ES2374628T3 - Vacunas contra la bordetella bronchiséptica. - Google Patents

Vacunas contra la bordetella bronchiséptica. Download PDF

Info

Publication number
ES2374628T3
ES2374628T3 ES05023118T ES05023118T ES2374628T3 ES 2374628 T3 ES2374628 T3 ES 2374628T3 ES 05023118 T ES05023118 T ES 05023118T ES 05023118 T ES05023118 T ES 05023118T ES 2374628 T3 ES2374628 T3 ES 2374628T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
adjuvant
vaccine
bordetella
oil
lecithin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES05023118T
Other languages
English (en)
Inventor
Don Alan Dearwester
David Stewart Roberts
Leroy Allen Swearingin
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pfizer Products Inc
Original Assignee
Pfizer Products Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer Products Inc filed Critical Pfizer Products Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2374628T3 publication Critical patent/ES2374628T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/099—Bordetella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/825—Bacterial vaccine for porcine species, e.g. swine

Abstract

Una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado mediante adición de formalina seguido de adición de glutaraldehído.

Description

Vacunas contra la bordetella bronchiseptica
Campo de la invención
La invención se refiere a una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchispetica que se ha inactivado añadiendo formalina seguido de la adición de glutaraldehído. La invención también se refiere a una composición de vacuna que comprende dicha composición de antígeno y un adyuvante.
Antecedentes de la invención
La generación de inmunidad a organismos infecciosos es una potente herramienta en el control de enfermedades. Los antígenos que inducen inmunidad a la infección se conocen como inmunógenos. Los anticuerpos protectores que inducen los antígenos pueden colaborar con otras defensas naturales para inhibir el proceso infeccioso, o éstos pueden neutralizar productos perjudiciales en el organismo infectado tales como toxinas.
Un medio eficaz para mejorar la respuesta de anticuerpos es el uso de un adyuvante. Así, se incluye un adyuvante en una vacuna como un aditivo o vehículo para mejorar la respuesta al antígeno. Un adyuvante puede actuar por diferentes mecanismos que incluyen, (1) atrapar al antígeno en el cuerpo causando una liberación lenta, (2) atraer las células del sistema inmune hacia el sitio de inyección, (3) estimular las células del sistema inmune para que proliferen y se activen y,
(4) mejorar la dispersión del antígeno en el cuerpo del receptor.
Como adyuvantes se han usado una serie de agentes con diversas propiedades químicas, incluyendo emulsiones "agua en aceite" y "aceite en agua", sales minerales, polinucleótidos y sustancias naturales. Un adyuvante, conocido con el nombre comercial AMPHIGENTM, se describe en la patente de los Estados Unidos nº 5.084.269. El adyuvante AMPHIGENTM está compuesto por una lecitina exenta de glicéridos disuelta en un aceite, normalmente parafina líquida clara. En preparaciones de vacuna, AMPHIGENTM se dispersa en una solución o suspensión acuosa del antígeno inmunizante en forma de una emulsión "aceite en agua".
Cuando se usó el adyuvante AMPHIGENTM según la patente de los Estados Unidos nº 5.084.269 anterior se observaron problemas. Por ejemplo, la lecitina en el AMPHIGENTM no es suficiente para producir una emulsión estable del aceite, dando lugar así a un acúmulo o depósito de aceite en los tejidos en los que se ha inyectado. El aceite mineral no puede ser metabolizado o eliminado por el animal. Como resultado, el aceite se convierte en el origen de una grave inflamación crónica y de aparición de marcas. La emulsificación del AMPHIGENTM directamente en la preparación de antígeno tiene el riesgo de dañar al antígeno. Además, si la emulsión deseada no se llega a formar, se deberá desechar el antígeno valioso.
El documento US 4.888.169 describe una composición de vacuna que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado añadiendo sólo glutaraldehído.
El documento US 5.578.308 describe la inactivación (detoxificación) de toxina Bordetella purificada usando glutaraldehído seguido de formalina en presencia de aminoácidos.
Sumario de la invención
La invención se refiere a una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado añadiendo formalina seguido de la adición de glutaraldehído. La invención también se refiere a una composición de vacuna que comprende dicha composición de antígeno y un adyuvante. De forma particular, la invención se refiere a dicha composición de vacuna, en la que dicho adyuvante comprende de aproximadamente 0,25% a aproximadamente 12,5% en volumen/volumen (v/v) de una lecitina, de aproximadamente 1% a aproximadamente 23% v/v de un aceite, y de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 3,5% v/v de al menos un tensioactivo anfifílico.
En una primera realización la invención proporciona un procedimiento de inactivación de un cultivo de Bordetella bronchiseptica que comprende la adición de formalina a dicho cultivo seguido de la adición de glutaraldehído a dicho cultivo.
En una segunda realización la invención proporciona una composición de Bordetella bronchiseptica que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica, formalina y glutaraldehído.
En una tercera realización la invención proporciona una vacuna para la protección de un mamífero frente a infección por Bordetella bronchiseptica que comprende aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de una cantidad de células de Bordetella bronchiseptica de un cultivo inactivado de acuerdo con el procedimiento anterior efectivo para proteger dicho mamífero contra una infección por Bordetella bronchiseptica y un vehículo fisiológicamente aceptable. Preferiblemente la vacuna comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica, más preferiblemente aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica.
En una cuarta realización la invención proporciona una vacuna para la protección de un mamífero frente a infección por Bordetella bronchiseptica que comprende aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de una cantidad de células de Bordetella bronchiseptica de un cultivo inactivado de acuerdo con el procedimiento anterior efectivo para proteger dicho mamífero frente a infección por Bordetella bronchiseptica y un vehículo fisiológicamente aceptable, en el que dicha vacuna comprende además aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de una cantidad de antígenos de Pasteutella multocida efectivo para proteger el mamífero frente a una infección por Pasteutella multocida toxigénica. Preferiblemente la vacuna comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de Pasteutella multocida toxigénica, más preferiblemente aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de antígenos de Pasteutella multocida toxigénica. Preferiblemente, la vacuna de la cuarta realización es para la protección de un cerdo frente a una infección por Bordetella bronchiseptica y/o una infección por Pasteutella multocida toxigénica. También se proporciona con la invención el uso de la vacuna de la cuarta realización en la preparación de una vacuna para la protección de un cerdo frente a infección por Bordetella bronchiseptica y/o una infección por Pasteutella multocida toxigénica.
Se proporciona también el uso de la vacuna de la cuarta realización, en la preparación de una vacuna para la protección de un lechón frente a rinitis atrópica mediante:
a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la cuarta realización, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti-Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y
b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón.
Se proporciona también la vacuna de la cuarta realización para la protección de un cerdo frente a rinitis atrópica mediante:
a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la cuarta realización, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti-Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y
b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón.
El adyuvante usado en la invención comprende una lecitina, un aceite y un tensioactivo anfifílicos capaz de emulsionar el adyuvante, por ejemplo, un Tween o un tensioactivo Span. En otro aspecto preferido el tensioactivo es Tween 80, Tween 85, Span 80 o Span 85. En otro aspecto el adyuvante comprente una lecitina, un aceite y dos tensioactivos anfifílicos capaces de emulsionar el adyuvante o una composición de vacuna que contiene el adyuvante. En un aspecto preferido uno de los dos tensioactivos se encuentra principalmente en la fase acuosa, por ejemplo, Tween 80, y el otro tensioactivo se encuentra principalmente en la fase oleosa, por ejemplo, Span 80.
Una lecitina es un fosfátido. Las preparaciones no purificadas de lecitina pueden incluir triglicéridos. A efectos de la presente invención, "lecitina" incluye tanto las preparaciones purificadas como las no purificadas. En un aspecto preferido, la lecitina está exenta de glicéridos.
