BE1021939B1

BE1021939B1 - Composition pour des composes aminoalkylglucosaminide phosphate tamponnes et son utilisation.

Info

Publication number: BE1021939B1
Application number: BE2014/0160A
Authority: BE
Inventors: David A. Johnson; David Burkhart; Nupur Dutta
Original assignee: Glaxosmithkline Biologicals S.A.
Priority date: 2013-03-15
Filing date: 2014-03-13
Publication date: 2016-01-27
Also published as: CN105188710A; JP2016512226A; US20160022719A1; WO2014141127A1; EP2968376B1; CA2905162A1; US9827260B2; BR112015023502A2; EP2968376A1; ES2743465T3

Abstract

Il est proposé une composition comprenant un composé aminoalkylglucosaminide phosphate ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci et un tampon pour une utilisation comme immunomodulateur.

Description

COMPOSITION POUR DES COMPOSES AMINOALKYLGLUCOSAMINIDE PHOSPHATE TAMPONNES ET SON UTILISATION

Domaine de 1'invention

La présente invention concerne une composition comprenant des composés aminoalkylglucosaminide phosphate (AGP) et l'utilisation de la composition dans ou comme adjuvant de vaccin ou dans des traitements prophylactiques ou thérapeutiques. Des procédés d'utilisation des compositions sont également divulgués. Déclarations relatives aux recherches réalisées avec le soutien fédéral

Des aspects de la présente invention ont été réalisés avec le soutien du gouvernement des Etats-Unis en conformité avec le contrat NIH n° HHSN272200900008C, le gouvernement des Etats-Unis pouvant avoir certains droits dans l'invention.

Contexte de l'invention

Les aminoalkylglucosaminide phosphates (AGP) sont des ligands de synthèse du récepteur de type Toll 4 (TLR4). Des AGP et leurs effets immunomodulateurs via TLR4 sont divulgués dans des publications de brevet telles que WO 2006/016 997, WO 2001/090 129 et/ou le brevet U. S. n° 6 113 918 et ont été rapportés dans la littérature. Des dérivés d'AGP additionnels sont divulgués dans le brevet Ü.S. n° 7 129 219, le brevet Ü.S. n° 6 525 028 et le brevet U.S. n° 6 911 434. Certains AGP agissent comme des agonistes de TLR4, alors que d'autres sont connus comme des antagonistes de TLR4. Les AGP sont connus pour être utiles comme adjuvants de vaccin et immunomodulateurs pour stimuler la production de cytokine, activer les macrophages, favoriser une réponse immunitaire innée et augmenter la production d'anticorps chez des animaux immunisés. Antérieurement, des AGP en tant qu'adjuvants et/ou immunomodulateurs ont principalement été utilisés sous la forme d'une émulsion huile dans l'eau, typiquement en utilisant de l'eau stérilisée et du glycérol (approximativement 2 %). Il existe un besoin continu d'identifier des tampons qui puissent être employés avec ces AGP dans des compositions pharmaceutiques et/ou d'adjuvant. Résumé de l'invention

En conséquence, la présente invention propose une composition pharmaceutique comprenant un ou plusieurs AGP et un tampon. La composition pharmaceutique divulguée dans la présente invention peut aboutir à un ou plusieurs des bénéfices suivants : une stabilité maximale ou accrue ou améliorée de l'AGP dans une solution tamponnée et/ou une activité maximale ou accrue ou améliorée de l'AGP dans une solution tamponnée par rapport à d'autres formulations aqueuses d'AGP.

Il est également proposé une composition d'AGP tamponnée ayant une stabilité et/ou une activité améliorée à environ pH 7 ou à un pH physiologiquement normal, ou à un pH pharmaceutiquement acceptable.

Il est également proposé un procédé de traitement d'un sujet (ou d'un patient tel qu'un humain ou un autre mammifère) avec la composition de l'invention.

En conformité avec l'invention, il est proposé une composition comprenant (i) un aminoalkylglucosaminide phosphate ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et (ii) un tampon. La solution tamponnée et le composé AGP sont combinés pour former une composition ayant une utilité en tant qu'immunomodulateur.

Il est en outre proposé un procédé de modulation de la réponse immunitaire d'un sujet, de préférence un humain, comprenant l'administration audit sujet d'une quantité efficace de la composition pharmaceutique.

Il est également proposé un procédé permettant d'améliorer ou de prévenir sensiblement une maladie infectieuse, une maladie auto-immune, une maladie neurologique ou une affection allergique ou inflammatoire chez un sujet, de préférence un humain, comprenant l'administration audit sujet d'une quantité efficace de la composition pharmaceutique.

Brève description des dessins

La figure 1 montre la structure de CRX-601 et le produit de dégradation de CRX-601 issus des exemples.

La figure 2 montre la vitesse de dégradation accélérée pour des tampons formulés avec CRX-601 à un pH neutre ou presque physiologique.

La figure 3 montre la vitesse de dégradation accélérée pour trois tampons formulés avec CRX-601 à un pH presque optimal pour chaque tampon.

La figure 4 montre la structure de CRX-527 et du produit de dégradation de CRX-527 issus des exemples.

La figure 5 montre la vitesse de dégradation accélérée utilisant des tampons phosphate et HEPES dans CRX-527 et CRX-601, respectivement.

La figure 6 montre la stabilité à long terme de CRX-601 formulé dans trois tampons.

Les figures 7 à 9 montrent l'activité relative parmi les trois tampons (HEPES, acétate, citrate) formulés avec CRX-601 à un pH presque optimal pour chaque tampon.

Description détaillée de l'invention

Composés aminoalkylqlucosaminide phosphate

Les AGP sont des modulateurs du récepteur de type Toll 4 (TLR4). Le récepteur de type Toll 4 reconnaît un LPS (lipopolysaccharide) bactérien et, lorsqu'il est activé, initie une réponse immunitaire innée. Les AGP sont une substance mimétique de monosaccharide de la protéine de lipide A de LPS bactérien et ont été développés avec des enchaînements éther et ester sur les « chaînes acyle » du composé. Des procédés de préparation de ces composés sont connus et divulgués, par exemple, dans le document WO 2006/016 997, les brevets U. S. n° 7 288 640 et 6 113 918, et le document WO 01/90 129, qui sont incorporés ici en référence dans leur intégralité. D'autres AGP et procédés apparentés sont divulgués dans le brevet U.S. n° 7 129 219, le brevet U.S. n° 6 525 028 et le brevet U.S. n° 6 911 434. Les AGP avec des enchaînements éther sur les chaînes acyle employés dans la composition de l'invention sont connus et divulgués dans le document WO 2006/016 997 qui est incorporé ici en référence dans son intégralité. Particulièrement intéressants sont les composés aminoalkylglucosaminide phosphate précisés et décrits selon la formule (III) aux paragraphes [0019] à [0021] dans le document WO 2006/016 997.

Des composés aminoalkylglucosaminide phosphate employés dans la présente invention ont la structure précisée dans la formule (I) comme suit

(Formule 1) dans laquelle m vaut 0 à 6 n vaut 0 à 4 ; X est 0 ou S, de préférence O ; Y est O ou NH ; Z est O ou H ; chaque Ri, R2, R3 est indépendamment choisi dans le groupe consistant en un acyle en Ci à 20 et un alkyle en Ci à 20 ; R4 est H ou Me ; R5 est indépendamment choisi dans le groupe consistant en -H, -OH, -alcoxy (en Ci à C4) , -PO3R8R9, -OPO3R8R9, -SO3R8, -OSO3R8, -NR8R9, -SRs, -CN, -NO2, -CHO, -CO2R8 et -CONR8R9, dans lesquels Rs et R9 sont chacun indépendamment choisis parmi H et alkyle (en Ci à C4) ; et chaque R6 et R7 est indépendamment H ou PO3H2.

