JPS59186921A - 免疫原性複合物 - Google Patents
免疫原性複合物Info
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- JPS59186921A JPS59186921A JP58195132A JP19513283A JPS59186921A JP S59186921 A JPS59186921 A JP S59186921A JP 58195132 A JP58195132 A JP 58195132A JP 19513283 A JP19513283 A JP 19513283A JP S59186921 A JPS59186921 A JP S59186921A
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- proteins
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、抗原性蛋白質と、ウィルス、マイコゾラズマ
、バクテリア、寄生虫または動物細胞からのベプチＶと
のあいだの免疫原性複合物つまりいわゆるイスコム（ｉ
ｓｃｏｍ ）に関する。本発明はまた、それらの製造方
法およびそれらを免疫刺激剤およびワクチンとして用い
ることに関する。
、バクテリア、寄生虫または動物細胞からのベプチＶと
のあいだの免疫原性複合物つまりいわゆるイスコム（ｉ
ｓｃｏｍ ）に関する。本発明はまた、それらの製造方
法およびそれらを免疫刺激剤およびワクチンとして用い
ることに関する。
死滅ウィルスたとへばインフレンザウイルスはすぐれた
抗原効果を有することが知られている。
抗原効果を有することが知られている。
しかしそれらは、かなりに精製したあとでさえも発熱的
である。防禦免疫性を誘導するに重要である成分を分け
ることにより発熱効果を避けられたが、免疫原性はしば
しば十分に強くはなくなる。
である。防禦免疫性を誘導するに重要である成分を分け
ることにより発熱効果を避けられたが、免疫原性はしば
しば十分に強くはなくなる。
それで免疫反応を増加さすためには、分離された抗原（
サブユニット）を含有するそれらのワクチンに適当なア
ジュバントを導入せねばならない。
サブユニット）を含有するそれらのワクチンに適当なア
ジュバントを導入せねばならない。
他方、有効なアジュバントは、これまで用いられた方式
では、マイナスの副作用をおこす。アジュバント含有ワ
クチンは、それで、発熱をおこす点では、全ウィルスを
基礎とするワクチンと同様に具合悪いのである。
では、マイナスの副作用をおこす。アジュバント含有ワ
クチンは、それで、発熱をおこす点では、全ウィルスを
基礎とするワクチンと同様に具合悪いのである。
免疫原性を増加さすために、リボゾームの表面に捕捉さ
れているかまたは結合されていた、デタージエントで取
り出された膜蛋白質が製造された（ ＢＰＯ願７９４０
０ Ｂ ３．０ ）。
れているかまたは結合されていた、デタージエントで取
り出された膜蛋白質が製造された（ ＢＰＯ願７９４０
０ Ｂ ３．０ ）。
ブタ−ジャントを除いた、リボゾーム中膜蛋白質はσ５
Ｐ４１４８８７６に記載されている。デタージエント不
含の単一ラメラのリポチーム生成物中にアジュバントを
添加することは、σｓｐ４ １９Ｓ １９１に記載さ
れている（その効果について報告はない〕。σ５ｐ４１
１７１１３Ｆｉ、ウィルス抗原を含有する、マイナスに
荷電したりポゾームを記載している。インフルエンザ赤
血球凝集素およびノイラミニダーゼを含有するりポゾー
ム中にアジュバントとしてマイコバクテリアの細胞壁を
加えると、よりすぐれた免疫反応を与える。
Ｐ４１４８８７６に記載されている。デタージエント不
含の単一ラメラのリポチーム生成物中にアジュバントを
添加することは、σｓｐ４ １９Ｓ １９１に記載さ
れている（その効果について報告はない〕。σ５ｐ４１
１７１１３Ｆｉ、ウィルス抗原を含有する、マイナスに
荷電したりポゾームを記載している。インフルエンザ赤
血球凝集素およびノイラミニダーゼを含有するりポゾー
ム中にアジュバントとしてマイコバクテリアの細胞壁を
加えると、よりすぐれた免疫反応を与える。
ジフテリアトキソイｒを含有するマイナスに帯電したり
ポゾームに死滅結核菌、°百日咳菌およびサポニンのよ
うなアジュバントヲ加えると、やはりよりよい免疫反応
が得られた（ｔｒｓｐ ４０５３５８５）。
ポゾームに死滅結核菌、°百日咳菌およびサポニンのよ
うなアジュバントヲ加えると、やはりよりよい免疫反応
が得られた（ｔｒｓｐ ４０５３５８５）。
しかし、上記した脂質含有膜蛋白質生成物はすべて、長
期保存、凍結乾燥または不注意な扱いたとべば高温で不
安定である。
期保存、凍結乾燥または不注意な扱いたとべば高温で不
安定である。
デタージエント不含および脂質不含の蛋白質ミセルもま
たワクチンとして生産された。Ｓθｎ＋ＬｉｋｉＦｏｒ
ｅ日ｔウィルス（ＳＦＶ ）の膜蛋白質のミセルがＳＦ
Ｖに対する循環抗体の形成を刺激しそして８ＦＶによる
胎児感染に対してマウスを保護する。他方、バラインア
レンデー６−ウィルスの膜蛋白質は、ミセルに油アジュ
バントを混合しないと、羊における抗体形成を刺激しな
いし、肺炎をおこすＰニー３−培賽物の投与に対して保
護しない。オイルアトシュバントは、感染部位において
、局所的反応の形で副作用をおこすのがふつうである。
たワクチンとして生産された。Ｓθｎ＋ＬｉｋｉＦｏｒ
ｅ日ｔウィルス（ＳＦＶ ）の膜蛋白質のミセルがＳＦ
Ｖに対する循環抗体の形成を刺激しそして８ＦＶによる
胎児感染に対してマウスを保護する。他方、バラインア
レンデー６−ウィルスの膜蛋白質は、ミセルに油アジュ
バントを混合しないと、羊における抗体形成を刺激しな
いし、肺炎をおこすＰニー３−培賽物の投与に対して保
護しない。オイルアトシュバントは、感染部位において
、局所的反応の形で副作用をおこすのがふつうである。
（ＥＰＣ願８１１０２２１３．６）。
本発明の目的はこれらの欠点を避け、高い免疫原性を有
し、副作用のない貯蔵に安定な膜蛋白質複合物を提供す
ることである。このことは、蛋白質の疎水性領域と、ウ
ィルス、マイコプラズマ細菌、動物細胞または寄生虫よ
りのベゾチドとのあいだの脂質不含複合物を用いて達成
される。この複合物は、１種または１種より多くの配糖
体の添加で製造される。これらの新規複合物は、配糖体
無添加で生ずる相当する蛋白質ミセルとは別の電顕下で
の形態学的構造を有する。これらのミセルは放射状に配
列されたスパイクを有する緊密な中心コアを有するが、
本発明による複合物は、円状サブユニットまたは球状構
造の部分より成立つ開放球状構造を有している。本発明
の複合物およびその部分は、また、相当するミセルより
より低い沈降定数（第１図をみよ）を有し、そして、蛋
白質またはペプ′チドの相当する単量体形より高い沈降
定数を有する。
し、副作用のない貯蔵に安定な膜蛋白質複合物を提供す
ることである。このことは、蛋白質の疎水性領域と、ウ
ィルス、マイコプラズマ細菌、動物細胞または寄生虫よ
りのベゾチドとのあいだの脂質不含複合物を用いて達成
される。この複合物は、１種または１種より多くの配糖
体の添加で製造される。これらの新規複合物は、配糖体
無添加で生ずる相当する蛋白質ミセルとは別の電顕下で
の形態学的構造を有する。これらのミセルは放射状に配
列されたスパイクを有する緊密な中心コアを有するが、
本発明による複合物は、円状サブユニットまたは球状構
造の部分より成立つ開放球状構造を有している。本発明
の複合物およびその部分は、また、相当するミセルより
より低い沈降定数（第１図をみよ）を有し、そして、蛋
白質またはペプ′チドの相当する単量体形より高い沈降
定数を有する。
配糖体を添加して製造した本発明による複合物は、配糖
体無添加で製造される相当する蛋白質ミセル、または蛋
白質分子と可溶化剤（単量体形）または脂質たとへばビ
ロソームに結合した蛋白質分子よりすぐれた免疫原性を
有する。それで膜蛋白質の投与量は、約ｌ／１ｏまたは
以下に減少させうる。
体無添加で製造される相当する蛋白質ミセル、または蛋
白質分子と可溶化剤（単量体形）または脂質たとへばビ
ロソームに結合した蛋白質分子よりすぐれた免疫原性を
有する。それで膜蛋白質の投与量は、約ｌ／１ｏまたは
以下に減少させうる。
配糖体の疎水性領域と結合させる疎水性領域を有する蛋
白質またはペゾチｒｉ Ａ）エンベロープを有するウィルス、バクテリア、マイ
コプラズマ細菌虫または動物細胞よりの膜蛋白質または
膜ペゾチドに由来するがそれら自体である、親水性およ
び疎水性の基をする両親媒性の蛋白質またはペプチド、
またはバイブＩＪ Ｐ ＤＮＡ技術で生ずるそのような
蛋白質またはペプチｖ１または合成で生ずるそのような
分子、 Ｂ）親水性蛋白質捷たはペプチドに疎水性基を結合させ
て生成させた両親媒性のもの。それらの蛋白質またはペ
プチドは、ウィルス、バクテリア、マイコプラズマ、寄
生虫に由来しうるし、またはハイプリｐ ＤＮＡ技術で
合成またけ採取しうるＯＣ）親水性蛋白質の到達され得
ない疎水性の部分を化学的手段により到達しつるように
した両親媒性蛋白質またはペプテＶ０それらの蛋白質は
上記したような微生物または細胞に由来しうるし、また
はハイ＼デリドＤＮＡ技術で得られる、または、合成さ
れたものでありうる。
白質またはペゾチｒｉ Ａ）エンベロープを有するウィルス、バクテリア、マイ
コプラズマ細菌虫または動物細胞よりの膜蛋白質または
膜ペゾチドに由来するがそれら自体である、親水性およ
び疎水性の基をする両親媒性の蛋白質またはペプチド、
またはバイブＩＪ Ｐ ＤＮＡ技術で生ずるそのような
蛋白質またはペプチｖ１または合成で生ずるそのような
分子、 Ｂ）親水性蛋白質捷たはペプチドに疎水性基を結合させ
て生成させた両親媒性のもの。それらの蛋白質またはペ
プチドは、ウィルス、バクテリア、マイコプラズマ、寄
生虫に由来しうるし、またはハイプリｐ ＤＮＡ技術で
合成またけ採取しうるＯＣ）親水性蛋白質の到達され得
ない疎水性の部分を化学的手段により到達しつるように
した両親媒性蛋白質またはペプテＶ０それらの蛋白質は
上記したような微生物または細胞に由来しうるし、また
はハイ＼デリドＤＮＡ技術で得られる、または、合成さ
れたものでありうる。
複合物の調製
ａ）全細胞に由来する膜蛋白質または膜ペプチドの調製
に関しては、複合物は原則的に６段階で調製する。動物
細胞または微生物またはそれらの断片を精製し；疎水性
の蛋白質を可溶化し可溶化剤を除き、同時に、免疫原性
の形状（免疫原性複合物）の、複合物とした望む抗原を
配糖体を用いて移す０ 精製および分離 ウィルス、マイコプラズマ、細菌、寄生虫および動物細
胞を既知の方法（たとへば、’ＴｈｅＴＯＯ１８ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、霞 Ｔ、Ｇ、 Ｃ！０
Ｏｐｅｒ、 ＪＯｈｎ Ｗｉ１ｅ７ ＆５ｏｎｓ （
１９７７） Ｎｅｗ ｙｏｒｋをみよ、；ｃｔ−ｔ、−
＋本明細書の参照文献として引用する）、たとへばゲル
濾過または糖グラジェントを通しての遠心またはｐθｒ
ｃＯ１を通してのグラジェント遠心またはホロウ ファ
バー ファイアライシス（ｈｏｌ’ｌｏｗ ｆｌ’ｂｅ
ｒｆｌａｌｙｓｉｓ ）で濃縮しそして精製する。細菌
では、たとへば超音波またはフレンチプレス処理で細胞
壁をまず融解または破壊するのが有利である。たとへば
、本明細書の参考文献として引用する、０ｏｔａ−Ｒｏ
ｂｌｅｓ ａｎｄ Ｅｌｔｅｉｎ、 ＯＲＯＨａｎｄｂ
ｏｏｋ ｏｆＭｌｃｒｏＪｏｌｏｇｙ ＶＯＩ ＩＩ
（１９７３）、８３３−８４４頁をみよ。
に関しては、複合物は原則的に６段階で調製する。動物
細胞または微生物またはそれらの断片を精製し；疎水性
の蛋白質を可溶化し可溶化剤を除き、同時に、免疫原性
の形状（免疫原性複合物）の、複合物とした望む抗原を
配糖体を用いて移す０ 精製および分離 ウィルス、マイコプラズマ、細菌、寄生虫および動物細
胞を既知の方法（たとへば、’ＴｈｅＴＯＯ１８ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、霞 Ｔ、Ｇ、 Ｃ！０
Ｏｐｅｒ、 ＪＯｈｎ Ｗｉ１ｅ７ ＆５ｏｎｓ （
１９７７） Ｎｅｗ ｙｏｒｋをみよ、；ｃｔ−ｔ、−
＋本明細書の参照文献として引用する）、たとへばゲル
濾過または糖グラジェントを通しての遠心またはｐθｒ
ｃＯ１を通してのグラジェント遠心またはホロウ ファ
バー ファイアライシス（ｈｏｌ’ｌｏｗ ｆｌ’ｂｅ
ｒｆｌａｌｙｓｉｓ ）で濃縮しそして精製する。細菌
では、たとへば超音波またはフレンチプレス処理で細胞
壁をまず融解または破壊するのが有利である。たとへば
、本明細書の参考文献として引用する、０ｏｔａ−Ｒｏ
ｂｌｅｓ ａｎｄ Ｅｌｔｅｉｎ、 ＯＲＯＨａｎｄｂ
ｏｏｋ ｏｆＭｌｃｒｏＪｏｌｏｇｙ ＶＯＩ ＩＩ
（１９７３）、８３３−８４４頁をみよ。
可溶化
精製された動物細胞または微生物またはそれらのフラグ
メントを、非イオン性、イオン性または両性のイオン性
のデタージエント没食子酸をベースとするデタージエン
トの過剰と混合する。適当な非イオン性デタージエント
の代表的な例は、脂肪族または芳香脂肪族の酸およびア
ルコールを用いたポリグリコールエステルおよびポリグ
リコールエーテルである。これらの例は、 ａｎＨ２ｎ＋１（ＯＯＨ２０Ｈ２）ｘＯＨの一般式のア
ルキルポリオキシエチレンエーテル（ＣｎＥＸと略記）
；アルキル基とポリオキシエチレン鎖とのあいだにフェ
ニル環ヲ含有するアルキルフェニルポリオキシエチレン
エーテル（ＣｎＰＥＸと略記〕、たとへばＴｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００＝３級−０８Ｅ９１．６ （ポリエチレンオ
キサイＰのオクチルフェノールエーテル）、アシルポリ
オキシエチレンエステル；アシルポリオキシエチレンソ
ルビタンエステル（ＣｎソルビタンＥＸト略記）たとえ
ばＴｗｅｅｎ ２ Ｄ ＸＴＶθｅｎ８０、β−Ｄ−ア
ルキルグルコシＰたとへばβ−Ｄ−オクチルグルコシｒ
がある。下記する配糖体、特にサポニンも用いうる。し
かし、これらは弱いデタージエントで、他のデタージエ
ントとあわせて用いるべきである。適当なイオン性のデ
タージエントの代表的な例駕としては、没食子酸デター
ジエントたとへばデソキシコレートおよびコレートがあ
る。
メントを、非イオン性、イオン性または両性のイオン性
のデタージエント没食子酸をベースとするデタージエン
トの過剰と混合する。適当な非イオン性デタージエント
の代表的な例は、脂肪族または芳香脂肪族の酸およびア
ルコールを用いたポリグリコールエステルおよびポリグ
リコールエーテルである。これらの例は、 ａｎＨ２ｎ＋１（ＯＯＨ２０Ｈ２）ｘＯＨの一般式のア
ルキルポリオキシエチレンエーテル（ＣｎＥＸと略記）
；アルキル基とポリオキシエチレン鎖とのあいだにフェ
ニル環ヲ含有するアルキルフェニルポリオキシエチレン
エーテル（ＣｎＰＥＸと略記〕、たとへばＴｒｉｔｏｎ
Ｘ−１００＝３級−０８Ｅ９１．６ （ポリエチレンオ
キサイＰのオクチルフェノールエーテル）、アシルポリ
オキシエチレンエステル；アシルポリオキシエチレンソ
ルビタンエステル（ＣｎソルビタンＥＸト略記）たとえ
ばＴｗｅｅｎ ２ Ｄ ＸＴＶθｅｎ８０、β−Ｄ−ア
ルキルグルコシＰたとへばβ−Ｄ−オクチルグルコシｒ
がある。下記する配糖体、特にサポニンも用いうる。し
かし、これらは弱いデタージエントで、他のデタージエ
ントとあわせて用いるべきである。適当なイオン性のデ
タージエントの代表的な例駕としては、没食子酸デター
ジエントたとへばデソキシコレートおよびコレートがあ
る。
複合デタージエントたとへばタウロデオキシコレート、
グリコデオキシコレートおよびグリココレートもまた用
いうる。可能な両性イオンデタージエントはリソレシチ
ンおよび合成リソホスホリぎドである。上記のデクージ
エントの混合物も用いうる。
グリコデオキシコレートおよびグリココレートもまた用
いうる。可能な両性イオンデタージエントはリソレシチ
ンおよび合成リソホスホリぎドである。上記のデクージ
エントの混合物も用いうる。
７／ｌ／コール、有機溶媒または小型の両媒性分子だト
へはヘプタン−１，２，３−）リオール、ヘキサン−１
，２，３−）リオール、酢酸、水溶性ペプチドおよび蛋
白質またはそれらの混合物も、または、デタージエント
との混合物も可溶化に用いうる。
へはヘプタン−１，２，３−）リオール、ヘキサン−１
，２，３−）リオール、酢酸、水溶性ペプチドおよび蛋
白質またはそれらの混合物も、または、デタージエント
との混合物も可溶化に用いうる。
脂質および疎水性蛋白質の量に比して過剰に可溶化剤を
用いる。細胞または微生物とデタージエントとを１対３
から１対１００重量比に混合するのが適当である。
用いる。細胞または微生物とデタージエントとを１対３
から１対１００重量比に混合するのが適当である。
細胞または微生物と可溶化剤とは、緩衝化された、でき
れば、塩溶液中で混合する。塩溶液のそル濃度は、０．
０２から０．５Ｍのあいだ、なるべくは０．０５から０
．２５ Ｍのあいだとするが、０．１−０．２Ｍが有利
である。ヂタージエントは室温で約１時間作用さすべき
である。
れば、塩溶液中で混合する。塩溶液のそル濃度は、０．
０２から０．５Ｍのあいだ、なるべくは０．０５から０
．２５ Ｍのあいだとするが、０．１−０．２Ｍが有利
である。ヂタージエントは室温で約１時間作用さすべき
である。
塩としては塩化ナトリウムが有利である０他の塩もまた
考えうる。特に、アルカリイオン、アルカリ土金属イオ
ンおよびアンモニウムイオンと強鉱酸および有機酸だと
へは酢酸、トリクロル酢酸、ギ酸およびシュウ酸との塩
がある。緩衝液として、ＰＨ６，５−９で緩衝作用のあ
るすべての物質が適当である。コレートおよびデスオキ
シコレートを用いる時にはＰＨ８−９が有利である。イ
オン性でないデタージエントを用いる時には、ＰＨ７，
４である。
考えうる。特に、アルカリイオン、アルカリ土金属イオ
ンおよびアンモニウムイオンと強鉱酸および有機酸だと
へは酢酸、トリクロル酢酸、ギ酸およびシュウ酸との塩
がある。緩衝液として、ＰＨ６，５−９で緩衝作用のあ
るすべての物質が適当である。コレートおよびデスオキ
シコレートを用いる時にはＰＨ８−９が有利である。イ
オン性でないデタージエントを用いる時には、ＰＨ７，
４である。
免疫原性複合物の調製
細胞捷たは微生物を可溶化すると、可溶化剤と細胞また
は微生物フラグメントの混合物を生ずる。
は微生物フラグメントの混合物を生ずる。
フラグメントのうちには、可溶化剤と複合物を形成した
、疎水性の領域を有する、帯電した単量体性抗原性蛋白
質が存在する。本発明に準する新規免疫原性複合物は、
１種または１種より多くの配糖体の存在か、配糖体に直
接に移すことにより、−帯電単量体性抗原性蛋白質を可
溶化剤より分けることにより生成させる。なは、この配
糖体は、疎水性および親水性結合を有し、少なくとも、
臨界ミセル濃度で存在せねばならない。フラグメントの
残りは、本発明による複合物が形成されるより前にか、
形成中、または形成後、なるべくは形成前に除去する。
、疎水性の領域を有する、帯電した単量体性抗原性蛋白
質が存在する。本発明に準する新規免疫原性複合物は、
１種または１種より多くの配糖体の存在か、配糖体に直
接に移すことにより、−帯電単量体性抗原性蛋白質を可
溶化剤より分けることにより生成させる。なは、この配
糖体は、疎水性および親水性結合を有し、少なくとも、
臨界ミセル濃度で存在せねばならない。フラグメントの
残りは、本発明による複合物が形成されるより前にか、
形成中、または形成後、なるべくは形成前に除去する。
本発明による複合物は、可溶化剤と、帯電単量体性抗原
性蛋白質と、そして存在するかも知れぬ他のフラグメン
トとの混合物より、たとへば透析、ｒル瀞過またはクロ
マトグラフィーにより可溶化剤を除去するか、または、
グラジェント遠心、クロマトグラフィー、電気泳動のよ
うなもので、混合物より、帯電、単量体性抗原性蛋白質
を分離することにより製造しうる。本発明の不可欠の特
徴は、ミセル形として存在せねばならない配糖体の存在
で単量体性抗原性蛋白質を可溶化剤より分離するか、ま
たは、蛋白質を分けてからしかに配糖体に移すことであ
る。配糖体と直接的に接触するように、単量体性抗原性
蛋白質を可溶化剤より分ける時に、本発明に準する特殊
の複合物を生成する。配糖体のミセル形が接合物形成の
ためのベースになり、複合体のミセル上の疎水性領域と
膜蛋白質上の疎水性部分とのあいだの引合で複合物が生
成すると考えられる。複合物中の配糖体の量は、用いた
配糖体および複合物に結合した蛋白質の量で変動し、０
．５から５０重量％、特に０．５から２５重量％、なる
べくは、０．５から１５重量％、しばしば０．５から１
０重量％とする。そして、特に、２から８重量％とする
。荷電抗原性単量体性蛋白質を、配糖体の存在しない状
態で可溶化剤から分けると、ＥＰＣ願８１１０２２１３
．６により生成するような型の蛋白質ミセルを生ずる。
性蛋白質と、そして存在するかも知れぬ他のフラグメン
トとの混合物より、たとへば透析、ｒル瀞過またはクロ
マトグラフィーにより可溶化剤を除去するか、または、
グラジェント遠心、クロマトグラフィー、電気泳動のよ
うなもので、混合物より、帯電、単量体性抗原性蛋白質
を分離することにより製造しうる。本発明の不可欠の特
徴は、ミセル形として存在せねばならない配糖体の存在
で単量体性抗原性蛋白質を可溶化剤より分離するか、ま
たは、蛋白質を分けてからしかに配糖体に移すことであ
る。配糖体と直接的に接触するように、単量体性抗原性
蛋白質を可溶化剤より分ける時に、本発明に準する特殊
の複合物を生成する。配糖体のミセル形が接合物形成の
ためのベースになり、複合体のミセル上の疎水性領域と
膜蛋白質上の疎水性部分とのあいだの引合で複合物が生
成すると考えられる。複合物中の配糖体の量は、用いた
配糖体および複合物に結合した蛋白質の量で変動し、０
．５から５０重量％、特に０．５から２５重量％、なる
べくは、０．５から１５重量％、しばしば０．５から１
０重量％とする。そして、特に、２から８重量％とする
。荷電抗原性単量体性蛋白質を、配糖体の存在しない状
態で可溶化剤から分けると、ＥＰＣ願８１１０２２１３
．６により生成するような型の蛋白質ミセルを生ずる。
含有される成分の沈降定数は、細胞フラグメント、本発
明に準する可溶化剤との蛋白質複合物、単量体蛋白質そ
して可溶化剤の順で減少するので、他の７ラグメントを
グラジェント遠心で分けるのが適当である。それで可溶
化剤と、単量体性蛋白質と、他のフラグメントとの混合
物より、グシコシドを添加するより前に他のフラグメン
トを除きそして可溶化剤はたとへば透析、ゲル濾過、ク
ロマトグラフィーで除くか、または、単量体性蛋白質を
、たとへは電気泳動、クロマトグラフィーまたはグラジ
ェント遠心で除く。後者の方法では、複合物が形成され
ているので、同じグラジェント遠心のあいだに他のフラ
グメントを除くこともできる。上記により複合物が形成
されたあとで、たとへば遠心、アフイニテイクロマトグ
ラフイー、分子ふるいまたはゲル濾過で他の細胞成分を
分けることもできる。
明に準する可溶化剤との蛋白質複合物、単量体蛋白質そ
して可溶化剤の順で減少するので、他の７ラグメントを
グラジェント遠心で分けるのが適当である。それで可溶
化剤と、単量体性蛋白質と、他のフラグメントとの混合
物より、グシコシドを添加するより前に他のフラグメン
トを除きそして可溶化剤はたとへば透析、ゲル濾過、ク
ロマトグラフィーで除くか、または、単量体性蛋白質を
、たとへは電気泳動、クロマトグラフィーまたはグラジ
ェント遠心で除く。後者の方法では、複合物が形成され
ているので、同じグラジェント遠心のあいだに他のフラ
グメントを除くこともできる。上記により複合物が形成
されたあとで、たとへば遠心、アフイニテイクロマトグ
ラフイー、分子ふるいまたはゲル濾過で他の細胞成分を
分けることもできる。
配糖体は疎水性および親水性の領域を有するいずれの配
糖体でもよい。なるべくは、Ｗ、 Ｈｅｒｚ。
糖体でもよい。なるべくは、Ｗ、 Ｈｅｒｚ。
Ｈ，Ｇｒｉｓｅｂａｃｈ、 Ｇ、 Ｗ、 Ｋｉｒｂｙ刊
、Ｆｏｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅｄｅｒ Ｏｈｅｍｉｅ Ｏ
ｒｇａｎｉｓｃｈｅｒ Ｎａｔｕｒｓｔｏｆｆｅ、 Ｖ
ｏｌ、 ３ Ｑ（１９７３）所載のＲ，Ｔｓｃｈｅｓｃ
ｈｅおよびＷｕｌｆによる（！ｈｅｍｉｅ、ｕｎｄ Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｅ ｄｅｒ ８ａｐｏｎｉｎｅに記載のサ
ポニン、特に極性の強いサポニン、主に、極性トリテル
ペンサポニン、つまり極性酸性ビスデスモサイｆ （ｂ
ｉｓｄｅｓｍｏｓｉｄｅｓ ）たとへば、Ｑｕｉｌｌａ
ｊａｂａｒｋＡｒａｌｏｓｉｄｅ Ａよりのサポニン抽
出物、０ｈｉｋｏｓｅｔ１１１ｕｓａｐｏｎｉｎ Ｉ′
Ｖ、 ０ａｌｅｎｄｕｌａ Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ Ｏ。
、Ｆｏｒｔｓｃｈｒｉｔｔｅｄｅｒ Ｏｈｅｍｉｅ Ｏ
ｒｇａｎｉｓｃｈｅｒ Ｎａｔｕｒｓｔｏｆｆｅ、 Ｖ
ｏｌ、 ３ Ｑ（１９７３）所載のＲ，Ｔｓｃｈｅｓｃ
ｈｅおよびＷｕｌｆによる（！ｈｅｍｉｅ、ｕｎｄ Ｂ
ｉｏｌｏｇｉｅ ｄｅｒ ８ａｐｏｎｉｎｅに記載のサ
ポニン、特に極性の強いサポニン、主に、極性トリテル
ペンサポニン、つまり極性酸性ビスデスモサイｆ （ｂ
ｉｓｄｅｓｍｏｓｉｄｅｓ ）たとへば、Ｑｕｉｌｌａ
ｊａｂａｒｋＡｒａｌｏｓｉｄｅ Ａよりのサポニン抽
出物、０ｈｉｋｏｓｅｔ１１１ｕｓａｐｏｎｉｎ Ｉ′
Ｖ、 ０ａｌｅｎｄｕｌａ Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ Ｏ。
（＋ｈｉｋｕｓｅｔｓｕｅａｐｏｎｉｎ Ｖ、 Ａ
Ｃｈｙｒａｎｔｈｅｓ−８ａｐｏｎｉｎ Ｂ。
Ｃｈｙｒａｎｔｈｅｓ−８ａｐｏｎｉｎ Ｂ。
ｃａｌｅｎｄｕｌａ−Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ Ａ、 Ａｒ
ａｌｏｓｉｄｅ Ｂ、 ＡｒａｌｏｓｉｄｅＣ！、 Ｐ
ｕｔｒａｎｊｉａ−８ａｐｏｎ ■、 Ｂｅｒｓａｍａ
ｓａｐｏｎｏｓｉｄｅ。
ａｌｏｓｉｄｅ Ｂ、 ＡｒａｌｏｓｉｄｅＣ！、 Ｐ
ｕｔｒａｎｊｉａ−８ａｐｏｎ ■、 Ｂｅｒｓａｍａ
ｓａｐｏｎｏｓｉｄｅ。
Ｐｕｔｒａｎｊｉａ−Ｅｌａｐｏｎｉｎ ｒｖ、 Ｔｒ
ｉｃｈｏｓｉｄｅ Ａ、 ＴｒｉｃｈｏｓｉｄｅＢ、
５ａｐｏｎａｓｔａｅ Ａ、 Ｔｒｉｃｈｏｓｉｄｅ
Ｏ，Ｇｙｐｓｏｓｉｄｅ。
ｉｃｈｏｓｉｄｅ Ａ、 ＴｒｉｃｈｏｓｉｄｅＢ、
５ａｐｏｎａｓｔａｅ Ａ、 Ｔｒｉｃｈｏｓｉｄｅ
Ｏ，Ｇｙｐｓｏｓｉｄｅ。
Ｎｕｔａｎｏｓｉｄｅ、 Ｄｉａｎｔｈ０８１ｄｅＣ，
５ａｐｏｎａｓｉｄｅ Ｄ、なるべくは、Ａｅｓｃｕｌ
ｕｅ ｈｉｐｐｏｃａｅｔａｎｕｍよりのａｅｓｃｉｎ
ｅ （Ｔ、 ＰａｔｔおよびＷ、 Ｗｉｎｌｋｌｅｒ
