Genomics 67:146-152; Uchida 등 (1999) Biochem. Biophys . Res . Commun . 266:593-602; Liang 등 (2000) Cancer Res . 60:4907-12; Glynne-Jones 등 (2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178-84.
(37) PSMA - FOLH1 (엽산 가수분해효소 (전립샘-특이적 막 항원) 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M99487
유전자은행 버전 M99487.1 GI:190663
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:48 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA60209
유전자은행 버전 AAA60209.1 GI:190664
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:48 AM
교차 참조
Israeli R.S., 등 Cancer Res. 53 (2), 227-230 (1993)
기타 정보
공식 기호:　FOLH1
기타 별칭:　GIG27, FGCP, FOLH, GCP2, GCPⅡ, NAALAD1, NAALAdase, PSM,　PSMA, mGCP
기타 명칭:　N-아세틸화 알파-결합된 산 디펩티다아제 1; N-아세틸화-알파-결합된 산 디펩티다아제 I; NAALADase I; 세포 성장-억제 유전자 27 단백질; 폴릴폴리-감마-글루타메이트 카르복시펩티다아제; 글루타메이트 카르복실라아제 Ⅱ; 글루타메이트 카르복시펩티다아제 2; 글루타메이트 카르복시펩티다아제 Ⅱ; 막 글루타메이트 카르복시펩티다아제; 전립샘 특이적 막 항원 변이체 F; 프테로일폴리-감마-글루타메이트 카르복시펩티다아제
항체
US 7,666,425:
하기 ATCC 참조를 갖는 하이브리도마에 의한 항체 생성: ATCC 수탁 번호 HB-12101, ATCC 수탁 번호 HB-12109, ATCC 수탁 번호 HB-12127 및 ATCC 수탁 번호 HB-12126.
Proscan: 8H12, 3E11, 17G1, 29B4, 30C1 및 20F2로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 모노클로날 항체 (US 7,811,564; Moffett S., 등 Hybridoma ( Larchmt ). 2007 Dec; 26(6): 363-72).
Cytogen: 모노클로날 항체 7E11-C5 (ATCC 수탁 번호 HB 10494) 및 9H10-A4 (ATCC 수탁 번호 HB11430) - US 5,763,202
GlycoMimetics: NUH2 - ATCC 수탁 번호 HB 9762 (US 7,135,301)
인간 Genome Science: HPRAJ70 - ATCC 수탁 번호 97131 (US 6,824,993); 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 ("ATCC") 기탁 번호 97131로서 기탁된 cDNA 클론 (HPRAJ70)에 의해 인코딩되는 아미노산 서열
Medarex: 푸코실 잔기가 결여된 항-PSMA 항체 - US 7,875,278
마우스 항-PSMA 항체는 3F5.4G6, 3D7.1.1, 4E10-1.14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9, 3G6, 4C8B9, 및 모노클로날 항체를 포함한다. 3F5.4G6, 3D7.1.1, 4E10-1.14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9, 3G6 또는 4C8B9를 분비하는 하이브리도마는 공적으로 기탁되었고, U.S. 특허 제6,159,508호에 기술되었다. 관련 하이브리도마는 공적으로 기탁되었고, U.S. 특허 제6,107,090호에 기술되었다. 또한 J591의 인간화 버전을 포함하는 인간화 항-PSMA 항체는 PCT 공보 WO 02/098897에 더욱 상세히 기술되었다.
기타 마우스 항-인간 PSMA 항체는 mAb 107-1A4와 같이, 당업계에 개시되어 있다 (Wang, S. 등. (2001) Int. J. Cancer 92:871-876) 및 mAb 2C9 (Kato, K. et a. (2003) Int. J. Urol. 10:439-444).　
인간 항-PSMA 모노클로날 항체의 예는 2005년 2월 18일자로 제출된 미국 가특허 출원 일련번호 제60/654,125호, "human monoclonal Antibodies to Prostate Specific Membrane Antigen (PSMA)" 및 PCT 공보 WO 01/09192 및 WO 03/064606에 최초 기술된 바와 같이, 단리되고, 구조적으로 특성화된 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 및 1C3 항체를 포함한다. 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 및 1C3의 V.sub.H 아미노산 서열은 서열 번호 1-9에 각각 제시된다. 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 및 1C3의 V.sub.L 아미노산 서열은 서열 번호 10-18에 각각 제시된다.
기타 인간 항-PSMA 항체는 PCT 공보 WO 03/034903 및 미국 출원 번호 제 2004/0033229호에 개시된 항체를 포함한다.　
NW Biotherapeutics: 3F5로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하이브리도마 세포주. ATCC 수탁 번호 HB12060의 3F5.4G6, ATCC 수탁 번호 HB12309의 3D7-1.I., ATCC 수탁 번호 HB12310의 4E10-1.14, 3E11 (ATCC HB12488), 4D8 (ATCC HB12487), 3E6 (ATCC HB12486), 3C9 (ATCC HB12484), 2C7 (ATCC HB12490), 1G3 (ATCC HB12489), 3C4 (ATCC HB12494), 3C6 (ATCC HB12491), 4D4 (ATCC HB12493), 1G9 (ATCC HB12495), 5C8B9 (ATCC HB12492) 및 3G6 (ATCC HB12485) - US 6,150,508 참조.
PSMA Development Company/Progenics/Cytogen - Seattle Genetics: ATCC 수탁 번호 PTA-3258 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성되는 mAb 3.9, 또는 TCC 수탁 번호 PTA-3347 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성되는 mAb 10.3 - US 7,850,971
PSMA Development Company- PSMA 항체의 조성물　(US 20080286284, 표 1)
상기 출원은 2003년 3월 21일자로 제출된 미국 특허 출원 일련번호 10/395,894 (US 7,850,971)의 부분이다.
University Hospital Freiburg, Germany - mAbs 3/A12, 3/E7, and 3/F11 (Wolf P., 등 Prostate. 2010 Apr 1; 70(5):562-9).
(38) SST ( 소마토스타틴 수용체; 주의: 5 하위유형 존재)
(38.1) SSTR2 (소마토스타틴 수용체 2)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001050
유전자은행 버전 NM_001050.2 GI:44890054
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 8월 19일 01:37 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001041
유전자은행 버전 NP_001041.1 GI:4557859
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 8월 19일 01:37 PM
교차 참조
Yamada Y., 등 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89 (1), 251-255 (1992); Susini C., 등 Ann Oncol. 2006 Dec; 17(12):1733-42
기타 정보
공식 기호:　SSTR2
기타 명칭:　SRIF-1; SS2R; 소마토스타틴 수용체 유형 2
(38.2) SSTR5 (소마토스타틴 수용체　5)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 D16827
유전자은행 버전 D16827.1 GI:487683
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2006년 8월 1일 12:45 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 BAA04107
유전자은행 버전 BAA04107.1 GI:487684
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2006년 8월 1일 12:45 PM
교차 참조
Yamada,Y., 등 Biochem . Biophys . Res . Commun . 195 (2), 844-852 (1993)
기타 정보
공식 기호:　SSTR5
기타 별칭:　SS-5-R
기타 명칭:　소마토스타틴 수용체　하위유형 5;　소마토스타틴 수용체　유형 5
(38.3) SSTR1
(38.4)SSTR3
(38.5) SSTR4
AvB6 - 서브유니트 (39+40)
(39) ITGAV ( 인테그린 , 알파 V;
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M14648 J02826 M18365
유전자은행 버전 M14648.1 GI:340306
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:56 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA36808
유전자은행 버전 AAA36808.1 GI:340307
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:56 AM
교차 참조
Suzuki S., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 83 (22), 8614-8618 (1986)
기타 정보
공식 기호:　ITGAV
기타 별칭:　CD51, MSK8, VNRA, VTNR
기타 명칭:　모노클로날 항체 L230에 의해 확인된 항체; 인테그린 알파-V; 인테그린 알파V베타3; 인테그린, 알파 V (비트로넥틴 수용체, 알파 폴리펩티드, 항원 CD51); 비트로넥틴 수용체 서브유니트 알파
(40) ITGB6 ( 인테그린 , 베타 6)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_000888
유전자은행 버전 NM_000888.3 GI:9966771
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 27일 12:46 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_000879
유전자은행 버전 NP_000879.2 GI:9625002
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 27일 12:46 AM
교차 참조
Sheppard D.J., 등 Biol . Chem . 265 (20), 11502-11507 (1990)
기타 정보
공식 기호:　ITGB6
기타 명칭:　인테그린 베타-6
항체
Biogen: US 7,943,742 - 하이브리도마 클론 6.3G9 및 6.8G6, ATCC, 수탁 번호 ATCC PTA-3649 및 -3645.
Biogen: US 7,465,449 - 일부 실시형태에서, 상기 항체는 하이브리도마 6.1A8, 6.3G9, 6.8G6, 6.2B1, 6.2B10, 6.2A1, 6.2E5, 7.1G10, 7.7G5, 또는 7.1C5에 의해 생성된 항체와 동일한 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 서열을 포함한다.
Centocor (J&J): US 7,550,142; US 7,163,681
예를 들어, US 7,550,142 - 서열 번호 7 및 서열 번호 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 중쇄 및 인간 경쇄 가변 영역을 갖는 항체.
Seattle Genetics: 15H3 (Ryan MC., 등 Cancer Res　April 15, 2012;　72(8 Supplement):　4630)
(41) CEACAM5 ( 암태아성 항원-관련 세포 부착분자 5)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M17303
유전자은행 버전 M17303.1 GI:178676
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAB59513
유전자은행 버전 AAB59513.1 GI:178677
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
교차 참조
Beauchemin N., 등 Mol . Cell . Biol . 7 (9), 3221-3230 (1987)
기타 정보
공식 기호:　CEACAM5
기타 별칭:　CD66e, CEA
기타 명칭:　메코늄(meconium) 항원 100
항체
AstraZeneca-MedImmune: US 20100330103; US 20080057063;
US 20020142359
- 예를 들어, 하기 서열의 상보성 결정 영역 (CDR)을 갖는 항체: 중쇄; CDR1 - DNYMH, CDR2 - WIDPENGDTE YAPKFRG, CDR3 - LIYAGYLAMD Y; 및 경쇄 CDR1 - SASSSVTYMH, CDR2 - STSNLAS, CDR3 - QQRSTYPLT.
- 유럽 컬렉션 셀 컬쳐 (ECACC) 기탁 번호 96022936로 기탁된 하이브리도마 806.077.
Research Corporation Technologies, Inc.: US 5,047,507
Bayer Corporation: US 6,013,772
BioAlliance: US 7,982,017; US 7,674,605, US 7,674,605
- 서열 번호 1의 아미노산 서열로부터의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 2의 아미노산 서열로부터의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체.
- 서열 번호 5의 아미노산 서열로부터의 중쇄 가변 영역 및 서열 번호 6의 아미노산 서열로부터의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체.
Celltech Therapeutics Limited: US 5,877,293
The Dow Chemical Company: US 5,472,693; US 6,417,337; US 6,333,405
US 5,472,693 - 예를 들어, ATCC No. CRL-11215
US 6,417,337 - 예를 들어, ATCC CRL-12208
US 6,333,405 - 예를 들어, ATCC CRL-12208
Immunomedics, Inc: US 7,534,431; US 7,230,084; US 7,300,644; US 6,730,300;
US 20110189085
- 경쇄 가변 영역의 CDR을 갖는 항체는 하기의 것을 포함한다: CDR1은 KASQDVGTSVA (서열 번호 20)을 포함하고; CDR2는 WTSTRHT (서열 번호 21)를 포함하고; CDR3은 QQYSLYRS (서열 번호 22)를 포함하고;
- 상기 항-CEA 항체의 중쇄 가변 영역의 CDR은 하기의 것을 포함한다: CDR1은 TYWMS (서열 번호 23)을 포함하고; CDR2는 EIHPDSSTINYAPSLKD (서열 번호 24)를 포함하고; CDR3은 LYFGFPWFAY (서열 번호 25)를 포함한다.
US 20100221175; US 20090092598; US 20070202044; US 20110064653; US 20090185974; US 20080069775.
(42) MET (met 원발암유전자 ; 간세포 성장 인자 수용체)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M35073
유전자은행 버전 M35073.1 GI:187553
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 3월 6일 11:12 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA59589
유전자은행 버전 AAA59589.1 GI:553531
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 3월 6일 11:12 AM
교차 참조
Dean M., 등 Nature 318 (6044), 385-388 (1985)
기타 정보
공식 기호:　MET
기타 별칭:　AUTS9, HGFR, RCCP2, c-Met
기타 명칭:　HGF 수용체; HGF/SF 수용체; SF 수용체; 간세포 성장 인자 수용체;　met　원발암유전자 티로신 키나아제; 원발암유전자 c-Met; 산란 인자 수용체; 티로신-단백질 키나아제　Met
항체
Abgenix/Pfizer: US 20100040629
예를 들어, 어메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC) 수탁 번호 PTA-5026을 갖는 하이브리도마 13.3.2에 의해 생성된 항체; ATCC 수탁 번호 PTA-5027을 갖는 하이브리도마 9.1.2에 의해 생성된 항체; ATCC 수탁 번호 PTA-5028을 갖는 하이브리도마 8.70.2에 의해 생성된 항체; 또는 TCC 수탁 번호 PTA-5029를 갖는 하이브리도마 6.90.3에 의해 생성된 항체.
Amgen/Pfizer: US 20050054019
예를 들어, 서열 번호 2에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체 (X2는 글루타메이트이고, X4는 세린임); 및 서열 번호 4에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 항체 (X8는 알라닌이고, 신호 서열은 없음); 서열 번호 6에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호 8에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 항체 (신호 서열 없음); 서열 번호 10에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호 12에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 항체 (신호 서열 없음); 또는 서열 번호 14에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 및 서열 번호 16에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 포함하는 항체 (신호 서열 없음).
Agouron Pharmaceuticals (Now Pfizer): US 20060035907
Eli Lilly: US 20100129369
Genentech: US 5,686,292; US 20100028337; US 20100016241; US 20070129301; US 20070098707; US 20070092520, US 20060270594; US 20060134104; US 20060035278; US 20050233960; US 20050037431
US 5,686,292 - 예를 들어, ATCC HB-11894 및 ATCC HB-11895
US 20100016241 - 예를 들어, ATCC HB-11894 (하이브리도마 1A3.3.13) 또는 HB-11895 (하이브리도마 5D5.11.6)
National Defense Medical Center, Taiwan: Lu RM., 등 Biomaterials. 2011 Apr; 32(12):3265-74.
Novartis: US 20090175860
- 예를 들어, 중쇄 4687의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 서열 (중쇄 4687의 CDR1, CDR2 및 CDR3의 서열은 각각 서열 번호 58의 잔기 26-35, 50-65, 및 98-102임); 경쇄 5097의 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 서열 (경쇄 5097의 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 서열은 서열 번호 37의 잔기 24-39,55-61, 및 94-100임)을 포함하는 항체.
Pharmacia Corporation: US 20040166544
Pierre Fabre: US 20110239316, US 20110097262, US 20100115639
Samsung: US 20110129481 - 예를 들어, 수탁 번호 KCLRF-BP-00223 또는 수탁 번호 KCLRF-BP-00219를 갖는 하이브리도마 세포로부터 생성되는 모노클로날 항체.
Samsung: US 20110104176 - 예를 들어, 수탁 번호: KCLRF-BP-00220을 갖는 하이브리도마 세포에 의해 생성되는 항체.
University of Turin Medical School: DN-30 Pacchiana G., 등 J Biol Chem. 2010 Nov 12; 285(46):36149-57
Van Andel Research Institute: Jiao Y., 등 Mol Biotechnol. 2005 Sep; 31(1):41-54.
(43) MUC1 ( Mucin 1, 세포 표면 관련)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 J05581
유전자은행 버전 J05581.1 GI:188869
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:48 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA59876
유전자은행 버전 AAA59876.1 GI:188870
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:48 AM
교차 참조
Gendler S.J., 등 J. Biol . Chem . 265 (25), 15286-15293 (1990)
기타 정보
공식 기호:　MUC1
기타 별칭:　RP11-263K19.2, CD227, EMA, H23AG, KL-6, MAM6, MUC-1, MUC-1/SEC, MUC-1/X,　MUC1/ZD, PEM, PEMT, PUM
기타 명칭:　DF3 항원; H23 항원; 유방 암종-관련 항원 DF3; 암종-관련 뮤신; 에피시알린; krebs von den Lungen-6; 뮤신 1, 막투과성; 뮤신-1; 땅콩-반응성 소변 뮤신; 다형성 상피 뮤신; 종양 관련 상피 뮤신; 종양-관련 상피 막 항원; 종양-관련 뮤신
항체
AltaRex- Quest Pharma Tech: US 6,716,966 - 예를 들어, 하이브리도마 ATCC No PTA-975에 의해 생성되는 Alt-1 항체.
AltaRex- Quest Pharma Tech: US 7,147,850
CRT: 5E5 - Sorensen AL., 등 Glycobiology vol. 16 no. 2 pp. 96-107, 2006; HMFG2 - Burchell J., 등 Cancer Res., 47, 5476-5482 (1987); 참고: WO2015/159076.
Glycotope GT-MAB: GT-MAB 2.5-GEX (Website: http://www.glycotope.com/ pipeline/pankomab-gex)
Immunogen: US 7,202,346
- 예를 들어, 항체 MJ-170: 하이브리도마 세포주 MJ-170 ATCC 수탁 번호 PTA-5286모노클로날 항체 MJ-171: 하이브리도마 세포주 MJ-171 ATCC 수탁 번호 PTA-5287; 모노클로날 항체 MJ-172: 하이브리도마 세포주 MJ-172 ATCC 수탁 번호 PTA-5288; 또는 모노클로날 항체 MJ-173: 하이브리도마 세포주 MJ-173 ATCC 수탁 번호 PTA-5302
Immunomedics: US 6,653,104
Ramot Tel Aviv Uni: US 7,897,351
Regents Uni. CA: US 7,183,388; US 20040005647; US 20030077676.
Roche GlycArt: US 8,021,856
Russian National Cancer Research Center: Imuteran- Ivanov PK., 등 Biotechnol J. 2007 Jul; 2(7):863-70
Technische Univ Braunschweig: (ⅡB6, HT186-B7, HT186-D11, HT186-G2, HT200-3A-C1, HT220-M-D1, HT220-M-G8) - Thie H., 등 PLoS One.　2011 Jan 14;6(1):e15921
(44) CA9 ( 탄산무수화효소 IX)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 X66839
유전자은행 버전 X66839.1 GI:1000701
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:15 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CAA47315
유전자은행 버전 CAA47315.1 GI:1000702
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:15 AM
교차 참조
Pastorek J., 등 Oncogene 9 (10), 2877-2888 (1994)
기타 정보
공식 기호:　CA9
기타 별칭:　CAIX, MN
기타 명칭:　CA-IX; P54/58N; RCC-관련 항원 G250; RCC-관련 단백질 G250; 카보네이트 디히드라타아제 IX; 탄산무수화효소 9; 탄산 디히드라타아제; 막 항원 MN; pMW1; 신장 세포 암종-관련 항원 G250
항체
Abgenix/Amgen: US 20040018198
애피바디: 항-CAIX 애피바디분자
(http://www.affibody.com/en/생성물-Portfolio/Pipeline/)
Bayer: US 7,462,696
Bayer/Morphosys: 3ee9 mAb - Petrul HM., 등 Mol Cancer Ther . 2012 Feb; 11(2):340-9
Harvard Medical School: 항체 G10, G36, G37, G39, G45, G57, G106, G119, G6, G27, G40 및 G125. Xu C., 등 PLoS One. 2010 Mar 10; 5(3):e9625
Instituteof Virology, Slovak Academyof Sciences (Bayer) - US 5,955,075
- 예를 들어, M75- ATCC 수탁 번호 HB 11128 또는 MN12 - ATCC 수탁 번호 HB 11647
Institute of Virology, Slovak Academyof Sciences: US 7,816,493
- 예를 들어, ATCC No. HB 11128 하에 어메리칸 타입 컬쳐 컬렉션에 기탁된 하이브리도마 VU-M75로부터 분비되는 M75 모노클로날 항체; 또는 수탁 번호 LMBP 6009CB 하에 벨기에 겐트의 겐트 대학교에서 LMBP (Laboratorium voor Moleculaire Bioloqie-Plasmidencollectie)에서 BCCM (International Depository Authority of the Belgian Coordinated Collection off Microorganisms)에 기탁된 하이브리도마 V/10-VU로부터분비되는 V/10 모노클로날 항체.
Institute of Virology, Slovak Academy of Sciences US 20080177046; US 20080176310; US 20080176258; US 20050031623
Novartis: US 20090252738
Wilex: US 7,691,375 - 예를 들어, 하이브리도마 세포주 DSM ASC 2526에 의해 생성된 항체.
Wilex: US 20110123537; Rencarex: Kennett RH., 등 Curr Opin Mol Ther . 2003 Feb;5(1):70-5
Xencor: US 20090162382
(45) EGFR ⅷ (상피 성장 인자 수용체 ( EGFR ), 전사 변이체 3,
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_201283
유전자은행 버전 NM_201283.1 GI:41327733
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:47 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_958440
유전자은행 버전 NP_958440.1 GI:41327734
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:47 PM
교차 참조
Batra SK., 등 Cell Growth Differ 1995;6:1251-1259.
항체:
US 7,628,986 및 US 7,736,644 (Amgen)
예를 들어, 서열 번호 142 및 변이체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 & 서열 번호 144 및 변이체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역 아미노산 서열.
US 20100111979 (Amgen)
예를 들어,
항체 13.1.2 (서열 번호 138), 131 (서열 번호 2), 170 (서열 번호 4), 150 (서열 번호 5), 095 (서열 번호 7), 250 (서열 번호 9), 139 (서열 번호 10), 211 (서열 번호 12), 124 (서열 번호 13), 318 (서열 번호 15), 342 (서열 번호 16), 및 333 (서열 번호 17)의 CDR1 영역의 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열로 이루어진 CDR1;
항체 13.1.2 (서열 번호 138), 131 (서열 번호 2), 170 (서열 번호 4), 150 (서열 번호 5), 095 (서열 번호 7), 250 (서열 번호 9), 139 (서열 번호 10), 211 (서열 번호 12), 124 (서열 번호 13), 318 (서열 번호 15), 342 (서열 번호 16), 및 333 (서열 번호 17)의 CDR2 영역의 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열로 이루어진 CDR2; 및
항체 13.1.2 (서열 번호 138), 131 (서열 번호 2), 170 (서열 번호 4), 150 (서열 번호 5), 095 (서열 번호 7), 250 (서열 번호 9), 139 (서열 번호 10), 211 (서열 번호 12), 124 (서열 번호 13), 318 (서열 번호 15), 342 (서열 번호 16), 및 333 (서열 번호 17)의 CDR3 영역의 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 서열로 이루어진 CDR3;을 포함하는 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체.
US 20090240038 (Amgen)
예를 들어, 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드를 갖는 항체는 서열 번호 2, 서열 번호 19, 서열 번호 142, 서열 번호 144, 및 이의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
US 20090175887 (Amgen)
예를 들어, 항체 13.1.2 (서열 번호 138), 131 (서열 번호 2), 170 (서열 번호 4), 150 (서열 번호 5), 095 (서열 번호 7), 250 (서열 번호 9), 139 (서열 번호 10), 211 (서열 번호 12), 124 (서열 번호 13), 318 (서열 번호 15), 342 (서열 번호 16), 및 333 (서열 번호 17)의 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 아미노산 서열을 갖는 항체.
US 20090156790 (Amgen)
예를 들어, 적어도 하나의 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드가 서열 번호 2, 서열 번호 19, 서열 번호 142, 서열 번호 144, 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 중쇄 폴리펩티드 및 경쇄 폴리펩티드를 갖는 항체.
US 20090155282, US 20050059087 및 US 20050053608 (Amgen)
예를 들어, 항체 13.1.2 (서열 번호 138), 131 (서열 번호 2), 170 (서열 번호 4), 150 (서열 번호 5), 095 (서열 번호 7), 250 (서열 번호 9), 139 (서열 번호 10), 211 (서열 번호 12), 124 (서열 번호 13), 318 (서열 번호 15), 342 (서열 번호 16), 및 333 (서열 번호 17)의 중쇄 아미노산 서열로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 아미노산 서열의 항체.
MR1-1 (US 7,129,332; Duke)
예를 들어, CDR3 VL에서 F92W 및 CDR3 VH에서 S98P-T99Y 치환을 갖는 서열 번호 18의 서열을 갖는 변이체 항체.
L8A4, H10, Y10 (Wikstrand CJ., 등 Cancer Res . 1995 Jul 15;55(14):3140-8; Duke)
US 20090311803 (하버드 대학)
예를 들어, 경쇄 가변 영역 아미노산 서열의 서열 번호 3 및 항체 중쇄 가변 영역 아미노산 서열의 서열 번호 9.
US 20070274991 (EMD72000, 마투부맙으로도 알려짐; 하버드 대학)
예를 들어, 각각 서열 번호 3 & 9의 경쇄 및 중쇄
US 6,129,915 (Schering)
예를 들어, 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6.
mAb CH12 - Wang H., 등 FASEB J. 2012 Jan;26(1):73-80 (상하이 암연구소).
RAbDMⅷ - Gupta P., 등 BMC Biotechnol. 2010 Oct 7;10:72 (스탠포드 대학 의학 센터).
mAb Ua30 - Ohman L., 등 종양 Biol. 2002 Mar-Apr;23(2):61-9 (웁살라 대학).
Han DG., 등 Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao . 2010 Jan;30(1):25-9 (시안 교통 대학).　
(46) CD33 (CD33분자)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M_23197
유전자은행 버전 NM_23197.1 GI:180097
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA51948
유전자은행 버전 AAA51948.1 GI:188098
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
교차 참조
Simmons D., 등 J. Immunol . 141 (8), 2797-2800 (1988)
기타 정보
공식 기호:　CD33
기타 별칭:　SIGLEC-3, SIGLEC3, p67
기타 명칭:　CD33　항원 (gp67); gp67; 골수 세포 표면 항원　CD33; 시알산 결합 Ig-형 렉틴 3; 시알산-결합 Ig-형 렉틴
항체
H195 (린투주맙)- Raza A., 등 Leuk Lymphoma. 2009 Aug;50(8):1336-44; US 6,759,045 (Seattle Genetics/Immunomedics)
mAb OKT9: Sutherland, D.R. 등. Proc Natl Acad Sci USA 78(7): 4515-4519 1981, Schneider,C., 등 J Biol Chem 257, 8516-8522 (1982)
mAb E6: Hoogenboom,H.R., 등 J Immunol 144, 3211-3217 (1990)
US 6,590,088 (Human Genome Sciences)
예를 들어, 서열 번호 1 및 2 및 ATCC 수탁 번호 97521
US 7,557,189 (Immunogen)
예를 들어, 서열 번호 4-6의 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 1-3의 아미노산 서열을 갖는 3개의 CDR을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 단편.
(47) CD19 (CD19분자)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001178098
유전자은행 버전 NM_001178098.1 GI:296010920
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 10일 12:43 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001171569
유전자은행 버전 NP_001171569.1 GI:296010921
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 10일 12:43 AM
교차 참조
Tedder TF., 등 J. Immunol.　143　(2): 712-7 (1989)
기타 정보
공식 기호:　CD19
기타 별칭:　B4, CVID3
기타 명칭:　B-림프구 항원　CD19; B-림프구 표면 항원 B4; T-세포 표면 항원 Leu-12;분화 항원　CD19
항체
Immunogen: HuB4 - Al-Katib AM., 등 Clin Cancer Res . 2009 Jun 15; 15(12): 4038-45.
