KR20080104671A - 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물로부터 풍부하고 유용한 활성 성분을 추출하여 이로 구성된 추출물을 함유하여 각종 스트레스로부터 피부를 보호하여 피부를 부드럽고 윤기있게 가꾸어주는 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

피부 보호, 화장료, 구기자, 사상자, 오미자, 토사자

Description

초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물 { The Cosmetic composition with the anti-aging effect using supercritical fluid extraction method }

도 1은 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 열수 추출하였을 때 DPPH 소거능에 의한 항산화 효과를 나타내는 그래프

도 2는 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 초임계 추출하였을 때 DPPH 소거능에 의한 항산화 효과를 나타내는 그래프

도 3은 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 열수 추출하였을 때 리놀산 자동 산화 억제 효과를 나타내는 그래프

도 4는 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 초임계 추출하였을 때 리놀산 자동 산화 억제 효과를 나타내는 그래프

도 5는 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 열수 추출하였을 때 활성산소종 (ROS) 소거능 활성을 나타내는 그래프

도 6은 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 초임계 추출하였을 때 활성산소종 (ROS) 소거능 활성을 나타내는 그래프

도 7은 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 열수 추출하였을 때 슈퍼록사이드 음이온 (superoxide anion)의 소거 활성을 나타내는 그래프

도 8은 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 초임계 추출하였을 때 슈퍼록사이드 음이온 (superoxide anion)의 소거 활성을 나타내는 그래프

도 9는 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 열수 추출하였을 때 하이드록실 라디칼 (hydroxyl radical)의 소거 활성을 나타내는 그래프

도 10은 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 천연 한방 식물 추출물을 초임계 추출하였을 때 하이드록실 라디칼 (hydroxyl radical)의 소거 활성을 나타내는 그래프

본 발명은 피부 노화를 억제하는 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것으 로, 더욱 상세하게는 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 한방 식물의 추출물을 함유함으로써 피부 보호 효과를 제공하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 체내의 제기관을 기온 및 습도 변화와 자외선 등 외부 환경의 자극으로부터 보호해 주는 기능을 가지고 있다. 그러나 외부로부터 받는 끊임없는 물리적, 화학적 자극은 피부 기능을 저하시키고 피부의 노화 현상을 촉진시키게 되는데 피부의 노화는 또한 피부 구성 성분의 전체적인 악화를 수반하여 결과적으로 피부가 쉽게 갈라지게 된다. 섬유 아세포의 감소 및 이 세포의 활성도 손상은 피부 노화 프로세스 중에 중요한 부분을 차지한다. 이러한 노화현상을 방지하고 보다 건강하고 아름다운 피부를 유지하기 위하여 종래 각종 식물, 동물, 미생물로부터 얻은 생리활성물질들이 강화된 화장품을 사용함으로써 피부의 고유 기능을 유지시키고 피부 세포를 활성화시켜 피부 노화를 효과적으로 억제하기 위한 노력이 있어 왔다. 그러나 기존의 화장품 원료들은 그 효능이 미흡하거나 피부 부작용을 유발하는 등 여러 가지 문제점을 가지고 있다.

최근에는 독성이 상대적으로 적고 자연친화적인 화장품을 개발하기 위한 노력으로서 라디칼 제거 기능을 갖는 식물에 대한 탐색 과정을 거쳐 수종의 식물들이 피부 노화 및 주름살 억제에 효과적이라는 사실이 밝혀지고 있다. 그 예로서 삼백초 추출물을 함유한 라디칼 제거제가 보고되었으며, 꿩의 비름속 식물의 추출물을 함유한 라디칼 제거제가 알려졌으며, 율피 추출물을 함유한 피부주름 개선 화장료가 알려졌고, 잠용유를 함유한 화장품 조성물 등이 보고되어 있으나, 구기자, 사상 자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로부터 추출한 분획물을 이용한 활성산소종 및 하이드록실 라디칼 등을 제거한 피부 노화 억제 효과에 대해서는 알려진 바가 없다.

