RO128628A2 - Anticorpi umani care leagă tnf alpha uman - Google Patents

Anticorpi umani care leagă tnf alpha uman Download PDF

Info

Publication number
RO128628A2
RO128628A2 ROA200900821A RO20090821A RO128628A2 RO 128628 A2 RO128628 A2 RO 128628A2 RO A200900821 A ROA200900821 A RO A200900821A RO 20090821 A RO20090821 A RO 20090821A RO 128628 A2 RO128628 A2 RO 128628A2
Authority
RO
Romania
Prior art keywords
seq
antibody
amino acid
human
acid sequence
Prior art date
Application number
ROA200900821A
Other languages
English (en)
Inventor
Paul Sakorafas
Hendricus R.J.M. Hoogenboom
David Schoenhaut
Tristan J. Vaughan
Michael White
Alison J. Wilton
Original Assignee
Abbott Biotechnology Ltd.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=24398777&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RO128628(A2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Abbott Biotechnology Ltd. filed Critical Abbott Biotechnology Ltd.
Priority claimed from ROA200500050A external-priority patent/RO123028B1/ro
Publication of RO128628A2 publication Critical patent/RO128628A2/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A61P29/02—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID] without antiinflammatory effect
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/80—Antibody or fragment thereof whose amino acid sequence is disclosed in whole or in part
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/81—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, immunotolerance, or anergy
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/868—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof involving autoimmunity, allergy, immediate hypersensitivity, delayed hypersensitivity, immunosuppression, or immunotolerance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)

Abstract

Prezenta invenţie se referă la utilizarea unui anticorp uman izolat, sau a unei porţiuni de legare la antigen a acestuia, care disociază din TNF α uman, la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări în care activitatea TNF α este nocivă, în care anticorpul se administrează în combinaţie cu cel puţin un agent suplimentar unui subiect, astfel încât se inhibă activitatea TNF α uman.

