RU2510281C2 - ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА - Google Patents
ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА Download PDFInfo
- Publication number
- RU2510281C2 RU2510281C2 RU2012126328/15A RU2012126328A RU2510281C2 RU 2510281 C2 RU2510281 C2 RU 2510281C2 RU 2012126328/15 A RU2012126328/15 A RU 2012126328/15A RU 2012126328 A RU2012126328 A RU 2012126328A RU 2510281 C2 RU2510281 C2 RU 2510281C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- vaccine
- hybrid protein
- streptococcus pneumoniae
- psaa
- Prior art date
Links
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 title claims abstract description 11
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 title claims abstract description 9
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 title description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 42
- 101710099976 Photosystem I P700 chlorophyll a apoprotein A1 Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 108010040721 Flagellin Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108010040473 pneumococcal surface protein A Proteins 0.000 claims abstract description 4
- -1 Sprl 895 Proteins 0.000 claims abstract 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 7
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 48
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 19
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 17
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 13
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 12
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 11
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 9
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 8
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 229940031960 pneumococcal polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 101710138270 PspA protein Proteins 0.000 description 5
- 102000008234 Toll-like receptor 5 Human genes 0.000 description 5
- 108010060812 Toll-like receptor 5 Proteins 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 3
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 102100032241 Lactotransferrin Human genes 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102100033762 Proheparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 108091005763 multidomain proteins Proteins 0.000 description 3
- 229940124733 pneumococcal vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800001649 Heparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 2
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 2
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 2
- 101710171321 Neuraminyllactose-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 2
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 2
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 231100000668 minimum lethal dose Toxicity 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229940031937 polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 208000026775 severe diarrhea Diseases 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940031831 23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000005416 ATP-Binding Cassette Transporters Human genes 0.000 description 1
- 108010006533 ATP-Binding Cassette Transporters Proteins 0.000 description 1
- 102100038740 Activator of RNA decay Human genes 0.000 description 1
- 101100130893 Alkalihalobacillus halodurans (strain ATCC BAA-125 / DSM 18197 / FERM 7344 / JCM 9153 / C-125) mntA gene Proteins 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 101100084597 Dictyostelium discoideum pspA gene Proteins 0.000 description 1
- 101710103508 FK506-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 101710104425 FK506-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710104423 FK506-binding protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 101710104333 FK506-binding protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101710104342 FK506-binding protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 101710149710 FKBP-type 16 kDa peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- 101710121306 FKBP-type 22 kDa peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- 101710180800 FKBP-type peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FkpA Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 101000871708 Homo sapiens Proheparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 108010002231 IgA-specific serine endopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710104030 Long-type peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000008826 LysM domains Human genes 0.000 description 1
- 108050000721 LysM domains Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 101100301239 Myxococcus xanthus recA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 101710114693 Outer membrane protein MIP Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 101710116692 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- 101710111764 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP10 Proteins 0.000 description 1
- 101710111749 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP11 Proteins 0.000 description 1
- 101710111747 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP12 Proteins 0.000 description 1
- 101710111757 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP14 Proteins 0.000 description 1
- 101710111682 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP1A Proteins 0.000 description 1
- 101710111689 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP1B Proteins 0.000 description 1
- 101710147154 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP2 Proteins 0.000 description 1
- 101710147149 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP3 Proteins 0.000 description 1
- 101710147152 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP4 Proteins 0.000 description 1
- 102100020739 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP4 Human genes 0.000 description 1
- 101710147150 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP5 Proteins 0.000 description 1
- 101710147138 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP7 Proteins 0.000 description 1
- 101710147137 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP8 Proteins 0.000 description 1
- 101710147136 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP9 Proteins 0.000 description 1
- 101710174853 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Mip Proteins 0.000 description 1
- 101710200991 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase, rhodopsin-specific isozyme Proteins 0.000 description 1
- 101710092145 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710092146 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase-like 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710092148 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase-like 3 Proteins 0.000 description 1
- 101710092149 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase-like 4 Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 102000006335 Phosphate-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010058514 Phosphate-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710113444 Probable parvulin-type peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- 101710090737 Probable peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- 101710110023 Putative adhesin Proteins 0.000 description 1
- 101710133309 Putative peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 101710124237 Short-type peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Proteins 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003497 anti-pneumococcal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002622 anti-tumorigenesis Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000014564 chemokine production Effects 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 101150106284 deoR gene Proteins 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 208000035474 group of disease Diseases 0.000 description 1
- 229940045808 haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036457 multidrug resistance Effects 0.000 description 1
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 231100000404 nontoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 101150093139 ompT gene Proteins 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- FJYCIMTWDRJSQU-UHFFFAOYSA-N phenoxymethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)COC1=CC=CC=C1 FJYCIMTWDRJSQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229940031999 pneumococcal conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000455 protein structure prediction Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 101150043479 psaA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 108090000589 ribonuclease E Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
- A61K39/0275—Salmonella
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/315—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
- C07K14/3156—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci from Streptococcus pneumoniae (Pneumococcus)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины. Предложена вакцина против пневмонии, вызываемой Streptococcus pneumoniae, на основе гибридного белка, соответствующего SEQ ID NO:1, включающего фрагменты белков Streptococcus pneumoniae PspA, Spr1895, PsaA, а также компоненты флагеллина в качестве адъюванта, соединенные гибкими мостиками. Изобретение обеспечивает эффективную профилактику и терапию пневмонии за счет того, что гибридный белок вакцины составлен из различных иммуногенных эпитопов, на которые вырабатывается специфический иммунный ответ с формированием иммунологической памяти. 4 ил., 8 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, фармакологии, биотехнологии и может быть использовано для профилактики и лечения пневмонии, вызываемой пневмококками (латинское название вида - Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae)).
Термин «гибридный белок» здесь обозначает белок, полученный в результате экспрессии рекомбинантной молекулы ДНК, в которой соединены друг с другом в одной рамке считывания кодирующие участки нескольких разных генов.
Пневмония (син. воспаление легких) считается распространенным заболеванием как у взрослых, так и у детей, и требует ответственного проведения диагностических и лечебных мероприятий. По медицинской статистике, более одного миллиона россиян ежегодно заболевают воспалением легких, и у 5% пациентов болезнь заканчивается летальным исходом (http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs331/ru/index.html).
Термин «пневмония» объединяет большую группу болезней, каждая из которых имеет свою этиологию, патогенез, клиническую картину, рентгенологические признаки, данные лабораторных исследований и особенности терапии, может протекать как самостоятельное заболевание или как осложнение других болезней.
