TW202327646A - Rna分子 - Google Patents

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TW202327646A
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艾瑞克 馬修 班尼特
佛南多 馬丁 狄亞茲
菲利浦 勞夫 多米澤爾
凱薩琳 猶他 詹森
莫雷諾 拉奎爾 穆諾茲
奎賈諾 艾莉西亞 索羅爾薩諾
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美商輝瑞大藥廠
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Abstract

本發明係關於編碼水痘帶狀疱疹病毒(VZV)之RNA分子。本發明進一步係關於包含調配於脂質奈米顆粒中之該等RNA分子(RNA-LNP)的組合物。本發明進一步係關於該等RNA分子、RNA-LNP及組合物用於治療或預防帶狀疱疹(herpes zoster或shingles)之用途。

Description

RNA分子
水痘帶狀疱疹病毒(VZV) (亦稱為人類疱疹病毒3 (HHV-3))係在兒童中引起水痘或雞痘且以後復發為帶狀疱疹(herpes zoster)或帶狀疱疹(shingles)的人類病原體。在各個國家中已研發及許可兩種用以預防帶狀疱疹之疫苗。第一種疫苗為ZOSTAVAX® (Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA),一種減毒活VZV疫苗。US FDA在2006年審批通過ZOSTAVAX®,然而截至2020年11月,ZOSTAVAX®不再在美國出售。第二種疫苗為SHINGRIX® (GlaxoSmithKline, Rockville, MD, USA),一種AS01 B作為佐劑之VZV gE次單元蛋白疫苗。US FDA在2017年審批通過SHINGRIX®。
在美國,每年大約出現一百萬個帶狀疱疹病例,且感染過雞痘的所有人中大約有30%以後會出現帶狀疱疹。全球帶狀疱疹之發病率持續增加。因此,鑒於帶狀疱疹之高盛行率,仍需要用於預防帶狀疱疹之改良疫苗。
本發明提供用於治療個體之免疫原性組合物及方法,該等方法包含投與RNA分子(例如免疫原性RNA聚核苷酸),該等RNA分子編碼包含水痘帶狀疱疹病毒(VZV)蛋白質、其免疫原性變異體、或VZV蛋白質之免疫原性片段或其免疫原性變異體(例如抗原肽或蛋白質)之胺基酸序列(例如免疫原性抗原)。因此,免疫原性抗原包含VZV蛋白質之用於在個體中誘導針對VZV之免疫反應的抗原決定基。投與編碼免疫原性抗原之RNA聚核苷酸以(在藉由適當目標細胞表現聚核苷酸之後)提供用於誘導(例如刺激、致敏及/或擴增)免疫反應(例如抗體及/或免疫效應細胞)之抗原。在一個態樣中,待根據本發明誘導之免疫反應為B細胞介導之免疫反應,例如抗體介導之免疫反應。另外或或者,待根據本發明誘導之免疫反應可為T細胞介導之免疫反應。在一個態樣中,免疫反應為抗VZV免疫反應。
本文所描述之免疫原性組合物包含RNA分子,該等RNA分子包含可在接受者細胞中轉譯成蛋白質之RNA (作為活性成分)。除編碼抗原序列之野生型或密碼子最佳化序列以外,RNA分子可含有一或多個針對RNA關於穩定性及轉譯效率之最大效力而最佳化的結構元件(5'端帽、5' UTR、3' UTR、聚A尾)。在一個態樣中,RNA分子含有所有此等元件。在一些態樣中,RNA分子之各尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換(例如經修飾之RNA;modRNA)。本文所描述之RNA分子可與脂質及/或蛋白質一起調配、囊封於脂質及/或蛋白質中或與脂質及/或蛋白質複合以產生用於投與之RNA-顆粒(例如脂質奈米顆粒(LNP))。在一個態樣中,本文所描述之RNA分子與脂質一起調配、囊封於脂質中或與脂質複合以產生用於投與之RNA-脂質奈米顆粒(例如RNA-LNP)。在一個態樣中,本文所描述之RNA分子與蛋白質一起調配、囊封於蛋白質中或與蛋白質複合以用於投與。在一個態樣中,本文所描述之RNA分子與脂質及蛋白質一起調配、囊封於脂質及蛋白質中、與脂質及蛋白質複合以用於投與。若使用不同RNA分子之組合,則RNA分子可一同與脂質及/或蛋白質一起調配或分開與脂質及/或蛋白質一起調配以產生用於投與之RNA-顆粒。
本發明提供RNA分子及RNA-LNP,其包括至少一個編碼VZV抗原之開放閱讀框架(ORF)。在一些態樣中,VZV抗原為VZV多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV醣蛋白。在一些態樣中,VZV醣蛋白為VZV gK、gN、gC、gB、gH、gM、gL、gI或gE。在一些態樣中,VZV醣蛋白為VZV gE。在一些態樣中,VZV多肽為全長VZV多肽、經截短VZV多肽、VZV多肽之片段或VZV多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽包含至少一個突變。
本發明提供RNA分子及RNA-LNP,其包括至少一個編碼表1之VZV多肽之ORF。在一些態樣中,VZV多肽與表1之胺基酸序列中之任一者,例如與SEQ ID NO: 1至11中之任一者具有、具有至少、或具有至多90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%、或更高一致性。在一些態樣中,VZV多肽包含選自SEQ ID NO: 1至11之胺基酸序列。在一些態樣中,VZV多肽由表1之胺基酸序列中之任一者,例如由SEQ ID NO: 1至11中之任一者組成。
本發明提供RNA分子及RNA-LNP,其包含至少一個由表2之至少一個DNA核酸轉錄的ORF。在一些態樣中,RNA分子包含由核酸序列轉錄之ORF,該核酸序列與表2之核酸序列中之任一者,例如與SEQ ID NO: 12至145中之任一者具有、具有至少、或具有至多90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%、或更高一致性。在一些態樣中,RNA分子由選自SEQ ID NO: 12至145之核酸序列轉錄。在一些態樣中,RNA分子包含由核酸序列轉錄之ORF,該核酸序列由表2之核酸序列中之任一者,例如由SEQ ID NO: 12至145中之任一者組成。
本發明進一步提供RNA分子及RNA-LNP,其包含至少一個包含表3之RNA核酸序列的ORF。在一些態樣中,RNA分子包含與表3之核酸序列中之任一者,例如與SEQ ID NO: 146至279中之任一者具有、具有至少、或具有至多90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%、或更高一致性的核酸序列。在一些態樣中,RNA分子包含選自SEQ ID NO: 146至279之核酸序列。在一些態樣中,RNA分子包含由表3之核酸序列中之任一者,例如由SEQ ID NO: 146至279中之任一者組成的核酸序列。在一些態樣中,SEQ ID NO: 146至279中之任一者之各尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換(例如經修飾之RNA;modRNA)。
本發明進一步提供RNA分子及RNA-LNP,其包括5'非轉譯區(5'-UTR)及/或3'非轉譯區(3'-UTR)。在一些態樣中,RNA分子包括5'非轉譯區(5'-UTR)。在一些態樣中,5' UTR包含選自SEQ ID NO: 281 (SEQ ID NO: 280 - DNA;SEQ ID NO: 282 - 具有Ψ之RNA)及312至313中之任一者的序列。在一些態樣中,5' UTR包含與SEQ ID NO: 281及312至313中之任一者具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%、或更高一致性的序列。在一些態樣中,5' UTR包含選自SEQ ID NO: 281及312至313中之任一者的序列。在一些態樣中,5' UTR包含由SEQ ID NO: 281及312至313中之任一者組成的序列。
在一些態樣中,RNA分子及RNA-LNP包括3'非轉譯區(3'-UTR)。在一些態樣中,3' UTR包含選自SEQ ID NO: 284 (SEQ ID NO: 283 - DNA;SEQ ID NO: 285 - 具有Ψ之RNA)、314及317 (SEQ ID NO: 318 - 具有Ψ之RNA)中之任一者的序列。在一些態樣中,3' UTR包含與SEQ ID NO: 284、314及317中之任一者具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%、或更高一致性的序列。在一些態樣中,3' UTR包含選自SEQ ID NO: 284、314及317中之任一者的序列。在一些態樣中,3' UTR包含由SEQ ID NO: 284、314及317中之任一者組成的序列。
本發明進一步提供RNA分子及RNA-LNP,其包括5'端帽部分。在一些態樣中,5'端帽部分為(3'OMe) - m 2 7,3'-OGppp (m 1 2'-O)ApG。本發明進一步提供RNA分子及RNA-LNP,其包括3'聚A尾。在一些態樣中,聚A尾包含選自SEQ ID NO: 287 (SEQ ID NO: 286 - DNA;SEQ ID NO: 288 - 具有Ψ之RNA)及315 (SEQ ID NO: 316 - 具有Ψ之RNA)中之任一者的序列。在一些態樣中,聚A尾包含選自SEQ ID NO: 287及315中之任一者的序列+/- 1個腺苷(A)或+/- 2個腺苷(A)。
在一些態樣中,RNA分子包括5' UTR及3' UTR。在一些態樣中,RNA分子包括5'端帽、5' UTR及3' UTR。在一些態樣中,RNA分子包括5'端帽、5' UTR、3' UTR及聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包括5' UTR、3' UTR及聚A尾。在一些態樣中,5' UTR、3' UTR及聚A尾中之任一者之各尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換(例如經修飾之RNA;modRNA)。
本發明提供如表5中所描述之RNA分子。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 146之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(gE WT)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 147之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(gE WT CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 148之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(gE WT CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 149之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms3 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 150之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms3 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 151之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms4 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 152之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms4 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 153之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms5 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 154之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms5 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 155之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms5 CO2 v2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 156之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms6 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 157之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms6 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 158之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms8 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 159之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms9 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 160之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms9 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 161之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms10 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 162之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms10 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 163之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms10 CO3)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 164之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms11 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 165之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms11 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 166之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms12 CO1)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 167之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾(ms12 CO2)。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 168之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 169之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 170之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 171之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 172之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 173之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 174之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 175至238中之任一者之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 239之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 240至254中之任一者之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 255至267中之任一者之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包含SEQ ID NO: 281或312之5' UTR、SEQ ID NO: 268至279中之任一者之VZV ORF、SEQ ID NO: 284或317之3' UTR及/或SEQ ID NO: 287或315之聚A尾。在一些態樣中,VZV ORF進一步包含本文所描述之終止密碼子。在一些態樣中,聚A尾長度可含有+1/-1 A或+2/-2 A。在一些態樣中,RNA分子之各尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換(例如經修飾之RNA;modRNA)。
本發明進一步提供RNA分子,其包括至少一個由密碼子最佳化DNA產生之開放閱讀框架。在一些態樣中,開放閱讀框架包含至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、約50%至75%、或約55%至70%之G/C含量。在一些態樣中,G/C含量為約58%,為約66%或約62%。本發明進一步提供RNA分子,其編碼VZV多肽,該等VZV多肽位於細胞膜中、位於高基氏體中及/或錨定在膜中且分泌。本發明進一步提供RNA分子,其包含經穩定化之RNA。本發明進一步提供RNA分子,其包括具有至少一個經修飾之核苷酸的RNA (例如經修飾之RNA;modRNA)。在一些態樣中,經修飾之核苷酸為假尿苷、N1-甲基假尿苷、N1-乙基假尿苷、2-硫代尿苷、4'-硫代尿苷、5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿苷、2-硫代-1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、4-硫代-假尿苷、5-氮雜-尿苷、二氫假尿苷、5-甲氧基尿苷及2'-O-甲基尿苷。在一些態樣中,經修飾之核苷酸為N1-甲基假尿苷(Ψ)。
本發明進一步提供RNA分子,其為信使RNA (mRNA)或自複製RNA。在一些態樣中,RNA為mRNA。
本發明進一步提供免疫原性組合物,其包括本文所描述之RNA分子。在此類免疫原性組合物中,RNA分子可調配於脂質奈米顆粒(LNP)中、囊封於LNP中、與LNP複合、結合至LNP或吸附在LNP上(例如VZV RNA-LNP)。在一些態樣中,脂質奈米顆粒包括陽離子脂質、聚乙二醇化(PEGylated)脂質及至少一種結構性脂質(例如中性脂質及類固醇或類固醇類似物)中之至少一者。
在一些態樣中,脂質奈米顆粒包括陽離子脂質。在一些態樣中,陽離子脂質為(4-羥丁基)氮烷二基(azanediyl))雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯) (ALC-0315)。
在一些態樣中,脂質奈米顆粒包括聚合物結合脂質。在一些態樣中,脂質奈米顆粒包括聚乙二醇化脂質,亦被稱為PEG-脂質。在一些態樣中,聚乙二醇化脂質為經PEG修飾之磷脂醯乙醇胺、經PEG修飾之磷脂酸、經PEG修飾之神經醯胺(例如PEG-CerC14或PEG-CerC20)、經PEG修飾之二烷基胺、經PEG修飾之二醯基甘油、經PEG修飾之二烷基甘油、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺、二醇脂質(包括PEG-c-DOMG、PEG-c-DMA、PEG-s-DMG、N-[(甲氧基聚乙二醇)2000)胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻醯氧基丙-3-胺(PEG-c-DMA)及PEG-2000-DMG)、聚乙二醇化二醯基甘油(PEG-DAG) (諸如1-(單甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG))、聚乙二醇化磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)、PEG丁二酸酯二醯基甘油(PEG-S-DAG) (諸如4-O-(2',3'-二(十四醯氧基)丙基-1-O-((鄰甲氧基(聚乙氧基)乙基)丁二酸酯(PEG-S-DMG))、聚乙二醇化神經醯胺(PEG-cer)或PEG二烷氧基丙基胺基甲酸酯(諸如共聚-甲氧基(聚乙氧基)乙基-N-(2,3二(十四烷氧基)丙基)胺基甲酸酯或2,3-二(十四烷氧基)丙基-N-(ω-甲氧基(聚乙氧基)乙基)胺基甲酸酯)。在一些態樣中,聚乙二醇化脂質為2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺(ALC-0159)。
在一些態樣中,脂質奈米顆粒包括至少一種結構性脂質,諸如中性脂質。在一些態樣中,中性脂質係選自1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)、二油醯基-磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、棕櫚醯油醯基-磷脂醯乙醇胺(POPE)及二油醯基-磷脂醯乙醇胺4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1甲酸酯(DOPE-mal)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂醯基-磷脂醯乙醇胺(DSPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂醯基-2-油醯基磷脂醯乙醇胺(SOPE)及/或1,2-二反油醯基(dielaidoyl)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(反式DOPE)。在一些態樣中,中性脂質為1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)。
在一些態樣中,脂質奈米顆粒包括第二結構性脂質,諸如類固醇或類固醇類似物。在一些態樣中,類固醇或類固醇類似物為膽固醇。
在一些態樣中,脂質奈米顆粒具有約1至約500 nm之平均直徑。
在一些態樣中,RNA-LNP免疫原性組合物為液體RNA-LNP組合物,其包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於具有包含以下之脂質組成的LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的第一結構性脂質及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的第二結構性脂質。在一些態樣中,液體組合物進一步包含緩衝液組合物,其包含約0.15至0.3 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約1.25至1.4 mg/mL之濃度的第二緩衝液及約95至110 mg/mL之濃度的穩定劑。
在特定態樣中,液體RNA-LNP免疫原性組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於具有包含以下之脂質組成的LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的((4-羥丁基)氮雜二基)雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯) (ALC-0315)、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺(ALC-0159)、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇。在一些態樣中,液體組合物進一步包含有包含約0.1至0.3 mg/mL之濃度的緩血酸胺及約1.25至1.4 mg/mL之濃度的Tris鹽酸(HCl)的Tris緩衝液組合物及約95至110 mg/mL之濃度的蔗糖。
在一些態樣中,液體RNA-LNP免疫原性組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於LNP中;且該液體RNA-LNP免疫原性組合物進一步包含約5至15 mM Tris緩衝液、pH約7.0至8.0之200至400 mM蔗糖。
在一些態樣中,RNA-LNP免疫原性組合物為凍乾(復原) RNA-LNP組合物,其包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於具有包含以下之脂質組成的LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的第一結構性脂質及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的第二結構性脂質。在一些態樣中,凍乾組合物進一步包含約0.01與0.15 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約0.5與0.65 mg/mL之濃度的第二緩衝液、約35至50 mg/mL之濃度的穩定劑及約5至15 mg/mL之濃度的用於復原之鹽稀釋劑。在特定態樣中,凍乾組合物在約0.6至0.75 mL之鹽稀釋劑中復原。凍乾RNA-LNP組合物中之濃度係在復原後測定。
在特定態樣中,凍乾(復原) RNA-LNP組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA聚核苷酸,該RNA聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該RNA聚核苷酸囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的ALC-0315、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的ALC-0159、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的DSPC及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇;且該凍乾(復原) RNA-LNP組合物進一步包含有包含約0.01與0.15 mg/mL之濃度的緩血酸胺及約0.5與0.65 mg/mL之濃度的Tris HCl的Tris緩衝液組合物、約35至50 mg/mL之濃度的蔗糖及約5至15 mg/mL之濃度的用於復原之氯化鈉(NaCl)稀釋劑。在特定態樣中,凍乾組合物在約0.6至0.75 mL之氯化鈉中復原。凍乾RNA-LNP組合物中之濃度係在復原後測定。
本發明提供RNA分子、RNA-LNP及免疫原性組合物,其可以每次投與至少、至多、恰好以下劑量或其中任何兩者之間的劑量向個體投與:1 µg、15 µg、30 µg、45 µg、60 µg、75 µg、90 µg、100 µg或更高劑量之囊封於LNP中之VZV RNA。
本發明提供RNA分子、RNA-LNP及免疫原性組合物,其可以單次劑量投與。本發明進一步提供RNA分子、RNA-LNP及免疫原性組合物,其可投與兩次(例如第0天及約第7天、第0天及約第14天、第0天及約第21天、第0天及約第28天、第0天及約第60天、第0天及約第90天、第0天及約第120天、第0天及約第150天、第0天及約第180天、第0天及約1個月後、第0天及約2個月後、第0天及約3個月後、第0天及約6個月後、第0天及約9個月後、第0天及約12個月後、第0天及約18個月後、第0天及約2年後、第0天及約5年後、或第0天及約10年後)。本發明進一步提供RNA分子、RNA-LNP及免疫原性組合物,其可在第0天及約2個月後投與兩次。本發明進一步提供RNA分子、RNA-LNP及免疫原性組合物,其可在第0天及約6個月後投與兩次。本發明進一步提供RNA分子、RNA-LNP及免疫原性組合物,其可投與三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或更多次投藥。在一些態樣中,可能需要以1至5年之間隔週期性加強免疫來維持抗體之保護性水準。本發明進一步提供至少一次加強劑量之投與。
本發明提供一種在個體中誘導針對VZV之免疫反應的方法,其包括向該個體投與有效量的本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或免疫原性組合物。本發明進一步提供本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或免疫原性組合物之用途,其用於製造用以在個體中誘導針對VZV之免疫反應的藥劑。
本發明提供一種在個體中誘導針對VZV之免疫反應的方法,其包括向該個體投與有效量的包括至少一個編碼VZV多肽之開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之組合物。本發明進一步提供包括至少一個編碼VZV多肽之開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之組合物的用途,其用於製造用以在個體中誘導針對VZV之免疫反應的藥劑。
本發明提供一種在個體中誘導針對VZV之免疫反應的方法,其包括向該個體投與有效量的包括至少一個編碼所關注基因之多肽的開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之組合物。本發明進一步提供包括至少一個編碼所關注基因之多肽的開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之組合物的用途,其用於製造用以在個體中誘導針對VZV之免疫反應的藥劑。
本發明提供一種預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的方法,其包括向個體投與有效量的本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或免疫原性組合物。本發明進一步提供本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或免疫原性組合物的用途,其用於製造用以預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的藥劑。在一些態樣中,該感染、疾病或病狀與VZV相關。在一些態樣中,該感染、疾病或病狀為帶狀疱疹(herpes zoster) (帶狀疱疹(shingles))。在一些態樣中,該感染、疾病或病狀為疱疹後神經痛。
本發明提供一種預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的方法,其包括向個體投與有效量的包括至少一個編碼VZV多肽之開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之免疫原性組合物。本發明進一步提供包括至少一個編碼VZV多肽之開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之免疫原性組合物的用途,其用於製造用以預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的藥劑。在一些態樣中,該感染、疾病或病狀與VZV相關。在一些態樣中,該感染、疾病或病狀為帶狀疱疹(herpes zoster)或帶狀疱疹(shingles)。在一些態樣中,該感染、疾病或病狀為疱疹後神經痛。
本發明進一步提供一種預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的方法,其包括向個體投與有效量的包括至少一個編碼所關注基因之多肽的開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之免疫原性組合物。本發明進一步提供包括至少一個編碼所關注基因之多肽的開放閱讀框架的RNA分子及/或RNA-LNP或本文所描述之免疫原性組合物的用途,其用於製造用以預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的藥劑。在一些態樣中,該感染、疾病或病狀與所關注基因相關。
在一些態樣中,個體為、至少為或至多為小於約1歲、約1歲或更大、約5歲或更大、約10歲或更大、約20歲或更大、約30歲或更大、約40歲或更大、約50歲或更大、約60歲或更大、約70歲或更大、或更大。在一些態樣中,個體為約50歲或更大。
在一些態樣中,個體具有免疫能力。在一些態樣中,個體免疫功能不全。
本發明提供本文所描述之方法或用途,其中RNA分子、RNA-LNP及/或免疫原性組合物作為疫苗投與。
本發明提供本文所描述之方法或用途,其中RNA分子、RNA-LNP及/或免疫原性組合物藉由皮內或肌肉內注射投與。
經考慮,本說明書中所論述之任何態樣可關於本發明之任何方法或組合物實施,且反之亦然。此外,本發明之組合物可用於實現本發明之方法。
本發明之其他目標、特徵及優勢將自以下實施方式而變得顯而易知。然而,應理解,實施方式及特定實例儘管指示本發明之特定態樣,但僅以說明方式給出,因為在本發明之精神及範疇內的各種變化及修改將由此實施方式而變得對熟習此項技術者顯而易見。
本發明提供一種RNA分子(例如RNA聚核苷酸),其包含至少一個編碼水痘帶狀疱疹病毒(VZV)抗原之開放閱讀框架(ORF)。在一些態樣中,VZV抗原為VZV多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gE多肽。在一些態樣中,VZV多肽包含表1之胺基酸序列。在一些態樣中,RNA分子包含由表2之至少一個DNA核酸序列轉錄的ORF。在一些態樣中,RNA分子包含有包含表3之RNA核酸序列的ORF。在一些態樣中,RNA分子包含5'端帽、5' UTR、3' UTR及聚A尾中之至少一者。本發明提供一種包含經修飾之核苷酸(例如經修飾之RNA;modRNA)的RNA分子。本發明提供一種免疫原性組合物,其包含編碼本文所描述之VZV多肽的RNA分子中之任一者,該等RNA分子與一或多種脂質複合、囊封於一或多種脂質中或與一或多種脂質一起調配且形成脂質奈米顆粒(RNA-LNP)。本發明進一步提供一種免疫原性組合物,其包含有包含本文所描述之至少一種RNA核酸的RNA分子中之任一者,該等RNA分子與一或多種脂質複合、囊封於一或多種脂質中或與一或多種脂質一起調配且形成RNA-LNP。本發明進一步提供一種預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀(例如帶狀疱疹(herpes zoster)或帶狀疱疹(shingles))的方法,其係經由向個體投與有效量的本文所描述之RNA分子、RNA-LNP或免疫原性組合物。本發明進一步提供本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或免疫原性組合物作為疫苗之用途。
I. 定義之實例在整個本申請案中,術語「約」係根據其在細胞及分子生物學領域中之普通及一般含義使用,以指示與其結合使用之一或多個值之±10%偏差。
本文中之值的範圍之敍述僅意欲充當個別地提及屬於該範圍內之各單獨值的簡寫方法。除非本文中另外指示,否則每一個別值均併入本說明書中,如同其在本文中個別地敍述一般。
當與術語「包含」結合使用時,詞語「一(a/an)」之使用可意謂「一個」,但其亦與「一或多個」、「至少一個」及「一個或多於一個」之含義相符。
片語「及/或」意謂「及」或「或」。為了說明,A、B及/或C包括:單獨的A、單獨的B、單獨的C、A與B之組合、A與C之組合、B與C之組合或A、B及C之組合。換言之,「及/或」作為包括性或操作。
片語「基本上全部」定義為「至少95%」;若群組之基本上全部成員具有某一特性,則該群組之至少95%成員具有該特性。在一些態樣中,基本上全部意謂等於以下中之任一者、以下中之至少任一者或在以下中之任何兩者之間:該群組之95%、96%、97%、98%、99%或100%成員具有該特性。
組合物及方法在使用時可「包含以下」、「基本上由以下組成」或「由以下組成」:在整個本說明書中所揭示之成分或步驟中之任一者。在整個本說明書中,除非上下文另外要求,否則詞語「包含(comprising)」(及包含之任何形式,諸如「包含(comprise)」及「包含(comprises)」)、「具有(having)」(及具有之任何形式,諸如「具有(have)」及「具有(has)」)、「包括(including)」(及包括之任何形式,諸如「包括(includes)」及「包括(include)」)或「含有(containing)」(及含有之任何形式,諸如「含有(contains)」及「含有(contain)」)為包括性或開放性的,且應理解為暗示包括所陳述步驟或要素或者步驟或要素之群組,但不排除包括任何其他步驟或要素或者步驟或要素之群組。經考慮,本文在術語「包含」之上下文中描述的態樣亦可在術語「由…組成」或「基本上由…組成」的上下文中實施。「基本上由」所揭示之成分或步驟中之任一者「組成」的組合物及方法將申請專利範圍之範疇限制於不實質影響所主張發明之基本及新穎特性的指定物質或步驟。詞語「由…組成(consisting of)」(及由…組成之任何形式,諸如「由…組成(consist of)」及「由…組成(consists of)」)意謂包括且限於接在片語「由…組成」後面的任何內容。因此,片語「由…組成」指示所列要素為所需或必選的,且不可存在其他要素。
在整個本說明書中對「一個態樣」、「一態樣」、「特定態樣」、「相關態樣」、「某一態樣」、「額外態樣」或「另一態樣」或其組合之提及意謂結合該態樣描述之特定特徵、結構或特性包括在本發明之至少一個態樣中。因此,前述片語在整個本說明書中各處之出現未必皆指代同一態樣。此外,特定特徵、結構或特性可在一或多個態樣中以任何合適方式組合。
術語「抑制(inhibiting)」、「降低(decreasing)」或「減少(reducing)」或此等術語之任何變化形式包括任何可量測降低(例如5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%降低)或完全抑制以達成所需結果。術語「改良」、「提高」或「增加」或此等術語之任何變化形式包括任何可量測增加(例如5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%增加)以達成所需結果或者蛋白質或分子之產生。
如本文所使用,術語「參考物」、「標準物」或「對照物」描述進行比較所相對的值。舉例而言,將所關注藥劑、個體、群體、樣品或值與所關注參考、標準或對照藥劑、個體、群體、樣品或值進行比較。參考物、標準物或對照物可實質上同時及/或藉由所關注藥劑、個體、群體、樣品或值之所關注測試或測定來測試及/或測定,及/或可在與所評定之所關注藥劑、個體、群體、樣品或值可比的條件或環境下進行測定或表徵。
術語「經分離」可係指實質上不含其來源之細胞物質、細菌物質、病毒物質或培養基(當藉由重組DNA技術產生時)或化學前驅體或其他化學物質(當以化學方式合成時)的核酸或多肽。此外,經分離化合物係指可以經分離化合物形式向個體投與之化合物;換言之,若化合物黏附至管柱或嵌入瓊脂糖凝膠中,則其不可簡單地被視為「經分離的」。此外,「經分離核酸片段」或「經分離肽」為天然不以片段形式存在及/或通常不呈功能狀態及/或經由人工干預自天然狀態改變或移除的核酸或蛋白質片段。舉例而言,天然存在於活動物中之DNA並非「經分離的」,但合成DNA或自其天然狀態之共存物質部分或完全分離之DNA為「經分離的」。經分離核酸可以實質上經純化形式存在,或可存在於非天然環境中,諸如其中已遞送有核酸之細胞中。
如本文所使用,「核酸」為包含核酸組分之分子,且係指DNA或RNA分子。其可與術語「聚核苷酸」互換使用。核酸分子為包含核苷酸單體或由核苷酸單體組成之聚合物,該等核苷酸單體藉由糖/磷酸酯主鏈之磷酸二酯鍵彼此共價連接。核酸亦可涵蓋經修飾之核酸分子,諸如鹼基經修飾、糖經修飾或主鏈經修飾等DNA或RNA分子。核酸可以多種形式存在,諸如:編碼多肽(諸如抗原或抗體之一條或兩條鏈)之所併入序列或重組聚核苷酸的經分離區段及重組載體,或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體;足以用作雜交探針之聚核苷酸;用於識別、分析、突變或擴增編碼多肽之聚核苷酸的PCR引子或定序引子;用於抑制聚核苷酸之表現的反義核酸;mRNA;saRNA;及本文所描述之前述各者之互補序列。核酸可編碼抗體可結合之抗原決定基。
術語「抗原決定基」係指由免疫球蛋白(例如抗體或受體)結合組分特異性識別之部分。在一些態樣中,抗原決定基包含抗原上之複數個化學原子或基團。在一些態樣中,當抗原採用相關三維構形時,此類化學原子或基團為表面暴露的。在一些態樣中,當抗原採用此類構形時,此類化學原子或基團在空間中實體上彼此接近。在一些態樣中,當抗原採用替代構形(例如經線性化)時,至少一些此類化學原子或基團實體上彼此分離。
核酸可為單股或雙股的,且可包含RNA及/或DNA核苷酸及其人工變異體(例如肽核酸)。在一些情況下,核酸序列可編碼具有額外異源編碼序列之多肽序列,例如以實現多肽之純化、轉運、分泌、轉譯後修飾,或實現治療益處,諸如靶向或功效。可向經修飾之多肽編碼序列中添加標籤或其他異源多肽,其中「異源」係指與經修飾之多肽不同的多肽。
術語「聚核苷酸」係指一種核酸分子,其可為重組的或已自總基因體核酸分離。術語「聚核苷酸」內包括寡核苷酸(100個殘基或更少殘基長度的核酸)、重組載體(包括例如質體、黏質體、噬菌體、病毒)及其類似者。在某些態樣中,聚核苷酸包括實質上與其天然存在之基因或蛋白質編碼序列分離之調節序列。聚核苷酸可為單股(編碼或反義)或雙股的,且可為RNA、DNA (基因體、cDNA或合成的)、其類似物或其組合。額外編碼或非編碼序列可(但無需)存在於聚核苷酸內。
在某些態樣中,存在與本文所揭示之序列實質上一致的聚核苷酸變異體;使用本文所描述之方法(例如使用標準參數之BLAST分析)與本文所提供之聚核苷酸序列相比,具有等於以下序列一致性中之任一者、中之至少任一者、中之至多任一者或在以下序列一致性中之任何兩者之間的序列一致性的聚核苷酸變異體:70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%或更高序列一致性。在某些態樣中,經分離聚核苷酸將包含編碼在整個序列長度上與本文所描述之胺基酸序列具有至少90%一致性之多肽的核苷酸序列;或與該經分離聚核苷酸互補之核苷酸序列。在一些態樣中,經分離聚核苷酸將包含編碼在整個序列長度上與本文所描述之胺基酸序列具有至少95%一致性之多肽的核苷酸序列;或與該經分離聚核苷酸互補之核苷酸序列。
與編碼序列本身之長度無關,核酸區段可與其他核酸序列(諸如啟動子、聚腺苷酸化信號、額外限制酶位點、多個選殖位點、其他編碼區段及其類似者)組合,使得其整體長度可顯著變化。核酸可具有任何長度。該等核酸可例如等於以下中之任一者、中之至少任一者、中之至多任一者或在以下中之任何兩者之間:5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1000、1500、3000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、11000、12000、13000、14000、15000或更多個核苷酸之長度;及/或可包含一或多個額外序列(例如調節序列);及/或可為較大核酸(例如載體)之一部分。因此,經考慮,可使用幾乎任何長度之核酸片段,其中總長度受製備簡易性及預期重組核酸方案中之用途限制。
就此而言,術語「基因」用於指編碼蛋白質、多肽或肽之核酸(包括適當轉錄、轉譯後修飾或定位所需之任何序列)。如熟習此項技術者將理解,此術語涵蓋基因體序列、表現卡匣、cDNA序列及較小的經工程改造之核酸區段,其表現或可經調適以表現蛋白質、多肽、域、肽、融合蛋白及突變體。編碼全部或一部分多肽之核酸可含有編碼全部或一部分此類多肽之連續核酸序列。亦考慮特定多肽可由含有變化之核酸編碼,該等核酸具有略微不同的核酸序列,但仍編碼相同或實質上類似的多肽。
如本文所使用,術語核酸序列之「表現」係指核酸序列產生任何基因產物。在一些態樣中,基因產物可為轉錄物。在一些態樣中,基因產物可為多肽。在一些態樣中,核酸序列之表現涉及以下中之一或多者:(1)自DNA序列產生RNA模板(例如藉由轉錄);(2) RNA轉錄物之加工(例如藉由剪接、編輯等);(3) RNA轉譯為多肽或蛋白質;及/或(4)多肽或蛋白質之轉譯後修飾。
一般而言,術語「經工程改造」係指已人工操控之態樣。舉例而言,當兩個或更多個在自然界中不以彼次序連接在一起的序列藉由人工操控而在經工程改造之聚核苷酸中直接彼此連接時及/或當聚核苷酸中之特定殘基為非天然存在的及/或經由人工作用而與自然界中不連接之實體或部分連接時,聚核苷酸被視為「經工程改造的」。
如本文所使用,術語「DNA」意謂包含諸如去氧腺苷單磷酸、去氧胸苷單磷酸、去氧鳥苷單磷酸及去氧胞苷單磷酸單體之核苷酸的核酸分子,該等核苷酸由糖部分(去氧核糖)、鹼基部分及磷酸部分構成,且藉由特徵性主鏈結構聚合。主鏈結構通常藉由第一單體之核苷酸之糖部分(例如去氧核糖)與第二相鄰單體之磷酸部分之間的磷酸二酯鍵形成。單體之特定次序(例如連接至糖/磷酸主鏈之鹼基之次序)被稱為DNA序列。DNA可為單股或雙股的。在雙股形式中,第一股之核苷酸通常例如藉由A/T鹼基配對及G/C鹼基配對與第二股之核苷酸雜交。DNA可包含全部或大部分去氧核糖核苷酸殘基。如本文所使用,術語「去氧核糖核苷酸」意謂在β-D-呋喃核糖基之2'位置處不含羥基的核苷酸。不受任何限制,DNA可涵蓋雙股DNA、反義DNA、單股DNA、經分離DNA、合成DNA、以重組方式產生之DNA及經修飾之DNA。
如本文所使用,術語「RNA」意謂包含諸如腺苷單磷酸、尿苷單磷酸、鳥苷單磷酸及胞苷單磷酸單體之核苷酸的核酸分子,該等核苷酸沿著所謂的主鏈彼此連接。主鏈藉由第一單體之糖(例如核糖)與第二相鄰單體之磷酸部分之間的磷酸二酯鍵形成。RNA可例如在細胞內藉由DNA序列之轉錄獲得。在真核細胞中,轉錄通常在細胞核或粒線體內進行。在活體內,DNA之轉錄可產生未成熟RNA,其被加工成信使RNA (mRNA)。例如在真核生物體中對未成熟RNA之加工包含各種轉錄後修飾,諸如剪接、5'加帽、聚腺苷酸化、自細胞核或粒線體輸出。成熟的信使RNA經加工且提供可轉譯成肽或蛋白質之胺基酸序列的核苷酸序列。成熟mRNA可包含5'端帽、5' UTR、開放閱讀框架、3' UTR及聚A尾序列。RNA可包含全部或大部分核糖核苷酸殘基。如本文所使用,術語「核糖核苷酸」意謂在β-D-呋喃核糖基之2'位置處含有羥基的核苷酸。在一個態樣中,RNA可為與編碼肽或蛋白質之RNA轉錄物相關的信使RNA (mRNA)。如熟習此項技術者已知,mRNA一般含有5'非轉譯區(5' UTR)、多肽編碼區及3'非轉譯區(3' UTR)。不受任何限制,RNA可涵蓋雙股RNA、反義RNA、單股RNA、經分離RNA、合成RNA、以重組方式產生之RNA及經修飾之RNA (modRNA)。
「經分離RNA」定義為一種RNA分子,其可為重組的或已自總基因體核酸分離。經分離之RNA分子或蛋白質可以實質上純化形式存在,或可存在於諸如宿主細胞之非天然環境中。
「經修飾之RNA」或「modRNA」係指與天然存在之RNA相比具有一或多個核苷酸之至少一個添加、缺失、取代及/或改變的RNA分子。此類改變可係指將非核苷酸物質添加至內部RNA核苷酸,或添加至RNA之5'端及/或3'端。在一個態樣中,此類modRNA含有至少一個經修飾之核苷酸,諸如核苷酸之鹼基之改變。舉例而言,經修飾之核苷酸可置換一或多個尿苷及/或胞苷核苷酸。舉例而言,此等置換可針對RNA序列中之尿苷及/或胞苷之每個實例發生,或可僅針對所選尿苷及/或胞苷核苷酸發生。RNA中之標準核苷酸之此類改變可包括非標準核苷酸,諸如化學合成之核苷酸或去氧核苷酸。舉例而言,在RNA序列中至少一個尿苷核苷酸可經N1-甲基假尿苷置換。其他此類經改變之核苷酸為熟習此項技術者已知的。此類經改變之RNA分子被視為天然存在之RNA之類似物。在一些態樣中,RNA藉由使用DNA模板進行活體外轉錄而產生,其中DNA係指含有去氧核糖核苷酸之核酸。在一些態樣中,RNA可為複製子RNA (複製子),尤其自複製RNA或自擴增RNA (saRNA)。
如本文中所涵蓋,不受任何限制,RNA可用作治療及/或預防哺乳動物(包括人類)之多種病狀的治療模態。本文所描述之方法包含向哺乳動物(諸如人類)投與本文所描述之RNA。舉例而言,在一個態樣中,使用RNA之此類方法包括編碼抗原之RNA疫苗以誘導穩定中和抗體及隨附/伴隨的T細胞反應,從而達成保護性免疫接種。在一些態樣中,投與最小疫苗劑量以誘導穩定中和抗體及隨附/伴隨的T細胞反應,從而達成保護性免疫接種。在一個態樣中,所投與之RNA為活體外轉錄之RNA。舉例而言,此類RNA可用於編碼至少一種意欲在該哺乳動物中產生免疫反應之抗原。病原性抗原為來源於與傳染性疾病相關之病原體的肽或蛋白質抗原。在特定態樣中,病原性物質為來源於VZV之肽或蛋白質抗原。可用本文所揭示之RNA治療的病狀及/或疾病包括(但不限於)由病毒感染引起及/或影響之彼等病狀及/或疾病。此類病毒包括(但不限於) VZV。
如本文所使用,當與疾病、病症及/或病狀之出現結合使用時,「預防(prevent/prevention)」係指降低罹患該疾病、病症及/或病狀之風險及/或延遲該疾病、病症或病狀之一或多種特徵或症狀之發作。當疾病、病症或病狀之發作已延遲預定時間段時,預防可視為完成。
如將自上下文理解,疾病、病症及/或病狀之「風險」係指特定個體將罹患該疾病、病症及/或病狀之可能性。在一些態樣中,風險表示為百分比。在一些態樣中,風險為、至少為或至多為0、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%直至100%。在一些態樣中,風險表示為相對於與參考樣品或參考樣品群組相關之風險的風險。在一些態樣中,參考樣品或參考樣品群組具有疾病、病症、病狀及/或事件之已知風險。在一些態樣中,參考樣品或參考樣品群組來自與特定個體類似之個體。在一些態樣中,風險可反映一或多個遺傳屬性,例如其可使個體傾向於罹患(或不罹患)特定疾病、病症及/或病狀。在一些態樣中,風險可反映一或多個表觀遺傳事件或屬性及/或一或多個生活方式或環境事件或屬性。易患上:「易患上」疾病、病症及/或病狀之個體為罹患該疾病、病症及/或病狀之風險高於一般公眾成員之個體。在一些態樣中,易患上疾病、病症及/或病狀之個體可能尚未診斷出患有該疾病、病症及/或病狀。在一些態樣中,易患上疾病、病症及/或病狀之個體可呈現該疾病、病症及/或病狀之症狀。在一些態樣中,易患上疾病、病症及/或病狀之個體可不呈現該疾病、病症及/或病狀之症狀。在一些態樣中,易患上疾病、病症及/或病狀之個體將罹患該疾病、病症及/或病狀。在一些態樣中,易患上疾病、病症及/或病狀之個體將不罹患該疾病、病症及/或病狀。
術語「蛋白質」、「多肽」或「肽」在本文中用作同義詞,且係指胺基酸單體之聚合物,例如包含至少兩個胺基酸殘基之分子。多肽可包括基因產物、天然存在之多肽、合成多肽、同源物、異種同源物、同種同源物、片段及前述者之其他等效物、變異體及類似物。多肽可為單分子或可為多分子複合物,諸如二聚體、三聚體或四聚體。蛋白質包含一或多種肽或多肽,且可摺疊成3維形式,蛋白質可能需要該3維形式來發揮其生物功能。
如本文所使用,術語「野生型」或「WT」或「天然」係指在生物體中天然存在的分子之內源性型式。在一些態樣中,採用蛋白質或多肽之野生型型式,然而在本發明之其他態樣中,採用經修飾之蛋白質或多肽以產生免疫反應。上文所描述之術語可互換使用。
「經修飾之蛋白質」或「經修飾之多肽」或「變異體」係指其化學結構,尤其其胺基酸序列相對於野生型蛋白質或多肽改變的蛋白質或多肽。在一些態樣中,經修飾之蛋白質或多肽/變異型蛋白質或多肽具有至少一種經修飾之活性或功能(認識到蛋白質或多肽可具有多種活性或功能)。尤其考慮,經修飾之蛋白質或多肽/變異型蛋白質或多肽可相對於一種活性或功能改變,但在其他方面中保留野生型活性或功能,諸如免疫原性。當在本文中特定提及蛋白質時,其一般係指天然(野生型)或重組(經修飾)蛋白質。蛋白質可自天然的生物體直接分離,藉由重組DNA/外源性表現方法產生,藉由固相肽合成(SPPS)或其他活體外方法產生。在特定態樣中,存在經分離之核酸區段及重組載體,其併有編碼多肽(例如抗原或其片段)之核酸序列。術語「重組」可與多肽或特定多肽之名稱結合使用,且此一般係指由已經活體外操控之核酸分子產生的多肽或作為此類分子之複製產物的多肽。
參考胺基酸序列(肽或蛋白質)之術語「片段」係指胺基酸序列之一部分,亦即表示在N端及/或C端處縮短之胺基酸序列的序列。在C端處縮短之片段(N端片段)可例如藉由不具有開放閱讀框架之3'端的經截短開放閱讀框架之轉譯而獲得。在N端處縮短之片段(C端片段)可例如藉由不具有開放閱讀框架之5'端的經截短開放閱讀框架之轉譯而獲得,只要該經截短開放閱讀框架包含用以起始轉譯之起始密碼子即可。胺基酸序列之片段包含例如來自胺基酸序列之至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少99%的胺基酸殘基。在本發明中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少、至多、恰好以下序列一致性或以下中之任何兩者之間的序列一致性的序列:5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。
在一個態樣中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少70%序列一致性的序列。在一個態樣中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少80%序列一致性的序列。在一個態樣中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少85%序列一致性的序列。在一個態樣中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少90%序列一致性的序列。在一個態樣中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少95%序列一致性的序列。在一個態樣中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少97%序列一致性的序列。在一個態樣中,多肽、DNA核酸或RNA核酸序列之片段係指與其所來源之多肽、DNA核酸或RNA核酸序列具有至少99%序列一致性的序列。
如本文在分子(例如核酸、蛋白質或小分子)之上下文中所使用,術語「變異體」係指與參考分子展現顯著結構一致性但在結構上與該參考分子不同的分子,例如與參考實體相比在一或多個化學部分之存在或不存在方面或在一或多個化學部分之含量方面不同。在一些態樣中,變異體亦在功能上與其參考分子不同。一般而言,特定分子是否恰當地視為參考分子之「變異體」係基於其與參考分子之結構一致性的程度。如熟習此項技術者將瞭解,任何生物或化學參考分子都具有某些特徵結構元件。按照定義,變異體為與參考分子共有一或多個此類特徵結構元件但在至少一個態樣上不同於參考分子的不同分子。在一些態樣中,變異型多肽或核酸可由於胺基酸或核苷酸序列之一或多個差異及/或由於作為多肽或核酸之共價組分(例如,連接至多肽或核酸主鏈)的化學部分(例如,碳水化合物、脂質、磷酸基)之一或多個差異而不同於參考多肽或核酸。在一些態樣中,變異型多肽或核酸與參考多肽或核酸展現至少、至多、恰好以下總體序列一致性或以下中之任何兩者之間的總體序列一致性:85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%或99%。在一些態樣中,變異型多肽或核酸不與參考多肽或核酸共有至少一個特徵序列元件。在一些態樣中,參考多肽或核酸具有一或多種生物活性。在一些態樣中,變異型多肽或核酸共有參考多肽或核酸之生物活性中之一或多者。在一些態樣中,變異型多肽或核酸不具有參考多肽或核酸之生物活性中之一或多者。在一些態樣中,變異型多肽或核酸與參考多肽或核酸相比展現一或多種生物活性水準之降低。在一些態樣中,若所關注多肽或核酸之胺基酸或核苷酸序列與參考物之胺基酸或核苷酸序列一致但具有特定位置處之少數序列改變,則將其視為參考多肽或核酸之「變異體」。較佳地,變異型多肽或核酸序列與參考多肽或核酸序列相比具有至少一個修飾,例如1至約20個修飾。在一個態樣中,變異型多肽或核酸序列與參考多肽或核酸序列相比具有1至約10個修飾。在一個態樣中,變異型多肽或核酸序列與參考多肽或核酸序列相比具有1至約5個修飾。通常,與參考物相比,變異體中少於約20%、約15%、約10%、約9%、約8%、約7%、約6%、約5%、約4%、約3%或約2%之殘基經取代、插入或缺失。通常,相對於參考物,變異型多肽或核酸包含極少數目個(例如,少於約5、約4、約3、約2或約1個)經取代、插入或缺失之功能性殘基(例如,參與特定生物活性之殘基)。在一些態樣中,變異型多肽或核酸與參考物相比包含約10、約9、約8、約7、約6、約5、約4、約3、約2或約1個經取代殘基。在一些態樣中,變異型多肽或核酸與參考物相比包含少於約25、約20、約19、約18、約17、約16、約15、約14、約13、約10、約9、約8、約7、約6且通常少於約5、約4、約3或約2個添加或缺失。在一些態樣中,變異型多肽或核酸與參考物相比包含不超過約5、約4、約3、約2或約1個添加或缺失,且在一些態樣中不包含添加或缺失。
在一些態樣中,參考多肽或核酸為自然界中存在之「野生型」或「WT」或「天然」序列,包括對偶基因變異。野生型多肽或核酸序列具有未經有意修飾之序列。出於本發明之目的,胺基酸序列(肽、蛋白質或多肽)之「變異體」包含胺基酸插入變異體、胺基酸添加變異體、胺基酸缺失變異體及/或胺基酸取代變異體。核苷酸序列之「變異體」包含核苷酸插入變異體、核苷酸添加變異體、核苷酸缺失變異體及/或核苷酸取代變異體。術語「變異體」包括所有突變體、剪接變異體、轉譯後修飾變異體、構形、同功異型物、對偶基因變異體、物種變異體及物種同源物,尤其天然存在之彼等者。術語「變異體」尤其包括胺基酸或核酸序列之片段。
可藉由突變向核酸中引入改變,從而引起該核酸所編碼之多肽(例如,抗原或抗體或抗體衍生物)之胺基酸序列的改變。突變可使用此項技術中已知的任何技術引入。在一個態樣中,使用例如定點突變誘發方案來改變一或多個特定胺基酸殘基。在另一態樣中,使用例如隨機突變誘發方案來改變一或多個隨機選擇之殘基。在一些態樣中,無論以何種方式進行,可針對所需特性來表現及篩選突變多肽。
可在不顯著改變核酸所編碼之多肽的生物活性的情況下將突變引入核酸中。舉例而言,吾人可進行在非必需胺基酸殘基處引起胺基酸取代之核苷酸取代。或者,可將選擇性改變核酸所編碼之多肽的生物活性的一或多個突變引入核酸中。舉例而言,突變可定量或定性地改變生物活性。定量改變之實例包括增加、降低或消除活性。定性改變之實例包括改變抗體之抗原特異性。
「序列相似性」指示一致的或表示保守胺基酸取代之胺基酸之百分比。兩個胺基酸序列之間的「序列一致性」指示序列之間一致的胺基酸之百分比。兩個核酸序列之間的「序列一致性」指示序列之間一致的核苷酸之百分比。
術語「一致%」、「一致性%」或類似術語尤其意欲指在所比較之序列之間的最佳比對中一致的核苷酸或胺基酸之百分比。該百分比純粹為統計的,且兩個序列之間的差異可能但未必隨機分佈於所比較之序列的整個長度上。兩個序列之比較通常藉由在最佳比對之後相對於區段或「比較窗」比較序列來進行,以便鑑別相應序列之局部區域。用於比較之最佳比對可手動地或藉助於Smith及Waterman, 1981, Ads App. Math. 2, 482之局部同源性演算法、藉助於Neddleman及Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48, 443之局部同源性演算法、藉助於Pearson及Lipman, 1988, Proc. Natl Acad. Sci. USA 88, 2444之相似性搜尋演算法或藉助於使用該等演算法之電腦程式(在Wisconsin遺傳學套裝軟體中之GAP、BESTFIT、FASTA、BLAST P、BLAST N及TFASTA,Genetics Computer Group)進行。在一些態樣中,兩個序列之一致性百分比係使用BLASTN或BLASTP演算法測定,如可在美國國家生物技術資訊中心(NCBI)網站上獲得。
一致性百分比係藉由測定所比較之序列中之對應的相同位置之數目,將此數值除以所比較之位置數(例如,參考序列中之位置數)且將此結果乘以100來獲得。
在一些態樣中,針對參考序列之整個長度的至少、至多、恰好以下或以下中之任何兩者之間的區域給出相似性或一致性程度:約50%、約60%、約70%、約80%、約90%或約100%。舉例而言,若參考核酸序列由200個核苷酸組成,則針對至少、至多、恰好以下數目個核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個核苷酸給出一致性程度:約100、約120、約140、約160、約180或約200個核苷酸,在一些態樣中,為連續核苷酸。在一些態樣中,針對參考序列之整個長度給出相似性或一致性程度。
同源胺基酸序列可展現胺基酸殘基之至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性:40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%一致性。在一個態樣中,同源胺基酸序列展現胺基酸殘基之至少95%一致性。在一個態樣中,同源胺基酸序列展現胺基酸殘基之至少98%一致性。在一個態樣中,同源胺基酸序列展現胺基酸殘基之至少99%一致性。
胺基酸序列(肽或蛋白質)之片段或變異體可為「功能片段」或「功能變異體」。術語胺基酸序列之「功能片段」或「功能變異體」係指展現出與其所來源之胺基酸序列相同或類似之一或多種功能特性的任何片段或變異體,例如其為功能上等效的。關於抗原或抗原序列,一種特定功能為由片段或變異體所來源之胺基酸序列呈現的一或多種免疫原性活性。如本文所使用,術語「功能片段」或「功能變異體」尤其係指包含胺基酸序列之變異體分子或序列,該胺基酸序列與親體分子或序列相比具有一或多個胺基酸之變化且仍能夠實現親體分子或序列之一或多種功能,例如誘導免疫反應。在一個態樣中,親體分子或序列之胺基酸序列中之修飾未顯著影響或改變該分子或序列之特徵。
「來源於」指定胺基酸序列(肽、蛋白質或多肽)之胺基酸序列(肽、蛋白質或多肽)係指第一胺基酸序列之來源。較佳地,來源於特定胺基酸序列之胺基酸序列具有與該特定序列或其片段一致、基本上一致或同源的胺基酸序列。來源於特定胺基酸序列之胺基酸序列可為該特定序列或其片段之變異體。舉例而言,一般熟習此項技術者應理解,可改變適用於本文中之抗原,使得其在序列上與其所來源之天然存在之序列或天然序列不同,同時保留天然序列之所需活性。
在本發明中,載體係指核酸分子,諸如人工核酸分子。載體可用於併入核酸序列,諸如包含開放閱讀框架之核酸序列。載體包括(但不限於)儲存載體、表現載體、選殖載體、轉移載體。載體可為RNA載體或DNA載體。在一些態樣中,載體為DNA分子。在一些態樣中,載體為質體載體。在一些態樣中,載體為病毒載體。通常,表現載體將含有所需編碼序列及在特定宿主生物體(例如細菌、酵母、植物、昆蟲或哺乳動物)中或在活體外表現系統中表現可操作地連接之編碼序列的適當其他序列。選殖載體通常用於工程改造及擴增某一所需片段(通常DNA片段),且可缺乏表現所需片段所需的功能序列。
如本文所使用,術語「醫藥組合物」係指與一或多種醫藥學上可接受之載劑一起調配之活性劑。醫藥組合物可為免疫原性組合物。在一些態樣中,活性劑以適合投與之單位劑量的量存在於治療方案中,其在向相關群體投與時展示出統計學上顯著的達成預定治療作用之機率。在一些態樣中,醫藥組合物可經專門調配以用於非經腸投與,例如藉由以(例如)無菌溶液或懸浮液或持續釋放調配物之形式皮下、肌肉內、靜脈內或硬膜外注射。
如本文所使用,術語「疫苗接種」係指投與意欲產生例如針對疾病相關(例如致病)原(例如病毒)之免疫反應的免疫原性組合物。在一些態樣中,疫苗接種可在暴露於疾病相關原之前、期間及/或之後且在某些態樣中在暴露於該疾病相關原之前、期間及/或之後不久投與。在一些態樣中,疫苗接種包括在時間上適當間隔開地多次投與疫苗組合物。在一些態樣中,疫苗接種產生針對感染原之免疫反應。在一些態樣中,疫苗接種產生針對腫瘤之免疫反應;在一些此類態樣中,疫苗接種為「個人化的」,因為其部分或完全針對確定存在於特定個體之腫瘤中的抗原決定基(例如,其可為或包括一或多個新抗原決定基)。
免疫反應係指生物體中之體液反應、細胞反應或體液反應及細胞反應兩者。免疫反應可藉由分析來量測,該等分析包括(但不限於)量測特異性識別蛋白質或細胞表面蛋白質之抗體之存在或量的分析、量測T細胞活化或增殖的分析及/或量測在一或多種細胞介素之活性或表現方面之調控的分析。
如本文所使用,術語「組合療法」係指個體同時暴露於兩種或更多種治療方案(例如,兩種或更多種治療劑)之彼等情況。在一些態樣中,兩種或更多種方案可同時投與;在一些態樣中,此類方案可依序投與(例如在投與第二方案之任何劑量之前投與第一方案之所有「劑量」);在一些態樣中,此類藥劑以重疊給藥方案投與。在一些態樣中,組合療法之「投與」可涉及向接受呈組合形式之其他藥劑或模態之個體投與一或多種藥劑或模態。為了清楚起見,組合療法不要求個別藥劑以單一組合物形式一起投與(或甚至不必須同時投與),但在一些態樣中,兩種或更多種藥劑或其活性部分可一起以組合組合物形式或甚至以組合化合物形式(例如作為單一化學複合物或共價實體之部分)投與。
熟習此項技術者將瞭解,術語「給藥方案」可用於指個別地向個體投與之一組單位給藥(通常超過一次),其通常由時間段分隔開。在一些態樣中,既定治療劑具有推薦的給藥方案,其可涉及一或多次給藥。在一些態樣中,給藥方案包含複數次給藥,該等給藥中之每一者在時間上與其他給藥分開。在一些態樣中,個別給藥由長度相同之時間段彼此分隔開;在一些態樣中,給藥方案包含複數次給藥及分隔開個別給藥之至少兩個不同時間段。在一些態樣中,給藥方案內之所有給藥具有相同單位給藥量。在一些態樣中,給藥方案內之不同給藥具有不同的量。在一些態樣中,給藥方案包含第一給藥量之第一次給藥,接著為不同於第一給藥量之第二給藥量的一或多次額外給藥。在一些態樣中,給藥方案包含第一給藥量之第一次給藥,接著為與第一給藥量相同之第二給藥量的一或多次額外給藥。在一些態樣中,給藥方案在跨越相關群體投與時與所需或有益結果相關(例如為治療性給藥方案)。
II. 水痘帶狀疱疹病毒 (VZV)本發明提供一種RNA分子(例如RNA聚核苷酸),其包含至少一個編碼水痘帶狀疱疹病毒(VZV)多肽之開放閱讀框架。本發明進一步提供一種免疫原性組合物,其包含至少一個編碼VZV多肽之RNA分子,該至少一個RNA分子與一或多種脂質複合、囊封於一或多種脂質中或與一或多種脂質一起調配且形成脂質奈米顆粒(LNP)。
水痘帶狀疱疹病毒(VZV) (亦稱為人類疱疹病毒3 (HHV-3))係在兒童中引起水痘或雞痘且以後復發為帶狀疱疹(herpes zoster)或帶狀疱疹(shingles)的人類病原體。VZV具有包圍線性雙股DNA基因體之內殼體。該殼體周圍為具有醣蛋白之外被層,且最外層為具有醣蛋白之富脂質包膜。醣蛋白具有多種功能,自DNA複製或殼體組裝至與細胞表面分子相互作用及輔助融合至質膜中。舉例而言,醣蛋白E係被認為對病毒之T細胞感染及細胞間擴散而言重要的整合膜蛋白。VZV顯示對神經元及T細胞之向性。
在初次感染VZV (例如水痘或「雞痘」)後,VZV在感覺神經節中建立潛伏期。需要VZV特異性T細胞來清除初次感染且預防再活化。再活化之機制不明,但認為VZV細胞介導之免疫性起作用。細胞介導之免疫性之缺乏(例如高齡、免疫低下條件)為再活化之風險因素。再活化引起VZV複製及轉運至皮膚,可能表現為帶狀疱疹(HZ)。
帶狀疱疹最常表現為伴隨疼痛之單側水皰性皮疹,其通常限於一個皮節或限於若干相連皮節。在皮疹發作數天內,可出現成群的水皰、大皰或膿皰;此等病變部位含有VZV且被視為傳染性的。帶狀疱疹之特徵性疼痛包括燒灼感或麻木感、搔癢或觸摸痛。許多人在皮疹出現前2至3天出現前驅疼痛。在具有免疫能力的個人中,病變部位在7至10天內結痂且在結痂後不再具有傳染性。
帶狀疱疹最常見的併發症為疱疹後神經痛(PHN),且高達15%的患有帶狀疱疹之個人出現PHN。PHN為在皮疹結痂之後受帶狀疱疹感染的區域中之顯著疼痛。較大年齡及前驅症狀被視為PHN之風險因素。帶狀疱疹之其他併發症包括眼部併發症(眼帶狀疱疹或帶狀疱疹性角膜炎、急性視網膜壞死)、神經併發症(耳帶狀疱疹、腦膜炎、腦炎、脊髓炎、周邊運動神經病變、格巴二氏症候群(Guillan-Barré syndrome)及中風)及繼發性細菌性皮膚及軟組織感染。
VZV基因體編碼至少71種獨特蛋白質(ORF0至ORF68)以及另外三個複製較早開放閱讀框架(分別為ORF64至62)之開放閱讀框架(ORF69至ORF71)。所編碼之蛋白質形成病毒顆粒之結構,包括九種醣蛋白:ORF5 (gK)、ORF9A (gN)、ORF14 (gC)、ORF31 (gB)、ORF37 (gH)、ORF50 (gM)、ORF60 (gL)、ORF67 (gI)及ORF68 (gE)。所編碼之醣蛋白gE、gI、gB、gH、gK、gL、gC、gN及gM在病毒複製週期之不同階段中起作用。在受感染細胞中以及成熟病毒粒子中發現之最豐富醣蛋白為醣蛋白E (gE,ORF 68),其為病毒粒子包膜之主要組分且為病毒複製所必需的。在受感染細胞中醣蛋白I (gI,ORG 67)與gE形成複合物,其有助於兩種醣蛋白之胞吞作用且將其引導至高基氏體成熟面網( trans-Golgi network,TGN),在此獲得最終病毒包膜。VZV gE為由開放閱讀框架68 (ORF68)編碼的623個胺基酸之I型膜蛋白,且為在感染VZV之細胞表面上表現的最豐富的病毒醣蛋白。在TGN內需要醣蛋白I (gI)來進行VZV囊封及VZV複製期間之有效膜融合。發現VZV gE及gI在受感染之宿主細胞表面上複合在一起。醣蛋白B (ORF 31)結合於中和抗體,該醣蛋白B為第二最普遍的醣蛋白且被認為在病毒進入中起作用。醣蛋白H被認為具有促進病毒之細胞間擴散的融合功能。針對gE、gB及gH之抗體在自然感染之後及在疫苗接種之後普遍存在,且已顯示活體外中和病毒活性。如本文所使用,術語「水痘帶狀疱疹病毒」或「VZV」不限於任何特定病毒株或變異體。
在一些態樣中,RNA分子包含編碼VZV抗原之開放閱讀框架。在一些態樣中,VZV抗原為VZV多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV醣蛋白(例如gK、gN、gC、gB、gH、gM、gL、gI及gE)或其片段或變異體。在一些態樣中,RNA分子編碼VZV gK多肽,RNA分子編碼VZV gN多肽,RNA分子編碼VZV gC多肽,RNA分子編碼VZV gB多肽,RNA分子編碼VZV gH多肽,RNA分子編碼VZV gM多肽,RNA分子編碼VZV gL多肽,RNA分子編碼VZV gI多肽,及/或RNA分子編碼VZV gE多肽。在一個態樣中,RNA分子編碼VZV gE多肽。在一些態樣中,VZV多肽包含兩種或更多種(例如2、3、4、5、6、7、8、9或更多種) VZV多肽。
在一些態樣中,VZV多肽為全長VZV多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gK多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gK多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gK多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gK多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gN多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gN多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gN多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gN多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gC多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gC多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gC多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gC多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gB多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gB多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gB多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gB多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gH多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gH多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gH多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gH多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gM多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gM多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gM多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gM多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gL多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gL多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gL多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gL多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gI多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gI多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gI多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gI多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽為全長gE多肽。在一些態樣中,VZV多肽為經截短VZV gE多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gE多肽之變異體。在一些態樣中,VZV多肽為VZV gE多肽之片段。
在一些態樣中,VZV多肽包含至少一個突變。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gK多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gN多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gC多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gB多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gH多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gM多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gL多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gI多肽。在一些態樣中,VZV多肽為包含至少一個突變之VZV gE多肽。
在一些態樣中,RNA分子編碼包含根據以下GENBANK®寄存編號中之任一者之胺基酸序列或其片段或變異體的VZV gE多肽:AAG32558.1、ABE03086.1、AAK01047.1、Q9J3M8.1、AEW88548.1、AGY33616.1、AEW89124.1、AIT53150.1、CAA25033.1、NP_040190.1、AKG56356.1、AEW89412.1、ABF21714.1、ABF21714.1、AAT07749.1、AEW88764.1、AAG48520.1及/或AEW88980.1,其各別序列以引用的方式併入本文中。在一些態樣中,RNA分子編碼包含根據GENBANK®寄存編號AH009994.2之胺基酸序列或其片段或變異體的VZV gE多肽(ORF68),其序列以引用的方式併入本文中。
在一些態樣中,RNA分子編碼表1之VZV多肽(參見實例7)。在一些態樣中,RNA分子編碼包含SEQ ID NO: 1至11中之任一者之胺基酸序列或其片段或變異體的VZV gE多肽。在一些態樣中,VZV gE多肽可與表1之胺基酸序列中之任一者,例如與SEQ ID NO: 1至11中之任一者具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性:70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些態樣中,VZV gE多肽由表1之胺基酸序列中之任一者,例如由SEQ ID NO: 1至11中之任一者組成。
在一些態樣中,RNA分子序列由表2之DNA核酸序列(DNA聚核苷酸) (參見實例7)轉錄。在一些態樣中,RNA分子包含由SEQ ID NO: 12至145中之任一者之核酸序列或其片段或變異體轉錄的ORF。在一些態樣中,RNA分子包含由核酸序列轉錄之ORF,該核酸序列可與表2之核酸序列中之任一者,例如與SEQ ID NO: 12至145中之任一者具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性:70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些態樣中,RNA分子包含由核酸序列轉錄之ORF,該核酸序列由表2之核酸序列中之任一者,例如由SEQ ID NO: 12至145中之任一者組成。
在一些態樣中,RNA分子包含有包含表3之RNA核酸序列(RNA聚核苷酸) (參見實例7)的ORF。在一些態樣中,RNA分子包含有包含SEQ ID NO: 146至279中之任一者之核酸序列或其片段或變異體的ORF。在一些態樣中,RNA分子包含有包含核酸序列之ORF,該核酸序列可與表3之RNA核酸序列中之任一者,例如與SEQ ID NO: 146至279中之任一者具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性:70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些態樣中,RNA分子包含有包含核酸序列之ORF,該核酸序列由表3之RNA核酸序列中之任一者,例如由與SEQ ID NO: 146至279中之任一者組成。
在一些態樣中,RNA分子包含穩定化RNA。在一些態樣中,RNA分子包含至少一個尿苷經N1-甲基假尿苷置換之核酸序列。在一些態樣中,RNA分子包含所有尿苷經N1-甲基假尿苷(表示為「Ψ」)置換之序列。在一些態樣中,RNA分子包含有包含SEQ ID NO: 146至279中之任一者之核酸序列的ORF,其中所有尿苷已經N1-甲基假尿苷(表示為「Ψ」)置換。
在一些態樣中,RNA分子包含編碼VZV多肽胺基酸序列之開放閱讀框架,該VZV多肽胺基酸序列可與SEQ ID NO: 1至11之VZV多肽序列中之任一者(表1)或本文所描述之其他VZV多肽具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性:70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些態樣中,RNA分子包含編碼VZV多肽胺基酸序列之開放閱讀框架,該VZV多肽胺基酸序列由SEQ ID NO: 1至11之VZV多肽序列中之任一者(表1)或本文所描述之其他VZV多肽組成。
在一些態樣中,RNA分子包含由DNA核酸序列轉錄之開放閱讀框架,該DNA核酸序列可與SEQ ID NO: 12至145之核酸序列中之任一者(表2)或本文所描述之其他核酸具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性:70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些態樣中,RNA分子包含由DNA核酸序列轉錄之開放閱讀框架,該DNA核酸序列由SEQ ID NO: 12至145之核酸序列中之任一者(表2)或本文所描述之其他核酸組成。
在一些態樣中,RNA分子包含有包含RNA核酸序列之開放閱讀框架,該RNA核酸序列可與SEQ ID NO: 146至279之核酸序列中之任一者(表3)或本文所描述之其他核酸具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性:70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。在一些態樣中,RNA分子包含有包含RNA核酸序列之開放閱讀框架,該RNA核酸序列由SEQ ID NO: 146至279之核酸序列中之任一者(表3)或本文所描述之其他核酸組成。在一些態樣中,RNA分子包含有包含SEQ ID NO: 146至279中之任一者之核酸序列(表3)的ORF,其中所有尿苷已經N1-甲基假尿苷(表示為「Ψ」)置換。
III. RNA 分子在一些態樣中,本文所描述之RNA分子為編碼RNA分子。編碼RNA包括可轉譯成肽或多肽之功能性RNA分子。在一些態樣中,編碼RNA分子包括至少一個編碼至少一種肽或多肽之開放閱讀框架(ORF)。開放閱讀框架包含可轉譯成肽或蛋白質之密碼子序列。編碼RNA分子可包括一個(單順反子)、兩個(雙順反子)或更多個(多順反子) OFR,其可為可轉譯成所關注多肽或蛋白質之密碼子序列。
編碼RNA分子可為信使RNA (mRNA)分子、病毒RNA分子或自擴增RNA分子(saRNA,亦稱為複製子)。在一些態樣中,RNA分子為mRNA。較佳地,本發明之RNA分子為mRNA。在一些態樣中,RNA分子為saRNA。在一些態樣中,saRNA分子可為編碼RNA分子。
RNA分子可編碼一種所關注多肽或更多種,諸如一種抗原或多於一種抗原,例如兩種、三種、四種、五種、六種、七種、八種、九種、十種或更多種多肽。或者或另外,一個RNA分子亦可編碼多於一種所關注多肽,諸如抗原,例如編碼不同或相同抗原的雙順反子或三順反子RNA分子。
RNA分子之序列可經密碼子最佳化或去最佳化以供在所需宿主(諸如人類細胞)中表現。在一些態樣中,本文所描述之所關注基因(例如抗原)由與野生型編碼序列相比經密碼子最佳化及/或鳥苷/胞苷(G/C)含量增加的編碼序列編碼。在一些態樣中,編碼序列之一或多個序列區與野生型編碼序列之對應序列區相比經密碼子最佳化及/或G/C含量增加。在一些態樣中,密碼子最佳化及/或增加G/C含量不改變所編碼胺基酸序列之序列。
熟習此項技術者應瞭解,術語「密碼子最佳化」係指核酸分子之編碼區中之密碼子改變,其反映宿主生物體之典型密碼子使用而不改變由核酸分子編碼之胺基酸序列。在本發明之上下文內,在一些態樣中,編碼區經密碼子最佳化以供在待使用本文所描述之RNA聚核苷酸治療之個體中最佳表現。密碼子最佳化係基於以下發現:轉譯效率亦由細胞中tRNA分子之不同出現頻率決定。因此,RNA之序列可經修飾,使得可獲得頻繁出現之tRNA分子的密碼子插入在「罕用密碼子」之位置。
在一些態樣中,RNA之編碼區(例如所關注基因序列;開放閱讀框架(ORF))的G/C含量與編碼該所關注基因之野生型RNA之對應編碼序列的G/C含量相比增加,其中在一些態樣中,由RNA編碼之胺基酸序列與由野生型RNA編碼之胺基酸序列相比未經修飾。RNA序列之此修飾係基於以下事實:待轉譯的任何RNA區之序列對於該mRNA之高效轉譯而言為重要的。G (鳥苷)/C (胞苷)含量增加之序列與A (腺苷)/U (尿苷)含量增加之序列相比更穩定。相對於若干密碼子編碼同一個胺基酸之事實(所謂的遺傳密碼簡併),可確定對於穩定性最有利之密碼子(所謂的替代密碼子使用)。視由RNA編碼之胺基酸而定,RNA序列相比於其野生型序列之修飾存在各種可能性。特別地,含有A及/或U核苷之密碼子可藉由用其他密碼子取代此等密碼子而經修飾,該等其他密碼子編碼相同胺基酸但不含有A及/或U或含有較低含量之A及/或U核苷。因此,在一些態樣中,本文所描述之RNA之編碼區的G/C含量與野生型RNA之編碼區的G/C含量相比增加至少、至多、恰好以下百分比或以下中之任何兩者之間的百分比:10%、20%、30%、40%、50%、55%或甚至更多。在一些態樣中,本文所描述之VZV RNA之編碼區包含至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%或約80%之G/C含量。在一些態樣中,本文所描述之VZV RNA之編碼區包含約50%至75%、約55%至70%、約50%至60%、約60%至70%、約70%至80%、約50%至55%、約55%至60%、約60%至65%、約65%至70%、約70%至75%、或約75%至80%之G/C含量。在一些態樣中,本文所描述之VZV RNA之編碼區包含約50%、約51%、約52%、約53%、約54%、約55%、約56%、約57%、約58%、約59%、約60%、約61%、約62%、約63%、約64%、約65%、約66%、約67%、約68%、約69%、約70%、約71%、約72%、約73%、約74%或約75%之G/C含量。在一些態樣中,本文所描述之VZV RNA之編碼區包含約58%、約66%或約62%之G/C含量。
在一些態樣中,RNA分子包括約20至約100,000個核苷酸(例如,30至50、30至100、30至250、30至500、30至1,000、30至1,500、30至3,000、30至5,000、30至7,000、30至10,000、30至25,000、30至50,000、30至70,000、100至250、100至500、100至1,000、100至1,500、100至3,000、100至5,000、100至7,000、100至10,000、100至25,000、100至50,000、100至70,000、100至100,000、500至1,000、500至1,500、500至2,000、500至3,000、500至5,000、500至7,000、500至10,000、500至25,000、500至50,000、500至70,000、500至100,000、1,000至1,500、1,000至2,000、1,000至3,000、1,000至5,000、1,000至7,000、1,000至10,000、1,000至25,000、1,000至50,000、1,000至70,000、1,000至100,000、1,500至3,000、1,500至5,000、1,500至7,000、1,500至10,000、1,500至25,000、1,500至50,000、1,500至70,000、1,500至100,000、2,000至3,000、2,000至5,000、2,000至7,000、2,000至10,000、2,000至25,000、2,000至50,000、2,000至70,000及2,000至100,000個核苷酸)。
在一些態樣中,RNA分子具有至少、至多、恰好以下數目個核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個核苷酸:約20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380、400、420、440、460、480、500、520、540、560、580、600、620、640、660、680、700、720、740、760、780、800、820、840、860、880、900、920、940、960、980、1000、1000、1200、1400、1600、1800、2000、2200、2400、2600、2800、3000、3200、3400、3600、3800、4000、4200、4400、4600、4800、5000、5200、5400、5600、5800、6000、6200、6400、6600、6800、7000、7200、7400、7600、7800、8000、8200、8400、8600、8800、9000、9200、9400、9600、9800、10000、10000、12000、14000、16000、18000、20000、22000、24000、26000、28000、30000、32000、34000、36000、38000、40000、42000、44000、46000、48000、50000、52000、54000、56000、58000、60000、62000、64000、66000、68000、70000、72000、74000、76000、78000、80000、82000、84000、86000、88000、90000、92000、94000、96000、98000或100000個核苷酸。
在一些態樣中,RNA分子包括至少100個核苷酸。舉例而言,在一些態樣中,RNA之長度在100與15,000個核苷酸之間;在7,000與16,000個核苷酸之間;在8,000與15,000個核苷酸之間;在9,000與12,500個核苷酸之間;在11,000與15,000個核苷酸之間;在13,000與16,000個核苷酸之間;在7,000與25,000個核苷酸之間。在一些態樣中,RNA分子具有至少、至多、恰好以下數目個核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個核苷酸:約100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550、1600、1650、1700、1750、1800、1850、1900、1950、2000、2050、2100、2150、2200、2250、2300、2350、2400、2450、2500、2550、2600、2650、2700、2750、2800、2850、2900、2950、3000、3050、3100、3150、3200、3250、3300、3350、3400、3450、3500、3550、3600、3650、3700、3750、3800、3850、3900、3950、4000、4050、4100、4150、4200、4250、4300、4350、4400、4450、4500、4550、4600、4650、4700、4750、4800、4850、4900、4950、5000、5050、5100、5150、5200、5250、5300、5350、5400、5450、5500、5550、5600、5650、5700、5750、5800、5850、5900、5950、6000、6050、6100、6150、6200、6250、6300、6350、6400、6450、6500、6550、6600、6650、6700、6750、6800、6850、6900、6950、7000、7050、7100、7150、7200、7250、7300、7350、7400、7450、7500、7550、7600、7650、7700、7750、7800、7850、7900、7950、8000、8050、8100、8150、8200、8250、8300、8350、8400、8450、8500、8550、8600、8650、8700、8750、8800、8850、8900、8950、9000、9050、9100、9150、9200、9250、9300、9350、9400、9450、9500、9550、9600、9650、9700、9750、9800、9850、9900、9950、10000、10050、10100、10150、10200、10250、10300、10350、10400、10450、10500、10550、10600、10650、10700、10750、10800、10850、10900、10950、11000、11050、11100、11150、11200、11250、11300、11350、11400、11450、11500、11550、11600、11650、11700、11750、11800、11850、11900、11950、12000、12050、12100、12150、12200、12250、12300、12350、12400、12450、12500、12550、12600、12650、12700、12750、12800、12850、12900、12950、13000、13050、13100、13150、13200、13250、13300、13350、13400、13450、13500、13550、13600、13650、13700、13750、13800、13850、13900、13950、14000、14050、14100、14150、14200、14250、14300、14350、14400、14450、14500、14550、14600、14650、14700、14750、14800、14850、14900、14950或15000個核苷酸。
在本發明之一些態樣中,RNA為或包含信使RNA (mRNA),其與編碼多肽之RNA轉錄物有關。在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含:5'端帽,其包含本文所揭示之5'端帽;5'非轉譯區,其包含端帽近端序列(5' UTR),亦即編碼蛋白質(例如多肽)之序列;3'非轉譯區(3' UTR);及/或聚腺苷酸(聚A)序列。
在一些態樣中,本文所揭示之RNA在5'至3'方向上包含以下組分:5'端帽,其包含本文所揭示之5'端帽;5'非轉譯區,其包含端帽近端序列(5' UTR),亦即編碼蛋白質(例如多肽)之序列;3'非轉譯區(3' UTR);及聚A序列。
A. 經修飾之核鹼基在本發明中,RNA分子可包含經修飾之核鹼基,該等經修飾之核鹼基可併入至經修飾之核苷及核苷酸中。在一些態樣中,RNA分子可包括一或多個經修飾之核苷酸。天然存在之核苷酸修飾為此項技術中已知的。
在一些態樣中,RNA分子可包括經修飾之核苷酸。可包括在RNA分子中的經修飾之核苷酸之非限制性實例包括假尿苷、N1-甲基假尿苷、5-甲基尿苷、3-甲基-尿苷、5-甲氧基-尿苷、5-氮雜-尿苷、6-氮雜-尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代-尿苷、4-硫代-尿苷、4-硫代-假尿苷、2-硫代-假尿苷、5-羥基-尿苷、5-胺基烯丙基-尿苷、5-鹵基-尿苷(例如5-碘-尿苷或5-溴-尿苷)、尿苷5-氧乙酸、尿苷5-氧乙酸甲酯、5-羧甲基-尿苷、1-羧甲基-假尿苷、5-羧基羥甲基-尿苷、5-羧基羥甲基-尿苷甲酯、5-甲氧基羰基甲基-尿苷、5-甲氧基羰基甲基-2-硫代-尿苷、5-胺甲基-2-硫代-尿苷、5-甲胺基甲基-尿苷、1-乙基-假尿苷、5-甲胺基甲基-2-硫代-尿苷、5-甲胺基甲基-2-硒基-尿苷、5-胺甲醯基甲基-尿苷、5-羧甲基胺甲基-尿苷、5-羧甲基胺甲基-2-硫代-尿苷、5-丙炔基-尿苷、1-丙炔基-假尿苷、5-牛磺酸甲基-尿苷、1-牛磺酸甲基-假尿苷、5-牛磺酸甲基-2-硫代-尿苷、1-牛磺酸甲基-4-硫代-假尿苷、5-甲基-2-硫代-尿苷、1-甲基-4-硫代-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、3-甲基-1-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-1-去氮-假尿苷、二氫尿苷、二氫假尿苷、5,6-二氫尿苷、5-甲基-二氫尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2-甲氧基-尿苷、2-甲氧基-4-硫代-尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、N1-甲基-假尿苷、3-(3-胺基-3-羧丙基)尿苷、1-甲基-3-(3-胺基-3-羧丙基)假尿苷、5-(異戊烯基胺甲基)尿苷、5-(異戊烯基胺甲基)-2-硫代-尿苷、a-硫代-尿苷、2'-O-甲基-尿苷、5,2'-O-二甲基-尿苷、2'-O-甲基-假尿苷、2-硫代-2'-O-甲基-尿苷、5-甲氧基羰基甲基-2'-O-甲基-尿苷、5-胺甲醯基甲基-2'-O-甲基-尿苷、5-羧甲基胺甲基-2'-O-甲基-尿苷、3,2'-O-二甲基-尿苷、5-(異戊烯基胺甲基)-2'-O-甲基-尿苷、1-硫代-尿苷、去氧胸苷、2'-F-阿糖尿苷、2'-F-尿苷、2'-OH-阿糖尿苷、5-(2-甲氧羰基乙烯基)尿苷、5-[3-(1-E-丙烯基胺基)尿苷、此項技術中已知的任何其他經修飾之尿苷、或其組合。
在本發明之一些態樣中,經修飾之核苷酸包括N1-甲基假尿苷或假尿苷中之任一者。
在一些態樣中,RNA分子包含經N1-甲基假尿苷修飾之核苷酸。在一些態樣中,RNA分子包含經假尿苷修飾之核苷酸。
在一些態樣中,RNA之至少一個尿苷由經修飾之核苷代替。在一些態樣中,RNA之每一個尿苷由經修飾之核苷代替。在一些態樣中,RNA分子包含至少一個尿苷經N1-甲基假尿苷置換之序列。在一些態樣中,RNA分子包含所有尿苷經N1-甲基假尿苷置換之序列。N1-甲基假尿苷在序列中表示為「Ψ」。如本文所使用,術語「尿嘧啶」描述可出現在RNA之核酸中的一種核鹼基。如本文所使用,術語「尿苷」描述可出現在RNA中的一種核苷。「假尿苷」為經修飾之核苷之一個實例,其為尿苷之異構物,其中尿嘧啶經由碳-碳鍵而非氮-碳醣苷鍵連接至戊醣環。
在一些態樣中,RNA分子包含至少一個尿苷經N1-甲基假尿苷或假尿苷置換之核酸序列。在一些態樣中,RNA分子包含至少、至多、恰好以下百分比或以下中之任何兩者之間的百分比之尿苷經N1-甲基假尿苷或假尿苷置換的核酸序列:1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%。在一些態樣中,RNA分子包含所有尿苷經N1-甲基假尿苷或假尿苷置換之核酸序列。
