DK167574B1 - Fremgangsmaade til fremstilling af en 16,17-acetalsubstitueret androstan-17beta-(2-oxoethylenoxy)-forbindelse - Google Patents

Description

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 16,17-acetalsubstituerede androstan-17j8-(2-oxo-ethy 1enoxy)-forbi ndel ser.

5 Disse forbindelser kan benyttes som udgangsmateriale ved fremstilling af hidtil ukendte 16,17-acetalsubstituerede androstan-170-carboxylsyrer.

Det er kendt, at visse glucocorticosteroider (GCS) kan bruges til 10 lokal behandling af betændelsessygdomme, allergiske eller immunologiske tilstande i åndedrætsvejene (fx astma og rhinitis), på huden (eksemer, psoriasis) eller i tarmen (ulcerativ koli ti s, Morbus Crohn). Med en sådan lokal glucocorticoidterapi opnås der kliniske fordele i forhold til en generel behandling (fx med glucocorticoid-I5 tabletter), især med hensyn til nedsættelse af uønskede glucocorti-coid-virkninger uden for det sygdomsangrebne område. For at opnå sådanne kliniske fordele, fx ved alvorlig sygdom i åndedrætsvejene, må GCS have en hensigtsmæssig farmakologisk profil. De skal have høj naturlig glucocorticoid-aktivitet på påføringsstedet, men også en 20 hurtig inaktivering ved fx hydrolyse i målorganet eller efter optagelse i det almindelige kredsløb.

Eftersom binding af GCS til glucocorticoid-receptorer er en forudsætning for, at deres anti inflammatoriske og allergiske virkninger 25 kan indtræde, kan evnen af steroider til at binde sig til disse receptorer bruges som en tilstrækkelig metode til bestemmelse af den biologiske aktivitet af GCS. Der er blevet påvist en direkte korrelation mellem affiniteten af GCS til receptorer og deres antiinflammatoriske virkninger ved anvendelse af øre-ødemprøven hos rotter 30 (Correlation between chemical structure, receptor binding, and biological activity of some novel, highly active, 16a,17a-acetalsubstituted glucocorticoids; E. Dahlberg, A. Thaién, R. Brattsand, J-Å Gustafsson, U. Johansson, K. Roempke og T. Saaetok, Mol. Pharmacol.

25, (1984), 70).

35

Den foreliggende opfindelse er baseret på den iagttagelse, at androstan-17^-(2-oxoethylenoxy)-forbindelserne, der fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan omdannes til de tilsvarende androstan-17/3-carboxyl syrer, som igen kan omdannes til de 2 tilsvarende 3-oxoandrosta-4-en- eller -l,4-dien-17^-carboxylsyre-estere med høj bindingsaffinitet til glucocorticosteroidreceptorer. Sidstnævnte forbindelser kan bruges til behandling og bekæmpelse af betændelsestilstande, og har den almene formel: 5 OR3

Hcy^f^-VCRiR2

CH3 _I

i

1 2 X

15 i. hvilken formel 1,2-bindingen er en enkelt- eller en dobbeltbinding, X* betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, 20 2 X betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, R* betegner hydrogen eller en lige eller forgrenet carbonhydrid- kæde med 1-4 carbonatomer, 25 2 R er hydrogen eller en lige eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer, 3 R betegner . - O , g 30 CRVoCr® eller CR4R50CYR6 Y betegner 0 eller S, 4 R betegner et hydrogenatom eller en lige eller forgrenet 35 carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer eller en phenyl gruppe, 5 R betegner hydrogen eller methyl, og g R betegner hydrogen, en lige eller forgrenet, mættet eller 3 umættet carbonhydridkæde med 1-10 carbonatomer, en alkylgruppe med 1-5 carbonatomer substitueret med mindst ét halogenatom, en pyrryl-, pyridyl-, pyrimidyl-, pyrazinyl-, furyl-, pyranyl-, benzofuranyl-, indolyl- eller thienylgruppe, gruppen 5 '(^VS^n = °> 1 eller 2; n = 2, 3, 4, 5 eller 6) eller en phenyl- eller benzylgruppe, som er usubstitueret eller substitueret med én eller flere substituenter udvalgt blandt alkyl, nitro, carboxy, alkoxy, halogen, cyan, carbalkoxy og trifluormethyl, 10 1 2 idet dog R og R ikke begge betegner hydrogen.

De enkelte stereoisomerkomponenter, der er til stede i en blanding af et steroid med den foran viste almene formel I, kan belyses på 15 følgende måde: OR3 C = O 2 H0

ChJ I * 20 -

Π; epimer S

'2 25 OR3 C = O 1

ChL , R1 H0_ 31---CKC^ chJ J_ 30 x1

III; epimer R

• 2

X

35

De enkelte stereoisomere komponenter, som er til stede i en blanding af steroid-17/?-carboxylsyreestere med formlerne - 4 Q . K p f.

Stfcocrrocr IV eller 5 9 4 5 δ 6 stcocRVocYir v hvor St er steroiddelen, kan belyses på følgende måde: r4 1^4 10 8 I g 6 8 8 6

StCOCOCRb StCOCOCR0 ‘5 I5 R5 Ra

VI VII

og 15 44 R** 9 I fl 6 9 ·: 9 6

StCOCOCYR0 StCOCOCYR0 i5 l5

Rb Ra

Vin IX

20 I diastereoisomerer som II, III, VI, VII, VIII og IX afviger konfigurationen kun ved ét ud af flere asymmetriske carbonatomer. Sådanne diastereoisomerer betegnes epimerer.

25

Al kyl i de foranstående definitioner er lige eller forgrenede carbonhydridkæder med 1-5 carbonatomer, fortrinsvis 1-4 carbonatomer.

gø Alkoxy i de foranstående definitioner er en gruppe -O-alkyl, hvor al kyldel en har den ovenfor angivne definition.

Halogen i de foranstående definitioner er fortrinsvis et chlor-, brom- eller fluoratom.

Carbalkoxy i foranstående definitionen er en gruppe -COO-alkyl, hvor al kyldel en har den ovenfor givne definition.

Særlige forbindelser med ovenstående formel I er: 5 DK 167574 Bl 17-Ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-110-hydroxy-16a,17a-[(1-me-thylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat, den epimere blanding A + B samt epimer B.

5 17-1sopropoxycarbonyloxyethyl -9α- f1 uor-110- hydroxy-16α,17α-[(1-me- thylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat og epimer B.

17 -Propoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-dif1uor-110-hydroxy-16a,17a-[(1-me-10 thyl ethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-di en-3-on-170-carboxylat og epimer B.

1'-Isopropoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-110-hydroxy-16a,17a-[(1-methylethyl iden)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-di en-3-on-170-carboxylat, 15 de epimere blandinger A + B og epimer B.

17 -Acetoxyethyl - (20R) -9a-fl uor-11/1-hydroxy- 16α, 17α-propyl methyl endi -oxyandrosta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat og epimer B.

20 17-Ethoxycarbonyloxyethyl-(22R)-9a-fluor-110-hydroxy-16a,17a-propyl- methylendioxyandrosta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat og epimer B.

17 -1 sopropoxycarbonyl oxyethyl - (20R) -9a-fl uor-11/3-hydroxy- 16a, 17a-propylmethylendioxyandrosta-l,4-dien-3-on-170-carboxyl at og epimer 25 B.

17-Ethoxycarbonyloxyethyl-(20R)-6a,9a-di fluor-110-hydroxy-16a,17a-propylmethylendioxyandrosta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat, den epimere blanding A + B og epimer B.

30

Forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen har en af formlerne X, XI og XII: 35 6 CH--0R7 I 2 c=o H0 - (£> CHr2 ’

5 1 I X

° 10 x2 CH,-0R7 I 2 C=0 n 2' i5 N'i r "'h

1 J_I

XI

t 20 X2 CH.-OR 7 I 2 c=o CH?L λ 25 *2 30 hvor den fuldt optrukne plus brudte linie mellem C-l og C-2 repræ- senterer en enkeltbinding eller dobbeltbinding, X , X og R har de foran angivne betydninger, og er et hydrogenatom eller en 35 acylgruppe med 1-10 carbonatomer i en lige eller forgrenet kæde.

Forbindelserne kan ved oxidation omdannes til den tilsvarende 17-/J-carboxylsyre.

7 DK 167574 Bl 17/3-Carboxyl syrerne forestres derefter til dannelse af forbindelser, 12 12

der er karakteriseret ved formlerne I-IX, hvor- , X , X , R , R

3 og R har de foran angivne betydninger.

