WO2004005490A1 - 新規パン酵母及びそれを用いたパン - Google Patents

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Atsushi Nagasawa
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    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/85—Saccharomyces
    • C12R2001/865—Saccharomyces cerevisiae

Definitions

  • the present invention relates to a novel baker's yeast and bread using the same.
  • the present invention relates to a novel baker's yeast having freezing resistance and extremely weak off-flavor and off-odor peculiar to yeast, and bread using the same.
  • Conventional technology
  • frozen dough baking technology has been increasing its importance in the baking industry due to the advantages of providing freshly baked bread and shortening working hours by improving the efficiency of the baking process.
  • the frozen dough is mixed with bread ingredients such as flour, sugar, salt, oil and fat, yeast, and water, molded, frozen and stored at around 20 ° C, thawed if necessary, and subjected to final fermentation before firing. You.
  • frozen dough contains more yeast than normal bread in order to reduce the degree of final fermentation time after thawing, even if the yeast is freeze-tolerant. It is common practice to increase the amount by a factor of 2-3.
  • a no-time method in which almost no fermentation is performed after kneading, is generally employed in order to prevent freeze damage of the yeast as much as possible.
  • the peculiar taste and odor peculiar to yeast are strongly felt, and the flavor of bread becomes unfavorable.
  • non-timed dough which hardly takes on fermentation, has a weaker fermented flavor, a stronger off-taste peculiar to yeast, and a more unpleasant odor, making the bread taste even more undesirable.
  • the usual bread making method in which the dough is not frozen, the work time is shortened. If the bread making method in which the fermentation time is shortened is used, the flavor of the bread is not preferable for the same reason as described above. It will be. .
  • the present invention provides a novel baker's yeast having an extremely weak off-flavor and off-odor peculiar to yeast.
  • the present invention also provides a new baker's yeast that has freezing resistance and has extremely weak yeast-specific off-flavors and odors.
  • the yeast of the present invention makes it possible to produce bread having an excellent flavor that is not adversely affected by the peculiar taste and odor peculiar to yeast.
  • FIG. 1 shows the fermentative power of the thawed dough after freezing and storing the dough prepared using the yeast FT-4 strain of the present invention and several comparative yeasts for 1 day to 3 months. It is a graph shown by the amount of tar gas generated.
  • Figure 1A shows the results for a low sugar dough
  • Figure 1B shows the results for a high sugar dough.
  • FIG. 2 is a graph showing the results of a sensory test for evaluating the yeast odor of bread dough prepared using the yeast strain FT-4 of the present invention and several comparative yeasts. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
  • the present inventors have developed a bread having a high fermentation power from a strain bred by crossing or classical mutation between strains possessing such as baker's yeast and sake yeast, and having extremely weak yeast-specific off-flavor and off-flavor. We succeeded in finding yeast and completed the present invention.
  • the novel baker's yeast Saccharomyces cerevisiae F T-4 strain discovered by the present invention has a very low yeast-specific off-flavor and off-flavor and is hardly perceived.
  • strain FT-4 has better freezing tolerance and fermentability in a wide range of sugars than our existing freezing resistant yeast.
  • the baker's yeast referred to in the present invention is not limited to Saccharomyces cerevisiae, but is not limited to Saccharomyces rosacea Saccharomyces saffiri, Saccharomyces siparia Lieri, Torrasbora del Bruckey, and in some cases Culveromyces saccharomyces. -Motor tolerance, Saccharomyces 'species' etc. can also be mentioned.
  • Saccharomyces cerevisiae a typical baker's yeast obtained in the present invention
  • ⁇ Saccharomyces cerevisiae F T-4 strain The bacteriological properties of ⁇ Saccharomyces cerevisiae) F T-4 strain are shown below. This strain was deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST) No. 1-1, Higashi 1-chome, Tsukuba, Japan on June 20, 2002, and was assigned the accession number of FERMBP-8081. Mycological properties of four strains of Saccharomyces cerevisiae) FT—
  • Assimilation and fermentability of carbon source Analysis of assimilation was performed by suspending fresh cells cultivated on a YPD agar medium in 5 ml of sterilized platinum loop water and then culturing twice with sterile water. The cells were collected by centrifugation, washed, and again suspended in 5 ml of sterile water, to which various carbon sources were added, and a sterilized medium (Yeast nitrogen base 0.67 g, various carbon sources 0.1 g, water 10 ml) ) Inoculate 0.1 ml in a tube (Sarstedt tube 10 lmmX 16.5 mm) containing 5 ml, shake culture at 30 ° C for 48 hours, and measure the absorbance at 660 nm.
  • a sterilized medium Yeast nitrogen base 0.67 g, various carbon sources 0.1 g, water 10 ml
  • the fermentability was determined by inoculating 0.1 ml of the cell suspension prepared in the same manner into a glass test tube (18 Omm x 15 mm) containing 10 ml of the same medium and a Durham tube. After static culture for one week, the presence or absence of air bubbles in the column was confirmed.
  • Nitrate assimilation Dispense 5 ml of nitrate medium (Yeast carbon base 1.1 g, potassium nitrate 7.8 g, water 10 ml) into a Sarstedt tube, sterilize, and conduct carbon source assimilation test. 0.1 ml of the bacterial cell suspension prepared in the same manner was inoculated, and cultured with shaking at 30 ° (48 hours), the absorbance at 660 nm was measured, and the growth status was determined by turbidity.
  • nitrate medium Yeast carbon base 1.1 g, potassium nitrate 7.8 g, water 10 ml
  • Vitamin requirement Dispense 5 ml of vitamin-deficient medium (1.67 g of vitamin free-base, 0.5 ml of each vitamin solution, 10 ml of water) into Sarstedt tubes, and sterilize
  • the vitamin solution was sterilized and cooled, and then added through a sterile filter.