Description

Cytokine 2:162-169; brevet SUA 5.231.024 pentru Moeller et al., publicația brevetului european 186.833 Bl de Wallach, D. ; publicația cererii de brevet european 218.868 Al de Old et al·.; publicația brevetului european 260.610 Bl de Moeller, A., et al.). în timp ce acești anticorpi de șoarece anti-hTNFa prezintă adesea afinitate crecută pentru hTNFa (de exemplu, Kd<10-9 M) și au fost capabili să neutralizeze activitatea hTNFa, utilizarea lor in vivo poate fi limitată de probleme asociate cu administrarea anticorpilor de șoarece la oameni, cum ar fi timpul de injumătățire scurt in ser, o incapacitate de a declanșa anumite funcții efectoare umane și provocarea unui răspuns imun nedorit împotriva anticorpului de șoarece la un om (reacția anticorp uman anti-șoarece (HAMA)).
într-o încercare de a depăși problemele asociate cu folosirea anticorpilor în întregime murini la oameni, anticorpii murini anti-hTNFa au fost prelucrați prin inginerie genetică pentru a deveni mai mult like-umani. De exemplu, s-au preparat anticorpi himerici în care regiunile variabile ale catenelor anticorpului sunt derivate murin și regiunile constante ale catenelor anticorpului sunt derivate uman (Knight, D.M., et al (1993) Mol. Immunol. 20:1443-1453 publicație PCT WO 92/16553 de Daddona, P.E., et al.). Suplimentar, au fost preparați, de asemenea, anticorpi umanizați, în care domeniile hipervariabile ale regiunilor variabile ale anticopului sunt derivate murin, dar restul regiunilor variabile și regiunile constante ale anticorpului sunt derivate uman (publicație PCT WO 92/11383 de Adair, J.R. et al.). Cu toate acestea, deoarece acești anticorpi himerici umanizați păstrează încă unele secvențe murine, ei încă mai provoacă o reacție imună nedorită, reacția umană anticorp anti-himeric (HACA), în special când se administrează perioade prelungite, de exemplu, pentru indicații cronice cum ar fi artrită reumatoidă (vezi, de exemplu, Elliot, M.J., et al. (1994) Lancet 311:1125-1121; Elliot, M.J., et al., (1994) Lancet 341:1105-1110).
Un agent inhibitor preferat hTNFa pentru mAb murin A \[ CABINET , ENFOrA > 'X s.fU c v L u u y - u u H 2 1 - //h derivați ai acestora (de exemplu, anticorpi himerici sau umanizați) va fi un anticorp uman în întregime anti-hTNFa, deoarece un astfel de agent nu ar provoca reacția HAMA, chiar dacă se folosește perioade prelungite. Autoanticorpi monoclonali umani împotriva hTNFa s-au preparat folosind tehnici hibridom uman (Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:556-568; Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:569-581; publicația cererii de brevet european 614.984 A2 de Boyle, et al.) . Totuși, acești autoanticorpi monoclonali derivați de la hibridom s-au raportat ca având o afinitate pentru hTNFa care a fost prea scăzută pentru a se calcula prin metode convenționale, au fost incapabili să lege hTNFa solubil și au fost incapabili să neutralizeze citotoxicitatea indusă hTNFa (vezi Boyle, et al, supra). Mai mult, succesul tehnicii hibridomului uman depinde de prezența naturală în sângele periferic uman a limfocitelor care produc autoanticorpi specifici pentru hTNFa. Anumite studii au detectat autoanticorpi în ser pentru hTNFa la subiecți umani (Fomsgaard, A., et al (1989) Scand.J.Immunol. 30:219-223; Bendtzen, K., et al.(1990) Prog.Leukocyte Biol. 10B:447-452), în timp ce altele nu Leusch,H-G., et al. (1991) J. Immunol .Methods 139:145-147).
Alternativa la anticorpii umani anti-hTNFa întâlniți în mod natural vor fi anticorpi recombianți hTNFa. Au fost descriși anticorpi umani recombinanți care leagă hTNFa cu afinitate relativ scăzută (adică, Kd~10’7M) și o rată rapidă a detașării (adică, Koff~10“2sec-1) (Griffiths, A.D., et al. (1993) EMBO J. 12:725-734) . Cu toate acestea, datorită cineticilor lor de disociere relativ rapidă, acești anticorpi nu pot fi adecvați pentru utilizare terapeutică. Suplimentar, s-a descris un antihTNFa uman recombinant care nu neutralizează activitatea hTNFa, ci mai degrabă intensifică legarea hTNFa la suprafața celulelor și intensifică internalizarea hTNFa (Lidbury, A., et al. (1994) Biotechnol. Ther. 5: 27-45; publicația PCT WO 92/03145 de Aston, R. et al.).
în conformitate, anticorpi umani cum ar fi anticorpi umani recombinanți, care leagă hTNFa cu afinitate crescută și cin&^'w&Î17’^?/ /7
... Λ f CABINET ( V ENFORA \ Vi =«··· <-2009-00821-1 0 -02- W de disociere lentă și care au capacitatea de a neutraliza activitatea hTNFa, inclusiv citotoxicitatea indusă de hTNFa (in vitro și in vivo) și activarea celulei indusă de hTNFa, sunt încă necesari.
Această invenție asigură anticorpi umani, de preferință, anticorpi umani recombinanți, care se leagă specific la TNFa uman. Anticorpii invenției sunt caracterizați prin legare la hTNFa cu afinitate ridicată și cinetici de disocire lentă și prin neutralizarea activității hTNFa, inclusiv citotoxicitatea indusă de hTNFa (in vitro și in vivo) și activarea celulară indusă de hTNFa. Anticorpii invenției sunt caracterizați suplimentar prin legare la hTNFa, dar nu și la hTNFp (limfotoxină) și prin a avea capacitatea de a se lega la alți TNFa de la primate și TNFa de la animale care nu sunt primate, in plus față de TNFa uman.
Anticorpii invenției pot fi de lungime întreagă (de exemplu, un anticorp IgGl sau IgG4) sau pot să cuprindă numai o porțiune de legare antigen (de exemplu, un fragment Fab, F(ab')2 sau scFv) . Anticorpul recombinant cel mai preferat al invenției, denumit D2E7, are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3 și un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4. De preferință, anticorpul D2E7 are o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2.
într-o realizare, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, care disociază de la TNFa uman cu o Kd de lxlO-eM, sau mai mică și o rată constantă Koff de lxlO'3s-1, sau mai mică, ambele determinate de suprafața de rezonanță a plasmonului și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman intr-un test standard L929 in vitro cu un IC50 de 1x10’7M sau mai mic. Mai preferat, anticorpul uman izolat, sau porțiunea de legare antigen a acestuia disociază de la TNFa uman cu o Koff de 5xlCr'’s~' sau mai mică, sau chiar mai preferat, cu Koff de 1 x 1 sau mai mică. Mai preferat, anticorpul uman izolat,^ sau porjminea , Z [ CABINET * enfora
v.
0^2009-00821-1 0-02-*^^ de legare antigen a acestuia, neutralizează citotoxicitatea TNFa uman intr-un test standard L929 in vitro cu un IC50 de IxlO’8 M sau mai mic, chiar mai preferat, cu un IC50 de IxlO*9 M sau mai mic și, încă mai preferat, cu un IC50 de 5xlO~10 M sau mai mic.
în altă realizare, invenția asigură un anticorp uman sau o porțiune de legare antigen a acestuia, cu următoarele caracteristici:
a) disociază de la TNFa uman cu Koff de lxl0*3s_1 sau mai mică, cum s-a determinat prin rezonanța suprafeței plasmonului;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența aminoacidă SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1, 4, 5, 7, sau 8, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8, și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, sau 11, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, și/sau 12.
Mai preferat, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, disociază de la TNFa uman cu Koff de 5xl0“4s'1 sau mai mică. încă mai preferat, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, disociază de la TNFa uman cu Koff de IxlO*^*1 sau mai mică.
în încă altă realizare, invenția asigură un anticorp uman, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, cu un LCVR având domeniul CDR3 care cuprinde secvența aminoacidă SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1, 4, 5, 7, sau 8, și cu un HCVR având un domeniu CDR3 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, sau 11. Mai preferat, LCVR are în plus un domeniu CDR2 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:5 și
HCVR are în plus un domeniu CDR2 cuprinzând secvența aminoacicLg SEQ ID NR:6. încă mai preferat, LCVR are în plus un domeniu
<λ-2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -ι ο -02- w cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:7 și HCVR are în plus un domeniu CDR1 cuprinzând secvența aminoacidă SEQ ID NR:8.
în încă altă realizare, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, cu un LCVR cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 și un HCVR cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2. în anumite realizări, anticorpul are o regiune constantă a catenei grele IgGl sau o regiune constantă a catenei grele IgG4. în încă alte realizări, anticorpul este un fragment Fab, un fragment F(ab')2 sau un fragment Ev cu o singură catenă.
în încă alte realizări, invenția asigură anticorpi, sau porțiuni de legare antigen ale acestora, cu un LCVR având domeniul CDR3 cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul care constă din SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12,
SEQ ID NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, SEQ ID NR:16, SEQ ID
NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ ID NR:20, SEQ ID NR:21,
SEQ ID NR:22, SEQ ID NR:23, SEQ ID NR:24, SEQ ID NR:25, SEQ ID
NR:26 sau cu un HCVR având un domeniu CDR3 cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul care constă din SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:27, SEQ ID NR:28, SEQ ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:32, SEQ ID NR:33, SEQ ID NR:34 și SEQ ID NR:35.
în încă altă realizare, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau porțiune de legare antigen a acestuia, care neutralizează activitatea TNFa uman, dar nu și a ΤΝΕβ uman (limfotoxină). într-o realizare preferată, anticorpul uman, sau o porțiune de legare antigen a acestuia neutralizează activitatea TNFa uman, TNFa de la cimpanzeu, și cel puțin un TNFa de la o primată suplimentară selectată din grupul care constă din TNFa de la babuin, TNFa de la sanguin, TNFa de la cynomolgus și TNFa de la rhesus. De asemenea, de preferință, anticorpul neutralizează activitatea TNFa de la cel puțin un animal care nu este primat. De exemplu, într-o subrealizare, anticorpul uman izolat sau porțiunea de legare a acestuia, neutralizează de asemenea, activitatea TNFa canin. într-o altă subrealizare, anticorpul uman izolat sau porțiunea de legare a aceștia,17’5®/' [[ CAB«*fî II·
V \) ^- 2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -1 0-02-ifiB neutralizează de asemenea, activitatea TNFa de la porc. în încă altă subrealizare, anticorpul uman izolat sau porțiunea de legare a acestuia, neutralizează de asemenea, activitatea TNFa de la șoarece.
Alt aspect al invenției aparține moleculelor de acid nucleic care codifică anticorpii, sau porțiunile de legare antigen ale invenției. Un acid nucleic preferat al invenției, care codifică un D2E7 LCVR, are secvența nucleotidică prezentată in Figura 7 și SEQ ID NR:36. Alt acid nucleic preferat al invenției, care codifică un D2E7 HCVR, are secvența nucleotidică prezentată în Figura 8 și SEQ ID NR:37. Vectori de expresie recombinanți care conțin acizii nucleici care codifică anticorpul invenției și celule gazdă în care s-au introdus asemenea vectori sunt de asemenea cuprinși în invenție, deoarece sunt metode de obținere a anticorpilor invenției prin cultivarea celulelor gazdă ale invenției.
încă alt aspect al invenției, aparține la metode pentru inhibarea activității TNFa uman folosind un anticorp, sau o porțiune de legare antigen a acestuia al invenției. într-o realizare, metoda cuprinde punerea în contact a TNFa uman cu anticorpul invenției, sau porțiunea de legare anticorp a acestuia, astfel încât activitatea TNFa uman este inhibată. în altă realizare, metoda cuprinde administrarea unui anticorp al invenției sau porțiunii de legare antigen a acestuia, la un subiect uman care suferă de o tulburare în care activitatea TNFa este dăunătoare, astfel încât activitatea TNFa uman din subiectul uman este inhibată. Tulburarea poate fi, de exemplu, sepsie, o boală autoimună (de exemplu, artrită reumatoidă, alergie, scleroză multiplă, diabet autoimun, uveită autoimună și sindrom nefrotic), o boală infecțioasă, o malignitate, respingerea transplantului sau boala gazdei față de grefă, o tulburare pulmonară, o tulburare osoasă, o tulburare intestinală, sau o tulburare cardiacă.
în continuare se prezintă pe scurt figurii^ care însoțesc— invenția.
( {( CABINET \ J V s.R ·
CV2 Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - ΐ ο -02να
Figurile ΙΑ și 1Β arată secvențele aminoacide ale regiunii variabile ale catenei ușoare ale D2E7 (D2E7 VL; de asemnea prezentate in SEQ ID NR:1), mutante alanină-scan ale D2E7 VL (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 și
LD2E7*.A8), regiunea variabilă a anticorpului înrudit D2E7, 1SD4 (2SD4 VL; prezentat de asemenea în SEQ ID NR:9) și alte regiuni variabile ale catenei ușoare înrudite D2E7 (EP B12, VL1OE4, VL100A9, VL100D2, VL1OF4, LOE5, VLLOF9, VLLOFIO, VLLOG7, VLLOG9, VLLOH1, VLLOHlO, VL1B7, VL1C1, VL1C7, VL0.1F4, VL0.1H8, LOE7 , LOE7.A și LOE7.T). Figura IA prezintă domeniile FR1, CDR1, FR2 și CDR2. Figura 1B arată domeniile FR3, CDR3 și FR4 . Domeniile catenei ușoare sunt încercuite CDR1(CDR Ll), CDR2(CDR L2) și CDR3(CDR L3).
Figurile 2A și 2B prezintă secvențele aminoacide ale regiunii variabile ale catenei grele ale D2E7 (D2E7 VH; prezentată de asemenea în SEQ ID NR:2), mutante alanină-scan ale D2E7 VH (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 și HD2E7*.A9), regiunea variabilă a catenei grele a anticorpului înrudit D2E7, 2SD4 (2SD4 VH; de asemenea prezentat în SEQ ID NR:1O) și regiuni variabile ale catenei grele înrudite la D2E7 (VH1B11, VH1D8, VH1A11, VH1B12, VH1-D2, VH1E4, VH1F6, VH1G1, 3C-H2, VH1-D2.N și VH1-D2.Y). Figura 2A prezintă domeniile FR1, CDR1, FR2 și CDR2. Figura 2B arată domeniile FR3, CDR3 și FR4 . Domeniile catenei grele CDR1(CDR Hi), CDR2(CDR H29 și CDR3(CDR H3) sunt încercuite.
Figura 3 este un grafic care ilustrează inhibarea citoxicității TNFa indusă de L929 prin anticorpul D2E7 anti-TNFa uman, cum s-a comparat la anticorpul murin anti-TNFa, MAK 195.
Figura 4 este un grafic care ilustrează inhibarea legării rhTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937 prin anticorpul D2E7 anti-TNFa uman, cum s-a comparat la anticorpul MAK 195 murin anti-hTMFa.
Figura 5 este un grafic care ilustrează inhibarea ELAM-1 indusă TNFa pe HUVEC prin anticorpul uman D2F.7 ț. ant ί -hTNFa, cum s-a comparat la anticorpul murin MAK anti-hTNFa. -— //V
C CABINET l· ENFORA '· 'x.' · V \ S.R1.
(\-2 Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - - ΙκΛ ί Ο -02-MÎW^
Figura 6 este un grafic cu bare care ilustrează protecția de letalitatea indusă TNFa la șoareci sensibilizați Dgalactozamină prin administrare de anticorp uman D2E7 anti-hTNFa (bare negre), cum s-a comparat la anticorpul murin MAK 195 antihTNFa (bare deschise) .
Figura 7 arată secvența nucleotidică a regiunii variabile a catenei ușoare a D2E7, cu secvența aminoacidă prezisă sub secvența nucleotidică. Regiunile CDR LI, CDR L2 și CDR L3 sunt subliniate.
Figura 8 prezintă secvența nucleotidică a regiunii variabile a catenei grele a D2E7, cu secvența aminoacidă prezisă sub secvența nucleotidică. Regiunile CDR HI, CDR H2 și CDR H3 sunt subliniate.
Figura 9 este un grafic care ilustrează efectul tratamentului cu anticorp D2E7 asupra mărimii medii a articulației șoarecilor transgenici Tgl97 ca un model de poliartrită.
Această invenție aparține anticorpilor umani izolați, sau porțiunilor de legare antigen ale acestora, care se leagă la TNFa uman cu afinitate ridicată, o rată de detașare scăzută și capacitate de neutralizare ridicată. Diverse aspecte ale invenției se referă la anticorpi și fragmente anticorp și compoziții farmaceutice ale acestora, precum acizi nucleici, vectori de expresie recombinanți și celule gazdă pentru a obține astfel de anticorpi și fragmente. Metode de folosire a anticorpilor invenției pentru detectarea TNFa uman sau pentru a inhiba activitatea TNFa uman, fie in vitro, fie in vivo, sunt de asemenea cuprinse in invenție.
în scopul ca invenția de față să fie înțeleasă cu mai multă ușurință, mai întâi sunt definiți anumiți termeni.
Termenul TNFa uman (abreviat aici ca hTNFa, sau simplu, hTNF) , așa cum s-a folosit aici, intenționează să se refere la o citokină umană care există ca o formă secretată de 17 kD și o formă asociată membranei de 26 kD a cărei formă biologic este compusă dintr-un trimer de molecule 17 kD legate necov
^- 2009-00821-to-oz-a&^V '
Structura hTNFa este descrisă suplimentar în, de exemplu, Pennica, D., et al.(1984) Nature 312:724-729; Davis, J.M., et al. (1988) Biochemistry 26:1322-1326; și Jones, E.Y., et al. (1989) Nature 338:225-228. Termenul TNFa uman intenționează să includă TNFa uman recombinant (rhTNFa), care se poate prepara prin metode de expresie recombinantă standard sau se poate procura comercial (R&D Systems, Catalog Nr. 210-TA, Minneapolis, MN) .
Termenul anticorp, așa cum s-a folosit aici, intenționează să se refere la molecule de imunoglobină cuprinzând 4 catene polipeptidice, 2 catene grele (H) și două catene ușoare (L) interconectate prin punți disulfură. Fiecare catenă grea cuprinde o regiune variabilă a catenei grele (abreviată aici ca HCVR sau VH) și o regiune constantă a catenei grele. Regiunea constantă a catenei grele cuprinde 3 domenii, CH1, CH2 și CH3. Fiecare catenă ușoară cuprinde o regiune variabilă a catenei ușoare (abreviată aici ca LCVR sau VL) și o regiune constantă a catenei ușoare. Regiunea constantă a catenei ușoare cuprinde un domeniu, CL. Regiunile VH și VL pot fi subdivizate în continuare în regiuni de hipervariabilitate, denumite regiuni care determină complementaritate (CDR), care alternează cu regiuni care sunt mai conservate, denumite regiuni cadru (FR). Fiecare VH și VL este compus din 3 CDR-uri și 4 FR-uri, aranjate de la terminusul amino spre terminusul carboxi în următoarea ordine: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Termenul porțiune de legare antigen a unui anticorp (sau simplu porțiune anticorp), așa cum s-a folosit, aici, se referă la unul sau mai multe fragmente ale unui anticorp care păstrează capacitatea de a se lega specific la un antigen (de exemplu, hTNFa). S-a dovedit că funcțiunea de legare antigen a unui anticorp poate fi realizată prin fragmente ale unui anticorp de lungime întreagă. Exemple de fragmente de legare cuprinse în termenul porțiune de legare antigen ale unui anticorp includ (i) un fragment Fab, un fragment monovalent, care consti domeniile VL, VH, CL și CH1; (ii) un fragmenst K(ab')
^-2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -1 0 -02- 2»[G Ϋ fragment bivalent care cuprinde 2 fragmente Fab legate printr-o punte disulfură la regiunea de legătură; (iii) un fragment Fd constând din domeniile VH și CH1; (iv) un fragment Fv constând din domeniile VL și VH ale unui singur braț al unui anticorp; (v) un fragment dAb (Ward et al. (1989) Nature 341:544-546) care constă dintr-un domeniu VH; și (vi) o regiune izolată de determinare a complementarității (CDR). Mai mult, deși cele 2 domenii al fragmentului Fv. VL și VH, sunt codate prin gene separate, ele pot fi unite, folosind metode recombinante, printrun linker sintetic cale le face să fie ca o singură catenă de proteină in care regiunile VL și VH se împerechează pentru a forma molecule monovalente (cunoscute drept catenă unică Fv-(scFv); vezi, de exemplu, Bird et al. (1988) Science 242:423426; și Huston et al (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85:58795883). Astfel de anticorpi cu o singură catenă sunt de asemenea intenționați să fie cuprinși în termenul porțiune de legare antigen a unui anticorp. Alte forme de anticorpi cu o singură catenă, cum ar fi diacorpii sunt de asemenea cuprinși în invenție. Diacorpii sunt anticorpi bivalenți, bispecifici în care domeniile VH și VL sunt exprimate pe o singură catenă polipeptidică, dar folosind un linker care este prea scurt pentru a permite împerecherea dintre cele 2 domenii pe aceiași catenă, prin aceasta forțând domeniile să se împerecheze cu domeniile complementare ale altei catene și creând 2 situri de legare antigen (vezi, de exemplu, Holliger, P., et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., et al (1994) Structure 2.:1121-1123), încă, în plus un anticorp sau porțiune de legare antigen a acestuia poate fi parte a unei molecule de imunoadeziune mai mare, formată prin asociere covalentă sau necovalentă a anticorpului sau porțiunii anticorp cu una sau mai multe alte proteine sau peptide. Exemple de astfel de molecule de imunoadeziune includ folosirea regiunii miez a streptavidinei pentru a obține o moleculă scFv tetramerică (Kipriyanov, S. et al. (1995) Human Antibodies and Hybridomasy 6: 93-101/ÎV și
W'Ș Și . c e^ \ SA·Ori O 0 9 - O O fi 2 1 - f O -02- W VW folosirea unui rest cisteină, o peptidă marker și o coadă Cterminală polilizină pentru a obține molecule bivalente și biotinilate scFv (Kipriayanov, S.M., et al. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058) . Porțiuni anticorp, cum ar fi fragmente Fab și F(ab')2, se pot prepara de la anticorpi întregi folosind tehnici convenționale, cum ar fi digestie papaină sau respectiv pepsină, a anticorpilor întregi. Mai mult, anticorpi, porțiuni anticorp și molecule de imunoadeziune pot fi obținute folosind tehnici ADN recombinant standard, așa cum s-au descris aici.
Termenul anticorp uman, așa cum s-a folosit aici, se intenționează să includă anticorpi având regiuni variabile și constante derivate de la secvențe ale liniei germinale imunoglobină. Anticorpii umani ai invenției pot să includă resturi aminoacide care nu sunt codate de secvențele liniei germinale ale imunoglobulinei umane (de exemplu, mutații introduse prin mutageneză randomică sau dirijată în sit in vitro sau prin mutație somatică in vivo) , de exemplu, în CDR-uri și în special CDR3. Totuși, termenul anticorp uman, așa cum s-a folosit aici, nu intenționează să includă anticorpi în care secvențele CDR derivate de la linia germinală a altor specii mamifere, cum ar fi un șoarece, au fost grefate pe secvențe cadru umane.
Termenul anticorp recombinant uman, așa cum s-a folosit aici, se intenționează să includă toți anticorpii umani care sunt preparați, creați sau izolați prin mijloace recombinante, cum ar fi anticorpii exprimați folosind un vector recombinant transfectat într-o celulă gazdă (descrisă suplimentar în Secțiunea II, de mai jos), anticorpi izolați de la bancă de anticorpi recombinanți, combinatoriali (descrisă în plus în Secțiunea III, de mai jos), anticorpi izolați de la un animal (de exemplu, un șoarece) care este transgenic pentru genele imunoglobulinei umane (vezi, de exemplu, Taylor, L.D., (1992)
Nuci. Acids Res. 20:6287-6295) sau anticorpi preparați, exprimați, creați sau izolați prin orice alte mijloace implică îmbinarea secvențelor genei imunoglobulinei umane li
2009-00821 -ί ο -02- «Μ \qq^ |ω secvențe ADN. Asemenea anticorpi recombinanți umani au regiuni variabile și constante derivate de la secvențele liniei germinale ale imunoglobulinei umane. în unele realizări, totuși, asemenea anticorpi umani recombinanți sunt supuși la mutageneză in vitro (sau, când se folosește un animal transgenic pentru secvențe Ig umane, mutageneză somatică in vivo) și astfel secvențele aminoacide ale regiunilor VH și VL ale anticorpilor recombinanți sunt secvențe care, în timp ce sunt derivate de la și înrudite la secvențele liniei germinale VBH și VL, pot să nu existe în mod natural în repertoriul in vivo al liniei germinale de anticorpi umani.
Un anticorp izolat, așa cum s-a folosit aici, intenționează să se refere la un anticorp care este în mod substanțial liber de alți anticorpi care au specificități antigenice diferite (de exemplu, un anticorp izolat care se leagă specific la hTNFa este substanțial liber de anticorpi care se leagă antigeni specifici alții decât hTNFa). Un anticorp izolat care se leagă specific la hTNFa poate, cu toate acestea, să aibă rectivitate încrucișată față de alți antigeni, cum ar fi molecule TNFa de la alte specii (discutate în detaliu mai jos). Mai mult, un anticorp izolat poate fi substanțial liber de alt material celular și/sau chimicale.
Un anticorp de neutralizare, așa cum s-a folosit aici (sau un anticorp care a neutralizat activitatea hTNFa), se intenționeză să se refere la un anticorp a cărui legare la hTNFa rezultă în inhibarea activității biologice a hTNFa. Această inhibare a activității biologice a hTNFa poate fi cercetată prin măsurarea unuia sau mai multor indicatori ai activității biologice a hTNFa, cum ar fi citoxicitatea indusă hTNFa (fie in vitro sau in vivo), activarea celulară hTNFa și legarea hTNFa la receptorii hTNFa. Acești indicatori ai activității biologice a hTNFa pot fi cercetați prin una sau mai multe dintre câteva analize standard in vitro sau in vivo cunoscute în domeniu (vezi Exemplul 4) . De preferință, capacitatea unui anticorp de a neutraliza activitatea hTNFa este cercetată prin \
0--2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -1 0 -DZ14 citoxicității induse de hTNFa a celulelor L929. Ca un parametru suplimentar sau alternativ al activității hTNFa, poate fi cercetată capacitatea unui anticorp de a inhiba expresia indusă hTNFa al ELAM-1 pe HUVEC, ca o măsură a activării celulare indusă de hTNFa.
Termenul rezonanța suprafeței plasmonului, așa cum s-a folosit aici, se referă la un fenomen optic care permite analiza interacțiunilor biospecifice în timp real prin detecția modificărilor în concentrațiile proteice cu o matrice biosenzor, de exemplu, folosind sistemul BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suedia și Piscataway, NJ). Pentru descrieri suplimentare vezi Exemplul 1 și Jonsson, U., et al. (1993) Arm. Biol. Clin. 51:19-26; Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11: 620-627; Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol. Recognit. 8.:125-131,- și Johnsson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198: 268-277.
Termenul Koff, așa cum s-a folosit aici, intenționează să se refere la constanta ratei de detașare pentru disocierea unui anticorp din complexul anticorp/antigen.
Termenul Kd, așa cum s-a folosit aici, intenționează să se refere la constanta disocierii unei interacțiuni particulare anticorp-antigen.
Termenul moleculă de acid nucleic, așa cum s-a folosit aici, intenționează să includă molecule ADN și molecule ARN. O moleculă de acid nucleic poate fi cu o singură bandă sau cu 2 benzi, dar de preferință, este ADN cu 2 benzi.
Termenul moleculă de acid nucleic izolat, așa cum s-a folosit aici cu referire la acizi nucleici care codifică anticorpi sau porțiuni anticorp (de exemplu, VH, VL, CDR3) care leagă hTNFa, intenționează să se refere la o moleculă de acid nucleic în care secvențele nucleotidice care codifică anticorpi sau porțiuni anticorp sunt libere de alte secvențe nucleotidice care codifică anticorpi sau porțiuni anticorp care leagă antigeni alții decât hTNFa, care alte secvențe pot flanca acidul nucleic natural în ADN-ul genomic uman. Astfel, de exemplu, un nucleic izolat al invenției care codifică o regiune VH a \
Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - 1 Ο -02- 20» anticorp anti-TNFa, nu conține alte secvențe care codifică alte regiuni VH care leagă antigeni alții decât TNFoe.
Termenul vector, așa cum s-a folosit aici, intenționează să se refere la o moleculă de acid nucleic capabilă să transporte alt acid nucleic la care a fost legat. Un tip de vector este un plasmid, care se referă la o buclă de ADN dublu bandă circulară în care pot fi legate segmente de ADN suplimentare. Alt tip de vector este un vector viral, în care segmente de ADN suplimentar pot fi legate în genomul viral. Anumiți vectori sunt capabili de replicare autonomă într-o celulă gazdă în care ei sunt produși (de exemplu, vectori bacterieni având o origine a replicării bacteriene și vectori epizomali mamiferi). Alți vectori (de exemplu, vectori mamiferi non-epizomali) pot fi integrați în genomul unei celule gazdă la introducere în celula gazdă și prin aceasta sunt replicați împreună cu genomul gazdei. Mai mult, anumiți vectori sunt capabili să dirijeze expresia genelor la care ei sunt legați operațional. Astfel de vectori sunt cunoscuți aici ca vectori de expresie recombinanți (sau simplu, vectori de expresie). în general, vectori de expresie cu utilitate în tehnicile ADN recombinant sunt adesea sub formă de plasmizi. în prezenta descriere, plasmid și vector pot fi folosiți interschimbabil, deoarece plasmidul este cea mai comună formă de vector folosit. Cu toate acestea, invenția intenționează să includă astfel de alte forme ale vectorilor de expresie, cum ar fi vectori virali (de exemplu, retrovirusuri deficiente pentru replicare, adenovirusuri și virusuri asociate adeno), care servesc pentru funcțiuni echivalente.
Termenul celulă gazdă recombinantă (sau simplu, celulă gazdă), așa cum s-a folosit aici, se intenționează să se refere la o celulă în care a fost introdus un vector de expresie recombinant. Se va înțelege că asemenea termeni se intenționează să se refere nu numai la celula subiect particular, ci și la urmașii unei astfel de celule. Deoarece anumite modificări se pot petrece în generațiile în succesiune fie datorită mutațiilor, influențelor de mediu, astfel de urmași, de fapt, nu pot# r i \ L CABINET \ \\\ enfora cv- 2 Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - -
0 -02--a» identici cu celula parentală, dar sunt încă incluși in cuprinsul termenului celulă gazdă cum s-a folosit aici.
Diverse aspecte ale invenției sunt descrise in continuare in detaliu in subsecțiunile care urmează.
I. Anticorpi umani care leagă TNFa uman
Această invenție asigură anticorpi umani izolați, sau porțiuni de legare antigen ale acestora, care se leagă la TNFa uman cu afinitate crescută, o rată a detașării scăzută și capacitate de neutralizare ridicată. De preferință, anticorpii umani ai invenției sunt anticorpi umani de neutralizare antihTNFa, recombinanți. Cel mai preferat anticorp recombinant de neutralizare al invenției este denumit până aici ca D2E7 și are secvențele VL și VH cum s-au prezentat in Figura IA, 1B și respectiv, Figura 2A, 2B (secvența aminoacidă a regiunii D2E7 VL este de asemenea prezentată in SEQ ID NR:1; secvența aminoacidă a regiunii D2E7 VH este prezentată de asemenea in SEQ ID NR:2). Proprietățile legării D2E7, așa cum s-au comparat la mAb murin MAK 195 anti-hTNFa care prezintă afinitate crescută și cinetici de disociere lentă și alt anticorp uman anti-hTNFa înrudit secvenței D2E7, 2SD4, sunt rezumate mai jos:
Anticorp Koff sec’1 kon M 'sec 1 Kd M Stoichiometrie
D2E7 IgGl 8, 81xl0-5 1,91X105 6, 09x10-'° 1,2
2SD4 IgG4 8,4xl0’3 4,20xl05 2,00x10’® 0,8
MAK 195 F(ab')2 8,70xl0-5 1,90xl05 4, 6OxlO10 1, 4
Anticorpul D2E7 și anticorpi înrudiți prezintă de asemenea o capacitate puternică de a neutraliza activitatea hTNFa, cum s-a cercetat prin câteva analize in vitro și in vivo (vezi, Exemplul 4). De exemplu, acești anticorpi neutralizează citotoxicitatea indusă hTNFa a celulelor cu valori IC50 în domeniu de aproximativ IO'7 M la aproximativ IO'10 M. D2E7, când s-a exprimat ca anticorp IgGl de lungime întreagă, neutralizează citotoxicitatea indusă hTNFa a celulelor L929 cu IC50 de aproximativ 1,25χ1Ο~10 M. mult, capacitatea de neutralizare a D2E7 este menținută \^cănd ți ' (Λ CABINET ή ' J enfora , \ 3 ‘ // anticorpul se exprimă ca un fragment Fab, F(ab')2 sau scFv. De asemenea, D2E7 inhibă activarea celulară indusă de TNFa, așa cum s-a măsurat prin expresia ELAM-1 pe HUVEC indusă de hTNFa (IC50= aproximativ 1,85χ10'10 M) și legarea hTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937 (IC50=aproximativ 1,56χ1Ο'10 M) . Considerând cele din urmă D2E7 inhibă legarea hTNFa la ambii receptori hTNFa p55 și p75. Mai mult, anticorpul inhibă in vivo letalitatea indusă hTNFa la șoareci (EDS0=l-2,5 pg/șoarece) .
Considerând specificitatea legării D2E7, acest anticorp se leagă la TNFa uman in diverse forme, incluzând hTNFa solubil, hTNFa transmembranar și hTNFa legat la receptori celulari. D2E7 nu se leagă specific la alte citokine ca limfotoxina (ΤΝΕβ), ILla, IL-Ιβ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, ΙΕΝγ și TGFȘ. Totuși, D2E7 prezintă reactivitate încrucișată la factorii necrozei tumorii de la alte specii. De exemplu, anticorpul neutralizează activitatea a cel puțin 5 TNFa de la primate (cimpanzeu, babuin, sanguin, cynomolgus și rhesus) cu valori IC50 aproximativ echivalente ca pentru neutralizarea hTNFa (vezi, Exemplul 4, subsecțiunea E). De asemenea, D2E7 neutralizează activitatea TNFa de șoarece, deși de aproximativ 1000 de ori mai puțin decât TNFa uman (vezi, Exemplul 4, subsecțiunea E) . De asemenea, D2E7 se leagă la TNFa canin și porcin.
într-un aspect, invenția aparține la anticorpii D2E7 și porțiuni de anticorp, anticorpi înrudiți D2E7 și porțiuni anticorp și alți anticorpi umgni și porțiuni de anticorp cu proprietăți echivalente la D2E7, cum ar fi afinitate de legare ridicată la hTNFa cu cinetici de disociere scăzute și capacitate de neutralizare ridicată. într-o realizare, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, care disociază de TNFa uman cu Kd de IxlO’8 M sau mai puțin și o rată constantă Koff de lxl03s-1 sau mai mică, ambele determinate de suprafața de rezonanță a plasmonului și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard L929 in vitro cu IC50 de lxl0“7 sau mai mic. Mai preferat, anticorpul uman izolat, sau porțiunea de legare antigMS^’a/,Ss/ legare
CABINEI (λ- 2 Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - 1 Ο -02acestuia disociază de la TNFa uman cu Koff de 5xl0'4s'1 sau mai mică, sau chiar mai preferat, cu Koff de lxl0-4s-1sau mai mică. Mai preferat, anticorpul uman izolat sau porțiunea de legare antigen a acestuia, neutralizează citotoxicitatea TNFa uman intr-un test standard L929 in vitro cu IC50 de IxlO'8 M sau mai puțin, chiar mai preferat, cu IC50 de IxlO'9 M sau mai puțin și încă mai preferabil, cu IC50 de IxlO'10 M sau mai puțin. într-o realizare preferată, anticorpul este un anticorp uman recombinant izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia. în altă realizare preferată, anticorpul neutralizează de asemenea, activarea celulară TNFa, așa cum s-a cercetat folosind o analiză standard in vitro pentru expresia ELAM-1 indusă TNFa pe celule endoteliale din vena ombilicală umană (HUVEC).
Analiza de rezonanță a suprafeței plasmonului pentru determinarea Kd și Koff poate fi realizată cum s-a descris în Exemplul 1. Un test standard L929 in vitro pentru determinarea valorilor IC50 este descris în Exemplul 4, subsecțiunea A. Un test standard in vitro pentru expresia ELAM-1 indusă TNFa asupra celulelor endoteliale din vena ombilicală umană (HUVEC) este descris în Exemplul 4, subsecțiunea C. Exemple de anticorpi umani recombinanți care îndeplinesc sau sunt anticipați a îndeplini, criteriile cinetice și de neutralizare menționate mai înainte includ anticorpi având următoarele perechi de secvențe [VH/VL] care sunt prezentate în Figurile IA, 1B, 2A și 2B (de asemenea vezi, Exemplele 2, 3 și 4 pentru analizele cinetice și de neutralizare): [D2E7 VH/D2E7 VL] ; [HD2E7*.A1/D2E7 VL], [HD2E7*.A2/D2E7 VL], [HD2E7 *.A3/D2E7 VL], [HD2E7 *.A4/D2E7 VL], [HD2E7 *.A5/D2E7 VL], [HD2E7 *.A6/D2E7 VL], [HD2E7 *.A7/D2E7 VL], [HD2E7 *.A8/D2E7 VL], [HD2E7 *.A9/D2E7 VL], [D2E7 VH/LD2E7*.Al], [D2E7 VH/LD2E7*. A4 ] , [D2E7 VH/LD2E7*.A5], [D2E7 VH/LD2E7*. A7 ], [D2E7 VH/LD2E7*.A8], [HD2E7 *.A9/LD2E7*.Al], [VH1-D2/LOE7], [VH1D2.N/LOE7,T], [VH1-D2.Y/LOE7.A], [VH1-D2.N/LOE7.A], [VH1-D2/EP B127] și [3C-H2/LOE7].
Este bine cunoscut în domeniu că domeniile CDR3 ale ce '
grea și ușoară joacă un rol important în specificii \
(χ- 2 Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - ΐ ο -02- νοο ;// afinitatea legării unui anticorp pentru un antigen. în conformitate, un alt aspect, invenția aparține anticorpilor umani care au cinetici de disociere mai mari pentru asociere cu hTNFa și care au domenii CDR3 ale catenei ușoare și grea care structural sunt identice la sau înrudite celor ale D2E7. Așa cum s-a demosntrat în Exemplul 3, poziția 9 a D2E7 VL CDR3 poate fi ocupată de Ala sau Thr cu afectarea substanțială a Koff. în conformitate, un motiv consens pentru D2E7 VL CDR3 cuprinde secvența aminoacidă: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(T/A) (SEQ ID NR:3). Suplimentar, poziția 12 a D2E7 VL CDR3 poate fi ocupată de Tyr sau Asn, fără afectarea substanțială a Koff. în conformitate, un motiv consens pentru D2E7 VL CDR3 cuprinde secvența aminoacidă: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NR:4). Mai mult, așa cum s-a demonstrat în Exemplul 2, domeniul CDR3 al catenelor grea și ușoară a D2E7 este favorabil pentru substituție cu un singur rest alanină (la poziția 1, 4, 5, 7 sau 8 în VL CDR3 sau la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11 în VH CDR3) fără afectarea substanțială a Koff. încă suplimentar, specialistul în domeniu va aprecia că dat fiind caracterul favorabil al domeniilor D2E7 VL și VH CDR3 pentru substituțiile prin alanină, substituția altor aminoacizi în domeniile CDR3 poate fi posibilă păstrând încă rata de detașare constantă a anticorpului, în special, substituții cu aminoacizi conservativi. O substituție aminoacidă conservativă, așa cum s-a folosit aici, este una în care restul aminoacid este înlocuit cu alt rest aminoacid având o catenă laterală similară. Familii ale resturilor aminoacide care au catene laterale similare au fost definite în domeniu, incluzând catene laterale bazice (de exemplu, Uzină, arginină, histidină) , catene laterale acide (de exemplu, acid aspartic, acid glutamic), catene laterale polare neîncărcate (de exemplu, glicină, asparagină, glutamină, serină, treonină, tirozină, cisteină), catene laterale nepolare (de exemplu, alanină, valină, leucină, izoleucină, prolină, fenilalanină, metionină, triptofan), catene laterale β-ramificate (de exemplu, treonină, valină, izoleucină) și catene le
aromatice (de exemplu, tirozină, fenilalanină^ tril ^“2009-00821-- 9’3 ι ο -ο?- w țgc] T histidină) . De preferință, nu sunt făcute mai mult de 1 la 5 substituții aminoacide conservative în D2E7 VL și/sau domeniile VH CDR3. Mai preferat, nu sunt făcute mai mult decât 1 la 3 substituții aminoacide conservative în domeniile D2E7 VL și/sau VH CDR3. Suplimentar, substituții aminoacide conservative nu vor fi făcute la poziții aminoacide critice pentru legare la hTNFa. Așa cum s-a arătat în Exemplul 3, pozițiile 2 și 5 ale D2E7 VL CDR3 și pozițiile 1 și 7 ale D2E7 VH CDR3 par a fi critice pentru interacțiune cu hTNFa și astfel, de preferință, substituții aminoacide conservative nu sunt făcute la aceste poziții (deși o substituție alanină la poziția 5 a D2E7 VL CDR3 este acceptabilă, așa cum s-a descris mai sus).
în conformitate, în altă realizare, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau porțiune de legare antigen a acestuia, cu următoarele caracteristici:
