JP7364331B2 - パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種マンナナーゼ - Google Patents

パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種マンナナーゼ Download PDF

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アレクセーエフ、ビクター・ユリエヴィッチ
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スコッチャー、マイルス・クリストファー
ヤオ、ジアン
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ダニスコ・ユーエス・インク
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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１１月５日出願の米国仮特許出願第６２／２５１５１６号明細書、及び２０１６年１月１３日出願の米国仮特許出願第６２／２７８３８７号明細書の優先権の利益に関し、且つこれを主張する。これらの出願は双方とも、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
本明細書中で開示されるのは、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種由来のマンナナーゼ、当該マンナナーゼをコードするポリヌクレオチド、当該マンナナーゼを含有する組成物、及びそれらの使用方法である。マンナナーゼを含有する組成物は、洗剤としての使用に、布地及び硬い表面の洗浄に、そして種々の他の産業用途において、適している。
電子的に提出される配列表への参照
ＡＳＣＩＩテキストファイル（名前：ＮＢ４０８４３ＷＯＰＣＴ＿ＳＴ２５；サイズ：３２１ＫＢ；作成日：２０１６年１１月３日）として本出願と共に電子的に提出された配列表の内容は、本出願の一部を形成し、そしてその全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
エンド－β－マンナナーゼが挙げられるマンナナーゼ酵素は、マンナンを加水分解することによってガムの染みを除去する洗剤洗浄組成物に使用されてきた。種々のマンナンが自然界に見出され、例えば、直鎖マンナン、グルコマンナン、ガラクトマンナン、及びグルコガラクトマンナンがある。そのような各マンナンは、グルコース残基で最大３３％置換されていてよいマンノース残基のβ－１，４－結合骨格を含有する多糖で構成される（Ｙｅｏｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，７０：１，２０１０，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）。ガラクトマンナン又はグルコガラクトマンナンにおいて、ガラクトース残基が、アルファ－１，６－結合でマンナン骨格に結合している（Ｍｏｒｅｉｒａ ａｎｄ Ｆｉｌｈｏ，Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，７９：１６５，２００８）。したがって、マンナンの、その構成糖への加水分解には、エンド－１，４－β－マンナナーゼが必要とされ、これは、骨格結合を加水分解して、短鎖のマンノオリゴサッカライドを生じさせる。マンノオリゴサッカライドはさらに、１，４－β－マンノシダーゼによって単糖に分解される。
マンナナーゼ、例えばエンド－β－マンナナーゼが、工業用酵素の技術において知られているが、特定の条件及び用途に適した更なるマンナナーゼが必要とされている。
本明細書中で開示される変異体、組成物、及び方法は、従来の分子生物学技術（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ参照）により生じる組換えマンナナーゼ、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関する。別の実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１、２、３、４、６、１０、１９、２８、３０、３８、５９、６０、６１、６２、６３、６６、６７、６８、７０、７１、７４、７５、７８、８０、８２、９３、９７、１０３、１１１、１２４、１２９、１３１、１３５、１３６、１３９、１４３、１５０、１６７、１６８、１８４、２１３、２１４、２１７、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、２５９、２６１、２８３、及び２８４から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置２９８での挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、１９、３８、５９、６７、６８、７１、７４、９７、１２９、１６７、１６８、１８４、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、及び２６１から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｘ、Ａ２Ｘ、Ｔ３Ｘ、Ｇ４Ｘ、Ｙ６Ｘ、Ｎ１０Ｘ、Ｐ１９Ｘ、Ｇ２８Ｘ、Ｓ３０Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｌ６０Ｘ、Ｙ６１Ｘ、Ｔ６２Ｘ、Ｋ６３Ｘ、Ｌ６６Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｋ７０Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｖ７５Ｘ、Ｑ７８Ｘ、Ｋ８０Ｘ、Ｉ８２Ｘ、Ｋ９３Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｖ１０３Ｘ、Ｅ１１１Ｘ、Ｉ１２４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｔ１３１Ｘ、Ｓ１３５Ｘ、Ａ１３６Ｘ、Ｄ１３９Ｘ、Ｋ１４３Ｘ、Ｎ１５０Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｎ２１３Ｘ、Ｋ２１４Ｘ、Ａ２１７Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、Ｇ２５９Ｘ、Ｎ２６１Ｘ、Ｄ２８３Ｘ、及びＴ２８４Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｘでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｐ１９Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、及びＮ２６１Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１Ｖ、Ｘ１Ｌ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ４Ｓ、Ｘ６Ｅ、Ｘ１０Ｔ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１９Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２８Ｓ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｄ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６１Ｗ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６６Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７０Ｒ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ７５Ｌ、Ｘ７８Ｄ、Ｘ７８Ｈ、Ｘ８０Ｔ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ９３Ｒ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１１１Ｄ、Ｘ１１１Ｓ、Ｘ１２４Ｖ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１３１Ａ、Ｘ１３５Ｌ、Ｘ１３６Ｌ、Ｘ１３９Ｍ、Ｘ１４３Ｑ、Ｘ１４３Ｒ、Ｘ１５０Ｔ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｉ、Ｘ２１７Ｐ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２５９Ｐ、Ｘ２６１Ｑ、Ｘ２６１Ｒ、Ｘ２８３Ｓ、Ｘ２８４Ａ、及びＸ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｘ１９Ｅ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２６１Ｑ、及びＸ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｖ、Ｍ１Ｌ、Ａ２Ｓ、Ｔ３Ｒ、Ｇ４Ｓ、Ｙ６Ｅ、Ｎ１０Ｔ、Ｎ１０Ｓ、Ｐ１９Ｅ、Ｇ２８Ａ、Ｇ２８Ｓ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｙ６１Ｗ，Ｔ６２Ｅ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｌ６６Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｋ７０Ｒ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｖ７５Ｌ、Ｑ７８Ｄ、Ｑ７８Ｈ、Ｋ８０Ｔ、Ｉ８２Ｍ、Ｋ９３Ｒ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｖ１０３Ｉ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｓ、Ｉ１２４Ｖ、Ｙ１２９Ｍ、Ｔ１３１Ａ、Ｔ１３５Ｌ、Ａ１３６Ｌ、Ｄ１３９Ｍ、Ｋ１４３Ｑ、Ｋ１４３Ｒ、Ｎ１５０Ｔ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｎ２１３Ａ、Ｋ２１４Ｉ、Ａ２１７Ｐ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｇ２５９Ｐ、Ｎ２６１Ｑ、Ｎ２６１Ｒ、Ｄ２８３Ｓ、Ｔ２８４Ａ、及びＴ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。