CN113355251B - 一种耐冷冻酿酒酵母菌株及其应用 - Google Patents

一种耐冷冻酿酒酵母菌株及其应用 Download PDF

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CN113355251B CN202110856932.6A CN202110856932A CN113355251B CN 113355251 B CN113355251 B CN 113355251B CN 202110856932 A CN202110856932 A CN 202110856932A CN 113355251 B CN113355251 B CN 113355251B
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Abstract

本发明提供一种耐冷冻酿酒酵母菌株及其应用。本发明提供的耐冷冻酿酒酵母菌株为：酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)，所述酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020708；或者，酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)，所述酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)于2020年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020447。本发明提供的耐冷冻酿酒酵母菌株具有较强的抗冷冻性，能有效的应用于不同冷冻面团产品。

Description

一种耐冷冻酿酒酵母菌株及其应用
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及耐冷冻酿酒酵母菌株及其应用。
背景技术
随着现代科技水平的发展，面包制作工艺得到不断提升，尤其是20世纪50年代在欧洲国家发展起来的冷冻面团技术，如今在全球各个国家和地区都得到了普及。目前，冷冻面团产品已经占到欧洲市场的40％以上，其中酥皮类面包(丹麦、羊角、蛋挞等)产品占60％以上，现在冷冻面团的保质期已经可以延长几周甚至几个月，还可以通过冷链出口到世界各地市场。但我国在冷冻面团上的研究还处于探索阶段，国内规模化的烘焙品牌和连锁品牌很多都建立了自己的冷冻面团工厂，随着冷冻面团技术的发展，烘焙饼店、咖啡店、超市、餐厅和酒店都已经实现冷冻面团的应用。
冷冻面团技术既能减少各烘焙连锁店的经营成本，还能满足顾客吃上新鲜食物的需求，不仅符合现代人的饮食习惯，而且既方便快捷又营养安全，随着冷冻设备及冷链配送运输方式不断的进步，烘焙行业市场占有率增长迅速，都为冷冻面团技术的发展提供了良好的基础，因此冷冻面团具有十分广阔的应用前景。
现有技术CN103275881A公开了一种适合于冷冻面团发酵的耐冷冻活性干酵母，该现有技术中提供的耐冷冻酵母在-20℃冷冻21天后的活细胞率为93.7％，耐冷冻性能较差。
发明内容
对于冷冻面团来说，冷冻解冻的过程使酵母生存环境发生了变化，因此对酵母质量提出了更高的要求，因此酵母的耐冻性是影响产品品质的关键因素。本申请发明人发现，冷冻对酵母真正的影响主要是两个方面：(1)在冷冻过程中或者急速冷冻过程中产生的冰晶会破坏酵母细胞，不同的冷冻速度会形成大小不一的冰晶，对酵母产生的伤害程度也有所不同；(2)冷冻面团中的水结晶对酵母影响也很大，当面团内自由水结晶时，细胞内部仍是液态，由于细胞外部溶液浓度高，导致渗透压升高，细胞膜内的水分会渗透到外面，细胞呈现脱水状态，引起细胞收缩；这两个因素都会影响酵母本身活性，导致面团醒发时间长、面团产气不足、面团下塌等，所以适用于冷冻面团的酵母一定要既抗冻又能克服渗透压的影响，在重油重糖面团环境下，仍可以保持良好的发酵活力，综合考虑各育种手段优缺点，杂交是目前面包酵母育种的最佳手段，既能进行性状改良又能达到工业生产的需求。
针对现有技术中存在的酵母用于面团发酵时候不能兼顾抗冻和克服渗透压的技术问题，本发明提供一种耐冷冻酿酒酵母。
本发明提供一种耐冷冻酿酒酵母菌株，所述耐冷冻酿酒酵母菌株为：
酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)，所述酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020708；
或者，酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)，所述酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)于2020年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020447。