Пневмония - воспалительный процесс инфекционного происхождения дыхательных систем человека. Возбудителями пневмонии могут быть вирусы, грибы, но чаще всего ими являются бактерии. Самая частая причина бактериальной пневмонии - пневмококк (S. pneumoniae). Изучение глоточной микрофлоры выявляет носительство пневмококков у 5-25% здоровых людей.
Для пневмококков характерна мощная полисахаридная капсула, которая выполняет функцию защиты микроорганизма от опсонизации и последующего фагоцитоза. Вследствие того, что капсула пневмококков является основным поверхностным элементом, распознаваемым системой иммунитета, капсульный полисахарид характеризуется наибольшей вариабельностью. К настоящему времени обнаружен 91 различный капсульный тип пневмококков, но большинство (более 90%) инвазивных пневмококковых заболеваний вызывается 23 наиболее распространенными сероварами. Большое количество иммунологических вариантов капсульного полисахарида является фактором, осложняющим создание эффективных полисахаридных вакцинных препаратов.
Заболеть пневмококковой инфекцией может любой человек, но существуют группы риска, в большей степени подверженные заболеванию, это лица в возрасте от 65 лет, маленькие дети, лица, имеющие определенные проблемы со здоровьем, лица с ослабленной иммунной системой, курильщики.
Пневмококковая инфекция нередко с трудом поддается лечению, поскольку многие циркулирующие эпидемические штаммы пневмококков приобрели множественную лекарственную устойчивость к антибиотикам. Для предупреждения развития заболевания используются вакцины. Согласно позиции ВОЗ (Всемирная Организация Здравоохранения) и Российского респираторного общества, «Вакцинация - единственная возможность предотвратить развитие пневмококковой инфекции». На данный момент FDA(Food and Drag Administration) одобрило 2 типа вакцин: пневмококковую конъюгатную вакцину и пневмококковую полисахаридную вакцину (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/pneimiococcalinfections.html). В России зарегистрированы вакцина Пневмо 23 (PPSV23) - 23-валентная пневмококковая полисахаридная вакцина производства компании Санофи Авентис Пастер, Франция, и вакцина Превенар (PCV7) - семивалентная пневмококковая полисахаридная конъюгированная адсорбированная вакцина компании Вайет Фармасьютикалз, США.
Пневмококковая полисахаридная вакцина (ППСВ) показана взрослым. У большинства здоровых взрослых людей, прошедших вакцинацию ППСВ, вырабатывается сопротивляемость большинству типов бактерий (антигены которых имеются в вакцине) в течение 2-3 недель после прививки. У лиц очень пожилого возраста, детей до 2 лет и людей с хроническими заболеваниями вакцинация может не привести к созданию стойкого иммунитета, либо иммунитет к заболеванию не возникает совсем (http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/languages/pneumococcalinfections.html#Russian). Кроме того, после вакцинации могут возникнуть осложнения: покраснение, болезненные ощущения в месте инъекции, высокая температура, мышечные боли или более серьезные местные реакции (Donalisio MR, Rodrigues SM, Mendes ET, Krutman M. Adverse events after pneumococcal vaccination. J Bras Pneumol. 2007 Feb; 33(1):51-6).
Однако, ППСВ оказалась достоверно эффективна лишь для людей с низким риском заболевания пневмококковой инфекцией. Для детей до 2 лет одновременно с вакцинацией показана профилактика с использованием антибиотиков (Bade A, Diot P, Lemarie E. Anti-pneumococcal vaccine: justifications and results. Rev Pneumol Clin. 1997; 53(3): 128-37).
Оказалось, что ППСВ не уменьшает частоту пневмонии и связанную с ней смертность и лишь немного уменьшает риск заражения тяжелой пневмококковой инфекцией. Также показано, что данная вакцина не защищает от пневмококков, чувствительных к пенициллину в больших концентрациях (Pneumococcal vaccine: a second look. Solution for SC or IM injection: pneumococcal vaccine. Prescrire Int. 1998 Feb; 7(33):16-8). Такие же результаты были показаны и для людей страрше 65 лет (Pneumococcal vaccination for elderly subjects: license extension. Still no proof of clinical efficacy. Prescrire Int. 2000 Aug; 9(48):106-9).
Действующим веществом ППСВ являются полисахариды 23 серотипов Streptococcus, вызывающих до 90% инвазивных заболеваний пневмококковой этиологии. Полисахарид - это антиген, не связанный с реакцией Т-клеток, потому вызывает лишь краткосрочный иммунитет без иммунной памяти; вакцины, содержащие только данные вещества, неэффективны, что показано у детей до 2 лет (Greenwood В М et al., Trans R Soc Trop Med Hyg, 1980, 74:756-760; международная заявка на изобретение WO 2010120921 A1, дата приоритета 16.04.2009). Также тот факт, что существует порядка 90 серотипов пневмококков, поскольку возбудители заболеваний в разных областях земного шара различаются, затрудняет создание универсальной вакцины на основе полисахаридов.
В конъюгированной вакцине, показанной детям, наряду с полисахаридами 7 сероваров пневмококков, которые наиболее часто вызывают заболевания среди детей, также содержится белок-носитель CRM 197 (мутант дифтерийного токсина), в качестве адъюванта. Благодаря наличию адъюванта в препарате вакцины данный антигенный комплекс хорошо распознается Т-клетками, обеспечивая устойчивый иммунитет (Schneerson R, Barrera O, Sutton A, Robbins JB. Preparation, characterization, and immunogenicity of Haemophilus influenzae type b polysaccharide-protein conjugates. J Exp Med. 1980 Aug 1; 152(2):361-76). CRM 197 связывается с гепарин-связывающим эпидермальным фактором роста и может ингибировать heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF). Несмотря на то, что токсичность CRM197 примерно в 106 раз меньше, чем дифтерийного токсина, все же его использование должно быть осторожным, особенно в высоких дозировках (Takuya Kageyama, Minako Ohishil, Shingo Miyamoto, Hiroto Mizushima, Ryo Iwamoto and Eisuke Mekada. Diphtheria Toxin Mutant CRM197 Possesses Weak EF2-ADP-ribosyl Activity that Potentiates its Anti-tumorigenic Activity. Received April 16, 2007. Accepted May 2, 2007). Кроме того, после вакцинации могут возникнуть осложнения: покраснение, чувствительность или припухлость в месте введения препарата, температура выше 38-39 ОС, а также беспокойность, сонливость, потеря аппетита. Более того, вакцинацию рекомендуют проводить детям до 2 лет четыре раза, от 2 до 5 лет - в зависимости от возраста ребенка, В общей сложности для вакцинации ребенка требуется введение как минимум 4 доз, что дорого и небезопасно.