可存在於RNA分子中之修飾進一步包括例如:m5C (5-甲基胞苷)、m5U (5-甲基尿苷)、m6A (N6-甲基腺苷)、s2U (2-硫代尿苷)、Um (2'-O-甲基尿苷)、m1A (1-甲基腺苷);m2A (2-甲基腺苷);Am (2-1-O-甲基腺苷);ms2m6A (2-甲硫代-N6-甲基腺苷);i6A (N6-異戊烯基腺苷);ms2i6A (2-甲硫代-N6異戊烯基腺苷);io6A (N6-(順式-羥基異戊烯基)腺苷);ms2io6A (2-甲硫代-N6-(順式-羥基異戊烯基)腺苷);g6A (N6-甘胺醯基胺甲醯基腺苷);t6A (N6-蘇胺醯基胺甲醯基腺苷);ms2t6A (2-甲硫代-N6-蘇胺醯基胺甲醯基腺苷);m6t6A (N6-甲基-N6-蘇胺醯基胺甲醯基腺苷);hn6A (N6-羥基正纈胺醯基胺甲醯基腺苷);ms2hn6A (2-甲硫代-N6-羥基正纈胺醯基胺甲醯基腺苷);Ar(p) (2'-O-核糖苷基腺苷(磷酸));I (肌苷);mil (1-甲基肌苷);m'lm (1,2'-O-二甲基肌苷);m3C (3-甲基胞苷);Cm (2T-O-甲基胞苷);s2C (2-硫代胞苷);ac4C (N4-乙醯基胞苷);f5C (5-甲醯基胞嘧啶);m5Cm (5,2-O-二甲基胞苷);ac4Cm (N4乙醯基2TO甲基胞苷);k2C (立西啶(lysidine));m1G (1-甲基鳥苷);m2G (N2-甲基鳥苷);m7G (7-甲基鳥苷);Gm (2'-O-甲基鳥苷);m22G (N2,N2-二甲基鳥苷);m2Gm (N2,2'-O-二甲基鳥苷);m22Gm (N2,N2,2'-O-三甲基鳥苷);Gr(p) (2'-O-核糖苷基鳥苷(磷酸));yW (懷俄丁苷(wybutosine));o2yW (過氧基懷俄丁苷);OHyW (羥基懷俄丁苷);OHyW* (修飾不足之羥基懷俄丁苷);imG (懷俄苷);mimG (甲基鳥苷);Q (Q核苷);oQ (環氧Q核苷);galQ (半乳糖基-Q核苷);manQ (甘露糖基-Q核苷);preQo (7-氰基-7-去氮鳥苷);preQi (7-胺甲基-7-去氮鳥苷);G* (古嘌苷);D (二氫尿苷);m5Um (5,2'-O-二甲基尿苷);s4U (4-硫代尿苷);m5s2U (5-甲基-2-硫代尿苷);s2Um (2-硫代-2'-O-甲基尿苷);acp3U (3-(3-胺基-3-羧丙基)尿苷);ho5U (5-羥基尿苷);mo5U (5-甲氧基尿苷);cmo5U (尿苷5-氧乙酸);mcmo5U (尿苷5-氧乙酸甲酯);chm5U (5-(羧基羥甲基)尿苷);mchm5U (5-(羧基羥甲基)尿苷甲酯);mcm5U (5-甲氧基羰基甲基尿苷);mcm5Um (S-甲氧基羰基甲基-2-O-甲基尿苷);mcm5s2U (5-甲氧基羰基甲基-2-硫代尿苷);nm5s2U (5-胺甲基-2-硫代尿苷);mnm5U (5-甲胺基甲基尿苷);mnm5s2U (5-甲胺基甲基-2-硫代尿苷);mnm5se2U (5-甲胺基甲基-2-硒基尿苷);ncm5U (5-胺甲醯基甲基尿苷);ncm5Um (5-胺甲醯基甲基-2'-O-甲基尿苷);cmnm5U (5-羧甲基胺甲基尿苷);cnmm5Um (5-羧甲基胺甲基-2-L-O甲基尿苷);cmnm5s2U (5-羧甲基胺甲基-2-硫代尿苷);m62A (N6,N6-二甲基腺苷);Tm (2'-O-甲基肌苷);m4C (N4-甲基胞苷);m4Cm (N4,2-O-二甲基胞苷);hm5C (5-羥甲基胞苷);m3U (3-甲基尿苷);cm5U (5-羧甲基尿苷);m6Am (N6,T-O-二甲基腺苷);rn62Am (N6,N6,O-2-三甲基腺苷);m2′7G (N2,7-二甲基鳥苷);m2′2′7G (N2,N2,7-三甲基鳥苷);m3Um (3,2T-O-二甲基尿苷);m5D (5-甲基二氫尿苷);f5Cm (5-甲醯基-2'-O-甲基胞苷);m1Gm (1,2'-O-二甲基鳥苷);m'Am (1,2-O-二甲基腺苷);tm5s2U (S-牛磺酸甲基-2-硫代尿苷);imG-14 (4-去甲基鳥苷);imG2 (異鳥苷);ac6A (N6-乙醯基腺苷)、次黃嘌呤、肌苷、8-側氧基-腺嘌呤、其7-經取代衍生物、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-胺基尿嘧啶、5-(C1-C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-Ce)烯基尿嘧啶、5-(C2-Ce)炔基尿嘧啶、5-(羥甲基)尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-(C1-C6)烷基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-(C2-C6)烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、N2-二甲基鳥嘌呤、7-去氮鳥嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤、7-去氮-7-經取代鳥嘌呤、7-去氮-7-(C2-C6)炔基鳥嘌呤、7-去氮-8-經取代鳥嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、8-側氧基鳥嘌呤、2-胺基嘌呤、2-胺基-6-氯嘌呤、2,4-二胺基嘌呤、2,6-二胺基嘌呤、8-氮雜嘌呤、經取代之7-去氮嘌呤、7-去氮-7-經取代嘌呤、7-去氮-8-經取代嘌呤、氫(無鹼基殘基)、m5C、m5U、m6A、s2U、W或2'-O-甲基-U。
在一些態樣中,RNA分子可包括胺基磷酸酯、硫代磷酸酯及/或甲基磷酸酯鍵。
RNA分子之序列可視需要經修飾,例如以增加RNA之表現或複製效力,或提供額外穩定性或抗降解性。舉例而言,RNA序列可在其密碼子使用方面經修飾,例如以增加RNA之轉譯效力及半衰期。
在一些態樣中,本發明之RNA分子包含具有經至少一個密碼子修飾之序列的開放閱讀框架。經密碼子修飾之序列係關於與對應野生型編碼序列相比至少一個密碼子(編碼一個胺基酸之核苷酸三聯體)不同的編碼序列。經密碼子修飾之序列可展現改良的抗降解性、改良的穩定性及/或改良的可轉譯性。
RNA分子之序列可經密碼子最佳化或去最佳化以供在所需宿主(諸如人類細胞)中表現。
在一些態樣中,RNA分子可包括賦予聚核苷酸適用特性之一或多個結構及/或化學修飾或改變,在一些態樣中,該等適用特性包括缺乏引入聚核苷酸之細胞之先天性免疫反應的實質性誘導。如本文所使用,「結構」特徵或修飾為兩個或更多個連接之核苷酸在RNA分子中插入、缺失、複製、反向或隨機化而不對核苷酸本身進行顯著化學修飾的修飾。因為化學鍵將必然斷裂且重新形成以實現結構修飾,因此結構修飾具有化學性質且因此為化學修飾。然而,結構修飾將產生不同核苷酸序列。舉例而言,聚核苷酸「ATCG」可化學修飾為「AT-5meC-G」。相同聚核苷酸可自「ATCG」結構修飾為「ATCCCG」。此處,已插入二核苷酸「CC」,從而引起聚核苷酸之結構修飾。
在一些態樣中,RNA分子可包括一或多個除任何5'端帽結構以外的經修飾之核苷酸。天然存在之核苷酸修飾為此項技術中已知的。
在一些態樣中,除了視情況存在的可包括例如7-甲基鳥苷之5'端帽(下文進一步描述)以外,RNA分子不包括經修飾之核苷酸,例如不包括經修飾之核鹼基,且RNA分子中之所有核苷酸為習知標準核糖核苷酸A、U、G及C。在一些態樣中,RNA可包括包含7'-甲基鳥苷之5'端帽,且前1個、2個或3個5'核糖核苷酸可在核糖之2'位置處甲基化。
在一些態樣中,本文所描述之RNA分子為非編碼RNA分子。非編碼RNA (ncRNA)分子包括不轉譯成肽或多肽之功能性RNA分子。非編碼RNA分子可包括高度豐富且在功能上重要的RNA分子。在一些態樣中,非編碼RNA為不轉譯成肽或多肽之功能性mRNA分子。非編碼RNA可包括如本文所描述之經修飾之核苷酸。較佳地,RNA分子為mRNA。
本發明之RNA分子可藉由此項技術中已知之任何方法製備,包括化學合成及活體外方法,諸如RNA活體外轉錄。在一些態樣中,本發明之RNA係使用活體外轉錄製備。
在一些態樣中,本發明之RNA分子例如藉由過濾來純化,該過濾可經由例如超濾、透濾或例如切向流超濾/透濾進行。
在一些態樣中,本發明之RNA分子凍乾成溫度穩定的。
B. 5' 端帽在一些態樣中,本文所描述之RNA分子包括5'端帽,其通常對RNA之5'端進行「加帽」且使RNA分子穩定。
在一些態樣中,5'端帽部分為天然5'端帽。「天然5'端帽」定義為包括經由5'至5'三磷酸鍵連接至mRNA分子之5'端之7-甲基鳥苷的端帽。在一些態樣中,包括在5'端帽中之鳥苷核苷可例如藉由鹼基(鳥嘌呤)上之一或多個位置處(例如7位置處)之甲基化及/或藉由核糖之一或多個位置處之甲基化而經修飾。在一些態樣中,包括在5'端帽中之鳥苷核苷包含核糖處之3'O甲基化(3'OMeG)。在一些態樣中,包括在5'端帽中之鳥苷核苷包含鳥嘌呤之7位置處之甲基化(m7G)。在一些態樣中,包括在5'端帽中之鳥苷核苷包含鳥嘌呤之7位置處之甲基化及核糖處之3'O甲基化(m7(3'OMeG))。5'端帽可在RNA合成期間併入(例如,共轉錄加帽),或可在RNA轉錄之後酶促工程改造(例如,轉錄後加帽)。在一些態樣中,用本文所揭示之端帽進行共轉錄加帽與用適當參考比較物進行共轉錄加帽相比,RNA之加帽效率提高。在一些態樣中,提高加帽效率可增加RNA之轉譯效率及/或轉譯速率,及/或增加所編碼多肽之表現。在一些態樣中,加帽在RNA分子之純化(例如,切向流過濾)之後進行。
在一些態樣中,本文所描述之RNA包含5'端帽或5'端帽類似物,例如端帽0、端帽1或端帽2。在一些態樣中,所提供之RNA不具有未加帽的5'-三磷酸。在一些態樣中,RNA之5'端用經修飾之核糖核苷酸加帽。在一些態樣中,5'端帽部分為5'端帽類似物。在一些態樣中,RNA可用5'端帽類似物加帽。端帽結構包括但不限於7mG(5')ppp(5')N,pN2p (端帽0)及7mG(5')ppp(5')N1mpNp (端帽1)。在一些態樣中,本文所描述之RNA包含端帽0。端帽0為經由5'至5'三磷酸鍵連接至5'核苷酸之N7-甲基鳥苷,其通常被稱作m7G端帽或m7Gppp。在細胞中,端帽0結構對於攜帶端帽之mRNA的高效轉譯為至關重要的。起始核苷酸之2'O位置上的額外甲基化產生端帽1,或被稱作m7GpppNm,其中Nm表示具有2'O甲基化之任何核苷酸。在一些態樣中,本文所描述之RNA包含例如如本文所描述之端帽1。在一些態樣中,本文所描述之RNA包含端帽2。
在一些態樣中,端帽0結構包含在鳥嘌呤之7位置處甲基化的鳥苷核苷(m7G)。在一些態樣中,端帽0結構經由5'至5'三磷酸鍵連接至RNA,且在本文中亦被稱為m7Gppp或m7G(5')ppp(5')。5'端帽可用結構m7G(5')ppp(5')N (端帽0結構)或其衍生物甲基化,其中N為攜帶5'端帽之核酸之末端5'核苷酸,通常為mRNA之5'端。用於加帽之例示性酶促反應可包括使用包括mRNA三磷酸酶、鳥苷醯基轉移酶及鳥嘌呤-7-甲基轉移酶之牛痘病毒加帽酶(VCE),其催化N7-單甲基化端帽0結構之構築。端帽0結構在維持RNA分子之穩定性及轉譯效力方面起重要作用。
RNA分子之5'端帽可進一步由2'-O-甲基轉移酶修飾,該2'-O-甲基轉移酶引起端帽1結構(m7Gppp [m2'-O] N)之產生,其可進一步增加轉譯效力。在一些態樣中,端帽1結構包含在鳥嘌呤之7位置處甲基化之鳥苷核苷(m7G)及RNA中經2'O甲基化之第一核苷酸(2'OmeN 1)。在一些態樣中,端帽1結構經由5'至5'三磷酸鍵連接至RNA,且在本文中亦被稱為m7Gppp(2'OMeN 1)或m7G(5')ppp(5')(2'OMeN 1)。在一些態樣中,N 1係選自A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A。在一些態樣中,N 1為C。在一些態樣中,N 1為G。在一些態樣中,N 1為U。在一些態樣中,m7G(5')ppp(5')(2'OmeN 1)端帽1結構包含第二核苷酸N 2,其為位置2處之端帽近端核苷酸且係選自A、G、C或U (m7G(5')ppp(5')(2'OmeN 1)N 2)。在一些態樣中,N 2為A。在一些態樣中,N 2為C。在一些態樣中,N 2為G。在一些態樣中,N 2為U。
在一些態樣中,端帽1結構包含在鳥嘌呤之7位置處甲基化之鳥苷核苷(m7G)及一或多個額外修飾(例如核糖上之甲基化)以及RNA中經2'O甲基化之第一核苷酸。在一些態樣中,端帽1結構包含在鳥嘌呤之7位置處甲基化之鳥苷核苷、核糖處之3'O甲基化(m7(3'OMeG))及RNA中經2'O甲基化之第一核苷酸(2'OMeN 1)。在一些態樣中,端帽1結構經由5'至5'三磷酸鍵連接至RNA,且在本文中亦被稱為m7(3'OMeG)ppp(2'OMeN 1)或m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeN 1)。在一些態樣中,N 1係選自A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A。在一些態樣中,N 1為C。在一些態樣中,N 1為G。在一些態樣中,N 1為U。在一些態樣中,m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeN 1)端帽1結構包含第二核苷酸N 2,其為位置2處之端帽近端核苷酸且係選自A、G、C或U (m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OmeN 1)N 2)。在一些態樣中,N 2為A。在一些態樣中,N 2為C。在一些態樣中,N 2為G。在一些態樣中,N 2為U。
在一些態樣中,端帽1結構中之第二核苷酸可包含一或多個修飾,例如甲基化。在一些態樣中,包含有包含2'O甲基化之第二核苷酸的端帽1結構為端帽2結構。
在一些態樣中,RNA分子可使用牛痘鳥苷醯基轉移酶、鳥苷三磷酸及S-腺苷基-L-甲硫胺酸在5'端處酶促加帽,得到端帽0結構。反向的7-甲基鳥苷端帽經由5'至5'三磷酸橋添加。或者,使用2'O-甲基轉移酶與牛痘鳥苷醯基轉移酶得到端帽1結構,其中除端帽0結構以外,倒數第二個核苷酸上之2'OH基團經甲基化。S-腺苷基-L-甲硫胺酸(SAM)為用作甲基轉移試劑之輔因子。5'端帽結構之非限制性實例為與此項技術中已知的合成5'端帽結構(或野生型、天然或生理5'端帽結構)相比,尤其端帽結合多肽之結合增強、半衰期增加、對5'核酸內切酶之敏感性降低及/或5'去帽減少的彼等結構。
舉例而言,重組牛痘病毒加帽酶及重組2'-O-甲基轉移酶可在mRNA之5'末端核苷酸與鳥嘌呤端帽核苷酸之間產生典型5'-5'三磷酸鍵,其中端帽鳥嘌呤包括N7甲基化且mRNA之5'末端核苷酸包括2'-O-甲基。此類結構被稱為端帽1結構。與例如此項技術中已知的其他5'端帽類似物結構相比,此端帽使得轉譯能力及細胞穩定性更高以及細胞促炎性細胞介素之活化減少。
在一些態樣中,5'端端帽包括端帽類似物,例如5'端端帽可包括鳥嘌呤類似物。例示性鳥嘌呤類似物包括(但不限於)肌苷、N1-甲基-鳥苷、2'-氟-鳥苷、7-去氮-鳥苷、8-側氧基-鳥苷、2-胺基-鳥苷、LNA-鳥苷及2-疊氮基-鳥苷。
在一些態樣中,加帽區可包括單一端帽或形成端帽之一系列核苷酸。在此態樣中,加帽區之長度可為1至10個,例如2至9個、3至8個、4至7個、1至5個、5至10個、或至少2個、或10個或更少核苷酸。在此態樣中,加帽區之長度為至少、至多、恰好以下數目個核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個核苷酸:1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個。在一些態樣中,不存在端帽。在一些態樣中,第一及第二操作區之長度可在3至40個核苷酸之範圍內,例如5至30個、10至20個、15個、或至少4個、或30個或更少核苷酸;且除了起始及/或終止密碼子以外,其亦可包含一或多個信號及/或限制序列。在一些態樣中,第一及第二操作區之長度為至少、至多、恰好以下數目個核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個核苷酸:3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40個;且除了起始及/或終止密碼子以外,其亦可包含一或多個信號及/或限制序列。
5'端帽結構之其他實例包括(但不限於)甘油基、反向去氧無鹼基殘基(部分)、4',5'亞甲基核苷酸、1-(β-D-赤呋喃醣基)核苷酸、4'-硫代核苷酸、碳環核苷酸、1,5-無水己糖醇核苷酸、L-核苷酸、α-核苷酸、經修飾之鹼基核苷酸、蘇-呋喃戊醣基核苷酸、非環狀3',4'-斷核苷酸、非環狀3,4-二羥丁基核苷酸、非環狀3,5二羥戊基核苷酸、3'-3'反向核苷酸部分、3'-3'反向無鹼基部分、3'-2'反向核苷酸部分、3'-2'反向無鹼基部分、1,4-丁二醇磷酸酯、3'-胺基磷酸酯、己基磷酸酯、胺基己基磷酸酯、3'-磷酸酯、3'硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯或橋接或非橋接甲基磷酸酯部分。
在一些態樣中,本發明之RNA分子包含至少一個5'端帽結構。在一些態樣中,本發明之RNA分子不包含5'端帽結構。
在一個態樣中,5'加帽結構包含經修飾之5'端帽1結構(m 7G +m 3'-5'-ppp-5'-Am)。在一個態樣中,5'加帽結構包含(3'OMe) - m 2 7,3'-OGppp (m 1 2'-O)ApG (TriLink BioTechnologies)。此分子與天然RNA端帽結構一致,因為其以在N7處甲基化之鳥苷開始,且藉由5'至5'三磷酸鍵連接至所轉錄RNA之第一經編碼核苷酸(在此情況下為腺苷)。此鳥苷亦在核糖之3'羥基處甲基化以緩解端帽分子之可能反向併入。腺苷上之核糖之2'羥基經甲基化,從而賦予端帽1結構。
C. 非轉譯區 ( UTR )5' UTR為位於蛋白質開放閱讀框架之5'端處的調節區,其轉錄成mRNA但不轉譯成胺基酸序列或RNA聚核苷酸(諸如mRNA分子)中之對應區。非轉譯區(UTR)可存在於開放閱讀框架之5'端(上游) (5' UTR)及/或開放閱讀框架之3'端(下游) (3' UTR)。
在一些態樣中,UTR來源於在mRNA表現所靶向之特定組織(例如淋巴組織)中天然豐富的mRNA。在一些態樣中,UTR增加蛋白質合成。不受機制或理論束縛,UTR可藉由增加mRNA在轉譯聚核糖體中之保持時間(信息穩定性)及/或核糖體基於信息起始轉譯之速率(信息轉譯效率)來增加蛋白質合成。因此,UTR序列可以組織特異性方式延長蛋白質合成。
在一些態樣中,5' UTR及3' UTR序列以計算方式衍生。在一些態樣中,5' UTR及3' UTR來源於組織中天然豐富的mRNA。該組織可為例如肝臟、幹細胞或淋巴組織。淋巴組織可包括例如淋巴細胞(例如B淋巴細胞、輔助T淋巴細胞、細胞毒性T淋巴細胞、調節T淋巴細胞或自然殺手細胞)、巨噬細胞、單核球、樹突狀細胞、嗜中性球、嗜酸性球及網狀紅血球中之任一者。在一些態樣中,5' UTR及3' UTR來源於α病毒(alphavirus)。在一些態樣中,5' UTR及3' UTR來自野生型α病毒。
i. 5′ UTR在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含5' UTR。5' UTR (若存在)位於5'端處,且以蛋白質編碼區之起始密碼子上游的轉錄起始位點開始。5' UTR在5'端帽(若存在)下游,例如直接鄰近於5'端帽。5' UTR可含有各種調節元件,例如5'端帽結構、莖環結構及內部核糖體進入位點(IRES),其可在轉譯起始之控制中起作用。
在一些態樣中,本文所揭示之5' UTR包含例如如本文所揭示之端帽近端序列。在一些態樣中,端帽近端序列包含鄰近於5'端帽之序列。在一些態樣中,端帽近端序列包含RNA聚核苷酸之位置+1、+2、+3、+4及/或+5之核苷酸。
在一些態樣中,端帽結構包含端帽近端序列之一或多個聚核苷酸。在一些態樣中,端帽結構包含m7鳥苷端帽及RNA聚核苷酸之核苷酸+1 (N 1)。在一些態樣中,端帽結構包含m7鳥苷端帽及RNA聚核苷酸之核苷酸+2 (N 2)。在一些態樣中,端帽結構包含m7鳥苷端帽及RNA聚核苷酸之核苷酸+1及+2 (N 1及N 2)。
閱讀本發明之熟習此項技術者應瞭解,在一些態樣中,端帽近端序列之一或多個殘基(例如,殘基+1、+2、+3、+4及/或+5中之一或多者)可藉助於已包括在端帽實體(例如端帽1結構等)中而包括在RNA中;或者,在一些態樣中,端帽近端序列中之至少一些殘基可酶促添加(例如藉由聚合酶,諸如T7聚合酶)。舉例而言,在利用(m 2 7,3'-O) Gppp(m 2'-O)ApG端帽之某些例示性態樣中,+1及+2殘基為端帽之(m 2 7,3'-O) A及G殘基,且+3、+4及+5殘基藉由聚合酶(例如T7聚合酶)添加。
在一些態樣中,端帽近端序列包含端帽結構之N 1及/或N 2,其中N 1及N 2為任何核苷酸,例如A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A。在一些態樣中,N 1為C。在一些態樣中,N 1為G。在一些態樣中,N 1為U。在一些態樣中,N 2為A。在一些態樣中,N 2為C。在一些態樣中,N 2為G。在一些態樣中,N 2為U。在一些態樣中,端帽近端序列包含端帽結構之N 1及N 2以及N 3、N 4及N 5,其中N 1至N 5對應於RNA聚核苷酸之位置+1、+2、+3、+4及/或+5。在一些態樣中,N 1、N 2、N 3、N 4或N 5為任何核苷酸,例如A、C、G或U。在一些態樣中,N 1N 2包含以下中之任一者:AA、AC、AG、AU、CA、CC、CG、CU、GA、GC、GG、GU、UA、UC、UG或UU。在一些態樣中,N 1N 2包含AG且N 3N 4N 5包含以下中之任一者:AAA、ACA、AGA、AUA、AAG、AGG、ACG、AUG、AAC、ACC、AGC、AUC、AAU、ACU、AGU、AUU、CAA、CCA、CGA、CUA、CAG、CGG、CCG、CUG、CAC、CCC、CGC、CUC、CAU、CCU、CGU、CUU、GAA、GCA、GGA、GUA、GAG、GGG、GCG、GUG、GAC、GCC、GGC、GUC、GAU、GCU、GGU、GUU、UAA、UCA、UGA、UUA、UAG、UGG、UCG、UUG、UAC、UCC、UGC、UUC、UAU、UCU、UGU或UUU。
在一些態樣中,端帽近端序列包含端帽結構之N 1及N 2以及包含以下之序列:A 3A 4X 5(SEQ ID NO: 307;其中X 5為A、G、C或U),其中N 1及N 2各自獨立地選自:A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A且N 2為G。在一些態樣中,X 5係選自A、C、G或U。在一些態樣中,X 5為A。在一些態樣中,X 5為C。在一些態樣中,X 5為G。在一些態樣中,X 5為U。
在一些態樣中,端帽近端序列包含端帽結構之N 1及N 2以及包含以下之序列:C 3A 4X 5(SEQ ID NO: 308;其中X 5為A、G、C或U),其中N 1及N 2各自獨立地選自:A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A且N 2為G。在一些態樣中,X 5係選自A、C、G或U。在一些態樣中,X 5為A。在一些態樣中,X 5為C。在一些態樣中,X 5為G。在一些態樣中,X 5為U。
在一些態樣中,端帽近端序列包含端帽結構之N 1及N 2以及包含X 3Y 4X 5(SEQ ID NO: 309;其中X 3或X 5各自獨立地選自A、G、C或U;且Y 4不為C)之序列。在一些態樣中,N 1及N 2各自獨立地選自:A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A且N 2為G。在一些態樣中,X 3及X 5各自獨立地選自A、C、G或U。在一些態樣中,X 3及/或X 5為A。在一些態樣中,X 3及/或X 5為C。在一些態樣中,X 3及/或X 5為G。在一些態樣中,X 3及/或X 5為U。在一些態樣中,Y 4為C。在其他態樣中,Y 4不為C。在一些態樣中,Y 4為A。在一些態樣中,Y 4為G。在其他態樣中,Y 4不為G。在一些態樣中,Y4為U。
在一些態樣中,端帽近端序列包含端帽結構之N 1及N 2以及包含A 3C 4A 5(SEQ ID NO: 310)之序列。在一些態樣中,N 1及N 2各自獨立地選自:A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A且N 2為G。
在一些態樣中,端帽近端序列包含端帽結構之N 1及N 2以及包含A 3U 4G 5(SEQ ID NO: 311)之序列。在一些態樣中,N 1及N 2各自獨立地選自:A、C、G或U。在一些態樣中,N 1為A且N 2為G。
例示性5' UTR包括人類α球蛋白(hAg) 5'UTR或其片段、TEV 5' UTR或其片段、HSP705' UTR或其片段、或c-Jun 5' UTR或其片段。
在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含hAg 5' UTR或其片段。在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含與SEQ ID NO: 312中所載之人類α球蛋白5' UTR具有99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%一致性的hAg 5' UTR。在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含SEQ ID NO: 312中所載之hAg 5' UTR。
在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含與SEQ ID NO: 313中所載之人類α球蛋白5' UTR具有99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%一致性的hAg 5' UTR。在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含SEQ ID NO: 313中所載之hAg 5' UTR。
在一個態樣中,編碼本文所揭示之5' UTR的DNA包含與SEQ ID NO: 280具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性的序列:99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%。在一個態樣中,編碼5' UTR之DNA包含SEQ ID NO: 280之序列。在一個態樣中,本文所揭示之RNA包含5' UTR,該5' UTR包含與SEQ ID NO: 281至282中之任一者中所載之5' UTR具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性的序列:99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%,其中所轉錄之5'端帽結構加底線。在一個態樣中,5' UTR包含SEQ ID NO: 281至282中之任一者之序列,其中所轉錄之5'端帽結構加底線。
ii. 3' UTR在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含3' UTR。3' UTR (若存在)位於蛋白質編碼序列開放閱讀框架下游,例如蛋白質編碼區之終止密碼子下游。3' UTR通常為位於mRNA之蛋白質編碼序列與聚A尾之間的mRNA部分。因此,在一些態樣中,3' UTR在聚A序列(若存在)上游,例如直接鄰近於聚A序列。3' UTR可涉及調節過程,包括轉錄物裂解、穩定性及聚腺苷酸化、轉譯及mRNA定位。
3' UTR亦可包含不在轉錄RNA之模板中編碼而是在轉錄之後在成熟期間添加的元件,例如聚A尾。mRNA之3' UTR不轉譯成胺基酸序列。在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含有包含F元件及/或I元件之3' UTR。在一些態樣中,3' UTR或其近端序列包含限制位點。在一些態樣中,限制位點為BamHI位點。在一些態樣中,限制位點為Xhol位點。
在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含與SEQ ID NO: 314中所載之3' UTR具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性的3' UTR:99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%。在一些態樣中,本文所揭示之RNA包含SEQ ID NO: 314中所載之3' UTR。
在一個態樣中,編碼本文所揭示之3' UTR的DNA包含與SEQ ID NO: 283具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性的序列:99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%。在一個態樣中,編碼5' UTR之DNA包含SEQ ID NO: 283之序列。在一個態樣中,本文所揭示之RNA包含3' UTR,該3' UTR包含與SEQ ID NO: 284至285及317至318中之任一者中所載之3' UTR具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性的序列:99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%。在一個態樣中,3' UTR包含SEQ ID NO: 284至285及317至318中之任一者之序列。
D. 開放閱讀框架 (ORF)5'及3' UTR可操作地連接至開放閱讀框架(ORF),其可為能夠轉譯成所關注多肽之密碼子序列。開放閱讀框架可為若干DNA或RNA核苷酸三聯體之序列,其可轉譯成肽或蛋白質。ORF可以其5'端及下一區處之起始密碼子開始,該起始密碼子例如通常編碼胺基酸甲硫胺酸之三個連續核苷酸之組合(ATG或AUG),其長度通常為3個核苷酸之倍數。開放閱讀框架可以至少一個終止密碼子終止,包括(但不限於) TAA、TAG、TGA或UAA、UAG或UGA、或其任何組合。在一些態樣中,開放閱讀框架可以一個、兩個、三個、四個或更多個終止密碼子終止,包括(但不限於) TAATAA (SEQ ID NO: 289)、TAATAG (SEQ ID NO: 290)、TAATGA (SEQ ID NO: 291)、TAGTGA (SEQ ID NO: 292)、TAGTAA (SEQ ID NO: 293)、TAGTAG (SEQ ID NO: 294)、TGATGA (SEQ ID NO: 295)、TGATAG (SEQ ID NO: 296)、TGATAA (SEQ ID NO: 297)或UAAUAA (SEQ ID NO: 298)、UAAUAG (SEQ ID NO: 299)、UAAUGA (SEQ ID NO: 300)、UAGUGA (SEQ ID NO: 301)、UAGUAA (SEQ ID NO: 302)、UAGUAG (SEQ ID NO: 303)、UGAUGA (SEQ ID NO: 304)、UGAUAG (SEQ ID NO: 305)、UGAUAA (SEQ ID NO: 306)、或其任何組合。開放閱讀框架可為分離的,或其可併入於較長核酸序列中,例如併入於載體或mRNA中。開放閱讀框架亦可被稱為「(蛋白質)編碼區」或「編碼序列」。
如本文所陳述,RNA分子可包括一個(單順反子)、兩個(雙順反子)或更多個(多順反子)開放閱讀框架。
在一些態樣中,ORF編碼非結構病毒基因。在一些態樣中,ORF進一步包括一或多個次基因體啟動子。在一些態樣中,RNA分子包括可操作地連接至ORF之次基因體啟動子。在一些態樣中,第一RNA分子不包括編碼任何所關注多肽之ORF,而第二RNA分子包括編碼所關注多肽之ORF。在一些態樣中,第一RNA分子不包括次基因體啟動子。
本發明提供一種RNA分子,其包含至少一個編碼水痘帶狀疱疹病毒(VZV)多肽之開放閱讀框架。在一些態樣中,RNA分子包含至少一個編碼VZV gE多肽之開放閱讀框架。
E. 所關注基因本文所描述之RNA分子可包括所關注基因。該所關注基因編碼所關注多肽。所關注多肽之非限制性實例包括例如生物製劑、抗體、疫苗、治療性多肽或肽、細胞穿透肽、分泌多肽、質膜多肽、細胞質或細胞骨架多肽、細胞內膜結合多肽、核多肽、與人類疾病相關之多肽、靶向部分、由人類基因體編碼的尚未鑑別出治療適應症但在研究及探索領域中具有效用之彼等多肽、或其組合。特定所關注基因之序列容易由熟習此項技術者使用公開及私有資料庫(例如GENBANK®)鑑別。
在一些態樣中,RNA分子包括所關注基因之編碼區。在一些態樣中,所關注基因為或包含抗原性多肽或其免疫原性變異體或免疫原性片段。在一些態樣中,抗原性多肽包含一個來自抗原之抗原決定基。在一些態樣中,抗原性多肽包含複數個來自抗原之不同抗原決定基。在一些態樣中,包含複數個來自抗原之不同抗原決定基的抗原性多肽為多抗原決定基的。在一些態樣中,抗原性多肽包含:來自過敏原之抗原性多肽、病毒抗原性多肽、細菌抗原性多肽、真菌抗原性多肽、寄生蟲抗原性多肽、來自傳染原之抗原性多肽、來自病原體之抗原性多肽、腫瘤抗原性多肽或自身抗原性多肽。
術語「抗原」可係指能夠由免疫系統(例如由適應性免疫系統)識別且能夠例如藉由形成抗體及/或抗原特異性T細胞來誘發抗原特異性免疫反應作為適應性免疫反應之一部分的物質。抗原可為或可包含肽或蛋白質,其可由MHC呈遞至T細胞。抗原可為所提供核酸分子(例如包含至少一個如本文所描述之編碼序列的RNA分子)之轉譯產物。另外,抗原(諸如肽或蛋白質)之包含至少一個抗原決定基之片段、變異體及衍生物理解為抗原。
在一些態樣中,編碼所關注基因(例如抗原)之RNA在所治療個體之細胞中表現以提供所關注基因(例如抗原)。在一些態樣中,RNA在個體之細胞中短暫表現。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現係在細胞表面處。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)在MHC之環境下表現及呈現。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現係至細胞外空間中,例如抗原為分泌性的。
在一些態樣中,RNA分子包括所關注基因(例如抗原)之編碼區。在一些態樣中,RNA分子包括來源於與傳染性疾病相關之病原體的所關注基因(例如抗原)之編碼區。在一些態樣中,RNA分子包括來源於水痘帶狀疱疹病毒(VZV)之所關注基因(例如抗原)之編碼區。
在一些態樣中,RNA分子編碼VZV gE蛋白或其片段或變異體。在一些態樣中,RNA分子編碼包含根據以下GENBANK®寄存編號中之任一者之胺基酸序列的VZV gE蛋白:AAG32558.1、ABE03086.1、AAK01047.1、Q9J3M8.1、AEW88548.1、AGY33616.1、AEW89124.1、AIT53150.1、CAA25033.1、NP_040190.1、AKG56356.1、AEW89412.1、ABF21714.1、ABF21714.1、AAT07749.1、AEW88764.1、AAG48520.1及/或AEW88980.1,其各別序列以引用的方式併入本文中。在一些態樣中,RNA分子編碼包含根據GENBANK®寄存編號AH009994.2之胺基酸序列的VZV gE蛋白,其序列以引用的方式併入本文中。
在一些態樣中,本文所描述之RNA聚核苷酸或包含其之組合物或醫療製劑包含本文所揭示之核苷酸序列。在一些態樣中,RNA聚核苷酸包含與本文所揭示之核苷酸序列具有至少80%一致性的序列。在一些態樣中,RNA聚核苷酸包含編碼多肽之序列,該多肽與本文所揭示之多肽序列具有至少80%一致性。在一些態樣中,本文所描述之RNA聚核苷酸或包含其之組合物或醫療製劑由DNA模板轉錄。在一些態樣中,用於轉錄本文所描述之RNA聚核苷酸的DNA模板包含與RNA聚核苷酸互補之序列。在一些態樣中,本文所描述之所關注基因由包含本文所揭示之核苷酸序列的本文所描述之RNA聚核苷酸編碼。在一些態樣中,RNA聚核苷酸編碼與本文所揭示之多肽序列具有至少80%一致性的多肽。在一些態樣中,本文所描述之多肽由RNA聚核苷酸編碼,該RNA聚核苷酸由包含與RNA聚核苷酸互補之序列的DNA模板轉錄。
在一些態樣中,RNA分子編碼包含SEQ ID NO: 1-11中之任一者之序列或其片段或變異體的VZV醣蛋白。
在一些態樣中,RNA分子編碼由包含SEQ ID NO: 12-145中之任一者或其片段或變異體之核酸序列合成的VZV醣蛋白。
F. A 在一些態樣中,本文所揭示之RNA分子包含例如如本文所描述之聚腺苷酸(聚A)序列。在一些態樣中,聚A序列位於3' UTR下游,例如鄰近於3' UTR。「聚A尾」或「聚A序列」係指連續腺嘌呤殘基之序列段,其可連接至RNA分子之3'端。聚A序列為熟習此項技術者已知的,且可接在本文所描述之RNA分子中之3' UTR後面。聚A尾可增加RNA分子之半衰期。
本文所揭示之RNA分子可具有在轉錄之後藉由不依賴於模板之RNA聚合酶連接至RNA之游離3'端的聚A序列,或由DNA編碼且由依賴於模板之RNA聚合酶轉錄的聚A序列。在一些態樣中,聚A序列在RNA轉錄期間,例如在活體外轉錄之RNA之製備期間,基於在與編碼股互補之股中包含重複dT核苷酸(去氧胸苷酸)的DNA模板進行連接。
編碼聚A序列之DNA序列(編碼股)被稱為聚A卡匣。在一些態樣中,存在於DNA之編碼股中的聚A卡匣基本上由dA核苷酸組成,但間雜有四個核苷酸(dA、dC、dG及dT)之隨機序列。此類隨機序列之長度可為至少、至多、恰好以下數目個核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個核苷酸:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個核苷酸。此類卡匣揭示於WO 2016/005324 A1中,其特此以引用之方式併入。WO 2016/005324 A1中所揭示之任何聚A卡匣均可用於本發明中。本發明涵蓋一種聚A卡匣,其基本上由dA核苷酸組成,但間雜有具有四個核苷酸(dA、dC、dG、dT)之相等分佈且具有例如5至50個核苷酸之長度的隨機序列,其在DNA層面上展現質體DNA在大腸桿菌( E. coli)中之恆定繁殖且在RNA層面上仍與關於支持RNA穩定性及轉譯效率之有益特性相關。在一些態樣中,本文所描述之RNA聚核苷酸中所含有的聚A序列基本上由腺苷核苷酸組成,但間雜有四個核苷酸(A、C、G、U)之隨機序列。此類隨機序列之長度可為至少、至多、恰好以下數目個核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個核苷酸:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50個核苷酸。
在一些態樣中,沒有除腺苷核苷酸以外的核苷酸在聚A序列之3'端側接該聚A序列,例如聚A序列之3'端不被除腺苷以外的核苷酸掩蓋或聚A序列之3'端後面不跟隨除腺苷以外的核苷酸。
在一些態樣中,RNA分子可進一步包括緊接在聚A尾序列下游的核酸內切酶識別位點序列。RNA分子可進一步包括靠近其3'端之聚A聚合酶識別序列(例如AAUAAA)。
聚A序列可具有任何長度。在一些態樣中,聚A尾可包括5至300個核苷酸之長度。在一些態樣中,RNA分子包括聚A尾,該聚A尾包含以下、基本上由以下組成、或由以下組成:約25至約400個腺苷核苷酸之序列、約50至約400個腺苷核苷酸之序列、約50至約300個腺苷核苷酸之序列、約50至約250個腺苷核苷酸之序列、約60至約250個腺苷核苷酸之序列、或約40至約100個腺苷核苷酸之序列。在一些態樣中,聚A尾包含以下、基本上由以下組成、或由以下組成:至少、至多、恰好以下數目個腺苷核苷酸或以下中之任何兩者之間的數目個腺苷核苷酸:5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215、220、225、230、235、240、245、250、255、260、265、270、275、280、285、290、295、300、305、310、315、320、325、330、335、340、345、350、355、360、365、370、375、380、385、390、395、400、405、410、415、420、425、430、435、440、445、450、455、460、465、470、475、480、485、490、495或500個腺苷核苷酸。在此上下文中,「基本上由…組成」意謂聚A序列中之大部分核苷酸(通常聚A序列中至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%之數目的核苷酸)為腺苷核苷酸,但准許其餘核苷酸為除腺苷核苷酸以外的核苷酸,諸如尿苷、鳥苷或胞嘧啶。在此上下文中,「由…組成」意謂聚A序列中之所有核苷酸(例如聚A序列中100%之數目的核苷酸)為腺苷核苷酸。
在一些態樣中,RNA分子包括有包括多於30個腺苷核苷酸之序列的聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包括有包括約40個腺苷核苷酸之聚A尾。在一些態樣中,RNA分子包括有包括約80個腺苷核苷酸之聚A尾。在一些態樣中,3'聚A尾具有至少10個連續腺苷殘基及至多300個連續腺苷殘基之序列段。在一些特定態樣中,RNA分子包括約40個連續腺苷殘基。在一些態樣中,RNA分子包括約80個連續腺苷殘基。聚A尾可在增強轉譯效率及調節mRNA品質控制及降解之效率方面起關鍵調節作用。短序列或超聚腺苷酸化可信號傳導RNA降解。一些設計包括約40個腺苷核苷酸。
在一些態樣中,聚A尾可位於RNA分子或其他核酸分子內,諸如位於載體中,例如位於充當例如藉由載體之轉錄來產生RNA (例如mRNA)之模板的載體中。在一些態樣中,RNA分子可不包括聚A尾。
在一個態樣中,編碼本文所揭示之聚A尾的DNA包含與SEQ ID NO: 286具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性的序列:99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%。在一個態樣中,編碼聚A尾之DNA包含SEQ ID NO: 286之序列。在一個態樣中,本文所揭示之RNA包含聚A尾,該聚A尾包含與SEQ ID NO: 287至288及315至316中之任一者具有至少、至多、恰好以下一致性或以下中之任何兩者之間的一致性的序列:99%、98%、97%、96%、95%、90%、85%或80%。在一個態樣中,聚A尾包含SEQ ID NO: 287至288中之任一者之序列+/- 2個腺苷(A)核苷酸。在一個態樣中,聚A尾包含SEQ ID NO: 287至288中之任一者之序列+/- 1個腺苷(A)核苷酸。在一個態樣中,聚A尾包含SEQ ID NO: 287至288中之任一者之序列。在一個態樣中,聚A尾包含SEQ ID NO: 315至316中之任一者之序列+/- 2個腺苷(A)核苷酸。在一個態樣中,聚A尾包含SEQ ID NO: 315至316中之任一者之序列+/- 1個腺苷(A)核苷酸。在一個態樣中,聚A尾包含SEQ ID NO: 315至316中之任一者之序列。
G. 自擴增 RNA (SARNA)在一些態樣中,RNA分子可為saRNA。「自擴增RNA (Self-amplifying RNA)」、「自擴增RNA (self-amplifying RNA)」及「複製子」係指能夠自我複製之RNA。自擴增RNA分子可藉由使用來源於例如α病毒之複製元件且用編碼所關注多肽之核苷酸序列取代結構病毒多肽來產生。自擴增RNA分子通常為可在遞送至細胞之後直接轉譯的正股分子,且此轉譯提供RNA依賴性RNA聚合酶,其隨後自所遞送RNA產生反義及正義轉錄物。所遞送RNA引起多個子RNA分子之產生。此等子RNA分子以及共線次基因體轉錄物可自身經轉譯以提供經編碼之所關注基因(例如病毒抗原)之原位表現,或可經轉錄以提供與經轉譯以提供抗原之原位表現的所遞送RNA同義的其他轉錄物。此系列轉錄之總體結果為所引入saRNA分子之數目擴增,且因此經編碼之所關注基因(例如病毒抗原)變成細胞之主要多肽產物。
在一些態樣中,自擴增RNA包括至少一或多個基因,包括病毒複製酶、病毒蛋白酶、病毒解旋酶及其他非結構病毒蛋白或其組合中之任一者。在一些態樣中,自擴增RNA亦可包括5'端及3'端牽引複製序列,及視情況存在之編碼所需胺基酸序列(例如,所關注抗原)之異源序列。引導異源序列之表現的次基因體啟動子可包括在自擴增RNA中。視情況,異源序列(例如,所關注抗原)可框內融合至自擴增RNA中之其他編碼區及/或可處於內部核糖體進入位點(IRES)之控制下。
在一些態樣中,本文所描述之自擴增RNA分子編碼:(i)可由自擴增RNA分子轉錄RNA之RNA依賴性RNA聚合酶;及(ii)所關注多肽,例如病毒抗原。在一些態樣中,聚合酶可為α病毒複製酶,例如包括α病毒蛋白nsP1、nsP2、nsP3、nsP4及其任何組合中之任一者。
在一些態樣中,自擴增RNA分子可具有兩個開放閱讀框架。第一(5')開放閱讀框架可編碼複製酶;第二(3')開放閱讀框架可編碼包含所關注抗原之多肽。在一些態樣中,RNA可具有額外(例如下游)開放閱讀框架,例如以編碼其他抗原或編碼輔助多肽。
在一些態樣中,saRNA分子進一步包括:(1) α病毒5'複製識別序列;及(2) α病毒3'複製識別序列。在一些態樣中,自擴增RNA分子之5'序列經選擇以確保與所編碼之複製酶相容。
在一些態樣中,自擴增RNA分子可編碼單一多肽抗原,或視情況編碼兩種或更多種多肽抗原,該等多肽抗原以序列中之每一者在以胺基酸序列形式表現時保持其一致性的方式連接在一起(例如,串聯連接)。由自擴增RNA產生之多肽接著可以融合多肽之形式產生,或以使得產生分離多肽或肽序列之方式經工程改造。
在一些態樣中,本文所描述之自擴增RNA可編碼包括一系列抗原決定基之一或多種多肽抗原。在一些態樣中,本文所描述之自擴增RNA可編碼能夠誘發輔助T細胞反應或細胞毒性T細胞反應或兩者之抗原決定基。
IV. RNA 轉錄在一些態樣中,本文所揭示之RNA藉由活體外轉錄或化學合成產生。在本發明之上下文中,術語「轉錄」係關於其中DNA序列中之遺傳密碼轉錄成RNA的過程。隨後,RNA可轉譯成肽或蛋白質。
根據本發明,「轉錄」包含「活體外轉錄」或「IVT」,其係指其中轉錄在非細胞系統中活體外發生以產生用於各種應用之合成RNA產物,包括例如產生蛋白質或多肽的過程。可應用選殖載體來產生轉錄物。此等選殖載體一般被稱為轉錄載體,且根據本發明由術語「載體」涵蓋。根據特定態樣,所使用RNA為活體外轉錄之RNA (IVT-RNA),且可藉由適當DNA模板之活體外轉錄獲得。用於控制轉錄之啟動子可為任何RNA聚合酶之任何啟動子。RNA聚合酶之特定實例為T7、T3及SP6 RNA聚合酶。較佳地,根據本發明之活體外轉錄受T7或SP6啟動子控制。用於活體外轉錄之DNA模板可藉由選殖核酸(尤其cDNA)且將其引入用於活體外轉錄之適當載體中而獲得。cDNA可藉由RNA之反轉錄獲得。
合成IVT RNA產物可活體外轉譯或直接引入細胞中,該等產物可在該等細胞中轉譯。就RNA而言,術語「表現」或「轉譯」係關於在細胞之核糖體中mRNA股引導胺基酸序列之組裝以產生肽或蛋白質的過程。此類合成RNA產物包括例如(但不限於) mRNA分子、saRNA分子、反義RNA分子、shRNA分子、長非編碼RNA分子、核酶、適體、引導RNA分子(例如用於CRISPR之引導RNA分子)、核糖體RNA分子、小核RNA分子、小核仁RNA分子及其類似者。IVT反應通常利用如本文所描述及/或利用之DNA模板(例如,線性DNA模板)、核糖核苷酸(例如,未經修飾之核糖核苷酸三磷酸或經修飾之核糖核苷酸三磷酸)及適當RNA聚合酶。
在一些態樣中,mRNA藉由使用DNA模板進行活體外轉錄而產生,其中DNA係指含有去氧核糖核苷酸之核酸。在一些態樣中,本文所揭示之RNA為活體外轉錄之RNA (IVT-RNA),且可藉由適當DNA模板之活體外轉錄獲得。用於控制轉錄之啟動子可為任何RNA聚合酶之任何啟動子。用於活體外轉錄之DNA模板可藉由選殖核酸(尤其cDNA)且將其引入用於活體外轉錄之適當載體中而獲得。cDNA可藉由RNA之反轉錄獲得。
在一些態樣中,IVT之起始物質可包括線性化DNA模板、核苷酸、RNase抑制劑、焦磷酸酶及/或T7 RNA聚合酶。在一些態樣中,IVT過程在生物反應器中進行。生物反應器可包含混合器。在一些態樣中,核苷酸可在整個IVT過程期間添加至生物反應器中。
在一些態樣中,在IVT過程之後,向生物反應器中包含RNA之IVT混合物中添加一或多種IVT後試劑。例示性IVT後試劑可包括經組態以消化線性化DNA模板之DNAse I以及經組態以消化DNAse I及T7 RNA聚合酶之蛋白酶K。在一些態樣中,在IVT之後,將IVT後試劑與生物反應器中之混合物一起培育。在一些態樣中,生物反應器可含有至少、至多、恰好以下公升數或以下中之任何兩者之間的公升數之IVT混合物:60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490及500或更多公升。IVT混合物可具有至少、至多、恰好為以下或在以下中之任何兩者之間的RNA濃度:3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、7.0、8.0、9.0、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40、50、60、70、80、90及100 mg/mL或更多RNA。
在一些態樣中,IVT混合物可包括殘餘亞精胺、殘餘DNA、殘餘蛋白質、肽、HEPES、EDTA、硫酸銨、陽離子(例如Mg 2+、Na +、Ca 2+)、RNA片段、殘餘核苷酸、游離磷酸鹽或其任何組合。
在一些態樣中,IVT混合物之至少一部分經過濾。IVT混合物可經由超濾及/或透濾進行過濾以自IVT混合物移除至少一些雜質及/或改變至少一部分IVT混合物之緩衝溶液以產生作為滲餘物之濃縮RNA溶液。
在一些態樣中,「超濾」及「透濾」均係指膜過濾製程。超濾通常使用孔徑為至少、至多、恰好以下尺寸或以下中之任何兩者之間的尺寸的膜:0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09及0.1 µm。在一些態樣中,超濾膜通常藉由截留分子量(MWCO)而非孔徑來進行分類。舉例而言,MWCO可為至少、至多、恰好以下或在以下中之任何兩者之間:30 kDa、40 kDa、50 kDa、60 kDa、70 kDa、80 kDa、90 kDa、100 kDa、110 kDa、120 kDa、130 kDa、140 kDa、150 kDa、160 kDa、170 kDa、180 kDa、190 kDa、200 kDa、210 kDa、220 kDa、230 kDa、240 kDa、250 kDa、260 kDa、270 kDa、280 kDa、290 kDa、300 kDa、310 kDa、320 kDa、330 kDa、340 kDa、350 kDa、360 kDa、370 kDa、380 kDa、390 kDa、400 kDa、500 kDa、600 kDa、700 kDa、800 kDa、900 kDa、1000 kDa、2000 kDa、3000 kDa、4000 kDa、5000 kDa、6000 kDa、7000 kDa、8000 kDa、9000 kDa及10000 kDa。熟習此項技術者應理解,視應用而定,過濾膜可具有不同的適合材料,包括例如聚合物、纖維素、陶瓷等。在一些態樣中,膜過濾可更合乎大體積純化製程需要。
在一些態樣中,用於純化RNA的IVT混合物之超濾及透濾可包括:(1)直流過濾(DFF),亦稱為「死端」過濾,其應用垂直於膜表面之進料流且試圖使100%的流體通過膜;及/或(2)切向流過濾(TFF),亦稱為掃流過濾,其中進料流平行於膜表面傳遞,其中一個部分通過膜(滲透物),而剩餘物(滲餘物)保留及/或再循環回至進料貯槽。
在一些態樣中,IVT混合物之過濾係經由TFF進行,該TFF包含超濾步驟、第一透濾步驟及第二透濾步驟。在一些態樣中,第一透濾步驟在硫酸銨存在下進行。第一透濾步驟可經組態以自IVT混合物移除大部分雜質。在一些態樣中,第二透濾步驟在不存在硫酸銨之情況下進行。第二透濾步驟可經組態以將RNA轉移至DS緩衝液調配物中。
可選擇具有適當MWCO之過濾膜用於TFF製程中之超濾。TFF膜之MWCO決定哪些溶質可通過膜進入濾液中及哪些溶質保留在滲餘物中。TFF膜之MWCO可經選擇,使得實質上所有所關注溶質(例如,所需合成RNA物種)保留在滲餘物中,而非所需組分(例如,過量的核糖核苷酸、小核酸片段(諸如經消化或水解之DNA模板)、肽片段(諸如經消化之蛋白質)及/或其他雜質)傳遞至濾液中。在一些態樣中,包含所需合成RNA物種之滲餘物可再循環至進料儲槽中以在額外循環中再過濾。在一些態樣中,TFF膜之MWCO可至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間:30 kDa、40 kDa、50 kDa、60 kDa、70 kDa、80 kDa、90 kDa或更大。在一些態樣中,TFF膜之MWCO可至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間:100 kDa、150 kDa、200 kDa、250 kDa、300 kDa、350 kDa、400 kDa或更大。在一些態樣中,TFF膜之MWCO可為約250-350 kDa。在一些態樣中,TFF膜(例如基於纖維素之膜)之MWCO可為約30-300 kDa;在一些態樣中,可為約50-300 kDa、約100-300 kDa、或約200-300 kDa。
透濾可不連續地或者連續地進行。舉例而言,在連續透濾中,透濾溶液可以與產生濾液相同的速率添加至樣品進料儲槽中。以此方式,樣品儲槽之容積保持恆定,但移除可自由滲透通過膜之小分子(例如,鹽、溶劑等)。使用溶劑移除作為實例,各額外透濾體積(DV)進一步降低溶劑濃度。在不連續透濾中,溶液首先經稀釋且接著濃縮回至起始體積。隨後重複此製程直至達到儲槽中剩餘之小分子(例如,鹽、溶劑等)之所需濃度。各額外透濾體積(DV)進一步降低小分子(例如溶劑)濃度。連續透濾通常需要用於待過濾分子之給定減少的最小體積。另一方面,不連續透濾准許滲餘物狀態(諸如pH、鹽含量及其類似者)之快速變化。在一些態樣中,第一透濾步驟以至少、至多、恰好等於以下數目或以下中之任何兩者之間的數目的透濾體積進行:2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個。在一些態樣中,第二透濾步驟以至少、至多、恰好等於以下數目或以下中之任何兩者之間的數目的透濾體積進行:5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多個。在一些態樣中,第一透濾步驟以5個透濾體積進行,且第二透濾步驟以10個透濾體積進行。
在一些態樣中,對於超濾及/或透濾,IVT混合物以至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間的速率過濾:100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、500、600、700、800、900或1000公升/平方公尺過濾器面積/小時或更大速率。濃縮RNA溶液可包含至少、至多、恰好以下濃度或以下中之任何兩者之間的濃度的單股RNA:2.0、2.1、2.2、2.3、2.4或2.5 mg/mL。
在一些態樣中,亦可減少經由過濾獲得RNA產物溶液的濃縮RNA溶液之生物負荷。可使用一或多個過濾器進行用於減少生物負荷之過濾。一或多個過濾器可包括孔徑至少、至多、恰好為以下或在以下中之任何兩者之間的過濾器:0.2 µm、0.45 µm、0.65 µm、0.8 µm或經組態以移除生物負荷之任何其他孔徑。
作為一個實例,減少生物負荷可包括對含有獲自超濾及/或透濾之滲餘物的滲餘物貯槽進行排液以獲得滲餘物。減少生物負荷可包括使用洗滌緩衝溶液來沖洗用於超濾及/或透濾之過濾系統,以獲得包含過濾系統中剩餘之殘餘RNA的洗滌彙集溶液。可過濾滲餘物以獲得經過濾之滲餘物。可使用第一0.2 µm過濾器來過濾洗滌彙集溶液以獲得經過濾之洗滌彙集溶液。可使用第一0.2 µm過濾器或另一0.2 µm過濾器來過濾滲餘物。
可合併經過濾之洗滌彙集溶液及經過濾之滲余物以形成合併彙集溶液。可使用第二0.2 µm過濾器來過濾合併彙集溶液以獲得經過濾之合併彙集溶液,該經過濾之合併彙集溶液使用第三0.2 µm過濾器進一步過濾以產生RNA產物溶液。
V. RNA 囊封RNA產物溶液中之RNA可經囊封,且RNA溶液可進一步包含至少一種囊封劑。在一個態樣中,囊封劑包含脂質、脂質奈米顆粒(LNP)、脂質複合物、聚合物顆粒、聚合複合物及整體型遞送系統以及其組合。
在一個態樣中,囊封劑為脂質,且產生脂質奈米顆粒(LNP)囊封之RNA。不意欲受任何理論束縛,咸信陽離子或陽離子可離子化脂質或類脂質物質及/或陽離子聚合物與核酸組合在一起以形成聚集體,且此聚集產生膠體穩定之顆粒。脂質可為天然存在之脂質或合成脂質。然而,脂質通常為生物物質。生物脂質為此項技術中所熟知的,且包括例如中性脂肪、磷脂、磷酸甘油酯、類固醇、萜類、溶血脂質、醣神經鞘脂質、糖脂質、硫脂、具有醚及酯連接脂肪酸之脂質及可聚合脂質及其組合。脂質為不溶於水且可用有機溶劑萃取之物質。除本文專門描述之彼等化合物以外的化合物由熟習此項技術者理解為脂質,且由本發明之組合物及方法涵蓋。脂質組分及非脂質可彼此共價或非共價連接。
在一些態樣中,LNP可經設計以保護RNA分子(例如saRNA、mRNA)免受細胞外RNases影響,及/或可經工程改造以將RNA全身遞送至目標細胞。在一些態樣中,此類LNP可尤其適用於在向有需要之個體靜脈內投與RNA分子時遞送RNA分子(例如saRNA、mRNA)。在一些態樣中,此類LNP可尤其適用於在向有需要之個體肌肉內投與RNA分子時遞送RNA分子(例如saRNA、mRNA)。
在一個態樣中,RNA溶液中之RNA之濃度< 1 mg/mL。在另一態樣中,RNA之濃度為至少約0.05 mg/mL。在另一態樣中,RNA之濃度為至少約0.5 mg/mL。在另一態樣中,RNA之濃度為至少約1 mg/mL。在另一態樣中,RNA濃度為約0.05 mg/mL至約0.5 mg/mL。在另一態樣中,RNA之濃度為至少10 mg/mL。在另一態樣中,RNA之濃度為至少50 mg/mL。在一些態樣中,RNA之濃度為至少、至多、恰好以下或在以下中之任何兩者之間:約0.05 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、10 mg/mL、50 mg/mL、75 mg/mL、100 mg/mL、150 mg/mL、200 mg/mL、250 mg/mL、300 mg/mL、400 mg/mL或更高。
本發明提供RNA溶液及其脂質製劑混合物或組合物,其包含至少一個編碼例如抗原(例如VZV多肽)之RNA,該至少一個RNA與一或多種脂質複合、囊封於一或多種脂質中及/或與一或多種脂質一起調配,且形成脂質奈米顆粒(LNP)、脂質體、脂質複合物及/或奈米脂質體。在一些態樣中,組合物包含脂質奈米顆粒。
脂質奈米顆粒或LNP係指當陽離子脂質及視情況存在之一或多種其他脂質例如在水性環境中及/或在RNA存在下合併時產生的任何形態之顆粒。在一些態樣中,脂質奈米顆粒包括在調配物中,該調配物可用於將活性劑或治療劑(諸如核酸(例如mRNA))遞送至所關注之目標部位(例如細胞、組織、器官、腫瘤及其類似者)。在一些態樣中,本發明之脂質奈米顆粒包含核酸。此類脂質奈米顆粒通常包含陽離子脂質及一或多種賦形劑,例如一或多種中性脂質、帶電脂質、類固醇、聚合物結合脂質或其組合。在一些態樣中,活性劑或治療劑(諸如核酸(例如mRNA))可囊封於脂質奈米顆粒之脂質部分中或由脂質奈米顆粒之一些或所有脂質部分包圍的水性空間中,從而保護其免於酶降解或宿主生物體或細胞之機制引起的其他不合需要之作用,例如不利免疫反應。核酸(例如mRNA)或其部分亦可與脂質奈米顆粒締合及複合。脂質奈米顆粒可包含能夠形成連接核酸或囊封一或多種核酸之顆粒的任何脂質。
在一些態樣中,所提供之RNA分子(例如saRNA、mRNA)可與LNP一起調配。在一些態樣中,脂質奈米顆粒之平均直徑可為約1至500 nm。在一些態樣中,脂質奈米顆粒之平均直徑為約30 nm至約150 nm、約40 nm至約150 nm、約50 nm至約150 nm、約60 nm至約130 nm、約70 nm至約110 nm、約70 nm至約100 nm、約80 nm至約100 nm、約90 nm至約100 nm、約70至約90 nm、約80 nm至約90 nm、約70 nm至約80 nm,或至少、至多、恰好為以下或在以下中之任何兩者之間:30 nm、35 nm、40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm、100 nm、105 nm、110 nm、115 nm、120 nm、125 nm、130 nm、135 nm、140 nm、145 nm或150 nm,且為實質上無毒的。術語「平均直徑」係指藉由動態雷射光散射(DLS)與使用所謂的累積量演算法進行的資料分析來量測的顆粒之平均流體動力直徑,其結果提供長度維度之所謂的Z平均值及無維度的多分散性指數(PI) (Koppel, D., J. Chem. Phys. 57, 1972, 第4814-4820頁, ISO 13321)。此處,顆粒之「平均直徑」、「直徑」或「尺寸」與此Z平均值同義使用。
本文所描述之LNP可展現小於約0.5、小於約0.4、小於約0.3或約0.2或更小之多分散性指數。藉助於實例,LNP可展現至少、至多、恰好以下或以下中之任何兩者之間的多分散性指數:0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49或0.5。在一些態樣中,多分散性指數係基於動態光散射量測結果,藉由如在「平均直徑」之定義中所提及的所謂的累積量分析來計算。在某些先決條件下,其可視為奈米顆粒總體之尺寸分佈之量測值。
在某些態樣中,核酸(例如RNA分子)當存在於所提供之LNP中時在水溶液中對核酸酶降解具有抗性。在一些態樣中,LNP為靶向肝臟之脂質奈米顆粒。在一些態樣中,LNP為包含一或多種陽離子脂質(例如本文所描述之陽離子脂質)之陽離子脂質奈米顆粒。在一些態樣中,陽離子LNP可包含至少一種陽離子脂質、至少一種聚合物結合脂質及至少一種輔助脂質(例如,至少一種中性脂質)。
在某些態樣中,RNA溶液及其脂質製劑混合物或組合物可具有以下量、至少具有以下量、或至少、至多、恰好具有以下量或具有以下中之任何兩者之間的量的特定脂質、脂質型或非脂質組分,諸如類脂質物質及/或陽離子聚合物或佐劑、抗原、肽、多肽、糖、核酸或本文所揭示或如熟習此項技術者將已知的其他物質:約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約7%、約8%、約9%、約10%、約11%、約12%、約13%、約14%、約15%、約16%、約17%、約18%、約19%、約20%、約21%、約22%、約23%、約24%、約25%、約26%、約27%、約28%、約29%、約30%、約31%、約32%、約33%、約34%、約35%、約36%、約37%、約38%、約39%、約40%、約41%、約42%、約43%、約44%、約45%、約46%、約47%、約48%、約49%、約50%、約51%、約52%、約53%、約54%、約55%、約56%、約57%、約58%、約59%、約60%、約61%、約62%、約63%、約64%、約65%、約66%、約67%、約68%、約69%、約70%、約71%、約72%、約73%、約74%、約75%、約76%、約77%、約78%、約79%、約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%或約99%。
本文所描述之LNP可使用廣泛範圍的方法製備,該等方法可涉及由至少一種陽離子或陽離子可離子化脂質或類脂質物質及/或至少一種陽離子聚合物獲得膠體且混合該膠體與核酸以獲得核酸顆粒。如本文所使用之術語「膠體」係關於分散粒子不會沈澱出來的一種均勻混合物。混合物中之不可溶顆粒為微小的,其粒徑在1與1000奈米之間。混合物可被稱為膠體或膠態懸浮液。有時,術語「膠體」僅係指混合物中之顆粒而非整個懸浮液。
為了製備包含至少一種陽離子或陽離子可離子化脂質或類脂質物質及/或至少一種陽離子聚合物的膠體,在本文中可應用習知用於製備脂質體囊泡且經適當調適之方法。用於製備脂質體囊泡之最常用方法共有以下基本階段:(i)脂質溶解於有機溶劑中,(ii)乾燥所得溶液,及(iii)對乾燥脂質進行水合(使用各種水性介質)。在膜水合方法中,首先將脂質溶解於適合之有機溶劑中,且乾燥以在燒瓶底部產生薄膜。使用適當水性介質使所得脂質膜水合以產生脂質體分散液。此外,可包括額外縮小尺寸步驟。
逆相蒸發為用於製備脂質體囊泡之膜水合的替代方法,該方法涉及在水相與含有脂質之有機相之間形成油包水乳液。此混合物之短暫音波處理為系統均勻化所需。在減壓下移除有機相得到乳白色凝膠,其隨後變成脂質體懸浮液。
術語「乙醇注射技術」係指其中包含脂質之乙醇溶液經由針頭快速注射至水溶液中的製程。此作用使脂質分散在整個溶液中且促進脂質結構形成,例如脂質囊泡形成,諸如脂質體形成。一般而言,本文所描述之RNA脂質複合物顆粒可藉由將RNA添加至膠態脂質體分散液中而獲得。使用乙醇注射技術,在一些態樣中,此類膠態脂質體分散液如下形成:在攪拌下將包含脂質(諸如陽離子脂質及額外脂質)之乙醇溶液注射至水溶液中。在一些態樣中,本文所描述之RNA脂質複合物顆粒可在無擠出步驟的情況下獲得。
術語「擠出(extruding)」或「擠出(extrusion)」係指產生具有固定橫截面輪廓之顆粒。特別地,其係指縮小顆粒之尺寸,其中迫使顆粒通過具有所限定孔之過濾器。
根據本發明,亦可使用具有無有機溶劑特性之其他方法來製備膠體。
在一些態樣中,經LNP囊封之RNA可藉由在觸發脂質組分之溶解度突變的條件下快速混合本文所描述之RNA溶液(例如RNA產物溶液)與本文所描述之脂質製劑(其包含於有機溶劑中的例如至少一種陽離子脂質及視情況存在之一或多種其他脂質組分)而產生,該溶解度突變使得脂質以LNP之形式自組裝。在一些態樣中,適合的緩衝劑包含tris、組胺酸、檸檬酸鹽、乙酸鹽、磷酸鹽或丁二酸鹽。液體調配物之pH與囊封劑(例如陽離子脂質)之pKa有關。酸化緩衝液之pH可比囊封劑(例如陽離子脂質)之pKa小至少一半pH標度,且最終緩衝液之pH可比囊封劑(例如陽離子脂質)之pKa大至少一半pH標度。在一些態樣中,選擇陽離子脂質之特性以使得顆粒之初始形成係藉由與核酸(例如RNA)之帶相反電荷之主鏈締合而發生。以此方式,圍繞核酸形成顆粒,在一些態樣中,其例如可產生比在核酸與脂質組分中之至少一者之間不存在相互作用的情況下達成的囊封效率高得多的囊封效率。
在某些態樣中,核酸當存在於脂質奈米顆粒中時,其在水溶液中耐核酸酶降解。包含核酸之脂質奈米顆粒及其製備方法揭示於例如美國專利公開案第2004/0142025號、第2007/0042031號及PCT公開案第WO 2013/016058號及第WO 2013/086373號中,該等文獻之全部揭示內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。
本文所描述之一些態樣係關於涉及多於一種,例如2、3、4、5、6或甚至更多種核酸物種(諸如RNA物種)的組合物、方法及用途。在LNP調配物中,有可能將各核酸物種分開調配為個別LNP調配物。在該情況下,各個別LNP調配物將包含一種核酸物種。個別LNP調配物可呈單獨實體之形式存在,例如存在於單獨容器中。此類調配物可藉由分開提供各核酸物種(通常各自呈含核酸之溶液形式)以及允許形成LNP之適合陽離子或陽離子可離子化脂質或類脂質物質及陽離子聚合物來獲得。各別顆粒將僅含有當形成顆粒時所提供的特定核酸物種(個別顆粒調配物)。
在一些態樣中,諸如醫藥組合物之組合物包含多於一種個別LNP調配物。各別醫藥組合物被稱為混合LNP調配物。根據本發明之混合LNP調配物可藉由分開形成如上文所描述之個別LNP調配物,接著進行混合該等個別LNP調配物之步驟而獲得。藉由混合步驟,可獲得包含含核酸之LNP的混合群體的調配物。個別LNP群體可一起在一個容器中,其包含個別LNP調配物之混合群體。
或者,不同核酸物種有可能一起調配為組合LNP調配物。此類調配物可藉由提供不同RNA物種之組合調配物(通常為組合溶液)以及允許形成LNP之適合陽離子或陽離子可離子化脂質或類脂質物質及陽離子聚合物來獲得。與混合LNP調配物相反,組合之LNP調配物將通常含有包含多於一種RNA物種之LNP。在組合LNP組合物中,不同RNA物種通常一起存在於單一顆粒中。
A. 陽離子聚合物質鑒於聚合物質之高度化學可撓性,通常將其用於基於奈米顆粒之遞送。通常,使用陽離子物質使帶負電的核酸靜電凝聚成奈米顆粒。此等帶正電基團通常由質子化狀態在5.5與7.5之間的pH範圍內改變的胺組成,認為該改變會引起導致胞內體破裂之離子不平衡。諸如聚-L-離胺酸、聚醯胺基胺、魚精蛋白及聚乙二亞胺之聚合物以及諸如聚葡萄胺糖之天然存在之聚合物皆已應用於核酸遞送,且適合作為適用於本文之一些態樣中的陽離子物質。另外,一些研究者已合成特定用於核酸遞送之聚合物質。特別地,聚(P-胺基酯)由於其易於合成及可生物降解性而廣泛用於核酸遞送中。在一些態樣中,此類合成物質可適用作本文中之陽離子物質。
如本文所使用之「聚合物質」具有其普通含義,例如包含藉由共價鍵連接的一或多個重複單元(單體)的分子結構。在一些態樣中,此類重複單元可全部相同;或者,在一些情況下,聚合物質內存在超過一種類型之重複單元。在一些情況下,聚合物質為以生物方式衍生的,例如生物聚合物,諸如蛋白質。在一些情況下,聚合物質中亦可存在額外部分,例如靶向部分,諸如本文所描述之彼等靶向部分。
熟習此項技術者應意識到,當超過一種類型之重複單元存在於聚合物(或聚合部分)內時,該聚合物(或聚合部分)被稱為「共聚物」。在一些態樣中,根據本發明利用之聚合物(或聚合部分)可為共聚物。形成共聚物之重複單元可以任何方式排列。舉例而言,在一些態樣中,重複單元可以隨機次序排列;或者或另外,在一些態樣中,重複單元可以交替次序排列,或排列為「嵌段」共聚物,其例如包含有一或多個各自包含第一重複單元(例如第一嵌段)之區域及一或多個各自包含第二重複單元(例如第二嵌段)之區域等。嵌段共聚物可具有兩種(二嵌段共聚物)、三種(三嵌段共聚物)或更多數目種不同嵌段。
在某些態樣中,根據本發明使用之聚合物質為生物相容的。生物相容性物質為在適中濃度下通常不導致顯著細胞死亡的物質。在某些態樣中,生物相容性物質為可生物降解的,例如能夠在生理環境內,諸如在身體內以化學及/或生物方式降解。在某些態樣中,聚合物質可為或包含魚精蛋白或聚伸烷基亞胺,尤其魚精蛋白。
如熟習此項技術者應意識到,術語「魚精蛋白」常常用以指具有相對較低分子量之各種強鹼性蛋白質中之任一者,其富含精胺酸且發現尤其與DNA代替各種動物(如魚)之精子細胞中之體細胞組蛋白相關聯。特別地,術語「魚精蛋白」常常用以指存在於魚精子中的呈強鹼性、可溶於水、加熱不凝固且在水解時主要產生精胺酸的蛋白質。在純化形式中,其用於胰島素之長效調配物中且用以中和肝素之抗凝血劑作用。
在一些態樣中,如本文所使用之術語「魚精蛋白」係指獲自或衍生自天然或生物來源的魚精蛋白胺基酸序列,包括其片段及/或該胺基酸序列或其片段之多聚形式,以及(合成)多肽,其為人工的且出於特定目的而特定設計且無法自天然或生物來源分離。
在一些態樣中,聚伸烷基亞胺包含聚伸乙亞胺及/或聚伸丙亞胺。在一些態樣中,聚伸烷基亞胺為聚乙亞胺(PEI)。在一些態樣中,聚伸烷基亞胺為直鏈聚伸烷基亞胺,例如直鏈聚乙亞胺(PEI)。
預期用於本文中之陽離子物質(例如聚合物質,包括多陽離子聚合物)包括能夠靜電結合核酸的彼等陽離子物質。在一些態樣中,預期用於本文中之陽離子聚合物質包括可例如藉由與核酸形成複合物或形成其中圍封或囊封核酸之囊泡而與核酸締合的任何陽離子聚合物質。
在一些態樣中,本文所描述之顆粒可包含除陽離子聚合物以外的聚合物,例如非陽離子聚合物質及/或陰離子聚合物質。陰離子及中性聚合物質在本文中統稱為非陽離子聚合物質。
B. 脂質及類脂質物質術語「脂質」及「類脂質物質」在本文中用於指包含一或多個疏水性部分或基團且視情況亦包含一或多個親水性部分或基團的分子。根據本發明,脂質及類脂質物質可為陽離子、陰離子或中性的。在所選pH下,中性脂質或類脂質物質以不帶電或中性兩性離子形式存在。
術語「脂質」係指特徵為不可溶於水中但可溶於許多有機溶劑中的一群有機化合物。通常,脂質可分為八類:脂肪酸及其衍生物(包括三酸甘油酯、二酸甘油酯、單酸甘油酯及磷脂)、甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、醣脂、聚酮化合物、固醇脂質以及含固醇代謝物(諸如膽固醇)及異戊烯醇脂質。脂肪酸之實例包括但不限於脂肪酯及脂肪醯胺。甘油脂之實例包括但不限於糖基甘油及甘油磷脂(例如磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲胺酸)。鞘脂之實例包括但不限於神經醯胺鞘磷脂(phosphosphingolipid) (例如鞘磷脂(sphingomyelin)、磷酸膽鹼)及醣神經鞘脂質(例如腦苷脂、神經節苷脂)。固醇脂質之實例包括但不限於膽固醇及其衍生物以及生育酚及其衍生物。
術語「類脂質物質」、「類脂質化合物」或「類脂質分子」係關於在結構及/或功能上與脂質相關但在嚴格意義上可不視為脂質的物質。舉例而言,該術語包括能夠在其存在於水性環境中之囊泡、多層/單層脂質體或膜中時形成兩親媒性層的化合物,且包括界面活性劑或具有親水性及疏水性部分之合成化合物。一般言之,該術語係指包含具有不同結構組織之親水性及疏水性部分的分子,該等親水性及疏水性部分可類似於或可不類似於脂質之親水性及疏水性部分。
在一些態樣中,RNA溶液及其脂質製劑混合物或組合物可包含陽離子脂質、中性脂質、膽固醇及/或聚合物(例如聚乙二醇)結合脂質,其形成包涵RNA分子之脂質奈米顆粒。因此,在一些態樣中,LNP可包含陽離子脂質及一或多種賦形劑,例如一或多種中性脂質、帶電脂質、類固醇或類固醇類似物(例如膽固醇)、聚合物結合脂質(例如PEG-脂質)或其組合。在一些態樣中,LNP包涵或囊封核酸分子。
i. 陽離子脂質陽離子或陽離子可離子化脂質或類脂質物質係指能夠帶正電且能夠靜電結合核酸之脂質或類脂質物質。如本文所使用,「陽離子脂質」或「陽離子類脂質物質」係指具有淨正電荷的脂質或類脂質物質。陽離子脂質或類脂質物質藉由靜電相互作用而結合帶負電之核酸。一般而言,陽離子脂質具有親脂性部分,諸如固醇、醯基鏈、二醯基或更多醯基鏈,且脂質之頭部基團通常攜帶正電荷。例示性陽離子脂質包括攜帶正電荷的一或多個胺基。陽離子脂質可囊封帶負電之RNA。
在一些態樣中,陽離子脂質為可離子化的,使得視pH而定,其可以帶正電或中性形式存在。陽離子脂質之離子化影響脂質奈米顆粒在不同pH條件下之表面電荷。不希望受理論所束縛,認為此可離子化行為經由幫助胞內體逃逸以及相較於在生理pH下保持陽離子性之顆粒降低毒性來增強功效。出於本發明之目的,除非與情形相矛盾,否則術語「陽離子脂質」或「陽離子類脂質物質」涵蓋此類「陽離子可離子化」脂質或類脂質物質。
在一些態樣中,陽離子脂質可佔顆粒中所存在之總脂質的約10莫耳%至約100莫耳%、約20莫耳%至約100莫耳%、約30莫耳%至約100莫耳%、約40莫耳%至約100莫耳%、或約50莫耳%至約100莫耳%。在一些態樣中,陽離子脂質可為顆粒中所存在之總脂質的至少、至多、恰好以下量或其中任何兩者之間的量:10莫耳%、20莫耳%、30莫耳%、40莫耳%、50莫耳%、60莫耳%、70莫耳%、80莫耳%、90莫耳%、或100莫耳%、或可來源於其中之任何範圍或值。
陽離子脂質之實例包括但不限於:((4-羥丁基)氮雜二基)雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯);1,2-二油醯基-3-三甲銨丙烷(DOTAP);N,N-二甲基-2,3-二油烯氧基丙胺(DODMA)、1,2-二-O-十八烯基-3-三甲銨丙烷(DOTMA)、3-(N-(N',N'-二甲胺基乙烷)-胺甲醯基)膽固醇(DC-Chol)、二甲基二(十八烷基)銨(DDAB);1,2-二油醯基-3-二甲銨-丙烷(DODAP);1,2-二醯氧基-3-二甲銨丙烷;1,2-二烷氧基-3-二甲銨丙烷;氯化二(十八烷基)二甲銨(DODAC)、1,2-二硬脂基氧基-N,N-二甲基-3-胺基丙烷(DSDMA)、2,3-二(十四烷氧基)丙基-(2-羥乙基)-二甲基氮鎓(DMRIE)、1,2-二肉豆蔻醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼(DMEPC)、1,2-二肉豆蔻醯基-3-三甲銨丙烷(DMTAP)、溴化1,2-二油烯氧基丙基-3-二甲基-羥乙銨(DORIE)及三氟乙酸2,3-二油醯氧基-N-[2(精胺甲醯胺)乙基]-N,N-二甲基-l-丙銨(DOSPA)、1,2-二亞油氧基-N,N-二甲胺基丙烷(DLinDMA)、1,2-二次亞麻氧基-N,N-二甲胺基丙烷(DLenDMA)、二(十八烷基)醯胺基甘胺醯基精胺(DOGS)、3-二甲胺基-2-(膽甾-5-烯-3-β-氧基丁-4-氧基)-l-(順式,順式-9,12-十八碳二烯氧基)丙烷(CLinDMA)、2-[5'-(膽甾-5-烯-3-β-氧基)-3'-氧雜戊氧基)-3-二甲基-l-(順式,順式-9',12'-十八碳二烯氧基)丙烷(CpLinDMA)、N,N-二甲基-3,4-二油烯氧基苯甲胺(DMOBA)、1,2-N,N'-二油烯基胺甲醯基-3-二甲胺基丙烷(DOcarbDAP)、2,3-二亞麻醯氧基-N,N-二甲基丙胺(DLinDAP)、1,2-N,N'-二亞油基胺甲醯基-3-二甲胺基丙烷(DLincarbDAP)、1,2-二亞麻醯氧基胺甲醯基-3-二甲胺基丙烷(DLinCDAP)、2,2-二亞油基-4-二甲胺基甲基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-DMA)、2,2-二亞油基-4-二甲胺基乙基-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-K-XTC2-DMA)、2,2-二亞油基-4-(2-二甲胺基乙基)-[1,3]-二氧雜環戊烷(DLin-KC2-DMA)、三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基-4-(二甲胺基)丁酸酯(DLin-MC3-DM A)、溴化N-(2-羥乙基)-N,N-二甲基-2,3-雙(十四烷氧基)-1-丙胺鎓(DMRIE)、溴化(±)-N-(3-胺丙基)-N,N-二甲基-2,3-雙(順式-9-十四碳烯氧基)-1-丙胺鎓(GAP-DMORIE)、溴化(±)-N-(3-胺丙基)-N,N-二甲基-2,3-雙(十二烷氧基)-1-丙胺鎓(GAP-DLRIE)、溴化(±)-N-(3-胺丙基)-N,N-二甲基-2,3-雙(十四烷氧基)-l-丙胺鎓(GAP-DMRIE)、溴化N-(2-胺乙基)-N,N-二甲基-2,3-雙(十四烷氧基)-1-丙胺鎓(bAE-DMRIE)、N-(4-羧基苯甲基)-N,N-二甲基-2,3-雙(油醯氧基)丙-1-胺鎓(DOBAQ)、2-({8-[(3b)-膽甾-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(辛基-CLinDMA)、1,2-二肉豆蔻醯基-3-二甲銨-丙烷(DMDAP)、1,2-二棕櫚醯基-3-二甲銨-丙烷(DPDAP)、N1-[2-((1S)-1-[(3-胺丙基)胺基]-4-[二(3-胺基-丙基)胺基]丁基甲醯胺基)乙基]-3,4-二[油烯氧基]-苯甲醯胺(MVL5)、1,2-二油醯基-sn-甘油基-3-乙基磷酸膽鹼(DOEPC)、溴化2,3-雙(十二烷氧基)-N-(2-羥乙基)-N,N-二甲基丙-1-銨(DLRIE)、溴化N-(2-胺乙基)-N,N-二甲基-2,3-雙(十四烷氧基)丙-1-胺鎓(DMORIE)、二((Z)-壬-2-烯-l-基) 8,8'-((((2(二甲胺基)乙基)硫代)羰基)氮雜二基)二辛酸酯(ATX)、N,N-二甲基-2,3-雙(十二烷氧基)丙-1-胺(DLDMA)、N,N-二甲基-2,3-雙(十四烷氧基)丙-1-胺(DMDMA)、二((Z)-壬-2-烯-l-基)-9-((4-(二甲胺基丁醯基)氧基)十七烷二酸酯(L319)、N-十二烷基-3-((2-十二烷基胺甲醯基-乙基)-{2-[(2-十二烷基胺甲醯基-乙基)-2-{(2-十二烷基胺甲醯基-乙基)-[2-(2-十二烷基胺甲醯基-乙胺基)-乙基]-胺基}-乙胺基)丙醯胺(類脂質98N12-5)、1-[2-[雙(2-羥基十二烷基)胺基]乙基-[2-[4-[2-[雙(2羥基十二烷基)胺基]乙基]哌𠯤-l-基]乙基]胺基]十二烷-2-醇(類脂質02-200);或8-((2-羥乙基)(6-側氧基-6-(十一烷氧基)己基)胺基)辛酸十七烷-9-基酯(SM-102)。
在一些態樣中,脂質奈米顆粒包含一或多種陽離子脂質。在一個態樣中,脂質奈米顆粒包含(4-羥丁基)氮雜二基)雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯) (ALC-0315),其具有下式: 陽離子脂質揭示於例如美國10,166,298中,其全部揭示內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。代表性陽離子脂質包括:
在一些態樣中,RNA-LNP包含陽離子脂質、如本文所描述之RNA分子及以下中之一或多者:中性脂質、類固醇、聚乙二醇化脂質或其組合。若將多於一種陽離子脂質併入LNP內,則此等百分比應用於經組合之陽離子脂質。在一個態樣中,陽離子脂質以諸如分別至少、至多、恰好以下量或其中任何兩者之間的量存在於LNP中:約40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60莫耳百分比。
在本發明之一些態樣中,LNP包含上述任何脂質之組合或混合物。
ii. 聚合物結合脂質在一些態樣中,LNP包含聚合物結合脂質。術語「聚合物結合脂質」係指包含脂質部分及聚合物部分兩者之分子。聚合物結合脂質之實例為聚乙二醇化脂質。術語「聚乙二醇化脂質」係指包含脂質部分及聚乙二醇部分兩者之分子。聚乙二醇化脂質為此項技術中已知的,且包括1-(單甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-s-DMG)、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺及其類似者。
在某些態樣中,LNP包含額外穩定化脂質,其為聚乙二醇脂質(聚乙二醇化脂質)。聚合物結合脂質(例如PEG-脂質)係指包含脂質部分及聚合物部分兩者之分子。聚合物結合脂質之實例為PEG-脂質。PEG-脂質係指包含脂質部分及聚乙二醇部分兩者之分子。PEG-脂質包括(但不限於)經PEG修飾之磷脂醯乙醇胺、經PEG修飾之磷脂酸、經PEG修飾之神經醯胺(例如PEG-CerC14或PEG-CerC20)、經PEG修飾之二烷基胺、經PEG修飾之二醯基甘油、經PEG修飾之二烷基甘油。代表性聚乙二醇脂質包括PEG-c-DOMG、PEG-c-DMA及PEG-s-DMG。在一個態樣中,聚乙二醇脂質為N-[(甲氧基聚乙二醇)2000)胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻醯氧基丙-3-胺(PEG-c-DMA)。在一個態樣中,聚乙二醇脂質為PEG-2000-DMG。在一個態樣中,聚乙二醇脂質為PEG-c-DOMG。在其他態樣中,LNP包含聚乙二醇化二醯基甘油(PEG-DAG),諸如1-(單甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG)、聚乙二醇化磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)、PEG丁二酸酯二醯基甘油(PEG-S-DAG),諸如4-O-(2',3'-二(十四醯氧基)丙基-1-O-((鄰甲氧基(聚乙氧基)乙基)丁二酸酯(PEG-S-DMG)、聚乙二醇化神經醯胺(PEG-cer)或PEG二烷氧基丙基胺基甲酸酯,諸如共聚-甲氧基(聚乙氧基)乙基-N-(2,3二(十四烷氧基)丙基)胺基甲酸酯或2,3-二(十四烷氧基)丙基-N-(ω-甲氧基(聚乙氧基)乙基)胺基甲酸酯。PEG-脂質揭示於例如美國9,737,619中,其全部揭示內容出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。
在一些態樣中,脂質奈米顆粒包含聚合物結合脂質。在一個態樣中,脂質奈米顆粒包含2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺(ALC-0159),其具有下式:
在各種態樣中,陽離子脂質與聚乙二醇化脂質之莫耳比在約100:1至約20:1之範圍內,例如約20:1、25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、65:1、70:1、75:1、80:1、85:1、90:1、95:1或100:1,或可來源於其中之任何範圍或值。
在某些態樣中,PEG-脂質以相對於奈米顆粒之總脂質含量之約1至約10莫耳百分比(莫耳%) (例如至少、至多、恰好1、2、3、4、5、6、7、8、9或10莫耳%或其中任何兩者之間的莫耳%)的量存在於LNP中。
iii. 額外脂質在某些態樣中,LNP包含一或多種額外脂質或類脂質物質,其在顆粒形成期間使顆粒之形成穩定。適合的穩定化或結構性脂質包括非陽離子脂質,例如中性脂質及陰離子脂質。不受任何理論束縛,藉由添加其他疏水性部分,諸如膽固醇及除可離子化/陽離子脂質或類脂質物質以外的脂質使LNP之調配最佳化可增強顆粒穩定性及核酸遞送效力。
如本文所使用,「陰離子脂質」係指在所選pH下帶負電的任何脂質。術語「中性脂質」係指在生理pH下以不帶電或中性兩性離子形式存在的多種脂質物種中之任一者。在一些態樣中,額外脂質包含以下中性脂質組分中之一者:(1)磷脂;(2)膽固醇或其衍生物;或(3)磷脂與膽固醇或其衍生物之混合物。
代表性中性脂質包括磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯甘油、磷脂酸、磷脂醯絲胺酸、神經醯胺、鞘磷脂、二氫鞘磷脂、腦磷脂及腦苷脂。例示性磷脂包括例如磷脂醯膽鹼,例如二醯基磷脂醯膽鹼,諸如二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、二肉豆蔻醯基磷脂醯膽鹼(DMPC)、二(十五烷醯基)磷脂醯膽鹼、二月桂醯基磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)、二花生醯基磷脂醯膽鹼(DAPC)、二山崳醯基磷脂醯膽鹼(DBPC)、二(二十三烷醯基)磷脂醯膽鹼(DTPC)、二(二十四烷醯基)磷脂醯膽鹼(DLPC)、棕櫚醯油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、1,2-二-O-十八烯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(18:0二醚PC)、l-油醯基-2-膽固醇半丁二醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(OChemsPC)及1-十六烷基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(C16 Lyso PC);及磷脂醯乙醇胺,例如二醯基磷脂醯乙醇胺,諸如二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、棕櫚醯油醯基磷脂醯乙醇胺(POPE)及二油醯基磷脂醯乙醇胺4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-l甲酸酯(DOPE-mal)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE)、二月桂醯基磷脂醯乙醇胺(DLPE)、二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺(DSPE)、二植烷醯基磷脂醯乙醇胺(DpyPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂醯基-2-油醯基磷脂醯乙醇胺(SOPE)及1,2-二反油醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(反式DOPE)。在一個態樣中,中性脂質為1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3磷酸膽鹼(DSPC),其具有下式:
在一些態樣中,LNP包含中性脂質,且該中性脂質包含DSPC、DPPC、DMPC、DOPC、POPC、DOPE或SM中之一或多者。
在各種態樣中,LNP進一步包含類固醇或類固醇類似物。「類固醇」為包含以下碳骨架之化合物:
在某些態樣中,類固醇或類固醇類似物為膽固醇。膽固醇衍生物之實例包括(但不限於)膽甾烷醇、膽甾烷酮、膽甾烯酮、糞甾醇、膽固醇基-2'-羥乙基醚、膽固醇基-4'-羥丁基醚、生育酚及其衍生物以及其混合物。在一個態樣中,膽固醇具有下式:
不受任何理論束縛,與至少一種額外脂質之量相比,至少一種陽離子脂質之量可影響重要的核酸顆粒特徵,諸如核酸之電荷、粒徑、穩定性、組織選擇性及生物活性。因此,在一些態樣中,陽離子脂質與中性脂質之莫耳比在約2:1至約8:1、或約10:0至約1:9、約4:1至約1:2、或約3:1至約1:1之範圍內。
在一些態樣中,非陽離子脂質,例如中性脂質(例如一或多種磷脂及/或膽固醇)可佔顆粒中所存在之總脂質的約0莫耳%至約90莫耳%、約0莫耳%至約80莫耳%、約0莫耳%至約70莫耳%、約0莫耳%至約60莫耳%、或約0莫耳%至約50莫耳%。在一些態樣中,非陽離子脂質,例如中性脂質(例如一或多種磷脂及/或膽固醇)可為顆粒中所存在之總脂質的至少、至多、恰好以下量或其中任何兩者之間的量:0莫耳%、10莫耳%、20莫耳%、30莫耳%、40莫耳%、50莫耳%、60莫耳%、70莫耳%、80莫耳%、或90莫耳%。
VI. RNA 分子之 表徵及分析本文所描述之RNA分子可使用各種方法分析及表徵。可在加帽之前或之後進行分析。替代地,可在基於聚A捕捉之親和純化之前或之後進行分析。在另一態樣中,可在額外純化步驟,例如陰離子交換層析及其類似步驟之前或之後進行分析。舉例而言,可使用基於生物分析器晶片之電泳系統來測定RNA模板品質。在其他態樣中,分別使用分析型逆相HPLC來分析RNA模板純度。加帽效率可使用例如總核酸酶消化,隨後二核苷酸端帽物種相對於未加帽GTP物種之MS/MS定量來分析。活體外效力可藉由例如將RNA分子轉染至人類細胞株中來分析。可使用諸如ELISA或流式細胞計之方法來定量所關注多肽之蛋白質表現。免疫原性可藉由例如將RNA分子轉染至指示先天性免疫刺激之細胞株(例如PBMC)中來分析。可使用例如諸如ELISA之方法來分析細胞介素誘導,從而定量細胞介素,例如干擾素-α。可例如藉由生物發光量測來分析生物分佈。
在一些態樣中,本文所揭示之RNA聚核苷酸之特徵在於,當在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑的生物體中評定時,相對於適當參考觀測到:所關注基因(例如抗原)之表現升高;所關注基因(例如抗原)之表現持續時間增加(例如長期表現);所關注基因(例如抗原)之表現升高且表現持續時間增加(例如長期表現);與RNA聚核苷酸之IFIT1的相互作用減少;RNA聚核苷酸之轉譯增加。
在一些態樣中,參考包含投與在其他方面類似但不具有m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeAi)pG2端帽之RNA聚核苷酸的生物體。在一些態樣中,參考包含投與在其他方面類似但不具有本文所揭示之端帽近端序列之RNA聚核苷酸的生物體。在一些態樣中,參考包含投與在其他方面類似但具有自雜交序列之RNA聚核苷酸的生物體。
在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後至少24小時、至少48小時、至少72小時、至少96小時、或至少120小時測定升高之表現。在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後至少24小時測定升高之表現。在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後至少48小時測定升高之表現。在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後至少72小時測定升高之表現。在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後至少96小時測定升高之表現。在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後至少120小時測定升高之表現。
在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後約24-120小時測定升高之表現。在一些態樣中,在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後約24-110小時、約24-100小時、約24-90小時、約24-80小時、約24-70小時、約24-60小時、約24-50小時、約24-40小時、約24-30小時、約30-120小時、約40-120小時、約50-120小時、約60-120小時、約70-120小時、約80-120小時、約90-120小時、約100-120小時、或約110-120小時測定升高之表現。
在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少2倍至至少10倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少2倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少3倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少4倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少6倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少8倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少10倍。
在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高約2倍至約50倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高約2倍至約45倍、約2倍至約40倍、約2倍至約30倍、約2倍至約25倍、約2倍至約20倍、約2倍至約15倍、約2倍至約10倍、約2倍至約8倍、約2倍至約5倍、約5倍至約50倍、約10倍至約50倍、約15倍至約50倍、約20倍至約50倍、約25倍至約50倍、約30倍至約50倍、約40倍至約50倍、或約45倍至約50倍。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高至少、至多、恰好以下倍數或其中任何兩者之間的倍數:2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍、20倍、21倍、22倍、23倍、24倍、25倍、26倍、27倍、28倍、29倍、30倍、31倍、32倍、33倍、34倍、35倍、36倍、37倍、38倍、39倍、40倍、41倍、42倍、43倍、44倍、45倍、46倍、47倍、48倍、49倍、或50倍、或可來源於其中之任何範圍或值。
在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高(例如表現持續時間增加)在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後持續至少、至多、恰好以下時間或其中任何兩者之間的時間:24小時、48小時、72小時、96小時、或120小時。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高在投與之後持續至少24小時。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高在投與之後持續至少48小時。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高在投與之後持續至少72小時。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高在投與之後持續至少96小時。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後持續至少120小時。
在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後持續約24-120小時。在一些態樣中,表現升高在投與包含RNA聚核苷酸之組合物或醫藥製劑之後持續約24-110小時、約24-100小時、約24-90小時、約24-80小時、約24-70小時、約24-60小時、約24-50小時、約24-40小時、約24-30小時、約30-120小時、約40-120小時、約50-120小時、約60-120小時、約70-120小時、約80-120小時、約90-120小時、約100-120小時、或約110-120小時。在一些態樣中,所關注基因(例如抗原)之表現升高持續至少、至多、恰好以下時間或其中任何兩者之間的時間:24小時、36小時、48小時、60小時、72小時、84小時、96小時、108小時、或120小時、或可來源於其中之任何範圍或值。
VII. 免疫反應及分析如本文所論述,本發明係關於在個體中誘發或誘導針對VZV蛋白質(例如野生型或變異型VZV醣蛋白)之免疫反應。在一個態樣中,免疫反應可保護個體免於患上感染或相關疾病(尤其與VZV相關之彼等感染或相關疾病)或治療患有、疑似患有或處於患上該感染或相關疾病之風險下的個體。本發明之免疫原性組合物的一種用途為藉由對個體進行接種或疫苗接種來預防VZV感染。
A. 免疫分析本發明包括實施血清學分析以評估免疫反應是否由本發明之組合物誘導或誘發及達到何種程度。可實施許多類型之免疫分析。本發明涵蓋之免疫分析包括(但不限於)美國專利4,367,110 (雙單株抗體夾心分析)及美國專利4,452,901 (西方墨點法)中所描述之彼等免疫分析。其他分析包括活體外及活體內的經標記配體之免疫沈澱及免疫細胞化學。
免疫分析一般為結合分析。在一些態樣中,免疫分析為此項技術中已知的各種類型之酶聯免疫吸附分析(ELISA)及放射免疫分析(RIA)。使用組織切片進行之免疫組織化學偵測亦為尤其適用的。在一個實例中,抗體或抗原固定在所選擇表面上,諸如聚苯乙烯微量滴定盤中之孔、試紙或管柱載體上。接著,將懷疑含有所需抗原或抗體之測試組合物(諸如臨床樣品)添加至該等孔。在結合及洗滌以移除非特異性結合之免疫複合物之後,可偵測結合之抗原或抗體。偵測一般藉由添加連接至可偵測標籤之對所需抗原或抗體具有特異性的另一種抗體來達成。此類型ELISA被稱為「夾心ELISA」。偵測亦可藉由添加對所需抗原具有特異性之第二抗體,接著添加對第二抗體具有結合親和力之第三抗體來達成,其中該第三抗體連接至可偵測標籤。
競爭ELISA亦為其中測試樣品與已知量之經標記抗原或抗體競爭結合的可能實施方案。未知樣品中反應性物種之量係藉由在與經塗佈孔一起培育之前或期間混合樣品與已知經標記物種來測定。樣品中反應性物種之存在用以減少可用於結合至孔之經標記物種的量,且因此減少最終信號。無論採用何種形式,ELISA均具有某些共同特徵,諸如塗佈、培育或結合、洗滌以移除非特異性結合之物種,及偵測經結合之免疫複合物。
抗原或抗體亦可連接至固體載體,諸如呈盤、珠粒、試紙、膜或管柱基質形式之固體載體,且待分析之樣品施加至經固定之抗原或抗體。在用抗原或抗體塗佈培養盤時,一般將該培養盤之孔與抗原或抗體溶液一起培育過夜或指定時間。接著洗滌該培養盤之孔以移除不完全吸附之物質。接著,該等孔之任何殘留可用表面利用對測試抗血清呈抗原中性之非特異性蛋白質「塗佈」。該等蛋白質包括牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白及奶粉溶液。該塗佈允許阻斷固定表面上之非特異性吸附位點且因此減少由該表面上抗血清之非特異性結合引起的背景。
B. VZV 感染之診斷本發明涵蓋以多種方式使用VZV多肽、蛋白質及/或肽,包括偵測VZV之存在以診斷感染。根據本發明,偵測感染存在之方法涉及獲得疑似經一或多種VZV病毒株感染之樣品的步驟,該樣品諸如獲自個體之樣品,例如獲自血液、唾液、組織、骨骼、肌肉、軟骨或皮膚之樣品。在分離樣品之後,可進行利用本發明之多肽、蛋白質及/或肽之診斷分析以偵測VZV之存在,且用於測定樣品中之此類存在的此類分析技術為熟習此項技術者所熟知的,且包括諸如放射免疫分析、西方墨點分析及ELISA分析之方法。
一般而言,根據本發明,涵蓋一種診斷感染之方法,其中將懷疑感染VZV之樣品添加至根據本發明之多肽、蛋白質或肽中,且VZV係藉由與該等多肽、蛋白質及/或肽之抗體結合或與樣品中之抗體的多肽、蛋白質及/或肽結合來指示。
因此,編碼根據本發明之VZV多肽、蛋白質及/或肽的RNA分子可用於治療、預防由VZV感染(例如主動或被動免疫接種)引起之感染所致的疾病或降低其嚴重程度或適用作研究工具。
上述多肽、蛋白質及/或肽中之任一者可直接用可偵測標籤標記以便鑑別及定量VZV。適用於免疫分析之標籤一般為熟習此項技術者已知的,且包括酶、放射性同位素、及螢光、發光及發色物質,包括著色粒子,諸如膠體金或乳膠珠粒。適合的免疫分析包括酶聯免疫吸附分析(ELISA)。
C. 保護性免疫性在本發明之一些態樣中,編碼VZV多肽之RNA分子、RNA-LNP及其組合物向個體賦予保護性免疫性。保護性免疫性係指建立特異性免疫反應之身體能力,其保護個體免於患上特定疾病或病狀,其涉及針對其存在免疫反應之藥劑。免疫原性有效量能夠賦予個體保護性免疫性。
如本文所使用,片語「免疫反應(immune response)」或其等效片語「免疫反應(immunological response)」係指產生針對抗原之體液反應(抗體介導)、細胞反應(由抗原特異性T細胞或其分泌產物介導)或體液及細胞反應兩者。此類反應可為主動反應或被動反應。細胞免疫反應係藉由多肽抗原決定基與I類或II類MHC分子締合呈現以活化抗原特異性CD4 (+) T輔助細胞及/或CD8 (+)細胞毒性T細胞來引發。反應亦可涉及單核球、巨噬細胞、NK細胞、嗜鹼性球、樹突狀細胞、星形膠質細胞、微神經膠質細胞、嗜酸性球或先天性免疫之其他組分的活化。如本文所使用,「主動免疫性」係指藉由回應於抗原(例如由本發明之RNA分子編碼的VZV多肽)之存在產生抗體而賦予個體之任何免疫性。
如本文所使用,「被動免疫性」包括(但不限於)投與活化之免疫效應子,包括免疫反應之細胞介體或蛋白質介體(例如單株及/或多株抗體)。單株或多株抗體組合物可用於被動免疫接種以治療、預防由攜帶抗體所識別之抗原的生物體感染引起之疾病或降低其嚴重程度。抗體組合物可包括結合於多種抗原之抗體,該等抗原可繼而與各種生物體締合。抗體組分可為多株抗血清。在某些態樣中,一或多種抗體係自已用抗原攻擊之動物或第二個體親和純化得到。或者,可使用抗體混合物,其為針對相同、相關或不同微生物或生物體(諸如病毒,包括但不限於VZV)中存在之抗原的單株及/或多株抗體之混合物。
可藉由向患者投與獲自具有已知免疫反應性之供體或其他非患者來源的免疫球蛋白(Ig)及/或其他免疫因子而向患者或個體賦予被動免疫性。在其他態樣中,可向個體投與本發明之免疫原性組合物,該個體隨後充當含有針對VZV或其他生物體之抗體的球蛋白之來源或供體,該球蛋白係回應於免疫原性組合物之攻擊而產生(「超免疫球蛋白」)。由此治療之個體將供給血漿,接著經由習知血漿分離方法自其中獲得超免疫球蛋白,且投與給另一個體以賦予針對VZV感染之抗性或治療VZV感染。
出於本說明書及隨附申請專利範圍之目的,術語「抗原決定基」及「抗原決定子」可互換地用於指B及/或T細胞回應或識別之抗原上之位點。B細胞抗原決定基可由藉由蛋白質之三級摺疊而並置的連續胺基酸或非連續胺基酸形成。由連續胺基酸形成的抗原決定基通常在暴露於變性溶劑後保留,而藉由三級摺疊形成的抗原決定基通常在用變性溶劑處理後消失。抗原決定基通常包括呈獨特空間構形之至少3個且更通常至少5個或8至10個胺基酸。測定抗原決定基之空間構形之方法包括例如x射線結晶學及2維核磁共振。參見例如Epitope Mapping Protocols (1996)。識別相同抗原決定基之抗體可在顯示一種抗體阻斷另一抗體與目標抗原之結合的能力的簡單免疫分析中鑑別。T細胞針對CD8細胞識別約九個胺基酸之連續抗原決定基或針對CD4細胞識別約13至15個胺基酸之連續抗原決定基。識別抗原決定基之T細胞可藉由活體外分析、藉由抗原依賴性殺死(細胞毒性T淋巴細胞分析,Tigges等人, 1996)或藉由細胞介素分泌來鑑別,該等活體外分析量測抗原依賴性增殖,其係藉由回應於抗原決定基之致敏T細胞引起之 3H-胸苷併入所測定(Burke等人, 1994)。
