KR101418240B1 - 백신 - Google Patents

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필리페 빈센트 헤르만트
얀 풀맨
마르셀 폴레뜨 반 메첼렌
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Abstract

본 발명은 폐렴구균 캡슐 당류 컨주게이트 백신의 분야에 속한다. 구체적으로, 상이한 혈청형들로부터의 2종 이상의 캡슐 당류 컨주게이트를 포함하는 다가 폐렴구균 백신을 포함하는 유아용 면역원성 조성물이 제공되는데, 여기서 본 발명의 조성물은 혈청형 22F 당류 컨주게이트를 포함한다. 이와 같은 백신은 유아 개체군에 사용되어 고령자에서 폐렴구균성 질환의 발병률, 예컨대, COPD 및/또는 IPD의 악화를 감소시킬 수 있다.

Description

백신{VACCINE}
발명의 분야
본 발명은 개선된 폐렴구균(Streptotococcus pneumoniae) 백신과 관련이 있다.
발명의 배경
2세 미만의 유아는 대부분의 다당류 백신에 대한 면역 반응을 나타내지 못하여, 단백질 운반체(carrier)에 대한 화학적 컨쥬게이션에 의해 다당류에 대한 면역원성이 부여되도록 할 필요가 있었다. 다당체, T-비의존성 항원을 단백질, T-의존성 항원에 결합시키면 다당체에, 아형 스위칭(isotype switching), 친화도 성숙 및 기억 유도를 포함하는 T 의존성에 관한 특성이 부여된다.
그러나, 다당체-단백질 컨쥬게이트, 또는 다가 백신을 만들기 위한 다당체-단백질 컨쥬게이트 혼합물의 반복 투여와 관련된 논쟁거리가 있을 수 있다. 예를 들면, 단백질 운반체로서 파상풍 독소(TT)를 사용한 헤모필루스 인플루엔자 b형(헤모필루스 인플루엔자 type b) 다당체(PRP) 백신이, 표준 유아 스케쥴에 따라(유리) TT 및 폐렴구균 다당체-TT 컨쥬게이트 백신과 함께 동시 면역화로 용량 범위 내에서 시험되었다. 폐렴구균 백신의 용량이 증가함에 따라, Hib 컨쥬게이트 백신의 PRP 다당체 부분에 대한 면역 반응이 감소하였는데, 이는 추정컨대, 동일한 운반체 단백질의 사용을 통한, 다당류의 면역 간섭을 의미하는 것이다(참조: Dagan et al., Infect I㎜un.(1998); 66 : 2093-2098).
단백질 자체에 대한 체액성 면역 반응에 대한 운반체 단백질 용량의 영향은 또한 다방면에 걸쳐 나타나는 것으로 입증되었다. 사람 유아에서, 4가 파상풍 독소 컨쥬게이트의 용량을 증가시키는 것은 결과적으로 파상풍 독소 운반체에 대한 반응의 증가를 초래한다는 것이 보고되었다(Dagan et al. 전게서). 복합 백신(Combination vaccines)의 여러 영향에 대한 전통적인 분석은 운반체 유도성 에피토프 억제로서 설명되는데, 이는 완전히 이해된 것은 아니지만, 과량의 운반체 단백질로 인한 것으로 여겨졌다(Fattom, Vaccine 17 : 126(1999)). 이는, 운반체 단백질에 대한 B 세포, 및 다당류에 대한 B 세포에 의한, Th-세포에 대한 경쟁반응을 초래하는 것으로 생각된다. 단체 단백질에 대한 B 세포가 우세한 경우, 다당류에 특이적인 B 세포를 위한 필수적인 도움을 제공할 수 있는 Th 세포가 충분하지 않을 수 있다. 그러나, 일부 경우에 있어서, 운반체 단백질의 총량이 면역 반응을 증가시키고, 다른 경우에 있어서, 면역 반응을 감소시킴에 따라, 관찰된 면역학적 효과는 일치하지 아니하였다.
그러므로, 다당체 컨쥬게이트를 단일의, 효험이 있는, 백신 제형으로 배합하는데는 기술적인 곤란성이 존재한다.
폐렴 구균은 상당한 질병률(morbidity)과 사망률(mortality)에(특히 어린 아이와 노인에 있어서) 관여하는 그람-양성 세균으로서, 폐렴, 균혈증 및 수막염과 같은 침습성 질환, 및 급성 중이염과 같은, 전이증식(colonisation)과 관련된 질환을 일으킨다. 60세 이상의 사람의 경우, 미국에서의 폐렴구균성 폐렴의 비는 100,000 명 당 3 내지 8명으로 추정된다. 대상 환자의 20%의 경우, 항생제를 처리하더라도 30%에 가까운 사망률을 수반하면서, 균혈증, 및 수막염과 같은 다른 징후를 일으킨다.
폐렴구균은 혈청형 특이성을 부여하는 화학적으로 결합된 다당류로 캡슐화되어 있다. 90종의 폐렴구균 혈청형이 공지되어 있고, 캡슐은 폐렴구균에 대한 주요 병원성(virulence) 결정인자인데, 그 이유는 캡슐이 보체로부터 세균의 내부 표면을 보호할 뿐만 아니라, 그 자체로 면역원성이 빈약하기 때문이다. 다당류는 T-비의존성 항원이고, T-세포와 상호작용하는 MHC 분자 상에서 가공되거나 제시될 수 없다. 그러나, 이들은 B 세포 상의 표면 수용체의 교차-결합과 연관된 대안적인 메카니즘을 통해 면역계를 자극할 수 있다.
몇 가지 실험에서 침습성 폐렴구균 질환에 대한 예방이 캡슐에 특이적인 항체와 가장 강력하게 상호관련되어 있으며, 상기 예방은 혈청형 특이적임이 밝혀졌다.
폐렴 구균은 영아 및 어린 아이에서의 침습성 세균 질환 및 중이염의 가장 보편적인 원인이다. 또한, 노인은 폐렴구균 백신에 대해 빈약한 반응을 나타내며[참조: Roghmannet al., (1987), J. Gerontol. 42:265-270], 따라서 상기 노인 개체군에서 세균성 폐렴의 발병률은 증가된다[참조: Verghese and Berk, (1983) Medicine(Baltimore) 62:271-285].
폐렴구균에 의해 초래되는 주요한 임상 징후는 널리 인지되어 있고 모든 표준 의학 교과서에 논의되어 있다(Fedson DS, Muscher DM In: Plotkin SA, Orenstein WA, editors Vaccines 4rth edition. Philadelphia WB Saunders Co, 2004a 529-588). 예를 들어, 침습성 폐렴구균 질환(invasive pneumococcal disease, IPD)은 혈액 또는 또 다른 정상적으로 멸균된 부위로부터 동정된 폐렴구균에 의한 임의의 감염으로 정의된다(Musher DM Streptococcus pneumoniae. In Mandell GL, Bennett JE, Dolin R(eds) Principles and Practice of Infectious diseases (5th ed). New York, Churchill Livingstone, 2001, p2128-2147). 만성 폐쇄성 폐질환(Chronic obstructive pulmonary disease, COPD)은 종종 동시에 존재하는 몇몇 확대성 병태로 인지된다(기도 폐쇄, 만성 기관지염, 세기관지염 또는 소기도질환 및 기종). 환자들은 일반적으로 증가된 무호흡과 연관된 이들의 악화된 병태로 고통받으며, 종종 점액 또는 화농성 객담을 생산할 수 있는 기침이 증가된다(Wilson, Eur Respir J 200117:995-1007). COPD는 만성 기관지염 및/또는 기종을 앓고 있는 환자에서 비가역적 또는 부분적으로 가역적인 기도 폐쇄에 의해 생리학적으로 정의된다(Standards for the diagnosis and care of patients with chronic obstructive pulmonary disease. American Thoracic Society. Am J Respir Crit Care Med. 1995 Nov;152(5 Pt 2):S77-121). COPD의 악화는 종종 세균(예를 들어, 폐렴구균) 감염에 의해 초래된다(Sethi S, Murphy TF. Bacterial infection in chronic obstructive pulmonary disease in 2000: a state-of-the-art review. Clin Microbiol Rev. 2001 Apr;14(2):336-63).
따라서 본 발명의 목적은 다혈청형 폐렴구균 다당류 컨쥬게이트 백신의 개선된 제형을 개발하는데 있다.
도면의 간단한 설명
도 1은 늙은 붉은털원숭이(Rhesus monkeys)에서의 11가 컨주게이트 면역원성을 보여주는 막대 그래프이다. 밝은 막대는 인산알루미늄 애주번트 중의 11가 컨주게이트로 2회 접종후의 GMC를 나타낸다. 어두운 막대는 애주번트 C 중의 11가 컨주게이트로 2회 접종후의 GMC를 나타낸다.
도 2는 애주번트 C 또는 인산알루미늄 애주번트 중의 11가 컨주게이트로 접종 후 PS3에 대한 메모리 B 세포를 보여주는 막대 그래프이다.
도 3은 Balb/C 생쥐에서의 4가 단순(plain) 다당류 및 4가 dPly 컨주게이트에 대한 항 다당류 19F 면역원성을 보여주는 막대 그래프이다.
도 4는 Balb/C 생쥐에서의 4가 단순 다당류 및 4가 PhtD 컨주게이트에 대한 항 다당류 22F 면역원성을 보여주는 막대 그래프이다.
도 5는 Balb/c 생쥐에서의 항-22F IgG 반응을 보여주는 막대 그래프이다.
도 6은 Balb/c 생쥐에서의 항-22F 옵소노-식세포작용(opsono-phagocytosis) 역가를 보여주는 막대 그래프이다.
도 7은 상이한 애주번트들로 제형화된 13가 컨주게이트 백신으로 예방접종(i㎜unisation) 후 어린 C57B1 생쥐에서 유도된 IgG 반응을 비교한 막대 그래프이다.
도 8은 원숭이 폐렴 모델에서 상이한 백신 조합물의 예방 효능을 보여주는 막대 그래프이다.
도 9는 22F-PhtD 또는 22F-AH-PhtD 컨주게이트로 예방접종 후 Balb/c 생쥐에서 항 PhtD IgG 반응을 보여주는 막대 그래프이다.
도 10은 22F-PhtD 또는 22F-AH-PhtD로 예방접종 후 생쥐에서 4형 폐렴구균 공격에 대한 보호를 보여준다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 상이한 혈청형으로부터의 2종 이상(예를 들어, 7종, 8종, 9종, 10종, 11종, 12종, 13종, 14종, 15종)의 캡슐 당류(capsular saccharides) 컨주게이트(conjugates)를 포함하는 다가 폐렴 구균 백신을 포함하는 유아용 면역원원 조성물을 제공하는데, 여기서 상기 조성물은 22F 당류 컨주게이트를 포함한다.
폐렴구균 혈청형 22F에 의한 유년기 감염이 매우 흔한 것은 아니지만, 본 발명자들은 유년기 폐렴구균 백신에서 22F의 존재가 개체군에서 대량의 면역성을 유도하는데 기여할 것으로 믿고 있는데, 예컨대, 이 혈청형에 의해 유발되는 심각한 노년기 질환(예컨대, 폐렴 및/또는 침습성 폐렴구균 질환(IPD) 및/또는 만성폐쇄성폐질환(COPD)의 악화)의 발병이 예방되거나 극심도가 감소될 수 있다. 본 발명의 목적과 관련하여, "COPD의 악화에 대한 인간 숙주 면역화" 또는 "COPD의 악화의 치료 또는 예방" 또는 "COPD 악화의 극심도의 감소"는 COPD 악화의 빈도 또는 비율에 있어서의 감소(예를 들어, 0.1, 0.5, 1, 2, 5, 10, 20% 또는 그 이상의 비율로 감소) 또는, 예를 들어, 본 발명의 조성물 또는 백신으로 면역화된 환자군 내부에서, 위에 정의된 바와 같은 COPD 악화의 극심도에 있어서의 감소를 의미한다.
따라서, 한 구체예에서, 고령의 인간 숙주가 폐렴 구균 혈청형 22F 감염에 의해 초래된 폐렴구균성 질환에 걸리는 것을 예방하는 방법(또는 이의 극심도를 감소시키는 방법)이 제공되는데, 상기 방법은 면역보호적 용량(i㎜unoprotective dose)의 본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신의 면역을 유아 인간 숙주(또는 유아 인간 개체군)에 투여하는 단계를 포함한다. 고령의 인간 환자에서 혈청형 22F 폐렴 구균 감염에 의해 유발된 질환을 예방하거나 상기 질환의 극심도를 감소시키기 위한 약제(medicament) 제조시의 본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신의 용도가 제공되는데, 여기서 면역보호적 용량의 상기 조성물 또는 백신이 유아 인간(또는 유아 개체군)에 투여된다.
일 구체예에서, 면역원성 조성물은 혈청형 19A 및 19F으로부터의 폐렴 구균 캡슐 당류 컨주게이트를 포함하며, 선택적으로, 여기서 19A는 제 1 세균 톡소이드(bacterial toxoid)에 컨주게이트되며 19F는 제 2 세균 톡소이드에 컨주게이션된다.
용어, 캡슐 당류는 상기 캡슐 다당류로부터 유래될 수 있는 캡슐 다당류 및 올리고당류를 포함한다. 올리고당류는 4개 이상의 당 잔기를 함유한다.
용어, 세균 톡소이드는 유전자 돌연변이, 화학적 처치 또는 컨주게이션 중 어느 하나에 의해 불활성화된 세균 독소를 포함한다. 적당한 세균 톡소이드는 파상풍 톡소이드, 디프테리아 톡소이드, 백일해 톡소이드, 세균 세포용해소(bacterial cytolysins) 또는 뉴모리신을 포함한다. 뉴모리신의 독성을 저하시키는 뉴모리신(Ply)의 돌연변이가 소개되었다(국제공개공보 WO 90/06951호, WO 99/03884호). 유사하게, 디프테리아 독소의 독성을 저하시키는 디프테리아 독소의 유전자 돌연변이가 공지되어 있다(하기 참조). 디프테리아 독소의 유전자적으로 무독화된(detoxified) 유사체는 CRM197과 미국특허 US 4,709,017호, US 5,843,711호, US 5,601,827호, 및 US 5,917,017호에 소개된 다른 돌연변이체를 포함한다. CRM197은 디프테리아 독소의 비독성 형태이나 디프테리아 독소와 면역학적으로 구별불가능하다. CRM197은 독소생성 카린 파지(caryne phage) b에 대한 니트로소구아니딘 돌연변이유발에 의해 생성된 독소무생성 파지 β197tox에 의해 감염된 코리네박테리움 디프테리아(C. diphtheriae)에 의해 생산된다(Uchida et al Nature New Biology(1971) 233; 8-11). CRM197 단백질은 디프테리아 독소와 동일한 분자량을 가지나 구조 유전자에서 단일 염기 변화에 의해 디프테리아 독소와 달라지게 된다. 이는 위치 52에서 글리신의 글루타민으로의 아미노산 변화를 유도하여, 단편 A가 NAD에 결합할 수 없게 만들고 그에 따라 무독성이 되게 한다(Pappenheimer 1977, Ann Rev, Biochem. 46; 69-94, Rappuoli Applied and Environmental Microbiology Sept 1983 p560-564).
제 1 및 제 2 세균 톡소이드는 동일 또는 상이할 수 있다. 제 1 및 제 2 세균 톡소이드가 상이한 경우, 이는 상기 톡소이드가 상이한 아미노산 서열을 갖는다는 것을 의미한다.
예를 들어, 19A와 19F는, 각각, 파상풍 톡소이드와 파상풍 톡소이드; 디프테리아 톡소이드와 디프테리아 톡소이드; Crm197과 CRM197, 뉴모리신과 뉴모리신, 파상풍 톡소이드와 디프테리아 톡소이드; 파상풍 톡소이드와 CRM197; 파상풍 톡소이드와 뉴모리신; 디프테리아 톡소이드와 파상풍 톡소이드; 디프테리아 톡소이드와 CRM197, 디프테리아 톡소이드와 뉴모리신; CRM197과 파상풍 톡소이드, CRM197과 디프테리아 톡소이드; CRM197과 뉴모리신; 뉴모리신과 파상풍 톡소이드; 뉴모리신과 디프테리아 톡소이드; 또는 뉴모리신과 CRM197에 컨주게이트될 수 있다.
한 구체예에서, 22F(및 선택적으로 19A와 19F)의 폐렴구균(S. pneumoniae) 당류 컨주게이트 이외에, 면역원성 조성물은 추가로 폐렴구균 캡슐 당류 4, 6B, 9V, 14, 18C 및 23F의 컨주게이트를 포함한다.
한 구체예에서, 22F(및 선택적으로 19A와 19F)의 폐렴구균(S. pneumoniae) 당류 컨주게이트 이외에, 면역원성 조성물은 추가로 폐렴구균 캡슐 당류 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C 및 23F의 컨주게이트를 포함한다.
한 구체예에서, 22F(및 선택적으로 19A와 19F)의 폐렴구균(S. pneumoniae) 당류 컨주게이트 이외에, 면역원성 조성물은 추가로 폐렴구균 캡슐 당류 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 22F 및 23F의 컨주게이트를 포함한다.
한 구체예에서, 22F(및 선택적으로 19A와 19F)의 폐렴구균(S. pneumoniae) 당류 컨주게이트 이외에, 면역원성 조성물은 추가로 폐렴구균 캡슐 당류 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 22F 및 23F의 컨주게이트를 포함한다.
한 구체예에서, 22F(및 선택적으로 19A와 19F)의 폐렴구균(S. pneumoniae) 당류 컨주게이트 이외에, 면역원성 조성물은 추가로 폐렴구균 캡슐 당류 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 22F 및 23F의 컨주게이트를 포함한다.
전형적으로, 본 발명의 폐렴 구균 백신은 캡슐 당류 항원(바람직하게는 컨주게이션된 항원)을 포함하는데, 여기서 상기 당류는 10종 이상의 폐렴구균 혈청형으로부터 유래된다. 폐렴구균 캡슐 당류의 갯수는 10종의 상이한 혈청형(또는 'V', 가) 내지 23개의 상이한 혈청형(23V)의 범위내일 수 있다. 일 구체예에서, 10종, 11종, 12종, 13종, 14종 또는 15종의 상이한 혈청형이 존재한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 백신은 컨주게이션된 폐렴구균 당류 및 비컨주게이션된 폐렴구균 당류를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 당류 혈청형의 총 갯수는 23이하이다. 예를 들어, 본 발명은 10종의 컨주게이션된 혈청형 및 13개의 비컨쥬게이션된 당류를 포함할 수 있다. 유사한 방식으로, 백신은 11종, 12종, 13종, 14종 또는 16종의 컨주게이션된 당류 및, 각각, 12종, 11종, 10종, 9종 또는 7종의 비컨주게이션된 당류를 포함할 수 있다.
일 구체예에서, 본 발명의 다가 폐렴구균 백신은 하기 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 1OA, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F 및 33F 중에서 선택될 것이지만, 1 또는 2종의 혈청형이, 백신을 투여받을 수령자의 연령 및 백신이 투여될 신체상 위치(geographical position)에 따라 대체될 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, 10가 백신은 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F 중으로부터의 다당류를 포함할 수 있다. 11가 백신은 혈청형 3으로부터의 당류를 포함할 수도 있다. 12 또는 13가 소아(유아) 백신은 또한 혈청형 6A 및 19A, 또는 6A 및 22F, 또는 19A 및 22F, 또는 6A 및 15B, 또는 19A 및 15B, 또는 22F 및 15B로 보충된 10 또는 11가 제형을 포함할 수 있고 한편, 13가 고령자용 백신은 혈청형 19A 및 22F, 8 및 12F, 또는, 8 및 15B, 또는 8 및 19A, 또는 8 및 22F, 또는 12F 및 15B, 또는 12F 및 19A, 또는 12F 및 22F, 또는 15B 및 19A, 또는 15B 및 22F로 보충된 11가 제형을 포함할 수 있다. 14가 소아 백신은 혈청형 3, 6A, 19A 및 22F; 혈청형 6A, 8, 19A 및 22F; 혈청형 6A, 12F, 19A 및 22F; 혈청형 6A, 15B, 19A 및 22F' 혈청형 3, 8, 19A 및 22F; 혈청형 3, 12F, 19A 및 22F' 혈청형 3, 15B, 19A 및 22F; 혈청형 3, 6A, 8 및 22F; 혈청형 3, 6A, 12F 및 22F; 또는 혈청형 3, 6A, 15B 및 22F로 보충된 위에 기재한 10가 제형을 포함할 수 있다.
일 구체예에서 본 발명의 조성물은 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F(바람직하게는 컨주게이트됨)에서 유래한 캡슐 당류를 포함한다. 본 발명의 추가의 구체예에서, 11종 이상의 당류 항원(바람직하게는 컨주게이트됨)가 포함되는데, 예를 들어, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F에서 유래한 캡슐 당류가 포함된다. 본 발명의 추가 구체예에서, 적어도 12 또는 13종의 당류 항원이 포함되는데, 예를 들어, 백신은, 비록 추가의 당류 항원, 예를 들어, 23가 항원(예컨대, 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F 및 33F)이 또한 본 발명에서 고려될 수 있지만, 혈청형 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F 및 23F 또는 혈청형에서 유래한 캡슐 당류 또는 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F 및 23F에서 유래한 캡슐 당류를 포함할 수 있다.
본 발명의 백신은 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae)(예를 들어, 유럽특허 EP 0594610호 참조)로부터의 단백질 D(PD)를 포함할 수 있다. 헤모필루스 인플루엔자는 중이염의 중요 원인 개체이며, 본 발명자들은 이 단백질을 폐렴 구균 백신에 포함시키는 것이 헤모필루스 인플루엔자와 관련된 중이염(참고문헌: POET 공개)에 대하여 일정 수준의 보호를 제공할 것임을 확인하였다. 일 구체 예에서, 백신 조성물은 단백질 D를 포함한다. 한 양상에서, PD는 하나 이상의 당류에 대한 운반체 단백질로서 존재한다. 또 다른 양상에서, 단백질 D는 유리 단백질로서 백신 조성물 내에 존재할 수 있다. 추가 양상에서, 단백질 D는 운반체 단백질 및 유리 단백질 둘 모두로서 존재한다. 단백질 D는 전장 길이 단백질 또는 단편(국제공개공보 WO0056360호)으로서 사용될 수 있다. 추가 양상에서, 단백질 D는 대부분의 당류를 위한 운반체 단백질로 존재할 수 있는데, 예를 들어 6종, 7종, 8종, 9종 또는 그 이상의 당류가 단백질 D에 컨주게이션될 수 있다. 이 양상에서, 단백질 D는 또한 유리 단백질로 존재할 수 있다.
본 발명의 백신은 1종, 2종 또는 그 이상의 상이한 유형의 운반체 단백질을 포함한다. 각 유형의 운반체 단백질은 하나 이상의 당류를 위한 운반체로서 역할할 수 있는데, 상기 당류는 동일하거나 상이할 수 있다. 예를 들어, 혈청형 3과 4는 동일한 운반체 단백질, 운반체 단백질의 동일한 분자 또는 동일한 운반체 단백질의 상이한 분자에 컨주게이션될 수 있다. 일 구체예에서, 2종 이상의 상이한 당류는 동일한 운반체 단백질, 운반체 단백질의 동일한 분자 또는 동일한 운반체 단백질의 상이한 분자에 컨주게이션될 수 있다.
본 발명의 면역원성 조성물에 존재하는 임의의 폐렴 구균 캡슐 당류는 TT, DT, CRM197, TT의 단편 C, PhtD, PhtDE 융합체(특히, 국제공개공보 WO 01/98334호 및 WO 03/54007호에 소개된 융합체), 무독화된(detoxified) 뉴모리신 및 단백질 D로 구성된 군에서 독립적으로 선택된 운반체 단백질에 컨주게이션될 수 있다. 본 발명의 컨주게이트에 사용될 수 있는 보다 완벽한 단백질 운반체의 목록은 하기에 제시된다.
본 발명의 면역원성 조성물에 존재하는 컨주게이트내의 하나 이상의 폐렴구균 캡슐 당류에 컨주게이션된 운반체 단백질은 선택적으로 폴리히스티딘 트리아드 패밀리(polyhistidine triad family, Pht) 단백질의 구성원, 이의 단편 또는 융합 단백질이다. PhtA, PhtB, PhtD 또는 PhtE 단백질은 국제공개공보 WO 00/37105호 또는 WO 00/39299호에 소개된 서열(예를 들어, PhtD의 경우, 국제공개공보 WO 00/37105호의 서열번호 4의 아미노산 서열 1-838 또는 21-838)과 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 지닐 수 있다. 예를 들어, 융합 단백질은 전장길이 또는 단편인 2, 3 또는 4개의 PhtA, PhtB, PhtD, PhtE로 구성된다. 융합 단백질의 예는 PhWB, PhtA/D, PhWE, PhtB/A, PhtB/D, PhtB/E PhtD/A. PhtD/B, PhtD/E, PhtE/A, PhtE/B 및 PhtE/D인데, 여기서 상기 단백질은 N-말단에서 제일처음 언급된 것과 연결된다(예를 들어, 국제공개공보 WO01/98334호를 참조하라).
Pht 단백질의 단편이 사용되는 경우(별개로 또는 융합 단백질의 일부로서), 각각의 단편은 선택적으로 그러한 폴리펩티드의 하나 이상의 히스티딘 트라이어드 모티프(들) 및/또는 꼬아진 코일 지역(coiled coil regions)을 포함한다. 히스티딘 트라이어드 모티프는 서열 HxxHxH(여기서 H는 히스티딘이고, x는 히스티딘 이외의 아미노산임)를 지니는 폴리펩티드 부분이다. 꼬아진 코일 지역은 "코일" 알고리즘에 의해 예상된 지역이다: Lupus, A et al(1991) Science 252; 1162-1164. 한 구체예에서, 해당 단편 또는 각각의 단편은 하나 이상의 히스티딘 트라이어드 모티 프뿐만 아니라 하나 이상의 꼬아진 코일 지역을 포함한다. 한 구체예에서, 해당 단편 또는 각각의 단편은 정확하게 또는 적어도 2, 3, 4 또는 5개의 히스티딘 트라이어드 모티프[선택적으로, 2개 또는 그 이상의 트라이어 사이의 천연 Pht 서열, 또는 트라이어드내 서열(천연 폐렴구균 트라이어드내 Pht 서열(예를 들어, PhtD에 대한 국제공개공보 WO 00/37105호에 제시된 트라이어드내 서열)에 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상 또는 100 % 동일성을 갖는 서열을 지님]을 포함한다. 한 구체예에서, 해당 단편 또는 각각의 단편은 정확하게 또는 적어도 2, 3 또는 4개의 꼬아진 코일 지역을 포함한다. 한 구체예에서, 본원에 소개된 Pht 단백질은 신호 서열이 부착된 전장 길이 단백질, 신호 펩티드(예를 들어 N-말단에서 20개 아미노산)가 제거된 성숙한 전장 길이 단백질, PhtD의 천연적으로 생성되는 변이체 및 PhtD의 면역원성 단편[예를 들어, 위에 기재된 것과 같은 단편 또는 국제공개공보 WO00/37105호 또는 국제공개공보 WOOO/39299호의 아미노산 서열로부터 15개 이상 또는 20개 이상의 연속된 아미노산을 포함하는 폴리펩티드(여기서 상기 폴리펩티드는 국제공개공보 WO00/37105호 또는 국제공개공보 WOOO/39299호의 상기 아미노산 서열에 대해 특이적인 면역 반응을 일으킬 수 있음)]을 포함한다.
특히, 본원에서 사용된 용어 "PhtD"는 신호 서열이 부착된 전장 길이 단백질, 신호 펩티드(예를 들어, N-말단에서 20개 아미노산)가 제거된 성숙한 전장 길이 단백질, PhtD의 천연적으로 생성되는 변이체 및 PhtD의 면역원성 단편[예를 들어, 위에 기재된 것과 같은 단편 또는 국제공개공보 WO00/37105호 또는 WOOO/39299호의 아미노산 서열로부터 15개 이상 또는 20개 이상의 연속된 아미노산을 포함하 는 폴리펩티드(여기서 상기 폴리펩티드는 국제공개공보 WO00/37105호 또는 WOOO/39299호의 상기 아미노산 서열(예를 들어, PhtD에 대한 국제공개공보 WO 00/37105의 서열번호:4)에 대해 특이적인 면역 반응을 일으킬 수 있음)]을 포함한다.
