DK167150B1

DK167150B1 - 16,17-acetalsubstituerede androstan-17beta-carboxylsyrer

Info

Publication number: DK167150B1
Application number: DK059392A
Authority: DK
Inventors: Paul Haakan Andersson; Per Ture Andersson; Bengt Ingemar Axelsson; Bror Arne Thalen; Jan William Trofast
Original assignee: Draco Ab
Priority date: 1985-04-04
Filing date: 1992-05-05
Publication date: 1993-09-06
Also published as: FI85378C; ATE107657T1; DK59693A; PT82340A; IL78143A0; ZA861884B; FI861275A; GR860902B; LV10281B; DK59392A; ES8802392A1; IE61474B1; CS266581B2; UA13319A; CN1021444C; LTIP1676A; LV10281A; RU1795972C; DE3687239D1; AU5486886A

Description

i DK 167150 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte 16,17-acetal-substituerede androstan-17-£-carboxylsyrer med den i kravet angivne formel Γ.

5 Disse forbindelser kan benyttes som udgangsmateriale ved fremstilling af hidtil ukendte glucocortocosteroider med høj anti-inflammatorisk styrke på påføringsstedet og lav systemisk glucocor-ticoid-virkning.

10 Det er kendt, at visse glucocorticosteroider (GCS), såsom de i handelen forekommende lægemidler triamcinolonacetonid, betametason-17/J-valerat og dexametason-21-valerat, kan bruges til lokal behandling af betændelsessygdomme på huden (eksemer, psoriasis), men de er ikke særligt egnede til behandling af allergiske eller immunologiske 15 tilstande i åndedrætsvejene (fx astma og rhinitis) eller i tarmen (ulcerativ kolitis, Morbus Crohn).

Med lokal glucocorticoidterapi opnås der imidlertid kliniske fordele i forhold til en systemisk behandling (fx med glucocorticoid-tablet-20 ter) , især med hensyn til nedsættelse af uønskede glucocorti- coid-virkninger uden for det sygdomsangrebne område. For at opnå sådanne kliniske fordele ved fx alvorlig sygdom i åndedrætsvejene må glucocorticosteroiderne have en hensigtsmæssig farmakologisk profil.

De skal således udvise høj naturlig glucocorticoid-aktivitet på 25 påføringsstedet men må tillige undergå en hurtig inaktivering ved fx hydrolyse i målorganet eller efter optagelse i det almindelige kredsløb.

De hidtil kendte glucocorticosteroider er ikke i besiddelse af nogen 3Q sådan helt tilfredsstillende farmakologisk profil ved handling af sygdomme i fx luftvejene.

Eftersom en binding af GCS til glucocorticoid-receptorer er en forudsætning for, at deres antiinflammatoriske og allergiske virk-_c ninger kan indtræde, kan steroidernes evne til at binde sig til

OD

disse receptorer bruges til bestemmelse af den biologiske aktivitet af GCS. Der er blevet påvist en direkte korrelation mellem affiniteten af GCS til receptorerne og deres antiinflammatoriske virkninger ved anvendelse af øre-ødemprøven på rotter (Correlation between 2 DK 167150 B1

Chemical structure, receptor binding, and biological activity of some novel, highly active, 16a,17a-acetalsubstituted glucocorticoids; E. Dahlberg, A. Thaién, R. Brattsand, J-A Gustafsson, U. Johansson, K. Roempke og T. Saaetok, Mol. Pharmacol. 25, (1984), 5 70).

Fra DK fremlæggelsesskrift nr. 153.493 kendes der ganske vist lavere alkylestere, navnlig methylestere, af androsta-l,4-dien-17-carboxyl-syre, der angives at have antiinflammatorisk virkning i lave doser.

10 Disse kendte androstanalkylestere har den almene formel: ch3?· HO . .

CHJ ^-f-COOH

R"· . 1 1 L

15 R"

Y

2o hvori R' betyder en fri eller med en carboxylsyre med højest 7 carbonatomer forestret hydroxylgruppe, R77- betyder en a- eller ^-stillet methylgruppe eller en methylengnippe, 25 eller R7 sammen med R" betyder en 16a,17a-dihydroxyacetonidgruppe med formlen:

___.O /CH

c 30 / \ ...-ox ^ch3 R'" betyder hydrogen eller chlor, 35 X betyder chlor eller fluor, og Y betyder hydrogen eller fluor, idet X betyder chlor og Y betyder fluor, når R'" betyder hydrogen.

3 DK 167150 B1

Det har imidlertid vist sig, at disse estere er vanskeligt hydrolyserbare af enzymer, der naturligt forekommer i biologisk væv og blod. Som følge heraf vil de efter indgivelse ikke undergå nogen hurtig inaktivering ved hydrolyse i målorgånet eller efter optagelse 5 i det almene blodkredsløb men vil være i stand til at udøve skadelige bivirkninger på andre organer i det behandlede individ. Det bemærkes i den forbindelse, at den ved hydrolysen dannede metabolit - den frie 17-carboxylsyre - er uden glucocorticoid virkning.

10 Den foreliggende opfindelse er baseret på den iagttagelse, at hidtil ukendte androsta-4-en- eller -l,4-dien-17/J-carboxylsyrer kan omdannes til hidtil ukendte androstan-17/8-carboxyl syreestere, som ikke blot besidder forholdsvis høj glucocorticoidreceptoraffinitet, men som tillige forholdsvis let hydrolyseres af esteraseenzymer, der 15 forekommer i blod og biologisk væv, hvorfor de forholdsvis hurtigt inaktiveres efter den lokale applikation. Disse forbindelser udviser derfor en mere hensigtsmæssig farmakologisk profil end ovennævnte kendte androstan-17-carboxyl syreestere og er derfor mere velegnede til indgivelse i f.eks. luftvejene til behandling af allergiske og 20 inflammatoriske sygdomme heri.

De hidtil ukendte androstan-17^-carboxylsyreestere er 16,17-acetal-substituerede og de har den almene formel I: 25 f3 c=o I ' so 0 ^ :

X

eller er en stereoisomer forbindelse deraf, i hvilken formel bindingen mellem 1,2-stillingerne er en enkelt- eller en dobbeltbinding, 35 X* betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, 2 X betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, 4 DK 167150 B1 R1 betegner hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet carbonhy-dridgruppe med 1-4 carbonatomer, R betegner hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet carbonhy-5 dridgruppe med 1-10 carbonatomer, 3 R betegner 0 0 4 K " 4 ς 11 fi CRVoCR0 eller CRVOCYR0 10 Y betegner oxygen eller svovl, 4 R betegner hydrogen, en ligekædet eller forgrenet carbonhy-dridgruppe med 1-10 carbonatomer eller en phenyl gruppe, 15 5 R betegner hydrogen eller methyl, og g R betegner hydrogen, en ligekædet eller forgrenet, mættet eller umættet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer, en ligekædet 20 eller forgrenet al kylgruppe med 1-5 carbonatomer substitueret med mindst ét halogenatom, en pyrryl-, pyridyl-, pyrimidyl-, pyrazinyl-, furyl-, pyranyl-, benzofuranyl-, indolyl- eller /—\ tienylgruppe, gruppen (hvor m er tallet 0, 1 eller 2, og n er tallet 2, 3, 4, 5 eller 6) eller en phenyl-25 eller benzylgruppe, som eventuelt er substitueret med én eller flere substituenter udvalgt blandt ligekædet eller forgrenet al kyl med 1-5 carbonatomer, nitro, carboxyl, alkoxy med 1-5 carbonatomer i al kyl del en, halogen, cyano, carbalkoxy med 1-5 carbonatomer i al kyldel en og trifluormethyl, 30 1 2 idet dog R og R ikke begge betegner hydrogen.

De enkelte stereoisomerkomponenter, der forekommer i en blanding af et steroid med den foran viste almene formel I, kan illustreres på 35 følgende måde: 5 DK 167150 B1 3

OR

C = O 2 * 5 110 “><*

CkJ^TJ " ^ i ; epimer s 10 *2

X

OR3 C = O 1 CH? , R1 HCL ~X--- is r^^r-^'>2 . CH^ ^^1 X^l

O HI; epimer R

• 2 X ^

20 A

De enkelte stereoisomere komponenter, som forekommer i en blanding af steroid-17/J-carboxylsyreestere med formlerne 25

O O

11 4 5 11 6

StC0CRV0CR° IV

eller

O O

30 StC0CRV0CYRD V

hvor St er steroiddelen, kan illustreres på følgende måde: r4 n4 O i O 0:0 35 StCOCOCR0 StCOCOCR0 :ς Ir R& R°

VI VII

6 DK 167150 B1 og

O I O O ? O

II I II c μ · Il c

StCOCOCYR StCOCOCYR0 5 *c I5

Rb RD

VIII IX

I diastereoisomerer som II, III, VI, VII, VIII og IX afviger konfi-10 gurationen kun ved ét ud af flere asymmetriske carbonatomer. Sådanne diastereoisomerer betegnes epimerer.

Al kyl i de foran stående definitioner er lige eller forgrenede carbonhydridkæder med 1-5 carbonatomer, fortrinsvis 1-4 carbonato-15 mer.

Alkoxy i de foran stående definitioner er en al kyl-0- gruppe, hvor al kyl del en har den ovenfor angivne definition.