优选地，所述酿酒酵母i5菌株的26S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
优选地，所述酿酒酵母i9菌株的26S rDNA基因序列如SEQ ID NO.2所示。
优选地，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻28天后活细胞率为97％以上。
优选地，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻14天后活力保存率为85％以上。
优选地，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻28天后活力保存率为80％以上。
本发明还提供所述的耐冷冻酿酒酵母菌株的发酵制备方法，所述方法包含如下步骤：培养所述的耐冷冻酿酒酵母菌株。
本发明还提供所述的耐冷冻酿酒酵母菌株在发酵中的应用。
本发明还提供所述的耐冷冻酿酒酵母菌株在面团中的应用。
本发明还提供一种面团，所述面团中含有所述的耐冷冻酿酒酵母菌株。
优选地，所述面团中含有质量比为100:0.5-5的面粉和所述耐冷冻酿酒酵母菌株。
本发明提供的耐冷冻酿酒酵母在冷冻面团中具有较强的抗冷冻性能，制备的面团经过冷冻后再解冻发酵活力仍保持相对高水平，能够保证发酵面团产品品质。
本发明通过自交获得的新菌株具有一定的抗冷冻性，能有效的应用于不同冷冻面团产品，尤其是重油重糖烘焙产品，能够满足冷冻面团市场大量需求。
菌种保藏信息
本发明提供的酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020708，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：027-68754052。
本发明提供的酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)于2020年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020447，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：027-68754052。
附图说明
图1所示为-20℃条件下不同冷冻时间的酵母菌株活细胞率；
图2所示为酿酒酵母i5菌株和酿酒酵母i9菌株26S rDNA凝胶电泳检测结果；
图3所示为酿酒酵母i5菌株和酿酒酵母i9菌株在不同冷冻时间下的发酵活力；
图4所示为酿酒酵母i5菌株和酿酒酵母i9菌株在不同冷冻时间下相对0天活力保存率。
具体实施方式
本发明提供的耐冷冻酿酒酵母菌株的是以安琪酵母股份有限公司市售安琪高活性低糖鲜酵母菌株为试验出发菌株，利用酵母有性生殖特性，通过自交手段，选育出的具有杂种优势的子代，从而获得具有优良耐冷冻性状的新菌株。
本发明实施例中活力保存率、相对亲本活力百分比和相对0天的活力保存率计算方法如下：
活力保存率＝冷冻后的发酵活力/冷冻0天发酵活力*100％；
Figure BDA0003184469890000041
Figure BDA0003184469890000042
本发明提供的耐冷冻酿酒酵母菌株的具体筛选方法如下：首先利用酵母显微操作仪获得杂合子，其次进行摇瓶发酵，检测0％及16％糖面团体系下发酵活力，都接近亲本菌株，优选为100-115％，再进行冷冻试验，8天后活细胞存活率至少达到40％，优选为60％；然后将优选菌株进行小试工艺验证，对制备的干酵母进行10％糖冷冻面团试验，筛选标准为冷冻7天、14天、21天、28天后，活力保存率至少达到85％、85％、80％、80％；最后，进行重油重糖配方应用测试，同样冷冻天数下杂交菌株相对0天的活力保存率接近或超过对照，优选为达到亲本菌株的100-110％。
实施例1耐冷冻酿酒酵母的筛选
以实验室保存的安琪高活性低糖鲜酵母菌株为亲本菌株在YPD固体培养基上在28℃条件下培养48h，连续活化两次。然后将活化好的菌株挑取单菌落接种到生孢子培养基McClary培养基上，在28℃条件下培养7d。待产孢率都达到90％以上，取适量的产孢的菌体，置于100μL的无菌水中，加入20μL的10％的蜗牛酶(终浓度0.02mg/mL)，在37℃水浴15min后立即放置冰上，终止酶解。然后利用酵母显微操作仪观察四分体，成功挑取10个孢子囊进行单孢分离。将分离的单孢在28℃条件下培养48h，记录存活的菌落数。取培养得到的菌落提取DNA，通过PCR检测存活孢子的有性配型，以引物对MAT-F和MAT-a检测是否为MATa单倍体，以MAT-F和MAT-α检测是否为MATα单倍体，其中MAT-F、MAT-a和MAT-α序列如下：
MAT-F：AGTCACATCAAGATCGTTTATGG，
MAT-a：ACTCCACTTCAAGTAAGAGTTTG，
MAT-α：GCACG GAATA TGGGA CTACT TCG。