細胞介導之免疫反應的存在可藉由增殖分析(CD4 (+) T細胞)或CTL (細胞毒性T淋巴細胞)分析法來測定。體液及細胞反應對免疫原性組合物之保護或治療作用之相對貢獻可藉由分別自經免疫接種之同基因型動物分離IgG及T細胞且量測第二個體中之保護或治療作用來區分。
如本文所使用,術語「抗體」或「免疫球蛋白」可互換使用,且係指作為動物或接受者之免疫反應之一部分起作用的若干類別之結構相關蛋白質中之任一者,該等蛋白質包括IgG、IgD、IgE、IgA、IgM及相關蛋白質。在正常生理條件下,抗體存在於血漿及其他體液中以及某些細胞之膜中,且由類型指示為B細胞之淋巴細胞或其功能等效物產生。
如本文所使用,術語「免疫原性劑」或「免疫原」或「抗原」可互換使用以描述在單獨、與佐劑結合或呈現於呈遞媒劑上向接受者投與時能夠誘導針對其自身之免疫反應的分子。
VIII. 組合物在一些態樣中,本文所揭示之RNA分子及/或RNA-LNP可以醫藥組合物或藥劑形式投與且可以任何適合醫藥組合物之形式投與。在一些態樣中,醫藥組合物係用於治療性或防治性治療。在一個態樣中,本發明係關於一種用於向宿主投與之組合物。在一些態樣中,該宿主為人類。在其他態樣中,該宿主為非人類。
在一些態樣中,本文所揭示之RNA分子及/或RNA-LNP可以醫藥組合物形式投與,該醫藥組合物可調配成固體、半固體、液體、凍乾、冷凍或氣體形式之製劑。在一些態樣中,本文所揭示之RNA分子及/或RNA-LNP可以醫藥組合物形式投與,該醫藥組合物可包含醫藥學上可接受之載劑且可視情況包含一或多種佐劑、穩定劑、鹽、緩衝液、防腐劑及視情況存在之其他治療劑。在一些態樣中,本文所揭示之醫藥組合物包含一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。在一些態樣中,醫藥組合物不包括佐劑(例如,其不含佐劑)。
適用於本發明之醫藥組合物的防腐劑包括(但不限於)苯紮氯銨(benzalkonium chloride)、氯丁醇、對羥基苯甲酸酯及硫柳汞。如本文所使用之術語「賦形劑」係指可存在於本發明之醫藥組合物中但不為活性成分的物質。賦形劑之實例包括(不限於)載劑、黏合劑、稀釋劑、潤滑劑、增稠劑、表面活性劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、緩衝液、調味劑或著色劑。
術語「稀釋劑」係關於稀釋及/或稀化劑。此外,術語「稀釋劑」包括流體、液體或固體懸浮液及/或混合介質中之任何一或多者。適合稀釋劑之實例包括乙醇、甘油鹽水及水。
術語「載劑」係指可為天然、合成、有機、無機之組分,活性組分合併於該組分中以便有助於、增強或實現醫藥組合物之投與。如本文所使用之載劑可為一或多種適合於向個體投與的相容固體或液體填充劑、稀釋劑或囊封物質。適合載劑包括(但不限於)無菌水、林格氏液(Ringer)、乳酸林格氏液、無菌氯化鈉溶液、等張鹽水、聚伸烷基二醇、氫化萘及尤其生物相容的乳酸交酯聚合物、乳酸交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚物。在一些態樣中,本發明之醫藥組合物包括氯化鈉。
用於治療用途之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑為醫藥技術中所熟知的,且描述於例如Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R Gennaro編 1985)中。
醫藥載劑、賦形劑或稀釋劑可根據預期投與途徑及標準醫藥實踐來選擇。
在一些態樣中,組合物包含有包含編碼免疫原性多肽之開放閱讀框架的RNA分子。在一些態樣中,免疫原性多肽包含VZV抗原。在一些態樣中,VZV抗原為VZV多肽。在一些態樣中,VZV多肽為VZV醣蛋白(例如gK、gN、gC、gB、gH、gM、gL、gI及gE)或其片段或變異體。在一些態樣中,RNA分子編碼VZV gK多肽,RNA分子編碼VZV gN多肽,RNA分子編碼VZV gC多肽,RNA分子編碼VZV gB多肽,RNA分子編碼VZV gH多肽,RNA分子編碼VZV gM多肽,RNA分子編碼VZV gL多肽,RNA分子編碼VZV gI多肽,及/或RNA分子編碼VZV gE多肽。在一個態樣中,RNA分子編碼VZV gE多肽。在一些態樣中,VZV多肽包含兩種或更多種(例如2、3、4、5、6、7、8、9或更多種) VZV多肽。
在一些態樣中,組合物包含有包含編碼全長VZV多肽之開放閱讀框架的RNA分子。在一些態樣中,所編碼之免疫原性多肽為經截短VZV多肽。在一些態樣中,所編碼之免疫原性多肽為VZV多肽之變異體。在一些態樣中,所編碼之免疫原性多肽為VZV多肽之片段。
A. 包括 LNP 免疫原性組合物在一些態樣中,醫藥組合物包含與基於脂質之遞送系統一起調配的本文所揭示之RNA分子(例如聚核苷酸)。因此,在一些態樣中,組合物包括基於脂質之遞送系統(例如LNP) (例如基於脂質之疫苗),其將核酸分子遞送至細胞內部,該核酸分子接著可在細胞內部複製、抑制所關注蛋白質表現及/或表現所編碼之所關注多肽。遞送系統可具有增強所編碼抗原之免疫原性的佐劑作用。在一些態樣中,組合物包含至少一個編碼VZV多肽之RNA分子,該至少一個RNA分子與一或多種脂質複合、囊封於一或多種脂質中及/或與一或多種脂質一起調配,且形成脂質奈米顆粒(LNP)、脂質體、脂質複合物及/或奈米脂質體。在一些態樣中,組合物包含脂質奈米顆粒。因此,在某些態樣中,本發明係關於包含一或多種與核酸或多肽/肽締合之脂質(例如VZV RNA-LNP)的組合物。
在一些情況下,包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物可進一步包括一或多種鹽及/或一或多種醫藥學上可接受之界面活性劑、防腐劑、載劑、稀釋劑及/或賦形劑。在一些態樣中,包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物進一步包括醫藥學上可接受之媒劑。在一些態樣中,緩衝液、穩定劑及視情況存在之鹽中之每一者可包括在包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物中。在其他態樣中,緩衝液、穩定劑、鹽、界面活性劑、防腐劑及賦形劑中之任何一或多者可不包括在包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物中。
在另一態樣中,包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物進一步包含穩定劑。在一些態樣中,穩定劑包含蔗糖、甘露糖、山梨糖醇、棉子糖、海藻糖、甘露糖醇、肌醇、氯化鈉、精胺酸、乳糖、羥乙基澱粉、聚葡萄糖、聚乙烯吡咯啶酮、甘胺酸或其組合。在一些態樣中,穩定劑為雙醣或糖。在一個態樣中,穩定劑為蔗糖。在另一態樣中,穩定劑為海藻糖。在另一態樣中,穩定劑為蔗糖與海藻糖之組合。在一些態樣中,組合物中穩定劑之總濃度為約5%至約10% w/v。舉例而言,穩定劑之總濃度可至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間:1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20% w/v,或可來源於其中之任何範圍或值。在一些態樣中,穩定劑濃度包括(但不限於)約10 mg/mL至約400 mg/mL、約100 mg/mL至約200 mg/mL、約100 mg/mL至約150 mg/mL、約100 mg/mL至約140 mg/mL、約100 mg/mL至約130 mg/mL、約100 mg/mL至約120 mg/mL、約100 mg/mL至約110 mg/mL、或約100 mg/mL至約105 mg/mL之濃度。在一些態樣中,穩定劑之濃度至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間:10 mg/mL、20 mg/mL、50 mg/mL、100 mg/mL、101 mg/mL、102 mg/mL、103 mg/mL、104 mg/mL、105 mg/mL、106 mg/mL、107 mg/mL、108 mg/mL、109 mg/mL、110 mg/mL、150 mg/mL、200 mg/mL、300 mg/mL、400 mg/mL或更高。
在另一態樣中,穩定劑之質量的量與RNA之質量的量呈特定比率。在一個態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過5000。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過2000。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過1000。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過500。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過100。在另一態樣中,穩定劑與醫藥物質之質量的量之比率不超過50。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過10。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過1。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過0.5。在另一態樣中,穩定劑與RNA之質量的量之比率不超過0.1。在另一態樣中,穩定劑及RNA包含約200至2000:1之質量比的穩定劑及RNA。
在一些態樣中,包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物進一步包含緩衝液。緩衝劑之實例包括(但不限於)檸檬酸鹽緩衝溶液、乙酸鹽緩衝溶液、磷酸鹽緩衝溶液、氯化銨、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣、葡庚糖酸鈣、葡糖酸鈣、d-葡萄糖酸、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、乳糖酸鈣、丙酸、乙醯丙酸鈣、戊酸、磷酸氫鈣、磷酸、磷酸鈣、磷酸氫氧化鈣、乙酸鉀、氯化鉀、葡糖酸鉀、鉀混合物、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鉀混合物、乙酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉混合物、緩血酸胺、Tris鹽酸(HCl)、胺基磺酸鹽緩衝液(例如HEPES)、氫氧化鎂、氫氧化鋁、褐藻酸、無熱原水、等張鹽水、林格氏溶液、乙醇及/或其組合。在一些態樣中,緩衝液為HEPES緩衝液、Tris緩衝液或PBS緩衝液。在一個態樣中,緩衝液為Tris緩衝液。在另一態樣中,緩衝液為HEPES緩衝液。在另一態樣中,緩衝液為PBS緩衝液。舉例而言,緩衝液濃度可至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間:1 mM、2 mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM、7 mM、8 mM、9 mM、10 mM、11 mM、12 mM、13 mM、14 mM、15 mM、16 mM、17 mM、18 mM、19 mM、或20 mM、或可來源於其中之任何範圍或值。緩衝液可呈中性pH、pH 6.5至8.5、pH 7.0至pH 8.0、或pH 7.2至pH 7.6。舉例而言,緩衝液可呈至少、至多、恰好以下pH或以下中之任何兩者之間的pH:6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4、或8.5、或可來源於其中之任何範圍或值。在特定態樣中,緩衝液呈pH 7.4。
在一些態樣中,包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物可進一步包含鹽。鹽之實例包括(但不限於)鈉鹽及/或鉀鹽。在一個態樣中,鹽為鈉鹽。在一特定態樣中,鈉鹽為氯化鈉。在一個態樣中,鹽為鉀鹽。在一些態樣中,鉀鹽包含氯化鉀。組合物中鹽之濃度可為約70 mM至約140 mM。舉例而言,鹽濃度可至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間:50 mM、60 mM、70 mM、80 mM、90 mM、100 mM、120 mM、130 mM、140 mM、150 mM、160 mM、170 mM、180 mM、190 mM或200 mM。
在一些態樣中,鹽濃度包括(但不限於)約1 mg/mL至約100 mg/mL、約1 mg/mL至約50 mg/mL、約1 mg/mL至約40 mg/mL、約1 mg/mL至約30 mg/mL、約1 mg/mL至約20 mg/mL、約1 mg/mL至約10 mg/mL、或約1 mg/mL至約15 mg/mL之濃度。在一些態樣中,鹽之濃度至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間:1 mg/mL、2 mg/mL、3 mg/mL、4 mg/mL、5 mg/mL、6 mg/mL、7 mg/mL、8 mg/mL、9 mg/mL、10 mg/mL、11 mg/mL、12 mg/mL、13 mg/mL、14 mg/mL、15 mg/mL、16 mg/mL、17 mg/mL、18 mg/mL、19 mg/mL、20 mg/mL或更高。鹽可呈中性pH、pH 6.5至8.5、pH 7.0至pH 8.0、或pH 7.2至pH 7.6。舉例而言,鹽可呈至少、至多、恰好等於以下或在以下中之任何兩者之間的pH:6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8、8.1、8.2、8.3、8.4或8.5。
在一些態樣中,包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物進一步包含界面活性劑、防腐劑、任何其他賦形劑或其組合。如本文所使用,「任何其他賦形劑」包括(但不限於)抗氧化劑、麩胱甘肽、EDTA、甲硫胺酸、甲磺酸去鐵胺(desferal)、抗氧化劑、金屬清除劑或游離基清除劑。在一個態樣中,界面活性劑、防腐劑、賦形劑或其組合為無菌注射用水(sWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、鹽水、右旋糖溶液、聚山梨醇酯、泊洛沙姆(poloxamer)、曲拉通(Triton)、二價陽離子、乳酸林格氏液、胺基酸、糖、多元醇、聚合物或環糊精。
賦形劑係指免疫原性組合物中不為活性成分之成分,其實例包括(但不限於)載劑、黏合劑、稀釋劑、潤滑劑、增稠劑、表面活性劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、緩衝液、調味劑、崩解劑、包衣、塑化劑、壓縮劑、濕式造粒劑或著色劑。用於本文所揭示之組合物中的防腐劑包括(但不限於)苯紮氯銨、氯丁醇、對羥基苯甲酸酯及硫柳汞。如本文所使用,「醫藥學上可接受之載劑」包括任何及所有水性溶劑(例如水、醇/水溶液、鹽水溶液、非經腸媒劑,諸如氯化鈉、林格氏右旋糖(Ringer's dextrose)等)、非水性溶劑(例如丙二醇、聚乙二醇、植物油及諸如油酸乙酯之可注射有機酯)、分散介質、包衣、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌或抗真菌劑、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體)、等張劑、吸收延遲劑、鹽、藥物、藥物穩定劑、凝膠、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料、流體及營養補充劑,諸如如一般熟習此項技術者將已知之物質及其組合。稀釋劑或者稀釋或稀化劑包括(但不限於)乙醇、甘油、水、糖(諸如乳糖、蔗糖、甘露糖醇及山梨糖醇)及來源於小麥、玉米水稻及馬鈴薯之澱粉;及纖維素,諸如微晶纖維素。組合物中稀釋劑之量按總組合物之重量計可介於約10%至約90%、約25%至約75%、約30%至約60%、或約12%至約60%之間。
包括基於脂質之遞送系統的免疫原性組合物中各種組分之pH及確切濃度係根據熟知參數來進行調節。此類介質及藥劑用於醫藥活性物質之用途為此項技術中熟知的。除非任何習知介質或試劑與活性成分不相容,否則涵蓋其在免疫原性、預防性及/或治療性組合物中之用途。
在一個態樣中,醫藥組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA分子,該VZV RNA分子與一或多種脂質複合、囊封於一或多種脂質中及/或與一或多種脂質一起調配以形成VZV RNA-LNP。在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為液體。在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為冷凍的。在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為凍乾的。在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸分子,其囊封於具有陽離子脂質、聚乙二醇化脂質(亦即PEG-脂質)及一或多種結構性脂質(例如中性脂質)之脂質組成的LNP中。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物包含陽離子脂質。陽離子脂質可包含本文所揭示之任何一或多種陽離子脂質。在特定態樣中,陽離子脂質包含((4-羥丁基)氮雜二基)雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯) (ALC-0315)。在一些態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49、0.5、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.7、0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.8、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.9、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.1、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19、1.2、1.21、1.22、1.23、1.24、1.25、1.26、1.27、1.28、1.29、1.3、1.31、1.32、1.33、1.34、1.35、1.36、1.37、1.38、1.39、1.4、1.41、1.42、1.43、1.44、1.45、1.46、1.47、1.48、1.49、1.5、1.51、1.52、1.53、1.54、1.55、1.56、1.57、1.58、1.59、1.6、1.61、1.62、1.63、1.64、1.65、1.66、1.67、1.68、1.69、1.7、1.71、1.72、1.73、1.74、1.75、1.76、1.77、1.78、1.79、1.8、1.81、1.82、1.83、1.84、1.85、1.86、1.87、1.88、1.89、1.9、1.91、1.92、1.93、1.94、1.95、1.96、1.97、1.98、1.99或2 ng/µg/mg/mL。在一些態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49、0.5、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.7、0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.8、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.9、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99或1 mg/mL。在一些態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以至少0.4 mg/mL、至少0.45 mg/mL、至少0.5 mg/mL、至少0.55 mg/mL、至少0.6 mg/mL、至少0.65 mg/mL、至少0.7 mg/mL、至少0.75 mg/mL、至少0.8 mg/mL、至少0.85 mg/mL、至少0.9 mg/mL、至少0.95 mg/mL、或至少1 mg/mL之濃度包括在組合物中。在一些態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以0.4與0.5之間、0.5與0.6之間、0.6與0.7之間、0.7與0.8之間、0.8與0.9之間、或0.9與1 mg/mL之間的濃度包括在組合物中。在一些態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以0.4與0.45 mg/mL之間、0.45與0.5 mg/mL之間、0.5與0.55 mg/mL之間、0.55與0.6 mg/mL之間、0.6與0.65 mg/mL之間、0.65與0.7 mg/mL之間、0.7與0.75 mg/mL之間、0.75與0.8 mg/mL之間、0.8與0.85 mg/mL之間、0.85與0.9 mg/mL之間、0.9與0.95 mg/mL之間、或0.95與1 mg/mL之間的濃度包括在組合物中。
在特定態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以0.8至0.95 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以約0.8至0.9 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以約0.85至0.9 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以約0.8、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.9、0.91、0.92、0.93、0.94或0.95 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,陽離子脂質(例如ALC-0315)以約0.86 mg/mL之濃度包括在組合物中。凍乾組合物之濃度係在復原後測定。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物進一步包含聚乙二醇化脂質(亦即PEG-脂質)。聚乙二醇化脂質可包含本文所揭示之任何一或多種聚乙二醇化脂質。在特定態樣中,聚乙二醇化脂質包含2-[(聚乙二醇)-2000]- N, N-二(十四烷基)乙醯胺(ALC-0159)。在一些態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49、0.5、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.7、0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.8、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.9、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.1、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19、1.2、1.21、1.22、1.23、1.24、1.25、1.26、1.27、1.28、1.29、1.3、1.31、1.32、1.33、1.34、1.35、1.36、1.37、1.38、1.39、1.4、1.41、1.42、1.43、1.44、1.45、1.46、1.47、1.48、1.49、1.5、1.51、1.52、1.53、1.54、1.55、1.56、1.57、1.58、1.59、1.6、1.61、1.62、1.63、1.64、1.65、1.66、1.67、1.68、1.69、1.7、1.71、1.72、1.73、1.74、1.75、1.76、1.77、1.78、1.79、1.8、1.81、1.82、1.83、1.84、1.85、1.86、1.87、1.88、1.89、1.9、1.91、1.92、1.93、1.94、1.95、1.96、1.97、1.98、1.99或2 ng/µg/mg/mL。在一些態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49或0.5 mg/mL。在一些態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以至少0.01 mg/mL、至少0.05 mg/mL、至少0.1 mg/mL、至少0.15 mg/mL、至少0.2 mg/mL、至少0.25 mg/mL、至少0.3 mg/mL、至少0.35 mg/mL、至少0.4 mg/mL、至少0.45 mg/mL、或至少0.5 mg/mL之濃度包括在組合物中。在一些態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以0.01與0.05 mg/mL之間、0.05與0.1 mg/mL之間、0.1與0.15 mg/mL之間、0.15與0.2 mg/mL之間、或0.2與0.25 mg/mL之間的濃度包括在組合物中。
在特定態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以約0.05至0.15 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以約0.10至0.15 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以約0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14或0.15 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,聚乙二醇化脂質(例如ALC-0159)以約0.11 mg/mL之濃度包括在組合物中。凍乾組合物之濃度係在復原後測定。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物進一步包含一或多種結構性脂質。一或多種結構性脂質可包含本文所揭示之任何一或多種結構性脂質。在特定態樣中,一或多種結構性脂質包含中性脂質及類固醇或類固醇類似物。在特定態樣中,一或多種結構性脂質包含1,2-二硬脂醯基- sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)及膽固醇。在一些態樣中,一或多種結構性脂質(例如DSPC及膽固醇)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49、0.5、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.7、0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.8、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.9、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.1、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19、1.2、1.21、1.22、1.23、1.24、1.25、1.26、1.27、1.28、1.29、1.3、1.31、1.32、1.33、1.34、1.35、1.36、1.37、1.38、1.39、1.4、1.41、1.42、1.43、1.44、1.45、1.46、1.47、1.48、1.49、1.5、1.51、1.52、1.53、1.54、1.55、1.56、1.57、1.58、1.59、1.6、1.61、1.62、1.63、1.64、1.65、1.66、1.67、1.68、1.69、1.7、1.71、1.72、1.73、1.74、1.75、1.76、1.77、1.78、1.79、1.8、1.81、1.82、1.83、1.84、1.85、1.86、1.87、1.88、1.89、1.9、1.91、1.92、1.93、1.94、1.95、1.96、1.97、1.98、1.99或2 ng/µg/mg/mL。在一些態樣中,一或多種結構性脂質(例如DSPC及膽固醇)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49或0.5 mg/mL。在一些態樣中,一或多種結構性脂質(例如DSPC及膽固醇)以至少0.05 mg/mL、至少0.1 mg/mL、至少0.15 mg/mL、至少0.2 mg/mL、至少0.25 mg/mL、至少0.3 mg/mL、至少0.35 mg/mL、至少0.4 mg/mL、至少0.45 mg/mL、至少0.5 mg/mL、至少0.55 mg/mL、至少0.6 mg/mL、至少0.65 mg/mL、至少0.7 mg/mL、至少0.75 mg/mL、至少0.8 mg/mL、至少0.85 mg/mL、至少0.9 mg/mL、至少0.95 mg/mL、或至少1 mg/mL之濃度包括在組合物中。在一些態樣中,一或多種結構性脂質(例如DSPC及膽固醇)以0.05與0.1 mg/mL之間、0.1與0.15 mg/mL之間、0.15與0.2 mg/mL之間、0.2與0.25 mg/mL之間、0.25與0.3 mg/mL之間、0.3與0.35 mg/mL之間、0.35與0.4 mg/mL之間、0.4與0.45 mg/mL之間、0.45與0.5 mg/mL之間、0.5與0.55 mg/mL之間、0.55與0.6 mg/mL之間、0.6與0.65 mg/mL之間、0.65與0.7 mg/mL之間、0.7與0.75 mg/mL之間、0.75與0.8 mg/mL之間、0.8與0.85 mg/mL之間、0.85與0.9 mg/mL之間、0.9與0.95 mg/mL之間、或0.95與1 mg/mL之間的濃度包括在組合物中。
在特定態樣中,一或多種結構性脂質包括DSPC,且DSPC以約0.1至0.25 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,一或多種結構性脂質包括DSPC,且DSPC以約0.15至0.25 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,一或多種結構性脂質包括DSPC,且DSPC以約0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24或0.25 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,DSPC以約0.19 mg/mL之濃度包括在組合物中。
在特定態樣中,一或多種結構性脂質包括膽固醇,且膽固醇以約0.3至0.45 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,一或多種結構性脂質包括膽固醇,且膽固醇以約0.3至0.4 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,一或多種結構性脂質包括膽固醇,且膽固醇以約0.35至0.45 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,一或多種結構性脂質包括膽固醇,且膽固醇以約0.30、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.40、0.41、0.42、0.43、0.44或0.45 mg/mL之濃度包括在組合物中。在特定態樣中,膽固醇以約0.37 mg/mL之濃度包括在組合物中。凍乾組合物之濃度係在復原後測定。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物進一步包含一或多種緩衝液及穩定劑以及視情況存在之鹽稀釋劑。因此,在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物包含陽離子脂質、聚乙二醇化脂質、一或多種結構性脂質、一或多種緩衝液、穩定劑及視情況存在之鹽稀釋劑。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物包含一或多種緩衝液。一或多種緩衝液可包含本文所揭示之任何一或多種緩衝劑。在特定態樣中,組合物包含Tris緩衝液,其包含至少第一緩衝液及第二緩衝液。在一些態樣中,第一緩衝液為緩血酸胺。在一些態樣中,第二緩衝液為Tris鹽酸(HCl)。在一些態樣中,Tris緩衝液之第一緩衝液及第二緩衝液(例如緩血酸胺及Tris HCl)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49、0.5、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.7、0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.8、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.9、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99、1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.1、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19、1.2、1.21、1.22、1.23、1.24、1.25、1.26、1.27、1.28、1.29、1.3、1.31、1.32、1.33、1.34、1.35、1.36、1.37、1.38、1.39、1.4、1.41、1.42、1.43、1.44、1.45、1.46、1.47、1.48、1.49、1.5、1.51、1.52、1.53、1.54、1.55、1.56、1.57、1.58、1.59、1.6、1.61、1.62、1.63、1.64、1.65、1.66、1.67、1.68、1.69、1.7、1.71、1.72、1.73、1.74、1.75、1.76、1.77、1.78、1.79、1.8、1.81、1.82、1.83、1.84、1.85、1.86、1.87、1.88、1.89、1.9、1.91、1.92、1.93、1.94、1.95、1.96、1.97、1.98、1.99或2 ng/µg/mg/mL。凍乾組合物之濃度係在復原後測定。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為包含Tris緩衝液之液體組合物。在一些態樣中,Tris緩衝液包含第一緩衝液。在一些態樣中,第一緩衝液為緩血酸胺。在一些態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在液體組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49或0.5 mg/mL。在一些態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以至少0.1 mg/mL、至少0.05 mg/mL、至少0.1 mg/mL、至少0.15 mg/mL、至少0.2 mg/mL、至少0.25 mg/mL、至少0.3 mg/mL、至少0.35 mg/mL、至少0.4 mg/mL、至少0.45 mg/mL、至少0.5 mg/mL、至少0.55 mg/mL、至少0.6 mg/mL、至少0.65 mg/mL、至少0.7 mg/mL、至少0.75 mg/mL、至少0.8 mg/mL、至少0.85 mg/mL、至少0.9 mg/mL、至少0.95 mg/mL、或至少1 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在一些態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以0.05與0.15之間、0.15與0.25之間、0.25與0.35之間、0.35與0.45之間、0.45與0.55之間、0.55與0.65之間、0.65與0.75之間、0.75與0.85之間、或0.85與0.95 mg/mL之間的濃度包括在液體組合物中。在一些態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以0.05與0.1 mg/mL之間、0.1與0.15 mg/mL之間、0.15與0.2 mg/mL之間、0.2與0.25 mg/mL之間、0.25與0.3 mg/mL之間、0.3與0.35 mg/mL之間、0.35與0.4 mg/mL之間、0.4與0.45 mg/mL之間、0.45與0.5 mg/mL之間、0.5與0.55 mg/mL之間、0.55與0.6 mg/mL之間、0.6與0.65 mg/mL之間、0.65與0.7 mg/mL之間、0.7與0.75 mg/mL之間、0.75與0.8 mg/mL之間、0.8與0.85 mg/mL之間、0.85與0.9 mg/mL之間、0.9與0.95 mg/mL之間、或0.95與1 mg/mL之間的濃度包括在液體組合物中。
在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.1至0.3 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.15至0.25 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29或0.3 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.20 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為包含有包含第二緩衝液之Tris緩衝液的液體組合物。在一些態樣中,第二緩衝液包含Tris HCl。在一些態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在液體組合物中:0.5、0.55、1、1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09、1.1、1.11、1.12、1.13、1.14、1.15、1.16、1.17、1.18、1.19、1.2、1.21、1.22、1.23、1.24、1.25、1.26、1.27、1.28、1.29、1.3、1.31、1.32、1.33、1.34、1.35、1.36、1.37、1.38、1.39、1.4、1.41、1.42、1.43、1.44、1.45、1.46、1.47、1.48、1.49或1.5 mg/mL。在一些態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以至少0.5 mg/mL、至少0.55 mg/mL、至少0.6 mg/mL、至少0.65 mg/mL、至少0.7 mg/mL、至少0.75 mg/mL、至少0.8 mg/mL、至少0.85 mg/mL、至少0.9 mg/mL、至少0.95 mg/mL、至少1 mg/mL、至少1.05 mg/mL、至少1.10 mg/mL、至少1.15 mg/mL、至少1.20 mg/mL、至少1.25 mg/mL、至少1.30 mg/mL、至少1.35 mg/mL、至少1.40 mg/mL、至少1.45 mg/mL、或至少1.50 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在一些態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以0.5與0.6 mg/mL之間、0.6與0.7 mg/mL之間、0.7與0.8 mg/mL之間、0.8與0.9 mg/mL之間、0.9與1 mg/mL之間、1與1.10 mg/mL之間、1.10與1.20 mg/mL之間、1.20與1.30 mg/mL之間、1.30與1.40 mg/mL之間、或1.40與1.50 mg/mL之間的濃度包括在液體組合物中。
在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約1.25至1.40 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約1.30至1.40 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約1.25、1.26、1.27、1.28、1.29、1.30、1.31、1.32、1.33、1.34、或1.35、1.36、1.37、1.38、1.39或1.40 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約1.32 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為包含Tris緩衝液之凍乾組合物。在一些態樣中,Tris緩衝液包含第一緩衝液。在一些態樣中,第一緩衝液為緩血酸胺。在一些態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之復原後濃度包括在凍乾組合物中:0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.2、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.3、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.4、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49或0.5 mg/mL。在一些態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以至少0.01 mg/mL、至少0.05 mg/mL、至少0.1 mg/mL、至少0.15 mg/mL、至少0.2 mg/mL、至少0.25 mg/mL、至少0.3 mg/mL、至少0.35 mg/mL、至少0.4 mg/mL、至少0.45 mg/mL、或至少0.5 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在一些態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺(Tris鹼))以0.01與0.05 mg/mL之間、0.05與0.1 mg/mL之間、0.1與0.15 mg/mL之間、0.15與0.2 mg/mL之間、0.2與0.25 mg/mL之間、0.25與0.3 mg/mL之間、0.3與0.35 mg/mL之間、0.35與0.4 mg/mL之間、0.4與0.45 mg/mL之間、或0.45與0.5 mg/mL之間的復原後濃度包括在凍乾組合物中。
在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.01與0.15 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.01與0.10 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.05與0.15 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14或0.15 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第一緩衝液(例如緩血酸胺)以約0.09 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為包含有包含第二緩衝液之Tris緩衝液的凍乾組合物。在一些態樣中,第二緩衝液包含Tris HCl。在一些態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之復原後濃度包括在凍乾組合物中:0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.7、0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.8、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.9、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99或1 mg/mL。在一些態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以至少0.1 mg/mL、至少0.2 mg/mL、至少0.3 mg/mL、至少0.4 mg/mL、至少0.5 mg/mL、至少0.6 mg/mL、至少0.7 mg/mL、至少0.8 mg/mL、至少0.9 mg/mL、或至少1 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在一些態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以0.1與0.2 mg/mL之間、0.2與0.3 mg/mL之間、0.3與0.4 mg/mL之間、0.4與0.5 mg/mL之間、0.5與0.6 mg/mL之間、0.6與0.7 mg/mL之間、0.7與0.8 mg/mL之間、0.8與0.9 mg/mL之間、或0.9與1 mg/mL之間的復原後濃度包括在凍乾組合物中。
在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約0.5與0.65 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約0.5與0.6 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約0.55與0.65 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約0.5、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.6、0.61、0.62、0.63、0.64或0.65 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,第二緩衝液(例如Tris HCl)以約0.57 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物包含穩定劑。穩定劑可包含本文所揭示之任何一或多種穩定劑。在一些態樣中,穩定劑亦充當低溫保護劑。在特定態樣中,穩定劑包含蔗糖。在一些態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在組合物中:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199或200 ng/µg/mg/mL。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為液體組合物,且穩定劑(例如蔗糖)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之濃度包括在液體組合物中:70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129或130 mg/mL。在一些態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以至少70 mg/mL、至少75 mg/mL、至少80 mg/mL、至少85 mg/mL、至少90 mg/mL、至少95 mg/mL、至少100 mg/mL、至少105 mg/mL、至少110 mg/mL、至少115 mg/mL、至少120 mg/mL、至少125 mg/mL、或至少130 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在一些態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以70與80 mg/mL之間、80與90 mg/mL之間、90與100 mg/mL之間、100與110 mg/mL之間、110與120 mg/mL之間、或120與130 mg/mL之間的濃度包括在液體組合物中。
在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約95至110 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約95至105 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約100至110 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109或110 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約103 mg/mL之濃度包括在液體組合物中。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物為凍乾組合物,且穩定劑(例如蔗糖)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之復原後濃度包括在凍乾組合物中:20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80 mg/mL。在一些態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以至少20 mg/mL、至少25 mg/mL、至少30 mg/mL、至少35 mg/mL、至少40 mg/mL、至少45 mg/mL、至少50 mg/mL、至少55 mg/mL、至少60 mg/mL、至少65 mg/mL、至少70 mg/mL、至少75 mg/mL、或至少80 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在一些態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以20至30 mg/mL之間、30至40 mg/mL之間、40至50 mg/mL之間、50至60 mg/mL之間、60至70 mg/mL之間、或70至80 mg/mL之間的復原後濃度包括在凍乾組合物中。
在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約35至50 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約35至45 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約40至50 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,穩定劑(例如蔗糖)以約44 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。
在一些態樣中,凍乾組合物在適合載劑或稀釋劑中復原。載劑或稀釋劑可包含本文所揭示之任何一或多種載劑或稀釋劑。在特定態樣中,載劑或稀釋劑包含鹽稀釋劑,諸如氯化鈉(NaCl) (例如鹽水,例如生理鹽水或標準鹽水)。氯化鈉可包含0.9%氯化鈉注射液。在一些態樣中,凍乾組合物在至少以下量、至多以下量、以下中之任何兩者之間的量或恰好以下量之鹽水中復原:0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、0.20、0.21、0.22、0.23、0.24、0.25、0.26、0.27、0.28、0.29、0.30、0.31、0.32、0.33、0.34、0.35、0.36、0.37、0.38、0.39、0.40、0.41、0.42、0.43、0.44、0.45、0.46、0.47、0.48、0.49、0.50、0.51、0.52、0.53、0.54、0.55、0.56、0.57、0.58、0.59、0.60、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.70、0.71、0.72、0.73、0.74、0.75、0.76、0.77、0.78、0.79、0.80、0.81、0.82、0.83、0.84、0.85、0.86、0.87、0.88、0.89、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99或1 mL。在一些態樣中,凍乾組合物在至少0.1 mL、至少0.2 mL、至少0.3 mL、至少0.4 mL、至少0.5 mL、至少0.6 mL、至少0.7 mL、至少0.8 mL、至少0.9 mL、或至少1 mL之氯化鈉中復原。
在特定態樣中,凍乾組合物在約0.6至0.75 mL之氯化鈉/鹽水中復原。在特定態樣中,凍乾組合物在約0.65至0.75 mL之氯化鈉/鹽水中復原。在特定態樣中,凍乾組合物在約0.6、0.61、0.62、0.63、0.64、0.65、0.66、0.67、0.68、0.69、0.7、0.71、0.72、0.73、0.74或0.75 mL之氯化鈉/鹽水中復原。
在一些態樣中,鹽稀釋劑(例如NaCl)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之復原後濃度包括在凍乾組合物中:0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、31.5、32、32.5、33、33.5、34、34.5、35、35.5、36、36.5、37、37.5、38、38.5、39、39.5、40、40.5、41、41.5、42、42.5、43、43.5、44、44.5、45、45.5、46、46.5、47、47.5、48、48.5、49、49.5或50 ng/µg/mg/mL。在一些態樣中,鹽稀釋劑(例如NaCl)以至少以下、至多以下、以下中之任何兩者之間或恰好以下之復原後濃度包括在凍乾組合物中:1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5或20 mg/mL。在一些態樣中,鹽稀釋劑(例如NaCl)以至少1 mg/mL、至少2 mg/mL、至少3 mg/mL、至少4 mg/mL、至少5 mg/mL、至少6 mg/mL、至少7 mg/mL、至少8 mg/mL、至少9 mg/mL、至少10 mg/mL、至少11 mg/mL、至少12 mg/mL、至少13 mg/mL、至少14 mg/mL、至少15 mg/mL、或至少20 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。
在特定態樣中,鹽稀釋劑(例如NaCl)以約5與15 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在一些態樣中,鹽稀釋劑(例如NaCl)以約5與10 mg/mL之間的復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,鹽稀釋劑(例如NaCl)以約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。在特定態樣中,鹽稀釋劑(例如NaCl)以約9 mg/mL之復原後濃度包括在凍乾組合物中。
VZV RNA-LNP組合物之pH可為至少、至多、恰好以下或在以下中之任何兩者之間:pH 6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、或8.5、或可來源於其中之任何範圍或值。在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物呈至少6.5、至少7.0、至少7.5、至少8.0、或至少8.5之pH。在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物呈6.0與7.5之間、6.5與7.5之間、7.0與8.0之間、7.5與8.5之間的pH。在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物在7.0與8.0之間。在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物呈pH 7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0。在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物呈約pH 7.4。在一些態樣中,氫氧化鈉緩衝液可用於緩衝液pH調節。
在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,其囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質;約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質;約0.1至0.25 mg/mL之濃度的第一結構性脂質;及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的第二結構性脂質。
在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,其囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的ALC-0315;約0.05至0.15 mg/mL之濃度的ALC-0159;約0.1至0.25 mg/mL之濃度的DSPC;約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇。
在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物為液體VZV RNA-LNP組合物,且該液體VZV RNA-LNP組合物進一步包含有包含以下之緩衝液組合物:約0.15至0.3 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約1.25至1.4 mg/mL之濃度的第二緩衝液及約95至110 mg/mL之濃度的穩定劑。在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物為液體VZV RNA-LNP組合物,且該液體VZV RNA-LNP組合物進一步包含有包含以下之Tris緩衝液組合物:約0.1至0.3 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約1.25至1.4 mg/mL之濃度的Tris HCl及約95至110 mg/mL之濃度的蔗糖。
因此,在特定態樣中,液體VZV RNA-LNP組合物包含約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的第一結構性脂質、約0.3至0.45 mg/mL之濃度的第二結構性脂質,且進一步包含約0.1至0.3 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約1.25至1.4 mg/mL之濃度的第二緩衝液及約95至110 mg/mL之濃度的穩定劑。
因此,在特定態樣中,液體VZV RNA-LNP組合物包含約0.8至0.95 mg/mL之濃度的ALC-0315、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的ALC-0159、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的DSPC、約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇,且進一步包含有包含以下之Tris緩衝液組合物:約0.1至0.3 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約1.25至1.4 mg/mL之濃度的Tris HCl及約95至110 mg/mL之濃度的蔗糖。
在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物為凍乾VZV RNA-LNP組合物,且該凍乾VZV RNA-LNP組合物(在復原後)進一步包含約0.01與0.15 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約0.5與0.65 mg/mL之濃度的第二緩衝液、約35至50 mg/mL之濃度的穩定劑及約5與15 mg/mL之間的濃度之鹽稀釋劑。
在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物為凍乾VZV RNA-LNP組合物,且該凍乾VZV RNA-LNP組合物(在復原後)進一步包含有包含以下之Tris緩衝液組合物:約0.01與0.15 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約0.5與0.65 mg/mL之濃度的Tris HCl、約35至50 mg/mL之濃度的蔗糖及約5至15 mg/mL之濃度的氯化鈉(NaCl)。
因此,在特定態樣中,凍乾VZV RNA-LNP組合物(在復原後)包含約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的第一結構性脂質、約0.3至0.45 mg/mL之濃度的第二結構性脂質,且進一步包含約0.01與0.15 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約0.5與0.65 mg/mL之濃度的第二緩衝液、約35至50 mg/mL之濃度的穩定劑及約5至15 mg/mL之濃度的鹽稀釋劑。在特定態樣中,凍乾組合物在0.6至0.75 mL之鹽稀釋劑中復原。
因此,在一些態樣中,凍乾VZV RNA-LNP組合物(在復原後)包含約0.8至0.95 mg/mL之濃度的ALC-0315、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的ALC-0159、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的DSPC、約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇,且進一步包含約0.01與0.15 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約0.5與0.65 mg/mL之濃度的Tris HCl、約35至50 mg/mL之濃度的蔗糖及約5至15 mg/mL之濃度的NaCl。在特定態樣中,凍乾組合物在0.6至0.75 mL之NaCl (鹽水)中復原。
上述凍乾VZV RNA-LNP組合物中之濃度係在復原後測定。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物(凍乾前)包含約1.0至3.0 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.10至0.35 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.4至0.55 mg/mL之濃度的第一結構性脂質、約0.85至1.0 mg/mL之濃度的第二結構性脂質,且進一步包含約0.1與0.3 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約1.25與1.40 mg/mL之濃度的第二緩衝液、約95至110 mg/mL之濃度的穩定劑。
因此,在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物(凍乾前)包含約1.0至3.0 mg/mL之濃度的ALC-0315、約0.10至0.35 mg/mL之濃度的ALC-0159、約0.4至0.55 mg/mL之濃度的DSPC、約0.85至1.0 mg/mL之濃度的膽固醇,且進一步包含約0.1與0.3 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約1.25與1.40 mg/mL之濃度的Tris HCl、約95至110 mg/mL之濃度的蔗糖。
VZV RNA-LNP組合物進一步包含囊封於LNP中的本文所描述之VZV RNA,參見章節D. 投與。
在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物為液體VZV RNA-LNP組合物,其包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,該VZV RNA聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該VZV RNA聚核苷酸囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的第一結構性脂質及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的第二結構性脂質;且該液體VZV RNA-LNP組合物進一步包含有包含以下之緩衝液組合物:約0.15至0.3 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約1.25至1.4 mg/mL之濃度的第二緩衝液及約95至110 mg/mL之濃度的穩定劑。
在特定態樣中,液體VZV RNA-LNP組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,該VZV RNA聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,且更佳為約0.06 mg/mL,該VZV RNA聚核苷酸囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的ALC-0315、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的ALC-0159、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的DSPC及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇;且該液體VZV RNA-LNP組合物進一步包含有包含以下之Tris緩衝液組合物:約0.1至0.3 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約1.25至1.4 mg/mL之濃度的Tris HCl及約95至110 mg/mL之濃度的蔗糖。
在特定態樣中,VZV RNA-LNP組合物為凍乾VZV RNA-LNP組合物,其包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,該VZV RNA聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該VZV RNA聚核苷酸囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的第一結構性脂質及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的第二結構性脂質;且該凍乾VZV RNA-LNP組合物進一步包含約0.01與0.15 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約0.5與0.65 mg/mL之濃度的第二緩衝液、約35至50 mg/mL之濃度的穩定劑及5至15 mg/mL之濃度的鹽稀釋劑。在特定態樣中,凍乾組合物在0.6至0.75 mL之鹽稀釋劑中復原。凍乾VZV RNA-LNP組合物中之濃度係在復原後測定。
在特定態樣中,凍乾VZV RNA-LNP組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,該VZV RNA聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,且更佳為約0.06 mg/mL,該VZV RNA聚核苷酸囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的ALC-0315、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的ALC-0159、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的DSPC及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇;且該凍乾VZV RNA-LNP組合物進一步包含約0.01與0.15 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約0.5與0.65 mg/mL之濃度的Tris HCl、約35至50 mg/mL之濃度的蔗糖及約5至15 mg/mL之濃度的NaCl。在特定態樣中,凍乾組合物在0.6至0.75 mL之NaCl稀釋劑(鹽水)中復原。凍乾VZV RNA-LNP組合物中之濃度係在復原後測定。
在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物(凍乾前)包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,該VZV RNA聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該VZV RNA聚核苷酸囊封於具有以下脂質組成之LNP中:約1.0至3.0 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.10至0.35 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.4至0.55 mg/mL之濃度的第一結構性脂質、約0.85至1.0 mg/mL之濃度的第二結構性脂質;且該VZV RNA-LNP組合物(凍乾前)進一步包含約0.1與0.3 mg/mL之濃度的第一緩衝液、約1.25與1.40 mg/mL之濃度的第二緩衝液、約95至110 mg/mL之濃度的穩定劑。
因此,在一些態樣中,VZV RNA-LNP組合物(凍乾前)包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的VZV RNA聚核苷酸,該VZV RNA聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,且更佳為0.15 mg/mL,該VZV RNA聚核苷酸囊封於具有包含以下之脂質組成的LNP中:約1.0至3.0 mg/mL之濃度的ALC-0315、約0.10至0.35 mg/mL之濃度的ALC-0159、約0.4至0.55 mg/mL之濃度的DSPC、約0.85至1.0 mg/mL之濃度的膽固醇;且該VZV RNA-LNP組合物(凍乾前)進一步包含約0.1與0.3 mg/mL之濃度的緩血酸胺、約1.25與1.40 mg/mL之濃度的Tris HCl、約95至110 mg/mL之濃度的蔗糖。
在一些態樣中,液體RNA-LNP免疫原性組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於LNP中;且該液體RNA-LNP免疫原性組合物進一步包含約5至15 mM Tris緩衝液、pH約7.0至8.0之200至400 mM蔗糖。
在一些態樣中,液體RNA-LNP免疫原性組合物包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,且更佳為約0.06 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於LNP中;且該液體RNA-LNP免疫原性組合物進一步包含約10 mM Tris緩衝液、pH約7.4之300 mM蔗糖。
在一些態樣中,RNA-LNP免疫原性組合物(凍乾前)包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於LNP中;且該RNA-LNP免疫原性組合物(凍乾前)進一步包含約5至15 mM Tris緩衝液、pH約7.0至8.0之200至400 mM蔗糖,且用0.9%氯化鈉稀釋劑復原。
在一些態樣中,RNA-LNP免疫原性組合物(凍乾前)包含編碼如本文所揭示之VZV多肽的RNA分子/聚核苷酸,該RNA分子/聚核苷酸之濃度為至少、至多、恰好0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL或其中任何兩者之間的濃度,較佳為約0.01至0.09 mg/mL,且更佳為0.15 mg/mL,該RNA分子/聚核苷酸囊封於LNP中;且該RNA-LNP免疫原性組合物(凍乾前)進一步包含約10 mM Tris緩衝液、pH約7.4之300 mM蔗糖,且用0.9%氯化鈉稀釋劑復原。
B. 疫苗在一些態樣中,本文所描述之醫藥組合物為用於誘導免疫反應之免疫原性組合物。舉例而言,在一些態樣中,免疫原性組合物為疫苗。在一些態樣中,本文所描述之組合物包括至少一種如本文所描述之經分離核酸或多肽分子。在特定態樣中,免疫原性組合物包含核酸,且免疫原性組合物為核酸疫苗。在一些態樣中,免疫原性組合物包含RNA (例如mRNA、saRNA),且疫苗為RNA疫苗。在其他態樣中,免疫原性組合物包含DNA,且疫苗為DNA疫苗。在又其他態樣中,免疫原性組合物包含多肽,且疫苗為多肽疫苗。可用核酸及/或肽或多肽組合物治療之病狀及/或疾病包括(但不限於)由感染引起及/或影響之彼等病狀及/或疾病、癌症、罕見病以及由蛋白質或核酸之過度產生、不足產生或不當產生引起之其他疾病或病狀。
在一些態樣中,組合物實質上不含一或多種雜質或污染物,且例如包括以下純度之核酸或多肽分子:至少、至多、恰好等於90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%純度或其中任何兩者之間的純度;至少98%純度;或至少99%純度。
本發明包括用於預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的方法,其包括向個體投與有效量的包括至少一個編碼本文所描述之多肽或組合物之開放閱讀框架的RNA分子。因此,本發明涵蓋用於主動及被動免疫接種態樣之疫苗。提議適用作疫苗之免疫原性組合物可由編碼多肽(諸如VZV醣蛋白)之RNA分子製備。在某些態樣中,免疫原性組合物經凍乾以便更容易調配至所需媒劑中。
含有核酸及/或肽或多肽作為活性成分之疫苗的製備一般為此項技術中充分瞭解的,如由美國專利4,608,251;4,601,903;4,599,231;4,599,230;4,596,792;及4,578,770所例示,以上所有者均以引用之方式併入本文中。通常,此類疫苗係以呈液體溶液或懸浮液之可注射劑形式製備;亦可製備適合於在注射之前在液體中形成溶液或在液體中形成懸浮液的固體形式。製劑亦可乳化。活性免疫原性成分通常與醫藥學上可接受的且與活性成分相容的賦形劑混合。適合之賦形劑例如為水、鹽水、右旋糖、甘油、乙醇或其類似者及其組合。另外,必要時,疫苗可含有大量輔助物質,諸如濕潤劑或乳化劑、pH緩衝劑或增強疫苗之有效性的佐劑。在特定態樣中,疫苗用物質組合調配,如美國專利6,793,923及6,733,754中所描述,其以引用之方式併入本文中。
疫苗可習知地藉由例如皮下或肌肉內注射以非經腸方式投與。適合於其他投與模式之額外調配物包括栓劑及在一些情況下口服調配物。對於栓劑,傳統黏合劑及載劑可包括例如聚烷二醇或甘油三酯:此類栓劑可由含有約0.5%至約10%範圍內之活性成分的混合物形成。在一些態樣中,栓劑可由含有約1%至約2%範圍內之活性成分的混合物形成。口服調配物包括常用賦形劑,諸如醫藥級甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂及其類似者。此等組合物呈溶液、懸浮液、錠劑、丸劑、膠囊、持續釋放調配物或散劑形式且含有約10%至約95%之活性成分。
編碼多肽之核酸構築體及多肽可調配成呈中性或鹽形式之疫苗。醫藥學上可接受之鹽包括酸加成鹽(用肽之游離胺基形成)以及用無機酸(諸如鹽酸或磷酸)或有機酸(諸如乙酸、草酸、酒石酸、杏仁酸及其類似酸)形成的彼等鹽。
通常,疫苗以與劑型相容之方式,且以諸如將為治療有效及免疫原性的量投與。待投與之數量取決於待治療之個體,包括個體免疫系統合成抗體之能力及所需防護等級。需要投與之活性成分的精確量視從業者之判斷而定。然而,適合的劑量範圍為每次疫苗接種大約數百微克活性成分。適合於初次投與及加強注射的方案亦為可變的,但典型的是進行初次投與,接著進行後續接種或其他投與。
施用方式可廣泛變化。可應用用於投與疫苗之習知方法中之任一種。咸信此等方法包括在生理學上可接受之固體基質內經口施用或在生理學上可接受之分散液中藉由注射或其類似方式而非經腸施用。疫苗劑量將視投與途徑而定且將根據個體之體型及健康狀況而變化。
在某些態樣中,將需要投與一次疫苗。在一些態樣中,將需要多次投與疫苗,例如投與2、3、4、5、6或更多次。疫苗接種可間隔1、2、3、4、5、6、7、8至5、6、7、8、9、10、11、12十二週,包括其間所有範圍。在一些態樣中,疫苗接種可間隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12個月,包括其間所有範圍。可能需要以1至5年之間隔週期性加強免疫來維持抗體之保護性水準。
i. 載劑醫藥學上可接受之載劑可包括組合物之液體或非液體基體。若組合物以液體形式提供,則載劑可為水,諸如無熱原水;等張鹽水或緩衝(水)溶液,例如磷酸鹽、檸檬酸鹽緩衝溶液。可使用水或含有鈉鹽、鈣鹽及/或鉀鹽之緩衝液,諸如水性緩衝液。鈉鹽、鈣鹽及/或鉀鹽可以其鹵化物(例如氯化物、碘化物或溴化物)之形式存在,以其氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽或硫酸鹽等形式存在。鈉鹽之實例包括但不限於NaCl、NaI、NaBr、Na 2CO 3、NaHCO 3、Na 2SO 4、Na 2HPO 4、Na 2HPO 4· 2H 2O,鉀鹽之實例包括但不限於KCl、KI、KBr、K 2CO 3、KHCO 3、K 2SO 4、KH 2PO 4,且鈣鹽之實例包括但不限於CaCl 2、CaI 2、CaBr 2、CaCO 3、CaSO 4、Ca(OH) 2。其他載劑之實例可包括糖,諸如乳糖、葡萄糖、海藻糖及蔗糖;澱粉,諸如玉米澱粉或馬鈴薯澱粉;右旋糖;纖維素及其衍生物,諸如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、乙酸纖維素;粉末黃蓍膠;麥芽;明膠;動物脂;固體滑動劑,諸如硬脂酸、硬脂酸鎂;硫酸鈣;植物油,諸如花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油及來自可可的油;多元醇,諸如聚丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇及聚乙二醇;褐藻酸。其他載劑之實例可包括膠體氧化矽、硬脂酸鎂、纖維素及月桂基硫酸鈉。額外適合之醫藥載劑及稀釋劑以及其使用之醫藥需求描述於Remington's Pharmaceutical Sciences中。
ii. 佐劑適合佐劑包括所有可接受之免疫刺激化合物,諸如細胞介素、毒素或合成組合物。多種佐劑可用於增強抗體反應。佐劑包括(但不限於)水包油乳液、油包水乳液、礦物鹽、聚核苷酸及天然物質。可使用之特定佐劑包括弗氏佐劑(Freund's adjuvant)、油(諸如MONTANIDE® ISA51)、IL1、IL2、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL8、IL9、IL10、IL12、α-干擾素、PTNGg、GM-CSF、GMCSP、BCG、LT-a、鋁鹽(諸如氫氧化鋁或其他鋁化合物)、MDP化合物(諸如thur-MDP及nor-MDP)、CGP (MTP-PE)、脂質A、單磷醯基脂質A (MPL)、脂肽(例如Pam3Cys)。RIBI,其含有於2%角鯊烯/Tween 80乳液中的自細菌提取之三種組分,亦即MPL、海藻糖二黴菌酸酯(TDM)及細胞壁骨架(CWS)。甚至可使用MHC抗原。
達成針對疫苗之佐劑效應的各種方法分別包括:使用諸如氫氧化鋁或磷酸鋁(明礬)之試劑,其常以於磷酸鹽緩衝鹽水中之約0.05%至約0.1%溶液之形式使用;與以約0.25%溶液形式使用之合成糖聚合物(CARBOPOL®)混合;藉由在約70℃至約101℃之間的溫度下熱處理30秒至2分鐘時間而使疫苗中之蛋白質聚集。亦可採用以下步驟來產生佐劑效應:藉由用針對白蛋白的經胃蛋白酶處理之(Fab)抗體再活化來發生聚集;與細菌細胞(例如微小隱孢子蟲( C. parvum))、內毒素或革蘭氏陰性細菌之脂多醣組分混合;在生理學上可接受之油媒劑(諸如二縮甘露醇單油酸酯(Aracel A))中乳化;或使用用作阻斷替代物之全氟化碳(FLUOSOL-DA®)之20%溶液乳化。
除佐劑之外,可能需要共同投與生物反應調節劑(BRM)以增強免疫反應。BRM已顯示上調T細胞免疫性或下調抑制細胞活性。此類BRM包括(但不限於)西咪替丁(Cimetidine) (CIM;1200 mg/d) (Smith/Kline, PA);或低劑量環磷醯胺(CYP;300 mg/m 2) (Johnson/Mead, NJ)及細胞介素,諸如γ-干擾素、IL-2、或IL-12、或編碼免疫輔助功能中涉及之蛋白質的基因,諸如B-7。
C. 組合療法本發明之組合物及相關方法,尤其投與編碼VZV多肽之RNA分子亦可與投與傳統療法組合使用。此等包括但不限於投與抗病毒療法,諸如阿昔洛韋(acyclovir)、發昔洛韋(valacyclovir)及泛昔洛韋(famciclovir),或抗病毒劑之各種組合。亦包括投與一或多種用以治療VZV感染之一或多個症狀的療法,包括但不限於類固醇(包括皮質類固醇)、抗炎劑(包括乙醯胺苯酚或布洛芬)、止痛劑、緩解瘙癢之乳膏或洗劑、冷敷法或其各種組合。
在一個態樣中,經考慮,疫苗及/或療法與抗病毒治療結合使用。或者,療法可以數分鐘至數週範圍內之時間間隔先於或後於另一種藥劑治療。在單獨投與其他藥劑及/或疫苗之態樣中,通常將確保在每次遞送之間有意義的時間段沒有到期,以使得藥劑及免疫原性組合物將仍能夠對個體發揮有利的組合作用。在此等態樣中,經考慮,可在彼此之約12至24小時內或在彼此之約6至12小時內投與兩種模態。在一些情況下,在各別投與之間流逝若干天(2、3、4、5、6或7天)至若干週(1、2、3、4、5、6、7或8週)時可能需要顯著延長投與時間段。
可採用各種組合,例如抗病毒療法「A」及作為免疫療法方案「B」之一部分給予的免疫原性多肽:
本發明之免疫原性組合物向患者/個體之投與將遵循用於投與此類化合物之一般方案,考慮VZV RNA疫苗組合物或本文所描述之其他組合物之毒性(若存在)。預期治療週期將視需要重複進行。亦考慮,不同標準療法(諸如保濕)可與所描述之療法組合應用。
D. 投與本文所描述之組合物之投與可經由用於起類似功用之藥劑的任一可接受投與模式進行。在一些態樣中,本文所描述之醫藥組合物可經靜脈內、動脈內、皮下、皮內或肌肉內投與。在特定態樣中,VZV RNA分子及/或RNA-LNP組合物經肌肉內投與。在某些態樣中,醫藥組合物經調配用於局部投與或全身投與。全身投與可包括經腸投與(其涉及經由胃腸道吸收)或非經腸投與。如本文所使用,「非經腸投與」係指以除經由胃腸道以外之任何方式投與,諸如藉由靜脈內注射。在一個態樣中,醫藥組合物經調配用於肌肉內投與。在另一態樣中,醫藥組合物經調配用於全身投與,例如用於靜脈內投與。
醫藥組合物可調配成呈固體、半固體、液體、凍乾、冷凍或氣體形式之製劑,諸如錠劑、膠囊、散劑、顆粒、軟膏、溶液、懸浮液、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠、微球體及氣霧劑。投與此類醫藥組合物之典型途徑包括(但不限於)經口、局部、經皮、吸入、非經腸、舌下、經頰、經直腸、經陰道及鼻內。如本文所使用之術語非經腸包括皮下注射、靜脈內、肌肉內、皮內、胸骨內注射或輸注技術。本文所描述之醫藥組合物經調配以便允許在向患者投與組合物時其中所含之活性成分為生物可用的。將向個體或患者投與之組合物呈一或多個劑量單位之形式,其中例如錠劑可為單一劑量單位,且呈氣霧劑形式之化合物之容器可容納複數個劑量單位。待投與之組合物將在任何情況下含有治療及/或預防有效量的在本發明之範疇內的化合物或其醫藥學上可接受之鹽,以根據本文所描述之教示治療所關注之疾病或病狀。
在本發明之範疇內的醫藥組合物可呈固體或液體之形式,且可經冷凍或凍乾。在一個態樣中,載劑為微粒,以使得組合物例如呈錠劑或散劑形式。載劑可為液體,使得組合物為例如口服糖漿、可注射液體或適用於例如吸入投與之氣霧劑。在一些態樣中,當意欲用於經口投與時,醫藥組合物呈固體或液體形式,其中半固體、半液體、懸浮液及凝膠形式包括在本文視為固體或液體之形式內。作為用於經口投與之固體組合物,醫藥組合物可調配成散劑、顆粒、壓縮錠劑、丸劑、膠囊、口嚼錠、粉片或其類似形式。此類固體組合物將通常含有一或多種惰性稀釋劑或可食載劑。另外,可存在或不包括以下中之一或多者:黏合劑,諸如羧甲基纖維素、乙基纖維素、微晶纖維素、黃蓍膠或明膠;賦形劑,諸如澱粉、乳糖或糊精;崩解劑,諸如褐藻酸、褐藻酸鈉、PRIMOJEL®、玉米澱粉及其類似物;潤滑劑,諸如硬脂酸鎂或STEROTEX®;滑動劑,諸如膠體二氧化矽;甜味劑,諸如蔗糖或糖精;調味劑,諸如胡椒薄荷、水楊酸甲酯或橙味調味劑;及著色劑。當醫藥組合物呈膠囊(例如明膠膠囊)形式時,除以上類型之物質之外,其可含有諸如聚乙二醇或油之液體載劑。醫藥組合物可呈液體形式,例如酏劑、糖漿、溶液、乳液或懸浮液。舉兩個例子,液體可用於經口投與或用於藉由注射遞送。在一些態樣中,當意欲用於經口投與時,除本發明化合物以外,組合物亦含有甜味劑、防腐劑、染料/著色劑及增香劑中之一或多者。在意欲藉由注射投與之組合物中,可包括或不包括界面活性劑、防腐劑、濕潤劑、分散劑、懸浮劑、緩衝液、穩定劑及等張劑中之一或多者。
液體醫藥組合物,無論其為溶液、懸浮液或其他類似形式,均可包括或不包括以下佐劑中之一或多者:無菌稀釋劑,諸如注射用水、鹽水溶液(例如生理鹽水)、林格氏溶液、等張氯化鈉、不揮發性油(諸如可充當溶劑或懸浮介質之合成單酸甘油酯或二酸甘油酯)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他溶劑;抗細菌劑,諸如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯;抗氧化劑,諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉;螯合劑,諸如乙二胺四乙酸;緩衝液,諸如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽;及張力調節劑,諸如氯化鈉或右旋糖;充當低溫保護劑之試劑,諸如蔗糖或海藻糖。非經腸製劑可封裝於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。在一個態樣中,生理鹽水為佐劑。在一個態樣中,可注射醫藥組合物為無菌的。意欲用於非經腸或經口投與之液體醫藥組合物應含有一定數量之化合物,使得將獲得適合劑量。
醫藥組合物可藉由醫藥技術中熟知之方法製備。舉例而言,可藉由將核酸或多肽與無菌蒸餾水或其他載劑組合以便形成溶液來製備意欲藉由注射投與之醫藥組合物。可添加界面活性劑以促進形成均勻溶液或懸浮液。界面活性劑為與同本文中之教示一致的化合物非共價相互作用以便促進該化合物溶解或均勻懸浮於水性遞送系統中的化合物。
根據本發明之醫藥組合物或其醫藥學上可接受之鹽一般以「治療有效量」或「預防有效量」且以「醫藥學上可接受之製劑」施用。術語「醫藥學上可接受」係指不與醫藥組合物之活性組分之作用相互作用的物質之非毒性。術語「治療有效量」及「預防有效量」係指單獨或與其他劑量一起達成所需反應或所需作用的量。在治療特定疾病的情況下,在一個態樣中,所需反應係關於抑制該疾病之病程。此包含減緩疾病進展,且尤其中斷或逆轉疾病進展。治療疾病之所需反應亦可為延遲該疾病或該病狀之發作或預防該疾病或該病狀之發作。
本發明範疇內之組合物以治療及/或預防有效量投與,該治療及/或預防有效量將視各種因素變化,包括:所採用之特定治療劑及/或預防劑之活性;治療劑及/或預防劑之代謝穩定性及作用時長;患者之個體參數,包括患者之年齡、體重、一般健康狀況、性別及飲食;投與之模式、時間及/或持續時間;分泌速率;藥物組合;特定病症或病狀之嚴重程度;及個體正進行之療法。因此,本文所描述之組合物之投與劑量可視各種此類參數而定。在患者中之反應在初始劑量下不充分的情況中,可使用較高劑量(或藉由另一更局部的投與途徑來達成之有效較高劑量)。在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以足以遞送以下量之劑量水準投與:每天每公斤個體體重0.0001 ng/µg/mg至100 ng/µg/mg、0.001 ng/µg/mg至0.05 ng/µg/mg、0.005 ng/µg/mg至0.05 ng/µg/mg、0.001 ng/µg/mg至0.005 ng/µg/mg、0.05 ng/µg/mg至0.5 ng/µg/mg、0.01 ng/µg/mg至50 ng/µg/mg、0.1 ng/µg/mg至40 ng/µg/mg、0.5 ng/µg/mg至30 ng/µg/mg、0.01 ng/µg/mg至10 ng/µg/mg、0.1 ng/µg/mg至10 ng/µg/mg、或1 ng/µg/mg至25 ng/µg/mg,一天一或多次、每週、每月等投與,以獲得所需治療性、診斷性、預防性或成像作用(參見例如國際公開案第WO2013/078199號中所描述之單位劑量範圍,該文獻以全文引用之方式併入本文中)。在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以足以遞送至少、至多、恰好以下量或其中任何兩者之間的量之劑量水準投與:每天每公斤個體體重0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 ng/µg/mg,一天一或多次、每週、每月等投與,以獲得所需治療性、診斷性、預防性或成像作用。
在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量投與或以足以遞送至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量之劑量水準投與:每天0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 ng/µg/mg,一天一或多次、每週、每月等投與,以獲得所需治療性、診斷性、預防性或成像作用。
在特定態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量投與或以足以遞送至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量之劑量水準投與:0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 mg/mL之囊封於LNP中之VZV RNA。
在例示性態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以至少、至多、恰好以下劑量水準或其中任何兩者之間的劑量水準投與:0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg/mL之囊封於LNP中之VZV RNA。在例示性態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以至少、至多、恰好以下劑量水準或其中任何兩者之間的劑量水準投與:0.01、0.15、0.30、0.45、0.60、0.75或0.90 mg之囊封於LNP中之VZV RNA。
在特定態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量投與或以足以遞送至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量之劑量水準投與:0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 µg/mL之囊封於LNP中之VZV RNA。
在例示性態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以至少、至多、恰好以下劑量水準或其中任何兩者之間的劑量水準投與:1、15、30、45、60、75、90、100或更高微克/毫升之囊封於LNP中之VZV RNA。在例示性態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以至少、至多、恰好以下劑量水準或其中任何兩者之間的劑量水準投與:1、15、30、45、60、75、90、100或更多微克之囊封於LNP中之VZV RNA。
所需劑量可一天多次(例如一天1、2、3、4、5或更多次)、每隔一天、每三天、每週、每兩週、每三週、每四週、每2個月、每三個月、每6個月等遞送。在某些態樣中,所需劑量可使用單次劑量投與進行遞送。在某些態樣中,所需劑量可使用多次投與(例如兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或更多次投與)進行遞送。當採用多次投與時,可使用分次給藥方案。組合物之初次投與與組合物之後續投與之間的投與時間可為(但不限於) 1分鐘、2分鐘、3分鐘、4分鐘、5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘、10分鐘、15分鐘、20分鐘、35分鐘、40分鐘、45分鐘、50分鐘、55分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、1天、36小時、2天、3天、4天、5天、6天、1週、10天、2週、3週、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1年、18個月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、25年、30年、35年、40年、45年、50年、55年、60年、65年、70年、75年、80年、85年、90年、95年或超過99年。
在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可以單次劑量投與。在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可投與兩次(例如第0天及約第7天、第0天及約第14天、第0天及約第21天、第0天及約第28天、第0天及約第60天、第0天及約第90天、第0天及約第120天、第0天及約第150天、第0天及約第180天、第0天及約1個月後、第0天及約2個月後、第0天及約3個月後、第0天及約6個月後、第0天及約9個月後、第0天及約12個月後、第0天及約18個月後、第0天及約2年後、第0天及約5年後、或第0天及約10年後),其中每次投與至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量或足以遞送至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量之劑量水準:0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 ng/µg/mg之囊封於LNP中之VZV RNA。本發明涵蓋較高及較低之投與劑量及頻率。舉例而言,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可投與三次或四次。可能需要以1至5年之間隔週期性加強免疫來維持抗體之保護性水準。
在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)以至少、至多、恰好以下或以下中之任何兩者之間的單次劑量向個體投與:0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 ng/µg/mg之囊封於LNP中之VZV RNA。在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)以至少、至多、恰好以下或以下中之任何兩者之間的單次劑量向個體投與:1 µg、15 µg、30 µg、45 µg、60 µg、75 µg、90 µg、100 µg或更高劑量之囊封於LNP中之VZV RNA。
在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)以至少、至多、恰好以下或以下中之任何兩者之間的兩次劑量向個體投與:0.0001、0.0002、0.0003、0.0004、0.0005、0.0006、0.0007、0.0008、0.0009、0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100 ng/µg/mg之囊封於LNP中之VZV RNA。在一些態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)以至少、至多、恰好以下或以下中之任何兩者之間的兩次劑量向個體投與:1 µg、15 µg、30 µg、45 µg、60 µg、75 µg、90 µg、100 µg或更高劑量之囊封於LNP中之VZV RNA。
在特定態樣中,組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可投與兩次(例如第0天及第28天、第0天及第60天、第0天及第180天、第0天及2個月後、第0天及6個月後),其中每次投與至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量或足以遞送至少、至多、恰好以下總劑量或其中任何兩者之間的總劑量之劑量水準:1 µg、15 µg、30 µg、45 µg、60 µg、75 µg、90 µg、100 µg或更高劑量之囊封於LNP中之VZV RNA。
IX. 使用方法本文提供用於預防及/或治療人類及其他哺乳動物中之VZV的組合物(例如包含VZV RNA分子及/或VZV RNA-LNP之醫藥組合物)、方法、套組及試劑。
VZV RNA組合物(例如VZV RNA-LNP組合物)可用作治療劑或預防劑。其可用於藥物中以預防及/或治療傳染病。在例示性態樣中,VZV RNA組合物用於提供針對水痘或帶狀疱疹之預防性保護。水痘係由VZV引起之急性傳染病。本發明之VZV疫苗可用於預防及/或治療VZV (帶狀疱疹(shingles)或帶狀疱疹(herpes zoster)),且可尤其適用於預防及/或治療免疫功能不全及老年患者以預防帶狀疱疹或降低其嚴重程度及/或減少其持續時間。
在一些態樣中,向個體(例如哺乳動物個體,諸如人類個體)投與本發明之VZV RNA組合物(例如VZV RNA-LNP組合物),且RNA聚核苷酸在活體內轉譯以產生抗原性多肽。
在一些態樣中,本發明之VZV RNA組合物可用於致敏免疫效應細胞,例如離體活化周邊血液單核細胞(PBMC),接著將其輸注(再輸注)至個體中。
在一些態樣中,在投與例如調配為RNA-LNP的本文所描述之VZV RNA分子之後,RNA之至少一部分遞送至目標細胞。在一些態樣中,RNA之至少一部分遞送至目標細胞之胞溶質。在一些態樣中,RNA由目標細胞轉譯以產生其編碼之多肽或蛋白質。在一些態樣中,目標細胞為脾臟細胞。在一些態樣中,目標細胞為脾臟中之抗原呈現細胞,諸如專職抗原呈現細胞。在一些態樣中,目標細胞為樹突狀細胞或巨噬細胞。RNA分子(諸如本文所描述之RNA-LNP)可用於將RNA遞送至此類目標細胞。因此,本發明亦係關於一種用於將RNA遞送至個體中之目標細胞的方法,其包含向該個體投與本文所描述之RNA顆粒。
在一些態樣中,RNA被遞送至目標細胞之胞溶質。在一些態樣中,RNA由目標細胞轉譯以產生RNA編碼之多肽或蛋白質。「編碼」係指諸如基因、cDNA或mRNA之聚核苷酸中之核苷酸之特異性序列在生物過程中充當合成其他聚合物及大分子之模板的固有特性,該等聚合物及大分子具有已確定之核苷酸序列(例如rRNA、tRNA及mRNA)或已確定之胺基酸序列及由其獲得之生物特性。因此,若與基因相對應之mRNA之轉錄及轉譯在細胞或其他生物系統中產生蛋白質,則該基因編碼該蛋白質。核苷酸序列與mRNA序列一致且通常提供於序列表中的編碼股與用作基因或cDNA轉錄之模板的非編碼股均可被稱為編碼該基因或cDNA之蛋白質或其他產物。
在一些態樣中,本文所描述之核酸組合物,例如包含VZV RNA-LNP之組合物之特徵為(例如當向個體投與時)持續表現所編碼之多肽。舉例而言,在一些態樣中,此類組合物之特徵在於當向人類投與時其在來自該人類之生物樣品(例如血清)中達成可偵測之多肽表現,且在一些態樣中,此類表現持續至少36小時或更長,包括例如至少48小時、至少60小時、至少72小時、至少96小時、至少120小時、至少148小時或更長之時間段。
在一些態樣中,本發明係關於一種在個體中誘導針對VZV之免疫反應的方法。該方法包括向該個體投與有效量的如本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物。
在另一態樣中,本發明係關於一種對個體進行疫苗接種的方法。該方法包括向有需要之個體投與有效量的本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物。