Dans la formule 1, la configuration des centres stéréogéniques en 3' auxquels les résidus d'acyle gras normaux (c'est-à-dire les résidus acyloxy ou alcoxy secondaires, par exemple, RiO, R2O et R3O) sont attachés est R ou S, de préférence R (telle que désignée par les règles de priorité de Cahn-Ingold-Prelog). La configuration des centres stéréogéniques aglycone auxquels R4 et R5 sont attachés peut être R ou S. Tous les stéréoisomères, à la fois les énantiomères et les diastéréoisomères, et leurs mélanges, sont considérés comme entrant dans la portée de la présente invention.

Le nombre d'atomes de carbone entre 1'hétéroatome X et l'atome d'azote aglycone est déterminé par la variable « n », qui peut être un entier de 0 à 4, de préférence un entier de 0 à 2.

La longueur de chaîne des acides gras normaux Ri, R2 et R3 peut être d'environ 6 à environ 16 carbones, de préférence d'environ 9 à environ 14 carbones. Les longueurs de chaîne peuvent être identiques ou différentes. Certains modes de réalisation préférés incluent des longueurs de chaîne où Ri, R2 et R3 sont de 6 ou 10 ou 12 ou 14.

La formule 1 englobe des AGP de lipide L/D-séryl, -tréonyl, -cystéinyl éther et ester, à la fois des agonistes et des antagonistes et leurs homologues (n = 1 à 4), ainsi que divers bioisostères d'acide carboxylique (c'est-à-dire R5 est un groupe acide capable de formation de sel ; le phosphate peut être en position 4 ou 6 du motif glucosamine, mais est de préférence dans la position 4).

Dans un mode de réalisation préféré de l'invention employant un composé AGP de formule 1, n vaut 0, R5 est CO2H, Rô est PO3H2 et R7 est H. Ce composé AGP préféré est précisé comme la structure de la formule la comme suit :

(Formule la) dans laquelle X est O ou S ; Y est O ou NH ; Z est O ou H ; chacun de Ri, R2, R3 est indépendamment choisi dans le groupe consistant en un acyle en Ci à C20 et un alkyle en Ci à C20 ; et R4 est H ou méthyle.

Dans la formule la, la configuration des centres stéréogéniques en 3' auxquels les résidus d'acyle gras normaux (c'est-à-dire les résidus acyloxy ou alcoxy secondaires, par exemple, RiO, R2O et R3O) sont attachés est R ou S, de préférence R (telle que désignée par les règles de priorité de Cahn-Ingold-Prelog). La configuration des centres stéréogéniques aglycone auxquels R4 et CO2H sont attachés peut être R ou S. Tous les stéréoisomères, à la fois les énantiomères et les diastéréoisomères, et leurs mélanges, sont considérés comme entrant dans la portée de la présente invention.

La formule la englobe des AGP de lipide L/D-séryl, -tréonyl, -cystéinyl éther et ester, à la fois des agonistes et des antagonistes. A la fois dans la formule 1 et la formule la, Z est attaché à 0 par une double liaison ou deux atomes d'hydrogène qui sont chacun attachés par une simple liaison. A savoir, le composé forme une liaison ester lorsque Z = Y = 0, une liaison amide lorsque Z = 0 et Y = NH ; et une liaison éther lorsque Z = H/H et Y = 0.

Des composés spécialement préférés de formule 1 sont désignés par CRX-601 et CRX-527. Leurs structures sont précisées comme suit : (CRX-601) (CRX-527).

De surcroît, un autre mode de réalisation préféré emploie CRX-547 ayant la structure montrée. CRX-547

Encore d'autres modes de réalisation incluent des AGP tels que CRX-602 et CRX-526 conférant une stabilité accrue à des AGP ayant des chaînes acyle ou alkyle secondaires plus courtes,.

CRX-602

CRX-526

Tampons

Dans un mode de réalisation de la présente invention, la composition comprenant un AGP est tamponnée en utilisant un tampon zwittérionique. Adéquatement, le tampon zwittérionique est un acide aminoalcanesulfonique ou un sel convenable. Les exemples de tampons aminoalcanesulfonique incluent, sans s'y limiter, l'HEPES, l'HEPPS/EPPS, le MOPS, le MOBS et le PIPES. De préférence, le tampon est un tampon pharmaceutiquement acceptable, convenant à une utilisation chez les humains, telle que pour une utilisation dans un produit d'injection commercial. De manière préférée entre toutes, le tampon est l'HEPES.

Dans des modes de réalisation convenables de la présente invention, les AGP sont tamponnés à l'aide d'un tampon choisi dans le groupe consistant en : i) de l'HEPES ayant un pH d'environ 7, ii) du citrate (par exemple, citrate de sodium) ayant un pH d'environ 5, et iii) de l'acétate (par exemple, acétate d'ammonium) ayant un pH d'environ 5.

Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, les AGP CRX-601, CRX-527 et CRX-547 sont tamponnés en utilisant de l'HEPES ayant un pH d'environ 7. Les tampons peuvent être utilisés avec une quantité appropriée de solution saline ou un autre excipient pour parvenir à une isotonicité souhaitée. Dans un mode de réalisation préféré, on utilise une solution saline à 0,9 %.

HEPES : numéro de registre CAS 7365-45-9 C8H18N2O4S L'acide 1-pipérazineéthanesulfonique, 4—(2— hydroxyéthyl)-HEPES est un tampon zwittérionique conçu pour tamponner dans la plage de pH physiologique d'environ 6 à environ 8 (par exemple, 6,15 à 8,35) et plus spécifiquement d'une plage plus utile d'environ 6,8 à environ 8,2 et, comme dans la présente invention, entre environ 7 et environ 8 ou entre 7 et 8, et de préférence entre environ 7 et moins de 8. HEPES est typiquement une poudre cristalline blanche répondant à la formule moléculaire : C8H18N2O4S de la structure suivante :

HEPES est bien connu et disponible dans le commerce, (voir, par exemple, Good et al., Biochemistry 1966.)

Les tampons de citrate (par exemple, citrate de sodium) et d'acétate lorsqu'ils sont employés en tant que tampon dans la composition de l'invention ont tous deux un pH d'environ 5. Dans un mode de réalisation, la concentration du tampon est d'environ 10 mM, mais dans certains modes de réalisation, une concentration en tampon accrue peut être nécessaire. Les tampons de citrate et d'acétate peuvent être employés dans les compositions de l'invention avec des AGP qui requièrent un pH acide ou légèrement acide. Le tampon d'acétate fonctionne bien dans des environnements ou des compositions dans lesquels les tampons de citrate peuvent ne pas être utilisés, tel qu'en présence d'alun. Les tampons de citrate et d'acétate sont disponibles dans le commerce. Mélanqe/solution de nanoparticules

Une fois formée, la composition de l'invention peut être une dispersion ou une solution. Adéquatement, la composition est une solution de nanoparticules avec des tailles de particule < 200 nm. Dans un mode de réalisation convenable, la composition est une solution de nanoparticules avec des tailles de particule < 200 nm affichant des caractéristiques micellaires ou liposomales. Dans un mode de réalisation, la solution ou dispersion convient à une utilisation pharmaceutique en tant qu'immunomodulateur. La taille des particules en solution est déterminée en partie par la durée pendant laquelle la composition dans la solution ou dispersion est soumise à une sonication.

