PL223992B1 - Zastosowanie RNA do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej - Google Patents

Zastosowanie RNA do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej

Info

Publication number
PL223992B1
PL223992B1 PL356698A PL35669800A PL223992B1 PL 223992 B1 PL223992 B1 PL 223992B1 PL 356698 A PL356698 A PL 356698A PL 35669800 A PL35669800 A PL 35669800A PL 223992 B1 PL223992 B1 PL 223992B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
dsrna
cell
rna
gene
expression
Prior art date
Application number
PL356698A
Other languages
English (en)
Other versions
PL356698A1 (pl
Inventor
Magdalena Zernicka-Goetz
Florence Wianny
Martin John Evans
David Moore Glover
Original Assignee
Cancer Res Tech Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10864842&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL223992(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Cancer Res Tech Ltd filed Critical Cancer Res Tech Ltd
Publication of PL356698A1 publication Critical patent/PL356698A1/pl
Publication of PL223992B1 publication Critical patent/PL223992B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
    • C12Y207/11—Protein-serine/threonine kinases (2.7.11)
    • C12Y207/11001—Non-specific serine/threonine protein kinase (2.7.11.1), i.e. casein kinase or checkpoint kinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01031—Beta-glucuronidase (3.2.1.31)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A01K2217/054—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic) inducing loss of function
    • A01K2217/058—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic) inducing loss of function due to expression of inhibitory nucleic acid, e.g. siRNA, antisense
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C12N2015/8527—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic for producing animal models, e.g. for tests or diseases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/30—Production chemically synthesised
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku jest zastosowanie RNA do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej, przy czym gen docelowy powoduje lub może powodować chorobę oraz przy czym komórkę ssaczą stanowi embrionalna komórka macierzysta z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka. W szczególności wynalazek dotyczy hamowania ekspresji genów u ssaków z użyciem dwuniciowego RNA (dsRNA).
Korzyści wynikające z możliwości hamowania ekspresji określonego genu lub grupy genów u ssaków są oczywiste. Wiele chorób (takich jak rak, zaburzenia hormonalne, zaburzenia immunologiczne, itp.) powstają w wyniku nieprawidłowej ekspresji konkretnego genu lub grupy genów u ssaka zatem hamowanie genu lub grupy genów można stosować do leczenia tych stanów. Podobnie, choroba może być wynikiem ekspresji zmutowanej postaci białka, w którym to przypadku korzystne byłoby wyeliminowanie ekspresji zmutowanego allelu. Ponadto takie specyficzne hamowanie genu można stosować do leczenia chorób wirusowych, które są wywołane np. przez retrowirusy, takie jak HIV, w których geny wirusowe są włączone do genomu ich gospodarza i ulegają ekspresji.
Ponadto, wyeliminowanie lub zahamowanie ekspresji specyficznego genu można stosować do badania lub manipulowania wczesnymi etapami rozwojowymi embrionu nie pochodzącego od człowieka. Najcenniejszą informację uzyska się, gdy działanie badanego genu będzie mogło być zaburzone w specyficznych komórkach embrionu i w określonych punktach czasowych. W takiej sytuacji, w modelu mysim nie można stosować klasycznych metod „knockoutu” genowego, gdyż eliminują one działanie genu ogólnie w całym embrionie. Ponadto, gdy gen jest używany do kierowania procesami rozwojowymi kilkakrotnie w przestrzeni i czasie, wyeliminowanie jego roli za pomocą standardowego „knockoutu” genowego może przeszkodzić w zrozumieniu czegokolwiek z wyjątkiem pierwszego etapu. Nawet gdy przedmiotem zainteresowania jest badanie pierwszego momentu rozwoju, w którym gen działa, wpływ matczynych transkryptów i produkty ich translacji mogą maskować efekty knockoutu genowego. Ponadto istniejąca metoda „konckoutu” jest niezwykle pracochłonna. Wymaga ona stworzenia najpierw przerwanego segmentu genu, który jest stosownie wyznakowany aby umożliwić selekcję pod względem homologicznej rekombinacji w hodowanych embrionalnych komórkach macierzystych. Następnie, komórki takie wprowadza się do blastocystu i tak powstałe chimeryczne zwierzęta stosuje do założenia czystych linii hodowlanych przed tym, aż możliwe będzie uzyskanie homozygotycznych mutantów.
Wiadomo, że ekspresję genów można specyficznie hamować za pomocą dwuniciowego RNA u pewnych organizmów. Ostatnio wykazano, że oddziaływanie dwuniciowego RNA (RNAi, od RNA interference) na ekspresję genów, pierwszy raz wykazane dla Caenorhabditis elegans (Fire i in., Nature 391, 806-811 (1998); WO nr 99/32 619), jest skuteczne u niższych eukariotów, w tym Drosophila melanogaster (Kennerdell i Carthew, Cell 95, 1017-1026 (1998)), Trypanosoma brucei (Ngo i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 14687-14692 (1998)), wypławków (Sanchez Alvarado i Newmark, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96, 5049-5054 (1999)) oraz u roślin (Waterhouse i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 13959-13964 (1998)). Zastosowanie tego podejścia wykazano także na embrionach Danio pręgowanego (Danio rerio), ale z ograniczonym powodzeniem (Wargelius i in., Biochem. Biophys. Res. Commun. 263, 156-161 (1999)).
Jak dotychczas nie opisano, że RNAi można stosować u ssaków, a ponadto uważa się, że RNAi nie będzie działać u ssaków. Biorąc to pod uwagę wyrażono obawę, że jest mało prawdopodobne, aby protokoły stosowane u bezkręgowców i w układach roślinnych były skuteczne w przypadku ssaków (praca przeglądowa autorstwa Fire (Fire, Trends Genet 15, 358-363 (1999)). Wynika to z faktu, że nagromadzenie dsRNA w komórkach ssaczych może spowodować ogólne zablokowanie syntezy białek. Nagromadzenie bardzo małych ilości dwuniciowego RNA (dsRNA) w komórkach ssaczych po zakażeniu wirusowym wywołuje odpowiedź interferonu (Marcus, Interferon 5, 115-180 (1983)), co prowadzi do ogólnego zablokowania translacji i wejścia na drogę apoptozy (Lee i Esteban Virology 199, 491-496 (1994)). Częścią odpowiedzi interferonu jest aktywacja kinazy białkowej odpowiadającej na dsRNA (PKR) (Clemens, Int. J. Biochem. Cell. Biol. 29, 945-949 (1997)). Enzym ten w odpowiedzi na dsRNA fosforyluje i inaktywuje czynnik translacyjny EIF2a. Konsekwencją jest ogólne zahamowanie translacji, co z kolei zapoczątkowuje apoptozę. Wagner i Sun (Nature 391, 806-811 (1998)) zasugerowali, że RNAi nie będzie działać u ssaków, gdyż nie wywołuje ono żadnych efektów przy stosowaniu jako kontrola w doświadczeniach z antysensownym RNA.
PL 223 992 B1
Antysensowny RNA próbowano stosować jako środek do zmniejszania ekspresji genów w embrionach wielu gatunków. Podczas gdy uzyskano znaczący sukces w przypadku Drosophila, nie powiodły się doświadczenia na embrionach Danio pręgowanego (Danio rerio), Xenopus oraz mysich. U Xenopus zaobserwowano kilka ograniczeń stosowania podejścia z antysensownym RNA. Uważa się, że było to skutkiem wyraźnej aktywności topnienia RNA (Bass i Weintraub, Cell 48, 607-613 (1987); Rebagliati i Melton, Cell 48, 599-605 (1987)), która wynikała ze specyficznej względem dsRNA deaminazy adenozyny (dsRAD), co sugeruje, że zastosowanie RNAi nie może się udać.
W embrionach mysich stosowanie antysensownego RNA odniosło niewielki i ograniczony sukces w zmniejszaniu ekspresji genów, szczególnie w dwu-czterokomórkowym stadium (Bevilacqua i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 831-835 (1988)). Autorzy podejrzewali, że częściowe zahamowanie β-glukuronidazy w ich doświadczeniach może także odzwierciedlać aktywność topnienia działającą względem dupleksów sensowny/antysensowny RNA, a zatem przebadali oni stabilność dsRNA β-glukuronidazy podanego drogą mikroiniekcji do mysich blastomerów. Stwierdzili oni brak wpływu na stabilność RNA, ale doświadczenie prowadzono tylko przez okres pięciu godzin. Zatem, brak jest w tym artykule sugestii, że dsRNA może utrzymywać się w ssaczych komórkach wystarczająco długo, aby mógł oddziaływać na ekspresję genów. Ponadto, nie stwierdzili oni wpływu na ekspresję β-glukuronidazy po wstrzyknięciu dsRNA. Zatem, artykuł ten nie sugeruje, że dsRNA może hamować ekspresję genów w komórkach ssaczych.
W WO nr 99/32 619 zasugerowano, że dsRNA można stosować do hamowania ekspresji genów u ssaków. Jednakże jedyny dowód doświadczalny w tym dokumencie wykazuje, że RNAi działa u C. elegans; brak tam dowodów wykazujących, że może ono działać u ssaków. Faktycznie, w późniejszych publikacjach twórców wymienionych w WO nr 99/32619 (Fire, Trends Genet 15, 358-363 (1999); (Montgomery i Fire, Trends Genet 14, 255-258 (1998)) stwierdzono, że RNAi może działać u ssaków, tylko gdy odpowiedź PKR zneutralizuje się lub zapobiegnie jej w pewien sposób, jednakże w W099/32619 nie podano żadnych sugestii, w jaki sposób można tego dokonać. Te późniejsze publikacje wskazują, że sami twórcy WO nr 99/32 619 uważają, że jak dotychczas działanie RNAi nie zostało wymuszone u ssaków (i że nie jest to możliwe).
Zatem, panuje opinia, że RNAi nie można zmusić do działania u ssaków. W przeciwieństwie do tej opinii wykazano, że możliwe jest zakłócenie ekspresji specyficznych genów w mysich oocytach i zygotach po mikroiniekcji odpowiedniego dsRNA. Doświadczalnie wykazano, że RNAi może fenokopiować efekty dysrupcji matczynej ekspresji genu c-mos w oocycie, tak by przezwyciężyć zatrzymanie mejozy w metafazie II lub zygotycznej ekspresji E-kadheryny, aby zapobiec rozwojowi blastocysty, co stwierdzono w odpowiednich myszach zknockoutowanych. Wykazano, że wstrzyknięcie dsRNA jest specyficzne względem odpowiadającego genu, nie wywołuje ono ogólnego zahamowania translacji, ze względu na to, że embriony nadal się rozwijają i nie obserwuje się objawów śmierci komórek. Zatem wykazano, że RNAi może być skuteczne w komórkach ssaczych.
Zatem, wynalazek dotyczy zastosowania RNA do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej, przy czym gen docelowy powoduje lub może powodować chorobę oraz przy czym komórkę ssaczą stanowi embrionalna komórka macierzysta z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka, RNA obejmuje dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów, która to sekwencja nukleotydów jest w 100% identyczna z co najmniej częścią tego genu docelowego w tej komórce ssaczej, która to dwuniciową struktura ma długość co najmniej 25 zasad oraz która to sekwencja nukleotydów pochodzi z endogennej matrycy, oraz przy czym RNA obejmuje dwie oddzielne komplementarne nici RNA.
Zgodnie z korzystną postacią wynalazku genem docelowym jest gen endogenny.
Zgodnie z inną korzystną postacią wynalazku genem docelowym jest gen wirusowy.
Zgodnie z inną korzystną postacią wynalazku embrion przed zagnieżdżeniem stanowi blastocyt.
Opisano RNA obejmujący dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów identycznej w co najmniej 80% z co najmniej częścią genu docelowego w komórce ssaczej lub zdolnej do hybrydyzacji z częścią transkryptu genu docelowego w następujących warunkach: hybrydyzacja w 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6,4, 1 mM EDTA, 50°C lub 70°C przez 12-16 godzin, następnie płukanie i pochodzącej z endogennej matrycy lub wektor ekspresyjny kodujący taki RNA, do zastosowania jako lek.
Opisano sposób in vitro hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej, który to sposób polega na wprowadzeniu do komórki RNA obejmującego dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów identycznej w co najmniej 80% z co najmniej częścią genu docelowego lub zdolnej do hybrydyzacji z częścią transkryptu genu docelowego w następujących warunkach: hybrydyzacja
PL 223 992 B1 w 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6,4, 1 mM EDTA, 50°C lub 70°C przez 12-16 godzin, następnie płukanie; i pochodzącej z endogennej matrycy; oraz potwierdzeniu zahamowania ekspresji genu docelowego, przy czym komórkę ssaczą stanowi komórka somatyczna, oocyt nie pochodzący od człowieka lub komórka z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka.
RNA, określany również jako dsRNA, znajdujący zastosowanie zgodnie z wynalazkiem, pochodzi z „endogennej matrycy. Taka matryca może stanowić całość lub część sekwencji nukleotydów endogennej dla ssaka; może ona być sekwencją DNA genu lub cDNA wytworzonego z mRNA wyizolowanego od ssaka, np. za pomocą odwrotnej transkryptazy. Gdy matryca stanowi całość lub część sekwencji DNA genu, korzystne jest aby obejmowała ona jeden lub większą liczbę, albo wszystkie eksony genu. Ponadto całość lub część genu wirusa może tworzyć endogenną matrycę, gdy ulega on ekspresji u ssaka w taki sposób, że odpowiedź interferonu nie jest wywoływana, np. ekspresji z prowirusa włączonego do chromosomu komórki gospodarza. Zatem, dsRNA według wynalazku różni się od wirusowego dsRNA i syntetycznego polyrlC, w przypadku których stwierdzono, że wzbudzają PKR, co prowadzi do apoptozy w komórkach ssaczych.
Gdy dsRNA pochodzi z endogennej matrycy, brak jest ograniczeń odnośnie sposobu, w jaki jest on syntetyzowany. Zatem może on być syntetyzowany in vitro lub in vivo, w wyniku stosowania manualnych i/lub automatycznych procedur. Syntezę in vitro można przeprowadzić drogą reakcji chemicznej lub enzymatycznej, np. z użyciem sklonowanej polimerazy RNA (np. T3, T7, SP6) do transkrypcji matrycy endogennego DNA (lub cDNA), względnie łącząc obie te metody.
In vivo, dsRNA można zsyntetyzować stosując dobrze znane metody rekombinacji (patrz np. Sambrook i in., Molecular Cloning; A Laboratory Manual, 2 wydanie (1989); DNA Cloning, tomy I i II (red. D. N. Glover, 1985); Oligonucleotide Synthesis (red. M. J. Gait, 1984); Nucleic Acid Hybridisation (red. B. D. Hames i S. J. Higgins, 1984); Transcription and Translation (red. B. D. Hames i S. J. Higgins, 1984); Animal Cell Culture (red. R. I. Freshney, 1986); Immobilised Cells and Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); seria, Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (red. J. H. Miller i M. P. Calos, 1987 , Cold Spring Harbor Laboratory), Methods in Enzymology tom 154 i tom 155 (red. odpowiednio Wu i Grossman oraz Wu) , red. Mayer i Walker, (1987), Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, Londyn), Scopes, (1987), Protein Purification: Principles and Practice, wydanie drugie (Springer-Verlag, N. Y.) oraz Handbook of Experimental Immunology, tomy I-IV (red. D. M. Weir i C. C. Blackwell 1986).
Zatem, komórki bakteryjne można transformować wektorem ekspresyjnym zawierającym matrycę DNA, z której ma pochodzić dsRNA. Alternatywnie, komórki ssaka, u którego wymagane jest zahamowanie ekspresji genu, można transformować wektorem ekspresyjnym lub w inny sposób. Dwukierunkową transkrypcję jednej lub większej liczby kopii matrycy może osiągnąć za pomocą endogennej polimerazy RNA stransformowanej komórki lub za pomocą sklonowanej polimerazy RNA (np. T3, T7, SP6) kodowanej przez dany wektor ekspresyjny lub inny wektor ekspresyjny. Stosowanie i wytwarzanie konstruktów ekspresyjnych jest znane (patrz WO nr 98/32 016; opisy patentowe Stanów Zjednoczonych Ameryki nr nr 5 593 874, 5 698 425, 5 712 135, 5 789 214 i 5 804 693). Hamowanie ekspresji genu może być ukierunkowane przez specyficzną transkrypcję w narządzie, tkance lub typie komórek; warunki środowiska (np. zakażenie, stres, temperatura, związki chemiczne); i/lub transkrypcję przeprowadzoną techniką inżynierii genetycznej w konkretnym stadium lub wieku rozwojowym, szczególnie gdy dsRNA jest syntetyzowany in vivo u ssaka. dsRNA można także dostarczać do określonych tkanek lub typów komórek za pomocą znanych genetycznych układów dostarczania. Znane wektory eukariotyczne obejmują pWLNEO, pSV2CAT, pOG44, pXTl i pSG dostępne z Stratagene; oraz pSVK3, pBPV, pMSG i pSVL, dostępne z Pharmacia. Wektory te wymieniono jedynie dla zilustrowania wielu dostępnych w handlu i dobrze znanych wektorów, które są dostępne dla specjalistów.
Gdy RNA jest syntetyzowany poza komórką ssaczą, może zostać oczyszczony przed wprowadzeniem do komórki. Oczyszczanie można przeprowadzić przez ekstrakcję rozpuszczalnikiem (takim jak fenol/chloroform) lub na żywicy, wytrącanie (np. etanolem), elektroforezę, chromatografię lub połączenie tych metod. Jednakże oczyszczanie może spowodować utratę dsRNA, a zatem powinno być ograniczone do minimum lub nie powinno się go wcale przeprowadzać. RNA można wysuszyć do przechowywania lub rozpuścić w roztworze wodnym, który może zawierać bufory lub sole ułatwiające splatanie i/lub stabilizację nici RNA.
dsRNA użyteczny zgodnie z wynalazkiem obejmuje dsRNA zawierający jedną lub większą liczbę zmodyfikowanych zasad oraz dsRNA ze szkieletem zmodyfikowanym ze względu na stabilność lub
PL 223 992 B1 z innych powodów. Przykładowo, wiązania fosfodiestrowe naturalnego RNA można zmodyfikować tak, by zawierały co najmniej jeden heteroatom azotu lub siarki. Ponadto, wymieniając dwa przykłady, zgodnie z wynalazkiem może być stosowany dsRNA zawierający nietypowe zasady, takie jak inozyna, lub inne zmodyfikowane zasady, takie jak zasady tritylowane. Należy zwrócić uwagę, że do RNA wprowadzono dużo różnych modyfikacji, które mogą służyć wielu użytecznym celom znanym specjalistom. Określenie dsRNA, stosowane w opisie, obejmuje takie chemicznie, enzymatycznie lub metabolicznie zmodyfikowane postacie dsRNA, pod warunkiem, że pochodzą one z endogennej matrycy.
Dwuniciowa struktura może zostać utworzona przez pojedynczą, autokomplementarną nić RNA, albo przez dwie oddzielne komplementarne nici RNA. Tworzenie dupleksu RNA może zostać rozpoczęte wewnątrz lub na zewnątrz komórki ssaczej.
dsRNA obejmuje strukturę dwuniciową, której sekwencja jest identyczna w co najmniej 100% z co najmniej częścią genu docelowego. „Identyczność, w znaczeniu z dziedziny wynalazku, oznacza zależność pomiędzy dwoma lub większą liczbą sekwencji polinukleotydowych (lub polipeptydowych), ustaloną przez porównanie sekwencji. W dziedzinie wynalazku, identyczność oznacza także stopień pokrewieństwa pomiędzy sekwencjami polinukleotydowymi, ustalony przez dopasowanie nici tych sekwencji. Identyczność można łatwo obliczyć (Computational Molecular Biology, red. Lesk, A. M., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, red. Smith, D. W., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Część I, red. Griffin, A. M. i Griffin, H. G., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; oraz Sequence Analysis Primer, red. Gribskov, M. i Devereux, J., M. Stockton Press, New York, 1991). Choć istnieje wiele metod pomiaru identyczności dwu sekwencji polinukleotydowych, określenie to jest dobrze znane specjalistom (Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, red. Gribskov, M. i Devereux, J., M. Stockton Press, New York, 1991; oraz Carillo, H. i Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988). Metody powszechnie stosowane do określania identyczności sekwencji obejmują, ale nie wyłącznie, ujawnione w Carillo, H. i Lipman, D., SLAM J. Applied Math., 48:1073 (1988).
Korzystne metody określania identyczności zaprojektowano tak, by dawały największe dopasowanie pomiędzy badanymi sekwencjami. Metody określania identyczności skodyfikowano w programach komputerowych. Programy komputerowe do określania identyczności pomiędzy dwiema sekwencjami obejmują, ale nie wyłącznie, pakiet oprogramowania GCG (Devereux, J. i in., Nucleic Acids Research 12 (1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN i FASTA (Atschul, S.F. i in., J. Molec. Biol. 215: 403 (1990)). Innym dobrze znanym pakietem oprogramowania do realizacji tej procedury jest program CLUSTAL. Porównuje on sekwencje dwóch polinukleotydów i znajduje optymalne dopasowanie przez wstawianie przerw w odpowiedniej sekwencji, gdy jest to stosowne. Identyczność optymalnego dopasowania można także obliczyć z użyciem pakietu oprogramowania, takiego jak BLASTx. Program ten dopasowuje najdłuższe fragmenty podobnych sekwencji i przypisuje wartość dopasowania. Dla każdego wzoru porównania można znaleźć kilka regionów podobieństwa, z których każdy będzie miał inną wartość. Dla specjalisty jest zrozumiałe, że dwa polinukleotydy o różnych długościach można porównać na całej długości dłuższego fragmentu. Alternatywnie, można porównywać małe regiony. Normalnie porównuje się sekwencje o tej samej długości, aby można było dokonać użytecznego porównania.
Występuje 100% identyczności sekwencji pomiędzy hamującym RNA a częścią genu docelowego. Jednakże, opisano dsRNA o 80% lub wyższej niż 90% lub 95% identyczności sekwencji, a zatem można tolerować zmiany sekwencji, których można oczekiwać ze względu na mutacje genetyczne, polimorfizm szczepów lub dywergencję ewolucyjną.
Region dupleksu RNA może mieć sekwencję nukleotydów zdolną do hybrydyzacji z częścią transkryptu genu docelowego (np. hybrydyzacji w 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6,4, 1 mM EDTA, 50°C lub 70°C przez 12-16 godzin; następnie płukanie).
Jakkolwiek optymalna długość dsRNA może różnić się w zależności od genu docelowego i warunków doświadczalnych, region dupleksu RNA ma długość co najmniej 25 zasad.
Stosowane tutaj określenie „gen docelowy” ogólnie oznacza polinukleotyd zawierający region kodujący polipeptyd lub region polinukleotydu regulujący replikację, transkrypcję lub translację, lub inne procesy ważne dla ekspresji polipeptydu, albo polinukleotyd zawierający zarówno region kodujący polipeptyd, jak i region funkcjonalnie z nim połączony, który reguluje ekspresję. Geny docelowe mogą być genami komórkowymi obecnymi w genomie lub genami wirusowymi albo prowirusowymi, które nie wywołują odpowiedzi interferonu, takimi jak geny retrowirusowe. Gen docelowy może być
PL 223 992 B1 genem kodującym białko lub genem nie kodującym białka, takim jak gen kodujący rybosomalne RNA, spliceosomalny RNA, tRNA, itd.
dsRNA może być identyczny z całym genem docelowym, to jest z częścią kodującą genu. Jednakże dsRNA może być identyczny z częścią genu docelowego. Wielkość tej części zależy od konkretnego genu docelowego i może być określona przez specjalistów przez zmienianie wielkości dsRNA i obserwację kiedy ekspresja genu jest hamowana.
dsRNA można stosować do hamowania genu docelowego, który wywołuje lub może wywołać chorobę, czyli można go stosować do leczenia choroby lub zapobiegania jej. W zapobieganiu chorobie genem docelowym może być gen wymagany do zapoczątkowania lub utrzymania choroby, albo taki, który zidentyfikowano jako związany z wyższym ryzykiem rozwoju choroby.