在另一態樣中,本發明係關於一種治療或預防傳染病的方法。該方法包括向個體投與有效量的如本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物。
在另一態樣中,本發明係關於一種治療或預防VZV感染及/或由VZV引起之疾病或降低其嚴重程度的方法。該方法包括向個體投與有效量的如本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物。
在另一態樣中,本發明係關於一種藉由例如在個體中誘導針對傳染病之免疫反應來治療或預防個體中之傳染病或降低其嚴重程度的方法。在一些態樣中,該方法包括投與包括有效量的本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物的致敏組合物,及投與包括有效量的RNA分子、RNA-LNP及/或組合物的加強組合物。在一些態樣中,組合物引發包括抗體反應之免疫反應。在一些態樣中,組合物引發包括T細胞反應之免疫反應。
在另一態樣中,本發明係關於一種藉由例如在個體中誘導針對VZV之免疫反應來治療或預防該個體之VZV感染及/或由VZV引起之疾病或降低其嚴重程度的方法。在一些態樣中,該方法包括投與包括有效量的本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物的致敏組合物,及投與包括有效量的如本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物的加強組合物。在一些態樣中,組合物引發包括抗體反應之免疫反應。在一些態樣中,組合物引發包括T細胞反應之免疫反應。
本文所揭示之方法可涉及向個體投與VZV RNA-LNP組合物,該VZV RNA-LNP組合物包含至少一個具有編碼至少一種VZV抗原性多肽之開放閱讀框架的VZV RNA分子,藉此在個體中誘導對VZV抗原性多肽具有特異性之免疫反應,其中在疫苗接種之後個體中之抗抗原性多肽抗體效價相對於用預防有效劑量(例如以臨床可接受程度預防病毒感染的治療有效劑量)之針對VZV之傳統疫苗進行疫苗接種的個體中之抗抗原性多肽抗體效價增加。「抗抗原性多肽抗體」為特異性結合於抗原性多肽之血清抗體。在一些態樣中,在投與VZV RNA-LNP組合物之後,個體中之抗抗原性多肽抗體效價相對於投與預防有效劑量之針對VZV之傳統組合物的個體中之抗抗原性多肽抗體效價增加至少以下數量、至多以下數量、以下中之任何兩者之間的數量或恰好以下數量:1、2、3、4、5、6、7、8、9或10的對數。
本文所揭示之方法可涉及向個體投與VZV RNA-LNP組合物,該VZV RNA-LNP組合物包含至少一個具有編碼至少一種VZV抗原性多肽之開放閱讀框架的VZV RNA分子,藉此在個體中誘導對VZV抗原性多肽具有特異性之免疫反應,其中個體中之免疫反應等效於投與至少以下量、至多以下量、其中任何兩者之間的量、或恰好以下量的針對VZV之傳統組合物的個體中之免疫反應:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98或100倍相對於RNA組合物之劑量水準。
在一些態樣中,RNA分子、RNA-LNP及/或組合物用作疫苗。在一些態樣中,RNA分子、RNA-LNP及/或組合物可用於各種治療或預防方法中以用於預防、治療或改善帶狀疱疹(herpes zoster)或帶狀疱疹(shingles)或與帶狀疱疹(herpes zoster)或帶狀疱疹(shingles)相關之病症。
在一些態樣中,RNA分子、RNA-LNP及/或組合物可用於各種治療或預防方法中以用於預防、治療或改善疱疹後神經痛。
可向健康個體或在感染早期在潛伏期期間或在症狀發作之後的活動性感染期間預防性或治療性地投與VZV RNA組合物。在一些態樣中,個體具有免疫能力。在一些態樣中,個體免疫功能不全。
在一些態樣中,RNA分子、RNA-LNP及/或組合物以單次劑量投與。在一些態樣中,可給予第二、第三或第四劑量。在一些態樣中,RNA分子、RNA-LNP及/或組合物以多次劑量投與。
在一些態樣中,RNA分子、RNA-LNP及/或組合物經肌肉內(IM)或皮內(ID)投與。
本發明進一步提供包含RNA分子、RNA-LNP及/或組合物之套組。
在一些態樣中,本文所描述之RNA分子、RNA-LNP及/或組合物向小於約1歲、或約1歲至約10歲、或約10歲至約20歲、或約20歲至約50歲、或約60歲至約70歲、或更大的個體投與。
在一些態樣中,個體之年齡為至少、至多、恰好以下或在其中任何兩者之間:小於1歲、大於1歲、大於5歲、大於10歲、大於20歲、大於30歲、大於40歲、大於50歲、大於60歲、大於70歲或更大。在一些態樣中,個體大於50歲。
在一些態樣中,個體之年齡為至少、至多、恰好以下或在其中任何兩者之間:約1歲或更大、約5歲或更大、約10歲或更大、約20歲或更大、約30歲或更大、約40歲或更大、約50歲或更大、約60歲或更大、約70歲或更大、或更大。在一些態樣中,個體可為約50歲或更大。
在一些態樣中,個體之年齡為至少、至多、恰好以下或在其中任何兩者之間:1歲或更大、5歲或更大、10歲或更大、20歲或更大、30歲或更大、40歲或更大、50歲或更大、60歲或更大、70歲或更大、或更大。在一些態樣中,個體可為50歲或更大。
X. 臨床研究本發明之VZV RNA-LNP疫苗包含編碼來自VZV之醣蛋白E (gE)的核苷經修飾之mRNA (經修飾之RNA;modRNA)。VZV RNA-LNP疫苗可包含有包含單股、5'加帽及聚腺苷酸化的經修飾之RNA的RNA,其在進入細胞之後轉譯。RNA包含編碼VZV gE之變異體的開放閱讀框架(ORF)。舉例而言,RNA分子可包含gE_WT CO2 (RNA編碼位於質膜及高基氏體中之全長gE蛋白)、gE ms5 CO1 (RNA編碼主要位於質膜中的C端經截短之gE蛋白)及/或gE ms6 CO2 (RNA編碼分泌的gE蛋白之胞外域)。此外,如本文所描述,RNA可包含針對RNA之高效力最佳化的結構元件,諸如非轉譯區(UTR)。VZV RNA-LNP可包含如本文所揭示之實例1之表5中所提供的RNA。VZV RNA-LNP可包含如本文所揭示之實例7之表1至3中所提供的RNA。RNA亦可包含1-甲基-假尿苷對尿苷之取代以減少先天免疫感測器(諸如鐸樣受體(TLR) 7及8)對疫苗RNA之識別,從而引起先天免疫活化之降低及蛋白質轉譯之增加。
本文所描述之RNA分子調配/囊封於脂質奈米顆粒(LNP)中以使得能夠在肌肉內(IM)注射之後將RNA遞送至宿主細胞中。LNP調配物可包含兩種功能性脂質(ALC-0315及ALC-0159)及兩種結構性脂質(DSPC (1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼)及膽固醇)。RNA疫苗之效能藉由LNP囊封最佳化,LNP囊封保護RNA免於細胞外RNase降解且有助於在細胞中之遞送。在IM注射VZV RNA-LNP疫苗之後,LNP由細胞吸收,且RNA釋放至胞溶質中。在胞溶質中,RNA經轉譯,且產生經編碼之病毒抗原。
本文中之實例證明本發明之VZV RNA-LNP疫苗在小鼠中為免疫原性的且在小鼠中誘發體液及細胞介導之免疫反應。
本發明之臨床研究評估針對VZV之VZV RNA-LNP疫苗之安全性、耐受性及免疫原性。舉例而言,VZV RNA-LNP疫苗可適用於進行主動免疫接種以用於預防成人(例如年齡≥45、≥50、≥55、≥60、≥70等,或50歲至69歲)之由VZV引起之帶狀疱疹疾病。VZV RNA-LNP疫苗可以如本文所描述之不同劑量水準、劑型、給藥次數及給藥時程進行投與,包括(但不限於): - 單次劑量時程或兩次劑量時程(例如第0天及約2個月後或第0天及約6個月後) - 不同劑量水準(例如每次投與約15 µg、約30 µg、約60 µg、約90 µg、約100 µg或更高劑量水準) - 不同調配物(非凍乾及/或凍乾)
VZV RNA-LNP可以液體或凍乾調配物形式呈現。VZV RNA-LNP疫苗之投與可以以下範圍給藥:注射體積約0.25至1 mL (例如約0.25、0.5、1 mL)之每次給藥約15 µg、約30 µg、約60 µg、約90 µg、約100 µg或更高劑量。可能需要用無菌0.9%氯化鈉(標準鹽水)進行稀釋。
VZV RNA-LNP臨床研究之目標可包括(但不限於): -描述以所選劑量水準及時程投與之VZV RNA-LNP疫苗在參與者中之安全性及耐受性概況。 -描述以所選劑量水準及時程投與之SHINGRIX®及VZV RNA-LNP疫苗在參與者中引發之免疫反應。
實例下文為用於實施本發明之特定態樣的實例。包括以下實例以說明本發明之態樣。實例僅出於說明性目的而提供,且並不意欲以任何方式限制本發明之範疇。熟習此項技術者應瞭解,以下實例中所揭示之技術表示本發明人所發現之在本發明之實踐中起良好作用的技術。然而,熟習此項技術者應理解,根據本發明,在不背離本發明之精神及範疇的情況下可對所揭示之特定態樣作出許多改變且仍獲得相同或類似結果。已作出努力以確保所使用數字的精確性(例如,量、溫度等),但一些實驗性誤差及偏差當然應為允許的。
實例 1. VZV RNA 構築體之產生本文中產生之RNA構築體編碼VZV gE野生型(WT)蛋白及具有細胞質尾區(CT)及/或跨膜(TM)域修飾之gE變異型蛋白。圖1及表4展示WT gE蛋白(gE WT)、具有細胞質尾區修飾之變異型gE蛋白(ms4、ms5、ms8、ms9、ms10、ms11及ms12)及具有TM修飾之變異型gE蛋白(ms3及ms6)。 4.VZV gE蛋白及描述
VZV 蛋白質 VZV 蛋白質描述
gE WTSEQ ID NO: 1 全長WT VZV gE (623aa)
ms3SEQ ID NO: 2 具有aa 547-623缺失(部分TM及完全CT缺失)的VZV gE (546aa),SHINGRIX®之蛋白質組分,*分泌性
ms4SEQ ID NO: 3 在YAGL (aa 582-585)胞吞作用再循環信號中具有取代Y582A以防止gE胞吞作用的全長VZV gE (623aa)
ms5SEQ ID NO: 4 具有aa 582-623缺失(部分TM缺失)的VZV gE (581 aa)
ms6SEQ ID NO: 5 具有aa 539-623缺失(完全TM及CT缺失)的VZV gE (538 aa),*分泌性
ms8SEQ ID NO: 6 具有CT中之酸性域(aa 588-602)缺失的VZV gE (608 aa)
ms9SEQ ID NO: 7 在使gE靶向高基氏體成熟面網之AYRV (aa 568-571)域中具有取代Y569A且具有CT中之酸性域aa 588-602缺失的VZV gE (608aa)
ms10SEQ ID NO: 8 具有取代Y569A且缺失aa 574-623 (部分CT缺失)的VZV gE (573 aa)
ms11SEQ ID NO: 9 具有取代Y569A (TGN)及Y582A的全長VZV gE (623 aa)
ms12SEQ ID NO: 10 具有取代Y569A且具有aa 582-623缺失(部分TM缺失)的VZV gE (581 aa)
製備編碼VZV蛋白質之DNA序列且將其用於活體外轉錄反應以產生RNA。RNA之活體外轉錄為此項技術中已知的且描述於本文中。將DNA模板選殖至具有主鏈序列元件(T7啟動子、5'及3' UTR、聚A尾以改良RNA穩定性及轉譯效率)之質體載體中。DNA經純化,以分光光度法定量,且在三核苷酸端帽1類似物((m 2 7,3′-O)Gppp(m 2'-O)ApG) (TriLink)存在下藉由T7 RNA聚合酶活體外轉錄,且其中N1-甲基假尿苷(Ψ)置換尿苷(經修飾之RNA;modRNA)。
VZV RNA由密碼子最佳化(CO) DNA產生以實現穩定性及優良蛋白質表現。如本文所使用,CO1指示約58% G/C含量,CO2指示約66% G/C含量,且CO3指示約62% G/C含量。表5展示本發明之RNA構築體及對應序列,包含5' UTR、編碼水痘帶狀疱疹病毒(VZV)多肽之開放閱讀框架、3' UTR及聚A尾。 5.VZV gE RNA構築體/分子
RNA 構築體 5' UTR SEQ ID NO VZV [ORF] SEQ ID NO 3' UTR SEQ ID NO 聚A 尾* SEQ ID NO VZV gE 蛋白/DNA SEQ ID NO
gE WT 281或312 146 284或317 287或315 1/12
gE WT CO1 281或312 147 284或317 287或315 1/13
gE WT CO2 281或312 148 284或317 287或315 1/14
ms3 CO1 281或312 149 284或317 287或315 2/15
ms3 CO2 281或312 150 284或317 287或315 2/16
ms4 CO1 281或312 151 284或317 287或315 3/17
ms4 CO2 281或312 152 284或317 287或315 3/18
ms5 CO1 281或312 153 284或317 287或315 4/19
ms5 CO2 281或312 154 284或317 287或315 4/20
ms5 CO2 v2 281或312 155 284或317 287或315 4/21
ms6 CO1 281或312 156 284或317 287或315 5/22
ms6 CO2 281或312 157 284或317 287或315 5/23
ms8 CO1 281或312 158 284或317 287或315 6/24
ms9 CO1 281或312 159 284或317 287或315 7/25
ms9 CO2 281或312 160 284或317 287或315 7/26
ms10 CO1 281或312 161 284或317 287或315 8/27
ms10 CO2 281或312 162 284或317 287或315 8/28
ms10 CO3 281或312 163 284或317 287或315 8/29
ms11 CO1 281或312 164 284或317 287或315 9/30
ms11 CO2 281或312 165 284或317 287或315 9/31
ms12 CO1 281或312 166 284或317 287或315 10/32
ms12 CO2 281或312 167 284或317 287或315 10/33
gE_P1_IRES_CA 281或312 168 284或317 287或315 11/34
gE_P2 281或312 169 284或317 287或315 1/35
gE_P3 281或312 170 284或317 287或315 1/36
gE_P4 281或312 171 284或317 287或315 1/37
gE_P6 281或312 172 284或317 287或315 1/38
gE_P7 281或312 173 284或317 287或315 1/39
gE EB1 281或312 174 284或317 287或315 1/40
gE MM_1 至gE MM_64 281或312 175至238 284或317 287或315 1/41至104
gE FO_D15_1_EB 281或312 239 284或317 287或315 1/105
gE FO_D15_1 至gE FO_D15_15 281或312 240至254 284或317 287或315 1/106至120
gE FO_D13_1 至gE FO_D13_13 281或312 255至267 284或317 287或315 1/121至133
gE FO_D12_1 至gE FO_D12_12 281或312 268至279 284或317 287或315 1/134至145
*聚A尾長度可含有+2/-2 A或+1/-1 A。
在本文於實例中所描述之活體外及活體內實驗中評估的VZV RNA構築體/分子及RNA-LNP包含經修飾之RNA (modRNA),其包含所有尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換之RNA序列。
實例 2. VZV gE 表現及次細胞定位 (Vero 細胞 )在經轉染之Vero細胞(來源於非洲綠猴之腎上皮細胞培養株)中測試VZV RNA構築體之表現。根據製造商之說明書,使用MESSENGERMAX™,用10 ng、25 ng或50 ng RNA構築體(表5)在37℃、5% CO 2下轉染經接種之Vero細胞24小時。細胞用PBS+Ca/Mg洗滌三次,且在25℃下在4%多聚甲醛(PFA)中固定20分鐘。細胞用含3%牛血清白蛋白(BSA)之PBS+Ca/Mg洗滌兩次。將初級及二級染色抗體稀釋於含0.1%皂素之山羊血清中。細胞在37℃下用1:1000稀釋之初級抗體染色1小時,用PBS+Ca/Mg洗滌三次,且在37℃下與二級抗體(1:500)及CELLMASK™ (1:140,000)一起培育45分鐘。細胞隨後在25℃下用Dapi (1:15,000至1:20,000)染色15分鐘,且用PBS+Ca/Mg洗滌三次。使用Opera PHENIX® Plus高含量篩選系統以10倍或63倍放大率分析細胞之VZV gE表現及次細胞定位。
成像分析顯示經VZV gE +轉染之Vero細胞百分比之RNA劑量依賴性增加,其中在細胞質尾區突變體(圖2)中,在50 ng劑量下幾乎100%的細胞表現VZV gE,且在分泌性突變體(圖3)中,在50 ng劑量下約80%的細胞表現VZV gE。由於分泌性突變體主要轉運至細胞外部,因此在內部偵測到較低水準。
各經轉染之RNA構築體之平均螢光強度(MFI)顯示在細胞質尾區突變體(圖4)及分泌性突變體(圖5)中VZV gE表現之劑量依賴性增加,以及在細胞質尾區突變體(圖4)中較高G/C含量(CO2)與較高VZV gE表現量之間的正相關性。
成像分析顯示經各種RNA構築體轉染之Vero細胞中VZV gE之次細胞定位。VZV gE在經gE_WT轉染之細胞中的定位出現在細胞膜及高基氏體成熟面網(TGN;圖6,63倍放大率;圖10,10倍放大率)內。細胞質尾區突變體(ms4、ms5、ms8、ms9、ms10、ms11、ms12)優先在細胞膜內顯示VZV gE定位(圖6至圖8,63倍放大率;圖10至圖12,10倍放大率)。分泌性突變體(ms3、ms6)在培養物上清液內顯示VZV gE定位(圖9,63倍放大率;圖13,10倍放大率)。
實例 3. 調配於 LNP 中之 VZV gE modRNA 製備使用可離子化陽離子脂質之乙醇脂質混合物將純化之RNA (如表5中所描述)調配/囊封於脂質奈米顆粒(RNA-LNP)中且經由透濾轉移至水性緩衝液系統中,得到如本文所描述之脂質奈米顆粒組合物。RNA-LNP包含VZV RNA分子、陽離子脂質、((4-羥丁基)氮雜二基)雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯)、聚乙二醇化脂質、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺及兩種結構性脂質(1,2-二硬脂醯基- sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)及膽固醇),參見表6。 6.脂質調配物
脂質 分子量[Da] 分子式 化學名稱及結構
陽離子脂質 ALC-0315 766 C 48H 95NO 5
PEG-脂質 ALC-0159 約2400-2600 C 30H 60NO(C 2H 4O) nOCH 3n=45-50
DSPC 790 C 30H 88NO 8P
膽固醇 387 C 27H 46O  
實例 4 活體外表現 (HEK 293T 細胞 )進行活體外表現(IVE)分析以評定VZV RNA-LNP疫苗之效能。如先前在實例3中所描述將RNA構築體調配至LNP中,且在37℃、5% CO 2下將一系列輸入VZV RNA-LNP量轉染至人類胚胎腎(HEK) 293T細胞中24小時。經轉染之細胞用DPBS洗滌,使用ACCUTASE®自培養盤孔剝離,且用冷的PBS沖洗。在FACS染色之前使細胞經受活/死染色、固定及滲透。經固定及滲透之細胞在2至8℃下與抗gE初級抗體(1:1000)一起培育45分鐘,用BD PERM/WASH™緩衝液洗滌兩次,且在2至8℃下與山羊抗人類κ-PE二級抗體(1:1000)一起培育30分鐘。細胞用BD PERM/WASH™緩衝液洗滌兩次,再懸浮於1× FACS緩衝液中,且在BD LSRII上分析以測定針對各VZV RNA-LNP輸入的表現VZV gE之細胞比例。創建滴定曲線,其中針對表現gE之細胞之百分比繪製輸入RNA量以測定各VZV RNA-LNP疫苗之EC50。
表7及圖14中之資料顯示VZV RNA-LNP疫苗效能(例如較低EC50)與較高MFI之間的正相關性。VZV RNA-LNP (293T細胞)與VZV gE RNA (Vero細胞;參見實例2)之MFI之比較顯示,VZV RNA-LNP及VZV gE RNA共有類似MFI趨勢(表7),其中對於效能及MFI,gE_WT CO2 > gE_WT CO1 > ms4 CO1 > ms3 CO1。 7. 活體外表現
   VZV RNA-LNP (293T 細胞) VZV RNA (Vero 細胞)
RNA 構築體 EC50 (ng/ 孔) MFI MFI
gE_WT CO2 6 2442 1274
gE_WT CO1 8 2057 1116
ms4 CO1 15 1713 981
*ms3 CO1 231 663 497
*分泌性
表8及圖15之資料亦觀測到此等趨勢,其中對於效能及MFI,ms5 CO1 > gE_WT CO2 > gE_WT CO1 > ms6 CO2。 8 .活體外表現
   VZV RNA-LNP (293T 細胞) VZV RNA (Vero 細胞)
RNA 構築體 EC50 (ng/ 孔) MFI MFI
ms5_CO1 14 543 1368
gE_WT CO2 17 452 1274
gE_WT CO1 22 337 1116
*ms6 CO2 220 162 458
*分泌性
實例 5 . 免疫反應 ( 活體內實驗 )測試VZV RNA-LNP疫苗在Balb/c小鼠中誘導IgG及T細胞反應之能力。根據表9中之時程及規格對每組15隻小鼠進行免疫接種。簡言之,每組15隻小鼠在第0天經肌肉內(IM)免疫接種且在第28天經IM加強免疫。用SHINGRIX®免疫接種之小鼠接受1、2.5或5 µg,分別對應於1/50、1/20及1/10之人類臨床劑量(50 µg);用gE_WT CO1免疫接種之小鼠接受0.5或1 µg;用ms3 CO1免疫接種之小鼠接受0.5 µg;用ms4 CO1免疫接種之小鼠接受0.5 µg;用gE_WT CO2免疫接種之小鼠接受0.5 µg;用凍乾gE_WT CO1免疫接種之小鼠接受0.5或1 µg。在第0天及第28天向陰性對照組投與鹽水。在第28天及第42天自小鼠收集血清以用於表徵結合VZV gE之IgG水準(LUMINEX®分析)。在第35天自各組中之五隻小鼠收集脾臟且收集血清以進行細胞分析。 9.SHINGRIX®及VZV RNA-LNP之投與時程
編號 小鼠 疫苗 劑量 (µg) 劑量體積/ 途徑 投藥 ( 天數) 放血 ( 天數)
1 15 鹽水 - 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
2 15 SHINGRIX® 5 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
3 15 SHINGRIX® 2.5 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
4 15 SHINGRIX® 1 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
5 15 gE_WT CO1 0.5 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
6 15 gE_WT CO1 1 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
7 15 ms3 CO1 0.5 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
8 15 ms4 CO1 0.5 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
9 15 gE_WT CO2 0.5 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
10 15 gE_WT CO1凍乾 0.5 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
11 15 gE_WT CO1凍乾 1 µg 50 µl/IM 0, 28 28, 34*, 42
*在第34天將5隻小鼠安樂死以獲得脾臟(T細胞)
IgG 抗體效價使用LUMINEX®平台測定各小鼠樣品之血清IgG水準。簡言之,稀釋血清在2至8℃、300 rpm下,在阻斷性重組gE蛋白結合之單重微球體(MAGPLEX®微球體,區域79)存在下,在暗處培育20±4小時。二級抗體溶液(R-藻紅蛋白結合之親和純化F(ab)'2片段山羊抗小鼠IgG F(ab)'2片段特異性)在LXA-16緩衝液中以1:250製備。培養盤在LXA-20 (EIA-7)中洗滌三次,且將二級抗體施加至分析盤之各孔。培養盤用鋁密封件覆蓋,且在25℃、300 rpm下培育2小時±15分鐘。培養盤用LXA-20 (EIA-7)緩衝液洗滌三次,且將100 μl LXA-20施加至各孔。培養盤用鋁密封件覆蓋,且在25℃、300 rpm下培育最少4分鐘或至多2小時。在BIO-PLEX®讀取器上分析培養盤。表10及圖17至圖19中展示第28、34及42天之IgG效價。 10.第28、34及42天之幾何平均效價(GMC)
劑量 第28 (GMC) 第34 (GMC) 第42 (GMC)
鹽水 - 0.03 0.04 0.09
SHINGRIX® 5 µg 37.74 547.8 1260.76
2.5 µg 6.77 438.4 959.78
1 µg 2.33 177.9 498.79
gE_WT CO1 1 µg 33.78 572.7 1630.85
0.5 µg 7.69 223.9 918.43
ms3 CO1 0.5 µg 3.98 29.5 370.11
ms4 CO1 0.5 µg 3.55 112.7 598.57
gE_WT CO2 0.5 µg 12.90 437.9 524.39
gE_WT CO1 lyo 1 µg 27.03 549.9 1979.67
0.5 µg 7.33 300.4 1166.40
如圖16中所展示,第28天(僅致敏接種/在接受加強免疫之前)之IgG效價顯示接受SHINGRIX®、gE_WT CO1及凍乾gE_WT CO1之小鼠中之幾何平均濃度(GMC)的劑量依賴性變化。以0.5 µg (潛在臨床劑量30 µg之1/60)投與的gE_WT CO1之GMC (7.69)及gE_WT CO2之GMC (12.90)顯著高於以1 µg (其人類臨床劑量50 µg之1/50)投與的SHINGRIX®之GMC (2.33) (圖16)。VZV RNA-LNP之潛在臨床劑量包括但不限於15 µg、30 µg、60 µg、90 µg、100 µg或更高。因此,以1 µg (潛在臨床劑量60 µg之1/60)投與的gE_WT CO1之GMC (33.78)高於以1 µg (其人類臨床劑量50 µg之1/50)投與的SHINGRIX®之GMC (2.33)。
如圖17中所展示,第34天(在第28天接受加強免疫之後六天)之IgG效價同樣顯示接受SHINGRIX®、gE_WT CO1及凍乾gE_WT CO1之小鼠中之GMC的劑量依賴性變化(圖17)。與SHINGRIX®相比,觀測到VZV RNA-LNP疫苗之較高IgG水準(特別地,在潛在臨床劑量30 µg之1/60下gE_WT CO1之GMC為223.9且gE_WT CO2之GMC為437.9,相對於在其人類臨床劑量之1/50下SHINGRIX®之GMC為177.9 (圖17))。
當比較gE_WT CO1 (約58% G/C)與gE_WT CO2 (約66% G/C)時,觀測到較高G/C含量與較高IgG效價之間的正相關性,參見圖16及圖17。
如圖18中所展示,第42天之IgG效價進一步顯示幾何平均濃度(GMC)之劑量依賴性變化。與SHINGRIX® (GMC 498.79)相比,觀測到gE_WT CO1 (GMC 918.43)及gE_WT CO2 (GMC 524.39)之較高IgG水準。
圖19展示在第28天(僅致敏接種)、第34天(加強免疫之後六天)及第42天觀測到的SHINGRIX® (1 µg)及RNA-LNP疫苗(0.5 µg)之IgG水準彙總。
針對非凍乾gE_WT CO1及凍乾gE_WT CO1 Lyo觀測到類似IgG效價。
細胞介導之免疫性 (T 細胞反應 )在第34天(免疫接種後34天,加強免疫後6天)自Balb/c小鼠收集脾細胞以評定所誘導之gE特異性T細胞反應。使用細胞內細胞介素染色(ICS)分析來偵測在抗原肽刺激之後CD4 +或CD8 +T細胞內細胞介素之存在。ICS分析可偵測在抗原肽刺激之後在CD4 +及CD8 +T細胞中產生的多種細胞介素,包括IFN-γ。在離體刺激脾細胞期間,添加用以阻斷蛋白質分泌之試劑以保留所合成之細胞介素,從而允許其藉由細胞內染色進行偵測。在刺激之後,針對表面及細胞內標誌物對細胞進行染色以鑑別T細胞類型(CD4及CD8 T細胞之CD3 +細胞)、活化標誌物(CD154/CD40L)及細胞介素。評定表現IFN-γ、IL-2、TNFα及CD40L之CD4 +T細胞及表現IFN-γ之CD8+ T細胞以評估gE特異性T細胞。
2×10 6個脾細胞用2 μg/mL gE肽池混合物、10 ng/ml乙酸肉豆蔻佛波醇(phorbol myristate acetate;PMA)與1 μg/mL離子黴素之混合物(陽性對照)或DMSO (陰性對照)進行刺激。添加BD GOLGISTOP™及BD GOLGIPLUG™以阻斷蛋白質分泌。在37℃下培育6小時之後,針對存活率(在25℃下10分鐘)及細胞外標誌物(在25℃下20分鐘)用直接標記之抗體對細胞進行染色。細胞經固定且用BD CYTOFIX/CYTOPERM™溶液滲透。細胞介素(IFN-γ、IL-2、TNFα)及活化標誌物(CD154/CD40L)之細胞內染色係在BD CYTOFIX/CYTOPERM™溶液中進行(在25℃下30分鐘)。洗滌細胞,再懸浮於2% FBS/PBS緩衝液中,且在LSRFORTESSA™上收集。藉由FlowJo 10.7.1分析資料。所示結果為減去背景的(培養基-DMSO)。
如圖20中所展示,對CD4 +IFN-γ +(Th1) T細胞之檢查顯示接受VZV RNA-LNP疫苗(包括凍乾疫苗)之組中的強劑量依賴性反應及接受SHINGRIX®之小鼠中的最小反應。如圖21中所展示,對CD8 +IFN-γ +T細胞之檢查顯示接受VZV RNA-LNP疫苗之組中的強但可變的反應及接受SHINGRIX®之小鼠中的不可偵測反應。
實例 6. 免疫反應 - 經歷 LAV 小鼠 ( 活體內實驗 )測試VZV RNA-LNP疫苗在C57BL/6小鼠中誘導IgG及T細胞反應之能力。根據表11中之時程及規格對每組15隻小鼠進行免疫接種。簡言之,每組10或15隻小鼠在第0天用減毒活水痘(LAV)疫苗(VARIVAX®,Merck)使用每小鼠完全人類劑量(1350 pfu)經皮下(SQ)致敏接種,在第35天經肌肉內(IM)免疫接種,且在第63天加強免疫。LAV疫苗之「感染」模擬人類在兒童時感染VZV時接受的VZV暴露且產生水痘。
用SHINGRIX®免疫接種之小鼠接受1、2.5或5 µg,分別對應於人類臨床劑量之1/50、1/20及1/10;用gE_WT CO2免疫接種之小鼠接受0.5或1 µg VZV RNA-LNP;用ms5 CO1免疫接種之小鼠接受0.5或1 μg VZV RNA-LNP;用ms6 CO2免疫接種之小鼠接受0.5或1 μg VZV RNA-LNP;且用凍乾gE_WT CO2免疫接種之小鼠接受0.5或1 μg VZV RNA-LNP。在第35天及第63天向陰性對照組投與鹽水。在第35天、第63天及第76天自小鼠收集血清以用於表徵結合VZV gE之IgG水準(LUMINEX®分析)。在第48天(對於所選組,在第1次劑量後13天)及第76天收集脾臟以進行細胞分析(T細胞及B細胞反應)。 11.SHINGRIX®及VZV RNA-LNP之投與時程
編號 小鼠 疫苗 劑量 (µg) 劑量體積/ 途徑 投藥 ( 天數) 放血 ( 天數) 脾臟收集 D48*/D76* (n=5)
1 15 鹽水 - 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
2 15 SHINGRIX® 5 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
3 10 SHINGRIX® 2.5 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 63, 76* 否/是
4 15 SHINGRIX® 1 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
5 15 gE_WT CO2 1 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
6 15 gE_WT CO2 0.5 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
7 15 ms5 CO1 1 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
8 10 ms5 CO1 0.5 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 63, 76 否/否
9 15 ms6 CO2 1 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
10 10 ms6 CO2 0.5 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 63, 76 否/否
11 15 gE_WT CO2凍乾 1 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 48*, 63, 76* 是/是
12 10 gE_WT CO2凍乾 0.5 µg 50 µl/IM 0**, 35, 63 35, 63, 76 否/是
*脾臟收集,第48天:8組,40隻小鼠;第76天:10組,50隻小鼠 **VARIVAX® (LAV)在第0天以0.5 mL之總體積以完全臨床劑量(1350 pfu)投與
IgG 抗體效價使用LUMINEX®平台(本文所描述)測定各小鼠樣品之血清IgG水準。表12及圖22至圖24中展示第35天、第63天(第1次劑量後1個月)及第76天(第2次劑量後13天)之IgG效價。圖式中之各資料點為個別動物之結果;各水平線表示幾何平均IgG濃度(µg/ml)且須表示95%置信區間。 12.第35天、第63天及第76天之幾何平均效價(GMC)
編號 劑量 第35 (GMC) 第63 (GMC) 第76 (GMC)
鹽水 1 - 0.15 0.17 0.17
SHINGRIX® 2 5 µg 0.11 101 1148
3 2.5 µg 0.13 115 1649
4 1 µg 0.3 94 887
gE_WT CO2 5 1 µg 0.60 112 695
6 0.5 µg 0.09 33 316
ms5 CO1 7 1 µg 0.14 76 530
8 0.5 µg 0.11 41 556
ms6 CO2 9 1 µg 0.19 58 723
10 0.5 µg 0.28 50 464
gE_WT CO2 lyo 11 1 µg 0.03 69 917
12 0.5 µg 0.07 56 460
如免疫接種之前所預期,圖22展示在第0天用LAV疫苗(VARIVAX®)進行SQ致敏之後第35天之低IgG效價水準。如圖23中所展示,在接受VZV RNA-LNP疫苗或SHINGRIX®的經歷LAV之小鼠中,劑量依賴性反應之IgG效價在第63天(第1次劑量後1個月)顯著增加。圖24展示在第76天(第2次給藥/加強免疫後13天)劑量依賴性反應之IgG效價進一步增加。
評估凍乾對免疫原性之影響。如圖25中所展示,在第63天(第1次劑量後1個月)及第76天(第2次劑量/加強免疫後13天)針對非凍乾gE_WT CO2及凍乾gE_WT CO2觀測到類似IgG效價。
細胞介導之免疫性 (T 細胞 B 細胞反應 )在用gE肽池(每一種肽為2 μg/mL)離體刺激脾細胞之後,藉由ELISpot及細胞內細胞介素染色(ICS)分析(本文所描述)來量測疫苗誘導之T細胞反應。對於ELISpot,藉由塗佈至微量培養盤上之孔底部之聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上的抗IFN-γ抗體來捕獲活化T細胞分泌之細胞介素IFN-γ。藉由另一非競爭性生物素標記抗IFN-γ二級抗體,接著使用產生深紫色沈澱或斑點的鏈黴抗生物素蛋白鹼性磷酸酶(ALP)結合物及受質溶液、硝基藍四唑鎓及5-溴-4-氯-3'-吲哚磷酸(BCIP/NBT-plus)進行酶呈色反應,使所捕獲之IFN-γ產生斑點。使用Mabtech小鼠IFN-γ ELISpot PLUS套組(ALP)來量測T細胞IFN-γ反應,且其以每百萬個細胞之斑點形成細胞(SFC)表示。ICS分析法量測CD4 +及CD8 +T細胞內表現IFN-γ之細胞,其以CD4 +及CD8 +T細胞內之IFN-γ +細胞百分比表示。
藉由量測脾臟中之VZV gE特異性B細胞之頻率來評估疫苗誘導之B細胞反應。具有鏈球菌標籤(streptag)之野生型gE蛋白胞外域在室溫(RT)下,在單獨試管中,在20×所需染色濃度(各蛋白質10 µg/mL)下,與2:1比率之鏈黴抗生物素蛋白(SA)-螢光染料PE及APC (兩者均來自BioLegend)偶合1小時。彙集各SA-螢光染料偶合之刺突蛋白,且使用流式細胞計(FC)緩衝液(2% FBS/PBS)稀釋至1×,產生用以鑑別gE特異性B細胞之B細胞探針。脾細胞之單細胞懸浮液(5 × 10 6個細胞/孔)首先在PBS中洗滌,且在室溫下用eFluor 506可固定存活力染料(eFluor 506 Fixable Viability)染色10分鐘以鑑別活細胞與死細胞。在FC緩衝液中洗滌之後,細胞與50微升/孔之1× B細胞探針一起培育30至45分鐘,且隨後洗滌以移除未結合之探針。細胞用流式細胞計抗體(CD19、IgD、IgM、IgD,全部皆來自BioLegend)之混合液進行表面染色以鑑別B細胞表面表現型。洗滌後,細胞使用BD固定緩衝液固定且懸浮於FC緩衝液中。在LSR Fortessa上收集細胞且藉由FlowJo (10.7.1)分析資料。gE特異性B細胞之結果係以表現IgG之B細胞的百分比表示。
48 在第48天(第1次劑量後13天)自C57BL/6小鼠收集脾細胞,以評定在單次疫苗劑量之後誘導的gE特異性細胞免疫反應,參見表13及圖26A至圖26D。經歷LAV之小鼠在第35天用SHINGRIX®或VZV RNA-LNP疫苗經IM免疫接種,且在第48天(第1次劑量後13天)收集脾臟。 13.第48天(第1次劑量後13天)之細胞免疫反應
劑量 gE 特異性IFN- γ + 細胞 IFN- γ +CD4 +T 細胞 IFN- γ +CD8 +T 細胞 gE 特異性IgG +B 細胞
鹽水 - 12 0.00 0.00 0.12
SHINGRIX® 5 µg 732 0.60 0.00 4.99
1 µg 126 0.08 0.00 1.39
gE_WT CO2 1 µg 1016 0.69 0.08 4.16
0.5 µg 238 0.12 0.06 0.78
ms5 CO1 1 µg 1068 0.47 0.05 4.14
ms6 CO2 1 µg 150 0.09 0.16 1.85
gE_WT CO2 lyo 1 µg 206 0.08 0.04 2.06
圖26A展示在單次疫苗劑量之後,經歷LAV之小鼠以劑量依賴性方式引發強gE特異性IFN-γ (T細胞)反應,藉由IFN-γ ELISpot所量測。如圖26B中所展示,ICS分析結果顯示疫苗誘導類似的強劑量依賴性gE特異性IFN-γ +CD4 +T細胞反應,藉由ELISpot所證明。圖26C展示,gE特異性IFN-γ +CD8 +T細胞反應僅由VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO2、ms5 CO1、ms6 CO2、gE_WT CCO2 lyo)誘導,而並未由SHINGRIX®誘導,表明VZV-RNA-LNP疫苗誘導獨特免疫反應。總體而言,在第48天(第1次劑量後13天),由1 μg (潛在臨床劑量60 μg之1/60) gE_WT CO2誘導之T細胞反應顯著高於由1 μg (其人類劑量之1/50) SHINGRIX®誘導之T細胞反應。
藉由用流式細胞計量測gE特異性IgG +B細胞之頻率來評估脾細胞中之B細胞反應。如圖26D中所展示,gE特異性IgG +B細胞之頻率顯示由疫苗誘導之B細胞反應類似於gE特異性IFN-γ +CD4 +T細胞反應。
76 在第76天(第2次劑量/加強免疫後13天)自C57BL/6小鼠收集脾細胞,以評定在第二/加強疫苗劑量之後誘導的gE特異性細胞免疫反應,參見表14及圖27A至圖27C。經歷LAV之小鼠在第35天及第63天用SHINGRIX®或VZV RNA-LNP疫苗經IM免疫接種,且在第76天(第2次劑量/加強免疫後13天)收集脾臟。 14.第76天(第2次劑量/加強免疫後13天)之細胞免疫反應
劑量 IFN- γ +CD4 +T 細胞 IFN- γ +CD8 +T 細胞 gE 特異性IgG +B 細胞
鹽水 - 0.00 0.01 0.22
SHINGRIX® 5 µg 2.24 0.01 7.38
2.5 µg 1.88 0.01 7.91
1 µg 0.49 0.00 16.90
gE_WT CO2 1 µg 1.41 0.37 2.19
0.5 µg 0.94 0.53 0.98
ms5 CO1 1 µg 0.48 0.28 2.19
ms6 CO2 1 µg 0.50 0.21 1.38
gE_WT CO2 lyo 1 µg 0.08 0.31 1.96
0.5 µg 0.67 0.32 1.71
圖27A展示第二/加強疫苗劑量以劑量依賴性方式顯著增加gE特異性CD4 +T細胞反應,藉由所ICS分析量測。如圖27B中所展示,gE特異性IFN-γ +CD8 +T細胞反應之穩定增加僅由VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO2、ms5 CO1、ms6 CO2、gE_WT CCO2 lyo)誘導,而並未由SHINGRIX®誘導,證實VZV-RNA-LNP疫苗誘導獨特免疫反應。總體而言,在第76天(第2次劑量/加強免疫後13天),由1 μg (潛在臨床劑量60 μg之1/60) gE_WT CO2誘導之T細胞反應高於由1 μg (其人類劑量之1/50) SHINGRIX®誘導之T細胞反應。
藉由用流式細胞計量測gE特異性IgG +B細胞之頻率來評估脾細胞中之B細胞反應,且展示於圖27C中。
實例 7. VZV 抗原本發明之VZV抗原/多肽、VZV DNA及VZV RNA之序列提供於表1至3中。序列可包含任何終止密碼子,包括(但不限於)表中所提供之終止密碼子。 1 . VZV 多肽
ID VZV 序列 SEQ ID NO:
gE_WT胺基酸 MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDFHIDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLIRYAAWTGGLAAVVLLCLVIFLICTAKRMRVKAYRVDKSPYNQSMYYAGLPVDDFEDSESTDTEEEFGNAIGGSHGGSSYTVYIDKTR 1
ms3胺基酸 MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDFHIDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLIRYAAWTGGLA 2
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ms5胺基酸 MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDFHIDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLIRYAAWTGGLAAVVLLCLVIFLICTAKRMRVKAYRVDKSPYNQSMY 4
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ms12胺基酸 MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDFHIDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLIRYAAWTGGLAAVVLLCLVIFLICTAKRMRVKAARVDKSPYNQSMY 10
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2.VZV DNA
ID VZV 序列 SEQ ID NO:
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gE_WT CO2 (gE_P5)DNA TGATGA (SEQ ID NO: 295)或TAATAA (SEQ ID NO: 289)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACCGGCACCCTGCGCATCACCAACCCCGTGCGCGCCAGCGTGCTGCGCTACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGACCACGCCGAGAGCAGCTGGGTGAACCGCGGCGAGAGCAGCCGCAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGCAACGACTACGACGGCTTCCTGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAACCAGGGCCGCGGCATCGACAGCGGCGAGCGCCTGATGCAGCCCACCCAGATGAGCGCCCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGCATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGCGACGACCGCCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGAGCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGCGCCCCCATCCAGCGCATCTACGGCGTGCGCTACACCGAGACCTGGAGCTTCCTGCCCAGCCTGACCTGCACCGGCGACGCCGCCCCCGCCATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGCTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCAGCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGCGTGCTGAAGGTGCTGCGCACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGCGGCAGCGACGGCACCAGCACCTACGCCACCTTCCTGGTGACCTGGAAGGGCGACGAAAAGACCCGCAACCCCACCCCCGCCGTGACCCCCCAGCCCCGCGGCGCCGAGTTCCACATGTGGAACTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGACACCTTCAGCCTGGCCATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCCTTCGACCTGCTGCTGGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACAGCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCCCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAACAGCGGCTGCACCTTCACCAGCCCCCACCTGGCCCAGCGCGTGGCCAGCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCCGACAACTACACCGCCTACTGCCTGGGCATCAGCCACATGGAGCCCAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGACGGCGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGAGCCTGAGCGGCCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAGGCCGTGGCCTACACCGTGGTGAGCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAGCGCGGCTTCCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCCGCCACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTGAACCCCGGCACCAGCCCCCTGATCCGCTACGCCGCCTGGACCGGCGGCCTGGCCGCCGTGGTGCTGCTGTGCCTGGTGATCTTCCTGATCTGCACCGCCAAGCGCATGCGCGTGAAGGCCTACCGCGTGGACAAGAGCCCCTACAACCAGAGCATGTACTACGCCGGCCTGCCCGTGGACGACTTCGAGGACAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGTTCGGCAACGCCATCGGCGGCAGCCACGGCGGCAGCAGCTACACCGTGTACATCGACAAGACCCGC 14
ms3 CO1 (gE_ms3_TM)DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 2) ATGGGCACCGTGAACAAGCCTGTTGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACAGGCACCCTGCGGATCACCAATCCTGTGCGGGCTAGCGTGCTGAGATACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGATCACGCCGAGTCTAGCTGGGTCAACAGAGGCGAGAGCAGCAGAAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGGAACGACTACGATGGCTTCCTGGAAAATGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAATCAAGGCAGAGGCATCGACAGCGGCGAGAGACTGATGCAGCCTACACAGATGAGCGCCCAAGAGGACCTGGGAGATGATACCGGCATCCACGTGATCCCCACACTGAACGGCGACGACAGACACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGGCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAATCCTAAGCCTCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAATCACCCCTTCACACTGAGAGCCCCTATCCAGAGAATCTACGGCGTGCGCTATACCGAGACATGGTCCTTTCTGCCCAGCCTGACATGTACCGGGGATGCCGCTCCTGCCATCCAGCACATTTGCCTGAAGCACACCACCTGTTTCCAGGACGTGGTGGTGGATGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAAGAGGATCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGGTTCCAGGGAAAGAAAGAGGCCGACCAGCCTTGGATCGTGGTCAACACCAGCACACTGTTCGACGAGCTGGAACTGGACCCTCCTGAGATTGAACCCGGGGTGCTGAAGGTGCTGAGAACCGAGAAGCAGTACCTGGGAGTGTACATCTGGAACATGAGAGGCAGCGACGGCACCTCTACCTACGCCACCTTTCTGGTCACATGGAAGGGCGACGAGAAAACACGGAACCCCACACCAGCTGTGACCCCTCAACCTAGAGGCGCCGAGTTTCACATGTGGAATTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGATACCTTTAGCCTGGCCATGCATCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCTTTCGACCTGCTGCTGGAATGGCTGTACGTGCCCATCGATCCTACCTGCCAGCCTATGCGGCTGTACTCCACCTGTCTGTATCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAATAGCGGCTGCACCTTCACAAGCCCTCACCTGGCTCAGCGAGTGGCCAGCACAGTGTACCAGAATTGCGAGCACGCCGACAATTACACCGCCTACTGTCTGGGCATCAGCCACATGGAACCTAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGATGGCGGCACAACCCTGAAGTTCGTGGATACCCCTGAGAGCCTGAGCGGCCTGTATGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAAGCCGTGGCCTACACCGTGGTGTCTACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAAAGAGGCTTCCCTCCAACTGCTGGACAGCCTCCTGCCACCACCAAGCCTAAAGAAATCACACCCGTGAATCCCGGCACAAGCCCACTGATCAGATACGCCGCTTGGACAGGCGGACTGGCT 15
ms3 CO2DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 2) ATGGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACCGGCACCCTGCGCATCACCAACCCCGTGCGCGCCAGCGTGCTGCGCTACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGACCACGCCGAGAGCAGCTGGGTGAACCGCGGCGAGAGCAGCCGCAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGCAACGACTACGACGGCTTCCTGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAACCAGGGCCGCGGCATCGACAGCGGCGAGCGCCTGATGCAGCCCACCCAGATGAGCGCCCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGCATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGCGACGACCGCCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGAGCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGCGCCCCCATCCAGCGCATCTACGGCGTGCGCTACACCGAGACCTGGAGCTTCCTGCCCAGCCTGACCTGCACCGGCGACGCCGCCCCCGCCATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGCTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCAGCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGCGTGCTGAAGGTGCTGCGCACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGCGGCAGCGACGGCACCAGCACCTACGCCACCTTCCTGGTGACCTGGAAGGGCGACGAAAAGACCCGCAACCCCACCCCCGCCGTGACCCCCCAGCCCCGCGGCGCCGAGTTCCACATGTGGAACTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGACACCTTCAGCCTGGCCATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCCTTCGACCTGCTGCTGGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACAGCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCCCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAACAGCGGCTGCACCTTCACCAGCCCCCACCTGGCCCAGCGCGTGGCCAGCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCCGACAACTACACCGCCTACTGCCTGGGCATCAGCCACATGGAGCCCAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGACGGCGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGAGCCTGAGCGGCCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAGGCCGTGGCCTACACCGTGGTGAGCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAGCGCGGCTTCCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCCGCCACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTGAACCCCGGCACCAGCCCCCTGATCCGCTACGCCGCCTGGACCGGCGGCCTGGCC    16
ms4 CO1 (gE_P1_ms4)DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 3) ATGGGCACCGTGAACAAGCCTGTTGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACAGGCACCCTGCGGATCACCAATCCTGTGCGGGCTAGCGTGCTGAGATACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGATCACGCCGAGTCTAGCTGGGTCAACAGAGGCGAGAGCAGCAGAAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGGAACGACTACGATGGCTTCCTGGAAAATGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAATCAAGGCAGAGGCATCGACAGCGGCGAGAGACTGATGCAGCCTACACAGATGAGCGCCCAAGAGGACCTGGGAGATGATACCGGCATCCACGTGATCCCCACACTGAACGGCGACGACAGACACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGGCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAATCCTAAGCCTCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAATCACCCCTTCACACTGAGAGCCCCTATCCAGAGAATCTACGGCGTGCGCTATACCGAGACATGGTCCTTTCTGCCCAGCCTGACATGTACCGGGGATGCCGCTCCTGCCATCCAGCACATTTGCCTGAAGCACACCACCTGTTTCCAGGACGTGGTGGTGGATGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAAGAGGATCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGGTTCCAGGGAAAGAAAGAGGCCGACCAGCCTTGGATCGTGGTCAACACCAGCACACTGTTCGACGAGCTGGAACTGGACCCTCCTGAGATTGAACCCGGGGTGCTGAAGGTGCTGAGAACCGAGAAGCAGTACCTGGGAGTGTACATCTGGAACATGAGAGGCAGCGACGGCACCTCTACCTACGCCACCTTTCTGGTCACATGGAAGGGCGACGAGAAAACACGGAACCCCACACCAGCTGTGACCCCTCAACCTAGAGGCGCCGAGTTTCACATGTGGAATTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGATACCTTTAGCCTGGCCATGCATCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCTTTCGACCTGCTGCTGGAATGGCTGTACGTGCCCATCGATCCTACCTGCCAGCCTATGCGGCTGTACTCCACCTGTCTGTATCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAATAGCGGCTGCACCTTCACAAGCCCTCACCTGGCTCAGCGAGTGGCCAGCACAGTGTACCAGAATTGCGAGCACGCCGACAATTACACCGCCTACTGTCTGGGCATCAGCCACATGGAACCTAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGATGGCGGCACAACCCTGAAGTTCGTGGATACCCCTGAGAGCCTGAGCGGCCTGTATGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAAGCCGTGGCCTACACCGTGGTGTCTACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAAAGAGGCTTCCCTCCAACTGCTGGACAGCCTCCTGCCACCACCAAGCCTAAAGAAATCACACCCGTGAATCCCGGCACAAGCCCACTGATCAGATACGCCGCTTGGACAGGCGGACTGGCTGCTGTTGTTCTGCTGTGCCTGGTCATCTTCCTGATCTGCACCGCCAAGCGGATGAGAGTGAAGGCCTACAGAGTGGACAAGAGCCCTTACAACCAGAGCATGTACGCCGCCGGCCTGCCTGTGGACGACTTCGAGGATAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGTTCGGCAACGCCATTGGAGGATCTCACGGCGGCAGCAGCTATACCGTGTACATCGACAAGACCCGG 17
ms4 CO2 (gE_P5_ms4)DNA TGATGA (SEQ ID NO: 295)或TAATAA (SEQ ID NO: 289)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 3) ATGGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACCGGCACCCTGCGCATCACCAACCCCGTGCGCGCCAGCGTGCTGCGCTACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGACCACGCCGAGAGCAGCTGGGTGAACCGCGGCGAGAGCAGCCGCAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGCAACGACTACGACGGCTTCCTGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAACCAGGGCCGCGGCATCGACAGCGGCGAGCGCCTGATGCAGCCCACCCAGATGAGCGCCCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGCATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGCGACGACCGCCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGAGCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGCGCCCCCATCCAGCGCATCTACGGCGTGCGCTACACCGAGACCTGGAGCTTCCTGCCCAGCCTGACCTGCACCGGCGACGCCGCCCCCGCCATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGCTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCAGCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGCGTGCTGAAGGTGCTGCGCACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGCGGCAGCGACGGCACCAGCACCTACGCCACCTTCCTGGTGACCTGGAAGGGCGACGAAAAGACCCGCAACCCCACCCCCGCCGTGACCCCCCAGCCCCGCGGCGCCGAGTTCCACATGTGGAACTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGACACCTTCAGCCTGGCCATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCCTTCGACCTGCTGCTGGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACAGCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCCCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAACAGCGGCTGCACCTTCACCAGCCCCCACCTGGCCCAGCGCGTGGCCAGCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCCGACAACTACACCGCCTACTGCCTGGGCATCAGCCACATGGAGCCCAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGACGGCGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGAGCCTGAGCGGCCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAGGCCGTGGCCTACACCGTGGTGAGCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAGCGCGGCTTCCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCCGCCACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTGAACCCCGGCACCAGCCCCCTGATCCGCTACGCCGCCTGGACCGGCGGCCTGGCCGCCGTGGTGCTGCTGTGCCTGGTGATCTTCCTGATCTGCACCGCCAAGCGCATGCGCGTGAAGGCCTACCGCGTGGACAAGAGCCCCTACAACCAGAGCATGTACGCCGCCGGCCTGCCCGTGGACGACTTCGAGGACAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGTTCGGCAACGCCATCGGCGGCAGCCACGGCGGCAGCAGCTACACCGTGTACATCGACAAGACCCGC 18
ms5 CO1 (gE_P1_ms5)DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 4) ATGGGCACCGTGAACAAGCCTGTTGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACAGGCACCCTGCGGATCACCAATCCTGTGCGGGCTAGCGTGCTGAGATACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGATCACGCCGAGTCTAGCTGGGTCAACAGAGGCGAGAGCAGCAGAAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGGAACGACTACGATGGCTTCCTGGAAAATGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAATCAAGGCAGAGGCATCGACAGCGGCGAGAGACTGATGCAGCCTACACAGATGAGCGCCCAAGAGGACCTGGGAGATGATACCGGCATCCACGTGATCCCCACACTGAACGGCGACGACAGACACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGGCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAATCCTAAGCCTCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAATCACCCCTTCACACTGAGAGCCCCTATCCAGAGAATCTACGGCGTGCGCTATACCGAGACATGGTCCTTTCTGCCCAGCCTGACATGTACCGGGGATGCCGCTCCTGCCATCCAGCACATTTGCCTGAAGCACACCACCTGTTTCCAGGACGTGGTGGTGGATGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAAGAGGATCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGGTTCCAGGGAAAGAAAGAGGCCGACCAGCCTTGGATCGTGGTCAACACCAGCACACTGTTCGACGAGCTGGAACTGGACCCTCCTGAGATTGAACCCGGGGTGCTGAAGGTGCTGAGAACCGAGAAGCAGTACCTGGGAGTGTACATCTGGAACATGAGAGGCAGCGACGGCACCTCTACCTACGCCACCTTTCTGGTCACATGGAAGGGCGACGAGAAAACACGGAACCCCACACCAGCTGTGACCCCTCAACCTAGAGGCGCCGAGTTTCACATGTGGAATTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGATACCTTTAGCCTGGCCATGCATCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCTTTCGACCTGCTGCTGGAATGGCTGTACGTGCCCATCGATCCTACCTGCCAGCCTATGCGGCTGTACTCCACCTGTCTGTATCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAATAGCGGCTGCACCTTCACAAGCCCTCACCTGGCTCAGCGAGTGGCCAGCACAGTGTACCAGAATTGCGAGCACGCCGACAATTACACCGCCTACTGTCTGGGCATCAGCCACATGGAACCTAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGATGGCGGCACAACCCTGAAGTTCGTGGATACCCCTGAGAGCCTGAGCGGCCTGTATGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAAGCCGTGGCCTACACCGTGGTGTCTACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAAAGAGGCTTCCCTCCAACTGCTGGACAGCCTCCTGCCACCACCAAGCCTAAAGAAATCACACCCGTGAATCCCGGCACAAGCCCACTGATCAGATACGCCGCTTGGACAGGCGGACTGGCTGCTGTTGTTCTGCTGTGCCTGGTCATCTTCCTGATCTGCACCGCCAAGCGGATGAGAGTGAAGGCCTACAGAGTGGACAAGAGCCCTTACAACCAGAGCATGTAC 19
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ms6 CO1 (gE_ms3)DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 5) ATGGGCACCGTGAACAAGCCTGTTGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACAGGCACCCTGCGGATCACCAATCCTGTGCGGGCTAGCGTGCTGAGATACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGATCACGCCGAGTCTAGCTGGGTCAACAGAGGCGAGAGCAGCAGAAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGGAACGACTACGATGGCTTCCTGGAAAATGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAATCAAGGCAGAGGCATCGACAGCGGCGAGAGACTGATGCAGCCTACACAGATGAGCGCCCAAGAGGACCTGGGAGATGATACCGGCATCCACGTGATCCCCACACTGAACGGCGACGACAGACACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGGCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAATCCTAAGCCTCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAATCACCCCTTCACACTGAGAGCCCCTATCCAGAGAATCTACGGCGTGCGCTATACCGAGACATGGTCCTTTCTGCCCAGCCTGACATGTACCGGGGATGCCGCTCCTGCCATCCAGCACATTTGCCTGAAGCACACCACCTGTTTCCAGGACGTGGTGGTGGATGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAAGAGGATCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGGTTCCAGGGAAAGAAAGAGGCCGACCAGCCTTGGATCGTGGTCAACACCAGCACACTGTTCGACGAGCTGGAACTGGACCCTCCTGAGATTGAACCCGGGGTGCTGAAGGTGCTGAGAACCGAGAAGCAGTACCTGGGAGTGTACATCTGGAACATGAGAGGCAGCGACGGCACCTCTACCTACGCCACCTTTCTGGTCACATGGAAGGGCGACGAGAAAACACGGAACCCCACACCAGCTGTGACCCCTCAACCTAGAGGCGCCGAGTTTCACATGTGGAATTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGATACCTTTAGCCTGGCCATGCATCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCTTTCGACCTGCTGCTGGAATGGCTGTACGTGCCCATCGATCCTACCTGCCAGCCTATGCGGCTGTACTCCACCTGTCTGTATCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAATAGCGGCTGCACCTTCACAAGCCCTCACCTGGCTCAGCGAGTGGCCAGCACAGTGTACCAGAATTGCGAGCACGCCGACAATTACACCGCCTACTGTCTGGGCATCAGCCACATGGAACCTAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGATGGCGGCACAACCCTGAAGTTCGTGGATACCCCTGAGAGCCTGAGCGGCCTGTATGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAAGCCGTGGCCTACACCGTGGTGTCTACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAAAGAGGCTTCCCTCCAACTGCTGGACAGCCTCCTGCCACCACCAAGCCTAAAGAAATCACACCCGTGAATCCCGGCACAAGCCCACTGATCAGATAC 22
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ms8 CO1DNA TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 6) ATGGGCACCGTGAACAAGCCTGTTGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACAGGCACCCTGCGGATCACCAATCCTGTGCGGGCTAGCGTGCTGAGATACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGATCACGCCGAGTCTAGCTGGGTCAACAGAGGCGAGAGCAGCAGAAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGGAACGACTACGATGGCTTCCTGGAAAATGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAATCAAGGCAGAGGCATCGACAGCGGCGAGAGACTGATGCAGCCTACACAGATGAGCGCCCAAGAGGACCTGGGAGATGATACCGGCATCCACGTGATCCCCACACTGAACGGCGACGACAGACACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGGCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAATCCTAAGCCTCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGTCCGTGGAAGAGAATCACCCCTTCACACTGAGAGCCCCTATCCAGAGAATCTACGGCGTGCGCTATACCGAGACATGGTCCTTTCTGCCCAGCCTGACATGTACCGGGGATGCCGCTCCTGCCATCCAGCACATTTGCCTGAAGCACACCACCTGTTTCCAGGACGTGGTGGTGGATGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAAGAGGATCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGGTTCCAGGGAAAGAAAGAGGCCGACCAGCCTTGGATCGTGGTCAACACCAGCACACTGTTCGACGAGCTGGAACTGGACCCTCCTGAGATTGAACCCGGGGTGCTGAAGGTGCTGAGAACCGAGAAGCAGTACCTGGGAGTGTACATCTGGAACATGAGAGGCAGCGACGGCACCTCTACCTACGCCACCTTTCTGGTCACATGGAAGGGCGACGAGAAAACACGGAACCCCACACCAGCTGTGACCCCTCAACCTAGAGGCGCCGAGTTTCACATGTGGAATTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGATACCTTTAGCCTGGCCATGCATCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCTTTCGACCTGCTGCTGGAATGGCTGTACGTGCCCATCGATCCTACCTGCCAGCCTATGCGGCTGTACTCCACCTGTCTGTATCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAATAGCGGCTGCACCTTCACAAGCCCTCACCTGGCTCAGCGAGTGGCCAGCACAGTGTACCAGAATTGCGAGCACGCCGACAATTACACCGCCTACTGTCTGGGCATCAGCCACATGGAACCTAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGATGGCGGCACAACCCTGAAGTTCGTGGATACCCCTGAGAGCCTGAGCGGCCTGTATGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAAGCCGTGGCCTACACCGTGGTGTCTACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAAAGAGGCTTCCCTCCAACTGCTGGACAGCCTCCTGCCACCACCAAGCCTAAAGAAATCACACCCGTGAATCCCGGCACAAGCCCACTGATCAGATACGCCGCTTGGACAGGCGGACTGGCTGCTGTTGTTCTGCTGTGCCTGGTCATCTTCCTGATCTGCACCGCCAAGCGGATGAGAGTGAAGGCCTACAGAGTGGACAAGAGCCCTTACAACCAGAGCATGTACTACGCCGGCCTGCCTGTGGGAAATGCCATCGGAGGATCTCACGGCGGCAGCAGCTATACCGTGTACATCGACAAGACCCGG    24
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ms9 CO2DNA TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 7) ATGGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATCACCGGCACCCTGCGCATCACCAACCCCGTGCGCGCCAGCGTGCTGCGCTACGACGACTTCCACATCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACAGCGTGTACGAGCCCTACTACCACAGCGACCACGCCGAGAGCAGCTGGGTGAACCGCGGCGAGAGCAGCCGCAAGGCCTACGACCACAACAGCCCCTACATCTGGCCCCGCAACGACTACGACGGCTTCCTGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGCGTGTACAACCAGGGCCGCGGCATCGACAGCGGCGAGCGCCTGATGCAGCCCACCCAGATGAGCGCCCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGCATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGCGACGACCGCCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGCGACGTGTTCAAGGGCGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGCCTGATCGAGGTGAGCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGCGCCCCCATCCAGCGCATCTACGGCGTGCGCTACACCGAGACCTGGAGCTTCCTGCCCAGCCTGACCTGCACCGGCGACGCCGCCCCCGCCATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCCGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCCGAGATCAGCTACCGCTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCAGCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGCGTGCTGAAGGTGCTGCGCACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGCGGCAGCGACGGCACCAGCACCTACGCCACCTTCCTGGTGACCTGGAAGGGCGACGAAAAGACCCGCAACCCCACCCCCGCCGTGACCCCCCAGCCCCGCGGCGCCGAGTTCCACATGTGGAACTACCACAGCCACGTGTTCAGCGTGGGCGACACCTTCAGCCTGGCCATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCCTTCGACCTGCTGCTGGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACAGCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCCCCCCAGTGCCTGAGCCACATGAACAGCGGCTGCACCTTCACCAGCCCCCACCTGGCCCAGCGCGTGGCCAGCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCCGACAACTACACCGCCTACTGCCTGGGCATCAGCCACATGGAGCCCAGCTTCGGCCTGATCCTGCACGACGGCGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGAGCCTGAGCGGCCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGCCACGTGGAGGCCGTGGCCTACACCGTGGTGAGCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCCATCGAGGAGCGCGGCTTCCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCCGCCACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTGAACCCCGGCACCAGCCCCCTGATCCGCTACGCCGCCTGGACCGGCGGCCTGGCCGCCGTGGTGCTGCTGTGCCTGGTGATCTTCCTGATCTGCACCGCCAAGCGCATGCGCGTGAAGGCCGCCCGCGTGGACAAGAGCCCCTACAACCAGAGCATGTACTACGCCGGCCTGCCCGTGGGCAACGCCATCGGCGGCAGCCACGGCGGCAGCAGCTACACCGTGTACATCGACAAGACCCGC    26
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gE_P3DNA TAGTGA (SEQ ID NO: 292)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACTGTCAACAAGCCCGTAGTGGGGGTCCTGATGGGGTTCGGGATCATCACGGGGACTCTGCGGATCACTAATCCGGTTAGGGCCTCTGTGCTGCGCTATGACGACTTCCACATTGATGAGGATAAGCTGGACACAAATAGCGTATATGAGCCATATTACCATAGCGATCATGCTGAGTCTTCCTGGGTGAATAGGGGTGAGTCTTCCCGCAAGGCTTATGATCACAATAGTCCATACATCTGGCCCCGGAATGACTATGATGGCTTTCTTGAGAACGCCCACGAGCATCATGGTGTTTACAACCAGGGGCGCGGAATTGACAGTGGAGAGAGGTTGATGCAGCCTACTCAGATGTCCGCTCAGGAGGATCTGGGCGACGACACTGGTATCCATGTGATTCCGACCTTAAACGGTGATGACCGGCATAAGATCGTGAATGTGGATCAAAGGCAATATGGTGATGTGTTTAAGGGGGATCTTAATCCTAAACCTCAAGGACAGAGGTTGATTGAGGTCTCTGTGGAGGAAAATCATCCTTTCACTCTGCGTGCGCCCATACAGAGAATCTATGGAGTTCGATACACCGAAACCTGGTCTTTTCTGCCTAGTCTGACATGCACTGGGGACGCCGCCCCGGCGATTCAGCACATATGCCTGAAGCATACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGTGCCGAGAATACCAAGGAGGATCAACTCGCCGAAATCTCATACAGGTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCGTGGATCGTCGTCAATACAAGTACTCTTTTTGACGAGCTGGAGCTCGATCCACCTGAGATCGAGCCAGGTGTGCTGAAAGTGTTGCGTACTGAAAAACAGTATCTCGGAGTTTATATTTGGAACATGAGGGGCTCTGATGGTACAAGCACATACGCAACCTTTCTGGTGACATGGAAAGGCGACGAGAAAACTCGTAACCCCACCCCTGCTGTGACTCCACAGCCTCGGGGGGCCGAGTTTCACATGTGGAACTACCATTCTCACGTGTTTAGTGTGGGTGACACATTTTCCCTCGCTATGCACCTGCAGTACAAGATCCATGAAGCCCCCTTTGATCTTCTGCTGGAGTGGCTCTACGTGCCGATAGATCCAACTTGTCAGCCCATGAGGTTGTACAGTACGTGCTTGTACCACCCCAACGCCCCCCAATGTCTGAGCCATATGAACTCCGGGTGCACATTCACGTCACCCCATCTTGCCCAGCGTGTTGCGTCCACGGTGTATCAGAACTGCGAGCACGCAGATAATTACACCGCCTATTGCCTTGGCATCTCACACATGGAACCTAGTTTTGGCCTGATCCTCCATGACGGCGGAACTACTCTCAAATTCGTGGATACCCCTGAGTCTCTGTCCGGCCTGTACGTGTTTGTTGTATACTTCAACGGCCATGTGGAGGCTGTGGCGTACACTGTTGTGAGCACTGTCGATCACTTTGTGAATGCTATCGAGGAAAGAGGCTTTCCTCCGACAGCTGGACAGCCGCCTGCCACCACTAAGCCCAAGGAGATCACACCTGTCAATCCCGGAACCTCGCCACTGATAAGGTATGCCGCCTGGACCGGCGGCTTGGCCGCTGTGGTGCTTTTGTGTTTAGTTATTTTTTTGATTTGCACTGCGAAACGCATGCGAGTTAAGGCATACCGGGTGGATAAGTCGCCCTACAACCAGTCTATGTACTATGCCGGGCTCCCCGTGGACGATTTTGAGGACTCAGAGAGCACGGACACAGAGGAGGAGTTCGGGAACGCGATAGGGGGGTCCCACGGGGGGTCCTCCTACACCGTGTACATAGACAAGACTCGG 36
gE_P4DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACTGTCAACAAGCCGGTTGTTGGGGTGCTCATGGGGTTCGGCATCATCACCGGTACACTCAGGATTACAAATCCTGTACGCGCGAGTGTCTTGCGGTACGACGATTTCCATATCGATGAAGATAAGCTCGACACGAACTCCGTGTACGAGCCTTATTATCATTCTGATCATGCGGAGTCGTCATGGGTGAATCGGGGTGAGTCTTCCAGGAAGGCTTATGATCATAACAGCCCATACATATGGCCTCGTAATGATTATGACGGCTTCCTGGAGAACGCCCATGAGCACCACGGTGTCTATAACCAAGGTCGAGGGATAGACTCTGGGGAAAGGCTGATGCAGCCTACCCAGATGTCGGCACAGGAGGACCTAGGGGATGACACTGGCATCCATGTCATCCCCACGCTCAATGGCGACGACCGCCATAAGATCGTGAATGTGGACCAGCGGCAGTACGGGGATGTCTTCAAAGGAGACCTTAACCCTAAGCCCCAAGGGCAGCGGTTGATAGAGGTCTCCGTTGAAGAAAATCATCCCTTTACTCTGCGGGCTCCCATTCAACGCATCTATGGGGTCCGCTATACTGAGACGTGGTCCTTCTTGCCGTCCCTGACCTGTACAGGTGATGCTGCCCCCGCTATTCAGCATATATGCCTCAAGCATACTACTTGCTTTCAGGACGTTGTGGTCGATGTCGATTGCGCTGAGAACACGAAGGAGGATCAGTTAGCTGAGATTTCCTATCGGTTCCAGGGTAAAAAGGAGGCCGATCAGCCGTGGATAGTGGTGAACACTTCAACCCTATTCGACGAGCTTGAATTGGACCCTCCCGAGATCGAACCCGGCGTCCTGAAGGTTCTGAGAACAGAGAAGCAGTATCTTGGGGTATATATCTGGAATATGCGGGGCAGCGACGGCACGTCCACCTATGCAACCTTCTTGGTGACATGGAAGGGCGATGAGAAGACACGTAACCCCACTCCGGCTGTGACACCACAGCCGCGAGGCGCTGAGTTCCACATGTGGAATTATCATTCCCATGTATTCAGTGTTGGGGATACGTTCTCTCTGGCCATGCACCTCCAGTACAAGATACACGAGGCGCCCTTTGATCTTTTACTGGAGTGGCTGTATGTGCCAATCGATCCTACATGTCAACCGATGAGGTTGTATTCCACTTGTTTATATCACCCAAACGCTCCTCAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGATGTACCTTTACATCACCCCATCTGGCACAGAGGGTGGCCTCCACGGTCTATCAGAATTGTGAACACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATCAGCCACATGGAGCCTAGCTTCGGGCTGATACTCCACGACGGTGGGACCACCTTAAAGTTCGTGGATACTCCCGAGTCTTTGAGTGGTCTGTATGTGTTTGTGGTTTATTTTAATGGACACGTGGAGGCGGTGGCGTACACGGTGGTCAGCACAGTTGACCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTCCCGCCTACGGCTGGGCAACCACCCGCTACCACGAAGCCCAAGGAGATTACTCCTGTGAATCCTGGGACATCACCTCTTATCAGGTACGCCGCGTGGACCGGTGGCCTTGCCGCAGTTGTTCTTCTGTGTCTGGTGATTTTCTTGATCTGCACCGCAAAGCGGATGCGGGTCAAGGCTTACCGGGTCGACAAGAGTCCTTACAATCAGAGTATGTACTACGCGGGCCTCCCGGTAGACGACTTTGAGGACTCTGAGTCGACCGACACAGAAGAAGAATTCGGCAACGCCATCGGGGGGAGCCATGGTGGCTCCTCCTACACGGTGTATATTGATAAGACCAGG 37