： ］）ａ８ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｓＣｈ ｗｉｒｋｓ
ａｍｅ Ｐｒ１ｎｚｉｐ ｄｅｒ Ｒｏｓｓｋａｓｔａ
ｎｉｅ（Ａｅｅｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｅｔａｎ
ｕｍ ）、 Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃ
ｈｕｎｇｌｏ（４）、２７３−２７５（１９６０）また
はＧｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｓｔｒｕｔｈｉｕｍ （Ｒ
，Ｖｏｃｈｔｅｎ、 Ｐ、 ＪｏｏｓおよびＲ，Ｒｕｙ
ｓｓｅｎ ： Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒ
ｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ ５ａｐｏａｌｂｉｎ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｆｏａ
ｍｓｔａｂｉｌｉｔｙ、 Ｊ、Ｐｈａｒｍ Ｂｅ１ｇ
４２ 、２１３−２２６（１９６３）、特にＱ、ｕｉｌ
ｌａｊａ ｅａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏ１ｉｎａよりサポ
ニン抽出物、主にに、 ］）ａｌθｇａａｒｄ ：５ａ
ｐｏｎｉｎ Ａａｊｕｖａｎｔｓ、 Ｂｕｌｌ ｏｆｆ
工ｎｔ Ｅｐｉｚ ７７（７−８）、１２８９−１２９
５（１９７２）により製造のＤＱ、−抽出物、Ｋ、 Ｄ
ａ１８ｇａａｒａ ： ５ａｐｏｎｉｎＡｄｊｕｖａｎ
ｔｓ ■、 Ａｒｃｈｉｖ ｆｕｒ ｄｉｅ Ｇｅｅ
ａｍｔｅＶｉｒｕｓｆｏｒｓｃｈｕｎｇ４４ 、２４３
−、２５４ （１９７４）により製造されるＱｕｉｌＡ
がある。また配糖体の混合物も用いる。添加する配糖体
の量は、それらの臨界ミセル形成濃度（ＯＭＯ）の少な
くとも１から６倍、なるべくは少なくとも５倍、特に少
なくとも７から１２倍とする。この場合、配糖体は、膜
蛋白質の単量体形に結合しこれを捕捉とすると仮定され
る。なるべくは、０．０３重量％の臨界ミセル形成濃度
を有するＱｕｉｔ Ａを用いる。それで、Ｑｕｉｌ Ａ
ＣＤ量は少々くとも０．０２重量％、特に０．０５−
０．５重量％、なるべくは０．２重量％とする。配糖体
についての上記引用を文献として引用する。
５ａｐｏｎａｓｉｄｅ Ｄ、なるべくは、Ａｅｓｃｕｌ
ｕｅ ｈｉｐｐｏｃａｅｔａｎｕｍよりのａｅｓｃｉｎ
ｅ （Ｔ、 ＰａｔｔおよびＷ、 Ｗｉｎｌｋｌｅｒ
： ］）ａ８ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｓＣｈ ｗｉｒｋｓ
ａｍｅ Ｐｒ１ｎｚｉｐ ｄｅｒ Ｒｏｓｓｋａｓｔａ
ｎｉｅ（Ａｅｅｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｅｔａｎ
ｕｍ ）、 Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃ
ｈｕｎｇｌｏ（４）、２７３−２７５（１９６０）また
はＧｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｓｔｒｕｔｈｉｕｍ （Ｒ
，Ｖｏｃｈｔｅｎ、 Ｐ、 ＪｏｏｓおよびＲ，Ｒｕｙ
ｓｓｅｎ ： Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒ
ｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ ５ａｐｏａｌｂｉｎ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｔｈｅ ｆｏａ
ｍｓｔａｂｉｌｉｔｙ、 Ｊ、Ｐｈａｒｍ Ｂｅ１ｇ
４２ 、２１３−２２６（１９６３）、特にＱ、ｕｉｌ
ｌａｊａ ｅａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏ１ｉｎａよりサポ
ニン抽出物、主にに、 ］）ａｌθｇａａｒｄ ：５ａ
ｐｏｎｉｎ Ａａｊｕｖａｎｔｓ、 Ｂｕｌｌ ｏｆｆ
工ｎｔ Ｅｐｉｚ ７７（７−８）、１２８９−１２９
５（１９７２）により製造のＤＱ、−抽出物、Ｋ、 Ｄ
ａ１８ｇａａｒａ ： ５ａｐｏｎｉｎＡｄｊｕｖａｎ
ｔｓ ■、 Ａｒｃｈｉｖ ｆｕｒ ｄｉｅ Ｇｅｅ
ａｍｔｅＶｉｒｕｓｆｏｒｓｃｈｕｎｇ４４ 、２４３
−、２５４ （１９７４）により製造されるＱｕｉｌＡ
がある。また配糖体の混合物も用いる。添加する配糖体
の量は、それらの臨界ミセル形成濃度（ＯＭＯ）の少な
くとも１から６倍、なるべくは少なくとも５倍、特に少
なくとも７から１２倍とする。この場合、配糖体は、膜
蛋白質の単量体形に結合しこれを捕捉とすると仮定され
る。なるべくは、０．０３重量％の臨界ミセル形成濃度
を有するＱｕｉｔ Ａを用いる。それで、Ｑｕｉｌ Ａ
ＣＤ量は少々くとも０．０２重量％、特に０．０５−
０．５重量％、なるべくは０．２重量％とする。配糖体
についての上記引用を文献として引用する。
可溶化剤よりの荷電単葉体性抗原性蛋白質の分離は、遠
心、透析電気泳動および種々のクロマトグラフ法で実施
した。
心、透析電気泳動および種々のクロマトグラフ法で実施
した。
遠心法
上記のように製造したフラグメント化された細胞または
微生物と可溶化剤との混合物は、グラジェント遠心する
。つまり、糖グラジェントまたはグリセロールのグラジ
ェントまたはメトライズアミｒのグラジェントまたは重
金属塩たとへばＣ，、Ｃ１（つまりグラジェント材料と
して作用する、適当な密度、粘度を有する比較的に不活
性の物質）のグラジェント、たとへば糖のグラジェント
では下記の濃度のような、配糖体含有グラジェントの存
在する、可溶色剤含有、糖または塩の溶液の上部に重ね
る。
微生物と可溶化剤との混合物は、グラジェント遠心する
。つまり、糖グラジェントまたはグリセロールのグラジ
ェントまたはメトライズアミｒのグラジェントまたは重
金属塩たとへばＣ，、Ｃ１（つまりグラジェント材料と
して作用する、適当な密度、粘度を有する比較的に不活
性の物質）のグラジェント、たとへば糖のグラジェント
では下記の濃度のような、配糖体含有グラジェントの存
在する、可溶色剤含有、糖または塩の溶液の上部に重ね
る。
グラジェント系は少なくとも１００．０００ ｇで遠心
する。糖としては、グルコースのような単糖類、乳糖、
果糖、しよ糖のよりな三糖類だけでなく、三糖類、四糖
類およびグリセリンを用いうる〇グラジェント中の糖濃
度は、適当には、最初の濃度（グラジェントの最上部）
は、少なくとも５、なるべくは１５−２５５重量％し、
そして、最終濃度（グラジェントの最下部）は少なくと
も２０゜なるべくは４５−６０重量％とする。グラジェ
ントは、たとへば５−２５重量％糖含量の上層および２
０−６０重量％糖含量の下層より成立ちりんしかし、い
くつかの層が存在してもよく、その際は、個々の層のあ
いだの濃度差は相応して減少させる。糖グラジェントに
は配糖体または配糖体の混合物を含有させる。配糖体の
量は、Ｑ、ｕｉｌＡの臨界ミセル形成濃度の少なくとも
１−３、なるべくは少なくとも７−１２倍で、少なくと
も０．０２、特に少なくとも０．０５−０．５、なるべ
くは少なくとも０．２重量％とする。この配糖体含有グ
ラジェント中で、可溶化剤は分離され、可溶化剤と蛋白
質とのあいだの複合物は蛋白質と配糖体とのあいだの複
合物に転換される。
する。糖としては、グルコースのような単糖類、乳糖、
果糖、しよ糖のよりな三糖類だけでなく、三糖類、四糖
類およびグリセリンを用いうる〇グラジェント中の糖濃
度は、適当には、最初の濃度（グラジェントの最上部）
は、少なくとも５、なるべくは１５−２５５重量％し、
そして、最終濃度（グラジェントの最下部）は少なくと
も２０゜なるべくは４５−６０重量％とする。グラジェ
ントは、たとへば５−２５重量％糖含量の上層および２
０−６０重量％糖含量の下層より成立ちりんしかし、い
くつかの層が存在してもよく、その際は、個々の層のあ
いだの濃度差は相応して減少させる。糖グラジェントに
は配糖体または配糖体の混合物を含有させる。配糖体の
量は、Ｑ、ｕｉｌＡの臨界ミセル形成濃度の少なくとも
１−３、なるべくは少なくとも７−１２倍で、少なくと
も０．０２、特に少なくとも０．０５−０．５、なるべ
くは少なくとも０．２重量％とする。この配糖体含有グ
ラジェント中で、可溶化剤は分離され、可溶化剤と蛋白
質とのあいだの複合物は蛋白質と配糖体とのあいだの複
合物に転換される。
糖グラジェントの頂部には、可＃ｆヒ剤または可溶化剤
の混合物を含有する、糖または重金属塩の溶液の層を存
在させる。脂質はこの層の中に残存する。この層中の可
溶化剤の濃度は、用いた、微生物または細胞と可溶化剤
との混合物中での濃度より低いかまたは同じとし、適当
には、０．１２から３重量％まで、なるぺ＜Ｆｉｏ、７
５から１．５重量％とする。１重量％が有利である。糖
または塩濃度はグラジェントの上層中の濃度と同じかま
たは低くしうる。
の混合物を含有する、糖または重金属塩の溶液の層を存
在させる。脂質はこの層の中に残存する。この層中の可
溶化剤の濃度は、用いた、微生物または細胞と可溶化剤
との混合物中での濃度より低いかまたは同じとし、適当
には、０．１２から３重量％まで、なるぺ＜Ｆｉｏ、７
５から１．５重量％とする。１重量％が有利である。糖
または塩濃度はグラジェントの上層中の濃度と同じかま
たは低くしうる。
少なくとも１６時間、少なくとも１００．０００ｇで、
２００Ｃでなるべくは２０時間遠心したあと、蛋白質性
の分画を集め緩衝液（０，５Ｍから０．００１Ｍ）なる
べくは０．００５ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＭＣＩ 、 ０．０
１ ＭＮａＣｌ、 ｐＨ７，４または０．２Ｍ酢酸アン
モニウム、ＰＨ７，０に対して透析し、そして、本明細
書の文献として引用するＴｈｅ Ｔｏｏｌｓ ｏｆ Ｂ
ｉＯＯｈｅＢｌｏｏｈｅ、 Ｔ、Ｇ。
２００Ｃでなるべくは２０時間遠心したあと、蛋白質性
の分画を集め緩衝液（０，５Ｍから０．００１Ｍ）なる
べくは０．００５ Ｍ Ｔｒｉｓ−ＭＣＩ 、 ０．０
１ ＭＮａＣｌ、 ｐＨ７，４または０．２Ｍ酢酸アン
モニウム、ＰＨ７，０に対して透析し、そして、本明細
書の文献として引用するＴｈｅ Ｔｏｏｌｓ ｏｆ Ｂ
ｉＯＯｈｅＢｌｏｏｈｅ、 Ｔ、Ｇ。
ｃｏｏｐｅｒ編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ ５ｏｎｓ
（Ｎｅｗ ｙｏｒｋ１９７４）記載のような方法で、
たとへぼ、凍結乾燥、真空透析および超濾過で濃縮する
。遠心中にすべての成分が沈降し、その際、蛋白質と可
溶化剤との複合物より可溶化剤の結合がゆるみ、単量体
性蛋白質は配糖体に移されそれと複合物を形成する。つ
ぎの透析で糖を除く。
（Ｎｅｗ ｙｏｒｋ１９７４）記載のような方法で、
たとへぼ、凍結乾燥、真空透析および超濾過で濃縮する
。遠心中にすべての成分が沈降し、その際、蛋白質と可
溶化剤との複合物より可溶化剤の結合がゆるみ、単量体
性蛋白質は配糖体に移されそれと複合物を形成する。つ
ぎの透析で糖を除く。
複合物は場合により、たとへば、２５から６０重量％の
糖、なるべくｔＩ′ｉ１０から４ｏ重量係のしよ糖を含
有する糖グラジェントとによるグラジェント遠心で遊離
配糖体よりさらに精製しつる。
糖、なるべくｔＩ′ｉ１０から４ｏ重量係のしよ糖を含
有する糖グラジェントとによるグラジェント遠心で遊離
配糖体よりさらに精製しつる。
透析法
上記のように細胞または微生物を精製したのち、そして
、上記の重量比に可溶化剤と混合したのち、上記した緩
衝液中の細胞と可溶化剤との混合物は、別様には、Ｑ、
ｕｉｌＡの臨界ミセル形成濃度（（！ＭＣ！ ）の少な
くとも１から、なるべくは７から１２倍の、０．０５−
２重量、なるべくは０．２重量％の配糖体と混合し、０
．５−０．００１’Ｍ、なるべｌｊｏ、００５Ｍ Ｔｒ
ｉｓ −ＨＣｌ 、 Ｑ、ＯＩ Ｍ ＮａＣ１、ｐＨ７
，４、特に０．２Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ７，
０に対して透析しうる。その結果、配糖体の存在で可溶
化剤を分離する。生成した膜蛋白質複合物は、上記の遠
心法の所に記載したようにして、配糖体添加物は除いて
、沈降グラジェント遠心で分離しうる。このようにして
他のフラグメントおよび遊離グリコシドより分ける。
、上記の重量比に可溶化剤と混合したのち、上記した緩
衝液中の細胞と可溶化剤との混合物は、別様には、Ｑ、
ｕｉｌＡの臨界ミセル形成濃度（（！ＭＣ！ ）の少な
くとも１から、なるべくは７から１２倍の、０．０５−
２重量、なるべくは０．２重量％の配糖体と混合し、０
．５−０．００１’Ｍ、なるべｌｊｏ、００５Ｍ Ｔｒ
ｉｓ −ＨＣｌ 、 Ｑ、ＯＩ Ｍ ＮａＣ１、ｐＨ７
，４、特に０．２Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ７，
０に対して透析しうる。その結果、配糖体の存在で可溶
化剤を分離する。生成した膜蛋白質複合物は、上記の遠
心法の所に記載したようにして、配糖体添加物は除いて
、沈降グラジェント遠心で分離しうる。このようにして
他のフラグメントおよび遊離グリコシドより分ける。
細胞および微生物と可溶化剤とを緩衝液中に含有する混
合物はまたグラジェント遠心しうる０たとへぼ、５−６
０重量係上記緩衝液中糖グラジェント、なるべくは１０
−２０重量％しよ゛糖グラジェント上に重層し、少なく
とも１５０．０００ ｇで〈 少ル、とも２０分、なるべくは２５０．０００９で３０
分遠心しうる。そのようにして他のフラグメントも、可
溶化剤と蛋白質との複合物より分けられる。
合物はまたグラジェント遠心しうる０たとへぼ、５−６
０重量係上記緩衝液中糖グラジェント、なるべくは１０
−２０重量％しよ゛糖グラジェント上に重層し、少なく
とも１５０．０００ ｇで〈 少ル、とも２０分、なるべくは２５０．０００９で３０
分遠心しうる。そのようにして他のフラグメントも、可
溶化剤と蛋白質との複合物より分けられる。
頂部分画と称する蛋白質性の上層液を抽出し、Ｑｕｌ
Ａ のＣＭＣの少なくとも１−３倍、なるべくは少なく
とも７−１２倍、つ捷り０．０５−０．５重量％、なる
べくは０．２重量％の配糖体を加え、０．５から０．０
０１Ｍ、特に０．００５Ｍの緩衝液に対し透析する。特
に、０．００５ Ｍ Ｔｒｉ８−ＭＣＩ 。
Ａ のＣＭＣの少なくとも１−３倍、なるべくは少なく
とも７−１２倍、つ捷り０．０５−０．５重量％、なる
べくは０．２重量％の配糖体を加え、０．５から０．０
０１Ｍ、特に０．００５Ｍの緩衝液に対し透析する。特
に、０．００５ Ｍ Ｔｒｉ８−ＭＣＩ 。
０．０１ Ｍ ＭＣＩ、 ｐＨ７，４、なるべくは０．
２Ｍ酢酸アンモニウムを用いる。可溶化剤は配糖体の存
在で除去する。上記遠心法の項の方法で沈降グラジェン
ト遠心してさらに精製しうるｏ ５−６００重量なるべ
くは１９から４０ｉ［Ｅ量チの糖グラジェントで遠心し
てさらに精製する。
２Ｍ酢酸アンモニウムを用いる。可溶化剤は配糖体の存
在で除去する。上記遠心法の項の方法で沈降グラジェン
ト遠心してさらに精製しうるｏ ５−６００重量なるべ
くは１９から４０ｉ［Ｅ量チの糖グラジェントで遠心し
てさらに精製する。
電気泳動法
別様には、フラグメント化微生物または細胞と可溶化剤
との混合物、または、混合物を緩衝液中５−６０重量％
、なるべく１ｌ−ｊ、１０−２０重量％糖グラジェント
でグラジェント遠心して得られる蛋白質性頂部液（他の
フラグメントおよび遊離可溶化剤が除かれている）ｆ可
溶化剤より電気泳動で分け、Ｑｕｉｌ ＡのＯＭＯの少
なくとも１から６、なるべくは少なくとも７−１２倍、
０．０’ ５−０．５重量％、なるべくは０．２重量％
の配糖体を含有する溶液に移す。このようにして、荷電
単量体性抗原性蛋白質を可溶化剤より分ける。電気泳動
による分離のためには、可溶剤−緩衝液溶液は、電気泳
動を妨害し過度の高温を発するような過剰の添加塩を含
有しないのが適当である０たとへば担体を用いるかまた
は用いないゾーン電気泳動および担体を用いるか用いな
いインタコホレーシスを用いうる０担体としては、ポリ
アクリルアミｖ１寒天、シリカデル、でんぷん、セルロ
ース、ポリ塩化ビニル、イオン交換体、セライトのよう
な担体を用いうる。遠心法の、Ｔｈｅ Ｔｏｏｌｓ ｏ
ｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ引用文献に記載のように
複合物を分離し濃縮しうる。遠心法の所に記載のグラジ
ェント遠心でも精製しうる。
との混合物、または、混合物を緩衝液中５−６０重量％
、なるべく１ｌ−ｊ、１０−２０重量％糖グラジェント
でグラジェント遠心して得られる蛋白質性頂部液（他の
フラグメントおよび遊離可溶化剤が除かれている）ｆ可
溶化剤より電気泳動で分け、Ｑｕｉｌ ＡのＯＭＯの少
なくとも１から６、なるべくは少なくとも７−１２倍、
０．０’ ５−０．５重量％、なるべくは０．２重量％
の配糖体を含有する溶液に移す。このようにして、荷電
単量体性抗原性蛋白質を可溶化剤より分ける。電気泳動
による分離のためには、可溶剤−緩衝液溶液は、電気泳
動を妨害し過度の高温を発するような過剰の添加塩を含
有しないのが適当である０たとへば担体を用いるかまた
は用いないゾーン電気泳動および担体を用いるか用いな
いインタコホレーシスを用いうる０担体としては、ポリ
アクリルアミｖ１寒天、シリカデル、でんぷん、セルロ
ース、ポリ塩化ビニル、イオン交換体、セライトのよう
な担体を用いうる。遠心法の、Ｔｈｅ Ｔｏｏｌｓ ｏ
ｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ引用文献に記載のように
複合物を分離し濃縮しうる。遠心法の所に記載のグラジ
ェント遠心でも精製しうる。
種々の荷電または重量の疎水性膜蛋白質が出発゛材料中
に存在するなら、電気泳動または遠心でそれらを相互に
分け、それらの複合物を分けうる。
に存在するなら、電気泳動または遠心でそれらを相互に
分け、それらの複合物を分けうる。
これの条件で種々の膜蛋白質の複合物を分けそして濃縮
しつる。
しつる。
クロマトグラフ法
可溶化蛋白質は、望むなら、細胞フラグメントより精製
したあとで、クロマトグラフ法で可溶化剤より分けつる
。抗原構造は、たとへばセルロース、アガロース、デキ
ストラン、アクリルアミドおよびガラスより成立ちつる
、子爵性の基体（マトリックス）に吸着される。マトリ
ックス構造には種々のリガンドを結合させる。すると分
離に用いうるような特異的構造となる０用いた可溶化剤
がマトリックス中を吸着されないで通過すると同時に、
ふつう、抗原構造が吸着される。ついで抗原を脱着する
。脱着段階で可溶化剤、塩および緩衝物質の交換がおこ
りうる。可溶化剤は配糖体でおき代えられ、複合物を生
成する。
したあとで、クロマトグラフ法で可溶化剤より分けつる
。抗原構造は、たとへばセルロース、アガロース、デキ
ストラン、アクリルアミドおよびガラスより成立ちつる
、子爵性の基体（マトリックス）に吸着される。マトリ
ックス構造には種々のリガンドを結合させる。すると分
離に用いうるような特異的構造となる０用いた可溶化剤
がマトリックス中を吸着されないで通過すると同時に、
ふつう、抗原構造が吸着される。ついで抗原を脱着する
。脱着段階で可溶化剤、塩および緩衝物質の交換がおこ
りうる。可溶化剤は配糖体でおき代えられ、複合物を生
成する。
イオン交換クロマトグラフィーにおいては、ジエチルア
ミンエタノール（ＤＥＡＥ ）のような荷電液体分子を
マトリックスに結合させ陽イオン交換体に用いる。カル
ボキシルメチル（ＣＭ ）またはリン酸塩（Ｐ）基をマ
トリックスに結合させ陰イオン交換体に用いる。抗原構
造と可溶化剤とのあいだの正味の荷電の差を用いて、こ
れらの分子を分ける。一般的に荷電は可溶化剤になく蛋
白質にある。Ｋ−またはＮａＣ１のような塩のグラジェ
ントや可溶化剤の存在（濃度については上記可溶化の項
をみよ）でリン酸緩衝液でＰＨを調節して溶出する。
ミンエタノール（ＤＥＡＥ ）のような荷電液体分子を
マトリックスに結合させ陽イオン交換体に用いる。カル
ボキシルメチル（ＣＭ ）またはリン酸塩（Ｐ）基をマ
トリックスに結合させ陰イオン交換体に用いる。抗原構
造と可溶化剤とのあいだの正味の荷電の差を用いて、こ
れらの分子を分ける。一般的に荷電は可溶化剤になく蛋
白質にある。Ｋ−またはＮａＣ１のような塩のグラジェ
ントや可溶化剤の存在（濃度については上記可溶化の項
をみよ）でリン酸緩衝液でＰＨを調節して溶出する。
溶出液に可溶化剤に代えて配糖体を加えるならば、溶出
において蛋白質を精製し、可溶化剤を交換し捷たは複合
物を生成させうる。ついで塩を透析で除く。
において蛋白質を精製し、可溶化剤を交換し捷たは複合
物を生成させうる。ついで塩を透析で除く。
ゲル濾過では、抗原構造より小さい可溶化蛋白質いあと
からでてくるようにする。イムノアフィニティークロマ
トグラフィーによると、抗体は、上記のマ） ＩＪラッ
クス非可逆的に結合させ得、そのあと、抗体に独特の親
和性および特異性を抗原の精製に用いる。可溶化剤の抗
体への親和性はない。溶出は温和な変性によりおこなう
。たとへは、可溶化剤または配糖体の存在でｐＨを約４
に減少させる。
からでてくるようにする。イムノアフィニティークロマ
トグラフィーによると、抗体は、上記のマ） ＩＪラッ
クス非可逆的に結合させ得、そのあと、抗体に独特の親
和性および特異性を抗原の精製に用いる。可溶化剤の抗
体への親和性はない。溶出は温和な変性によりおこなう
。たとへは、可溶化剤または配糖体の存在でｐＨを約４
に減少させる。
レクチンクロマトグラフィーではレクチンを用いる。レ
クチンは特異的な糖基と可逆的に反応しうる１群の蛋白
質で、たとへば糖蛋白質を結合しうる。レクチンをリガ
ンドとしてたとへば５ｅｐｈａｒｏｓｅ （Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ 、 ｃｒｐｐｓａｌａ ）に結合さすか、適
当なマトリックスに結合させた市販品を用いる。デター
ヅエント（可溶化剤）は固定レクチンに親和性を有しな
い。吸着された抗原は、メチルｆｆ［たとへばメチルマ
ンノシド、メチルグルコシｒまたはＮ−アセチルグリコ
サミンを、可溶化剤または配糖体の存在で緩衝剤塩溶液
中に溶解したものを用いて容易に脱着しうる〇 コバレントクロマトグラフイーでに、チオール基をコバ
レント結合に用いて抗原構造をマトリックスに結合させ
る。抗原中のチオール基は、適当なマトリックスに結合
させた活性化チオ基に、チオージスルファイＶ交換によ
り結合する。この結合は可逆的で、可溶化剤を洗って除
いたあと、チオールを有する抗原構造を、メルカプトエ
タノールまたはジチオトリエタふノールでジスルファイ
ｒ結合を還元することにより、可溶化剤または配糖体の
存在で溶出しうる。
クチンは特異的な糖基と可逆的に反応しうる１群の蛋白
質で、たとへば糖蛋白質を結合しうる。レクチンをリガ
ンドとしてたとへば５ｅｐｈａｒｏｓｅ （Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ 、 ｃｒｐｐｓａｌａ ）に結合さすか、適
当なマトリックスに結合させた市販品を用いる。デター
ヅエント（可溶化剤）は固定レクチンに親和性を有しな
い。吸着された抗原は、メチルｆｆ［たとへばメチルマ
ンノシド、メチルグルコシｒまたはＮ−アセチルグリコ
サミンを、可溶化剤または配糖体の存在で緩衝剤塩溶液
中に溶解したものを用いて容易に脱着しうる〇 コバレントクロマトグラフイーでに、チオール基をコバ
レント結合に用いて抗原構造をマトリックスに結合させ
る。抗原中のチオール基は、適当なマトリックスに結合
させた活性化チオ基に、チオージスルファイＶ交換によ
り結合する。この結合は可逆的で、可溶化剤を洗って除
いたあと、チオールを有する抗原構造を、メルカプトエ
タノールまたはジチオトリエタふノールでジスルファイ
ｒ結合を還元することにより、可溶化剤または配糖体の
存在で溶出しうる。
ハイＶロフオビツククロマトグラフイーこの方法は、オ
クチル、フェニル型の固定化ハイドロフオビツクリガン
ぜと、抗原構造のハイドロフオビツク表面との相互作用
を用いる。別様には、この技術は、混合物より可溶化剤
を結合させ、同時非吸着抗原構造を採取し、例４（透析
法）により連続処理する方法でもありうる。別の条件で
は、抗原構造をリガンドに結合させ得、可溶化剤のりガ
ントへの親和性をなくして、ついで透析法を用いうる。
クチル、フェニル型の固定化ハイドロフオビツクリガン
ぜと、抗原構造のハイドロフオビツク表面との相互作用
を用いる。別様には、この技術は、混合物より可溶化剤
を結合させ、同時非吸着抗原構造を採取し、例４（透析
法）により連続処理する方法でもありうる。別の条件で
は、抗原構造をリガンドに結合させ得、可溶化剤のりガ
ントへの親和性をなくして、ついで透析法を用いうる。
高イオン強度たとへば硫酸アンモニウムで固定し、水ま
たはエチレングリコールを用いて低イオン強度で溶出し
つる。
たはエチレングリコールを用いて低イオン強度で溶出し
つる。
それでこの複合物は細菌よりの膜蛋白質を含有し得、細
胞材料を上記方法で処理するより前にまず細胞壁を破壊
するのが有利である。ハイＶロフオビック蛋白質を生成
させうる細菌の例としては、Ｂｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、
５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、 Ｈａｅｍｏｐｈｉｌ
ｕｓに属するもの、たとへば、Ｈ，１ｎｆｌｕｅｎｚａ
ｅ 、 ＢｏｒｄｅｔｅｌｌａたとへばＢ、 ｐｅｒｔ
ｕｓｓｉＪ Ｖｉｌ）ｒｉｏたとへば■。
胞材料を上記方法で処理するより前にまず細胞壁を破壊
するのが有利である。ハイＶロフオビック蛋白質を生成
させうる細菌の例としては、Ｂｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、
５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、 Ｈａｅｍｏｐｈｉｌ
ｕｓに属するもの、たとへば、Ｈ，１ｎｆｌｕｅｎｚａ
ｅ 、 ＢｏｒｄｅｔｅｌｌａたとへばＢ、 ｐｅｒｔ
ｕｓｓｉＪ Ｖｉｌ）ｒｉｏたとへば■。
ｃｈ、ｏｌｅｒａｅ、 Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａたとへば
Ｂ、ｔｙｐｈｉ、 Ｓ。
Ｂ、ｔｙｐｈｉ、 Ｓ。
ｐａｒａｔｙｐｈｉがある。なるべくは、Ｃ０１１中の
結合因子たとへばｐｉｌｉ Ｋ ８８およびたとへばサ
ルモネラ中のｐｏｒｉｎ蛋白質捷たは、Ｂ、ｐｅｒｔｕ