20 Halogen i de foran stående definitioner er fortrinsvis et chlor-, brom- eller fluoratom.

Carbalkoxy i definitionen foran er en -COO-alkyl gruppe, hvor alkyldelen har den ovenfor givne definition.

25 Særlige forbindelser med ovenstående formel (I) er: r-Ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-llj3-hydroxy-16tt,17a-[(l-me-thylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17y3-carboxylat, den 30 epimere blanding A + B samt epimer B.

r-Isopropoxycarbonyloxyethyl-6a-fluor-ll^-hydroxy-16a,17a-[(l-me-thylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17/J-carboxylat og epimer B.

35 1'-Propoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difl uor-lljS-hydroxy-16a,17a-[(1-methyl ethyl i den)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-di en-3-on-17j8-carboxylat og epimer B.

DK 167150 ΒΊ 7 1' -Isopropoxycarbonyloxyethyl-6α,9a-di f1uor-11/J-hydroxy- 16a,17a-[(1-methyl ethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17/J-carboxylat, de epimere blandinger A + B og epimer B.

5 1' -Acetoxyethyl-(20R)-9a-fluor-11)3-hydroxy-16a,17a-propylmethylendi- oxyandrosta-l,4-dien-3-on-17)3-carboxylat og epimer B.

1'-Ethoxycarbonyloxyethyl-(22R)-9a-fluor-ll)3-hydroxy-16a,17a-propyl-methylendioxyandrosta-l,4-dien-3-on-17)3-carboxylat og epimer B.

10 1' - Isopropoxycarbonyl oxyethyl - (20R) -9a-fl uor-ll/3-hydroxy-16a, 17a-propylmethylendioxyandrosta-l,4-dien-3-on-17/l-carboxylat og epimer B.

j5 1'-Ethoxycarbonyloxyethyl-(20R)-6a,9a-di fluor-ll/Miydroxy-16a,17a- propylmethylendioxyandrosta-l,4-dien-3-on-17)3-carboxylat, den epimere blanding A + B og epimer B.

Som ovenfor nævnt angår den foreliggende opfindelse hidtil ukendte 20 androsta-4-en- eller -1,4-dien-170-carboxylsyrer, som kan omdannes til ovenstående androstan-17/?-carboxylsyreestere med formlen (I). De hidtil ukendte androstan-17/J-carboxylsyrer er 16,17-acetalsubstituerede og er ejendommelige ved, at de har den almene formel I':

25 fQ

ho^-3^s.'-:^cr1r2 «II_1 i «1| * 30 0 , X2 eller er en stereoisomer forbindelse deraf, i hvilken formel 35 bindingerne mellem 1,2-stilli ngerne er en enkelt- eller en dobbeltbinding, X* betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, 2 8 DK 167150 B1 X betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, R1 betegner ydrogen eller en lige eller forgrenet carbonhydrid-kæde med 1-4 carbonatomer, og 5 2 R betegner hydrogen eller en lige eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer, 1 2 idet dog R og R ikke begge betegner hydrogen.

10

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved oxidation af en forbindelse med en af nedenstående formler X, XI og XII til den tilsvarende 17/i-carboxylsyre: 15 CH^-OR7.

ίο 20 ^chJ _J x ’ 2 CH--0R7 25 * I2 C=0 „2

XI

30 4 i X2 35 9 DK 167150 B1 OL-OR 7 I 2 C=° 1 CHJ _ λ , YTj'-'i’S' *2

10 X

hvor den fuldt optrukne plus den brudte linie mellem C-l og C-2 12 1 repræsenterer en enkeltbinding eller dobbeltbinding, X , X , R og 2 7 R har de foran angivne betydninger, og R betegner et hydrogenatom 15 eller en acylgruppe afledt af en carboxylsyre med 1-10 carbonatomer i en lige eller forgrenet kæde.

17/?-Carboxylsyrerne ifølge opfindelsen kan derefter forestres til dannelse af forbindelser, der er karakteriseret ved formlerne I-IX, 12 12 3 20 hvor 7^77 , X , X , R , R og R har de foran angivne betydninger.

Omdannelsen af en forbindelse med en af formlerne X, XI og XII til de tilsvarende 17-carboxylsyrer udføres i et passende oxygeneret carbonhydrid-opløsningsmiddel, såsom en lavtkogende alkanol.

25 Methanol og ethanol foretrækkes, navnlig førstnævnte. Reaktions mediet gøres svagt alkalisk ved tilsætning af en passende svag uorganisk base, såsom et alkalimetalcarbonat, fx natrium-, lithium-eller kaliumcarbonat. Sidstnævnte foretrækkes. Omdannelse af en forbindelse med formel X, XI eller XII til en 17j3-carboxylsyre, som 3 30 svarer til formlen I, II eller III (men hvor R = H), finder sted ved stuetemperatur, dvs. 20-25°C.

Nærværelse af oxygen er nødvendig for reaktionen. Oxygen kan tilføres ved indbobling af en strøm af luft eller oxygen i reaktionsbian-35 dingen.

Den oxidative nedbrydning af 170-sidekæden i forbindelser med formlen X, XI og XII til de tilsvarende Πβ-carboxyl syrer kan også udføres med periodsyre, natriumhypobromat eller natriumbismutat.

10 DK 167150 B1

Reaktionen udføres i en blanding af vand og et passende oxygeneret carbonhydrid-opløsningsmiddel såsom en lavtkogende ether. Dioxan og tetrahydrofuran foretrækkes, navnlig førstnævnte.

5 17/i-Carboxyl syrerne ifølge opfindelsen, som svarer til forbindelser 3 med formlen I, II og III (men hvor R = H), kan forestres på kendt måde til tilvejebringelse af 17/3-carboxylatestere. Fx kan 17/?-carbo-xylsyren omsættes med en behørig alkohol og et carbodiimid, fx dicyclohexylcarbodiimid, i et passende opløsningsmiddel, såsom 10 diethylether, tetrahydrofuran, methylenchlorid eller pyridin, og fordelagtigt ved en temperatur på 25-100°C. Man kan også omsætte et salt af 17/J-carboxylsyren med et alkalimetal, fx lithium, natrium eller kalium, et salt af en kvaternær ammoniumforbindelse, såsom et salt af triethyl- eller tri butylamin, eller tetrabutyl ammonium, med 15 et behørigt alkyleringsmiddel, fx et acyloxyalkylhalogenid eller halogenal kyl-al kylcarbonat, fortrinsvis i et polært opløsningsmiddel, såsom acetone, methyl ethyl keton eller dimethyl formamid, dimethyl sul foxid, methylenchlorid eller chloroform og hensigtsmæssigt ved en temperatur i området 25-100°C. Reaktionen kan også 20 udføres i nærværelse af en kronether.

De dannede rå steroidesterderivater renses efter isolering ved kromatografering på et passende materiale, fx tværbundne dextran-geler af Sephadex® LH-type med passende opløsningsmidler som 25 elueringsmidler, fx halogenerede carbonhydrider, ethere eller estere, såsom ethylacetat, eller acetonitril. De enkelte epimerer, som dannes ved forestringen af 17)3-carboxyl syrerne, har praktisk talt identiske opløselighedsegenskaber. Det har følgeligt vist sig umuligt at adskille og isolere dem fra epimerblandingen ved konven-30 tionelle metoder til resolvering af stereoisomerer, fx fraktioneret krystallisation. For at vinde de enkelte epimerer hver for sig underkastes stereoisomerblåndingerne med formlerne I, IV og V søjlekromatografering, hvorved epimererne II, III, VI, VII, VIII og IX adskilles på grundlag af deres forskellige mobiliteter på den 35 stationære fase. Kromatograferingen kan fx udføres på tværbundne dextrangeler af typen Sephadex® LH, fx Sephadex® LH-20, i kombination med et passende organisk opløsningsmiddel som elueringsmiddel. Sephadex® LH-20, fremstillet af Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sverige, er en perleformet hydroxypropyleret dextrangel, 11 DK 167150 B1 hvori dextrankæderne er tværbundne til frembringelse af et tredimen-sionelt polysaccharid-netværk. Som elueringsmiddel har man med held anvendt halogenerede kulbrinter, fx chloroform eller en blanding af heptan, chloroform og ethanol i mængdeforholdet 0-50:50-100:10-1, 5 fortrinsvis en 20:20:1 blanding.

Som udgangsmaterialer for fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen bruges der forbindelser med formlerne X, XI og XII. Sidstnævnte fremstilles ved omsætning af forbindelser med formlen: 10 CH-OR7 i * C=0

HO N/\| Λ-- 0H

γ η— oh I xi11 15

o ^ T

i

f 2 X

20 hvor den fuldt optrukne plus den brudte linie mellem C-l og C-2 1 2 repræsenterer en enkeltbinding eller en dobbeltbinding, og X og X og'R7 har de foran angivne betydninger, med et aldehyd med formlen

25 H

/

0=C

\ 2' ir v hvor R betegner en ligekædet eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer, eller med en keton med formlen R1' / o=c 35 \ 2' R^ hvor R betegner en ligekædet eller forgrenet carbonhydridkæde med 2' 12 DK 167150 B1 1-4 carbonatomer, og R betegner en ligekædet eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer.

