CN118159286A - 抗Siglec-15抗体及其应用 - Google Patents

抗Siglec-15抗体及其应用 Download PDF

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CN118159286A CN202280073954.8A CN202280073954A CN118159286A CN 118159286 A CN118159286 A CN 118159286A CN 202280073954 A CN202280073954 A CN 202280073954A CN 118159286 A CN118159286 A CN 118159286A
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邵娜
徐辉
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关广阔
周亮
张正平
李田田
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Abstract

提供了抗Siglec‑15抗体及其应用。具体来说，提供了分离的抗Siglec‑15抗体或其抗原结合片段，用于表达前述抗体或其抗原结合片段的表达载体和宿主细胞，以及前述抗体或者抗原结合片段的应用。进一步提供了含有前述抗体或其抗原结合片段的药物组合物，以及前述药物组合物的应用。

Description

抗Siglec-15抗体及其应用 技术领域
本公开属于生物医药领域，具体涉及抗Siglec-15抗体及其应用。更具体的，本公开涉及人Siglec-15单克隆抗体及其应用。
背景技术
免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗等常规治疗之后的第四大癌症治疗方式。免疫治疗因其副作用小、抗肿瘤活性高、适应症广，而被认为是最有前途的治疗方式。针对抑制性受体细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和程序性细胞死亡1(PD-1)的单克隆抗体(mAb)在超过15种人类恶性肿瘤中显示出临床疗效和持久治疗反应。抗PD-1/PD-L1治疗是目前最著名和临床最有效的癌症免疫治疗方法，但它仅对20％-30％的人实体瘤有效，大多数癌症患者显示出原发或获得性耐药。此外，大量接受ICB(免疫检查点封锁)治疗的患者产生了与治疗相关的毒性，称为“免疫相关不良事件”(irAE)，有时甚至会导致死亡。因此，开发出能在多种恶性肿瘤中表现出高抗肿瘤功效且能安全靶向的新免疫检查点抑制剂是非常必要的。
Siglec-15是Siglec家族的一员，最初在破骨细胞分化和骨重建中的作用被报道(Hiruma Y et.al.2011，Biochemical and biophysical research communications，409(3):424-429)。与此同时，Siglec-15在肿瘤调节中的详细功能和机制被研究人员揭示，他们发现Siglec-15可能是一个有效的免疫抑制分子，有助于未来的正常化癌症治疗。Siglec-15mRNA在大多数正常人体组织和各种免疫细胞亚群中均罕见表达。Siglec-15的表达主要在癌细胞，巨噬细胞和骨髓细胞上。Siglec-15广泛的表达在多种肿瘤包括结肠癌，甲状腺癌，子宫内膜样癌，肾癌，膀胱癌，肺癌和肝癌。小鼠实验证明巨噬细胞上的Siglec-15可以抑制体内T细胞反应，其并不影响T细胞凋亡，而是通过调节细胞生长抑制T细胞的特异性应答。Siglec-15基因敲除后并不会导致小鼠自身免疫性疾病或其他症状，将肿瘤细胞接种到Siglec-15基因敲除小鼠体内，发现这些小鼠的肿瘤生长缓慢，生存期延长，CD8 +T细胞和NK细胞的浸润也相应增多。将抗Siglec-15单克隆抗体α-S15用在多种小鼠肿瘤模型中，发现α-S15可成功阻断Siglec-15导致的免疫抑制作用，进而提高体内抗肿瘤免疫反应。另外，在肿瘤中，Siglec-15和PD-L1的表达不重叠，说明以Siglec-15作为治疗靶点，可以为PD-1/PD-L1疗法无应答的患者提供新的治疗选择。综上可见，Siglec15是一个安全有效、极具潜力的靶标。
目前，由NextCure公司主导的多项临床试验正在进行，以测试NC318(抗Siglec-15单克隆抗体)在实体瘤(例如非小细胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)和三阴性乳腺癌(TNBC))中的功效。
考虑到目前极其有限的抗Siglec-15的单克隆抗体，因此，开发靶向人Siglec-15的具有更高安全性，更好治疗效果的抗Siglec-15抗体具有重大意义。
现有技术文献：
1.WO 2018/057735A1；
2.Wang，J.，Sun，J.，Liu，L.N.et al.Siglec-15 as an immune suppressor and potential target for normalization cancer immunotherapy.Nat Med 25，656–666(2019)。
发明内容
本公开提供了一种高亲和力、高特异性、高生物活性的抗Siglec-15抗体，适合用于治疗与Siglec-15相关的疾病。
本公开提供了分离的抗体，例如，与Siglec-15(例如，人Siglec-15和猴Siglec-15)结合的小鼠、嵌合、人源化或全人源的单克隆抗体或其抗原结合片段。
本公开的抗体或其抗原结合片段具有多种用途，包括检测Siglec-15蛋白，以及治疗和预防与Siglec-15相关的疾病和病症，所述与Siglec-15相关的疾病和病症包括癌症、感染、自身免疫性疾病、骨代谢异常， 或其组合。
一方面，本公开提供了分离的抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR，所述重链CDR包含重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3，其中，(1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:79具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(6)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:97具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(7)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％、 81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:135具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(8)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:112具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或SEQ ID NO:99其具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(9)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:115所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或SEQ ID NO:99其具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(10)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；或(11)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:151所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:151具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR，所述轻链CDR包含轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3，其中，(1)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:14具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:16具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:18具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:34具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有 至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(4)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:70具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:72具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(5)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:86具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:88具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:90具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(6)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(7)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:140所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:144具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(8)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:121所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:121具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(9)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:124所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:124具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、 88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；或(10)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:127所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:127具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3以及轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3，其中，(1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:5、23、41、59、77、95或131所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:5、23、41、59、77、95或131具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)重链CDR2包含如SEQ ID NO:7、25、43、61、79、97、133、112、115或118所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:7、25、43、61、79、97、133、112、115或118具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)重链CDR3包含如SEQ ID NO:9、27、45、63、81、99、135或151所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:9、27、45、63、81、99、135或151具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(4)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:14、32、50、68、86、104、140、121、124或127所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:14、32、50、68、86、104、140、121、124或127具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(5)轻链CDR2包含如SEQ ID NO:16、34、52、70、88、106或142所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:16、34、52、70、88、106或142具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；和(6)轻链CDR3包含如SEQ ID NO:18、36、54、72、90、108或144所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:18、36、54、72、90、108或144具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3以及轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3，其中，(1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:14具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:16具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:18具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、 93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:34具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:70具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:72具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:79具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:81所示 的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:86具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:88具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:90具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(6)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:97具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；或(7)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:135具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:140所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:144具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3以及轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3，其中，(1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:112具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％、81％、 82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:115所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:121所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:121具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:124所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:124具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、 91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:127所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:127具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(6)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:135具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:140所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:144具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；或(7)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:151所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:151具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:140所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:144具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NOs：3，21，39，57，75，93，111，114，117，129，147或149所示的氨基酸序列；或与SEQ ID NOs：3，21，39，57，75，93，111，114，117，129，147或149具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、 86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NOs：12，30，48，66，84，102，120，123，126或138所示的氨基酸序列；或与SEQ ID NOs：12，30，48，66，84，102，120，123，126或138具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中，(1)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：3具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：12具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：21具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：30具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：39具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：48所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：48具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(4)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：57具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：66所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：66具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(5)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：75具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：84具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(6)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：93所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：93具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：102具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(7)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：129所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：129具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：138具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(8)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：111所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：111具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：102具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(9)所述重 链可变区包含如SEQ ID NO：114所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：114具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：102具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(10)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：120所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：120具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(11)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：123所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：123具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(12)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：126所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：126具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(13)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：147所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：147具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：138具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；或(14)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：149所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：149具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：138具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含重链可变区和重链恒定区，所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，重链可变区和轻链可变区包含上述氨基酸序列，重链恒定区具有人IgG1，IgG2或IgG4恒定区或其变体，优选人IgG1恒定区或其变体；轻链恒定区具有人κ恒定区或λ恒定区或其变体，其中该抗体或抗原结合片段其与Siglec-15结合。