ｓｓｉ８およびＮｅ１ｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔ
ｉｄｉｓの外膜蛋白質とするＯ エンベロープを有する用いうるウィルスの例としては、
Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅたとへばインフルエ
ンザＡ 、 Ｂ 、 Ｃ、ＰａｒａｍｙｏＶｉｒｉｄａ
ｅ特に、はしかウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、バ
ラインフルエンｒ１．２．３および４ウイルス、イヌジ
ステンパーウィルス、リングペストウィルス、Ｒｈａｂ
ｄｏｖｉｒｉｄａｅ特に狂犬病ライ／ｌ／ ス、Ｒｅｔ
ｒｏｖｉｄｉｄａｅ特に、ねこ白血病ウィルス、ウシ白
血球ウィルス、ａｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ 、特にＰ
ｓｅｕｄｏｒａｂｌｅｓ 、 ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉａ
ａｅ。
結合因子たとへばｐｉｌｉ Ｋ ８８およびたとへばサ
ルモネラ中のｐｏｒｉｎ蛋白質捷たは、Ｂ、ｐｅｒｔｕ
ｓｓｉ８およびＮｅ１ｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔ
ｉｄｉｓの外膜蛋白質とするＯ エンベロープを有する用いうるウィルスの例としては、
Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅたとへばインフルエ
ンザＡ 、 Ｂ 、 Ｃ、ＰａｒａｍｙｏＶｉｒｉｄａ
ｅ特に、はしかウィルス、流行性耳下腺炎ウィルス、バ
ラインフルエンｒ１．２．３および４ウイルス、イヌジ
ステンパーウィルス、リングペストウィルス、Ｒｈａｂ
ｄｏｖｉｒｉｄａｅ特に狂犬病ライ／ｌ／ ス、Ｒｅｔ
ｒｏｖｉｄｉｄａｅ特に、ねこ白血病ウィルス、ウシ白
血球ウィルス、ａｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ 、特にＰ
ｓｅｕｄｏｒａｂｌｅｓ 、 ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉａ
ａｅ。
Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ 、たとへばＥＥＥ、 Ｗｉ、
ＶＨｉＥ （イースターン、ウェスターンおよびベネ
ズエラウマ脳炎）、黄熱病ウィルス特に、ウシウィルス
性下痢ウィルスおよびヨーロッパブタ発熱性ウィルス、
Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ、 Ｐｏｘｖｉｄｉｄａｅ、
Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ。
ＶＨｉＥ （イースターン、ウェスターンおよびベネ
ズエラウマ脳炎）、黄熱病ウィルス特に、ウシウィルス
性下痢ウィルスおよびヨーロッパブタ発熱性ウィルス、
Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ、 Ｐｏｘｖｉｄｉｄａｅ、
Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ。
工ｒｉ（ｌＯＶｉｒｉ（ｌａｅ 、特に、アフリカブタ
熱ウィルスおよび未分類ウィルスとして、ヒト肝炎β−
ウィルスおよびＭａｒｂｕｒｇ ／ Ｆｉｔ）Ｏ１ａウ
ィルスがある。
熱ウィルスおよび未分類ウィルスとして、ヒト肝炎β−
ウィルスおよびＭａｒｂｕｒｇ ／ Ｆｉｔ）Ｏ１ａウ
ィルスがある。
本発明に準じて用いうる寄生虫の例として、原虫には、
ＴｏｘｏｐｌａｓｍａたとへばＴｏｘｏｐｌａｓｍａ
ｇｏｎｄｉｉＰｌａｅｍＯｄｉｕｍたとへげり÷郷佇Ｐ
’ｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｕｉｖａｘｍａｌａｒｉａｅ、
ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ、ｏｖａｌｅ、Ｔｅｉｌｅｒｉ
ａｐａｒｖｕｍおよびＦｉｌａｒｏｉｄａｅ 、なるべ
くはｐａｒａｆｌａｒｉａおよびｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ
、 Ｂｎｔａｍｏｅｂａｈ１θｔｏ１７ｔｉｃ＆、種々
の型のアナプラズマ、９ｃｈｉｓｔｏｇ ｏＩｎａたと
へばＢｃｈｉｓ加ｓｏｍａ ｈａｅｍａｔ−Ｏｂｉｕｍ
。
ＴｏｘｏｐｌａｓｍａたとへばＴｏｘｏｐｌａｓｍａ
ｇｏｎｄｉｉＰｌａｅｍＯｄｉｕｍたとへげり÷郷佇Ｐ
’ｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｕｉｖａｘｍａｌａｒｉａｅ、
ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ、ｏｖａｌｅ、Ｔｅｉｌｅｒｉ
ａｐａｒｖｕｍおよびＦｉｌａｒｏｉｄａｅ 、なるべ
くはｐａｒａｆｌａｒｉａおよびｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ
、 Ｂｎｔａｍｏｅｂａｈ１θｔｏ１７ｔｉｃ＆、種々
の型のアナプラズマ、９ｃｈｉｓｔｏｇ ｏＩｎａたと
へばＢｃｈｉｓ加ｓｏｍａ ｈａｅｍａｔ−Ｏｂｉｕｍ
。
ｍａｎｓｏｉ、 ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、およびＴｒ７ｐ
ａｎ０８０ｍａたとへばＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｇａ
ｍｂｉｅｎｓｅ、 ｂｒｕｓｅｉまたはｃｏｎｇｏｌｅ
ｓｉがある。
ａｎ０８０ｍａたとへばＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｇａ
ｍｂｉｅｎｓｅ、 ｂｒｕｓｅｉまたはｃｏｎｇｏｌｅ
ｓｉがある。
ｂ）非ハイドロフォビック蛋白質またはペプチＰより出
発しハイＶロフォビックの基をそれらに結合さすことも
可能である。非ハイＶロフォビック蛋白質に、エンベロ
ープを有するかまたは有しないウィルス、細菌、マイコ
プラズマ、寄生虫より由来しうる。非エンプローゾウィ
ルスで、非ハイリオウイルス、Ａｄｅｎｏｖ４ｒｉｄａ
ｅ、 Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ 。
発しハイＶロフォビックの基をそれらに結合さすことも
可能である。非ハイＶロフォビック蛋白質に、エンベロ
ープを有するかまたは有しないウィルス、細菌、マイコ
プラズマ、寄生虫より由来しうる。非エンプローゾウィ
ルスで、非ハイリオウイルス、Ａｄｅｎｏｖ４ｒｉｄａ
ｅ、 Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ 。
たとへは、ねこペストウィルス、およびプタバルポウイ
ルス、ＲｅｏｖｉｒｉｄａｅたとへばＲｏｔａｖｉｒｕ
ｓがある。マイコプラズマの例には、Ｍ、ｐｎθｕｍｏ
ｎｉａｅ。
ルス、ＲｅｏｖｉｒｉｄａｅたとへばＲｏｔａｖｉｒｕ
ｓがある。マイコプラズマの例には、Ｍ、ｐｎθｕｍｏ
ｎｉａｅ。
ｍｙｃｏｉｄｅｓ、 ｂｏｖｉｓ、 ５ｕｉｓ、 ｏｒ
ａｌｅ、 ｓａｌｖａｒｉｕｍ。
ａｌｅ、 ｓａｌｖａｒｉｕｍ。
ｈｏｍｉｎｌＢおよびｆｅｒｍｅｎｔａｎｓがある。
これらの蛋白質またはペプチド例ａ）のように精製しう
る〇 非ハイドロンオビック蛋白質に結合させうるハイドロフ
オビック基は、１ 、２ 、３ 、４ ｊ５ 、６゜７
および８炭素原子数の、なるべくは６．７および８炭素
原子数の、直鎖、枝分れ、飽和オたは不飽和の脂肪族鎖
； ’ｌ”ｒｐ、工Ｉｓ、 Ｐｈｅ、 Ｐｒｏ、 Ｔｙ
ｒ、 Ｌｅｕｊｖａｒ、特に’ｒｙｒから選択した、１
．２．３．４．ｔたＦｉ５個、なるべくは２．３．４個
のアミノ酸の小型ベデチｒコリン酸、コレステロール誘
導体たとへぼ、コリン酸、ウルソデンキシコリン酸であ
る。
る〇 非ハイドロンオビック蛋白質に結合させうるハイドロフ
オビック基は、１ 、２ 、３ 、４ ｊ５ 、６゜７
および８炭素原子数の、なるべくは６．７および８炭素
原子数の、直鎖、枝分れ、飽和オたは不飽和の脂肪族鎖
； ’ｌ”ｒｐ、工Ｉｓ、 Ｐｈｅ、 Ｐｒｏ、 Ｔｙ
ｒ、 Ｌｅｕｊｖａｒ、特に’ｒｙｒから選択した、１
．２．３．４．ｔたＦｉ５個、なるべくは２．３．４個
のアミノ酸の小型ベデチｒコリン酸、コレステロール誘
導体たとへぼ、コリン酸、ウルソデンキシコリン酸であ
る。
これらの疎水性の基は、非ハイｒロフォビックの蛋白質
に結合させうる基に連結しておらねばならぬ。それらの
基はたとへばカルボキシル基、アミノ基、ジスルファイ
ド基、ヒＰロキシル基、スルフヒドリル基およびアルデ
ヒド基のようなカルプロパン、ブタン、ヘキサン、ヘゾ
タン、オクタンのカルボキシル、アルデヒ’ ％ ７
ミ／ 、ヒ） 。
に結合させうる基に連結しておらねばならぬ。それらの
基はたとへばカルボキシル基、アミノ基、ジスルファイ
ド基、ヒＰロキシル基、スルフヒドリル基およびアルデ
ヒド基のようなカルプロパン、ブタン、ヘキサン、ヘゾ
タン、オクタンのカルボキシル、アルデヒ’ ％ ７
ミ／ 、ヒ） 。
キシルおよびジスルファイｒ誘導体とシスチン、アスパ
ラギン酸、グルタミン酸、リジンを含有するペプチドと
のあいだ、なるべくはオクタナールとＴｙｒ−Ｔ７ｒ−
Ｔｙｒ−Ｃｙｅ（−Ａｓｐまた１ｄ−Ｇｌｕ）とする。
ラギン酸、グルタミン酸、リジンを含有するペプチドと
のあいだ、なるべくはオクタナールとＴｙｒ−Ｔ７ｒ−
Ｔｙｒ−Ｃｙｅ（−Ａｓｐまた１ｄ−Ｇｌｕ）とする。
結合させうる基を有する疎水性基は、たとへぼ上記した
ような可溶化剤および洗浄剤または塩酸、酢酸、６７チ
容量係酢酸、カセイソーダ、アンモニヤを用いて水に溶
解せねばならぬ。ついで、物質が沈殿せぬよう中性の方
向に調整する。なは、疎水性基を結合させようとする蛋
白質を変性さす…とじてはならない。
ような可溶化剤および洗浄剤または塩酸、酢酸、６７チ
容量係酢酸、カセイソーダ、アンモニヤを用いて水に溶
解せねばならぬ。ついで、物質が沈殿せぬよう中性の方
向に調整する。なは、疎水性基を結合させようとする蛋
白質を変性さす…とじてはならない。
疎水性分子は、非疎水性蛋白質に、１０：１から０．１
： １なるべくは１：１に添加する。
： １なるべくは１：１に添加する。
結合分子として、カルボキシル基を有する疎水性基ハ、
水溶性のカルボジイミドまたは複合無水物を経由して蛋
白質に結合させつる。第１の場合、カルざジイミｒでｐ
！−１５でカルざキシル基を活性化し、リン酸塩含量の
高い緩衝液（ｐＨ８）に溶解した蛋白質と混合する。第
２の場合は、ジオキサンまたはアセトニトリル中トリエ
チルアミンの存在でカルボキシ化合物とイソブチルクロ
ルホルメートとを反応させ、生ずる無水物をＰ）４８か
ら９において蛋白質に添加する。カルボキシル基をヒド
ラゾンを用いてヒＶラジＶに変え、これを、蛋白質中の
過ヨー素酸酸化糖単位中アルデヒドおよびケトンとヒド
ラゾン結合とする。
水溶性のカルボジイミドまたは複合無水物を経由して蛋
白質に結合させつる。第１の場合、カルざジイミｒでｐ
！−１５でカルざキシル基を活性化し、リン酸塩含量の
高い緩衝液（ｐＨ８）に溶解した蛋白質と混合する。第
２の場合は、ジオキサンまたはアセトニトリル中トリエ
チルアミンの存在でカルボキシ化合物とイソブチルクロ
ルホルメートとを反応させ、生ずる無水物をＰ）４８か
ら９において蛋白質に添加する。カルボキシル基をヒド
ラゾンを用いてヒＶラジＶに変え、これを、蛋白質中の
過ヨー素酸酸化糖単位中アルデヒドおよびケトンとヒド
ラゾン結合とする。
亜硝酸を用いてアミノ基を低温条件でシア・戸ニウム塩
に変え、これをＴ７ｒ、 Ｈ２ＯおよびＬ７Ｓとアゾ結
合させる。
に変え、これをＴ７ｒ、 Ｈ２ＯおよびＬ７Ｓとアゾ結
合させる。
コハク酸無水物でヒｒロキシル基をヘミサクシネート誘
導体に変え、これをカルボキシル基に結合させうる〇 アルデヒＶ基は蛋白質中のアミノ酸と反応させてシック
塩基となしうる。
導体に変え、これをカルボキシル基に結合させうる〇 アルデヒＶ基は蛋白質中のアミノ酸と反応させてシック
塩基となしうる。
いくつかのカップリングのための基および方法は、Ｊｏ
ｕｒｎａｌｏｆ １ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ、 ５９（１９８３１）１２９−１４３．２８
９−２９９、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ Ｖｏｌ ９３ ２８０−３３およびＡｎａｌｙｔ
ｉｃａｌ ＢｉｏｃｈｅｍｉＳｔｒ７１１６ ｓ ４０
２受は入れた疎水性基を有するそのように製造された蛋
白質またはペゾチＶつい”ｅ 、ａ）におけるように配
糖体と結合させ複合物となしうる。しかし、ここで細胞
フラグメント除去のための精製段階は省略しうる。
ｕｒｎａｌｏｆ １ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔ
ｈｏｄｓ、 ５９（１９８３１）１２９−１４３．２８
９−２９９、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ Ｖｏｌ ９３ ２８０−３３およびＡｎａｌｙｔ
ｉｃａｌ ＢｉｏｃｈｅｍｉＳｔｒ７１１６ ｓ ４０
２受は入れた疎水性基を有するそのように製造された蛋
白質またはペゾチＶつい”ｅ 、ａ）におけるように配
糖体と結合させ複合物となしうる。しかし、ここで細胞
フラグメント除去のための精製段階は省略しうる。
Ｃ）疎水性基が閉じこめられている親水性蛋白質より出
発し、蛋白質をおだやかに檀那で、疎水性が露出される
ようにしてもよい。たとへは約２．５の低い一１３Ｍの
尿素または７０℃を超える高温などある。これらの蛋白
質は、■ｇＧｓ工ｇＭ。
発し、蛋白質をおだやかに檀那で、疎水性が露出される
ようにしてもよい。たとへは約２．５の低い一１３Ｍの
尿素または７０℃を超える高温などある。これらの蛋白
質は、■ｇＧｓ工ｇＭ。
工ｇＡ、工ｇＤおよび工ｇＥのような免疫グロブリンお
よびポリオウィルス蛋白質のようなある種のウィルス蛋
白質でありうる。免疫グロブリンは、アンチジオチぎツ
ク（ａｎｔｉｄｉｏｔｙｐｉ（！ ）抗体に用いうる。
よびポリオウィルス蛋白質のようなある種のウィルス蛋
白質でありうる。免疫グロブリンは、アンチジオチぎツ
ク（ａｎｔｉｄｉｏｔｙｐｉ（！ ）抗体に用いうる。
得られる蛋白質はｂ）におけるように蛋白質として精製
し、Ｃ）におけるように配糖体に結合させて複合物とす
る０なは細胞７ラグメン）ｋ除く段階は略する。
し、Ｃ）におけるように配糖体に結合させて複合物とす
る０なは細胞７ラグメン）ｋ除く段階は略する。
本発明に準する凭疫原性複合物は、ヒトおよび動物にお
いて特異的な免疫の刺激に用いうる。それらは、細菌、
ウィルス、マイコプラズマおよび寄生虫による病気に対
するワクチンおよび楕々の動物細胞に由来する膜蛋白質
に対する、研究のための抗体生産に用いうる。
いて特異的な免疫の刺激に用いうる。それらは、細菌、
ウィルス、マイコプラズマおよび寄生虫による病気に対
するワクチンおよび楕々の動物細胞に由来する膜蛋白質
に対する、研究のための抗体生産に用いうる。
種々の細菌またはウィルスに由来する両親媒性蛋白質の
混合物を用いて、いくつかの病気に対してワクチンとも
なしうる。
混合物を用いて、いくつかの病気に対してワクチンとも
なしうる。
本発明は、場合によっては、ふつうの添加物および充填
剤を加えた、なるべくは、Ｔ、Ｎ溶液（例１）のような
、イソコムの緩衝溶液の形の、本発明に準するインコム
を含有するヒトや家畜用組成物とする。
剤を加えた、なるべくは、Ｔ、Ｎ溶液（例１）のような
、イソコムの緩衝溶液の形の、本発明に準するインコム
を含有するヒトや家畜用組成物とする。
つぎに、非限定的実施例で本発明をよりくわしく記載す
る。
る。
例１
［Ｊｍθａで分離されたバラインフルエンデー６−ウィ
ルス３０重量％しよ糠中、１００．０００．Ｆで４℃で
１時間遠心し精製した。底部の層を、［１１，０５Ｍ
Ｔｒｉｓ−ＭＣＩ 、 ｐＨ７，４および０．Ｉ Ｍ
ＮａＣ１（’Ｉ’Ｎ）巾約１０■／−の濃度に溶解した
。同じ緩衝液（ＴＭＪ中１１−５１ｎ／−のＰニー３−
ウィルスを、ＴＮ緩衝液中約１０５カウント／分３Ｈ−
標識ウィルスとあわせて、２重量％（最終濃ｆ） Ｔｒ
ｉｔＯｎ Ｘ −１００を用いて可溶化した。（Ａ、Ｌ
ｕｕｋｋｏｎｅｎ、 Ｏ。
ルス３０重量％しよ糠中、１００．０００．Ｆで４℃で
１時間遠心し精製した。底部の層を、［１１，０５Ｍ
Ｔｒｉｓ−ＭＣＩ 、 ｐＨ７，４および０．Ｉ Ｍ
ＮａＣ１（’Ｉ’Ｎ）巾約１０■／−の濃度に溶解した
。同じ緩衝液（ＴＭＪ中１１−５１ｎ／−のＰニー３−
ウィルスを、ＴＮ緩衝液中約１０５カウント／分３Ｈ−
標識ウィルスとあわせて、２重量％（最終濃ｆ） Ｔｒ
ｉｔＯｎ Ｘ −１００を用いて可溶化した。（Ａ、Ｌ
ｕｕｋｋｏｎｅｎ、 Ｏ。
Ｇａｍｂｅｒｇ、 Ｂ、Ｒｅｎｋｏｎｅｎ （１９
７９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ７６ ５６−５９頁、本明細書
中の文献に引用する）。約２００μｌの容葉の試料を、
ＴＮ中１チＴｒｔｔｏｎ ｘ −１００含有１５チしよ
糖の３００μｊおよび０．２％（重量） Ｑｕｉｌ Ａ
含有２０から５０重量％までのＴＮ中１２−しよ糖グラ
ジェント上に重ねた。遠心したあと、５００μｌ宛の分
画を下部から集め、試料（２０−５０μ／）の放射活性
を測定した。放射活性のある蛋白質分画を集め０．００
５ ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ 、 ０．０’Ｉ Ｍ Ｎａ
Ｃ１，ｐＨ７，４中で透析し、１０−フラスコに入れ、
ＥｄＷａｒｄ８ 凍結乾燥装置中で１８時間透析した。
７９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ７６ ５６−５９頁、本明細書
中の文献に引用する）。約２００μｌの容葉の試料を、
ＴＮ中１チＴｒｔｔｏｎ ｘ −１００含有１５チしよ
糖の３００μｊおよび０．２％（重量） Ｑｕｉｌ Ａ
含有２０から５０重量％までのＴＮ中１２−しよ糖グラ
ジェント上に重ねた。遠心したあと、５００μｌ宛の分
画を下部から集め、試料（２０−５０μ／）の放射活性
を測定した。放射活性のある蛋白質分画を集め０．００
５ ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ 、 ０．０’Ｉ Ｍ Ｎａ
Ｃ１，ｐＨ７，４中で透析し、１０−フラスコに入れ、
ＥｄＷａｒｄ８ 凍結乾燥装置中で１８時間透析した。
この調製物の沈降係数に２４８であった。
この複合物は、１０−１４重量％しよ糖グラジェント中
で遠心してさらに精製した。
で遠心してさらに精製した。
例２
ウマインフルエンザウィルス（８ｏ１ｖａｌｌａ。
５Ｏ１ｖａｌｌａ、ストックホルムで分離）を用い、例
１の操作を反復した。この実験を配糖体無添加で実施し
た（ ｕｐｃ願８１１０２２１３．６の原則による）０
そしてそのように得られた蛋白質ミセルおよび配糖体を
用いて生成した蛋白質複合物は、１０−４０重ｔ％の糖
グラジェントでプラス４℃で４時間２８肌０００ｙで遠
心した。結果は第１図に示す。
１の操作を反復した。この実験を配糖体無添加で実施し
た（ ｕｐｃ願８１１０２２１３．６の原則による）０
そしてそのように得られた蛋白質ミセルおよび配糖体を
用いて生成した蛋白質複合物は、１０−４０重ｔ％の糖
グラジェントでプラス４℃で４時間２８肌０００ｙで遠
心した。結果は第１図に示す。
これはチログロブリンの沈降係数を標準にしている（矢
印は１６Ｓ）。蛋白質ミセルの沈降係数は３０Ｂで、配
糖体蛋白質のミセルは１９８である。。
印は１６Ｓ）。蛋白質ミセルの沈降係数は３０Ｂで、配
糖体蛋白質のミセルは１９８である。。
（ウィルス糖蛋白質は、ガラク＊ドースオキシダーゼ−
３Ｈ−水素化ホウ素法で標識した）０例３ 例１の方法は、パラインフルエンザ−３−ウィルスに代
えてはしかウィルスを用いて反復した。
３Ｈ−水素化ホウ素法で標識した）０例３ 例１の方法は、パラインフルエンザ−３−ウィルスに代
えてはしかウィルスを用いて反復した。
得られた複合物は電顕で、第２図の特徴的構造を示した
。
。
例４
Ｂｉｌｔｈｏｖｅｎ （オランＶ）より得た狂犬病ウィ
ルスを５ｅｐｈａｃｒ７１ Ｓ ３００上にゲル重層し
て精製した。ＴＮ中２＋＋ｖ／ｍ７！の濃度に再懸濁さ
せた。ウィルス０１■？ １００ ｍＭのオクチル−β
−Ｄ−グルコシドを用いて可溶化し、２０℃で４５分イ
ンキュベートした。試料は５０重量％のショ糖溶液上に
重層し、プラス４°Ｃで４５分２５０．０００ ｇで遠
心した。上層の溶液を取り出しｑｕｔＩＡ ？ ０．２
重量％に添加した。
ルスを５ｅｐｈａｃｒ７１ Ｓ ３００上にゲル重層し
て精製した。ＴＮ中２＋＋ｖ／ｍ７！の濃度に再懸濁さ
せた。ウィルス０１■？ １００ ｍＭのオクチル−β
−Ｄ−グルコシドを用いて可溶化し、２０℃で４５分イ
ンキュベートした。試料は５０重量％のショ糖溶液上に
重層し、プラス４°Ｃで４５分２５０．０００ ｇで遠
心した。上層の溶液を取り出しｑｕｔＩＡ ？ ０．２
重量％に添加した。
Ｅ料Ｕセルロースホースに入れ、１０００ｍ容量の０．
１５Ｍの酢酸アンモニウム緩衝液中プラス２０℃で透析
した。この溶液は７２時間のあいだかくはんし、その間
溶液は３度交換した。透析した材料は狂犬病ウィルスの
複合物を含有した０１０−４０重量％糖溶液中プラス４
℃で２８０．０００ ｇで４時間遠心して、材料の１部
を精製した。電顕像は、第３図の構造を示す。
１５Ｍの酢酸アンモニウム緩衝液中プラス２０℃で透析
した。この溶液は７２時間のあいだかくはんし、その間
溶液は３度交換した。透析した材料は狂犬病ウィルスの
複合物を含有した０１０−４０重量％糖溶液中プラス４
℃で２８０．０００ ｇで４時間遠心して、材料の１部
を精製した。電顕像は、第３図の構造を示す。
例５
例・４の方法を反復した。はしかウィルスを用いた。複
合物は、例３で得られた複合物と同じ構造を示した。
合物は、例３で得られた複合物と同じ構造を示した。
例６
しよ糖グラジェント遠心を用いてパラインフルエンザ−
６−ウィルス（σ−２３）を精製した。
６−ウィルス（σ−２３）を精製した。
精製ウィルスは１ｏｑ／ＴｎＩ！に、ｏ、ｏ ２Ｍバー
ビトン緩衝液、ｐＨ８，０，０，２４Ｍグルコース（Ｂ
Ｇ ）に溶解精製した。ＢＧ−緩衝液中１−５■／−Ｐ
ニー３−ウィルスを、ＢＧ緩衝液中約１０５３Ｈ＋カウ
ント／分標識ウィルス（上記Ｌｕｕｋｋｏｎｅｎ等、１
９７７による）と共に、２ ％ Ｔｒｉｔｏｎ ｘ −
１００を用いて可溶化した。１−の試料を、ＰＨ８，０
，０−０２Ｍハ−ヒ）、ン緩衝液および肌０２重量係の
Ｑｕｉｌ Ａ含有１％アガロースデル上に重層した。
ビトン緩衝液、ｐＨ８，０，０，２４Ｍグルコース（Ｂ
Ｇ ）に溶解精製した。ＢＧ−緩衝液中１−５■／−Ｐ
ニー３−ウィルスを、ＢＧ緩衝液中約１０５３Ｈ＋カウ
ント／分標識ウィルス（上記Ｌｕｕｋｋｏｎｅｎ等、１
９７７による）と共に、２ ％ Ｔｒｉｔｏｎ ｘ −
１００を用いて可溶化した。１−の試料を、ＰＨ８，０
，０−０２Ｍハ−ヒ）、ン緩衝液および肌０２重量係の
Ｑｕｉｌ Ａ含有１％アガロースデル上に重層した。
アガロースデルは８５ｕ２表面積、２５ｕの高さのチュ
ーブに入れた。チューブの上方部分および下方部分はそ
れぞれ、ｐＨ８，０，０，０２Ｍパービトン緩衝液の電
気泳動緩衝液に接続した。上方を陰極に、下方を陽極に
接続した。５ｖ／ｃＩＩＬで４時間泳動させた。デルの
陽極側で試料を集めて放射活性を測定した。ｐＨ７，０
，０，１５Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液中で透析した。凍
結乾燥した。
ーブに入れた。チューブの上方部分および下方部分はそ
れぞれ、ｐＨ８，０，０，０２Ｍパービトン緩衝液の電
気泳動緩衝液に接続した。上方を陰極に、下方を陽極に
接続した。５ｖ／ｃＩＩＬで４時間泳動させた。デルの
陽極側で試料を集めて放射活性を測定した。ｐＨ７，０
，０，１５Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液中で透析した。凍
結乾燥した。
この調製物は約２０８の沈降係数（例２と同様に測定）
であった。
であった。
この複合物げ１０−４００重量％よ糖グラジェントで精
製した。
製した。
例７
Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ （Ｔａｇｅ Ｗ
ａｌｌｅｒ、 ８ｔａｔｅｎｓＶｅｔｅｒｉｎＫｒｍｅ
ｄｉｃｉｎｓｋａ Ａｎｓｔａｌｔ ）を木綿を通し濾
過し、４°Ｃで２０分、１００．０００ ｇで３０重量
しよ糠中で遠心して精製した。このものは、０．０５
Ｍ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７，４および０ 、Ｉ Ｍ
ＮａＣ１（ＴＮ ）巾約５■／−に溶解した。本明細書
の参考文献として引用する、” Ａｎ ｉｎｖｅｓｔｉ
ｇａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ５ｔ
ｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ’ｌ’ｏｘｏｐｌａｅｍａ ｇ
ｏｎｄｉｉ”により、約１０５カウント／分の３Ｈ標識
トキソゾラズマ（Ｌｕｕｋｋｏｎｅｎ等、１９７７ ）
（ＴＮ−緩衝液中）とあわせて、１ｔｎｇのＴｏｘｏ
ｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉを、５％オクチル−β−Ｄ
−グルコシＶおよび５％サポニン中で可溶化した。約２
００μｌ容量の試料は、ＴＮ中１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ
−１００含有１５％しよ糖の３００ ｐｉおよび０．２
重量％ Ｑｕｉｌ Ａ含有２０から５００重量％ＴＮ中
１２ｍ７！ｔ、よ糖グラジエ′ント上に重層させた。約
１８時間、２０°Ｃで１５０．０００ 、！９で遠心し
た。遠心後はグラジエン）Ｈ５００ｐｌ宛ノ分画毎に集
メ（２０−５０ｐｌ）の試料の放射活性をみた。２つの
放射活性ぎ−クを検出した。それぞれのピーク中の分画
をあわせ、例１のように透析し濃縮した。Ｑｕｉｌ Ａ
との複合物は、同じ寄生虫より得た蛋白質ミセルより低
い沈降係数を示した。
ａｌｌｅｒ、 ８ｔａｔｅｎｓＶｅｔｅｒｉｎＫｒｍｅ
ｄｉｃｉｎｓｋａ Ａｎｓｔａｌｔ ）を木綿を通し濾
過し、４°Ｃで２０分、１００．０００ ｇで３０重量
しよ糠中で遠心して精製した。このものは、０．０５
Ｍ トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７，４および０ 、Ｉ Ｍ
