TWI466686B - Whitening agents, anti-aging agents and antioxidants, and whitening endermic agents, anti-aging and anti-skin external oxidation method for producing a skin external preparation of - Google Patents

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Description

美白劑、抗老化劑及抗氧化劑及美白用皮膚外用劑、抗老化用皮膚外用劑及抗氧化用皮膚外用劑之製造方法
本發明係關於一種美白劑、抗老化劑以及抗氧化劑，更詳細而言，係關於一種含有植物萃取物作為有效成分之美白劑、抗老化劑、抗氧化劑以及含有其之皮膚外用劑。
關於皮膚的斑等的發生機制雖然仍有一部分不明瞭，但一般認為賀爾蒙的異常或來自日光的紫外線刺激會造成黑色素(melanin)形成，此會異常沉積於皮膚內。為皮膚著色原因之黑色素係產生於位在表皮與真皮之間的黑色素細胞(melanocyte)內的黑色素生成顆粒(melanosome)，所生成之黑色素係藉由滲透作用擴散至相鄰的細胞。
此黑色素細胞內的生化學反應推論如下。亦即，為必須胺基酸之酪胺酸經蛋白酪胺酸激酶(protein tyrosine kinase)的作用成為度巴醌(dopaquinone)，而此再經由酵素或非酵素的氧化作用變化成黑色的黑色素，此一過程即為黑色素的生成過程。
關於用以抑制上述黑色素生成之美白劑，從以前開始便期待來自植物之萃取物的安全性、對皮膚造成刺激等穩定性而有各種開發(參照例如專利文獻1~4)。
另一方面，眾所周知紫外線會造成活性氧的產生。活性氧之中，自由基型態者當與脂質等氧化性基質反應時，則會誘發連鎖的氧化反應。因此，自由基型態之活性氧對皮膚等身體組織所造成之傷害會大幅增加。
皮膚因為經常暴露於氧和紫外線，因此是自由基所致之氧化壓力傷害最為嚴重的組織。近年來，紫外線所產生之各種活性氧會引起皮脂、脂質的過氧化、蛋白質變性、酵素阻礙等，其短期而言會引起皮膚的發炎症狀等。而長期而言，被認為是造成老化及癌症等的原因。
又，活性氧及過氧化脂質被認為與異位性皮膚炎及接觸性皮膚炎、乾癬等皮膚疾病有關。因此，活性氧(自由基)與皮膚老化、皮膚疾病有很深的關連性。
具備捕捉自由基能力之物質可抑制自由基連鎖反應，或是使之停止，例如所謂的抗氧化劑即為一種。
因此，配合有抗氧化劑之皮膚外用劑可期待對於光氧化壓力所致之皮膚老化(例如斑、皺紋、鬆弛等)之預防、改善效果。又，與自由基有關之各種皮膚疾病用皮膚外用劑亦可期待其具有預防、改善效果。
作為抗氧化劑所周知之維生素E及維生素C係生物體內之自由基捕捉型抗氧化物質。且亦已知有BHT、BHA之合成抗氧化物質。而來自植物之抗氧化劑有野生香菇、金針菇、占地菇(Lyophyllum shimeji )、云芝、松茸(Tricholoma matsutake )、靈芝、白肉迷孔菌(Daedalea dickinsii )、滑茸、其他擔子菌類的萃取物被報告出來(專利文獻6~8)。再者亦報告有玄參科(Scrophulariaceae )毛蕊花屬植物的萃取物所構成之抗氧化劑(專利文獻9)、紫草料破布子屬植物的萃取物所構成之抗氧化劑(專利文獻10)。
又，專利文獻5中就含有芹菜素(apigenin)及穗花杉双黃酮(amentoflavone)的植物萃取物之一，例舉了松葉蕨科松葉蕨的溶劑萃取物。專利文獻5中，並無此植物萃取物具有黑色素生成促進作用之數據，專利文獻5中松葉蕨溶劑萃取物其本身的作用不明。而本發明係關於松葉蕨萃取物之黑色素生成抑制作用及自由基捕捉型之抗氧化作用，專利文獻5之記載與本發明之內容完全相異。
專利文獻1：日本特開平8-310939號公報
專利文獻2：日本特開平7-89843號公報
專利文獻3：日本特開平9-30954號公報
專利文獻4：日本特開2003-73224號公報
專利文獻5：日本特開平9-263534號公報
專利文獻6：日本特開平5-317016號公報
專利文獻7：日本特開平6-65575號公報
專利文獻8：日本特開昭59-124984號公報
專利文獻9：日本特開平11-171723號公報
專利文獻10：日本特開平11-171720號公報
如上所述，對於來自植物之美白劑、抗老化劑係尋求發現一種新穎植物展現新穎美白效果、抗老化效果。本發明係因應於此種以往情況，目的在於提供一種來自新穎植物之美白劑、抗老化劑以及抗氧化劑。
