ES2261453T3 - Nuevos compuestos inmunoefectores. - Google Patents
Nuevos compuestos inmunoefectores.Info
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Abstract
Compuesto que tiene la siguiente fórmula: (Ver fórmula) y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, donde X es un elemento seleccionado del grupo que consiste en -O- y -NH-; Y es un elemento seleccionado del grupo que consiste en -O- y -S-;R1, R2 y R3 son cada uno elementos seleccionados independientemente del grupo que consiste en acilo(C2-C24); R4 es un elemento seleccionado del grupo que consiste en -H y PPO3R7R8, donde R7 y R8 son cada uno elementos seleccionados independientemente del grupo que consiste en -H y alquilo (C1-C4); R5 es un elemento seleccionado del grupo que consiste en -H, -CH3 y -PO3R9R10, donde R9 y R10 son cada uno elementos seleccionados independientemente del grupo seleccionado que se compone de -H y y alquilo (C1-C4); R6 se selecciona de entre H, OH, alcoxi (C1-C4), -PO3R11R12, -OPO3R11R12, -SO3R11, -OSO3R11, -NR11R12, -SR11, CN, -NO2, -CHO, -CO2R11, y -CONR11R12, donde R11 y R12 se seleccionan. Cada uno independientemente de -H y y alquilo ((C1-C4), con la condición de que cuando R4 es -PO3R7R8, R5 es distinto de -PO3R9R10; en la que ¿*1¿, ¿*2¿, ¿*3¿ y ¿**¿ representan centros quirales; en el que los subíndices n, m, p y q son cada uno independientemente un número entero de 0 a 6, con la condición de que la suma de p y m es un valor de 0 a 6.
Description
Nuevos compuestos inmunoefectores.
La presente invención se refiere generalmente a
los compuestos inmunoefectores, a su uso en composiciones
farmacéuticas y a procedimientos para su producción y utilización en
vacunas preventivas y/o terapéuticas. Más concretamente, la presente
invención se refiere a un sistema adyuvante que comprende
2-desoxi-2-amino-\beta-D-glucopiranosa
(glucosamina) unida glucosídicamente a un grupo aminoalquilo cíclico
(aglicón).
La inmunidad humoral y la inmunidad mediada por
células son las dos ramas principales de la respuesta inmunitaria de
los mamíferos. La inmunidad humoral implica la generación de
anticuerpos contra xenoantígenos. Los anticuerpos son producidos por
los linfocitos B. La inmunidad mediada por células implica la
activación de linfocitos T, los cuales actúan contra células
infectadas portadoras de xenoantígenos o estimulan otras células
para que actúen contra células infectadas. Ambas ramas del sistema
inmunitario de los mamíferos son importantes para combatir la
enfermedad. La inmunidad humoral es la principal línea de defensa
contra patógenos bacterianos. En el caso de una enfermedad vírica,
la inducción de linfocitos T citotóxicos (CTL) parece ser crucial
para la inmunidad protectora. Así, una vacuna efectiva estimula
preferentemente ambas ramas del sistema inmunitario para protegerse
de la enfermedad.
Las vacunas presentan xenoantígenos procedentes
de agentes que causan la enfermedad a un huésped, de tal manera que
éste puede organizar una respuesta inmunitaria protectora. A menudo,
los antígenos de la vacuna son formas muertas o atenuadas de los
microbios que causan la enfermedad. La presencia de componentes no
esenciales y antígenos en estas vacunas muertas o atenuadas ha
favorecido los notables esfuerzos realizados para purificar los
componentes de una vacuna, incluida la elaboración de antígenos
sintéticos bien definidos mediante técnicas químicas y
recombinantes. No obstante, la purificación y la simplificación de
las vacunas microbianas ha llevado a una pérdida concomitante de la
potencia. Los antígenos sintéticos de bajo peso molecular, si bien
están desprovistos de contaminantes potencialmente perjudiciales, a
menudo no son lo suficientemente inmunogénicos por sí mismos. Estas
observaciones han llevado a los investigadores a añadir
estimuladores del sistema inmunitario, conocidos como adyuvantes, a
las composiciones de las vacunas para potenciar la actividad de sus
componentes.
Los adyuvantes inmunitarios son compuestos que,
cuando se administran a un sujeto o se analizan in vitro,
aumentan la respuesta inmunitaria contra un antígeno en un sujeto al
que se le ha administrado el antígeno o estimulan determinadas
actividades de las células del sistema inmunitario. Se han preparado
y analizado numerosos compuestos que muestran grados diversos de
actividad adyuvante (véase, por ejemplo, Shimizu y otros, 1985;
Bulusu y otros, 1992; Ikeda y otros, 1993; Shimizu y otros, 1994;
Shimizu y otros, 1995; Miyajima y otros, 1996). No obstante, éstos y
otros sistemas adyuvantes anteriores a menudo presentan propiedades
tóxicas, son inestables y/o tienen efectos inmunoestimuladores
inaceptablemente bajos.
Actualmente, el único adyuvante autorizado para
su uso en humanos en Estados Unidos es el alumbre, un grupo de sales
de aluminio (por ejemplo, hidróxido de aluminio, fosfato de
aluminio) en el que se formulan los antígenos de la vacuna. Se ha
descrito que portadores particulares como el alumbre estimulan la
captación, el procesado y presentación de antígenos solubles por
parte de macrófagos. No obstante, el alumbre no carece de efectos
secundarios y lamentablemente su uso se limita únicamente a la
inmunidad humoral (anticuerpos).
La solicitud de patente WO 98/50399 y Johnson y
otros (Bioorg. Med. Chem. Let, 9, (1999), 2273-78)
describe fosfatos de aminoalquil glucosamina como adyuvantes de la
vacuna.
El descubrimiento y el desarrollo de sistemas
adyuvantes efectivos es esencial para mejorar la eficacia y la
seguridad de las vacunas existentes y futuras. Así, existe la
necesidad continua de nuevos y mejores sistemas adyuvantes, en
particular los que impulsan ambos brazos efectores del sistema
inmunitario, para facilitar mejor el desarrollo de otra generación
de vacunas sintéticas. La presente invención cumple éstas y otras
necesidades.
Los compuestos de la presente invención son
moléculas inmunoefectoras que estimulan las respuestas inmunitarias
humoral y mediadas por células contra los antígenos de la vacuna.
Los compuestos comprenden
2-desoxi-2-amino-\beta-D-glucopiranosa
(glucosamina) unida glucosídicamente a un grupo aminoalquilo cíclico
(aglicón). Los compuestos son fosforilados en la posición 4 o 6 del
anillo de glucosamina y acilados con restos
alcanoiloxitetradecanoilo en el nitrógeno de aglicón y las
posiciones 2 y 3 del anillo de glucosamina. Los compuestos de la
presente invención se describen generalmente mediante la fórmula
(I):
y las sales farmacéuticamente
aceptables de la misma, en la que X es -O- o -NH- e Y es -O- o -S-;
R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente un grupo
acilo (C_{2}-C_{24}) que incluye grupos acilo
saturados, insaturados y ramificados; R^{4} es -H- o
-PO_{3}R^{7}R^{8}, donde R^{7} y R^{8} son cada uno
independientemente un -H- o un grupo alquilo
(C_{1}-C_{4}); R^{5} es -H-, -CH_{3}- o
-PO_{3}R^{9}R^{10} donde R^{9} y R^{10} se seleccionan
cada uno independientemente de -H- y el grupo alquilo
(C_{1}-C_{4}); R^{6} se selecciona
independientemente de H, OH, del grupo alcoxi
(C_{1}-C_{4}), -PO_{3}R^{11}R^{12},
-OPO_{3}R^{11}R^{12}, -SO_{3}R^{11}, -OSO_{3}R^{11},
-NR^{11}R^{12}, -SR^{11}, -CN, -NO_{2}, -CHO,
-CO_{2}R^{11} y -CONR^{11}R^{12}, en los que R^{11} y
R^{12} se seleccionan independientemente de H y el grupo alquilo
(C_{1}-C_{4}); con la condición de que cuando
R^{4} es -PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} es distinto de
-PO_{3}R^{9}R^{10}, en el que "*^{1-3}"
y "**" representan centros quirales; en los que los subíndices
n, m, p y q son cada uno independientemente un número entero que va
de 0 a 6, con la condición de que la suma de p y m oscile entre 0 y
6.
En algunas realizaciones, los compuestos de la
presente invención contienen un -O- en X e Y, R^{4} es
-PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} y R^{6} son H, y los subíndices
n, m, p y q son números enteros de 0 a 3. En una realización más
preferida, R^{7} y R^{8} son -H. En una realización aún más
preferida, el subíndice n es 1, el subíndice m es 2, y los
subíndices p y q son 0. Y en una realización todavía más preferida,
R^{1}, R^{2} y R^{3} son tetradecanoílo. Y aún en otra
realización más preferida, *^{1-3} se hallan en la
configuración R, Y se sitúa en la posición ecuatorial y ** se halla
en la configuración
S(N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinometil
2-desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido
y sus sales farmacéuticamente aceptables; RC-553;
fórmula (II).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Fórmula pasa a página
siguiente)
La presente invención también proporciona
compuestos que pueden utilizarse como composiciones farmacéuticas
que contienen compuestos de la fórmula general anterior. Las
composiciones farmacéuticas pueden combinarse con una variedad de
antígenos y en una variedad de formulaciones conocidas para los
expertos en la materia.
Los compuestos de la presente invención también
son útiles en procedimientos de inducción de una respuesta
inmunitaria en un sujeto. El procedimiento requiere administrar una
composición que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de
un portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la
presente invención.
La presente invención también abarca
procedimientos para tratar a un mamífero que sufre o es susceptible
a una infección patógena, un cáncer o un trastorno inmunitario. El
procedimiento abarca administrar al mamífero una cantidad
terapéuticamente efectiva de una composición que contiene un
portador farmacéuticamente aceptable y un compuesto de la presente
invención.
Además, la presente invención abarca un
procedimiento para tratar enfermedades o trastornos mejorados
mediante la producción de óxido nítrico en un sujeto. El
procedimiento requiere poner en contacto el sujeto con una cantidad
efectiva de un compuesto de la presente invención. En algunas
realizaciones, los compuestos de la presente invención pueden
administrarse 48 horas antes de la isquemia, hasta la isquemia y
durante la misma.
El término "acilo" se refiere a los grupos
derivados de un ácido orgánico mediante la eliminación de la parte
hidroxilo del ácido. Por consiguiente, por acilo se entiende que
incluye, por ejemplo, acetilo, propionilo, butirilo, decanoilo,
pivaloilo, benzoilo y similares.
Un "acilo
(C_{2}-C_{24})" es un grupo acilo que tiene
de 2 a 24 carbonos.
El término "alquilo", por sí solo o como
parte de otro sustituyente, se refiere, a no ser que se afirme otra
cosa, a una cadena lineal o ramificada, o un radical hidrocarburo
cíclico o la combinación de los mismos, que puede ser totalmente
saturada, mono o poliinsaturada y que puede incluir radicales
divalentes o multivalentes, con el número designado de átomos de
carbonos (es decir, C_{1}-C_{10} significa de
uno a 10 carbonos). Entre los ejemplos de radicales hidrocarburo
saturados se incluyen grupos, tales como metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, n-butilo,
t-butilo, isobutilo, sec-butilo,
ciclohexilo, (ciclohexilo)etilo, ciclopropilmetilo,
homólogos e isómeros de, por ejemplo, n-pentilo,
n-hexilo, n-heptilo,
n-octilo y similares. Un grupo alquilo insaturado es
el que tiene uno o más enlaces dobles o triples. Entre los ejemplos
de grupos alquilo insaturados se incluyen vinilo,
2-propenilo, crotilo,
2-isopentenilo, 2-(butadienilo),
2,4-pentadienilo,
3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y
3-propinilo, 3-butinilo y los
homólogos e isómeros superiores. Los grupos alquilo que se limitan a
grupos hidrocarburo se denominan "homoalquilo".
Un "alquilo
(C_{1}-C_{4})" es un grupo alquilo que tiene
de 1 a 4 carbonos.
El término "alquileno" por sí solo o como
parte de otro sustituyente significa un radical divalente derivado
de un alcano, tal como ejemplifica el
-CH_{2}CH_{2}CH_{2}CH_{2}-, y, además, incluye aquellos
grupos conocidos como "heteroalquilenos".