  • 0.1 ml of the cell suspension prepared in the same manner as in the carbon source assimilation test was inoculated, and the mixture was incubated at 30 ° C for 48 hours. After shaking culture, the absorbance at 660 nm was measured to determine the growth status by turbidity.
  • test strain was Saccharomyces cerevisiae cerevisiae.
  • the “unusual taste and odor peculiar to yeast” referred to in the present invention refers to a muddy odor or a fresh odor flavor that is clearly felt when live yeast cells are directly eaten, and is also called yeast odor. These flavors are also felt in frozen dough in which 7 or more yeasts are added to 100 flour. Scratch bread that uses only about 2 to 3% of yeast still has yeast-specific off-flavors and off-flavors, but is recognized as part of the bread flavor when conventional yeast is used. .
  • Yeast-specific substances that cause off-flavors and off-flavors consist of a wide variety of compounds, and it is difficult to limit them to a single compound.
  • isobutyric acid which is known as a straight-chain fatty acid with putrefactive odor, is a causative substance. It is presumed to be one.
  • Yeast had an isobutyric acid content of 300-1,000 ppm per dry cell, whereas Saccharomyces cerevisiae FT-4 had an isobutyric acid content of 125 ppm. It was confirmed that the content was less than half of the baker's yeast.
  • freeze resistance means that the refrigeration is not affected or hardly affected by refrigeration.
  • the prepared dough is fermented in a 30 ° C incubator for 60 minutes, and after the fermentation is completed, divided into 30 g, rounded, and the dough balls are frozen at 120 ° C. .
  • One day later measure the amount of carbon dioxide generated during fermentation while thawing at 38 ° C for 120 minutes, and use the result as the fermentation power one day after freezing.
  • the amount of carbon dioxide generated when the same dough frozen for one month is thawed at 38 for 120 minutes while thawing is measured, and the fermentation power after one month of freezing is measured.
  • a yeast that is resistant to freezing is, for example, a low-sugar dough with 5% sugar. Yeasts exhibiting 90% or more in a high-sugar dough with a residual fermentation power of 80% or more and a sugar content of 25% are applicable.
  • the scratch manufacturing method is a series of continuous processes from dough mixing to fermentation (including primary fermentation and secondary fermentation), splitting, molding, final fermentation, and firing without freezing the dough. Process, straight-time method, no-time method, middle-age method, aging method, etc. It has been used since then. Although the novel baker's yeast obtained in the present invention has freeze resistance, there is no problem if it is used in the above-mentioned scratch production method.
  • sugar-free dough refers to dough without sugar.
  • the low sugar dough refers to a dough having less than 10% sugar.
  • a dough with an added amount of sugar of 5% is defined as a low sugar dough.
  • the high sugar dough usually refers to a dough with an added amount of sugar of 20% or more and less than 35%, but in the present invention, a dough with a sugar addition of 25% is defined as a high sugar dough.
  • the baker's yeast of the present invention which may have freezing resistance and is extremely weak in the peculiar taste and odor peculiar to yeast, germinates spores of a diploid strain of baker's yeast which may have freezing resistance.
  • Haploid yeast strains obtained by germinating spores of diploid strains of sake yeast and wild yeast, which have weak off-flavors and odors peculiar to yeast, obtained by sexual reproductive mating.
  • the yeast strain can be obtained by selecting a strain having a peculiar off-flavor and offensive odor peculiar to yeast by the screening method described in Example 1 from the resulting yeast strain.
  • a strain having freeze-resistance was selected by the screening method described in Example 1, and an yeast strain having freeze-resistance and having extremely low off-taste and off-odor peculiar to yeast was selected. You can also get Such a strain is a preferred embodiment of the present invention.
  • freeze-resistant baker's yeast is mutated by irradiating ultraviolet rays under conditions with a kill rate of around 99% to have a freezing resistance by the same screening method, and has a unique taste of yeast. It is also possible to obtain strains with extremely weak off-flavors.
  • Example 1 Breeding and Screening of Saccharomyces cerevisiae FT-4 Strain A haploid yeast strain obtained by germinating spores of a diploid yeast strain (our YF yeast) belonging to Saccharomyces cerevisiae having at least strong freezing resistance, A haploid yeast strain obtained by germinating spores of a diploid yeast strain (a sake yeast owned by our company) belonging to Saccharomyces cerevisiae, which does not have freezing resistance but has a peculiar off-taste and odor peculiar to yeast. A large number of diploid yeast strains were obtained by sexual reproductive mating. Next, these strains were subjected to a primary screening for freezing tolerance.
  • 3 ml of YPD liquid medium was placed in a 13 ml tube, sterilized for 121 and 15 minutes, and one loopful of each strain was inoculated and cultured with shaking at 30 ° C for 20 hours.
  • the obtained cells were centrifuged at 3,000 rpm for 15 minutes, collected, washed twice with cold water, and collected.
  • YPD liquid medium 100 ml of YPD liquid medium is dispensed into a 500-ml 1-volume Erlenmeyer flask, sterilized at 121 ° C for 15 minutes, and inoculated with one loop of each strain. Shaking culture was performed at 20 ° C for 20 hours. The culture solution was transferred to a centrifuge tube, centrifuged at 3000 rpm for 15 minutes, collected, and washed twice with cold water to obtain cells.
  • the low sugar dough fermenting power of the obtained strain was measured.
  • Each raw material of the low sugar dough shown in Table 5 was put into a gram mixer, and the dough was prepared at a mixing time of 2 minutes and a target kneading temperature of 30 ° C.
  • the obtained dough was fermented in a 30 incubator for 60 minutes. After the completion of the fermentation, the dough was divided into 30 g, rounded, and then frozen at a temperature of 1-20.
