ES2630759T3 - Vacuna que comprende conjugados de polisacáridos capsulares de Streptococcus pneumoniae - Google Patents

Vacuna que comprende conjugados de polisacáridos capsulares de Streptococcus pneumoniae Download PDF

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pneumoniae
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Nathalie Marie-Josephe Garcon
Philippe Vincent Hermand
Jan Poolman
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Abstract

Una composición inmunogénica que comprende conjugados de sacáridos capsulares de S. pneumoniae de los serotipos 19A y 19F en la que 19A se conjuga con un primer toxoide bacteriano y 19F se conjuga con un segundo toxoide bacteriano que es toxoide diftérico o CRM197 y que comprende adicionalmente conjugados de los sacáridos capsulares de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C y 23F, en la que el primer toxoide bacteriano es una proteína diferente del segundo toxoide bacteriano.

Description

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DESCRIPCION
Vacuna que comprende conjugados de polisacaridos capsulares de Streptococcus pneumoniae Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a una vacuna de Streptococcus pneumoniae mejorada. Antecedentes de la invencion
Los ninos menores de 2 anos no desarrollan una respuesta inmunitaria contra la mayona de vacunas polisacandicas, por lo que ha sido necesario hacer que los polisacaridos se vuelvan inmunogenicos por conjugacion qmmica con un vehmulo proteico. El acoplamiento del polisacarido, un antigeno independiente de T, a una protema, un antfgeno dependiente de T, confiere al polisacarido las propiedades de dependencia de T que incluye un cambio de isotopo, maduracion de afinidad, e induccion de memoria.
Sin embargo, puede haber problemas con la administracion repetida de conjugados protema-polisacarido, o la combinacion de conjugados protema-polisacarido para formar vacunas multivalentes. Por ejemplo, se ha informado que una vacuna polisacandica (PRP) de Haemophilus influenzae tipo b que utiliza toxoide tetanico (TT) como vehmulo proteico se ensayo en un intervalo de dosificacion con una inmunizacion simultanea con TT (libre) y una vacuna de conjugado polisacarido neumococico-TT siguiendo un calendario vacunal infantil convencional. Al aumentarse la dosificacion de la vacuna neumococica, la respuesta inmunitaria a la parte de polisacarido PRP de la vacuna de conjugado Hib disminma, indicando una interferencia inmunitaria del polisacarido, posiblemente por medio del uso del mismo vehmulo proteico (Dagan y col., Infect Immun. (1998); 66: 2093-2098).
El efecto de la dosificacion del vehmulo proteico sobre la respuesta humoral a la protema misma se ha probado tambien que es multifacetico. En ninos humanos se ha informado que el aumento de un conjugado con toxoide tetanico tetravalente resultaba en una disminucion de la respuesta al vehmulo tetanico (Dagan y col., supra). Los analisis clasicos de estos efectos de la combinacion de vacunas se han descrito como supresion epitopica inducida por vehmulo, que no se entiende completamente, pero que se cree que resulta de una cantidad excesiva de vehmulo proteico (Fattom, Vaccine 17: 126 (1999)). Esto parece que da como resultado la competicion con los linfocitos Th, por los linfocitos B contra el vehmulo proteico, y los linfocitos B contra el polisacarido. Si los linfocitos B contra el vehmulo proteico predominan, no hay suficientes linfocitos Th disponibles para proporcionar el auxilio necesario para los linfocitos B espedficos del polisacarido. Sin embargo, los efectos inmunologicos no han sido consistentes, aumentando en algunos casos la respuesta inmunitaria con la cantidad total de vehmulo proteico, y en otros casos disminuyendo la respuesta inmunitaria.
Por lo tanto se mantienen dificultades tecnicas en la combinacion de conjugados de multiples polisacaridos en una unica formulacion vacunal eficaz.
El Streptococcus pneumoniae es una bacteria Gram-positiva responsable de considerable morbilidad y mortalidad (en particular en jovenes y ancianos), que produce enfermedades invasivas tales como neumoma, bacteriemia y meningitis, y enfermedades asociadas con la colonizacion, tal como otitis media aguda. La tasa de neumoma neumococica en los EE. UU. para las personas de mas de 60 anos de edad se estima que es de 3 a 8 por cada 100.000. En el 20% de los casos da lugar a bacteriemia, y otras manifestaciones tales como meningitis, con una tasa de mortalidad cercana al 30 % incluso con tratamiento antibiotico.
El neumococo esta encapsulado con un polisacarido unido qmmicamente que confiere la especificidad de serotipo. Hay 90 serotipos conocidos de neumococos, y la capsula es el principal determinante de virulencia para los neumococos, ya que la capsula no solo protege la superficie interna de las bacterias del complemento, sino que ella misma es poco inmunogenica. Los polisacaridos son antfgenos independientes de T, y no se pueden procesar o presentar en moleculas del MHC para que interactuen con linfocitos T. Sin embargo, pueden estimular el sistema inmunitario por medio de un mecanismo alternativo que implica el entre-cruzamiento con receptores de superficie de linfocitos B.
Se ha demostrado en varios experimentos que la proteccion contra la enfermedad neumococica invasiva se corresponde muy fuertemente con anticuerpos espedficos de la capsula, y la proteccion es espedfica del serotipo.
El Streptococcus pneumoniae es la causa mas comun de enfermedad bacteriana invasiva y de otitis media en bebes y ninos pequenos. Al igual, los ancianos desarrollan respuestas pobres a las vacunas neumococicas [Roghmann y col., (1987), J. Gerontol. 42:265-270], por lo tanto, aumenta la incidencia de neumoma bacteriana en esta poblacion [Verghese y Berk, (1983) Medicine (Baltimore) 62:271-285].
El documento WO03/051392 desvela un conjugado vacunal de multiples serotipos de Streptococcus
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pneumoniae.
Es un objetivo de la presente invencion desarrollar una formulacion mejorada de un conjugado vacunal de polisacaridos de multiples serotipos.
Breve descripcion de las Figuras
Figura 1. Grafico de barras que muestra la inmunogenicidad de un conjugado de 11 valencias en monos Rhesus ancianos. Las barras mas claras representan la GMC tras dos inoculaciones con el conjugado de 11 valencias en una adyuvante de fosfato de aluminio. Las barras mas oscuras representan la GMC tras dos inoculaciones con el conjugado de 11 valencias en el adyuvante C.
Figura 2. Grafico de barras que muestra los linfocitos B de memoria para PS3 tras la inoculacion del conjugado de 11 valencias en adyuvante C o adyuvante de fosfato de aluminio.
Figura 3. Grafico de barras que muestra la inmunogenicidad contra el polisacarido 19F en ratones Balb/c para los polisacaridos de 4 valencias planos y los conjugados de 4 valencias dPly.
Figura 4. Grafico de barras que muestra la inmunogenicidad contra el polisacarido 22F en ratones Balb/c para los polisacaridos de 4 valencias planos y los conjugados de 4 valencias PhtD
Figura 5. Grafico de barras que muestra la respuesta de IgG anti-22F en ratones Balb/c.
Figura 6. Grafico de barras que muestran los tftulos de opsono-fagocitosis contra 22F en ratones Balb/c.
Figura 7. Grafico de barras que compara la respuesta de IgG inducida por ratones C57B1 jovenes tras la inmunizacion con el conjugado vacunal de 13 valencias formulado con diferentes adyuvantes.
Figura 8. Grafico de barras que muestra la eficacia de proteccion de diferentes combinaciones vacunales en un modelo de neumoma en monos.
Figura 9. Grafico de barras que muestra la respuesta de IgG anti-PhtD en ratones Balb/c tras la inmunizacion con conjugados 22F-PhtD o 22F-AH-PhtD.
Figura 10. Proteccion contra un desafm neumococico tipo 4 en ratones tras la inmunizacion con 22F- PhtD o 22F-AH-PhtD.
Descripcion de la invencion
La presente invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende conjugados de sacaridos capsulares de Streptococcus pneumoniae de los serotipos 19A y 19F en los que 19A se conjuga con un primer toxoide bacteriano y 19F se conjuga con un segundo toxoide es el toxoide difterico o CRM197 y que comprende ademas conjugados de los sacaridos capsulares de S. pneumoniae , 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C y 23F, en los que el primer toxoide bacteriano es una protema diferente del segundo toxoide bacteriano.
La expresion sacarido capsular incluye los polisacaridos capsulares y los oligosacaridos que se puedan derivar de los polisacaridos capsulares. Un oligosacarido contiene al menos 4 restos de azucares. Los terminos conjugar y conjugado se refiere a un sacarido capsular unido covalentemente con un vehmulo proteico.
Para los fines de la presente invencion, “inmunizar un huesped humano contra las exacerbaciones de COPD” o “tratamiento o prevencion de exacerbaciones de COPD” o “reduccion de la gravedad de exacerbaciones de COPD” se refiere a una reduccion de la incidencia o tasa de exacerbaciones de COPD (por ejemplo, una reduccion en la tasa de un 0,1, 0,5, 1, 2, 5, 10, 20 % o mas), por ejemplo en un grupo de pacientes inmunizado con las composiciones o vacunas de la invencion.
La expresion toxoide bacteriano incluye toxinas bacterianas que se han inactivado por mutacion genetica, por tratamiento qmmico o por conjugacion. Los toxoides bacterianos adecuados incluyen el toxoide tetanico, toxoide pertussis, citolisinas bacterianas o pneumolisina. Se han descrito mutaciones de pneumolisina (Ply) que disminuyen la toxicidad de la pneumolisina (documentos WO 90/06951, WO 99/03884). De manera similar, las mutaciones geneticas de la toxina difterica que disminuyen su toxicidad se conocen (vease posteriormente). Los analogos geneticamente detoxicados de toxina difterica incluyen CRM197 y otros mutantes descritos en los documentos US 4.709.017. US 5.843.711. US 5.601.827, y US 5.917.017. El CRM197 es una forma no toxica de la toxina difterica pero no se distingue inmunologicamente de la toxina difterica. El CRM197 se produce por C. diphtheriae infectado por la fase p197tox no toxigenica creada por mutagenesis por nitrosoguanidina del carinofago b toxigenico (Uchida y col., Nature New Biology (1971) 233; 8-11). La protema CRM197 tiene el mismo peso molecular que la toxina difterica pero se diferencia de esta por un unico cambio de bases en el gen estructural. Esto da lugar a un cambio de una glicina por una glutamina en la posicion de aminoacidos 52 que fabrica un fragmento A incapaz de unirse a NAD y por lo
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tanto no toxico (Pappenheimer 1977, Ann Rev, Biochem. 46; 69-94, Rappuoli Applied and Environmental Microbiology Sept 1983 p560-564).
Cuando el primer y segundo toxoides bacterianos son diferentes, significa que tienen una secuencia de aminoacidos diferente.
Por ejemplo, se pueden conjugar el 19A y 19F a toxoide tetanico y toxoide difterico; toxoide tetanico y CRM197; toxoide tetanico y pneumolisina; toxoide difterico y toxoide tetanico; toxoide difterico y CRM197, toxoide difterico y pneumolisina; CRM197 y toxoide tetanico; CRM197 y toxoide difterico; CRM197 y pneumolisina; pneumolisina y toxoide tetanico; pneumolisina y toxoide difterico; o pneumolisina y CRM197, respectivamente.
En una realizacion, ademas de conjugados de sacaridos de S. pneumoniae de 19A y 19F, la composicion inmunogenica comprende ademas conjugados de sacaridos capsulares de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 22F y 23F.
En una realizacion, ademas de los conjugados de sacaridos de S. pneumoniae de 19A y 19F, la composicion inmunogenica comprende conjugados de sacaridos capsulares de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 22F y 23F.
En una realizacion, ademas de los conjugados de sacaridos de S. pneumoniae de 19A y 19F, la composicion inmunogenica comprende conjugados de sacaridos capsulares de S. pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 22F y 23F.
Normalmente la vacuna de Streptococcus pneumoniae de la presente invencion comprendera sacaridos antfgenos capsulares (opcionalmente conjugados), en la que los sacaridos se derivan de al menos 11 serotipos de S. pneumoniae. El numero de sacaridos capsulares de S. pneumoniae puede variar desde al menos 11 serotipos diferentes (o “V”, por valencias) a 23 serotipos diferentes (23V). En una realizacion hay 11, 12, 13, 14 o 15 serotipos diferentes. En otra realizacion de la invencion, la vacuna puede comprender sacaridos de S. pneumoniae y sacaridos no conjugados de S. pneumoniae. Opcionalmente, el numero total de serotipos sacandicos es menor o igual a 23. De manera similar, la vacuna puede comprender 11, 12, 13, 14 o 16 sacaridos conjugados y 12, 11, 10, 9 o 7 respectivamente, sacaridos no conjugados.
En una realizacion la vacuna neumococica multivalente de la invencion se seleccionara de entre los siguientes serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F y 33F, aunque se aprecia que uno o dos serotipos distintos se podnan sustituir dependiendo de la edad del receptor que recibe la vacuna y la localizacion geografica en la que se administrara la vacuna. Una vacuna pediatrica (de bebes) de 12 o 13 valencias tambien puede incluir la formulacion de 11 valencias suplementada con los serotipos 6A y 19A, o 6A y 22F, o 19A y 22F, o 6A y 15B, o 19A y 15B, o 22F y 15B, mientras que una vacuna para ancianos de 13 valencias puede incluir la formulacion de 11 valencias suplementada con los serotipos 19A y 22F, 8 y 12F, o 8 y 15B, o 8 y 19A, o 8 y 22F, o 12F y 15B, o 12F y 19A, o 12F y 22F, o 15B y 19A, o 15B y 22F. una vacuna pediatrica de 14 valencias puede incluir la formulacion de 10 valencias descrita anteriormente suplementada con los serotipos 3, 6a, 19A y 22F; serotipos 6A, 8, 19A y 22F; serotipos 6A, 12F, 19A y 22F; serotipos 6A, 15B, 19A y 22F; serotipos 3, 8, 19A y 22F; serotipos 3, 12f, 19A y 22F; serotipos 3, 15B, 19A y 22F; serotipos 3, 6A, 8 y 22F; serotipos 3, 6A, 12F y 22F; o serotipos 3, 6A, 15B y 22F.
En una realizacion adicional de la invencion, al menos se incluyen 2 o 13 sacaridos antigenicos, por ejemplo una vacuna puede comprender sacaridos capsulares derivados de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F y 23F o sacaridos capsulares derivados de los serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F y 23F, aunque tambien se contemplan sacaridos antigenicos adicionales, por ejemplo de 23 valencias (tales como los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F y 33F).
La vacuna de la presente invencion puede comprender protema D (PD) de Haemophilus influenzae (vease, por ejemplo, el documento EP 0594610). Haemophilus influenzae es un organismo causal clave de otitis media, y los presentes inventores han demostrado que incluyendo esta protema en una vacuna de Streptococcus pneumoniae se proporcionara un nivel de proteccion contra la otitis media relacionada con Haemophilus influenzae (referencia a publicacion POET). En una realizacion, la composicion vacunal comprende la protema D. En un aspecto, la PD esta presente como un vehmulo proteico para uno o mas de los sacaridos. En otro aspecto, la protema D podna estar presente en la composicion vacunal como una protema libre. En un aspecto mas, la protema D esta presente como un vehmulo proteico y como una protema libre. La protema D se puede utilizar como una protema de longitud completa o como un fragmento (documento WO0056360). En un aspecto adicional, la protema D esta presente como un vehmulo proteico para la mayona de los sacaridos, por ejemplo 6, 7, 8, 9 o mas de los sacaridos se pueden conjugara a la
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protema D. En este aspecto, la protema D puede estar presente tambien como una protema libre.
La vacuna de la presente invencion comprende uno, dos, o mas tipos diferentes de vehmulos proteicos. Cada tipo de vehmulo proteico puede actuar como un vehmulo para mas de un sacarido, cuyos sacaridos pueden ser el mismo o diferentes. Por ejemplo, los serotipos 3 y 4 se pueden conjugar con el mismo vehmulo proteico, sea con la misma molecula de vehmulo proteico o con diferentes moleculas del mismo vehmulo proteico. En una realizacion, dos o mas sacaridos diferentes pueden conjugarse, o a la misma molecula de vehmulo proteico o a diferentes moleculas del mismo vehmulo proteico.
Cualquiera de los sacaridos capsulares de Streptococcus pneumoniae presentes en la composicion inmunogenica de la invencion aparte de 19A y 19F se puede conjugar con un vehmulo proteico seleccionado independientemente de entre el grupo que consiste en fusiones de TT, DT, CRM197, fragmento C de TT, PhtD, PhtBE, o PhtDE (particularmente los descritos en los documentos WO 01/98334 y WO 03/54007), pneumolisina detoxicada y protema D. Una lista mas completa de vehmulos proteicos que se pueden utilizar en los conjugados de la invencion se presenta posteriormente.
El vehmulo proteico conjugado con uno o mas de los sacaridos capsulares de S. pneumoniae en los conjugados presentes en las composiciones inmunogenicas de la invencion es opcionalmente un miembro de la familia de las protemas de la tnada polihistidina (Pht), fragmentos o protemas de fusion de los mismos. Las protemas PhtA, PhtB, PhtD o PhtE pueden tener una secuencia de aminoacidos que comparte un 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad con una secuencia que se desvela en los documentos WO 00/37105 o WO 00/39299 (por ejemplo, con la secuencia de aminoacidos 1-838 o 21-838 de SEQ ID NO: 4 del documento WO 00/37105 para PhtD). Por ejemplo, las protemas de fusion estan compuestos por la longitud completa o fragmentos de 2, 3 o 4 de PhtA, PhtB, PhtD, PhtE. Ejemplos de protemas de fusion son PhtA/B, PhtA/D, PhtA/E, PhtB/A, PhtB/D, PhtB/E. PhtD/A. PhtD/B, PhtD/E, PhtE/A, PhtE/B y PhtE/D, en las que las protemas estan unidas con la primera mencionada en el extremo N (vease, por ejemplo, el documento WO01/98334).
Cuando los fragmentos de protema Pht se utilizan (por separado o como parte de una protema de fusion), cada fragmento contiene opcionalmente uno o mas motivos de triada de histidina y/o regiones superenrolladas de dichos polipeptidos. Un motivo de triada de histidina es la parte de polipeptido que tienen la secuencia HxxHxH donde H es histidina y x es un aminoacido distinto de histidina. Una region superenrollada es una region prevista por el algoritmo “Coils” de Lupus, A y col., (1991) Science 252; 1162-1164. En una realizacion el o cada fragmento incluye uno o mas motivos de triada de histidina asf como al menos una region superenrollada. En una realizacion, el o cada fragmento contiene exactamente o al menos 2, 3, 4, o 5 motivos de tnada de histidina (opcionalmente, con la secuencia de Pht nativa entre las 2 o mas tnadas, o secuencia intra-tnada que es mas de un 50, 60, 70, 80, 90 o 100 % identica a una secuencia Pht intra-tnada neumococica nativa - por ejemplo, las secuencia intra-tnada que se muestra en SEQ ID NO: 4 del documento WO 00/37105 para PhtD). En una realizacion, el o cada fragmento contiene exactamente o al menos 2, 3, o 4 regiones superenrolladas. En una realizacion una protema Pht que se desvela en el presente documento incluye la protema de longitud completa con la secuencia de senal unida, la protema de longitud completa madura con el peptido de senal (por ejemplo, 20 aminoacidos en el extremo N) eliminado, las variantes de origen natural de la protema Pht y fragmentos inmunogenicos de protema Pht (por ejemplo, los fragmentos que se han descrito anteriormente o polipeptidos que comprenden al menos 15 o 20 aminoacidos contiguos de una secuencia de aminoacidos de los documentos Wo 00/37105 o WO 00/39299 en los que dicho polipeptido es capaz de producir una respuesta inmunitaria espedfica para dicha secuencia de aminoacidos de los documentos WO 00/37105 o WO 00/39299).
En particular, el termino “PhtD” como se utiliza en el presente documento incluye la protema de longitud completo con la secuencia de senal unida, la protema de longitud completa madura con el peptido de senal eliminado (por ejemplo 20 aminoacidos del extremo N), variantes de PhtD de origen natural y fragmentos inmunogenicos de PhtD (por ejemplo, fragmentos como se han descrito anteriormente o polipeptidos que comprenden al menos 15 o 20 aminoacidos contiguos de una secuencia de aminoacidos de los documentos Wo 00/37105 o WO 00/39299 en los que dicho polipeptido es capaz de producir una respuesta inmunitaria espedfica para dicha secuencia de aminoacidos de los documentos Wo 00/37105 o WO 00/39299 (por ejemplo, SEQ ID NO: 4 de WO 00/37105 para PhtD).
Si el vehmulo proteico es el mismo para 2 o mas sacaridos de la composicion, los sacaridos se podnan conjugar con la misma molecula del vehmulo proteico (moleculas de vehmulo que tienen 2 o mas sacaridos diferentes conjugados con ellas) [vease por ejemplo, el documento WO 04/083251]. De manera alternativa los sacaridos pueden estar cada uno conjugado por separado a diferentes moleculas del vehmulo proteico (cada molecula de vehmulo proteico solo tiene un tipo de sacarido conjugado con ella).
Ejemplos de vehmulos proteicos que se pueden utilizar en la presente invencion estan DT (toxoide difterico), TT (toxoide tetanico) o fragmento C de RR, DT CRM197 (un mutante de DT), otros mutantes puntuales de DT, tales como CRM176, CRM228, CRM 45 (Uchida y col., J. Biol. Chem. 218; 3838-3844, 1973); CRM 9, CRM 45, CRM102, CRM 103 y CRM107 y otras mutaciones descritas por Nicholls y Youle en Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992; eliminacion o mutacion de Glu-148 en Asp, Gln o Ser y/o Ala 158
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por Gly y otras mutaciones desveladas en los documentos US 4709017 o US 4950740; o el fragmento desvelado en el documento US 5843711, la pneumolisina neumococica (Kuo y col., (1995) Infect Immun 63; 2706-13) incluyendo la Ply detoxificada de alguna manera, por ejemplo, dpLY-GMBS (documentos WO 04081515, PCT/EP2005/010258) o dPLY-formol, PhtX, que incluyen PhtA, PhtB, PhtD, PhtE y fusiones de protemas Pht, por ejemplo, fusiones PhtDE, fusiones PhtBE (documentos WO 01/98334 y WO 03/54007), (se describe la Pht A- E con mas detalle posteriormente), OMPC (protema de membrana externa meningococica - extrafda habitualmente del serogrupo B de N. meningitidis - documento EP0372501), PorB (de N. meningitidis), PD (protema D de Haemophilus influenzae - vease por ejemplo, el documento EP 0 594 610 B), o equivalentes inmunologicamente funcionales de los mismos, peptidos sinteticos (documentos EP0378881, EP0427347), protemas de choque termico (documentos WO 93/17712, WO 94/03208), protemas pertussis (documentos WO 98/58668, EP0471177), citocinas, linfocinas, factores de crecimiento u hormonas (documento WO 91/01146), protemas artificiales que comprenden multiples epftopos de linfocitos T CD4+ humanos de antigenos derivados de distintos agentes patogenos (Falugi y col., (2001) Eur J Immunol 31; 3816-3824) tales como la protema N19 (Baraldoi y col., (2004) Infect Immun 72; 4884-7), protema PspA de superficie neumococica (documento WO 02/091998), protemas de captacion de hierro (documento Wo 01/72337), toxina A o B of C. difficile (documento WO 00/61761).