ＮａＣ１（ＴＮ ）巾約５■／−に溶解した。本明細書
の参考文献として引用する、” Ａｎ ｉｎｖｅｓｔｉ
ｇａｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ５ｔ
ｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ’ｌ’ｏｘｏｐｌａｅｍａ ｇ
ｏｎｄｉｉ”により、約１０５カウント／分の３Ｈ標識
トキソゾラズマ（Ｌｕｕｋｋｏｎｅｎ等、１９７７ ）
（ＴＮ−緩衝液中）とあわせて、１ｔｎｇのＴｏｘｏ
ｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉを、５％オクチル−β−Ｄ
−グルコシＶおよび５％サポニン中で可溶化した。約２
００μｌ容量の試料は、ＴＮ中１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ
−１００含有１５％しよ糖の３００ ｐｉおよび０．２
重量％ Ｑｕｉｌ Ａ含有２０から５００重量％ＴＮ中
１２ｍ７！ｔ、よ糖グラジエ′ント上に重層させた。約
１８時間、２０°Ｃで１５０．０００ 、！９で遠心し
た。遠心後はグラジエン）Ｈ５００ｐｌ宛ノ分画毎に集
メ（２０−５０ｐｌ）の試料の放射活性をみた。２つの
放射活性ぎ−クを検出した。それぞれのピーク中の分画
をあわせ、例１のように透析し濃縮した。Ｑｕｉｌ Ａ
との複合物は、同じ寄生虫より得た蛋白質ミセルより低
い沈降係数を示した。
例８
グラスミｆ ｐｔｌｌＫ ８８を有するバクテリヤＥ。
ｃｏｌｉ ｆ、３度、機械的に振り等電点て沈降させた
。この材料は例１記載のように処理した。得られた複合
物は第２図および第３図に示す特徴的構造を有した。
。この材料は例１記載のように処理した。得られた複合
物は第２図および第３図に示す特徴的構造を有した。
例９
ボリン（ｐｏｒｉｎ ）蛋白質を有するｓａｌｍｏｎｅ
ｌｌａを用い例８の方法を反復した。第２および６図に
示す特徴的構造を有する複合物を得た。
ｌｌａを用い例８の方法を反復した。第２および６図に
示す特徴的構造を有する複合物を得た。
例１０
ネコ白血球ウィルスで感染されたネコよりエーテル（θ
ｐｉｔθ１）腎細胞を採取した。しｏｌのように処理し
た。第２および第３図に示す特徴的構造の複合物を得た
。
ｐｉｔθ１）腎細胞を採取した。しｏｌのように処理し
た。第２および第３図に示す特徴的構造の複合物を得た
。
例１１
生白血球ウィルスで転換したエピチル腎細胞を例１の方
法で処理した。第２および第３図に示す特徴的構造の複
合物を得た。
法で処理した。第２および第３図に示す特徴的構造の複
合物を得た。
例１２
例１の方法でバラインフルエンｆ′−６−ウィルスσ−
２３を精製し、蛋白質複合物を調製した。
２３を精製し、蛋白質複合物を調製した。
ただし、２０から５０重量％ＴＴＮ中よ糖グラジェント
は、Ｑｕｉｌ Ａ以外のサポニンを含有した。
は、Ｑｕｉｌ Ａ以外のサポニンを含有した。
２種の市販サポニンを試験した。ＭＥ３ｒＱｋ″Ｗｅｉ
θ日”。
θ日”。
ｒθ１ｎ ５１４０００２３およびＳｃ、 Ｌｉｃｋｈ
ａｒｄｔ″Ｓ″５ＯｈｕＣｈａｒｄｔ、 Ｍｕｎｉｃｈ
である。（純粋な形状なサポニン。製造者は製品の型を
明らかにしない。
ａｒｄｔ″Ｓ″５ＯｈｕＣｈａｒｄｔ、 Ｍｕｎｉｃｈ
である。（純粋な形状なサポニン。製造者は製品の型を
明らかにしない。
薄層クロマトグラフィーでＱｕｉｌ Ａと異なる）。
生ずる複合物の沈降定数は２４Ｂで、例６の複合物と同
じ構造を示す。
じ構造を示す。
例１６
５ηのはしかウィルスを例３のように可溶化し、ＤＩＢ
セルロース型の陰イオン交換体で処理した。
セルロース型の陰イオン交換体で処理した。
イオン交換体は２０−のカラムとし、０．５重量％のオ
クチル−β−Ｄ−グルコシｒ含有、ｐＨ７，２の０．０
１ Ｍ Ｕン酸塩緩衝液と平衡させた。試料はイオン交
換体に施し、未成着分１ｄ、０．５重量％オフ−ｙ ／
ｌ／ −β−Ｄ −ｙ” ルコシ）含有、ｐＨ７，２，
０，０１Ｍ リン酸塩緩衝液の５倍容量で洗い流した。
クチル−β−Ｄ−グルコシｒ含有、ｐＨ７，２の０．０
１ Ｍ Ｕン酸塩緩衝液と平衡させた。試料はイオン交
換体に施し、未成着分１ｄ、０．５重量％オフ−ｙ ／
ｌ／ −β−Ｄ −ｙ” ルコシ）含有、ｐＨ７，２，
０，０１Ｍ リン酸塩緩衝液の５倍容量で洗い流した。
はしか膜蛋白質の同定された分画を同定し合併しＱ、ｕ
ｉｌ Ａを０．１重量％まで加え、０．０５Ｍ酢酸アン
モニウム、ＰＨ７，０に対し透析した。特徴的構造（図
１および２）を有する複合物を生成した０例１４ ＬＯｎｄｏｎ ５ｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ
Ｍｅｄｉａｉｎｓ ａｎｄＨｙｇｉｎｅ （Ｆｔｎｇ
ｌａｎｄ）より受は取った肝炎Ｂウィルスの２２ ｎｍ
粒子をＴＮ中に１■／−に再懸濁させたｃ ２２ ｎｍ
粒子の０．３■蛋白質をＴｒｉｔｏｎ ｘ−１００，
０，５Ｍ ＮａＣ１の２容量％で可＋１ａ化Ｌ、６７０
Ｃで１６時間インキュベートした。ついで例１の操作を
反復した。生成複合物は２０Ｓの沈降定数を示した。電
顕で第４図の構造の複合物を示した。
ｉｌ Ａを０．１重量％まで加え、０．０５Ｍ酢酸アン
モニウム、ＰＨ７，０に対し透析した。特徴的構造（図
１および２）を有する複合物を生成した０例１４ ＬＯｎｄｏｎ ５ｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ
Ｍｅｄｉａｉｎｓ ａｎｄＨｙｇｉｎｅ （Ｆｔｎｇ
ｌａｎｄ）より受は取った肝炎Ｂウィルスの２２ ｎｍ
粒子をＴＮ中に１■／−に再懸濁させたｃ ２２ ｎｍ
粒子の０．３■蛋白質をＴｒｉｔｏｎ ｘ−１００，
０，５Ｍ ＮａＣ１の２容量％で可＋１ａ化Ｌ、６７０
Ｃで１６時間インキュベートした。ついで例１の操作を
反復した。生成複合物は２０Ｓの沈降定数を示した。電
顕で第４図の構造の複合物を示した。
この構造は第１図の構造とは異なる。
例１５
牛下痢ウィルス（ＢＭ）３■をＴＮ Ｋ溶解しＴｒｌｔ
ｏｎ ｘ −１００を１容量チ捷で加え可溶化した。混
合物は室温で２時間かくけんした。可溶イヒしたウィル
スはＢｅｐｈａｒｏθ１３４Ｂに固定化したレクチンＬ
θｎｔｉｌより成立つレクチンカラムに処した。
ｏｎ ｘ −１００を１容量チ捷で加え可溶化した。混
合物は室温で２時間かくけんした。可溶イヒしたウィル
スはＢｅｐｈａｒｏθ１３４Ｂに固定化したレクチンＬ
θｎｔｉｌより成立つレクチンカラムに処した。
カラムはＴＮで平衡させ、カラムにウィルスを導入した
あと、０．１容量％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ −１００を含
有するＴＮの５力ラム容量倍で洗い、ついで１０カラム
容量倍のＴＮで洗った。ウィルスエンベローフ蛋白質を
、０．２Ｍメチルα−Ｄ−マンノシド、０．５重量係オ
クチルーβ−Ｄ−グルコシｌ−” （ＴＮ中）の緩衝液
で溶出脱着させた。ウィルスをエンベロープする蛋白質
含有分画を集めＱｕＦＩ Ａ ｆＯ，１型針Ｌ１６まで
加えた。＋４°Ｃで３日間ＰＨ７，０の０．０５Ｍ酢酸
アンモニウムに対し透析した。そのあいだ１リツトルの
緩衝液は６度変えた。
あと、０．１容量％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ −１００を含
有するＴＮの５力ラム容量倍で洗い、ついで１０カラム
容量倍のＴＮで洗った。ウィルスエンベローフ蛋白質を
、０．２Ｍメチルα−Ｄ−マンノシド、０．５重量係オ
クチルーβ−Ｄ−グルコシｌ−” （ＴＮ中）の緩衝液
で溶出脱着させた。ウィルスをエンベロープする蛋白質
含有分画を集めＱｕＦＩ Ａ ｆＯ，１型針Ｌ１６まで
加えた。＋４°Ｃで３日間ＰＨ７，０の０．０５Ｍ酢酸
アンモニウムに対し透析した。そのあいだ１リツトルの
緩衝液は６度変えた。
最終生成物は凍結乾燥した。電顕は第４図の複合物構造
を示した。この調製物の沈降定数は２０Ｓであった。
を示した。この調製物の沈降定数は２０Ｓであった。
例１６
ポリオウィルスをホルマリンで殺し既知の方法だとべば
超遠心、そにつぐ、Ｓｅｐｈａｒｏｅｅ（ｐｈａｎｍｃ
ｉａ。
超遠心、そにつぐ、Ｓｅｐｈａｒｏｅｅ（ｐｈａｎｍｃ
ｉａ。
ｔｙｐｐ日ａｈａ ）ゲルクロマトグラフィーで精製し
た。
た。
最後に塩化セシウム中でデンシティ遠心に処した。
たとへば２ ％ ＳＤ８ （ナトリウムＶデシルスルフ
ェート）のような可溶色剤含有ＴＮのような緩衝液中で
９０°Ｃで２分間加熱し可溶化した。ウィルス蛋白質は
０．１チＳＤＳを含有する１３チポリアクリルアミｖデ
ル中の電気泳動で分けた。デル中の蛋白質は、ｃｏ ｍ
ａ８ｓｉｅ Ｂｌｕｅ Ｒ２５０で着色させ同定した。
ェート）のような可溶色剤含有ＴＮのような緩衝液中で
９０°Ｃで２分間加熱し可溶化した。ウィルス蛋白質は
０．１チＳＤＳを含有する１３チポリアクリルアミｖデ
ル中の電気泳動で分けた。デル中の蛋白質は、ｃｏ ｍ
ａ８ｓｉｅ Ｂｌｕｅ Ｒ２５０で着色させ同定した。
ＶＩ’ ３は約２６０００ダルトンの分子量のウィルス
蛋白前のひとつである。このウィルス蛋白質の帯をデル
より切り出し、逆電気泳動で抽出した。
蛋白前のひとつである。このウィルス蛋白質の帯をデル
より切り出し、逆電気泳動で抽出した。
抽出物ハ、２ ％ Ｔｒｉｔｏｎ ｘ −１００可溶化
剤全含有するＴＮｖｃ溶解した。この混合物は、例１の
遠心法で蛋白質複合物（ｉｓｃｏｍｅｒ ）とした。電
顕は、第６図に示す特徴的構造を示した０例１７ ホルマリンで殺した精製ポリオウィルス′（ｉ−０，１
ＭのＭｇＣｌ２を含有する６７答量チの酢酸に溶解した
。ウィルスはついで１００，０００ 、！９で２時間超
遠心に処した。ウィルス蛋白質のみ含有する上清を、０
．１重量％ ＱｕｌｌＡの存在で、０．０１ ｙ Ｔｒ
ｔｓ。
剤全含有するＴＮｖｃ溶解した。この混合物は、例１の
遠心法で蛋白質複合物（ｉｓｃｏｍｅｒ ）とした。電
顕は、第６図に示す特徴的構造を示した０例１７ ホルマリンで殺した精製ポリオウィルス′（ｉ−０，１
ＭのＭｇＣｌ２を含有する６７答量チの酢酸に溶解した
。ウィルスはついで１００，０００ 、！９で２時間超
遠心に処した。ウィルス蛋白質のみ含有する上清を、０
．１重量％ ＱｕｌｌＡの存在で、０．０１ ｙ Ｔｒ
ｔｓ。
０．１４ Ｍ ＮａＣ１、ｐＨ７，４に対し透析した。
生成複合物は例６製造のものと同じ構造を示した。
例１８
凍結脱水した形状の１ｔＴｅｉ８ｓ６１ｒｉａ ｍ８ｎ
ｉｎｇｉｔｉ（ｌｉｅの外膜蛋白質を、Ｎａｔｉｏｎａ
ｌ工ｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ。
ｉｎｇｉｔｉ（ｌｉｅの外膜蛋白質を、Ｎａｔｉｏｎａ
ｌ工ｎ５ｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ。
（オランダ）より受は取った。２係（重箪）のオクチル
−β−Ｄ−グルコシＰおよび肌１重量％のＱｕｉｌ Ａ
ｆ含有するＴＮに溶解し、例４のように処理した。生
ずる複合物は例２のように測定して、沈降定数２０８で
あったＯ 例１９ ０．１．２．３および４個のチロシンを末端に結合させ
合成した、疎水性アミノ酸を有するペグチー１口てい病
ペプチド１４４−１６９．０、 Ｋａｕｆｂｅｈｒｅｎ
、 ＶＰ工を用いた。ペプチドは極少量の６７容量チ
酢酸に溶解し、２５％アンモニヤで中和し、Ａｇ ｄｅ
ｓｔ （２％最終濃度とする）と共に０．５Ｍ酢酸アン
モニウムの濃度まで希訳した。
−β−Ｄ−グルコシＰおよび肌１重量％のＱｕｉｌ Ａ
ｆ含有するＴＮに溶解し、例４のように処理した。生
ずる複合物は例２のように測定して、沈降定数２０８で
あったＯ 例１９ ０．１．２．３および４個のチロシンを末端に結合させ
合成した、疎水性アミノ酸を有するペグチー１口てい病
ペプチド１４４−１６９．０、 Ｋａｕｆｂｅｈｒｅｎ
、 ＶＰ工を用いた。ペプチドは極少量の６７容量チ
酢酸に溶解し、２５％アンモニヤで中和し、Ａｇ ｄｅ
ｓｔ （２％最終濃度とする）と共に０．５Ｍ酢酸アン
モニウムの濃度まで希訳した。
０．１％の配糖体を加え、混合物は、０．０５Ｍ酢酸ア
ンモニウム、Ｐ）（７に対し透析した（透析チュー−７
” ５ｐｅｃｔｒａ ｐｏｒ ６ＭＷｃ０１．０００
）。
ンモニウム、Ｐ）（７に対し透析した（透析チュー−７
” ５ｐｅｃｔｒａ ｐｏｒ ６ＭＷｃ０１．０００
）。
２週間の間隔をおき、マウスを、５０μｇ量で２度ワク
チン処理した。
チン処理した。
Ｑ Ｏ，００５
１０，２１７
２０，３１１
３０，３４７
４０，３４６
生成複合物の電顕像（第５図）は、２［＋−４［）ｎｍ
の長さで１０ｎｍの巾の球状の電子を通さない粒子を示
した。他の大きさのものもある。
の長さで１０ｎｍの巾の球状の電子を通さない粒子を示
した。他の大きさのものもある。
第５ａ図は６個のチロシンに結合したペプチドの電顕像
で、第５ｂ図は４個のチロシンに結合したベゾチドの像
である。
で、第５ｂ図は４個のチロシンに結合したベゾチドの像
である。
例２０
既知の方法（ｖａｎ ｃｌｅｎ Ｂｒａｎｄｅｎ、 、
７． Ｌ、ｄｅ （＋ｏｅｎ。
７． Ｌ、ｄｅ （＋ｏｅｎ。
Ｌ＋ＫａｎａｒｅｋおよびＲｕｙｓｃｈａｅｒｔ （１
９８１）およびＭｏ１ｅｃｕｌａｒ工ｍｍｕｎｏ１ｏｇ
ｙ １８ ＃ ｐｐ６２１−６３１（１９８１））で精
製するか、硫酸アンモニウム沈殿で接縮した（ Ｊ、Ｅ
、 ０ｏｎｒａｄｉｅ、 Ｍ、 ＧＯｖｅｎｄｅｒ。
９８１）およびＭｏ１ｅｃｕｌａｒ工ｍｍｕｎｏ１ｏｇ
ｙ １８ ＃ ｐｐ６２１−６３１（１９８１））で精
製するか、硫酸アンモニウム沈殿で接縮した（ Ｊ、Ｅ
、 ０ｏｎｒａｄｉｅ、 Ｍ、 ＧＯｖｅｎｄｅｒ。
Ｌ、 Ｖｉｓｓｅｒ、 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＭｅｔｈｏｄｓＶｏｌ ５９
ｐｐ、 ２８９−２９９ 、１９８３、本明細書の参照
文献として引用）マウスよりの工ｇａ４ｒｓ冷蔵室中で
０．１５Ｍリン酸塩（ＰＣ緩衝液、Ｐ）１２ ）の１リ
ツトルに対して透析した。ついで２％のデタージエント
（たとへば）オクチル−β−Ｄ−グルコシＰ〕を加えた
。デタージエントの臨界ミセル濃度（ＯＭＯ）が低いな
らば、透析を始めるより前にデタージエントを交換すべ
きである。混合物はｐｃ ｐＨ７に対し透析した０１時
間後に０８０５チの最終濃度までＱ、ｕｉｌ Ａを加え
た。冷蔵室中で２４時間ｐＨ７のＰＣに対し透析を続け
た０複合物の形成は、Ｂｅｃｋｍａｎ ＳＷ −６００
−ター中で４００００ ｒｐｍで３．３時間５から３０
係しよ糖勾配で遠心することにより示された。複合物は
ＥＬＩＳＡ法によりグラジェント中に検出された。
ｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ＭｅｔｈｏｄｓＶｏｌ ５９
ｐｐ、 ２８９−２９９ 、１９８３、本明細書の参照
文献として引用）マウスよりの工ｇａ４ｒｓ冷蔵室中で
０．１５Ｍリン酸塩（ＰＣ緩衝液、Ｐ）１２ ）の１リ
ツトルに対して透析した。ついで２％のデタージエント
（たとへば）オクチル−β−Ｄ−グルコシＰ〕を加えた
。デタージエントの臨界ミセル濃度（ＯＭＯ）が低いな
らば、透析を始めるより前にデタージエントを交換すべ
きである。混合物はｐｃ ｐＨ７に対し透析した０１時
間後に０８０５チの最終濃度までＱ、ｕｉｌ Ａを加え
た。冷蔵室中で２４時間ｐＨ７のＰＣに対し透析を続け
た０複合物の形成は、Ｂｅｃｋｍａｎ ＳＷ −６００
−ター中で４００００ ｒｐｍで３．３時間５から３０
係しよ糖勾配で遠心することにより示された。複合物は
ＥＬＩＳＡ法によりグラジェント中に検出された。
実験１
本発明に準じＱ、ｕｉｌ Ａを用いて生産された膜蛋白
質複合物と配糖体無添加で生産された相当する膜蛋白質
ミセルとの免疫原性についての比較２５頭のマウス（Ｂ
ＡＬＢ Ｏ，Ｂｏｍｈｏｌｌｇａｒａ。
質複合物と配糖体無添加で生産された相当する膜蛋白質
ミセルとの免疫原性についての比較２５頭のマウス（Ｂ
ＡＬＢ Ｏ，Ｂｏｍｈｏｌｌｇａｒａ。
Ｄｅｎｍａｒｌｃ、約２０ｇ）’に５群に分け、各群は
、６週の間隔で２度、緩衝液のみ（ＰＢＳ ） 、例１
に従い、１００μｌ ＰＢＳ中インフルエンザの膜蛋白
質およびＱｕｉｌ Ａよシ製造の複合物の０．１μｇｍ
Ｏ，５μｇｊおよび５μｇ、 ＥＰＯ願８１１０２２
１３．６により製造の配糖体なしの膜蛋白質ミセルの５
μｇで免疫した。
、６週の間隔で２度、緩衝液のみ（ＰＢＳ ） 、例１
に従い、１００μｌ ＰＢＳ中インフルエンザの膜蛋白
質およびＱｕｉｌ Ａよシ製造の複合物の０．１μｇｍ
Ｏ，５μｇｊおよび５μｇ、 ＥＰＯ願８１１０２２
１３．６により製造の配糖体なしの膜蛋白質ミセルの５
μｇで免疫した。
実験終了まで毎週血清を採取した。ＥｉＩｔｌＳＡ法で
血清中の免疫反応を測定した。こめ方法は、Ｖｏｌｌｅ
ｒ、 Ｂｉｄｗｅｌ、およびＢａｒｔｌｅｔｔ １９３
［］ 。
血清中の免疫反応を測定した。こめ方法は、Ｖｏｌｌｅ
ｒ、 Ｂｉｄｗｅｌ、およびＢａｒｔｌｅｔｔ １９３
［］ 。
Ｆ！ｎｚｙｍｅ−’１ｉｎｋｅｄ 工ｍｍｕｎｏｓｏ
ｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ、ｐｐ ３５９−３ ７ １
、 Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｔｃａｌ 工
ｍｍｕｎ０１０ｇ７゜Ａｍｅｒｉｃａｎ ５ｏｃｉｅ
ｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、
−Ｗａ８ｈｉｎｇｔＯｎ Ｋ： 記載サレテイル。
ｒｂｅｎｔ Ａｓ５ａｙ、ｐｐ ３５９−３ ７ １
、 Ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｃｌｉｎｔｃａｌ 工
ｍｍｕｎ０１０ｇ７゜Ａｍｅｒｉｃａｎ ５ｏｃｉｅ
ｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、
−Ｗａ８ｈｉｎｇｔＯｎ Ｋ： 記載サレテイル。
結果は第６図に示す。明らかに、Ｑ、ｕｉ、Ｉ Ａを用
いて製造した抗原複合物は、Ｑｕｉ’ｌ Ａを加えない
相当する蛋白質ミセルよりより良い免疫反応を示す。Ｑ
、ｕｉ’ｌ Ａを用いて製造した蛋白質膜複合物は、配
糖体無添加の蛋白質ミセルの５μｇより高い免疫反応を
おこさせる。
いて製造した抗原複合物は、Ｑｕｉ’ｌ Ａを加えない
相当する蛋白質ミセルよりより良い免疫反応を示す。Ｑ
、ｕｉ’ｌ Ａを用いて製造した蛋白質膜複合物は、配
糖体無添加の蛋白質ミセルの５μｇより高い免疫反応を
おこさせる。
実験２
買被合物と、アジュバント添加物としての配糖体と混合
した相当する膜蛋白質ミセルとの免疫効果および副作用
についての比較 Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ工ｎ
ｓ ｔｉｔｕｔｅ 、 ｓ’ｗｅ８ａｅｎよシの３０頭
のモルモットを用いた。１群６頭５１！ｌに分け、イン
フルエンザウィルス（カルチャー ８ｏ１ｖａ’ｌｌａ
）よりの蛋白質ミセル（Ｐ）および表１に従い配糖体
ＱｕｔＩＡ （ｏｐ） ’ｆｔ用い生産の同じインフル
エンザウィルスよりの膜蛋白質複合物（例２で製造）で
免疫した。ワクチン未処理対照として６頭を用いた。Ｇ
Ｐ複合物からは、しよ糖グラジェント遠心で遊離配糖体
を除いた。表１に結果を示す。ｐ−ミセルもＧＰ−複合
物もほとんど副作用なく、ＧＰ複合物は明らかに ｐ−
ミセルよシ高い抗体反応を与えた。１０μｇの遊離配糖
体とｐ−１セルとの混合物は副作用が温和であったがア
ジュバント効果はない。１・００μｇの遊離グリコシド
の添加で、発赤、にれの形で強い局所的副作用をみた。
した相当する膜蛋白質ミセルとの免疫効果および副作用
についての比較 Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ工ｎ
ｓ ｔｉｔｕｔｅ 、 ｓ’ｗｅ８ａｅｎよシの３０頭
のモルモットを用いた。１群６頭５１！ｌに分け、イン
フルエンザウィルス（カルチャー ８ｏ１ｖａ’ｌｌａ
）よりの蛋白質ミセル（Ｐ）および表１に従い配糖体
ＱｕｔＩＡ （ｏｐ） ’ｆｔ用い生産の同じインフル
エンザウィルスよりの膜蛋白質複合物（例２で製造）で
免疫した。ワクチン未処理対照として６頭を用いた。Ｇ
Ｐ複合物からは、しよ糖グラジェント遠心で遊離配糖体
を除いた。表１に結果を示す。ｐ−ミセルもＧＰ−複合
物もほとんど副作用なく、ＧＰ複合物は明らかに ｐ−
ミセルよシ高い抗体反応を与えた。１０μｇの遊離配糖
体とｐ−１セルとの混合物は副作用が温和であったがア
ジュバント効果はない。１・００μｇの遊離グリコシド
の添加で、発赤、にれの形で強い局所的副作用をみた。
ｐ−ミセルワクチンよりは高い抗体反応を与えた。
表１
４週の間隔で２度ワクチン処理したあと、赤血球凝集阻
害〔Ｈ工〕で測定したモルモット血清中のインフルエン
ザウィルスへの免疫反応 ｐ＝インフルエンザウイルスペゾロマーよシ成立つ蛋白
質ミセル（ＨおよびＮ）の１μｇｐ＋１０＝１μｇ蛋白
質ミセル＋１０μｇ遊離配糖体 ｐ＋１００＝１μｇ蛋白質ミセル＋１００μｇ遊離配糖
体 ＧＰ＝配糖体を用いて製造した蛋白買被の１μｇ（遊離
配糖体含量〈０．１μｇ） −反応なし ＋ わづかな発赤 ＋十 中程度の発赤 ＋＋＋ 強い発赤およびネクローゼ Ｈニータイター（”１ｏｇ／ｌ） ｐ ｐ＋
１０ ｐ＋ １００ ａｐＭ−１：５Ｄ（６頭）
７．９士２．３７．５−１＝１．５ １［１，
３±３．１ ９．７−１ｍ０．６局所反応
−＋ ＋＋＋ −なお、ワクチン未処理のモル
モットのタイターは２（６頭） 実験３ 例１により製造し１０−４０％しょ糖勾配でさらに精製
した膜蛋白質複合物の免疫原効果をみた。
害〔Ｈ工〕で測定したモルモット血清中のインフルエン
ザウィルスへの免疫反応 ｐ＝インフルエンザウイルスペゾロマーよシ成立つ蛋白
質ミセル（ＨおよびＮ）の１μｇｐ＋１０＝１μｇ蛋白
質ミセル＋１０μｇ遊離配糖体 ｐ＋１００＝１μｇ蛋白質ミセル＋１００μｇ遊離配糖
体 ＧＰ＝配糖体を用いて製造した蛋白買被の１μｇ（遊離
配糖体含量〈０．１μｇ） −反応なし ＋ わづかな発赤 ＋十 中程度の発赤 ＋＋＋ 強い発赤およびネクローゼ Ｈニータイター（”１ｏｇ／ｌ） ｐ ｐ＋
１０ ｐ＋ １００ ａｐＭ−１：５Ｄ（６頭）
７．９士２．３７．５−１＝１．５ １［１，
３±３．１ ９．７−１ｍ０．６局所反応
−＋ ＋＋＋ −なお、ワクチン未処理のモル
モットのタイターは２（６頭） 実験３ 例１により製造し１０−４０％しょ糖勾配でさらに精製
した膜蛋白質複合物の免疫原効果をみた。
この調製物の、Ｑｕｌ Ａの溶解反応にもとづいて測定
した遊離Ｑ、ｕｉｌ Ａの量は０．０２重量係以下であ
った。溶解反応は牛歩血球について調べた。血球はアガ
ロースデル中０．０５％濃度とした。アガロースデルは
電気泳動システム中においた。ここでＱｕｉｌ Ａは陽
極へと移動し血球を溶解する。溶解域はロケットの形状
で配糖体の量はロケットの長さに比例し、Ｑｏｏｍａｓ
ｉｅ Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅを用いる蛋白質染
色で可視化される。この方法で、０．０２係またはそれ
以上の配糖体濃度を測定しうる。
した遊離Ｑ、ｕｉｌ Ａの量は０．０２重量係以下であ
った。溶解反応は牛歩血球について調べた。血球はアガ
ロースデル中０．０５％濃度とした。アガロースデルは
電気泳動システム中においた。ここでＱｕｉｌ Ａは陽
極へと移動し血球を溶解する。溶解域はロケットの形状
で配糖体の量はロケットの長さに比例し、Ｑｏｏｍａｓ
ｉｅ Ｂｒ１ｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅを用いる蛋白質染
色で可視化される。この方法で、０．０２係またはそれ
以上の配糖体濃度を測定しうる。
（５ｕｎｄｑｕｉ ｓｔ等、 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ａｎｄ Ｂｉｏｐｂ７ｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ
ＯＯｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ Ｖｏｌ、 １１４ ａ
１）１） ６９９−７０４．１９８３）。
ａｎｄ Ｂｉｏｐｂ７ｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ
ＯＯｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ Ｖｏｌ、 １１４ ａ
１）１） ６９９−７０４．１９８３）。
沈降速度の分析で、追加して精製した材料は非精製材料
と同じ沈降定数を示した０電顕て同じ形態を示した（第
２図および第３図）０マウスをワクチン処理すると、抗
体反応の刺激について、両者は同じ活性を示した。ひと
つの実験で、Ｑｕｉｔ Ａ−添加で調製し、２度のグラ
ジェント遠心で精製したインフルエンデウィルスの複合
物の１μｇｔたけ０．１μｇは、精製を加えてない対応
する材料と同様に有効であった０上記の結果は、遊離。
と同じ沈降定数を示した０電顕て同じ形態を示した（第
２図および第３図）０マウスをワクチン処理すると、抗
体反応の刺激について、両者は同じ活性を示した。ひと
つの実験で、Ｑｕｉｔ Ａ−添加で調製し、２度のグラ
ジェント遠心で精製したインフルエンデウィルスの複合
物の１μｇｔたけ０．１μｇは、精製を加えてない対応
する材料と同様に有効であった０上記の結果は、遊離。
ｕｉｌＡが証明できなくても安定で免疫原として有効で
あることを示す。
あることを示す。
実験４
肝炎Ｂ （ＨＢ）抗原を有する３種のワクチンを、それ
ぞれ、５μｇ ＨＢ抗原量で、４頭のマウスで調べた。
ぞれ、５μｇ ＨＢ抗原量で、４頭のマウスで調べた。
３種のワクチンは、例１４により製造のｉｓｃｏｍｅｓ
、相当する市販ワクチンでインタクトの２２ ｎｍ粒
子を有するもの、もうひとつは、相当するＨＢ膜蛋白質
ｍｐｏ願８１１０２２１３．６に準じ製造のミセルの形
で存在する実□験ワクチンである。抗体反応はＫＬ工８
Ａ法で測定した。
、相当する市販ワクチンでインタクトの２２ ｎｍ粒
子を有するもの、もうひとつは、相当するＨＢ膜蛋白質
ｍｐｏ願８１１０２２１３．６に準じ製造のミセルの形
で存在する実□験ワクチンである。抗体反応はＫＬ工８
Ａ法で測定した。
表２に示すように、ｉｓｃｏｍｅ処理マウスは、インタ
フ） ２２ ｎｍ粒子含有およびミセルのＨＢより、強
い抗体反応を与えた。
フ） ２２ ｎｍ粒子含有およびミセルのＨＢより、強
い抗体反応を与えた。
表２
ワクチン
ｌｓｃｏｍ ２２ｎｌ１１粒子 ミセル４９
５■て読んだ １．３４３ ［１，６０！１
、 ０．５６９ＫＬＩ８Ａ吸光値 １．７８８
α５９８ ０．２４０１．８４１ ０．