W leczeniu choroby, dsRNA można doprowadzić do kontaktu z komórkami lub tkankami dotkniętymi chorobą. Przykładowo, dsRNA zasadniczo identyczny z całością lub częścią zmutowanego genu związanego z rakiem lub ulegającego ekspresji na wysokim poziomie w komórkach nowotworowych, np. Aurora-kinazy, można doprowadzić do kontaktu z komórką rakową lub genem nowotworowym lub wprowadzić do tej komórki lub genu. Przykłady raków, obejmują guzy lite i białaczki, włącznie z: apudomą, guzem zarodkowym, guzem skrzelopochodnym, zespołem złośliwego rakowiaka, rakowiakową chorobą serca, rakiem (np. Walkera, podstawnokomórkowym, mieszanym podstawnopłaskokomórkowym, Brown-Pearcea, przewodowym, guzem Ehrlicha, in situ, Krebsa 2, komórkowym Merkela, śluzowym, niedrobnokomórkowym płuc, owsianokomórkowym, brodawczakowatym, włóknistym, oskrzelikowym, oskrzelopochodnym, płaskokomórkowym oraz z nabłonka przejściowego), zaburzeniami histiocytowymi, białaczką (np. z komórkami B, mieszaną, z komórkami zerowymi, z komórkami T, przewlekłą z komórkami T, związaną z HTLV-II, ostrą limfatyczną, przewlekłą limfatyczną, mastocytową oraz szpikową przewlekłą), histiocytozą złośliwą, chorobą Hodgkina, immunoproliferacyjną chorobą jelita cienkiego, chłoniakiem nieziarniczym, plazmocytomą, siatkowiako-śródbłoniakiem, czerniakiem, chrzęstniakiem zarodkowym, chrzęstniakiem, chrzęstniakomięsakiem, włókniakiem, włókniakomięsakiem, guzami olbrzymiokomórkowymi, guzem histiocytarnym, tłuszczakiem, tłuszczakomięsakiem, międzybłoniakiem, śluzakiem, śluzakomięsakiem, kostniakiem, kostniakomięsakiem, mięsakiem Ewinga, maziówczakiem, gruczolakowłókniakiem, gruczolakiem limfatycznym, rakomięsakiem, struniakiem, czaszkogardlakiem, rozrodczakiem, hamartomą, guzem mezenchymalnym, pranerczakiem, mięśniakomięsakiem, szkliwiakiem, kostniwiakiem, zębiakiem, potworniakiem, grasiczakiem, guzem trofoblastycznym, gruczolakorakiem, gruczolakiem, gruczolakiem przewodów żółciowych, perlakiem, oblakiem, torbielakogruczolakorakiem, torbielakogruczolakiem, ziarniszczakiem, obojnaczakiem, wątrobiakiem, gruczolakiem potowym, guzem z komórek wyspowych, guzem z komórek Leydiga, brodawczakiem, guzem z komórek Sertoliego, guzem z komórek otoczkowych, mięśniakiem gładkokomórkowym, mięśniakomięsakiem gładkokomórkowym, mięśniakiem zarodkowym, mięśniakiem, mięśniakomięsakiem, mięśniakiem prążkowanokomórkowym, mięśniakomięsakiem prążkowanokomórkowym, wyściółczakiem, nerwiakiem zwojowokomórkowym, glejakiem, rdzeniakiem, oponiakiem, osłoniakiem, nerwiakiem niedojrzałym, nabłoniakiem nerwowym, włókniakonerwiakiem, nerwiakiem, przyzwojakiem, przyzwojakiem niechromochłonnym, rogowcem naczyniakowym, rozrostem naczyniowowo-limfoidalnym z eozynofilią, naczyniakiem twardniejącym, naczyniakowatością, kłębczakonaczyniakiem, śródbłoniakiem, naczyniakiem krwionośnym, obłoniakiem, naczyniakomięsakiem krwionośnym, naczyniakiem limfatycznym, naczyniakomięśniakiem limfatycznym, naczyniakomięsakiem limfatycznym, szyszyniakiem, mięsakorakiem, chrzęstniakomięsakiem, torbielakomięsakiem, gusem liściastym, włókniakomięsakiem, naczyniakomięsakiem krwionośnym, mięśniakomięsakiem gładkokomórkowym, mięsakiem limfatycznym z białaczką, tłuszczakomięsakiem, naczyniakomięsakiem limfatycznym, mięśniakomięsakiem, śluzakomięsakiem, rakiem jajników, mięśniakomięsakiem prążkowanym, mięsakiem (np. Ewinga, doświadczalnym, Kaposiego oraz komórek tucznych), nowotworami (np. kości, sutka, układu trawiennego, okrężnicy i odbytu, wątroby, trzustki, przysadki, jąder, oczodołu, głowy i szyi, ośrodkowego układu nerwowego, układu słuchowego, miednicy, dróg oddechowych oraz układu moczowo-płciowego), nerwiakowłókniakowatością, dysplazją szyjki macicy oraz innymi stanami, w których komórki stały się unieśmiertelnione lub uległy transformacji. Wynalazek można także stosować w połączeniu z innymi terapiami, takimi jak chemioterapia, krioterapia, hipertermia, napromienianie, itp.
Opisano również leczenie i profilaktykę innych chorób, szczególnie chorób związanych z ekspresją lub nadekspresją konkretnego genu lub genów. Przykładowo, ekspresję genów związanych z odpowiedzią immunologiczną można hamować, aby leczyć/zapobiegać zaburzeniom autoimmunoPL 223 992 B1 logicznym, takim jak reumatoidalne zapalenie stawów, reakcja przeszczepu przeciwko gospodarzowi, itd. W takim leczeniu, dsRNA można stosować w połączeniu z lekami immunosupresyjnymi. Do najczęściej obecnie stosowanych leków immunosupresyjnych należą kortykosteroidy i silniejsze inhibitory, takie jak np. metotreksat, sulfazalazyna, hydroksychlorochina, 6-MP/azatiopryna i cyklosporyna. Jednakże wszystkie te terapie wywołują poważne skutki uboczne związane z toksycznością i istnieje pilna potrzeba opracowania leków, które pozwolą wyeliminować je lub ograniczyć ich użycie. Do innych leków immunosupresyjnych należą łagodniejsze, ale i mniej skuteczne leki niesteroidowe, takie jak aspiryna i ibuprofen oraz nowa grupa środków, które są oparte na bardziej specyficznym działaniu immunomodulacyjnym. Do tej ostatniej grupy należą interleukiny, cytokiny, zrekombinowane cząsteczki adhezyjne i przeciwciała monoklonalne. Zastosowanie dsRNA do hamowania genów związanych z odpowiedzią immunologiczną w protokole leczenia immunosupresyjnego może zwiększyć skuteczność immunosupresji, a w szczególności może umożliwić zmniejszenie ilości innych podawanych leków, które są toksyczne lub obniżyć inne skutki uboczne.
Poniższe grupy możliwych genów docelowych są przykładami genów, które można hamować zgodnie z wynalazkiem: geny rozwojowe (np. cząsteczek adhezyjnych, inhibitorów kinazy cyklin, cząsteczek z rodziny Wnt, cząsteczek z rodziny Pax, cząsteczek z rodziny Winged helix, cząsteczek z rodziny Hox, cytokin/limfokin oraz ich receptorów, czynników wzrostowych/różnicowania oraz ich receptorów, neuroprzekaźników oraz ich receptorów); onkogeny (np. ABL1, BCL1, BCL2, BCL6, CBFA2, CBL, CSFIR, ERBA, ERBB, EBRB2, ETS1, ETS1, ETV6, FGR, FOS, FYN, HCR, HRAS, JUN, KRAS, LCK, LYN, MDM2, MLL, MYB, MYC, MYCL1, MYCN, NRAS, PIM1, PML, RET, SRC, TAL1, TCL3 oraz YES); geny supresorów nowotworów (np. APC, BRCA1, BRCA2, MADH4, MCC, NF1, NF2, RB1, TP53 i WT1) oraz enzymów (np. ACP desaturaz i hydroksylaz, piroforylaz ADP-glukozy, ATPaz, dehydrogenaz alkoholowych, amylaz, amyloglukozydaz, katalaz, celulaz, cyklooksygenaz, dekarboksylaz, dekstrynaz, polimeraz DNA i RNA, galaktozydaz, glukanaz, oksydaz glukozy, GTPaz, helikaz, hemicelulaz, integraz, inwertaz, izomeraz, kinaz, laktaz, lipaz, lipoksygenaz, lizozymów, pektynoesteraz, peroksydaz, fosfataz, fosfolipaz, fosforylaz, poligalakturonaz, proteinaz i peptydaz, pullanaz, rekombinaz, odwrotnych transkryptaz, topoizomeraz oraz ksylanaz).
Opisano, że dsRNA nie pochodzi od β-glukuronidazy. Opisano także sposób in vitro hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej, który to sposób polega na wprowadzeniu do komórki RNA obejmującego dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów identycznej w co najmniej 80% z co najmniej częścią genu docelowego lub zdolnej do hybrydyzacji z częścią transkryptu genu docelowego w następujących warunkach: hybrydyzacja w 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6,4, 1 mM EDTA, 50°C lub 70°C przez 12-16 godzin, następnie płukanie, i pochodzącej z endogennej matrycy; przy czym dsRNA nie pochodzi od β-glukuronidazy oraz przy czym komórkę ssaczą stanowi komórka somatyczna, oocyt nie pochodzący od człowieka lub komórka z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka
Zahamowanie ekspresji genu docelowego można potwierdzić obserwując lub wykrywając brak lub widoczne obniżenie poziomu białka kodowanego przez gen docelowy (można to wykryć np. za pomocą specyficznego przeciwciała lub innych metod znanych specjalistom) i/lub produktu mRNA z genu docelowego (można to wykryć np. drogą badań hybrydyzacyjnych), i/lub fenotypu związanego z ekspresją genu. W kontekście leczenia medycznego, weryfikacji zahamowania ekspresji genu docelowego można dokowi nać przez obserwację zmiany w stanie choroby u pacjenta, takiej jak zmniejszenie objawów, remisja, zmiana stanu choroby itd. Korzystnie zahamowanie jest specyficzne, to jest ekspresja genu docelowego jest zahamowana bez wywierania wpływu na inne geny w komórce.
Ilość dsRNA podawanego ssakowi w celu skutecznego hamowania genu zmienia się w szerokim zakresie, zależnie od różnych czynników, w tym drogi podawania, wieku, wielkości i stanu ssaka, genu, który ma być hamowany, stanu choroby lub zaburzenia, które mają być leczone, itd. Stwierdzono, że gdy podaje się 10 pl do oocytu nie pochodzącego od człowieka lub komórki wczesnego embrionu nie pochodzącego od człowieka, skuteczne są roztwory zawierające dsRNA w stężeniu 0,01-40 mg/ml, korzystnie 0,1-4 mg/ml, a najkorzystniej 0,1-2 mg/ml. Tak więc, dsRNA można podawać tak, aby dostarczyć go do każdej komórki w ilości 0,1-400 pg, korzystnie 1-40 pg, a najkorzystniej 1-20 pg.
Komórka zawierająca docelowy gen może być somatyczna, totipotentna lub pluripotentna, dzieląca się lub niedzieląca, nabłonkowa, unieśmiertelniona lub transformowana, z linii rozrodczej nie pochodzącej od człowieka itp. Komórka może być komórką macierzystą lub zróżnicowaną. Typy komórek zróżnicowanych obejmują komórki tłuszczowe, fibroblasty, komórki mięśniowe, komórki mięśniowe serca, komórki śródbłonka, komórki nerwowe, komórki glejowe, komórki krwi, megakariocyty, limfocy8
PL 223 992 B1 ty, makrofagi, neutrofile, eozynofile, bazofile, komórki tuczne, leukocyty, granulocyty, keratynocyty, komórki chrzęstne, komórki kościotwórcze, komórki kościogubne, komórki wątrobowe oraz komórki gruczołów wewnątrzwydzielniczych i zewnątrzwydzielniczych. Komórka może być pojedynczą komórką wczesnego embrionu nie pochodzącego od człowieka i może być blastocytem nie pochodzącym od człowieka. Alternatywnie, komórka może być oocytem nie pochodzącym od człowieka.
Wiadomo, że komórki ssacze mogą odpowiadać na zewnątrzkomórkowy dsRNA, a zatem mogą wykazywać mechanizm transportujący dsRNA (Asher i in., Nature 223, 715-717 (1969)). Zatem, dsRNA można ssakowi podawać zewnątrzkomórkowo do jamy, przestrzeni śródmiąższowej, obiegu lub podawać doustnie. Sposoby doustnego podawania obejmują bezpośrednie mieszanie RNA z pożywieniem ssaka, a także rozwiązania z dziedziny inżynierii genetycznej, w których gatunki, które są stosowane jako pożywienie, modyfikuje się genetycznie tak, by eksprymowały RNA, a następnie karmi się nimi danego ssaka. Przykładowo bakterie spożywcze, takie jak Lactococcus lactis, można transformować tak, by wytwarzały dsRNA (patrz W) nr 93/17 117, WO nr 97/14 806). Miejscami, w które można wstrzykiwać RNA, są krążenie naczyniowe i pozanaczyniowe, układ krwionośny i limfatyczny oraz płyn mózgowo-rdzeniowy.
RNA można wprowadzać do komórki wewnątrzkomórkowo. W tym aspekcie można także stosować fizyczne sposoby wprowadzania kwasów nukleinowych. dsRNA można podawać stosując metody mikroiniekcji opisane w Zernicka-Goetz i in., Development 124, 1133-1137 (1997) oraz Wianny i in., Chromosoma 107, 430-439 (1998).
Inne fizyczne metody wprowadzania kwasów nukleinowych wewnątrzkomórkowo obejmują bombardowanie cząstkami powleczonymi RNA, np. z zastosowaniem technologii działa genowego, w której dsRNA unieruchamia się na cząstkach złota i wystrzeliwuje bezpośrednio w kierunku zranienia. Zatem, opisano zastosowanie RNA obejmującego dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów zasadniczo identycznej z co najmniej częścią genu docelowego w komórce ssaczej i która pochodzi z endogennej matrycy, w dziale genowym do hamowania ekspresji genu docelowego. Ponadto, dostarcza się kompozycję odpowiednią do stosowania w terapii z użyciem działa genowego, zawierającą: RNA obejmujący dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów zasadniczo identycznej z co najmniej częścią genu docelowego w komórce ssaczej i pochodzący z endogennej matrycy; oraz cząstki złota. Inna metoda fizyczna obejmuje elektroporację błon komórkowych w obecności RNA. dsRNA można wprowadzić do komórek embrionalnych nie pochodzących od człowieka drogą elektroporacji stosując warunki podobne do ogólnie stosowanych w przypadku komórek hodowanych. Szczegółowe warunki elektroporacji zależą od urządzenia stosowanego do wytworzenia wstrząsu elektrycznego oraz od wymiarów komory stosowanej do utrzymywania embrionów. Metoda ta umożliwia stosowanie RNAi w dużej skali. Do podania RNA można stosować jakąkolwiek znaną metodę terapii genowej. Konstrukt wirusowy zapakowany do cząsteczki wirusowej pozwala osiągnąć zarówno wydajne wprowadzenie konstruktu ekspresyjnego do komórki, jak i transkrypcję RNA kodowanego przez konstrukt ekspresyjny. Można stosować inne znane metody wprowadzania kwasów nukleinowych do komórek, takie jak transport nośnikowy za pośrednictwem lipidów, transport kierowany chemicznie, np. przez fosforan wapnia, itp. Zatem, RNA można wprowadzić razem ze składnikami, które wykazują jedną lub większą liczbę poniższych aktywności: zwiększają pobieranie RNA przez komórkę, ułatwiają asocjację nici dupleksu, stabilizują zasocjowane nici lub w inny sposób zwiększają hamowanie genu docelowego. Ssaka transgenicznego nie będącego człowiekiem, eksprymującego RNA ze zrekombinowanego konstruktu można wytworzyć przez wprowadzenie konstruktu do zygoty, embrionalnej komórki macierzystej lub innej multipotentnej komórki pochodzącej od odpowiedniego ssaka.
Opisano zastosowanie RNA lub wektora ekspresyjnego kodującego taki RNA, jak zdefiniowano powyżej, do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej, przy czym gen docelowy powoduje lub może powodować chorobę oraz przy czym komórkę ssaczą stanowi komórka somatyczna lub komórka z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka.
Lek zazwyczaj będzie dostarczać się jako część jałowego środka farmaceutycznego, który normalnie będzie zawierać farmaceutycznie dopuszczalny nośnik. Zatem opisano preparat farmaceutyczny zawierający RNA, jak zdefiniowano powyżej, lub wektor ekspresyjny kodujący taki RNA, wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem.
Ten środek farmaceutyczny może być w dowolnej odpowiedni niej postaci (zależnie od wymaganego sposobu podawania pacjentowi). Można go dostarczać w postaci dawek jednostkowych, przy czym zazwyczaj dostarcza się go w szczelnie zamkniętym opakowaniu oraz można go dostarczać
PL 223 992 B1 jako cześć zestawu. Taki zestaw będzie zazwyczaj zawierał (ale niekoniecznie) instrukcje stosowania. Może on zawierać wiele wspomnianych dawek jednostkowych.
Środek farmaceutyczny może być dostosowany do podawania odpowiednią drogą, np. doustnie (w tym podpoliczkowo i podjęzykowo), doodbytniczo, donosowo, domiejscowo (w tym podpoliczkowo, podjęzykowo lub przezskórnie), dopochwowo lub pozajelitowo (w tym podskórnie, domięśniowo, dożylnie i śródskórnie). Takie środki można wytwarzać dowolnym sposobem znanym w dziedzinie farmacji, np. przez zmieszanie substancji czynnej z nośnikiem (nośnikami) lub zaróbką (zaróbkami) w jałowych warunkach.
Środek farmaceutyczny dostosowany do podawania doustnego może być sformułowany w postaci odrębnych jednostek, takich jak kapsułki lub tabletki; jako proszki lub granulaty; jako roztwory, syropy lub zawiesiny (w wodzie lub bezwodnych cieczach; albo jako jadalne pianki lub piany; albo w postaci emulsji). Do odpowiednich zaróbek do tabletek lub twardych kapsułek żelatynowych należą laktoza, skrobia kukurydziana lub jej pochodne, kwas stearynowy lub jego sole. Odpowiednie zaróbki do stosowania w miękkich kapsułkach żelatynowych stanowią np. oleje roślinne, woski, tłuszcze, półstałe lub płynne poliole, itd.
Do wytwarzania roztworów i syropów można stosować, zaróbki, którymi są np. woda, poliole i cukry. Do wytwarzania zawiesin można stosować oleje (np. oleje roślinne) aby wytworzyć zawiesiny typu olej w wodzie lub woda w oleju.
Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania miejscowego można formułować jako maści, kremy, zawiesiny, lotiony, pudry, roztwory, pasty, żele, spreje, aerozole lub oliwki. Przy zakażeniach oka lub innych zewnętrznych tkanek, np. jamy ustnej lub skóry, środki korzystnie nakłada miejscowo się w postaci maści lub kremu. Gdy substancja czynna sformułowana jest w postaci maści, można ją stosować z podłożem parafinowym lub mieszającym się z wodą. Alternatywnie, substancję czynną można formułować w postaci kremu z podłożem w postaci kremu olej w wodzie lub z podłożem typu woda w oleju. Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania miejscowego do oka obejmują krople do oczu, w których substancja czynna jest rozpuszczona lub w postaci suspensji w odpowiednim nośniku, zwłaszcza w rozpuszczalniku wodnym. Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania miejscowego do jamy ustnej stanowią pastylki do ssania, pastylki i płukanki do jamy ustnej.
Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania doodbytniczego mogą być w postaci czopków lub wlewów.
Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania donosowego, w których nośnik jest substancją stałą, mogą stanowić gruboziarnisty proszek o wielkości cząstek w zakresie 20-500 μm, który podaje się w taki sposób, w jaki zażywa się tabaki, czyli przez szybkie wciągnięcie przez przewód nosowy z pojemnika zawierającego proszek, trzymanego blisko nosa. Odpowiednie środki, w których nośnik jest płynny, do podawania w postaci aerozolu lub kropli donosowych, stanowią wodne lub olejowe roztwory substancji czynnej.
Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania przez inhalacje obejmują drobnocząsteczkowe pyły lub aerozole, które mogą być wytwarzane za pomocą różnych typów, odmierzających dawki ciśnieniowych pojemników do aerozoli, rozpylaczy i insuflatorów.
Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania dopochwowego mogą być w postaci pesariów, tamponów, kremów, żeli, past, pianek lub sprejów.
Środki farmaceutyczne dostosowane do podawania pozajelitowego obejmują wodne lub bezwodne jałowe roztwory do iniekcji, które mogą zawierać przeciwutleniacze, bufory, środki bakteriostatyczne oraz substancje rozpuszczone, które sprawiają, że środek jest zasadniczo izotoniczny z krwią biorcy; oraz wodne i bezwodne jałowe zawiesiny, które mogą zawierać środki suspendujące i środki zagęszczające. Zarobki, które można stosować w roztworach do iniekcji, obejmują np. wodę, alkohole, poliole, glicerynę i tłuszcze roślinne. Środki mogą być sformułowane w postaci jednodawkowych lub wielodawkowych pojemników, np. szczelnie zamkniętych ampułek lub fiolek i mogą być przechowywane w stanie zliofilizowanym, co wymaga tylko dodania bezpośrednio przed użyciem jałowego ciekłego nośnika, np. wody do iniekcji. Roztwory i zawiesiny do iniekcji, przygotowywane bezpośrednio przed użyciem, można wytwarzać z jałowych proszków, granulek i tabletek.
Środki farmaceutyczne mogą zawierać środki konserwujące, środki zwiększające rozpuszczalność, środki stabilizujące, środki zwilżające, środki emulgujące, środki słodzące, barwniki, środki zapachowe, sole (substancje według wynalazku mogą same być dostarczane w postaci farmaceutycznie
PL 223 992 B1 dopuszczalnych soli), bufory, środki powlekające lub przeciwutleniacze. Mogą one także zawierać środki terapeutycznie czynne oprócz substancji według wynalazku.
Dawki substancji według wynalazku mogą zmieniać się w szerokim zakresie, zależnie od leczonej choroby lub zaburzenia, wieku i stanu leczonego osobnika itd., tak że lekarz ostatecznie określa dawki odpowiednie do stosowania. Dawka ta może być powtarzana tak często jak jest to konieczne. Gdy pojawią się skutki uboczne, ilość i/lub częstość dawkowania można zmniejszyć, zgodnie z normalną praktyką kliniczną.
Opisany dsRNA może być stosowany samodzielnie lub jako składnik zestawu zawierającego co najmniej jeden z odczynników potrzebnych do dokonania in vitro lub in vivo wprowadzenia RNA do osobnika. Korzystnymi składnikami są dsRNA i nośnik, który ułatwia wprowadzenie dsRNA. Taki zestaw może także zawierać instrukcje, umożliwiające osobie używającej zestawu realizację wynalazku w praktyce.
Opisano zestaw do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej, który to zestaw zawiera RNA obejmujący dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów identycznej w co najmniej 80% z co najmniej częścią genu docelowego w komórce ssaczej lub zdolnej do hybrydyzacji z częścią transkryptu genu docelowego w następujących warunkach: hybrydyzacja w 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6,4, 1 mM EDTA, 50°C lub 70°C przez 12-16 godzin, następnie płukanie i pochodzącej z endogennej matrycy lub wektor ekspresyjny zawierający taki RNA; i nośnik, który ułatwia wprowadzenie RNA lub wektora do komórki ssaczej, przy czym RNA nie pochodzi od genu kodującego β-glukuronidazę oraz przy czym komórkę ssaczą stanowi komórka somatyczna, oocyt nie pochodzący od człowieka lub komórka z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka.
Opisano również manipulowanie ekspresją genów w oocycie nie pochodzącym od człowieka w celu leczenia bezpłodności. Opisano również regulację procesów rozdzielania chromosomów u ssaków nie będących ludźmi. U ludzi występuje zwiększona częstość nierozdzielania się chromosomów u matek powyżej 35 roku życia, co prowadzi u potomstwa do zespołu Downa i samoistnego poronienia. Znanych jest wiele cząsteczek regulujących cykl komórkowy, które ułatwiają kilka aspektów postępu cyklu komórkowego, takich jak kinazy cyklinozależne, cykliny, polokinazę, aurora-kinazę, kinazę min A, fosfatazy białkowe, związki kompleksu wywołującego anafazę i jego cząsteczki regulatorowe, składniki proteosomu, kompleks SCF, składniki centrosomu, składniki kinetochoru, białka strukturalne chromosomów, enzymy replikacji DNA, białka rekombinacji DNA i białka naprawy DNA. Wynalazek można stosować u istot nie będących ludźmi do modulowania ekspresji jednego lub większej liczby powyższych białek dla zapewnienia prawidłowej segregacji chromosomów.
Opisano również manipulowanie stadiami cyklu komórkowego pozbawionych jąder zygot biorcy i komórek dawcy, które dostarczają jąder do klonowania ssaków nie będących ludźmi (patrz WO nr 97/07 668). Doświadczenia z klonowaniem owiec i myszy wykazują potrzebę optymalizacji stadium cyklu komórkowego jaja biorcy przed usunięciem z niego jądra, a także pobierania jąder z komórek w specyficznym stadium, często, ale nie koniecznie, z komórek G0. Zastosowanie wynalazku do zahamowania jednej lub większej liczby cząsteczek cyklu komórkowego wymienionych powyżej może służyć do tego celu.
Opisano również kierowanie przebiegiem ekspresji genów w komórkach pluripotentnych, w celu wytwarzania specyficznych zróżnicowanych typów komórek do stosowania w przeszczepach, aby zastąpić chorą lub z innego powodu nie funkcjonującą tkankę. Jednym z przykładów komórek pluripotentnych są macierzyste komórki embrionalne (ES) z embrionów przed zagnieżdżeniem nie pochodzących od człowieka. Dobrze wiadomo, że mysie komórki ES można ponownie wprowadzić do blastocysty, po czym włączają się one do rozwijającego się embrionu, rozwijają i różnicują do wszystkich typów komórek i struktur ciała. Komórki ES można także pobudzać do różnicowania in vitro do szerokiego zakresu typów komórek, po usunięciu określonych czynników wzrostowych z pożywki hodowlanej. Oczekuje się, że linie komórek ES można założyć od wszystkich ssaków i faktycznie obecnie opracowano sposoby zakładania linii ludzkich komórek ES. Różnicowanie pluripotentnych typów komórek do specyficznych typów komórek wymaga wyłączenia pewnych szlaków ekspresji genów, a włączenia innych. Wynalazek można stosować do wyeliminowania kluczowych białek takich szlaków regulacyjnych, aby ukierunkować ES i inne komórki embrionalne na różnicowanie w specyficzne typy komórek. Opisano również wpływanie na ekspresję genów rozwojowych (takich jak wspomniane powyżej) aby skierować różnicowanie komórki na korzystny szlak. Wiadomo, że pewne typy komórek kończą swoje różnicowanie po wyjściu z cyklu podziału komórki. Opisano również hamowanie cząsteczek regulatorowych cyklu komórkowego, takich jak wymienione powyżej. Takie dsRNA można stoPL 223 992 B1 sować bezpośrednio lub mogą one ulegać ekspresji z regulowanych promotorów, tak by wpływały na końcowe etapy różnicowania komórki.