Aceites adecuados incluyen un aceite mineral, por ejemplo el aceite mineral ligero DRAKEOLTM.
En un aspecto adicional, el adyuvante de la invención contiene una solución de vehículo acuosa, por ejemplo, un tampón fisiológicamente aceptable, agua o una solución salina.
En una realización preferida, el adyuvante de la invención contiene una lecitina, un aceite mineral, dos tensioactivos anfifílicos y una solución vehículo acuosa (por ejemplo, solución salina).
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 presenta un gráfico que representa la distribución del tamaño de las gotitas de una emulsión preparada como se describe a continuación. Las líneas (a) y (b) representan que aproximadamente el 94% de las gotitas tienen un diámetro de 1 Im o menor.
Breve descripción de la invención
La invención se refiere a una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordotella bronchiseptica que se ha inactivado añadiendo formalina seguido de la adición de glutaraldehído. La invención también se refiere a una composición de vacuna que comprende dicha composición de antígeno y un adyuvante. De forma particular, la invención se refiere a dicha composición de vacuna, en la que dicho de adyuvante comprende de aproximadamente 0,25% a aproximadamente 12,5% en volumen/volumen (v/v) de una lecitina, de aproximadamente 1% a aproximadamente 23% en relación v/v de un aceite, y de aproximadamente 1,5% a 3,5% en relación v/v de al menos un tensioactivo anfifílico. El
adyuvante es útil para la mejora de la respuesta inmune a un antígeno.
En particular, se describe aquí un adyuvante de aceite que es capaz de emulsionar una formulación de vacuna. Además se describe en este documento un adyuvante que, cuando se usa en una formulación de vacuna es capaz de evitar sustancialmente la inflamación o la cicatrización en el sitio de inyección, típico de vacunas que contienen aceite mineral. Los adyuvantes usados en la invención comprenden una lecitina, un aceite y un tensioactivo anfifílico capaz de emulsionar el adyuvante o una composición de vacuna que contiene el adyuvante.
Se ha descubierto que la adición de aproximadamente 1,5% v/v (es decir, 1,5% de concentración en volumen obtenida, por ejemplo, mezclando 98,5 volúmenes de la vacuna que comprende el adyuvante con 1,5 volúmenes del tensioactivo anfifílico) a 3,5% v/v de un tensioactivo anfifílico a una vacuna que contiene un adyuvante como el que se describe en la patente de los Estados Unidos nº 5.084.269 es eficaz para emulsionar suficientemente una composición de vacuna formulada con dicho adyuvante y minimizar la irritación en el sitio de inyección del animal vacunado.
En un aspecto el adyuvante descrito contiene una lecitina y un aceite y un tensioactivo anfifílico. En otro aspecto el adyuvante contiene una lecitina y un aceite y un tensioactivo anfifílico capaz de emulsionar una composición de vacuna formulada con un adyuvante de la invención. En otro aspecto preferido se usan dos tensioactivos anfifílicos en un adyuvante, por ejemplo, un tensioactivo Tween y un tensioactivo Span.
Un adyuvante preferido, denominado en la presente memoria "Adyuvante nº 1", comprende aproximadamente 2% v/v de lecitina, aproximadamente 18% v/v de aceite mineral y aproximadamente 8% v/v de tensioactivo (por ejemplo, aproximadamente 5,6% v/v de Tween 80 y aproximadamente 2,4% v/v de Span 80), siendo el volumen restante una solución salina. En un aspecto preferido, se formula una composición de vacuna que comprende un antígeno en una concentración de aproximadamente 75% v/v y un adyuvante, preferiblemente, Adyuvante nº 1, en una concentración de aproximadamente 25% v/v de la composición de vacuna. Todas las concentraciones expresadas en la presente memoria en porcentaje se indican en volumen por volumen, a no ser que el contexto indique otra cosa.
Tensioactivos útiles en el adyuvante
Los tensioactivos útiles para el adyuvante usado en la invención son anfifílicos y aceptables para uso veterinario o médico. Los técnicos en la materia pueden determinar si a un tensioactivo particular es aceptable o no para uso médico o veterinario. Un tensioactivo es anfifílico si una parte de la molécula de tensioactivo es hidrófoba y otra parte es hidrófila. Véanse las patentes de los Estados Unidos números 5.690.942; 5.376.369; 4.933.179 y 4.606.918, que describen tensioactivos que se pueden usar en el adyuvante de la invención. Ejemplos de tensioactivos útiles en el adyuvante de la invención incluyen, aunque sin quedar limitados a ellos, un tensioactivo Tween y un tensioactivo Span. Los tensioactivos Tween y Span incluyen, aunque no quedan limitados a ellos, monolaureato (Tween 20, Tween 21, Span 20), monopalmitato (Tween 40, Span 40), monoestearato (Tween 60, Tween 61, Span 60), tristearato (Tween 65, Span 65), monooleato (Tween 80, Tween 81, Span 80) y trioleato (Tween 85, Span 85). En una realización preferida, se usa Tween 80, Tween 85, Span 80 o Span 85.
Se prefiere que un tensioactivo útil en el adyuvante de la invención sea anfifílico y tenga un valor del equilibrio hidrófilolipófilo ("HLB") que sea preferiblemente al menos la mitad de la suma de los valores HLB del resto de los componentes del adyuvante. Más preferiblemente, el tensioactivo tiene un valor HLB que varía de aproximadamente la mitad a aproximadamente dos veces la suma de los valores HLB del resto de componentes del adyuvante. Más preferiblemente, el tensioactivo tiene un valor HLB que es aproximadamente igual al valor HLB del resto de componentes del adyuvante. Se puede disponer fácilmente de los valores HLB para los tensioactivos, lecitinas, aceites y soluciones vehículo o, si fuera necesario, se pueden determinar por experimentación de rutina. Por ejemplo, véanse las patentes de los Estados Unidos números 4.504.275 y 4.261.925 y las referencias citadas en las mismas.
Los tensioactivos anfifílicos útiles en el adyuvante de la invención tienen valores HLB de aproximadamente 2 a aproximadamente 20, preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 17. Los procedimientos para determinar los valores HLB de tensioactivos particulares son conocidos en la técnica. Véanse por ejemplo, las patentes de los Estados Unidos números 5.603.951; 4.933.179 y 4.606.918, que describen tensioactivos que tienen valores particulares de HLB.
La concentración de un tensioactivo en una composición de vacuna de la invención formulada con el adyuvante varía de aproximadamente 1,5% a 3,5% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 3% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 2,5% v/v y, lo más preferible, de aproximadamente 2% v/v. Cuando se usa más de un tensioactivo, la suma de las concentraciones de todos los tensioactivos usados en la composición de vacuna formulada con el adyuvante de la invención también variará de 1,5% a 3,5% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 3% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 2,5% v/v y, lo más preferible, de aproximadamente 2% v/v.
La concentración de un tensioactivo en el adyuvante de la invención depende también de la concentración en la que se usa el adyuvante en una composición de vacuna. Por ejemplo, se puede formular una composición de vacuna con el adyuvante de la invención de forma que aproximadamente el 25% del volumen de la composición de vacuna es el
adyuvante ("adyuvante al 25%") y el resto, aproximadamente el 75%, lo constituyen el resto de componentes, por ejemplo, la composición de antígeno. En un aspecto, la concentración del tensioactivo en un adyuvante al 25% varía de aproximadamente 6% a 14% v/v. Más preferiblemente, la concentración del tensioactivo en un adyuvante al 25% varía de aproximadamente 6% a 12% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 6% a aproximadamente 10% v/v y, lo más preferible, aproximadamente 8% v/v.
La concentración del tensioactivo en el adyuvante de la invención depende de diversos factores. Por ejemplo, cuanto mayor sea la concentración de aceite en el adyuvante, más tensioactivo se necesita para emulsionar una composición de vacuna formulada con el adyuvante. Otro factor que es útil para determinar la concentración de un tensioactivo es la concentración de una lecitina. Cuanto mayor concentración de una lecitina en el adyuvante, menor es la cantidad de adyuvante requerida para la emulsión.
Cuando se usa el adyuvante en una composición de vacuna a una concentración inferior al 25% v/v, la concentración de los componentes del adyuvante en el adyuvante deberá aumentar de forma proporcional. El vehículo acuoso es una excepción ya que el vehículo siempre comprende el volumen que queda sin ocupar por el resto de componentes; así, si aumenta la concentración de todos los componentes salvo el vehículo, la concentración del vehículo en el adyuvante disminuirá y viceversa. Por ejemplo, cuando se usa el adyuvante en una concentración de aproximadamente 12,5% v/v en una composición de vacuna, la concentración de los componentes en el adyuvante es aproximadamente el doble de la concentración de los componentes en un adyuvante al 25%. De igual forma, cuando el adyuvante de la invención se usa en una composición de vacuna en una concentración que es superior al 25% v/v, la concentración de los componentes en el adyuvante tendrá que disminuir en consecuencia, por ejemplo, cuando el adyuvante se usa en una concentración de aproximadamente 50% v/v en una composición de vacuna, la concentración de los componentes en el adyuvante es aproximadamente la mitad de la concentración de los componentes en un adyuvante al 25%.