８８８ ０．２７３１．８８４ ０．８９２ 実験５ 病原性の狂犬病株（ｅｖｅ ）ｉｓｃｏｍの試験的感染
でワクチン処理実験を行なった。例４に準じ製造の狂犬
病ウィルスよりのエンベロープ蛋白質を含有し、マウス
について防禦免疫をおこすかをみた。
５■て読んだ １．３４３ ［１，６０！１
、 ０．５６９ＫＬＩ８Ａ吸光値 １．７８８
α５９８ ０．２４０１．８４１ ０．
８８８ ０．２７３１．８８４ ０．８９２ 実験５ 病原性の狂犬病株（ｅｖｅ ）ｉｓｃｏｍの試験的感染
でワクチン処理実験を行なった。例４に準じ製造の狂犬
病ウィルスよりのエンベロープ蛋白質を含有し、マウス
について防禦免疫をおこすかをみた。
表３に示す投与量で、１度マウスをワクチン処理した。
１４日問おいてから、マウスに病原性のＣＶＳ株でＬＤ
５Ｑの４０倍の投与量で試験感染させた。
５Ｑの４０倍の投与量で試験感染させた。
表３
４２ １８／１９
０．８４ １５／１８
０．１７ １０／２０
−一＆−０／２０
表は、１０００ｍワクチンが防禦的免疫をおこしている
ことを示す。
ことを示す。
本発明に準する新規抗原複合物は、凍結乾燥した形状と
しても、水性懸濁液としても貯蔵しうる。
しても、水性懸濁液としても貯蔵しうる。
投与には、適当な溶媒、たとへば生理食塩水中に溶液と
するのが有利である。なるべくは、ｐＨ７，２−７，６
（Ｄ Ｏ，Ｉ Ｍ ＮａＣｌ溶液を用イルｏ ｐＨＵｏ
、０５ ＭＴｒｉθ−ＨＣｌで調整する。他の緩衝液も
用いうる。
するのが有利である。なるべくは、ｐＨ７，２−７，６
（Ｄ Ｏ，Ｉ Ｍ ＮａＣｌ溶液を用イルｏ ｐＨＵｏ
、０５ ＭＴｒｉθ−ＨＣｌで調整する。他の緩衝液も
用いうる。
本発明に準する新規蛋白質複合物は、配糖体なして製造
した、アジュバントと混合してない蛋白質ミセルの約１
０倍そしてしばしばそれ以上の強い免疫原効果を示す。
した、アジュバントと混合してない蛋白質ミセルの約１
０倍そしてしばしばそれ以上の強い免疫原効果を示す。
対応する蛋白質ミセルが回し蛋白質量で同じ免疫原効果
を有すべきならば、大量の配糖体または他のアジュバン
トとの混合が必要となり、それだけに副作用も大となる
であろう０ 本発明に準する蛋白質複合物はなんらのアジュバントと
混合しなくてもよく、副作用は最小限におさえられる。
を有すべきならば、大量の配糖体または他のアジュバン
トとの混合が必要となり、それだけに副作用も大となる
であろう０ 本発明に準する蛋白質複合物はなんらのアジュバントと
混合しなくてもよく、副作用は最小限におさえられる。
さらに、リポソームに結合させた抗原蛋白質に比して、
本発明の新規複合物は安定である。
本発明の新規複合物は安定である。
第１図は、明細書例２記載のように、ウマインフルエン
ザウィルスの蛋白質ミセルおよび本発明による蛋白質複
合体の糖グラジェントでの遠心結果を示す。 第２図は、明細書例６記載の本発明による複合物の電顕
図である。 第３図は、明細書例４記載の本発明による複合物の電顕
図である。 第４図は、明細書例１４記載の本発明による複合物の電
顕図を示す。 第５Ａ図及び第５Ｂ図は、明細書例１９記載の本発明に
よる複合物の電顕図を示す。 第６図は、明細書実験１に記載の、本発明による膜蛋白
質複合物と配糖体無添加で製造された膜蛋白質ミセルの
免疫原性を比較して示す。 代理人 浅 村 晧 図面の浄書（内容に変更なし１ ５ １５ ＦＩＧ、１ 外画を号 ＦＩＧ、 ２ ＦＩｏ、３ ＦＩｏ、４ ＦＩＧ、５Ａ ＦＩＧ、５Ｂ シ 手続補正書（自発） 昭和５８年１１月２ヶ日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第 １９５１！１２ 号２、発明の
名称 免疫原性複合物 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４１．代理人 ５、補正命令の日付 昭和 年 月 日 ６、補正により増加する発明の数 ７・補正０対象 、細 書 ８、補正の内容 別紙のとおり 明細書の浄書 （内容に変更なし−）。 手続補正書（方式） 昭和３ｊ７年ノ月／／日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和ａ年特許願第 ／、９，１．− ／、ｊ、＜号２、
発明の名称 菊祿朗ｔｉｌｔ咋 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和５７年 ７月８７日 ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 図面の浄３ （内容に変更なし） ８、補正の内容 別紙のとおり
ザウィルスの蛋白質ミセルおよび本発明による蛋白質複
合体の糖グラジェントでの遠心結果を示す。 第２図は、明細書例６記載の本発明による複合物の電顕
図である。 第３図は、明細書例４記載の本発明による複合物の電顕
図である。 第４図は、明細書例１４記載の本発明による複合物の電
顕図を示す。 第５Ａ図及び第５Ｂ図は、明細書例１９記載の本発明に
よる複合物の電顕図を示す。 第６図は、明細書実験１に記載の、本発明による膜蛋白
質複合物と配糖体無添加で製造された膜蛋白質ミセルの
免疫原性を比較して示す。 代理人 浅 村 晧 図面の浄書（内容に変更なし１ ５ １５ ＦＩＧ、１ 外画を号 ＦＩＧ、 ２ ＦＩｏ、３ ＦＩｏ、４ ＦＩＧ、５Ａ ＦＩＧ、５Ｂ シ 手続補正書（自発） 昭和５８年１１月２ヶ日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５８年特許願第 １９５１！１２ 号２、発明の
名称 免疫原性複合物 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４１．代理人 ５、補正命令の日付 昭和 年 月 日 ６、補正により増加する発明の数 ７・補正０対象 、細 書 ８、補正の内容 別紙のとおり 明細書の浄書 （内容に変更なし−）。 手続補正書（方式） 昭和３ｊ７年ノ月／／日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和ａ年特許願第 ／、９，１．− ／、ｊ、＜号２、
発明の名称 菊祿朗ｔｉｌｔ咋 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住 所 ４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和５７年 ７月８７日 ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 図面の浄３ （内容に変更なし） ８、補正の内容 別紙のとおり
Claims (8)
- （１） 配糖体を含有し；そし、て、緩衝化された、
なるべくは塩溶液中で、疎水性領域を有する蛋白質また
はベゾチぜと１種または１種より多くの可溶化剤とを混
合し、それにより荷電を有する単量体性抗原性蛋白質ま
たはペプチ「と可溶化剤とのあいだに複合物を形成させ
、そのあとで、少なくとも臨界ミセル形成濃度とした、
疎水性および親水性の領域を有する配糖体の１種またに
１種より多く含む配糖体溶液の存在で、荷電単量体性、
抗原性蛋白質またにベプチＰを可溶化剤より分けるか、
または、それらを可溶化剤より分は直接に配糖体溶液に
移【−１それにより、蛋白質複合体を形成させ、それを
分離し精製してうろことを特徴とする、疎水性領域を有
する抗原性蛋白質またはペプチドを含有する免疫原性複
合物。 - （２） ウィルス、マイコプラズマ、細菌、寄生虫、
動物細胞に由来する、疎水性（ハイＶロフオビツク）膜
蛋白質、および、１がら８炭素原子数の脂肪族基、トリ
シトファン（’ｒｒｐ ） 、イソロイシン（工１ｅ）
、フェニルアラニン（ｐｈｅ ） 、プロリン（Ｐｒｏ
） 、チロシン（Ｔｙｒ ）、ロインｙ （Ｌｅｕ
）、バリン（Ｖａｒ ）のようなアミノ酸１から５個の
小型ペデチＰ１コリン酸およびコレステロール誘導体よ
り選択した疎水性基と結合させて疎水性となしうる非ハ
イＶロフオビツク蛋白質；おだやかな変性により露出さ
せうる、内部に入れこ１れた疎水性基を有する両親媒性
の蛋白質およびペプチド；または合成蛋白質またはペプ
チドまたはハイプリＰ ＤＮＡ技術により生成された蛋
白質またはペプチＶより、蛋白質およびペプチドを選択
することを特徴とする、上記（１）項記載の免疫原性複
合物。 - （３） ウィルス、マイコプラズマ、細菌、寄生虫、
動物細胞捷たけ疎水性ペプチドまたは蛋白質と、イオン
性、非イオン性、両性イオン性または没食子酸デタージ
エント、アルコール、小型両親媒性分子、水溶性ペプチ
Ｖまたは蛋白質またはそれらの混合物とを、緩衝化され
た、できれば塩溶液中で混合し、この混合物を、配糖体
を含有するひとつのグラジェント上に存在している、可
溶他剤含有溶液上におき、少なくとも１００．０００９
で遠心して、蛋白質性分画を分けるか、または、微生物
、蛋白質またはペプチＶを、緩衝塩溶液中でデタージエ
ントと混合したあと可溶化剤と反応させ、そして、なる
べくは酢酸アンモニウム緩衝液に対して透析するかまた
はグラジェント上に直接的に層としておき、少なくとも
ｉｏｏ、ｏｏｏｇで遠心し、そのあとで蛋白質含有頂部
分画を集め、つづいて、配糖体と反応させ、緩衝液なる
べくは酢酸アンモニウムに対し透析するか、捷たは、緩
衝液中微生物、動物細胞、蛋白質またはペデテｒと可溶
化剤との混合物か、または、微生物、動物細胞、蛋白質
またにベプチＰと可溶化剤との緩衝塩溶液中での混合物
をグラジェントを通して遠心して得られた蛋白質頂部分
画かを、電気泳動により可溶化剤より分け、配糖体を含
有する溶液中に集め、そのあとで得られる蛋白質複合物
を、できれば、凍結乾燥、真空透析または超遠心などで
濃縮し、または、グラジェント遠心でさらに精製するこ
とにより得られることを特徴とする、上記（１）項記載
の免疫原性複合物。 - （４） エンベロープを有するウィルス、特に、ｏｒ
ｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ、 Ｐａｒａｍｙｘｏｖ
ｉｒｉｄａｅ。 Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、 Ｒａｂｄｏｖｉｒｉｄａ
ｅ、 Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ。 Ｈθｒｐθ５ｖ１ｒｌａａｅおよび肝炎Ｂウィルスより
の膜蛋白質、トキソプラズマ、エンベロープを有しない
ウィルスたとへばＰｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、 Ｐ
ａｒｖｏｙｉｒｉａａｅ。 Ｒｅａｖｉｒｉｄａｅよりの膜蛋白質を選択し、たとへ
ばＱｕｉｌｌａｊａ ５ａｐｏｎａｒｉａ、 Ｍｏ１１
ｎａ、 、Ａｅｓｃｕｌｕｓｈｌｐｐｏｃａｓｔａｎｕ
ｍ、またＦｉＧ７ｐＯｐｈｉｌｌａ ｓｔｒｕｔｈｉｕ
ｍよりの配糖体抽出物のようなサポニン、なるべくはＤ
Ｑ、 Ｑｕｉｌ Ａ、 ａｅｓｃｉｎ、 ５ａｐｏａｌ
ｂｉｎより配糖体を選択してうろことを特徴とする、上
記（１）から（３）項までのいずれかに記載の免疫原性
複合物。 - （５）配糖体含有糖グラジェントの開始時の濃度を少な
くとも５重量％、なるべくは１５−２５重量％そして最
終の濃度を少なくとも２０重量％、なるべくは４５−６
０重量％とし、配糖体含量を、臨界ミセル形成濃度（Ｏ
ＭＯ）の少なくとも１から３倍、なるべくは少なくとも
５倍、特に７から１２倍として、しよ糖のグラジェント
中で遠心してうろことを特徴とする、上記（２）から（
４）項のいずれかに記載の免疫原性複合物。 - （６）可溶化剤と糖とを含有する溶液が、配糖体含有糖
グラジェントの上層中の糖濃度に等しいか、それより低
い、なるべくは５から２５重量％の、特に１５重量％の
糖を含有し、可溶化剤の濃度は、０．２５−３重量％、
なるべくは０．７５−１．５重量％、特に１重量％であ
る溶液を用いてうろことを特徴とする、上記（１１から
（４）項のいずれかに記載の免疫原性複合物。 - （７）免疫刺激剤、特にワクチンとして用いるための上
記（１）から（６）項のいずれかに記載の免疫原性複合
物。 - （８） できれば、添加物または充填剤と混合した、
上記＋１１から（７）項のいずれかに記載の免疫原性複
合物を含有することを特徴とする、医および獣医用の薬
剤組成物。 （８）蛋白質またにベプチｒと１種または１種より多く
の可溶化剤とを、緩衝化された、できれば塩溶液中で混
合し、荷電単量体性抗原性蛋白質と可溶化剤とのあいだ
に複合物を生成させ、少なくとも臨界ミセル形成濃度と
した、疎水性および親水性の領域を含有する配糖体の１
種または１種以上を含有する溶液の存在で、可溶化剤よ
シ荷電単量体性抗原性蛋白質を分けるか、または、可溶
化剤よｐ分けそして直接的に配糖体溶液に移行させ、そ
のようにして、蛋白質複合物を形成させ、それを分離し
そして精製することを特徴とする、疎水性領域を有する
抗原性蛋白質またはペゾチドを含有する免疫原性複合物
の製造方法。
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Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61129136A (ja) * | 1984-11-01 | 1986-06-17 | ブロル モレイン | 免疫原性複合体およびその製造法 |
| JPS61200924A (ja) * | 1985-02-14 | 1986-09-05 | アクゾ・エヌ・ヴエー | 合成免疫原 |
| JPS62255436A (ja) * | 1986-04-18 | 1987-11-07 | ノルデン・ラボラトリ−ス・インコ−ポレイテツド | ワクチン処方 |
| JPH0292996A (ja) * | 1988-09-30 | 1990-04-03 | Bror Morein | アジュバントおよび脂質を含む複合体 |
| JP2004511527A (ja) * | 2000-10-18 | 2004-04-15 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ワクチン |
| JP2006511451A (ja) * | 2002-07-05 | 2006-04-06 | イスコノヴァ アーベー | 免疫刺激複合体の調製及びその使用 |
| JP2008285487A (ja) * | 2000-10-18 | 2008-11-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | ワクチン |
| WO2012093706A1 (ja) * | 2011-01-07 | 2012-07-12 | 東亞合成株式会社 | 抗疎水性ペプチド抗体を得るための抗原調製方法 |
| JP2013533244A (ja) * | 2010-06-24 | 2013-08-22 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | タンパク質含有製剤の安定化のためのアルキルグリコシドを含む組成物及び方法 |
| US9370182B2 (en) | 2012-05-28 | 2016-06-21 | Toagosei Co., Ltd. | Antimicrobial peptide and use thereof |
| US9480727B2 (en) | 2012-10-18 | 2016-11-01 | Toagosei Co. Ltd. | Synthetic peptide for inhibiting expression of type 2 TNF receptor and use thereof |
Families Citing this family (284)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4804624A (en) * | 1982-05-21 | 1989-02-14 | The University Of Tennessee Research Corporation | Passive agglutination assay for pseudorabies antibody |
| SE8205892D0 (sv) * | 1982-10-18 | 1982-10-18 | Bror Morein | Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin |
| US4772466A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-20 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Vaccines comprising polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US4770874A (en) * | 1983-08-22 | 1988-09-13 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
| US5916588A (en) * | 1984-04-12 | 1999-06-29 | The Liposome Company, Inc. | Peptide-containing liposomes, immunogenic liposomes and methods of preparation and use |
| US6090406A (en) * | 1984-04-12 | 2000-07-18 | The Liposome Company, Inc. | Potentiation of immune responses with liposomal adjuvants |
| SE8402861L (sv) * | 1984-05-28 | 1985-11-29 | Stefan Svenson | Rening av biologiskt material |
| NL8403195A (nl) * | 1984-10-19 | 1986-05-16 | Nederlanden Staat | Immunogene complexen en vaccins die deze bevatten. |
| US4683294A (en) * | 1985-04-03 | 1987-07-28 | Smith Kline Rit, S.A. | Process for the extraction and purification of proteins from culture media producing them |
| US4871488A (en) * | 1985-04-22 | 1989-10-03 | Albany Medical College Of Union University | Reconstituting viral glycoproteins into large phospholipid vesicles |
| US4631191A (en) * | 1985-06-20 | 1986-12-23 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Methods and compositions useful in preventing equine influenza |
| DK166762B1 (da) * | 1986-01-14 | 1993-07-12 | Nederlanden Staat | Fremgangsmaade til fremstilling af immunogenkomplekser og farmaceutisk sammensaetning indeholdende saadanne komplekser |
| US4981685A (en) * | 1986-03-07 | 1991-01-01 | Utah State University Foundation | Bacterial extract vaccines for veterinary application |
| CA1331355C (en) * | 1986-04-21 | 1994-08-09 | Bioenterprises Pty. Ltd | Immunopotentation |
| ZA872203B (en) * | 1986-04-28 | 1988-02-24 | New York Blood Center Inc | Complex immunogen containing synthetic peptides |
| JPH0789951B2 (ja) * | 1986-06-18 | 1995-10-04 | 財団法人阪大微生物病研究会 | 遺伝子発現産物の精製法 |
| US5374426A (en) * | 1986-09-03 | 1994-12-20 | University Of Saskatchewan | Rotavirus nucleocapsid protein VP6 in vaccine compositions |
| US5190859A (en) * | 1987-02-26 | 1993-03-02 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Purification of LFA-3 |
| US5026828A (en) * | 1987-02-27 | 1991-06-25 | Merck & Co., Inc. | Method of purifying recombinant pres-1/S-2/S/S hepatitis B antigen from yeast |
| US5976839A (en) * | 1987-03-13 | 1999-11-02 | Bioenterprises Pty Limited | Immunopotentiation through covalent linkage between immunogen and immunopotentiating molecules |
| US4888416A (en) * | 1987-03-30 | 1989-12-19 | International Minerals & Chemical Corp. | Method for stabilizing somatotropins |
| US5583112A (en) * | 1987-05-29 | 1996-12-10 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin-antigen conjugates and the use thereof |
| US5043158A (en) * | 1987-08-21 | 1991-08-27 | Chembiomed, Ltd. | Immunogenic compositions containing ordered carriers |
| US5011915A (en) * | 1987-10-26 | 1991-04-30 | Merck & Co., Inc. | Process for purifying recombinant hepatitis antigens |
| ATE118348T1 (de) * | 1987-12-04 | 1995-03-15 | Liposome Co Inc | Liposome hoher stabilität und verfahren zur herstellung und verwendung. |
| AU3048689A (en) * | 1988-01-13 | 1989-08-11 | University Of North Carolina At Chapel Hill, The | Immunogenic peptides |
| US5039522A (en) * | 1988-01-29 | 1991-08-13 | New York Blood Center, Inc. | Immunogens containing peptides with an attached hydrophobic tail for adsorption to hepatitis B virus surface antigen |
| US5885589A (en) * | 1988-04-12 | 1999-03-23 | Intervet International B.V. | Pasteurella vaccine |
| DK199588D0 (da) * | 1988-04-12 | 1988-04-12 | Nordisk Droge & Kemikalie | Vaccine |
| AU638210B2 (en) * | 1988-05-04 | 1993-06-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Protein micelles |
| US5071964A (en) * | 1988-05-04 | 1991-12-10 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Protein micelles |
| GB8818415D0 (en) * | 1988-08-03 | 1988-09-07 | Animal Health Inst | Vaccine |
| US6291228B1 (en) | 1988-08-03 | 2001-09-18 | Vericore Limited | Vaccine |
| NZ230747A (en) * | 1988-09-30 | 1992-05-26 | Bror Morein | Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina |
| US4981684A (en) * | 1989-10-24 | 1991-01-01 | Coopers Animal Health Limited | Formation of adjuvant complexes |
| DK0493446T3 (da) * | 1989-09-15 | 1997-08-11 | Tanox Biosystems Inc | Behandling af autoimmunsygdom. |
| NL9002314A (nl) * | 1990-10-23 | 1992-05-18 | Nederlanden Staat | Immunogene complexen, in het bijzonder iscoms. |