Opisano również izolowaną komórkę ssaczą, zawierającą konstrukt ekspresyjny, który to konstrukt koduje RNA, tworzący dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów identycznej w co najmniej 80 % z co najmniej częścią genu docelowego w komórce ssaczej lub zdolnej do hybrydyzacji z częścią transkryptu genu docelowego w następujących warunkach: hybrydyzacja w 400 mM NaCl, 40 mM PIPES pH 6,4, 1 mM EDTA, 50°C lub 70°C przez 12-16 godzin, następnie płukanie, i pochodzącej z endogennej matrycy, przy czym komórkę ssaczą stanowi komórka somatyczna, oocyt nie pochodzący od człowieka lub komórka z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka.
Stosowane tu określenie „leczenie/terapia” obejmuje jakikolwiek tryb, który może być korzystny dla człowieka lub ssaka nie będącego człowiekiem, a „zawierający/mający” obejmuje cokolwiek stanowiącego tylko specyficzną cechę/charakterystykę, a także cokolwiek o tej cesze/charakterystyce, ale co także ma jedną lub większą liczbę cech/charakterystyk.
Przykłady
Wynalazek zostanie opisany dokładniej w poniższych przykładach, w nawiązaniu do dołączonych rysunków.
Figura 1. MmGFP dsRNA specyficznie znosi ekspresję MmGFP w transgenicznych embrionach MmGFP.
(a-c) Reprezentacyjne embriony spośród 131 embrionów otrzymanych z 11 różnych krzyżówek pomiędzy samicami F1 i transgenicznymi samcami MmGFP. MmGFP transgeniczne 4-6- komórkowe stadia embrionów (a), morule (b), blastocysty (c). Podobny wzór ekspresji GFP uzyskano po wstrzyknięciu antysensownego MmGFP RNA (d-f). Reprezentatywne embriony spośród 147 transgenicznych embrionów MmGFP, do których wstrzyknięto MmGFP dsRNA w stadium jednokomórkowym. 4-6-komórkowe stadia embrionów (d), morule (e), blastocysty (f), (g-i). Reprezentatywne embriony spośród 18 transgenicznych embrionów MmGFP, którym wstrzyknięto c-mos dsRNA w stadium jednokomórkowym. 6-komórkowe stadium (g), morule (h), blastocysty (i). Słupki skali odpowiadają 20 μm. Zacienienie oznacza zieloną fluorescencję.
Figura 2. Oddziaływanie na ekspresję wstrzykniętego syntetycznego MmGFP mRNA.
(a) Morule typu dzikiego, do których wstrzyknięto sam MmGFP mRNA; (b), razem z dsRNA dla E-kadheryny; oraz (c) razem z MmGFP dsRNA, w stadium jednokomórkowym. Słupki skali odpowiadają 20 μm. Zacienienie oznacza zieloną fluorescencję.
Figura 3. Iniekcja dsRNA dla E-kadheryny do zygoty zmniejsza ekspresję E-kadheryny i zaburza rozwój embrionów, którym wykonano iniekcję.
(a) Barwienie immunofluorescencyjne E-kadheryny w embrionach, do których wstrzyknięto MmGFP dsRNA w stadium jednokomórkowym i które hodowano przez cztery dni in vitro do stadium balstocysty; (b) barwienie immunofluorescencyjne E-kadheryny w embrionach, do których wstrzyknięto dsRNA dla E-kadheryny w stadium jednokomórkowym i które hodowano przez cztery dni in vitro. Należy zwrócić uwagę na zmieniony rozwój tych embrionów. Słupki skali odpowiadają 20 μm; (c) analiza metodą Western ekspresji E-kadheryny w zygotach, morulach do których nie dokonano iniekcji (zebranych w stadium jednokomórkowym i hodowanych in vitro przez trzy dni), morulach, do których wstrzykiwano w stadium jednokomórkowym 2 mg/ml GFP dsRNA i które hodowano in vitro przez trzy dni, morulach do których wstrzykiwano w stadium jednokomórkowym 2 mg/ml dsRNA dla E-kadheryny i które hodowano in vitro przez trzy dni. W każdym przypadku białka wyekstrahowano z 15 embrionów. Doświadczenie to powtórzono trzykrotnie z tym samym wynikiem. Zmniejszenie sygnału po wstrzyknięciu dsRNA dla E-kadheryny było około 6,5-krotne. Słupki skali odpowiadają 20 μm. Zacienienie oznacza chemiluminescencję.
Figura 4. Wstrzyknięcie c-mos dsRNA do niedojrzałego oocytu hamuje ekspresję c-mos i wywołuje aktywację partenogenetyczną.
(a-d) Przykłady partenogenetycznie aktywowanych jaj uzyskanych po wstrzyknięciu c-mos dsRNA w oocytach w stadium pęcherzyka zarodkowego, (a) kontrolne oocyty zatrzymane w metafazie II; (b) jednokomórkowy embrion (biała strzałka wskazuje pronukleus); (c) embrion dwukomórkowy; (d) embrion czterokomórkowy. Słupki skali odpowiadają 20 μm, (e) analiza metodą Western ekspresji c-mos w oocytach zatrzymanych w metafazie II, do oocytów w stadium pęcherzyka zarodkowego wstrzyknięto 2 mg/ml MmGFP dsRNA i hodowano je in vitro przez 12 godzin, do oocytów w stadium pęcherzyka zarodkowego wstrzyknięto 2 mg/ml c-mos dsRNA i hodowano je in vitro przez
PL 223 992 B1 godzin. W każdym przypadku białka wyekstrahowano z 35 oocytów. Doświadczenie to powtórzono dwukrotnie z tym samym wynikiem.
Figura 5. Hamowanie ekspresji genów po wstrzyknięciu dwuniciowego RNA jest ograniczone do klonalnej linii pochodzącej z komórki, do której go wstrzyknięto.
Barwienie immunofluorescencyjne E-kadheryny w embrionach, do których wstrzyknięto do jednej komórki w stadium dwukomórkowym dsRNA dla E-kadheryny i syntetyczny mRNA dla MmGFP. Lewa część pokazuje jeden zakres (czerwony) fluorescencji ujawniającej E-kadherynę. Należy zauważyć, że zabarwienie jest znacznie zmniejszone u komórek potomnych komórki, do której dokonano iniekcji. Te komórki potomne zidentyfikowano w drugim zakresie (zielonym) jako komórki eksprymujące MmGFP.
Metody
Zbieranie i hodowla oocytów i embrionów
Niedojrzałe oocyty zatrzymane w profazie I mejozy zbierano z jajników 4-6-tygodniowych myszy F1 (CBAxC57B1) w pożywce FHM (Speciality media, Inc. Lavalette, N. J.) wzbogaconej surowiczą albuminą bydlęcą (BSA) (4 mg/ml). U samicy myszy F1 wywołano superowulację przez śródotrzewnowe zastrzyki surowiczej gonadotropiny źrebnych klaczy (PMSG, 5 i.u.) i ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej (hCG) z przerwą 48-52 godzin. Zapłodnione jednokomórkowe embriony otrzymano od zapłodnionych samic 20-24 godziny po hCG.
Synteza RNA i mikroiniekcje
Matryce stosowane do syntezy RNA były plazmidami w formie liniowej. Pełnej długości MmGFP cDNA (714bp) wklonowano do plazmidu T7TS (Zernicka-Goetz i in., Development 124, 1133-1137 (1997)). Fragment KpnI/Hindlll c-mos cDNA (550bp) (Colledge i in., Nature 370, 665-68 (1994)) wklonowano do Bluescript pSK. cDNA odpowiadający fragmentowi ekson4-ekson8 E-kadheryny (580bp) (Larue i in., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 92, 855-859 (1995)) wklonowano do Bluescript pKS. RNA syntetyzowano stosując polimerazy T3 lub T7, z użyciem zestawu Megascripts (Ambion). Matryce DNA usunięto przez zadziałanie DNA-zą. Produkty RNA ekstrahowano mieszaniną fenol/chloroform i wytrącono etanolem.
Do asocjacji równomolowe ilości sensownego i antysensownego RNA zmieszano w buforze do asocjacji (10 mM Tris pH 7,4, EDTA 0,1 mM) w końcowym stężeniu 2 μΜ każdy, podgrzano przez 10 minut w 68°C, a następnie inkubowano w 37°C przez 3-4 godziny. Aby zapobiec obecności zanieczyszczających jednoniciowych RNA w próbkach dsRNA, preparaty poddano działaniu 2 μg/ml RNazy T1 (Calbiochem) i 1 μg/ml RNazy A (Sigma) przez 30 minut w 37°C. Następnie, dsRNA poddano działaniu 140 μg/ml proteinazy K (Sigma), wyekstrahowano mieszaniną fenol/chloroform i wytrącono etanolem. Tworzenie dsRNA potwierdzono przez migrację w żelu agarozowym: dla każdego dsRNA, ruchliwość w żelu była przesunięta w porównaniu z ssRNA. Do porównania antysensownych i dwuniciowych RNAs zastosowano równe masy RNA.
Następnie, RNA rozcieńczono wodą do końcowego stężenia 2-4 mg/ml. Zakres skutecznych stężeń jest najlepiej zobrazowany w doświadczeniu c-mos (tabela 2) ze względu na czułość tego fenotypu biologicznego. Wykonano mikroiniekcje mRNA do cytoplazmy oocytów lub embrionów stosując system ciągłego przepływu (Transjector, Eppendorf), jak opisano (Zernicka-Goetz w Cell Lineage and fate determination (red. Moody, S. A.) 521-527 (Academic Press, San Diego, CA, 1999)). Do każdego oocytu lub embrionu wstrzyknięto około 10 pl dsRNA. Zwiększoną penetrację osiągnięto poprzez ujemną kapacytancję. Po mikroiniekcji oocyty i embriony hodowano w pożywce KSOM (Speciality Media, Inc. Lavalette, N. J.) wzbogaconej 4 mg/ml BSA w 37°C w atmosferze 5% CO2. Transgeniczne embriony MmGFP obserwowano metodą mikroskopii konfokalnej (głowica skanująca Biorad 1024 na mikroskopie Nikon Eclipse 800).
Analiza immunoblot i barwienie immunologiczne
Do analizy immunoblot próbki poddano elektroforezie w żelu poliakryloamidowym z SDS i białka przeniesiono na błonę nitrocelulozową hybond (Amersham). Błony wstępnie inklubowano w buforze TBST (20 mM Tris-HCl, pH 8,2, 150 mM NaCl, 0,1% Tween-20) zawierającym 5% (wag./obj.) odtłuszczonego mleka w proszku przez noc, aby zablokować niespecyficzne wiązanie przeciwciał. Następnie, błony inkubowano z przeciwciałem przeciw E-kadherynie (DECMA-1) lub przeciwciałem przeciw mos (SantaCruz Biotechnology) przez 1 godzinę, przemyto w TBST, potem inkubowano z drugim przeciwciałem sprzężonym z peroksydazą (SantaCruz Biotechnology) przez 1 godzinę, a następnie ponownie przemyto w TBST. Przeciwciała rozcieńczono w TBST zawierającym 5% (wag./obj.) odtłuszczonego
PL 223 992 B1 mleka w proszku. Drugie przeciwciało wykryto przez wzmocnioną chemiluminescencję (Amersham). Do analizy immunofluorescencyjnej całych zatopionych embrionów z przeciwciałem przeciw E-kadherynie, embriony utrwalano w 2% paraformaldehydzie przez 20 minut w temperaturze pokojowej, a następnie permeabilizowano w 0,1% Triton X-100 przez 10 minut. Po preinkubacji w 2% BSA w PBS przez 30 minut, embriony inkubowano z przeciwciałem przeciw E-kadherynie przez 1 godzinę w 37°C, a następnie z kozim przeciwciałem przeciw-szczurzym sprzężonym z Texas-Red (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Pa., USA) przez 1 godzinę w 37°C. Embriony obserwowano stosując mikroskop konfokalny z laserem skanującym Biorad 1024.
P r z y k ł a d 1. dsRNA zapobiega ekspresji transgenu gfp
W celu ustalenia, czy dsRNA można stosować do zapobiegania ekspresji genów w mysim embrionie, opracowano testowy układ doświadczalny z zastosowaniem transgenicznego szczepu myszy eksprymującego MmGFP pod kontrolą promotora czynnika wydłużania 1α (E1Fa) (Zernicka-Goetz, M. w Cell Lineage and fate determination (red. Moody, S. A.) 521-527 (Academic Press, San Diego, CA, 1999)). Zaletą tej linii jest to, że ekspresję GFP można łatwo uwidocznić w żyjących embrionach oraz, z uwagi na to, że jej funkcja nie jest istotna, można «i było monitorować jakikolwiek niespecyficzny szkodliwy wpływ dsRNA na rozwój embrionów. Aby zapobiec powikłaniom wynikającym z trwałości matczynych produktów genów, stosowano heterozygotyczne embriony, w których transgen pochodził od ojca. Zapoczątkowanie ekspresji GFP w tych embrionach obserwowano jako pojawienie się zielonych komórek po rozpoczęciu zygotycznej transkrypcji w stadium dwukomórkowym.
Można było wykazać, że wstrzykniecie MmGFP dsRNA do jednokomórkowej zygoty przeciwdziałało wystąpieniu zielonej fluorescencji w stadiach 2-4-komórkowych (fig. 1). Po wstrzyknięciu embriony hodowano in vitro przez 3-4 dni do stadium blastocysty. Podczas gdy embriony, do których nie dokonano iniekcji, eksprymowały MmGFP w przewidywany sposób (fig. 1a-c), wszystkie embriony, do których wstrzyknięto Mn dsRNA, wykazywały znacznie zmniejszoną zieloną fluorescencję w tym okresie czasu (fig. 1d-f), z niewielką częścią (6,8%) wykazującą resztkową zieloną fluorescencję. Embriony rozwijały się normalnie przed zagnieżdżeniem i po zagnieżdżeniu, co wskazuje, że iniekcja dsRNA nie jest toksyczna.
Zakłócanie ekspresji genu jest specyficzne, gdyż w przypadku wstrzyknięcia do transgenicznych MmGFP embrionów nie spokrewnionego dsRNA, odpowiadającego segmentowi transkryptu c-mos, nie wywołało to zmniejszenia zielonej fluorescencji (fig 1g-i). Podobnie, wstrzyknięcie do transgenicznych zygot (obserwowanych 59 embrionów) dsRNA odpowiadającego segmentowi transkryptu E-kadheryny nie wywołało zmniejszenia zielonej fluorescencji, a synteza białek nie została zatrzymana przez kinazę dsRNA, choć genotyp takich embrionów był nienormalny (danych nie pokazano, patrz poniżej). Stwierdzono także, że transgeniczne zygoty, do których wstrzyknięto antysensowny MnRNA, zachowały zieloną fluorescencję we wszystkich stadiach przed zagnieżdżeniem (obserwowanych 37 embrionów - danych nie pokazano).
Próbowano także ustalić, czy ekspresja MmGFP z zakończonego czapeczką pełnej długości MmGFP mRNA, może zostać zniesiona przez równoczesne wstrzykniecie MmGFP dsRNA. Stwierdzono, że zielona fluorescencja była znacznie zmniejszona lub zanikła w tak traktowanych embrionach (fig. 2d). Różniło się to od wyników osiągniętych przy wstrzykiwaniu sensownego MmGFP RNA lub równoczesnego wstrzykiwania MmGFP mRNA i „nie komplementarnego” dsRNA dla E-kadheryny (fig. 2a-b). Zatem, dsRNA może zakłócać ekspresję zarówno chromosomalnie zlokalizowanego genu, jak i syntetycznego mRNA wprowadzonego drogą mikroiniekcji.
P r z y k ł a d 2. Fenokopiowanie knockoutu E-kadheryny
Oceniono specyficzne rozwojowe konsekwencje wstrzyknięcia dsRNA dla E-kadheryny. E-kadheryna jest zarówno matczynie, jak i zygotycznie eksprymowana podczas rozwoju przed zagnieżdżeniem. Przerwanie genu E-kadheryny, drogą homologicznej rekombinacji, z usunięciem regionów cząsteczki istotnych dla funkcji adhezyjnych, prowadzi do poważnego uszkodzenia w okresie przed zagnieżdżeniem. Embriony te mogą początkowo przechodzić proces upakowania ze względu na obecność matczynej wyrażanej E-kadheryny. Jednakże wykazują one poważne zaburzenie w tworzeniu się jam i nigdy nie tworzą normalnych blastocyst (Larue i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 8263-8267 (1994); Riethmacher i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 855- 859 (1995)).
Stwierdzono, że po wstrzyknięciu dsRNA dla E-kadheryny, fenotyp był identyczny z obserwowanym dla embrionów z mutacją zerową (null). Zatem, embriony początkowo rozwijały się normalnie do stadium upakowania, moruli (danych nie pokazano). Jednakże, tylko około 30% było zdolnych do tworzenia jam i tworzyły one tzw. „cysty”, ale nie tworzyły normalnych blastocyst (Larue i in., Proc.
PL 223 992 B1
Natl. Acad. Sci. USA 91, 8263-8267 (1994)) (tabela 1). W odróżnieniu od tego, znaczna większość embrionów, do których nie wstrzykiwano lub embrionów kontrolnych, do których wstrzyknięto MmGFP dsRNA, tworzyła jamę i formowała normalne blastocysty (tabela 1).
T a b e l a 1
Fenotypy otrzymane po wstrzyknięciu dsRNA dla E-kadheryny do zygot
Wstrzyknięty dsRNA Liczba doświad- czeń Liczba embrionów Znany fenotyp mutanta zerowego Fenotyp wynikający z wstrzyknięcia dsRNA dla E-kadheryny
Brak 6 240 > 90% powstałych blastocyst (Ohsugi i in., Dev. Biol. 185, 261-271 (1997)) 91,6% ± 18,3% powstałych blastocyst
Gfp (2 mg/ml) 5 89 N. A.* 74,1%% ± 17% powstałych blastocyst
E-kadhe- ryna (2 mg/ml) 5 130 47,5% powstałych cyst. Pozostałe nie rozwinęły się do tego stadium (Larue i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 8263-8267 (1994); Ohsugi i in., Dev. Biol. 185, 261-271 (1997)) 26,9% ± 25,6%a powstałych cyst. Pozostałe nie rozwinęły się do tego stadium
*N. A.: Nie dotyczy. Średnia ± s. d. (odchylenie standardowe)a. Znacząco różna od wyników dla GFP dsRNA; zastosowano test X2 (p < 0,05)
Analiza ekspresji E-kadheryny metodą barwienia immunologicznego i analizy immunoblot wykazała, że ekspresja E-kadheryny była znacznie obniżona po wstrzyknięciu dsRNA dla E-kadheryny (fig. 3b, c). W odróżnieniu od tego, nie stwierdzono zmniejszenia ekspresji E-kadheryny w embrionach, do których wstrzyknięto MmGFP dsRNA, gdyż poziom ekspresji E-kadheryny był podobny jak w embrionach, w przypadku których nie zastosowano iniekcji (fig. 3c). Poziom E-kadheryny w stadium moruli w embrionach, do których wstrzykiwano dsRNA dla E-kadheryny, był niższy niż w świeżo zapłodnionych embrionach przed wstrzyknięciem (fig. 3c). To resztkowe białko E-kadheryny może znacząco odzwierciedlać utrzymywanie się matczynie eksprymowanego białka, którego synteza zatrzymuje się podczas stadium dwukomórkowego (Sefton i in., Development 115, 313-318 (1992)). To resztkowe białko matczyne jest obecne do późnego stadium blastoscysty w homozygotycznych embrionach z mutacją zerową (Larue i in., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91, 8263-8267 (1994)).
Zatem, wyciągnięto wniosek, że dsRNA dla E-kadheryny prowadzi do uderzającego zmniejszenia ilości białka E-kadheryny, a w konsekwencji do podobnego fenotypu jak w embrionach z mutacją zerową.
P r z y k ł a d 3. dsRNA oddziaływuje w oocycie
Aby stwierdzić, czy dsRNA można stosować do zakłócania matczynie eksprymowanych genów, poszukiwano genu modelowego o charakterystycznym fenotypie knockoutu. C-mos jest istotnym składnikiem czynnika cytostatycznego, odpowiedzialnego za zatrzymanie dojrzewającego oocytu w metafazie w drugim podziale mejotycznym. W myszach c-mos -/-, 60-75% oocytów nie utrzymuje tego zatrzymania w metafazie II i rozpoczyna partenogenetyczny rozwój (Colledge i in., Nature 370, 65-68 (1994); Hashimoto i in., Nature 370, 68-71 (1994)). C-mos mRNA jest obecny w całkowicie wyrośniętych niedojrzałych oocytach, a jego translacja jest zapoczątkowywana z matczynych matryc, gdy mejoza rozpoczyna się na nowo po rozpadnięciu pęcherzyka zarodkowego (Verlhac i in., Development 122, 815-822 (1996)). Zatem, wstrzyknięcie c-mos dsRNA mogłoby umożliwić zbadanie, czy dsRNA może zakłócać ekspresję matczynego mRNA.
Gdy wstrzyknięto c-mos dsRNA do oocytów, około 63% nie utrzymało zatrzymania w metafazie II (tabela 2). Z nich 78% rozpoczęło partenogenetyczny rozwój i przeszło do embrionów w stadium 2 do 4 komórkowym (fig. 4a, b, c). Pozostałe przeszły fragmentację. Oba te zjawiska wystąpiły z częstością podobną do obserwowanej dla oocytów z mutacją zerową (Colledge i in., Nature 370, 65-68 (1994)). Natomiast tylko 1-2% kontrolnych oocytów, do których wstrzyknięto lub nie wstrzyknięto MmGFP dsRNA, przeszło samorzutną aktywację (tabela 2). W dalszym ciągu stwierdzono, że 42% oocytów, w przypadku których zastosowano iniekcję, nie zatrzymało się w metafazie II, gdy zmniejszono stężenie wstrzykiwanego c-mos dsRNA około 20-krotnie do 0,1 mg/ml (tabela 2). Jest to znacznie wyższe stężenie od tego, które się uważa za skuteczne u C. elegans i roślin, w przypadku których uważa się, że efekty można uzyskać w przypadku kilku cząsteczek dsRNA na komórkę.
PL 223 992 B1
T a b e l a 2
Fenotypy obserwowane po wstrzyknięciu c-mos dsRNA do oocytów w stadium pęcherzyka zarodkowego
Wstrzyknięty dsRNA Liczba doświadczeń Liczba oocytów Znany fenotyp mutanta zerowego Fenotyp wynikający z wstrzyknięcia dsRNA
Brak 1 158 N. A.* 1,3 ± 2% samorzutnej aktywacji; 3,8 ± 5,8% fragmentami
Ds gfp (2 mg/ml) 4 73 N. A.* 1,4 ± 2,1% samorzutnej aktywacji; 2,7 ± 2% fragmentacji
Ds mos (2 mg/ml) 4 108 60-75% uwolnionych z bloku metafazy II. Wysoki stopień fragmentami cytoplazmatycznej (Colledge i in., Nature 370, 65-68 (1994); Hashimoto i in., Nature 370, 68-71 (1994)) 49,1 ± 27%a uwolnionych z bloku metafazy II; 13,9 ± 13% fragmentacji
Ds mos (0,1 mg/ml) 2 33 jak powyżej 36,4±7,6%b uwolnionych z bloku metafazy II; 6,1 ± 1,9% fragmentacji
*N.A.: Nie dotyczy. Stwierdzono, że oocyty, w przypadku których nie zastosowano iniekcji, rzadko przechodziły samorzutną aktywację, z częstością podobną jak u tych, do których wstrzyknięto GFP dsRNA. Średnia ± s.d.a,b znacząco różna w stosunku do wyników dla GFP dsRNA; zastosowano test x2 (p < 0,05)
Potwierdzono, że c-mos dsRNA zakłóca ekspresję c-mos na podstawie analizy immunoblot przeprowadzonej w 12 godzin po wstrzyknięciu do oocytów w stadium pęcherzyka zarodkowego, zanim fenotypowe konsekwencje utraty jego ekspresji stały się widoczne (fig. 4e). Zatem, wstrzyknięcie c-mos dsRNA do oocytu specyficznie zakłóca aktywność c-mos i efekt ten naśladuje ukierunkowaną delecję c-mos na drodze homologicznej rekombinacji. Doświadczenia te wykazały, że dsRNA może blokować ekspresję matczynie dostarczanych produktów genów.
P r z y k ł a d 4. Wpływy RNAi są klonalnie dziedziczone w embrionie mysim
Aby ocenić czy możliwe będzie wyeliminowanie ekspresji specyficznych genów w określonych liniach komórek we wczesnym embrionie mysim, wykonano mikroiniekcję dsRNA dla E-kadheryny do embrionów mysich w stadium jednokomórkowym lub dwukomórkowym, wraz z syntetycznym mRNA dla MmGFP, aby zaznaczyć komórkę z iniekcją. Poziom ekspresji E-kadheryny i MmGFP obserwowano podczas rozwoju tych embrionów. Ekspresja E-kadheryny była obniżona specyficznie w komórkach pochodzących od komórki, do której wstrzyknięto dsRNA dla E-kadheryny, klon ten był zaznaczony przez ekspresję MmGFP ulegającego translacji z mRNA wstrzykniętego do tej samej komórki. Zatem we wczesnym stadium embrionu mysiego działanie dsRNA nie zostało przekazane do sąsiadujących komórek. Zatem dsRNAi można stosować w embrionach do regulacji wzoru ekspresji genów w różny sposób dla linii o odmiennej przeszłości.
Dyskusja
Wykazano, że dsRNA można stosować jako specyficzny inhibitor aktywności genów w mysich oocytach i w embrionach wczesnych lub przed zagnieżdżeniem. Wykazano specyficzność procedury przez oddzielne blokowanie ekspresji trzech różnych genów: c-mos w oocycie oraz transgenu E-kadheryny lub gfp we wczesnym embrionie. W przypadkach dwóch endogennych genów mysich prowadziło to do fenotypów porównywalnych z mutantami zerowymi. Doświadczenia z zapobieganiem ekspresji transgenu gfp wskazują, że RNAi sam z siebie nie wpływa na normalny przebieg rozwoju.
Dwa doświadczenia potwierdzają hipotezę, że RNAi działa w embrionach mysich przez wywoływanie rozpadu docelowego RNA lub przez hamowanie jego translacji. Po pierwsze wykazano, że wstrzyknięcie MmGFP dsRNA hamuje ekspresję równocześnie wstrzykiwanego sensownego MmGFP mRNA. Po drugie, wstrzykiwano dsRNA dla c-mos do oocytów przed rozpadem pęcherzyka zarodkowego, w stadium w którym nagromadził się c-mos mRNA, ale nie ulegał on jeszcze translacji. C-mos ulega translacji gdy rozpadnie się pęcherzyk zarodkowy, aby zatrzymać oocyty w metafazie II drugiego podziału mejotycznego. Stwierdzono, że c-mos dsRNA zapobiega jego działaniu; oocyty przechodziły przez metafazę II i wchodziły na drogę aktywacji partenogenetycznej. W każdym przypadku wpływ RNAi utrzymywał się przez wystarczający czas, aby fenokopiować utratę działania genu. Gdy
PL 223 992 B1 dsRNA wprowadzano do wczesnych blastocyst, pozostawał on skuteczny do wczesnych stadiów po zagnieżdżeniu. Dziedziczeni nie klonalne działania RNAi wskazuje, że może być on skierowany do wzoru aktywności genów w określonej linii. Na koniec, ze względu na to, że RNAi działa w rozwoju okołozagnieżdżeniowym, można oczekiwać, że spowoduje ono wyeliminowanie ekspresji genów docelowych w embrionalnych komórkach macierzystych wyprowadzonych z mysich embrionów w tym stadium rozwojowym i może to służyć ich ukierunkowanemu różnicowaniu w specyficzne typy komórek.