Los términos "alcoxi", "alquilamino" y
"alquiltio" hacen referencia a los grupos que tienen un grupo
alquilo unido al resto de la molécula a través de un átomo de
oxígeno, de nitrógeno o de azufre, respectivamente.
El término "alcoxi
(C_{1}-C_{4})" se refiere a un grupo alcoxi
que tiene de 1 a 4 carbonos.
Se supone que cada uno de los anteriores
términos (por ejemplo, "alquilo", "acilo") incluye tanto
la forma sustituida como la no sustituida de los radicales
indicados. A continuación se proporcionan los sustituyentes
preferidos para cada tipo de radical.
Los sustituyentes de los radicales alquilo y
acilo pueden ser una variedad de grupos seleccionados a partir de:
-OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R'', -SR', -halógeno,
-SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R',
-CO_{2}R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'',
-NR''C(O)R',
-NR-C(O)NR''R''',
-NR''C(O)_{2}R',
-NH-C(NH_{2})=NH,
-NR'C(NH_{2})=NH,
-NH-C(NH_{2})=NR', -S(O)R',
-S(O)_{2}R', -S(O)_{2}NR'R'', -CN y
-NO_{2} en un número que oscila entre cero y (2m'+1), donde m' es
el número total de átomos de carbonos en dicho radical. R', R'' y
R''' se refieren, cada uno independientemente, a hidrógeno y alquilo
(C_{1}-C_{8}) no sustituido. Cuando R' y R''
están unidos al mismo átomo de nitrógeno, pueden combinarse con el
átomo de nitrógeno para formar un anillo de 5, 6 ó 7 miembros. Por
ejemplo, -NR'R'' se entiende que incluye
1-pirrolidinil y 4-morfolinil. A
partir de la descripción anterior de los sustituyentes, un experto
en la materia entenderá que el término "alquilo" pretende
incluir grupos, tales como haloalquilo (por ejemplo, -CF_{3} y
-CH_{2}CF_{3}) y similares.
El término "sales farmacéuticamente
aceptables" pretende incluir sales de los compuestos activos que
se preparan con ácidos o bases relativamente no tóxicas, en función
de los sustituyentes en particular hallados en los compuestos
descritos en la presente. Cuando los compuestos de la presente
invención contienen funcionalidades relativamente ácidas, pueden
obtenerse sales de adición de base poniendo en contacto la forma
neutra de tales compuestos con una cantidad suficiente de la base
deseada, bien en estado puro o en un disolvente inerte adecuado.
Entre los ejemplos de sales de adición de base farmacéuticamente
aceptables se incluyen sales de sodio, potasio, calcio, amonio,
amina orgánica, o magnesio o una sal similar. Cuando los compuestos
de la presente invención contienen funcionalidades relativamente
básicas, pueden obtenerse sales de adición de ácido poniendo en
contacto la forma neutra de tales compuestos con una cantidad
suficiente del ácido deseado, bien en estado puro o en un disolvente
inerte adecuado. Entre los ejemplos de sales de adición de ácido
farmacéuticamente aceptables se incluyen aquéllas derivadas de
ácidos inorgánicos como los ácidos clorhídrico, bromhídrico,
nítrico, carbónico, monohidrogenocarbónico, fosfórico,
monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico,
monohidrogenosulfúrico, yodhídrico o fosforoso y similares, así como
las sales derivadas de ácidos orgánicos relativamente no tóxicos
como los ácidos acético, propiónico, isobutírico, oxálico, maleico,
malónico, benzoico, succínico, subérico, fumárico, mandélico,
ftálico, benzenosulfónico, p-tolilsulfónico,
cítrico, tartárico, metanosulfónico y similares. También se incluyen
las sales de aminoácidos , tales como arginato y similares, y sales
de ácidos orgánicos como los ácidos glucurónico y galacturónico y
similares (véase, por ejemplo, Berge, S.M., y otros,
"Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical
Science, 1977, 66, 1-19). Algunos compuestos
específicos de la presente invención contienen funcionalidades tanto
básicas como ácidas que permiten a los compuestos convertirse en
sales de adición de ácido o base.
Las formas neutras de los compuestos pueden
regenerarse poniendo en contacto la sal con una base o un ácido y
aislando el compuesto original de la forma convencional. La forma
original del compuesto difiere de los diversos tipos de sales en
ciertas propiedades físicas, tales como la solubilidad en
disolventes polares, pero por otra parte las sales son equivalentes
a la forma original del compuesto para los propósitos de la presente
invención.
Además de las formulaciones de sales, la
presente invención proporciona compuestos que están en forma de
profármaco. Los profármacos de los compuestos descritos en la
presente son aquellos compuestos que en condiciones fisiológicas
fácilmente experimentan cambios químicos para proporcionar los
compuestos de la presente invención. Además, los profármacos pueden
convertirse en los compuestos de la presente invención mediante
procedimientos químicos o bioquímicos en un entorno ex vivo.
Por ejemplo, los profármacos pueden convertirse lentamente en los
compuestos de la presente invención cuando se colocan en el depósito
de un parche transdérmico con una enzima o con un reactivo químico
adecuados.
Algunos compuestos de la presente invención
pueden existir en formas no solvatadas, así como en formas
solvatadas, incluidas las formas hidratadas. En general, las formas
solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y pretenden
ser englobadas en el alcance de la presente invención. Algunos
compuestos de la presente invención pueden existir en múltiples
formas cristalinas o amorfas. En general, todas las formas físicas
son equivalentes para los usos contemplados por la presente
invención y pretenden estar dentro del alcance de la presente
invención.
Algunos compuestos de la presente invención
tienen átomos de carbono asimétricos (centros ópticos) o dobles
enlaces; los racematos, los diastereómeros, los isómeros geométricos
y los isómeros individuales tienen todos ellos como finalidad ser
englobados en el campo de aplicación de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención también
pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en
uno o más de los átomos que constituyen tales compuestos. Por
ejemplo, los compuestos pueden estar radiomarcados con isótopos
radioactivos, tales como, por ejemplo, tritio (^{3}H), yodo 125
(^{125}I) o carbono 14 (^{14}C). Todas las variaciones
isotópicas de los compuestos de la presente invención,
independientemente de si son radioactivas o no, pretenden ser
englobadas en el alcance de la presente invención.
En un intento de mejorar la seguridad de las
vacunas, los fabricantes evitan utilizar vacunas inactivadas de
células completas y producen vacunas recombinantes o formadas por
subunidades. Al preparar estas vacunas más seguras, se eliminan los
componentes bacterianos o víricos extraños, a la vez que se
mantienen las estructuras mínimas o epítopos mínimos consideradas
necesarias para una inmunidad protectora. La seguridad de estas
vacunas aumenta gracias a la eliminación de componentes bacterianos
víricos extraños que a menudo se demuestra que son tóxicos y
pirogénicos. No obstante, los mismos componentes que causan
toxicidad proporcionan la inmunoestimulación inespecífica que hace
que las vacunas de células completas sean tan efectivas. Sin la
inmunoestimulación adicional, las estructuras mínimas y epítopos que
comprenden vacunas recombinantes y vacunas formadas por subunidades
son a menudo escasamente inmunogénicas.
Una molécula disacárida derivada del LPS de
Salmonella minnesota R595, el inmunoestimulante MPL® (Corixa
Corp.), tiene propiedades inmunoestimulantes. El inmunoestimulante
MPL®, el monofosforil lípido A, es un derivado estructural del
lípido A (o LPS) y tiene un índice terapéutico mejorado relativo al
lípido A (véase la patente de Estados Unidos US 4.987.237 para la
estructura del monofosforil lípido A; las patentes US 4.436.727 y
4.436.728 para la descripción de la preparación del monofosforil
lípido A). Otros inmunoestimulantes útiles incluyen el monofosforil
lípido A
3-des-0-acilado
(3D-MPL), que se describe en la patente US
4.912.094. El compuesto puede administrarse de forma segura en
humanos en dosis de hasta por lo menos 20 \mug/kg, si bien en
algunos pacientes pueden observarse aumentos de la temperatura,
síntomas parecidos a la gripe, aumento de la frecuencia cardíaca y
disminuciones moderadas de la tensión arterial con dosis \geq 10
\mug/kg. El cultivo celular y las evaluaciones con animales
confirman que el inmunoestimulante MPL® sigue conservando cierta
actividad inmunoestimuladora de LPS parenteral por cuanto permanece
la pirogenicidad y la capacidad para producir citocinas
proinflamatorias, tales como el TNF y la IL-8,
aunque a concentraciones de dosis más altas. Así, está clara la
necesidad de disponer de adyuvantes efectivos para las vacunas. En
teoría, estos adyuvantes aumentarán la respuesta inmunitaria
protectora sin inducir toxicidad y pirogenicidad no deseadas.
En un intento de obtener un inmunoestimulante
que tenga baja pirogenicidad, se han preparado moléculas sintéticas
que comparten semejanzas estructurales con el inmunoestimulante MPL®
(véase solicitud de patente US 09/810.915, presentada el 16 de marzo
de 2001, y la presente invención). Estas nuevas moléculas que en
conjunto se denominan fosfatos de aminoalquil glucosaminida (AGP) se
componen de una parte glucosa acilada unida a un grupo aminoalquilo
acilado (Johnson y otros, 1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:
2273-2278; PCT/WO98/50399 y referencias al
respecto). Cada molécula tiene 6 colas de ácidos grasos que se cree
que es el número óptimo de la actividad adyuvante máxima. La
sustitución de distintas partes químicas dentro de las estructuras
de aminoalquilo se determinó en los AGP en previsión de optimizar la
estabilidad y las propiedades de solubilidad. Así, los AGP pueden
separarse ampliamente en diversas familias en función de la
estructura de sus grupos aminoalquilo. Tras la evaluación biológica
inicial, quedó claro que los motivos aminoalquilo podían influir de
un modo radical sobre las propiedades pirogénicas de los AGP (véase
solicitudes de patentes US 09/810915 (presentada el 16 de marzo de
2001), 09/439.839, 09/074.720 y patente US 6.113.918 (procedente de
USSN 08/853.826). Como parte del proceso inicial de cribado de los
componentes adyuvantes sintéticos, se determinaron los datos sobre
pirogenicidad en conejos. Se observó que diversos de los compuestos
no produjeron una respuesta de fiebre cuando se administraron por
vía intravenosa a dosis de 10 \mug/kg. En general, estos mismos
compuestos no pudieron inducir concentraciones detectables de las
citocinas inflamatorias TNF-\alpha o
IL-\beta en un ensayo ex vivo de inducción de citocinas, realizado con células mononucleares de sangre periférica humana. En este caso se informa de estudios sobre las propiedades adyuvantes de un tipo de AGP que induce actividad mínima tanto en la prueba pirógena con conejos como en el ensayo ex vivo con citocinas.
IL-\beta en un ensayo ex vivo de inducción de citocinas, realizado con células mononucleares de sangre periférica humana. En este caso se informa de estudios sobre las propiedades adyuvantes de un tipo de AGP que induce actividad mínima tanto en la prueba pirógena con conejos como en el ensayo ex vivo con citocinas.
\newpage
La presente invención proporciona compuestos que
generalmente se describen mediante la fórmula (I):
y sales farmacéuticamente
aceptables de los mismos, en las que X es -O- o -NH- e Y es -O- o
-S-; R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno independientemente un
grupo acilo (C_{2}-C_{24}), que incluye grupos
acilo saturados, insaturados y ramificados; R^{4} es -H o
-PO_{3}R^{7}R^{8}, donde R^{7} y R^{8} son cada uno
independientemente un H o un grupo alquilo
(C_{1}-C_{4}); R^{5} es -H, -CH_{3} o
-PO_{3}R^{9}R^{10}, donde R^{9} y R^{10} se seleccionan
cada uno independientemente de -H y grupo alquilo
(C_{1}-C_{4}); R^{6} se selecciona
independientemente de H, OH, alcoxi
(C_{1}-C_{4}), -PO_{3}R^{11}R^{12},
-OPO_{3}R^{11}R^{12}, -SO_{3}R^{11}, -OSO_{3}R^{11},
-NR^{11}R^{12}, -SR^{11}, -CN, -NO_{2}, -CHO,
-CO_{2}R^{11} y -CONR^{11}R^{12}, donde R^{11} y R^{12}
se seleccionan cada uno independientemente de H y grupo alquilo
(C_{1}-C_{4}); con la condición de que cuando
R^{4} es -PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} es distinto de
-PO_{3}R^{9}R^{10}, donde "*^{1-3}" y
"**" representan centros quirales; en los que los subíndices n,
m, p y q son cada uno independientemente un número entero del 0 al
6, con la condición de que la suma de p y m oscile entre 0 y
6.