本發明人等有鑑於上述現狀，反覆研究之結果，發現特定之植物萃取物具有優異之美白作用以及抗老化作用，而完成本發明。
本發明係一種美白劑，其特徵在於含有松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物。
本發明係一種美白用皮膚外用劑，其特徵在於含有松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物。
本發明係一種抗老化劑，其特徵在於含有松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物。
本發明係一種抗老化用皮膚外用劑，其特徵在於含有松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物。
本發明係一種抗氧化劑，其特徵在於含有松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物。
本發明係一種抗氧化用皮膚外用劑，其特徵在於含有松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物。
本發明之美白劑具有優異之美白作用，並於使日曬後之色素沉著、斑、雀斑、肝斑等淡色化、美白方面具有優異之效果。
本發明之抗老化劑以及抗氧化劑係具有防止、抑制活性氧(自由基)所致之皮膚老化、皮膚疾病之優異的自由基捕捉能力。
本發明之美白用皮膚外用劑藉由塗布於肌膚而發揮優異之美白效果，於使日曬後之色素沉澱、斑、雀斑、肝斑等淡色化、美白方面具有優異之效果，安全性亦高。
本發明之抗老化用皮膚外用劑以及抗氧化用皮膚外用劑藉由塗布於肌膚而發揮優異之自由基捕捉能力，可防止、抑制活性氧(自由基)所致之皮膚老化、皮膚疾病，安全性亦高。
以下詳述本發明。
本發明中所用之植物為屬於松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)之植物，為羊齒植物的親緣植物。就松葉蕨屬植物而言，已知有Psilotum nudum、Psilotum complanatum、Psilotum flabellatum、Psiloum flaccidum、Psilotum triquetrum、Psilotum truncatum等。
分布於日本國內的品種可例舉如松葉蕨(Psilotum nudum)，此係廣泛地分布於日本中部以南、台灣、中國、南部、東南亞等。本發明中，屬於松葉蕨科松葉蕨屬(Psilotum)之植物尤佳為松葉蕨(Psilotum nudum)。
至目前為止並無本發明之植物萃取物具有美白作用或抗氧化作用、抗老化作用這樣的報告出現，該等皆由本發明人等所初次發現。
本發明中所用之松葉蕨屬植物之萃取物係藉由將整株適當地乾燥或粉碎後，以溶劑萃取所得。萃取於室溫靜置下進行為佳，視需要可利用加溫、攪拌、加熱迴流來促進萃取。所得之萃取液可直接或者適當施以過濾、濃縮、脫色等處理來使用。又，亦可在一度除去溶劑後，再溶解於與萃取所用之溶劑相異之溶劑來使用。亦可利用活性碳、管柱層析等進一步將所得之萃取物精製後再使用。
萃取部位除了使用整株以外，亦可收集特定部位進行萃取。
本發明中所用之萃取溶劑只要是通常萃取所使用之溶劑即可，可使用任一種，尤其可單獨使用或組合使用甲醇、乙醇、1,3-丁二醇、丙二醇、二丙二醇等醇類、含水醇類、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等有機溶劑，而尤佳為甲醇、乙醇、1,3-丁二醇、丙酮等。又，亦可利用溶劑區分、活性碳處理、管柱層析等精製該等之萃取物後再使用。
本發明之美白劑、抗氧化劑以及抗老化劑之特徵在於含有松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物，亦可於無損本發明效果的範圍內含有其他各種成分。
本發明之美白劑、抗老化劑可配合於皮膚外用基劑，作成為美白用皮膚外用劑或是以抗氧化作用為基礎之抗老化用皮膚外用劑。該等皮膚外用劑尤其可較佳地使用於化妝料、醫藥品、準醫藥品等領域中。
含有本發明美白劑、抗老化劑之皮膚外用劑中的植物萃取物配合量，就來自松葉蕨屬植物之成分的乾燥殘留物而言，通常為0.00001質量%以上，較佳為0.0001質量%以上。配合量若過少，則效果無法充分地發揮。上限只要是在無損於本發明效果之範圍內即不特別限定，但因為即使配合過量也無法獲得相稱於增量之顯著效果，且有時亦會對製劑設計或使用性等造成不良影響等，因此通常為10質量%以下，較佳為5質量%以下。