따라서 본 발명의 목적은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 피부 노화를 억제하기 위하여 천연 한방 식물 추출물을 이용한 활성산소종을 제거하는 능력이 우수한 화장료 조성물을 개발하기 위하여 연구를 수행하여, 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로부터 추출한 분획물을 함유한 것을 특징으로 하는 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명은 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로부터 초임계 추출한 분획물을 함유하여 효능이 뛰어나며 활성산소종을 제거하는 능력이 우수한 효과를 제공하는 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물을 그 특징으로 한다.

이하 본 발명을 상세하게 설명하면 다음과 같다.

본 발명에 따르는 한방 식물 추출물에서 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 한방 식물 원료의 조성은 각각의 건조 중량을 기준으로 하여 구기자 10 ~ 20 중량%, 사상자 10 ~ 20 중량%, 오미자 10 ~ 20 중량%, 토사자 10 ~ 30 중량%, 복분자 5 ~ 10 중량%, 자황 10 ~ 20 중량%, 음양곽 5 ~ 10 중량%의 비로 배합하여 사용된다.

이때 본 발명의 한방 식물 추출물의 원료로서 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽은 기존의 열수 추출 효율을 개선한 초임계 추출 방법을 사용한다.

여기서 초임계 추출 방법이란 어떠한 물질이 특정 압력과 온도가 되면 기체와 액체의 양쪽 성질을 모두 갖는 특이한 상태에 도달하게 된다. 이 경계점을 임계점(critical point)라고 하며, 이를 넘어선 상태를 초임계(supercritical) 상태라 한다. 이러한 상태에서 용매를 이용하여 추출하는 것을 초임계 추출 방법이라고 한다.

초임계 추출 방법에 사용하는 용매로서는 여러 가지를 사용할 수 있으나 주로 이산화탄소를 이용한다. 그 이유는 이산화탄소는 임계점에 도달하는 온도와 압력이 다른 용매에 비하여 용이하기 때문이다.

본 발명에 따르는 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물에 대하여 각각 열수 추출 방법과 초임계 추출 방법을 사용하여 각 한방 식물의 특성을 비교하였으며, 여러 항노화 실험을 통하여 이들을 단일 성분으로 추출하여 혼합물로 제조시 보다 우수한 항노화 실험 결과를 얻게 되었다.

또한 초임계 추출 방법을 사용하여 기존의 열수 추출 공정 중에 발생할 수 있는 한방 식물 추출물의 유용 성분의 조성 변화에 영향을 최소화하도록 노력하였다. 이러한 초임계 추출 방법은 각종 유용성분의 불안정한 구조를 안정화시키며 잔 류 유기용매 및 잔류 중금속이 부재하며 용매로 사용한 이산화탄소는 인체에 무해하고 추출 마지막 단계에서 제거되므로 다양한 범위의 화장료 조성물에 적용 가능한 장점을 가진다.

본 발명에 따른 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물에 사용할 경우 상기 제조된 한방 식물 추출물을 0.1 ~ 5 중량%로 바람직하게는 2 중량%가 되게 함유하는 것을 특징으로 한다.

이 때 0.1 중량% 이하는 첨가시에 본 발명의 피부 노화를 억제하는 효과가 미흡하게 나타나며, 5 중량% 이상 사용하는 경우 최종 제품에서 고유 풍미에 따른 고유취와 색상이 강하게 나타나 제품 적용에 어려움이 있어 5 중량%, 보다 바람직하게는 2 중량%로 제한하였다.

본 발명에 따른 피부 노화를 억제하는 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상의 제형을 가질 수 있으며, 예를 들어 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 바디로션, 바디오일, 바디에센스 등으로 제형화될 수 있다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 이하에 피부 노화를 억제하는 효과가 우수한 화장료 조성물의 대표적인 스킨과 로션 조성물을 예를 들어 설명한다.