단백질 운반체가 본 발명의 조성물에서 2종 이상의 당류와 관련하여 동일한 경우, 상기 당류는 단백질 운반체의 동일한 분자(당해 분자에 컨주게이션된 2종 이상의 상이한 당류를 지니는 운반체 분자)에 컨주게이션될 수 있다[예를 들어, 국제공개공보 WO 04/083251호 참조]. 대안적으로, 당류는 단백질 운반체의 상이한 분자(해당 분자에 컨주게이션된 한가지 유형의 당류만을 지니는 각각의 단백질 운반체 분자)에 각각 별개로 컨주게이션될 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 운반체 단백질의 예는 DT(디프테리아 톡소이드), TT(파상풍 톡소이드) 또는 TT의 단편 C, DT CRM197(DT 돌연변이체), 다른 DT 점 돌연변이체, 예컨대, CRM176, CRM228, CRM45(Uchida et al J. Biol. Chem. 218; 3838-3844, 1973); CRM9, CRM45, CRM102, CRM103과 CRM107 및 니콜과 율레의 문헌(Nicholls and Youle, Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992)에 소개된 다른 돌연변이; Glu-148의 결실 또는 Asp, GIn 또는 Ser으로의 돌연변이 및/또는 Ala-158의 결실 또는 Gly으로의 돌연변이 및 미국특허 US 4709017호 또는 US 4950740호에 소개된 다른 돌연변이; Lys 516, Lys 526, Phe 530 및/또는 Lys 534 잔기들 중 하나 이상 돌연변이 및 미국 특허 US 5917017호 또는 US 6455673호에 소개된 다른 돌연변이; 또는 미국 특허 US 5843711호에 소개된 단편, 폐렴구균 뉴모리신(Kuo et al.(1995) Infect l㎜un 63; 2706-13) including ply detoxified in some fashion 예를 들어 dPLY-GMBS(국제공개공보 WO 04081515호, PCT/EP2005/010258호) 또는 dPLY-formol, PhtX(PhtA, PhtB, PhtD, PhtE 및 Pht 단백질의 융합체(예를 들어 PhtDE 융합체, PhtBE 융합체(국제공개공보 WO 01/98334호 및 국제공개공보 WO 03/54007호)를 포함하며, Pht A-E는 아래에 보다 상세히 기술되어 있음), OMPC(메닝지코쿠스 외막 단백질 - 나이세리아 메닝지티디스(N. meningitidis) 혈청그룹 B로부터 일반적으로 추출됨 - 유럽특허 EP0372501호), PorB(나이세리아 메닝지티디스로부터), PD(헤모필루스 인플루엔자 단백질 D - 예를 들어, 유럽특허 유럽특허 EP 0 594 610 B호 참조), 또는 이의 면역학적으로 기능성 등가체, 합성 펩티드(유럽특허 EP0378881호, 유럽특허 EP0427347호), 열 충격 단백질(국제공개공보 WO 93/17712호, 국제공개공보 WO 94/03208호), 백일해 단백질(국제공개공보 WO 98/58668호, 유럽특허 EP0471177호), 사이토카인, 림포카인, 성장인자 또는 호르몬(국제공개공보 WO 91/01146호), 다양한 병원체 유래 항원으로부터의 다수의 인간 CD4+ T 세포 에피토프를 포함하는 인공 단백질(Falugi et al.(2001) Eur J I㎜unol 31; 3816-3824)[예컨대, N19 단백질(Baraldoi et al.(2004) Infect㎜un 72; 4884-7], 폐렴구균 표면 단백질 PspA(국제공개공보 WO 02/091998호), 철 흡수 단백질(국제공개공보 WO 01/72337호), 클로스트리듐 디피실레(C. difficile)의 독소 A 또는 B(국제공개공보 WO 00/61761호)이다.
누르카 등의 문헌(Nurkka et al Pediatric Infectious Disease Journal. 23(11): 1008-14, 2004 Nov.)은 PD에 컨주게이션된 모든 혈청형을 지니는 11가 폐 렴구균 백신을 소개하였다. 그러나, 본 발명자들은 옵소노식세포작용(opsonophagocytic) 활성이 PD에 컨주게이션된 19F와 비교하여 DT에 컨주게이션된 19F를 지니는 컨주게이트로 유도된 항체에 있어서 증가되었음을 확인하였다. 또한, 본 발명자들은 DT에 컨주게이션된 19F가 19A에 대한 더 우세한 교차 반응성을 나타낸다는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 조성물의 특징은 혈청형 19F가 세균 톡소이드, 예를 들어, TT, 뉴모리신, DT 또는 CRM197에 컨주게이션된다는 것이다. 한 양상에서, 혈청형 19F는 DT에 컨주게이션된다. 혈청형 19A가 세균 톡소이드, 예를 들어 TT, 뉴모리신, DT 또는 CRM197에 컨주게이션된다는 것이 또한 본 발명의 특징이다. 면역원성 조성물의 나머지 당류 혈청형은 DT가 아닌(즉, 19F만 DT에 컨주게이션됨) 하나 이상의 운반체 단백질에 컨주게이션되거나, DT가 아닌 하나 이상의 운반체 단백질과 DT 그 자신 사이에서 분절될 수 있다. 일 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고 나머지 혈청형 모두는 PD에 컨주게이션된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이되고, 나머지 혈청형은 PD, 및 TT 또는 DT 또는 CRM197 사이에 나뉘어 분배된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고 단지 1개의 당류가 TT에 컨주게이션된다. 이 구체예의 한 양상에서, 상기 한 당류는 18C 또는 12F이다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고 단지 2종의 당류들이 TT에 컨주게이션된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고, 나머지 혈청형들은 PD, TT와 DT 또는 CRM197 사이에 나뉘어 분배된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고, 나머지 혈청형들은 PD, TT와 뉴모리신 사 이에 나뉘어 분배된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고, 나머지 혈청형들은 PD, TT와 CRM197 사이에 나뉘어 분배된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고 나머지 혈청형들은 PD, TT, 뉴모리신과 선택적으로 PhtD 또는 PhtD/E 융합 단백질 사이에 나뉘어 분배된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고, 19A는 뉴모리신 또는 TT에 컨주게이션되며 나머지 혈청형들은 PD, TT, 뉴모리신과 선택적으로 PhtD 또는 PhtD/E 융합 단백질 사이에 나뉘어 분배된다. 추가의 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고, 19A는 뉴모리신 또는 TT에 컨주게이션되며, 1개의 추가 당류는 TT에 컨주게이션되고, 1개의 추가 당류는 PhtD 또는 PhtD/E에 컨주게이션되며 모든 추가 당류는 PD에 컨주게이션된다. 추가 구체예에서, 19F는 DT 또는 CRM197에 컨주게이션되고, 19A는 뉴모리신에 컨주게이션되며, 1종의 추가 당류는 TT에 컨주게이션되고, 1종의 추가 당류는 뉴모리신에 컨주게이션되며, 2종의 추가 당류는 PhtD 또는 PhtD/E에 컨주게이션되고 모든 추가 당류는 PD에 컨주게이션된다.
일 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 헤모필루스 인플루엔자로부터의 단백질 D를 포함한다. 이 구체예에서, PD가 19F 이외의 임의의 당류를 컨주게이션시키는데 사용되는 운반체 단백질 중 하나가 아니라면, 예를 들어 19F가 DT에 컨주게이션되고 한편, 다른 혈청형들이 PD가 아닌 하나 이상의 상이한 운반체 단백질에 컨주게이션된 경우, 이때 PD는 백신 조성물내에서 유리 단백질로서 존재할 것이다. PD가 19F 이외의 당류를 컨주게이션시키는데 사용된 운반체 단백질 중 하나 인 경우, 이때 PD는 백신 조성물내에서 유리 단백질로 존재하거나 존재하지 아니할 것이다.
본 명세서 전반에 걸쳐 사용된 용어 "당류"는 다당류 또는 올리고당류를 의미하며 상기 둘 모두를 포함한다. 다당류는 세균으로부터 동정되며 공지의 방법(예를 들어, 유럽특허 EP497524호와 EP497525호를 참조)과 바람직하게는 미세유동화(microfluidisation)에 의해 어느 정도 소정 크기로 제작될 수 있다. 다당류는 다당류 샘플 내에서 점성을 감소시키고/시키거나 컨주게이션된 생성물의 여과도(filterability)시키기 위해 소정 크기로 제작될 수 있다. 올리고당류는 적은 수의 반복 단위(전형적으로, 5-30개의 반복 단위)를 가지며 전형적으로 가수분해된 다당류이다.
폐렴 구균의 캡슐 다당류는 최대 8개의 당 잔기를 내포할 수 있는 반복되는 올리고당류 단위를 포함한다. 주요 폐렴 구균 혈청형의 올리고당류 단위에 대한 검토와 관련하여, 다음 문헌을 참조라하: JONES, Christopher. Vassines based on the cell surface carbohydrates of pathogenic bacteria. An. Acad. Bras. Cienc, June 2005, vol.77, no.2, p.293-324. ISSN 0001-3765. 일 구체예에서, 캡슐 당류 항원은 전장 길이 다당류일 수 있으나, 다른 구체예에서, 1개의 올리고당류 단위이거나, 반복되는 올리고당류 단위의 천연 당류 사슬 길이보다 더 짧을 수 있다. 일 구체예에서, 백신내에 존재하는 모든 당류는 다당류이다. 전장 길이 다당류는 "크기조절(sized)"될 수 있는데, 즉, 이들의 크기는 산 가수분해 처치, 과산화수소 처 치, 올리고당류 단편을 생산하기 위한 이멀시플레스(emulsiflex®)에 의한 크기조절 후 과산화수소 처치 또는 미세유동화와 같은 다양한 방법에 의해 감소될 수 있다.
본 발명자들은 또한 종래기술은 컨주게이트 생산의 용이함으로 인한 올리고당류를 사용하는데 초점을 맞추어 왔음에 주목하였다. 본 발명자들은 천연 또는 약간 크기조절된 다당류 컨주게이트를 사용함으로써, 하기 이점들 중 하나 이상이 현실화될 수 있다는 것을 발견하였다: 1) 여과될 수 있는, 고 면역원성을 지니는 컨주게이트, 2) 컨주게이트내의 다당류 대 단백질 비가 변형될 수 있어서 상기 컨주게이트내의 다당류 대 단백질의 비(w/w)가 증가될 수 있음(이러한 비는 운반체 억제 효과에 영향을 미칠 수 있음), 3) 가수분해되기 쉬운 면역원성 컨주게이트는 컨주게이션을 위해 더 거대한 당류를 사용하여 안정화될 수 있다. 거 거대한 다당류의 사용은 컨주게이트 운반체와의 더 많은 가교를 초래할 수 있고 컨주게이트로부터 유리 당류의 유리를 적게할 수 있다. 종래 기술분야에 소개된 컨주게이트 백신은 컨주게이션을 개선하기 위해 컨주게이션에 앞서 다당류를 탈중합화(depolymerisation)하는 경향이 있다. 본 발명자들은 거 거대한 크기의 당류를 보유한 당류 컨주게이트 백신이 폐렴구균성 질환에 대한 양호한 면역 반응을 제공할 수 있음을 발견하였다.
따라서, 본 발명의 면역원성 조성물은 하나 이상의 당류 컨주게이트를 포함하는데, 여기서 컨주게이션되기 전에 각각의 당류의 평균 크기는 약 8OkDa, 10OkDa, 20OkDa, 30OkDa, 40OkDa, 50OkDa 또는 100OkDa이다. 일 구체예에서, 본 발명의 하나 이상의 당류 컨주게이트는 당류 컨주게이이션 이전에 50-1600, 80-1400, 100-1000, 150-500, 또는 200-400 kDa의 평균 크기를 갖는다(여기서 평균 크기는 Mw이고, 단위 'kDa'은 본원에서 'x 103'으로 대체될 수 있음에 주목하라). 일 구체예에서, 컨주게이션 이후 컨주게이트는 0.2 미크론 필터를 통해서 용이하게 여과되어 여과 이전의 샘플과 비교하여 여과 이후에 50, 60, 70, 80, 90 또는 95%의 수득률이 획득되어야 한다.
본 발명의 목적을 위하여, "천연 다당류"는 당류의 크기를 감소시키려는 목적으로 행해지는, 공정(예를 들어, 사후-정제)를 거치지 아니한 당류를 의미한다. 다당류는 일반적인 정제 절차가 진행되는 동안 크기가 조금 줄어들 수 있다. 그러한 당류 역시 여전히 천연 당류이다. 다당류가 크기조절 조작을 거친 경우에만, 해당 다당류는 천연 다당류가 아닌 것으로 간주될 것이다.
본 발명의 목적을 위해, "최대 2배의 인자로 크기조절된(sized by a factor up to x2)"이라는 용어는 당류의 크기를 감소시키지만, 천연 다당류 크기의 1/2 이상의 크기를 보유하도록 의도된 공정을 해당 당류가 거친다는 것을 의미한다. x3, x4 등은 상기와 동일한 방식으로 이해되어야 하는데, 즉, 당류의 크기를 감소시키지만 천연 다당류 크기의 1/3 이상, 1/4 이상 등의 크기를 보유하도록 의도된 공정을 해당 당류가 거친다는 의미이다.
본 발명의 한 양상에서, 면역원성 조성물은 운반체 단백질에 컨주게이션된 10종 이상의 혈청형으로부터의 폐렴구균 당류를 포함하는데, 여기서 1종 이상, 2종 이상, 3종 이상, 4종 이상, 5종 이상, 6종 이상, 7종 이상, 8종 이상, 9종 이상의 폐렴구균 당류 또는 각각의 폐렴구균 당류는 천연 다당류이다.
본 발명의 한 양상에서, 면역원성 조성물은 운반체 단백질에 컨주게이션된 10종 이상의 혈청형으로부터의 폐렴구균 당류를 포함하는데, 여기서 1종 이상, 2종 이상, 3종 이상, 4종 이상, 5종 이상, 6종 이상, 7종 이상, 8종 이상, 9종 이상의 폐렴구균 당류 또는 각각의 폐렴구균 당류는 최대 x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9 또는 x10의 인자로 크기조절된다. 이 양상의 일 구체예에서, 대부분의 당류를 위한, 예를 들어 6종, 7종, 8종 또는 그 이상의 당류들이 최대 x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9 또는 x10의 인자로 크기조절된다.
본원에서 당류의 분자량 또는 평균 분자량(또는 크기)는 컨주게이션 이전에 측정된 당류의 중량-평균 분자량(Mw)를 의미하며 MALLS에 의해 측정된다.
MALLS 기술은 당업계에 널리 알려져 있으며 전형적으로 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행된다. 폐렴구균 당류에 대한 MALLS 분석에서, 2가지 컬럼(TSKG6000 및 5000PWxI)가 조합되어 사용될 수 있으며 당류는 물로 용리된다. 당류는 광 산란 검출기(예를 들어, 1OmW 아르곤 레이져(488nm)를 구비한 Wyatt Dawn DSP)와 간섭형 굴절계(inferometric refractometer)(예를 들어, P100 셀과 적색 필터(498nm)를 구비한 Wyatt Otilab DSP)를 사용하여 검출된다.
한 구체예에서, 폐렴구균 당류는 천연 다당류 또는 일반적인 추출 공정이 진행되는 도안 크기가 감소된 천연 다당류이다.
한 구체예에서, 폐렴구균 당류는 기계적 절단, 예를 들어, 미세유동화 또는 초음파처리에 의해 크기조절된다. 미세유동화와 초음파처리는 여과가능한 컨주게이트를 제공하기 위하여 더 거대한 천연 다당류의 크기를 충분히 감소시키는데 장점을 갖는다. 크기는 단지 x20, x10, x8, x6, x5, x4, x3 또는 x2의 인자에 의해 조절된다.
한 구체예에서, 면역원성 조성물은 천연 다당류와 단지 x20의 인자로 크기조절된 당류의 혼합물로부터 제조된 폐렴구균 컨주게이트를 포함한다. 이 구체예의 한 양상에서, 대부분의 당류, 예를 들어 6종, 7종, 8종 또는 그 이상의 당류는 최대 x2, x3, x4, x5 또는 x6의 인자로 크기조절된다.
한 구체예에서, 폐렴 구균 당류는 링커, 예를 들어, 이작용성(bifunctional) 링커를 통해 운반체 단백질에 컨주게이션된다. 링커는 선택적으로 이종이작용성 또는 동종이작용성인데, 예를 들어, 반응성 아미노기와 반응성 카르복시산 기, 2개의 반응성 아미노기 또는 2개의 반응성 카르복시간 기를 지닌다. 링커는, 예를 들어, 4 내지 20개, 4 내지 12개, 5 내지 10개의 탄소 원자를 갖는다. 가능한 링커는 ADH이다. 기타 링커는 B-프로피온아미도(국제공개공보 WO 00/10599), 니트로페닐-에틸아민(Gever et al(1979) Med. Microbiol. I㎜unol. 165; 171-288), 할로알킬 할라이드(미국특허 US4057685호), 글리코시드 결합(미국특허 US4673574호, US4808700호), 및 6-아미노카프로산(미국특허 US4459286호)을 포함한다. 한 구체예에서, ADH는 혈청형 18C로부터의 당류를 컨주게이션시키기 위한 링커로서 사용된다. 한 구체예에서, ADH는 혈청형 22F로부터의 당류를 컨주게이션시키기 위한 링커로서 사용된다.
본 발명의 면역원성 조성물에 존재하는 당류 컨쥬게이트는 공지된 임의의 커플링 기술로 제조될 수 있다. 컨쥬게이션 방법은 시아네이트 에스테르를 형성하기 위해 1-시아노-4-디메틸아미노 피리디늄 테트라플루오로보레이트(CDAP)를 이용한 당류의 활성화에 의존할 수 있다. 따라서, 활성화된 당류는 운반체 단백질 상의 아미노기에 직접적으로 또는 스페이서(링커) 기를 통해 커플링될 수 있다. 예를 들어, 스페이서는 말레이미드-활성화 운반체 단백질(예를 들어, GMBS를 사용) 또는 할로아세틸화된 운반체 단백질(예를 들어, 아이오도아세트이미드[예를 들어, 에틸 아이오도아세트이미드 HCI] 또는 N-석신이미딜 브로모아세테이트 또는 SIAB, 또는 SIA, 또는 SBAP)를 사용)과 반응 이후에 획득되는 티오에테르 결합을 통해 운반체에 커플링될 수 있는 티올화된(thiolated) 다당류 를 제공하기 위한 시스타민 또는 시스테아민일 수 있다. 바람직하게는, 시아네이트 에스테르는 헥산 디아민 또는 ADH와 커플링되고, 아미노 유래의 당류는 티오에테르 결합의 형성을 수반하는 헤테로라이게이션 화학을 이용하여 운반체 단백질에 컨쥬게이팅되거나, 카르보디이미드(예를 들어, EDAC 또는 EDC) 화학을 이용하여 운반체 단백질에 컨쥬게이팅된다. 이러한 컨쥬게이트는 PCT 국제공개공보 WO 93/15760호(국립의과대학) 및 WO 95/08348호 및 WO 96/29094호에 기술되어 있다.
기타 적절한 기술은 카르보디이미드, 히드라지드, 활성 에스테르, 노르보란, p-니트로벤조산, N-히드록시숙신이미드, S-NHS, EDC, TSTU를 사용한다. 많은 기술들이 국제공개공보 WO 98/42721호에 기술되어 있다. 컨쥬게이션은 당류의 유리 히드록실기와 CDI의 반응(Bethell et al., J. Biol. Chem. 1979, 254; 2572-4, Hearn et al., J. Chromatogr.1981. 218; 509-18) 후, 단백질과의 반응으로 카르바메이트 결합을 형성시킴으로써 형성될 수 있는 카르보닐 링커를 포함할 수 있다. 이는 아노머 말단의 일차 히드록실기로의 환원, CDI 카르바메이트 중간체를 형성시시키 위한 일차 히드록실기와 CDI의 일차 히드록실기 반응의 선택적인 보호/탈보호 및 단백질 상의 아미노기와 CDI 카르바메이트 중간체의 커플링을 포함할 수 있다.
컨쥬게이트는 또한 미국특허 US 4365170호(Jennings) 및 미국특허 US 4673574호(Anderson)에 기술된 직접 환원 아민화 방법에 의해 제조될 수 있다. 다른 방법은 유럽특허 EP-0-161-188호, 유럽특허 EP-208375호 및 유럽특허 EP-0-477508호에 기술되어 있다.
추가 방법은 카르보디이미드 축합에 의한(Chu C. et al., Infect. I㎜unity, 1983 245 256), 예를 들어 EDAC를 이용한, 단백질 담체에 대한, 아디프산 히드라지드(ADH)로 유도체화된(derivatised) 시아노겐 브로마이드(또는 CDAP)로 활성화된 당류의 커플링을 포함한다.
한 구체예에서, 당류 상의 히드록실기(바람직하게는, 활성화된 히드록실 기, 예를 들어, 시아네이트 에스터를 만들기 위해[예를 들어, CDAP로] 활성화된 히드록실 기)는 단백질 상의 아미노기 또는 카르복실기에 직접적으로 또는(링커를 통해서) 간접적으로 연결된다. 링커가 존재하는 경우, 당류 상의 히드록실기는, 예를 들어, CDAP 컨쥬게이션에 의해 링커 상의 아미노기에 연결되는 것이 바람직하다. 링커(예를 들어, ADH) 내의 추가의 아미노기는, 예를 들어, 카르보디이미드 화학, 예를 들어, EDAC를 사용하여, 단백질 상의 카르복시산 기에 컨쥬게이션될 수 있다. 일 구체예에서, 폐렴구균 캡슐 당류(들)은 링커가 운반체 단백질에 컨쥬게이션되기 이전에 먼저 링커에 컨쥬게이션된다. 대안적으로, 링커는 당류에 컨주게이션되기 이전에 운반체에 컨주게이션될 수 있다.
조합된 기술은 또한 사용될 수 있는데, 일부 당류-단백질 컨주게이트는 CDAP에 의해 제조된 몇몇 당류되며, 일부는 환원적 아민화반응에 의해 제조된다.
일반적으로, 단백질 운반체 상에 존재하는 다음 유형의 화학기들이 커플링/컨쥬게이션에 사용될 수 있다:
A) 카르복시기(예를 들어, 아스파르트산 또는 글루탐산을 통함). 한 구체예에서, 이러한 기는 당류 상의 아미노기에 직접 연결되거나, 카르보디이미드 화학, 예를들어 EDAC를 이용하여 링커 상의 아미노기에 연결된다.
B) 아미노기(예를 들어, 리신을 통함). 한 구체예에서, 이러한 기는 당류 상의 카르복실기에 직접 연결되거나, 카르보디이미드 화학, 예를 들어, EDAC를 사용하여 링커 상의 카르복실기에 연결된다. 또 다른 구체예에서, 이러한 기는 CDAP 또는 CNBr로 활성화된 당류 상의 히드록실기에 직접 연결되거나 링커 상의 상기 기에 연결되고; 알데히드기를 지니는 당류 또는 링커에 연결되고; 숙신이미드 에스테르기를 지니는 당류 또는 링커에 연결된다.
C) 술프히드릴기(예를 들어, 시스테인을 통함). 한 구체예에서, 이러한 기는 말레이미드 화학을 이용하여 브로모 또는 클로로 아세틸화된 당류 또는 링커에 연결된다. 한 구체예에서, 이러한 기는 비스 디아조벤지딘을 이용하여 활성화/변형된다.
D) 히드록시기(예를 들어, 티로신을 통함). 한 구체예에서, 이러한 기는 비스 디아조벤지딘을 이용하여 활성화/변형된다.
E) 이미다졸기(예를 들어, 히스티딘을 통함). 한 구체예에서, 이러한 기는 비스 디아조벤지딘을 이용하여 활성화/변형된다.
F) 구아니딘기(예를들어, 아르기닌을 통함).
G) 인돌기(예를 들어, 트립토판을 통함).
당류에 대해서는, 일반적으로 다음 기들이 커플링을 위해 사용될 수 있다: OH, COOH 또는 NH2. 알데히드기는 다음과 같은 당업계에 공지된 다양한 처리 후 생성될 수 있다: 페리오데이트, 산 가수분해, 과산화수소 등.
직접 커플링 방법:
당류-OH + CNBr 또는 CDAP -----> 시아네이트 에스테르 + NH2-단백질 ---->컨쥬게이트
당류-알데히드 + NH2-단백질 ----> 시프(Shiff) 염기 + NaCNBH3 ----> 컨쥬게이트
당류-COOH + NH2-단백질 + EDAC ----> 컨쥬게이트
당류-NH2 + COOH-단백질 + EDAC ----> 컨쥬게이트
스페이서(링커)를 통한 간접 커플링 방법:
당류-OH + CNBr 또는 CDAP ---> 시아네이트 에스테르 + NH2----NH2 ----> 당 류----NH2 + COOH-단백질 + EDAC -----> 컨쥬게이트
당류-OH + CNBr 또는 CDAP ----> 시아네이트 에스테르 + NH2-----SH -----> 당류----SH + SH-단백질(노출된 시스테인을 지닌 천연 단백질 또는, 예를 들어 SPDP에 의한 단백질의 아미노기의 변형 후에 수득된 단백질) -----> 당류-S-S-단백질
당류-OH + CNBr 또는 CDAP ---> 시아네이트 에스테르 + NH2----SH -------> 당류----SH + 말레이미드-단백질(아미노기의 변형) ----> 컨쥬게이트
당류-COOH + CNRr 또는 CDAP ---> 시아네이트 에스터 + NH2----SH -------> 당류----SH + 할로아세틸화된-단백질 ----> 컨쥬게이트
당류-COOH + EDAC + NH2-----NH2 ---> 당류------NH2 + EDAC + COOH-단백질 ----> 컨쥬게이트
당류-COOH + EDAC+ NH2----SH -----> 당류----SH + SH-단백질(노출된 시스테인을 지니는 천연 단백질 또는, 예를 들어, SPDP에 의한 단백질의 아미노기의 변형 후에 수득된 단백질) -----> 당류-S-S-단백질
당류-COOH + EDAC+ NH2----SH -----> 당류----SH + 말레이미드-단백질(아미노기의 변형) ----> 컨쥬게이트
당류-COOH + EDAC+ NH2----SH -----> 당류----SH + 할로아세틸화된-단백질 ----> 컨쥬게이트
당류-알데히드 + NH2-----NH2 ----> 당류---NH2 + EDAC + COOH-단백질 ----> 컨쥬게이트
주: 상기 EDAC 대신, 임의의 적절한 카르보디이미드가 사용될 수 있다.
요약하면, 당류와의 커플링에 일반적으로 사용될 수 있는 단백질 담체 화학기 유형은 아미노기(예를 들어, 리신 잔기 상에 존재), COOH기(예를들어, 아르파르트산 및 글루탐산 잔기 상에 존재) 및 SH기(접근가능한 경우)(예를들어, 시스테인 잔기 상에 존재)이다.
바람직하게는, 운반체 단백질 때 폐렴구균 당류의 비는 1:5 내지 5:1; 예를 들어, 1:0.5-4:1, 1:1-3.5:1, 1.2:1-3:1, 1.5:1-2.5:1; 예를 들어, 1:2 내지 2.5:1; 1:1 내지 2:1(w/w)이다. 한 구체예에서, 대부분의 컨주게이트, 예를 들어 6개, 7개, 8개, 9개 또는 그 이상의 컨주게이트는 1:1 이상, 예를 들어 1.1:1, 1.2:1, 1.3:1, 1.4:1, 1.5:1 또는 1.6:1의 운반체 단백질 대 당류의 비를 지닌다.
한 구체예에서, 하나 이상의 폐렴구균 당류는 CDAP와 EDAC를 사용하여 링커를 통해 운반체 단백질에 컨주게이션된다. 예를 들어, 18C 또는 22F는 위에 기술한 바와 같이 CDAP와 EDAC를 사용하여 링커(예를 들어, ADH와 같이 이의 말단에 2개의 히드라지노 기를 지니는 링커)를 통해 단백질에 컨주게이션될 수 있다. 링커가 사용될 때, CDAP가 당류를 링커에 컨주게이션시키는데 사용되고 그후 EDAC가 링커를 단백질에 컨주게이션시키는데 사용되거나, 대안적으로, EDAC가 우선 링커를 단백질에 컨주게이션시키는데 사용되고, 그후 CDAP가 링커를 당류에 컨주게이션시 키는데 사용될 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 면역원성 조성물은 0.1 내지 20㎍, 1 내지 10㎍ 또는 1 내지 3㎍의 당류를 각 당류 컨주게이트 1회 용량에 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 0.1-20㎍; 0.5-1O㎍; 0,5-5㎍ 또는 1-3㎍의 당류를 각 폐렴구균 캡슐 당류 1회 용량에 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 캡슐 당류는 상이한 투여량으로 존재할 수 있는데, 예를 들어, 몇몇 캡슐 당류는 정확하게 1㎍의 용량으로 존재하거나, 몇몇 캡슐 당류는 정확하게 3㎍의 용량으로 존재할 수 있다. 한 구체예에서, 혈청형 3, 18C 및 19F(또는 4, 18C 및 19F)로부터의 당류는 다른 당류들보다 더 높은 용량으로 존재한다. 이 구체예의 한 양상에서, 혈청형 3, 18C 및 19F(또는 4, 18C 및 19F)는 대략 또는 정확하게 3㎍의 용량으로 존재하며, 한편, 면역원성 조성물내에서 다른 당류는 대략 또는 정확하게 1㎍의 용량으로 존재한다.
"대략" 및 "약"은 본 발명의 목적상 제시된 수치의 10% 이내의 값으로 정의된다.
한 구체예에서, 하나 이상의 폐렴구균 캡슐 당류는 직접적으로 운반체 단백질에 컨주게이션된다(예를 들어, 위에 기술한 화학을 이용하여); 바람직하게는, 하나 이상의 폐렴구균 캡슐 당류는 CDAP에 의해 직접적으로 컨주게이션된다. 한 구체예에서, 대부분의 캡슐 당류들, 예를 들어, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 그 이상의 캡슐 당류들이 CDAP에 의해 직접적으로 운반체 단백질에 연결된다(국제공개공보 WO 95/08348호 및 WO 96/29094호 참조).
면역원성 조성물은 본원에서 본 발명의 폐렴 구균 단백질로 지칭된, 폐렴 구균 단백질을 포함한다. 그러한 단백질은 운반체 단백질로서 사용되거나, 유리 단백질로서 존재하거나, 운반체 단백질 및 유리 단백질 둘 모두로서 존재할 수 있다. 본 발명의 폐렴 구균 단백질은 노출된 표면이 있거나(적어도 폐렴구균의 생명 주기의 일부 시기 동안), 폐렴구균에 의해 분비 또는 배출되는 단백질이다. 바람직하게는, 본 발명의 단백질은 다음 카테고리, 예컨대, LXXC의 Ⅱ형 신호 서열 모티프(여기서, X는 임의의 아미노산, 예를 들어, 폴리히스티딘 트리아드 패밀리(PhtX)임)를 갖는 단백질, 콜린 결합 단백질(CbpX), I형 신호 서열 모티프를 갖는 단백질(예를 들어, Sp101), LPXTG 모티프를 갖는 단백질(여기서, X는 임의의 아미노산, 예를 들어, Sp128, Sp130임), 및 독소(예를 들어, Ply)로부터 선택된다. 이러한 카테고리(또는 모티프) 내의 바람직한 예는 하기 단백질, 또는 이의 면역학적으로 기능적인 등가물(equivalents)이다.