Procédé de traitement et d'administration

La présente invention propose un procédé pour accentuer une réponse immunitaire d'un sujet comprenant l'administration au sujet d'une quantité efficace de la composition pharmaceutique.

Les compositions de la présente invention peuvent être utilisées pour protéger ou traiter un mammifère au moyen d'une administration via la voie systémique ou muqueuse. Ces administrations peuvent inclure une injection via les voies intramusculaire, intrapéritonéale, intradermique ou sous-cutanée ; ou via une administration muqueuse aux tractus oral/alimentaire, respiratoire, génito-urinaire. La composition de l'invention peut être administrée sous forme de dose unique ou de doses multiples. De plus, les compositions de l'invention peuvent être administrées par différentes voies pour primovaccination et rappel, par exemple, des doses de primovaccination IM et des doses de rappel IN.

La composition de la présente invention peut être administrée seule ou avec des vecteurs pharmaceutiques convenables, et peut être utilisée dans la fabrication sous forme solide ou liquide, telles que des comprimés, des capsules, des poudres, des solutions, des suspensions ou des émulsions. La composition peut être formulée en un « vaccin » et administrée sous forme de solution libre, ou formulée avec un adjuvant, ou un excipient. La préparation de vaccin est décrite de façon générale dans Vaccine Design (« The subunit and adjuvant approach » (éd. Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York). L'encapsulation au sein de liposomes est décrite par Fullerton, brevet US 4 235 877. Les vaccins peuvent être stockés en solution ou lyophilisés.

Des doses efficaces de traitements qui incorporent les compositions de la présente invention pour le traitement d'un sujet varient en fonction de nombreux facteurs différents, dont le moyen d'administration, le site cible, l'état physiologique du patient, d'autres médications administrées, l'état physique du patient par rapport à d'autres complications médicales, et selon que le traitement est prophylactique ou thérapeutique. Les posologies de traitement doivent être adaptées pour optimiser sécurité et efficacité. Les doses décrites ici varient typiquement d'environ 0,1 pg à 50 mg par administration qui, selon l'application, pourront être données quotidiennement, hebdomadairement ou mensuellement ou selon toute autre durée entre ces dernières. Plus généralement, des doses muqueuses ou locales varient d'environ 10 pg à 10 mg par administration, et facultativement d'environ 100 pg à 1 mg, 2 à 4 administrations étant distantes de quelques jours ou semaines. Plus typiquement, les doses d'immunostimulant varient de 1 pg à 10 mg par administration, le plus typiquement de 10 pg à 1 mg, avec des administrations quotidiennes ou hebdomadaires. Les doses selon l'invention décrites ici pour une administration parentérale, par exemple pour induire une réponse immunitaire innée, ou dans des véhicules d'administrations spécialisés varient typiquement d'environ 0,1 pg à 10 mg par administration qui, selon l'application, pourront être données quotidiennement, hebdomadairement ou mensuellement ou selon toute autre durée entre celles-ci. Plus typiquement, les doses parentérales à ces fins varient d'environ 10 pg à 5 mg par administration, et le plus typiquement d'environ 100 pg à 1 mg, 2 à 4 administrations étant distantes de plusieurs jours ou semaines. Dans certains modes de réalisation, néanmoins, les doses parentérales à ces fins peuvent être utilisées dans une plage de 5 à 10 000 fois plus élevée que les doses typiques décrites ci-dessus.

Il est également proposé un procédé pour améliorer ou prévenir sensiblement une maladie infectieuse, une maladie auto-immune, un trouble neurologique ou une affection allergique ou inflammatoire chez un sujet comprenant l'administration au sujet d'une quantité efficace de la composition pharmaceutique. Dans certains cas, un antigène exogène peut être administré au sujet conjointement avec la composition pharmaceutique. Dans des compositions permettant de déclencher ou d'accentuer une réponse immunitaire, les compositions de l'invention concernée sont administrées à un animal à sang chaud, tel qu'un humain ou un autre mammifère, avec un antigène tel qu'un antigène protéique ou polypeptidique ou un polynucléotide qui exprime un antigène protéique ou polypeptidique. La quantité d'antigène administrée pour déclencher une réponse souhaitée peut être aisément déterminée par l'homme du métier et variera avec le type d'antigène administré, la voie d'administration et le programme d'immunisation. Les compositions de la présente invention peuvent également être administrées sans antigène exogène, pour déclencher une protection immédiate via un effet de résistance non spécifique. Des compositions ayant la capacité de stimuler la résistance non spécifique et/ou déclencher un effet adjuvant peuvent être utilisées dans des formulations de vaccin à action rapide.

Termes/définitions

Comme évoqué ici, le terme « aliphatique » en lui-même ou comme partie d'un autre substituant, signifie, sauf indication contraire, une chaîne droite ou ramifiée, ou un radical hydrocarbure cyclique, ou l'une de leurs combinaisons, qui peut être pleinement saturé, mono- ou poly-insaturé et peut inclure des radicaux di-et multi-valents, ayant le nombre d'atomes de carbone désigné (c'est-à-dire, Ci à Cio ou Ci à 10 signifie un à dix carbones). Les exemples de radicaux hydrocarbure saturés incluent des groupes tels que méthyle, éthyle, n-propyle, isopropyle, n-butyle, t-butyle, isobutyle, sec-butyle, cyclohexyle, (cyclohexyl)méthyle, cyclopropylméthyle, des homologues et isomères de, par exemple, n-pentyle, n-hexyle, n-heptyle, n-octyle, et similaires. Un groupe aliphatique insaturé est un groupe ayant une ou plusieurs doubles liaisons ou triples liaisons. Les exemples de groupes aliphatiques insaturés incluent vinyle, 2-propényle, crotyle, 2-isopentényle, 2-(butadiényle), 2,4-pentadiényle, 3-(1,4-pentadiényle), éthynyle, 1- et 3-propynyle, 3-butynyle, et les homologues et isomères supérieurs. Typiquement, un groupe aliphatique aura de 1 à 24 atomes de carbone. Un groupe « aliphatique inférieur » est un groupe aliphatique à chaîne plus courte, ayant généralement huit atomes de carbone ou moins.

Le terme « acyle » se réfère à un groupe dérivé d'un acide organique par élimination du groupe hydroxy. Les exemples de groupes acyle incluent acétyle, propionyle, dodécanoyle, tétradécanoyle, isobutyryle, et similaires. En conséquence, le terme « acyle » tel qu'utilisé ici est censé inclure un groupe sinon défini comme -C(0)-aliphatique, où le groupe aliphatique est de préférence un groupe aliphatique saturé. L'expression « sels pharmaceutiquement acceptables » est censée inclure des sels des composés actifs qui sont préparés avec des acides ou des bases relativement non toxiques selon des substituants particuliers que l'on trouve sur les composés décrits ici. Lorsque des composés de la présente invention contiennent des fonctionnalités relativement acides, les sels d'addition de bases peuvent être obtenus en mettant en contact la forme neutre de tels composés avec une quantité suffisante de la base souhaitée, soit non diluée, soit dans un solvant inerte convenable. Les exemples de sels d'addition de bases pharmaceutiquement acceptables incluent les sels de sodium, de potassium, de calcium, d'ammonium, amino organique ou de magnésium, ou un sel similaire. Dans un mode de réalisation, le sel est un sel d'éthanolamine, tel que la monoéthanolamine (MEA) ou la triéthanolamine (TEA). Lorsque des composés utilisés dans la composition de la présente invention contiennent des fonctionnalités relativement basiques, des sels d'addition d'acides peuvent être obtenus en mettant en contact la forme neutre de tels composés avec une quantité suffisante de l'acide souhaité, soit non diluée, soit dans un solvant inerte convenable. Les exemples de sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables incluent ceux dérivés d'acides inorganiques comme les acides chlorhydrique, bromhydrique, nitrique, carbonique, monohydrogénocarbonique, phosphorique, monohydrogénophosphorique, dihydrogénophosphorique, sulfurique, monohydrogénosulfurique, iodhydrique ou phosphoreux et similaires, ainsi que les sels dérivés d'acides organiques relativement non toxiques comme les acides acétique, propionique, isobutyrique, maléique, malonique, benzoïque, succinique, subérique, fumarique, lactique, mandélique, phtalique, benzènesulfonique, p-tolylsulfonique, citrique, tartrique, méthanesulfonique, et similaires. On inclut également les sels d'acides aminés tels que l'arginate et similaires, et les sels d'acides organiques comme les acides glucuronique ou galacturonique et similaires (voir, par exemple, Berge, S.M., et al., « Pharmaceutical Salts », Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1 à 19, 1977). Certains composés spécifiques utilisés dans la composition de la présente invention contiennent des fonctionnalités à la fois basiques et acides qui permettent de convertir les composés en sels d'addition soit de bases, soit d'acides.