5 Omdannelsen af en forbindelse med en af formlerne X, XI og XII til de tilsvarende 17-carboxylsyrer udføres i et passende oxygeneret carbonhydrid-opløsningsmiddel såsom en lavtkogende alkanol. Methanol og ethanol foretrækkes, navnlig førstnævnte. Reaktionsmediet gøres svagt alkalisk ved tilsætning af en passende svag uorganisk base 10 såsom et alkalimetalcarbonat, fx natrium-, lithium- eller kaliumcarbonat. Sidstnævnte foretrækkes. Omdannelse af en forbindelse med formlen X, XI eller XII til en 17jS-carboxylsyre, som 3 svarer til formlen I, II eller III (men hvor R = H) finder sted ved stuetemperatur, dvs. 20-25eC.

15 Nærværelse af oxygen er nødvendig for reaktionen. Oxygen kan tilføres ved indbobling af en strøm af luft eller oxygen i reaktionsblandingen.

20 Den oxidative nedbrydning af 17j8-sidekæden i forbindelser med formlen X, XI og XII til de tilsvarende 170-carboxylsyrer kan også udføres med periodsyre, natriumhypobromat eller natriumbismutat. Reaktionen udføres i en blanding af vand og et passende oxygeneret carbonhydridopløsningsmiddel såsom en lavtkogende ether. Dioxan og 25 tetrahydrofuran foretrækkes, navnlig førstnævnte.

Moder-17j8-carboxylsyrerne, som svarer til formlen I, II og III (men hvor R = H) kan forestres på kendt måde til tilvejebringelse af 170-carboxylatestere. Fx kan 17/1-carboxylsyren omsættes med en 3® passende alkohol og et carbodiimid, fx dicyclohexylcarbodiimid, i et passende opløsningsmiddel såsom diethyl ether, tetrahydrofuran, methylenchlorid eller pyridin og fordelagtigt ved en temperatur på 25-100®C. Man kan også omsætte et salt af 170-carboxylsyren med et alkalimetal, fx lithium, natrium eller kalium, et salt af en kva-35 ternær ammoniumforbindelse såsom et salt af tri ethyl- eller tri butyl amin, eller tetrabutylammonium, med et passende al kyl eringsmiri-del, fx et acyloxyalkylhalogenid eller halogenalkyl-alkylcarbonat, fortrinsvis i et polært opløsningsmiddel såsom acetone, methylethyl-keton eller dimethyl formamid, dimethyl sul foxid, methylenchlorid 8 eller chloroform og hensigtsmæssigt ved en temperatur i området 25-100'C. Reaktionen kan også udføres i nærværelse af en kronether.

De dannede rå steroidesterderivater renses efter isolering ved 5 kromatografering på et passende materiale, fx tværbundne dextran-geler af Sephadex® LH-type med passende opløsningsmidler som elueringsmidler, fx halogenerede carbonhydrider, ethere og estere, såsom ethylacetat, eller acetonitril. De enkelte epimerer, som dannes ved acetal iseringen af 16a,17a-hydroxygrupperne eller ved forestringen af 170-carboxylsyrerne, har praktisk talt identiske opløselighedsegenskaber. Det har følgelig vist sig umuligt at adskille og isolere dem fra epimerblandingen ved konventionelle metoder til resolvering af stereoisomerer, fx fraktioneret krystallisation. For at vinde de enkelte epimerer hver for sig underkastes stereoisomerblåndingerne med formlerne I, IV og V søjlekromatografering, hvorved epimererne II, III, VI, VII, VIII og IX adskilles på grundlag af deres forskellige mobiliteter på den stationære fase. Kromatograferingen kan fx udføres på tværbundne dextrangeler af typen Sephadex® LH, fx Sephadex® LH-20, i kombi-2® nation med et passende organisk opløsningsmiddel som eluerings-middel. Sephadex® LH-20, fremstillet af Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sverige, er en perleformet hydroxypropyleret dextrangel, hvor dextrankæderne er tværbundne til frembringelse af et tredimen-sionelt polysaccharid-netværk. Som elueringsmiddel har man med held 25 anvendt halogenerede carbonhydrider, fx chloroform eller en blanding af heptan, chloroform og ethanol i mængdeforholdet 0-50:50-100:10-1, fortrinsvis en 20:20:1 blanding.

Forbindelserne med formlerne X, XI og XII kan fremstilles ved ΟΠ omsætning af forbindelser med formlen CH-OR7 i *- C=0

HO . ---0H

x γ- OH

35 XIII

Γ fx1 o 1 2 9

Ulv 1b/t>/4 bl hvor den fuldt optrukne plus brudte linie mellem C-l og C-2 repræ- 12 7 senterer en enkeltbinding eller en dobbeltbinding, og X og X og R har de foran angivne betydninger, med et aldehyd med formlen

5 H

/

0=C

V

10 hvor R har den foran angivne betydning.

Aldehydet er fortrinsvis acetal aldehyd, propanal, butanal, isobuta-nal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethylpropanal, hexanal, heptanal, octanal, nonanal og dodecanal. Reaktionen udføres ved, at 15 man sætter steroidet til en opløsning af aldehydet sammen med en sur katalysator, fx perchlorsyre, p-toluensulfonsyre eller saltsyre i ether, fortrinsvis dioxan eller en halogeneret kulbrinte, fortrinsvis methylenchlorid eller chloroform.

20 Forbindelserne X, XI og XII kan også fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som er ejendommelig ved trans-acetalisering af de tilsvarende 16a,17a-acetonider: CH-OR7 t ^ c=o

25 HO ---0^ ^CH

Ύ' N--O"' ^ J

30 ° i

X

hvor den fuldt optrukne og brudte linie mellem C-l og C-2 repræsen- 12 7 terer en enkeltbinding eller dobbeltbinding, og X , C og R har de foran angivne betydninger, med et aldehyd med formlen 35

H

/

0=C

R^

Lsiv ιυ/u/T u i 2' 10 hvor R har den foran angivne betydning.

Aldehydet er fortrinsvis acetal aldehyd, propanal, butanal, isobuta- nal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethyl propanal, hexanal, 5 heptanal, octanal, nonanal og dodecanal. Reaktionen udføres ved tilsætning af steroidet til en opløsning af aldehydet sammen med en stærk uorganisk syre som katalysator, fortrinsvis perchlorsyre eller saltsyre, i en ether, fortrinsvis dioxan eller tetrahydrofuran, en halogeneret carbonhydrid, fortrinsvis methyl enchlorid eller chloroform, et aromatisk carbonhydrid, fortrinsvis toluen, et alicyclisk carbonhydrid, fortrinsvis cyclohexan eller et aliphatisk carbonhydrid, fortrinsvis heptan eller isooctan, under de sidstnævnte betingelser med eliminering af kromatografitrinnet til fremstilling af epimererne III og XII.

15

Fremstillingen af de 16,17-acetalsubstituerede androstan-17-/5-(2- oxo-ethylenoxy)-forbindelser ifølge krav 1 og deres anvendelse til fremstilling af hidtil ukendte 16,17-acetyl substituerede androstan- 170-carboxylsyreestere, via 16,17-acetylsubstituerede androstan-

20 17/J-carboxyl syrer skal belyses nærmere ved de følgende eksempler. I

2 -1 eksemplerne bruges der en strømningshastighed på 2,5 ml/cm .h ved de præparative kromatografiske gennemløb. Molekylvægtene er i alle eksemplerne bestemt ved elektrontryk-massespektrometri på smeltepunkterne på et Leitz Wetzlar varmtrinsmikroskop. Alle HPLC-analyser pc (HPLC = højeffektiv væskekromatografering) udførtes på en Waters /iBondapak Cjg-kolonne (300 x 3,9 mm indvendig diameter) med en strømningshastighed på 1,0 ml/minut og med ethanol/vand i forhold mellem 50:50 og 60:40 som mobil fase, medmindre andet er angivet.

Eksempel 1

Fremstilling af (22RSI-. (22R1- oa (22Sl-llg.l6ft.l7ft.21-tetrahvdro-nreana-1.4-di en-3.20-di on-16a. 17or-acetal er I22RS1-. I22R1- oa f22Sl-16o;.17Q;-butvlidendioxv-6tt.9ft-difluor-llfl.21-dihvdroxvDreana-l.4-dien-3.20-dion iL Til en suspension af 1,0 g 6d!,9a-difluor-llj8,16ft,17o!,21-tetrahy-droxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 500 ml methylenchlorid sattes der 0,32 ml frisk destilleret n-butanal og 2 ml 72%s perchlorsyre.