Известна вакцина, двумя главными компонентами которой являются полисахарид оболочки N. meningitidi и белок PsaA S.pneumoniae (может также использоваться белок PspA) (международная заявка на изобретение WO2010120921 A1, дата приоритета 16.04.2009). Ввиду невозможности выработки иммунной памяти на полисахариды, считаем использование полисахарида оболочки N. meningitidi в качестве компонента вакцины неоправданным. Использование же белков PsaA и PspA целесообразно - это поверхностные антигены пневмококков, которые способны вызывать и иммунный ответ, и формирование иммунологической памяти.
При создании патентуемой вакцины опирались на индукцию сильного иммунного ответа с последующим формированием иммунной памяти. Для этого в нашей разработке центральное место заняли не полисахариды, а белки пневмококков, полученные с использованием методов молекулярной биологии и рекомбинантной ДНК. По литературным данным, в качестве вакцинных кандидатов белковой природы наиболее перспективными антигенами являются три поверхностных белка пневмококков: PsaA, PspA, Spr1895.
Белок PsaA считают перспективным иммуногеном и авторы международной заявки на изобретение WO 2004102199 A2, дата приоритета 16.05.2003. Авторы приводят данный белок и еще несколько белков (SlrA - ротамаза липопротеинов, IgA1 - протеаза, PpmA - белок созревания стрептококков) или их компонентов в качестве основы для создания вакцины. Однако, мы считаем более перспективным подход с использованием других поверхностных белков S. pneumoniae - помимо PsaA, PspA и Spr1895.
Описан гибридный белок, включающий PsaA и В-субъединицу холерного токсина в качестве адъюванта (Areas АР, Oliveira ML, Miyaji EN, Leite LC, Aires KA, Dias WO, Ho PL. Expression and characterization of cholera toxin B-pneumococcal surface adhesin A fusion protein in Escherichia coli: ability of CTB-PsaA to induce humoral immune response in mice. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Aug 13; 321(1):192-6). Однако мы считаем использование холерного токсина, либо его компонентов в качестве компонента вакцины менее безопасным, чем флагеллина, ввиду того, что люди высокочувствительны к холерному токсину, и даже 8 мкг токсина может вызвать сильную диарею.
Исследования показали, что белки PsaA и PspA целесообразно использовать как основу для вакцин от пневмококковой инфекции. Белок PsaA высококонсервативен среди различных серотипов пневмококков и обусловливает адгезию бактерии и ее вирулентность (Berry AM, and Paton JC: Sequence heterogeneity of psaA, a 37-kilodalton putative adhesin essential for virulence of Streptococcus pneumoniae. Infect Immun 1996; 64:5255-5262). Показано, что антитела к PsaA обладают перекрестной активностью относительно всех серотипов S. pneumonia.
PspA - это холин-связывающий поверхностный антиген, который ингибирует комплемент-опосредованный фагоцитоз, связывается с лактоферрином и предотвращает лактоферрин-опосредованную элиминацию бактериальных клеток (Hammerschmidt S, Bethe G, Remane PH, Chhatwal GS(1999) Identification of pneumococcal surface protein A as a lactoferrin-binding protein of Streptococcus pneumoniae. Infect Immun 67:1683-1687). В данной статье также указывается белок PsaA как перспективный для создания вакцины. Авторами показан еще ряд белков, кандидатных для создания вакцин для защиты от пневмококковой инфекции, однако мы сочли целесообразным использование именно белков PsaA и PspA ввиду их консервативности среди серотипов пневмококков и некоторых других бактерий.
Одним из главных компонентов предлагаемой вакцины также является белок Spr1895, закодированный в гене фосфат-связывающего белка фосфатного ABC транспортера. Данный белок является жизненно важным для бактерий, константным, что обуславливает его выбор для создания вакцины от пневмонии, вызываемой S. pneumonia.
В настоящем изобретении также фигурирует белок флагеллин (FliC) в качестве адъюванта. FliC, взаимодействуя с Toll-like receptor-5 (TLR-5), стимулирует созревание макрофагов и дендритных клеток - антиген-презентирующих клеток, что приводит к выработке иммунного ответа (Me Dermott P.F..High-affinity interaction between Gram-negative flagellin and a cell surface polypeptide results in human monocyte activation. Infect. Immun. - 2000. - V.68. - p.:5525-5529; Means Т.K. et al. The Toll-like receptor 5 stimulus bacterial flagellin induces maturation and chemokine production in human dendritic cells. J.Immunol. - 2003. - V.170. - p.:5165-5175).
На данный момент флагеллин является одним из наиболее перспективных и хорошо изученных адьювантов нового поколения. Результаты исследований показывают, что рекомбинантные белки, вводимые с флагеллином, имеют повышенные иммуногенные и антигенные характеристики. Ответы на них регистрируются в более короткие сроки и вызывают более сильный клеточный и гуморальный иммунный ответ (Balaram, 2008).
В настоящем изобретении указывается, что в качестве адъюванта могут быть использованы компоненты флагеллина. Во флагеллине обнаружены два рецептор -активирующих участка в терминальных областях (а.о. 79-117 и а.о. 408-439) (Tonyia, 2001).
Таким образом, оправдан подход с использованием в качестве адъюванта определенных компонентов флагеллина (FliC domain I, FliC domain 2).
TLR-5 экспрессирован на клетках врожденного иммунитета, на эпителиальных и эндотелиальных клетках (Sebastiani G. et al. Cloning and characterization of the murine Toll-like receptor 5(Tlr5) gene: sequence and mRNA expression studies in Salmonella-susceptibleMOLF/Eimice. Genomics. - 2000. - V.64. - p.230-240; Zarember K.A. and Godowski P.J. Tissue expression of human Toll-like receptors and differential regulation of Toll-like receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products, and cytokines. J.Immunol. - 2002. - V.168. - p.554-561; Delneste, 2007). Ввиду этого целесообразно использование для иммунизации поверхности слизистой, что значительно облегчает доставку иммуногена.
Таким образом, к наиболее близким к настоящему изобретению можно отнести изобретение, описанное в WO2004102199 А2, и конструкцию CTB-PsaA, описанную в вышеприведенной статье. В международной заявке, однако, предлагается использовать белки или их функциональные части в качестве отдельных компонентов вакцины. В основе же нашего изобретения лежит гибридный белок, который, помимо специфической белковой компоненты S.pneumoniae, также включает адъювант.В связи с этим, прототипом настоящего изобретения является гибридный белок, описанный бразильскими авторами.