gE_P6DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACAGTTAATAAACCTGTGGTGGGGGTATTGATGGGGTTCGGAATTATCACGGGAACGTTGCGTATAACGAATCCGGTCAGAGCATCCGTCTTGCGATACGATGATTTTCACATCGATGAAGACAAACTGGATACAAACTCCGTATATGAGCCTTACTACCATTCAGATCATGCGGAGTCTTCATGGGTAAATCGGGGAGAGTCTTCGCGAAAAGCGTACGATCATAACTCACCTTATATATGGCCACGTAATGATTATGATGGATTTTTAGAGAACGCACACGAACACCATGGGGTGTATAATCAGGGCCGTGGTATCGATAGCGGGGAACGGTTAATGCAACCCACACAAATGTCTGCACAGGAGGATCTTGGGGACGATACGGGCATCCACGTTATCCCTACGTTAAACGGCGATGACAGACATAAAATTGTAAATGTGGACCAACGTCAATACGGTGACGTGTTTAAAGGAGATCTTAATCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACTCATTGAGGTGTCAGTGGAAGAAAATCACCCGTTTACTTTACGCGCACCGATTCAGCGGATTTATGGAGTCCGGTACACCGAGACTTGGAGCTTTTTGCCGTCATTAACCTGTACGGGAGACGCAGCGCCCGCCATCCAGCATATATGCTTAAAACATACAACATGCTTTCAAGACGTGGTGGTGGATGTGGATTGCGCGGAAAATACTAAAGAGGATCAGTTGGCCGAAATCAGTTACCGTTTTCAAGGTAAGAAGGAAGCGGACCAACCGTGGATTGTTGTAAACACGAGCACACTGTTTGATGAACTCGAATTAGACCCCCCCGAGATTGAACCGGGTGTCTTGAAAGTACTTCGGACAGAAAAACAATACTTGGGTGTGTACATTTGGAACATGCGCGGCTCCGATGGTACGTCTACCTACGCCACGTTTTTGGTCACCTGGAAAGGGGATGAAAAAACAAGAAACCCTACGCCCGCAGTAACTCCTCAACCAAGAGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAATTACCACTCGCATGTATTTTCAGTTGGTGATACGTTTAGCTTGGCAATGCATCTTCAGTATAAGATACATGAAGCGCCATTTGATTTGCTGTTAGAGTGGTTGTATGTCCCCATCGATCCTACATGTCAACCAATGCGGTTATATTCTACGTGTTTGTATCATCCCAACGCACCCCAATGCCTCTCTCATATGAATTCCGGTTGTACATTTACCTCGCCACATTTAGCCCAGCGTGTTGCAAGCACAGTGTATCAAAATTGTGAACATGCAGATAACTACACCGCATATTGTCTGGGAATATCTCATATGGAGCCTAGCTTTGGTCTAATCTTACACGACGGGGGCACCACGTTAAAGTTTGTAGATACACCCGAGAGTTTGTCGGGATTATACGTTTTTGTGGTGTATTTTAACGGGCATGTTGAAGCCGTAGCATACACTGTTGTATCCACAGTAGATCATTTTGTAAACGCAATTGAGGAACGTGGATTTCCGCCAACGGCCGGTCAGCCACCGGCGACTACTAAACCCAAGGAAATTACCCCCGTAAACCCCGGAACGTCACCACTTATACGATATGCCGCATGGACCGGAGGGCTTGCAGCAGTAGTACTTTTATGTCTCGTAATATTTTTAATCTGTACGGCTAAACGAATGAGGGTTAAAGCCTATAGGGTAGACAAGTCCCCGTATAACCAAAGCATGTATTACGCTGGCCTTCCAGTGGACGATTTCGAGGACTCGGAATCTACGGATACGGAAGAAGAGTTTGGTAACGCGATTGGAGGGAGTCACGGGGGTTCGAGTTACACGGTGTATATAGATAAGACCCGG 38
gE_P7DNA TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACTGTCAACAAGCCGGTTGTTGGGGTGCTCATGGGGTTCGGCATCATCACCGGTACACTCAGGATTACAAATCCTGTACGCGCGAGTGTCTTGCGGTACGACGATTTCCATATCGATGAAGATAAGCTCGACACGAACTCCGTGTACGAGCCTTATTATCATTCTGATCATGCGGAGTCGTCATGGGTGAATCGGGGTGAGTCTTCCAGGAAGGCTTATGATCATAACAGCCCATACATATGGCCTCGTAATGATTATGACGGCTTCCTGGAGAACGCCCATGAGCACCACGGTGTCTATAACCAAGGTCGAGGGATAGACTCTGGGGAAAGGCTGATGCAGCCTACCCAGATGTCGGCACAGGAGGACCTAGGGGATGACACTGGCATCCATGTCATCCCCACGCTCAATGGCGACGACCGCCATAAGATCGTGAATGTGGACCAGCGGCAGTACGGGGATGTCTTCAAAGGAGACCTTAACCCTAAGCCCCAAGGGCAGCGGTTGATAGAGGTCTCCGTTGAAGAAAATCATCCCTTTACTCTGCGGGCTCCCATTCAACGCATCTATGGGGTCCGCTATACTGAGACGTGGTCCTTCTTGCCGTCCCTGACCTGTACAGGTGATGCTGCCCCCGCTATTCAGCATATATGCCTCAAGCATACTACTTGCTTTCAGGACGTTGTGGTCGATGTCGATTGCGCTGAGAACACGAAGGAGGATCAGTTAGCTGAGATTTCCTATCGGTTCCAGGGTAAAAAGGAGGCCGATCAGCCGTGGATAGTGGTGAACACTTCAACCCTATTCGACGAGCTTGAATTGGACCCTCCCGAGATCGAACCCGGCGTCCTGAAGGTTCTGAGAACAGAGAAGCAGTATCTTGGGGTATATATCTGGAATATGCGGGGCAGCGACGGCACGTCCACCTATGCAACCTTCTTGGTGACATGGAAGGGCGATGAGAAGACACGTAACCCCACTCCGGCTGTGACACCACAGCCGCGAGGCGCTGAGTTCCACATGTGGAATTATCATTCCCATGTATTCAGTGTTGGGGATACGTTCTCTCTGGCCATGCACCTCCAGTACAAGATACACGAGGCGCCCTTTGATCTTTTACTGGAGTGGCTGTATGTGCCAATCGATCCTACATGTCAACCGATGAGGTTGTATTCCACTTGTTTATATCACCCAAACGCTCCTCAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGATGTACCTTTACATCACCCCATCTGGCACAGAGGGTGGCCTCCACGGTCTATCAGAATTGTGAACACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATCAGCCACATGGAGCCTAGCTTCGGGCTGATACTCCACGACGGTGGGACCACCTTAAAGTTCGTGGATACTCCCGAGTCTTTGAGTGGTCTGTATGTGTTTGTGGTTTATTTTAATGGACACGTGGAGGCGGTGGCGTACACGGTGGTCAGCACAGTTGACCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTCCCGCCTACGGCTGGGCAACCACCCGCTACCACGAAGCCCAAGGAGATTACTCCTGTGAATCCTGGGACATCACCTCTTATCAGGTACGCCGCGTGGACCGGTGGCCTTGCCGCAGTTGTTCTTCTGTGTCTGGTGATTTTCTTGATCTGCACCGCAAAGCGGATGCGGGTCAAGGCTTACCGGGTCGACAAGAGTCCTTACAATCAGAGTATGTACTACGCGGGCCTCCCGGTAGACGACTTTGAGGACTCTGAGTCGACCGACACAGAAGAAGAATTCGGCAACGCCATCGGGGGGAGCCATGGTGGCTCCTCCTACACGGTGTATATTGATAAGACCAGG 39
gE EB1DNA    TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGTACTGTGAATAAGCCTGTGGTGGGGGTTCTAATGGGGTTCGGGATCATCACTGGAACACTGAGGATTACCAATCCCGTTAGGGCCTCCGTGCTGCGTTACGATGACTTCCACATCGACGAGGATAAGCTGGATACCAATTCAGTTTATGAGCCTTACTACCACTCTGATCACGCCGAGAGCTCTTGGGTGAATCGGGGGGAGTCCTCTAGGAAAGCCTATGATCATAATTCTCCATATATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTTCTGGAGAATGCACACGAACATCACGGCGTTTATAACCAAGGTCGTGGGATTGACTCGGGCGAGCGTCTGATGCAACCCACTCAGATGTCCGCTCAGGAAGACCTGGGCGATGACACTGGGATTCATGTGATTCCAACTCTTAATGGCGACGATCGCCATAAGATTGTGAATGTGGATCAGAGACAGTATGGAGATGTGTTTAAGGGCGATCTGAATCCGAAGCCCCAGGGTCAGAGACTCATCGAAGTGAGTGTGGAGGAAAACCATCCCTTTACTCTGAGGGCTCCGATTCAGCGCATCTACGGTGTGCGCTACACTGAGACTTGGAGTTTCCTGCCGTCTTTGACTTGCACAGGTGACGCTGCCCCCGCTATTCAGCATATTTGCCTCAAGCACACAACATGCTTCCAGGATGTTGTGGTTGACGTGGATTGCGCAGAGAACACCAAAGAGGATCAATTGGCCGAAATCTCCTATCGTTTCCAAGGAAAGAAGGAGGCTGATCAGCCTTGGATTGTGGTTAATACCTCTACCTTGTTCGATGAGCTGGAGCTCGATCCTCCTGAGATCGAGCCCGGCGTGTTGAAGGTTCTCAGGACTGAGAAGCAGTATTTGGGGGTGTACATCTGGAATATGCGGGGTAGTGACGGAACGTCCACCTACGCCACTTTTCTTGTGACCTGGAAAGGCGATGAGAAGACACGTAACCCTACCCCTGCTGTGACTCCACAGCCAAGGGGTGCGGAGTTCCACATGTGGAATTATCACAGTCACGTGTTTAGCGTTGGCGATACGTTCAGTCTGGCAATGCATCTGCAGTATAAGATACACGAGGCGCCCTTTGATCTTCTGCTAGAATGGTTGTATGTCCCAATTGATCCAACCTGTCAGCCTATGAGGCTGTACAGCACTTGTCTGTACCATCCTAACGCTCCTCAATGTCTTTCGCACATGAACAGTGGGTGCACCTTCACATCTCCGCATCTGGCGCAGAGGGTGGCCTCCACCGTCTATCAGAATTGCGAACACGCCGATAACTATACCGCTTATTGTCTGGGGATTAGCCACATGGAGCCCAGCTTTGGGCTGATCCTGCACGACGGTGGGACGACTCTGAAGTTTGTGGACACTCCAGAGTCTCTCAGCGGTTTGTACGTGTTCGTGGTGTATTTCAATGGGCATGTCGAGGCCGTGGCCTACACCGTTGTAAGTACTGTGGATCACTTTGTGAATGCTATCGAGGAGCGTGGCTTCCCGCCCACGGCGGGACAGCCGCCTGCCACGACGAAGCCCAAGGAGATCACTCCAGTGAATCCTGGTACATCGCCTTTGATACGGTACGCAGCCTGGACTGGTGGTCTGGCTGCTGTCGTGCTCTTATGTCTGGTGATCTTTCTGATTTGTACTGCTAAGCGGATGCGAGTGAAGGCTTATCGGGTCGATAAGAGCCCATACAATCAGAGCATGTACTATGCTGGTCTCCCTGTGGATGATTTTGAAGATAGTGAGAGCACAGACACTGAGGAGGAGTTTGGCAATGCCATCGGTGGTAGCCACGGCGGATCTTCTTACACTGTCTATATCGACAAGACTCGT 40
gE MM_1DNA    TGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCAGTTGTGGGAGTTCTGATGGGGTTCGGTATCATCACTGGGACTCTCAGGATTACCAATCCTGTTCGCGCCTCTGTTTTACGCTATGATGACTTTCATATTGATGAGGATAAGCTCGACACAAACTCTGTGTACGAGCCTTATTATCATAGCGATCATGCAGAGTCGTCATGGGTAAATAGGGGTGAGAGTTCCCGCAAGGCTTATGATCATAACAGTCCTTATATCTGGCCAAGAAATGATTACGATGGTTTCTTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGTGTTTACAACCAGGGCAGGGGGATTGATTCTGGAGAGCGTCTTATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGACCTGGGTGATGACACTGGGATCCATGTGATTCCAACTCTTAATGGTGACGATCGCCATAAGATTGTGAACGTGGATCAGAGGCAGTATGGGGACGTTTTTAAGGGCGATCTCAATCCTAAGCCGCAGGGACAGAGGCTGATCGAGGTTTCTGTGGAGGAGAACCATCCCTTTACCTTGCGGGCTCCAATCCAAAGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAAACTTGGTCATTTCTGCCCTCGCTTACCTGCACTGGAGATGCTGCTCCCGCTATTCAACATATCTGTCTCAAGCACACCACGTGCTTCCAGGATGTGGTTGTAGACGTCGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAGGATCAGCTGGCTGAGATCAGTTACCGCTTCCAGGGGAAGAAGGAAGCTGATCAGCCTTGGATTGTTGTGAATACGTCTACACTGTTTGACGAGCTTGAACTGGACCCTCCAGAAATCGAGCCAGGTGTGTTGAAAGTGTTGAGGACTGAGAAACAGTACCTTGGAGTGTATATCTGGAATATGAGAGGTTCCGACGGGACCTCTACATATGCCACTTTCCTCGTGACGTGGAAGGGCGACGAGAAGACTCGGAATCCCACGCCGGCTGTGACCCCACAGCCGCGTGGGGCCGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCACGTGTTCTCTGTGGGCGACACGTTCAGTTTGGCCATGCACCTTCAGTACAAGATACACGAAGCCCCTTTTGATCTTCTGCTCGAATGGCTGTATGTGCCAATTGACCCGACGTGTCAGCCCATGAGATTATACTCTACGTGTTTATATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGGTGTACGTTCACAAGTCCTCATCTAGCGCAGCGCGTGGCTTCCACTGTCTATCAGAACTGTGAGCACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTTGGGCTGATTCTTCACGACGGTGGCACCACACTTAAGTTCGTGGACACTCCCGAGTCTTTAAGTGGGTTGTATGTTTTTGTGGTTTATTTCAATGGACACGTGGAAGCCGTGGCTTACACTGTGGTGAGTACTGTGGATCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTTCCTCCTACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCTAAGGAAATTACCCCGGTGAATCCAGGTACCTCGCCTCTTATCAGGTATGCAGCCTGGACCGGTGGTCTGGCTGCAGTCGTGCTACTATGCCTCGTGATTTTCTTGATCTGCACTGCTAAACGCATGCGTGTCAAGGCTTATAGGGTGGATAAATCCCCCTATAACCAGTCTATGTACTATGCTGGCCTTCCTGTGGACGACTTCGAGGATTCGGAGTCGACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGCAATGCGATCGGGGGGAGTCACGGGGGTAGTAGCTACACTGTGTATATCGATAAGACGAGG 41
gE MM_2DNA TAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCTGTGGTCGGAGTGTTGATGGGGTTTGGGATCATCACCGGGACATTGAGGATCACGAATCCTGTTCGTGCCTCGGTGTTGCGGTACGATGATTTCCACATAGATGAGGATAAGTTGGATACCAATTCCGTTTATGAGCCCTATTACCACTCTGACCACGCCGAATCATCTTGGGTGAACCGGGGTGAGTCTTCGCGCAAGGCTTATGATCATAATTCTCCATACATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTCCTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGCGTTTATAACCAAGGCAGGGGGATTGATTCTGGAGAGCGTCTTATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGACCTGGGTGATGACACTGGGATCCATGTGATTCCAACTCTTAATGGTGACGATCGCCATAAGATTGTGAACGTGGATCAGAGGCAGTATGGGGACGTTTTTAAGGGCGATCTCAATCCTAAGCCGCAGGGACAGAGGCTGATCGAGGTTTCTGTGGAGGAGAACCATCCCTTTACCTTGCGGGCTCCAATCCAAAGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAAACTTGGTCATTTCTGCCCTCGCTTACCTGCACTGGTGACGCTGCCCCTGCTATTCAGCATATATGCCTTAAGCATACAACTTGTTTTCAGGATGTGGTGGTGGATGTTGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAAGATCAGCTTGCCGAAATTTCTTACAGATTTCAGGGCAAAAAGGAAGCTGATCAACCTTGGATTGTTGTCAATACATCCACGCTTTTTGACGAGCTGGAGCTCGATCCCCCGGAAATCGAGCCTGGCGTGTTGAAGGTGCTGCGTACTGAGAAGCAATATCTTGGGGTGTATATCTGGAATATGCGGGGGTCGGACGGCACCAGTACCTATGCCACTTTCCTCGTGACGTGGAAGGGCGACGAGAAGACTCGGAATCCCACGCCGGCTGTGACCCCACAGCCGCGTGGGGCCGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCACGTGTTCTCTGTGGGCGACACGTTCAGTTTGGCCATGCACCTTCAGTACAAGATACACGAAGCCCCTTTTGATCTTCTGCTCGAATGGCTGTATGTGCCAATTGACCCGACGTGTCAGCCCATGAGATTATACTCTACGTGTTTATATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGGTGTACGTTCACAAGTCCCCACCTAGCCCAGCGGGTGGCCTCGACGGTGTACCAGAATTGTGAGCATGCTGACAACTATACGGCATACTGCCTCGGAATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTCGGGCTGATTCTGCATGACGGTGGAACTACACTTAAATTCGTGGACACTCCTGAGTCGCTTAGCGGGTTGTACGTGTTTGTAGTGTATTTCAATGGTCATGTTGAGGCAGTGGCTTATACCGTTGTCAGCACTGTTGATCATTTTGTGAACGCCATTGAGGAGCGGGGGTTCCCGCCTACGGCTGGGCAACCCCCCGCTACGACTAAGCCCAAAGAGATTACACCAGTGAACCCTGGCACAAGCCCCCTGATTAGGTATGCTGCCTGGACAGGCGGGCTTGCTGCCGTGGTGTTGCTGTGTCTAGTCATCTTTTTGATCTGCACTGCCAAGCGGATGCGGGTCAAGGCTTATCGGGTTGACAAGTCTCCGTATAATCAGTCGATGTATTACGCAGGCCTTCCTGTGGATGATTTTGAGGACTCTGAGTCCACAGACACCGAGGAGGAGTTTGGTAATGCTATTGGCGGTAGTCACGGGGGGTCGTCATATACAGTGTATATCGACAAGACTCGG 42
gE MM_3DNA    TGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCAGTTGTGGGAGTTCTGATGGGGTTCGGTATCATCACTGGGACTCTCAGGATTACCAATCCTGTTCGCGCCTCTGTTTTACGCTATGATGACTTTCATATTGATGAGGATAAGCTCGACACAAACTCTGTGTACGAGCCTTATTATCATAGCGATCATGCAGAGTCGTCATGGGTAAATAGGGGTGAGAGTTCCCGCAAGGCTTATGATCATAACAGTCCTTATATCTGGCCAAGAAATGATTACGATGGTTTCTTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGTGTTTACAACCAGGGTCGGGGTATCGACTCTGGCGAGAGATTGATGCAACCGACCCAAATGAGTGCGCAGGAGGACCTAGGCGATGATACCGGGATTCACGTGATTCCTACTCTGAATGGCGACGACAGACACAAGATTGTCAATGTTGATCAGCGGCAGTACGGGGATGTGTTCAAGGGTGACCTCAATCCGAAGCCTCAGGGGCAGAGGCTCATTGAGGTTTCGGTTGAGGAGAATCATCCTTTTACACTCCGTGCTCCTATTCAGAGGATTTACGGGGTCCGGTATACAGAGACCTGGTCTTTTCTGCCGTCACTTACTTGCACTGGAGATGCTGCTCCCGCTATTCAACATATCTGTCTCAAGCACACCACGTGCTTCCAGGATGTGGTTGTAGACGTCGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAGGATCAGCTGGCTGAGATCAGTTACCGCTTCCAGGGGAAGAAGGAAGCTGATCAGCCTTGGATTGTTGTGAATACGTCTACACTGTTTGACGAGCTTGAACTGGACCCTCCAGAAATCGAGCCAGGTGTGTTGAAAGTGTTGAGGACTGAGAAACAGTACCTTGGAGTGTATATCTGGAATATGAGAGGTTCCGACGGGACCTCTACATATGCCACTTTCCTCGTGACGTGGAAGGGCGACGAGAAGACTCGGAATCCCACGCCGGCTGTGACCCCACAGCCGCGTGGGGCCGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCACGTGTTCTCTGTGGGCGACACGTTCAGTTTGGCCATGCACCTTCAGTACAAGATACACGAAGCCCCTTTTGATCTTCTGCTCGAATGGCTGTATGTGCCAATTGACCCGACGTGTCAGCCCATGAGATTATACTCTACGTGTTTATATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGGTGTACGTTCACAAGTCCTCATCTAGCGCAGCGCGTGGCTTCCACTGTCTATCAGAACTGTGAGCACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTTGGGCTGATTCTTCACGACGGTGGCACCACACTTAAGTTCGTGGACACTCCCGAGTCTTTAAGTGGGTTGTATGTTTTTGTGGTTTATTTCAATGGACACGTGGAAGCCGTGGCTTACACTGTGGTGAGTACTGTGGATCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTTCCTCCTACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCTAAGGAAATTACCCCGGTGAATCCAGGTACCTCGCCTCTTATCAGGTATGCAGCCTGGACCGGTGGTCTGGCTGCAGTCGTGCTACTATGCCTCGTGATTTTCTTGATCTGCACTGCTAAACGCATGCGTGTCAAGGCTTATAGGGTGGATAAATCCCCCTATAACCAGTCTATGTACTATGCTGGCCTTCCTGTGGACGACTTCGAGGATTCGGAGTCGACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGCAATGCGATCGGGGGGAGTCACGGGGGTAGTAGCTACACTGTGTATATCGATAAGACGAGG 43
gE MM_4DNA    TGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCTGTGGTCGGAGTGTTGATGGGGTTTGGGATCATCACCGGGACATTGAGGATCACGAATCCTGTTCGTGCCTCGGTGTTGCGGTACGATGATTTCCACATAGATGAGGATAAGTTGGATACCAATTCCGTTTATGAGCCCTATTACCACTCTGACCACGCCGAATCATCTTGGGTGAACCGGGGTGAGTCTTCGCGCAAGGCTTATGATCATAATTCTCCATACATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTCCTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGCGTTTATAACCAAGGCAGGGGGATTGATTCTGGAGAGCGTCTTATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGACCTGGGTGATGACACTGGGATCCATGTGATTCCAACTCTTAATGGTGACGATCGCCATAAGATTGTGAACGTGGATCAGAGGCAGTATGGGGACGTTTTTAAGGGCGATCTCAATCCTAAGCCGCAGGGACAGAGGCTGATCGAGGTTTCTGTGGAGGAGAACCATCCCTTTACCTTGCGGGCTCCAATCCAAAGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAAACTTGGTCATTTCTGCCCTCGCTTACCTGCACTGGTGACGCTGCCCCTGCTATTCAGCATATATGCCTTAAGCATACAACTTGTTTTCAGGATGTGGTGGTGGATGTTGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAAGATCAGCTTGCCGAAATTTCTTACAGATTTCAGGGCAAAAAGGAAGCTGATCAACCTTGGATTGTTGTCAATACATCCACGCTTTTTGACGAGCTGGAGCTCGATCCCCCGGAAATCGAGCCTGGCGTGTTGAAGGTGCTGCGTACTGAGAAGCAATATCTTGGGGTGTATATCTGGAATATGCGGGGGTCGGACGGCACCAGTACCTATGCCACTTTCCTCGTGACGTGGAAGGGCGACGAGAAGACTCGGAATCCCACGCCGGCTGTGACCCCACAGCCGCGTGGGGCCGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCACGTGTTCTCTGTGGGCGACACGTTCAGTTTGGCCATGCACCTTCAGTACAAGATACACGAAGCCCCTTTTGATCTTCTGCTCGAATGGCTGTATGTGCCAATTGACCCGACGTGTCAGCCCATGAGATTATACTCTACGTGTTTATATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGGTGTACGTTCACAAGTCCCCACCTAGCCCAGCGGGTGGCCTCGACGGTGTACCAGAATTGTGAGCATGCTGACAACTATACGGCATACTGCCTCGGAATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTCGGGCTGATTCTGCATGACGGTGGAACTACACTTAAATTCGTGGACACTCCTGAGTCGCTTAGCGGGTTGTACGTGTTTGTAGTGTATTTCAATGGTCATGTTGAGGCAGTGGCTTATACCGTTGTCAGCACTGTTGATCATTTTGTGAACGCCATTGAGGAGCGGGGGTTCCCGCCTACGGCTGGGCAACCCCCCGCTACGACTAAGCCTAAGGAAATTACCCCGGTGAATCCAGGTACCTCGCCTCTTATCAGGTATGCAGCCTGGACCGGTGGTCTGGCTGCAGTCGTGCTACTATGCCTCGTGATTTTCTTGATCTGCACTGCTAAACGCATGCGTGTCAAGGCTTATAGGGTGGATAAATCCCCCTATAACCAGTCTATGTACTATGCTGGCCTTCCTGTGGACGACTTCGAGGATTCGGAGTCGACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGCAATGCGATCGGGGGGAGTCACGGGGGTAGTAGCTACACTGTGTATATCGATAAGACGAGG 44
gE MM_5DNA    TAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCTGTGGTCGGAGTGTTGATGGGGTTTGGGATCATCACCGGGACATTGAGGATCACGAATCCTGTTCGTGCCTCGGTGTTGCGGTACGATGATTTCCACATAGATGAGGATAAGTTGGATACCAATTCCGTTTATGAGCCCTATTACCACTCTGACCACGCCGAATCATCTTGGGTGAACCGGGGTGAGTCTTCGCGCAAGGCTTATGATCATAATTCTCCATACATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTCCTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGCGTTTATAACCAAGGTCGGGGTATCGACTCTGGCGAGAGATTGATGCAACCGACCCAAATGAGTGCGCAGGAGGACCTAGGCGATGATACCGGGATTCACGTGATTCCTACTCTGAATGGCGACGACAGACACAAGATTGTCAATGTTGATCAGCGGCAGTACGGGGATGTGTTCAAGGGTGACCTCAATCCGAAGCCTCAGGGGCAGAGGCTCATTGAGGTTTCGGTTGAGGAGAATCATCCTTTTACACTCCGTGCTCCTATTCAGAGGATTTACGGGGTCCGGTATACAGAGACCTGGTCTTTTCTGCCGTCACTTACTTGCACTGGTGACGCTGCCCCTGCTATTCAGCATATATGCCTTAAGCATACAACTTGTTTTCAGGATGTGGTGGTGGATGTTGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAAGATCAGCTTGCCGAAATTTCTTACAGATTTCAGGGCAAAAAGGAAGCTGATCAACCTTGGATTGTTGTCAATACATCCACGCTTTTTGACGAGCTGGAGCTCGATCCCCCGGAAATCGAGCCTGGCGTGTTGAAGGTGCTGCGTACTGAGAAGCAATATCTTGGGGTGTATATCTGGAATATGCGGGGGTCGGACGGCACCAGTACCTATGCCACCTTTCTAGTAACCTGGAAGGGTGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCTGCTGTGACTCCGCAGCCTAGGGGTGCGGAGTTCCACATGTGGAATTACCATTCCCATGTGTTTTCCGTGGGTGATACGTTCAGTCTGGCTATGCACCTCCAGTATAAGATACACGAAGCTCCTTTTGATCTTCTACTGGAATGGCTGTATGTGCCGATTGACCCTACGTGTCAGCCCATGAGATTGTATTCGACGTGTTTGTATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGCGGATGCACTTTCACCAGTCCCCACCTAGCCCAGCGGGTGGCCTCGACGGTGTACCAGAATTGTGAGCATGCTGACAACTATACGGCATACTGCCTCGGAATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTCGGGCTGATTCTGCATGACGGTGGAACTACACTTAAATTCGTGGACACTCCTGAGTCGCTTAGCGGGTTGTACGTGTTTGTAGTGTATTTCAATGGTCATGTTGAGGCAGTGGCTTATACCGTTGTCAGCACTGTTGATCATTTTGTGAACGCCATTGAGGAGCGGGGGTTCCCGCCTACGGCTGGGCAACCCCCCGCTACGACTAAGCCCAAAGAGATTACACCAGTGAACCCTGGCACAAGCCCCCTGATTAGGTATGCTGCCTGGACAGGCGGGCTTGCTGCCGTGGTGTTGCTGTGTCTAGTCATCTTTTTGATCTGCACTGCCAAGCGGATGCGGGTCAAGGCTTATCGGGTTGACAAGTCTCCGTATAATCAGTCGATGTATTACGCAGGCCTTCCTGTGGATGATTTTGAGGACTCTGAGTCCACAGACACCGAGGAGGAGTTTGGTAATGCTATTGGCGGTAGTCACGGGGGGTCGTCATATACAGTGTATATCGACAAGACTCGG 45
gE MM_6DNA TGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCAGTTGTGGGAGTTCTGATGGGGTTCGGTATCATCACTGGGACTCTCAGGATTACCAATCCTGTTCGCGCCTCTGTTTTACGCTATGATGACTTTCATATTGATGAGGATAAGCTCGACACAAACTCTGTGTACGAGCCTTATTATCATAGCGATCATGCAGAGTCGTCATGGGTAAATAGGGGTGAGAGTTCCCGCAAGGCTTATGATCATAACAGTCCTTATATCTGGCCAAGAAATGATTACGATGGTTTCTTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGTGTTTACAACCAGGGCAGGGGGATTGATTCTGGAGAGCGTCTTATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGACCTGGGTGATGACACTGGGATCCATGTGATTCCAACTCTTAATGGTGACGATCGCCATAAGATTGTGAACGTGGATCAGAGGCAGTATGGGGACGTTTTTAAGGGCGATCTCAATCCTAAGCCGCAGGGACAGAGGCTGATCGAGGTTTCTGTGGAGGAGAACCATCCCTTTACCTTGCGGGCTCCAATCCAAAGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAAACTTGGTCATTTCTGCCCTCGCTTACCTGCACTGGTGACGCTGCCCCTGCTATTCAGCATATATGCCTTAAGCATACAACTTGTTTTCAGGATGTGGTGGTGGATGTTGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAAGATCAGCTTGCCGAAATTTCTTACAGATTTCAGGGCAAAAAGGAAGCTGATCAACCTTGGATTGTTGTCAATACATCCACGCTTTTTGACGAGCTGGAGCTCGATCCCCCGGAAATCGAGCCTGGCGTGTTGAAGGTGCTGCGTACTGAGAAGCAATATCTTGGGGTGTATATCTGGAATATGCGGGGGTCGGACGGCACCAGTACCTATGCCACTTTCCTCGTGACGTGGAAGGGCGACGAGAAGACTCGGAATCCCACGCCGGCTGTGACCCCACAGCCGCGTGGGGCCGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCACGTGTTCTCTGTGGGCGACACGTTCAGTTTGGCCATGCACCTTCAGTACAAGATACACGAAGCCCCTTTTGATCTTCTGCTCGAATGGCTGTATGTGCCAATTGACCCGACGTGTCAGCCCATGAGATTATACTCTACGTGTTTATATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGGTGTACGTTCACAAGTCCTCATCTAGCGCAGCGCGTGGCTTCCACTGTCTATCAGAACTGTGAGCACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTTGGGCTGATTCTTCACGACGGTGGCACCACACTTAAGTTCGTGGACACTCCCGAGTCTTTAAGTGGGTTGTATGTTTTTGTGGTTTATTTCAATGGACACGTGGAAGCCGTGGCTTACACTGTGGTGAGTACTGTGGATCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTTCCTCCTACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCTAAGGAAATTACCCCGGTGAATCCAGGTACCTCGCCTCTTATCAGGTATGCAGCCTGGACCGGTGGTCTGGCTGCAGTCGTGCTACTATGCCTCGTGATTTTCTTGATCTGCACTGCTAAACGCATGCGTGTCAAGGCTTATAGGGTGGATAAATCCCCCTATAACCAGTCTATGTACTATGCTGGCCTTCCTGTGGACGACTTCGAGGATTCGGAGTCGACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGCAATGCGATCGGGGGGAGTCACGGGGGTAGTAGCTACACTGTGTATATCGATAAGACGAGG 46
gE MM_7DNA TAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCTGTGGTCGGAGTGTTGATGGGGTTTGGGATCATCACCGGGACATTGAGGATCACGAATCCTGTTCGTGCCTCGGTGTTGCGGTACGATGATTTCCACATAGATGAGGATAAGTTGGATACCAATTCCGTTTATGAGCCCTATTACCACTCTGACCACGCCGAATCATCTTGGGTGAACCGGGGTGAGTCTTCGCGCAAGGCTTATGATCATAATTCTCCATACATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTCCTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGCGTTTATAACCAAGGCAGGGGGATTGATTCTGGAGAGCGTCTTATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGACCTGGGTGATGACACTGGGATCCATGTGATTCCAACTCTTAATGGTGACGATCGCCATAAGATTGTGAACGTGGATCAGAGGCAGTATGGGGACGTTTTTAAGGGCGATCTCAATCCTAAGCCGCAGGGACAGAGGCTGATCGAGGTTTCTGTGGAGGAGAACCATCCCTTTACCTTGCGGGCTCCAATCCAAAGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAAACTTGGTCATTTCTGCCCTCGCTTACCTGCACTGGAGATGCTGCTCCCGCTATTCAACATATCTGTCTCAAGCACACCACGTGCTTCCAGGATGTGGTTGTAGACGTCGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAGGATCAGCTGGCTGAGATCAGTTACCGCTTCCAGGGGAAGAAGGAAGCTGATCAGCCTTGGATTGTTGTGAATACGTCTACACTGTTTGACGAGCTTGAACTGGACCCTCCAGAAATCGAGCCAGGTGTGTTGAAAGTGTTGAGGACTGAGAAACAGTACCTTGGAGTGTATATCTGGAATATGAGAGGTTCCGACGGGACCTCTACATATGCCACCTTTCTAGTAACCTGGAAGGGTGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCTGCTGTGACTCCGCAGCCTAGGGGTGCGGAGTTCCACATGTGGAATTACCATTCCCATGTGTTTTCCGTGGGTGATACGTTCAGTCTGGCTATGCACCTCCAGTATAAGATACACGAAGCTCCTTTTGATCTTCTACTGGAATGGCTGTATGTGCCGATTGACCCTACGTGTCAGCCCATGAGATTGTATTCGACGTGTTTGTATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGCGGATGCACTTTCACCAGTCCCCACCTAGCCCAGCGGGTGGCCTCGACGGTGTACCAGAATTGTGAGCATGCTGACAACTATACGGCATACTGCCTCGGAATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTCGGGCTGATTCTGCATGACGGTGGAACTACACTTAAATTCGTGGACACTCCTGAGTCGCTTAGCGGGTTGTACGTGTTTGTAGTGTATTTCAATGGTCATGTTGAGGCAGTGGCTTATACCGTTGTCAGCACTGTTGATCATTTTGTGAACGCCATTGAGGAGCGGGGGTTCCCGCCTACGGCTGGGCAACCCCCCGCTACGACTAAGCCCAAAGAGATTACACCAGTGAACCCTGGCACAAGCCCCCTGATTAGGTATGCTGCCTGGACAGGCGGGCTTGCTGCCGTGGTGTTGCTGTGTCTAGTCATCTTTTTGATCTGCACTGCCAAGCGGATGCGGGTCAAGGCTTATCGGGTTGACAAGTCTCCGTATAATCAGTCGATGTATTACGCAGGCCTTCCTGTGGATGATTTTGAGGACTCTGAGTCCACAGACACCGAGGAGGAGTTTGGTAATGCTATTGGCGGTAGTCACGGGGGGTCGTCATATACAGTGTATATCGACAAGACTCGG 47
gE MM_8DNA TGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCTGTGGTCGGAGTGTTGATGGGGTTTGGGATCATCACCGGGACATTGAGGATCACGAATCCTGTTCGTGCCTCGGTGTTGCGGTACGATGATTTCCACATAGATGAGGATAAGTTGGATACCAATTCCGTTTATGAGCCCTATTACCACTCTGACCACGCCGAATCATCTTGGGTGAACCGGGGTGAGTCTTCGCGCAAGGCTTATGATCATAATTCTCCATACATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTCCTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGCGTTTATAACCAAGGCAGGGGGATTGATTCTGGAGAGCGTCTTATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGACCTGGGTGATGACACTGGGATCCATGTGATTCCAACTCTTAATGGTGACGATCGCCATAAGATTGTGAACGTGGATCAGAGGCAGTATGGGGACGTTTTTAAGGGCGATCTCAATCCTAAGCCGCAGGGACAGAGGCTGATCGAGGTTTCTGTGGAGGAGAACCATCCCTTTACCTTGCGGGCTCCAATCCAAAGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAAACTTGGTCATTTCTGCCCTCGCTTACCTGCACTGGAGATGCTGCTCCCGCTATTCAACATATCTGTCTCAAGCACACCACGTGCTTCCAGGATGTGGTTGTAGACGTCGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAGGATCAGCTGGCTGAGATCAGTTACCGCTTCCAGGGGAAGAAGGAAGCTGATCAGCCTTGGATTGTTGTGAATACGTCTACACTGTTTGACGAGCTTGAACTGGACCCTCCAGAAATCGAGCCAGGTGTGTTGAAAGTGTTGAGGACTGAGAAACAGTACCTTGGAGTGTATATCTGGAATATGAGAGGTTCCGACGGGACCTCTACATATGCCACTTTCCTCGTGACGTGGAAGGGCGACGAGAAGACTCGGAATCCCACGCCGGCTGTGACCCCACAGCCGCGTGGGGCCGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCACGTGTTCTCTGTGGGCGACACGTTCAGTTTGGCCATGCACCTTCAGTACAAGATACACGAAGCCCCTTTTGATCTTCTGCTCGAATGGCTGTATGTGCCAATTGACCCGACGTGTCAGCCCATGAGATTATACTCTACGTGTTTATATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGTGGGTGTACGTTCACAAGTCCTCATCTAGCGCAGCGCGTGGCTTCCACTGTCTATCAGAACTGTGAGCACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTTGGGCTGATTCTTCACGACGGTGGCACCACACTTAAGTTCGTGGACACTCCCGAGTCTTTAAGTGGGTTGTATGTTTTTGTGGTTTATTTCAATGGACACGTGGAAGCCGTGGCTTACACTGTGGTGAGTACTGTGGATCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTTCCTCCTACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCTAAGGAAATTACCCCGGTGAATCCAGGTACCTCGCCTCTTATCAGGTATGCAGCCTGGACCGGTGGTCTGGCTGCAGTCGTGCTACTATGCCTCGTGATTTTCTTGATCTGCACTGCTAAACGCATGCGTGTCAAGGCTTATAGGGTGGATAAATCCCCCTATAACCAGTCTATGTACTATGCTGGCCTTCCTGTGGACGACTTCGAGGATTCGGAGTCGACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGCAATGCGATCGGGGGGAGTCACGGGGGTAGTAGCTACACTGTGTATATCGATAAGACGAGG 48
gE MM_9DNA TAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCAGTTGTGGGAGTTCTGATGGGGTTCGGTATCATCACTGGGACTCTCAGGATTACCAATCCTGTTCGCGCCTCTGTTTTACGCTATGATGACTTTCATATTGATGAGGATAAGCTCGACACAAACTCTGTGTACGAGCCTTATTATCATAGCGATCATGCAGAGTCGTCATGGGTAAATAGGGGTGAGAGTTCCCGCAAGGCTTATGATCATAACAGTCCTTATATCTGGCCAAGAAATGATTACGATGGTTTCTTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGTGTTTACAACCAGGGTCGGGGTATCGACTCTGGCGAGAGATTGATGCAACCGACCCAAATGAGTGCGCAGGAGGACCTAGGCGATGATACCGGGATTCACGTGATTCCTACTCTGAATGGCGACGACAGACACAAGATTGTCAATGTTGATCAGCGGCAGTACGGGGATGTGTTCAAGGGTGACCTCAATCCGAAGCCTCAGGGGCAGAGGCTCATTGAGGTTTCGGTTGAGGAGAATCATCCTTTTACACTCCGTGCTCCTATTCAGAGGATTTACGGGGTCCGGTATACAGAGACCTGGTCTTTTCTGCCGTCACTTACTTGCACTGGAGATGCTGCTCCCGCTATTCAACATATCTGTCTCAAGCACACCACGTGCTTCCAGGATGTGGTTGTAGACGTCGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAGGATCAGCTGGCTGAGATCAGTTACCGCTTCCAGGGGAAGAAGGAAGCTGATCAGCCTTGGATTGTTGTGAATACGTCTACACTGTTTGACGAGCTTGAACTGGACCCTCCAGAAATCGAGCCAGGTGTGTTGAAAGTGTTGAGGACTGAGAAACAGTACCTTGGAGTGTATATCTGGAATATGAGAGGTTCCGACGGGACCTCTACATATGCCACCTTTCTAGTAACCTGGAAGGGTGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCTGCTGTGACTCCGCAGCCTAGGGGTGCGGAGTTCCACATGTGGAATTACCATTCCCATGTGTTTTCCGTGGGTGATACGTTCAGTCTGGCTATGCACCTCCAGTATAAGATACACGAAGCTCCTTTTGATCTTCTACTGGAATGGCTGTATGTGCCGATTGACCCTACGTGTCAGCCCATGAGATTGTATTCGACGTGTTTGTATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGCGGATGCACTTTCACCAGTCCTCATCTAGCGCAGCGCGTGGCTTCCACTGTCTATCAGAACTGTGAGCACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTTGGGCTGATTCTTCACGACGGTGGCACCACACTTAAGTTCGTGGACACTCCCGAGTCTTTAAGTGGGTTGTATGTTTTTGTGGTTTATTTCAATGGACACGTGGAAGCCGTGGCTTACACTGTGGTGAGTACTGTGGATCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTTCCTCCTACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGATTACACCAGTGAACCCTGGCACAAGCCCCCTGATTAGGTATGCTGCCTGGACAGGCGGGCTTGCTGCCGTGGTGTTGCTGTGTCTAGTCATCTTTTTGATCTGCACTGCCAAGCGGATGCGGGTCAAGGCTTATCGGGTTGACAAGTCTCCGTATAATCAGTCGATGTATTACGCAGGCCTTCCTGTGGATGATTTTGAGGACTCTGAGTCCACAGACACCGAGGAGGAGTTTGGTAATGCTATTGGCGGTAGTCACGGGGGGTCGTCATATACAGTGTATATCGACAAGACTCGG 49
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gE MM_31DNA TGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCTGTGGTCGGAGTGTTGATGGGGTTTGGGATCATCACCGGGACATTGAGGATCACGAATCCTGTTCGTGCCTCGGTGTTGCGGTACGATGATTTCCACATAGATGAGGATAAGTTGGATACCAATTCCGTTTATGAGCCCTATTACCACTCTGACCACGCCGAATCATCTTGGGTGAACCGGGGTGAGTCTTCGCGCAAGGCTTATGATCATAATTCTCCATACATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTCCTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGCGTTTATAACCAAGGCAGGGGGATTGATTCTGGAGAGCGTCTTATGCAGCCTACCCAGATGTCCGCCCAGGAGGACCTGGGTGATGACACTGGGATCCATGTGATTCCAACTCTTAATGGTGACGATCGCCATAAGATTGTGAACGTGGATCAGAGGCAGTATGGGGACGTTTTTAAGGGCGATCTCAATCCTAAGCCGCAGGGACAGAGGCTGATCGAGGTTTCTGTGGAGGAGAACCATCCCTTTACCTTGCGGGCTCCAATCCAAAGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAAACTTGGTCATTTCTGCCCTCGCTTACCTGCACTGGAGATGCTGCTCCCGCTATTCAACATATCTGTCTCAAGCACACCACGTGCTTCCAGGATGTGGTTGTAGACGTCGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAGGATCAGCTGGCTGAGATCAGTTACCGCTTCCAGGGGAAGAAGGAAGCTGATCAGCCTTGGATTGTTGTGAATACGTCTACACTGTTTGACGAGCTTGAACTGGACCCTCCAGAAATCGAGCCAGGTGTGTTGAAAGTGTTGAGGACTGAGAAACAGTACCTTGGAGTGTATATCTGGAATATGAGAGGTTCCGACGGGACCTCTACATATGCCACCTTTCTAGTAACCTGGAAGGGTGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCTGCTGTGACTCCGCAGCCTAGGGGTGCGGAGTTCCACATGTGGAATTACCATTCCCATGTGTTTTCCGTGGGTGATACGTTCAGTCTGGCTATGCACCTCCAGTATAAGATACACGAAGCTCCTTTTGATCTTCTACTGGAATGGCTGTATGTGCCGATTGACCCTACGTGTCAGCCCATGAGATTGTATTCGACGTGTTTGTATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGCGGATGCACTTTCACCAGTCCCCACCTAGCCCAGCGGGTGGCCTCGACGGTGTACCAGAATTGTGAGCATGCTGACAACTATACGGCATACTGCCTCGGAATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTCGGGCTGATTCTGCATGACGGTGGAACTACACTTAAATTCGTGGACACTCCTGAGTCGCTTAGCGGGTTGTACGTGTTTGTAGTGTATTTCAATGGTCATGTTGAGGCAGTGGCTTATACCGTTGTCAGCACTGTTGATCATTTTGTGAACGCCATTGAGGAGCGGGGGTTCCCGCCTACGGCTGGGCAACCCCCCGCTACGACTAAGCCTAAGGAAATTACCCCGGTGAATCCAGGTACCTCGCCTCTTATCAGGTATGCAGCCTGGACCGGTGGTCTGGCTGCAGTCGTGCTACTATGCCTCGTGATTTTCTTGATCTGCACTGCTAAACGCATGCGTGTCAAGGCTTATAGGGTGGATAAATCCCCCTATAACCAGTCTATGTACTATGCTGGCCTTCCTGTGGACGACTTCGAGGATTCGGAGTCGACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGCAATGCGATCGGGGGGAGTCACGGGGGTAGTAGCTACACTGTGTATATCGATAAGACGAGG 71
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gE MM_62DNA TGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACTGTTAATAAGCCTGTGGTCGGAGTGTTGATGGGGTTTGGGATCATCACCGGGACATTGAGGATCACGAATCCTGTTCGTGCCTCGGTGTTGCGGTACGATGATTTCCACATAGATGAGGATAAGTTGGATACCAATTCCGTTTATGAGCCCTATTACCACTCTGACCACGCCGAATCATCTTGGGTGAACCGGGGTGAGTCTTCGCGCAAGGCTTATGATCATAATTCTCCATACATATGGCCAAGAAATGATTATGATGGTTTCCTGGAGAATGCCCATGAGCATCATGGCGTTTATAACCAAGGTCGGGGTATCGACTCTGGCGAGAGATTGATGCAACCGACCCAAATGAGTGCGCAGGAGGACCTAGGCGATGATACCGGGATTCACGTGATTCCTACTCTGAATGGCGACGACAGACACAAGATTGTCAATGTTGATCAGCGGCAGTACGGGGATGTGTTCAAGGGTGACCTCAATCCGAAGCCTCAGGGGCAGAGGCTCATTGAGGTTTCGGTTGAGGAGAATCATCCTTTTACACTCCGTGCTCCTATTCAGAGGATTTACGGGGTCCGGTATACAGAGACCTGGTCTTTTCTGCCGTCACTTACTTGCACTGGTGACGCTGCCCCTGCTATTCAGCATATATGCCTTAAGCATACAACTTGTTTTCAGGATGTGGTGGTGGATGTTGATTGCGCTGAGAATACCAAGGAAGATCAGCTTGCCGAAATTTCTTACAGATTTCAGGGCAAAAAGGAAGCTGATCAACCTTGGATTGTTGTCAATACATCCACGCTTTTTGACGAGCTGGAGCTCGATCCCCCGGAAATCGAGCCTGGCGTGTTGAAGGTGCTGCGTACTGAGAAGCAATATCTTGGGGTGTATATCTGGAATATGCGGGGGTCGGACGGCACCAGTACCTATGCCACCTTTCTAGTAACCTGGAAGGGTGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCTGCTGTGACTCCGCAGCCTAGGGGTGCGGAGTTCCACATGTGGAATTACCATTCCCATGTGTTTTCCGTGGGTGATACGTTCAGTCTGGCTATGCACCTCCAGTATAAGATACACGAAGCTCCTTTTGATCTTCTACTGGAATGGCTGTATGTGCCGATTGACCCTACGTGTCAGCCCATGAGATTGTATTCGACGTGTTTGTATCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTGAGTCATATGAACAGCGGATGCACTTTCACCAGTCCTCATCTAGCGCAGCGCGTGGCTTCCACTGTCTATCAGAACTGTGAGCACGCAGACAACTATACAGCCTACTGTCTGGGGATTAGCCACATGGAGCCAAGCTTTGGGCTGATTCTTCACGACGGTGGCACCACACTTAAGTTCGTGGACACTCCCGAGTCTTTAAGTGGGTTGTATGTTTTTGTGGTTTATTTCAATGGACACGTGGAAGCCGTGGCTTACACTGTGGTGAGTACTGTGGATCACTTCGTGAATGCCATCGAGGAGCGGGGGTTTCCTCCTACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCTAAGGAAATTACCCCGGTGAATCCAGGTACCTCGCCTCTTATCAGGTATGCAGCCTGGACCGGTGGTCTGGCTGCAGTCGTGCTACTATGCCTCGTGATTTTCTTGATCTGCACTGCTAAACGCATGCGTGTCAAGGCTTATAGGGTGGATAAATCCCCCTATAACCAGTCTATGTACTATGCTGGCCTTCCTGTGGACGACTTCGAGGATTCGGAGTCGACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGCAATGCGATCGGGGGGAGTCACGGGGGTAGTAGCTACACTGTGTATATCGATAAGACGAGG 102
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gE FO_D15_3DNA TAGTAG (SEQ ID NO: 294)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACTGTCAACAAGCCTGTGGTTGGAGTGCTGATGGGGTTTGGTATAATCACAGGTACCTTGAGGATAACCAATCCTGTTAGGGCCTCTGTGCTGCGCTATGATGACTTCCACATTGATGAGGATAAACTAGACACTAACAGCGTGTACGAACCATATTACCATAGCGACCATGCCGAGTCCTCCTGGGTGAATAGGGGTGAGTCTTCCAGGAAGGCCTACGATCACAATAGTCCATACATCTGGCCCCGGAATGACTATGATGGCTTTCTTGAGAACGCACACGAGCATCACGGTGTTTATAACCAGGGTCGCGGAATTGACAGTGGTGAGAGGTTGATGCAGCCTACTCAGATGTCCGCTCAGGAGGACTTGGGCGACGATACTGGGATCCATGTCATCCCGACCCTGAACGGTGATGACAGACATAAGATTGTGAATGTGGACCAGAGGCAGTATGGCGATGTGTTTAAAGGGGACCTGAATCCAAAGCCTCAGGGACAGAGGCTGATTGAGGTCTCTGTGGAGGAGAATCATCCCTTCACTCTGCGTGCTCCCATTCAGAGAATTTACGGCGTTCGGTACACTGAAACTTGGTCTTTTCTGCCTAGTCTTACATGTACCGGAGACGCCGCTCCGGCCATCCAGCACATATGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGATGTGGTGGTGGACGTGGACTGTGCAGAAAACACCAAGGAAGACCAACTTGCTGAAATCAGCTACCGGTTTCAGGGCAAGAAGGAAGCAGACCAACCGTGGATTGTCGTCAACACATCCACTTTGTTTGACGAGCTGGAGCTGGATCCTCCCGAGATCGAACCCGGCGTGCTGAAAGTGCTTCGTACTGAAAAGCAGTATCTCGGAGTTTATATTTGGAACATGAGGGGTAGTGACGGTACAAGCACGTATGCTACCTTTCTGGTGACTTGGAAGGGCGACGAGAAGACGCGGAACCCTACCCCTGCTGTGACGCCACAGCCTAGGGGAGCCGAGTTTCACATGTGGAACTACCATTCTCACGTGTTTAGTGTGGGAGATACGTTTTCCCTGGCTATGCACCTCCAGTACAAGATCCACGAAGCGCCCTTCGATCTTCTGCTGGAGTGGCTCTACGTGCCCATAGATCCAACTTGTCAGCCCATGAGATTGTACAGTACATGCCTGTACCATCCAAATGCCCCTCAATGTCTGAGCCATATGAACTCTGGATGCACTTTCACGTCACCCCATCTTGCCCAGCGGGTTGCGTCTACGGTGTACCAGAACTGTGAACACGCTGATAATTACACCGCCTACTGCCTAGGGATCTCCCATATGGAACCTAGTTTCGGTCTAATCCTCCATGACGGCGGCACCACTCTCAAGTTCGTGGATACACCTGAAAGCCTGAGCGGTCTCTACGTGTTTGTTGTCTACTTTAACGGGCACGTAGAGGCCGTGGCTTACACTGTTGTGTCGACCGTCGATCATTTTGTGAATGCGATCGAGGAGCGCGGGTTTCCTCCGACAGCCGGACAGCCCCCTGCCACGACTAAGCCTAAGGAGATTACCCCTGTGAATCCAGGAACCAGTCCCCTGATTCGGTATGCTGCGTGGACCGGCGGTCTGGCCGCTGTGGTGCTGTTGTGTCTGGTAATCTTTCTTATTTGCACTGCCAAACGCATGCGAGTCAAGGCTTATCGGGTGGATAAGTCGCCCTACAACCAGTCTATGTACTATGCCGGACTTCCCGTGGACGATTTTGAGGACTCAGAATCTACGGACACAGAGGAGGAGTTTGGGAACGCGATAGGAGGATCCCATGGGGGCTCCTCCTATACTGTGTATATAGATAAGACTCGT 108
gE FO_D15_4DNA TGATAG (SEQ ID NO: 296)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGAACTGTCAATAAGCCTGTGGTGGGAGTGCTGATGGGATTCGGTATCATCACTGGAACCCTGAGGATCACCAATCCCGTTCGCGCTTCTGTGCTTCGCTATGACGATTTCCACATCGACGAAGATAAGCTAGACACTAACAGCGTGTACGAACCGTACTACCACAGCGACCACGCTGAGTCCTCTTGGGTGAACCGGGGTGAATCTTCTAGGAAGGCTTACGACCATAATAGTCCTTACATCTGGCCACGGAACGACTATGATGGTTTCCTCGAGAACGCACACGAGCATCATGGCGTTTACAACCAGGGGCGCGGAATTGACAGCGGTGAGAGGTTGATGCAGCCTACCCAAATGTCCGCTCAGGAGGATCTGGGAGACGACACGGGTATTCATGTGATTCCGACCTTAAATGGCGACGATCGCCATAAGATCGTGAATGTGGATCAAAGGCAATATGGTGATGTGTTTAAAGGTGATCTTAATCCGAAACCGCAAGGGCAGAGGTTGATTGAGGTCTCTGTTGAGGAGAACCACCCCTTCACTCTGCGCGCTCCAATTCAGCGGATTTACGGAGTTCGGTACACGGAGACTTGGTCTTTTCTGCCCAGTCTCACATGCACAGGGGATGCCGCTCCTGCCATTCAGCACATATGTCTGAAGCATACAACATGCTTTCAGGATGTGGTGGTGGATGTGGATTGTGCAGAGAACACTAAGGAAGATCAGCTTGCAGAGATTTCATACAGGTTTCAGGGCAAGAAAGAGGCAGACCAGCCCTGGATTGTCGTCAACACAAGTACATTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGATCCGCCCGAAATCGAGCCAGGGGTGCTGAAAGTGCTGCGCACAGAAAAGCAGTATCTGGGTGTTTATATATGGAACATGAGGGGTAGCGATGGTACCAGCACCTATGCAACATTTCTGGTGACCTGGAAAGGTGACGAAAAGACCAGAAACCCCACTCCCGCTGTGACCCCACAGCCACGGGGAGCGGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCCCATGTGTTTAGTGTAGGGGACACTTTCTCCCTCGCTATGCATCTCCAGTATAAGATCCATGAAGCACCGTTTGACTTGTTGCTGGAGTGGCTTTACGTGCCCATTGATCCAACTTGTCAGCCCATGAGATTGTATAGTACGTGCTTGTACCATCCCAATGCACCCCAGTGTCTCTCACATATGAACTCCGGATGTACTTTCACGTCACCTCACCTTGCCCAGCGGGTGGCTTCGACCGTGTACCAGAATTGTGAGCACGCGGATAACTACACCGCCTATTGCCTCGGTATCTCCCACATGGAACCTAGTTTCGGTCTGATTCTCCATGATGGCGGAACTACCCTTAAATTCGTGGACACCCCTGAGAGTCTGTCTGGCCTCTATGTATTCGTGGTGTACTTCAACGGACATGTGGAGGCCGTGGCGTACACTGTTGTGAGCACCGTGGACCACTTCGTGAATGCGATTGAGGAACGTGGCTTTCCCCCTACTGCTGGTCAGCCCCCTGCTACCACCAAGCCCAAGGAGATCACGCCCGTAAACCCAGGAACCAGCCCTCTGATTCGGTACGCTGCATGGACCGGAGGATTGGCCGCAGTGGTGCTGCTGTGTCTGGTTATTTTCCTTATTTGCACTGCCAAGCGGATGCGAGTTAAGGCCTATCGGGTTGATAAATCACCATACAATCAGTCAATGTACTATGCCGGACTCCCCGTGGATGATTTTGAGGATTCAGAGTCAACCGACACAGAGGAGGAGTTTGGGAATGCGATAGGAGGGAGTCACGGTGGCTCCTCCTATACCGTGTATATTGACAAGACTAGG 109
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gE FO_D15_8DNA TAGTAA (SEQ ID NO: 293)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACTGTCAATAAGCCAGTAGTGGGGGTCCTGATGGGGTTTGGTATTATTACTGGCACGCTCAGGATAACTAACCCTGTGAGGGCCTCTGTGCTGCGCTATGACGACTTTCACATCGATGAGGACAAACTAGATACCAACAGCGTGTATGAGCCATACTACCATTCTGACCATGCGGAGAGTAGTTGGGTGAATAGGGGTGAGTCTTCCCGCAAGGCTTATGACCACAATAGTCCATATATCTGGCCCAGAAATGACTATGATGGCTTTCTTGAGAACGCCCATGAGCATCACGGTGTTTACAACCAGGGCCGCGGGATTGACAGTGGTGAAAGGTTGATGCAGCCTACCCAGATGTCTGCCCAGGAGGACCTGGGCGACGACACTGGGATCCATGTTATTCCGACTCTTAATGGCGACGATCGTCACAAGATCGTGAATGTGGATCAGAGGCAGTATGGCGATGTGTTTAAGGGTGACCTTAATCCAAAGCCTCAGGGACAGAGGTTGATTGAGGTGTCGGTGGAGGAAAACCATCCATTCACTCTCCGTGCCCCCATTCAGAGAATCTATGGAGTACGGTATACCGAGACTTGGTCTTTTCTGCCCAGTCTTACGTGTACCGGGGACGCCGCCCCGGCCATCCAGCACATCTGCCTGAAGCATACAACATGCTTTCAGGATGTGGTGGTGGACGTGGATTGTGCAGAGAACACCAAGGAGGATCAACTCGCTGAAATCTCTTACAGGTTTCAGGGCAAGAAGGAAGCAGACCAACCTTGGATTGTCGTGAATACGAGTACTCTGTTCGACGAGCTGGAGCTCGATCCTCCCGAGATCGAGCCCGGCGTGCTGAAGGTGCTACGTACTGAAAAACAGTATCTCGGAGTATATATTTGGAACATGAGGGGGTCAGATGGTACGTCAACGTACGCTACTTTTCTGGTGACGTGGAAGGGCGACGAGAAGACTCGAAATCCCACTCCGGCAGTGACTCCACAGCCTAGGGGAGCCGAGTTTCACATGTGGAACTACCATAGCCACGTGTTTAGTGTGGGAGATACGTTTTCCTTGGCTATGCACCTCCAGTATAAGATTCACGAGGCCCCCTTCGATCTTTTACTGGAGTGGCTCTACGTGCCCATTGATCCCACTTGTCAGCCTATGAGACTGTATTCTACGTGCCTGTATCATCCTAACGCCCCTCAATGTCTCAGCCATATGAATTCTGGATGCACTTTCACGTCACCCCATCTTGCCCAGCGGGTTGCGTCCACGGTGTACCAGAACTGTGAGCACGCAGATAATTACACCGCCTATTGCCTAGGCATCTCACACATGGAACCTTCATTCGGCCTGATCCTGCATGATGGTGGCACTACCCTCAAGTTCGTGGATACCCCTGAGAGCCTGAGTGGCCTATACGTGTTCGTTGTCTACTTCAATGGACATGTCGAGGCCGTGGCCTACACAGTTGTGAGCACCGTCGACCATTTCGTGAATGCGATCGAGGAAAGAGGGTTTCCTCCAACCGCTGGACAACCCCCTGCGACAACTAAGCCTAAGGAGATCACACCCGTGAATCCCGGAACCTCGCCCCTGATTCGCTACGCGGCCTGGACCGGCGGTCTGGCCGCGGTGGTTCTGCTGTGTTTAGTAATTTTTCTCATCTGCACCGCCAAGCGGATGCGGGTGAAGGCTTACCGGGTGGACAAGTCGCCTTACAACCAGTCTATGTACTATGCCGGATTGCCTGTGGACGATTTTGAGGACTCAGAGTCTACGGACACAGAGGAGGAGTTTGGGAACGCGATAGGAGGGTCCCATGGGGGCTCCTCCTACACCGTGTACATAGATAAGACTAGG 113
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gE FO_D13_7DNA TGATAA (SEQ ID NO: 297)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGTACGGTTAATAAGCCGGTGGTCGGGGTGCTGATGGGGTTCGGGATCATCACCGGGACGCTGCGCATTACAAATCCAGTGCGCGCGTCCGTCCTGCGTTACGATGACTTTCACATCGACGAGGACAAGCTGGATACAAACAGCGTGTACGAGCCATATTACCACTCTGATCACGCCGAGTCCTCCTGGGTGAATAGGGGGGAATCGAGTCGCAAAGCGTACGACCACAATTCTCCCTATATCTGGCCCCGGAACGACTATGACGGGTTCCTGGAGAACGCCCATGAGCATCATGGAGTGTATAACCAGGGGCGCGGCATAGATTCGGGGGAGAGGCTGATGCAGCCGACCCAGATGTCTGCCCAGGAGGACCTGGGCGACGACACTGGCATCCACGTGATCCCGACCCTCAACGGGGACGATCGTCACAAGATCGTCAACGTGGACCAGCGGCAGTACGGTGACGTGTTCAAGGGGGACCTCAACCCGAAGCCCCAGGGGCAGCGGCTTATTGAGGTGTCAGTGGAGGAAAATCATCCATTCACCCTCCGAGCCCCAATTCAGCGGATCTATGGGGTTCGGTACACGGAGACGTGGAGTTTTCTGCCAAGTCTGACCTGCACGGGCGATGCCGCCCCTGCAATCCAGCATATTTGCTTGAAACACACTACATGCTTTCAGGATGTGGTGGTTGATGTCGACTGTGCAGAGAACACTAAGGAGGATCAGCTTGCCGAGATTTCTTACCGCTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCTGATCAGCCTTGGATCGTGGTGAACACGTCCACCCTGTTTGATGAGCTCGAGCTTGATCCTCCCGAGATCGAGCCCGGGGTGCTGAAGGTGCTCCGCACCGAGAAGCAGTACCTGGGGGTGTACATCTGGAACATGCGGGGGTCGGACGGGACTTCTACGTACGCGACCTTCCTTGTGACCTGGAAGGGCGACGAGAAGACCCGTAATCCGACCCCCGCAGTGACACCCCAGCCTCGGGGGGCGGAATTTCATATGTGGAACTATCACTCCCACGTGTTCTCGGTGGGGGACACCTTCAGTCTTGCAATGCACCTCCAGTATAAGATCCACGAGGCTCCCTTTGATCTCTTGCTGGAGTGGCTGTATGTGCCTATTGACCCCACATGCCAGCCAATGAGACTGTATTCTACGTGTCTCTATCATCCCAACGCTCCTCAATGCCTGTCCCATATGAACAGTGGGTGTACCTTTACATCCCCCCACCTGGCCCAGCGTGTTGCTAGCACGGTGTACCAGAATTGTGAACACGCCGATAACTATACGGCGTATTGCCTGGGCATTAGCCACATGGAGCCCTCCTTCGGCCTGATTCTGCACGACGGAGGCACGACGCTCAAGTTCGTGGATACCCCTGAGAGCTTGAGCGGCCTCTACGTGTTCGTGGTGTATTTTAACGGACACGTGGAGGCCGTGGCGTACACAGTGGTCAGCACGGTCGACCACTTTGTGAACGCCATTGAGGAGCGTGGGTTTCCACCCACCGCAGGCCAGCCCCCTGCCACCACGAAGCCAAAGGAGATTACCCCAGTAAACCCTGGGACTAGTCCCTTGATCCGCTACGCTGCGTGGACAGGCGGGCTGGCCGCGGTGGTGCTGCTGTGTCTGGTCATTTTTCTTATCTGCACGGCTAAGCGCATGCGGGTGAAGGCTTACCGGGTTGACAAGTCCCCCTATAATCAGAGCATGTACTACGCCGGTCTGCCGGTCGATGACTTTGAAGATAGTGAGTCCACTGACACTGAGGAGGAGTTCGGCAATGCCATCGGCGGGTCACACGGCGGCTCCTCGTATACTGTCTATATCGACAAGACCCGC 127
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gE FO_D13_9DNA TGATAG (SEQ ID NO: 296)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACCGTGAATAAGCCCGTGGTAGGCGTGCTCATGGGCTTCGGTATCATCACAGGTACTCTGCGCATTACAAACCCTGTACGCGCAAGTGTCCTACGCTACGATGATTTTCACATCGATGAGGACAAGTTGGACACCAACTCAGTCTATGAGCCGTATTACCACTCCGATCACGCCGAGTCTTCCTGGGTGAACAGGGGGGAGTCTAGTAGGAAGGCCTACGATCACAACTCCCCCTACATCTGGCCCCGGAATGACTACGACGGGTTCCTGGAGAACGCACATGAGCATCATGGCGTGTATAACCAGGGGCGCGGTATTGATTCCGGGGAGAGGCTGATGCAGCCCACGCAGATGTCTGCCCAGGAGGACCTCGGCGATGATACGGGCATTCATGTTATCCCCACCCTAAATGGCGATGACCGCCACAAGATCGTGAACGTGGATCAGCGCCAATATGGGGACGTTTTTAAGGGGGACTTGAACCCCAAGCCTCAGGGCCAGCGGCTGATCGAGGTCAGTGTGGAGGAAAACCACCCCTTCACCCTGAGGGCGCCCATCCAGCGAATTTACGGGGTACGATATACTGAGACTTGGAGCTTTCTACCCTCGCTCACCTGCACAGGCGACGCCGCCCCCGCCATTCAGCATATATGCCTGAAGCATACAACATGCTTCCAGGATGTGGTGGTGGACGTCGACTGTGCAGAAAACACCAAGGAGGATCAGCTCGCCGAAATTTCTTACCGTTTCCAGGGTAAGAAGGAGGCTGATCAACCTTGGATCGTGGTAAACACGAGTACCCTGTTTGACGAGCTGGAGCTCGATCCTCCAGAGATCGAGCCTGGGGTGTTGAAGGTTCTCCGCACCGAGAAGCAGTACCTGGGAGTGTATATTTGGAACATGAGGGGGTCGGACGGGACCTCTACTTATGCCACCTTCCTCGTCACCTGGAAGGGTGACGAGAAGACCCGGAACCCGACCCCAGCTGTAACCCCACAGCCCCGGGGAGCAGAGTTCCATATGTGGAACTACCACTCCCATGTCTTCTCGGTGGGGGATACCTTCTCTCTAGCTATGCATCTCCAGTACAAGATCCATGAGGCTCCCTTCGATCTTCTGCTGGAGTGGCTGTATGTGCCCATCGACCCGACATGTCAGCCAATGAGACTGTACTCTACATGTCTCTACCATCCAAACGCCCCACAATGTCTGAGCCACATGAATTCGGGCTGTACTTTTACCAGCCCTCACCTGGCTCAGAGGGTGGCCTCAACAGTGTATCAGAACTGCGAGCACGCAGATAATTACACTGCCTACTGCCTCGGCATCAGCCATATGGAGCCCTCATTTGGGCTCATCCTTCACGATGGAGGAACCACGCTGAAGTTCGTGGACACACCTGAGAGCTTGAGCGGCCTCTACGTGTTCGTTGTTTACTTCAACGGACACGTAGAGGCCGTGGCGTACACTGTGGTTTCCACGGTGGACCACTTCGTCAACGCCATCGAGGAGAGAGGATTTCCTCCCACCGCCGGCCAGCCTCCTGCCACAACGAAACCGAAGGAGATCACACCTGTCAATCCAGGCACGTCTCCTTTGATCCGATACGCTGCGTGGACAGGAGGCTTGGCCGCGGTGGTACTGCTCTGCCTTGTGATCTTTCTGATCTGCACCGCCAAGCGGATGCGGGTCAAGGCTTACAGGGTAGACAAGTCCCCCTATAATCAGTCCATGTATTACGCCGGGCTGCCAGTGGATGACTTTGAGGACTCCGAATCCACTGACACAGAGGAGGAGTTCGGCAACGCTATCGGCGGCAGCCACGGCGGATCATCTTATACTGTCTACATAGACAAGACCAGA 129
gE FO_D13_10DNA TGATAG (SEQ ID NO: 296)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGGACCGTGAATAAGCCTGTGGTGGGCGTGCTCATGGGCTTTGGTATAATCACCGGGACACTGAGGATTACCAACCCTGTGCGAGCCAGCGTCCTGAGGTACGATGACTTTCACATCGACGAGGACAAGCTGGATACTAACAGCGTCTATGAGCCGTACTACCACTCCGACCACGCCGAATCCTCCTGGGTGAACAGGGGGGAGTCAAGCCGCAAGGCATATGACCATAACTCCCCCTACATCTGGCCCCGGAATGATTACGACGGCTTCCTGGAGAACGCCCATGAGCATCATGGGGTCTATAACCAGGGCCGCGGCATCGATTCCGGGGAGAGGCTGATGCAGCCTACACAGATGTCCGCCCAGGAGGATTTGGGCGATGACACCGGAATTCACGTAATCCCCACTCTCAATGGTGATGATCGCCACAAGATCGTCAACGTGGACCAGCGCCAATATGGCGACGTGTTTAAGGGGGACTTGAACCCCAAGCCTCAGGGGCAGCGGCTGATTGAGGTGAGCGTGGAGGAGAACCATCCCTTCACGCTTCGGGCACCGATCCAGCGCATTTATGGGGTACGATACACTGAGACCTGGTCTTTTCTGCCAAGTCTCACCTGCACAGGAGACGCCGCCCCAGCCATTCAGCATATATGCCTGAAGCACACAACCTGCTTCCAGGATGTGGTGGTGGACGTCGACTGTGCAGAGAACACCAAGGAGGATCAGCTTGCCGAGATTTCTTACCGCTTCCAGGGTAAGAAGGAGGCTGATCAGCCGTGGATCGTCGTGAACACGAGTACCCTGTTTGATGAGCTGGAGCTTGATCCTCCTGAGATCGAGCCCGGCGTGTTGAAGGTACTCCGCACCGAGAAGCAGTACTTGGGAGTGTACATTTGGAACATGAGGGGTTCCGATGGGACCTCTACATATGCGACTTTTCTCGTCACCTGGAAAGGTGACGAGAAAACGCGGAATCCCACCCCCGCTGTCACCCCGCAGCCGCGCGGGGCTGAGTTTCATATGTGGAACTATCATTCCCACGTCTTCTCGGTGGGAGATACCTTCTCACTTGCAATGCATCTCCAGTACAAGATCCACGAGGCCCCCTTTGATCTGCTGCTGGAGTGGTTGTACGTGCCCATTGACCCAACATGTCAGCCGATGAGACTGTACTCTACATGTCTCTACCACCCTAACGCCCCTCAGTGTCTGAGCCACATGAACTCGGGCTGTACATTTACCAGCCCGCATCTGGCTCAGAGGGTGGCCAGCACAGTGTATCAGAACTGCGAACACGCAGACAATTACACTGCGTACTGCCTTGGCATCAGCCATATGGAGCCCTCGTTTGGGCTCATCCTTCACGATGGAGGGACTACCCTCAAGTTCGTGGACACCCCTGAGAGCTTGTCCGGTCTCTACGTGTTTGTTGTTTACTTCAACGGACATGTGGAGGCCGTGGCGTACACAGTGGTATCTACTGTGGACCACTTCGTGAACGCCATTGAGGAGCGGGGGTTTCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCTGCCACCACGAAGCCCAAGGAGATTACCCCTGTGAATCCAGGGACGTCTCCACTCATCCGCTACGCTGCGTGGACAGGGGGCCTTGCGGCGGTGGTGCTGCTTTGCCTTGTGATCTTTTTGATCTGCACCGCCAAGCGGATGCGGGTCAAAGCTTATAGGGTGGACAAGTCCCCCTATAATCAGTCCATGTATTACGCCGGGCTGCCAGTCGATGATTTTGAGGATTCCGAATCGACAGACACCGAGGAGGAGTTTGGCAACGCCATCGGCGGCAGCCACGGTGGGTCATCCTACACTGTTTACATTGACAAGACGAGA 130
gE FO_D13_11DNA TGATGA (SEQ ID NO: 295)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACCGTGAACAAGCCAGTGGTGGGCGTCCTGATGGGCTTCGGGATTATCACTGGCACGTTGCGCATAACGAACCCTGTGCGCGCTAGCGTCCTGCGTTACGATGACTTTCACATCGACGAGGATAAGCTCGATACCAACAGTGTGTATGAGCCCTATTACCACAGTGATCACGCTGAATCCTCCTGGGTGAACAGGGGGGAGTCCAGCCGGAAGGCTTATGACCACAATTCCCCCTACATCTGGCCCCGGAATGATTATGATGGGTTCCTGGAGAATGCCCATGAACACCATGGAGTGTATAACCAGGGGCGCGGGATCGATTCCGGGGAACGGCTGATGCAGCCAACCCAGATGTCCGCCCAGGAAGATCTCGGGGACGATACCGGAATCCATGTGATCCCTACCCTGAATGGGGACGATCGACACAAGATCGTCAACGTGGATCAACGCCAATATGGCGATGTATTTAAGGGGGATCTCAACCCCAAGCCGCAGGGCCAGCGGCTCATCGAGGTGAGCGTGGAGGAGAATCACCCCTTCACCTTGAGGGCTCCGATCCAGCGCATCTATGGGGTGCGTTACACTGAGACTTGGTCCTTCTTGCCAAGTCTTACCTGCACAGGCGATGCAGCCCCTGCTATTCAGCACATTTGTCTCAAGCATACCACATGCTTCCAAGACGTCGTGGTGGATGTCGACTGTGCAGAGAACACCAAGGAGGATCAGCTTGCCGAGATAAGCTACCGCTTTCAGGGCAAGAAGGAGGCTGATCAGCCTTGGATCGTGGTGAACACGAGCACCCTGTTCGATGAGCTGGAACTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGGGTGCTGAAGGTGCTCCGCACTGAGAAGCAGTACCTCGGGGTGTACATCTGGAATATGCGGGGGTCCGACGGGACCTCCACATACGCCACTTTTCTCGTCACCTGGAAGGGTGACGAGAAGACCCGGAACCCTACACCGGCCGTGACTCCACAGCCCCGGGGTGCAGAGTTCCACATGTGGAATTACCATAGCCACGTGTTCTCGGTGGGGGACACTTTCAGCCTGGCAATGCATCTGCAATACAAGATCCACGAGGCCCCCTTTGATCTGCTGCTGGAGTGGCTGTATGTGCCAATAGACCCAACATGTCAGCCAATGAGACTGTACTCTACATGTCTCTATCATCCAAACGCTCCTCAGTGCCTGAGCCACATGAACTCGGGCTGCACATTTACTAGCCCGCATCTGGCACAAAGGGTGGCCTCAACAGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCAGATAATTACACTGCGTATTGCTTGGGCATTAGCCACATGGAGCCCTCTTTCGGGCTCATCCTCCATGACGGGGGCACAACGCTCAAGTTCGTGGACACCCCCGAGAGCTTGAGCGGCCTCTACGTGTTCGTTGTATACTTCAACGGACACGTAGAGGCCGTGGCGTATACGGTAGTGTCTACAGTGGATCACTTCGTGAACGCCATTGAGGAGCGCGGCTTTCCGCCCACCGCCGGCCAGCCCCCTGCTACCACGAAGCCGAAAGAAATAACACCGGTGAATCCGGGGACCTCCCCACTCATCCGGTACGCCGCGTGGACAGGGGGCTTGGCCGCGGTGGTGCTGCTCTGTCTGGTGATTTTCTTGATCTGCACCGCAAAGCGGATGCGGGTTAAGGCATATAGGGTGGACAAAAGTCCCTATAACCAGTCAATGTACTACGCCGGGCTCCCTGTTGACGACTTCGAGGACTCCGAGTCCACCGACACGGAGGAGGAGTTCGGAAACGCCATCGGCGGGTCACACGGGGGCTCATCATACACTGTATATATCGACAAAACACGG 131
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gE FO_D12_2DNA TGATAA (SEQ ID NO: 297)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGAACAGTCAATAAACCTGTGGTGGGCGTGCTGATGGGCTTCGGCATCATTACCGGTACACTGCGCATTACTAACCCAGTCCGAGCTAGTGTGTTGAGATATGATGATTTTCACATAGATGAGGATAAGCTGGACACAAACTCGGTTTACGAGCCTTACTATCACAGCGACCATGCTGAATCATCTTGGGTGAACAGGGGAGAGTCTTCACGGAAGGCTTATGATCACAACTCCCCTTATATTTGGCCAAGAAATGATTACGACGGCTTTCTGGAGAATGCCCACGAACATCACGGTGTGTATAACCAGGGCCGAGGCATCGATTCAGGAGAGAGGCTGATGCAGCCAACCCAGATGTCTGCACAGGAGGATCTGGGAGATGACACTGGAATCCATGTGATCCCTACCCTCAACGGTGACGACCGGCACAAGATCGTTAACGTTGATCAGCGTCAATACGGGGACGTCTTCAAAGGCGACCTTAACCCGAAGCCACAGGGGCAGAGGCTGATCGAAGTATCCGTGGAGGAAAACCATCCATTTACCTTGCGGGCACCGATTCAGAGAATCTATGGAGTGAGGTACACGGAAACTTGGTCTTTTCTGCCTAGTCTGACCTGCACCGGGGACGCTGCTCCTGCCATACAGCACATCTGTCTCAAACATACAACCTGCTTCCAGGACGTCGTTGTCGATGTAGACTGCGCCGAAAATACAAAGGAGGATCAGCTGGCTGAGATTAGCTACAGGTTCCAGGGGAAAAAAGAGGCTGACCAACCATGGATCGTGGTTAACACTTCTACTCTCTTTGACGAACTTGAGCTCGATCCTCCTGAGATCGAGCCCGGAGTTCTCAAGGTGCTGCGAACAGAGAAGCAGTACTTGGGGGTTTATATCTGGAATATGCGTGGCAGCGACGGTACATCCACCTACGCAACTTTCCTGGTCACATGGAAGGGGGACGAAAAAACCCGGAATCCTACCCCGGCTGTGACTCCACAGCCTAGAGGGGCAGAGTTTCACATGTGGAATTACCATTCTCACGTGTTCTCTGTAGGGGATACCTTTTCGCTAGCTATGCATCTCCAATATAAGATTCACGAGGCCCCATTTGATCTTCTGCTGGAGTGGTTGTACGTTCCGATCGACCCCACGTGTCAGCCGATGAGATTGTATTCTACCTGTCTTTATCATCCGAATGCTCCCCAGTGTTTATCTCACATGAACTCCGGGTGTACTTTTACTAGTCCACATCTGGCCCAGAGAGTGGCCAGTACAGTATATCAGAACTGCGAGCATGCTGACAATTACACAGCTTACTGCCTTGGTATCTCACACATGGAGCCTTCATTCGGGCTCATTCTGCACGATGGAGGCACCACGCTGAAGTTTGTTGACACTCCCGAAAGCCTTTCTGGCCTTTACGTGTTTGTGGTGTATTTCAATGGACACGTGGAGGCAGTGGCATACACAGTGGTCAGCACGGTTGATCATTTTGTGAATGCCATCGAGGAGCGTGGTTTTCCTCCTACGGCAGGGCAGCCTCCTGCAACTACCAAGCCAAAGGAGATTACACCGGTCAACCCAGGAACCAGCCCATTGATCCGGTATGCCGCTTGGACCGGGGGGTTGGCAGCTGTAGTTCTGCTTTGCCTGGTTATATTTTTGATTTGCACCGCAAAGCGAATGCGGGTTAAAGCCTACAGGGTGGACAAAAGTCCTTATAACCAGTCAATGTATTATGCGGGCCTCCCGGTGGATGATTTCGAAGATAGCGAGAGCACCGATACAGAGGAGGAGTTTGGTAATGCAATAGGGGGTTCCCACGGCGGAAGCTCTTATACAGTGTATATTGACAAAACCAGG 135