일 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 폴리 히스티딘 트라이어드 패밀리(PhtX), 콜린 결합 단백질 패밀리(CbpX), CbpX 트렁케이트(truncate), LytX 패밀리, LytX 트렁케이트, CbpX 트렁케이트-LytX 트렁케이트 키메라 단백질(또는 융합체), 뉴모리신(Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125 및 Sp133로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 포함한다. 추가의 구체예에서, 면역원성 조성물은 폴리 히스티딘 트라이어드 패밀리(PhtX), 콜린 결합 단백질 패밀리(CbpX), CbpX 트렁케이트, LytX 패밀리, LytX 트렁케이트, CbpX 트렁케이트-LytX 트렁케이트 키메라 단백질(또는 융합체), 뉴모리신(Ply), PspA, PsaA, 및 Sp128로 구성된 군에서 선택된 2개 이상의 단백질을 포함한다. 추가의 구체예에서, 면역원성 조성물은 폴리 히스티딘 트라이어드 패밀리(PhtX), 콜린 결합 단백질 패밀리(CbpX), CbpX 트렁케이트, LytX 패밀리, LytX 트렁케이트, CbpX 트렁케이트-LytX 트렁케이트 키메라 단백질(또는 융합체), 뉴모리신(Ply), 및 Sp128로 구성된 군에서 선택된 2개 이상의 단백질을 포함한다.
Pht 패밀리(Polyhistidine triad family)는 단백질 PhtA, PhtB, PhtD, 및 PhtE를 포함한다. 상기 패밀리는 지질화(lipidation) 서열, 추정컨대, 금속 또는 뉴클레오시드 결합 활성 또는 효소 활성에 관여하는, 프롤린 풍부 영역 및 수개의 히스티딘 트라이어드에 의해 분리되는 2개의 도메인, (3-5) 코일된 코일 영역, 보존 N-말단 및 이종 C 말단에 의해 특징지워진다. 이는 시험된 모든 폐렴구균 종에 존재한다. 동종 단백질은 또한 다른 연쇄구균(Streptococci) 및 나이세리아(Neisseria)에서 발견되었다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 Pht 단백질은 PhtD이다. 그러나, 용어 Pht A, B, D 및 E는 하기 인용에서 기술된 서열을 갖는 단백질뿐만 아니라 언급된 단백질과 90% 이상의 서열 상동성을 갖는 이의 천연-생성(및 인공) 변이체를 의미하는 것으로 이해된다. 바람직하게는 이는 95% 이상, 가장 바람직하게는 97% 이상 동일하다.
PhtX 단백질에 대해서, PhtA는 국제공개공보 WO 98/18930에 기재되어 있고, 또한 Sp36로 지칭된다. 위에서 언급한 바와 같이, 이는 폴리히스티딘 트라이어드 패밀리에 속한 단백질이고 LXXC의 II형 신호 모티프를 갖는다. PhtD는 국제공개공보 WO 00/37105호에 기재되어 있고, 또한 Sp036D로 지칭된다. 위에서 언급한 바와 같이, 이는 폴리히스티딘 트라이어드 패밀리에 속한 단백질이고 II형 LXXC 신호 모티프를 갖는다. PhtB는 국제공개공보 WO 00/37105호에 기재되어 있고, 또한 Sp036B로 지칭된다. PhtB 패밀리의 다른 구성원은 C3-변성(degrading) 폴리펩티드인데, 이는 국제공개공보 WO 00/17370호에 기재되어 있다. 이 단백질은 폴리히스티딘 트라이어드 패밀리에 속하며 II형 LXXC 신호 모티프를 갖는다. 바람직한 면역학적 기능성 등가물은 국제공개공보 WO 98/18930호에 기술된 단백질 Sp42이다. PhtB 트렁케이트(약 79kD)는 W099/15675에 기술되어 있는데, 이는 또한 PhtX 패밀리의 구성원으로 여겨진다. PhtE는 국제공개공보 WO/30299호에 기술되어 있고 BVH-3으로 언급된다. 임의의 Pht 단백질이 본원에서 언급된 경우, Pht 단백질의 면역원성 단편 또는 이의 융합체가 사용될 수 있다는 것을 의미한다. 예를 들어, PhtX에 대한 레퍼러스는 임의의 Pht 단백질로부터의 면역원성 단편 또는 이의 융합체를 포함한다. 또한 PhtD 또는 PhtB에 대한 레퍼런스는 예를 들어, 국제공개공보 WO0198334호에서 확인되는 것과 같은, PhtDE 또는 PhtBE 융합체에 대한 레퍼런스이다.
뉴모리신은 독특한 세포용해(용혈) 및 보체 활성화 활성을 갖는 다기능 독소이다[참조: Rubins et al., Am. Respi. Cit Care Med, 153: 1339-1346(1996)]. 상기 독소는 폐렴구균에 의해 분비되지 않지만, 자가용해소의 영향하에 폐렴구균의 용해시 방출된다. 이의 영향은 예를 들어, 인간 단핵구에 의한 염증성 사이토카인 생성의 자극, 인간 호흡기 상피 상의 섬모의 비팅(beating) 억제하고, 세균 활성 및 호중구 이동의 감소를 포함한다. 뉴모리신의 가장 명백한 효과는 적혈구 용해 인데, 콜레스테롤에 대한 결합이 연루되어 있다. 이는 독소이기 때문에, 생체내로 투여하기 전에 독성이 제거될 필요가 있다(즉, 예방을 위한 목적에 적당한 용량으로 제공될 경우, 사람에게 무독성이어야 함). 야생형 또는 천연 뉴모리신의 발현 및 클로닝은 당분야에 공지되어 있다. 하기 문헌을 참조하라: Walker et al.(Infect I㎜un, 55:1184-1189(1987)), Mitchell et al.(Biochim Biophys Acta, 1007: 67-72(1989) 및 Mitchell et al(NAR, 18:4010(1990)). ply의 무독화는 화학적 수단으로 수행될 수 있는데, 예를 들어, 포르말린 처리 또는 글루타르알데하이드 처리 또는 상기 둘의 조합 처리이다. 이러한 방법은 여러가지 독소에 대해 당업계에 익히 공지된 방법이다. 대안적으로, Ply는 유전적으로 무독화될 수 있다. 따라서, 본 발명은 폐렴구균 단백질의 유도체를 포함하는데, 예를 들어, 돌연변이된 단백질일 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 '돌연변이된'은 위치지정돌연변이유발을 위해 익히 공지된 방법 또는 기타 통상의 방법을 사용하여 하나 이상의 아미노산의 결손, 첨가 또는 치환을 겪은 분자를 의미하기 위해 사용된다. 예를 들어, 상술한 바와 같이, 돌연변이 ply 단백질은 생물학적으로 불활성이면서 한편 여전히 이의 면역원성 에피토프를 유지하도록 변형될 수 있다[예를 들어, 하기 문헌을 참조하라: 국제공개공보 W090/06951호, Berry et al.(Infect I㎜un, 67:981-985(1999)) 및 W099/03884호].
본원에 사용된 바와 같이, 용어 'Ply'는 의약적 용도로 적합한 돌연변이되거나 무독화된 뉴모리신을 의미하는 것으로 이해된다.
콜린 결합 단백질 패밀리(CbpX)와 관련하여, 당해 패밀리의 구성원은 원래, 콜린 친화성 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있는 폐렴구균 단백질로서 확인되었다. 모든 콜린 결합 단백질은 세포벽 테이코산(teichoic acid) 및 막-관련 리포테이코산의 포스포릴콜린 잔기에 비공유적으로 결합한다. 구조적으로, 비록 단백질이 정확한 특성(아미노산 서열, 길이 등)은 다를 수 있지만, 이들은 전체 패밀리에 대해 공통되는 수개의 영역을 지닌다. 일반적으로, 콜린 결합 단백질은, 다수의 반복체로 구성된, N 말단 영역(N), 보존성 반복 영역(R1 및/또는 R2), 프롤린 풍부 영역(P) 및 상기 단백질의 대략 절반을 차지하는 보존성 콜린 결합 영역(C)을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "콜린 결합 단백질 패밀리(CbpX)"은 국제공개공보 W097/41151호에서 확인된 바와 같은 콜린 결합 단백질, PbcA, SpsA, PspC, CbpA, CbpD 및 CbpG로 이루어진 군으로부터 선택된다. CbpA는 국제공개공보 W097/41151호에 기재되어 있다. CbpD 및 CbpG는 국제공개공보 WOOO/29434호에 기재되어 있다. PspC는 국제공개공보 W097/09994호에 기재되어 있다. PbcA는 국제공개공보 W098/21337호에 기재되어 있다. SpsA는 국제공개공보 WO 98/39450호에 기재되어 있는 콜린 결합 단백질이다. 바람직하게는, 콜린 결합 단백질은 CbpA, PbcA, SpsA 및 PspC로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 바람직한 구체예는 CbpX 트렁케이트인데, 여기서 "CbpX"는 상기에서 정의한 바와 같고 "트렁케이트"는 콜린 결합 영역(C)의 50% 이상이 결여된 CbpX 단백질을 의미한다. 바람직하게는 이러한 단백질은 전체 콜린 결합 영역이 결여되어 있다. 더 바람직하게는, 이러한 단백질 트렁케이트는, (i) 콜린 결합 영역이 결여되어 있고, (ii) 프롤린 풍부영역 및 하나 이상의 반복 영역(Rl 또는 R2)을 보유한 다. 더더욱 바람직하게는, 트렁케이트는 2개의 반복 영역(Rl 및 R2)을 갖는다. 이러한 바람직한 구체예의 예는 국제공개공보 W099/51266호 또는 W099/51188호에 기재된 바와 같이 NRlxR2 및 RlxR2이지만, 유사한 콜린 결합 영역이 결여된 다른 콜린 결합 단백질이 또한 본 발명의 범주내에서 고려된다.
LytX 패밀리는 세포 용해와 관련된 막 관련 단백질이다. N-말단 도메인은 콜린 결합 도메인(들)을 포함하지만, LytX 패밀리는 위에서 언급한 CbpA 패밀리에서 발견된 모든 특징을 갖지 아니하며, 따라서, 본 발명의 목적을 위해, LytX 패밀리는 CbpX 패밀리와는 구별되는 것으로 여겨진다. CbpX 패밀리와는 대조적으로, C-말단 도메인은 LytX 단백질 패밀리의 촉매적 도메인을 함유한다. 당해 패밀리는 LytA, B 및 C를 포함한다. LytX 패밀리와 관련하여, LytA은 론다 등의 문헌[참조: Ronda et al., Eur J Biochem, 164:621-624(1987)]에 기재되어 있다. LytB은 국제공개공보 WO 98/18930호에 기재되어 있고, 또한 Sp46로서 언급된다. LytC는 또한 국제공개공보 WO 98/18930호에 기재되어 있고, 또한 Sp91로서 언급된다. 당해 패밀리의 바람직한 구성원은 LytC이다.
또 다른 바람직한 구체예는 LytX 트렁케이트인데, 여기서 "LytX"는 위에서 정의한 바와 같고, '트렁케이트'는 콜린 결합 영역이 50% 이상 결여된 LytX 단백질을 의미한다. 바람직하게는 이러한 단백질은 전체 콜린 결합 영역이 결여되어 있다. 본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태는 CbpX 트렁케이트-LytX 트렁케이트 키메라 단백질(또는 융합물)이다. 바람직하게는 이는 CbpX의 NRlxR2(또는 RlxR2) 및 LytX의 C 말단 부분(Cterm, 즉 콜린 결합 도메인 결여)(예를 들어, LytCCterm 또는 Sp91Cterm)을 포함한다. 더 바람직하게는 CbpX는 CbpA, PbcA, SpsA 및 PspC로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더더욱 바람직하게는, 이는 CbpA이다. 바람직하게는, LytX는 LytC(또는 Sp91로 언급됨)이다. 본 발명의 다른 구체예는 콜린 결합 도메인(C) 결여 PspA 또는 PsaA 트렁케이트이고 LytX와의 융합 단백질로서 표현된다. 바람직하게는, LytX는 LytC이다.
PsaA 및 PspA에 대해서는, 이들 둘 다 당분야에 공지되어 있다. 예를 들어, PsaA 및 이의 막 결손 변이체가 문헌[참조예: Berry amp; Paton, Infect I㎜un 1996 Dec; 64(12):5255-62]에 기술되어 있다. PspA 및 이의 막 결손 변이체가, 예를 들어, 미국특허 제5804193호, 국제공개공보 WO 92/14488호 및 국제공개공보 WO 99/53940호에 기술되어 있다.
Sp128 및 Sp130는 국제공개공보 WOOO/76540호에 기재되어 있다. Sp125는 LPXTG(여기서 X는 임의의 아미노산이다)의 세포벽 고정 모티프를 갖는 폐렴구균 표면 단백질의 예이다. 당해 모티프를 갖는 폐렴구균 표면 단백질의 이러한 부류내에 임의의 단백질은 본 발명의 내용에 유용한 것으로 밝혀졌고, 따라서 본 발명의 추가의 단백질로서 간주된다. sp125 그 자체는 국제공개공보 WO98/18930호에 기재되어 있고, 또한 ZmpB-아연 메탈로프 로페이나제로서 언급된다. Sp101은 국제공개공보 WO98/06734호(여기서 이는 참조번호 #y85993을 갖는다)에 기재되어 있다. 이는 I형 신호 서열에 의해 특징지워진다. Spl33은 국제공개공보 WO 98/06734호(여기서 이는 참조번호 #y85992를 갖는다)에 기재되어 있다. 이는 I형 신호 서열에 의해 특징지워진다.
복합 백신(특히 중이염 예방용)에 포함될 수 있는 바람직한 모락셀라 카타르할리스(Moraxella catarrhalis) 단백질 항원의 예는 다음과 같다: OMP106[국제공개공보 WO 97/41731호(Antex) & 국제공개공보 WO 96/34960호(PMC)]; OMP21 또는 이의 단편(국제공개공보 WO 0018910호); LbpA 및/또는 LbpB[국제공개공보 WO 98/55606(PMC)]; TbpA 및/또는 TbpB[국제공개공보 WO 97/13785호 & WO 97/32980호(PMC)]; CopB[Helminen ME, et al.(1993) Infect. I㎜un. 61:2003-2010]; UspA1 및/또는 UspA2[국제공개공보 WO 93/03761호(University of Texas)]; OmpCD; HasR(PCT/유럽특허 EP99/03824호); PilQ(PCT/유럽특허 EP99/03823); OMP85(PCT/유럽특허 EP00/01468호); lipo06(영국특허 GB 9917977.2호); lipo1O(영국특허 GB 9918208.1호); lipo11(GB991 8302.2); lipo18(영국특허 GB 9918038.2호); P6(PCT/유럽특허 EP99/03038호); D15(PCT/유럽특허 EP99/03822호); OmplA1(PCT/유럽특허 EP99/06781); Hly3(PCT/유럽특허 EP99/03257호); 및 OmpE. 복합 백신(특히 중이염 예방용)에 포함될 수 있는 정형불가한(non-typeable) 헤모릴루스 인플루엔자 항원의 예는 다음을 포함한다: 핌브린 단백질[(미국특허 US 5766608호 - Ohio State Research Foundation)] 및 이로부터의 펩티드를 포함하는 융합물[예를 들어, LB(f) 펩티드 융합물; 미국특허 US 5843464호(OSU) 또는 국제공개공보 WO99/64067호]; OMP26[국제공개공보 WO 97/01638호(Cortecs)]; P6[유럽특허 EP 281673g호(State University of New York)]; TbpA 및/또는 TbpB; Hia; Hsf; Hin47; Hif; Hmwl; Hmw2; Hmw3; Hmw4; Hap; D15(국제공개공보 WO94/12641호); P2; 및 P5(국제공개공보 WO94/26304호)를 포함한다.
본 발명의 단백질은 또한 조합되는 것이 이로울 수 있다. '조합된'이라는 용어는 면역원성 조성물이 하기 조합물내의 모든 단백질을, 운반체 단백질로서 또는 유리 단백질로서, 또는 상기 둘의 혼합물로서 포함한다는 것을 의미한다. 예를 들어, 이후부터 언급되는 2가지 단백질의 조합물에서, 두 단백질은 운반체 단백질로 사용되거나, 두 단백질은 유리 단백질로 존재하거나, 두 단백질은 운반체 및 유리 단백질로 존재하거나, 한 단백질은 운반체 단백질 및 유리 단백질로 존재하며 한편, 다른 단백질은 단지 운반체 단백질로만 또는 단지 유리 단백질로만 존재하거나, 한 단백질은 운반체 단백질로 존재하며 다른 한 단백질은 유리 단백질로 존재할 수 있다. 3가지 단백질의 조합이 주어진 경우, 유사한 가능성이 존재한다. 바람직한 조합은, 이로만 국한되는 것은 아니지만, PhtD + NRlxR2, PhtD + NRlxR2P, PhtD + NRlxR2-Sp91Cterm 키메라 또는 융합 단백질, PhtD + Ply, PhtD + Sp128, PhtD + PsaA, PhtD + PspA, PhtA + NRlxR2, PhtA + NR1xR2P, PhtA + NRlxR2-Sp91Cterm 키메라 또는 융합 단백질, PhtA + Ply, PhtA + sp128, PhtA + PsaA, PhtA + PspA, NRlxR2 + LytC, NRlxR2P + PspA, NRlR2 + PspA, NR1xR2P + PsaA, NRlxR2 + PsaA, NRlxR2 + sp128, RlxR2 + LytC, RlxR2 + PspA, RlxR2 + PsaA, RlxR2 + Sp128, R1xR2 + PhtD, RlxR2 + PhtA를 포함한다. 바람직하게는, NRlxR2(또는 RlxR2)는 CbpA 또는 PspC에서 나온다. 더 바람직하게는 상기 조합은 CbpA로부터 나온다. 다른 조합물은 PhtD + NR1xR2P + Ply와 PhtA + NRlxR2 + PhtD와 같은 3개의 단백질 조합물을 포함한다. 한 구체예에서, 복합 백신은 무독화된 뉴몰리신과 운반체 단백질로서 PhtD 또는 PhtDE를 포함한다. 추가의 구체예에서, 복합 백신은 무독화된 뉴몰리신과 유리 단백질로서 PhtD 또는 PhtDE를 포함한다.
독립적인 양상에서, 본 발명은 상이한 폐렴구균 혈청형으로부터의 당류를 내포하는 4개 이상의 폐렴구균 캡슐 당류 컨주게이트를 포함하는 면역원성 조성물을 제공하는데, 여기서, 하나 이상의 당류는 PhtD 또는 이의 융합 단백질에 컨주게이션되며, 상기 면역원성 조성물은 PhtD에 대한 유효한 면역 반응을 개시시킬 수 있다.
PhtD 또는 이의 융합 단백질에 대한 유효한 면역 반응은, 예를 들어, 실시예 15에 기재되어 있는 것과 같은 보호 검정(protection assay)에 의해 측정된다. 유효한 면역 반응은 이종성 균종(heterologous strain)으로 공격 후 7일 경과시, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상 또는 90% 이상의 생존율을 제공한다. 공격 종이 이종라는 것을 고려하면, 제공된 보호는 PhtD 또는 이의 융합 단백질에 대한 면역 반응에 기인한다.
대안적으로, PhtD에 대한 유효한 면역 반응은 실시예 14에 기술된 것과 같은 ELISA에 의해 측정된다. 유효한 면역 반응은 적어도 300, 350, 400, 500, 550 또는 600㎍/㎖ GMC의 항-PhtD IgG 반응을제공한다.
예를 들어, 면역원성 조성물은 PhtD 또는 이의 융합 단백질에 컨주게이션된, 상이한 혈청형들로부터의 2종 이상, 3종 이상, 4종 이상, 5종 이상, 6종 이상, 7종 이상, 8종 이상, 9종 이상 또는 10종 이상의 폐렴구균 캡슐 당류를 포함한다. 예를 들어, 혈청형 22F 및 혈청형 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N1 9V11 OA, 11A112F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 23F 및 33F로부터 추가로 선택된 1종, 2종, 3종, 4종, 5종, 6종 또는 7종의 당류가 PhtD에 컨주게이션된다. 한 구체예에서, 2 또는 3종의 혈청형 3, 6A 및 22F가 PhtD 또는 이의 융합 단백질에 컨주게이션된다.
한 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 링커, 예를 들어 ADH를 통해, PhtD 또는 이의 융합 단백질에 컨주게이션된 하나 이상의 폐렴구균 캡슐 당류를 포함한다. 한 구체예에서, 아래 나열된 컨주게이션 화학 중 하나가 사용된다.
한 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 PhtD 또는 이의 융합 단백질에 컨주게이션된 폐렴구균 캡슐 당류를 포함하는데, 여기서 상기 컨주게이트내에서 PhtD 대 당류의 비는 6:1 내지 1:5, 6:1 내지 2:1, 6:1 내지 2.5:1, 6:1 내지 3:1, 6:1 내지 3.5:1(w/w)이거나 2.0:1, 2.5:1, 3.0:1, 3.5:1 또는 4.0:1(w/w)를 이상이다(즉, PhtD를 더 많은 비율로 포함함).
한 구체예에서, 본 발명의 면역원성 조성물은 뉴모라이시스(pneumolysis)를 포함한다.
본 발명은 추가로 본 발명의 면역원성 조성물과 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 백신을 제공한다.
본 발명의 백신은 애주번트화될 수 있는데, 특히 고령 개체군에 사용이 의도된 경우와 더불어 유아 개체군에 사용이 의도된 경우에 그러하다. 적합한 애쥬번트는 알루미늄 염, 예컨대, 수산화알루미늄 겔 또는 인산 알루미늄을 포함하지만, 또한 다른 금속 염, 예컨대, 칼슘, 마그네슘, 철 또는 아연의 염일 수 있고, 아실화 티로신, 또는 아실화 당, 양이온적으로 또는 음이온적으로 유도체화된 당류, 또 는 폴리포스파젠의 불용성 현탁액일 수 있다.
TH1 형 반응의 우세한 유도인자가 되도록 당해 애쥬번트를 선택하는 것이 바람직하다. 이러한 고수준의 Th1-형 사이토카인은 소정의 항원에 대한 세포성 면역 반응의 유도를 촉진하는 경향이 있는 반면, 고수준의 Th2-형 사이토카인은 당해 항원에 대한 체액성 면역 반응의 유도를 촉진하는 경향이 있다.
Th1 및 Th2-형 면역 반응이 절대적인 것은 아니라는 점을 기억하는 것이 중요하다. 실제로, 개체는 우선적으로 Th1 또는 우선적으로 Th2로 기재된 면역 반응을 지지할 것이다. 그러나, Mosmann 및 Coffman에 의한 생쥐 CD4 +ve T 세포 클론에 기술되어 있는 내용의 측면에서 사이토카인 패밀리을 고려하는 것이 흔히 편리하다[참조: Mosmann, T. R. and Coffman, R. L.(1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of I㎜unology, 7, pl45-173]. 전통적으로, Th1-형 반응은 T 림프구에 의한 INF-γ 및 IL-2 사이토카인의 생성과 관련이 있다. Th1-형 면역 반응과 흔히 직접적으로 연관되어 있는 다른 사이토카인은 T 세포, 예를 들어, IL-12에 의해 생성되지 않는다. 대조적으로, Th2-형 반응은 IL-4, IL-5, IL-6, IL-10의 분비와 관련되어 있다. 우선적으로 Th1 반응을 촉진하는 적합한 애쥬번트 시스템은 다음을 포함한다: 모노포스포릴 지질 A 또는 이의 유도체(또는 일반적으로 무독화된 지질 A - 예를 들어, 국제공개공보 WO2005107798 참조), 특히 3-데-O-아실화 모노포스포릴 지질 A(3D-MPL)(이의 제조와 관련하여 GB 2220211A 참조); 및 알루미늄 염(예를 들어, 인산알루미늄 또는 수산화알루미늄) 또는 수중유 에멀젼 중 어느 하나와 함께, 조합된 모노포스포릴 지질 A, 바람직하게는 3-데-O-아실화 모노포스포릴 지질 A. 이러한 조합물에서, 항원 및 3D-MPL은 동일한 미립자 구조로 함유되어, 항원성 및 면역자극성 신호의 더 효율적인 전달을 가능케 한다. 연구 결과 3D-MPL이 백반-흡착 항원의 면역원성을 더 향상시키는 것으로 나타났다[참조: Thoelen et al. Vaccine(1998) 16:708-14; 유럽특허 EP689454-B1호].
향상된 시스템은 모노포스포릴 지질 A와 사포닌 유도체의 조합물, 특히 국제공개공보 WO 94/00153호에 소개된 QS21과 3D-MPL의 조합물 또는 국제공개공보 WO 96/33739호에 소개된 QS21이 콜레스테롤로 켄칭된 낮은 반응원성 조합물을 포함한다. 수중유 에멀젼 중의 QS21, 3D-MPL 및 토코페롤을 포함하는 특히 효능있는 애쥬번트 제형은 국제공개공보 WO 95/17210호에 기재되어 있다. 일 구체예에서, 면역원성 조성물은 추가로 사포닌을 포함하는데, 상기 사포닌은 QS21일 수 있다. 제형은 또한 수중유 에멀젼 및 토코페롤을 포함할 수 있다(국제공개공보 WO95/17210호). 비메틸화 CpG 함유 올리고뉴클오타이드(국제공개공보 WO 96/02555호)가 또한 TH1 반응의 우세한 유도인자이고 본 발명에서 사용하기에 적합하다.
특별한 애주번트는 금속 염, 수중유 에멀젼, 톨 유사 수용체 작용제(톨 유사 수용체s 작용제), (특히, 톨 유사 수용체 2 작용제, 톨 유사 수용체 3 작용제, 톨 유사 수용체 4 작용제, 톨 유사 수용체 7 작용제, 톨 유사 수용체 8작용제, 및 톨 유사 수용체 9 작용제), 사포닌 또는 이의 조합물로 구성된 군에서 선택된 애주번트이다.
본 발명의 백신 조성물과 함께 사용될 수 있는 그램 음성 세균 종으로부터의 애주번트는 국제공개공보 WO02/09746호에 교시된 것과 같은 그램 음성 세균 종으로부터의 수포(bleb) 또는 외막 소포(outer membrane vesicle) 제조물이다 - 특히 나이세리아 메닝지티디스 수포. 수포의 애주번트 특성은 이의 표면 상에 LOS(lipooligosaccharide)를 보유함으로써 개설될 수 있다(예를 들어, 저 농도의 계면활성제[예를 들어, 0-0.1% 데옥시콜레이트]를 이용한 추출을 통해). LOS는 국제공개공보 WO02/09746호에서 논의된 msbB(-) 또는 htrB(-) 돌연변이를 통해 무독화될 수 있다. 애주번트 특성은 또한 수막구균 수포(meningococcal blebs)로부터의 P또는B를 보유시킴으로써(및 선택적으로 P또는A를 제거함으로써) 개선될 수 있다. 애주번트 특성은 수막구균 수포 상의 LOS의 외부 코어 당류 구조를 트렝케이션시킴으로써 개선될 수도 있다 - 예를 들어, 국제공개공보 WO2004/014417호에 논의된 IgtB(-) 돌연변이를 통해 가능. 대안적으로, 앞서 언급된 LOS(예를 들어, msbB(-) 및/또는 IgtB(-) 종으로 부터 동정됨)는 본 발명의 조성물에서 애주번트로서 정제 및 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물과 함께 사용될 수 있는 추가의 애주번트는 다음 군으로부터 선택될 수 있다: 사포닌, 지질 A 또는 이의 유도체, 면역자극성 올리고뉴클레오티드, 알킬 글루코사미니드 포스페이트, 수중유 에멀젼 또는 이의 조합물. 추가의 바람직한 애주번트는 또 다른 애주번트와 조합된 금속 염이다. 애주번트가 톨 유사 수용체 작용제, 특히 톨 유사 수용체 2, 3, 4, 7, 8 또는 9의 작용제, 또는 사포닌(특히, Qs21)인 것이 바람직하다. 애주번트 시스템은 상기 목록으로부터 2종 이상의 애주번트를 포함하는 것이 더 바람직하다. 특히, 조합물은 사포닌(특히, Qs21) 애주번트 및/또는 톨 유사 수용체 9 작용제 예컨대, CpG 함유 면역자극 올리고뉴클레오티드를 함유하는 것이 바람직하다. 다른 바람직한 조합물은 사포닌(특히 QS21)과 톨 유사 수용체 4 작용제, 예컨대, 모노포스포릴 지질 A 또는 이의 3 탈아실화 유도체, 3D-MPL, 또는 사포닌(특히, QS21)과 톨 유사 수용체 4 리간드, 예컨대, 알킬 글루코사미니드 포스페이트를 포함한다.
특히 바람직한 애주번트는 3D-MPL과 QS21의 조합물(유럽특허 EP O 671 948 B1호), 3D-MPL과 QS21를 포함하는 수중유 에멀젼(국제공개공보 WO 95/17210호, 국제공개공보 WO 98/56414호), 또는 다른 운반체들로 제형화된 3D-MPL(유럽특허 EP O 689 454 B1호)이다. 다른 선호되는 애주번트 시스템은 미국특허 US6558670호, US6544518호에 소개된 3D MPL, QS21 및 CpG 올리고뉴클레오티드의 조합물을 포함한다.
한 구체예에서, 애주번트는 톨 유사 수용체(TLR) 4 리간드, 바람직하게는 작용제, 예컨대, 지질 A 유도체, 특히 모노포스포릴 지질 A 또는 더 바람직하게는 3-탈아실화된 모노포스포릴 지질 A(3D-MPL)이다(또는 포함함).