Nurkka y col., Pediatric Infectious Disease Journal. 23(11):1008-14, Nov de 2004. describfan una vacuna neumococica de 11 valencias con todos los serotipos conjugados a la PD. Sin embargo, los presentes
inventores han demostrado que la actividad de opsono-fagocitosis mejoraba por los anticuerpos inducidos con
conjugados que teman 19F conjugado con DT en comparacion con 19F conjugado con PD. Ademas, los presentes inventores han demostrado que se aprecia una reactividad cruzada mayor con 19A cuando se conjuga 19F con DT. Por lo tanto, una caractenstica de la composicion de la presente invencion es que el serotipo 19F se conjuga con DT o CRM197. En un aspecto, el serotipo 19F se conjuga con DT. Tambien es una caractenstica de la invencion que el serotipo 19A se conjuga con un toxoide bacteriano, por ejemplo TT, pneumolisina, DT o CRM197. Los serotipos de sacarido restantes de la composicion inmunogenica se pueden conjugar todos con uno o mas vehmulos proteicos que no sean DT (es decir, solamente el 19F se conjuga con DT), o pueden dividirse entre uno o mas vehmulos proteicos que no sean DT y el DT mismo. En una
realizacion, 19F se conjuga con DT o CRM197 y todos los serotipos restantes se conjugan con PD. En una
realizacion adicional, 19F se conjuga con DT o CRM 197, y los restantes serotipos se dividen entre PD, y TT o DT o CRM197. En una realizacion adicional, el 19F se conjuga con DT o CRM197 y no se conjuga mas de un sacarido con TT. En un aspecto de esta realizacion, dicho un sacarido es 18C o 12F. En una realizacion adicional, 19F se conjuga con DT o CRM 197, y no mas de dos sacaridos se conjugan con TT. En una realizacion adicional, 19F se conjuga con DT o CRM197, y el resto de serotipos se dividen entre PD, TT y DT o CRM197. En una realizacion adicional, 19F se conjuga con DT o CRM197, y el resto de serotipos se dividen entre PD, TT y pneumolisina. En una realizacion adicional, 19F se conjuga con DT o CRM197, y los restantes serotipos se dividen entre PD, TT y CRM197. En una realizacion adicional, 19F se conjuga con Dt o CRM197, y los restantes serotipos se dividen entre PD, TT, pneumolisina y opcionalmente PhtD o la protema de fusion PhtD/E. En una realizacion adicional, 19F se conjuga con DT o CRM197, 19A se conjuga con pneumolisina o TT y los serotipos restantes se dividen entre pD, TT, pneumolisina y opcionalmente PhtD o la protema de fusion PhtD/E. En una realizacion adicional, 19F se conjuga con DT o CRM197, 19A se conjuga con pneumolisina o TT, un sacarido adicional se conjuga con TT, un sacarido adicional se conjuga con PhtD o PhtD/E y todos los sacaridos adicionales se conjugan con PD. En una realizacion adicional 19F se conjuga con DT o CRM 197, 19A se conjuga con pneumolisina, un sacarido adicional se conjuga con TT, un sacarido adicional se conjuga con pneumolisina, 2 sacaridos adicionales se conjugan con PhtD o PhtD/E y todos los sacaridos adicionales se conjugan con PD.
En una realizacion, la composicion inmunogenica de la invencion comprende protema D de Haemophilus influenzae. En esta realizacion, si la PD no es una de los vehmulos proteicos utilizados para conjugase con cualquier sacarido distinto del 19F, por ejemplo, el 19F se conjuga con DT mientras que los otros serotipos se conjugan con uno o mas vehmulos proteicos que no son PD, entonces la PD estara presente en la composicion vacunal como una protema libre. Si la PD es uno de los vehmulos proteicos utilizados para conjugar sacaridos distintos de 19F, entonces PD puede estar presente opcionalmente en la composicion como una protema libre.
El termino “sacarido” a lo largo de la presente memoria descriptiva puede indicar un polisacarido u oligosacarido e incluye ambos. Los polisacarido se afslan de bacterias y se pueden modificar de tamano hasta cierto grado por procedimientos conocidos (vease, por ejemplo, los documentos EP497524 y EP497525) y opcionalmente por microfluidizacion. Los polisacaridos se pueden modificar de tamano con el fin de reducir la viscosidad en muestras de polisacarido y/o para mejorar la filtrabilidad de productos conjugados. Los oligosacaridos tienen un pequeno numero de unidades repetidas (tfpicamente 5-30 unidades de repeticion) y son normalmente polisacaridos hidrolizados.
Los polisacaridos capsulares de Streptococcus pneumoniae comprenden unidades de oligosacarido repetidas que pueden contener hasta 8 restos de azucares. Para una revision de las unidades de oligosacarido de los serotipos clave de Streptococcus pneumoniae, vease JONES, Christopher. Vaccines based on the cell surface
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carbohydrates of pathogenic bacteria. An. Acad. Bras. Cienc., Junio de 2005, vol. 77, n° 2, p. 293-324. ISSN 0001-3765. En una realizacion, un antfgeno sacarido capsular puede ser un polisacarido de longitud completa, sin embargo en otros puede ser una unidad de oligosacarido, o mas corta que una cadena de sacarido de longitud nativa de unidades repetidas de oligosacaridos. En una realizacion todos los sacaridos presentes en la vacuna son polisacarido. Los polisacaridos de longitud completa se pueden “modificar de tamano”, es decir, su tamano se puede reducir por distintos procedimientos tales como por tratamiento de hidrolisis, tratamiento con peroxido de hidrogeno, modificacion de tamano por emulsiflex® seguido por un tratamiento con peroxido de hidrogeno para generar fragmentos de oligosacarido o microfluidizacion.
Los inventores tambien han senalado que el foco de la tecnica ha sido utilizar oligosacaridos para facilitar la produccion de conjugados. Los inventores han descubierto que utilizando conjugados de polisacarido nativo o ligeramente modificado de tamano, se pueden conseguir una o mas de las siguientes ventajas: 1) un conjugado que tienen alta inmunogenicidad que es filtrable, 2) la relacion de polisacarido respecto a protema en el conjugado se puede alterar de manera que la relacion de polisacarido respecto a protema (p/p) en el conjugado pueda aumentarse (lo que puede tener un efecto sobre el efecto de supresion del vehmulo), 3) los conjugados inmunogenicos que tienden a la hidrolisis se pueden estabilizar por el uso de sacaridos mas grandes en la conjugacion. El uso de polisacaridos mas grandes puede dar como resultado mas entrecruzamiento con el vehmulo conjugado y puede disminuir la liberacion de sacarido libre del conjugado. Las vacunas de conjugado descritas en la tecnica anterior tienden a despolimerizar los polisacaridos antes de la conjugacion con el fin de mejorar la conjugacion. Los presentes inventores han encontrado que las vacunas de conjugado sacarido que mantienen un tamano mayor de sacarido pueden proporcionar una buena respuesta inmunitaria contra la enfermedad neumococica.
La composicion inmunogenica de la invencion puede comprender por lo tanto uno o mas conjugados de sacaridos en los que el tamano medio (media de peso del peso molecular; Pm) de cada sacarido antes de la conjugacion esta por encima de los 80 kDa, 100 kDa, 200 kDa, 300 kDa, 400 kDa, 500 kDa o 1000 kDa. En una realizacion el conjugado tras la conjugacion debena ser filtrable facilmente a traves de un filtro de 0,2 micras de manera que se obtiene un rendimiento de mas de 50, 60, 70, 80, 90 o 95 % post filtracion en comparacion con la muestra pre-filtracion.
Para los fines de la invencion, “polisacarido nativo” se refiere a un sacarido que no se ha sometido a un procedimiento, el fin del cual es reducir el tamano del sacarido. Un polisacarido se puede convertir en ligeramente reducido de tamano durante los procedimientos normales de purificacion. Dicho sacarido sigue siendo nativo. Solamente si el polisacarido se ha sometido a tecnicas de modificacion de tamano se considerana que el polisacarido no es nativo.
Para los fines de la invencion “modificado por un factor de hasta x2” significa que el sacarido se somete a un procedimiento con la intencion de reducir el tamano del sacarido pero que mantenga un tamano mayor de la mitad del tamano del polisacarido nativo. x3, x4, etc., se tienen que interpretar de la misma manera, es decir, el sacarido se somete a un procedimiento con la intencion de reducir el tamano del polisacarido pero que mantenga un tamano mayor de un tercio, un cuarto, etc. del tamano del polisacarido nativo. En un aspecto de la invencion, la composicion inmunogenica que comprende sacaridos de Streptococcus pneumoniae de al menos 10 serotipos conjugados con un vehmulo proteico, en el que al menos 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o cada sacarido de
5. pneumoniae es un polisacarido nativo.
En un aspecto de la invencion, la composicion inmunogenica comprende sacaridos de Streptococcus pneumoniae de al menos 10 serotipos conjugados con un vehmulo proteico, en el que al menos 1, 2 ,3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 o cada sacarido de S. pneumoniae esta modificado en tamano por un factor de hasta x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9 o x10. En una realizacion de este aspecto la mayona de los sacaridos, por ejemplo 6, 7 ,9 o mas de los sacaridos estan modificados de tamano por un factor de hasta x2, x3, x4, x5, x6, x7, x8, x9 o x10.
El peso molecular, o media del peso molecular de un sacarido del presente documento se refiere al peso medio del peso molecular (Pm) del sacarido medido antes de la conjugacion como se mide por MALLS.
La tecnica MALLS es bien conocida en la tecnica y se lleva a cabo normalmente como se describe en el Ejemplo 2. Para el analisis MALLS de sacaridos neumococicos, se pueden utilizar dos columnas (TSKG6000 y 5000PWxl) en combinacion y los sacaridos se eluyen en agua. Los sacaridos se detectan utilizando un detector de dispersion de luz (por ejemplo un DSP Wyatt Dawn equipado con un laser de 10 mW a 488 nm) y un refractometro inferometrico (por ejemplo un DSP Wyatt Otilab equipado con una celda P100 y un filtro rojo a 498 nm).
En una realizacion los sacaridos de S. pneumoniae son polisacaridos nativos o polisacaridos nativos que se han reducido de tamano durante un procedimiento de extraccion normal.
En una realizacion los sacaridos de S. pneumoniae se modifican de tamano por escision mecanica, por ejemplo, por microfluidizacion o sonicacion. La microfluidizacion y sonicacion tienen la ventaja de disminuir el tamano de los polisacaridos nativos mas grandes los suficiente para proporcionar un conjugado filtrable. La
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modificacion del tamano es por un factor de no mas de x20, x10, x8, x6, x5, x4, x3, o x2.
En una realizacion, la composicion inmunogenica comprende conjugados de S. pneumoniae que se producen a partir de una mezcla de polisacaridos nativos y sacaridos que se han modificado de tamano por un factor de no mas de x20. En un aspecto de esta realizacion, la mayona de los sacaridos, por ejemplo 6, 7, 8 o mas de los sacaridos se modifican de tamano por un factor de hasta x2, x3, x4, x5, o x6.
En una realizacion, el sacarido de Streptococcus pneumoniae se conjuga con el vehmulo proteico por medio de un engarce, por ejemplo un engarce bifuncional. El engarce es opcionalmente heterobifuncional u homobifuncional, que tienen por ejemplo un grupo amino reactivo y un grupo de acido carboxflico reactivo, 2 grupos amino reactivos o dos grupos de acido carboxflico reactivos. El engarce tiene por ejemplo entre 4 y 20, 4 y 12, 5 y 10 atomos de carbono. Un engarce posible es ADH. Otros engarces incluyen B-propionamido (documento WO 00/10599), nitrofenil-etilamina (Gever y col., (1979) Med. Microbiol. Immunol. 165; 171-288), haloalquil halidos (documento US4057685), enlaces glucosfdicos (documentos US4673574, US4808700), hexano diamina y acido 6-aminocaproico (documento US4459286). En una realizacion, se utiliza ADH como engarce para conjugar el sacarido del serotipo 18C.
Los conjugados de sacaridos presentes en las composiciones inmunogenicas de la invencion se pueden preparar por cualquier tecnica de acoplamiento conocida. El procedimiento de conjugacion podfa basarse en la activacion del sacarido con tetrafluoroborato de 1-ciano-4-dimetil-amino piridinio (CDAP) para formar un ester de cianato. El sacarido activado puede por lo tanto acoplarse directamente o por medio de un grupo espaciador (engarce) a un grupo amino del vehmulo proteico. Por ejemplo, el espaciador podna ser cistamina o cisteamina para dar un polisacarido tiolado que se podna acoplar al vehmulo por medio de un enlace tioeter obtenido tras la reaccion con un vehmulo proteico activado por maleimida (por ejemplo, utilizando GMBS) o un vehmulo proteico haloacetilado (por ejemplo utilizando yodoacetimida [por ejemplo, etil yodoacetimida HCL] o N-succinimidil bromoacetato o SIAB, o SIA, o SBAP). Opcionalmente, el ester de cianato (opcionalmente producido por qrnmica CDAP) se acopla con hexano diamina o ADH y el sacarido amino derivado se conjuga con el vehmulo proteico utilizando qrnmica de carbodiimida (por ejemplo, EDAC o EDC) por medio de un grupo carboxilo del vehmulo proteico. Dichos conjugados se describen en la solicitud publicada PCT WO 93/15760 Uniformed Services University y documentos WO 95/08348 y WO 96/29094.
Otras tecnicas adecuadas utilizan carbodiimidas, carbiinidas, hidrazidas, esteres activos, norborano, acido p- nitrobenzoico, N-hidroxisuccinimida, S-NHS, EDC, TSTU. Muchos se describen en el documento WO 98/42721. La conjugacion puede implicar un engarce carbonilo que se puede formar por la reaccion de un grupo hidroxilo libre del sacarido con CDI (Bethell y col., J. Biol. Chem. 1979, 254; 2572-4, Hearn y col., J. Chromatogr. 1981.218; 509-18) seguida por la reaccion con una protema para formar un enlace carbamato. Esto puede implicar la reduccion del extremo anomerico en un grupo hidroxilo primario, opcional proteccion/desproteccion del grupo hidroxilo primario, reaccion del grupo hidroxilo primario con CDI para formar un carbamato CDI intermedio y acoplamiento del carbamato CDI intermedio con un grupo amino de una protema.
Los conjugados se pueden preparar tambien por procedimientos de aminacion reductora directa como se describe en los documentos US 4365170 (Jennings) y US 4673574 (Anderson). Otros procedimientos se describen en los documentos EP-0-161-188, EP-208375 y EP-0-477508.
Un procedimiento adicional implica el acoplamiento de un sacarido activado por bromuro de cianogeno (o CDAP) derivado con dihidracida de acido adfpico (ADH) con el vehmulo proteico por condensacion de carbodiimida (Chu C. y col., Infect. Immunity, 1983 245 256), por ejemplo utilizando EDAC.
En una realizacion, se une un grupo hidroxilo (opcionalmente un grupo hidroxilo activado por ejemplo, un grupo hidroxilo activado para fabricar un ester de cianato [por ejemplo, utilizando CDAP]) de un sacarido con un grupo amino o carboxflico de una protema sea directa o indirectamente (por medio de un engarce). Cuando esta presente un engarce, el grupo hidroxilo del sacarido se une opcionalmente con un grupo amino de un engarce, por ejemplo utilizando la conjugacion CDAP. Un grupo amino adicional en el engarce (por ejemplo, ADH) que se puede conjugara un grupo de acido carboxflico de una protema, por ejemplo utilizando qrnmica de carbodiimida, por ejemplo utilizando EDAC. En una realizacion, los sacaridos capsulares neumococicos se conjugan al engarce primero antes de que se conjugue el engarce al vehmulo proteico. De manera alternativa, el engarce se puede conjugar al vehmulo antes de la conjugacion con el sacarido.
Tambien se pueden utilizar una combinacion de tecnicas, estando algunos conjugados sacarido-protema preparados por CDAP, y algunos por aminacion reductora.
En general se pueden utilizar los siguientes tipos de grupos qrnmicos de un vehmulo proteico para el acoplamiento/conjugacion:
A) Carboxilo (por ejemplo por medio de acido aspartico o acido glutamico). En una realizacion este grupo se une a los grupos amino de los sacaridos directamente o a un grupo amino de un engarce con qrnmica
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carbodiimida, por ejemplo con EDAC.
B) Grupo amino (por ejemplo, por medio de lisina). En una realizacion, este grupo se une a grupos carboxilos de los sacaridos directamente o a un grupo carboxilo en un engarce con qmmica carbodiimida, por ejemplo, con EDAC. En otra realizacion este grupo se une a grupos hidroxilo activados con CDAP o CNBr en los sacaridos directamente o a dichos grupos en un engarce; a sacaridos o engarces que tienen un grupo aldehfdo; a sacaridos o engarces que tienen un grupo ester de succinimida.
C) Sulfhidrilo (por ejemplo, por medio de cistema). En una realizacion este grupo se une a un sacarido o engarce bromo o cloro acetilado con qmmica maleimida. En una realizacion, este grupo esta activado/modificado por bis diazobencidina.
D) Grupo hidroxilo (por ejemplo, por medio de tirosina). En una realizacion este grupo se activa/modifica con bis-diazobencidina.
E) Grupo imidazolilo (por ejemplo, por medio de histidina). En una realizacion, este grupo se activa/modifica con bis-diazobencidina.
F) Grupo guanidilo (por ejemplo, por medio de arginina).
G) Grupo Indolilo (por ejemplo, por medio de triptofano).
En un sacarido, en general se pueden utilizar los siguientes grupos para un acoplamiento: OH, COOH o NH2. Se pueden generar grupos aldehfdo tras diferentes tratamientos conocidos en la tecnica tal como: peryodato, hidrolisis acida, peroxido de hidrogeno, etc.
Estrategias de acoplamiento directo:
Sacarido-OH + CNBr o CDAP--------- > ester de cianato + NH2-Prot —> conjugado
Sacarido-aldehndo + NH2-Prot —> base Schiff + NaCNBH3 —> conjugado Sacarido-COOH + NH2-Prot + EDAC —> conjugado Sacarido-NH2 + COOH-Prot + EDAC —> conjugado
Estrategias de acoplamiento indirecto por medio de un espaciador (engarce):
Sacarido-OH + CNBr o CDAP ^ ester de cianato + NH2 -NH2 ^ Sacarido - NH2 + COOH - Prot + EDAC ^ conjugado
Sacarido-OH + CNBr o CDAP ^ ester de cianato + NH2 - SH ^ Sacarido - SH + SH-Prot (Protema nativa con una cistema expuesta u obtenida tras la modificacion de grupos amino de la protema, por ejemplo, por SPDP) ^ Sacarido-S-S-Prot
Sacarido-OH + CNBr o CDAP ^ ester de cianato + NH2 - SH ^ Sacarido—SH + maleimida - Prot (modificacion de grupos amino) ^ conjugado
Sacarido-OH + CNBr o CDAP ^ ester de cianato + NH2 - SH ^ Sacarido-SH + haloacetilado-Prot ^ Conjugado
Sacarido-COOH + EDAC + NH2 - NH2 ^ Sacarido - NH2 + EDAC + COOH-Prot ^ conjugado
Sacarido-COOH + EDAC+ NH2 - SH ^ Sacarido - SH + SH-Prot (Protema nativa con una cistema expuesta u obtenido tras la modificacion de grupos amino de la protema, por ejemplo, por SPDP) ^ Sacarido-S-S- Prot
Sacarido-COOH + EDAC+ NH2 - SH ^ Sacarido - SH + maleimida-Prot (modificacion de grupos amino) ^ conjugado
Sacarido-COOH + EDAC + NH2 - SH ^ Sacarido-SH + haloacetilado-Prot ^ Conjugado Sacarido-Aldelmdo + NH2 - NH2 ^ Sacarido - NH2 + EDAC + COOH-Prot ^ conjugado Nota: en vez de EDAC como anteriormente, se puede utilizar cualquier carbodiimida.
En resumen, los tipos de grupo qmmico del vehmulo proteico que se puede utilizar en general para el acoplamiento con un sacarido son grupos amino (por ejemplo sobre restos de lisina), grupos COOh (por ejemplo sobre restos de acido aspartico y acido glutamico) y grupos SH (si estan accesibles) (por ejemplo sobre restos de cistema).
Opcionalmente la relacion de vehmulo proteico con respecto a sacarido de S. pneumoniae es entre 1:5 y 5:1; 1:2 y 2,5:1, 1:1 y 2:1 (p/p). En una realizacion, la mayona de los conjugados, por ejemplo 6, 7, 8, 9 o mas de
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los conjugados tienen una relacion de vehmulo proteico respecto a sacarido que es mayor de 1:1, por ejemplo, 1,1:1, 1,2:1, 1,3:1, 1,4:1, 1,5:1 o 1,6:1.
En una realizacion, se conjuga al menos un sacarido de S. pneumoniae con un vehmulo proteico por medio de un engarce utilizando CDAP y EDAC. Por ejemplo, el 18C se puede conjugar con una protema por medio de un engarce (por ejemplo los que tienen dos grupos hidracino en sus extremos tal como ADH) utilizando CDAP y EDAC como se ha descrito anteriormente. Cuando se utiliza un engarce, se puede utilizar CDAP para conjugar el sacarido a un engarce y entonces se puede utilizar EDAC para conjugar el engarce a la protema, o de manera alternativa, se puede utilizar primero EDAC para conjugar el engarce a la protema, tras lo cual se puede utilizar CDAP para conjugar el engarce al sacarido.
En general, la composicion inmunogenica de la invencion puede comprender una dosis de cada conjugado de sacarido de entre 0,1 y 20 |jg, 1 y 10 |jg o 1 y 3 |jg de sacarido.
En una realizacion, la composicion inmunogenica de la invencion contiene cada uno de los sacaridos capsulares de S. pneumoniae a una dosis entre 0,1-20 jig; 0,5-10 jig; 0,5-5 jig o 1-3 jig de sacarido. En una realizacion, los sacaridos capsulares pueden estar presentes a diferentes dosificaciones, por ejemplo, algunos sacaridos capsulares pueden estar presentes a una dosis de exactamente 1 jig o algunos sacaridos capsulares pueden estar presentes a una dosis de exactamente 3 jig. En una realizacion, los sacaridos de los serotipos 3, 18C y 19F (o 4, 18C y 19F) estan presentes a una dosis mayor que otros sacaridos. En un aspecto de esta realizacion, los serotipos 3, 18C y 19F (o 4, 18C y 19F) estan presentes a una dosis de alrededor o exactamente 3 jig mientras que otros sacaridos en la composicion inmunogenica estan presentes a una dosis de alrededor o exactamente 1 jig.
“Alrededor” o “aproximadamente” se definen como un 10 % mas o menos de la figura dada para los fines de la invencion.
En una realizacion, al menos uno de los sacaridos capsulares de S. pneumoniae esta directamente conjugado a un vehmulo proteico. Opcionalmente el al menos uno de los sacaridos capsulares de S. pneumoniae esta directamente conjugado por CDAP. En una realizacion, la mayona de los sacaridos capsulares, por ejemplo 5, 6, 7, 8, 9 o mas estan directamente unidos al vehmulo proteico por CDAP (vease los documentos WO 95/08348 y WO 96/29094).
La composicion inmunogenica puede comprender protemas de Streptococcus pneumoniae, denominadas en el presente documento como protemas de Streptococcus pneumoniae de la invencion. Dichas protemas se pueden utilizar como vehmulos proteicos, o pueden estar presentes como protemas libres, o pueden estar presentes como vehmulos proteicos y como protemas libres. Las protemas de Streptococcus pneumoniae de la invencion se exponen en la superficie, al menos durante parte del ciclo vital del neumococo, o son protemas que se secretan o liberan por el neumococo. Opcionalmente las protemas de la invencion se seleccionan de entre las siguientes categonas, tal como protemas que tienen el motivo de secuencia de senal Tipo II, LXXC (donde X es cualquier aminoacido, por ejemplo, Sp101), protemas que tienen un motivo LPXTG (donde X es cualquier aminoacido, por ejemplo Sp128, Sp130), y toxinas (por ejemplo, Ply). Ejemplos de estas categonas (o motivos) son las siguientes protemas, o equivalentes inmunologicamente funcionales de las mismas.
