DK168601B1 - 16,17-Acetalsubstituerede pregnan-21-syrederivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf og farmaceutisk præparat indeholdende sådanne forbindelser samt anvendelse af forbindelserne til fremstilling af et lægemiddel - Google Patents

Description

i DK 168601 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte farmakologisk aktive forbindelser og fremgangsmåder til fremstilling deraf. Opfindelsen angår også farmaceutiske præparater indeholdende forbindelserne og anvendelse af forbindelserne til fremstilling af et 5 lægemiddel.

Formålet med opfindelsen er at tilvejebringe et glucocorticosteroid, som besidder høj antiinflammatorisk styrke på det sted, hvor det påføres, og lav glucocorticoid systemisk virkning.

10

Glukocorticosteroider (GCS) er de mest værdifulde lægemidler til behandling af astma og rhinitis. Det er almindeligt anerkendt, at GCS viser deres terapeutiske effekt ved antiinflammatorisk og antianafylakti sk virkning i luftveje og lungevæv. Oral anvendelse 15 gennem længere tid af GCS hæmmes imidlertid i høj grad af alvorlige bivirkninger uden for lungeregionen. Som følge deraf underkastes kun en mindre del af patienter med astma eller rhinitis en fortsat oral GCS-terapi. Der kan opnås bedre sikkerhed ved at tilføre GCS ved inhalering af aerosol præparater. Imidlertid har også de virknings-20 fulde inhalerede GCS, som for tiden finder bred klinisk anvendelse -beclometason-17a,21-dipropionat (BDP) og budesonid - en temmelig snæver sikkerhedsmargen, og for begge er der rapporteret om uønskede GCS-virkninger i det almene kredsløb ved de højeste af de anbefalede doser for inhalering (C.-G. Lofdahl, T. Mellstrand og N. Svedmyr, 25 Eur. 0. Respir. Dis. Suppl 136, 65 (1984), 69; S.-Å. Johansson, K.-E. Andersson, R. Brattsand, E. Gruvstad og P. Hedner, Eur. J. Clin. Pharmacol. 22 (1982), 523; J.H. Toogood, J.C. Baskerville, B. Jennings, N.M. Lefcoe og S.-Å. Johansson, J. Allergy Clin. Immunol.

70 (1982), 288). Dette kan henføres til, at sådanne forbindelser 30 efter absorption har en plasmahalveringstid på > 2 timer og hoved sageligt inaktiveres i leveren (R. Pauwels og M. van der Straeten,

Eur. J. Respir. Dis. Suppl 122, 63 (1982), 83; A. Ryrfeldt, P.

Andersson, S. Edsbåcker, M. Tonnesson, D. Davies og R. Pauwels, Eur.

J. Respir. Dis. Suppl 122, 63 (1982), 86). I overensstemmelse hermed 35 viser budesonid en lav selektivitet ved anvendelse i luftveje i et modelsystem (R. Brattsand, L. Kållstrom, U. Johansson og M. Dahlbåck i "Glucocorticosteroid Inflammation and Bronchial Hyperreactivity", Editor J.C. Hogg, R. El 1 i el-Mi cal 1ef, R. Brattsand, Excerpta Medica 1985, Amsterdam, side 150-153). For nylig er der blevet beskrevet 2 DK 168601 B1 GCS med andre kemiske strukturer, f.eks. fluocortinbutylester (FCB), i eksperimentelle systemer (J.-F. Kapp, H. Koch, M. Topers, H.J. Kessler og E. Gerhards, Arzneim-Forsch. 27 (1977), 2230). Disse forbindelser har den egenskab, at de inaktiveres ved 5 biotransformering ved hydrolyse også uden for leveren, men som vist af Mutzel (Arzneim-Forsch. 27 (1977), 2191) har FCB en næsten lige så lang en halveringstid i plasma som budesonid. Som følge af lavere styrke må FCB anvendes i meget højere doser end budesonid eller BDP (P.S. Burge, J. Efthimiou, M. Turner-Warwich og P.T.J. Nelmes, 10 Clinical Allergy 12 (1982), 523).

Fra DK fremlæggelsesskrift nr. 135.380 kendes endvidere 16,17-acetalsubstituerede pregnan-21-syrederivater med den almene formel: 15 COOR3 c=o 1,1 J X--------0^ ^R1 ------0^" ^R2*

20 x I

X

hvor X betegner et hydrogenatom eller et fluoratom, Y betegner et 25 hydrogenatom, et fluor- eller et chloratom, Z betegner en 3 hydroxygruppe, et fluor- eller chloratom, R betegner et hydrogenatom, et natriumatom eller en alkylgruppe med 1-8 t/H nt carbonatomer, og R og R betegner en alkylgruppe med 1-4 carbonatomer eller en phenylgruppe. Disse forbindelser angives at 30 have udmærket betændelseshæmmende virkning ved lokal anvendelse og at være praktisk taget uvirksomme ved systemisk anvendelse.

Det har imidlertid nu vist sig, at disse forbindelser har en større systemisk virkning og et lavere selektivitetsforhold ved lokal 35 lungeafprøvning i dyreforsøg end de med den foreliggende opfindelse tilvejebragte hidtil ukendte 16,17-acetalsubstituerede pregnan-21-syrederivater, jvf. efterfølgende sammenlignende afprøvningsresultater i tabel 1.

3 DK 168601 B1

Med den foreliggende opfindelse er der tilvejebragt hidtil ukendte 16,17-acetalsubstituerede pregnan-21-syrederivater med høj antiinflammatorisk og anti-anafylaktisk styrke på påføringsstedet, men med lave glucocorticoide systemiske virkninger. Forbindelserne 5 ifølge opfindelsen kan derfor anvendes til behandling og kontrol af inflammatoriske, allergiske eller immunologiske sygdomme i de respiratoriske luftveje, på huden, i led eller i tarmen.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er kendetegnet ved, at de har den 10 almene formel: COOR1 c=o H° -~°^r 15 ~o' v ch2ch2ch3

F

20 eller en stereoisomer form deraf, i hvilken formel R* betegner en lige eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-4 carbonatomer.

25 Særlig foretrukne R^-substituenter er methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl og sekundær butyl.

De enkelte stereoisomere former, der findes i en blanding af et steroid med den ovenfor angivne formel I, kan illustreres på 3° følgende måde: COOR1 c=o HO . L---0^ 35 I X -Q' u'vCH2CH2CH3 epimer s , · < »

F

4 DK 168601 B1 COOR1 C=0 HO X- -O- r -CH2CH2CH3 5 T ° Ή

epimer R

i

F

10

Den foretrukne epimer er 22R-isomeren.

Forbindelserne med formlen I kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, der er ejendommelig ved det i krav 2's ^ kendetegnende del angivne. Forbindelserne med formlen I kan således fremstilles ved: A. Oxidation af et aldehyd med formlen II: 20

CHO

C=0 HO x /ν,Λ-'-Ο'-ρΗ0 Y O' 'ch2ch2ch3

25 I fI

F

eller et hydrat eller en hemiacetal deraf i nærværelse af cyanidioner og en alkohol med formlen R^OH, hvor R* har samme betydning som ovenfor.

Processen ifølge denne fremgangsmåde beskrives nedenfor i forbin-^ del se med det forudgående trin til fremstilling af forbindelsen med formlen II.

det forudgående trin omdannes et 21-hydroxysteroid med formlen III: 5 DK 168601 B1 CHo0H I 2 C=0

HO s ~ - -0 ^ r- -"H

^ch2ch2ch3 5

F

i I *

F

10 under anvendelse af oxygen (eller luft) og en katalysator, såsom et kobber-(II)-salt i en alkoholopløsning, til steroidaldehydet med formlen II.