Tel qu'utilisé ici « vecteur pharmaceutiquement acceptable » signifie un milieu qui n'interfère pas avec l'activité immunomodulatrice de l'ingrédient actif et n'eèt pas toxique pour le patient auquel il est administré.

Les vecteurs pharmaceutiquement acceptables incluent les émulsions hui.le dans l'eau ou eau dans l'huile, les émulsions multiples (par exemple, eau dans l'huile dans l'eau), les microémulsions, les liposomes, les microbilles, les microsphéres, les microsomes et similaires. Par exemple le vecteur peut être une microsphère ou de préférence une nanosphère, ou peut être une microparticule ou de préférence une nanoparticule, ayant un composé de la présente invention dans la matrice de la sphère ou de la particule ou adsorbée à la surface de la sphère ou particule. Le vecteur peut également être une solution aqueuse ou une dispersion micellaire contenant de la triéthylamine, de la triéthanolamine ou un autre agent qui rend la formulation alcaline par nature, ou une suspension contenant de l'hydroxyde d'aluminium, de 1'hydroxyde de calcium, du phosphate de calcium ou de l'adsorbate de tyrosine. Les vecteurs peuvent également inclure tous les solvants, les milieux de dispersion, les véhicules, les enrobages, les diluants, les agents antibactériens et antifongiques, les agents isotoniques et de retardement de l'absorption, les tampons, les solutions de vecteur, les suspensions, les colloïdes, et similaires. L'utilisation de tels milieux et agents pour des substances actives pharmaceutiques est bien connue dans l'art. Sauf dans la mesure Où un milieu ou agent classique quelconque est incompatible avec l'ingrédient actif, son utilisation dans les compositions thérapeutiques est envisagée.

Dans certains modes de réalisation, des liposomes, des nanocapsules, des microparticules, des particules de lipides, des vésicules et similaires, sont utilisés pour l'introduction des compositions de la présente invention dans des cellules/organismes hôtes convenables. En particulier, les compositions de la présente invention peuvent être formulées pour un apport encapsulé dans une particule de lipide, un liposome, une vésicule, une nanosphère ou une nanoparticule ou similaire.

La formation et l'utilisation de préparations de liposome et de type liposome en tant que vecteurs de médicament potentiels sont généralement connues de l'homme du métier (voir par exemple, Lasic, Trends Biotechnol juillet 1998 ; 16(7) : 307 à 21 ; Takakura, Nippon Rinsho mars 1998 ; 56(3) : 691 à 695 ; Chandran et al., Indian J Exp Biol. Août 1997 ; 35(8) : 801 à 809 ; Margalit, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 1995 ; 12(2 à 3) : 233 à 261 ; brevet U.S. 5 567 434 ; brevet U.S. 5 552 157 ; brevet U.S. 5 565 213 ; brevet U.S. 5 738 868 et brevet U.S. 5 795 587).

Des liposomes ont été utilisés avec succès avec un certain nombre de types de cellules qui sont normalement difficiles à transfecter par d'autres procédures, dont des suspensions de cellules T, des cultures d'hépatocytes primaires et des cellules PC 12 (Renneisen et al., J Biol Chem. 25 septembre 1990 ; 265(27) : 16337 à 16342 ; Muller et al., DNA Cell Biol, avril 1990 ; 9(3) : 221 à 229). De plus, les liposomes sont exempts des contraintes en termes de longueur d'ADN qui sont typiques des systèmes d'apport à base de virus. Des liposomes ont été utilisés efficacement pour introduire des gènes, divers médicaments, des agents radiothérapeutiquees, des enzymes, des virus, des facteurs de transcription, des effecteurs allostériques et similaires, dans une variété de lignées cellulaires cultivées et d'animaux. De plus, l'utilisation de liposomes ne semble pas être associée à des réponses auto-immunes ou à une toxicité inacceptable après apport systémique.

Dans certains modes de réalisation, des liposomes sont formés à partir de phospholipides qui sont dispersés dans un milieu aqueux et forment spontanément des vésicules bicouches concentriques multilamellaires (également désignées vésicules multilamellaires (MLV)).

En variante, dans d'autres modes de réalisation, l'invention propose des formulations de nanocapsules pharmaceutiquement acceptables des compositions de la présente invention. Les nanocapsules peuvent généralement piéger des composés de manière stable et reproductible (voir, par exemple, Quintanar-Guerrero et al., Drug Dev Ind Pharm, décembre 1998 ; 24(12) : 1113 à 1128) . Pour éviter des effets secondaires dus à une surcharge polymérique intracellulaire, de telles particules ultrafines (de dimension d'environ 0,1 pm) peuvent être conçues en utilisant des polymères pouvant être dégradés in vivo. De telles particules peuvent se préparer comme décrit, par exemple, par Couvreur et al., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 1988 ; 5(1) : 1 à 20 ; zur Mühlen et al., Eur J Pharm Biopharm. mars 1998 ; 45(2) : 149 à 155 ; Zambaux et al. J Controlled Release. 2 janvier 1998 ; 50(1 à 3) : 31 à 40 ; et le brevet U.S. 5 145 684.

Le terme « immunomodulateur » tel qu'utilisé ici signifie une substance qui modifie la réponse immunitaire chez un sujet, tel qu'en augmentant, réduisant, changeant ou sinon affectant la réponse immunitaire du sujet.

Voies d'administration

Les compositions de l'invention concernée qui peuvent être administrées par voie parentérale, c'est-à-dire par voie intrapéritonéale, soüs-cutanée ou intramusculaire incluent les vecteurs préférés suivants. Les .exemples de vecteurs convenables pour une utilisation sous-cutanée incluent, sans s'y limiter, une solution de sérum physiologique tamponnée au phosphate (PBS), ou du chlorure de sodium à 0,9 % dans de l'eau USP pour injection, et de la triéthanolamine à 0,01 à 0,1 % dans de l'eau USP pour injection. Les vecteurs convenables pour injection intramusculaire incluent, sans s'y limiter, l'éthanol USP à 10 %, le propylène glycol à 40 % et le reste étant une solution isotonique acceptable telle que le dextrose à 5 %, ou du chlorure de sodium à 0,9 % dans l'eau USP pour injection. Les exemples de vecteurs convenables pour une utilisation intraveineuse incluent, sans s'y limiter, l'éthanol USP à 10 %, le propylène glycol à 40 % et le reste étant de l'eau USP pour injection, ou du chlorure de sodium à 0,9 % dans l'eau USP pour injection. Dans un mode de réalisation, le vecteur inclut de l'éthanol USP à 10 % et de l'eau USP pour injection ; pour encore un autre mode de réalisation, le vecteur acceptable est de la triéthanolamine à 0,01 à 0,1 % dans de l'eau USP pour injection. Les solvants parentéraux pharmaceutiquement acceptables sont tels qu'ils fournissent une solution ou une dispersion qui peut être filtrée sur un filtre de 5 microns, ou de préférence un filtre de 0,2 micron, sans éliminer l'ingrédient actif.