a) disociază de la TNFa uman cu o rată constantă K de lxl0“3s_1 sau mai mică, cum s-a determinat prin rezonanța suprafeței plasmonului;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1, 4, 5, 7, sau 8, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8, și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11 sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 și/sau 12.
Mai preferabil, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, disociază de la TNFa uman cu un Koff de δχΙΟ'^1 sau mai mic. Chiar mai preferabil, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, disociază de la TNFa uman cu un KoEf de IxlO^s'1 sau mai mic.
în încă altă realizare, invenția asigură un anticorp izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia', cu o rfe λ·.
bune ^2009-00821-1 0 -02- 2609 $0 variabilă a catenei ușoare (LCVR)având un domeniu CDR3 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3, sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1, 4, 5, 7 sau 8, și cu o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) având un domeniu CDR3 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4, sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură poziție alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11. De preferință, LCVR cuprinde în plus un domeniul CDR2 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:5 (adică, D2E7 VL CDR2) și HCVR cuprinde in plus un domeniu CDR2 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:6 (adică, D2E7 VH CDR2). Chiar mai preferat, LCVR are in plus un domeniu CDR1 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:7 (adică, D2E7 VL CDR1) Și HCVR are un domeniu CDR1 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:8 (adică, D2E7 VH CDR1). Regiunile cadru pentru VL sunt de preferință de la linia germinală umană VkI, mai preferat de la gena Vk a liniei germinale umane A20 și cel mai preferat de la secvențele cadrului D2E7 VL prezentate în Figurile IA și 1B. Regiunile cadru pentru VH sunt de preferință de la familia germinală umană VH3, mai preferat de la gena VH linia germinală DP-31 și cel mai preferat de la secvențele cadrului D2E7 VH prezentate în Figurile 2A și 2B.
în încă altă realizare, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau porțiune de legare antigen a acestuia, cu o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) care cuprinde secvența aminoacidă a secvenței SEQ ID NR:1 (adică, D2E7 VL) și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2 (adică, D2E7 VH). în anumite realizări, anticorpul cuprinde o regiune constantă a catenei grele, cum ar fi o regiune constantă IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, ilgA, IgE, IgM sau IgD. De preferință, regiunea constantă a a catenei grele este o regiune constantă a catenei grele IgGl sau o regiune constantă a catenei grele IgG4. Mai mult, anticorpul poate cuprinde o regiune constantă a catenei ușoare, fie o regiune constant a catenei ușoare, fie o regiune, constantă lambda a
Ο 0 9 - 0 0 8 2 1 - 1 0 -0222 ușoare. De preferință, anticorpul cuprinde o regiune constantă kappa a catenei ușoare. Alternativ, porțiunea anticorp poate fi, de exemplu, un fragment Fab sau un fragment mono catenar Fv.
în încă alte realizări, invenția asigură un anticorp uman izolat, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, având domenii CDR3 VL și VH înrudite D2E7, de exemplu, anticorpi, sau porțiuni de legare antigen ale acestora, cu regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) având un domeniu CDR3 cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul care constă din SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12, SEQ ID NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, SEQ ID NR:16, SEQ ID NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ ID NR:20, SEQ ID NR:21, SEQ ID NR:22, SEQ ID NR:23, SEQ ID NR:24, SEQ ID NR:25 și SEQ ID NR:26 sau cu regiune variabilă a catenei grele (HCVR) având un domeniu CDR3 cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul constând din SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:27, SEQ ID NR:28, SEQ ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:32, SEQ ID NR:33, SEQ ID NR:34 și SEQ ID NR:35.
în încă altă realizare, invenția asigură un anticorp uman recombinant, sau o porțiune de legare antigen a acestuia, care neutralizează activitatea TNFa uman dar nu a ΤΝΕβ uman. De preferință, anticorpul, sau porțiunea de legare antigen a acestuia, neutralizează, de asemenea, TNFa de cimpanzeu și cel puțin un TNFa de la un primat suplimentar selectat din grupul care constă din TNFa de babuin, TNFa de sanguin, TNFa de cynomolgus și TNFa de la rhesus. De preferință, anticorpul, sau porțiunea de legare antgen a acestuia, neutralizează TNFa uman, de la cimpanzeu și/sau TNFa de la o primată suplimentară într-un test standard L929 in vitro cu un IC50 IxlO8 M sau mai mic, mai preferat IxlO'9 M sau mai mic, și chiar mai preferat 5xl0'10 M sau mai mic. într-o subrealizare, anticorpul neutralizează de asemenea activitatea TNFa canin, de preferință într-un test standard L929 in vitro cu un IC50 de IxlO'7 M sau mai puțin, mai preferat IxlO-8 M sau mai puțin și chiar mai preferat 5xl0“9 M sau mai puțin. în altă subrealizare, anticorpul neutralizeaz asemenea activitatea TNFa de la porc, de preferință 'cu Iț
(\’2 Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - - 9'6' t ο-02-a» lxlO-5 Μ sau mai puțin, mai preferat lxl0“6 M sau mai puțin și chiar mai preferat 5xl0'7 M sau mai puțin. în încă altă realizare, anticorpul neutralizează de asemenea activitatea TNFa de la șoarece, de preferință cu IC50 de IxlO-4 M sau mai puțin, mai preferat lxlO'5 M sau mai puțin sau chiar mai preferat 5xl0‘6 M sau mai puțin.
Un anticorp sau porțiune anticorp ale invenției pot fi derivate sau legate la altă moleculă funcțională (de exemplu, altă peptidă sau proteină) în conformitate, anticorpii sau porțiunile de anticorp ale invenției intenționează să includă forme derivate sau modificate în alt fel ale anticorpilor umani anti-hTNFa descriși aici, incluzând molecule de imunoadeziune. De exemplu, un anticorp sau porțiune de anticorp ale invenției pot fi legați funcțional (prin cuplare, fuziune genetică, asociere necovalentă sau în alt fel) la una sau mai multe alte entități moleculare, cum ar fi alt anticorp (de exemplu, un anticorp bispecific sau un diacorp), un agent detectabil, un agent citotoxic, un agent farmaceutic, și/sau o proteină sau peptidă care poate media asocierea anticorpului sau porțiunii de anticorp cu altă moleculă (cum ar fi o regiune miez streptavidină sau o coadă polihistidină).
Un tip de anticorp derivatizat este produs prin legarea încrucișată a doi sau mai mulți anticorpi (de același tip sau tipuri diferite, de exemplu, pentru a crea anticorpi bispecifici). Linkeri încrucișați includ pe cei care sunt heterofuncționali, care au două grupări reactive distincte separate printr-un distanțier corespunzător (de exemplu, ester m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimidă) sau homobifuncțional (de exemplu, suberat de disuccinimidil). Astfel de linkeri sunt accesibili de la Pierce Chemical Company, Rockford, IL.
Agenți detectabili utili cu care un anticorp sau porțiune anticorp a invenției pot fi derivați, includ compuși fluorescenți. Agenți fluorescenți detectabili exemplificatori includ fluoresceină, izotiocianat de fluoresceină, rodamină, clorură de 5-dimetilamin-l-naftalensulfonil, ficoeritrir
-2009-00821-î 0-0224 alții. De asemenea, un anticorp poate fi derivat cu enzime detectabile, cum ar fi fosfatază alcalină, peroxidază de la hrean, glucoz oxidază și altele. Când un anticorp este derivat cu o enzimă detectabilă el se detectează adăugând reactivi suplimentari care folosesc enzima pentru a da un produs de reacție detectabil. De exemplu, când este prezent agentul detectabil peroxidază de la hrean, adăugarea de apă oxigenată și diaminobenzidină conduce la un produs de reacție colorat care este detectabil. Un anticorp poate fi derivat cu biotină și detectat prin măsurare indirectă a legării avidinei sau streptavidinei.
II. Expresia anticorpilor
Un anticorp, sau porțiune anticorp, a invenției se poate prepara prin expresie recombinantă a genelor catenei ușoare și grea ale imunoglobulinei intr-o celulă gazdă. Pentru a exprima un anticorp recombinant, o celulă gazdă este transfectată cu unul sau mai mulți vectori de expresie recombinanți care conțin fragmente ADN care codifică cafenele ușoară și grea ale imunoglobinei ale anticorpului astfel încât cafenele ușoară și grea sunt exprimate în celula gazdă și, de preferință, secretate în mediul în care sunt cultivate celule gazdă, mediu din care se pot recupera anticorpii. Metodologiile ADN recombinante standard sunt folosite pentru a obține cafenele grea și ușoară ale anticorpilor, se încorporează aceste gene în vectori de expresie recombinanți și se introduc vectorii în celule gazdă precum cei descriși în Sambrook, Fritsch și Maniatis (ed.), Mol^aular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.Y., (1989), Ausubel, F.M. et al. (ed.) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, (1989) și în brevetul SUA 4.816.397 de Boss et al.
Pentru a exprima anticorp D2E7 sau anticorp înrudit D2E7 mai întâi sunt obținute, fragmente ADN care codifică regiunile variabile ale catenei ușoară și grea. Aceste ADN-uri potx obținute prin amplificarea și modificarea liniei germinafte
^- 2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -1 0 -0225 secvențelor variabile ale catenei ușoară și grea folosind reacția polimerazică de catenă (PCR). Secvențele ADN ale liniei germinale pentru genele regiunii variabile ale catenei grea și ușoară umane sunt cunoscute în domeniu (vezi, de exemplu, Vbase baza de date pentru secvențe ale liniilor germinale umane; vezi, de asemenea, Kabat, E.A., et al.(1991)-Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson, I.M., et al. (1992) The Repertoire of Human Germline VH Sequences Reveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hypervariable Loops J.Mol.Biol. 227:776-698 ; și Cox,J.P.L. et al (1994 ) A Directory of Human Germ-line VK Segments Reveals a Strong Bias in Their Usage Eur. J. Immunol. 24.:827-836,- conținuturile fiecăreia fiind expres încorporate aici ca referință). Pentru a obține un fragment ADN care codifică regiunea variabilă a catenei grele a anticorpului D2E7 sau unui anticorp înrudit D2E7, un membru al familiei VH3 al genelor liniei germinale VH este amplificat prin PCR standard. Cel mai preferat, este amplificată secvența liniei germinale DP-31 VH. Pentru a obține un fragment ADN care codifică regiunea variabilă a catenei ușoare a anticorpului D2E7 sau unui anticorp înrudit D2E7, un membru al familiei VkI al genelor liniei germinale VL este amplificat prin PCR standard. Cel mai preferat, este amplificată secvența liniei germinale A20 VL. Primeri PCR corespunzători pentru utilizare în amplificarea liniei germinale DP-31 VH și liniei germinale A20 VL, secvențele se pot desemna pe baza secvențelor nucleotidice discutate în referințele citate supra, folosind metode standard.
O dată ce sunt obținute fragmentele liniei germinale VH și VL, aceste secvențe pot fi mutate pentru a codifica secvențele aminoacide D2E7 sau înrudite D2E7 descrise aici. Secvențele aminoacide codificate prin secvențele ADN ale liniei germinale VH și VL sunt comparate mai întâi la secvențele aminoacide VH și VL pentru D2E7 și înrudite D2E7 pentru identificarea resturilor aminoacide din secvența D2E7 sau înrudită D2E7 care diferă linia germinală. Apoi, nucleotidele corespunzătoare #ile X ' o.·.^ xE#
0^2009-00921-- Μ
0 -02- secvențelor ADN ale liniei germinale sunt mutate astfel încât secvența liniei germinale mutate codifică secvența aminoacidă D2E7 sau înrudită D2E7, folosind codul genetic pentru a determina care schimbări nucleotidice ar putea fi făcute. Mutageneza secvențelor liniei germinale se realizează prin metode standard, cum ar fi mutageneză mediată PCR (în care nucleotidele mutate sunt încorporate în primerii PCR, astfel că produsul PCR conține mutațiile) sau mutagenază dirijată în sit.
Mai mult, ar fi de remarcat că dacă secvențele liniei germinale obținute prin amplificare PCR codifică diferențe aminoacide în regiunile cadru de la configurația adevărată a liniei germinale (adică, diferențele în secvența amplificată cum s-au comparat la secvența liniei germinale adevărate, de exemplu, ca un rezultat al mutației somatice) , poate fi de dorit să se schimbe aceste diferențe aminoacide înapoi la secvențele liniei germinale adevărate (adică, mutație înapoi a resturilor cadrului la configurația liniei germinale).
O dată ce fragmentele ADN care codifică segmente VH și VL ale D2E7 sau înrudite D2E7 sunt obținute (prin amplificare și mutageneză a liniei germinale VH și VL, cum s-a descris mai sus) aceste fragmente ADN pot fi manipulate în continuare prin tehnici ADN recombinant standard, de exemplu, pentru convertirea genelor regiunii variabile la genele catenei anticorpului de lungime întreagă, la genele fragmentului Fab, sau la o genă scFv. în aceste manipulări, un fragment ADN care codifică VL sau VH este legat operațional la alt fragment ADN care codifică altă proteină, cum ar fi o regiune constantă a unui anticorp sau un linker flexibil. Termenul legată operațional așa cum s-a folosit în acest context, intenționează să însemne că cele două fragmente ADN sunt unite astfel încât secvențele aminoacide codificate de cele două fragmente ADN rămân în cadru.
ADN-ul izolat care codifică regiunea VH poate fi transformat la o genă a catenei grele de lungime întreagă, legând operațional ADN-ul care codifică VH la altă moleculă de ADN care codifică regiunile constante ale catenei grele (CH1,
Ce. 2 Ο 0 9 - Ο Ο 9 2 1 t ο -02- ώο c$
Secvențele genelor regiunii constante ale catenei grele umane sunt cunoscute în domeniu (vezi, de exemplu, Kabat, E.A., et al. (1991) -Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) și fragmente ADN care cuprind aceste regiuni se pot obține prin amplificare PCR standard. Regiunea constantă a catenei grele poate fi o regiune constantă IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM sau IgD, dar cel mai preferat este o regiune constantă IgGl, sau IgG4. Pentru un fragment Fab gena catenei grele, ADN-ul care codifică VH poate fi legat operațional la altă moleculă ADN care codifică numai regiunea constantă CH1 a catenei grele.
ADN-ul izolat care codifică regiunea VL poate fi transformat la gena catenei ușoare de lungime întreagă (precum o genă a catenei ușoare Fab) prin legarea operațională a ADN-ului care codifică VL la altă moleculă ADN care codifică regiunea constantă a catenei ușoare, CL. Secvențele genelor regiunii constante ale catenei ușoare umane sunt cunoscute în domeniu (vezi, de exemplu, Kabat, E.A., et al. (1991)-Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S.Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) și fragmentele ADN care cuprind aceste regiuni pot fi obținute prin amplificare PCR standard. Regiunea constantă a catenei ușoare poate fi o regiune constantă kappa sau lambda, dar cel mai preferat este o regiune constantă kappa.
Pentru a crea o genă scFv, fragmentele ADN care codifică VHși VL- sunt legate operațional la alt fragment care codifică un linker flexibil, de exemplu, codifică secvența aminoacidă (Gly4Ser)3, astfel încât secvențele VH și VL pot fi exprimate ca o proteină contiguă cu o singură catenă, cu regiunile VL și VH legate prin linkerul flexibil (vezi, de exemplu, Bird et al. (1988) Science 24 2:423-426; Huston et al (1988) Proc. Natl . Acad. Sci . USA 85:5879-5883; McCafferty et al. Nature (1990) 348.: 552-554) .
Pentru a exprima anticorpii sau porțiuni gnticorp . i \ ' f CABINET \ • \ v ’ s.h:- 1 \ \\ . <&>//
- ___·. Xi'-F e RO'țzz ^- 2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -ί 0 -D228 invenției, ADN-urile care codifică cafenele ușoară și grea parțiale, sau de lungime întreagă, obținute cum s-a descris mai sus, sunt inserate în vectori de expresie astfel încât genele sunt legate operațional la secvențe de control transcripțional și translațional. în acest context, termenul legat operațional intenționează să însemne că o genă anticorp este legată într-un vector astfel încât secvențele de control transcripțional și translațional din vector servesc funcției lor intenționate de reglare a transcripției și translației genei anticorp. Vectorul de expresie și secvențele de control ale expresiei sunt alese pentru a fi compatibile cu expresia celulei gazdă folosite. Gena catenei ușoare a anticorpului și gena catenei grele a anticorpului, pot fi inserate în vector separat sau, mai obișnuit, ambele gene sunt inserate în același vector de expresie. Genele anticorpului sunt inserate în vectorul de expresie prin metode standard (de exemplu, situri de expresie complementare ligării pe fragmentul genei anticorpului și vector, sau ligare la capăt teșit dacă nu sunt prezente situri de restricție). înaintea inserării catenelor ușoară sau grea ale D2E7 sau înrudit D2E7, vectorul de expresie poate să conțină deja secvențele regiunii constante a anticorpului. De exemplu, o abordare pentru transformarea secvențelor VH și VL D2E7 și înrudit D2E7 la gene anticorp de lungime întreagă este să se însereze acestea în vectori de expresie care codifică deja regiuni constante ale catenei grele și, respectiv regiuni constante ale catenei ușoare, astfel încât segmentul VH este legat operațional la segmentul(e) CH din vector și segmentul VL este legat operațional la segmentul CL din vector. Suplimentar sau alternativ, vectorul de expresie recombinant poate codifica o peptidă semnal care facilitează secreția catenei anticorpului dintr-o celulă gazdă. Gena catenei anticorpului poate fi donată în vector astfel încât peptida semnal este legată în cadru la terminusul amino al genei catenei anticorpului. Peptida semnal poate fi o peptidă semnal imunoglobulină sau o peptidă semnal heteroloagă (adică, o peptidă semnal de la o proteină c
¢^-2009-00321 -ί ο -oz-w^Q'T este imunoglobulină).
Suplimentar la genele catenei anticorpului, vectorii recombinanți de expresie ai invenției conțin secvențe regulatoare care controlează expresia genelor catenei anticorpului intr-o celulă gazdă. Termenul secvență regulatoare intenționează să includă promotori, intensificatori și alte elemente de control ale expresiei (de exemplu, semnale de poliadenilare) care controlează transcripția sau translația genelor catenei anticorpului. Astfel de secvențe regulatoare sunt descrise, de exemplu, în Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990) . Se va aprecia de către cei cu pregătire în domeniu că desemnarea vectorului de expresie, inclusiv selecția secvențelor regulatoare, poate să depindă de astfel de factori ca alegerea celulei gazdă care trebuie transformată, nivelul expresiei proteinei dorite, etc. Secvențe regulatoare preferate pentru expresia unei celule gazdă de la mamifer includ elemente virale care dirijează expresia proteinei la niveluri ridicate în celule de la mamifere, cum ar fi promotori și/sau intensificatori derivați de la citomegalovirus (CMVj (cum ar fi promotorul/intensificatorul CMV), virusul simian 40 (SV40) (cum ar fi promotorul/intensificatorul SV40), adenovirus (de exemplu, promotorul târziu principal al adenovirusului (AdMLP)) și polioma. Pentru descrierea suplimentară a elementelor regulatoare virale și secvențele acestora, vezi de exemplu, brevet SUA 5.168.062 de Stinski, brevet SUA 4.510.245 de Bell et al. și brevet SUA 4.968.615 de Schaffner et al.
în plus la genele catenei anticorpului și secvențele regulatoare, vectorii recombinanți de expresie ai invenției pot să conțină secvențe suplimentare, cum ar fi secvențele care reglează replicarea vectorului în celule' gazdă (de exemplu, originile replicării) și gene marker selectabil. Gena marker selectabil facilitează selecția celulelor gazdă în care s-a introdus vectorul (vezi, de exemplu, brevet SUA 4.399.216, 4,634.665 și 5.179.017 toate de Axei et al.). De exemplu, gs^Șs^’7’7’5^ \[ CABINET
I · eneora ( S.H.30 ^2009-00821--
0 -02--2909-1¾¾^ marker selectabil tipice conferă rezistență la medicamente, cum ar fi G418, higromicină sau metotrexat, pe o celulă gazdă în care s-a introdus vectorul. Gene marker selectabil preferate includ gena dihidrofolat reductază (DHFR) (pentru utilizare în celule gazdă dhfr' cu selecție/amplificare metotrexat) și gena neo (pentru selecție G418).
Pentru expresia catenelor ușoară și grea, vectorului) de expresie care codifică cafenele grea și ușoară se transfectează într-o celulă gazdă prin tehnici standard. Diverse forme ale termenului transfecție sunt intenționate să cuprindă o gamă largă de tehnici folosite în mod obișnuit pentru introducerea ADN-ului exogen într-o celulă gazdă procariotică sau eucariotică, de exemplu, electroporare, precipitare fosfat de calciu, transfecție DEAE-dextran și altele. Deși teoretic este posibil să se exprime anticorpii invenției fie în celule gazdă procariotice, fie eucariotice, expresia anticorpilor în celule eucariotice și, cel mai preferat, celula gazdă de la mamifere, este cea mai preferată deoarece astfel de celule eucariotice și, în special, celule de la mamifere, sunt mai probabil decât celulele procariotice să se asemene și să secrete un anticorp pliat corespunzător și imunologic activ. Expresia procariotică a genelor anticorpului a fost raportată ca ineficientă pentru producerea cu randamente ridicate a anticorpului activ (Boss, M.A. și Wood, C.R. (1985) Immunology Today 6,:6-13) .
Celule gazdă de la mamifere, preferate pentru expresia anticorpilor recombinanți ai invenției includ celule ovariene de la hamster chinezesc (celule CHO) (incluzând celule CHO dhfr-, descrise în Urlaub și Chasin (1980) Proc. Nat 1. Acad. Sci . USA
22.:4216-4220, folosite cu un marker selectabil DHFR, de exemplu, cum s-a descris în R.J.Kaufman și P.A. Sharp (1982) Mol.Biol. 159:601-621) , celule mielomice NSO, celule COS și celule SP2. Când vectori recombinanți de expresie care codifică gene anticorp sunt introduși în celule gazdă mamifere, anticorpii sunt produși prin cultivarea celulelor gazdă pentru o perioadă de timp suficientă să permită expresia anticorpului în celulele gazz^^Wig^.
\j ( . țtrOR* I, .< V
0-2009-00321 -1 0 '02- W sau, mai preferabil, secreția anticorpului în mediul de cultură în care sunt crescute celulele gazdă. Anticorpii pot fi recuperați din mediul de cultură folosind metode standard de purificare a proteinelor.
Celulele gazdă pot fi folosite de asemenea, pentru a produce porțiuni ale anticorpilor intacți, cum ar fi fragmente Fab sau molecule scFv. Se va înțelege că variațiile privind procedura de mai sus sunt cuprinse în prezenta invenție. De exemplu, poate fi de dorit să se transfecteze o celulă gazdă cu ADN care codifică fie catena ușoară, fie catena grea (dar nu ambele) ale unui anticorp al acestei invenții. Tehnologia ADN recombinant poate fi de asemenea, folosită pentru a îndepărta o parte sau tot ADNul care codifică una sau ambele catene ușoară și grea care nu sunt necesare pentru legare la hTNFa. Moleculele exprimate de la astfel de molecule ADN scurtate, sunt de asemenea cuprinse de anticorpii invenției. Suplimentar, pot fi produși anticorpi bifuncționali în care o catenă ușoară și o catenă grea sunt ale unui anticorp al invenției și altă catenă grea și catenă ușoară sunt specifice pentru un antigen, altul decât hTNFa prin legarea încrucișată al unui anticorp al invenției la un al doilea anticorp prin metode chimice standard de legare încrucișată.
într-un sistem preferat pentru expresie recombinantă a unui anticorp, sau porțiune de legare antigen a acestuia, al invenției, un vector recombinant de expresie care codifică atât catena grea, cât și catena ușoară ale anticorpului se introduce în celule CHO dhfr- prin transfecție mediată fosfat de calciu, în vectorul recombinant de expresie recombinantă, genele catenei grea și ușoară ale anticorpului sunt fiecare legate operațional la elemente regulatoare intensificator/promotor (de exemplu, derivate de la SV40, CMV, adenovirus și altele cum ar fi un element regulator CMV intensificator/promotor AdMLP sau un element regulator SV40 intensificator/promotor AdMLP) pentru a conduce niveluri ridicate ale transcripției genelor. De asemenea, vectorul recombinant de expresie conține o genă DHFR, care permite selecția celulelor CHO care au fost trgnsfectat
Ατ 2 Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - ί Ο -02vectorul folosind selecția/amplificarea metotrexat. Celulele gazdă transformante selectate sunt lăsate pentru expresia catenelor grea și ușoară ale anticorpului și anticorpul intact se recuperează din mediul de cultură. Tehnicile biologiei moleculare standard sunt folosite pentru prepararea vectorului de expresie recombinant, transfectarea celulelor gazdă, selectarea transformanților, cultura celulelor gazdă și recuperarea anticorpului din mediul de cultură.
Din punct de vedere al celor anterioare, alt aspect al invenției aparține acidului nucleic, vectorului și compozițiilor de celule gazdă care se pot folosi pentru expresia recombinantă a anticorpilor și porțiunilor anticorp ale invenției. Secvența nucleotidică care codifică regiunea variabilă catenă ușoară D2E7 este prezentată în Figura 7 și SEQ ID NR:36. Domeniul CDR1 al LCVR cuprinde nucleotidele 70-102, domeniul CDR2 cuprinde nucleotidele 148-168 și domeniul CDR3 cuprinde nucleotidele 265291. Secvența nucleotidică care codifică regiunea variabilă catenă grea D2E7 este prezentată în Figura 8 și SEQ ID NR:37. Domeniul CDR1 al HCVR cuprinde nucleotidele 91-105, domeniul CDR2 cuprinde nucleotidele 148-198 și domeniul CDR3 cuprinde nucleotidele 295-330. Se va aprecia de către specialistul în domeniu că secvențele nucleotidice care codifică anticorpi înrudiți D2E7, sau porțiuni ale acestora (de exemplu, un domeniu CDR cum ar fi un domeniu CDR3), pot fi derivați de la secvențele nucleotidice care codifică LCVR și HCVR D2E7 folosind codul genetic și tehnicile biologiei moleculare standard.
într-o realizare, invenția asigură un acid nucleic izolat care codifică un domeniu CDR3 catenă ușoară cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:3 (adică, D2E7 VL CDR3), sau modificată de la SEQ ID NR:3 printr-o singură substituție alanină la poziția 1, 4, 5, 7, sau 8, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8, și/sau 9. Acest acid nucleic poate codifica numai regiunea CDR3, sau mai preferat, codifică o regiune variabilă catenă ușoară întreagă a c‘ SK$0 /<-2 0 0 9 - 0 0 3 2 1 - τχ
0 -02- W un LCVR având un domeniu CDR2 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:5 (adică, D2E7 VL CDR2) și un domeniu CDR1 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:7 (adică, D2E7 VL CDR1).
în altă realizare, invenția asigură un acid nucleic izolat care codifică un domeniu CDR3 catenă grea cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:4 (adică, D2E7 VH CDR3), sau modificată de la SEQ ID NR:4 printr-o singură substituție alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin 1 la 5 substituții aminoacide conservative la pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, și/sau 12. Acest acid nucleic poate codifica numai regiunea CDR3, sau mai preferat, codifică o regiune variabilă catenă grea întreagă a anticorpului (HCVR). De exemplu, acidul nucleic poate codifica un HCVR având un domeniu CDR2 care cuprinde secvența aminoacidă a SEQ ID NR:6 (adică, D2E7 VH CDR2) și un domeniu CDR1 cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:8 (adică, D2E7 VH CDR1).
în încă altă realizare, invenția asigură acizii nucleici izolați care codifică un domeniu CDR3 înrudit D2E7, de exemplu, cuprinzând o secvență aminoacidă selectată din grupul care constă din: SEQ ID NR:3, SEQ ID NR:4, SEQ ID NR:11, SEQ ID NR:12, SEQ ID NR:13, SEQ ID NR:14, SEQ ID NR:15, SEQ ID NR:16, SEQ ID NR:17, SEQ ID NR:18, SEQ ID NR:19, SEQ ID NR:20, SEQ ID NR:21, SEQ ID NR:22, SEQ ID NR:23, SEQ ID NR:24, SEQ ID NR:25, SEQ ID NR:26, SEQ ID NR:27, SEQ ID NR:28, SEQ ID NR:29, SEQ ID NR:30, SEQ ID NR:31, SEQ ID NR:32, SEQ ID NR:33, SEQ ID NR:34, și SEQ ID NR:35.
în încă altă realizare, invenția asigură un acid nucleic izolat care codifică o regiune variabilă catenă ușoară a unui anticorp cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 (adică, D2E7 LCVR). De preferință, acest acid nucleic cuprinde secvența nucleotidică a SEQ ID NR:36, deși specialistul în domeniu va aprecia că datorită degenerării codului genetic, și alte secvențe nucleotidice pot codifica secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1. Acidul nucleic poate codifica numai LCVR-ul sau poate de asemenea codifica regiunea constantă catenă ușoară, legată operațional la
LCVR. într-o realizare, acest acid nucleic este un 5
(^2 0 0 9 - 0 0 9 2 1 -ί ο -οζ-m [C]^<
recombinant de expresie.
în încă altă realizare, invenția asigură un acid nucleic izolat care codifică o regiune variabilă catenă grea a unui anticorp cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2 (adică, D2E7 HCVR). De preferință, acest acid nucleic cuprinde secvența nucleotidică a SEQ ID NR:37, deși specialistul în domeniu va aprecia că datorită degenerării codului genetic, și alte secvențe nucleotidice pot codifica secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2. Acidul nucleic poate codifica numai HCVR-ul sau poate, de asemenea, să codifice regiunea constantă catenă grea, legată operațional la HCVR. De exemplu, acidul nucleic poate cuprinde o regiune constantă IgGl sau IgG4. într-o realizare, acest acid nucleic este un vector recombinant de expresie.
De asemenea, invenția asigură vectori recombinanți de expresie care codifică atât o catenă grea a anticorpului, cât și o catenă ușoară a anticorpului. De exemplu, într-o realizare, invenția asigură un vector recombinant de expresie care codifică:
a) o catenă ușoară a unui anticorp având o regiune variabilă cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:1 (adică, D2E7 LCVR); Și
b) o catenă grea a unui anticorp având o regiune variabilă cuprinzând secvența aminoacidă a SEQ ID NR:2 (adică, D2E7 HCVR).
De asemenea, invenția asigură celule gazdă în care s-au introdus unul sau mai mulți vectori recombinanți de expresie. De preferință, celula gazdă este o celulă gazdă de la mamifer, mai preferat, celula gazdă este o celulă CHO, o celulă NSO, sau o celulă COS.
încă suplimentar, invenția asigură o metodă de sinteză a unui anticorp recombinant uman al invenției prin cultivarea unei celule gazdă a invenției într-un mediu de cultură adecvat până când se sintetizează un anticorp recombinant uman al invenției. Metoda poate cuprinde în plus, izolarea anticorpului uman recombinant din mediul de cultură.
III. Selecția anticorpilor umani recombinanți cabine; V ίλ- 2 Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - î ο -02-»lc]9Τ
Anticorpi recombinanți umani ai invenției suplimentar față de D2E7 sau anticorpi înrudiți D2E7 descriși aici pot fi izolați în cercetarea unei bănci de anticorpi recombinanți combinatoriali, de preferință, o bancă care prezintă un fag scFv, preparată folosind cADN-uri VL și VH preparate de la mARN din limfocite umane. Metodologii pentru prepararea și cercetarea de astfel de bănci sunt cunoscute în domeniu. Suplimentar, la trusele accesibile comercial pentru generarea băncilor care prezintă fag (de exemplu, Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, catalog nr. 27-9400-01; și kit-ul de prezentare fag Stratagene SurfZAP™, catalog nr. 240612), exemple de metode și reactivi favorabili în mod deosebit pentru folosire în generarea și cercetarea băncilor care prezintă anticorp pot fi găsite în, de exemplu, Ladner et al. brevet US nr. 5.223.409; Kang et al. Publicare PCT nr. WO 92/19619; Dower et al publicare PCT nr. WO 91/17271; Winter et al publicare PCT nr. WO 92/20791; Markland et al., publicație PCT nr. WO 92/15679; Breitling et al. Publicare PCT nr. WO 93/01288; McCafferty et al. Publicare PCT nr. WO 92/01047; Garrard et al., publicare PCT nr. WO 92/09690; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; McCafferty et al., Mature (1990) 348:552-554; Friffithd et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al.(1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson et al. (1991) Mature 352:624 -628; Gram et al.(1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al.(1991) Bio/Technology 9: 1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acids Res 19: 4133-4137; și Barbas et al. (1991) PNAS 88: 7 97 8-7 982 .
într-o realizare preferată, pentru izolarea anticorpilor umani cu afinitate crescută și o constantă a ratei de detașare redusă pentru hTNFa, s-a folosit mai întâi un anticorp murin anti-hTNFa având afinitate crescută și o rată de detașare redusă pentru hTNFa (de exemplu, MAK 195, hibridom pentru care există depozitul cu numărul ECACC 87 050801) pentru selectarea
^2009-00921-î o -o?36 legare similară față de hTNFa, folosind epitop de supraimprimare, sau selecția ghidată, metode descrise în Hoogenboom et al. Publicația PCT WO 93/06213. Băncile de anticorp folosite în această metodă sunt de preferință bănci scFv preparate și cercetate cum s-a descris în McCafferty et al., publicația PCT WO 92/011047, McCafferty et al., Nature (1990) 348:552-554; și Griffiths et al., (1993) EMBO J 12:725-734. Băncile de anticorp scFv sunt cercetate de preferință folosind TNFa uman recombinant ca antigen.
O dată ce segmentele umane inițiale VL și VH selectat, sunt realizate experimente amestec și împerechere, în care diferite perechi ale segmentelor VL și Vh inițiale sunt cercetate pentru legare hTNFa pentru a selecta combinații pereche preferată VL/VH. Suplimentar, pentru a îmbunătăți afinitatea și/sau constanta ratei detașării pentru legare hTNFa, segmentele VL și VH ale perechi(lor) VL/VH preferate pot fi mutate randomic, de preferință în regiunea CDR3 a VH și/sau VL, într-un proces analog procesului de mutație somatică in vivo responsabil pentru maturarea afinității anticorpilor în timpul răspunsului imun natural. Această maturare a afinității in vitro se poate realiza prin amplificarea regiunilor VH și VL folosind primeri PCR complementari la CDR3 VH sau respectiv VL CDR3, primeri care au fost fixați cu un amestec randomic de 4 baze nucleotidice la anumite poziții astfel încât produsele PCR rezultate codifică segmente VH și VL în care mutațiilor randomice au fost introduse în regiunile CDR3 VH și/sau VL. Aceste segmente VH și VL mutate randomic pot fi recercetate pentru legare la hTNFa și secvențele care prezintă activitate ridicată și rată de detașare scăzută pentru hTNFa pot fi selectate.
Secvențele aminoacide ale catenelor grea și ușoară ale anticorpului pot fi comparate la secvențele aminoacide ale catenei grea și ușoară ale liniei germinale. în cazul unde anumite resturi ale cadrului catenelor selectate VL și/sau VH diferă de configurația liniei germinale (de exemplu, ca un rezultat al mutației somatice a genelor imunoglobulinei folos^ș'vîTT^x ? ! CABINET V k* ενγοβα i ί 'λ 3.H.C // ^“2009-00921-ί ο -uz-m pentru a prepara banca de fag), se poate dori să se mute înapoi resturile modificate ale cadrului ale anticorpilor selectați față de configurația liniei germinale (adică, schimbarea secvențelor aminoacide ale cadrului anticorpilor selectați astfel încât ele sunt aceleași ca secvențele aminoacide ale cadrului liniei germinale). Astfel de mutație înapoi (sau aliniere germinală) a resturilor cadrului se poate realiza prin metodele bilogiei moleculare standard pentru introducerea mutațiilor specifice (de exemplu, mutageneză dirijată în sit; mutageneză mediată PCR, și altele).
După cercetarea și izolarea unui anticorp anti-hTNFa al invenției din banca prezentată de imunoglobulină recombinantă, acidul nucleic care codifică anticorpul selectat poate fi recuperat din seria prezentată (de exemplu, de la genomul fagului) și subclonat în alți vectori de expresie prin tehnici ADN recombinant standard. Dacă se dorește, acidul nucleic poate fi manipulat suplimentar pentru a crea alte forme anticorp ale invenției (de exemplu, legat la acid nucleic care codifică domenii suplimentare ale imunoglobulinei, cum ar fi regiuni constante suplimentare). Pentru a exprima un anticorp uman recombinant izolat prin cercetarea unei bănci combinatoriale, ADN-ul care codifică anticorpul este donat într-un vector recombinant de expresie și introdus în celule gazdă mamifere, cum s-a descris în detalii suplimentare în Secțiunea II de mai sus.
IV. Compoziții și administrare farmaceutică
Anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției pot fi încorporate în compoziții farmaceutice pentru administrare la un subiect. De obicei, compoziția farmaceutică cuprinde un anticorp sau porțiune anticorp a invenției și un purtător acceptabil farmaceutic. Așa cum s-a folosit aici, purtător acceptabil farmaceutic include oricare și toții solvenții, medii de dispersie, acoperiri, agenți antibacterieni și antifungici, agenți izotonici și de întârziere a absorpției, și altele care
(Κ2 Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - I Ο -02- 2Μ9farmaceutic includ unul sau mai mulți dintre apă, soluție salină, soluție salină tamponată fosfat, dextroză, glicerol, etanol și altele, precum și combinații ale lor. în numeroase cazuri, va fi preferat să se includă agenți izotonici, de exemplu, zaharuri, polialcooli ca manitol, sorbitol, sau clorură de sodiu în compoziție. Purtători acceptabili farmaceutic pot să cuprindă suplimentar cantități minore de substanțe auxiliare cum ar fi agenți de umectare sau emulgatori, conservanți sau tampon, care intensifică durata termenului de valabilitate, sau eficiența anticorpului sau porțiunii anticorp.
Compozițiile acestei invenții pot fi într-o diversitate de forme. Acestea includ, de exemplu, forme de dozaj lichide, semisolide și solide cum ar fi soluții lichide (de exemplu, soluții injectabile sau infuzabile), dispersii sau suspensii, tablete, pilule, pulberi, lipozomi și supozitoare. Forma preferată depinde de modul intenționat de administrare și aplicare terapeutică. Compoziții tipice preferate sunt sub formă de soluții injectabile sau infuzabile, cum ar fi compoziții similare celor folosite pentru imunizarea pasivă a oamenilor cu alți anticorpi. Modul preferat de adminstrare este parenteral (de exemplu, intravenos, subcutanat, intraperitoneal, intramuscular). într-o realizare preferată, anticorpul se administrează prin infuzie sau injectare intravenoasă. în altă realizare preferată, anticorpul se administrează prin injectare intramusculară sau subcutanată.
Compoziții terapeutice tipice trebuie să fie sterile și stabile în condițiile de fabricare și depozitare. Compoziția poate fi formulată ca o soluție, microemulsie, dispersie, lipozom, sau altă structură ordonată adecvată pentru concentrații crescute ale medicamentului. Soluțiile injectabile sterile pot fi preparate prin încorporarea compusului activ (adică, anticorp sau porțiune anticorp) în cantitatea cerută dintr-un solvent corespunzător cu unul sau o combinație de ingrediente enumerate mai sus, după cum este necesar, urmat de sterilizare prin filtrare. în general, dispersiile sunt preparate fie p.