  • the amount of carbon dioxide gas generated during fermentation while thawing at 38 ° C for 120 minutes was measured using a fermograph (manufactured by Ato Ichisha), and the fermentation power after one day of freezing was determined.
  • the amount of carbon dioxide generated when the same dough frozen for one month was thawed at 38 ° C for 120 minutes while being thawed was similarly measured with a thermograph, and the fermentation power after one month of freezing was measured. . Assuming that the fermentation power after one day of freezing was 100, the percentage of fermentation power after one month of freezing was defined as the remaining fermentation power, and strains with this value of 80% or more were selected.
  • each strain was cultured, collected, and washed in a 500 ml baffled Erlenmeyer flask in the same manner as in the above test to obtain cells. Sensory tests were performed on these cells with 10 subjects, and strains with little yeast-specific off-flavor and off-flavor were selected.
  • the cells were adjusted to a solid content of 20% with distilled water, the beads were crushed, and the isobutyric acid content of the supernatant was measured by gas chromatography (manufactured by Shimadzu Corporation). Cells having an isobutyric acid content of 200 ppm or less per cell dry solid content were selected.
  • One loopful of the FT-4 strain and the baker's yeast were inoculated into 100 ml of a YPD liquid medium in a 500-ml baffled Erlenmeyer flask, and cultured with shaking at 30 ° C for 20 hours.
  • the culture was centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes, collected, and washed twice with sterile distilled water.
  • the washed cells were freeze-dried. Cold water was added to the freeze-dried cells to adjust the solid content to 20%, then 10% of glass beads were added, and the mixture was rapidly stirred at Vortex to break the cells. After centrifugation at 10,000 rpm for 10 minutes, the content of isobutyric acid in the supernatant was measured by gas chromatography to determine the content of isobutyric acid per dry solid content.
  • Table 3 shows the measurement results.
  • the isobutyric acid content of the strain of the present invention was 1Z2 or less of the baker's yeast compared.
  • Non-frozen dough fermentation power was measured by the yeast industry association method using FT-4 strain cells cultured in a 300 L jar arm mentor according to the following process.
  • One platinum loop of FT-14 strain was inoculated into 200 ml of YPD liquid medium in a 500-ml baffled Erlenmeyer flask, and 30 L of a culture solution obtained by shaking culture at 30 ° C for 24 hours was used. (See Table 4), and used as seed yeast for overnight culture of 300 L of jaff amen under the conditions shown in Table 4.
  • the culture solution was centrifuged to separate the cells, and the cells were squeezed and dehydrated using a filter cloth to obtain cells having a water content of 65 67%.
  • the non-frozen fermentation power of the dough compositions shown in Table 5 was measured. That is, the raw materials Mix for 2 minutes with a Gram Mixer (National Corporation, USA), divide the obtained dough into 30 g, and use a pharmograph (Ato Ichisha) for 30 minutes and 120 minutes for total The amount of gas generated was measured.
  • Table 6 shows the results.
  • the strain obtained according to the present invention has a low sugar dough compared to our conventional strain and a slightly lower sugar dough, but shows a strong non-frozen dough fermentation power in a sugar-free dough and a high sugar dough, and can be used in a wide range of sugar regions. It suggested that it was versatile.
  • Example 3 the freezing resistance of the low-sugar dough and the high-sugar dough was measured.
  • Raw materials prepared according to the dough composition shown in Table 7 were mixed for 2 minutes using a Gram mixer (National Corporation, USA), and the obtained dough was fermented for 60 minutes in an incubator at 25 ° C overnight. .
  • the dough was divided into 30 g pieces, placed in a plastic bag and stored frozen at 120 ° C. Thaw, remove the dough from the freezer 1 day, 2 weeks, 1 month, 2 months, 3 months after freezing, put it in a glass bottle for thermography measurement, and generate total gas at 38 ° C for 120 minutes
  • the amount was measured with a farmograph (manufactured by Atto).
  • FIG. 1 shows a graph of the progress of the amount of 1 tall gas generated for 120 minutes, and Table 8 shows the residual fermentation power after one month of frozen storage.
  • the strain FT-4 of the present invention showed a residual ratio of fermentation power of 80% or more with low sugar dough and 90% or more with high sugar dough. In addition, it was confirmed from the progress of fermentation power for three months that it had better freezing resistance than the conventional product.
  • yeast odor was "extremely weak (1 point)", “weak (2 points)", “ordinary (same level, 3 points)”, and “strong (4 points)” as compared to the 45 list. , "Very strong (5 points)” and evaluated on a 5-point scale, and averaged.
  • Figure 2 shows the results.
  • the strain of the present invention was extremely weak in off-flavor and off-odor peculiar to yeast compared to other yeasts, and was almost tasteless and odorless.
  • Example 3 Using the cells obtained in Example 3, a frozen dough bread test of bread, butter roll, and confectionery bread was performed in accordance with the formulations and steps shown in Table 9. The frozen dough was thawed at the 1st, 2nd and 3rd months, and the hoist time and bread volume after baking were measured. In addition, the measurement of the whiskey mouth time and bread volume and the judgment of the flavor were carried out as follows. Hui Mouth time ⁇ ⁇ ⁇ Time to reach a certain volume set for each dough (measured at the top of the case for bread baked goods. For putter rolls and sweet buns, use 100 g round dough separately frozen and stored. Thaw the sample at the highest level and measure).
  • Table 10 shows the results of the baking test.
  • the frozen dough using the strain of the present invention has a shorter Hui mouth time than any of the existing strains, and its fermentative power exceeds that of the existing strains in all low, medium and high sugar production areas. ing.