15 Egnede kobber-(II)-salte til denne reaktion er vandopløselige salte af uorganiske eller organiske syrer. Egnede kobber-(II)-salte er, men er ikke begrænset til, kobber-(II)-formiat, kobber-(II)-acetat, kobber-(II)-propionat eller kobber-(II)-butyrat.

20 Alkoholer, der kan anvendes i det første reaktionstrin, er alkoholer med den almene formel R^H, hvor R1 har samme betydning som i formel I. Særligt foretrukne alkoholer er methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol eller tertiær butanol.

25 Det forudgående reaktionstrin udføres fortrinsvis ved en temperatur på 0-40°C. Reaktionstiden er, afhængigt af reaktionstemperaturen, 5-60 minutter, fortrinsvis 40 minutter ved stuetemperatur.

Afhængigt af, om der anvendes vandige eller vandfri alkoholer til reaktionen, dannes der i det forudgående trin hertil svarende hydrater, hemiacetal er eller blandinger heraf. Der anvendes fortrinsvis den samme alkohol som i det efterfølgende reaktionstrin, da der ellers er risiko for dannelse af blandingsestere.

35 Acetal- eller hemiacetalderivaterne af aldehydet med formlen II kan direkte omdannes til pregnansyreestere med formlen I ved oxidation.

Den alkohol, som svarer til den ønskede ester, skal anvendes i acetaliseringstrinnet. Oxidationen udføres med chlorundersyrling, der er opnået fra et al kalimetalhypochlorit, f.eks. natrium- eller 6 DK 168601 B1 kaliumhypochlorit, og en syre, fortrinsvis eddikesyre, ved en temperatur på 0-25eC, fortrinsvis ved OeC. Egnede opløsningsmidler er ketoner, f.eks. acetone, methyl ethyl keton og alkoholer. Der skal anvendes den samme alkohol, der ønskes som del af carboxylsyreeste-5 ren.

Omdannelsen af steroidaldehydet med formlen II til pregnansyreestere med den almene formel I kan udføres ved hjælp af flere forskellige oxidationsmidler.

10

For eksempel er det muligt at omdanne II eller dens additionsforbindelser til pregnansyreestere ved anvendelse af alkoholer og organiske oxidationsmidler, såsom ammoniumpersulfat, N-bromsuccinimid, 5,6-dichlor-2,3-dicyano-benzoquinon eller tri phenyltetrazolium-15 chlorid.

Det er også muligt at oxidere steroidaldehydet II med oxiderende metaloxider eller metalsalte, såsom manganoxid, sølvoxid, chromsyre, permanganat og lignende, i nærværelse af alkoholer og eventuelt 20 syrer. Steroidaldehydet II kan også omsættes med atmosfærisk oxygen i nærværelse af en alkohol og cyanidioner.

Når der opnås en 20-keto-21-syre ved fremgangsmåden A, omdannes syren til esteren med formlen I f.eks. ifølge fremgangsmåde C.

25

Der opnås den hurtigste reaktion og de højeste udbytter, når der anvendes oxiderende tungmetaloxider i nærværelse af alkohol og cyanidioner. Det andet procestrin skal udføres ved anvendelse af den alkohol, der er påtænkt som del af esterfunktionen og også er 30 anvendt i det første reaktionstrin. Hvis der anvendes en anden alkohol i det første reaktionstrin, vil esteren af denne alkohol opnås som urenhed i produktet fra omsætningen af aldehyd II til esteren I, da denne alkohol indgår i det andet reaktionstrin via aldehydhemiacetal en. Overskydende alkohol kan også samtidig anvendes 35 som reaktionsopløsningsmiddel, selv om det selvfølgelig også er muligt at iblande inerte opløsningsmidler i reaktionsblandingen foruden alkoholerne. Egnede inerte opløsningsmidler er: carbon-hydrider, f.eks. benzen, cyklohexan eller toluen; chlorerede carbon-hydrider, f.eks. methylenchlorid, chloroform eller tetrachlorethan; DK 168601 Bl 7 ethere, f.eks. diethylether, di isopropyl ether, dibutylether, glykol-dimethylether, dioxan eller tetrahydrofuran; dipolære aprote opløsningsmidler, f.eks. dimethyl formamid, N-methylacetamid eller N-methylpyrrolidon; men er dog ikke begrænset hertil.

5

Egnede oxider til det andet reaktionstrin er f.eks., men er ikke begrænset til, sølvoxider, bly-(VI)-oxid, mønje (Pb304), vanadium- (V)-oxid eller mangan-(IV)-oxid. De katalysatorer, der anvendes ved dette reaktionstrin, er cyanidioner, fortrinsvis opnået fra alkali-*0 metal cyanider, f.eks. natrium- eller kaliumcyanid. Hvis der anvendes alkalimetalcyanider som det reagens, der tilvejebringer cyanidioner, udføres reaktionen passende ved til reaktionsblandingen at sætte en al kalineutral i serende mængde syre, f.eks. mi neral syre, såsom svovlsyre, phosphorsyre eller saltsyre; sul fonsyre, såsom p-toluensulfon-syre; eller carboxylsyre, såsom myresyre eller eddikesyre, til opnåelse af en pH på ca. 2,0-6,0.

Reaktionen udføres passende ved en reaktionstemperatur mellem 0eC og +50eC, fortrinsvis ved stuetemperatur. Reaktionstiden er afhængig af 2° temperaturen, 15-120 minutter, fortrinsvis 50 minutter ved stuetemperatur.

Hvis ovennævnte reaktion får lov til at fortsætte i længere tid, f.eks. mere end 48 timer, vil det overvejende produkt være 25 20-hydroxy-21-carboxylsyreester med den formel, der angives i nedenstående fremgangsmåde B.

B. Oxidation af 20-hydroxygruppen i forbindelsen med formlen: 30 COOR1 i

CHOH

^ CH2CH2CH3 35

F

20-Hydroxygruppen kan være i a- eller β-stilling, og reaktionen 8 DK 168601 B1 udføres i et inert opløsningsmiddel med et oxiderende metaloxid eller metallisk salt.

Denne proces kan udføres i et inert opløsningsmiddel. Egnede 5 opløsningsmidler er carbonhydrider, f.eks. cyklohexan, benzen, toluen og xylen; chlorerede carbonhydrider, f.eks. methylenchlorid, chloroform, carbontetrachlorid; ethere, f.eks. diethylether, di isopropylether, dibutylether, tetrahydrofuran, dioxan, giykoldimethyl ether; ketoner, f.eks. acetone, methylethyl keton, methyl isobutylketon; og alkoholer, f.eks. methanol, ethanol, isopropanol og tertiær-butanol; og blandinger af disse opløsningsmidler.

Oxidationen ifølge fremgangsmåde B kan udføres ved anvendelse af 15 mangan-(IV)-oxid, bly-(IV)-oxid eller bly-(IV)-acetat. For at opnå høje udbytter ved denne proces anvendes fortrinsvis aktivt mangan- (IV)-oxid.

Oxidationen udføres fortrinsvis ved en reaktionstemperatur mellem 20 OeC og 150°C. Det er således muligt at udføre oxidationen ifølge fremgangsmåde B ved stuetemperatur eller ved kogepunktet for det anvendte opløsningsmiddel.

Konfigurationen af 20-hydroxygruppen i udgangsforbindelsen er uden 25 betydning ved processen ifølge opfindelsen. Således kan både 20a- og 20j3-hydroxyepimeren såvel som blandinger deraf oxideres til pregnan-syrederivater med den almene formel I.

