JPS62255436A

JPS62255436A - ワクチン処方

Info

Publication number: JPS62255436A
Application number: JP62096109A
Authority: JP
Inventors: ジェイ・ディーン・ガーバー
Original assignee: Norden Laboratories Inc
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1986-04-18
Filing date: 1987-04-16
Publication date: 1987-11-07
Anticipated expiration: 2011-07-10
Also published as: ATE95425T1; EP0242205A2; AU609667B2; DK190387D0; DE3787663D1; ES2059369T3; DE3787663T2; PT84692A; JP2515321B2; DK190387A; EP0242205A3; CA1282003C; IE871003L; US4806350A; ZA872743B; AU7176087A; IE61233B1; PT84692B; EP0242205B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】発明の分野本発明は、増強した免疫刺激特性を有することが示され
た新規なワクチン処方に関する。

発明の背景ワクチン開発の歴史の初期において、粒子状物を含む異
物のワクチン処方への添加がそのようなワクチンに対す
る免疫応答を増強させることが見出された。フロイント
（Ｆ　ｒｅｕｎｄ）は、抗原に対する抗体応答を増強さ
けるだめの油中水型（Ｗｌｏ）エマルジョンの使用を報
告した。そのようなエマルジョン（フロイントの完全ア
ジュバントまたはＣＩ；Ａ）への不活化マイクバクテリ
アの添加は、細胞伝達応答をさらに増強させ、および、
体液性応答を増強さＵ゛るかまたはさせない。

ワクチンアジュバントの有効性は、抗原の隔離もしくは
濃縮効果または炎症応答の刺激またはその両方によるも
のと考えられる。ＣＦＡは、その投与によって誘発され
ろ局部炎症が許容できないほど激しいため、実験室の実
験以外は実用的でない。他の多くのワクチンアジュバン
トかＮｊ中水型（Ｗｌｏ）ならびに水中４１１型（０／
Ｗ）エマルジョンに用いられた。そのようなアジュバン
トとしては、ノ、ラミルジペブチド（ＭＤＩ’）、Ａ＆
（ＯＨ）３のような無機アルミニウム化合物ならびにト
レハロースジミコレート（’Ｉ”ｌ）Ｍ）、リボ多糖類
（Ｌｒ’Ｓ）、例えば、リピドＡ、ある種の親水性遮断
ポリマーおよび高度の親油性、かつ、水不溶性である多
くのアルキル窒素化合物のような界面活性剤が挙げられ
る。

有用な界面活性剤は、大きな非極性領域に結合した小さ
な極性領域を有し、それらは、ＷｌｏよｊよびＯ／Ｗエ
マルジョン中の親水性および親油性界面の間にて相互作
用する。そのような界面活性剤は、典型的には、非混和
性液体、すなわち、油および水の表面張力を減じてエマ
ルジョンを形成しえないため、通常、乳化剤を添加する
。通常用いられる乳化剤は、ツイーンおよびスパンであ
る。

フロイント、アトパンシーズ・イン・チューベキュール
・リサーチ（Ｆｒｅｕｎｄ、　Ａｄｖ、　Ｔｕｂｅｒｃ
。

Ｒｅｓ、）、７、＋３０（＋９５６）は、アジュバント
として水−油エマルジョンの使用を報告している。

サポニン類、またはサナゲニングリコシド類は、植物に
広く分布するグリコシド界面活性剤の１種である。Ｗｌ
ｏまたはＯ／Ｗエマルジョン中ではないがワクチンアジ
ュバントとしての種々のサポニン調製物の使用がよく知
られている。

キル（Ｑｕｉｌ）Ａは、南アフリカの地域原産の樹木で
あろキラヤ・ザボナリア・モリナ（Ｑ　ｕｉｌ　１ａｊ
ａｓａｐｏｎａｒｉａ　　Ｍｏ１ｉｎａ）の樹皮から単
離されたサポニンである。それは、トリテルペノイドで
あろキラ酸にグリコシド結合した炭水化物残基からなる
。

ワクチンアジュバントとしてのその使用は、充分確立さ
れている。例えば、ダルスガードら、アクタ・ベテリナ
リア・スカンジナビカ（Ｄ　ａｌｓｇａａｒｄｅｔ　　
ａｌ、　、　Ａｃｔａ　　ｖｅｔ、　５ｃａｎｄ、　）
、１８．３４９〜３６０（＋９７７）参照。