^2009-00821-1 încorporarea compusului activ într-un vehicul steril care conține un mediu de dispersie de bază și necesită alte ingrediente dintre cele enumerate mai sus. în cazul pulberilor sterile, pentru prepararea soluțiilor injectabile sterile, metodele preferate de preparare sunt uscarea sub vid și liofilizarea care dă o pulbere a ingredientului activ plus orice ingredient suplimentar dorit dintr-o soluție filtrată steril anterior a acestuia. Fluiditatea corespunzătoare a unei soluții poate fi menținută, de exemplu, prin folosirea unei acoperiri cum ar fi lecitina, prin menținerea mărimii cerute a particulei în cazul dispersiei și prin folosirea surfactanților. Absorbția prelungită a compozițiilor injectabile poate fi obținută prin includerea în compoziție a unui agent care întârzie absorpția, de exemplu, săruri monostearat și gelatină.
Anticorpii și porțiunile anticorp ale prezentei invenții pot fi administrate printr-o diversitate de metode cunoscute în domeniu, deși pentru numeroase aplicații terapeutice ruta/modul preferat de administrare este injectarea intravenoasă sau infuzia. Așa cum va fi apreciat de către specialistul în domeniu, ruta și/sau modul de adminsitrare vor varia depinzând de rezultatele dorite. în anumite realizări, compusul activ poate fi preparat cu un purtător care va proteja compusul împotriva eliberării rapide, cum ar fi o formulare cu eliberare controlată, incluzând împlânte, plasturi transdermali și sisteme de eliberare microîncapsulate. Pot fi folosiți polimeri biodegradabili, biocompatibili, cum ar fi acetat de etilenvinil, polianhidride, acid poliglicolic, colagen, poliortoesteri și acid polilactic. Numeroase metode pentru prepararea de asemenea formulări sunt brevetate sau cunoscute în general celor cu pregătire în domeniu.
Vezi, de exemplu, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
în anumite realizări, un anticorp sau porțiuni anticorp ale invenției pot fi administrate oral, de exemplu, cu un diluent inert, sau un purtător comestibil asimilabil. Compusul (și alte ingrediente, cochilie de dacă se dorește) poate fi închis de gelatină dură sau moale, comprimată asemenea, într-o
Aj-2 0 0 9 - 0 0 9 2 1 - -
0 -02- 200l· încorporată direct în dieta subiectului. Pentru administrare terapeutică orală, compușii pot fi încorporați cu excipiente și folosiți sub formă de tablete ingerabile, tablete bucale, gelule, capsule, elixire, suspensii, siropuri, cașete și altele. Pentru a administra un compus al invenției altfel decât administrare parenterală, poate fi necesar să se acopere compusul cu, sau să se coadministreze compusul cu, un material pentru prevenirea inactivării sale.
De asemenea, în compoziție pot fi încorporați compuși activi suplimentar. în anumite realizări, un anticorp sau porțiune anticorp a invenției este coformulat cu și/sau cooadministrat cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari, care sunt utili pentru tratarea tulburărilor în care activitatea TNFa este dăunătoare. De exemplu, un anticorp anti-hTNFa sau o porțiune de anticorp al invenției poate fi coformulat și/sau coadministrat cu unul sau mai mulți anticorpi suplimentari, care se leagă la alte ținte (de exemplu, anticorpi care leagă alte citokine, sau care se leagă la moleculele suprafeței celulare), una sau mai multe citokine, receptor TNFa solubil (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 94/06476) și/sau unul sau mai mulți agenți chimici care inhibă producerea sau activitatea hTNFa (cum ar fi derivați ciclohexan-iliden cum s-au descris în publicația PCT WO 93/19751). în plus, unul sau mai mulți anticorpi ai invenției pot fi folosiți în combinație cu 2 sau mai mulți agenți terapeutici anteriori. Astfel de terapii combinate pot să utilizeze avantajos dozaje mai scăzute ale agenților terapeutici administrați evitând astfel toxicității posibile sau complicațiile asociate cu diverse monoterapii.
Exemple nelimitative de agențți terapeutici pentru artrită reumatoidă cu care un anticorp sau porțiune anticorp a invenției poate fi combinat include următoarele: medicamente(e) antiinflamatoare nesteroide (NSAID); medicament(e) antiinflamatoare supresive ale citokinei (CSAID); CDP-561/BAY-103356 (anticorp umanizat anti-TNFa; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp himeric anti-TNFa; Centocor) ; 75 kdTNFR-IgG (proteină de f v-x Lj \\//
CV c
Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - 1 Ο-Ο2-28Η^®ΜΤ kD TNF receptor-IgG; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis &
Rheumatism (1994) Voi.37, S295; J.Ivest.Med. (1996) Voi.44:235A);
kdTNFR-IgG (proteină de fuziune 55 kD TNF receptor-IgG; Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.1/SB210396 (anticorp anti-CD4 primatizat neepuizat; IDEC/SmithKline; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1995) Voi.38, S185(; DAB 486-IL-2 și/sau DAB 389-IL-2 (proteine de fuziune IL-2; Seragen; vezi de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1993) Voi.36, 1223); Anti-Tac (anti-IL2Ra umanizate; Protein Design Labs/Roche); IL-4 (citokină antiinflamatorie; DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; IL-10 recombinant, citokină antiinflamatorie; DNAX/Schering); IL-4; agoniști IL-10 și/sau IL-4 (de exemplul, anticorpi agoniști); IL1RA (antagonist receptor IL-1; Synergen/Amgen); TNF-bp/s-TNFR (proteină de legare TNF solubilă; vezi de exemplu, Arthritis &
Rheumatism (1996) Voi.39, nr. 9(supliment); S284; Amer. J.
Physiol.-Heart and Circulatory Physiology (1995) Voi.268, p.3742); R973401( inhibitor fosfodiesterază tip IV; veri, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi.39, nr. 9(supliment),S282) ; MK.966 (inhibitor COX-2; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi.39, nr.9(supliment),S81); Iloprost (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi.39, nr.9(supliment), S82); metotrexat; talidomidă (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 3_9, nr . 9 ( supliment), S282 ) și medicamente talidomidă legată (de exemplu, Celgen); leflunomidă (inhibitori citokjnă și antiinflamatori; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996)
Voi. 3_9, nr . 9 (supliment) , S131; Inflammation Research (1996)
Voi.45, p.103-107); acid tranexamic (inhibitor al activității plasminogen; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 39 , nr . 9(supliment), S284); T-614(inhibitor citokină; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 39, nr. 9(supliment),S282) ; prostaglandin El (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 39, nr. 9 (supliment) , S282) ; Tenidap (medicament nesteroid antiinflamator; vezi, de exemplu,
Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 39, nr. 9 ( supliment), S2 8 0 (Κ-2 Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - ί 0-02-888^00^
Naproxen(medicament nesteroid antiinflamator; vezi, de exemplu, Neuro Report (1996) Voi.7, p.1209-1213); Meloxicam (medicament nesteroidal antiinflamator); Ibuprofen(medicament nesteroidal antiinflamator); Piroxicam (medicament nesteroidal antiinflamator); Diclofenac (medicament nesteroidal antiinflamator); Indometacin (medicament nesteroidal antiinflamator);
Sulfasalazină (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996)
Voi. 3 9, nr. 9 (supliment) , S281; Azatioprină (vezi, de exemplu,
Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 39. nr. 9 (supliment) , S281); inhibitor ICE (inhibitor al enzimei interleukin-ΐβ enzimă de acoperire); inhibitor zap-70 și/sau Ick (inhibitor al tirozin kinaza zap-70 sau Ick); inhibitor VEGF și/sau inhibitor VEGF-R (inhibitori al factorului de creștere vascular al celulei endoteliale sau receptor factor de creștere vascular al celulei endoteliale; inhibitori ai angiogenezei) ; medicamente corticosteroide antiinflamatorii (de exemplu, SB203580); inhibitori TNF-convertază; anticorpi anti-IL-12; interleukin-11 (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 39.
nr.9(supliment), S296); interleukin-13 (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 3 9, nr. 9 (supliment) , S308); inhibitori interleukin-17 (vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1996) Voi. 3 9, nr. 9 (supliment) , S120); aur; penicilamină; clorochină; hidroxiclorochină; clorambucil; ciclofosfamidă; ciclosporină; iradiere totală limfoid; globulină antitimocit; anticorpi anti-CD4; toxine-CD5; peptide administrate oral și colagen; lobenzarit disodiu; Cytokine Regulating Agents (CRA-uri ( HP228 și HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); oligodeoxinucleotidă fosforotioat antisens ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); receptor 1 complement solubil (TP10; T Cell Sciences, Inc.); prednison; orgotein; glicosaminoglican polisulfat; minociclină; anticorpi anti-IL2R; lipide marine și botanice (acizi grași din pește și din semințe de plante; vezi, de exemplu, DeLuca et al.(1995) Theum.Dis.Clin.North Am. 21:759777); auranofin; fenilbutazonă; acid meclofenamic; acid flufenamic; globulin intravenos imun; zileuton;
Ιλ* 2009-00921 - -
0 -02- W (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamicin); amipriloză (terafectin); cladribină (2-clorodeoxiadenozin); și azaribină.
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru boala inflamatorie a intestinului cu care un anticorp, sau porțiune anticorp a invenției pot fi combinate, includ următoarele; budenozidă; factorul de creștere epidermal; corticosteroizi; ciclosporină, sulfasalazină; aminosalicilați; 6-mercaptopurină; azatioprină; metronidazol; inhibitori lipoxigenază; mesalamină; olsalazin; balsalazidă; antioxidanți; inhibitori tromboxan; antagoniști receptor IL-1; anticorpi monoclonali anti-IL-Ιβ; anticorpi monoclonali anti-IL-6; factori de creștere; inhibitori elastază; compuși piridinil-imidazol; CDP-571/BAY-10-3356 (anticorp anti-TNFa umanizat; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp himeric anti-TNFa; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 75 kD; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Voi. 37 , S295); J. Invest :Med (1996) Voi .44, 235A); 55 kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 55 kD; Hoffmann-LaRoche) ; interleukin-10 (SCH 52000; Schering Plough); IL-4; agoniști IL-10 și/sau IL-4 (de exemplu, anticorpi agonisi); interleukin-11; promedicamente glucoronid- sau dextran-conjugate ale prednisolin, dexametasonă sau budezonidă; oligodeoxinucleotide fosforotioat ICAM-1 antisens (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.); receptor 1 complement solubil (ΤΡΙΟ; T Cel Sciences, Inc.); mesalazină cu eliberare scăzută; metotraxat; antagoniști ai facotrului de activare a plachetului (PAF); ciprofloxacin; și lignocaină.
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru scleroză multiplă cu care un anticorp, sau porțiune anticorp a invenției poate fi combinat include următoarele: corticosteroizi, prednisolin; metilprednisolon; azatioprin; ciclofosfamidă; ciclosporină; metotrexat;. 4-aminopiridină; tizanidină; interferon-țla (Avonex™; Biogen); interferon-țlb (Betaseron™; Chiron/Berlex); Copolimer 1 (Cop-1; Copaxone™; Teva Pharmaceutical Industries, Inc); oxigen hiperbatic;
2009-00821 - - fy î ο -ο?44 imunoglobulină intravenoasă; clabribin; CDP-571/BAY-10-3356 (anticorp anti-TNFa umanizate; Celltech/Bayer) ; cA2(anticorp anti-TNFa himeric; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 75 kD; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Voi. 37 , S295; J. Invest .Med. (1996) Voi .44, 235A); 55 kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 55 kD; Hoffmann-LaRoche); IL-10; IL-4; și agoniști IL-10 și/sau IL-4 (de exemplu, anticorpi agonist).
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru sepsie cu care un anticorp, sau porțiune anticorp a invenției poate fi combinat include următoarele: soluții saline hipertonice; antibiotice; gamma globulină intravenoasă; hemofiltrare continuă: carbapeneme (de exemplu, meropenem); antagoniști de citokine precum TNFa, IL-Ιβ, IL-6 și/sau IL-8; CDP-571/CAY-10-3356 (anticorp anti-TNFa umanizat; Celltech/Bayer); cA2(anticorp antiTNFa himeric; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 75 kD; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Voi. 37 , S295; J. Invest .Med. (1996) Voi. 44, 235A); 55 kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 55 kD; Hoffmann-LaRoche);agenți de reglare citokină (CRA-uri) HO228 și HP466 (Houghten Pharmaceuticals, Inc.); SK&F 107647 (peptidă moleculară ușoară; SmithKline Beecham); guanilhidrazonă CNI-1493 tetravalentă (Picower Institute); factorul inhibitor al căii țesutului (TFPI; Chiron) PHP (hemoglobină modificată chimic; APEX Bioscience); chlaori de fier și chelați, care includ complex acid dietilentriamin pentaacetic-fier (III) (DTPA iron(III); Molichem Medicines); lizofilină (metilxantină sintetică cu moleculă mică; Cell Therapeuties, Inc.); PGG-Glucan (pi,3glucan solubil apos; Alpha-Beta Technology); apolipoproteină A-l recosntituită cu lipide; acizi chiral hidroxamici (antibacterieni sintetici care inhibă biosinteza lipidei A); anticorpi anti-endotoxină; E5531 (antagonist sintetic lipidă A; Eisai America, Inc.); rBPI. (fragment recombinant N-terminal creșterebactericid/permeabilitate); endotoxină (SAEP; BiosYnth Research al proteinei umane de și peptide sintetice anti-
(Λτ 2 Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - - ί ’^ ί 0 -02- 2βΰ
Exemple nelimitative de agenți terapeutici pentru sindromul bolii respiratorii la adult (ARDS) cu care un anticorp, sau porțiune anticorp a invenției poate fi combinată includ următoarele: anticorpi anti-IL-8; terapie de înlocuire agent de suprafață; CDP-57l/BAY-10-3356 (anticorp anti-TNFa umanizat; Celltech/Bayer); cA2 (anticorp anti-TNFa himeric; Centocor); 75 kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 75 kD; Immunex; vezi, de exemplu, Arthritis & Rheumatism (1994) Voi. 37, S295; J. Invest.Med. (1996) Voi.4.4, 235A) ; și 55kdTNFR-IgG (proteină de fuziune TNF receptor-IgG 55 kD; Hoffmann-LaRoche).
Utilizarea anticorpilor, sau porțiunilor anticorp ai invenției în combinație cu alți agenți terapeutici s-a discutat suplimentar în subsecțiunea IV.
Compozițiile farmaceutice ale invenției pot include o cantitate eficientă terapeutic sau o cantitate eficientă profilacticdintr-un anticorp sau porțiune anticorp a invenției. O cantitate eficientă terapeutic se referă la o cantitate eficientă, la dozaje și pentru perioade de timp necesare, pentru a obține rezultatul terapeutic dorit. O cantitate eficientă terapeutic a anticorpului sau porțiunii de anticorp poate varia conform factorilor cum ar fi starea de boală, vârstă, sex, și greutatea individului, și capacitatea anticorpului sau porțiunii anticorp de a provoca răspunsul dorit la individ. De asemenea, o cantitate eficientă terapeutic este una în care orice efecte toxice sau dăunătoare ale anticorpului sau porțiunii anticorp sunt depășite și sunt terapeutic benefice. O cantitate eficientă profilactic se referă la o cantitate eficientă, la dozaje și pentru perioade de timp necesare, pentru a atinge rezultatul profilactic dorit. De obicei, deoarece o doză profilactică se folosește la subiecți înainte sau la un stadiu mai timpuriu al bolii, cantitatea eficientă terapeutic va fi mai mică decât cantitatea eficientă terapeutic.
Regimurile de dozaj pot fi ajustate pentru a asigura răspunsul optim dorit (de exemplu, un răspuns terapeutic sau profilactic). De exemplu, poate fi administrat un sjngur
(X- 2 Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - 1 0 -02-w fi administrate câteva doze divizate în timp sau doza poate fi redusă sau crescută proporțional după cum este indicat de exigențele situației terapeutice. Este avantajos în mod special să se formuleze compoziții parenterale sub formă de doze unitate pentru ușurința administrării și uniformitatea dozajului. Forma de doză unitate așa cum s-a folosit aici se referă la unități fizice concrete potrivite ca dozaje unitare pentru tratarea subiecților mamifer; fiecare unitate conține o cantitate predeterminată a compusului activ calculată pentru a produce efectul terapeutic dorit în asociere cu purtătorul farmaceutic necesar. Descrierea pentru formele unitate dozată ale invenției sunt dictate de și direct dependent de (a) caracteristicile unice ale compusului activ și de efectul terapeutic și profilactic particular care trebuie atins, și (b) limitările inerente în domeniul compoundării cum ar fi un compus activ pentru tratamentul sensibilității la indivizi.
Un domeniu exemplificator, nelimitativ pentru o cantitate eficientă terapeutic și .profilactic a unui anticorp sau porțiune de anticorp al invenției este 0,1-20 mg/kg, mai preferat 1-10 mg/kg. Este de remarcat că valorile dozajului pot varia cu tipul și severitatea condiției care trebuie ameliorată. Este de înțeles în plus că pentru orice subiect particular, regimurile specifice de dozaj vor fi ajustate în timp conform nevoii individuale și aprecierii profesionale a persoanei care administrează sau supervizează administrarea compozițiilor, și că domeniile de dozaj menționate aici sunt numai exemplificatoare și nu intenționează să limiteze întinderea sau practica compoziției revendicate.
IV. Utilizări ale anticorpilor invenției
Dată fiind capacitatea lor de a se lega la hTNFa, anticorpii anti-hTNFa, sau porțiuni ale acestora, ale invenției se pot folosi pentru a detecta hTNFa (de exemplu, într-o probă biologică cum ar fi ser sau plasmă), folosind un imunotest convențional, cum ar fi analizele enzimă legată la imunosorbent (ELIS^
Μ
Ο Ο 9 - ο ο 9 2 1 . _ ί Ο -02- ?6θ9 1¾ radioimunotest (RIA) sau imunohistochimia țesutului. Invenția asigură o metodă pentru detectarea hTNFa intr-o probă biologică cuprinzând contactarea unei probe biologice cu un anticorp, sau porțiune de anticorp, a invenției și detectarea fie a anticorpului (sau porțiunii anticorp) legat la hTNFa sau anticorp nelegat (sau porțiune de anticorp), prin aceasta detectând hTNFa intr-ο probă biologică. Anticorpul este direct sau indirect marcat cu o substanță detectabilă pentru a facilita detectarea anticorpului legat sau nelegat. Substanțe detectabile adecvate includ diverse enzime, grupări prostetice, materiale fluorecente, materiale luminiscente și materiale radioactive. Exemple de enzime corespunzătoare includ peroxidază de la hrean, fosfatază alcalină, β-galactozidază, sau acetilcolinesterază; exemple de complexe de grupări prostetice corespunzătoare includ streptavidină/biotină și avidină/biotină; exemple de materiale fluorescente corespunzătoare includ umbelliferonă, fluoresceină, izotiocianat de fluoresceină, rodamină, diclorotriazinilamină, fluoresceină, clorură de dansil sau ficoeritrina; un exemplu de material luminiscent include luminolul; și exemple de material radioactiv corespunzător include 125I, 131I, 35S sau 3H.
Alternativ la marcarea anticorpului, hTNFa poate fi cercetat în fluide biologice printr-un imunotest de competiție folosind standarde rhTNFa marcate cu o substanță detectabilă și un anticorp anti-hTNFa nemarcat. în această analiză, proba biologică, standardele rhTNFa marcate și anticorpul anti-hTNFa sunt combinate și se determină cantitatea de standard rhTNFa legată la anticorpul nemarcat. Cantitatea de hTNFa dintr-o probă biologică este invers proporțională cantității de standard rhTNFa marcat legată la anticorp anti-hTNFa.
Anticorpul D2E7 al invenției se poate folosi de asemenea pentru detectarea TNFa de la alte specii decât oameni, în special TNFa de la primate (de exemplu, cimpanzeu, babuin, sanguin, cynomolgus și rhesus), porc și șoarece, deoarece D2E7 se poate lega la fiecare dintre aceste TNFa (cum s-a discutat suplimentgx— în Exemplul 4, subsecțiunea E) . ' 'λ . Α γ ·
CX12009-00321 -ί ο -02- 2008Anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției sunt capabile să neutralizeze activitatea hTNFa atât in vitro cât și in vivo (vezi Exemplul 4). Mai mult, cel puțin unii dintre anticorpii invenției, cum ar fi D2E7, pot neutraliza activitatea TNFa de la alte specii. în conformitate anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției pot fi folosite pentru inhibarea activității TNFa, de exemplu intr-o cultură de celule care conține hTNFa, la subiecți umani sau alți subiecți mamiferi care au TNFa cu care anticorpul invenției reacționează încrucișat (de exemplu, cimpanzeu, babuin, sanguin, cynomolgus și rhesus, porc sau șoarece). într-o realizare, invenția asigură o metodă pentru inhibarea activității TNFa cuprinzând contactarea TNFa cu un anticorp sau porțiune anticorp a invenției astfel încât activitatea TNFa este inhibată. De preferință TNFa este TNFa uman. De exemplu, într-o cultură de celule care conține, sau este suspectată că ar conține hTNFa, se poate adăuga un anticorp sau porțiune anticorp a invenției la mediul de cultură pentru a inhiba activitate a hTNFa din cultură.
în altă realizare, invenția asigură o metodă pentru inhibarea activității TNFa la un subiect care suferă de o tulburare în care activitatea TNFa este dăunătoare. TNFa a fost implicat în patofiziologia unei game largi de tulburări (vezi de exemplu, Moeller, A., et al. (1990) Citokine 2/-162-169; brevet SUA 5.231.024 pentru Moeller et al.; publicația de brevet european 260 610 de Moeller, A.). Invenția asigură metode pentru activitatea TNFa la un subiect care suferă de o astfel de tulburare, metodă care cuprinde administrarea la subiect a unui anticorp sau porțiune anticorp a invenției astfel că activitatea TNFa din subiect este inhibată. De preferință, TNFa este uman și subiectul este un subiect uman. Alternativ, subiectul poate fi un mamifer care exprimă un TNFa cu care un anticorp al invenției reacționează încrucișat. încă, în plus, subiectul poate fi un mamifer în care s-a introdus hTNFa (de exemplu, prin administrarea hTNFa sau prin expresia unei transgene hTNFa). Un anticorp al invenției poate fi administrat la un subiect ΧΧΧ'Χχ * // * A
Π CABINET '
V ENfORA h < V «,/ ^2009-00321-1 pentru scopuri terapeutice (discute suplimentar mai jos). Mai mult, un anticorp al invenției poate fi administrat la un mamifer care nu este om care exprimă un TNFot cu care anticorpul reacționează încrucișat (de exemplu, o primată, porc sau șoarece) pentru scopuri veterinare sau ca un model animal al bolii umane. Cu privire la cele din urmă, astfel de modele animale pot fi utile pentru evaluarea eficacității terapeutice a anticorpilor invenției (de exemplu, prin testarea dozajelor și duratelor de timp pentru administrare).
Așa cum s-a folosit aici, termenul o tulburare în care activitatea TNFa este dăunătoare intenționează să includă boli și alte tulburări în care prezența TNFa într-un subiect care suferă de tulburare s-a dovedit a fi sau este suspectată ca fiind responsabilă pentru patofiziologia tulburării sau un factor care contribuie la o înrăutățire a tulburării. în conformitate, o tulburare în care activitatea TNFa este dăunătoare este o tulburare în care inhibarea activității TNFa este așteptată să amelioreze simptomele și progresul tulburării. Asemenea tulburări pot fi evidențiate, de exemplu, printr-o creștere în concentrația de TNFa într-un fluid biologic al subiectului care suferă de tulburare (de exemplu, o creștere în concentrația de TNFa în ser, plasmă, fluid sinovial, etc. al subiectului), care se poate detecta de exemplu, folosind un anticorp anti-TNFa cum s-a descris mai sus. Există numeroase exemple de tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare. Utilizarea anticorpilor sau porțiunilor de anticorp ale invenției în tratamentul tulburărilor specifice este discutat suplimentar mai jos:
A. Sepsie
Factorul necrozei tumorii are un rol stabilit în patofiziologia sepsiei, cu efecte biologice care includ hipotensiune, supresie miocardică, sindrom de scurgere vasculară, necroza organelor, stimularea eliberării mediatorilor toxici secundari și activarea cascadei coagulării (vezi, de exemplu,
Ck - 2 009-00921--10-02-1997-50
5.231.024 et al.; publicația de brevet european 260 610 Bl de Moeller, A.; Tracey, K.J. și Cerami, A. (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503; russel, D și Thompson, R.C. (1993) Curr. Opin. Biotech. 4.:714-721). în conformitate, anticorpii umani și porțiunile de anticorp, ale invenției ale invenției se pot folosi pentru tratarea sepsiei în oricare dintre manifestările sale clinice, incluzând șoc septic, șoc endotoxic, sepsie gram negativă și sindromul șocului toxic.
în plus, pentru tratarea sepsiei, un anticorp anti-hTNFa, o porțiune de anticorp, a invenției se poate coadministra cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari care pot ameliora suplimentar sepsia, cum ar fi un inhibitor interleukină-1 )precum cei descriși în publicațiile PCT WO 92/16221 și WO 92/17583), citokina interleukină-6 (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 93/11793) sau un antagonist al factorului de activare plachetară (vezi, de exemplu, publicația cererii de brevet european EP 374 510). Alte terapii combinate pentru tratamentul sepsiei sunt discutate suplimentar în subsecțiunea III.
Suplimentar, într-o realizare preferată, un anticorp antihTNFa sau porțiune de anticorp a invenției se administrează la un subiect uman într-un subgrup de pacienți cu sepsie care au o concentrație în ser sau plasmă de IL-6 de peste 500 pg/ml, și mai preferat 1000 pg/ml, la momentul tratamentului (vezi, publicația PCT WO 95/20978 de Daum, L., et al.).
B. Boli autoimune
Factorul necrozei tumorii a fost implicat ca jucând un rol în patofiziologia unei diversități de boli autoimune. De exemplu, TNFa a fost implicat în activarea inflamării țesutului care produce distrugerea articulației în artrita reumatoidă (vezi, de exemplu, Moeller, A. et al., (1990) Cytokine 2:162-169; brevet SUA 5.231.024 de Moeller et al.; publicația brevetului european 260.610 Bl de Moeller, A.; Tracey și Cerami, supra; Arend,W.O. și Dayer, J-M . (1995) Arth.RHeum, 3J3:151-160; Fava,R.A.,et
O O 9 - O O 3 2 1 - -1 O - O 2 - 1 3 9 7 - 51 al. (1993) Clin.Exp. Immunol. 94,:261-266). De asemenea, TNFa a fost implicat în promovarea morții celulelor insulei și în medierea diabetului rezistent la insulină (vezi, de exemplu, Tracey și Cerami, supra; publicație PCT WO 94/08609). De asemenea, TNFa a fost implicat în medierea citotoxicității față de oligodendrocite și inducerea plăcii inflamatorii în scleroza multiplă (vezi, de exemplu, Tracey și Cerami, supra). Anticorpi himerici și umanizați murin anti-hTNFa au fost supuși testării clinice pentru tratamentul artritei reumatoide (vezi, de exemplu, Elliott, M.J., et al. (1994) Lancet 344:1125-1127; Elliott, M.J., et al. (1994) Lancet 344:1105-1110; Rankin, E.C.,et al.(1995)Br. J. Rheumatoi. 34:334-342).
Anticorpi umani și porțiuni de anticorp ale invenției pot fi folosite pentru tratarea bolilor autoimune, în special a celor asociate cu inflamație, incluzând artrita reumatoidă, spondilita reumatoidă, osteoartrita și artrita gutoasă, alergie, scleroză multiplă, diabet autoimun, uveită autoimună și sindrom nefrotic. De obicei, anticorpul sau porțiunea de anticorp, se administrează sistemic, deși pentru anumite tulburări, administrarea locală a anticorpului sau porțiunii de anticorp la un sit al inflamării poate fi benefică (administrare locală în articulații în artrita reumatoidă sau aplicare topică la ulcere diabetice, singur sau în combinație cu un derivat ciclohexan-iliden cum s-a descris în publicația PCT WO 93/19751) . Un anticorp, sau porțiune de anticorp a invenției se poate administra cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari utili în tratamentul autoimune, cum s-a discutat suplimentar în subsecțiunea III.
C. Boli infecțioase
Factorul necrozei tumorii a fost implicat în medierea efectelor biologice observate într-o diversitate de boli infecțioase. De exemplu, TNFa a fost implicat în medierea inflamării creierului și trombozei capilare și infarctului în malarie. De asemenea, inflamării creierului, hTNFa a inducerea fost implicat în medierea distrugerii barierei
creier, declanșarea sindromului de șoc septic și activarea infarctului venos în meningită. De asemenea, TNFa a fost implicat în inducerea cașexiei, stimularea proliferării virale și medierea lezării sistemului nervos cerntral în sindromul deficienței imune dobândite (SIDA). în conformitate, anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției se pot folosi în tratamentul bolilor infecțioase, incluzând meningita bacteriană (de exemplu, publicația de brevet european EP 585 705), malaria cerebrală, SIDA și complexul legat de SIDA (ARC) (vezi, de exemplu, publicația cererii de brevet european EP 230 574), precum și infecția citomegalovirus secundară transplantării (vezi, de exemplu, Fietze, E., et al. (1994) Transplantation 58:675-680) . Anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției se pot folosi pentru a ameliora simptomele asociate cu boli infecțioase, incluzând febră și mialgie datorită infecției (ca influenza) și cașexia secundară infecției (de exemplu, secundară la SIDA sau ARC) .
D. Transplantare
Factorul necrozei tumorii a fost implicat ca un mediator cheie al respingerii allogrefei și boala gazdei față de grefă (GVHD) și în medierea unei reacții adverse care s-a observat când anticorpul OKT3 de șobolan, îndreptat împotriva complexului celulă T receptor CD3, se folosește pentru a inhiba respingerea transplanturilor renale (vezi, de exemplu, Eason, J.D.,et al.(1995) Transplantarea 59:300-305; Suthanthiran,M. Și Strom,T.B. (1994 ) New Engl.J.Med. 331:365-375) . în conformitate, anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției se pot folosi pentru inhibarea respingerii transplantului, inclusiv respingerile allogrefelor și xenogrefelor și pentru inhibarea
GVHD. Deși anticorpul sau porțiunea anticorp poate fi folosită singură, mai preferat se folosește în combinație cu unul sau mai mulți alți agenți care inhibă sau inhibă GVHD. De exemplu, porțiune anticorp a invenției răspunsul imun împotriva allogrefei într-o realizare, un anticorp se folosește în combinație cu
Qh;-71/’-9S
KT 3 ieT CABINET rc 1 o 9 ”-C O 3 2 ' - -1 O - } 2 - i 3 9 7 - L1 pentru a inhiba reacțiile induse OKT3. în altă realizare, un anticorp sau porțiune anticorp a invenției se. folosește în combinație cu unul sau mai mulți anticorpi dirijați la alte ținte implicate în reglarea răspunsurilor imune, cum ar fi moleculele suprafeței celulei CD25 (receptorul-α interleukină-2) , CDllafLFA1), CD%n(ICAM-1), CD4, CD45, CD28/CTLA4, CD80 (B7-I) și/sau CD86(B7-2). în încă altă realizare, un anticorp sau porțiune anticorp a invenției se folosește în combinație cu unul sau mai mulți agenți imunosupresivi generali, cum ar fi ciclosporina A sa FK506.
E. Malignitate
Factorul necrozei tumorii a fost implicat în inducerea cașexiei, stimularea creșterii tumorii, intensificarea potențialului metastatic și medierea citotoxicității în malignități. în conformitate, anticorpii și porțiuni anticorp ale invenției, se pot folosi în tratamentul malignităților, pentru inhibarea creșterii tumorii sau metastazelor și/sau pentru ameliorarea cașexiei secundare malignității. Anticorpul sau porțiunea anticorp se poate administra sistemic sau local la locul tumorii.
F. Tulburări pulmonare
Factorul necrozei tumorii a fost implicat în patofiziologia sindromului insuficienței respiratorii la adult (ARDS), incluzând stimularea activării leucocită-endotelială, dirijind citotoxicitatea spre pneumocite și inducând sindromul scurgerii vasculare, în conformitate, anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției pot fi folosite pentru a trata diverse tulburări pulmonare, incluzând sindromul insuficienței respiratorii la adult (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 91/04054), șoc pulmonar, boală inflamatorie pulmonară, sarcoidoză pulmonară, fibroză pulmonară și silicoză. Anticorpul sau porțiunea anticorp poate fi administrată sistemic sau local la suprafața plămânului, de exemplu, ca un aerosol. Un anticorp sau porțiune anticorp/^?
ESFORA ;
))
Sf ^-2009-00921-- 1 0 - 0 2 - 1 3 9 7 -54 invenției se poate administra de asemenea cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari utili în tratamentul tulburărilor pulmonare, cum s-a discutat suplimentar în subsecțiunea III.
G. Tulburări intestinale
Factorul necrozei tumorii a fost implicat în patofiziologia tulburărilor inflamatorii ale intestinului (vezi, de exemplu, Tracy,K.J.,et al. (1986) Science 234:470-474; Sun, X-M., et al. (1988) J.Clin.In vest. 81:1328-1331; MacDonald, T. T., et al.,(1990) Clin.Exp.Immunol. 81:301-305). Anticorpi himerici murini anti-hTNFa au fost supuși testării clinice pentru tratamentul bolii lui Crohn (van Dullemen,Η.E.,et al. (1995) Gastroenterology 109:129-135). Anticorpi umani și porțiuni anticorp ale invenției, se pot folosi de asemenea, pentru tratarea tulburărilor intestinale, cum ar fi boala idiopatică inflamatorie a intestinului, care include 2 sindromuri, boala lui Crohn și colita ulcerativă. Un anticorp sau porțiune anticorp a invenției poate fi administrată de asemenea cu unul sau mai mulți agenți terapeutici suplimentari utili în tratamentul tulburărilor intestinale, cum s-a discutat suplimentar în subsecțiunea III.
H. Tulburări cardiace
Anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției pot fi folosite de asemenea pentru tratarea diverselor tulbuări cardiace, incluzând ischemia inimii (vezi, de exemplu, publicația cererii de brevet european EP 453 898) și insuficiența inimii (slăbirea mușchiului inimii) (vezi, de exemplu, publicația PCT WO 94/20139) .
I. Altele
Anticorpii și porțiunile anticorp ale invenției se pot folosi de asemenea, pentru tratarea altor diverse tulburări în care activitatea TNFa este dăunătoare. Exemple de alte boli și tulburări în care a fost implicată activitatea TNFa în patofiziologie și care, astfel pot fi tratate c t Λ
a-2 O O 9 - O O 8 2 1 - - 1 0 - 0 2 - 1 3 9 7 - anticorp sau porțiune anticorp a invenției includ tulburări inflamatorii ale osului și resorbției osoase (vezi, de exemplu, Bertolini,D.R.,et al.(1986) Nature 319:516-518; Konig,A.,et al., (1988) J.Bone Miner. Res. 3.:621-627,- Lerner, U.H., și Ohlin,A. (1993) J.Bone Miner.Res. 8.:147-155,- și Shankar, G. și Stern, P. H .(1993 ) Bone 14.:71-876), hepatite, incluzând hepatite alcoolice (vezi, de exemplu, McClain,C.J. și Cohen,D.A.(1989) Hepatology 9'. 349-351; Felver, Μ. E. et al. (1990) Alcohol. Clin. Exp. Res. 14.:255-259,- și Hansen,J.,et al. (1994) Hepatology 20: 461-474) hepatite virale (Sheron,N.,et al. (1991) J.Hepatol. 12:241-245; și Hussain,M.J.,et al.(1994) J. Clin. Pathol. £7:1112-1115( și hepatite explozive; tulburări de coagulare (vezi, de exemplu, van der Poll,T.,et al. (1990) N. Engl. J. Med. 322:1622-1627; și van der Poll,T.,et al. (1991) Prog. Clin. Biol. Res. 367:55-60) , arsuri(vezi, de exemplu, Giroir, B. P. , et al. (1994) Am. <J. Physiol. 267 :H118-124; și Liu,X.S.,et al. (1994) Burns 20.:40-44), leziune de reperfuzare (vezi, de exemplu, Scales,W.E.,et al.(1994) Am.
J. Physiol. 267:G1122-1127; Serrick,C. , et al. (1994) Transplantetion 58.: 1158-1162; și Yao,Y.M.,et al. (1995) Resusci ta tion 29.:157-168), formarea cheloidului (vezi, de exemplu, McCauley,R.L.,et al. (1992) J. Clin. Immunol. 12:300308), formarea cicatricei țesutului; febra; tulburare periodontală; obezitate și toxicitate de iradiere.
Această invenție este ilustrată suplimentar prin exemplele care urmează care nu vor fi interpretate ca limitative. Conținuturile tuturor referințelor, brevetelor și cererilor de brevet publicate citate în această cerere sunt încorporate aici ca referințe.
EXEMPLUL 1: Analiza cineticii legării anticorpilor umani la hTNFa
Interacțiunile de legare în timp real dintre ligand (TNFa uman recombinant biotinilat (rhTNFa) imobilizat pe o me'
CABîNET ENPORA \(Χ-2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 ' -10-02-1 397-56 biosenzor) și analit (anticorpii în soluție) s-au măsurat prin rezonanța suprafeței plasmonului (SPR) folosind sistemul BIAcore (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ) . Sistemul utilizează proprietățile optice ale SPR pentru a detecta alterări în concentrațiile proteinei într-o matrice dextran biosenzor. Proteinele sunt legate covalent la matricea dextran la concentrații cunoscute. Anticorpii sunt injectați în matrice dextran și între anticorpii injectați care se leagă în mod specific și ligandul imobilizat rezultă o creștere a concentrației proteinei din matrice și schimbarea rezultă în semnalul SPR. Aceste schimbări în semnalul SPR sunt înregistrate ca unități de rezonanță (RU) și sunt afișate față de timp de-a lungul axei y ale unei senzograme.
Pentru a facilita imobilizarea rhTNFct pe o matrice biosenzor, streptavidina este legată covalent prin intermediul grupărilor amină libere la matricea dextran activând mai întâi grupările carboxil pe matrice cu 100 mM N-hidroxisuccinimidă (NHS) și 400 mM clorhidrat de N-etil-N'-(3-dietilaminopropil)carbodiimidă (EDC). în continuare, streptavidina se injectează prin matricea activată. Se injectează 35 μΐ streptavidină (25 pg/ml) diluată în acetat de sodiu, pH 4,5 în biosenzorul activat și aminele libere de pe proteină sunt legate direct la grupările carboxil activate. Esterii EDC ai matricei nereacționați sunt dezactivați printr-o injecție cu 1 M etanolamină. Fragmente biosenzor cuplat streptavidină sunt de asemenea accesibile comercial (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia biosensor, Piscataway, NJ) .
S-a preparat rhTNFct biotinilat dizolvând mai întâi 50 mg biotină (esterul acidului D-biotinil-s-aminocaproic N-hidroxisuccinimidă; Boehringer Mannheim Cat. No. 1008 960) în 500 gl dimetilsulfoxid pentru a obține o soluție 10 mg/ml. S-au adăugat 10 μΐ biotină per ml rhTNFcc (la 2,65 mg/ml) pentru un raport molar 2:1 biotină față de rhTNFa. Reacția s-a amestecat cu grijă și s-a incubat 2 ore în întuneric la temperatura camerei. S-a
«.-2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -- Ιζ-10-02-1 397-57
17-0851-01) cu 25 ml PBS rece și s-a încărcat cu 2 ml rhTNFabiotină per coloană. Coloana s-a eluat cu 10x1 ml PBS rece. Fracțiile s-au colectat și s-au citit la OD280 (1,0 OD=1,25 mg/ml). Fracțiile corespunzătoare s-au strâns și s-au depozitat la -80°C până la utilizare. De asemenea, rhTNFa biotinilat este accesibil comercial (R&D Systems Catalog Nr.FTAOO, Minneapolis, MN) .
