FI85378B - Foerfarande foer framstaellning av farmakologiskt aktiva 16,17-acetalsubstituerade androstan-17 -karboxylsyraestrar. - Google Patents

Description

1 85378

Menetelmä farmakologisesti aktiivisten 16,17-asetaalisubstitu-oitujen androstaani-17fi-karboksyylihappoesterien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av farmakologiskt aktiva 16,17-acetalsubstituerade androstan-17fi-karboxylsyraestrar

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää uusien, farmakologisesti aktiivisten 16,17-asetaalisubstituoitujen androstaani-17P-karboksyylihappoesterien valmistamiseksi. Näitä yhdisteitä voidaan käyttää tulehdustilojen, allergisten, muskoskeletaalisten tai dermatologiSten tilojen hoitamiseksi.

Keksinnön päämääränä on aikaansaada glukokortikosteroidi, jolla on korkea tulehduksia estävä teho applikointikohdassa ja alhainen glukokortikoidinen systeeminen teho.

On tunnettua, että tiettyjä glukokortikosteroideja (GCS) voidaan käyttää tulehduksellisten, allergisten tai immunologisten sairauksien paikallishoidossa hengitystiessä (esim. astma, ne-näkatarri), iholla (ekseema, psoriasis) tai suolessa (haavaut-tava paksusuolen tulehdus, Crohnin tauti). Tällaisella paikallisella glukokortikoidihoidolla saavutetaan kliinisiä etuja verrattuna yleishoitoon (esim. glukokortikoiditableteilla), erityisesti sairaan alueen ulkopuolisten, ei-toivottujen gluko-kortikoidivaikutusten vähentymisen suhteen. Tällaisten kliinisten etujen saavuttamiseksi, esim. vakavassa hengitystiesairaudessa, GCSsillä on oltava sopiva farmakologinen profiili. Niillä on oltava korkea sisäinen glukokortikoidiaktiivisuus applikointikohdassa, mutta myöskin nopea inaktivoituminen esim. hyd-rolysoinnin vaikutuksesta kohde-elimessä tai yleiseen verenkiertoon joutumisen jälkeen.

Koska GCSsn sitoutuminen glukokortikoidireseptoriin on edellytyksenä niiden tulehduksia estävien ja allergisten vaikutusten ilmenemiselle, voidaan steroidien sitoutumiskykyä niiden reseptoriin (reseptoreihin) käyttää sopivana menetelmänä GCSsn biologisen aktiivisuuden määrittelemiseksi. Suora korrelaatio GCSsn reseptoriaffiniteetin ja niiden tulehduksia estävien vaikutusten 2 85378 välillä on osoitettu käyttäen rotan korvaturvotuskoetta. /Correlation between chemical structure, receptor binding, and biological activity of some novel, highly active, 16a, 17a-acetalsubstituted glucocorticoids. E. Dahlberg, A. ThalSn, R. Brattsand, J-Λ Gustafsson, U. Johansson, K. Roempke, and T. Saartok. Mol. Pharmacol. 25^ (1984), 70^7

Esillä oleva keksintö perustuu siihen havaintoon, että tietyt 3-okso-androsta-1,4-dieeni-17β-karboksyylihappoesterit omaavat korkean sitomisaffiniteetin glukokortikosteroidiresepto-riin. Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää tulehdustilojen hoitamiseksi ja hillitsemiseksi.

Keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä on kaava or3 c = o HO ^ O \ ^ 1 ' X2 jossa 1,2-asema on tyydytetty tai on kaksoissidos, on vety, fluori, kloori tai bromi, X2 on vety, fluori, kloori tai bromi, R^ on vety tai suora tai haarautunut 1-4 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju, R2 on vety tai suora tai haarautunut 1-10 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju, ja R-> on 8 . ? CR.R-OCR,- tai CR.R-OCOR, 4 5 6 4 5 6 li 3 85378 R4 on vety, suora tai haarautunut 1-10 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju tai fenyyli, R5 on vety tai metyyli ja R6 on vety, suora tai haarautunut, tyydytetty tai tyydyttämätön, 1-10 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju, alkyyli-ryhmä, joka on substituoitu ainakin yhdellä halogeeniato-milla, heterosyklinen rengasjärjestelmä, joka sisältää 3-10 atomia rengasjärjestelmässä ja jossa heteroatomit ovat happi, -(CH2)„(^H(^:H2)n (m = 0,1,2; n = 2,3,4,5,6) tai subs-tituoimaton fenyyli- tai bentsyyliryhmä, edellyttäen, että kun R2 on vety, Rx on suora tai haarautunut, 1-4 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju.

Kaavan (I) mukaisessa steroidiseoksessa läsnäolevat yksittäiset stereoisomeeriset komponentit voidaan selventää seuraavasti:

0R3 I J

C = 0

Ri _ x 1 (II; epimeeri S) oX^K!y .... , x

1 OR

C = O

R1 Ύ \

cil^ J_I

(III; epimeeri R) i i x2 4 85378

Yksittäiset stereoisomeeriset komponentit, jotka ovat läsnä steroidi-173-karboksyylihappoestereiden seoksessa, jolla on kaava 0 0

StCOCR4R5OCR6 (IV) tai 0 0

StCOCR.Rj.OC OR (V) 4 b b jossa St on steroidi-tähde, voidaan selventää seuraavasti 0 R4 0 O ^,4 0 il i il m ) n

StCOCOCRj- StCOCOCR- l 6 , 6 R5 5

VI VII

ja

O R4 O 0¾ O

StCOCOCOR, StCOCOCOR, • 6 ,6 R5

VIII IX

Diastereoisomeereissä, kuten II, ITT, VI, VII, VIII ja IX, konfiguraatio eroaa ainoastaan yhden asymmetrisen hiiliatomin suhteen, joita asymmetrisiä hiiliatomeja on useita. Tällaisia diastereoisomeerejä kutsutaan epimeereiksi.

Edellä esitetyissä määritelmissä alkyyli on suora tai haarautunut, 1-5 hiiliatomia, edullisesti 1-4 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju.

Edellä esitetyssä määritelmässä alkoksi on ryhmä -O-alkyyli, jossa alkyyl it.ähteellä on edellä esitetty merkitys.

Edellä esitetyssä määritelmässä halogeeni on edullisesti kloori-, bromi- tai fluoriatomi.

5 85378

Edullinen heterosyklinen rengasjärjestelmä on furyyli.

Erityisen edullisia keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat: 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-6a, 9a-difluori-11β-hydroksi-1 6n , 17n-/Tl -me tyy lietyl.ideeni )bis (oksi]7-androsta-1 ,4-dieeni- 3-oni-170-karboksylaatti, epimeeriseos A + B ja epimeeri B, 1'-isopropoksikarbonyylioksietyyli-9a-fluori-11β-hydroksi-16n , 17«-/ (1-metyylietylideeni) b.is (oksir7-androsta-1 ,4-dieeni-3-oni-176-karboksylaatti, epimeeri B, 1'-propoksikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-11β-hydroksi-16 m # 1 7 o (1 -metyylietylideeni) bi s (oks.iJ^androsta-1 ,4-dieeni-3-oni-17β-karboksylaatti, epimeeri B, |1-isopropoksikarbonyylioksietyyli-6a,9«-difluori-11β-hydroksi-16α ,I7a-/Tl -metyylietylideeni )bis (oksj_^ndrosta-1 ,4-dieeni-3-oni-17β-karboksylaatii, epimeeriseos A + B ja epimeeri B, 1 ' -nael oks i etyyl i -(20R) -On-f 1 uor i -11β -hydroksi-1 6a , 17«-pro-pyyl i mety leen i d ioksi androsta-1 , 4-d i een L-3-on.i-1 7 β-karboksylaatti, epimeeri B, - 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-(22R)-9a-fluori-11β-hydroksi- : ·, 16 α,17a-propyylimetyleen idioks iandrosta-1,4-dieeni-3-oni-17 β- karhoksylaatti, epimeeri B, 1 1 - i sopropok sika r bony yl.iok s ie tyyli - (20R) -9a-f luori-11 β-hydroksi-. . 16α,17a-propyy1imetyleenidioksiandrosta-1,4-dieeni-3-oni-17β- karboksylaatii, epimeeri B, 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-(20R)-6a,9a-difluori-11β-hydroksi-16« , 1 7«-propyy1 i me tyleen id i oks i androsl:a -1 , 4 -d i eeni -3-oni-1 7β-karboksylaatii , epimeeriseos A + B ja epimeeri B.

6 85378

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan keksinnön mukaisesti valmistaa siten, että yhdiste, jolla on kaava

OH

c=o ^ CHlk---0~-CRiR? _

^ I

x2

OH

C=0 ~°X/R2 I l--0 "R1

CH^I L I

o^k^sV

X2

OH

C=0 t^|l__J r2 X2 tai sen suola saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 7 85378

R. O R4 O

I II II

Z-C-O-C-R, tai Z-C-O-C-OR, r5 r5 jossa kaavoissa Xlt X2, Rlr R2, R4, R5, R6 ja tarkoittavat samaa kuin edellä ja Z on halogeeniatomi tai toiminnallisesti ekvivalentti ryhmä, minkä jälkeen jos näin saatu esteri on epimeeriseos ja halutaan puhdas epimeeri, seos jaetaan stereoisomeerisiksi komponenteiksi.

Kaavojen I, II ja III mukaisten yhdisteiden 176-karboksyy-lihappolähtöaineet (R3=H) voidaan esteröidä sinänsä tunnetulla tavalla 17B-karboksylaattiestereiden muodostamiseksi. 17B-karboksyylihappo voidaan esim. saattaa reagoimaan sopivan alkoholin ja karbodi-imidin, esim. disykloheksyylikarbo-di-imidin, kanssa sopivassa liuottimessa, kuten dietyylieet-terissä, tetrahydrofuraanissa, metyleenikloridissa tai pyri-diinissä edullisesti lämpötilassa 25-100°C. Vaihtoehtoisesti voidaan 17B-karboksyylihapon alkalimetalli-, esim. litium-, natrium- tai kaliumsuola tai suola kvaternäärisen am-moniumyhdisteen kanssa, kuten trietyyli- tai tributyyliamii-ni- tai tetrabutyyliammoniumsuola, saattaa reagoimaan sopivan alkyloimisaineen, esim. asyylioksialkyylihalogenidin tai halogeenialkyylialkyylikarbonaatin kanssa edullisesti polaarisessa liuotinväliaineessa, kuten asetonissa, metyylietyy-liketonissa tai dimetyyliformamidissa, dimetyylisulfoksidis-sa, metyleenikloridissa tai kloroformissa sopivasti lämpötilassa 25-100°C. Reaktio voidaan myöskin suorittaa kruunueet-terin läsnäollessa.

Muodostuneet raa'at steroidiesterijohdannaiset puhdistetaan eristämisen jälkeen kromatografisesti sopivalla materiaalilla, esim. Sephadex® LH-tyyppisillä ristisidotuilla deksa-traanigeeleillä käyttäen eluoimisaineina sopivia liuottimia, esim. halogenoituja hiilivetyjä, eettereitä, estereitä, kuten etyyliasetaattia tai asetonitriiliä.

Yksittäisillä epimeereillä, jotka muodostuvat 16a, 17a-hyd-roksiryhmien asetaloinnissa tai 17B-karboksyylihappojen es- 8 85378 teröinnissä, on käytännöllisesti katsoen identtiset liukoisuus-ominaisuudet. Näin ollen on osoittautunut mahdottomaksi erottaa ja eristää niitä epimeerisestä seoksesta tavanomaisilla stereo-isomeerien erotusmenetelmillä, esim. jakokiteyttämällä. Yksittäisten epimeerien saamiseksi erikseen kaavojen I, IV ja V mukaisille stereoisomeerisille seoksille suoritetaan pylväskroma-tografointi, jolloin epimeerit II, III, VI, VII, VIII ja IX erottuvat erilaisen liikkuvuuden perusteella stationäärisessä faasissa. Kromatografointi voidaan suorittaa esimerkiksi Sephadex® LH-tyyppisillä ristisidotuilla dekstraanigeeleillä, esim. Sephadex® LH-20:llä käyttäen samalla eluomisaineena sopivaa orgaanista liuotinta. Sephadex® LH-20, (jota valmistaa Pharmacia Fine Chemicals AB, Upsala, Ruotsi) on helmimäinen hydroksipro-pyloitu dekstraanigeeli, jossa dekstraaniketjut ovat ristisido-tut muodostaen kolmiulotteisen polysakkaridiverkoston. Eluoi-misaineena on menestyksellisesti käytetty halogenoituja hiilivetyjä, esim. kloroformia tai heptaanin, kloroformin ja etanolin seosta suhteessa 0-50:50-100:10-1, edullisesti 20:20:1-seosta.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää erilaisia paikallisia annostustapoja käyttäen riippuen tulehduksen sijaintipaikasta, esim. perkutaanisesti, parenteraalisesti tai paikallisesti annettuna hengitystiehen sisäänhengityksen avulla. Formu-laatin muodon eräänä tärkeänä tarkoituksena on aikaansaada aktiivisen steroidiaineosan optimaalinen biokäytettävyys. Perku-taanisissa formulaateissa tämä aikaansaadaan edullisesti, jos steroidi liuotetaan siten, että sillä on suuri termodynaaminen aktiivisuus väliaineessa. Tämä aikaansaadaan käyttäen sopivaa liuotinjärjestelmää, joka sisältää sopivia glykoleja, kuten propyleeniglykolia tai 1,3-butaanidiolia, joko sellaisenaan tai yhdessä veden kanssa.

On myöskin mahdollista liuottaa steroidi joko täydellisesti tai osittain lipofiiliseen faasiin käyttäen apuna pinta-aktiivista ainetta liuotusaineena. Perkutaaninen seos voi olla voide, öljy vedessä -voide, vesi öljyssä -voide tai liuos. Emulsioväliai-neissa voi järjestelmä, joka sisältää liuotetun aktiivisen aineosan, muodostaa dispergoituneen faasin samoin kuin jatkuvan I, 9 85378 faasin. Steroidi voi esiintyä edellä mainituissa seoksissa myös mikrojakoisena kiinteänä aineena.