ボムフオード、インターナショナル・アーカイブス・オ
ブ・アラージ・アンド・アプライド・イムノロジー（ｒ
３ｏｍｆｏｒｄ、　　Ｉ　ｎｔ、Ａｒｃｈ　、　Ａ　Ｉ
　ＩｅｒｇｙＡｐｐｌ、　　ｌｍｌｌ１ｕｎｏ１．　）
、６７（２）、１２７〜１３１（１９８２）は、ワクチ
ンアジュバントとしてのコレステロール−サポニン曳合
体の使用を報告している。ボナチ（１３ｏｎａｔｉ）、
米国特許第４１（１１６４２号は、医薬組成物中へのザ
ボニンーステロール複合体、例えば、コレステロールと
曵合したニスキン、ポリガラ−サポニン類、トマチンま
たはジギトニンの使用を開示している。

ヂャーリーら、アーキフ・エフ・エクスペリメンテレ・
ベテリネアメディツィーン（ＣｈａｒｌｉｅｒｅＬ　　
ａｌ、　、　Ａｒｃｈ、　Ｅｘｐ、　Ｖｅｔ、　−Ｍｅ
ｄ、　）、２７゜７８３（＋９７３）は、種々のサポエ
ンユリ製物に関ずろ研究を報告している。

発明の要約油およびサポニンを２元的アジュバントとしたワクチン
抗原は、動物の免疫応答を刺激するのに非常に浮動であ
ることが見出された。したかつて、本発明は、一つの態
様において、水および浦エマルノヨン中の非毒性有効量
の免疫刺激抗原および非毒性免疫刺激量のサポニンから
なることを特徴とするワクチンに関する。

らう一つの態様において、本発明は、そのようなワクチ
ンの製造法および本発明のワクチンを動物に内用投与す
ることを特徴とする動物の免疫応答を刺激する方法に関
する。以下に充分に開示した実施例は、単一の発明の別
の態様である。

介朋ｐ、蹟本発明のワクチン処方は、アジュバントとしてサポニン
および油を用いろ。それは、抗原が所望の免疫応答を刺
激するだめのいずれらの抗原または抗原性成分である非
経口投与可能な一価または多価ワクチンである。そのよ
うなワクチンは、例えば、病原性または日和見感染性バ
クテリア、ウィルス、寄生虫または他の侵襲性微生物も
しくは〈「機体による：感染に対してまたは感染から生
じる疾患の進行に対して哺乳類を保護するためのワクチ
ンであってよい。そのようなワクチンは、例えば、ｔｌ
を体形成ホルモンのようなホルモンであってらよい。＋
ｉｉ７各の場合において、該抗原は、１または２以上の
修飾または不活化バクテリア、ウィルス、寄生虫または
他の微生物もしくは灯機体または１または２以」二のそ
のサブユニットもしくはそのようなザブユニットの誘導
体とすることかできる。

該ワクチンは、ワクチン量、すなわち、０／′Ｗまたは
Ｗ１０エマルンヨンを用いるワクチン調製のための標準
的方法によりｌ用量当たり非毒性ｆイ効量のそれぞれの
抗原を含有するように処方する。

代表的には、゛これは、油および水を合する前に油よ５
よび水エマルジョンの浦または水層に免疫φ１１激抗原
およびサポニンを添加することからなるａ通常、抗原お
よびサポニンを水に加える。代表的には、サポニンを１
用量当たり１５〜５０００μｇ、好ましくは、２５〜１
ｏｏｏノ１ｇの量にて水層に加える。サポニン類または
サポニン誘導体のいずれら用いることができる。例えば
、チャーリーら、アーキフ・エフ・エクスベリメンテレ
・ベテリネアメディツィーン（Ｃｈａｒｌｉｅｒ　　ｅ
ｔ　　ａｔ２．　Ａｒｃｈ。