所述恒定区变体是指相对于恒定区具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述取代可以是保守氨基酸取代。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中，所述重链包含如SEQ ID NOs：2，20，38，56，74，92，110，113，116，128，146或148所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs：2，20，38，56，74，92，110，113，116，128，146或148具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链包含如SEQ ID NOs：11，29，47，65，83，101，119，122，125或137所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs：11，29，47，65，83，101，119，122，125或137具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中，(1)所述重链包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：2具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、 86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：11具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(2)所述重链包含如SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：20具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：29具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(3)所述重链包含如SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：38具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：47具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(4)所述重链包含如SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：56具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：65所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：65具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(5)所述重链包含如SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：74具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：83具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(6)所述重链包含如SEQ ID NO：92所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：92具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：101具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(7)所述重链包含如SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：128具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：137具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(8)所述重链包含如SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：110具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：101具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(9)所述重链包含如SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：113具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：101具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(10)所述重链包含如SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：119所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：119具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(11)所述重链包含如SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116具有至少80％、81％、82％、83％、84％、 85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：122具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(12)所述重链包含如SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：125所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：125具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；(13)所述重链包含如SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：146具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：137具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；或(14)所述重链包含如SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：148具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：137具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在一些具体的实施方案中，所述分离的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合。
在一些实施方案中，本公开的抗体包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条轻链组成，重链和轻链通过二硫键相互连接，其中每条重链包含上述重链恒定区，重链可变区或CDR序列，每条轻链包含上述轻链恒定区，轻链可变区或CDR序列，其中重链可变区的C-末端连接至重链恒定区的N-末端，轻链可变区的C-末端连接至轻链恒定区的N-末端。
本公开的抗体可以是例如IgG1，IgG2或IgG4同种型的全长抗体。在一些实施方案中，本文公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段是IgG1同种型抗体。在另一个实施方案中，本公开的抗体可以是单链抗体(scFv)，或抗体片段，例如Fab片段，F(ab') 2片段，Fd片段、Fv片段、dAb或分离的CDR区。
一方面，本公开提供与本公开任何示例性抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段结合人Siglec-15上相同表位的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本公开提供与本公开任何示例性抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段竞争结合人Siglec-15的抗体或其抗原结合片段。
一方面，本公开提供一种分离的核酸分子，其编码本公开的抗体或其抗原结合片段。
一方面，本公开提供一种表达载体，其包含前述核酸分子。
一方面，本公开提供一种宿主细胞，其包含前述核酸分子或前述表达载体。
一方面，本公开提供一种多肽融合物或多特异性抗体，其包含前述抗体或其抗原结合片段。
一方面，本公开提供一种病毒载体，其包含编码本公开的抗体或其抗原结合片段的核酸分子或前述核酸分子。
一方面，本公开提供一种药物组合物，其包含本公开的抗体或其抗原结合片段，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体；其中所述抗体或其抗原结合片段减少或阻断Siglec-15与其配体的结合和/或减少或阻断Siglec-15介导的信号转导。
一方面，本公开提供一种检测来源于受试者的样品中Siglec-15表达量的方法，该方法包括在使得本公开的抗体或其抗原结合片段能够和Siglec-15形成复合物的条件下，将所述样品与所述抗体或其抗原结合片段接触的步骤，和检测所述复合物的形成或测定所述复合物的量的步骤。
一方面，本公开提供一种用于在有需要的受试者中治疗或缓解与Siglec-15相关的疾病和病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗体或其抗原结合片段、前述核酸分子或前述药物组合物。
在一些具体的实施方案中，所述与Siglec-15相关的疾病和病症包括癌症、感染、自身免疫性疾病、骨代谢异常，或其组合。
一方面，本公开提供一种在有需要的受试者中调节免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗体或其抗原结合片段、前述核酸分子或前述药物组合物。
在一些具体的实施方案中，所述受试者患有癌症、感染、自身免疫性疾病、骨代谢异常，或其组合。
一方面，本公开提供一种减少有需要的受试者中T细胞抑制的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗体或其抗原结合片段、前述核酸分子或前述药物组合物。
在一些具体的实施方案中，所述受试者患有癌症、感染、自身免疫性疾病、骨代谢异常，或其组合。
一方面，本公开提供一种检测或诊断与Siglec-15相关的疾病或病症的方法，其包括：(a)使用根据本公开的抗体或其抗原结合片段测定受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达，以及(b)将所述Siglec-15水平与对照水平作比较，其中与所述对照水平相比，所述测定的Siglec-15水平增加表明有所述疾病或病症。
一方面，本公开提供一种监测疾病或病症进展的方法，其包括：(a)使用本公开的抗体或其抗原结合片段测定在第一时间点和之后时间点获得的受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及(b)比较所述第一时间点和之后时间点的所述受试者的所述细胞或所述组织样品中的Siglec-15表达水平，其中与所述第一时间点相比，在所述之后时间点测定的所述Siglec-15水平增加表明疾病或病症进展。
一方面，本公开提供一种监测对治疗的应答的方法，其包括：(a)使用本公开的抗体或其抗原结合片段测定治疗之前和之后受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及(b)比较随时间变化的Siglec-15水平，由此与治疗之前的Siglec-15水平相比，治疗之后测定的所述Siglec-15水平降低表明对所述治疗应答良好。
发明的效果
在一个具体的实施方式中，本公开采用了单个B细胞克隆技术(SBC)筛选阳性克隆，与传统的单克隆抗体筛选技术相比，可以大大缩短开发周期并且节省了大量的物力和人力，大大提高了抗体药物发现的效率。
在一个具体的实施方式中，采用免疫人源抗体转基因小鼠的方式制备获得的抗Siglec-15抗体具有全人源抗体的氨基酸序列，省去了冗长的抗体人源化过程，为筛选候选药物分子提供了足够的灵活性和多样性，进而改善了药物研发的CMC和临床开发的药物特性。
在一个具体的实施方式中，本公开的抗Siglec-15抗体与人Siglec-15蛋白具有高度亲和力，其解离常数通常小于1×10 -10M。
在一个具体的实施方式中，经酶联免疫吸附实验检测，本公开的抗Siglec-15抗体基本上不结合Siglec-2、Siglec-3、Siglec-4a、Siglec-10或PD-L1。
在一个具体的实施方式中，在T细胞实验中，本公开的抗Siglec-15抗体能显著增加IFN-γ的表达水平。
在一个具体的实施方式中，在人髓系细胞实验中，本公开的抗Siglec-15抗体能显著抑制髓细胞的存活以及TNF-α的释放。
在一个具体的实施方式中，本公开的抗Siglec-15抗体与人Siglec-15和猴Siglec-15蛋白，例如食蟹猴Siglec-15蛋白，有相似的结合能力。
附图说明
图1A-图1D示出了重组抗体与人Siglec-15蛋白结合的实验结果；
图2A-图2B示出了重组抗体与食蟹猴Siglec-15蛋白结合的实验结果；
图3A-图3B示出了重组抗体与小鼠Siglec-15蛋白结合的实验结果；
图4A-图4C示出了重组抗体与CHO-K1/人Siglec-15结合的实验结果；
图5A-图5B示出了重组抗体与CHO-K1/食蟹猴Siglec-15结合的实验结果；
图6示出了重组抗体与其他同类蛋白的交叉反应的实验结果；
图7A-图7D示出了重组抗体的T细胞功能试验——细胞因子IFN-γ分泌的实验结果；
图8A-图8D示出了重组抗体的髓系细胞功能试验——细胞增殖的实验结果；
图9示出了重组抗体的髓系细胞功能试验——细胞因子TNF-α分泌的实验结果。
具体实施方式
定义
为了更容易理解本公开，以下具体定义了某些技术和科学用语。除非在本文中另有明确定义，本公开使用的所有的其他技术和科学术语都具有本公开所属领域的一般技术人员通常理解的含义。
在本公开的权利要求和/或说明书中，除非上下文中另有说明，否则例如“一个/种(a，an)”、“所述(said)”或“所述(the)”等指示对象旨在支持单数和/或复数情况二者。
如在权利要求和说明书中所使用的，词语“包含”、“具有”、“包括”、“拥有”、或“含有”是指包括在内的或开放式的，并不排除额外的、未引述的元件或方法步骤。
如本公开所使用的，术语“约”表示：一个数值包括测定该数值所使用的装置或方法的误差的标准偏差。示例性的，前述标准偏差一般为原始数值相差20-30％的范围之内。在本文中，除非另有说明，步骤参数或条件的值默认均由“约”修饰。
虽然所公开的内容支持术语“或”的定义仅为替代物以及“和/或”，但除非明确表示仅为替代物或替代物之间相互排斥外，权利要求中的术语“或”是指“和/或”。
如本公开所使用的，在两种核酸或多肽比较中的术语“序列同一性”或“同一性百分比”，是指当使用核苷酸或氨基酸残基序列比较算法或通过目视检查测量，以最大的对应性进行比较和比对时，它们是具有相同序列特定百分比数。也就是说，核苷酸或者氨基酸序列的同一性可以利用下述比例来定义，该比例是将两个或多个核苷酸或氨基酸序列按照一致的核苷酸或氨基酸数比较达到最大的方式，并根据需要加入空位来进行比对时一致的核苷酸数或氨基酸数，在比对部分的全部核苷酸或氨基酸数中的比例。
如本公开所使用的，两个或更多个多核苷酸或多肽之间的序列同一性可通过以下方法测定：将多核苷酸或多肽的核苷酸或氨基酸序列对准且对经对准的多核苷酸或多肽中含有相同核苷酸或氨基酸残基的位置数目进行评分，且将其与经对准的多核苷酸或多肽中含有不同核苷酸或氨基酸残基的位置数目进行比较。多核苷酸可例如通过含有不同核苷酸或缺失核苷酸而在一个位置处不同。多肽可例如通过含有不同氨基酸或缺失氨基酸而在一个位置处不同。序列同一性可通过用含有相同核苷酸或氨基酸残基的位置数目除以多核苷酸或多肽中氨基酸残基的总数来计算。举例而言，可通过用含有相同核苷酸或氨基酸残基的位置数目除以多核苷酸或多肽中核苷酸或氨基酸残基的总数且乘以100来计算同一性百分比。
示例性的，在本公开中，当使用序列比较算法或通过目视检查测量以最大的对应性进行比较和比对时，两个或多个序列或子序列具有至少40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％核苷酸或氨基酸残基的“序列同一性”或“同一性百分比”。“序列同一性”或“同一性百分比”的判断/计算可以基于序列任何合适的区域上。例如，长度至少约10个残基的区域、长度至少约20个残基的区域、至少约50个残基的区域，至少约100个残基的区域，至少约200个残基的区域，或至少约400个残基的区域。在某些实施方案中，所述序列在任一或两个相比较的生物聚合物(就是核酸或多肽)的整个长度上基本相同。
如本公开所使用的，将不同序列的核苷酸或者氨基酸的编号进行对应的依据为，当使用核苷酸或氨基酸残基序列比较算法或通过目视检查测量，以最大的对应性进行比较或比对，进而判断“序列同一性”或“同一性百分比”时，目标核苷酸或者目标氨基酸相较于基准核苷酸或者基准氨基酸的编号。示例性的，两个序列之间的序列比较和同一性百分比测定可以通过National Center For Biotechnology Institute网站上的BLASTN/BLASTP算法的默认设置来进行。
如本公开所使用的，术语“氨基酸突变”或“核苷酸突变”，包括“取代、重复、缺失或添加一个或多个氨基酸或核苷酸”。在本公开中，术语“突变”是指核苷酸序列或者氨基酸序列的改变。在一个具体的实施方式中，术语“突变”是指“取代”。
在一个实施方式中，本公开的“突变”可以选自“保守突变”。在本公开中，术语“保守突变”是指可正常维持蛋白质的功能的突变。保守突变的代表性例子为保守置换/取代。例如，某些氨基酸可以取代序列中的其它氨基酸而没有明显的活性丧失。因为多肽的相互作用能力和性质限定了多肽的生物功能活性，所以可以在多肽序列中进行某些氨基酸序列取代，并且仍然获得具有类似性质的多肽。
如本公开所使用的，术语“保守突变”涉及用具有类似侧链的氨基酸残基替换氨基酸残基。本领域已经 定义了具有类似侧链的氨基酸残基家族，并且包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸和谷氨酸)、不带电极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、和半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸和色氨酸)、β-支链(例如苏氨酸、缬氨酸和异亮氨酸)和芳香侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和组氨酸)的氨基酸。
如本公开所使用的，“保守突变”通常在蛋白质的一个或多个位点上交换一种氨基酸。这种取代可以是保守的。作为被视作保守突变的置换，具体而言，可以举出Ala向Ser或Thr的置换、Arg向Gln、His或Lys的置换、Asn向Glu、Gln、Lys、His或Asp的置换、Asp向Asn、Glu或Gln的置换、Cys向Ser或Ala的置换、Gln向Asn、Glu、Lys、His、Asp或Arg的置换、Glu向Gly、Asn、Gln、Lys或Asp的置换、Gly向Pro的置换、His向Asn、Lys、Gln、Arg或Tyr的置换、Ile向Leu、Met、Val或Phe的置换、Leu向Ile、Met、Val或Phe的置换、Lys向Asn、Glu、Gln、His或Arg的置换、Met向Ile、Leu、Val或Phe的置换、Phe向Trp、Tyr、Met、Ile或Leu的置换、Ser向Thr或Ala的置换、Thr向Ser或Ala的置换、Trp向Phe或Tyr的置换、Tyr向His、Phe或Trp的置换、及Val向Met、Ile或Leu的置换。此外，保守突变还包括起因于基因所来源的个体差异、株、种的差异等天然产生的突变。
如本公开所使用的，术语“多核苷酸”指由核苷酸组成的聚合物。多核苷酸可以是单独片段的形式，也可以是更大的核苷酸序列结构的一个组成部分，其是从至少在数量或浓度上分离一次的核苷酸序列衍生而来的，能够通过标准分子生物学方法(例如，使用克隆载体)识别、操纵以及恢复序列及其组分核苷酸序列。当一个核苷酸序列通过一个DNA序列(即A、T、G、C)表示时，这也包括一个RNA序列(即A、U、G、C)，其中“U”取代“T”。换句话说，“多核苷酸”指从其他核苷酸(单独的片段或整个片段)中去除的核苷酸聚合物，或者可以是一个较大核苷酸结构的组成部分或成分，如表达载体或多顺反子序列。多核苷酸包括DNA、RNA和cDNA序列。“重组多核苷酸”属于“多核苷酸”中的一种。
如本公开所使用的，术语“重组多核苷酸”指具有在自然界中不连接在一起的序列的多核苷酸。重组多核苷酸可包括在合适的载体中，且该载体可用于转化至合适的宿主细胞。含有重组多核苷酸的宿主细胞被称为“重组宿主细胞”。然后多核苷酸在重组宿主细胞中表达以产生例如“重组多肽”。
如本公开所使用的，术语“Siglec-15”也被称为“唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-15”，是Siglec家族的成员，在肿瘤微环境的多个免疫细胞中均有较高表达。在本公开中，编码人Siglec-15前体的氨基酸序列如本公开所记载的SEQ ID NO：1所示。SEQ ID NO：1所示的序列中，第1-19位氨基酸为编码信号肽(signal peptide)的序列。
本公开的“抗体”是指具有至少一个抗原(例如Siglec-15)结合结构域的结合蛋白。本公开的抗体或其抗原结合片段可以是整个抗体(即，全长抗体)或其任何片段，包括单克隆抗体或其片段和抗体变体或其片段。抗体或其抗原结合片段的实例包括单特异性抗体或多特异性抗体、Fab片段、F(ab’) 2片段、Fv片段、分离的CDR区、单链Fv(scFv)和本领域任何已知的抗体片段。本文公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体种类。在一些实施方案中，本文公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段是IgG1同种型。本公开公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段可以衍生自任何物种，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、灵长类动物、美洲驼和人。本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段可以是鼠类抗体、嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。除非另有说明，否则本公开的“抗体”包括全长抗体及其任何抗原结合片段(或“抗原结合部分”)或单链。