  • the bread taste was clear and favorable after less than one month of cold storage, with less yeasty odor.
  • the generation of dead odor due to the death of the yeast due to freezing damage is extremely small compared to other yeasts, and the flavor is very favorable.

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Description

明細書 新規パン酵母及びそれを用いたパン 発明の分野
本発明は冷凍耐性を有し、 かつ酵母特有の異味、 異臭が極めて弱い新規パン酵 母及びこれを用いたパンに関するものである。 従来の技術
近年、 冷凍生地製パン技術は焼きたてパンの提供、 製パン工程の効率化による 労働時間の短縮等のメリッ卜から製パン業界での比重を高めつつある。 冷凍生地 は小麦粉、 砂糖、 食塩、 油脂、 酵母、 水等のパン原料を混合、 成型し一 2 0 °C前 後で凍結保存され、 必要に応じて解凍し、 最終発酵を行ってから焼成される。 長 期の冷凍保存を行った場合、 たとえ冷凍耐性酵母でも多少の冷凍傷害を受けるこ とと、 解凍後の最終発酵時間を短縮するためにも、 通常のパンに比べ、 冷凍生地 は酵母の添加量を 2〜 3倍程度に増やすことが一般的に行われている。 また、 酵 母の冷凍傷害を出来るだけ防止するために捏ね上げ後にほとんど発酵を取らない ノータイム法も一般に採用されている。 しかしながら酵母を増量することにより 酵母特有の異味、 異臭が強く感じられパンの風味が好ましくないものとなる。 ま た、 発酵をほとんど取らないノータイム生地では発酵風味が弱い分、 酵母特有の 異味、 異臭がより強く感じられてパンの風味はさらに好ましくないものとなる。 また、 生地を冷凍しない通常の製パン法 （スクラッチ法） においても作業時間 短縮のため、 発酵時間を短縮した製パン法を用いた場合は上記と同様の理由によ りパンの風味は好ましくないものとなる。 .
さらに、 高価な発酵バタ一やサワークリームのような油脂類、 あるいはパネト一 ネ種ゃ酒種のような発酵種を用いたパンを従来のパン酵母を用いて製造した場合、 パン酵母特有の異味、 異臭がそれらの香りをマスキングし風味を損ねることが考 えられた。 発明の概要
本発明は、 酵母特有の異味、 異臭が極めて弱い新規パン酵母を提供する。 本発 明は、 冷凍耐性を有し、 酵母特有の異味、 異臭が極めて弱い新規パン酵母も提供 する。 本発明の酵母は、 酵母特有の異味、 異臭の悪影響を受けない優れた風味の パンの製造を可能とする。 図面の簡単な説明
図 1は、 本発明の酵母 F T— 4株およびいくつかの比較酵母を用いて調製した たパン生地を 1日〜 3ヶ月冷凍保管した後の解凍生地の発酵力を、 1 2 0分間の ト一タルガス発生量で示すグラフである。 図 1 Aは低糖生地で、 図 1 Bは高糖生 地での結果を示す。
図 2は、 本発明の酵母 F T— 4株およびいくつかの比較酵母を用いて調製した たパン生地の酵母臭を、 官能試験で評価した結果を示すグラフである。 発明の詳細な説明
本発明者らは、 上記課題を解決するべく、 パン酵母や酒酵母等の保有菌株間の 交雑や古典変異等により育種した菌株から高い発酵力を持ち、 酵母特有の異味、 異臭が極めて弱いパン酵母を見出すことに成功し、 本発明を完成した。
すなわち、 本発明により見出された新規パン酵母サッカロミセス ·セレビジェ {Saccharomyces cerevisiae) F T— 4株は、 酵母特有の異味、 異臭が極めて弱 く、 ほとんど感じられないものである。 さらに、 F T— 4株は当社の既存冷凍耐 性酵母よりも優れた冷凍耐性と幅広い糖領域での発酵能をもっている。
また、 本発明の新規パン酵母サッカロミセス ·セレビジェ F T— 4株を用い ることで通常のパン酵母を用いたパンに比較して明らかに酵母特有の異味、 異臭 が弱く、 風味の好ましいパンを製造することが可能となった。
以下、 本発明を詳細に説明する。
本発明でいうパン酵母はサッカロミセス ·セレビジェに限定されるものではな くサッカロミセス ·ロゼィゃサッカロミセス ·ゥパルム、 サッカロミセス■シパ リエリ、 トルラスボラ ·デルブル一キー、 場合によってはクルベロマイセス ·サ ーモトレランス、 サッカロミセス 'スぺーシーズ等もあげることが出来る。
本発明で得られた代表的なパン酵母であるサッカロミセス ·セレビジェ
{Saccharomyces cerevisiae) F T— 4株の菌学的性質を以下に示す。本菌株は、 日本国つくば市東 1丁目 1番地 1中央第 6の独立行政法人産業技術総合研究所へ 2002年 6月 20日付けで寄託され、 FERMBP-8081の受託番号が付与された。 サッカロミセス ·セレビジェ Saccharomyces cerevisiae) FT— 4株の菌学 的性質
① 形状 YPD培地で培養した菌体を顕微鏡にて観察した。
② 大きさ 同様に YPD培地で培養した菌体を顕微鏡にて観察した。