4G7: Kugler M., 등 단백질 Eng Des Sel . 2009 Mar; 22(3): 135-47
예를 들어, Knappik, A. 등. J Mol Biol 2000 Feb; 296(1): 57-86의 도 3의 서열.
AstraZeneca /MedImmune: MEDI-551 - Herbst R., 등 J Pharmacol Exp Ther. 2010 Oct; 335(1): 213-22
Glenmark Pharmaceuticals: GBR-401 - Hou S., 등 Mol Cancer Ther　November 2011　10 (Meeting Abstract Supplement) C164
US 7,109,304 (Immunomedics)
예를 들어, hA19Vk (서열 번호7)의 서열 및 hA19VH (서열 번호10)의 서열을 포함하는 항체.
US 7,902,338 (Immunomedics)
예를 들어, 항체 또는 항원-결합 단편은 서열 번호 16 (KASQSVDYDGDSYLN)의 경쇄 상보성 결정 영역 CDR 서열 CDR1; 서열 번호 17 (DASNLVS)의 CDR2; 및 서열 번호 18 (QQSTEDPWT)의 CDR3 및 서열 번호 19 (SYWMN)의 중쇄 CDR 서열 CDR1; 서열 번호 20 (QIWPGDGDTNYNGKFKG)의 CDR2 및 서열 번호 21 (RETTTVGRYYYAMDY)의 CDR3을 포함하고, 모 쥐 항체의 상응하는 프레임워크 영역 서열로부터 치환된 하나 이상의 프레임워크 영역 아미노산 잔기를 갖는 불변 영역 서열 및 인간 항체 프레임워크 (FR)를 포함하고, 여기서 상기 치환된 FR 잔기는 중쇄 가변 영역의 Kabat 잔기 91에서 페닐알라닌에 대한 세린의 치환을 포함한다.
Medarex: MDX-1342 - Cardarelli PM., 등 Cancer 　 Immunol Immunother. 2010 Feb;59(2):257-65.
MorphoSys /Xencor: MOR-208/XmAb-5574 - Zalevsky J., 등 Blood. 2009 Apr 16; 113(16): 3735-43
US 7,968,687 (Seattle Genetics)
서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 항원-결합 단편.
4G7 chim - Lang P., 등 Blood. 2004 May 15; 103(10): 3982-5 (University of Tubingen) 예를 들어, US 20120082664의 도 6 및 서열 번호 80
Zhejiang University School의 Medicine: 2E8 - Zhang J., 등 J 약물 Target. 2010 Nov; 18(9): 675-8
(48) IL2RA (인터루킨 2 수용체, 알파); NCBI 참조 서열: NM_000417.2);
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_000417
유전자은행 버전 NM_000417.2 GI:269973860
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 9일 04:59 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_000408
유전자은행 버전 NP_000408.1 GI:4557667
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 9일 04:59 PM
교차 참조
Kuziel W.A., 등 J. Invest . Dermatol . 94 (6 SUPPL), 27S-32S (1990)
기타 정보
공식 기호:　IL2RA
기타 별칭:　RP11-536K7.1, CD25, IDDM10, IL2R, TCGFR
기타 명칭:　FIL-2 수용체 서브유니트 알파; IL-2-RA; IL-2R 서브유니트 알파; IL2-RA; TAC 항원; 인터루킨-2 수용체 서브유니트 알파; p55
항체
US 6,383,487 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
US 6,521,230 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
예를 들어, 항원 결합 위치를 갖는 항체는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 갖는 CDR1, 서열 번호 8의 아미노산 서열을 갖는 CDR2 및 서열 번호 9의 아미노산 서열을 갖는 CDR3을 포함하거나, 또는 전체로서 서열 내에 적용되는 상기 CDR1, CDR2 및 CDR3가 전체로서 서열 내에 적용되는 서열 번호 7, 8 및 9와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 하나의 도메인을 포함한다.
다클리주맙 - Rech AJ., 등 Ann N Y Acad Sci . 2009 Sep;1174:99-106 (Roche)
(49) AXL ( AXL 수용체 티로신 키나아제)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M76125
유전자은행 버전 M76125.1 GI:292869
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:53 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA61243
유전자은행 버전 AAA61243.1 GI:29870
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:53 AM
교차 참조
O'Bryan J.P., 등 Mol . Cell . Biol . 11 (10), 5016-5031 (1991); Bergsagel P.L., 등 J. Immunol . 148 (2), 590-596 (1992)
기타 정보
공식 기호:　AXL
기타 별칭:　JTK11, UFO
기타 명칭:　AXL　암유전자;　AXL　변형 서열/유전자; 암유전자　AXL; 티로신-단백질 키나아제 수용체 UFO
항체
YW327.6S2 - Ye X., 등 Oncogene . 2010 Sep 23; 29(38): 5254-64. (Genentech)
BergenBio: BGB324 (http://www.bergenbio.com/BGB324)
(50) CD30 - TNFRSF8 (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 , 구성원 8)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M83554
유전자은행 버전 M83554.1 GI:180095
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:53 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA51947
유전자은행 버전 AAA51947.1 GI:180096
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:53 AM
교차 참조
Durkop H., 등 Cell 68 (3), 421-427 (1992)
기타 정보
공식 기호:　TNFRSF8
기타 별칭:　CD30, D1S166E, Ki-1
기타 명칭:　CD30L 수용체; Ki-1 항원; 시토킨 수용체　CD30; 림프구 활성 항원　CD30; 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 8
(51) BCMA (B-세포 성숙 항원) - TNFRSF17 (종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 , 구성원 17)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 Z29574
유전자은행 버전 Z29574.1 GI:471244
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:40 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CAA82690
유전자은행 버전 CAA82690.1 GI:471245
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:40 AM
교차 참조
Laabi Y., 등 Nucleic acids Res. 22 (7), 1147-1154 (1994)
기타 정보
공식 기호:　TNFRSF17
기타 별칭:　BCM, BCMA, CD269
기타 명칭:　B 세포 성숙 항원; B-세포 성숙 인자; B-세포 성숙 단백질; 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 17
(52) CT Ags - CTA (암 고환 항원)
교차 참조
Fratta E., 등. Mol Oncol . 2011 Apr; 5(2): 164-82; Lim SH., 등 Am J Blood Res. 2012; 2(1): 29-35.
(53) CD174 (루이스 Y) - FUT3 ( 푸코실트랜스퍼라아제 3 (갈락토시드 3(4)-L-푸코실프랜스퍼라아제, 루이스 혈액형)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM000149
유전자은행 버전 NM000149.3 GI:148277008
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일 04:49 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_000140
유전자은행 버전 NP_000140.1 GI:4503809
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 26일 04:49 PM
교차 참조
Kukowska-Latallo,J.F., 등 Genes Dev . 4 (8), 1288-1303 (1990)
기타 정보
공식 기호:　FUT3
기타 별칭:　CD174, FT3B, FucT-Ⅲ, LE, Les
기타 명칭:　 루이스 FT; 알파-(1,3/1,4)-푸코실트랜스퍼라아제; 혈액형 루이스 알파-4-푸코실트랜스퍼라아제; 푸코실트랜스퍼라아제 Ⅲ; 갈락토시드 3(4)-L-푸코실트랜스퍼라아제
(54) CLEC14A (C-유형 렉틴 도메인 패밀리 14, 구성원 A; 유전자은행 수탁 번호 NM175060)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM175060
유전자은행 버전 NM175060.2 GI:371123930
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 4월 1일 03:34 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_778230
유전자은행 버전 NP_778230.1 GI:28269707
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 4월 1일 03:34 PM
기타 정보
공식 기호:　CLEC14A
기타 별칭:　UNQ236/PRO269, C14orf27, CEG1, EGFR-5
기타 명칭:　C-유형 렉틴 도메인 패밀리 14 구성원 A; ClECT 및 EGF-형 도메인 함유 단백질; 상피 성장 인자 수용체 5
(55) GRP78 - HSPA5 (열 충격 70kDa 단백질 5 (당-조절 단백질, 78kDa )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM005347
유전자은행 버전 NM005347.4 GI:305855105
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:42 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_005338
유전자은행 버전 NP_005338.1 GI:16507237
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:42 PM
교차 참조
Ting J., 등 DNA 7 (4), 275-286 (1988)
기타 정보
공식 기호:　HSPA5
기타 별칭:　BIP,　GRP78, MIF2
기타 명칭:　78 kDa 당-조절 단백질; 세포질 그물 내강 Ca(2+)-결합 단백질　grp78; 면역글로불린 중쇄-결합 단백질
(56) CD70 (CD70　분자) L08096
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 L08096
유전자은행 버전 L08096.1 GI:307127
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 23일 08:54 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA36175
유전자은행 버전 AAA36175.1 GI:307128
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 23일 08:54 AM
교차 참조
Goodwin R.G., 등 Cell 73 (3), 447-456 (1993)
기타 정보
공식 기호:　CD70
기타 별칭:　CD27L, CD27LG, TNFSF7
기타 명칭:　CD27 리간드; CD27-L;　CD70　항원; Ki-24 항원; 표면 항원　CD70; 종양 괴사 인자 (리간드) 슈퍼패밀리, 구성원 7; 종양 괴사 인자 리간드 서브패밀리, 구성원 7
항체
CD70에 대한 MDX-1411 (Medarex)
h1F6 (Oflazoglu, E., 등, Clin Cancer Res.　2008 Oct 1; 14(19): 6171-80; Seattle Genetics)
예를 들어, US 20060083736 서열 번호 1, 2, 11 및 12 및 도 1 참조.
(57) 줄기 세포 특이적 항원. 예를 들어:
● 5T4 (엔트리 (63) 참조)
● CD25 (엔트리 (48) 참조)
● CD32
○ 폴리펩티드
● 유전자은행 수탁 번호 ABK42161
● 유전자은행 버전 ABK42161.1 GI:117616286
● 유전자은행 기록 갱신 날짜: 2007년 7월 25일 03:00 PM
● LGR5/GPR49
○ 뉴클레오티드
● 유전자은행 수탁 번호 NM_003667
● 유전자은행 버전 NM_003667.2 GI:24475886
● 유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 22일 03:38 PM
○ 폴리펩티드
● 유전자은행 수탁 번호 NP_003658
● 유전자은행 버전 NP_003658.1 GI:4504379
● 유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 22일 03:38 PM
● 프로미닌/CD133
○ 뉴클레오티드
● 유전자은행 수탁 번호 NM_006017
● 유전자은행 버전 NM_006017.2 GI:224994187
● 유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:47 PM
○ 폴리펩티드
● 유전자은행 수탁 번호 NP_006008
● 유전자은행 버전 NP_006008.1 GI:5174387
● 유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:47 PM
(58) ASG -5
교차 참조
(Smith L.M., 등 AACR 2010 Annual Meeting (abstract #2590); Gudas J.M., 등. AACR 2010 Annual Meeting (abstract #4393)
항체
항-AGS-5 항체: M6.131 (Smith, L.M., 등 AACR 2010 Annual Meeting (abstract #2590)
(59) ENPP3 ( 엑토뉴클레오티드 피로포스파타아제 / 포스포디에스테라아제 3)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF005632
유전자은행 버전 AF005632.2 GI:4432589
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 09:41 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAC51813
유전자은행 버전 AAC51813.1 GI:2465540
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 09:41 PM
교차 참조
Jin-Hua P., 등 Genomics 45 (2), 412-415 (1997)
기타 정보
공식 기호:　ENPP3
기타 별칭:　RP5-988G15.3, B10, CD203c, NPP3, PD-IBETA, PDNP3
기타 명칭:　E-NPP 3; dJ1005H11.3 (포스포디에스테라아제 I/뉴클레오티드 피로포스파타아제 3); dJ914N13.3 (포스포디에스테라아제 I/뉴클레오티드 피로포스파타아제 3); 엑토뉴클레오티드 피로포스파타아제/포스포디에스테라아제 패밀리 구성원 3; gp130RB13-6; 포스포디에스테라아제 I 베타; 포스포디에스테라아제 I/뉴클레오티드 피로포스파타아제 3; 포스포디에스테라아제-I 베타
(60) PRR4 (프롤린 풍부 4 (눈물샘))
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_007244
유전자은행 버전 NM_007244.2 GI:154448885
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 28일 12:39 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_009175
유전자은행 버전 NP_009175.2 GI:154448886
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 28일 12:39 PM
교차 참조
Dickinson D.P., 등 Invest . Ophthalmol . Vis . Sci . 36 (10), 2020-2031 (1995)
기타 정보
공식 기호:　PRR4
기타 별칭:　LPRP, PROL4
기타 명칭:　눈물샘 프롤린-풍부 단백질; 상인두암-관련 프롤린-풍부 단백질 4; 프롤린-풍부 폴리펩티드 4; 프롤린-풍부 단백질 4
(61) GCC - GUCY2C (구아닐레이트 시클라아제 　2C ( 열 무변성 엔테로톡신 수용체)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_004963
유전자은행 버전 NM_004963.3 GI:222080082
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:50 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_004954
유전자은행 버전 NP_004954.2 GI:222080083
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 2일 01:50 PM
교차 참조
De Sauvage F.J., 등 J. Biol . Chem . 266 (27), 17912-17918 (1991); Singh S., 등 Biochem . Biophys . Res . Commun . 179 (3), 1455-1463 (1991)
기타 정보
공식 기호:　GUCY2C
기타 별칭:　DIAR6, GUC2C, MUCIL, STAR
기타 명칭:　GC-C; STA 수용체; 구아닐릴 시클라아제　C; hSTAR; 열 무변성 엔테로톡신 수용체; 장내 구아닐레이트 시클라아제
(62) Liv -1 - SLC39A6 (용질 담체 패밀리 39 (아연 수송체 ), 구성원 6)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 U41060
유전자은행 버전 U41060.2 GI:12711792
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2009년 11월 30일 04:35 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA96258
유전자은행 버전 AAA96258.2 GI:12711793
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2009년 11월 30일 04:35 PM
교차 참조
Taylor KM., 등 Biochim Biophys Acta . 2003 Apr 1; 1611(1-2): 16-30
기타 정보
공식 기호:　SLC39A6
기타 별칭:　LIV-1
기타 명칭:　LIV-1　단백질, 에스트로겐 조절; ZIP-6; 에스트로겐 조절 단백질　LIV-1; 용질 담체 패밀리 39 (금속 이온 수송체), 구성원 6; 용질 담체 패밀리 39 구성원 6; 아연 수송체 ZIP6; zrt- 및 Irt-형 단백질 6
(63) 5T4, 영양아층 당단백질, TPBG - TPBG ( 영양아층 당단백질)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AJ012159
유전자은행 버전 AJ012159.1 GI:3805946
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 1일 10:27 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CAA09930
유전자은행 버전 CAA09930.1 GI:3805947
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 1일 10:27 AM
교차 참조
King K.W.,등 Biochim . Biophys . Acta 1445 (3), 257-270 (1999)
기타 정보
공식 기호:　TPBG
기타 별칭:　5T4, 5T4AG, M6P1
기타 명칭:　5T4　태아종양 항원;　5T4　태아종양 영양아층 당단백질;　5T4　암영양아층 당단백질
참고: WO2015/155345
(64) CD56 - NCMA1 (신경 세포 부착분자 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_000615
유전자은행 버전 NM_000615.6 GI:336285433
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:32 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_000606
유전자은행 버전 NP_000606.3 GI:94420689
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:32 PM
교차 참조
Dickson,G., 등, Cell 50 (7), 1119-1130 (1987)
기타 정보
공식 기호:　 NCAM1
기타 별칭:　 CD56, MSK39, NCAM
기타 명칭:　 모노클로날 항체 5.1H11에 의해 인식된 항원; 신경 세포 부착분자, NCAM
항체
Immunogen: HuN901 (Smith SV., 등 Curr Opin Mol Ther . 2005 Aug; 7(4): 394-401)
예를 들어, 쥐 N901 항체로부터 인간화 참조. Roguska, M.A., 등. Proc Natl Acad Sci USA Feb 1994; 91:969-973의 도 1b 및 1e 참조.
(65) CanAg (종양 관련 항원 CA242)
교차 참조
Haglund C., 등 Br J Cancer 60:845-851, 1989;Baeckstrom D., 등 J Biol Chem 266: 21537-21547, 1991
항체
huC242 (Tolcher AW 등., J Clin Oncol . 2003 Jan 15; 21(2): 211-22; Immunogen)
예를 들어, US 20080138898A1 서열 번호 1 및 2 참조
(66) FOLR1 (엽산 수용체 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 J05013
유전자은행 버전 J05013.1 GI:182417
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA35823
유전자은행 버전 AAA35823.1 GI:182418
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 AM
교차 참조
Elwood P.C., 등 J. Biol . Chem . 264 (25), 14893-14901 (1989)
기타 정보
공식 기호:　FOLR1
기타 별칭:　FBP, FOLR
기타 명칭:　FR-알파; KB 세포 FBP; 성인 엽산-결합 단백질;　엽산 결합 단백질;　엽산　수용체　알파;　엽산　수용체, 성인; 난소 종양-관련 항원 MOv18
항체
M9346A - Whiteman KR., 등 Cancer Res 　April 15, 2012;　72(8 Supplement):　4628 (Immunogen)
(67) GPNMB [당단백질　( 막투과성 )　 nmb ]
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 X76534
유전자은행 버전 X76534.1 GI:666042
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:10 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CAA54044
유전자은행 버전 CAA54044.1 GI:666043
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:10 AM
교차 참조
Weterman M.A., 등 Int . J. Cancer 60 (1), 73-81 (1995)
기타 정보
공식 기호:　GPNMB
기타 별칭:　UNQ1725/PRO9925, HGFIN,　NMB
기타 명칭:　당단백질　NMB;　당단백질　nmb-gud 단백질; 골액티빈; 막투과성　당단백질　HGFIN; 막투과성　당단백질　NMB
항체
Celldex Therapeutics: CR011 (Tse KF., 등 Clin Cancer Res .　2006 Feb 15;12(4):1373-82)
예를 들어, EP1827492B1 서열 번호 22, 24, 26, 31, 33 및 35 참조
(68) TIM -1 - HAVCR1 (A형 간염 세포 수용체 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF043724
유전자은행 버전 AF043724.1 GI:2827453
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 06:24 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAC39862
유전자은행 버전 AAC39862.1 GI:2827454
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 06:24 PM
교차 참조
Feigel스톡 D., 등 J. Virol . 72 (8), 6621-6628 (1998)
기타 정보
공식 기호:　 HAVCR1
기타 별칭:　HAVCR, HAVCR-1, KIM-1, KIM1, TIM,　TIM-1, TIM1, TIMD-1, TIMD1
기타 명칭:　 T 세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 단백질 1; T-세포 막 단백질 1; 신장 손상분자 1
(69) RG -1/전립샘 종양 표적 민딘 - 민딘 / RG -1
교차 참조
Parry R., 등 Cancer Res. 2005 Sep 15;65(18):8397-405
(70) B7-H4 - VTCN1 (V-세포 도메인 함유 T-세포 활성 억제제 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 BX648021
유전자은행 버전 BX648021.1 GI:34367180
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 08:40 AM
교차 참조
Sica GL., 등 Immunity . 2003 Jun;18(6):849-61
기타 정보
공식 기호:　VTCN1
기타 별칭:　RP11-229A19.4, B7-H4,　B7H4, B7S1, B7X, B7h.5, PRO1291, VCTN1
기타 명칭:　B7 패밀리 멤버, H4; B7 슈퍼패밀리 구성원 1; T 세포 동시자극성분자 B7x; T-세포 동시자극성분자 B7x; V-세트 도메인-함유 T-세포 활성 억제제 1; 면역 동시자극성 단백질 B7-H4
(71) PTK7 ( PTK7 단백질 티로신 키나아제 7)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF447176
유전자은행 버전 AF447176.1 GI:17432420
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2008년 11월 28일 01:51 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAL39062
유전자은행 버전 AAL39062.1 GI:17432421
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2008년 11월 28일 01:51 PM
교차 참조
Park S.K.,등 J. Biochem . 119 (2), 235-239 (1996)
기타 정보
공식 기호:　PTK7
기타 별칭:　CCK-4, CCK4
기타 명칭:　결장암 키나아제 4; 비활성 티로신-단백질 키나아제 7; 위 티로신 키나아제 수용체 7; 티로신-단백질 키나아제-형 7
(72) CD37 (CD37　분자)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001040031
유전자은행 버전 NM_001040031.1 GI:91807109
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 29일 02:08 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001035120
유전자은행 버전 NP_001035120.1 GI:91807110
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 7월 29일 02:08 PM
교차 참조
Schwartz-Albiez R., 등 J. Immunol . 140 (3), 905-914 (1988)
기타 정보
공식 기호:　CD37
기타 별칭:　GP52-40, TSPAN26
기타 명칭:　CD37　항원; 세포분화 항원 37; 백혈구 항원　CD37; 백혈구 표면 항원　CD37; 테트라스파닌-26; 트스판-26
항체
Boehringer Ingelheim: mAb 37.1 (Heider KH., 등 Blood.　2011 Oct 13;118(15):4159-68)
Trubion: CD37-SMIP (G28-1 scFv-Ig) ((Zhao X., 등 Blood . 2007;110: 2569-2577)
예를 들어, US 20110171208A1 서열 번호 253 참조
Immunogen: K7153A (Deckert J., 등 Cancer Res　April 15, 2012;　72(8 보충물):　4625)
(73) CD138 - SDC1 ( 신데칸 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AJ551176
유전자은행 버전 AJ551176.1 GI:29243141
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 1일 12:09 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CAD80245
유전자은행 버전 CAD80245.1 GI:29243142
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 1일 12:09 PM
교차 참조
O'Connell FP., 등 Am J Clin Pathol . 2004 Feb;121(2):254-63
기타 정보
공식 기호:　SDC1
기타 별칭:　CD138, SDC, SYND1, 신데칸
기타 명칭:　CD138　항원; 헤파란 술페이트 프로테오글리칸 섬유아세포 성장 인자 수용체; 신데칸 프로테오글리칸 1; 신데칸-1
항체
Biotest: chimerized MAb (nBT062) -　(Jagannath S., 등 Poster ASH #3060, 2010; WIPO Patent Application WO/2010/128087) 예를 들어, US 20090232810 서열 번호 1 및 2 참조
Immunogen: B-B4 (Tassone P., 등 Blood 104_3688-3696)
예를 들어, US 20090175863A1 서열 번호 1 및 2 참조
(74) CD74 (CD74　분자, 주요 조직적합성 복합체, 클래스 Ⅱ 불변 사슬)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_004355
유전자은행 버전 NM_004355.1 GI:343403784
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:30 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_004346
유전자은행 버전 NP_004346.1 GI:10835071
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:30 PM
교차 참조
Kudo,J., 등 Nucleic Acids Res . 13 (24), 8827-8841 (1985)
기타 정보
공식 기호:　CD74
기타 별칭:　DHLAG, HLADG, Ⅱ, Ia-감마
기타 명칭:　CD74　항원 (주요조직적합 복합체의 불변 폴리펩티드, 클래스 Ⅱ 항원-관련); HLA 클래스 Ⅱ 조직적합 항원 감마 사슬; HLA-DR 항원-관련 불변 사슬; HLA-DR-감마; Ia-관련 불변 사슬; MHC HLA-DR 감마 사슬; 클래스 Ⅱ 항원의 감마 사슬; p33
항체
Immunomedics: hLL1 (Milatuzumab,) - Berkova Z., 등 Expert Opin Investig 약물.　2010 Jan;19(1):141-9)
예를 들어, US 20040115193 서열 번호 19, 20, 21, 22, 23 및 24 참조
Genmab: HuMax-CD74 (웹사이트 참조)
(75) 클라우딘 - CLs ( Claudins )
교차 참조
Offner S., 등 Cancer Immunol Immunother . 2005 May; 54(5):431-45, Suzuki H., 등 Ann N Y Acad Sci . 2012 Jul;1258:65-70)
인간에서, 이 패밀리의 24개 구성원이 개시되었다 - 참조 문헌 참조.
(76) EGFR (상피 성장 인자 수용체)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_005228
유전자은행 버전 NM_005228.3 GI:41927737
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:47 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_005219
유전자은행 버전 NP_005219.2 GI:29725609
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:47 PM
교차 참조
Dhomen NS., 등 Crit Rev Oncog. 2012;17(1):31-50
기타 정보
공식 기호:　EGFR
기타 별칭:　ERBB, ERBB1, HER1, PIG61, mENA
기타 명칭:　조류 적아세포 백혈병 바이러스 (v-erb-b) 암유발유전자 상동체; 세포 성장 억제 단백질 40; 세포 증식-유도 단백질 61; 원발암유전자 c-ErbB-1; 수용체 티로신-단백질 키나아제 erbB-1
항체
BMS: 세툭시맙 (Erbitux) - Broadbridge VT., 등 Expert Rev anticancer Ther. 2012 May;12(5):555-65. 예를 들어, US6217866 - ATTC 기탁 번호 9764 참조.
Amgen: 파니투무맙 (Vectibix) - Argiles G., 등 Future Oncol . 2012 Apr;8(4):373-89 예를 들어, US6235883 서열 번호 23-38 참조.
Genmab: 자루투무맙 - Rivera F., 등 Expert Opin Biol Ther . 2009 May;9(5):667-74.
YM Biosciences: 니모투주맙 - Ramakrishnan MS., 등 MAbs . 2009 Jan-Feb;1(1):41-8. 예를 들어, US5891996 서열 번호 27-34 참조.
(77) Her3 ( ErbB3 ) - ERBB3 (v- erb -b2 적아세포 백혈병 바이러스 암유발유전자 상동체 3 (조류))
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M34309
유전자은행 버전 M34309.1 GI:183990
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA35979
유전자은행 버전 AAA35979.1 GI:306841
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:47 PM
교차 참조
Plowman,G.D., 등., Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 87 (13), 4905-4909 (1990)
기타 정보
공식 기호:　ERBB3
기타 별칭:　ErbB-3,　HER3, LCCS2, MDA-BF-1, c-erbB-3, c-erbB3, erbB3-S, p180-ErbB3, p45-sErbB3, p85-sErbB3
기타 명칭:　원발암유전자-형 단백질 c-ErbB-3; 수용체 티로신-단백질 키나아제 erbB-3; 티로신 키나아제-유형 세포 표면 수용체　HER3
항체
Merimack Pharma : MM-121　(Schoeberl B., 등 Cancer Res.　2010 Mar 15;70(6):2485-2494)
예를 들어, US 2011028129 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8 참조.
(78) RON - MST1R (대식세포 자극 1 수용체 (c-met-관련 티로신 키나아제))
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 X70040
유전자은행 버전 X70040.1 GI:36109
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:17 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CCA49634
유전자은행 버전 CCA49634.1 GI:36110
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:17 PM
교차 참조
Ronsin C., 등 Oncogene 8 (5), 1195-1202 (1993)
기타 정보
공식 기호:　MST1R
기타 별칭:　CD136, CDw136, PTK8,　RON
기타 명칭:　MSP 수용체; MST1R 변이체 RON30; MST1R 변이체 RON62; PTK8 단백질 티로신 키나아제 8;　RON　변이체 E2E3; c-met-관련 티로신 키나아제; 대식세포-자극 단백질 수용체; p185-Ron; 용해성　RON　변이체 1; 용해성　RON　변이체 2; 용해성　RON　변이체 3; 용해성　RON 변이체 4
(79) EPHA2 ( EPH 수용체 A2)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 BC037166
유전자은행 버전 BC037166.2 GI:33879863
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 3월 6일 01:59 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAH37166
유전자은행 버전 AAH37166.1 GI:22713539
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 3월 6일 01:59 PM
교차 참조
Strausberg R.L., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 99 (26), 16899-16903 (2002)
기타 정보
공식 기호:　EPHA2
기타 별칭:　ARCC2, CTPA, CTPP1, ECK
기타 명칭:　에프린 유형-A 수용체 2; 상피 세포 수용체 단백질 티로신 키나아제; 용해성　EPHA2　변이체 1; 티로신-단백질 키나아제 수용체 ECK
항체
Medimmune: 1C1 (Lee JW., 등 Clin Cancer Res .　2010 May 1;16(9):2562-2570)
예를 들어, US 20090304721A1 도 7 및 8 참조.