常规的“全长抗体”是包含两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，重链和轻链通过二硫键连接。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由三个结构域组成，即CH1，CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区还可以划分为高变区，即互补决定区(CDR)，和序列较为保守的框架区(FR)。每个VH和VL分别由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端分别为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的多种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一 成分(C1q)。与此同时，如本领域技术人员所了解的，特殊的“全长抗体”，例如纳米抗体，其仅只有重(H)链而没有轻(L)链。
在本公开中，抗体的“抗原结合片段”或“抗体结合部分”是指抗体的一个或多个片段，其保留特异性结合抗原(例如，Siglec-15)的功能。已证实，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实施。涵盖在术语抗体的“抗原结合部分/片段”中的实例包括：(i)Fab片段：由V L、V H、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab') 2片段，包含在铰链区二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH结构域组成的dAb片段(参见Ward et al.,Nature.341:544-546(1989))；(vi)分离的互补决定区(CDR)；以及(vii)纳米抗体，一种包含单个重链可变结构域和两个恒定结构域的抗体。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同基因编码，但可以采用重组的方法通过合成接头将VH和VL连接成单蛋白链，其中VL和VH配对形成单价分子(称单链Fv(scFv)；参见例如Bird et al.,Science.242:423-426(1988)；Huston et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883(1988))。这些单链抗体也涵盖在术语抗原结合部分/片段中。此外，包含该抗原结合部分/片段的重组多肽、融合蛋白、免疫缀合物和多特异性抗体也涵盖在术语抗原结合部分/片段中。这些抗体片段可以由本领域技术人员通过已知的常规技术获得，且片段可以通过与全长抗体相同的方法进行功能筛选。
在本公开中，“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与Siglec-15特异性结合的分离的抗体基本上不含特异性结合Siglec-15以外抗原的抗体)。但是，特异性结合人Siglec-15的分离抗体可能与其他抗原(例如，来自其他物种的Siglec-15)具有交叉结合性。此外，分离的抗体基本上不含其他细胞成分和/或化学物质。
在本公开中，“小鼠抗体”或“鼠源抗体”是指可变区中骨架区和CDR区均来自小鼠种系免疫球蛋白序列的抗体。此外，如果抗体包含恒定区，则恒定区也来自小鼠种系免疫球蛋白序列。本公开的小鼠抗体可以包括不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机突变或点突变或通过体内体细胞突变引入的突变)，但“小鼠抗体”不包括在小鼠骨架序列中插入得自其他哺乳动物种系的CDR序列的抗体。
在本公开中，“嵌合抗体”通常是指这样的抗体，其中重链或轻链氨基酸序列的一部分与来自特定物种的抗体中相应氨基酸序列同源或者均属于某一类别，而该链的其他部分则与另一物种中的相应序列同源。例如，轻链和重链的可变区可以均来自一个动物物种(如小鼠、大鼠等)的抗体的可变区，而恒定部分则与来自另一物种(如人)的抗体序列同源。例如，为获得嵌合抗体，可利用非人源的B细胞或杂交瘤细胞产生可变区，而与其组合的恒定区则来自人。由于嵌合抗体的恒定区可来源于人类，因此嵌合抗体在注射时引发免疫应答的可能性会低于使用恒定区为非人来源的抗体。
在本公开中，“人源化抗体”是指来自非人物种但其蛋白质序列已被修改以增加其与人天然产生的抗体相似度的抗体。其含有较少的来自非人免疫球蛋白的序列，从而降低异种抗体引入到人类中时的免疫原性。
在本公开中，“全人源抗体”通常是指全人抗体，即抗体的恒定区和可变区均来源于人。所述全人源抗体可以通过噬菌体抗体库技术、转基因小鼠制备人源性抗体、核糖体展示技术、EBV转化B细胞克隆技术、单个B细胞克隆等技术来实现。
本公开中所使用的针对Siglec-15的抗体的片段与Siglec-15特异性结合。
在本公开中，“特异性结合人Siglec-15”的抗体是指与人Siglec-15(还可能是其他非人物种的Siglec-15)结合但基本上不结合非Siglec-15的抗体。优选地，抗体以“高亲和力”结合人Siglec-15，即KD为5.0×10 -8M或更小，1.0×10 -8M或更小，优选为5.0×10 -9M或更小，1.0×10 -9M或更小，更优选为5.0×10 -10M或更小，1.0×10 -10M或更小。
术语“基本上不结合”蛋白质或细胞是指不与蛋白质或细胞结合，或不以高亲和力与其结合，即结合蛋白质或细胞的KD为1.0×10 -6M或更高，优选为1.0×10 -5M或更高，1.0×10 -4M或更高，更优选为1.0×10 -3M或更高，1.0×10 -2M或更高。
术语“高亲和力”对IgG而言，是指KD为5.0×10 -8M或更小，1.0×10 -8M或更小，优选为5.0×10 -9M或更小，1.0×10 -9M或更小，更优选为5.0×10 -10M或更小。但对于其他抗体同种型，“高亲和力”结合可能 有所不同。例如，IgM同种型的“高亲和力”结合是指KD为1.0×10 -6M或更小，优选1.0×10 -7M或更小，更优选1.0×10 -8M或更小。
在本公开中，术语“EC50”，又称半数有效浓度，是指在特定暴露时间后，能达到50％最大效应的抗体浓度。
在本公开中，术语“IC50”，又称半数抑制浓度，是指相对于不存在抗体的情况，将特异性生物学或生化功能抑制50％的抗体浓度。
在本公开中，术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物及非哺乳动物，优选哺乳动物，例如非人的灵长类动物，绵羊，狗，猫，牛和马。
在本公开中，术语“治疗有效量”是指足以实现或至少部分实现期望效果的量。药物或治疗剂的治疗“有效量”或“有效剂量”是指当单独或与另一治疗剂组合使用时，足以预防或改善疾病或病症相关症状的量和/或减轻疾病或病症的严重性的量，优选引起疾病症状严重程度降低、无症状期频率和持续时间增加、或对疾病引起的损伤或无能具有预防能力的量。治疗有效量与被治疗的疾病相关，其中本领域技术人员可以方便地判别出实际的有效量。
本领域人员公知，在本领域中可以通过多种方法来定义抗体的CDR，例如基于序列可变性的Kabat定义规则(参见，Kabat等人，免疫学的蛋白质序列，第五版，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州(1991))、基于结构环区域位置的Chothia定义规则(参见JMol Biol 273:927-48,1997)、ImMunoGenTics(IMGT)编号规则(Lefranc M.P.，Immunologist，7，132-136(1999)；Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003))、AbM编号规则(Oxford Molecular的AbM抗体建模软件定义)和Contact编号规则(基于对可用复杂晶体结构的分析)，以及Kabat、Chothia、IMGT、AbM和Contact定义规则中的两种或多种组合。
在本公开的技术方案中，可以使用包含了Kabat定义和Chothia定义的Combined定义规则来确定可变结构域序列中的氨基酸残基。其中Combined定义规则即是将Kabat定义和Chothia定义的范围相结合，基于此取了一个更大的范围，详见下表1。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“CDR”及“互补决定区”应了解为涵盖通过任何一种已知方案界定的互补决定区。虽然本公开中请求保护的范围是基于Combined定义规则所示出的序列，但是根据其它CDR定义规则(例如Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact等定义规则)所对应的氨基酸序列也应当落在本公开的保护范围中。
表1本公开抗体CDR定义规则(Combined定义规则)示意表
Kabat Chothia Combined
LCDR1 L24--L34 L24--L34 L24-L34
LCDR2 L50--L56 L50--L56 L50-L56
LCDR3 L89--L97 L89--L97 L89-L97
HCDR1 H31--H35 H26--H32 H26-H35
HCDR2 H50--H65 H52--H56 H50-H65
HCDR3 H95--H102 H95--H102 H95-H102
本公开的多个方面在以下更加具体地加以描述。
抗 Siglec-15抗体特异性结合Siglec-15，以及其他有益的功能特征
本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段特异性结合Siglec-15(例如，人Siglec-15，猴Siglec-15和鼠Siglec-15)。本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段以高亲和力特异性结合人Siglec-15。本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段基本上不结合其他Siglec家族受体，例如Siglec-2、Siglec-3、Siglec-4a或Siglec-10。本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段基本上不结合PD-L1。优选地，本公开的抗Siglec-15抗体是单克隆抗体。此外，抗体可以是例如小鼠(鼠源)、嵌合、人源化或全人源单克隆抗体。
Siglec-15单克隆抗体
优选地，本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段是结构和化学特性如下文所述的抗体，示例性抗体或其抗原结合片段所对应的氨基酸序列编号提供于下表2和表5中。一些抗体具有相同的CDR，一些抗体具有相同的VH或VL。抗体的重链恒定区可以是人IgG1，IgG2、IgG4恒定区或其变体，优选人IgG1重链恒定区或其变体，抗体的轻链恒定区可以是人κ恒定区、人λ恒定区或其变体，优选人κ轻链恒定区或其变体。这些抗体还可包含小鼠IgG1重链恒定区和/或小鼠κ轻链恒定区或其变体。
本公开所记载的抗Siglec-15抗体的重链CDR区和轻链CDR区由Combined编号系统定义。然而，如本领域所公知的，CDR区也可以基于重/轻链可变区序列由其他编号系统，包括但不限于Kabat、Chothia、IMGT、AbM或Contact编号系统/方法确定。
与人Siglec-15结合的其他抗Siglec-15抗体的VH和/或VL序列(或CDR序列)可以与本公开的抗体的VH和/或VL序列(或CDR序列)“混合并配对”。优选地，当VH和VL链(或其CDR)混合并配对时，特定VH/VL对中的VH序列可以由结构相似的VH序列取代。同样，优选地将特定VH/VL对中的VL序列替换为结构相似的VL序列。
因此，在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区，其包含列于表2或表5中的氨基酸序列；和
(b)轻链可变区，其包含列于表2或表5中的氨基酸序列，或另一种抗Siglec-15抗体的VL，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人Siglec-15。
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括：
(a)列于表2或表5中的重链CDR1，CDR2和CDR3；和
(b)列于表2或表5中的轻链CDR1，CDR2和CDR3，或另一种抗Siglec-15抗体的CDRs，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人Siglec-15。
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括本公开的抗Siglec-15抗体的重链CDR2以及其他结合人抗Siglec-15抗体的CDR，例如另一抗Siglec-15抗体的重链CDR1和/或CDR3，和/或轻链CDR1，CDR2和/或CDR3。
此外，本领域内公知，CDR3结构域独立于CDR1和/或CDR2结构域，可以单独确定抗体对同种抗原的结合特异性，并且可以预测到基于该CDR3序列可产生具有相同结合特异性的多种抗体。参见，例如，Klimka et al.,British J.of Cancer.83(2):252-260(2000)；Beiboer et al.,J.Mol.Biol.296:833-849(2000)；Rader et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:8910-8915(1998)；Barbas et al.,J.Am.Chem.Soc.116:2161-2162(1994)；Barbas et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92:2529-2533(1995)；Ditzel et al.,J.Immunol.157:739-749(1996)；Berezov et al.,BIAjournal 8:Scientific Review 8(2001)；Igarashi et al.,J.Biochem(Tokyo).117:452-7(1995)；Bourgeois et al.,J.Virol.72:807-10(1998)；Levi et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:4374-8(1993)；Polymenis and Stoller,J.Immunol.152:5218-5329(1994)and Xu and Davis,Immunity.13:37-45(2000)；U.S.Pat.Nos.6,951,646；6,914,128；6,090,382；6,818,216；6,156,313；6,827,925；5,833,943；5,762,905和5,760,185。这些参考文献均通过引用的方式全部并入本公开。
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包含本公开的抗Siglec-15抗体的重链CDR2以及至少本公开的抗Siglec-15抗体的重链和/或轻链CDR3，以及另一种抗Siglec-15抗体的CDR，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人Siglec-15。优选地，这些抗体或其抗原结合片段与本公开的抗Siglec-15抗体(a)竞争结合Siglec-15；(b)保留功能特征；(c)结合相同的表位；和/或(d)具有相似的结合亲和力。
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段还包含本公开的抗Siglec-15抗体的轻链CDR2，以及另一种抗Siglec-15抗体的轻链CDR，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人Siglec-15。在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段还包括本公开的抗Siglec-15抗体的重和/或轻链CDR1，以及另一种抗Siglec-15抗体的CDR，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人Siglec-15。
保守突变
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包含与本公开的抗Siglec-15抗体相比存在一个 或多个保守突变的重链可变区和/或轻链可变区的CDR1，CDR2和CDR3序列。本领域应理解，一些保守的序列突变不会使抗原结合性消失。参见，例如，Brummell et al.,Biochem 32:1180-8(1993)；de Wildt et al.,Prot.Eng.10:835-41(1997)；Komissarov et al.,J.Biol.Chem.272:26864-26870(1997)；Hall et al.,J.Immunol.149:1605-12(1992)；Kelley and O’Connell Biochem.32:6862-35(1993)；Adib-Conquy et al.,Int.Immunol.10:341-6(1998)；Beers et al.,Clin.Can.Res.6:2835-43(2000)。
因此，在一个实施方式中，抗体包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含CDR1、CDR2和CDR3，其中：
(a)重链可变区的CDR1序列包含表2或表5中列出的序列，和/或其保守突变；和/或
(b)重链可变区的CDR2序列包含表2或表5中列出的序列，和/或其保守突变；和/或
(c)重链可变区的CDR3序列包含表2或表5中列出的序列，和/或其保守突变；和/或
(d)轻链可变区的CDR1和/或CDR2和/或CDR3序列包含表2或表5中列出的序列；和/或其保守突变；且
(e)抗体特异性结合人Siglec-15。
本公开的抗体具有上述一种或多种以下功能特性，例如对人Siglec-15具有高亲和力，阻断Siglec-15与其配体的结合和/或减少或阻断Siglec-15介导的信号转导。
在多个实施方案中，抗体可以是小鼠、嵌合、人源化或全人源抗体或其抗原结合片段。
本公开所用的术语“保守修饰”或“保守突变”是指不显著影响或改变抗体结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰或保守突变包括氨基酸取代、添加和删除。可以通过本领域已知的标准技术将修饰引入本公开的抗体中，例如点突变和PCR介导的突变。保守氨基酸取代是指氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基取代。具有类似侧链的氨基酸残基家族在本领域中已知。因此，本公开的抗体的CDR区中一个或多个氨基酸残基可以被同侧链家族的其他氨基酸残基取代，且得到的抗体可以使用本公开所述的功能检测对其进行保留功能(即，上述的功能)的测试。
工程化和修饰的抗体
本公开的抗体可以用具备本公开抗Siglec-15抗体的一个或多个VH/VL序列的抗体作为起始材料来工程化产生修饰抗体。抗体可以对一个或两个可变区(即VH和/或VL)内(例如，在一个或多个CDR区和/或一个或多个骨架区)的一个或多个残基进行修饰。此外，或者，可以对恒定区中的残基进行修饰，例如改变抗体的效应功能。
在某些实施方案中，CDR移植可用于修饰抗体的可变区。抗体主要通过六个位于重链和轻链互补决定区(CDR)中的氨基酸残基与靶抗原相互作用。因此，各个抗体CDR内的氨基酸序列比CDR外的序列更加地多样。由于CDR序列负责主要的抗体-抗原相互作用，因此可以通过构建表达载体，其中特定天然抗体的CDR序列移植到不同特性的不同抗体的骨架序列，来表达模拟特定天然抗体的特性的重组抗体(Riechmann et al.,Nature 332:323-327(1998)；Jones et al.,Nature.321:522-525(1986)；Queen et al.,Proc.Natl.Acad；U.S.A.86：10029-10033(1989)；U.S.Pat.Nos.5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
因此，本公开的另一个实施方案涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中，重链可变区包含本公开上述序列的CDR1、CDR2和CDR3，轻链可变区包含本公开上述序列的CDR1、CDR2和CDR3。尽管这些抗体包含本公开单克隆抗体的VH和VL的CDR序列，它们可以含有不同的骨架序列。
这样的骨架序列可以从包括种系抗体基因序列的公开DNA数据库或公开参考文献中获得。例如，用于人重链可变区和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在Vbase人种系序列数据库(www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase)以及Kabat et al.,(1991)，同上；Tomlinson et al.,J.Mol.Biol.227:776-798(1992)；和Cox et al.,Eur.J.Immunol.24:827-836(1994)中获得。另一个实施方案中，用于人重链可变区和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在Genbank数据库中得到。
使用本领域技术人员公知的Gapped BLAST的序列相似性搜索方法之一(Altschul et al.，(1997)，同上)，将抗体蛋白序列与蛋白序列数据库进行比较。
本公开的抗体的骨架序列优选的是与本公开的抗体所用的骨架序列在结构上相似的那些。可以将VH CDR1，CDR2和CDR3序列移植到与得到该骨架序列的种系免疫球蛋白基因具有相同序列的骨架区中，或者可以将CDR序列移植到与种系序列相比具有一个或多个突变的骨架区中。例如，在一些情况下，对骨架区中的残基进行突变是有益的，可以维持或增强抗体的抗原结合能力(参见，例如，U.S.Pat.Nos.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
另一种类型的可变区修饰是将VH和/或VL的CDR1，CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基进行突变，从而改善目标抗体的一种或多种特性(例如，亲和力，理化性质)。可以通过点突变或PCR介导的突变引入突变，并可通过本领域已知的体外或体内测定方法评估突变对抗体结合或其他功能特性的影响。优选地，引入本领域中已知的保守的修饰。可以是对氨基酸进行取代、添加或删除，优选为取代。此外，通常改变每个CDR区内不多于一个、两个、三个、四个或五个的残基。
此外，在另一个实施方案中，本公开提供分离的Siglec-15单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：(a)HCDR1区，包含本公开的序列HCDR1，或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，删除或添加的氨基酸序列，(b)HCDR2区，其包含本公开的HCDR2序列，或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，删除或添加的氨基酸序列，和(c)HCDR3区，其包含本公开的HCDR3序列，或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，删除或添加的氨基酸序列；所述轻链可变区包含：(a)LCDR1区，其包含本公开的LCDR1序列，或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，删除或添加的氨基酸序列，(b)LCDR2区，其包含本公开的LCDR2序列，或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，删除或添加的氨基酸序列，和(c)LCDR3区，其包含本公开的LCDR3序列，或具有1、2、3、4或5个氨基酸取代，删除或添加的氨基酸序列。
在一个具体的实施方式中，前述氨基酸取代为不同氨基酸之间的保守置换。
本公开的修饰抗体包括在VH和/或VL的骨架区残基进行修饰以改善抗体特性的那些抗体。通常，此类骨架区修饰可以降低抗体的免疫原性。例如，将一个或多个骨架残基“回复突变”为相应的种系序列。更具体地，经历体细胞突变的抗体可能包含不同于得到的抗体种系序列的骨架区残基。这些残基可以通过将抗体骨架序列与得到抗体的种系序列相比较而识别出来。
另一种类型的修饰涉及对骨架区、或者甚至一个或多个CDR区的一个或多个残基进行突变，以去除T细胞表位，从而减少抗体可能导致的免疫原性。该方法也称为“去免疫化”，在美国专利公开号20030153043中有更详细描述。
此外，骨架区或CDR区修饰之外的另外一种修饰，例如通过基因改造对本公开的抗体的Fc区进行修饰，通常用来改变抗体的一种或多种功能特性，例如血清半衰期，补体结合，Fc受体结合，和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本公开的抗体还可以进行化学修饰(例如，连接一个或多个化学功能基团)，或修饰以改变其糖基化，来改变抗体的一种或多种功能特性。