Aldehydet er fortrinsvis acetal aldehyd, propanal, butanal, isobuta-5 nal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethyl propanal, hexanal, heptanal, octanal, nonanal og dodecanal. Reaktionen udføres ved, at man sætter steroidet til en opløsning af aldehydet (eller ketonen) sammen med en sur katalysator, fx perchlorsyre, p-toluensulfonsyre eller saltsyre i ether, fortrinsvis dioxan eller et halogeneret 10 carbonhydrid, fortrinsvis methylenchlorid eller chloroform.

Forbindelserne X, XI og XII kan også fremstilles ved trans-acetali-sering af de tilsvarende 16a,17a-acetonider: 15 CH-OR7 i * 00 1 ____O— _ ^CH-, »O ysiA. _ 0-cC 3 "'ΎΎ “3 2° *2 1Γ 25 hvor den fuldt optrukne og den brudte linie mellem C-l og C-2 1 2 repræsenterer en enkeltbinding eller en dobbeltbinding, og X , X og R^ har de foran angivne betydninger, med et aldehyd med formlen

H

30 0=/ \ 2' tir 2' hvor R betegner det samme som ovenfor, eller med en keton med 3g formlen 13 DK 167150 B1 R1' /

5 0=C

\ ?' 9r i / o' hvor R og R betegner det samme som ovenfor.

10

Aldehydet er fortrinsvis acetal aldehyd, propanal, butanal, isobuta-nal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethylpropanal, hexanal, heptanal, octanal, nonanal og dodecanal. Reaktionen udføres ved tilsætning af steroidet til en opløsning af aldehydet (eller ketonen) sammen med en stærk uorganisk syre som katalysator, for-^ trinsvis perchlorsyre eller saltsyre, i en ether, fortrinsvis dioxan eller tetrahydrofuran, et halogeneret carbonhydrid, fortrinsvis methylenchlorid eller chloroform, et aromatisk carbonhydrid, fortrinsvis toluen, et alicyclisk carbonhydrid, fortrinsvis cyclohexan eller et aliphatisk carbonhydrid, fortrinsvis heptan eller isooctan, 20 under de sidstnævnte betingelser med eliminering af kromatografi -trinnet til fremstilling af epimererne III og XII.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan som ovenfor nævnt benyttes til fremstilling af hidtil ukendte androstan-17/l-carboxylsyreestere med 25 formlen (I), hvilke forbindelser kan anvendes til forskellige former for lokal behandling i afhængighed af betændelsesstedet, fx perku-tan, parenteral eller til lokal administration i åndedrætskanalen ved inhalation. Et vigtigt formål for udformningen af præparatet er at opnå optimal biotilgængelighed af den virksomme steroidbestand- 30 del. Til perkutane præparater opnås dette med fordel, hvis steroidet er opløst med høj termodynamisk aktivitet i bærematerialet. Dette opnås ved anvendelse af et passende system af opløsningsmidler omfattende egnede glycoler såsom propylenglycol eller 1,3-butandiol, enten som sådanne eller i kombination med vand.

35

Det er også muligt at opløse steroidet med formlen I enten fuldstændigt eller delvis i en 1ipofil-fase ved hjælp af et overfladeaktivt middel som solubiliseringsmiddel. De perkutane præparater kan være en salve, en olie-i-vand creme, en vand-i-olie creme eller en 14 DK 167150 B1 lotion. I emulsions-bærevæskerne kan det system, som omfatter den opløste aktive komponent, udgøre den disperse fase såvel som den kontinuerlige fase. Steroidet kan også eksistere i de ovennævnte præparater som et mikroniseret, fast stof.

5

Aerosoler med steroider under tryk er beregnet til oral eller nasal inhalation. Aerosol systemet udformes på en sådan måde, at enhver afgiven dosis indeholder 10-1000 /tg, fortrinsvis 20-250 /tg af det virksomme steroid. De mest virksomme steroider indgives i den nedre 10 del af det angivne dosisområde. Det mikroniserede steroid består af partikler, som er væsentligt mindre end 5 /tm, og de er suspenderet i en drivmiddel bl ånding under medvirken af et dispergeringsmiddel, såsom sorbitantrioleat, oliesyre, lecithin eller natriumsaltet af di octyl sulforavsyre.

15

Fremstillingen af de 16,17-acetalsubstituerede androstan-17/J-carbo-xylsyrer ifølge opfindelsen og deres anvendelse til fremstilling af hidtil ukendte 16,17-acetalsubstituerede androstan-17/J-carboxylsyreestere skal belyses nærmere ved de efterfølgende eksempler. I

2 -1 20 eksemplerne bruges der en strømningshastighed på 2,5 ml/cm *h ved de præparative kromatografiske gennemløb. Molekylvægtene er i alle eksemplerne bestemt ved elektrontryk-massespektrometri, smeltepunkterne på et Leitz Wetzlar varmtrinsmikroskop. Alle HPLC-analyser (HPLC = højeffektive væskekromatografering) udførtes på en Waters 25 //Bondapak Cjg-kolonne (300 x 3,9 mm indvendig diameter) med en strømningshastighed på 1,0 ml/minut og med ethanol/vand i forhold mellem 50:50 og 60:40 som mobil fase, medmindre andet er angivet.

Eksempel 1 30

Fremstilling af (22RS1-. (22R1- oa i22S)-113.16a.l7a.21-tetrahvdro-

Dreqna-1.4-dien-3.20-dion-16o;.17o!-aceta1er (22RS1-. (22R1- og (22Sl-16o;.17a-butv1idendioxv-6Q!.9o!-difluor- llfl.21-dihvdroxvpreqna-1.4-dien-3.20-dion 35

Aj_ Til en suspension af 1,0 g 6a,9a-difluor-ll/J,16a,17a,21-tetrahy-droxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 500 ml methylenchlorid sattes der 0,32 ml frisk destilleret n-butanal og 2 ml 72%s perchlorsyre. Reaktionsblandingen henstod i 24 timer ved stuetemperatur.

15 DK 167150 B1

Reaktionsblandingen vaskedes med 10%s vandig kaliumcarbonatopløsning og vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes. Remanensen opløstes i ethyl acetat og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 883 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-5 110,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion. HPLC-analyse viste 99% renhed og forholdet 16:84 mellem 22S- og 22R-epimeren. Molekylvægt 466 (beregnet 466,5).

(22RS)-Epimerblandingen kromatograferedes på en Sephadex® LH-20 10 kolonne (76 x 6,3 cm) under anvendelse af heptan/chloroform/ethanol 20:20:1 mobil fase. Fraktionerne 12315-13425 ml (A) og 13740-15690 (B) opsamledes og inddampedes, og remanensen opløstes i methylen-chlorid og udfældedes med petroleumsether. Fraktion A gav 62 mg (22S)- og fraktion B 687 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-15 fluor-llj8,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion. (22$)-epimeren havde molekylvægt 466 (beregnet 466,5) og smp. 196-200‘C. (22R)-epimeren havde molekylvægt 466 (beregnet 466,5) og smp. 169-172eC.

Bj. Til en opløsning af 1,0 g 6a,9a-difluor-ll/5,21-dihydroxy-16a,17a-20 [(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-pregna-l,4-dien-3,20-dion i 500 ml methylenchlorid sattes der 0,30 ml frisk destilleret n-butanal og 2 ml 72%s perchlorsyre. Reaktionsblandingen henstod i 24 timer ved 33eC under omrøring, ekstraheredes med vandigt kaliumcarbonat og vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes. Remanensen 25 opløstes i methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 848 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-110,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion. HPLC-analyse viste 93% renhed og forholdet 12/88 mellem 22S- og 22R-epimeren.

30 Bli Til en suspension af 4,0 g 6a,9a-difluor-ll/?,21-dihydroxy- 16a,17a[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-pregna-l,4-dien-3,20-dion i 100 ml heptan sattes der 1,2 ml frisk destilleret n-butanal og 3,8 ml 72%s perchlorsyre. Reaktionsblandingen henstod i 5 timer ved stuetemperatur under kraftig omrøring, ekstraheredes med vandigt 35 kaliumcarbonat og vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes til frembringelse af 4,0 g (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-llj8,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion. HPLC-analyse viste 98,5% renhed og forholdet 3/97 mellem 22S- og 22R-epimeren. Efter to omkrystallisationer fra chloroform/petroleumsether vandtes der 3,1 g 16 DK 167150 B1 22R-epimer, som kun indeholdt 1,1% af 225-epimeren og 1,3% af andre urenheder.

Cj. På tilsvarende måde ved at følge den fremgangsmåde, der er 5 beskrevet i eksemplet og ved at udskifte 6a,9a-difluor-110,16a,17a,-21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion med 11/5,16a, 17a, 21-tetrahy-droxypregna-l,4-dien-3,20-dion, 9a-fluor- og 6a-fluor-U/3,16a,17a,-21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion eller de tilsvarende 16a,17a-acetonider fremstilles der ikke-fluorerede og monofluorerede 10 (22RS)-, (22R)- og (22S)-ll)3,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-l,4-dien- 3,20-dion-16a,17a-acetaler fra acetaldehyd, propanal, butanal, isobutanal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethylpropanal, hexanal, heptanal, octanal, nonanal og dodecanal.