En una realizacion, la composicion inmunogenica de la invencion comprende al menos 1 protema que se selecciona de entre el grupo que consiste en la familia de la tnada de polihistidina (PhtX), familia de protemas que se unen a colina (CbpX), CbpX trucadas, familia LytX, LytX truncadas, protemas quimericas (o fusiones) de CbpXtruncada-LytX truncada, pneumolisina (Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125, y Sp133. En una realizacion adicional, la composicion inmunogenica comprende 2 o mas protemas que se seleccionan de entre el grupos que consiste en la familia de tnadas de polihistidina (PhtX), familia de protemas de union a colina (CbpX), CbpX truncadas, familia LytX, LytX truncadas, protemas quimericas (o fusiones) de CbpX truncada-LytX truncada, pneumolisina (Ply), PspA, PsaA y Sp128. En una realizacion mas, la composicion inmunogenica comprende 2 o mas protemas que se seleccionan de entre el grupos que consiste en la familia de tnadas de polihistidina (PhtX), familia de protemas de union a colina (CbpX), CbpX truncadas, familia LytX, LytX truncadas, protemas quimericas (o fusiones) de CbpXtruncada-LytX truncada, pneumolisina (Ply) y Sp128.
La familia Pht (tnadas de polihistidina) comprende las protemas PhtA, PhtB, PhtD, y PhtE. La familia se caracteriza por una secuencia de lipidacion, dos dominios separados por una region rica en prolina y varias tnadas de histidina, posiblemente implicadas en la union metalica o de nucleosidos o actividad enzimatica, (3-5) regiones superenrolladas, una extremo N conservado y un extremo C heterogeneo. Esta presente en todas las cepas de neumococos ensayados. Tambien se han encontrado protemas homologas en otros estreptococos y neiserias. En una realizacion de la invencion, la protema Pht de la invencion es PhtD. Se entiende, sin embargo, que los terminos Pht A, B, D, y E se refieren a protemas que tienen las secuencias desveladas en las referencias posteriores asf como a las variantes de origen natural (y artificial) de las mismas que tienen una homologfa de secuencia con al menos un 90 % de identidad con las protemas a las
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que se hace referencia. Opcionalmente es al menos un 95 % de identidad o al menos un 97 % de identidad.
Con respecto a las protemas PhtX, la PhtA se desvela en el documento WO 98/18930, y a la que tambien se hace referencia como Sp36. Como se ha senalado anteriormente, es una protema de la familia de tnadas de polihistidina que tiene el motivo de senal tipo II de LXXC. La PhtD se desvela en el documento WO 00/37105, y a la que tambien se hace referencia como Sp036D. Como se ha senalado anteriormente, tambien es una protema de la familia de tnadas de polihistidina y tiene el motivo de senal tipo II LXXC. PhtB se desvela en el documento, y a la que tambien se hace referencia como Sp036B. Otro miembro de la familia PhtB es el polipeptido de degradacion C3, como se desvela en el documento WO 00/17370. Esta protema tambien es de la familia de tnadas de polihistidina y tiene el motivo de senal tipo II LXXC. Por ejemplo, un equivalente inmunologicamente funcional es la protema Sp42 desvelada en el documento WO 98/18930. Una PhtB truncada (aproximadamente de 79 kD) se desvela en el documento WO99/15675 que tambien se considera un miembro de la familia PhtX. La PhtE se desvela en el documento WO00/30299 y a la que se hace referencia como BVH-3. Cuando se hace referencia en el presente documento a cualquier protema Pht, dignifica que se pueden utilizar los fragmentos inmunogenicos o fusiones de los mismos de la protema Pht. Por ejemplo, una referencia a PhtX incluye los fragmentos inmunogenicos o fusiones de los mismos de cualquier protema Pht. Una referencia a PhtD o PhtB tambien hace referencia a fusiones PhtDE o PhtBE como se encuentran, por ejemplo, en el documento WO0198334.
La pneumolisina es una toxina multifuncional con distintas actividades citoltticas (hemolfticas) y de activacion del complemento (Rubins y col., Am. Respi. Cit Care Med, 153:1339-1346 (1996)). La toxina no se secreta por los neumococos, pero se libera al lisarse los neumococos por la influencia de una autolisina. Sus efectos incluye, por ejemplo, la estimulacion de la produccion de citocinas inflamatorias por los monocitos humanos, la inhibicion de la pulsacion de los cilios del epitelio respiratorio humano, y el descenso de la actividad bactericida y la migracion de neutrofilos. El efecto mas obvio de la pneumolisina es la lisis de globulos rojos, que implica la union al colesterol. Debido a que es una toxina, es necesario detoxicarla (es decir, que no sea toxica para un ser humano cuando se proporciona como una dosificacion adecuada para la proteccion) antes de que se pueda administrar in vivo. La expresion y clonacion de la pneumolisina de tipo silvestre o nativa se conoce en la tecnica. Vease por ejemplo, Walker y col., (Infect Immun, 55:1184-1189 (1987)), Mitchell y col., (Biochim Biophys Acta, 1007:67-72 (1989) y Mitchell y col., (NAR, 18:4010 (1990)). La detoxificacion de Ply se puede llevar a cabo por medios qrnmicos, por ejemplo, sometiendola a un tratamiento con formalina o glutaraldehfdo o una combinacion de ambos (documentos WO 04081515, PCT/EP2005/010258). Dichos procedimientos se conocen bien en la tecnica para varias toxinas. De manera alternativa, la Ply se puede detoxicar geneticamente. Por lo tanto, la invencion engloba derivados de protemas neumococicas que pueden ser, por ejemplo, protemas mutadas. El termino “mutado” como se utiliza en el presente documento significa una molecula que se ha sometido a eliminacion, adicion o sustitucion de uno o mas aminoacidos utilizando tecnicas bien conocidas por mutagenesis dirigida al sitio o cualquier otro procedimiento convencional. Por ejemplo, como se ha descrito anteriormente, se puede alterar una protema Ply mutante de manera que sea biologicamente inactiva mientras que mantiene sus epftopos inmunogenicos, vease, por ejemplo, el documento WO90/06951, Berry y col., (Infect Immun, 67:981-985 (1999)) y el documento WO99/03884.
Como se utiliza en el presente documento, se entiende que el termino “Ply” se refiere a la pneumolisina mutada o detoxicada adecuada para su uso medico (es decir, no toxica).
En lo que concierne a la familia de la protema de union a colina (CbpX), los miembros de esa familia se identifico originalmente como protemas neumococicas que se podfa purificar por cromatograffa de afinidad a colina. Todas las protemas de union a la colina estan unidas no covalentemente a restos de fosforilcolina del acido teicoico de la pared celular y el acido lipoteicoico asociado a la membrana. Estructuralmente, tienen varias regiones en comun en toda la familia, aunque la naturaleza exacta de las protemas (secuencia de aminoacidos, longitud, etc.) puede variar. En general las protemas de union a la colina comprenden una region terminal N (N), regiones de repeticion conservadas (R1 y/o R2), una region rica en prolina (P) y una region de union a la colina conservada (C), que se compone de multiples repeticiones, que comprende aproximadamente la mitad de la protema. Como se utiliza en la presente solicitud, la expresion “familia de protemas de union a la colina (CbpX)” se selecciona de entre el grupo que consiste en Protemas de union a la colina como se identifica en el documento WO97/41151, PbcA, SpsA, PspC, CbpA, CbpD, y CbpG. CbpA se desvela en el documento WO97/41151. CbpD y CbpG se desvelan en el documento WO00/29434. PspC se desvela en el documento WO97/09994. PbcA se desvela en el documento WO98/21337. SpsA es una protema de union a la colina que se desvela en el documento WO 98/39450. Opcionalmente las protemas de union a la colina se seleccionan de entre el grupo que consiste en CbpA, PbcA, SpsA y PspC.
Una realizacion de la invencion comprende CbpX truncadas en las que “CbpX” se define anteriormente y “truncadas” se refiere a protemas CbpX que carecen del 50 % o mas de la region de union a la colina (C). Opcionalmente, dichas protemas carecen de la region de union a la colina completa. Opcionalmente, dichas protemas truncadas carecen de (i) la region de union a la colina y (ii) una parte de la mitad terminal N de la protema tambien, aunque mantiene al menos una region de repeticion (R1 o R2). Opcionalmente, la
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truncada tiene 2 regiones repetidas (R1 y R2). Ejemplos de tales realizaciones son NR1xR2 y R1xR2 como se ilustra en los documentos WO99/51266 o WO99/51188, sin embargo, otras protemas de union a la colina que carezcan de una region de union a la colina similar tambien se contemplan en el ambito de la presente invencion.
La familia LytX la forman protemas asociadas a la membrana que se asocian con lisis celular. El dominio terminal N comprende un dominio(s) de union a la colina, sin embargo la familia LytX no tiene todas las caractensticas que se encuentran en la familia CbpA senaladas anteriormente y por lo tanto, para la presente invencion, la familia LytX se considera distinta de la familia CbpX. Al contrario que en la familia CbpX, el dominio terminal C contiene el dominio catalttico de la familia de protemas LytX. La familia comprende LytA, B y C. Con respecto a la familia LytX, LytA se desvela en Ronda y col., Eur J Biochem, 164:621-624 (1987). LytB se desvela en el documento WO 98/18930, y a la que tambien se hace referencia como Sp46. LytC tambien se desvela en el documento WO 98/18930, y a la que tambien se hace referencia como Sp91. Una realizacion de la invencion comprende LytC.
Otra realizacion comprende LytX truncadas en las que “LytX” se define anteriormente y “truncadas” se refiere a protemas LytX que carecen del 50 % o mas de la region de union a la colina. Opcionalmente dichas protemas carecen de la region de union a la colina completa. En otra realizacion mas de la presente invencion comprende protemas quimericas (o fusiones) de CbpX truncada-LytX truncada. Opcionalmente comprende NR1xR2 (o R1xR2) de CbpX y la parte terminal C (Cterm, es decir, que carece de los dominios de union a la colina) de LytX (por ejemplo LytCCterm o Sp91 Cterm). Opcionalmente, la CbpX se selecciona de entre el grupo que consiste en CbpA, PbcA, SpsA y PspC. Opcionalmente, es CbpA. Opcionalmente, LytX es LytC (a la que se hace referencia tambien como Sp91). Otra realizacion de la presente invencion es PspA, o PsaA truncada que carece del dominio de union a la colina (C) y que se expresa como una protema de fusion con LytX. Opcionalmente LytX es LytC.
Con respecto a PsaA y PspA, ambas se conocen en la tecnica. Por ejemplo, la PsaA y las variantes de eliminacion transmembrana de la misma se han descrito por Berry y Paton, Infect Immun 1996 Dic; 64(12):5255-62. La PspA y las variantes de eliminacion transmembrana de la misma se han desvelado, por ejemplo, en los documentos US 5804193, WO 92/14488, y WO 99/53940.
Sp128 y Sp130 se desvelan en el documento WO00/76540. Sp125 es un ejemplo de protema de superficie neumococica con el motivo anclado de pared celular de LPXTG (donde X es cualquier aminoacido). Cualquier protema en esta clase de protemas de superficie neumococica con este motivo se ha descubierto que es util en el contexto de la presente invencion, y por lo tanto se considera como una protema adicional de la invencion. La Sp125 misma se desvela en el documento WO 98/18930, y tambien se conoce como ZmpB - una metaloproteinasa de zinc. La Sp101 se desvela en el documento WO 98/06734 (en el que tiene el numero de referencia y85993). Se caracteriza por una secuencia de senal Tipo I. La Sp133 se desvela en el documento WO 98/06734 (en el que tiene el numero de referencia y85992). Tambien se caracteriza por una secuencia de senal Tipo I.
Ejemplos de los antfgenos proteicos de Moraxella catarrhalis que se pueden incluir en una combinacion vacunal (especialmente para la prevencion de la otitis media) son: OMP106 [documentos WO 97/41731 (Antex) y WO 96/34960 (PMC)]; OMP21 o fragmentos del mismo (documento WO 0018910); LbpA y/o LbpB [documento WO 98/55606 (PMC)]; TbpA y/o TbpB [documentos WO 97/13785 y WO 97/32980 (PMC)]; CopB [Helminen ME, y col., (1993) Infect. Immun. 61:2003-2010]; UspA1 y/o UspA2 [documento wO 93/03761 (Universidad de Texas)]; OmpCD; HasR (documento PCT/EP99/03824); PilQ (documento PCT/EP99/03823); OMP85 (documento PCT/EP00/01468); lipo06 (documento GB 9917977.2); lipo10 (documento GB 9918208.1); lipo11 (documento GB 9918302.2); lipo18 (documento GB 9918038.2); P6 (documento PCT/EP99/03038); D15 (documento PCT/EP99/03822); OmplA1 (documento PCT/EP99/06781); Hly3 (documento PCT/EP99/03257); y OmpE. Ejemplos de antfgenos de Haemophilus influenzae no tipable o fragmentos de los mismos se pueden incluir en una combinacion vacunal (especialmente para la prevencion de la otitis media) incluyen: Protema Fimbrina [(US 5766608 - Ohio State Research Foundation)] y fusiones que comprenden peptidos de la misma [por ejemplo, fusiones de peptido LB1(f); documentos US 5843464 (OSU) o WO 99/64067]; OMP26 [documento WO 97/01638 (Cortecs)]; P6 [documento EP 281673 (State University de Nueva York)]; TbpA y/o TbpB; Hia; Hsf; Hin47; Hif; Hmw1; Hmw2; Hmw3; Hmw4; Hap; D15 (documento WO 94/12641); P2; y P5 (documento WO 94/26304).
Las protemas de la invencion tambien se pueden combinar beneficiosamente. Por combinado se quiere significar que la composicion inmunogenica comprende todas las protemas de las siguientes combinaciones. bien como vehmulos proteicos o como protemas libres o una mezcla de las dos. Por ejemplo, en una combinacion de dos protemas como se expone a partir de ahora, ambas protemas se pueden utilizar como vehuculos proteicos, o ambas protemas pueden estar presentes como protemas libres, o ambas pueden estar presentes como vehmulo y como protema libre, o una puede estar presente como un vehmulo proteico y como protema libre mientras que la otra esta presente solo como vehmulo proteico o solo como protema libre, o una puede estar presente como un vehmulo proteico y la otra como una protema libre. Cuando se da una combinacion de tres protemas, existen posibilidades similares. Las combinaciones incluyen, pero no se
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limitan a PhtD + NR1xR2, PhtD + NR1xR2-Sp91Cterm quimericas o protemas de fusion, PhtD + Ply, PhtD + Sp128, PhtD + PsaA, PhtD + PspA, PhtA + NR1xR2, PhtA + NR1 xR2-Sp91 Cterm quimericas o protemas de fusion, PhtA + Ply, PhtA + Sp128, PhtA + PsaA, PhtA + PspA, NR1xR2 + LytC, NR1xR2 + PspA, NR1xR2 + PsaA, NR1xR2 + Sp128, R1xR2 + LytC, R1xR2 + PspA, R1xR2 + PsaA, R1xR2 + Sp128, R1xR2 + PhtD, R1xR2 + PhtA. Opcionalmente, NR1xR2 (o R1xR2) es de CbpA o PspC. Opcionalmente es de CbpA. Otras combinaciones incluyen combinaciones de 3 protemas tales como PhtD + NR1xR2 + Ply, y PhtA + NR1xR2 + PhtD. En una realizacion, la composicion vacunal comprende pneumolisina detoxicada y PhtD o PhtDE como vehmulos proteicos. En una realizacion adicional, la composicion vacunal comprende pneumolisina detoxicada y PhtD o PhtDE como protemas libres.
En un aspecto independiente, la presente invencion proporciona una composicion inmunogenica que comprende al menos cuatro conjugados de sacaridos capsulares de S. pneumoniae que contienen sacaridos de diferentes serotipos de S. pneumoniae en los que al menos un sacaridos se conjuga con PhtD o una protema de fusion de la misma y la composicion inmunogenica es capaz de producir una respuesta inmunitaria eficaz contra PhtD.
Una respuesta inmunitaria eficaz contra PhtD o protema de fusion de la misma se mide por ejemplo por un ensayo de proteccion tal como el que se describe en el ejemplo 15. Una respuesta inmunitaria eficaz proporciona al menos un 40 %, 50 %, 60 % 70 %, 80 % o 90 % de supervivencia 7 dfas despues del desaffo con una cepa heterologa. Debido a que la cepa de desaffo es heterologa, la proteccion que se logra es debida a la respuesta inmunitaria contra PhtD o la protema de fusion de la misma.
De manera alternativa, una respuesta inmunitaria eficaz contra PhtD se mide por ELISA como se describe en el ejemplo 14. Una respuesta inmunitaria eficaz da una respuesta de IgG anti-PhtD de al menos 250, 300, 350, 400, 500, 550 o 600 pg/ml GMC.
Por ejemplo, la composicion inmunogenica comprende al menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 sacaridos capsulares de S. pneumoniae de diferentes serotipos conjugados con PhtD o una protema de fusion de la misma. Por ejemplo los serotipos 22F y 1,2, 3, 4, 5, 6, o 7 adicionales seleccionados de entre los serotipos 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 23F y 33F se conjugan con PhtD. En una realizacion dos o tres de los serotipos 3, 6A y 22F se conjugan a PhtD o una protema de fusion de la misma.
En una realizacion, la composicion inmunogenica de la invencion comprende al menos un sacarido capsular de S. pneumoniae conjugado con PhtD o una protema de fusion de la misma por medio de un engarce, por ejemplo ADH. En una realizacion, se utiliza una de las qmmicas de conjugacion enumeradas posteriormente.
En una realizacion, la composicion inmunogenica de la invencion comprende al menos un sacarido capsular de S. pneumoniae conjugado con una PhtD o una protema de fusion de la misma, en el que la relacion de PhtD respecto al sacarido en el conjugado es entre 6:1 y 1:5, 6:1 y 2:1, 6:1 y 2,5:1, 6:1 y 3:1, 6:1 y 3,5:1 (p/p) o es mayor de (es decir, contiene una proporcion mayor de PhtD) 2,0:1,2,5:1, 3,0:1, 3,5:1 o 4,0:1 (p/p).
En una realizacion, la composicion inmunogenica de la invencion comprende pneumolisina.
La presente invencion proporciona ademas una vacuna que contiene las composiciones inmunogenicas de la invencion y un excipiente aceptable farmaceuticamente. La presente invencion proporciona ademas un procedimiento para fabricar una vacuna que comprende la etapa de mezclar la composicion inmunogenica de la invencion con un excipiente farmaceuticamente aceptable.
Las vacunas de la presente invencion se puede adyuvar, particularmente cuando se tiene la intencion de utilizarla en una poblacion anciana pero tambien para su uso en poblaciones infantiles. Los adyuvantes adecuados incluyen sales de aluminio tales como el gel de hidroxido de aluminio o fosfato de aluminio o alumina, pero puede ser tambien otras sales metalicas como las de calcio, magnesio, hierro o zinc, o puede ser una suspension insoluble de tirosina acilada, o azucares acilados, sacaridos derivados cationica o anionicamente, o polifosfacenos.
El adyuvante se selecciona opcionalmente para que sea un inductor preferencial de un tipo de respuesta TH1. Dichos altos niveles de citocinas tipo Th1 tienden a favorecer la induccion de respuestas inmunitarias mediadas por celulas para un determinado antfgeno, mientras que los altos niveles de citocinas tipo Th2 tienden a favorecer la induccion de respuestas inmunitarias humorales al antfgeno.
La distincion de las respuestas inmunitarias tipo Th1 y Th2 no es absoluta. En realidad un individuo tendra una respuesta inmunitaria que se describe como que es predominantemente Th1 o predominante Th2. Sin embargo, a menudo es conveniente considerar las familias de citocinas en terminos de lo que describen en clones de linfocitos T CD4+ por Mosmann y Coffman (Mosmann, T.R. y Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. (Annual Review of Immunology, 7, p145-173). Tradicionalmente, las respuestas de tipo Th1 se asocian con la produccion de INF- Y y citocinas IL-2 por los linfocitos T. Otras citocinas asociadas a menudo directamente con la induccion de las
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respuestas inmunitarias tipo Th1 no se producen por linfocitos T, tales como IL-12. Por el contrario, las respuestas tipo Th2 se asocian con la secrecion de IL-4, IL-5, IL-6, IL-10. Sistemas adyuvantes adecuados que promuevan una respuesta predominantemente Th1 incluyen: Monofosforil Kpido A o na derivado del mismo (o lfpido A detoxicado en general - vease por ejemplo el documento WO2005107798), particularmente el monofosforil lfpido A 3-des-O-acilado (3D-MPL) (para su preparacion vease el documento GB 2220211 A); y una combinacion de monofosforil Kpido A, opcionalmente monofosforil lfpido A3-des-O-acilado junto con una sal de aluminio (por ejemplo fosfato de aluminio o hidroxido de aluminio) o una emulsion de aceite en agua. En dichas combinaciones, el antigeno y el 3D-MPL estan contenidos en las mismas estructuras particuladas, permitiendo un suministro mas eficaz de las senales antigenicas e inmunoestimulantes. Los estudios han demostrado que el 3D-MPL es capaz de aumentar adicionalmente la inmunogenicidad de un antigeno adsorbido a alumina [Thoelen y col., Vaccine (1998) 16:708-14; EP 689454-B1].
Un sistema mejorado implica la combinacion de un monofosforil lfpido A y un derivado de saponina, particularmente la combinacion de QS21 y 3D-MPL se desvela en el documento WO 94/00153, o una composicion menos reactogenica donde el QS21 se inactiva con colesterol como se desvela en el documento WO 96/33739. Una formulacion de adyuvante particularmente potente implica QS21, 3D-MPL y tocoferol en una emulsion de aceite en agua se describe en el documento WO 95/17210. En una realizacion la composicion inmunogenica comprende adicionalmente una saponina, que puede ser QS21. La formulacion puede comprender tambien una emulsion de aceite en agua y tocoferol (documento WO 95/17210). Los oligonucleotidos que contiene CpG no metilado (documento WO 96/02555) y otros oligonucleotidos inmunomoduladores (documentos WO0226757 y WO03507822) tambien son inductores preferenciales de una respuesta Th1 y son adecuados para su uso en la presente invencion.
Los adyuvantes particulares son los que se seleccionan de entre el grupo de sales metalicas, emulsiones de aceite en agua, agonistas de receptores tipo Toll, (en particular el agonista del receptor 2 tipo Toll, agonista del receptor 3 tipo Toll, agonista del receptor 4 tipo Toll, agonista del receptor 7 tipo Toll, agonista del receptor 8 tipo Toll y agonista del receptor 9 tipo Toll), saponinas y combinaciones de los mismos.