| IT1248075B (it) * | 1991-06-18 | 1995-01-05 | Sclavo Spa | Processo per la purificazione del virus dell'epatite a (hav), virus cosi` purificato e composizioni vaccinali che lo contengono. |
| GB9200117D0 (en) * | 1992-01-06 | 1992-02-26 | Connaught Lab | Production of recombinant chimeric proteins for vaccine use |
| DE4220653A1 (de) * | 1992-06-26 | 1994-01-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Mittel zum Nachweis eines Analyten enthaltend glykosidische Tenside |
| EP0604727A1 (en) * | 1992-12-31 | 1994-07-06 | American Cyanamid Company | Improved immunogenicity of a vaccine by incorporation of a cytokine within an immune-stimulating complex containing an antigen |
| JPH09502091A (ja) * | 1993-09-03 | 1997-03-04 | マックギル ユニヴァーシティー | 特異的に発現するリーシュマニア遺伝子及び蛋白質 |
| US5773011A (en) * | 1993-09-27 | 1998-06-30 | Gerbu Biotechnik Gmbh | Method of preparing a synergistic immunological adjuvant formulation |
| GB9320597D0 (en) * | 1993-10-06 | 1993-11-24 | Proteus Molecular Design | Improvements in and realting to vaccines |
| US6083513A (en) * | 1993-11-16 | 2000-07-04 | Gerbu Biotechnik Gmbh | Method for increasing the yield of antibodies in the techniques of immunology |
| US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| WO1996015807A1 (en) * | 1994-11-21 | 1996-05-30 | Scofield Virginia L | Sperm as vaccine vectors |
| ATE355363T1 (de) * | 1995-01-27 | 2006-03-15 | Genencor Int | Verfahren zur extraktion von enzymen unter verwendung von tensiden |
| DK0831897T3 (da) | 1995-06-07 | 2001-04-30 | Pfizer | In ovo-vaccination mod coccidiosis |
| CA2223699C (en) * | 1995-06-07 | 2002-07-02 | Pfizer Inc. | In ovo vaccination against coccidiosis |
| ZA97452B (en) | 1996-01-25 | 1997-08-15 | Trinity College Dublin | Streptococcus equi vaccine. |
| GB9618119D0 (en) | 1996-08-30 | 1996-10-09 | Univ Southampton | Adjuvants for use in vaccines |
| ZA9710606B (en) * | 1996-12-05 | 1998-06-12 | Akzo Nobel Nv | Non-virulent Mycoplasma synoviae vaccine thereof. |
| US6406705B1 (en) * | 1997-03-10 | 2002-06-18 | University Of Iowa Research Foundation | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant |
| AUPO732997A0 (en) | 1997-06-12 | 1997-07-03 | Csl Limited | Ganglioside immunostimulating complexes and uses thereof |
| US6455323B1 (en) | 1997-07-03 | 2002-09-24 | Pharmacia & Upjohn Company | Anti-bacterial methods and materials |
| US6627205B2 (en) | 1997-12-01 | 2003-09-30 | Pfizer Incorporated | Ovo vaccination against coccidiosis |
| US6495140B1 (en) | 1998-01-12 | 2002-12-17 | Her Majesty In Right Of Canada As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food Canada | Process for the isolation, recovery and purification of non-polar extractives |
| US6908770B1 (en) * | 1998-07-16 | 2005-06-21 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Fluid based analysis of multiple analytes by a sensor array |
| US20010033839A1 (en) * | 1999-10-04 | 2001-10-25 | Emilio Barbera-Guillem | Vaccine and immunotherapy for solid nonlymphoid tumor and related immune dysregulation |
| GB2348203B (en) | 1998-11-04 | 2002-06-19 | Imp College Innovations Ltd | Solube beta-forms of prion proteins, methods of preparation and use |
| US7776343B1 (en) | 1999-02-17 | 2010-08-17 | Csl Limited | Immunogenic complexes and methods relating thereto |
| US6984378B1 (en) | 1999-02-26 | 2006-01-10 | Pfizer, Inc. | Method for the purification, recovery, and sporulation of cysts and oocysts |
| US6790950B2 (en) | 1999-04-09 | 2004-09-14 | Pharmacia & Upjohn Company | Anti-bacterial vaccine compositions |
| EP1860117A3 (en) | 1999-04-09 | 2008-09-03 | Pharmacia & Upjohn Company LLC | Anti-bacterial vaccine compositions |
| DK1187629T3 (da) | 1999-04-19 | 2005-01-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Adjuvanssammensætning omfattende saponin og et immunostimulerende oligonucleotid |
| US6558670B1 (en) | 1999-04-19 | 2003-05-06 | Smithkline Beechman Biologicals S.A. | Vaccine adjuvants |
| BR0014281A (pt) * | 1999-09-24 | 2002-05-21 | Smithkline Beecham Biolog | Vacina contra vìrus de gripe intranasal |
| NZ518999A (en) * | 1999-11-19 | 2002-12-20 | Csl Ltd | Vaccine compositions |
| ATE300949T1 (de) | 2000-03-17 | 2005-08-15 | Pharmacia & Upjohn Co Llc | Ssa inaktivierte salmonella impfstoffe |
| AU2001251370A1 (en) | 2000-04-06 | 2001-10-23 | Pharmacia And Upjohn Company | Antimicrobial methods and materials |
| US7323174B1 (en) | 2000-06-12 | 2008-01-29 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Modulation of immune response and methods based thereon |
| DE60239594D1 (de) | 2001-02-23 | 2011-05-12 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Influenza vakzinzusammensetzungen zur intradermaler verabreichung |
| ATE409495T1 (de) | 2001-04-04 | 2008-10-15 | Nordic Vaccine Technology As | Polynukleotide-bindende komplexe die sterolen und saponine enthalten |
| US7713942B2 (en) * | 2001-04-04 | 2010-05-11 | Nordic Vaccine Technology A/S | Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides |
| GB0109297D0 (en) | 2001-04-12 | 2001-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| GB0112126D0 (en) | 2001-05-18 | 2001-07-11 | Allergene Inc | Composition |
| US20100221284A1 (en) | 2001-05-30 | 2010-09-02 | Saech-Sisches Serumwerk Dresden | Novel vaccine composition |
| TWI228420B (en) | 2001-05-30 | 2005-03-01 | Smithkline Beecham Pharma Gmbh | Novel vaccine composition |
| CA2452841C (en) | 2001-08-30 | 2012-10-02 | Embrex, Inc. | Method of sporulating eimeria oocytes |
| US20140248273A1 (en) | 2001-09-08 | 2014-09-04 | Jos van Strijp | Vaccine based on staphylococcal superantigen-like 3 protein (ssl3) |
| BR0313237A (pt) | 2002-08-12 | 2005-07-12 | Akzo Nobel Nv | Sequência de ácido nucleico, fragmento de dna, molécula de dna recombinante, veìculo recombinante vivo, célula hospedeira, proteìna de streptococcus uberis, usos da mesma e de uma sequência de ácido nucleico, de um fragmento de dna, de uma molécula de dna recombinante, de um veìculo recombinante vivo, de uma célula hospedeira ou de uma proteìna ou de um fragmento imunogênico da mesma, vacina, método para a preparação da mesma, e, kit diagnóstico |
| PT2353608T (pt) | 2002-10-11 | 2020-03-11 | Novartis Vaccines And Diagnostics S R L | Vacinas de polipéptidos para protecção alargada contra linhagens meningocócicas hipervirulentas |
| US7125425B2 (en) * | 2002-10-21 | 2006-10-24 | Sdgi Holdings, Inc. | Systems and techniques for restoring and maintaining intervertebral anatomy |
| EP1578443B1 (en) | 2002-11-20 | 2011-01-12 | Bestewil Holding B.V. | Compositions comprising antigen-complexes, method for making same as well as methods of using the antigen-complexes for vaccination |
| US7491395B2 (en) | 2002-11-20 | 2009-02-17 | Bestewil Holding B.V. | Compositions comprising antigen-complexes, method of making same as well as methods of using the antigen-complexes for vaccination |
| DK1587537T3 (da) | 2003-01-30 | 2012-07-16 | Novartis Ag | Injicerbare vacciner mod multiple meningococ-serogrupper |
| TWI329130B (en) | 2003-06-19 | 2010-08-21 | Bestewil Holding Bv | Functionally reconstituted viral membranes containing adjuvant |
| GB0315323D0 (en) | 2003-07-01 | 2003-08-06 | Royal Veterinary College | Vaccine composition |
| US9023366B2 (en) | 2003-07-01 | 2015-05-05 | The Royal Veterinary College | Vaccine composition for vaccinating dogs against canine infectious respiratory disease (CIRD) |
| SE0301998D0 (sv) | 2003-07-07 | 2003-07-07 | Isconova Ab | Quil A fraction with low toxicity and use thereof |
| EP1648500B1 (en) | 2003-07-31 | 2014-07-09 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Immunogenic compositions for streptococcus pyogenes |
| SI1961426T1 (sl) | 2003-10-02 | 2011-10-28 | Novartis Ag | Kombinirana cepiva proti meningitisu |
| GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| WO2005107797A1 (en) | 2004-03-09 | 2005-11-17 | Chiron Corporation | Influenza virus vaccines |
| GB0409745D0 (en) | 2004-04-30 | 2004-06-09 | Chiron Srl | Compositions including unconjugated carrier proteins |
| GB0500787D0 (en) | 2005-01-14 | 2005-02-23 | Chiron Srl | Integration of meningococcal conjugate vaccination |
| MXPA06011994A (es) | 2004-04-30 | 2007-01-25 | Chiron Srl | Vacunacion con conjugado de meningococos. |
| GB0410866D0 (en) | 2004-05-14 | 2004-06-16 | Chiron Srl | Haemophilius influenzae |
| EP2811027A1 (en) | 2004-05-21 | 2014-12-10 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Alphavirus vectors for RSV and PIV vaccines |
| WO2005117958A1 (en) | 2004-05-28 | 2005-12-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine compositions comprising virosomes and a saponin adjuvant |
| US20060287263A1 (en) * | 2004-07-18 | 2006-12-21 | Csl Limited | Methods and compositions for inducing antigen-specific immune responses |
| US20060165716A1 (en) | 2004-07-29 | 2006-07-27 | Telford John L | Immunogenic compositions for gram positive bacteria such as streptococcus agalactiae |
| CA2587084C (en) | 2004-10-08 | 2019-07-16 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention | Modulation of replicative fitness by using less frequently used synonym ous codons |
| GB0424092D0 (en) | 2004-10-29 | 2004-12-01 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
| BRPI0606481A2 (pt) | 2005-01-20 | 2009-06-30 | Isconova Ab | composição de vacina compreendendo uma proteìna de ligação a fibronectina ou um peptìdeo de ligação a fibronectina |
| GB0502095D0 (en) | 2005-02-01 | 2005-03-09 | Chiron Srl | Conjugation of streptococcal capsular saccharides |
| GB0503337D0 (en) | 2005-02-17 | 2005-03-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Compositions |
| CN101180312A (zh) | 2005-02-18 | 2008-05-14 | 诺华疫苗和诊断公司 | 来自尿路病原性大肠杆菌的免疫原 |
| WO2006089264A2 (en) | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli |
| GB0504436D0 (en) | 2005-03-03 | 2005-04-06 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| ATE516817T1 (de) | 2005-06-16 | 2011-08-15 | Univ Gent | Impfstoffe zur immunisierung gegen helicobacter |
| DE602006019878D1 (de) | 2005-07-28 | 2011-03-10 | Pfizer Prod Inc | Impfstoff gegen felines calicivirus (fcv), der ein fcv kapsid protein oder ein isoliertes fcv kapsid protein mit der protein sequenz seq id no: 13 oder mit einer protein sequenz, die zumindestens zu 95% identisch zur seq id no: 13 ist enthält. |
| GB0519871D0 (en) | 2005-09-30 | 2005-11-09 | Secr Defence | Immunogenic agents |
| CA2621320C (en) | 2005-10-07 | 2016-05-24 | Pfizer Products Inc. | Vaccines and methods to treat canine influenza |
| US20110223197A1 (en) | 2005-10-18 | 2011-09-15 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Mucosal and Systemic Immunization with Alphavirus Replicon Particles |
| EP2368572B1 (en) | 2005-11-04 | 2020-03-04 | Seqirus UK Limited | Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture |
| JP5215865B2 (ja) | 2005-11-22 | 2013-06-19 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス インコーポレイテッド | ノロウイルス抗原およびサポウイルス抗原 |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| NZ569168A (en) | 2005-12-22 | 2012-02-24 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Streptococcus pneumoniae polysaccharide conjugate vaccine comprising 19F-DT conjugate |
| PT2478916T (pt) | 2006-01-27 | 2020-07-03 | Seqirus Uk Ltd | Vacinas de influenza que contêm hemaglutinina e proteínas da matriz |
| CA2646539A1 (en) | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Novartis Ag | Imidazoquinoxaline compounds as immunomodulators |
| CA2646891A1 (en) | 2006-03-23 | 2007-09-27 | Novartis Ag | Immunopotentiating compounds |
| EP2382987A1 (en) | 2006-03-24 | 2011-11-02 | Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH | Storage of influenza vaccines without refrigeration |
| SG170090A1 (en) | 2006-03-30 | 2011-04-29 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| SG173336A1 (en) | 2006-03-31 | 2011-08-29 | Novartis Ag | Combined mucosal and parenteral immunization against hiv |