ＥＸ＋）、　Ｖｅｔ、　−Ｍｅｄ、　）、■、７８３（
１９７３）よｊよびボナヂ（１３ｏｎａｔｉ）、米国特
許第４１０１６５２号参照。好ましく？よ、そのような
サポニンは、現油性および親水性領域を有し、したがっ
て、界面活性剤および乳化剤として作用しうる。キルＡ
は、好ましいサポニンである。キルＡは、０．０３％位
の低濃度にて水溶液中でミセルを形成し、および、広範
囲の抗原と複合体を形成する。それは、スーパーフォス
（Ｓ　ｕｐｅｒｆｏｓ）（コペンハーゲン、デンマーク
）のような商業販売人を含む種々の源から公的に人丁で
きろ。

該油層は、１または２以上の非経口的に許容さイする浦
からなる。これらには、大豆油および落花生油のような
Ｍｆ物７１ｈ、ドレークオール（Ｄ　ｒａｋｅｏｌ）Ｇ
　Ｖ　ｌ（のようｔ鉱油、スクアレンのような動物油お
よびヘキザデカノのような所望により置換した中間の長
さく炭素ｖｉ１２〜２０）のアルカン類が挙げられる。

例えば、マレ−ら、アンルズ・オブ・アラージ（Ｍｕｒ
ｒａｙ　　ａｔ　　ａｔ、　、　Ａｎｎ、　Ａｌｌｅｒ
ｇｙ）、坪、１４Ｇ（１９７２）参照。油の量は、９５
容量％までである。０／Ｗエマルノジンにおいては、浦
の量は、好ましくは、０．２〜２０％、さらに好ましく
は、０．５〜１０％であり、Ｗ１０エマルジョンにおい
ては、油の量は、好ましくは、４０〜９０％、さらに好
ましくは、５０〜７０％である。

０／ＷまたはＷ１０エマルジョン中のキルＡによる抗原
の区画化は、この伝達系を強力な免疫刺激剤にずろと思
われろ。キルＡは乳化剤であるので、それぞれのキルＡ
の分子の一部は親油性であり、その他の部分は現水性で
ある。したか−）で、キルＡは油−水界面に集まる。キ
ルＡと複合した場合、該抗原は、また、この界面に集ま
りうる。

該抗原自体が親水性および親油性特性を肴ｆしている場
合、それかキルＡと合しているかどうかにかかわら１′
界面に位置する。該抗原が完全に現水性であるかまたは
完全に親油性であり、かつ、キルＡと合していない場合
、それは、それぞｈ水層または油層に存在する。該抗原
がＬＩＪＩ層に存（’Ｅ　する場合、キルＡは、油滴の
表面上に存在する。該抗原が水層に存在する場合、キル
Ａは、該抗原とともに水滴中にまたは水滴の表面上のい
ずれかに存在する。どちらの場合ら、抗原およびアジュ
バントか区画化される。そのような区画化は、抗原およ
びアジュバントを免疫細胞、特にマクロファージへ伝達
するために非常に有効な方法であると考えられる。

キルＡは、また、通常、５０〜７０％の油を含有するＷ
１０エマルジョンを形成する場合、水層に加えられる。

これらのエマルジョンは、油層中に撹拌しながら水層を
加えろことによりまたは高シェア混合乳化器を用いて乳
化することにより製造する。

該免疫刺激抗原は、哺乳類に内用投与した場合、該抗原
に対する体液性または細胞伝達応答を誘発する因子であ
る。それは、弱毒化または不活化バクテリア、ウィルス
もしくは腎生虫またはポリペプチドであってよい。該ポ
リペプチドは、例えば、オリゴペプチド、ポリペプチド
またはそのような　゛イＴ機体もしくはウィルスから誘
導し、所望により、精製したタンパク質であってよく、
グリコジル化またはその他に修飾ずろことができる。別
法として、そのような抗原は、合成法または組替え型Ｄ
ＮＡ法により調製できる。該抗原は、また、ホルモンま
たはその誘導体のような異なる源のタンパク質であって
よい。代表的な抗原は、イヌ・パーホウイルス（ＣＰ　
Ｖ）、仮性狂犬病ウィルス（ＰＳＶ）、ネコ感染性腹膜
炎ウィルス（ＦＩＰ）、ジロフィラリア・イミティスお
よび黄体形成ホルモンに対する免疫応答を刺激する抗原
である。