Aunque el hexopiranósido de la fórmula I se
muestra en la configuración gluco, otros glucósidos se hallan dentro
del campo de aplicación de la invención. Por ejemplo, los
glucopiranósidos, incluidos otros hexopiranósidos (por ejemplo, alo,
altro, mano, gulo, ido, galacto, talo), están dentro del alcance de
la invención.
En la fórmula general anterior, la configuración
de los centros 3'-estereogénicos, a los que se unen
los restos normales de aciles grasos, indicados con "*^{1}",
"*^{2}" y "*^{3}", es R o S pero
preferiblemente R. La estereoquímica absoluta de los átomos de
carbono de la unidad cíclica aglicón a la que están unidas R^{6} y
la unidad glucosamínica son directa o indirectamente (indicado con
"**") R o S. En la fórmula general anterior, Y puede estar en
la posición ecuatorial o axial, pero preferiblemente está en la
ecuatorial. Se considera que todos los estereoisómeros,
enantiómeros, diastereómeros y mezclas de los mismos están dentro
del alcance de la presente invención.
En las realizaciones preferidas de la presente
invención, X e Y son -O-, R^{4} es fosfono, R^{5} y R^{6} son
H y los subíndices n, m , p y q son números enteros entre 0 y 3, y
más preferiblemente entre 0 y 2. Más preferiblemente el número
entero n es 1, el número entero m es 2 y los números enteros p y q
son 0. En esta realización preferida, los compuestos de la invención
son 4-fosfatos de 2-pirrolidinometil
\beta-D-glucosaminida que tienen
la fórmula general (III):
En la realización más preferida de la presente
invención, R^{1}, R^{2} y R^{3} de la fórmula (III) son restos
tetradecanoilo y la configuración de los centros
3'-estereogénicos ("*^{1-3}")
a los que están unidos es R, Y se encuentra en la posición
ecuatorial y la estreoquímica absoluta del centro estereogénico de
la pirrolidina ("**") es S. Específicamente, el
compuesto de la realización más preferido es
N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinometil
2-desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-tetradecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido
y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo. Esta realización
más preferida también se conoce como RC-553 y se
representa en la fórmula II.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Fórmula pasa a página
siguiente)
Los compuestos de la presente invención pueden
prepararse utilizando los procedimientos destacados en Johnson y
otros, Bioorg. Med. Chem. Lett.
92273-2278 (1999) y PCT/WO98/50399 y las
referencias al respecto. En general, los procedimientos sintéticos
descritos en las referencias señaladas más arriba son ampliamente
aplicables a la preparación de compuestos con distintos grupos acilo
y sustituciones. Alguien que sea experto en la materia apreciará que
los procedimientos convergentes descritos al respecto pueden
modificarse para utilizar agentes de acilación alternativos o pueden
iniciarse con materiales comercialmente disponibles que tengan
unidos grupos acilo adecua-
dos.
dos.
Los compuestos proporcionados en la presente
pueden evaluarse en una variedad de formatos de ensayos para
seleccionar un compuesto que tenga un perfil farmacocinético
adecuado. Por ejemplo, la patente US 6.013.640 describe modelos
animales adecuados para evaluar los efectos cardioprotectores de los
compuestos descritos en la presente. Los ejemplos que aparecen más
abajo también proporcionan ensayos para evaluar la pirogenicidad de
los compuestos en cuestión, y otros ensayos para evaluar los efectos
proinflamatorios de los compuestos.
La presente invención proporciona además
composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos
proporcionados en la presente mezclados con uno o más portadores
farmacéuticamente aceptables. Los portadores adecuados dependerán de
la enfermedad que se esté tratando y de la vía de administración. De
acuerdo con esto, a continuación se proporciona un análisis sobre
los portadores junto con los procedimientos en uso.
En una realización, la presente invención
proporciona composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto
de la presente invención y un portador farmacéuticamente aceptable.
El compuesto se halla en una cantidad terapéuticamente efectiva, la
cual es la cantidad de compuesto necesaria para conseguir el efecto
deseado en cuanto a tratamiento de una enfermedad, un estado o de
conseguir una manifestación biológica. Las composiciones
farmacéuticas pueden actuar como adyuvante cuando se administran
conjuntamente con un antígeno.
Así, los sistemas adyuvantes de la invención son
particularmente ventajosos para elaborar y utilizar la vacuna y
otras composiciones inmunoestimulantes para tratar o prevenir
enfermedades, como inducir inmunidad activa frente a los antígenos
en mamíferos, preferiblemente en humanos. La preparación de la
vacuna es una técnica bien desarrollada y las orientaciones
generales sobre cómo preparar y formular vacunas ya se encuentran
disponibles en cualquiera de una variedad de fuentes. Un ejemplo de
ello es New Trends and Developments in Vaccines, editado por
Voller y otros, University Park Press, Baltimore, Md, EE.UU.,
1978.
En una realización ilustrativa, el antígeno de
una composición de una vacuna de la invención es un péptido, un
polipéptido o una parte inmunogénica de los mismos. Una "parte
inmunogénica", tal como se utiliza en la presente, es una parte
de proteína que se identifica (es decir, unida específicamente)
mediante un receptor del antígeno de superficie de la célula B y/o
la célula T. Tales partes inmunogénicas generalmente comprenden por
lo menos 5 restos aminoácido, más preferiblemente por lo menos 10, y
aún más preferiblemente por lo menos 20 restos aminoácido de una
proteína antigénica o una variante de la misma.
Las partes inmunogénicas de los polipéptidos
antigénicos generalmente pueden identificarse con técnicas bien
conocidas, tales como las que se resumen en Paul, Fundamental
Immunology, 3.ª ed., 243-247 (Raven Press, 1993)
y las referencias mencionadas al respecto. Tales técnicas incluyen
el cribado de polipéptidos por su capacidad de reaccionar con
anticuerpos específicos del antígeno, antisueros y/o estirpes o
clones de células T. Tal como se utilizan en la presente, los
antisueros y los anticuerpos son "específicos del antígeno" si
se unen específicamente a un antígeno (es decir, reaccionan con la
proteína en una prueba de ELISA u otro inmunoensayo, y no reaccionan
de manera detectable con proteínas no relacionadas). Tales antisuero
y anticuerpos pueden prepararse tal como se explica en la presente,
y utilizando técnicas bien conocidas. Una parte inmunogénica de una
proteína es una parte que reacciona con tales antisuero y/o células
T a una concentración que no es considerablemente menor que la
reactividad del polipéptido en toda su longitud (por ejemplo, en una
prueba ELISA o un ensayo de reactividad de las células T). Tales
partes inmunogénicas pueden reaccionar con tales ensayos a una
concentración que es similar o mayor que la reactividad del
polipéptido en toda su longitud. Tales cribados generalmente pueden
realizarse utilizando procedimientos que son bien conocidos para los
que son expertos en el estado de la técnica, tales como los
descritos por Harlow y Lane. Antibodies: A Laboratory
Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. Por ejemplo, un
polipéptido puede inmovilizarse sobre un soporte sólido y en
contacto con el suero del paciente permitir la unión de anticuerpos
en el suero con el polipéptido inmovilizado. Entonces, puede
eliminarse el suero no unido y los anticuerpos unidos detectados
mediante, por ejemplo, una proteína A marcada con ^{125}I.
Los antígenos peptídicos y polipeptídicos se
preparan utilizando cualquiera de una variedad de técnicas bien
conocidas. Los polipéptidos recombinantes codificados por secuencias
de ADN pueden prepararse fácilmente a partir de secuencias aisladas
de ADN utilizando cualquiera de una variedad de vectores de
expresión, conocidos por los expertos en la materia. La expresión
puede conseguirse en cualquier célula huésped adecuada que haya sido
transformada o transfectada con un vector de expresión que contiene
una molécula de ADN que codifica un polipéptido recombinante. Entre
las células huésped adecuadas se incluyen procariotas, levaduras y
células eucariotas superiores, tales como las células de mamíferos y
las células de plantas. Preferiblemente, las células huésped
utilizadas son E. coli, levaduras o una estirpe celular de
mamífero tal como COS o CHO.
Con medios sintéticos también pueden generarse
partes y otras variantes de un antígeno proteico que tiene menos de
100 aminoácidos, y generalmente menos de unos 50 aminoácidos,
utilizando técnicas bien conocidas por los expertos en la materia.
Por ejemplo, tales polipéptidos pueden sintetizarse utilizando
cualquiera de las técnicas de fase sólida disponibles
comercialmente, como el procedimiento de síntesis de fase sólida de
Merrifield, en el que los aminoácidos se añaden secuencialmente a
una cadena de aminoácidos en crecimiento. Véase Merrifield, J.
Am. Chem. Soc. 85: 2149-2146, 1963. El material
para la síntesis automática de polipéptidos se halla comercialmente
disponible en distribuidores tales como Perkin Elmer/Applied
BioSystems División (Foster City, CA) y puede utilizarse de acuerdo
con las instrucciones del fabricante.
En algunas realizaciones específicas, el
antígeno polipeptídico utilizado en las composiciones de la vacuna
de la invención puede ser una proteína de fusión que comprende dos o
más polipéptidos distintos. Un elemento (partner) de fusión
puede, por ejemplo, contribuir a proporcionar epítopos T
colaboradores (un elemento de fusión inmunológico), preferiblemente
epítopos T colaboradores identificados por humanos, o puede
contribuir a expresar la proteína (un estimulador de la expresión) a
mayor rendimiento que la proteína recombinante nativa. Algunos de
los elementos de fusión preferidos son tanto inmunológicos como de
estimulación de la fusión. Pueden seleccionarse otros elementos de
fusión para incrementar la solubilidad de la proteína o para dirigir
la proteína a los compartimientos celulares deseados. Además, los
elementos de fusión incluyen etiquetas de afinidad, que facilitan la
purificación de la proteína.
Las proteínas de fusión generalmente pueden
prepararse utilizando técnicas estándar, incluida la conjugación
química. Preferiblemente, una proteína de fusión se expresa como una
proteína recombinante, que permite la producción de mayor
concentración, relativa a una proteína de no fusión, en un sistema
de expresión. En resumen, las secuencias de ADN que codifican los
componentes del polipéptido pueden agruparse por separado y unirse a
un vector de expresión adecuado. El extremo 3' de la secuencia de
ADN que codifica un componente polipeptídico está unido, con o sin
un enlace peptídico, al extremo 5' de la secuencia de ADN que
codifica el segundo componente polipeptídico, de manera que los
marcos de lectura de la secuencia están en fase. Esto permite la
traducción en una única proteína de fusión que retiene la actividad
biológica de ambos componentes polipeptídicos.
Puede emplearse una secuencia de enlace
peptídico para separar el primer y el segundo componentes
polipeptídicos una distancia suficiente para asegurar que cada
polipéptido se pliega para formar las estructuras secundaria y
terciaria. Tal secuencia de enlace peptídico es incorporada a la
proteína de fusión utilizando técnicas estándar bien conocidas en el
estado de la técnica. Las secuencias de un enlace peptídico adecuado
pueden escogerse a partir de los siguientes factores: (1) su
capacidad de adoptar una conformación expandida flexible; (2) su
incapacidad de adoptar una estructura secundaria que pueda
interaccionar con epítopos funcionales del primer y segundo
polipéptidos; y (3) la falta de restos hidrófobos o con carga que
podrían reaccionar con los epítopos funcionales del polipéptido. Las
secuencias de enlace peptídico preferidas contienen restos Gly, Asn
y Ser. Otros aminoácidos casi neutros, tales como la Thr y la Ala,
también pueden utilizarse en la secuencia de enlace. Las secuencias
de aminoácidos que pueden emplearse de manera útil como ligandos
incluyen las descritas en Maratea y otros, Gene 40:
39-46, 1985; Murphy y otros, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 83: 8258-8262, 1986; las patentes US
4.935.233 y US 4.751.180. La secuencia de enlaces generalmente puede
tener una longitud de 1 a aproximadamente 50 aminoácidos. Las
secuencias de enlaces no son necesarias cuando el primer y el
segundo polipéptido tienen regiones no esenciales del aminoácido N
terminal que pueden utilizarse para separar los dominios funcionales
y prevenir la interferencia estérica.