Une autre voie d'administration des compositions de la présente invention est l'administration muqueuse, en particulier l'administration intranasale ou dans certains cas l'administration par inhalation (administration pulmonaire). L'apport pulmonaire d'un médicament peut être accompli par plusieurs approches différentes, dont les nébuliseurs liquides, les inhalateurs-doseurs (MDI) à base d'aérosol et des dispositifs de dispersion de poudre sèche. Des compositions à utiliser dans des administrations de ce type sont typiquement des poudres sèches ou des aérosols.

Les poudres sèches contiennent, en plus de la composition de l'invention, un vecteur, un renforçateur d'absorption et facultativement d'autres ingrédients. Le vecteur est, par exemple, un mono-, di- ou polysaccharide, un alcool de sucre ou un autre polyol.

Les vecteurs convenables incluent le lactose, le glucose, le raffinose, le mélézitose, le lactitol, le maltitol, le tréhalose, le saccharose, le mannitol ; et l'amidon. Le lactose est particulièrement préféré, spécialement sous la forme de son monohydrate. On inclut également des renforçateurs d'absorption tels que les polypeptides, les tensioactifs, les alkylglycosides, les sels d'amine d'acides gras ou les phospholipides. Les ingrédients de la formulation doivent typiquement être sous une forme finement divisée, c'est-à-dire que leur diamètre médian en volume doit généralement être d'environ 30 à environ 200 microns, tel que mesuré par un instrument de diffraction laser ou un compteur de Coulter. La taille de particule souhaitée peut être produite en utilisant des méthodes connues dans l'art, par exemple le broyage, la micronisation ou la précipitation directe.

La voie d'administration intranasale procure de nombreux avantages par rapport à d'autres formes d'administration pour les composés de la présente invention. A titre d'exemple, un avantage de l'administration intranasale est la commodité. Un système injectable requiert une stérilisation de la seringue hypodermique et, dans l'établissement institutionnel, conduit à des préoccupations à propos du personnel médical quant au risque de contracter la maladie en se faisant accidentellement piquer par une aiguille contaminée. Des exigences strictes pour la mise au rebut sécurisée de l'aiguille et de la seringue usagées doivent également être imposées dans l'établissement institutionnel. Au contraire, l'administration intranasale requiert peu de temps de la part du patient et du personnel médical préposé, et est bien moins contraignante que les injectables pour 1'institution.

Un deuxième avantage important de l'administration intranasale est l'acceptation par le patient du système d'apport de médicament. L'administration intranasale est perçue comme non-invasive, ne s'accompagne pas de douleur, n'a pas d'effets secondaires significatifs et produit la gratification d'un soulagement rapide chez le patient présentant le symptôme. Cela est particulièrement avantageux lorsque le patient est un enfant. Une autre considération importante est que le patient puisse être capable de s'auto-administrer la ou les posologies prescrites de spray nasal.

Pour l'administration intranasale, les compositions de la présente invention peuvent être formulées comme des liquides ou comme des solides. De telles formulations peuvent contenir un ou plusieurs adjuvants additionnels, des agents permettant d'accentuer l'absorption des ingrédients actifs par perméation à travers la membrane nasale, et (pour des compositions liquides) un tampon aqueux additionnel ou d'autres vecteurs pharmaceutiquement acceptables. La composition peut inclure facultativement en outre un ou plusieurs alcools polyhydriques et un ou plusieurs agents conservateurs. Les conservateurs convenables incluent, par exemple, la gentamicine, la bacitracine (0,005 %) ou le crésol. Les compositions peuvent être administrées à la cavité nasale sous la forme d'un spray en utilisant un atomiseur, un nébuliseur, un pulvérisateur, un goutte-à-goutte ou un autre dispositif qui assure le contact de la solution avec la membrane muqueuse nasale. Le dispositif peut être un dispositif simple tel qu'un pulvérisateur nasal simple qui peut être utilisé par le patient, ou peut être un instrument plus élaboré pour une distribution plus précise des compositions, qui peut être utilisé dans le cabinet d'un médecin ou dans un établissement médical.

Les compositions de poudre nasale peuvent être préparées en lyophilisant la composition de la présente invention ou en adsorbant la composition sur des poudres nasales convenables (par exemple du lactose) et par broyage si nécessaire jusqu'à la taille de particule souhaitée. En variante, une solution de la composition et des excipients de cyclodextrine peuvent être préparés, suivi par une précipitation, une filtration et une pulvérisation. Il est également possible d'éliminer le solvant par séchage par congélation, suivi par une pulvérisation de la poudre dans la taille de particule souhaitée en utilisant des techniques classiques, connues de la littérature pharmaceutique. L'étape finale est la classification par taille par exemple par tamisage, pour obtenir des particules qui sont de préférence entre 30 et 200 microns de diamètre. Les poudres peuvent être administrées à l'aide d'un insufflateur nasal, ou elles peuvent être placées dans une capsule disposée dans un dispositif d'inhalation ou d'insufflation. Une aiguille pénètre la capsule pour réaliser des pores en haut et en bas de la capsule et de l'air est envoyé pour souffler les particules de poudre vers l'extérieur. La formulation de poudre peut également être administrée dans un spray à jet d'un gaz inerte ou mise en suspension dans des fluides organiques liquides.

Les compositions de l'invention concernée sont administrées à un individu dans une quantité efficace ou une quantité pharmaceutiquement efficace, pour effectuer ou accentuer la réponse immunitaire de l'individu. Telle qu'utilisée ici, « quantité efficace » ou « quantité pharmaceutiquement efficace » est la quantité qui présente une réponse au-dessus de et supérieure à celle du véhicule ou des témoins négatifs. Une « quantité efficace d'adjuvant » est la quantité du composé en question qui, lorsqu'il est administré conjointement avec un antigène, présente une réponse au-dessus de et supérieure à celle produite par l'antigène seul. La posologie précise de la composition de l'invention concernée à administrer à un patient dépendra du composé particulier utilisé, de la voie d'administration, de la composition pharmaceutique et du patient.

Dosage d'activité de MM6

Le dosage d'activité de MonoMacô est utilisé pour mesurer quantitativement l'activité relative entre deux lots différents d'un produit biologique. Une gamme de doses de composés d'essai et de référence sont coincubées avec des cellules MonoMac6, une lignée cellulaire monocytaire humaine, et des surnageants cellulaires sont récoltés pour plus d'essai. Un marqueur de chimiokine (MIP-lß), mesuré à partir des surnageants cellulaires par ELISA imbriqué, sert de sortie. On a construit un modèle d'analyse d'activité dans lequel les densités optiques brutes sont jointes, et on réalise automatiquement l'analyse. D'après la pente et le parallélisme entre les courbes de réponse d'essai et de référence, des critères de consigne dans les métriques définies déterminent si une détermination d'activité réussie peut ou non se produire. Si ces critères sont remplis avec succès, l'analyse donnera une valeur d'activité relative du produit d'essai par rapport au produit de référence.