在一个实施方案中，修饰CH1-铰链区，例如改变铰链区中的半胱氨酸残基数目。该方法在美国专利No.5,677,425有具体描述。改变CH1-铰链区中半胱氨酸残基的数目，例如可以促进轻链和重链的组装或改变抗体的稳定性。
在另一个实施方案中，对抗体的Fc-铰链区突变以改变低抗体的生物学半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链区的CH2-CH3区，使得抗体相对于天然Fc-铰链域，具有减弱的葡萄球菌蛋白A(SpA)结合。该方法在美国专利No.6,165,745中有更详细的描述。
在另一个实施方案中，修饰抗体的糖基化。例如，可以制备去糖基化的抗体(即，该抗体缺少糖基化)。这样的糖基化修饰可通过例如改变抗体序列内一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸取代，以消除一个或多个可变区骨架中的糖基化位点，从而消除该位点的糖基化。这种去糖基化可以增加抗体对抗原的亲和力。参见，例如，美国专利No.5,714,350和6,350,861。
此外，可以制备具有改变的糖基化类型的抗体，例如岩藻糖残基量减少的低岩藻糖基化抗体，或者具有增加的平分型N-乙酰葡糖胺(GlcNac)结构的抗体。已经证明糖基化形式的改变增加了抗体的ADCC活性。这样的糖基化修饰可以通过例如在糖基化系统改变的宿主细胞中表达抗体来实现，糖基化系统改变的宿主细胞在本领域中已知，且可以用作表达本公开重组抗体的宿主细胞，以制备具有改变的糖基化的抗 体。例如，细胞系Ms704，Ms705和Ms709缺少岩藻糖基转移酶基因FUT8(α(1,6)-岩藻糖基转移酶)，因此在Ms704，Ms705和Ms709细胞系中表达的抗体缺少岩藻糖。Ms704，Ms705和Ms709FUT8-/-细胞系是通过在CHO/DG44细胞中使用两种替换载体定向破坏FUT8基因而制备(参见美国专利20040110704和Ohnuki et al.,Biotechnol Bioeng.87:614-22(2004))。作为另一个例子，EP1,176,195描述了FUT8基因功能破坏的细胞系，该基因编码岩藻糖基转移酶，使得在这种细胞系中表达的抗体通过降低或消除α-1,6键相关的酶而表现出低岩藻糖基化。EP1,176,195还描述了一种细胞系，具有较低或缺乏向结合于抗体Fc区的N-乙酰氨基葡糖添加岩藻糖的酶活性，例如大鼠骨髓瘤细胞系YB2/0(ATCC CRL 1662)。WO03/035835描述了一种CHO变体细胞系，Lec13细胞，其向Asn(297)-相关糖添加岩藻糖的能力降低，从而使该宿主细胞表达的抗体低岩藻糖基化(参见Shields et al.,J.Biol.Chem.277:26733-26740(2002))。如WO06/089231中所述，还可以在鸡蛋中制备具有改变的糖基化特征的抗体。或者可以在植物细胞如Lemna中制备具有改变的糖基化特征的抗体。WO99/54342公开了一种细胞系，其基因改造成表达修饰糖蛋白的糖基转移酶(例如，β(1,4)-N-乙酰葡萄糖胺转移酶III(GnTIII))，使得在该细胞系中表达的抗体表现出增加的平分型GlcNac结构，从而引起抗体增强的ADCC活性(另参见Umana et al.,Nat.Biotech.17:176-180(1999))。或者，使用岩藻糖苷酶将抗体的岩藻糖残基切割掉，例如α-L-岩藻糖苷酶从抗体移除岩藻糖残基(Tarentino et al.,Biochem.14:5516-23(1975))。
本公开的抗体的另一种修饰是聚乙二醇化(PEG化)。将抗体PEG化例如可以增加抗体的生物学(例如，血清)半衰期。为了得到PEG化抗体，使抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)，例如PEG的反应性酯或醛衍生物，在使一个或多个PEG基团附着于抗体或抗体片段的条件下反应。优选地，通过与反应性PEG分子(或类似的反应性的水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应进行。如本公开所用的术语“聚乙二醇”包括任何形式的用于衍生其他蛋白的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，需PEG化的抗体是去糖基化的抗体。PEG化的方法是本领域已知的，并且可以应用于本公开的抗体。参见，例如，EP0154316和EP0401384。
抗体的物理性质
各抗体具有独特的等电点(pI)，通常在6-9.5的pH范围内。IgG1抗体的pI通常在7-9.5的pH范围内，而IgG4抗体的pI通常在6-8的pH范围内。有人推测pI值在正常范围外的抗体，在体内条件下可能会发生一些解折叠且不稳定。因此，优选pI值在正常范围内的抗Siglec-15抗体。可以通过选择pI在正常范围内的抗体或突变表面残基来实现。
编码本公开抗体的核酸分子
在另一方面，本公开提供了编码本公开抗体或其抗原结合片段的重链可变区和/或轻链可变区或CDR的核酸分子。核酸分子可以完整细胞，细胞裂解物，或以部分纯化或基本上纯的形式存在。当通过标准技术从其他细胞组分或其他污染物，例如其他细胞核酸或蛋白质中纯化出来时，核酸分子是“分离的”或“基本上纯的”。本公开的核酸分子可以为单链或双链。本公开的核酸分子可以是例如DNA或RNA，且可以包含或可以不包含内含子序列。在一个优选的实施方案中，核酸分子是cDNA分子。
本公开的核酸分子可以使用标准分子生物学技术获得。对于杂交瘤(例如，由携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)表达的抗体，可通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得编码由杂交瘤制备的抗体的轻链和重链cDNA。对于从免疫球蛋白基因文库获得的抗体(例如，使用噬菌体展示技术)，可以从基因文库回收编码此类抗体的核酸。
优选地，本公开的核酸分子包括编码本公开的Siglec-15单克隆抗体的VH和VL序列或CDR的核酸分子。一旦获得了编码VH和VL片段的DNA片段，就可以进一步通过标准重组DNA技术进行操作，例如将可变区基因转换为全长抗体链基因，Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，将编码VL或VH的DNA片段与编码另一种蛋白质的另一种DNA片段可操作性地连接，例如抗体恒定区或柔性接头。在本公开中使用的术语“可操作地连接”是指将两个DNA片段连接在一起，使得两个DNA片段编码的氨基酸序列都在阅读框内。
通过将编码VH的DNA与编码重链恒定区(CH1，CH2和CH3)的另一个DNA分子可操作地连接，可以将编码VH区的分离的DNA转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的，并且 可以通过标准PCR扩增获得这些DNA片段。重链恒定区可以是IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA，IgE，IgM或IgD恒定区，但是最优选是IgG1恒定区。对于Fab片段重链基因，可以将编码VH的DNA与仅编码重链CH1恒定区的另一个DNA分子可操作地连接。
通过将编码VL的DNA与编码轻链恒定区(CL)的另一个DNA分子可操作地连接，可以将编码VL区的分离的DNA转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的，并且可以通过标准PCR扩增获得这些DNA片段。在优选的实施方案中，轻链恒定区可以是κ或λ轻链恒定区。
为了制备scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段可操作地与编码柔性接头例如编码氨基酸序列(Gly 4-Ser) 3的另一片段连接，使得VH和VL序列可以作为连续的单链蛋白进行表达，其中该VL和VH区通过柔性接头连接(参见例如Bird et al.,Science 242:423-426(1988)；Huston et al.,Proc Nat.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)；McCafferty et al.,Nature 348:552-554(1990))。
本公开单克隆抗体的制备
在一个具体的实施方式中，本公开的单克隆抗体(mAb)可以使用Kohler和Milstein Nature.256：495(1975)的体细胞杂交(杂交瘤)技术来制备。制备单克隆抗体的其他实施方式包括B淋巴细胞的病毒或致癌性转化以及噬菌体展示技术。嵌合或人源化抗体也是本领域熟知的。参见例如美国专利4,816,567；5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370。
在一个具体的实施方式中，本公开采用了单个B细胞克隆技术(SBC)筛选阳性克隆，与传统的单克隆抗体筛选技术相比，可以大大缩短开发周期并且节省了大量的物力和人力，大大提高了抗体药物发现的效率。
在一个具体的实施方式中，本公开采用免疫人源抗体转基因小鼠的方式制备获得的抗Siglec-15抗体具有全人源抗体的氨基酸序列，省去了冗长的抗体人源化过程，为筛选候选药物分子提供了足够的灵活性和多样性，进而改善了CMC和临床开发的药物特性。
本公开的抗体也可以使用例如重组DNA技术结合基因转染方法，在宿主细胞转染瘤中产生(例如，Morrison，S.Science 229:12021985)。在一个实施方案中，将由标准分子生物学技术获得的编码部分或全长轻链和重链的DNA插入一种或多种表达载体中，使得基因可操作地连接至转录和翻译调控序列。在该情况下，术语“可操作地连接”是指将抗体基因连接到载体中，使得载体内的转录和翻译调控序列发挥其既定的调节抗体基因的转录和翻译的功能。
术语“调控序列”包括控制抗体基因的转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。这样的调控序列在Goeddel(Gene Expression Technology.Methods in Enzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990))中有过描述。优选地，用于哺乳动物宿主细胞表达的调控序列包括指导哺乳动物细胞中高水平蛋白表达的病毒元件，例如源自巨细胞病毒(CMV)，猿猴病毒40(SV40)，腺病毒的启动子和/或增强子，如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP)。或者使用非病毒调控序列，例如泛素启动子或β-珠蛋白启动子。另外，调控元件由不同来源的序列组成，例如SRα启动子系统，该序列包含来自SV40早期启动子的序列和人T细胞白血病I型毒长末端重复序列的序列(Takebe et al.,Mol(Cell.Biol.8:466-472(1988))。表达载体和表达调控序列与所使用的表达宿主细胞相容。
抗体轻链基因和抗体重链基因可以插入到同一或不同的表达载体中。在优选实施方式中，可变区通过插入到已经编码所需亚型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中而构建全长抗体基因，从而使VH与载体中的CH可操作地连接，VL与载体中的CL可操作地连接。或者，重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。抗体链基因可以克隆到载体中，从而信号肽在阅读框内连接到抗体链基因的氨基端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
除了抗体链基因和调控序列之外，本公开的重组表达载体还可以携带其他序列，例如调控载体在宿主细胞中复制的序列(例如，复制起点)和可选择标记基因。可选择标记基因可用于选择已导入载体的宿主细胞(参见，例如，美国专利4,399,216；4,634,665和5,179,017)。例如，通常可选择标记基因在已导入载体的宿主细胞上赋予对药物如G418，潮霉素或氨甲蝶呤的抗性。优选的可选择标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于dhfr宿主细胞的甲氨蝶呤选择/扩增)和neo基因(用于G418选择)。
为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。术语“转染”包括多种将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的技术，例如电穿孔，磷酸钙沉淀，DEAE-葡聚糖转染等。尽管在原核或真核宿主细胞中表达本公开的抗体在理论上是可行的，但优选在真核细胞，最优选在哺乳动物宿主细胞中表达抗体，因为真核细胞，特别是哺乳动物细胞，比原核细胞更可能组装并分泌适当折叠且具有免疫活性的抗体。
优选的用于表达本公开重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括与DHFR可选择标记一起施用的dhfr-CHO细胞，如Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220(1980)中描述，DHFR可选择标记如RJ Kaufman和PA Sharp.J.Mol.Biol.159:601-621(1982)中所述)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。特别是在使用NSO骨髓瘤细胞时，另一优选的表达系统是WO87/04462，WO89/01036和EP338,841中公开的GS基因表达系统。当编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞时，通过将宿主细胞培养足以使得宿主细胞中抗体表达、或优选地足以使得抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中的一段时间，从而制备抗体。抗体可以使用蛋白纯化方法从宿主细胞或其细胞培养物中回收。
多肽融合物
另一方面，本公开提供一种多肽融合物，所述多肽融合物包含一种或多种本公开的抗体或其抗原结合片段，其中本公开的抗体或其抗原结合片段与至少一个其他功能分子连接，所述其他功能分子可以是肽或蛋白质或非蛋白质。
在一个实施方案中，本公开的多肽融合物包括免疫缀合物，所述免疫缀合物包含一种或多种本公开的抗体或其抗原结合片段以及至少一种与本公开的抗体或其抗原结合片段相连接的其他治疗剂(例如，细胞毒性剂、放射性同位素、免疫粘附分子或成像剂等)，如抗体-药物偶联物(ADC)。
在一个实施方案中，本公开的多肽融合物包括重组多肽或融合蛋白，所述重组多肽或融合蛋白包含一种或多种本公开的抗体或其抗原结合片段以及至少一种与本公开的抗体或其抗原结合片段相连接的其他功能片段(例如，另一种肽、蛋白质、免疫细胞因子或受体配体)，所述其他功能片段可以是针对B7-H1、CTLA4或LAG3，以便增强免疫调节作用并在一个分子中结合多种作用机制，诸如配体阻断、免疫细胞活化和直接肿瘤靶向。
在一些实施方案中，所述连接是共价连接。在一些实施方案中，所述连接是非共价连接。在一些实施方案中，所述连接是直接连接。在一些实施方案中，所述连接是通过接头连接。合适的接头包括但不限于氨基酸或多肽接头。在其他实施方案中，本公开的多肽融合物还包含其他形式。上述形式和其他形式的多肽融合物可以通过本领域熟知的方法例如基因改造、化学法等进行制备。
多特异性抗体
另一方面，本公开提供包含一种或多种本公开的抗体或其抗原结合片段的多特异性抗体，其包含本公开的抗体或其抗原结合片段与至少一个与本公开的抗体或抗原结合片段具有不同特异性的抗体或其抗原结合片段，所述多特异性抗体能够与至少两个不同结合位点或靶点结合。本公开所用的“多特异性抗体”涵盖具有两种(即双特异性抗体)、三种(即三特异性抗体)、四种(即四特异性抗体)或更多种的特异性的抗体。这些多特异性抗体可以通过本领域熟知的方法进行制备。
在一个具体的实施方案中，本公开的多特异性抗体，除Fc结合特异性和Siglec-15结合特异性外，还可以具有一种或多种其他特异性。示例性的，所述其他特异性可以是针对B7-H1、CTLA4或LAG3的。
在一个具体的实施方案中，多特异性抗体可以以多种不同的形式和尺寸出现。示例性的，对于双特异性抗体，在尺寸谱的一端，双特异性抗体保留了传统的抗体形式，不同的是具有两个结合臂且各臂具有不同特异性，而不是具有两个特异性相同的结合臂。在另一端，双特异性抗体由两个经肽链连接的单链抗体片段(scFv)构成，称为Bs(scFv) 2构建体。中间尺寸的双特异性抗体包括由肽类接头连接的两个不同的F(ab)片段。这些和其他形式的双特异性抗体可以通过基因改造、体细胞杂交或化学法进行制备。参见，例如Kufer et al.,cited supra；Cao and Suresh,Bioconjugate Chemistry.9(6).635-644(1998)；和van Spriel et al.,Immunology Today.21(8):391-397(2000)。
病毒载体
另一方面，本公开的抗体或其抗原结合片段还可以由病毒载体编码或由病毒载体承载。此外，本公开 的抗体或其抗原结合片段也可以与病毒载体一起使用，或将编码或承载本公开抗体或其抗原结合片段的病毒载体引入人体中。
本公开还提供了包含本公开的多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体，以及药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体的药物组合物。
药物组合物
另一方面，本公开提供了药物组合物，其包含本公开的抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。所述药物组合物可以任选地包含一种或多种其他药学上的有效成分，例如另一种抗体或药物，例如另一抗Siglec-15抗体，或另一针对B7-H1、CTLA4或LAG3的抗体。
优选地，药物组合物适合于静脉内，肌内，皮下，肠道外，脊柱或表皮施用(例如，通过注射或输注)。基于施用途径的不同，可以将有效成分包在材料中以保护其不受酸和可能使其失活的其他自然条件的影响。“肠道外施用”是指不同于肠道和局部外用的方式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、膜内、囊内、眶内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬脑膜上和胸骨内注射和推注。或者，本公开的药物组合物可以通过非肠道外路径施用，例如外用、表皮施用或粘膜施用，例如鼻内、经口、阴道、直肠、舌下、或局部外用。
药物组合物可以为无菌水溶液或分散液的形式。它们也可以配制在微乳剂、脂质体或其他适于高浓度药物的有序结构中。
给药方案经调整提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单次大剂量，可以随时间推移施用多个分剂量，或者剂量可以随治疗情况的危急程度成比例降低或提高。特别有利的是，以方便施用和剂量均匀的剂量单位型配置肠道外组合物。剂量单位型是指物理上分开的单位，适于治疗主体的单次给药；各单位包含计算出来与药学载体一起产生所需疗效的预定量的有效成分。或者，抗体可以以缓释剂施用，这种情况下所需的施用频率降低。
对于组合物的施用，剂量可以为约0.0001至100mg/kg宿主体重，更常见的是0.01至5mg/kg。
药物组合物可以是缓释试剂，包括植入体、透皮贴剂和微胶囊递送系统。可以使用生物可降解、生物相容的聚合物，例如乙烯-醋酸乙烯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯、和聚乳酸。
在某些实施方案中，本公开的抗体可以经配制，以确保合适的体内分布。例如，为确保本公开的治疗抗体穿越血脑屏障，抗体可以配制在脂质体中，其还可以额外地包含靶向功能基团，以增强对特定细胞或器官的选择性输送。
本公开的用途和方法
本公开的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体具有多种体外和体内应用，涉及与Siglec-15相关的疾病和病症的诊断、治疗和/或预防。所述与Siglec-15相关的疾病和病症，包括但不限于癌症、感染、自身免疫性疾病或骨代谢异常。本公开的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体可以施用至人受试者，以预防、减轻、缓解或治疗所述疾病或病症。
与Siglec-15相关的疾病或病症是本领域技术人员所熟知的，包括但不限于癌症、感染、自身免疫性疾病或骨代谢异常。
本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体可用于预防和/或治疗的自身免疫性疾病包括但不限于类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣、哮喘、特异性皮炎、过敏性鼻炎等。
本公开所述“癌症”是指由异常细胞生长引起的任何恶性和/或侵袭性生长或肿瘤，包括以形成它们的细胞类型命名的实体瘤、血癌、骨髓癌或淋巴系统癌。术语“癌症”包括但不限于源于体内特定部位的原发癌、已从其起始位置扩散到身体其它部位的转移癌、原始原发癌在缓解后的复发、和第二原发癌(之前有不同类型的癌症史的人的新发原发癌)。
本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体和方法可用于预防和/或治疗的癌症是与Siglec-15相关的癌症，例如与表达异常高水平的Siglec-15或其配体相关的癌症。所述癌症包括但不限于：皮肤癌、胃癌、食道癌、胃肠道癌(包括结肠癌和直肠癌)、 胆管癌、子宫癌(包括子宫内膜癌)、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌(包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、肝癌、胰腺癌、甲状腺癌、头颈癌(包括头颈部鳞状细胞癌)、骨和结缔组织肉瘤(包括骨肉瘤和软组织肉瘤)、黑色素瘤、白血病(包括急性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞性白血病和慢性白血病)、淋巴瘤(包括霍奇金病和非霍奇金病淋巴瘤)、多发性骨髓瘤、脑肿瘤(包括神经母细胞瘤和神经胶质瘤)。
本公开所述“感染”可以由进入细胞内并受到细胞毒性T淋巴细胞攻击的细菌、病毒、原生动物、蠕虫或其它微生物病原体引起。
本公开所述“感染”可以是急性或慢性的。急性感染通常是持续时间短的感染。在急性微生物感染期间，免疫细胞开始表达免疫调节受体。因此，在一些实施方案中，本公开的用途和方法包括增强针对急性感染的免疫刺激反应。
在一些实施方案中，本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体用于治疗慢性感染，例如已经发生T细胞衰竭或T细胞无能的感染，导致感染随宿主保持更长时间。因为病毒感染主要由T细胞清除，所以T细胞活性的增加在治疗上可用于更快速或彻底地清除感染病毒。因此，可以施用本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体用于治疗局部或全身性病毒感染。
本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体可用于预防或和/治疗的骨代谢异常包括但不限于骨质疏松、伴随类风湿关节炎的骨破坏、癌性高钙血症、伴随多发性骨髓瘤以及癌的骨转移的骨破坏、巨细胞瘤、牙周炎导致的牙缺失、骨溶解、慢性骨髓炎中的骨破坏、佩吉特骨病、肾病性骨营养不良以及成骨不全。
在诊断过程中，本公开的抗体可以在允许本公开的抗体或其抗原结合片段与Siglec-15结合的条件下，与受试者的样品接触，以检测受试者样品中Siglec-15蛋白的量。
本公开的这些和其他方法在以下进一步讨论。
联合疗法
本公开提供抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段、核酸分子、药物组合物、多肽融合物、多特异性抗体或病毒载体可以单独施用，或者与一种或多种其他治疗剂联合施用，所述其他治疗剂能预防、减轻、缓解或治疗受试者中与Siglec-15相关的疾病和病症，包括但不限于癌症、感染、自身免疫性疾病或骨代谢异常。
示例性的其他治疗剂包括但不限于细胞因子、化学治疗剂(包括细胞毒性剂)、放射性核素、其它免疫治疗剂(包括针对B7-H1、PD-1、CTLA4的抗体)、酶、抗生素、抗病毒剂(特别是蛋白酶抑制剂，单独或与核苷组合用于治疗HIV或乙型肝炎或丙型肝炎)、抗寄生虫剂(蠕虫、原生动物)、生长因子、生长抑制剂、激素、激素拮抗剂、抗体及其生物活性片段(包括人源化、单链抗体和嵌合抗体)、抗原和疫苗制剂(包括佐剂)、肽类药物、抗炎药，结合Toll样受体(包括但不限于聚肌苷酸:聚胞苷酸(polyI:C)和CpG寡核苷酸)以激活先天免疫系统的配体，调动和优化适应性免疫系统的分子，激活或上调细胞毒性T淋巴细胞、自然杀伤细胞和辅助T细胞的作用的其它分子，以及灭活或下调抑制因子或调节性T细胞的其它分子。
在一个实施方案中，本公开提供了一种治疗受试者癌症的方法，其中本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段以及一种或多种其他抗体一起施用，例如针对B7-H1、CTLA4或LAG3的抗体。在一个实施方案中，本公开提供了一种治疗受试者癌症的方法，其中本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段以及一种或多种化学治疗剂一起施用，例如烷化剂、鬼臼类、喜树碱类、紫杉类、抗代谢类和抗生素类。在某些实施方案中，受试者是人。其他可以与本公开的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段联合治疗癌症的还包括：放射治疗和手术等。