Un adyuvante que se puede utilizar con las composiciones vacunales de la invencion son preparaciones en ampollas o vesfculas de la membrana externa de cepas bacterianas Gram-negativas tales como las que ensena el documento WO02/09746 - particularmente, ampollas de N. meningitidis. Las propiedades adyuvantes de las ampollas pueden mejorarse por retencion de LOS (lipooligosacaridos) en su superficie (por ejemplo, mediante la extraccion con bajas concentraciones de detergente [por ejemplo un 0-0,1 % de desoxicolato]). Los LOS se pueden detoxicar por medio de mutaciones msbB (-) o htrB (-) que se tratan en el documento WO02/09746. Las propiedades adyuvantes se pueden mejorar por retencion de PorB (y opcionalmente eliminando PorA) de las ampollas meningococicas. Las propiedades adyuvantes tambien pueden mejorarse truncando la estructura externa del nucleo de sacarido de LOS en las ampollas meningococicas - por ejemplo por medio de una mutacion IgtB (-) como se trata en el documento WO2004/014417. De manera alternativa, los LOS mencionados anteriormente (por ejemplo aislados de una cepa msbB (-) y/o IgtB (-)) se pueden purificar y utilizarse como un adyuvante en las composiciones de la invencion.
Un adyuvante adicional que se puede utilizar con las composiciones de la invencion se puede seleccionar de entre el grupo: una saponina, lfpido A o un derivado de los mismos, un oligonucleotido inmunoestimulante, un fosfato de alquil glucosaminida, una emulsion de aceite en agua o combinaciones de los mismos. Un adyuvante adicional que se puede utilizar con las composiciones de la invencion es una sal metalica en combinacion con otro adyuvante. En una realizacion, el adyuvante es un agonista de receptor tipo Toll en particular un agonista de un receptor 2, 3, 4, 7, 8 o 9 tipo Toll o una saponina, en particular QS21. En una realizacion, el sistema adyuvante comprende dos o mas adyuvantes de la lista anterior. En particular, las combinaciones contienen opcionalmente una saponina (en particular QS21) adyuvante y/o un agonista de receptor 9 tipo Toll tal como un oligonucleotido inmunoestimulantes que contiene CpG. Otras combinaciones comprenden una saponina (en particular QS21) y un agonista del receptor 4 tipo Toll tal como monofosforil lfpido A o su derivado desacilado, 3D-MPL, o una saponina (en particular QS21) y un ligando del receptor 4 tipo Toll tal como un fosfato de alquil glucosaminida.
En una realizacion, los adyuvantes son combinaciones de 3D-MPL y QS21 (documento EP 0 671 948 B1), emulsiones de aceite en agua que comprenden 3D-MPL y QS21 (documentos WO 95/17210, WO 98/56414), o 3D-MPL formulado con otros vehnculos (documento EP 0 689 454 B1). En una realizacion, los sistemas adyuvantes comprenden una combinacion de 3D-MPL, QS21 y un oligonucleotido CpG como se describe en los documentos US6558670, US6544518.
En una realizacion, el adyuvante es un ligando del receptor 4 tipo Toll (TLR), opcionalmente un agonista tal como un derivado del lfpido A particularmente el monofosforil lfpido A o mas particularmente el monofosforil lfpido A 3-desacilado (3D-MPL).
El 3D-MPL esta disponible en Glaxo SmithKline Biologicals North America y primariamente promueve respuestas de linfocitos T CD4+ con un fenotipo IFN-g (Th1). Esto se puede producir de acuerdo con los
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procedimientos desvelados en el documento GB 2 220 211 A. Qmmicamente es una mezcla de monofosforil kpido A 3-desacilado con 3, 4, 5, o 6 cadenas aciladas. en una realizacion, las composiciones de la presente invencion utilizan 3D-MPL de partfcula pequena. La pequena partfcula de 3D-MPL tiene un tamano de partfcula de manera que puede esterilizarse por filtracion a traves de un filtro de 0,22 mm. Dichas preparaciones se describen en la Solicitud de Patente Internacional N° WO 94/21292. Los derivados sinteticos de lfpido A se conocen y se piensan que son agonistas TLR 4, pero no se limitan a:
OM174 (2-desoxi-6-o-[2-desoxi-2-[(R)-3-dodecanoiloxitetra-decanoilamino]-4-o-fosfono- p-D-
glucopiranosil]-2-[(R)-3-hidroxitetradecanoilamino]-a-D-glucopiranosildihidrogenofosfato), (documento WO 95/14026)
OM 294 DP (3S, 9R)-3-[(R)-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-4-oxo-5-aza-9(R)-[(R)-3- hidroxitetradecanoilamino] decan-1,10-diol, 1,10-bis (dihidrogenofosfato) (documentos WO99 /64301 y Wo 00/0462)
OM 197 MP-Ac DP (3S-, 9R)-3-[(R)-dodecanoiloxitetradecanoilamino]-4-oxo-5-aza-9-[(R)-3-
hidroxitetradecanoil amino] decan-1,10-diol, 1 -dihidrogenofosfato 10-(6-aminohexanoato) (documento WO 01/46127)
Otros ligandos TLR 4 que se pueden utilizar son fosfatos de alquil glucosaminida (AGP) tales como los que se desvelan en los documentos WO9850399 o US6303347 (tambien se desvelan los procedimientos para la preparacion de AGP), o sales de AGP farmaceuticamente aceptables como se desvela en el documento US6764840. Algunos AGP son agonistas de TLR4, y algunos son antagonistas TLR4. Se piensa que ambos son utiles como adyuvantes.
Otro inmunoestimulante para su uso en la presente invencion es Quil A y sus derivados. Quil A es una preparacion de saponina aislada del arbol sudamericano Quilaja Saponaria Molina y se describio por primera vez que tema actividad adyuvantes por Dalsgaard y col., in 1974 ("Saponin adjuvants", Archiv. fur die gesamte Virusforschung, Vol. 44, Springer Verlag, Berlin, p243-254). Los fragmentos purificados de Quil A se han aislado por HPLC que mantiene la actividad adyuvante sin la toxicidad asociada con Quil A (documento EP 0 362 278), por ejemplo, QS7 y QS21 (tambien conocidos como QA7 y QA21). QS21 es una saponina derivada de la corteza de Quillaja saponaria Molina que induce linfocitos T citotoxicos CD8+ (CTL), celulas Th1 y una respuesta de anticuerpos predominante en IgG2a y es una saponina en el contexto de la presente invencion.
Se han descrito formulaciones particulares de QS21 que son una realizacion de la invencion, estas formulaciones comprenden adicionalmente un esterol (documento WO96/33739). Las saponinas que forman parte de la presente invencion se pueden separar en forma de micelas, micelas mixtas (opcionalmente con sales biliares) o pueden estar en forma de matrices ISCOM (documento EP 0 109 942 B1), liposomas o estructuras coloidales relacionadas tales como complejos multimericos tipo gusano o tipo anillo o estructuras lipfdicas/laminadas y lamelas cuando se formulan con colesterol y lfpidos, o en forma de una emulsion de aceite en agua (por ejemplo como en el documento WO 95/17210). Las saponinas se pueden asociar con una sal metalica, tal como hidroxido de aluminio, o fosfato de aluminio (documento WO 98/15287). Opcionalmente, la saponina se presenta en forma de un liposoma, ISCOM o en una emulsion de aceite en agua.
Un sistema mejorado implica la combinacion de un monofosforil lfpido A (o lfpido A detoxicado) y un derivado de saponina, particularmente la combinacion de QS21 y 3D-MPL como se desvela en el documento WO 94/00153, o una composicion menos reactogenica en la que el QS21 se inactiva con colesterol como se desvela en el documento WO 96/33739. Una formulacion adyuvante particularmente potente implica tocoferol con o sin QS21 y/o 3D-MPL en una emulsion de aceite en agua que se describe en el documento WO 95/17210. En una realizacion la composicion inmunogenica comprende adicionalmente una saponina, que puede ser QS21.
Tambien se pueden utilizar oligonucleotidos inmunoestimulantes o cualquier otro receptor 9 tipo Toll (TLR). Los oligonucleotidos para su uso en los adyuvantes o vacunas de la presente invencion son opcionalmente oligonucleotidos que contienen CpG, opcionalmente contienen dos o mas motivos CpG dinucleotfdicos separados por al menos tres, opcionalmente al menos seis o mas nucleotidos. Un motivo CpG es un nucleotido Citosina seguido por un nucleotido Guanina. Los oligonucleotidos CpG de la presente invencion son tfpicamente desoxinucleotidos. En una realizacion, el internucleotido en el oligonucleotido es fosforoditioato, o un enlace fosforotioato, aunque estan en el ambito de la invencion enlaces fosfodiester y otros enlaces internucleotfdicos. Tambien se incluyen en el ambito de la invencion oligonucleotidos con uniones internucleotfdicas mezcladas. Los procedimientos para producir oligonucleotidos fosforotioato o fosforoditioato se describen en los documentos US 5.666.153, US 5.278.302 y WO95/26204.
Ejemplos de oligonucleotidos tienen las siguientes secuencias. Las secuencias contienen opcionalmente uniones internucleotfdicas de fosforotioato modificadas.
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OLIGO 1(SEQ ID NO: 1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826)
OLIGO 2 (SEQ ID NO: 2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758)
OLIGO 3(SEQ ID NO: 3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC
ACG OLIGO 4 (SEQ ID NO: 4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006)
OLIGO 5 (SEQ ID NO: 5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668)
OLIGO 6 (SEQ ID NO: 6): TCG ACG TTT TCG GCG CGC GCC G (CpG 5456)
Oligonucleotidos CpG alternativos pueden comprender las secuencias anteriores en las que tienen eliminaciones o adiciones sin consecuencias en las mismas.
Los oligonucleotidos CpG que se utilizan en la presente invencion pueden sintetizarse por cualquier procedimiento conocido en la tecnica (por ejemplo, vease el documento EP 468520). Convenientemente, dichos oligonucleotidos se pueden sintetizar utilizando un sintetizador automatico.
El adyuvante puede ser una emulsion de aceite en agua o puede comprender una emulsion de aceite en agua en combinacion con otros adyuvantes. La fase oleosa del sistema de emulsion comprende opcionalmente un aceite metabolizable. El significado de la expresion aceite metabolizable es bien conocido en la tecnica. Metabolizable se puede definir como “que es capaz de ser transformado por metabolismo” (Dorland's Illustrated Medical Dictionary, W.B. Sanders Company, 25a edicion (1974)). El aceite puede ser cualquier aceite vegetal, aceite de pescado, aceite animal o sintetico, que no sea toxico para el receptor y es capaz de ser transformado por metabolismo. Los frutos secos, y granos son fuentes comunes de aceites vegetales. Los aceites sinteticos tambien son parte de la invencion y pueden incluir los aceites disponibles en el mercado tales como NEOBEE® y otros. El escualeno (2,6,10,15,19,23-hexametil-2,6,10,14,18,22- tetraicosahexaeno) es un aceite insaturado que se encuentra en grandes cantidades en el aceite de tugado de tiburon, y en pequenas cantidades en el aceite de oliva, aceite de germen de trigo, aceite de salvado de arroz, y levadura, y es un aceite para su uso en la presente invencion. El escualeno es un aceite metabolizable gracias al hecho de que es un intermediario en la biosmtesis del colesterol (mdice Merck, 10a Edicion, entrada n° 8619).
Los tocoles (por ejemplo, la vitamina E) a menudo se utilizan tambien en adyuvantes de emulsiones oleosas (documentos EP 0 382 271 B1; US5667784; WO 95/17210). Los tocoles que se utilizan en las emulsiones oleosas (opcionalmente en emulsiones de aceite en agua) de la invencion se pueden formular como se describe en el documento EP 0 382 271 B1, en el que los tocoles pueden ser dispersiones de gotas de tocol, opcionalmente que comprenden un emulsionante, de opcionalmente menos de 1 micra. De manera alternativa, se pueden utilizar los tocoles en combinacion con otro aceite, para formar la fase oleosa de una emulsion oleosa. Ejemplos de emulsiones oleosas que se pueden utilizar en combinacion con el tocol se describen en el presente documento, tal como los aceites metabolizables descritos anteriormente.
Se ha sugerido que los adyuvantes de aceite en agua per se son utiles como composiciones adyuvantes (documento EP 0 399 843B), tambien se han descrito combinaciones de emulsiones de aceite en agua y otros agentes activos para las vacunas (documentos WO 95/17210; WO 98/56414; WO 99/12565; wO 99/11241). Otros adyuvantes de emulsion oleosa se han descrito, tales como las emulsiones de agua en aceite (documentos Us 5.422.109; EP 0 480 982 B2) y emulsiones de agua en aceite en agua (documentos US 5.424.067; EP 0 480 981 B). Todos los cuales forman sistemas de emulsion oleosa (en particular cuando incorporan tocoles) para formar adyuvantes y composiciones de la presente invencion.
En una realizacion, la emulsion oleosa (por ejemplo, emulsiones de aceite en agua) comprenden ademas un emulsionante tal como TWEEN80 y/o un esterol tal como el colesterol.
En una realizacion, la emulsion oleosa (opcionalmente una emulsion de aceite en agua) comprende un aceite metabolizable no toxico, tal como el escualeno, el escualeno o un tocoferol tal como el tocoferol alfa (y opcionalmente ambos escualeno y tocoferol alfa) y opcionalmente un emulsionante (o tensioactivo) tal como el Tween 80. Un esterol (por ejemplo, colesterol) se puede incluir tambien. El procedimiento para producir emulsiones de aceite en agua se conoce bien por el experto en la tecnica. Comunmente, el procedimiento comprende mezclar la fase oleosa que contiene tocol con un tensioactivo tal como una solucion PBS/TWEEN80™, seguido por la homogeneizacion utilizando un homogeneizador, estana claro para un experto en la tecnica que un procedimiento que comprende el paso de la mezcla dos veces a traves de una aguja de jeringa sena adecuado para homogenizar pequenos volumenes de lfquido. De igual manera, el procedimiento de emulsion en un microfluidificador (maquina de Microflrndica M110S, maximo de 50 pasajes, durante un periodo de 2 minutos a presion maxima de entrada de 6 bares (presion de salida de aproximadamente 850 bares)) podna adaptarlo el experto en la tecnica para producir volumenes mayores o menores de emulsion. La adaptacion se podna conseguir por experimentacion de rutina que comprende la medicion de la emulsion resultante hasta que se consiga una preparacion con gotas de aceites del diametro necesario. En una emulsion de aceite en agua, el aceite y el emulsionante debenan estar en un vehfculo acuoso. El vehfculo acuoso puede ser, por ejemplo, solucion salina tampon de fosfato.
El tamano de las gotas de aceite que se encuentran en la emulsion de aceite en agua estable es opcionalmente menos de 1 micra, puede estar en el intervalo de sustancialmente de 30-600 nm,
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opcionalmente sustancialmente alrededor de 30-500 nm de diametro, y opcionalmente sustancialmente de 150-500 nm de diametro, y en particular aproximadamente 150 nm de diametro como se mide por espectroscopia de correlacion de fotones. A este respecto, el 80 % de las gotas de aceite por numero debena estar en los intervalos, opcionalmente mas del 90 % y opcionalmente mas del 95 % de las gotas por numero estan en los intervalos de tamano definidos. Las cantidades de componentes presentes en las emulsiones oleosas de la presente invencion estan convencionalmente en el intervalo de desde un 0,5-20 % o 2 a 10 % de aceite (del volumen total de la dosis), tal como escualeno; y cuando estan presentes de un 2 a 10%% de tocoferol alfa; y desde un 0,3 a 3% de tensioactivo, tal como monooleato de sorbitan polioxietileno. Opcionalmente la relacion de aceite (por ejemplo, escualeno): tocol (por ejemplo a-tocoferol) es igual o menor de 1, ya que esta proporciona una emulsion mas estable. Un emulsionante, tal como Tween 80 o Span 85 tambien puede estar presente a un nivel de aproximadamente el 1 %. En algunos casos puede ser ventajoso que las vacunas de la presente invencion pueden contener adicionalmente un estabilizador.
Ejemplos de sistemas de emulsion se describen en los documentos WO 95/17210, WO 99/11241 y WO 99/12565 que desvelan adyuvantes de emulsion basados en escualeno, a-tocoferol, y TWEEN80, formulado opcionalmente con los inmunoestimulantes QS21 y/o 3D-MPL. Por lo tanto, en una realizacion de la presente invencion, el adyuvante de la invencion puede comprender adicionalmente mas inmunoestimulantes, tales como LPS o derivados de los mismos y/o saponinas. Ejemplos de inmunoestimulantes adicionales se describen en el presente documento y/o en “Vaccine Design - The Subunit and Adjuvant Approach" 1995, Pharmaceutical Biotechnology, Volumen 6, Eds. Powell, M.F., y Newman, M.J., Plenum Press, Nueva Yorky Londres, ISBN 0-306-44867-X.
En una realizacion, el adyuvante y las composiciones inmunogenicas de acuerdo con la invencion comprenden una saponina (por ejemplo, QS21) y/o un derivado de LPS (por ejemplo, 3D-MPL) en una emulsion oleosa que se ha descrito anteriormente, opcionalmente con un esterol (por ejemplo, colesterol). Adicionalmente la emulsion oleosa (opcionalmente una emulsion de aceite en agua) puede contener Span 85 y/o lecitina y/o tricaprilina. Los adyuvantes que comprenden una emulsion de aceite en agua, un esterol y una saponina se describen en el documento WO 99/12565. Normalmente, para la administracion a seres humanos la saponina (por ejemplo QS21) y/o el derivado de LPS (por ejemplo, 3D-MPL) estaran presentes en una dosis para seres humanos de la presente composicion inmunogenica en el intervalo de 1 jg-200 |jg, tal como 10-100 jg, o 10 jg-50 jg por dosis. Normalmente, la emulsion oleosa (opcionalmente una emulsion de aceite en agua) comprendera desde un 2 a 10 % de acetite metabolizable. Opcionalmente comprendera de un 1 a 10 % de escualeno, de 2 a 10 % de alfa tocoferol y desde un 0,3 a 3 % (opcionalmente de un 0,42 %) de emulsionante (opcionalmente Tween 80 [monooleato de sorbitan polioxietilado]). Cuando estan presentes escualeno y alfa tocoferol, opcionalmente la relacion de escualeno: alfa tocoferol es igual o menor de 1, ya que esta proporciona una emulsion mas estable. El Span 85 (trioleato de sorbitan) tambien puede estar presente a un nivel de un 0,5 a 1 % en las emulsiones utilizadas en la invencion. En algunos casos puede ser ventajoso que las composiciones inmunogenicas y vacunas de la presente invencion contendran adicionalmente un estabilizante, por ejemplo otros emulsionantes/tensioactivos, incluyendo el acido capnlico (mdice Merck 10a Edicion, entrada n° 1739), por ejemplo Tricaprilina.
Cuando el escualeno y una saponina (opcionalmente QS21) se incluyen, es beneficioso incluir tambien un esterol (opcionalmente colesterol) a la formulacion ya que esto permite una reduccion del nivel total de aceite en la emulsion. Esto da lugar a una reduccion del coste de fabricacion, mejora la comodidad de la vacunacion, y tambien mejora cuantitativa y cualitativamente el resultado de las respuestas inmunitarias, tal como una mejor produccion de IFN-y. En consecuencia, el sistema de adyuvante de la presente invencion comprende normalmente una relacion de aceite metabolizable: saponina (p/p) en el intervalo de 200:1 a 300:1, tambien se puede utilizar la presente invencion en una forma “baja en aceite” cuyo intervalo opcional es de 1:1 a 200:1, opcionalmente de 20:1 a 100:1, o sustancialmente de 48:1, esta vacuna mantiene las propiedades de adyuvante beneficiosas de todos los componentes, con un nivel de reactogenicidad muy reducido. En consecuencia, algunas realizaciones tienen una relacion de escualeno:QS21 (p/p) en el intervalo de 1:1 a 250:1, o 20:1 a 200:1, o 20:1 a 100:1, o sustancialmente 48:1. Opcionalmente un esterol (por ejemplo, colesterol) se puede incluir tambien estando presente en una relacion de saponina:esterol como se ha descrito en el presente documento.
Los sistemas de emulsion de la presente invencion tienen opcionalmente un tamano de gota de aceite pequeno en el intervalo de sub-micra. Opcionalmente, los tamanos de gota de aceite estara en el intervalo de 120 a 750 nm, o desde 120 - 600 nm de diametro.
Una formulacion particularmente potente de adyuvante (para la ultima combinacion con AIPO4 en las composiciones inmunogenicas de la invencion) implica una saponina (por ejemplo, QS21), un derivado de LPS (por ejemplo, 3D-MPL) y una emulsion oleosa (por ejemplo , escualeno y alfa tocoferol en una emulsion de aceite en agua) como se describe en los documentos WO 95/17210 o in WO 99/12565 (en particular la formulacion adyuvante 11 del Ejemplo 2, Tabla 1).
Ejemplos de un agonista de TLR2 incluye un peptidoglicano o lipoprotema. Las imidazoquinolinas, tales como Imiquimod y Resiquimod son agonistas TLR7 conocidos. Tambien se conocen un agonista de TLR que es un ARN de cadena sencilla (TLR8 en seres humanos y TLR 7 en ratones), mientras que un ARN de doble cadena y poli IC (acido poliinosmico-policitidflico - un sintetico comercial mimetico de un ARN vrnco), son
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ejemplares de agonistas TLR3. El 3D-MPL es un ejemplo de un agonista TLR4 mientras que CPG es un ejemplo de un agonista TLR9.
La composicion inmunogenica puede comprender un antigeno y una inmunoestimulante adsorbido en una sal metalica. Las formulaciones vacunales basadas en aluminio, en las que el antigeno y el inmunoestimulante monofosforil lfpido A 3-des-O-acilado (3D-MPL), se adsorben en la misma partfcula se describen en los documentos EP 0 576 478 B1, EP 0 689 454 B1, y EP 0 633 784 B1. En estos casos entonces el antigeno se adsorbe primero a la sal de aluminio seguido por la adsorcion del estimulante 3D- MPL en las mismas partfculas de aluminio. Dichos procedimiento primero implican la suspension de 3D-MPL por sonicacion en un bano de agua hasta que las partfculas alcanzan un tamano de entre 80 y 500 nm. El antigeno se adsorbe normalmente en la sal de aluminio por agitado a temperatura ambiente durante una hora. La suspension de 3D-MPL se anade entonces al antigeno adsorbido y la formulacion se incuba a temperatura ambiente durante una hora, y luego se mantiene a 4°c hasta su uso.
En otro procedimiento, el inmunoestimulante y el antfgeno estan en partfculas metalicas separadas, como se describe en el documento EP 1126876. El procedimiento mejorado comprende la adsorcion del inmunoestimulante, en una partfcula de sal metalica, seguido por la adsorcion del antfgeno en otra partfcula de sal metalica, seguido por el mezclado de las partfculas metalicas separadas para formar una vacuna. El adyuvante para su uso en la presente invencion puede ser una composicion adyuvante que comprende un inmunoestimulante, adsorbido en una partfcula de sal metalica, que se caracteriza porque la partfcula de sal metalica esta sustancialmente libre de otro antigeno. Ademas, se proporcionan vacunas por la presente invencion y se caracterizan porque el inmunoestimulante esta adsorbido en partfculas de sal metalica que estan sustancialmente libres de otro antfgeno, y porque las partfculas de sal metalica que tienen el antfgeno adsorbido estan sustancialmente libres de otro inmunoestimulante. En consecuencias, la presente invencion proporciona una formulacion de adyuvante que comprende un inmunoestimulante que se ha adsorbido en una partfcula de una sal metalica, que se caracteriza porque la composicion esta sustancialmente libre de otro antfgeno. Ademas, esta formulacion adyuvante puede ser intermedia el cual, si se utiliza dicho adyuvante, es necesario para la fabricacion de una vacuna. En consecuencia se proporciona un procedimiento para la fabricacion de una vacuna que comprende la mezcla de una composicion adyuvante que es uno o mas inmunoestimulantes adsorbidos en una partfcula metalica con un antfgeno. Opcionalmente, el antfgeno se ha pre-adsorbido en una sal metalica. Dicha sal metalica puede ser identica o similar a la sal metalica en la que se ha adsorbido el inmunoestimulantes. Opcionalmente, la sal metalica es una sal de aluminio, por ejemplo, fosfato de aluminio o hidroxido de aluminio.