3D-MPL은 글락소스미스클라인 바이올로지칼즈 노스 아메리카(GlaxoSmithKline Biologicals North America)로부터 구매할 수 있으며 IFN-g(Th1) 표현형을 지닌 CD4+ T 세포 반응을 주로 촉진한다. 3D-MPL은 GB 2 220 211 A에 기술된 방법에 따라 제조될 수 있다. 화학적으로, 3D-MPL은 3-탈아실화된 모노포스포릴 지질 A와 3, 4, 5 또는 6 아실화 사슬의 혼합물이다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물에서는 소입자 3D-MPL이 사용된다. 소입자 3D-MPL은 0.22㎛ 필터 를 통해 살균 여과될 수 있는 입자 크기를 갖는다. 이러한 제조물은 국제공개공보 WO 94/21292호에 기술되어 있다. 지질 A의 합성 유도체들이 공지되어 있으며, 이에만 국한되는 것은 아니지만, 다음을 포함하는 TLR 4 작용제일 것으로 생각된다:
OM174(2-데옥시-6-o-[2-데옥시-2-[(R)-3-도데카노일옥시테트라-데카노일아미노]-4-o-포스포노-β-D-글루코피라노실]-2-[(R)-3-히드록시테트라데카노일아미노]-α-D-글루코피라노실디히드로겐포스페이트), (국제공개공보 WO 95/14026호)
OM294 DP(3S, 9R)-3-[(R)-도데카노일옥시테트라데카노일아미노]-4-옥소-5-아자-9(R)-[(R)-3-히드록시테트라 데카노일아미노]데칸-1,10-디올, 1,10-비스(디히드로게노포스페이트)(국제공개공보 WO 99/64301호 및 국제공개공보 WO 00/0462호)
OM197 MP-Ac DP(3S-, 9R)-3-[(R)-도데카노일옥시테트라데카노일아미노]-4-옥소-5-아자-9-[(R)-3-히드록시테트라데카노일아미노]데칸-1,10-디올, 1-디히드로게노포스페이트 10-(6-아미노헥사노에이트)(국제공개공보 WO 01/46127호)
사용될 수 있는 다른 TLR4 리간드는 예컨대, 국제공개공보 WO9850399호 또는 미국특허 US6303347호(AGP의 제조 방법도 소개되어 있음)에 개시된 알킬 글루코사미니드 포스페이트(AGP), 또는 미국특허 US6764840호에 개시된 AGP의 약제학적으로 허용되는 염이다. 일부 AGP들은 TLR4 작용제이며, 일부는 TLR4 길항제이다. 양자 모두 애주번트로서 유용할 것으로 생각된다.
본 발명에 사용하기 위한 또 다른 바람직한 면역자극제는 퀼(Quil) A 및 이의 유도체이다. 퀼 A는 남 아메리카산 나무인 퀼라자 사포나리아 모닐라(Quilaja Saponaria Molina)에서 단리된 사포닌 제조물이고 1974년에, 달스가드 등(Dalsgaard et al)에 의해 최초로 애주번트 활성을 지니고 있음이 개시되었다("Saponin adjuvants", Archiv fur die gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, Berlin, p243-254). 퀼 A의 정제된 단편은 HPLC에 의해 동정되었는데, Quil A(유럽특허 EP 0 362 278), 예를 들어 QS7 및 QS21(QA7 및 QA21로도 공지되어 있음)과 관련된 독성 없이 애주번트 활성을 보유한다. QS-21은 퀼라자 사포나리아 몰리나(Quillaja saponaria Molina)의 수피로부터 유래한 천연 사포닌인데, CD8+ 세포독성 T 세포(CTLs), TM 세포 및 우세한 IgG2a 항체 반응을 유도하며, 본 발명의 문맥에서 바람직한 사포닌이다.
특히, 바람직한 것으로 기술되어 온 QS21의 바람직한 제형에서, 이러한 제형은 스테롤을 추가로 포함한다(국제공개공보 WO96/33739호). 본 발명의 일부를 구성하는 사포닌은 미셀(micelles), 혼합된 미셀(우세하게, 그러나 비독점적으로 담즙산과 함께)의 형태로 별개로 존재하거나 ISCOM 매트릭스(유럽특허 EP 0 109 942 B1), 리포좀 또는 관련된 콜로이드성 구조, 예컨대, 웜-형(worm-like) 또는 링-형(ring-like) 다가 복합체 또는 지질형/층형 구조 및 라멜라(콜레스텔롤과 지질로 제형화될 때), 또는 수중유 에멀젼의 형태(예를 들어, 국제공개공보 WO 95/17210호에 소개된 형태)로 존재할 수 있다. 사포닌은 바람직하게는 금속성 염, 예컨대, 수산화알루미늄 또는 인산알루미늄(국제공개공보 WO 98/15287호)과 결합될 수 있다.
바람직하게는, 사포닌이 리포좀, ISCOM 또는 수중유 에멀젼의 형태로 제공된다.
향상된 시스템은 모노포스포릴 지질 A(또는 무독화된 지질 A)와 사포닌 유도체의 조합물, 특히 국제공개공보 94/00153호에 소개된 QS21과 3D-MPL의 조합물 또는 국제공개공보 WO 96/33739호에 소개된 QS21이 콜레스테롤로 켄칭되는 낮은 반응원성 조성물을 포함한다. 수중유 에멀젼 중에 QS21 및/또는 3D-MPL을 지니거나 지니지 아니하는 토코페롤을 포함하는 특히 효능있는 애쥬번트 제형은 국제공개공보 WO 95/17210호에 기재되어 있다. 한 구체예에서, 면역원성 조성물은 추가로 사포닌(QS21일 수 있음)을 포함한다.
면역자극성 올리고뉴클레오티드 또는 임의의 다른 톨-유사 수용체(TLR) 9 작용제가 또한 사용될 수 있다. 본 발명의 애주번트 또는 백신에 사용하기에 바람직한 올리고뉴클레오티드는 CpG 함유 올리고뉴클레오티드인데, 바람직하게는 3개 이상, 더 바람직하게는 6개 이상의 뉴클레오티드에 의해 분리된 2개 이상의 디뉴클레오티드 CpG 모티프를 포함하는 것이 바람직하다. CpG 모티프는 시토신 뉴클레오티드 다음에 뒤이어 구아닌 뉴클레오티드가 이어진다. 본 발명의 CpG 올리고뉴클레오티드는 전형적으로 데옥시뉴클레오티드이다. 바람직한 구체예에서, 올리고뉴클레오티드내의 뉴클레오티드간(internucleotide) 포스포로디티오에이트, 또는 더 바람직하게는 포스포로티오에이트 결합이지만, 포스포디에스터 및 다른 뉴클레오티드간 결합이 본 발명의 영역내에 포함된다. 본 발명의 영역내에는 혼합된 뉴클레오티드간 결합을 지니는 올리고뉴클레오티드들도 포함된다. 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드 또는 포스포로디티오에이트를 생산하기 위한 방법은 미국특허 US 5,666,153호, US 5,278,302호 및 국제공개공보 WO95/26204호에 소개되어 있다.
바람직한 올리고뉴클레오티드의 예는 하기 서열을 지닌다. 당해 서열은 포스포로티오에이트 변형 뉴클레오티드간 결합을 내포하는 것이 바람직하다.
올리고 1(서열번호:1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT(CpG 1826)
올리고 2(서열번호:2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT(CpG 1758)
올리고 3(서열번호:3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG
올리고 4(서열번호:4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT(CpG 2006)
올리고 5(서열번호:5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT(CpG 1668)
올리고 6(서열번호:6): TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G(CpG 5456)
대안적으로, CpG 올리고누클레오티드는 사소한 결손 또는 첨가를 지니는 상기 바람직한 서열을 포함할 수 있다.
본 발명에 사용된 CpG 올리고누클레오티드는 당 분야에 공지된 임의의 방법(예를 들어, 유럽특허 EP 468520호)에 의해 합성될 수 있다. 편리하게는, 이와 같은 올리고누클레오티드는 자동화된 합성기를 사용하여 합성될 수 있다.
애주번트는 수중유 에멀젼이거나 다른 애주번트와 조합된 수중유 에멀젼을 포함할 수 있다. 에멀젼 시스템의 오일상(oil phase)은 바람직하게는 대사가능한 기름을 포함한다. 용어 '대사가능한'은 '대사작용에 의해 변형될 수 있는"이라는 의미로 정의될 수 있다[참조: Dorland's Illustrated Medical Dictionary, W.B. Sanders Company, 25th edition(1974)]. 상기 기름은 수혜자에게 비독성이고, 대사에 의해 변형될 수 있는, 임의의 식물성 기름, 어류성 기름, 동물성 기름 또는 합성 기름일 수 있다. 견과, 종자 및 곡물은 식물성 기름의 통상적인 공급원이다. 합성 기름 또한 본 발명의 일부이며, 통상적으로 구입할 수 있는 기름, 예컨대, NEOBEE® 등을 포함할 수 있다. 스쿠알렌(2,6,10,15,19,23-헥사메틸-2,6,10,14,18,22-테트라코사헥산)은 상어간 기름에서 대량으로, 그리고 올리브기름, 밀배아기름, 쌀겨기름, 및 효모에서 소량으로 발견되는 불포화 기름이며, 본 발명에 사용하기에 특히 바람직한 오일이다. 스쿠알렌은 콜레스테롤 생합성에서 중간체라는 사실에 비추어 대사가능한 오일이다[참조: Merck index, 10th Edition, entry no.8619].
토콜(예를 들어, 비타민 E)이 또한 흔하게 오일 애주번트(유럽특허 EP 0 382 271 B1호; 미국특허 US 5667784호; 국제공개공보 WO 95/17210호)로 사용된다. 본 발명의 오일 에멀젼(바람직하게는, 수중유 에멀젼)에 사용되는 코콜은 유럽특허 EP 0 382 271 B1호에 소개된 것과 같이 제형화될 수있는데, 토콜은, 선택적으로 유화제를 포함하며, 바람직하게는 직경 1미크론 미만의 토콜 방울의 분산액일 수 있다. 대안적으로, 토콜은 오일 에멀젼의 오일상을 형성하기 위해 또 다른 오일과 조합되어 사용될 수 있다. 토콜과 조합되어 사용될 수 있는 오일 에멸젼의 예는, 본원에 기술되어 있는데, 예컨대, 상술한 대사가능한 오일이다.
수중유형 에멀젼 애쥬번트는 그 자체가 애쥬번트 조성물로서 유용한 것으로 제안되었고(유럽특허 EP 0 399 843B호), 또한 수중유형 에멀젼과 그 밖의 활성제의 조합물이 백신용 애쥬번트로서 소개된 바 있다(국제공개공보 WO 95/17210호; 국제공개공보 WO 98/56414호; 국제공개공보 WO 99/12565호; 국제공개공보 WO 99/11241 호). 유중수형 에멀젼(미국특허 US 5,422,109호; 유럽특허 EP 0 480 982 B2호) 및 수중유중수형 에멀젼(미국특허 US 5,424,067호; 유럽특허 EP 0 480 981 B호)과 같은 그 밖의 오일 에멀젼 애쥬번트가 소개되었다. 본 발명의 애주번트와 조성물을 구성하는데 모든 형태의 오일 에멀젼 시스템(특히, 토콜을 포함하는 경우)이 바람직하다.
가장 바람직하게는, 오일 에멀젼(예를 들어, 수중유 에멀젼)은 추가로 유화제, 예컨대, TWEEN 80 및/또는 스테롤, 예컨대, 콜레스테롤을 포함한다.
바람직한 오일 에멀젼(바람직하게는, 수중유 에멀젼)은 대사가능한, 비독성 오일, 예컨대, 스쿠알란, 스쿠알렌 또는 토코페롤, 예컨대, 알파 토코페롤(및 바람직하게는 스쿠알렌 및 알파 토코페롤 둘 모두) 및 선택적으로 유화제(또는 계면활성제), 예컨대, 트윈 80을 포함한다. 스테롤(바람직하게는, 콜레스테롤)이 포함될 수도 있다.
수중유형 에멀젼의 제조 방법은 당업계의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다. 보통, 이 방법은 토콜-함유 오일상을 PBS/TWEEN80™과 같은 계면활성제와 혼합하고 나서, 균질화기를 이용하여 균질화시키는 것을 포함하고, 주사기 바늘을 통해 혼합물을 2회 통과시키는 방법이 소부피의 액체를 균질화하는데 적절하다는 것은 당업계의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 동일하게, 마이크로 유동화기(M110S microfluidics machine, 최대 50 패스, 최대 압력 인풋 6바(bar)에서 2분간(약 850바의 아웃풋 압력))에서의 에멀젼화 공정은 보다 작은 부피나 보다 큰 부피의 에멀젼을 생산하기 위해 당업계의 통상의 기술자에 의해 변형될 수 있다. 이 러한 변형은, 요구되는 직경의 오일 소적을 갖는 제조물이 획득될 때까지 생성된 에멀젼에 대한 측정을 포함하는 정규 실험에 의해 달성될 수 있다. 수중유 에멀젼에서, 오링 및 유화제는 수성 담체로 존재하여야 한다. 상기 수성 담체는, 예를 들어, 인산 완충 염수일 수 있다.
안정한 수중유형 에멀젼내에서 발견되는 오일 소적(small droplets)의 크기는 광자 상관성 분광기(photon correlation spectroscopy)에 의해 측정한하여, 바람직하게 1미크론 미만이고, 실제로 30 내지 600nm의 범위일 수 있으며, 바람직하게는 실제로 약 30-500nm의 직경, 가장 바람직하게는 실제로 약 150-500nm의 직경, 그리고 특히 약 150nm의 직경을 갖는다. 이와 관련하여, 수치상 80%의 오일 소적(droplets)이 바람직한 범위내에 있어야 하고, 보다 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 수치상 95% 이상의 오일 소적이 상기 규정된 크기 범위내에 있어야 한다. 본 발명의 오일 에멀젼내에 존재하는 성분량은 통상적으로 스쿠알렌 등의 오일이 0.5-20% 또는 2 내지 10%; 존재하는 경우, 알파 토코페롤이 2 내지 10%; 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레이트와 같은 계면활성제가 0.3 내지 3%의 범위내로 존재한다. 오일(바람직하게는, 스쿠알렌):토콜(바람직하게는, α-토코페롤)의 비는 보다 안정한 에멀젼을 제공하도록 1이거나 1 미만인 것이 바람직하다. 또한 트윈80(Tween80) 또는 스팬85(Span85)와 같은 유화제가 약 1% 수준으로 존재할 수 있다. 몇몇 경우, 본 발명의 백신이 추가로 안정제를 함유하는 것이 유리할 수 있다.
스쿠알렌, α-토코페롤 및 트윈 80에 기반하여, 선택적으로 면역자극제 QS21 및/또는 3D-MPL을 제형화시킨 에멀젼 애쥬번트가 교시된 국제공개공보 WO 95/17210호 및 WO 99/11241호에 바람직한 에멀젼 시스템의 구체예가 기술되어 있다. 따라서, 특히, 본 발명의 바람직한 구체예에서, 본 발명의 애주번트는 추가적으로 면역자극제, 예컨대, LPS 또는 이의 유도체, 및/또는 사포닌을 더 포함할 수 있다. 추가의 면역자극제의 예는 본원 및 다음 문헌["Vaccine Design - The Subunit and Adjuvant Approach" 1995 Pharmaceutical Biotechnology, Volume 6, Eds Powell, M F, and Newman, M. J., Plenum Press, New York and London, ISBN 0-306-44867-X]에 소개되어 있다.
바람직한 양상에서, 본 발명에 따른 애주번트 및 면역원성 조성물은, 선택적으로 스테롤(바람직하게는, 콜레스테롤)과 함께, 상술한 오일 에멀젼 중에 사포닌(바람직하게는, QS21) 및/또는 LPS 유도체(바람직하게는, 3D-MPL)를 포함한다. 추가적으로, 오일 에멀젼(바람직하게는, 수중유 에멀젼)은 스팬 85 및/또는 레시틴 및/또는 트리카프릴린을 포함한다. 수중유 에멀젼, 스테롤 및 사포닌을 포함하는 애주번트는 국제공개공보 WO 99/12565호에 소개되어 있다.
전형적으로, 인간 투여용으로, 사포닌(바람직하게는, QS21 ) 및/또는 LPS 유도체(바람직하게는, 3D-MPL)는 용량 당 1㎍-200㎍, 예컨대, 10-100㎍, 바람직하게는, 10㎍-50㎍의 범위 내로 면역원성 조성물의 인간 용량에 존재할 것이다. 전형적으로, 오일 에멀젼(바람직하게는, 수중유 에멀젼)은 2 내지 10% 대사가능한 오일을 포함할 것이다. 바람직하게는, 상기 오일 에멀젼은 2 내지 10% 스쿠알렌, 2 내지 10% 알파 토코페롤 및 0.3 내지 3%(바람직하게는, 0.4-2%) 유화제(바람직하게 는, 트윈 80[폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트])을 포함할 것이다. 스쿠알렌과 알파 토코페롤 둘 모두가 존재하는 경우, 스쿠알렌:알파 토코페롤의 비는 보다 더 안정한 유화를 제공하도록 1 또는 1미만이다. 스팬 85(소르비탄 트리올레이트)가 또한 본 발명에 사용된 에멀젼에서 0.5 내지 1% 수준으로 존재할 수 있다. 일부 경우, 본 발명의 면역원성 조성물 및 백신은 추가로 안정제, 예를 들어, 다른 유화제/계면활성제[카프릴산을 포함하며(merck index 10th Edition, entry no 1739), 트리카플릴린이 특히 바람직함]를 포함할 것이다.
스쿠알렌 및 사포닌(바람직하게는, QS21)이 포함되는 경우, 에멀젼내 오일의 총 수준이 감소되도록 제형에 스테롤(바람직하게는, 콜레스테롤)을 포함시키는 것이 또한 유익하다. 이것은 제조비용의 감소, 백신접종의 전반적인 안락함의 개선, 결과적으로 생성되는 면역 반응의 질적 및 양적 개선, 예컨대, 개선된 IFN-γ 생산을 유도한다. 따라서, 본 발명의 애주번트 시스템은 전형적으로 200:1 내지 300:1의 범위의 대사가능 오일:사포닌의 비(w/w)를 포함하며, 또한 본 발명은 1:1 내지 200:1, 바람직하게는, 20:1 내지 100:1, 및 가장 바람직하게는, 실질적으로 48:1의 바람직한 범위의 "저 오일(low oil)" 형태로 사용될 수 있으며, 이 백신은 훨씬 감소된 반응원성(reactogenicity) 프로파일을 지니면서, 모든 성분들의 유익한 애주번트 특성들을 보유한다. 따라서, 특히 바람직한 구체예는 1:1 내지 250:1의스쿠알렌:QS21의 비(w/w)를 지니며, 또한 바람직한 범위는 20:1 내지 200:1, 바람직하게는, 20:1 내지 100:1, 및 가장 바람직하게는, 실질적으로 48:1이다. 바람직하게는, 포함된 스테롤(가장 바람직하게는, 콜레스테롤)은 또한 본원에 소개된 것과 같 은 사포닌:스테롤의 비로 존재한다.
본 발명의 에멀젼 시스템은, 바람직하게는, 서브-미크론 범위로 오일 소적 크기를 지닌다. 가장 바람직하게는, 오일 소적 크기는 직경에 있어서 120 내지 750 nm, 및 가장 바람직하게는, 120-600nm 범위 이내일 것이다.
특히 효능있는 애주번트 제형(본 발명의 면역원성 조성물에서 AIPO4와 최적 조합을 위한 제형)은 국제공개공보 WO 95/17210호 또는 국제공개공보 WO 99/12565호에 소개된 것과 같이 사포닌(바람직하게는, QS21), LPS 유도체(바람직하게는, 3D-MPL) 및 오일 에멀젼(바람직하게는, 수중유 에멀젼 중의 스쿠알렌 및 알파 토코페롤)을 포함한다(특히, 실시예 2, 표 1의 애주번트 제형).
TLR 2 작용제의 예는 펩티도글리칸 또는 리포단백질을 포함한다. 이미다조퀴놀린, 예컨대, 이미퀴모드 및 레시퀴모드가 공지된 TLR7 작용제이다. 단일 가닥 RNA가 또한 공지된 TLR 작용제(인간에서 TLR8 및 생쥐에서 TLR7)이고, 한편, 이중 가닥 RNA 및 폴리 IC(폴리이노시닉-폴리시티딜산 - 바이러스 RNA의 상업적 합성 모방체)가 대표적인 TLR 3 작용제이다. 3D-MPL은 TLR4 작용제의 일예이며, 한편 CPG는 TLR9 작용제의 일예이다.
면역원성 조성물은 금속 염 상에 흡착된 항원 및 면역자극제를 포함할 수 있다. 항원 및 면역자극제 3-데-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A(3D-MPL)이 동일한 입자 상에 흡착된, 알루미늄 기반 백신 제형이 유럽특허 EP 0 576 478 B1호, 유럽특허 EP 0 689 454 B1호, 및 유럽특허 EP 0 633 784 B1호에 소개되어 있다. 상기 경우에서, 항원이 우선 알루미늄 염 상에 흡착되고 나서 동일한 알루미늄 입자 상 에 면역자극제 3D-MPL의 흡착이 후속된다. 상기 방법은 입자 크기가 80 내지 500nm에 도달될 때까지 우선 수조에서 초음파처리에 의한 3D-MPL의 현탁을 포함한다. 항원은 전형적으로 교반하에서 실온에서 1시간 동안 알루미늄 염 상에 흡착된다. 3D-MPL 현탁액은 이후 흡착된 항원에 첨가되고 제형은 실온에서 1시간 동안 인큐베이션되고 나서, 사용될 때까지 4℃에서 유지된다.
또 다른 방법에서, 면역자극제 및 항원은 유럽특허 EP 1126876호에 소개된 바와 같이, 별개의 금속 입자 상에 존재한다. 개선된 방법은 금속성 염 입자로의 면역자극제의 흡착 단계, 뒤이어 또 다른 금속성 염 입자로의 항원의 흡착 단계, 뒤이어 백신을 제조하기 위한 분산된 금속성 입자들의 혼합 단계를 포함한다. 본 발명에서 사용을 위한 애주번트는 금속성 염 입자 상에 흡착된 면역자극제를 포함하는 애주번트 조성물일 수 있는데, 상기 금속성 염 입자는 다른 항원이 실질적으로 결여되어 있음을 특징으로 한다. 더욱이, 백신이 본 발명에 의해 제공되며, 상기 백신에서 면역자극제는 다른 항원을 실질적으로 지니지 아니하는 금속 염의 입자 상에 흡착되며, 상기 항원에 흡착된 금속성 염의 입자는 다른 면역자극제를 실질적으로 지니지 아니함을 특징으로 한다.
따라서, 본 발명은 금속성 염의 입자 상에 흡착된 면역자극제를 포함하는 애주번트 제형을 제공하는데, 본 발명의 조성물은 다른 항원을 실질적으로 지니지 아니함을 특징으로 한다. 더욱이, 이 애주번트 제형은, 그러한 애주번트가 사용되는 경우, 백신 제조에 필요한 중간체일 수 있다. 따라서, 금속 입자 상에 흡착된 하나 이상의 면역자극제가 존재하는 애주번트 조성물을 항원과 혼합하는 단계를 포함 하는 백신 제조를 위한 방법이 제공된다. 바람직하게는, 상기 항원은 금속성 염 상에 미리-흡착된다. 상기 금속성 염은 면역자극제가 흡착된 금속성 염과 동일하거나 유사할 수 있다. 바람직하게는, 금속 염은 알루미늄 염, 예를 들어, 인산알루미늄 또는 수산화알루미늄이다.
본 발명은 추가로 금속성 염의 제 1 입자 상에 흡착된 면역자극제, 및 금속성 염의 제 2 입자 상에 흡착된 항원을 포함하는 백신 조성물을 제공하는데, 상기 금속성 염의 제 1 및 제 2 입자는 별개의 입자임을 특징으로 한다.
본원에서 소개된 LPS 또는 LOS 유도체 또는 돌연변이 또는 지질 A 유도체는 천연 리포다당류보다 독성이 적게(예를 들어, 3D-MPL) 디자인되며, 본원에 소개된 이러한 모이어티들의 임의의 용도와 관련하여 교체할 수 있는 등가물이다. 이들은 상술한 바와 같은 TLR4 리간드이다. 이와 같은 다른 유도체는 국제공개공보 WO020786737호, WO9850399호, WO0134617호, WO0212258호, WO03065806호에 소개되어 있다.
일 구체예에서, 본 발명의 조성물에 사용되는 애주번트는 리포좀 운반체(인지질(예컨대, 디올레오일 포스파티딜 콜린[DOPC]) 및 선택적으로 스테롤[예컨대, 콜레스테롤]로부터 공지된 기술에 의해 제조됨)을 포함한다. 그러한 리포좀 운반체는 지질 A 유도체[예컨대, 3D-MPL - 상기 참조] 및/또는 사포닌(예컨대, QS21 - 상기 참조)를 운반할 수 있다. 일 구체예에서, 애주번트는(0.5㎖ 용량 당) 0.1-10㎎, 0.2-7, 0.3-5, 0.4-2, 또는 0.5-1㎎(예를 들어, 0.4-0.6, 0.9-1.1, 0.5 또는 1㎎)의 인지질(예를 들어, DOPC), 0.025-2.5, 0.05-1.5, 0.075-0.75, 0.1-0.3, 또는 0.125-0.25㎎(예를 들어, 0.2-0.3, 0.1-0.15, 0.25 또는 0.125㎎)의 스테롤(예를 들어, 콜레스테롤), 5-60, 10-50, 또는 20-30㎍(예를 들어, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 또는 50㎍)의 지질 A 유도체(예를 들어, 3D-MPL), 및 5-60, 10-50, 또는 20-30㎍(예를 들어, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 또는 50㎍)의 사포닌(예를 들어, QS21)를 포함한다.
이 애주번트는 특히 고령자를 위한 백신 제형에 적당하다. 일 구체예에서, 이 애주번트를 포함하는 백신 조성물은 적어도 하기 모든 혈청형들로부터 유래된 당류 컨주게이트를 포함하는데, 여기서, 백신 성분 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F 중 1종 이상(또는 모두)에 대하여 유도된 GMC 항체 역가는 인간 백신인 Prevnar® 백신에 의해 유도된 역가에 비하여 실질적으로 열등하지 아니하다: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F(및 또한 혈청형 3, 6A, 19A, 및 22F 중에서 1종 이상을 포함할 수 있음).
일 구체예에서, 본 발명의 조성물에 사용되는 애주번트는 대사가능한 오일(예컨대, 스쿠알렌), 유화제(예컨대, Tween80) 및 선택적으로 토콜(예컨대, 알파 토코페롤)로 만들어진 수중유 에멀젼을 포함한다. 일 구체예에서, 애주번트는(0.5㎖ 용량 당) 0.5-15, 1-13, 2-11, 4-8, 또는 5-6㎎(예를 들어, 2-3, 5-6, 또는 10-11㎎)의 대사가능한 오일(예컨대, 스쿠알렌), 0.1-10, 0.3-8, 0.6-6, 0.9-5, 1-4, 또는 2-3㎎(예를 들어, 0.9-1.1, 2-3 또는 4-5㎎)의 유화제(예컨대, Tween80) 및 선택적으로 0.5-20, 1-15, 2-12, 4-10, 5-7㎎(예를 들어, 11-13, 5-6, 또는 2-3㎎) 의 토콜(예컨대, 알파 토코페롤)을 포함한다.
이 애주번트는 추가로 5-60, 10-50, 또는 20-30㎍(예를 들어, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 또는 50㎍)의 지질 A 유도체(예를 들어, 3D-MPL)를 포함한다.
이러한 애주번트는 특히 유아 또는 고령자용 백신 제형에 적당하다. 일 구체예에서, 이 애주번트를 포함하는 백신 조성물은 적어도 하기 모든 혈청형으로부터 유래된 당류 컨주게이트를 포함하는데, 여기서, 백신 성분 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F 중 1종 이상(또는 모두)에 대하여 유도된 GMC 항체 역가는 인간 백신인 Prevnar? 백신에 의해 유도된 역가에 비하여 실질적으로 열등하지 아니하다: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F(및 또한 혈청형 3, 6A, 19A, 및 22F 중 1종 이상을 포함할 수 있음).
이 애주번트는 선택적으로 0.025-2.5, 0.05-1.5, 0.075-0.75, 0.1-0.3, 또는 0.125-0.25㎎(예를 들어, 0.2-0.3, 0.1-0.15, 0.25 또는 0.125㎎)의 스테롤(예를 들어, 콜레스테롤), 5-60, 10-50, 또는 20-30㎍(예를 들어, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 또는 50㎍)의 지질 A 유도체(예를 들어, 3D-MPL), 및 5-60, 10-50, 또는 20-30㎍(예를 들어, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 또는 50㎍)의 사포닌(예를 들어, QS21)을 포함한다.
이 애주번트는 특히 고령자용 백신 제형에 적당하다. 일 구체예에서, 이 애주번트를 포함하는 백신 조성물은 적어도 하기 모든 혈청형으로부터 유래된 당류 컨주게이트를 포함하는데, 여기서, 백신 성분 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F 중 1종 이상(또는 모두)에 대하여 유도된 GMC 항체 역가는 인간 백신인 Prevnar® 백신에 의해 유도된 역가에 비하여 실질적으로 열등하지 아니하다: 4, 6B, 9V, 14, 18C119F1 23F, 1, 5, 7F(및 또한 혈청형 3, 6A, 19A, 및 22F 중 1종 이상을 포함할 수 있음).
일 구체예에서, 본 발명의 조성물에 사용되는 애주번트는 인산알루미늄 및 지질 A 유도체(예컨대, 3D-MPL)를 포함한다. 이 애주번트는(0.5㎖_ 용량 당) 인산알루미늄으로써 100-750, 200-500, 또는 300-400㎍의 Al, 및 5-60, 10-50, 또는 20-30㎍(예를 들어, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 또는 50㎍)의 지질 A 유도체(예를 들어, 3D-MPL)를 포함한다.