| DK2054431T3 (da) | 2006-06-09 | 2012-01-02 | Novartis Ag | Konformere af bakterielle adhæsiner |
| US8039007B2 (en) | 2006-06-29 | 2011-10-18 | J. Craig Venter Institute, Inc. | Polypeptides from Neisseria meningitidis |
| NZ574239A (en) | 2006-07-18 | 2011-12-22 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Hybrid fusion proteins for malaria vaccines |
| GB0614460D0 (en) | 2006-07-20 | 2006-08-30 | Novartis Ag | Vaccines |
| WO2008012538A2 (en) | 2006-07-25 | 2008-01-31 | The Secretary Of State For Defence | Live vaccine strains of francisella |
| US20100166788A1 (en) | 2006-08-16 | 2010-07-01 | Novartis Vaccines And Diagnostics | Immunogens from uropathogenic escherichia coli |
| EP3456348A1 (en) | 2006-09-11 | 2019-03-20 | Seqirus UK Limited | Making influenza virus vaccines without using eggs |
| PT2468300T (pt) | 2006-09-26 | 2018-01-30 | Infectious Disease Res Inst | Composição para vacina contendo adjuvante sintético |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| ES2480491T3 (es) | 2006-12-06 | 2014-07-28 | Novartis Ag | Vacunas incluyendo antígeno de cuatro cepas de virus de la gripe |
| BRPI0720667A8 (pt) | 2006-12-27 | 2017-04-25 | Pfizer Prod Inc | Métodos de administração de vacina |
| GB0700562D0 (en) | 2007-01-11 | 2007-02-21 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Modified Saccharides |
| US20110097360A1 (en) | 2007-05-25 | 2011-04-28 | Claudio Donati | Streptococcus pneumoniae pilus antigens |
| KR101579947B1 (ko) | 2007-06-26 | 2015-12-28 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 스트렙토코쿠스 뉴모니애 캡슐 다당류 컨쥬게이트를 포함하는 백신 |
| EP2484377A1 (en) | 2007-06-27 | 2012-08-08 | Novartis AG | Low-additive influenza vaccines |
| GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
| GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
| AU2008299376B2 (en) | 2007-09-12 | 2013-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | GAS57 mutant antigens and GAS57 antibodies |
| EP2062594A1 (en) | 2007-11-21 | 2009-05-27 | Wyeth Farma, S.A. | Bluetongue virus vaccine and immunogenic compositions, methods of use and methods of producing same |
| GB0810305D0 (en) | 2008-06-05 | 2008-07-09 | Novartis Ag | Influenza vaccination |
| ES2626634T3 (es) | 2007-12-19 | 2017-07-25 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Formas solubles de la glucoproteína F del virus de Hendra y Nipah y usos de la misma |
| GB0818453D0 (en) | 2008-10-08 | 2008-11-12 | Novartis Ag | Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom |
| KR101773114B1 (ko) | 2007-12-21 | 2017-08-30 | 노파르티스 아게 | 스트렙토라이신 ｏ의 돌연변이 형태 |
| SG188813A1 (en) | 2007-12-24 | 2013-04-30 | Id Biomedical Corp Quebec | Recombinant rsv antigens |
| EP3263591B1 (en) | 2008-02-21 | 2019-03-27 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Meningococcal fhbp polypeptides |
| KR20100135766A (ko) | 2008-03-18 | 2010-12-27 | 노파르티스 아게 | 인플루엔자 바이러스 백신 항원 제조의 개선 |
| AU2010204139A1 (en) | 2009-01-12 | 2011-08-11 | Novartis Ag | Cna_B domain antigens in vaccines against gram positive bacteria |
| GB0900455D0 (en) | 2009-01-13 | 2009-02-11 | Secr Defence | Vaccine |
| GB0901423D0 (en) | 2009-01-29 | 2009-03-11 | Secr Defence | Treatment |
| GB0901411D0 (en) | 2009-01-29 | 2009-03-11 | Secr Defence | Treatment |
| PE20110992A1 (es) | 2009-02-17 | 2012-02-12 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicion inmunogenica que comprende un antigeno del virus del dengue |
| EP2403526B1 (en) | 2009-03-06 | 2019-05-15 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Chlamydia antigens |
| NZ612315A (en) | 2009-04-14 | 2014-10-31 | Novartis Ag | Compositions for immunising against staphylococcus aureus |
| GB0906234D0 (en) | 2009-04-14 | 2009-05-20 | Secr Defence | Vaccine |
| DK2437753T3 (en) | 2009-06-05 | 2016-12-19 | Infectious Disease Res Inst | Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants and vaccine compositions containing them |
| SG176532A1 (en) | 2009-06-15 | 2012-01-30 | Univ Singapore | Influenza vaccine, composition, and methods of use |
| AU2010264688A1 (en) | 2009-06-24 | 2012-01-19 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Recombinant RSV antigens |
| KR20120093811A (ko) | 2009-06-24 | 2012-08-23 | 아이디 바이오메디컬 코포레이션 오브 퀘벡 | 백신 |
| CN102470168A (zh) * | 2009-07-10 | 2012-05-23 | 伊斯克诺瓦公司 | 新组合物 |
| HRP20220756T1 (hr) | 2009-07-15 | 2022-09-02 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Proteinski pripravci rsv f i postupci za izradu istih |
| DK2464658T3 (en) | 2009-07-16 | 2014-12-15 | Novartis Ag | Detoxified escherichia coli immunogens |
| GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| EP2470204B1 (en) | 2009-08-27 | 2015-12-16 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Hybrid polypeptides including meningococcal fhbp sequences |
| US20110110980A1 (en) | 2009-09-02 | 2011-05-12 | Wyeth Llc | Heterlogous prime-boost immunization regimen |
| CA2773637A1 (en) | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Novartis Ag | Combination vaccines against respiratory tract diseases |
| GB0917003D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl | Purification of bacterial vesicles |
| GB0917002D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl | Improved shigella blebs |
| CA2779798C (en) | 2009-09-30 | 2019-03-19 | Novartis Ag | Conjugation of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular polysaccharides |
| AU2010302344A1 (en) | 2009-09-30 | 2012-04-26 | Novartis Ag | Expression of meningococcal fhbp polypeptides |
| BR112012009309B1 (pt) | 2009-10-19 | 2021-10-05 | Intervet International B.V | Vacina combinada, uso de células de microrganismos,método para a preparação de uma vacina combinada, e, kit de partes |
| GB0918392D0 (en) | 2009-10-20 | 2009-12-02 | Novartis Ag | Diagnostic and therapeutic methods |
| CN102711816A (zh) | 2009-10-22 | 2012-10-03 | 莱比锡大学 | 患有牛新生儿全血细胞减少症的小牛中的圆环病毒的检测 |
| MX2012004850A (es) | 2009-10-27 | 2012-05-22 | Novartis Ag | Polipeptidos fhbp meningococicos modificados. |
| GB0919690D0 (en) | 2009-11-10 | 2009-12-23 | Guy S And St Thomas S Nhs Foun | compositions for immunising against staphylococcus aureus |
| GB201003333D0 (en) | 2010-02-26 | 2010-04-14 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| MX2012011189A (es) | 2010-03-26 | 2013-02-07 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna contra el virus e inmunodeficiencia humana. |
| GB201005625D0 (en) | 2010-04-01 | 2010-05-19 | Novartis Ag | Immunogenic proteins and compositions |
| US9597326B2 (en) | 2010-04-13 | 2017-03-21 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Benzonapthyridine compositions and uses thereof |
| EP2560985B1 (en) | 2010-04-21 | 2016-06-29 | Pharmaq AS | Nucleic acid sequences of a fish virus and the use thereof |
| WO2011143617A1 (en) | 2010-05-14 | 2011-11-17 | Baxter International Inc. | Chimeric ospa genes, proteins, and methods of use thereof |
| WO2011149564A1 (en) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Tetris Online, Inc. | Interactive hybrid asynchronous computer game infrastructure |
| US9238796B2 (en) | 2010-06-04 | 2016-01-19 | Toagosei Co. Ltd. | Cell growth-promoting peptide and use thereof |
| GB201009861D0 (en) | 2010-06-11 | 2010-07-21 | Novartis Ag | OMV vaccines |
| US9192661B2 (en) | 2010-07-06 | 2015-11-24 | Novartis Ag | Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles |
| WO2012010291A1 (en) | 2010-07-21 | 2012-01-26 | Athera Biotechnologies Ab | Diagnostic and therapeutic methods and compositions for metabolic disease |
| WO2012010290A1 (en) | 2010-07-21 | 2012-01-26 | Athera Biotechnologies Ab | Diagnostic and therapeutic methods and compositions for metabolic disease |
| KR102143105B1 (ko) | 2010-07-23 | 2020-08-11 | 이스코노바 에이비 | 인플루엔자 백신 |
| US8628947B2 (en) | 2010-08-30 | 2014-01-14 | Intervet Inc. | Potomac horse fever isolates |
| GB201101665D0 (en) | 2011-01-31 | 2011-03-16 | Novartis Ag | Immunogenic compositions |
| SG188624A1 (en) | 2010-09-27 | 2013-04-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| GB201017519D0 (en) | 2010-10-15 | 2010-12-01 | Novartis Vaccines Inst For Global Health S R L | Vaccines |
| WO2012059593A1 (en) | 2010-11-05 | 2012-05-10 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Vaccines for preventing meningococcal infections |
| EP2640832B1 (en) | 2010-11-15 | 2017-12-20 | Pharmaq AS | New ethiological agent |
| WO2012072769A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Novartis Ag | Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations |
| EP2462950A1 (en) | 2010-12-08 | 2012-06-13 | Neovacs | Strongly inactivated and still highly immunogenic vaccine, and process of manufacturing thereof |
| CN103347536A (zh) | 2010-12-08 | 2013-10-09 | 尼奥瓦克斯公司 | 强灭活且仍高免疫原性的疫苗及其制备方法 |
| CA2860331A1 (en) | 2010-12-24 | 2012-06-28 | Novartis Ag | Compounds |
| GB201022007D0 (en) | 2010-12-24 | 2011-02-02 | Imp Innovations Ltd | DNA-sensor |
| US9139618B2 (en) | 2010-12-29 | 2015-09-22 | Intervet Inc. | Salmonid alphavirus protein E2 |
| EP2658568A1 (en) | 2010-12-29 | 2013-11-06 | Intervet International B.V. | Canine babesiosis vaccine antigen |
| EP4159232A1 (en) | 2011-01-26 | 2023-04-05 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Rsv immunization regimen |
| EP2691111B1 (en) | 2011-03-31 | 2017-09-20 | Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale (INSERM) | Use of blood or tissue bacteriome for prediction, diagnosis and prevention of metabolic diseases and their cardiovascular complications |
| CA2832260C (en) | 2011-04-07 | 2021-06-22 | Neovacs | Method for treating ifnalpha related conditions |
| EP2508197A1 (en) | 2011-04-07 | 2012-10-10 | Neovacs | Method for treating IFNalpha related conditions |
| JP2014516955A (ja) | 2011-05-13 | 2014-07-17 | ゾエティス エルエルシー | ヘンドラ及びニパウイルスｇ糖タンパク質免疫原性組成物 |
| RS56748B1 (sr) | 2011-05-13 | 2018-03-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Pre-fuzioni rsv f antigeni |
| JP2014520807A (ja) | 2011-07-06 | 2014-08-25 | ノバルティス アーゲー | 免疫原性組成物およびその使用 |
| EP3332802A1 (en) | 2011-07-06 | 2018-06-13 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Immunogenic combination compositions and uses thereof |
| US9149541B2 (en) | 2011-07-08 | 2015-10-06 | Novartis Ag | Tyrosine ligation process |
| EP2755683B1 (en) | 2011-09-14 | 2019-04-03 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Methods for making saccharide-protein glycoconjugates |
| RS57350B1 (sr) | 2011-10-03 | 2018-08-31 | Mx Adjuvac Ab | Nanočestice, postupak dobijanja i njihova primena kao nosača amfipatičnih ili hidrofobnih molekula u medicini, uključujući i terapiju kancera, kao i prehrambenih jedinjenja |
| MX354924B (es) | 2011-11-07 | 2018-03-22 | Novartis Ag | Molecula portadora que comprende un antigeno spr0096 y un spr2021. |
| MY188083A (en) | 2011-11-23 | 2021-11-16 | In3Bio Ltd | Recombinant proteins and their therapeutic uses |
| US9089574B2 (en) | 2011-11-30 | 2015-07-28 | Emory University | Antiviral JAK inhibitors useful in treating or preventing retroviral and other viral infections |
| GB201200259D0 (en) | 2012-01-09 | 2012-02-22 | Ohlin Per M | Novel therapies |
| WO2013108272A2 (en) | 2012-01-20 | 2013-07-25 | International Centre For Genetic Engineering And Biotechnology | Blood stage malaria vaccine |
| US11510875B2 (en) | 2012-02-07 | 2022-11-29 | Access To Advanced Health Institute | Adjuvant formulations comprising TLR4 agonists and methods of using the same |
| EP2850431B1 (en) | 2012-05-16 | 2018-04-18 | Immune Design Corp. | Vaccines for hsv-2 |
| WO2013174832A1 (en) | 2012-05-22 | 2013-11-28 | Novartis Ag | Meningococcus serogroup x conjugate |
| WO2014005958A1 (en) | 2012-07-06 | 2014-01-09 | Novartis Ag | Immunogenic compositions and uses thereof |
| EP2877206B1 (en) | 2012-07-27 | 2019-11-27 | Baxalta GmbH | Compositions comprising chimeric ospa molecules and methods of use thereof |