11

Reaktionsblandingen henstod i 24 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen vaskedes med 10%s vandig kaliumcarbonatopløsning og vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes. Remanensen opløstes i ethyl acetat og udfældedes med petroleumsether, hvorved der 5 vandtes 883 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-llj3,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion. HPLC-analyse viste 99¾ renhed og forholdet 16:84 mellem 22S- og 22R-epimeren. Molekylvægt 466 (beregnet 466,5).

(22RS)-Epimerblandingen kromatograferedes på en Sephadex® LH-20 kolonne (76 x 6,3 cm) under anvendelse af heptan/chloroform/ethanol 20:20:1 mobil fase. Fraktionerne 12315-13425 ml (A) og 13740-15690 (B) opsamledes og Inddampedes, og remanensen opløstes i methylen-chlorid og udfældedes med petroleumsether: Fraktion A gav 62 mg 15 (22S)- og fraktion B 687 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di- f1uor-11/},21-dihydroxypregna-1,4-di en-3,20-di on. (22S)-epimeren havde molekylvægt 466 (beregnet 466,5) og smp. 196-200eC. (22R)-epimeren havde molekylvægt 466 (beregnet 466,5) og smp. 169-172eC.

20 EL Til en opløsning af 1,0 g 6or,9a-difluor-110,21-dihydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-pregna-l,4-dien-3,20-dion i 500 ml methylenchlorid sattes der 0,30 ml frisk destilleret n-butanal og 2 ml 72%s perchlorsyre. Reaktionsblandingen henstod i 24 timer ved 33eC under omrøring, ekstraheredes med vandigt kaliumcarbonat og

OC

vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes. Remanensen opløstes i methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 848 mg (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-ll/l,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion. HPLC-analyse viste 93% renhed og forholdet 12/88 mellem 22S- og 22R-epimeren.

30 B'. Til en suspension af 4,0 g 6a,9a-difluor-ll/L21-dihydroxy-16a, 17a[(l-methylethyl iden)-bis-(oxy)]-pregna-l,4-dien-3,20-dion i 100 ml heptan sattes der 1,2 ml frisk destilleret n-butanal og 3,8 ml 72%s perchlorsyre. Reaktionsblandingen henstod i 5 timer ved or 3 stuetemperatur under kraftig omrøring, ekstraheredes med vandigt kaliumcarbonat og vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes til frembringelse af 4,0 g (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-llj5,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion. HPLC-analyse viste 98,5% renhed og forholdet 3/97 mellem 22S- og 22R-epimeren. Efter to

Ul\ U I

12 omkrystallisationer fra chioroform/petroleumsether vandtes der 3,1 g 22R-epimer, som kun indeholdt 1,1% af 22S-epimeren og 1,3% af andre urenheder.

5 L. På tilsvarende måde ved at følge den fremgangsmåde, der er beskrevet i eksemplet og ved at udskifte 6a,9a-difluor-ll/J,16a,17a,-21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion med ll/J,16a,17a,21-tetrahy-droxypregna-l,4-dien-3,20-dion, 9a-fluor- og 6a-fluor-110,16a,17a,- 21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion eller de tilsvarende 10 16a,17a-acetonider fremstilles der ikke-fluorerede og monof1uorerede (22RS)-, (22R)- og (22S)-ll/l,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion-16a,17a-acetaler fra acetaldehyd, propanal, butanal, isobutanal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethylpropanal, hexanal, heptanal, octanal, nonanal og dodecanal.

15

Eksempel 2 /L 250 mg (0,6 mmol) Prednaquinolon-16a,17a-acetonid opløstes i 75 ml CHgCl. Der tilsattes 130 mg (1,8 mmol) n-butanal og 0,025 ml 70%s 20 perchlorsyre. Opløsningen omrørtes ved 33eC i 15 timer. Den gule opløsning vaskedes med 2 x 10 ml 10%s K2C03 og 4 x 10 ml H20, tørredes og inddampedes. Udbytte 257 mg (97,7%). HPLC viste 91,1% renhed. Uomsat acetonid udgør 7,4% af urenhederne. Epimerforhold 14,6/85,4.

25 JL. 0,5 g (1,1 mmol Triamquinolon-16a,17a-acetonid opløstes i 150 ml CHgClg. Der tilsattes 260 mg (3,6 mmol) n-butanal og 0,22 ml 70%s perchlorsyre. Blandingen omrørtes ved 33eC i 16 timer. CH2Cl2-opløs-ningen overførtes til en skilletragt, og reaktionskolben vaskedes 30 flere gange med henholdsvis 10 ml K2C03 og CH2C12· Opløsningen vaskedes derefter med 2 x 10 ml 10%s K2C03 og 4 x 10 ml H20, tørredes og inddampedes. Udbytte 438 mg (84,9%). HPLC viste 80,2% renhed. Epimerforholdet 19/81.

3® C*. 0,5 g (1,1 mmol) Fluoquinolon-16a,17a-acetonid opløstes i 150 ml CHgCl2. Der tilsattes 260 mg (3,6 mmol) n-butanal og 0,22 ml 70%s perchlorsyre. Blandingen omrørtes ved 33*C i 24 timer. CH2Cl2-fasen overførtes til en skilletragt. Reaktionskolben vaskedes flere gange med 15 ml henholdsvis 10%s K2C03 og CH2C12. Opløsningen vaskedes med 13 2 x 15 ml 10%s KgC03 og 4 x 15 ml H20, tørredes og inddampedes. Udbytte 513 mg (100%). HHLC viste 97,4% renhed. Epimerforholdet 8,6/91,4.

5 Eksempel 3

Fremstilling af lll-hvdroxv-16o. 17a-ΓΠ-methylethyl iden)-bis-(oxv)l-oa (20RS1-. (20R)- oo f20S)-llfl-hvdroxv-16a,17a-alkvlmethvlendioxy-androsta-1.4-dien-3-on-178-carboxvlsvrer og -4-en-3-on-178-carboxvl-10 syrer 6a.9a-Di fl uor-llfl-hvdroxv- 16α. 17α- Γ (1 -methvl ethvl iden) -bi s- (οχνΐ 1 -androsta-1.4-dien-3-on-17fl-carboxvlsvre

Ai. Til en opløsning af 1,99 g fluoquinolon-16a,17a-acetonid i 120 ml 15 methanol sattes der 40 ml 20%s vandigt kaliumcarbonat. Der bobledes en luftstrøm gennem denne opløsning i ca. 20 timer under omrøring ved stuetemperatur. Methanol et afdampedes, og der sattes 200 ml vand til remanensen. Opløsningen ekstraheredes med methylenchlorid. Den vandige fase syrnedes med tynd saltsyre. Det dannede bundfald 20 opsamledes ved filtrering og tørredes til frembringelse af 1,34 g 6a,9a-difluor-ll/)-hydroxy-16a, 17a-[(1-methylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylsyre med smp. 264-268’C og molekylvægt 438. Renheden bestemt ved HPLC var 94,0%. Den vandige fase ekstraheredes med ethyl acetat. Efter tørring afdampedes opløs-2® ningsmidlet og gav en yderligere portion på 0,26 g af syren. Renhed 93,7%.

JL 15,1 g Periodsyre i 16,5 ml vand sattes til en opløsning af 5,0 g fluoquinolon-16a,17a-acetonid i 55 ml dioxan. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 20 timer, neutraliseredes med mættet vandigt natriumhydrogencarbonat og inddampedes. Remanensen opløstes i 200 ml methyl enchl orid og vaskedes med 8 x 100 ml 10%s vandigt kaliumcarbonat. Den vandige fase syrnedes med koncentreret saltsyre og ekstraheredes med 6 x 100 ml ethylacetat. Efter tørring afdam-

OC

3 pedes opløsningsmidlet. Remanensen opløstes i 400 ml ethyl acetat og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 3,96 g 6a,9a-di-f1uor-11β-hydroxy-16α,17α-[(1-methyl ethyl i den)-bi s- (oxy)]-androsta- l,4-dien-3-on-17/)-carboxylsyre. Renheden bestemt ved HPLC var 99,5%.