이 애주번트는 특히 고령자 또는 유아용 백신 제형에 적당하다. 일 구체예에서, 이 애주번트를 포함하는 백신 조성물은 적어도 하기 모든 혈청형으로부터 유래된 당류 컨주게이트를 포함하는데, 여기서, 백신 성분 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F 중 1종 이상(또는 모두)에 대하여 유도된 GMC 항체 역가는 인간 백신인 Prevnar? 백신에 의해 유도된 역가에 비하여 실질적으로 열등하지 아니하다: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F(및 또한 혈청형 3, 6A, 19A, 및 22F 중 1종 이상을 포함할 수 있음).
본 발명의 면역원성 조성물을 포함하는 백신 제조물은 전신성 또는 점막성 경로를 통해 상기 백신을 투여함으로써, 감염에 걸리기 쉬운 포유동물을 보호 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 투여는 근육내, 복막내, 피내 또는 피하 경로를 통한 주입; 또는 구강/소화, 호흡, 비뇨생식 관에 대한 점막성 투여를 통한 주입을 포함한다. 폐렴 또는 중이염의 치료를 위한 백신의 비내 투여가 바람직하다(폐렴구균의 비인강 캐리지가 더 효과적으로 보호될 수 있고, 그에 따라 가장 이른 단계에서 감염을 약화시킬 수 있기 때문임). 본 발명의 백신이 단일 용량으로서 투여될 수 있지만, 이의 성분들은 또한 동일한 시간에 함께 동시투여되거나 또는 상이한 시간에 투여될 수 있다(예를 들어, 폐렴구균 당류 컨주게이트는 동일한 시간에 또는 서로에 대한 면역 반응의 최적 공동작용을 위하여 백신의 임의의 세균 단백질 성분의 투여 후 1-2주 경과시, 별개로 투여될 수 있다). 동시-투여의 경우, 선택적인 Th1 애주번트가 임의 또는 모든 상이한 투여로 제공될 수 있다. 당일 경로의 투여 이외에, 2가지 상이한 투여 경로가 이용될 수 있다. 예를 들어, 당류 또는 당류 컨주게이트는 IM(또는 ID)로 투여될 수 있으며, 세균 단백질은 IN(또는 ID)으로 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 백신은 프라이밍 용량의 경우에 IM으로, 부스터 용량의 경우에 IN으로 투여될 수 있다.
백신내 단백질 항원의 함량은 전형적으로 1-100㎍, 바람직하게는, 5-50㎍, 가장 바람직하게는 5-25㎍의 범위내일 것이다. 초기 면역접종 후, 피검체는 적절한 시간을 두고 1회 또는 수회 부스터 면역접종을 받게 될 것이다.
백신 제조물은 일반적으로 문헌[Vaccine Design("The subunit and adjuvant approach"(eds Powell M F. & Newman M.J.)(1995) Plenum Press New York)]에 소개되어 있다. 리포좀 내에서 캡슐화는 문헌[Fullerton, 미국특허 US 4,235,877호]에 소개되어 있다.
본 발명의 백신은 용액으로 저장되거나 동결건조될 수 있다. 바람직하게는, 용액은 당, 예컨대, 수크로오스 또는 락토오스 존재하에 동결건조된다. 이들은 동결건조되고 사용하기 전에 즉흥적으로 개구성되는 것이 훨씬 더 바람직할 수 있다. 동결건조는 결과적으로 더 안정한 조성물(백신)을 초래하며, 추정컨대, 3D-MPL 존재시 및 알루미늄 기반 애주번트의 부재시 더 높은 항체 역가를 유도할 것이다.
본 발명의 한 양상에서, 본 발명의 면역원성 조성물(선택적으로 동결건조된 형태로)을 함유한 바이얼을 포함하는 백신 키트가 제공되는데, 상기 키트는, 추가로 본원에서 기술한 것과 같은 애주번트를 함유하는 바이얼을 포함한다. 본 발명의 이 양상에서, 애주번트는 동결건조된 면역원성 조성물을 재구성시키는데 사용될 것으로 생각된다.
본 발명의 백신을 임의의 경로로 투여할 수 있지만, 상기 백신의 피부내(ID) 투여는 본 발명의 한 실시태양이다. 인간 피부는 표피를 감싸고 있는, 외부의 "경화된(horny)" 큐티클(각질층(stratum corneum)으로 칭해짐)을 포함한다. 이 표피 바로 아래에 진피로 불리우는 층이 존재하는데, 이는 차례로 피하 조직을 감싸고 있다. 연구자들은 피부, 및 특히 진피로의 백신 주입이, 수많은 추가적인 이점과 연관되어 있을 수도 있는, 면역 반응을 자극시킨다는 것을 밝혀내었다. 본원에 기술한 백신을 이용한 진피 백신접종은 본 발명의 바람직한 특징이다.
통상의 피내 주사 기술인 "망투(mantoux) 방법" 은 피부를 세정한 후 한손으로 신장시키면서 좁은 게이지 바늘(26-31 게이지) 위쪽에 존재하는 베벨(bevel)을 사용하여 10 내지 15도의 각도로 삽입하는 것을 포함한다. 바늘의 베벨이 삽입된 후에, 바늘의 배럴을 낮게 위치시킨 후 다시 전진시키면서 경미한 압력을 제공하여 피부 아래로부터 상승시킨다. 이어서, 액체를 매우 서서히 주사하여 피부 표면에 수포 또는 혹을 형성시키고, 바늘을 서서히 빼낸다.
보다 최근에는, 피부 내로 또는 피부를 통하여 액체 약물을 투여하도록 특이적으로 디자인된 장치가 소개되었으며, 예를 들어, 국제공개공보 WO 99/34850호 및 유럽특허 EP 1092444호에 기재된 장치, 국제공개공보 WO 01/13977, 미국 특허 제5,480,381호, 제5,599,302호, 제5,334,144호, 제5,993,412호, 제5,649,912호, 제5,569,189호, 제5,704,911호, 제5,383,851호, 제5,893,397호, 제5,466,220호, 제5,339,163호, 제5,312,335호, 제5,503,627호, 제5,064,413호, 제5,520,639호, 제4,596,556호, 제4,790,824호, 제4,941,880호, 제4,940,460호, 국제공개공보 WO 97/37705호 및 WO 97/13537에 기재된 제트 주사 장치가 사용된다. 백신 제제의 다른 피내 투여 방법은 통상의 주사기 및 바늘, 또는 고체 백신의 발사체성 전달(ballistic delivery)을 위해 고안된 장치(국제공개공보 WO 99/27961호), 또는 경피 패치(국제공개공보 WO 97/48440호, WO 98/28037호)를 포함할 수 있거나 또는 피부 표면에 사용될 수 있다(경피내 전달, 국제공개공보 WO 98/20734호, WO 98/28037호).
본 발명의 백신이 피부에, 보다 구체적으로는 진피에 투여될 경우, 백신은 낮은 액체 부피, 특히 약 0.05㎖ 내지 0.2㎖로 사용된다.
본 발명의 피부 또는 피내 백신내 항원의 함량은 근내 백신(상기 참조)의 통상의 투여량과 유사할 수 있다. 그러나, 피부 또는 피내 백신의 특징은 그 제제가 "저용량(low dose)" 일 수 있다는 것이다. 따라서, "저용량" 백신내 단백질 항원은 용량 당 0.1 내지 10㎍, 바람직하게는 0.1 내지 5㎍의 소량으로 존재하고, 당류(바람직하게는 컨쥬게이트된) 항원은 용량 당 0.01-1㎍, 보다 바람직하게는 0.01 내지 0.5㎍의 당류로 존재할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "피내 전달" 은 피부의 진피 영역에 백신의 전달을 의미한다. 그러나, 백신은 반드시 진피에만 존재하는 것은 아니다. 진피는 인간 피부 표면으로부터 약 1.0 내지 약 2.0㎜ 내부에 위치한 피부내 층이지만, 개인별로 또한 상이한 신체 부분에서 어느 정도의 차이가 있다. 일반적으로, 진피는 피부 표면의 1.5㎜ 내부에 위치하는 것으로 생각할 수 있다. 진피는 표면의 각질층 및 표피와 아래의 피하층 사이에 존재한다. 전달 방식에 따라, 백신은 최종적으로 진피 내에 단독으로 또는 주요 성분으로 존재할 수 있거나 또는 표피 및 진피 내에 최종적으로 분배될 수 있다.
본 발명은 추가로 유리 또는 컨주게이션된 형태로, 헤모필루스 인플루엔자 단백질, 예를 들어, 단백질 D를 첨가함으로써, 헤모필루스 인플루엔자에 의해 유발된 중이염의 예방 또는 경감을 위한 개선된 백신을 제공한다. 또한, 본 발명은 추가로 유아에서 폐렴구균 감염(예를 들어, 중이염)의 예방 또는 경감을 위한 개선된 백신을 제공하는데, 이는 본 발명의 폐렴구균 컨주게이트 조성물에 유리 또는 컨주게이션된 단백질로서 1종 또는 2종의 폐렴구균 단백질을 부가하는데 의존한다. 상기 폐렴구균 유리 단백질은 운반체 단백질로서 사용된 임의의 폐렴구균 단백질과 동일하거나 상이할 수 있다. 1종 이상의 모락셀라 카타르할리스(Moraxella catarrhalis) 단백질 항원이 또한 유리 또는 컨주게이션된 형태로 조합 백신에 포함될 수 있다. 따라서, 본 발명은 유아에서 중이염에 대한(보호적) 면역 반응을 개시시키는 개선된 방법이 된다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 안정하고 유효한 양의 본 발명의 백신[소아 백신]을 투여함으로써 유아(본 발명의 문맥에서 0-2세로 정의됨)에서(보호적) 면역 반응을 개시시키기 위한 개선된 방법이 된다. 본 발명의 추가의 구체예는 의약으로 사용하기 위한 본 발명의 항원성 폐렴구균 컨주게이트 조성물 및 폐렴구균성 질환의 예방(또는 치료)를 위한 약제 제조시의 본 발명의 폐렴구균 컨주게이트의 용도의 제공을 포함한다.
아직 또 다른 구체예에서, 본 발명은 바람직하게는, 유리 또는 컨주게이션된 단백질로서 존재하는 1종 또는 2종의 폐렴구균 단백질과 연계하여, 안전하고 유효한 양의 본 발명의 백신을 투여함으로써, 고령 개체군(본 발명의 문맥에서, 환자가 50세 이상, 전형적으로 55세 이상 및 더 일반적으로 60세 이상이면 고령으로 간주됨)에서(보호적) 면역 반응을 개시시키기 위한 개선된 방법을 제공하는데, 유리 폐렴구균 단백질은 운반체 단백질로 사용되는 임의의 폐렴구균 단백질과 동일하거나 상이할 수 있다.
본 발명의 다른 양태는 숙주에 면역보호적 용량의 본 발명의 면역성 조성물 또는 백신 또는 키트를 투여함을 포함하여, 폐렴구균에 의해 야기되는 질환 및 선택적으로 헤모필루스 인플루엔자 감염증에 대해 인간 숙주를 면역화시키는 방법이다.
본 발명의 다른 양태는 폐렴구균에 의해 야기되는 질환 및 선택적으로 헤모필루스 인플루엔자 감염증의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 면역성 조성물이다.
본 발명의 다른 양태는 폐렴구균에 의해 야기되는 질환 및 선택적으로 헤모필루스 인플루엔자 감염증의 치료 또는 예방을 위한 약제 제조에 있어서, 본 발명의 면역성 조성물 또는 백신 또는 키트의 용도이다.
본원에 사용된 용어 "포함하는" 및 "포함하다"는 본 발명자들에 의해 모든 경우에서 각각 용어 "이루어지는" 및 "이루어지다"로 선택적으로 대체되도록 의도된다.
본원에서 본 발명의 "백신 조성물"과 관련한 구체예는 또한 본 발명의 "면역성 조성물"과 관련한 구체예에 적용가능하며, 그 역도 가능하다.
본 특허 명세서내에 인용된 모든 참고문헌 또는 특허출원은 본원에 참고문헌으로 통합된다.
본 발명을 보다 용이하게 이해하게 하기 위하여, 하기 실시예를 기술하였다. 이러한 실시예들은 단지 설명하기 위한 것으로서, 어떤 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않는다.
실시예
실시예 1: 단백질 D의 발현
헤모필루스 인플루엔자 단백질 D
단백질 D 발현을 위한 유전자적 작제
출발 물질
단백질 D 엔코딩 DNA
단백질 D는 H. 인플루엔자의 모든 혈청형과 유형을 규정할 수 없는(non-typeable) 균주에서 고도로 보존되어 있다. 전체 단백질 D 유전자를 엔코딩하는 DNA 서열을 함유하는 벡터 pHIC348를 룬트 대학(Malmoe General Hospital Malmoe, Sweden)의 의학 미생물학과의 에이. 포스그렌 박사(Dr. A. Gorsgren)로부터 획득하였다. 단백질 D의 DNA 서열은 얀손 등(Janson et al.)에 의한 문헌[Janson et al. (1991) Infect. lmmun. 59: 119-125]에 공개되어 있다.
발현 벡터 pMG1
발현 벡터 pMG은 pBR322의 유도체로서(Gross et al., 1985), 여기에는 외래성 삽입 유전자의 전사 및 번역을 위한 박테리오파지 λ 유래 대조 엘리먼트가 도입되었다[Shatzman et al., 1983]. 또한, 암피실린 내성 유전자는 카나마이신 내성 유전자로 교체되었다.
대장균 균주 AR58
대장균 균주 AR58을 이전에 SA500 유도체(galE::TN10, IambdaKil cI857 △H1) 상에 성장된 P1 파지 모액으로 N99를 형질도입하므로써 발생시켰다. N99 및 SA500를 국립건강연구소의 마틴 로젠버그 박사의 실험실로부터 획득하였다.
발현 벡터 pMG1
단백질 D의 생산을 위하여, 단백질을 엔코딩하는 DNA를 발현 벡터 pMG1에 클로닝하였다. 이러한 플라스미드는 삽입된 외부 유전자의 전사 및 번역을 수행하기 위하여 람다파지 DNA로부터 신호를 이용한다. 벡터는 프로모터(PL), 작동 유전자(OL) 및 N 단백질이 제공될 때 전사 극성 효과를 경감시키는 두개의 활용 부위(NutL 및 NutR)를 포함한다[Gross et al., 1985]. PL 프로모터를 포함하는 벡터를 대장균 용원성 숙주에 도입시켜 플라스미드 DNA를 안정화시킨다. 용원성 숙주 균주는 게놈에 통합된 복제-결함 람다파지 DNA를 포함한다[Shatzman at at., 1983]. 염색체 람다파지 DNA는 cI 억제물질 단백질의 합성에 지시하는 것으로, 벡터의 OL 억제물질에 결합하고 PL 프로모터에 RNA 폴리머라제의 결합을 방해하여, 삽입된 유전자의 전사를 방해한다. 발현 균주 AR58의 cI 유전자는 온도 민감성 돌연변이를 포함하여, PL 유도 전사가 온도 변이(shift)에 의해 조절되도록, 즉 배양 온도의 증가가 억제 물질을 비활성화시키고 외부 단백질의 합성이 개시되도록 한다. 이러한 발현 시스템은 외부 단백질 특히 세포에 독성일 수 있는 외부 단백질의 조절된 합성을 허용한다[Shimataka & Rosenberg, 1981].
대장균 균주 AR58
단백질 D 운반체의 생산을 위해 사용되는 AR58 용원성 대장균 균주는 표준 NIH 대장균 K12 균주 N99의 유도체이다(F- su- galK2, lacZ- thr-). 이는 결함성 용원성 람다파지를 포함한다(galE::TN10, lambdaKil- cI857 △H1). Kil- 표현형은 숙주 거대분자 합성의 차단을 방지한다. cI857 돌연변이는 cI 억제물질에 대한 온도 민감성 병소를 부여한다. △H1 결실은 람다파지 우측 오페론 및 숙주 bio, uvr3, 및 chlA 유전자 좌를 제거한다. N99를 SA500 유도체(galE::TN10, lambdaKil- cI857 △H1) 상에서 미리 배양한 P1 파지 모액(stock)으로 형질 도입시켜 AR58 균주를 생성시켰다. N99에 결함성 용원균의 도입은 인접 galE 유전자내에 존재하는 테트라사이클린 내성에 관한 TN10 트랜스포손(transposon) 코딩 서열 덕택에 테트라사이클린을 사용하여 선별되었다.
벡터 pMGMDPPrD의 작제
인플루엔자 바이러스의 비-구조 S1 단백질을 엔코딩하는 유전자를 함유한 pMG1 벡터(pMGNSI)를 사용하여 pMGMDPPrD를 작제하였다. 5' 및 3' 말단 각각에 NcoⅠ 및 XbaⅠ 제한효소 부위를 포함하는 PCR 프라이머를 이용하여 pHIC348 벡터(Janson et at, 1991 Infect. Immun. 59:119-125)로부터 PCR에 의해 단백질 D 유전자를 증폭시켰다. 이후 NcoⅠ/XbaⅠ 단편을 pMGNS1의 NcoⅠ 및 XbaⅠ 사이에 도입하여 NS1 단백질의 N-말단 81개 아미노산 다음에 뒤이어 PD 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성시켰다. 이러한 벡터를 pMGNAS1PrD로 라벨링하였다.
상술된 작제물에 기반하여, 단백질 D 발현을 위한 최종 작제물을 생성시켰다. BamHI/BamHI 단편을 pMGNAS1PrD로부터 제거하였다. 이러한 DNA 가수분해는 처음 세개의 N-말단 잔기를 제외하고, NS1 코딩 구역을 제거시킨다. 벡터의 재결합(religation)시, 하기 N-말단 아미노산 서열을 지닌 융합 단백질을 엔코딩하는 유전자가 생성되었다:
---MDP SSHSSNMANT---
NS1 단백질 D
단백질 D는 지질 사슬이 일반적으로 부착된 N-말단 시스테인 또는 선도 펩티 드를 함유하지 않는다. 따라서 단백질은 주변세포질에 분비되지 않거나 지질화되지 않으며 용해가능한 형태로 세포질에 잔류한다.
최종 작제물 pMG-MDPPrD를 37℃에서 열충격에 의해 AR58 숙주 균주에 도입하였다. 플라스미드를 함유한 박테리아를 카나마이신의 존재하에 선별하였다. DNA 삽입물을 엔코딩하는 단백질 D의 존재는 분리된 플라스미드 DNA를 선택된 엔도뉴클레아제로 분해시킴으로써 확인되었다. 재조합 대장균 균주는 ECD4로 지칭된다.
단백질 D는 람다 PL 프로모터/OL 작동 유전자의 조절하에 발현된다. 숙주 균주 AR58은 게놈내에 OL에 대한 결합에 의해 저온에서 람다 PL로부터의 발현을 차단하는 온도-민감성 cI 유전자를 함유한다. 온도가 상승되자 마자, cI은 OL로부터 방출되고 단백질 D는 발현된다.
소규모 제조
발효의 말기에 세포를 농축하고 냉동시켰다.
수확된 세포로부터의 추출 및 단백질 D의 정제를 하기와 같이 수행하였다. 냉동된 세포 배양물 펠렛을 해동시키고, 세포 분열 용액(시트레이트 완충액 pH 6.0)에 최종 OD650=60으로 재현탁하였다. 현탁액을 P=1000바(bar)에서 고압 균질화 장치에 2회 통과시켰다. 세포 배양 균질물을 원심분리로 맑게 하고, 세포 분쇄물을 여과로 제거하였다. 제 1 정제 단계에서 여과된 용해물을 양이온교환 크로마토그래피 컬럼(SP Sepharose FAST FLOW)에 적용하였다. 이온 결합에 의해 PD는 겔 매트릭스에 결합하며, 용리 완충액의 이온 강도를 단계별로 증가시킴으로써 용리된 다.
제 2 정제 단계에서 불순물을 음이온교환 매트릭스(Q Sepharose Fast Flow) 상에 유지시켰다. PD는 겔에 결합하지 않고 플로우 쓰루(flow through)에서 수집될 수 있다.
두개의 컬럼 크로마토그래피 단계 모두에서 분획 수집을 OD로 모니터하였다. 정제된 단백질 D를 함유한 음이온교환 컬럼 크로마토그래피의 플로우 쓰루를 한외여과로 농축하였다.
단백질 D 함유 한외여과 보유물(retentate)을 최종적으로 0.2㎛ 막에 통과시켰다.
대규모 제조
수확된 세포로부터의 추출 및 단백질 D의 정제를 하기와 같이 수행하였다. 수확된 배양액을 냉각시키고, 대략 800바의 압력에서 직접 고압 균질화기에 2회 통과시켰다.
제 1 정제 단계에서 세포 배양 균질화물을 희석시키고, 양이온교환 크로마토그래피 컬럼(SP Sepharose Big bead)에 적용하였다. PD는 이온 결합에 의해 겔 매트릭스에 결합하고, 용리 완충액의 이온 강도의 단계별 증가에 의해 용리되고 여과된다.
제 2 정제 단계에서, 불순물을 음이온교환 매트릭스(Q Sepharose Fast Flow) 상에 유지시켰다. PD는 겔에 결합하지 않고 플로우 쓰루에서 수집될 수 있다.
두가지 컬럼 크로마토그래피 단계 모두에서, 분획물 수집은 OD로 모니터되었 다. 정제된 단백질 D를 함유한 음이온교환 컬럼 크로마토그래피의 플로우 쓰루는 농축되고 한외여과에 의해 희석여과된다.
단백질 D 함유 한외여과 잔류물을 최종적으로 0.2 ㎛막에 통과시켰다.
실시예 1b: PhtD의 발현
PhtD 단백질은 히스티딘-트라이어드 작용기(HXXHXH 모티프)의 존재에 의해 특징지워 지는 폐렴구균성 히스티딘-트라이어드 작용기(Pht) 단백질 패밀리의 일원이다. PhtD는 838개의 아미노산으로 구성된 분자이며, 5개의 히스티딘 트라이어드를 지닌다(참조, MedImmune 국제공개공보 W000/37105호: 아미노산에 대한 서열번호 4 및 DNA 서열에 대한 서열번호 5 참조). PhtD는 또한 중간에 프롤린-풍부 영역을 포함한다(아미노산 위치 348-380). PhtD는 LXXC 모티프를 갖는 20개 아미노산으로 구성된 N-말단 신호 서열을 갖는다.
유전자 작제
성숙한 MedImmune PhtD 단백질의 유전자 서열(아미노산 21에서 아미노산 838)을 pλ 프로모터를 지니는 인-하우스 pTCMP 14 벡터를 사용하여 대장균에 재조합적으로 옮겼다. 대장균 숙주 균주는 AR58로서, 이는 프로모터에 대한 열-유도를 가능케하는 cI857 열민감성 억제 물질을 지닌다.
중합효소 연쇄 반응을 수행하여 MedImmune 플라스미드로부터의 phtD 유전자(스트렙토코쿠스 뉴모니애 종 노르웨이 4(혈청형 4)로부터의 phtD 유전자를 운반함-국제공개공보 WO 00/37105호에 기술된 바와 같은 서열번호 5)를 증폭시켰다. 오직 phtD 유전자에만 특이적인 프라이머를 사용하여 phtD를 두개의 단편으로 증폭시 켰다. 프라이머는 NdeI 및 KpnI 또는 KpnI 및 XbaI 제한효소 부위를 지닌다. 이러한 프라이머는 벡터로부터의 임의의 뉴클레오티드와 혼성화되지 않으며 오직 phtD의 특이적 유전자 서열에만 혼성화된다. 인공 ATG 개시 코돈을 NdeI 제한효소 부위를 지니는 제 1 프라이머를 사용하여 삽입하였다. 생성된 PCR 생성물을 이후 pGEM-T 클로닝 벡터(Promega)에 삽입하고, DNA 서열을 확인하였다. 그런 다음 표준 기술을 이용하여 TCMP14 발현 벡터내로 단편의 서브클로닝을 수행하였으며, 벡터로 AR58 대장균을 형질전환시켰다.
PhtD 정제
PhtD 정제를 하기와 같이 수행하였다:
□ 카나마이신의 존재하에 대장균 세포를 성장시킴: 30℃에서 30 시간 동안 성장시킨 후 39.5℃에서 18 시간 동안 유도시킴.
□ 프로테아제 억제제로서 PMSF 2mM 및 EDTA 5mM의 존재하에 OD±115에서 전체 배양물로부터 대장균 세포를 파쇄시킴: Rannie, 2회, 1000바.
□ 실온(20℃)에서 확장된 베드(bed) 모드 Streamline Q XL 크로마토그래피 상에서 항원을 포획하고 세포 분쇄물을 제거함; 컬럼을 NaCl 150mM + 엠피겐(Empigen) 0.25%(pH 6.5)로 세척하고, 25mM 칼슘 포스페이트 완충액(pH 7.4) 중 NaCl 400mM + 엠피겐 0.25%로 용리시켰다.
□ 사르토브란(Sartobran) 150 카트리지(0.45 + 0.2 ㎛) 상에서 여과시킴.
□ 4℃에서 5mM 이미다졸의 존재하에 pH 7.4에서 Zn++ 킬레이팅 세파로즈 FF IMAC 크로마토그래피 상에 항원 결합; 컬럼을 25mM 칼륨 포스페이트 완충액(pH 8.0) 중의 이미다졸 5 mM 및 엠피겐 1%로 세척하고, 25mM 칼륨 포스페이트 완충액(pH 8.0) 중의 50 mM 이미다졸로 용리시킴.
□ 4℃, pH 8.0에서 프락토겔(Fractogel) EMD DEAE 상에서 포지티브 모드로 약한 음이온교환 크로마토그래피 수행; 컬럼을 140mM NaCl로 세척하고 200 mM NaCl로 용리하였으며, 오염물질(단백질 및 DNA)은 교환기 상에 흡착되어 잔류됨.
□ 농축시키고 50kDa 막 상에서 2mM Na/K 포스페이트(pH 7.15)로 한외여과시킴.
□ Millipak-20 0.2㎛ 필터 카트리지로 정제된 벌크를 멸균 여과시킴.
실시예 1c: 뉴몰리신(PNEUMOLYSIN)의 발현
국제공개공보 WO 2004/081515호 및 WO 2006/032499호에 기술된 바와 같이 폐렴구균 뉴몰리신(Pneumococcal pneumolysin)을 제조하고 무독화시켰다.
실시예 2: 컨주게이트의 제조
당업계에 정제된 폐렴구균 다당류를 제조하는 방법이 널리 공지되어 있다. 본 실시예의 목적을 위하여, 다당류를 필수적으로 유럽특허 EP 082513호에 기술된 바와 같이 또는 밀접하게 관련된 방법으로 제조하였다. 컨주게이션 전에 다당류를 하기에 기술된 미세유동화로 크기에 따라 분류하였다.
활성화 및 커플링 조건은 각각의 다당류에 대해 특정되었다. 이러한 조건은 표 1에 제시되어 있다. 크기조절된 다당류(PS5, 6B 및 23F를 제외)를 주사(WFI)를 위해 NaCl 2M, NaCl 0.2M 또는 물에 용해시켰다. 모든 혈청형에 대해 최적의 다당 류 농도를 평가하였다. 혈청형 18C를 제외한 모든 혈청형을 하기에서 상세히 설명된 바와 같이 운반체 단백질에 직접 컨주게이션시켰다. 두가지 대안적인 혈청형 22F 컨주게이트를 제조하였으며; 하나는 직접 컨주게이션시키고, 다른 하나는 ADH 링커를 통해 컨주게이션시켰다.
아세토니트릴 또는 아세토니트릴/물 50%/50% 용액 중 100㎎/㎖ 모용액으로부터 CDAP(CDAP/PS 비율 0.5 내지 1.5㎎ CDAP/㎎ PS)를 다당류 용액에 첨가하고, 1.5분 후에, 0.2M 내지 0.3M NaOH를 첨가하여 특정 활성화 pH를 획득하였다. 다당류의 활성화를 25℃, 상기 pH에서 3분 동안 수행하였다. 정제된 단백질(단백질 D, PhtD, 뉴몰리신 또는 DT)(양은 개시 PS/운반체 단백질 비율에 따름)을 활성화된 다당류에 첨가하고, 커플링 반응을 pH를 조절하면서, 특정 pH에서(혈청형에 따라) 최대 2 시간 동안 수행하였다. 반응하지 아니한 시아네이트 에스테르기를 켄칭하기 위하여, 2M 글리신 용액을 이후 혼합물에 첨가하였다. pH를 켄칭 pH(pH 9.0)로 조절하였다. 용액을 25℃에서 30분 동안 교반한 후, 2 내지 8℃에서 하룻밤 동안 계속 서서히 교반하였다.
18C의 제조:
18C를 링커-아디프산 디히드라지드(ADH)를 통해 운반체 단백질에 연결시켰다. 컨주게이션 전에 다당류 혈청형 18C를 미세유동화시켰다.
파상풍균 톡소이드의 EDAC로의 유도체화
파상풍균 톡소이드를 유도체화하기 위하여, 정제된 TT를 0.2M NaCl에 25㎎/㎖로 희석시키고, 0.2M의 최종 농도에 도달되도록 하기 위하여 ADH 스페이서를 첨 가하였다. 스페이서의 용해가 완료되었을 때, pH를 6.2로 조절하였다. 그런 다음 EDAC(1-에틸-3-(3-디메틸-아미노프로필)카르보디이미드)를 첨가하여 0.02M의 최종 농도에 도달시키고, 혼합물을 pH 조절하에서 1시간 동안 교반하였다. 25℃에서 적어도 30분 동안 pH를 9.0까지 증가시켜 축합 반응을 정지시켰다. 이후 잔류 ADH 및 EDAC 시약을 제거하기 위하여 유도체화된 TT를 투석여과시켰다(10kDa CO 막).