Claims (4)

1. Zastosowanie RNA do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej, przy czym gen docelowy powoduje lub może powodować chorobę oraz przy czym komórkę ssaczą stanowi embrionalna komórka macierzysta z embrionu przed zagnieżdżeniem nie pochodzącego od człowieka, RNA obejmuje dwuniciową strukturę o sekwencji nukleotydów, która to sekwencja nukleotydów jest w 100% identyczna z co najmniej częścią tego genu docelowego w tej komórce ssaczej, która to dwuniciową struktura ma długość co najmniej 25 zasad oraz która to sekwencja nukleotydów pochodzi z endogennej matrycy, oraz przy czym RNA obejmuje dwie oddzielne komplementarne nici RNA.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym genem docelowym jest gen endogenny.
3. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym genem docelowym jest gen wirusowy.
4. Zastosowanie według zastrz. 1, w którym embrion przed zagnieżdżeniem stanowi blastocyt.
PL356698A 1999-11-19 2000-11-17 Zastosowanie RNA do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej PL223992B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9927444.1A GB9927444D0 (en) 1999-11-19 1999-11-19 Inhibiting gene expression
PCT/GB2000/004404 WO2001036646A1 (en) 1999-11-19 2000-11-17 Inhibiting gene expression with dsrna

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL356698A1 PL356698A1 (pl) 2004-06-28
PL223992B1 true PL223992B1 (pl) 2016-11-30

Family

ID=10864842

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL356698A PL223992B1 (pl) 1999-11-19 2000-11-17 Zastosowanie RNA do wytwarzania leku do hamowania ekspresji genu docelowego w komórce ssaczej

Country Status (18)

Country Link
US (6) US20030027783A1 (pl)
EP (1) EP1230375B2 (pl)
JP (4) JP2003514533A (pl)
AT (1) ATE299185T1 (pl)
AU (1) AU774285B2 (pl)
CA (1) CA2391622C (pl)
DE (2) DE60021199T3 (pl)
DK (1) DK1230375T3 (pl)
ES (1) ES2246905T3 (pl)
GB (1) GB9927444D0 (pl)
HK (1) HK1050378B (pl)
IL (2) IL149666A0 (pl)
MX (1) MXPA02005013A (pl)
NO (1) NO335429B1 (pl)
PL (1) PL223992B1 (pl)
PT (1) PT1230375E (pl)
WO (1) WO2001036646A1 (pl)
ZA (1) ZA200203816B (pl)