Pentru a fi imobilizat rhTNFa biotinilat pe matrice prin intermediul streptavidinei s-a diluat în tampon de migrare PBS (Gibco Cat.Nr. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY) suplimentat cu 0,05% surfactant (BIAcore) P20 (Pharmacia BR-100054, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ) . Pentru a determina capacitatea anticorpilor specifici rhTNFa de a lega rhTNFa imobilizat, s-a dirijat un test de legare după cum urmează: s-au injectat alicote de rhTNFa biotinilat (25 nM; alicote 10 pl) prin matricea dextran cuplată streptavidină la o rată de curegere de 5 μΐ/minut. înaintea injectării proteinei și imediat după s-a trecut un curent de tampon PBS prin fiecare celulă de curgere. Diferența netă în semnal între linia de bază și aproximativ 30 secunde după completarea injectării rhTNFa biotinilat s-a considerat a reprezenta valoarea legării (aproximativ 500 RU) . S-a măsurat legarea directă anticorp specific rhTNFa la rhTNFa imobilizat biotinilat. S-au diluat anticorpi (20pg/ml) în tampon de migrare PBS și s-au injectat alicote de 25 μΐ în matricele de proteină imobilizată la o rată de curgere de 5 μΐ/minut. înaintea injectării anticorpului și imediat după s-a trecut un flux de PBS prin fiecare celulă de curgere. Diferența netă în semnalul liniei de bază și semnalul după completarea injectării anticorp s-a considerat a reprezenta valoarea de legare a probei particulare. S-au regenerat matricile biosenzor folosind 100 mM HC1 înaintea injectării probei următoare. Pentru determinarea ratei de detașare (Koff) pe rata de atașare (Kon) s-a folosit ' software-ul de evaluare cinetică BIAcore (versiunea 2.1) a constantelor ratei de asociere (Ka) și ratei de disociere (Kd) .
£\- 2009-00921 - -10-02-1 397-58 de lungime întreagă) la rhTNFa biotinilat, cum s-a comparat la mAb de șoarece MAK 195 (fragment F(ab')2) sunt prezentate mai jos în Tabelul 1.
Tabelul 1: Legarea D2E7 IgG4 sau MAK 195 la rhTNFa biotinilat
Anticorp [Ab],nM rhTNFa, legat, RU Ab, legat, RU rhTNFa/Ab KoEE, sec’ b (Avg)
D2E7 267 373 1215 1, 14 8, 45xl0“5
133 420 1569 1,30 5,42xl0’5
67 434 1633 1,31 4,75xl0‘5
33 450 1532 1,19 4, 46xl0’5
17 460 1296 0,98 3,47xl0-5
8 486 936 0, 67 2, 63xl0“5
4 489 536 0, 38 2, 17xl0’5
2 470 244 0, 18 3, 68x10'’
(4,38xl0'5)
MAK 195 400 375 881 1,20 5,38xl0'5
200 400 1080 1,38 4,54xl0’5
100 419 1141 1,39 3, 54xl0~s
50 427 1106 1,32 3,67xl0~5
25 446 957 1,09 4 , 41xl05
13 464 708 0, 78 3, 66xl0'5
6 474 433 0, 47 7,37xl0'5
3 451 231 0, 26 6, 95xl0'5
(4 , 94xl0'5)
în a doua serie de experimente dintre un IgGl formă de lungime întreagă a D2E7 și rhTNF s-a analizat cantitativ folosind tehnologia BIAcore și s-au derivat constantele ratei cinetice și s-au rezumat mai jos în Tabelele 2, 3 și 4.
6^-2009-00921--10-02-1 397-59 interacțiunii dintre D2E7 si rhTNF biotinilat
Experiment KJs-1)
1 9,58xl0-5
2 9,26xl0-5
3 7,60xl0-5
Medie 8,81±1, 06xl0’5
Tabel 3: Constantele ratei de asociere aparentă dintre D2E7 si rhTNF biotinilat
Experiment Ka(M-1, s-1)
1 1,33xl05
2 1,05xl05
3 3,36xl05
Medie 1,91±1,26x10°
Tabel 4: Rata cinetică aparentă si constantele afinității D2E7 si rhTNF
Experiment KJM-țs-1) Kd(s-1) Kd(M)
1 1,33xl05 9,58xl0-5 7,20xl0-10
2 1,05xl05 9,26xl0-5 8, 82xl0-10
3 3,36xl05 7, 60xl0’5 2,26xl0-10
Medie 1,91±1,26xl05 8,81+1,06xl0-5 6,09+3,42x1ο-10
Constantele ratei de disociere și asociere s-au calculat prin analiza regiunilor disocierii și asocierii a senzogramelor prin software-ul analizei BIA. S-au asumat cineticile reacției chimice convenționale pentru interacțiunea dintre D2E7 și molecula rhTNF: cinetici o disociere de ordinul 0 și asociere de ordinul 1. Pentru analiză, s-a considerat numai interacțiunea dintre un braț al anticorpului bivalent D2E7 și o unitate a rhTNF biotinilat trimeric în alegerea modelelor moleculare pentru analiza datelor cinetice. S-au realizat 3 experimente independente și rezultatele s-au analizat separat. Media constantei ratei disocierii aparente dintre D2E7 și rhTNF biotinilat a fost 8 , 81±1,0 6x1 CT5s_1 și media____ z țțC F R
Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - - (ο -10-02-1 397-60 constantei ratei asocierii aparente, ka a fost 1, 91±1,26xlObM~1s'1. Constanta disocierii intrinsece aparente (Kd) a fost calculată apoi prin formula: Kd=kd/ka. Astfel, media Iț a anticorpului D2E7 pentru rhTNF derivată de la parametrii cinetici a fost 6, 09 + 3, 42xlO-loM. Diferențele minore în valorile cinetice pentru forma IgGl a D2E7 (prezentate în Tabelele 2, 3 și 4) și forma IgG4 a D2E7 (prezentată în Tabelul 1 și Exemplele 2 și 3) nu sunt considerate a fi diferențe reale care rezultă din prezența regiunilor constante fie IgGl, fie IgG4, ci mai degrabă sunt considerate ca putând fi atribuite măsurătorilor concentrației anticorp mai precise folosite pentru analiza cineticii IgGl. în conformitate, valorile cineticii pentru forma IgGl a D2E7 prezentate aici sunt considerate a fi parametrii cei mai preciși pentru anticorpul D2E7.
EXEMPLUL 2: Scanarea mutagenezei alaninei a domeniilor CDR3 D2E7
S-au introdus o serie de mutații alanină singulare prin metode standard alături de domeniul CDR3 al regiunilor D2E7 VL și D2E7 VH. Mutațiile catenei ușoare sunt ilustrate în Figura B (LD2E7*.A1, LD2E7*.A3, LD2E7*.A4, LD2E7*.A5, LD2E7*.A7 și LD2E7*.A8, având o mutație alanină la poziția 1, 3, 4, 5, 7, sau respectiv 8 ale domeniului D2E7 VL CDR3) . Mutațiile catenei grele sunt ilustrate în Figura 2B (HD2E7*.A1, HD2E7*.A2, HD2E7*.A3, HD2E7*.A4, HD2E7*.A5, HD2E7*.A6, HD2E7*.A7, HD2E7*.A8 și HD2E7*.A9, având o mutație alanină la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau respectiv, 11 a domeniului D2E7 VH CDR3). Cineticele interacțiunii rhTNFa cu un anticorp compus al tipului sălbatic D2E7 VL și VH s-au comparat cu cele ale anticorpilor compuși din 1) un tip sălbatic D2E7 VL împerecheat cu D2E7 VH cu o alanină substituită; 2) un D2E7 VH de tip sălbatic împerecheat cu D2E7 VL cu o alanină substituită; sau 3) D2E7 VL cu alanină substituită împerecheat cu un D2E7 VH alanină substituită. Toți anticorpii s-au testat ca molecule IgG4 de lungime întreagă.
Cineticile interacțiunii anticorpilor cu rhTNFoc s-a-u
a¢^-2 0 0 9 - 0 0 3 2 1 -- 10 ~ 0 2 - 1 3 9 7-61 determinat prin rezonanța suprafeței plasmonului cum s-a descris în Exemplul 1. Ratele detașării Koff pentru diferite perechi VH/VL sunt rezumate mai jos în Tabelul 5:
Tabelul 5: Legarea mutantelor D2E7 scan-alanină la rhTNFa biotinilat
VH VL Koff (sec_j)
D2E7 VH D2E7 VL 9, 65xl05
HD2E7* .Al D2E7 VL i, 4xicr4
HD2E7* . A2 D2E7 VL 4, 6x10’“
HD2E7* .A3 D2E7 VL 8, 15x10’“
HD2E7* . A 4 D2E7 VL i, 8xi0’“
HD2E7* -A5 D2E7 VL 2,35x10’“
HD2E7* ,A6 D2E7 VL 2, 9x10“
HD2E7* ,A7 D2E7 VL 1,0x10’“
HD2E7* .A8 D2E7 VL 3,1x10’“
HD2E7* -A9 D2E7 VL 8, 1x10“
D2E7 VH LD2E7* • Al 6, 6xl05
D2E7 VH LD2E7* ,A3 NETECTABIL
D2E7 VH LD2E7* .A4 1, 75X10’“
D2E7 VH LD2E7* .A5 1, 8X10’“
D2E7 VH LD2E7* .A7 1,4X10’“
D2E7 VH LD2E7* -A8 3, 65X10-“
HD2E7* • A9 LD2E7* .Al 1,05X10-“
Aceste rezultate demonstrează că majoritatea pozițiilor domeniilor CDR3 ale regiunii D2E7 VL și regiunii VH sunt favorabile substituirii cu un singur rest alanină. Substituție unei singure alanine la poziția 1, 4, 5 sau 7 a domeniului CDR3 al D2E7 VH sau la poziția 2, 5, 6, 8, 9, sau 10 ale domeniului
CDR3 al
D2E7
VH nu afectează
!V 2009-00921 -- 1 0 - 0 2 - 1 3 9 7 -62 s-a comparat la anticorpul D2E7 parental de tip sălbatic. Substituția alaninei la poziția 8 a D2E7 VL CDR3 sau la poziția 3 a D2E7 VH CDR3 dă Koff de 4 ori mai rapidă și o substituție alanină la poziția 4 sau 11 a D2E7 VH CDR3 dă Koff de 8 ori mai rapidă, arătând că aceste poziții sunt mai critice pentru legare la hTNFa. Totuși, o singură substituție alanină la poziția 1, 4, 5, 7, sau 8 a domeniului CDR3 al D2E7 VL sau la poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, sau 11 a domeniului CDR3 al D2E7 VH rezultă încă într-un anticorp anti-hTNFa care are Koff de lxlO'3 sec'1 sau mai mic.
EXEMPLUL 3: Analiza legării anticorpilor înrudiți D2E7
O serie de anticorpi înrudiți în secvență la D2E7 s-au analizat pentru legarea lor la rhTNFot, așa cum s-a comparat cu D2E7, prin rezonanța suprafeței plasmonului cum s-a descris în Exemplul 1. Secvențele aminoacide ale regiunilor VL testate sunt prezentate în Figurile IA și 1B. Secvențele aminoacide ale regiunilor VH testate sunt prezentate în Figurile 2A și 2B. Ratele Koff pentru diverse perechi VH/VL (în formatul indicat fie ca anticorp de lungime integrală IgGl sau IgG4, fie ca scFv) sunt rezumate mai jos în Tabelul 6.
Tabelul 6: Legarea anticorpilor D2E7 legați la rhTNFct biotinilați
^- 2 0 0 9 - 0 0 3 2 1 -- X
-10-02-1 397--
2SD4 VH LOE7 seFv 6, 07xl0’3
2SD4 VH 2SD4 VL seFv 1,37xl0'2
VH1A11 2SD4 VL seFv 1,34xl0-2
VH1B12 2SD4 VL seFv 1, OlxlO-2
VH1B11 2SD4 VL seFv 9, 8xl0-3
VH1E4 2SD4 VL seFv 1, 59xl0'2
VH1F6 2SD4 VL seFv 2,29xl0'2
VH1D8 2SD4 VL seFv 9, 5xl0-3
VH1G1 2SD4 VL seFv 2, 14xl0-2
2SD4 VH EP B12 seFv 6, 7xl0~3
2SD4 VH VL10E4 seFv 9, 6xl0“3
2SD4 VH VL100A9 seFv 1,33xl0“2
2SD4 VH VL100D2 seFv 1, 41xl0“2
2SD4 VH VL10F4 seFv 1, llxlO’2
2SD4 VH VLLOE5 seFv 1,16xl0’2
2SD4 VH VLL0F9 seFv 6, 09xl0’3
2SD4 VH VLL0F10 seFv 1,34xl0-2
2SD4 VH VLLOG7 seFv l,56xl0'2
2SD4 VH VLLOG9 seFv 1,46xl0-2
2SD4 VH VLLOH1 seFv 1,17xl0'2
2SD4 VH VLLOHIO seFv 1,12xl0-2
2SD4 VH VL1B7 seFv 1, 3xl0'2
2SD4 VH VL1C1 seFv 1,36xl0‘2
2SD4 VH VLC7 seFv 2,0xl0~2
2SD4 VH VLO.1F4 seFv 1,76xl0-2
2SD4 VH VL0.1H8 seFv 1, 14xlCF2
Ratele lente (adică, Koff^lxlO 4sec 1) pentru anticorpi de lungime întreagă (adică, format IgG) având un VL selectat de la D2E7, LOE7, LOE7.E și LOE7.A, care au fie o treonină, fie o alanină la poziția 9, arată că poziția 9 a CDR3 D2E7 VL poate fi ocupată de oricare dintre aceste două resturi fără afectarea substanțială a Koff. în conformitate, un motiv consens pentru CDR3 D2E7 VL cuprinde secvența aminoacidă
<\-2 Ο Ο 9 - Ο Ο 8 2 1 - - 1 0 - 0 2 - 1 3 9 7 - 64
ID NR:3) . Mai mult, (adică, Κθ^^ΙχΙΟ’^βο-1) pentru anticorpi care au un VH selectat de la D2E7, VH1-D2E7.N și VH1-D2E7.Y, care au fie o tirozină, fie o asparagină la poziția 12, arată că poziția 12 a CDR3 D2E7 VH poate fi ocupată de oricare dintre aceste 2 resturi fără a afecta substanțial Koff. în conformitate, un motiv consens pentru CDR3 D2E7 VH cuprinde secvența aminoacidă: V-S-YL-S-T-A-S-S-L-D(Y/N) (SEQ ID NR:4).
Rezultatele prezentate în Tabelul 6 demonstrează că, anticorpii care conțin regiunea 2SD4 VL sau VH CDR3 prezintă Kof£ mai rapidă (adică Koff^lxl0'3sec-1) cum s-a comparat la anticorpii care conțin regiunea D2E7 VL sau VH CDR3. în VL CDR3, 2SD4 diferă de D2E7 la pozițiile 2,5 și 9. Așa cum s-a discutat mai sus, totuși, poziția 9 poate fi ocupată de Ala (ca în 2SD4) sau Thr (ca în D2E7) fără afectarea substanțială a Koff. Astfel, prin comparația 2SD4 și D2E7, pozițiile 2 și 5 ale D2E7 VL CDR3, ambele arginine, pot fi indicate ca fiind critice pentru asocierea anticorpului cu hTNFa. Aceste reziduuri ar putea fi direct implicate ca resturi de contact în situl de legare anticorp sau ar putea contribui critic la menținerea arhitecturii scheletului moleculei de anticorp în această regiune. Considerând importanța poziției 2, înlocuirea Arg (în LOE7, care are aceiași VL CDR3 ca D2E7) cu Lys (în EP B12) accelerează rata detașării prin factorul 2. Considerând importanța poziției 5, înlocuirea Arg (în D2E7) cu Ala (în LD2E7*.A5), cum s-a descris în Exemplul 2, de asemenea accelerează rata detașării de 2 ori. Mai mult, fără Arg la pozițiile 2 și 5 (în 2SD4), rata detașării este de 5 ori mai rapidă. Cu toate acestea, ar fi de remarcat că deși poziția 2 este importantă pentru îmbunătățirea legării la hTNFa, o schimbare la această poziție poate fi negată prin schimbări la alte poziții, așa cum s-a observat în VLLOE4, VLLOH1 sau VLO.1H8.
în VH CDR3, 2SD4 diferă de D2E7 la pozițiile 1, 7 și 12. Așa cum s-a discutat mai sus, totuși poziția 12 poate fi ocupată prin Asn (ca în 2SD4) sau Tyr (ca în D2E7) fără afectarea substanțială a Koff. Astfel, în comparația a 2SD4 și D2E7, pozițiile 1 și 7 ale D2E7 VH CDR3 pot fi identificate ca fiind critice pentru leg^er1'19?/
α-2 Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - - 1 0 - 0 2 - 1 3 9 7 - 65 la hTNFa. Așa cum s-a discutat mai sus, aceste resturi ar putea fi implicate direct ca resturi de contact în situl de legare anticorp sau ar putea contribui critic la menținerea arhitecturii scheletului moleculei anticorpului din această regiune. Ambele poziții sunt importante pentru legare la hTNFa deoarece atunci când se folosește 3C-H2 VH CDR3 (care are o valină pentru schimbare alanină la poziția 1 considerând D2E7 VH CDR3) scFv are o rată de detașare de 3 ori mai rapidă decât atunci când se folosește D2E7 VH CDR3, dar această rată de detașare este încă de 4 ori mai lentă decât atunci când se folosește 2SD4 VH CDR3 (care are schimbări la ambele poziții 1 și 7 față de D2E7 VH CDR3).
EXEMPLUL 4: Activitate funcțională a D2E7
- ·
Pentru a examina activitatea funcțională a D2E7, anticorpul s-a folosit în câteva analize care măsoară capacitatea anticorpului de a inhiba activitatea hTNFa, fie in vitro, fie in vi vo.
Ά. Neutralizarea citotoxicității indusă TNFa în celule L929
TNFa uman recombinant (rhTNFa) produce citototxicitate celulară pentru celule murine L929 după o perioadă de incubare de 18-24 ore. Anticorpi umani anti-hTNFa au fost evaluați în analize L929 prin coincubarea anticorpilor cu rhTNFa și celule după cum urmează. O placă de microtitrare cu 96 godeuri conținând 100 μΐ Ab anti-hTNFa a fost diluată serial 1/3 în duplicate folosind mediul RPMI care conține 10% ser fetal bovin (FBS). S-au adăugat 50 μΐ rhTNFa pentru o concentrație finală de 500 pg/ml în fiecare godeu cu probă. Apoi, plăcile s-au incubat 30 minute la temperatura camerei. în continuare, s-au adăugat celule fibroblastice de șoarece L929 sensibile la TNFa pentru o concentrație finală de 5xl04 celule per godeu, incluzând 1 pg/ml Actinomicină-D. Controalele au inclus mediu plus celule și rh <9
CABÎNET ENPORA
Λ- 2009-00821 - -10-02-1 397-66 plus celule. Aceste controale și o curbă standard TNFa, în domeniul de la 2 ng/ml până la 8,2 pg/ml, s-au folosit pentru determinarea calității analizei și pentru a asigura o fereastră a neutralizării. Apoi, plăcile s-au incubat peste noapte (18-24 ore) la 37°C în 5% CO2. S-au îndepărtat 100 μΐ mediu din fiecare godeu și s-au adăugat 50 μΐ de 5 mg/ml bromură de 3, (4,4dimetiltiazol-2-il)2,5-difenil-tetrazoliu (MTT; accesibilă comercial de la Sigma Chemical Co., St.Louis, MO) în PBS. Apoi, plăcile s-au incubat 4 ore la 37°C. S-au adăugat apoi 50 μΐ dodecil sulfat de sodiu 20% (SDS) la fiecare godeu și plăcile sau incubat peste noapte la 37°C. S-a măsurat densitatea optică la 570/630 nm, curbele s-au marcat pentru fiecare probă și s-au determinat valorile IC50 prin metode standard.
Rezultatele reprezentative pentru anticorpi umani având diverse perechi VL și VH, așa cum s-au comparat la mAb murin MAK 195, sunt prezentate în Figura 3 și în Tabelul 7 de mai jos.
Tabelul 7: Neutralizarea cititoxicității L929 indusă TNFa
VH VL Structură ic50xm
D2E7 D2E7 scFv 1,1x10°
D2E7 D2E7 IgG4 4,7x10-
2SD4 2SD4 scFv/IgGl/IgG4 3, OxlO'7
2SD4 LOE7 scFv 4,3xl0'8
VH1-D2 2SD4 scFv 1,0x10’®
VH1-D2 LOE7 scFv/IgGl/IgG4 3, 4xl0-10
VH1-D2 LOE7.T IgG4 8,lxl0~
VH1-D2 LOE7.T IgG4 1,3χ10'10
VH1-D2 LOE7.A IgG4 2,8x10-
VH1-D2 LOE7.A IgG4 6,2x10’
MAK 195 MAK 195 scFv 1, 9x10-®
MAK 195 MAK 195 F(ab')j 6,2x10'
Rezultatele din Figura 3 și Tabelul 7 demonstrează că anticorpul uman anti-hTNFa D2E7 și diverși anticorpi înrudiți D2E7, neutralizează citotoxicitatea L929 indusă TNFa cu o capacita^^r^îu^ > // • -- I CABÎNET /· * ENTORA ( ’ \ •’R’ '-x '-i x. \O ^<- 2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 --10-02-1 397-67 aproximativ echivalentă celei a mAb murin anti-hTNFa MAK 195.
în altă serie de experimente s-a examinat cum s-a descris mai sus, capacitatea formei IgGl a D2E7 de a neutraliza citotoxicitatea L929 indusă TNFa. Rezultatele de la 3 experimente independente și media acestora sunt rezumate in Tabelul 8 de mai j os:
Tabelul 8: Neutralizarea citotoxicitătii L929 indusă TNFa prin IgGl D2E7
Experiment ICS0[M]
1 1,26xl(T10
2 1,33xl0-l°
3 1,15xl0‘10
Medie 1,25±0, OlxlO-10
Această serie de experimente a confirmat că D2E7, în forma IgGl de lungime întreagă, neutralizează citotoxicitatea L929 indusă TNFa cu IC50[M] mediu de 1,25±0, OlxlO'10.
B. Inhibarea legării TNFa la receptori TNFa pe celule U-937
Capacitatea anticorpilor umani anti-hTNFa de a inhiba legarea hTNFa la receptori hTNFa pe suprafața celulelor a fost examinată folosind linia de celule U-937 (ATCC nr. CRL 1593), o linie celulară histiocitică umană care exprimă receptori hTNFa. Celulele U-937 s-au crescut în mediu RPMI 1640 suplimentat cu 10% ser fetal bovin (Hyclone A-llll, Hyclone Laboratories, Logan, UT), L-glutamină (4 nM), soluție tampon HEPES (10 mM) , penicilină (100 pg/ml) și streptomicină (100 pg/ml). Pentru a examina activitatea anticorpilor IgG, celule U-937 s-au preincubat cu PBS suplimentat cu Co., St.Louis, s-au spălat de receptorului, într-un tampon mg/ml MO) timp 3 ori cu celulele
IgG uman (Sigma 1-4506, Sigma Chemical de 45 minute pe gheață și apoi celulele tampon de legare. Pentru testul legării U-937 (5xl06 celule/godeu) s-au incubat de legare (PBS suplimentat cu 0,2% albumină seri^
CABîNET iL-2 0 0 9 - 0 0 9 2 1 --10’02-1 397-68 bovină) în plăci de microtitrare cu 96 godeuri (Costar 3799, Costar Corp., Cambridge, MA) împreună cu rhTNFa marcat 125I (3 x IO'10 M; 25 pCi/ml; obținut de la BEB Research Products, Wilmington, DE), cu sau fără anticorpi anti-hTNFa, într-un volum total de 0,2 ml. Plăcile s-au incubat pe gheață timp de 1,5 ore. Apoi, 75 μΐ al fiecărei probe s-au transferat la eprubete de testat 1,0 ml (Sastedt 72,700, Sarstedt Corp., Princeton NJ) conținând dibutilftalat (Sigma D-2270, Sigma Chemical Co., St.Louis,MO) și dinonilftalat (ICN 210733, ICN, Irvine, CA). Eprubetele de testat au conținut un amestec 300 μΐ de dibutilftalat și dinonilftalat, raport volum respectiv 2:1. S-a îndepărtat rhTNFa marcat 125I, liber (adică, nelegat) prin microcentrifugare timp de 5 minute. Apoi, fiecare eprubetă de testat a conținut în final un pelet celular care s-a decupat cu ajutorul unei foarfeci pentru microeprubete (Bel-Art 210180001, Bel-Art Products, Pequannock, NJ). Peletul celular conține rhTNFa marcat 125I legat la receptorul TNFa p60 sau p80, în timp ce în faza apoasă de mai sus amestecul de ulei conține un exces de rhTNFa liber marcat 125I. Toate peletele celulare s-au colectat într-o eprubetă de numărare (Falcon 2052, Becton Dickinson Labware, Lincoln Park, NJ) și s-au numărat într-un contor de scintilație.
Rezultatele reprezentative sunt prezentate în Figura 4. Valoarea IC50 pentru inhibarea legării hTNFa de către D2E7 la receptori hTNFa pe celule 0-937 este de aproximativ 3xlO'10 M în aceste experimente. Aceste rezultate, demonstrează că anticorpul uman anti-hTNFa D2E7 inhibă legarea rhTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937 la concentrații aproximativ echivalente celor ale mAb murin anti-hTNFa MAK 195.
în altă serie de experimente a fost examinată cum s-a descris mai sus capacitatea formei IgGl a D2E7 de a inhiba legarea rhTNFa la receptori hTNFa pe celule U-937. Rezultatele de la 3 experimente independente și media lor sunt rezumate în Tabelul 9.
x // 3 7 ț.
CABSNET V F ENFORA Λ ( \ -·«·- / ^-2009-00921--10-02-1997-Tabelul 9: Inhibarea legării receptorului TNF pe celule U-937 prin IgGl D2E7
Experiment IC50[M]
1 l,7OxlO'10
2 1,49xl0'10
3 l,50xl0-1°
Medie 1,56±0,12xl0’10
Această serie de experimente a confirmat că D2E7, in forma IgGl de lungime întreagă, inhibă legarea receptorului TNF pe celule U-937 cu IC50[M] mediu de 1,56±0, 12xlO'10.
Pentru a ivestiga potența inhibitoare a D2E7 în legarea rhTNF 125I la receptori individuali p55 și p75, s-a realizat un radioimunotest în fază solidă. Pentru a măsura valorile IC50 ale D2E7 pentru receptori separați TNF, s-au incubat diverse concentrații ale anticorpului cu 3xlO'10 concentrație de rhTNF 125I. Apoi, amestecul s-a testat pe plăci separate conținând receptor fie p55, fie p75 TNF într-un mod dependent de doză. Rezultatele sunt rezumate mai jos în Tabelul 10:
Tabelul 10: Inhibarea legării receptorului TNF la p55 și p75 TNFR prin D2E7 IgGl
IC50[M]
Reactiv p55 TNFR p75 TNFR
D2E7 1,47xl0“9 1, 26xl0'9
rhTNF 2,31xl0“9 2,70xl0'9
Inhibarea legării rhTNF 125I la receptori p55 și p75 TNF pe celule U, 937 prin D2E7 a urmat o curbă sigmoidală simplă, indicând valori IC50 pentru fiecare receptor. în experimentele radioimunotest în fază solidă (RIA) cu receptori recombinanți TNF, s-au calculat valori IC50 pentru inhibarea legării rhTNF 125I la receptorii p55 și p75 prin D2E7 ca l,47xl09 și respectiv, l,26xl0“9 M. Descreșterea în valorile IC50 în faza solidă s-a datorat probabil densității mai mari a receptorilor în
Oc 2 0 0 9 - 0 □ 8 2 1 - ~ o “ U 2 - 1' $ yf 7
RIA, deoarece rhTNF nemarcat a inhibat de asemenea, cu valori IC50 similare. Valorile IC50 pentru inhibarea legării rhTNF 125I la receptorii p55 și p75 prin rhTNF nemarcat au fost 2,31xl0'9 și respectiv, 2,70xl0’9 M.
C. Inhibarea expresiei ELAM-1 pe HUVEC
Celule endoteliale ale venei ombilicale umane (HUVEC) pot fi induse să exprime molecula 1 de adeziune a leucocitului la celula endotelială (ELAM-1) pe suprafața celulei lor prin tratament cu hTNFa, care poate fi detectat prin reacția HUVEC tratate hTNFa cu un anticorp de șoarece anti-uman ELAM-1. Capacitatea anticorpilor umani anti-hTNFa de a inhiba această expresie indusă TNFa a ELAM-1 pe HUVEC s-a examinat după cum urmează: HUVEC (ATCC Nr. CRL 1730) s-au plasat în plăci cu 96 godeuri (5xl04 celule/godeu) și s-au incubat peste noapte la 37°C. în ziua următoare, s-au preparat diluții seriale de anticorp uman anti-hTNFa (1:10) într-o placă de microtitrare, începând cu 20100 pg/ml anticorp. O soluție stoc de rhTNFa s-a preparat la 4,5 ng/ml, s-au adăugat alicote rhTNFa la fiecare godeu conținând anticorp și conținuturile s-au amestecat bine. Controalele au inclus numai mediu, mediu plus anticorp anti-hTNFa și mediu plus rhTNFa. Plăcile HUVEC s-au îndepărtat de la incubarea lor la 37°C peste noapte și mediul din fiecare godeu s-a aspirat cu grijă. S-au transferat 200 μΐ amestec anticorp-rhTNFa la fiecare godeu al plăcilor HUVEC. Apoi, plăcile HUVEC s-au incubat în continuare la 37°C timp de 4 ore. în continuare, stocul de anticorp murin anti-ELAM-1 s-a diluat 1:10000 în RPMI. Mediul din fiecare godeu al plăcii HUVEC s-a aspirat cu grijă, s-au adăugat 50 μΐ/godeu soluție anticorp anti-ELAM-1 și plăcile HUVEC s-au incubat 60 minute la temperatura camerei. S-a preparat o soluție anticorp Ig anti-șoarece marcată 125I în RPMI (aproximativ 50000 cpm în 50 μΐ). Mediul din fiecare godeu al plăcilor HUVEC a fost aspirat cu atenție, godeurile s-au spălat de 2 ori cu RPMI și la fiecare_ godeu s-au adăugat 50 μΐ soluție Ig anti-șoarece marcată j7l/'a.s>pX \ i\ ( CABINET ' \\* (
y. /J (X - 2 O O 9 - O O 9 2 1 - -1 O O 2 - 1 9 9 ? - 71
Plăcile s-au incubat 1 oră la temperatura camerei și apoi fiecare godeu s-a spălat de 3 ori cu RPMI. S-au adăugat 180 μΐ SDS 5% la fiecare godeu pentru liza celulelor. Apoi, Uzatul celular de la fiecare godeu s-a transferat intr-o eprubetă și s-a numărat intrun contor de scintilație.
Rezultatele reprezentative sunt prezentate în Figura 5. Valoarea IC50 pentru inhibarea expresiei ELAM-1 pe HUVEC indusă hTNFa D2E7 este de aproximativ 6xl0~u M în aceste experimente. Aceste rezultate demonstrează că anticorpul uman D2E7 anti-hTNFa inhibă expresia indusă hTNFa a ELAM-1 pe HUVEC la concentrații aproximativ echivalente celor ale mAb murin anti-hTNFa MAK 195.
în altă serie de experimente, capacitatea formei IgGl a D2E7 de a inhiba expresia indusă hTNFa a ELAM-1 pe HUVEC s-a examinat cum s-a descris mai sus. Rezultatele de la 3 experimente independente și media lor sunt rezumate mai jos în Tabelul 11.
Tabelul 11: Inhibarea expresiei ELAM-1 indusă TNFa prin receptor IgGl D2E7
Experiment ICS0[M]
1 1, 95xlCT10
2 1,69xl0~10
3 1, 90xl0'10
Medie 1, 85±0,14xlO’10
Această serie de experimente a confirmat că D2E7, în forma IgGl de lungime întreagă, inhibă expresia ELAM-1 pe HUVEC indusă TNFa cu IC50[M] mediu de 1,85±0,14xlO’10.
De asemenea, s-a examinat potența de neutralizare a D2E7 IgGl pentru expresia indusă rhTNF a altor 2 molecule de adeziune ICAM-1 și VCAM-1. Deoarece curba de titrare rhTNF pentru expresia ICAM-1 la 16 ore a fost similară curbei de expresie a ELAM-1. Aceeși concentrație de rhTNF s-a folosit în experimentele de neutralizare anticorp, a diverse concentrații 16 ore, și s-a măsurat
S-au incubat HUVEC cu rhTNF în prezența D2E7 într-un incubator CO2 la 37°C timp de expresia ICAM-1 prin anticorp de șoa
cabsnet ^-2009-00921-- 1 0 - 0 2 - 1 9 9 7 -72 anti-ICAM-1 urmată de anticorp de oaie anti-șoarece marcat 125I. S-au realizat 2 experimente independente și s-au calculat valorile IC50. Un anticorp uman neînrudit IgGl nu inhibă expresia ICAM-1.
Procedura experimentală pentru testarea inhibării expresiei VCAM-1 a fost aceiași ca procedura pentru expresia ELAM-1 cu excepția că s-a folosit MAb anti-VCAM-1 în loc de MAb anti-ELAM1. S-au realizat 3 exprimente independente și s-au calculat valorile IC50. Un anticorp neînrudit IgGl uman nu inhibă expresia VCAM-1.
Rezultatele sunt rezumate în Tabel 12.
Tabelul 12: Inhibarea expresiei ICAM-1 si VCAM-1 prin D2E7 IgGl
Inhibare ICAM-1 IC50[M]
Experiment IC50[M] Experiment IC50[M]
1 1, 84xl0‘10 1 1, O3xlCT10
2 2, 49xl0‘10 2 9,26xl0~n
3 1, O6xl(T10
Medie 2, 17±0, 46xlO~10 Medie 1,01+0, OlxlCT10
Aceste experimente demonstrază că tratamentul celulelor endoteliale ale venei ombilicale umane primare cu rhTNF au condus la expresia optimă a moleculelor de adeziune ELAM-1 și VCAM-1 la 4 ore, și la expresie maximă reglată crescător a ICAM-1 la 16 ore. D2E7 a fost capabil să inhibe expresia a 3 molecule de adeziune în mod dependent de doză. Valorile IC50 pentru inhibarea ELAM-1, ICAM-1 și VCAM-1 au fost l,85xlO'10, 2,17xlO~10 și respectiv, Ι,ΟΙχΙΟ-10. Aceste valori au fost similare, indicând cerințe similare pentru doza de activare a semnalului rhTNF de a induce expresia ELAM-1, ICAM-1 și VCAM-1. Interesant, D2E7 a fost eficient similar în testul de inhibare mai lungă a inhibării ICAM-1. Testul de inhibare ICAM-1 a necesaitat 16 ore de coincubare a rhTNF și D2E7 cu HUVEC opus la cele 4 ore necesare pentru testele de inhibare ELAM-1 și VCAM-1. Deoarece D2E7 are_ o rată de detașare lentă pentru rhTNF, este d^ imaginat o^în1/’S'9/\
Λ /i cabinet A k x r / V
Ο Ο 9 - Ο Ο 9 2 1 - “10-02-1997-73 timpul perioadei de 16 ore de coincubare nu a existat nici o competiție semnificativă prin receptorii TNF asupra HUVEC.
D. Neutralizarea hTNFa in vivo
S-au folosit 3 sisteme diferite in vivo pentru a demonstra că D2E7 este eficient pentru inhibarea activității hTNFa in vivo.
I.Inhibarea letalității indusă TNF la șoareci sensibilizați
D-galactozamină
Injectarea TNFa uman recombinant (rhTNFa) la șoareci sensibilizați D-galactozamină produce letalitate intr-o perioadă de timp de 24 ore. Agenți care neutralizează TNFa s-au dovedit a împiedica letalitatea în acest model. Pentru a examina capacitatea anticorpilor umani anti-hTNFa de a neutraliza hTNFa in vivo în acest model, s-au injectat șoareci C57B1/6 cu diverse concentrații de D2E7-IgGl sau o proteină de control, în PBS intraperitoneal (i.p.). Șoarecii s-au provocat 30 minute mai târziu cu 1 pg rhTNFa și 20 mg D-galactozamină în PBS i.p. și sau observat 24 ore mai târziu. Aceste cantități rhTNFa și Dgalactozamina au fost determinate anterior pentru a obține o letalitate de 80-90% în acești șoareci.
Rezultate reprezentative ilustrate ca un grafic cu bare, al supraviețuirii % față de concentrația anticorp, sunt prezentate în Figura 6. Barele negre reprezintă D2E7, în timp de barele hașurate reprezintă MAK 195. Injectarea a 2,5-25 pg anticorp D2E7 per șoarece a protejat animalele de letalitatea indusă TNFa. Valoarea ED50 este de aproximativ 1-2,5 pg/șoarece. Anticorpul de control pozitiv, MAK 195, a fost similar în capacitatea sa protectoare. Injectarea D2E7 în absența rhTNFa nu a avut nici un efect dăunător asupra șoarecilor. Injectarea unui anticorp IgGl uman nespecific nu oferă nici o protecție de letalitatea indusă TNFa.
într-un al doilea experiment, 49 șoareci s-au împărți
^- 2 0 0 9 - 0 0 8 2 1 -- V/
-10-02-1997-74 grupuri egale. Fiecare grup a primit doze D2E7 care variază 30 minute înainte de a primi o doză LD80 amestec rhTNF/Dgalactozamină (1,0 pg rhTNF și 20 mg D-galactozamină per șoarece). Grupul de control 7 a primit anticorp kappa IgGl uman normal la doză 25 pg/șoarece. Șoarecii s-au examinat 24 ore mai târziu. Supraviețuirea pentru fiecare grup este rezumată mai jos în Tabelul 13.
Tabelul 13: Supraviețuire 24 ore după tratament cu D2E7
Grup Supraviețuire (vii/total Supraviețuire (%)
1 (fără anticorp) 0/7 0
2 (1 pg) 1/7 14
3 (2,6 pg) 5/7 71
4 (5,2 pg) 6/7 86
5 (26 pg) 6/7 86
6 (26 pg;fără rhTNF) 7/7 100
7 (15 pg Hu IgGl) 1/7 14
II· Inhibarea febrei indusă TNF la iepure
S-a examinat eficacitatea D2E7 în inhibarea răspunsului de febră indusă rhTNF la iepuri. Grupuri de iepuri femele NZW cântărind aproximativ 2,5 kg fiecare s-au injectat intravenos cu D2E7, rhTNF și complexe imune D2E7 și rhTNF. S-au măsurat temperaturile rectal prin sonde termistor pe un înregistrator termic Kaye la fiecare minut aproximativ 4 ore. TNF recombinant uman în soluție salină injectat la 5 pg/kg, a provocat o creștere a temperaturii mai mare de 0,4°C la aproximativ 45 minute după injectare. Preparatul anticorp el însuși, în soluție salină la o doză de 138 pg/kg nu provoacă o creștere în temperatură la iepuri până la 140 minute după administrare. în toate experimentele care au urmat, D2E7 sau reactivi de control (IgGl uman sau un vehicul salin) s-au injectat i.v. la iepuri după 15—-^.
.....\\ I
L ; .FORA ‘ v
X 6 ^-2 0 0 9 - 0 0821-- ' ~1 Ο ~ 0 2 - 1 997-75 minute mai târziu printr-o injecție de rhTNF în soluție salină la 5 pg/kg i.v. Rezultatele reprezentative de la câteva experimente sunt rezumate mai jos în Tabelul 14:
Tabelul 14: Inhibarea febrei indusă rhTNF la iepuri cu D2E7
Creștere temp.*,°C Raport molar Maxim temp.
Doză D2E7 (pg/kg) rhTNF rhTNF + D2E7 Inhib.%** D2E7:rhTNF minute post rhTNF
14 0,53 0, 25 53 1 60
24 0, 43 0, 13 70 1, 6 40
48 0,53 0, 03 94 3,3 50
137 0, 53 0,00 100 9, 5 60
792 0, 80 0, 00 100 55 60
* = maxim temperatură **= inhibare % = (l-(creștere temperatură cu rhTNF&D2E7/creșetere temperatură cu rhTNF singur})xlOO.
Pretratamentul intravenos cu D2E7 la o doză de 14 pg/kg a inhibat parțial răspunsul pirogenic, comparat la iepuri pretratați numai cu soluție salină. D2E7 administrat la 137 pg/kg a suprimat total răspunsul pirogenic al rhTNF în același experiment. în al doilea experiment, D2E7 administrat la 24 pg/kg de asemenea a suprimat parțial răspunsul pirogenic, comparat la iepuri tratați numai cu soluție salină. Raportul molar al D2E7 față de rhTNF a fost 1/6:1 în acest experiment. în al treilea experiment, D2E7 injectat i.v. la 48 pg/kg (raport molar D2E7:rhTNF=3,3:1) a suprimat total răspunsul pirogenic, comparat la iepuri pretratați cu IgGl uman de control în soluție salină la 30 pg/kg. în experimentul final, iepuri pretratați cu D2E7 (792 pg/kg) la un raport molar foarte ridicat față de rhTNF (55:1) nu dezvoltă nici o creștere în temperatură la orice moment până la 4 ore de observație. Tratamentul iepurilor cu complexe imune generate de la un amestec D2E7 și rhTNF incubat la 37°C timp de 1 oră, la un raport molar de 55:1, fără administrare subsecventă de rhTNF, de asemenea rnkrțț'x /k X i'·' li
- ț ' \ 'X-î/ n'iik ^-2009-00921--10-02-1997-76 provoacă nici o creștere de temperatură în același experiment.
III. Prevenirea poliartritei la șoareci transgenici Tgl97
Efectul D2E7 asupra dezvoltării bolii s-a investigat într-un model murin de artrită. S-au generat șoareci transgenici (Tgl97) care exprimă TNF uman de tip sălbatic (modificat în regiunea 3' dincolo de secvențele de codificare) și acești șoareci dezvoltă poliartrită cronică cu incidență 100% la vârsta de 4-7 săptămâni (vezi, EMBO J (1991)10.:4 025-4 031 pentru descrirea suplimentară a modelului de poliartrită Tgl97).
Animale transgenice s-au identificat prin PCR la vârsta de 3 zile. Grupuri de șoareci transgenici născuți o dată s-au împărțit în 6 grupuri. Șoarecii transgenici s-au verificat prin analiza de hibridizare slot-blot la vârsta de 15 zile. Protocoalele tratamentului pentru cele 6 grupuri au fost cum urmează: Grup l=fără tratament; Grup 2=soluție salină (vehicul); Grup 3=D2E7 la 1,5 pg/g; Grup 4=D2E7 la 15 pg/g; Grup 5=D2E7 la 30 pg/g; și Grup 6=izotip de control IgGl la 30 pg/g. De asemenea, a fost inclus în studiu un grup de șoareci născuți o dată netransgenici pentru a servi drept control (Grup 7 netransgenici; fără tratament). Fiecare grup a primit 3 injecții i.p. per săptămână din tratamentele indicate. Injecțiile au continuat timp de 10 săptămâni. în fiecare săptămână s-au înregistrat schimbările macroscopice în morfologia articulației pentru fiecare animal. La 10 săptămâni, toți șoarecii au fost sacrificați și țesutul de șoarece s-a colectat în formalină. S-au realizat examinări microscopice ale țesutului.
La începutul fiecărei săptămâni au fost luate greutățile în grame pentru fiecare șoarece. De asemenea, la același moment s-au făcut măsurători ale mărimii articulației (în mm) ca o măsură a severității bolii. Mărimea articulației a fost stabilită ca o medie a 3 măsurători ale gleznei piciorului drept posterior folosind un micrometru. Scorurile artritice s-au înregistrat săptămânal după cum urmează: 0=fără artrită (apariție și flexiu^^^^ λ ί CABiNET
A h * ENFORA <..... ·. V r j q-2 Ο Ο 9 - Ο Ο 3 21 - -1 Ο - Ο 2 - 1 9 9 7 - ~ normală); +=artrită ușoară (articulație deformată) ; ++=artrită moderată (umflare, deformarea articulației) și +++= artrită grea (anchiloză detectată asupra flexiunii și mișcare deteriorată sever). Scorurile histopatologice bazate pe colorație hematoxină/eozină a secțiunilor articulației au fost bazate după cum urmează: 0=fără boală detectabilă; l=proliferarea membranei sinoviale; 2=îngroșare puternică a membranei sinoviale; 3=distrugerea cartilajului și eroziunea osului.
Efectul tratamentului asupra mărimii medii a articulației a șoarecilor artritici transgenici Tgl97 este prezentat în graficul Figurii 9. Scorurile histopatologice și artritice ale șoarecilor transgenici Tgl97, la vârsta de 11 săptămâni sunt rezumate mai jos în Tabelul 15:
Tabelul 15: Efectul D2E7 asupra histopatologiei si scorului artritic la șoareci Tgl97
Grup Tratament Scor histopatologic Scor artritic
1 fără 3(7/7) +++(7/7)
2 soluție salină 3(8/8) +++(8/8)
6 control IgGl 3(9/9) +++(7/9)
3 D2E7 la 1,5 pg/g 0(6/8) 0(8/8)
4 D2E7 la 15 pg/g 0 (7/8) 0(8/8)
5 D2E7 la 30 pg/g 0(8/8) 0(8/8)
Acest experiment a demonstrat că anticorpul D2E7 are un efect benefic definit asupra șoarecilor transgenici care exprimă TNF uman de tip sălbatic (Tgl97) fără nici o artrită evidentă după perioada studiului.
E. Neutralizarea D2E7 a TNFa de la alte specii
Specificitatea legării D2E7 s-a examinat prin măsurarea capacității sale de a neutraliza factorii necrozei tumorii de la diverse specii primate și de la șoarece, folosind un test un test λ ^-2009-00921--1 G 02-1 997-78 citotoxicitate L929 (cum s-a descris în Exemplul 4, subsecțiunea A, de mai sus) . Rezultatele sunt rezumate în Tabelul 7 de mai jos.
Tabelul 16: Capacitatea D2E7 de a neutraliza hTNFa de la diferite specii în analiza L929
TNFa Sursă ICRn pentru neutralizare D2E7 (Mi**
Uman Recombinant 7,8x10““
Cimpanzeu LPS-stimulat PBMC 5,5x10““
Babuin Recombinant 6,0x10“
Sanguin LPS-stimulat PBMC 4, OxlO’10
Cynomolgus LPS-stimulat PBMC 8, OxlO11
Rhesus LPS-stimulat PBMC 3,0x10’“
Canin LPS-stimulat PBMC 2, 2x10“°
Porcin Recombinant 1, OxlO’7
Murin Recombinant >1, OxlO-7
Rezultatele din Tabelul 16 demonstrează că D2E7 poate neutraliza activitatea a 5 TNFa de la primate aproximativ echivalent TNFa uman și mai mult, pot neutraliza activitatea TNFa canin (aproximativ de 10 mai puțin bine decât TNFa uman) și TNFa porcin și de șoarece (aproximativ de 1000 de ori mai puțin bine decât TNFa uman). Mai mult, legarea D2E7 la rhTNFa în fază de soluție nu a fost inhibată de alte citokine ca limfotoxină (ΤΝΕβ), IL-la, IL-Ιβ, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IFNy și ΤΘΕβ, arătând că D2E7 este foarte specific pentru ligandul său TNFa.
F. Absența eliberării citokinei de sânge uman integral incubat cu D2E7 în acest exemplu, s-a examinat capacitatea D2E7 de a induce, prin el însăși, celule sanguine umane normale să secrete citokine^i^’o^^ •k x [f r- £ CABÎNET
...1 W ENFORA ( \ 3.H.L ^- 2 0 0 9 - 0 0 3 2 1 -- 57
- 1 0 0 2 - 1 9 9 7 -sau molecule așezate pe suprafața celulei. D2E7 s-a incubat cu sânge integral diluat de la 3 donatori normali diferiți la diferite concentrații timp de 24 ore. La același moment, s-a desfășurat un control pozitiv LPS, la o concentrație determinată anterior de a stimula celule sanguine imunocompetente să secrete citokine. Supernatantele au fost recoltate și testate intr-un tablou de truse ELISA cu 10 citokine solubile, receptor și molecule de adeziune: IL-la, IL-Ιβ, receptor antagonist IL-1, IL6, IL-8, TNFa, receptor I TNF solubil, receptor II TNF solubil, ICAM-1 solubil, și E-selectină solubilă. Nu s-au măsurat cantități semnificative de citokină sau molecule prezente pe suprafața celulei ca urmare a coincubării anticorpului D2E7, la concentrații de până la 343 mg/ml. adăugare de anticorp de asemenea nu au de citokine, în timp ce cocultura de ridicate la un domeniu în picograme crescut la Aceste rezultate arată că D2E7 nu induce celule
Culturi de control fără dat cantități măsurabile control
LPS a dat valori să secrete citokine sau proteine prezente pe peste nivelurile normale în culturi ex vivo.
Ca formând o parte a prezentei descrieri Secvențelor, al cărei conținut este rezumat jos.
nanograme scăzut, de sânge integral suprafața celulei este anexată Lista in tabelul de mai
SEQ ID NR: CATENĂ ANTICORP REGIUNE TIP SECVENȚĂ
1 D2E7 VL aminoacidă
2 D2E7 VH aminoacidă
3 D2E7 VL CDR3 aminoacidă
4 D2E7 VH CDR3 aminoacidă
5 D2E7 VL CDR2 aminoacidă
6 D2E7 VH CDR2 aminoacidă
7 D2E7 VL CDR1 aminoacidă
8 D2E7 VH CDR1 aminoacidă
9 2SD4 VL aminoacidă
10 2SD4 VH aminoacidă
11 2SD4 VL CDR3 aminoacidă
CABINET
ESFORA
S.R.l.
k-2 O 09-00321 --1 O ~ 0 2 - 1 9 9 7 --
12 EP B12 VL CDR3 aminoacidă
13 VL10E4 VL CDR3 aminoacidă
14 VL100A9 VL CDR3 aminoacidă
15 VLL100D2 VL CDR3 aminoacidă
16 VLL0F4 VL CDR3 aminoacidă
17 LOE5 VL CDR3 aminoacidă
18 VLLOG7 VL CDR3 aminoacidă
19 VLLOG9 VL CDR3 aminoacidă
20 VLLOH1 VL CDR3 aminoacidă
21 VLLOH10 VL CDR3 aminoacidă
22 VL1B7 VL CDR3 aminoacidă
23 VL1C1 VL CDR3 aminoacidă
24 VLO.1F4 VL CDR3 aminoacidă
25 VL0.H8 VL CDR3 aminoacidă
26 LOE7.A VL CDR3 aminoacidă
27 2SD4 VH CDR3 aminoacidă
28 VH1B11 VH CDR3 aminoacidă
29 VH1D8 VH CDR3 aminoacidă
30 VH1A11 VH CDR3 aminoacidă
31 VH1B12 VH CDR3 aminoacidă
32 VH1E4 VH CDR3 aminoacidă
33 VH1F6 VH CDR3 aminoacidă
34 3C-H2 VH CDR3 aminoacidă
35 VH1-D2,N VH CDR3 aminoacidă
36 D2E7 VL acid nucleic
37 D2E7 VH acid nucleic
Specialiștii în domeniu vor recunoaște sau vor fi capabili să stabilească folosind nu mai mult decât experimentarea de rutină, numeroase echivalente la realizările specifice ale invenției descrise aici.