La presente invencion proporciona adicionalmente una composicion vacunal que comprende un inmunoestimulante adsorbido en una primera partfcula de una sal metalica, y un antfgeno adsorbido en una sal metalica, que se caracteriza por que la primera y segunda partfculas son partfculas separadas.
Los derivados o mutaciones de LPS o LOS o derivados de lfpido A que se describen en el presente documento se disenan por ser menos toxicos (por ejemplo, 3D-MPL) que los lipopolisacaridos nativos y son equivalentes intercambiables con respecto a cualquiera de los usos de estos restos que se describen en el presente documento.
En una realizacion el adyuvante que se utiliza en las composiciones de la invencion comprenden un vehfculo liposomico (producido por tecnicas conocidas a partir de fosfolfpidos (tales como el dioleoilfosfatidil colina [DOPC]) y opcionalmente un esterol [tal como el colesterol]). Dichos vehfculos liposomicos pueden albergar derivados del lfpido A [tal como 3D-MPL - vease anteriormente] y/o saponinas (tales como QS21 - vease anteriormente). En una realizacion el adyuvante comprende (por dosis de 0,5 ml) 0,1-10 mg, 0,2-7, 0,3-5, 0,4-2, o 0,5-1 mg (por ejemplo, 0,4-0,6, 0,9-1,1, 0,5 o 1 mg) de fosfolfpido (por ejemplo, DOPC), 0,025-2,5, 0,05-1,5, 0,075-0,75, 0,1-0,3, o 0,125-0,25 mg (por ejemplo, 0,2-0,3, 0,1-0,15, 0,25 o 0,125 mg) de esteroles (por ejemplo, colesterol), 5-60, 10-50, o 20-30 |jg (por ejemplo, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 o 50 |jg) de un derivado de lfpido A (por ejemplo 3D-MPL), y 5-60, 10-50, o 20-30 jg (por ejemplo, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 o 50 jg) de saponina (por ejemplo, QS21).
Este adyuvante es particularmente adecuado para formulaciones vacunales para ancianos. En una realizacion la composicion vacunal que comprende este adyuvante comprende conjugados que se derivan de al menos todos los siguientes serotipos: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F (y puede comprender tambien uno o mas serotipos 3, 6A, 19A, y 22F), en el que el tftulo de anticuerpo GMC inducido contra uno o mas (o todos) los componentes vacunales 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F no es significativamente inferior a los inducidos por la vacuna Prevnar® en seres humanos vacunados.
En una realizacion el adyuvante utilizado para las composiciones de la invencion comprende una emulsion de aceite en agua producida a partir de un aceite metabolizable (tal como escualeno), un emulsionante (tal como Tween 80) y opcionalmente un tocol (tal como alfa tocoferol). En una realizacion el adyuvante comprende (por dosis de 0,5 ml) 0,5-15, 1-13, 2-11, 4-8, o 5-6 mg (por ejemplo, 2-3, 5-6, o 10-11 mg) de aceite metabolizable (tal como escualeno), 0,1-10, 0,3-8, 0,6-6, 0,9-5, 1-4, o 2-3 mg (por ejemplo, 0,9-1,1, 23 o 4-5 mg)de emulsionante (tal como Tween 80) y opcionalmente 0,5-20, 1-15, 2-12, 4-10, 5-7 mg (por ejemplo, 11-13, 5-6, o 2-3 mg) de tocol (tal como alfa tocoferol).
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Este adyuvante puede comprender ademas opcionalmente 5-60, 10-50, o 20-30 |jg (por ejemplo, 5-15, 4050, 10, 20, 30, 40 o 50 jg) de derivado de Upido A (por ejemplo, 3D-MPL).
Estos adyuvantes son particularmente adecuados para formulaciones infantiles y de ancianos. En una realizacion la composicion vacunal que comprende este adyuvante comprende conjugados sacandicos derivados de al menos todos los siguientes serotipos: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F (y puede comprender tambien uno o mas de los serotipos 3, 6A, 19A, y 22F), en el que el tftulo de anticuerpo GMC inducido contra uno o mas (o todos) los componentes vacunales 4, 6B, 9v, 14, 18C, 19F y 23F no es significativamente inferior al inducido por la vacuna Prevnar® en los seres humanos vacunados.
Este adyuvante puede contener opcionalmente 0,025-2,5, 0,05-1,5, 0,075-0,75, 0,1-0,3, o 0,125-0,25 mg (por ejemplo, 0,2-0,3, 0,1-0,15, 0,25 o 0,125 mg) de un esterol (por ejemplo, colesterol), 5-60, 10-50, o 20-30 jg (por ejemplo, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 o 50 jg) de un derivado de lfpido A (por ejemplo, 3D-MPL), y 560, 10-50, o 20-30 jg (por ejemplo, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 o 50 jg) de una saponina (por ejemplo, QS21).
Este adyuvante es particularmente adecuado para formulaciones vacunales para ancianos. En una realizacion la composicion vacunal que comprende este adyuvante comprende conjugados sacandicos derivados de al menos todos los siguientes serotipos: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F (y puede comprender tambien uno o mas de los serotipos 3, 6A, 19A, y 22F), en los que el tftulo de anticuerpo GMC inducido contra uno o mas (o todos) los componentes vacunales 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F no es significativamente inferior al inducido por la vacuna Prevnar® en los seres humanos vacunados.
En una realizacion el adyuvante que se utiliza para las composiciones de la invencion comprende fosfato de aluminio y un derivado de lfpido A (tal como 3D-MPL). Este adyuvante puede comprender (por dosis de 0,5 ml) 100-750, 200-500, o 300-400 jg de Al como fosfato de aluminio, y 5-60, 10-50, o 20-30 jg (por ejemplo, 5-15, 40-50, 10, 20, 30, 40 o 50 jg) de un derivado de lfpido A (por ejemplo, 3D-MPL).
Este adyuvante es particularmente adecuado para formulaciones vacunales para ancianos o infantiles. En una realizacion la composicion vacunal que comprende este adyuvante comprende conjugados sacandicos derivados de al menos todos los siguientes serotipos: 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F, 1, 5, 7F (y puede comprender tambien uno o mas de los serotipos 3, 6A, 19A, y 22F), en los que el tftulo de anticuerpo GMC inducido contra uno o mas (o todos) los componentes vacunales 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F y 23F no es significativamente inferior al inducido por la vacuna Prevnar® en los seres humanos vacunados.
Las preparaciones vacunales que contienen composiciones inmunogenicas de la presente invencion se pueden utilizar para proteger o tratar un marnffero susceptible a la infeccion, por medio de la administracion de dicha vacuna por medio de una via sistemica o mucosa. Estas administraciones pueden incluir la inyeccion por medio de las vfas intramuscular, intraperitoneal, intradermica, o subcutanea; o por medio de la administracion mucosa en los tractos oral y alimentario, respiratorio, genitourinario. La administracion intranasal de las vacunas para el tratamiento de neumoma u otitis media es posible (ya que el transporte nasofanngeo de neumococos puede evitarse mas eficazmente, atenuando la infeccion de esta manera en su estadio mas temprano). Aunque la vacuna de la invencion se puede administrar como una dosis unica, los componentes de la misma se pueden co-administrar juntos al mismo tiempo o en diferentes momentos (por ejemplo los conjugados de sacaridos neumococicos se podnan administrar por separado, al mismo tiempo o 1-2 semanas tras la administracion de cualquier componente proteico bacteriano de la vacuna para la coordinacion optima de las respuestas inmunitarias con respecto uno del otro). Para la co-administracion, el adyuvante Th1 opcional puede estar presente en cada una o todas de las diferentes administraciones. Ademas de una unica via de administracion, se pueden utilizar 2 vfas diferentes de administracion. Por ejemplo, los sacaridos o conjugados sacandicos se pueden administrar IM (o ID) y las protemas bacterinas se pueden administrar IN (o ID). Ademas, las vacunas de la invencion se pueden administrar IM para las dosis de sensibilizacion e IN para las dosis de refuerzo.
El contenido de protemas antigenicas en la vacuna normalmente estara en el intervalo de 1-100 jg, opcionalmente de 5-50 jg, mas tfpicamente en el intervalo de 5-25 jg. Despues de una vacunacion inicial, los sujetos pueden recibir una o mas inmunizaciones de refuerzo espaciadas adecuadamente.
La preparacion de vacunas se describe en general en Vaccine Design ("The subunit and adjuvant approach" (eds Powell M.F. y Newman M.J.) (1995) Plenum Press New York). La encapsulacion en liposomas se describe por Fullerton, Patente de EE. UU. 4.235.877.
Las vacunas o composiciones inmunogenicas de la presente invencion se pueden almacenar en solucion o liofilizadas. En una realizacion, se liofiliza la solucion en presencia de azucar que actua como un lioprotector amorfo, tal como sacarosa, trealosa, glucosa, manosa, maltosa o lactosa. En una realizacion, la solucion se liofiliza en presencia de un azucar que actua como lioprotector amorfo, y un agente de volumen que proporciona una estructura mejor aglutinada tal como glicina o manitol. La presencia de un agente de volumen cristalino permite el acortamiento de los ciclos de secado por congelacion, en presencia de una alta
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concentracion de sal. Ejemplos de dichas mezclas para su uso en la liofilizacion de las composiciones inmunogenicas o vacunas de la invencion incluyen sacarosa/glicina, trealosa/glicina, glucosa/glicina, manosa/glicina, maltosa/glicina, sacarosa/manitol, trealosa/manitol, glucosa/manitol, manosa/manitol y maltosa/manitol. Normalmente, la relacion molar de los dos constituyentes es opcionalmente 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 o 1:6. Las composiciones inmunogenicas de la invencion comprenden opcionalmente los reactivos de liofilizacion que se han descrito anteriormente.
Los agentes estabilizadores anteriores y las mezclas de agentes estabilizadores pueden incluir adicionalmente un polfmero capaz de aumentar la temperatura de transicion de cristalizacion (Tg) de la formulacion, tal como poli(vinilpirrolidona) (PVP), hidroxietil almidon o dextrano, o un polfmero que actua como un agente de volumen cristalino tal como polietilenglicol (PEG) por ejemplo que tengan un peso molecular de entre 1500 y 6000 y dextrano.
Las composiciones inmunogenicas de la invencion estan opcionalmente liofilizadas y se reconstituyen extemporaneamente antes de su uso. La liofilizacion puede dar como resultado una composicion (vacuna) mas estable y posiblemente da lugar a tftulos de anticuerpo mas altos en presencia de 3D-MPL y en ausencia de un adyuvante basado en aluminio.
En un aspecto de la invencion se proporciona un kit vacunal, que comprende un vial que contiene una composicion inmunogenica de la invencion, opcionalmente en forma liofilizada, y ademas comprende un vial que contiene un adyuvante como se ha descrito en el presente documento. Se preve que en este aspecto de la invencion, el adyuvante se utilizara para reconstituir la composicion inmunogenica liofilizada.
Aunque las vacunas de la presente invencion se pueden administrar por cualquier via, la administracion de las vacunas descritas en la piel (ID) forma una realizacion de la presente invencion. La piel humana comprende una cutfcula externa “queratinizada”, llamada estrato corneo, que cubre la epidermis. Por debajo de esta epidermis hay una capa llamada dermis, que a su vez cubre el tejido subcutaneo. Los investigadores han demostrado que la inyeccion de una vacuna en la piel, y en particular la dermis, estimula la respuesta inmunitaria, que se puede asociar tambien a varias ventajas adicionales. La vacunacion intradermica con las vacunas descritas en el presente documento constituye una caractenstica opcional de la presente invencion.
La tecnica convencional de inyeccion intradermica, el “procedimiento de Mantoux”, comprende las etapas de limpiar la pial, y luego pellizcar la piel con una mano, y con el bisel de una aguja de calibre estrecho (calibre 26-31) situando la aguja hacia arriba insertarla en un angulo de entre 10-15 °°. Una vez que se inserta el bisel de la aguja, el cono de la aguja se baja y se avanza adicionalmente mientras se proporciona una pequena presion para elevarla bajo la piel. Entonces se inyecta el lfquido muy lentamente formando de esta manera una ampolla o protuberancia en la superficie de la piel, seguido por una retirada lenta de la aguja.
Mas recientemente, se han descrito dispositivos disenados espedficamente para administrar agentes lfquidos en o a traves de la piel, por ejemplo los dispositivos descritos en los documentos WO 99/34850 y EP 1092444, tambien los dispositivos de inyeccion por propulsion descritos por ejemplo en los documentos WO 01/13977; US 5,480,381, US 5,599,302, US 5,334,144, US 5,993,412, US 5,649,912, US 5,569,189, US 5,704,911, US 5,383,851, US 5,893,397, US 5,466,220, US 5,339,163, US 5,312,335, US 5,503,627, US 5,064,413, US 5,520, 639, US 4,596,556, US 4,790,824, US 4,941,880, US 4,940,460, WO 97/37705 y WO 97/13537. Los procedimientos alternativos de administracion intradermica de las preparaciones vacunales pueden incluir jeringas y agujas convencionales, o dispositivos disenados para el suministro balfstico de vacunas solidas (documento WO 99/27961), o parches transdermicos (documentos WO 97/48440; WO 98/28037); o se aplican en la superficie de la piel (suministro transdermico o transcutaneo, documentos WO 98/20734 ; WO 98/28037).
Cuando las vacunas de la presente invencion se van a administrar en la piel, o mas espedficamente en la dermis, la vacuna esta en un volumen lfquido bajo, particularmente un volumen de entre aproximadamente 0,5 ml y 0,2 ml.
El contenido de antfgenos en vacunas de la piel o intradermicas de la presente invencion puede ser similar a las dosis convencionales que se encuentran en las vacunas intramusculares (vease anteriormente). Sin embargo, una caractenstica de las vacunas de la piel o intradermicas que las formulaciones puedan tener una “dosis baja”. En consecuencia, los antfgenos proteicos en las vacunas de “dosis baja” se presentan opcionalmente de solo 0,1 a 10 |jg o 0,1 a 5 |jg por dosis; y los antfgenos sacandicos (opcionalmente conjugados) pueden estar presentes en el intervalo de 0,01- 1 jg, o entre 0,01 a 0,5 jg de sacarido por dosis.
Como se utiliza en el presente documento, la expresion “suministro intradermico” significa el suministro de una vacuna en la region de la dermis en la piel. Sin embargo, la vacuna no estar localizada necesariamente exclusivamente en la dermis. La dermis es la capa de la piel que se localiza entre aproximadamente 1,0 y aproximadamente 2,0 mm de la superficie en la piel humana, pero hay una cierta variacion en cantidad entre individuos y en diferentes partes del cuerpo. En general, se puede esperar que se alcance la dermis
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penetrando 1,5 mm por debajo de la superficie de la piel. La dermis se localiza entre el estrato corneo y la epidermis en la superficie y la capa subcutanea por debajo. Dependiendo del modo de suministro, la vacuna se puede localizar en ultimo termino solo o primariamente en la dermis, o puede en ultimo termino distribuirse en la epidermis y la dermis.
La presente invencion proporciona ademas una vacuna mejorada para la prevencion o mejora de la otitis media producida por Haemophilus influenzae por la adicion de protemas de Haemophilus influenzae, por ejemplo la protema D en forma libre o conjugada. Ademas, la presente invencion proporciona adicionalmente una vacuna mejorada para la prevencion o mejora de la infeccion neumococica en bebes (por ejemplo, otitis media), basandose en la adicion de una o mas protemas neumococicas como protemas libres o conjugadas de las composiciones conjugadas de S. pneumoniae de la invencion. Dichas protemas neumococicas libres pueden ser las mismas o diferentes de cualquiera de las protemas de S. pneumoniae que se utilizan como velmculos proteicos. Uno o mas antigenos proteicos de Moraxella catarrhalis tambien pueden incluirse en la combinacion vacunal en una forma libre o conjugada. Por lo tanto, la presente invencion es un procedimiento mejorado para dar lugar a una respuesta inmunitaria (protectora) contra la otitis media en bebes.
En otra realizacion, la presente invencion es un procedimiento mejorado para dar lugar a una respuesta inmunitaria (protectora) en bebes (definidos con de 0-2 anos en el contexto de la presente invencion) administrando una cantidad eficaz y segura de una vacuna de la invencion [una vacuna pediatrica]. Otras realizaciones de la presente invencion incluyen la provision de composiciones de conjugados antigenicos de S. pneumoniae de la invencion para su uso en medicina y el uso de conjugados de S. pneumoniae de la invencion en la fabricacion de un medicamento para la prevencion (o tratamiento) de enfermedad neumococica.
En otra realizacion mas, la presente invencion es un procedimiento mejorado para dar lugar a una respuesta inmunitaria (protectora) en una poblacion anciana (en el contexto de la presente invencion un paciente se considera anciano si tiene 50 anos o mas de edad, normalmente por encima de 55 anos y mas general mente por encima de 60 anos) administrando una cantidad eficaz y segura de la vacuna de la invencion, opcionalmente en conjuncion con una o dos protemas de S. pneumoniae presentes como protema libre o conjugada, cuyas protemas de S. pneumoniae libres pueden ser las mismas o diferentes de las protemas de S. pneumoniae que se utilizan como velmculos proteicos.
Un aspecto adicional de la invencion es un procedimiento para inmunizar un ser humano huesped contra una enfermedad producida por S. pneumoniae y opcionalmente la infeccion por Haemophilus influenzae que comprende la administracion al huesped de una dosis inmunoprotectora de la composicion inmunogenica o vacuna o kit de la invencion.
Un aspecto adicional de la invencion es una composicion inmunogenica de la invencion para su uso en el tratamiento o prevencion de la enfermedad producida por la infeccion con S. pneumoniae y opcionalmente Haemophilus influenzae.
Un aspecto adicional de la invencion es el uso de la composicion inmunogenica o vacuna o kit de la invencion en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o prevencion de enfermedades producidas por la infeccion con S. pneumoniae y opcionalmente Haemophilus influenzae.
En un aspecto adicional, la enfermedad es cualquiera de o neumoma o enfermedad neumococica invasiva (IPD) de seres humanos ancianos, exacerbaciones de enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD) de seres humanos ancianos, meningitis y/o bacteriemia de seres humanos infantiles, otitis media de seres humanos infantiles o neumoma y/o conjuntivitis de seres humanos infantiles.
Las expresiones “que comprende”, “comprender” y “comprende” en el presente documento tienen la intencion de los inventores de que se puedan sustituir opcionalmente con las expresiones “que consiste en”, “consistir en” y “consiste en”, respectivamente, en cada caso.
Las realizaciones en el presente documento que se refieren a “composiciones vacunales” de la invencion tambien se pueden aplicar a las realizaciones que se refieren a “composiciones inmunogenicas” de la invencion y viceversa.
Con el fin de que se entienda mejor la presente invencion, se exponen los siguientes ejemplos. Estos ejemplos tienen solamente fines de ilustracion, y no se pretende que limiten el ambito de la invencion de ninguna manera.
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Ejemplos
Ejemplo 1: Expresion de Protema D
Protema D de Haemophilus influenzae
Construccion genetica para la expresion de protema D
Materiales de partida
El ADN codificante de la protema D
La protema D esta altamente conservada entre todos los serotipos y cepas no tipables de H. influenzae. Se obtuvo el vector pHIC348 que contema la secuencia de ADN que codifica el gen de Protema D completo gracias al Dr. A. Forsgren, Department of Medical Microbiology, University of Lund, Malmo General Hospital, Malmo, Suecia. La secuencia de ADN de la protema D se ha publicado por Janson y col., (1991) Infect. Immun. 59: 119-125.
Vector de expresion pMG1
El vector de expresion pMG1 es un derivado del pBR322 (Gross y col., 1985) en el que se introdujeron elementos de control derivados del bacteriofago A para la transcripcion y traduccion de genes ajenos insertados (Shatzman y col., 1983). Ademas, se intercambio el gen de resistencia a la ampicilina por el gen de resistencia a la kanamicina.
La cepa de E. coli AR58
La cepa de E. coli AR58 se genero por transduccion de N99 con una materia prima de fago P1 cultgivado previamente en un derivad SA500 (gaIE::TN10, lambdakil" cl857 AH1). N99 y SA500 son cepas E. coli K12 derivdas del laboratorio del Dr. Martin Rosenberg en el Instituto Nacional de la Salud.
El vector de expresion pMG1
Para la produccion de la protema D, el ADN que codifica la protema se clono en el vector de expresion pMG1. Esta plasmidos utiliza senales del ADN del fago lambda para dirigir la transcripcion y traduccion de los genes ajenos insertados. El vector contiene el promotor PL, operador OL y dos sitios de utilizacion (NutL y NutR) para aliviar los efectos de la polaridad transcripcional cuando se proporciona la protema N (Gross y col., 1985). Los vectores que contienen el promotor PL, se introducen en un huesped E. coli lisogenico para estabilizar el ADN plasirndico. Las cepas huesped lisogenicas contienen el ADN del fago lambda deficiente en replicacion integrado en el genoma (Shatzman y col., 1983). El ADN del fago lambda cromosomico dirige la smtesis de la protema represora cl que se une al represor OL del vector y evita la union de la ARN polimerasa al promotor PL y de esta manera la transcripcion del gen insertado. El gen cl de la cepa de expresion AR58 contiene una mutante sensible a la temperatura de manera que la transcripcion dirigida por PL se puede regular por un cambio de temperatura, es decir, un aumento en la temperatura de cultivo inactiva el represor y la smtesis de la protema ajena se inicia. Este sistema de expresion permite la smtesis controlada de protemas ajenas especialmente las que pueden ser toxicas para la celula (Shimataka y Rosenberg, 1981).
La cepa AR58 de E. coli
La cepa AR58 lisogenica de E. coli que se utiliza para la produccion del vehmulo proteico D es un derivado de la cepa N99 de E. coli K12 NIH (F- su- galK2, lacZ" thr" ). Contiene un fago lambda lisogenico deficiente (galE::TN10, lambdakil"cl857 AH1). El fenotipo Kil" evita el silenciamiento de la smtesis macromolecular del huesped. La mutacion cI857 confiere una lesion sensible a la temperatura del represor cl. La eliminacion AH1 retira el operon derecho del fago lambda y los loci del huesped bio, uvr3, y chlA. La cepa AR58 se genero por transduccion de N99 con un fago materia prima P1 cultivado previamente en un derivado de SA500 (galE::TN10, lambdaKil" cl857 AH1). La introduccion del lisogen deficiente en N99 se selecciono con tetraciclina gracias a la presencia de un transposon TN10 que codifica la resistencia a la tetraciclina en el gen gaIE adyacente.
Construccion del vector pMGMDPPrD
El vector pMG1 que contienen el gen que codifica la protema S1 no estructural del virus de influenza (pMGNS1) se utilizo para construir el pMGMDPPrD. El gen de la protema D se amplifico por PCR a partir del vector pHIC348 (Janson y col., 1991 Infect. Immun. 59:119-125) con los cebadores de PCR que conteman los sitios de restriccion NcoI y XbaI en los extremos 5' y 3', respectivamente. El fragmento NcoI/XbaI se introdujo entonces en el pMGNS1 entre NcoI y XbaI creando asf una protema de fusion que contema los 81 aminoacidos del extremo N de la protema NS1 seguido por la protema PD. Este vector se etiqueto como pMGNS1PrD.