15 Eksempel 2 250 mg (0,6 mmol) Prednaquinolon-16a,17a-acetonid opløstes i 75 ml CH2C1. Der tilsattes 130 mg (1,8 mmol) n-butanal og 0,025 ml 70%s perchlorsyre. Opløsningen omrørtes ved 33eC i 15 timer. Den gule 20 opløsning vaskedes med 2 x 10 ml 10%s K2C03 og 4 x 10 ml H20, tørredes og inddampedes. Udbytte 257 mg (97,7%). HPLC viste 91,1% renhed. Uomsat acetonid udgør 7,4% af urenhederne. Epimerforhold 14/6/85,4.

25 JL 0,5 g (1,1 mmol Triamquinolon-16a,17a-acetonid opløstes i 150 ml CHgCl2- Der tilsattes 260 mg (3,6 mmol) n-butanal og 0,22 ml 70%s perchlorsyre. Blandingen omrørtes ved 33eC i 16 timer. CH2Cl2-opløs-ningen overførtes til en skilletragt, og reaktionskolben vaskedes flere gange med henholdsvis 10 ml K2C03 og CHgClg. Opløsningen 30 vaskedes derefter med 2 x 10 ml 10%s K2C03 og 4 x 10 ml H20, tørredes og inddampedes. Udbytte 438 mg (84,9%). HPLC viste 80,2% renhed. Epimerforholdet 19/81.

L. 0,5 g (1,1 mmol) Fluoquinolon-16a,17a-acetonid opløstes i 150 ml 35 CHgClg. Der tilsattes 260 mg (3,6 mmol) n-butanal og 0,22 ml 70%s perchlorsyre. Blandingen omrørtes ved 33°C i 24 timer. CH2Cl2-fasen overførtes til en skilletragt. Reaktionskolben vaskedes flere gange med 15 ml henholdsvis 10%s K2C03 og CH2C12. Opløsningen vaskedes med 2 x 15 ml 10%s K2C03 og 4 x 15 ml H20, tørredes og inddampedes.

17 DK 167150 B1

Udbytte 513 mg (100%). HHLC viste 97,4% renhed. Epimerforholdet 8,6/91,4.

Eksempel 3 5

Fremstilling af llg-hvdroxy-16a.l7a-r(l-methvlethvlidenl-bis-(oxvn-oq (20RS1-. (20R1- oa i20SMlg-hvdroxv-16a.l7a-alkvlniethv1endioxv-androsta-1.4-dien-3-on-17/?-carboxylsvrer og -4-en-3-on-178-carboxyl-svrer 10 6a.9a-Dif1uor-1Ιθ-hvdroxv-16a.17or-Γ f1-methvlethviiden)-bis-(oxv)l- androsta-1.4-dien-3-on-17g-carboxvlsvre

Ai Til en opløsning af 1,99 g fluoquinolon-16a,17a-acetonid i 120 ml methanol sattes der 40 ml 20%s vandigt kaliumcarbonat. Der bobledes 15 en luftstrøm gennem denne opløsning i ca. 20 timer under omrøring ved stuetemperatur. Methanol et afdampedes, og der sattes 200 ml vand til remanensen. Opløsningen ekstraheredes med methylenchlorid. Den vandige fase syrnedes med tynd saltsyre. Det dannede bundfald opsamledes ved filtrering og tørredes til frembringelse af 1,34 g 20 6a,9a-difluor-llj8-hydroxy-16a,17a-[(1-methylethyl iden)-bis-(oxy)]- androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylsyre med smp. 264-268°C og molekylvægt 438. Renheden bestemt ved HPLC var 94,0%. Den vandige fase ekstraheredes med ethyl acetat. Efter tørring afdampedes opløsningsmidlet og gav en yderligere portion på 0,26 g af syren. Renhed 25 93,7%.

EL 15,1 g Periodsyre i 16,5 ml vand sattes til en opløsning af 5,0 g fluoquinolon-16a,17a-acetonid i 55 ml dioxan. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 20 timer, neutraliseredes med mættet 30 vandigt natriumhydrogencarbonat og inddampedes. Remanensen opløstes i 200 ml methyl enchl orid og vaskedes med 8 x 100 ml 10%s vandigt kaliumcarbonat. Den vandige fase syrnedes med koncentreret saltsyre og ekstraheredes med 6 x 100 ml ethyl acetat. Efter tørring afdampedes opløsningsmidlet. Remanensen opløstes i 400 ml ethylacetat og 35 udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 3,96 g 6a,9a-di-fluor-ll/J-hydroxy-16α,17α-[(1-methyl ethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta- l,4-dien-3-on-170-carboxylsyre. Renheden bestemt ved HPLC var 99,5%.

(L På lignende måde og ved at følge den fremgangsmåde, der er 18 DK 167150 B1 beskrevet i eksemplet, men erstatte fluoquinolon-16a,17a-acetonid med 110,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion, 6a-fluor-110,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-1,4-di en-3,20-di on henholdsvi s tri amqui nol on-16a,17a-acetoni d fremst i 11 edes 110-hydroxy-16α,17α-5 [(1-methylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxyl-syrer. Ved at udskifte 16a,17a-acetonidgruppen med 16a,17a-acetaler mellem 16a-hydroprednisolon, 6a-fluor-16a-hydroxyprednisolon, triamquinolon og fluoquinolon og acetaldehyd, propanal, butanal, isobutanal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethylpropanal, hexa-10 nal, heptanal, octanal, nonanal og dodecanal og deres 21-estere fremstilles der (20RS)-, (20R)- og (20S)-110-hydroxy-16a,17a-alkyl-methylendioxyandrosta-l,4-dien- og -4-en-3-on-170-carboxylsyrer.

Eksempel 4 15 1/-Ethoxvcarbonvloxvethvl-6a.9a-di Π uor-118-hvdroxv-16a.17a-Γ(1-methyl ethv1idenl-bis-(oxvl1-androsta-l«4-dien-3-on-178-carboxvlat /L 600 mg 6a,9a-Difluor-110-hydroxy-16a,17a-[(l-methy1ethyliden)-20 bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylsyre og 684 mg kalium-hydrogencarbonat opløstes i 45 ml dimethyl formamid. Der tilsattes 2 ml 1-bromethyl-ethylcarbonat, og reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur natten over. Der tilsattes 200 ml vand, og blandingen ekstraheredes med methylenchlorid. De forenede ekstrakter vaskedes 25 med 5%s vandigt natriuhydrogencarbonat og vand, og remanensen rensedes ved kromatografering på en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) under anvendelse af chloroform som mobil fase. Fraktionen 1515-2250 ml opsamledes og inddampedes og gav 480 mg l'-ethoxycarbo-nyl oxyethy 1 -6a,9a-dif1 uor-110-hydroxy-16a, 17a- [(1 -methylethyl iden)-30 bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat. Renheden bestemt ved HPLC var 98,1%, og opimerforholdet A/B var 48:52. Smp. 218-227°C. [a]g5 = +63,2° (c = 0,214) i CHgClg. Molekylvægten var 554.

480 mg 1' -Ethoxycarbonyl oxyethyl -6α, 9a-di fl uor-110-hydroxy-16a, 17a-35 [(1-methyl ethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-di en-3-on-170-carboxy- lat kromatograferedes på en Sephadex® LH-20 kolonne (76 x 6,3 cm) med heptan/chloroform/ethanol 20:20:1 som mobil fase. Fraktionen 2325-2715 ml opsamledes og inddampedes, og remanensen opløstes i methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether, hvorved der 19 DK 167150 B1 vandtes 200 mg af en forbindelse (A) med renhed 97,3% bestemt ved HPLC-analyse. Smp. 246-250°C. [a]p5= +100,5° (c = 0,214 i CH2C12).

Molekylvægten var 554.

5 Fraktionen 4140-5100 gav 250 mg af en forbindelse (B) med renhed 99,0%. Smp. 250-255‘C. [a]^5= +28,5° (c = 0,246 i CHgClg). Molekylvægten var 554. Metinsignal et fra estergruppen blev skiftet ved 0,13 ppm nede i feltet i *H-NMR-spektret for B i sammenligning med A, mens resten af spektrene er næsten identiske. Elektrontryk-masse-10 spektrene af A og B er identiske bortset fra massetoppenes intensiteter. De spektroskopiske forskelle og ligheder viser, at A og B er epimerer på grund af chiral-centret i estergruppen.

EL 200 mg 6a,9a-Difluor-ll/J-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-15 bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/i-carboxylsyre opløstes i 25 ml dimethyl formamid. Der tilsattes 100 mg 1-chlorethyl-ethylcarbonat, 70 mg kaliumhydrogencarbonat og 18-kron-6-ether. Reaktionsblandingen omrørtes ved 80°C i 3 timer, afkøledes, ekstraheredes med methylen-chlorid efter tilsætning af 105 ml vand, tørredes og inddampedes.

20 Det rå produkt rensedes på samme måde som i fremgangsmåde A, hvorved der vandtes 207 mg l'-ethoxycarbonyloxyethyl-ea^a-difluor-ll/B-hy-droxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-U/i-carboxylat. Renheden (HPLC) var 98,4%, og epimerforholdet A/B var 54/46.