^1¾ I V f W # T b# I

14

Ll På lignende måde og ved at følge den fremgangsmåde, der er beskrevet i eksemplet, men erstatte fluoquinolon-16a,17a-acetonid med 1lj8,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-1,4-dien-3,20-dion, 6a-f1uor-ll£,16a,17a,21-tetrahydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion henholdsvis 5 triamquinolon-16a,17a-acetonid fremstilledes ll)3-hydroxy-16a,17a- [(1-methylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-170-carboxyl-syrer. Ved at udskifte 16a,17a-acetonidgruppen med 16a,17a-acetaler mellem 16a-hydroprednisolon, 6a-fluor-16a-hydroxyprednisolon, triamquinolon og fluoquinolon og acetaldehyd, propanal, butanal, 10 isobutanal, pentanal, 3-methylbutanal, 2,2-dimethylpropanal, hexa- nal, heptanal, octanal, nonanal og dodecanal og deres 21-estere fremstilles der (20RS)-, (20R)- og (20S)-llj8-hydroxy-16a,17a-alkyl-methylendioxyandrosta-l,4-dien- og -4-en-3-on-170-carboxyl syrer.

Eksempel 4 1'-Ethoxvcarbonvloxvethvl-6a.9a-di f1uor-1lg-hvdroxv-16a,17a-Γ(1-methyl ethvlidenl-bi s-(oxvl 1-androsta-1.4-di en-3-on-17g-carboxvlat 20 Aj. 600 mg 6a,9a-Difluor-110-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)- bis-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-170-carboxylsyre og 684 mg kalium-hydrogencarbonat opløstes i 45 ml dimethyl formamid. Der tilsattes 2 ml 1-bromethyl-ethylcarbonat, og reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur natten over. Der tilsattes 200 ml vand, og blandingen 25 ekstraheredes med methylenchlorid. De forenede ekstrakter vaskedes med 5%s vandigt natriuhydrogencarbonat og vand, og remanensen rensedes ved kromatografering på en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) under anvendelse af chloroform som mobil fase. Fraktionen 1515-2250 ml opsamledes og inddampedes og gav 480 mg Γ-ethoxycarbo-30 nyl oxyethyl -6a, 9a-di f 1 uor-11/J-hydroxy- 16a, 17a- [ (1 -methyl ethyl i den) - bi s - (oxy) ] - androsta-1,4-d i en-3-on-17^8-carboxyl at. Renheden bestemt ved HPLC var 98,1%, og opimerforholdet A/B var 48:52. Smp. 218-227eC. [a]g5 = +63,2* (c = 0,214) i CHgClg. Molekylvægten var 554.

33 480 mg r-Ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-ll/?-hydroxy-16a,17a- [(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/}-carboxy-1 at kromatograferedes på en Sephadex® LH-20 kolonne (76 x 6,3 cm) med heptan/chloroform/ethanol 20:20:1 som mobil fase. Fraktionen 2325-2715 ml opsamledes og inddampedes, og remanensen opløstes i 16 DK 167574 B1 methylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-170-carboxylsyre i 25 ml acetone sattes der 175 mg a-bromdiethylcarbonat og 45 mg vandfrit kaliumcarbonat. Blandingen opvarmedes i 6 timer under tilbagesvaling. Den afkølede reaktionsblanding udhældtes i 150 ml 5 vand og ekstraheredes med methylenchlorid. Ekstrakten vaskedes med vand, tørredes over natriumsulfat og inddampedes, hvorved der vandtes 65 mg fast Γ-ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor- 11/S-hy-droxy-16a,17a-[(1-methyl ethyl i den)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-di en-3-on-17/5-carboxylat. Renheden bestemt ved HPLC var 97,6%, og epimer-10 forholdet A/B var 49:51.

JL. 500 mg 6a,9a-Difluor-ll/3-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/J-carboxylsyre og 577 mg tetra-butylammonium-hydrogensulfat sattes til 3 ml 1M natriumhydroxid. Der 15 tilsattes en opløsning af 435 mg 1-bromethyl-ethylcarbonat i 50 ml methylenchlorid. Blandingen til bagesvaledes under omrøring natten over. De to lag adskiltes. Det organiske lag vaskedes med 2 x 10 ml vand, tørredes og inddampedes. Råproduktet rensedes ved kromatogra-fering på en kolonne af Sephadex® LH-20 (72 x 6,3 cm) under 2° anvendelse af chloroform som mobil fase. Fraktionen 1545-1950 ml opsamledes og inddampedes, og remanensen udfældedes fra methylen-chlorid/petroleumsether, hvorved der vandtes 341 mg l'-ethoxycarbo-nyl oxyethyl -6a, 9a-di f1 uor-11/5- hydroxy- 16a, 17a- [(1 -methyl ethyl i den) -bi s-(oxy)]-androsta-1,4-dien-3-on-17β-carboxyl at. Renheden bestemt ^ ved HPLC var 99,2%, og epimerforholdet A/B var 56:44.

L. 200 mg 6a,9a-Difluor-ll/5-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/5-carboxylsyre og 200 mg trica-prylmethylammoniumchlorid sattes til 5 ml mættet vandigt NaHC0v Der J tilsattes en opløsning af 100 mg 1-bromethyl-ethylcarbonat i 10 ml methylenchlorid. Blandingen omrørtes ved 45eC i 20 timer, fortyndedes med 10 ml methyl enchl orid og i soleredes og rensedes på samme måde som i fremgangsmåde E, hvorved der vandtes 254 mg 1'-ethoxycarbonyloxyethyl -6a,9a-difluor-110-hydroxy-16α,17α-[(1-methyl ethyli-den)-bi s-(oxy) ]-androsta-1,4-di en-3-on-17/8-carboxylat. Renheden bestemt ved HPLC var 97,4, og epimerforholdet A/B var 60:40.

IL. 200 mg 6a,9a-Difluor-ll/5-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/5-carboxylsyre, 135 mg 15 methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 200 mg af en forbindelse (A) med renhed 97,3% bestemt ved HPLC-analyse. Smp. 246-250*C. [a]25= +100,5* (c = 0,214 i CH2C12). Molekylvægten var 554.

5

Fraktionen 4140-5100 gav 250 mg af en forbindelse (B) med renhed 99,0%. Smp. 250-255*C. [a]p5= +28,5* (c = 0,246 i CH2C12). Molekylvægten var 554. Metinsignalet fra estergruppen blev skiftet ved 0,13 ppm nede i feltet i ^-NMR-spektret for B i sammenligning med A, 10 mens resten af spektrene er næsten identiske. Elektrontryk-masse-spektrene af A og B er identiske bortset fra massetoppenes intensiteter. De spektroskop!ske forskelle og ligheder viser, at A og B er epimerer på grund af chiral-centret i estergruppen.

15 JL. 200 mg 6a,9ar-Difluor-llj3-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/l-carboxylsyre opløstes i 25 ml dimethyl formamid. Der tilsattes 100 mg 1-chlorethyl-ethylcarbonat, 70 mg kaliumhydrogencarbonat og 18-kron-6-ether. Reaktionsblandingen omrørtes ved 80*C i 3 timer, afkøledes, ekstraheredes med methylen-chlorid efter tilsætning af 105 ml vand, tørredes og inddampedes. Det rå produkt rensedes på samme måde som i fremgangsmåde A, hvorved der vandtes 207 mg Γ-ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-ll/?-hy-droxy-16a,17a-[(l-methylethyl iden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat. Renheden (HPLC) var 98,4%, og epimerforholdet A/B 25 var 54/46.

Ci 200 mg 6a,9a-DifTuor-llj3-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17^-carboxylsyre og 140 mg 1,5-di-azabicyclo[5.4.0]-undecen-5 suspenderedes i 25 ml benzen og opvarme- on J des til tilbagesvaling. Der tilsattes en opløsning af 175 mg 1-brom-ethyl-ethylcarbonat i 5 ml benzen, og blandingen til bagesval edes i 2,5 timer. Efter afkøling tilsattes der 50 ml methylenchlorid, og opløsningen vaskedes med vand, tørredes og inddampedes. Råproduktet rensedes på samme måde som i fremgangsmåde A, hvorved der vandtes

OC

207 mg r-ethoxycarbonyloxyethyl-6a,9a-difluor-ll^-hydroxy-16a,17a-[(1-methyl ethyl i den)-bi s-(oxy)]-androsta-1,4-di en-3-on-17/J-carboxy-lat. Renheden (HPLC) var 96,4%, og epimerforholdet A/B var 44:56.

Dj, Til en opløsning af 100 mg 6a,9a-difluor-110-hydroxy-16a,17a-[(l- 17 1-bromethyl-ethylcarbonat og 275 mg triethylamin opløstes i 20 ml dimethylformamid. Blandingen omrørtes ved 80eC i 3 timer, fortyndedes med 200 ml methylenchlorid, vaskedes med vand, tørredes og inddampedes. Det rå produkt rensedes på samme måde som i 5 fremgangsmåde A, hvorved der vandtes 69 mg l'-ethoxycarbonyloxyeth-. yl -6a, 9a-d i f 1 uor-11/Miydroxy- 16a, 17a- [(1 -methyl ethyl i den)-bi s-(oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-170-carboxylat. Renheden bestemt ved HPLC var 97,8%, og epimerforholdet A/B var 48:52.