(80) CD20 - MS4A1 (막-폭 4-도메인, 서브패밀리 A, 구성원 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M27394
유전자은행 버전 M27394.1 GI:179307
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2009년 11월 30일 11:16 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA35581
유전자은행 버전 AAA35581.1 GI:179308
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2009년 11월 30일 11:16 AM
교차 참조
Tedder T.F., 등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 85 (1), 208-212 (1988)
기타 정보
공식 기호: MS4A1
기타 별칭: B1, Bp35, CD20, CVID5, LEU-16, MS4A2, S7
기타 명칭: B-림프구 항원 CD20; B-림프구 세포-표면 항원 B1; CD20 항원; CD20 수용체; 백혈구 표면 항원 Leu-16
항체
Genentech/Roche: 리툭시맙 - Abdulla NE., 등 BioDrugs . 2012 Apr 1;26(2):71-82.
예를 들어, US5736137, ATCC 기탁 번호 HB-69119 참조.
GSK/Genmab: 오파투무맙 - Nightingale G., 등 Ann Pharmacother. 2011 Oct;45(10):1248-55.
예를 들어, US 20090169550A1 서열 번호 2, 4 및 5 참조.
Immunomedics: 벨투주맙 - Goldenberg DM., 등 Leuk Lymphoma . 2010 May;51(5):747-55.
예를 들어, US7919273B2 서열 번호 1, 2, 3, 4, 5 및 6 참조.
(81) 테나신 C - TNC ( 테나신 　C)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_002160
유전자은행 버전 NM_002160.3 GI:340745336
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:33 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_002151
유전자은행 버전 NP_002151.2 GI:153946395
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 23일 02:33 PM
교차 참조
Nies D.E., 등 J. Biol. Chem. 266 (5), 2818-2823 (1991); Siri A., 등 Nucleic acids Res. 19 (3), 525-531 (1991)
기타 정보
공식 기호:　TNC
기타 별칭:　150-225, GMEM, GP, HXB, JI, TN, TN-C
기타 명칭:　GP 150-225; 시토탁틴 (cytotactin); 글리오마-관련-세포 등기질 항원; 헥사브라키온 (hexabrachion) (테나신); 근-건 (myotendinous) 항원; 뉴로넥틴 (neuronectin);　테나신;　테나신-C 동형 14/AD1/16
항체
Philogen : G11 (von Lukowicz T., 등 J Nucl Med .　2007 Apr;48(4):582-7) 및 F16 (Pedretti M., 등 Lung Cancer.　2009 Apr;64(1):28-33)
예를 들어, US7968685 서열 번호 29, 35, 45 및 47 참조.
(82) FAP (섬유아세포 활성 단백질, 알파)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 U09278
유전자은행 버전 U09278.1 GI:1888315
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 09:22 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAB49652
유전자은행 버전 AAB49652.1 GI:1888316
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 09:22 AM
교차 참조
Scanlan,M.J.,등 Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 91 (12), 5657-5661 (1994)
기타 정보
공식 기호:　FAP
기타 별칭:　DPPIV, FAPA
기타 명칭:　170 kDa 흑색종 막-결합 겔라티나아제; 혼입 막 세린 프로테아제; 세프라제
(83) DKK -1 ( 딕코프 1 상동체 [ 제노푸스 래비스 ( Xenopus laevis )]
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_012242
유전자은행 버전 NM_012242.2 GI:61676924
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:48 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_036374
유전자은행 버전 NP_036374.1 GI:7110719
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:48 PM
교차 참조
Fedi P. 등 J. Biol . Chem . 274 (27), 19465-19472 (1999)
기타 정보
공식 기호:　DKK1
기타 별칭:　UNQ492/PRO1008,　DKK-1, SK
기타 명칭:　딕코프 관련 단백질-1; 딕코프-1 형; 딕코프-형 단백질 1; 딕코프-관련 단백질 1; hDkk-1
항체
Novartis: BHQ880 (Fulciniti M., 등 Blood .　2009 Jul 9;114(2):371-379)
예를 들어, US 20120052070A1 서열 번호 100 및 108 참조.
(84) CD52 (CD52　분자)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_001803
유전자은행 버전 NM_001803.2 GI:68342029
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:48 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_001794
유전자은행 버전 NP_001794.2 GI:68342030
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 9월 30일 01:48 PM
교차 참조
Xia M.Q., 등 Eur . J. Immunol . 21 (7), 1677-1684 (1991)
기타 정보
공식 기호:　CD52
기타 별칭:　CDW52
기타 명칭: CAMPATH-1 항원;　CD52　항원 (CAMPATH-1 항원); CDW52 항원 (CAMPATH-1 항원); 케임브리지 병리학 (cambridge pathology) 1 항원; 정소상체분비 단백질 E5; he5; 인간 정소상체-특이적 단백질 5
항체
알렘투주맙 (Campath) - Skoetz N., 등 Cochrane Database Syst Rev. 2012 Feb 15;2:CD008078.
예를 들어, 드럼뱅크 기탁번호 DB00087 (BIOD00109, BTD00109)
(85) CS1 - SLAMF7 (SLAM 패밀리 구성원 7)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 NM_021181
유전자은행 버전 NM_021181.3 GI:1993571
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 29일 11:24 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 NP_067004
유전자은행 버전 NP_067004.3 GI:19923572
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2012년 6월 29일 11:24 AM
교차 참조
Boles K.S., 등 Immunogenetics 52 (3-4), 302-307 (2001)
기타 정보
공식 기호:　SLAMF7
기타 별칭:　UNQ576/PRO1138, 19A, CD319, CRACC,　CS1
기타 명칭:　19A24 단백질; CD2 서브세트 1; CD2-형 수용체 활성 세포독성 세포; CD2-형 수용체-활성 세포독성 세포; 막 단백질 FOAP-12; 신규의 LY9 (림프구 항원 9) 형 단백질; 단백질 19A
항체
BMS: elotuzumab/HuLuc63 (Benson DM., 등 J Clin Oncol .　2012 Jun 1;30(16):2013-2015)
예를 들어, US 20110206701 서열 번호 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 및 16 참조.
(86) 엔도글린 -ENG ( 엔도글린 )
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 AF035753
유전자은행 버전 AF035753.1 GI:3452260
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 06:36 PM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAC32802
유전자은행 버전 AAC32802.1 GI:3452261
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 3월 10일 06:36 PM
교차 참조
Rius C., 등 Blood 92 (12), 4677-4690 (1998)
공식 기호:　ENG
기타 정보
기타 별칭:　RP11-228B15.2, CD105, END, HHT1, ORW, ORW1
기타 명칭:　CD105 항원
(87) 아넥신 A1- ANXA1 ( 아넥신 A1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 X05908
유전자은행 버전 X05908.1 GI:34387
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:02 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 CCA29338
유전자은행 버전 CCA29338.1 GI:34388
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2011년 2월 2일 10:02 AM
교차 참조
Wallner B.P.,등 Nature 320 (6057), 77-81 (1986)
기타 정보
공식 기호:　ANXA1
기타 별칭:　RP11-71A24.1, ANX1, LPC1
기타 명칭:　아넥신　I (리포코틴 I);　아넥신-1; 칼팍틴 Ⅱ; 칼팍틴-2; 크로모빈딘-9; 리포코틴 I; p35; 포스포리파아제 A2 억제 단백질
(88) V-CAM (CD106) - VCAM1 (혈관 세포 부착분자 1)
뉴클레오티드
유전자은행 수탁 번호 M60335
유전자은행 버전 M60335.1 GI:340193
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:56 AM
폴리펩티드
유전자은행 수탁 번호 AAA61269
유전자은행 버전 AAA61269.1 GI:340194
유전자은행 기록 갱신 날짜: 2010년 6월 23일 08:56 AM
교차 참조
Hession C., 등 J. Biol . Chem . 266 (11), 6682-6685 (1991)
기타 정보
공식 기호 VCAM1
기타 별칭:　CD106, INCAM-100
기타 명칭:　CD106　항원; 혈관 세포 부착 단백질 1
항체 서열
항- 인테그린 ανβ6
Figure 112019107278289-pct00022
Figure 112019107278289-pct00023
Figure 112019107278289-pct00024
Figure 112019107278289-pct00025
Figure 112019107278289-pct00026
모 항체는 또한 알부민-결합 펩티드 (ABP) 서열을 포함하는 융합 단백질일 수 있다 (Dennis 등. (2002) "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of proteins" J Biol Chem . 277:35035-35043; WO 01/45746). 본 발명의 항체는 하기에 의해 교시된 ABP 서열을 갖는 융합 단백질을 포함하고, 그 전체는 본 명세서에서 참조로서 포함된다: (i) Dennis 등 (2002) J Biol Chem . 277:35035-35043, 표 Ⅲ 및 IV, 페이지 35038; (ⅱ) US 2004/0001827, [0076]; 및 (ⅲ) WO 01/45746, 페이지 12-13.
일 실시형태에서, 상기 항체는 표적 특이적 종양 관련 항원 αvβ6에 대해 생성되었다.
상기 세포 결합제는, 예를 들어 컨쥬게이트 또는 컨쥬게이트의 일부로서 혼입되기 전에 상기 제제의 검출 또는 정제를 보조하기 위해, 표지될 수 있다. 상기 표지는 비오틴 표지일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 상기 세포 결합제는 방사성 동위 원소에 의해 표지될 수 있다.
리간드 단위에 대한 링커 단위의 연결
리간드 단위는 이황화 결합을 통해 링커 단위에 연결된다.
일 구현예에서, 리간드 단위와 약물 링커 사이의 연결은 리간드 단위 시스테인 잔기의 티올기와 약물 링커 단위의 말레이미드기 사이에 형성된다.
리간드 단위의 시스테인 잔기는 연결을 형성하기 위해 링커의 작용기와의 반응에 대해 이용가능할 수 있다. 다른 구현예에서, 예를 들면, 리간드 단위가 항체인 경우, 항체의 티올기는 사슬간 이황화 결합에 참여할 수 있다. 이들 사슬간 결합은 예를 들면 링커 단위의 작용기와의 반응 이전에 DTT로의 항체의 처리에 의해 유리 티올기로 변환될 수 있다.
일부 구현예에서, 시스테인 잔기는 항체의 중쇄 또는 경쇄에 도입된다. 항체 중쇄 또는 경쇄에 의한 치환에 의한 시스테인 삽입을 위한 위치는 공개된 미국출원번호 제2007-0092940호 및 국제특허공보 WO2008070593에 기재된 것을 포함하고, 이는 본원에 포함되어 있다.
치료 방법
본 발명의 화합물은 요법의 방법에서 사용될 수 있다. 또한, 치료적 유효량의 화학식 Ⅱ의 컨쥬게이트를 치료를 필요로 하는 피험체에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 제공된다. 용어 "치료적 유효량"은, 환자에 대한 장점을 나타내기에 충분한 양이다. 이와 같은 장점은 적어도 하나의 증상의 적어도 완화일 수 있다. 투여되는 실제 양 및 투여의 속도 및시간-경과는 치료되는 대상의 특징 및 중증도에 좌우될 것이다. 치료의 처방, 예를 들면 복용량에 대한 결정은 일반 종사자 및 다른 의사의 책임 내에 있다.
컨쥬게이트는 치료되는 질병에 따라 동시에 또는 순차적으로 단독 또는 다른 치료와 병용하여 투여될 수 있다. 치료 및 요법의 예는, 화학요법 (활성제 예를 들면 약물의 투여); 수술; 및 방사선 요법을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명에 따른 그리고 본 발명의 따라 사용하기 위한 약학적 조성물은 활성 성분 이외에, 즉, 화학식 I의 컨쥬게이트, 약제학적으로 허용가능한 부형제, 담체, 완충제, 안정제 또는 당업자에게 알려진 다른 물질을 포함할 수 있다. 이러한 물질은 무독성이어야 하고, 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 특징은 경구, 또는 주사, 예를 들면 피부, 피하, 또는 정맥내일 수 있는 투여 경로에 좌우될 것이다.
경구 투여를 위한 약학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 고형 담체 또는 아쥬반트를 포함할 수 있다. 액체 약학적 조성물은 일반적으로 액체 담체 예컨대 물, 석유, 동물 또는 식물성 오일, 광유 또는 합성 오일을 포함한다. 생리적 염수 용액, 덱스트로오스 또는 다른 당류 용액 또는 글리콜 예컨대 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 포함될 수 있다. 캡슐은 젤라틴과 같은 고형 담체를 포함할 수 있다.
정맥내, 피부 또는 피하 주사, 또는 고통의 부위에의 주사의 경우에, 활성 성분은 무발열원이고, 적합한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구로 허용가능한 수용액의 형태일 것이다. 본 기술분야에서의 당업자는 예를 들면, 등장의 비히클 예컨대 염화나트륨 주사, 링거 주사, 락테이트화된 링거 주사를 사용하여 적합한 용액을 적절하게 제조할 수 있다. 보존제, 안정제, 완충제, 산화방지제 및/또는 다른 첨가제는 요구되는 경우에 포함될 수 있다.
본 컨쥬게이트는 증식성 질환 및 자가면역 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "증식성 질환"은, 바람직하지 않은, 예컨대, 시험관내 또는 생체내와 무관하게 신생물성 또는 과형성 성장일 수 있는 과도한 또는 비정상 세포의 원치 않는 또는 조절되지 않는 세포 증식에 관한 것이다.
증식성 질병의 예는, 비제한적으로, 양성, 전암성, 및 악성 세포 증식을 포함하고, 이는 비제한적으로 신생물 및 종양 (예를 들면, 조직구종, 신경아교종, 성상 세포종, 골종), 암 (예를 들면 폐암, 소세포 폐암, 위장 암, 장암, 결장암, 유방 암종, 난소 암종, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종, 흑색종), 백혈병, 건선, 뼈 질환, 섬유증식성 장애 (예를 들면 결합 조직의 것), 및 죽상경화증을 포함한다. 관심 대상의 다른 암은 혈액암; 악성종양 예컨대 백혈병 및 림프종, 예컨대 비-호지킨 림프종, 및 하위유형 예컨대 DLBCL, 변연부, 외투세포, 및 여포성, 호지킨 림프종, AML, 및 B 또는 T 세포 기원의 다른 암을 포함한다.
자가면역 질환의 예는 하기를 포함한다: 류마티스성 관절염, 자가면역 탈수초 질환 (예를 들면, 다발성 경화증, 알러지성 뇌척수염), 건선성 관절염, 내분비 눈병증, 포도막망막염, 전신 홍반성 낭창, 중증 근무력증, 그레이브스병, 사구체신염, 자가면역 간장 장애, 염증성 장 질환 (예를 들면, 크론병), 과민증, 알러지성 반응, 쇼그렌 증후군, I형 진성 당뇨병, 원발성 담도성 간경변증, 베게너 육아종증, 섬유근육통, 다발성근염, 피부근염, 다중 내분비 부전, 슈미트 증후군, 자가면역 포도막염, 애디슨병, 부신염, 갑상선염, 하시모토 갑상선염, 자가면역 갑상선 질환, 악성 빈혈, 위 위축증, 만성 간염, 유낭창 간염, 죽상경화증, 아급성 피부 홍반성 낭창, 부갑상선기능저하증, 드레슬러 증후군, 자가면역 혈소판감소증, 특발성 혈소판감소성 자반병, 용혈성 빈혈, 심상성 천포창, 천포창, 포진성 피부염, 원형 탈모증, 유사천포창, 경피증, 진행성 전신 경화증, CREST 증후군 (석회증, 레이노 증후군 현상, 식도 운동성장애, 가락피부경화증, 및 모세혈관확장증), 남성 및 여성 자가면역 불임, 강직성 척추염, 궤양성 대장염, 혼합된 결합 조직 질환, 결절 다발 동맥염, 전신 괴사성 혈관염, 아토피 피부염, 아토피성 비염, 굿파스투어 증후군, 샤가스 질환, 유육종증, 류마티스성 열, 천식, 재발성 낙태, 항-인지질 증후군, 농부폐병, 홍반 다형성, 심장수술후 증후군, 쿠싱 증후군, 자가면역 만성 활동 간염, 새-사육가 폐, 독성 표피 괴사성용해, 알포트 증후군, 폐포염, 알러지성 폐포염, 섬유성 폐포염, 사이질 폐 질환, 결절 홍반, 괴저성 농피증, 수혈 반응, 다카야수 동맥염, 류마티스성 다발근육통, 일시적 동맥염, 주혈협충병, 거대세포 동맥염, 회충증, 아스페르길루스증, 샘프터 증후군, 습진, 림프종모양 육아종증, 베체트병, 카플란 증후군, 가와사키병, 뎅기열, 뇌척수염, 심내막염, 심내막심근 섬유증, 내안구염, 지속시간 융기 홍반, 건선, 태아 적모구증, 호산구 근막염, 슐만 증후군, 펠티 증후군, 사상충증, 모양체염, 만성 모양체염, 헤테로만성 모양체염, 푸치스 모양체염, IgA 신병증, 헨노흐-숀라인 자반병, 이식편대 숙주 질환, 이식 거부, 심근병증, 이튼-람베르트 증후군, 재발 다연골염, 한성글로불린혈증, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 이반 증후군, 및 자가면역 성선부전증.
일부 구현예에서, 자가면역 질환은 B 림프구의 장애 (예를 들면, 전신 홍반성 낭창, 굿파스투어 증후군, 류마티스성 관절염, 및 I형 당뇨병), Th1-림프구 (예를 들면, 류마티스성 관절염, 다발성 경화증, 건선, 쇼그렌 증후군, 하시모토 갑상선염, 그레이브스병, 원발성 담도성 간경변증, 베게너 육아종증, 결핵, 또는 이식편대 숙주 질환), 또는 Th2-림프구 (예를 들면, 아토피 피부염, 전신 홍반성 낭창, 아토피성 천식, 비결막염 알러지성 비염, 오멘 증후군, 전신 경화증, 또는 만성 이식편 대 숙주 질환)이다. 일반적으로, 수지상 세포와 관련된 장애는 Th1-림프구 또는 Th2-림프구의 장애와 관련된다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애는 T 세포-매개된 면역학적 장애이다.
일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.01 내지 약 10 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.01 내지 약 5 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.05 내지 약 5 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.1 내지 약 5 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.1 내지 약 4 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.05 내지 약 3 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.1 내지 약 3 mg/kg의 범위이다. 일부 구현예에서, 투여되는 컨쥬게이트의 양은 복용량당 약 0.1 내지 약 2 mg/kg의 범위이다.
약물 부하
약물 부하(p)는 항체와 같은 세포 결합제 당 PBD 약물의 평균 개수이다. 본 발명의 화합물이 시스테인에 결합하는 경우, 약물 부하는 세포 결합제 당 1 내지 8개의 약물 (D) 범위일 수 있다. 즉 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 및 8개 약물 모이어티가 세포 결합제에 공유적으로 부착된다. 컨쥬게이트의 조성물은 1 내지 8의 범위의 약물과 컨쥬게이트된 항체와 같은 세포 결합제의 집합을 포함한다. 본 발명의 화합물이 리신에 결합하는 경우, 약물 부하는, 40, 20, 10 또는 8개의 상한이 바람직할 수 있다 할지라도, 세포 결합제 당 1 내지 80개 약물 (D)의 범위일 수 있다. 컨쥬게이트의 조성물은 1 내지 80개, 1 내지 40개, 1 내지 20개, 1 내지 10개, 또는 1 내지 8개의 범위의 약물과 컨쥬게이트된 항체와 같은 세포 결합제의 집합을 포함한다.
컨쥬게이션 반응으로부터의 ADC의 제조에서 항체 당 약물의 평균 개수는 UV, 역상 HPLC, HIC, 질량분광분석법, ELISA 분석 및 전기영동과 같은 통상의 수단에 의해 특성화될 수 있다. 또한, p의 관점에서 ADC의 정량적 분포가 결정될 수 있다. ELISA에 의해, ADC의 특정 제조에서, p의 평균값이 결정될 수 있다 (Hamblett et a (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Sanderson 등 (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). 그러나, p (약물) 값의 분포는 ELISA의 항체-항원 결합 및 검출 한계에 의해 구별될 수 없다. 또한, 항체-약물 컨쥬게이트의 검출을 위한 ELISA 분석은, 특정 아미노산 잔기 또는 중쇄 또는 경쇄 단편과 같이, 약물 모이어티가 항체에 부착되는 경우에는 고려하지 않는다. 일부 예에서, p가 다른 약물 부하의 ADC로부터의 특정 값인 경우, 동종 ADC의분리, 정제 및 특성화는 역상 HPLC 또는 전기영동과 같은 수단에 의해 성취될 수 있다. 이러한 기술은 또한 다른 유형의 컨쥬게이트에도 적용될 수 있다.
일부 항체-약물 컨쥬게이트에서, p는 항체 상의 부착 위치의 수에 의해 제한될 수 있다. 예를 들어, 항체는 단지 하나의 또는 수 개의 시스테인 티올기를 가질 수 있고, 링커가 부착될 수 있는 하나의 또는 수 개의 충분한 반응성의 티올기를 가질 수 있다. 고 약물 부하, 예를 들어 p＞5는 특정 항체-약물 컨쥬게이트의 세포 투과성의 손실, 응집, 불용성 또는 독성을 야기할 수 있다.
일반적으로, 이론적 최대치보다 적은 수의 약물 모이어티가 컨쥬게이션 반응 동안 항체에 컨쥬게이트된다. 항체는, 약물-링커와 반응하지 않는 다수의 리신 잔기를 포함할 수 있다. 가장 반응성이 큰 리신 기만이 아민-반응 링커 시약과 반응할 수 있다. 또한, 가장 반응성이 큰 시스테인 기만이 티올-반응 링커 시약과 반응할 수 있다. 일반적으로, 항체는 존재하는 경우, 약물 모이어티에 연결될 수 있는 다수의 유리 및 반응성 시스테인 티올을 포함하지 않는다. 상기 화합물의 항체 내의 대부분의 시스테인 티올 잔기는 이황화 가교로서 존재하고, 부분적 또는 전체적 환원 조건에서, 디티오트레이톨 (DTT) 또는 TCEP와 같은 환원제에 의해 환원될 수 있다. ADC의 부하 (약물/항체 비율)는 하기의 방법을 포함하는 다수의 상이한 방법으로 조절될 수 있다: (i) 항체와 관해 몰 과량의 약물-링커의 제한, (ⅱ) 컨쥬게이션 반응시간 또는 온도의 제한, 및 (ⅲ) 시스테인 티올 변형을 위한 환원 조건의 부분적 또는 제한.
특정 항체는 환원가능한 사슬간 환원성 디설파이드, 즉 시스테인 가교를 갖는다. 항체는 DTT (디티오트레이톨)와 같은 환원제를 이용한 처리에 의해 링커 시약과 컨쥬게이션을 위해 반응할 수 있다. 각각의 시스테인 가교는 따라서 이론적으로 2 개의 반응성 티올 친핵체를 형성할 것이다. 추가의 친핵성 그룹은 아민을 티올로 변환시키는 리신과 2-이미노티올란 (트라우트 (Traut) 시약)과의 반응을 통해서 항체 내에 도입될 수 있다. 반응성 티올 기는 1, 2, 3, 4, 또는 그 이상의 시스테인 잔기를 조작 (예를 들어, 하나 이상의 비-천연 시스테인 아미노산 잔기를 포함하는 돌연변이체 항체 제조)함으로써, 항체 (또는 이의 단편)로 도입될 수 있다. US 7521541은 반응성 시스테인 아미노산의 도입에 의한 항체 조작에 대해 교시하고 있다.
시스테인 아미노산은, 사슬내 또는 분자간 이황화 가교를 형성하지 않는 항체 내의 반응성 위치에서 조작될 수 있다 (Junutula, 등., 2008b Nature Biotech., 26(8):925-932; Dornan 등 (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249). 조작된 시스테인 티올은 말레이미드 또는 알파-할로 아미드와 같은 티올-반응성, 친전자성 기를 갖는 약물-링커 시약 또는 링커 시약과 반응할 수 있고, 이에 따라 시스테인 조작 항체 및 PBD 약물 모이어티를 갖는 ADC를 형성할 수 있다. 따라서, 약물 모이어티의 위치는 설계 및 조절될 수 있고, 알 수 있다. 조작된 시스테인 티올 기는 일반적으로 고 수율로 티올-반응성 링커 시약 또는 약물-링커 시약과 반응하기 때문에, 약물 부하가 조절될 수 있다. 중쇄 또는 경쇄의 단일 위치에서 치환에 의해 시스테인 아미노산을 도입시키는 IgG 항체의 조작은 대칭 항체에 2개의 새로운 시스테인을 제공한다. 약 2개의 약물 부하는 컨쥬게이션 생성물 ADC의 대략적인 동종성에 의해 성취된다.
항체의 하나 이상의 친핵성 또는 친전자성 기가 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응한 다음, 약물 모이어티 시약과 반응하는 경우, 그 후 생성된 생성물은, 예를 들어 1, 2, 3개 등과 같은 항체에 부착된 약물 모이어티의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물이다. 중합체 역상 (PLRP) 및 소수성 상호작용 (HIC)과 같은 액체 크로마토그래피 방법은 약물 부하 값에 의해 혼합물에서 화합물을 분리시킬 수 있다. 단일 약물 부하 값 (p)을 갖는 ADC의 제조물이 단리될 수 있으나, 이러한 단일 부하 값 ADC는, 약물 모이어티가 항체의 상이한 위치에서 링커를 통해 부착될 수 있기 때문에, 여전히 이종 혼합물일 수 있다.
따라서, 항체가 하나 이상의 PBD 약물 모이어티를 가지고, 약물 모이어티가 다양한 아미노산 잔기에서 항체에 부착될 수 있는 경우, 본 발명의 항체-약물 컨쥬게이트 조성물은 항체-약물 컨쥬게이트 화합물의 혼합물을 포함한다.
일 구현예에서, 세포 결합제 당 이량체 피롤로벤조디아제핀 기의 평균 수는 1 내지 20개의 범위 내이다. 일부 실시형태에서, 상기 범위는 1 내지 8개, 2 내지 8개, 2 내지 6개, 2 내지 4개, 및 4 내지 8개로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 세포 결합제 당 하나의 이량체 피롤로벤조디아제핀 기가 존재한다.
일반적인 합성 경로
PBD 화합물의 합성은 하기와 같은 참조문헌에 넓게 논의되어 있고, 이는 본원에 참조로 포함되어 있다:
a) WO 00/12508 (페이지 14 내지 30);
b) WO 2005/023814 (페이지 3 내지 10);
c) WO 2004/043963 (페이지 28 내지 29); 및
d) WO 2005/085251 (페이지 30 내지 39).
합성 경로
R20 및 R21이 이들이 결합 된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중 결합을 형성하는 화학식 I의 본 발명의 화합물은 하기 화학식 II의 화합물로부터 합성 될 수있다:
Figure 112019107278289-pct00027
화학식 2
여기서, R6, R7, R9, R6', R7', R9', R11b, Y, Y' 및 R"는 화학식 I의 화합물에서 정의된 바와 같고, RLL은 RL의 전구체이다 - 이 방법은 화학식 I의 화합물 (여기서, RL은 화학식 IIIa이다)에 특히 적용될 수 있다. 이들 화합물에 대해서는, RLL은 통상 RL의 일부분, 예컨대 화학식 IIIa'의 기일 것이다:
Figure 112019107278289-pct00028
. 상기 경우에서, 반응은 GL 기의 첨가를 포함한다. 두번째 필수 단계는 ProtO 그룹 제거이다.