PCR扩增程序为94℃，10min；94℃，30s；55℃，30s；72℃，60s，30个循环；72℃，10min。将PCR产物进行凝胶电泳检测，电泳条带MATa型单倍体为544bp，MATα单倍体为404bp。存活的孢子数、MATa单倍体及MATα单倍体数如下表1所示。
表1
Figure BDA0003184469890000051
将来源于不同四分体的单孢子放置平板上同一位置，使其接触分泌信息素进而形成西蒙氏细胞，30℃培养3天，取单菌落进行转接培养，并进行配型及生孢检测验证杂合菌株。利用PCR法检测菌株是否为杂合菌株。取PCR产物出现两条带(二倍体为544bp和404bp条带)且具有生孢能力的菌株即为杂合菌株。共得到20株杂合菌株，分别命名为i1、i2、i3、i4、i5、i6、i7、i8、i9、i10、i11、i12、i13、i14、i15、i16、i17、i18、i19和i20。
实施例2耐冷冻酿酒酵母的筛选
对实施例1获得的20株杂合菌株进行生物量指标的筛选。
将获得的20株杂合子接种至5mlYPD液体培养基，30℃、180rpm条件下过夜培养至菌体饱和。再将饱和菌液按0.6％的接种量接种至300mlYPD液体培养基中培养20h，然后在5000rpm条件下离心1min收集菌体，进行生物量指标检测，得到的生物量如表2所示。表2中相比亲本菌株的增益通过如下公式计算：
相比亲本菌株的增益＝(新菌株的生物量-亲本菌株的生物量)/亲本菌株的生物量*100％。
表2杂合菌株摇瓶发酵生物量指标
Figure BDA0003184469890000061
Figure BDA0003184469890000071
从表2可以看出，获得的i3、i5、i7、i9、i10、i11、i12、i17和i20菌株比亲本的生物量高，具有生物量优势。
实施例3初始发酵活力筛选
对获得的新菌株活化后按0.6％的接种量接种至300mL YPD液体培养基，30℃，160rpm条件下培养20h，经离心，洗涤后获得酵母乳。对获得的酵母乳进行水分检测，按发酵活力检测体系中干酵母添加量，计算所需酵母乳的重量。
利用亲本菌株和实施例2中获得的9株酵母菌株制备基于面粉重量为0％的蔗糖面团和基于面粉重量为16％的蔗糖面团。
分别称取10份下表3中所示重量配比的面粉、盐、水，然后分别加入表3所示干酵母重量配比的亲本菌株和i3、i5、i7、i9、i10、i11、i12、i17和i20酿酒酵母菌株，分别和面4-5min，制备得到基于面粉重量为0％的蔗糖面团。
表3 0％蔗糖面团体系烘焙原料百分比
原料 面粉 干酵母 盐 水
烘焙百分比 100g 1.4g 1g 65g
分别称取10份下表4中所示重量配比的面粉、蔗糖、盐、水，然后分别加入表4所示干酵母重量配比的亲本菌株和i3、i5、i7、i9、i10、i11、i12、i17和i20酿酒酵母菌株，分别和面4-5min，制备得到基于面粉重量为16％的蔗糖面团。
表4 16％蔗糖面团体系烘焙原料百分比
Figure BDA0003184469890000072
将上述20份面团各取70g用于测定各酿酒酵母菌株的发酵活力。控制各面团中心温度为30℃左右，利用Risograph酵母产气测量仪测量70g面团在不同体系下发酵活力。其中，0％糖面团体系检测1h产气量，16％糖面团体系检测2h产气量。相比亲本面团发酵活力增益＝(新菌株的面团发酵活力-亲本菌株的面团发酵活力)/亲本菌株的面团发酵活力*100％。结果如下表5所示。
表5鲜酵母在0％和16％糖面团体系中发酵活力及增益
Figure BDA0003184469890000081
结果表明，i5、i7、i9、i10、i11、i17菌株在0％和16％糖面团体系下的发酵活力都超过亲本，即未经过冷冻的无糖及高糖初始发酵活力优于亲本菌株。
实施例3耐冷冻活细胞率检测
将摇瓶培养后的i5、i7、i9、i10、i11、i17和亲本酿酒酵母菌株进行发酵培养，经培养、分离、洗涤、抽滤、压滤、造粒、干燥、包装工业化生产得到干物质96％左右的活性干酵母。将获得的各菌株的活性干酵母在-20℃下冷冻7天、14天、21天、28天，根据国标GB/T20886-2007进行活细胞率检测。计算方法如下。结果如表6和图1所示。
Figure BDA0003184469890000091
表6 -20℃条件下不同冷冻时间的酵母菌株活细胞率
Figure BDA0003184469890000092
表6和图1所示结果表明，同一菌株不同冷冻天数相比，酵母在冷冻前期受冰晶和渗透压的影响较大，尤其是亲本、i11菌株。其中i5和i9菌株的活细胞存活率在7天后呈平缓趋势，即耐冷冻性较好。
实施例4干酵母冷冻面团试验
测试i5、i7、i9、i10、i17和亲本酿酒酵母菌株的活性干酵母在-20℃条件下冷冻0、7、14、21和28天后，以如下表6所示的面团组分配比表制备蔗糖含量基于面粉含量为10％的面团，各取280g测试耐冷冻酿酒酵母菌株的发酵活力。面团的组分配比表如下表7所示。