En las realizaciones preferidas, se obtiene un
elemento de fusión inmunológico de la proteína D, una proteína de
superficie de la bacteria gramnegativa Haemophilus influenzae
B (WO 91/18926). Preferiblemente, un derivado de una proteína D
comprende aproximadamente el primer tercio de la proteína (por
ejemplo, los primeros 100-110 aminoácidos del
extremo N terminal) y un derivado de una proteína D puede
lipidificarse. En algunas realizaciones preferidas, los primeros 109
restos de un elemento de fusión de una lipoproteína D se incluyen en
el extremo N terminal para proporcionar al polipéptido más epítopos
exógenos de la célula T y aumentar la expresión en E. coli
(que de este modo actúa como un estimulante de la expresión). La
cola lipídica asegura la presentación óptima del antígeno a las
células presentadoras de antígeno. Otros elementos de fusión
incluyen la proteína no estructural procedente del virus de la
gripe, NS 1 (hemoaglutinina). Habitualmente, se utilizan los 81
aminoácidos del extremo N terminal, aunque pueden utilizarse
fragmentos distintos que incluyen epítopos de las células T
colaboradoras.
En otra realización, el elemento de fusión
inmunológico es la proteína conocida como LYTA, o una parte de la
misma (preferiblemente una parte C terminal). LYTA procede de
Streptococcus pneumoniae, que sintetiza una
N-acetil-L-alanina
amidasa conocida como amidasa LYTA (codificada por el gen LytA;
Gene 43: 265-292, 1986). LYTA es una autolisina
que degrada específicamente ciertos enlaces de la estructura de
peptidoglicanos. El dominio C terminal de la proteína LYTA es
responsable de la afinidad a la colina o a algunos análogos de la
colina, tales como el DEAE. Esta propiedad ha sido explotada para el
desarrollo de plásmidos de E. coli que expresan
C-LYTA, útiles para la expresión de proteínas de
fusión. Se ha descrito la purificación de proteínas híbridas que
contienen el fragmento C-LYTA en el extremo amino
terminal (véase Biotechnology 10: 795-798,
1992). En una realización preferida, puede incorporarse una parte
repetida de LYTA a la proteína de fusión. Se observa la presencia de
una parte repetida en la región C terminal que empieza en el resto
178. Una parte repetida particularmente preferida incorpora restos
188-305.
En otra realización de la invención, el sistema
adyuvante que se describe en la presente se utiliza para preparar
las composiciones de la vacuna basadas en ADN. Las vacunas
ilustrativas de este tipo contienen ADN que codifica para uno o más
antígenos polipeptídicos, tales que el antígeno se generan in
situ. El ADN puede estar presente en cualquiera de una variedad
de sistemas de administración conocidos por los expertos en el
estado de la técnica, incluidos los sistemas de expresión de ácidos
nucleicos, los sistemas de expresión bacteriana y vírica. Numerosas
técnicas de administración de genes son bien conocidas en el estado
de la técnica, tales como las que describe Roland, Crit. Rev.
Therap. Drug Carrier Systems 15: 143-198, 1988 y
las referencias mencionadas al respecto. Los sistemas de expresión
adecuada de ácidos nucleicos contienen las secuencias necesarias de
ADN para su expresión en el paciente (tal como un promotor y una
señal de finalización adecuados). Los sistemas de administración de
bacterias involucran la administración de una bacteria (tal como el
bacilo de Calmette-Guérin) que expresa una
parte inmunogénica del polipéptido sobre la superficie de la célula
o secreta tal epítopo. En una realización preferida, el ADN se
introduce utilizando un sistema de expresión vírica (por ejemplo,
virus de la vacuna u otros poxvirus, retrovirus o adenovirus), que
habitualmente implica el uso de un virus de replicación competente
no patógeno (defectuoso o incompleto). Se han descrito sistemas
ilustrativos, por ejemplo, en Fischer-Hoch y otros,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 317-321, 1989;
Flexner y otros, Ann. N.Y. Acad. Sci. 569:
86-103; Flexner y otros, Vaccine 8:
17-21, 1990; patentes US 4.603.112.4.769.330 y
5.017.487; WO 89/01973; patente US 4.777.127; GB 2.200.651; EP
0.345.242; WO 91/02805; Berkner, Biotechniques 6:
616-627, 1988; Rosenfeld y otros, Science
252: 431-434, 1991; Kolls y otros, Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 91: 215-219, 1994;
Kass-Eisler y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. USA
90; 11498-11502, 1993; Guzmán y otros,
Circulation 88: 2838-2848, 1993; y Guzmán y
otros, Cir. Res. 73: 1202-1207, 1993. Las
técnicas para incorporar ADN a tales sistemas de expresión son bien
conocidos para quienes son expertos en el estado de la técnica.
Por otro lado, el ADN puede estar
"desnudo", tal como se describe, por ejemplo, en Ulmer y otros,
Science 259: 1745-1749, 1993 y revisa Cohen,
Science 259: 1691-1692, 1993. La absorción de
ADN desnudo puede aumentarse cubriendo el ADN con perlas
biodegradables que son eficazmente transportadas a las células. Está
claro que una vacuna puede comprender tanto un componente
polinucleótido como un componente polipéptido si se desea.
Además, está claro que una vacuna puede contener
sales farmacéuticamente aceptables de los antígenos polinucleótidos,
polipeptídicos y/o de carbohidratos deseados. Por ejemplo, tales
sales pueden prepararse a partir de bases no tóxicas
farmacéuticamente aceptables, incluidas bases orgánicas (por
ejemplo, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, y
aminoácidos básicos) y bases inorgánicas (por ejemplo, sales de
sodio, de potasio, de litio, de amonio, de calcio y de
magnesio).
El sistema adyuvante de la presente invención
muestra fuertes efectos adyuvantes cuando se administra en una
amplia diversidad de posologías y en una amplia diversidad de
proporciones.
La cantidad de antígeno de cada dosis de una
vacuna se selecciona generalmente como una cantidad que induce una
respuesta inmunoprotectora sin efectos secundarios adversos
significativos en vacunas características. Tal cantidad variará en
función del inmunógeno específico utilizado y de cómo se presente.
Generalmente, se espera que cada dosis comprenda aproximadamente de
1 a 1.000 \mug de proteína, más característicamente
aproximadamente entre 2 y 100 \mug, preferiblemente
aproximadamente entre 5 y 50 \mug. Evidentemente, la posología
administrada dependerá de la edad, el peso, el tipo de tratamiento
concomitante, si es que hay alguno, y la naturaleza del antígeno
administrado.
La actividad inmunogénica de una cantidad
determinada de una composición de una vacuna de la presente
invención puede determinarse fácilmente, por ejemplo controlando el
aumento en el ajuste del anticuerpo contra el antígeno utilizado en
la composición de la vacuna (Dalsgaard, K. Acta Veterinia
Scandinavica 69: 1-40 (1978)). Otro
procedimiento común implica inyectar por vía intradérmica diversas
cantidades de una composición de una vacuna a un ratón
CD-1 y posteriormente recoger suero del ratón y
hacer pruebas de anticuerpos antiinmunogénicos, por ejemplo mediante
ELISA. Estos y otros métodos similares son claros para el experto en
la utilización de la técnica.
El antígeno puede derivar y/o aislarse de
fundamentalmente cualquier fuente deseada, dependiendo de que sea
una enfermedad infecciosa, una enfermedad autoinmunitaria, un
estado, cáncer, un microorganismo patógeno o una enfermedad que debe
tratarse con una composición de vacuna determinada. A modo de
ejemplo, los antígenos pueden obtenerse de fuentes víricas, como el
virus de la gripe, el virus de la leucemia felina, el virus de
inmunodeficiencia felina, los virus VIH-1 y
VIH-2 humanos, el virus del herpes simple de tipo 2,
el citomegalovirus humano, el virus de la hepatitis A, B, C o E, el
virus respiratorio sincitial, el virus del papiloma humano, el virus
de la rabia, el virus del sarampión o el virus de la fiebre aftosa.
Los antígenos ilustrativos también pueden proceder de fuentes
bacterianas, tales como carbunco, difteria, enfermedad de Lyme,
malaria, tuberculosis, leishmaniasis, T. cruzi, Ehrlichia,
Candida, etc. o de protozoos tales como Babeosis bovis o
Plasmodium. El antígeno o antígenos, que habitualmente estará
compuesto de aminoácidos naturales o sintéticos, por ejemplo en
forma de péptidos, polipéptidos o proteínas, puede estar compuesto
por polisacáridos o ser una mezcla de los mismos. Los antígenos
ilustrativos pueden aislarse de fuentes naturales, pueden
sintetizarse por medio de síntesis de fase sólida o pueden obtenerse
mediante técnicas de ADN recombinante.
En otra realización, se utilizan antígenos
tumorales en las composiciones de la vacuna de la presente invención
para prevenir y/o tratar el cáncer. Las células cancerosas a menudo
tienen antígenos distintos sobre su superficie, tales como factor de
crecimiento epidérmico truncado, proteína de unión al folato,
mucinas epiteliales, melanoferrina, antígeno carcinoembrionario,
antígeno de membrana prostático específico,
HER2-neu, de uso experimental en vacunas para tratar
el cáncer. Puesto que los antígenos tumorales son normales o están
relacionados con componentes normales del cuerpo, el sistema
inmunitario a menudo es incapaz de organizar una respuesta
inmunitaria efectiva contra estos antígenos para destruir las
células tumorales. Para conseguir tal respuesta, pueden utilizarse
los sistemas adyuvantes descritos en la presente. Como resultado,
las proteínas exógenas pueden incorporarse a la vía de síntesis de
antígenos endógenos, lo que lleva a la producción de células T
citolíticas o citotóxicas (CTL). Este efecto adyuvante facilita la
producción de CTL específicas del antígeno que detectan y destruyen
las células tumorales que en su superficie llevan el antígeno, o
antígenos, tumoral utilizado en la vacunación. Los tipos de cáncer
ilustrativos en los que puede utilizarse este método incluyen el de
próstata, colon, mama, ovario, páncreas, cerebro, cabeza y cuello,
melanoma, leucemia, linfoma, etc.
En otra realización de la invención, el sistema
adyuvante de la presente invención puede administrarse solo, es
decir, sin administrar un antígeno al mismo tiempo, para potenciar
el sistema inmunitario para el tratamiento de enfermedades
infecciosas crónicas, especialmente en los pacientes
inmunodeprimidos. En la patente US 5.508.310 pueden encontrarse
ejemplos ilustrativos de enfermedades infecciosas en las que puede
utilizarse este procedimiento en el tratamiento o la prevención. La
potenciación del sistema inmunitario de esta manera también puede
ser útil como medida preventiva para limitar los riesgos de
infección nosocomial y/o posquirúrgica.
En otra realización, el antígeno presente en las
composiciones de la vacuna no es un xenoantígeno, sino un
autoantígeno, por ejemplo, la composición de la vacuna está dirigida
contra una enfermedad autoinmunitaria tal como una diabetes de tipo
1, enfermedades autoinmunitarias convencionales específicas de un
órgano, enfermedades neurológicas, enfermedades reumáticas,
psoriasis, enfermedades del tejido conjuntivo, citopenias
autoinmunitarias y otras enfermedades autoinmunitarias. Tal
autoinmunidad convencional específica de un órgano puede incluir
tiroiditis (de Graves y de Hashimoto), gastritis, adrenalitis (de
Addison), ovaritis, cirrosis biliar primaria, miastenia grave,
insuficiencia gonadal, hipoparatiroidismo, alopecia, síndrome de
malabsorción, anemia perniciosa, hepatitis, enfermedades de los
anticuerpos antireceptor y vitíligo. Tales enfermedades neurológicas
pueden incluir esquizofrenia, enfermedad de Alzheimer, depresión,
hipopituitarismo, diabetes insípida, síndrome seco y esclerosis
múltiple. Tales enfermedades reumáticas/enfermedades del tejido
conjuntivo pueden incluir artritis reumatoide, lupus eritematoso
sistémico (LES) o lupus, escleroderma, polimiositis, enfermedad
intestinal inflamatoria, dermatomiositis, colitis ulcerativa,
enfermedad de Crohn, vasculitis, artropatía psoriásica, dermatitis
psoriásica exfoliativa, pénfigo vulgar, síndrome de Sjogren. Otras
enfermedades autoinmunitarias relacionadas pueden incluir
uvorretinitis autoinmunitaria, glomerulonefritis, síndrome de
cardiotomía posterior a un infarto de miocardio, hemosiderosis
pulmonar, amiloidosis, sarcoidosis, estomatitis aftosa y otras
enfermedades inmunitarias relacionadas, como las presentadas en la
presente y conocidas en el estado de las técnicas relacionadas.