③ 胞子形成 YPD寒天培地で培養した菌体を S h a rma n寒天培地に接種 し、 20〜25°Cで 3〜1 0日間培養し、 顕微鏡で胞子形成の有無を確認した。 尚、 YPD培地、 YPD寒天培地及び S h a rma n寒天培地の組成を表 1に示 す。
表 1 培地組成
Figure imgf000005_0001
④ 炭素源の資化性と発酵性： 資化性の分析は、 YPD寒天培地で培養した新 鮮な菌体を一白金耳滅菌水 5m 1に懸濁した後、 滅菌水にて 2回菌体を遠心集菌 洗浄し、 再度、 滅菌水 5m 1に懸濁した液を各種炭素源を添加、 滅菌した培地 (Yeast nitrogen base 0. 6 7 g、 各種炭素源 0. l g、 水 1 0m l ) 5 m 1 を入れたチューブ （Sarstedt tube 1 0 lmmX 1 6. 5 mm) に 0. 1 m 1接種 し 3 0°Cにて 48時間振とう培養後、 6 6 0 nmの吸光度を測定し生育状況を濁 度で判定した。 発酵性は、 同様に調整した菌体懸濁液を同培地 1 0m 1とダーラ ム管を入れたガラス試験管（1 8 Omm X 1 5mm) に 0. 1m l接種し、 3 0で にて 1週間静置培養した後、 ダ一ラム管中の気泡の有無を確認した。
⑤ 硝酸塩の資化性： Sarstedtチューブに硝酸塩培地 （Yeast carbon base 1. 1 7 g、 硝酸カリウム 7. 8 g、 水 1 0m l ) 5m lを分注、 滅菌し、 炭素源の 資化性試験と同様に調整した菌体懸濁液を 0. 1m l接種し、 30°(で48時間 振とう培養後、 660 nmの吸光度を測定し生育状況を濁度で判定した。
⑥ ビタミン要求性： Sarstedtチューブにビタミン欠乏培地 （Vitamin free- base 1. 67 g、 各ビタミン溶液 0. 5m l、 水 1 0m l ) 5m lを分注、 滅菌
(ビタミン溶液は滅菌冷却後、 無菌フィルタ一を通し添加） した後、 炭素源の資 化性試験と同様に調整した菌体懸濁液を 0. 1m l接種し、 3 0°Cで 48時間振 とう培養後、 66 0 nmの吸光度を測定し生育状況を濁度で判定した。
FT— 4株の菌学的性質
Figure imgf000006_0001
表 2の結果から供試菌株はサッカロミセス ·セレビジェ Saccharo房 ces cerevisiae) と同定でさる。
本発明でいう 「酵母特有の異味、 異臭」 とは生酵母菌体を直接食した場合、 特 に明確に感じられる泥臭い又は生臭い風味のことで、 酵母臭ともいわれている。 これらの風味は小麦粉 1 0 0に対して 7以上の酵母を添加する冷凍生地でも同様 に感じられるものである。 また、 酵母を 2〜3 %程度しか使用しないスクラッチ 製法のパンでも酵母特有の異味、 異臭は存在しているが、 従来の酵母を用いてい る場合、 パンの風味の一部として認識されている。
酵母特有の異味、 異臭の原因となる物質は多種多様な化合物からなり、 一種類 の化合物に限定するのは困難ではあるが、 腐敗臭を持つ直鎖脂肪酸として知られ るイソ酪酸が原因物質の一つであると推測される。 本発明で得られた酵母特有の 異味、 異臭が極めて弱いことを特徴とするサッカロミセス ·セレビジェ F T— 4 株の乾燥菌体をビーズ破砕し、 イソ酪酸の含有量を測定したところ通常の冷凍耐 性酵母が乾燥菌体当たりのィソ酪酸含有量が 3 0 0〜 1 , 0 0 0 p p mだったの に対しサッカロミセス ·セレビジェ F T— 4株のイソ酪酸含有量は 1 2 5 p p m であり、 従来のパン酵母の半分以下の含有量であることが確認された。
本発明でいう冷凍耐性とは、 冷凍により障害を受けないか、 受けにくいことを いう。 例えば、 調製した生地を 3 0 °Cの恒温器中にて 6 0分間発酵させ、 発酵終 了後、 3 0 gに分割、 丸目をした後、 その生地玉を一 2 0 °Cで冷凍する。 1日後 に 3 8 °Cで 1 2 0分間、 解凍しつつ発酵させた際に発生する炭酸ガス発生量を測 定し、 冷凍 1日後の発酵力とする。 一方、 1ヶ月冷凍した同じ生地を 3 8 で 1 2 0分間、 解凍しつつ発酵させた際に発生する炭酸ガス発生量を測定し、 冷凍 1 ヶ月後の発酵力とする。 冷凍 1日後の発酵力を 1 0 0として、 冷凍 1ヶ月後の発 酵力の割合を求め、 発酵力残存率とした場合、 冷凍耐性がある酵母とは、 例えば 砂糖が 5 %の低糖生地において発酵力残存率が 8 0 %以上、 砂糖添加量が 2 5 % の高糖生地において 9 0 %以上を示すような酵母が該当する。
冷凍生地製法に対するものとしてスクラッチ製法が挙げられる。 スクラッチ製 法とは生地を冷凍することなく生地ミキシングから発酵 （一次発酵、 二次発酵を 含む）、 分割、 成型、 最終発酵、 焼成までの一連の工程を連続して行うものであり、 中種法、 ストレート法、 ノータイム法、 中麵法、 老麵法等の多種多様な製法が従 来から用いられている。 本発明で得られた新規パン酵母は冷凍耐性を有するもの であるが、 上記のようなスクラッチ製法に用いても何ら問題はない。
上記の砂糖添加量は小麦粉 1 0 0に対する重量％で示される。 通常、 無糖生地 とは砂糖無添加生地をいう。 低糖生地とは砂糖が 1 0 %未満の生地をいうが、 本 発明では砂糖添加量 5 %の生地を低糖生地とする。 高糖生地とは通常、 砂糖添加 量が 2 0 %以上 3 5 %未満の生地をいうが、 本発明では砂糖添加量 2 5 %の生地 を高糖生地としている。