또한 본 발명에 따른 피부 노화를 억제하는 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용 횟수를 달리할 수 있다.

이하 본 발명의 실시예를 통하여 본 발명의 피부 노화를 억제하는 효과가 우수한 화장료 조성물을 보다 상세히 설명하지만 본 발명이 이들 실시예에만 국한되는 것은 아니다.

실시예 1 : 한방 식물 추출물의 제조

초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물에 사용하기 위한 한방 식물 추출물은 건조된 한방 식물 원료를 건조된 상태를 사용하였다.

본 발명의 한방 식물 추출물의 제조에 사용되는 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽의 비교예로서 열수 추출 방법은 원물을 1차로 물로 세척한 다음, 잘게 분쇄하고 분쇄물 1 내지 10 중량%를 정제수에 1 내지 5일간 바람직하게는 3일간 침지시키는 단계와 1시간 내지 5시간 동안 이루어지는 100℃ 이상의 고온으로 열수 추출 방법을 사용하는 단계로 구성되어진다.

본 발명의 한방 식물 추출물의 제조에 사용되는 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽의 실시예로서 초임계 추출 방법은 원물을 1차로 물로 세척하여 건조한 다음, 잘게 분쇄하고 분쇄물을 이산화탄소를 용매로 하여 초임계 추출한다.

상기의 배합비로 혼합한 한방 식물 추출물에 1 내지 5배의 에탄올 또는 부틸렌글리콜을 포함하는 유기용매 또는 정제수를 가하여 화장료 제조시 첨가한다.

하기 표 1에 나타난 바와 같이 혼합한 한방 식물 원료를 초임계 추출 및 열수 추출하여 최종적으로 여과하고, 감압 농축하여 2g의 한방 식물 추출물을 획득하였다.

순번	종류	추출전 무게(g)	추출후 무게(g)
1	구기자	1.5
2	사상자	1.5
3	오미자	1.5
4	토사자	1.5
5	복분자	2.0
6	지황	1.0
7	음양곽	1.0
합계		10.0	0.2

실시예 2 : 본 발명에 따른 피부 보호 효과가 있는 스킨 로션의 제조

하기 표 2에 나타난 바와 같은 조성비율로 스킨 로션을 제조하였다. 알콜 부분은 곡정에서 생산하여 78℃ 증류한 알콜에 M-P, tween 20, NP-12의 순서대로 용해시켜 제조하였고, 정제수 부분은 멸균 처리된 정제수에 글리세린, 1,3-BG, DC-193, 히아루론산, 알란토인, 구연산, 구여산소다의 순서대로 용해시켜 제조한 다음 상기 실시예 1에서 제조한 한방 식물 추출물과 혼합하여 스킨 로션을 제조하였다.

분류	원료명	무게(중량%)
알콜 부분	에탄올	7
	메틸파라히드록시벤조익산	0.1
	tween-20	0.2
	노닐페닐에테르-12	0.2
정제수 부분	정제수	89.01
	글리세린	0.1
	1,3-부틸렌글리콜	0.2
	알라닌 193	0.1
	히아루론산	0.5
	알란토인	0.05
	구연산	0.01
	구연산소다	0.03
한방식물추출물	한방 식물 추출물	2.5
합계		100

실시예 3 : 본 발명에 따른 피부 보호 효과가 있는 밀크 로션의 제조

실시예 2와 동일한 방법으로 밀크 로션을 제조하였다.