En una realización, se pueden usar dos tensioactivos anfifílicos en el adyuvante de la invención. Con preferencia, los dos tensioactivos incluirán un tensioactivo que estaría más concentrado en una fase acuosa que en una fase oleosa del adyuvante ("tensioactivo hidrófilo") y un tensioactivo que estaría más concentrado en una fase oleosa del adyuvante ("tensioactivo lipófilo"). Por ejemplo, Tween 80 se concentraría más en una fase acuosa y Span 80 se concentraría más en una fase oleosa. Un tensioactivo hidrófilo preferido tiene un valor HLB de aproximadamente 9 a aproximadamente 20 y un tensioactivo lipófilo preferido tiene un valor HLB de aproximadamente 2 a aproximadamente 9. Véanse las patentes de los Estados Unidos números 5.603.951; 4.933.179 y 4.606.918, que describen tensioactivos con valores HLB en ambos intervalos útiles para el adyuvante de la invención.
Cuando se usan dos tensioactivos en el adyuvante de la invención, la concentración total de ambos tensioactivos combinados en una composición de vacuna formulada con el adyuvante de la invención varía de aproximadamente 1,5% a 3,5%, más preferiblemente, de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 3%, más preferiblemente, de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 2,5% y, lo más preferible, aproximadamente 2% v/v. La concentración de cada uno de los dos tensioactivos usados en el adyuvante de la invención puede diferir entre sí. Por ejemplo, cuando se usan un tensioactivo hidrófilo y un tensioactivo lipófilo, por ejemplo Tween 80 y Span 80, la concentración de Tween 80 puede variar de aproximadamente 1,2 a aproximadamente 5 veces la concentración de Span, más preferiblemente, de aproximadamente 1,5 a aproximadamente 4, más preferiblemente de aproximadamente 1,8 a aproximadamente 3, más preferiblemente, de aproximadamente 2 a aproximadamente 2,5 y más preferiblemente, aproximadamente 2,3, con preferencia cuando se usa en un adyuvante con una lecitina y una concentración de aceite como en el Adyuvante nº 1.
La concentración del tensioactivo hidrófilo usado en el adyuvante de la invención depende, en parte, del tamaño de la fase acuosa, y la concentración del tensioactivo lipófilo depende, en parte, del tamaño de la fase oleosa. En una realización, el adyuvante de la invención que consta de una fase acuosa al 80% v/v y una fase oleosa al 20% v/v, puede contener un tensioactivo hidrófilo en una concentración de hasta aproximadamente cuatro veces (es decir, 80/20) la concentración de un tensioactivo lipófilo o, por ejemplo, hasta aproximadamente 2 veces.
Componentes no tensioactivos del adyuvante
Además del tensioactivo anfifílico, el adyuvante contiene una lecitina y un aceite. En otro aspecto, el adyuvante contiene una solución vehículo acuosa.
Cualquier lecitina conocida en la técnica es útiles para el adyuvante. El término "lecitina" se refiere a una mezcla de fosfátidos. Cuando se proporciona en forma de extracto bruto, una lecitina puede contener además triglicéridos. Las lecitinas pueden ser de origen vegetal o animal. Además, las lecitinas pueden obtenerse por vía sintética. En las patentes de los Estados Unidos números 5.690.942; 5.597.602 y 5.084.269 se describen ejemplos de lecitinas. En una realización preferida, el contenido de triglicéridos en una lecitina usada en el adyuvante de la invención es reducido cuando se compara con su fuente natural, es decir, la lecitina está exenta de glicéridos. En la técnica se conocen una serie de formas para eliminar los glicéridos de una lecitina, por ejemplo, como se describe en la patente de los Estados Unidos nº
5.597.602.
La concentración de una lecitina en una composición de vacuna formulada con el adyuvante de la invención varía de aproximadamente 0,25% a aproximadamente 12,5% v/v, más preferiblemente, de aproximadamente 0,5% a
aproximadamente 10% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 7,5%, más preferiblemente de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 5%, más preferiblemente de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 2,5% y, lo más preferible, de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 1,25% v/v.
La concentración de una lecitina en un adyuvante al 25% es de al menos aproximadamente 1% v/v, preferiblemente, al menos aproximadamente 2% v/v. En otro aspecto, la concentración de lecitina en un adyuvante al 25% varía de aproximadamente 1% a aproximadamente 50% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 2% a aproximadamente 40% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 2% a aproximadamente 30% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 2% a aproximadamente 20% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 2% a aproximadamente 10% v/v y, lo más preferible, de aproximadamente 2% a aproximadamente 5% v/v. La concentración de una lecitina en el adyuvante de la invención con una mayor o menor concentración se determina como se ha ejemplificado antes.
El adyuvante usado en la invención contiene un aceite, por ejemplo, un aceite descrito en las patentes de los Estados Unidos números 5.814.321 y 5.084.269. En un aspecto preferido, el adyuvante de la invención contiene un aceite mineral, por ejemplo, DRAKEOLTM. En otro aspecto, se usa una mezcla de aceites. El aceite puede aportarse para la preparación del adyuvante de la invención en forma de aceite puro o como una mezcla que contiene el aceite y otro componente, por ejemplo, la lecitina.
La concentración de un aceite en una composición de vacuna formulada con el adyuvante varía de aproximadamente 1% a aproximadamente 23% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 20% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 2,5% a aproximadamente 15%, más preferiblemente de aproximadamente 3,5% a aproximadamente 10%, más preferiblemente de aproximadamente 3,5% a aproximadamente 7,5%, más preferiblemente, de aproximadamente 4% a aproximadamente 6% v/v y, lo más preferible, aproximadamente 4,5%.
La concentración de un aceite en un adyuvante al 25% es de al menos aproximadamente 5% v/v, preferiblemente de al menos aproximadamente 8% v/v y mas preferiblemente de al menos aproximadamente 12% v/v. En otro aspecto, la concentración de aceite en un adyuvante al 25% varía de aproximadamente 4% a aproximadamente 92% v/v, más preferiblemente, de aproximadamente 6% a aproximadamente 80% v/v, más preferiblemente, de aproximadamente 10% a aproximadamente 60% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 14% a aproximadamente 40% v/v, más preferiblemente, de aproximadamente 14% a aproximadamente 30% v/v, más preferiblemente, de aproximadamente 16% a aproximadamente 24% y, lo más preferible, de aproximadamente 18%. La concentración de un aceite en el adyuvante de la invención con una mayor o menor concentración se determina como se ha ejemplificado antes.
En otra realización, en el adyuvante de la invención se usa un vehículo acuoso, por ejemplo, solución salina (por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato), tris-HCl, tampón citrato-fosfato, tampones Hepes, otros tampones farmacéuticamente aceptables conocidos en la técnica o agua. El pH del vehículo es preferiblemente fisiológicamente aceptable, por ejemplo, de 6 a 8, más preferible, de aproximadamente 7. El vehículo acuoso usado en el adyuvante de la invención constituye el volumen que no es necesario para cualquiera de los restantes componentes.
El adyuvante de la invención se proporciona preferiblemente en una concentración que varía de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 veces la concentración después de la formulación del adyuvante en una composición de vacuna, más preferiblemente, de aproximadamente 2 a aproximadamente 8, más preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 y, lo más preferible, de aproximadamente 4.
Usos de los adyuvantes
Los adyuvantes de la invención se pueden usar para mejorar la respuesta inmune a un antígeno de una formulación de vacuna. Los adyuvantes de la invención se pueden usar con antígenos derivados de cualquier bacteria o de cualquier virus, con la condición de que el antígeno no se destruya o quede desnaturalizado. Los antígenos usados en la invención son antígenos de Bordetella bronchiseptica y antígenos de cepas toxígenas de Pasteurella multocida.
En una realización preferida, el adyuvante se usa en una composición de vacuna que contiene antígenos de un cultivo de