表7 10％蔗糖面团组分配比表
Figure BDA0003184469890000093
i5、i7、i9、i10、i17和亲本酿酒酵母菌株在冷冻0天后制备的面团发酵2h总产气量数据，即酿酒酵母发酵活力数据如下表8所示。
表8冷冻0天发酵活力数据
Figure BDA0003184469890000094
Figure BDA0003184469890000101
i5、i7、i9、i10、i17和亲本酿酒酵母菌株在冷冻7天后制备的面团发酵2h总产气量数据，即酿酒酵母发酵活力数据如下表9所示。
表9冷冻7天发酵活力数据
Figure BDA0003184469890000102
i5、i7、i9、i10、i17和亲本酿酒酵母菌株在冷冻14天后制备的面团发酵2h总产气量数据，即酿酒酵母发酵活力数据如下表10所示。
表10冷冻14天发酵活力数据
Figure BDA0003184469890000103
i5、i7、i9、i10、i17和亲本酿酒酵母菌株在冷冻21天后制备的面团发酵2h总产气量数据，即酿酒酵母发酵活力数据如下表11所示。
表11冷冻21天发酵活力数据
Figure BDA0003184469890000111
i5、i7、i9、i10、i17和亲本酿酒酵母菌株在冷冻28天后制备的面团发酵2h总产气量数据，即酿酒酵母发酵活力数据如下表12所示。
表12冷冻28天发酵活力数据
Figure BDA0003184469890000112
根据相对亲本活力百分比和活力保存率数据比较，只有i5和i9菌株在冷冻7天和14天活力保存率达到85％以上，冷冻21天和28天活力保存率达到80％以上。
实施例5
将i5和i9菌株分别划线接种于YPD斜面培养基，30℃培养24h，观察形态发现该菌株菌落质地为奶酪状、颜色为乳白色，表面有褶皱，边缘光滑，显微形态呈椭圆形，出芽生殖。
提取i5和i9菌株基因组，以NL1和NL4为引物扩增i5和i9菌株26S rDNA基因序列，其中NL1和NL4引物序列如下：
NL1：5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’、
NL4：5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’。
PCR反应体系是：25μlMix；1μl样品；22μl ddH2O；1μl NL1；1μl NL4；PCR反应温度：94℃，5min；94℃，30s，44℃，30s，72℃，1min，30x；72℃，10min；4℃保存。PCR产物4℃保存，再经1％凝胶电泳检测及测序后，与GenBank上序列进行Blast分析比对，序列相似性大于99％为同一物种。
结合形态分析及分子鉴定，该菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
凝胶电泳检测结果如图4所示。i5菌株26S rDNA基因序列测序结果如SEQ ID NO.1所示，i9菌株26S rDNA基因序列测序结果如SEQ ID NO.2所示。
SEQ ID NO.1如下所示：
CTTAGTAACGGCGAGTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGTACCTTCGGTGCCCGAGTTGTAATTTGGAGAGGGCAACTTTGGGGCCGTTCCTTGTCTATGTTCCTTGGAACAGGACGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTGTGGCGAGGAGTGCGGTTCTTTGTAAAGTGCCTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCATTTGATCAGACATGGTGTTTTGTGCCCTCTGCTCCTTGTGGGTAGGGGAATCTCGCATTTCACTGGGCCAGCATCAGTTTTGGTGGCAGGATAAATCCATAGGAATGTAGCTTGCCTCGGTAAGTATTATAGCCTGTGGGAATACTGCCAGCTGGGACTGAGGACTGCGACGTAAGTCAAGGATGCTGGCATAATGGTTATATGCCGCCCGTCTTGAA
SEQ ID NO.2如下所示：
GGGGGCATGCTTAGTACGGCGAGTGAAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGTACCTTCGGTGCCCGAGTTGTAATTTGGAGAGGGCAACTTTGGGGCCGTTCCTTGTCTATGTTCCTTGGAACAGGACGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTGTGGCGAGGAGTGCGGTTCTTTGTAAAGTGCCTTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCATTTGATCAGACATGGTGTTTTGTGCCCTCTGCTCCTTGTGGGTAGGGGAATCTCGCATTTCACTGGGCCAGCATCAGTTTTGGTGGCAGGATAAATCCATAGGAATGTAGCTTGCCTCGGTAAGTATTATAGCCTGTGGGAATACTGCCAGCTGGGACTGAGGACTGCGACGTAAGTCAAGGATGCTGGCATAATGGTTATATGCCGCCCGTCTTGAA