원료명	무게(중량%)
스테아린산	2.1
세탄올	1.3
유동파라핀	7.0
스쿠알렌	0.5
이소프로필 미리스테이트	1.0
글리세릴 모노스테아레이트	0.5
아라셀-60	0.85
tween-20	0.1
이소스테아릴-이소스테아레이트	0.5
프로필파라벤	0.1
알라닌 200F/100CS	0.1
정제수	70.15
트리에탄올아민	0.7
프로필렌글리콜	7.0
글리세린	3.0
메틸파라히드록시벤조익산	0.1
한방식물 추출물	5.0
합계	100

실험예 1 : 본 발명에 따른 스킨 로션의 피부 자극성 및 보호 효과 확인

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 2에서 제조한 스킨 로션을 일정량(10m/5㎠)씩 도포하고, 그외의 부위를 알루미늄 호일로 차폐하여 30분 후에, 자외선 조사기를 이용하여 장파장 자외선을 10.2J/㎠ 의 용량으로 조사하고 24시간 후에 피부 상태(홍반, 부종, 구진 등)를 관찰하였다. 관찰 결과 피부에 홍반 등의 부작용이 발생되지 않아 상기 스킨 로션은 광독성이 없으며 피부 보호 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 2 : 본 발명에 따른 밀크 로션의 피부 자극성 및 보호 효과 확인

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 3에서 제조한 밀크 로션을 일정량(10m/5㎠)씩 도포하고, 그외의 부위를 알루미늄 호일로 차폐하여 30분 후에, 자외선 조사기를 이용하여 장파장 자외선을 10.2J/㎠ 의 용량으로 조사하고 24시간 후에 피부 상태(홍반, 부종, 구진 등)를 관찰하였다. 관찰 결과 피부에 홍반 등의 부작용이 발생되지 않아 상기 밀크 로션은 광독성이 없으며 피부 보호 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 3 : 본 발명에 따른 스킨 로션 및 밀크 로션의 피부 안정성 확인 시험

건강한 성인 남녀 20명(남자 10명, 여자 10명)의 전박부에 상기 실시예 2와 3에서 제조한 스킨 로션 및 밀크 로션을 인체 첩포 시험을 실시하였다. 시험대상자의 전박부를 70% 에탄올로 잘 닦은 다음 그 부위에, 통상의 화장료 기제에 상기 실시예 2와 3에서 제조한 스킨 로션 및 밀크 로션을 20㎕씩 담은 핀 챔버를 점착 테이프를 이용하여 24시간 폐쇄 부착시켰다. 24시간 후에 점착 테이프와 핀 챔버를 제거하고, 가제로 피부에 잔존된 시료를 가볍게 닦아 제거한 뒤에 피부 상태를 관찰하고 다시 24시간 후에 한번 더 관찰하였다. 실험 결과 표 4에 나타난 바와 같이 본 발명에 따른 스킨 로션 및 밀크 로션의 피부 자극성을 확인하기 위한 인체 첩포 시험에서 양성 반응을 보이지 않아 인체 피부에 자극성이 전혀 없는 것으로 확인되었다.

시료	24시간 후(n=30)	48시간 후(n=30)	비고
스킨로션	0/30	0/30	반응양성자수/총대상자수
밀크로션	0/30	0/30

실험예 4 : DPPH 소거능에 의한 항산화 효과

활성 산소에 의한 피부 노화 과정은 지질 과산화, DNA 산화, 멜라닌 생성, 결합조직의 절단 및 비정상적인 교차 결합들을 포함한다. 이들 반응들은 거의 대부분 라디칼 반응으로서 자동산화반응 과정이 포함된다. 생체 내에서 자동산화반응을 차단시키는 역할은 항산화제가 담당하고 있다. 전자를 주는 능력으로서 환원력이 클수록 강한 항산화제가 된다. 항산화제의 환원력을 측정하는 시약으로 1,1-diphenyl-2 picrylhydrazyl radical(DPPH)가 있다. DPPH는 화합물 내 질소 중심의 안정화된 구조의 라디칼로 존재한다. 517nm에서 최대 흡수를 나타내며 환원되면 517nm에서 흡수가 없어진다. 본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물 추출물 각각에 대한 환원력의 크기를 도 1에서는 열수 추출 방법에 의한 효과를 도 2에서는 초임계 추출 방법에 의한 효과를 나타내었다. 그 결과 열수 추출 방법에서는 구기자가 항산화 효과가 가장 우수하였으며, 초임계 추출 방법에서는 음양곽, 복분자, 구기자, 토사자가 가장 우수한 항산화 효과를 나타내었다.