“治疗”是指减轻症状、病症、病况或疾病的进展或严重程度的方法。
本公开讨论的治疗剂的组合(即，联合)可以作为在药学可接受载体中的单一组合物同时施用，或者作为分开的组合物同时施用，其中各药剂处于药学可接受载体中。在另一个实施方案中，治疗剂的组合可以按序施用。
此外，如果进行多次联合疗法施用，且药剂按序施用，则在各时间点的按序施用的次序可以反转或保 持相同，按序施用可以与同时施用或其任何组合相结合。
除非另外指出，否则本公开的实践将采用本领域技术范围内的蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。
实施例
本公开的其他目的、特征和优点将从以下详细描述中变得明显。但是，应当理解的是，详细描述和具体实施例(虽然表示本公开的具体实施方式)仅为解释性目的而给出，因为在阅读该详细说明后，在本公开的精神和范围内所做出的各种改变和修饰，对于本领域技术人员来说将变得显而易见。
实施例中采用的所有试剂，除非另有说明，否则均可以通过商业途径购买获得。
如前所述的，以下涉及抗体的序列CDR定义规则均为Combined定义规则。
在本公开的技术方案中，说明书核苷酸和氨基酸序列表的编号所代表的含义如下所示：
SEQ ID NO：1示出了人Siglec-15前体(Siglec-15 precursor)的氨基酸序列如下：
其中，前述序列的下划线部分示出了人Siglec-15前体的信号肽(第1-19位氨基酸)。
SEQ ID NO：2示出了PR300526抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：3示出了PR300526抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：4示出了PR300526抗体的重链第一框架区(HFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：5示出了PR300526抗体的重链第一互补决定区(HCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：6示出了PR300526抗体的重链第二框架区(HFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：7示出了PR300526抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：8示出了PR300526抗体的重链第三框架区(HFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：9示出了PR300526抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：10示出了PR300526抗体的重链第四框架区(HFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：11示出了PR300526抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：12示出了PR300526抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：13示出了PR300526抗体的轻链第一框架区(LFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：14示出了PR300526抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：15示出了PR300526抗体的轻链第二框架区(LFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：16示出了PR300526抗体的轻链第二互补决定区(LCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：17示出了PR300526抗体的轻链第三框架区(LFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：18示出了PR300526抗体的轻链第三互补决定区(LCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：19示出了PR300526抗体的轻链第四框架区(LFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：20示出了PR300659抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：21示出了PR300659抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：22示出了PR300659抗体的重链第一框架区(HFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：23示出了PR300659抗体的重链第一互补决定区(HCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：24示出了PR300659抗体的重链第二框架区(HFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：25示出了PR300659抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：26示出了PR300659抗体的重链第三框架区(HFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：27示出了PR300659抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：28示出了PR300659抗体的重链第四框架区(HFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：29示出了PR300659抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：30示出了PR300659抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：31示出了PR300659抗体的轻链第一框架区(LFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：32示出了PR300659抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：33示出了PR300659抗体的轻链第二框架区(LFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：34示出了PR300659抗体的轻链第二互补决定区(LCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：35示出了PR300659抗体的轻链第三框架区(LFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：36示出了PR300659抗体的轻链第三互补决定区(LCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：37示出了PR300659抗体的轻链第四框架区(LFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：38示出了PR300670抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：39示出了PR300670抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：40示出了PR300670抗体的重链第一框架区(HFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：41示出了PR300670抗体的重链第一互补决定区(HCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：42示出了PR300670抗体的重链第二框架区(HFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：43示出了PR300670抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：44示出了PR300670抗体的重链第三框架区(HFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：45示出了PR300670抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：46示出了PR300670抗体的重链第四框架区(HFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：47示出了PR300670抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：48示出了PR300670抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：49示出了PR300670抗体的轻链第一框架区(LFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：50示出了PR300670抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：51示出了PR300670抗体的轻链第二框架区(LFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：52示出了PR300670抗体的轻链第二互补决定区(LCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：53示出了PR300670抗体的轻链第三框架区(LFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：54示出了PR300670抗体的轻链第三互补决定区(LCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：55示出了PR300670抗体的轻链第四框架区(LFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：56示出了PR300679抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：57示出了PR300679抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：58示出了PR300679抗体的重链第一框架区(HFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：59示出了PR300679抗体的重链第一互补决定区(HCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：60示出了PR300679抗体的重链第二框架区(HFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：61示出了PR300679抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：62示出了PR300679抗体的重链第三框架区(HFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：63示出了PR300679抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：64示出了PR300679抗体的重链第四框架区(HFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：65示出了PR300679抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：66示出了PR300679抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：67示出了PR300679抗体的轻链第一框架区(LFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：68示出了PR300679抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：69示出了PR300679抗体的轻链第二框架区(LFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：70示出了PR300679抗体的轻链第二互补决定区(LCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：71示出了PR300679抗体的轻链第三框架区(LFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：72示出了PR300679抗体的轻链第三互补决定区(LCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：73示出了PR300679抗体的轻链第四框架区(LFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：74示出了PR301285抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：75示出了PR301285抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：76示出了PR301285抗体的重链第一框架区(HFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：77示出了PR301285抗体的重链第一互补决定区(HCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：78示出了PR301285抗体的重链第二框架区(HFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：79示出了PR301285抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：80示出了PR301285抗体的重链第三框架区(HFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：81示出了PR301285抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：82示出了PR301285抗体的重链第四框架区(HFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：83示出了PR301285抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：84示出了PR301285抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：85示出了PR301285抗体的轻链第一框架区(LFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：86示出了PR301285抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：87示出了PR301285抗体的轻链第二框架区(LFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：88示出了PR301285抗体的轻链第二互补决定区(LCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：89示出了PR301285抗体的轻链第三框架区(LFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：90示出了PR301285抗体的轻链第三互补决定区(LCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：91示出了PR301285抗体的轻链第四框架区(LFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：92示出了PR301286抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：93示出了PR301286抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：94示出了PR301286抗体的重链第一框架区(HFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：95示出了PR301286抗体的重链第一互补决定区(HCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：96示出了PR301286抗体的重链第二框架区(HFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：97示出了PR301286抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：98示出了PR301286抗体的重链第三框架区(HFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：99示出了PR301286抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：100示出了PR301286抗体的重链第四框架区(HFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：101示出了PR301286抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：102示出了PR301286抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：103示出了PR301286抗体的轻链第一框架区(LFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：104示出了PR301286抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：105示出了PR301286抗体的轻链第二框架区(LFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：106示出了PR301286抗体的轻链第二互补决定区(LCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：107示出了PR301286抗体的轻链第三框架区(LFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：108示出了PR301286抗体的轻链第三互补决定区(LCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：109示出了PR301286抗体的轻链第四框架区(LFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：110示出了PR301286-1抗体的重链(H)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：111示出了PR301286-1抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：112示出了PR301286-1抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：113示出了PR301286-3抗体的重链(H)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：114示出了PR301286-3抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：115示出了PR301286-3抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：116示出了PR301286-5、PR301286-6和PR301286-7抗体的重链(H)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：117示出了PR301286-5、PR301286-6和PR301286-7抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：118示出了PR301286-5、PR301286-6和PR301286-7抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：119示出了PR301286-5抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：120示出了PR301286-5抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：121示出了PR301286-5抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：122示出了PR301286-6抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：123示出了PR301286-6抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：124示出了PR301286-6抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：125示出了PR301286-7抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：126示出了PR301286-7抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：127示出了PR301286-7抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301286抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：128示出了PR301289抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：129示出了PR301289抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：130示出了PR301289抗体的重链第一框架区(HFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：131示出了PR301289抗体的重链第一互补决定区(HCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：132示出了PR301289抗体的重链第二框架区(HFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：133示出了PR301289抗体的重链第二互补决定区(HCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：134示出了PR301289抗体的重链第三框架区(HFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：135示出了PR301289抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：136示出了PR301289抗体的重链第四框架区(HFR4)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：137示出了PR301289抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：138示出了PR301289抗体的轻链可变区(VL)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：139示出了PR301289抗体的轻链第一框架区(LFR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：140示出了PR301289抗体的轻链第一互补决定区(LCDR1)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：141示出了PR301289抗体的轻链第二框架区(LFR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：142示出了PR301289抗体的轻链第二互补决定区(LCDR2)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：143示出了PR301289抗体的轻链第三框架区(LFR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：144示出了PR301289抗体的轻链第三互补决定区(LCDR3)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：145示出了PR301289抗体的轻链第四框架区(LFR4)的氨基酸序列如下：