含有本發明美白劑、抗老化劑之皮膚外用劑係將本發明中所得之美白劑、抗老化劑配合於皮膚外用基劑來製造。皮膚外用劑中，除了上述必須成分以外，亦可視需要在無損於本發明效果的範圍內，適當配合一般用於化妝品或醫藥品等皮膚外用劑之成分例如保濕劑、抗氧化劑、油性成分、紫外線吸收劑、界面活性劑、增黏劑、醇類、粉末成分、著色劑、水性成分、水、植物萃取物類、各種皮膚營養劑等。
其他亦可適當配合乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸三鈉、檸檬酸鈉、多磷酸鈉、偏磷酸鈉、葡萄糖酸等金屬螯合劑、咖啡因、單寧、维拉帕米(verapamil)、傳明酸(tranexamic acid)以及其之衍生物、甘草萃取物、光甘草定(glabridin)、火棘果實之熱水萃取物、各種生藥、乙酸生育醇酯、甘草酸以及其之衍生物或其之鹽等藥劑、維生素C、抗壞血酸磷酸鎂、抗壞血酸葡糖苷、熊果素、麴酸、烷氧水楊酸(alkoxysalicylic acid)以及/或其之鹽類等其他美白劑、葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖(trehalose)等糖類等。
含有本發明美白劑、抗老化劑之皮膚外用劑只要是用於例如軟膏、乳霜、乳液、化妝水(lotion)、面膜、浴用劑等以往之皮膚外用劑中即可，劑型並不特別限定。
本發明之美白劑、抗老化劑除了使用於上述外用劑以外，亦可配合於食品中，藉由攝取該食品而期待從內發揮美白效果、抗老化效果。
實施例
以下舉出實施例詳述本發明，本發明並不限定於該等。配合量只要未特別記載即表示質量%。
首先說明本實施例中所用之植物萃取物的調製方法、關於黑色素生成抑制效果、抗氧化效果之試驗方法與其結果。
1.試料之調製
本實施例中皆使用沖繩產的植物，但並不限定於此。
(1)於Psilotum nudum整株7.4g加入甲醇75mL，於室溫浸漬7天後進行過濾。餾去濾液的溶劑，獲得乾燥固形物1.360g。
(2)於Psilotum nudum整株1.04g加入50%乙醇水溶液10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。餾去濾液的溶劑，獲得乾燥固形物0.18g。
(3)於Psilotum nudum整株1.02g加入70%乙醇水溶液10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。餾去濾液的溶劑，獲得乾燥固形物0.21g。
(4)於Psilotum nudum整株1.03g加入90%乙醇水溶液10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。餾去濾液的溶劑，獲得乾燥固形物0.21g。
(5)於Psilotum nudum整株1.05g加入100%乙醇10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。餾去濾液的溶劑，獲得乾燥固形物0.15g。
(6)於Psilotum nudum整株1.00g加入丙酮10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。餾去濾液的溶劑，獲得乾燥固形物0.072g。
(7)於Psilotum nudum整株1.01g加入乙酸乙酯10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。餾去濾液的溶劑，獲得乾燥固形物0.067g。
(8)於Psilotum nudum整株1.00g加入1,3-丁二醇10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。測定本萃取物之蒸發殘留物(105℃、減壓下6小時)之結果，為6.3mg/g。
(9)於Psilotum nudum整株1.00g加入二丙二醇10ml，於室溫一邊攪拌一邊萃取三天後，進行過濾。測定本萃取物之蒸發殘留物(105℃、減壓下6小時)之結果，為5.3mg/g。
(10)將(1)中所得之萃取乾燥固體1.0g分散並溶解於水50ml以後，以乙酸乙酯50ml萃取3次。濃縮乙酸乙酯相，獲得272mg之乾燥物。將本品溶解於丙酮並進行活性碳處理後，進行過濾。濃縮濾液，獲得脫色物201mg(乙酸乙酯區分)。
2.黑色素生成抑制效果試驗方法以及其之結果
使用上述各種萃取方法所得之松葉蕨萃取物作為試驗試料，並以下述之方法測定、評價黑色素生成抑制效果。
(1)細胞播種、試驗物質之添加