화학식 2의 화합물은 화학식 3의 화합물의 RLL기를 탈보호함으로써 제조될 수 있다:
Figure 112019107278289-pct00029
화학식 3
여기서, R6, R7, R9, R6', R7', R9', R11b, Y, Y' 및 R"는 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 같고, RLL - Prot은 RLL의 보호된 버전이고, ProtN은 RLL 보호기와 직교하는 단순한 질소 보호기(예들 들어, Fmoc, Boc)를 나타낸다.
화학식 3의 화합물은 화학식 4의 화합물을 폐환(ring-closure)함으로써 제조될 수 있고:
Figure 112019107278289-pct00030
화학식 4
여기서, 폐환은 산화, 예를 들어 스원 산화반응(Swern oxidation)에 의해 실시된다.
화학식 4의 화합물은, 화학식 5의 화합물로부터 2개의 보호기를 단계별 첨가함으로서 합성될 수 있다:
Figure 112019107278289-pct00031
화학식 5
이것은 아미노기의 간단한 보호에 의해 달성될 수 있으며, 이는 최종 화합물 (예를 들어, Fmoc, Boc)에서 아마노 결합을 초래할 것이며, 그 후 또 다른 아미노기에 원하는 보호기를 배치함으로서 달성될 수 있다.
화학식 I의 화합물 (여기서, RL은 화학식 IIIb의 화합물임)은, 완전한 RL 기가 화학식 5의 화합물로부터 시작하여 배치될 수 있기는 하지만, 보호된 전구체를 사용하기보다는 유사한 방식으로 합성될 수 있다.
화학식 5의 화합물은 공지의 방법, 예컨대 WO 2011/130598에 기재된 방법에 의해 합성될 수 있다.
대안적으로, 화학식 4의 화합물은 실시예 3에 보여진 바와 같이 단량체 경로에 의해 합성될 수 있다.
R20 및 R21이 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중 결합을 형성하지 않는 화학식 I의 본 발명의 화합물은 상기 경로에 대한 변형에 의해 이루어질 수 있다.
약물 컨쥬게이트의 합성
본 컨쥬게이트는 앞서 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 항체는 문헌 [Doronina 등., Nature Biotechnology, 2003, 21, 778-784]에 기재된 바와 같은 약물 링커 화합물에 컨쥬게이션될 수 있다. 간단하게는, pH 7.4에서 50 mM 나트륨 보레이트를 함유하는 PBS 중의 항체 (4-5 mg/㎖)는 37℃에서 트리스(카복시에틸)포스핀 하이드로클로라이드 (TCEP)로 환원된다. 사슬간 이황화물을 환원시키는 반응의 진행은 5,5'-디티오비스(2-니트로벤조산)과의 반응으로 모니터링되고, 티올/mAb의 원하는 수준이 달성될 때까지 진행될 수 있게 한다. 환원된 항체는 이후 0℃로 냉각되고, 항체 티올당 1.5 당량의 말레이미드 약물-링커로 알킬화된다. 1시간 이후, 반응은 5 당량의 N-아세틸 시스테인의 첨가에 의해 퀀칭된다. 퀀칭된 약물 링커는 PD-10 칼럼에 걸쳐 겔 여과에 의해 제거된다. ADC는 이후 0.22㎛ 주사기 필터를 통해 멸균-여과된다. 단백질 농도는 각각 280nm 및 329nm에서의 스펙트럼 분석, 및 280nm에서의 약물 흡광도의 기여도에 대한 보정에 의해 결정될 수 있다. 크기 배제 크로마토그래피는 항체 응집의 정도를 결정하기 위해 사용될 수 있고, RP-HPLC는 NAC-퀀칭된 약물-링커의 수준을 결정하기 위해 사용될 수 있다.
추가의 선호사항
하기의 선호사항은 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 모든 양태에 적용될 수 있거나, 또는 단일 양태와 관련될 수 있다. 선호사항은 임의의 조합으로 함께 조합될 수 있다.
일부 구현예에서, R6', R7', R9', 및 Y'는 각각 R6, R7, R9, 및 Y와 동일한 기들로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R6', R7', R9', 및 Y'는 각각 R6, R7, R9, 및 Y와 동일하다.
N10'-C11'
일부 구현예에서, R20은 H이고, R21은 OH, ORA이며, 여기서 RA는 C1-4 알킬이다. 이들 구현예 중 일부에서, R21은 OH이다. 이들 구현예 중 다른 일부에서, R21은 ORA이며 여기서 RA는 C1-4 알킬이다. 이들 구헌예 중 일부에서, RA는 메틸이다.
일부 구현예에서, R20 및 R21은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중 결합을 형성한다.
일부 구현예에서, R20은 H이고, R21은 SOzM이며, 여기서 z는 2 또는 3이고 M은 1가 약제학적으로 허용가능한 양이온이다. 이들 구현예 중 일부에서, M은 1가 약제학적으로 허용가능한 양이온이고, Na+일 수 있다. 또한, 일부 구현예에서 z는 3이다.
일부 구현예에서, R20은 H이고 R21은 H이다.
R20이 (d-iii)인 일부 구현예에서, 예를 들어, RZ에 직교하는 벤젠 고리 상에 추가의 니트로기일 수 있다.
일부 구현예에서, R21은 OH 또는 ORA이며, 여기서 RA는 C1-4 알킬이고 R20은 하기로부터 선택된다:
Figure 112019107278289-pct00032
Figure 112019107278289-pct00033
-C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-는 디펩티드를 나타낸다. 디펩티드 내의 아미노산은 천연 아미노산의 임의의 조합일 수 있다. 디펩티드는 카텝신-매개 절단에 대한 작용 부위일 수 있다.
일부 구현예에서, 디펩티드, -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-는 하기로부터 선택된다:
-Phe-Lys-,
-Val-Ala-,
-Val-Lys-,
-Ala-Lys-,
-Val-Cit-,
-Phe-Cit-,
-Leu-Cit-,
-Ile-Cit-,
-Phe-Arg-,
-Trp-Cit-
여기서 Cit는 시트룰린이다.
바람직하게는, 디펩티드, -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-는 하기로부터 선택된다:
-Phe-Lys-,
-Val-Ala-,
-Val-Lys-,
-Ala-Lys-,
-Val-Cit-.
보다 바람직하게는, 디펩티드, -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-는 -Phe-Lys- 또는 -Val-Ala-이다.
문헌[Dubowchik et　al., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869]에 기술된 것들을 포함하는 다른 디펩티드 조합이 사용될 수 있으며, 이는 본원에 참고로 포함된다.
일 구현예에서, 아미노산 측쇄는 적절한 경우 유도체화된다. 예를 들어, 아미노산 측쇄의 아미노기 또는 카르복시기는 유도체화될 수 있다.
일 구현예에서, 리신과 같은 측쇄 아미노산의 아미노기 NH2는 NHR 및 NRR'로 이루어진 군으로부터 선택된 유도체 형태이다.
일 구현예에서, 아스파르산과 같은 측쇄 아미노산의 카르복시기 COOH는 COOR, CONH2, CONHR 및 CONRR'로 이루어진 군으로부터 선택된 유도체 형태이다.
일 구현예에서, 아미노산 측쇄는 적절한 경우 화학적으로 보호된다. 측쇄 보호기는 전술한 바와 같은 기일 수 있다. 본 발명자는 보호된 아미노산 서열이 효소에 의해 절단될 수 있음을 확립하였다. 예를 들어, Boc 측쇄-보호된 Lys 잔기를 포함하는 디펩티드 서열이 카텝신에 의해 절단될 수 있음을 확립하였다.
아미노산이 측쇄에 대한 보호기는 당업계에 공지되어 있고 Novabiochem 카탈로그에 기재되어 있다. 추가 보호기 전략은 유기 합성, Greene 및 Wuts의 보호기에 정리되어 있다.
반응성 측쇄 작용기를 갖는 아미노산에 대해 가능한 측쇄 보호기가 아래에 제시되어 있다:
Arg: Z, Mtr, Tos;
Asn: Trt, Xan;
Asp: Bzl, t-Bu;
Cys: Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt;
Glu: Bzl, t-Bu;
Gln: Trt, Xan;
His: Boc, Dnp, Tos, Trt;
Lys: Boc, Z-Cl, Fmoc, Z, Alloc;
Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS;
Thr: Bz;
Trp: Boc;
Tyr: Bzl, Z, Z-Br.
일 구현예에서, 측쇄 보호는 존재하는 경우 캡핑 기로서 또는 캡핑 기의 일부로서 제공된 기에 직교하도록 선택된다. 따라서, 측쇄 보호기의 제거는 캡핑기 또는 캡핑기의 일부인 임의의 보호기 작용기를 제거하지 않는다.
본 발명의 다른 구현예에서, 선택된 아미노산은 반응성 측쇄 작용기가 없는 것들이다. 예를 들어, 아미노산은 Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, 및 Val로부터 선택될 수 있다.
L1이 디펩티드를 포함하는 경우, -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-가 동일한 디펩티드인 것이 본 발명에서 특히 바람직하다.
다른 바람직한 R20 기는 하기를 포함한다:
Figure 112019107278289-pct00034
및
Figure 112019107278289-pct00035
.
이량체 링크
일부 구현예에서, Y 및 Y'은 모두 O이다.
일부 구현예에서, R"는 치환기가 없는 C3-7 알킬렌기이다. 일부 구현예에서, R"는 C3, C5 또는 C7 알킬렌이다. 특히, R"는 C3 또는 C5 알킬렌일 수 있다.
다른 구현예에서, R"는 이하의 화학식의 기이다:
Figure 112019107278289-pct00036
(여기서, r은 1 또는 2이다).
페닐렌기는 피리딜렌기로 대체될 수 있다.
R 6 내지 R 9
일부 구현예에서, R9은 H이다.
일부 구현예에서, R6은 H, OH, OR, SH, NH2, 니트로 및 할로로부터 선택되고, H 또는 할로로부터 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, R6은 H이다.
일부 구현예에서, R7은 H, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 및 할로로부터 선택된다. 일부 구현예에서, R7은 H, OH 및 OR로부터 선택되고, 여기서 R은 선택적으로 치환된 C1-7 알킬, C3-10 헤테로사이클릴 및 C5-10 아릴기로부터 선택된다. R은 더욱 바람직하게는 치환 또는 비치환될 수 있는 C1-4 알킬기일 수 있다. 관심 치환기는 C5-6 아릴기 (예를 들어, 페닐)이다. 7-위치에서 특히 바람직한 치환기는 OMe 및 OCH2Ph이다. 특히 관심있는 다른 치환기는 디메틸아미노 (즉, -NMe2); -(OC2H4)qOMe (여기서, q는 0 내지 2임); 질소-함유 C6 헤테로사이클릴 (모르폴리노, 피페리디닐 및 N-메틸-피페라지닐을 포함)이다.
이들 구현예 및 선호 사항은 R9', R6' 및 R7'에 각각 적용된다.
R 11b
일부 구현예에서, R11b는 OH이다.
일부 구현예에서, R11b는 ORA이고, 여기서 RA는 C1-4 알킬이다. 일부 구현예에서, RA는 메틸이다.
본 발명의 제1 측면의 일부 구현예는, 화학식 Ia, Ib 또는 Ic의 화합물이다:
Figure 112019107278289-pct00037
Figure 112019107278289-pct00038
Figure 112019107278289-pct00039
여기서, R1a는 메틸 및 벤질로부터 선택된다;
RL 및 R11b는 상기에서 정의한 바와 같다.
이들 구현예 및 선호도는 또한 본 발명의 제2 측면에 적용된다.
링커 ( R L )
일부 구현예에서, RL은 화학식 IIIa을 갖는다.
일부 구현예에서, RLL은 화학식 IIIa'을 갖는다.
G L
GL은 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
Figure 112019107278289-pct00040
Figure 112019107278289-pct00041
여기서, Ar은 C5-6 아릴렌기, 예를 들어, 페닐렌을 나타낸다.
일부 구현예에서, GL은 GL1-1 및 GL1-2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, GL은 GL1-1이다.
G LL
GLL은 이하의 것들로부터 선택될 수 있다:
Figure 112019107278289-pct00042
여기서, Ar은 C5-6 아릴렌기, 예를 들어, 페닐렌을 나타낸다.
일부 구현예에서, GL는 GLL1 -1 및 GLL1 -2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, GLL은 GLL1-1이다.
X
X는
Figure 112019107278289-pct00043
이며,
여기서, a = 0 내지 5이고, b = 0 내지 16이고, c = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이다.
a는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 구현예에서, a는 0 내지 3이다. 일부 구현예에서, a는 0 또는 1이다. 추가적인 구현예에서, a는 0이다.
b는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16일 수 있다. 일부 구현예에서, b는 0 내지 12이다. 일부 구현예에서, b는 0 내지 8이고, 0, 2, 4 또는 8일 수 있다.
c는 0 또는 1일 수 있다.
d는 0, 1, 2, 3, 4 또는 5일 수 있다. 일부 구현예에서, d는 0 내지 3이다. 일부 구현예에서, d는 1 또는 2이다. 추가적인 구현예에서, d는 2이다.
X의 일부 구현예에서, a는 0이고, c는 1이고, d는 2이고, b는 0 내지 8일 수 있다. 일부 구현예에서, b는 0, 4 또는 8이다.
Q
하나의 구현예에서, Q는 아미노산 잔기이다. 아미노산은 천연 아미노산 또는 비-천연 아미노산일 수 있다.
하나의 구현예에서, Q는 Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg, 및 Trp로부터 선택되며, 여기서 Cit은 시트룰린이다.
하나의 구현예에서, Q는 디펩티드 잔기을 포함한다. 디펩티드 내의 아미노산은 천연 아미노산과 비-천연 아미노산의 어느 조합일 수 있다. 일부 구현예에서, 디펩티드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정 링커인 경우, 디펩티드는 카텝신-매개 절단을 위한 작용 부위이다. 디펩티드는 이후 카텝신에 대한 인식 부위이다.
하나의 구현예에서, Q는 이하의 것들로부터 선택된다:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH,
CO-Phe-Cit-NH,
CO-Leu-Cit-NH,
CO-Ile-Cit-NH,
CO-Phe-Arg-NH, 및
CO-Trp-Cit-NH;
여기서, Cit는 시트룰린이다.
바람직하게는, Q는 이하의 것들로부터 선택된다:
CO-Phe-Lys-NH,
CO-Val-Ala-NH,
CO-Val-Lys-NH,
CO-Ala-Lys-NH,
CO-Val-Cit-NH.
가장 바람직하게는, Q는 CO-Phe-Lys-NH, CO-Val-Cit-NH 및 CO-Val-Ala-NH로부터 선택된다.
다른 관심 디펩티드 조합은 이하의 것들을 포함한다:
CO-Gly-Gly-NH,
CO-Pro-Pro-NH, 및
CO-Val-Glu-NH.
본원에 참고로 포함된 Dubowchik 등, Bioconjugate Chemistry, 2002, 13, 855-869에 기술된 것들을 포함하는, 다른 디펩티드 조합이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, QX는 트리펩티드 잔기이다. 트리 펩티드 내의 아미노산은 천연 아미노산과 비-천연 아미노산의 어느 조합일 수 있다. 일부 구현예에서, 트립펩티드는 천연 아미노산을 포함한다. 링커가 카텝신 불안정 링커인 경우, 트리펩티드는 카텝신-매개 절단을 위한 작용 부위이다. 트리펩티드는 이후 카텝신에 대한 인식 부위이다.
하나의 구현예에서, 아미노산 측쇄는 적절한 경우 화학적으로 보호된다. 측쇄 보호기는 이하에서 논의될 기일 수 있다. 보호된 아미노산 서열은 효소에 의해 절단가능하다. 예를 들어, Boc 측쇄-보호된 Lys 잔기을 포함하는 디펩티드 서열은 카텝신에 의해 절단가능하다.
아미노산 측쇄를 위한 보호기는 당업계에 잘 알려져 있고, Novabiochem 카탈로구에 기재되며, 상기에서 기술되었다.
일부 구현예에서, RL은 화학식 IIIb을 갖는다.
일부 구현예에서, RLL은 화학식 IIIb'을 갖는다.
RL1 및 RL2은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌기를 형성한다.
일부 구현예에서, RL1 및 RL2는 모두 H이다.
일부 구현예에서, RL1은 H이고, RL2은 메틸이다.
일부 구현예에서, RL1 및 RL2은 모두 메틸이다.
일부 구현예에서, RL1 및 RL2은 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 기를 형성한다.
일부 구현예에서, RL1 및 RL2는 이들이 부착된 탄소 원자와 함께 사이클로부틸렌기를 형성한다.
IIIb 기에서는, 일부 구현예에서, e는 0이다. 다른 구현예에서, e는 1이고, 니트로기는 고리의 이용가능한 어느 위치에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 오쏘 위치에 있다. 다른 추가적인 구현예에서, 이는 파라 위치에 있다.
하나의 특정 구현예에서, 본 발명의 제1 측면은 화학식 (Id)의 화합물을 포함한다:
Figure 112019107278289-pct00044
여기서 Q는 하기로부터 선택된다:
(a) -CH2-;
(b) -C3H6-; 및
(c)
Figure 112019107278289-pct00045
.
본 발명의 제2 측면의 하나의 특정 구현예에서, 약물 링커 (DL)는 화학식 (Id')을 갖는다:
Figure 112019107278289-pct00046
여기서 Q는 하기로부터 선택된다:
(a) -CH2-;
(b) -C3H6-; 및
(c)
Figure 112019107278289-pct00047
.
본 발명의 일부 구현예에서, C11 치환기는 이웃하는 기에 대해 이하의 입체적 배열을 할 수 있다:
Figure 112019107278289-pct00048
다른 구현예에서, C11 치환기는 이웃하는 기에 대해 이하의 입체적 배열을 할 수 있다:
Figure 112019107278289-pct00049
실시예
일반적인 정보
플래쉬 크로마토그래피는 88% 헥산/EtOAc 또는 99.9% DCM/MeOH로부터 개시하여, 컬럼으로부터 모든 UV 활성 성분 (214 및 254nm에서 검출)이 용출될 때까지, Biotage Isolera 1™을 사용하여 수행하였다. UV 활성 물질의 실질적인 용출이 관찰될 때마다 구배를 수동으로 유지시켰다. 알루미늄 플레이트 상의 형광 표지를 갖는, Merck Kieselgel 60 F254 실리카겔을 사용하는 박층 크로마토그래피 (TLC)를 사용하여, 분획을 순도에 대해 체크하였다. TLC의 시각화는 달리 기재된 바 없는 경우, UV 광 또는 요오드 증기로 달성하였다. 추출 및 크로마토그래피 용매를 VWR, U.K.로부터 구입하여, 추가의 정제 없이 사용하였다. 모든 정밀 화학물질은 달리 기재된 바 없는 경우, Sigma-Aldrich 또는 TCI Europe 사로부터 구입하였다. 페길화 시약은 Stratech UK를 통해 Quanta biodesign 사로부터 입수하였다.
1H 및 13C NMR 스펙트럼은 Bruker Avance® 400 스펙트로미터로 수득하였다. 커플링 상수는 헤르츠 (Hz)로 제시되었다. 화학적 이동(shift)은 테트라메틸실란으로부터 하류에서 백만분율(ppm)로 기록되었다. 스핀 다중성은 s (단일선), bs (넓은 단일선), d (이중선), t (삼중선), 및 m (다중선)으로 기재되었다.
(반응 모니터링 및 순도 결정을 위한) 분석 LC/MS 조건은 이하와 같다: 양성 모드 전기분무 질량 스펙트로스코피는 Shimadzu Nexera®/Prominence® LCMS-2020를 사용하여 수행하였다. 사용된 이동상은 용매 A (0.1% 포름산을 포함하는 H2O) 및 용매 B (0.1% 포름산을 포함하는 CH3CN)이다. 통상의 3-분 전개를 위한 구배: 초기 조성물은 5% B에서 25초 동안 유지한 후, 1분 35초의 시기에 걸쳐 5% B에서 100% B로 증가되었다. 조성물은 100% B에서 50초 동안 유지한 후, 5초 내에 5% B로 돌아오고, 거기에서 5초 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 3.0분이었다. 15-분 전개를 위한 구배: 초기 조성물 5% B가 1분에 걸쳐 유지된 후, 5% B로부터 100% B로 9분 시기에 걸쳐 증가되었다. 조성물은 100% B에서 2분간 유지된 후, 10초 내에 5% B로 돌아오고, 거기에서 2분 50초 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 15.0분이다. 유속은 0.8㎖/분 (3-분 전개시) 및 0.6㎖/분 (15-분 전개시)이다. 254nm에서 탐지하였다. 컬럼: Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard 예비-컬럼, 130A, 1.7㎛, 2.1mm×5mm이 장착된 Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 1.7㎛ 2.1×50mm (50℃에서)(통상의 3-분 전개); 및 Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard 예비-컬럼 (130A, 1.7㎛, 2.1mm×5mm)이 장착된 ACE Excel 2 C18-AR (2μ, 3.0×100mm) (15-분 전개).
분취용 HPLC 조건은 이하와 같다: 역상의 매우 신속한 고성능 액체 크로마토그래피(UFLC)는 Phenomenex® Gemini NX 5μ C18 컬럼 (50℃에서) : 150×21.2 mm을 사용하는 Shimazdzu Prominence® 기계를 사용하여 수행되었다. 사용된 용출제는 용매 A (0.1% 포름산을 포함하는 H2O) 및 용매 B (0.1% 포름산을 포함하는 CH3CN)이다. 모든 UFLC 실험은 이하의 구배 조건에서 수행되었다: 방법 A: 초기 조성물 13% B는 15분 시기에 걸쳐 60% B로 증가된 후, 2분에 걸쳐 100% B로 증가되었다. 조성물은 100% B에서 1분간 유지된 후, 0.1분 내에 13% B로 돌아오고, 거기에서 1.9분 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 20.0분이었다. 유속은 20.0mL/분이었고, 254 및 280 nm에서 탐지되었다.
방법 B: 초기 조성물 13% B는 17분 시기에 걸쳐 70% B로 증가되었고 2분에 걸쳐 유지된 후, 0.1 분 내에 13% B로 돌아오고, 거기에서 1.9분 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 20.0분이었다. 유속은 20.0 mL/분이었고 223 nm에서 탐지되었다.
방법 C: 초기 조성물 13% B는 15분 시기에 걸쳐 75% B로 증가된 후, 2분에 걸쳐 100% B로 증가되었다. 조성물은 100% B에서 1분간 유지된 후, 0.1분 내에 13% B로 돌아오고, 거기에서 1.9분 동안 유지되었다. 구배 전개의 총 지속시간은 20.0분이었다. 유속은 20.0mL/분이었고, 254 및 280 nm에서 탐지되었다.
실시예 1
Figure 112019107278289-pct00050
Figure 112019107278289-pct00051
Figure 112019107278289-pct00052
(a) (((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스(((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)메탄온) ( I2 )
DMF (12방울)를 무수 DCM (150㎖) 중의 비스-니트로벤조산 I1 (10g, 21.5mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (5.6㎖, 8.2g, 64.5mmol)의 교반된 현탁액에 첨가하였다. 초기 발포 후, 반응 현탁액은 용액이 되고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 진공에서 증발시켜 대부분의 용매를 제거하고 생성된 농축 용액을 최소량의 건조 DCM에 재용해시키고 디에틸 에테르로 분쇄하였다(triturate). 생성된 황색 침전물을 진공 여과하여 수집하고, 차가운 디에틸 에테르로 세척하고 40℃의 진공 오븐에서 1시간 동안 건조시켰다. 고체 산 클로라이드를 -40℃ (드라이 아이스/CH3CN)에서 DCM (100㎖) 중의 (S)-(+)-2-피롤리딘메탄올 (5.0g, 4.9㎖, 49.5mmol) 및 TEA (15.0㎖, 10.9g, 108mmol)의 교반된 현탁액에 나누어 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 체류시간 1.33분, ES+ m/z 655 [M+Na]+, 633 [M+H]+에서 독점적으로 원하는 생성물로 LC/MS에 의해 판단된 대로 반응이 완료되었다. 혼합물을 DCM (100㎖)으로 희석하고 1N HCl (2×50㎖), 포화 NaHCO3 (3×40㎖), 염수 (50㎖)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과하고 용매를 진공에서 증발시켜 순수한 생성물 I2를 황색 고체로서 얻었다 (13.6g, 100% 수율).
(b) ((2S,2'S)-(4,4'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로벤조일))비스 (피롤리딘-1,2-디일))비스(메틸렌) 디아세테이트 ( I3 )
건조 DCM (25㎖) 중의 Ac2O (4.47㎖, 4.83g, 47.3mmol)의 용액을 아르곤 분위기 하에 0℃ (얼음/아세톤)에서 건조 DCM (125㎖) 중의 비스-알콜 I2 (13.6g, 21.5mmol), DMAP (263mg, 2.15mmol) 및 피리딘 (4.17㎖, 4.08g, 51.6mmol)의 교반된 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 가온하고 실온에서 1시간 후 LC/MS에 의한 분석은 체류시간 1.55분, ES+ m/z 740 [M+Na]+, 717 [M+H]+에서 반응 완료 및 원하는 생성물로의 완전한 변환을 나타냈다. 혼합물을 DCM (20㎖)으로 희석하고 1N HCl (2×100㎖), H2O (25㎖), 염수 (50㎖)로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 여과하고 용매를 진공에서 증발시켜 미정제 비스-아세테이트 I3을 황색 고체 (14.4g, 94% 수율)로서 얻었고, 이의 순도는 만족스러워 추가 정제없이 다음 단계로 진행하였다.
(c) ((2S,2'S)-(4,4'-(프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(2-아미노-5-메톡시 벤조일))비스 (피롤리딘-1,2-디일))비스(메틸렌) 디아세테이트 ( I4 )
10% Pd-C (132mg)의 샘플을 EtOAc (10㎖)로 조심스럽게 처리하여 슬러리를 얻고,이를 수소화 용기에서 EtOAc (20㎖) 및 EtOH (30㎖) 중의 니트로 화합물 I3 (1.32g, 1.84mmol)의 용액에 첨가하였다. Parr® 장치를 사용하여, 혼합물을 수소 가스로 10psi로 처리하고 실온에서 진탕시킨 후 진공에서 탈기시키고, 이 공정을 추가로 2회 반복하였다. 용기를 45psi로 수소 기체로 채우고, 진탕시키고 수소 소비시 압력을 유지시켰다. LC/MS에 의한 분석은 반응이 3시간 후 불완전하고 45psi에서 3일 동안 (주말) 진탕된 후 생성물로의 만족스러운 전환이 체류시간 1.32분, ES+ m/z 657 [M+H]+에서 달성됨을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공에서 탈기한 후 celite® 패드를 통해 여과하였다. 여액을 진공에서 증발시키고, 생성된 잔여물을 DCM (30㎖)에 재용해시키고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고, 용매를 진공에서 증발시켜 미정제 비스-아닐린 I4를 황색 발포체(1.1g, 91%)로 얻었으며, 이는 8% 불순물을 함유하지만 추가 정제없이 다음 단계로 진행하였다.