将本发明提供的i5菌株命名为酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiaei5)，所述酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2020708。
将本发明提供的i9菌株命名为酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiaei9)，所述酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)于2020年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2020447。
实施例6应用测试
测试i5、i9和亲本酿酒酵母菌株以如下表13所示的配方制备面团。
表13冷冻面团配方
原料 配比(g)
面粉 100
酵母 2
食盐 1
蔗糖 20
黄油 20
水 52
将以上述表13中所示的配方制得的面团在-20℃条件下保存0-60天，然后测试70g面团的2h发酵活力以及活力保存率及相对增益。相对增益通过下述计算方法得到：相对增益＝(新菌株相对冷冻0天活力保存率-亲本菌株相对冷冻0天活力保存率)/亲本菌株相对冷冻0天活力保存率*100％。
发酵活力测试结果如表14和图3所示。活力保存率及相对增益测试结果如表15所示。图4所示为酿酒酵母i5菌株和酿酒酵母i9菌株在不同冷冻时间下相对0天活力保存率。
表14 -20℃条件下不同冷冻时间发酵活力
Figure BDA0003184469890000141
从表14和图3中可以看出，本发明中的酿酒酵母i5菌株和酿酒酵母i9菌株以表12所示的配方制得的面团在-20℃条件下冷冻60天，70g面团2h的发酵活力仍能达到307mL和266mL。说明本发明提供的酿酒酵母i5菌株和酿酒酵母i9菌株同时具有优异的抗冻性能及耐渗透压性能。
表15 -20℃条件下不同冷冻时间相对0天的活力保存率及相对增益(％)
Figure BDA0003184469890000142
Figure BDA0003184469890000151
从表15和图4中可以看出，本发明提供的酿酒酵母i5菌株和酿酒酵母i9菌株以表12所示的配方制得的面团在-20℃条件下冷冻60天，相对0天的活力保存率仍达到71％以上，相对增益达到9.9％和10.9％。
结果表明，在重油重糖面团配方中，同一冷冻时间下，i5和i9菌株发酵活力都超过亲本菌株，其中i9菌株的各个冷冻时间检测点的相对0天活力保存率都达到优选标准100-110％。
序列表
<110> 安琪酵母股份有限公司
<120> 一种耐冷冻酿酒酵母菌株及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 565
<212> DNA
<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)
<400> 1
cttagtaacg gcgagtgaag cggcaaaagc tcaaatttga aatctggtac cttcggtgcc 60
cgagttgtaa tttggagagg gcaactttgg ggccgttcct tgtctatgtt ccttggaaca 120
ggacgtcata gagggtgaga atcccgtgtg gcgaggagtg cggttctttg taaagtgcct 180
tcgaagagtc gagttgtttg ggaatgcagc tctaagtggg tggtaaattc catctaaagc 240
taaatattgg cgagagaccg atagcgaaca agtacagtga tggaaagatg aaaagaactt 300
tgaaaagaga gtgaaaaagt acgtgaaatt gttgaaaggg aagggcattt gatcagacat 360
ggtgttttgt gccctctgct ccttgtgggt aggggaatct cgcatttcac tgggccagca 420
tcagttttgg tggcaggata aatccatagg aatgtagctt gcctcggtaa gtattatagc 480
ctgtgggaat actgccagct gggactgagg actgcgacgt aagtcaagga tgctggcata 540