B. bronchiseptica que se ha inactivado mediante la adición de formalina en la fase log, preferiblemente en la fase log tardía, seguida de la adición de glutaraldehído. Además de matar las células bacterianas, el objeto de esta novedosa y única inactivación es hacer no tóxicas la endotoxina y exotoxina B. bronchiseptica, mientras que los antígenos de las células de B. bronchiseptica siguen siendo eficaces para provocar la respuesta inmune deseada. Se añade formalina en el cultivo de B. bronchiseptica en una concentración de aproximadamente 0,2% v/v a aproximadamente 1% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 0,4% v/v a aproximadamente 0,8% v/v y, lo más preferible, de aproximadamente 0,6% v/v. Se añade glutaraldehído de aproximadamente 10 minutos a aproximadamente 40 minutos después de la adición de la formalina al cultivo, más preferiblemente, de aproximadamente 15 minutos a aproximadamente 30 minutos y, lo más preferible, aproximadamente 20 minutos. Se añade glutaraldehído en el cultivo de B. bronchiseptica en una concentración de aproximadamente 0,2% v/v a aproximadamente 1% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 0,4% v/v a aproximadamente 0,8% v/v y, lo más preferible, de aproximadamente 0,6% v/v. Antes de añadir el glutaraldehído al cultivo, éste tiene una concentración de aproximadamente 10% v/v a aproximadamente 50% v/v, más preferiblemente de aproximadamente 15% v/v a aproximadamente 35% v/v y, lo más preferible, de aproximadamente 25% v/v. Después de añadir formalina y glutaraldehído al cultivo de B. bronchiseptica, la mezcla resultante se incuba
agitando de aproximadamente 32ºC a aproximadamente 42ºC, más preferiblemente, de aproximadamente 35ºC a aproximadamente 39ºC y, lo más preferible a aproximadamente 37ºC. La mezcla se incuba de aproximadamente 12 horas a aproximadamente 60 horas, más preferiblemente de aproximadamente 24 horas a aproximadamente 48 horas. El resto de etapas de procesado en la preparación de la composición de antígeno de la invención a partir de un cultivo de
B. bronchiseptica se describen en el Ejemplo 7, más adelante, y en las patentes de los Estados Unidos números
5.019.388 y 4.888.169.
Composiciones de vacuna que comprenden adyuvantes de la invención y su administración
El adyuvante de la invención se puede usar en una formulación de vacuna para inmunizar un animal. En una realización, la formulación de vacuna contiene el adyuvante y un antígeno. Las relaciones óptimas de cada componente en la formulación de vacuna se pueden determinar por técnicas bien conocidas por los técnicos en la materia.
Se puede administrar una formulación de vacuna a un sujeto per se o en forma de una composición farmacéutica o terapéutica. Las composiciones farmacéuticas que comprenden el adyuvante de la invención y un antígeno se pueden fabricar por medio de procedimientos convencionales para mezclar, disolver, granular, arrastrar, desleir, emulsionar, encapsular, atrapar o liofilizar. Las composiciones farmacéuticas se pueden formular de forma convencional usando uno
o más vehículos, diluyentes, excipientes o materiales auxiliares fisiológicamente aceptables que facilitan el procesado de los antígenos de la invención en preparaciones que se pueden usar farmacéuticamente. La formulación correcta depende de la vía de administración elegida. A efectos de esta solicitud, "vehículo fisiológicamente aceptable" abarca los vehículos que son aceptables para el uso por seres humanos o animales sin efectos secundarios relativamente perjudiciales (respecto al trastorno que se esté tratando), así como los diluyentes, excipientes o materiales auxiliares que son igualmente aceptables.
Las formulaciones sistémicas incluyen las diseñadas para su administración por inyección, por ejemplo, para inyección subcutánea, intradérmica, intramuscular o intraperitoneal.
Para inyección, las preparaciones de vacuna se pueden formular en soluciones acuosas, con preferencia en tampones fisiológicamente compatibles como: solución de Hank, solución de Ringer, solución salina tamponada con fosfato, o cualquier otro tampón a base de solución salina fisiológica. La solución puede contener agentes de formulación como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. Como alternativa, las proteínas pueden estar en forma de polvo para su reconstitución con un vehículo adecuado antes de usarlas, por ejemplo, con agua estéril exenta de pirógenos.
Está dentro de los conocimientos de los técnicos en la materia determinar la cantidad eficaz de la formulación de vacuna que se administrará, en especial a la luz de la descripción detallada expuesta en la presente memoria.
Se puede estimar una dosis eficaz inicialmente a partir de ensayos in vitro. Por ejemplo, se puede formular una dosis en modelos animales para conseguir la inducción de una respuesta inmune usando técnicas que son bien conocidas en la técnica. Un técnico en la materia podría optimizar fácilmente la administración a todas las especies animales en base a los resultados descritos en la presente memoria. La cantidad dosificada y el intervalo se pueden ajustar caso por caso. Por ejemplo, cuando se usan como una vacuna, las formulaciones de vacuna de la invención se pueden administrar en aproximadamente 1 a 3 dosis durante períodos de 1 a 36 semanas. Con preferencia, se administran 1 ó 2 dosis, en intervalos de aproximadamente 3 semanas a aproximadamente 4 meses, y se pueden administrar vacunaciones de refuerzo de forma periódica posteriormente. Para animales individuales pueden ser apropiados otros protocolos. Una dosis adecuada es una cantidad de la formulación de vacuna que, cuando se administra en la forma antes descrita, puede provocar una respuesta inmune en un animal inmunizado, suficiente para proteger al animal de una infección durante al menos 4 a 12 meses. En general, la cantidad de antígeno presente en una dosis varía de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de receptor, con preferencia, de aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg y, preferiblemente de aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 Ig. El intervalo de dosis adecuado variará según la vía de inyección y el peso del paciente, aunque de forma típica variará desde aproximadamente 0,1 ml a aproximadamente 5 ml.
Habiendo descrito la invención, se presentan los siguientes ejemplos únicamente en sentido ilustrativo y no limitante.
Ejemplo 1. Uso de un adyuvante que contiene aceite y lecitina
El siguiente ejemplo describe el uso de un adyuvante que contiene lecitina exenta de glicéridos disuelta en un aceite ("adyuvante a base de aceite-lecitina"), normalmente aceite mineral (parafina líquida clara) en vacunas para uso veterinario. Véase la patente de los Estados Unidos nº 5.084.269, que describe un adyuvante a base de aceite-lecitina. Una preparación de vacuna que usa un adyuvante a base de aceite-lecitina es una emulsión "aceite en agua".
A no ser que se indique de otro modo, en la presente memoria, todas las concentraciones porcentuales se expresan en volumen por volumen. Los valores porcentuales, a no ser que se exprese de otro modo, de un adyuvante a base de aceite-lecitina, se refieren a la concentración de una mezcla de lecitina (10% de la mezcla) y un aceite vehículo (DRAKEOLTM) (90% de la mezcla) en un vehículo acuoso (fase continua). Por ejemplo, un adyuvante a base de aceitelecitina al 20% contiene lecitina al 2% v/v (Central Soya, Fort Wayne, Indiana), DRAKEOLTM 5 al 18% v/v (Penreco,
Karns City, Pennsylvania) y solución salina al 80% v/v (reduciéndose el contenido de la solución salina si se añaden otros componentes, por ejemplo, tensioactivos). A no ser que se indique de otro modo, los valores porcentuales de un adyuvante a base de aceite-lecitina en una composición de vacuna, es decir, después de diluir la solución de adyuvante con la solución de antígeno, se refieren a la concentración de una mezcla de lecitina (10% de la mezcla) y un aceite vehículo (DRAKEOLTM) (90% de la mezcla) en la preparación de vacuna que comprende el adyuvante y una solución que contiene un antígeno. Salvo que se indique de otro modo, en todos los casos en los que se añade un tensioactivo a una composición de adyuvante, los valores porcentuales para la concentración de tensioactivo se refieren a la concentración total de todos los tensioactivos añadidos en el adyuvante o la preparación de vacuna.
Cuando se usó un adyuvante a base de aceite-lecitina como adyuvante en las formulaciones de vacuna, se encontró que no se emulsionaba en preparaciones acuosas sin la adición de tensioactivos adicionales ya que la lecitina en el adyuvante a base de aceite-lecitina no es suficiente para la emulsión. Por tanto, las vacunas preparadas usando adyuvante a base de aceite-lecitina dispersado de forma inadecuada formaron un acúmulo o depósito de la mayor parte del aceite mineral en los tejidos en el sitio de inyección. Este aceite no lo puede metabolizar o eliminar el animal al que se ha inyectado y permanece como fuente de inflamación grave crónica y aparición de marcas.