(d) ((S)-1-(4-(3-(4-((S)-2-( 아세톡시메틸 ) 피롤리딘 -1- 카보닐 ))-5-(( tert - 부톡시카보닐)아미노)-2-메톡시페녹시)프로폭시)-2-아미노-5-메톡시벤조일)피롤리 딘-2-일)메틸 아세테이트 ( I5 )
Boc2O (330mg, 1.51mmol)를 건조 THF (10㎖) 중의 비스-아닐린 I4 (1.1g, 1.68mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 가열하고 75℃에서 16시간 동안 교반하였다. LC/MS에 의한 분석은 체류시간 1.58분, I% = 50, ES+ m/z 779 [M+Na]+, 757 [M+H]+에서 원하는 모노 Boc 생성물 I5를 나타내고, 이와 함께 체류시간 1.32분, I% = 30에서 미반응 출발 물질을 나타내고, 체류시간 1.81분, I% = 21, ES+ m/z 879 [M+Na]+, 857 [M+H]+에서 비스-Boc 물질을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공에서 증발시켜 THF를 제거하였다. Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 50g, 1분당 100㎖)에 의한 정제로 오렌지 발포체 (519mg, Boc2O를 기준으로 46% 수율, 97% DCM/MeOH로 용출)로서의 모노 Boc 생성물 I5, 미반응 비스-아닐린 I4 (285mg, 95% DCM/MeOH로 용출) 및 비스-Boc (248mg, 98% DCM/MeOH로 용출)를 얻었다.
(e) ((S)-1-(4-(3-(4-((S)-2-(아세톡시메틸)피롤리딘-1-카보닐))-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-2-메톡시페녹시)프로폭시)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)-5- 메톡시벤조일)피롤리딘-2-일)메틸 아세테이트 ( I7 )
트리포스겐 (380mg, 1.28mmol)을 실온에서 건조 DCM (30㎖) 중의 모노 Boc 생성물 I5 (2.69g, 3.56mmol) 및 TEA (1.09㎖, 791mg, 7.83mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 아르곤 하에 10분 동안 교반한 후, LC/MS에 의한 분석은 이소시아네이트로의 완전한 변환을 나타냈다 (MeOH 중에서 샘플화되어, 체류시간 1.66분, ES+ m/z 837 [M+Na]+, 815 [M+H]+에서 메틸 카바메이트를 얻었다). 혼합물을 추가의 TEA (740㎕, 539mg, 5.34mmol)로 처리한 후 링커 I6 (1.34g, 3.56mmol)을 첨가하였다. 아르곤 하에 2시간 동안 교반한 후, LC/MS는 카바메이트 I7로의 만족스러운 변환을 나타냈다 (체류시간 1.74분, (ES+) m/z 1182 [M+Na]+, 1160 [M+H]+). 혼합물을 DCM (80㎖)으로 희석하고 포화 NH4Cl (2×30㎖), H2O (30㎖), 염수 (50㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 진공에서 증발시켜 조 생성물을 얻었다. Isolera™ (헥산/EtOAc, SNAP Ultra 100g, 1분당 100㎖)에 의한 정제로, 황색 발포체 (2.95g, 71% 수율)로서의 순수한 카바메이트 I7 (65% 헥산/EtOAc로 용출)을 얻었다.
(f) tert -부틸 (5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-4-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)프로폭시)-2-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I8 )
고체 K2CO3 (1.75g, 12.7mmol)을 MeOH (60㎖) 및 H2O (12㎖) 중의 아세테이트-보호된 화합물 I7 (2.93g, 2.53mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 체류시간 1.57분, ES+ m/z 1098 [M+Na]+, 1076 [M+H]+에서 원하는 생성물로 LC/MS에 의해 판단된 대로 반응이 완료된 것으로 여겼다. 진공에서 증발시켜 MeOH를 제거하고 생성된 잔여물을 물 (75㎖)과 DCM (75㎖) 사이에 분배하였다. 층을 분리하고 수상을 DCM (3×25㎖)으로 추출하였다. 합한 유기층을 물 (3×50㎖), 염수 (60㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 진공에서 증발시켜 조 생성물을 얻었다. Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100g, 1분당 100㎖)에 의한 정제로 비스-알콜 I8 (97% DCM/MeOH에서 용출)을 백색 발포체 (2.44g, 90% 수율)로서 얻었다.
(g) 4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-피 롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I9 )
건조 DCM (20㎖) 중의 무수 DMSO (710㎕, 780mg, 9.99mmol)의 용액을 아르곤 분위기 하에 -45℃(드라이 아이스/CH3CN)에서 건조 DCM (20㎖) 중의 옥살릴 클로라이드의 교반된 용액 (DCM 중의 2.0M 용액 2.72㎖, 5.44mmol)에 적가하였다. -45℃에서 15분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 건조 DCM (30㎖) 중의 비스-알콜 I8 (2.44g, 2.27 mmol)의 용액으로 적가 처리하였다. -45℃에서 추가로 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 건조 DCM (20㎖) 중의 TEA (3.16㎖, 2.29g, 22.7mmol)의 용액으로 적가 처리하였다. 반응 혼합물을 1.5시간에 걸쳐 실온으로 가온하고 DCM (100㎖)으로 희석한 다음 포화 NH4Cl (2×50㎖), 포화 NaHCO3 (50㎖), 물 (30㎖), 염수(50㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 진공에서 증발시켜 조 생성물을 얻었다. Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100g, 1분당 100㎖)에 의한 정제로 고리형 화합물 I9 (95.7% DCM/MeOH에서 용출)를 황색 발포체 (1.61g, 66% 수율)로서 얻었다: LC/MS I9 체류시간 1.46분, ES+ m/z 1072 [M+H]+, 1094 [M+Na]+.
(h) 4-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I10 )
Pd(PPh3)4 (6.47mg, 5.6μmol)를 건조 DCM (10㎖) 중의 피롤리딘 (29㎕, 25mg, 0.35mmol) 및 Alloc 화합물 I9 (300mg, 0.28mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 실온에서 아르곤 하에 4시간 동안 교반한 후, LC/MS에 의한 분석은 체류시간 1.10분, ES+ m/z 1010 [M+Na]+, 988 [M+H]+에서 원하는 생성물로 반응 완료를 나타냈다. 반응 혼합물을 DCM (30㎖)으로 희석한 다음 포화 NH4Cl (2×20㎖), 염수 (30㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 진공에서 증발시켜 조 생성물을 얻었다. 디에틸 에테르로 분쇄한 후 진공에서 증발시켜 미정제 아민 I10 (261mg, 95% 수율)을 얻었고, 이를 추가 정제 또는 분석없이 다음 단계로 진행하였다.
(i) tert-부틸(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질)옥시)카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I11 )
EDCI (56mg, 0.29mmol)를 실온에서 건조 DCM (10㎖) 중의 MAL-dPEG®8-산 (172mg, 0.29mmol, Stratech Scientific Limited) 및 아민 I10 (261mg, 0.26mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 2.5시간 동안 교반하였고, 이때 LC/MS에 의한 포인트 분석은 체류시간 1.38분, ES+ m/z 1585 [M+Na]+, 1563 [M+H]+에서 원하는 생성물로의 완전한 변환을 나타냈다. 반응 혼합물을 DCM (30㎖)으로 희석하고 H2O (20㎖), 염수 (2×20㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 진공에서 증발시켜 조 생성물을 얻었다. Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25g, 1분당 75㎖)로 정제하여 아미드 I11 (91% DCM/MeOH에서 용출)을 백색 발포체 (277mg, 67% 수율)로서 얻었다.
(j) 4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질(11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-(3-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( 1 )
95:5 v/v TFA/H2O (2㎖)의 용액을 Boc-보호된 화합물 I11 (262mg, 0.17mmol)의 미정제 샘플에 0℃(얼음/아세톤)에서 첨가하였다. 0℃에서 3시간 동안 교반한 후, LC/MS에 의해 체류시간 1.30분, ES+ m/z 1445 [M+H]+에서 원하는 생성물 피크가 관찰되어 반응이 완료된 것으로 간주되었다. 반응 혼합물을 차갑게 유지하고 NaHCO3 (100㎖)의 냉각된 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 DCM (3×30㎖)으로 추출하고 합한 유기층을 염수 (30㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 진공에서 증발시켜 조 생성물을 얻었다. Isolera™ (CHCl3/MeOH, SNAP Ultra 25g, 1분당 25㎖)에 의한 정제로 1 (89.6% CHCl3/MeOH로 용출)을 황색 발포체 (170mg, 70% 수율)로서 얻었다. 분취용 HPLC (방법 A)에 의한 추가 정제에 의해 1을 담황색 발포체 (105mg, 43% 수율)로서 얻었다: LC/MS (15분 전개), 체류시간 5.25분, ES+ m/z 1445 [M+H]+; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9.92 (s, 1H), 8.16 (d, 1H, J = 6.8 Hz), 7.99 (t, 1H, J = 5.7 Hz), 7.86 (d, 1H, J = 8.6 Hz), 7.80 (d, 1H, J = 4.5 Hz), 7.64-7.50 (m, 2H), 7.34 (s, 1H), 7.24-7.13 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.53-6.41 (m, 1H), 5.52-5.41 (m, 1H), 5.13 (d, 1H, J = 12.2 Hz), 4.93-4.77 (m, 1H), 4.42-4.34 (m, 1H), 4.30-3.90 (m, 6H), 3.80-3.60 (m, 4H), 3.80 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.60 (t, 4H, J = 7.3 Hz), 3.53-3.46 (m, 28H), 3.41-3.33 (m, 1H), 3.32-3.29 (m, 2H, H2O에 의해 불분명해짐), 3.19-3.12 (m, 2H), 2.48-1.60, m, 15H), 1.35-1.20 (m, 3H), 0.87 (d, 3H, J = 6.6 Hz), 0.83 (d, 3H, J = 6.8 Hz).
실시예 2
Figure 112019107278289-pct00053
Figure 112019107278289-pct00054
(a) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스 (((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)메탄온) ( I13 )
DMF (5방울)를 무수 CH2Cl2 (65㎖)중의 비스-니트로벤조산 I12 (4.05g, 8.192mmol, 1.0당량) 및 옥살릴 클로라이드 (2M 용액 12.3㎖, 24.57mmol, 3.0당량)의 교반된 현탁액에 첨가하였다. 초기 발포 후, 반응 현탁액은 용액이 되고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 생성된 고체를 Et2O로 분쇄하고 40℃의 진공 오븐에서 3시간 동안 건조시켰다. 고체 산 클로라이드를 -40℃ (드라이 아이스/CH3CN)에서 CH2Cl2 (65㎖) 중의 (S)-(+)-2-피롤리딘메탄올 (1.78㎖, 18.02mmol, 2.2당량) 및 i-Pr2NEt (7.13㎖, 40.96mmol, 5.0당량)의 교반된 현탁액에 나누어 첨가하였다. 1시간 동안 교반 한 후, 반응 온도는 0℃에 도달하였고, 체류시간 1.44분, ES+ m/z 661 [M+H]+, 683 [M+Na]+에서 독점적으로 원하는 생성물로 LC/MS에 의해 판단된 대로 반응이 완료되었다. 혼합물을 CH2Cl2 (100㎖)로 희석하고 H2O, 1N NaOH 및 1M HCl (50㎖)로 연속적으로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 여과하고 용매를 진공에서 증발시켜 순수한 생성물 I13을 황색 발포체 (4.44g, 82% 수율)로서 얻었고, 이를 추가 정제없이 다음 단계에 사용하였다.
(b) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스 (((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)메탄온) ( I14 )
이미다졸 (2.74g, 40.32mmol, 6.0당량)에 이어서 TBSCl (3.04g, 20.16mmol, 3.0당량)을 아르곤 분위기에서 비스-알콜 I13 (4.44g, 6.720mmol, 1.0당량)의 교반된 용액에 나누어 첨가하였다. 90분 후, 반응 혼합물을 여과하고 여액을 H2O로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중의 50-80% EtOAc)로 생성물 I14를 황색 발포체 (4.84g, 5.443mmol, 81% 수율)로서 얻었다. LC/MS 체류시간 = 2.18분, ES+ m/z 889 [M+H]+, 911 [M+Na]+.
(c) ((펜탄-1,5-디일비스(옥시))비스(2-아미노-5-메톡시-4,1-페닐렌))비스 (((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)메탄온) ( I15 )
Zn 분말을 0℃에서 MeOH (40㎖) 중의 비스-니트로 화합물 I14 (1.32g, 1.84mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. MeOH 중의 5% HCO2H를 0℃에서 적가하고 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고, 유기상을 MgSO4상에서 건조시키고 진공에서 농축시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (CHCl3 중의 0-2% MeOH)로 생성물 I15를 담황색 발포체 (3.098mmol, 3.736mmol, 69% 수율)로서 얻었다. LC/MS 체류시간 = 2.09분, ES+ m/z 415 [M + 2H]2+, 829 [M+H]+, 851 [M+Na]+.
(d) tert -부틸 (5-((5-(5-아미노-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I16 )
Boc2O (734mg, 3.362mmol)를 건조 THF (20㎖) 중의 비스-아닐린 I15 (3.098g, 3.736mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하고 진공에서 농축시켰다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중의 30-50% EtOAc)로 황색 발포체 (1.474g, Boc2O에 기초한 47% 수율)로서의 모노 Boc 생성물 I16, 미반응 비스-아닐린 I15 (1.043g, 30% 수율) 및 비스-Boc (419mg, 15% 수율, LC/MS 체류시간 = 2.37분)를 얻었다. I16의 LC/MS 체류시간 = 2.25분, ES+ m/z 929 [M+H]+, 951 [M+Na]+.
(e) tert -부틸 (5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-히드록시페녹시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I17 )
트리포스겐 (169mg, 0.5710mmol, 0.36당량)을 -10℃에서 건조 CH2Cl2 (9㎖) 중의 모노 Boc 생성물 I16 (1.474g, 1.586mmol, 1.0당량) 및 Et3N (486㎕, 3.489mmol, 2.2당량)의 교반된 용액에 첨가하였다. 아르곤 하에 10분 동안 교반한 후, LC/MS에 의한 분석은 이소시아네이트로의 완전한 변환을 나타냈다 (MeOH 중에서 샘플화되어, 체류시간 2.30분, ES+ m/z 1009 [M+Na]+, 987 [M+H]+에서 메틸 카바메이트를 얻었다). 건조 CH2Cl2 (14㎖) 중의 I6 (898mg, 2.379mmol, 1.5당량) 및 Et3N (332㎕, 2.379mmol, 1.5당량)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 서서히 가온하고 16시간 동안 교반하였다. 15분 LC/MS 분석에 의해 출발 물질이 소비된 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 SiO2 패드 (CH2Cl2 중의 5% MeOH 용출)를 통해 여과하여 과량의 I6을 제거하였다. 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중의 20-80% EtOAc)로 I17을 황색 발포체 (1.439g, 68% 수율)로서 얻었다. LC/MS 체류시간 = 2.26분 (3분 전개) 및 10.43분 (15분 전개) ES+ m/z 1355 [M+Na]+, 1333 [M+H]+. 무시할만한 양의 요소 이량체가 관찰되었고 (LC/MS 체류시간 = 12.11분, ES+ m/z 1906 [M+Na]+), 이는 후속 정제 단계에서 제거되었다.
(f) tert -부틸 (5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-2-히드록시-4-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)페녹시)펜틸)옥시)-2-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리 딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I18 )
아세트산 (124㎕, 2.160mmol, 2.0당량)을 TBAF의 1M 용액 (3.2㎖, 3.200mmol, 3.0당량)에 첨가한 후, 0℃에서 THF (67㎖) 중의 I17의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 16시간 동안 교반하였다. LC/MS는 반응이 완료되지 않았음을 나타냈다. TBAF (1M 용액 1.00㎖, 1mmol, 1.0당량)를 첨가하고 반응 혼합물을 추가로 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고 Isolera™ (CH2Cl2 중 0-5% MeOH)에 의한 정제로 생성물 I18을 담황색 발포체 (916mg, 77% 수율)로서 얻었다. LC/MS 체류시간 = 1.62분, ES+ m/z 1126 [M+Na]+, 1104 [M+H]+.
(g) 4-((S)-2-((S)-2-((( 알릴옥시 ) 카보닐 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 ) 프로판아미도 )벤질 (11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I19 )
IBX (1.14g, 1.825mmol, 2.2당량)를 DMSO 중의 디올 I18 (916mg, 0.8296mmol, 1.0당량)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 35℃로 가온하고 60시간 동안 교반하였다. H2O를 첨가하고 수성물을 CHCl3로 여러 번 추출하였다. 유기 추출물을 합하고 포화 NaHCO3로 세척하고 MgSO4상에서 건조시켰다. Isolera™ (CH2Cl2 중의 1-8% MeOH)에 의한 정제로 I19를 오렌지색 발포체 (908mg, 99% 수율)로서 얻었다: LC/MS 체류시간 = 1.50분, ES+ m/z 1122 [M+Na]+, 1100 [M+H]+.
(h) 4-((S)-2-((S)-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 ) 프로판아미도 ) 벤질 (11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I20 )
Pd(PPh3)4 (15.8mg, 13.64μmol, 0.050당량)를 아르곤 하에 CH2Cl2 (10㎖) 중의 피롤리딘 (56㎕, 0.6818mmol, 2.5당량) 및 I19 (300mg, 0.2727mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 30분 후, 포화 NH4Cl 용액을 첨가하고 혼합물을 격렬하게 교반하고 Isolute® 상 분리기로 옮겼다. 수집된 유기상을 진공에서 농축시켜 오렌지 발포체 I20을 얻었고,이를 추가 정제없이 사용하였다.
(i) tert -부틸 ( 11S,11aS )-8-((5-((( 11S,11aS )-10-(((4-(( 2S,5S )-37-(2,5-디 옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질)옥시)카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)펜틸)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I21 )
EDCI.HCl (117mg, 0.29mmol)을 실온에서 CH2Cl2 (15㎖) 중의 MAL-dPEG®8-산 (360mg, 0.6079mmol, Stratech Scientific Limited) 및 아민 I20 (608mg, 0.5526mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 분위기 하에 24시간 동안 교반하였고, 이 시점에서 LC/MS에 의한 분석은 I20의 완전한 소비를 나타냈다. 반응 혼합물을 CH2Cl2로 희석하고 포화 NH4Cl 및 포화 NaHCO3로 연속적으로 세척하고, MgSO4상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. Isolera™ (CH2Cl2 중의 4-16% MeOH)에 의한 정제로 아미드 I21을 백색 고체로서 얻었다 (77mg, 79% 순도 (223nm에서 UV 통합) 8.8% 미정제 수율; 107mg, 88% 순도, 12% 미정제 수율; 224mg, 86% 순도, 25% 미정제 수율).
(j) 4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질(11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-(3-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-피롤로[2,1-c][1,4]벤조디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( 2 )
95:5 v/v TFA/H2O (3㎖)의 빙냉 용액을 0℃ (얼음/염수)에서 Boc-보호된 화합물 I21 (107mg, 67.51μmol)의 미정제 샘플에 첨가하였다. 0℃에서 30분 동안 교반한 후, 체류시간 1.38분, ES+ m/z 737 [M+2H]2+, 748 [M+H+Na]2+; 1472 [M+H]+에서 원하는 생성물 피크가 관찰되어 LC/MS에 의해 판단된 대로 반응이 완료된 것으로 여겼다. 반응 혼합물을 차갑게 유지하고 NaHCO3의 식힌 포화 수용액에 적가하였다. 혼합물을 CH2Cl2에 이어 CH2Cl2 중의 10% MeOH로 추출하고, 합한 유기층을 MgSO4상에서 건조시키고 진공에서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 이 공정을 다른 배치의 I21에 대해 반복하고, 조 생성물을 합하고 분취용 HPLC (방법 B)로 정제하여 동결 건조 후 2를 백색 고체로서 얻었다 (126mg, 33% 수율, 223nm에서 UV에 의한 96% 순도): LC/MS (30분 전개), 체류시간 = 10.96분, ES+ m/z 1472 [M+H]+.
실시예 3
Figure 112019107278289-pct00055
Figure 112019107278289-pct00056
Figure 112019107278289-pct00057
(a) I23
이 단계는 문헌(예를 들어, WO2005085259A2; 또는 Wells, et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 18 (2008) 2147-2151 참조)에서와 같이 수행될 수 있다. 상기 방법은 EtOH 중의 10% Pd/C를 이용한 실온에서의 Parr 수소화를 포함한다. 수율은 정량적이다. 두 번 증발시켜 에탄올을 제거한다 (EtOAc,이어서 DCM).
(b) tert -부틸 (11S,11aS)-8-((3-(브로모메틸)벤질)옥시)-7-메톡시-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I25 )
페놀 I23 (4g, 8.91mmol, 1당량), 1,3-비스(브로모메틸)벤젠 I24 (9.42g, 35.7mmol, 4당량), 탄산칼륨 (1.23g, 8.91mmol, 1당량) 및 아세톤 (40㎖)의 혼합물을 60℃에서 5시간 동안 가열하였다. LC/MS에 의해 완료가 관찰된 후, 고체를 여과하여 제거하고 여액을 진공 하에 농축 건조시켰다. 잔여물을 크로마토그래피 (Biotage Isolera, 100g Ultra, 12CV에서 구배 EtOAc/헥산 30/70에서 80/20까지)로 정제하였다. 수율 4.25g (75%). LC/MS, 3분 방법, 1.82분 (ES+) m/z (상대 강도) 631.15 ([M+H]+, 100), 분할 피크: THP 부분입체이성질체. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.67 - 7.27 (m, 4H), 7.20 - 6.57 (m, 2H), 5.72 - 5.57 (m, 1H), 5.24 - 4.84 (m, 3H), 4.72 (s, 2H), 3.91 - 3.73 (m, 4H), 3.61 - 3.33 (m, 4H), 2.20 - 1.75 (m, 4H), 1.74 - 1.57 (m, 2H), 1.55 - 1.01 (m, 13H).
I28은 문헌에 공지되어 있다 (WO 2013053872A1, 화합물 2, 페이지 60 참조).
(c) (S)-(2-( 히드록시메틸 ) 피롤리딘 -1-일)(5- 메톡시 -2-니트로-4-(( 트리이소프로필실릴 )옥시)페닐)메탄온 ( I29 )
EDCI (12.4g, 65mmol, 1.2당량)를 0℃에서 디클로로메탄 (200㎖) 중의 산 I28 (20g, 54.1mmol, 1당량) 및 히드록시벤조트리아졸 수화물 (8.05g, 59.5mmol, 1.1당량)의 용액에 첨가하였다. 냉욕(cold bath)을 제거하고 반응을 실온에서 30분 동안 진행시켰으며, 이때 디클로로메탄 (100㎖) 중의 (S)-피롤리딘-2-일메탄올 (5.87㎖, 59.5mmol, 1.1당량) 및 트리에틸아민 (11.32㎖, 81.1mmol, 1.5당량)의 용액을 아르곤 하에 -10℃에서 빠르게 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 40분 내지 1시간 동안 교반하고 LC/MS 및 TLC (EtOAc)로 모니터링하였다. 셀라이트상에서 여과에 의해 고체를 제거하고 pH가 4 또는 5가 측정될 때까지 유기상을 차가운 수성 0.1M HCl로 세척 하였다. 이어서, 유기상을 물로 세척한 후, 포화 수성 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용매를 제거하였다. 잔여물을 컬럼 플래쉬 크로마토그래피시켰다 (Isolera Biotage, 340g Ultra; 6CV에서 구배 에틸 아세테이트/헥산 25/75에서 에틸 아세테이트/헥산 100/0까지). 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용매를 제거하여 순수한 생성물 I29를 담황색 발포체 (15.7g, 64%)로서 얻었다. LC/MS 1.92분 (ES+) m/z (상대 강도) 453.15 ([M+H]+, 30%; 328.15, 100 %); 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.70 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.57 - 4.24 (m, 2H), 4.01 - 3.69 (m, 5H), 3.25 - 3.06 (m, 2H), 2.18 (dt, J = 7.5, 5.6 Hz, 1H), 1.96 - 1.62 (m, 3H), 1.42 - 1.18 (m, 3H), 1.10 (d, J = 7.4 Hz, 18H).
(d) (S)-(2-((( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 ) 피롤리딘 -1-일)(5- 메톡시 -2- 니트로-4-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)메탄온 ( I30 )
t-부틸디메틸실릴 클로라이드 (10.39g, 68.9mmol, 2당량)를 DCM (100㎖) 중의 알콜 I29 (15.6g, 34.5mmol, 1당량) 및 이미다졸 (5.87g, 86.2mmol, 2.5당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (300㎖), 0.5M 시트르산 (200㎖), 염수 (100㎖)로 순차적으로 세척하고 건조시켰다 (MgSO4). 과량의 용매를 여과 및 제거하여 조 생성물을 얻었으며, 이를 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera, KP-Sil 340g; 에틸 아세테이트/헥산 10/90 (v/v)에서 에틸 아세테이트/헥산 최대 30/70 (v/v)까지)하여 실릴 에테르 I30을 걸쭉한 황색 오일로서 단리하였다. 수율: 18.9g, 97%. LC/MS 2.32분 (ES+) m/z (상대 강도) 567.55 ([M+H]+, 100 %)
(e) (S)-(2-아미노-5- 메톡시 -4-(( 트리이소프로필실릴 ) 옥시 )페닐)(2-((( tert - 부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)메탄온 ( I31 )
10% Pd/C (10% w/w, 1.89g)상에서 에틸 아세테이트 (200㎖) 중의 니트로 화합물 I30 (18.9g, 33.3mmol, 1당량)의 용액을 Parr 장치에서 압력 (45psi) 하에 6시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하여 Pd/C를 제거하고, 필터 패드를 에틸 아세테이트로 헹구었다. 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용매를 제거하고, 고진공 하에 건조시켜 아민 I31을 걸쭉한 오일로서 얻었다. LC/MS, 3분 방법, 2.28분 (ES+) m/z (상대 강도) 537.30 ([M+H]+, 100); 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.73 (s, 1H), 6.24 (s, 1H), 4.54 - 4.13 (m, 3H), 4.07 - 3.80 (m, 1H), 3.79 - 3.61 (m, 4H), 3.50 (dd, J = 9.2, 4.2 Hz, 2H), 2.10 - 1.97 (m, 2H), 1.92 (dt, J = 11.7, 6.2 Hz, 1H), 1.80 - 1.65 (m, 1H), 1.24 (ddt, J = 13.7, 9.9, 6.4 Hz, 3H), 1.09 (d, J = 7.3 Hz, 18H), 0.90 (s, 9H), 0.04 (d, J = 2.8 Hz, 6H).
(f) 알릴 ((S)-1-(((S)-1-((4-((((2-((S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1)-카보닐)-4-메톡시-5-((트리이소프로필실릴)옥시)페닐)카바모일)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 ( I32 )
트리에틸아민 (10.1㎖, 72.4mmol, 2.2당량)을 5℃ (얼음욕)에서 건조 테트라히드로퓨란 (180㎖) 중의 아민 I31 (17.68g, 32.9mmol, 1당량) 및 트리포스겐 (3.51g, 11.8mmol, 0.36당량)의 교반된 용액에 첨가하였다. 이소시아네이트 반응의 진행은 반응 혼합물로부터 분취량을 주기적으로 제거하고 메탄올로 켄칭하고 LC/MS 분석을 수행함으로써 모니터링하였다. 이소시아네이트 형성이 완료되면, 건조 테트라히드로퓨란 (70㎖) 중의 alloc-Val-Ala-PABOH I6 (18.6g, 49.4mmol, 1.5당량) 및 트리에틸아민 (6.88㎖, 49.4mmol, 1.5당량)의 현탁액을 새로 준비된 이소시아네이트에 신속하게 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반하였다. 여과로 고체를 제거하였다. 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용매를 제거하였다. 생성된 잔여물을 실리카 겔 상에 건조 로딩하고 수동 플래쉬 컬럼 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헥산 40/60 (v/v)에서 에틸 아세테이트/헥산 70/30 (v/v) 까지)를 수행하였다. 순수한 분획을 수집하여 합하고, 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용출액을 제거하여 생성물 I32 8.17g (26.4%)을 얻었다. LC/MS, 3분 방법, 2.29분 (ES+) m/z (상대 강도) 962.45 ([M+Na]+, 100; 940.40 ([M+H]+, 30); 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.95 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.53 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.80 (s, 1H), 6.71 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.89 (tt, J = 10.8, 5.3 Hz, 1H), 5.44 - 5.15 (m, 3H), 5.10 (s, 2H), 4.66 (p, J = 7.2 Hz, 1H), 4.62 - 4.53 (m, 2H), 4.32 (s, 1H), 4.08 - 3.86 (m, 2H), 3.74 (s, 4H), 3.52 (dd, J = 27.4, 7.6 Hz, 2H), 2.15 (h, J = 6.8 Hz, 1H), 2.09 - 1.85 (m, 3H), 1.71 (s, 1H), 1.46 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.29 (dq, J = 15.0, 7.4 Hz, 3H), 1.11 (d, J = 7.4 Hz, 18H), 0.95 (dd, J = 14.1, 6.8 Hz, 6H), 0.89 (s, 9H), 0.02 (d, J = 13.1 Hz, 6H).