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Basandose en la construccion descrita anteriormente se genero la construccion final para la expresion de protema D. Se retiro un fragmento BamHI/BamHI del pMGNSIPrD. Esta hidrolisis de ADN elimina la region codificante NS1, excepto los tres primeros tres restos del extremo N. Al re-unir en el vector un gen que codifica una protema de fusion con la siguiente secuencia de aminoacidos del extremo N se generaba:
— MDP SSHSSNMANT --- NS1 Protema D
La protema D no contiene peptido ffder o cistema en el extremo N al cual se fijan normalmente las cadenas lipfdicas. La protema por lo tanto ni se excreta en el periplasma ni se lipida, y permanece en el citoplasma en forma soluble.
La construccion final pMG-MDPPrD se introdujo en la cepa huesped AR58 por choque termico a 37°C. Las bacterias que conteman el plasmido se seleccionaron en presencia de kanamicina. La presencia de la insercion de ADN que codificaba la protema D se demostraba por digestion del ADN plasmfdico aislado con endonucleasas seleccionadas. Se hace referencia a la cepa recombinante de E. coli como ECD4.
La expresion de la protema D esta bajo el control del promotor PL lambda/Operador OL. La cepa huesped AR58 contiene un gen cl sensible a la temperatura en el genoma que bloquea la expresion de PL lambda a baja temperatura uniendose a OL .Una vez que se eleva la temperatura se libera el cl del OL y la protema D se expresa.
Preparacion a pequena escala
Al final de la fermentacion las celulas se concentraron y congelaron.
La extraccion de celulas recolectadas y la purificacion de protema D se llevo a cabo de la siguiente manera. El aglomerado del cultivo celular congelado se descongelo y se re-suspendio en una solucion de destruccion celular (tampon citrato pH 6,0) a una DO650 = 60 final. La suspension se paso dos veces a traves de un homogeneizador de alta presion a una P = 1000 bar. El homogenado de cultivo celular se clarifico por centrifugacion y se eliminaron los desechos celulares por filtracion. En la primera etapa de purificacion el lisado filtrado se aplica a una columna de cromatograffa de intercambio cationico (SP Sepharose de flujo rapido). La PD se une a la matriz de gel por interaccion ionica y se eluye por una etapa de aumento de la fuerza ionica del tampon de elucion.
En una segunda etapa de purificacion las impurezas se retienen en una matriz de intercambio anionico (Q Sepharose de flujo rapido). La PD no se une en el gel y se puede recolectar en el flujo continuo.
En ambas etapas de columnas de cromatograffa la fraccion recolectada se controla por DO. El flujo continuo de la cromatograffa en columna de intercambio anionico que contema la protema D purificada se concentra por ultrafiltracion.
La protema D que contema el retenido de la ultrafiltracion se pasa finalmente por una membrana de 0,2 mm. Preparacion a gran escala
La extraccion de las celulas recolectadas y la purificacion de protema D se llevo a cabo de la siguiente manera. El caldo recolectado se enfrio y se paso directamente dos veces a traves de un homogeneizador de alta presion a una presion de aproximadamente 800 bares.
En la primera etapa de purificacion el homogenado de cultivo celular se diluye y se aplica a una columna de cromatograffa de intercambio cationico (SP Sepharose de perlas grandes). La PD se une a la matriz de gel por interaccion ionica y se eluye por una etapa de aumento de la fuerza ionica del tampon de elucion y se filtra.
En una segunda etapa de purificacion las impurezas se retienen en una matriz de intercambio anionico (Q Sepharose de flujo rapido). La PD no se une al gel y se puede recolectar en el flujo continuo.
En ambas etapas de cromatograffa en columna la recoleccion se controla por DO. El flujo continuo de la cromatograffa en columna de intercambio anionico contiene la protema D purificada se concentra y se diafiltra por ultrafiltracion.
La protema D contenida en el retenido de ultrafiltracion se pasa finalmente a traves de una membrana de 0,2 mm.
Ejemplo 1 b: Expresion de PhtD
La protema PhtD es un miembro de la familia de protemas de tffadas de histidina neumococica (Pht) que se caracteriza por tffadas de histidina (motivo HXXHXHX). La PhtD es una molecula de 838 aa y tiene 5 tffadas de histidina (vease Medlmmune WO00/37105 SEQ ID NO: 4 para la secuencia de aminoacidos y SEQ ID
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NO: 5 para la secuencia de ADN). La PhtD tambien contiene una region rica en prolina en el medio (posiciones de aminoacidos 348-380). La PhtD tiene una secuencia de senal en el extremo N de 20 a con un motivo LXXC.
Construccion genetica
La secuencia genetica de la protema PhtD MedImmune (desde el aa 21 al aa 838) se transfirio recombinantemente a E. coli utilizando un vector domestico pTCMP14 que portaba el promotor pA. La cepa huesped E. coli es AR58, que alberga el represor termosensible cI857, que permite la induccion por calor del promotor.
Se llevo a cabo la reaccion en cadena de la polimerasa para amplificar el gen phtD a partir del plasmido MedImmune (que alberga el gen phtD de la cepa Norway 4 de Streptococcus pneumoniae (serotipo 4) - SEQ ID NO: 5 como se describe en el documento WO 00/37105). Los cebadores, espedficos solo para el gen phtD, se utilizaron para amplificar el gen phtD en dos fragmentos. Los cebadores teman cada uno los sitios de restriccion Ndel y Kpnl o el Kpnl y Xbal. Estos cebadores no se hibridan con cualquier nucleotido del vector sino solo con las secuencias espedficas del gen phtD. Un codon de inicio ATG artificial se inserto utilizando el primer cebador que tiene el sitio de restriccion Ndel. Los productos PCR generados se insertaron entonces en el vector de clonacion pGEM-T (Promega), y se confirmo la secuencia de ADN. Se llevo a cabo entonces la subclonacion de los fragmentos en el vector de expresion TCMP14 utilizando tecnicas convencionales y el vector se transformo en E. coli AR58.
Purificacion de PhtD
La purificacion de PhtD se consiguio de la siguiente manera:
□ Cultivo de las celulas de E. coli en presencia de kanamicina: cultivo de 30 horas a 30°C, luego induccion durante 18 horas a 39,5°C.
□ Destruccion de celulas E. coli del cultivo completo a una DO de 6115 en presencia de EDTA 5 mM y PMSF 2 mM como inhibidores de proteasa: Rannie, 2 pasajes, 1000 bares.
□ Captura de anffgenos y eliminacion de desechos celulares sobre cromatograffa XL Q Streamline en modo de lecho expandido a temperatura ambiente (20°C); la columna se lavo con NaCl 150 mM + Empigen 0,25 % pH 6,5 y se eluyo con NaCl 400 mM + Empigen 0,25 % en 25 mM de tampon de fosfato potasico pH 7,4.
□ Filtracion en un cartucho Sartobran 150 (0,45 + 0,2 mm)
□ Union del anffgeno con cromatograffa sobre Sepharose FF IMAC quelante de Zn++ a pH 7,4 en presencia de 5 mM de imidazol a 4°C; la columna se lava con imidazol 5 mM y Empigen al 1 % y se eluye con 50 mM de imidazol, ambos en 25 mM de tampon de fosfato potasico pH 8,0.
□ Cromatograffa de intercambio anionico debil en modo positivo sobre Fractogel EMD DEAE a pH 8,0 (25 mM de fosfato potasico) at 4°C; la columna se lavo con 140 mM de NaCl y se eluyo a 200 mM de NaCl mientras que los contaminantes (protemas y ADN) se mantuvieron adsorbidos en el intercambiador.
□ Concentracion y ultrafiltracion con 2 mM de Na/fosfato K pH 7,15 sobre una membrana de 50 kDa.
□ Esterilizacion por filtracion del volumen purificado en un cartucho filtrante Millipak-20 0,2 mm.
Ejemplo 1c: Expresion de pneumolisina
La pneumolisina neumococica se preparo y detoxico como se describe en los documentos WO2004/081515 y WO2006/032499.
Ejemplo 2:
Preparacion de conjugados
Es bien conocido en la tecnica como fabricar polisacaridos neumococicos purificados. Para los fines de estos ejemplos, los polisacaridos se produjeron esencialmente como se describe en el documento EP072513 o por procedimientos estrechamente relacionados. Antes de la conjugacion los polisacaridos se tienen que modificar de tamano por microfluidizacion como se describe posteriormente.
Las condiciones de activacion y acoplamiento son espedficas de cada polisacarido. Estas se dan en la Tabla 1. El polisacarido modificado de tamano (excepto pS5, 6B y 23F) se disolvio en NaCl 2M , NaCl 0,2 M o en agua para inyeccion (WFI). Se evaluo la concentracion optima de polisacarido para todos los serotipos. Todos los serotipos excepto el serotipo 18C se conjugaron directamente al vetffculo proteico como se detalla
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posteriormente. Se hicieron dos conjugados alternativos con el serotipo 22F; uno conjugado directamente, el otro por medio de un engarce ADH.
A partir de una solucion materia prima de 100 mg/ml en acetonitrilo o en una solucion de acetonitrilo/agua al 50 %/50 %, se anadio CDAP (relacion CDAP/PS 0,5-1,5 mg/mg PS) a la solucion de polisacarido. 1,5 minutos mas tarde se anadieron 0,2 M-0,3 M de NaOH para obtener el pH espedfico de activacion. La activacion del polisacarido se llevo a cabo a este pH durante 3 minutos a 25°C. La protema purificada (protema D, PhtD, pneumolisina o DT) (la cantidad depende de la relacion inicial PS/vehmulo proteico) se anadio al polisacarido activado y se llevo a cabo la reaccion de acoplamiento al pH espedfico durante hasta 2 horas (dependiendo del serotipo) bajo la regulacion el pH. Con el fin de inactivar los grupos no reactivos de ester de cianato, se anadio entonces una solucion de glicina 2 M a la mezcla. El pH se ajusto entonces al pH de inactivacion (pH 9,0). La solucion se agito durante 30 minutos a 25°C y luego durante una noche a 2-8°C con agitado continuo lento.
Preparacion de 18C:
El 18C se unio al vehmulo proteico por medio de un engarce dihidracida de acido adfpico (ADH). El serotipo de polisacarido 18C se microfluidizo antes de la conjugacion.
Derivacion de toxoide tetanico con EDAC
Para la derivacion del toxoide tetanico, se diluyo el TT purificado a 25 mg/ml en 0,2 M de NaCl y se anadio el espaciador ADH con el fin de alcanzar una concentracion final de 0,2 M. Cuando se completo la disolucion del espaciador, se ajusto el pH a 6,2. Se anadio entonces EDAC (1-etil-3-(3-dimetil-aminopropil) carbodiimida) hasta alcanzar una concentracion final de 0,02 M y la mezcla se agito durante 1 hora bajo el pH de regulacion. La reaccion de condensacion se paro aumentando el pH hasta 9,0 durante al menos 30 minutos a 25°C. El TT derivado se diafiltro entonces (membrana CO de 10 kDa) con el fin de eliminar la ADH residual y el reactivo EDAC.
el TTah en masa se esterilizo por filtracion finalmente hasta la etapa de acoplamiento y se almaceno a -70°C. Acoplamiento qmmico de TTah a PS 18C
Los detalles de los parametros de conjugacion se pueden encontrar en la Tabla 1.
2 gramos de PS microfluidizado se diluyeron a la concentracion definida en agua y se ajusto a 2 M NaCl por adicion de NaCl en polvo.
La solucion CDAP (100 mg/ml de acetonitrilo/WFI 50/50 v/v recien preparado) se anadio hasta alcanzar la relacion CDAP/PS apropiada.
El pH se elevo a pH de activacion pH 9,0 por la adicion de 0,3 M de NaOH y se estabilizo a este pH hasta la adicion de TTah.
Tras 3 minutos, el TTah derivado (20 mg/ml en 0,2 M de NaCl) se anadio a cada relacion TTah/PS de 2; se regulo el pH a pH de acoplamiento 9,0. La solucion se dejo una hora bajo el pH de regulacion.
Para la inactivacion, se anadio una solucion de glicina 2 M a la mezcla PS/TTah/CDAP.
El pH se ajusto a pH de inactivacion (pH 9,0).
La solucion se agito durante 30 min a 25°C, y luego se dejo durante una noche a 2-8°C con agitado continuo lento.
Conjugado PS22FAH-PhtD
En un segundo procedimiento de conjugacion para este sacarido (el primero era el procedimiento de conjugacion directa PS22-PhtD que se muestra en la Tabla 1), el 22F se unio al vehmulo proteico por medio de un engarce - dihidracida de acido adfpico (ADH). El polisacarido serotipo 22F se microfluidizo antes de la conjugacion.
Derivacion PS 22F
La activacion y acoplamiento se llevaron a cabo a 25°C bajo agitado continuo en un bano de agua con control de temperatura.
El PS22F microfluidizado se diluyo para obtener una concentracion final de PS de 6 mg/ml en 0,2 M de NaCl y la solucion se ajusto a un pH de 6,05 ± 0,2 con HCl 0,1 N.
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La solucion CDAP (100 mg/ml de acetonitrilo/WFI, 50/50 reden preparada) se anadio hasta alcanzar la relacion CDAP/PS apropiada (1,5/1 p/p).
El pH se elevo a pH de activacion 9,00 ± 0,05 por adicion de NaOH 0,5 M y se estabilizo a este pH hasta la adicion de ADH.
Tras 3 minutos, se anadio el ADH hasta alcanzar la relacion de ADH/PS apropiada (8,9/1 p/p); el pH se regulo a pH de acoplamiento pH 9,0. La solucion se dejo durante 1 hora bajo pH de regulacion.
El derivado PSah se concentro y diafiltro.
Acoplamiento
La PhtD a 10 mg/ml en 0,2 M de NaCl se anadio al derivado PS22Fah con el fin de alcanzar una relacion de PhtD/PS22FAH de 4/1 (p/p). El pH se ajusto a 5,0 ± 0,05 con HCl. La solucion de EDAC (20 mg/ml en 0,1 M Tris-HCl pH 7,5) se anadio manualmente en 10 min (250 pl/min) hasta alcanzar 1 mg EDAC/mg PS22Fah. La solucion resultante se incubo durante 150 min (tambien se utilizo durante 60 min) a 25°C con agitado y pH de regulacion. La solucion se neutralizo por la adicion de 1 M de Tris-HCl pH 7,5 (1/10 del volumen final) y se dejo 30 min a 25°C.
Antes de la elucion en Sephacryl S400HR, el conjugado se clarifico utilizando un filtro Minisart de 5 mm.
El conjugado resultante tiene una relacion final PhtD/PS de 4,1 (p/p), un contenido de PS libre por debajo del 1 % y una antigenicidad (a-PS/a-PS) de 36,3 % y antigenicidad anti-PhtD de 7,4 %.
Purificacion de los conjugados:
Los conjugados se purificaron por filtracion en gel utilizando una columna de filtracion en geles Sephacryl S400HR equilibrada con 0,15 M de NaCl (S500HR para 18C) para retirar las moleculas pequenas (incluyendo DMAP) y el PS y proterna no conjugados. Basandose en los diferentes tamanos moleculares de los componentes de reaccion, los conjugados PS-PD, PS-TT, PS-PhtD, PS-pneumolisina o PS-DT primero se eluyen , seguido por PS libre o DT libre y finalmente DMAP y otras sales (NaCl, glicina).
Las fracciones que contienen los conjugados se detectaron por UV280 nm. Las fracciones se agruparon de acuerdo con su Kd, se esterilizaron por filtracion (0,22 mm) y se almacenaron a +2-8°C. Se determinaron las relaciones PS/Proterna en las preparaciones de conjugado.
Condiciones especificas de activacion/acoplamiento/inactivacion de conjugados de PS de S. pneumoniae con Proterna D/TT/DT/PhtD/Ply
Cuando aparece “pfluid” en una lrnea de cabecera, indica que el sacarido se modifico de tamano por microfluidizacion antes de la conjugacion. Los tamanos de sacaridos despues de la microfluidizacion se dan en la Tabla 2.
Tabla 1 Condiciones especificas de activacion/acoplamiento/inactivacion de conjugados de PS de S.
pneumoniae con Proterna D/TT/DT/PhtD/Ply
Serotipo
1 pfluid 4 pfluid 5 6A 6B 7F pfluid
Conc. de PS (mg/ml)
2,5 2,5 7,1 5,0 5,0 5,0
Disolucion de PS
WFI WFI WFI NaCI2 M NaCI2 M NaCI2 M
Conc. de PD (mg/ml)
10,0 10,0 5,0 5,0 5,0 10,0
Relacion Inicial PD/PS (p/p)
1,5/1 1,5/1 1/1 1/1 1,1/1 1,2/1
Conc. de CDAP (mg/mg PS)
0,50 0,50 0,79 0,83 0,83 0,75
pHa=pHc=pHq
9,0/9,0/9,0 9,5/9,5/9,0 9,0/9,0/9,0 9,5/9,5/9,0 9,5/9,5/9,0 9,5/9,5/9,0
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Serotipo
9V pfluid 14 pfluid 18C pfluid 19A pfluid 19F pfluid 22F pfluid 23F
Conc. de PS (mg/ml)
5,0 5,0 4,5 15,0 9,0 6,0 2,38
Disolucion de PS
NaCI2 M NaCI2 M NaCI2 M NaCI2 M NaCI2 M NaCI 0,2 M NaCI2 M
Conc. de vehculo proteico (mg/ml)
10,0 10,0 20,0 (TT) 10,0 (Ply) 20,0 (DT) 10,0 (PhtD) 5,0
Relacion Inicial vehiculo proteico/PS (P/P)
1,2/1 1,2/1 2/1 2,5/1 1,5/1 3/1 1/1
Conc, de CDAP. (mg/mg PS)
0,50 0,75 0,75 1,5 1,5 1,5 0,79
pHa=pHc=pHq
9,5/9,5/9,0 9,5/9,5/9,0 9,0/9,0/9,0 9,0/9,0/9,0 9,0/9,0/9,0 9,0/9,0/9,0 9,5/9,5/9,0
Nota: pHa,c,q corresponden al pH de activacion, acoplamiento e inactivacion, respectivamente
Caracterizacion:
Cada conjugado se caracterizo y cumpKa las especificaciones descritas en la Tabla 2. El contenido en polisacarido (jg/ml) se midio por el ensayo de Resorcinol y el contenido proteico (|jg/ml por el ensayo de Lowry. La relacion PS/PD (p/p) se determina por la relacion de las concentraciones.
Contenido de polisacarido libre (%):
Se determino el contenido en polisacarido libre de los conjugados que se manteman a 4°C o almacenados dfas a 37 °C en el sobrenadante obtenido tras la incubacion con anticuerpos anti vehmulo proteico a y sulfato amonico saturado, seguido por una centrifugacion.
Se utilizo un ELISA a-PS/ a-PS se utilizo para la cuantificacion de polisacaridos libres en el sobrenadante. La ausencia de conjugado tambien se controlo por ELISA a-vehmulo proteico/ a-PS.
Antigenicidad:
Se analizo la antigenicidad de los mismos conjugados en un ELISA tipo sandwich en el que la captura y la deteccion de anticuerpo era a-PS y a-Protema, respectivamente.
Contenido en protema libre (%):
El vehmulo proteico sin conjugar se puede separar del conjugado durante la etapa de purificacion. El contenido de protema residual libre se determino utilizando una cromatograffa de exclusion por tamano (TSK 5000-PWXL) seguido por una deteccion con UV (214 nm). Las condiciones de elucion permitfan la separacion del vehmulo proteico libre y el conjugado. Se determino entonces el contenido en protema libre en los volumenes conjugados frente a una curva de calibracion (desde 0 a 560 jlg/ml de vehmulo proteico). El vehmulo proteico libre en T se obtema de la siguiente manera: % vehmulo libre = (vehmulo libre (jg/ml) / (concentracion total del correspondiente vehmulo proteico medido por Lowry (jg/ml) * 100 %).
Estabilidad:
La distribucion de peso molecular (Kav) y la estabilidad se midieron por HPLC-SEC filtracion en gel (TSK 5000-PWXL) para los conjugados que se mantuvieron a 4°C y almacenados durante 7 dfas a 37°C.
La caracterizacion de 10/11/13/14 valencias se da en la Tabla 2 (vease el comentario por debajo).
Los conjugados proteicos se pueden adsorber en fosfato de aluminio y agruparse para forma la vacuna final.
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Conclusion:
Se habfan producido conjugados inmunogenicos, que habfan demostrado ser componentes de una vacuna prometedora.
TABLA 2 - Caractensticas de los conjugados
Conjugados
Tamano de PS (Dax103) Relacion Vehfculo/PS PS libre (Elisa) Vehfculo libre Antigenicidad de PS (Elisa) Tamano de Conj, (kDa)
PS1-PD
349-382* 1,5-1,6 1,0 %-1,2 % 3,9 %-4,8 % 87 %-95 % 1499-1715
PS4-PD
93-100* 1,5-1,6 4,7-6,5% 3,2 %-4,0 % 90 %-96 % 1303-1606
PS5-PD***
367-443 0,80 8,7-11,2% 2,2 %-3,8 % 93 %-108 % 1998-2352
PS6A-PD
1100-1540 0,61 4,5 % No hecho 45,9 % No hecho
PS6B-PD***
1069-1391 0,7-0,8 1,3-1,6 % <2,0 % 68 %-75 % 4778-5235
PS7F-PD
255-264* 1,1-1,2 <1 % <1,4 % 58 % 3907-4452
PS9V-PD
258-280* 1,3-1,5 <1 % <1,3 % 67 %-69 % 9073-9572
PS14-PD
232-241* 1,4 <1 % <1,5 % 70 % 3430-3779
PS18C-TT”
89-97* 2,2-2,4 1,5-2,2% <4 % 46 %-56 % 5464-6133
PS19A-Ply*
151 3,2 <1 % 29 %
PS19F-DT
133-143* 1,4-1,5 4,1 %-5,9 % <1,2 %-<1,3 % 82 %-88 % 2059-2335
PS22F-PhtD*
159-167 2,17 5,8 No hecho 37 % No hecho
PS22F-AHPhtD*159-167
3,66-4,34 <1 % No hecho 28-31 % No hecho
PS23F-PD***
914-980 0,5 1,4-1,9 % 3,7 %-4,9 % 137 %-154 % 2933-3152
* Tamano de PS despues de la microfluidizacion del PS nativo
Se produjo una vacuna de 10 valencias mezclando los conjugados de serotipos 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F y 23F (por ejemplo a una dosis de 1, 3, 1, 1, 1, 1, 1, 3, 3, 1 |jg de sacarido, respectivamente por dosis para un ser humano). Se produjo una vacuna de 11 valencias anadiendo ademas el conjugado del serotipo 3 de la Tabla 5 (por ejemplo, a 1 jg de sacarido por dosis para un ser humano). Se produjo una vacuna de 13 valencias anadiendo ademas los conjugados de serotipos 19A y 22F anteriores (con el 22F unido bien directamente a PhtD, o alternativamente mediante un engarce aDh) [por ejemplo, a una dosis de 3 jg de cada uno de los sacaridos por dosis para un ser humano]. Se produjo una vacuna de 14 valencias anadiendo ademas el conjugado del serotipo 6A anterior [por ejemplo, a una dosis de 1 jg de sacarido por dosis para un ser humano].