25 (L 200 mg 6ar,9at-Di f 1 uor-ll^-hydroxy- 16α, 17a:-[ (1 -methyl ethyl iden) -bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylsyre og 140 mg 1,5-di-azabicyclo[5.4.0]-undecen-5 suspenderedes i 25 ml benzen og opvarmedes til tilbagesvaling. Der tilsattes en opløsning af 175 mg 1-brom-30 ethyl-ethylcarbonat i 5 ml benzen, og blandingen til bagesvaledes i 2,5 timer. Efter afkøling tilsattes der 50 ml methylenchlorid, og opløsningen vaskedes med vand, tørredes og inddampedes. Råproduktet rensedes på samme måde som i fremgangsmåde A, hvorved der vandtes 207 mg 1'-ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-1 l/?-hydroxy-16a,17a-35 [(1-methylethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17j8-carboxy- lat. Renheden (HPLC) var 96,4%, og epimerforholdet A/B var 44:56.

IL Til en opløsning af 100 mg 6a,9a-difluor-llj8-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyl i den)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17/j-carboxylsyre 20 DK 167150 B1 i 25 ml acetone sattes der 175 mg a-bromdiethyl carbonat og 45 mg vandfrit kaliumcarbonat. Blandingen opvarmedes i 6 timer under tilbagesvaling. Den afkølede reaktionsblanding udhældtes i 150 ml vand og ekstraheredes med methylenchlorid. Ekstrakten vaskedes med 5 vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes, hvorved der vandtes 65 mg fast r-ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-llj3-hy-droxy-16a,17a-[(1-methylethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17/J-carboxylat. Renheden bestemt ved HPLC var 97,6%, og epimer-forholdet A/B var 49:51.

10

Di 500 mg 6a,9a-Difluor-ll/3-hydroxy-16a,17a-[(1-methylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/3-carboxylsyre og 577 mg tetra-butylammonium-hydrogensulfat sattes til 3 ml 1M natriumhydroxid. Der tilsattes en opløsning af 435 mg 1-bromethyl-ethylcarbonat i 50 ml 15 methylenchlorid. Blandingen tilbagesval edes under omrøring natten over. De to lag adskiltes. Det organiske lag vaskedes med 2 x 10 ml vand, tørredes og inddampedes. Råproduktet rensedes ved kromatogra-fering på en kolonne af Sephadex® LH-20 (72 x 6,3 cm) under anvendelse af chloroform som mobil fase. Fraktionen 1545-1950 ml 20 opsamledes og inddampedes, og remanensen udfældedes fra methylen chl ori d/petroleumsether, hvorved der vandtes 341 mg l'-ethoxycarbo-nyloxyethyl-6a,9a-difluor-11/5-hydroxy-16a,17a-[(1-methyl ethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17/J-carboxylat. Renheden bestemt ved HPLC var 99,2%, og epimerforholdet A/B var 56:44.

25 F.. 200 mg 6a,9a-Difluor-ll/3-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17/3-carboxylsyre og 200 mg trica-prylmethylammoniumchlorid sattes til 5 ml mættet vandigt NaHCOg. Der tilsattes en opløsning af 100 mg 1-bromethyl-ethylcarbonat i 10 ml 30 methylenchlorid. Blandingen omrørtes ved 45eC i 20 timer, fortynde des med 10 ml methyl enchl orid og i soleredes og rensedes på samme måde som i fremgangsmåde E, hvorved der vandtes 254 mg l'-ethoxycar-bonyloxyethyl-6a,9a-dif1uor-ll/l-hydroxy-16a,17a-[(1 -methyl ethyl i -den)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-di en-3-on-17/3-carboxyl at. Renheden 35 bestemt ved HPLC var 97,4, og epimerforholdet A/B var 60:40.

GL 200 mg 6a,9a-Difluor-110-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/5-carboxylsyre, 135 mg 1-brom-ethyl-ethylcarbonat og 275 mg triethylamin opløstes i 20 ml 21 DK 167150 B1 dimethyl formamid. Blandingen omrørtes ved 80°C i 3 timer, fortyndedes med 200 ml methylenchlorid, vaskedes med vand, tørredes og inddampedes. Det rå produkt rensedes på samme måde som i fremgangsmåde A, hvorved der vandtes 69 mg l'-ethoxycarbonyloxyeth-5 yl-6a,9a-difluor-ll/J-hydroxy-16a,17a-[(1-methylethyl iden)-bi s- (oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/?-carboxylat. Renheden bestemt ved HPLC var 97,8%, og epimerforholdet A/B var 48:52.

Eksempel 5 10 1-Acetoxvethvl-6a.9a-di f1 uor-1lfl-hvdroxv-16a.17a- Γ11-methvi -ethvlidenl-bi s-(oxvl1-androsta-1.4-dien-3-on-17g-carboxv1at 500 mg 6a,9a-Dif1uor-11/J-hydroxy-16a,17a-[(1-methylethyl i den)-bi s -15 (oxy)3-androsta-l,4-dien-3-on-17/}-carboxylsyre og 575 mg kaliumhy-drogencarbonat opløstes i 40 ml dimethyl formamid. Der tilsattes 1 ml 1-chlorethyl acetat, og reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 40 timer. Reaktionsblandingen udhældtes i 50 ml vand og ekstraheredes med methylenchlorid. Ekstrakten vaskedes med vandigt 20 natriumhydrogencarbonat og vand, tørredes og inddampedes. Remanensen kromatograferedes på en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) under anvendelse af chloroform som mobil fase. Fraktionerne 1755-2025 og 2026-2325 ml opsamledes og inddampedes.

25 Det faste produkt fra fraktionen 1755-2025 ml rensedes yderligere ved kromatografering på en Sephadex® LH-20 kolonne (76 x 6,3 cm indvendig diameter) under anvendelse af en blanding af heptan/chlo-roform/ethanol 20:20:1 som mobil fase. Fraktionen 2505-2880 ml opsamledes og inddampedes. Remanensen opløstes i methylenchlorid og 30 udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 167 mg fast produkt (A). Renheden bestemt ved HPLC var 99,1% og smp. 238-259°C.

[a]j^= +94° (c = 0,192; C^C^). Molekylvægten var 524.

Det faste produkt fra ovennævnte fraktion 2026-2325 ml rensedes 35 yderligere ved kromatofering på samme måde som beskrevet ovenfor. Fraktionen 5100-5670 ml opsamledes og inddampedes. Remanensen opløstes i methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 165 mg fast produkt (B). Renheden bestemt ved HPLC var 99,4%. Smp. 261-265°C. [a]jj5= +34° (c = 0,262 i CHgClg).

i 22 DK 167150 B1

Molekylvægten var 524.

^-NMR-spektrene for A og B er næsten identiske med undtagelse af metinkvartetten fra estergruppen, der skiftes 0,16 ppm nede i feltet 5 i forbindelsen B i sammenligning med A. Fragmenteringsmønstrene af A og B i elektrontryk-massespektra er identiske bortset fra massetoppenes intensiteter. De spektriskopiske egenskaber for A og B viser, at de er epimerer på grund af chiralcentret i estergruppen.

10 Eksempel 6-88

De i tabellerne 1-3 i det følgende angivne forbindelser fremstilledes, i soleredes og rensedes på analog måde med, hvad der er beskrevet i eksempel 4 og 5.

15 20 25 30 35 DK 167150 Bl 23

Η H M Η* 3 W

LJtOl-'OvOOO-Ocn H ?S*

• M

ιί<ι]Ιι|Ιι)·ι|ίι)3!Κ X

t-·

O

^•ttnasscacsa: x ^_ ηο^Ί-οοΊ-Ί· \\ / S®m<0 Π!£Πφ (D \\ / _ U>GJ 3 ~ 3 =* tO )-(— <2 5 *> / Xo? ,° —. —· a: ro —1 -1 „ / \ / VL'-L J\ H 7\ ro to \ — -/ \

Kata rctnccacra 5d 1 V? w )r-8 /1 ° ooooonoo rj -[ '-''Saxasa <λ '1 ΟΟωωυωωω \ i X S KJ ,| _! °L°L io^? uTtT \/ ^ ο/Γ\ t X X tf u U ®i W H> Ό a>a>u>w> »- 3

(D

κ to to (o to toto tn \ / x m u a to »c» 3 -f—o 00 tO 03 VO t-* tO Ό \.?- I I — -—- I —* — · Y*>

-o Ό 0< p< O.Q. 0 -51 /-G

-O O Φ Φ (0 (D O U. /lo O O O O 3 -1 , jtj—0—30

— ^ — —· n> . 1 I in O

O ~i OeO

+ S O Q — I I i + + + + + H + + to n *— ^ oo tnæ-OO^orø'J O CCto \ / -c 73 o^jtnojototovo m - tn V 33 cn 00000000 to to °*

^ O O

tn tn

LJ CJ

tntnuttntntntntn CTS

oiottnottowuitn φ o σισιοοοοΐ-χνοο km ''•'-'»»'ΦΦ σισισισισισιοο tQX* • ·< Μ tntntntncntntntn tu < motmmwwutui e Ri mooocoib^oo 3<0 O. ft \ / φ V· (—<~> rf v? 3 i lOtOtOtOlJtOMM K 50 ΖΪ -/ I 33—Cl---30 tnMoooMtoaicr. c ro = I tn o MISObOlMUltlt 3 ft -Ϊ I n*=«0 tnotnomtnMtn t-t> φ i · i 1 I t I t I I I 01 3 07 · t—*—*