Eksempel 5 1'-Acetoxvethvl-6a.9a-dif 1 uor-1lfl-hvdroxv-16a.17a-Γ(1-methvl-ethvlidenl-bi s-(oxv)1-androsta-1.4-di en-3-on-17fl-carboxvlat 15 500 mg 6a,9a-Difluor-ll^-hydroxy-16a,17a-[(l-methylethyliden)-bis- (oxy)]-androsta-l,4-dien-3-on-17/?-carboxylsyre og 575 mg kaliumhy-drogencarbonat opløstes i 40 ml dimethyl formamid. Der tilsattes 1 ml 1-chlorethyl acetat, og reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 40 timer. Reaktionsblandingen udhældtes i 50 ml vand og 20 ekstraheredes med methylenchlorid. Ekstrakten vaskedes med vandigt natriumhydrogencarbonat og vand, tørredes og inddampedes. Remanensen kromatograferedes på en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) under anvendelse af chloroform som mobil fase. Fraktionerne 1755-2025 og 2026-2325 ml opsamledes og inddampedes.

25

Det faste produkt fra fraktionen 1755-2025 ml rensedes yderligere ved kromatografering på en Sephadex® LH-20 kolonne (76 x 6,3 cm indvendig diameter) under anvendelse af en blanding af heptan/chlo-roform/ethanol 20:20:1 som mobil fase. Fraktionen 2505-2880 ml 30 opsamledes og inddampedes. Remanensen opløstes i methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 167 mg fast produkt (A). Renheden bestemt ved HPLC var 99,1% og smp. 238-259eC.

[a]p^= +94e (c = 0,192; CHgCl2). Molekylvægten var 524.

3® Det faste produkt fra ovennævnte fraktion 2026-2325 ml rensedes yderligere ved kromatofering på samme måde som beskrevet ovenfor. Fraktionen 5100-5670 ml opsamledes og inddampedes. Remanensen opløstes i methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether, hvorved der vandtes 165 mg fast produkt (B). Renheden bestemt ved 18 HPLC var 99,4%. Smp. 261-265*C. [a]j;5= +34e (c = 0,262 i CH2C12). Molekylvægten var 524.

*H-NMR-spektrene for A og B er næsten identiske med undtagelse af 5 metinkvartetten fra estergruppen, der skiftes 0,16 ppm nede i feltet i forbindelsen B i sammenligning med A. Fragmenteringsmønstrene af A og B i elektrontryk-massespektra er identiske bortset fra massetoppenes intensiteter. De spektriskopiske egenskaber for A og B viser, at de er epimerer på grund af chiralcentret i estergruppen.

10

Eksempel 6-88

De i tabellerne 1-3 i det følgende angivne forbindelser fremstilledes, isoleredes og rensedes på analog måde med, hvad der er beskre-^ vet i eksempel 4 og 5.

20 25 30 35 19 DK 167574 ΒΊ

(- I- Η (- 3 M

u>N>(-*OVoaj~J<Ji (i x • M « H*

O

►q*ijn;n2an:a:a x^ ^_ QQl-^-GSa·^· V* / S 3! «. (D S S φ (D \\ /

U>U»23-^-^33 50 ) 1 ( O 3S

5 << O O *< << ^ / \ = o 03 03 Χ·- >5_Γ ~ / \ ^ tO \ M / \ to to \_( \ i-f—o SSSSSXSX 50 \=c w /Γ-° oooonooo » -( I το-orJ» — " s b s ffi k a <λ 1 I ·υιο λ O Ou ω ω u u u \ , ;’=° rc 33 ·< I 1 ω u> Jd · i——\ V A O O Λ* w w \/ =¾.°1 </"rS g' x x er U U) 15 I—* Μ (- X> «>w>w>a> i- 3 ro +i (O (O M K> (OM 01 \ / σ* <r> ω ** to * 3 ---( o

00 (O β (O (— (O Ό \3T

> i —- — t i — — · V*» -oOQ.0» o-o- o 4? λ-s ό o ro ro roro o z. /1 2 O O O O 3 -( o t wo«o

+ a o Q ^ II T

+ + + + +M++ to a — > Λ0

UlOvJ^JikOCO-^J O ccto \f ^-<70 OOWWOMWU) Η » ϋ» V 500 00000000 to to <»

^ O O

a a u> u> uimuimviutuiui CT2

<j\oo>oo>o>mut DO

000900^^*00 rt μ D <t>

ΟΟΟΟΟΟΌΌ »O X

♦ *< H*

UlUllDUtUlUtUlUI Ht < oooou>coLnin c » OOQOOO^^loO 9 <2 α rt \ / <5 V" £—o rt \ x \w S’ /r~s WN>MMU»(OH*(- H » -/ I ;o_2—*> uiHooMumm c ro g I υ,ο "k κ>νονοΛ·ο\Μνοσ> 3r+ -? I nnef uiouioLntn(-*Ln Miro , ) 1 I I I I I I I »3 W · 1 r*., WNUirouMMH 3(+ OO *<3 IDUIMUUlUlKte iQ Μ \/ vDOcotnuioo-jvo »o \' 01 oromrotnouio 3 /? »—»-*·—*t—·»-·»-*»—·»-· 3 w / \ «-* w W *W> W «W L_* I _ '

G O

X X

03 u 20 *2 S fS K M M ro.M ^ ?r -* O U> CO ^1 <Λ 01-4» tO M~S«>COVIWW^ · w • *η*η·η·η·η·η·η*η-η-η-ηχΙ·ητ1-ηηηΊΙ χ Η* “Π'τίτΐ'η'τΐ’η-η'η-η-η-πτ,-η^-ς^-η-η χ % to

SxSiixiiSSSSSggggg » totocococococooooo ω οι ο» ο> c? w1 c? c? o? ·*“ ^^^^^x^x^xcaiicrcaixiacaco^ac » c? «* 8R88888£5>888888£ l··» XXXXXXXOOIX Il" „t,? <D (O <3» foro ^ Λ ^ x XQ (T 5 ± n nW 3,3 >· i 5 S ? t 9 5*^ <"> o dt 5 ^< *< £§ ΞΕ ΞΕ^τ^?1.31 ae dc *«— -w- cc ae co ω —* —* ^ ^ ^ M Co Co Co ΓΟ ro CO CO W w

5 5 5 o--— o o ^^-co cT

rvF .V? ,.F , T11 Μ Mroarac tv> to

ro ro CO Co CO CO

^ ^ w _ dc dc ro ro »-3

Co CO OJ

rT'rT' g· H* Η» * > ΓΤ* ®>σ)>σ?> + ©>υϊ>σ>σ}> , co> "2.

® -am Φ o rr n”tNNNNNMNNNNu-<JMM Cn 01 ΝΝωωο,^®ω!ηΝ 3 o> * ιί Ό n ^ ro ro Co co co Γ" eja <n cd α\ o» * o — -oo-ocncoo— uiSSS ® & 3 o o ssggSsssl|lålså^| ·§££, * ro cn ^ μ·

225iSS?|;S!S<!!l»«"noi<iioiOMn <D O

O o SS5SSSS|SSS22SS§ s m 'J'JvivJOlolOlWOlOOlOlOlMVIOimo, Ό 5f * *% »- < 8

OoSmSSSSSi^O'OO'O'UoS £ **

oocvoiojooewoooooo^fcjfcoooio» O

Dj

(D

{* iss»*s»S2SS8SSi5SaS ♦< » ?T??T'?‘f????V’?T‘i,??T i «+ »»goSoioiSSSgoueMéS 2*5 SS§g00’§ou’0oss°§i5S5“ 5 3- ^^^^Mrotnroroo» ro C^- Μ ej CLJ “L· 'f1 1 (n

i-· I

21 3 Μ Α ω ro μ ω ω U ω ω u ω ^ ^ — — — >—- co vi σ> νι ·> CJ r\) · gj σ ·υ *υ -g Τ3 qj* Ah Oh oh oh 55535 "n -n -n -n -n -n m x U> CO C/> CO </> Φ Φ Φ Φ Φ "g- ή -n -n -n *n -n -n x

o> o> 0> 0> 0> W

O. CL o. o. o.

CD CD Φ Φ CD

a a ft a si o o o o o o o to ® ® ® ® ® ϊ i x x i i x Λ r r r r r ω ω w w ω w w

X X X X X

>11*1 ro ro ro ro ro o o o o o

7Γ 7? 7T 7Γ O O O O O

0 o o o o o =c =c =c =c =c n: » 1 I I 3 3 CO ^ 3 3 3 13 3

Φ CD CD (D CD

O O O O O O O » ^ Λ -—v Λ OOOOOOO <Tv Μ v| CD CO S| X X X X ^ ^ -s ^ m ro vt vj ο ro ro ro ro o o o -< — - o o o o s x x :o