(g) 알릴 ((S)-1-(((S)-1-((4-((((2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-5-히드록시-4-메톡시페닐)카바모일)옥시)메틸)페닐)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카바메이트 ( I33 )
리튬 아세테이트 (50mg, 0.49mmol)를 습윤 디메틸포름아미드 (61.2㎖, 50:1 DMF/물) 중의 화합물 I32 (7g, 7.44mmol, 1당량)의 용액에 첨가하였다. 4시간 후, 반응이 완료되었다. 과량의 DMF를 진공 하에 제거하고 잔여물을 에틸 아세테이트 (300㎖)로 희석하고 0.5M 수성 시트르산 (100㎖), 물 (300㎖) 및 염수 (100㎖)로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 에틸 아세테이트를 제거하였다. 생성된 잔여물을 컬럼 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage Isolera 100g Ultra; 구배, 8CV에서 에틸 아세테이트/헥산 40/60 내지 80/20 (v/v))에 적용하였다. 순수한 분획을 수집하여 합하고, 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용출액을 제거하여 생성물 I33 (5.13g, 88%)을 얻었다. LC/MS, 3분 방법, 1.82분 (ES+) m/z (상대 강도) 784.40 ([M+H]+, 100). 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 9.06 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.45 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.35 - 7.18 (m, 2H), 6.92 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 5.89 (ddd, J = 16.2, 10.7, 5.4 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.37 - 5.15 (m, 2H), 5.14 - 5.01 (m, 2H), 4.67 (p, J = 7.1 Hz, 1H), 4.63 - 4.50 (m, 2H), 4.33 (s, 1H), 4.13 - 3.89 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.74 - 3.33 (m, 3H), 2.24 - 1.84 (m, 4H), 1.69 (d, J = 21.2 Hz, 1H), 1.43 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.07 - 0.71 (m, 15H), 0.23 - 0.20 (m, 6H).
(h) tert -부틸 (11S,11aS)-8-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)메틸)벤질)옥시)-7-메톡시-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라 히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I34 )
탄산칼륨 (582mg, 4.21mmol, 1.1당량)을 아세톤 (18㎖) 중의 I25 (2.66g, 4.21mmol, 1.1당량) 및 페놀 I33 (3g, 3.82mmol, 1당량)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 63℃에서 4시간 동안 교반하였다. 탈지면을 통해 여과하여 고체를 제거하였다. 감압 하에 회전 증발시켜 아세톤을 제거하였다. 생성된 잔여물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (Biotage isolera, 100g Ultra, 실리카 겔; 구배, 8CV에서 에틸 아세테이트/헥산 50/50 내지 100/0 (v/v) , 83%로부터 용출). 순수한 분획을 수집하여 합하고, 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용출액을 제거하여 생성물 I34 (4.71g, 92%)를 얻었다. LC/MS, 3분 방법, 2.08분 (ES+) m/z (상대 강도) 1335.15 ([M+H]+, 50). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.98 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.68 - 7.50 (m, 3H), 7.50 - 7.37 (m, 3H), 7.32 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.28 - 7.01 (m, 2H), 6.86 (s, 2H), 5.90 (ddd, J = 16.0, 10.7, 5.2 Hz, 1H), 5.64 (t, J = 9.8 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.23 - 4.84 (m, 8H), 4.57 - 4.36 (m, 3H), 4.11 (s, 1H), 3.95 - 3.59 (m, 9H), 3.56 - 3.34 (m, 4H), 1.94 (d, J = 34.0 Hz, 10H), 1.74 - 1.06 (m, 21H), 1.01 - 0.59 (m, 15H), 0.03 (s, 6H).
(i) tert -부틸 ( 11S,11aS )-8-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-((( 알릴옥시 ) 카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-4-((S)-2- (히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)메틸)벤질)옥시)-7-메톡시-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피 롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I35 )
테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드 (1M, 6.94㎖, 6.94mmol, 2당량)를 테트라히드로퓨란 (28㎖) 중의 I34 (4.63g, 3.47mmol, 1당량)의 용액에 첨가하였다. 출발 물질은 1시간 후에 완전히 소비되었다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (30㎖)로 희석하고 물 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 유기상을 황산마그네슘상에서 건조시키고, 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 에틸 아세테이트를 제거하였다. 생성된 잔여물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (Biotage isolera, 50g Ultra; 구배, 4CV에서 에틸 아세테이트/메탄올 98/2 내지 90/10 (v/v), 10% 메탄올로부터 용출)에 적용 하였다. 순수한 분획을 수집하여 합하고, 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용출액을 제거하여 생성물 I35 (4.23g, 정량적)를 얻었다. LC/MS, 3분, 1.75분 (ES+) m/z (상대 강도) 1220.30 ([M+H]+, 100). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.98 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.70 - 7.49 (m, 3H), 7.51 - 7.27 (m, 6H), 7.21 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.15 - 6.58 (m, 3H), 5.90 (dt, J = 10.9, 5.5 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 5.38 - 4.82 (m, 9H), 4.73 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.59 - 4.34 (m, 3H), 4.05 (dd, J = 15.4, 8.3 Hz, 1H), 3.96 - 3.68 (m, 8H), 3.66 - 3.32 (m, 6H), 2.16 - 1.72 (m, 8H), 1.63 (d, J = 9.8 Hz, 3H), 1.54 - 1.02 (m, 18H), 0.86 (dd, J = 18.2, 6.7 Hz, 6H).
(j) 4-((S)-2-((S)-2-((( 알릴옥시 ) 카보닐 )아미노)-3- 메틸부탄아미도 ) 프로판아미도 )벤질 (11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카보닐)-7-메톡시-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)메틸)벤질)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I36 )
안정화된 IBX 45% (2.72g, 4.36mmol, 1.2당량)를 DMSO (2.6㎖) 중의 I35 (4.44g, 3.64mmol, 1당량)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 밤새 교반하였다. 또 다른 0.2당량의 IBX (450mg, 0.73mmol, 0.2당량)를 첨가하고 반응 완료가 LC/MS에 의해 관찰될 때까지 용액을 추가로 18시간 동안 교반하였다. 용액을 물 (250㎖)에 침전시키고 여과하였다. 생성물을 DCM에 용해시키고 잔류 백색 고체를 여과로 제거하였다. 유기상을 수성 NaHCO3, 물, 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시켰다. 감압 하에 회전 증발시켜 디클로로메탄을 제거하였다. 생성된 잔여물을 컬럼 플래쉬 크로마토그래피 (Biotage Isolera 100g Ultra; 구배, 10CV에서 DCM/메탄올 99/1 내지 92/8 (v/v))에 적용하였다. 순수한 분획을 수집하여 합하고 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용출액을 제거하여 생성물 I36 (3.04g, 69%)을 수득하였다. LC/MS, 15분 방법 Ace Excel 2, 7.89분 및 7.97분 (THP 부분입체이성질체) (ES+) m/z (상대 강도) 1218.30 ([M]+, 100). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.93 (s, 1H), 8.11 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.68 - 7.27 (m, 6H), 7.27 - 7.01 (m, 4H), 7.01 - 6.32 (m, 3H), 6.02 - 5.81 (m, 1H), 5.71 - 5.57 (m, 1H), 5.57 - 5.40 (m, 1H), 5.29 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.21 - 4.78 (m, 8H), 4.58 - 4.32 (m, 3H), 3.99 - 3.68 (m, 8H), 3.58 - 3.31 (m, 8H), 2.23 - 1.72 (m, 9H), 1.72 - 1.04 (m, 18H), 0.85 (dd, J = 18.0, 6.7 Hz, 6H).
(k) 4-((S)-2-((S)-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 ) 프로판아미도 ) 벤질 (11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(tert-부톡시카보닐)-7-메톡시-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)메틸)벤질)옥시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I37 )
테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (11mg, 0.01mmol, 0.02당량)을 건조 디클로로메탄 (10㎖) 중의 I36 (600mg, 0.49mmol, 1당량) 및 피롤리딘 (51㎕, 0.62mmol, 1.25당량)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 아르곤으로 3회 플러싱하고 실온에서 20분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 디클로로메탄 (50㎖)으로 희석하고 포화 수성 염화암모늄 (50㎖) 및 염수 (30㎖)로 순차적으로 세척하였다. 유기상을 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 디클로로메탄을 제거하였다. 생성된 잔여물 I37을 다음 반응을 위해 미정제 혼합물로 사용하였다. LC/MS, 3분 방법, 1.29분 (ES+) m/z (상대 강도) 1134.35 ([M+H]+, 80).
(l) tert -부틸 (11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질)옥시)카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)메틸)벤질)옥시)-7-메톡시-5-옥소-11-((테트라히드로-2H-피란-2-일)옥시)-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I38 )
1-에틸-3-(3'-디메틸아미노프로필)카보디이미드 (94mg, 0.79mmol, 1당량)를 클로로포름 (12㎖) 중의 미정제 I37 (558mg, 0.49mmol, 1당량) 및 Mal-(PEG)8-산 (292mg, 0.49mmol, 1당량)의 용액에 첨가하였다. 반응을 아르곤으로 3회 탈기하고 2시간 동안 교반하였고 LC/MS에 의해 출발 물질의 존재가 더 이상 관찰되지 않았다. 반응물을 디클로로메탄으로 희석하고 물 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 유기상을 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 디클로로메탄을 제거하였다. 생성된 잔여물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera 50g Ultra; 10CV에서 DCM/메탄올 98/2 내지 90/10 (v/v))에 적용하였다. 순수한 분획을 수집하여 합하고, 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 용출액을 제거하여 I38 (485mg, 58%)을 얻었다. LC/MS, 3분 방법, 1.58분 (ES+) m/z (상대 강도) 1709.30 ([M+H]+, 100). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.88 (s, 1H), 8.13 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.92 (m, 1H), 7.85 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.68 - 7.04 (m, 9H), 6.99 (s, 2H), 6.89 (d, J = 15.0 Hz, 2H), 6.52 (s, 1H), 5.66 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.26 - 4.75 (m, 6H), 4.49 - 4.31 (m, 1H), 4.20 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.80 (d, J = 11.9 Hz, 6H), 3.59 (t, J = 7.2 Hz, 4H), 3.55 - 3.41 (m, 32H), 3.41 - 3.30 (m, 11H), 3.21 - 3.09 (m, 3H), 2.48 - 2.28 (m, 4H), 2.18 - 1.08 (m, 24H), 0.84 (dd, J = 15.0, 6.7 Hz, 5H).
(m) 4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질 ( 11S,11aS )-11-히드록시-7- 메톡시 -8-((3-((((S)-7- 메톡시 -5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시) 메틸)벤질)옥시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( 3 )
TFA/물의 차가운 혼합물 (6㎖)을 I38 (460mg, 0.27mmol, 1당량)에 첨가하고 생성된 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 포화 수성 NaHCO3 (200㎖) 및 디클로로메탄 (50㎖)으로 중화시켰다. DCM층을 물 및 염수로 순차적으로 세척하였다. 유기상을 황산마그네슘상에서 건조시키고 여과하고 감압 하에 회전 증발시켜 과량의 디클로로메탄을 제거하였다. 생성된 잔여물을 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 (Biotage Isolera 50g Ultra; 10CV에서 DCM/메탄올 98/2 내지 88/12 (v/v))에 적용하였다. 순수한 분획을 수집하여 합하고 (154mg, 38%), 역상 분취용 HPLC (방법 C) (아세토니트릴/물 75/25까지 구배, 0.02% 포름산)로 추가 정제하여 순수한 3 (78mg, 19%)을 얻었다. LC/MS, 15분 방법, Ace-Excel2, 6.18분 (ES+) m/z (상대 강도) 1506.70 ([M+H]+, 100). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.07 - 9.79 (m, 1H), 8.14 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.98 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.67 - 7.30 (m, 7H), 7.28 - 7.05 (m, 3H), 6.99 (s, 2H), 6.98 - 6.85 (m, 2H), 6.58 - 6.47 (m, 1H), 5.59 - 5.34 (m, 1H), 5.32 - 4.77 (m, 6H), 4.48 - 4.30 (m, 1H), 4.28 - 4.08 (m, 1H), 3.88 - 3.75 (m, 5H), 3.75 - 3.55 (m, 6H), 3.55 - 3.42 (m, 28H), 3.42 - 3.32 (m, 6H), 3.14 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 2.48 - 2.16 (m, 6H), 2.08 - 1.77 (m, 6H), 1.36 - 1.17 (m, 4H), 0.84 (dd, J = 15.4, 6.7 Hz, 6H).
실시예 4
Figure 112019107278289-pct00058
Figure 112019107278289-pct00059
(a) ((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스 (((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-일)메탄온) ( I2 )
DMF (12방울)를 무수 DCM (150㎖) 중의 I1 (10g, 21.5mmol) 및 옥살릴 클로라이드 (5.6㎖, 8.2g, 64.5mmol)의 교반된 현탁액에 첨가하였다. 초기 발포 후, 반응 현탁액은 용액이 되고 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 감압 하에 증발시켜 대부분의 용매를 제거하였다. 생성된 진한 용액을 최소량의 건조 DCM에 재용해시키고 디에틸 에테르로 분쇄하였다. 황색 침전물을 진공 여과하여 수집하고, 차가운 디에틸 에테르로 세척하고 40℃의 진공 오븐에서 1시간 동안 건조시켰다. 산 클로라이드를 -40℃ (드라이 아이스/CH3CN)에서 무수 DCM (100㎖) 중의 (S)-(+)-2-피롤리딘메탄올 (5.0g, 4.9㎖, 49.5mmol) 및 TEA (15.0㎖, 10.9g, 108mmol)의 교반된 현탁액에 나누어 첨가하였다. 생성된 용액을 추가로 60분 동안 교반하고, DCM (100㎖)으로 희석하고 1N HCl (2×50㎖), 포화 NaHCO3 (3×40㎖), 염수 (50㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 용매를 진공 하에 증발시켜 순수한 생성물 I2를 황색 고체 (13.6g, 100% 수율)로서 얻었다. LC/MS (방법 A): 체류시간 1.33분 (ES+) m/z 655 [M+Na]+, 633 [M+H]+ (부록 참조). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1.68 - 1.80 (m, 2H), 1.80 - 2.00 (m, 6H), 2.27 (d, 2H), 3.05 - 3.25 (m, 4H), 3.37 - 3.48 (m, 2H), 3.56 - 3.76 (m, 2H), 3.92 (s, 6H), 4.09 (dd, 2H), 4.25 - 4.31 (m, 4H), 4.82 (t, 2H), 7.08 (s, 2H), 7.73 (s, 2H).
(b) ((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(5-메톡시-2-니트로-4,1-페닐렌))비스 (((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)메탄온) ( I39 )
TBS-Cl (8.12g, 53.90mmol)을 실온에서 질소 하에 DCM (300㎖) 중의 I2 (15.5g, 24.50mmol) 및 이미다졸 (4.17g, 61.25mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성 된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 물 (200㎖)을 첨가하고, 유기층을 제거하고, 수상을 DCM (2×300㎖)으로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고 (Na2SO4), 진공 하에 증발시켜 암색 잔여물을 얻고 이를 컬럼 크로마토그래피 (0 내지 2% 메탄올/DCM)로 정제하였다. 순수한 분획을 진공 하에 증발시켜 I39를 갈색 고체 (17.0g, 81% 수율)로서 얻었다. LC/MS (방법 A): 체류시간 1.83분 (ES+) m/z 861 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0.09 (s, 12H), 0.91 (s,18H), 1.70 - 1.81 (m, 2H), 1.87 - 1.99 (m, 6H), 2.22 - 2.30 (m, 2H), 3.10 (t, 4H), 3.40 - 3.51 (m, 2H), 3.59 - 3.67 (m, 2H), 3.88-3.95 (m, 2H), 3.91 (s, 6H), 4.28 (t, 6H), 6.96 (s, 2H), 7.72 (s, 2H).
(c) ((프로판-1,3-디일비스(옥시))비스(2-아미노-5-메톡시-4,1-페닐렌))비스 (((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-일)메탄온) ( I40 )
아연 (25.8g, 394.8mmol) 및 포화 NH4Cl (150㎖)을 실온에서 EtOH (300㎖) 중의 I39 (17g, 19.74mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하고, 냉각시키고 셀라이트 층을 통해 여과한 다음 EtOAc (300㎖) 및 물 (300㎖)로 세척하였다. 유기층을 제거하고 수성층을 EtOAc (3×400㎖)로 추출하였다. 합한 유기상을 건조시키고 (MgSO4), 진공 하에 증발시켜 황색 잔여물을 수득하고이를 컬럼 크로마토그래피 (0 내지 5% 메탄올/DCM)로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 I40을 황색 고체 (13.00g, 82% 수율)로서 얻었다. LC/MS (방법 A): 체류시간 2.30분 (ES+) m/z 802.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0.06 (s, 12H), 0.85 (s,18H), 1.52 - 1.78 (m, 2H), 1.81 - 2.00 (m, 6H), 2.14 - 2.22 (m, 2H), 3.41 (d, 4H), 3.61-3.75 (m, 4H), 3.63 (s, 6H), 4.01 - 4.16 (m, 6H), 4.98 - 5.22 (m, 4H), 6.40 (s, 2H), 6.66 (s, 2H).
(d) 알릴 (5-(3-(5-아미노-4-((S)-2-(((t- 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 ) 피롤리 딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)프로폭시)-2-((S)-2-(((t-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I41 )
알릴 클로로포르메이트 (784㎕, 0.9g, 7.36mmol)를 0℃에서 DCM (100㎖) 중의 I40 (5.9g, 7.36mmol) 및 피리딘 (715㎕, 0.7g, 8.84mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 추가로 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0.5M HCl (50㎖), 포화 탄산수소나트륨 (50㎖) 및 염수 (50㎖)로 세척하였다. 용매를 감압 하에 제거하고 생성된 오일을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다; (50% 에틸 아세테이트/헵탄을 이용한 초기 용출로 비스-alloc 보호된 아민을 제거한 후, 에틸 아세테이트로 용출하여 원하는 모노-alloc 보호된 생성물 (I41)을 제거하였다. 마지막으로, 미반응 출발 물질을 5% 메탄올/DCM으로 제거하였다). 순수한 분획을 감압 하에 증발시켜 I41을 황색 고체 (3.5g, 54% 수율)로서 수득하였다. LC/MS (방법 B): 체류시간 2.41분 (ES+) m/z 886.5 [M+H]+.
(e) 알릴 (5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)프로폭시)-2-((S)-2-((((tert- 부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I42 )
트리포스겐 (0.41g, 1.4mmol)을 아르곤 하에 실온에서 건조 THF (70㎖) 중의 I41 (3.5g, 3.95mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 트리에틸아민 (1.2㎖, 0.87g, 8.6mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하였다. LC/MS에 의한 분석은 이소시아네이트로의 완전한 변환을 나타냈다 (MeOH 중 샘플화되어, 체류시간 2.48분, (ES+) m/z 944.4 [M+H]+에서 메틸 카바메이트를 얻었다). 건조 THF (30㎖) 중의 I6 (1.64g, 4.35mmol) 및 트리에틸아민 (0.83㎖, 0.6g, 5.9mmol)의 혼합물을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 40℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (0.5 내지 2.5% 메탄올/DCM)로 정제하여 I42를 백색 고체(3.58g, 70% 수율)로서 얻었다. LC/MS (방법 B): 체류시간 2.45분, (ES+) m/z 1290.0 [M+H]+.
(f) 알릴 (5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)아미노)-4-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)프로폭시)-2-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I43 )
1M 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (6.1㎖, 6.1mmol)를 실온에서 THF (35㎖) 중의 I42 (3.58g, 2.78mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 60분 동안 교반 한 후, 감압 하에 증발 건조시켰다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (2 내지 5% 메탄올/DCM)로 정제하여 I43을 백색 발포체 (2.95g, 98% 수율)로 얻었다. LC/MS (방법 B): 체류시간 1.70분, (ES+) m/z 1061.3 [M+H]+.
(g) 알릴 (11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((알릴옥시)카보닐)아미노)-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)벤질)옥시)카보닐)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아 제핀-8-일)옥시)프로폭시)-11-히드록시-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I44 )
MeCN (5.47㎖, 1.1mmol) 중의 스탈 호기성 산화(Stahl aerobic oxidation) TEMPO 0.2M 용액에 이어서 테트라키스아세토니트릴 구리 (I) 트리플레이트 (0.41g, 1.1mmol)를 DCM (30㎖) 및 아세토니트릴 (6㎖) 중의 I43 (2.9g, 2.74mmol)의 용액에 첨가하고 공기 분위기 하에 35℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (25㎖)로 세척하고, 건조시키고 (biotage 상 분리기), 감압 하에 증발 건조시켰다. 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (3 내지 6% 메탄올/DCM)로 정제하여 산화된 생성물 I44를 백색 고체 (2.46g, 85% 수율)로 얻었다. LC/MS (방법 B): 체류시간 1.60분, (ES+) m/z 1057.1 [M+H]+.
(h) 4-((S)-2-((S)-2-아미노-3- 메틸부탄아미도 ) 프로판아미도 ) 벤질 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-(3-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라 히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I45 )
Pd(Ph3P)4 (10mg, 5mol%)를 실온에서 DCM (10㎖) 중의 I44 (200mg, 0.19mmol) 및 피롤리딘 (40㎕, 0.34g, 0.48mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 (10㎖)으로 세척하고, 건조시키고 (biotage 상 분리기), 감압 하에 증발 건조시켰다. 잔여물을 고진공 라인에 4시간 동안 두어 미량의 피롤리딘을 제거하였다. 생성된 회백색 고체를 다음 단계에서 추가 정제없이 사용하였다 (160mg, 97% 수율). LC/MS (방법 B): 체류시간 1.17분, (ES+) m/z 871.1 [M+H]+.
(i) 4-((2S,5S)-37-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-5-이소프로필-2-메틸-4,7,35-트리옥소-10,13,16,19,22,25,28,31-옥타옥사-3,6,34-트리아자헵타트리아콘탄아미도)벤질 ( 11S,11aS )-11-히드록시-7- 메톡시 -8-(3-(((S)-7- 메톡시 -5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)프로 폭시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( 1 )
EDCI.HCl (46mg, 0.24mmol)을 CHCl3 (10㎖) 중의 I45 및 Mal-PEG8-산 (130mg, 0.22mmol)의 용액에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC/MS는 78%의 출발 물질의 존재를 나타낸다. 추가의 2당량의 EDCI.HCl을 나누어 첨가하여 반응을 완료시켰다. 반응 혼합물을 물 (10㎖)로 세척하고, 건조시키고 (biotage PS), 감압 하에 증발 건조시켜 황색 고체를 얻고, 이를 분취용 HPLC로 정제하여 생성물 1을 회백색 고체로서 얻었다 (90mg, 34% 수율). LC/MS (방법 B): 체류시간 1.47분, (ES+) m/z 1445.9 [M+H]+.
실시예 5
(i) 4-(( 29S,32S )-1- 아지도 -29-이소프로필-32- 메틸 -27,30- 디옥소 -3,6,9,12,15,18,21,24-옥타옥사-28,31-디아자트리트리아콘탄-33-아미도)벤질 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-(3-((((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a)테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실 레이트 ( 4 )
Figure 112019107278289-pct00060
EDCI.HCl (27mg, 0.14mmol)을 CHCl3 (6㎖) 중의 I45 및 아지도-PEG8-산 (49mg, 0.10mmol)의 용액에 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 황색 발포체를 얻었다. 분취용 HPLC에 의한 정제로 생성물 4를 회백색 고체 (20mg, 17% 수율)로서 얻었다. LC/MS (방법 B): 체류시간 6.01분, (ES+) m/z 1320 [M+H]+.
(ii) (R)-2-((3- 니트로피리딘 -2-일) 디설파닐 )프로필 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-(3-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( 5 )
Figure 112019107278289-pct00061
(a) tert -부틸 (5-(3-(5-아미노-4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시페녹시)프로폭시)-2-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I46 )
Boc 무수물 (0.5g, 2.3mmol, 1.0당량)을 THF (50㎖) 중의 I40 (1.9g, 2.3mmol, 1.0당량)의 용액에 첨가하고 55℃에서 5시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 제거하고 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (50-100% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 생성물을 황색 고체로서 1.7g (80%) 얻었다. LC/MS (방법 1): 실온 2.48분, m/z (902.5) M+H.
(b) tert -부틸 (2-((S)-2-((( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 메틸 ) 피롤리딘 -1- 카 보닐)-5-(3-(4-((S)-2-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메 톡시-5-(((((R)-2-((3-니트로피리딘-2-일)디설파네일)프로폭시)카보닐)아미노)페녹시)프로폭시)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I47 )
트리포스겐 (0.135g, 0.455mmol, 0.35당량)을 무수 디클로로메탄 (5㎖) 중의 (2R)-2-[(3-니트로-2-피리딜)디설파닐]프로판-1-올 (0.316g, 1.28mmol, 1.05당량) 및 피리딘 (111mg, 1.4mmol, 1.15당량)의 용액에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 생성된 용액을 무수 디클로로메탄 (10㎖) 중의 I46 (1.10g, 1.22mmol, 1.0당량) 및 피리딘 (106mg, 1.34mmol, 1.1당량)의 용액에 첨가하고 실온에서 60분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 제거하고 잔여물을 컬럼 크로마토그래피 (40-50% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제하여 생성물을 황색 발포체로서 1.21g (85%) 얻었다. LC/MS (방법 1): 실온 2.53분, m/z (1174.5) M+H.
(c) tert -부틸 (2-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)-5-(3-(4-((S)-2-(히드록시메틸)피롤리딘-1-카보닐)-2-메톡시-5-((((R)-2-((3-니트로피리딘-2-일)디설파네일)프로폭시)카보닐)아미노)페녹시)프로폭시)-4-메톡시페닐)카바메이트 ( I48 )
I47 (1.21g, 1.03mmol)을 아세트산 (5㎖), THF (1㎖), 메탄올 (1㎖) 및 물 (2㎖)의 혼합물에 용해시켰다. 생성된 용액을 실온에서 90분 동안 교반한 다음 증발 건조시켰다. 잔여물을 에틸 아세테이트 (50㎖)에 용해시키고, 물 (50㎖)로 세척 한 다음 포화 NaHCO3 (50㎖)로 세척하고, 건조시키고 (MgSO4), 감압 하에 증발시켰다. 잔여물을 컬럼 (4% 메탄올/DCM)으로 정제하여 생성물을 황색 고체로서 0.97g (100%) 얻었다. LC/MS (방법 1): 실온 1.87분, m/z (946.0) M+H.