別の実施形態は、Ｐ１９Ｅ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｙ１２９Ｍ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ，Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｎ２６１Ｑ、及びＮ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１２９－２４４、１２９－１４３－２４４、３８－２５８、３８－１４３－２５８、１９－１８４、１９－１４３－１８４、９７－２２５、９７－１４３－２２５、６０－６１、６７－１６８、６７－１４３－１６８、６３－７１、６３－７１－１４３、２２８－２３５、及び１４３－２２８－２３５から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換；（ｉｉ）Ｙ１２９Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｌ６０Ｘ－Ｙ６１Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ－Ｋ１４３Ｘ、Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘ、及びＫ１４３Ｘ－Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換（式中、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）；（ｉｉｉ）Ｘ１２９Ｍ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６０Ｑ－Ｘ６１Ｗ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌ、及びＸ１４３Ｑ－Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換（式中、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）；並びに（ｉｖ）Ｙ１２９Ｍ－Ｋ２４４Ｌ、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｋ２４４Ｌ、Ｔ３８Ｅ－Ｓ２５８Ｄ、Ｔ３８Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｓ２５８Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｌ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｃ、Ｌ６０Ｑ－Ｙ６１Ｗ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ６７Ｄ－Ｐ１６８Ｓ、Ｎ６７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ、及びＫ１４３Ｑ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｑ２４２Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｌ６６Ｖ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７４Ｓ－Ｖ７５Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の実施形態は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含むマンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅに関し、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は：位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフ（式中、Ｘａは、Ｆ又はＹであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）（「モチーフ１」）；位置２６３～２７４にてＬＤＸＸＸＧＰＸＧＸＬＴ（配列番号１６）のモチーフ（式中、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）（「欠失モチーフ１」）；位置２６３～２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）のモチーフ（式中、Ｘ１は、Ｍ又はＬであり、Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）（「欠失モチーフ２」）；及び位置２６３～２７４にてＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフ（「欠失モチーフ３」）から選択される１つ又は複数のモチーフを含み、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。マンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅは、２０１５年７月１０日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／４００５７号明細書（後に国際公開第２０１６／００７９２９号パンフレットとして公開）においてより完全に記載されている。
他の実施形態において、マンナナーゼ変異体は、エンド－β－マンナナーゼである。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号１３のアミノ酸配列に対して少なくとも７０％のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、マンナナーゼ活性、例えばローカストビーンガムガラクトマンナン又はコンニャクグルコマンナンに対する活性を有する。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、界面活性剤の存在下でマンナナーゼ活性を有する。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４０℃～約７０℃、約４５℃～約６５℃、約５０℃～約６０℃、約６０℃～約７０℃、又は約５６℃の温度にて、少なくとも５分間、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％の残留マンナナーゼ活性を保持する
一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、洗剤組成物中で洗浄活性を有する。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、プロテアーゼの存在下でマンナナーゼ活性を有する。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、プロテアーゼ及び／又は界面活性剤の存在下で、約１５日間以上、又は約１５～約４０日間、マンナナーゼ活性を少なくとも５０％保持する。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、グアーガム、ローカストビーンガム、及びそれらの組合せからなる群から選択される基質を加水分解することができる。一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、炭水化物－結合モジュールを含まない。
別の実施形態は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含む洗浄組成物に関する。一部の実施形態において、洗浄組成物はさらに、界面活性剤を含む。一部の実施形態において、界面活性剤は、イオン性界面活性剤である。一部の実施形態において、イオン性界面活性剤は、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、及びそれらの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態において、当該組成物はさらに、アシルトランスフェラーゼ、アミラーゼ、アルファ－アミラーゼ、ベータ－アミラーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼ、アラビナーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、ベータ－グルカナーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド－ベータ－１，４－グルカナーゼ、エンド－ベータ－マンナナーゼ、エキソ－ベータ－マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ－マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、脂肪分解酵素、リポキシゲナーゼ、マンナナーゼ、メタロプロテアーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、リダクターゼ、ラムノガラクツロナーゼ、ベータ－グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチルエステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、キシロシダーゼ、及びそれら組合せからなる群から選択される酵素を含む。一部の実施形態において、当該組成物はさらに、プロテアーゼ及びアミラーゼを含む。一部の実施形態において、洗浄組成物は、洗濯洗剤、布地柔軟仕上げ洗剤、食器洗い洗剤、及び硬質表面洗浄洗剤から選択される。一部の実施形態において、当該組成物は、顆粒、粉末、固体、バー、液体、タブレット、ゲル、ペースト、泡、シート、又は単位用量の組成物である。一部の実施形態において、洗浄組成物は、液体、粉末、顆粒状の固体、及びタブレットから選択される形態である。
更なる実施形態は、洗浄方法であって、マンナンを含む汚れ又は染みを含む表面又はアイテムを、（ｉ）本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、あるいは（ｉｉ）本明細書中に記載される洗浄組成物と接触させることを含み、前記汚れ又は前記染みに含有されるマンナンは加水分解される、洗浄方法に関する。
一部の実施形態はさらに、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードする核酸又は単離された核酸に関する。更なる実施形態は、調節配列に作動可能に結合された、本明細書中に記載される核酸又は単離された核酸を含む発現ベクターに関する。更なる実施形態は、本明細書中に記載される発現ベクター、あるいは本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。一部の実施形態において、宿主細胞は、細菌細胞又は真菌細胞である。更なる実施形態は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を生産する方法であって：マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を安定して形質転換することと；形質転換された宿主細胞を、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を産生するのに適した条件下で培養することと；マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を回収することとを含む方法に関する。