冷凍耐性を有してよく、 かつ酵母特有の異味、 異臭が極めて弱いことを特徴と する本発明のパン酵母は、 冷凍耐性を有してよいパン酵母の二倍体株の胞子を発 芽させて得た一倍体酵母菌株と、 酵母特有の異味、 異臭が弱い酒酵母や野生酵母 の二倍体株の胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株とを有性生殖交配させて得ら れる酵母菌株から、実施例 1に記載するスクリーニング法により酵母特有の異味、 異臭の弱い菌株を選択することにより得ることができる。 さらに、 該スクリ一二 ングの前または後に、 実施例 1に記載するスクリーニング法により冷凍耐性を有 する菌株を選択して、 冷凍耐性を有し且つ酵母特有の異味、 異臭が極めて弱い酵 母菌株を得ることも出来る。 そのような菌株は本発明の好ましい態様である。 さ らにまた、 冷凍耐性を有するパン酵母に死滅率 9 9 %前後の条件下で紫外線を照 射し変異を起こさせて同様のスクリーニング法にて冷凍耐性を有し、 かつ酵母特 有の異味、 異臭が極めて弱い菌株を得ることも出来る。 実施例
以下、 実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、 本発明はこれらに限定 されるものではない。
実施例 1 サッカロミセス ·セレビジェ F T— 4株の育種とスクリーニング 少なくとも強い冷凍耐性を有するサッカロミセス ·セレビジェに属する二倍体 酵母菌株 （当社 Y Fイースト） の胞子を発芽させて得た一倍体酵母菌株と、 冷凍 耐性を有しないが酵母特有の異味、 異臭が弱いサッカロミセス 'セレビ、ジェに属 する二倍体酵母菌株 （当社保有の清酒用酵母） の胞子を発芽させて得た一倍体酵 母菌株とを有性生殖交配させることにより多数の二倍体酵母菌株を得た。 次にこれらの菌株について冷凍耐性の一次スクリーニングを実施した。 13m 1容チューブに YPD液体培地 3m 1を入れ、 121 、 15分滅菌した後、 各 菌株を一白金耳、 接種し 30°Cにおいて 20時間振とう培養した。 得られた菌体 を 3， 000 rpm、 15分遠心分離し集菌後、 冷水にて 2回洗浄、 集菌した。 集菌した菌体に LF培地 （グルコース 10 g、 マルトース 30 g、 スクロース 3 0 gを蒸留水にて 1 Lにメスアップ） 3mlを加え、 30 にて 1時間静置発酵 後、 3， 000 r pm、 10分遠心分離し、 上清のエタノール含有量をバイオセ ンサー BF— 4 (王子計測機器社製） にて測定した後、 再度、 vo r t exにて 懸濁して一 20 で 2週間冷凍保存した。 2週間後、 30 で 1時間、 解凍しつ つ発酵させた後、 3， 000 r pm、 10分遠心分離し、 上清のエタノール含有 量をバイオセンサー BF- 4 (王子計測機器社製） にて測定した。 得られた数値 から冷凍前のエタノール生成量を引いた値を解凍後の生成量とし、 最終エタノー ル濃度に占める割合が 40%以上の菌株を選抜した。
冷凍耐性の二次スクリ一ニングは 500 m 1容パッフル付き三角フラスコに 1 00m 1の YPD液体培地を分注し、 121°C、 15分滅菌した後、 各菌株を一 白金耳、 接種し 30°Cにおいて 20時間振とう培養した。 培養液を遠心チューブ に移し、 3000 r pm、 15分遠心分離、 集菌後、 冷水にて 2回洗浄、 菌体を 得た。
次に得られた菌株の低糖生地発酵力を測定した。 表 5に示した低糖生地の各原 料をグラムミキサーに投入し、 ミキシングタイム 2分、 目標捏上温度 30°Cにて 生地を調製した。 次いで、 得られた生地を 30 の恒温器中にて 60分間発酵さ せ、 発酵終了後、 30 gに分割、 丸目をした後、 その生地玉を一 20 で冷凍し た。 1日後に 38°Cで 120分間、 解凍しつつ発酵させた際に発生する炭酸ガス 発生量をファーモグラフ （アト一社製） にて測定し、 冷凍 1日後の発酵力とした。 一方、 1ヶ月冷凍した同じ生地を 38°Cで 120分間、 解凍しつつ発酵させた際 に発生する炭酸ガス発生量を同様にファーモグラフにて測定し、 冷凍 1ヶ月後の 発酵力とした。 冷凍 1日後の発酵力を 100として、 冷凍 1ヶ月後の発酵力の割 合を発酵力残存率とし、 この値が 80%以上の菌株を選抜した。
次に得られた冷凍耐性菌株の酵母特有の異味、 異臭についてスクリーニングを 実施した。 一次スクリーニングは各菌株を上記試験と同様に 500mlバッフル 付き三角フラスコにて培養、 集菌、 洗浄し、 菌体を得た。 これらの菌体について 被験者 10名にて官能試験を実施、 酵母特有の異味、 異臭が少ない菌株を選抜し た。
二次スクリーニングは菌体を蒸留水にて固形分 20%に調整後、 ビーズ破碎し 上清のイソ酪酸含有量をガスクロマトグラフィー （島津社製） にて測定した。 得 られたイソ酪酸含有量が菌体乾燥固形分あたり 200 p pm以下の菌体を選抜し た。
上記の条件を満たし、 製パン試験においても良好な結果が得られた菌株が 4株 選択され、 内、 一つをサッカロミセス セレビジェ Saccharomyces cerevisiae) FT— 4株と命名した。