(d) tert -부틸 (11S,11aS)-11-히드록시-8-(3-(((11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-10-(((R)-2-((3)-니트로피리딘-2-일)디설파네일)프로폭시)카보닐)-5-옥소-2,3,5,10,11,11a-헥사히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-7-메톡시-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( I49 )
스탈 호기성 산화 TEMPO 용액 (2.05㎖, 0.4mmol, 0.2mol/ℓ)에 이어서 테트라키스아세토니트릴 구리 (I) 트리플레이트 (0.15g, 0.40mmol)를 DCM (20㎖, 312.0mmol) 중의 I48 (0.97g, 1.0mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 35℃에서 15시간 동안 가열하였다. 유기상을 물 (25㎖)로 세척하고 건조시키고 (biotage), 감압 하에 증발 건조시키고 컬럼 크로마토그래피 (3-6% 메탄올/DCM)로 정제하여 생성물을 백색 고체로서 0.77g (79%) 얻었다. LC/MS (방법 1): 실온 1.70분, m/z (941.9) M+H.
(e) (R)-2-((3- 니트로피리딘 -2-일) 디설파닐 )프로필 (11S,11aS)-11-히드록시-7-메톡시-8-(3-(((S)-7-메톡시-5-옥소-2,3,5,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-8-일)옥시)프로폭시)-5-옥소-2,3,11,11a-테트라히드로-1H-벤조[e]피롤로[1,2-a][1,4]디아제핀-10(5H)-카르복실레이트 ( 5 )
트리플루오로아세트산 (4.5㎖)을 물 (0.5㎖)에 첨가하고 0℃로 냉각시켰다. 이어서 이 용액을 I49 (0.75g, 0.80mmol)에 첨가하고 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔여물을 DCM (10㎖)에 용해시키고, 포화 NaHCO3를 첨가하여 반응 혼합물을 중화시켰다. 건조 (biotage) 및 감압 증발 후, 잔여물을 컬럼 (4-6% 메탄올/DCM)으로 정제하여 생성물을 밝은 황색 고체로서 0.6g (91%) 얻었다. LC/MS (방법 2): 실온 6.04분, m/z (824.0) M+H.
실시예 5 (ii)에 대한 분석 LC/MS 조건
Waters Aquity H-class SQD2를 사용하여 양성 모드 전기분무 질량 분석을 수행하였다. 사용된 이동상은 용매 A(0.1% 포름산을 함유하는 물) 및 용매 B(0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴)였다.
방법 1: 통상의 3분 전개를 위한 구배: 초기 조성물은 5% B에서 25초 동안 유지한 후, 1분 35초에 걸쳐 5% B에서 100% B로 증가시켰다. 상기 조성물을 100% B에서 50초 동안 유지한 후, 5초 내에 5% B로 되돌리고 5초 동안 유지시켰다. 구배 전개의 총 지속시간은 3.0분이었다. 유속은 0.8㎖/분이었다. 254nm에서 탐지하였다. 컬럼: 50℃에서 Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard Pre-column(130A, 1.7㎛, 2.1mm×5mm)이 장착된 Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18(1.7㎛, 2.1×50mm).
방법 2: 15분 전개를 위한 구배: 초기 조성물은 5% B에서 1분 동안 유지 한 다음, 9분에 걸쳐 5% B에서 100% B로 증가시켰다. 상기 조성물을 100% B에서 2분 동안 유지한 후, 10초 내에 5% B로 되돌리고 2분 50초 동안 유지시켰다. 구배 전개의 총 지속시간은 15.0분이었다. 유속은 0.8㎖/분(3분 전개 시) 및 0.6㎖/분(15분 전개 시)이었다. 254nm에서 탐지하였다. 컬럼: Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard Pre-column(130A, 1.7㎛, 2.1mm×5mm)이 장착된 ACE Excel 2 C18-AR (2μ, 3.0×100mm).
실시예 6 - 컨쥬게이션
Conj -HER-1
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 허셉틴(Herceptin)(30mg, 0.2 마이크로몰)의 12㎖ 용액에 2.5mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 16 마이크로몰, 50mM에서 0.32㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 4시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 3 마이크로몰, 50mM에서 0.08㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 1.5mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 1을 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.0 마이크로몰, 1.5㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 13.5㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(15mg, 0.1 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 3시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(15 마이크로몰, 100mM에서 0.150㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트(neat) 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터(Mustang filter)를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 1 특이적인) 214nm 및 330nm에서 Conj-HER-1의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.74분자의 화합물 1의 항체-당-약물 비율(drug-per-antibody ratio, DAR)과 일치하는, 화합물 1의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-HER-1의 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 99% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 7.8㎖에서 1.39mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 10.8mg(72% 수율)이다.
Conj -HER-2
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 허셉틴(104mg, 0.69 마이크로몰)의 11.8㎖ 용액에 4.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 55.5 마이크로몰, 50mM에서 1.11㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 20몰 당량/항체, 12.4 마이크로몰, 50mM에서 0.25㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 2.4mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 2를 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.03 마이크로몰, 1.40㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 14㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(15.5mg, 0.103 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 1.5시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(5.15 마이크로몰, 100mM에서 0.051㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 115㎠의 표면적을 갖는 mPES, MidiKros® 30kDa 섬유 필터를 사용하는 접선유동여과(Tangential Flow Filtration, TFF) 유닛을 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 2 특이적인) 214nm 및 330nm에서 Conj-HER-2의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.85분자의 화합물 2의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 2의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-HER-2의 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 98% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 8.5㎖에서 0.88mg/㎖의 최종 ADC의 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 7.5mg(48% 수율)이다.
Conj -HER-3
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 허셉틴(15mg, 0.1 마이크로몰)의 1.39㎖ 용액에 4.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(40몰 당량/항체, 40 마이크로몰, 50mM에서 0.08㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +37℃에서 2시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 실온에서 16시간 동안 50KDa MWCO 카세트를 사용하는 투석을 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 25몰 당량/항체, 2.5 마이크로몰, 50mM에서 0.04㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 1.5mg/㎖의 항체 농도에서 2시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 반응시켰다. 불완전한 산화로 인해, 또 다른 0.04㎖의 50mM DHAA를 첨가하고 실온에서 2시간 동안 추가로 진탕하였다. 그 후, 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰된다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 3을 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 0.8 마이크로몰, 1.1㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 11㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(12mg, 0.08 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 1시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(3.2 마이크로몰, 100mM에서 0.032㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 3 특이적인) 214nm 및 330nm에서 Conj-HER-3의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.78분자의 화합물 3의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 3의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-HER-3의 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 94% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 8.2㎖에서 1.14mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 9.3mg(62% 수율)이다.
Conj -R347-1
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 R347(1300mg, 8.67 마이크로몰)의 44.36㎖ 용액에 5.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 697 마이크로몰, 50mM에서 13.87㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 235㎠의 표면적을 갖는 mPES, MidiKros® 30kDa 섬유 필터를 사용하는 접선유동여과(TFF) 유닛을 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. 환원된 항체를 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 여과하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 130 마이크로몰, 50mM에서 2.6㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 5.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 1을 DMSO 용액 (10몰 당량/항체, 86.7 마이크로몰, 23.40㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 330㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(1300mg, 8.67 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 3시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(433 마이크로몰, 100mM에서 4.33㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 235㎠의 표면적을 갖는 mPES, MidiKros® 30kDa 섬유 필터를 사용하는 접선유동여과(TFF) 유닛을 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. ADC를 25mM 히스티딘, 200mM 슈크로스, pH 6.0 상에 제형화하였다. 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 -78℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 1 특이적인) 214nm 및 330nm에서 Conj-R347-1의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.82분자의 화합물 1의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 1의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 ADC 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 99% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 113㎖에서 10.11mg/㎖의 최종 Conj-R347-1 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 1141mg(88% 수율)이다.
Conj -R347-2
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 R347(400mg, 2.67 마이크로몰)의 13.7㎖ 용액에 5.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 213 마이크로몰, 50mM에서 4.3㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 115㎠의 표면적을 갖는 mPES, MidiKros® 30kDa 섬유 필터를 사용하는 접선유동여과(TFF) 유닛을 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. 환원된 항체를 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 여과하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 40 마이크로몰, 50mM에서 0.8㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 3.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 2를 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 26.7 마이크로몰, 15.5㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 330㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(400mg, 2.67 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 1.5시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(125 마이크로몰, 100mM에서 1.25㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 115㎠의 표면적을 갖는 mPES, MidiKros® 30kDa 섬유 필터를 사용하는 접선유동여과(TFF) 유닛을 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. ADC를 25mM 히스티딘, 200mM 슈크로스, pH 6.0 상에 제형화하였다. 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 -78℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 2 특이적인) 214nm 및 330nm에서 Conj-R347-2의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.8분자의 화합물 2의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 2의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-R347-2 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 99% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 93㎖에서 3.06mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 284mg(71% 수율)이다.
Conj -R347-3
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 R347(450mg, 3.0 마이크로몰)의 15.36㎖ 용액에 5.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 240 마이크로몰, 50mM에서 4.8㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 235㎠의 표면적을 갖는 mPES, MidiKros® 30kDa 섬유 필터를 사용하는 접선유동여과(TFF) 유닛을 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. 환원된 항체를 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 여과하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 45 마이크로몰, 50mM에서 0.9㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 3.5mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 3을 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 30.0 마이크로몰, 13.0㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 330㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(450mg, 3.0 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 3시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(150 마이크로몰, 100mM에서 1.5㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 235㎠의 표면적을 갖는 mPES, MidiKros® 30kDa 섬유 필터를 사용하는 접선유동여과(TFF) 유닛을 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트(neat) 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, ADC를 25mM 히스티딘, 200mM 슈크로스, pH 6.0 상에 제형화하였다. 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 -78℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 3 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.82분자의 화합물 3의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 3의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-R347-3 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 99% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 174㎖에서 2.35mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, Conj-R347-3의 수득된 질량은 409mg(91% 수율)이다.
Conj - HLL2 -1
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 HLL2(100mg, 0.6 마이크로몰)의 11.8㎖ 용액에 5.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 53.3 마이크로몰, 50mM에서 1.07㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 9 마이크로몰, 50mM에서 0.18㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 3.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 1을 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.2 마이크로몰, 0.58㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 7㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(18mg, 0.12 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 3시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(6 마이크로몰, 100mM에서 0.06㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 1 특이적인) 214nm 및 330nm에서 Conj-HLL2-1의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.74분자의 화합물 1의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 1의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-HLL2-1 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 98% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 7.5㎖에서 1.6mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 12mg(67% 수율)이다.
Conj - HLL2 -2
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 HLL2(100mg, 0.6 마이크로몰)의 11.8㎖ 용액에 5.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 53.3 마이크로몰, 50mM에서 1.07㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 9 마이크로몰, 50mM에서 0.18㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 3.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 2를 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.2 마이크로몰, 0.58㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 7㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(18mg, 0.12 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 3시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(6 마이크로몰, 100mM에서 0.06㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 2 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체 당 1.78분자의 화합물 2의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 2의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-HLL2-2 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 98% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 8.0㎖에서 1.56mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, Conj-HLL2-2의 수득된 질량은 12.5mg(69% 수율)이다.
Conj - HLL2 -3
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 HLL2(100mg, 0.6 마이크로몰)의 11.8㎖ 용액에 5.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 53.3 마이크로몰, 50mM에서 1.07㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 9 마이크로몰, 50mM에서 0.18㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 3.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 3을 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.2 마이크로몰, 0.58㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 7㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(18mg, 0.12 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 3시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(6 마이크로몰, 100mM에서 0.06㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 3 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체 당 1.79분자의 화합물 3의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 3의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-HLL2-3 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 98% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 8.2㎖에서 1.73mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, Conj-HLL2-3의 수득된 질량은 14.2mg(79% 수율)이다.
Conj - CD79b -1
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 CD79b(100mg, 0.67 마이크로몰)의 13.9㎖ 용액에 4.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 53.6 마이크로몰, 50mM에서 1.07㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 4시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 9 마이크로몰, 50mM에서 0.18㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 2.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 1을 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.2 마이크로몰, 1.0㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 9.0㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(18mg, 0.12 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 2시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(4.8 마이크로몰, 100mM에서 0.048㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 1 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체 당 1.90분자의 화합물 1의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 1의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-CD79b-1 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 98% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 7.85㎖에서 2.00mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, Conj-CD79b-1의 수득된 질량은 15.7mg(79% 수율)이다.
Conj - CD79b -2
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 CD79b(100mg, 0.67 마이크로몰)의 13.9㎖ 용액에 4.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 53.6 마이크로몰, 50mM에서 1.07㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 4시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 9 마이크로몰, 50mM에서 0.18㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 2.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 2를 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.2 마이크로몰, 1.0㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 9.0㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(18mg, 0.12 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 2시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(4.8 마이크로몰, 100mM에서 0.048㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 2 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체 당 1.87분자의 화합물 2의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 2의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 Conj-CD79b-2 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 98% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 5.9㎖에서 2.25mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, Conj-CD79b-2의 수득된 질량은 13.3mg(66% 수율)이다.
Conj - 1C1 -1
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체 1C1(140mg, 0.93 마이크로몰)의 26.4㎖ 용액에 5.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(80몰 당량/항체, 75 마이크로몰, 50mM에서 1.5㎖). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 3.5시간 동안 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. DMSO 중의 데히드로아스코르브산(DHAA, 15몰 당량/항체, 14 마이크로몰, 50mM에서 0.28㎖)의 50mM 용액을 첨가하고, 재산화 혼합물을 ~ 3.0mg/㎖의 항체 농도에서 16시간 동안 실온에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 (또는 시스테인 티올의 완전한 재산화로 사슬간 시스테인 디설파이드를 재형성하는 것이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 반응시켰다. 재산화 혼합물을 4000rpm에서 3분 동안 원심분리한 다음 0.22㎛ 막 필터를 사용하여 멸균-여과하였다. 화합물 1을 DMSO 용액(10몰 당량/항체, 1.3 마이크로몰, 0.6㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 6㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(20mg, 0.133 마이크로몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 4시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(6.65 마이크로몰, 100mM에서 0.067㎖)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 완충제를 25mM 히스티딘, 200mM 슈크로스, pH 6.0 상에서 교환하였다. 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 -78℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 1 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 1.86 분자의 화합물 1의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 1의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 ADC 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 98% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 8.0㎖에서 1.49mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 11.9mg(60% 수율)이다.
Conj -HER-1++ (높은 DAR)
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 디티오트레이톨(DTT)의 50mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체(10mg, 67 나노몰)의 5㎖ 용액에 2.0mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(100몰 당량/항체, 6.7 마이크로몰, 50mM에서 0.13㎖). 생성된 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +25℃에서 밤새 (또는 완전한 환원이 UHPLC에 의해 관찰될 때까지) 배양하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 환원된 항체는 50KDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4 및 1mM EDTA를 함유하는 재산화 완충제로 완충제 교환하여 모든 과량의 환원제를 제거하였다. 화합물 1을 DMSO 용액(20몰 당량/항체, 1.34 마이크로몰, 0.4㎖ DMSO 중)으로서 10% (v/v) 최종 DMSO 농도가 되도록, 4.0㎖의 이러한 재산화된 항체 용액(10mg, 67 나노몰)에 첨가하였다. 용액을 +25℃에서 1시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 과량의 N-아세틸 시스테인(6.7 마이크로몰, 100mM에서 67㎕)으로 켄칭하였다.
생성된 ADC를 pH 7.4 완충제 PBS를 사용하여 AKTA Start 기기에 장착된 분취 크기 배제 컬럼(GE Sephadex 26/60)을 통해 정제하였다. 분획을 수집하고, 280nm에서 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템을 사용하여 단량체 함량을 분석하였다. >92%의 단량체 함량을 갖는 분획을 모은 후 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하여 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 농축시켰다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하고 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 1 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체 당 7.41 분자의 화합물 1의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 1의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 ADC 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 95%의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 4.5㎖에서 1.44mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 6.5mg(65% 수율)이다.
Conj -HER-1+ (중간 DAR)
포스페이트-완충 식염수 pH 7.4(PBS) 중의 트리스(2-카복시에틸)포스핀(TCEP)의 10mM 용액을, PBS 및 1mM 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)을 함유하는 환원 완충제 중의 항체(10mg, 67 나노몰)의 4㎖ 용액에 2.5mg/㎖의 최종 항체 농도가 되도록 첨가하였다(2몰 당량/항체, 0.134 마이크로몰, 10mM에서 13.3㎕). 환원 혼합물을 회전 진탕기에서 가볍게(60rpm) 진탕하면서 +37℃에서 2시간 동안 가열하였다. 화합물 1을 DMSO 용액(15몰 당량/항체, 1.0 마이크로몰, 0.3㎖ DMSO 중의 10mM 0.1㎖)으로서 첨가하고 생성된 혼합물을 +25℃에서 1.5시간 동안 진탕한 후, 컨쥬게이션을 N-아세틸 시스테인(5 마이크로몰, 100mM에서 50㎕)으로 켄칭하였다.
과잉의 유리 약물을 50kDa MWCO 비바스핀을 사용하는 스핀 필터를 통해 PBS pH 7.4를 함유하는 완충제로 제거하였다. 유리 약물 제거의 정도는 니트 컨쥬게이트를 사용하여 UHPLC-RP로 모니터링하였다. 유리 약물을 완전히 제거한 후, 멸균 분위기 하에 0.22㎛ 무스탕 필터를 사용하여 ADC를 여과한 후 +4℃에서 저장하였다.
Phenomenex Aeris 3.6u XB-C18 150×2.1mm 컬럼을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, (화합물 1 특이적인) 214nm 및 330nm에서 컨쥬게이트의 환원된 샘플에 대해 물 및 아세토니트릴의 구배로 용출하는 UHPLC 분석은, 항체당 4.2 분자의 화합물 1의 항체-당-약물 비율(DAR)과 일치하는, 화합물 1의 몇몇 분자에 부착된 경쇄와 중쇄의 혼합물을 나타냈다.
Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4㎛ 4.6×150mm 컬럼(4㎛ 3.0×20mm 가드 컬럼 포함)을 사용하는 Shimadzu Prominence 시스템에서, 280nm에서 ADC 샘플에 대해 200mM 인산칼륨 pH 6.95, 250mM 염화칼륨 및 10% (v/v) 이소프로판올을 함유하는 0.3㎖/분의 멸균-여과된 SEC 완충제로 용출하는 UHPLC 분석은, 99% 초과의 단량체 순도를 나타냈다. UHPLC SEC 분석으로 3.6㎖에서 2.05mg/㎖의 최종 ADC 농도를 얻었고, ADC의 수득된 질량은 7.36mg(74% 수율)이다.
실시예 7 - 시험관내 시험
MTS 세포독성법
서브-컨플루언트(sub-confluent) (밀집도 80 내지 90%) T75 플라스크로부터의 세포 농도 및 생존력을 트리판 블루 염색으로 측정하고, LUNA-II™ 자동 세포 계수기를 사용하여 계수하였다. 세포를 2×105/㎖로 희석하고 96-웰 평면 바닥 플레이트에 분배하였다(50㎕/웰).
시험될 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) (20㎍/㎖)의 스톡 용액(1㎖)은 필터-멸균된 ADC를 세포 배양 배지로 희석함으로써 제조하였다. 세포 배양 배지 900㎕에 100㎕를 연속적으로 전달함으로써 24-웰 플레이트에서 스톡 ADC의 8×10배 희석액 세트를 제조하였다. ADC 희석액을 이전에 접종된(seeded) 50㎕ 세포 현탁액을 함유하는 96-웰 플레이트의 4개의 복제 웰에 분배하였다(50㎕/웰). 대조군 웰에 50㎕ 세포 배양 배지를 공급하였다. 세포 및 ADC를 함유하는 96-웰 플레이트를 노출 시간 동안 CO2 기체 충전된 배양기에서 37℃에서 배양하였다.
배양 기간의 종료시, 세포 생존력을 MTS 검정으로 측정하였다. MTS (Promega)를 각각의 웰로 분배하였고(20㎕/웰), CO2 기체 충전된 배양기에서 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 웰 흡광도를 490nm에서 측정하였다. 세포 생존력(백분율)을, 4개의 대조군 비처리된 웰에서의 평균 흡광도(100%)와 비교하여 4개의 ADC-처리된 웰에서의 평균 흡광도로부터 계산하였다. IC50을 비선형 곡선 핏팅 알고리즘: 가변 기울기를 갖는 에스자형 용량-반응 곡선을 사용하는 GraphPad Prism을 사용하여 용량-반응 데이터로부터 결정하였다.
ADC 배양 시간은 SK-BR-3, MDA-MB-468, WSU-DLCL2 및 SU-DHL-4의 경우 4일, Granta-519의 경우 5일, BJAB의 경우 6일, NCI-N87의 경우 7일이었다. MDA-MB-468, NCI-N87, WSU-DLCL2 및 SU-DHL-4는 Glutamax + 10% (v/v) HyClone™ 소 태아 혈청과 함께 RPMI 1640에서, Granta-519는 10% (v/v) HyClone™ 소 태아 혈청과 함께 DMEM + Glutamax에서, SK-BR-3은 10% (v/v) HyClone™ 소 태아 혈청과 함께 McCoys 5A에서, 그리고 BJAB는 20% (v/v) HyClone™ 소 태아 혈청과 함께 RPMI 1640 + Glutamax에서 배양하였다.
CellTiter - Glo 세포독성법
서브컨플루언트(밀집도 80 내지 90%) T75 플라스크로부터의 세포 농도 및 생존력을 트리판 블루 염색으로 측정하고, LUNA-II™ 자동 세포 계수기를 사용하여 계수하였다. 세포를 희석하고 96-웰 평면 바닥 플레이트에 1500 세포/웰(현탁액 50㎕/웰)로 플레이팅하였다.
시험될 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) (20㎍/㎖)의 스톡 용액(1㎖)은 필터-멸균된 ADC를 세포 배양 배지로 희석함으로써 제조하였다. 세포 배양 배지 900㎕에 100㎕를 연속적으로 전달함으로써 24-웰 플레이트에서 스톡 ADC의 8×10배 희석액 세트를 제조하였다. ADC 희석액을 이전에 접종된 50㎕ 세포 현탁액을 함유하는 96-웰 플레이트의 4개의 복제 웰에 분배하였다(50㎕/웰). 대조군 웰에 50㎕ 세포 배양 배지를 공급하였다. 세포 및 ADC를 함유하는 96-웰 플레이트를 노출 시간 동안 CO2 기체충전된 배양기에서 37℃에서 배양하였다.
배양 기간의 종료시, 세포 생존력을 CellTiter-Glo 검정으로 측정하였다. CellTiter-Glo (Promega)를 100㎕/웰로 분배하였고 실온에서 10분 안정화 전에 2분 동안 진탕시켰다. 각 웰의 발광도를 읽었다. 세포 생존력(백분율)을, 4개의 대조군 비처리된 웰에서의 평균 흡광도(100%)와 비교하여 4개의 ADC-처리된 웰에서의 평균 흡광도로부터 계산하였다. IC50을 비선형 곡선 핏팅 알고리즘: 가변 기울기를 갖는 에스자형 용량-반응 곡선을 사용하는 GraphPad Prism을 사용하여 용량-반응 데이터로부터 결정하였다.
PC-3의 ADC 배양 시간은 6일이다. PC-3을 Glutamax + 10% (v/v) HyClone™ 소 태아 혈청과 함께 RPMI 1640에서 배양하였다.
결과
Figure 112019107278289-pct00062
세포주 SU-DHL-4, GRANTA519, BJAB 및 WSU-DL-CL2는 모두 CD79b를 발현한다.
Figure 112019107278289-pct00063
세포주 SK-BR-3 및 NCI-N87은 Her2를 발현한다. 세포주 MDA-MB-468은 HER2를 발현하지 않는다.
Figure 112019107278289-pct00064
실시예 8 - 생체내 분석
(i) 다우디 ( Daudi )
시험된 컨쥬게이트: Conj-HLL2-1; Conj-HLL2-2; Conj-HLL2-3
10주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 0.1㎖의 1×107 다우디 세포를 피하 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 1500㎣의 종양 부피 또는 60일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0 2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다.
ADC의 농도는 다음 투여량을 제공하도록 조정되었다:
Figure 112019107278289-pct00065
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다.
Conj - HLL2 -1: 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(time to endpoint, TTE)의 중간값은 27.8일이었고, 60일 연구에 대해 32.2일(116%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(tumour growth delay, TGD)을 확립하였다. 28일째에 치료와 관련되지 않은 사망이 한 건 기록되었으며, 이 동물은 분석에서 제외되었다.
0.6mg/kg 요법은 48.1일(73%)의 TGD를 초래하였으며, 이는 대조군과 통계적으로 유의하였다(p <0.001). 또한, 이 요법은 9개의 59-퇴행반응 중 2개의 부분 퇴행 및 3개의 완전 퇴행으로 구성된 5개를 가졌다. 6마리의 동물이 1500㎣의 종점에 도달하였고 60일 후에 3마리의 생존동물이 남았다. 3마리의 생존동물은 평균 종양 부피가 221㎣였다. 치료와 관련되지 않은 사망이 한 건 있었으며 이 동물은 분석에서 제외되었다.
1.8mg/kg 요법은 가능한 최대의 유의한 TGD(대조군에 대해, p <0.001)를 초래했으며, 10마리의 60일 생존동물 중 8마리를 보유했고 비히클 처리된 대조군과 통계적으로 유의하게 다른 생존 이점을 제공하였다(p <0.001). 8마리의 동물은 완전 퇴행 반응을 보였다. 이 동물들 중 5마리는 60일 후에 종양이 없었다.
두 치료 요법 모두 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 생존 이점을 나타냈다(0.6㎎/㎖ 및 1.8㎎/㎖ 모두에 대해 p <0.001).
Conj - HLL2 -2: 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 27.8일로, 60일 연구에서 32.2일(116%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립했다.
0.3㎎/㎏ 및 1㎎/㎏ 요법은 모두 최대 달성가능한 TGD(32.2일, 116%)를 초래하였다. 이들 결과는 모두 대조군과 통계적으로 유의하였다(각 요법에 대해 p <0.001).
0.3㎎/㎏ 처리된 동물의 80%가 2개의 부분 반응 및 6개의 완전 반응으로 이루어진 퇴행 반응을 나타냈고, 그 중 4마리는 연구 종료시 종양이 없는 상태로 남았다. 0.3㎎/㎏ 처리된 동물 4마리가 종양 부피 종점에 도달하여 연구 종료시 6마리의 연구 생존동물이 종양이 없는 상태로 남았다.
1㎎/㎏ 처리된 동물의 100%가 퇴행 반응을 보였으며 모든 동물에게 60일째에 종양이 없었다.
두 치료 요법 모두 대조군과 비교하여 유의한 전체 생존 차이를 초래하였다(대조군 대 0.3㎎/㎏ 또는 1㎎/㎏, p <0.0001).
Conj - HLL2 -3: 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 27.8일로, 60일 연구에서 32.2일(116%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립했다.
0.1㎎/㎏ 및 0.3㎎/㎏ 요법은 12.9일(46%) 및 24.6일(88%)의 TGD를 초래하였다. 이들 결과는 모두 대조군과 통계적으로 유의하였다(각 요법에 대해 p <0.001).
0.1㎎/㎖ 요법으로 처리된 동물의 30%에서 3개의 부분 반응을 갖는 퇴행 반응이 관찰되었다. 이 그룹의 모든 동물은 60일까지 종양 부피 종점에 도달했다.