図１は、液体洗濯洗剤中での１６℃での、ローカストビーンガム（ＣＦＴ Ｃ－Ｓ－７３）に及ぼすＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼ及び市販のマンナナーゼ（ＭＡＮＮＡＷＡＹ ４Ｌ（登録商標），Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ ＡＳ，Ｄｅｎｍａｒｋ）の洗浄性能を示す。 図２Ａは、ＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼ及びＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼを含むＮＤＬ－クレードマンナナーゼの成熟した形態の、ＢｃｉＭａｎ１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＢＡＤ９９５２７．１（１ＷＫＹ＿Ａ）、Ｂ．ネアルソニィ（Ｂ＿ｎｅａｌｓｏｎｉｉ）＿ＡＧＵ７１４６６．１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＷＯ２０１５０２２４２８－００１５、及びＢ．レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）＿ＷＯ２０１４１０００１８－０００２を含む他のマンナナーゼの種々の成熟した形態の配列とのＭＵＳＣＬＥアラインメントを示しており、当該アラインメントは、位置３１～４０及び２６３～２７４にて、ＮＤＬ－クレードモチーフの周りにボックスを含む。 図２Ｂは、ＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼ及びＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼを含むＮＤＬ－クレードマンナナーゼの成熟した形態の、ＢｃｉＭａｎ１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＢＡＤ９９５２７．１（１ＷＫＹ＿Ａ）、Ｂ．ネアルソニィ（Ｂ＿ｎｅａｌｓｏｎｉｉ）＿ＡＧＵ７１４６６．１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＷＯ２０１５０２２４２８－００１５、及びＢ．レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）＿ＷＯ２０１４１０００１８－０００２を含む他のマンナナーゼの種々の成熟した形態の配列とのＭＵＳＣＬＥアラインメントを示しており、当該アラインメントは、位置３１～４０及び２６３～２７４にて、ＮＤＬ－クレードモチーフの周りにボックスを含む。 図２Ｃは、ＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼ及びＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼを含むＮＤＬ－クレードマンナナーゼの成熟した形態の、ＢｃｉＭａｎ１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＢＡＤ９９５２７．１（１ＷＫＹ＿Ａ）、Ｂ．ネアルソニィ（Ｂ＿ｎｅａｌｓｏｎｉｉ）＿ＡＧＵ７１４６６．１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＷＯ２０１５０２２４２８－００１５、及びＢ．レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）＿ＷＯ２０１４１０００１８－０００２を含む他のマンナナーゼの種々の成熟した形態の配列とのＭＵＳＣＬＥアラインメントを示しており、当該アラインメントは、位置３１～４０及び２６３～２７４にて、ＮＤＬ－クレードモチーフの周りにボックスを含む。 図２Ｄは、ＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼ及びＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼを含むＮＤＬ－クレードマンナナーゼの成熟した形態の、ＢｃｉＭａｎ１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＢＡＤ９９５２７．１（１ＷＫＹ＿Ａ）、Ｂ．ネアルソニィ（Ｂ＿ｎｅａｌｓｏｎｉｉ）＿ＡＧＵ７１４６６．１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＷＯ２０１５０２２４２８－００１５、及びＢ．レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）＿ＷＯ２０１４１０００１８－０００２を含む他のマンナナーゼの種々の成熟した形態の配列とのＭＵＳＣＬＥアラインメントを示しており、当該アラインメントは、位置３１～４０及び２６３～２７４にて、ＮＤＬ－クレードモチーフの周りにボックスを含む。 図２Ｅは、ＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼ及びＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼを含むＮＤＬ－クレードマンナナーゼの成熟した形態の、ＢｃｉＭａｎ１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＢＡＤ９９５２７．１（１ＷＫＹ＿Ａ）、Ｂ．ネアルソニィ（Ｂ＿ｎｅａｌｓｏｎｉｉ）＿ＡＧＵ７１４６６．１、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＷＯ２０１５０２２４２８－００１５、及びＢ．レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）＿ＷＯ２０１４１０００１８－０００２を含む他のマンナナーゼの種々の成熟した形態の配列とのＭＵＳＣＬＥアラインメントを示しており、当該アラインメントは、位置３１～４０及び２６３～２７４にて、ＮＤＬ－クレードモチーフの周りにボックスを含む。 図３は、Ｇｅｎｅｉｏｕｓ Ｔｒｅｅビルダープログラムを用いて構築した種々のマンナナーゼの成熟した形態のアミノ酸についての系統樹を示しており、ＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼ及びＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼを含む種々のＮＤＬ－クレードマンナナーゼを含む。 図４は、粉末洗濯洗剤中での１６℃での、ローカストビーンガム（ＣＦＴ Ｃ－Ｓ－７３）に及ぼすＰｓｐＭａｎ１１８マンナナーゼ及び市販のマンナナーゼ（ＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４Ｌ，Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ ＡＳ，Ｄｅｎｍａｒｋ）の洗浄性能を示す 図５は、１ＷＫＹ＿Ａマンナナーゼの、ＰｓｐＭａｎ１１８マンナナーゼ変異体との構造比較を示しており、１ＷＫＹ＿Ａマンナナーゼの主鎖を灰色で示し、ＰｓｐＭａｎ１１８マンナナーゼの主鎖を黒色で示す。 図６は、ＰｓｐＭａｎ１１８のＮＤＬモチーフ及び欠失モチーフの領域における、ＰｓｐＭａｎ１１８構造及び１ＷＫＹ＿Ａ構造の構造比較を示す。 図７Ａは、ＰｓｐＭａｎ１４８（黒色）マンナナーゼ及び２ＷＨＬ＿Ａ（淡い灰色）マンナナーゼの主鎖折畳みの比較を示しており、２ＷＨＬ＿Ａに結合するマンノトリオシル部分は、（基質結合部位の相対的位置を示すために）灰色のスティックとして示し、ＰｓｐＭａｎ１４８に存在する１８個のアミノ酸置換の側鎖を、黒色のスティック図として示す。 図７Ｂは、ＰｓｐＭａｎ１４８（黒色）マンナナーゼ及び２ＷＨＬ＿Ａ（淡い灰色）マンナナーゼの主鎖折畳みの比較を示しており、２ＷＨＬ＿Ａに結合するマンノトリオシル部分は、（基質結合部位の相対的位置を示すために）灰色のスティックとして示し、基質結合部位の周りの、且つ近くの、ＰｓｐＭａｎ１４８における７個の置換（Ｓ３０Ｔ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｋ６３Ｒ、Ｔ２２８Ｖ、Ｓ２５８Ｄ、及びＮ２６１Ｒ）の位置を、黒色の球として示す。 図７Ｃは、ＰｓｐＭａｎ１４８（黒色）マンナナーゼ及び２ＷＨＬ＿Ａ（淡い灰色）マンナナーゼの主鎖折畳みの比較を示しており、２ＷＨＬ＿Ａに結合するマンノトリオシル部分は、（基質結合部位の相対的位置を示すために）灰色のスティックとして示し、ＰｓｐＭａｎ１４８における１１個の表面置換を、黒色の球として示す。
本明細書中で記載されるのは、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種由来のエンド－β－マンナナーゼ、そのようなエンド－β－マンナナーゼをコードするポリヌクレオチド、そのようなマンナナーゼを含有する洗浄組成物、及びそれらの使用方法である。一実施形態において、本明細書中で記載されるパエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種エンド－β－マンナナーゼは、グリコシルヒドロラーゼ活性を有し、且つ／又は洗浄組成物及び／若しくはプロテアーゼの存在下で安定している。本明細書中に記載されるエンド－β－マンナナーゼの特徴は、種々の洗浄用途及び他の工業用途での使用によく適しており、例えばそこで、当該酵素は、洗剤組成物中に見出される界面活性剤、プロテアーゼ、及び／又は他の成分の存在下でマンナンを加水分解することができる。
明確にするために以下の用語が定義される。定義されない用語及び略語は、当該技術分野において用いられている通常の意味が与えられるべきである。例えば、本明細書中で定義されない技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する（例えば、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｓａｉｎｓｂｕｒｙ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，ＮＹ １９９４；及びＨａｌｅ ａｎｄ Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ Ｈａｒｐｅｒ Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈａｒｐｅｒ Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ，ＮＹ １９９１参照）。
単数の用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確にそうでないと示さない限り、複数の言及を含む。
用語「マンナンエンド－１，４－β－マンノシダーゼ」、「エンド－１，４－β－マンナナーゼ」、「エンド－β－１，４－マンナーゼ」、「β－マンナナーゼＢ」、「β－１，４－マンナン４－マンナノヒドロラーゼ」、「エンド－β－マンナナーゼ」、「β－Ｄ－マンナナーゼ」、「１，４－β－Ｄ－マンナンマンナノヒドロラーゼ」、又は「エンド－β－マンナナーゼ」（ＥＣ ３．２．１．７８）は、マンナン、ガラクトマンナン、及びグルコマンナン中の１，４－β－Ｄマンノシド結合のランダムな加水分解が可能な酵素を指す。エンド－１，４－β－マンナナーゼは、グリコシルヒドロラーゼのいくつかのファミリーのメンバーであり、ＧＨ２６及びＧＨ５が挙げられる。特に、エンド－β－マンナナーゼは、マンナンを分解させる一群のポリサッカラーゼを構成し、そして、マンノース単位を含有するポリオース鎖を切断することができる（すなわち、マンナン、グルコマンナン、ガラクトマンナン、及びガラクトグルコマンナン中のグリコシド結合を切断することができる）酵素を意味する。本明細書中で記載される「エンド－β－マンナナーゼ」は、追加的な酵素活性（例えば、エンド－１，４－β－グルカナーゼ、１，４－β－マンノシダーゼ、及びセロデキストリナーゼ活性）を有し得る。