TTAH 벌크를 마지막으로 커플링 단계까지 멸균 여과하고, -70℃에서 저장하였다.
PS 18C에 대한 TT AH 의 화학적 커플링
컨주게이션 파라미터의 상세한 설명은 표 1에서 확인할 수 있다.
2그램의 미새유동화된 PS를 수(水) 중의 정의된 농도로 희석시키고, NaCl 분말을 첨가하여 2M NaCl로 조절하였다.
CDAP 용액(50/50 v/v 아세토니트릴/WFI에서 새롭게 제조된 100㎎/㎖)을 첨가하여 적절한 CDAP/PS 비율에 도달시켰다.
0.3M NaOH를 첨가하여 pH를 활성 pH 9.0까지 상승시키고, TTAH를 첨가할 때까지 상기 pH에서 안정화시켰다.
3분 후에, 유도체화된 TTAH(0.2M NaCl 중 20㎎/㎖)를 첨가하여 TTAH/PS의 비율이 2가 되게 하였다; pH를 커플링 pH 9.0으로 조절하였다. 용액을 pH 조절하에서 1시간 동안 방치시켰다.
켄칭을 위해, 2M 글리신 용액을 혼합물 PS/TTAH/CDAP에 첨가하였다.
pH를 켄칭 pH(pH 9.0)로 조절하였다.
용액을 25℃에서 30분 동안 교반한 후, 서서히 계속 교반하면서 2 내지 8℃에서 하룻밤 동안 방치시켰다.
PSSF AH -PhtD 컨주게이트
이 당류에 대한 제 2 콘주게이션 방법에서(제 1 방법은 표 1에 제시된 직접 PS22-PhtD 콘주게이션 방법임), 22F를 링커인 아디프산 디히드라지드(ADH)를 통해 운반체 단백질에 연결시켰다. 다당류 환원형 22F를 컨주게이션 전에 미세유동화시켰다.
PS 22F 유도체화
활성화 및 커플링을 온도-조절 수욕조에서 계속적으로 교반하면서 25℃에서 수행하였다.
미세유동화된 PS 22F를 희석시켜 0.2M NaCl 중 6㎎/㎖의 최종 PS 농도를 수득하고, 용액을 0.1N HCl로 pH 6.05±0.2로 조절하였다.
CDAP 용액(아세토니트릴/WFI, 50/50 중에 새롭게 제조된 100㎎/㎖)을 첨가하여 적합한 CDAP/PS 비율(1.5/1 ww)이 되게 하였다.
0.5M NaOH를 첨가하여 pH를 활성 pH 9.00±0.05까지 증가시키고, ADH를 첨가할 때까지 상기 pH에서 안정화시켰다.
3분 후에, ADH를 첨가하여 적합한 ADH/PS 비율(8.9/1 w/w)이 되게 하고; pH 를 커플링 pH 9.0으로 조절하였다. 용액을 pH 조절하에서 1 시간 동안 방치하였다.
PSAH 유도체를 농축하고, 투석여과시켰다.
커플링
PhtD/PS22FAH 비율이 4/1(w/w)이 되도록 하기 위하여 0.2M NaCl 중 10㎎/㎖의 PhtD를 PS22FAH 유도체에 첨가하였다. EDAC 용액(0.1M 트리스-HCl 중 20㎎/㎖, pH 7.5)을 수작업으로 10분(250㎕/분) 동안 첨가하여 1㎎ EDAC/㎎ PS22FAH가 되게 하였다. 얻어진 용액을 교반 및 pH 조절하, 25℃에서 150분 동안(60분이 사용될 수도 있음) 인큐베이션하였다. 1M 트리스-HCl pH 7.5(1/10의 최종부피)를 첨가하고 25℃에서 30분 동안 방치하여 용액을 중화시켰다.
세파크릴 S400HR 상에서 용리하기 전에, 컨주게이트를 5㎛ Minisart 필터를 이용하여 여과시켰다.
얻어진 컨주게이트는 4.1의 최종 PhtD/PS 비율(w/w), 1% 미만의 유리 PS 함량, 및 36.3%의 항원성(α-PS/α-PS) 및 7.4%의 항-PhtD 항원성을 갖는다.
컨주게이트의 정제:
컨주게이트를 0.15M NaCl로 평형을 유지시킨 세파크릴 S400HR 겔 여과 컬럼을 이용한 겔 여과로 정제하여, 작은 분자(DMAP를 포함) 및 컨주게이션되지 아니한 PS 및 단백질을 제거하였다. 반응 성분들의 상이한 크기에 기초하여, PS-PD, PS-TT, PS-PhtD, PS-뉴몰리신 또는 PS-DT 컨주게이트를 먼저 용리시키고, 유리 PS를 용리시킨 후 유리 PD 또는 유리 DT를 용리시키고, 마지막으로 DMAP 및 다른 염(NaCl, 글리신)을 용리시켰다.
컨주게이트를 함유한 분획물을 UV280nm로 검출하였다. 분획물을 이러한 Kd에 따라 수집(pooling)하고, 멸균 여과하고(0.22 ㎛), +2 내지 -8℃에서 저장하였다. 컨주게이트 제조물 중 PS/단백질 비율을 결정하였다.
PS 폐렴구균-단백질 D/TT/DT/PhtD/Ply컨주게이트의 특이적 활성화/커플링/켄칭 조건
"μ유체"가 열의 서두에 기재된 경우, 당류가 컨주게이션 전에 미세유동화에 의해 크기조절된다는 것을 의미한다. 미세유동화 이후 당류의 크기는 표 2에 제시되어 있다.
표 1 PS 폐렴구균-단백질 D/TT/DT/PhtD/Ply컨주게이트의 특이적 활성화/커플링/켄칭 조건
Figure 112008052704976-pct00001
Figure 112008052704976-pct00002
참조: pHa, c, q는 각각 활성화, 커플링 및 켄칭을 위한 pH에 해당한다.
특성결정:
각각의 컨주게이트들의 특성을 확인하였으며, 표 2에 기술된 설명을 충족하였다. 다당류 함량(㎍/㎖)을 레소르시놀 시험으로 측정하였으며 단백질 함량(㎍/㎖)을 로우리(Lowry) 시험으로 측정하였다. 최종 PS/PD 비율(w/w)을 농도의 비율로 결정하였다.
유리 다당류 함량(%):
4℃에서 유지되거나 37℃에서 7일 동안 저장된 컨주게이트의 유리 다당류 함량을, α-운반체 단백질 항체 및 포화된 암모늄 술페이트와 인큐베이션한 후 원심분리하여 수득된 상청액에서 결정하였다.
α-PS/α-PS ELISA를 상청액 중 유리 다당류의 정량화를 위해 사용하였다. 컨주게이트의 부재를 또한 α-운반체 단백질/α-PS ELISA로 조절하였다.
항원성:
동일한 컨주게이트의 항원성을 샌드위치-타입 ELISA에서 분석하였으며, 여기 서 포획 및 검출된 항체들은 각각 α-PS 및 α-단백질이었다.
유리 단백질 함량(%):
컨주게이션되지 아니한 운반체 단백질을 정제 단계 동안 컨주게이트로부터 분리할 수 있다. 유리 잔류 단백질의 함량을 크기배제크로마토그래피(TSK 5000-PWXL)을 이용한 후 UV 검출(214nm)을 이용하여 결정하였다. 용리 조건은 유리 운반체 단백질과 컨주게이트가 분리될 수 있게 하였다. 컨주게이트 벌크 중 유리 단백질 함량을 보정 곡선에 대해 결정하였다(0 내지 50㎍/㎖의 운반체 단백질). 유리 운반체 단백질의 %를 하기와 같이 수득하였다: 유리 운반체 비율(%) = (유리 운반체(㎍/㎖)/(로우리에 의해 측정된 상응하는 운반체 단백질의 전체 농도(㎍/㎖)*100%).
안정성:
분자량분포(Kav) 및 안정성을 4℃에서 유지되고 37℃에서 7일간 저장된 컨주게이트에 대해 HPLC-SEC 겔 여과(TSK 5000-PWXL)로 측정하였다.
10/11/13/14-가 컨주게이트의 특성은 표 2에 제시되어 있다(표 하단의 코멘트 참조).
단백질 컨주게이트는 인산알루미늄 상에 흡착할 수 있으며 수집하여 최종 백신을 형성할 수 있다.
결론:
유망한 백신의 성분이 존재하는 것으로 나타난 바, 면역원성 컨주게이트가 생성되었다.
표 2 - 컨주게이트의 특징
Figure 112008052704976-pct00003
* 천연 PS의 미세유동화에 따른 PS 크기
10가 백신을 혈청형 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F 컨주게이트(예를 들어, 각 인간 투여량 당, 1, 3, 1, 1, 1, 1, 1, 3, 3, 1㎍의 당류의 투여량에서)을 혼합하여 제조하였다. 11가 백신을 표 5(예를 들어, 인간 투여량 당 1㎍의 당류)로부터 혈청형 3 컨주게이트를 더 첨가하여 제조하였다. 13가 백신을 상기 혈청형 19A 및 22F 컨주게이트(PhtD에 직접, 또는 선택적으로 ADH 링커를 통해 연결된 22F와)[예를 들어 인간 투여량 당 각각 3㎍의 당류의 투여량에서]를 더 첨가하여 제조하였다. 14가 백신을 상기 혈청형 6A 컨주게이트[예를 들어 인간 투여량 당 각각 1㎍의 당류의 투여량에서]를 더 첨가하여 제조하였다.
실시예 3: 본 발명의 면역원성 조성물 내의 헤모필루스 인플루엔자 단백질 D의 포함이 급성 중이염 (AOM)에 대한 개선된 보호를 제공할 수 있는 증거.
연구 계획.
연구에는 H. 인플루엔자(실시예 4에서 표 5 참조)로부터 혈청형 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F 및 23F 각각에 컨주게이션된 단백질 D를 포함하는 11 Pn-PD 백신을 사용하였다. 피검체를 약 3, 4, 5 및 12-15개월의 연령에서 11 Pn-PD 백신 또는 하브릭스(Havrix)의 4회 투여를 위한 2개의 그룹으로 무작위화시켰다. 모든 피검체에 3, 4 및 5개월의 연령에서 GSK 바이오로지칼즈사의 인펀릭스(Infanrix)-헥사(DTPa-HBV-IPV/Hib) 백신을 동시에 투여하였다. 인판릭스- 헥사는 투여 전에 혼합되는 페디아릭스 및 Hib의 조합물이다. "프로토콜에 따른(According-to-Protocol)" 분석을 위한 효능 추적 검사를 세번째 백신 투여 2주 후에 시작하였고, 24-27개월의 연령까지 지속하였다. S. 뉴모니애 및 H. 인플루엔자의 비인두 보균을 피검체의 선택된 아집단에서 평가하였다.
어린이가 아프고, 귀 통증, 고막의 자발적 천공 또는 자발적 이루가 있는 경우, 부모들은 연구자의 조언을 받았다. 만약 연구자가 AOM의 에피소드를 의심한다면, 어린이는 즉시 진단의 확인을 위한 귀, 코 및 인후(ENT) 전문가에게 위탁하였다.
AOM의 임상적 진단은 고막의 시각적 외관(즉, 발적, 팽창, 빛 반사의 상실) 또는 중이 유체 유출의 존재(단순이경검사 또는 공기이경검사(pneumatic otoscopy) 또는 현미경에 의해 증명되는 바와 같은)에 근거한다. 또한, 적어도 둘 이상의 아래의 신호 또는 증상이 존재해야 한다: 이통, 이루, 난청, 열, 졸음증, 과민성, 거식증, 구토, 또는 설사. 만약 ENT 전문가가 임상적 진단을 확인하면, 세균 시험을 위해 고실 천자(tympanocentesis)에 의해 중이 유체의 표본을 수집하였다.
병으로 인해 반복되는 진찰을 받는 피검체에 대해, 기존의 에피소드의 시작 후에 30일 이상이 경과한 경우 새로운 AOM 에피소드가 시작되는 것으로 간주하였다. 또한, 두 연속적인 에피소드 사이에 간격이 어떠한 간에 분리된 박테리아/혈청형이 이전의 분리물과 상이한 경우 새로운 박테리아 에피소드인 것으로 간주하였다.
실험 결과
11 Pn-PD 군에서 2489명 및 대조군에서 2479명, 전체 4968명의 유아가 등록되었다. 두 군 사이에 인구학적 특징 또는 위험 인자의 큰 차이는 없었다.
임상적 에피소드 및 AOM 케이스 정의
프로토콜에 따른 (per protocol) 추적검사 기간 동안, 11 Pn-PD 군 및 499명의 대조군에서 전체 333 에피소드의 임상적 AOM이 기록되었다.
표 3은 임의의 AOM의 에피소드 및 서로 다른 폐렴구균 혈청형, H. 인플루엔자, NTHi 및 M. 카타르할리스에 의해 야기된 AOM에 대한 11 Pn-PD 백신 및 이전에 핀란드에서 시험된 7가 백신(Eskola et al N Engl J Med 2001 ; 344: 403-409 and Kilpi et a/Clin Infect Dis 2003 37:1155-64)의 보호 효능을 나타낸다.
병인학(표 3)에 상관없이 전체 AOM 질병 존재량의 33.6%인 통계적으로 중요하고 임상적으로 의미있는 감소가 11 Pn-PD로 달성되었다. 11 Pn-PD 백신을 포함하는 11 폐렴구균 혈청형의 임의의 AOL 에피소드에 대한 전체 효능은 57.6%였다(표 3).
본 연구에서 발견한 다른 중요한 점은 H. 인플루엔자(및 특히 NTHi에 의해 공급된 35.3% 보호)에 의해 야기된 AOM에 대해 11 Pn-PD 백신에 의해 공급된 35.6% 보호이다. 이 발견은 폐렴구균 컨주게이트 백신 연대에서 AOM의 중요한 원인으로서, H. 인플루엔자의 증가된 중요성을 주는 중요한 임상적 의미가 있다. AOM에 대해 제공되는 보호와 관련하여, 11 Pn-PD 백신은 또한 두 번째에서 추가 예방 접종 투여에 따른 H. 인플루엔자는 비인두 보균을 감소시켰다. 병인학적 대체(etiological replacement)의 증거로서 H. 인플루엔자로 인한 AOM 에피소드의 증가가 관찰(Eskola et al and Kilpi et al)된 핀란드에서의 이전의 관찰과는 대조적이다.
Hi AOM 에피소드가 없는 채로 유지되는 11 Pn-PD 예방접종자에서의 일차 투여 후의 항-PD IgG 항체 농도가 효능 추적기간 동안의 하나 이상의 Hi AOM 에피소드가 발생한 11 Pn-PD 예방접종자에서 측정된 일차 투여 후의 항-PD IgG 항체 수준과 본질적으로 동일하므로, Hi로 인한 AOM 에피소드와 담체 단백질 D에 대한 항체 수준 사이의 명백한 상관관계는 확립될 수 없었다. 그러나, 백신의 생물학적 영향 및 초기 후 IgG 항-PD 면역원성 사이에 확립된 상관관계가 없을지라도, H. 인플루 엔자 스트레인 사이에 높게 보존된 PD 운반체 단백질이 Hi에 대해 보호의 유발에 크게 기여하는 것으로 추정하는 것이 타당하다.
AOM 질병의 효과는 백신 혈청형 폐렴구균 및 H, 인플루엔자(도 1)와 유사한 크기의 비인두 보균 상의 효과를 동반한다. ELISA에 의해 측정된 바와 같이 보호 약효가 항-PD IgG 면역 반응과 상호 작용할 수 없다고 할지라도 PD-컨주게이트 백신에서 H. 인플루엔자의 비인두 보균의 이러한 감소는 H. 인플루엔자에 대한 PD-컨주게이트 백신의 직접적인 보호 효과의 가설을 뒷받침한다.
아래의 실험에서 친칠라 중이염 모델을 이 실시예의 11가 제형과 면역된 유아로부터의 혈청 풀(serum pools) 또는 실시예 2(또한 표 1 및 2 및 이에 따른 주석 참고)의 10가 백신과 함께 사용하였다. 두 풀 모두 면역 이전 혈청풀에 대해 중이염을 갖는 동물의 백분율의 상당한 감소를 유발하였다. 10 및 11가 면역풀 사이에 상당한 차이는 없다. 이것은 두 백신 모두 이 모델에서 형을 정할 수 없는 H. 인플루엔자에 의해 야기되는 중이염에 대해 보호를 유발하는 유사한 잠재력을 갖는다는 점을 증명한다.
표 3
Figure 112008052704976-pct00004
실시예 4:
혈청형 19F에 대한 운반체 단백질의 선택
사용된 ELISA 분석
22F 억제 ELISA 방법은 본질적으로 2001년 콘셉션(Concepcion) 및 프라쉬(Frasch)에 의해 2001년에 제안된 분석법을 기초로 하며, 문헌 [Henckaerts et al.p 2006, Clinical and Vaccine Immunology 13:356-360]에 보고되어 있다. 요약하면, 정제된 폐렴구균 다당류를 메틸화된 인간 혈청 알부민과 혼합하고 4℃에서 밤새도록 고 바인딩 미량역가 플레이트인 Nunc Maxisorp™(Roskilde, DK) 상에 흡착시켰다. 실온에서 흔들어주면서 1 시간 동안 PBS에서 플레이트를 10% 소태아 혈청(FBS)으로 블록하였다. 혈청 샘플을 10% FBS, 10㎍/㎖ 세포벽 다당류(SSI) 및 2㎍/㎖의 혈청형 22F(ATCC)의 폐렴구균 다당류를 포함하는 PBS에서 희석하고, 같은 완충액를 갖는 미량역가 플레이트 상에서 더 희석하였다. 89-SF에서 혈청형-특이적 IgG 농도를 사용하는 표준 혈청 89-SF에 대해 검정된 내부 기준은 같은 방법으로 처리하였고 모든 플레이트 상에 포함시켰다. 세척 후, 결합된 항체를 10% FBS(PBS에서)에서 희석된 과산화-컨주게이션된 항-인간 IgG 단일 클론 항체(Stratech Scientific Ltd., Soham, UK)를 사용하여 검출하고, 실온에서 흔들어주면서 1 시간 동안 배양하였다. 색은 어두운 실온에서 레디-투-유스(ready-to-use) 단일 성분 테트라메틸벤지딘 과산화물 효소 면역분석 기질 키트(BioRad, Hercules, CA, US)를 사용하여 발현하였다. 반응을 H2SO4 0.18 M로 중단시키고, 광 학 밀도를 450 nm에서 읽었다. 샘플 내 혈청형-특이적 IgG 농도(㎍/㎖ 내)를 내부 기준 혈청 커브에 대해 제한된 정의 내에서 기준이 되는 광학 밀도점에 의해 계산하였으며, 그것을 소프트 맥스 프로™(SoftMax Pro™; Molecular Devices, Sunnyvale, CA) 소프트웨어에 의해 계산된 4-파라미터 산정 로그식으로 모델화하였다. ELISA에 대한 컷-오프는 검출 한도 및 정량 한도를 고려하여 모든 혈청형에 대해 0.05㎍/㎖ IgG이었다.
옵소노-식세포작용 분석
2003년 6월 WHO 회의 미팅에서, 문헌[Romero-Steiner et al Clin Diagn Lab Immunol 2003 10 (6): pp1019-1024]에서 설명된 바와 같은 OPA 분석을 사용할 것을 추천하였다. 이 프로토콜을 아래의 시험에서 혈청형의 OPA 활성을 시험하기 위해 사용하였다.
컨주게이트의 제조
11 Pn-PD&Di-001 및 11 Pn-PD&Di-007의 연구에서, 세 개의 11가 백신 제형(표 4)은 1㎍ 다당류에 컨주게이션된 단백질 D(19F-PD) 대신에 3㎍의 19F 다당류에 컨주게이션된 디프테리아 톡소이드(19F-DT)를 포함하였다. 11 Pn-PD, 11 Pn-PD&Di-001 및 11 Pn-PD&Di-007 연구에 대한 컨주게이션 파라미터를 표 5, 6 및 7에 각각 개시하였다.
이들 19F-DT 제형으로 1차 백신 접종 한 달 후의 혈청형 19F에 대한 항-폐렴구균 항체 반응 및 OPA 활성을 표 8 및 9에 각각 나타내었다.
표 10은 23가 단순 다당류 추가 백신 접종 전후에 0.2㎍/㎖ 역치(threshold) 에 달하는 피검체의 22F-ELISA 항체 농도 및 백분율을 보여준다.
옵소노-식세포작용 활성은 1차 백신 접종 한 달 후의 높은 양성혈청반응 속도(옵소노-식세포작용 역가 ≥ 1:8) 및 OPA GMT로 증명되는 것과 같이 이들 19F-DT 제형으로 유도되는 항체에 대한 분명한 개선점을 보여준다(표 9). 23가 단순 다당류 추가 백신 접종 한 달 후, 19F 항체의 옵소노-식세포작용 활성은 19F-DT 제형으로 초회 항원자극을 받은 아이에 대한 것보다 현저하게 나은 채로 유지되었다.(표 11).
표 12는 Prevnar®의 4회 연속적인 투여와 비교한, 19F-DT 또는 19F-PD 컨주게이트로 이전에 초회 항원자극을 받은 유아에서 11 Pn-PD 추가 접종 투여 후의 면역원성 데이터를 나타낸다. 미국에서 Prevnar®의 도입 후 보고된 비약적 발전의 예들을 감안하면, DT 운반체 단백질에 컨주게이션될 때 혈청형 19F에 대한 개선된 옵소노식세포작용 활성은 후보 백신의 장점이 될 수 있다. 표 13은 가교-반응성 혈청형 19A에 관한 19F-DT 컨주게이트에 대한 ELISA 및 OPA 데이터를 제공한다. 19F-DT는 낮게 유도하지만 19A에 대한 상당한 OPA 활성이 발견된다.
표 4: 임상 연구에 사용된 폐렴구균 컨주게이트 백신 제형.
Figure 112008052704976-pct00005
표 5: PS S. 뉴모니애-단백질 D/TT/DT 컨주게이트의 특정 활성화/커플링/켄 칭 조건
Figure 112008052704976-pct00006
Figure 112008052704976-pct00007
표 6: 11 Pn-PD&Di-001 연구를 위한 PS S. 뉴모니애-단백질 D/DT 컨주게이트의 특정 활성화/커플링/켄칭 조건
Figure 112008052704976-pct00008
Figure 112008052704976-pct00009
표 7: 11 Pn-PD&Di-007 연구를 위한 PS S. 뉴모니애-단백질 D/DT 컨주게이트의 특정 활성화/커플링/켄칭 조건
Figure 112008052704976-pct00010
Figure 112008052704976-pct00011
표 8: 1㎍의 19F-PD, 3㎍의 19F-DT 또는 프레브나르 (2㎍의 19F-CRM) 일차 예방접종 1개월 후의 0.20㎍/㎖ 이상의 19F 항체 농도를 지니는 피검체의 백분율 및 19F 항체 기하학적 평균 항체 농도(95% CI를 지니는 GMC;㎍/㎖)(전체 코호트)
Figure 112008052704976-pct00012
「다양한 제형의 조성물이 표 4에 제공된다.
표 9: 1㎍의 19F-PD, 3㎍의 19F-DT 또는 프레브나르(2㎍의 19F-CRM)를 이용한 일차 예방접종 1개월 후에 1:8 이상의 19F OPA를 지니는 피검체의 백분율 및 19F OPA GMT(전체 코호트)
Figure 112008052704976-pct00013
「다양한 제형의 조성물이 표 4에 제공된다.
표 10: 1㎍의 19F-PD, 3㎍의 19F-DT 또는 프레브나르(2㎍의 19F-CRM)으로 프라이밍된 아동에서의 23-가 플레인 다당류 부스터(또는 추가 접종) 전 및 1개월 후에 0.20㎍/㎖ 이상의 19F 항체 농도를 지니는 피검체의 백분율 및 19F 항체 GMC(㎍/㎖)(전체 코호트)
Figure 112008052704976-pct00014
「다양한 제형의 조성물이 표 4에 제공된다.
표 11: 1㎍의 19F-PD, 3㎍의 19F-DT 또는 프레브나르(2㎍의 19F-CRM)으로 프라이밍된 아동에서의 23-가 플레인 다당류 부스터(또는 추가 접종) 전 및 1개월 후에 1:8 이상의 19F OPA 역가를 지니는 피검체의 백분율 및 19F OPA GMT (전체 코호트)
Figure 112008052704976-pct00015
「다양한 제형의 조성물이 표 4에 제공된다.
표 12: 1㎍의 19F-PD, 3㎍의 19F-DT 또는 프레브나르(2㎍의 19F-CRM)으로 프라이밍된 아동에서의 11 Pn-PD 또는 프레브나르 부스터(또는 추가 접종) 1개월 후에 0.2㎍/㎖ 이상의 항체 농도 및 1:8 이상의 OPA를 지니는 피검체의 백분율 및 19F 폐렴구균에 대한 GMC/GMT(전체 코호트)
Figure 112008052704976-pct00016
「다양한 제형의 조성물이 표 4에 제공된다.
표 13: 1㎍의 19F-PD, 3㎍의 19F-DT 또는 프레브나르(2㎍의 19F-CRM)을 이용한 일차 예방접종 1개월 후에 0.2㎍/㎖ 이상의 항체 농도 및 1:8 이상의 OPA를 지니는 피검체의 백분율 및 19A 폐렴구균에 대한 GMC/GMT(전체 코호트)
Figure 112008052704976-pct00017
「다양한 제형의 조성물이 표 4에 제공된다.
실시예 5: 전임상 모델에서 애주번트 실험: 고령의 붉은털원숭이에서 폐렴구균 11가 다당류 컨주게이트의 면역원성 상의 영향
고령의 모집단에서 컨주게이트 폐렴구균 백신을 얻기 위한 반응을 최적화하기 위해, GSK는 신규 애주번트인 애주번트 C와 11가 다당류(PS) 컨주게이트 백신을 제형화하였다 - 하기 참조.
5마리의 고령의 붉은털원숭이(14 내지 28살)의 군을 500㎕의 315㎍의 AIPO4 상에 흡착된 11가 PS 컨주게이트 또는 애주번트 C와 혼합된 11가 PS 컨주게이트로 0 및 28일째에 근육 내(IM)로 면역화하였다.
두 백신 제형 모두, 11가 PS 컨주게이트는 다음의 컨주게이트 PS1-PD, PS3-PD, PS4-PD, PS5-PD, PS7F-PD, PS9V-PD, PS14-PD, PS18C-PD, PS19F-PD, PS23F-DT 및 PS6B-DT로 각각 구성된다. 사용된 백신은 표 6 조건(실시예 4)에 따라 컨주게이션된 백신의 인간 투여량의 1/5 투여량(6B[10㎍]를 제외하고 인간 투여량 당 5㎍의 각 당류)이었으며, 단 아래의 CDAP 공정 조건에 따라 제조된 19F는 제외한다: 9㎎/㎖, 5㎎/㎖에서 PD, 1.2/1의 초기 PD/PS 비율, 0.75㎎/㎎ PS의 CDAP 농도, pHa=pHc=pHq 9.0/9.0/9.0 및 60 mm의 커플링 시간에서 측정된 당류.
항-PS ELISA IgG 수준 및 옵소노식세포작용 역가를 42일째에서 수집한 혈청에 투여하였다. 항-PS3 기억 B 세포 빈도를 42일째에서 수집한 말초 혈액 세포로부터 엘리스팟(Elispot)으로 측정하였다.
아래에서 보여진 결과에 따르면, 애주번트 C는 고령의 원숭이에서 AIPO4와 컨주게이트한 것보다 11가 PS 컨주게이트의 면역원성을 상당히 개선하였다. 신규의 애주번트는 PS(도 1) 및 옵소노식세포작용 항체 역가(표 14)에 대한 IgG 반응을 증강하였다. 또한 애주번트 C(도 2)의 사용에 의해 PS3-특이적 기억 B 세포의 빈도가 증가됨을 지지하는 증거가 있었다.
표 14: 고령의 붉은털원숭이에서 컨주게이트 면역원성(두번째 투여 후 옵소노식세포작용 역가)
Figure 112008052704976-pct00018
B 세포 엘리스팟
분석의 이론은 기억 B 세포가 시험관내에서 CpG와 5일 동안 배양된 다음 플라즈마 세포내로 성숙한다는 사실에 의존한다. 시험관내에서 생성된 항원-특이적 플라즈마 세포는 쉽게 검출될 수 있으며, 따라서 B-세포 엘리스팟 분석을 사용하여 계산될 수 있다. 특이적 플라즈마 세포의 수는 배양의 개시 시점에서 기억 B 세포의 빈도를 반영한다.
요약하면, 시험관내에서 생성된 플라즈마 세포는 항원으로 코팅된 배양 플레이트에서 배양된다. 항원-특이적 플라즈마 세포는 항체/항원 스팟을 형성하며, 그것은 전형적인 면역-효소적 방법에 의해 검출되며 기억 B 세포처럼 계수된다. 본 연구에서, 다당류는 각각의 기억 B 세포를 계산하기 위해 배양 플레이트에 코팅하여 사용하였다. 결과는 백만의 기억 B 세포 내에서 PS 특이적 기억 B 세포의 빈도로써 발현된다.
본 연구는 애주번트 C가 공지된 PS3 추가접종능력의 문제를 완화할 수 있다는 것을 보여준다(문헌[5th International Symposium on Pneumococci and Pneumococcal Diseases, April 2-6 2006, Alice Springs, Central Australia]. 문헌[Specificities of immune responses against a serotype 3 pneumococcal conjugate. Schuerman L, Prymula R, Poolman J. Abstract book p 245, PO10.06]을 참조).