0.3㎎/㎏ 처리된 동물의 70%는 3개의 부분 반응 및 4개의 완전 반응으로 이루어진 퇴행 반응을 나타내었고, 그 중 한 마리는 연구 종료시 종양이 없는 상태로 남았다. 0.3㎎/㎏ 처리된 동물 4마리가 종양 부피 종점에 도달하여 연구 종료시 6마리의 연구 생존동물이 종양이 없는 상태로 남았다. 이 그룹에서 7마리의 동물은 종양 부피 종점에 도달하여 연구 종료시 MTV가 750㎣인 3마리의 60일 생존동물이 남았다.
두 치료 요법 모두 대조군과 비교하여 유의한 전체 생존 차이를 초래하였다(대조군 대 0.1㎎/㎏ 또는 0.13㎎/㎏, p <0.0001).
(ii) JIMT -1
시험된 컨쥬게이트: Conj-Her-3
10주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 50% Matrigel 중의 1×107 JIMT-1 세포 0.1㎖를 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 1000㎣의 종양 부피 또는 59일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0.2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다. ADC의 농도는 단일 투여로 1㎎ ADC/kg 체중 또는 3㎎ ADC/kg 체중을 제공하도록 조정되었다.
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다. 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 48.4일이었고, 59일 연구에서 10.6일(22%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립하였다.
1㎎/㎏ 용량이 공급된 동물에서 중간 종양 부피가 34일까지 정적으로 유지 된 후 진행되는 반면, 3㎎/㎏으로 처리된 동물의 경우, 종양 크기가 81㎣의 MTV로 약간 감소되어 투여량 의존적 효과가 관찰되었다. 두 투약 요법은 대조군에 비해 10.6일(22%)의 최대 TGD를 초래하였다(두 치료군 모두에 대해 p <0.001).
1㎎/㎏ 요법은 MTV가 650㎣이고 객관적인 퇴행 반응이 없는 9마리의 연구 생존동물을 초래하였다.
3㎎/㎏ 요법은 2개의 부분 반응으로 구성된 20%의 객관적인 퇴행 반응을 갖는 9마리의 연구 생존동물을 초래하였다. 연구 생존동물의 MTV는 108㎣이었다. 치료 요법은 서로 크게 다르지 않았다(p >0.05).
두 치료 요법 모두 대조군과 비교하여 유의한 전체 생존 차이를 초래하였다(대조군 대 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏, p <0.0001).
(iii) NCI-N87
시험된 컨쥬게이트: Conj-Her-3
10주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 50% Matrigel 중의 1×107 NCI-N87 세포 0.1㎖를 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 800㎣의 종양 부피 또는 81일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0.2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다. ADC의 농도는 단일 투여로 0.3㎎ ADC/kg 체중 또는 1㎎ ADC/kg 체중을 제공하도록 조정되었다.
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다. 10개의 대조군 종양 중 6개가 800㎣에 도달하였으며, 종점까지의 시간(TTE)은 36.8 내지 81.0일 범위였다. 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 77일이었고, 81일 연구에서 4일(5%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립하였다. 4마리의 대조군 동물은 696㎣의 중간 종양 부피(MTV)로 생존하였다.
0.3㎎/㎏ 및 1㎎/㎏ 요법은 각각 0.5일(1%) 및 4.0일(5%)의 TGD를 초래하였다. 이들 결과는 모두 대조군과 통계적으로 유의하지 않았고 서로 통계적으로 유의하지 않았다(p >0.05). 어느 그룹에서도 객관적인 퇴행은 기록되지 않았다. 0.3㎎/㎏ 처리된 5마리의 동물 및 1㎎/㎏ 처리된 7마리의 동물은 두 그룹 모두에서 550㎣의 MTV로 생존하였다.
치료 요법은 대조군과 비교하여 통계적으로 유의한 생존 이점을 초래하지 않았고 (두 치료군 모두에 대해 p >0.05), 치료 그룹 사이에 유의한 차이는 없었다(p >0.05).
(iv) NCI-N87
시험된 컨쥬게이트: Conj-Her-1, Conj-Her-3
8주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 50% Matrigel 중의 1×107 NCI-N87 0.1㎖를 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 800㎣의 종양 부피 또는 78일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0.2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다.
ADC의 농도는 다음 투여량을 제공하도록 조정되었다:
Figure 112019107278289-pct00066
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다.
Conj -Her-1: 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 42일로, 60일 연구에서 36일(86%)의 최대 종양 성장 지연(TGD)을 확립했다.
0.6㎎/㎏ 및 1㎎/㎏ 요법은 각각 9.9일(24%) 및 11.6일(28%)의 TGD를 초래하였다. 이들 결과는 모두 대조군과 통계적으로 유의하지 않았다(p >0.05). 두 그룹의 모든 동물은 800㎣의 종점에 도달했다.
6㎎/㎏ 요법은 가능한 최대의 유의한 TGD(대조군에 대해, p <0.001)를 초래했으며, 10마리의 60일 생존동물 중 8마리를 보유했고 비히클 처리된 대조군과 통계적으로 유의하게 다른 생존 이점을 제공하였다(p <0.0001). 한 마리의 동물이 78일에 800㎣의 종점에 도달하여 평균 종양 부피가 550㎣인 9마리의 생존동물이 남았다.
1㎎/㎏, 3㎎/㎏ 또는 6㎎/㎏ 요법으로 퇴행 반응이 관찰되지 않았다.
Conj -Her-3: 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 42.0일이었고, 78일 연구에서 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)은 36.0일(86%)이었다.
0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 및 3㎎/㎏에 대한 TGD는 각각 15.1일(36%), 30.6일(73%) 및 36.0일(86%)이었다. 대조군과 비교하여 1㎎/㎏ 및 3㎎/㎏에 대해 유의한 차이(두 치료군 모두에 대해 p < 0.001)가 있었으나, 0.3㎎/㎏에 대해서는 아니었다(p > 0.05). 0.3㎎/㎏ ADC 및 1㎎/㎏ ADC로 처리된 동물에서는 퇴행 반응이 관찰되지 않았다. 3㎎/㎏ 처리된 동물의 90%에서 퇴행 반응이 관찰되었다. 이것은 8개의 부분 반응 및 1개의 완전 반응으로 이루어졌으며, 이는 연구 종료시 종양이 없는 상태로 유지되었다. 0.3㎎/㎏으로 처리된 모든 동물은 800㎣의 종점에 도달했다. 1㎎/㎏ 처리된 5마리의 동물이 종점에 도달하여 5마리의 78일 생존동물이 남았다. 이들의 MTV는 486㎣였다. 3㎎/㎏ 처리된 10마리의 동물 모두 63㎣의 MTV로 연구에서 생존했다.
1㎎/㎏ 및 3㎎/㎏ 요법은 대조군과 비교하여 유의한 생존 차이를 초래하였다(두 치료 그룹 모두에 대해 p <0.001). 0.3㎎/㎏ 처리된 그룹은 대조군과 통계적으로 유의하지 않았다(p >0.05). 1㎎/㎏ 및 3㎎/㎏ 처리는 0.3㎎/㎏ 그룹과 유의하게 상이하였다(각각 p <0.001 및 p <0.0001).
(v) NCI-N87
시험된 컨쥬게이트: Conj-Her-2
8주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 50% Matrigel 중의 1×107 NCI-N87 세포 0.1㎖를 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 800㎣의 종양 부피 또는 79일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0.2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다. ADC의 농도는 단일 투여로 1㎎ ADC/kg 체중 또는 2㎎ ADC/kg 체중을 제공하도록 조정되었다.
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다. 비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 49.6일이었고, 79일 연구에서 29.4일(59%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립하였다.
1㎎/㎏ 및 2㎎/㎏ 요법은 각각 7.6일(15%) 및 23.6일(48%)의 TGD를 초래하였다. 이들 결과는 모두 대조군과 통계적으로 유의하였다(각각 p<0.05 및 p <0.001).
1㎎/㎏ 요법으로 처리된 8마리의 동물은 800㎣의 종점에 도달하여 MTV가 694㎣인 2마리의 79일 생존동물이 남았다. 2㎎/㎖ 처리 그룹에서 7마리의 동물은 79일까지 종양 부피 종점에 도달하여 MTV가 600㎣인 3마리의 연구 생존동물이 남았다.
두 치료 요법은 모두 대조군과 비교하여 현저한 전체 생존 차이를 초래하였다(대조군 대 1㎎/㎏, p <0.05; 대조군 대 2㎎/㎏, p <0.001).
회귀 반응은 어느 요법으로도 기록되지 않았다.
(vi) NCI-N87
시험된 컨쥬게이트: Conj-Her-1, Conj-Her-1++
10주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 50% Matrigel 중의 1×107 NCI-N87 0.1㎖를 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 800㎣의 종양 부피 또는 81일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0.2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다.
ADC의 농도는 다음 투여량을 제공하도록 조정되었다:
Figure 112019107278289-pct00067
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다.
비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 40.2일이었고, 80일 연구에서 40일(86%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립하였다.
Conj -Her- 1: 6㎎/㎏ 및 18㎎/㎏ 단일 투여 요법은 최대 가능한 종양 성장 지연을 초래하였다. 6㎎/㎏ 단일 투여 요법에서, 5마리 마우스의 평균 종양 부피는 600㎣였으며, 퇴행 반응은 관찰되지 않았다. 18㎎/㎏ 단일 투여 요법에서 평균 종양 부피가 36㎣인 생존동물이 10마리였다. 부분 퇴행은 4개, 완전 퇴행은 6개였다.
6㎎/㎏ 및 8㎎/㎏의 3주 투여 요법은 또한 최대 가능한 종양 성장 지연을 초래하였다. 6㎎/㎏의 3주 투여 요법에서, 연구 종료시 9마리 마우스에 대한 평균 종양 부피는 245㎣였고 2개의 부분 퇴행이 있었다. 8㎎/㎏의 3주 투여 요법에서 평균 종양 부피가 92㎣인 생존동물이 10마리였다. 7개의 부분 퇴행, 3개의 완전 퇴행 및 2마리의 무종양 생존동물이 있었다.
Conj -Her-1++: 6㎎/㎏ 단일 투여 요법으로 최대 종양 성장 지연이 발생했다. 평균 종양 부피가 161㎣인 생존동물이 10마리였다. 5개의 부분 퇴행, 5개의 완전 퇴행 및 2마리의 무종양 생존동물이 있었다.
(vii) NCI-N87
시험된 컨쥬게이트: Conj-Her-1, Conj-Her1+, Conj-Her-1++
8주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 50% Matrigel 중의 1×107 NCI-N87 0.1㎖를 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 800㎣의 종양 부피 또는 83일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0.2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다.
ADC의 농도는 다음 투여량을 제공하도록 조정되었다:
Figure 112019107278289-pct00068
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다.
비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 36.8일이었고, 80일 연구에서 46.2일(126%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립하였다.
Conj -Her- 1: 6㎎/㎏ 및 18㎎/㎏ 단일 투여 요법은 45.9일(125%) 및 46.2일(126%)의 종양 성장 지연을 초래하였다. 6㎎/㎏ 요법에서, 4마리 마우스의 평균 종양 부피는 564㎣였으며, 퇴행 반응은 관찰되지 않았다. 18㎎/㎏ 요법에서 평균 종양 부피가 108㎣인 생존동물이 9마리였다. 9개의 부분 퇴행, 1개의 완전 퇴행이 있었다.
Conj -Her-1++: 1.5㎎/㎏ 및 3㎎/㎏ 요법은 45.9일(125%) 및 46.2일(126%)의 종양 성장 지연을 초래하였다. 1.5㎎/㎏ 요법에서, 평균 종양 부피가 634㎣인 생존동물이 2마리였다. 3㎎/㎏ 요법에서 평균 종양 부피가 451㎣인 생존동물이 10마리였다.
Conj -Her-1+: 3㎎/㎏ 및 6㎎/㎏ 요법은 46.2일(126%)의 최대 종양 성장 지연을 초래하였다. 3㎎/㎏ 요법에서 평균 종양 부피가 600㎣인 생존동물이 7마리였다. 6㎎/㎏ 요법에서 평균 종양 부피가 256㎣인 생존동물이 10마리였다. 2개의 부분 퇴행이 있었다.
(viii) JIMT1
시험된 컨쥬게이트: Conj-Her-1, Conj-Her-1++
8주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스의 오른쪽 옆구리에 50% Matrigel 중의 1×107 JIMT1 0.1㎖를 주사하였다. 종양의 평균 크기가 100 내지 150㎣에 도달하면 치료를 시작하였다. 마우스는 일주일에 두 번 체중을 측정했다. 종양 크기는 일주일에 두 번 측정했다. 동물을 개별적으로 모니터링하였다. 실험 종점은 1000㎣의 종양 부피 또는 60일 중 빠른 쪽이었다.
10마리의 이종이식된 마우스 그룹들에 인산염 완충 식염수(비히클) 중의 항체 약물 컨쥬게이트(ADC) 0.2㎖/20g 체중 또는 비히클 단독 0.2㎖/20g 체중을 정맥내 주사하였다.
ADC의 농도는 다음 투여량을 제공하도록 조정되었다:
Figure 112019107278289-pct00069
모든 요법은 체중 감소가 거의 없이 용인되었다.
비히클 처리된 대조군에 대한 종점까지의 시간(TTE)의 중앙값은 37.5일이었고, 60일 연구에서 22.5일(60%)의 최대 가능한 종양 성장 지연(TGD)을 확립하였다.
Conj -Her- 1: 18㎎/㎏ 및 24㎎/㎏ 요법은 5.3일(14%) 및 3.2일(9%)의 종양 성장 지연을 초래하였다. 18㎎/㎏ 요법에서, 모든 동물이 1000㎣의 종점에 도달했다. 24㎎/㎏ 요법에서 종양 부피가 968㎣인 생존동물이 한 마리였다. 두 요법 모두 대조군과 비교하여 유의한 전체 생존 차이를 초래하였다(P <0.01).
Conj -Her-1++: 4㎎/㎏, 6㎎/㎏ 및 8㎎/㎏ 요법은 4.4일(12%), 6.9일(18%) 및 17.7일(47%)의 종양 성장 지연을 초래하였다. 4㎎/㎏ 요법에서, 모든 동물이 1000㎣의 종점에 도달했다. 6㎎/㎏ 요법에서, 종양 부피가 650㎣인 생존동물이 한 마리였다. 8㎎/㎏ 요법에서, 종양 부피가 847㎣인 생존동물이 한 마리였다. 모든 요법이 대조군과 비교하여 유의한 전체 생존 차이를 초래하였다(P <0.01).
실시예 9 - 독성 분석
단일 투여 비GLP 독성 연구를 사용하여 시험된 ADC Conj-R347-1, Conj-R347-2 및 Conj-R347-3의 최대 내성 용량(maximum tolerated dose, MTD) 및 안전성 프로파일을 결정하였다.
수컷 스프라그 돌리 래트(Envigo, Inc)에 꼬리 정맥을 통한 느린 볼루스 정맥내 주사로 ADC를 1회 투여하였다. 사용된 희석용 비히클은 25mM 히스티딘-HCl, 7% 슈크로스, 0.02 % 폴리소르베이트 80, pH 6.0이었다. 연구 동안 평가된 파라미터는 사망률, 신체 검사, 케이지 관찰, 체중, 체중 변화, 임상 병리(임상 화학, 혈액학 및 응고), 및 육안적 병리학 소견을 포함하였다. 모든 동물은 연구일(Study Day, SD) 29에 사명시켰다.
Figure 112019107278289-pct00070
혈액학적 파라미터의 경미한 감소, 현미경 평가 및 골수 억제를 포함하는 독성 종점에 기초하여 내성을 결정하였다. 최고 용량이 투여된 동물의 미세한 변화에 기초하여, 단일 투여 후 래트에서의 최대내성용량(MTD)은 25㎎/㎏인 것으로 결정되었다.
Figure 112019107278289-pct00071
독성 종점에 기초하여 내성을 결정하였다. ADC는 단일 투여 후 래트에서 8㎎/㎏까지 허용되었다. 결과는 용량 의존적 체중 감소 및 골수 억제를 포함하였다.
Figure 112019107278289-pct00072
독성 종점에 기초하여 내성을 결정하였다. ADC는 단일 투여 후 래트에서 4㎎/㎏까지 허용되었다. 결과는 용량 의존적 체중 감소 및 골수 억제를 포함하였다.
치료 지수 (Therapeutic Index)
각 ADC/약물 링커의 치료 지수는 다음 등식을 사용하여 계산되었다:
TI = 래트의 MTD(㎎/㎏)/마우스 효능 모델의 MED(㎎/㎏)
Figure 112019107278289-pct00073

Claims (66)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물:
    Figure 112020067765412-pct00096

    [여기서,
    R6 및 R9는 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 독립적으로 선택되고;
    여기서, R 및 R'은 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, C3-20 헤테로사이클릴 및 C5-20 아릴기로부터 독립적으로 선택되고;
    R7은 H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', 니트로, Me3Sn 및 할로로부터 선택되고;
    R"는 C3-12 알킬렌기이고, 그 사슬이 O, S 또는 NRN2 (여기서 RN2는 H 또는 C1-4 알킬임)에서 선택되는 하나 이상의 헤테로원자, 및/또는 벤젠 또는 피리딘에서 선택되는 방향족 고리에 의해 단절될 수 있고;
    Y 및 Y'은 O, S, 또는 NH로부터 선택되고;
    R6', R7', R9'은 각각 R6, R7 및 R9와 동일한 기로부터 선택되고;
    R11b은 OH, ORA로부터 선택되고, 여기서 RA는 C1-4 알킬이고; 그리고
    RL은 세포 결합제와의 연결을 위한 링커이며, 하기로부터 선택된다:
    (IIIa):
    Figure 112020067765412-pct00097
    ,
    여기서,
    Q는
    Figure 112020067765412-pct00098
    이고, 이때 QX는 Q가 아미노-산 잔기, 디펩티드 잔기 또는 트리펩티드 잔기가 되도록 하는 것이고;
    X는
    Figure 112020067765412-pct00099
    이고,
    여기서, a = 0 내지 5이고, b = 0 내지 16이고, c = 0 또는 1이고, d = 0 내지 5이고;
    GL은 리간드 단위에 연결하기 위한 링커이고; 그리고
    (IIIb):
    Figure 112020067765412-pct00100
    ,
    여기서, RL1 및 RL2은 H 및 메틸로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 사이클로프로필렌 또는 사이클로부틸렌기를 형성하고;
    e는 0 또는 1이고;
    하기 중 하나:
    (a) R20은 H이고, R21은 OH 또는 ORA(여기서 RA는 C1-4 알킬임)이거나; 또는
    (b) R20 및 R21은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중 결합을 형성하거나; 또는
    (c) R20은 H이고 R21은 SOzM(여기서 z는 2 또는 3이고 M은 1가의 약제학적으로 허용가능한 양이온임)이거나; 또는
    (d) R20은 H이고 R21은 H이거나; 또는
    (e) R21은 OH 또는 ORA(여기서 RA는 C1-4 알킬)이고 R20은 하기로부터 선택된다:
    Figure 112020067765412-pct00101
    , 여기서 RZ는 하기로부터 선택된다:
    Figure 112020067765412-pct00102

    (z-ii) OC(=O)CH3;
    (z-iii) NO2;
    (z-iv) OMe;
    (z-v) 글루코로나이드;
    (z-vi) -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-RZC, 여기서 -C(=O)-X1-NH- 및 -C(=O)-X2-NH-는 천연 아미노산 잔기를 나타내고 RZC는 Me, OMe, OCH2CH2OMe로부터 선택된다].
  2. 제1항에 있어서, Y 및 Y'은 모두 0이고, R"는 (a) C3-7 알킬렌 또는 (b) 하기 화학식의 기인, 화합물:
    Figure 112020011056559-pct00117
    (여기서, r은 1 또는 2임).
  3. 제1항에 있어서, R9는 H이고, R6는 H인, 화합물.
  4. 제1항에 있어서, R7은 C1-4 알킬옥시기인, 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R6'는 R6과 동일한 기이고, R7'는 R7과 동일한 기이고, R9'는 R9와 동일한 기이고 Y'는 Y와 동일한 기인, 화합물.
  6. 제1항에 있어서, R20 및 R21은 이들이 결합된 질소와 탄소 원자 사이에 질소-탄소 이중 결합을 형성하는, 화합물.
  7. 제1항에 있어서, 하기 화학식 Ia, Ib 또는 Ic을 갖는, 화합물:
    Figure 112020011056559-pct00106

    (여기서 R1a은 메틸 및 벤질로부터 선택되고;
    RL 및 R11b는 제1항에서 정의된 바와 같다).
  8. 제1항에 있어서, R11b는 OH인, 화합물.
  9. 제1항에 있어서, RL은 화학식 IIIa를 갖고, Q는 하기로부터 선택된 디펩티드 잔기인, 화합물:
    CO-Phe-Lys-NH,
    CO-Val-Ala-NH,
    CO-Val-Lys-NH,
    CO-Ala-Lys-NH,
    CO-Val-Cit-NH,
    CO-Phe-Cit-NH,
    CO-Leu-Cit-NH,
    CO-Ile-Cit-NH,
    CO-Phe-Arg-NH, 및
    CO-Trp-Cit-NH.
  10. 제1항에 있어서, RL은 화학식 IIIa을 갖고, a는 0인, 화합물.
  11. 제1항에 있어서, RL은 화학식 IIIa을 갖고, b는 0 내지 8인, 화합물.
  12. 제1항에 있어서, RL은 화학식 IIIa을 갖고, d는 2인, 화합물.
  13. 제1항에 있어서, RL은 화학식 IIIa을 갖고, GL은 하기로부터 선택되는, 화합물:
    Figure 112020011056559-pct00107

    Figure 112020011056559-pct00108

    (여기서, Ar은 C5-6 아릴렌기를 나타낸다).
  14. 제13항에 있어서, GL는 GL1-1인, 화합물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 하기 화학식 Id를 갖는, 화합물:
    Figure 112020011056559-pct00109
    ,
    (여기서 Q는 하기로부터 선택된다:
    (a) -CH2-;
    (b) -C3H6-; 및
    (c)
    Figure 112020011056559-pct00110
    ).
  16. 하기 화학식 II의 컨쥬게이트:
    L - (DL)p (II)
    [여기서, L은 리간드 단위이고, DL은 하기 화학식 I'의 약물 링커 단위이고:
    Figure 112020067765412-pct00111

    여기서, R6, R7, R9, R11b, Y, R", Y', R6', R7, R9', R20 및 R21는 청구항 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에서 정의한 바와 같고;
    RLL은 세포 결합제와의 연결을 위한 링커로서, 하기로부터 선택되며:
    (IIIa'):
    Figure 112020067765412-pct00112
    (여기서, Q 및 X는 제1항, 및 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에서 정의한 바와 같고, GLL은 리간드 단위에 연결된 링커임); 및
    (IIIb'):
    Figure 112020067765412-pct00113
    (여기서, RL1 및 RL2은 제1항에서 정의한 바와 같음);
    여기서, p는 1 내지 20의 정수임].
  17. 제16항에 있어서, GLL 은 하기로부터 선택된, 컨쥬게이트:
    Figure 112020011056559-pct00114

    (여기서, Ar은 C5-6 아릴렌기를 나타냄).
  18. 제17항에 있어서, GLL은 GLL1-1인, 컨쥬게이트.
  19. 제16항에 있어서, DL은 하기의 화학식 (Id')을 갖는, 컨쥬게이트:
    Figure 112020011056559-pct00115

    (여기서 Q는 하기로부터 선택된다:
    (a) -CH2-;
    (b) -C3H6-; 및
    (c)
    Figure 112020011056559-pct00116
    ).
  20. 제16항에 있어서, 상기 리간드 단위가 항체 또는 이의 활성 단편이고, 상기 항체 또는 항체 단편이 하기 (1) 내지 (88)로부터 선택되는 하나 이상의 종양-관련 항원 또는 세포-표면 수용체에 결합되는 항체인, 컨쥬게이트:
    (1) BMPR1B;
    (2) E16;
    (3) STEAP1;
    (4) 0772P;
    (5) MPF;
    (6) Napi3b;
    (7) Sema 5b;
    (8) PSCA hlg;
    (9) ETBR;
    (10) MSG783;
    (11) STEAP2;
    (12) TrpM4;
    (13) CRIPTO;
    (14) CD21;
    (15) CD79b;
    (16) FcRH2;
    (17) HER2;
    (18) NCA;
    (19) MDP;
    (20) IL20R-알파;
    (21) 브레비칸;
    (22) EphB2R;
    (23) ASLG659;
    (24) PSCA;
    (25) GEDA;
    (26) BAFF-R;
    (27) CD22;
    (28) CD79a;
    (29) CXCR5;
    (30) HLA-DOB;
    (31) P2X5;
    (32) CD72;
    (33) LY64;
    (34) FcRH1;
    (35) IRTA2;
    (36) TENB2;
    (37) PSMA - FOLH1;
    (38) SST;
    (38.1) SSTR2;
    (38.2) SSTR5;
    (38.3) SSTR1;
    (38.4) SSTR3;
    (38.5) SSTR4;
    (39) ITGAV;
    (40) ITGB6;
    (41) CEACAM5;
    (42) MET;
    (43) MUC1;
    (44) CA9;
    (45) EGFRvIII;
    (46) CD33;
    (47) CD19;
    (48) IL2RA;
    (49) AXL;
    (50) CD30 - TNFRSF8;
    (51) BCMA - TNFRSF17;
    (52) CT Ags - CTA;
    (53) CD174 (루이스 Y) - FUT3;
    (54) CLEC14A;
    (55) GRP78 - HSPA5;
    (56) CD70;
    (57) 줄기 세포 특이적 항원;
    (58) ASG-5;
    (59) ENPP3;
    (60) PRR4;
    (61) GCC - GUCY2C;
    (62) Liv-1 - SLC39A6;
    (63) 5T4;
    (64) CD56 - NCMA1;
    (65) CanAg;
    (66) FOLR1;
    (67) GPNMB;
    (68) TIM-1 - HAVCR1;
    (69) RG-1/전립선 종양 표적 민딘(Mindin) - 민딘/RG-1;
    (70) B7-H4 - VTCN1;
    (71) PTK7;
    (72) CD37;
    (73) CD138 - SDC1;
    (74) CD74;
    (75) 클라우딘 - CLs;
    (76) EGFR;
    (77) Her3;
    (78) RON - MST1R;
    (79) EPHA2;
    (80) CD20 - MS4A1;
    (81) 테나신 C - TNC;
    (82) FAP;
    (83) DKK-1;
    (84) CD52;
    (85) CS1 - SLAMF7;
    (86) 엔도글린 - ENG;
    (87) 아넥신　A1 - ANXA1;
    (88) V-CAM (CD106) - VCAM1.
  21. 제16항에 있어서, p가 1 내지 8의 정수인, 컨쥬게이트.
  22. 제16항에 있어서, 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한, 컨쥬게이트.
  23. 제16항에 따른 컨쥬게이트 및 약제학적으로 허용가능한 희석제, 담체 또는 부형제를 포함하는, 증식성 질환의 치료용 약학적 조성물.
  24. 삭제
  25. 제23항에 있어서, 상기 증식성 질환이 암인, 약학적 조성물.
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 삭제
  33. 삭제
  34. 삭제
  35. 삭제
  36. 삭제
  37. 삭제
  38. 삭제
  39. 삭제
  40. 삭제
  41. 삭제
  42. 삭제
  43. 삭제
  44. 삭제
  45. 삭제
  46. 삭제
  47. 삭제
  48. 삭제
  49. 삭제
  50. 삭제
  51. 삭제
  52. 삭제
  53. 삭제
  54. 삭제
  55. 삭제
  56. 삭제
  57. 삭제
  58. 삭제
  59. 삭제
  60. 삭제
  61. 삭제
  62. 삭제
  63. 삭제
  64. 삭제
  65. 삭제
  66. 삭제
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