用語「マンナナーゼ」、「マンノシド酵素」、「マンノース分解酵素」、「マンナナーゼ酵素」、「マンナナーゼポリペプチド」、又は「マンナナーゼタンパク質」は、マンナンを分解させることができる酵素、ポリペプチド、又はタンパク質を指す。マンナナーゼ酵素は、例えば、エンド－β－マンナナーゼ、エキソ－β－マンナナーゼ、又はグリコシルヒドロラーゼであってよい。本明細書中で用いられるマンナナーゼ活性は、当該技術分野において知られているあらゆる手順に従って判定されてよい（例えば、Ｌｅｖｅｒ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，４７：２７３，１９７２；Ｅｒｉｋｓｓｏｎ ａｎｄ Ｗｉｎｅｌｌ，Ａｃｔａ Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．，（１９６８），２２：１９２４；米国特許第６６０２８４２号明細書；及び国際公開第９５／３５３６２Ａ１号パンフレット参照）。
本明細書中で用いられる「マンナン」は、β－１，４結合したマンノースで構成される骨格を有する多糖である；「グルコマンナン」は、多かれ少なかれ規則正しく交互になっている、β－１，４結合したマンノース及びグルコースの骨格を有する多糖である；「ガラクトマンナン」及び「ガラクトグルコマンナン」は、アルファ－１，６結合したガラクトース側枝を有するマンナン及びグルコマンナンである。これらの化合物はアセチル化されていてもよい。ガラクトマンナン及びガラクトグルコマンナンの分解は、ガラクトース側枝の完全な、又は部分的な除去によって促進される。さらに、アセチル化マンナン、グルコマンナン、ガラクトマンナン、及びガラクトグルコマンナンの分解は、完全な、又は部分的な脱アセチル化によって促進される。アセチル基は、アルカリによって、又はマンナンアセチルエステラーゼによって除去され得る。マンナナーゼから、又はマンナナーゼとアルファガラクトシダーゼ及び／若しくはマンナンアセチルエステラーゼとの組合せによって放出されるオリゴマーは、β－マンノシダーゼ及び／又はβ－グルコシダーゼによってさらに分解して、遊離マルトースを放出し得る。
用語「改変」は、アミノ酸配列におけるあらゆる変化又は変更を指し、注目するアミノ酸配列の同定された位置でのアミノ酸の、出発アミノ酸とは異なるアミノ酸による置換、注目するアミノ酸配列の同定された位置でのアミノ酸の欠失、注目するアミノ酸配列の同定された位置でのアミノ酸の挿入、注目するアミノ酸配列中のアミノ酸側鎖の置換、及び／又は注目するアミノ酸配列の化学的改変が挙げられる。
用語「触媒活性」又は「活性」は、定義された反応条件下での所定の基質の変換を量的に説明する。用語「残留活性」は、ある条件セット下での酵素の触媒活性の、異なる条件セット下での触媒活性に対する比率と定義される。用語「比活性」は、定義された反応条件下での酵素量あたりの触媒活性を量的に説明する。
用語「ｐＨ安定性」は、安定性が最適であるｐＨから大きく（例えば、最適ｐＨを１ｐＨ単位超える、又は下回るよりも）外れているｐＨ値への限られた曝露に、その活性が測定可能である条件下でその活性を失うことなく耐えるタンパク質の能力を説明する。
用語「洗剤安定性」は、洗剤組成物混合物中での指定された洗剤組成物成分（例えば加水分解酵素）の安定性を指す。
用語「ペルヒドロラーゼ」は、洗浄、漂白、及び消毒等の用途に適した過酸の形成をもたらす反応を触媒することができる酵素を指す。
フレーズ「水性組成物」及び「水性環境」に用いられる用語「水性」は、少なくとも５０％水で構成される組成物を指す。水性組成物は、水を少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％含有し得る。
用語「界面活性剤」は、表面活性品質を有すると当該技術分野において一般に認識されているあらゆる化合物を指す。界面活性剤として一般に、陰イオン性化合物、陽イオン性化合物、非イオン性化合物、及び双性イオン性化合物が挙げられ、これらは本明細書中でさらに説明される。
用語「表面特性」は、タンパク質の表面によって示される静電荷、並びに疎水性及び親水性等の特性に関して用いられる。
用語「キレーター安定性」は、本開示のエンド－β－マンナナーゼが、例えばキレート剤に曝され、又はこれと接触しながら、本明細書中で開示されるマンノシル化プロセス、加水分解プロセス、洗浄プロセス、又は他のプロセスの間の支配的な条件下で所定の期間にわたって、指定された量の酵素活性を保持することを指す。一部の実施形態において、マンナナーゼは、例えば、少なくとも約１０分、約２０分、約４０分、約６０分、約１００分その他の所定の期間にわたるキレート剤との接触後、マンナナーゼ活性を少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９２％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％保持する。
用語「熱安定性」及び「熱安定の」は、マンナナーゼが、例えば、高温に曝されながら、マンノシル化プロセス、加水分解プロセス、洗浄プロセス、又は他のプロセスの間の支配的な条件下で所定の期間にわたって高温に曝された後に、指定された量の酵素活性を保持することを指す。一部の実施形態において、マンナナーゼは、例えば、少なくとも約５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、１２０分、１８０分、２４０分、３００分その他の所定の期間にわたって、高温、例えば、少なくとも約５０℃、約５５℃、約６０℃、約６５℃、又は約７０℃に曝された後に、マンナナーゼ活性を少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９２％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％保持する。
用語「洗浄活性」は、本明細書中で開示されるマンノシル化プロセス、加水分解プロセス、洗浄プロセス、又は他のプロセスの間の支配的な条件下で、エンド－β－マンナナーゼによって達成される洗浄性能を指す。一部の実施形態において、洗浄性能は、食品、家庭用剤、又はパーソナルケア製品から生じた酵素感受性の染みに関する種々の洗浄アッセイの利用によって判定される。これらの染みの一部として、例えば、標準的な洗い条件に染みを曝した後の種々のクロマトグラフィ、分光測光法、又は他の定量的方法論によって判定される、アイスクリーム、ケチャップ、ＢＢＱソース、マヨネーズ、スープ、チョコレートミルク、チョコレートプリン、冷凍デザート、シャンプー、ボディローション、サンプロテクション製品、練り歯みがき、ローカストビーンガム、又はグアーガムが挙げられる。例示的なアッセイとして、以下に限定されないが、国際公開第９９／３４０１１号パンフレット、米国特許第６６０５４５８号明細書、及び米国特許第６５６６１１４号明細書に記載されるもの、並びに実施例に記載される方法が挙げられる。
用語「クリーンな表面」及び「クリーンな織物」は、染み除去パーセントが、汚された表面又は織物の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、又は４０％である表面又は織物をそれぞれ指す。
マンナナーゼ変異体又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と併せて用いられる場合の用語「有効量」は、指定された洗浄組成物中で所望されるレベルの酵素活性を達成するのに必要とされるマンナナーゼ変異体又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の量を指す。そのような有効量は、当業者によって容易に確認され、そして多くの因子、例えば、用いられる特定のマンナナーゼ変異体又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、洗浄用途、洗浄組成物の特定の組成に、そして液体組成物又は乾燥組成物（例えば、顆粒、バー、粉末、固体、液体、タブレット、ゲル、ペースト、泡、シート、又は単位用量）が必要とされるかに基づく。
洗浄組成物と併せて用いられる場合の用語「補助剤成分」は、所望される洗浄組成物の特定のタイプ、及び製品の形態（例えば、液体、顆粒、粉末、バー、ペースト、スプレー、タブレット、ゲル、単位用量、シート、又は泡の組成物）について選択されるあらゆる液体、固体、又は気体の材料を意味し、当該材料もまた好ましくは、組成物に用いられるマンナナーゼ変異体又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と適合する。一部の実施形態において、顆粒状組成物は、「コンパクトな」形態であり、他の実施形態において、液体組成物は、「濃縮した」形態である。
用語「洗浄組成物」及び「洗浄製剤」は、洗浄されることになるアイテム又は表面、例えば布地、皿、コンタクトレンズ、固体表面、毛髪、皮膚、及び歯からの不所望の化合物（例えば、汚れ又は染み）の除去に用いられる化学成分の混合物を指す。洗浄されることになる表面又はアイテム、及び組成物又は製剤の所望される形態に応じて、組成物又は製剤は、液体、ゲル、顆粒、粉末、バー、ペースト、スプレー、タブレット、ゲル、単位用量、シート、又は泡の形態であってよい。
用語「洗剤組成物」及び「洗剤製剤」は、汚された物体の洗浄用の洗い媒体に用いることが意図される化学成分の混合物を指す。洗剤組成物／製剤は一般に、少なくとも１つの界面活性剤を含み、そして場合によっては、加水分解酵素、酸化還元酵素、ビルダー、漂白剤、漂白活性化剤、青味剤、蛍光色素、固化阻害剤、マスキング剤、酵素活性化剤、酸化防止剤、及び可溶化剤を含んでよい。
用語「食器洗い組成物」は、皿類及びカトラリーを洗浄するための、例えば、顆粒、単位用量、及び液体の形態が挙げられる組成物の全ての形態を指す。一部の実施形態において、食器洗い組成物は、自動食器洗い機に用いられる「自動食器洗い」組成物である。用語「皿類」は、セラミックス、プラスチック、金属、磁器、ガラス、及びアクリルが挙げられるがこれらに限定されないあらゆる材料の皿（例えば、プレート、カップ、ガラス、ボウル、及びコンテナ）及びカトラリー（例えば、スプーン、ナイフ、及びフォークが挙げられるがこれらに限定されない器具）を指す。
用語「漂白する」は、十分な時間、そして適切なｐＨ及び温度の条件下での材料（例えば、布地、洗濯物、パルプその他）又は表面の、材料のブライトニング（すなわちホワイトニング）及び／又は洗浄をもたらすための処理を指す。漂白に適した化学物質の例として、以下に限定されないが、ＣｌＯ２、Ｈ２Ｏ２、過酸、及びＮＯ２が挙げられる。
マンナナーゼ変異体又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の用語「洗い性能」は、洗剤組成物に追加的な洗浄性能を付与する、変異体又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の、洗いへの寄与を指す。洗い性能は、関連する洗い条件下で比較される。用語「関連する洗い条件」は、本明細書中で、皿又は洗濯洗剤の市場区分における、家庭で実際に用いられる条件、特に洗い温度、時間、洗い機構、泡濃度、洗剤のタイプ、及び水硬度を示すのに用いられる。
本明細書中で用いられる用語「殺菌」は、表面からの汚染物質の除去、並びにアイテムの表面上の微生物の阻害又は死滅を指す。
本明細書中の洗浄組成物の「コンパクトな」形態は、密度によって、そして組成に関しては無機フィラー塩の量によって、最も良く反映される。無機フィラー塩は、粉末形態の洗剤組成物の従来の成分である。従来の洗剤組成物において、フィラー塩は、かなりの量で、典型的には総組成物の約１７～約３５重量％の量で存在する。それに対して、コンパクトな組成物において、フィラー塩は、総組成物の約１５％以下の量で存在する。一部の実施形態において、フィラー塩は、組成物の約１０重量％以下、より好ましくは約５重量％以下の量で存在する。一部の実施形態において、無機フィラー塩は、アルカリ金属及びアルカリ土類金属の硫酸塩及び塩化物塩から選択される。一部の実施形態において、好ましいフィラー塩は、硫酸ナトリウムである。