Paineistetut aerosolit steroideja varten ovat tarkoitetut si-säänhengitettäviksi suun tai nenän kautta. Aerosolijärjestelmä on muodostettu siten, että kukin annettu annos sisältää 10-1000 μg, edullisesti 20-250 μς aktiivista steroidia. Kaikkein aktiivisimpia steroideja annetaan tämän annostusalueen alaosaa käyttäen. Mikrojakoinen steroidi muodostuu osasista, jotka ovat oleellisesti pienempiä kuin 5 μπ> ja jotka ovat suspendoituneita ponnekaasuseokseen dispergointiaineen, kuten sorbitaanitriole-aatin, öljyhapon, lesitiinin tai dioktyylisulfomeripihkahapon natriumsuolan avulla.

Sovellutusesimerkit

Keksintöä kuvataan edelleen seuraavien ei-rajoittavien esimerkkien avulla. Esimerkeissä käytetään virtausnopeutta 2,5 ml/-cm2.h’1 preparatiivisissa kromatografisissa juoksutuksissa. Mo-lekyylipainot määritetään kaikissa esimerkeissä elektroni-im-pulssimassaspektrometrian avulla ja sulamispisteet Leitz Wetz-larin kuumavaihemikroskoopin avulla. Kaikki HPLC-analyysit (HPLC = High Performance Liquid Chromatography) suoritettiin Waterin μBondapak-C18-pylväällä (300x3,9 mm sisähalkaisija) käyttäen virtausnopeutta 1,0 ml/min ja etanoli-vesisuhdetta välillä 50:50 ja 60:40 liikkuvana faasina, ellei toisin ole esitetty.

Esimerkki 1 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-llfi-hydroksi-16a,17a-[(1-metyylietylideeni)bis(oksi)]androsta-l,4-dieeni-3-oni-17fl-karboksylaatti.

A. 6a,9a-difluori-110-hydroksi-16a,17a-[(1-metyylietylideeni)-bis(oksi)]androsta-l,4-dieeni-3-oni-17B-karboksyylihappoa (600 mg) ja kaliumvetykarbonaattia (684 mg) liuotettiin 45 ml:aan dimetyyliformamidia. Lisättiin 1-bromietyylietyylikar-bonaatti (2 ml) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Lisättiin vettä (200 ml) ja seos uutettiin 10 8 5378 metyleenikloridilla. Yhdistetyt uutteet pestiin natriumvety-karbonaatin 5 %:sella vesiliuoksella ja vedellä ja jäännös puhdistettiin kromatografisesti Sephadex LH-20-pylväässä (72 x 6,3 cm) käyttäen kloroformia liikkuvana faasina. Jakeet 1515-2250 ml otettiin talteen ja haihdutettiin, jolloin saatiin 480 mg l'-etoksikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-118-hydroksi-16«, 17n-/(1-metyylietylif eeni) bis (oksi]_7androsta- l,4-dieent-3-oni-l7B-karboksylaattia. Puhtaus määritettynä HPLCrllä oli 98,1 % ja epimeerin suhde A/B oli 48/52. Sulamispiste; 218-227°C. /"«7p5 = +63,2° (c = 0,214; CII2C12) , Mole-kyylipaino oli 554.

1'-etoksikarbonyylioksietyyli-6«,9«-difluori-llfi-hydroksi-16«, 17«-/(lT-metyyl ietylideeni) bis (oksi)/androsta-l,4-dieeni-3-oni-17fl-karboksy1aattia (480 mg) kromatografoitiin Sephadex LH-20-pylväässä (76 x 6,3 cm) käyttäen heptaani;kloroformi:etanolia, 20:20:1, liikkuvana faasina. Jae 2325-2715 ml otettiin talteen, haihdutettiin ja jäännös liuotettiin metyleeniklori-diin ja saostettiin petrolieetterillä, jolloin saatiin 200 mg yhdistettä (A), jonka puhtaus oli 97,3 % (määritettynä HPLC-analyys.il ] ä) . Sulamispiste: 246-250°C. /"V7p5 +100,5° (c = 0,214; CH2C12). Mol.ekyyl.ipai.no oli 554.

Jakeesta 4140-5100 ml saatiin 250 mg yhdistettä (B), jonka ‘ puhtaus oli 99,0 %. Sulamispiste: 250-255°C. /"λ_7ρ5 = +28,5° - " (c - 0,246; Cll^tl .,) . Mol ekyy 1 ipa i no oli 554 . Este rl ryhmän roetii- nisignaali on siirtynyt 0,13 ppm alaspäin yhdisteen B *H-NMR-: : : spektrikentässä verrattuna yhdisteeseen A, kun taas muut spektrit ovat lähes identtiset. Yhdisteiden A ja B elektroni-impulssimassaspektrit ovat identtiset lukuunottamatta massa- ____ huippujen intensiteettejä. Nämä spektroskooppiset eroavaisuudet ja yhteneväisyydet osoittavat, että A ja B ovat esteriryhmän kiraalikeskuksesta johtuvia epimeerejä.

B. 6« ,9u-di f 1 uori-11 p-hydroks i.-lf>i*, 17«-/7l-metyylietylidee-: ni) bis (oksi Jl7androsta-l ,4-dieeni-3-oni-17e-karboksyylihappoa (200 mg) liuotettiin 25 ml :aan di metyyli formamidia. Lisättiin 1-klooriet.yyl ietyyl ikarbonaattia (100 mg), kai iumvetykarbo-naattia (70 mg) ja 18-kruunu-6-eetteriä. Reaktioseosta 11 85378 sekoitettiin lämpötilassa 80°C 3 h, jäähdytettiin, uutettiin metyleenikloridilla sen jälkeen kun oli lisätty 150 ml vettä, ' kuivattiin ja haihdutettiin. Raaka tuote puhdistettiin samalla tavoin kuin menetelmässä A, jolloin saatiin 207 mg 1'-e toksikarbonyylietyyli-6a,9a-difluori-llB-hydroksi-16a,17a-/(1-metyylietylideeni)bis (oksiJ^/-androsta-l,4-dieeni-3-oni-178-karboksylaattia. (HPLC) oli 98,4 % ja epimeerin suhde A/B oli 54/46.

C. 6a,9a-difluori-11B-hydroksi-16a,17a-/7l-metylideeni)bis-(oksi]7-androsta-l,4-dieeni-3-oni-17S-karboksyylihappoa (200 mg) ja 1,5-diatsabisyklo/5.4.0/undekeeni-5:ttä (140 mg) suspendoitiin 25 ml:aan bentseeniä ja lämmitettiin refluksoin-tipisteeseen. Liuosta, jossa oli 1-bromietyylietyylikarbonaat-tia (175 mg) 5 ml:ssa bentseeniä, lisättiin ja seosta refluk-soitiin 2 1/2 h. Jäähdyttämisen jälkeen lisättiin 50 ml mety-leenikloridia ja liuos pestiin vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin. Raaka tuote puhdistettiin samalla tavoin kuin menetelmässä A, jolloin saatiin 207 mg 1'-etyylikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-lle-hydroksi-16a,17a-/7l-metyylietylideeni)-bis(oksi|7androsta-l, 4-dieeni-3-oni-17B-karboksylaattia.

Puhtaus (HPLC) oli 96,4 % ja epimeerin suhde A/B oli 44/56.

D. Liuokseen, joissa oli 6a,9a-difluori-llf3-hydroksi-16a,17a-/Tl-metyylietylideeni)bis (oksij_7androsta-l, 4-dieeni-3-oni- 17B-karboksyylihappoa (100 mg) 25 mlsssa asetonia, lisättiin 175 mg α-bromidietyy 1 ikarbonaattia ja 45 mg vedetöntä kalium-karbonaattia. Seosta kuumennettiin 6 h refluksoiden. Jäähdytet-ty reaktioseos kaadettiin 150 ml:aan vettä ja uutettiin metyy-likloridilla. Uute pestiin vedellä, kuivattiin natriumsulfaa-tilla ja haihdutettiin, jolloin saatiin 65 mg kiinteätä 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-11B-hydroksi-16a,17 a-/7l-metyylietylideeni)bis (oksijTandrosta-l ,4-dieeni-3-oni-17fl-karboksylaattia. Puhtaus määritettynä HPLCsllä oli 97,6 % ja epimeerin suhde A/B oli 49/51.

E. 6a,9a-difluori-11B-hydroksi-16a,17o-/7l-metyylietylideeni)-bis (oksi)7c>ndrosta-l, 4-di eeni -3-oni-l 7β-karboksyylihappoa 12 85378 (500 mg) ja tetrabutyyliammoniumvetysulfaattia (577 mg) lisättiin 3 ml:aan IM natriumhydroksidia. Lisättiin liuosta, jossa oli 435 mg 1-bromietyylietyylikarbonaattia 50 ml:ssa metyleenikloridia. Seosta refluksoitiin sekoittaen yön yli. Kaksi kerrosta erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 2 x 10 ml:11a vettä, kuivattiin ja haihdutettiin. Raaka tuote puhdistettiin kromatografisesti Sephadex LH-20-pylväässä (72 x 6,3 cm) käyttäen kloroformia liikkuvana faasina. Jae 1545-1950 ml otettiin talteen ja haihdutettiin ja jäännös säestettiin metyleenikloridi-petrolieetteristä, jolloin saatiin 341 mg 1' -etoksikarbonyyl.toksietyyli-6a , 9a-dif luori-llp-hydroksi-16u,17α-/(1-metyylietylideeni)bis(oksi^7-androsta- 1,4-dieeni-3-oni-17 fi-karboksylaattia . Puhtaus määritettynä IIPIjC: 11 ä oli 99,2 5, ja epimeerin suhde Λ/B oli 56/44 .

F. 6n,9n-difluori-11(l-hydroksi-16« , 17a-/ (1-metyylietylideeni)-bis (oksi/7androsta-l, 4-dieeni-3-oni-.l7$-karboksyylihappoa (200 mg) ja trikapryylimetyyliammoniumkloridia (200 mg) lisättiin 5 ml:aan NallCO^n kyllästettyä vesiliuosta. Lisättiin liuosta, jossa oli 100 mg 1-bromietyylietyylikarbonaattia 10 ml:ssa metyleenikloridia. Seosta sekoitettiin lämpötilassa 45°C 20 h, laimennettiin 10 ml :11a metyleenikloridia ja eristettiin ja puhdistettiin samalla tavoin kuin menetelmässä E, jolloin saatiin 254 mg 1' -etoksikarbonyy lioksietyy li-6n , 9a-dif luori-.l l fl-hydroksi-1 6a , 1 7«-/ (1 -metyy 1 ietylideeni) bis (oksi/7-. androst:a-1 , 4 -di een i-3-oni-.l7(t-karboksy 1 aa ttia . Puhtaus (HPLC) ] oi i 97,4 i ja ep 1 mee r I-suhde Λ/H oli (»0/40.

G. 6a,9a-difluori-11p-hydroksi-16a,17a-/(1-metyylietylideeni)- : bi s (oksi)7androsta-l ,4-di.eeni-3-oni-170-karboksyylihappoa (200 mg), 1-bromietyylietyylikarbonaattia (135 mg) ja trietyy-·:··: liamiinia (275 mg) liuotettiin 20 ml:aan dimetyyliformamidia.

Seosta sekoitettiin lämpötilassa 80°C 3 h, laimennettiin 200 ml :11a metyleenikloridia, pestiin vedellä, kuivattiin ja ‘ · haihdutettiin. Ranka tuote puhdistettiin samalla tavoin kuin '··' menetelmässä Λ, jolloin saatiin 69 mg 1 ’-etoksikarbonyylioksi-: etyyli -6u ,9u-d.i fluori -11 (t-hydroksi-1 6u, 1 7u-/Tl-metyyliety li- li 13 85378 deeni) bis (oksi]_7-androsta-l ,4-dieeni-3-oni-170-karboksylaattia. Puhtaus (HPLC) oli 97,8 % ja epimeeri-suhde A/B oli 48/52.

Esimerkki 2 1'-asetoksietyyli-6a,9a-difluori-118-hydroksi-16a,17a~7(l-metyylietylideeni) bis (oksij7androsta-l, 4-dieeni-3-oni-178-karboksylaatti 6a,9a-difluori-ll8-hydroksi-16a,17a-/(1-metyylietylideeni)-bis (oksiJ^7aridrostä-l ,4-dieeni-3-oni-17 8-karboksyylihappoa (500 mg) ja kaliumvetykarbonaattia (575 mg) liuotettiin 40 raitaan dimetyyliformamidia. Lisättiin 1-kloorietyyliase-taattia (1 ml) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 40 h. Reaktioseos kaadettiin 50 mitään vettä ja uutettiin metyleenikloridilla. Uute pestiin natriumvetykarbonaatin vesi-liuoksella ja vedellä, kuivattiin ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin Sephadex LH-20-pylväässä (72 x 6,3 cm) käyttäen kloroformia liikkuvana faasina. Jakeet 1755-2025 ja 2026-2325 ml otettiin talteen ja haihdutettiin.

Jakeesta 1755-2025 ml saatua kiinteätä tuotetta puhdistettiin edelleen kromatografisesti Sephadex LH-20-pylväässä (76 x 6,3 cm sisähalkaisija) käyttäen heptaanin, kloroformin ja etanolin seosta, 20:20:1, liikkuvana faasina. Jae 2505-2880 ml otettiin " talteen ja haihdutettiin. Jäännös liuotettiin metyleeniklori- - · diin ja saostettiin petrolieetteri.1 lei, jolloin saatiin 167 mg ____: kiinteätä tuotetta (A). Puhtaus määritettynä HPLCillä oli 99,1 %. Sulamispiste 238-59°C. /a_7p5 = +94° (c = 0,192; 17 CII2C12) . Molekyylipaino oli 524 .

Yllä olevasta jakeesta 2026-2325 ml saatua kiinteätä tuotetta puhdistettiin edelleen kromatografisesti samalla tavoin kuin edellä. Jae 5100-5670 ml otettiin talteen ja haihdutettiin.