WtOUJtOWtOtOM 3 ft O O r= 23 tiuitoutnuiHco ia t~ \ / 'o»'” voocouitnco-oto 'O y* otnintntnoino 3 /i (— t—* t—· t—· t—» t—* i— i—· 3 tt / \ --------l ^ 1 n o tn æ lo to 24 DK 167150 B1

·- Ol0(0vJcll01AWNJO|00)v|(j|(ji<i · U

«

M

'η-Π-Π-η-π-π-τι-η-η-η-τ,-τ,-τ,^.^-τ,-τ,-η χ ' K> ωωωωωωο^ω^ο?1 c? o? o? o? c? c?1 c? o?1 <** ^^^-^-^^^^^cai-niacararjcosra: τσ

c? «I

S22200°oooooooo<-»"H."a _ SSSgSooSsli” "c? ξ ® 5* s s s s s s SM=Cw o o S S *<'^ ^ o ο~οΜοω^^ω^ΜοΜο “-“-<rS- nVJ'w1"1 ~ ~ ~ o o -— ·— w

rc rcisj ro H

co ω cj ^TrT g- M H* * > m »>W>CD> + W>W>co>cs;> , a> “O ^ ” 3 Mi S o

“1 K

rt vvvT??Trt<TT??2”°S2 ·§ ct -iNIONj.NMuWUftCim0,},!!./, " v p

+ + + + + + + + ir+ij-ij..·... O O

^“ = ssssssssssåH € £S

* ro <n H· 2222mSS2Xwwoi«ntn<jitnwoi ro"? p o S S S S S S S é é S g 2 2 £ g s S £

'J Μ M s m o. (J O! Oi dl o. ov m 'vi lj V ® 'a, « J

• *N

H

< flj

® }5 οι cn in in tn <n m oi in in m «η <« «η <n iQ

oSSSS2SSS?SSSSSSStt c: <+ OOC\0>03C3COCOCOOOOO<»XkSo{S 3

Oi

<D

ft lilisj|iss|l|§g||| il 1111 i 2 I i § g ! 1111 3 s g Π Z^ Zl ZL ZL ^ N w ϋ ίί ω N f\> co ^L, °L. <Q £*

3 in Μ I

25 DK 167150 B1

D M

Cn >(3ι (a) ΓΟ M CO OJ CO Co CO CO CO M 5^* w%-*www 00 Ni o tn ^ CO fO · tø T3 T3 *Ό Ό Ό o*· a>· &>· &>· o>*

§3333 TI ·η *T1 "Π ·η *Π *η X

CO CO ίΛ 00 CO

Λ Φ Φ Φ <D

*5-"§-*S-3-*5* -η ί ί *η *η ί -η χ Ο) ρι ρ ρ (U ^ α. ο. ο. α. ο.

φ φ φ φ φ Λ Α Λ Λ ^ Ο Ο Ο Ο Ο Ο Ο το 9 ® ® ® ® I I I ϊ I ϊ I ^

r Γ r Γ Γ CO<0<OCO<OCOCO

X I I I I

I I I I I

ro no ro ro no ο ο ο ο ο /rjcTTTr;*· ο ο ο ο ο —»·—*—·—» oaercrracrnrr 30 ΟΟΟΟΟ Ζ3Ζ (J1

3 3 3 3 3 CO

3 3 3 3 3 Φ <0 Φ Φ Φ Ο Ο Ο Ο Ο Ο Ο 70 /-Ν ^-ν ^ χ-s ο ο ο ο ο ο ο σι Ν >4 03 CO Nj X X X X ο ^ Λ -ν.

μ ro οι Ni 0¾ ro ro ro ro ο ο ο ·< - - oooorcxcx » tn χ χ tn χ ,ι — C: -C-ω ω ω σ\ X cn no χ σι . ψ~, , ^ 01 01

w U «# CO CO CO

σ> <o <ji ro co , 7", 7", ^ w co <0 Co CO O O 01 o 3 3 3 o —- —· o —· 3 3

--33-3 (D (D tD

3 O. CL 3 O. m H

<0 tD -i? S

°· g. g. g. 1 π > + ts > + -*· cr

O^-O- COCJ 3 <D

3-0 0 3-0 2 H

—· -S “S —· “S “

OOOOO M

00000 W S O ^ N ^ 3 ° i 3 o i .?????? ? s* 3 o o \ <ίΓ ooOJOjrStoæ n° £ « 3 3 3- -o £

orne* M

3 3 3 -σ pj Λ £U

OOr+3 + iln ft 1 2: 2: s > + + + + i + Si— — S-ZIZj-^S. i ro <o cn ro o cn ro o p ^ fZ CO 00 o *n| o cn o··»—·

il -K 2. ? 000000 —* NOM

—J *♦) "Π <T {U M (fl O* 0> 3· 3 VL- ^ -t> </> iA ία O H* pi φ <D 3 —1

(Λ · * O

Φ —* ro * ® f-r- *7 N ·· tn oi cn tn tn <n <n χ 5?

O ΓΟ σ» to CO CO CD CD Co W V

·* o 03 <n O cn N N N H M

ro- . ^ ' , ' ' . (D (D

O ·—* nj vj nj cn <n σι ?? -s · *5

in 3 <J

o iu

33 tn tn tn in tn tn tn h>«P

o cn 10 to ο 05 03 « r- ff 30- Co σ\ cn cn ro ro ro — ' o -*· 2 CX —» Ui

—<♦ (D

—1 -b ft o -h co co· Jk ro od cn cn ro ro 22?

Φ o-Nj^ocncn<o £ (D

• <n O cn cn O cn o 3 <-+ « i * « t i i t-n φ A U N -' 00 CO —* 0). 3 cn vj w to o »o —» ti O cn Co cd O O ro .x ^ o o cn o ^ η·

ro —« —· —* ro co cn ' O

_______ 3 w M t DK 167150 B1 26

3 M

—' 1— "J m U1 4> U N —'O ID , \\ Ό -Q / \\ »>•0»· / \\ 3 3 ^^ΙΙΙ-ΠΪΙΪ X V / tn vi ·“ / γJc p <t> (P / \ω / §.·§. x to" \ m'7-(

Dl W (O \ / \ O. CL '-( \ (0 CO \ / ® ® ??2?"Qnn2 )-(— o S o S S s £ £ S £ £ _/« § ^ ^ ω ω ω u ω ω c? o?" | o o = 30 I ' l*° 3 3 CO 00 CO · Λ O O —( S g V ί"«

o sj s rc IC —*"*» o O O CO π si* ' V

to ro <2 =c o: 3: S ^ rc» x x .£ £ £0?^^°^ » «* w 00 00 _ω u ω οι 01 ro σι ω ο t n ω co ο ο 3 3 3 3 Ο- Ω_ \ / „ „ > 5> > fj -----(—Ο 22 é é é ' ' ' ' ' ' g· V?

A _ 5 )i 1 O

00 <o m /i o "S "S -t T3 /* o O O -/ I 3=-0-30 ζ 2 ococitn^cntooio, 3 % .1 π=<=> is σαιωοιοΛΓοωδ χ> ^ I 1 tn« »g'Jmiiiii * *" I I m gg ^Otnrøo1c3tT>olsJ OO V, “ 33 o \/ Π)

0 O -- o M

. + + + + + + +£Q^, -J* ^ 10

_, _ 1 tOIOlvloiNI'JM tv) QQ 333J

ω m o ji o 10 to o * JL ro

-t, -ti 0000000 * NOM

0) ju fO <J1 01 (Λ ^ mA» <Τ> <ΰ JJlnOIOlUimOlAOI „ __

co o ro cn ot co o co ro (DO

H l-l

OlUlONvIMVJOlO, (D(D \ /

? *5 V—f-S

M \ cr SS?I5u,w,tn'£*tn'^>3 S /1 o »orooioicoocorog'S. g· / J =c—o-33 S' 5 ! I ?=°

rf 00 1 I

_, _, w — I 1 -co T* ^ ^ ' —* wmd «I Π 51 O o ?3 o» ?if^i^CJro-c‘r'D—‘(td C(D \ , σι ο?ίΓ255σ03-&-'*03Γ+ '/ c o wi O O U1 Ul 0*0 Hi (D o

NiNimii »3 J Λ.