gE FO_D12_3DNA    TAATAA (SEQ ID NO: 289)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGAACAGTGAATAAACCCGTCGTCGGAGTGCTTATGGGTTTCGGGATCATCACTGGTACCTTGAGGATTACCAACCCTGTCCGTGCTTCGGTCTTAAGATATGATGATTTCCATATTGACGAGGATAAGCTGGATACGAACTCGGTTTACGAGCCATACTACCACAGCGATCACGCTGAGTCATCCTGGGTTAACAGGGGTGAGTCATCCCGGAAGGCTTACGACCATAACTCTCCATACATATGGCCCAGAAATGATTATGACGGCTTTCTGGAAAATGCACACGAACATCACGGTGTGTATAACCAGGGCAGGGGGATCGATAGCGGCGAACGGCTGATGCAGCCTACCCAGATGAGTGCTCAGGAGGACCTGGGAGATGACACCGGTATCCATGTCATCCCTACCCTCAACGGGGACGACCGGCACAAAATTGTGAACGTTGACCAGCGCCAATACGGAGATGTATTCAAAGGCGATCTGAACCCCAAGCCACAAGGGCAGAGGCTGATCGAGGTCTCGGTGGAGGAGAACCATCCTTTTACACTGCGTGCCCCAATCCAGCGGATATATGGCGTGCGATACACGGAGACATGGTCTTTCCTGCCTTCACTGACATGCACAGGGGACGCTGCCCCGGCCATTCAGCACATTTGTCTGAAGCATACGACCTGCTTCCAGGACGTGGTCGTGGACGTAGATTGCGCCGAAAACACAAAGGAGGATCAGCTGGCTGAAATCAGCTACAGGTTTCAGGGGAAGAAGGAAGCCGACCAACCATGGATCGTTGTTAACACTTCTACACTCTTTGATGAACTTGAGCTCGACCCTCCTGAGATCGAGCCCGGAGTGCTCAAAGTGCTGAGAACAGAGAAGCAGTATTTGGGCGTGTATATATGGAACATGCGTGGCAGCGATGGAACATCCACCTACGCCACCTTTCTGGTGACATGGAAAGGCGATGAAAAGACGCGGAACCCTACTCCAGCTGTGACTCCACAGCCACGTGGCGCTGAGTTTCACATGTGGAACTACCATTCTCATGTGTTCAGCGTGGGGGATACCTTCAGTCTAGCGATGCATCTCCAATATAAGATTCACGAGGCCCCATTTGATCTCCTCCTGGAGTGGTTGTATGTGCCAATCGATCCAACTTGTCAGCCGATGAGACTGTATTCCACGTGTCTTTATCACCCCAATGCCCCACAGTGTTTATCCCACATGAACTCCGGATGTACTTTCACTAGTCCACATCTCGCCCAGAGAGTGGCCAGCACAGTATACCAGAATTGTGAGCATGCTGACAACTATACCGCCTACTGTCTTGGTATATCACACATGGAGCCTTCATTCGGGTTAATATTGCACGATGGAGGCACTACGTTGAAGTTTGTTGACACTCCGGAGAGCCTGTCTGGCCTCTACGTTTTTGTTGTGTATTTCAATGGACACGTCGAGGCCGTGGCATACACAGTCGTGTCGACGGTCGATCATTTTGTGAATGCTATCGAGGAGCGTGGTTTCCCTCCTACCGCTGGGCAGCCTCCTGCAACGACCAAGCCGAAGGAGATCACACCCGTGAACCCCGGAACCAGCCCATTGATCCGGTATGCCGCTTGGACCGGGGGGTTGGCTGCCGTGGTGCTGTTGTGCCTGGTTATTTTTCTTATTTGTACGGCGAAAAGGATGCGGGTGAAAGCCTACAGAGTGGACAAGAGTCCCTATAACCAGTCAATGTATTACGCGGGCTTACCAGTAGATGATTTCGAGGATTCAGAGAGCACGGATACTGAAGAAGAATTCGGTAATGCCATAGGTGGTTCACACGGGGGATCTTCTTATACAGTGTATATTGACAAAACCCGA 136
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gE FO_D12_10DNA TGATAA (SEQ ID NO: 297)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGCACAGTCAATAAACCTGTGGTGGGCGTGCTCATGGGCTTCGGAATCATCACCGGGACATTAAGGATTACCAATCCTGTCCGAGCCTCCGTTCTGCGCTATGATGACTTTCACATAGATGAGGACAAGCTGGACACCAACTCGGTTTACGAGCCATACTATCATAGCGATCATGCCGAGTCCTCTTGGGTGAACAGGGGAGAGTCTTCCCGGAAAGCTTATGACCACAATAGCCCGTACATTTGGCCGCGAAATGACTATGATGGCTTTCTGGAGAATGCTCATGAACATCACGGTGTGTATAATCAGGGACGAGGCATAGATAGCGGCGAAAGGCTCATGCAGCCAACACAGATGTCTGCGCAGGAGGACCTGGGAGATGACACTGGGATCCATGTCATCCCTACCCTGAACGGGGACGACCGGCATAAAATCGTTAACGTTGATCAGCGCCAATACGGTGACGTGTTCAAGGGCGATCTGAATCCGAAGCCCCAGGGGCAGAGGCTGATTGAGGTGTCGGTGGAGGAAAATCATCCCTTCACATTGCGCGCACCCATACAGCGGATTTACGGAGTGAGGTATACGGAGACATGGTCTTTTCTGCCCTCTCTGACCTGCACCGGGGACGCCGCCCCGGCTATCCAGCACATCTGTCTGAAGCACACTACCTGCTTCCAGGACGTGGTCGTGGATGTGGACTGCGCCGAGAACACAAAGGAGGACCAGCTGGCTGAGATAAGCTATAGGTTCCAAGGAAAGAAGGAAGCTGACCAACCTTGGATCGTGGTGAACACTTCTACTCTCTTTGATGAGCTCGAGCTGGACCCACCTGAGATCGAGCCCGGAGTTCTCAAGGTCCTGCGCACAGAAAAGCAGTATTTGGGGGTGTATATCTGGAACATGCGCGGCAGTGACGGGACATCCACATACGCTACTTTTCTGGTCACCTGGAAGGGGGATGAAAAAACCCGAAATCCTACCCCAGCAGTGACTCCACAGCCTCGTGGCGCAGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCCCATGTGTTCAGCGTGGGGGATACATTCAGCCTGGCGATGCACCTCCAATACAAAATCCACGAGGCCCCATTTGATCTACTCCTGGAGTGGTTGTATGTGCCTATCGACCCCACATGTCAGCCGATGAGACTGTATTCAACATGTCTTTACCATCCAAATGCTCCACAGTGTTTATCCCATATGAACTCAGGGTGTACTTTTACCAGTCCCCATCTCGCTCAGCGGGTGGCCAGTACGGTATACCAGAACTGCGAGCATGCTGACAACTATACAGCCTACTGTCTTGGTATCTCACATATGGAGCCTTCATTCGGGCTGATCCTGCACGACGGAGGCACCACGTTGAAGTTTGTTGACACTCCCGAGAGCCTCTCAGGTCTGTATGTGTTTGTGGTATATTTCAATGGACACGTTGAAGCCGTGGCATACACAGTAGTGTCTACGGTCGATCACTTTGTGAACGCTATCGAGGAGCGTGGTTTCCCTCCTACGGCGGGCCAGCCTCCAGCCACAACCAAGCCTAAGGAGATCACACCCGTGAACCCCGGAACTAGCCCCTTGATACGGTATGCCGCTTGGACCGGGGGTCTGGCGGCTGTGGTGCTGTTATGTCTGGTTATATTTTTGATCTGCACCGCTAAGCGGATGCGGGTGAAGGCCTATAGGGTAGACAAAAGTCCATATAACCAGTCAATGTATTATGCCGGCCTCCCGGTAGATGATTTTGAGGACAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGTTCGGTAACGCTATAGGGGGCTCTCATGGCGGGAGTTCATATACAGTGTATATCGACAAGACTCGC 143
gE FO_D12_11DNA TAGTAA (SEQ ID NO: 293)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGAACGGTCAACAAGCCCGTGGTGGGGGTGCTTATGGGGTTCGGGATCATCACCGGTACACTGAGGATTACTAATCCAGTCCGAGCTTCAGTCCTGAGGTACGATGATTTTCACATTGACGAGGACAAACTGGACACAAATAGCGTGTACGAACCTTACTATCACAGCGACCACGCTGAGTCATCATGGGTTAACAGGGGAGAGAGTAGCCGGAAGGCTTATGACCATAACTCCCCCTACATTTGGCCCAGAAATGACTATGACGGCTTTCTGGAGAACGCTCACGAACATCATGGTGTGTATAATCAGGGGCGAGGGATCGATTCGGGCGAAAGGCTGATGCAGCCAACACAGATGTCTGCGCAGGAGGACCTGGGCGATGATACAGGTATCCATGTCATCCCAACCCTGAACGGGGACGACCGGCACAAAATCGTTAACGTCGATCAGCGCCAATATGGTGACGTGTTCAAGGGCGATCTGAATCCGAAACCACAGGGGCAGAGGCTGATCGAGGTATCCGTTGAGGAAAATCACCCTTTCACCCTGCGGGCACCGATTCAGCGGATCTATGGAGTGAGGTACACAGAGACTTGGTCCTTTCTGCCATCTCTGACCTGTACCGGGGACGCTGCCCCCGCTATCCAACACATCTGCCTGAAGCACACGACCTGCTTCCAGGACGTGGTCGTGGATGTAGATTGCGCCGAGAACACAAAGGAGGATCAGCTCGCTGAGATCAGCTACAGGTTCCAGGGAAAGAAGGAAGCTGACCAGCCATGGATCGTGGTTAACACTTCTACTCTCTTTGATGAACTTGAGCTAGACCCTCCTGAGATCGAGCCCGGAGTTCTCAAGGTGCTCCGCACAGAGAAGCAGTACCTGGGGGTGTATATCTGGAATATGCGTGGAAGCGATGGTACCTCCACATACGCTACTTTTCTGGTTACCTGGAAGGGTGACGAAAAGACCCGAAATCCTACCCCTGCGGTGACTCCACAGCCCCGCGGGGCAGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCATGTGTTCAGCGTAGGGGATACCTTCTCTCTAGCCATGCATCTCCAATACAAGATTCACGAGGCCCCTTTCGATCTACTCCTGGAGTGGTTGTATGTACCAATCGATCCTACTTGTCAGCCGATGAGACTGTATTCGACATGTCTCTACCACCCTAATGCTCCTCAGTGTTTAAGCCACATGAATTCCGGATGTACGTTTACTAGTCCACATCTGGCCCAGAGAGTGGCCAGTACCGTATACCAGAATTGCGAGCATGCTGACAACTACACCGCCTACTGTTTAGGGATATCCCACATGGAACCTTCTTTCGGGCTGATTTTGCATGACGGAGGCACTACTTTGAAGTTTGTTGACACTCCCGAAAGCCTGTCGGGCCTATACGTTTTTGTGGTTTACTTCAATGGACATGTCGAGGCGGTGGCTTACACGGTTGTGTCTACGGTAGATCATTTTGTGAATGCAATCGAGGAGCGTGGTTTTCCTCCTACGGCGGGGCAGCCCCCTGCCACCACAAAGCCAAAGGAGATCACACCCGTGAACCCGGGAACCAGCCCCTTGATCCGGTATGCAGCTTGGACCGGGGGCTTGGCAGCTGTCGTCCTGCTTTGTCTGGTCATATTTTTAATCTGCACCGCCAAGCGGATGCGGGTTAAAGCATACCGAGTAGATAAGTCCCCCTACAACCAGTCCATGTACTATGCGGGGCTGCCTGTGGATGATTTTGAAGACTCCGAGAGCACGGACACCGAGGAGGAGTTTGGAAACGCCATAGGAGGATCACATGGAGGGTCTTCTTATACTGTTTATATCGACAAAACCCGC 144
gE FO_D12_12DNA TGATAA (SEQ ID NO: 297)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) ATGGGTACCGTTAATAAACCCGTGGTGGGAGTGCTTATGGGTTTTGGGATCATCACTGGTACATTGAGGATTACTAATCCAGTGCGAGCTAGTGTCCTGAGATACGATGATTTCCACATTGATGAGGATAAGCTGGATACAAACTCGGTTTATGAGCCATACTATCACAGCGATCACGCTGAGTCATCTTGGGTGAACAGGGGAGAGTCTAGCCGGAAGGCTTACGACCATAACTCCCCGTATATATGGCCCCGAAATGATTATGATGGGTTTCTGGAAAACGCTCACGAACATCACGGTGTGTATAACCAGGGCCGCGGCATCGATAGCGGTGAAAGGCTGATGCAGCCTACCCAGATGAGTGCGCAGGAGGACCTGGGAGATGACACTGGTATCCACGTCATTCCTACCCTGAACGGGGACGATCGGCATAAAATCGTCAACGTTGATCAGCGCCAATACGGTGACGTGTTCAAGGGCGATCTGAACCCTAAACCACAAGGGCAGAGGCTGATCGAAGTGTCCGTTGAGGAGAATCACCCGTTTACCTTGCGGGCACCGATTCAGCGGATCTACGGAGTCAGGTATACGGAGACTTGGTCTTTCCTGCCTTCTCTGACCTGCACCGGGGACGCCGCCCCGGCTATACAGCACATCTGTCTGAAGCATACTACCTGTTTCCAGGACGTGGTCGTCGATGTAGATTGCGCCGAGAACACTAAGGAGGATCAGCTGGCAGAGATAAGCTACAGGTTCCAGGGAAAGAAGGAAGCTGACCAGCCATGGATCGTGGTTAACACTTCTACTCTCTTTGACGAGCTTGAGCTGGATCCTCCTGAGATCGAGCCCGGAGTGCTCAAGGTGTTGCGCACAGAGAAGCAGTACCTGGGGGTGTATATCTGGAATATGCGTGGCTCTGACGGTACAAGTACCTACGCTACTTTCCTGGTGACATGGAAGGGGGACGAGAAAACCCGAAACCCTACCCCCGCTGTCACTCCACAGCCTCGTGGGGCAGAGTTTCACATGTGGAATTATCATTCTCATGTCTTTAGCGTAGGAGACACCTTTAGCCTAGCGATGCATCTCCAGTACAAGATTCACGAGGCCCCATTCGATCTACTCCTGGAATGGCTTTATGTTCCTATCGATCCTACTTGTCAGCCGATGAGACTGTATTCTACATGTCTGTACCATCCCAATGCTCCCCAGTGTTTATCTCACATGAACTCCGGTTGTACTTTTACTAGTCCACATCTCGCCCAGAGAGTGGCCAGCACAGTATACCAGAACTGCGAGCACGCCGACAACTATACGGCCTATTGTCTGGGTATATCACACATGGAGCCCAGTTTCGGGCTCATCCTGCATGACGGAGGAACAACGCTGAAGTTCGTAGATACTCCGGAAAGCTTATCTGGCCTCTACGTTTTCGTGGTATATTTCAATGGACACGTCGAGGCCGTAGCATATACCGTGGTGAGCACCGTTGACCACTTCGTGAATGCGATCGAGGAGCGTGGATTCCCTCCTACGGCGGGGCAGCCTCCTGCCACGACCAAGCCCAAGGAAATCACACCCGTGAACCCCGGGACCAGCCCCTTGATTCGGTATGCTGCTTGGACCGGCGGCCTCGCAGCTGTGGTGCTGCTTTGTCTGGTTATCTTCTTGATCTGCACCGCCAAACGCATGCGGGTTAAAGCCTACAGGGTGGATAAAAGTCCTTATAACCAGTCAATGTACTACGCCGGACTCCCGGTAGATGATTTCGAAGACAGCGAGAGCACCGATACCGAGGAGGAGTTCGGTAACGCCATCGGAGGTAGCCACGGCGGGTCTTCTTATACAGTGTATATAGACAAGACCCGC 145
3.VZV RNA
ID 序列 SEQ ID NO:
gE_WTRNA UGA終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACAGUUAAUAAACCUGUGGUGGGGGUAUUGAUGGGGUUCGGAAUUAUCACGGGAACGUUGCGUAUAACGAAUCCGGUCAGAGCAUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGCUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAAGAGCGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUAUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUAAACGAAUGAGGGUUAAAGCCUAUAGGGUAGACAAGUCCCCGUAUAACCAAAGCAUGUAUUACGCUGGCCUUCCAGUGGACGAUUUCGAGGACUCGGAAUCUACGGAUACGGAAGAAGAGUUUGGUAACGCGAUUGGAGGGAGUCACGGGGGUUCGAGUUACACGGUGUAUAUAGAUAAGACCCGG 146
gE_WT CO1 (gE_P1)RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACCGUGAACAAGCCUGUUGUGGGCGUGCUGAUGGGCUUCGGCAUCAUCACAGGCACCCUGCGGAUCACCAAUCCUGUGCGGGCUAGCGUGCUGAGAUACGACGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACCAACAGCGUGUACGAGCCCUACUACCACAGCGAUCACGCCGAGUCUAGCUGGGUCAACAGAGGCGAGAGCAGCAGAAAGGCCUACGACCACAACAGCCCCUACAUCUGGCCCCGGAACGACUACGAUGGCUUCCUGGAAAAUGCCCACGAGCACCACGGCGUGUACAAUCAAGGCAGAGGCAUCGACAGCGGCGAGAGACUGAUGCAGCCUACACAGAUGAGCGCCCAAGAGGACCUGGGAGAUGAUACCGGCAUCCACGUGAUCCCCACACUGAACGGCGACGACAGACACAAGAUCGUGAACGUGGACCAGCGGCAGUACGGCGACGUGUUCAAGGGCGACCUGAAUCCUAAGCCUCAGGGCCAGCGCCUGAUCGAGGUGUCCGUGGAGGAGAAUCACCCCUUCACACUGAGAGCCCCUAUCCAGAGAAUCUACGGCGUGCGCUAUACCGAGACAUGGUCCUUUCUGCCCAGCCUGACAUGUACCGGGGAUGCCGCUCCUGCCAUCCAGCACAUUUGCCUGAAGCACACCACCUGUUUCCAGGACGUGGUGGUGGAUGUGGACUGCGCCGAGAACACCAAAGAGGAUCAGCUGGCCGAGAUCAGCUACCGGUUCCAGGGAAAGAAAGAGGCCGACCAGCCUUGGAUCGUGGUCAACACCAGCACACUGUUCGACGAGCUGGAACUGGACCCUCCUGAGAUUGAACCCGGGGUGCUGAAGGUGCUGAGAACCGAGAAGCAGUACCUGGGAGUGUACAUCUGGAACAUGAGAGGCAGCGACGGCACCUCUACCUACGCCACCUUUCUGGUCACAUGGAAGGGCGACGAGAAAACACGGAACCCCACACCAGCUGUGACCCCUCAACCUAGAGGCGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCACAGCCACGUGUUCAGCGUGGGCGAUACCUUUAGCCUGGCCAUGCAUCUGCAGUACAAGAUCCACGAGGCCCCUUUCGACCUGCUGCUGGAAUGGCUGUACGUGCCCAUCGAUCCUACCUGCCAGCCUAUGCGGCUGUACUCCACCUGUCUGUAUCACCCCAACGCUCCCCAGUGCCUGAGCCACAUGAAUAGCGGCUGCACCUUCACAAGCCCUCACCUGGCUCAGCGAGUGGCCAGCACAGUGUACCAGAAUUGCGAGCACGCCGACAAUUACACCGCCUACUGUCUGGGCAUCAGCCACAUGGAACCUAGCUUCGGCCUGAUCCUGCACGAUGGCGGCACAACCCUGAAGUUCGUGGAUACCCCUGAGAGCCUGAGCGGCCUGUAUGUGUUCGUGGUGUACUUCAACGGCCACGUGGAAGCCGUGGCCUACACCGUGGUGUCUACCGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUCGAGGAAAGAGGCUUCCCUCCAACUGCUGGACAGCCUCCUGCCACCACCAAGCCUAAAGAAAUCACACCCGUGAAUCCCGGCACAAGCCCACUGAUCAGAUACGCCGCUUGGACAGGCGGACUGGCUGCUGUUGUUCUGCUGUGCCUGGUCAUCUUCCUGAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGAGAGUGAAGGCCUACAGAGUGGACAAGAGCCCUUACAACCAGAGCAUGUACUACGCCGGCCUGCCUGUGGACGACUUCGAGGAUAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGUUCGGCAACGCCAUUGGAGGAUCUCACGGCGGCAGCAGCUAUACCGUGUACAUCGACAAGACCCGG 147
gE_WT CO2 (gE_P5)RNA    UGAUGA (SEQ ID NO: 304)或UAAUAA (SEQ ID NO: 298)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACCGUGAACAAGCCCGUGGUGGGCGUGCUGAUGGGCUUCGGCAUCAUCACCGGCACCCUGCGCAUCACCAACCCCGUGCGCGCCAGCGUGCUGCGCUACGACGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACCAACAGCGUGUACGAGCCCUACUACCACAGCGACCACGCCGAGAGCAGCUGGGUGAACCGCGGCGAGAGCAGCCGCAAGGCCUACGACCACAACAGCCCCUACAUCUGGCCCCGCAACGACUACGACGGCUUCCUGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGCGUGUACAACCAGGGCCGCGGCAUCGACAGCGGCGAGCGCCUGAUGCAGCCCACCCAGAUGAGCGCCCAGGAGGACCUGGGCGACGACACCGGCAUCCACGUGAUCCCCACCCUGAACGGCGACGACCGCCACAAGAUCGUGAACGUGGACCAGCGCCAGUACGGCGACGUGUUCAAGGGCGACCUGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGCCUGAUCGAGGUGAGCGUGGAGGAGAACCACCCCUUCACCCUGCGCGCCCCCAUCCAGCGCAUCUACGGCGUGCGCUACACCGAGACCUGGAGCUUCCUGCCCAGCCUGACCUGCACCGGCGACGCCGCCCCCGCCAUCCAGCACAUCUGCCUGAAGCACACCACCUGCUUCCAGGACGUGGUGGUGGACGUGGACUGCGCCGAGAACACCAAGGAGGACCAGCUGGCCGAGAUCAGCUACCGCUUCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCCUGGAUCGUGGUGAACACCAGCACCCUGUUCGACGAGCUGGAGCUGGACCCCCCCGAGAUCGAGCCCGGCGUGCUGAAGGUGCUGCGCACCGAGAAGCAGUACCUGGGCGUGUACAUCUGGAACAUGCGCGGCAGCGACGGCACCAGCACCUACGCCACCUUCCUGGUGACCUGGAAGGGCGACGAAAAGACCCGCAACCCCACCCCCGCCGUGACCCCCCAGCCCCGCGGCGCCGAGUUCCACAUGUGGAACUACCACAGCCACGUGUUCAGCGUGGGCGACACCUUCAGCCUGGCCAUGCACCUGCAGUACAAGAUCCACGAGGCCCCCUUCGACCUGCUGCUGGAGUGGCUGUACGUGCCCAUCGACCCCACCUGCCAGCCCAUGCGCCUGUACAGCACCUGCCUGUACCACCCCAACGCCCCCCAGUGCCUGAGCCACAUGAACAGCGGCUGCACCUUCACCAGCCCCCACCUGGCCCAGCGCGUGGCCAGCACCGUGUACCAGAACUGCGAGCACGCCGACAACUACACCGCCUACUGCCUGGGCAUCAGCCACAUGGAGCCCAGCUUCGGCCUGAUCCUGCACGACGGCGGCACCACCCUGAAGUUCGUGGACACCCCCGAGAGCCUGAGCGGCCUGUACGUGUUCGUGGUGUACUUCAACGGCCACGUGGAGGCCGUGGCCUACACCGUGGUGAGCACCGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUCGAGGAGCGCGGCUUCCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCCGCCACCACCAAGCCCAAGGAGAUCACCCCCGUGAACCCCGGCACCAGCCCCCUGAUCCGCUACGCCGCCUGGACCGGCGGCCUGGCCGCCGUGGUGCUGCUGUGCCUGGUGAUCUUCCUGAUCUGCACCGCCAAGCGCAUGCGCGUGAAGGCCUACCGCGUGGACAAGAGCCCCUACAACCAGAGCAUGUACUACGCCGGCCUGCCCGUGGACGACUUCGAGGACAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGUUCGGCAACGCCAUCGGCGGCAGCCACGGCGGCAGCAGCUACACCGUGUACAUCGACAAGACCCGC 148
ms3 CO1 (gE_ms3_TM)RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 2) AUGGGCACCGUGAACAAGCCUGUUGUGGGCGUGCUGAUGGGCUUCGGCAUCAUCACAGGCACCCUGCGGAUCACCAAUCCUGUGCGGGCUAGCGUGCUGAGAUACGACGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACCAACAGCGUGUACGAGCCCUACUACCACAGCGAUCACGCCGAGUCUAGCUGGGUCAACAGAGGCGAGAGCAGCAGAAAGGCCUACGACCACAACAGCCCCUACAUCUGGCCCCGGAACGACUACGAUGGCUUCCUGGAAAAUGCCCACGAGCACCACGGCGUGUACAAUCAAGGCAGAGGCAUCGACAGCGGCGAGAGACUGAUGCAGCCUACACAGAUGAGCGCCCAAGAGGACCUGGGAGAUGAUACCGGCAUCCACGUGAUCCCCACACUGAACGGCGACGACAGACACAAGAUCGUGAACGUGGACCAGCGGCAGUACGGCGACGUGUUCAAGGGCGACCUGAAUCCUAAGCCUCAGGGCCAGCGCCUGAUCGAGGUGUCCGUGGAGGAGAAUCACCCCUUCACACUGAGAGCCCCUAUCCAGAGAAUCUACGGCGUGCGCUAUACCGAGACAUGGUCCUUUCUGCCCAGCCUGACAUGUACCGGGGAUGCCGCUCCUGCCAUCCAGCACAUUUGCCUGAAGCACACCACCUGUUUCCAGGACGUGGUGGUGGAUGUGGACUGCGCCGAGAACACCAAAGAGGAUCAGCUGGCCGAGAUCAGCUACCGGUUCCAGGGAAAGAAAGAGGCCGACCAGCCUUGGAUCGUGGUCAACACCAGCACACUGUUCGACGAGCUGGAACUGGACCCUCCUGAGAUUGAACCCGGGGUGCUGAAGGUGCUGAGAACCGAGAAGCAGUACCUGGGAGUGUACAUCUGGAACAUGAGAGGCAGCGACGGCACCUCUACCUACGCCACCUUUCUGGUCACAUGGAAGGGCGACGAGAAAACACGGAACCCCACACCAGCUGUGACCCCUCAACCUAGAGGCGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCACAGCCACGUGUUCAGCGUGGGCGAUACCUUUAGCCUGGCCAUGCAUCUGCAGUACAAGAUCCACGAGGCCCCUUUCGACCUGCUGCUGGAAUGGCUGUACGUGCCCAUCGAUCCUACCUGCCAGCCUAUGCGGCUGUACUCCACCUGUCUGUAUCACCCCAACGCUCCCCAGUGCCUGAGCCACAUGAAUAGCGGCUGCACCUUCACAAGCCCUCACCUGGCUCAGCGAGUGGCCAGCACAGUGUACCAGAAUUGCGAGCACGCCGACAAUUACACCGCCUACUGUCUGGGCAUCAGCCACAUGGAACCUAGCUUCGGCCUGAUCCUGCACGAUGGCGGCACAACCCUGAAGUUCGUGGAUACCCCUGAGAGCCUGAGCGGCCUGUAUGUGUUCGUGGUGUACUUCAACGGCCACGUGGAAGCCGUGGCCUACACCGUGGUGUCUACCGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUCGAGGAAAGAGGCUUCCCUCCAACUGCUGGACAGCCUCCUGCCACCACCAAGCCUAAAGAAAUCACACCCGUGAAUCCCGGCACAAGCCCACUGAUCAGAUACGCCGCUUGGACAGGCGGACUGGCU 149
ms3 CO2DNA    UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 2) AUGGGCACCGUGAACAAGCCCGUGGUGGGCGUGCUGAUGGGCUUCGGCAUCAUCACCGGCACCCUGCGCAUCACCAACCCCGUGCGCGCCAGCGUGCUGCGCUACGACGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACCAACAGCGUGUACGAGCCCUACUACCACAGCGACCACGCCGAGAGCAGCUGGGUGAACCGCGGCGAGAGCAGCCGCAAGGCCUACGACCACAACAGCCCCUACAUCUGGCCCCGCAACGACUACGACGGCUUCCUGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGCGUGUACAACCAGGGCCGCGGCAUCGACAGCGGCGAGCGCCUGAUGCAGCCCACCCAGAUGAGCGCCCAGGAGGACCUGGGCGACGACACCGGCAUCCACGUGAUCCCCACCCUGAACGGCGACGACCGCCACAAGAUCGUGAACGUGGACCAGCGCCAGUACGGCGACGUGUUCAAGGGCGACCUGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGCCUGAUCGAGGUGAGCGUGGAGGAGAACCACCCCUUCACCCUGCGCGCCCCCAUCCAGCGCAUCUACGGCGUGCGCUACACCGAGACCUGGAGCUUCCUGCCCAGCCUGACCUGCACCGGCGACGCCGCCCCCGCCAUCCAGCACAUCUGCCUGAAGCACACCACCUGCUUCCAGGACGUGGUGGUGGACGUGGACUGCGCCGAGAACACCAAGGAGGACCAGCUGGCCGAGAUCAGCUACCGCUUCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCCUGGAUCGUGGUGAACACCAGCACCCUGUUCGACGAGCUGGAGCUGGACCCCCCCGAGAUCGAGCCCGGCGUGCUGAAGGUGCUGCGCACCGAGAAGCAGUACCUGGGCGUGUACAUCUGGAACAUGCGCGGCAGCGACGGCACCAGCACCUACGCCACCUUCCUGGUGACCUGGAAGGGCGACGAAAAGACCCGCAACCCCACCCCCGCCGUGACCCCCCAGCCCCGCGGCGCCGAGUUCCACAUGUGGAACUACCACAGCCACGUGUUCAGCGUGGGCGACACCUUCAGCCUGGCCAUGCACCUGCAGUACAAGAUCCACGAGGCCCCCUUCGACCUGCUGCUGGAGUGGCUGUACGUGCCCAUCGACCCCACCUGCCAGCCCAUGCGCCUGUACAGCACCUGCCUGUACCACCCCAACGCCCCCCAGUGCCUGAGCCACAUGAACAGCGGCUGCACCUUCACCAGCCCCCACCUGGCCCAGCGCGUGGCCAGCACCGUGUACCAGAACUGCGAGCACGCCGACAACUACACCGCCUACUGCCUGGGCAUCAGCCACAUGGAGCCCAGCUUCGGCCUGAUCCUGCACGACGGCGGCACCACCCUGAAGUUCGUGGACACCCCCGAGAGCCUGAGCGGCCUGUACGUGUUCGUGGUGUACUUCAACGGCCACGUGGAGGCCGUGGCCUACACCGUGGUGAGCACCGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUCGAGGAGCGCGGCUUCCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCCGCCACCACCAAGCCCAAGGAGAUCACCCCCGUGAACCCCGGCACCAGCCCCCUGAUCCGCUACGCCGCCUGGACCGGCGGCCUGGCC    150
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gE_P4RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAGCCGGUUGUUGGGGUGCUCAUGGGGUUCGGCAUCAUCACCGGUACACUCAGGAUUACAAAUCCUGUACGCGCGAGUGUCUUGCGGUACGACGAUUUCCAUAUCGAUGAAGAUAAGCUCGACACGAACUCCGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUUCUGAUCAUGCGGAGUCGUCAUGGGUGAAUCGGGGUGAGUCUUCCAGGAAGGCUUAUGAUCAUAACAGCCCAUACAUAUGGCCUCGUAAUGAUUAUGACGGCUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCACCACGGUGUCUAUAACCAAGGUCGAGGGAUAGACUCUGGGGAAAGGCUGAUGCAGCCUACCCAGAUGUCGGCACAGGAGGACCUAGGGGAUGACACUGGCAUCCAUGUCAUCCCCACGCUCAAUGGCGACGACCGCCAUAAGAUCGUGAAUGUGGACCAGCGGCAGUACGGGGAUGUCUUCAAAGGAGACCUUAACCCUAAGCCCCAAGGGCAGCGGUUGAUAGAGGUCUCCGUUGAAGAAAAUCAUCCCUUUACUCUGCGGGCUCCCAUUCAACGCAUCUAUGGGGUCCGCUAUACUGAGACGUGGUCCUUCUUGCCGUCCCUGACCUGUACAGGUGAUGCUGCCCCCGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUCAAGCAUACUACUUGCUUUCAGGACGUUGUGGUCGAUGUCGAUUGCGCUGAGAACACGAAGGAGGAUCAGUUAGCUGAGAUUUCCUAUCGGUUCCAGGGUAAAAAGGAGGCCGAUCAGCCGUGGAUAGUGGUGAACACUUCAACCCUAUUCGACGAGCUUGAAUUGGACCCUCCCGAGAUCGAACCCGGCGUCCUGAAGGUUCUGAGAACAGAGAAGCAGUAUCUUGGGGUAUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGCAGCGACGGCACGUCCACCUAUGCAACCUUCUUGGUGACAUGGAAGGGCGAUGAGAAGACACGUAACCCCACUCCGGCUGUGACACCACAGCCGCGAGGCGCUGAGUUCCACAUGUGGAAUUAUCAUUCCCAUGUAUUCAGUGUUGGGGAUACGUUCUCUCUGGCCAUGCACCUCCAGUACAAGAUACACGAGGCGCCCUUUGAUCUUUUACUGGAGUGGCUGUAUGUGCCAAUCGAUCCUACAUGUCAACCGAUGAGGUUGUAUUCCACUUGUUUAUAUCACCCAAACGCUCCUCAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGAUGUACCUUUACAUCACCCCAUCUGGCACAGAGGGUGGCCUCCACGGUCUAUCAGAAUUGUGAACACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUCAGCCACAUGGAGCCUAGCUUCGGGCUGAUACUCCACGACGGUGGGACCACCUUAAAGUUCGUGGAUACUCCCGAGUCUUUGAGUGGUCUGUAUGUGUUUGUGGUUUAUUUUAAUGGACACGUGGAGGCGGUGGCGUACACGGUGGUCAGCACAGUUGACCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCACCCGCUACCACGAAGCCCAAGGAGAUUACUCCUGUGAAUCCUGGGACAUCACCUCUUAUCAGGUACGCCGCGUGGACCGGUGGCCUUGCCGCAGUUGUUCUUCUGUGUCUGGUGAUUUUCUUGAUCUGCACCGCAAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUACCGGGUCGACAAGAGUCCUUACAAUCAGAGUAUGUACUACGCGGGCCUCCCGGUAGACGACUUUGAGGACUCUGAGUCGACCGACACAGAAGAAGAAUUCGGCAACGCCAUCGGGGGGAGCCAUGGUGGCUCCUCCUACACGGUGUAUAUUGAUAAGACCAGG 171
gE_P6RNA    UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACAGUUAAUAAACCUGUGGUGGGGGUAUUGAUGGGGUUCGGAAUUAUCACGGGAACGUUGCGUAUAACGAAUCCGGUCAGAGCAUCCGUCUUGCGAUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAAGACAAACUGGAUACAAACUCCGUAUAUGAGCCUUACUACCAUUCAGAUCAUGCGGAGUCUUCAUGGGUAAAUCGGGGAGAGUCUUCGCGAAAAGCGUACGAUCAUAACUCACCUUAUAUAUGGCCACGUAAUGAUUAUGAUGGAUUUUUAGAGAACGCACACGAACACCAUGGGGUGUAUAAUCAGGGCCGUGGUAUCGAUAGCGGGGAACGGUUAAUGCAACCCACACAAAUGUCUGCACAGGAGGAUCUUGGGGACGAUACGGGCAUCCACGUUAUCCCUACGUUAAACGGCGAUGACAGACAUAAAAUUGUAAAUGUGGACCAACGUCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAACCCCAAGGCCAAAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAAGAAAAUCACCCGUUUACUUUACGCGCACCGAUUCAGCGGAUUUAUGGAGUCCGGUACACCGAGACUUGGAGCUUUUUGCCGUCAUUAACCUGUACGGGAGACGCAGCGCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGCUUAAAACAUACAACAUGCUUUCAAGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGCGCGGAAAAUACUAAAGAGGAUCAGUUGGCCGAAAUCAGUUACCGUUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUUGUAAACACGAGCACACUGUUUGAUGAACUCGAAUUAGACCCCCCCGAGAUUGAACCGGGUGUCUUGAAAGUACUUCGGACAGAAAAACAAUACUUGGGUGUGUACAUUUGGAACAUGCGCGGCUCCGAUGGUACGUCUACCUACGCCACGUUUUUGGUCACCUGGAAAGGGGAUGAAAAAACAAGAAACCCUACGCCCGCAGUAACUCCUCAACCAAGAGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCACUCGCAUGUAUUUUCAGUUGGUGAUACGUUUAGCUUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUACAUGAAGCGCCAUUUGAUUUGCUGUUAGAGUGGUUGUAUGUCCCCAUCGAUCCUACAUGUCAACCAAUGCGGUUAUAUUCUACGUGUUUGUAUCAUCCCAACGCACCCCAAUGCCUCUCUCAUAUGAAUUCCGGUUGUACAUUUACCUCGCCACAUUUAGCCCAGCGUGUUGCAAGCACAGUGUAUCAAAAUUGUGAACAUGCAGAUAACUACACCGCAUAUUGUCUGGGAAUAUCUCAUAUGGAGCCUAGCUUUGGUCUAAUCUUACACGACGGGGGCACCACGUUAAAGUUUGUAGAUACACCCGAGAGUUUGUCGGGAUUAUACGUUUUUGUGGUGUAUUUUAACGGGCAUGUUGAAGCCGUAGCAUACACUGUUGUAUCCACAGUAGAUCAUUUUGUAAACGCAAUUGAGGAACGUGGAUUUCCGCCAACGGCCGGUCAGCCACCGGCGACUACUAAACCCAAGGAAAUUACCCCCGUAAACCCCGGAACGUCACCACUUAUACGAUAUGCCGCAUGGACCGGAGGGCUUGCAGCAGUAGUACUUUUAUGUCUCGUAAUAUUUUUAAUCUGUACGGCUAAACGAAUGAGGGUUAAAGCCUAUAGGGUAGACAAGUCCCCGUAUAACCAAAGCAUGUAUUACGCUGGCCUUCCAGUGGACGAUUUCGAGGACUCGGAAUCUACGGAUACGGAAGAAGAGUUUGGUAACGCGAUUGGAGGGAGUCACGGGGGUUCGAGUUACACGGUGUAUAUAGAUAAGACCCGG 172
gE_P7RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAGCCGGUUGUUGGGGUGCUCAUGGGGUUCGGCAUCAUCACCGGUACACUCAGGAUUACAAAUCCUGUACGCGCGAGUGUCUUGCGGUACGACGAUUUCCAUAUCGAUGAAGAUAAGCUCGACACGAACUCCGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUUCUGAUCAUGCGGAGUCGUCAUGGGUGAAUCGGGGUGAGUCUUCCAGGAAGGCUUAUGAUCAUAACAGCCCAUACAUAUGGCCUCGUAAUGAUUAUGACGGCUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCACCACGGUGUCUAUAACCAAGGUCGAGGGAUAGACUCUGGGGAAAGGCUGAUGCAGCCUACCCAGAUGUCGGCACAGGAGGACCUAGGGGAUGACACUGGCAUCCAUGUCAUCCCCACGCUCAAUGGCGACGACCGCCAUAAGAUCGUGAAUGUGGACCAGCGGCAGUACGGGGAUGUCUUCAAAGGAGACCUUAACCCUAAGCCCCAAGGGCAGCGGUUGAUAGAGGUCUCCGUUGAAGAAAAUCAUCCCUUUACUCUGCGGGCUCCCAUUCAACGCAUCUAUGGGGUCCGCUAUACUGAGACGUGGUCCUUCUUGCCGUCCCUGACCUGUACAGGUGAUGCUGCCCCCGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUCAAGCAUACUACUUGCUUUCAGGACGUUGUGGUCGAUGUCGAUUGCGCUGAGAACACGAAGGAGGAUCAGUUAGCUGAGAUUUCCUAUCGGUUCCAGGGUAAAAAGGAGGCCGAUCAGCCGUGGAUAGUGGUGAACACUUCAACCCUAUUCGACGAGCUUGAAUUGGACCCUCCCGAGAUCGAACCCGGCGUCCUGAAGGUUCUGAGAACAGAGAAGCAGUAUCUUGGGGUAUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGCAGCGACGGCACGUCCACCUAUGCAACCUUCUUGGUGACAUGGAAGGGCGAUGAGAAGACACGUAACCCCACUCCGGCUGUGACACCACAGCCGCGAGGCGCUGAGUUCCACAUGUGGAAUUAUCAUUCCCAUGUAUUCAGUGUUGGGGAUACGUUCUCUCUGGCCAUGCACCUCCAGUACAAGAUACACGAGGCGCCCUUUGAUCUUUUACUGGAGUGGCUGUAUGUGCCAAUCGAUCCUACAUGUCAACCGAUGAGGUUGUAUUCCACUUGUUUAUAUCACCCAAACGCUCCUCAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGAUGUACCUUUACAUCACCCCAUCUGGCACAGAGGGUGGCCUCCACGGUCUAUCAGAAUUGUGAACACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUCAGCCACAUGGAGCCUAGCUUCGGGCUGAUACUCCACGACGGUGGGACCACCUUAAAGUUCGUGGAUACUCCCGAGUCUUUGAGUGGUCUGUAUGUGUUUGUGGUUUAUUUUAAUGGACACGUGGAGGCGGUGGCGUACACGGUGGUCAGCACAGUUGACCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCACCCGCUACCACGAAGCCCAAGGAGAUUACUCCUGUGAAUCCUGGGACAUCACCUCUUAUCAGGUACGCCGCGUGGACCGGUGGCCUUGCCGCAGUUGUUCUUCUGUGUCUGGUGAUUUUCUUGAUCUGCACCGCAAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUACCGGGUCGACAAGAGUCCUUACAAUCAGAGUAUGUACUACGCGGGCCUCCCGGUAGACGACUUUGAGGACUCUGAGUCGACCGACACAGAAGAAGAAUUCGGCAACGCCAUCGGGGGGAGCCAUGGUGGCUCCUCCUACACGGUGUAUAUUGAUAAGACCAGG 173
gE EB1RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGUACUGUGAAUAAGCCUGUGGUGGGGGUUCUAAUGGGGUUCGGGAUCAUCACUGGAACACUGAGGAUUACCAAUCCCGUUAGGGCCUCCGUGCUGCGUUACGAUGACUUCCACAUCGACGAGGAUAAGCUGGAUACCAAUUCAGUUUAUGAGCCUUACUACCACUCUGAUCACGCCGAGAGCUCUUGGGUGAAUCGGGGGGAGUCCUCUAGGAAAGCCUAUGAUCAUAAUUCUCCAUAUAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUUCUGGAGAAUGCACACGAACAUCACGGCGUUUAUAACCAAGGUCGUGGGAUUGACUCGGGCGAGCGUCUGAUGCAACCCACUCAGAUGUCCGCUCAGGAAGACCUGGGCGAUGACACUGGGAUUCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGCGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAAUGUGGAUCAGAGACAGUAUGGAGAUGUGUUUAAGGGCGAUCUGAAUCCGAAGCCCCAGGGUCAGAGACUCAUCGAAGUGAGUGUGGAGGAAAACCAUCCCUUUACUCUGAGGGCUCCGAUUCAGCGCAUCUACGGUGUGCGCUACACUGAGACUUGGAGUUUCCUGCCGUCUUUGACUUGCACAGGUGACGCUGCCCCCGCUAUUCAGCAUAUUUGCCUCAAGCACACAACAUGCUUCCAGGAUGUUGUGGUUGACGUGGAUUGCGCAGAGAACACCAAAGAGGAUCAAUUGGCCGAAAUCUCCUAUCGUUUCCAAGGAAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUGGUUAAUACCUCUACCUUGUUCGAUGAGCUGGAGCUCGAUCCUCCUGAGAUCGAGCCCGGCGUGUUGAAGGUUCUCAGGACUGAGAAGCAGUAUUUGGGGGUGUACAUCUGGAAUAUGCGGGGUAGUGACGGAACGUCCACCUACGCCACUUUUCUUGUGACCUGGAAAGGCGAUGAGAAGACACGUAACCCUACCCCUGCUGUGACUCCACAGCCAAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUAUCACAGUCACGUGUUUAGCGUUGGCGAUACGUUCAGUCUGGCAAUGCAUCUGCAGUAUAAGAUACACGAGGCGCCCUUUGAUCUUCUGCUAGAAUGGUUGUAUGUCCCAAUUGAUCCAACCUGUCAGCCUAUGAGGCUGUACAGCACUUGUCUGUACCAUCCUAACGCUCCUCAAUGUCUUUCGCACAUGAACAGUGGGUGCACCUUCACAUCUCCGCAUCUGGCGCAGAGGGUGGCCUCCACCGUCUAUCAGAAUUGCGAACACGCCGAUAACUAUACCGCUUAUUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCCAGCUUUGGGCUGAUCCUGCACGACGGUGGGACGACUCUGAAGUUUGUGGACACUCCAGAGUCUCUCAGCGGUUUGUACGUGUUCGUGGUGUAUUUCAAUGGGCAUGUCGAGGCCGUGGCCUACACCGUUGUAAGUACUGUGGAUCACUUUGUGAAUGCUAUCGAGGAGCGUGGCUUCCCGCCCACGGCGGGACAGCCGCCUGCCACGACGAAGCCCAAGGAGAUCACUCCAGUGAAUCCUGGUACAUCGCCUUUGAUACGGUACGCAGCCUGGACUGGUGGUCUGGCUGCUGUCGUGCUCUUAUGUCUGGUGAUCUUUCUGAUUUGUACUGCUAAGCGGAUGCGAGUGAAGGCUUAUCGGGUCGAUAAGAGCCCAUACAAUCAGAGCAUGUACUAUGCUGGUCUCCCUGUGGAUGAUUUUGAAGAUAGUGAGAGCACAGACACUGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCCAUCGGUGGUAGCCACGGCGGAUCUUCUUACACUGUCUAUAUCGACAAGACUCGU 174
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gE MM_3RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 177
gE MM_4RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 178
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gE MM_18RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 192
gE MM_19UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 193
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gE MM_24RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 198
gE MM_25RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 199
gE MM_26RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 200
gE MM_27RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 201
gE MM_28RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 202
gE MM_29RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 203
gE MM_30RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 204
gE MM_31RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 205
gE MM_32RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 206
gE MM_33RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 207
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gE MM_35RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 209
gE MM_36RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 210
gE MM_37RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 211
gE MM_38RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 212
gE MM_39RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1)    AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 213
gE MM_40RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 214
gE MM_41RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 215
gE MM_42RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 216
gE MM_43RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 217
gE MM_44RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 218
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gE MM_46RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 220
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gE MM_51RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 225
gE MM_52RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 226
gE MM_53RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 227
gE MM_54RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 228
gE MM_55RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 229
gE MM_56RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 230
gE MM_57RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 231
gE MM_58RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 232
gE MM_59RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 233
gE MM_60RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGCAGGGGGAUUGAUUCUGGAGAGCGUCUUAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUGGGUGAUGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCAACUCUUAAUGGUGACGAUCGCCAUAAGAUUGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGGGACGUUUUUAAGGGCGAUCUCAAUCCUAAGCCGCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUUUCUGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACCUUGCGGGCUCCAAUCCAAAGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAAACUUGGUCAUUUCUGCCCUCGCUUACCUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 234
gE MM_61RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCCCACCUAGCCCAGCGGGUGGCCUCGACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACGGCAUACUGCCUCGGAAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUCGGGCUGAUUCUGCAUGACGGUGGAACUACACUUAAAUUCGUGGACACUCCUGAGUCGCUUAGCGGGUUGUACGUGUUUGUAGUGUAUUUCAAUGGUCAUGUUGAGGCAGUGGCUUAUACCGUUGUCAGCACUGUUGAUCAUUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCGCCUACGGCUGGGCAACCCCCCGCUACGACUAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 235
gE MM_62RNA UGA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGUGACGCUGCCCCUGCUAUUCAGCAUAUAUGCCUUAAGCAUACAACUUGUUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAAGAUCAGCUUGCCGAAAUUUCUUACAGAUUUCAGGGCAAAAAGGAAGCUGAUCAACCUUGGAUUGUUGUCAAUACAUCCACGCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCCCCGGAAAUCGAGCCUGGCGUGUUGAAGGUGCUGCGUACUGAGAAGCAAUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCGGACGGCACCAGUACCUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCUAAGGAAAUUACCCCGGUGAAUCCAGGUACCUCGCCUCUUAUCAGGUAUGCAGCCUGGACCGGUGGUCUGGCUGCAGUCGUGCUACUAUGCCUCGUGAUUUUCUUGAUCUGCACUGCUAAACGCAUGCGUGUCAAGGCUUAUAGGGUGGAUAAAUCCCCCUAUAACCAGUCUAUGUACUAUGCUGGCCUUCCUGUGGACGACUUCGAGGAUUCGGAGUCGACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCGAUCGGGGGGAGUCACGGGGGUAGUAGCUACACUGUGUAUAUCGAUAAGACGAGG 236
gE MM_63RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCUGUGGUCGGAGUGUUGAUGGGGUUUGGGAUCAUCACCGGGACAUUGAGGAUCACGAAUCCUGUUCGUGCCUCGGUGUUGCGGUACGAUGAUUUCCACAUAGAUGAGGAUAAGUUGGAUACCAAUUCCGUUUAUGAGCCCUAUUACCACUCUGACCACGCCGAAUCAUCUUGGGUGAACCGGGGUGAGUCUUCGCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGUUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUUUAUAACCAAGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACCUUUCUAGUAACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCGCAGCCUAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUUCCGUGGGUGAUACGUUCAGUCUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUACACGAAGCUCCUUUUGAUCUUCUACUGGAAUGGCUGUAUGUGCCGAUUGACCCUACGUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUUCGACGUGUUUGUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGCGGAUGCACUUUCACCAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 237
gE MM_64RNA UAA終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUUAAUAAGCCAGUUGUGGGAGUUCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGGACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUUCGCGCCUCUGUUUUACGCUAUGAUGACUUUCAUAUUGAUGAGGAUAAGCUCGACACAAACUCUGUGUACGAGCCUUAUUAUCAUAGCGAUCAUGCAGAGUCGUCAUGGGUAAAUAGGGGUGAGAGUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCUUAUAUCUGGCCAAGAAAUGAUUACGAUGGUUUCUUGGAGAAUGCCCAUGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGGGGUAUCGACUCUGGCGAGAGAUUGAUGCAACCGACCCAAAUGAGUGCGCAGGAGGACCUAGGCGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUUCCUACUCUGAAUGGCGACGACAGACACAAGAUUGUCAAUGUUGAUCAGCGGCAGUACGGGGAUGUGUUCAAGGGUGACCUCAAUCCGAAGCCUCAGGGGCAGAGGCUCAUUGAGGUUUCGGUUGAGGAGAAUCAUCCUUUUACACUCCGUGCUCCUAUUCAGAGGAUUUACGGGGUCCGGUAUACAGAGACCUGGUCUUUUCUGCCGUCACUUACUUGCACUGGAGAUGCUGCUCCCGCUAUUCAACAUAUCUGUCUCAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUAGACGUCGAUUGCGCUGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGUUACCGCUUCCAGGGGAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUUGUGAAUACGUCUACACUGUUUGACGAGCUUGAACUGGACCCUCCAGAAAUCGAGCCAGGUGUGUUGAAAGUGUUGAGGACUGAGAAACAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUCCUCGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGGAAUCCCACGCCGGCUGUGACCCCACAGCCGCGUGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCUCUGUGGGCGACACGUUCAGUUUGGCCAUGCACCUUCAGUACAAGAUACACGAAGCCCCUUUUGAUCUUCUGCUCGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUUGACCCGACGUGUCAGCCCAUGAGAUUAUACUCUACGUGUUUAUAUCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUGAGUCAUAUGAACAGUGGGUGUACGUUCACAAGUCCUCAUCUAGCGCAGCGCGUGGCUUCCACUGUCUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGACAACUAUACAGCCUACUGUCUGGGGAUUAGCCACAUGGAGCCAAGCUUUGGGCUGAUUCUUCACGACGGUGGCACCACACUUAAGUUCGUGGACACUCCCGAGUCUUUAAGUGGGUUGUAUGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUGGAAGCCGUGGCUUACACUGUGGUGAGUACUGUGGAUCACUUCGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGGGGGUUUCCUCCUACGGCAGGACAGCCCCCCGCGACCACAAAGCCCAAAGAGAUUACACCAGUGAACCCUGGCACAAGCCCCCUGAUUAGGUAUGCUGCCUGGACAGGCGGGCUUGCUGCCGUGGUGUUGCUGUGUCUAGUCAUCUUUUUGAUCUGCACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUCGGGUUGACAAGUCUCCGUAUAAUCAGUCGAUGUAUUACGCAGGCCUUCCUGUGGAUGAUUUUGAGGACUCUGAGUCCACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUUGGCGGUAGUCACGGGGGGUCGUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGG 238
gE FO_D15_1_EBRNA    UAGUGA (SEQ ID NO: 301)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAGCCCGUAGUGGGGGUCCUGAUGGGGUUCGGGAUCAUCACGGGGACUCUGCGGAUCACUAAUCCGGUUAGGGCCUCUGUGCUGCGCUAUGACGACUUCCACAUUGAUGAGGAUAAGCUGGACACAAAUAGCGUAUAUGAGCCAUAUUACCAUAGCGAUCAUGCUGAGUCUUCCUGGGUGAAUAGGGGUGAGUCUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCACAAUAGUCCAUACAUCUGGCCCCGGAAUGACUAUGAUGGCUUUCUUGAGAACGCCCACGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGGCGCGGAAUUGACAGUGGAGAGAGGUUGAUGCAGCCUACUCAGAUGUCCGCUCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGUAUCCAUGUGAUUCCGACCUUAAACGGUGAUGACCGGCAUAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAAAGGCAAUAUGGUGAUGUGUUUAAGGGGGAUCUUAAUCCUAAACCUCAAGGACAGAGGUUGAUUGAGGUCUCUGUGGAGGAAAAUCAUCCUUUCACUCUGCGUGCGCCCAUACAGAGAAUCUAUGGAGUUCGAUACACCGAAACCUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUGACAUGCACUGGGGACGCCGCCCCGGCGAUUCAGCACAUAUGCCUGAAGCAUACCACCUGCUUCCAGGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGUGCCGAGAAUACCAAGGAGGAUCAACUCGCCGAAAUCUCAUACAGGUUCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCGUGGAUCGUCGUCAAUACAAGUACUCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCACCUGAGAUCGAGCCAGGUGUGCUGAAAGUGUUGCGUACUGAAAAACAGUAUCUCGGAGUUUAUAUUUGGAACAUGAGGGGCUCUGAUGGUACAAGCACAUACGCAACCUUUCUGGUGACAUGGAAAGGCGACGAGAAAACUCGUAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCACAGCCUCGGGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAACUACCAUUCUCACGUGUUUAGUGUGGGUGACACAUUUUCCCUCGCUAUGCACCUGCAGUACAAGAUCCAUGAAGCCCCCUUUGAUCUUCUGCUGGAGUGGCUCUACGUGCCGAUAGAUCCAACUUGUCAGCCCAUGAGGUUGUACAGUACGUGCUUGUACCACCCCAACGCCCCCCAAUGUCUGAGCCAUAUGAACUCCGGGUGCACAUUCACGUCACCCCAUCUUGCCCAGCGUGUUGCGUCCACGGUGUAUCAGAACUGCGAGCACGCAGAUAAUUACACCGCCUAUUGCCUUGGCAUCUCACACAUGGAACCUAGUUUUGGCCUGAUCCUCCAUGACGGCGGAACUACUCUCAAAUUCGUGGAUACCCCUGAGUCUCUGUCCGGCCUGUACGUGUUUGUUGUAUACUUCAACGGCCAUGUGGAGGCUGUGGCGUACACUGUUGUGAGCACUGUCGAUCACUUUGUGAAUGCUAUCGAGGAAAGAGGCUUUCCUCCGACAGCUGGACAGCCGCCUGCCACCACUAAGCCCAAGGAGAUCACACCUGUCAAUCCCGGAACCUCGCCACUGAUAAGGUAUGCCGCCUGGACCGGCGGCUUGGCCGCUGUGGUGCUUUUGUGUUUAGUUAUUUUUUUGAUUUGCACUGCGAAACGCAUGCGAGUUAAGGCAUACCGGGUGGAUAAGUCGCCCUACAACCAGUCUAUGUACUAUGCCGGGCUCCCCGUGGACGAUUUUGAGGACUCAGAGAGCACGGACACAGAGGAGGAGUUCGGGAACGCGAUAGGGGGGUCCCACGGGGGGUCCUCCUACACCGUGUACAUAGACAAGACUCGG 239
gE FO_D15_1RNA UAGUGA (SEQ ID NO: 301)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAGCCCGUAGUGGGGGUCCUGAUGGGGUUCGGGAUCAUCACGGGGACUCUGCGGAUCACUAAUCCGGUUAGGGCCUCUGUGCUGCGCUAUGACGACUUCCACAUUGAUGAGGAUAAGCUGGACACAAAUAGCGUAUAUGAGCCAUAUUACCAUAGCGAUCAUGCUGAGUCUUCCUGGGUGAAUAGGGGUGAGUCUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCACAAUAGUCCAUACAUCUGGCCCCGGAAUGACUAUGAUGGCUUUCUUGAGAACGCCCACGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGGCGCGGAAUUGACAGUGGAGAGAGGUUGAUGCAGCCUACUCAGAUGUCCGCUCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGUAUCCAUGUGAUUCCGACCUUAAACGGUGAUGACCGGCAUAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAAAGGCAAUAUGGUGAUGUGUUUAAGGGGGAUCUUAAUCCUAAACCUCAAGGACAGAGGUUGAUUGAGGUCUCUGUGGAGGAAAAUCAUCCUUUCACUCUGCGUGCGCCCAUACAGAGAAUCUAUGGAGUUCGAUACACCGAAACCUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUGACAUGCACUGGGGACGCCGCGCCGGCGAUUCAGCACAUAUGCCUGAAGCAUACCACCUGCUUCCAGGACGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGUGCCGAGAAUACCAAGGAGGAUCAACUCGCCGAAAUCUCAUACAGGUUCCAGGGCAAGAAGGAGGCCGACCAGCCGUGGAUCGUCGUCAAUACAAGUACUCUUUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCACCUGAGAUCGAGCCAGGUGUGCUGAAAGUGUUGCGUACUGAAAAACAGUAUCUCGGAGUUUAUAUUUGGAACAUGAGGGGCUCUGAUGGUACAAGCACAUACGCAACCUUUCUGGUGACAUGGAAAGGCGACGAGAAAACUCGUAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCACAGCCUCGGGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAACUACCAUUCUCACGUGUUUAGUGUGGGUGACACAUUUUCCCUCGCUAUGCACCUGCAGUACAAGAUCCAUGAAGCCCCCUUUGAUCUUCUGCUGGAGUGGCUCUACGUGCCGAUAGAUCCAACUUGUCAGCCCAUGAGGUUGUACAGUACGUGCUUGUACCACCCCAACGCCCCCCAAUGUCUGAGCCAUAUGAACUCCGGGUGCACAUUCACGUCACCCCAUCUUGCCCAGCGUGUUGCGUCCACGGUGUAUCAGAACUGCGAGCACGCAGAUAAUUACACCGCCUAUUGCCUUGGCAUCUCACACAUGGAACCUAGUUUUGGCCUGAUCCUCCAUGACGGCGGAACUACUCUCAAAUUCGUGGAUACCCCUGAGUCUCUGUCCGGCCUGUACGUGUUUGUUGUAUACUUCAACGGCCAUGUGGAGGCUGUGGCGUACACUGUUGUGAGCACUGUCGAUCACUUUGUGAAUGCUAUCGAGGAAAGAGGCUUUCCUCCGACAGCUGGACAGCCGCCUGCCACCACUAAGCCCAAGGAGAUCACACCUGUCAAUCCCGGAACCUCGCCACUGAUAAGGUAUGCCGCCUGGACCGGCGGCUUGGCCGCUGUGGUGCUUUUGUGUUUAGUUAUUUUUUUGAUUUGCACUGCGAAACGCAUGCGAGUUAAGGCAUACCGGGUGGAUAAGUCGCCCUACAACCAGUCUAUGUACUAUGCCGGGCUCCCCGUGGACGAUUUUGAGGACUCAGAGAGCACGGACACAGAGGAGGAGUUCGGGAACGCGAUAGGGGGGUCCCACGGGGGGUCCUCCUACACCGUGUACAUAGACAAGACUCGG 240
gE FO_D15_2RNA UAAUGA (SEQ ID NO: 300)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGAACCGUCAACAAGCCUGUGGUGGGAGUCCUAAUGGGGUUCGGUAUUAUCACGGGUACCCUGAGGAUCACCAACCCCGUUAGGGCUUCUGUCCUACGCUAUGACGACUUCCAUAUCGAUGAAGAUAAACUAGAUACUAAUAGCGUGUAUGAACCGUACUACCACAGCGACCAUGCUGAGUCGUCGUGGGUCAACCGGGGUGAAUCUUCUAGGAAGGCUUACGAUCAUAAUUCUCCAUACAUCUGGCCAAGGAAUGACUAUGAUGGUUUUCUCGAGAACGCGCACGAACAUCACGGCGUUUACAACCAGGGGCGCGGAAUUGAUAGUGGUGAGAGGUUGAUGCAACCAACUCAGAUGUCCGCUCAAGAAGAUUUAGGCGACGAUACUGGGAUUCAUGUGAUUCCGACCUUGAAUGGCGAUGACCGCCAUAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAAAGGCAAUACGGUGAUGUGUUUAAAGGAGAUCUUAAUCCAAAGCCUCAAGGUCAGAGGCUGAUUGAGGUCUCUGUGGAGGAGAACCACCCCUUUACUCUGCGCGCGCCUAUUCAGAGGAUAUAUGGCGUUCGGUAUACCGAAACUUGGUCGUUCCUGCCCAGUCUAACAUGCACCGGGGAUGCGGCUCCCGCAAUCCAGCAUAUUUGUCUGAAGCAUACAACCUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUUGACUGUGCAGAGAACACUAAGGAGGACCAGCUUGCUGAAAUUUCUUAUAGAUUUCAGGGCAAGAAAGAGGCGGACCAGCCUUGGAUUGUCGUUAACACGAGUACUUUGUUUGAUGAGUUGGAGCUGGAUCCGCCUGAGAUUGAACCUGGGGUGCUGAAAGUGCUGCGCACUGAAAAGCAGUAUCUUGGAGUCUAUAUAUGGAACAUGAGGGGCAGCGAUGGGACAAGCACGUAUGCCACGUUUCUGGUGACUUGGAAGGGCGACGAAAAGACCAGAAACCCGACCCCUGCUGUGACACCACAGCCGAGAGGGGCGGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCAUGUGUUUAGUGUAGGGGACACCUUCUCCCUCGCUAUGCACUUGCAGUAUAAGAUCCACGAAGCCCCAUUCGAUCUGUUGCUGGAGUGGCUUUACGUGCCCAUUGACCCGACUUGUCAGCCCAUGAGACUGUACAGUACCUGUUUGUACCAUCCCAAUGCACCCCAAUGUCUCUCGCAUAUGAACUCUGGAUGCACUUUCACCUCACCCCACCUUGCCCAGCGGGUGGCCUCGACCGUGUACCAGAACUGCGAGCACGCAGAUAACUACACCGCCUAUUGCCUAGGGAUCUCCCAUAUGGAACCUUCGUUUGGAUUAAUUCUCCAUGAUGGCGGGACUACUCUUAAGUUUGUCGACACCCCUGAAAGUCUGUCAGGCCUCUACGUGUUCGUGGUGUACUUCAACGGGCAUGUGGAGGCCGUGGCUUACACCGUUGUGAGCACCGUUGAUCACUUCGUGAACGCUAUCGAGGAGAGAGGCUUUCCGCCAACGGCUGGUCAGCCCCCUGCAACAACCAAGCCAAAGGAGAUCACACCCGUGAACCCCGGCACCAGCCCUUUGAUCCGUUACGCAGCAUGGACCGGGGGGUUGGCAGCUGUGGUGCUGUUGUGUCUGGUUAUCUUCCUUAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCGUACCGGGUUGAUAAGAGUCCUUACAAUCAGUCAAUGUACUAUGCCGGACUUCCUGUCGACGACUUUGAGGAUUCAGAGUCAACCGACACAGAGGAGGAAUUCGGCAAUGCGAUAGGUGGCUCACACGGUGGCUCAUCCUAUACCGUGUAUAUUGACAAGACUAGG 241
gE FO_D15_3RNA UAGUAG (SEQ ID NO: 303)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAGCCUGUGGUUGGAGUGCUGAUGGGGUUUGGUAUAAUCACAGGUACCUUGAGGAUAACCAAUCCUGUUAGGGCCUCUGUGCUGCGCUAUGAUGACUUCCACAUUGAUGAGGAUAAACUAGACACUAACAGCGUGUACGAACCAUAUUACCAUAGCGACCAUGCCGAGUCCUCCUGGGUGAAUAGGGGUGAGUCUUCCAGGAAGGCCUACGAUCACAAUAGUCCAUACAUCUGGCCCCGGAAUGACUAUGAUGGCUUUCUUGAGAACGCACACGAGCAUCACGGUGUUUAUAACCAGGGUCGCGGAAUUGACAGUGGUGAGAGGUUGAUGCAGCCUACUCAGAUGUCCGCUCAGGAGGACUUGGGCGACGAUACUGGGAUCCAUGUCAUCCCGACCCUGAACGGUGAUGACAGACAUAAGAUUGUGAAUGUGGACCAGAGGCAGUAUGGCGAUGUGUUUAAAGGGGACCUGAAUCCAAAGCCUCAGGGACAGAGGCUGAUUGAGGUCUCUGUGGAGGAGAAUCAUCCCUUCACUCUGCGUGCUCCCAUUCAGAGAAUUUACGGCGUUCGGUACACUGAAACUUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUUACAUGUACCGGAGACGCCGCUCCGGCCAUCCAGCACAUAUGCCUGAAGCACACCACCUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGACGUGGACUGUGCAGAAAACACCAAGGAAGACCAACUUGCUGAAAUCAGCUACCGGUUUCAGGGCAAGAAGGAAGCAGACCAACCGUGGAUUGUCGUCAACACAUCCACUUUGUUUGACGAGCUGGAGCUGGAUCCUCCCGAGAUCGAACCCGGCGUGCUGAAAGUGCUUCGUACUGAAAAGCAGUAUCUCGGAGUUUAUAUUUGGAACAUGAGGGGUAGUGACGGUACAAGCACGUAUGCUACCUUUCUGGUGACUUGGAAGGGCGACGAGAAGACGCGGAACCCUACCCCUGCUGUGACGCCACAGCCUAGGGGAGCCGAGUUUCACAUGUGGAACUACCAUUCUCACGUGUUUAGUGUGGGAGAUACGUUUUCCCUGGCUAUGCACCUCCAGUACAAGAUCCACGAAGCGCCCUUCGAUCUUCUGCUGGAGUGGCUCUACGUGCCCAUAGAUCCAACUUGUCAGCCCAUGAGAUUGUACAGUACAUGCCUGUACCAUCCAAAUGCCCCUCAAUGUCUGAGCCAUAUGAACUCUGGAUGCACUUUCACGUCACCCCAUCUUGCCCAGCGGGUUGCGUCUACGGUGUACCAGAACUGUGAACACGCUGAUAAUUACACCGCCUACUGCCUAGGGAUCUCCCAUAUGGAACCUAGUUUCGGUCUAAUCCUCCAUGACGGCGGCACCACUCUCAAGUUCGUGGAUACACCUGAAAGCCUGAGCGGUCUCUACGUGUUUGUUGUCUACUUUAACGGGCACGUAGAGGCCGUGGCUUACACUGUUGUGUCGACCGUCGAUCAUUUUGUGAAUGCGAUCGAGGAGCGCGGGUUUCCUCCGACAGCCGGACAGCCCCCUGCCACGACUAAGCCUAAGGAGAUUACCCCUGUGAAUCCAGGAACCAGUCCCCUGAUUCGGUAUGCUGCGUGGACCGGCGGUCUGGCCGCUGUGGUGCUGUUGUGUCUGGUAAUCUUUCUUAUUUGCACUGCCAAACGCAUGCGAGUCAAGGCUUAUCGGGUGGAUAAGUCGCCCUACAACCAGUCUAUGUACUAUGCCGGACUUCCCGUGGACGAUUUUGAGGACUCAGAAUCUACGGACACAGAGGAGGAGUUUGGGAACGCGAUAGGAGGAUCCCAUGGGGGCUCCUCCUAUACUGUGUAUAUAGAUAAGACUCGU 242
gE FO_D15_4RNA UGAUAG (SEQ ID NO: 305)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGAACUGUCAAUAAGCCUGUGGUGGGAGUGCUGAUGGGAUUCGGUAUCAUCACUGGAACCCUGAGGAUCACCAAUCCCGUUCGCGCUUCUGUGCUUCGCUAUGACGAUUUCCACAUCGACGAAGAUAAGCUAGACACUAACAGCGUGUACGAACCGUACUACCACAGCGACCACGCUGAGUCCUCUUGGGUGAACCGGGGUGAAUCUUCUAGGAAGGCUUACGACCAUAAUAGUCCUUACAUCUGGCCACGGAACGACUAUGAUGGUUUCCUCGAGAACGCACACGAGCAUCAUGGCGUUUACAACCAGGGGCGCGGAAUUGACAGCGGUGAGAGGUUGAUGCAGCCUACCCAAAUGUCCGCUCAGGAGGAUCUGGGAGACGACACGGGUAUUCAUGUGAUUCCGACCUUAAAUGGCGACGAUCGCCAUAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAAAGGCAAUAUGGUGAUGUGUUUAAAGGUGAUCUUAAUCCGAAACCGCAAGGGCAGAGGUUGAUUGAGGUCUCUGUUGAGGAGAACCACCCCUUCACUCUGCGCGCUCCAAUUCAGCGGAUUUACGGAGUUCGGUACACGGAGACUUGGUCUUUUCUGCCCAGUCUCACAUGCACAGGGGAUGCCGCUCCUGCCAUUCAGCACAUAUGUCUGAAGCAUACAACAUGCUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUGGAUUGUGCAGAGAACACUAAGGAAGAUCAGCUUGCAGAGAUUUCAUACAGGUUUCAGGGCAAGAAAGAGGCAGACCAGCCCUGGAUUGUCGUCAACACAAGUACAUUGUUCGACGAGCUGGAGCUGGAUCCGCCCGAAAUCGAGCCAGGGGUGCUGAAAGUGCUGCGCACAGAAAAGCAGUAUCUGGGUGUUUAUAUAUGGAACAUGAGGGGUAGCGAUGGUACCAGCACCUAUGCAACAUUUCUGGUGACCUGGAAAGGUGACGAAAAGACCAGAAACCCCACUCCCGCUGUGACCCCACAGCCACGGGGAGCGGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCCCAUGUGUUUAGUGUAGGGGACACUUUCUCCCUCGCUAUGCAUCUCCAGUAUAAGAUCCAUGAAGCACCGUUUGACUUGUUGCUGGAGUGGCUUUACGUGCCCAUUGAUCCAACUUGUCAGCCCAUGAGAUUGUAUAGUACGUGCUUGUACCAUCCCAAUGCACCCCAGUGUCUCUCACAUAUGAACUCCGGAUGUACUUUCACGUCACCUCACCUUGCCCAGCGGGUGGCUUCGACCGUGUACCAGAAUUGUGAGCACGCGGAUAACUACACCGCCUAUUGCCUCGGUAUCUCCCACAUGGAACCUAGUUUCGGUCUGAUUCUCCAUGAUGGCGGAACUACCCUUAAAUUCGUGGACACCCCUGAGAGUCUGUCUGGCCUCUAUGUAUUCGUGGUGUACUUCAACGGACAUGUGGAGGCCGUGGCGUACACUGUUGUGAGCACCGUGGACCACUUCGUGAAUGCGAUUGAGGAACGUGGCUUUCCCCCUACUGCUGGUCAGCCCCCUGCUACCACCAAGCCCAAGGAGAUCACGCCCGUAAACCCAGGAACCAGCCCUCUGAUUCGGUACGCUGCAUGGACCGGAGGAUUGGCCGCAGUGGUGCUGCUGUGUCUGGUUAUUUUCCUUAUUUGCACUGCCAAGCGGAUGCGAGUUAAGGCCUAUCGGGUUGAUAAAUCACCAUACAAUCAGUCAAUGUACUAUGCCGGACUCCCCGUGGAUGAUUUUGAGGAUUCAGAGUCAACCGACACAGAGGAGGAGUUUGGGAAUGCGAUAGGAGGGAGUCACGGUGGCUCCUCCUAUACCGUGUAUAUUGACAAGACUAGG 243
gE FO_D15_5RNA UAGUAG (SEQ ID NO: 303)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAAUAAGCCUGUUGUAGGGGUGUUAAUGGGGUUCGGUAUCAUCACGGGAACAUUGCGGAUUACUAACCCUGUUAGGGCUUCUGUGCUGCGCUAUGAUGACUUUCACAUCGAUGAAGAUAAACUAGACACCAACAGCGUGUAUGAGCCAUACUACCAUAGCGAUCAUGCCGAGUCAAGUUGGGUGAACAGGGGUGAGUCUUCCCGAAAGGCUUACGAUCAUAAUAGUCCAUAUAUCUGGCCACGGAAUGACUAUGACGGCUUUUUGGAGAACGCACACGAGCAUCACGGUGUUUACAACCAGGGCCGCGGCAUUGACAGCGGUGAGAGGUUGAUGCAGCCAACUCAGAUGUCCGCUCAGGAGGAUUUGGGCGACGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCGACCUUAAAUGGGGAUGACCGCCAUAAGAUUGUGAAUGUGGACCAGAGACAGUACGGCGACGUUUUUAAGGGCGACCUCAAUCCAAAGCCUCAAGGACAGAGGCUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAGAACCACCCUUUCACUCUGCGUGCUCCCAUCCAGAGAAUCUAUGGCGUUCGGUAUACCGAAACUUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUGACAUGUACCGGAGACGCAGCGCCUGCGAUUCAGCACAUAUGCCUAAAGCACACCACCUGCUUUCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUGGACUGCGCCGAGAAUACCAAGGAAGACCAACUCGCUGAGAUCUCUUAUAGGUUUCAGGGCAAGAAAGAGGCCGACCAACCGUGGAUCGUCGUCAACACAAGUACUUUGUUUGACGAGCUGGAGCUGGAUCCACCUGAGAUCGAGCCCGGCGUGCUGAAAGUGCUCCGUACUGAAAAACAGUACCUUGGAGUUUAUAUUUGGAACAUGAGGGGGUCAGACGGGACAAGCACGUACGCUACAUUUCUGGUGACUUGGAAGGGGGAUGAAAAAACUCGAAACCCCACCCCGGCUGUGACUCCACAGCCUAGGGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAACUACCAUUCUCACGUGUUUAGUGUGGGAGAUACAUUUUCCCUCGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUUCACGAAGCCCCCUUUGAUCUCCUGCUGGAAUGGCUCUAUGUGCCCAUAGACCCCACUUGCCAGCCCAUGAGGCUGUACUCAACGUGCUUAUACCAUCCCAAUGCCCCCCAGUGUCUCAGCCACAUGAACUCUGGAUGCACUUUUACGUCACCCCAUCUUGCCCAGCGGGUUGCUUCAACGGUGUACCAGAAUUGUGAGCACGCCGAUAAUUACACCGCCUACUGUCUCGGAAUUUCCCACAUGGAACCCAGUUUUGGCCUGAUCCUGCAUGAUGGUGGAACAACGCUCAAGUUCGUGGAUACCCCUGAGUCGUUGUCCGGCCUAUACGUGUUUGUUGUGUACUUCAACGGACAUGUGGAGGCCGUGGCAUACACUGUUGUGAGCACCGUCGACCAUUUCGUGAAUGCGAUCGAGGAGAGAGGCUUUCCUCCAACCGCCGGACAACCCCCUGCCACAACCAAGCCUAAGGAGAUCACACCUGUGAAUCCUGGCACCUCCCCACUGAUUCGGUACGCUGCUUGGACAGGCGGUCUGGCCGCUGUGGUGCUCUUGUGUUUAGUUAUUUUCCUUAUUUGCACUGCGAAGCGCAUGCGGGUGAAAGCAUAUCGGGUGGAUAAGUCGCCUUACAACCAGAGUAUGUACUAUGCCGGACUCCCUGUGGACGAUUUUGAGGACUCAGAAUCCACGGACACCGAGGAGGAGUUUGGGAACGCUAUAGGAGGGUCCCACGGGGGCUCCUCCUAUACCGUUUACAUAGACAAGACUAGG 244