用語「布地」は、例えば、布、ニット、及び不織材料、そして例えば、糸及び布、ニット、並びに不織布に変換され得るステープルファイバー及びフィラメントを指す。当該用語は、天然繊維、及び合成（例えば人造）繊維から製造される材料を包含する。
核酸又はポリヌクレオチドが「単離される」とは、以下に限定されないが、例えば、他のタンパク質、核酸、及び細胞が挙げられる他の成分から少なくとも部分的に、又は完全に分離されている場合である。同様に、ポリペプチド、タンパク質、又はペプチドが「単離される」とは、以下に限定されないが、例えば、他のタンパク質、核酸、及び細胞が挙げられる他の成分から少なくとも部分的に、又は完全に分離されている場合である。モルベースで、単離された種は、組成物中の他の種よりも豊富である。例えば、単離された種は、存在する全ての高分子種の少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％（モルベース）を構成し得る。好ましくは、注目する種は、必要な均一性となるように精製される（すなわち、汚染物質種が、従来の検出方法によって組成物中に検出され得ない）。純度及び均一性は、当該技術分野において周知のいくつかの技術、例えば、核酸サンプル又はタンパク質サンプルのそれぞれアガロース電気泳動又はポリアクリルアミドゲル電気泳動に続く、染色直後の視覚化を用いて、判定され得る。所望される場合、高分解能の技術、例えば、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）又は類似の手段が、物質の精製に利用されてよい。
核酸又はポリペプチドに用いられる用語「精製された」は、一般に、当該技術分野において周知の分析技術によって判定されて、他の成分が本質的にない核酸又はポリペプチドを意味する（例えば、精製されたポリペプチド又はポリヌクレオチドは、電気泳動ゲル、クロマトグラフィ溶出液、及び／又は密度勾配遠心分離に曝された媒体において、不連続なバンドを形成する）。例えば、電気泳動ゲル中に本質的に１つのバンドが生じる核酸又はポリペプチドは、「精製されている」。精製された核酸又はポリペプチドは、少なくとも約５０％純粋であり、通常、少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、又は９９．８％以上純粋である（例えば、モルベースでの重量パーセント）。これに関連して、精製技術又は富化技術の利用後に分子の濃度が実質的に増大している場合、組成物は分子について富化されている。用語「富化される」は、出発組成物におけるよりも高い相対濃度又は絶対濃度にて組成物中に存在する化合物、ポリペプチド、細胞、核酸、アミノ酸、又は他の特定の材料若しくは成分を指す。
本明細書中で用いられる「ポリペプチド」は、ペプチド結合により結合する複数のアミノ酸を含む分子を指す。用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、互換的に用いられる。タンパク質は、場合によっては、官能性を付加するように改変（例えば、グリコシル化、リン酸化、アシル化、ファルネシル化、プレニル化、そしてスルホン化）されてよい。そのようなアミノ酸配列は、活性を示す場合、「酵素」と呼ばれ得る。アミノ酸残基についての従来の１文字コード又は３文字コードが用いられ、アミノ酸配列は、標準的なアミノ末端からカルボキシ末端の向き（すなわち、Ｎ→Ｃ）に示される。
用語「ポリヌクレオチド」は、ポリペプチドをコードすることができるＤＮＡ、ＲＮＡ、ヘテロ二本鎖、及び合成分子を包含する。核酸は一本鎖であっても二本鎖であってもよいし、化学改変を有してもよい。用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、互換的に用いられる。遺伝コードが縮重するので、複数のコドンが、特定のアミノ酸をコードするのに用いられ得、そして本組成物及び本方法は、特定のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を包含する。特に明記されない限り、核酸配列は、５’から３’の向きに示される。
本明細書中で用いられる用語「野生型」及び「固有の」は、自然界に見出されるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。
ポリペプチドに関して、用語「野生型」及び「親の」は、１つ又は複数のアミノ酸位置にて人工的な置換、挿入、又は欠失を含まない、天然に存在するポリペプチドを指す。同様に、ポリヌクレオチドに関して、用語「野生型」及び「親の」は、１つ又は複数のヌクレオシドにて人工的な置換、挿入、又は欠失を含まない、天然に存在するポリヌクレオチドを指す。しかしながら、野生型又は親のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然に存在するポリヌクレオチドに限定されず、野生型又は親のポリペプチドをコードするあらゆるポリヌクレオチドを包含することを強調する。
ポリペプチドに関して、用語「基準」は、１つ又は複数のアミノ酸位置にて人工的な置換、挿入、又は欠失を含まない、天然に存在するポリペプチド、及び１つ又は複数のアミノ酸位置にて１つ又は複数の人工的な置換、挿入、又は欠失を含むポリペプチドを指す。同様に、ポリヌクレオチドに関して、用語「基準」は、１つ又は複数のヌクレオシドの人工的な置換、挿入、又は欠失を含まない、天然に存在するポリヌクレオチド、及び１つ又は複数のヌクレオシドにて１つ又は複数の人工的な置換、挿入、又は欠失を含むポリヌクレオチドを指す。しかしながら、野生型又は親のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、天然に存在するポリヌクレオチドに限定されず、野生型又は親のポリペプチドをコードするあらゆるポリヌクレオチドを包含することを強調する。
１文字コード「Ｚ」は、親又は基準のアミノ酸配列において、挿入又は欠失を同定する。親又は基準の配列に対する挿入について、１文字コード「Ｚ」は、位置番号の左側にあり、そしてさらに、その中に挿入される各アミノ酸の前に、挿入の順位を示す数字（例えば、．０１）を含む。例えば、位置２９８での一アミノ酸、グルタミン（Ｑ）の挿入は、「Ｚ２９８．０１Ｑ」と表されることとなる；位置２９８での一アミノ酸Ｘ（Ｘはあらゆるアミノ酸であってよい）の挿入は、「Ｚ２９８．０１Ｘ」と表されることとなる；そして、位置８７と８８の間への３つのアミノ酸、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、及びチロシン（Ｙ）の挿入は、「Ｚ８７．０１Ａ／Ｚ８７．０２Ｓ／Ｚ８７．０３Ｙ」と表されることとなる。欠失について、１文字コード「Ｚ」は、位置番号の右側にある。例えば、位置１００からのアラニン（Ａ）の欠失は、Ａ１００Ｚと表されることとなる。先の挿入及び欠失のいくつかの組合せが、以下のように表されることとなる：「Ｇ８７Ｓ／Ｚ８７．０１Ａ／Ｚ８７．０２Ｓ／Ｚ８７．０３Ｙ／Ａ１００Ｚ」。
用語「マンナナーゼ変異体」は、１つ又は複数のアミノ酸の置換、付加、又は欠失によって、典型的には組換えＤＮＡ技術によって基準ポリペプチドから得られるポリペプチドを指す。マンナナーゼ変異体は、少数のアミノ酸残基が基準ポリペプチドと異なってよく、そして、触媒ドメインの全長にわたる、基準ポリペプチドとの一次アミノ酸配列の相同性／同一性のレベルによって定義されてよい。例えば、マンナナーゼ変異体は、基準ポリペプチドとのアミノ酸配列同一性が、少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。基準ポリペプチドとして、マンナナーゼ（エンド－１，４－β－マンノシダーゼ、ＥＣ ３．２．１．７８）のＧＨ５＿８サブファミリー内の天然に存在するマンナナーゼ及び組換えマンナナーゼが挙げられる。このＧＨ５＿８サブファミリーは、Ａｓｐｅｂｏｒｇ ｅｔ ａｌ（２０１２），「Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｓｕｂｆａｍｉｌｙ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｏｓｙｌ ｈｙｄｒｏｌａｓｅ ｆａｍｉｌｙ ５（ＧＨ５）」，ＢＭＣ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１２：１８６においてより完全に記載されている。例示的なＧＨ５＿８細菌のマンナナーゼとして、例えば、ＮＤＬ－Ｃｌａｄｅマンナナーゼ、例えば、ＰｓｐＭａｎ４（配列番号１４）及びＰｓｐＭａｎ９（配列番号３０）；並びに他のマンナナーゼ、例えば、バチルス属種（Ｂａｃ．ｓｐ．）１ＷＫＹ＿Ａ（ＢＡＤ９９５２７．１）（配列番号４３）、Ｂ．アガラドハエレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）２ＷＨＬ＿Ａ（Ｑ５ＹＥＸ６の残基３０～３３０）（配列番号４５）、ＷＯ２０１５０２２４２８－００１５（配列番号４４）、ＵＳ６５６６１１４－００２の残基３２～３３０（配列番号１６０）、及びＵＳ６５６６１１４－００２の残基３２～３４０（配列番号１６２）が挙げられる。マンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅは、２０１５年７月１０日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／４００５７号明細書（後に国際公開第２０１６／００７９２９号パンフレットとして公開）においてより完全に記載されている。
用語「変異ポリヌクレオチド」は、マンナナーゼ変異体をコードし、親ポリヌクレオチドとの指定された程度の相同性／同一性を有し、又は親ポリヌクレオチド若しくはその相補体に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを指す。例えば、変異ポリヌクレオチドは、親ポリヌクレオチドとのヌクレオチド配列同一性が、少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。
標準的なパラメータを用いる既知のプログラム、例えばＢＬＡＳＴ、ＡＬＩＧＮ、及びＣＬＵＳＴＡＬを用いて、配列同一性が判定されてよい（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．［１９９０］Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．［１９８９］Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５；Ｋａｒｉｎ ｅｔ ａｌ．［１９９３］Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：５８７３；及びＨｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．［１９８８］Ｇｅｎｅ ７３：２３７－２４４参照）。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアが、国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ＮＣＢＩ）により公開されている。また、ＦＡＳＴＡを用いて、データベースが検索されてもよい（Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．［１９８８］Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４－２４４８）。２つのポリペプチドが実質的に同一であるという１つの指示は、第１のポリペプチドが第２のポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである。典型的には、保存的なアミノ酸置換により異なるポリペプチドは、免疫学的に交差反応性である。従って、ポリペプチドは、例えば、２つのペプチドが、１つの保存的な置換によってのみ異なる場合、第２のポリペプチドと実質的に同一である。複数のタンパク質配列の比較に有用な別のアルゴリズムとして、Ｇｅｎｅｉｏｕｓソフトウェア（Ｂｉｏｍａｔｔｅｒｓ Ｌｔｄ．）のＭＵＳＣＬＥプログラムがある（Ｒｏｂｅｒｔ Ｃ．Ｅｄｇａｒ．ＭＵＳＣＬＥ：ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００４）３２（５）：１７９２－１７９７）。