Гибридный белок CTB-PsaA включает PsaA серотипа 6 В S.pneumoniae (289 а.о.), а также В-субъединицу холерного токсина в качестве адъюванта (Areas АР, Oliveira ML, Miyaji EN, Leite LC, Aires KA, Dias WO, Ho PL. Expression and characterization of cholera toxin B-pneumococcal surface adhesin A fusion protein in Escherichia coli: ability of CTB-PsaA to induce humoral immune response in mice. Biochem Biophys Res Commun. 2004 Aug 13; 321(1):192-6). Однако, выгоднее и удобнее (для обеспечения правильного фолдинга молекулы) использовать фрагмент белка - антигенную детерминанту - вместо полноразмерного белка. Именно такой подход - использование наиболее иммуногенных фрагментов белков - был использован при создании настоящего изобретения. Кроме того, мы считаем использование холерного токсина, либо его компонентов в качестве компонента вакцины менее безопасным, чем флагеллина, ввиду того, что люди высокочувствительны к холерному токсину, и даже 8 мкг токсина может вызвать сильную диарею. Относительно метода получения данного гибридного белка, ген, кодирующий белок PsaA, амплифицируется отдельно с плазмиды, в которую он введен, с последующим клонированием по сайтам рестрикции в вектор, содержащий ген, кодирующий СТВ. В нашем же случае использовался подход с применением синтеза полноразмерного гена, кодирующего гибридный белок.
Настоящее изобретение представляет собой вакцину на основе высокоочищенного гибридного белка, соответствующего SEQ ID NO:1, включающего иммуногенные фрагменты белков PspA (160-262 а.о. gb|EHD89266.1| pneumococcal surface protein A [Streptococcus pneumoniae]), Spr1895 (94-161 a.o. ref|ZP 01836139.1| LysM domain protein [Streptococcus pneumoniae]), PsaA (238-309 a.o. gb|AAF70667.1| PsaA [Streptococcus pneumoniae]), а также компоненты флагеллина в качестве адъюванта (1-169 а.о. gb|AAB33952.1| flagellin {alternatively spliced} [Salmonella typhimurium], 311-405 a.o. gb|AAB33952.1| flagellin {alternatively spliced} [Salmonella typhimurium]), соединенные гибкими мостиками.
Для получения в соответствии с настоящим изобретением гибридного белка могут быть использованы стандартные методы молекулярной биологии и микробиологии, известные специалистам в данной области техники. Такие методы полно представлены в научной литературе.
После вакцинации на входящие в состав гибридного белка вакцины эпитопы бактериальных поверхностных белков вырабатываются антитела, и формируется способность вырабатывать антитела в ответ на попадание в организм S. pneumoniae. В гибридном белке вакцины представлены антигенные детерминанты консервативных белков пневмококка, которые присутствуют у всех сероваров данного микроорганизма, поэтому иммунный ответ, который вырабатывается после вакцинации, будет вырабатываться при встрече с любым сероваром пневмококка. Использование эпитопов нескольких белков позволит увеличить эффективность вакцины. Наличие в сыворотке крови человека протективных антител к S. pneumoniae приведет к тому, что человек не заболеет или легко перенесет болезнь.
Вакцина обладает как профилактическим, так и терапевтическим эффектом.
Технический результат от использования изобретения заключается в обеспечении универсальной защиты от пневмококков, благодаря возможности и профилактики, и терапии заболеваний, вызываемых S.pneumoniae, за счет того, что белок вакцины составлен из иммуногенных эпитопов нескольких консервативных белков пневмококков, на которые вырабатывается специфический иммунный ответ с формированием иммунологической памяти.
Технический результат от использования изобретения также заключается в усилении иммунного ответа на активный компонент вакцины, за счет использования в составе конструкции адъюванта, компонентов флагеллина.
Технический результат выражается и в увеличении безопасности вакцины, благодаря использованию в качестве адъюванта нетоксичного агента (компонентов флагеллина).
Изобретение проиллюстрировано следующими графическими материалами.
Фигура 1. 3D-структура гибридного белка, показаны α-спирали и β-слои.
Фигура 2. 3D-структура гибридного белка, показаны аминокислотные остатки.
Фигура 3. Динамика выживаемости мышей (%) после заражения 1 LD S. pneumoniae (профилактическая модель).
Фигура 4. Динамика выживаемости мышей (%) после заражения 1 LD S. pneumoniae (терапевтическая модель).
Осуществление настоящего изобретения.
Пример 1. Моделирование гибридного белка.
Спланированный гибридный полипептид является сложным мультидоменным белком (5 доменов: FHCdomainl, FliCdomain2, PspA, Spr1895, PsaA). Для моделирования мультидоменных белков были произведены определение границ доменов, построение модели целого белка для определения ориентации доменов, построение моделей для каждого домена (с использованием образцов 3D структур и ab initio) и докинг моделей с использованием модели целого белка.
В спланированном гибридном полипептиде два домена имели образцы, а три нуждались в ab initio моделировании, кроме этого, в ab initio моделировании требовалось сформировать гибкие мостики между доменами.
Для получения более приближенных к реальности результатов в автоматическом режиме использовали алгоритм I-Tasser, признанный лучшим на последних трех CASP (Critical Assessment of protein Structure Prediction) - соревнованиях по моделированию белков. Данный анализ проводили в течение трех дней. Однако, даже с использованием данного мощного алгоритма получение адекватных данных для мультидоменного белка с необходимостью ab initio моделирования доменов и их границ не полностью достоверно (70%).
Для получения более точных данных разбили белок на используемые домены, провели их моделирование с использованеием I-Tasser и далее провели их докинг.
Проделав все шаги, получили конструкцию, представленную на фиг.1, 2.
Смоделированный гибридный белок состоит из 536 а.о., представлена его аминокислотная последовательность - SEQ ID NO:1. Анализ аминокислотной последовательности данного белка с помощью программы ProtParam (http://au.expasy.org/tools/protparam.html) показал, что гибридный белок имеет молекулярную массу 56,6 кДа, pI 4.56.
Пример 2. Создание нуклеотидной последовательности, кодирующей гибридный белок.
Перевели аминокислотную последовательность гибридного белка, включающего FliCdomainl, FliCdomain2, PspA, Spr1895, PsaA, в нуклеотидную (1623 п.н.), оптимизировав последнюю для экспрессии в клетках E. coli.