Se determinó además que el añadir tensioactivos a la formulación de vacuna, que comprende un adyuvante a base de aceite-lecitina y un antígeno, con el fin de emulsionar la formulación no era una solución adecuada. Los problemas encontrados cuando se añadía aceite y tensioactivos a la formulación de vacuna antes de emulsionar fueron que el antígeno podía quedar dañado y, si no se conseguía una emulsión adecuada, la formulación debía descartarse, incluyendo el antígeno valioso.
Se ensayaron diferentes composiciones de adyuvante que comprendían un adyuvante a base de aceite-lecitina en combinación con tensioactivos para emulsionar las formulaciones de vacuna.
Ejemplo 2. Uso de un adyuvante que contiene un tensioactivo en una baja concentración
El siguiente ejemplo describe el uso de una emulsión que contiene aceite-lecitina al 40% y 2% de tensioactivos sintéticos, es decir, Tween 80 y Span 80 (Van Water & Rogers, Omaha, Nebraska) en solución salina tamponada con fosfato. Este adyuvante se preparó de forma aséptica y separada del antígeno. La emulsión se añadió a la preparación de antígeno sin emulsión adicional. Los tensioactivos sintéticos ayudaron al adyuvante a base de aceite-lecitina a dispersarse en forma de una emulsión relativamente estable y gotitas relativamente grandes. La emulsión de adyuvante se añadió a la preparación acuosa del antígeno en una relación de uno a ocho, disminuyendo el contenido de adyuvante a base de aceite-lecitina desde 40% a 5% y los tensioactivos de un 2% combinado a 0,25%.
El adyuvante se usó en varias vacunas. Se encontró que debido a que la emulsión tiene gotas gruesas y no es muy estable, las gotitas de aceite tienden a coalescer y a separarse en forma de un depósito permanente irritante de aceite en los tejidos inyectados. Otro problema observado con este adyuvante fue que se agregaba con un gel de Al. Una serie de vacunas contienen gel de Al para una serie de propósitos, por ejemplo, como adyuvante o para estabilizar un antígeno o unirse a una endotoxina. El adyuvante a base de aceite-lecitina tiene una carga negativa que hace que éste se una con el gel de Al cargado positivamente, formando agregados de gran tamaño. Estos agregados son antiestéticos, presentan dificultades para pasar a través de una aguja hipodérmica y son muy irritantes para los tejidos inyectados.
Ejemplo 3. Uso de un adyuvante que contiene un tensioactivo en una elevada concentración
Se emulsionó un adyuvante a base de aceite-lecitina (5% v/v) en la preparación de antígeno con ayuda de los tensioactivos Tween 80 y Span 80, como antes, aunque en una concentración de tensioactivo total de 8% en la composición de vacuna. La emulsión fue muy fina y estable. La emulsión tenía casi la claridad de una solución y no sufrió cremado en reposo. Al microscopio, con un aumento máximo (resolución de 0,2 micrómetros), la mayoría de la gotitas eran demasiado pequeñas para ser visibles. Por tanto, era una microemulsión. Se encontró que este adyuvante, cuando se usó en una formulación de vacuna estaba prácticamente exento de reactividad en el sitio de inyección y, cuando se añadió gel de Al, no se detectó agregación del aceite y el gel. Como resultado de su elevado contenido en tensioactivo, este adyuvante es fácil de emulsionar, tiene una apariencia atractiva, es estable, no reacciona con gel de Al y prácticamente está exento de efectos irritantes en el sitio de inyección. Sin embargo, a pesar de estas ventajas, esta emulsión tenía una potencia como adyuvante ligeramente menor cuando se compara con la versión de gotitas gruesas realizada con tensioactivos en una menor concentración.
Ejemplo 4. Uso de un adyuvante que contiene un tensioactivo en una concentración media
Se realizó un intento por encontrar una emulsión de adyuvante que fuera aceptablemente suave y con potencia completa como un adyuvante. Se usó un adyuvante a base de aceite-lecitina al 20% en estos experimentos y se encontró que una emulsión de adyuvante a base de aceite-lecitina al 20% es más fácil de preparar que una emulsión de adyuvante a base de aceite-lecitina al 40%. Su adición a vacunas en una relación de uno a cuatro, para preparar una concentración final de aceite del 5%, dejaba el 75% del volumen de la dosis para los antígenos. Los experimentos previos demostraron que se podía preparar una emulsión suave submicrométrica (la mayoría de las gotitas tenían un diámetro menor de un micrómetro, véase la Figura 1) con aceite al 20% y con un 16% de los tensioactivos Tween 80 y Span 80.
Se prepararon para los ensayos dos emulsiones. Una contenía adyuvante a base de aceite-lecitina al 20% y tensioactivos Tween 80 y Span 80 al 16%. La dilución uno a cuatro proporcionó una emulsión que comprendía adyuvante a base de aceite-lecitina al 5% y tensioactivos al 4% en la preparación de vacuna. La otra emulsión se preparó con un adyuvante a base de aceite-lecitina al 40% y 2% de los tensioactivos Tween 80 y Span 80. La dilución uno a ocho proporcionó una emulsión con adyuvante a base de aceite-lecitina al 5% y tensioactivos al 0,25%.
Se añadió gel de Al (REHYDRAGELTM, obtenido de Reheis, Berkeley Heights, New Jersey) en una concentración del 10% a muestras de cada emulsión. En la emulsión con tensioactivos al 0,25%, el aceite y el gel de Al se agregaron y se separaron formando una capa densa en la parte superior de la columna de líquido (cremado). Por el contrario, en la emulsión con 4% de tensioactivos, no se produjo agregación o cremado. Con un 4% de tensioactivos, el gel de Al sedimentó en el fondo del tubo, dejando las gotitas de aceite dispersadas en el líquido sobrenadante.
Ejemplo 5. Inflamación de los lugares de inyección usando un adyuvante que contiene un tensioactivo en una concentración media
Se ensayaron preparaciones de vacuna en cerdos para determinar si se producía inflamación del sitio de inyección cuando se usaba un adyuvante con una concentración media de tensioactivo. Las preparaciones de vacuna que contenían un adyuvante a base de aceite-lecitina al 5% y 0,25% ó 4% de tensioactivos no provocaron inflamación en cerdos en el sitio de inyección. Cuando se añadió gel de Al a la preparación de vacuna en una concentración de 10%, la preparación con un 0,25% de tensioactivos provocó una inflamación intensa en el sitio de inyección, mientras que la preparación con un 4% de tensioactivos casi no produjo inflamación.
Los experimentos se llevaron a cabo para determinar el intervalo de concentraciones de tensioactivos que era eficaz para prevenir la agregación con el gel de Al y la inflamación del sitio de inyección. Cuando se usó una concentración de tensioactivo del 1,5% en la vacuna, se observó una ligera agregación del aceite y el gel de Al. La agregación fue mucho más intensa a concentraciones menores de tensioactivo. A concentraciones de tensioactivo del 2% y 4%, no se observó agregación. La inflamación inducida en cerdos por las preparaciones de vacuna que contenían 0,5% o menos de tensioactivos fue mayor a las 2 y 4 semanas después de la vacunación que la inducida por las preparaciones que contenían 1% o más de tensioactivos. A las 6 semanas de la vacunación, fue evidente que el mínimo necesario para evitar inflamación crónica era un 1,5% de tensioactivos.
Ejemplo 6. Adyuvantes con propiedades útiles in vivo e in vitro
Se llevaron a cabo ensayos para encontrar un adyuvante que no reaccionara con gel de Al y que no originara reactividad en el animal después de la vacunación. Se determinó que un adyuvante a base de aceite-lecitina al 20% que contenía 8% de tensioactivos, y que originaba una preparación de vacuna con un 5% de adyuvante a base de aceite-lecitina y 2% de tensioactivos, era suficiente para evitar tanto la reactividad in vitro con el gel de Al como la irritación de los tejidos en el sitio de inyección. La evidencia de una relación entre la concentración de tensioactivo y la potencia del adyuvante fue mucho menos clara. Existían indicaciones ocasionales de que un 4% de tensioactivos en la vacuna era un porcentaje excesivo, por ejemplo, en la inducción de aglutinina a E. coli K99 y neutralización de antitoxina a la toxina de P. multocida Tipo D.
Así, se determinó que la concentración óptima de tensioactivos era del 8% en un adyuvante a base de aceite-lecitina al 20%, obteniéndose un 2% de tensioactivos en la composición de vacuna. Esto proporcionó una emulsificación razonablemente fácil y una buena estabilidad cuando se almacenó en frío. En vacunas con adyuvante a base de aceitelecitina al 5%, un 2% de tensioactivos era ideal para la potencia del adyuvante y para la ausencia de irritación en los tejidos inyectados.
Se determinó el tamaño de las gotitas en la emulsión submicrométrica de un adyuvante a base de aceite-lecitina al 20% con un 8% de tensioactivos. El tensioactivo al 8% estaba formado por Tween 80 al 5,6% en la fase acuosa y Span 80 al 2,4% en la fase oleosa. Aproximadamente el 94% de todas las gotitas tenía un diámetro inferior a 1 micrómetro, véase la Figura 1.