Families Citing this family (701)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6605712B1 (en) 1990-12-20 2003-08-12 Arch Development Corporation Gene transcription and ionizing radiation: methods and compositions
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US5898031A (en) 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
CN101818145A (zh) 1998-03-20 2010-09-01 联邦科学和工业研究组织 控制基因表达
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
AU776150B2 (en) * 1999-01-28 2004-08-26 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
US7601494B2 (en) 1999-03-17 2009-10-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of screening candidate compounds for susceptibility to biliary excretion
US20040138168A1 (en) * 1999-04-21 2004-07-15 Wyeth Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
IL145778A0 (en) * 1999-04-21 2002-07-25 American Home Prod Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
US6924109B2 (en) * 1999-07-30 2005-08-02 Agy Therapeutics, Inc. High-throughput transcriptome and functional validation analysis
US6423885B1 (en) 1999-08-13 2002-07-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells
GB9927444D0 (en) * 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US7829693B2 (en) 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US7491805B2 (en) 2001-05-18 2009-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US8202979B2 (en) 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US7833992B2 (en) 2001-05-18 2010-11-16 Merck Sharpe & Dohme Conjugates and compositions for cellular delivery
JP2003526367A (ja) 2000-03-16 2003-09-09 ジェネティカ インコーポレイテッド Ｒｎａ干渉の方法とｒｎａ干渉組成物
US8202846B2 (en) 2000-03-16 2012-06-19 Cold Spring Harbor Laboratory Methods and compositions for RNA interference
CN1426466A (zh) * 2000-03-17 2003-06-25 贝尼泰克澳大利亚有限公司 遗传沉默
KR20080023768A (ko) 2000-03-30 2008-03-14 화이트헤드 인스티튜트 포 바이오메디칼 리서치 Ｒｎａ 간섭의 ｒｎａ 서열 특이적인 매개체
CA2456008A1 (en) * 2000-08-19 2002-02-28 Axordia Limited Stem cell differentiation
US20080032942A1 (en) 2000-08-30 2008-02-07 Mcswiggen James RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030190635A1 (en) * 2002-02-20 2003-10-09 Mcswiggen James A. RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering RNA
CN100523215C (zh) 2000-12-01 2009-08-05 马普科技促进协会 介导rna干涉的小rna分子
US8546143B2 (en) 2001-01-09 2013-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US7767802B2 (en) 2001-01-09 2010-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US7423142B2 (en) 2001-01-09 2008-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US20020132257A1 (en) 2001-01-31 2002-09-19 Tony Giordano Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
JP3765574B2 (ja) * 2001-02-22 2006-04-12 三菱化学株式会社 逆向き反復配列を含む組み換え遺伝子及びその利用
EP1386004A4 (en) 2001-04-05 2005-02-16 Ribozyme Pharm Inc MODULATION OF GENE EXPRESSION ASSOCIATED WITH INFLAMMATORY PROLIFERATION AND GROWTH OF NEURITIES BY METHODS INVOLVING NUCLEIC ACID
US8034791B2 (en) 2001-04-06 2011-10-11 The University Of Chicago Activation of Egr-1 promoter by DNA damaging chemotherapeutics
EP3231445A1 (en) 2001-05-18 2017-10-18 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US7517864B2 (en) 2001-05-18 2009-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050148530A1 (en) 2002-02-20 2005-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030175950A1 (en) * 2001-05-29 2003-09-18 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA
WO2003070197A2 (en) * 2002-02-20 2003-08-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TGF-BETA AND TGF-BETA RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050256068A1 (en) 2001-05-18 2005-11-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7109165B2 (en) 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US20050159378A1 (en) 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9994853B2 (en) 2001-05-18 2018-06-12 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US20050014172A1 (en) 2002-02-20 2005-01-20 Ivan Richards RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8008472B2 (en) 2001-05-29 2011-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
BR0211111A (pt) 2001-07-12 2004-06-22 Univ Massachusetts Molécula de ácido nucleico isolada, vetor, célula hospedeira, transgene, precursor de rna engenheirado, animal transgênico não humano, e, método de induzir a interferência de ácido ribonucleico de um gene alvo em uma célula
WO2003010180A1 (en) * 2001-07-23 2003-02-06 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for rnai mediated inhibition of gene expression in mammals
US10590418B2 (en) 2001-07-23 2020-03-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals
GB0118223D0 (en) * 2001-07-26 2001-09-19 Univ Sheffield Stem loop RNA
US7745418B2 (en) 2001-10-12 2010-06-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting viral replication
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
DE10230997A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels
DE10230996A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Behandlung eines Pankreaskarzinoms
WO2003035083A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Medikament zur behandlung einer fibrotischen erkrankung durch rna interferenz
FR2832154B1 (fr) * 2001-11-09 2007-03-16 Centre Nat Rech Scient Oligonucleotides inhibiteurs et leur utilisation pour reprimer specifiquement un gene
DE10202419A1 (de) 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
EP1478656B1 (en) 2002-02-01 2009-09-16 Life Technologies Corporation Oligonucleotide compositions with enhanced efficiency
US20060009409A1 (en) 2002-02-01 2006-01-12 Woolf Tod M Double-stranded oligonucleotides
US7928218B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7667029B2 (en) 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
EP1476459A4 (en) * 2002-02-20 2005-05-25 Sirna Therapeutics Inc INHIBITION OF RNA INTERFERENCE-INDUCED CHROMOSOME TRANSLOCATION GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (SINA)
JP2005517427A (ja) * 2002-02-20 2005-06-16 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 短干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）遺伝子発現のＲＮＡ干渉媒介性阻害
US7935812B2 (en) 2002-02-20 2011-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7667030B2 (en) 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7678897B2 (en) 2002-02-20 2010-03-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090253773A1 (en) 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TNF AND TNF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7897753B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of XIAP gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7897757B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7662952B2 (en) 2002-02-20 2010-02-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US7893248B2 (en) 2002-02-20 2011-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7928219B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US7691999B2 (en) 2002-02-20 2010-04-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of NOGO and NOGO receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090192105A1 (en) 2002-02-20 2009-07-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE (ICAM) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCELIC ACID (siNA)
EP1432724A4 (en) * 2002-02-20 2006-02-01 Sirna Therapeutics Inc RNA inhibition mediated inhibition of MAP KINASE GENES
US20090253774A1 (en) 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) AND PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR RECEPTOR (PDGFR) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7683165B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7928220B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8067575B2 (en) 2002-02-20 2011-11-29 Merck, Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7700760B2 (en) 2002-02-20 2010-04-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US8258288B2 (en) 2002-02-20 2012-09-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090099117A1 (en) 2002-02-20 2009-04-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MYOSTATIN GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7683166B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7795422B2 (en) 2002-02-20 2010-09-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7910724B2 (en) 2002-02-20 2011-03-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7897752B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of telomerase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8013143B2 (en) 2002-02-20 2011-09-06 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
JP2005517450A (ja) * 2002-02-20 2005-06-16 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 短干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いるＲＮＡ干渉媒介性標的発見および標的評価
EP1352960A1 (en) * 2002-04-12 2003-10-15 Viruvation B.V. Antiviral therapy on the basis of RNA interference
US20050222061A1 (en) * 2002-04-18 2005-10-06 Schulte Ralf W Means and methods for the specific inhibition of genes in cells and tissue of the cns and/or eye
US8952213B2 (en) 2002-04-26 2015-02-10 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Neuronal activation in a transgenic model
US20040180438A1 (en) 2002-04-26 2004-09-16 Pachuk Catherine J. Methods and compositions for silencing genes without inducing toxicity
AU2003235893A1 (en) * 2002-05-08 2003-11-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of inhibiting gene expression
US20040121353A1 (en) 2002-05-23 2004-06-24 Ceptyr, Inc. Modulation of TCPTP signal transduction by RNA interference
GB0212302D0 (en) * 2002-05-28 2002-07-10 Isis Innovation Method of selecting targets for gene silencing by RNA interference
WO2003101376A2 (fr) * 2002-06-03 2003-12-11 L'oreal Utilisation par voie topique d'au moins un oligonucleotide d'arn double brin (ds rna)
FR2840217B1 (fr) * 2002-06-03 2005-06-24 Oreal Compositions cosmetiques comprenant au moins un oligonucleotide d'arn double brin (dsrna)et leurs utilisations
US7655790B2 (en) 2002-07-12 2010-02-02 Sirna Therapeutics, Inc. Deprotection and purification of oligonucleotides and their derivatives
US7148342B2 (en) 2002-07-24 2006-12-12 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis
EP1857547B2 (en) 2002-08-05 2020-12-02 Silence Therapeutics GmbH Further novel forms of interfering RNA molecules
US20040029275A1 (en) * 2002-08-10 2004-02-12 David Brown Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs
CN1685063B (zh) 2002-08-12 2011-12-21 新英格兰生物实验室公司 与基因沉默相关的方法和组合物
KR101117673B1 (ko) 2002-08-21 2012-03-07 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 암-관련 단백질을 표적으로 하는 알엔에이아이 프로브
US20040242518A1 (en) * 2002-09-28 2004-12-02 Massachusetts Institute Of Technology Influenza therapeutic
US7122361B2 (en) 2002-10-10 2006-10-17 Wyeth Compositions employing a novel human kinase
US20040077082A1 (en) * 2002-10-18 2004-04-22 Koehn Richard K. RNA-based inhibitory oligonucleotides
CA2503491A1 (en) 2002-10-24 2004-05-06 Wyeth Calcineurin-like human phosphoesterase
CA2504694C (en) 2002-11-05 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US9150606B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
WO2004044138A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
GB0225799D0 (en) * 2002-11-05 2002-12-11 Novartis Forschungsstiftung Tel/etv6-mediated inhibition of cell proliferation
US8604183B2 (en) 2002-11-05 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
US9771586B2 (en) 2002-11-14 2017-09-26 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting ZNF205
US9719094B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting SEC61G
US10011836B2 (en) 2002-11-14 2018-07-03 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
WO2006006948A2 (en) 2002-11-14 2006-01-19 Dharmacon, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY
US9719092B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting CNTD2
US9839649B2 (en) 2002-11-14 2017-12-12 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US9228186B2 (en) 2002-11-14 2016-01-05 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US9879266B2 (en) 2002-11-14 2018-01-30 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
CA2505416A1 (en) 2002-11-21 2004-06-10 Wyeth Methods for diagnosing rcc and other solid tumors
WO2004050831A2 (en) 2002-11-27 2004-06-17 Wyeth Compositions, organisms and methodologies employing a novel human kinase
US20040248158A1 (en) 2003-01-28 2004-12-09 Loughran Thomas P Differentially expressed genes in large granular lymphocyte leukemia
JP2007524362A (ja) 2003-02-14 2007-08-30 サイグレス ディスカバリー， インコーポレイテッド 癌における治療ｇｐｃｒ標的
CA2518475C (en) 2003-03-07 2014-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna agents comprising asymmetrical modifications
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
US8017762B2 (en) 2003-04-17 2011-09-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
EP2669377A3 (en) 2003-04-17 2015-10-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Modified iRNA agents
US8796436B2 (en) 2003-04-17 2014-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
EP3222294A1 (en) 2003-04-30 2017-09-27 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
JP2006265102A (ja) * 2003-05-08 2006-10-05 Taisho Pharmaceut Co Ltd ＴＧＦβ由来アポトーシス調節方法
US7619068B2 (en) 2003-05-09 2009-11-17 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
US20050059044A1 (en) * 2003-06-03 2005-03-17 Graham Michael Wayne Double-stranded nucleic acid
JP4579911B2 (ja) 2003-06-03 2010-11-10 アイシス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド スルビビン発現の調節
US7595306B2 (en) 2003-06-09 2009-09-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Method of treating neurodegenerative disease
JP5183064B2 (ja) * 2003-07-02 2013-04-17 エムユーエスシー ファウンデイション フォー リサーチ デべロップメント 甲殻類動物、及び他の無脊椎動物における、ｄｓＲＮＡで誘導された特異的、及び非特異的免疫、及びそこで使用する生物送達媒体
CN1845993B (zh) 2003-08-28 2010-06-23 诺瓦提斯公司 具有平端和3＇修饰的干扰rna双链体
US20070123480A1 (en) * 2003-09-11 2007-05-31 Replicor Inc. Oligonucleotides targeting prion diseases
DE602004031975D1 (de) * 2003-11-04 2011-05-05 Geron Corp Rna-amidate und thioamidateur rnai
US8685946B2 (en) * 2003-11-26 2014-04-01 Universiy of Massachusetts Sequence-specific inhibition of small RNA function
JP4682152B2 (ja) 2003-12-31 2011-05-11 ザ・ペン・ステート・リサーチ・ファンデーション 卵巣がんの化学療法に対する抵抗性を予測および克服するための方法ならびに結腸がんの発生を予測するための方法
WO2005072057A2 (en) 2004-01-30 2005-08-11 Quark Biotech, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases
ATE452188T1 (de) 2004-02-10 2010-01-15 Sirna Therapeutics Inc Rna-interferenz-vermittelte hemmung der genexpression unter verwendung multifunktioneller sina (short interfering nucleic acid)
WO2005078848A2 (en) 2004-02-11 2005-08-25 University Of Tennessee Research Foundation Inhibition of tumor growth and invasion by anti-matrix metalloproteinase dnazymes
EP1734996B1 (en) 2004-04-02 2013-05-22 The Regents of The University of California Methods and compositions for treating and preventing disease associated with alpha v beta 5 integrin
CA2557532A1 (en) 2004-04-23 2005-11-10 Angela M. Christiano Inhibition of hairless protein mrna
US10508277B2 (en) 2004-05-24 2019-12-17 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
EP2471924A1 (en) * 2004-05-28 2012-07-04 Asuragen, INC. Methods and compositions involving microRNA
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
US20060040876A1 (en) * 2004-06-10 2006-02-23 Rong-Hwa Lin Modulation of peroxisome proliferator-activated receptors
ATE501252T1 (de) 2004-06-22 2011-03-15 Univ Illinois Verfahren zur inhibierung von tumorzellwachstum mit foxm1 sirns
US7968762B2 (en) 2004-07-13 2011-06-28 Van Andel Research Institute Immune-compromised transgenic mice expressing human hepatocyte growth factor (hHGF)
US20060024677A1 (en) 2004-07-20 2006-02-02 Morris David W Novel therapeutic targets in cancer
US20100132058A1 (en) 2004-07-23 2010-05-27 Diatchenko Luda B Methods and materials for determining pain sensitivity and predicting and treating related disorders
EP1789070B1 (en) 2004-08-03 2012-10-24 Biogen Idec MA Inc. Taj in neuronal function
EP2990410A1 (en) 2004-08-10 2016-03-02 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
NZ553162A (en) 2004-08-16 2010-03-26 Quark Biotech Inc Double stranded siRNA compounds that inhibit RRTP801
WO2006017932A1 (en) 2004-08-18 2006-02-23 Genesense Technologies Inc. Small interfering rna molecules against ribonucleotide reductase and uses thereof
CA2576247C (en) 2004-08-26 2016-08-30 The University Of Western Ontario Pharmaceutical compositions comprising inhibitors of iron transport, and method of identifying iron transport inhibitors, in staphylococcus aureus
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
FI20041204A0 (fi) 2004-09-16 2004-09-16 Riikka Lund Menetelmät immuunivälitteisiin sairauksiin liittyvien uusien kohdegeenien hyödyntämiseksi
JP5085326B2 (ja) 2004-09-18 2012-11-28 ユニバーシティ オブ メリーランド，ボルチモア ＮＣＣａ−ＡＴＰチャネルを標的とする処置剤およびその使用方法
US10583094B2 (en) 2004-09-18 2020-03-10 University Of Maryland Therapeutic methods that target the NCCA-ATP channel
JP4991547B2 (ja) 2004-09-28 2012-08-01 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 脱毛症、急性腎不全および他の疾患の治療のためのオリゴリボヌクレオチドおよびその使用の方法
JP2008515458A (ja) 2004-10-13 2008-05-15 ユニバーシティ オブ ジョージア リサーチ ファウンデーション， インコーポレーテッド 線虫抵抗性の遺伝子組換え植物
ES2534300T3 (es) 2004-11-12 2015-04-21 Asuragen, Inc. Procedimientos y composiciones que implican miARN y moléculas inhibidoras de miARN
TWI401316B (zh) * 2004-12-23 2013-07-11 Alcon Inc 用於治療青光眼之血清澱粉樣蛋白Ａ的ＲＮＡｉ抑制作用
TWI386225B (zh) 2004-12-23 2013-02-21 Alcon Inc 用於治療眼睛病症的結締組織生長因子（ＣＴＧＦ）ＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ）抑制技術
JP2008526213A (ja) * 2004-12-30 2008-07-24 トッド エム． ハウザー， 自己保護オリゴヌクレオチドを使用する、遺伝子発現を調節するための組成物および方法
US8137907B2 (en) 2005-01-03 2012-03-20 Cold Spring Harbor Laboratory Orthotopic and genetically tractable non-human animal model for liver cancer and the uses thereof
AU2006204120A1 (en) * 2005-01-06 2006-07-13 Benitec, Inc. RNAi agents for maintenance of stem cells
DK1841793T3 (da) 2005-01-07 2010-07-19 Diadexus Inc Ovr110-antistofsammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
TW200639253A (en) 2005-02-01 2006-11-16 Alcon Inc RNAi-mediated inhibition of ocular targets
US7745389B2 (en) 2005-02-14 2010-06-29 University Of Iowa Research Foundation Methods for treatment of age-related macular degeneration
DE202005004135U1 (de) * 2005-03-11 2005-05-19 Klocke Verpackungs-Service Gmbh Mehrkomponentenverpackung mit Applikator
CA2598234A1 (en) 2005-03-11 2006-09-21 Alcon, Inc. Rnai-mediated inhibition of frizzled related protein-1 for treatment of glaucoma
PL1866414T3 (pl) 2005-03-31 2012-10-31 Calando Pharmaceuticals Inc Inhibitory podjednostki 2 reduktazy rybonukleotydowej i ich zastosowania
AU2006235276A1 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. CACNA1E in cancer diagnosis, detection and treatment
CA2604844A1 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Cancer-related genes
US20090203055A1 (en) * 2005-04-18 2009-08-13 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for RNA interference with sialidase expression and uses thereof
CA2605508A1 (en) 2005-05-12 2006-11-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Blockade of pin1 prevents cytokine production by activated immune cells
FR2885808B1 (fr) 2005-05-19 2007-07-06 Oreal Vectorisation de dsrna par des particules cationiques et utilisation topique.
WO2007053184A2 (en) 2005-05-31 2007-05-10 Cold Spring Harbor Laboratory Methods for producing micrornas
US20100266574A1 (en) * 2005-06-10 2010-10-21 Orna Mor Oligoribonucleotides and Methods of Use Thereof for Treatment of Fibrotic Conditions and Other Diseases
WO2007011702A2 (en) 2005-07-15 2007-01-25 The University Of North Carolina At Chapel Hill Use of egfr inhibitors to prevent or treat obesity
US20070213292A1 (en) 2005-08-10 2007-09-13 The Rockefeller University Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro RNA and uses thereof
WO2007039454A1 (en) 2005-09-20 2007-04-12 Basf Plant Science Gmbh Methods for controlling gene expression using ta-siran
AU2006292278B2 (en) 2005-09-20 2012-03-08 Osi Pharmaceuticals, Inc. Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors
CA2636070A1 (en) 2006-01-06 2007-08-02 North Carolina State University Cyst nematode resistant transgenic plants
US7825099B2 (en) 2006-01-20 2010-11-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes
UY30097A1 (es) 2006-01-20 2007-08-31 Atugen Ag Usos terapeuticos de inhibidores de rtp801
EP2526968A3 (en) 2006-01-27 2013-05-22 Biogen Idec MA Inc. Nogo receptor antagonists
US7910566B2 (en) 2006-03-09 2011-03-22 Quark Pharmaceuticals Inc. Prevention and treatment of acute renal failure and other kidney diseases by inhibition of p53 by siRNA
WO2007123777A2 (en) 2006-03-30 2007-11-01 Duke University Inhibition of hif-1 activation for anti-tumor and anti-inflammatory responses
KR20090010194A (ko) 2006-04-13 2009-01-29 노바티스 백신즈 앤드 다이아그노스틱스, 인크. 암의 치료, 진단 또는 검출 방법
GB0608838D0 (en) 2006-05-04 2006-06-14 Novartis Ag Organic compounds
WO2007141796A2 (en) 2006-06-09 2007-12-13 Quark Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic uses of inhibitors of rtp801l
WO2008054561A2 (en) 2006-07-11 2008-05-08 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Proteins, nucleic acids encoding the same and associated methods of use
DK2447275T3 (en) 2006-07-13 2015-06-29 Univ Iowa Res Found Methods and reagents for the treatment of age-related macular degeneration
BRPI0714875A2 (pt) 2006-07-21 2013-05-28 Silence Therapeutics Ag meios para inibir a expressço da proteÍna cinase 3
JP5693004B2 (ja) 2006-07-28 2015-04-01 チルドレンズ メモリアル ホスピタル ヒト胚性幹細胞の微小環境を使用して腫瘍細胞の悪性度を抑制する方法
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
WO2008036741A2 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Asuragen, Inc. Mir-200 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
EP2145001A2 (en) * 2006-09-19 2010-01-20 Asuragen, Inc. Mir-15, mir-26, mir -31,mir -145, mir-147, mir-188, mir-215, mir-216 mir-331, mmu-mir-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
JP2010507387A (ja) 2006-10-25 2010-03-11 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 新規のｓｉＲＮＡおよびその使用方法
AU2007325283B2 (en) 2006-11-27 2012-08-30 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
EP2104735A2 (en) * 2006-12-08 2009-09-30 Asuragen, INC. Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
EP2104737B1 (en) * 2006-12-08 2013-04-10 Asuragen, INC. Functions and targets of let-7 micro rnas
CN101622348A (zh) * 2006-12-08 2010-01-06 奥斯瑞根公司 作为治疗性干预靶标的miR-20调节的基因和途径
US20100129358A1 (en) 2006-12-22 2010-05-27 University Of Utah Research Foundation Method of detecting ocular diseases and pathologic conditions and treatment of same
WO2008089103A2 (en) 2007-01-12 2008-07-24 University Of Maryland, Baltimore Targeting ncca-atp channel for organ protection following ischemic episode
CA2676143A1 (en) 2007-01-26 2008-07-31 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Modification of exosomal components for use as a vaccine
WO2008106102A2 (en) 2007-02-26 2008-09-04 Quark Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of rtp801 and their use in disease treatment
WO2008104978A2 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Quark Pharmaceuticals, Inc. Novel sirna structures
WO2008112988A2 (en) 2007-03-14 2008-09-18 Novartis Ag Apcdd1 inhibitors for treating, diagnosing or detecting cancer
US7812002B2 (en) 2007-03-21 2010-10-12 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotide inhibitors of NRF2 and methods of use thereof for treatment of cancer
ES2538217T3 (es) 2007-03-21 2015-06-18 Brookhaven Science Associates, Llc Composiciones combinadas antisentido de horquilla y métodos para modular la expresión
EP1985295A1 (en) 2007-04-04 2008-10-29 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Selective inhibitors of CB2 receptor expression and/or activity for the treatment of obesity and obesity-related disorders
EP2377952A1 (en) 2007-04-26 2011-10-19 Ludwig Institute For Cancer Research Methods for diagnosing and treating astrocytomas
EP2607477B1 (en) 2007-05-03 2020-09-23 The Brigham and Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
US20090131354A1 (en) * 2007-05-22 2009-05-21 Bader Andreas G miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
US20090232893A1 (en) * 2007-05-22 2009-09-17 Bader Andreas G miR-143 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
AU2008261951A1 (en) * 2007-06-08 2008-12-18 Asuragen, Inc. miR-34 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US8097422B2 (en) 2007-06-20 2012-01-17 Salk Institute For Biological Studies Kir channel modulators
CA2691199C (en) 2007-06-22 2017-09-12 Marc J. Simard Inhibitors of ncca-atp channels for therapy
SI2170403T1 (sl) 2007-06-27 2014-07-31 Quark Pharmaceuticals, Inc. Sestavki in postopki za inhibicijo ekspresije pro-apoptotskih genov
US9689031B2 (en) 2007-07-14 2017-06-27 Ionian Technologies, Inc. Nicking and extension amplification reaction for the exponential amplification of nucleic acids
WO2009012263A2 (en) 2007-07-18 2009-01-22 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Tissue-specific micrornas and compositions and uses thereof
CA2697363A1 (en) 2007-08-23 2009-03-05 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Modulation of synaptogenesis
US8361714B2 (en) 2007-09-14 2013-01-29 Asuragen, Inc. Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof
CA2701845A1 (en) 2007-10-03 2009-04-09 Quark Pharmaceuticals, Inc. Novel sirna structures
WO2009070805A2 (en) * 2007-12-01 2009-06-04 Asuragen, Inc. Mir-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
EP2229186A2 (en) 2007-12-04 2010-09-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides
US8614311B2 (en) 2007-12-12 2013-12-24 Quark Pharmaceuticals, Inc. RTP801L siRNA compounds and methods of use thereof
US20110105584A1 (en) * 2007-12-12 2011-05-05 Elena Feinstein Rtp80il sirna compounds and methods of use thereof
US20090192114A1 (en) * 2007-12-21 2009-07-30 Dmitriy Ovcharenko miR-10 Regulated Genes and Pathways as Targets for Therapeutic Intervention
WO2009090639A2 (en) * 2008-01-15 2009-07-23 Quark Pharmaceuticals, Inc. Sirna compounds and methods of use thereof
US8163709B2 (en) * 2008-01-28 2012-04-24 Board Of Regents Of The University Of Texas System TAK1-D mediated induction of cell death in human cancer cells by specific sequence short double-stranded RNAS
WO2009100430A2 (en) * 2008-02-08 2009-08-13 Asuragen, Inc miRNAs DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN LYMPH NODES FROM CANCER PATIENTS
US20090233297A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-17 Elizabeth Mambo Microrna markers for recurrence of colorectal cancer
RU2010138558A (ru) * 2008-03-20 2012-03-27 Кварк Фармасьютикалс. Инк, (Us) Новые соединения миphk для ингибирования rtp801
US20090253780A1 (en) * 2008-03-26 2009-10-08 Fumitaka Takeshita COMPOSITIONS AND METHODS RELATED TO miR-16 AND THERAPY OF PROSTATE CANCER
JP2011516065A (ja) 2008-04-04 2011-05-26 カランド ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド Ｅｐａｓ１阻害剤の組成物および使用
WO2009126726A1 (en) * 2008-04-08 2009-10-15 Asuragen, Inc Methods and compositions for diagnosing and modulating human papillomavirus (hpv)
US8575123B2 (en) 2008-04-11 2013-11-05 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
WO2009144704A2 (en) * 2008-04-15 2009-12-03 Quark Pharmaceuticals, Inc. siRNA COMPOUNDS FOR INHIBITING NRF2
GB0807018D0 (en) 2008-04-17 2008-05-21 Fusion Antibodies Ltd Antibodies and treatment
US8258111B2 (en) * 2008-05-08 2012-09-04 The Johns Hopkins University Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis
US8431692B2 (en) * 2008-06-06 2013-04-30 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of ear disorders
TWI455944B (zh) 2008-07-01 2014-10-11 Daiichi Sankyo Co Ltd 雙股多核苷酸
US20110263478A1 (en) 2008-09-16 2011-10-27 Simard J Marc Sur1 inhibitors for therapy
EP2350264A4 (en) 2008-11-06 2012-08-29 Univ Johns Hopkins TREATMENT OF CHRONIC INFLAMMATION OF THE RESPIRATORY TRACT
WO2010054264A1 (en) 2008-11-07 2010-05-14 Triact Therapeutics, Inc. Use of catecholic butane derivatives in cancer therapy
EP2352847B1 (en) 2008-11-10 2014-01-08 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Gene signature for predicting prognosis of patients with solid tumors
US20100179213A1 (en) * 2008-11-11 2010-07-15 Mirna Therapeutics, Inc. Methods and Compositions Involving miRNAs In Cancer Stem Cells
JP5832293B2 (ja) 2008-12-04 2015-12-16 オプコ ファーマシューティカルズ、エルエルシー 血管新生促進ｖｅｇｆイソ型を選択的に抑制する組成物および方法
US20110288155A1 (en) 2008-12-18 2011-11-24 Elena Feinstein Sirna compounds and methods of use thereof
JP2012513464A (ja) 2008-12-23 2012-06-14 ザ トラスティーズ オブ コロンビア ユニヴァーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク ホスホジエステラーゼ阻害剤及びその使用
WO2010074783A1 (en) 2008-12-23 2010-07-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Phosphodiesterase inhibitors and uses thereof
EP2201982A1 (en) 2008-12-24 2010-06-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Histamine H4 receptor antagonists for the treatment of vestibular disorders
US20120189641A1 (en) 2009-02-25 2012-07-26 OSI Pharmaceuticals, LLC Combination anti-cancer therapy
US20110171124A1 (en) 2009-02-26 2011-07-14 Osi Pharmaceuticals, Inc. In situ methods for monitoring the EMT status of tumor cells in vivo
US8642834B2 (en) 2009-02-27 2014-02-04 OSI Pharmaceuticals, LLC Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal-like tumor cells or their formation