즉 열수 추출물과 초임계 추출물을 비교하였을 때 음양곽은 48.83%, 복분자는 53.81%, 오미자는 28.92%, 지황은 13.13%, 사상자는 17.83%, 토사자는 51.65% 수준으로 각각 초임계 추출물이 열수 추출물보다 DPPH 소거능력에 따른 높은 항산화 효과를 나타내었다.

실험예 5 : 리놀산 자동 산화 억제 효과 측정

리놀산은 산화되기 쉽고 체내에서 과산화지질을 생성하게 하여 암이나 피부 질환을 유발하는 물질로 널리 알려져 있으며 리놀산이 산화되는 것을 억제하면 암이나 피부 질환의 발생을 예방하게 된다. 리놀산 자동산화의 억제는 곧 항산화 활성을 알아보는 실험으로 이것은 노화 방지 효과를 보여준다.

자동 산화가 잘되는 물질인 리놀산을 이용하여 자동 산화를 억제하는 정도를 상호 비교하였다. 8ml 캡튜브에 10mM 리놀산 용액 3ml와 4mg/ml 로 조정한 시료 0.075ml을 첨가한 후 4℃에서 24시간 방치한다. 상기의 혼합액 0.1ml을 75% 에탄올 4.7ml에 첨가하여 교반한 후 30% 티오시안산암모늄 용액 0.1ml와 20mM 염화제1철 0.1ml를 첨가하여 3분간 방치한 후 발색시켜 500㎚에서 흡수 파장을 측정하여 항산화 효과를 측정하였다.

본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물 추출물 각각에 대한 항산화력의 크기를 도 3에서는 열수 추출 방법에 의한 효과를 도 4에서는 초임계 추출 방법에 의한 효과를 나타내었다. 그 결과 열수 추출 방법에서는 사상자와 토사자가 리놀산의 자동 산화를 많이 억제하였으며, 초임계 추출 방법에서는 복분자, 토사자가 가장 활성이 뛰어났지만, 다른 물질들도 대체로 활성이 뛰어나서 리놀산의 자동 산화를 억제하였다.

즉 열수 추출물과 초임계 추출물을 비교하였을 때 음양곽은 41.19%, 복분자는 82.93%, 오미자는 46.08%, 지황은 51.81%, 사상자는 21.45%, 토사자는 47.11% 수준으로 각각 초임계 추출물이 열수 추출물보다 리놀산의 자동 산화를 억제하는 능력에 따른 높은 항산화 효과를 나타내었다.

실험예 6 : 활성산소종 (ROS) 소거능 활성 측정

활성산소종 (ROS)는 반응성이 뛰어난 산소종을 말하며, 인간을 비롯하여 동식물의 체내에 세균과 바이러스 같은 이물질이 침입하였을 때 이것들을 제거하는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 하지만 이것이 과량 존재하면 인체를 공격하여 세포나 조직을 상해하는 등의 악영향을 끼치므로 이것을 소거하여야 할 목적으로 활성산소종 제거 실험을 하는 것이다.

해부하기 3시간 전에 LPS (lipopolysaccharide)를 5mg/kg 투여하여 급성 독성을 유발하여 해부한다. 해부하여 간을 적출하여 간 속에 함유되어 있는 미토콘드리아를 분리하여 샘플로 사용한다. DCFDA (1mM) 50㎕와 에스터라제 (600unit/ml) 50㎕를 혼합한 뒤 37℃에서 20분간 반응시켜 DCFH 용액을 만든다. 각 well 에 시료 10㎕를 넣고 균질액 190㎕를 넣어준다. 인산완충용액으로 100배 희석한 DCFH 용액 50㎕를 넣고 5분간 섞어준다. 다중검출기로 485/530nm에서 형광검출기로 5분 간격 30분 측정하였다.