該ワクチン処方は、選択した１または２以上の抗原のた
めの標準的方法に従って哺乳類に内用、例えば、筋肉内
、皮下、腹腔内または静脈内投与される。ヒトでないＵ
＋ｆｉ乳順に対しては、該ワクチンを、代表的には０．
５〜４ｘ（１、好ましくは、１〜２ｘＱの投与容量にて
筋肉内または皮下に投与する。代表的ワクチン接種法は
、通常、最初のワクヂン接種後２〜６週間目に第２のワ
クチン接種をし、ついで定期的期間、例えば、１〜２年
毎に増強することを要する。

所望により追加の賦形剤を加えることができろ。

例えば、ステロール類は、サポニン類と複合して水溶液
中のサポニン類の投与に関連した溶血を減じ、ツイーン
およびスパンのような乳化剤は、通常、Ｏ／ＷまたはＷ
１０エマルジョンに用いられ、モンタニド（ｍｏｎＬａ
ｎｉｄｅ）　８８８は、通常、乳化剤として用いられる
モノオレエートである。それ以上のアジュバントの追加
は、該免疫応答をそれ以上増強することが期待できない
が、ムラミルジペプチド、トレハロースジミコレート、
アルミナ、Ｌ　Ｉ）　Ｓおよびアルキルアミン類のよう
な追加の薬剤またはアジュバントを該ワクチンに含有さ
せることができる。

逓嵐慰つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが
、本発明はそれらに限定されるものではない。ドレーク
オール６Ｖｒ（、ベンードレーク、シカゴ（１）ｒａｋ
ｅｏｌ　　６ＶＲ，Ｐｅｎｎ−Ｄｒａｋｅ。

Ｃｈｉｃａｇｏ）を油層として用いた。０．５〜ＩＯ％
０／Ｗエマルジョンを調製するため、濾過滅菌キルＡ（
２５〜ｌ　Ｏ００ｕ９／　Ｉ　用ｆｆ１）を水層中の抗
原に加えた。エマルジョンは、撹拌しながら水層を濾過
滅菌部に加えることによりまたは水層の上に油を重層し
、高シェア混合乳化器（シルバーソン、ミックストロニ
クス・インコーホレーテッド、クリーブランド、オハイ
オ（Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ、　ＭｉｘｔｒｏｎｉｃｓＩ　
ｎｃ、　、　Ｃ１ｅｖａｌａｎｄ、　Ｏｈｉｏ）を用い
て乳化することにより調製した。

このキルΔエマルジジンと合した抗原は、りイヌ・バー
ボウイルス、２）仮性狂犬病ウィルスサブユニット、３
）ネコ病染性腹膜炎ウィルスおよび４）ジロフィラリア
・イミティス（イヌ心糸状虫）である。実施例は、動物
を本発明のワクチン処方でワクチン接種した場合、予期
しない増強した免疫応答を示した。

実施例１安定なイヌ細胞株においてビルレントｃｒ’ｖＢを増殖
し、ベータープロピオラクトン（ｎｐｔ）またはベータ
ーエチルアミン（１３ＥＩ）で処理することにより亥細
胞培逐から収穫しｆこヒルレントウイルスを不活化し、
乳化ｉＮに該水層に添加することにより該不活化ウィル
スおよびつぎのアジュバント　Ｉ）５％鉱油およびキル
Ａ（３００ｌ１ｆｌ／　Ｉ　ｘＱ用量）または２）乳化
剤としてモンタニド８８８を含（ｒする〜Ｖ１０エマル
ノジンを合して不活化イヌ・パーボウイルス（ＣＰ　Ｖ
）ワクチンを調製した。第３群は、非アノユハントワク
チンでワクチン接種したモルモー・トを含む。

５％Ｏ／Ｗエマルノヨン中のキルＡは、キルＡ不含の５
％エマルノヨンよりはるかにＣＰＶの抗原性を増強した
。後者のワクチンにおいては、キルＡの代わりにモンタ
ニド８８８を乳化剤として用いた（表１）。

別の実験において、キルＡおよびＯ／Ｗエマルジョンを
アジュバントにした不活化ＣＰ　Ｖにてワクチン接種し
たモルモットは、特に最初のワクチン接種後、５％アル
ヒドロゲル（水酸化アルミニウム）をアジュバントにし
た不活化ＣＰＶまたはアジュバントを用いないワクチン
のいずれかにてワクチン接種したモルモットより、７！
ｊい１（Ｉ［清中和（ＳＮ）力価を生した（表２）。