JP2012519282A (ja) 2009-02-27 2012-08-23 オーエスアイ・ファーマシューティカルズ，エルエルシー 間葉様腫瘍細胞またはその生成を阻害する薬剤を同定するための方法
WO2010099138A2 (en) 2009-02-27 2010-09-02 Osi Pharmaceuticals, Inc. Methods for the identification of agents that inhibit mesenchymal-like tumor cells or their formation
US8975389B2 (en) 2009-03-02 2015-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid chemical modifications
CN102985557B (zh) * 2009-03-13 2018-06-15 安吉奥斯医药品有限公司 用于细胞增殖相关病症的方法和组合物
US20120029054A1 (en) 2009-03-19 2012-02-02 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of GATA Binding Protein 3 (GATA3) Gene Expression Using Short Intefering Nucleic Acid (siNA)
JP2012520683A (ja) 2009-03-19 2012-09-10 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション 低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いた結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）遺伝子発現のＲＮＡ干渉媒介性阻害
AU2010226604A1 (en) 2009-03-19 2011-10-13 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of BTB and CNC homology 1, basic leucine zipper transcription factor 1 (Bach 1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) sequence listing
US20120035247A1 (en) 2009-03-19 2012-02-09 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Signal Transducer and Activator of Transcription 6 (STAT6) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
EP2408455B1 (en) 2009-03-20 2014-06-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Inhibitors of cathepsin S for prevention or treatment of obesity-associated disorders
US8444983B2 (en) 2009-03-23 2013-05-21 Quark Pharmaceuticals, Inc. Composition of anti-ENDO180 antibodies and methods of use for the treatment of cancer and fibrotic diseases
WO2010111490A2 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF THE THYMIC STROMAL LYMPHOPOIETIN (TSLP) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20120010272A1 (en) 2009-03-27 2012-01-12 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Apoptosis Signal-Regulating Kinase 1 (ASK1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
WO2010111468A2 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF THE NERVE GROWTH FACTOR BETA CHAIN (NGFß) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (SINA)
US20120022142A1 (en) 2009-03-27 2012-01-26 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Signal Transducer and Activator of Transcription 1 (STAT1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
EP2411517A2 (en) 2009-03-27 2012-02-01 Merck Sharp&Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF THE INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE 1 (ICAM-1)GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
WO2010115874A1 (en) 2009-04-07 2010-10-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment and the diagnosis ofpulmonary arterial hypertension
WO2010118243A2 (en) 2009-04-08 2010-10-14 Genentech, Inc. Use of il-27 antagonists to treat lupus
US8283332B2 (en) 2009-04-17 2012-10-09 University Of Louisville Research Foundation, Inc. PFKFB4 inhibitors and methods of using the same
EP2432467B1 (en) 2009-05-20 2018-02-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Serotonin 5-ht3 receptor antagonists for use in the treatment of lesional vestibular disorders
ES2432618T3 (es) 2009-05-20 2013-12-04 Inserm (Institut National De La Santé Et De La Recherche Medicale) Antagonistas del receptor 5-HT3 de serotonina para usar en el tratamiento o prevención de una patología del oído interno con déficit vestibular
WO2010141511A2 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof
EP2258858A1 (en) 2009-06-05 2010-12-08 Universitätsklinikum Freiburg Transgenic LSD1 animal model for cancer
EP2445334A1 (en) 2009-06-26 2012-05-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Non human animal models for increased retinal vascular permeability
US9512164B2 (en) 2009-07-07 2016-12-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide end caps
US8927513B2 (en) 2009-07-07 2015-01-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5′ phosphate mimics
SI2453923T1 (sl) 2009-07-14 2016-04-29 Mayo Foundation For Medical Education And Research S peptidi posredovana ne-kovalentna dostava aktivnih učinkovin preko krvno možganske bariere
JP5755647B2 (ja) 2009-07-24 2015-07-29 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア αｖβ５インテグリンに関連する疾患の処置および予防のための方法および組成物
EP2467159A1 (en) 2009-08-20 2012-06-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Vla-4 as a biomarker for prognosis and target for therapy in duchenne muscular dystrophy
US20120219543A1 (en) 2009-10-20 2012-08-30 Raphael Scharfmann Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of disorders of glucose homeostasis
WO2011050210A1 (en) 2009-10-21 2011-04-28 Agios Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for cell-proliferation-related disorders
WO2011054916A1 (en) 2009-11-06 2011-05-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of atherosclerosis
CN102666856B (zh) 2009-11-08 2016-04-06 夸克制药公司 定向至RhoA靶基因的双链RNA化合物在制造治疗神经性疼痛的药物中的用途
AU2010321582B2 (en) 2009-11-23 2014-08-21 Aquabounty Technologies, Inc. Maternally induced sterility in animals
TW201124160A (en) 2009-11-26 2011-07-16 Quark Pharmaceuticals Inc SiRNA compounds comprising terminal substitutions
US9163240B2 (en) 2009-12-07 2015-10-20 The Johns Hopkins University SR-BI mutation as a predictor of low progesterone levels and poor fetal viability during pregnancy
WO2011070049A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Endothelin inhibitors for the treatment of rapidly progressive glomerulonephritis
WO2011072091A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the cns
CA2781896C (en) 2009-12-09 2021-03-30 Nitto Denko Corporation Modulation of hsp47 expression
US10640457B2 (en) 2009-12-10 2020-05-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Histone acetyltransferase activators and uses thereof
EP2509590B1 (en) 2009-12-10 2019-10-30 The Trustees of Columbia University in the City of New York Histone acetyltransferase activators and uses thereof
MX339050B (es) 2009-12-18 2016-05-09 Novartis Ag Composiciones organicas para tratar las enfermedades relacionadas con hsf1.
WO2011076807A2 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Novartis Ag Lipids, lipid compositions, and methods of using them
WO2011080261A1 (en) 2009-12-28 2011-07-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for improved cardiomyogenic differentiation of pluripotent cells
US9109227B2 (en) 2010-01-05 2015-08-18 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) FLT3 receptor antagonists for the treatment or the prevention of pain disorders
WO2011084193A1 (en) 2010-01-07 2011-07-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs
JP5914357B2 (ja) 2010-01-15 2016-05-11 インセルム（インスティチュート ナショナル デ ラ サンテ エ デ ラ リシェルシェ メディカル） 自閉症の治療のための化合物
MX344543B (es) 2010-01-26 2016-12-19 Nat Jewish Health Metodos y composiciones para prediccion de riesgo, diagnosis, prognosis y tratamiento de desordenes pulmonares.
MX2012009318A (es) 2010-02-10 2012-09-07 Novartis Ag Metodos y compuestos para el crecimiento muscular.
WO2011109427A2 (en) 2010-03-01 2011-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Improving the biological activity of sirna through modulation of its thermodynamic profile
AU2011223643A1 (en) 2010-03-03 2012-06-28 OSI Pharmaceuticals, LLC Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors
AU2011223655A1 (en) 2010-03-03 2012-06-28 OSI Pharmaceuticals, LLC Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors
WO2011123621A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc. 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides
CU23896B1 (es) 2010-04-01 2013-05-31 Ct De Ingeniería Genética Y Biotecnología Método para inhibir la replicación del vih en células de mamíferos
WO2011133868A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
WO2011133931A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Genentech, Inc. Use of il-27 antagonists for treating inflammatory bowel disease
US9725479B2 (en) 2010-04-22 2017-08-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. 5′-end derivatives
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
EP2568986B1 (en) 2010-05-10 2016-01-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for the treatment of fluid accumulation in and/ or under the retina
KR101223660B1 (ko) 2010-05-20 2013-01-17 광주과학기술원 ＨＩＦ－２α 억제제를 유효성분으로 포함하는 관절염 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
JP6033218B2 (ja) 2010-05-21 2016-11-30 ペプティメド， インコーポレイテッド がんを治療するための試薬および方法
EP2582365B1 (en) 2010-06-16 2019-03-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Compositions for stimulating reepithelialisation during wound healing
WO2011163121A1 (en) 2010-06-21 2011-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
US9168297B2 (en) 2010-06-23 2015-10-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Regulation of skin pigmentation by neuregulin-1 (NRG-1)
AU2011270896B9 (en) 2010-06-24 2015-05-07 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double stranded RNA compounds to RhoA and use thereof
US9095591B2 (en) 2010-06-28 2015-08-04 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Pharmaceutical composition for use in the treatment of glaucoma
EP2596025B1 (en) 2010-07-23 2018-06-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for cancer management targeting co-029
CN103068980B (zh) 2010-08-02 2017-04-05 瑟纳治疗公司 使用短干扰核酸（siNA）的RNA干扰介导的联蛋白（钙粘蛋白关联蛋白质），β1（CTNNB1）基因表达的抑制
WO2012019991A1 (en) 2010-08-09 2012-02-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of hiv-1 infections
RU2745848C2 (ru) 2010-08-17 2021-04-01 Сирна Терапьютикс, Инк. ОПОСРЕДУЕМОЕ РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИЕЙ ИНГИБИРОВАНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ ВИРУСА ГЕПАТИТА B (HBV) С ПРИМЕНЕНИЕМ МАЛОЙ ИНТЕРФЕРИРУЮЩЕЙ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ (миНК)
JP6106085B2 (ja) 2010-08-24 2017-03-29 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 内部非核酸スペーサーを含む一本鎖ＲＮＡｉ剤
WO2012027467A1 (en) 2010-08-26 2012-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROLYL HYDROXYLASE DOMAIN 2 (PHD2) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
WO2012028703A1 (en) 2010-09-02 2012-03-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for the prognosis of the progression of cancer
US9290760B2 (en) 2010-09-15 2016-03-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
WO2012042289A1 (en) 2010-09-28 2012-04-05 Inserm ( Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of bone density related diseases
US20140079769A1 (en) 2010-10-01 2014-03-20 Fabiola Terzi Methods for predicting the progression and treating a chronic kidney disease in a patient
US20140134231A1 (en) 2010-10-11 2014-05-15 Sanford-Burnham Medical Research Institute Mir-211 expression and related pathways in human melanoma
CN103391784A (zh) 2010-10-15 2013-11-13 纽约市哥伦比亚大学理事会 肥胖症-相关的基因和它们的蛋白和其用途
WO2012058210A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACIDS (siNA)
SG10201508981YA (en) 2010-11-01 2015-11-27 Peptimed Inc Compositions Of A Peptide-Based System For Cell-Specific Targeting
US9198911B2 (en) 2010-11-02 2015-12-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating hair loss disorders
PT2635299T (pt) 2010-11-02 2019-10-14 Univ Columbia Métodos de tratamento de distúrbios de perda de cabelo
WO2012072681A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Diagnostic and treatment of chronic heart failure
US9533041B2 (en) 2010-12-03 2017-01-03 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the treatment of heart failure
US9150926B2 (en) 2010-12-06 2015-10-06 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Diagnosis and treatment of adrenocortical tumors using human microRNA-483
CA2818024C (en) 2010-12-06 2019-09-24 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double stranded oligonucleotide compounds comprising positional modifications
US9969677B2 (en) 2010-12-22 2018-05-15 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Histone acetyltransferase modulators and uses thereof
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012116040A1 (en) 2011-02-22 2012-08-30 OSI Pharmaceuticals, LLC Biological markers predictive of anti-cancer response to insulin-like growth factor-1 receptor kinase inhibitors in hepatocellular carcinoma
EP2681314B1 (en) 2011-03-03 2017-11-01 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating lung disease and injury
AU2012223366B2 (en) 2011-03-03 2017-02-23 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
US9796979B2 (en) 2011-03-03 2017-10-24 Quark Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
EP2684045B2 (en) 2011-03-09 2023-03-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods to characterize patients suffering from hemolysis
WO2012129145A1 (en) 2011-03-18 2012-09-27 OSI Pharmaceuticals, LLC Nscle combination therapy
ES2607616T3 (es) 2011-04-13 2017-04-03 Institut National de la Santé et de la Recherche Medicale (INSERM) Modelo animal no humano para la colitis ulcerosa y sus principales complicaciones
KR101291668B1 (ko) 2011-04-21 2013-08-01 서울대학교산학협력단 미코박테리아―대장균용 셔틀 벡터 및 이의 용도
JP2014519813A (ja) 2011-04-25 2014-08-21 オーエスアイ・ファーマシューティカルズ，エルエルシー 癌薬剤発見、診断、および治療におけるｅｍｔ遺伝子シグネチャーの使用
WO2012146702A1 (en) 2011-04-28 2012-11-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for preparing accessory cells and uses thereof for preparing activated nk cells
EP2714037B1 (en) 2011-05-25 2016-07-13 Université Paris Descartes Erk inhibitors for use in treating spinal muscular atrophy
WO2012163848A1 (en) 2011-05-27 2012-12-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of crohn's disease
US10196637B2 (en) 2011-06-08 2019-02-05 Nitto Denko Corporation Retinoid-lipid drug carrier
TWI658830B (zh) 2011-06-08 2019-05-11 日東電工股份有限公司 Ｈｓｐ47表現調控強化用類視色素脂質體
WO2012175711A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for predicting the responsiveness of a patient affected with an osteosarcoma to a chemotherapy
WO2013014262A1 (en) 2011-07-27 2013-01-31 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosing and treating myhre syndrome
WO2013024022A1 (en) 2011-08-12 2013-02-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treatment of pulmonary hypertension
SG2014011316A (en) 2011-08-31 2014-06-27 Genentech Inc Diagnostic markers
US20160032284A1 (en) 2011-09-02 2016-02-04 Arrowhead Research Corportation Organic compositions to treat hsf1-related diseases
JP2014531425A (ja) 2011-09-02 2014-11-27 ザ トラスティーズ オブ コロンビア ユニヴァーシティ イン ザ シティ オブ ニューヨーク 肥満の代謝異常を治療するためのＣａＭＫＩＩ、ＩＰ３Ｒ、カルシニューリン、ｐ３８、およびＭＫ２／３阻害剤
US9644241B2 (en) 2011-09-13 2017-05-09 Interpace Diagnostics, Llc Methods and compositions involving miR-135B for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease
US9352312B2 (en) 2011-09-23 2016-05-31 Alere Switzerland Gmbh System and apparatus for reactions
JP2014531213A (ja) 2011-09-30 2014-11-27 ジェネンテック， インコーポレイテッド 上皮又は間葉の表現型の診断用メチル化マーカー、及び腫瘍又は腫瘍細胞におけるｅｇｆｒキナーゼ阻害薬に対する応答
WO2013050405A1 (en) 2011-10-03 2013-04-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of th2 mediated diseases
EP2766733A2 (en) 2011-10-14 2014-08-20 Inserm Biomarkers of renal disorders
PE20141562A1 (es) 2011-10-14 2014-11-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-htra1 y metodos de uso
AU2012325997C1 (en) 2011-10-18 2018-07-05 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Amine cationic lipids and uses thereof
EP2768971A1 (en) 2011-10-20 2014-08-27 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods for the detection and the treatment of cardiac remodeling
EP2773758B1 (en) 2011-11-03 2017-06-07 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions for use in neuroprotection
EP2776130A1 (en) 2011-11-07 2014-09-17 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) A ddr1 antagonist or an inhibitor of ddr1 gene expression for use in the prevention or treatment of crescentic glomerulonephritis
US20140323549A1 (en) 2011-11-08 2014-10-30 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the nervous system
EP2782933A1 (en) 2011-11-22 2014-10-01 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods and pharmaceutical compositions for reducing airway hyperresponse
WO2013098813A1 (en) 2012-01-01 2013-07-04 Qbi Enterprises Ltd. Endo180-targeted particles for selective delivery of therapeutic and diagnostic agents
EP2802657B1 (en) 2012-01-12 2018-05-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hearing and balance disorders
WO2013113762A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and kits for predicting the risk of having a cutaneous melanoma in a subject
WO2013121034A1 (en) 2012-02-17 2013-08-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for reducing adipose tissue inflammation
HK1200093A1 (en) 2012-03-16 2015-07-31 霍夫曼-拉罗奇有限公司 Methods of treating melanoma with pak1 inhibitors
DK2830662T3 (da) 2012-03-29 2019-01-02 Univ Columbia Fremgangsmåder til behandlng af hårtabsforstyrrelser
WO2013152252A1 (en) 2012-04-06 2013-10-10 OSI Pharmaceuticals, LLC Combination anti-cancer therapy
EP3919620A1 (en) 2012-05-02 2021-12-08 Sirna Therapeutics, Inc. Short interfering nucleic acid (sina) compositions
EP2844668A1 (en) 2012-05-03 2015-03-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method and pharmaceutical composition for use in the treatment and diagnotic of anemia of inflammation
WO2013167582A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for prevention or treatment of chronic obstructive pulmonary disease
WO2013171296A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Diagnostic and treatment of sarcoidosis
WO2013174834A1 (en) 2012-05-22 2013-11-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosing and treating focal segmental glomerulosclerosis
HUE039713T2 (hu) 2012-06-08 2019-02-28 Sensorion H4 receptor inhibitorok tinnitus kezelésére
WO2013187556A1 (en) 2012-06-14 2013-12-19 Scripps Korea Antibody Institute Novel antibody specific for clec14a and uses thereof
WO2014006025A2 (en) 2012-07-02 2014-01-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Marker of pathogenicity in salmonella
EP2875049B1 (en) 2012-07-18 2018-12-26 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods for preventing and treating chronic kidney disease (ckd)
WO2014018375A1 (en) 2012-07-23 2014-01-30 Xenon Pharmaceuticals Inc. Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods
ES2817897T3 (es) 2012-07-23 2021-04-08 La Jolla Inst Allergy & Immunology PTPRS y proteoglicanos en enfermedad autoinmune
EP2895608B1 (en) 2012-09-12 2018-12-05 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded oligonucleotide molecules to p53 and methods of use thereof
WO2014043289A2 (en) 2012-09-12 2014-03-20 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded oligonucleotide molecules to ddit4 and methods of use thereof
WO2014045126A2 (en) 2012-09-18 2014-03-27 Uti Limited Partnership Treatment of pain by inhibition of usp5 de-ubiquitinase
WO2014053871A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A method for screening a compound capable of inhibiting the notch1 transcriptional activity
EP3677310A1 (en) 2012-10-08 2020-07-08 St. Jude Children's Research Hospital Therapies based on control of regulatory t cell stability and function via a neuropilin-1:semaphorin axis
US20150259403A1 (en) 2012-10-10 2015-09-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and Pharmaceutical Compositions for Treatment of Gastrointestinal Stromal Tumors
CN105142621A (zh) 2012-10-24 2015-12-09 国家健康科学研究所 用于预防或治疗糖尿病和促进β-细胞存活的TPL2激酶抑制剂
US20150246118A1 (en) 2012-10-26 2015-09-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Lyve-1 antagonists for preventing or treating a pathological condition associated with lymphangiogenesis
WO2014064192A1 (en) 2012-10-26 2014-05-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method and pharmaceutical composition for use in the treatment and prediction of myocardial infraction
WO2014068070A1 (en) 2012-10-31 2014-05-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for preventing antiphospholipid syndrome (aps)
EP2917347B1 (en) 2012-11-08 2019-01-02 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of bone metastases
EP2732815A1 (en) 2012-11-16 2014-05-21 Neurochlore Modulators of intracellular chloride concentration for treating fragile X syndrome
US20150377888A1 (en) 2013-02-01 2015-12-31 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for Predicting and Preventing Metastasis in Triple Negative Breast Cancers
WO2014122199A1 (en) 2013-02-06 2014-08-14 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treatment of chronic intestinal pseudo-obstruction
WO2014128127A1 (en) 2013-02-19 2014-08-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treatment of prostate cancer
AU2014223548A1 (en) 2013-02-26 2015-10-15 Triact Therapeutics, Inc. Cancer therapy
EP2961853B1 (en) 2013-02-28 2018-09-19 The Board of Regents of The University of Texas System Methods for classifying a cancer as susceptible to tmepai-directed therapies and treating such cancers
AU2014233198B2 (en) 2013-03-15 2019-06-27 Sutter West Bay Hospitals Falz for use as a target for therapies to treat cancer
WO2014151734A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fusion proteins and methods thereof
US9688767B2 (en) 2013-03-15 2017-06-27 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Method of predicting survival time in myocardial infarction patients by measuring BAFF levels
US20160051556A1 (en) 2013-03-21 2016-02-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method and Pharmaceutical Composition for use in the Treatment of Chronic Liver Diseases Associated with a Low Hepcidin Expression
WO2014170712A1 (en) 2013-04-15 2014-10-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Rac-1 inhibitors or pi3k inhibitors for preventing intestinal barrier dysfunction
JP2016523818A (ja) 2013-04-18 2016-08-12 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル それを必要とする被験体におけるｔ細胞増殖を阻害するための方法及び医薬組成物（ｃｔｐｓ１阻害剤、例えばノルロイシン）
WO2014180975A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 Kirwan Laurence Normothermic maintenance method and system
US10155001B2 (en) 2013-06-14 2018-12-18 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) RAC1 inhibitors for inducing bronchodilation
EP3222274B1 (en) * 2013-06-19 2020-10-21 Apse Llc Compositions and methods using capsids resistant to hydrolases
WO2015001053A1 (en) 2013-07-03 2015-01-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the screening of substances that may be useful for the prevention and treatment of infections by enterobacteriaceae family
CA2917102A1 (en) 2013-07-03 2015-01-08 City Of Hope Anticancer combinations
EP3027223A1 (en) 2013-07-31 2016-06-08 QBI Enterprises Ltd. Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds
EP3027222A1 (en) 2013-07-31 2016-06-08 QBI Enterprises Ltd. Sphingolipid-polyalkylamine-oligonucleotide compounds
WO2015035410A1 (en) 2013-09-09 2015-03-12 Triact Therapeutic, Inc. Cancer therapy
WO2015036618A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method and pharmaceutical composition for use in the treatment of epilepsy
WO2015049365A2 (en) 2013-10-03 2015-04-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for modulating autophagy in a subject in need thereof
EP3055426B1 (en) 2013-10-09 2019-06-19 The United States of America as represented by The Secretary Department of Health and Human Services Detection of hepatitis delta virus (hdv) for the diagnosis and treatment of sjögren's syndrome and lymphoma
WO2015054670A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Genentech, Inc. Nsp4 inhibitors and methods of use
US20170002064A1 (en) 2013-11-08 2017-01-05 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Vh4 antibodies against gray matter neuron and astrocyte
US10004814B2 (en) 2013-11-11 2018-06-26 Sirna Therapeutics, Inc. Systemic delivery of myostatin short interfering nucleic acids (siNA) conjugated to a lipophilic moiety
US9682123B2 (en) 2013-12-20 2017-06-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods of treating metabolic disease
WO2015091857A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Fondazione Istituto Italiano Di Tecnologia Modulators of intracellular chloride concentration for treating down syndrome
US9274117B2 (en) 2013-12-21 2016-03-01 Catholic University Industry Academic Use of SIRT7 as novel cancer therapy target and method for treating cancer using the same
WO2015098113A1 (ja) 2013-12-27 2015-07-02 独立行政法人医薬基盤研究所 悪性腫瘍の治療薬
RU2752933C2 (ru) 2014-03-11 2021-08-11 Селлектис Способ создания т-клеток, пригодных для аллогенной трансплантации
WO2015140351A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for enhancing myelination
US10272135B2 (en) 2014-04-16 2019-04-30 Philippe Rouet Apolipoprotein O and fragments thereof for inducing apoptosis in a cancerous cell
KR101633881B1 (ko) 2014-05-08 2016-06-28 고려대학교 산학협력단 도파민 의존성 신경장애 치료를 위한 REV-ERBα 유전자의 용도
KR101633876B1 (ko) 2014-05-08 2016-06-28 고려대학교 산학협력단 정서장애 및 중독질환 치료를 위한 REV-ERBα 유전자의 용도
EP3167063B1 (en) 2014-07-09 2019-03-06 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods and compositions for treating neuropathic pain
CN106794141B (zh) 2014-07-16 2021-05-28 诺华股份有限公司 将核酸包封在脂质纳米粒主体中的方法
JP2017524739A (ja) 2014-07-17 2017-08-31 アンセルムＩｎｓｅｒｍ 神経筋接合部関連疾患の処置方法
US10278986B2 (en) 2014-08-14 2019-05-07 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Antibody-siRNA conjugates and uses therefor
CN115054687A (zh) 2014-08-22 2022-09-16 广州英恩迈生物医药科技有限公司 治疗和/或预防与ifp35蛋白家族的异常水平和/或活性相关的疾病或不适的方法和组合物
CN107106544B (zh) 2014-09-19 2021-09-24 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 用于治疗脑转移瘤的方法
EP3197446A2 (en) 2014-09-26 2017-08-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cdc25a inhibitor for the treatment of drug resistant cancer or for the prevention of tumor relapse
US20170304459A1 (en) 2014-10-10 2017-10-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide
EP3009147A1 (en) 2014-10-16 2016-04-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating resistant glioblastoma
WO2016059220A1 (en) 2014-10-16 2016-04-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Tcr-activating agents for use in the treatment of t-all
WO2016066608A1 (en) 2014-10-28 2016-05-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treatment of pulmonary cell senescence and peripheral aging
WO2016066671A1 (en) 2014-10-29 2016-05-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating resistant cancers using progastrin inhibitors
AU2015346281B2 (en) 2014-11-12 2021-12-02 Nmc, Inc. Transgenic plants with engineered redox sensitive modulation of photosynthetic antenna complex pigments and methods for making the same
EP3925979A3 (en) 2014-12-23 2022-03-23 The Trustees of Columbia University in the City of New York Fgfr-tacc fusion proteins and methods thereof
US10264976B2 (en) 2014-12-26 2019-04-23 The University Of Akron Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging
WO2016128523A1 (en) 2015-02-12 2016-08-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the responsiveness of a patient affected with malignant hematological disease to chemotherapy treatment and methods of treatment of such disease
WO2016131944A1 (en) 2015-02-20 2016-08-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method for treating cardiovascular diseases
WO2016139331A1 (en) 2015-03-05 2016-09-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of melanoma
US10584144B2 (en) 2015-03-09 2020-03-10 University Of Kentucky Research Foundation RNA nanoparticles for brain tumor treatment
US10781446B2 (en) 2015-03-09 2020-09-22 University Of Kentucky Research Foundation RNA nanoparticle for treatment of gastric cancer
CN107429251A (zh) 2015-03-09 2017-12-01 肯塔基大学研究基金会 用于治疗乳腺癌的miRNA
WO2016142427A1 (en) 2015-03-10 2016-09-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method ank kit for reprogramming somatic cells
WO2016146587A1 (en) 2015-03-13 2016-09-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Hepcidin antagonists for use in the treatment of inflammation
KR101797569B1 (ko) 2015-03-18 2017-11-22 한국교통대학교산학협력단 금속 나노입자 기반 간 표적성 핵산 전달체 및 이의 제조방법
US11279768B1 (en) 2015-04-03 2022-03-22 Precision Biologics, Inc. Anti-cancer antibodies, combination therapies, and uses thereof
EP3078378B1 (en) 2015-04-08 2020-06-24 Vaiomer Use of factor xa inhibitors for regulating glycemia
ES2841437T3 (es) 2015-04-13 2021-07-08 Inst Nat Sante Rech Med Métodos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades hemorrágicas
WO2016168784A2 (en) 2015-04-17 2016-10-20 University Of Kentucky Research Foundation Rna nanoparticles and method of use thereof
WO2016170027A1 (en) 2015-04-22 2016-10-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of th17 mediated diseases
WO2016170382A1 (en) 2015-04-23 2016-10-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Pharmaceutical compositions comprising a bradykinin 2 receptor antagonist for prevention or treatment of impaired skin wound healing
WO2016176617A2 (en) 2015-04-29 2016-11-03 New York University Method for treating high-grade gliomas
EP3297615A1 (en) 2015-05-20 2018-03-28 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and pharmaceutical composition for modulation polarization and activation of macrophages
EP3303391A1 (en) 2015-05-26 2018-04-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions (ntsr1 inhibitors) for the treatment of hepatocellular carcinomas
EP3307779A2 (en) 2015-06-12 2018-04-18 Alector LLC Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