Claims (59)

1. Utilizare a unui anticorp uman izolat, sau a unei porțiuni de legare la antigen a acestuia, care disociază din TNFa uman cu o Kd de 1 x IO-8 M sau mai mică și o constantă a ratei KOffde 1 x IO’3 * * * s-1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard in vitro L929 cu IC50 de 1 x IO 7 M sau mai mică, la fabricarea unui medicament pentru tratamentul unei tulburări în care activitatea TNFa este nocivă, în care anticorpul se administrează în combinație cu cel puțin un agent suplimentar unui subiect astfel încât se inhibă activitatea TNFa uman.
2. Utilizare conform revendicării 1, în care anticorpul uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, are următoarele caracteristici:
a) disociază din TNFa uman cu o constantă a ratei KOfr de 1 x IO 3 s’1 sau mai mică, așa cum s-a determinat prin rezonanța plasmonului de suprafață;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 3, sau modificată din SEQ ID NR.: 3 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 1, 4, 5, 7 sau 8, sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 4, sau modificată din SEQ ID NR.: 4 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
3. Utilizare conform revendicării 1, în care anticorpul uman izolat, sau porțiunea acestuia care leagă antigenul, are o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2.
α-2 009-00921 -- S/
-10'02-1997--
4. Utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1, 2 sau 3, în care tulburarea este selectată din grupul constând dintr-o boală autoimună, o tulburare intestinală, o boală infecțioasă, respingerea transplantului sau boala grefă-contra-gazdă, afecțiune malignă, o tulburare pulmonară și o tulburare cardiacă.
5. Utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1, 2 sau 3, în care tulburarea este sepsis.
6. Utilizare conform revendicării 5, în care anticorpul uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, se administrează unui subiect uman împreună cu citokina interleukină-6 (IL-6), sau se administrează unui subiect uman cu o concentrație în ser sau plasmă a IL-6 peste 500 pg/ml.
7. Utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1, 2 sau 3, în care tulburarea este selectată din grupul constând din tulburări inflamatorii osoase, boala resorbției osoase, hepatita alcoolică, hepatita virală, hepatita fulminantă, tulburări de coagulare, arsuri, leziuni legate de reperfuzie, formarea cheloidului, formarea țesutului cicatricei, pirexie, boala periodontală, obezitate, toxicitatea radiațiilor, șoc septic, șoc endotoxic, sepsis gram negativ, sindromul șocului toxic, malarie, meningită, cașexie, SIDA, meningită bacteriană, complexul înrudit cu SIDA (ARC), malarie cerebrală, infecție cu citomegalovirus consecutivă transplantului, febră și mialgii din cauza infecției și cașexiei consecutivă infecției, respingerea alogrefei, respingerea xenogrefei, stimularea creșterii tumorii, creșterea potențialului metastazic și medierea citotoxicității în afecțiunile maligne și inhibarea creșterii tumorii sau a metastazei.
8. Utilizare conform revendicării 4, în care tulburarea autoimună este selectată din grupul constând din artrită reumatoidă, spondilită reumatoidă, osteoartrită, artrită gutoasă, alergie, scleroză multiplă, diabet autoimun, uveită autoimună și sindrom nefritic.
Λ 2009-00921 -- 1 0 ' 0 2 - 1 9 9 7 --
9. Utilizare conform revendicării 4, în care tulburarea pulmonară este selectată din grupul constând din sindromul detresei respiratorii la adult, plămân de șoc, boală inflamatorie cronică pulmonară, sarcoidoză pulmonară, fibroză pulmonară, și silicoză.
10. Utilizare conform revendicării 4, în care tulburarea intestinală este selectată din grupul constând din afecțiune intestinală inflamatorie, boală intestinală inflamatorie idiopatică, boala Crohn, și colita ulcerativă.
11. Utilizare conform revendicării 4, în care tulburarea cardiacă este selectată din grupul constând din ischemie cardiacă, insuficiență cardiacă și hepatită.
12. Utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1 la 11, în care anticorpul uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, se combină cu un purtător acceptabil farmaceutic.
13. Utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1 la 12, în care subiectul este uman.
14. Utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1 la 13, în care agentul terapeutic suplimentar este selectat din grupul constând din ibuprofen, iradiere limfoidă totală, inhibitor de interleukină-1, OKT3, anticorp anti-CD25, anticorp anti-CDlla, anticorp anti-CD54, anticorp anti-CD54, anticorp anti-CD28, anticorp anti-CD80, anticorp anti-CD86, medicamente antiinflamatoare nestereoidiene, medicamente antiinflamatoare nestereoidiene, CDP-571/BAY-103356, cA2, 75 kdTNFR-lgG 55 kdTNFR-lgG, IDEC-CE9.1/SB 210396, DAB486-IL2, DAB389-IL-2, Anti-Tac, IL-4, IL-10, agoniști IL-4, agoniști IL-10, IL-IRA, TNFbp/s-TNFR, S284, R973401, MK-966, iloprost, metotrexat, talidomidă, medicamente înrudite cu talidomida, leflunomidă, acid tranexanic, T-614, prostaglandină El,
^2009-00821-- 9(
- 10 ~ 0 2 - 1 9 9 7 -tenidap, naproxen, meloxicam, piroxicam, diclofenac, indometacin, sulfsalazină, azatioprin, inhibitori ICE, inhibitori zap-70, inhibitori Ick, inhibitori VEGF, inhibitori VEGF-R, corticosteroizi, inhibitori TNF-convertază, anticorpi anti-IL-12, interleukină-11, interleukină-13, inhibitori ai interleukinei-17, aur, penicilamină, clorochină, hidroxiclorochină, clorambucil, ciclofosfamidă, ciclosporină, globulină anti-timocit, anticorpi anti-CD4, toxine CD5, peptide administrate oral, colagen, lobenzarit disodic, agenți de reglare ai citokinei HP228 și HP466, oligodeoxinucleotide fosforotioat antisens ICAM-1, receptor 1 complement solubil, prednison, orgotein, polisulfat de glicosaminoglican, minociclină, anticorpi antiIL2R, lipide marine, lipide botanice, auranofin, fenilbutazonă, acid meclofenamic, acid flufenamic, globulină imună intravenoasă, zileuton, acid micofenolic, tacrolimus, sirolimus, amipriloză, cladribin, azaribin, budebozidă, factor de creștere epidermică, aminosalicilați, 6-mercaptopurină, metronidazol, inhibitori ai lipoxigenazei, mesalamină, olsalazină, balsalazidă, antioxidanți, inhibitori ai tromboxanului, antagoniști ai receptorului IL-1, anticorpi monoclonali anti-IL-Ιβ, anticorpi monoclonali anti-IL-6, factori de creștere, inhibitori ai elastazei, compuși piridinil-imidazolici, promedicamente glucuronid -conjugate ale prednisolonului, dexametazonei sau budezonidului, promedicamente dextran-conjugate ale prednisolonului, dexametrazonei sau budezonidului, receptor 1 complement solubil, mesalazină cu eliberare lentă, antagoniști ai factorului de activare a plachetelor (PAF), ciprofloxacin, lignocaină, prednisolon, metilprednisolon, ciclofosfamidă, 4aminopiridină, tizanidină, interferon-pia, interferon-pib, copolimer 1, oxigen hiperbaric, imunoglobulină intravenoasă, clabribină, soluții saline hipertonice, antibiotice, hemofiltrare continuă, carbapenem, antagoniști ai citokinelor, cum ar fi TNFa, IL-Ιβ, IL-6, și/sau IL-8, SK&F 107647, guanilhidrazonă tetravalentă CNI1493, factor inhibitor al căii țesutului, PHP, chelatori de fier și chelați, incluzând un complex acid dietilentriamino-pentaacetic-fier (III), lizofilină, PGG-glucan, apolipoproteină A-l reconstituită cu lipide, acizi chiral hidroxamici, anticorpi antiendotoxină, E5531, rBPhi, peptide sintetice anti-endotoxină, anticorpi terapeutici de înlocuire a surfactanților și anticorpi anti-IL-8.
Λ-2 0 0 9 - 0 0 9 2 1- - 3$
-1 Ο ’ Ο 2 - 1 9 9 7 - -
15. Anticorp uman izolat, sau o porțiune a acestuia care se leagă la antigen, derivatizat sau legat la cel puțin o moleculă funcțională, în care anticorpul uman disociază din TNFa uman cu o Kd de 1 x IO'8 M sau mai mică și o constantă a ratei KOff de 1 x IO'3 s-1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard in vitro L929 cu ICso de 1 x 10 7 M sau mai mică.
16. Anticorp uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, conform revendicării 15, derivatizat sau legat la cel puțin o moleculă funcțională, în care anticorpul uman, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, are următoarele caracteristici:
a) disociază din TNFa uman cu o constantă a ratei KOff de 1 x IO’3 s1 sau mai mică, așa cum s-a determinat prin rezonanța plasmonului de suprafață;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 3, sau modificată din SEQ ID NR.: 3 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 1, 4, 5, 7 sau 8, sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 4, sau modificată din SEQ ID NR.: 4 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
17. Anticorp uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, conform revendicării 15, derivatizat sau legat la cel puțin o moleculă funcțională, în care anticorpul uman cuprinde o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2. 18
18. Anticorp uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, conform oricăreia dintre revendicările 15 la 17, în care molecula funcțională este
?. O 9 ? - ? π Q ; · - -10'02-1997-selectată din grupul constând dintr-un al doilea anticorp, un agent detectabil, un agent citotoxic, un agent farmaceutic și o proteină sau peptidă care poate să medieze asocierea anticorpului sau a porțiunii din anticorp cu altă moleculă.
19. Anticorp uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, conform revendicării 18, în care agentul detectabil este selectat din grupul constând dintr-un compus fluorescent, o enzimă detectabilă și biotină.
20. Anticorp uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, conform revendicării 19, în care compusul fluorescent este selectat din grupul constând din fluoresceină, izotiocianat de fluoresceină, rodamină, clorură de 5dimetilamino-l-naftalensulfonil și ficoeritrină.
21. Anticorp uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, conform revendicării 19, în care enzima detectabilă este selectată din grupul constând din fosfatază alcalină, peroxidază din hrean și glucozoxidază.
22. Compoziție cuprinzând un polimer biocompatibil și un anticorp uman izolat, sau o porțiune a acestuia care se leagă la antigen, care disociază din TNFa uman cu o Kd de 1 x IO-8 M sau mai mică și o constantă a ratei Koffde 1 x IO’3 s1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață, și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard in vitro L929 cu IC50 de 1 x IO’7 M sau mai mică.
23. Compoziție conform revendicării 22, în care anticorpul uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, are următoarele caracteristici:
a) disociază din TNFa uman cu o constantă a ratei KOff de 1 x IO’3 S’1 sau mai mică, așa cum s-a determinat prin testul de rezonanța a plasmonului de suprafață;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 3, sau modificată din SEQ ID NR.: 3 printr-o singură
zț- 2 O O 9 - O O 9 2 1 - “10'02-1997-substituție a alaninei în poziția 1, 4, 5, 7 sau 8 sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 4, sau modificată din SEQ ID NR.: 4 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11 sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
24. Compoziție conform revendicării 22, în care anticorpul uman izolat, sau porțiunea acestuia care se leagă la antigen, cuprinde o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2.
25. Compoziție conform oricăreia dintre revendicările 22 la 24, în care polimerul biocompatibil este selectat din grupul constând din acetat de etilen vinii, polianhidride, acid poliglicolic, colagen, poliortoesteri and acid polilactic.
26. Compoziție conform oricăreia dintre revendicările 22 la 24, în care polimerul biocompatibil este biodegradabil.
27. Compoziție cuprinzând un agent care întârzie absorbția și un anticorp uman izolat, sau o porțiune a acestuia care se leagă la antigen, care disociază din TNFa uman cu o Ka de 1 x IO’8 M sau mai mică și o constantă a ratei Koffde 1 x IO’3 s1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard in vitro L929 cu IC50 de 1 x IO’7 M sau mai mică.
28. Compoziție conform revendicării 27, în care anticorpul uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, are următoarele caracteristici:
22009-00821-“1 ο 02-1 997--
a) disociază din TNFa uman cu o constantă a ratei KOff de 1 x IO’3 s-1 sau mai mică, așa cum s-a determinat prin rezonanța plasmonului de suprafață;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 3, sau modificată din SEQ ID NR.: 3 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 1, 4, 5, 7 sau 8 sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 4, sau modificată din SEQ ID NR.: 4 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11 sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
29. Compoziție conform revendicării 27, în care anticorpul uman izolat, sau porțiunea acestuia care se leagă la antigen, cuprinde o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2.
30. Compoziție cuprinzând un purtător care împiedică eliberarea rapidă și un anticorp uman izolat, sau o porțiune a acestuia care se leagă la antigen, care disociază din TNFa uman cu o Ka de 1 x IO’8 M sau mai mică și o constantă a ratei KOff de 1 x IO3 s 1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață, și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard in vitro L929 cu IC50 de 1 x IO’7 M sau mai mică.
31. Compoziție conform revendicării 30, în care anticorpul uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, are următoarele caracteristici:
a) disociază din TNFa uman cu o constantă a ratei KOff de 1 x IO’3 s1 sau mai mică, așa cum s-a determinat prin rezonanța plasmonului de suprafață;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 3, sau modificată din SEQ ID NR.: 3 printr-o singură
-2009-00321-- 3Ύ
- 1 0 ’ 0 2 - 1 9 9 7 -substituție a alaninei în poziția 1, 4, 5, 7 sau 8 sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 4, sau modificată din SEQ ID NR.: 4 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11 sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
32. Compoziție conform revendicării 30, în care anticorpul uman izolat, sau porțiunea acestuia care se leagă la antigen, cuprinde o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2.
33. Fragment Fd sau F(ab*)2 al unui anticorp uman izolat caracterizat prin aceea că, anticorpul disociază din TNFa uman cu o Kd de 1 x IO 8 M sau mai mică și o constantă a ratei KOff de 1 x IO’3 s-1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață, și neutralizează citotoxicitatea TNFa uman într-un test standard in vitro L929 cu IC50 de 1 x IO'7 M sau mai mică.
34. Fragment Fd sau Ffab^ conform revendicării 33, în care anticorpul uman izolat are următoarele caracteristici:
a) disociază din TNFa uman cu o constantă a ratei Koff de 1 x IO-3 s-1 sau mai mică, așa cum s-a determinat prin rezonanța plasmonului de suprafață;
b) are un domeniu CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 3, sau modificată din SEQ ID NR.: 3 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 1, 4, 5, 7 sau 8, sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9;
c) are un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 4, sau modificată din SEQ ID NR.: 4 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin una până
¢1- 2 0 0 9 - 0 0 3 2 1 --10'02-1 997-la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
35. Fragment Fd sau Ftab^ conform revendicării 33, în care anticorpul uman izolat cuprinde o regiune variabilă a catenei ușoare (LCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1 și o regiune variabilă a catenei grele (HCVR) cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2.
36. Anticorp uman izolat, sau o porțiune a acestuia care se leagă la antigen, care disociază din TNFa uman cu o Kd de 1 x IO’8 M sau mai mică și o constantă a ratei Koff de 1 x IO-3 s1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață, și neutralizează activarea celulară indusă de TNFa într-un test standard in vitro pentru expresia ELAM-1 indusă de TNFa pe o celulă endotelială a venei ombilicale umane (HUVEC).
37. Anticorp uman izolat, sau o porțiune a acestuia care se leagă la antigen, care disociază din TNFa uman cu o Kd de 1 x IO 8 M sau mai mică și o constantă a ratei Koff de 1 x IO 3 S’1 sau mai mică, ambele determinate prin rezonanța plasmonului de suprafață și inhibă legarea TNFa uman pe ambii receptori p55 și p75 ai TNFa uman.
38. Acid nucleic izolat cuprinzând SEQ ID NR.: 36.
39. Acid nucleic izolat cuprinzând SEQ ID NR.: 37.
40. Compoziție farmaceutică cuprinzând anticorpul uman izolat, sau poțiunea acestuia care se leagă la antigen, conform revendicării 38 sau 39 și un purtător acceptabil farmaceutic.
41. Acid nucleic izolat care codifică domeniul CDR3 al catenei ușoare cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 3, sau modificată din SEQ ID ^-2009-00321-- /G
-1 O‘0 2 - 1 9 9 7 - NR.: 3 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 1, 4, 5, 7 sau 8, sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 1, 3, 4, 6, 7, 8 și/sau 9.
42. Acid nucleic izolat conform revendicării 41, care codifică o regiune variabilă a catenei ușoare a anticorpului (LCVR).
43. Acid nucleic izolat conform revendicării 42, în care domeniul CDR2 al anticorpului LCVR cuprinde secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 5.
44. Acid nucleic izolat conform revendicării 42, în care domeniul CDR1 al anticorpului LCVR cuprinde secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 7.
45. Acid nucleic izolat care codifică un domeniu CDR3 al catenei grele cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 4, sau modificată din SEQ ID NR.: 4 printr-o singură substituție a alaninei în poziția 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 sau 11, sau prin una până la cinci substituții de aminoacizi conservatoare în pozițiile 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 și/sau 12.
46. Acid nucleic izolat conform revendicării 45, care codifică o regiune variabilă a catenei grele a anticorpului (HCVR).
47. Acid nucleic izolat conform revendicării 46, în care domeniul CDR2 al anticorpului HCVR cuprinde secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 6.
48. Acid nucleic izolat conform revendicării 46, în care domeniul CDR1 al anticorpului HCVR cuprinde secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 8.
49. Acid nucleic izolat care codifică un domeniu CDR3 cuprinzând o secvență de aminoacid selectată din grupul constând din SEQ ID NR.: 11, SEQ ID NR.: 12, SEQ ID NR.: 13, SEQ ID NR.: 14, SEQ ID NR.: 15, SEQ ID NR.: 16,
^-2 0 0 9 - 0 0 3 2 1 - -1 0'02-1 3 9 7-SEQ ID NR.: 17, SEQ ID NR.: 18, SEQ ID NR.: 19, SEQ ID NR.: 20, SEQ ID NR.: 21, SEQ ID NR.: 22, SEQ ID NR.: 23, SEQ ID NR.: 24, SEQ ID NR.: 25, SEQ ID NR.: 26, SEQ ID NR.: 27, SEQ ID NR.: 28, SEQ ID NR.: 29, SEQ ID NR.: 30, SEQ ID NR.: 31, SEQ ID NR.: 32, SEQ ID NR.: 33 și SEQ ID NR.: 34.
50. Acid nucleic izolat care codifică o regiune variabilă a catenei ușoare a anticorpului cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1.
51. Acid nucleic izolat conform revendicării 50, care codifică regiunea variabilă a catenei ușoare a anticorpului și o regiunea constantă a catenei ușoare a anticorpului.
52. Acid nucleic izolat conform revendicării 51, care este într-un vector de expresie recombinant.
53. Acid nucleic izolat care codifică o regiune variabilă a catenei grele a anticorpului cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2.
54. Acid nucleic izolat conform revendicării 53, care codifică regiunea variabilă a catenei grele a anticorpului și o regiunea constantă a catenei grele a anticorpului.
55. Acid nucleic izolat conform revendicării 54, în care regiunea constantă a catenei grele a anticorpului este o regiune constantă IgGl sau o regiune constantă IgG4.
56. Acid nucleic izolat conform revendicării 54, care este într-un vector de expresie recombinant.
57. Vector de expresie recombinant care codifică:
* £·;γΟΚΑ jj κθ /Z <V 2 Ο 0 9 - 0 0 3 2 1 - “10 02-1997“-
a) ο catenă ușoară a unui anticorp având o regiune variabilă cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 1; și
b) o catenă grea a unui anticorp având o regiune variabilă cuprinzând secvența de aminoacid a SEQ ID NR.: 2.
58. Celulă gazdă caracterizată prin aceea că, în aceasta s-a introdus vectorul de expresie recombinant conform revendicării 57.
59. Procedeu de sinteză a unui anticorp uman care leagă TNFa uman, caracterizat prin aceea că, acesta cuprinde cultivarea celulei gazdă, conform revendicării 58, într-un mediu de cultură până când celula sintetizează un anticorp uman care leagă TNFa uman.
ROA200900821A 1996-02-09 1997-02-10 Anticorpi umani care leagă tnf alpha uman RO128628A2 (ro)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/599,226 US6090382A (en) 1996-02-09 1996-02-09 Human antibodies that bind human TNFα
US3147696P 1996-11-25 1996-11-25
ROA200500050A RO123028B1 (ro) 1996-02-09 1997-02-10 Anticorpi umani, care leagă tnf alpha uman