Vi X X Vt X ^ Λ —* CO OO OD O

CO O O O W ^ x ot ro x o> x x rcco co oo

• « ^ CO CO CO

ot co tn ro co w ^ v-»

M. · CO CO CO

co o o m o 3 3 3 o ^ ^—· n w 3 3 ^ 3 3 v— 3

Φ CD CD

3 O. CL 3 CL _ ^ CD CD _ _ tn g 0.000.0 Ό p> 3* y 3P * 03 > + P > + -i. O" o —'> o —* 109 ® 3 ro ΧΓ O O ΖΓ O Φ «_» —* -j -s —· -s 1 ^ o o o o o , “1 -*»-+> "S -*> · . K, ^ co ^ o o o o o ro ro ro —* —* —* a -K -< -S -h -< ro -É* O «) VI SJ 3 .

03303 σ> CP OD O "vi O ^ ^ T ^ \ »ii«li» · J?1

3 w w 3 t n οι ω ίο N N o O

o O \ CD CD O crt ro CO CO o ^ V> 3 3 3- T3

O CD e-T W

3 3 3 "O A> o> O O cT 3 . Λ 7 ct 3crcroj\ . . . . i , o n rr Λ .4. ak “1 /T> T T T T T X ti ·' · v

^ —1 ^ \ S * ro oo ot ro o ot ro o O

2. Λ? od co o "vj o cn

— -♦> -t> <-r ST ° o o o · e MOM

P> P> 3- 3 W w H> V> V> A> O w h.

A> CD Φ 3 —»

w · · O

cd —»ro • o _ ·· ut tn ot ot ot ui ut J *

0^3 Ot CO CO CO CD CO CD O O

** o co ot crt ot ro ro ro rtH

Kil · ^ "**·** ^ ^ roro

2 M 0\ Μ Μ Μ ο» φ Ol CQX

Μ <A · *<

O M

v> 3 < O Al

3 3 W Ol W Ol W ΟΙ W Hl cQ

O Ot CO co CO 03 CO 03 ert 3 ο σ> o> σ> ro ro ro S'* O 3 er -J O* X <* o* ^ -*> w lu φ U - . .

«Λ · A N 0> Ot en N N 2 S) CD O vi A Q V» Ut CO C φ • cn o cn tn o cn o 3rt ••••»ti Hl (ft A U) N -* 00 tO —· fy L,

Ot M -· CO O -» » i! i ouicocoooro 2 ^ o o in o Ό K- ro —· —* —* ro u* m » O 1 w *- i 22 3 tt ro μ Γω Λ s- ^ Γ m -σ -Ό / γν sv tv / \\ § § ’»•’’ϊϊΐ-ηιιι x y / n =

M irt I-· · / \ 2 O

(O cd / \ω / 3-3- ^ = = = = = = = = x fO \ ^'7-( o* o> ro \ / \ CL Q. '-( \ O <T> \ / X X , ^ ^ _ \ / ® ® it> I-(-0 _ _. ^--cxinrcacacrca» \rc £ ^ N ro ro ro ro ro \ ςο * '» «"O ro ro ro ro ro-"ro- / ' g ro ro OOr>oor>oo /«2 00 = 3:;ε = :ε533 -(1 Τλ,£,_

^^toototototototo I

o o OsO

o o 5Sgx=xxxx =0 I 1 ·

3 3 to CO CO · Λ. O O <“*—I

»5 \' _ _ ^^822292 =° Λ “ CD %J X X = ----- O CD CD CO CD C ' p- S ro fJN N 2 = = 3:3 -< = » 3 3 Τί?1^40 to CO 33 K) y y .O- _I_ 3: CO -—- —- ___ CO CO CO —- CO CO Co CO °*

ro cr> ω O

Dl U tO

CD O

3 3 3 3 O. CL \ / CD CD >>>,., -O I-V"3 · ΞΞ» CD CD CD 11 ί Vo

= V— ' CD

O O CD Π /1 CD

S “S -J T3 / 0

o o -/ 1 =---CD—DD

—· w __ _. ro_rf CO- 3 J rp P-.

Ξ 2 gtotncn^cicocnaj 3 2 . t o=o =am oætocnox»roco«o T3 I i S S ^ocncoccnSSiS 0 3f<n “ 3 3 O \/ 01 flf o o — o

Ξ I ..+ + + + + + +S«— -/ \ M

—*—» * ' OJ OJVJ Ο» VI VJ V Γν> OQ 31 ^.

W Ni O A ^ to ¢5 q 4 w tO

-ty-H O O o o O o O —* ro o ro οΓ βΓ ro cn v> v> ^ o o

(n(n<noi(noi<n^tn _ M

2ϊ ^ λ co 03 o cr 3:

© O fvj o> (Λ co-*o co ro O O

^ ^ 1 s *% |-(|_· O»O>O^J^JV4njo\OV<^(0 \ / Ό o \-/_0 • »< \ = ·“· \ to

^ \— Q

©tnviuitnoioi*tktn μ»λ γη /Γ q »Of\JO»Cft©0«S 5¾ ^ L-/ I x—o··» 2 " 3 I o ^ O " I I 0=0 450 I l v

^ M I -CO

—· —· .—· ^2? o o x> 0» S*NUNAMOM C® \ 7 σ» N ^ N N o CO * —’CO 3 rt \/ ΟΟΙΛΟΟΟ,Ο,Ο-ΟΜ,Ο o N-wiiiiiL »3 y\ — WOOIpIOO-CLMOI "i* =50 •o Λ. cn o uj © S S? S Ό ►" ^o

t" tn cn o o o cn - O

—’ — roro—* —· —< —> _* 3 ~ ~ ----~ w — 3«?

Η* I

23 oicntnuiuiviinui«« Ξ Ξ νι ,σ> υΐ-ΛωΝ-^οωω '* ζΐ “ ο -η-η-ΠΤΙ-η-η-ητίΙΙ χ / νν χχχχχχχχχχ χ / \ χ ο to / \ω / X---( X ---}-( Ν) Α “* Τ \ ο ο ο λ \ / IIXISIIXIO 30 \ / fN> rs> rc Η» \ / ^ ’—· — *— w ν L: μ μ ro \, τ* Ο Ο Ο V——

X X =c /1 S

<*ί ο> ο> /, § Ο Ο Ο Ο ο Ί· 1 i ^ x x = xxxxxox χ , 0—0 fs> <\> ro ro ro χ ^ * j 1 t'» Ν Ν Ν λΓ *** Λ <-ι

O O O O O S “ 73 O

„X X X x . - X \/ <J> 03 03 03 οι „ o ri -1 \ ϊ ΙΟΟΟΟΙΪΧΙ Ja 7333 *r — χ χ χ χ Λ M eo o οω ω ω ω „ X X ω ω IV> (ν3

^ΧΧΧΧΧΧΧΧΧ X

\ /' νΡ

JSSSSS2222 χ -S’ Λ~ S

**> ωωωωω οποο «λ /1 ο χ χ χ χ ν 3 -ί , χ—ο—χ Ο3 03 03 03 —< Π>. 1 I (Π Ο Λ» *-3 — — — — χ -ι <~>τ=ο to

Οο 03 03 03 <33 I I I ' CT

** οο ® ν-< 73 ι-* ~L °>

_ Τ3 Ο °* OJ

1=3 > Ο > ρ > ι , ι , _*. / \ 3 ' '

<Χ> XX

^ t—* to 133 — Γ\3—>ΓΟΓΟΙΝ3Ι\3—·—« cn " U-^MONOIOIUJUJ 3 Ο ΟΙΛΟΙΝΟΙΙΠ-'ΟΙΝ m • ι · ι < < t t · y 03 —* Co 03 03 cn cr> ro io

M UIU>(S0>-><0>IOM

o o

O

, + . ^ . + <3 O

X -+ + -++^+ + + + X«--· ~ —;^0030crvcnco<33 IN> OR \ / -tv OOII3UI-<OIIOM^ O' -_- \ ( r-1 ° ooooooooo -+ NON \ -r (33 cn \03