gE FO_D15_6RNA UAGUAA (SEQ ID NO: 302)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAGCCAGUGGUGGGGGUGCUAAUGGGGUUCGGUAUCAUCACGGGAACGUUGAGGAUCACAAACCCUGUUCGCGCUUCUGUGCUGCGCUAUGAUGACUUCCAUAUCGAUGAGGAUAAACUAGAUACAAAUAGCGUGUAUGAGCCAUACUACCACAGCGACCAUGCUGAGUCAAGUUGGGUCAAUAGGGGUGAGUCUUCCCGUAAGGCAUAUGACCACAAUAGUCCAUACAUCUGGCCUCGGAAUGACUAUGAUGGGUUCCUGGAAAAUGCCCACGAGCAUCAUGGUGUUUACAACCAGGGUCGCGGUAUUGACAGUGGUGAGAGGCUGAUGCAGCCUACUCAGAUGUCCGCUCAAGAGGAUCUGGGCGAUGACACCGGCAUUCAUGUGAUUCCGACCUUGAACGGUGAUGACCGGCACAAGAUCGUGAAUGUGGACCAGAGGCAGUACGGCGAUGUGUUUAAGGGCGACCUUAAUCCCAAGCCUCAAGGCCAGAGGUUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAGAACCAUCCAUUCACCCUGCGUGCUCCCAUUCAGAGAAUCUAUGGAGUUCGGUAUACCGAAACUUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUGACAUGUACGGGUGAUGCCGCUCCGGCCAUUCAGCACAUAUGCCUGAAGCAUACCACGUGUUUUCAGGACGUAGUGGUUGAUGUAGACUGUGCGGAGAAUACCAAGGAGGACCAGCUCGCCGAGAUUAGCUAUAGGUUUCAGGGCAAGAAGGAAGCGGACCAACCGUGGAUUGUCGUCAAUACCAGUACACUGUUUGACGAGCUGGAGUUGGACCCCCCCGAGAUCGAACCCGGCGUGUUAAAAGUGCUUCGUACUGAAAAGCAGUAUCUCGGAGUGUAUAUAUGGAAUAUGAGGGGCUCCGAUGGUACAAGCACAUACGCUACAUUUCUGGUGACAUGGAAGGGCGACGAGAAGACCAGAAACCCCACCCCUGCUGUGACCCCACAGCCAAGGGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCAUUCUCAUGUGUUUAGUGUGGGGGAUACCUUCUCUCUCGCUAUGCACCUUCAGUACAAGAUUCACGAGGCCCCCUUUGAUCUCUUACUGGAGUGGCUCUACGUGCCCAUAGAUCCGACUUGUCAGCCCAUGAGAUUGUACAGUACCUGCUUGUACCAUCCGAACGCCCCCCAAUGUCUGUCUCAUAUGAACUCUGGGUGCACUUUCACGUCACCACAUCUUGCCCAGCGGGUUGCGUCCACGGUGUACCAGAACUGCGAGCAUGCAGAUAAUUACACUGCCUACUGUCUAGGCAUCAGCCACAUGGAGCCUAGUUUCGGUCUGAUUCUGCAUGAUGGGGGCACCACUCUCAAGUUCGUGGAUACGCCUGAGAGCCUAAGCGGUCUUUACGUGUUUGUUGUUUACUUUAACGGACACGUGGAGGCCGUGGCCUACACUGUUGUGAGCACCGUGGAUCAUUUCGUGAACGCCAUCGAGGAAAGAGGCUUUCCUCCAACCGCUGGACAGCCCCCUGCCACAACCAAGCCUAAGGAGAUCACCCCUGUGAAUCCCGGGACCUCCCCACUGAUUCGGUAUGCCGCAUGGACAGGGGGUUUAGCGGCUGUGGUGCUGUUGUGUCUAGUAAUUUUUCUUAUUUGCACUGCCAAGCGGAUGCGAGUGAAGGCUUAUCGGGUGGAUAAAAGUCCCUACAAUCAGUCUAUGUACUAUGCCGGACUUCCUGUUGACGACUUUGAGGACUCAGAGUCGACCGACACAGAGGAGGAAUUUGGGAACGCAAUAGGAGGGUCUCACGGAGGCUCCUCCUAUACUGUGUAUAUAGACAAGACUAGG 245
gE FO_D15_7RNA UAGUAG (SEQ ID NO: 303)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUCAAUAAGCCUGUGGUUGGGGUUUUAAUGGGGUUUGGUAUCAUUACUGGGACACUCAGGAUCACCAAUCCUGUUAGGGCCUCAGUGCUGCGCUAUGAUGACUUUCACAUCGAUGAGGAUAAACUAGAUACCAACAGCGUGUAUGAACCGUACUACCACAGCGACCAUGCUGAGAGUUCCUGGGUAAAUCGCGGUGAAUCUAGCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUUCUCCAUAUAUCUGGCCACGGAAUGAUUAUGAUGGCUUUCUUGAGAACGCCCACGAGCACCACGGAGUCUACAACCAGGGCCGCGGAAUUGACAGUGGUGAACGUUUGAUGCAGCCCACUCAAAUGUCCGCCCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGGAUCCAUGUGAUUCCGACCUUGAACGGUGACGACCGGCAUAAGAUUGUGAAUGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGCGACGUGUUCAAGGGCGACCUUAAUCCUAAGCCUCAGGGACAGAGGUUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAAAACCAUCCUUUCACACUGCGGGCUCCCAUUCAGAGAAUCUAUGGUGUUCGGUAUACCGAAACUUGGAGCUUUCUGCCCAGUCUGACAUGUACCGGGGACGCCGCCCCGGCCAUUCAGCACAUCUGCCUGAAGCAUACGACAUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGAUGUCGACUGUGCCGAGAAUACCAAGGAGGAUCAACUCGCUGAGAUCAGCUAUCGAUUUCAGGGCAAGAAGGAGGCUGACCAACCGUGGAUCGUCGUCAAUACAAGUACUCUGUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCACCCGAGAUUGAGCCCGGCGUGUUGAAAGUCCUUCGUACGGAGAAGCAGUACCUCGGAGUGUAUAUCUGGAACAUGCGGGGGAGCGACGGUACAAGUACGUACGCUACCUUCCUGGUGACAUGGAAAGGUGACGAGAAAACAAGAAACCCCACCCCUGCUGUUACUCCACAGCCUAGGGGUGCUGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCACAGCCACGUGUUUAGUGUGGGAGAUACCUUCUCCCUGGCUAUGCAUCUCCAGUACAAGAUCCACGAGGCUCCCUUCGAUUUACUGCUGGAGUGGCUCUACGUGCCUAUUGAUCCAACGUGUCAACCAAUGAGAUUGUACAGUACGUGCUUGUAUCACCCCAACGCACCCCAAUGUCUGUCUCAUAUGAAUUCUGGGUGCACUUUCACAUCUCCCCAUCUUGCCCAGCGGGUUGCCUCAACGGUAUACCAGAACUGCGAGCACGCAGACAACUACACCGCCUACUGCCUGGGUAUCUCACAUAUGGAACCUAGUUUCGGCCUGAUUCUCCAUGACGGCGGCACUACUCUCAAAUUCGUGGAUACGCCUGAGAGCCUGAGCGGUCUCUACGUGUUUGUUGUGUACUUUAACGGACACGUGGAGGCCGUUGCCUACACCGUUGUGAGCACCGUGGACCACUUCGUGAACGCGAUUGAGGAAAGAGGCUUUCCUCCGACCGCUGGACAGCCCCCUGCCACCACCAAGCCUAAGGAGAUUACACCCGUGAACCCGGGAACCUCCCCACUGAUUCGGUAUGCUGCUUGGACCGGGGGGCUGGCCGCCGUGGUGCUGUUGUGUCUGGUAAUUUUUCUUAUUUGCACUGCCAAACGCAUGCGAGUGAAGGCUUAUCGAGUGGAUAAGUCGCCUUACAAUCAGUCGAUGUACUAUGCUGGUCUCCCUGUGGACGAUUUUGAGGAUUCAGAAUCCACUGAUACAGAGGAGGAAUUCGGGAACGCGAUAGGAGGGUCCCACGGGGGGUCGUCCUAUACCGUGUACAUAGAUAAGACUAGG 246
gE FO_D15_8RNA UAGUAA (SEQ ID NO: 302)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAAUAAGCCAGUAGUGGGGGUCCUGAUGGGGUUUGGUAUUAUUACUGGCACGCUCAGGAUAACUAACCCUGUGAGGGCCUCUGUGCUGCGCUAUGACGACUUUCACAUCGAUGAGGACAAACUAGAUACCAACAGCGUGUAUGAGCCAUACUACCAUUCUGACCAUGCGGAGAGUAGUUGGGUGAAUAGGGGUGAGUCUUCCCGCAAGGCUUAUGACCACAAUAGUCCAUAUAUCUGGCCCAGAAAUGACUAUGAUGGCUUUCUUGAGAACGCCCAUGAGCAUCACGGUGUUUACAACCAGGGCCGCGGGAUUGACAGUGGUGAAAGGUUGAUGCAGCCUACCCAGAUGUCUGCCCAGGAGGACCUGGGCGACGACACUGGGAUCCAUGUUAUUCCGACUCUUAAUGGCGACGAUCGUCACAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAGAGGCAGUAUGGCGAUGUGUUUAAGGGUGACCUUAAUCCAAAGCCUCAGGGACAGAGGUUGAUUGAGGUGUCGGUGGAGGAAAACCAUCCAUUCACUCUCCGUGCCCCCAUUCAGAGAAUCUAUGGAGUACGGUAUACCGAGACUUGGUCUUUUCUGCCCAGUCUUACGUGUACCGGGGACGCCGCCCCGGCCAUCCAGCACAUCUGCCUGAAGCAUACAACAUGCUUUCAGGAUGUGGUGGUGGACGUGGAUUGUGCAGAGAACACCAAGGAGGAUCAACUCGCUGAAAUCUCUUACAGGUUUCAGGGCAAGAAGGAAGCAGACCAACCUUGGAUUGUCGUGAAUACGAGUACUCUGUUCGACGAGCUGGAGCUCGAUCCUCCCGAGAUCGAGCCCGGCGUGCUGAAGGUGCUACGUACUGAAAAACAGUAUCUCGGAGUAUAUAUUUGGAACAUGAGGGGGUCAGAUGGUACGUCAACGUACGCUACUUUUCUGGUGACGUGGAAGGGCGACGAGAAGACUCGAAAUCCCACUCCGGCAGUGACUCCACAGCCUAGGGGAGCCGAGUUUCACAUGUGGAACUACCAUAGCCACGUGUUUAGUGUGGGAGAUACGUUUUCCUUGGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUUCACGAGGCCCCCUUCGAUCUUUUACUGGAGUGGCUCUACGUGCCCAUUGAUCCCACUUGUCAGCCUAUGAGACUGUAUUCUACGUGCCUGUAUCAUCCUAACGCCCCUCAAUGUCUCAGCCAUAUGAAUUCUGGAUGCACUUUCACGUCACCCCAUCUUGCCCAGCGGGUUGCGUCCACGGUGUACCAGAACUGUGAGCACGCAGAUAAUUACACCGCCUAUUGCCUAGGCAUCUCACACAUGGAACCUUCAUUCGGCCUGAUCCUGCAUGAUGGUGGCACUACCCUCAAGUUCGUGGAUACCCCUGAGAGCCUGAGUGGCCUAUACGUGUUCGUUGUCUACUUCAAUGGACAUGUCGAGGCCGUGGCCUACACAGUUGUGAGCACCGUCGACCAUUUCGUGAAUGCGAUCGAGGAAAGAGGGUUUCCUCCAACCGCUGGACAACCCCCUGCGACAACUAAGCCUAAGGAGAUCACACCCGUGAAUCCCGGAACCUCGCCCCUGAUUCGCUACGCGGCCUGGACCGGCGGUCUGGCCGCGGUGGUUCUGCUGUGUUUAGUAAUUUUUCUCAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUGAAGGCUUACCGGGUGGACAAGUCGCCUUACAACCAGUCUAUGUACUAUGCCGGAUUGCCUGUGGACGAUUUUGAGGACUCAGAGUCUACGGACACAGAGGAGGAGUUUGGGAACGCGAUAGGAGGGUCCCAUGGGGGCUCCUCCUACACCGUGUACAUAGAUAAGACUAGG 247
gE FO_D15_9RNA UAGUAG (SEQ ID NO: 303)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAACCAGUGGUGGGGGUCCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACGGGAACGUUAAGGAUAACUAACCCCGUCAGGGCCUCUGUUCUGCGAUAUGAUGACUUCCAUAUCGACGAGGAUAAACUAGAUACCAACAGCGUGUAUGAGCCAUACUACCACAGCGAUCAUGCUGAGUCAUCCUGGGUGAACAGGGGUGAAUCUAGCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUAGUCCCUAUAUUUGGCCACGGAAUGACUACGAUGGGUUUCUUGAGAAUGCCCACGAGCAUCACGGUGUUUACAACCAGGGCCGAGGGAUUGACAGCGGAGAGAGGCUGAUGCAGCCUACUCAGAUGAGUGCUCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGGAUUCAUGUUAUUCCGACCUUAAACGGUGAUGACCGGCAUAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAAAGGCAGUACGGCGAUGUGUUUAAGGGCGACCUUAAUCCCAAACCUCAGGGGCAGAGGUUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAGAACCACCCUUUCACACUGCGGGCUCCCAUUCAGAGAAUCUAUGGAGUUCGGUACACCGAAACUUGGUCUUUUCUGCCCAGUCUGACAUGCACUGGAGAUGCCGCUCCAGCCAUUCAGCACAUCUGCCUGAAGCACACCACCUGUUUCCAAGACGUGGUGGUGGAUGUAGACUGUGCCGAGAAUACCAAGGAGGAUCAACUUGCCGAGAUCUCUUACAGGUUUCAGGGCAAGAAAGAGGCCGACCAACCUUGGAUCGUCGUGAACACGAGUACUUUAUUCGAUGAACUGGAGCUGGAUCCCCCUGAGAUUGAGCCCGGGGUUCUGAAAGUGCUUAGAACUGAAAAGCAGUAUCUGGGAGUUUAUAUCUGGAACAUGAGGGGGUCCGAUGGUACGAGCACGUACGCCACAUUCCUGGUGACAUGGAAGGGCGACGAGAAGACCAGAAACCCCACCCCUGCUGUGACCCCGCAGCCUAGGGGGGCGGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUUAGCGUGGGAGACACAUUUUCCCUGGCUAUGCACCUUCAGUACAAGAUUCACGAAGCCCCUUUUGAUCUCCUGCUGGAAUGGCUCUACGUGCCCAUAGAUCCAACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUACAGUACGUGCCUGUAUCAUCCCAACGCUCCCCAGUGUCUUUCUCAUAUGAACUCCGGAUGCACUUUCACGAGUCCUCAUCUUGCCCAGCGGGUUGCCUCCACGGUGUACCAGAACUGUGAGCACGCAGAUAAUUACACUGCCUACUGCCUUGGCAUCUCCCACAUGGAACCUAGUUUUGGGCUCAUCCUCCAUGAUGGCGGCACAACUCUUAAGUUCGUCGAUACCCCGGAGAGCCUCAGCGGUCUCUACGUGUUUGUUGUCUACUUCAACGGGCAUGUGGAGGCUGUGGCCUACACCGUGGUGAGCACCGUCGAUCAUUUCGUGAACGCGAUCGAGGAAAGAGGCUUUCCUCCGACCGCUGGGCAGCCCCCUGCCACAACCAAACCUAAGGAGAUUACACCUGUGAACCCAGGGACCUCUCCAUUGAUUCGGUAUGCUGCUUGGACCGGAGGUCUGGCGGCUGUGGUCCUGUUGUGUUUAGUGAUAUUUCUUAUUUGCACAGCCAAACGCAUGCGAGUGAAGGCAUAUCGCGUGGAUAAGUCGCCUUACAACCAGUCUAUGUACUAUGCCGGCCUCCCCGUGGACGAUUUUGAGGACUCAGAAUCCACGGACACGGAGGAGGAGUUUGGCAAUGCUAUAGGAGGGUCUCACGGGGGCUCCUCCUAUACCGUCUAUAUAGACAAGACUCGG 248
gE FO_D15_10RNA UAGUAG (SEQ ID NO: 303)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAAUAAGCCGGUUGUGGGCGUGUUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACUGGAACAUUGAGGAUAACGAACCCUGUACGAGCGUCUGUGCUGCGCUAUGACGACUUCCAUAUCGAUGAGGAUAAGCUAGAUACUAACAGCGUCUAUGAGCCUUAUUACCAUAGCGAUCAUGCUGAGUCAUCAUGGGUGAACAGGGGUGAGUCUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUAGUCCAUACAUCUGGCCACGGAAUGACUAUGAUGGCUUUCUGGAGAAUGCCCACGAGCAUCACGGUGUUUAUAACCAGGGCCGCGGAAUUGACAGUGGUGAGAGGCUUAUGCAGCCUACUCAAAUGUCCGCUCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGAAUCCAUGUGAUUCCGACUUUAAAUGGUGAUGACCGCCAUAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAGAGGCAGUACGGCGAUGUAUUUAAGGGCGACCUUAACCCUAAGCCACAGGGCCAGAGGUUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAAAAUCAUCCUUUCACUCUGCGAGCUCCGAUUCAGAGAAUCUAUGGCGUUCGUUACACCGAAACUUGGUCCUUCCUUCCUAGUCUGACCUGCACUGGGGACGCUGCUCCUGCCAUCCAGCACAUAUGCCUGAAGCACACGACAUGCUUCCAGGACGUGGUGGUGGAUGUAGAUUGUGCAGAGAACACCAAGGAGGAUCAACUGGCUGAGAUCUCAUAUAGGUUUCAGGGAAAGAAGGAGGCAGAUCAGCCUUGGAUAGUCGUCAACACGAGUACUCUCUUUGACGAACUCGAGCUGGAUCCUCCCGAGAUCGAACCGGGCGUGCUGAAAGUGCUUCGUACUGAGAAGCAGUAUCUCGGAGUUUAUAUCUGGAAUAUGAGGGGGUCCGAUGGUACCAGCACGUACGCAACCUUUCUGGUGACAUGGAAGGGCGACGAGAAGACUAGAAACCCCACUCCUGCUGUGACUCCUCAGCCUAGGGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCACGUGUUUAGUGUGGGAGAUACAUUUAGUCUCGCUAUGCACCUCCAGUACAAGAUUCACGAGGCCCCCUUUGACUUGCUGCUGGAGUGGCUUUACGUGCCCAUAGACCCCACUUGUCAACCCAUGAGGCUGUAUAGUACCUGCCUGUAUCAUCCAAACGCCCCCCAAUGCCUGAGCCAUAUGAACUCUGGAUGUACUUUUACAAGUCCUCAUCUUGCCCAGCGGGUUGCGAGUACGGUGUAUCAGAACUGCGAGCAUGCAGAUAAUUACACUGCCUAUUGCCUAGGAAUCUCCCACAUGGAACCUAGUUUCGGCCUGAUCCUGCAUGACGGUGGAACUACUCUUAAGUUCGUGGAUACCCCUGAGAGCCUGAGCGGCCUCUAUGUGUUCGUUGUCUACUUUAACGGACACGUGGAGGCCGUGGCUUAUACAGUUGUGAGCACCGUUGACCAUUUCGUGAACGCGAUCGAGGAGAGAGGCUUUCCUCCGACCGCUGGGCAGCCCCCUGCCACAACCAAGCCUAAGGAGAUCACUCCUGUGAACCCGGGGACCAGCCCACUGAUCCGAUAUGCUGCCUGGACCGGCGGUCUGGCAGCCGUGGUGCUGUUGUGUUUAGUUAUCUUCCUCAUUUGCACUGCGAAGCGCAUGCGAGUGAAGGCAUAUCGGGUGGACAAGUCGCCCUACAAUCAGUCUAUGUACUAUGCUGGACUCCCUGUCGAUGAUUUUGAGGACUCAGAAUCUACAGACACAGAGGAGGAGUUCGGAAACGCGAUAGGUGGAUCCCACGGGGGGUCUAGCUAUACCGUUUACAUAGAUAAGACUAGG 249
gE FO_D15_11RNA UAGUGA (SEQ ID NO: 301)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGUACGGUCAACAAGCCUGUGGUCGGGGUGCUGAUGGGGUUCGGUAUCAUCACGGGAACCUUGAGGAUCACGAACCCUGUUAGGGCCUCUGUGCUGCGGUAUGAUGACUUCCACAUCGAUGAAGAUAAGCUGGACACCAACAGUGUGUAUGAGCCAUAUUACCAUAGCGACCAUGCCGAGUCAUCCUGGGUGAAUAGGGGCGAAUCUUCCAGGAAGGCCUAUGAUCAUAAUAGUCCAUAUAUCUGGCCCAGAAAUGACUAUGAUGGCUUUUUGGAGAACGCCCACGAGCAUCACGGUGUUUACAACCAGGGCCGCGGAAUUGACUCCGGUGAGAGGUUGAUGCAGCCUACUCAGAUGUCCGCCCAGGAGGAUCUGGGCGACGAUACAGGAAUCCAUGUUAUUCCUACCUUAAACGGUGACGACCGGCAUAAGAUAGUGAAUGUGGAUCAGAGGCAGUACGGCGAUGUUUUUAAGGGCGACCUUAAUCCAAAACCUCAGGGUCAGAGGUUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAGAACCAUCCUUUCACUCUGCGAGCUCCCAUCCAGCGGAUCUAUGGGGUUCGGUAUACCGAGACUUGGUCUUUUUUGCCUAGUCUGACAUGUACUGGCGACGCCGCCCCGGCCAUUCAACACAUAUGUCUGAAGCAUACCACCUGCUUCCAGGACGUGGUGGUGGAUGUAGACUGCGCAGAGAAUACUAAGGAGGAUCAACUCGCUGAGAUCUCUUACAGGUUUCAGGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAACCGUGGAUAGUCGUCAACACGAGUACUCUGUUCGACGAACUGGAGCUGGAUCCCCCGGAGAUCGAGCCCGGGGUGCUGAAAGUGCUUCGUACUGAGAAACAGUACCUCGGAGUUUAUAUUUGGAACAUGAGGGGGUCUGAUGGUACAAGCACGUACGCUACCUUUCUGGUUACAUGGAAGGGCGACGAGAAGACUAGAAAUCCCACCCCUGCUGUGACUCCACAGCCUAGGGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUUAGUGUGGGAGAUACAUUUAGUCUGGCUAUGCACCUGCAGUACAAGAUCCAUGAAGCCCCCUUCGAUUUACUGCUGGAGUGGCUCUACGUGCCCAUCGAUCCAACUUGUCAGCCAAUGAGAUUGUACAGUACGUGCCUGUACCAUCCCAACGCCCCUCAGUGUUUGAGCCAUAUGAAUUCUGGAUGUACUUUUACGUCCCCCCAUCUCGCCCAGCGAGUUGCGUCCACGGUGUACCAGAACUGUGAGCACGCAGAUAAUUAUACCGCCUACUGUCUGGGCAUCUCACACAUGGAGCCUAGUUUCGGGCUGAUCCUUCAUGAUGGUGGAACCACACUCAAGUUCGUAGAUACCCCCGAAUCCUUGAGCGGCUUGUACGUGUUCGUUGUAUACUUCAACGGACAUGUCGAGGCCGUGGCCUACACUGUCGUGAGCACCGUUGAUCAUUUCGUGAACGCGAUCGAGGAGAGGGGGUUUCCUCCGACGGCUGGACAGCCCCCCGCCACAACCAAGCCUAAGGAGAUCACGCCUGUCAAUCCAGGAACCUCGCCCCUGAUACGGUAUGCCGCUUGGACCGGCGGGCUCGCCGCCGUGGUGUUGUUGUGUUUAGUUAUCUUUUUGAUUUGUACUGCCAAGCGGAUGCGAGUCAAGGCAUAUCGGGUGGAUAAGUCGCCCUACAAUCAGUCUAUGUAUUAUGCCGGACUGCCUGUGGACGAUUUUGAGGACUCAGAGUCUACCGAUACGGAGGAGGAGUUCGGGAACGCCAUAGGAGGGUCCCAUGGGGGCUCCAGUUAUACCGUGUAUAUAGAUAAGACUAGG 250
gE FO_D15_12RNA UAGUAG (SEQ ID NO: 303)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAACAAGCCUGUGGUGGGGGUCCUGAUGGGGUUCGGGAUCAUCACAGGGACAUUGAGGAUUACUAACCCUGUUCGGGCCUCUGUGCUGCGCUAUGAUGACUUCCAUAUCGAUGAGGAUAAACUGGAUACCAACAGCGUGUAUGAGCCAUAUUACCAUAGCGACCAUGCCGAAUCAUCCUGGGUGAAUCGCGGGGAGUCAUCUCGUAAGGCUUAUGAUCAUAAUAGUCCGUACAUCUGGCCCAGAAACGAUUAUGAUGGCUUUCUUGAGAAUGCCCACGAGCAUCACGGUGUUUACAACCAGGGCCGCGGAAUUGACAGUGGUGAGAGGUUGAUGCAGCCUACUCAGAUGUCCGCUCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGGAUUCAUGUGAUUCCGACUUUGAACGGUGAUGACCGGCAUAAAAUCGUGAAUGUGGAUCAGAGGCAGUACGGCGAUGUGUUUAAGGGCGAUCUUAAUCCAAAGCCUCAGGGACAGAGGUUGAUUGAGGUGUCCGUGGAGGAGAACCAUCCCUUUACGCUGCGUGCUCCCAUACAGAGAAUCUAUGGGGUUCGGUAUACCGAAACUUGGAGCUUUCUCCCUAGUCUGACAUGUACGGGCGACGCUGCUCCCGCUAUCCAGCACAUAUGUCUGAAGCACACAACGUGCUUCCAGGACGUGGUGGUGGAUGUUGACUGUGCCGAGAAUACCAAGGAGGACCAACUUGCAGAGAUCAGCUACAGGUUUCAGGGCAAGAAAGAGGCAGACCAGCCGUGGAUUGUCGUCAACACAUCUACGCUGUUUGACGAACUGGAGCUCGAUCCUCCUGAGAUUGAGCCCGGCGUCCUGAAAGUGCUGCGUACUGAAAAGCAGUACCUCGGAGUUUAUAUUUGGAACAUGAGGGGUAGUGAUGGUACCAGCACGUACGCUACGUUUCUGGUGACAUGGAAAGGCGACGAGAAGACACGAAACCCCACCCCUGCUGUGACUCCACAGCCAAGGGGGGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUUAGUGUGGGCGAUACAUUUUCUCUCGCUAUGCACCUCCAGUAUAAGAUCCAUGAAGCACCUUUCGAUCUACUACUGGAGUGGCUCUACGUGCCCAUAGAUCCAACCUGUCAGCCCAUGAGAUUGUACAGUACGUGUCUGUACCAUCCCAACGCUCCCCAAUGUCUGAGUCAUAUGAACUCUGGUUGUACUUUCACGUCUCCCCAUCUCGCCCAGCGGGUUGCCUCCACGGUGUACCAGAACUGCGAGCAUGCAGACAACUACACUGCCUAUUGCCUCGGGAUCUCCCAUAUGGAGCCUAGUUUCGGGCUCAUCCUCCAUGAUGGCGGCACCACUCUCAAAUUCGUGGAUACUCCUGAGAGCCUGAGCGGCCUGUACGUGUUCGUAGUCUACUUUAACGGCCAUGUGGAGGCUGUGGCCUACACUGUUGUAAGUACUGUCGACCAUUUCGUUAACGCAAUCGAGGAAAGGGGCUUUCCGCCGACUGCCGGACAGCCCCCCGCCACAACAAAGCCUAAGGAGAUCACCCCUGUGAACCCCGGUACUUCCCCACUGAUUCGGUAUGCUGCUUGGACUGGCGGUCUGGCCGCAGUCGUGCUGUUGUGUUUAGUAAUUUUUCUGAUUUGUACAGCCAAAAGGAUGCGAGUGAAAGCUUAUCGAGUGGACAAGUCGCCUUACAACCAGUCAAUGUACUAUGCCGGACUCCCUGUUGAUGAUUUUGAGGACUCAGAAUCUACCGACACCGAGGAGGAGUUUGGGAACGCGAUAGGAGGCUCUCACGGGGGGUCAUCCUACACUGUGUACAUAGAUAAGACUCGG 251
gE FO_D15_13RNA UAGUAA (SEQ ID NO: 302)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACUGUCAACAAACCCGUGGUCGGAGUGCUGAUGGGGUUCGGUAUUAUCACGGGGACUCUCCGGAUAACUAACCCUGUUCGCGCCUCCGUGCUGCGUUAUGAUGACUUCCACAUCGAUGAGGACAAACUAGACACCAACUCUGUGUAUGAGCCAUACUACCACAGCGACCAUGCUGAGUCAUCUUGGGUCAAUAGGGGAGAGUCUUCCAGAAAGGCUUAUGAUCAUAACAGUCCAUAUAUCUGGCCCCGGAAUGAUUAUGAUGGCUUUCUGGAGAACGCCCACGAGCAUCACGGUGUUUACAACCAGGGCCGCGGAAUUGACAGUGGUGAGAGAUUGAUGCAGCCUACUCAAAUGUCCGCCCAGGAGGAUCUGGGCGAUGACACGGGGAUCCAUGUGAUUCCGACCCUGAAUGGUGACGACCGCCAUAAGAUCGUGAAUGUGGAUCAGAGGCAAUACGGCGACGUGUUCAAGGGCGACCUUAAUCCGAAGCCUCAGGGCCAGAGGUUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAGAACCAUCCUUUCACUCUGCGUGCUCCCAUCCAGAGAAUCUAUGGAGUUCGGUAUACCGAAACUUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUGACCUGUACCGGGGAUGCCGCCCCCGCCAUCCAGCACAUAUGCCUGAAGCACACCACGUGCUUUCAGGACGUGGUGGUGGAUGUAGAUUGUGCAGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUCGCUGAGAUCUCUUAUAGGUUUCAGGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUCGUCAACACGUCCACUCUGUUUGACGAGCUGGAGCUGGAUCCUCCCGAGAUCGAGCCUGGCGUGCUGAAGGUGCUUCGUACUGAGAAACAGUAUCUCGGAGUCUAUAUCUGGAACAUGAGGGGGUCGGACGGUACAAGCACGUACGCUACAUUUCUGGUGACAUGGAAGGGCGACGAGAAGACUAGAAACCCGACUCCCGCUGUGACUCCACAGCCCAGGGGUGCCGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUUAGUGUGGGAGAUACAUUUAGUCUCGCUAUGCACCUCCAGUACAAGAUUCACGAAGCCCCCUUCGAUCUGCUACUGGAGUGGCUCUACGUGCCCAUUGAUCCAACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUACAGUACGUGCCUGUAUCACCCAAACGCUCCCCAGUGUCUAAGCCAUAUGAACUCUGGAUGCACCUUCACAUCCCCCCAUCUUGCCCAGCGGGUUGCUUCUACGGUGUAUCAGAACUGUGAGCACGCCGACAAUUACACCGCCUAUUGCCUAGGCAUCAGCCACAUGGAACCCUCGUUCGGACUGAUCCUCCAUGAUGGUGGAACUACUCUCAAAUUCGUGGACACGCCUGAGAGCCUGAGCGGCCUGUACGUGUUUGUUGUGUACUUUAACGGACAUGUGGAGGCCGUAGCUUACACCGUUGUGAGCACCGUCGAUCAUUUCGUGAACGCGAUCGAGGAGAGAGGAUUUCCCCCGACCGCUGGACAGCCCCCUGCCACCACAAAGCCUAAGGAGAUCACACCCGUGAAUCCAGGCACAUCCCCAUUGAUUCGGUAUGCUGCAUGGACCGGCGGUCUGGCCGCCGUGGUGCUGCUUUGUCUGGUAAUUUUCCUGAUUUGUACUGCUAAGCGCAUGCGAGUUAAGGCAUACCGGGUUGACAAGUCCCCAUACAAUCAGUCUAUGUACUAUGCCGGGCUUCCUGUCGACGAUUUUGAGGACUCAGAAUCGACCGACACAGAGGAGGAGUUCGGGAACGCGAUAGGUGGGUCCCACGGGGGCUCCUCCUACACCGUGUACAUAGAUAAGACUCGA 252
gE FO_D15_14RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACCGUCAACAAGCCCGUGGUGGGAGUCCUGAUGGGAUUCGGUAUUAUCACUGGCACCCUCAGGAUCACCAAUCCCGUCAGGGCUUCUGUCCUACGCUAUGACGAUUUCCACAUCGAUGAAGACAAGCUGGACACUAAUAGCGUGUAUGAACCAUACUACCACAGCGACCAUGCGGAGUCAUCAUGGGUCAACCGGGGCGAGUCUUCUAGGAAAGCCUACGAUCAUAAUAGUCCAUACAUCUGGCCACGGAAUGACUAUGAUGGUUUUUUGGAAAACGCUCAUGAGCAUCACGGCGUUUACAACCAGGGGCGGGGAAUUGACAGUGGUGAGAGGUUGAUGCAGCCUACUCAGAUGUCCGCUCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGCAUUCAUGUGAUUCCGACCUUGAACGGCGACGACCGCCACAAGAUCGUGAAUGUGGACCAACGGCAAUAUGGUGAUGUGUUUAAAGGGGAUCUGAAUCCAAAGCCUCAAGGACAGAGGCUGAUUGAGGUCUCUGUGGAGGAGAACCAUCCUUUCACUCUGCGCGCUCCAAUUCAGAGGAUCUACGGAGUUCGGUAUACCGAAACUUGGUCGUUCCUGCCCAGUCUCACAUGCACCGGGGAUGCUGCUCCAGCGAUCCAGCACAUUUGCCUCAAGCAUACAACUUGCUUCCAGGAUGUGGUUGUGGAUGUGGACUGUGCAGAGAACACCAAAGAGGACCAGCUGGCUGAGAUCUCUUACAGAUUUCAGGGCAAGAAGGAGGCUGACCAGCCAUGGAUCGUGGUUAACACCUCUACCCUGUUCGAUGAACUGGAGCUUGAUCCUCCCGAAAUCGAACCAGGGGUGCUGAAAGUGCUGCGAACAGAAAAGCAGUAUCUCGGGGUAUACAUAUGGAACAUGAGGGGUAGCGAUGGGACCAGCACGUAUGCAACGUUCCUGGUGACUUGGAAGGGCGACGAAAAGACACGGAACCCCACGCCUGCUGUGACCCCACAGCCUAGAGGCGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCUCAUGUCUUUAGCGUAGGGGACACAUUCUCACUGGCUAUGCACUUACAGUAUAAGAUCCAUGAAGCCCCAUUCGAUCUCCUGCUGGAGUGGCUUUACGUGCCCAUUGACCCAACUUGCCAGCCCAUGCGUCUGUAUAGCACCUGCUUGUACCACCCCAAUGCACCCCAAUGUUUGUCCCAUAUGAACUCUGGAUGCACCUUCACUUCACCACACCUUGCCCAGCGGGUCGCCUCUACCGUGUACCAGAACUGCGAGCAUGCAGAUAAUUACACCGCCUAUUGCCUAGGCAUCUCCCAUAUGGAACCUAGUUUCGGCCUGAUCCUGCAUGACGGCGGAACCACUCUUAAGUUCGUCGAUACCCCUGAAAGCCUGAGCGGCCUCUAUGUGUUUGUUGUGUAUUUUAACGGACAUGUGGAGGCCGUGGCUUACACCGUUGUGAGCACCGUUGAUCACUUCGUGAACGCGAUCGAAGAACGUGGUUUUCCUCCUACGGCUGGUCAGCCCCCAGCUACCACCAAGCCCAAGGAGAUUACCCCCGUGAACCCUGGGACGUCCCCCCUGAUCCGGUAUGCUGCCUGGACCGGGGGCUUGGCCGCAGUGGUGCUGUUGUGUCUGGUUAUCUUCCUGAUUUGCACCGCUAAGCGCAUGCGAGUCAAGGCCUAUCGGGUUGAUAAGAGUCCUUACAACCAGUCAAUGUACUAUGCCGGACUCCCUGUGGAUGAUUUUGAAGAUUCAGAGUCAACGGACACAGAGGAGGAAUUCGGCAAUGCAAUAGGAGGGUCUCAUGGAGGCUCCUCUUAUACCGUGUACAUUGACAAGACUAGG 253
gE FO_D15_15RNA UAGUAA (SEQ ID NO: 302)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUCAAUAAGCCAGUCGUGGGUGUGCUCAUGGGGUUCGGUAUUAUCACGGGAACACUGCGCAUAACAAACCCUGUUAGGGCAUCUGUGCUGCGCUAUGACGACUUCCACAUCGACGAGGAUAAACUAGAUACCAACAGCGUGUAUGAACCAUAUUACCAUAGCGACCAUGCUGAGUCAAGUUGGGUGAAUAGGGGUGAGUCUUCCCGCAAGGCUUAUGAUCAUAAUAGUCCAUACAUCUGGCCCCGGAAUGACUAUGAUGGCUUUCUUGAGAAUGCUCACGAGCAUCACGGUGUUUACAAUCAAGGCCGCGGGAUUGACAGUGGCGAGCGUCUGAUGCAGCCAACUCAGAUGUCCGCUCAGGAGGAUCUGGGCGACGACACUGGGAUUCAUGUUAUCCCGACAUUAAACGGUGAUGACCGGCAUAAGAUCGUGAACGUGGAUCAGAGGCAGUACGGCGAUGUGUUUAAGGGCGACCUUAAUCCUAAGCCUCAGGGACAGAGGCUGAUUGAGGUGUCUGUGGAGGAAAACCAUCCUUUCACUCUGCGUGCUCCCAUUCAGAGAAUAUAUGGUGUUCGGUAUACUGAAACUUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUGACAUGCACUGGAGACGCCGCUCCGGCCAUUCAGCACAUAUGCCUGAAGCAUACCACCUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUUGAUGUCGACUGUGCAGAGAAUACCAAGGAGGAUCAACUCGCCGAGAUCUCCUACAGGUUUCAGGGCAAGAAGGAGGCAGACCAGCCGUGGAUUGUCGUCAACACAAGUACCUUGUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCUCCUGAGAUUGAGCCCGGCGUGUUGAAAGUGCUUCGUACAGAGAAGCAGUAUCUCGGAGUGUAUAUCUGGAACAUGAGGGGUUCCGAUGGUACUUCUACGUACGCCACAUUUCUGGUGACAUGGAAGGGCGACGAGAAAACUCGAAAUCCCACACCUGCUGUGACUCCACAGCCUAGGGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAAUUACCAUUCUCAUGUGUUUAGUGUGGGAGAUACCUUUUCCCUCGCUAUGCACCUCCAGUACAAGAUUCACGAGGCCCCCUUCGAUCUUCUACUGGAGUGGCUCUACGUGCCCAUUGAUCCAACUUGUCAGCCCAUGAGACUGUACAGUACGUGCCUGUAUCAUCCGAACGCCCCUCAAUGUUUAUCACAUAUGAAUUCUGGAUGCACUUUCACUUCUCCCCAUCUCGCCCAGCGGGUUGCAUCCACGGUGUAUCAGAACUGCGAGCAUGCAGAUAAUUACACCGCCUAUUGCCUGGGGAUCUCGCACAUGGAACCCAGUUUCGGCCUGAUCCUCCAUGAUGGCGGAACUACACUCAAGUUCGUGGACACUCCUGAGAGCCUGUCGGGCCUAUACGUGUUUGUUGUCUACUUUAACGGGCAUGUAGAGGCCGUGGCCUAUACUGUCGUGAGCACCGUAGAUCAUUUUGUGAAUGCGAUCGAGGAAAGAGGCUUUCCCCCGACCGCAGGCCAGCCCCCUGCCACAACCAAGCCUAAGGAGAUUACUCCUGUGAACCCCGGUACAUCACCACUGAUUCGGUAUGCUGCCUGGACCGGAGGUCUGGCCGCCGUGGUGCUGUUAUGUUUAGUGAUCUUUUUGAUUUGCACCGCAAAGCGGAUGCGAGUGAAAGCGUAUCGGGUGGAUAAGUCGCCCUACAACCAGUCUAUGUACUAUGCCGGACUCCCUGUGGAUGAUUUUGAGGAUUCAGAAUCCACCGACACAGAGGAGGAGUUUGGGAACGCGAUCGGAGGGUCCCACGGGGGCUCCUCCUAUACCGUGUACAUAGAUAAGACUCGG 254
gE FO_D13_1RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACAGUGAACAAGCCAGUGGUAGGCGUGCUGAUGGGCUUCGGCAUCAUCACUGGAACCUUGCGGAUCACAAACCCCGUGAGGGCCAGCGUCCUGCGUUACGAUGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACUAACAGUGUAUACGAGCCAUAUUACCACUCCGAUCAUGCAGAGAGUUCCUGGGUGAAUCGCGGGGAGAGCAGCCGGAAGGCUUAUGACCACAACUCUCCCUACAUCUGGCCCCGGAACGACUAUGAUGGCUUCCUGGAGAACGCCCACGAGCACCACGGGGUGUAUAACCAGGGGCGUGGCAUAGAUUCCGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAAGAUCUCGGGGAUGAUACUGGAAUCCACGUGAUUCCAACCCUGAACGGGGACGACCGGCACAAGAUCGUCAACGUGGAUCAGCGCCAAUAUGGCGACGUUUUUAAGGGGGACCUGAACCCCAAGCCUCAGGGCCAGAGACUCAUUGAGGUGUCAGUGGAGGAAAACCACCCCUUCACCCUCCGCGCACCUAUCCAGCGUAUUUAUGGGGUGCGUUACACCGAGACUUGGAGCUUUCUGCCAAGUCUCACCUGCACAGGCGACGCCGCCCCAGCUAUACAGCAUAUUUGUCUGAAGCAUACAACAUGCUUCCAAGACGUGGUGGUGGACGUCGACUGUGCAGAAAACACCAAGGAGGAUCAGCUUGCUGAAAUCUCUUACCGAUUUCAGGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUUGUGGUGAACACGAGCACCCUAUUUGAUGAGCUGGAGCUGGACCCUCCCGAGAUCGAGCCCGGGGUGCUGAAAGUUCUCCGCACGGAGAAGCAGUACCUCGGGGUCUAUAUCUGGAAUAUGAGAGGCUCUGACGGGACCUCUACAUACGCUACGUUUCUCGUCACCUGGAAAGGUGACGAGAAGACUCGGAACCCCACCCCAGCUGUGACUCCACAGCCCAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUUCACACGUGUUCUCUGUGGGGGACACAUUCAGCCUUGCCAUGCAUCUGCAGUAUAAAAUUCACGAGGCCCCCUUUGACCUGCUGCUGGAGUGGCUGUAUGUGCCCAUAGACCCGACCUGUCAGCCCAUGAGACUGUACUCAACAUGCCUCUACCAUCCAAACGCACCACAGUGCCUGAGCCACAUGAAUUCGGGCUGCACUUUUACCAGCCCUCACCUGGCUCAGAGGGUGGCCUCAACAGUGUACCAGAACUGCGAGCACGCAGAUAAUUACACUGCGUAUUGUUUGGGUAUCAGUCAUAUGGAGCCCAGUUUCGGGCUCAUUCUGCAUGACGGAGGCACUACCCUCAAGUUCGUGGAUACUCCCGAGAGCUUGAGCGGCCUCUACGUGUUCGUUGUUUACUUCAACGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUACACCGUAGUGUCCACAGUGGAUCACUUCGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGCUUCCCGCCCACCGCCGGCCAGCCUCCGGCAACCACGAAGCCGAAGGAGAUAACUCCCGUUAAUCCCGGGACGUCCCCUUUGAUAAGGUAUGCAGCGUGGACCGGAGGUCUGGCCGCGGUGGUGCUCCUCUGUCUGGUGAUUUUCUUGAUUUGCACCGCCAAGCGGAUGCGAGUCAAGGCAUACAGGGUGGACAAGUCACCCUACAAUCAGAGUAUGUACUACGCCGGGCUCCCUGUGGAUGACUUUGAGGACUCCGAAUCAACCGACACUGAGGAGGAGUUCGGCAACGCCAUCGGAGGGAGCCACGGCGGCUCGUCAUACACUGUGUACAUCGACAAAACUCGG 255
gE FO_D13_2RNA UGAUAA (SEQ ID NO: 306)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGUACCGUGAAUAAGCCCGUGGUAGGCGUGCUCAUGGGCUUUGGUAUAAUUACCGGCACACUGCGGAUUACAAAUCCUGUGCGUGCCAGCGUCCUGAGAUACGAUGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGAUACAAACAGCGUCUAUGAGCCAUAUUACCACAGCGAUCAUGCCGAAUCCUCCUGGGUGAAUAGGGGGGAGUCAAGCCGCAAGGCGUACGACCAUAACUCCCCCUACAUCUGGCCCCGGAAUGACUAUGACGGGUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCACCAUGGAGUGUACAACCAGGGACGCGGCAUAGAUUCUGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCUACACAGAUGUCCGCCCAGGAGGAUUUGGGAGAUGAUACCGGGAUUCACGUGAUCCCCACUUUAAACGGGGACGAUCGCCACAAGAUCGUCAACGUGGAUCAAAGACAAUACGGUGACGUCUUCAAGGGGGACUUGAAUCCCAAGCCUCAGGGCCAGCGGCUGAUCGAGGUAAGCGUGGAGGAGAACCAUCCCUUCACCUUGCGGGCUCCCAUCCAGCGGAUCUACGGGGUACGAUACACCGAGACUUGGAGUUUUCUGCCAAGUCUCACAUGCACAGGCGACGCCGCCCCCGCCAUCCAGCAUAUUUGCUUGAAGCAUACAACAUGUUUCCAGGAUGUGGUGGUGGACGUCGACUGUGCAGAAAAUACCAAGGAAGAUCAGCUGGCUGAGAUUUCUUACCGCUUCCAGGGUAAGAAAGAGGCCGAUCAGCCUUGGAUCGUUGUCAACACGAGUACCCUGUUUGACGAGCUGGAACUUGAUCCGCCAGAGAUAGAGCCCGGGGUCUUGAAGGUUCUCCGCACGGAAAAACAGUACCUGGGAGUGUACAUCUGGAACAUGAGGGGUUCCGACGGGACCUCGACCUAUGCCACCUUCCUGGUGACCUGGAAGGGGGACGAGAAGACGCGGAACCCCACCCCGGCUGUCACCCCGCAGCCCCGGGGAGCGGAGUUUCACAUGUGGAACUACCACUCCCACGUGUUUUCCGUGGGGGAUACCUUCUCUCUUGCUAUGCAUUUGCAGUACAAGAUACACGAGGCCCCCUUCGAUCUGCUGCUGGAGUGGCUGUAUGUGCCCAUUGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGCGGCUGUAUAGCACCUGCCUUUACCACCCCAACGCCCCACAGUGUCUGAGCCAUAUGAACUCGGGCUGUACUUUUACUAGCCCGCACUUGGCUCAGAGGGUGGCCAGUACAGUGUACCAAAACUGUGAACACGCUGACAACUACACCGCGUAUUGUCUGGGCAUCAGCCACAUGGAGCCCAGUUUUGGGCUCAUUCUUCACGAUGGGGGCACCACCCUCAAAUUUGUGGAUACCCCUGAGAGCUUGAGCGGCCUGUAUGUGUUCGUUGUGUACUUCAACGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUACACAGUGGUCAGCACAGUUGACCACUUCGUGAACGCCAUUGAGGAGCGUGGGUUCCCGCCCACCGCCGGCCAGCCUCCUGCGACCACGAAGCCGAAGGAGAUCACCCCUGUGAACCCAGGGACGUCUCCACUGAUUCGCUAUGCUGCGUGGACAGGAGGCCUGGCCGCGGUGGUGCUCCUCUGCCUUGUGAUUUUUUUGAUUUGCACCGCAAAGCGGAUGCGAGUCAAAGCUUAUAGGGUGGAUAAGUCCCCCUACAAUCAAUCCAUGUAUUACGCCGGGCUGCCCGUCGAUGACUUUGAGGAUUCCGAGUCCACAGACACUGAGGAGGAGUUCGGCAACGCCAUCGGCGGCAGCCACGGUGGGUCAUCUUAUACUGUUUACAUUGACAAAACAAGA 256
gE FO_D13_3RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子    (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACCGUGAAUAAGCCAGUGGUAGGAGUGUUGAUGGGCUUCGGCAUUAUCACUGGCACCUUGCGCAUCACAAACCCUGUGCGAGCCAGCGUCCUGCGUUACGAUGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGAUACGAAUAGCGUGUAUGAGCCAUAUUACCACUCCGAUCAUGCAGAGUCCUCCUGGGUGAACAGGGGGGAGUCUAGCCGGAAGGCUUACGACCACAAUUCCCCCUACAUCUGGCCCCGGAACGAUUAUGACGGGUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCAUCAUGGAGUGUAUAACCAGGGACGCGGCAUCGAUUCCGGGGAGCGGCUCAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUCGGGGAUGAUACCGGGAUCCACGUGAUUCCAACCCUGAAUGGGGACGAUCGGCACAAGAUCGUCAACGUGGAUCAACGCCAAUAUGGCGAUGUUUUCAAAGGGGAUCUUAACCCUAAGCCCCAGGGCCAGCGGCUAAUCGAGGUGAGUGUGGAGGAGAACCAUCCAUUCACCUUGAGAGCCCCGAUCCAGCGUAUCUAUGGGGUGCGUUAUACUGAGACUUGGUCAUUCCUGCCGAGUCUUACCUGCACCGGUGAUGCCGCCCCAGCUAUACAACACAUAUGUCUCAAGCAUACCACAUGCUUUCAGGACGUGGUGGUUGAUGUUGACUGUGCAGAGAACACCAAGGAGGAUCAGCUUGCAGAGAUUUCUUACCGCUUUCAGGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUGGUGAACACGAGCACCCUGUUUGAUGAGCUGGAGCUGGACCCUCCGGAGAUUGAACCCGGGGUGUUGAAGGUGCUGCGCACCGAGAAACAAUACCUCGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGAGGGGGUCCGACGGGACCUCCACAUAUGCCACUUUUCUCGUCACCUGGAAAGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCUACCCCCGCUGUGACCCCACAGCCGCGGGGUGCGGAGUUUCACAUGUGGAACUAUCAUAGCCACGUGUUCUCGGUGGGCGAUACCUUCAGCCUGGCAAUGCACCUGCAGUACAAGAUACACGAGGCCCCCUUUGAUCUCCUGUUGGAGUGGCUGUAUGUGCCCAUCGACCCCACAUGCCAGCCUAUGCGGUUGUACUCCACCUGCCUGUACCAUCCUAACGCACCACAGUGCUUGAGCCAUAUGAAUUCGGGCUGCACUUUCACCAGCCCUCAUCUGGCCCAGAGGGUGGCCUCAACAGUGUACCAAAACUGUGAACACGCUGACAAUUACACUGCGUAUUGCCUGGGUAUUAGCCAUAUGGAGCCUAGUUUUGGGCUCAUUCUGCAUGACGGUGGCACAACCCUCAAGUUCGUGGACACCCCCGAGAGCUUGAGCGGCCUCUACGUGUUCGUUGUGUACUUCAAUGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUAUACCGUAGUGUCAACUGUAGACCACUUCGUUAACGCCAUAGAGGAGCGCGGCUUCCCGCCCACCGCCGGCCAGCCUCCUGCCACCACAAAGCCGAAGGAGAUCACCCCAGUUAAUCCUGGGACGUCUCCCCUCAUUCGGUACGCCGCGUGGACAGGAGGCUUGGCCGCGGUGGUGCUCCUCUGUCUGGUUAUAUUUUUGAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCAUACAGGGUGGACAAGUCACCCUACAACCAGUCCAUGUACUACGCCGGGCUCCCUGUUGAUGACUUUGAGGACUCCGAAUCUACCGACACUGAGGAGGAGUUCGGGAAUGCCAUCGGCGGGAGCCACGGCGGCAGUAGUUAUACUGUCUACAUCGAUAAGACACGG 257
gE FO_D13_4RNA UAAUAG (SEQ ID NO: 299)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACGGUGAAUAAGCCGGUGGUAGGCGUGCUCAUGGGCUUCGGUAUCAUUACCGGGACCCUGCGCAUCACUAAUCCUGUGCGGGCCAGCGUGCUGCGUUACGAUGACUUCCACAUCGACGAGGAUAAGCUGGACACAAAUAGCGUCUAUGAGCCGUACUACCACAGUGAUCAUGCCGAAUCCUCCUGGGUGAAUAGGGGAGAGUCAUCUCGUAAGGCGUACGACCAUAACUCUCCCUACAUCUGGCCCCGGAAUGACUAUGACGGGUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCACCAUGGAGUGUAUAACCAGGGGCGCGGCAUAGAUUCCGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCUACACAAAUGUCAGCCCAGGAGGAUUUGGGAGAUGACACUGGGAUUCACGUGAUCCCUACCCUCAAUGGCGACGAUCGGCAUAAGAUCGUCAACGUCGACCAGCGCCAAUAUGGCGACGUUUUUAAGGGGGACUUGAACCCCAAGCCUCAGGGGCAGCGCCUGAUUGAGGUGAGCGUGGAGGAGAACCAUCCUUUCACGCUGCGGGCCCCCAUCCAGCGGAUCUACGGGGUACGGUACACUGAGACUUGGAGUUUUCUGCCAAGUCUCACCUGCACAGGCGACGCCGCACCUGCCAUUCAGCACAUAUGCCUGAAGCACACCACGUGCUUUCAGGAUGUGGUGGUGGACGUCGAUUGUGCAGAGAAUACCAAGGAGGAUCAGCUCGCCGAGAUUUCUUACCGCUUCCAGGGUAAGAAAGAGGCUGAUCAACCUUGGAUCGUGGUCAACACGAGUACCCUGUUUGACGAGUUGGAGCUUGAUCCACCCGAGAUCGAGCCGGGGGUGUUGAAGGUGCUCCGCACGGAGAAGCAGUACUUGGGCGUGUACAUCUGGAACAUGAGGGGGUCCGACGGGACCUCUACUUAUGCAACUUUUCUCGUCACCUGGAAGGGUGACGAGAAAACGCGGAAUCCCACGCCCGCGGUGACCCCCCAACCCCGGGGGGCGGAGUUCCACAUGUGGAACUACCACUCACAUGUGUUCUCGGUGGGGGAUACCUUUUCUCUGGCCAUGCACCUCCAGUACAAGAUCCACGAGGCACCCUUUGAUCUGCUGCUGGAGUGGCUGUACGUCCCCAUUGACCCCACUUGUCAGCCUAUGAGGCUGUACAGUACAUGUCUGUAUCACCCCAACGCCCCCCAGUGCCUGAGCCACAUGAACUCGGGCUGUACAUUUACAAGCCCGCACCUGGCCCAGAGGGUGGCCUCGACAGUGUACCAAAACUGCGAGCACGCAGACAACUACACUGCGUACUGCCUUGGGAUCUCCCACAUGGAGCCCAGUUUCGGGCUCAUUCUUCACGAUGGAGGAACCACCCUCAAAUUCGUGGACACCCCUGAGAGCUUGUCCGGUCUCUACGUGUUCGUUGUGUACUUCAACGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUACACAGUGGUCUCUACAGUGGACCAUUUUGUGAACGCCAUAGAGGAGCGUGGUUUUCCACCCACCGCCGGCCAGCCUCCUGCCACCACGAAGCCGAAGGAGAUCACCCCUGUGAAUCCAGGCACAUCUCCUCUGAUCCGCUACGCUGCGUGGACAGGAGGCUUGGCCGCGGUGGUGCUCCUCUGCCUAGUGAUCUUUCUUAUCUGUACCGCAAAGCGGAUGCGGGUGAAAGCUUACAGGGUAGACAAGUCCCCCUACAAUCAGUCCAUGUAUUACGCCGGGCUGCCAGUCGAUGACUUCGAGGAUUCUGAAAGCACAGACACCGAGGAGGAGUUCGGCAAUGCGAUUGGGGGUAGCCACGGGGGUUCCAGUUAUACUGUCUACAUAGACAAGACCAGA 258
gE FO_D13_5RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACCGUGAACAAGCCCGUGGUCGGCGUGCUCAUGGGCUUCGGUAUCAUUACCGGCACGCUGAGGAUCACUAACCCUGUGCGUGCCAGCGUCCUGCGAUAUGAUGACUUUCAUAUCGACGAGGACAAGCUGGAUACAAACAGCGUCUAUGAGCCAUAUUACCAUUCCGAUCAUGCCGAAUCUUCCUGGGUGAAUCGGGGGGAGUCAAGCCGCAAGGCAUACGACCACAACUCCCCCUACAUUUGGCCCCGGAAUGACUACGACGGGUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAACAUCAUGGGGUGUACAACCAGGGGCGCGGCAUCGAUUCCGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCUACACAAAUGUCCGCCCAGGAGGAUUUGGGCGAUGAUACCGGGAUCCACGUGAUCCCCACCCUGAAUGGGGACGAUCGACACAAGAUCGUCAACGUGGAUCAGCGCCAAUACGGCGACGUAUUCAAGGGGGAUUUGAAUCCCAAACCGCAGGGUCAGCGGCUGAUCGAGGUUAGCGUUGAGGAGAACCAUCCUUUUACCCUGCGGGCGCCCAUCCAGCGGAUUUACGGGGUGCGAUAUACUGAGACUUGGAGUUUCCUCCCAAGUCUCACCUGCACAGGCGACGCCGCCCCAGCCAUCCAGCAUAUCUGCCUGAAGCAUACAACUUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGACGUCGACUGUGCAGAAAACACCAAGGAGGAUCAGCUCGCUGAGAUCUCUUACCGCUUCCAAGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUGGUCAACACCAGCACCCUGUUUGAUGAGCUGGAGCUCGAUCCUCCCGAGAUCGAGCCCGGGGUGUUGAAGGUGCUCCGCACCGAGAAACAGUAUCUGGGCGUCUAUAUAUGGAAUAUGAGGGGGUCCGACGGGACGUCUACCUACGCAACAUUUCUCGUCACCUGGAAGGGAGAUGAGAAAACGCGUAAUCCGACUCCCGCUGUGACCCCACAGCCCAGAGGGGCUGAGUUUCACAUGUGGAACUACCAUUCACAUGUUUUCUCGGUGGGGGACACCUUCUCUCUGGCAAUGCACCUCCAGUACAAGAUCCACGAGGCCCCCUUUGAUCUGCUGCUGGAAUGGCUGUACGUGCCGAUCGACCCGACAUGUCAGCCGAUGAGGCUGUACUCUACAUGUCUUUACCAUCCAAAUGCUCCCCAGUGUCUGAGCCACAUGAACUCGGGCUGUACUUUCACAAGCCCGCAUCUGGCUCAGAGGGUGGCGAGCACAGUCUACCAAAACUGCGAACACGCAGAUAAUUACACAGCGUACUGCCUCGGCAUCAGCCAUAUGGAGCCCAGUUUCGGGCUCAUUCUCCACGAUGGAGGGACCACCCUCAAGUUCGUGGACACUCCAGAGAGUCUCUCAGGUCUCUACGUGUUCGUUGUGUACUUUAAUGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUAUACAGUGGUCUCUACGGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUCCCACCUACAGCCGGCCAGCCUCCGGCCACCACGAAGCCGAAGGAGAUUACCCCUGUGAAUCCAGGGACGUCUCCACUGAUCCGCUACGCGGCUUGGACCGGAGGCUUGGCCGCUGUUGUGCUCCUCUGCCUUGUGAUCUUUUUGAUUUGCACCGCGAAGCGGAUGCGGGUCAAAGCUUACAGGGUGGACAAGUCCCCCUACAACCAGUCGAUGUACUACGCCGGGCUGCCAGUCGAUGACUUUGAGGACUCCGAGUCCACAGACACUGAGGAGGAGUUCGGCAACGCGAUCGGCGGUAGCCACGGCGGGUCUAGCUAUACAGUGUACAUCGACAAGACCAGA 259
gE FO_D13_6RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACCGUCAACAAACCAGUGGUAGGAGUGCUGAUGGGAUUCGGCAUUAUCACUGGGACCCUGCGCAUCACAAACCCGGUGCGCGCCUCUGUUCUGAGGUACGAUGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUCGACACUAAUUCUGUGUAUGAGCCAUACUAUCACUCUGAUCAUGCAGAAUCCUCCUGGGUGAAUAGGGGGGAGUCUAGCCGGAAGGCAUAUGACCACAAUUCCCCCUACAUCUGGCCCCGGAACGACUACGACGGGUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCAUCAUGGCGUGUACAACCAGGGGCGCGGCAUCGAUUCCGGGGAACGGCUGAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUCGGGGACGAUACCGGAAUCCACGUUAUCCCCACACUGAAUGGGGACGAUCGCCACAAGAUCGUUAACGUGGAUCAGCGCCAAUAUGGCGACGUAUUUAAGGGGGAUCUGAACCCCAAACCUCAGGGCCAGCGGCUAAUUGAGGUGAGUGUGGAGGAGAAUCACCCCUUCACCUUGAGGGCUCCCAUCCAGCGUAUCUAUGGGGUGCGUUACACCGAGACUUGGUCCUUUCUGCCAAGUCUCACCUGCACAGGCGAUGCCGCCCCCGCCAUCCAGCAUAUUUGUCUGAAGCAUACCACAUGCUUCCAAGACGUGGUGGUGGACGUCGACUGUGCAGAAAACACCAAGGAGGAUCAGCUUGCCGAGAUUUCUUACCGCUUCCAGGGUAAGAAGGAAGCAGAUCAACCUUGGAUCGUGGUAAACACGAGCACCCUUUUUGAUGAGCUGGAGCUGGAUCCUCCCGAAAUCGAACCUGGGGUGCUGAAGGUGCUCCGCACUGAGAAGCAAUACCUGGGGGUGUACAUCUGGAAUAUGAGAGGUUCCGAUGGGACCUCUACAUACGCCACUUUUCUCGUCACCUGGAAAGGUGACGAGAAGACGAGGAACCCCACCCCUGCUGUUACUCCACAGCCAAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAACUACCACAGUCAUGUUUUCUCGGUGGGGGACACCUUCAGCCUGGCGAUGCACCUGCAAUACAAAAUCCAUGAGGCCCCCUUUGAUCUCCUGCUGGAGUGGCUUUAUGUACCCAUAGACCCGACAUGCCAGCCCAUGAGAUUGUACAGCACUUGUCUGUAUCAUCCAAACGCACCUCAGUGCCUGAGCCACAUGAAUUCGGGCUGCACCUUUACCAGCCCGCAUCUGGCUCAGAGGGUUGCCUCAACGGUGUAUCAGAACUGUGAGCACGCAGAUAAUUACACCGCGUAUUGCUUGGGCAUCAGCCACAUGGAGCCGUCAUUCGGGCUCAUUCUGCAUGACGGGGGGACUACCCUCAAGUUUGUGGACACCCCAGAAAGCUUGAGCGGCCUCUACGUGUUCGUUGUUUACUUCAACGGACAUGUGGAGGCUGUGGCGUACACCGUAGUGUCCACGGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUUGAGGAGCGCGGGUUCCCGCCCACCGCCGGCCAGCCUCCUGCCACCACCAAGCCGAAAGAAAUCACCCCAGUGAAUCCUGGGACGAGCCCACUGAUUCGGUACGCUGCGUGGACAGGAGGCCUGGCUGCGGUGGUGCUCCUCUGUCUGGUAAUAUUUUUGAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAAGCAUAUAGGGUGGACAAGAGUCCCUACAACCAGUCGAUGUAUUACGCCGGGCUCCCUGUCGAUGACUUUGAAGACUCCGAGUCUACCGACACGGAGGAGGAGUUCGGCAACGCCAUCGGCGGAAGUCAUGGUGGCAGUUCUUACACUGUAUACAUCGACAAGACACGG 260
gE FO_D13_7RNA UGAUAA (SEQ ID NO: 306)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGUACGGUUAAUAAGCCGGUGGUCGGGGUGCUGAUGGGGUUCGGGAUCAUCACCGGGACGCUGCGCAUUACAAAUCCAGUGCGCGCGUCCGUCCUGCGUUACGAUGACUUUCACAUCGACGAGGACAAGCUGGAUACAAACAGCGUGUACGAGCCAUAUUACCACUCUGAUCACGCCGAGUCCUCCUGGGUGAAUAGGGGGGAAUCGAGUCGCAAAGCGUACGACCACAAUUCUCCCUAUAUCUGGCCCCGGAACGACUAUGACGGGUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCAUCAUGGAGUGUAUAACCAGGGGCGCGGCAUAGAUUCGGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCGACCCAGAUGUCUGCCCAGGAGGACCUGGGCGACGACACUGGCAUCCACGUGAUCCCGACCCUCAACGGGGACGAUCGUCACAAGAUCGUCAACGUGGACCAGCGGCAGUACGGUGACGUGUUCAAGGGGGACCUCAACCCGAAGCCCCAGGGGCAGCGGCUUAUUGAGGUGUCAGUGGAGGAAAAUCAUCCAUUCACCCUCCGAGCCCCAAUUCAGCGGAUCUAUGGGGUUCGGUACACGGAGACGUGGAGUUUUCUGCCAAGUCUGACCUGCACGGGCGAUGCCGCCCCUGCAAUCCAGCAUAUUUGCUUGAAACACACUACAUGCUUUCAGGAUGUGGUGGUUGAUGUCGACUGUGCAGAGAACACUAAGGAGGAUCAGCUUGCCGAGAUUUCUUACCGCUUCCAGGGCAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUGGUGAACACGUCCACCCUGUUUGAUGAGCUCGAGCUUGAUCCUCCCGAGAUCGAGCCCGGGGUGCUGAAGGUGCUCCGCACCGAGAAGCAGUACCUGGGGGUGUACAUCUGGAACAUGCGGGGGUCGGACGGGACUUCUACGUACGCGACCUUCCUUGUGACCUGGAAGGGCGACGAGAAGACCCGUAAUCCGACCCCCGCAGUGACACCCCAGCCUCGGGGGGCGGAAUUUCAUAUGUGGAACUAUCACUCCCACGUGUUCUCGGUGGGGGACACCUUCAGUCUUGCAAUGCACCUCCAGUAUAAGAUCCACGAGGCUCCCUUUGAUCUCUUGCUGGAGUGGCUGUAUGUGCCUAUUGACCCCACAUGCCAGCCAAUGAGACUGUAUUCUACGUGUCUCUAUCAUCCCAACGCUCCUCAAUGCCUGUCCCAUAUGAACAGUGGGUGUACCUUUACAUCCCCCCACCUGGCCCAGCGUGUUGCUAGCACGGUGUACCAGAAUUGUGAACACGCCGAUAACUAUACGGCGUAUUGCCUGGGCAUUAGCCACAUGGAGCCCUCCUUCGGCCUGAUUCUGCACGACGGAGGCACGACGCUCAAGUUCGUGGAUACCCCUGAGAGCUUGAGCGGCCUCUACGUGUUCGUGGUGUAUUUUAACGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUACACAGUGGUCAGCACGGUCGACCACUUUGUGAACGCCAUUGAGGAGCGUGGGUUUCCACCCACCGCAGGCCAGCCCCCUGCCACCACGAAGCCAAAGGAGAUUACCCCAGUAAACCCUGGGACUAGUCCCUUGAUCCGCUACGCUGCGUGGACAGGCGGGCUGGCCGCGGUGGUGCUGCUGUGUCUGGUCAUUUUUCUUAUCUGCACGGCUAAGCGCAUGCGGGUGAAGGCUUACCGGGUUGACAAGUCCCCCUAUAAUCAGAGCAUGUACUACGCCGGUCUGCCGGUCGAUGACUUUGAAGAUAGUGAGUCCACUGACACUGAGGAGGAGUUCGGCAAUGCCAUCGGCGGGUCACACGGCGGCUCCUCGUAUACUGUCUAUAUCGACAAGACCCGC 261
gE FO_D13_8RNA UAAUGA (SEQ ID NO: 300)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACCGUGAAUAAGCCGGUGGUAGGGGUGCUCAUGGGGUUCGGUAUCAUUACCGGUACUCUGCGCAUUACUAACCCUGUGCGUGCUAGUGUCCUCCGGUACGAUGACUUCCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACUAACAGCGUAUAUGAGCCCUACUACCACUCCGAUCACGCCGAGUCCUCCUGGGUGAAUAGGGGGGAGUCAUCCCGCAAGGCCUAUGACCAUAACUCUCCCUAUAUCUGGCCCCGGAAUGACUAUGACGGAUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCAUCAUGGGGUGUAUAACCAGGGGCGCGGAAUAGACUCCGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCUACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGAUCUUGGCGAUGAUACCGGCAUUCACGUCAUCCCCACCCUCAAUGGCGACGAUCGUCACAAGAUCGUCAAUGUGGACCAGCGCCAAUAUGGCGAUGUUUUCAAGGGGGACCUCAAUCCCAAGCCCCAAGGACAGCGGCUGAUUGAGGUCAGCGUGGAGGAAAACCAUCCCUUCACCCUUCGGGCUCCCAUCCAGCGGAUCUACGGUGUACGAUAUACUGAGACUUGGUCAUUCCUGCCAAGUCUCACAUGCACAGGCGACGCCGCCCCAGCCAUCCAGCACAUAUGCCUGAAGCACACCACGUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGACGUGGACUGUGCAGAAAACACCAAGGAGGAUCAGCUCGCCGAGAUUUCUUACCGCUUUCAAGGUAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUGGUCAACACGAGUACACUGUUUGACGAGCUGGAGCUGGACCCCCCCGAAAUCGAGCCAGGGGUGCUGAAGGUACUCCGCACCGAGAAACAGUACCUGGGAGUCUACAUUUGGAACAUGAGGGGGAGCGACGGGACGUCGACUUACGCAACAUUUCUCGUGACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACGCGGAAUCCGACUCCCGCGGUCACCCCUCAGCCUCGUGGCGCAGAGUUCCAUAUGUGGAACUACCACUCGCAUGUGUUCUCGGUGGGGGAUACCUUCAGUCUCGCUAUGCACCUCCAGUACAAGAUCCACGAGGCACCCUUCGAUCUGCUGCUGGAGUGGCUGUACGUGCCGAUAGACCCGACAUGUCAGCCUAUGAGGCUGUAUUCUACAUGCCUCUACCACCCAAAUGCCCCACAGUGUCUGAGCCACAUGAACUCGGGCUGUACUUUUACCAGCCCGCAUCUGGCUCAGAGGGUGGCUAGCACAGUUUACCAGAACUGUGAGCACGCAGAUAAUUACACUGCGUACUGCCUUGGCAUCAGCCAUAUGGAGCCCAGUUUCGGGCUCAUACUCCACGAUGGAGGGACCACCCUCAAGUUCGUGGAUACACCUGAGAGCUUGUCCGGCCUCUACGUGUUCGUUGUAUACUUCAACGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUACACAGUGGUCUCUACAGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUUGAAGAAAGGGGGUUCCCCCCCACCGCCGGCCAGCCUCCUGCCACCACGAAGCCUAAGGAGAUCACCCCUGUGAACCCAGGGACGUCUCCACUUAUCCGCUACGCUGCGUGGACAGGAGGUCUGGCGGCGGUGGUAUUGCUCUGCCUCGUGAUCUUUUUGAUUUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUAUAGAGUGGACAAGUCUCCCUACAAUCAAUCCAUGUACUACGCUGGGCUGCCAGUGGAUGACUUUGAGGACUCCGAAUCCACAGAUACGGAGGAGGAGUUCGGCAAUGCGAUCGGCGGCAGCCACGGAGGUUCCUCCUAUACUGUCUACAUUGACAAGACCCGC 262
gE FO_D13_9RNA UGAUAG (SEQ ID NO: 305)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACCGUGAAUAAGCCCGUGGUAGGCGUGCUCAUGGGCUUCGGUAUCAUCACAGGUACUCUGCGCAUUACAAACCCUGUACGCGCAAGUGUCCUACGCUACGAUGAUUUUCACAUCGAUGAGGACAAGUUGGACACCAACUCAGUCUAUGAGCCGUAUUACCACUCCGAUCACGCCGAGUCUUCCUGGGUGAACAGGGGGGAGUCUAGUAGGAAGGCCUACGAUCACAACUCCCCCUACAUCUGGCCCCGGAAUGACUACGACGGGUUCCUGGAGAACGCACAUGAGCAUCAUGGCGUGUAUAACCAGGGGCGCGGUAUUGAUUCCGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCCACGCAGAUGUCUGCCCAGGAGGACCUCGGCGAUGAUACGGGCAUUCAUGUUAUCCCCACCCUAAAUGGCGAUGACCGCCACAAGAUCGUGAACGUGGAUCAGCGCCAAUAUGGGGACGUUUUUAAGGGGGACUUGAACCCCAAGCCUCAGGGCCAGCGGCUGAUCGAGGUCAGUGUGGAGGAAAACCACCCCUUCACCCUGAGGGCGCCCAUCCAGCGAAUUUACGGGGUACGAUAUACUGAGACUUGGAGCUUUCUACCCUCGCUCACCUGCACAGGCGACGCCGCCCCCGCCAUUCAGCAUAUAUGCCUGAAGCAUACAACAUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGACGUCGACUGUGCAGAAAACACCAAGGAGGAUCAGCUCGCCGAAAUUUCUUACCGUUUCCAGGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAACCUUGGAUCGUGGUAAACACGAGUACCCUGUUUGACGAGCUGGAGCUCGAUCCUCCAGAGAUCGAGCCUGGGGUGUUGAAGGUUCUCCGCACCGAGAAGCAGUACCUGGGAGUGUAUAUUUGGAACAUGAGGGGGUCGGACGGGACCUCUACUUAUGCCACCUUCCUCGUCACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCGACCCCAGCUGUAACCCCACAGCCCCGGGGAGCAGAGUUCCAUAUGUGGAACUACCACUCCCAUGUCUUCUCGGUGGGGGAUACCUUCUCUCUAGCUAUGCAUCUCCAGUACAAGAUCCAUGAGGCUCCCUUCGAUCUUCUGCUGGAGUGGCUGUAUGUGCCCAUCGACCCGACAUGUCAGCCAAUGAGACUGUACUCUACAUGUCUCUACCAUCCAAACGCCCCACAAUGUCUGAGCCACAUGAAUUCGGGCUGUACUUUUACCAGCCCUCACCUGGCUCAGAGGGUGGCCUCAACAGUGUAUCAGAACUGCGAGCACGCAGAUAAUUACACUGCCUACUGCCUCGGCAUCAGCCAUAUGGAGCCCUCAUUUGGGCUCAUCCUUCACGAUGGAGGAACCACGCUGAAGUUCGUGGACACACCUGAGAGCUUGAGCGGCCUCUACGUGUUCGUUGUUUACUUCAACGGACACGUAGAGGCCGUGGCGUACACUGUGGUUUCCACGGUGGACCACUUCGUCAACGCCAUCGAGGAGAGAGGAUUUCCUCCCACCGCCGGCCAGCCUCCUGCCACAACGAAACCGAAGGAGAUCACACCUGUCAAUCCAGGCACGUCUCCUUUGAUCCGAUACGCUGCGUGGACAGGAGGCUUGGCCGCGGUGGUACUGCUCUGCCUUGUGAUCUUUCUGAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAGGCUUACAGGGUAGACAAGUCCCCCUAUAAUCAGUCCAUGUAUUACGCCGGGCUGCCAGUGGAUGACUUUGAGGACUCCGAAUCCACUGACACAGAGGAGGAGUUCGGCAACGCUAUCGGCGGCAGCCACGGCGGAUCAUCUUAUACUGUCUACAUAGACAAGACCAGA 263
gE FO_D13_10RNA UGAUAG (SEQ ID NO: 305)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACCGUGAAUAAGCCUGUGGUGGGCGUGCUCAUGGGCUUUGGUAUAAUCACCGGGACACUGAGGAUUACCAACCCUGUGCGAGCCAGCGUCCUGAGGUACGAUGACUUUCACAUCGACGAGGACAAGCUGGAUACUAACAGCGUCUAUGAGCCGUACUACCACUCCGACCACGCCGAAUCCUCCUGGGUGAACAGGGGGGAGUCAAGCCGCAAGGCAUAUGACCAUAACUCCCCCUACAUCUGGCCCCGGAAUGAUUACGACGGCUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCAUCAUGGGGUCUAUAACCAGGGCCGCGGCAUCGAUUCCGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCUACACAGAUGUCCGCCCAGGAGGAUUUGGGCGAUGACACCGGAAUUCACGUAAUCCCCACUCUCAAUGGUGAUGAUCGCCACAAGAUCGUCAACGUGGACCAGCGCCAAUAUGGCGACGUGUUUAAGGGGGACUUGAACCCCAAGCCUCAGGGGCAGCGGCUGAUUGAGGUGAGCGUGGAGGAGAACCAUCCCUUCACGCUUCGGGCACCGAUCCAGCGCAUUUAUGGGGUACGAUACACUGAGACCUGGUCUUUUCUGCCAAGUCUCACCUGCACAGGAGACGCCGCCCCAGCCAUUCAGCAUAUAUGCCUGAAGCACACAACCUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGACGUCGACUGUGCAGAGAACACCAAGGAGGAUCAGCUUGCCGAGAUUUCUUACCGCUUCCAGGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCGUGGAUCGUCGUGAACACGAGUACCCUGUUUGAUGAGCUGGAGCUUGAUCCUCCUGAGAUCGAGCCCGGCGUGUUGAAGGUACUCCGCACCGAGAAGCAGUACUUGGGAGUGUACAUUUGGAACAUGAGGGGUUCCGAUGGGACCUCUACAUAUGCGACUUUUCUCGUCACCUGGAAAGGUGACGAGAAAACGCGGAAUCCCACCCCCGCUGUCACCCCGCAGCCGCGCGGGGCUGAGUUUCAUAUGUGGAACUAUCAUUCCCACGUCUUCUCGGUGGGAGAUACCUUCUCACUUGCAAUGCAUCUCCAGUACAAGAUCCACGAGGCCCCCUUUGAUCUGCUGCUGGAGUGGUUGUACGUGCCCAUUGACCCAACAUGUCAGCCGAUGAGACUGUACUCUACAUGUCUCUACCACCCUAACGCCCCUCAGUGUCUGAGCCACAUGAACUCGGGCUGUACAUUUACCAGCCCGCAUCUGGCUCAGAGGGUGGCCAGCACAGUGUAUCAGAACUGCGAACACGCAGACAAUUACACUGCGUACUGCCUUGGCAUCAGCCAUAUGGAGCCCUCGUUUGGGCUCAUCCUUCACGAUGGAGGGACUACCCUCAAGUUCGUGGACACCCCUGAGAGCUUGUCCGGUCUCUACGUGUUUGUUGUUUACUUCAACGGACAUGUGGAGGCCGUGGCGUACACAGUGGUAUCUACUGUGGACCACUUCGUGAACGCCAUUGAGGAGCGGGGGUUUCCCCCCACCGCCGGCCAGCCCCCUGCCACCACGAAGCCCAAGGAGAUUACCCCUGUGAAUCCAGGGACGUCUCCACUCAUCCGCUACGCUGCGUGGACAGGGGGCCUUGCGGCGGUGGUGCUGCUUUGCCUUGUGAUCUUUUUGAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAAGCUUAUAGGGUGGACAAGUCCCCCUAUAAUCAGUCCAUGUAUUACGCCGGGCUGCCAGUCGAUGAUUUUGAGGAUUCCGAAUCGACAGACACCGAGGAGGAGUUUGGCAACGCCAUCGGCGGCAGCCACGGUGGGUCAUCCUACACUGUUUACAUUGACAAGACGAGA 264
gE FO_D13_11RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACCGUGAACAAGCCAGUGGUGGGCGUCCUGAUGGGCUUCGGGAUUAUCACUGGCACGUUGCGCAUAACGAACCCUGUGCGCGCUAGCGUCCUGCGUUACGAUGACUUUCACAUCGACGAGGAUAAGCUCGAUACCAACAGUGUGUAUGAGCCCUAUUACCACAGUGAUCACGCUGAAUCCUCCUGGGUGAACAGGGGGGAGUCCAGCCGGAAGGCUUAUGACCACAAUUCCCCCUACAUCUGGCCCCGGAAUGAUUAUGAUGGGUUCCUGGAGAAUGCCCAUGAACACCAUGGAGUGUAUAACCAGGGGCGCGGGAUCGAUUCCGGGGAACGGCUGAUGCAGCCAACCCAGAUGUCCGCCCAGGAAGAUCUCGGGGACGAUACCGGAAUCCAUGUGAUCCCUACCCUGAAUGGGGACGAUCGACACAAGAUCGUCAACGUGGAUCAACGCCAAUAUGGCGAUGUAUUUAAGGGGGAUCUCAACCCCAAGCCGCAGGGCCAGCGGCUCAUCGAGGUGAGCGUGGAGGAGAAUCACCCCUUCACCUUGAGGGCUCCGAUCCAGCGCAUCUAUGGGGUGCGUUACACUGAGACUUGGUCCUUCUUGCCAAGUCUUACCUGCACAGGCGAUGCAGCCCCUGCUAUUCAGCACAUUUGUCUCAAGCAUACCACAUGCUUCCAAGACGUCGUGGUGGAUGUCGACUGUGCAGAGAACACCAAGGAGGAUCAGCUUGCCGAGAUAAGCUACCGCUUUCAGGGCAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUGGUGAACACGAGCACCCUGUUCGAUGAGCUGGAACUGGACCCCCCCGAGAUCGAGCCCGGGGUGCUGAAGGUGCUCCGCACUGAGAAGCAGUACCUCGGGGUGUACAUCUGGAAUAUGCGGGGGUCCGACGGGACCUCCACAUACGCCACUUUUCUCGUCACCUGGAAGGGUGACGAGAAGACCCGGAACCCUACACCGGCCGUGACUCCACAGCCCCGGGGUGCAGAGUUCCACAUGUGGAAUUACCAUAGCCACGUGUUCUCGGUGGGGGACACUUUCAGCCUGGCAAUGCAUCUGCAAUACAAGAUCCACGAGGCCCCCUUUGAUCUGCUGCUGGAGUGGCUGUAUGUGCCAAUAGACCCAACAUGUCAGCCAAUGAGACUGUACUCUACAUGUCUCUAUCAUCCAAACGCUCCUCAGUGCCUGAGCCACAUGAACUCGGGCUGCACAUUUACUAGCCCGCAUCUGGCACAAAGGGUGGCCUCAACAGUGUACCAGAACUGCGAGCACGCAGAUAAUUACACUGCGUAUUGCUUGGGCAUUAGCCACAUGGAGCCCUCUUUCGGGCUCAUCCUCCAUGACGGGGGCACAACGCUCAAGUUCGUGGACACCCCCGAGAGCUUGAGCGGCCUCUACGUGUUCGUUGUAUACUUCAACGGACACGUAGAGGCCGUGGCGUAUACGGUAGUGUCUACAGUGGAUCACUUCGUGAACGCCAUUGAGGAGCGCGGCUUUCCGCCCACCGCCGGCCAGCCCCCUGCUACCACGAAGCCGAAAGAAAUAACACCGGUGAAUCCGGGGACCUCCCCACUCAUCCGGUACGCCGCGUGGACAGGGGGCUUGGCCGCGGUGGUGCUGCUCUGUCUGGUGAUUUUCUUGAUCUGCACCGCAAAGCGGAUGCGGGUUAAGGCAUAUAGGGUGGACAAAAGUCCCUAUAACCAGUCAAUGUACUACGCCGGGCUCCCUGUUGACGACUUCGAGGACUCCGAGUCCACCGACACGGAGGAGGAGUUCGGAAACGCCAUCGGCGGGUCACACGGGGGCUCAUCAUACACUGUAUAUAUCGACAAAACACGG 265