Синтез данной нуклеотидной последовательности осуществляли путем удлиннения взаимоперекрывающихся олигонуклеотидов согласно описанным методам (Majumder, 1992). Олигонуклеотиды представляли собой фрагменты гибридного гена длиной около 70 нуклеотидов со взаимоперекрывающимися участками длиной около 20 нуклеотидов. Основные требования к праймерам заключались в том, что их длина не должна была превышать 60 нуклеотидов, а участки гибридизации должны были быть не меньше 20 нуклеотидов. Кроме того, на концах олигонуклеотидов не должно было быть длинных участков с повторяющимися G или C. В ряде случаев подбор оптимальных праймеров осуществляли эмпирически путем сдвига праймера по отношеню к матрице или изменения длины праймера на 3-6 нуклеотидов. В общей сложности для синтеза гибридного гена длиной 1623 п.н. было использовано 59 праймеров. Синтезированные фрагменты по 300 п.н. выделяли с помощью гель-электрофореза и клонировали в плазмидный вектор pGEM-T Easy. Клонирование осуществляли с использованием рестрикционных сайтов Kpnl, SacII, EcoRV, BamHI или посредством „тупых" концов. После секвенирования фрагменты амплифицировали, после чего соединяли в нуклеотидную последовательность гибридного белка путем их сплавления методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). После заключительного этапа синтеза гибридного гена путем лигирования фрагментов искусственный ген клонировали в вектор pGEM-T по рестрикционным сайтам KpnI и SacI. Полученный ген был фланкирован дополнительными рестрикционными сайтами EcoRI на 5′-конце и XhoI на 3′-конце. Далее искусственный ген переклонировали в экспрессионный вектор рЕТ24а по рестрикционным сайтам EcoRI и XhoI.
Пример 3. Создание плазмидной ДНК, кодирующей гибридный белок.
По методике, описанной в примере 2, получили нуклеотидную последовательность гибридного белка для создания вакцины от пневмонии.
Клонировали полученный ген в плазмиде рЕТ24а для последующей экспрессии. Для этого провели реакцию лигирования гена и вектора рЕТ24а, с использованием соответствующего буфера и лигазы. Реакцию проводили при +20°C в течение 2 часов.
Смесь прогрели при +95°C в течение 10 мин и очистили от солей диализом на нитроцелюлозных фильтрах с диаметром пор 0,025 мкм (Millipore, США). Диализ провели против раствора, содержащего 0,5 мМ ЭДТА в 10% глицерине, в течение 10 мин.
Пример 4. Создание штамма E. coli для амплификации плазмидной ДНК, содержащей гибридный ген.
По методике, описанной в примере 3, получили нуклеотидную последовательность белка для создания вакцины от пневмонии и клонировали ее в плазмиде рЕТ24а. Полученной плазмидой были трансформированы клетки Е. coli штамма DH10B/R (Gibko BRL, США) с генотипом F-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZΔM 15 ΔlacX74 deoR recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)769 galU galKλ- rpsL nupG методом электропорации.
После трансформации клетки инкубировали в SOC-среде (2% бакто-триптон, 0.5% дрожжевой экстракт, 10 мМ NaCl, 2.5 мМ KCl, 10 мМ MgCl2, 10 мМ MgSO4, 20 мМ глюкоза) в течение 40 мин при +37°C.
С помощью скрининга клеток E.coli на наличие плазмид на селективной среде, содержащей LB-arap, 100 мкг/мл ампициллина, отобрали колонии клеток E. coli - штамм E. coli для амплификации плазмидной ДНК, содержащей гибридный ген.
Из выросших клонов была выделена плазмидная ДНК с использованием набора Wizard Minipreps DNA Purification System (Promega, США).
Очищенная плазмидная ДНК была проверена с помощью рестрикционного анализа и секвенирования. В ходе работы были отобраны клоны, содержащие фрагменты ДНК требуемого размера в составе плазмиды, из которых такие плазмиды были выделены для дальнейшей индукции экспрессии гена.
Пример 5. Создание штамма E. coli - продуцента гибридного белка.
По методике, описанной в примере 4, получили нуклеотидную последовательность белка для создания вакцины от пневмонии и клонировали ее в плазмиде рЕТ24а, амплифицировали полученную плазмиду в клетках E. coli штамма DH10B/R с последующим ее выделением.
Для экспрессии белка использовали клетки E.coli штамма BL21 Star (DE3) (Invitrogen, USA), с генотипом F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm rne131 (DE3), содержащие в геноме λDe3 лизоген и мутацию rne131. Мутированный ген те (rne131) кодирует усеченную форму РНКазы Е, что уменьшает внутриклеточное разрушение мРНК, приводя к увеличению ее ферментативной стабильности. Ion- и ompT-мутации по генам протеаз позволяют получать непротеолизированные рекомбинантные белки в больших количествах.
Подготовили клетки Е. coli штамма BL 21 с генотипом F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm rne131 (DE3) следующим образом. Инкубировали клетки при +37°C в течение ночи в 5 мл L-бульона, содержащего 1% триптон, 1% дрожжевой экстракт и 1% натрий хлористый. Развели культуру свежим L-бульоном в 50-100 раз и вырастили на качалке при +37°C до оптической плотности 0,2-0,3 при длине волны 590 нм. При достижении оптической плотности более 0,3 культуру развели свежим L-бульоном до оптической плотности 0,1 и растили 30 мин. Перенесли 100 мл культуры в стерильную центрифужную пробирку и осадили клетки при +4°C на 5000g в течение 10 мин. Супернатант слили, клетки ресуспендировали в деионизованной воде в исходном объеме с последующим центрифугированием. Процедура отмывки повторялась трижды. После отмывки осадок клеток ресуспендировали в малом объеме деионизованной воды и центрифугировали 30 сек. при 5000 об/мин, на микроцентрифуге.
Трансформацию компетентных клеток осуществляли методом электропорации. Для этого 1 мкл плазмидной ДНК добавляли к 12 мкл компетентных клеток, перемешивали и проводили электропорацию на генераторе высоковольтных импульсов ГВИ-1 (СПбГТУ, Санкт-Петербург) в стерильных ячейках при электрическом импульсе напряженностью 10 кВ/см длительностью 4 мсек.
После трансформации клетки инкубировали в SOC-среде (2% бакто-триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 10 мМ NaCl, 2,5 мМ КС1, 10 мМ MgCl2, 10 мМ MgSO4, 20 мМ глюкоза) в течение 40 мин. при +37°C. 10-100 мкл клеточной суспензии высеивались на селективную LB-среду (Gibko BRL, США), содержащую ампициллин (100 мкг/мл), для отбора клонов, содержащих плазмиды (штаммов-продуцентов).
Полученная после трансформации компетентных клеток штаммов Е. coli плазмида обеспечивает высокий уровень биосинтеза рекомбинантного белка, закодированного в ней.
Пример 6. Получение гибридного белка для создания вакцины от пневмонии в клетках E. coli индукцией синтеза белка 0.2% лактозой по методу Штудиера.