Se preparó una solución patrón de 1000 ml de adyuvante a base de aceite-lecitina al 20% con un 8% de tensioactivos a partir de 200 ml de solución de lecitina-aceite esterilizada por filtrado (lecitina al 10% en aceite mineral DRAKEOLTM), Tween 80 (56 ml) y Span 80 (24 ml) esterilizados en autoclave, y solución salina tamponada con fosfato (720 ml) (PBS de Dulbecco). La solución de lecitina-aceite y Span 80 se combinaron y mezclaron en un depósito estéril durante al menos 1 hora a temperatura ambiente hasta que se completó la emulsión. La solución salina y el Tween 80 se combinaron y mezclaron en un depósito estéril durante al menos 1 hora a temperatura ambiente. La mezcla de aceite se emulsionó en la mezcla acuosa usando un agente emulsionante. La emulsión se continuó por recirculación hasta que se añadió todo el adyuvante a la solución salina. La emulsión se hizo pasar entonces dos veces por un homogeneizador a temperatura ambiente. El adyuvante se almacenó a una temperatura de 2ºC a 8ºC.
Ejemplo 7. Vacuna para la rinitis atrófica usando un adyuvante que contiene un tensioactivo en una concentración media
Se usó el adyuvante descrito en el Ejemplo 4 con una concentración media de tensioactivos en una vacuna para la rinitis atrófica que contenía antígenos de Bordetella bronchiseptica y Pasteurella multocida toxígena. Se preparó una vacuna de Bordetella bronchiseptica-Bacterina-toxoide de Pasteurella multocida a partir de células de B. bronchiseptica y el toxoide de P. multocida.
Las células de B. bronchiseptica, cepa 2-9 NADL, se prepararon como se describe en las patentes de los Estados Unidos números 5.019.388 y 4.888.169, salvo porque al finalizar el ciclo de crecimiento, los cultivos se mezclaron continuamente y se añadió solución de formalina hasta una concentración final de 0,6%. En un período de 20 minutos después de la adición de formalina, se añadió una solución de glutaraldehído al 25% hasta una concentración final de 0,6%. El cultivo se agitó durante 24 a 48 horas a 37 ± 2ºC para completar la inactivación y destoxificación. (Véase la Tabla 1). A continuación, se enfriaron los líquidos del cultivo hasta 15ºC o menos para su procesado. Los cultivos inactivados no procesados inmediatamente se almacenaron a 2-8ºC durante un período de hasta 14 días. Después de la inactivación, se separaron las bacterias del líquido de cultivo por centrifugación. El sobrenadante se descartó y las células se volvieron a suspender en solución salina tamponada con fosfato a aproximadamente una décima parte del volumen original. La suspensión concentrada se almacenó a 2-8ºC. El tratamiento de B. bronchiseptica con dos aldehídos inactiva tanto la endotoxina como la exotoxina, evitando otros tratamientos de seguridad.
El toxoide de P. multocida se preparó de dos formas diferentes como se describe en las patentes de los Estados Unidos números 5.536.496 y 5.695.769. En una de ellas, la toxina se convierte en toxoide en las células bacterianas mediante la adición de formaldehído al cultivo; el toxoide permanece en el interior de las células. En la forma alternativa, las células vivas se lisan mecánicamente y se extrae la toxina. La toxina se convierte en toxoide por exposición a un pH elevado, como se describe en la patente de los Estados Unidos 5.536.496. Ambas formas de toxoide se tratan con gel de Al para controlar la endotoxina libre por un procedimiento patentado, como se describe en la patente de los Estados Unidos
5.616.328 (véase la Tabla 1). La sinergia entre las dos formas de toxoide de pasteurella da como resultado respuestas de antitoxina que superan con creces la suma de las respuestas de cada una cuando se usan por separado como se describe en la patente de los Estados Unidos 5.695.769.
Tabla 1.Tratamiento de células durante la preparación de vacuna de Bordetella bronchiseptica-Bacterina-toxoide de Pasteurella multocida
Antígeno
Inactivador Concentración Intervalo de T diana Tiempo (mín/máx)
B.bronchiseptica
Formalina Glutaraldehído 0,6% 0,6% 37 ± 2ºC 24 a 48 horas
Toxoide ligado a las células de P. multocida
Formalina 0,4% 37 ± 2ºC 5 días
Toxoide sin células de P. multocida
NaOH 5N pH 10 ± 0,2 15 ± 2ºC 1 a 6 horas
El adyuvante descrito en el Ejemplo 4 se añadió dando concentraciones de 5% de adyuvante a base de aceite-lecitina y 2% de tensioactivos en la formulación de vacuna.
Un ensayo clínico para determinar la dosis inmunizadora mínima de la vacuna para la rinitis atrófica demostró las propiedades como adyuvante del adyuvante a base de aceite-lecitina con una concentración media de tensioactivos. Se vacunaron cerdas preñadas con dos dosis de 2 ml en un intervalo de 4 semanas. Estas parieron aproximadamente 2 semanas después de la segunda dosis. Al mes de edad, sus lechones se sometieron a una severa infección provocada, consistente en cultivos virulentos de B. Bronchiseptica y P. Multocida administrados intranasalmente de forma secuencial. Los cerdos nacidos de 7 cerdas vacunadas solo con un placebo desarrollaron rinitis atróficas graves. Los lechones de las 7 cerdas a las que se les administró vacuna que contenía una dosis completa de los antígenos estuvieron fuertemente protegidos por el anticuerpo materno todavía circulante. Las cerdas a las que se administraron vacunas que contenían 1/2 ó 1/8 de dosis de antígenos no proporcionaron a sus lechones una protección satisfactoria.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado mediante adición de formalina seguido de adición de glutaraldehído.
  2. 2.
    Una composición de vacuna que comprende la composición de antígeno de la reivindicación 1 y un adyuvante.
  3. 3.
    La composición de vacuna de la reivindicación 2, en la que dicho adyuvante comprende de aproximadamente 0,25% a aproximadamente 12,5% en volumen/volumen (v/v) de una lecitina, de aproximadamente 1% a aproximadamente 23% v/v de un aceite y de aproximadamente 1,5% a 3,5% v/v de al menos un tensioactivo anfifílico.
  4. 4.
    Un procedimiento para inactivar un cultivo de Bordetella bronchiseptica que comprende añadir formalina a dicho cultivo, seguido de la adición de glutaraldehído a dicho cultivo.
  5. 5.
    Una composición de Bordetella bronchiseptica que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica, formalina y glutaraldehído.
  6. 6.
    Una vacuna para la protección de un mamífero frente a infección Bordetella bronchiseptica que comprende aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica de un cultivo inactivado de acuerdo con el procedimiento de la reivindicación 4 efectivo para proteger dicho mamífero frente a una infección por Bordetella bronchiseptica y un vehículo fisiológicamente aceptable.
  7. 7.
    La vacuna de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de Bordetella bronchiseptica.
  8. 8.
    La vacuna de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica.
  9. 9.
    La vacuna de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende además aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de antígenos de Pasteurella multocida toxigénica efectivos para proteger al mamífero frente a una infección de Pasteurella multocida toxigénica.
  10. 10.
    La vacuna de acuerdo con la reivindicación 9, que comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de antígenos de Pasteurella multocida toxigénica.
  11. 11.
    La vacuna de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de antígenos de Pasteurella multocida toxigénica.
  12. 12.
    La vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 para la protección de un cerdo frente a una infección por Bordetella bronchiseptica y/o una infección por Pasteuralla multocida toxigénica.
  13. 13.
    Uso de una vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 en la preparación de una vacuna para la protección de un cerdo frente a una infección por Bordetella bronchispetica y/o una infección por Pasteuralla bronchiseptica.
  14. 14.
    Uso de una vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 en la preparación de una vacuna para la protección de un lechón frente a rinitis atrófica mediante:
    a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la reivindicación 9, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti-Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y
    b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón.
  15. 15. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 en la protección de un lechón frente a rinitis atrófica mediante:
    a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la reivindicación 9, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti-Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y
    b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón.
    Figura 1
ES05023118T 1999-01-29 1999-12-23 Vacunas contra la bordetella bronchiséptica. Expired - Lifetime ES2374628T3 (es)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11770599P 1999-01-29 1999-01-29
US117705P 1999-01-29
US12176099P 1999-02-26 1999-02-26
US121760P 1999-02-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2374628T3 true ES2374628T3 (es) 2012-02-20