| WO2014024026A1 (en) | 2012-08-06 | 2014-02-13 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Method for eliciting in infants an immune response against rsv and b. pertussis |
| US20140037680A1 (en) | 2012-08-06 | 2014-02-06 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel method |
| US10232035B2 (en) | 2012-09-14 | 2019-03-19 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Conditionally replication deficient herpes virus and use thereof in vaccines |
| MX363529B (es) | 2012-09-18 | 2019-03-27 | Novartis Ag | Vesículas de membrana externa. |
| ES2848048T3 (es) | 2012-10-03 | 2021-08-05 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composiciones inmunogénicas |
| ES2826555T3 (es) | 2012-11-30 | 2021-05-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Antígenos de Pseudomonas y combinación de antígenos |
| US10058603B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-08-28 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine |
| WO2014140894A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Bioven 3 Limited | Self-assembling synthetic proteins |
| KR20150137085A (ko) | 2013-03-26 | 2015-12-08 | 더 피르브라이트 인스티튜트 | 안정화된 ｆｍｄｖ 캡시드 |
| US9907846B2 (en) | 2013-04-01 | 2018-03-06 | Mx Adjuvac Ab | Nanoparticles, composed of sterol and saponin from Quillaja saponaria Molina for use in pharmaceutical compositions |
| CA2909221A1 (en) | 2013-04-18 | 2014-10-23 | Immune Design Corp. | Gla monotherapy for use in cancer treatment |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| BE1022008B1 (fr) | 2013-08-05 | 2016-02-03 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Compositions immunogenes combinees |
| EP3613430A2 (en) | 2013-10-11 | 2020-02-26 | Servizo Galego De Saúde (Sergas) | Live attenuated vaccines |
| EP2870974A1 (en) | 2013-11-08 | 2015-05-13 | Novartis AG | Salmonella conjugate vaccines |
| US20160331829A1 (en) | 2013-12-16 | 2016-11-17 | Zoetis Services Llc | Hendra and nipah virus g glycoprotein immunogenic compositions |
| KR102411781B1 (ko) | 2013-12-31 | 2022-06-22 | 인펙셔스 디지즈 리서치 인스티튜트 (아이디알아이) | 단일 바이알 백신 제형 |
| SI3122378T1 (sl) | 2014-03-26 | 2020-03-31 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Mutantni stafilokokni antigeni |
| WO2015164826A2 (en) | 2014-04-24 | 2015-10-29 | Rhode Island Hospital | ASPARTATE-β-HYDROXYLASE INDUCES EPITOPE-SPECIFIC T CELL RESPONSES IN TUMORS |
| MX2016016533A (es) | 2014-06-13 | 2017-05-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Combinaciones inmunogenas. |
| US9790509B2 (en) | 2014-07-18 | 2017-10-17 | Oregon Health & Science University | 5′-triphosphate oligoribonucleotides |
| EP3169699A4 (en) | 2014-07-18 | 2018-06-20 | The University of Washington | Cancer vaccine compositions and methods of use thereof |
| CN104250640A (zh) | 2014-08-22 | 2014-12-31 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用 |
| BR112017003462B1 (pt) | 2014-09-03 | 2023-02-14 | Intervet International B.V. | Coronavírus bovino atenuado e vacina |
| CN106794242B (zh) | 2014-10-03 | 2021-11-30 | 英特维特国际股份有限公司 | 针对禽类呼肠孤病毒的广谱疫苗 |
| EA201790558A1 (ru) | 2014-10-15 | 2017-08-31 | Ксенотера | Композиция с пониженной иммуногенностью |
| US10813993B2 (en) | 2015-03-03 | 2020-10-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Display platform from bacterial spore coat proteins |
| CN105087506B (zh) | 2015-03-20 | 2020-06-30 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种猪伪狂犬病病毒致弱方法、及其致弱的病毒株、疫苗组合物和应用 |
| CN108291210B (zh) | 2015-06-10 | 2022-03-11 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | 生产和纯化含核酸组合物的方法 |
| CN108697790B (zh) | 2015-09-03 | 2022-02-18 | 诺瓦瓦克斯股份有限公司 | 具有改进的稳定性和免疫原性的疫苗组合物 |
| CN105770887A (zh) * | 2016-03-04 | 2016-07-20 | 邓招红 | 一种用于hbv疫苗的佐剂及其制备方法 |
| GB2551984B (en) | 2016-06-30 | 2019-01-16 | Pharmaq As | Fish virus |
| CA3033759C (en) | 2016-08-17 | 2022-06-14 | Pharmaq As | Sea lice vaccine |
| GB201614799D0 (en) | 2016-09-01 | 2016-10-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compositions |
| CA3043790A1 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | Institute For Research In Biomedicine | Novel recombinant prefusion rsv f proteins and uses thereof |
| RU2020106669A (ru) | 2017-07-18 | 2021-08-18 | Ин3Байо Лтд. | Синтетические белки и пути их терапевтического применения |
| CN111315406A (zh) | 2017-09-08 | 2020-06-19 | 传染病研究所 | 包括皂苷的脂质体调配物及其使用方法 |
| AU2019238171A1 (en) | 2018-03-19 | 2020-09-24 | Novavax, Inc. | Multivalent influenza nanoparticle vaccines |
| EP3581201A1 (en) | 2018-06-15 | 2019-12-18 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Escherichia coli o157:h7 proteins and uses thereof |
| CA3109889A1 (en) | 2018-08-23 | 2020-02-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Immunogenic proteins and compositions |
| WO2020243115A1 (en) | 2019-05-25 | 2020-12-03 | Infectious Disease Research Institute | Composition and method for spray drying an adjuvant vaccine emulsion |
| CA3144845A1 (en) | 2019-06-25 | 2020-12-30 | In3Bio Ltd. | Stabilized chimeric synthetic proteins and therapeutic uses thereof |
| WO2021097347A1 (en) | 2019-11-15 | 2021-05-20 | Infectious Disease Research Institute | Rig-i agonist and adjuvant formulation for tumor treatment |
| US10953089B1 (en) | 2020-01-27 | 2021-03-23 | Novavax, Inc. | Coronavirus vaccine formulations |
| EP3922255A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-15 | Prokarium Limited | Cancer therapy |
| CA3202549A1 (en) | 2020-12-02 | 2022-06-09 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Novel antigens |
| WO2022136505A1 (en) | 2020-12-23 | 2022-06-30 | Xenothera | Composition of pig polyclonal antibody for its use to treat and/or prevent antibody-dependent macrophage pro-inflammatory cytokine release in a passive anti-infectious immunotherapy |
| EP4124342A1 (en) | 2021-07-28 | 2023-02-01 | Prokarium Limited | Cancer therapy with live attenuated bacteria |
| WO2023079528A1 (en) | 2021-11-05 | 2023-05-11 | King Abdullah University Of Science And Technology | Compositions suitable for use in a method for eliciting cross-protective immunity against coronaviruses |
| WO2023114727A1 (en) | 2021-12-13 | 2023-06-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Bacteriophage lambda-vaccine system |
| GB2622559A (en) | 2022-05-10 | 2024-03-27 | Johan Frostegaard | Compositions, methods and uses |
| WO2023225458A1 (en) | 2022-05-16 | 2023-11-23 | Zoetis Services Llc | Vaccines against moritella viscosa |
| GB202209588D0 (en) | 2022-06-29 | 2022-08-10 | Plant Bioscience Ltd | Methods and compositions |
| GB202215134D0 (en) | 2022-10-13 | 2022-11-30 | Prokarium Ltd | Composition |
| GB202215576D0 (en) | 2022-10-21 | 2022-12-07 | Prokarium Ltd | Circuit |
| WO2024130009A1 (en) | 2022-12-14 | 2024-06-20 | Yale University | Compositions and methods of use thereof for the treatment of virally driven cancers |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1083815A (en) * | 1963-10-01 | 1967-09-20 | Wellcome Found | Vaccine adjuvants |
| US4064232A (en) * | 1974-01-14 | 1977-12-20 | Sandoz Ltd. | Process for isolating the immunogenic components of influenza viruses |
| GB1502774A (en) * | 1974-06-25 | 1978-03-01 | Nat Res Dev | Immunological preparations |
| US4117113A (en) * | 1974-06-25 | 1978-09-26 | National Research Development Corporation | Immunological preparations |
| US4148876A (en) * | 1975-09-29 | 1979-04-10 | Burroughs Wellcome Co. | Biological preparations |
| US4196191A (en) * | 1975-09-29 | 1980-04-01 | Burroughs Wellcome Co. | Biological preparations |
| US4201767A (en) * | 1978-11-08 | 1980-05-06 | Merck & Co., Inc. | Viral liposome particle |
| US4235877A (en) * | 1979-06-27 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit |
| US4261975A (en) * | 1979-09-19 | 1981-04-14 | Merck & Co., Inc. | Viral liposome particle |
| US4251509A (en) * | 1980-01-31 | 1981-02-17 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Dry particulate vaccine for oral administration |
| DE3014189A1 (de) * | 1980-04-14 | 1981-10-15 | Europäisches Laboratorium für Molekularbiologie (EMBL), 6900 Heidelberg | Verfahren zur herstellung eines immunogenen membranproteinaggregats von influenza-, parainfluenza- und rhabdo-viren |
| EP0047480B1 (en) * | 1980-09-05 | 1986-02-05 | Institut Armand Frappier | Formation of an immunosome exclusively made of viral antigens reconstituted on an artificial membrane |
| MX7528E (es) * | 1981-01-09 | 1989-08-02 | New York Blood Center Inc | Procedimiento para la preparacion de una vacuna sintetica |
| GB2093039B (en) * | 1981-01-29 | 1984-06-06 | Nat Res Dev | Improvements relating to hepatitis b vaccine |
| EP0058021A3 (en) * | 1981-02-06 | 1982-10-27 | Beecham Group Plc | Pharmaceutical compositions |
| SE8205892D0 (sv) * | 1982-10-18 | 1982-10-18 | Bror Morein | Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin |
-
1982
- 1982-10-18 SE SE8205892A patent/SE8205892D0/xx unknown
-
1983
- 1983-10-11 NZ NZ205925A patent/NZ205925A/en unknown
- 1983-10-12 AU AU20103/83A patent/AU558258B2/en not_active Expired
- 1983-10-12 ZA ZA837603A patent/ZA837603B/xx unknown
- 1983-10-12 IE IE2394/83A patent/IE57025B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-10-13 AT AT83850273T patent/ATE61228T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-10-13 EP EP83850273A patent/EP0109942B1/en not_active Expired - Lifetime
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- 1983-10-13 DE DE8383850273T patent/DE3382190D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-14 FI FI833748A patent/FI80600C/fi not_active IP Right Cessation
- 1983-10-17 CA CA000439130A patent/CA1243954A/en not_active Expired
- 1983-10-17 ES ES526524A patent/ES8503951A1/es not_active Expired
- 1983-10-17 PT PT77515A patent/PT77515B/pt unknown
- 1983-10-17 NO NO833769A patent/NO163668C/no not_active IP Right Cessation
- 1983-10-17 DK DK478383A patent/DK162057C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-10-18 MX MX8310844U patent/MX7563E/es unknown
- 1983-10-18 US US06/543,032 patent/US4578269A/en not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-18 JP JP58195132A patent/JPH07112983B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1983-10-18 AR AR83294560A patent/AR243080A1/es active
-
1986
- 1986-01-31 US US06/825,778 patent/US4744983A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61129136A (ja) * | 1984-11-01 | 1986-06-17 | ブロル モレイン | 免疫原性複合体およびその製造法 |
| JPS61200924A (ja) * | 1985-02-14 | 1986-09-05 | アクゾ・エヌ・ヴエー | 合成免疫原 |
| JPS62255436A (ja) * | 1986-04-18 | 1987-11-07 | ノルデン・ラボラトリ−ス・インコ−ポレイテツド | ワクチン処方 |
| JPH0292996A (ja) * | 1988-09-30 | 1990-04-03 | Bror Morein | アジュバントおよび脂質を含む複合体 |
| JP2008285487A (ja) * | 2000-10-18 | 2008-11-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | ワクチン |
| JP2004511527A (ja) * | 2000-10-18 | 2004-04-15 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ワクチン |
| JP2006511451A (ja) * | 2002-07-05 | 2006-04-06 | イスコノヴァ アーベー | 免疫刺激複合体の調製及びその使用 |
| JP4636877B2 (ja) * | 2002-07-05 | 2011-02-23 | イスコノヴァ アーベー | 免疫刺激複合体の調製及びその使用 |
| JP2013533244A (ja) * | 2010-06-24 | 2013-08-22 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | タンパク質含有製剤の安定化のためのアルキルグリコシドを含む組成物及び方法 |
| WO2012093706A1 (ja) * | 2011-01-07 | 2012-07-12 | 東亞合成株式会社 | 抗疎水性ペプチド抗体を得るための抗原調製方法 |
| US9506933B2 (en) | 2011-01-07 | 2016-11-29 | Toagosei Co., Ltd. | Method of preparing antigen for acquiring anti-hydrophobic peptide antibody |
| US9370182B2 (en) | 2012-05-28 | 2016-06-21 | Toagosei Co., Ltd. | Antimicrobial peptide and use thereof |
| US9480727B2 (en) | 2012-10-18 | 2016-11-01 | Toagosei Co. Ltd. | Synthetic peptide for inhibiting expression of type 2 TNF receptor and use thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0109942A2 (en) | 1984-05-30 |
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| MX7563E (es) | 1989-10-17 |
| SE8205892D0 (sv) | 1982-10-18 |
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| NO163668B (no) | 1990-03-26 |
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