2ϋΓ :£ =q '^ΛιπΟίΟΟΛΟιΟΙ tQH- to

tn o o O tn * O

—'roro —« —* —. —. —. 3 H *? 27 DK 167150 B1 oiinwoiwwuiuijiii 2 0 'J .0\ UI^UN-Ιθιβθ) Pm

. O

η-ητιτι-Γΐ-π-τι-ηχα: x / xxxxxxxxxx x / \ S o to / \co / x- - -( x.---i-( to 1-1 / \ ο·ο o ' \ / xxxxxxxxxo 33 \ / ro^fo^ to x t-* y__Z_o »o to ro

xx S /Γ S

u u co / i o

„ ^ „ -I 33-O^JSJ

O O O CJ o "i 1 I

II Ιϊϊΐιιηι » 1 | ° to to to to ro rc M I .

to ro'to ro”" to' ω A0 :5x o o o o o °v° x x X x x IC \/ <n ^ ω u u μ q o O 1/4, x ΧΟΟΟΟΧΧΧΧ 33 ” — x x x x js. 1- to

π O CO CO CO CO

x X ω co to ri' xxxxxxxxxx 33 ' H= ?CQQGGor><^<^ rn >-o 03 co co co co co 0000 cn /1 o I I 2 I ^ 3 *-f , JO—O— JO _ ω ω u oj -< π) «I m o -w w w -w το -¾ osso o* co co cj co σ> ({ 1 · er * 00 ® V-c *"» X °>

_ T3 O 01 CO

β> 2> ca > 00 1 1 1 1 -o- / \ 3 ' \ to 33 33

T Μ tO

to—<to—· ro ro 10 ro — — tn —· co —1 μ u N ui 01 o o g O ω Δ Ot N <)> Cn —' Ot ΓΟ tri * < · · « I t I I I ” —' cj —- 00 co Oo en en ro to ro eneocooo—‘voooo

o O

O

,+. + .+ o o £—· + —*+—+ + -*-+ x h — P —'x»ocooCTicr>co<n ro o R \ / ocno^cn—'cotOO-^i o ' ___ \ f n o 000000000 —* ro o ro \ -r to tn \u> w h· _ \-o m /lo /0 g· -/ I 33—O—-33 tntntntnoitntnoitntn trS ro · , _»ofr b^tototoroo^o^oo mn -r 1 .1°

Cn Cooooocooororo Sil, II

t * 1 ^0 1 , * i

Ό SOtfflinOlOOtTlOI ffl (D 00 -< X

lQ 3Γ , T 33 <31 * ·< \/ en < / \ cn cncncncncncncncnin mi $ Ή v, S f'WMi'iNAAOO diQ ^, cn cooooococorvsro 3rt Mto

Qi Φ ft res ro co—»ro—f—*_r t-tw co *-< σι λ ω U3 —· «3 oj 01 rrT^ cn Ococooo-c^cnocn s4Jl o oooocncnocno sn*

‘ i « 1 « 1 i 1 1 > Mi (D

CO ΝΝΔωΓΟΤΟΝ-ι-ί ro -c*—'to-vj—^co-^tnin D<-t ro ocnoro-^j^jocnco if>w cn O O cn O O O cn 7* £

— —1 N N —* —> —< —rco_, U

_---------· a s M 1 28 DK 167150 B1

3 M

MvlMM'JMOlOlWOffldlOlOlOlOltllOl h S'

Ul Λ U N -lOUnMOIUI^WIM^OIDO)' , rø «

*η*τ)*η*τΐ·η·η*Π·ηΐΙ·η·Π·η*ΠΙ3:*Π·η X

M

ϊϊ2ΐχιιπ:ζ3:*η*η3:χ3:3:3:ι x to *“«* ·#>*** 0 o o o o 1 i x x x N n ro ro ro IIIIwwIXIwISSwIwIS S3

ro ro ro ro to · M

o o o o o ^- x x x x x

OI Ol CO CO CO

o o o o non non o oo

X X X X XXX XXX X XX

to ro ro ro x x ro ro ro x ro ro ro x ro x ro ro S3 ro ro ro ro ro ro ro ro ro ro ro roro o o o o o o o o o o o oo

XXXX XXX XXX X XX

CO CO CO CO CO CO CO CO CO CO CO CO CO

§ §.

OOOOOOOOOOXXXXXXiD J5 70 XXXXXXXXXX 3 S «fe* cocococococococococo ζ xxxxxxxxxxxxxxxxxx 70 ^ w . » σ ooooooooooooo 4 O O O fi> OOOOOOOOOOOOOOOOOO 70 {-i XX — -^XXXXXX--^—*-«*-^XX Λν o o —» o o ro ro ro co ·*— ro o o o oco oo n: ., xxooxxooooooxxxx -< w CO CO X x CO CO X X X X X X CO CO CO CO 70 — — Co co — —co co co co co co — — — >— a\ ^ co co w wc) co - co co to co t-n ro ro ro q ti c+ (0 m o > y> T3 rt CD>C3>CO>CO>++ I I I I I I CD > -»· ' C33 03 3

<D

—»—»roro—»—'ro—*—»·—»—»ro——»—»ro S

vi cn -» ro σ\ ci -» to * cn coioocnOOi-Cfccnco si

iiCDN-'**»*NOltDt33CnOJ —' —' O O '‘-J tn *U

I « I I I < « I I t I « I I f I I · MM-jroww-'WWWN—»cnvjo^cox* n

<0-»ϋ1Λ03νΐί»05-'ΝΟ-'ί»ωϋΐΝΝΟ O

co 'J

+ + + + o o

+ —* + --+ + + -- + --+ + + + + + + + XII

ωοωοΝίου — ro o ~

-»coiDvjvjfooiourootoroniositnci o- O

4 O O Q e C 60666660000 —» (O w ro o ro - H- «* intnwwwwwoioiwwwoioiuioioiw *=»· ^o>4o%o>^ivi(Tioicocoo\cnovo\^^æcs χ ·»

(00)Α^Ο}0900ΝΝβ)Λ^ΛσΐΟ\ΝΝ O

* ^ ·» «, ·» ^ S ^ S ^ « S ^ H

M*JviNjsisJvJ>Jff»CftC»C»vJvjviNSN <φ φ iQ 7?

• K

t- _ Ml < tncntncncncntntntncncncncncncncncncn c fil '^j-^jcnov'sj'^jaitncoco av. ui ^ σι ώ * © 03 3 »n ©©Αώ©©ΟΟΝΝ©ΛΛΛ©©ΝΓΟ Qjft

(D

ft ti 50 ro —- — ro ro § 5.

ro-Cfccncox*cocnÆfcX»corocororoovcnvj—» fi JJ

cncococnco-cfc03000coro-c*cnroocn0 Lp *0 tncnmcncncncntnoocncncnooooo ® 3 I t t C i i I I I ( I i i t I f I I 3 (+ cocncr-t*cn-c*cn-c*-ccorocororo—»— co. ro tQ »-»· —-'«JCJfOOvO'O'-sJOV'sJCn-OVOCOOav o. % r\ ©otntncnoocnoocnootnoocnOO z, O cn cn cn o - £ cnrororororororororo—- -c* x* —» —* —« —. 3 tn 29 DK 167150 B1 d td 00 03 CO CO O) 03*60 (D (O S N S ^

03^01UlJkO)N^O(øQ}sjø) « (O

*

yi^W(S)M

“U “O “U "U *T3 ·π·η·η*π·η*π·η·η-π·η*η*η*π X

0>· ro* ro· ro· OM j_«i ro ro ro ro ro 3=3 "Π*η"η*η*η*η"η·η-ηχχχχ χ CO OO OO CO CO to ro ro ro ro ro Ό Ό Ό Ό Ό zt or zr 3· rr —> ^ O) O) (u fi) fl) 00 00 O-ClO-Q-O. _ _ _ _ _ _ _ Ϊ s — —‘ ro ro ro ro ro x 1 2 2 1 1 ac ro ro ac ae o o zo

X X X X X — ^ X X , H

® o @ ® @ r~ i i i r~ * ' a: ac co co

T I I X X CO CO

i i < i i ro ro ro ro ro __ _ _ 00000 0000000 "52 =c x=C3:a:3:3:3:ooa:x za

N N N N N N Μ I I KJ

OOOOO W w * W w OJ OJ

^ ^ ^ « ro ro ro ro ro ro ro — — 22222 0000000 co co 3 !3 XJ Γ3 3 X X X X 2 2 s

3 3 2 3 3 CO CO CO CO CO CO CO

ro ro ro ro ro CO CO O CO O OOOOOOOOOOOOO 33 m o n μ σι ac ^ ac XXX11112112 ·* ·< CO CO co CO co CO co <0 CO CO Co Co CO ^

Cn X X cn X

x ro cn x σ> ro cn co ro 00 cn o o cn o 33 3 ΟΧΙΙϊϊιϊϊϊχϊϊ 33 o *—* Ci · aa 3 g co on 3 3 3 ro ro ro . .