실시예 6: 어린 Balb/c 생쥐에서 PS 19F의 면역원성을 증강시키는 단백질 운반체로써 무독화된 뉴모리신(dPly)의 효과
40 마리의 암컷 Balb/c 생쥐(4주)의 군을 둘 모두 애주번트 C로 혼합된 50㎕의 4가 단순 PS 또는 4가 dPly-컨주게이션된 PS로 0, 14 및 28일째에서 IM 면역화하였다.
두 백신 제형 모두 다음의 0.1㎍(당류의 양)의 각 PS로 구성된다: PS8, PS12F, PS19F 및 PS22F.
항-PS ELISA IgG 수준을 42일째에 수거된 혈청에서 결정하였다.
도 3에서 실시예에서 보여주는 바와 같은 항-PS19F 반응은 단순 PS로 면역화된 생쥐와 비교하여 4가 dPly 컨주게이트가 주어진 생쥐에서 강력하게 증강되었다. 동일한 개선점이 항-PS8, 12F 및 22F IgG 반응에 대해서도 관찰되었다(데이터는 보여지지 않음).
실시예 7: 어린 Balb/c 생쥐에서 PS 22F의 면역원성을 증강시키는 단백질 운반체로써 폐렴구균 히스티딘 트라이어드 단백질 D(PhtD)의 효과
40 마리의 암컷 Balb/c 생쥐(4주)의 군을 둘 모두 애주번트 C로 혼합된 50㎕의 4가 단순 PS 또는 4가 PhtD-컨주게이션된 PS로 0, 14 및 28일째에서 IM 면역화하였다.
두 백신 제형 모두 다음의 0.1㎍(당류의 양)의 각 PS로 구성된다: PS8, PS12F, PS19F 및 PS22F.
항-PS ELISA IgG 수준을 42일째에 수거된 혈청에서 결정하였다.
도 4에서 실시예에서 보여주는 바와 같은 항-PS22F 반응은 단순 PS로 면역화된 생쥐와 비교하여 4가 PhtD 컨주게이트가 주어진 생쥐에서 강력하게 증강되었다. 동일한 개선점이 항-PS8, 12F 및 19F IgG 반응에 대해서도 관찰되었다(데이터는 보여지지 않음).
실시예 8: 19A-dPly 및 22F-PhtD를 포함하는 13가 PS 컨주게이트의 고령의 C57BI 생쥐에서의 면역원성
30 마리의 늙은 C57BI 생쥐(>69주)의 군을 둘 모두 애주번트 C로 혼합된 50㎕의 11가 PS 컨주게이트 또는 13가 PS 컨주게이트로 0, 14 및 28일째에서 IM 면역화하였다(하기 참조).
11가 백신 제형은 다음의 각 컨주게이트의 0.1㎍의 당류로 구성된다: PS1-PD, PS3-PD, PS4-PD, PS5-PD, PS6B-PD, PS7F-PD, PS9V- PD, PS14-PD, PS18C-TT, PS19F-DT 및 PS23F-PD(표 1 및 표 2의 하기에 논의된 11가 백신에 대한 주석 참조). 13가 백신 제형은 게다가 0.1㎍의 PS19A-dPly 및 PS22F-PhtD 컨주게이트를 포함한다(표 1 및 표 2의 하기에 논의된 13가 백신[직접 컨쥬게이트된 22F를 이용]에 대한 주석 참조). 군 2 및 4에서 뉴모리신 운반체를 GMBS 치료로 무독화하였고, 군 3 및 5에서는 포름알데히드로 수행하였다. 군 2 및 3에서 PhtD를 PS 22F를 컨주게이션하는데 사용하였고, 군 4 및 5에서는 PhtD_E 융합체(국제공개공보 WO 03/054007호로부터 작제된 VP147)을 사용하였다. 군 6에서는 19A를 디프테리아 톡 소이드에 컨주게이션하였고 22F는 단백질 D에 하였다.
항-PS19A 및 22F ELISA IgG 수준을 42일째에 수거된 개별적 혈청에서 결정하였다. 다른 PS에 대하여 생성된 ELISA IgG 반응이 수집된(pooled) 혈청에서 측정되었다.
13가 컨주게이트 백신 제형 내에 투여된 19A-dPly 및 22F-PhtD는 늙은 C57BI 생쥐에서 면역원성을 보여준다(표 15). 다른 PS에 대하여 유도된 면역 반응은 11가 제형으로 면역화된 것들과 비교하여 13가 제형이 주어진 생쥐에서 네거티브하게 영향받지 않았다.
표 15: 나이든 C57BI 마우스에서의 PS 면역원성 (세번째 투여 후 IgG 수준)
Figure 112008052704976-pct00019
실시예 9: 19A-dPly 및 22F-PhtD를 포함하는 13가 PS 컨주게이트의 어린 Balb/c 생쥐에서의 면역원성
30 마리의 어린 Balb/c 생쥐(4주)의 군을 둘 모두 애주번트 C로 혼합된 50㎕의 11가 PS 컨주게이트 또는 13가 PS 컨주게이트로 0, 14 및 28일째에서 IM 면역화하였다(하기 참조).
11가 백신 제형은 다음의 각 컨주게이트의 0.1㎍의 당류로 구성된다: PS1-PD, PS3-PD, PS4-PD, PS5-PD, PS6B-PD, PS7F-PD, PS9V-PD, PS14-PD, PS18C-TT, PS19F-DT 및 PS23F-PD(표 1 및 표 2의 하기에 논의된 11가 백신에 대한 주석 참조). 13가 백신 제형은 게다가 0.1㎍의 PS19A-dPly 및 PS22F-PhtD 컨주게이트를 포함한다(표 1 및 표 2의 하기에 논의된 13가 백신[직접 컨쥬게이트된 22F를 이용]에 대한 주석 참조). 군 2 및 4에서 뉴모리신 운반체를 GMBS 치료로 무독화하였고, 군 3 및 5에서는 포름알데히드로 수행하였다. 군 2 및 3에서 PhtD를 PS 22F를 컨주게이션하는데 사용하였고, 군 4 및 5에서는 PhtD_E 융합체(WO 03/054007로부터 구성된 VP147)을 사용하였다. 군 6에서는 19A를 디프테리아 톡소이드에 컨주게이션하였고 22F는 단백질 D에 하였다.
항-PS19A 및 22F ELISA IgG 수준을 42일째에 수거된 개별적 혈청에서 결정하였다. 다른 PS에 대하여 생성된 ELISA IgG 반응이 수집된 혈청에서 측정되었다.
13가 컨주게이트 백신 제형 내에 투여된 19A-dPly 및 22F-PhtD는 어린 Balb/c 생쥐에서 면역원성을 보여준다(표 16). 다른 PS에 대하여 유도된 면역 반응은 11가 제형으로 면역화된 것들과 비교하여 13가 제형이 주어진 생쥐에서 네거티브하게 영향받지 않았다.
표 16: 어린 Balb/c 마우스에서의 PS 면역원성 (세번째 투여후 IgG 수준)
Figure 112008052704976-pct00020
실시예 10: 19A-dPly 및 22F-PhtD를 포함하는 13가 PS 컨주게이트의 기니아 피그에서의 면역원성
20 마리의 어린 기니아 피그(하틀리 계통; 5주)의 군을 둘 모두 애주번트 C로 혼합된 125㎕의 11가 PS 컨주게이트 또는 13가 PS 컨주게이트로 0, 14 및 28일째에서 IM 면역화하였다(하기 참조).
11가 백신 제형은 다음의 각 컨주게이트의 0.25㎍의 당류로 구성된다: PS1-PD, PS3-PD, PS4-PD, PS5-PD, PS6B-PD, PS7F-PD, PS9V-PD, PS14-PD, PS18C-TT, PS19F-DT 및 PS23F-PD(표 1 및 표 2의 하기에 논의된 11가 백신에 대한 주석 참조). 13가 백신 제형은 게다가 0.1㎍의 PS19A-dPly 및 PS22F-PhtD 컨주게이트를 포함한다(표 1 및 표 2의 하기에 논의된 13가 백신[직접 컨쥬게이트된 22F를 이용]에 대한 주석 참조). 군 2 및 4에서 뉴모리신 운반체를 GMBS 치료로 무독화하였고, 군 3 및 5에서는 포름알데히드로 수행하였다. 군 2 및 3에서 PhtD를 PS 22F를 컨주게이션하는데 사용하였고, 군 4 및 5에서는 PhtD_E 융합체(국제공개공보 WO 03/054007호로부터 작제된 VP147)을 사용하였다. 군 6에서는 19A를 디프테리아 톡소이드에 컨주게이션하였고 22F는 단백질 D에 하였다.
항-PS19A 및 22F ELISA IgG 수준을 42일째에 수거된 개별적 혈청에서 결정하였다. 다른 PS에 대하여 생성된 ELISA IgG 반응이 수집된 혈청에서 측정되었다.
표 17: 기니아 피그에서의 PS 면역원성(세번째 투여 후의 IgG 수준)
Figure 112008052704976-pct00021
실시예 11: 제조되고 시험된 제형
a) 하기의 제형을 제조하였다(표 1로부터의 13가 백신 및 표 5로부터의 혈청 형 3을 이용함 - 표 2 하기에 논의된 14가 백신[직접 컨쥬게이팅된 22F 또는 ADH 링커를 통해 컨쥬게이팅된 22F를 이용함]에 대한 주석을 참고). 하기 나타낸 바와 같이 알루미늄 포스페이트 및 3D-MPL을 이용하여 당류를 제형화하였다.
Figure 112008052704976-pct00022
b) 동일한 당류 제형을 하기 애쥬번트 각각으로 애쥬번팅시켰다:
- 농도 500㎕ 투여 당 에멀젼 성분의 농도를 아래의 표에 보여준다.
Figure 112008052704976-pct00023
c) 당류는 또한 애주번트에 근거한 두 개의 리포좀으로 제형화하였다:
애주번트 Bl의 조성
정성 정량 (0.5㎖ 투여량당)
리포좀:
- DOPC 1㎎
- 콜레스테롤 0.25㎎
3DMPL 50㎍
QS21 50㎍
KH2PO4, 3.124㎎ 완충액
Na2HPO4, 0.290㎎ 완충액
NaCl 2.922㎎
(10O mM)
WFI q.s. ad 0.5㎖ 용매
pH 6.1
1. 전체 PO4 농도 = 50 mM
애주번트 B2의 조성
정성 정량(0.5㎖ 투여량당)
리포좀:
- DOPC 0.5㎎
- 콜레스테롤 0.125㎎
3DMPL 25㎍
QS21 25㎍
KH2PO4, 3.124㎎ 완충액
Na2HPO4, 0.290㎎ 완충액
NaCl 2.922㎎
(10OmM)
WFI q.s. ad 0.5㎖ 용매
pH 6.1
d) 당류는 또한 애주번트 C로 제형화하였다(이러한 애쥬번트가 사용된 기타 조성에 대해서는 상기 참조):
정성 정량 (0.5㎖ 투여량당)
수중유 에멀젼: 50㎕
- 스쿠알렌 2.136㎎
- α-토코페롤 2.372㎎
- 트윈 80 0.97㎎
- 콜레스테롤 0.1㎎
3DMPL 50㎍
QS21 50㎍
KH2PO4, 0.470㎎ 완충액
Na2HPO4, 0.219㎎ 완충액
NaCl 4.003㎎
(137mM)
KCl 0.101㎎
(2.7mM) WFI q.s. ad 0.5㎖ 용매
pH 6.8
실시예 12: Balb/c 생쥐에서 22F-PhtD 컨주게이트 면역원성 상에 컨주게이션 화학의 영향
30 마리의 암컷 Balb/c 생쥐의 군을 PS 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F 및 23F(투여량: PS 4, 18C, 19A, 19F 및 22F에 대한 0.3㎍ 당류 / 컨주게이트 및 다른 PS에 대한 0.1㎍ 당류 / 컨주게이트)를 포함하는 13가 PS 제형으로 0, 14 및 28일째에서 근육 내(IM) 경로에 의해 면역화하였다.
PS 18C를 파상풍 톡소이드에 컨주게이션하고, 19F를 디프테리아 톡소이드에, 19A를 포르몰-무독화된 Ply에, 22F를 PhtD에, 그리고 다른 PS를 PD에 하였다.
직접적인 CDAP 화학 또는 22F-AH-PhtD(ADH-파생된 PS)에 의해 제조된 22F-PhtD로 구성된 두 제형을 비교하였다. 직접적으로 컨주게이션된 22F로 또는 ADH 스페이서를 통해 제조된 13가 백신의 특징에 대해서는 실시예 2, 표 1 및 표 2의 하기의 주석을 참조하라. 백신 제형을 애주번트 C로 보충하였다.
항-PS22F ELISA IgG 수준 및 옵소노-식세포작용 역가를 42일째에 수거된 혈 청으로부터 측정하였다.
22F-AH-PhtD는 IgG 수준(도 5) 및 옵소노-식세포작용 역가(도 6) 둘 모두에 관하여 22F-PhtD보다 더욱 큰 면역원성을 보여준다.
실시예 13: 스트렙토코쿠스 뉴모니애 캡슐 PS 컨쥬게이트의 면역원성에 대한 신규한 애쥬번트의 영향
40 마리의 암컷 Balb/c 생쥐의 군을 PS 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F 및 23F(투여량: PS 4, 18C, 19A, 19F 및 22F에 대한 0.3㎍ 당류 / 컨주게이트 및 다른 PS에 대한 0.1㎍ 당류 / 컨주게이트)를 포함하는 13가 PS 제형으로 0, 14 및 28일째에서 IM 경로에 의해 면역화하였다.
PS 18C를 파상풍 톡소이드에 컨주게이션하고, 19F를 디프테리아 톡소이드에, 19A를 포르몰-무독화된 Ply에, 22F를 PhtD에, 그리고 다른 PS를 PD에 하였다. 직접적으로 컨주게이션된 22F로 제조된 13가 백신의 특징에 대해서는 실시예 2, 표 1 및 표 2의 하기의 주석을 참조하라.
AIPO4, 애주번트 A1, 애주번트 A4 또는 애주번트 A5로 보충된 4개의 제형을 비교하였다.
항-PS, Ply, PhtD 및 PD ELISA IgG 수준을 42일째에서 수집된 혈청 및 각 수집된 군에서 측정하였다. 각각의 항원에 대해 하기의 비를 계산하였다: 시험된 신규 애쥬번트로 유도된 IgG 수준 / AIPO4에서 유도된 IgG 수준으로 유도된다.
시험된 모든 신규 애주번트는 전형적인 AIPO4 제형(도 7)과 비교하여 13가 컨주게이트에 대해 면역 반응을 적어도 2배 이상 개선시켰다.
실시예 14: 폐렴구균 원숭이 폐렴 모델에서 PhtD/무독화된 Ply 콤보의 보호 효능
최저의 선재(preexisting) 항-19F 항체 수준을 갖는 것들로서 선택되는, 6 마리의 암컷 붉은털원숭이(3 내지 8살)의 군을 11가 PS 컨주게이트(즉 1㎍의 PS 1, 3, 5, 6B, 7F, 9V, 14 및 23F, 및 3㎍의 PS 4, 18C 및 19F[당류의]) 또는 PhtD(10㎍) + 포르말-무독화된 Ply(10㎍) 또는 애주번트 단독으로 0 및 28일째에서 근육 내적으로 면역화하였다.
PS 18C를 파상풍 톡소이드에 컨주게이션하고, 19F를 디프테리아 톡소이드에, 그리고 다른 PS를 PD에 하였다. 11가 백신의 특징에 대해서는 실시예 2, 표 1 및 표 2의 하기의 주석을 참조하라. 모든 제형을 애주번트 C로 보충하였다.
타입 19F 폐렴구균(5.108 cfu)을 42일째에서 오른쪽 폐에 접종하였다. 공격 1, 3 및 7일 후에 수거된 기관지폐포 세척액에서 집락을 계수하였다. 결과를 공격 7일후에 사망하거나, 폐에 집락화되었거나, 제거된 그룹당 동물수로 나타내었다.
도 8에서 보는 바와 같이, 애주번트 단독 군과 비교하여 11가 컨주게이트 및 PhtD+dPly 콤보(p < 0.12, 피셔 직접확률검정법)로 통계학적 의미에 가까운(사용된 동물의 적은 수에도 불구하고) 우수한 보호가 얻어졌다.
실시예 15: 22F-PhtD 컨쥬게이트에 의해 유도된 제 4형 공격에 대한 항-PhtD 항체 반응 및 보호 효능에 대한 컨쥬게이션 화학의 영향
20 마리 암컷의 OF1 생쥐의 군을 3㎍의 22F-PhtD(직접적으로 CDAP 화학에 의해 제조된) 또는 22F-AH-PhtD(ADH-파생된 PS), 또는 애주번트 단독으로 0 및 14일째에서 근육 내 경로로 면역화하였다. 실시예 2(표 1 및 표 2를 또한 참조)의 방법에 의해 둘 모두 1가 22F 컨주게이트로 제조되었다. 각 제형을 애주번트 C로 보충하였다.
항-PhtD ELISA IgG 수준을 27일째에 수집된 혈청에서 측정하였다.
28일째에 생쥐에 5.1O6 cfu의 제 4형 폐렴구균을 비강 내에 투여하였다(즉, 시험된 백신 제형에서 존재하는 PS에 의해 잠재적으로 보호되지 않는 폐렴구균 혈청형). 유도되는 사망률을 투여 후 8일간 모니터하였다.
22F-AH-PhtD는 22F-PhtD 보다 제 4형 투여에 대해 상당히 높은 항-PhtD IgG 반응을 유도하였으며 보다 나은 보호를 제공하였다.
SEQUENCE LISTING <110> GlaxoSmithKline Biologicals S.A. <120> Vaccine <130> VB62170 <160> 7 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 1 tccatgacgt tcctgacgtt 20 <210> 2 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 2 tctcccagcg tgcgccat 18 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 3 accgatgacg tcgccggtga cggcaccacg 30 <210> 4 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 4 tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 5 tccatgacgt tcctgatgct 20 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 6 tcgacgtttt cggcgcgcgc cg 22 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 7 Met Asp Pro Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr 1 5 10

Claims (136)

  1. 상이한 혈청형들로부터의 캡슐 당류 컨주게이트를 12종 이상 포함하는 다가 폐렴구균(Streptococcus pneumoniae) 백신을 포함하는 유아용 면역원성 조성물로서, 상기 조성물은 폐렴구균(Streptococcus pneumoniae) 감염에 의해 유발된, 유아 인간의 중이염, 수막염, 균혈증, 폐렴 및 결막염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질병의 치료 또는 예방에 사용하기 위해 혈청형 22F 당류 컨주게이트를 포함하고, 폐렴구균 캡슐 당류 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C ,19A, 19F 및 23F를 추가로 포함하며, 상기 면역원성 조성물 내 존재하는 상기 캡슐 당류가 TT, DT, CRM197, TT의 단편 C, PhtD, PhtDE 융합체, 무독화된(detoxified) 뉴모리신 및 단백질 D로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 운반체 단백질(carrier protein)에 컨쥬게이션되는 것인, 면역원성 조성물.
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  3. 제 1항에 있어서, 2종의 상이한 운반체 단백질들(carrier proteins)이 2종 이상의 상이한 폐렴구균(S. pneumoniae) 캡슐 당류 혈청형들에 별개로 컨쥬게이션되는 것인, 면역원성 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 링커를 통해 운반체 단백질에 컨주게이션된 22F 캡슐 당류를 포함하는 것인, 면역원성 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 링커가 ADH인 것인, 면역원성 조성물.
  6. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 링커가 EDAC를 포함하는 카르보디이미드 화학에 의해, 상기 운반체 단백질에 부착되는 것인, 면역원성 조성물.
  7. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 22F 당류가 CDAP 화학을 이용하여 상기 운반체 단백질 또는 상기 링커에 컨주게이션되는 것인, 면역원성 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 22F 당류 컨주게이트를 포함하는 면역원성 조성물로서, 운반체 단백질 대 22F 당류의 비가 5:1 내지 1:5, 4:1 내지 1:1 또는 2:1 내지 1:1(w/w)인 것인, 면역원성 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 22F 당류 컨주게이트를 포함하는 면역원성 조성물로서, 22F 당류의 평균 크기가 100kDa 이상인 것인, 면역원성 조성물.
  10. 제1항에 있어서, 1종 이상의 비컨주게이션되거나 컨주게이션된 폐렴구균(S. pneumoniae) 단백질을 추가로 포함하는 것인, 면역원성 조성물.
  11. 제 10항에 있어서, 상기 1종 이상의 폐렴구균 단백질이 폴리 히스티딘 트라이어드 패밀리(Poly Histidine Triad family, PhtX), 콜린 결합 단백질 패밀리(CbpX), CbpX 트렁케이트(truncates), LytX 패밀리, LytX 트렁케이트, CbpX 트렁케이트-LytX 트렁케이트 키메라 단백질, 무독화된(detoxified) 뉴모리신(Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125 및 Sp133으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, 면역원성 조성물.
  12. 제1항에 있어서, 애주번트를 추가로 포함하는 것인, 면역원성 조성물.
  13. 제1항의 면역원성 조성물 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 백신.
  14. 제1항의 면역원성 조성물과 약제학적으로 허용되는 부형제를 혼합하는 단계를 포함하는 제 13항에 따른 백신을 제조하는 방법.
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Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU8189501A (en) * 2000-06-29 2002-01-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
DE60117164T2 (de) * 2000-11-07 2006-08-03 Immuno Vaccine Technologies Inc., Halifax Impfstoffe mit erhöhter immunantwort und verfahren zur deren herstellung
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
KR101730748B1 (ko) 2005-04-08 2017-04-26 와이어쓰 엘엘씨 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
US8431136B2 (en) * 2005-06-27 2013-04-30 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
JO2813B1 (en) 2005-12-22 2014-09-15 جلاكسو سميث كلاين بايولوجيكالز اس.ايه A vaccine with multiple pneumococcal saccharides
KR101523108B1 (ko) * 2006-08-17 2015-05-26 더 유에이비 리서치 파운데이션 면역원성 ｐｃｐａ 폴리펩티드 및 이의 용도
US8398985B2 (en) * 2007-04-23 2013-03-19 Serum Institute Of India Ltd. Antigenic polysaccharides and process for their preparation
EA201490303A1 (ru) 2007-05-02 2014-05-30 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина
PT2167121E (pt) * 2007-06-26 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina compreendendo conjugados de polissacáridos capsulares de streptococcus pneumoniae
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
ES2588705T3 (es) 2007-09-27 2016-11-04 Immunovaccine Technologies Inc. Uso de liposomas en un vehículo que comprende una fase hidrófoba continua para la entrega de polinucleótidos in vivo
ES2383231T3 (es) 2007-10-19 2012-06-19 Novartis Ag Formulaciones para vacunas meningocócicas
WO2009094730A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-06 Newcastle Innovation Limited Vaccine compositions
AU2009237647A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CA2720877A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
WO2009143413A1 (en) * 2008-05-22 2009-11-26 Children'smedical Center Corporation Synergistic immunogenic fusion protein-polysaccharide conjugate
ES2524699T3 (es) 2008-06-05 2014-12-11 Immunovaccine Technologies Inc. Composiciones que comprenden liposomas, un antígeno, un polinucleótido y un vehículo que comprende una fase continua de una sustancia hidrófoba
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
US20100189737A1 (en) 2008-12-17 2010-07-29 Arico Beatrice Meningococcal vaccines including hemoglobin receptor
CN104548082A (zh) 2009-03-24 2015-04-29 诺华股份有限公司 为脑膜炎球菌因子h结合蛋白添加佐剂
BRPI1009829A2 (pt) 2009-03-24 2016-11-16 Novartis Ag combinações de proteína de ligação de fator h meningocócico e conjugados de sacarídeos pneumocócicos
NZ595223A (en) * 2009-03-24 2013-12-20 Novartis Ag Combinations including pneumococcal serotype 14 saccharide
EP2424562B1 (en) * 2009-04-30 2015-10-07 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Pneumococcal vaccine and uses thereof
WO2010141312A2 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Wake Forest University Health Sciences Flagellin fusion proteins and conjugates comprising pneumococcus antigens and methods of using the same
US20120237536A1 (en) 2009-09-10 2012-09-20 Novartis Combination vaccines against respiratory tract diseases
KR20110068831A (ko) * 2009-12-16 2011-06-22 재단법인 전라남도생물산업진흥재단 리포좀 조성물, 그 제조방법, 및 폐렴 백신으로서의 그 용도
TW201136603A (en) * 2010-02-09 2011-11-01 Merck Sharp & Amp Dohme Corp 15-valent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine composition
GB201003924D0 (en) * 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB201003922D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
CA2803239A1 (en) 2010-06-25 2011-12-29 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding proteins
AU2011300418B2 (en) 2010-09-10 2016-05-12 Glaxosmithkline Biologicals Sa Meningococcus overexpressing NadA and/or NHBA and outer membrane vesicles derived therefrom
WO2012072769A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Novartis Ag Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations
RU2013144207A (ru) * 2011-03-02 2015-04-10 Новартис Аг Комбинированные вакцины с пониженными дозами антигена и/или адъюванта
GB201103836D0 (en) 2011-03-07 2011-04-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
US20140072622A1 (en) * 2011-05-17 2014-03-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine against streptococcus pneumoniae
US10105435B2 (en) 2011-10-06 2018-10-23 Immunovaccine Technologies Inc. Liposome compositions comprising an adjuvant that activates or increases the activity of TLR2 and uses thereof
AU2011384634A1 (en) 2011-12-29 2014-06-19 Novartis Ag Adjuvanted combinations of meningococcal factor H binding proteins
CA2863178C (en) * 2012-01-30 2021-04-06 Serum Institute Of India Ltd. Immunogenic composition
EP2809785B1 (en) 2012-02-02 2017-11-01 GlaxoSmithKline Biologicals SA Promoters for increased protein expression in meningococcus
EP3563834A1 (en) * 2012-02-07 2019-11-06 Infectious Disease Research Institute Improved adjuvant formulations comprising tlr4 agonists and methods of using the same
WO2013131983A1 (en) 2012-03-07 2013-09-12 Novartis Ag Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens
EP2822584A1 (en) 2012-03-08 2015-01-14 Novartis AG Combination vaccines with tlr4 agonists
KR102057217B1 (ko) 2012-06-20 2020-01-22 에스케이바이오사이언스 주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
RU2510281C2 (ru) * 2012-06-22 2014-03-27 Общество с ограниченной ответственностью "Эпитоп" (ООО "Эпитоп") ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА
CN104487086B (zh) * 2012-07-07 2019-08-30 巴拉特生物技术国际有限公司 无动物源的不含酒精的疫苗组合物及其制备方法
ES2700824T3 (es) * 2012-08-16 2019-02-19 Pfizer Procedimientos y composiciones de glucoconjugación
CA2882619A1 (en) 2012-09-06 2014-03-13 Novartis Ag Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p
CN109289045A (zh) * 2012-09-19 2019-02-01 国立大学法人大阪大学 含有肺炎球菌表面蛋白a的肺炎球菌疫苗
GB201218660D0 (en) 2012-10-17 2012-11-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
KR20140075196A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
KR20140075201A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
CN105007935A (zh) 2012-12-18 2015-10-28 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 用于保护免于白喉和/或破伤风的缀合物
EP3363806B1 (en) * 2012-12-20 2022-11-16 Pfizer Inc. Glycoconjugation process
RU2544168C1 (ru) * 2014-01-17 2015-03-10 Андрей Дмитриевич Протасов Способ формирования иммунологической памяти к антигенам streptococcus pneumoniae у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких
RU2743793C1 (ru) * 2014-01-21 2021-02-26 Пфайзер Инк. Капсульные полисахариды Streptococcus pneumoniae и их конъюгаты
MX371454B (es) * 2014-01-21 2020-01-29 Pfizer Polisacaridos capsulares de streptococcus pneumoniae y conjugados de los mismos.
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
PE20212335A1 (es) * 2014-01-21 2021-12-16 Pfizer Composiciones inmunogenicas que comprenden antigenos sacaridos capsulares conjugados y usos de los mismos
JP2017505792A (ja) 2014-02-14 2017-02-23 ファイザー・インク 免疫原性糖タンパク質コンジュゲート
CN103893751B (zh) * 2014-03-26 2016-04-20 天津康希诺生物技术有限公司 一种肺炎球菌多糖蛋白缀合疫苗及其制备方法
CN103936842B (zh) * 2014-04-30 2016-03-23 重庆医科大学 肺炎链球菌溶血素突变体及其作为粘膜免疫佐剂的应用
US9107906B1 (en) 2014-10-28 2015-08-18 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
EP3221339A1 (en) * 2014-11-20 2017-09-27 Biological E Limited Codon optimized polynucleotide for high level expression of crm197
CA2980616A1 (en) * 2015-03-26 2016-09-29 Gpn Vaccines Pty Ltd Streptococcal vaccine
MY182282A (en) 2015-05-04 2021-01-18 Pfizer Group b streptococcus polysaccharide-protein conjugates, methods for producing conjugates, immunogenic compositions comprising conjugates, and uses thereof
BR112017026343A2 (pt) * 2015-06-08 2019-11-19 Serum Inst Of India Private Ltd métodos para aperfeiçoar a adsorção de conjugados de proteína-polissacarídeo e formulação de vacina multivalente assim obtida
RU2600838C1 (ru) * 2015-06-08 2016-10-27 Андрей Дмитриевич Протасов Способ усиления активности факторов неспецифической защиты у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких
KR20160146240A (ko) 2015-06-12 2016-12-21 전관구 염기성 계면활성제를 이용한 산화은나노 및 은나노 제조 방법
PT3313436T (pt) * 2015-06-23 2021-02-25 Biological E Ltd Vacina de conjugado pneumocócico multivalente
KR102225282B1 (ko) * 2015-07-21 2021-03-10 화이자 인코포레이티드 접합된 캡슐형 사카라이드 항원을 포함하는 면역원성 조성물, 그를 포함하는 키트 및 그의 용도
GB201518684D0 (en) * 2015-10-21 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB201522068D0 (en) * 2015-12-15 2016-01-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Dried composition
MX2019001341A (es) * 2016-08-05 2019-07-04 Sanofi Pasteur Inc Composicion de conjugado de polisacarido neumococico multivalente-proteina.