Mientras que en las composiciones de la vacuna
de la presente invención puede utilizarse cualquier portador
adecuado conocido por los expertos en el estado de la técnica, el
tipo de portador habitualmente variará en función del modo de
administración deseado. Las composiciones de la presente invención
pueden formularse para cualquier vía de administración adecuada
como, por ejemplo, tópica, nasal, intravenosa, intracraneal,
intraperitoneal, intradérmica, subcutánea o intramuscular. En la
administración parenteral, tal como una inyección subcutánea, el
portador a menudo comprende agua, solución salina, alcohol, una
grasa, una cera o un tampón. En la administración oral, a menudo se
utilizan los portadores mencionados anteriormente o también puede
utilizarse un portador sólido, tal como manitol, lactosa, almidón,
estearato de magnesio, sacarina sódica, talco, celulosa, glucosa,
sacarosa y carbonato de magnesio. Las microesferas biodegradables
(por ejemplo, polilactato poliglicolato) también pueden utilizarse
como portadores en las composiciones de la presente invención. Se
hace referencia a las microesferas biodegradables adecuadas, por
ejemplo, en las patentes US 4.897.268; 5.075.109; 5.928.647;
5.811.128; 5.820.883; 5.853.763; 5.814.344 y 5.942.252, las
referencias de las cuales se incorporan a la presente como
referencia en su totalidad. Los sistemas portadores modificados de
la proteína esencial de la hepatitis B también son adecuados, tales
como los que se describen en la patente WO/99 40934, y las
referencias mencionadas al respecto, todas ellas incorporadas a la
presente como referencia en su totalidad. También puede utilizarse
un portador que comprenda complejos proteicos particulares, tales
como los que se describen en la patente US 5.928.647, cuya
referencia se incorpora a la presente como referencia en su
totalidad, los cuales pueden inducir respuestas restringidas de tipo
I en los linfocitos T citotóxicos de un
huésped.
huésped.
En una realización ilustrativa, las
formulaciones de la vacuna se administran en las mucosas, en
particular en la cavidad oral y, preferiblemente, debajo de la
lengua, para provocar una respuesta inmunitaria. En muchos casos es
preferible la administración en la cavidad oral que la tradicional
vía de administración parenteral, por la facilidad y la conveniencia
ofrecidas por las técnicas de administración no agresivas. Además,
este procedimiento proporciona otra manera de producir inmunidad
mucosal, que a menudo es difícil de conseguir con la administración
parenteral tradicional, y puede proteger frente a los
microorganismos patógenos de transmisión aérea y/o frente a los
alérgenos. Otra ventaja de la administración en la cavidad oral es
que puede mejorarse el cumplimiento del paciente con la
administración de una vacuna sublingual, especialmente en las
aplicaciones pediátricas o en las aplicaciones que tradicionalmente
requieren numerosas inyecciones durante un período prolongado de
tiempo, tal como ocurre en los tratamientos de desensibilización
alérgica.
Las composiciones de la vacuna también pueden
comprender tampones (por ejemplo, solución salina tamponada neutra,
solución salina tamponada con fosfato o solución salina agua en
aceite tamponada con fosfato), carbohidratos (por ejemplo, glucosa,
manosa, sacarosa o dextranos), manitol, proteínas, polipéptidos o
aminoácidos, tales como la glicina, antioxidantes, bacteriostatos,
agentes quelantes tales como EDTA o glutatión, adyuvantes (por
ejemplo, hidróxido de aluminio), solutos que vuelven la formulación
isotónica, hipotónica o ligeramente hipertónica con la sangre del
receptor, agentes de suspensión, agentes espesantes y/o
conservantes. Por otro lado, las composiciones de la presente
invención pueden formularse como un liofilizado. Las composiciones
también pueden encapsularse dentro de liposomas utilizando una
tecnología bien conocida.
De hecho, en una realización, las composiciones
de la vacuna son formulaciones acuosas que comprenden una cantidad
efectiva de uno o más tensoactivos. Por ejemplo, la composición
puede hallarse en forma de dispersión micelar que comprende por lo
menos un tensoactivo adecuado, por ejemplo un tensoactivo
fosfolípido. Entre los ejemplos ilustrativos de fosfolípidos se
incluyen diacil fosfatidil gliceroles, tales como el dimiristoil
fosfatidil glicerol (DPMG), el dipalmitoil fosfatidil glicerol
(DPPG) y el disteraoil fosfatidil glicerol (DSPG), diacil fosfatidil
colinas, tales como dimiristoil fosfatidilcolina (DPMC), dipalmitoil
fosfatidilcolina (DPPC), diestearoil fosfatidilcolina (DSPC);
ácidos diacil fosfatídicos, tales como el ácido dimiristoil
fosfatídico (DPMA), el ácido dipalmitoil fosfatídico (DPPA) y el
ácido diestearoil fosfatídico (DSPA); y diacil fosfatidil
etanolaminas, tales como la dimiristoil fosfatidil etanolamina
(DPME), la dipalmitoil fosfatidil etanolamina (DPPE) y la distearoil
fosfatidil etanolamina (DSPE).
Habitualmente, la proporción molar
tensoactivo:adyuvante de una formulación acuosa oscila
aproximadamente entre 10:1 y 1:10, más habitualmente entre
aproximadamente 5:1 y aproximadamente 1:5, aunque en una formulación
acuosa puede utilizarse cualquier cantidad de tensoactivo para
adaptar mejor los objetivos específicos de
interés.
interés.
En otra realización, la composición es una
emulsión, tal como una emulsión de agua en aceite o una emulsión de
aceite en agua. Tales emulsiones son en general conocidas por los
expertos en la materia.
El sistema adyuvante de la presente invención
puede utilizarse como único sistema adyuvante o, por otro lado,
puede administrarse junto con otros adyuvantes o inmunoefectores. A
modo de ejemplo, tales adyuvantes pueden incluir adyuvantes de base
lipídica (por ejemplo, completo e incompleto de Freund), liposomas,
sales minerales (por ejemplo, AlK(SO_{4})_{2},
AlNa(SO_{4})_{2}, AlNH_{4}(SO_{4}),
sílice, alumbre, Al(OH)_{3},
Ca_{3}(PO_{4})_{2}, caolín y carbono),
polinucleótidos (por ejemplo, ácidos poli IC y poli AU), polímeros
(por ejemplo, polímeros en bloque no iónicos, polifosfacenas,
cianoacrilatos,
polimerasa-(DL-láctido-co-glucósido),
entre otros, y determinadas sustancias naturales (por ejemplo,
lípido A y sus derivados, cera D procedente de Mycobacterium
tuberculosis, así como sustancias halladas en Corynebacterium
parvum, Bordetella pertussis y miembros del género
Brucella), albúmina sérica bovina, toxoide diftérico, toxoide
tetánico, edestina, hemocianina de lapa, toxina A de
Pseudomona, coleragenoide, toxina del cólera, toxina de
pertussis, proteínas víricas y proteínas eucariotas, tales como
interferones, interleucinas o factor de necrosis tumoral. Tales
proteínas pueden obtenerse de fuentes naturales o recombinantes
según métodos bien conocidos para quienes son expertos en la
materia. Cuando se obtienen de fuentes recombinantes, el adyuvante
puede comprender un fragmento de proteína que comprenda por lo menos
la parte inmunoestimuladora de la molécula. Otras macromoléculas
inmunoestimuladoras conocidas que pueden utilizarse en la práctica
de la invención incluyen, pero no se limitan a ellos: polisacáridos,
ARNt, polímeros sintéticos no metabolizables, tales como
polivinilamina, ácido polimetacrílico, polivinilpirrolidona,
policondensados mezclados (con un peso molecular relativamente
elevado) de ácido
4',4-diaminodifenilmetano-3,3'-dicarboxílico
y ácido
4-nitro-2-aminobenzoico
(véase Sela, M., Science 166: 1365-1374 (1969)) o
glucolípidos, lípidos o carbohidratos.
En una realización, el sistema adyuvante se ha
diseñado preferiblemente para inducir una respuesta inmunitaria
predominantemente de tipo Th1. La concentración elevada de citocinas
de tipo Th1 (por ejemplo, IFN-\gamma,
TNF-\alpha, IL-2 e
IL-12) tiende a favorecer la inducción de respuestas
de inmunidad celular ante la administración de un antígeno. En
cambio, la concentración elevada de citocinas de tipo Th2 (por
ejemplo, IL-4, IL-5,
IL-6 e IL-10) tiende a favorecer la
inducción de respuestas de inmunidad humoral. Tras la aplicación de
una vacuna como la que se proporciona en la presente, un paciente
mantendrá una respuesta inmunitaria que incluye respuestas de tipo
Th1 y Th2. En la realización preferida, en la que una respuesta es
mayormente de tipo Th1, la concentración de citocinas de tipo Th1
aumentará en mayor grado que la concentración de citocinas de tipo
Th2. La concentración de estas citocinas puede evaluarse fácilmente
mediante los ensayos habituales. Para una revisión de las familias
de citocinas, véase Mosmann y Coffman, Ann. Rev. Immunol. 7:
145-173, 1989.
Por ejemplo, otros adyuvantes utilizados para
provocar unas respuesta mayormente de tipo Th1 incluyen, por
ejemplo, una combinación de monofosforil lípido A, tal como el
monofosforil lípido A
3-des-O-acilado
(3D-MPL), junto con una sal de aluminio. Los
adyuvantes MPL se hallan disponibles en Corixa Corporation (Seattle,
WA; véase las patentes US 4.436.727; US 4.877.611; US 4.866.034 y US
4.912.094). Los oligonucleótidos que contienen CpG (en los que el
dinucleótido CpG no está metilado) también inducen una respuesta
predominantemente de tipo Th1. Tales oligonucleótidos son bien
conocidos y se describen, por ejemplo, en las patentes WO 96/02555,
WO 99/33448 y en las patentes US 6.008.200 y US 5.856.462. Las
secuencias inmunoestimuladoras de ADN también se describen, por
ejemplo, en Sato y otros, Science 273: 352, 1996. Otros
adyuvantes ilustrativos que pueden incluirse en las composiciones de
la vacuna incluyen Montanide ISA 720 (Seppic, Francia), SAF (Chiron,
California, Estados Unidos), ISCOMS (CSL), MF-59
(Chiron), adyuvante Detox^{TM} (Corixa, Hamilton, MT).
Las composiciones descritas en la presente
pueden administrarse como parte de una formulación de liberación
prolongada (es decir, una formulación tal como una cápsula, una
esponja o un gel (compuestos, por ejemplo, de polisacáridos) que
efectúa una liberación lenta del compuesto tras su administración).
Tales formulaciones generalmente pueden prepararse utilizando una
tecnología bien conocida (véase, por ejemplo, Combes y otros,
Vaccine 14: 1429-1438, 1996) y administrarse,
por ejemplo, mediante implantación oral, rectal o subcutánea, o
mediante implantación en el lugar objetivo deseado. Las
formulaciones de liberación prolongada pueden contener un
polipéptido, un polinucleótido o un anticuerpo dispersados en una
matriz portadora y/o contenidos en un depósito rodeado por una
membrana que controla la velocidad de liberación. Los portadores que
se utilizan en tales formulaciones son biocompatibles y también
pueden ser biodegradables; preferiblemente la formulación
proporciona un nivel relativamente constante de liberación del
componente activo. Tales portadores incluyen micropartículas de poli
(láctido-co-glucólido),
poliacrilato, látex, almidón, celulosa, dextrano y similares. Otros
portadores de liberación retrasada incluyen los biovectores
supramoleculares, que comprenden un núcleo no líquido hidrofílico
(por ejemplo, un polisacárido o un oligosacárido con enlaces
transversales) y, de manera opcional, una capa externa que comprende
un compuesto anfifílico, tal como un fosfolípido (véase por
ejemplo, la patente US 5.151.254 y las solicitudes PCT de las WO
94/20078, WO 94/23701 y WO 96/06638). La cantidad de compuesto
activo contenido en una formulación de liberación prolongada variará
en función del lugar de implantación, la velocidad y la duración
esperada de la liberación y la naturaleza de la enfermedad que hay
que tratar o prevenir.
En las composiciones farmacéuticas y vacunas,
puede utilizarse cualquiera de una variedad de vehículos de
administración conocidos para facilitar la producción de una
respuesta inmunitaria específica contra el antígeno dirigida a las
células. Los vehículos de administración incluyen células
presentadoras de antígeno (APC), tales como células dendríticas,
macrófagos, células B, monocitos y otras células que pueden haberse
diseñado y supervisado para convertirse en eficientes APC. Tales
células pueden modificarse genéticamente, si bien no es necesario,
para aumentar su capacidad para presentar el antígeno, mejorar la
activación y/o mantener la respuesta de la célula T, tener efectos
antidiana per se y/o ser inmunológicamente compatible con el
receptor (es decir, correspondencia con el haplotipo HLA).
Las células presentadoras de antígeno generalmente se aislan de
cualquiera de una variedad de fluidos y órganos biológicos,
incluidos los tumores y los tejidos peritumorales, y pueden ser
células autógenas, alogénicas, singeneicas y xenogeneicas.
Determinadas realizaciones preferidas de la
presente invención utilizan células dendríticas o progenitoras de
las mismas como células presentadoras de antígeno. Las células
dendríticas son APC muy potentes (Banchereau y Steinman, Nature
392: 245-251, 1998) y se ha observado que son
efectivas como adyuvante fisiológico para producir inmunidad
antitumoral preventiva o terapéutica (véase Timmerman y Levy,
Ann. Rev. Med. 50: 507-529, 1999). En
general, las células dendríticas pueden identificarse en función de
su forma habitual (estrelladas in situ, con notables
prolongaciones citoplasmáticas (dendritas) visibles in
vitro), su capacidad para agrupar, procesar y presentar
antígenos con una eficiencia elevada y su capacidad para activar
respuestas de las células T nave. Evidentemente, las células
dendríticas pueden haber sido diseñadas y supervisadas para expresar
receptores de superficie, específicos de la célula, o ligandos que
normalmente no aparecen en las células dendríticas in vivo o
ex vivo, y tales células dendríticas modificadas se
contemplan en la presente invención. Como alternativa a las células
dendríticas, en una vacuna pueden utilizarse células dendríticas
(llamadas exosomas) cargadas de antígenos secretados por vesículas,
(véase Zitvogel y otros, Nature Med. 4:
594-600, 1998).
Las células dendríticas y sus progenitoras
pueden obtenerse de sangre periférica, médula ósea, células de
infiltración tumoral, células de infiltración de tejidos
peritumorales, nódulos linfoides, bazo, piel, sangre de cordón
umbilical o cualquier otro tejido o fluido adecuado. Por ejemplo,
las células dendríticas pueden diferenciarse ex vivo
añadiendo una combinación de citocinas, tales como
GM-CSF, IL-4, IL-13
y/o TNF-\alpha, a cultivos de monocitos
procedentes de sangre periférica. Por otro lado, las células
positivas CD34 procedentes de sangre periférica, sangre de cordón
umbilical o médula ósea pueden diferenciarse en células dendríticas
añadiendo al medio de cultivo combinaciones de
GM-CSF, IL-3,
TNF-\alpha, ligando CD40, LPS, ligando flt3 y/o
otro compuesto, o compuestos, que induzca diferenciación, maduración
y proliferación de células dendríticas.
Las células dendríticas se hallan
convenientemente categorizadas como células "inmaduras" o
"maduras", lo que permite discriminar de manera simple entre
etapas intermedias de diferenciación. Las células dendríticas
inmaduras se caracterizan como APC con una capacidad elevada para
absorber y procesar el antígeno, que se correlaciona con la
expresión elevada del receptor Fc\gamma y el receptor de la
manosa. El fenotipo maduro habitualmente se caracteriza por una
menor expresión del receptor de estos marcadores, pero una expresión
elevada de las moléculas de la superficie celular responsables de la
activación de células T tales como las MHC de tipo I y de tipo II,
moléculas de adhesión (por ejemplo, CD54 y CD11) y moléculas
coestimuladoras (por ejemplo, CD40, CD80, CD86 y
4-1BB).
Las APC generalmente son transfectadas mediante
un polinucleótido que codifica un polipéptido antígeno (o una parte
u otra variante del mismo), tal que el polipéptido antígeno o una
parte inmunogénica del mismo, se expresa en la superficie de la
célula. Tal transfección puede producirse ex vivo y,
entonces, puede utilizarse una composición o vacuna que comprenda
tales células transfectadas, así como los adyuvantes descritos en la
presente, con propósitos terapéuticos. Por otro lado, puede
administrarse a un paciente un vehículo de administración génica que
se dirija a una célula dendrítica o a otra APC, lo que da como
resultado una transfección que tiene lugar in vivo. La
transfección in vivo y ex vivo de células dendríticas,
por ejemplo, generalmente puede realizarse utilizando cualquier
procedimiento conocido en el estado de la técnica, tal como los que
se describen en WO 97/24447, o la aproximación de la pistola génica
descrita por Mahvi y otros, Immunology and cell Biology 75:
456-460, 1997. La carga de antígenos de las células
dendríticas puede conseguirse incubando células dendríticas o
células progenitoras con el polipéptido antígeno, ADN (desnudo o en
un vector plásmido) o ARN; o con bacterias o virus recombinantes que
expresan el antígeno (por ejemplo, vacuna, viruela aviar, adenovirus
o lentivirus). Antes de la carga, puede conjugarse covalentemente el
polipéptido con un elemento inmunológico que proporciona células T
colaboradoras (por ejemplo, una molécula portadora). Por otro lado,
una célula dendrítica puede ser estimulada con un elemento
inmunológico no conjugado, separadamente o en presencia del
polipéptido.
En un aspecto, la presente invención proporciona
compuestos o composiciones para tratar enfermedades o trastornos en
los que interviene el óxido nítrico, en particular la isquemia y la
afectación por revascularización. Generalmente hay acuerdo en que
los inductores de la transcripción del gen iNOS y la síntesis de
proteínas son proinflamatorios y, por consiguiente, algo
"tóxicos" o mal tolerados por los animales y los humanos. La
endotoxina (LPS) y las citocinas proinflamatorias tales como la
IL-1, el TNF-\alpha y el
IFN-\gamma son conocidos inductores de iNOS. Todos
son inherentemente tóxicos y capaces de inducir una respuesta
inflamatoria sistémica, síndrome de distrés respiratorio del adulto,
insuficiencia de múltiples órganos y síncope cardiovascular cuando
se administran a animales.
Las investigaciones sobre la actividad
cardioprotectora del inmunoestimulante MPL® demostraron que la
inducción de sintetasas del óxido nítrico (iNOS) es importante en el
efecto cardioprotector retrasado del compuesto. Además, la
señalización con óxido nítrico (NO), presumiblemente a través de
mezclas constitutivas de NOS es importante para el intenso efecto
cardioprotector del compuesto. En vistas a la actividad residual de
tipo endotóxico del inmunoestimulante MPL®, no es sorprendente que
el compuesto sea capaz de inducir la señalización con óxido nítrico.
Además, la señalización con óxido nítrico se ha sugerido como vía
posible a través de la cual el precondicionamiento isquémico
produce cardioprotección. Esta observación, junto con el hecho de
que los donantes de óxido nítrico son cardioprotectores, corrobora
la vía NOS/NO como ruta para la cardioprotección del
inmunoestimulante
MPL®.
MPL®.
Los compuestos de la presente invención,
incluida la RC-553, son útiles para tratar
enfermedades o estados modulados o mejorados con óxido nítrico, en
particular la isquemia y la afectación por revascularización (véase,
solicitud de la patente US 09/808669, presentada el 14 de marzo de
2001, para una descripción de las propiedades cardioprotectoras de
los fosfatos de aminoalquil glucosaminida y de los procedimientos
para analizar las propiedades cardioprotec-
toras).
toras).
\newpage
Los siguientes ejemplos son para ilustrar, pero
no para limitar la invención reivindicada.
Ejemplo
1
Preparación de la sal de trietilamonio de
N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinometil
2-desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-
tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido
(fórmula (I), R_{1}=R_{2}=R_{3}=C_{13}H_{27}CO, X=Y=O,
n=1, m=2, p=q=0, R_{5}=R_{6}=H, R_{4}=PO_{3}H_{2;}
(fórmula II) R_{1}=R_{2}=R_{3}=
C_{13}H_{27}CO); RC-553.
C_{13}H_{27}CO); RC-553.
- (1)
- A una solución de bromuro de 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino-\beta-D-glucopiranosil (1,05 g, 0,81 mmol) en seco se añadió 1,2-dicloroetano (10 ml) de tamiz molecular de 4 \ring{A} (0,5 g), CaSO_{4} anhidro (2,2 g, 16 mmol) y N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinometanol (0,40 g, 0,75 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente, se trató con Hg(CN)_{2} (1,02 g, 4,05 mmol) y se calentó a reflujo durante 16 horas en condiciones de oscuridad. La mezcla de reacción enfriada se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se filtró. El filtrado se lavó con KI acuoso 1 N, se desecó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. La cromatografía rápida sobre gel de sílice (gradiente de elución, 15\rightarrow20% EtOAc/hexanos) proporcionó 0,605 g (43%) de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinometil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-6-O-(2,2,2-tricloro-1,1-dimetiletoxicarbonil)-2-(2,2,2-tricloroetoxicarbonilamino-\beta-D-glucopiranósido como un sólido amorfo.
- (2)
- Se trató la disolución del compuesto preparado anteriormente en (1) (0,50 g; 0,29 mmol) en AcOH (10 ml) a 60ºC con polvo de cinc (0,98 g; 15 mmol) a tres partes iguales durante un período de 1 hora: la mezcla de reacción enfriada se expuso a los ultrasonidos, se filtró a través de celite y se concentró. El resto resultante se distribuyó entre CH_{2}Cl_{2} y NaHCO_{3} acuoso saturado, y se separaron las capas. La capa orgánica se desecó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. Se agitó la disolución de amino alcohol sin purificar obtenida y el ácido (R)-3-tetradecanoloxitetradecanoil (0,155 g; 0,34 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (3,5 ml) con tamices moleculares en polvo de 4 \ring{A} (0,25 g) durante 0,5 horas y después se trató con 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina (0,11 g; 0,44 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas, se filtró a través de celite y se concentró. La cromatografía rápida sobre gel de sílice con EtOAc/hexanos al 50% proporcionó 0,355 g (68%) de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinometil 2-desoxi-4-O-difenilfosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido como jarabe incoloro.
- (3)
- Se hidrogenó una disolución del compuesto preparado anteriormente en (2) (0,300 g; 0,166 mmol) en una mezcla de AcOH (1 ml) y tetrahidrofurano (9 ml) en presencia de PtO_{2} (0,15 g) a temperatura ambiente y 70 psig durante 18 horas. La mezcla de reacción se diluyó con CHCl_{3}-MeOH 2:1 (50 ml) y se expuso a los ultrasonidos por un período corto de tiempo. Se recogió y lavó el catalizador con CHCl_{3}-MeOH 2:1 y se concentraron la mezcla de filtrado y lavados. La cromatografía rápida sobre gel de sílice con CHCl_{3}-MeOH-H_{2}O-Et_{3}N (90:10:0,5:0,5) dio un producto parcialmente purificado que se disolvió en CHCl_{3}-MeOH extremadamente frío a una proporción 2:1 (30 ml) y se lavó con HCl acuoso 0,1 N extremadamente frío (12 ml). La fase orgánica se filtró y liofilizó a partir de Et_{3}N acuoso al 2% (5 ml, sin pirógeno) para proporcionar 0,228 g (79%) de una sal de trietilamonio de N-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-(S)-2-pirrolidinometil 2-desoxi-4-O-fosfono-2-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoilamino]-3-O-[(R)-3-tetradecanoiloxitetradecanoil]-\beta-D-glucopiranósido como polvo incoloro: mp 67-70ºC; IR (film) 3306, 2955, 2923, 2853, 1736, 1732, 1644, 1548, 1466, 1378, 1245, 1177, 1110, 1053, 844 cm^{-1}; H^{1} NMR (CDCl_{3}-CD_{3}OD) \delta 0,88 (m, 18 H), 1,0-1,2,05 (mH), 2,20-2,70 (m, 12 H), 3,06 (q, 6 H, J=7,2 Hz), 3,3-325 (mH), 4,52 (d, 1 H, J=8 Hz), 5,05-5,28 (m, 4 H), 7,44 (d, 1 H, J=9 Hz); C^{13} NMR (CDCl_{3}) \delta 173,3, 173,0, 170,3, 169,6, 168,6, 101,8, 100,4, 75,8, 72,5, 72,4, 70,9, 70,8, 70,3, 70,2, 69,9, 69,3, 67,9, 66,6, 56,5, 56,3, 54,5, 47,4, 45,8, 44,6, 41,4, 41,0, 39,7, 39,2, 39,0, 34,5, 34,3, 34,1, 32,0, 29,7, 29,4, 28,1, 27,3, 25,7, 25,3, 25,2, 25,1, 24,0, 22,7, 21,6, 14,1, 8,6.