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RO128628A2 true RO128628A2 (ro) 2013-07-30

Family

ID=24398777

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ROA200900821A RO128628A2 (ro) 1996-02-09 1997-02-10 Anticorpi umani care leagă tnf alpha uman

Country Status (9)

Country Link
US (8) US6090382A (ro)
EP (9) EP2930186A1 (ro)
CN (5) CN1876683A (ro)
BR (1) BRPI9715219C8 (ro)
CA (2) CA2596476A1 (ro)
NZ (4) NZ587678A (ro)
RO (1) RO128628A2 (ro)
RU (1) RU2268266C2 (ro)
UA (2) UA111707C2 (ro)

Families Citing this family (382)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5959087A (en) * 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US20030225254A1 (en) * 1989-08-07 2003-12-04 Rathjen Deborah Ann Tumour necrosis factor binding ligands
JP3443119B2 (ja) * 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
US6713610B1 (en) * 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6270766B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) * 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US7608262B2 (en) * 1996-02-16 2009-10-27 The Kennedy Institute Of Rheumatology Methods of preventing or treating thrombosis with tumor necrosis factor antagonists
EP2305027B1 (en) * 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
JP2002505574A (ja) * 1997-04-30 2002-02-19 エンゾン，インコーポレイテッド ポリアルキレンオキシド修飾された単鎖ポリペプチド
US20040009166A1 (en) * 1997-04-30 2004-01-15 Filpula David R. Single chain antigen-binding polypeptides for polymer conjugation
GB9722131D0 (en) * 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
US20020114802A1 (en) * 1998-02-10 2002-08-22 Tjellstrom Bo Arthur Einar Oral immunoglobulin treatment for inflammatory bowel disease
US7067144B2 (en) * 1998-10-20 2006-06-27 Omeros Corporation Compositions and methods for systemic inhibition of cartilage degradation
EP1022027A1 (en) * 1999-01-22 2000-07-26 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Tumor necrosis factor antagonists and their use in endometriosis
US7883704B2 (en) * 1999-03-25 2011-02-08 Abbott Gmbh & Co. Kg Methods for inhibiting the activity of the P40 subunit of human IL-12
US6914128B1 (en) 1999-03-25 2005-07-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Human antibodies that bind human IL-12 and methods for producing
US7135287B1 (en) 1999-10-02 2006-11-14 Biosite, Inc. Human antibodies
US20070111259A1 (en) * 1999-10-02 2007-05-17 Medarex, Inc. Human antibodies
US6680209B1 (en) * 1999-12-06 2004-01-20 Biosite, Incorporated Human antibodies as diagnostic reagents
KR100840816B1 (ko) 2000-05-12 2008-06-23 젠자임 코포레이션 ＴＮＦ-α시그널링의 조절물질
UA81743C2 (uk) * 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20110195063A1 (en) * 2000-08-07 2011-08-11 Centocor, Inc. Methods of Treating Ankylosing Spondylitis Using Anti-TNF Antibodies and Peptides of Human Tumor Necrosis Factor
US7087726B2 (en) 2001-02-22 2006-08-08 Genentech, Inc. Anti-interferon-α antibodies
AU2008202001B2 (en) * 2001-06-08 2011-09-22 Abbvie Biotechnology Ltd Methods of administering anti-TNFalpha antibodies
AU2011218743B2 (en) * 2001-06-08 2012-09-06 Abbvie Biotechnology Ltd Methods of administering anti-TNFalpha antibodies
AU2013204357B2 (en) * 2001-06-08 2017-03-30 Abbvie Biotechnology Ltd Methods of administering anti-TNFalpha antibodies
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
EP1414517A4 (en) * 2001-06-26 2008-02-06 Photomed Technologies Inc MULTIPLE WAVELENGTH ILLUMINATOR
MY143582A (en) 2001-06-26 2011-05-31 Amgent Fremont Inc Antibodies to opgl
US20050271663A1 (en) * 2001-06-28 2005-12-08 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
US20060073141A1 (en) * 2001-06-28 2006-04-06 Domantis Limited Compositions and methods for treating inflammatory disorders
RU2200574C1 (ru) * 2001-10-10 2003-03-20 Санкт-Петербургский государственный научно-исследовательский институт скорой помощи им. И.И. Джанелидзе Способ профилактики и лечения сердечной недостаточности, развившейся вследствие инфаркта миокарда
US7794715B2 (en) * 2001-12-21 2010-09-14 Cellact Pharma Gmbh Anti-TIRC7 antibodies in therapy of inflammatory diseases
US20040009172A1 (en) * 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) * 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
TWI426919B (zh) * 2002-06-07 2014-02-21 Abbvie Biotechnology Ltd 投予抗－ＴＮＦα抗體之方法
AU2013204153A1 (en) * 2002-07-19 2013-05-02 Abbvie Biotechnology Ltd Treatment of TNFalpha related disorders
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AR040603A1 (es) * 2002-07-19 2005-04-13 Abbott Lab S A El uso de un anticuerpo anti-tnfalfa neutralizador de alta afinidad en la fabricacion de un medicamento y conjunto de elementos
AU2012203853B2 (en) * 2002-07-19 2015-09-03 Abbvie Biotechnology Ltd Treatment of TNFalpha related disorders
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040105858A1 (en) * 2002-08-29 2004-06-03 Kim Joanne Young Hee Kwak Diagnosis and treatment of infertility
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
US20070010658A1 (en) * 2002-10-29 2007-01-11 Holtet Thor L Trimeric binding proteins for trimeric cytokines
DE60335652D1 (de) * 2002-11-21 2011-02-17 Genzyme Corp Verwendung eines diamidderivats zur verhinderung der chronischen transplantatabstossung
PT1562571E (pt) * 2002-11-21 2011-11-25 Genzyme Corp Combinação de derivados de diamina e agentes imunossupressores para a indução da tolerância imunológica
US20040101939A1 (en) * 2002-11-22 2004-05-27 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US20040162414A1 (en) * 2002-11-22 2004-08-19 Santora Ling C. Method for reducing or preventing modification of a polypeptide in solution
US7285269B2 (en) 2002-12-02 2007-10-23 Amgen Fremont, Inc. Antibodies directed to tumor necrosis factor
MXPA05007019A (es) * 2002-12-30 2005-08-18 Amgen Inc Terapia de combinacion con factores co-estimuladores.
US7101978B2 (en) * 2003-01-08 2006-09-05 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
US20040208876A1 (en) 2003-04-18 2004-10-21 Kim Kyung Jin Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor
US20070027075A1 (en) * 2003-06-09 2007-02-01 Smithrud David B Compositions and methods for targeted drug delivery
SI1639011T1 (sl) 2003-06-30 2009-04-30 Domantis Ltd Pegilirana protitelesa z enojno domeno (dAb)
MXPA06000508A (es) * 2003-07-18 2006-04-05 Amgen Inc Agentes de union especifica al factor del crecimiento de los hepatocitos.
SG148877A1 (en) 2003-07-22 2009-01-29 Micron Technology Inc Semiconductor substrates including input/output redistribution using wire bonds and anisotropically conductive film, methods of fabrication and assemblies including same
US7485297B2 (en) * 2003-08-12 2009-02-03 Dyax Corp. Method of inhibition of vascular development using an antibody
US7871610B2 (en) * 2003-08-12 2011-01-18 Dyax Corp. Antibodies to Tie1 ectodomain
JP2007528720A (ja) * 2003-08-12 2007-10-18 ダイアックス コーポレイション Ｔｉｅ１結合リガンド
FR2859725B1 (fr) 2003-09-16 2006-03-10 Neovacs Procede a haut rendement pour l'obtention d'anticorps humains neutralisant l'activite biologique d'une cytokine humaine
US7435799B2 (en) * 2004-01-08 2008-10-14 Applied Molecular Evolution TNF-α binding molecules
TWI439284B (zh) * 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
GB0414054D0 (en) 2004-06-23 2004-07-28 Owen Mumford Ltd Improvements relating to automatic injection devices
EP2322554A1 (en) 2004-06-30 2011-05-18 Domantis Limited Composition comprising an anti-TNF-alpha domain antibody for the treatment of rheumatoid arthritis
WO2006014477A1 (en) * 2004-07-06 2006-02-09 Bioren, Inc. HIGH AFFINITY ANTI-TNF-α ANTIBODIES AND METHOD
EP1807111A4 (en) * 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
CN100460508C (zh) * 2004-11-03 2009-02-11 马延高 人胰岛素基因在甲醇酵母中的分泌表达方法
US7645450B2 (en) * 2004-12-29 2010-01-12 Yuhan Corporation Humanized antibody specific for tumor necrosis factor-alpha
US7731965B2 (en) * 2005-02-17 2010-06-08 Abbott Lab Human ring specific BNP antibodies
AU2006246721B2 (en) * 2005-05-16 2012-12-13 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
JP5089582B2 (ja) 2005-06-07 2012-12-05 エスバテック、アン アルコン バイオメディカル リサーチ ユニット、エルエルシー ＴＮＦαを阻害する安定な可溶性抗体
ES2776657T3 (es) 2005-06-14 2020-07-31 Amgen Inc Formulaciones de proteínas autotamponantes
JP2008543449A (ja) * 2005-06-17 2008-12-04 アボット・ラボラトリーズ 変性脊椎疾患の改良型治療方法
BRPI0613784A2 (pt) * 2005-07-21 2011-02-01 Abbott Lab expressão de gene múltipla incluindo constructos sorf e métodos com poliproteìnas, pro-proteìnas e proteólise
TW200726776A (en) * 2005-07-29 2007-07-16 Friedrich Alexander University Of Erlangen Nuremberg CD33-specific single-chain immunotoxin and methods of use
CN101253409A (zh) * 2005-08-02 2008-08-27 埃克斯生物科技公司 使用IL-1α自身抗体诊断、治疗和预防血管疾病
US20070041905A1 (en) * 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
GB2430880A (en) * 2005-10-04 2007-04-11 Cambridge Biostability Ltd Pharmaceutical compositions stabilized in glassy particles
CA2626804A1 (en) 2005-11-01 2007-08-09 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
CA2629438C (en) * 2005-11-09 2014-02-25 Abbott Laboratories Human bnp immunospecific antibodies
US7939069B2 (en) 2005-11-09 2011-05-10 Abbott Laboratories Human BNP immunospecific antibodies
PE20070684A1 (es) 2005-11-14 2007-08-06 Amgen Inc MOLECULAS QUIMERICAS DE ANTICUERPO RANKL-PTH/PTHrP
EP1987064A4 (en) * 2006-02-01 2010-04-07 Arana Therapeutics Ltd DOMAIN ANTIBODY CONSTRUCT
US7935342B2 (en) * 2006-02-02 2011-05-03 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating obesity by administering a trkB antagonist
EP1988923A1 (en) * 2006-02-02 2008-11-12 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating unwanted weight loss or eating disorders by administering a trkb agonist
MX2008012896A (es) 2006-04-05 2008-10-14 Abbott Biotech Ltd Purificacion de anticuerpos.
WO2007120626A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
CA2564435A1 (en) 2006-04-10 2007-10-10 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for monitoring and treating intestinal disorders
WO2007120656A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US9605064B2 (en) * 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080118496A1 (en) * 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
EP2708242A3 (en) 2006-04-10 2014-03-26 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
US20080131374A1 (en) * 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US8022188B2 (en) * 2006-04-24 2011-09-20 Abbott Laboratories Immunosuppressant binding antibodies and methods of obtaining and using same
US20110008282A1 (en) * 2006-05-15 2011-01-13 Xbiotech, Inc. IL-1alpha immunization induces autoantibodies protective against atherosclerosis
ES2374845T3 (es) * 2006-05-22 2012-02-22 Xbiotech, Inc Tratamiento de cáncer con anticuerpos anti-il-1.
RS52176B (sr) * 2006-06-02 2012-08-31 Regeneron Pharmaceuticals Inc. Antitela visokog afiniteta prema humanom il-6 receptoru
US20080311043A1 (en) * 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
CN103316402A (zh) 2006-06-30 2013-09-25 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
CN101505795B (zh) 2006-07-03 2013-02-13 查尔斯·戴维·阿代尔 用于调节细胞粘附分子表达的组合物
US20080064045A1 (en) * 2006-09-07 2008-03-13 Huaiqin Wu Biomarker fragments for the detection of human BNP
BRPI0716762A2 (pt) * 2006-09-13 2013-09-24 Abbott Lab melhorias da cultura celular
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
EP2500416A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
EP2486941B1 (en) 2006-10-02 2017-03-15 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human antibodies that bind CXCR4 and uses thereof
NZ576133A (en) 2006-10-27 2012-10-26 Abbott Biotech Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
US8754107B2 (en) * 2006-11-17 2014-06-17 Abbvie Inc. Aminopyrrolidines as chemokine receptor antagonists
BRPI0717902A2 (pt) 2006-12-01 2013-10-29 Medarex Inc "anticorpo monoclonal humano isolado, composição, conjugado anticorpo-molécula parceria, imunoconjugado, molécula de ácido nucléico isolada, vetor de expressão, célula hospedeira, método para prepar um anticorpo anti-cd22, método para inibir o desenvolvimento de uma célula tumoral que expressa cd22 e método para tratar uma doença inflamatória ou autoimuneem um indivíduo"
CL2007003622A1 (es) 2006-12-13 2009-08-07 Medarex Inc Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales.
JP2010513306A (ja) 2006-12-14 2010-04-30 メダレックス インコーポレーティッド Ｃｄ７０に結合するヒト抗体およびその使用
BRPI0720473A2 (pt) * 2006-12-20 2014-01-14 Rinat Neuroscience Corp Agonistas de trkb para tratamento de distúbios autoimunes
WO2008089070A2 (en) * 2007-01-12 2008-07-24 Dyax Corp. Combination therapy for the treatment of cancer
AU2008205512B2 (en) * 2007-01-16 2014-06-12 Abbvie Inc. Methods for treating psoriasis
MX2009010361A (es) 2007-03-29 2009-10-16 Abbott Lab Anticuerpos il-12 anti-humanos cristalinos.
US20100255513A1 (en) 2007-03-30 2010-10-07 Denson Lee A Serological markers of inflammatory bowel disease phenotype and disease progression
US7807168B2 (en) * 2007-04-10 2010-10-05 Vaccinex, Inc. Selection of human TNFα specific antibodies
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
WO2008149147A2 (en) * 2007-06-06 2008-12-11 Domantis Limited Polypeptides, antibody variable domains and antagonists
WO2008154543A2 (en) 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP2173380A4 (en) * 2007-07-13 2011-08-31 Abbott Biotech Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa HEMMER
WO2009020654A1 (en) 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
CN101808515A (zh) * 2007-09-25 2010-08-18 雅培制药有限公司 作为趋化因子受体拮抗剂的八氢并环戊二烯化合物
NZ622583A (en) 2007-11-30 2015-08-28 Abbvie Biotechnology Ltd Protein formulations and methods of making same
US8883146B2 (en) 2007-11-30 2014-11-11 Abbvie Inc. Protein formulations and methods of making same
WO2009073805A2 (en) * 2007-12-04 2009-06-11 Verdezyne, Inc. Aglycosylated therapeutic antibodies and therapeutic antibody-encoding nucleotide sequences
EP2225276B1 (en) * 2007-12-31 2014-04-23 Bayer Intellectual Property GmbH Antibodies to tnf alpha
CN101965514A (zh) * 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
BRPI0907186A2 (pt) 2008-01-15 2015-07-14 Abbott Gmbh & Co Kg Composições proteicas pulverizadas e métodos para sua produção
NZ600979A (en) 2008-01-15 2014-01-31 Abbott Lab Improved mammalian expression vectors and uses thereof
KR20100126515A (ko) * 2008-03-18 2010-12-01 아보트 러보러터리즈 건선의 치료방법
JP5646457B2 (ja) * 2008-04-29 2014-12-24 アッヴィ・インコーポレイテッド 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
US20110112281A1 (en) * 2008-05-20 2011-05-12 Kaneka Corporation Cytotoxic composition
KR20120127543A (ko) 2008-05-23 2012-11-21 시와 코퍼레이션 재생을 촉진하는 방법, 조성물 및 장치
NZ590033A (en) * 2008-05-30 2011-08-26 Xbiotech Inc Interleukin-1alpha antibodies and methods of use
AR072000A1 (es) 2008-06-03 2010-07-28 Abbott Lab Proteinas de union multivalentes con capacidad de unir dos o mas antigenos y usos de la misma
JP2011523853A (ja) 2008-06-03 2011-08-25 アボット・ラボラトリーズ 二重可変ドメイン免疫グロブリン及びその使用
HUE028347T2 (en) 2008-06-10 2016-12-28 Abbvie Inc Tricyclic compounds
RU2653753C1 (ru) * 2008-06-25 2018-05-14 ИЭсБиЭйТЕК, ЭН АЛЬКОН БАЙОМЕДИКАЛ РИСЕРЧ ЮНИТ ЭлЭлСи СТАБИЛЬНЫЕ И РАСТВОРИМЫЕ АНТИТЕЛА, ИНГИБИРУЮЩИЕ TNFα
BRPI0915448A2 (pt) * 2008-07-08 2015-11-10 Abbott Lab imunoglobulinas de domínio variável duplo para prostaglandina e2 e usos das mesmas
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
CA2737056C (en) * 2008-09-12 2018-10-30 Xbiotech Inc. Targeting pathogenic monocytes
KR20110079693A (ko) * 2008-10-29 2011-07-07 와이어쓰 엘엘씨 단일 도메인 항원 결합 분자의 정제 방법
AU2009319856A1 (en) * 2008-11-28 2010-06-03 Abbvie Inc. Stable antibody compositions and methods for stabilizing same
KR20110110247A (ko) 2008-12-30 2011-10-06 센토코 오르토 바이오테크 인코포레이티드 강직성 척추염 환자에서 항-ＴＮＦα 항체에 대한 임상적 반응을 예측하는 혈청 마커
WO2010081787A1 (en) * 2009-01-14 2010-07-22 Domantis Limited IMPROVED TNFα ANTAGONISM, PROPHYLAXIS & THERAPY WITH REDUCED ORGAN NECROSIS
IT1394281B1 (it) 2009-01-19 2012-06-06 Zardi Processo per la produzione di proteine di fusione polivalenti e polispecifiche utilizzando come struttura portante l'uteroglobina e prodotti cosi' ottenuti.
SG173705A1 (en) * 2009-03-05 2011-09-29 Abbott Lab Il-17 binding proteins
CN101896502B (zh) * 2009-03-20 2012-10-17 刘庆法 抗人TNFα单抗、分子进化及其应用
CA2758964A1 (en) 2009-04-16 2010-10-21 Abbott Biotherapeutics Corp. Anti-tnf-.alpha. antibodies and their uses
CN102458517B (zh) 2009-04-29 2014-07-23 阿布维生物技术有限公司 自动注射装置
AU2010242840B2 (en) * 2009-05-01 2014-04-17 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
SG179135A1 (en) * 2009-09-14 2012-05-30 Abbott Lab Methods for treating psoriasis
US8568726B2 (en) 2009-10-06 2013-10-29 Medimmune Limited RSV specific binding molecule
TW201119676A (en) * 2009-10-15 2011-06-16 Abbott Lab Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
EP3037104B1 (en) 2009-10-20 2020-05-27 AbbVie Inc. Isolation and purification of anti-il-13 antibodies using protein a affinity chromatography
UY32979A (es) * 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
EP2493923A1 (en) * 2009-10-30 2012-09-05 Abbott Laboratories Sorf constructs and multiple gene expression
KR20120102724A (ko) * 2009-12-01 2012-09-18 아보트 러보러터리즈 신규한 트리사이클릭 화합물
ME02800B (me) 2009-12-01 2018-01-20 Abbvie Inc Nova triciklična jedinjenja
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
NZ600069A (en) 2009-12-15 2015-02-27 Abbvie Biotechnology Ltd Improved firing button for automatic injection device
JP2013514388A (ja) 2009-12-16 2013-04-25 フィリップ ボッシュ， 間質性膀胱炎の処置の方法
US20130052195A1 (en) 2009-12-23 2013-02-28 Emergent Product Development Seattle,LLC Compositions Comprising TNF-alpha and IL-6 Antagonists and Methods of Use Thereof
EP2531613A2 (en) 2010-02-02 2012-12-12 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for predicting responsiveness to treatment with tnf-alpha inhibitor
WO2011095174A1 (en) 2010-02-08 2011-08-11 Aarhus Universitet Human herpes virus 6 and 7 u20 polypeptide and polynucleotides for use as a medicament or diagnosticum
CN102958537B (zh) 2010-04-07 2015-09-16 Abbvie公司 TNF-α结合蛋白
NZ702172A (en) 2010-04-21 2016-03-31 Abbvie Biotechnology Ltd Wearable automatic injection device for controlled delivery of therapeutic agents
US20110287018A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Philip Bosch Methods of Treating Interstitial Cystitis
HUE039740T2 (hu) * 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére
PT2582391T (pt) 2010-06-18 2019-01-11 Xbiotech Inc Tratamento da artrite
EP3252072A3 (en) 2010-08-03 2018-03-14 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US8822663B2 (en) 2010-08-06 2014-09-02 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
RU2013110030A (ru) 2010-08-23 2014-09-27 ИксБиотеч, Инк. Лечение неопластических заболеваний
SG187938A1 (en) 2010-08-26 2013-04-30 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9649376B2 (en) 2010-09-27 2017-05-16 Siwa Corporation Selective removal of age-modified cells for treatment of atherosclerosis
DK4108671T3 (da) 2010-10-01 2025-01-06 Modernatx Inc Modificerede nukleosider, nukleotider og nukleinsyrer samt anvendelser deraf
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
AU2011322482B2 (en) 2010-10-30 2017-03-23 Oxford University Innovation Limited Treatment for Dupuytren's disease
AU2011325974B2 (en) * 2010-11-11 2016-10-27 Abbvie Biotechnology Ltd. Improved high concentration anti-TNFalpha antibody liquid formulations
US8721571B2 (en) 2010-11-22 2014-05-13 Siwa Corporation Selective removal of cells having accumulated agents
EP2490024A1 (en) 2010-12-22 2012-08-22 Proteomika, S.L. Method to optimize the treatment of patients with biological drugs
AU2012209222B2 (en) 2011-01-24 2015-07-09 Abbvie Biotechnology Ltd Removal of needle shields from syringes and automatic injection devices
EP3187216B1 (en) 2011-01-24 2019-08-21 AbbVie Biotechnology Ltd. Automatic injection devices having overmolded gripping surfaces
US8992477B2 (en) 2011-01-24 2015-03-31 Elcam Agricultural Cooperative Association Ltd. Injector
US20130344081A1 (en) * 2011-03-07 2013-12-26 The University Of Tokushima Method of treating amyotrophic lateral sclerosis
MX2013010699A (es) 2011-03-18 2014-03-27 Abbvie Inc Sistemas, dispositivosy metodos para ensamblar dispositivos de inyeccion automaticos y sub-ensambles de los mismos.
TWI588156B (zh) 2011-03-28 2017-06-21 賽諾菲公司 具有交叉結合區定向之雙重可變區類抗體結合蛋白
JP2014515658A (ja) 2011-03-29 2014-07-03 アッヴィ・インコーポレイテッド 自動注射装置における改善されたシュラウド展開
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
US9724409B2 (en) 2011-04-01 2017-08-08 Xbiotech, Inc. Treatment of inflammatory skin disease
AU2012245211B2 (en) 2011-04-21 2016-03-10 Abbvie Inc. Wearable automatic injection device
EP2702077A2 (en) * 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
AR086113A1 (es) 2011-04-30 2013-11-20 Abbott Lab Isoxazolinas como agentes terapeuticos
CA2835094C (en) 2011-05-06 2020-12-22 David Gearing Anti-nerve growth factor antibodies and methods of preparing and using the same
GB201112429D0 (en) 2011-07-19 2011-08-31 Glaxo Group Ltd Antigen-binding proteins with increased FcRn binding
CN103958545A (zh) 2011-08-30 2014-07-30 Nvip私人有限公司 犬源化肿瘤坏死因子抗体及其使用方法
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US20130072470A1 (en) 2011-09-21 2013-03-21 Abbvie Inc. Novel tricyclic compounds
PT2750709T (pt) 2011-09-23 2018-11-22 Xbiotech Inc Tratamento da caquexia
JP6113737B2 (ja) 2011-10-03 2017-04-12 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 修飾型のヌクレオシド、ヌクレオチドおよび核酸、ならびにそれらの使用方法
US20140288278A1 (en) 2011-10-31 2014-09-25 Joseph Nti-Gyabaah Chromatography process for resolving heterogeneous antibody aggregates
HK1202628A1 (en) 2011-11-30 2015-10-02 Abbvie Deutschland Gmbh & Co Kg Methods and compositions for determining responsiveness to treatment with a tnf-alpha inhibitor
US20140359902A1 (en) 2011-12-16 2014-12-04 Synthon Biopharmaceuticals B.V. EXPRESSION OF SECRETORY IgA ANTIBODIES IN DUCKWEED
KR20140102759A (ko) 2011-12-16 2014-08-22 모더나 세라퓨틱스, 인코포레이티드 변형된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 핵산 조성물
CN104159920A (zh) 2011-12-30 2014-11-19 艾伯维公司 针对il-13和/或il-17的双重可变结构域免疫球蛋白
JP2015509526A (ja) 2012-03-07 2015-03-30 カディラ ヘルスケア リミティド 医薬製剤
WO2013149376A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Abbott Laboratories Chemokine receptor antagonists
EP2834259A4 (en) 2012-04-02 2016-08-24 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
RU2499000C1 (ru) * 2012-04-06 2013-11-20 Открытое акционерное общество "Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения" (ОАО "ВНЦМДЛ") ВАРИАБЕЛЬНЫЕ ДОМЕНЫ ЛЕГКОЙ И ТЯЖЕЛОЙ ЦЕПИ МЫШИНОГО МОНОКЛОНАЛЬНОГО АНТИТЕЛА ПРОТИВ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ АЛЬФА (ФНО-α) ЧЕЛОВЕКА (ВАРИАНТЫ), АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЙ ФРАГМЕНТ (Fab) ПРОТИВ ФНО-α ЧЕЛОВЕКА, СОДЕРЖАЩИЙ УКАЗАННЫЕ ДОМЕНЫ (ВАРИАНТЫ)
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9505833B2 (en) 2012-04-20 2016-11-29 Abbvie Inc. Human antibodies that bind human TNF-alpha and methods of preparing the same
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9334319B2 (en) * 2012-04-20 2016-05-10 Abbvie Inc. Low acidic species compositions
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
PT2692865E (pt) * 2012-07-30 2015-02-06 Nbe Therapeutics Llc Identificação mediada por transposição de proteínas funcionais ou de ligação específicas
HK1211981A1 (en) * 2012-09-02 2016-06-03 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
TW201422590A (zh) 2012-09-07 2014-06-16 Abbvie Inc 雜環核激素受體調節劑
AU2013312300A1 (en) 2012-09-07 2015-04-16 Coherus Biosciences, Inc. Stable aqueous formulations of adalimumab
US9545441B2 (en) 2012-09-18 2017-01-17 Xbiotech, Inc. Treatment of diabetes
RU2648141C2 (ru) 2012-09-19 2018-03-22 Эббви Биотерапьютикс Инк. Способы идентификации антител с пониженной иммуногенностью
MY171664A (en) 2012-11-01 2019-10-22 Abbvie Inc Anti-dll4/vegf dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US9597380B2 (en) 2012-11-26 2017-03-21 Modernatx, Inc. Terminally modified RNA
CA2894225A1 (fr) 2012-12-17 2014-06-26 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Utilisation d'anticorps monoclonaux pour le traitement de l'inflammation et d'infections bacteriennes
CA2897997A1 (en) 2013-01-21 2014-07-24 Abbvie Inc. Anti-tnf and anti-il17 combination therapy biomarkers for inflammatory disease
CN105051064A (zh) 2013-01-24 2015-11-11 葛兰素史克知识产权开发有限公司 抗TNF-α抗原结合蛋白
AU2014215639B2 (en) 2013-01-25 2017-03-23 Thymon, Llc Compositions for selective reduction of circulating bioactive soluble TNF and methods for treating TNF-mediated disease
CN105308068A (zh) * 2013-02-13 2016-02-03 法国化学与生物科技实验室 高度半乳糖基化的抗TNF-α抗体及其用途
TW201444867A (zh) 2013-03-08 2014-12-01 Lilly Co Eli 抗ｔｎｆ－抗ｉｌ－１７雙特異性抗體
US10023608B1 (en) 2013-03-13 2018-07-17 Amgen Inc. Protein purification methods to remove impurities
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
AU2013384204B2 (en) 2013-03-14 2017-03-16 Abbvie Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
HK1213919A1 (zh) 2013-03-14 2016-07-15 Abbvie Inc. 低酸性物質組合物和利用置換色譜技術製備該組合物的方法
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
CN105209147B (zh) 2013-03-15 2020-07-03 唐纳森公司 过滤介质和元件
JP2016522793A (ja) 2013-03-15 2016-08-04 アッヴィ・インコーポレイテッド ＩＬ−１βおよび／またはＩＬ−１７に対して指向された二重特異的結合タンパク質
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
TW201446961A (zh) 2013-05-06 2014-12-16 Abbvie Inc 用於細胞培養之組合物及其使用方法
MX355943B (es) 2013-06-26 2018-05-07 Abbvie Inc Carboxamidas primarias como inhibidores de btk.
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
EP3052521A1 (en) 2013-10-03 2016-08-10 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
WO2015057910A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
CN104726393A (zh) * 2013-12-24 2015-06-24 江苏省农业科学院 TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法
CN103965357B (zh) 2013-12-31 2016-08-17 嘉和生物药业有限公司 一种抗人rankl抗体
WO2015115849A1 (ko) 2014-01-29 2015-08-06 주식회사 엘지생명과학 배양배지의 최적화를 통한 재조합 단백질의 갈락토오스화를 조절하는 방법
US20150291689A1 (en) 2014-03-09 2015-10-15 Abbvie, Inc. Compositions and Methods for Treating Rheumatoid Arthritis
TWI731535B (zh) 2014-03-21 2021-06-21 美商艾伯維有限公司 抗-egfr抗體及抗體藥物結合物
EP2946766B1 (en) 2014-05-23 2016-03-02 Ares Trading S.A. Liquid pharmaceutical composition
HUE029849T2 (en) 2014-05-23 2017-04-28 Ares Trading Sa Liquid pharmaceutical composition
WO2015191783A2 (en) 2014-06-10 2015-12-17 Abbvie Inc. Biomarkers for inflammatory disease and methods of using same
EP3145951A1 (en) 2014-06-24 2017-03-29 InSight Biopharmaceuticals Ltd. Methods of purifying antibodies
US20170226552A1 (en) 2014-07-03 2017-08-10 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using cobalt
WO2016007764A1 (en) 2014-07-09 2016-01-14 Abbvie Inc. Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using non-commonly used sugars
MY192824A (en) 2014-09-03 2022-09-12 Boehringer Ingelheim Int Compound targeting il-23a and tnf-alpha and uses thereof
US10435464B1 (en) 2014-09-05 2019-10-08 Coherus Biosciences, Inc. Methods for making recombinant proteins
RU2721568C2 (ru) 2014-09-19 2020-05-20 Сива Корпорейшн Анти-age антитела для лечения воспаления и аутоиммунных нарушений
HUP1400510A1 (hu) 2014-10-28 2016-05-30 Richter Gedeon Nyrt Gyógyászati TNFalfa ellenes antitest készítmény
AR102417A1 (es) 2014-11-05 2017-03-01 Lilly Co Eli Anticuerpos biespecíficos anti-tnf- / anti-il-23
WO2016094881A2 (en) 2014-12-11 2016-06-16 Abbvie Inc. Lrp-8 binding proteins
US10358502B2 (en) 2014-12-18 2019-07-23 Siwa Corporation Product and method for treating sarcopenia
US9993535B2 (en) 2014-12-18 2018-06-12 Siwa Corporation Method and composition for treating sarcopenia
EP3237000A1 (en) 2014-12-23 2017-11-01 Pfizer Inc Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
EP3085709B1 (en) 2014-12-28 2019-08-21 Genor Biopharma Co., Ltd Humanized anti-human rankl antibody, pharmaceutical composition and use thereof
US10696735B2 (en) 2015-01-21 2020-06-30 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
WO2016162819A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Lupin Limited Stable aqueous pharmaceutical composition of anti-tnf alpha antibody
EP3078675A1 (en) 2015-04-10 2016-10-12 Ares Trading S.A. Induction dosing regimen for the treatment of tnf alpha mediated disorders
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
US11365198B2 (en) 2015-10-16 2022-06-21 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US12365689B2 (en) 2015-10-16 2025-07-22 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11780848B2 (en) 2015-10-16 2023-10-10 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1- carboxamide and solid state forms thereof
KR20250010141A (ko) 2015-10-16 2025-01-20 애브비 인코포레이티드 (3S,4R)-3-에틸-4-(3H-이미다조[1,2-a]피롤로[2,3-e]-피라진-8-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)피롤리딘-1-카복스아미드및 이의 고체상 형태의 제조 방법
US11512092B2 (en) 2015-10-16 2022-11-29 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11524964B2 (en) 2015-10-16 2022-12-13 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-a]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-n-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US10550126B2 (en) 2015-10-16 2020-02-04 Abbvie Inc. Processes for the preparation of (3S,4R)-3-ethyl-4-(3H-imidazo[1,2-A]pyrrolo[2,3-e]-pyrazin-8-yl)-N-(2,2,2-trifluoroethyl)pyrrolidine-1-carboxamide and solid state forms thereof
US11229702B1 (en) 2015-10-28 2022-01-25 Coherus Biosciences, Inc. High concentration formulations of adalimumab
US11583584B1 (en) 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use
EP3400241B1 (en) 2016-01-06 2020-07-22 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of afucosylated species in a monoclonal antibody composition
WO2017120359A1 (en) 2016-01-06 2017-07-13 Oncobiologics, Inc. Reduction of high molecular weight species, acidic charge species, and fragments in a monoclonal antibody composition
EP3411401A1 (en) 2016-02-03 2018-12-12 Oncobiologics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
CN109071675A (zh) 2016-02-19 2018-12-21 Siwa有限公司 使用高级糖化终产物(age)的抗体治疗癌症、杀死转移性癌细胞和预防癌症转移的方法和组合物
US11919924B1 (en) * 2016-03-15 2024-03-05 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Methods of purifying and producing an adalimumab antibody
CA3019003A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
CA3057829A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Siwa Corporation Anti-age antibodies for treating neurodegenerative disorders
US11071782B2 (en) 2016-04-20 2021-07-27 Coherus Biosciences, Inc. Method of filling a container with no headspace
SG10202001787QA (en) 2016-06-02 2020-04-29 Abbvie Inc Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
AU2017277534A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-EGFR antibody drug conjugates
AU2017277914A1 (en) 2016-06-08 2019-01-03 Abbvie Inc. Anti-CD98 antibodies and antibody drug conjugates
CN109641962A (zh) 2016-06-08 2019-04-16 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
RS61828B1 (sr) 2016-06-08 2021-06-30 Abbvie Inc Anti-b7-h3 antitela i antitelske konjugacije lekova
JP2019526529A (ja) 2016-06-08 2019-09-19 アッヴィ・インコーポレイテッド 抗ｂ７−ｈ３抗体及び抗体薬物コンジュゲート
CA3027173A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-egfr antibody drug conjugates
EP3257866A1 (en) 2016-06-17 2017-12-20 Academisch Medisch Centrum Modified anti-tnf antibody and use thereof in the treatment of ibd
EP3475306A1 (en) 2016-06-23 2019-05-01 Siwa Corporation Vaccines for use in treating various diseases and disorders
WO2018075408A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating acute myeloid leukemia (aml) with combinations of anti-cd200 antibodies, cytarabine, and daunorubicin
EP3528787B1 (en) 2016-10-21 2026-01-07 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations and methods of making the same
WO2018102594A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating solid tumors with anti-cd200 antibodies
CA3046489A1 (en) 2016-12-07 2018-06-14 Progenity Inc. Gastrointestinal tract detection methods, devices and systems
GB2557655A (en) 2016-12-14 2018-06-27 Teva Pharma Medical injection device packaging
KR102616436B1 (ko) 2016-12-14 2023-12-27 비오라 쎄라퓨틱스, 인크. Tnf 저해제로의 위장관 질환의 치료
EP3339444A1 (en) 2016-12-20 2018-06-27 Mabxience Research, S.L. Method for obtaining a glycoprotein with an increased percentage of afucosylated glycans
EP3824906A1 (en) 2016-12-21 2021-05-26 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
JOP20190162A1 (ar) 2016-12-30 2019-06-27 Biocad Joint Stock Co تركيبة صيدلانية مائية من جسم مضاد لـ tnf? أحادي النسيلة معاود الارتباط الجيني
US10925937B1 (en) 2017-01-06 2021-02-23 Siwa Corporation Vaccines for use in treating juvenile disorders associated with inflammation
US10858449B1 (en) 2017-01-06 2020-12-08 Siwa Corporation Methods and compositions for treating osteoarthritis
US10961321B1 (en) 2017-01-06 2021-03-30 Siwa Corporation Methods and compositions for treating pain associated with inflammation
US10995151B1 (en) 2017-01-06 2021-05-04 Siwa Corporation Methods and compositions for treating disease-related cachexia
CN120392659A (zh) 2017-01-11 2025-08-01 赛特瑞恩股份有限公司 稳定的液体调配物
KR20190117579A (ko) 2017-02-16 2019-10-16 엑스바이오테크, 인크. 화농성 한선염의 치료
CN110494554A (zh) * 2017-02-17 2019-11-22 隆扎有限公司 用于生产生物产物变体的方法
EP3609923A1 (en) 2017-04-13 2020-02-19 Siwa Corporation Humanized monoclonal advanced glycation end-product antibody
AR112341A1 (es) 2017-08-02 2019-10-16 Lilly Co Eli ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS ANTI-TNF- / ANTI-IL-23 DE IgG
AU2018336826B2 (en) 2017-09-20 2022-01-27 Alvotech Hf Pharmaceutical formulations for adalimumab
US11761963B2 (en) 2017-09-27 2023-09-19 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biomarker signature for predicting tumor response to anti-CD200 therapy
CA3082356A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Abbvie Inc. Glucocorticoid receptor agonist and immunoconjugates thereof
US11802154B2 (en) 2017-12-20 2023-10-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CD200 antibodies and uses thereof
WO2019126133A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Liquid formulations of anti-cd200 antibodies
US11518801B1 (en) 2017-12-22 2022-12-06 Siwa Corporation Methods and compositions for treating diabetes and diabetic complications
EP3514541A1 (de) * 2018-01-17 2019-07-24 Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH Verfahren zur quantitativen bestimmung eines therapeutischen tnf-alpha inhibitors
WO2019190877A1 (en) 2018-03-26 2019-10-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High throughput method for measuring the protease activity of complement c3 convertase
EP3581203A1 (en) 2018-06-11 2019-12-18 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Antibodies with increased activity in the digestive tract
EP3810095A1 (en) 2018-06-20 2021-04-28 Progenity, Inc. Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor
CA3103664A1 (en) 2018-07-03 2020-01-09 Novartis Ag Methods of treating or selecting a treatment for a subject resistant to tnf inhibitor using a nlrp3 antagonist
AU2019310803B2 (en) 2018-07-25 2022-11-03 Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. Anti-TIGIT antibody and uses thereof
WO2020053661A1 (en) 2018-09-13 2020-03-19 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Methods of purifying antibodies from the milk of transgenic non-human mammals comprising the use of chitosan
EP3870168A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 Novartis AG Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
ES2974842T3 (es) 2018-11-13 2024-07-01 Novartis Ag Compuestos y composiciones para el tratamiento de afecciones asociadas a la actividad de nlrp
US12134611B2 (en) 2018-11-13 2024-11-05 Novartis Ag Compounds and compositions for treating conditions associated with NLRP activity
CN116726361A (zh) 2018-11-19 2023-09-12 比奥拉治疗股份有限公司 用生物治疗剂治疗疾病的方法和装置
US12428484B2 (en) 2018-12-06 2025-09-30 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Anti-ALK2 antibodies and uses thereof
CN109762067B (zh) 2019-01-17 2020-02-28 北京天广实生物技术股份有限公司 结合人Claudin 18.2的抗体及其用途
WO2020154321A1 (en) 2019-01-22 2020-07-30 Novartis Inflammasome Research, Inc. Compounds and compositions for treating conditions associated with nlrp activity
IL320091A (en) 2019-01-31 2025-06-01 Numab Therapeutics AG Multispecific antibodies having specificity for tnfa and il-17a, antibodies targeting il-17a, and methods of use thereof
US10570210B1 (en) 2019-03-04 2020-02-25 Beijing Mabworks Biotech Co.Ltd Antibodies binding CD40 and uses thereof
JP2022525556A (ja) 2019-03-18 2022-05-17 アルヴォテック エイチエフ Ｔｎｆ－アルファ抗体の高濃度水性製剤
WO2021002887A1 (en) 2019-07-02 2021-01-07 Novartis Inflammasome Research, Inc. Gut-targeted nlrp3 antagonists and their use in therapy
CN114401988A (zh) * 2019-07-09 2022-04-26 国家生物技术研究所公司 具有降低的免疫原性的抗体
WO2021119482A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Progenity, Inc. Ingestible device for delivery of therapeutic agent to the gastrointestinal tract
JP2023511291A (ja) 2020-01-15 2023-03-17 ウーシー バイオロジクス アイルランド リミテッド 培養細胞から生産された生体物質を連続的に収穫するための装置及び方法
CN115087673B (zh) 2020-02-27 2025-02-18 正大天晴药业集团股份有限公司 结合il4r的抗体及其用途
WO2021182874A1 (ko) 2020-03-13 2021-09-16 삼성바이오에피스 주식회사 안정성이 증진된 액상 약제학적 조성물
IL298075A (en) 2020-05-12 2023-01-01 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co Ltd St2 antigen binding protein
CA3095676A1 (en) 2020-10-07 2022-04-07 Xbiotech Inc. True human antibody specific for interleukin 1 alpha (il-1a)
CA3095740A1 (en) 2020-10-07 2022-04-07 Xbiotech Inc. True human antibody specific for interleukin alpha (il-1a)
CA3095679A1 (en) 2020-10-07 2022-04-07 Xbiotech Inc. True human antibody specific for interleuken 1 alpha (il-1a)
CA3095675A1 (en) 2020-10-07 2022-04-07 Xbiotech Inc. True human antibody specific for interleukin 1 alpha (il-1a)
US11672929B2 (en) 2020-12-02 2023-06-13 Breathe Restore, Inc. Product delivery devices and methods
CA3202339A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Mei Jang Protein compositions and methods for producing and using the same
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
AU2022264509A1 (en) 2021-04-27 2023-12-14 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing therapeutic antibodies and uses thereof
EP4329884A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Generation Bio Co. Non-viral dna vectors expressing anti-coronavirus antibodies and uses thereof
IL310241A (en) 2021-07-27 2024-03-01 Astrazeneca Ab Lupus treatment
KR20240073051A (ko) 2021-09-16 2024-05-24 주식회사 에이프로젠 항-TNFα 항체를 포함하는 약제학적 조성물
US20260070974A1 (en) 2021-11-25 2026-03-12 Nona Biosciences (Suzhou) Co., Ltd. Anti-siglec-15 antibody and use thereof
WO2023154799A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Combination immunotherapy for treating cancer
JP2025507144A (ja) 2022-03-18 2025-03-13 ベイジン マブワークス バイオテック カンパニー リミテッド 抗体結合ｂ７－ｈ３及びその使用
AU2023338402A1 (en) 2022-09-07 2025-03-13 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitors for treating cancer
WO2024097804A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Mdx Management Llc Combination of a tyrosine kinase inhibitor and a pro-inflammatory agent for treating cancer
KR20260016906A (ko) 2023-03-17 2026-02-04 엠디엑스 메니지먼트 엘엘씨 요법의 유해효과를 개선하기 위한 조성물 및 방법
WO2025038745A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Mdx Management Llc Compositions and methods for activating immune cells
WO2025049345A1 (en) 2023-08-25 2025-03-06 Proteologix Us Inc. Anti-il-13 multispecific antibody constructs and uses thereof
WO2025049774A1 (en) 2023-08-30 2025-03-06 Vividion Therapeutics, Inc. (e)-2-(benzylamino)-n-(3-(methylsulfonyl)allyl)-benzamide derivatives and similar compounds as jak1 inhibitors for the treatment of inflammatory diseases, autoimmune diseases or cancer
US20260022185A1 (en) 2024-01-03 2026-01-22 Kiniksa Pharmaceuticals, Gmbh Method of reducing aggregation in the virus-inactivated preparation of anti-cd40 antibodies
WO2025188909A1 (en) 2024-03-06 2025-09-12 Mdx Management Llc Shp-1 inhibitor conjugates with pro-inflammatory compounds
WO2026006472A2 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Kiniksa Pharmaceuticals, Gmbh Compositions of il-1r1 antibodies and methods of producing and using the same