본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물 추출물 각각에 대해서 활성산소종을 소거하는 세기를 도 5에서는 열수 추출 방법에 의한 효과를 도 6에서는 초임계 추출 방법에 의한 효과를 나타내었다. 그 결과 열수 추출 방법에서는 오미자와 구기자에서 높은 활성산소종 소거 능력을 나타냈으며, 음양곽, 사상자, 복분자, 지황도 50% 이상의 활성산소종 소거 능력을 보여 모두 우수한 항산화 효과를 나타내었다. 초임계 추출 방법에서는 오미자와 음양곽에서 90% 이상의 활성도를 보여 아주 높은 항산화 활성을 나타냈으며, 복분자, 구기자, 지황, 사상자, 토사자도 80% 이상의 활성을 보여 초임계 추출 방법에 의한 본 발명의 한방 식물 추출물이 전체적으로 활성산소종에 대한 소거 효과가 우수한 것을 알 수 있었다.

즉 열수 추출물과 초임계 추출물을 비교하였을 때 음양곽은 42.84%, 복분자는 65.23%, 오미자는 21.73%, 지황은 61.60%, 사상자는 32.49%, 토사자는 61.61% 수준으로 각각 초임계 추출물이 열수 추출물보다 활성산소종 소거 활성 능력에 따른 높은 항산화 효과를 나타내었다.

실험예 7 : 슈퍼록사이드 음이온 (superoxide anion)의 소거 활성 측정

활성산소 가운데 슈퍼록사이드 음이온은 자외선 흡수로 시작되는 광증감반응에 의해 생성되고, 생체내에 존재하는 SOD(Superoxide dismutase) 효소에 의해 과산화수소로 전환된다. 슈퍼록사이드와 과산화수소는 반응성이 약하여 직접적으로 조직세포 손상에 참여하는 경우는 드물지만 보다 위험한 하이드록시라디칼 생성에 참여한다. 즉 슈퍼록사이드는 철과 구리 이온을 환원시킬 수 있고, 환원된 철과 구리 이온은 과산화수소를 환원시키면서 결과적으로 하이드록실 라디칼을 생성시킨다. 또한 생체내에서 슈퍼록사이드는 페리틴으로부터 철 이온(II)을 방출시킬 수 있다. 이러한 현상은 자외선 조사 후에 나타나며 자외선으로 인해 생성된 슈퍼록사이드의 작용으로 간주되고 있다.

해부하기 3시간 전에 LPS (lipopolysaccharide)를 5mg/kg 투여하여 급성 독성을 유발하여 해부한다. 해부하여 간을 적출하여 간 속에 함유되어 있는 미토콘드리아를 분리하여 샘플로 사용한다. DCFDA (1mM) 50㎕와 에스터라제 (600unit/ml) 50㎕를 혼합한 뒤 37℃에서 20분간 반응시켜 DCFH 용액을 만든다. 각 well 에 시료 10㎕를 넣고 50mM 인산 완충용액 130㎕를 넣어준다. 인산 완충용액으로 100배 희석한 20mM 메나디온 10㎕와 100배 희석한 DCFH 용액 50㎕를 넣고 5분간 섞어준다. 다중검출기로 485/530nm에서 형광검출기로 5분 간격으로 30분 측정하였다.

본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물 추출물 각각에 대해서 슈퍼록사이드 활성산소종을 소거하는 세기를 도 7에서는 열수 추출 방법에 의한 효과를 도 8에서는 초임계 추출 방법에 의한 효과를 나타내었다. 그 결과 열수 추출 방법에서는 복분자와 음양곽이 뛰어난 슈퍼록사이드 활성산소종 소거 능력을 나타냈으며, 초임계 추출 방법에서는 복분자와 구기자에서 높은 활성이 나타내었다.