C. Forestring af en carboxylsyre med formlen IV: 30

COOH

c=o HO . X- —0^. c N--o^υ^ch2ch2ch3 35 -' i i i

F

DK 168601 Bl 9 eller et funktionelt ækvivalent derivat deraf med en forbindelse med formlen R*-OH eller et funktionelt derivat deraf, hvor R* har ovennævnte betydning.

5 Forbindelsen med formlen IV opnås ved oxidation af aldehydet II

eller et hydrat eller en hemiacetal deraf med et oxidationsmiddel.

De ved processen ifølge opfindelsen anvendte 20-keto-21-syrer kan fremstilles ved oxidation af en forbindelse med den almene formel II 1° med et oxiderende metallisk oxid, fortrinsvis sølvoxid, der er friskt fremstillet ud fra sølvnitrat og et al kalihydroxid, f.eks. natrium eller kaliumhydroxid i vandig opløsning. Andre anvendelige oxidationsmidler er f.eks. tetrabutylammoniumpermanganat, sølv-(II)- komplekser, chlorit og lignende.

15

Alternativt kan cyanohydrinderivatet af II oxideres med methylenblåt eller med metalliske oxider, såsom manganoxid eller sølvoxid.

20-Keto-21-syrerne kan også fremstilles ved hydrolyse af 21-esterne 20 med formlen I (R* = alkyl). Hydrolysen kan udføres ved traditionel teknik, f.eks. ved hydrolyse af esterne i vand eller en vandig alkohol i nærværelse af en syrekatalysator, f.eks. saltsyre, svovlsyre eller p-toluensul fonsyre, eller i nærværelse af en basekatalysator, f.eks. kaliumhydrogencarbonat, kaliumcarbonat, natrium-25 eller kaliumhydroxid.

Forestring af de frie syrer med formlen IV udføres ved traditionel teknik. De frie syrer kan således omsættes med en al i fati sk Cj_4-di-azoforbindelse, f.eks. med diazomethan eller diazoethan, hvilket 30 giver den tilsvarende methyl- henholdsvis ethylester. En almindeligt anvendt metode er omsætning af de frie syrer med en alkhol i nærværelse af Ν,Ν'-carbonyldiimidazol, dicyklohexylcarbodiimid, anionbyt-ningskunstharpikser, polymerbeskyttet Al Cl^, pyridiniumsalte, H^BOg-HgSO^, BF3 EtgO, H^SO^-molekyl sigter, Ι,Ι'-icarbonyldioxy)-35 di benzotri azol, 6-chlor-1-p-chlorbenzen-sulfonyloxybenzotri azol, tri fluoreddi kesyreanhydri d, faseovergangskatalysatorer, trimethyl-chlorsilan, N,N-bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphordiamidinchlorid og lignende. Syrerne kan også omdannes til et blandet anhydrid, f.eks. med isobutylchlorcarbonat, og omsættes med den udvalgte alkohol, 10 DK 168601 B1 eller til sølvsalte, det sidste ved omsætning med et al kyl halogenid.

Alternativt kan et salt af 20-keto-21-syren med et alkalimetal, f.eks. lithium, natrium eller kalium, et salt af en amin, f.eks.

5 triethyl- eller tributylamin, et salt af en bicyklisk amidin, f.eks.

l,5-diazabicyklo[5.4.0]undecen-5 (DBU), et salt af en kvaternær ammoniumforbindelse, såsom et salt af tetrabutylammonium eller tricaprylmethyl ammonium, omsættes med et passende alkyleringsmiddel, f.eks. et al kyl halogenid eller di al kyl sul fat, f.eks. dimethyl- eller 10 di ethyl sul fat, fortrinsvis i et polært opløsningsmiddel, såsom acetone, methyl ethyl keton, dimethyl formamid, dimethyl sul foxid, methylenchlorid eller chloroform, hensigtsmæssigt ved en temperatur i området 25-100°C. Reaktionen kan også udføres i nærværelse af kroneether.

15

En anden måde at fremstille esteren med formlen I på er at omdanne de frie syrer til de tilsvarende dimethylformamidal kyl acetal er. De frie syrer kan også i nærværelse af en stærk syrekatalysator, f.eks.

hydrogenchlorid, svovlsyre, perchlorsyre, trifluormethylsul fonsyre ^ eller p-toluensul fonsyre, omsættes med en alkohol eller med en lavere alkan-carboxylsyreester af den valgte alkohol. De frie carboxylsyrer kan ligeledes omdannes til deres syrechlorider eller syreanhydrider og omsættes med de valgte alkoholer i nærværelse af basekatalysatorer.

25 D. Transforestring af en ester med formlen: COOR1 30 f=° H0\ --- γ η- -o' -ch2ch2ch3 35 i

F

hvor R betegner methyl eller ethyl, med en alkohol med formlen 1" 1'' 2 R -OH, hvor R , som er forskellig fra R , har samme betydning 11 DK 168601 B1 som R* defineret ovenfor.

Transforestringen udføres fortrinsvis i nærværelse af en syre eller en basekatalysator.

5

Processen ifølge opfindelsen udføres i henhold til fremgangsmåde D

ved at omsætte esterne med ovennævnte formel med den ønskede alkohol 1" med formlen R OH i nærværelse af en fortrinsvis sur eller vandfri basisk katalysator.

10

Foretrukne basiske katalysatorer er alkali-, jordalkali- og aluminiumal kohol ater, og en foretrukken sur katalysator er p-toluensul-fonsyre. Reaktionen udføres fortrinsvis ved en reaktionstemperatur mellem 0eC og 180°C. Under reaktionen bruges alkoholen i overskud.

15 Alkoholen kan også fortyndes med et inert opløsningsmiddel. Egnede opløsningsmidler er ethere, f.eks. di-n-butylether, tetrahydrofuran, dioxan og giykoldimethyl ether; eller dipolære aprote opløsningsmidler, f.eks. dimethyl formamid, N-methylacetamid, dimethyl sul foxid, N-methylpyrrol idon og acetonitril.

20

Som estere med ovennævnte formel anvendes til processen i henhold til fremgangsmåde D methyl- eller ethyl ester af pregnansyren.

Fælles for fremgangsmåderne A-D er den omstændighed, at hver proces 25 som udgangsmateriale anvender en C-22-epimerblånding, som om ønsket efter fuldendelse af processen resolveres i sine R- og S-isomerer (C-22). Subsidiært kan hver af processerne A-D udføres ved anvendelse af en R- eller S-isomer som udgangsmateriale, i hvilket tilfælde processen resulterer i, at man opnår slutprodukterne i form af henholdsvis en R- eller S-isomer.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan anvendes på forskellige måder til lokal tilførsel afhængigt af inflammationsstedet, f.eks. perkutant, parenteralt eller til lokal tilførsel i det respira-33 toriske system ved inhalering. Et vigtigt sigte for udformningen af præparatet er at opnå optimal biotilgængelighed af den aktive steroide bestanddel. For perkutane præparater opnås dette hensigtsmæssigt, hvis steroidet opløses ved høj termodynamisk aktivitet i bæremidlet. Dette opnås ved at anvende et egnet system af 12 DK 168601 B1 opløsningsmidler indeholdende passende glykoler, såsom propylenglykol eller 1,3-butandiol enten som sådan eller i blanding med vand.

5 Det er også muligt at opløse steroidet enten fuldstændigt eller delvis i en lipofil fase ved hjælp af et overfladeaktivt middel som sol ubi li seringsmiddel. De perkutane præparater kan være en salve, en creme med olie i vand, en creme med vand i olie eller en lotion. I emulsionsbæremidlerne kan systemet indeholdende den opløste aktive 10 komponent udgøre den disperse fase såvel som den kontinuerte. Steroidet kan i ovennævnte præparater også foreligger i form af en mikroniseret, fast substans.