La présente invention est davantage décrite à l'aide des exemples non limitants suivants et des exemples d'essai qui sont donnés à des fins d'illustration uniquement. Toutes les références citées ici sont incorporées en référence dans leur intégralité.

Partie expérimentale

Exemple 1 : formulation d'HEPES à pH = 7,0

La masse moléculaire de 1'HEPES est de 238,3 g/mole. Ainsi, on a pesé 6,044 g d'HEPES et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 5,2. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du NaOH à 5 N pour atteindre un pH final de 7,0. On a complété le volume de la solution à 250 mL, conduisant à un tampon d'HEPES à 100 mM à pH = 7,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon d'HEPES à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon d'HEPES à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL) . On a également filtré de manière stérile le tampon d'HEPES à 10 mM résultant à pH = 7,0 pour qu'il soit utilisé avec du CRX-601 que l'on a obtenu auprès de GSK Vaccines Hamilton, Montana.

Exemple 2 (comparatif) : formulation d'HEPES à pH = 8,0 La masse moléculaire de l'HEPES est de 238,3 g/mole. Ainsi, on a pesé 6,044 g d'HEPES et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 5,2. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du NaOH à 5 N pour atteindre un pH final de 8,0. On a complété le volume de la solution à 250 mL, conduisant à un tampon d'HEPES à 100 mM à pH = 8,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon d'HEPES à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon d'HEPES à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon d'HEPES à 10 mM résultant à pH = 8,0 pour qu'il soit utilisé avec du CRX-601.

Exemple 3 : formulation d'AGP et d'HEPES à pH = 7,0

On a formulé du CRX-601 dans l'HEPES à 10 mM tamponné à pH = 7,0 à une concentration cible de 2 mg/mL en pesant 3,99 mg de CRX-601 et en ajoutant 1,877 mL d'HEPES à 10 mM suivi par une ultrasonication dans un sonicateur à bain d'eau. Après 25 minutes, la solution était visiblement limpide, mais on a poursuivi la sonication puisque les autres formulations de CRX-601 avec les autres tampons employés ici n'avaient pas encore atteint un aspect visuel similaire. On a réalisé cela car le but était de soumettre chaque formulation tamponnée de CRX-601 à la même quantité d'énergie de traitement.

Exemple 4 (comparatif) : formulation d'AGP et d'HEPES à pH = 8

On a formulé du CRX-601 dans l'HEPES à 10 mM tamponné à pH = 8,0 à une concentration cible de 2 mg/mL en pesant 3,99 mg de CRX-601 et en ajoutant 1,877 mL d'HEPES à 10 mM suivi par une ultrasonication dans un sonicateur à bain d'eau. Après 25 minutes, la solution était visiblement limpide, mais on a poursuivi la sonication puisque les autres formulations de CRX-601 avec les autres tampons employés ici n'avaient pas encore atteint un aspect visuel similaire. On a réalisé cela car le but était de soumettre chaque formulation tamponnée de CRX-601 à la même quantité d'énergie de traitement.

Formulation des tampons non-HEPES

Le pH pour chaque tampon était dans la capacité de tamponnage du tampon respectif. La recette de préparation pour chaque tampon est décrite ci-dessous.

Exemple 5 : tampon d'acétate à pH = 5,0

La masse moléculaire de l'acétate d'ammonium est de 77,08 g/mole. Ainsi, on a pesé 1,927 g d'acétate d'ammonium et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 6,6. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte de l'acide acétique pour atteindre un pH final de 5,0. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon d'acétate à 100 mM à pH = 5,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon d'acétate à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon d'acétate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon d'acétate à 10 mM résultant à pH = 5,0 pour qu'il soit utilisé avec du CRX-601.

Exemple 6 : (comparatif) tampon d'acétate à pH = 5,5

La masse moléculaire de l'acétate d'ammonium est de 77,08 g/mole. Ainsi, on a pesé 1,927 g d'acétate d'ammonium et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 6,6. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte de l'acide acétique pour atteindre un pH final de 5,5. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon d'acétate à 100 mM à pH = 5,5. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon d'acétate à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon d'acétate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon d'acétate à 10 mM résultant à pH = 5,5 pour l'utiliser avec du CRX-601.

Exemple 7 : tampon de citrate à pH = 5,0

La masse moléculaire du citrate trisodique (déshydrate) est de 294,1 g/mole et celle de l'acide acétique (monohydrate) est de 210,14 g/mole. Ainsi, on a pesé 3,670 g de citrate trisodique et 2,627 g d'acide acétique et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 4,1. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du NaOH à 5 N pour atteindre un pH final de 5,0. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon de citrate à 100 mM à pH = 5,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon de citrate à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon de citrate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon de citrate à 10 mM résultant à pH = 5,0 pour l'utiliser avec du CRX-601.

Exemple 8 (comparatif) : tampon de citrate à pH = 6,0

La masse moléculaire du citrate trisodique (déshydrate) est de 294,1 g/mole et celle de l'acide citrique (monohydrate) est de 210,14 g/mole. Ainsi, on a pesé 3,670 g de citrate trisodique et 2,627 g d'acide citrique et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 4,1. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du NaOH à 5 N pour atteindre un pH final de 6,0. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon de citrate à 100 mM à pH = 6,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon de citrate à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon de citrate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon de citrate à 10 mM résultant à pH = 6,0 pour l'utiliser avec du CRX-601.

Exemple 9 (comparatif) : tampon de citrate à pH = 6,1

La masse moléculaire du citrate trisodique (déshydrate) est de 294,1 g/mole et celle de l'acide citrique (monohydrate) est de 210,14 g/mole. Ainsi, on a pesé 3,670 g de citrate trisodique et 2,627 g d'acide citrique et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 4,1. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du NaOH à 5 N pour atteindre un pH final de 6,1. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon de citrate à 100 mM à pH = 6,1. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon de citrate à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon de citrate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon de citrate à 10 mM résultant à pH = 6,1 pour l'utiliser avec du CRX-601.

Exemple 10 (comparatif) : tampon de citrate à pH = 7,0 La masse moléculaire du citrate trisodique (déshydrate) est de 294,1 g/mole et celle de l'acide citrique (monohydrate) est de 210,14 g/mole. Ainsi, on a pesé 3,670 g de citrate trisodique et 2,627 g d'acide citrique et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 4,1. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du NaOH à 5 N pour atteindre un pH final de 7,0. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon de citrate à 100 mM à pH = 7,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon de citrate à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon de citrate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon de citrate à 10 mM résultant à pH = 7,0 pour l'utiliser avec du CRX-601.

Exemple 11 (comparatif) : tampon TRIS à pH = 7,0

La masse moléculaire du TRIS est de 121,14 g/mole. Ainsi, on a pesé 3,029 g de TRIS et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 10,5. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du HCl à 6 N pour atteindre un pH final de 7,0. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon de TRIS à 100 mM à pH = 7,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon de TRIS à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon de citrate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL) . On a également filtré de manière stérile le tampon de TRIS à 10 mM résultant à pH = 7,0 pour l'utiliser avec du CRX-601.

Exemple 12 (comparatif) : tampon de succinate à pH - 7,0

La masse moléculaire de l'anhydride succinique est de 100,07 g/mole. Ainsi, on a pesé 2,502 g d'anhydride succinique et on a ajouté 200 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 2,5. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du NaOH à 5 N pour atteindre un pH final de 7,0. On a complété le volume de la solution jusqu'à 250 mL, conduisant à un tampon de succinate à 100 mM à pH = 7,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future. Pour préparer le tampon de succinate à 10 mM, on a dilué 10 mL du tampon de succinate à 100 mM dans 90 mL d'eau stérile (volume total = 100 mL). On a également filtré de manière stérile le tampon de succinate à 10 mM résultant à pH =7,0 pour l'utiliser avec du CRX-601.