Ejemplo 3: Evidencia de que la inclusion de la proteina D de Haemophilus influenzae en una composicion inmunogenica de la invencion puede proporcionar una proteccion mejorada contra la otitis media aguda (AOM)
Diseno del estudio
El estudio utilizaba una vacuna 11Pn-PD - que comprendfa los serotipos 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F y 23F conjugado cada uno con proteina D de H. influenzae (a los que se hace referencia en la Tabla 5 del Ejemplo 4). Los sujetos se distribuyeron aleatoriamente en dos grupos para recibir cuatro dosis de cualquiera de la vacuna 11 Pn-PD o Havrix a aproximadamente 3, 4, 5 y 12-15 meses de edad. Todos los sujetos recibieron la vacuna Infanrix-hexa de GSK Biologicals (DTPa-HBV-IPV/Hib) concomitantemente a los 3, 4 y 5 meses de edad. La vacuna Infanrix-hexa es una combinacion de Pediarix y Hib mezcladas antes de la administracion. El seguimiento de la eficacia para el analisis “Segun el Protocolo” comenzo 2 semanas despues de la administracion de la tercera dosis de vacuna y continuo hasta los 24-27 meses de edad. Se evaluo el transporte nasofarmgeo de S. pneumoniae y H. influenzae en un subgrupo seleccionado de sujetos.
Los padres se advirtieron de que consultaran al investigador si su hijo estaba enfermo, tema dolor de ofdos, perforacion espontanea de la membrana timpanica o descarga otica espontanea. Si el investigador
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sospechaba de un episodio de AOM, el nino se remitfa inmediatamente a un especialista de o^dos, nariz y garganta (ENT) para la confirmacion del diagnostico.
Un diagnostico clmico de AOM se basaba en la apariencia visual de la membrana timpanica (es decir, enrojecimiento, abultamiento, perdida de reflejo de la luz) o la presencia de descarga de fluido de ofdo medio (como se demuestra por una otoscopia simple o neumatica o por microscopfa). Ademas, al menos dos de los siguientes signos o smtomas teman que estar presentes: dolor de ofdos, descarga otica, perdida de audicion, fiebre, letargia, irritabilidad, anorexia, vomitos, o diarrea. Si el especialista ENT confirmaba el diagnostico clmico, se recolectaba un especimen del fluido de ofdo medio por timpanocentesis para el ensayo bacteriologico.
Para los sujetos que repetfan la visita enfermos, se consideraba que habfa comenzado un nuevo episodio de AOM si habfan pasado mas de 30 dfas desde el principio del episodio anterior. Ademas, se consideraba que un episodio de AOM era un nuevo episodio bacteriano si el serotipo de la bacteria aislada era diferente del aislado previo cualquiera que fuera el intervalo entre los dos episodios consecutivos.
Resultados del ensayo
Se inscribieron un total de 4968 ninos, 2489 en el grupo 11Pn-PD y 2479 en el grupo de control. NO habfa diferencias importantes en las caractensticas demograficas o factores de riesgo entre los dos grupos.
Episodios clinicos y definicion de los casos de AOM
Durante el periodo de seguimiento por protocolo, se registro un total de 333 episodios de AOM clmica en el grupo 11Pn-PD y 499 en el grupo de control.
La Tabla 3 presenta la eficacia protectora de la vacuna 11Pn-PD y ambas vacunas 7-valentes ensayadas anteriormente en Finlandia (Eskola y col., N Engl J Med 2001; 344: 403 - 409 y Kilpi y col., Clin Infect Dis 2003 37:1155-64) contra cualquier episodio de AOM y AOM causado por diferentes serotipos de neumococos, H. influenzae, NTHi y M. catarrhalis.
Se consegrna una reduccion estadfsticamente significativa y clmicamente relevante del 33,6 % de la carga total de enfermedad de AOM con la 11Pn-PD, independientemente de la etiologfa (Tabla 3).
La eficacia total contra los episodios de AOM debido a cualquiera de los 11 serotipos neumococicos contenidos en la vacuna 11Pn-PD era del 57,6 % (Tabla 3).
Otro hallazgo importante en el estudio actual es el 35,6 % de proteccion proporcionado por la vacuna 11Pn- PD contra la AOM causada por H. influenzae (y especialmente un 35,3 % de proteccion proporcionada por NTHi). Esta hallazgo es de principal significacion clmica, debido al aumento de la importancia de H. influenzae como una causa principal de AOM en la vacuna de conjugado neumococico. En lmea con la proteccion proporcionada contra AOM, la vacuna 11Pn-PD tambien reducfa la presencia nasofarmgea de H. influenzae despues de la dosis de refuerzo el segundo ano de edad. Estos hallazgos contrastan con las observaciones previas en Finlandia, donde se observo, para ambas vacunas conjugadas neumococicas 7- valentes, un aumento de los episodios de AOM debidos a H. influenzae, (Eskola y col., y Kilpi y colj como prueba de la sustitucion etiologica.
No se podfa establecer una clara correlacion entre la proteccion contra los episodios de AOM debidos Hi y los niveles de anticuerpos contra el vehmulo proteico D, y las concentraciones de anticuerpos IgG anti-PD post-primarias en los vacunados con 11Pn-pD, que se manteman libres de episodios de AOM-Hi, eran esencialmente los mismos que los niveles de anticuerpos IgG anti-PD post-primarios medidos en los vacunados con 11Pn-PD que desarrollaban al menos un episodio de AOM Hi durante el periodo de seguimiento de la eficacia. Sin embargo, aunque no se puedo establecer la correlacion entre el impacto biologico de la vacuna y la inmunogenicidad para IgG anti-PD post-primaria, es razonable asumir que el vehmulo proteico PD, que esta altamente conservado entre las cepas de H. influenzae, ha contribuido en gran manera a la induccion de la produccion contra Hi.
El efecto sobre la enfermedad de AOM se acompanaba por un efecto sobre la presencia nasofarmgea que era de similar magnitud para la vacuna de serotipos neumococicos y H. influenzae (Figura 1). Esta reduccion de la presencia nasofarmgea de H. influenzae en los vacunados con el conjugado PD apoya la hipotesis de un efecto protector directo de la vacuna del conjugado-PD contra H. influenzae, incluso si la eficacia protectora no se podfa correlacionar con las respuestas inmunitarias de IgG anti-PD segun se mide por ELISA.
En el siguiente ejemplo se utilizo un modelo de otitis media de chinchilla con agrupamientos de sueros de los ninos inmunizados con la formulacion 11-valente de este ejemplo o con la vacuna 10-valente del Ejemplo 2 (vease tambien las Tablas 1 y 2 y los comentarios por debajo) Ambos agrupamientos inducen una reduccion significativa del porcentaje de animales con otitis media respecto al agrupamiento de sueros pre-inmunes.
No hay una diferencia significativa entre los agrupamientos inmunes de 10 y 11-valentes. Esto demuestra que ambas vacunas tienen un potencial similar para inducir proteccion contra la otitis media producida por una H. influenzae no tipable en este modelo.

Claims (14)

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    REIVINDICACIONES
    1. Una composicion inmunogenica que comprende conjugados de sacaridos capsulares de S. pneumoniae de los serotipos 19A y 19F en la que 19A se conjuga con un primer toxoide bacteriano y 19F se conjuga con un segundo toxoide bacteriano que es toxoide difterico o CRM197 y que comprende adicionalmente conjugados de los sacaridos capsulares de S. pneumoniae 1, 4, 5, 6B, 7F, 9v, 14, 18C y 23F, en la que el primer toxoide bacteriano es una protema diferente del segundo toxoide bacteriano.
  2. 2. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 1 en la que el primer toxoide bacteriano se selecciona de entre toxoide tetanico, pneumolisina, toxoide difterico o CRM197.
  3. 3. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-2 que comprende adicionalmente un conjugado del sacarido capsular 3 de S. pneumoniae.
  4. 4. La composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1-3 que comprende ademas un conjugado del sacarido capsular 6A de S. pneumoniae.
  5. 5. La composicion inmunogenica de cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende ademas una o mas protemas de S. pneumoniae conjugadas o no conjugadas.
  6. 6. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 5 en la que dichas una o mas protemas de S. pneumoniae se seleccionan de entre la familia de Tnadas de Poli Histidina (PhtX), familia de protemas de union a la colina (CbpX), CbpX truncadas, familia LytX, LytX truncadas, protemas quimericas CbpX truncada- LytX truncada, pneumolisina detoxicada (Ply), PspA, PsaA, Sp128, Sp101, Sp130, Sp125 y Sp133.
  7. 7. La composicion inmunogenica de cualquiera de las reivindicaciones 5 o 6 que comprende una protema PhtX.
  8. 8. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 6 en la que la protema PhtX es PhtD.
  9. 9. La composicion inmunogenica de la reivindicacion 8 que comprende al menos un sacarido capsular de S. pneumoniae conjugado con PhtD o una protema de fusion de la misma, en la que la relacion de PhtD respecto al sacarido en el conjugado es entre 6:1 y 1:5.
  10. 10. La composicion inmunogenica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende ademas un adyuvante.
  11. 11. Una vacuna que comprende la composicion inmunogenica de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 y un excipiente farmaceuticamente aceptable.
  12. 12. Un procedimiento de fabricacion de una vacuna de acuerdo con la reivindicacion 11 que comprende la etapa de mezclar la composicion inmunogenica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 con un excipiente farmaceuticamente aceptable.
  13. 13. El uso de la composicion inmunogenica de las reivindicaciones 1 a 10 o la vacuna de la reivindicacion 11 en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento o la prevencion de enfermedades producidas por la infeccion por Streptococcus pneumoniae.
  14. 14. El uso de acuerdo con la reivindicacion 13 en el que la enfermedad es cualquiera o ambas de entre neumoma o enfermedad neumococica invasiva (IPD) de seres humanos ancianos, exacerbaciones de enfermedad pulmonar obstructiva cronica (COPD) de seres humanos ancianos, meningitis y/o bacteriemia de seres humanos infantiles, otitis media de seres humanos infantiles o neumoma y/o conjuntivitis de seres humanos infantiles.
    imagen1
    Figura 1, Inmunogenicidad del conjugado en monos Rhesus (niveles de IgG anti-PS post-ll)
    Respuesta de linfocitos B de memoria especifica de PS3
    imagen2
    Figura 2, Inmunogenicidad del conjugado en monos Rhesus (frecuencias de linfocitos B de memoria anti-PS3 post-ll)
    imagen3
    4-va ente
    4-va ente
    solo PS
    dPIy
    Figura 3, Inmunogenicidad de PS19F en ratones Balb/c
    {niveles de IgG post-
    4-valente
    4-valente
    lo PS
    PlilD
    Figura 4, Inmunogenicidad de PS22F en ratones Balb/c
    (niveles de IgG post
    IgG Anti-PS19F
    4-va ente
    4-va ente
    solo PS
    dPIy
    imagen4
    Respuesta de IgG anti-22F en ratones Balb/c
    g 120
    3 100
    d 80
    5
    O 60 | 40
    a 20
    O 0 o> u
    22F-PhtD
    p < 0,00001
    1
    #Ife —
    fll J- ll,j
    22F-AH-PhtD
    Figura 5, Niveles en el suero de anticuerpos IgG anti-PS
    Titulos de opsono-fagocitosis anti-22F en ratones
    Balb/c
    p < 0,00001
    k. CD
    (/)
    20000
    4-1 O
    15000
    Sh-
    10000
    Q. 5 6 a c
    5000
    o (/) Q. o
    0
    22F-PhtD
    . 11 ■ If _____
    ________—71_________________________
    22F-AH-PhtD
    Figura 6, titulos de opsono-fagocitosis
    imagen5
    imagen6
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Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY133981A (en) * 2000-06-29 2007-11-30 Smithkline Beecham Biologicals S A Vaccine composition
ATE317267T1 (de) * 2000-11-07 2006-02-15 Immunovaccine Technologies Inc Impfstoffe mit erhöhter immunantwort und verfahren zur deren herstellung
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
KR102220506B1 (ko) 2005-04-08 2021-03-02 와이어쓰 엘엘씨 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
CN103083657B (zh) * 2005-06-27 2016-06-08 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 免疫原性组合物
KR101515078B1 (ko) * 2005-12-22 2015-04-24 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
KR101523108B1 (ko) * 2006-08-17 2015-05-26 더 유에이비 리서치 파운데이션 면역원성 ｐｃｐａ 폴리펩티드 및 이의 용도
US8398985B2 (en) * 2007-04-23 2013-03-19 Serum Institute Of India Ltd. Antigenic polysaccharides and process for their preparation
BRPI0810778A2 (pt) * 2007-05-02 2011-09-13 Glaxosmithkline Biolog Sa kit, vacina combinada, e, métodos de diminuição da interferência de vizinhança de crm sobre um antìgeno sensìvel em um esquema de imunização primária de uma vacina, e de diminuição da interferência de vizinhança sobre um antìgeno sensìvel, e, uso de conjugados de sacarìdeo
ES2552366T3 (es) * 2007-06-26 2015-11-27 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vacuna que comprende conjugados de polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
CN106310293A (zh) 2007-09-27 2017-01-11 免疫疫苗技术有限公司 在包括连续疏水相的载体中的脂质体在体内输送多核苷酸中的应用
EP2200642B1 (en) 2007-10-19 2012-04-18 Novartis AG Meningococcal vaccine formulations
US8226959B2 (en) 2008-02-01 2012-07-24 Newcastle Innovation Pty Ltd Vaccine compositions
PT2271360E (pt) * 2008-04-16 2015-12-07 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina
MX2010011393A (es) * 2008-04-16 2010-11-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacuna.
US9125863B2 (en) * 2008-05-22 2015-09-08 Children's Medical Center Corporation Synergistic immunogenic fusion protein-polysaccharide conjugate
AU2009253780B2 (en) 2008-06-05 2014-08-14 Immunovaccine Technologies Inc. Compositions comprising liposomes, an antigen, a polynucleotide and a carrier comprising a continuous phase of a hydrophobic substance
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
MX2011006648A (es) 2008-12-17 2011-10-14 Novartis Ag Vacunas meningococales que incluyen receptor de hemoglobina.
JP5597245B2 (ja) 2009-03-24 2014-10-01 ノバルティス アーゲー アジュバント添加した髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質
AU2010227221B2 (en) * 2009-03-24 2015-01-22 Novartis Ag Combinations including pneumococcal serotype 14 saccharide
WO2010109324A1 (en) * 2009-03-24 2010-09-30 Novartis Ag Combinations of meningococcal factor h binding protein and pneumococcal saccharide conjugates
WO2010125480A1 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Pneumococcal vaccine and uses thereof
WO2010141312A2 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Wake Forest University Health Sciences Flagellin fusion proteins and conjugates comprising pneumococcus antigens and methods of using the same
WO2011030218A1 (en) 2009-09-10 2011-03-17 Novartis Ag Combination vaccines against respiratory tract diseases
KR20110068831A (ko) * 2009-12-16 2011-06-22 재단법인 전라남도생물산업진흥재단 리포좀 조성물, 그 제조방법, 및 폐렴 백신으로서의 그 용도
TW201136603A (en) * 2010-02-09 2011-11-01 Merck Sharp & Amp Dohme Corp 15-valent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine composition
GB201003924D0 (en) * 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB201003922D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
EP2585106A1 (en) 2010-06-25 2013-05-01 Novartis AG Combinations of meningococcal factor h binding proteins
EP2613805B1 (en) 2010-09-10 2019-10-23 GlaxoSmithKline Biologicals SA Meningococcus overexpressing nada and/or nhba and outer membrane vesicles derived therefrom
WO2012072769A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Novartis Ag Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations
CN103533954B (zh) * 2011-03-02 2015-09-09 诺华股份有限公司 含较低剂量的抗原和/或佐剂的联合疫苗
GB201103836D0 (en) 2011-03-07 2011-04-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
US20140072622A1 (en) * 2011-05-17 2014-03-13 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine against streptococcus pneumoniae
SG11201401177WA (en) 2011-10-06 2014-04-28 Immunovaccine Technologies Inc Liposome compositions comprising an adjuvant that activates or increases the activity of tlr2 and uses thereof
CA2862247A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Novartis Ag Adjuvanted combinations of meningococcal factor h binding proteins
SI2809349T1 (sl) * 2012-01-30 2019-03-29 Serum Institute Of India Private Limited Imunogeni sestavek
BR112014019166A2 (pt) 2012-02-02 2017-07-04 Novartis Ag promotores para expressão aumentada de proteína em meningococos
TR201908003T4 (tr) * 2012-02-07 2019-06-21 Infectious Disease Res Inst TLR4 agonistleri içeren gelişmiş adjuvan formülasyonları ve bunların kullanım metotları.
WO2013131983A1 (en) 2012-03-07 2013-09-12 Novartis Ag Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens
EP2822584A1 (en) 2012-03-08 2015-01-14 Novartis AG Combination vaccines with tlr4 agonists
KR102057217B1 (ko) 2012-06-20 2020-01-22 에스케이바이오사이언스 주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
RU2510281C2 (ru) * 2012-06-22 2014-03-27 Общество с ограниченной ответственностью "Эпитоп" (ООО "Эпитоп") ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА
WO2014009971A2 (en) * 2012-07-07 2014-01-16 Bharat Biotech International Limited Non-alcoholic vaccine compositions free from animal- origin and process for preparation thereof
PT3421051T (pt) 2012-08-16 2020-06-26 Pfizer Processos e composições de glicoconjugação
RU2015106930A (ru) 2012-09-06 2016-10-20 Новартис Аг Комбинированные вакцины с менингококком серогруппы в и к/д/с
CN109289045A (zh) * 2012-09-19 2019-02-01 国立大学法人大阪大学 含有肺炎球菌表面蛋白a的肺炎球菌疫苗
GB201218660D0 (en) 2012-10-17 2012-11-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
KR20140075201A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
KR20140075196A (ko) * 2012-12-11 2014-06-19 에스케이케미칼주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
US20150320852A1 (en) 2012-12-18 2015-11-12 Glaxosmithkline Biologicals Sa Conjugates for protecting against diphtheria and/or tetanus
RU2672053C2 (ru) * 2012-12-20 2018-11-09 Пфайзер Инк. Способ гликоконъюгации
RU2544168C1 (ru) * 2014-01-17 2015-03-10 Андрей Дмитриевич Протасов Способ формирования иммунологической памяти к антигенам streptococcus pneumoniae у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
NZ759686A (en) * 2014-01-21 2023-07-28 Pfizer Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
BR122023022294A2 (pt) * 2014-01-21 2023-12-12 Pfizer Inc. Uso de uma composição imunogênica que compreende um conjugado imunogênico compreendendo um polissacarídeo capsular isolado de streptococcus pneumoniae do sorotipo 15b
KR102049826B1 (ko) 2014-01-21 2019-12-03 화이자 인코포레이티드 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 및 그의 접합체
EP3443983B1 (en) * 2014-02-14 2022-07-20 Pfizer Inc. Immunogenic glycoprotein conjugates
CN103893751B (zh) * 2014-03-26 2016-04-20 天津康希诺生物技术有限公司 一种肺炎球菌多糖蛋白缀合疫苗及其制备方法
CN103936842B (zh) * 2014-04-30 2016-03-23 重庆医科大学 肺炎链球菌溶血素突变体及其作为粘膜免疫佐剂的应用
US9107906B1 (en) 2014-10-28 2015-08-18 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
EP3221339A1 (en) * 2014-11-20 2017-09-27 Biological E Limited Codon optimized polynucleotide for high level expression of crm197
JP6903046B2 (ja) * 2015-03-26 2021-07-14 ジーピーエヌ ワクチン プロプライアタリー リミティド 連鎖球菌ワクチン
SG11201708242YA (en) 2015-05-04 2017-11-29 Pfizer Group b streptococcus polysaccharide-protein conjugates, methods for producing conjugates, immunogenic compositions comprising conjugates, and uses thereof
MX2017015985A (es) * 2015-06-08 2018-08-15 Serum Inst Of India Private Ltd Metodos para mejorar la adsorcion de conjugados de polisacarido-proteina y formulacion de vacuna multivalente obtenida con los mismos.
RU2600838C1 (ru) * 2015-06-08 2016-10-27 Андрей Дмитриевич Протасов Способ усиления активности факторов неспецифической защиты у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких
KR20160146240A (ko) 2015-06-12 2016-12-21 전관구 염기성 계면활성제를 이용한 산화은나노 및 은나노 제조 방법
BR112017028130A2 (pt) * 2015-06-23 2018-08-28 Biological E Ltd vacina conjugada pneumocócica multivalente
TWI756893B (zh) * 2015-07-21 2022-03-01 美商輝瑞股份有限公司 包含經共軛之莢膜糖抗原的致免疫性組成物、包含該致免疫性組成物之套組及彼等之用途
GB201518684D0 (en) * 2015-10-21 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB201522068D0 (en) * 2015-12-15 2016-01-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Dried composition
MX2019001342A (es) 2016-08-05 2019-07-04 Sanofi Pasteur Inc Composicion de conjugado de proteina-polisacarido de neumococo multivalente.
CA3031797A1 (en) * 2016-08-05 2018-02-08 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
CN109890413B (zh) 2016-09-02 2024-04-16 赛诺菲巴斯德股份有限公司 脑膜炎奈瑟氏菌疫苗
CN109982715A (zh) 2016-09-27 2019-07-05 免疫疫苗技术有限公司 利用低剂量体积b细胞表位组合物以在受试人中诱导抗体免疫应答的方法
JP2019529497A (ja) 2016-09-30 2019-10-17 バイオロジカル イー リミテッド 多糖類−タンパク質コンジュゲートを含む多価肺炎球菌ワクチン組成物
JP6944946B2 (ja) * 2016-10-20 2021-10-06 Ｋｍバイオロジクス株式会社 低分子化ＰＲＰを用いたＨｉｂコンジュゲートワクチンの製造方法
KR102083973B1 (ko) * 2016-10-28 2020-04-23 주식회사 엘지화학 향상된 IgG 역가를 갖는 다가면역원성 조성물 및 이의 용도
CN108144052A (zh) * 2016-12-02 2018-06-12 武汉博沃生物科技有限公司 肺炎链球菌多糖-蛋白质缀合物及其制取方法和用途
EP3562838A2 (en) 2016-12-28 2019-11-06 Henriques Normark, Birgitta Microparticles from streptococcus pneumoniae as vaccine antigens
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
WO2018126229A2 (en) * 2016-12-30 2018-07-05 Sutrovax, Inc. Polypeptide-antigen conjugates with non-natural amino acids
EP3570879B1 (en) * 2017-01-20 2022-03-30 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
KR102650073B1 (ko) 2017-01-31 2024-03-20 머크 샤프 앤드 돔 엘엘씨 스트렙토코커스 뉴모니아 혈청형 19f 유래의 협막 다당류 단백질 접합체의 제조 방법
US11246918B2 (en) 2017-02-03 2022-02-15 Eva Barbara Schadeck Haemophilus influenzae saccharide-carrier conjugate compositions and uses thereof
US11400162B2 (en) 2017-02-24 2022-08-02 Merck Sharp & Dohme Llc Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
CN107929728A (zh) * 2017-04-19 2018-04-20 武汉博沃生物科技有限公司 一种肺炎球菌蛋白疫苗及其制备方法
US10729763B2 (en) 2017-06-10 2020-08-04 Inventprise, Llc Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds
EP3634481A4 (en) 2017-06-10 2021-07-21 Inventprise, LLC. MULTIVALENT CONJUGATE VACCINES WITH BIVALENT OR MULTIVALENT CONJUGATE POLYSACCHARIDES THAT CONFIRM ENHANCED IMMUNOGENICITY AND AVIDITY
WO2019043245A1 (en) * 2017-09-04 2019-03-07 London School Of Hygiene And Tropical Medicine MICROBIAL CELLS EXPRESSING STREPTOCOCCAL SERROTYPES
CA3074714A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Processes for the formulation of pneumococcal polysaccharides for conjugation to a carrier protein
CN111065387B (zh) 2017-09-07 2023-08-25 默沙东有限责任公司 肺炎球菌多糖及其在免疫原性多糖-载体蛋白缀合物中的用途
MX2020002557A (es) 2017-09-07 2020-07-13 Merck Sharp & Dohme Polisacaridos neumococicos y su uso en conjugados de polisacarido inmunogenico con proteina.