Tryksatte aerosoler til steroider er beregnet til oral eller nasal 15 inhalering. Aerosol systemet er udformet på en sådan måde, at hver angiven dosis indeholder 10-1000 pq, fortrinsvis 20-250 μg af det aktive steroid. De mest aktive steroider tilføres i doser i den lavere del af dosisintervallet. Det mikroniserede steroid består af partikler, der i det væsentlige er mindre end 5 øm, som er suspende-20 ret i en drivmiddel bl ånding under medvirken af et dispergeringsmid-del, såsom sorbitantrioleat, oliesyre, lecithin eller natriumsaltet af di octyl sulforavsyre.

Det mikroniserede steroid kan også blandes med en bæresubstans, 25 såsom lactose eller glucose. Pulverblandingen fyldes i hårde gelatinekapsler, som hver indeholder den ønskede dosis steroid. Ved brug anbringes kapslen i en pulverinhaleringsmekanisme, og pulverdosen inhaleres i luftvejene.

30 Opfindelsen belyses yderligere af følgende eksempler. I eksemplerne 2 -1 anvendtes der en strømhastighed på 2,5 ml/cm x h ved de indledende kromatografiske processer. Molekylvægte er i alle eksempler bestemt ved elektronstødsmassespektrometri og smeltepunkterne i et Leitz Wetzlar varmbordsmikroskop. Alle HPLC-analyser 35 (HPLC = High Performance Liquid Chromatography) udførtes i en Waters /iBondapak C18 kolonne (300 x 3,9 mm indvendig diameter) med en strømhastighed på 1,0 ml /mi nut og med ethanol/vand i et forhold på mellem 50:50 og 60:40 som mobil fase, hvis ikke andet er anført.

DK 168601 Bl 13

Eksempel la

En opløsning af 0,18 g kobber-(II)-acetat i 100 ml methanol sattes til en opløsning af 0,825 g (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-5 fluor-llj8,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 50 ml methanol.

Der bobledes luft gennem reaktionsblandingen i 40 minutter ved stuetemperatur. Det meste methanol fjernedes, og resten opløstes i 150 ml methylenchlorid, vaskedes med 10%'s vandig ammoniumchlorid og vand og tørredes. Remanensen efter inddampning udkrystalliseredes 10 fra methyl enchl orid-petroleumsether og gav 0,837 g (22R)-16a,17a- butyliden-dioxy-6a,9a-difluor-ll/}-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien--21-almethylhemiacetal. Renheden bestemt ved HPLC var 98,5%.

100 mg af denne hemiacetal opløstes i 1,25 ml dimethyl formamid. Der 15 tilsattes 13 mg kaliumcyanid, mangan-(IV)-oxid (175 mg), methanol (0,5 ml) og koncentreret eddikesyre (0,1 ml), og reaktionsblandingen omrørtes i 50 minutter ved stuetemperatur. Mangan-(IV)-oxidet fjernedes ved filtrering, og der tilsattes 25 ml methylenchlorid til filtratet. Opløsningen vaskedes med 5%'s vandig natriumcarbonat og 20 vand. Efter tørring afdampedes opløsningsmidlerne, og remanensen omkrystalli seredes fra acetone-vand og gav 66 mg methyl -(22R)-16α, 17a-butyl i dendi oxy-6a, 9a-di f1 uor-1 ljS-hydroxy-3,20-di oxopregna- l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 94,7%. Smp. 225-236°C. [a]?5 = + 72,0° (c = 0,400 i OUTI«). Molekylvægten var 25 494.

Eksempel Ib

En opløsning af 0,13 g kobber-(II)-acetat i 50 ml methanol blev sat til en opløsning af 0,61 g (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-llj3,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 75 ml methanol.

Luft blev boblet gennem reaktionsblandingen i 40 minutter ved stuetemperatur. Produktet blev isoleret som beskrevet i eksempel 1, og der opnåedes 0,56 g (22S)-16a,17a-budylidendioxy-6a,9a-difluor-35 llj3-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-almethylhemiacetal.

Denne hemiacetal blev opløst i 7,5 ml dimethyl formamid og omsat med kaliumcyanid (0,09 g), mangan-(IV)-oxid (1,0 g), methanol (3 ml) og koncentreret eddikesyre (0,3 ml) under de i eksempel la beskrevne 14 DK 168601 B1 betingelser. Udbytte 0,62 g råprodukt, som blev oprenset på en Sephadex® LH-20 kolonne (76,5 x 6,3 cm) med heptan:chloroform ethanol, 20:20:1, som mobil fase. Fraktionen 4980-5340 ml blev opsamlet og inddampet. Remanensen udfældedes fra methylenchlorid-5 petroleumsether og gav 128 mg methyl-(22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a, 9a-di f 1 uor- llj8-hydroxy-3,20-di oxopregna-1,4-di en-21 -syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 99,6%. Smp. 237-244eC. [a]p5 = +34,0° (c « 0,200 i CHgClg)· Molekylvægten var 494.

Eksempel lc

En opløsning af 0,15 g kobber-(II)-acetat i 75 ml methanol blev sat til en opløsning af 0,25 g (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-llj3,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 50 ml methanol. Luft blev boblet gennem reaktionsblandingen i 40 minutter ved stuetemperatur. Produktet blev isoleret som beskrevet i eksempel la og gav 0,33 g (22RS)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-110-hy-droxy-3,20-di oxopregna-1,4-di en-21-almethylhemi acetal.

20 Denne hemi acetal blev opløst i 4 ml di methyl formamid og omsat med kaliumcyanid (0,06 g), mangan-(IV)-oxid (0,8 g), methanol (1,4 ml) og koncentreret eddikesyre (0,4 ml) under de i eksempel la beskrevne betingelser. Udbytte 0,15 g råprodukt, som blev oprenset på en Sephadex® LH-20 kolonne (85 x 2,5 cm) med heptan:chloroform:ethanol, 25 20:20:1, som mobil fase. Fraktionen 850-945 ml blev opsamlet og inddampet. Remanensen udfældedes fra methylenchlorid-petroleumsether og gav 100 mg methyl-(22RS)-16a,17a-butyl idendioxy-6a,9a-difluor-llj8-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 97,3%. Smp. 225-237°C. [a]p5 = +67,2° (c = 0,238 i 30 CH2C12)* Molekylvægten var 494.

Eksempel 2

Kobber-(II)-acetat (0,5 g) sattes til en opløsning af 1 g (22R)-35 16a,17a-butyli dendi oxy-6a,9a-di f1uor-11^3,21-di hydroxypregna-1,4- dien-3,20-dion i 200 ml methanol. Blandingen omrørtes i 3 dage ved stuetemperatur. Der tilførtes oxygen i 3 timer, og blandingen omrørtes i yderligere 8 dage. Opløsningsmidlet afdampedes, og remanensen opløstes i 300 ml methylenchlorid, vaskedes med 4 x 25 ml 15 DK 168601 B1 10%'s ammoniumhydroxid, 2 x 25 ml vand, tørredes og inddampedes. Remanensen rensedes kromatografisk i en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) med chloroform som mobil fase. Fraktionerne 2550-3000 ml (A) og 3150-3825 ml (B) opsamledes og inddampedes. Fra A opnåedes 5 102 mg fast stof, identificeret som methyl-(22R)-16a,17a-butyliden- dioxy-6a,9a-difluor-llj8-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4^dien-21-syre-ester, og fra B blev 586 mg methyl-(22R)-16a,17ar-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll/3,20-dihydroxy-3-oxopregna-l,4-dien-21-syreester isoleret og identificeret.