По методике, описанной в примере 5, получили нуклеотидную последовательность гибридного белка для создания вакцины от пневмонии и клонировали ее в плазмиде рЕТ24а, амплифицировали полученную плазмиду в клетках E.coli штамма DH10B/R с последующим ее выделением, трансформировали ею клетки E.coli штамма BL21 для последующей индукции экспрессии целевого гена.
Для культивирования полученных штаммов-продуцентов использовалась стандартная агаризованная LB-среда, содержащая ампициллин в концентрации 100 мкг/мл и глюкозу в концентрации 1% для блокирования неспецифической экспрессии.
Индукция экспрессии проводилась при достижении культурой клеток оптической плотности 0.6-0.8 оптических единиц при длине волны 600 нм.
В качестве индуктора использовалась 0.2% лактоза (Studier, 2005).
Для автоиндукции экспрессии по методу Штудиера (Studier, 2005) использовалась среда PYP-5052, состоящая из 1% пептона (Gibco, США), 0.5% дрожжевого экстракта (Gibco, США), 50 мМ Na2HPO4, 50 мМ K2HPO4, 25 мМ (NH4)2SO4, 2 мМ MgSO4, 0.5% глицерола, 0.05% глюкозы и 0.2% лактозы.
В среду PYP-5052, содержащую ампициллин в концентрации 100 мкг/мл, была инокулирована единичная колония штамма-продуцента. Ферментация проводилась при +37°C в термостатированном шейкере роторного типа при 250 об. мин. в течение 20 часов до отсутствия существенного изменения ОП600 за 1 час. Отбиралась аликвота клеток на анализ экспрессии гена, кодирующего вакцинный белок, методом электрофореза в ПААГ, а оставшуюся биомассу осаждали центрифугированием при 9000g.
Белок выделяли из клеток E. coli посредством лизиса клеток. Клетки ресуспендировали в лизирующем буфере, содержащем 20 мМ трис-HCl рН 7,5, 5 мМ ЭДТА и 1 мМ феноксиметилсульфонилфторид, из расчета на 1 г клеток 5-7 мл буфера. Суспензию клеток обрабатывали ультразвуком 7 раз по 30 сек с интервалом в 30 сек (частота ультразвука составляет 22 кГц). Лизат центрифугировали 10 мин при +4°C, 5000 g. Надосадочную жидкость сливали, к осадку добавляли раствор 1 М мочевины из расчета 10 мл на 1 г клеток, интенсивно перемешивали. Повторяли центрифугирование. Супернатант сливали, осадок ресуспендировали в растворе 2М мочевины того же объема. Повторяли центрифугирование. Супернатант сливали.
Полученный препарат содержал по данным SDS-PAGE (PolyAcrylamide Gel Electrophoresis with Sodium dodecyl sulfate) около 97% гибридного белка в концентрации 1 мг/мл.
Условия выделения и очистки подбирались экспериментальным путем и могут варьировать в известных среднему специалисту в этой области значениях.
Пример 7. Протективное действие вакцины на основе гибридного белка, содержащего PspA, Sprl895, PsaA, FliCdomainl, FliCdomain2, на профилактической модели летальной инфекции S. pneumoniae.
Для определения протективного действия препарата гибридного белка использовали мышей.
Опытная и контрольная группы содержали по 30 мышей линии Balb/c (самки), 7-8 недель (массой 18-20 г), каждая. Гибридный белок вводили в количестве 10 мкг на мышь. Через 1 месяц заражали вакцинированных мышей пневмококковой инфекцией: вводили внутрибрюшинно 104 КОЕ (колониеобразуещих единиц) S.pneumoniae (это минимальная летальная доза для мыши). Наблюдали выживаемость таких мышей в течение 14 дней после введения летальной дозы пневмококка (Фиг.3).
Иммунизированные вакциной на основе рекомбинантного гибридного белка мыши показали выживаемость 80% через неделю после заражения и 68% на 14 день наблюдений. В контрольной группе выживаемость составила 0% уже на 5 день эксперимента.
Таким образом, препарат предлагаемой вакцины обладает протективным действием. Кроме того, исследуемая доза препарата вакцины (10 мкг/мышь) не оказывает токсического действия на мышей.
Пример 8. Протективное действие вакцины на основе гибридного белка, содержащего PspA, Sprl895, PsaA, FliCdomainl, FliCdomain2, на терапевтической модели летальной инфекции S. pneumoniae.
Опытная и контрольная группы содержали по 30 мышей линии Balb/c (самки), 7-8 недель (массой 18-20 г), каждая. Мышей заражали пневмококковой инфекцией: вводили внутрибрюшинно 104 КОЕ (колониеобразуещих единиц) S. pneumoniae (это минимальная летальная доза для мыши). В этот же день мышам вводили гибридный белок в количестве 10 мкг на мышь. Наблюдали выживаемость таких мышей в течение 14 дней после введения летальной дозы пневмококка.
При совместном введении пневмококка и вакцины на основе гибридного белка мыши показали выживаемость 76% через неделю после заражения и 65% на 14 день наблюдений. В контрольной группе выживаемость составила 0% уже на 6 день эксперимента. Такие результаты доказывают хорошую иммуногенность вакцины, предлагаемой в данном изобретении. Таким образом, вакцина может использоваться для терапии пневмококковой инфекции.
Claims (1)
- Вакцина против пневмонии, вызываемой Streptococcus pneumoniae, на основе гибридного белка, соответствующего SEQ ID NO:1, включающего фрагменты белков Streptococcus pneumoniae PspA, Spr1895, PsaA, а также компоненты флагеллина в качестве адъюванта, соединенные гибкими мостиками.