^ M- _ \-O

"2. A 8

-/ I X-O---X

(£i muiuioimuiOTUiui rr·* ro I , wo a £v£v(m(33I3>(3>4v«.00 mn ™ I Oe«5 ® »000003CONN 22. I I 1 1. ' JL. V. ^ « J JT CO ' Γ,Α·“\ ^ N9t(no)otNscno) Φ Φ n n «Ο X s J 33 <Λ

. l< \/ OV

Η* O

- <; / \ wwwmwvivitnw μ» W v u o 03000009e>NtO Dft MK> a (0 ft N ro (a> r\> —· —* —» η m w “'OiAuw-'iflucn J Cr

S OOJujQOXktnoS £ J

9 oooocncnotno 3cr * ·*····!·» tft φ W fN)MAOJrat\>fN)ww 0»a ^ A VO Ό —* (o «4 in »o *i _+ J)5 OWOfS)>JMOO>«) ^ μ.

oviooov* ;T Λ

ro ro -»· —* w —» ^ O

— — — - ^ - g3

μ I

24 s η in Λ U Μ —'OlOt»vl0\01AWM-'OU30) . tø -n'n-n-ri-n*n-n-nxx*n*n-n"nx:i:'ri*Ti x H* ιΐϊϊΐϊΐϊϊΐ·η·ηιΐϊΐιι x

M

O O O o o x i x a: x rs> ro ro ro ro xxxx^-'—xxx — xxx-— ar^irx

ro ro ro ro ro - H

00 o o r> ^ xx x xx

CO 00 CO CO CO

0000 n o o 000 o o co XXXX XXX XXX x_xx ro ro ro ro x x ro ro ro X ro ro ro x ro X ro ro x ro ro ro ro ro ro ro ro ro ro ro ro ro 0000 000 o o ro o ro ro XXXX XXX XXX x.xx

CJ CO CO CO CO CO CO CO CO CO CO CO CO

- % oooooooooorcrcrnrnrciciD ^ po icrcxczcicxacicinrc P a ωωωωωωωωωω *< << IIIIIIXIIXXXISIIIS 70 j 01 P? * cr OOOOOOOOOOOOO ’ o o o o

OOOOOOOOOOOOOOOOOO PO H

:c = — x x x x x x — — ^ x rc av o o o o n in} n (\) —ro 000 οω co n . <.

xxnoxxnoooooxxxx -c w u ω ic xcj to x X x x x ic <0 ω u ω το — O w «—CO (J(i)(4b)U vvvv ON '— (lo co w wo u v ω ω ο» ω m ro ro n o rt co m 0» > > Ό rr a>n>CD>CD>+ + 1 i » « i » co ;> *- ^ 03 03 3 o -i ^roro—*—*ro—* ro ro ί μ σ> n σ> σι co’tn (ο\οοσ)>ιο·>νΐ(ο » .ϋ. cd ro —» —»-CkfOCr>COCDCnO—· — O O Ό Cl . " *Ι»Ι|·<«ΙΙ»·»«Ι1Ι·Ι · vr —► ro ο» <λ —*<o«ooiro-<oN'J(^Jfc03-£fc I o «-»<nAO*M^<0-'MO-iAUWMNO I Λ

NO

4* + + + O Λ 4-—* + —*4-4- + —*4·—»4-4-4-4-4-+4-4- 3C* CJ O CJ O ro U> U —•UOMiOMO'OMvJNJ ro o *—·

-'ucoNTNirocvotoroocorocNCONiuiui o — Q

0 « o A « « 000««000·βφ fO fc-» ro o ro H- «* woicjcnwcncntncftwcnwawcnwtnoi rr*7

NrstQvcvvjNjuttnuuetoicnot^^ooOd z x θ3θ^4>οοΰθθΝΝθ)Α^χ»σ»σνιοιο £ w Π “

MNMNMSMMO'OCnOVONSMMM <9 O

tfl *· • < H* _ rt> < wwwwwcncnwwwwcnwwwcnww C ft

m n σ» ο» μ μ vi cn <o co σν· cn o ^ ^ o n 3tQ

CQ03AXkO)CDOororoo}^-Ck^o^o>roro Qm rt

Q

rt

H 30 C CD

ro “•-'NN g rf

ro x* tn to ^ u in ^^wnwnnuvwnj —* i L

V)CDUCnO}^COOOOUfN)^V>rOOOO A?il incncntncntntncnoocncnuiooooo ν 3 1 « i i « i · « i i i t i i i « i i X rt CJUlffiAUI^OtA^UNUNN-«·^ CO. N NO M· — Muroo'O'J’OOvsicnvicocONoo. a - n

OOcncncnOOcnOOcnoocnCDcn*^iO X

O ui w ui o rå 71 cnrororororororoNfo— αλλ-»-*-- — s w 25 D Μ

00 CO 00 00 Co 03 - C» n 0} SI V M M ·< JV

ΟΟΜΛΟΙΑΜΝ^ΟΙΟΟΜΟι · Co • yi ω rv> ·-* “Ο *Ό “O XJ *0 “Τ|·τ|-π·τ|-τ|-π-η-π-τ|-η-η-η-η v> 0>· 0>* 0>* ft>* o>

ID ID ID (D ID

3 3 3 3 3 _ ^η-η-η-η-η-η-η-Πίχχ! x W V> W w W fo

CD CD CD (D ID

Ό Ό X> XI T> 3-3-3-3-3- - —· D> Ο» &> fU &> 00 00 r> 0 r> ο η χ χ ___ id cd id id m I i i i i 3; x ro ro x x 0 0 20 X X X X X XX t-» Φ ® ® ® ® roro cj o> Ο O ----- i— r~ i— r- r~ · ·χχ ω ω X 31 X X X Ο Ο» t » » » * ro ro ro ro ro _ 00000 00000H0 2 2 -ir~ *i' t— TT* x" **· 5C 3 2C 3Z 3· 3» 3m Ο O 1i mim 53 o ? O O O 2-2^2^2-2-2^2^ I I to 2 2 2 2 2 o o o o o o r> o u> = = = = = i i i i i i i = = =» = = cj ω ω ω cj co o

ID CD ID ID ID

03 03 vi C3 si ooooooooonnnn m — o ro vj σ> acacxscacicacrcicxxxx ^nxxcnx «ο>ωωωωωωωωωω co *· x m o> x σ» ro w ω μ ω o* o o cn o o-S-H-ow 2 = = = = = = = = = = 3^ » 3 3 co cn '— 3 3 3

3 o. o. g α 2222°°°oooooo » HJ

ID <D OOOOOOOOOOOOrj ^ Ql Q.OOQ.3- x=cxxx=cxxxxxx2 vf* rr 3" 3* id fo *7** ^ ^ ro ro ro ro ro ro ro ro ro ·<. m

o —· —* 3Γ -O QOOOOOOO <3 0 0 0 0 =o iL

3- o o id rr xxxxxacacacxicS^S ?L M

—· -s -s *σ ©> co co cj to co co a> co co co co co o> ^ O O O c+* 3 ·*—* — -— co -S -♦>-+> oj N. ro ro ro 0 0 0 3 0 _ -t> -J -S \ 3- _ 0 3 3 0 —· 2

-s rr o m O

3ΙΛΙΛ—·-? 3*5» -LJ H

o o o ° 1 tD>ia>3-CD>o>D)> H. ft «·> 3 3 -s -t> Oco 3 w §33°° 5 “ 0 0 0 3 3 or CT -* \ — O -*·—*- 3 ID . ro’ -*· ID 3" , WNO-jniOoNOVIOMO 2 —* -t> -b rt p Λ Λ Λ · J · 1 1 1 · · · Ό P P 7 3 tocoro—»MlDiOMWOJUN ·

-b w ø p O NNj-Jw-»<bOO-Jf\jsjro O

ft> ID ID 3 —» ° Π 0 · · o w id —· ro • o — OF» + + + + w+ + + +i++ X^N J—.

••O I C0C0<nC0O<7>r0V0C0—'—»<£> fvi o Q

ro·* ^ciMiN)tnoooiWAvi©(n c-> >

O M oooooooooooo —* ro orvJ

*· ro cn

M 0 W

O H- v> 3 o

3 O HSSi5H!ii»«»«n<noio«inoi CT S

3cr SSSSSSSSSo'oio'·" (0 o O-·- i| Η 5ϋ ~J <y»<no»o»e»oso*ovo»ViV(V,V, tSSS· “* ? · ·< -t, W ^ H· Ο» (B rt> < . Η5?®ρ<Λσ\^σνσ»ο»€ηοο% 3*9.