10

Til en opløsning af 100 mg af den sidste forbindelse sattes 200 mg mangan-(IV)-oxid, og reaktionsblandingen omrørtes i 16 timer ved stuetemperatur. Mangan-(IV)-oxidet fjernedes ved filtrering gennem Cel ite®, og opløsningsmidlet afdampedes. Remanensen opløstes i chloroform og kromatograferedes i en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) ved anvendelse af chloroform som mobil fase. Fraktionen 2190-2560 ml opsamledes, inddampedes og kromatograferedes igen i en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) med heptan:chloroform:ethanol, 20:20:1, som mobil fase. Fraktionen 5130-5745 ml opsamledes, inddam-20 pedes og gav 35 mg methyl-(22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-110-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 95,5%. Smp. 223-235eC. Molekylvægten var 494.

Eksempel 3 25

En opløsning af 0,45 g kobber-(II)-acetat i 100 ml absolut ethanol sattes til en opløsning af 2,0 g (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll/J,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 300 ml absolut ethanol, omsattes, og produktet isoleredes som beskrevet i eksempel 30 la og gav 2,0 g (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-110-hy-droxy- 3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-alethylhemiacetal.

Denne hemiacetal omsattes under samme betingelser som i eksempel 1, idet methanol ombyttedes med ethanol. Udbytte 1,77 g råprodukt, som 35 rensedes i en Sephadex® LH-20 kolonne (76,5 x 6,3 cm) med heptan:-chloroform:ethanol, 20:20:1, som mobil fase. Fraktionen 2655-3150 ml opsamledes og inddampedes. Efter omkrystallisation af remanensen fra ethanol opnåedes 1,03 g ethyl-(22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-ll/l-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden 16 DK 168601 B1 bestemt ved HPLC var 97%. Smp. 227-235°C. [a]§5 = + 67,2’ (c = 0,180 i CHgClg}. Molekylvægten var 508.

Eksempel 4 5

En opløsning af 0,35 g kobber-(II)-acetat i 150 ml propanol sattes til en opløsning af 0,80 g (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-lljS,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 100 ml propanol, omsattes, og produktet i soleredes som beskrevet i eksempel la og gav 10 0,95 g (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll/3-hydroxy- 3,20-di oxopregna-1,4-di en-21-alpropylhemi acetal.

Denne hemiacetal omsattes under de betingelser, der er angivet i eksempel la, idet methanol ombyttedes med propanol. Råproduktet rensedes i Sephadex® LH-20 kolonne (76,5 x 6,3 cm) med heptan:chloroform:ethanol, 20:20:1, som mobil fase. Fraktionen 3450-3990 ml opsamledes og inddampedes. Remanensen udfældedes fra methylenchlorid-petroleumsether og gav 0,38 g n-propyl-(22R)-16a,17a-butyli dendi oxy-6a,9a-di fluor-110-hydroxy-3,20-di oxopregna-2° l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 98,9%. Smp. 192-195eC. [a]jp = + 66,4* (c = 0,256 i CHgClg). Molekylvægten var 522.

Eksempel 5 25

En opløsning af 0,45 g kobber-(II)-acetat i 150 ml methanol sattes til en opløsning af 1,0 g (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-llj3,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 150 ml methanol, omsattes, og produktet i soleredes som beskrevet i eksempel la.

30 Produktet opløstes i 15 ml isopropanol og inddampedes. Denne fremgangsmåde blev gentaget 2 gange og gav 1,2 g (22R)-16a,17a-buty-1 i dendi oxy-6a,9a-di fluor-1l/?-hydroxy-3,20-di oxopregna-1,4-di en-21-ali sopropylhemi acetal.

33 Hemiacetal en omsattes under betingelserne beskrevet i eksempel la, idet methanol ombyttedes med isopropanol. Råproduktet rensedes i en Sephadex® LH-20 kolonne (71,5 x 6,3 cm) med chloroform som mobil fase. Fraktionen 1845-2100 ml opsamledes, inddampedes og gav 0,42 g fast stof, som udfældedes fra methylenchlorid-petroleumsether.

17 DK 168601 B1

Udbytte: 0,41 g isopropyl-(22R)-16a,17tt-butylidendioxy-6a,9a-di- fluor-ll/J-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 96,5%. Snip. 198-210'C. [a]*5 - + 62,0* (c = 0,292 i CHgClg). Molekylvægten var 522.

5

Eksempel 6a

En opløsning af 55 mg kobber-(II)-acetat i 25 ml methanol sattes til en opløsning af 200 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a:-difluor- 10 110,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 25 ml methanol, omsattes, og produktet i soleredes som beskrevet i eksempel 1 og gav 250 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll^-hydroxy-3,20-di-oxopregna-1,4-dien-21-almethylhemi acetal.

15 Denne hemiacetal omsattes under samme betingelser som beskrevet i eksempel la, idet methanol ombyttedes med butanol. Råproduktet rensedes i en Sephadex® LH-20 kolonne (87,5 x 2,5 cm) med heptan:-chloroform:ethanol, 20:20:1, som mobil fase. Fraktionen 610-674 ml opsamledes, inddampedes og udfældedes fra methylenchlorid-petrole- 20 umsether og gav 76 mg butyl-(22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-ll/?-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemtes ved HPLC og var 97,0%. Smp. 185-188eC. [a]g^ = + 63,3° (c = 0,300 i CH2C1g)- Molekylvægten var 536.

25 Eksempel 6b

En opløsning af 0,05 g kobber-(II)-acetat i 20 ml methanol blev sat til en opløsning af 0,15 g (22S)-16ft,17a!-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-llj3,21-dihydroxypregna-l,4-dien-3,20-dion i 20 ml methanol.

30 Luft blev boblet gennem reaktionsblandingen i 40 minutter ved stuetemperatur. Produktet blev isoleret som beskrevet i eksempel la og gav 0,16 g (22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-llfi-hy-droxy-3,20-dioxopregna-1,4-di en-21-almethylhemi acetal.

35 Denne hemiacetal blev opløst i 1,5 ml di methyl formamid og omsat med kaliumcyanid (0,03 g), mangan-(IV)-oxid (0,33 g), methanol (0,6 ml) og koncentreret eddikesyre (0,2 ml) under de i eksempel 1 beskrevne betingelser. Udbytte 64 g råprodukt, som blev oprenset på en Sephadex® LH-20 kolonne (87,5 x 2,5 cm) med 18 DK 168601 B1 heptan:chloroform:ethanol, 20:20:1, som mobil fase. Fraktionen 675-740 ml blev opsamlet og inddampet. Remanensen udfældedes fra methyl enchl orid-petroleumsether og gav 38 mg methyl-(22S)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-llj&-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-5 21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 98,7%. Smp. 216-219°C. [a]g5 = +25,7° (c = 0,210 i CH2C12). Molekylvægten var 536.

Eksempel 7 10 Til en opløsning af 185 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9o!-di-f1uor-1 l/J-hydroxy-3,20-d i oxopregna-l,4-dien-21-almethylhemi acetal i 10 ml dimethyl formamid sattes 40 mg kaliumcyanid og 0,2 ml iseddike. Efter omrøring i 15 minutter tilsattes 0,5 g mangan-(IV)-oxid. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i yderligere 2 I5 timer. Mangan-(IV)-oxidet fjernedes ved filtrering, og resten hældtes i 50 ml vand og ekstraheredes med ethyl acetat.