Jäännös liuotettiin metyleenikl oridiin ja saostettiin petroli-eetterillä, jolloin saatiin 165 mg kiinteätä tuotetta (B) . Puhtaus määritettynä HPLCillä oli 99,4 %. Sulamispiste oli : 261-265°C. /~«_7p5 = +34° (c = 0,262; CH2C12) . Molekyylipa ino •... oli 524 .

14 85378 A:n ja B:n ^H-NMR-spektrit ovat lähes identtiset lukuunottamatta esteriryhmän kvartettia, joka yhdisteessä B on siirtynyt 0,16 ppm alaspäin yhdisteeseen Λ verrattuna. A:n ja B:n fragmentointikuviot elektroni-impulssimassaspektrissä ovat identtiset lukuunottamatta massahuippujen intensiteettejä. A:n ja B:n nämä spektroskooppiset ominaisuudet osoittavat, että ne ovat esteriryhmän kiraalikeskuksesta johtuvia epimeerejä.

Esimerkit 3-85

Seuraavissa taulukoissa 1-3 esitetyt aineet valmistettiin, eristettiin ja puhdistettiin samalla tavoin kuin on kuvattu esimerkeissä 1 ja 2.

I! 15 8 5 37 8 I rHi— O (fl o mo m m m m o •h 3 σ\ Γ" oo m m oo o <r» 3 ^ oo iHm m m 04 m cr>

. C>rH <H 04 04 ro 04 CO 04 O

3 m e i il i tili 4-i ·η — m <—i m m o m o m dJ-H vo en oi vo <f o\ e> o) __ K 4-> vo oo m e-i ooorHm

O» oo rH iHOJ OI 04 04 04 CO

a a v/ ϋ

O fdOO^TrrOOOOVOVO

/ \ I > mmrocovovovovo ^ ' vH^^ininininmminm

i I cq C

„ Pt I ÄO. 3 O' O' VO vo vo vo VO vo o~vJ | ,_i (Uci-U » »· *· - ·> *» ·« «.

JF O VA 1_ ,Η -H UI 4-> O 0-3· tj· oooovovo P5---CJ—P5 i / r) oraraommmrovovovovo O . / S a .h x m mm m m m m m O 1/ O) ^ $ 5 —)-\ W «N D » ' \ Γ^, oi oi O 00 O OOO0 • , a I '•h en en oi o romr^o ki ? H-, ΐ + S ? ΐϊϊΐ -ϋθ * m m r * * * · « CJ n m ·η ·γ~ι rt n O <0 m ra ra o o- \ / · w I I --- 04 04 U CV 04 1—1 OV CO 04 00 / \ ·*γ oi m vo vo £ Q 0401 01040401 I ' ·>Η VO , | I J-4 oi . 1 ^ ·Ηω<«»<ιη<ρθΛ;ρο °ry u,, i * a-g K“ö"“ V—I » S / ω

A I

mm g mm mm s. mmmmmmÖÖ g g *°5Söö5öoo Λ/ • · u Λ oT K K X K KKK» o o ;1

Sc,{LjTi I-. -H -Γ* -Γ -H

§_/ «r g & a g & g g"\ 1 I a a ·.§ I a” a” r— / / — -\ m \ / \ X iCXXKtEKUvtn o \ / rH\ ~ m / aT\ /

3 rv Ϊ» \ / <—I

iH £ u ~7-v\ X K K Cm fM Γμ tn Cm Cm : ; 3 / \ ns f \\ w jo v m ot „ ro rrm vo ο-οοσνο O ΰ S Π *- 16 6 5 3 7 8 ^~ιτ> "~ίΓ> ^ ό a ίθΠΝ§ηκ^20ιηο°ιηο®°®0 § £ pi inowinwoJiowii^i- 1) -rj ^jnoiMLninNinmriioiriifioN^i!!^

8-H JS ro J5 ^ί" ° O ° O 00 CO CO 00 00 VO VO O O

(ö i> ιηιηιηιηιοιηιοίΛΐηιηΐΛΐΛΐηιηιηιηνίϊνΛ 0i nJ :i -.1 :i: -Ij

rH

^ ( p ^^^^'^vovovoiovovovovovor^i^.fv.r^ rHOlti IS m ® ^ v O O ° O K (Ο (Ο (Ο (θ' ίο" lO O o' U) in ™ ^ro^-coocnoorvj^-ijmcr.^^-^ocno cnQ γνη oi^^CTiooo^oroocsjuncnn^^S^ Γ^ι ouc + + + + +7 + 7+ 7 + + + + + + + +

α II BC

\| ^) G

??r:0?»*?r5s;i5sss d U wS°SnS°nNNNO°^S2^ or 0 νμ^γ-λνννννμ^ν^"®νΟ •H ^ ^ jjj <oq I <ca<co<co<co + <co<m<£n

M

CVJ CVJ CO CO

CVJ CM 31 re -—» ο υ .'...; _, . coco co co cm cm

r> (n- ^ F* F. N N NI I I I

—Γ ~~P <-><-> —» —· — «_) CJ O O

VO ο,^πΓπΓ ΛνιηΙηΙη1ΝϊΝ; Ξ

0 >, >> 5 υ “ ϋ π ni^i'id ϋ ϋ ϋ ϋ UNUN

<. CC Μ·^·«Χ χ τ X U Μ χτχττ -4^ 0>° ££?, ^^^U,JS-"5uu55uu ^ ^'•-οοοοοοοοοοοοοοοο co 3-:ro:i::r::i:3:3:3:3:^a:3:a:a:a:xn: :-: 8 ^ -S1 " -S"* _Γ° .4° f*"* ΟΟΓΟΓΟΠΓΟΓΟΓΟΠΓΟΓΟΓΟΓΟ ν «* s 5 5 S 5 s 5 5 5 5 5 5 5 5 5 S 5 s

- - - H

: (N

^ ^ ^^^•^-^V^-lJ-O-Li-li-U.U-tj-Ll-Li-Li-li I.

- H rH

- **· U.U.lLlLU.liu.u.u.^^^^^^^^ ilo (nm.. τ-ΓΜΓΟ'Τίηνο^-οοσνοΓ-ΓΝΗΊττιηνοΓ'-οο

WEd i-i-r-i-r-r-i-i-i-rj(MN(SNtM(SNN

li 17 85378

. Η rn όϊ Η Η Η ήϊ C

I o in o o (rt -H

0 tn <n o o en ro m o e tn -H p en >—i o en rH l'' eo -H (rt p P — <h rs oo »—( rs ro o* in nj e £ «h iiiiiii m *w QJ (rt E o m o m m o m (rt

PiH'-' σ» m m o <q* o ms m

Qj -H rs rs S3 S3 co rs Ό1 e

(¾ P «H r-S rH Γ0 (0 S

s 1 0 i i i C fd (NCMCNVOVOVOCO -A r-\ •H > co oo ao en σ\ en vd *η ass m m in m m m m i—i .—.

•H xs f*

rH cH O

>s »»es

i>i „ O

Λί p io m ίο n n n id rs o DIP ***«.»*». k rs ιΗώΡ rs rs rs ro ro ro oo O'— (0

QmQJ oooooocncncnuD rs e S m Ai in m in m m m in — ns m πΐ ·Η •h e e in (0 rH *H ·Η (rt •ho in in (0 - s | 8 S ^ (rt C P HS *4-1 (fl

in ä f g ,« S

·· O O O O O O <}) -H ö d g

m rs n mor-oeoeo f drofdP

n Q ή o o rs <x> en rs I -H ro > > Ä fr?H, * ? * + * " Sillä ag S 8· ä 3 Λ

Dl £ -H -H

oo en rs S3 S3 oo (D l -H <-t iö en ro in rs £ h -h

—i rH rH rs rs es lEirtnJB

IIIIIII H Π H H M

(), f > o I- o co oo S) h o E E O

ιλ o r · i ^ en o vr rs p mi m P ms . n rH r-s rs rs rs 0 O 0 0 0

MS M MS MS P

S 5 S 8 5 Λ0 2 < «Φ e n . 3 * S S 2

fl· g * « 2 S 2 * S

S p S S p sun

£ HU

A? x is -~ jpjrjr ~ g - ~ 6

ro ro ro g EE

^ro ^ro ng Q g ^ U m U D ro >o ro ro ”~ro — rc ro rs in ro ro

g S S S » x il- » X

oä" 8 8 8 8 8 8 8 * "i x * “i M ro m rs «h 0 ro oo r^ ^ pi° k ® rc x K x S ω 'S 'S 'S u! .Jz, in w in w w ro ro ro ro ro ro ro > 'j> > «- S 0 S S 8 S S g g ΐ S Ϊ

Hi ό O <3 CP C3 rs rs rs rs rs : t rs tiili r-i X 1*1 (*i Im I*» U* Ui Uj !lj UJ Uj 4i

•j il il M >-*1 *-J

£ ä S 8 B Jj rH '0 Ό r0 Ό Ό

X h (n h Im Im (n (m J3 S j3 JS

U U U ft ft οι qi oi qi q> •H (Λ (Λ on ιΛ t75 | Ή •H 'is o en ° T- rs ro τί· m mm.. rs ro ro ro ro ro ro .—. .—. —^ — M E G rS rs ro u- in 18 8 5 378 — «— ·— (— <— CNJ CNI ·— «—

1ΛΟΟΟ1Λ LO ID

— · νοΐ£>«τοσ>οιη«τι>^ * f O W Loog^rooroooou·)·—

\ r -H 2 '— ·— '— '— '— *3" CM *— CNI

<-> C > r-j O OlOloOOlOOO

/ \ <D (0 E on.— «tcoocnicnj.— cni

' ' -P (H — CNI N <} CM (*) N <»· VO

O O m H r- „ I I » •sS 1 S o i si

“'"R 31 * /-Φ C Ή CNJCOOCOvDlOrNJOCO

2 ./ g '3 (Ö ocootf^^nmia 522

R_1/ S fö > tn^rLOLOLOLOLfiLOLO ronJ

o \ >ί< Οι rg 3 n) (0 .£» \ W ^ K +> «H U4 ^ y V. <fl nj

' .+ O VO VO N N N N VO Vfi VO C C

Ψ I -P ••••'»•.»r.v» Id <0 cj (rt P CMCOOCOlOlOCNIOCO > > Q(uQ) Ocoro^Kj-o-roiOLO 3 3 5. W Λ: mvrininininininm Λ! Λί Η ·Η (5 ·Η ·Η W I 1 ω »-π γη ·· (N o o o o o o o flJid CNJ ,ο rsifi CO Cd «r <+ O CO ‘"j

α: χ ί η °1 υ_. r^r^r^iorv-LOLOii E E

V· r PTi h o o o

O I ö u U »H »M

/\ -- 0 0 o O u u

CNJOLOcovocotnor^ o O

Il CntNOlUIVTifllNUJCO r-i <-4 LO I ** o r >.....I I I I JJ O.

o; I . ,&J-,o%rocNj^+ovncocoo ^ o=o I ' Γ] in o ooLOCTiLD^rioLorovo __

«ro I M — >— cnj ,_ _ _ _ CC

oi—o---x | J- m QJ O) o / p >rj ad ad o 1/ C Π +» +> ° co\ fl· co eo cd l. l.

-f; \ μ< 3i I I I I I I + + + >4>1

\_ .5 «C C «£ MO XO

/ \ β· * * Ή "e

OO

- ro m

nr-ι »N V

ro

ΙΠ VO fM

Ό o ro

ro ro ro ro ^ ro ro co XX

o <oi x i

esi i^roro rocvJicooo CMfO

3i , _ X xacxo esi esi esi Lp L? oT J ΟΟ ΓΟΟΟΟ — χχχ ΓΙ ®

K ·— X '—' -—- —- O O O O

O OOOOOOOOO

Aad ad _ _ (rt (rt o O ^ χΜ aP aP « 01 qR I | « 3:=:3:0:3:3:000 ad ad O—o Λ ·ξ oTJLS^-a:1 !__ en ro en co m m ro ro £ £ S 1 / 00000000 e* o ~__|/ CNJ CNJ CNJ CNJ CNJ CNJ CNI CNI f1· Dj

rn \ CNJ CNJ CNJ CNJ CNJ CNI CNJ CNJ O O

(N 3: \ m 3:3:3:3:3:3:3:3: C4 OJ

o —V (m 3: o o o o o o o o . , O / \ of --------- « i

... S \_/ . __ s* >V 3:--1:3:3:3:3:3:3:11. S S

3 / Ό Ό nJ o x \ / n] to - - - E-* x o —) < ^ jj /v\ jxjXXXU.XXXU.il. 0(1¾

/ \\ <U (U

(\ ' > · 10 (Λ

Y\ / E

N-/ -MO lo r-- 00 01 o '— <n cn«r -- — V w ι-t tv

o WC

II

19 85378 , CO — — ·— i— CO CO — "Ϊ2 r>m U o o ° m O om M S3 oivoor-r-coomo ro

, j pi _ Olinr-rtr-NOI^fl· CO

t; f 27 '--NNNinvNN ro

SI ί V *11111111 I

jjJ23 omoinmoooo o fi ^ ιΓ>ΟιΛ«5ΤΟΟΟΟΓΟΟιΓ>

«VJr- Är] vOCOOr- c*CO*r\Or-CO

OiCC m+-> i— ·-» i—> C\J ,— ro N M

\ / ·

O I . tJ

A-r4irt'!r('-I{N<CSiOOeOOOOOOO' CO _ flmSijC^^^^cjcMCjoo*» ** ο Ο ’Γ’^^+’^ΐΛίΛιΠίΛαιΐΛΐΛίΛνη m

I I ® ,ν1 o =J KDvOl-.rs.vOVOVOVOr'' *V

(11=,, I Ή die I 1J »«,»«·*· »

Q in i H r-HH W 4-1 rorOCOCOOOOOCO CO

Q-r. .rt- nr I J_ Φ QlrtieiD 00*ftf(MNNN*f « “ * / φ ιΛιΛιΛιΛιηιΛΙΛΙΛΙΛ tf> °~lr\ I a

(_)—V— , w ooooooooo O

7 \ ** ΓΝΓχ^Μ,-ίΛιίιοο <r I» as, * * *

"S

o NOsoir-toooffiin ro ΟΙ Μ ΙΟ ιΛ (*) (T) 00 I— ro ,_

. * * I I I I I I I

NiOr-inioNio«-n O Ai* σι cn vo in ro ro .— ro UJO r— <— CJCSJCMCvJ·— CO r- ro CO r—

oc. a: -H

\J ^ 1 · * · < co < cq < ta vo *? ? < fi* o=5 11 H ^ JPJPJPJ? «ΊΙ-αΤ'Ι- jjj £ ιηϊηιηιη s—I ^ oUoo555555 0^= = = = 3=3:3:3:3: 3; co co *P '~rn

_ I I

M M n MU U

evi -- = = = 3: — ϋ qc oe o: ^-^iiuuuui x \J ° ° Y\ =° =ro ^ro _co ^ro 00 O O O O (j «, 1 I e ^ _ro_co_rM_rsj oc 1 nP* _ = ro co co ro ro 0= o, K = 0 = = = 3:3: = 3= = «a-oinli ocjooo ocr»*c->~oc 1- —· — — — —- Οι/ ro ro ro o—M = = =

c\ o o (J

m \ co co co

° / \ rej-1 3Γ1 CO CO CO

ro ( )-v if if if O )-/-- >Γ)--- .« / fo\ / ^ Z 5 Λ_( >Γ = = = = = = = = = = ·; 7\v --- *\ / o XXU.U.11.11.U.ILU.U.