Family

ID=26815550

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES99310514T Expired - Lifetime ES2251164T3 (es) 1999-01-29 1999-12-23 Adyuvantes para uso en vacunas.
ES05023118T Expired - Lifetime ES2374628T3 (es) 1999-01-29 1999-12-23 Vacunas contra la bordetella bronchiséptica.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES99310514T Expired - Lifetime ES2251164T3 (es) 1999-01-29 1999-12-23 Adyuvantes para uso en vacunas.

Country Status (17)

Country Link
US (6) US6572861B1 (es)
EP (2) EP1023904B1 (es)
JP (3) JP2000219636A (es)
CN (2) CN1126568C (es)
AR (2) AR035474A1 (es)
AT (2) ATE311900T1 (es)
AU (2) AU769539B2 (es)
BR (2) BRPI0000126B8 (es)
CA (2) CA2296244C (es)
CY (2) CY1105684T1 (es)
DE (1) DE69928763T2 (es)
DK (2) DK1023904T3 (es)
ES (2) ES2251164T3 (es)
HK (2) HK1030166A1 (es)
NZ (2) NZ502341A (es)
PT (1) PT1616573E (es)
TW (1) TW585777B (es)

Families Citing this family (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU769539B2 (en) * 1999-01-29 2004-01-29 Zoetis Services Llc Adjuvants for use in vaccines
US6676958B2 (en) 2001-06-19 2004-01-13 Advanced Bioadjuvants, Llc Adjuvant composition for mucosal and injection delivered vaccines
US7279163B1 (en) * 2002-03-21 2007-10-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Water-in-oil emulsion vaccines
JP2006501237A (ja) * 2002-08-26 2006-01-12 ファイザー・プロダクツ・インク 家畜の呼吸系と生殖系の感染症に対するワクチン
KR20050103215A (ko) * 2003-01-29 2005-10-27 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 보르데텔라 브론키셉티카에 대한 개 백신
NZ542576A (en) 2003-04-04 2008-11-28 Pfizer Prod Inc Submicron oil-in-water emulsions composed of a non-metabolizable oil, at least one surfactant, and an aqueous component, where the oil is dispersed in the aqueous component with al droplet size in the submicron range
US8637047B2 (en) * 2003-10-30 2014-01-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Erysipelothrix rhusiopathiae-haemophilus parasuis vaccine and methods of using the same
CN1323718C (zh) * 2004-03-15 2007-07-04 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法
FR2878746B1 (fr) * 2004-12-02 2007-02-23 Vetoquinol Sa Sa Nouvelle composition pharmaceutique utilisable dans le domaine des vaccins
CN1320924C (zh) * 2005-01-07 2007-06-13 邢为藩 一种自乳化疫苗佐剂及其制备方法
WO2008019162A2 (en) 2006-01-18 2008-02-14 University Of Chicago Compositions and methods related to staphylococcal bacterium proteins
EP2068918B1 (en) 2006-09-26 2012-05-02 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
US20090181078A1 (en) * 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
NZ576563A (en) * 2006-11-03 2012-09-28 Alphavax Inc Alphavirus and alphavirus replicon particle formulations and methods
US20090017064A1 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Wyeth Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus
CN106310293A (zh) * 2007-09-27 2017-01-11 免疫疫苗技术有限公司 在包括连续疏水相的载体中的脂质体在体内输送多核苷酸中的应用
US20100209452A1 (en) * 2007-10-03 2010-08-19 Immunovaccine Technologies, Inc Compositions comprising an antigen, an amphipathic compound and a hydrophobic carrier, and uses thereof
WO2009059328A2 (en) * 2007-11-02 2009-05-07 The Johns Hopkins University Multi- component l2 vaccine for prevention of human papillomavirus infection
CN101428145B (zh) * 2007-11-05 2013-01-02 北京生泰尔生物科技有限公司 新型疫苗佐剂
ES2524699T3 (es) * 2008-06-05 2014-12-11 Immunovaccine Technologies Inc. Composiciones que comprenden liposomas, un antígeno, un polinucleótido y un vehículo que comprende una fase continua de una sustancia hidrófoba
CN104001170B (zh) 2008-06-27 2016-08-24 硕腾有限责任公司 新颖的佐剂组合物
BRPI0920041A2 (pt) 2008-10-06 2017-06-27 Univ Chicago composições e processos relacionados às proteínas eap, emp e/ou adsa bacterianas
PL3281947T3 (pl) 2009-04-03 2020-07-27 The University Of Chicago Kompozycje i sposoby związane z wariantami białka A (SpA)
EP2437753B1 (en) 2009-06-05 2016-08-31 Infectious Disease Research Institute Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants and vaccine compositions containing them
US9241987B2 (en) 2009-11-20 2016-01-26 The University Of Chicago Methods and compositions related to immunogenic fibrils
US9849174B2 (en) 2009-11-20 2017-12-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and compositions related to immunogenic fibrils
US10080799B2 (en) 2010-02-12 2018-09-25 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Methods and compositions related to glycoprotein-immunoglobulin fusions
BR112012022939A2 (pt) 2010-03-11 2016-08-02 Immune Design Corp composição farmacêutica para uso em um método de imunização de um indivíduo em necessidade do mesmo contra um vírus influenza
JP2013523818A (ja) 2010-04-05 2013-06-17 ザ・ユニバーシティー・オブ・シカゴ 免疫反応のエンハンサーとしてのプロテインＡ（ＳｐＡ）抗体に関連する組成物および方法
US9050319B2 (en) 2010-04-30 2015-06-09 Telormedix, Sa Phospholipid drug analogs
US9173935B2 (en) 2010-04-30 2015-11-03 Telormedix Sa Phospholipid drug analogs
EP2563401A1 (en) 2010-04-30 2013-03-06 Telormedix SA Methods for inducing an immune response
JP6002128B2 (ja) 2010-07-02 2016-10-05 ザ・ユニバーシティ・オブ・シカゴＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｃａｇｏ プロテインＡ（ＳｐＡ）変種に関連する組成物および方法
WO2012034067A1 (en) 2010-09-09 2012-03-15 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens
WO2012042857A1 (ja) * 2010-09-28 2012-04-05 共立製薬株式会社 粘膜アジュバント組成物
US9044420B2 (en) 2011-04-08 2015-06-02 Immune Design Corp. Immunogenic compositions and methods of using the compositions for inducing humoral and cellular immune responses
WO2012149307A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Immune Design Corp. Synthetic long peptide (slp)-based vaccines
US8945588B2 (en) 2011-05-06 2015-02-03 The University Of Chicago Methods and compositions involving protective staphylococcal antigens, such as EBH polypeptides
AU2012321022B2 (en) 2011-10-06 2017-03-23 Immunovaccine Technologies Inc. Liposome compositions comprising an adjuvant that activates or increases the activity of TLR2 and uses thereof
GB201205237D0 (en) 2012-03-26 2012-05-09 Univ Edinburgh Adjuvant
DK2844275T3 (da) 2012-04-26 2020-07-13 Univ Chicago Staphylokok-koagulase-antigener og fremgangsmåder til anvendelse af disse
EP3388835B1 (en) 2012-05-16 2020-04-01 Immune Design Corp. Vaccines for hsv-2
HUE059179T2 (hu) 2012-09-10 2022-10-28 Galenbio Inc Vízimadárban Mycoplasma-fertõzés megelõzésére szolgáló oltóanyag
AU2013327241A1 (en) 2012-10-01 2015-02-26 Urogen Pharma Ltd. Phospholipid drug analogs
US8957047B2 (en) 2013-04-18 2015-02-17 Immune Design Corp. GLA monotherapy for use in cancer treatment
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
PL3166634T3 (pl) * 2014-07-11 2021-12-27 Zoetis Services Llc Nowe kompozycje szczepionek przeciwko wirusowi biegunki epidemicznej świń
CN113769079A (zh) 2015-02-27 2021-12-10 衣阿华州立大学研究基金会股份有限公司 猪流行性腹泻病毒株和由其产生的免疫原性组合物
CA3010977A1 (en) 2016-01-11 2017-07-20 Zoetis Services Llc Novel cross protective vaccine compositions for porcine epidemic diarrhea virus
US11013798B2 (en) 2016-03-21 2021-05-25 South Dakota Board Of Regents Orf virus-based platform for vaccine delivery
US11246924B2 (en) 2016-04-01 2022-02-15 Duke University Alpha-helical peptide nanofibers as a self-adjuvanting vaccine platform
US10662226B2 (en) 2016-10-28 2020-05-26 The Regents of the University of Caiifomia Synthetic beta-amyloid peptides capable of forming stable antigenic oligomers
GB201703529D0 (en) 2017-03-06 2017-04-19 Cambridge Entpr Ltd Vaccine composition
CN107027749B (zh) * 2017-05-24 2021-04-09 浙江工业大学 一种复合乳化剂及其在复配毒死蜱农药中的应用
ES2705378A1 (es) * 2017-09-22 2019-03-22 Decco Worldwide Post Harvest Holdings B V Metodo para el tratamiento y control de fisiopatias de postcosecha de frutas mediante recubrimientos comestibles.
US11413336B2 (en) 2018-03-23 2022-08-16 Board Of Regents, The University Of Texas System Coccidioides antigens and methods of their use
WO2020044267A1 (en) 2018-08-29 2020-03-05 Centre Hospitalier Universitaire Vaudois Ebola vaccine compositions and methods of using same
US11208167B2 (en) 2018-11-15 2021-12-28 Kuat Innovations Llc Bicycle rack with actuated arm
CN114315985A (zh) 2020-09-29 2022-04-12 硕腾服务有限责任公司 减毒猪流行性腹泻病毒
CN115216451A (zh) 2021-04-16 2022-10-21 硕腾服务有限责任公司 伪狂犬病病毒疫苗
TW202327646A (zh) 2021-10-15 2023-07-16 美商輝瑞大藥廠 Rna分子
CN113907044A (zh) * 2021-11-09 2022-01-11 福建省连江县刘氏兔业养殖场 一种抗病猪品系的培育方法及其应用
WO2023111907A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Pfizer Inc. Polynucleotide compositions and uses thereof
WO2023144779A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Pfizer Inc. Coronavirus antigen variants