実施例 2 イソ酪酸含有量の比較
FT— 4株及び各社パン酵母を 500ml容バッフル付き三角フラスコ中の Y PD液体培地 100m 1に一白金耳、植菌し、 30°C、 20時間振とう培養した。 培養液を 3， 000 r pm、 5分遠心分離し集菌後、 滅菌蒸留水にて 2回洗浄し、 得られた洗浄菌体を凍結乾燥した。 凍結乾燥菌体に冷水を加え、 固形分 20%に 調整後、ガラスビーズを 10 %加え V o r t e xにて高速攪拌し菌体を破砕した。 10， 000 r pm、 10分の遠心分離後、 上清のイソ酪酸含有量をガスクロマ トグラフィ一にて測定し、 乾燥固形分あたりのイソ酪酸含有量を求めた。
表 3に測定結果を示したが、 本発明株のイソ酪酸含有量は比較したパン酵母の 1Z2以下だった。
表 3 各社パン酵母ィソ酪酸含有量の比較
イソ酪酸含有量
FT— 4株 125 p pm
当社非冷凍生地用 45イースト 375 m
当社冷凍生地用 YFィースト 310 p pm
A社冷凍生地用ィースト 1 530 p pm
A社冷凍生地用ィースト 2 360 p p m
B社冷凍生地用ィースト 1 595 p p m
B社冷凍生地用ィースト 2 990 p pm
C社冷凍生地用ィ一スト 395 p pm
D社冷凍生地用ィースト 730 p pm 実施例 3 非冷凍生地発酵力
下記の工程に従い 300 Lジャーフアーメンターにて培養した FT— 4株菌体 を用いてィースト工業会法にて非冷凍生地発酵力を測定した。
• FT - 4株の培養
(1) シード用酵母培養
500ml容バッフル付き三角フラスコ中の YPD液体培地 200m 1に FT 一 4株を一白金耳、 植菌し、 30°C24時間振とう培養した培養液を 30Lジャ ーフアーメン夕一中の糖蜜培地 15 L (表 4参照） に接種し、 表 4に示した条件 で 300 Lジャ一フアーメン夕一培養用のシード用酵母とした。
(2) 300 Lジャーフアーメンター培養
300 Lジャーフアーメン夕一に表 4の本培養用培地 150 Lを調整後、 30 Lジャーフアーメン夕一で培養したシードを全量接種し、 以下に示す条件で培養 を行った。
表 4 FT— 4株培養条件
Figure imgf000011_0001
培養終了後、 直ちに培養液を遠心分離し菌体を分離後、 濾布を用いて圧搾脱水 し、 水分 65 67%の菌体を得た。
•非冷凍生地発酵力の測定
表 5に示される生地組成における非冷凍時の発酵力を測定した。 即ち、 原料を グラムミキサー （米国 National社製） にて 2分間ミキシングし、 得られた生地 を 3 0 gに分割してファーモグラフ （アト一社製） を用いて 3 0 、 1 2 0分間 で発生するトータルガス発生量を測定した。
スト工業会法生地組成
Figure imgf000012_0001
表 6に結果を示した。 本発明により得られた菌株は当社従来菌株ゃ市販ィース 卜に比較して低糖生地でやや低いものの無糖生地と高糖生地では強い非冷凍生地 発酵力を示し、 広範囲の糖領域で使用可能な万能性があることを示唆した。
非冷凍生地発酵力の比較
Figure imgf000012_0002
実施例 4 冷凍生地発酵力の比較
実施例 3で得られた菌体を用いて低糖生地および高糖生地における冷凍耐性を 測定した。 表 7に示した生地組成に従い調合した原料をグラムミキサー （米国 National社製） にて 2分間ミキシングし、 得られた生地は、 2 5 °Cのインキュべ 一夕一中で 6 0分間発酵した。 発酵終了後、 生地を 3 0 gに分割した後、 ポリ袋 に入れて一 2 0 °Cで冷凍保管した。 解凍は冷凍後、 1日、 2週間、 1ヶ月、 2ケ 月、 3ヶ月後に生地を冷凍庫から取り出し、 ファーモグラフ測定用ガラス瓶に入 れ、 3 8 °C、 1 2 0分間のトータルガス発生量をファーモグラフ （アト一社製） にて測定した。
表 7 冷凍生地試験生地組成
小麦粉 砂糖 食塩 ィース卜 水 低糖生地 1 0 0 g 5 g 1 . 5 g 7 g 6 2 g 高糖生地 1 0 0 g 2 5 g 1 . 5 g 6 g 5 5 g 図 1に 1 2 0分間の 1 タルガス発生量の経過グラフを、 表 8に冷凍保存 1ケ 月後の発酵力残存率を示した。 本発明株 F T— 4株は低糖生地で 8 0 %以上、 高 糖生地で 9 0 %以上の発酵力残存率を示した。 また、 3ヶ月間の発酵力経過から も従来品に比較して良好な冷凍耐性能を有することが確認された。
冷凍保存 1ケ月後の発酵力残存率
Figure imgf000013_0001
実施例 5 酵母臭の比較
実施例 3で得られた菌体の酵母特有の異味、 異臭の強度について当社非冷凍生 地用 4 5イーストを基準に被験者 1 0名にて官能試験を実施した。 官能試験は 4 5ィ一ストに比較して酵母臭が「極めて弱い（1点）」、 「弱い（2点）」、 「普通（同 程度、 3点)」、 「強い （4点）」、 「極めて強い （5点）」 の 5段階にて評価し、 平均 値を求めた。
図 2に結果を示した。 本発明株は他の酵母に比較して酵母特有の異味、 異臭が 極めて弱く、 無味無臭に近いものだった。
実施例 6 製パン試験