N i o E O lovoc- co 01 o ’— ro ro ^

In e ό1 ·π> ·ο· ·ο< ·ο> m m in m m

M

20 8 5378 I ·— ‘— r-i-V*f^r.NNMNN(NjNN(\|in 0(/) o m ir> m o *H p Op^vocomooinoOLfioommmoo 4-> p .—. 'TOMOr-^cricnr— uor-.iDr-.r^OMDCMCor-'.·—

C>rH CMCOr— CVICMCOCMCO^rO-VO^m^+VOUOCO

QJiÖSiiiiiiiitii iii···· 4-) <—ι — οοοοοιηιηίΛΟΟίηιηΐΛΐΛΐηΐΛΐηιη d) Ή OioocMU">«rcMcooooco«3-couococom

«4-) »— r~Lr>MDCMCMCOCMCO«cr*3-LnrO*yrOm<crCM

N rj .— .— CM

0 3 r ±t£!£Jio<£>*r*r*rco<vrvc3oaoao*T*Tcoao •H 4-) ^co^t^covOLnvorocoiDLnr^.r^vocOf^i'^ (fll H u^inuoa-iuomuocninuoLomLnminmmir»

Äx S

»H

,jjj’ ρ ''J c- is.rvvDto^tDr-,r^rvr-.r'.p^NN

rH (/) 43 ΰ ϊ 5 t t ^ ® Ν Ν θ' ο" CO o' » ίί 00 (θ' q (rt 0) cooo^y^+vooLnvororouomr^i^covor'.r'.

Ζι-ηΛ! minmuommLnuoinuoinuoinuouomuom

S

ui ·. ooooooooooo o o 0 o o o (Π {M LT) tn r^. 03 VO CM 03 O CM ΓΟ O (O CM ΓΜ Γ-ν 03 CO r— cm Q (n H (''-('^(-'-lOvpr^cn^om,— mcncMonoro |\ * U + ++ + + + + +r-+>— + + +.— + r- + C, Έ s" + + _ CT» ocMCMLnm«a-r— ocm.— corj-r-.co^j-Ln»— σι « o <ί ίο n (O r- (M ΐΛ οι σι i- m ιο cm <— p^ps.

• I I ) I I I I · I ) I | I I I I

• V1+~OOf— r— rOcOCOCOCOCM^r-r— CMOO^ C^tjcoin^a-cor^vooCTiroinm·— mvocM*— cor*» (Λ O *Ν *“ «—<—·—«— CM r- r— r— f— CM f— r- (M CM r- . t— h m co | V-j «t CO i i i i i I + 4cfm<fmrfmrf(ff •H φ C <

fl*S

CM (M CM

co ci co n ·— co co ·—. .—. ro co CO -— -— CO CO CO CO CO CO -—- CO CO -—- -—- pi COCOCOCOXXXXXX CO CO X X coco

o XXXXOOOOOOXXOOXX

CT CO CO O O (_)<_) CM — CM CM CM (M O O ----<_) CJ

jo XX — — ·— — XXXXXX — — XX — —

Λ OOOOOOOOOOOOOOOOOO

oooooooooooooooo xxscxxxxxxxxxxxxxxx __>>>> cocococococococococo · oJ C c xxxxxxxxxx

Λ Λ( e/XXXIXXOO(JU(JUU(J(JO

*♦- *♦- ro ro co ro ro co ro co ro co ro co co XX X XXX XXX xxxx U(J U OUU (JUU oooo

CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM CM

PN CM CM X CM X CM CM CM X CM CM CM X X CM CM CM CM 'Z K XX X XXX XXX xxxx (U <_) <_) O O O O O O O oooo X — — —

tl CO ro CO CO CO

«J xx x XX

"(N o o o o o

... — CM CM CM CM CM

o; 3: x — Χ'-'Χχχ^'ΧΧΧ'-^-χχχχ

m CM CM CM CM CM

XX X XX

O o O o o o X — —*

P ixP XX XXXXU.U.XXXXXXXXXX

»H

3

- "· «J

Eh U.Ii.XIU.U.U.Ii.XXLU.U.U.U.Il1lU.

'jSOuoMjr-oocxNOT— (Nro'M'Lnor^oocrtOT— (N

(“j in m io m in o o M3 o o o o o o o r- l! 2i 85378

CM CM CM CM in m »— LO ID *— *— *— CM

. _ tn o m o I οοιΛίηοίΛΐηοιηοιηοο OW o ro m σι <o σι — κτ σ> σι ro er> HP sriocionm^rnnfONn^t -y p -— •••••••it·

Ηζ'ΗΟΟίηιηοιηοο*— ooom qq£20^rooiDomcMcr>nrcr>cnroco H

»{ h ^ MvnnmnMKpjpir-r-ion ··

Si rj co cm cm co o

^ ^ rH CN

·· ·· o o

I. CM CN

,-¾ ·· ^ flj I 'H itWVireOeeOOCONNNN o «-* •H (0 lOlOUOiOlOiOlOiOiOOOOOCOCO m -. ιηιτΐ_ί Τ' ζ mininininmininininininin *_*, "j JJ 2 Tj >i Ι0Ρ - -- -H c C U) ΪΗ 3J-> rH -Η -H (0

Hft Q <0 0 w w nj rH -5 3 ^ 5 2

QrOIPr^fMr-f^vOioeoiOiOiOiOioiO Ί 2 nJil] iddiif cwvoooooenooNNNN C <jj q ,* —· Hi loiouomminioiouocooococo ro I njnlni »Λ cmw ininininminininminminin ρ ^ CC> OJQ ' w oooooooooooo 9 § 5?5?2

ί'ι 9 " incoin^rininoomcMf^inr^ ' ^ > > -V

I «I }' HI σι — .— cocTiCNiooromcnco ι *H Ο P P Ai

Hn +- H- 1H O Ai Ai -r|

SO Ρ -H -H rH

Ή O **H -H

o O rH rH f-H n) cvic».<\ir-ooio*— in»— r-» cm P Ai -h

CNrocoinrMcnoicN — cncoco O I nJiBE

nr» « I · » » I » I I I ι ι _i _j Jj £

OfMcninr^oooor^- cocMin Ί TJ pp^

U NCMNltliiCONrr-OiniM I . P CKO

N(\JN(Mr-r-i-NNr-CMN 1 *0 H M 1H

•H <0 O O O

C p »H *W p

rtj Οι O O O

H caeo «J Ο) μ in rH

A }rf <ffl<a<tan<cQi<ea ι "t} Λ O O X

n rti «C «t Pi . rH f-H

β4 | Φ C X X G

κ JC Q> 0)

C C uQ

cm cm cm C ω Φ P

__. . _ Οι P ao ao P

cococococororococorocororo ao >1 P p >.

or χχχχχχχχιχιειπχχ P «ο ρ p :(o ir epipipepcpcpipcpcpcpcpipep p a; ·>. a* y CM CM CM CM CM CM CM CM CM-— (Μ ΤΓ Λ .P’.P1'*'

Co xxxxxxxxxxxxx .21 *2 .fl rJ~ cpepoocpcpepipeptpcpipcp -f® 'Z: XX*-.

^4 ooooooooooooo X G G

U 1^· C-» (J

m CS β β ,η g *n o O m κ xxxxxxxxxxxxcp _ '

CO IN Π lii (N

«M *“ ’ ^ ^ ^

-P c° co ro ro ro ro ro co ro co co ro ιο X vd cn X

(K* ooooooo5S5£S5 x in X x m

ie f- (N O rH

cororocororocoi—oot— oooo coco xscaixixx »r — w

-z J!P jp u O O CP CP O CP

g CO Ίο «0 ao ao ao ao

Αί cP* -T-_.p-.p-_ _ CM CM CM CM CM CM CM M M «CflW

P K -^^^i^^xxxxxxxx ω en menen

Trt n n ocpcpocpoo ad ao :c0 ao ao ίο “ " a0 ao ao ao ao

_ _ ro ro Hid H Id H H H

... ro ___ .—. 5 £ rH C X C >1 >1 >1 co co Ίμ cm W (1, O, o, oh XX -4 „ ι m ι en · I l

.s p IP CP X X CM CM X x x ~r~ ~T~ —τ' -r- Ρ Ό O 10 O O O

“ ~ XX CN CO CN (0 CN CN CN

-- -q CPO OO IUHIUHIII

• - A — -r XXWX® rj i-3 <0 «-3 n) »-3 H 1-3

Ph ^T* XXXXU.U.U.U.U-U-U.U.U. X nd X cd X x X

^ 01 > 0> > (U O) 0)

... •dPOPOOO

tH <ÖAi eo Ai (0 flj (0 * ^-p-^n-u-u-u.u.u.u.u.u.u.. ω H a O, a . a) -h o* -h eo a> a> g WH en h ui tn en

Jnii ro^initi—ouuiipc-iNto^m WC r-r- e— Ht— e^-r-TOOOooex)oooo ^ ~ ^ ^ 22 8 5 378

Farmakologia

Uusien androstaani-17B-karboksyylihappoestereiden af- finiteetti qlukokortikoidi-reseptoriin_

Kaikki esillä olevan keksinnön mukaiset steroidit ovat fysiologisesti aktiivisia yhdisteitä. Uusien androstaani-17B-karboksyylihappoestereiden affiniteettia glukokortikoidi-reseptoriin on käytetty mallina tulehduksia estävän tehon määrittämiseksi. Niiden reseptoriaffiniteetteja on verrattu budesonidi-([22R,S]-16a,17a-butylideenidioksi-llö,21-di-hyd-roksipregna-1,4-dieeni-3,20-dioniin), joka on hyvin aktiivinen glukokortikoidi, jolla suhde paikallisten ja systeemisten vaikutusten välillä on edullinen (Thalen and Brattsand, Arzneim.-Forsch. 29, 1687-90 (1979)).

Yhden-kahden kuukauden ikäisiä urospuolisia Spraque-Dawley-rottia käytettiin läpi koko tutkimuksen. Kateenkorva poistettiin ja asetettiin jääkylmään suolaliuokseen. Kudos homogenoitiin Potter Elvehjem-homogenoijassa 10 ml:ssa puskuria, joka sisälsi 20 mM Tris, pH 7,4, 10 % (paino/tilavuus) glyserolia, 1 mM EDTA, 20 mM NaMo04, 10 mM merkaptoetanolia. Homogenaatti sentrifugoitiin 15 min, 20 000 x g. Eriä 20 000 x g supernatantista (230 μΐ) inkuboitiin noin 24 h lämpötilassa 0eC 100 pl:lla fenyylimetyylisulfonyylifluoridia (es-teraasi-inhibiittori, loppupitoisuus 0,5 mM), 20 pl:lla merkitsemätöntä kompetiittoria ja 50 pl:lla 3H-merkittyä deksa-metasonia (loppupitoisuus 3 nM). Sidottu ja vapaa steroidi erotettiin inkuboimalla seosta 60 pl:lla 2,5 % (paino/tilavuus) puuhiiltä ja 0,25 %:sella (paino/tilavuus) dekstraani-T70-suspensiolla 20 mM:ssä Tris, pH 7,4, 1 mM EDTA, ja 20 mM NaMo04 10 min ajan lämpötilassa 0°C. Sentrifugoitiin 10 min, 500 x g, minkä jälkeen 230 μΐ supernatanttia laskettiin 10 ml:ssa Insta-Gel'iä Packard-tuikespektrofoto-metrillä. Supernatantit inkuboitiin a) pelkällä [3H]-deksa-metasonilla, b) [3H]-deksametasonilla ynnä 1000-kertaisella ylimäärällä merkitsemätöntä deksametasonia ja c) [3H]-deksametasonilla ynnä 0,03-300-kertaisella "ylimäärällä" kompetiittoria. Ei-spesifinen sitominen määritettiin kun 1000-kertainen ylimäärä merkitsemätöntä deksametasonia lisättiin [3H]-merkittyyn deksametasoniin.

23a 8 5 3 7 8

Kun reseptoriin sidottu radioaktiivisuus, kun läsnä oli kompe-tiittoria, jaetaan reseptoriin sidotulla radioaktiivisuudella, kun läsnä ei ollut kompetiittoria, ja kerrotaan 100:11a, saadaan merkityn deksametasonin spesifinen sitomisaste. Kompetiit-torin jokaiselle pitoisuudelle piirretään spesifisesti sidotun radioaktiivisuuden osuuden käyrä kompetiittorin pitoisuuden login funktiona. Käyrät verrataan 50-%:11a spesifisellä sito-mistasolla ja suhteutetaan budesonidiin, jonka suhteelliseksi sitomisaffiniteetiksi (RBA) on annettu arvo 1.