Den vandige opløsning blev gjort sur med saltsyre og ekstraheredes med ethyl acetat. Ekstrakten tørredes og inddampedes. Remanensen 20 rensedes kromatografisk i en Sephadex® LH-20 kolonne (88 x 2,5 cm) med chloroform:ethanol:iseddike, 95:5:0,25, som mobil fase. Fraktionen 985-1125 ml opsamledes, inddampedes og gav 60 mg (22R)-16a,17a-butyli dendi oxy-6a, 9a-di f1uor-1ljS-hydroxy-3,20-di oxopregna-1,4-di en- 21-syre. Renheden bestemtes ved HPLC og var 99,0%. Massespektrum 25 (kemisk ionisering): 481 (MH+), 460 (MH+-HF), 409 (MH+-(C02)20).

Eksempel 8

Til 680 mg AgNOg opløst i 1,2 ml vand sattes 4 ml 2M natriumhydroxid 30 under omrøring. Den ovenpå svømmende væske centrifugeredes efter 15 minutter, og opløsningsmidlet dekanteredes fra. Det fremkomne Ag20 suspenderedes i 3 ml 0,01M natriumhydroxid, og 185 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll]3-hydroxy-3,20-dioxopregna-1,4-dien-21-almethylhemiacetal tilsattes. Suspensionen omrørtes ved stuetem-35 peratur i 1 time, centrifugeredes, og den ovenpå svømmende væske suspenderedes i 3 ml 0,01M natriumhydroxid og centrifugeredes 3 gange. De samlede alkaliske faser ekstraheredes med methylenchlorid, syrnedes med 2M saltsyre og ekstraheredes med ethyl acetat. Opløsningsmidlet afdampedes, og remanensen rensedes kromatografisk i en i 19 DK 168601 B1

Sephadex® LH-20 kolonne (88 x 2,5 cm) med chioroform:ethanol:iseddike, 95:5:0,25, som mobil fase. Fraktionen 900-1010 ml opsamledes, inddampedes og gav 85 mg (22R)-16a,17tt-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-ll/5-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syre.

5

Eksempel 9

Til en opløsning af 130 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-lliS-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-almethylhemiacetal i 1° 1,5 ml acetone sattes 3 ml 0,1M vandig Na3P0^ og 1 mg kaliumcyanid.

Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 30 minutter. Der tilsattes methylenblåt (1% i vand) dråbevis, indtil farven vedblev. Reaktionsblandingen omrørtes i yderligere 30 minutter, koncentreredes til -2 ml, og der tilsattes 25 ml mættet vandig NaHC03. Blan-dingen vaskedes med methylenchlorid, syrnedes med 2M saltsyre og ekstraheredes med ethyl acetat. Ekstrakten tørredes og inddampedes, og remanensen rensedes kromatografisk i en Sephadex® LH-20 kolonne 88 x 2,5 cm) med chloroform:ethanol:iseddike, 95:5:0,25, som mobil fase. Fraktionen 900-1005 ml opsamledes, inddampedes og gav 27 mg 2° (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll/3-hydroxy-3,20-dioxo-pregna-l,4-dien-21-syre.

Eksempel 10 25 Til en opløsning af 100 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-ll/J-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syre og 35 mg kaliumhydrogencarbonat i 10 ml dimethyl formamid sattes 285 mg methyl iodid. Reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur natten over, 50 ml vand tilsattes, og blandingen ekstraheredes med methy-50 1 enchl orid. Den organiske fase skiltes fra, vaskedes med 10 ml mættet vandig natriumthiosul fat, 2 x 10 ml vand, tørredes og inddampedes. Remanensen rensedes kromatografisk i en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) med chloroform som mobil fase. Fraktionen 2115-2550 ml opsamledes og inddampedes. Remanensen opløstes i 35 methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether (kp. 40-60*C) og gav 88 mg methyl-(22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll^-hydroxy-3,20-dioxopregna-1,4-dien-21-syreester. Renheden bestemtes ved HPLC og var 96,2%. Smp. 227-235eC. Molekylvægten var 494.

Eksempel 11 20 DK 168601 B1

Til en opløsning af 100 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-llj8-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syre i 10 ml 5 dimethyl formamid sattes 0,2 ml triethylamin og 0,5 ml methyliodid.

Reaktionsblandingen omrørtes ved 45°C i 4 timer, afkøledes til stuetemperatur, fortyndedes med 50 ml methylenchlorid, vaskedes med vand, tørredes og inddampedes. Remanensen rensedes kromatografisk i en Sephadex® LH-20 kolonne (88 x 2,5 cm) med chloroformiethanol 10 iseddike, 95:5:0,25, som mobil fase. Fraktionen 265-320 ml opsamledes, inddampedes, og remanensen bundfældedes fra methylenchlorid-petroleumsether (kp. 40-60eC) og gav 89 mg methyl-(22R)-16α,17a-bu-tyli dendi oxy-6a,9a-di fluor-1l/S-hydroxy-3,20-di oxopregna-1,4-di en-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 98,8%. Smp. 231-236°C.

15 Molekylvægten var 494.

Eksempel 12

Til en opløsning af 100 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-20 fluor-ll/J-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syre i 15 ml benzen sattes 65 ml l,5-diazabicyklo[5.4.0]undecen-5 og 0,5 ml methyliodid. Reaktionsblandingen omrørtes ved 50eC i 4 timer, fortyndedes med 50 ml methylenchlorid, vaskedes med vand, tørredes og inddampedes. Remanensen rensedes i en Sephadex® LH-20 kolonne (88 x 2,5 cm) med 25 chloroform:ethanol:iseddike, 95:5:0,25, som mobil fase. Fraktionen 295-335 ml opsamledes og inddampedes. Remanensen opløstes i methylenchlorid og udfældedes med petroleumsether (kp. 40-60eC) og gav 93 mg methyl-(22R)-16a,17a-buty1idendioxy-6a,9a-difluor-ll/J-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved 5° HPLC var 98,9%. Smp. 231-236°C, Molekylvægten var 494.

Eksempel 13

Der sattes (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll/J-hydroxy-35 3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syre (100 mg) og tetrabutylammonium-hydrogensulfat (100 mg) til 0,5 ml 1M natriumhydroxid. Der tilsattes en opløsning af 0,5 ml methyliodid i 10 ml methylenchlorid. Blandingen til bagesval edes under omrøring natten over. Efter afkøling tilsattes yderligere 20 ml methylenchlorid. De to faser adskiltes.

21 DK 168601 B1

Den organiske fase vaskedes med 2 x 10 ml vand, tørredes og inddampedes. Råproduktet rensedes kromatografisk i en Sephadex® LH-20 kolonne (72 x 6,3 cm) med chloroform som mobil fase. Fraktionen 2130-2550 ml opsamledes, inddampedes, remanensen bundfældedes fra 5 methylenchlorid-petroleumsether (kp. 40-60eC) og gav 106 mg methyl -(22R)-16α:, 17a-butylidendioxy-6a,9a-dif1uor-11Ø-hydroxy-3,20-dioxo-pregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 93,9%. Smp. 225-235*C. Molekylvægten var 494.

10 Eksempel 14

Der sattes (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-lljB-hydroxy- 3.20- dioxopregna-l,4-dien-21-syre (100 mg) og 80 mg tricapryl- methylammoniumchlorid (Aliquat® 336) til 2,5 ml mættet vandig 15 NaHCOj. Der tilsattes en opløsning af 0,5 ml methyliodid i 10 ml methylenchlorid. Blandingen omrørtes ved 45eC i 20 timer, afkøledes og fortyndedes med 20 ml methylenchlorid. De to faser adskiltes. Den organiske fase vaskedes med 3 x 5 ml vand, tørredes og inddampedes. Råproduktet rensedes kromatografisk i en Sephadex® LH-20 kolonne (88 20 x 2,5 cm) med chloroform:ethanol:iseddike, 95:5:0,25, som mobil fase. Fraktionen 300-350 ml opsamledes, inddampedes og remanensen udfældedes fra methylenchlorid-petroleumsether (kp. 40-60°C) og gav 28 mg methyl - (22R)-16α, Ha-butyl idendioxy-6a, 9a-difl uor-ll/J-hydroxy - 3.20- dioxopregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC 25 var 98,7%. Smp. 231-236°C. Molekylvægten var 494.