AU2016276981B2 (en) 2015-06-12 2022-10-06 Alector Llc Anti-CD33 antibodies and methods of use thereof
JP6980534B2 (ja) 2015-06-25 2021-12-15 ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレーション 造血幹細胞の増大、富化、および維持に関する方法および組成物
WO2017029391A1 (en) 2015-08-20 2017-02-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method for treating cancer
MX2018002090A (es) 2015-08-24 2018-09-12 Halo Bio Rnai Therapeutics Inc Nanoparticulas de polinucleótido para modulación de expresión génica y sus usos.
US10072065B2 (en) 2015-08-24 2018-09-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Peptide-mediated delivery of immunoglobulins across the blood-brain barrier
CN115960235A (zh) 2015-08-28 2023-04-14 艾利妥 抗siglec-7抗体及其使用方法
EP3347486A4 (en) 2015-09-09 2019-06-19 The Trustees of Columbia University in the City of New York REDUCTION OF ER-MAM-LOCALIZED APP-C99 AND METHOD FOR THE TREATMENT OF ALZHEIMER DISEASE
WO2017059118A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Duke University Compositions and methods for identifying and treating dystonia disorders
WO2017067944A1 (en) 2015-10-19 2017-04-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the survival time of subjects suffering from triple negative breast cancer
SG11201803567XA (en) 2015-10-29 2018-05-30 Alector Llc Anti-siglec-9 antibodies and methods of use thereof
BR112018007703A2 (pt) 2015-10-30 2018-11-06 Genentech Inc anticorpos, ácido nucleico isolado, métodos de produção de um anticorpo e de tratamento de um distúrbio, composição farmacêutica, terapia de combinação e uso do anticorpo
WO2017085566A1 (en) 2015-11-20 2017-05-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for increase/induction of immune responses
WO2017093354A1 (en) 2015-11-30 2017-06-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Nmdar antagonists for the treatment of diseases associated with angiogenesis
WO2017093350A1 (en) 2015-12-01 2017-06-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of darier disease
WO2017096165A1 (en) 2015-12-03 2017-06-08 Agios Pharmaceuticals, Inc. Mat2a inhibitors for treating mtap null cancer
AU2016371624B2 (en) 2015-12-13 2020-08-27 Nitto Denko Corporation siRNA structures for high activity and reduced off target
WO2017129558A1 (en) 2016-01-25 2017-08-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting or treating myelopoiesis-driven cardiometabolic diseases and sepsis
EP3423568A4 (en) 2016-03-04 2019-11-13 University Of Louisville Research Foundation, Inc. METHOD AND COMPOSITIONS FOR EX-VIVO REPRODUCTION OF VERY SMALL EMBRYONAL STEM CELLS (VSELS)
PL3779447T3 (pl) 2016-03-15 2023-06-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Sposób aktywowania przeciwnowotworowej odpowiedzi komórek t cd8+ u pacjenta dotknego nowotworem
WO2017161001A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions relating to hematopoietic stem cell expansion
WO2017158396A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Cytidine deaminase inhibitors for the treatment of pancreatic cancer
US20190086392A1 (en) 2016-03-21 2019-03-21 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherch Medicale) Methods for diagnosis and treatment of solar lentigo
WO2017162798A1 (en) 2016-03-23 2017-09-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Targeting the neuronal calcium sensor 1 for treating wolfram syndrome
WO2017173327A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 The Schepens Eye Research Institute, Inc. Endomucin inhibitor as an anti-angiogenic agent
WO2017182834A1 (en) 2016-04-19 2017-10-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method for treating resistant glioblastoma
WO2017202813A1 (en) 2016-05-24 2017-11-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of pulmonary bacterial infections
WO2017216352A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method of treatment of gut inflammatory diseases such as inflammatory bowel diseases (ibd) or irritable bowel syndrome (ibs)
CA3070146A1 (en) 2016-07-19 2018-01-25 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Oncolytic viruses targeting stat3
EP3490606B8 (en) 2016-07-26 2024-04-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antagonist of mineralocorticoid receptor for the treatment of osteoarthritis
EP3491387A1 (en) 2016-07-28 2019-06-05 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods of treatement of cancer disease by targetting tumor associated macrophage
EP3519582A1 (en) 2016-07-29 2019-08-07 Danmarks Tekniske Universitet Methods for decoupling cell growth from production of biochemicals and recombinant polypeptides
EP3493670A1 (en) 2016-08-05 2019-06-12 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods and compositions for the preservation of organs
EP3510407A1 (en) 2016-09-08 2019-07-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosing and treating nephrotic syndrome
EP3516062A1 (en) 2016-09-21 2019-07-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Myostatin irna compositions and methods of use thereof
EP3516071B1 (en) 2016-09-22 2021-02-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of lung cancer
WO2018069232A1 (en) 2016-10-10 2018-04-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the risk of having cardiac hypertrophy
WO2018078083A1 (en) 2016-10-28 2018-05-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method for treating multiple myeloma
EP3318277A1 (en) 2016-11-04 2018-05-09 Institut du Cerveau et de la Moelle Epiniere-ICM Inhibitors of glucosylceramide synthase for the treatment of motor neuron diseases
WO2018089772A1 (en) 2016-11-10 2018-05-17 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Inhibition of kmt2d for the treatment of cancer
EP3538140A1 (en) 2016-11-14 2019-09-18 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) Methods and pharmaceutical compositions for modulating stem cells proliferation or differentiation
US11147249B2 (en) 2016-12-08 2021-10-19 Alector Llc Siglec transgenic mice and methods of use thereof
WO2018115083A1 (en) 2016-12-21 2018-06-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method of treatment of gut diseases such as irritable bowel syndrome (ibs)
WO2018138106A1 (en) 2017-01-27 2018-08-02 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of heart failure
WO2018141753A1 (en) 2017-01-31 2018-08-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating squamous cell carcinomas
WO2018167283A1 (en) 2017-03-17 2018-09-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the diagnosis and treatment of pancreatic ductal adenocarcinoma associated neural remodeling
WO2018185516A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treating cardiovascular toxicity induced by anti-cancer therapy
US20200088732A1 (en) 2017-04-13 2020-03-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Mèdicale) Methods for the diagnosis and treatment of pancreatic ductal adenocarcinoma
EP3625258A1 (en) 2017-05-16 2020-03-25 Alector LLC Anti-siglec-5 antibodies and methods of use thereof
WO2018211018A1 (en) 2017-05-17 2018-11-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Flt3 inhibitors for improving pain treatments by opioids
EP3412288A1 (en) 2017-06-08 2018-12-12 Galderma Research & Development Vegf inhibitors for use for preventing and/or treating acne
EP3641739A1 (en) 2017-06-20 2020-04-29 Institut Curie Inhibitor of suv39h1 histone methyltransferase for use in cancer combination therapy
CN110997902B (zh) 2017-06-20 2021-11-30 居里研究所 Suv39h1缺陷的免疫细胞
WO2018234538A1 (en) 2017-06-23 2018-12-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) ANTAGONIST OR AGONIST OF HEPCIDINE FOR USE IN THE TREATMENT OF DYSREGULATION OF MO AND / OR MN METABOLISM
WO2019012030A1 (en) 2017-07-13 2019-01-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) DHODH INHIBITOR AND CHK1 INHIBITOR FOR THE TREATMENT OF CANCER
MY205541A (en) 2017-08-03 2024-10-25 Alector Llc Anti-cd33 antibodies and methods of use thereof
US20200237864A1 (en) 2017-10-10 2020-07-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating fibrotic interstitial lung disease
WO2019072885A1 (en) 2017-10-11 2019-04-18 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) MAGNETIC NANOPARTICLES FOR THE TREATMENT OF CANCER
JP2021500371A (ja) 2017-10-26 2021-01-07 レ ラボラトワール セルヴィエ チューブリンカルボキシペプチダーゼ関連疾患を処置するための方法及び医薬組成物
WO2019089755A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Western Oncolytics Ltd. Platform oncolytic vector for systemic delivery
US11618884B2 (en) 2017-11-14 2023-04-04 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Regulatory T cells genetically modified for the lymphotoxin alpha gene and uses thereof
EP3713603A1 (en) 2017-11-23 2020-09-30 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) New method for treating dengue virus infection
WO2019108835A1 (en) 2017-11-29 2019-06-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Delta-2-tubulin as a biomarker and therapeutic target for peripheral neuropathy
WO2019106126A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Mdm2 modulators for the diagnosis and treatment of liposarcoma
US11470827B2 (en) 2017-12-12 2022-10-18 Alector Llc Transgenic mice expressing human TREM proteins and methods of use thereof
WO2019121872A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the diagnosis and treatment of liver cancer
WO2019158512A1 (en) 2018-02-13 2019-08-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the prognosis and the treatment of glioblastoma
WO2019170727A1 (en) 2018-03-06 2019-09-12 Institut Curie Inhibitor of setdb1 histone methyltransferase for use in cancer combination therapy
WO2019185683A1 (en) 2018-03-28 2019-10-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treating cancer
WO2019199673A1 (en) 2018-04-09 2019-10-17 President And Fellows Of Harvard College Modulating nuclear receptors and methods of using same
WO2019207066A1 (en) 2018-04-26 2019-10-31 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for the treatment of sjögren's syndrome
WO2019211369A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treating cancer
WO2019211370A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treating cancer
CA3098623A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Extrahepatic delivery
JP7512207B2 (ja) 2018-05-24 2024-07-08 サーナオミクス インコーポレイテッド 核酸治療薬のための調節可能な共カップリングポリペプチドナノ粒子送達系の組成物および方法
WO2019234099A1 (en) 2018-06-06 2019-12-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for diagnosing, predicting the outcome and treating a patient suffering from heart failure with preserved ejection fraction
CN119841953A (zh) 2018-06-08 2025-04-18 艾利妥 抗siglec-7抗体及其使用方法
WO2019234221A1 (en) 2018-06-08 2019-12-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for stratification and treatment of a patient suffering from chronic lymphocytic leukemia
WO2020016160A1 (en) 2018-07-16 2020-01-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method to treat neurological diseases
WO2020016377A1 (en) 2018-07-19 2020-01-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combination for treating cancer
SG11202100555PA (en) 2018-07-27 2021-02-25 Alector Llc Anti-siglec-5 antibodies and methods of use thereof
AR119259A1 (es) 2018-08-31 2021-12-09 Alector Llc Anticuerpos anti-cd33 y métodos de uso de los mismos
CN112654397B (zh) 2018-09-05 2025-01-03 国家医疗保健研究所 用于治疗哮喘和过敏性疾病的方法和组合物
JP2022501388A (ja) 2018-09-19 2022-01-06 ラホヤ インスティチュート フォー イミュノロジー 関節リウマチにおけるｐｔｐｒｓ及びプロテオグリカン
CN112955462B (zh) 2018-10-18 2024-05-07 国家医疗保健研究所 用于治疗实体瘤的βIG-H3拮抗剂和免疫检查点抑制剂的组合
US20220000893A1 (en) 2018-10-31 2022-01-06 |Nserm (Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale) Method for treating t-helper type 2 mediated disease
EP3650040A1 (en) 2018-11-07 2020-05-13 Galderma Research & Development Vegf inhibitors for use for preventing and/or treating atopic dermatitis
EP4365289A3 (en) 2018-11-16 2024-07-10 Nitto Denko Corporation Rna interference delivery formulation and methods for malignant tumors
CN114144423B (zh) 2018-12-27 2025-04-04 圣诺制药公司 使用与免疫检查点抑制剂组合递送的siRNA沉默TGF-BETA 1和COX2以治疗癌症
BR112021015159A2 (pt) 2019-02-01 2021-09-28 Universität Basel Células imunológicas resistentes a inibidores de calcineurina para uso em terapia de transferência de células adotivas
US20220117911A1 (en) 2019-02-04 2022-04-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for modulating blood-brain barrier
WO2020169707A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Foxo1 inhibitor for use in the treatment of latent virus infection
WO2020178193A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method of treatment of sarcoidosis
US12215382B2 (en) 2019-03-01 2025-02-04 The General Hospital Corporation Liver protective MARC variants and uses thereof
WO2020183011A1 (en) 2019-03-14 2020-09-17 Institut Curie Htr1d inhibitors and uses thereof in the treatment of cancer
WO2020193740A1 (en) 2019-03-28 2020-10-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New strategy for treating pancreatic cancer
WO2020208082A1 (en) 2019-04-09 2020-10-15 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating cmv related diseases
CN114096313A (zh) 2019-04-19 2022-02-25 索邦大学 用于预防或治疗亨廷顿氏病的p16INK4a抑制剂
EP3969472A1 (en) 2019-05-16 2022-03-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method to treat type 2 inflammation or mast-cell dependent disease
WO2020236600A1 (en) 2019-05-17 2020-11-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oral delivery of oligonucleotides
WO2020249769A1 (en) 2019-06-14 2020-12-17 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for treating ocular diseases related to mitochondrial dna maintenance
WO2021001539A1 (en) 2019-07-04 2021-01-07 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New strategy to detect and treat eosinophilic fasciitis
US20220251567A1 (en) 2019-07-10 2022-08-11 Inserm (Institut National De La Santè Et De La Recherche Médicale) Methods for the treatment of epilepsy
JP7645553B2 (ja) 2019-08-14 2025-03-14 ヴァナリックス エスエー 硝子軟骨組織のｉｎ ｖｉｔｒｏでの産生のための方法
US20220340975A1 (en) 2019-09-05 2022-10-27 INSERM (Institute National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method of treatment and pronostic of acute myeloid leukemia
KR102100163B1 (ko) 2019-09-24 2020-04-13 테고사이언스 (주) 켈로이드 또는 비후성 반흔 예방 또는 치료용 조성물
WO2021058744A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Use of müllerian inhibiting substance inhibitors for treating cancer
WO2021092371A2 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Extrahepatic delivery
WO2021099394A1 (en) 2019-11-19 2021-05-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of cancer
WO2021105384A1 (en) 2019-11-27 2021-06-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Targeting the nls region of nupr1 protein to treat cancer
WO2021105391A1 (en) 2019-11-27 2021-06-03 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combination comprising nupr1 inhibitors to treat cancer
PH12022551482A1 (en) 2019-12-18 2023-11-29 Novartis Ag 3-(5-methoxy-1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
JP7846007B2 (ja) 2019-12-18 2026-04-14 ノバルティス アーゲー 異常ヘモグロビン症の治療用組成物及び方法
IL294611B1 (en) 2020-01-08 2026-05-01 Regeneron Pharma Treatment of fibrodysplasia ossificans progressive
US12178902B1 (en) 2020-01-12 2024-12-31 University Of Southern California Methods and compositions for fluid drainage by Piezo ion channel activation
US20210222128A1 (en) 2020-01-22 2021-07-22 Massachusetts Institute Of Technology Inducible tissue constructs and uses thereof
WO2021156329A1 (en) 2020-02-05 2021-08-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of treatment of cancer disease by targeting an epigenetic factor
WO2021173965A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Massachusetts Institute Of Technology Identification of variable influenza residues and uses thereof
WO2021224401A1 (en) 2020-05-07 2021-11-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and compositions for determining a reference range of β-galactose exposure platelet
JP7869149B2 (ja) 2020-05-19 2026-06-02 アンスティテュ・クリー サイトカイン放出症候群の診断及び処置の方法
US20230302031A1 (en) 2020-06-02 2023-09-28 Institut Gustave-Roussy Modulators Of Purinergic Receptors and Related Immune Checkpoint For Treating Acute Respiratory Distress Syndrome
EP3919062A1 (en) 2020-06-02 2021-12-08 Institut Gustave-Roussy Modulators of purinergic receptors and related immune checkpoint for treating acute respiratory distress syndrom
US20230235326A1 (en) 2020-06-05 2023-07-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for treating ocular diseases
CN116194474A (zh) 2020-06-09 2023-05-30 吉尼松公司 遗传性扩张型心肌病的治疗
CA3185499A1 (en) 2020-06-09 2021-12-16 Genethon Cilp-1 inhibitors for use in the treatment of dilated cardiomyopathies
WO2021255204A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New strategy for treating pancreatic cancer
WO2021260139A1 (en) 2020-06-25 2021-12-30 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of treatment and diagnostic of pathological conditions associated with intense stress
US20230266325A1 (en) 2020-06-30 2023-08-24 Lunglife Ai, Inc. Methods for detecting lung cancer
KR20230050336A (ko) 2020-07-10 2023-04-14 인스티튜트 내셔널 드 라 싼테 에 드 라 리셰르셰 메디칼르 (인 썸) 뇌전증을 치료하기 위한 방법과 조성물
US20230257745A1 (en) 2020-07-10 2023-08-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Circular siRNAs
WO2022018667A1 (en) 2020-07-24 2022-01-27 Pfizer Inc. Combination therapies using cdk2 and cdc25a inhibitors
JP7886313B2 (ja) 2020-07-30 2026-07-07 アンスティテュ・クリー Ｓｏｃｓ１に欠陥のある免疫細胞
US20230340149A1 (en) 2020-09-07 2023-10-26 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of treatment of inflammatory bowel diseases
JP2023552289A (ja) 2020-11-19 2023-12-15 カリヴィル イムノセラピューティクス， インコーポレイテッド 腫瘍微小環境リモデリングによる腫瘍溶解性免疫療法
WO2022147481A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Ansun Biopharma Inc. Combination therapy of an oncolytic virus delivering a foreign antigen and an engineered immune cell expressing a chimeric receptor targeting the foreign antigen
US20240343746A1 (en) 2020-12-31 2024-10-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Cyclic-disulfide modified phosphate based oligonucleotide prodrugs
US20240336914A1 (en) 2020-12-31 2024-10-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified nucleoside based oligonucleotide prodrugs
EP4291898A1 (en) 2021-02-12 2023-12-20 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Method for prognosis and treating a patient suffering from cancer
WO2022218998A1 (en) 2021-04-13 2022-10-20 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for treating hepatitis b and d virus infection
EP4322938A1 (en) 2021-04-14 2024-02-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) New method to improve nk cells cytotoxicity
US20240190993A1 (en) 2021-04-14 2024-06-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New method to improve the anti-tumoral activity of macrophages
EP4329786A4 (en) 2021-04-30 2024-12-11 KaliVir Immunotherapeutics, Inc. Oncolytic viruses for modified mhc expression
WO2022253910A1 (en) 2021-06-02 2022-12-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A new method to treat an inflammatory skin disease
US20250127809A1 (en) 2021-06-23 2025-04-24 Novartis Ag Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
WO2023283403A2 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Bis-rnai compounds for cns delivery
EP4381069A1 (en) 2021-08-02 2024-06-12 Universite De Montpellier Compositions and methods for treating cmt1a or cmt1e diseases with rnai molecules targeting pmp22
EP4380691A1 (en) 2021-08-06 2024-06-12 Institut Régional du Cancer de Montpellier (ICM) Methods for the treatment of cancer
US20240316061A1 (en) 2021-09-17 2024-09-26 Institut Curie Bet inhibitors for treating pab1 deficient cancer
EP4405680A1 (en) 2021-09-20 2024-07-31 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods for improving the efficacy of hdac inhibitor therapy and predicting the response to treatment with hdac inhibitor
US20240401146A1 (en) 2021-10-06 2024-12-05 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for predicting and improving the efficacy of mcl-1 inhibitor therapy
MX2024003887A (es) 2021-10-14 2024-07-09 Arsenal Biosciences Inc Células inmunitarias que tienen arnch coespresados y sistemas de compuerta lógica.
WO2023073099A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method to improve phagocytosis
WO2023078906A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating acute myeloid leukemia
EP4427044A1 (en) 2021-11-03 2024-09-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods and compositions for treating triple negative breast cancer (tnbc)
WO2023089032A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Institut Curie Methods for the treatment of hrd cancer and brca-associated cancer
WO2023089159A1 (en) 2021-11-22 2023-05-25 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) New strategy targeting stroma/tumor cell crosstalk to treat a cancer
WO2023099763A1 (en) 2021-12-03 2023-06-08 Institut Curie Sirt6 inhibitors for use in treating resistant hrd cancer
WO2023111173A1 (en) 2021-12-16 2023-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) An ezh2 degrader or inhibitor for use in the treatment of resistant acute myeloid leukemia
EP4522742A2 (en) 2022-05-13 2025-03-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Single-stranded loop oligonucleotides
EP4532772A1 (en) 2022-05-24 2025-04-09 Lunglife Ai, Inc. Methods for detecting circulating genetically abnormal cells
EP4547683A2 (en) 2022-06-30 2025-05-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Cyclic-disulfide modified phosphate based oligonucleotide prodrugs
WO2024017990A1 (en) 2022-07-21 2024-01-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating chronic pain disorders
WO2024028476A1 (en) 2022-08-05 2024-02-08 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the treatment of th2-mediated diseases
WO2024037910A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Syk inhibitors for use in the treatment of cancer
WO2024047110A1 (en) 2022-08-31 2024-03-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method to generate more efficient car-t cells
EP4584291A1 (en) 2022-09-08 2025-07-16 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to ltbp2 and uses thereof
CR20250095A (es) 2022-09-13 2025-09-01 Arsenal Biosciences Inc Células inmunitarias que coexpresan arnhc de tgfbr
WO2024056659A1 (en) 2022-09-13 2024-03-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method for treating prostate cancer and other epithelial cancers
JP2025532585A (ja) 2022-09-16 2025-10-01 アーセナル バイオサイエンシズ インコーポレイテッド 組み合わせ遺伝子摂動を有する免疫細胞
JP2025532985A (ja) 2022-09-30 2025-10-03 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 修飾二本鎖ｒｎａ剤
WO2024074713A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method to generate improving car-t cells
WO2024161015A1 (en) 2023-02-03 2024-08-08 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method to treat age-related diseases
JP2026506602A (ja) 2023-02-13 2026-02-25 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 鉄過剰関連疾患の処置方法
TW202442689A (zh) 2023-03-03 2024-11-01 美商亞森諾生物科學公司 靶向ｐｓｍａ及ｃａ９之系統
CN120858176A (zh) 2023-03-07 2025-10-28 居里研究所 Brca相关癌症中的ung/udg抑制
WO2024184479A1 (en) 2023-03-08 2024-09-12 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the treatment of food allergy
WO2024194402A1 (en) 2023-03-21 2024-09-26 Institut Curie Farnesyl transferase inhibitor for use in methods for the treatment of hrd cancer
EP4683630A1 (en) 2023-03-21 2026-01-28 Institut Curie Vps4b inhibitor for use in methods for the treatment of hrd cancer
WO2024194673A1 (en) 2023-03-21 2024-09-26 Institut Curie Methods for the treatment of dedifferentiated liposarcoma
JP2026514045A (ja) 2023-04-12 2026-05-01 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 二本鎖ｒｎａ剤の肝外デリバリー
EP4702132A1 (en) 2023-04-26 2026-03-04 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method for modulating the differentiation and functions of human dendritic cells
WO2024238385A2 (en) 2023-05-12 2024-11-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Single-stranded loop oligonucleotides
WO2024236131A1 (en) 2023-05-17 2024-11-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Stratificate and method to treat a patient suffering from a cancer
EP4713003A1 (en) 2023-05-17 2026-03-25 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Lipc variant in the treatment of hypercholesterolemia and atherosclerotic cardiovascular disease
EP4719423A1 (en) 2023-05-30 2026-04-08 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method and pharmaceutical composition for use in the treatment of focal cortical dysplasia
EP4727570A1 (en) 2023-06-13 2026-04-22 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Use of a cxcl 10 inhibitor for the treatment of transplant vasculopathy
WO2024256635A1 (en) 2023-06-15 2024-12-19 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Dpm1 inhibitor for treating cancer
EP4735019A1 (en) 2023-06-30 2026-05-06 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods of treatment of metabolic disorders
WO2025008406A1 (en) 2023-07-04 2025-01-09 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of cancer
WO2025021839A1 (en) 2023-07-25 2025-01-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method to treat metabolic disorders
EP4757808A1 (en) 2023-08-08 2026-06-17 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the treatment of type 2-mediated diseases
WO2025052001A1 (en) 2023-09-07 2025-03-13 Mnemo Therapeutics Methods and compositions for improving immune response
EP4520334A1 (en) 2023-09-07 2025-03-12 Mnemo Therapeutics Methods and compositions for improving immune response
WO2025068180A1 (en) 2023-09-25 2025-04-03 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods of treatment of cancer by targetting cancer - associated fibroblasts
WO2025068157A1 (en) 2023-09-25 2025-04-03 Stromacare COMBINATION OF A βIG-H3 ANTAGONIST AND A PDFG-AA ANTAGONIST FOR THE TREATMENT OF CANCER
WO2025068393A1 (en) 2023-09-27 2025-04-03 Institut Curie Methods for the treatment of fibrotic related diseases
WO2025068418A1 (en) 2023-09-27 2025-04-03 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Inhibitor of the transcription factor ap-1 for use in the treatment of age-related diseases
EP4788839A1 (en) 2023-10-03 2026-08-12 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods of prognosis and treatment of patients suffering from melanoma
WO2025078851A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Methods of treating cognitive deficit
WO2025082944A1 (en) 2023-10-16 2025-04-24 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Inhibitor of the low-density lipoprotein receptor family (ldl-r family) and/or apolipoprotein e (apoe) for use in the treatment of crimean-congo hemorrhagic fever virus (cchfv) infection
WO2025114512A1 (en) 2023-11-29 2025-06-05 Cnrs Dsi Therapeutic use of surf2 modulators
WO2025114453A1 (en) 2023-11-30 2025-06-05 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method of prevention and/or treatment of nairoviridae family infections
WO2025162980A1 (en) 2024-01-30 2025-08-07 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the treatment of breast cancer using a jnk-1 inhibitor
WO2025163107A1 (en) 2024-02-01 2025-08-07 Institut Gustave Roussy Immune cells defective for znf217 and uses thereof
WO2025176679A1 (en) 2024-02-19 2025-08-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Inhibitor of the flavin-containing monooxygenase (fmo) for use in the treatment of cancer
WO2025176777A1 (en) 2024-02-20 2025-08-28 Institut Curie Dut inhibition in homologous recombination deficiency cancer
WO2025191018A1 (en) 2024-03-13 2025-09-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Mrgpre binding agent for use in the treatment of inflammatory and pain disorders
TW202544044A (zh) 2024-03-20 2025-11-16 美商亞森諾生物科學公司 靶向ｓｌｃ３４ａ２及ｔｍｐｒｓｓ４之系統及其使用方法
WO2025224297A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antibodies having specificity to tgfbi and uses thereof
WO2025237990A1 (en) 2024-05-14 2025-11-20 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of pulmonary fibrosis
WO2026002934A1 (en) 2024-06-25 2026-01-02 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Combination of a slc16a1 inhibitor and a smad3 inhibitor for treating cancer
WO2026003239A2 (en) 2024-06-28 2026-01-02 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method to improve macrophages functions
WO2026013153A1 (en) 2024-07-10 2026-01-15 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods of prognosis and treatment of patients suffering from myc-high tumors
EP4681722A1 (en) 2024-07-18 2026-01-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods for the treatment of inflammatory skin diseases with urocanase inhibitor
WO2026052851A2 (en) 2024-09-09 2026-03-12 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Inhibitor of ciliogenesis for use in a method of preventing therapeutic resistance in cancer
WO2026062222A1 (en) 2024-09-20 2026-03-26 Institut Curie Novel protein isoforms and uses
WO2026125263A1 (en) 2024-12-09 2026-06-18 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Inhibitor of the heterochromatin protein 1 (hp1) for modulating th cells
WO2026136848A2 (en) 2024-12-20 2026-06-25 Juno Therapeutics, Inc. Cd70-targeted cars and engineered cells comprising same and related methods
WO2026151965A1 (en) 2025-01-10 2026-07-16 Arsenal Biosciences, Inc. Shrna targeting fas and tgfbrii genes