表１不活化ＣＩ）　Ｖに対するキルへ含（７５％水中浦エマ
ルノヨｌンおよびキルＡ不含５爲氷中油工マルンヨンの
アジュバント性の比較 ’：３００μｇ／１ｚ（Ｈ用項表２不活化イヌ・バーボウイルスワクチンに対するモルモッ
トの応答に及ぼす異種アジュバントの作用実施例２仮性狂犬病サブユニットワクチンは、定着しｆニブタ腎
臓細胞株上の連続通過により該ウィルスの株を弱毒化し
、レクチン現相性カラム」二にて細胞培養培地を分画し
、アルファーマンノノドを用いて該ワクチン抗原を溶出
し、ついて乳化１ｎに該抗原お上ひつぎのアジュバント
・　１）キルＡ１２）キルＡおよびボルデテラ・ブロン
キセプチカ（Ｉｌｏｒｄａｔｅｌｌａ　　ｂｒｏｎｃｈ
ｉｓｃｐｔｉｃａ）および３）モンタニド８８８および
キルＡ含（Ｔ　Ｗ　／　Ｏエマルシヨンを合することに
より調製した。１η９ギルｌ＼／１７＆用量含白’Ｗ１
０エマルノヨンをアジュバントにした仮性狂犬病サブユ
ニット抗原は、キルＡのみまｆコはキルＡおよびボルデ
テラを用いた場合よりブタにおける仮性狂犬病ウィルス
に対して非常に高いＩＥＬＩＳＡ力価を刺激した（表：
３）。二のアジュバントは、最初のワクチン接種後抗体
に１答を刺激する唯一のアジュバントで３うった。この
同じワクチン抗原−アノユバ〉１・の＜′１１合せは、
（反性狂犬病抗原に対して最良の細胞−伝達免疫（Ｃｘ
ｌｌ）［と：答を刺激しｆこ（，１ａ）。別の実験にお
いて、キルＡおよびモンクニド１０３含Ｃ−ｒ　Ｗ／　
Ｏエマルジョンは、不活性化仮性狂犬病ウィルスに対し
５％アルヒドロゲルより良いアジュバントてあった。Ｅ
ＬＩＳＡ力価は、第１ワクチン接種および第２ワクチン
接種および攻撃後より一層高かった（表５）。さらに別
の実験において、仮性狂犬病ウィルスに対するＣＭＩ応
答は、また、アルヒドロゲル含有ワクチンよりキルＡお
よびモンタニド８８８を用いたＷ１０エマルノヨン含打
ワクヂンを接種したブタにおいてより一層高かった（表
６）。

表３異なるアジュバントと合した仮性狂犬病ウイルスサブ表
５２つの５■なるアジュバントと合した不活化仮性狂犬病
ワクチンにてワクチン抗原したブタのＥＬＩＳＡ力価ｌ
：力価子ン１用虫当たりキルＡｌ１９実施例３ネコ感染症腹膜炎（ＦｒＰ）ペプロマーワクチンは、定
着した安定な細胞株にてＦ　Ｉ　ｌ）のビルレント株を
増殖し、ポリアクリルアミドゲルにて該細胞培養培地を
分画して該ワクチン抗原を吸着し、溶出し、乳化面に該
抗原と５％Ｏ／Ｗエマルジョン中のキルΔ、６７％Ｗ１
０エマルノヲン中のキルΔまたは５％Ｏ／Ｗエマルジョ
ン中のポリオールＬ　Ｉ　２１と合したキルＡのいずれ
かを合して調製した。それぞれのアジュバント調製物に
２５μｇのギルΔを用いた。５％Ｏ／Ｗエマルノヨン、
５％Ｗ１０エマルジョンまたは５％Ｏ／Ｗエマルノヨン
ｌよび１，１２１のいずれかと合したキルＡは、Ｙ′：
、Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａにより測定した場合、ベブロマーおよ
びキルＡのみを用いた場合よりＦＩＰペブロマーに対し
より良い抗原応答を刺激した（表７）。