Taulukko 4. Yhteenveto muutamien tutkittujen yhdisteiden suhteellisesta sitomisaffiniteetista glukokortikoidireseptoriin

Yhdiste esimerkistä n:o RBA

Budesonidi 1 1 epimeeri B 0,30 2 epimeeri B 0,17 24 0,50 35 0,04 52 0,20 61 0,05 64 0,04 66 0,44 81 1,03 84 0,63

Yhdiste A 0,001

Yhdisteellä A, joka on tunnettu FI-patenttijulkaisusta 71748 (s. 77, yhdiste 7A-26), on kaava

O

II

o-ch2oc-ch3 c=o HO -^/^l/^-OCOCzHs ΓΤΤ ' o

Kuten koetuloksista ilmenee, keksinnön mukaiset yhdisteet ovat 40-1000 kertaa aktiivisempia kuin tämä FI-patenttijulkaisusta 71748 tunnettu yhdiste.

23b 3 5 378

Kuten koetuloksista ilmenee, keksinnön mukaiset yhdisteet ovat 40-1000 kertaa aktiivisempia kuin tämä FI-patenttijulkaisusta 71748 tunnettu yhdiste.

24 8 5 378

Den föreliggande uppfinningen hänför sig tili ett förfarande för framställning av nya, farmakologiskt aktiva 16,17-acetal-substituerade androstan-17B-karboxylsyraestrar. Dessa förenin-gar kan användas för behandling av inflammatoriska, allergiska, musko-skelettala eller dermatologiska tillständ.

Uppfinningens ändamäl är att tillhandahälla en glukokortikoste-roid som besitter hög anti-inflammatorisk effekt pä applika-tionsstället och läg glukokortikoid systemeffekt.

Det är känt att vissa glukokortikosteroider (GCS) kan användas för lokal behandling av inflammatoriska, allergiska eller im-munologiska sjukdomstillständ i andningsvägarna (t.ex. astma, rinit), pä hud (eksem, psoriasis) eller i tarmen (ulcerös co-lit, Morbus Crohn). Med sädan lokal glukokortikoid terapi er-hälles kliniska fördelar gentemot vanlig terapi (med t.ex. glu-kokortikoida tabletter), speciellt med avseende pä minskning av oönskade glukokortikoida effekter utanför det sjuka omrädet.

För att uppnä sädana kliniska fördelar, vid t.ex. allvarliga sjukdomstillständ i andningsvägarna, mäste GCS ha en lämplig farmakologisk profil. De bör ha en hög inre glukokortikoid ak-tivitet pä applikationsstället men samtidigt en snabb inaktive-ring, t.ex. genom hydrolys i mälorganet eller efter upptagning i den vanliga cirkulationen.

Eftersom bindning av GCS tili den glukokortikoida receptorn är en förutsättning för att de anti-inflammatoriska och allergiska effekterna skall uppstä, kan förmägan av steroiderna att bindas till deras receptor (receptorer) användas som en lämplig metod för att bestämma den biologiska aktiviteten av GCS. Ett direkt samband mellan affiniteten hos GCS tili receptorn och de in-flammatoriska effekterna har visats med användning av öronödem-test hos rätta. [Correlation between chemical structure, receptor binding, and biological activity of some novel, highly active, 16a,17a-acetalsubstitutet glucocorticoids. E. Dahlberg, A. Thalön, R. Brattsand, J-Ä Gustafsson, U. Johansson, K. Roempke and T. Saartok, Mol. Pharmacol. .25 (1984), 70.] li 25 8 5 378

Den föreliggande uppfinningen grundar sig pä observationen att vissa 3-oxo-androsta-l,4-dien-17H-karboxylsyraestrar besitter hög bindningsaffinitet tili glukokortikosteroid-receptorn. Föreningarna enligt uppfinningen kan användas för behandling och kontroll av inflammatoriska tillständ.

Föreningarna frainställda enligt uppfinningen har formeln or3

C = O

HO - -θ'-CR R

-1 I

*2 där 1,2-positionen är mättad eller är en dubbelbindning,

Xi är väte, fluor, klor eller brom,

Xz är väte, fluor, klor eller brom,

Ri är väte eller en rak eller grenad kolvätekedja med 1-4 kol-atomer,

Rz är väte eller en rak eller grenad kolvätekedja med 1-10 kol-atomer, och R3 är 0 0

1 I

CR/,R50CR6 eller CR^RjOCOR^ R* är väte, en rak eller grenad kolvätekedja med 1-10 kolatomer eller fenyl, R5 är väte eller metyl, och R6 är väte, en rak eller grenad, mättad eller omättad kolvätekedja med 1-10 kolatomer, en alkylgrupp substituerad med &t-minstone en halogenatom, ett heterocykliskt ringsystem innehäl-lande 3-10 atomer i ringsystemet eller där heteroatomerna ut- 26 8 5 3 7 8 görs av syre, -(CH2)nCH(CH2)n (m=0,l/2; n=2,3,4,5,6) eller en osubstituerad fenyl- eller bensylgrupp, förutsatt att när R2 är väte, sä är Rj en rak eller grenad kolvätekedja med 1-4 kolato-mer.

De enskilda stereoisomera komponenterna som ingär i en blandning av en steroid med formeln (I) kan äskädliggöras pä

följande sätt: 0P

I 3 C = 0 σ,3^- - - °"r'"R2 R1 I i (II; epimer S)

IJsV

0 T

X

1 OR

C = 0 C1LI Λ / R1 HO >k---°V 1 CIL· J_ I . (III; epimer R) 0 i ·': X2

De enskilda stereoisomera komponenterna som är närvarande i en blandning av steroid-17fl-karboxylsyraestrar har formlerna 0 0

1 I

StCOCR«R5OCR6 (IV) eller 0 0

I I

StCOR4R5OCOR6 (V) där St är steroiddelen, kan äskädliggöras pä följande sätt I; 27 85378

O R40 o R^O

II I II e I II

StCOCOCRfi StCOCOCRe

I I

Rs r5

VI VII

och 0 R4O o r4o

1 I » Il I II

StCOCOCRg StCOCOCRe

I I

Rs Rs

VIII IX

I diastereoisomerer säsom II, III, VI, VII, VIII och IX skiljer sig konfigurationen enbart vid en av flera asymmetriska kolatomer. Sädana diastereoisomerer benämnes epimerer.

Alkyl i definitionerna ovan är en rak eller grenad kolvätekedja med 1-5 kolatomer, företrädesvis 1-4 kolatomer.

Alkoxi i definitionen ovan är en grupp -O-alkyl, där alkylres-ten har den ovan angivna definitionen.

Halogen i definitionen ovan är företrädesvis en klor-, brom-eller fluoratom.

Ett föredraget heterocykliskt ringsystem är furyl.

Särskilda föreningar enligt uppfinningen som föredrages är: 1'-etoxikarbonyloxietyl-6a,9a-difluoro-llB-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis(oxi)]-androsta-l,4-dien-3-on-17ö-karboxy-lat, epimerblandningen A + B och epimer B, 1'-isopropoxikarbonyloxietyl-9a-fluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis(oxi)]-androsta-1,4-dien-3-on-17B-kar-boxylat, epimer B, 28 85378 1'-propoxikarbonyloxietyl-6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a, 17a-[(1-metyletyliden)bis(oxi)]-androsta-1,4-dien-3-on-17β-karboxylat, epimer B, 1'-isopropoxikarbonyloxietyl-6a,9a-difluoro-1lB-hydroxi-16a, 17a-[(1-metyletyliden)bis(oxi)]-androsta-1,4-dien-3-on-17fi-karboxylat, epimerblandning A+ B och epimer B, 1'-acetoxietyl-(20R)-9a-fluoro-llB-hydroxi-16a,17a-propylmety-lendioxiandrosta-1,4-dien-3-on-17fi-karboxylat, epimer B, 1'-etoxikarbonyloxietyl-(22R)-9a-fluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-propylmetylendioxiandrosta-1,4-dien-3-on-17fi-karboxylat, epimer B, 1'-isopropoxikarbonyloxietyl-(20R)-9a-fluoro-llfl-hydroxi-16a, 17a-propylmetylendioxiandrosta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylat, epimer B, 1'-etoxikarbonyloxietyl-(20R)-6a,9a-difluoro-110-hydroxi-16a, 17a-propylmetylendioxiandrosta-l,4-dien-3-on-17fl-karboxylat, epimerblandning A + B och epimer B.

Föreningarna med formeln I kan enligt uppfinningen framställas genom att en förening med formeln

OH

C=0 CH3j_--— 0-^CRiRo

__-q/ 1 L

^ I—I

0^Ax « X2 I! 29 8 5 378

OH

" -0.c^2 η--**R] CH3IJ_ f X?

2 OH

C=0 HO /\CH3JL---r^R] CHj I I Γ 2 X, 0 x2 eller ett salt därav, omsättes med en förening med formeln 0 R/i 0

Il IB

Z-C-0-C-R6 eller Z-C-0-C-0R6

I I

r5 r5 i vilka formler Xlf X2/ Rlf R2, R«, R5/ Re och '=^=· har ovan angiv-na betydelser och Z är en halogenatom eller en funktionellt ekvivalent grupp, varefter, om den sälunda erh&llna estern är en epimerblandning och en ren epimer önskas, spaltas blandnin-gen i stereoisomera komponenter.

Moder-17fl-karboxylsyrorna till föreningarna med formlerna I, II och III (R3=H) kan förestras pä känt sätt sä att 17fl-karboxylat-estrar erhälles. Sä kan t.ex. 17fl-karboxylsyran omsättas med en lämplig alkohol och en karbodiimid, t.ex. dicyklohecylkarbodii-mid, i ett lampiigt lösningsmedel säsom dietyleter, tetrahydro-furan, metylenklorid eller pyridin företrädesvis vid temperatu-rer mellan 25-100°C. Alternativt kan ett sait av 17fi-karboxyl-syran med en alkalimetall, t.ex. litium, natrium eller kalium, ett sait av en kvater är ammoniumförening, säsom ett sait av 30 85378 trietyl- eller tributylamin, eller tetrabutylammonium, omsättas med ett lämpligt alkyleringsmedel, t.ex. en acyloxialkylhalo-genid eller haloalkylalkylkarbonat, företrädesvis i ett polärt lösningsmedel säsom aceton, metyletylketon eller dimety1forma-mid, dimetylsulfoxid, metylenklorid eller kloroform, lämpligen vid en temperatur i omrädet 25-100°C. Reaktionen kan ocksä ut-föras i närvaro av en kroneter.

De bildade räa steroidesterderivaten renas efter isolering me-delst kromatografi pä ett lämpligt material, t.ex. tvärbundna dextrangeler av Sephadex® LH-typ med lampiiga lösningsmedel som elueringsmedel, t.ex. halogenkoIvaten, etrar, estrar säsom etylacetat eller acetonitril.

De individuella epimererna, som bildas vid acetaliseringen av 16a,17a-hydroxigrupperna eller vid förestringen av 17B-karbo-xylsyrorna, besitter praktiskt taget identiska löslighetsegen-skaper. De har därför visat sig vara omöjliga att separera och isolera frän epimerblandningen medelst konventionella metoder för separation av stereoisomerer, t.ex. fraktionerad kristalla-tion. För att erhälla de individuella epimererna separat under-kastas de stereoisomera blandningarna enligt formlerna I, IV och V kolonnkromatografering, därvid separerande epimererna II, III, VI, VII, VIII och IX pä grund av olika vandringshastighet pä den stationära fasen. Kromatograferingen kan t.ex. utföras pä tvärbundna dextrangeler av typ Sephadex® LH-20 (framställd av Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sverige) är en pärl-formad hydroxipropylerad dextrangel i vilken dextrankedjorna är tvärbundna tili ett tredimensionellt polysackarid-nätverk. Som elueringsmedel har framgängsrikt använts halogenerade kolväten, t.ex. kloroform eller en blandning av heptan, kloroform och etanol i förhällandet 0-50:50-100:10-1, företrädesvis i förhäl-landet 20:20:1.

Föreningarna med formeln I kan användas för olika slag av lokal administration beroende pä inflammationens säte, t.ex. perku-tant, parenteralt eller för lokal administration i andningsor-ganen medelst inhalation. Ett viktigt mäl med konstruktionen av beredningen är att uppnä optimal biotillgänglighet hos den ak- li 3i 85378 tiva steroidkomponenten. För perkutana beredningar uppnäs detta lämpligast om steroiden är lost med hög termodynamisk aktivitet i bäraren. Detta uppnäs genom att använda ett lämpligt system av lösningsmedel bestäende av lämpliga glykoler, säsom propy-lenglykol eller 1,3-butandiol antingen som sädana eller i kom-bination med vatten.

Det är ocksä möjligt att lösa steroiden antingen helt eller delvis i en lipofil fas med hjälp av ett ytaktivt medel som löslighetsförmedlare. Den perkutana blandningen kan vara en salva, en oija-i-vatten-kräm, en vatten-i-olja-kräm eller en lösning. I emulsionsvehiklarna kan systemet med den lösta akti-va komponenten utgöra säväl den disperse som den kontinuerliga fasen. Steroiden kan även vara närvarande i ovan nämnda beredningar som mikroniserad, fast substans.

Tryck-aerosoler för steroider är avsedda för oral eller nasal inhalation. Aerosolsystemet är sä konstruerat att varje uppmätt dos innehäller 10-1000 μg, företrädesvis 20-250 μg av den akti-va steroiden. De mest aktiva steroiderna administreras i det lägre dosomrädet. Den mikroniserade steroiden bestär av par-tiklar huvudsakligen mindre än 5 μπι, som är suspenderade i en drivgasblandning med hjälp av ett dispergeringsmedel, säsom sorbitantrioleat, oleinsyra, lecitin eller natriumsalt av diok-tylsulfobärnstenssyra.