用語「に由来する」は、用語「に起源する」、「から得られる」、「から入手できる」、「から単離される」、及び「から生じる」を包含し、一般に、指定されたある材料が、指定された別の材料にその起源があるのを見出すことを、又は指定された別の材料に関して記載され得る特徴を有することを示す。
用語「ハイブリダイゼーション」は、当該技術分野において知られているように、核酸の鎖が、塩基対形成により相補鎖と結合するプロセスを指す。
用語「ハイブリダイゼーション条件」は、ハイブリダイゼーション反応が行われる条件を指す。当該条件は典型的に、ハイブリダイゼーションが評価される条件の「ストリンジェンシー」の程度によって分類される。ストリンジェンシーの程度は、例えば、核酸に結合する複合体又はプローブの融解温度（Ｔｍ）に基づいてよい。例えば、「最大ストリンジェンシー」は、典型的に、Ｔｍ－５℃（プローブのＴｍを５℃下回る）くらいで；「高ストリンジェンシー」は、Ｔｍを約５～１０℃下回って；「中程度のストリンジェンシー」は、プローブのＴｍを約１０～２０℃下回って；そして「低ストリンジェンシー」は、Ｔｍを約２０～２５℃下回って、起こる。代わりに、又は加えて、ハイブリダイゼーション条件は、ハイブリダイゼーションの塩若しくはイオンの強度条件、並びに／又は１つ若しくは複数のストリンジェンシー洗い、例えば６×ＳＳＣ＝非常に低いストリンジェンシー；３×ＳＳＣ＝低～中程度のストリンジェンシー；１×ＳＳＣ＝中程度のストリンジェンシー；及び０．５×ＳＳＣ＝高ストリンジェンシーに基づいてよい。機能的に、最大ストリンジェンシー条件は、ハイブリダイゼーションプローブと厳密な同一性又はほぼ厳密な同一性を有する核酸配列を同定するのに用いられ得る；一方、高ストリンジェンシー条件は、プローブと約８０％以上の配列同一性を有する核酸配列を同定するのに用いられる。高い選択性を必要とする用途については、ハイブリッドを形成するために比較的ストリンジェントな条件を用いる（例えば、比較的低い塩及び／又は高い温度条件が用いられる）ことが典型的に所望される。
少なくとも２つの核酸又はポリペプチドの文脈における用語「実質的に類似した」及び「実質的に同一の」は、ポリヌクレオチド又はポリペプチドが、親配列若しくは基準配列との同一性が少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％である配列、又は、官能性を付加することなく本記載を回避するためだけになされたアミノ酸の置換、挿入、欠失、若しくは改変を含む配列のいずれかを含むことを意味する。
用語「発現ベクター」は、指定されたポリペプチドをコードして、適切な宿主においてポリペプチドの発現をもたらすことができる適切な制御配列に作動可能に結合されたＤＮＡ配列を含有するＤＮＡ構築物を指す。そのような制御配列は、転写をもたらすプロモーター、そのような転写を制御する任意選択のオペレータ配列、適切なｍＲＮＡリボソーム結合部位をコードする配列、並びに転写及び翻訳の終結を制御する配列を含む。ベクターは、プラスミドであってもファージ粒子であってもよいし、単純に、潜在的なゲノム挿入物であってもよい。一旦適切な宿主に形質転換されれば、ベクターは、宿主ゲノムと独立して複製且つ機能してもよいし、場合によっては、それ自体ゲノム中に組み込んでもよい。
用語「組換え体」は、例えば、変更されたポリペプチドを生産するようにコード配列を突然変異させることによって、コード配列を別の遺伝子のコード配列に融合させることによって、異なるプロモーターの制御下に遺伝子を置くことによって、異種起源の生物中で遺伝子を発現させることによって、低いレベル又は高いレベルにて遺伝子を発現させることによって、条件的に、又は構成的に、その生来の発現プロフィールと異なるように遺伝子を発現させることによって、配列特性又は発現特性を変えるように改変された遺伝的材料（すなわち、核酸、これがコードするポリペプチド、並びにそのようなポリヌクレオチドを含むベクター及び細胞）を指す。通常、組換え核酸、ポリペプチド、それらに基づく細胞は、人によって、自然界に見出される関連する核酸、ポリペプチド、及び細胞と同一でないように操作されてきた。
用語「シグナル配列」は、ポリペプチドのＮ末端部分に結合した一連のアミノ酸の配列を指し、これにより、成熟形態のタンパク質の、細胞からの分泌が促進される。成熟形態の細胞外タンパク質は、分泌プロセスの間にシグナル配列が切断されて、これを欠く。
用語「選択マーカー」又は「選択可能なマーカー」は、導入された核酸又はベクターを含有する宿主の選択を容易にし得る、宿主細胞中での発現が可能な遺伝子を指す。選択可能マーカーの例として、以下に限定されないが、代謝の利点、例えば栄養的な利点を宿主細胞に付与する抗菌物質（例えば、ハイグロマイシン、ブレオマイシン、又はクロラムフェニコール）及び／又は遺伝子が挙げられる。用語「選択可能な遺伝子産物」は、選択可能なマーカーが発現される細胞に、抗生物質又は薬物に対する耐性を付与する酵素活性をコードする遺伝子を指す。
本明細書中で用いられる用語「調節要素」は、核酸配列の発現の一部の態様を制御する遺伝的要素を指す。例えば、プロモーターは、作動可能に結合されたコード領域の転写の開始を促進する調節要素である。追加的な調節要素として、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、及び終結シグナルが挙げられる。
用語「宿主細胞」は一般に、当該技術分野において知られている組換えＤＮＡ技術を用いて構築されたベクターにより形質転換又は形質移入される原核生物宿主又は真核生物宿主を指す。形質転換された宿主細胞は、タンパク質変異体をコードするベクターを複製することができ、又は所望されるタンパク質変異体を発現することができる。タンパク質変異体のプレフォーム又はプロフォームをコードするベクターの場合、そのような変異体は典型的に、発現された場合、宿主細胞から宿主細胞培地中に分泌される。
核酸配列を細胞中に挿入する文脈における用語「導入される」は、形質転換、形質導入、又は形質移入を意味する。形質転換の手段として、当該技術分野において知られているプロトプラスト形質転換、塩化カルシウム沈殿、電気穿孔法、裸ＤＮＡ等が挙げられる（Ｃｈａｎｇ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ［１９７９］Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．１６８：１１１－１１５；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．［１９８６］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５１：６３４；及びＦｅｒｒａｒｉ ｅｔ ａｌ．によるレビュー論文（Ｈａｒｗｏｏｄ，Ｂａｃｉｌｌｕｓ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ｐｐ．５７－７２，１９８９）参照）。
数値と併せて用いられる場合の用語「約」は、数値の－１０％～＋１０％の範囲を指す。例えば、フレーズ「約６のｐＨ値」は、５．４から６．６のｐＨ値を指す。
本明細書中で用いられるあらゆる見出しは、便宜上記載されるものであり、限定として解釈されるべきでない。一見出しの下に含まれる記載は、全体として本明細書に適用され得る。
本明細書中で開示される変異体、組成物、及び方法は、２つ以上の改変を含む組換えマンナナーゼ、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、そのような変異体は、従来の分子生物学技術により生じる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ参照）。一実施形態において、変異マンナナーゼ、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、少なくとも１つの置換、少なくとも１つの欠失、及び少なくとも１つの挿入から選択される２つ以上の改変を含む。一部の実施形態において、改変は、突然変異の組合せ、例えば、少なくとも１つの置換及び少なくとも１つの欠失、少なくとも１つの欠失及び少なくとも１つの挿入、少なくとも１つの挿入及び少なくとも１つの置換、又は少なくとも１つの置換、少なくとも１つの欠失、及び少なくとも１つの挿入の組合せを含む。
一実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１、２、３、４、６、１０、１９、２８、３０、３８、５９、６０、６１、６２、６３、６６、６７、６８、７０、７１、７４、７５、７８、８０、８２、９３、９７、１０３、１１１、１２４、１２９、１３１、１３５、１３６、１３９、１４３、１５０、１６７、１６８、１８４、２１３、２１４、２１７、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、２５９、２６１、２６３、２７６、２８３、及び２８４から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置２９８での挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１、２、３、４、６、１０、１９、２８、３０、３８、５９、６０、６２、６３、６６、６７、６８、７０、７１、７４、７５、７８、８０、８２、９３、９７、１０３、１１１、１２４、１２９、１３１、１３５、１３６、１３９、１４３、１５０、１６７、１６８、１８４、２１３、２１４、２１７、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、２５９、２６１、２６３、２７６、２８３、及び２８４から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置２９８での挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１、２、３、４、６、１０、１９、２８、３０、３８、５９、６０、６２、６３、６６、６７、６８、７０、７１、７４、７５、７８、８０、８２、９３、９７、１０３、１１１、１２４、１２９、１３１、１３５、１３６、１３９、１４３、１５０、１６７、１６８、１８４、２１３、２１４、２１７、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、２５９、２６１、２８３、及び２８４から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置２９８での挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１、４、６、１０、１９、２８、３０、３８、５９、６０、６３、６６、６７、６８、７０、７１、７４、７５、７８、８０、８２、９７、１０３、１１１、１２４、１２９、１３１、１４３、１６７、１６８、１８４、２１４、２１７、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、２５９、２６１、２６３、２７６、及び２８４から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置２９８での挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１９、３０、３８、５９、６０、６３、６７、６８、７１、７４、９７、１０３、１２９、１６７、１６８、１８４、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、及び２６１から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置２９８での挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。