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9517779D0 (en) * 1995-08-31 1995-11-01 Roslin Inst Edinburgh Biological manipulation
DE19631919C2 (de) * 1996-08-07 1998-07-16 Deutsches Krebsforsch Anti-Sinn-RNA mit Sekundärstruktur
US6506559B1 (en) * 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
CN101818145A (zh) * 1998-03-20 2010-09-01 联邦科学和工业研究组织 控制基因表达
GB9827152D0 (en) * 1998-07-03 1999-02-03 Devgen Nv Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition
AU776150B2 (en) * 1999-01-28 2004-08-26 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for (in vivo) and (in vitro) attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) * 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
IL145778A0 (en) * 1999-04-21 2002-07-25 American Home Prod Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
GB9927444D0 (en) * 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression

Also Published As

Publication number Publication date
DK1230375T3 (da) 2005-10-31
DE1230375T1 (de) 2003-01-09
US20080242628A1 (en) 2008-10-02
ATE299185T1 (de) 2005-07-15
EP1230375B1 (en) 2005-07-06
EP1230375B2 (en) 2016-10-26
DE60021199T3 (de) 2017-03-02
AU1406501A (en) 2001-05-30
IL149666A (en) 2015-05-31
CA2391622C (en) 2016-01-12
IL149666A0 (en) 2002-11-10
PT1230375E (pt) 2005-11-30
US20180355352A1 (en) 2018-12-13
MXPA02005013A (es) 2004-08-12
ES2246905T3 (es) 2006-03-01
JP2015109847A (ja) 2015-06-18
US20150047064A1 (en) 2015-02-12
EP1230375A1 (en) 2002-08-14
JP2017195886A (ja) 2017-11-02
AU774285B2 (en) 2004-06-24
NO335429B1 (no) 2014-12-15
NO20022359D0 (no) 2002-05-16
HK1050378B (en) 2006-04-28
WO2001036646A1 (en) 2001-05-25
JP2012085641A (ja) 2012-05-10
US20030027783A1 (en) 2003-02-06
US20080221054A1 (en) 2008-09-11
JP2003514533A (ja) 2003-04-22
PL356698A1 (pl) 2004-06-28
ZA200203816B (en) 2003-01-02
US20170096667A1 (en) 2017-04-06
DE60021199T2 (de) 2006-04-20
CA2391622A1 (en) 2001-05-25
NO20022359L (no) 2002-07-18
HK1050378A1 (en) 2003-06-20
DE60021199D1 (de) 2005-08-11
GB9927444D0 (en) 2000-01-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1230375B1 (en) Inhibiting gene expression with dsrna
JP5969889B2 (ja) 二本鎖ｒｎａによる遺伝子阻害
CN102321626B (zh) 用于抑制蛋白激酶3表达的方法
US20040086911A1 (en) Inhibition of gene expression in vertebrates using double-stranded RNA (RNAi)
RU2835497C1 (ru) ЛИНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ МЫШЕЙ ДЛЯ МОДЕЛИРОВАНИЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ, sgPHK И КОМБИНАЦИЯ crRNA/tracrRNA, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ В СПОСОБЕ, И НАБОР ПРАЙМЕРОВ

Legal Events

Date Code Title Description
VDSO Invalidation of derivated patent or utility model

Ref document number: 388605

Country of ref document: PL

Kind code of ref document: A1