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012126328/15A RU2510281C2 (ru) | 2012-06-22 | 2012-06-22 | ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА |
| CUP2014000145A CU24238B1 (es) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | Vacuna de proteína quimérica contra la neumonía causada por streptococcus pneumoniae |
| UAA201500499A UA116634C2 (uk) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | Вакцина проти пневмонії, викликуваної streptococcus pneumoniae, на основі гібридного білка |
| CN201380037745.9A CN104470538B (zh) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | 针对由肺炎链球菌引起的肺炎的嵌合蛋白疫苗 |
| EA201590078A EA027981B1 (ru) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | Вакцина против пневмонии, вызываемой streptococcus pneumoniae, на основе гибридного белка |
| EP13806364.9A EP2863944B1 (en) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | Chimeric protein vaccine against pneumonia caused by streptococcus pneumoniae |
| JP2015518363A JP6195089B2 (ja) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | ストレプトコッカス・ニューモニエによる肺炎に対するキメラタンパク質ワクチン |
| HK15109455.2A HK1208632B (en) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | Chimeric protein vaccine against pneumonia caused by streptococcus pneumoniae |
| BR112014032135A BR112014032135A2 (pt) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | vacina de proteína quimérica contra pneumonia causada por streptococcus pneumoniae |
| MX2014016049A MX355642B (es) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | Vacuna de proteina quimerica contra la neumonia causada por streptococcus pneumoniae. |
| PCT/RU2013/000525 WO2013191591A1 (en) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | Chimeric protein vaccine against pneumonia caused by streptococcus pneumoniae |
| KR20157001672A KR20150034192A (ko) | 2012-06-22 | 2013-06-21 | 폐렴 연쇄상구균에 의해 유발되는 폐렴에 대한 키메라 단백질 백신 |
| US14/579,279 US9345757B2 (en) | 2012-06-22 | 2014-12-22 | Chimeric protein vaccine against pneumonia caused by Streptococcus pneumoniae |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012126328/15A RU2510281C2 (ru) | 2012-06-22 | 2012-06-22 | ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012126328A RU2012126328A (ru) | 2013-12-27 |
| RU2510281C2 true RU2510281C2 (ru) | 2014-03-27 |
Family
ID=49769080
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012126328/15A RU2510281C2 (ru) | 2012-06-22 | 2012-06-22 | ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9345757B2 (ru) |
| EP (1) | EP2863944B1 (ru) |
| JP (1) | JP6195089B2 (ru) |
| KR (1) | KR20150034192A (ru) |
| CN (1) | CN104470538B (ru) |
| BR (1) | BR112014032135A2 (ru) |
| CU (1) | CU24238B1 (ru) |
| EA (1) | EA027981B1 (ru) |
| MX (1) | MX355642B (ru) |
| RU (1) | RU2510281C2 (ru) |
| UA (1) | UA116634C2 (ru) |
| WO (1) | WO2013191591A1 (ru) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2591809C1 (ru) * | 2015-07-21 | 2016-07-20 | Андрей Дмитриевич Протасов | Способ активации факторов противовирусной защиты у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких |
| RU2627602C2 (ru) * | 2015-12-29 | 2017-08-09 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Способ получения химерного рекомбинантного белка fliC:pagN |
| RU2687488C1 (ru) * | 2018-07-12 | 2019-05-14 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" ФГБНУ ВНИТИБП | Формолвакцина полиштаммная против пневмоний телят стрептококковой этиологии |
| RU2720614C1 (ru) * | 2020-04-23 | 2020-05-12 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) |
| RU2769573C2 (ru) * | 2017-08-03 | 2022-04-04 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Вакцина для защиты от streptococcus suis |
| RU2782598C1 (ru) * | 2021-09-23 | 2022-10-31 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" | Рекомбинантная плазмидная ДНК pSp-raPLY, кодирующая синтез рекомбинантного атоксичного белка пневмолизина Streptococcus pneumoniae, штамм Escherichia coli M15/pSp-raPLY - продуцент рекомбинантной атоксичной формы пневмолизина и получение указанного белка для разработки вакцинного препарата для профилактики пневмококковых инфекций |
| US11806392B2 (en) | 2016-12-03 | 2023-11-07 | The Uab Research Foundation | Pneumococcal vaccine combining selected alpha helical domains and proline rich domains of pneumococcal surface protein A |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104844712B (zh) * | 2015-04-03 | 2019-06-28 | 长春百克生物科技股份公司 | 肺炎链球菌蛋白抗原及其制备方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA014107B1 (ru) * | 2005-12-22 | 2010-10-29 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Вакцина, содержащая конъюгаты капсульных полисахаридов streptococcus pneumoniae |
| US20110287052A1 (en) * | 2008-10-17 | 2011-11-24 | The Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Recombinant bacterium capable of eliciting an immune response against streptococcus pneumoniae |
| US20120135037A1 (en) * | 2009-06-01 | 2012-05-31 | Mizel Steven B | Flagellin fusion proteins and conjugates comprising pneumococcus antigens and methods of using the same |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6936252B2 (en) | 1998-07-27 | 2005-08-30 | Microbial Technics Limited | Streptococcus pneumoniae proteins and nucleic acid molecules |
| EP1189632A4 (en) * | 1999-06-10 | 2002-08-21 | Uab Research Foundation | Pneumococcal surface protein combination vaccine |
| GB0022742D0 (en) * | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| EP1572868A4 (en) | 2001-04-16 | 2007-04-04 | Wyeth Corp | NOVEL OPEN READING FRAMES OF STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE ENCODING POLYPEPTIDE ANTIGENS AND USES THEREOF |
| EP2336357A1 (en) | 2003-04-15 | 2011-06-22 | Intercell AG | S. pneumoniae antigens |
| EP1477802A1 (en) | 2003-05-16 | 2004-11-17 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Method for selecting and producing vaccine components and vaccines based thereon |
| ES2431315T3 (es) | 2005-05-19 | 2013-11-26 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Epítopos funcionales del antígeno PsaA de Streptococcus pneumoniae y usos de los mismos |
| MX2010014575A (es) * | 2008-06-25 | 2011-06-17 | Herche Medicale Inserm Inst Nat De La Sante Et De La Rec | Nuevos compuestos inmunoadyuvantes basados en flagelina y uso de los mismos. |
| US8003112B2 (en) | 2009-04-16 | 2011-08-23 | Howard University | Meningococcal and pneumococcal conjugate vaccine and method of using same |
-
2012
- 2012-06-22 RU RU2012126328/15A patent/RU2510281C2/ru not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-06-21 MX MX2014016049A patent/MX355642B/es active IP Right Grant
- 2013-06-21 KR KR20157001672A patent/KR20150034192A/ko not_active Abandoned
- 2013-06-21 CU CUP2014000145A patent/CU24238B1/es unknown
- 2013-06-21 UA UAA201500499A patent/UA116634C2/uk unknown
- 2013-06-21 EA EA201590078A patent/EA027981B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2013-06-21 WO PCT/RU2013/000525 patent/WO2013191591A1/en active Application Filing