Exemple 13 (comparatif) : tampon de phosphate à pH = 7,0

La masse moléculaire du phosphate de sodium (monobasique) est de 137,99 g/mole et celle du phosphate de sodium (dibasique) est de 141,96 g/mole. Ainsi, on a pesé 0,059 g de phosphate de sodium (monobasique) et 0,082 g de phosphate de sodium (dibasique) et on a ajouté 80 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 7,0. On a complété le volume de la solution jusqu'à 100 mL, conduisant à un tampon de phosphate à 10 mM à pH = 7,0. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future avec du CRX-601.

Exemple 14 (comparatif) : tampon de phosphate de sodium à pH = 6,1

La masse moléculaire du phosphate de sodium (dibasique) est de 141,96 g/mole et celle du chlorure de sodium est de 58,5 g/mole. Ainsi, on a pesé 7,098 g de phosphate de sodium (dibasique) et 5,844 g de chlorure de sodium et on a ajouté 900 mL d'eau stérile et on a agité le mélange à l'aide d'un agitateur magnétique. On a mesuré le pH de la solution à 9,0. Ensuite, on a ajouté goutte à goutte du HCl à 6 N pour atteindre un pH final de 6,1. On a complété le volume de la solution jusqu'à 1 000 mL, conduisant à du NaCl à 100 mM et un tampon de phosphate de sodium à 50 mM (dibasique) à pH = 6,1. On a filtré ce tampon de manière stérile pour une utilisation future avec du CRX-601.

Exemple 15

Formulation d'AGP et de tampons

Le tableau 1 liste sept tampons communs considérés comme étant utiles dans l'art pharmaceutique. On a formulé du CRX-601 dans chacun des tampons résumés dans le tableau 1 à une concentration cible de 2 mg/mL. On a formulé les tampons à ou près de leur pH optimal rapporté montré dans le tableau 1.

On a traité tous les échantillons dans les mêmes conditions pour quantifier la dégradation de CRX-601 provoquée par le tampon spécifique et non due au traitement à l'exception du CRX-601 dans le tampon d'acétate qui a pris plus de temps pour être traité.

Tableau 1

On a ensuite soniqué chacune des solutions tampons pour réduire la taille de particule en vue de permettre une filtration stérile. Le tableau 2 montre le temps de traitement pour atteindre une solution partiellement limpide (c'est-à-dire atteindre une taille de particule d'approximativement 200 nm) par sonication pour chacune des formulations tamponnées de CRX-601.

Tableau 2

Dégradation

On a criblé la stabilité des tampons 1 à 7 du tableau 1 aux concentrations montrées dans le tableau 1 à l'aide d'un essai de stabilité accéléré. On a maintenu les compositions tampons pendant 14 jours à 40 °C. On a déterminé la stabilité de CRX-601 dans chaque composition en mesurant le pourcentage de CRX-601 dans la composition par rapport à un produit de dégradation de CRX-601 commun (structures montrées sur la figure 1) . Le tracé de la figure 2 montre les données issues du premier jeu de tampons qui ont été criblés avec CRX-601. La pente des droites de tendance ajustée à chaque série de données est une mesure de la vitesse de dégradation du CRX-601. De manière intéressante, on a trouvé que l'HEPES (pH = 7,00), l'acétate (pH = 5,50) et le citrate (pH = 6,10) entraînaient une moindre dégradation du CRX-601 en solution après 14 jours à 40 °C. Le phosphate de sodium (pH = 7,15), le succinate (pH = 7,00), le TRIS (pH = 7,10) et le phosphate de sodium (pH = 6,10) présentaient une stabilité réduite, et réduisaient étonnamment la stabilité comparés à l'HEPES (pH =7). On n'a observé aucun changement significatif de pH pendant l'étude. La taille de particule de toutes les formulations restait stable sauf pour le CRX-601 dans le tampon d'hydratation de liposome (LHB) et le tampon d'acétate qui présentaient une agrégation.

Exemple 16 Stabilité/pureté

On a évalué les tampons pour identifier l'effet du pH sur la vitesse de dégradation du CRX-601 ; spécialement, on a évalué la stabilité du CRX-601 formulé dans l'acétate à pH = 5,0, l'HEPES à pH 7,0, 8,0, et le citrate à pH 5,0, 6,0, et 7,0. A cette fin, on a préparé les tampons suivants : HEPES à pH 7,0, 8,0, citrate à pH 5,0, 6,0, 7,0 et acétate à pH = 5,0 selon les exemples 1, 2, 5, 7, 8 et 10 et on a formulé du CRX-601 dans chacun d'entre eux et on les a soumis à une dégradation forcée pendant 14 jours à 40 °C.

On a déterminé la pureté pour chaque solution tamponnée en mesurant le pourcentage de CRX-601 dans la composition par rapport au produit de dégradation de CRX-601 commun. Les données de pureté sont tracées sur la figure 3 et indiquent que l'HEPES à pH = 7,0 conduit à une dégradation minimale, alors qu'à un pH différent (pH = 5), à la fois le citrate et l'acétate conduisent à une. dégradation minimale du CRX-601.

On n'a observé aucun changement significatif dans la taille de particule à l'exception du CRX-601 dans le tampon de citrate à pH = 5,0, qui présentait une augmentation de la taille de particule. On n'a observé aucun changement significatif dans le pH pour aucune des formulations dans cette étude.

Exemple 17

Mise à l'essai des tampons avec un autre AGP

On a criblé un autre AGP CRX-527 (obtenu auprès de GSK Vaccines, Hamilton, Montana) dans l'étude de stabilité accélérée pendant 14 jours à 40 °C avec le tampon phosphate et HEPES à pH = 7,0. On a déterminé la stabilité du CRX-527 dans chaque composition en mesurant le pourcentage de CRX-527 dans la composition par rapport au produit de dégradation de CRX-527 commun (structures montrées sur la figure 4). De même, on a déterminé la pureté de la solution tamponnée en mesurant le pourcentage de CRX-601 dans la composition par rapport au produit de dégradation de CRX-601 commun comme expliqué ci-dessus. Le tracé de la figure 5 montre le profil de dégradation du CRX-527 dans les deux tampons conjointement avec le CRX-601. L'HEPES conférait une stabilité accentuée aux AGP en comparaison au tampon de phosphate au même pH (pH = 7,0).

Exemple 18

Stabilité/pureté à long terme de CRX-601

On a évalué les tampons pour identifier l'effet du pH sur la stabilité à long terme du CRX-601 ; spécialement, on a évalué la stabilité du CRX-601 formulé dans l'acétate à pH = 5,0, 1'HEPES à pH 7,0 et le citrate à pH 5,0. A cette fin, on a préparé les tampons suivants : HEPES à pH 7,0, citrate à pH 5,0 et acétate à pH 5,0 selon les exemples 1, 5 et 7 et on a formulé le CRX-601 dans chacun d'entre eux et on les a stockés pendant > 1 an à 2 à 8 °C. On a déterminé la pureté pour chaque solution tamponnée en mesurant le pourcentage de CRX-601 dans la composition par rapport au produit de dégradation de CRX-601 commun. Les données de pureté sont tracées sur la figure 6 et indiquent qu'il n'y a pas de dégradation significative dans aucun des tampons mis à l'essai sur une période d'~ 1 an. Ainsi, le tampon HEPES donne des composés AGP de stabilité souhaitée à une valeur de pH nettement différente comparé aux tampons d'acétate et de citrate.