Utförinqsexempel

Uppfinningen kommer nu att illustreras genom följande icke be-gränsande exempel. I exempeln användes en flödeshastighet av 2,5 ml/cm2.h'1 vid de preparativa kromatograferingarna. Molekyl-vikterna är i samtliga exempel bestämda med elektronimpact mass-spektrometri och smältpunkterna pä ett Leitz Wetzlar-smältpunktsmikroskop. Samtliga HPLC-analyser (HPLC = High Performance Liquid Chromatography) utfördes om inte annat angi-vits, pä en Waters μBondapak Ci8 kolonn (300x3,9 mm inre diameter) med flödeshastigheten 1,0 ml/min och med etanol/vatten i förhällanden varierande raellan 50:50 och 60:40 som rörlig fas.

32 85378

Exexnpel 1 1'-etoxikarbonyloxietyl-6a,9a-difluoro-llB-hydroxi-16a,17a-[(1-metyletyliden)bi s(oxi)]androsta-1,4-dien-3-on-17 β-karboxylat.

A. 6a,9a-difluoro-llB-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis-(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylsyra (600 mg) och ka-liumvätekarbonat (684 mg) löstes i 45 ml dimetylformamid.

1-brometyletylkarbonat (2 ml) tillsattes och reaktionsblandnin-gen omrördes vid rumstemperatur over natten. Vatten (200 ml) tillsattes och blandningen extraherades med metylenklorid. De sammanslagna extrakten tvättades med 5 % vattenhaltig natrium-vätekarbonat och vatten, och äterstoden renades genom kromato-grafering pä en Spehadex LH-20 kolonn (72x6,3 cm) med använd-ning av kloroform som mobil fas. Fraktioner 1515-2250 ml upp-samlades och evaporerades varvid erhölls 480 mg l'-etoxikar-bonyloxietyl-6a,9a-difluoro-llB-hydroxi-16a,17a-[(1-metyletyliden) bis (oxi )]androsta-1,4-dien-3-on-17B-karboxylat. Renheten, bestämd medelst HPLC, var 98,1 % och förhällandet epimer A/B, 48/52. Smps 218-227°C.

[a]25 = +63,2° (c=0,214; CH2C12). Molekylvikten var 554.

D

1'-etoxikarbonyloxietyl-6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(1-metyletyliden)bis(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxy-lat (480 mg) kromatograferades pä en Sephadex LH-20 kolonn (76x6,3 cm) med användning av heptan:kloroform:etanol, 20:20:1, som mobil fas. Fraktionen 2325-2715 ml uppsamlades, evaporerades och äterstoden löstes i metylenklorid och fälldes med petroleumeter varvid erhölls 200 mg av en förening (A) med renheten 97,3 % (bestämd medelst HPLC-analys). Smp: 246-250°C.

[a]25 = +100,5° (c=0,214; CH2C12)· Molekylvikten var 554.

D

Fraktionen 4140-5100 ml gav 250 mg en förening (B) med renheten 99,0 %. Smp. 250-255°C. [a]25 = +28,5° (c=0,246; CH2C12).

D

Molekylvikten var 554. Metin-signalen frän estergruppen är shiftad 0,13 ppm nerät i fältet i ^-NMR-spektrat för föreningen B jämfört med A, medan äterstoden av spektrat är i det närmaste identiskt. Elektronimpactmasspektra av A och B är identiska med li 33 ö 5 3 7 8 undantag för intensiteterna hos masstopparna. Dessa spektrosko-piska skillnader och likheter anger att A och B är epimerer med avseende pä det chirala centret i estergruppen.

B. 6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis-(oxi) ]androsta-l ,4-dien-3-on-17J3-karboxylsyra (200 mg) löstes i 25 ml dimetylformamid. 1-kloretyletylkarbonat (100 mg), kalium-vätekarbonat (70 mg) och 18-kron-6-eter tillsattes. Reaktions-blandningen omrördes vid 80°C i 3 timmar, avkyldes, extrahera-des med metylenklorid efter tillsatts av 150 ml vatten, torka-des och indunstades. Den räa produkten renades pä samma sätt som i metod A, varvid erhölls 207 mg 1'-etoxikarbonyletyl- 6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis(oxi)]-androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylat. Renheten (HPLC) var 98,4 % och förhällandet epimer A/B var 54/46.

C. 6a,9a-difluoro-llB-hydroxi-16a,17a-((l-metyliden)bis(oxi)]-androsta-1,4-dien-3-on-17B-karboxylsyra (200 mg) och 1,5-diaza-bicyklo[5.4.0]undeken-5 (140 mg) suspenderades i 25 ml bensen och uppvärmdes tili refluxpunkt. En lösning av 1-brometyletyl-karbonat (175 mg) i 5 ml bensen tillsattes och blandningen re-fluxerades i 2 1/2 timme. Efter avkylning tillsattes 50 ml metylenklorid och lösningen tvättades med vatten, torkades och indunstades. Den räa produkten renades pä samma sätt som i metod A, varvid erhölls 207 mg l'-etylkarbonyloxietyl-6a,9a-dif-luoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis(oxi)]-androsta- 1,4-dien-3-on-17B-karboxylat. Renheten (HPLC) var 96,4 % och förhällandet epimer A/B var 44/56.

D. Tili en lösning av 6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylsyra (100 mg) i 25 ml aceton sattes 175 mg α-bromdietylkarbonat och 45 mg vattenfri kaliumkarbonat. Blandningen upphettades i 6 timmar under reflux. Den kylda reaktionsblandningen hälldes i 150 ml vatten och extraherades med metylenklorid. Extraktet tvättades med vatten, torkades över natriumsulfat och evapore-rades varvid erhölls 65 mg av fast l'-etoxikarbonyloxietyl-6α,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17α-[(l-metyletyliden)bis- 34 85378 (oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylat. Renheten, bestämd medelst HPLC, var 97,6 % och förhällandet epimer A/B, 49/51.

E. · 6a, 9a-dif luoro-llfi-hydroxi-16a, 17a-[ (1-metyletyliden)bis-(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylsyra (500 mg) och tet-rabutylammoniumvätesulfat (577 mg) sattes till 3 ml 1M natrium-hydroxid. En lösning av 435 mg 1-brometyletylkarbonat i 50 ml metylenklorid tillsattes. Blandningen refluxerades under omrö-ring over natten. De tvä skikten separerades. Det organiska skiktet tvättades 2 x 10 ml vatten, torkades och indunstades.

Den räa produkten renades kromatografiskt pä en Sephadex LH-20 kolonn (72 x 6,3 cm) med användning av kloroform som mobil fas. Fraktionen 1545-1950 ml uppsamlades och indunstades och äter-stoden godfälldes med metylenklorid-petroleumeter, varvid er-hölls 341 mg 1'-etoxikarbonyloxietyl-6a,9a-difluoro-llB-hydr-oxi-16a,17a-[(1-metyletyliden) bis(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylat. Renheten, bestämd medelst HPLC, var 99,2 % och förhällandet epimer A/B var 56/44.

F. 6a,9a-difluoro-llB-hydroxi-16a,17a-[(1-metyletyliden)bis-(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17fi-karboxylsyra (200 mg) och trikaprylmetylammoniumklorid (200 mg) sattes till 5 ml mättad vattenlösning av NaHC03. En lösning av 100 mg 1-brometyletylkarbonat i 10 ml metylenklorid tillsattes. Blandningen omrördes vid 45°C i 20 timmar, utspäddes med 10 ml metylenklorid och isolerades och renades pä sanana sätt som i metod E, varvid er-hölls 254 mg 1'-etoxikarbonyloxietyl-6a,9a-difluoro-llfl-hydr-oxi-16a,17a-[(1-metyletyliden)bis(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17B-karboxylat. Renheten (HPLC) var 97,4 % och förhällandet epimer A/B var 60/40.

G. 6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(l-metyletyliden)bis-(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17fl-karboxylsyra (200 mg), 1-brometyletylkarbonat (135 mg) och trietylamin (275 mg) löstes i 20 ml dimetylformamid. Blandningen omrördes vid 80°C i 3 timmar, utspäddes med 200 ml metylenklorid, tvättades med vatten, torkades och indunstades. Den räa produkten renades pä samma sätt som i metod A, varvid erhölls 69 mg 1'-etoxikarbonylo-xietyl-6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(1-metyletyliden)bis- li 35 85378 (oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17fl-karboxylat. Renheten (HPLC) var 97,8 % och förhällandet epimer A/B var 48/52.

Exempel 2 1'-acetoxietyl-6a,9a-difluoro-llfi-hydroxi-16a,17a-[(1-metylety-liden)bis(oxi)]androsta-l,4-dien-3-on-17fi-karboxylat 6a,9a-difluoro-llB-hydroxi-16a,17a-[(1-metyletyliden)bis(oxi)]-androsta-1,4-dien-3-on-17fi-karboxylsyra (500 mg) och kaliumvä-tekarbonat (575 mg) löstes i 40 ml dimetylformamid. 1-kloretyl-acetat (1 ml) tillsattes och reaktionsblandningen omrördes vid rumstemperatur i 40 timmar. Reaktionsblandningen halides i 50 ml vatten och extraherades med metylenklorid. Extraktet tvätta-des med vattenhaltig natriumvätekarbonat och vatten, torkades och evaporerades. Äterstoden kromatograferades pä en Spehadex LH-20 kolonn (72x6,3 cm) med användning av kloroform som mobil fas. Fraktionerna 1755-2050 och 2026-2325 ml uppsamlades och evaporerades.

Den fasta produkten frän fraktionen 1755-2025 ml renades ytter-ligare genom kromatografering pä en Spehadex LH-20 kolonn (76x6,3 cm inre diameter) med användning av en blandning av heptan, kloroform och etanol, 20:20:1, som mobil fas. Fraktionen 2505-2880 ml uppsamlades och evaporerades. Äterstoden löstes i metylenklorid och fälldes med petroleumeter varvid er-hölls 167 mg av en fast produkt (A). Renheten, bestämd medelst HPLC, var 99,1 %. Smp: 238-259°C.

[a]25 = +94° (c=0,192? CH2C12) . Molekylvikten var 524.

D

Den fasta produkten frän fraktionen 2026-2325 ml ovan renades ytterligare medelst kromatografering p& saroina sätt ovan. Fraktionen 5100-5670 ml uppsamlades och evaporerades. Äterstoden löstes i metylenklorid och fälldes med petroleumeter varvid erhölls 165 mg av fast produkt (B). Renheten, bestämd medelst HPLC, var 99,4 %. Smp: 261-265°C.

[a]25 = +34° (c=0,262; CH2C12) . Molekylvikten var 524.

D

36 85378 ^-NMR-spektra av A och B är nastan identiska med undantag för metinkvartetten frän estergruppen som är shifted 0,16 ppm nerät i fältet hos förening B jämfört A. Fragmentationsmönstren för A och B i elektronimpact-masspektra är identiska med undantag för intensiteterna hos masstopparna. Dessa spektroskopiska egenska-per anger att A och B är epimerer med avseende pä det chirala centret i estergruppen.

Exempel 3-85 Föreningarna som anges i följande tabeller 1-3 framställdes, isolerades och renades pä sätt som är analogt till det som be-skrivits i exemplen 1 och 2.

li 37 8 5 378 £ E O m o m m m m '"o ° —- wr^couomcooo% ‘Z β^ιηιηηΜιη» aP aP £ E 7..77777

55 SäSSSSSS

V Ϊ5 SS!3;SS;S

/\ o o c l|“ £ 0=K I Jr, §005«-COCOvDvo

Qp.2_Qp, I_ .Jf £ inuommmininin O 1 / Q. -r- S_K ω - .

rov >> c g \ I u n '‘i Λ, ί Λ, «

/ \ n oi OO^J-*7GOCOlOlO

^S^mroroioiovoio ininmininmmio n r-> in ^ c\i ~r~ -T- N O CM oooooooo o (j 'T cri(Ticsjoroinr--o \ / ® ® _Γ^ r^-coo^-r^r^coin V U 5 + +- + + + + + ®V S ä *5 g o r.

I* <r <_> Τ3·σ ΌΤ3 Γ'Ι^'

lO o --NN

cc | | t. 1 · it

0=0 I QJ o. C\J«— ffi CO N CO

ero m e E *a-c\j e n r- ®

CC—o- · CC | J- oO CMC\J N M (M N

S / o.

s—Y “ S;

x \ I

0-4 J CCOCCDetCQcCro

' \ UJ

ro ro XX _ m o O v£) J? 00 \ / g _p7o /°\ To x^^PaPx^oPaPH ϋ

O o “ OOOOOOOO

a° 1 I u,

vri I 3ZXXXXXXX

CCr^or-QO, }- O I /

3_V CM CM

ro\ —L. -V.

x \ co ro G \ _ ·— X X .— _ / \ κ — cc ro ro / \ «υΟίΧΧφφχχ V> >------, **-S-000<4-00 H-v-5, ~ ' x\ / ^ XXXXXXU.U.

O 0—7——/ z x 7\ •j; A/ ^ XXU.U.U.IJ.U.U.

"ίο / I— \c o 7 Q.