- 2013-06-21 BR BR112014032135A patent/BR112014032135A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-06-21 CN CN201380037745.9A patent/CN104470538B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2013-06-21 EP EP13806364.9A patent/EP2863944B1/en active Active
- 2013-06-21 JP JP2015518363A patent/JP6195089B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-12-22 US US14/579,279 patent/US9345757B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA014107B1 (ru) * | 2005-12-22 | 2010-10-29 | Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. | Вакцина, содержащая конъюгаты капсульных полисахаридов streptococcus pneumoniae |
| US20110287052A1 (en) * | 2008-10-17 | 2011-11-24 | The Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Recombinant bacterium capable of eliciting an immune response against streptococcus pneumoniae |
| US20120135037A1 (en) * | 2009-06-01 | 2012-05-31 | Mizel Steven B | Flagellin fusion proteins and conjugates comprising pneumococcus antigens and methods of using the same |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 2007 [найдено 02.09.2013]. Найдено из Интернет: <URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank/>. * |
| DATABASE, GenBank, * |
| DATABASE, GenBank, A[найдено 02.09.2013]. Найдено из Интернет: . * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2591809C1 (ru) * | 2015-07-21 | 2016-07-20 | Андрей Дмитриевич Протасов | Способ активации факторов противовирусной защиты у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких |
| RU2627602C2 (ru) * | 2015-12-29 | 2017-08-09 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Способ получения химерного рекомбинантного белка fliC:pagN |
| RU2794625C2 (ru) * | 2016-12-03 | 2023-04-24 | Зэ Юаб Ресерч Фаундейшн | Пневмококковая вакцина, сочетающая выбранные альфа-спиральные домены и богатые пролином домены пневмококкового поверхностного белка а |
| US11806392B2 (en) | 2016-12-03 | 2023-11-07 | The Uab Research Foundation | Pneumococcal vaccine combining selected alpha helical domains and proline rich domains of pneumococcal surface protein A |
| RU2769573C2 (ru) * | 2017-08-03 | 2022-04-04 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Вакцина для защиты от streptococcus suis |
| RU2687488C1 (ru) * | 2018-07-12 | 2019-05-14 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" ФГБНУ ВНИТИБП | Формолвакцина полиштаммная против пневмоний телят стрептококковой этиологии |
| RU2802072C2 (ru) * | 2018-11-08 | 2023-08-22 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Вакцина для защиты от streptococcus suis |
| RU2720614C1 (ru) * | 2020-04-23 | 2020-05-12 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) |
| RU2720614C9 (ru) * | 2020-04-23 | 2021-02-09 | федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации | Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты) |
| RU2782598C1 (ru) * | 2021-09-23 | 2022-10-31 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова" | Рекомбинантная плазмидная ДНК pSp-raPLY, кодирующая синтез рекомбинантного атоксичного белка пневмолизина Streptococcus pneumoniae, штамм Escherichia coli M15/pSp-raPLY - продуцент рекомбинантной атоксичной формы пневмолизина и получение указанного белка для разработки вакцинного препарата для профилактики пневмококковых инфекций |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104470538B (zh) | 2017-12-22 |
| EA201590078A1 (ru) | 2015-06-30 |
| HK1208632A1 (en) | 2016-03-11 |
| JP2015521618A (ja) | 2015-07-30 |
| EP2863944A1 (en) | 2015-04-29 |
| CU24238B1 (es) | 2017-02-02 |
| US9345757B2 (en) | 2016-05-24 |
| EP2863944B1 (en) | 2018-12-19 |
| BR112014032135A2 (pt) | 2017-08-01 |
| JP6195089B2 (ja) | 2017-09-20 |
| RU2012126328A (ru) | 2013-12-27 |
| WO2013191591A1 (en) | 2013-12-27 |
| CU20140145A7 (es) | 2015-04-29 |
| US20150174230A1 (en) | 2015-06-25 |
| CN104470538A (zh) | 2015-03-25 |
| WO2013191591A4 (en) | 2014-04-03 |
| UA116634C2 (uk) | 2018-04-25 |
| EP2863944A4 (en) | 2016-05-11 |
| WO2013191591A9 (en) | 2014-02-13 |
| KR20150034192A (ko) | 2015-04-02 |
| MX355642B (es) | 2018-04-25 |
| EA027981B1 (ru) | 2017-09-29 |
| MX2014016049A (es) | 2015-07-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2510281C2 (ru) | ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА | |
| Goodwin et al. | Brucellosis vaccines for livestock | |
| AU760858B2 (en) | Multicomponent meningococcal vaccine | |
| US7585669B2 (en) | Compositions and methods for treating or preventing pneumococcal infection | |
| US6716432B1 (en) | Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom | |
| SG192060A1 (en) | Vaccines and compositions against streptococcus pneumoniae | |
| CN103304670A (zh) | 结核分枝杆菌特异性融合蛋白疫苗ab及其制备和应用 | |
| JP2015500827A (ja) | Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素ベースのワクチン | |
| Li et al. | Recent progress in pneumococcal protein vaccines | |
| Sun et al. | A short peptide of autotransporter ata is a promising protective antigen for vaccination against acinetobacter baumannii | |
| KR102608642B1 (ko) | 폐렴구균 표면 단백질 a의 선택된 알파 나선 도메인 및 프롤린 풍부 도메인을 조합한 폐렴구균 백신 | |
| Douce et al. | Novel mucosal vaccines generated by genetic conjugation of heterologous proteins to pneumolysin (PLY) from Streptococcus pneumoniae | |
| Chen et al. | Design of bacterial inclusion bodies as antigen carrier systems | |
| CN108025053A (zh) | 百日咳杆菌免疫原性的疫苗组合物 | |
| US20150079132A1 (en) | Evoking protection against streptotoccus pneumoniae incorporating b-cell and t-cell pneumococcal protein antigens and pneumococcal polysaccharides delivered concomitantly | |
| RU2701733C1 (ru) | Живая вакцина на основе штамма пробиотиков ENTEROCOCCUS FAECIUM L3 для профилактики инфекции, вызванной STREPTOCOCCUS PNEUMONIE | |
| AU761394B2 (en) | Superoxide dismutase as a vaccine antigen | |
| JP2002514061A (ja) | 肺炎球菌ｄｎａを投与するための組成物および方法 | |
| Gebara et al. | Adjuvant and immunogenic activities of the 73 kDa N-terminal α-domain of BrkA autotransporter and Cpn60/60 kDa chaperonin of Bordetella pertussis | |
| HK1208632B (en) | Chimeric protein vaccine against pneumonia caused by streptococcus pneumoniae | |
| JP6216371B2 (ja) | ＹｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓＦ１−Ｖ融合タンパク質を発現するＳａｌｍｏｎｅｌｌａＴｙｐｈｉＴｙ２１ａおよびその使用 | |
| EP1947110B1 (en) | Intranasal vaccine for use against disease caused by enterotoxigenic escherichia coli | |
| RU2794625C2 (ru) | Пневмококковая вакцина, сочетающая выбранные альфа-спиральные домены и богатые пролином домены пневмококкового поверхностного белка а | |
| BR102020006421A2 (pt) | Utilização de quimera recombinante nas formas purificada e não purificada para composição de vacina recombinante contra a linfadenite caseosa | |
| Das | Cloning and evaluation of Vibrio cholerae surface proteins in conferring protection against experimental cholera |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HE4A | Change of address of a patent owner |
Effective date: 20180712 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200623 |