JP2018108081A5 - - Google Patents
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Description
4つの免疫化戦略を以下のように行った。
A.コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長ヒトVEGFA165を用いるウサギのプレ免疫化(pre−immunization)。aa長16−K FM DV Y QRS Y CHP−28(下線:受容体相互作用、二重下線、ウサギにおける不一致、Cysは結晶構造によるジスルフィド結合に関与する)由来のペプチドでの第2追加免疫。ペプチド配列中に含まれるCysは、KLHとのカップリングに使用できるので、したがって、遊離Cysとして露出しない。最終ペプチドは、KFMDVYQRSY−Cys−KLHと思われる。
B.コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長VEGFA165を用いるマウスのプレ免疫化。aa長16−K FM DV Y QRS Y CHP−28(Cysは、結晶構造によるジスルフィド結合に関与する)由来のペプチドでの第2追加免疫。ペプチド配列中に含まれるCysは、KLHとのカップリングに使用できるので、したがって、遊離Cysとして露出しない。最終ペプチドは、以下と思われる:KFMDVYQRSY−Cys−KLH。
C.aa長16−K FM DV Y QRS YC HP−28(最終ペプチド:KFMDVYQRSY−Cys−KLH)由来のペプチドを用いるウサギ/マウスのプレ免疫化。コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長VEGFA165を用いる第2追加免疫。
A.コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長ヒトVEGFA165を用いるウサギのプレ免疫化(pre−immunization)。aa長16−K FM DV Y QRS Y CHP−28(下線:受容体相互作用、二重下線、ウサギにおける不一致、Cysは結晶構造によるジスルフィド結合に関与する)由来のペプチドでの第2追加免疫。ペプチド配列中に含まれるCysは、KLHとのカップリングに使用できるので、したがって、遊離Cysとして露出しない。最終ペプチドは、KFMDVYQRSY−Cys−KLHと思われる。
B.コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長VEGFA165を用いるマウスのプレ免疫化。aa長16−K FM DV Y QRS Y CHP−28(Cysは、結晶構造によるジスルフィド結合に関与する)由来のペプチドでの第2追加免疫。ペプチド配列中に含まれるCysは、KLHとのカップリングに使用できるので、したがって、遊離Cysとして露出しない。最終ペプチドは、以下と思われる:KFMDVYQRSY−Cys−KLH。
C.aa長16−K FM DV Y QRS YC HP−28(最終ペプチド:KFMDVYQRSY−Cys−KLH)由来のペプチドを用いるウサギ/マウスのプレ免疫化。コンフォメーションバインダーを得る可能性を高めるための、全長VEGFA165を用いる第2追加免疫。
Claims (25)
- 可変重鎖(VH)と可変軽鎖(VL)を含むヒト化抗体またはその抗原結合性フラグメントであって、
該VHが、それぞれ配列番号8、配列番号20および配列番号32のCDRH1、CDRH2およびCDRH3配列を含み、該VLが、配列番号43、配列番号55および配列番号66のCDRL1、CDRL2およびCDRL3配列を含み、
該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、1×10 −9 M以下の親和性(K d )でヒトVEGF 165 に結合する、ヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。 - scFv、Fabフラグメント、Fab’フラグメント、またはF(ab’) 2 フラグメントである、請求項1に記載の抗原結合性フラグメント。
- 請求項1に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
- 局所投与、眼内投与、経口投与、経鼻投与、直腸投与、または、非経口投与のために処方される、請求項3に記載の組成物。
- 配列番号164の配列と少なくとも95%の配列同一性を有する重鎖可変領域フレームワーク配列を含む、請求項1に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
- 前記重鎖可変領域フレームワークが、配列番号164と100%の同一性を有する配列を含む、請求項5に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
- 配列番号87の配列と少なくとも95%の配列同一性を有する軽鎖可変領域フレームワーク配列を含む、請求項1に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
- 前記軽鎖可変領域フレームワークが、配列番号87と100%の同一性を有する配列を含む、請求項7に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
- ヒトVEGF媒介性疾患を有する被験体において、ヒトVEGF媒介性の内皮細胞増殖および血管性透過を阻害するための組成物であって、請求項1に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメントを含み、その結果、該被験体がVEGF媒介性疾患について処置される、組成物。
- 可変重鎖(VH)と可変軽鎖(VL)を含む抗体またはその抗原結合性フラグメントをコードする単離された核酸分子であって、以下:
a.該VHが、配列番号2、配列番号15および配列番号27からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号38、配列番号50および配列番号61からなる群のCDRを含む;