SG11202005255PA (en) 2017-12-06 2020-07-29 Merck Sharp & Dohme Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
WO2019152921A1 (en) 2018-02-05 2019-08-08 Sanofi Pasteur Inc. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
CA3089007A1 (en) 2018-02-05 2019-08-08 Sanofi Pasteur Inc. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
JP2021522213A (ja) 2018-04-18 2021-08-30 エスケー バイオサイエンス カンパニー リミテッド ストレプトコッカス・ニューモニエ莢膜多糖類及びその免疫原性接合体
US20210252125A1 (en) * 2018-04-30 2021-08-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for producing streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide carrier protein conjugates
US11896656B2 (en) 2018-04-30 2024-02-13 Merck Sharp & Dohme Llc Methods for providing a homogenous solution of lyophilized mutant diptheria toxin in dimethylsulfoxide
CN112074294A (zh) * 2018-04-30 2020-12-11 默沙东公司 从冻干球生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法
CN108524926B (zh) * 2018-06-29 2021-06-29 康希诺生物股份公司 一种多价肺炎球菌结合疫苗的制剂组合及其应用
JP7399934B2 (ja) 2018-07-04 2023-12-18 バックスサイト・インコーポレイテッド 免疫原性複合体の改良
EP3849587A4 (en) * 2018-09-12 2022-06-29 Affinivax, Inc. Multivalent pneumococcal vaccines
MX2021007496A (es) 2018-12-19 2021-08-05 Merck Sharp & Dohme Llc Composiciones que comprenden conjugados de polisacarido de streptococcus pneumoniae con proteina y sus metodos de uso.
JP7441301B2 (ja) * 2019-07-18 2024-02-29 セルトリオン， インク． 球菌多糖類－タンパク質接合体を含む免疫原性組成物
US20210070890A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Serum Institute Of India Private Limited Method for obtaining purified bacterial polysaccharides
JP7419499B2 (ja) 2019-09-18 2024-01-22 アルコン インク． 湿式充填のソフトヒドロゲル眼用インサート
KR20220146451A (ko) * 2020-01-17 2022-11-01 인벤트프라이즈 엘엘씨 다가 스트렙토코커스 백신
KR20210117663A (ko) 2020-03-20 2021-09-29 주식회사 보고 수직형 침지식 dpf 세척장치
CN116121106A (zh) * 2021-07-08 2023-05-16 成都生物制品研究所有限责任公司 肺炎链球菌无动物源冻干保护剂

Family Cites Families (180)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
US4235877A (en) 1979-06-27 1980-11-25 Merck & Co., Inc. Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit
EP0027888B1 (en) 1979-09-21 1986-04-16 Hitachi, Ltd. Semiconductor switch
BE889979A (fr) 1981-08-14 1982-02-15 Smith Kline Rit Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4619828A (en) 1982-07-06 1986-10-28 Connaught Laboratories, Inc. Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccines
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4695624A (en) 1984-05-10 1987-09-22 Merck & Co., Inc. Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
US4709017A (en) 1985-06-07 1987-11-24 President And Fellows Of Harvard College Modified toxic vaccines
IT1187753B (it) 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
US5173294A (en) 1986-11-18 1992-12-22 Research Foundation Of State University Of New York Dna probe for the identification of haemophilus influenzae
US4950740A (en) 1987-03-17 1990-08-21 Cetus Corporation Recombinant diphtheria vaccines
AU614755B2 (en) 1987-06-05 1991-09-12 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Autocrine motility factors in cancer diagnosis and management
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4940460A (en) 1987-06-19 1990-07-10 Bioject, Inc. Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US5785973A (en) * 1988-02-01 1998-07-28 Praxis Biologics, Inc. Synthetic peptides representing a T-cell epitope as a carrier molecule for conjugate vaccines
US5339163A (en) 1988-03-16 1994-08-16 Canon Kabushiki Kaisha Automatic exposure control device using plural image plane detection areas
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
DE3841091A1 (de) 1988-12-07 1990-06-13 Behringwerke Ag Synthetische antigene, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
EP0449856B1 (en) 1988-12-16 2001-09-12 De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom
EP0378881B1 (en) 1989-01-17 1993-06-09 ENIRICERCHE S.p.A. Synthetic peptides and their use as universal carriers for the preparation of immunogenic conjugates suitable for the development of synthetic vaccines
DE69015222T2 (de) 1989-02-04 1995-05-04 Akzo Nv Tocole als Impfstoffadjuvans.
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
FR2649013B1 (fr) 1989-07-03 1991-10-25 Seppic Sa Vaccins et vecteurs de principes actifs fluides contenant une huile metabolisable
FR2649012B1 (fr) 1989-07-03 1991-10-25 Seppic Sa Emulsions multiphasiques injectables
CA2063271A1 (en) 1989-07-14 1991-01-15 Subramonia Pillai Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
IL98715A0 (en) 1990-08-13 1992-07-15 American Cyanamid Co Filamentous hemaglutinin of bodetella pertussis as a carrier molecule for conjugate vaccines
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
CA2059693C (en) * 1991-01-28 2003-08-19 Peter J. Kniskern Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
US6592876B1 (en) 1993-04-20 2003-07-15 Uab Research Foundation Pneumococcal genes, portions thereof, expression products therefrom, and uses of such genes, portions and products
JP3215109B2 (ja) 1991-02-15 2001-10-02 ユーエイビー リサーチ ファウンデーション 肺炎球菌タンパクの構造遺伝子
US5476929A (en) 1991-02-15 1995-12-19 Uab Research Foundation Structural gene of pneumococcal protein
GB9105992D0 (en) 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US5552146A (en) 1991-08-15 1996-09-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions relating to useful antigens of Moraxella catarrhalis
GB9118204D0 (en) 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
EP0625910B1 (en) 1992-02-11 2003-07-23 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Dual carrier immunogenic construct
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
MA22842A1 (fr) 1992-03-27 1993-10-01 Smithkline Beecham Biolog Procede de preparation de compositions de vaccin.
EP0643559B1 (en) 1992-05-06 1999-04-14 The President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin receptor-binding region
JP3428646B2 (ja) 1992-06-18 2003-07-22 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバードカレッジ ジフテリア毒素ワクチン
SG49909A1 (en) 1992-06-25 1998-06-15 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition containing adjuvants
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
US5569189A (en) 1992-09-28 1996-10-29 Equidyne Systems, Inc. hypodermic jet injector
US5334144A (en) 1992-10-30 1994-08-02 Becton, Dickinson And Company Single use disposable needleless injector
GB9224584D0 (en) 1992-11-23 1993-01-13 Connaught Lab Use of outer membrane protein d15 and its peptides as vaccine against haempohilus influenzae diseases
DE69405551T3 (de) 1993-03-23 2005-10-20 Smithkline Beecham Biologicals S.A. 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen
EP1300156A3 (en) 1993-05-18 2003-05-07 The Ohio State University Research Foundation Otitis media vaccine
AU678613B2 (en) 1993-09-22 1997-06-05 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method of activating soluble carbohydrate using novel cyanylating reagents for the production of immunogenic constructs
SI0729473T1 (en) 1993-11-17 2001-02-28 Om Pharma Glucosamine disaccharides, method for their preparation, pharmaceutical composition comprising same, and their use
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
WO1995024176A1 (en) 1994-03-07 1995-09-14 Bioject, Inc. Ampule filling device
US5466220A (en) 1994-03-08 1995-11-14 Bioject, Inc. Drug vial mixing and transfer device
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US5917017A (en) 1994-06-08 1999-06-29 President And Fellows Of Harvard College Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain
US6455673B1 (en) 1994-06-08 2002-09-24 President And Fellows Of Harvard College Multi-mutant diphtheria toxin vaccines
EP0772619B2 (en) 1994-07-15 2010-12-08 The University of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
US5565204A (en) * 1994-08-24 1996-10-15 American Cyanamid Company Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections
US5599302A (en) 1995-01-09 1997-02-04 Medi-Ject Corporation Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring
EP0814833B1 (en) 1995-03-22 2003-05-28 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Producing immunogenic constructs using soluble carbohydrates activated via organic cyanylating reagents
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
GB9620795D0 (en) 1996-10-05 1996-11-20 Smithkline Beecham Plc Vaccines
US6440425B1 (en) 1995-05-01 2002-08-27 Aventis Pasteur Limited High molecular weight major outer membrane protein of moraxella
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
US5843464A (en) 1995-06-02 1998-12-01 The Ohio State University Synthetic chimeric fimbrin peptides
US5695768A (en) * 1995-06-07 1997-12-09 Alberta Research Council Immunostimulating activity of Streptococcus pneumoniae serotype 8 oligosaccharides
GB9513074D0 (en) 1995-06-27 1995-08-30 Cortecs Ltd Novel anigen
US5666153A (en) 1995-10-03 1997-09-09 Virtual Shopping, Inc. Retractable teleconferencing apparatus
US6290970B1 (en) 1995-10-11 2001-09-18 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor protein of Moraxella
US5893397A (en) 1996-01-12 1999-04-13 Bioject Inc. Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus
US6090576A (en) 1996-03-08 2000-07-18 Connaught Laboratories Limited DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella
GB9607549D0 (en) 1996-04-11 1996-06-12 Weston Medical Ltd Spring-powered dispensing device
ATE323721T1 (de) 1996-05-01 2006-05-15 Univ Rockefeller Cholin-bindendes protein, welches als gegen pneumokokken gerichtetes vakzin verwendet wird
US7341727B1 (en) 1996-05-03 2008-03-11 Emergent Product Development Gaithersburg Inc. M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same
DE69719761T2 (de) 1996-06-18 2003-12-18 Alza Corp Vorrichtung zur verbesserung der transdermalen verabreichung von medikamenten oder der abnahme von körperflüssigkeiten
WO1998006734A1 (en) 1996-08-16 1998-02-19 Smithkline Beecham Corporation Novel prokaryotic polynucleotides, polypeptides and their uses
WO1998018931A2 (en) 1996-10-31 1998-05-07 Human Genome Sciences, Inc. Streptococcus pneumoniae polynucleotides and sequences
EP0942984A2 (en) 1996-11-12 1999-09-22 Regents Of The University Of Minnesota C3 BINDING PROTEIN OF $i(STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE)
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
EP0957972B1 (en) 1996-12-20 2003-03-19 Alza Corporation Device and method for enhancing transdermal agent flux
DE19708537A1 (de) 1997-03-03 1998-09-10 Biotechnolog Forschung Gmbh Neues Oberflächenprotein (SpsA-Protein) von Streptococcus pneumoniae etc.
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6303347B1 (en) 1997-05-08 2001-10-16 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6764840B2 (en) 1997-05-08 2004-07-20 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
FR2763244B1 (fr) * 1997-05-14 2003-08-01 Pasteur Merieux Serums Vacc Composition vaccinale multivalente a porteur mixte
US5993412A (en) 1997-05-19 1999-11-30 Bioject, Inc. Injection apparatus
CA2292838A1 (en) 1997-06-03 1998-12-10 Connaught Laboratories Limited Lactoferrin receptor genes of moraxella
GB9711990D0 (en) 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
US6764686B2 (en) 1997-07-21 2004-07-20 Baxter International Inc. Modified immunogenic pneumolysin compositions as vaccines
WO1999011241A1 (en) 1997-09-05 1999-03-11 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Oil in water emulsions containing saponins
GB9718901D0 (en) 1997-09-05 1997-11-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US6224880B1 (en) * 1997-09-24 2001-05-01 Merck & Co., Inc. Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines
KR20010024299A (ko) 1997-09-24 2001-03-26 리전츠 오브 더 유니버스티 오브 미네소타 스트렙토코쿠스 뉴모니애로부터의 사람 보체 ｃ3 분해단백질분해효소
US5965714A (en) * 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
CN1285753A (zh) 1997-12-02 2001-02-28 鲍德杰克特疫苗公司 透皮给药微粒疫苗组合物
IT1298087B1 (it) 1998-01-08 1999-12-20 Fiderm S R L Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni
US7018637B2 (en) 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
NZ530277A (en) 1998-04-07 2005-08-26 Medimmune Inc Derivatives of pneumococcal choline binding proteins for vaccines
KR100638503B1 (ko) 1998-04-07 2006-10-26 세인트 쥬드 칠드런즈 리써치 호스피탈 Ｎ-말단 콜린 결합 단백질 ａ 절두물의 아미노산을 포함하는 폴리펩티드, 이로부터 유도된 백신 및 이를 포함하는 약제학적 조성물
CA2328399A1 (en) 1998-04-23 1999-10-28 University Of Alabama At Birmingham Pneumococcal surface protein c(pspc), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor
AU7924598A (en) 1998-06-08 1999-12-30 Sca Emballage France Fast flattening packaging
GB9812613D0 (en) 1998-06-11 1998-08-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
DK1091928T3 (da) 1998-06-30 2007-07-23 Om Pharma Nye acylerede pseudodipeptider, fremgangsmåde til disses fremstilling og sammensætninger, som indeholder dem
CZ2001622A3 (cs) 1998-08-19 2002-01-16 North American Vaccine, Inc. Imunogenní konjugát polysacharid-protein s ß-propionamidovým spojením výhodný jako vakcina produkovaná za pouľití N-akryloylovaného polysacharidu
GB9818548D0 (en) 1998-08-25 1998-10-21 Microbiological Res Authority Treatment of mucas hypersecretion
BR9914066A (pt) 1998-09-24 2002-04-23 Univ Minnesota Polipeptìdio degradador de c3 de complemento humano de streptococcus pneumoniae
US6541616B1 (en) 1998-10-01 2003-04-01 Antex Biologics Inc. Moraxella catarrhalis protein, gene sequence and uses thereof
US7357936B1 (en) 1998-10-16 2008-04-15 Smithkline Beecham Biologicals, Sa Adjuvant systems and vaccines
AU1819400A (en) 1998-11-17 2000-06-05 Schlumberger Technology Corporation Transmitting information over a communication link
AU2027400A (en) 1998-11-19 2000-06-05 St. Jude Children's Research Hospital Identification and characterization of novel pneumococcal choline binding proteins, cbpg and cbpd, and diagnostic and therapeutic uses thereof
EP1140157B1 (en) 1998-12-21 2009-02-18 MedImmune, Inc. Streptococcus pneumoniae proteins and immunogenic fragments for vaccines
CN100398653C (zh) 1998-12-23 2008-07-02 益得生物医学公司 新颖的链球菌抗原
EP1034792A1 (en) 1999-03-11 2000-09-13 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Intranasal delivery of pneumococcal polysaccharide vaccines
MY125387A (en) * 1999-03-19 2006-07-31 Smithkline Beecham Biologicals S A Vaccine
JP2002541808A (ja) 1999-04-09 2002-12-10 テクラブ， インコーポレイテッド ポリサッカリド結合体ワクチンのための組換えトキシンａタンパク質キャリア
IL145982A0 (en) 1999-04-19 2002-07-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6558670B1 (en) 1999-04-19 2003-05-06 Smithkline Beechman Biologicals S.A. Vaccine adjuvants
DE60045721D1 (de) 1999-06-10 2011-04-21 Medimmune Inc Streptococcus pneumoniae Proteine und Impfstoffe
US6319224B1 (en) 1999-08-20 2001-11-20 Bioject Medical Technologies Inc. Intradermal injection system for injecting DNA-based injectables into humans
US6494865B1 (en) 1999-10-14 2002-12-17 Becton Dickinson And Company Intradermal delivery device including a needle assembly
US20040191834A1 (en) * 1999-10-28 2004-09-30 Laferriere Craig Antony Joseph Novel method
WO2001046127A1 (fr) 1999-12-22 2001-06-28 Om Pharma Pseudodipeptides acyles porteurs d'un bras auxiliaire fonctionnalise
FR2806304B1 (fr) * 2000-03-17 2002-05-10 Aventis Pasteur Conjugues polysaccharidiques du pneumocoque a usage vaccinal contre le tetanos et la diphterie
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
EP1303612A2 (en) 2000-06-20 2003-04-23 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
MY133981A (en) * 2000-06-29 2007-11-30 Smithkline Beecham Biologicals S A Vaccine composition
GB0108364D0 (en) * 2001-04-03 2001-05-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
GB0103170D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
AU2001281001B2 (en) 2000-08-04 2005-11-03 Corixa Corporation New immunoeffector compounds
GB0022742D0 (en) 2000-09-15 2000-11-01 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU9475001A (en) 2000-09-26 2002-04-08 Hybridon Inc Modulation of immunostimulatory activity of immunostimulatory oligonucleotide analogs by positional chemical changes
WO2002078673A1 (fr) 2001-03-29 2002-10-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Procede de production d'un medicament sous forme de granules fins
US20030031684A1 (en) 2001-03-30 2003-02-13 Corixa Corporation Methods for the production of 3-O-deactivated-4'-monophosphoryl lipid a (3D-MLA)
WO2002091998A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Aventis Pasteur, Inc. Novel meningitis conjugate vaccine
FR2827199B1 (fr) 2001-07-10 2004-07-09 Centre Nat Rech Scient Procede et machine de fabrication ex situ de reseaux de biopuces basse et moyennes integration
GB0123580D0 (en) 2001-10-01 2001-11-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
WO2003035836A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Hybridon Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends
GB0130215D0 (en) * 2001-12-18 2002-02-06 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
WO2003054007A2 (en) 2001-12-20 2003-07-03 Shire Biochem Inc. Streptococcus antigens
CA2474398A1 (en) 2002-02-04 2003-08-14 Corixa Corporation New immunoeffector compounds
GB0213622D0 (en) * 2002-06-13 2002-07-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine Corporation
AU2003257003A1 (en) 2002-07-30 2004-02-16 Baxter Healthcare S.A. Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines
SI1524993T1 (sl) 2002-08-02 2013-07-31 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Neisserijski vakcinski sestavki, ki obsegajo kombinacijo antigenov
GB0220198D0 (en) * 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Modified saccharides,conjugates thereof and their manufacture
JP3754420B2 (ja) 2003-02-04 2006-03-15 三洋電機株式会社 二次電池用電極板及びその製造方法並びにこの電極板を用いた二次電池
ES2295836T3 (es) 2003-03-13 2008-04-16 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Procedimiento de purificacion de citolisina bacteriana.
US20060251675A1 (en) 2003-03-17 2006-11-09 Michael Hagen Mutant cholera holotoxin as an adjuvant and an antigen carrier protein
WO2005000347A1 (en) 2003-06-23 2005-01-06 Baxter International Inc. Vaccines against group y neisseria meningitidis and meningococcal combinations thereof
US8048432B2 (en) * 2003-08-06 2011-11-01 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Polysaccharide-protein conjugate vaccines
GB0323103D0 (en) * 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
GB0408977D0 (en) * 2004-04-22 2004-05-26 Chiron Srl Immunising against meningococcal serogroup Y using proteins
EP1740217B1 (en) 2004-04-30 2011-06-15 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Meningococcal conjugate vaccination
AU2005239963B2 (en) 2004-05-11 2011-01-06 De Staat Der Nederlanden, Vertegenwoordigd Door De Minister Van Vws Neisseria meningitidis IgtB LOS as adjuvant
GB0421083D0 (en) 2004-09-22 2004-10-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Purification process
GB0502096D0 (en) 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Purification of streptococcal capsular polysaccharide
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
KR102220506B1 (ko) * 2005-04-08 2021-03-02 와이어쓰 엘엘씨 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
US7955605B2 (en) * 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
CN103083657B (zh) 2005-06-27 2016-06-08 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 免疫原性组合物
WO2007026249A2 (en) * 2005-09-01 2007-03-08 Novartis Vaccines And Diagnostics Gmbh & Co Kg Multiple vaccination including serogroup c meningococcus
US20090035326A1 (en) 2005-11-01 2009-02-05 Novartis Ag Compositions with antigens adsorbed to calcium phosphate
TWI457133B (zh) * 2005-12-13 2014-10-21 Glaxosmithkline Biolog Sa 新穎組合物
KR101515078B1 (ko) * 2005-12-22 2015-04-24 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 백신
GB0607088D0 (en) * 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US8852625B2 (en) 2006-04-26 2014-10-07 Micell Technologies, Inc. Coatings containing multiple drugs
ES2552366T3 (es) 2007-06-26 2015-11-27 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vacuna que comprende conjugados de polisacárido capsular de Streptococcus pneumoniae
PL2385981T3 (pl) 2008-12-18 2020-01-31 Wyeth Llc Sposób kontroli masy cząsteczkowej polisacharydów streptococcus pneumoniae z zastosowaniem węgla

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0620193B1 (pt) 2019-12-31
EP1968631B1 (en) 2015-04-08
AU2006327041A1 (en) 2007-06-28
CY1121376T1 (el) 2020-05-29
CN103585623A (zh) 2014-02-19
AU2006327036A1 (en) 2007-06-28
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CA2634885A1 (en) 2007-06-28
KR101365001B1 (ko) 2014-02-21
CR10119A (es) 2008-07-29
EP1962899A2 (en) 2008-09-03
SI1973564T1 (sl) 2017-02-28
AU2006327041B2 (en) 2010-08-26
NO343981B1 (no) 2019-08-05
MA30062B1 (fr) 2008-12-01
BRPI0620163B1 (pt) 2019-08-13
CY1116407T1 (el) 2017-02-08
CR10122A (es) 2008-08-21
CY1118535T1 (el) 2017-07-12
JP5579387B2 (ja) 2014-08-27
EP2402025A3 (en) 2012-03-07
TW201350129A (zh) 2013-12-16
WO2007071710A2 (en) 2007-06-28
HRP20190037T1 (hr) 2019-02-22
HRP20161682T1 (hr) 2017-01-27
WO2007071710A8 (en) 2008-09-04
HK1120230A1 (en) 2009-03-27
EP2384765B1 (en) 2016-11-23
CN110179974A (zh) 2019-08-30
EP2384765A2 (en) 2011-11-09
PE20071305A1 (es) 2007-12-14
IL211664A0 (en) 2011-05-31
NO344187B1 (no) 2019-09-30
SI1968631T1 (sl) 2015-07-31
MA30065B1 (fr) 2008-12-01
DK1968631T3 (da) 2015-06-15
CN101378779A (zh) 2009-03-04
CA2816182C (en) 2018-02-20
CA2808919A1 (en) 2007-06-28
CN101374548A (zh) 2009-02-25
CN101378778A (zh) 2009-03-04
EP2384765A3 (en) 2012-06-20
TW200738258A (en) 2007-10-16
MY147495A (en) 2012-12-14
CA2634885C (en) 2016-04-19
KR20080081061A (ko) 2008-09-05
IL192084A (en) 2013-11-28
EP1968631A2 (en) 2008-09-17
US20180207262A1 (en) 2018-07-26
CA2816182A1 (en) 2007-06-28
PT2384765T (pt) 2017-02-06
NO20082647L (no) 2008-09-18
HRP20161681T1 (hr) 2017-01-13
PL3017827T3 (pl) 2019-04-30
EA014107B1 (ru) 2010-10-29
MY150719A (en) 2014-02-28
IL219641A (en) 2017-10-31
LT2384765T (lt) 2017-01-10
NZ569077A (en) 2011-08-26
SG168517A1 (en) 2011-02-28
NZ569168A (en) 2012-02-24
ES2614938T3 (es) 2017-06-02
AU2006327040B2 (en) 2010-08-19
KR20130103831A (ko) 2013-09-24
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