E

J( u m •er in m n co w o UJ e *“ 38 85378 c E ^ " N w “b^ ** 'b'b^b'b

O '— NNMOOsmoomoiDuioetioSS

£ S§^S:SS5$i^»§Sg5 7 t '*·,#·**ίΙ·ΙΙΙ||ι· >, ιηουοίοιοοιοοίοοοιοοίΟιοόΐοΑ « > ^^^^^^ΝΙΛΓΟ«}·νθη«·ΛΓνΙ- ρνίΙ_ c 0) c ξ SS2!?!i0020®®®®OOOoo 3 COCOCOtOtDlOlO^J-^-tOCDcDtDvDOOti-ii +£ ^4- ιηιηϋΐΐΛΐΛΐΛΐηιηΐΛΐίΐΐίΐιηιηίπιηιη,ονο >

">i C

φϊίο '^'^'^'^'^'O'OvovovoKOvovovor^r^r^r^ m !Sl£St'i00°0®roooDe0iölDoo O a> OOOOrOU>^Otntn^^vOsO^D^O^D<^e^Zii!· Ä.-Q ιηιηιηΐΛΐοι/)ΐΛΐηιοΐΤ)ιΤ)ΐΛΐηΐΛιη|/)^^ ir> cm NON »- °00°000000 00 000000 *"3* * <-> ^OD^COO^COCVJ^vOCOOirtfinQftn O o cnj a^^-voo^rooiDOfOoc^mcriro^fOooro ϋ o + + + + +7+7+7 + + + + + + + + f\ o o- cm r»·. nmNnr-oooifiNcos»-n o n »o <i co uiro^nroMNcvj^j-cvjoipjr- r~i ^ ^ CD ^ O O O li) ID tj N tO O C\J to rn r·__ >— E cvitoncooocOfOfOcjfNjcNjo·— ’Tcvco — o

lO CnJ CNJ r— r— CNJ CM CNJ CNJ CNJ CNJ CNJ CNJ <NJ CM r— CNJ CNJ

i- <u ε co JT 4ffi I <β<Ο<0!<Β) + <03<β<|0 LU <

CM CNJ

co co

CNJ CNJ X X

'— -— (J (J

CO CO CO CO CN1 CNJ

cnjcnj x x cnj cnj cnj x a: a: χ CO CO ~ " ' U L> — ·— ·—' Q (j Μ n --- — CO CO CNJ CNJ CO CO ΓΟ CNJ CNJ ·— —~

Ό CO CO X X — -—- X T I I I X T

O 7Γ u u ϋ id mm _T° »-> tj O C_> t_> <_> <_} . . P O o __O U w CO CO X X — — — -__— CM pv» c c CO»— — xxxxc_>0 XXXxx T -r VO Ο) ΦΧΟΟΟΟΟΟ'-'-^ΟΟΟΟΟΟΟ X +-«+<->οοοοοοοοοοοοοοο co lO x cc ^^<->xxxxxxx:rx:rxxxxx *+ x° x° x° ι” x° x° x° i*1 χ° x” x° x° χ° af° x° χ° x° i° °C οοοοοοοοοοοοοοοώοο

«Λ CNJ

^ ^ ίΐ·ί.ϋ.111ί|ΐ·ί.ϋ.ίίίί.1ΐ-1ΐ·1ι-ΐι li ii t.

o ____ «*- . '-‘-'-‘-'-i-Ij-I-l.XXU.U-U.Ij.U.Ij.Ll.U.U.Ll.Ll.

Φ <v Ε ίΐ£ί£2Ξ!ιη^ΟΓ^οοσ*0,~<ΝΓ0^'ΐπνοΓ'θθ

h~ 0) ^ r- CvJ <N CM <N<NCNCN<NCM

X u

Ul c 39 85378 *λ«— in ro cm »—«—»— cm vo c E O moo «o O'— CM Ο Ο Ο ΓΟ LO o ΙΛ l*- »— O ·— O N VO 10 4-> .— ro CO >— CM ro *r

Cc I I I I I I I το >L o m o m m o m — jo 4J«— σι m m o «· n* o -i-o

0)0 CM CM lO VO 00 CM O' -O E

cc > ·— — ro o

E E

E S

S S = £ (M CM N 1C 1C ΙΟ 00 "- ·· 5 oo oo co σι σ σ vo -—o in in in in in in m ^ cm

ΐ CM O

ΙΓ CM

> o —

e CM

_x _x ιο ιο ns r»~ γ-·» rv io "—' ·~ ιλ CD :c 2“**® t_ cm cm cm ιο ιο vo co 7 ί 'Ί i»- ! o<D co co αο σ σ σ> ιο 5; _q m in m in m in m

f 1 — i— S

a» e ·— .r- o I <0 JO JO ε e -M o o

-Γ- — Ό Q. E E H

m CM ^ 2 r= „ ° CM O CM #— O O O 0 0 0 λΓιλΕ0 '-'•cj m o rv o co co x p S S ==

O O CM VO O CM VO CTl CM I ll ^F

— II X + - + + + + EOf=«=k υο + ΐ ° E E £ O O O O o *«- V. U- if. s.

CO m N vc vo cn ° ° ° ,2 o r~ rv <yt ro m oo o .x o o .x

0 I— I— I— MMM I

i i t i i 1 i i ^ ^ .. ^ CL O rv O 00 CO m ! E r— i cm o ^r cm i oo - - - CM CM CM j rawamcn CT) *r- CT) CM *r— o> F -5 c c «= E CO 00 cccc"c o + < co + «t co , -o :¾ -5 -O :£ °r < e > e e > ^ -Ό e :io :io e > «e > > io £ c c la Ό IB /0 Ό Φ 0)

D E -D -a E

(1) <l> 0) ro ro ro E*EEE”e

ro ro ro *E U ^ "e U

ro ro mx x x e> m o υ ro — — o o <_> eo vo ro ro ro — '— —- x ro cm m ro vo cc x x x o o o o ·> x ·> · x

O l_3 O l_> CM CM CM CM VO LO CM VO LO

~v — — X X X χ X " X χ vo <_> i_> o <_> o o i_> vor^mroi— cc OOOOOOO rv co CO rv n.

co e e e e e in X e e e e e OC XXXXXXCJ O o o o o 0 o o o o JC JC JC ^ o o e o o

CM CM CM CM CM

1 I I I |

3C X X X X

ro ro co ro ro co co —i —i i i »a- xxxxxxx

OC l_> <_> l_> O (_> V_> (_) X X X X X

..... οι οι ai ai ω „ -σ ό -σ -σ xj on , ιο <θ ιβ ιο ιο 4-> cm -e -e χ χ χ

s_ X U.U.U.U.U.U.U. O.Q.Q.Q.CL

ο <ν οι <υ α> οι m m οο οο οο

— CCCCC

χ U. u. Li. u. Lv. u. u. αι Qj αι <υ φ ·Ό ·Ι3 ΜΟ «.Ό ΜΟ cl Q- ο. α. α.

r“ r— >— ω QJ Q. --- -—- -— -— — .o Ε _ _ __ ·— cm ro rt νη ιο 5 S S ^ ΰ m ir m t— χι. cn ro ro ro ro ro ro UJ e 40 85378 c e in ο^ο^οΊο^ ^ '"In "In t\J O'— Λ«νθσΐΟΐΛΑ·Ν OCX ‘Π VDCNJ^rcOfOOCOLDr— \ J z: T ^ ·~ cm ^ * 5“Ε*|ι·*ιιι· O SI S°S!ilSPlfto0

At" J-VCOONtVlf-M

βίο fSJ — N «· N Π fg «ή- IO

OO oe> «.Jr m I * 00

0=0 I I Φ S

«•-ο—x 1 J--» eSy£SO®omcM©co O / uj -mo u">Ta-inmmir>tninm

o-\ JC

ro \ -r- 5-Λ—I > .

' ' 5 O ^ N N N r— VO l£> m , * w ^SoroinvnfOoco 12« 2; jd mo-mmLOinmunm r· •r *r-

.O -O

o o r- -. e e ID <\| ^ O <\i r— ο ο Ο Ο Ο ο ο ^ ε «* _ δ o UN “ N s S ^ S , ,

\ f jj5+ + + + + -*-+ EE

o‘ o o / \ M- s- / \ o o O O O «'JOlOOOlOOOinOr^ «« ll _ ο »Ν(Λ1ΛνΛΝ§5 ° °

1 < I *11111,7, *Z *Z

>P I , ! Q- CTjmtNj^a-OLDroooo o=5 1 φ Μ ϊ'0^'’^^'0 > > *3-0 , I E <0« cc.— o- - a: I )- -<- _ _ O . / o. u ? ?

O !/ LU <D C C

° “j\ I ......? ? ? II

5-)—l s * « < & & c c

<B <Q

σ ό Φ <u

E E

ro —» —*

X EE

_ _ o ro υ υ - ro ro ro roro ro ro .o "Τ' "" — ro a: χ χ ro m r\j α rorocvjxuoo ' *

rv -v O X X X X O CNJ C\J C\J Ό CV

? F o m o o o — χ a: χ x x K ooooooooo r·* oo O'o «a- ro ro ro cc ^ , | x xxxara: x o o o o o 0=0 'o o 1 o ro ro ro ro ro ro ro Ji a; j. X 3C 3Γ X T Tr t y o < / oooooooo oo O j ^rsi ro ro M m csj m n rjj

ro \ X X

X\ Λ1 _o x x x x x x a: a: -* o o —Λ—-4 qT0 xx / \ ^ OI <u / \ -o -o

V. >-----v 1 «J «O

>-^ xxxxxx^aru. f f / ,v,\ / mm o x \ / _ c.

1 ^ ~J Λ. x xxxu.xxiu.u- « «» / \\ «3 «3 °^ \\ / ·— a. a.

- y> / ® «l» v E 15^δ$0,·Ν(η ^ ,— .—.

jo '0 u ^ ^ uj e u u u / u CO r— r- M (\j ^ ce m © © o m o Olt>

O ^ J Φ O N fs CV O tT) © CV

·*- wmi-fOi-soip.^ <m ♦f '-'-MNMnvKM ro

£ e · » I I » I · I I I

ΦΡ OiDOlOlDOOOO ©

+3 Jo uoovn^a-oororoo S

α>_ so ro os <— os ro «- «o >— co

^ ^ ^ N r- (*) (M CV

C

O) CSJ,- I NNCOOOOOOOO® ry ry 300«T«3-CVJC\JC\JC\J^-^J· - 4Ji*- LOLOLOLOuntrisninun u-> \ / ·* A 2 .

00 _** _fj sosoixrxso^sovor-- r^.

soil 03 0):«ts .........

CC ' . — i- ΝΝΟβΟΟΟΟβ CO

O— Γ5 1 r. O O) OO^-VNNIVJM»»· ^ ^ om i p ς: jo ΐΛΐηιηιηιηΐΛΐΛίΛιΛ^ CC-.-y-QC I )- O / rs

8-Y

_r°\ m rv rh \_ cv O CV f— 000000000 o ^ 7 \ ^ · <-! rj- / \ B O CV SDCOsOvDOcOO»»·— rt - Il I + + υ u + + + o O O^OfxoSr— OOCOOSLfS cv o oscvvOLr>coco®<— ro.—

11)11111 I

Q. (MIOr-iniONlDCrt o E Os os so lo cv ro r·^ c— ro t—

00 <— f— M IV N N I- CV.— CV

CV f— Ιοί CX 0)

\ / E

1 i i 1 < i& < co < en /\ 00 VO I «t cc I I vo ro ro ro ro ©= o 1- cc ^3- O vo I I 0) o ro ro ro ro cc —p-cx L- E V x 3: 2: 1 O 1 / 'r vo <_> o o <_> rororororo ro

p / o. ex — — - — X X X X X 3C

O-\ l-l·) 0<_J<_>CJC_>000(_> C_> ^>4 uo °i χχχχχχχχχ®

CVJ CSJ

ro ro X 3: ^ ro ro ro ro o o

Q^1 of oi XXXX<->jj003CaC

\ / 00 V3 ro ro ro ro ro

/ \ X X X X X

OO <-> O o (_> t_> , cnj cv cv cv cv ^ I rO "" '

CV- 1 I X CSJ CV CV CV CSJ

0= 5 “ x<->xxxxxxxx ra- © Lrt I OCJOO© cc r^c_>—cc I- “ ^— o / ro © ©

S_V X XX

O O o X \ cv cv cv O—V r^ ' —- -— / \ — X CV cv cv

/ \ oi OXXXXXXXX3C

. \ /\ «. ~ ~~

f ro\ / CV

g 5 \ / ^ xxxxxxxxxx . "λ / ^ X X Lt- U- Lu Li_ Le Le U_ Ll.

ro V / _ oJ ° O- X E Lnvor-oocTvor-cNrota' 75 «i> '^'T^rv^LnminLDLn LT x t- r~ LU e 4 2 c ε "“o "V> 7d 7d c v 8 5378 ° "" 2ηί?ί2Ρ^ΡΟ^ΟθΛιΛΛΟΟ TT ? 5 ^ ^ ^ 0> N ΙΛ N VO N fs, O VD N CO »\ -% C rr 77777777^^^^^^^22^ ®i 5, OOOOOiDiDiDOOiDiDcDiDlDlOlOld t* r— ovoorsjiDo-csjooooTO-e-roiDomiii

I SnnSSiSSSSSSSSSSS

** 't- iD ID ID ID ID ID ID ID LO ID kD LD LO ID LD ID ID u"> •f* >

*>> C

·* :* 777777'1i'0vDv£>r^rvr,'r,»rx.r*»r^f>.

o 5 ®C0’3',yOOlD<O(Drr)tDLDr~r^.^D<Of~-l~~

Σ Λ LDlDLDlDLDLDlDtDlDlDlDLDLDlDlDlDlDlD

ID -r- —

DJ O tV

7?^·— ooooooooooo o o O o o o B · o IJ'iP^i'S^iONnOlCNNNWnr- ° x~ 7777777727:=7772727 , x _ o» o ONM^n^^OCVJr-cO^NCO^ir)p-iTi

° TCOiilCSlDr-Mm^u,,— UI Λ M f- N S

a liiti......I I i i i . .

ID JT' ^O^'OO^VOOOOlDCTir— ID LO DJ <— LO Pv.

i~ Q)

ε CD CO

'S. «XB3I I I I I l++*ieO<CD«CCO«tCD

UJ ** «*

I „_ _ _ DJ N N

ro ro to ro — to ro — — ro to -iP Τ,Τ,ΤλΤ, PO PO O PO— — PO PO— —

Sf ro ro ro PO X x x x x x po po x x ro to

O ^XIIIUUUUUOIXUUTT

ΐο xf0IMH 2 2 2 ~~ ~ o 2 2 5 5 cc °°^^^^^}Jooo«joo£5oo

OOOOOOOOOOOOOOOO

ID

α xxxxxxxxxxxxxxxxxx —. _f> popopopopopopopopo “ qjqjxxxxxx5555o5£555 xM,n -,Ρ ro po ro PO PO ro PO ro PO ro 5 5 5 555 5 5 5 £555

jsj ^ ^ ^ N CVJ CSJ CSJ CSJ CSJ CsJ C\J f\J

a: P\J cv X DJ X DJ DJ PJ x rv tv rv x x Tsj "~dj ”7j ""dj -*· -c XXX lii TTTt· 22 2 222 22^ 5555 to ro ro ro ro -C X X ΓΠ O o o o o Γ" tNJ CSJ CSJ (sj fyi α XX — X — XXX — XXX — — x X x x

DJ DJ DJ DJ DJ

^ 5 5 5 5 5 to —p

4-> CSJ

q X ^^XXXXU-Li-XXXXXXXxxx ____ +- X U-U-XX>J-IJ.Li_Li.XXU_1jl.U-U.U.U.U.U.

r· I— 4) Φ Q.