表７ベプロマーおよび異なるアジュバントにてワクチン抗原
した後のＦ［ＰＶベブロマーに対するネコの抗体応答 ’：　４０５ｎｍにおける吸光度２・ワクチン１用虫当たりキルＡ２５μｇ実施例、・１イヌを３００μｇ／々ＱキルΔおよび５％油、３００μ
ｇキルＡおよび５０％Ｗ１０モンタニド８８８エマルジ
ジン、キルＡ、５％ｍ１およびポリオールＬ　Ｉ　２１
またはキルＡのみのいずれかをアジュバントにした成虫
心糸状虫の抽出物からのイヌ心糸状虫抗原にてワクヂン
接種した。全ての群のイヌは、受身血球凝集試験により
測定した場合、心糸状虫抗原に対する強い抗体応答を示
した（表８）。

実施例５モラクセラ・ボビス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ　　ｂｏｖｉ
ｓ）バクテリアは、実質的にゲーバー（Ｇｅｒｂｅｒ）
、ヨーロッパ特許出願第１４６５２３号の記載と同様に
してＪ、町１製した。該バクテリアは、（１）５％ドレ
ークオール６１＃’ｔおよびキ／ｌ／Ａ（５Ｑ　Ｏｔｔ
ｇ／ｙ（１）または（ｉｉ）キルＡ（５００μｇ／πの
のみをアジュバントにした。ウソを２週間間隔で２回ワ
クチン接種し、ついて攻撃した。該バクテリアとキルＡ
のみを合した７つのワクチンのうちの３つが１１３Ｋを
発症した。該バクテリアとキルＡおよび油を合した７つ
のワクチンのうちの１つだけがＩＢＫを発症した。６匹
の非ワクヂン接種動物のうち４匹がＩｎＫを発症した。

キルＡおよび油をアジュバントとしたバクテリアは、安
定な均一組成物を維持した。

これらの実施例は、油および水ワクチン処方中へのギル
Ａの使用およびそのような処方にて達成しろる細胞性お
よび体液性免疫応答の増強が他の油および水エマルジョ
ンまたは他のアジュバント含有処方より大きいことを示
している。そのようなキルＡ−浦処方が浦と他のアジュ
バント、例えば、ボルデテラより大きな免疫応答を誘発
するということはまことに驚くべきことである。

特許出願人　ノルデン・ラボラトリーズ・インコーホレ
イテッド

Claims

【特許請求の範囲】

（１）油および水エマルジョン中の非毒性有効量の免疫
刺激抗原および非毒性免疫刺激量のサポニンからなるこ
とを特徴とする動物の免疫応答を刺激するワクチン。
（２）該サポニンが１５〜５０００μｇ／１用量のキル
Ａ（ＱｕｉｌＡ）であり、かつ、該エマルジョンが９５
容量％までの油を含有する前記第（１）項のワクチン。
（３）キルＡの量が１ｍｌ用当たり２５〜１０００μｇ
であり、かつ、該エマルジョンが０．２〜２０容量％ま
たは４０〜９０容量％の油を含有する前記第（２）項の
ワクチン。
（４）該抗原が弱毒化または不活化バクテリア、ウィル
スもしくは寄生虫またはポリペプチドである前記第（１
）項のワクチン。
（５）該抗原がＣＰＶ、ＰＳＶ、ＦＩＰＶ、ジロフィラ
リア・イミティス（Ｄｉｒｏｆｉｌａｒｉａ　ｉｍｍｉ
ｔｉｓ）または黄体形成ホルモンに対する免疫応答を刺
激する前記第（４）項のワクチン。
（６）得られる処方が単一ワクチン用量当たり非毒性有
効量の該抗原およびサポニンを含有するように免疫刺激
抗原、サポニンならびに油および水エマルジョンを合し
たことを特徴とするワクチンの製造法。
（７）該サポニンが１５〜５０００μｇ／１用量のキル
Ａであり、かつ、該エマルジョンが９５容量％までの油
を含有する前記第（６）項の製造法。
（８）該サポニンが２５〜１０００μｇ／１用量のキル
Ａであり、かつ、該エマルジョンが０．２〜２０容量％
または４０〜９０容量％の油を含有する前記第（７）項
の製造法。
（９）該抗原が弱毒化または不活化バクテリア、ウィル
スもしくは寄生虫またはポリペプチドである前記第（６
）項の製造法。
（１０）該抗原がＣＰＶ、ＰＳＶ、ＦＩＰＶ、ジロフィ
ラリア・イミティスまたは黄体形成ホルモンに対する免
疫応答を刺激する前記第（９）項の製造法。