Eksempel 15 (22R)-16a,17a-Butylidendioxy-6a,9a-difluor-110-hydroxy-3,20-dioxo-30 pregna-l,4-dien-21-syre (100 mg) opløstes i 5 ml methylenchlorid og blandedes med 5 ml etherisk diazomethanopløsning. Efter 10 minutter tilsattes iseddike dråbevis, indtil den gule farve var forsvundet. Blandingen inddampedes, remanensen opløstes i methylenchlorid, udfældedes fra petroleumsether (kp. 40-60eC) og gav 76 mg methyl-35 (22R)-16α, 17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-ll^-hydroxy-3,20-dioxo- pregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 96,7%.

Smp. 228-235eC. Molekylvægten var 494.

DK 168601 B1

Eksempel 16 •22

Til en opløsning af 82 mg (22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-di-fluor-ll/Miydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-almethylhemi acetal i ^ 25 ml methanol, som køledes i et isbad, sattes 0,06 ml iseddike og dernæst langsomt 0,5 ml 2M vandig natriumhypochlorid under omrøring. Reaktionsblandingen omrørtes i yderligere 1 time. Der tilsattes methylenchlorid (150 ml), og opløsningen vaskedes med 10%s vandig natriumcarbonat og mættet natriumchlorid. Den organiske fase 10 tørredes og inddampedes. Remanensen opløstes i methylenchlorid, udfældedes med petroleumsether (kp. 40-60eC) og gav 9 mg methyl -(22R)-16α,17a-butyli dendi oxy-6a,9a-di f1uor-1l/i-hydroxy-3,20-di oxo-pregna-l,4-dien-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 93,8%.

Smp. 225-235eC. Molekylvægten var 494.

15

Eksempel 17

Til en opløsning af 100 mg methy1-(22R)-16a,17a-butylidendioxy-6a,9a-difluor-110-hydroxy-3,20-dioxopregna-l,4-dien-21-syreester i 20 12 ml n-propanol sattes 20 mg kalium-tertiær-butylat. Reaktions blandingen tilbagesvaledes under argon i 1 time, afkøledes og hældtes i 25 ml isvand og ekstraheredes med methylenchlorid. Ekstrakten vaskedes med mættet vandig natriumhydrogencarbonat, tørredes, inddampedes og gav 28 mg propyl-(22R)-16α,17a-bu-tyl i dendi oxy-6a,9a-di f1uor-1l/J-hydroxy-3,20-di oxopregna-1,4-di en-21-syreester. Renheden bestemt ved HPLC var 99,2%. Smp. 262-270°C. Molekylvægten var 566.

Eksempel 18 (Farmaceutiske præparater) 30 Følgende eksempler belyser præparater beregnet til forskellige former for indgivelse. Mængden af aktivt steroid i de perkutane præparater er normalt 0,001-0,2 vægt%, fortrinsvis 0,01-0,1 vægt%.

Præparat 1. salve

Steroid, mikroniseret 0,025 g

Flydende paraffin 10,0 g

Hvidt, blødt paraffin op til 100,0 g DK 168601 Bl 23

Præparat 2. salve

Steroid 0,025 g

Propylenglykol 5,0 g

Sorbitan-sesquioleat 5,0 g 5 Flydende paraffin 10,0 g

Hvidt, blødt paraffin op til 100,0 g

Præparat 3. Olie i vand creme

Steroid 0,025 g 10 Cetanol 5,0 g

Glycerylmonostearat 5,0 g

Flydende paraffin 10,0 g "Cetomacrogol 1000“ 2,0 g

Citronsyre 0,1 g

Natriumcitrat 0,2 g

Propylenglykol 35,0 g

Vand op til 100,0 g

Præparat 4, Olie i vand creme 20 Steroid, mikroniseret 0,025 g

Hvidt, blødt paraffin 15,0 g

Flydende Paraffin 5,0 g

Cetanol 5,0 g

Sorbimacrogolstearat 2,0 g 25 Sorbitanmonostearat 0,5 g

Sorbinsyre 0,2 g

Citronsyre 0,1 g

Natriumcitrat 0,2 g

Vand op til 100,0 g 30

Præparat 5, Vand i olie creme

Steroid 0,025 g

Hvidt, blødt paraffin 35,0 g

Flydende paraffin 5,0 g

Sorbitansesquioleat 5,0 g

Sorbinsyre 0,2 g

Citronsyre 0,1 g

Natriumcitrat 0,2 g

Vand op til 100,0 g 24 DK 168601 B1

Præparat 6. Lotion

Steroid 0,25 mg

Isopropanol 0,5 ml

Carboxyvinylpolymer 3 mg 5 NaOH q.s.

Vand op til 1,0 g

Præparat 7. Suspension til in.iektion

Steroid, mikroniseret 0,05-10 mg 10 Natriumcarboxymethylcellulose 7 mg

NaCl 7 mg

Polyoxyethylen-(20)-sorbitan- monooleat 0,5 mg

Phenylcarbinol 8 mg

Vand, sterilt op til 1,0 ml

Præparat 8. Aerosol til oral og nasal inhalation Steroid, mikroniseret 0,1 vægt%

Sorbitantrioleat 0,7 vægt% 20 Trichlorfluormethan 24,8 vægt%

Dichlortetrafluormethan 24,8 vægt%

Dichlordifluormethan 49,6 vægt%

Præparat 9. Opløsning til forstøvning 25 Steroid 7,0 mg

Propylenglykol 5,0 g

Vand op til 10,0 g

Præparat 10, Pulver til inhalation 30 En gelatinekapsel fyldes med en blanding af

Steroid, mikroniseret 0,1 mg

Lactose 20 mg

Pulveret inhaleres ved hjælp af et inhalationsapparat.

35 25 DK 168601 B1

Farmakologi

Antiinflammatorisk effekt 5 Selektiviteten for antiinflammatorisk effekt på påføringsstedet i lunger er blevet undersøgt på et modelsystem i en rotte efter intrabronkial indføring af glucocorticosteroid.

Indføring af Sephadex® korn i en rottelunge fører til bronkial og 10 alveolar inflammation. Dette fremkalder interstitiel lungeødem, som forøger lungens vægt, og inflammationen kan gradueres i forhold til forøgelsen af lungens vægt sammenlignet med en kontrolgruppe, der er blevet indgivet bærestof. Dannelsen af lungeødem kan modvirkes ved forbehandling med glucocorticosteroider, fortrinsvis ved lokal 15 tilførsel ved intrabronkial inddrypning eller ved inhalering. Ideelt set skulle der opnås en antiinflammatorisk virkning kun på det sted i lungen, hvor der var påført glucocorticosteroid, men ikke uden for dette område, da dette ved langtidsbehandling kan føre til terapibegrænsende systemiske bivirkninger.