2 ε in^or-oo<T\o*--fM<OTj<iovor~co<T\o*-DJ

XU inLDlDlDinvOVOVDVDVDVDVDVDVOVOf^D-D'

LU C

έ ί 5 :::,, 85378 O — ΟΟιΛιΛΟιΛιΛΟιΛΟίΛΟΟ -r* roni/IO^Offir-fl-ffi^fOOfl· +-» rrio*Ttocoro«-ror>->cocMco«r

c E ill.....I I I I I

4· >t ΟΟιΛιΛΟιΛΟΟ'— OOOlD

·*-* rr κ^(θιοοιθΝο\^σισιπο3 4> o foifiroiflnnr».(\jn^-(-von OC > CO CM CM ΓΟ nj (Λ C · * p: ι/l t|_ 5; «'3‘^-^-oocococococmcmcmcm ro J. rr lOtOiOiOlOtOtOiOlOCOCOCOCO «4-1— ιΠιΛιΛιΛιΠωίΛιΛιΛιΟιΛιΛιΛ .,- — -g

> -r- O

,- jq ε

>! c EE

:j£ P-P-'P^I^'VOtOlOvOlOlOtOtDlO O

»^«fVOOOOCOCOeNNCMN o 1/1 vOOtOtOtOtDlOlDvOCOCOOOOO K) .—.

ΐπίΛίΛιηιηιηιηΐΛΐηΐΛΐηιηω r—

-— O

.. r\j o ··

•r- —~ CM O

IT) CM · CM

CM O CM *— oooooooooooo O —,--

1 1 · <_3 ΐΛ(ΟΛή·ΐηΐΟ(ΟΐηΝΝΐ)Ν CM

ö O CM f— COOICMIOOCOlOCTICOl --- ·— 1/) — 1' 3: + +>—+ + + +,— + + + + O -.(13 O <—3 + + r— c (/) 1/) 1|—

O ID <Q IQ

C 4-> <4- «4- Γιο a> v—

O -4-> I .Q

o n n n r- oo«Oi— m<— r^cM ωε·ι-·Γ-ο

o NnnioNO\0)(Mi-(Mfon i i- .o .o E

I I I I I I I I I I I ε O O O

a. oc-^miop^cocor-v,— cocMin i- «4- E E E

= CMCMCM^lOCOr^r— r— i\ n N I O O o 1Λ CM CM CM CM r— r— CM CM r— CM CM «4- l- E Ε «Λ

O O O O

U «— 1Λ 1Λ E

L. O JC ΙΟ) I— ε ε o ε earn -x c i- j- «4-

•r- CCQ<tCQetCQ4-<Cc0 4-CcQ I IIOOOO

Q. «X <r C -4-> >4- <+- S- LU <0 0.0 0 0

MOJULr-O- JC O O

43 f— f— CM CM CM 2J 5j cocococococorocoropococopi-> — _ — ? to χχχχχχχχχχχχχ «o cn <o «3 cn OC (_3(_><_)(_3C_3<_>(_3(_>(_)(->(_>(_)1_> —. c —. _ c O CM CM CM CM CM CM CM CM CM —· — CM χ1 'Z CD CD t- < xxxxxxxxxxxxx = £ c e c

«o (_)<_)<_>c_>ooc_)oo<_)oc_><_) Z Έ "Z "Z

oc OOOOOOOOOOOOO -§ :S -§ -§ :g c ’> c c ’> :«o c :<o :<o c m X > io > > <o “ ΧΧΧΧΧΧΧΧΧΧΧΧΟ S-oSg-o 43 03

Ό ε Ό Ό E

43 43 4) E 9 E ε ~ υ ' o fOcococococococococopococo o in o R m X* =:3:=C3: xxxxxxxxx o in o urn

QC C_3(_)<_>C_>(_3(_)(_>(_)t_>l_3(_>C_)0 PO CM PO in CM

' 3C « » x io m io cm in co (*) co fo po co co «o n. pj o r-

^ X X X X X rs GO N GO CO

CO CO <_3 t_3 C_3 C_3 C_3 1_3 C_) _ -2- ,__ "

----- CM CM CM CM CM CM CM

PO CO --. — —- ·—. ^ ---- Λ r r r r r

CM XX CM CM CM CM CM CM CM CCCCC

OC XXOOXXXXXXXXX OOOOO

οοοοοοο X X X X X

C-><_3 ^ ^ w w OOOOO

3C JC Ji Ji X

_ COCO OOOOO

C^C^ 3C= CM CM nj CM CM

—1 —- U U I I I I I

__ aP ap x x x x x ---- OC C-3 O X X "pi^X XXXXXX -3-3-1-3-1 TTTT x x x x x (-3(-3 (-3 (_3 43 43 43 43 43 — -— ’—' Ό TO Ό Ό T3 (/) <o to <0 10 #o

+-> -c J= JC JC JZ

J_ C'J Q. O. O. Q. Q.

o "CC X X X X U- U- U. II. Ll_ U_ 11 11 11 43 43 43 43 43 14. to in in to in "" c c c c c »— (U φ φ φ ^ X Ιΐ-ϋ.Ια-Ια_Ιι»Ι^.Ιι.ϋ-ϋ.Ιι.ΐΑ-Ια.ϋ_

fO *<0 t(Q ·#0 ·<0 HO

r— CL· Ω- a CL α.

r— (U

r— Q.

0) e ro^L^or^cDCTiO^— (Noo^lo X) 5 r^r-r^r^r^r^r^oococococooo Όχι. <— CM CO *3" en *— IU e 44 8 5378

Farmakologi

Affinitet av de nya androstan-17fl-karboxylsyraestrarna tili qlukokortikoidreceptorn_

Alla steroider enligt den föreliggande uppfinningen är fysiolo-giskt aktiva föreningar. Affiniteten hos de nya androstan-17B-karboxylsyraestrarna tili glukokortikoidreceptorn har använts som en modell för bestämning av den anti-inflammatoriska effek-ten. Deras receptoraffiniteter har jämförts med den hos bu-desonid ([22R,S]-16a,17a-butylidendioxi-llfi,21-dihydroxipregna- 1,4-dien-3,20-dion), som är en mycket aktiv glukokortikoid med ett gynnsamt förhällande mellan lokal och systemiska effekter (Thalön och Brattsand, Arzneim.-Forsch. 29_, 1687-90 (1979)).

Sprague-Dawley rättor av hankön, en tili tvä. mänader gamla, användes genomgäende i undersökningen. Tymus avlägsnades och lades i iskall saltlösning. Vävnaden homogeniserades i en Potter Elvehjem homogenisator i 10 ml av en buffert innehällande 20 mM Tris, pH 7,4, 10 % (vikt/volym) glycerol, 1 mM EDTA, 20 mM NaMoOi,, 10 mM mercaptoetanol. Homogenatet centrifugerades i 15 min vid 20 000 x g. Portioner av 20 000 x g supernatanten (230 μΐ) inkuberades i omkring 24 timmar vid 0°C med 100 μΐ fenylmetylsulfonylfluorid (en esterashämmare, slutlig kone. 0,5 mM), 20 μΐ omärkt kompetitor och 50 μΐ 3H-märkt dexametason (slutlig kone. 3 nM). Bunden och fri steroid separerades genom att inkubera blandningen med 60 μΐ 2,5 % (vikt/volym) träkol och 0,25 % (vikt/volym) dextran T70 suspension i 20 mM Tris, pH

7,4, 1 mM EDTA och 20 mM NaMoO* i 10 min vid 0°C. Efter centri-fugering vid 500 x g i 10 min räknades 230 μΐ av supernatanten i 10 ml Insta-Gel i en Packard scintillationsspektrofotometer. Supernatanterna inkuberades med a) [3H]dexametason enbart, b) [3H]dexametason plus 1000-faldigt överskott av omärkt dexametason och c) [3H]dexametason plus 0,03-300-faldigt "överskott" av kompetitor. Den icke specifikä bindningen bestämdes när 1000-faldigt överskott av omärkt dexametason sattes tili [3H]-märkt dexametason.

Radioaktiviteten som är bunden tili reeeptorn i närvaro av kompetitor delad med radioaktiviteten som är bunden tili reeeptorn 45 8 5378 i fränvaro av kompetitor multiplicerat med 100 ger den specifi-ka bindningen av märkt dexametason i procent. För varje kon-centration av en kompetitor avsätts procenten specifikt bunden radioaktivitet mot logaritmen för koncentrationen av kompetitor. Kurvorna jämförs vid nivän 50 % specifik bindning och i förhällande tili budesonid, som äsätts en relativ bindningsaf-finitet (RBA) = 1.

Tabell 4. Tabellen summerar relativa bindningsaffiniteter tili glukokortikoidreceptorn hos nägra av de undersökta föreningarna

Föreninq enliqt ex. nr BRA

Budesonid 1 1 epimer B 0,30 2 epimer B 0,17 24 0,50 35 0,04 52 0,20 61 0,05 64 0,04 66 0,44 81 1,03 84 0,63 Förening A 0,001 Föreningen A som är känd genom FI-patentskriften 71748 (s. 77, förening 7A-26), har formeln

O

0-CH20C-CH3 c=o H0 /Ar ~ococ2h5 Säsom av testresultaten framgär, är föreningarna enligt uppfin-ningen 40-1000 gänger mera aktiva än den genom FI-patentskrif-ten 71748 kända föreningen.

Claims (2)

46 85378

1. Analogiamenetelmä terapeuttisesti vaikuttavien 16,17- asetaalisubstituoitu jen androstaani-17β-karboksyylihappoesterien valmistamiseksi, joilla on kaava I or3 c = o MO ~ CH, L θ'— CR.R. Y ^ Y -0' 1 2 γΙ_I i ΛΑγ i *2 tai niiden stereo!someerisen komponentin valmistamiseksi, jossa kaavassa 1,2-asema on tyydytetty tai on kaksoissidos, Xi on vety, fluori, kloori tai bromi, X2 on vety, fluori, kloori tai bromi, Ri on vety tai suora tai haarautunut, 1-4 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju, R2 on vety tai suora tai haarautunut, 1-10 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju, ja R3 on 0 0 Il . i CR4R5OCR6 tai CR/,R5OCOR6 R4 on vety, suora tai haarautunut, 1-10 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju tai fenyyli, R5 on vety tai metyyli, ja R6 on vety, suora tai haarautunut, tyydytetty tai tyydyttämätön, 1-10 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju, alkyyliryhmä, joka on substituoitu ainakin yhdellä halogeeniatomilla, heterosykli-nen rengas järjestelmä, joka sisältää 3-10 atomia rengas järjestelmässä ja jossa heteroatomit ovat happi, -(CH2)m CH(CH2)n II 47 8 5 378 (m-O, 1,2; 11=2,3,4,5,6) tai substituoimaton fenyyli- tai bent- syyliryhmä, edellyttäen, että kun R2 on vety, R, on suora tai haarautunut, 1-4 hiiliatomia sisältävä hiilivetyketju, tunnettu siitä, että yhdiste, jolla on kaava OH c=o h.yo4%---^r^ ** · X. x2 OH c=o -0>crR2 Ί--0 **R. oJOS> X2 OH C=0 HO ---0^r^Rl Γ" ” '''R CHl| I Γ 2 i x2 tai sen suola saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 48 85378 Ra O Ra O I II I II Z-C-0-C-R6 tai Z-C-0-C-0R6 I I r5 r5 jossa kaavoissa Xlf X2, Ri, Rz/ R4, R5/ Rö ja --- tarkoittavat samaa kuin edellä ja Z on halogeeniatomi tai toiminnallisesti ekvivalentti ryhmä, minkä jälkeen jos näin saatu esteri on epi-meeriseos ja halutaan puhdas epimeeri, seos jaetaan stere-oisomeerisiksi komponenteiksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-llB-hydroksi-16a,-17a-[(1-metyylietylideeni)bis(oksi)]-androsta-1,4-dieeni-3-oni-17B-karboksylaatti, 1'-isopropoksikarbonyylioksietyyli-9a-fluori-llB-hydroksi-16a,-17a-[(1-metyylietylideeni)bis(oksi)]-androsta-1,4-dieeni-3-oni-17B-karboksylaatti, 1'-propoksikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-llfl-hydroksi-16a, 17a-[ (1-metyy.lietylideeni )bis (oksi ) ] -androsta-1,4-dieeni-3-oni-17fi-karboksylaatti, 1'-isopropoksikarbonyylioksietyyli-6a,9a-difluori-llfi-hydroksi-16a,17a-[(1-metyylietylideeni)bis(oksi)]-androsta-1,4-dieeni-3-oni-17B-karboksylaatti, 1'-asetoksietyyli-(20R)-9a-fluori-llfi-hydroksi-16a,17a-propyy-limetyleenidioksiandrosta-1,4-dieeni-3-oni-17fl-karboksylaatti, 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-(22R)-9a-fluori-llfi-hydroksi-16a-,17a-propyylimetyleenidioksiandrosta-l,4-dieeni-3-oni-17fi-kar-boksylaatti, 1'-isopropoksikarbonyylioksietyyli-(20R)-9a-fluori-llfi-hydrok-si-16a,17a-propyylimetyleenidioksiandrosta-l,4-dieeni-3-oni-17B-karboksylaatti tai 1'-etoksikarbonyylioksietyyli-(20R)-6a,9a-difluori-llB-hydrok-si-16a,17a-propyylimetyleenidioksiandrosta-l,4-dieeni-3-oni-17B-karboksylaatti. li 49 8 5378