実施例 3で得られた菌体を用い、表 9に示した配合および工程に従い、食パン、 バターロール、 菓子パンの冷凍生地製パン試験を実施した。 冷凍した生地は 1ケ 月目、 2ヶ月目、 3ヶ月目に解凍し、 ホイ口時間、 焼成後のパン体積を測定した。 尚、 ホイ口時間とパン体積の測定および風味の判定は以下のように実施した。 ホイ口時間 · · ·各生地毎に設定した一定容積に達するまでの時間 （食パン生 地の場合はケース上部で測定。 パターロール、 菓子パンの場合は別途凍結保存し た 1 0 0 g丸生地をビ一力一にて解凍し測定）。
パン容積 · · · ·ホイ口にて一定容積に達した生地を焼成後、 直ちに菜種法に て容積を測定 （n = 5以上）。
風味 被験者 1 0名にて焼成したパンの風味が好ましいかどうかを 5段階で評価（非常に好ましい = 5点、好ましい = 4点、 どちらでもない = 3点、 好ましくない = 2点、 非常に好ましくない = 1点）。 各パンの得点を平均し、 4点 以上を 「◎」、 4〜3点を 「〇」、 3〜2点を 「△ 2点以下を 「X」 とした。
製パン試験配合 ·工程
Figure imgf000014_0001
製パン試験結果は表 1 0に示した。 本発明株を用いた冷凍生地はいずれの生地 もホイ口時間が既存株より短時間で推移しており、 低糖、 中糖、 高糖すベての生 地においてその発酵力は既存株を上回っている。 また、 パンの風味は 1ヶ月の冷 凍保存後の段階では酵母臭が少なくすっきりとしていて好ましい風味だつた。 ま た、 2ヶ月、 3ヶ月の長期冷凍保存後でも酵母臭が少ないことに加えて冷凍障害 による酵母死滅に伴う死滅臭の発生が他の酵母に比べて非常に少なく大変好まし い風味であった。 製パン試験結果
•食パン
当社冷凍生地用 A社市販冷凍生 B社市販冷凍生 冷凍期間 FT— 4株
YFィースト 地用ィースト 地用ィ一ス卜 ホ 1ヶ月 48分 47分 52分 5 2分 ィ 2ヶ月 5 5分 58分 59分 60分 時
間 3ヶ月 57分 62分 60分 6 5分
1ヶ月 248 0m l 2340m l 2490m l 249 0m l ン 2ヶ月 241 0m l 2345m l 2 320m l 232 0m l 体
3ヶ月 2390m l 2 3 50m l 23 1 0m l 2 3 1 0m l
1ヶ月
風 ◎ 〇 〇 〇
2ヶ月 Δ X 味 ◎ X
3ヶ月 ◎ X X X
•バタ一ロール
当社冷凍生地用 A社市販冷凍生 B社市販冷凍生 冷凍期間 FT— 4株
YFィ一ス卜 地用ィースト 地用ィース卜 ホ 1ヶ月 34分 3 8分 36分 3 7分 ィ 2ヶ月 3 8分 44分 44分 45分 口
時
間 3ヶ月 39分 42分 46分 49分
1ヶ月 3 1 5m l 300m l 283m l 300m l ン 2ヶ月 287m l 270m l 2 53m l 26 5m l 体
3ヶ月 283m l 260m l 2 30m l 2 50m l
1ヶ月 〇 〇 〇 風 ◎
2ヶ月
味 ◎ 〇 Δ Δ
3ヶ月 ◎ Δ X X 子パン
当社冷凍生地用 Α社市販冷凍生 Β社市販冷凍生 冷凍期間 FT— 4株
YFィース卜 地用ィ一スト 地用ィ一スト ホ 1ヶ月 42分 49分 52分 49分 ィ 2ヶ月 5 5分 58分 59分 6 0分
3ヶ月 5 6分 62分 65分 6 6分 パ 1ヶ月 33 5m l 32 7m l 330m l 3 1 5m l ン 2ヶ月 320m l 30 3m l 300m l 30 5m l 体
3ヶ月 31 5m l 30 5m l 290m l 29 5m l 1ヶ月 〇 〇 風 ◎ 〇
2ヶ月
味 ◎ 〇 〇 〇
3ヶ月 ◎ 〇 △ △ 発明の効果
本発明の完成により、 冷凍耐性を有し、 酵母特有の異味、 異臭が極めて弱い新 規パン酵母を提供することが可能となり、 酵母特有の異味、 異臭の悪影響を受け ない優れた風味のパンの製造が可能となった。

Claims

請求の範囲
1. 乾燥菌体中のイソ酪酸含有料が 1 5 0 p pm以下であることにより、 酵 母特有の異味、 異臭が弱いことを特徴とするパン酵母。
2. サッカロミセス （Saccharomyces ) 属である請求項 1のパン酵母。
3. サッカロミセス 'セレビジェ (Saccharomyces cerevisiae) である請求 項 2のパン酵母。
4. 冷凍耐性を有する請求項 1ないし 3のいずれか 1項のパン酵母。
5. サッカロミセス 'セレビジェ (Saccharomyces cerevisiae) F T— 4株 (FERM B P— 808 1) である、 請求項 4のパン酵母。
6. 請求項 1〜4のいずれか 1項記載のパン酵母を用いて製造されるパン生 地。
7. 請求項 1〜4のいずれか 1項記載のパン酵母を用いて製造される酵母特 有の異味、 異臭が極めて弱いことを特徴とするパンの製造方法。
8. サッカロミセス ·セレビジェ （Saccharomyces cerevisiae) F T— 4株 (FERM BP— 8 08 1) を用いて製造されるパン生地。
9. サッカロミセス 'セレビジェ （Saccharomyces cerevisiae) F T— 4株 (FERM B P— 808 1) を用いて製造される酵母特有の異味、 異： ¾が極め て弱いことを特徴とするパンの製造方法。
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