Exemple 19

Mise à l'essai de l'activité de CRX-601

On a utilisé un dosage d'activité de cellule MonoMac 6 pour mesurer l'activité relative du CRX-527 dans différents tampons à un pH optimal et une activité relative du CRX-501 dans différents tampons à un pH optimal. Des expériences initiales comparant l'activité du CRX-527 dans 1'HEPES et du CRX-527 IN ne montraient aucune différence significative d'activité (données non montrées). Toutefois, on a observé des différences notables d'activité lorsque l'on criblait du CRX-601 dans de 1'HEPES à pH = 7,0, du citrate à pH = 5,0 et de l'acétate à pH = 5,0 dans le dosage d'activité de cellule MM 6 contre une formulation de référence CRX-601 IN (solution aqueuse dans le glycérol à 2 %) . Les résultats d'activité donnés sur les figures 7 à 9 montrent que l'acétate de CRX-601 et le citrate de CRX-601 avaient moins de 50 % d'activité comparés au CRX-601 IN. On n'a observé aucune mort cellulaire significative dans les formulations tamponnées à l'acétate ou au citrate lors d'une coloration par le bleu de trypan. En comparaison, l'HEPES CRX-601 avait une augmentation double de l'activité de CRX-601 comparé au CRX-601 IN.

Claims

REVENDICATIONS

1. Composition comprenant (i) un aminoalkylglucosaminide phosphate ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci et (ii) une quantité efficace d'un tampon HEPES suffisante pour procurer une plage de pH pharmaceutiquement acceptable.
2. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ledit tampon est choisi dans le groupe consistant en de l'HEPES ayant un pH qui est dans une plage de pH pharmaceutiquement acceptable.
3. Composition selon la revendication 2, dans laquelle ledit tampon est de 1'HEPES ayant un pH entre environ 7 et environ 8.
4. Composition selon la revendication 2, ayant un pH d'environ 7,0.
5. Composition selon la revendication 2, ayant un pH = 7,0.
6. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ledit aminoalkylglucosaminide phosphate a pour structure

dans laquelle m vaut 0 à 6 n vaut 0 à 4 ; X est 0 ou S ; Y est O ou NH ; Z est O ou H ; chaque Ri, R2, R3 est indépendamment choisi dans le groupe consistant en un acyle en Ci à 20 et un alkyle en Ci à 20 ; R4 est H ou méthyle ; R5 est indépendamment choisi dans le groupe consistant en -H, -OH, -alcoxy (en Ci à C4) , -PO3R8R9, -OPO3R8R9, -SO3R8, -OSO3R8, -NR8R9, — SRe, -CN, -NO2, -CHO, -CO2R8 et -CONR8R9, dans lesquels Rs et Rg sont chacun indépendamment choisis parmi H et alkyle (en Ci à C4) ; et chaque Rô et R7 est indépendamment H ou PO3H2.
7. Composition selon la revendication 6, dans laquelle n est un entier de 0 à 2 inclus.
8. Composition selon la revendication 6, dans laquelle Ri, R2 et R3 contiennent chacun indépendamment d'environ 7 à environ 16 atomes de carbone.
9. Composition selon la revendication 6, dans laquelle Ri, R2 et R3 contiennent chacun indépendamment d'environ 9 à environ 14 atomes de carbone.
10. Composition selon la revendication 6, dans laquelle n vaut 0.
11. Composition selon la revendication 6, dans laquelle R5 est CO2H.
12. Composition selon la revendication 6, dans laquelle R6 est PO3H2.
13. Composition selon la revendication 6, dans laquelle R7 est H.
14. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ledit aminoalkylglucosaminide phosphate a pour structure

(Formule la) dans laquelle X est O ou S ; Y est O ou NH ; Z est O ou H ; chacun de Ri, R2 et R3 est indépendamment choisi dans le groupe consistant en un acyle en Ci à C20 et un alkyle en Ci à C20 ; et FU est H ou méthyle.
15. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ledit aminoalkylglucosaminide phosphate a pour structure
16. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ledit aminoalkylglucosaminide phosphate a pour structure
17. Composition selon la revendication 6, dans laquelle Rô est un groupe phosphate et le contre-ion est choisi dans le groupe consistant en la monoéthanolamine, la diéthanolamine et la triéthanolamine.
18. Composition selon la revendication 17, dans laquelle le contre-ion est la monoéthanolamine.
19. Composition selon la revendication 14, dans laquelle le contre-ion est la monoéthanolamine.
20. Composition selon la revendication 1, sous la forme d'une dispersion.
21. Composition selon la revendication 1, sous la forme d'une solution.
22. Composition selon la revendication 20 ou 21, sous la forme d'une solution limpide.
23. Composition selon la revendication 22, dans laquelle le mélange, la solution et la solution limpide sont une composition de nanoparticules ayant une taille de particule < 200 pm.
24. Composition selon la revendication 23, dans laquelle ladite solution est utilisée comme un immunomodulateur.
25. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ladite composition a une taille de particule après filtration stérile, telle que mesurée par diffusion dynamique de la lumière (DLS) sur une période de 14 jours à 40 degrés centigrades, < 200 nanomètres.
26. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ladite composition a une perte en pour cent de pureté après 14 jours à 40 degrés centigrades, telle que mesurée par chromatographie liquide haute performance en phase inverse (RP-HPLC) , de 4,46 % à 5,93 %.
27. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ladite solution est utilisée comme un immunomodulateur.
28. Composition selon la revendication 27, dans laquelle ladite solution est utilisée comme un adjuvant de vaccin.
29. Composition selon la revendication 28, comprenant en outre un antigène.
30. Composition selon la revendication 27, convenant pour une administration muqueuse.
31. Composition selon la revendication 30, convenant pour une administration intranasale.
32. Composition selon la revendication 27, administrée à un sujet en l'absence d'un antigène exogène.
33. Procédé pour accentuer une réponse immunitaire chez un sujet comprenant l'administration audit sujet d'une quantité efficace de la composition pharmaceutique selon la revendication 1.
34. Procédé selon la revendication 33, dans lequel ledit sujet est un mammifère.
35. Procédé selon la revendication 34, dans lequel ledit mammifère est un humain.
36. Procédé selon la revendication 35, comprenant en outre l'administration d'un antigène exogène audit sujet.
37. Procédé selon la revendication 36, dans lequel ledit sujet est un mammifère.
38. Procédé selon la revendication 37, dans lequel ledit mammifère est un humain.
39. Procédé pour améliorer ou prévenir sensiblement une maladie infectieuse, une maladie autoimmune, ou une affection allergique chez un sujet comprenant l'administration audit sujet d'une quantité efficace de la composition pharmaceutique selon la revendication 1.
40. Procédé selon la revendication 39, dans lequel ledit sujet est un mammifère.
41. Procédé selon la revendication 40, dans lequel ledit mammifère est un humain.
42. Procédé selon la revendication 41, comprenant en outre l'administration d'un antigène exogène audit sujet.
43. Procédé selon la revendication 42, dans lequel ledit sujet est un mammifère.
44. Procédé selon la revendication 43, dans lequel ledit mammifère est un humain.
45. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ladite eau est stérile.
46. Composition comprenant (i) un aminoalkylglucosaminide phosphate ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci et (ii) une quantité efficace d'un tampon de citrate ou d'acétate suffisante pour procurer un pH pharmaceutiquement acceptable.
47. Composition selon la revendication 46, dans laquelle le pH n'est pas plus grand que 6,5.
48. Composition selon la revendication 46, dans laquelle le pH est entre environ 4,0 et environ 6,0.
49. Composition selon la revendication 48, dans laquelle le pH est d'environ 5,0.