Análisis calculado para
C_{101}H_{194}N_{3}O_{17}P · H_{2}O: C, 68,47; H, 11,15;
N, 2,37; P, 1,75. Hallado: C, 68,79; H, 11,00; N, 2,24; P, 1,97.
Ejemplos
2-6
El principal objetivo de los ejemplos
2-6 fue determinar si RC-553 podía
favorecer una pirogenicidad mínima y mediar la actividad del
adyuvante cuando se formulaba con los antígenos de la vacuna.
\newpage
Ejemplo
2
A grupos de ratones BALB/c (Jackson Laboratories
Bar Harbor, Maine) de 6-8 semanas de edad se les
inyectaron por vía subcutánea 2 \mug de HBsAg (Laboratorio Pablo
Cassara) \pm 20 \mug de adyuvante (inmunoestimulante MPL® o
RC-553) el día 0 y el día 21. Las vacunas se
prepararon mezclando el adyuvante que contenía formulaciones de TeoA
(trietanolamina) con HBsAg recombinante. Las valoraciones de HBsAg
se determinaron mediante ELISA a partir de mezcla de sueros (5
ratones/grupo) obtenida al cabo de 21 días de la segunda vacunación
(tabla 1). Los controles no inmunitarios no fueron vacunados.
Las valoraciones séricas de los ratones que
recibían RC-553 mostraron que las respuestas
anti-HBsAg eran significativamente mayores que en
los sueros de los controles que sólo recibían antígeno (tabla 1).
Especialmente remarcable fue el aumento de las valoraciones para los
isotipos IgG2a e IgG2b. Estas valoraciones eran equivalentes a las
expresadas por los grupos control que recibían inmunoestimulante
MPL®.
| Grupos | Pirogenicidad^{a} | \underline{\hskip3.5cm Valoraciones \ séricas \hskip3.5cm} | ||||
| IgG | IgG1 | IgG2a | IgG2b | |||
| No inmunitario | - | <100 | <100 | <100 | <100 | |
| Vehículo TEoA | N.A. | 51.200 | 102.400 | 25.600 | 1.600 | |
| MPL®-TeoA | 2-3 | 409.600 | 204.800 | 204.800 | 51.200 | |
| RC-553-TeoA | 0,3 | 409.600 | 204.800 | 409.600 | 51.200 | |
| ^{a.} \begin{minipage}[t]{155mm} Los datos de pirogenicidad representan el aumento total en ^{o}C observado en 3 conejos tras la administración de una dosis intravenosa de 10 \mu g/kg. En el ensayo pirógeno los compuestos fueron solubilizados en EtOH/WFI al 10% (agua para inyección USP) y a continuación se diluyeron con dextrosa acuosa al 5%. N.A. significa que el compuesto no fue analizado.\end{minipage} | ||||||
Ejemplo
3
A grupos de ratones BALB/c (Jackson Laboratories
Bar Harbor, Maine) de 6-8 semanas de edad se les
inyectaron por vía subcutánea 0,2 \mug de proteína hemoaglutinina
en una vacuna contra la gripe FluZone (Connaught Laboratories,
Swiftwater, PA) \pm 20 \mug de adyuvante (inmunoestimulante MPL®
o RC-553) el día 0 y el día 14. Las valoraciones de
la FluZone se determinaron mediante análisis ELISA de FluZone a
partir de una mezcla de sueros de 5 ratones, recogida al cabo de 14
días de la segunda vacunación (tabla 2). Los controles no
inmunitarios no fueron vacunados. Las disoluciones iniciales
utilizadas en los sueros de los grupos analizados fueron
1:1.600.
Los resultados fueron similares a los del
ejemplo anterior. De nuevo, la RC-553 presentaba
valoraciones significativamente mayores que los sueros control que
sólo recibían antígeno (tabla 2). El aumento de las valoraciones
también se reflejó en el aumento de las respuestas de IgG2a e IgG2b.
Estas valoraciones eran equivalentes a las expresadas por los grupos
control que recibían inmunoestimulante MPL®.
| Grupos | Pirogenicidad^{a} | \underline{\hskip3.5cm Valoraciones \ séricas\hskip3.5cm} | ||||
| IgG | IgG1 | IgG2a | IgG2b | |||
| No inmunitario | - | <100 | <100 | <100 | <100 | |
| Vehículo TEoA | N.A. | 12.800 | 51.200 | 1.600 | 1.600 | |
| MPL®-TeoA | 2-3 | 102.400 | 102.400 | 25.600 | 12.800 | |
| RC-553-TeoA | 0,3 | 51.200 | 102.400 | 25.600 | 6.400 | |
| ^{a.} \begin{minipage}[t]{155mm} Los datos de pirogenicidad representan el aumento total en ^{o}C observado en 3 conejos tras la administración de una dosis intravenosa de 10 \mu g/kg. En el ensayo pirógeno los compuestos fueron solubilizados en EtOH/WFI al 10% (agua para inyección USP) a 100 \mu g/ml y a continuación diluidos con dextrosa acuosa al 5%. N.A. significa que el compuesto no fue analizado.\end{minipage} | ||||||
Ejemplo
4
Grupos de ratones BALB/c recibieron por vía
subcutánea 0,2 \mug de HBsAg (Rhein Americana, & Rhein
Biotech) \pm 25 \mug de adyuvante (inmunoestimulante MPL® o
RC-553) el día 0 y el día 21. Las valoraciones de
los isotipos IgG1 e IgG2a se determinaron mediante análisis ELISA a
partir de una mezcla de sueros recogida al cabo de 21 días de la
segunda vacunación (tabla 3). Los controles no inmunitarios no
fueron vacunados. En este experimento, RC-553
intervenía en el aumento de las valoraciones comparado con el grupo
control, que recibió antígeno en PBS (solución tampón de fosfato).
RC-553 estimuló valoraciones equivalentes a los
controles positivos, inmunoestimulante MPL® (tabla 3).
| Grupos | Pirogenicidad^{a} | \underline{\hskip2cm Valoraciones \ séricas \hskip2cm} | ||
| IgG1 | IgG2a | |||
| No inmunitario | - | <100 | <100 | |
| Control PBS | N.A. | 64.000 | 4.000 | |
| MPL®-TeoA | 2-3 | 128.000 | 1.024.000 | |
| RC-553-TeoA | 0,3 | 32.000 | 2.048.000 | |
| ^{a.} \begin{minipage}[t]{155mm} Los datos de pirogenicidad representan el aumento total en ^{o}C observado en 3 conejos tras la administración de una dosis intravenosa de 10 \mu g/kg. En el ensayo pirógeno los compuestos fueron solubilizados en EtOH/WFI al 10% (agua para inyección USP) a 100 \mu g/ml y a continuación diluidos con dextrosa acuosa al 5%. N.A. significa que el compuesto no fue analizado.\end{minipage} | ||||
Ejemplo
5
Se utilizaron algunos ratones de cada grupo del
ejemplo 4 como donantes de células del bazo para evaluar la
actividad CTL. Se evaluó la lisis específica dirigida contra HBsAg
mediante un ensayo ordinario de liberación de Cr^{15} de cuatro
horas (Moore y otros, (1988) Cell 55:
777-785). Se prepararon suspensiones unicelulares
procedentes de los bazos de los ratones al cabo de 9 días de la
vacunación. Las células del bazo se trataron con NH_{4}Cl
tamponado con tris para eliminar los eritrocitos y se resuspendieron
a una concentración de 7,5 x 10^{6}/ml en RPMI/FCS al 10%
suplementado con HEPES 5 mM, L-glutamina 4 mM,
2-mercaptoetanol 0,05 mM y antibióticos. Se añadió
un péptido sintético, compuesto por un conocido epítopo CTL
L^{d}-restringido de clase I (IPQSLDSWWTSL), a las
células a una concentración final de 75 nM. Tras cuatro días de
incubación, se aislaron las células y se evaluó la actividad CTL.
Se determinó la actividad letal específica contra las células P815S
transfectadas, marcadas con Cr^{51}, que expresaban el epítopo
L^{d}-restringido. Las células diana eran una
estirpe celular P815 transfectada (P815S) que expresa el epítopo
L^{d}-restringido. La lisis inespecífica fue
<10% a una proporción E:T de 50:1 contra el objetivo P815 (tabla
4). Al contrario que la respuesta de los anticuerpos, el
RC-553 estimulaba considerablemente la actividad
elevada de las CTL comparado con los controles compuestos solo por
antígeno (tabla 4).
| Grupos | Pirogenicidad^{a} | Porcentaje de actividad letal específica | |||
| \underline{\hskip3cm (proporción \ efector: \ Objetivo) \hskip3cm} | |||||
| - | 50:1 | 25:1 | 12,5:1 | 6,25:1 | |
| No inmunitario | 6 | 3 | 1 | 0 | |
| PBS | N.T. | 29 | 20 | 11 | 7 |
| MPL®-TEoA | 2-3 | 80 | 71 | 47 | 32 |
| RC-553-TEoA | 0,3 | 85 | 77 | 53 | 37 |
| ^{a.} \begin{minipage}[t]{155mm} Los datos de pirogenicidad representan el aumento total en ^{o}C en 3 conejos tras la administración intravenosa de una dosis de 10 \mu g/kg. En el ensayo pirógeno los compuestos se solubilizaron en EtOH/WFI (agua para inyección USP) al 10% a 100 \mu g/ml y después se diluyeron con dextrosa acuosa al 5%. N.T. significa que el compuesto no fue analizado.\end{minipage} | |||||
\newpage
Ejemplo
6
Los efectos de la RC-553 en la
elaboración del TNF-\alpha y la
IL-1\beta se determinó en condiciones ex
vivo en células mononucleares de sangre periférica humana. El
inmunoestimulante MPL® y la RC-553 se formularon en
soluciones acuosas de TEoA/WFI al 0,2%.
Se utilizó sangre humana completa para evaluar
la capacidad de los glucolípidos (AGP) para inducir citocinas
proinflamatorias. La sangre humana completa se recoge en tubos
heparinizados y 0,45 ml de la misma se mezclan con 0,05 ml de una
solución salina tamponada con fosfato (PBS, pH 7,4) que contiene los
glucolípidos (es decir, los compuestos de la prueba). Los tubos se
incuban en un agitador a 37ºC durante 4 horas. Entonces, se diluyen
las muestras con 1,55 ml de PBS estéril y se centrifugan. Se separan
los sobrenadantes y se analizan en busca del
TNF-\alpha y la IL-1\beta
asociados a células mediante sándwich ELISA utilizando los kits de
inmunoanálisis de R&D Systems'Quantikine para el
TNF-\alpha y la IL-1\beta
humanos.
A 1,5 y 10 \mug/ml, la RC-553
no produjo concentraciones de TNF-\alpha que
pudieran detectarse en las condiciones del ensayo. En cambio, el LPS
de control positivo fue un estimulante efectivo de la secreción de
TNF-\alpha en el intervalo de concentración de 100
a 10.000 ng/ml.
Asimismo, la RC-553 (a 1, 5 y 10
\mug/ml) no produjo concentraciones detectables de
IL-1\beta. Para comparar los efectos de
RC-553, se asignó el valor 1 a la concentración de
IL-1\beta inducida con inmunoestimulante MPL® y la
inducción relativa de citocinas para RC-553 fue
\leq0,05.
Los datos de estos estudios indican que la
RC-553 puede aumentar la inmunidad de los antígenos
de una vacuna. La RC-553 aumentó las valoraciones
séricas de dos antígenos de vacuna distintos, los antígenos de la
gripe y los antígenos de superficie de la hepatitis. Al igual que el
inmunoestimulante MPL®, la RC-553 interviene en una
modificación del perfil de los anticuerpos que pasan de una
respuesta dominada por el isotipo IgG1 a una respuesta con mayor
concentración de anticuerpos IgG2a. Además de aumentar la respuesta
de los anticuerpos, la RC-553 es un buen adyuvante
para inducir la actividad CTL.