FGQGTRLEIK
SEQ ID NO：146示出了PR301289-1的重链(H)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301289抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：147示出了PR301289-1抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301289抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：148示出了PR301289-2的重链(H)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301289抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：149示出了PR301289-2抗体的重链可变区(VH)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301289抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：151示出了PR301289-2抗体的重链第三互补决定区(HCDR3)的氨基酸序列如下(下划线所示的氨基酸为相较于PR301289抗体突变的氨基酸)：
SEQ ID NO：152示出了PR300066(Tab)抗体的重链(H)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：153示出了PR300066(Tab)抗体的轻链(L)的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：154示出了重组蛋白人Siglec-15 ECD-hFc的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：155示出了食蟹猴Siglec-15的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：156示出了OS8的氨基酸序列如下：
实施例1 H2L2全人源转基因小鼠免疫和全人源抗体筛选鉴定
1.1 H2L2全人源转基因小鼠的免疫
免疫原分为三种：人Siglec-15 ECD-hFc蛋白、293T/Siglec-15细胞株、Siglec-15DNA。利用上述三种免疫原分别免疫HARBOUR H2L2转基因小鼠(参见WO 2010/070263A1，其通过引用并入本文)制备抗人Siglec-15 ECD抗体。
(1)人Siglec-15 ECD-hFc蛋白免疫H2L2小鼠：重组的人Siglec-15 ECD-hFc蛋白(SEQ ID NO：154)免疫6-8周龄的HARBOUR H2L2转基因小鼠，小鼠饲养于无特定的病原条件(SPF)的环境下。初次免疫，将50μg免疫蛋白和完全弗氏佐剂(CFA，Sigma，Cat#：F5881)混合在一起，在腹腔和腋下淋巴结及腹股沟淋巴结处注射。为了加强免疫应答，在初次免疫接种的两周后，将25μg免疫原蛋白与Ribi(Sigma佐剂系统，Sigma，Cat#：S6322)佐剂混合，注射到每只小鼠的腹腔内和皮下淋巴结处，随后每只小鼠每隔两周注射一次25μg免疫原，佐剂均为Ribi，加上初次免疫共计6次。分别在每次加强免疫的一周后，采集小鼠血液，离心分离得到血浆，将血浆稀释6个浓度(1:100、1:1000、1:3000、1:9000、1:27000、1:81000)，在包被有人Siglec-15 ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)的ELISA板进行ELISA检测来确定小鼠血液中抗人Siglec-15抗体的滴度，并经流式细胞术检测2个浓度的小鼠血浆(1:100、1:1000)对Siglec-15(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)高表达的CHO-K1/人Siglec-15细胞(KYinno，Beijing)和CHO-K1母细胞的特异反应性。空白对照组(PB)为免疫前老鼠的血浆。
(2)293T/Siglec-15细胞株免疫H2L2小鼠：将编码人Siglec-15(SEQ ID NO:1)的cDNA通过基因合成获得，并被克隆到表达载体plenti6.3中，然后将表达载体转染至293T细胞中，构建高表达人Siglec-15的稳转细胞株293T/Siglec-15。用免疫原293T/Siglec-15细胞株免疫6-8周龄的HARBOUR H2L2转基因小鼠，小鼠饲养于无特定的病原条件(SPF)的环境下。初次免疫，每只小鼠在腹腔共注射5-10*10^ 6 293T/Siglec-15细胞。为了加强免疫应答，在初次免疫接种的两周后，将5-10*10^ 6 293T/Siglec-15细胞注射到每只小鼠的腹腔内，随后每只老鼠每隔三周注射一次5-10*10^ 6 293T/Siglec-15细胞，加上第一次免疫共计6次。分别在每次加强免疫的一周后，采集小鼠血液，离心分离得到血浆，将血浆稀释6个浓度(1:100、1:1000、1:3000、1:9000、1:27000、1:81000)，在包被有人Siglec-15 ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)的ELISA板进行ELISA检测来确定小鼠血液中抗人Siglec-15抗体的滴度，并经流式细胞术检测2个浓度的小鼠血浆(1:100、1:1000)对Siglec-15高表达的CHO-K1/人Siglec-15细胞(KYinno，Beijing)和CHO-K1母细胞的特异反应性。空白对照组(PB)为免疫前老鼠的血浆。
(3)Siglec-15DNA免疫H2L2小鼠：将编码人Siglec-15(SEQ ID NO:1)的cDNA通过基因合成获得，并被克隆到表达载体pVAX1中，构建人Siglec-15DNA(pVAX1-hSiglec-15)。用免疫原pVAX1-hSiglec-15免疫6-8周龄的HARBOUR H2L2转基因小鼠，小鼠饲养于无特定的病原条件(SPF)的环境下。初次免疫，每只小鼠在腹腔用基因枪注射约4μg pVAX1-hSiglec-15。为了加强免疫应答，在第一次免疫接种的两周后，将4μg pVAX1-hSiglec-15注射到每只小鼠的腹腔内，随后每只老鼠每隔三周注射一次4μg pVAX1-hSiglec-15，加上第一次免疫共计6次。分别在每次加强免疫的一周后，采集小鼠血液，离心分离得到血浆，将血浆稀释6个浓度(1:100、1:1000、1:3000、1:9000、1:27000、1:81000)，在包被有人Siglec-15ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)的ELISA板进行ELISA检测来确定小鼠血液中抗人Siglec-15抗体的滴度，并经流式细胞术检测2个浓度的小鼠血浆(1:100、1:1000)对Siglec-15高表达的CHO-K1/人Siglec-15细胞(KYinno，Beijing)和CHO-K1母细胞的特异反应性。空白对照组(PB)为免疫前老鼠的血浆。
在完成上述步骤之后，选择抗体滴度高，具有针对人Siglec-15特异性免疫应答的小鼠进行融合。在融 合之前，注射25μg纯化的人Siglec-15 ECD-hFc蛋白或5-10*10^ 6 293T/Siglec-15细胞或4μg pVAX1-hSiglec-15加强免疫。三天后，处死小鼠，并收集其脾细胞和淋巴结细胞。
1.2全人源抗体的筛选
(1)基于 Optofluidic system的单个B细胞筛选:
Optofluidic system使用光-电定位(OEPTM)技术来进行单个细胞的移动。Beacon光电系统是一个自动化的生物仪器设备，能够允许在细胞培养条件下同时进行生物功能试验、实验分析、阳性克隆挑选等多种操作。Beacon平台可以在数千个细胞上以大规模并行、自动化的方式执行这些任务。
本申请使用浆细胞(plasma cell)发现工作流程，每次实验中最多可以筛选14000个单个plasma细胞，用于挑选分泌抗Siglec-15抗体的抗原特异性的浆细胞。然后，将这些分泌特异性抗体的浆细胞分别导出到含细胞裂解液的96孔板中，用于后续的单个B细胞测序，以鉴定单个B细胞(单克隆)产生的抗体的重链和轻链序列。
(2)基于杂交瘤技术的筛选：
取5-10mL红细胞裂解液添加到脾细胞和淋巴结样品中，4℃裂解5分钟，使用1-10倍体积37℃10％FBS DMEM终止。弃上清，使用适量DMEM培养基重悬，测定细胞的存活率和数量。小鼠骨髓瘤细胞sp2/0(ATCC，Cat#：CRL-1581)计数，37℃备用。然后用高效电融合法以细胞数量为4:1-10:1的比例将脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞sp2/0(ATCC，Cat#：CRL-1581)融合。
将融合细胞重新悬浮于含有20％FBS(Biological Industries，Cat#：04-002-1A)并添加有1X次黄嘌呤、氨蝶呤和胸苷(50X HAT supplement，Cat#：21060017，life technologies)的培养基(DMEM)中，调整细胞浓度为10 5个细胞/200μL。在96孔板的每个孔中加入200μL的融合细胞，在37℃、5％二氧化碳条件下培养。细胞融合后的第10天，杂交瘤上清液通过酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其与人Siglec-15 ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)结合的能力；
筛选出的阳性克隆(OD450>1.0)，再通过流式细胞术筛选与CHO-K1/人Siglec-15细胞(KYinno，Beijing)特异结合的克隆。在荧光强度评分后，选择荧光强度最强的30个杂交瘤母克隆，通过有限稀释法进行亚克隆，筛选生长起来的亚单克隆通过ELISA及流式细胞术筛选，找出与人Siglec-15 ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)和CHO-K1/人Siglec-15细胞(KYinno，Beijing)的结合均最强的亚单克隆。经大鼠Ig分型kit(Invitrogen，Cat#：88-50640-88)确定为IgG亚型的亚单克隆将进行测序分析。
本公开通过上述方法获得的全人源抗体及其序列，如表2所示：
表2抗体所对应的序列编号(SEQ ID NO：X)
抗体 H VH HCDR1 HCDR2 HCDR3 L VL LCDR1 LCDR2 LCDR3
PR300526 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18
PR300659 20 21 23 25 27 29 30 32 34 36
PR300670 38 39 41 43 45 47 48 50 52 54
PR300679 56 57 59 61 63 65 66 68 70 72
PR301285 74 75 77 79 81 83 84 86 88 90
PR301286 92 93 95 97 99 101 102 104 106 108
PR301289 128 129 131 133 135 137 138 140 142 144
实施例2抗Siglec-15抗体的表达、纯化
将抗Siglec-15抗体的重链可变区序列亚克隆到含有信号肽和人重链IgG1恒定区的pTT5表达载体中。将抗Siglec-15抗体的轻链可变区序列亚克隆到含有信号肽和人抗体轻链kappa恒定区的表达载体中。重组质粒经测序证实后用大抽试剂盒(Macherey-Nagel， Xtra Midi)抽提质粒，以提高重组质粒的纯 度和质量，质粒通过0.22μm过滤器(millpore)过滤。纯化后的质粒用于转染。
调整Freestyle 293F细胞(Thermo/Gibco，R79007)密度到1-1.5x10 6/mL后进行转染。用重链质粒和轻链质粒通过PEI(Polyethylenimine，Polysciences，Cat#：24885)共转染Freestyle 293F细胞，转染后的细胞于37℃，125rpm，8％二氧化碳条件下培养。培养约6-7天后，细胞活率降至70％以下，向细胞培养物中加入AmMag TM Protein A Magnetic Beads(GenScript,Cat#：L00695-4)，37℃孵育1-4小时。用AmMag TM MR magnetic rack(GenScript，Cat#：L00722)收集Magnetic Beads，去除细胞培养液。用10-20倍Magnetic Beads体积的PBS清洗Magnetic Beads，操作重复3-5次。收集Magnetic Beads加入2-3倍体积的0.1M Glycine-HCl(pH2.8)进行洗脱，收集含有抗Siglec-15抗体的洗脱液，操作重复3-5次。然后加入1M Tris-HCl(pH8.0)进行中和，将中和后的洗脱液加入到透析袋(Thermo，Cat#：68100)中，放入到1×PBS溶液中透析8-16小时。透析后用NanoPhotometer(IMPLEN，Cat#：NP80)测定抗Siglec-15抗体的浓度，用SDS-PAGE或高效液相色谱-质谱法测定抗体纯度，用内毒素检测试剂盒(GenScript，Cat#：L00350)测定内毒素含量。
实施例3抗体的序列分析和变体获得
抗体的重链可变结构域序列来源于染色体上重链基因群的胚系基因V、D、J基因片段的基因重排和体细胞高频突变等事件；轻链可变结构域序列来源于轻链基因群的胚系基因V、J基因片段的基因重排和体细胞高频突变等事件。基因重排和体细胞高频突变是增加抗体多样性的主要因素。来源于相同胚系V基因片段的抗体也可能产生不同的序列，但总体上相似性较高。利用一些算法，例如IMGT/DomainGapAlign(http://imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/DomainGapAlign.cgi)或者NCBI/IgBLAST(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)可以从抗体的可变结构域序列推测出其发生基因重排时可能的胚系基因片段。将实施例1和表2中的抗体序列进行分析，其重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)的胚系基因V基因片段列于表3。
蛋白质或多肽氨基酸链在细胞中翻译合成后有时会引入化学修饰，称为翻译后修饰(PTM)。对于抗体而言，一些PTM的位点是非常保守的，例如，在人的IgG1抗体的恒定结构域的第297位(EU编号)的保守的氨基酸天冬酰胺Asn通常会发生糖基化修饰形成糖链，而该糖链结构对于抗体结构和相关的效应子功能是至关重要的。但是，如果在抗体的可变结构域尤其是抗原结合区域(如CDR)中存在PTM，那么这些PTM的存在有可能会对抗原的结合有较大的影响，也可能对抗体的物理化学性质带来变化。例如，糖基化、脱酰胺、异构化、氧化等都可能增加抗体分子的不稳定性或异质性，从而增加抗体开发的难度和风险。因而避免一些潜在的PTM对于治疗性抗体的开发是非常重要的。随着经验的积累，人们发现一些PTM是和氨基酸序列的组成尤其是相邻氨基酸组成的“模式”是高度相关的，这样使得可以从蛋白质的一级氨基酸序列预测出潜在的PTM。例如，N-x-S/T(第一位是天冬酰胺，第二位是非脯氨酸以外的任意氨基酸，第三位是丝氨酸或者苏氨酸)的序列模式预测出N-连接糖基化位点。引起PTM的氨基酸序列模式有可能来源于胚系基因序列，例如人胚系基因片段IGHV3-33天然地在FR3区域存在糖基化模式NST；也可能来源于体细胞高频突变。表3列出了实施例1的抗体的可变结构域VH和VL的预测的PTM。具体说来，NSS或NLT可能是糖基化位点，NS或NT或NN可能是脱酰胺位点。
可以通过氨基酸突变来破坏PTM的氨基酸序列模式，从而降低或者去除特定PTM的形成。根据抗体序列和PTM序列模式的不同，有不同的突变设计方法。一种方法是将“热点”氨基酸(如NS模式中的N或S)替换成物理化学性质相似的氨基酸(如把N突变为Q)。如果PTM序列模式来源于体细胞高频突变，而并不存在于胚系基因序列中，那么另一种方法可以是把该序列模式替换成对应的胚系基因序列。实际操作中，对同一个PTM序列模式可能采用多种突变设计方法。
表4列出了对2个来自实施例1的具有潜在PTM位点的抗体的序列进行氨基酸突变得到的新的抗体分子(称为PTM变体)。表5列出了本实施例中这些PTM变体的轻、重链可变结构域氨基酸序列，轻链全长氨基酸序列，重链(人IgG1)全长氨基酸序列，和根据Combined定义规则定义的CDR的氨基酸序列。所有设计出来的PTM变体按照实施例2中描述的方法得到纯化的重组抗体，并进行功能验证。
表3抗siglec-15抗体序列的胚系基因分析和翻译后修饰位点(PTM)分析
抗体 VH胚系V基因 VL胚系V基因 VH PTM VL PTM
PR301286 VH3_30*01 Vk2_28*01 DG(HCDR2) NG(LCDR1)
PR301289 VH1_8*01 Vk3_20*01 NxS/T(HFR3) /
表4抗siglec-15抗体序列的突变位点设计
表5突变PTM后得到的抗体所对应的序列编号(SEQ ID NO：X)
PTM变体 H VH HCDR1 HCDR2 HCDR3 L VL LCDR1 LCDR2 LCDR3
PR301286-1 110 111 95 112 99 101 102 104 106 108
PR301286-3 113 114 95 115 99 101 102 104 106 108
PR301286-5 116 117 95 118 99 119 120 121 106 108
PR301286-6 116 117 95 118 99 122 123 124 106 108
PR301286-7 116 117 95 118 99 125 126 127 106 108
PR301289-1 146 147 131 133 135 137 138 140 142 144
PR301289-2 148 149 131 133 151 137 138 140 142 144
实施例4重组抗体与人Siglec-15蛋白结合
溶于PBS的1μg/mL人Siglec-15 ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)以100μL/孔对ELISA板进行包被，4℃过夜。含2％BSA的PBST(PBS+0.05％吐温20)以200μL/孔对ELISA板进行封闭，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。向ELISA板中加入100μL/孔梯度稀释的抗Siglec-15抗体(5倍稀释，起始浓度为6.67nM)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/孔山羊抗人IgG(H+L)-HRP(1:5000，Jackson，Cat#:109-035-088)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/孔TMB底物(Biopanda，Cat#：TMB-S-003)，室温孵育5分钟，随后加入100μL/孔终止缓冲液(Solarbio，Cat#:C1058)来终止反应。用酶标仪(Molecular Devices，Spectra max 384plus)记录OD 450nm读值。
如图1A-图1D和表6(表6A-表6D)所示，本公开获得的初始抗体及其变体均能特异性地结合人Siglec-15蛋白，且检测到的抗体结合能力与抗体浓度成正相关关系递增。与参照抗体PR300066Tab(参照抗体可变区来自专利WO 2018/057735A1的克隆5G12)相比，本公开的6个抗Siglec-15抗体(PR301285、PR301286、PR301289、PR300526、PR300659、PR300670)表现出和参照抗体(PR300066)相当的结合活性。且PR301286和PR301289的工程化改造的突变体表现出和母本抗体相当或更强的结合活性。
表6重组抗体与人Siglec-15蛋白结合
表6A
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.022
PR301285 0.031
PR301286 0.022
PR301289 0.058
表6B
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.012
PR300526 0.020
PR300659 0.010
PR300670 0.018
表6C
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.012
PR301286 0.027
PR301286-1 0.019
PR301286-3 0.019
表6D
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.021
PR301286 0.018
PR301286-5 0.020
PR301286-6 0.029
PR301286-7 0.025
PR301289 0.027
PR301289-1 0.020
PR301289-2 0.029
实施例5重组抗体与食蟹猴Siglec-15蛋白结合
溶于PBS的1μg/mL食蟹猴Siglec-15-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-C52H6)以100μL/孔对ELISA板进行包被，4℃过夜。含2％BSA的PBST(PBS+0.05％吐温20)以200μL/孔对ELISA板进行封闭，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。向ELISA板中加入100μL/孔梯度稀释的抗Siglec-15抗体(5倍稀释，起始浓度为6.67nM)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/孔山羊抗人IgG(H+L)-HRP(1:5000，Jackson，Cat#:109-035-088)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/ 孔TMB底物(Biopanda，Cat#:TMB-S-003)，室温孵育5分钟，随后加入100μL/孔终止缓冲液(Solarbio，Cat#:C1058)来终止反应。用酶标仪(Molecular Devices，Spectra max 384plus)记录OD 450nm读值。
如图2A-图2B和表7(表7A-表7B)所示，本公开的PR301285、PR301286、PR301289、PR300526、PR300659、PR300670均能与食蟹猴Siglec-15蛋白交叉结合，且与参照抗体PR300066(Tab)即5G12相比，本公开的6个抗Siglec-15抗体表现出和参照抗体相当的结合活性。
表7重组抗体与食蟹猴Siglec-15蛋白结合
表7A
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.025
PR301285 0.038
PR301286 0.090
PR301289 0.104
表7B
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.012
PR300526 0.071
PR300659 ～0.011
PR300670 0.025
实施例6重组抗体与小鼠Siglec-15结合
溶于PBS的1μg/mL小鼠Siglec-15-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-M52H7)以100μL/孔对ELISA板进行包被，4℃过夜。含2％BSA的PBST(PBS+0.05％吐温20)以200μL/孔对ELISA板进行封闭，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。向ELISA板中加入100μL/孔梯度稀释的抗Siglec-15抗体(5倍稀释，起始浓度为6.67nM)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/孔山羊抗人IgG(H+L)-HRP(1:5000，Jackson，Cat:109-035-088)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/孔TMB底物(Biopanda，Cat:TMB-S-003)，室温孵育5分钟，随后加入100μL/孔终止缓冲液(Solarbio，Cat#:C1058)来终止反应。用酶标仪(Molecular Devices，Spectra max 384plus)记录OD 450nm读值。