gE FO_D13_12RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACUGUGAAUAAACCAGUGGUCGGAGUGCUGAUGGGCUUCGGCAUCAUUACUGGUACCCUGCGCAUAACCAACCCUGUGCGCGCCAGCGUCCUGCGUUAUGAUGACUUUCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACCAACAGUGUCUAUGAGCCAUAUUAUCAUUCCGAUCAUGCAGAAUCUUCCUGGGUGAACAGGGGGGAGUCUAGCCGGAAGGCAUACGACCACAACUCCCCCUACAUCUGGCCCAGGAACGACUACGACGGGUUCCUGGAGAACGCCCACGAACACCACGGGGUGUAUAACCAGGGGCGUGGGAUCGAUUCUGGCGAACGGCUGAUGCAGCCGACCCAGAUGUCCGCCCAGGAGGACCUCGGGGAUGAUACCGGCAUCCACGUGAUUCCAACCCUGAAUGGGGACGAUCGGCAUAAGAUCGUCAACGUGGAUCAACGCCAGUAUGGCGACGUGUUUAAGGGGGAUCUGAACCCUAAGCCACAGGGCCAGCGGCUCAUCGAGGUGUCUGUGGAGGAGAACCACCCAUUCACCUUGAGAGCUCCGAUCCAGCGUAUUUAUGGGGUGCGUUAUACUGAGACUUGGUCUUUCCUGCCAAGUCUUACCUGCACAGGCGAUGCCGCCCCAGCCAUUCAGCAUAUAUGUCUGAAGCAUACGACCUGCUUCCAAGACGUGGUGGUGGACGUCGACUGUGCAGAGAAUACCAAGGAGGACCAGCUUGCCGAGAUUUCUUACCGGUUUCAGGGUAAGAAGGAAGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUGGUAAACACGAGCACCCUGUUCGAUGAGCUGGAGCUGGACCCUCCCGAGAUCGAACCCGGGGUGCUGAAGGUUCUCCGCACCGAGAAACAAUACCUGGGGGUGUACAUUUGGAAUAUGAGAGGCUCCGAUGGGACCUCUACAUACGCCACCUUUCUCGUCACCUGGAAAGGUGACGAGAAGACCAGGAACCCGACUCCGGCUGUGACUCCACAGCCCAGGGGUGCGGAGUUCCACAUGUGGAAUUAUCAUUCCCAUGUGUUCUCGGUGGGGGAUACCUUCAGCCUGGCUAUGCACCUGCAGUACAAAAUCCACGAGGCGCCCUUUGAUCUCCUGUUGGAAUGGCUGUACGUGCCUAUUGACCCAACAUGUCAGCCUAUGAGAUUGUACAGUACAUGUCUGUAUCAUCCCAACGCGCCUCAGUGUCUGAGCCACAUGAACUCGGGCUGCACUUUUACCAGCCCCCAUCUGGCUCAGAGGGUUGCGUCAACAGUGUACCAAAACUGCGAACACGCAGACAACUACACUGCGUAUUGCCUGGGCAUUAGCCACAUGGAGCCUAGUUUCGGGCUCAUUCUGCAUGAUGGGGGGACUACGCUCAAGUUCGUGGACACCCCAGAGAGCUUGAGCGGCCUCUACGUGUUCGUUGUGUAUUUCAAUGGACACGUGGAGGCCGUGGCGUACACGGUAGUGUCGACAGUGGACCACUUUGUGAACGCCAUAGAGGAGCGCGGGUUUCCGCCCACCGCGGGUCAGCCUCCUGCAACCACGAAGCCAAAGGAGAUCACGCCAGUGAAUCCGGGCACGAGCCCACUGAUUCGCUACGCUGCUUGGACAGGAGGCUUGGCCGCGGUGGUGCUCCUCUGCCUGGUAAUCUUUUUGAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUGAAAGCUUACCGGGUAGACAAGUCCCCCUACAACCAGUCGAUGUACUACGCCGGGCUCCCCGUUGACGACUUUGAGGACUCAGAGUCUACCGACACAGAGGAGGAGUUCGGCAACGCCAUCGGGGGGUCCCACGGUGGCAGCAGUUACACGGUAUACAUCGACAAAACACGG 266
gE FO_D13_13RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACCGUGAAUAAGCCCGUGGUGGGUGUGCUCAUGGGCUUUGGUAUUAUUACCGGUACUCUCAGGAUUACCAAUCCUGUGCGUGCCUCAGUCCUGCGUUACGAUGACUUUCACAUCGACGAGGACAAGCUGGACACAAACAGCGUCUAUGAGCCCUACUACCACAGUGAUCACGCCGAAUCCUCCUGGGUGAAUCGGGGGGAGUCCAGCCGCAAGGCUUAUGACCACAACUCCCCCUACAUCUGGCCCCGGAACGACUAUGACGGCUUCCUGGAGAACGCCCAUGAGCACCAUGGCGUGUAUAACCAGGGUCGCGGUAUUGAUUCCGGGGAGAGGCUGAUGCAGCCUACACAGAUGUCCGCCCAGGAGGAUUUGGGUGAUGACACUGGCAUUCACGUAAUCCCCACUCUGAAUGGGGACGAUCGCCAUAAGAUUGUCAAUGUGGAUCAGCGCCAAUAUGGUGAUGUGUUUAAGGGGGAUUUGAAUCCUAAGCCUCAGGGGCAGCGGCUGAUUGAGGUGUCAGUGGAGGAGAAUCACCCAUUCACCCUCCGGGCACCCAUCCAGCGCAUUUACGGGGUGCGAUACACUGAGACUUGGAGUUUCCUUCCAAGUCUCACCUGCACAGGCGAUGCCGCCCCCGCCAUCCAGCAUAUAUGCCUGAAGCACACUACAUGCUUCCAGGAUGUGGUGGUGGACGUUGACUGUGCAGAAAACACAAAGGAGGAUCAGCUCGCCGAAAUUUCUUACCGCUUCCAGGGUAAGAAGGAGGCUGAUCAGCCUUGGAUCGUGGUGAACACGAGCACCCUGUUUGAUGAGCUGGAGCUUGAUCCUCCUGAGAUCGAGCCUGGGGUGCUGAAGGUGUUGCGCACCGAGAAGCAGUACCUAGGGGUCUACAUUUGGAAUAUGAGGGGGUCCGACGGGACCUCUACAUAUGCCACUUUUCUGGUCACCUGGAAGGGAGACGAGAAGACCCGGAAUCCAACCCCCGCUGUGACACCACAGCCACGGGGGGCUGAGUUCCACAUGUGGAACUACCAUUCACACGUGUUCUCGGUGGGCGACACCUUCUCUCUUGCAAUGCAUCUGCAGUAUAAGAUCCACGAGGCCCCCUUCGACCUCCUGCUGGAGUGGCUGUACGUGCCAAUAGACCCUACAUGUCAGCCGAUGAGACUGUACUCUACAUGUCUCUACCACCCCAACGCUCCACAGUGUCUGAGCCACAUGAACUCGGGCUGUACUUUUACUAGCCCGCAUCUGGCGCAGAGGGUGGCCAGCACGGUGUACCAGAACUGCGAGCACGCAGAUAACUAUACCGCUUACUGCUUGGGGAUCAGCCAUAUGGAGCCCUCCUUCGGGCUGAUCCUCCACGAUGGGGGCACAACCCUCAAAUUCGUCGACACCCCUGAGAGCUUGAGCGGUCUGUAUGUGUUCGUUGUAUACUUCAACGGACACGUGGAGGCCGUUGCGUACACAGUGGUCAGCACAGUGGAUCACUUCGUGAACGCCAUUGAGGAGCGUGGGUUUCCACCCACCGCUGGCCAGCCUCCUGCCACCACCAAGCCGAAGGAGAUCACCCCCGUGAACCCGGGGACGUCUCCACUAAUUCGGUAUGCUGCGUGGACAGGAGGCUUGGCCGCGGUGGUGCUCCUCUGCCUUGUGAUAUUUUUGAUUUGUACUGCCAAGCGGAUGCGGGUCAAAGCUUACAGGGUGGACAAGUCCCCCUACAACCAGAGCAUGUAUUACGCCGGGCUGCCAGUCGAUGACUUUGAGGAUUCCGAAUCCACAGACACUGAGGAGGAAUUCGGCAACGCGAUCGGUGGUAGUCACGGUGGGUCAUCUUAUACUGUCUACAUUGACAAGACCAGA 267
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gE FO_D12_2RNA UGAUAA (SEQ ID NO: 306)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGAACAGUCAAUAAACCUGUGGUGGGCGUGCUGAUGGGCUUCGGCAUCAUUACCGGUACACUGCGCAUUACUAACCCAGUCCGAGCUAGUGUGUUGAGAUAUGAUGAUUUUCACAUAGAUGAGGAUAAGCUGGACACAAACUCGGUUUACGAGCCUUACUAUCACAGCGACCAUGCUGAAUCAUCUUGGGUGAACAGGGGAGAGUCUUCACGGAAGGCUUAUGAUCACAACUCCCCUUAUAUUUGGCCAAGAAAUGAUUACGACGGCUUUCUGGAGAAUGCCCACGAACAUCACGGUGUGUAUAACCAGGGCCGAGGCAUCGAUUCAGGAGAGAGGCUGAUGCAGCCAACCCAGAUGUCUGCACAGGAGGAUCUGGGAGAUGACACUGGAAUCCAUGUGAUCCCUACCCUCAACGGUGACGACCGGCACAAGAUCGUUAACGUUGAUCAGCGUCAAUACGGGGACGUCUUCAAAGGCGACCUUAACCCGAAGCCACAGGGGCAGAGGCUGAUCGAAGUAUCCGUGGAGGAAAACCAUCCAUUUACCUUGCGGGCACCGAUUCAGAGAAUCUAUGGAGUGAGGUACACGGAAACUUGGUCUUUUCUGCCUAGUCUGACCUGCACCGGGGACGCUGCUCCUGCCAUACAGCACAUCUGUCUCAAACAUACAACCUGCUUCCAGGACGUCGUUGUCGAUGUAGACUGCGCCGAAAAUACAAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAGAUUAGCUACAGGUUCCAGGGGAAAAAAGAGGCUGACCAACCAUGGAUCGUGGUUAACACUUCUACUCUCUUUGACGAACUUGAGCUCGAUCCUCCUGAGAUCGAGCCCGGAGUUCUCAAGGUGCUGCGAACAGAGAAGCAGUACUUGGGGGUUUAUAUCUGGAAUAUGCGUGGCAGCGACGGUACAUCCACCUACGCAACUUUCCUGGUCACAUGGAAGGGGGACGAAAAAACCCGGAAUCCUACCCCGGCUGUGACUCCACAGCCUAGAGGGGCAGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCAUUCUCACGUGUUCUCUGUAGGGGAUACCUUUUCGCUAGCUAUGCAUCUCCAAUAUAAGAUUCACGAGGCCCCAUUUGAUCUUCUGCUGGAGUGGUUGUACGUUCCGAUCGACCCCACGUGUCAGCCGAUGAGAUUGUAUUCUACCUGUCUUUAUCAUCCGAAUGCUCCCCAGUGUUUAUCUCACAUGAACUCCGGGUGUACUUUUACUAGUCCACAUCUGGCCCAGAGAGUGGCCAGUACAGUAUAUCAGAACUGCGAGCAUGCUGACAAUUACACAGCUUACUGCCUUGGUAUCUCACACAUGGAGCCUUCAUUCGGGCUCAUUCUGCACGAUGGAGGCACCACGCUGAAGUUUGUUGACACUCCCGAAAGCCUUUCUGGCCUUUACGUGUUUGUGGUGUAUUUCAAUGGACACGUGGAGGCAGUGGCAUACACAGUGGUCAGCACGGUUGAUCAUUUUGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGUGGUUUUCCUCCUACGGCAGGGCAGCCUCCUGCAACUACCAAGCCAAAGGAGAUUACACCGGUCAACCCAGGAACCAGCCCAUUGAUCCGGUAUGCCGCUUGGACCGGGGGGUUGGCAGCUGUAGUUCUGCUUUGCCUGGUUAUAUUUUUGAUUUGCACCGCAAAGCGAAUGCGGGUUAAAGCCUACAGGGUGGACAAAAGUCCUUAUAACCAGUCAAUGUAUUAUGCGGGCCUCCCGGUGGAUGAUUUCGAAGAUAGCGAGAGCACCGAUACAGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCAAUAGGGGGUUCCCACGGCGGAAGCUCUUAUACAGUGUAUAUUGACAAAACCAGG 269
gE FO_D12_3RNA UAAUAA (SEQ ID NO: 298)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGAACAGUGAAUAAACCCGUCGUCGGAGUGCUUAUGGGUUUCGGGAUCAUCACUGGUACCUUGAGGAUUACCAACCCUGUCCGUGCUUCGGUCUUAAGAUAUGAUGAUUUCCAUAUUGACGAGGAUAAGCUGGAUACGAACUCGGUUUACGAGCCAUACUACCACAGCGAUCACGCUGAGUCAUCCUGGGUUAACAGGGGUGAGUCAUCCCGGAAGGCUUACGACCAUAACUCUCCAUACAUAUGGCCCAGAAAUGAUUAUGACGGCUUUCUGGAAAAUGCACACGAACAUCACGGUGUGUAUAACCAGGGCAGGGGGAUCGAUAGCGGCGAACGGCUGAUGCAGCCUACCCAGAUGAGUGCUCAGGAGGACCUGGGAGAUGACACCGGUAUCCAUGUCAUCCCUACCCUCAACGGGGACGACCGGCACAAAAUUGUGAACGUUGACCAGCGCCAAUACGGAGAUGUAUUCAAAGGCGAUCUGAACCCCAAGCCACAAGGGCAGAGGCUGAUCGAGGUCUCGGUGGAGGAGAACCAUCCUUUUACACUGCGUGCCCCAAUCCAGCGGAUAUAUGGCGUGCGAUACACGGAGACAUGGUCUUUCCUGCCUUCACUGACAUGCACAGGGGACGCUGCCCCGGCCAUUCAGCACAUUUGUCUGAAGCAUACGACCUGCUUCCAGGACGUGGUCGUGGACGUAGAUUGCGCCGAAAACACAAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAAAUCAGCUACAGGUUUCAGGGGAAGAAGGAAGCCGACCAACCAUGGAUCGUUGUUAACACUUCUACACUCUUUGAUGAACUUGAGCUCGACCCUCCUGAGAUCGAGCCCGGAGUGCUCAAAGUGCUGAGAACAGAGAAGCAGUAUUUGGGCGUGUAUAUAUGGAACAUGCGUGGCAGCGAUGGAACAUCCACCUACGCCACCUUUCUGGUGACAUGGAAAGGCGAUGAAAAGACGCGGAACCCUACUCCAGCUGUGACUCCACAGCCACGUGGCGCUGAGUUUCACAUGUGGAACUACCAUUCUCAUGUGUUCAGCGUGGGGGAUACCUUCAGUCUAGCGAUGCAUCUCCAAUAUAAGAUUCACGAGGCCCCAUUUGAUCUCCUCCUGGAGUGGUUGUAUGUGCCAAUCGAUCCAACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUAUUCCACGUGUCUUUAUCACCCCAAUGCCCCACAGUGUUUAUCCCACAUGAACUCCGGAUGUACUUUCACUAGUCCACAUCUCGCCCAGAGAGUGGCCAGCACAGUAUACCAGAAUUGUGAGCAUGCUGACAACUAUACCGCCUACUGUCUUGGUAUAUCACACAUGGAGCCUUCAUUCGGGUUAAUAUUGCACGAUGGAGGCACUACGUUGAAGUUUGUUGACACUCCGGAGAGCCUGUCUGGCCUCUACGUUUUUGUUGUGUAUUUCAAUGGACACGUCGAGGCCGUGGCAUACACAGUCGUGUCGACGGUCGAUCAUUUUGUGAAUGCUAUCGAGGAGCGUGGUUUCCCUCCUACCGCUGGGCAGCCUCCUGCAACGACCAAGCCGAAGGAGAUCACACCCGUGAACCCCGGAACCAGCCCAUUGAUCCGGUAUGCCGCUUGGACCGGGGGGUUGGCUGCCGUGGUGCUGUUGUGCCUGGUUAUUUUUCUUAUUUGUACGGCGAAAAGGAUGCGGGUGAAAGCCUACAGAGUGGACAAGAGUCCCUAUAACCAGUCAAUGUAUUACGCGGGCUUACCAGUAGAUGAUUUCGAGGAUUCAGAGAGCACGGAUACUGAAGAAGAAUUCGGUAAUGCCAUAGGUGGUUCACACGGGGGAUCUUCUUAUACAGUGUAUAUUGACAAAACCCGA 270
gE FO_D12_4RNA UAAUGA (SEQ ID NO: 300)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACAGUCAACAAGCCCGUGGUGGGCGUACUUAUGGGGUUCGGGAUUAUUACUGGUACAUUGAGGAUUACUAAUCCAGUUCGAGCUUCUGUCCUCCGCUACGAUGAUUUCCACAUUGACGAGGACAAGCUGGACACUAACUCGGUCUAUGAGCCAUACUAUCACAGCGAUCACGCUGAGUCAUCUUGGGUGAACAGGGGAGAGUCAUCAAGGAAGGCCUAUGAUCACAACUCCCCGUACAUAUGGCCGAGAAAUGACUACGAUGGCUUUCUGGAGAAUGCUCACGAACAUCACGGUGUGUAUAACCAGGGCCGGGGCAUUGAUAGCGGAGAACGCCUGAUGCAGCCAACCCAGAUGUCUGCGCAGGAGGAUCUGGGUGAUGAUACAGGUAUCCAUGUUAUCCCUACCCUUAAUGGGGAUGACAGGCACAAAAUCGUUAACGUUGAUCAGCGCCAAUACGGUGACGUGUUUAAAGGCGAUCUGAAUCCGAAGCCCCAGGGACAGAGGCUGAUCGAGGUGUCCGUUGAGGAGAACCACCCUUUUACCUUGCGUGCACCGAUUCAGCGGAUCUAUGGCGUGAGGUACACGGAGACUUGGUCAUUCCUGCCUAGCCUGACCUGCACAGGGGACGCCGCCCCUGCUAUCCAGCACAUCUGCUUGAAGCAUACGACCUGUUUUCAGGACGUGGUGGUGGAUGUAGACUGCGCCGAGAACACGAAGGAGGAUCAGCUGGCCGAAAUAAGCUAUAGGUUCCAGGGAAAGAAGGAAGCUGACCAGCCAUGGAUCGUGGUUAACACUUCUACUCUCUUUGAUGAGCUUGAGCUCGAUCCACCAGAGAUCGAGCCAGGAGUCCUCAAGGUGCUGCGCACAGAGAAGCAGUACCUUGGAGUGUAUAUCUGGAACAUGCGUGGCAGUGACGGUACCUCCACCUACGCAACCUUUCUGGUGACCUGGAAGGGAGACGAGAAGACCCGAAAUCCUACGCCGGCAGUGACCCCACAGCCCCGCGGGGCAGAAUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCAGCGUGGGAGACACUUUCAGCCUAGCCAUGCACCUCCAAUACAAGAUCCACGAAGCCCCUUUCGAUCUACUCCUUGAGUGGCUGUAUGUUCCUAUCGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGAGGCUGUACAGUACUUGCCUAUACCAUCCCAAUGCUCCGCAGUGUUUAUCUCAUAUGAACUCCGGAUGCACGUUCACCAGCCCACAUCUCGCCCAGAGAGUGGCUAGCACGGUAUACCAAAACUGCGAGCAUGCUGACAAUUACACCGCCUACUGUCUUGGUAUAUCACACAUGGAGCCUUCAUUCGGGCUAAUACUGCAUGACGGAGGAACCACGUUGAAAUUUGUUGACACACCCGAGAGCCUGUCUGGUUUGUACGUGUUUGUGGUCUAUUUCAAUGGACACGUAGAGGCCGUGGCAUACACAGUGGUAAGCACCGUUGAUCACUUUGUUAAUGCAAUCGAGGAGCGUGGUUUCCCUCCUACGGCUGGGCAGCCUCCUGCCACUACAAAGCCAAAGGAGAUCACACCCGUGAAUCCCGGAACCAGCCCAUUGAUUCGGUAUGCAGCUUGGACCGGGGGCCUGGCAGCUGUCGUGCUGCUCUGCUUGGUUAUUUUUCUGAUCUGCACUGCCAAGCGCAUGCGGGUUAAAGCCUACAGGGUGGACAAAAGUCCUUAUAAUCAGUCAAUGUAUUAUGCGGGCCUGCCUGUAGAUGAUUUCGAAGACAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCCAUAGGUGGCUCACACGGCGGGUCAUCAUAUACAGUGUAUAUCGAUAAGACCCGC 271
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gE FO_D12_6RNA UAGUAA (SEQ ID NO: 302)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGAACUGUGAACAAACCAGUGGUCGGCGUGCUUAUGGGGUUCGGAAUCAUCACAGGCACUUUGCGGAUUACUAACCCAGUUAGAGCUUCCGUCCUGAGAUACGAUGACUUUCAUAUAGAUGAGGACAAACUGGACACAAAUUCGGUUUACGAGCCCUACUAUCACAGCGAUCACGCUGAGUCAUCUUGGGUGAAUCGCGGUGAGUCUUCCAGGAAGGCUUAUGACCACAACUCCCCGUACAUCUGGCCAAGAAACGAUUACGACGGGUUUCUGGAGAACGCUCACGAACAUCACGGUGUGUAUAACCAGGGCCGAGGCAUCGAUAGCGGAGAGAGGCUGAUGCAGCCAACGCAGAUGUCUGCGCAGGAGGACCUUGGGGAUGACACUGGUAUCCACGUCAUCCCAACCCUGAACGGGGACGAUCGGCACAAAAUCGUUAACGUUGAUCAGCGCCAAUAUGGUGACGUGUUCAAGGGAGACCUGAAUCCGAAGCCACAAGGGCAGAGACUGAUCGAGGUUUCCGUCGAGGAAAAUCACCCAUUUACCUUGCGGGCUCCGAUUCAGCGAAUCUAUGGGGUUCGAUAUACGGAGACAUGGUCAUUUCUGCCCUCACUUACUUGCACCGGGGACGCCGCUCCUGCUAUACAGCACAUUUGUCUGAAGCACACCACGUGCUUCCAGGACGUGGUUGUGGAUGUAGACUGUGCCGAGAAUACAAAGGAAGAUCAGCUGGCUGAAAUAAGCUACAGGUUUCAAGGAAAGAAGGAGGCCGAUCAACCAUGGAUCGUGGUGAACACUUCUACUCUGUUUGACGAGCUUGAGCUCGAUCCGCCUGAGAUCGAGCCCGGGGUUUUGAAGGUGCUGCGCACAGAGAAGCAGUACCUGGGAGUUUAUAUCUGGAACAUGCGUGGCAGCGACGGGACAUCUACCUAUGCUACUUUCUUGGUGACAUGGAAGGGGGACGAAAAAACCCGAAAUCCUACCCCUGCAGUGACUCCUCAGCCUCGGGGGGCAGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCAUUCUCAUGUCUUUAGCGUAGGAGAUACGUUCAGCCUAGCCAUGCAUCUCCAGUAUAAAAUUCACGAGGCCCCAUUCGAUCUGCUCCUGGAAUGGCUGUAUGUGCCAAUCGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUAUAGUACAUGUCUUUACCAUCCCAAUGCUCCACAGUGCUUGAGCCACAUGAAUUCCGGAUGUACUUUCACUAGCCCUCACCUCGCUCAGAGAGUGGCCAGCACAGUAUACCAGAAUUGCGAGCAUGCUGACAACUAUACAGCCUACUGUCUUGGUAUAUCACACAUGGAGCCAUCUUUCGGGCUCAUACUGCAUGACGGAGGCACUACGUUGAAAUUUGUUGACACUCCCGAAAGCCUGUCUGGCCUCUACGUUUUUGUGGUUUAUUUCAAUGGACACGUCGAAGCAGUGGCCUACACGGUGGUCAGCACCGUUGACCACUUUGUGAAUGCGAUCGAGGAGCGUGGUUUCCCGCCCACGGCGGGGCAGCCCCCUGCCACAACCAAGCCCAAGGAGAUCACACCUGUGAACCCCGGAACCUCACCCUUGAUCCGUUAUGCCGCGUGGACCGGAGGCUUGGCUGCCGUGGUGCUGCUUUGCCUGGUUAUAUUUUUAAUCUGCACCGCCAAACGGAUGCGGGUUAAAGCCUACAGGGUGGACAAAAGUCCCUAUAAUCAGUCAAUGUACUAUGCUGGCUUGCCUGUGGAUGAUUUUGAAGACAGCGAAAGCACCGACACCGAGGAAGAAUUUGGUAAUGCCAUUGGUGGUUCUCACGGUGGGAGCUCAUAUACAGUGUAUAUCGAUAAAACCCGC 273
gE FO_D12_7RNA UAGUGA (SEQ ID NO: 301)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACAGUGAAUAAACCCGUGGUGGGCGUACUUAUGGGGUUCGGAAUCAUAACAGGUACAUUGAGGAUCACUAAUCCAGUCCGCGCUUCUGUGUUAAGAUAUGACGAUUUUCAUAUCGACGAGGACAAGCUGGAUACAAACUCGGUUUACGAGCCGUACUACCACAGCGAUCACGCUGAAUCUUCUUGGGUCAAUAGGGGAGAGUCUUCCCGGAAGGCUUACGACCACAAUUCCCCUUACAUAUGGCCAAGAAAUGAUUAUGAUGGCUUUCUGGAGAACGCCCACGAGCAUCACGGUGUGUAUAACCAGGGACGAGGUAUCGAUUCCGGCGAAAGACUGAUGCAGCCUACCCAGAUGUCUGCUCAGGAGGACCUGGGAGAUGACACUGGUAUCCAUGUCAUCCCAACCCUGAACGGGGACGAUCGGCACAAAAUCGUUAAUGUUGAUCAGCGUCAGUACGGCGACGUGUUCAAAGGCGAUCUGAAUCCCAAACCACAAGGGCAGAGGCUAAUCGAGGUGUCAGUGGAGGAAAAUCAUCCUUUUACCUUGAGAGCACCGAUUCAGCGGAUCUAUGGAGUAAGGUAUACUGAAACAUGGUCUUUUCUGCCUAGCCUGACUUGUACCGGGGACGCAGCCCCGGCUAUACAGCAUAUCUGUCUUAAGCAUACGACCUGCUUCCAGGACGUGGUCGUGGAUGUAGACUGCGCCGAGAAUACAAAGGAAGAUCAGCUGGCUGAGAUCAGCUAUAGGUUCCAAGGAAAGAAGGAGGCAGACCAACCCUGGAUCGUGGUUAACACUUCUACUCUCUUUGACGAGCUUGAGCUUGACCCACCGGAGAUCGAGCCCGGAGUCCUCAAAGUGCUCCGCACAGAGAAGCAGUACUUGGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGUGGCAGCGACGGUACGUCCACCUACGCUACUUUUCUGGUGACAUGGAAGGGGGAUGAAAAAACCCGAAACCCUACCCCUGCUGUGACUCCACAGCCUAGAGGGGCAGAGUUUCACAUGUGGAAUUACCAUUCCCAUGUGUUUAGCGUGGGCGAUACCUUCAGCUUGGCGAUGCAUCUGCAGUACAAAAUUCACGAGGCCCCCUUCGAUCUCCUUCUGGAGUGGUUGUAUGUCCCGAUCGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUACAGUACAUGUCUUUACCAUCCUAACGCUCCCCAGUGUUUAUCUCAUAUGAACUCAGGAUGUACUUUCACUUCUCCACAUCUCGCCCAGAGAGUGGCGAGCACAGUAUACCAGAACUGCGAGCAUGCUGACAACUAUACAGCAUACUGCCUUGGUAUAUCACACAUGGAGCCUUCAUUCGGGCUUAUACUGCAUGACGGAGGCACUACGUUGAAGUUUGUUGAUACUCCGGAGAGCCUGUCUGGCCUGUAUGUUUUUGUUGUGUACUUCAAUGGGCACGUGGAGGCCGUGGCAUACACAGUGGUCAGCACGGUCGAUCACUUUGUGAAUGCCAUCGAGGAGCGCGGGUUCCCUCCUACGGCGGGGCAGCCGCCUGCUACCACCAAGCCCAAGGAGAUCACACCCGUGAAUCCCGGAACCAGCCCCUUGAUCCGGUAUGCCGCUUGGACCGGUGGAUUGGCAGCUGUCGUGUUGCUUUGCCUGGUUAUUUUCUUAAUCUGCACCGCUAAGCGCAUGCGGGUUAAAGCCUAUAGGGUGGACAAAAGUCCCUAUAACCAGAGCAUGUACUAUGCCGGCCUCCCUGUUGAUGAUUUCGAAGAUAGCGAGUCUACGGACACCGAAGAAGAAUUUGGGAACGCCAUAGGAGGUUCCCACGGCGGAUCUUCUUAUACGGUGUACAUCGAUAAGACCCGC 274
gE FO_D12_8RNA UGAUGA (SEQ ID NO: 304)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGAACUGUCAAUAAGCCUGUGGUGGGCGUGCUUAUGGGCUUCGGGAUCAUCACCGGUACUUUGAGGAUUACUAAUCCAGUCCGAGCUUCCGUGCUGAGAUAUGAUGAUUUCCAUAUAGAUGAGGACAAGCUGGAUACAAAUUCGGUCUACGAGCCAUACUAUCACAGCGACCACGCUGAGUCAUCCUGGGUGAACAGGGGAGAGUCGAGUCGGAAGGCUUAUGACCAUAACUCCCCAUACAUUUGGCCUCGGAAUGAUUACGAUGGCUUUCUGGAGAAUGCCCACGAACAUCACGGUGUGUAUAACCAGGGCAGGGGCAUCGAUAGCGGCGAAAGGCUGAUGCAGCCCACCCAAAUGUCAGCGCAGGAGGAUCUGGGAGAUGACACUGGUAUCCAUGUCAUCCCUACACUGAACGGGGACGAUCGACACAAAAUCGUUAACGUCGAUCAGCGCCAAUACGGGGACGUCUUCAAAGGCGAUCUGAACCCGAAGCCUCAAGGGCAAAGGCUGAUCGAGGUGUCCGUUGAGGAGAAUCACCCAUUCACCUUGCGGGCCCCGAUUCAACGGAUCUACGGAGUGAGGUAUACCGAAACUUGGUCUUUUCUCCCUUCACUGACCUGUACCGGGGACGCUGCACCGGCCAUUCAGCACAUCUGUCUGAAGCAUACGACCUGCUUCCAGGACGUGGUCGUGGACGUAGACUGUGCCGAGAACACGAAGGAGGACCAGCUGGCUGAGAUAAGCUACAGGUUCCAGGGAAAGAAAGAGGCUGACCAGCCGUGGAUCGUGGUCAAUACUUCUACUCUCUUUGAUGAGCUUGAGUUGGAUCCUCCUGAGAUUGAGCCUGGAGUUCUCAAGGUGCUGCGGACAGAAAAGCAGUACCUUGGGGUGUAUAUCUGGAACAUGCGGGGCUCUGACGGUACAUCCACCUAUGCUACCUUUCUGGUAACUUGGAAAGGGGAUGAAAAAACUCGAAACCCUACGCCUGCUGUGACUCCACAGCCUCGUGGGGCAGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCACGUGUUCAGCGUAGGUGAUACCUUCAGCCUGGCAAUGCAUCUUCAGUAUAAGAUUCACGAGGCACCUUUCGAUUUGCUCCUGGAGUGGUUGUAUGUCCCUAUCGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUAUAGUACAUGUCUUUACCAUCCCAAUGCUCCCCAGUGCUUGUCACACAUGAACAGCGGAUGUACUUUCACAUCUCCACAUCUAGCCCAGCGAGUGGCAAGUACAGUAUACCAGAACUGUGAGCAUGCUGACAACUACACCGCCUACUGUCUUGGUAUAUCACACAUGGAGCCUUCAUUCGGGCUCAUACUGCACGACGGAGGCACUACGCUGAAAUUUGUGGACACUCCUGAAAGCCUGUCUGGUCUCUAUGUUUUUGUUGUGUAUUUCAACGGCCACGUGGAGGCCGUGGCAUACACAGUGGUCAGCACCGUGGAUCACUUUGUUAAUGCAAUCGAGGAGCGUGGUUUUCCUCCUACGGCGGGGCAGCCACCUGCCACGACCAAGCCCAAGGAGAUCACACCCGUGAACCCGGGAACCAGCCCCUUGAUCCGGUAUGCCGCUUGGACCGGGGGUUUGGCAGCCGUCGUGCUGCUCUGUCUGGUUAUAUUUUUAAUCUGCACCGCCAAGCGAAUGCGGGUUAAAGCCUAUAGGGUGGACAAGAGUCCCUAUAACCAAUCAAUGUAUUAUGCAGGUCUUCCUGUAGAUGAUUUCGAAGACUCUGAGAGUACCGACACCGAGGAGGAGUUCGGAAAUGCCAUAGGAGGCUCACACGGGGGGUCCUCUUACACAGUUUACAUCGACAAGACAAGA 275
gE FO_D12_9RNA UAGUAA (SEQ ID NO: 302)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGGACCGUCAACAAGCCCGUCGUGGGCGUGCUUAUGGGGUUCGGGAUCAUCACCGGUACACUCCGCAUUACUAAUCCAGUACGAGCUUCAGUCCUGCGUUAUGAUGAUUUCCACAUUGAUGAGGACAAGCUGGACACAAACAGCGUUUAUGAGCCAUAUUACCACAGCGAUCACGCUGAGUCAUCUUGGGUCAAUAGGGGCGAGUCUAGCCGGAAGGCAUACGACCAUAACAGUCCUUACAUUUGGCCGCGGAAUGAUUAUGAUGGAUUUCUGGAGAAUGCUCACGAACAUCACGGUGUGUAUAAUCAGGGUCGAGGCAUUGAUAGCGGGGAAAGGCUGAUGCAACCAACGCAGAUGUCUGCGCAGGAGGACCUGGGCGAUGAUACUGGCAUACAUGUCAUCCCCACUCUGAAUGGGGACGACAGACACAAAAUUGUUAACGUUGAUCAGCGCCAAUACGGUGACGUGUUUAAGGGCGAUCUGAACCCUAAGCCACAAGGCCAGAGGCUGAUCGAGGUGUCUGUAGAGGAAAAUCACCCGUUUACCCUGCGGGCACCUAUUCAGCGGAUCUACGGAGUGAGGUAUACGGAAACAUGGUCUUUUCUGCCUUCUCUGACCUGCACCGGGGACGCUGCCCCGGCUAUACAGCACAUCUGUCUGAAGCAUACAACCUGCUUCCAGGACGUGGUCGUGGAUGUCGAUUGCGCCGAGAACACAAAGGAGGAUCAGCUGGCUGAAAUAAGCUACAGGUUCCAGGGCAAGAAGGAGGCUGACCAGCCAUGGAUUGUGGUGAACACAUCCACUCUGUUCGACGAGCUUGAGCUAGAUCCACCUGAGAUCGAGCCCGGAGUUCUCAAGGUGCUGCGGACCGAGAAGCAGUAUCUUGGGGUGUAUAUCUGGAACAUGCGUGGCUCUGAUGGCACAAGCACGUACGCUACGUUUCUUGUGACAUGGAAGGGGGACGAAAAGACCCGGAAUCCGACCCCUGCUGUGACUCCCCAGCCUCGUGGCGCAGAGUUCCACAUGUGGAAUUAUCAUAGCCAUGUGUUCAGCGUGGGAGAUACCUUCAGCCUAGCCAUGCAUCUCCAAUACAAGAUUCACGAGGCCCCAUUCGAUCUACUCCUGGAAUGGUUGUAUGUUCCUAUCGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUACAGUACCUGUCUGUACCAUCCCAAUGCUCCCCAGUGUUUAAGUCAUAUGAACUCUGGAUGUACUUUCACUAGUCCACAUCUCGCACAGAGAGUGGCCAGCACAGUAUAUCAGAACUGCGAGCAUGCUGACAACUAUACCGCCUACUGUCUGGGUAUAAGCCACAUGGAGCCUUCAUUCGGGCUCAUACUUCAUGACGGAGGGACUACAUUGAAGUUUGUUGACACUCCAGAGAGCCUGAGUGGCUUAUACGUGUUUGUUGUGUAUUUUAAUGGGCACGUUGAGGCCGUGGCUUACACAGUGGUCAGCACGGUCGAUCACUUUGUCAAUGCCAUCGAGGAACGUGGUUUCCCCCCUACGGCGGGGCAACCACCCGCUACGACCAAGCCCAAGGAGAUCACACCCGUGAACCCCGGAACAAGCCCUUUGAUCCGCUAUGCCGCCUGGACGGGGGGCUUGGCAGCCGUUGUUCUGCUUUGCCUGGUUAUAUUCUUAAUUUGCACCGCCAAACGCAUGCGAGUUAAAGCUUACAGAGUGGACAAGAGUCCAUAUAACCAGAGUAUGUAUUAUGCGGGCCUCCCGGUAGAUGAUUUCGAGGAUAGCGAGUCUACCGAUACGGAGGAGGAGUUUGGUAAUGCUAUAGGCGGGUCACACGGCGGGUCUUCUUAUACAGUGUAUAUAGACAAGACUCGC 276
gE FO_D12_10RNA UGAUAA (SEQ ID NO: 306)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGCACAGUCAAUAAACCUGUGGUGGGCGUGCUCAUGGGCUUCGGAAUCAUCACCGGGACAUUAAGGAUUACCAAUCCUGUCCGAGCCUCCGUUCUGCGCUAUGAUGACUUUCACAUAGAUGAGGACAAGCUGGACACCAACUCGGUUUACGAGCCAUACUAUCAUAGCGAUCAUGCCGAGUCCUCUUGGGUGAACAGGGGAGAGUCUUCCCGGAAAGCUUAUGACCACAAUAGCCCGUACAUUUGGCCGCGAAAUGACUAUGAUGGCUUUCUGGAGAAUGCUCAUGAACAUCACGGUGUGUAUAAUCAGGGACGAGGCAUAGAUAGCGGCGAAAGGCUCAUGCAGCCAACACAGAUGUCUGCGCAGGAGGACCUGGGAGAUGACACUGGGAUCCAUGUCAUCCCUACCCUGAACGGGGACGACCGGCAUAAAAUCGUUAACGUUGAUCAGCGCCAAUACGGUGACGUGUUCAAGGGCGAUCUGAAUCCGAAGCCCCAGGGGCAGAGGCUGAUUGAGGUGUCGGUGGAGGAAAAUCAUCCCUUCACAUUGCGCGCACCCAUACAGCGGAUUUACGGAGUGAGGUAUACGGAGACAUGGUCUUUUCUGCCCUCUCUGACCUGCACCGGGGACGCCGCCCCGGCUAUCCAGCACAUCUGUCUGAAGCACACUACCUGCUUCCAGGACGUGGUCGUGGAUGUGGACUGCGCCGAGAACACAAAGGAGGACCAGCUGGCUGAGAUAAGCUAUAGGUUCCAAGGAAAGAAGGAAGCUGACCAACCUUGGAUCGUGGUGAACACUUCUACUCUCUUUGAUGAGCUCGAGCUGGACCCACCUGAGAUCGAGCCCGGAGUUCUCAAGGUCCUGCGCACAGAAAAGCAGUAUUUGGGGGUGUAUAUCUGGAACAUGCGCGGCAGUGACGGGACAUCCACAUACGCUACUUUUCUGGUCACCUGGAAGGGGGAUGAAAAAACCCGAAAUCCUACCCCAGCAGUGACUCCACAGCCUCGUGGCGCAGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCCCAUGUGUUCAGCGUGGGGGAUACAUUCAGCCUGGCGAUGCACCUCCAAUACAAAAUCCACGAGGCCCCAUUUGAUCUACUCCUGGAGUGGUUGUAUGUGCCUAUCGACCCCACAUGUCAGCCGAUGAGACUGUAUUCAACAUGUCUUUACCAUCCAAAUGCUCCACAGUGUUUAUCCCAUAUGAACUCAGGGUGUACUUUUACCAGUCCCCAUCUCGCUCAGCGGGUGGCCAGUACGGUAUACCAGAACUGCGAGCAUGCUGACAACUAUACAGCCUACUGUCUUGGUAUCUCACAUAUGGAGCCUUCAUUCGGGCUGAUCCUGCACGACGGAGGCACCACGUUGAAGUUUGUUGACACUCCCGAGAGCCUCUCAGGUCUGUAUGUGUUUGUGGUAUAUUUCAAUGGACACGUUGAAGCCGUGGCAUACACAGUAGUGUCUACGGUCGAUCACUUUGUGAACGCUAUCGAGGAGCGUGGUUUCCCUCCUACGGCGGGCCAGCCUCCAGCCACAACCAAGCCUAAGGAGAUCACACCCGUGAACCCCGGAACUAGCCCCUUGAUACGGUAUGCCGCUUGGACCGGGGGUCUGGCGGCUGUGGUGCUGUUAUGUCUGGUUAUAUUUUUGAUCUGCACCGCUAAGCGGAUGCGGGUGAAGGCCUAUAGGGUAGACAAAAGUCCAUAUAACCAGUCAAUGUAUUAUGCCGGCCUCCCGGUAGAUGAUUUUGAGGACAGCGAGAGCACCGACACCGAGGAGGAGUUCGGUAACGCUAUAGGGGGCUCUCAUGGCGGGAGUUCAUAUACAGUGUAUAUCGACAAGACUCGC 277
gE FO_D12_11RNA UAGUAA (SEQ ID NO: 302)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGAACGGUCAACAAGCCCGUGGUGGGGGUGCUUAUGGGGUUCGGGAUCAUCACCGGUACACUGAGGAUUACUAAUCCAGUCCGAGCUUCAGUCCUGAGGUACGAUGAUUUUCACAUUGACGAGGACAAACUGGACACAAAUAGCGUGUACGAACCUUACUAUCACAGCGACCACGCUGAGUCAUCAUGGGUUAACAGGGGAGAGAGUAGCCGGAAGGCUUAUGACCAUAACUCCCCCUACAUUUGGCCCAGAAAUGACUAUGACGGCUUUCUGGAGAACGCUCACGAACAUCAUGGUGUGUAUAAUCAGGGGCGAGGGAUCGAUUCGGGCGAAAGGCUGAUGCAGCCAACACAGAUGUCUGCGCAGGAGGACCUGGGCGAUGAUACAGGUAUCCAUGUCAUCCCAACCCUGAACGGGGACGACCGGCACAAAAUCGUUAACGUCGAUCAGCGCCAAUAUGGUGACGUGUUCAAGGGCGAUCUGAAUCCGAAACCACAGGGGCAGAGGCUGAUCGAGGUAUCCGUUGAGGAAAAUCACCCUUUCACCCUGCGGGCACCGAUUCAGCGGAUCUAUGGAGUGAGGUACACAGAGACUUGGUCCUUUCUGCCAUCUCUGACCUGUACCGGGGACGCUGCCCCCGCUAUCCAACACAUCUGCCUGAAGCACACGACCUGCUUCCAGGACGUGGUCGUGGAUGUAGAUUGCGCCGAGAACACAAAGGAGGAUCAGCUCGCUGAGAUCAGCUACAGGUUCCAGGGAAAGAAGGAAGCUGACCAGCCAUGGAUCGUGGUUAACACUUCUACUCUCUUUGAUGAACUUGAGCUAGACCCUCCUGAGAUCGAGCCCGGAGUUCUCAAGGUGCUCCGCACAGAGAAGCAGUACCUGGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGUGGAAGCGAUGGUACCUCCACAUACGCUACUUUUCUGGUUACCUGGAAGGGUGACGAAAAGACCCGAAAUCCUACCCCUGCGGUGACUCCACAGCCCCGCGGGGCAGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCAUGUGUUCAGCGUAGGGGAUACCUUCUCUCUAGCCAUGCAUCUCCAAUACAAGAUUCACGAGGCCCCUUUCGAUCUACUCCUGGAGUGGUUGUAUGUACCAAUCGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUAUUCGACAUGUCUCUACCACCCUAAUGCUCCUCAGUGUUUAAGCCACAUGAAUUCCGGAUGUACGUUUACUAGUCCACAUCUGGCCCAGAGAGUGGCCAGUACCGUAUACCAGAAUUGCGAGCAUGCUGACAACUACACCGCCUACUGUUUAGGGAUAUCCCACAUGGAACCUUCUUUCGGGCUGAUUUUGCAUGACGGAGGCACUACUUUGAAGUUUGUUGACACUCCCGAAAGCCUGUCGGGCCUAUACGUUUUUGUGGUUUACUUCAAUGGACAUGUCGAGGCGGUGGCUUACACGGUUGUGUCUACGGUAGAUCAUUUUGUGAAUGCAAUCGAGGAGCGUGGUUUUCCUCCUACGGCGGGGCAGCCCCCUGCCACCACAAAGCCAAAGGAGAUCACACCCGUGAACCCGGGAACCAGCCCCUUGAUCCGGUAUGCAGCUUGGACCGGGGGCUUGGCAGCUGUCGUCCUGCUUUGUCUGGUCAUAUUUUUAAUCUGCACCGCCAAGCGGAUGCGGGUUAAAGCAUACCGAGUAGAUAAGUCCCCCUACAACCAGUCCAUGUACUAUGCGGGGCUGCCUGUGGAUGAUUUUGAAGACUCCGAGAGCACGGACACCGAGGAGGAGUUUGGAAACGCCAUAGGAGGAUCACAUGGAGGGUCUUCUUAUACUGUUUAUAUCGACAAAACCCGC 278
gE FO_D12_12RNA UGAUAA (SEQ ID NO: 306)終止密碼子 (胺基酸SEQ ID NO: 1) AUGGGUACCGUUAAUAAACCCGUGGUGGGAGUGCUUAUGGGUUUUGGGAUCAUCACUGGUACAUUGAGGAUUACUAAUCCAGUGCGAGCUAGUGUCCUGAGAUACGAUGAUUUCCACAUUGAUGAGGAUAAGCUGGAUACAAACUCGGUUUAUGAGCCAUACUAUCACAGCGAUCACGCUGAGUCAUCUUGGGUGAACAGGGGAGAGUCUAGCCGGAAGGCUUACGACCAUAACUCCCCGUAUAUAUGGCCCCGAAAUGAUUAUGAUGGGUUUCUGGAAAACGCUCACGAACAUCACGGUGUGUAUAACCAGGGCCGCGGCAUCGAUAGCGGUGAAAGGCUGAUGCAGCCUACCCAGAUGAGUGCGCAGGAGGACCUGGGAGAUGACACUGGUAUCCACGUCAUUCCUACCCUGAACGGGGACGAUCGGCAUAAAAUCGUCAACGUUGAUCAGCGCCAAUACGGUGACGUGUUCAAGGGCGAUCUGAACCCUAAACCACAAGGGCAGAGGCUGAUCGAAGUGUCCGUUGAGGAGAAUCACCCGUUUACCUUGCGGGCACCGAUUCAGCGGAUCUACGGAGUCAGGUAUACGGAGACUUGGUCUUUCCUGCCUUCUCUGACCUGCACCGGGGACGCCGCCCCGGCUAUACAGCACAUCUGUCUGAAGCAUACUACCUGUUUCCAGGACGUGGUCGUCGAUGUAGAUUGCGCCGAGAACACUAAGGAGGAUCAGCUGGCAGAGAUAAGCUACAGGUUCCAGGGAAAGAAGGAAGCUGACCAGCCAUGGAUCGUGGUUAACACUUCUACUCUCUUUGACGAGCUUGAGCUGGAUCCUCCUGAGAUCGAGCCCGGAGUGCUCAAGGUGUUGCGCACAGAGAAGCAGUACCUGGGGGUGUAUAUCUGGAAUAUGCGUGGCUCUGACGGUACAAGUACCUACGCUACUUUCCUGGUGACAUGGAAGGGGGACGAGAAAACCCGAAACCCUACCCCCGCUGUCACUCCACAGCCUCGUGGGGCAGAGUUUCACAUGUGGAAUUAUCAUUCUCAUGUCUUUAGCGUAGGAGACACCUUUAGCCUAGCGAUGCAUCUCCAGUACAAGAUUCACGAGGCCCCAUUCGAUCUACUCCUGGAAUGGCUUUAUGUUCCUAUCGAUCCUACUUGUCAGCCGAUGAGACUGUAUUCUACAUGUCUGUACCAUCCCAAUGCUCCCCAGUGUUUAUCUCACAUGAACUCCGGUUGUACUUUUACUAGUCCACAUCUCGCCCAGAGAGUGGCCAGCACAGUAUACCAGAACUGCGAGCACGCCGACAACUAUACGGCCUAUUGUCUGGGUAUAUCACACAUGGAGCCCAGUUUCGGGCUCAUCCUGCAUGACGGAGGAACAACGCUGAAGUUCGUAGAUACUCCGGAAAGCUUAUCUGGCCUCUACGUUUUCGUGGUAUAUUUCAAUGGACACGUCGAGGCCGUAGCAUAUACCGUGGUGAGCACCGUUGACCACUUCGUGAAUGCGAUCGAGGAGCGUGGAUUCCCUCCUACGGCGGGGCAGCCUCCUGCCACGACCAAGCCCAAGGAAAUCACACCCGUGAACCCCGGGACCAGCCCCUUGAUUCGGUAUGCUGCUUGGACCGGCGGCCUCGCAGCUGUGGUGCUGCUUUGUCUGGUUAUCUUCUUGAUCUGCACCGCCAAACGCAUGCGGGUUAAAGCCUACAGGGUGGAUAAAAGUCCUUAUAACCAGUCAAUGUACUACGCCGGACUCCCGGUAGAUGAUUUCGAAGACAGCGAGAGCACCGAUACCGAGGAGGAGUUCGGUAACGCCAUCGGAGGUAGCCACGGCGGGUCUUCUUAUACAGUGUAUAUAGACAAGACCCGC 279
以下段落描述本發明之額外態樣: 1. 一種RNA分子,其包含至少一個編碼水痘帶狀疱疹病毒(VZV)多肽之開放閱讀框架。 2. 如段落1之RNA分子,其中該VZV多肽為VZV醣蛋白。 3. 如段落2之RNA分子,其中該VZV醣蛋白係選自VZV gK、gN、gC、gB、gH、gM、gL、gI及gE。 4. 如段落3之RNA分子,其中該VZV醣蛋白為VZV gE。 5. 如段落1至4中任一段之RNA分子,其中該VZV多肽為全長VZV多肽、經截短VZV多肽、VZV多肽之片段或VZV多肽之變異體。 6. 如段落1至5中任一段之RNA分子,其中該VZV多肽包含至少一個突變。 7. 如段落1至6中任一段之RNA分子,其中該VZV多肽包含表1之胺基酸,包括但不限於SEQ ID NO: 1至11中之任一者。 8. 如段落1至7中任一段之RNA分子,其中該VZV多肽與選自SEQ ID NO: 1至11之胺基酸序列具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。 9. 如段落1至8中任一段之RNA分子,其中該VZV多肽包含選自SEQ ID NO: 1至11之胺基酸序列。 10.       如段落1至9中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架係由表2之核酸序列,包括但不限於SEQ ID NO: 12至145中之任一者轉錄。 11.       如段落1至10中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架係由與SEQ ID NO: 12至145中之任一者之序列具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的核酸序列轉錄。 12.       如段落1至11中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含表3之核酸序列,包括但不限於SEQ ID NO: 146至279中之任一者。 13.       如段落1至12中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含與SEQ ID NO: 146至279中之任一者之序列具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的核酸序列。 14.       如段落1至13中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 146之核酸序列(gE WT)。 15.       如段落1至14中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 147之核酸序列(gE WT CO1)。 16.       如段落1至15中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 148之核酸序列(gE WT CO2)。 17.       如段落1至16中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 149之核酸序列(ms3 CO1)。 18.       如段落1至17中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 150之核酸序列(ms3 CO2)。 19.       如段落1至18中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 151之核酸序列(ms4 CO1)。 20.       如段落1至19中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 152之核酸序列(ms4 CO2)。 21.       如段落1至20中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 153之核酸序列(ms5 CO1)。 22.       如段落1至21中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 154之核酸序列(ms5 CO2)。 23.       如段落1至22中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 155之核酸序列(ms5 CO2 v2)。 24.       如段落1至23中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 156之核酸序列(ms6 CO1)。 25.       如段落1至24中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 157之核酸序列(ms6 CO2)。 26.       如段落1至25中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 158之核酸序列(ms8 CO1)。 27.       如段落1至26中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 159之核酸序列(ms9 CO1)。 28.       如段落1至27中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 160之核酸序列(ms9 CO2)。 29.       如段落1至28中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 161之核酸序列(ms10 CO1)。 30.       如段落1至29中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 162之核酸序列(ms10 CO2)。 31.       如段落1至30中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 163之核酸序列(ms10 CO3)。 32.       如段落1至31中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 164之核酸序列(ms11 CO1)。 33.       如段落1至32中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 165之核酸序列(ms11 CO2)。 34.       如段落1至33中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 166之核酸序列(ms12 CO1)。 35.       如段落1至34中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含SEQ ID NO: 167之核酸序列(ms12 CO2)。 36.       如段落1至35中任一段之RNA分子,其中各尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換。 37.       如段落1至36中任一段之RNA分子,其進一步包含5'非轉譯區(5' UTR)。 38.       如段落37之RNA分子,其中該5' UTR包含選自SEQ ID NO: 281及312至313中之任一者之序列。 39.       如段落1至38中任一段之RNA分子,其進一步包含3'非轉譯區(3' UTR)。 40.       如段落39之組合物,其中該3' UTR包含選自SEQ ID NO: 284、314及317中之任一者之序列。 41.       如段落1至40中任一段之RNA分子,其中該RNA分子包含5'端帽部分。 42.       如段落41之RNA分子,其中該RNA分子包含有包含(3'OMe) - m 2 7,3'-OGppp (m 1 2'-O)ApG之5'端帽部分。 43.       如段落1至42中任一段之RNA分子,其進一步包含3'聚A尾。 44.       如段落43之RNA分子,其中該聚A尾包含有包含+/-1個或+/-2個腺苷(A)之選自SEQ ID NO: 287及315中之任一者之序列。 45.       如段落43之RNA分子,其中該聚A尾包含有包含+/-1個或+/-2個腺苷(A)之SEQ ID NO: 287之序列。 46.       如段落43之RNA分子,其中該聚A尾包含有包含+/-1個或+/-2個腺苷(A)之SEQ ID NO: 315之序列。 47.       如段落1至46中任一段之RNA分子,其中該RNA分子包含5' UTR及3' UTR。 48.       如段落1至47中任一段之RNA分子,其中該RNA分子包含5'端帽、5' UTR及3' UTR。 49.       如段落1至48中任一段之RNA分子,其中該RNA分子包含5'端帽、5' UTR、3' UTR及聚A尾。 50.       如段落1至49中任一段之RNA分子,其包含:5' UTR,其包含SEQ ID NO: 281或312之序列;開放閱讀框架,其包含SEQ ID NO: 146至279中之任一者之序列;及3' UTR,其包含SEQ ID NO: 284或317之序列。 51.       如段落1至50中任一段之RNA分子,其包含:5' UTR,其包含SEQ ID NO: 28、312及313中之任一者之序列;開放閱讀框架,其包含SEQ ID NO: 146至279中之任一者之序列;3' UTR,其包含SEQ ID NO: 284、314及317中之任一者之序列;及聚A尾,其包含SEQ ID NO: 287及315中之任一者之序列。 52.       如段落1至51中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架係由密碼子最佳化之DNA產生。 53.       如段落1至52中任一段之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、約50%至75%、約55%至70%、約58%、約66%、或約62%之G/C含量。 54.       如段落1至53中任一段之RNA分子,其中所編碼之VZV多肽位於細胞膜中、位於高基氏體中及/或錨定在膜中且分泌。 55.       如段落1至54中任一段之RNA分子,其中該RNA分子包含經穩定化之RNA。 56.       如段落1至55中任一段之RNA分子,其中該RNA包含至少一個經修飾之核苷酸。 57.       如段落56之RNA分子,其中該經修飾之核苷酸為假尿苷、N1-甲基假尿苷、N1-乙基假尿苷、2-硫代尿苷、4'-硫代尿苷、5-甲基胞嘧啶、5-甲基尿苷、2-硫代-1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、4-硫代-假尿苷、5-氮雜-尿苷、二氫假尿苷、5-甲氧基尿苷或2'-O-甲基尿苷。 58.       如段落56或57之RNA分子,其中該經修飾之核苷酸為N1-甲基假尿苷(Ψ)。 59.       如段落1至58中任一段之RNA分子,其中各尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換。 60.       如段落1至59中任一段之RNA分子,其中該RNA為mRNA或自複製RNA。 61.       如段落60之RNA分子,其中該RNA為mRNA。 62.       一種組合物,其包含如段落1至61中任一段之RNA分子,其中該RNA分子調配於脂質奈米顆粒(LNP)中。 63.       如段落62之組合物,其中該脂質奈米顆粒包含陽離子脂質、聚乙二醇化脂質及至少第一及第二結構性脂質中之至少一者。 64.       如段落62或63之組合物,其中該脂質奈米顆粒包含陽離子脂質。 65.       如段落64之組合物,其中該陽離子脂質為(4-羥丁基)氮雜二基)雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯) (ALC-0315)。 66.       如段落61至64中任一段之組合物,其中該脂質奈米顆粒包含聚乙二醇化脂質。 67.       如段落63至66中任一段之組合物,其中該聚乙二醇化脂質為經PEG修飾之磷脂醯乙醇胺、經PEG修飾之磷脂酸、經PEG修飾之神經醯胺(例如PEG-CerC14或PEG-CerC20)、經PEG修飾之二烷基胺、經PEG修飾之二醯基甘油、經PEG修飾之二烷基甘油、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺、二醇脂質(包括PEG-c-DOMG、PEG-c-DMA、PEG-s-DMG、N-[(甲氧基聚乙二醇)2000)胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻醯氧基丙-3-胺(PEG-c-DMA)及PEG-2000-DMG)、聚乙二醇化二醯基甘油(PEG-DAG) (諸如1-(單甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG))、聚乙二醇化磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)、PEG丁二酸酯二醯基甘油(PEG-S-DAG) (諸如4-O-(2',3'-二(十四醯氧基)丙基-1-O-((鄰甲氧基(聚乙氧基)乙基)丁二酸酯(PEG-S-DMG))、聚乙二醇化神經醯胺(PEG-cer)或PEG二烷氧基丙基胺基甲酸酯(諸如共聚-甲氧基(聚乙氧基)乙基-N-(2,3二(十四烷氧基)丙基)胺基甲酸酯或2,3-二(十四烷氧基)丙基-N-(ω-甲氧基(聚乙氧基)乙基)胺基甲酸酯)。 68.       如段落63至67中任一段之組合物,其中該聚乙二醇化脂質為2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺(ALC-0159)。 69.       如段落63至68中任一段之組合物,其中該第一結構性脂質為中性脂質。 70.       如段落69之組合物,其中該中性脂質為1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)、二油醯基-磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、棕櫚醯油醯基-磷脂醯乙醇胺(POPE)及二油醯基-磷脂醯乙醇胺4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1甲酸酯(DOPE-mal)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂醯基-磷脂醯乙醇胺(DSPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂醯基-2-油醯基磷脂醯乙醇胺(SOPE)或1,2-二反油醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(反式DOPE)。 71.       如段落69或70之組合物,其中該中性脂質為1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)。 72.       如段落63至71中任一段之組合物,其中該第二結構性脂質為類固醇或類固醇類似物。 73.       如段落72之組合物,其中該類固醇或類固醇類似物為膽固醇。 74.       如段落62至73中任一段之組合物,其中脂質奈米顆粒具有約1至約500 nm之平均直徑。 75.       如段落62至74中任一段之組合物,其包含約0.01至0.09 mg/mL之濃度的RNA分子,該RNA分子調配於包含以下之脂質奈米顆粒(LNP)中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的中性脂質及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的類固醇或類固醇類似物。 76.       如段落62至75中任一段之組合物,其包含約0.01至0.09 mg/mL之濃度的RNA分子,該RNA分子調配於包含以下之脂質奈米顆粒(LNP)中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的(4-羥丁基)氮雜二基)雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯) (ALC-0315)、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺(ALC-0159)、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的膽固醇。 77.       如段落62至76中任一段之組合物,其包含約0.06 mg/mL之濃度的RNA分子,該RNA分子調配於脂質奈米顆粒(LNP)中。 78.       如段落62至77中任一段之組合物,其進一步包含緩衝液、穩定劑、鹽、界面活性劑、防腐劑、賦形劑或佐劑中之至少一者。 79.       如段落62至78中任一段之組合物,其進一步包含至少緩衝液及穩定劑及視情況存在之鹽稀釋劑。 80.       如段落78或79之組合物,其中該緩衝液為Tris緩衝液。 81.       如段落80之組合物,其中該Tris緩衝液包含緩血酸胺及Tris鹽酸(HCl)。 82.       如段落81之組合物,其中該緩血酸胺之濃度為約0.1至0.3 mg/mL或約0.01至0.15 mg/mL。 83.       如段落81或82之組合物,其中該Tris HCl之濃度為約1.25至1.40 mg/mL或約0.5至0.65 mg/mL。 84.       如段落78至83中任一段之組合物,其中該穩定劑為蔗糖。 85.       如段落84之組合物,其中該蔗糖之濃度為約95至110 mg/mL或約35至50 mg/mL。 86.       如段落78至85中任一段之組合物,其中用於復原之該鹽稀釋劑為氯化鈉。 87.       如段落86之組合物,其中該氯化鈉之濃度為約5至15 mg/mL。 88.       如段落62至87中任一段之組合物,其中該組合物為液體或凍乾的。 89.       如段落62之組合物,其包含約0.01至0.09 mg/mL之濃度的RNA分子,該RNA分子調配於包含以下之脂質奈米顆粒(LNP)中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的中性脂質及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的類固醇或類固醇類似物;且該組合物進一步包含有包含約0.1至0.3 mg/mL之濃度的緩血酸胺及約1.25至1.40 mg/mL之濃度的Tris鹽酸(HCl)的Tris緩衝液及約95至110 mg/mL之濃度的蔗糖,其中該組合物為液體組合物。 90.       如段落62之組合物,其包含約0.01至0.09 mg/mL之濃度的RNA分子,該RNA分子調配於包含以下之脂質奈米顆粒(LNP)中:約0.8至0.95 mg/mL之濃度的陽離子脂質、約0.05至0.15 mg/mL之濃度的聚乙二醇化脂質、約0.1至0.25 mg/mL之濃度的中性脂質及約0.3至0.45 mg/mL之濃度的類固醇或類固醇類似物;且該組合物進一步包含有包含約0.01至0.15 mg/mL之濃度的緩血酸胺及約0.5至0.65 mg/mL之濃度的Tris鹽酸(HCl)的Tris緩衝液、約35至50 mg/mL之濃度的蔗糖。 91.       如段落90之組合物,其中該組合物用約5至15 mg/mL之濃度的氯化鈉復原。 92.       如段落91之組合物,其中該組合物用約0.6至0.75 mL氯化鈉復原。 93.       如段落62之組合物,其進一步包含約5至15 mM Tris緩衝液、pH約7.0至8.0之200至400 mM蔗糖及視情況存在的用以復原之0.9%氯化鈉稀釋劑。 94.       一種在個體中誘導針對VZV之免疫反應的方法,其包含向該個體投與有效量的如段落1至93中任一段之RNA分子及/或組合物。 95.       一種預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的方法,其包含向該個體投與有效量的如段落1至93中任一段之RNA分子及/或組合物。 96.       如段落95之方法,其中該感染、疾病或病狀與VZV相關。 97.       如段落95或96之方法,其中該感染、疾病或病狀為帶狀疱疹(herpes zoster) (帶狀疱疹(shingles))。 98.       如段落95或96之方法,其中該感染、疾病或病狀為疱疹後神經痛。 99.       一種如段落1至93中任一段之RNA分子及/或組合物的用途,其用於製造用以在個體中誘導針對VZV之免疫反應的藥劑。 100.    一種如段落1至93中任一段之RNA分子或組合物的用途,其用於製造用以預防、治療或改善個體之感染、疾病或病狀的藥劑。 101.    如段落100之用途,其中該感染、疾病或病狀與VZV相關。 102.    如段落100或101之用途,其中該感染、疾病或病狀為帶狀疱疹(herpes zoster) (帶狀疱疹(shingles))。 103.    如段落100或101之用途,其中該感染、疾病或病狀為疱疹後神經痛。 104.    如段落94至103中任一段之方法或用途,其中該個體小於約1歲、約1歲或更大、約5歲或更大、約10歲或更大、約20歲或更大、約30歲或更大、約40歲或更大、約50歲或更大、約60歲或更大、約70歲或更大、或更大。 105.    如段落94至104中任一段之方法或用途,其中該個體約50歲或更大。 106.    如段落94至105中任一段之方法或用途,其中該個體具有免疫能力。 107.    如段落94至105中任一段之方法或用途,其中該個體免疫功能不全。 108.    如段落94至107中任一段之方法或用途,其中該RNA分子及/或組合物作為疫苗投與。 109.    如段落94至108中任一段之方法或用途,其中該RNA分子及/或組合物藉由皮內或肌肉內注射投與。 110.    如段落94至109中任一段之方法或用途,其中向該個體投與單次劑量、兩次劑量、三次劑量或更多次劑量的該RNA分子及/或組合物。 111.    如段落94至110中任一段之方法或用途,其中向該個體投與單次劑量的該RNA分子及/或組合物。 112.    如段落94至110中任一段之方法或用途,其中向該個體投與兩次劑量的該RNA分子及/或組合物。 113.    如段落94至110中任一段之方法或用途,其中在第0天及約2個月後向該個體投與兩次劑量的該RNA分子及/或組合物。 114.    如段落94至110中任一段之方法或用途,其中在第0天及約6個月後向該個體投與兩次劑量的該RNA分子及/或組合物。 115.    如段落94至114中任一段之方法或用途,其中向該個體投與至少一次加強劑量的該RNA分子及/或組合物。 116.    如段落94至115中任一段之方法或用途,其中每次投與向該個體投與至少約15 μg、至少約30 μg、至少約60 μg、至少約90 μg、至少約100 μg或更高劑量的RNA分子及/或組合物。 117.    如段落94至116中任一段之方法或用途,其中向該個體投與體積約0.25至1 mL,包括但不限於約0.25、0.5、1 mL之注射劑。
本文所揭示及主張之所有方法可根據本發明在無不當實驗的情況下進行及執行。雖然本發明之組合物及方法已根據某些態樣加以描述,但熟習此項技術者將顯而易見的係,變化形式可適用於本文所描述之方法以及方法之步驟或方法之步驟順序,而不脫離本發明之概念、精神及範疇。更特定言之,顯而易見在化學上及生理上相關之某些試劑可取代本文所描述之試劑,同時將實現相同或類似結果。熟習此項技術者顯而易知的所有該等類似取代及修改視為在由隨附申請專利範圍所界定的本發明之精神、範疇及概念內。
在本申請案中敍述的所有引用之參考文獻(包括如在整個本申請案中引用之文獻參考、發佈專利、公開專利申請案及GENBANK®寄存編號)之內容在其提供補充本文所闡述之彼等者之例示性程序或其他細節的程度上在此特定且明確地以引用之方式併入。當以引用之方式併入本文中的文獻中之術語之定義與本文所使用之定義衝突時,以本文所使用之定義為準。
1示意地示出野生型(WT)水痘帶狀疱疹病毒(VZV) gE蛋白(gE WT)及變異型VZV gE蛋白,其中SP係指信號肽序列,胞外域係指對應於延伸至細胞外空間中之蛋白質部分的肽序列,TM係指對應於跨越細胞膜之蛋白質部分的跨膜肽序列,且CT係指對應於延伸至細胞質中之蛋白質部分的細胞質尾區肽序列。具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE蛋白被稱為ms4、ms5、ms8、ms9、ms10、ms11及ms12。具有TM修飾之分泌性變異型VZV gE蛋白被稱為ms3及ms6。編碼VZV gE蛋白之VZV gE RNA構築體係由密碼子最佳化(CO) DNA產生,其中CO1指示具有約58% G/C含量之CO構築體,CO2指示具有約66% G/C含量之CO構築體,且CO3指示具有約62% G/C含量之CO構築體。 2展示經10 ng、25 ng或50 ng VZV RNA構築體轉染之Vero細胞的VZV gE表現,該等VZV RNA構築體包括WT構築體(gE_WT CO1及gE_WT CO2)及在細胞質尾區(CT)中具有修飾之構築體(ms4、ms5、ms8、ms9、ms10、ms11及ms12;各自有CO1及CO2兩種構築體)。針對VZV gE表現對細胞進行成像,且展示針對各VZV RNA構築體的經VZV gE +轉染之Vero細胞之百分比。 3展示經10 ng、25 ng或50 ng在跨膜(TM)中具有修飾之VZV RNA構築體(分泌性) (ms3及ms6;各自有CO1及CO2兩種構築體)轉染之Vero細胞的VZV gE表現。針對VZV gE表現對細胞進行成像,且展示針對各VZV RNA構築體的經VZV gE +轉染之Vero細胞之百分比。 4展示經10 ng、25 ng或50 ng VZV RNA構築體轉染之Vero細胞的平均螢光強度(MFI),該等VZV RNA構築體包括WT構築體(gE_WT CO1及gE_WT CO2)及在細胞質尾區(CT)中具有修飾之構築體(ms4、ms5、ms8、ms9、ms10、ms11及ms12;各自有CO1及CO2兩種構築體)。 5展示經10 ng、25 ng或50 ng在跨膜(TM)中具有修飾之VZV RNA構築體(分泌性) (ms3及ms6;各自有CO1及CO2兩種構築體)轉染之Vero細胞的平均螢光強度(MFI)。 6展示在經50 ng gE WT VZV RNA構築體及具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms4、ms5、ms8)轉染之Vero細胞中VZV gE的63倍放大之次細胞定位。 7展示在經50 ng具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms9、ms11及ms12)轉染之Vero細胞中VZV gE的63倍放大之次細胞定位。 8展示在經50 ng具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms10)轉染之Vero細胞中VZV gE的63倍放大之次細胞定位。 9展示在經50 ng具有TM修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms3及ms6) (分泌性)轉染之Vero細胞中VZV gE的63倍放大之次細胞定位。 10展示在經25 ng gE WT VZV RNA構築體及具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA (ms4、ms5、ms8)轉染之Vero細胞中VZV gE的10倍放大之次細胞定位。 11展示在經25 ng具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms9、ms11、ms12)轉染之Vero細胞中VZV gE的10倍放大之次細胞定位。 12展示在經25 ng具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms10)轉染之Vero細胞中VZV gE的10倍放大之次細胞定位。 13展示在經25 ng具有TM修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms3及ms6) (分泌性)轉染之Vero細胞中VZV gE的10倍放大之次細胞定位。 14展示藉由繪製輸入RNA量相對於表現VZV gE之人類胚胎腎(HEK) 293T細胞之百分比的圖而產生的滴定曲線,其中該滴定曲線用於測定用以下各者調配的VZV RNA-LNP疫苗之EC 50:VZV gE WT RNA構築體(gE WT CO1及gE WT CO2)、具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms4 CO1)及具有跨膜(TM)修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms3 CO1) (分泌性)。 15展示藉由繪製輸入RNA量相對於表現VZV gE之人類胚胎腎(HEK) 293T細胞之百分比的圖而產生的滴定曲線,其中該滴定曲線用於測定用以下各者調配的VZV RNA-LNP疫苗之EC 50:VZV gE WT RNA構築體(gE WT CO1及gE WT CO2)、具有細胞質尾區修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms5 CO1)及具有TM修飾之變異型VZV gE RNA構築體(ms6 CO2) (分泌性)。 16展示在免疫接種後第28天小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用致敏劑量之以下各者進行免疫接種:1 µg、2.5 µg或5 µg SHINGRIX®;0.5 µg或1 µg用gE_WT CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用具有TM修飾之ms3 CO1 RNA構築體(分泌性)調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用具有細胞質尾區修飾之ms4 CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;或0.5 µg或1 µg用gE_WT CO1 RNA構築體調配之凍乾VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO1 LYO)。 17展示在免疫接種後第34天小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用致敏劑量之以下各者進行免疫接種且在第28天用加強劑量之相應者進行免疫接種:1 µg、2.5 µg或5 µg SHINGRIX®;0.5 µg或1 µg用gE_WT CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用具有TM修飾之ms3 CO1 RNA構築體(分泌性)調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用具有細胞質尾區修飾之ms4 CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;或0.5 µg或1 µg用gE_WT CO1 RNA構築體調配之凍乾VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO1 LYO)。 18展示在免疫接種後第42天小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用致敏劑量之以下各者進行免疫接種且在第28天用加強劑量之相應者進行免疫接種:1 µg、2.5 µg或5 µg SHINGRIX®;0.5 µg或1 µg用gE_WT CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用具有TM修飾之ms3 CO1 RNA構築體(分泌性)調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用具有細胞質尾區修飾之ms4 CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;0.5 µg用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗;或0.5 µg或1 µg用gE_WT CO1 RNA構築體調配之凍乾VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO1 LYO)。 19展示在免疫接種後第28天(僅致敏劑量)、第34天(加強劑量之後六天)及第42天(加強劑量之後兩週)小鼠中之血清IgG水準之比較結果,該等小鼠在第0天用致敏劑量之SHINGRIX® (1 µg)或VZV RNA-LNP疫苗(0.5 µg)進行免疫接種且在第28天用加強劑量之相應者進行免疫接種。 20展示在對免疫接種後第34天自小鼠收穫之脾細胞進行體外刺激之後的CD4 +IFN-γ +染色T細胞之百分比,該等小鼠在第0天用致敏劑量之SHINGRIX® (1 µg、2.5 µg或5 µg)或VZV RNA-LNP疫苗(0.5 µg及/或1 µg)進行免疫接種且在第28天用加強劑量之相應者進行免疫接種。 21展示在對免疫接種後第34天自小鼠收穫之脾細胞進行體外刺激之後的CD8 +IFN-γ +染色T細胞之百分比,該等小鼠在第0天用致敏劑量之SHINGRIX® (1 µg、2.5 µg或5 µg)或VZV RNA-LNP疫苗(0.5 µg及/或1 µg)進行免疫接種且在第28天用加強劑量之相應者進行免疫接種。 22展示在皮下疫苗接種後第35天小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用1350 pfu減毒活水痘(LAV)進行皮下疫苗接種。 23展示在疫苗接種後第63天(第1次劑量後1個月)小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用LAV疫苗進行疫苗接種且在第35天用一劑量之以下各者進行免疫接種:SHINGRIX® (5 µg、2.5 µg或1 µg);用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg);用具有細胞質尾區修飾之ms5 CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg);或用具有TM修飾之ms6 CO2 RNA構築體(分泌性)調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg)。 24展示在疫苗接種後第76天(第2次劑量/加強免疫後13天)小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用LAV疫苗進行疫苗接種且在第35天及第63天用一劑量之以下各者進行免疫接種:SHINGRIX® (5 µg、2.5 µg或1 µg);用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg);用具有細胞質尾區修飾之ms5 CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg);或用具有TM修飾之ms6 CO2 RNA構築體(分泌性)調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg)。 25展示在疫苗接種後第63天(第1次劑量後1個月)小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用LAV疫苗進行疫苗接種且在第35天用一劑量的以下各者進行免疫接種:用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg)或用gE_WT CO2 RNA構築體調配之凍乾VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO2 lyo) (1 µg或0.5 µg);及在疫苗接種後第76天(第2次劑量/加強免疫後13天)小鼠中之血清IgG水準,該等小鼠在第0天用LAV疫苗進行疫苗接種且在第35天及第63天用一劑量的以下各者進行免疫接種:用gE_WT CO2調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg)或用gE_WT CO2 RNA構築體調配之凍乾VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO2 lyo) (1 µg或0.5 µg)。 26A 26D展示在第48天(第1次劑量後13天)在經歷LAV之小鼠中收集的脾細胞中疫苗誘導的VZV gE特異性T細胞及B細胞反應,該等小鼠在第35天用一劑量的以下各者進行免疫接種:SHINGRIX® (5 µg或1 µg);用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg);用具有細胞質尾區修飾之ms5 CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg);用具有TM修飾之ms6 CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg);或用gE_WT CO2調配之凍乾VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO2 Lyo) (1 µg)。 26A展示ELISpot量測的分泌IFN-γ之VZV gE特異性細胞之數目,且結果表示成每百萬個細胞之斑點形成細胞(SFC)。 26B展示ICS分析量測的CD4 +T細胞內表現IFN-γ之細胞,其表示為CD4 +T細胞內IFN-γ +細胞之百分比。 26C展示ICS分析量測的CD8 +T細胞內表現IFN-γ之細胞,其表示為CD8+ T細胞內IFN-γ +細胞之百分比。 26D展示脾細胞中之B細胞反應,其係藉由用流式細胞計量測gE特異性IgG +B細胞之頻率來進行評估。 27A 27C展示在第76天(第2次劑量/加強免疫後13天)在經歷LAV之小鼠中收集的脾細胞中疫苗誘導的VZV gE特異性T細胞及B細胞反應,該等小鼠在第35天及第63天用一劑量的以下各者進行免疫接種:SHINGRIX® (5 µg或1 µg);用gE_WT CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg或0.5 µg);用具有細胞質尾區修飾之ms5 CO1 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg);用具有TM修飾之ms6 CO2 RNA構築體調配之VZV RNA-LNP疫苗(1 µg);或用gE_WT CO2調配之凍乾VZV RNA-LNP疫苗(gE_WT CO2 Lyo) (1 µg)。 27A展示ICS分析量測的CD4 +T細胞內表現IFN-γ之細胞,其表示為CD4 +T細胞內IFN-γ +細胞之百分比。 27B展示ICS分析量測的CD8 +T細胞內表現IFN-γ之細胞,其表示為CD8+ T細胞內IFN-γ +細胞之百分比。 27C展示脾細胞中之B細胞反應,其係藉由用流式細胞計量測gE特異性IgG +B細胞之頻率來進行評估。
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Claims (32)

  1. 一種RNA分子,其包含至少一個編碼水痘帶狀疱疹病毒(VZV)醣蛋白E (gE)多肽之開放閱讀框架。
  2. 如請求項1之RNA分子,其中該VZV多肽為全長VZV多肽、經截短VZV多肽、VZV多肽之片段或VZV多肽之變異體。
  3. 如請求項1或2之RNA分子,其中該VZV多肽包含至少一個突變。
  4. 如請求項1至3中任一項之RNA分子,其中該VZV多肽與選自SEQ ID NO: 1至11之胺基酸序列中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性。
  5. 如請求項1至4中任一項之RNA分子,其中該開放閱讀框架係由與選自SEQ ID NO: 12至145之序列中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的核酸序列轉錄。
  6. 如請求項1至5中任一項之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含與選自SEQ ID NO: 146至279之序列中之任一者具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%一致性的核酸序列。
  7. 如請求項1至6中任一項之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含選自SEQ ID NO: 146至279中之任一者之核酸序列。
  8. 如請求項1至7中任一項之RNA分子,其進一步包含5'非轉譯區(5' UTR)。
  9. 如請求項8之RNA分子,其中該5' UTR包含選自SEQ ID NO: 281、312或313中之任一者之序列。
  10. 如請求項1至9中任一項之RNA分子,其進一步包含3'非轉譯區(3' UTR)。
  11. 如請求項10之RNA分子,其中該3' UTR包含選自SEQ ID NO: 284、314或317中之任一者之序列。
  12. 如請求項1至11中任一項之RNA分子,其中該RNA分子進一步包含5'端帽部分及/或3'聚A尾。
  13. 如請求項12之RNA分子,其中該聚A尾包含選自SEQ ID NO: 287或315中之任一者之序列。
  14. 如請求項1至13中任一項之RNA分子,其中該開放閱讀框架包含至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、約50%至75%、或約55%至70%之G/C含量。
  15. 如請求項1至14中任一項之RNA分子,其中所編碼之VZV多肽位於細胞膜中、位於高基氏體(Golgi)中及/或經分泌。
  16. 如請求項1至15中任一項之RNA分子,其中該RNA包含至少一個經修飾之核苷酸。
  17. 如請求項1至16中任一項之RNA分子,其中各尿苷經N1-甲基假尿苷(Ψ)置換。
  18. 如請求項1至17中任一項之RNA分子,其中該RNA為mRNA。
  19. 一種組合物,其包含如請求項1至18中任一項之RNA分子,其中該RNA分子調配於脂質奈米顆粒(LNP)中。
  20. 如請求項19之組合物,其中該脂質奈米顆粒包含陽離子脂質、聚乙二醇化(PEGylated)脂質、中性脂質及類固醇或類固醇類似物中之至少一者。
  21. 如請求項20之組合物,其中該陽離子脂質為(4-羥丁基)氮烷二基(azanediyl))雙(己烷-6,1-二基)雙(2-己基癸酸酯) (ALC-0315)。
  22. 如請求項20或21之組合物,其中該聚乙二醇化脂質為經PEG修飾之磷脂醯乙醇胺、經PEG修飾之磷脂酸、經PEG修飾之神經醯胺(例如PEG-CerC14或PEG-CerC20)、經PEG修飾之二烷基胺、經PEG修飾之二醯基甘油、經PEG修飾之二烷基甘油、2-[(聚乙二醇)-2000]-N,N-二(十四烷基)乙醯胺(ALC-0159)、二醇脂質(包括PEG-c-DOMG、PEG-c-DMA、PEG-s-DMG、N-[(甲氧基聚乙二醇)2000)胺甲醯基]-1,2-二肉豆蔻醯氧基丙-3-胺(PEG-c-DMA)及PEG-2000-DMG)、聚乙二醇化二醯基甘油(PEG-DAG) (諸如1-(單甲氧基-聚乙二醇)-2,3-二肉豆蔻醯基甘油(PEG-DMG))、聚乙二醇化磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)、PEG丁二酸酯二醯基甘油(PEG-S-DAG) (諸如4-O-(2',3'-二(十四醯氧基)丙基-1-O-((鄰甲氧基(聚乙氧基)乙基)丁二酸酯(PEG-S-DMG))、聚乙二醇化神經醯胺(PEG-cer)或PEG二烷氧基丙基胺基甲酸酯(諸如共聚-甲氧基(聚乙氧基)乙基-N-(2,3二(十四烷氧基)丙基)胺基甲酸酯或2,3-二(十四烷氧基)丙基-N-(ω-甲氧基(聚乙氧基)乙基)胺基甲酸酯)。
  23. 如請求項20至22中任一項之組合物,其中該中性脂質為1,2-二硬脂醯基-sn-甘油基-3-磷酸膽鹼(DSPC)、二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)、二油醯基磷脂醯膽鹼(DOPC)、二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)、二油醯基磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)、二油醯基-磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯油醯基磷脂醯膽鹼(POPC)、棕櫚醯油醯基-磷脂醯乙醇胺(POPE)及二油醯基-磷脂醯乙醇胺4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)-環己烷-1甲酸酯(DOPE-mal)、二棕櫚醯基磷脂醯乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻醯基磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂醯基-磷脂醯乙醇胺(DSPE)、16-O-單甲基PE、16-O-二甲基PE、18-1-反式PE、1-硬脂醯基-2-油醯基磷脂醯乙醇胺(SOPE)或1,2-二反油醯基(dielaidoyl)-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(反式DOPE)。
  24. 如請求項20至23中任一項之組合物,其中該類固醇或類固醇類似物為膽固醇。
  25. 一種在個體中誘導針對VZV之免疫反應的方法,其包含向該個體投與有效量的如請求項1至24中任一項之RNA分子或組合物。
  26. 一種預防、治療或改善個體之與VZV相關之感染、疾病或病狀的方法,其包含向個體投與有效量的如請求項1至24中任一項之RNA分子或組合物。
  27. 一種如請求項1至24中任一項之RNA分子或組合物的用途,其用於製造用以預防、治療或改善個體之與VZV相關之感染、疾病或病狀的藥劑。
  28. 如請求項26或27中任一項之方法或用途,其中該感染、疾病或病狀為帶狀疱疹(herpes zoster(shingles))或疱疹後神經痛。
  29. 一種如請求項1至24中任一項之RNA分子或組合物的用途,其用於製造用以在個體中誘導針對VZV之免疫反應的藥劑。
  30. 如請求項25至29中任一項之方法或用途,其中該個體小於約1歲、約1歲或更大、約5歲或更大、約10歲或更大、約20歲或更大、約30歲或更大、約40歲或更大、約50歲或更大、約60歲或更大、約70歲或更大、或更大。
  31. 如請求項25至30中任一項之方法或用途,其中該RNA分子或組合物作為疫苗投與。
  32. 如請求項25至30中任一項之方法或用途,其中向該個體投與單次劑量、兩次劑量、三次劑量或更多次劑量及視情況存在之加強劑量的該RNA分子或組合物。
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