Family Cites Families (130)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
CA1208546A (en) * 1981-09-08 1986-07-29 Anthony Cerami Lipoprotein lipase suppression by endotoxin-induced mediator (shock assay)
US4510245A (en) 1982-11-18 1985-04-09 Chiron Corporation Adenovirus promoter system
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US5672347A (en) * 1984-07-05 1997-09-30 Genentech, Inc. Tumor necrosis factor antagonists and their use
IL73883A (en) * 1984-12-20 1990-12-23 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
EP0613006A1 (en) * 1985-08-16 1994-08-31 The Rockefeller University Antibodies to cachectin and immunoassays
US4870163A (en) 1985-08-29 1989-09-26 New York Blood Center, Inc. Preparation of pure human tumor necrosis factor and hybridomas producing monoclonal antibodies to human tumor necrosis factor
US4968615A (en) 1985-12-18 1990-11-06 Ciba-Geigy Corporation Deoxyribonucleic acid segment from a virus
EP0230574A3 (en) 1986-01-31 1989-03-22 Yale University Pharmaceutical compositions against infections caused by lav/htlv iii virus and the use thereof
US5013249A (en) * 1986-06-19 1991-05-07 Labinal Components And Systems, Inc. Electrical connectors
DE3631229A1 (de) * 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
JP2638652B2 (ja) * 1988-07-18 1997-08-06 カイロン・コーポレーション カケクチンと反応するモノクロナール抗体
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
DE68914244T2 (de) * 1988-10-24 1994-10-27 Otsuka Pharma Co Ltd Monoklonaler Antikörper.
EP0374510B1 (en) 1988-12-19 1997-01-15 American Cyanamid Company Products for the treatment of endotoxic shock in a mammal
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
ZA902949B (en) * 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
US5959087A (en) 1989-08-07 1999-09-28 Peptide Technology, Ltd. Tumour necrosis factor binding ligands
US6448380B2 (en) 1989-08-07 2002-09-10 Peptech Limited Tumor necrosis factor antibodies
JP3443119B2 (ja) 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
FR2651130B1 (fr) 1989-08-23 1991-12-13 Roussel Uclaf Sequence d'oligonucleotides anti-sens, anti-arn message du tnf alpha, procede de preparation, application a titre de medicaments et compositions pharmaceutiques.
GB8921123D0 (en) 1989-09-19 1989-11-08 Millar Ann B Treatment of ards
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DE4037604A1 (de) 1990-04-25 1991-10-31 Bayer Ag Verwendung von anti-tnf-antikoerpern als arzneimittel bei der behandlung von ischaemien und deren folgen
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
JPH06508511A (ja) 1990-07-10 1994-09-29 ケンブリッジ　アンティボディー　テクノロジー　リミティド 特異的な結合ペアーの構成員の製造方法
CA2090401A1 (en) 1990-08-27 1992-02-28 Deborah A. Rathjen Method of treating viral infection
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US7084260B1 (en) 1996-10-10 2006-08-01 Genpharm International, Inc. High affinity human antibodies and human antibodies against human antigens
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
GB9022547D0 (en) * 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Purified immunoglobulin
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5994510A (en) 1990-12-21 1999-11-30 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibodies specific for TNFα
GB2279077B (en) * 1990-12-21 1995-06-14 Celltech Ltd Therapeutic compositions comprising recombinant antibodies specific for the TNFalpha
GB9109645D0 (en) * 1991-05-03 1991-06-26 Celltech Ltd Recombinant antibodies
GB9028123D0 (en) * 1990-12-28 1991-02-13 Erba Carlo Spa Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor alpha
DE69233769D1 (de) 1991-03-01 2009-09-24 Dyax Corp Chimäres Protein mit Mikroprotein mit zwei oder mehr Disulfidbindungen und Ausgestaltungen davon
DE69233069T2 (de) 1991-03-15 2003-11-27 Amgen Inc., Thousand Oaks Pegylation von polypeptiden
US20070298040A1 (en) 1991-03-18 2007-12-27 Centocor, Inc. Methods of treating seronegative arthropathy with anti-TNF antibodies
US20060246073A1 (en) 1991-03-18 2006-11-02 Knight David M Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5698195A (en) 1991-03-18 1997-12-16 New York University Medical Center Methods of treating rheumatoid arthritis using chimeric anti-TNF antibodies
EP1097945B1 (en) * 1991-03-18 2007-07-04 New York University Monoclonal and chimeric antibody specific for human tumor necrosis factor
US20040120952A1 (en) 2000-08-07 2004-06-24 Centocor, Inc Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US7192584B2 (en) * 1991-03-18 2007-03-20 Centocor, Inc. Methods of treating psoriasis with anti-TNF antibodies
US6277969B1 (en) 1991-03-18 2001-08-21 New York University Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US5656272A (en) * 1991-03-18 1997-08-12 New York University Medical Center Methods of treating TNF-α-mediated Crohn's disease using chimeric anti-TNF antibodies
ATE171471T1 (de) 1991-03-29 1998-10-15 Immunex Corp Isolierte virale proteine als cytokinantagonisten
ATE414768T1 (de) 1991-04-10 2008-12-15 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer rezeptoren mittels phagemiden
DE4122599C2 (de) 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
US5328985A (en) * 1991-07-12 1994-07-12 The Regents Of The University Of California Recombinant streptavidin-protein chimeras useful for conjugation of molecules in the immune system
DE4124758A1 (de) * 1991-07-25 1993-01-28 Max Planck Gesellschaft Antitumorwirksame substanz aus humanen makrophagen
ATE181571T1 (de) * 1991-09-23 1999-07-15 Medical Res Council Methoden zur herstellung humanisierter antikörper
AU3244693A (en) 1991-12-17 1993-07-19 Schering Corporation Use of the combination of anti-tumor necrosis factor plus interleukin-6 to treat septic shock
US5605923A (en) 1992-04-02 1997-02-25 Smithkline Beecham Corporation Compounds useful for treating inflammatory diseases and inhibiting production of tumor necrosis factor
EP0585705B1 (en) 1992-08-28 1998-11-04 Bayer Corporation Use of monoclonal antibodies to TNF to treat bacterial meningitis
JPH07504203A (ja) 1992-09-15 1995-05-11 イミュネックス・コーポレーション 腫瘍壊死因子アンタゴニストを用いるｔｎｆ−依存性炎症の治療方法
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
WO1994008609A1 (en) 1992-10-15 1994-04-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. TREATMENT OF INSULIN RESISTANCE IN OBESITY LINKED TYPE II DIABETES USING ANTAGONISTS TO TNF-α FUNCTION
DE69427928T3 (de) * 1993-03-05 2012-05-10 Bayer Healthcare Llc Humane monoklonale anti-TNF alpha Antikörper
DE4307508A1 (de) 1993-03-10 1994-09-15 Knoll Ag Verwendung von anti-TNF-Antikörpern als Arzneimittel bei der Behandlung von Herzinsuffizienz (Herzmuskelschwäche)
ATE183513T1 (de) * 1993-06-03 1999-09-15 Therapeutic Antibodies Inc Herstellung von antikörperfragmenten
WO1995011317A1 (en) * 1993-10-19 1995-04-27 The Scripps Research Institute Synthetic human neutralizing monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus
EP0659766A1 (en) * 1993-11-23 1995-06-28 Schering-Plough Human monoclonal antibodies against human cytokines and methods of making and using such antibodies
NZ278607A (en) 1994-02-07 1999-05-28 Knoll Ag Use of tnf antagonists for treating disorders involving elevated serum levels of il-6 wherein the serum levels are 500pg/ml or above
WO1995023813A1 (en) * 1994-03-04 1995-09-08 Merck & Co., Inc. In vitro antibody affinity maturation using alanine scanning mutagenesis
US5561053A (en) * 1994-08-05 1996-10-01 Genentech, Inc. Method for selecting high-expressing host cells
US6113898A (en) * 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6090382A (en) 1996-02-09 2000-07-18 Basf Aktiengesellschaft Human antibodies that bind human TNFα
DE122004000004I1 (de) 1996-02-09 2004-08-12 Abott Biotechnology Ltd Humane Antikörper welche an Humanen TNFalpha binden.
US20050249735A1 (en) 2000-08-07 2005-11-10 Centocor, Inc. Methods of treating ankylosing spondylitis using anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
US20060018907A1 (en) * 2000-08-07 2006-01-26 Centocor, Inc. Anti-TNF antibodies and peptides of human tumor necrosis factor
UA81743C2 (uk) 2000-08-07 2008-02-11 Центокор, Инк. МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ
US20030012786A1 (en) 2001-05-25 2003-01-16 Teoh Leah S. Use of anti-TNF antibodies as drugs in treating septic disorders of anemic patients
CA2385745C (en) 2001-06-08 2015-02-17 Abbott Laboratories (Bermuda) Ltd. Methods of administering anti-tnf.alpha. antibodies
US20030161828A1 (en) 2002-02-19 2003-08-28 Abbott Gmbh & Co. Kg Use of TNF antagonists as drugs for the treatment of patients with an inflammatory reaction and without suffering from total organ failure
US20040009172A1 (en) 2002-04-26 2004-01-15 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20030206898A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Steven Fischkoff Use of anti-TNFalpha antibodies and another drug
US20090280065A1 (en) * 2006-04-10 2009-11-12 Willian Mary K Uses and Compositions for Treatment of Psoriasis
AR040603A1 (es) * 2002-07-19 2005-04-13 Abbott Lab S A El uso de un anticuerpo anti-tnfalfa neutralizador de alta afinidad en la fabricacion de un medicamento y conjunto de elementos
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
MY150740A (en) 2002-10-24 2014-02-28 Abbvie Biotechnology Ltd Low dose methods for treating disorders in which tnf? activity is detrimental
TWI439284B (zh) 2004-04-09 2014-06-01 Abbvie Biotechnology Ltd 用於治療ＴＮＦα相關失調症之多重可變劑量療法
EP1807111A4 (en) 2004-10-08 2009-05-27 Abbott Biotech Ltd SYNCYTIAL RESPIRATORY VIRUS INFECTION (RSV)
AU2006246721B2 (en) 2005-05-16 2012-12-13 Abbvie Biotechnology Ltd Use of TNF inhibitor for treatment of erosive polyarthritis
US20070041905A1 (en) 2005-08-19 2007-02-22 Hoffman Rebecca S Method of treating depression using a TNF-alpha antibody
CN100426232C (zh) * 2005-10-28 2008-10-15 纬创资通股份有限公司 可开机通用序列总线存储装置的制作方法
CA2626804A1 (en) 2005-11-01 2007-08-09 Abbott Biotechnology Ltd. Methods and compositions for diagnosing ankylosing spondylitis using biomarkers
MX2008012896A (es) 2006-04-05 2008-10-14 Abbott Biotech Ltd Purificacion de anticuerpos.
US9605064B2 (en) 2006-04-10 2017-03-28 Abbvie Biotechnology Ltd Methods and compositions for treatment of skin disorders
EP2666472A3 (en) 2006-04-10 2014-04-02 Abbott Biotechnology Ltd Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20080118496A1 (en) 2006-04-10 2008-05-22 Medich John R Uses and compositions for treatment of juvenile rheumatoid arthritis
WO2007120626A2 (en) * 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
WO2007120656A2 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Abbott Biotechnology Ltd. Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20090317399A1 (en) * 2006-04-10 2009-12-24 Pollack Paul F Uses and compositions for treatment of CROHN'S disease
US20080131374A1 (en) 2006-04-19 2008-06-05 Medich John R Uses and compositions for treatment of rheumatoid arthritis
US20080311043A1 (en) 2006-06-08 2008-12-18 Hoffman Rebecca S Uses and compositions for treatment of psoriatic arthritis
US20100021451A1 (en) * 2006-06-08 2010-01-28 Wong Robert L Uses and compositions for treatment of ankylosing spondylitis
CN103316402A (zh) * 2006-06-30 2013-09-25 艾伯维生物技术有限公司 自动注射装置
BRPI0716762A2 (pt) 2006-09-13 2013-09-24 Abbott Lab melhorias da cultura celular
NZ576133A (en) * 2006-10-27 2012-10-26 Abbott Biotech Ltd Crystalline anti-htnfalpha antibodies
WO2008150491A2 (en) 2007-05-31 2008-12-11 Abbott Laboratories BIOMARKERS PREDICTIVE OF THE RESPONSIVENESS TO TNFα INHIBITORS IN AUTOIMMUNE DISORDERS
EP2152318A4 (en) * 2007-06-01 2011-12-07 Abbott Biotech Ltd COMPOSITIONS AND USES FOR THE TREATMENT OF PSORIASIS AND CROHN'S DISEASE
WO2008154543A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Abbott Biotechnology Ltd. Methods for treating juvenile idiopathic arthritis
EP2173380A4 (en) * 2007-07-13 2011-08-31 Abbott Biotech Ltd METHOD AND COMPOSITIONS FOR PULMONARY ADMINISTRATION OF A TNFa HEMMER
WO2009020654A1 (en) * 2007-08-08 2009-02-12 Abbott Laboratories Compositions and methods for crystallizing antibodies
NZ622583A (en) * 2007-11-30 2015-08-28 Abbvie Biotechnology Ltd Protein formulations and methods of making same
CN101965514A (zh) * 2008-01-03 2011-02-02 艾博特生物技术有限公司 预测化合物在治疗银屑病中的长期功效
NZ600979A (en) * 2008-01-15 2014-01-31 Abbott Lab Improved mammalian expression vectors and uses thereof
BRPI0907186A2 (pt) * 2008-01-15 2015-07-14 Abbott Gmbh & Co Kg Composições proteicas pulverizadas e métodos para sua produção
US20100040630A1 (en) * 2008-03-24 2010-02-18 Aake Elden Methods and compositions for treating bone loss
CN102458517B (zh) * 2009-04-29 2014-07-23 阿布维生物技术有限公司 自动注射装置
RU2560701C2 (ru) * 2009-05-04 2015-08-20 Эббви Байотекнолоджи Лтд. Стабильные композиции с высокими концентрациями белков антител человека против tnf-альфа
HUE039740T2 (hu) 2010-06-03 2019-01-28 Abbvie Biotechnology Ltd Alkalmazások és készítmények hidradenitis suppurativa (HS) kezelésére

Also Published As

Publication number Publication date
CN101343324B (zh) 2015-06-24
CN1935260A (zh) 2007-03-28
CA2389943A1 (en) 1997-08-14
NZ614727A (en) 2015-03-27
EP2357200B1 (en) 2016-11-16
NZ587678A (en) 2012-04-27
US8197813B2 (en) 2012-06-12
CN1935260B (zh) 2012-07-18
EP1285930A2 (en) 2003-02-26
US8414894B2 (en) 2013-04-09
CN101003573B (zh) 2014-02-26
EP2305712A1 (en) 2011-04-06
CA2389943C (en) 2009-04-07
CN1876683A (zh) 2006-12-13
CN101302515A (zh) 2008-11-12
EP1285930A3 (en) 2007-05-30
US6509015B1 (en) 2003-01-21
US20060024293A1 (en) 2006-02-02
EP2930186A1 (en) 2015-10-14
US20100016557A1 (en) 2010-01-21
CN101302515B (zh) 2013-11-06
US7588761B2 (en) 2009-09-15
CA2596476A1 (en) 1997-08-14
EP2397494B1 (en) 2016-08-10
EP2930185A1 (en) 2015-10-14
BRPI9715219C8 (pt) 2017-12-12
US8372401B2 (en) 2013-02-12
CN101343324A (zh) 2009-01-14
US6090382A (en) 2000-07-18
EP2305713A1 (en) 2011-04-06
US20030219438A1 (en) 2003-11-27
US20120178107A1 (en) 2012-07-12
NZ598487A (en) 2014-01-31
EP2357200A1 (en) 2011-08-17
EP2933267A1 (en) 2015-10-21
US20120219564A1 (en) 2012-08-30
US20130122018A1 (en) 2013-05-16
UA102988C2 (ru) 2013-09-10
CN101003573A (zh) 2007-07-25
EP2397494A1 (en) 2011-12-21
NZ546790A (en) 2008-05-30
UA111707C2 (uk) 2016-06-10
RU2268266C2 (ru) 2006-01-20
EP2930187A1 (en) 2015-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RO128628A2 (ro) Anticorpi umani care leagă tnf alpha uman
US8753633B2 (en) Human antibodies that bind human TNFα
AU2006241387B2 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2014202726A1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
HK1053846A (en) Human antibodies that bind human tnfalpha
AU2014202693A1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
AU2004202769A1 (en) Human antibodies that bind human TNFalpha
HK1165437A (en) Human antibodies that bind human tnfalpha
MXPA98006347A (en) Human antibodies that link human tnfalfa