如图3A-图3B和表8(表8A-表8B)所示，本公开的5个抗体PR300526，PR300659，PR300670，PR301286，PR301289能与小鼠Siglec-15蛋白交叉结合，且与参照抗体PR300066(Tab)即5G12相比，本公开的这5个抗Siglec-15抗体表现出和参照抗体相当的结合活性。但是PR301285不能与小鼠Siglec-15蛋白交叉结合。
表8重组抗体与小鼠Siglec-15蛋白结合
表8A
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.019
PR300526 0.104
PR300659 0.013
PR300670 0.079
表8B
抗体名称 EC50(nM)
hIgG1 -
PR300066(Tab) 0.023
PR301285 -
PR301286 0.051
PR301289 0.036
实施例7重组抗 Siglec-15抗体与CHO-K1/人Siglec-15结合能力
用PBS调节CHO-K1/人Siglec-15细胞(KYinno，Beijing)密度至1*10 6/mL，每孔取100uL细胞悬液至96孔V型板内。96孔V型板1000rpm离心5分钟，用PBS+2％FBS清洗一次。将细胞重悬于100μL梯度稀释的抗体中(5倍稀释，起始浓度为500nM)，并于4℃孵育1小时，PR300066和hlgG1分别作为阳性对照和阴性对照。1小时后用PBS+2％FBS清洗两次。将细胞与100μL Alexa Fluor 488山羊抗人IgG(Jackson，Cat#:109-545-098)避光4℃孵育1小时，用PBS+2％FBS清洗两次。将细胞重新悬浮在200μL PBS+2％FBS中。用BD FACSCanto TM II流式细胞仪分析细胞的荧光强度。
如图4A-图4C和表9(表9A-表9C)所示，在细胞水平上，本公开的抗体PR301285、PR301286、PR301289、PR300659、PR300670、PR300679以及PR301286和PR301289的工程化改造的突变体PR301286-5、PR301289-2能够与人Siglec-15结合。其中，除PR300659和PR301286-5外，其他6个抗体与人Siglec-15的EC50比参照抗体PR300066(Tab)即5G12的EC50小，说明这些抗体能以较低的浓度更灵敏地结合Siglec-15。
表9重组抗体与CHO-K1/人Siglec-15结合
表9A
抗体编号 EC50(nM) 最高值(MFI)
hIgG1 - -
PR300066(Tab) 3.657 40910
PR301285 0.5528 20327
PR301286 1.984 24204
PR301289 1.039 29231
表9B
抗体编号 EC50(nM) 最高值(MFI)
hIgG1 - -
PR300066(Tab) 2.197 37867
PR300659 3.447 23970
PR300670 1.487 16631
PR300679 1.033 25330
表9C
抗体编号 EC50(nM) 最高值(MFI)
hIgG1 - -
PR300066(Tab) 1.638 42520
PR301286-5 1.815 24396
PR301289-2 1.264 28759
实施例8重组抗体与CHO-K1/食蟹猴Siglec-15结合
将编码食蟹猴Siglec-15(其氨基酸序列如SEQ ID NO:155所示)的cDNA通过基因合成获得，并被克隆 到表达载体pcDNA3.1中，然后将表达载体转染至CHO-K1细胞，构建表达食蟹猴Siglec-15的CHO-K1/食蟹猴Siglec-15细胞。用PBS调节CHO-K1/食蟹猴Siglec-15细胞密度至1*10 6/mL，每孔取100uL细胞悬液至96孔V型板内。96孔V型板1000rpm离心5分钟，用PBS+2％FBS清洗一次。将细胞重悬于100μL梯度稀释的抗体中(5倍稀释，起始浓度为500nM)，并于4℃孵育1小时，PR300066和hlgG1分别作为阳性对照和阴性对照。1小时后用PBS+2％FBS清洗两次。将细胞与100μL Alexa Fluor 488山羊抗人IgG(Jackson，Cat#:109-545-098)避光4℃孵育1小时，用PBS+2％FBS清洗两次。将细胞重新悬浮在200μl PBS+2％FBS中。用BD FACS Canto TM II流式细胞仪分析细胞的荧光强度。
如图5A-图5B和表10(表10A-表10B)所示，在细胞水平上，本公开的PR301285、PR301286、PR301289以及PR301286和PR301289的工程化改造的突变体PR301286-5、PR301289-2能够与食蟹猴Siglec-15结合。其中，PR301285和PR301289-2的EC50比参照抗体PR300066(Tab)即5G12的EC50小，说明PR301285和PR301289-2能以较低的浓度更灵敏地结合食蟹猴Siglec-15。但PR001286和PR301286-5与食蟹猴Siglec-15的结合力稍弱一些。
表10重组抗体与CHO-K1/食蟹猴Siglec-15结合
表10A
抗体编号 EC50(nM) 最高值(MFI)
hIgG1 - -
PR300066(Tab) 1.495 6596
PR301285 0.889 5656
PR301286 3.386 5862
PR301289 1.363 5419
表10B
抗体编号 EC50(nM) 最高值(MFI)
hIgG1 - -
PR300066(Tab) 2.192 6678
PR301286-5 5.258 4280
PR301289-2 1.342 4420
实施例9抗 Siglec-15抗体对重组人Siglec-15蛋白的结合亲和力和解离常数的测定
按照制造商提供的详细操作和方法，使用Octet RED96仪器(ForteBio)和抗人IgG Fc捕获传感器(AHC生物传感器，ForteBio，Cat#：18-5060)测定亲和力。具体地，将候选抗体稀释至终浓度6μg/mL，并直接固化到AHC生物传感器上，进行动力学测量。将抗原蛋白Siglec-15 ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)用10 X Kinetics buffer分别稀释至60nM，30nM和15nM 3个浓度，作为分析物，进样120s，解离时间为400s，10mM glycine HCl(pH1.5)再生15s。使用简单一对一Languir结合模型(Octet Red96数据分析软件)，计算结合速率(kon)和解离速率(kdis)。平衡解离常数(kD)以比率kdis/kon计算。
结果如表11(表11A-表11B)所示，测试的抗体中，PR300659，PR300670，PR301285，PR301286，PR301286-1与人Siglec-15蛋白的KD值低于参照抗体PR300066(Tab)即5G12，表明其更强的人Siglec-15结合亲和力。PR300679，PR301289，PR301286-3，PR301286-5，PR301286-6，PR301286-7，PR301289-1，PR301289-2与人Siglec-15蛋白的结合亲和力和参照抗体PR300066(Tab)即5G12相当。
表11抗Siglec-15抗体对重组人Siglec-15蛋白的结合亲和力和解离常数的测定
表11A
表11B
实施例10重组抗体与其他同类蛋白的交叉反应
溶于PBS的1μg/mL人Siglec-15 ECD-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SG5-H52H3)，人Siglec-2-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：CD2-H52H8)，人Siglec-4a-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：MAG-H52H8)，人Siglec-3-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：CD3-H5226)，人Siglec-10-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：SI0-H52H9)，人PD-L1/B7-H1-his蛋白(Acrobiosystems，Cat#：PD1-H5229)各以100μL/孔对ELISA板进行包被，4℃过夜。含2％BSA的PBST(PBS+0.05％吐温20)以200μL/孔对ELISA板进行封闭，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。向ELISA板中加入100μL/孔梯度稀释的抗Siglec-15抗体(浓度为100nM，10nM)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/孔山羊抗人IgG(H+L)-HRP(1:5000，Jackson，Cat#：109-035-088)，37℃孵育1小时。用PBST清洗ELISA板4遍。加入100μL/孔TMB底物(Biopanda，Cat#：TMB-S-003)，室温孵育5分钟，随后加入100μL/孔终止缓冲液(Solarbio，Cat#:C1058)来终止反应。用酶标仪(Molecular Devices，Spectra max 384plus)记录OD 450nm读值。
结果如图6所示，本申请的抗Siglec-15抗体(PR301285、PR301286、PR301289)与其它同类蛋白Siglec-2、Siglec-4a、Siglec-3、Siglec-10、PD-L1无交叉反应。
实施例11重组抗体的T细胞功能试验——细胞因子IFN-γ分泌
将编码人Siglec-15(其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示)和OS8(其为OKT3scFv，其氨基酸序列如SEQ ID NO:156所示)的cDNA通过基因合成获得，并被克隆到表达载体pcDNA3.1中，然后将表达载体转染至CHO细胞中，构建共同表达OS8和人Siglec-15的CHO-OS8-hSiglec-15细胞。用1640完全培养基调节CHO-OS8-hSiglec-15细胞密度至2.5*10 4/mL，每孔取100uL细胞悬液至96孔型板中。于37℃，CO 2 培养箱中孵育过夜。用人T细胞试剂盒(Miltenyi，Cat#:130-096-535)从外周血单核细胞(PBMC)中分离Pan T细胞，用1640完全培养基调节细胞密度至2*10 6/mL，每孔取50μL细胞悬液至96孔型板中；每孔取50μL梯度稀释的抗体(20倍稀释，起始终浓度为10nM)至96孔型板中。于37℃，CO 2培养箱中孵育72h后，取上清液并使用IFN gamma Human Uncoated ELISA Kit(Ebioscience，Cat#:88-7316-88)测试上清液中的INF-γ。PR300066和hlgG1分别作为参考作阳性对照和阴性对照。
结果如图7A-图7D所示，测试的PR300526，PR300659，PR300670，PR301285，PR3001286，PR3001289抗体均能剂量依赖性的增强激活的T淋巴细胞分泌细胞因子IFN-γ，并且和阳性对照相比具有相当甚至更强的激活作用。且PR301286和PR301289的工程化改造的突变体也表现出和母本抗体相当的活性。
实施例12重组抗体的髓系细胞功能试验——细胞增殖
用人monocyte细胞试剂盒(Miltenyi，Cat#:130-050-201)从PBMC中分离monocyte细胞。用1640完全培养基调节细胞密度至1*10 6/mL，每孔取100uL细胞悬液至96孔型板中；每孔取50uL梯度稀释的抗体(2倍稀释，起始终浓度为40nM)至96孔型板中。将人Siglec-15 ECD-hFc蛋白(SEQ ID NO：154)稀释至16μg/mL，每孔加入50μL(终浓度为4μg/mL)。于37℃，CO 2培养箱中孵育5天后，测试细胞增殖。PR300066和hlgG1分别作为阳性对照和阴性对照。活细胞数目测定采用 Luminescent Cell Viability Assay试剂盒(Promega，Cat#：G7572)，实验操作严格按照试剂盒说明书要求。具体实验简述如下：在测定前将96孔板放在室温平衡30分钟，加入与细胞培养基等体积的 试剂，放置在摇床10分钟以诱导细胞裂解，再将孔板放置在室温10分钟来稳定发光信号，最后用读板机(EnVision，PerkinElmer)读取数值。
结果如图8A-图8D所示，测试的PR300526，PR300659，PR300670，PR201285，PR3001286，PR3001289抗体均能剂量依赖性的抑制髓系细胞的增殖，并且和阳性对照相比具有相当甚至更强的抑制作用。且PR301286和PR301289的工程化改造的突变体也表现出和母本抗体相当的活性。
实施例13重组抗体的髓系细胞功能试验——细胞因子TNF-α分泌
用人monocyte细胞试剂盒(Miltenyi，Cat#:130-050-201)从PBMC中分离monocyte细胞。用1640完全培养基调节细胞至密度1*10 6/mL，每孔取100uL细胞悬液至96孔型板中；每孔取50uL梯度稀释的抗体(5倍稀释，起始终浓度为100nM)至96孔型板中。将人Siglec-15 ECD-hFc蛋白(SEQ ID NO：154)稀释至16μg/mL，每孔加入50μL(终浓度为4μg/mL)。孵育24h后，取上清液并使用TNF alpha Human Uncoated ELISA Kit(Ebioscience，Cat#:88-7346-88)测试上清液中的TNF-α。PR300066和hlgG1分别作为阳性对照和阴性对照。
结果如图9所示，测试的4个抗体均能剂量依赖性的抑制髓系细胞分泌炎性因子TNF-α，PR301285，PR301289和阳性对照相比具有更强的抑制作用；PR300679和阳性对照相比具有相当的抑制作用；但PR301286和阳性对照相比抑制作用稍微较弱些。
实施例14抗SigLec-15抗体对hPBMC-A375移植瘤的抑制作用
编码人Siglec-15(SEQ ID NO:1)的cDNA通过基因合成获得，并被克隆到表达载体plenti6.3中，然后将表达载体转染至A375细胞中，构建表达人Siglec-15的A375-hSiglec-15细胞。
SPF级B-NDG小鼠购买自百奥赛图，每只小鼠右侧腋窝皮下接种5×10 6个A375-hSiglec-15细胞。待肿瘤长出后，每只小鼠经尾静脉注射1×10 7个hPBMC细胞。待肿瘤平均体积达100-300mm 3时，将动物随机分成4组，每组6只。分组当天为d0，给药方案见表12。每周测量2-3次肿瘤体积，同时称量小鼠的体重，记录数据；每日观察与记录小鼠一般表现；实验结束后剥取肿瘤并称重。计算公式如下：
肿瘤体积，TV(mm 3)＝1/2×(a×b 2)，a为长径，b为示短径。
相对肿瘤体积，RTV＝TV t/TV 0，TV 0为d0天肿瘤体积，TV t为每一次测量时的肿瘤体积。
相对肿瘤增殖率， T RTV：治疗组RTV，C RTV：溶剂组RTV；肿瘤体积抑制率，1-T/C。
瘤重抑制率，TGI(％)＝(1-治疗组瘤重量/溶剂组瘤重量)×100％。
体重变化率，WCR(％)＝(Wt t-Wt 0)/Wt 0×100％，Wt 0为d0天的小鼠体重，Wt t为每一次测量时的小鼠体重。
表12给药方案
组别 药物 给药剂量 给药体积 给药时间 给药途径
i 溶剂(PBS) -- 10mL/kg d0、d3、d7、d10、d14、d17和d20 i.p.
ii PR300066 10mg/kg 10mL/kg d0、d3、d7、d10、d14、d17和d20 i.p.
iii PR301286-5 10mg/kg 10mL/kg d0、d3、d7、d10、d14、d17和d20 i.p.
iv PR301289-2 10mg/kg 10mL/kg d0、d3、d7、d10、d14、d17和d20 i.p.
注：i.p.为腹腔注射
结果如表13所示，PR300066、PR301286-5和PR301289-2对A375-hS15人黑色素瘤的生长具有抑制作用，d21天的肿瘤体积抑制率分别为16.8％、35.3％和42.7％，d21天的瘤重抑制率分别为27.7％、36.1％和45.9％，PR301286-5和PR301289-2的抑制作用显著优于PR300066。此外，荷瘤小鼠对以上药物都能够较好耐受，各给药组小鼠的体重变化率与溶剂组接近，说明PR300066、PR301286-5和PR301289-2表现出引起毒性反应的低可能性。
表13抗SigLec15抗体对hPBMC-A375移植瘤的抑制效果
注：i.p.为腹腔注射；通过student’s t test与溶剂组进行比较，*p<0.05，**p<0.01
本说明书公开的所有技术特征都可以任何组合方式进行组合。本说明书所公开的每个特征也可以被其它具有相同、相等或相似作用的特征所替换。因此，除非特殊说明，所公开的每一特征仅仅是一系列相等或相似特征的实例。
此外，从上述描述中，本领域技术人员可从本公开中很容易清楚本公开的关键特征，在不脱离本公开的精神及范围的情况下，可对发明进行很多修改以适应各种不同的使用目的及条件，因此这类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。

Claims (20)

  1. 一种分离的抗Siglec-15抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(i)-(iii)中的任一项：
    (i)重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3，其中，
    (1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:135具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133所具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:151所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:151具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (6)重链CDR1包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (7)重链CDR1包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:79具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (8)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:97具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (9)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:112具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (10)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:115所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (11)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少 80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (ii)轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3，其中，
    (1)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:140所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:144所示的序列或与SEQ ID NO:144具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:14具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:16具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:18具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:34具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (5)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:70具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:72具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (6)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:86具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:88具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:90具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (7)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (8)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:121所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:121具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (9)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:124所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:124具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (10)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:127所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:127具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (iii)如(i)所示的重链CDR1，重链CDR2和重链CDR3，以及如(ii)所示的轻链CDR1，轻链CDR2和轻链CDR3。
  2. 根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中，