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4070454A (en) * 1973-05-04 1978-01-24 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Vaccines, the process for preparing the same and the applications thereof
AT350181B (de) 1977-05-04 1979-05-10 Schuller Walter Dr Verfahren zur herstellung einer mischvaccine
US4137115A (en) * 1977-11-07 1979-01-30 Patrick Lambert Joining structure
US4237115A (en) * 1977-11-23 1980-12-02 Bactex, Inc. Method of immunization against enterotoxogenic infection by Escherichia coli
US4261925A (en) 1978-04-05 1981-04-14 The Dow Chemical Company Surfactants
US4504275A (en) 1983-03-24 1985-03-12 Imperial Chemical Industries Plc Emulsifying agents
US4606918A (en) 1983-08-22 1986-08-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants
US4933179A (en) 1983-08-22 1990-06-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Feline leukemia virus antigen vaccines
US5338748A (en) 1985-01-18 1994-08-16 Cetylite Industries, Inc. Sterilant composition
US5424323A (en) * 1985-01-18 1995-06-13 Cetylite Industries, Inc. Sterilant composition
DE3517805A1 (de) 1985-05-17 1986-11-20 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Impfstoff zur immunisierung von schweinen gegen rhinitis atrophicans (schnueffelkrankheit)
US4803070A (en) * 1986-04-15 1989-02-07 Ribi Immunochem Research Inc. Immunological emulsion adjuvants for polysaccharide vaccines
US4789544A (en) * 1986-05-23 1988-12-06 Midcon Labs. Inc. Co-vaccination using non-O-carbohydrate side-chain gram-negative bacteria preparation
US4888169A (en) 1986-10-14 1989-12-19 Norden Laboratories, Inc. Bordetella Bronchiseptica vaccine
US5019388A (en) 1986-10-14 1991-05-28 Norden Laboratories Inc. Bordetella bronchiseptica vaccine
US5084269A (en) * 1986-11-06 1992-01-28 Kullenberg Fred W Adjuvant for dose treatment with antigens
US5209929A (en) * 1987-03-19 1993-05-11 Washington State University Research Foundation Immunization against Babesiosis using purified merozoite surface antigens of Basesia bigemina
US5376369A (en) 1987-11-03 1994-12-27 Syntex (U.S.A.) Inc. Vaccine adjuvant
US5069901A (en) * 1988-02-03 1991-12-03 Jones Elaine V Preparation of a recombinant subunit vaccine against pseudorabies infection
GB8822857D0 (en) * 1988-09-29 1988-11-02 Patralan Ltd Pharmaceutical formulations
FR2649012B1 (fr) * 1989-07-03 1991-10-25 Seppic Sa Emulsions multiphasiques injectables
US5223253A (en) * 1989-09-28 1993-06-29 American Home Products Corporation Bovine vaccine compositions and method for preventing trichomonas infections using same
US5578308A (en) 1990-02-12 1996-11-26 Capiau; Carine Glutaraldehyde and formalin detoxified bordetella toxin vaccine
EP0515415B1 (en) * 1990-02-12 1995-10-18 SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. Novel vaccine and method therefor
WO1991018627A1 (en) * 1990-05-29 1991-12-12 Smithkline Beecham Corporation Swine pneumonia vaccine and method for the preparation thereof
DE69131525T2 (de) * 1990-06-13 1999-11-25 Pfizer Pasteurella multocida toxoid enthaltende impfstoffe
US5695769A (en) 1990-06-13 1997-12-09 Pfizer Inc. Pasteurella multocida toxoid vaccines
US5242686A (en) * 1990-11-07 1993-09-07 American Home Products Corporation Feline vaccine compositions and method for preventing chlamydia infections or diseases using the same
EP0669971B1 (en) 1991-11-15 2003-03-19 Pfizer Inc. Method of producing gram-negative bacterial vaccines
US5338543A (en) 1992-02-27 1994-08-16 Ambico, Inc. Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine
US5422277A (en) * 1992-03-27 1995-06-06 Ortho Diagnostic Systems Inc. Cell fixative composition and method of staining cells without destroying the cell surface
DE4222153C2 (de) 1992-07-06 1998-12-03 Peter Siegfried Verfahren zur Entölung von Rohlecithin
DK0626452T3 (da) * 1993-05-17 2000-02-14 Akzo Nobel Nv Vaccine mod infektion af Streptococcus suis
WO1995011700A1 (en) * 1993-10-29 1995-05-04 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
CA2183684C (en) * 1994-02-18 2008-07-15 Richard D. Hansen Inoculation of animals with dried, pelleted biological materials
GB2289279B (en) * 1994-05-13 1998-09-16 Iberica Cyanamid Diagnostic kits and vaccines containing recombinant PRRSV proteins
DK0773030T3 (da) * 1994-06-10 2003-12-22 Chemo Sero Therapeut Res Inst Fremgangsmåde til oprensning af nekrotoksin produceret af Bordetella
US5538733A (en) * 1994-07-07 1996-07-23 Willmar Poultry Company, Inc. Method of priming an immune response in a one-day old animal
US5625038A (en) * 1994-07-27 1997-04-29 Henderson; Louise M. Monoclonal antibodies specific for Erysipelothrix rhusiopathiae
US5603951A (en) 1994-11-09 1997-02-18 Hanmi Pharm. Ind. Co., Ltd. Cyclosporin-containing soft capsule compositions
GB9620795D0 (en) 1996-10-05 1996-11-20 Smithkline Beecham Plc Vaccines
US5877298A (en) * 1995-05-04 1999-03-02 Connaught Lab Acellular pertussis vaccines and methods of preparing thereof
US5718904A (en) * 1995-06-02 1998-02-17 American Home Products Corporation Adjuvants for viral vaccines
US5690942A (en) * 1995-06-02 1997-11-25 American Home Products Corporation Adjuvants for viral vaccines
US5814321A (en) 1995-11-30 1998-09-29 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Oil adjuvant vaccine and method for preparing same
PT835930E (pt) 1996-10-09 2001-06-29 Akzo Nobel Nv Estirpes europeias de vacina do virus do sindroma reprodutivo e respiratorio porcino (prrsv)
ZA982870B (en) * 1997-04-10 1998-10-09 Akzo Nobel Nv Live attenuated bacteria of the species actinobacillus pleuropneumoniae
US6517843B1 (en) * 1999-08-31 2003-02-11 Merial Reduction of porcine circovirus-2 viral load with inactivated PCV-2
AU769539B2 (en) * 1999-01-29 2004-01-29 Zoetis Services Llc Adjuvants for use in vaccines
US6585981B1 (en) 2000-07-27 2003-07-01 Regents Of The University Of Minnesota Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae

Also Published As

Publication number Publication date
DE69928763T2 (de) 2006-06-29
CN1449825B (zh) 2012-08-22
EP1616573B1 (en) 2011-11-16
EP1023904A3 (en) 2002-08-21
BRPI0017566B1 (pt) 2015-11-10
HK1059739A1 (en) 2004-07-16
CY1105684T1 (el) 2010-12-22
JP2005041883A (ja) 2005-02-17
NZ513202A (en) 2003-02-28
JP5167469B2 (ja) 2013-03-21
EP1616573A3 (en) 2007-05-09
CA2455134A1 (en) 2000-07-29
DE69928763D1 (de) 2006-01-12
AU769539B2 (en) 2004-01-29
EP1023904A2 (en) 2000-08-02
JP2000219636A (ja) 2000-08-08
DK1616573T3 (da) 2012-01-30
US20030175299A1 (en) 2003-09-18
NZ502341A (en) 2001-08-31
EP1616573A2 (en) 2006-01-18
CY1112521T1 (el) 2015-12-09
BRPI0000126B1 (pt) 2015-07-14
CA2296244A1 (en) 2000-07-29
CN1126568C (zh) 2003-11-05
CA2296244C (en) 2004-04-27
JP4785365B2 (ja) 2011-10-05
US20030175308A1 (en) 2003-09-18
CN1270838A (zh) 2000-10-25
PT1616573E (pt) 2012-01-11
BRPI0000126B8 (pt) 2021-05-25
US20030175298A1 (en) 2003-09-18
DK1023904T3 (da) 2005-12-27
ATE311900T1 (de) 2005-12-15
CA2455134C (en) 2010-05-11
US6733754B2 (en) 2004-05-11
AU2004201021A1 (en) 2004-04-08
AU6537299A (en) 2000-08-03
CN1449825A (zh) 2003-10-22
US7393535B2 (en) 2008-07-01
US20030175309A1 (en) 2003-09-18
US6814971B2 (en) 2004-11-09
BR0000126A (pt) 2001-05-02
US6572861B1 (en) 2003-06-03
TW585777B (en) 2004-05-01
JP2004002479A (ja) 2004-01-08
US20050058667A1 (en) 2005-03-17
ES2251164T3 (es) 2006-04-16
EP1023904B1 (en) 2005-12-07
ATE533504T1 (de) 2011-12-15
AR035474A1 (es) 2004-06-02
AR055422A2 (es) 2007-08-22
HK1030166A1 (en) 2001-04-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2374628T3 (es) Vacunas contra la bordetella bronchiséptica.
ES2398235T3 (es) Emulsiones de aceite en agua microfluidizadas y composiciones de vacunas
JP5393978B2 (ja) マイクロ流動化された水中油型乳剤及びワクチン組成物
KR101292874B1 (ko) 신규 백신 제형물
US6274149B1 (en) Therapeutic composition comprising an antigen or an in vivo generator of a compound comprising an amino acid sequence
US20030119774A1 (en) Compositions and methods for stimulating an immune response
AU769375B2 (en) Vaccine formulation
JP4842430B2 (ja) 新規ワクチン組成物及び界面活性剤の免疫用アジュバントとしての使用
AU2003204726B2 (en) Adjuvants for Use in Vaccines
MXPA00001152A (es) Adyuvantes para usar en vacunas
MXPA06011569A (es) Emulsiones de aceite en agua microfluidizadas y composiciones de las vacunas