3 Q- Q- 3 Ol. OOOOOOOOOOOOO 33 *3

<d re ooooooorjoocsoo o\ O

cl o o o. rr iiiiiiiisiiii *<' cr ZT rr ns f\3 ^ λ oN NNNNNNNN -< fl) rt——·=Γ-σ ononoonnoonno jj Γ,

zrootDc+ , JEScacinxxxxxrcxxx -m M

—· s s -a pi to cotococjcjtotococjtotoco u 0 o o r*- 3 ^ — to

1 -ti -il Οι \ N N N

0 0 0 3 0 — -h -s --s \ =r ^ 0330—· X1 3 =r o . _ m χ 3 c/i c/s —'“S _ ' > -C3 “ 0000 i ®> + a>jt.cD>oj>cD> —i. ft co 3 3 -s -ti OJCO g (n 000 (Pc; 3 3 3 ·+> “Ϊ -J w- ° o ° 3 ^ o ^ 3 ro roro—-roro —» —* —* ro ro ro ro Γη· π- —j —i \ c-r irococo—*—' ^ co σι λ m n n a —1. m -y cnroco—-«-οοοοο·*-4σι*ο·*Νΐο -K ^ ^ p, < ' I I « I I < « 4 | f Ό ro ro zr 3 cocoro—»rococD^sitncocoro ·

-hcowroo ro^j-^cn—icnoo—*ro\jro O

ro ro ro =5 —j o q </> · · o ro —1 ro o ro + + + + —* + + -+- + —· + + 2 ^ ·—* • •o 1 co co cn co o c> ro co co —» 10 ro o o

ro·· McnNro<jicocnwi»uicoui o ^ ZL

01—1 000000000000 —i fv) o ro ·· ro cn *-» «Λ —-

O H

iA 3

O

^ o <n<ncn<ncn<ncncncncncntncn D4 S

s X cococococnoicncncnoicnoicri (DO

53. NNNNrøQOJOJCDAXkAA Hl-*

Z 01010l<710\cn00l0isjs|vjs| ^ jjL

—' “*> « e<- o> 7l

-h </> _ T

ro ro _ ? ro

m* vj^ononvicjncjiuncjicncnuitjn 5 tS

*» cococococnoicncnoicncncncn τ • NNNNC005COa3CO^*^4i ^ ΓΤ

(D

rt* cj ro ro co n

cuo—*—»coro-sjcjcocncocnco C(D

oocoioco^bcorocnoocnjico a ft V1 O o O—'oocnocncnoo zL it> -CfcCOrOCJ CJCOXkOJCOOn-CkOiJa* iUw -£* co co to a —» 10 <0 to tn to co D rf OOcnocnocntnOcntnoo O cn o cn -To ro—»oicn—»enenrorororo j 3 , g 01 I *-· 1 DK 167150 B1 30

Eksempel 89

Farmaceutiske præparater 5 De følgende eksempler belyser præparater beregnet til forskellige topiske administrationsformer. Mængden af det virksomme steroid i de perkutane præparater er sædvanligvis 0,001-0,2 vægt%, fortrinsvis 0,01-0,1 vægt%.

10 Præparat 1. salve mikroniseret steroid 0,025 g flydende paraffin 10,0 g hvid blød paraffin indtil 100,0 g 15 Præparat 2. salve steroid 0,025 g propylenglycol 5,0 g sorbitan-sesquioleat 5,0 g flydende paraffin 10,0 g 20 hvid blød paraffin indtil 100,0 g

Præparat 3. olie-i-vand creme steroid 0,025 g cetanol 5,0 g 25 giycerylmonostearat 5,0 g flydende paraffin 10,0 g

Cetomakrogol® 1000 2,0 g citronsyre 0,1 g natriumcitrat 0,2 g 30 propylenglycol 35,0 g vand indtil 100,0 g

Præparat 4. olie-i-vand creme mikroniseret steroid 0,025 g 35 hvid blød paraffin 15,0 g flydende paraffin 5,0 g cetanol 5,0 g sorbimakrogolstearat 2,0 g sorbitanmonostearat 0,5 g 31 DK 167150 B1 sorbinsyre 0,2 g citronsyre 0,1 g natriumcitrat 0,2 g vand indtil 100,0 g 5

Præparat 5, vand-i-olie creme steroid 0,025 g hvid blød paraffin 35,0 g flydende paraffin 5,0 g 10 sorbitansesquioleat 5,0 g sorbinsyre 0,2 g citronsyre 0,1 g natriumcitrat 0,2 g vand indtil 100,0 g 15

Præparat 6, lotion steroid 0,25 mg isopropanol 0,5 ml carboxyvinylpolymer 3 mg 20 NaOH efter behov vand indtil 1,0 g

Præparat 7, suspension til in.iektion mikroniseret steroid 0,05-10 mg 25 natriumcarboxymethylcel lul ose 7 mg

NaCl 7 mg polyoxyethylen-(20)-sorbitan- monooleat 0,5 mg phenylcarbinol 8 mg 30 sterilt vand indtil 1,0 ml

Præparat 8, aerosol til oral og nasal inhalation mikroniseret steroid 0,1 vægt% sorbitantrioleat 0,7 vægt% 35 trichlorfluormethan 24,8 vægt% dichlortetrafluormethan 24,8 vægt% dichlordifluormethan 49,6 vægt% DK 167150 B1 32

Præparat 9. oplåsning til forstøvning steroid 7,0 mg propylenglycol 5,0 g vand indtil 10,0 g 5

Præparat 10. pulver til inhalering en gelatinekapsel fyldes med en blanding af mi krom*seret steroid 0,1 mg 10 lactose 20 mg

Pulveret inhaleres ved hjælp af et inhalationsapparat.

Farmakoloai 15

Affiniteten til alucocorticoid-receotorer af de nve androstan-17fl-carboxvlsvreestere. som kan fremstilles ud fra androstan-178-carbo-xvlsyrerne ifølge opfindelsen.

20 Alle fremstillede steroider med formlen I er fysiologisk aktive forbindelser. Affiniteten af de fremstillede androstan-17/l-carboxyl-syreestere til glucocorticoid-receptorer er blevet anvendt som model til bestemmelse af den anti-inflammatoriske styrke. Deres receptoraffiniteter er sammenlignet med budesonid ([22R,S]-16a,17a-butyli-25 dendioxy-110,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion), et højaktivt glucocorticoid med et gunstigt forhold mellem lokale og systemiske virkninger (Thaién og Brattsand, Arzneim.-Forsch. 29, 1687-1690 (1979)).

30 Der blev benyttet hanrotter af stammen Sprague-Dawley med en alder på 1-2 måneder under hele undersøgelsen. Thymus fjernedes og anbragtes i iskold fysiologisk saltopløsning. Vævet homogeniseredes i en Potter Elvehjem-homogenisator i 10 ml puffer indeholdende 20 mM Tris pH 7,4, 10% v/r glycerol, 1 mM EDTA, 20 mM NaMoO^ og 10 mM 35 mercaptoethanol. Homogenisatet centrifugeredes i 15 minutter ved 20.000 x g. Portioner på 230 /il af den ved 20.000 x g ovenstående væske inkuberedes i ca. 24 timer ved 0eC med 100 /il phenylmethylsul-fonylfluorid (en esterase-inhibitor; slutkoncentration 0,5 mM), 20 /il umærket konkurrent og 50 /il H-mærket dexamethason 33 DK 167150 B1 (slutkoncentration 3 nM). Bundet og frit steroid adskiltes ved inkubering af blandingen med 60 β1 2,5% v/r aktivt kul og 0,25% v/r

dextran T70 suspension i 20 mM Tris, pH 7,4, 1 mM EDTA og 20 mM

NaMoO^ i 10 minutter ved 0°C. Efter centrifugering ved 500 x g i 10 5 minutter taltes 230 μΐ af den ovenstående væske i 10 ml "Insta-Gel" i et Packard-scintillationsspektrofotometer. De ovenstående væsker 3 3 blev inkuberet med a) [H]-dexamethason alene, b) [ H]-dexamethason plus et 1000 gange overskud af umærket dexamethason og c) [H]-dexamethason plus 0,03-300 gange "overskud" af konkurrenten.

10 Den uspecifikke binding bestemtes, når et 1000 gange overskud af 3 umærket dexamethason sattes til [ H]-dexamethason.

Den radioaktivitet, som er bundet til receptoren i nærværelse af konkurrenten, divideret med den radioaktivitet, som var bundet til 15 receptoren i fravær af konkurrent, multipliceret med 100, giver den procentuelle specifikke binding af umærket konkurrent. For hver koncentration af en konkurrent stilles procenten af specifikt bundet radioaktivitet op mod logaritmen til koncentrationen af konkurrenten. Kurverne sammenlignes ved 50% specifikt bindingsniveau og 20 sættes i relation til budesonid, der tilskrives en relativ bindingsaffinitet (RBA) på 1.

Tabel 4 25

Summarisk tabel over de relative bindingsaffiniteter (RBA) til glucocorticoid-receptorer af nogle af de undersøgte forbindelser.

Forbindelse ifølge 30

Eks. nr. RBA

Budesonid 1 4 epimer B 0,30 35 5 epimer B 0,17 27 0,50 38 0,04 55 0,20 64 0,05 DK 167150 B1 34 67 0,04 69 0,44 5 84 1,03 87 0,63

Yderligere afprøvede forbindelser ifølge 10

Eks. nr. RBA

14 0,58 56 0,006 15 59 0,02 71 0,22 77 0,11 79 0,12 20 25 30 35

Claims

35 DK 167150 B1 Patenkkrav 16,17-Acetal substitueret androstan-U/l-carboxyl syreester, kendetegnet ved, at den har den almene formel I': 5 L H0^^^3jU - ^^Cr1r2 jr v 10 J03T i2 15 eller er en stereoisomer forbindelse deraf, i hvilken formel bindingen mellem 1,2-still ingerne er en enkelt- eller en dobbeltbinding, 2q X* betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, 2 X betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, R* betegner hydrogen eller en 1igekædet eller forgrenet oc carbonhydridgruppe med 1-4 carbonatomer, CO 2 R betegner hydrogen eller en lige eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer, 1 2 idet dog R og R ikke begge betegner hydrogen. V v 35