b.該VHが、配列番号3、配列番号15および配列番号27からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号38、配列番号50および配列番号61からなる群のCDRを含む;
c.該VHが、配列番号4、配列番号16、配列番号28からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号39、配列番号51および配列番号62からなる群のCDRを含む;
d.該VHが、配列番号5、配列番号17、配列番号29からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号40、配列番号52および配列番号63からなる群のCDRを含む;
e.該VHが、配列番号6、配列番号18および配列番号30からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号41、配列番号53および配列番号64からなる群のCDRを含む;
f.該VHが、配列番号7、配列番号19および配列番号31からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号42、配列番号54および配列番号65からなる群のCDRを含む;
g.該VHが、配列番号8、配列番号20および配列番号32からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号43、配列番号55および配列番号66からなる群のCDRを含む;
h.該VHが、配列番号9、配列番号21および配列番号33からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号44、配列番号56および配列番号67からなる群のCDRを含む;
i.該VHが、配列番号10、配列番号22および配列番号34からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号45、配列番号57および配列番号68からなる群のCDRを含む;
j.該VHが、(i)配列番号11、配列番号23および配列番号35からなる群;(ii)配列番号11、配列番号25および配列番号35からなる群;(iii)配列番号13、配列番号23および配列番号35からなる群;もしくは(iv)配列番号13、配列番号25および配列番号35からなる群のCDRを含み、該VLが、配列番号46、配列番号58および配列番号69からなる群のCDRを含む;または
k.該VHが、配列番号12、配列番号24および配列番号36からなる群のCDRを含み、該VLが、(i)配列番号47、配列番号59および配列番号70からなる群のCDR;もしくは(ii)配列番号48、配列番号59および配列番号70からなる群のCDRを含む、
単離された核酸分子。 - 前記抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号164の配列と少なくとも95%同一であるアミノ酸配列を有する可変重鎖を含み、該抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号87の配列と少なくとも95%同一であるアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む、請求項10に記載の単離された核酸分子。
- 前記可変重鎖が配列番号164のアミノ酸配列を含み、前記可変軽鎖が配列番号87のアミノ酸配列を含む、請求項11に記載の単離された核酸分子。
- 前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域が、配列番号181の配列によって連結される、請求項12に記載の単離された核酸分子。
- 請求項10に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
- 請求項11に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
- 請求項12に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
- 請求項14に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
- 請求項15に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
- 請求項16に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
- 前記抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号164の配列を含む可変重鎖を含み、該抗体または抗原結合性フラグメントが、配列番号87の配列を含む可変軽鎖を含む、請求項1に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
- 前記重鎖可変領域と前記軽鎖可変領域を連結する配列番号181の配列を有するリンカー配列をさらに含む、請求項20に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
- 単鎖抗体(scFv)である、請求項21に記載の抗原結合性フラグメント。
- 前記抗原結合性フラグメントを発現する発現ベクターに存在する開始コドンに由来するN末端メチオニンを含む、請求項22に記載の抗原結合性フラグメント。
- 前記抗体またはその抗原結合性フラグメントが、1×10 −10 M以下の親和性(K d )でヒトVEGF 165 に結合する、請求項1、5、6、7、8、20、21、22または23に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメント。
- 請求項24に記載のヒト化抗体または抗原結合性フラグメントと、薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
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