즉 열수 추출물과 초임계 추출물을 비교하였을 때 음양곽은 11.59%, 복분자는 28.69%, 구기자는 37.31%, 오미자는 24.54%, 지황은 39.71%, 사상자는 3.16%, 토사자는 6.25% 수준으로 각각 초임계 추출물이 열수 추출물보다 슈퍼록사이드 활성산소종 소거 활성 능력에 따른 높은 항산화 효과를 나타내었다.

실험예 8 : 하이드록실 라디칼 (hydroxyl radical)의 소거 활성 측정

하이드록실 라디칼은 세포에 손상을 주는 가장 강력한 free radical로서 피부 세포막의 지질의 과산화반응을 일으키고 특히 DNA 및 결합조직 기질 손상에 참여하는 주원인 활성 산소종으로 알려져 있다. 특히 자외선 흡수로 시작되는 광증감 반응에 의해 슈퍼록사이드와 과산화수소가 생성되고 이들은 생체내에서 보다 위험한 하이드록실 라디칼 생성에 참여한다. 즉 슈퍼록사이드는 철 이온과 구리 이온을 환원시킬 수 있고 환원된 철과 구리는 과산화수소를 환원시키면서 결과적으로 하이드록실 라디칼을 생성시킨다.

본 발명의 한방 식물 추출물은 in vitro에서 Fenton 반응에 의해 생성시킨 하이드록실 라디칼을 소거하는 능력을 측정하여 도 9와 도 10에 나타내었다.

본 발명의 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물 추출물 각각에 대해서 하이드록실 라디칼 활성산소종을 소거하는 세기를 도 9에서는 열수 추출 방법에 의한 효과를 도 10에서는 초임계 추출 방법에 의한 효과를 나타내었다. 그 결과 열수 추출 방법에서는 복분자가 가장 뛰어난 하이드록실 라디칼 활성산소종 소거 능력을 나타냈으며, 음양곽, 구기자, 오미자, 지황, 사상자, 토사자는 50% 안팎의 활성을 보였으며, 초임계 추출 방법에서는 복분자가 다른 한방 식물 추출물에 비하여 뛰어난 하이드록실 라디칼 소거 능력을 나타냈으며, 음양곽, 오미자, 구기자, 지황, 사상자, 토사자는 60% 미만의 활성을 나타냈지만 열수 추출물 보다는 높은 수치를 나타내었다.

즉 열수 추출물과 초임계 추출물을 비교하였을 때 음양곽은 10.09%, 복분자는 53.25%, 구기자는 2.73%, 오미자는 25.92%, 지황은 1.14%, 사상자는 20.04%, 토사자는 30.49% 수준으로 각각 초임계 추출물이 열수 추출물보다 하이드록실 라디칼 활성산소종 소거 활성 능력에 따른 높은 항산화 효과를 나타내었다.

이상 상기 실시예와 실험예를 통하여 본 발명의 한방 식물 추출물을 포함한 화장료는 천연 한방 식물인 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 주요 한방 식물 성분의 추출물을 함유하여 각종 스트레스로부터 피부를 보호하여 피부를 부드럽고 윤기있게 가꾸어주는 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

Claims (3)

1. 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물 추출물을 초임계 추출 방법으로 분획한 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부노화를 억제하는 효과가 우수한 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물
2. 제 1항에 있어서,

   상기 한방 식물 추출물의 조성은 각각의 건조중량을 기준으로 하여 구기자 10 ~ 20 중량%, 사상자 10 ~ 20 중량%, 오미자 10 ~ 20 중량%, 토사자 10 ~ 30 중량%, 복분자 5 ~ 10 중량%, 자황 10 ~ 20 중량%, 음양곽 5 ~ 10 중량%의 비로 혼합된 것을 특징으로 하는 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물
3. 제 1항에 있어서, 구기자, 사상자, 오미자, 토사자, 복분자, 지황, 음양곽으로 구성된 한방 식물의 초임계 추출물이 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 영양크림, 바디로션, 바디오일, 바디에센스 중에서 선택된 제형에 첨가된 것임을 특징으로 하는 초임계 한방 추출물을 이용한 항노화 화장료 조성물

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