20

Differentieringen mellem glucocorticosteroidvirkning i den behandlede lungeregion og uden for dette område blev undersøgt på følgende måde. Sprague-Dawley-rotter (225 g) bedøvedes let med ether, og glucocorticosteroidprøven i et rumfang på 0,05 mg/kg 25 inddryppedes i kun den venstre lungelap. Dette opnåedes ved inddrypning med et tyndt og bøjet stål kateter, indført via munden og luftrøret, i den venstre lungelap (selektiviteten af denne måde til indførsel i kun den venstre lap verificeredes ved særskilte forsøg med Evans Blue, hvor det viste sig, at >95% af den tilførte substans blev fundet i den venstre og <5% i den højre lungehalvdel). 30 Minutter senere blev der inddryppet en suspension af Sephadex® (5 mg/kg i et rumfang på 1 ml/kg) i luftrøret et stykke over bi furkationen, sådan at suspensionen nåede både den venstre og højre lungelap. Tyve timer senere blev rotterne aflivet, og den venstre og ^5 højre lungelap dissekeredes og vejedes særskilt. Ligeledes måltes vægten af thymuskirtlen. Kontrolgrupper fik bærestof i stedet for glucocorticosteroidprøver og saltopløsning i stedet for Sephadex®-suspension til bestemmelse af vægten af henholdsvis det ikke-medikamentbeskyttede Sephadex®-ødem og den normale lunge. For hvert 26 DK 168601 B1 glucocorticosteroidpræparat afprøvedes mindst 3 doser inden for området 0,01-10 mg/kg og med hver > 6 paralleller/dosis. Glucocor-ticosteroiderne suspenderedes i et bæremedium bestående af CMC-Na 0,75%, "Tween® 80" 0,4% og 0,7%s NaCl op til 100%.

5

Den ideelle profil for en forbindelse, der er beregnet til nøjagtig lokal anti inflammatorisk behandling af luftvejssygdomme, er en sådan, at den skal modvirke inflammation i den lokalt behandlede venstre lungelap, men ikke i den højre lungehalvdel, som først 10 forventes at blive nået af glucocorticosteroid via det systemiske kredsløb (efter absorption fra den venstre lunge). Forholdet mellem de krævede ED^'er (doser, der reducerer ødemet med 50%) i henholdsvis den højre og venstre lungehalvdel kan anvendes som en parameter til estimering af den selektive aktivitetspræference for påførings-stedet. For et ideelt glucocorticosteroid skal dette selektivitetsforhold være højt.

Resultaterne af de udførte prøver fremgår af tabel 1, hvor den øvre del svarer til virkninger opnået med hidtil kendte typer af gluco-20 corticosteroider. Budesonid havde ingen selektivitet for applikationsstedet i lungen, da den krævede EDgg for den venstre henholdsvis højre lungehalvdel var temmelig ens (selektivitetsforhold -1,5). Ved den højeste prøvedosis (0,3 mg/kg) reducerer budesonid vægten af thymuskirtlen med 22% (p<0,01). Det kendte 25 glucocorticosteroid FCB (fluocortinbutylester) udviser nogen selektivitet, da reduktion af ødemet i højre lungehalvdel kræver en ca. 2-3 gange højere dosis, end der er nødvendig for at inhibere det venstre lungeødem.

De hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen viser en overraskende meget bedre selektivitet for virkning i den lokalt behandlede venstre lungelap (tabel 1). Selektivitetsforholdet når 6 eller endog højere tal. Med disse forbindelser er det muligt at hæmme ødemet i venstre lunge med mindst 60% uden nogen signifikante 35 effekter på ødemet i højre lungehalvdel. Ved dosen 10 mg/kg påvirker forbindelserne ifølge eksemplerne la og 5 slet ikke vægten af thymus, mens forbindelsen ifølge eksempel 3 ved samme dosis fremkalder en lille reduktion i vægten af thymus (ved 15%, p<0,05).

27 DK 168601 B1

De nye forbindelser har alle en højere antiinflammatorisk styrke på applikationsstedet (ED5Q-værdi i den venstre lungelap 1 5 mg/kg) end den lavere styrke, der udvistes af FCB (10 mg/kg).

5 Tabel 1

Virkninger af afprøvede glucocorticosteroider på Sephadex®-modellen. Resultaterne er angivet i forhold til den tilsvarende kontrolgruppe, der blev indgivet Sephadex®.

10

Forbindelse ED5Q1 Selektivitets- Thymus ifølge eksem- Venstre forhold indskrumpning pel lungelap, EDrp1 hø.ire lunae (dosis mg/kg) *5 mg/kg ED501 venstre lunge

Budesonid 0,2 1,4 22 (0,3) FCB 10 2,5 6 (10) I2 0,9 3,1 20 _ la 1,5 6,0 -3 (10) 3 1,7 5,9 15 (10) 5 5 10,0 -1 (10) 4 <1 >10 6 (10) 25 lb 3,9 > 3,5 6 (10) 35 ED50 = Krævet glucocorticosteroid dosis til reduktion af ødemet med 50%.

30 2

Methyl-6α,9a-difluor-ll/Miydroxy-16a,17a-isopropylidendioxy-3,20-di- oxo-1,4-pregnadien-21-syreester svarende til steroidforbindelsen i eksempel 10 i DK fremlæggelsesskrift nr. 135.380.

Claims (8)

1. 2. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse ifølge krav 1 20 med formi en coor1 i c=o H0X ---0^r^H 25. p -0^ >- CH2CH2CH3 - 1
2. 30 F eller en af dens stereoisomere former, i hvilken formel R* betegner en lige eller forgrenet carbonhydridkæde med 1-4 carbonatomer, kendetegnet ved, a*) at et aldehyd med formlen: 35 DK 168601 B1 CHO c=o HO v Jc----0^r^H , Y η- -o' u v- ch2ch2ch3 » > F 10 eller et hydrat eller en hemiacetal deraf oxideres i nærværelse af cyanidioner og en alkohol med formlen R*-0H, hvor R* har samme betydning som ovenfor, eller o 15 a ) at en forbindelse med formlen: A i c=o HOx 20 |X p Ό" " ch2ch2ch3 F 25 i hvor A betegner en acetal rest -CH(0R )« eller en hemiacetal rest 1. c -CH(0H)0R , i hvilke formler R har ovennævnte betydning, oxideres med chlorundersyrlig, eller 30 b) at 20-hydroxygruppen i en forbindelse med formlen: COOR1 CHOH HOx ---0^ r Y j--O'' u 35 γ-i/y — » « F hvor R1 har den ovenfor angivne betydning, oxideres eller DK 168601 B1 c) at en carboxylsyre med formlen: COOH i c=o
3. 5 HO . - -O-- c η— -O' >- CH2CH2CH3 o 10 ί F eller et funktionelt ækvivalent derivat deraf forestres med en forbindelse med formlen R*0H eller et funktionelt derivat deraf, hvor R* har ovennævnte betydning, eller med en diazoforbindelse med 10 formlen R -CF^Ng, hvor R betegner en ligekædet eller forgrenet carbonhydridgruppe med 1-3 carbonatomer, eller d) at en ester med formlen:
4. 20 COOR2 C=0 HO. /s. ---0^r Y' ^ / γ- -Q' ^ V CH2CH2CH3 25 ;? i F 2 hvor R betegner en methyl- eller ethyl gruppe, transforestres med en alkohol med formlen R -OH, hvor R , som er forskellig fra R , har samme betydning som R* defineret ovenfor, hvorefter blandingen resolveres i stereoisomere forbindelser, hvis den således fremkomne forbindelse er en epimerblånding, og der ønskes en ren epimer.
5. 3. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det som virksom bestanddel indeholder en forbindelse ifølge krav 1.
6. 4. Farmaceutisk præparat ifølge krav 3, kendetegnet ved, at det foreligger i enhedsdosisform. DK 168601 B1
7. 5. Farmaceutisk præparat ifølge krav 3 eller 4, kendetegnet ved, at det indeholder den virksomme bestanddel sammen med et farmaceutisk acceptabelt bærestof.
8. 6. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1 til fremstilling af et lægemiddel imod inflammatoriske, allergiske og dermatologiske tilstande. 10 15 20 25 30 35