將大鼠B16黑色素瘤(melanoma)細胞以100,000細胞/井接種於6井盤(well plate)。隔日添加試驗物質溶液(乾燥物的情況時溶劑為DMSO)。
(2)細胞增殖試驗
從試驗物質溶液添加開始3天後將培養液吸去以後，添加含有10%AlamarBlue溶液之EMEM培養液1ml，於37℃使之反應。30分鐘後將100μl移至96井盤，並以激發波長544nm、測定波長590nm來測定螢光。其之值係以細胞數目的相對值的方式算出相對於無添加試驗物質群(僅添加溶劑)之試驗物質添加群的細胞數目比率(%細胞數目)。細胞數目越高表示細胞毒性越低，未滿80%者判斷為「有毒性」。
(3)黑色素(melanine)量之測定
吸去培養液，使用緩衝液(磷酸緩衝液50mM、pH6.8)進行洗淨後，添加1M NaOH將細胞溶解，測定475nm的吸光度。此值係以黑色素量相對值的方式算出相對於無添加試驗物質群(僅添加溶劑)之試驗物質添加群之黑色素量比率(%)。黑色素量比率越低表示黑色素生成抑制效果越高。
將使用有各植物萃取物之黑色素量比率(%)之結果表示於表1。表1係以相對於對照組之百分率表示以對照組之黑色素量作為基準，添加有松葉蕨萃取物(萃取乾燥切換算濃度)時之黑色素量。僅添加不含植物萃取物之溶劑的情況定為對照組。
由表1可明瞭本發明中所用之植物萃取物皆具有優異之黑色素抑制作用，有用於作為美白劑。評價表1以外之各種溶劑萃取液的結果，確認到如圖1所示之高度美白效果。圖1係將各溶劑萃取液調整為最終濃度0.04%(volume/volume)之結果。任一情況皆未確認到細胞毒性。又，僅將對照組之各溶劑同樣地調整為0.04%(volume/volume)。
再者由表2可明瞭甲醇萃取物之乙酸乙酯區分物亦展現高度之美白效果。
如上所述可明瞭本發明中所用之植物萃取物皆具有優異之黑色素生成抑制作用，有用於作為美白劑使用。
3.抗氧化效果之評價及其結果
將上述各種萃取方法所得之松葉蕨萃取物使用作為試驗試料，並以以下方法測定、評價抗氧化效果。
(1)抗氧化效果之評價法(DPPH radical quenching assay)
將以二甲基硫氧化物(Dimethyl Sulfoxide)溶解之被試驗物質以10μl/well逐次注入96井盤之後，以90μl/well添加1mmol/l之1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl溶液。於室溫放置10分鐘後，測定於517nm之吸光度，並由吸光度數據求出自由基量相對於對照組之消去率(%)。將其評價結果示於表3。
由表3可明瞭本發明中所用之植物萃取物，所有的溶劑萃取物皆具有優異之自由基消去作用，而有用於作為抗氧化劑。評價表3以外之各種溶劑萃取液之結果，確認到以1,3-丁二醇、二丙二醇等多元醇類萃取之萃取物亦展現如圖2所示之高度抗氧化效果。圖2係將各溶劑萃取液調整為最終濃度1%(volume/volume)之結果。皆未確認到細胞毒性。
由以上之結果可知本發明之松葉蕨屬(Psilotum)植物之萃取物展現優異之抗氧化效果，因此對於人類的肌膚亦發揮優異之抗氧化活性。因此，於外用劑中配合該植物萃取物，可用作為防止肌膚的老化、維持年輕健康之肌膚狀態之抗老化劑。
以下以處方例的方式說明各種劑型之本發明的美白劑、抗老化劑的配合例。當然本發明並不受到此處方例任何限定，而是以申請專利範圍來界定。
各處方例中之松葉蕨萃取物含量係以除去萃取溶劑後之乾燥殘留物量來表示。
圖1係表示本發明之植物萃取物的黑色素生成抑制作用結果。
圖2係表示本發明之植物萃取物的自由基消去作用結果。

Claims (3)

  1. 一種美白劑，其特徵在於含有松葉蕨(Psilotum nudum)之萃取物，該萃取物係單獨或混合使用選自甲醇、乙醇、1,3-丁二醇、丙二醇及二丙二醇所構成之群中之一種或複數種醇類、含水之上述醇類、丙酮或乙酸乙酯所萃取出來的。
  2. 一種美白用皮膚外用劑，其特徵在於含有松葉蕨(Psilotum nudum)之萃取物，該萃取物係單獨或混合使用選自甲醇、乙醇、1,3-丁二醇、丙二醇及二丙二醇所構成之群中之一種或複數種醇類、含水之上述醇類、丙酮或乙酸乙酯所萃取出來的。
  3. 一種美白用皮膚外用劑之製造方法，係使用松葉蕨(Psilotum nudum)之萃取物來製造美白用皮膚外用劑，該萃取物係單獨或混合使用選自甲醇、乙醇、1,3-丁二醇、丙二醇及二丙二醇所構成之群中之一種或複數種醇類、含水之上述醇類、丙酮或乙酸乙酯所萃取出來的。
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