CN109862908B (zh) 2016-08-05 2023-05-02 圣诺菲·帕斯图尔公司 多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物
SG11201901394XA (en) 2016-09-02 2019-03-28 Sanofi Pasteur Inc Neisseria meningitidis vaccine
US11406705B2 (en) 2016-09-27 2022-08-09 Immunovaccine Technologies Inc. Methods of using low dose volume B-cell epitope compositions for inducing an antibody immune response in human subjects
WO2018064444A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Biological E Limited Multivalent pneumococcal vaccine compositions comprising polysaccharide-protein conjugates
JP6944946B2 (ja) 2016-10-20 2021-10-06 Ｋｍバイオロジクス株式会社 低分子化ＰＲＰを用いたＨｉｂコンジュゲートワクチンの製造方法
KR102083973B1 (ko) * 2016-10-28 2020-04-23 주식회사 엘지화학 향상된 IgG 역가를 갖는 다가면역원성 조성물 및 이의 용도
CN108144052A (zh) * 2016-12-02 2018-06-12 武汉博沃生物科技有限公司 肺炎链球菌多糖-蛋白质缀合物及其制取方法和用途
WO2018124959A2 (en) 2016-12-28 2018-07-05 Henriques Normark Birgitta Microparticles from streptococcus pneumoniae as vaccine antigens
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
BR112019013475A2 (pt) * 2016-12-30 2020-02-27 Sutrovax, Inc. Conjugados de polipeptídeo-antígeno com aminoácidos não naturais
WO2018134693A1 (en) * 2017-01-20 2018-07-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
CN110225757A (zh) * 2017-01-31 2019-09-10 默沙东公司 由肺炎链球菌血清型19f生产荚膜多糖蛋白缀合物的方法
CA3052621A1 (en) * 2017-02-03 2018-08-09 Schadeck, Eva Barbara Haemophilus influenzae saccharide-carrier conjugate compositions and uses thereof
US11400162B2 (en) 2017-02-24 2022-08-02 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
CN107929728A (zh) * 2017-04-19 2018-04-20 武汉博沃生物科技有限公司 一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法
US10729763B2 (en) 2017-06-10 2020-08-04 Inventprise, Llc Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds
AU2018280272C1 (en) 2017-06-10 2021-05-06 Inventprise, Inc. Multivalent conjugate vaccines with bivalent or multivalent conjugate polysaccharides that provide improved immunogenicity and avidity
WO2019043245A1 (en) * 2017-09-04 2019-03-07 London School Of Hygiene And Tropical Medicine MICROBIAL CELLS EXPRESSING STREPTOCOCCAL SERROTYPES
EP3678694A4 (en) * 2017-09-07 2021-10-20 Merck Sharp & Dohme Corp. METHOD FOR FORMULATING PNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDES FOR CONJUGATION TO A CARRIER PROTEIN
EP3678653A4 (en) 2017-09-07 2021-05-26 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTIPNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDES AND THEIR USE IN POLYSACCHARIDE-CARRIER PROTEIN IMMUNOGENIC CONJUGATES
KR20200051005A (ko) 2017-09-07 2020-05-12 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 폐렴구균 폴리사카라이드 및 면역원성 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체에서의 그의 용도
CA3084436A1 (en) 2017-12-06 2019-07-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
BR112020015696A2 (pt) 2018-02-05 2020-12-08 Sanofi Pasteur, Inc. Composição de conjugado polissacarídeo-proteína pneumocócico multivalente
AU2019215212A1 (en) 2018-02-05 2020-07-23 Sk Bioscience Co., Ltd. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
CN111989114A (zh) 2018-04-18 2020-11-24 Sk生物科学株式会社 肺炎链球菌的荚膜多糖以及其免疫原性缀合物
WO2019212846A1 (en) * 2018-04-30 2019-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for producing streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide carrier protein conjugates
EP3787674A4 (en) * 2018-04-30 2022-01-26 Merck Sharp & Dohme Corp. PROCESS FOR THE PRODUCTION OF STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE POLYSACCHARIDE CAPSULAR PROTEIN CONJUGATES FROM LYOSPHERES
JP7397000B2 (ja) 2018-04-30 2023-12-12 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー 凍結乾燥変異ジフテリア毒素のジメチルスルホキシド中均一溶液を提供する方法
CN108524926B (zh) * 2018-06-29 2021-06-29 康希诺生物股份公司 一种多价肺炎球菌结合疫苗的制剂组合及其应用
KR20210042904A (ko) 2018-07-04 2021-04-20 박사이트, 인코포레이티드 면역원성 접합체의 개선
TW202019470A (zh) * 2018-09-12 2020-06-01 美商艾芬尼維克斯公司 多價肺炎球菌疫苗
AU2019401535B2 (en) 2018-12-19 2023-12-14 Merck Sharp & Dohme Llc Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
TW202116352A (zh) * 2019-07-18 2021-05-01 南韓商賽特瑞恩股份有限公司 包含多價肺炎球菌多醣-蛋白共軛物的免疫組成物、醫藥組成物及其用途
US20210070890A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Serum Institute Of India Private Limited Method for obtaining purified bacterial polysaccharides
US11931454B2 (en) 2019-09-18 2024-03-19 Alcon Inc. Wet-packed soft hydrogel ocular inserts
KR20220146451A (ko) * 2020-01-17 2022-11-01 인벤트프라이즈 엘엘씨 다가 스트렙토코커스 백신
KR20210117663A (ko) 2020-03-20 2021-09-29 주식회사 보고 수직형 침지식 dpf 세척장치
CN113293115B (zh) * 2021-07-08 2022-08-26 成都生物制品研究所有限责任公司 肺炎链球菌无动物源冻干保护剂

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002000249A2 (en) * 2000-06-29 2002-01-03 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Multivalent vaccine composition
US20030099672A1 (en) * 2000-03-17 2003-05-29 Dominique Schultz Pneumococcus polysaccharide conjugates for use as vaccine against tetanus an diphtheria
KR20040074091A (ko) * 2001-12-18 2004-08-21 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 폐렴연쇄구균 백신

Family Cites Families (177)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4235877A (en) 1979-06-27 1980-11-25 Merck & Co., Inc. Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit
DE3071552D1 (en) 1979-09-21 1986-05-22 Hitachi Ltd Semiconductor switch
BE889979A (fr) 1981-08-14 1982-02-15 Smith Kline Rit Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4619828A (en) 1982-07-06 1986-10-28 Connaught Laboratories, Inc. Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4695624A (en) 1984-05-10 1987-09-22 Merck & Co., Inc. Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4709017A (en) 1985-06-07 1987-11-24 President And Fellows Of Harvard College Modified toxic vaccines
IT1187753B (it) 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
US5173294A (en) 1986-11-18 1992-12-22 Research Foundation Of State University Of New York Dna probe for the identification of haemophilus influenzae
US4950740A (en) 1987-03-17 1990-08-21 Cetus Corporation Recombinant diphtheria vaccines
AU614755B2 (en) 1987-06-05 1991-09-12 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Autocrine motility factors in cancer diagnosis and management
US4940460A (en) 1987-06-19 1990-07-10 Bioject, Inc. Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US5785973A (en) * 1988-02-01 1998-07-28 Praxis Biologics, Inc. Synthetic peptides representing a T-cell epitope as a carrier molecule for conjugate vaccines
US5339163A (en) 1988-03-16 1994-08-16 Canon Kabushiki Kaisha Automatic exposure control device using plural image plane detection areas
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
JP3237842B2 (ja) 1988-12-16 2001-12-10 オランダ国 ニューモリシンミュータント及びそれから製造されたニューモコッカルワクチン
EP0378881B1 (en) 1989-01-17 1993-06-09 ENIRICERCHE S.p.A. Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
DK0382271T3 (da) 1989-02-04 1995-05-01 Akzo Nobel Nv Tocoler som adjuvanser i vacciner
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
FR2649013B1 (fr) 1989-07-03 1991-10-25 Seppic Sa Vaccins et vecteurs de principes actifs fluides contenant une huile metabolisable
FR2649012B1 (fr) 1989-07-03 1991-10-25 Seppic Sa Emulsions multiphasiques injectables
CA2063271A1 (en) 1989-07-14 1991-01-15 Subramonia Pillai Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
ATE128628T1 (de) 1990-08-13 1995-10-15 American Cyanamid Co Faser-hemagglutinin von bordetella pertussis als träger für konjugierten impfstoff.
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
CA2059693C (en) 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae
JP3215109B2 (ja) 1991-02-15 2001-10-02 ユーエイビー リサーチ ファウンデーション 肺炎球菌タンパクの構造遺伝子
US6592876B1 (en) 1993-04-20 2003-07-15 Uab Research Foundation Pneumococcal genes, portions thereof, expression products therefrom, and uses of such genes, portions and products
US5476929A (en) 1991-02-15 1995-12-19 Uab Research Foundation Structural gene of pneumococcal protein
GB9105992D0 (en) 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US5552146A (en) 1991-08-15 1996-09-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions relating to useful antigens of Moraxella catarrhalis
GB9118204D0 (en) 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
ATE245446T1 (de) 1992-02-11 2003-08-15 Jackson H M Found Military Med Dualer träger für immunogene konstrukte
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
MY111880A (en) 1992-03-27 2001-02-28 Smithkline Beecham Biologicals S A Hepatitis vaccines containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
JP3506431B2 (ja) 1992-05-06 2004-03-15 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ ジフテリア毒素受容体結合領域
AU671649B2 (en) 1992-06-18 1996-09-05 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin vaccines
HU219808B (hu) 1992-06-25 2001-08-28 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Adjuvánst tartalmazó vakcinakompozíció és eljárás annak előállítására
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
US5569189A (en) 1992-09-28 1996-10-29 Equidyne Systems, Inc. hypodermic jet injector
US5334144A (en) 1992-10-30 1994-08-02 Becton, Dickinson And Company Single use disposable needleless injector
GB9224584D0 (en) 1992-11-23 1993-01-13 Connaught Lab Use of outer membrane protein d15 and its peptides as vaccine against haempohilus influenzae diseases
DE69405551T3 (de) 1993-03-23 2005-10-20 Smithkline Beecham Biologicals S.A. 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen
WO1994026304A1 (en) 1993-05-18 1994-11-24 Ohio State Research Foundation Otitis media vaccine
AU678613B2 (en) 1993-09-22 1997-06-05 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs
US6005099A (en) 1993-11-17 1999-12-21 Laboratoires Om S.A. Glucosamine disaccharides, method for their preparation, pharmaceutical composition comprising same, and their use
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
WO1995024176A1 (en) 1994-03-07 1995-09-14 Bioject, Inc. Ampule filling device
US5466220A (en) 1994-03-08 1995-11-14 Bioject, Inc. Drug vial mixing and transfer device
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5917017A (en) 1994-06-08 1999-06-29 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain
US6455673B1 (en) 1994-06-08 2002-09-24 President And Fellows Of Harvard College Multi-mutant diphtheria toxin vaccines
CA2194761C (en) 1994-07-15 2006-12-19 Arthur M. Krieg Immunomodulatory oligonucleotides
US5565204A (en) 1994-08-24 1996-10-15 American Cyanamid Company Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections
US5599302A (en) 1995-01-09 1997-02-04 Medi-Ject Corporation Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring
ATE241384T1 (de) 1995-03-22 2003-06-15 Jackson H M Found Military Med Herstellung von immunogenen konstrukten unter verwendung von löslichen kohlehydraten, die durch organische cyanylierungs-reagenzien aktiviert wurden
GB9620795D0 (en) 1996-10-05 1996-11-20 Smithkline Beecham Plc Vaccines
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US6440425B1 (en) 1995-05-01 2002-08-27 Aventis Pasteur Limited High molecular weight major outer membrane protein of moraxella
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
US5843464A (en) 1995-06-02 1998-12-01 The Ohio State University Synthetic chimeric fimbrin peptides
US5695768A (en) * 1995-06-07 1997-12-09 Alberta Research Council Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides
GB9513074D0 (en) 1995-06-27 1995-08-30 Cortecs Ltd Novel anigen
US5666153A (en) 1995-10-03 1997-09-09 Virtual Shopping, Inc. Retractable teleconferencing apparatus
US6290970B1 (en) 1995-10-11 2001-09-18 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor protein of Moraxella
US5893397A (en) 1996-01-12 1999-04-13 Bioject Inc. Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus
US6090576A (en) 1996-03-08 2000-07-18 Connaught Laboratories Limited DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella
GB9607549D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Weston Medical Ltd Spring-powered dispensing device
EP0912608B1 (en) 1996-05-01 2006-04-19 The Rockefeller University Choline binding proteins for anti-pneumococcal vaccines
US7341727B1 (en) 1996-05-03 2008-03-11 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same
US6230051B1 (en) 1996-06-18 2001-05-08 Alza Corporation Device for enhancing transdermal agent delivery or sampling
EP0956289A4 (en) 1996-08-16 2004-10-13 Smithkline Beecham Corp NOVEL PROKARYOTA POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES AND USES THEREOF
EP1770164B1 (en) 1996-10-31 2010-09-01 Human Genome Sciences, Inc. Streptococcus pneumoniae antigens and vaccines
EP0942984A2 (en) 1996-11-12 1999-09-22 Regents Of The University Of Minnesota C3 BINDING PROTEIN OF $i(STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE)
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
CN1133472C (zh) 1996-12-20 2004-01-07 阿尔萨公司 增加经皮样剂流量的装置
DE19708537A1 (de) 1997-03-03 1998-09-10 Biotechnolog Forschung Gmbh Neues Oberflächenprotein (SpsA-Protein) von Streptococcus pneumoniae etc.
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
US6303347B1 (en) 1997-05-08 2001-10-16 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6764840B2 (en) 1997-05-08 2004-07-20 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
FR2763244B1 (fr) * 1997-05-14 2003-08-01 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale multivalente a porteur mixte
US5993412A (en) 1997-05-19 1999-11-30 Bioject, Inc. Injection apparatus
ATE380867T1 (de) 1997-06-03 2007-12-15 Sanofi Pasteur Ltd Lactoferrinrezeptorgen von moraxella
GB9711990D0 (en) 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
KR100619350B1 (ko) 1997-07-21 2006-09-05 박스터 헬쓰케어 에스.에이. 변형 면역성 뉴멀리신 백신조성물
GB9718901D0 (en) 1997-09-05 1997-11-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP1009382B1 (en) 1997-09-05 2003-06-18 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Oil in water emulsions containing saponins
US6224880B1 (en) * 1997-09-24 2001-05-01 Merck & Co., Inc. Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines
AU9510598A (en) 1997-09-24 1999-04-12 American Cyanamid Company Human complement c3-degrading proteinase from (streptococcus pneumoniae)
US5965714A (en) * 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
CN1285753A (zh) 1997-12-02 2001-02-28 鲍德杰克特疫苗公司 透皮给药微粒疫苗组合物
IT1298087B1 (it) 1998-01-08 1999-12-20 Fiderm S R L Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni
US7018637B2 (en) 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
CN1200731C (zh) 1998-04-07 2005-05-11 免疫医疗公司 用作疫苗的肺炎球菌胆碱结合蛋白衍生物
KR100638503B1 (ko) 1998-04-07 2006-10-26 세인트 쥬드 칠드런즈 리써치 호스피탈 Ｎ-말단 콜린 결합 단백질 ａ 절두물의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드, 이로부터 유도된 백신 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
CA2328399A1 (en) 1998-04-23 1999-10-28 University Of Alabama At Birmingham Pneumococcal surface protein c(pspc), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor
WO1999064301A1 (fr) 1998-06-08 1999-12-16 Sca Emballage France Emballage a remise a plat rapide
GB9812613D0 (en) 1998-06-11 1998-08-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
RU2223262C2 (ru) 1998-06-30 2004-02-10 Ом Фарма Новые ацилированные псевдодипептиды, способ их получения и содержащие их фармацевтические композиции
CA2340692A1 (en) 1998-08-19 2000-03-02 North American Vaccine, Inc. Immunogenic .beta.-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide
GB9818548D0 (en) 1998-08-25 1998-10-21 Microbiological Res Authority Treatment of mucas hypersecretion
EP1115875A1 (en) 1998-09-24 2001-07-18 Regents Of The University Of Minnesota Human complement c3-degrading polypeptide from streptococcus pneumoniae
US6541616B1 (en) 1998-10-01 2003-04-01 Antex Biologics Inc. Moraxella catarrhalis protein, gene sequence and uses thereof
DE122007000087I1 (de) 1998-10-16 2008-03-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Adjuvanzsysteme und impfstoffe
AU1819400A (en) 1998-11-17 2000-06-05 Schlumberger Technology Corporation Transmitting information over a communication link
WO2000029434A2 (en) 1998-11-19 2000-05-25 St. Jude Children's Research Hospital PNEUMOCOCCAL CHOLINE BINDING PROTEINS, CbpG AND CbpD, DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC USES THEREOF
ES2322306T3 (es) * 1998-12-21 2009-06-18 Medimmune, Inc. Proteinas de streptpcpccus pneumoniae y fragmentos inmunogenicos para vacunas.
CA2356836C (en) 1998-12-23 2011-09-13 Shire Biochem Inc. Novel streptococcus antigens
EP1034792A1 (en) 1999-03-11 2000-09-13 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Intranasal delivery of pneumococcal polysaccharide vaccines
BR0009163A (pt) 1999-03-19 2001-12-26 Smithkline Beecham Biolog Vacina
JP2002541808A (ja) 1999-04-09 2002-12-10 テクラブ， インコーポレイテッド ポリサッカリド結合体ワクチンのための組換えトキシンａタンパク質キャリア
BRPI0010612B8 (pt) 1999-04-19 2021-05-25 Smithkline Beecham Biologicals S A vacinas
US6558670B1 (en) 1999-04-19 2003-05-06 Smithkline Beechman Biologicals S.A. Vaccine adjuvants
EP1185297B1 (en) 1999-06-10 2006-05-10 MedImmune, Inc. Streptococcus pneumoniae proteins and vaccines
US6319224B1 (en) 1999-08-20 2001-11-20 Bioject Medical Technologies Inc. Intradermal injection system for injecting DNA-based injectables into humans
US6494865B1 (en) 1999-10-14 2002-12-17 Becton Dickinson And Company Intradermal delivery device including a needle assembly
US20040191834A1 (en) * 1999-10-28 2004-09-30 Laferriere Craig Antony Joseph Novel method
WO2001046127A1 (fr) 1999-12-22 2001-06-28 Om Pharma Pseudodipeptides acyles porteurs d'un bras auxiliaire fonctionnalise
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
IL153558A0 (en) 2000-06-20 2003-07-06 Shire Biochem Inc Streptococcus antigens
GB0108364D0 (en) * 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
GB0103170D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
ES2261453T3 (es) 2000-08-04 2006-11-16 Corixa Corporation Nuevos compuestos inmunoefectores.
GB0022742D0 (en) 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
WO2002026757A2 (en) 2000-09-26 2002-04-04 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory activity of immunostimulatory oligonucleotide analogs by positional chemical changes
WO2002078673A1 (fr) 2001-03-29 2002-10-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Procede de production d'un medicament sous forme de granules fins
US20030031684A1 (en) 2001-03-30 2003-02-13 Corixa Corporation Methods for the production of 3-O-deactivated-4'-monophosphoryl lipid a (3D-MLA)
AU2002309706A1 (en) 2001-05-11 2002-11-25 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
FR2827199B1 (fr) 2001-07-10 2004-07-09 Centre Nat Rech Scient Procede et machine de fabrication ex situ de reseaux de biopuces basse et moyennes integration
GB0123580D0 (en) 2001-10-01 2001-11-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
WO2003035836A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Hybridon Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends
WO2003054007A2 (en) 2001-12-20 2003-07-03 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
WO2003065806A1 (en) 2002-02-04 2003-08-14 Corixa Corporation New immunoeffector compounds
GB0213622D0 (en) * 2002-06-13 2002-07-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine Corporation
AU2003257003A1 (en) 2002-07-30 2004-02-16 Baxter Healthcare S.A. Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines
CA2493124C (en) 2002-08-02 2014-04-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
GB0220198D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Modified saccharides,conjugates thereof and their manufacture
JP3754420B2 (ja) 2003-02-04 2006-03-15 三洋電機株式会社 二次電池用電極板及びその製造方法並びにこの電極板を用いた二次電池
AU2004219910B2 (en) 2003-03-13 2010-06-17 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Purification process for bacterial cytolysin
CA2519511A1 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Wyeth Holdings Corporation Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
JP4918356B2 (ja) 2003-06-23 2012-04-18 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド Ｙ群髄膜炎菌ワクチン及びそれらの髄膜炎菌組合せワクチン
US8048432B2 (en) * 2003-08-06 2011-11-01 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Polysaccharide-protein conjugate vaccines
GB0323103D0 (en) * 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
GB0408977D0 (en) * 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
RU2379052C2 (ru) 2004-04-30 2010-01-20 Чирон С.Р.Л. Вакцинация менингококковыми конъюгатами
MXPA06013093A (es) 2004-05-11 2007-08-08 Nederlanden Staat Lipo-oligo-sacarido de neisseria meningitidis igtb como adyuvante.
GB0421083D0 (en) 2004-09-22 2004-10-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Purification process
GB0502096D0 (en) 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Purification of streptococcal capsular polysaccharide
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7955605B2 (en) * 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
KR101730748B1 (ko) 2005-04-08 2017-04-26 와이어쓰 엘엘씨 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
US8431136B2 (en) 2005-06-27 2013-04-30 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
RU2457858C2 (ru) 2005-09-01 2012-08-10 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс Гмбх Унд Ко Кг Множественная вакцинация, включающая менингококки серогруппы с
EP1945249A2 (en) 2005-11-01 2008-07-23 Novartis AG Compositions with antigens adsorbed to calcium phosphate
TWI457133B (zh) * 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
GB0607088D0 (en) * 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
JO2813B1 (en) 2005-12-22 2014-09-15 جلاكسو سميث كلاين بايولوجيكالز اس.ايه A vaccine with multiple pneumococcal saccharides
EP2019657B1 (en) 2006-04-26 2015-05-27 Micell Technologies, Inc. Coatings containing multiple drugs
PT2167121E (pt) 2007-06-26 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina compreendendo conjugados de polissacáridos capsulares de streptococcus pneumoniae
CN102257127B (zh) 2008-12-18 2014-01-01 惠氏有限责任公司 使用二氧化碳控制肺炎链球菌多糖分子量的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030099672A1 (en) * 2000-03-17 2003-05-29 Dominique Schultz Pneumococcus polysaccharide conjugates for use as vaccine against tetanus an diphtheria
WO2002000249A2 (en) * 2000-06-29 2002-01-03 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Multivalent vaccine composition
KR20040074091A (ko) * 2001-12-18 2004-08-21 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 폐렴연쇄구균 백신

Also Published As

Publication number Publication date
ES2614938T3 (es) 2017-06-02
KR20080081061A (ko) 2008-09-05
ES2539795T3 (es) 2015-07-06
MY160199A (en) 2017-02-28
BRPI0620163B8 (pt) 2021-05-25
CA2816182A1 (en) 2007-06-28
IL191913A0 (en) 2009-02-11
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EA200801344A1 (ru) 2008-12-30
PE20071305A1 (es) 2007-12-14
CA2633772C (en) 2015-09-15
AR058707A1 (es) 2008-02-20
JP2009520761A (ja) 2009-05-28
MX2008008140A (es) 2008-09-24
IL192084A0 (en) 2008-12-29
UA96934C2 (uk) 2011-12-26
KR20080081063A (ko) 2008-09-05
IL191913A (en) 2012-07-31
EP1973564B1 (en) 2016-11-09
NO20082718L (no) 2008-09-16
AU2006327040B2 (en) 2010-08-19
US20160243219A1 (en) 2016-08-25
PT2384765T (pt) 2017-02-06
US20100074922A1 (en) 2010-03-25
EA014649B1 (ru) 2010-12-30
CA2808919A1 (en) 2007-06-28
JP2009520759A (ja) 2009-05-28
IL192084A (en) 2013-11-28
CN103251940A (zh) 2013-08-21
CA2634885C (en) 2016-04-19
AU2006327036B2 (en) 2012-11-15
MY148141A (en) 2013-03-15
MY150719A (en) 2014-02-28
IL219641A0 (en) 2012-06-28
ES2707499T3 (es) 2019-04-03
AU2006327041B2 (en) 2010-08-26
US11400147B2 (en) 2022-08-02
EP1962899B1 (en) 2011-08-17
NZ596500A (en) 2013-05-31
DK2384765T3 (en) 2017-01-09
PE20071058A1 (es) 2007-11-27
EP3470080A1 (en) 2019-04-17
CL2013002106A1 (es) 2014-03-07
WO2007071711A2 (en) 2007-06-28
MX354843B (es) 2018-03-22
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WO2007071710A8 (en) 2008-09-04
KR20140036327A (ko) 2014-03-25
AU2006327036A1 (en) 2007-06-28
BRPI0620193A2 (pt) 2011-11-01
JP2014205673A (ja) 2014-10-30
EP2384765A3 (en) 2012-06-20
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IL219641A (en) 2017-10-31
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HRP20110685T1 (hr) 2011-10-31
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HUE041979T2 (hu) 2019-06-28
KR101515078B1 (ko) 2015-04-24
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CN101378779A (zh) 2009-03-04
EA200801367A1 (ru) 2008-12-30
IL211664A0 (en) 2011-05-31
US20180207262A1 (en) 2018-07-26
US9107872B2 (en) 2015-08-18
ATE520415T1 (de) 2011-09-15
NO346529B1 (no) 2022-09-26
HRP20161682T1 (hr) 2017-01-27
WO2007071707A3 (en) 2007-09-13
US20220354941A1 (en) 2022-11-10
PL1962899T3 (pl) 2011-12-30
US20150190521A1 (en) 2015-07-09
JP5615323B2 (ja) 2014-10-29
SI1962899T1 (sl) 2011-11-30
BRPI0620460B1 (pt) 2019-08-13
CA2633772A1 (en) 2007-06-28
JP2012229228A (ja) 2012-11-22
JP5749689B2 (ja) 2015-07-15
CA2808919C (en) 2016-04-19
EP3017827A1 (en) 2016-05-11
BRPI0620163B1 (pt) 2019-08-13
CY1116407T1 (el) 2017-02-08
PT1973564T (pt) 2017-01-24
TWI465248B (zh) 2014-12-21
EP3020411A1 (en) 2016-05-18
JP5461838B2 (ja) 2014-04-02
PT3017827T (pt) 2019-01-28
IL191911A0 (en) 2008-12-29
CN101374548B (zh) 2013-05-01
JP5600337B2 (ja) 2014-10-01
MA30065B1 (fr) 2008-12-01
CN103585623B (zh) 2016-09-28
EP2402025A3 (en) 2012-03-07
CA2634885A1 (en) 2007-06-28
CN101378779B (zh) 2015-09-02
CY1112677T1 (el) 2016-02-10
CY1118345T1 (el) 2017-06-28
CY1118535T1 (el) 2017-07-12
EP2382986A2 (en) 2011-11-02
AU2010241281B2 (en) 2012-12-06
EP3017827B1 (en) 2018-11-07
SI1968631T1 (sl) 2015-07-31
US10646564B2 (en) 2020-05-12
PL2384765T3 (pl) 2017-05-31
NO345368B1 (no) 2021-01-04
TW200738258A (en) 2007-10-16
BRPI0620163A2 (pt) 2011-11-01
WO2007071711A3 (en) 2007-11-08
EP2402025A2 (en) 2012-01-04
TR201900418T4 (tr) 2019-02-21
KR101365001B1 (ko) 2014-02-21
AR058706A1 (es) 2008-02-20
CN101378778B (zh) 2013-02-06
EP1968631A2 (en) 2008-09-17
BRPI0620193B1 (pt) 2019-12-31
EP1973564A2 (en) 2008-10-01
DK1968631T3 (da) 2015-06-15
DK1973564T3 (da) 2017-01-16
DK3017827T3 (en) 2019-02-18
US20180250389A9 (en) 2018-09-06
EP2384765B1 (en) 2016-11-23
TWI487534B (zh) 2015-06-11
CA2634887A1 (en) 2007-06-28
LT1973564T (lt) 2016-12-27
NO344187B1 (no) 2019-09-30
KR101367237B1 (ko) 2014-03-14
PL1973564T3 (pl) 2017-04-28
AU2006327041A1 (en) 2007-06-28
MA30066B1 (fr) 2008-12-01
EA200801374A1 (ru) 2008-12-30
CN101374548A (zh) 2009-02-25
CN101378778A (zh) 2009-03-04
HRP20161681T1 (hr) 2017-01-13
JP2012211165A (ja) 2012-11-01
BRPI0620460A2 (pt) 2011-11-16
EP1962899A2 (en) 2008-09-03
SG168517A1 (en) 2011-02-28
WO2007071707A2 (en) 2007-06-28
NZ569077A (en) 2011-08-26
US10279033B2 (en) 2019-05-07
MA30062B1 (fr) 2008-12-01
JP2012232985A (ja) 2012-11-29
PT1968631E (pt) 2015-07-20
NZ569076A (en) 2011-08-26
US20090017059A1 (en) 2009-01-15
JP2009520760A (ja) 2009-05-28
HRP20190037T1 (hr) 2019-02-22
LT3017827T (lt) 2019-01-10
KR101441368B1 (ko) 2014-09-24
EP2382986A3 (en) 2012-08-22
CN103585623A (zh) 2014-02-19
MY147495A (en) 2012-12-14
CN110179974A (zh) 2019-08-30
PL3017827T3 (pl) 2019-04-30
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