Una característica notable de los resultados de
este estudio es que al parecer la RC-553 influye en
la respuesta sin inducir concentraciones detectables de las
citocinas inflamatorias TNF-\alpha o
IL-1\beta. Estas citocinas son producidas por
células del sistema inmunitario innato en respuesta a productos
bacterianos de la pared celular como el lípido A. Puesto que la
RC-553 comparte similitudes estructurales con el
lípido A es concebible pensar que también estimularía el
TNF-\alpha o la IL-1\beta y, de
hecho, muchas moléculas de AGP lo hacen. Como citocinas
inflamatorias el TNF-\alpha y la
IL-1\beta estimulan la liberación de cascadas de
otros mediadores de citocinas responsables de activar las células
fagocíticas y movilizar la inmunidad específica. La
IL-1 se denominó inicialmente pirógeno endógeno
porque induce una respuesta de fiebre. Así, la falta de
IL-1 detectable tras la administración de
RC-553 coincide con la falta aparente de fiebre en
la prueba pirógena realizada al conejo.
Al parecer es posible que, en estos estudios, la
RC-553 realmente favorezca la secreción de
TNF-\alpha y de IL-1\beta a
concentraciones lo suficientemente elevadas como para mediar la
activación de la inmunidad específica, aún demasiado baja para ser
detectada en el ensayo de citocinas ex vivo. Otra opción
sería que estos compuestos estimulen mediadores de citocinas,
distintos al TNF-\alpha y la
IL-1\beta, que originen una respuesta inmunitaria
específica ante la coadministración de antígenos de la vacuna.
Parece probable que se esté produciendo
IFN-\gamma. Se cree que esta citocina es
responsable de inducir el cambio de isotipo de los anticuerpos de la
subclase IgG2a, así como un promotor de las respuestas de CTL
dirigidas por TH-1. Así, el aumento de las
valoraciones de IgG2a y las poblaciones activas de CTL refleja la
producción de IFN-\gamma.
Ejemplo
7
Este ejemplo ilustra los efectos de diversos
glucolípidos sobre la inducción de iNOS en macrófagos murinos J774.
La estirpe celular de los macrófagos murinos J774 puede ser
sensibilizada in vitro por IFN-\gamma y es
muy sensible a la siguiente estimulación de LPS del aumento de la
iNOS determinada mediante ensayo ELISA con reactivo estándar de
Greiss. El ensayo utiliza células J774 sembradas a 1 x 10^{6}/ml
en frasco de 30 ml y con IFN-\gamma añadido a 100
unidades/ml durante 16-24 horas. Entonces se recogen
las células, se lavan y se resuspenden en un pocillo de 2 x 10^{5}
de una bandeja de 96 pocillos donde se deja que se adhieran. Los
compuestos glucolípidos se diluyen sucesivamente en los pocillos
para un grupo experimental y los cultivos resultantes se incuban
durante otras 36-40 horas antes de recoger los
sobrenadantes procedentes del análisis del reactivo de Greiss de
liberación de nitrito (Green y otros, (1992) Anal. Biochem.
126: 131-138). El contenido en nitritos se
corresponde estrechamente con la función iNOS.
La potencia se determinó como la concentración
(ng/ml) de glucolípido del cultivo capaz de inducir la mitad de la
inducción máxima de nitrito (ED_{50}). Cuanto menor el valor de
ED_{50}, mayor la potencia de inducción de iNOS. El valor de
ED_{50} se calculó de acuerdo con los procedimientos establecidos
por Johnson y otros (1999) J Med Chem. 42:
4640-4649.
Se vio que el inmunoestimulante MPL® tiene una
ED_{50} de aproximadamente 2 ng/ml que resulta en concentraciones
elevadas de nitrito mientras que el RC-553 muestra
una ED_{50} nominal aproximada \geq3.000 (ng/ml).
La actividad máxima exacta de iNOS observada con
la RC-553 sugiere que en este sistema es
esencialmente inactiva para la inducción de iNOS.
Está claro que los ejemplos y realizaciones
descritos en la presente tienen propósitos exclusivamente
ilustrativos y que a los expertos en el estado de la técnica se les
ocurrirán las diversas modificaciones o cambios a la luz de los
mismos y deben incluirse dentro de los límites de esta solicitud y
en el ámbito de las reivindicaciones adjuntas.
Claims (33)
1. Compuesto que tiene la siguiente fórmula:
y sales farmacéuticamente
aceptables del mismo, donde X es un elemento seleccionado del grupo
que consiste en -O- y
-NH-;
Y es un elemento seleccionado del grupo que
consiste en -O- y -S-;
R^{1}, R^{2} y R^{3} son cada uno
elementos seleccionados independientemente del grupo que consiste en
acilo(C_{2}-C_{24});
R^{4} es un elemento seleccionado del grupo
que consiste en -H y PO_{3}R^{7}R^{8}, donde R^{7} y R^{8}
son cada uno elementos seleccionados independientemente del grupo
que consiste en -H y alquilo (C_{1}-C_{4});
R^{5} es un elemento seleccionado del grupo
que consiste en -H, -CH_{3} y -PO_{3}R^{9}R^{10}, donde
R^{9} y R^{10} son cada uno elementos seleccionados
independientemente del grupo seleccionado que se compone de -H y
alquilo (C_{1}-C_{4});
R^{6} se selecciona de entre H, OH, alcoxi
(C_{1}-C_{4}), -PO_{3}R^{11}R^{12},
-OPO_{3}R^{11}R^{12}, -SO_{3}R^{11}, -OSO_{3}R^{11},
-NR^{11}R^{12}, -SR^{11},-CN, -NO_{2}, -CHO,
-CO_{2}R^{11}, y -CONR^{11}R^{12}, donde R^{11} y R^{12}
se seleccionan.
Cada uno independientemente de -H y alquilo
(C_{1}-C_{4}), con la condición de que cuando
R^{4} es -PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} es distinto de
-PO_{3}R^{9}R^{10};
en la que “*^{1}”, “*^{2}”, “*^{3}” y “**”
representan centros quirales; en el que los subíndices n, m, p y q
son cada uno independientemente un número entero de 0 a 6, con la
condición de que la suma de p y m es un valor de 0 a 6.
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el
que X e Y son -O-, R^{4} es PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} y
R^{6} son H, y los subíndices n, m, p y q son un número entero de
0 a 3.
3. Compuesto según la reivindicación 2, en el
que R^{7} y R^{8} son H.
4. Compuesto según la reivindicación 3, en el
que los subíndices n, m, p y q son un número entero de 0 a 2.
5. Compuesto según la reivindicación 3, en el
que el subíndice n es 1, el subíndice m es 2 y los subíndices p y q
son 0.
6. Compuesto según la reivindicación 5, en el
que R^{1}, R^{2} y R^{3} son restos tetradecanoílo.
7. Compuesto según la reivindicación 5, en el
que *^{1}, *^{2} y *^{3} se hallan en la configuración
R.
8. Compuesto según la reivindicación 5, en el
que Y se halla en la posición ecuatorial.
9. Compuesto según la reivindicación 5, en el
que ** se halla en la configuración S.
10. Compuesto según la reivindicación 5, en el
que *^{1}, *^{2} y *^{3} se hallan en la configuración
R, en el que Y se halla en la posición ecuatorial y en el que
** se halla en la configuración S.
11. Composición farmacéutica que comprende:
una cantidad terapéuticamente efectiva de una
composición que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y
un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones
1-10.
12. Composición farmacéutica según la
reivindicación 11, en la que la composición farmacéutica además
comprende por lo menos un antígeno.
13. Composición farmacéutica según la
reivindicación 12, en la que el antígeno procede del grupo
consistente en virus del herpes simple tipo 1, virus del herpes
simple tipo 2, citomegalovirus humano, VIH, hepatitis A, B, C o E,
virus respiratorio sincitial, virus del papiloma humano, virus de la
gripe, tuberculosis, leishmaniasis, T. cruzi, Erlichia, Candida,
Salmonella, Neisseria, Borrellia, Clamidia, Bordetella, Plasmodium y
Toxoplasma.
14. Composición farmacéutica según la
reivindicación 12, en la que el antígeno es un antígeno tumoral
humano.
15. Composición farmacéutica según la
reivindicación 14, en la que el antígeno tumoral procede de un
cáncer de próstata, de colon, de mama, de ovario, de páncreas, de
cerebro, de cabeza y cuello, de un melanoma, de leucemia o de un
linfoma.
16. Composición farmacéutica según la
reivindicación 12, en la que el antígeno es un autoantígeno.
17. Composición farmacéutica según la
reivindicación 16, en la que el autoantígeno es un antígeno asociado
a una enfermedad autoinmunitaria.
18. Composición farmacéutica según la
reivindicación 17, en la que la enfermedad autoinmunitaria es una
diabetes de tipo 1, esclerosis múltiple, miastenia grave, artritis
reumatoide o psoriasis.
19. Composición farmacéutica según la
reivindicación 11, en una formulación acuosa.
20. Composición farmacéutica según la
reivindicación 19, en la que la formulación acuosa comprende uno o
más tensoactivos.
21. Composición farmacéutica según la
reivindicación 19, en la que la formulación acuosa comprende uno o
más tensoactivos fosfolípidos.
22. Composición farmacéutica según la
reivindicación 21, en la que el tensoactivo se selecciona del grupo
consistente en diacil fosfatidil gliceroles, diacil fosfatidil
colinas, ácidos diacil fosfatídicos y diacil fosfatidil
etanolaminas.
23. Composición farmacéutica según la
reivindicación 21, en la que el tensoactivo se selecciona del grupo
consistente en dimiristoil fosfatidil glicerol (DPMG), dipalmitoil
fosfatidil glicerol (DPPG), distearoil fosfatidil glicerol (DSPG),
dimiristoil fosfatidilcolina (DPMC), dipalmitoil fosfatidilcolina
(DPPC), diestearoil fosfatidilcolina (DSPC), ácido dimiristoil
fosfatídico (DPMA), ácido dipalmitoil fosfatídico (DPPA), ácido
diestearoil fosfatídico (DSPA), dimiristoil fosfatidil etanolamina
(DPME), dipalmitoil fosfatidil etanolamina (DPPE) y diestearoil
fosfatidil etanolamina (DSPE).
24. Composición farmacéutica según la
reivindicación 11, en una formulación de emulsión.
25. Compuesto o composición según cualquiera de
las reivindicaciones 1-24 para su utilización en un
procedimiento de inducción de una respuesta inmunitaria en un
sujeto.
26. Compuesto o composición para su utilización
según la reivindicación 25, donde dicha composición comprende además
por lo menos un antígeno.
27. Compuesto o composición según cualquiera de
las reivindicaciones 1-24 para su utilización en un
procedimiento de tratamiento de un mamífero que es susceptible de
una infección patógena, cáncer o un trastorno autoinmunitario, o que
es susceptible a los mismos.
28. Compuesto o composición para su utilización
según la reivindicación 27, donde dicha composición comprende además
por lo menos un antígeno.
29. Compuesto o composición según cualquiera de
las reivindicaciones 1-24 para su utilización en un
procedimiento para el tratamiento de enfermedades o estados
mejorados mediante la producción de óxido nítrico.
30. Compuesto o composición para su utilización
según la reivindicación 29, donde dicho compuesto se administra a
dicho animal durante el período que va de aproximadamente 48 horas
antes del inicio de la isquemia hasta el inicio de la isquemia.
31. Compuesto o composición para su utilización
según la reivindicación 29, donde dicho compuesto se administra a
dicho animal desde inmediatamente antes del inicio de la isquemia y
durante toda la isquemia.
32. Compuesto o composición para su utilización
según la reivindicación 29, donde dicho compuesto se administra a
dicho animal desde inmediatamente antes del inicio de isquemia y
durante toda la revascularización.
33. Compuesto o composición para su utilización
según la reivindicación 29,
donde X e Y son -O-, R^{4} es
PO_{3}R^{7}R^{8}, R^{5} y R^{6} son H, donde R^{7} y
R^{8} son H, donde el subíndice n es 1, el subíndice m es 2, y los
subíndices p y q son 0, donde R^{1}, R^{2} y R^{3} son restos
tetradecanoílo, donde *^{1}, *^{2} y *^{3} se hallan en la
configuración R, donde Y se halla en la posición ecuatorial y
donde ** se halla en la configuración S.
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