ΝΝΝΝΟΟΟΟΒλλαΪ, Cl it

CD

ft ω to n cj ι-c 50 !ί!2πί·ίωΜν,ωω«'ω«ιω c to SJiSS'*k'0N0'o<,'®*w 3rt <2 2 O—'oocnocncnoo 2, n ΛωΝυωωΛωωο>ήο>* β 3 ΛΐοοιοιοΛ — ιοωιοοιοιω 3ft °S2Su,otn0’Ou,i»oo vo *-*'

o in o cn ~ O

to-·- — win—ioiuifoNNN , g — — “ ----- i 3 w

1 t- I

26

Eksempel 89

Farmaceutiske præparater 5 De følgende eksempler belyser præparater beregnet til forskellige topiske administrationsformer. Mængden af det virksomme steroid i de perkutane præparater er sædvanligvis 0,001-0,2 vægt%, fortrinsvis 0,01-0,1 vægt%.

Præparat 1. salve mikroniseret steroid 0,025 g flydende paraffin 10,0 g hvid blød paraffin indtil 100,0 g 1® Præparat 2. salve steroid 0,025 g propylenglycol 5,0 g sorbitan-sesquioleat 5,0 g flydende paraffin 10,0 g 20 hvid blød paraffin indtil 100,0 g

Præparat 3. olie-i-vand creme steroid 0,025 g cetanol 5,0 g 25 glycerylmonostearat 5,0 g flydende paraffin 10,0 g

Cetomakrogol® 1000 2,0 g citronsyre 0,1 g natriumcitrat 0,2 g 30 propylenglycol 35,0 g vand indtil 100,0 g

Præparat 4. olie-i-vand creme mikroniseret steroid 0,025 g 35 hvid blød paraffin 15,0 g flydende paraffin 5,0 g cetanol 5,0 g sorbimakrogolstearat 2,0 g sorbitanmonostearat 0,5 g 27 ΡΚ Ί67574 bl sorbinsyre 0,2 g citronsyre 0,1 g natriumcitrat 0,2 g vand indtil 100,0 g 5

Præparat 5. vand-i-olie creme steroid 0,025 g hvid blød paraffin 35,0 g flydende paraffin 5,0 g sorbitansesquioleat 5,0 g sorbinsyre 0,2 g citronsyre 0,1 g natriumcitrat 0,2 g vand indtil 100,0 g 15

Præparat 6. lotion steroid 0,25 mg isopropanol 0,5 ml carboxyvinyl polymer 3 mg

NaOH efter behov vand indtil 1,0 g

Præparat 7. suspension til injektion mikroniseret steroid 0,05-10 mg 25 natriumcarboxymethylcellul ose 7 mg

NaCl 7 mg polyoxyethylen-(20)-sorbitan- monooleat 0,5 mg phenylcarbinol 8 mg sterilt vand indtil 1,0 ml

Præparat 8. aerosol til oral og nasal inhalation mikroniseret steroid 0,1 vægt% sorbitantrioleat 0,7 vægt% 35 trichlorfluormethan 24,8 vægt% dichlortetrafluormethan 24,8 vægt% dichlordifluormethan 49,6 vægt% 28

Præparat 9. opløsning til forstøvning steroid 7,0 mg propylenglycol 5,0 g vand indtil 10,0 g 5

Præparat 10. pulver til inhalering en gelatinekapsel fyldes med en blanding af mikroniseret steroid 0,1 mg 10 1actose 20 mg

Pulveret inhaleres ved hjælp af et inhalationsapparat.

Farmakologi 15

Affiniteten til glucocorticoid-receotorer af de nve androstan-17fl-carboxvlsvreestere. som kan fremstilles ud fra de ifølge opfindelsen fremstillede androstan-178-(2-oxoethvlenoxvl-forbindel ser, via de 2Q tilsvarende androstan-17fl-carboxvlsvrer

Alle fremstillede steroider med formlen I er fysiologisk aktive forbindelser. Affiniteten af de fremstillede androstan-170-carboxyl-syreestere til glucocorticoid-receptorer er blevet anvendt som model 2g til bestemmelse af den anti-inflammatoriske styrke. Deres receptoraffiniteter er sammenlignet med budesonid ([22R,S]-16a,17a-butyli-dendioxy-110,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion), et højaktivt glucocorticoid med et gunstigt forhold mellem lokale og systemiske virkninger (Thaién og Brattsand, Arzneim.-Forsch. 29, 1687-1690 30 <1979»·

Der blev benyttet hanrotter af stammen Sprague-Dawley med en alder på 1-2 måneder under hele undersøgelsen. Thymus fjernedes og anbragtes i iskold fysiologisk saltopløsning. Vævet homogeniseredes jg i en Potter Elvehjem-homogenisator i 10 ml puffer indeholdende 20 mM Tris, pH 7,4, 10% v/r glycerol, 1 mM EDTA, 20 mM NaMoO^ og 10 mM mercaptoethanol. Homogenatet centrifugeredes i 15 minutter ved 20.000 x g. Portioner på 230 /il af den ved 20.000 x g ovenstående væske inkuberedes i ca. 24 timer ved 0eC med 100 /il phenylmethylsul-fonylfluorid (en esterase-inhibitor; slutkoncentration 0,5 mM), 20 29 ο /ti umærket konkurrent og 50 /il H-mærket dexamethason (slutkoncen- tration 3 nM). Bundet og frit steroid adskiltes ved inkubering af blandingen med 60 /il 2,5% v/r aktivt kul og 0,25% v/r dextran T70 suspension i 20 mM Tris, pH 7,4, 1 mM EDTA og 20 mM NaMoO^ i 10 5 minutter ved 0eC. Efter centrifugering ved 500 x g i 10 minutter taltes 230 /il af den ovenstående væske i 10 ml "Insta-Gel" i et

Packard-scintillationsspektrofotometer. De ovenstående væsker 3 3 inkuberedes med a) [ H]-dexamethason alene, b) [ H]-dexamethason plus et 1000 gange overskud af umærket dexamethason og c) (½]-dexamethason plus, et 0,03-300 gange "overskud" af konkurrenten. Den uspecifikke binding bestemtes, når et 1000 gange 3 overskud af umærket dexamethason sattes til [H]-dexamethason.

Den radioaktivitet, som er bundet til receptoren i nærværelse af 15 konkurrenten, divideret med den radioaktivitet, som var bundet til receptoren i fravær af konkurrent, multipliceret med 100, giver den procentuelle specifikke binding af mærket dexamethason. For hver koncentration af en konkurrent afbildes procenten af specifikt bundet radioaktivitet mod logaritmen til koncentrationen af 20 konkurrenten. Kurverne sammenlignes ved 50% specifikt bindingsniveau og sættes i relation til budesonid, der tilskrives en relativ bindingsaffinitet (RBA) på 1.

Tabel 4 25

Summarisk tabel over de relative bindingsaffiniteter (RBA) til glucocorticoid-receptorer af nogle af de undersøgte forbindelser.

on

Forbindelse ifølge

Eks. nr. RBA

Budesonid 1 ^ 4 epimer B 0,30 5 epimer B 0,17 27 0,50 38 0,04 55 0,20 30

Eks. nr. EM

64 0,05 67 0,04 5 69 0,44 84 1,03 87 0,63 10 15 20 25 30 35

Claims (2)

1. 5 31 Fremgangsmåde til fremstilling af en 16,17-acetalsubstitueret androstan-17/?-(2-oxoethylenoxy)-forbindelse med formlen: CH-.-OR7 l_2 chJ R 10 - i2 eller er en stereoisomer forbindelse deraf, i hvilken formel bindingen mellem 1,2-stillingerne er en enkelt- eller en dobbeltbinding,
2. 20 X1 betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, X betegner hydrogen, fluor, chlor eller brom, 2' R betegner en ligekædet eller forgrenet carbonhydridgruppe 25 med 1-10 carbonatomer, og R7 betegner hydrogen eller en acylgruppe afledt af en carboxylsyre med 1-10 carbonatomer i lige eller forgrenet kæde, 30 kendetegnet ved, at en forbindelse med formlen: 35 32 CH-OR7 l 2 c=o Η0Ν^Φ^' '0^C^CH3 5 ^Ch3 " i2 10 omsættes med en forbindelse med formlen: H / . 0=C V 15 hvor bindingen mellem 1,2-stillingerne er en enkelt- eller en 12 2' 7 dobbeltbinding, og X , X , R og R har de ovenfor angivne betydninger, i nærværelse af en sur katalysator. 20 25 30 35