atggttatat gccgcccgtc ttgaa 565
<210> 2
<211> 573
<212> DNA
<213> 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)
<400> 2
gggggcatgc ttagtacggc gagtgaagcg gcaaaagctc aaatttgaaa tctggtacct 60
tcggtgcccg agttgtaatt tggagagggc aactttgggg ccgttccttg tctatgttcc 120
ttggaacagg acgtcataga gggtgagaat cccgtgtggc gaggagtgcg gttctttgta 180
aagtgccttc gaagagtcga gttgtttggg aatgcagctc taagtgggtg gtaaattcca 240
tctaaagcta aatattggcg agagaccgat agcgaacaag tacagtgatg gaaagatgaa 300
aagaactttg aaaagagagt gaaaaagtac gtgaaattgt tgaaagggaa gggcatttga 360
tcagacatgg tgttttgtgc cctctgctcc ttgtgggtag gggaatctcg catttcactg 420
ggccagcatc agttttggtg gcaggataaa tccataggaa tgtagcttgc ctcggtaagt 480
attatagcct gtgggaatac tgccagctgg gactgaggac tgcgacgtaa gtcaaggatg 540
ctggcataat ggttatatgc cgcccgtctt gaa 573

Claims (13)

1.一种耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述耐冷冻酿酒酵母菌株为：
酿酒酵母i5菌株（Saccharomyces cerevisiae i5），所述酿酒酵母i5菌株（Saccharomyces cerevisiae i5）于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M 2020708；
或者，酿酒酵母i9菌株（Saccharomyces cerevisiae i9），所述酿酒酵母i9菌株（Saccharomyces cerevisiae i9）于2020年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为CCTCC NO：M 2020447。
2.根据权利要求1所述的耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述酿酒酵母i5菌株的26S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述酿酒酵母i9菌株的26S rDNA基因序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1所述的耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻28天后活细胞率为97%以上。
5.根据权利要求2所述的耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻28天后活细胞率为97%以上。
6.根据权利要求3所述的耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻28天后活细胞率为97%以上。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻14天后活力保存率为85%以上。
8.根据权利要求1-6任意一项所述的耐冷冻酿酒酵母菌株，其特征在于，所述耐冷冻酿酒酵母菌株在-20℃条件下冷冻28天后活力保存率为80%以上。
9.一种耐冷冻酿酒酵母菌株的发酵制备方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：培养权利要求1-8任意一项所述的耐冷冻酿酒酵母菌株。
10.权利要求1-8任意一项所述的耐冷冻酿酒酵母菌株在发酵中的应用。
11.权利要求1-8任意一项所述的耐冷冻酿酒酵母菌株在面团中的应用。
12.一种面团，其特征在于，所述面团中含有权利要求1-8任意一项所述的耐冷冻酿酒酵母菌株。
13.根据权利要求12所述的面团，其特征在于，所述面团中含有质量比为100:0.5-5的面粉和所述耐冷冻酿酒酵母菌株。
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