    (1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:135具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:140所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:144具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:131具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:133所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:133具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:151所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:151具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:140所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:140具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:142所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:142具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:144所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:144具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:14具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:16具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:18具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:32具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:34所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:34具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:36所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:36具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:45所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (6)重链CDR1包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:70具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:72所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:72具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (7)重链CDR1包含如SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:77具有至少80％同一性 的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:79所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:79具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:86具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:88具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:90具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (8)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:97具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (9)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:112所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:112具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (10)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:115所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:115具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:104所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:104具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (11)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:121所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:121具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (12)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:124所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:124具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (13)重链CDR1包含如SEQ ID NO:95所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:95具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:118所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:118具有至少80％同一性的氨基酸序列和重链CDR3包含如SEQ ID NO:99所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:99具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:127所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO: 127具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:106所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:106具有至少80％同一性的氨基酸序列和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:108所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:108具有至少80％同一性的氨基酸序列。
  3. 根据权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段是嵌合、人源化或全人源的。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(i)-(iii)中的任一项：
    (i)重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NOs：129，147，149，3，21，39，57，75，93，111，114或117所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs：129，147，149，3，21，39，57，75，93，111，114或117具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (ii)轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NOs：138，12，30，48，66，84，102，120，123或126所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs：138，12，30，48，66，84，102，120，123或126具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (iii)如(i)所示的重链可变区以及如(ii)所示的轻链可变区。
  5. 根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中，
    (1)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：129所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：129具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：138具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：147所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：147具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：138具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：149所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：149具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：138所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：138具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：3具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：12具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (5)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：21具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：30具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (6)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：39具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：48所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：48具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (7)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：57所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：57具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：66所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：66具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (8)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：75具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：84具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (9)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：93所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：93具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：102具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (10)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：111所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：111具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：102具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (11)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：114所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：114具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：102具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (12)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：120所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：120具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (13)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：123所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：123具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (14)所述重链可变区包含如SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：117具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链可变区包含如SEQ ID NO：126所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：126具有至少80％同一性的氨基酸序列。
  6. 根据权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含(i)-(iii)中的任一项：
    (i)重链，所述重链包含如SEQ ID NOs：128，146，148，2，20，38，56，74，92，110，113或116所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs：128，146，148，2，20，38，56，74，92，110，113或116具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (ii)轻链，所述轻链包含如SEQ ID NOs：137，11，29，47，65，83，101，119，122或125所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs：137，11，29，47，65，83，101，119，122或125具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (iii)如(i)所示的重链以及如(ii)所示的轻链。
  7. 根据权利要求1-6任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中，
    (1)所述重链包含如SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：128具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：137具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)所述重链包含如SEQ ID NO：146所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：146具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：137具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)所述重链包含如SEQ ID NO：148所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：148具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：137所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：137具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)所述重链包含如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：2具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：11具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (5)所述重链包含如SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：20具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：29具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (6)所述重链包含如SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：38具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：47具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (7)所述重链包含如SEQ ID NO：56所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：56具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：65所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：65具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (8)所述重链包含如SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：74具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：83具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (9)所述重链包含如SEQ ID NO：92所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：92具有至少80％、81％、82％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：101具有至少80％一性的氨基酸序列；
    (10)所述重链包含如SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：110具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：101具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (11)所述重链包含如SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：113具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：101具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (12)所述重链包含如SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：119所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：119具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (13)所述重链包含如SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：122具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (14)所述重链包含如SEQ ID NO：116所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：116具有至少80％同一性的氨基酸序列，和所述轻链包含如SEQ ID NO：125所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：125具有至少80％同一性的氨基酸序列。
  8. 根据权利要求1-7任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段基本上不结合Siglec-2、Siglec-3、Siglec-4a、Siglec-10和PD-L1。
  9. 根据权利要求1-8任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括单克隆抗体、纳米抗体、Fab片段、F(ab') 2片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段、分离的CDR区、scFv或其组合。
  10. 一种分离的核酸分子，其编码权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
  11. 一种表达载体，其包含权利要求10所述的核酸分子。
  12. 一种宿主细胞，其包含权利要求10所述的核酸分子或权利要求11所述的表达载体。
  13. 一种多肽融合物或多特异性抗体，其包含权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
  14. 一种病毒载体，其包含编码权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段的核酸分子或权利要求10所述的核酸分子。
  15. 一种药物组合物，其包含权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
  16. 一种用于在有需要的受试者中治疗或缓解与Siglec-15相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求10所述的核酸分子或权利要求15所述的药物组合物。
  17. 根据权利要求16所述的方法，其中，所述与Siglec-15相关的疾病或病症包括癌症、感染、自身免疫性疾病、骨代谢异常，或其组合。
  18. 一种用于在有需要的受试者中调节免疫应答或者减少有需要的受试者中T细胞抑制的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求10所述的核酸分子或权利要求15所述的药物组合物。
  19. 一种检测或诊断疾病或病症的方法，其包括：
    (a)使用权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段测定受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达，以及
    (b)将所述Siglec-15水平与对照水平作比较，其中与所述对照水平相比，所述测定的Siglec-15水平增加表明有所述疾病或病症。
  20. 一种监测对治疗的应答的方法，其包括：
    (a)使用权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段测定治疗之前和之后受试者的细胞或组织样品中的Siglec-15表达；以及
    (b)比较随时间变化的Siglec-15水平，由此与治疗之前的Siglec-15水平相比，治疗之后测定的所述Siglec-15水平降低表明对所述治疗应答良好。
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