別の実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）１９、３０、３８、５９、６０、６３、６７、９７、１０３、１２９、１６７、１８４、２２５、２２８、２３５、２４４、２５８、及び２６１から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置２９８での挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、１９、３８、５９、６７、６８、７１、７４、９７、１２９、１６７、１６８、１８４、２２５、２２８、２３５、２４２、２４４、２５８、及び２６１から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｘ、Ａ２Ｘ、Ｔ３Ｘ、Ｇ４Ｘ、Ｙ６Ｘ、Ｎ１０Ｘ、Ｐ１９Ｘ、Ｇ２８Ｘ、Ｓ３０Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｌ６０Ｘ、Ｙ６１Ｘ、Ｔ６２Ｘ、Ｋ６３Ｘ、Ｌ６６Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｋ７０Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｖ７５Ｘ、Ｑ７８Ｘ、Ｋ８０Ｘ、Ｉ８２Ｘ、Ｋ９３Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｖ１０３Ｘ、Ｅ１１１Ｘ、Ｉ１２４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｔ１３１Ｘ、Ｓ１３５Ｘ、Ａ１３６Ｘ、Ｄ１３９Ｘ、Ｋ１４３Ｘ、Ｎ１５０Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｎ２１３Ｘ、Ｋ２１４Ｘ、Ａ２１７Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、Ｇ２５９Ｘ、Ｎ２６１Ｘ、Ｌ２６３Ｘ、Ｆ２７６Ｘ、Ｄ２８３Ｘ、及びＴ２８４Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｘでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｘ、Ａ２Ｘ、Ｔ３Ｘ、Ｇ４Ｘ、Ｙ６Ｘ、Ｎ１０Ｘ、Ｐ１９Ｘ、Ｇ２８Ｘ、Ｓ３０Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｌ６０Ｘ、Ｔ６２Ｘ、Ｋ６３Ｘ、Ｌ６６Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｋ７０Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｖ７５Ｘ、Ｑ７８Ｘ、Ｋ８０Ｘ、Ｉ８２Ｘ、Ｋ９３Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｖ１０３Ｘ、Ｅ１１１Ｘ、Ｉ１２４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｔ１３１Ｘ、Ｓ１３５Ｘ、Ａ１３６Ｘ、Ｄ１３９Ｘ、Ｋ１４３Ｘ、Ｎ１５０Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｎ２１３Ｘ、Ｋ２１４Ｘ、Ａ２１７Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、Ｇ２５９Ｘ、Ｎ２６１Ｘ、Ｌ２６３Ｘ、Ｆ２７６Ｘ、Ｄ２８３Ｘ、及びＴ２８４Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｘでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｘ、Ｇ４Ｘ、Ｙ６Ｘ、Ｎ１０Ｘ、Ｐ１９Ｘ、Ｇ２８Ｘ、Ｓ３０Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｌ６０Ｘ、Ｋ６３Ｘ、Ｌ６６Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｋ７０Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｖ７５Ｘ、Ｑ７８Ｘ、Ｋ８０Ｘ、Ｉ８２Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｖ１０３Ｘ、Ｅ１１１Ｘ、Ｉ１２４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｔ１３１Ｘ、Ｋ１４３Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｋ２１４Ｘ、Ａ２１７Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、Ｇ２５９Ｘ、Ｎ２６１Ｘ、Ｌ２６３Ｘ、Ｆ２７６Ｘ、及びＴ２８４Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｘでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｘ、Ａ２Ｘ、Ｔ３Ｘ、Ｇ４Ｘ、Ｙ６Ｘ、Ｎ１０Ｘ、Ｐ１９Ｘ、Ｇ２８Ｘ、Ｓ３０Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｌ６０Ｘ、Ｔ６２Ｘ、Ｋ６３Ｘ、Ｌ６６Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｋ７０Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｖ７５Ｘ、Ｑ７８Ｘ、Ｋ８０Ｘ、Ｉ８２Ｘ、Ｋ９３Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｖ１０３Ｘ、Ｅ１１１Ｘ、Ｉ１２４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｔ１３１Ｘ、Ｓ１３５Ｘ、Ａ１３６Ｘ、Ｄ１３９Ｘ、Ｋ１４３Ｘ、Ｎ１５０Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｎ２１３Ｘ、Ｋ２１４Ｘ、Ａ２１７Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、Ｇ２５９Ｘ、Ｎ２６１Ｘ、Ｄ２８３Ｘ、及びＴ２８４Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｘでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｐ１９Ｘ、Ｓ３０Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｌ６０Ｘ、Ｋ６３Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｖ１０３Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、及びＮ２６１Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｘでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｐ１９Ｘ、Ｓ３０Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｌ６０Ｘ、Ｋ６３Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｖ１０３Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、及びＮ２６１Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｘでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｐ１９Ｘ、Ｔ３８Ｘ、Ｓ５９Ｘ、Ｎ６７Ｘ、Ａ６８Ｘ、Ｎ７１Ｘ、Ｎ７４Ｘ、Ｎ９７Ｘ、Ｙ１２９Ｘ、Ｆ１６７Ｘ、Ｐ１６８Ｘ、Ｑ１８４Ｘ、Ｇ２２５Ｘ、Ｔ２２８Ｘ、Ｙ２３５Ｘ、Ｑ２４２Ｘ、Ｋ２４４Ｘ、Ｓ２５８Ｘ、及びＮ２６１Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１Ｖ、Ｘ１Ｌ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ４Ｓ、Ｘ６Ｓ、Ｘ６Ｅ、Ｘ１０Ｔ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１９Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２８Ｓ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｄ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６３Ｅ、Ｘ６６Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７０Ｒ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ７５Ｌ、Ｘ７８Ｄ、Ｘ７８Ｈ、Ｘ８０Ｔ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ９３Ｒ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１１１Ｄ、Ｘ１１１Ｓ、Ｘ１２４Ｖ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１３１Ａ、Ｘ１３５Ｌ、Ｘ１３６Ｌ、Ｘ１３９Ｍ、Ｘ１４３Ｑ、Ｘ１４３Ｒ、Ｘ１５０Ｔ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｉ、Ｘ２１７Ｐ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２５９Ｐ、Ｘ２６１Ｑ、Ｘ２６１Ｒ、Ｘ２６３Ｅ、Ｘ２７６Ｙ、Ｘ２８３Ｓ、Ｘ２８４Ａ、及びＸ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１Ｖ、Ｘ１Ｌ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ４Ｓ、Ｘ６Ｓ、Ｘ６Ｅ、Ｘ１０Ｔ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１９Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２８Ｓ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｄ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６１Ｗ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６３Ｅ、Ｘ６６Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７０Ｒ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ７５Ｌ、Ｘ７８Ｄ、Ｘ７８Ｈ、Ｘ８０Ｔ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ９３Ｒ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１１１Ｄ、Ｘ１１１Ｓ、Ｘ１２４Ｖ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１３１Ａ、Ｘ１３５Ｌ、Ｘ１３６Ｌ、Ｘ１３９Ｍ、Ｘ１４３Ｑ、Ｘ１４３Ｒ、Ｘ１５０Ｔ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｉ、Ｘ２１７Ｐ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２５９Ｐ、Ｘ２６１Ｑ、Ｘ２６１Ｒ、Ｘ２６３Ｅ、Ｘ２７６Ｙ、Ｘ２８３Ｓ、Ｘ２８４Ａ、及びＸ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１Ｖ、Ｘ１Ｌ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ４Ｓ、Ｘ６Ｅ、Ｘ１０Ｔ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１９Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２８Ｓ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｄ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６６Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７０Ｒ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ７５Ｌ、Ｘ７８Ｄ、Ｘ７８Ｈ、Ｘ８０Ｔ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ９３Ｒ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１１１Ｄ、Ｘ１１１Ｓ、Ｘ１２４Ｖ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１３１Ａ、Ｘ１３５Ｌ、Ｘ１３６Ｌ、Ｘ１３９Ｍ、Ｘ１４３Ｑ、Ｘ１４３Ｒ、Ｘ１５０Ｔ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｉ、Ｘ２１７Ｐ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２５９Ｐ、Ｘ２６１Ｑ、Ｘ２６１Ｒ、Ｘ２８３Ｓ、Ｘ２８４Ａ、及びＸ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１Ｖ、Ｘ１Ｌ、Ｘ２Ｓ、Ｘ３Ｒ、Ｘ１０Ｔ、Ｘ１９Ｅ、Ｘ２８Ａ、Ｘ２８Ｓ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｄ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６２Ｅ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６６Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７０Ｒ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７８Ｄ、Ｘ８０Ｔ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１１１Ｄ、Ｘ１１１Ｓ、Ｘ１２４Ｖ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１３１Ａ、Ｘ１３９Ｍ、Ｘ１４３Ｑ、Ｘ１４３Ｒ、Ｘ１５０Ｔ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２１３Ａ、Ｘ２１４Ｉ、Ｘ２１７Ｐ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２５９Ｐ、Ｘ２６１Ｑ、Ｘ２６１Ｒ、Ｘ２８３Ｓ、Ｘ２８４Ａ、及びＸ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１Ｖ、Ｘ４Ｓ、Ｘ６Ｓ、Ｘ６Ｅ、Ｘ１０Ｔ、Ｘ１０Ｓ、Ｘ１９Ｅ、Ｘ２８Ｓ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６６Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７０Ｒ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ７５Ｌ、Ｘ７８Ｄ、Ｘ７８Ｈ、Ｘ８０Ｔ、Ｘ８２Ｍ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１１１Ｄ、Ｘ１２４Ｖ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１３１Ａ、Ｘ１４３Ｑ、Ｘ１４３Ｒ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２１４Ｉ、Ｘ２１７Ｐ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２５９Ｐ、Ｘ２６１Ｒ、Ｘ２６３Ｅ、Ｘ２７６Ｙ、及びＸ２８４Ａから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１９Ｅ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６３Ｅ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２６１Ｑ、及びＸ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１９Ｅ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ７４Ｓ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４２Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２６１Ｑ、及びＸ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１９Ｅ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ６８Ｓ、Ｘ７１Ｄ、Ｘ７４Ｅ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ９７Ｌ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１６８Ａ、Ｘ１６８Ｓ、Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、Ｘ２６１Ｑ、及びＸ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｘ１９Ｅ、Ｘ３０Ｔ、Ｘ３８Ｅ、Ｘ５９Ｖ、Ｘ６０Ｑ、Ｘ６３Ｒ、Ｘ６３Ｌ、Ｘ６３Ｅ、Ｘ６７Ｄ、Ｘ９７Ｄ、Ｘ１０３Ｉ、Ｘ１２９Ｍ、Ｘ１６７Ｙ、Ｘ１８４Ｌ、Ｘ２２５Ｃ、Ｘ２２５Ｐ、Ｘ２２８Ｖ、Ｘ２３５Ｌ、Ｘ２４４Ｌ、Ｘ２５８Ｄ、及びＸ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｖ、Ｍ１Ｌ、Ａ２Ｓ、Ｔ３Ｒ、Ｇ４Ｓ、Ｙ６Ｓ、Ｙ６Ｅ、Ｎ１０Ｔ、Ｎ１０Ｓ、Ｐ１９Ｅ、Ｇ２８Ａ、Ｇ２８Ｓ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｙ６１Ｗ、Ｔ６２Ｅ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｋ６３Ｅ、Ｌ６６Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｋ７０Ｒ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｖ７５Ｌ、Ｑ７８Ｄ、Ｑ７８Ｈ、Ｋ８０Ｔ、Ｉ８２Ｍ、Ｋ９３Ｒ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｖ１０３Ｉ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｓ、Ｉ１２４Ｖ、Ｙ１２９Ｍ、Ｔ１３１Ａ、Ｔ１３５Ｌ、Ａ１３６Ｌ、Ｄ１３９Ｍ、Ｋ１４３Ｑ、Ｋ１４３Ｒ、Ｎ１５０Ｔ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｎ２１３Ａ、Ｋ２１４Ｉ、Ａ２１７Ｐ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｇ２５９Ｐ、Ｎ２６１Ｑ、Ｎ２６１Ｒ、Ｌ２６３Ｅ、Ｆ２７６Ｙ、Ｄ２８３Ｓ、Ｔ２８４Ａ、及びＴ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｖ、Ｍ１Ｌ、Ａ２Ｓ、Ｔ３Ｒ、Ｇ４Ｓ、Ｙ６Ｓ、Ｙ６Ｅ、Ｎ１０Ｔ、Ｎ１０Ｓ、Ｐ１９Ｅ、Ｇ２８Ａ、Ｇ２８Ｓ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｔ６２Ｅ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｋ６３Ｅ、Ｌ６６Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｋ７０Ｒ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｖ７５Ｌ、Ｑ７８Ｄ、Ｑ７８Ｈ、Ｋ８０Ｔ、Ｉ８２Ｍ、Ｋ９３Ｒ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｖ１０３Ｉ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｓ、Ｉ１２４Ｖ、Ｙ１２９Ｍ、Ｔ１３１Ａ、Ｔ１３５Ｌ、Ａ１３６Ｌ、Ｄ１３９Ｍ、Ｋ１４３Ｑ、Ｋ１４３Ｒ、Ｎ１５０Ｔ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｎ２１３Ａ、Ｋ２１４Ｉ、Ａ２１７Ｐ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｇ２５９Ｐ、Ｎ２６１Ｑ、Ｎ２６１Ｒ、Ｌ２６３Ｅ、Ｆ２７６Ｙ、Ｄ２８３Ｓ、Ｔ２８４Ａ、及びＴ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｖ、Ｍ１Ｌ、Ａ２Ｓ、Ｔ３Ｒ、Ｇ４Ｓ、Ｙ６Ｅ、Ｎ１０Ｔ、Ｎ１０Ｓ、Ｐ１９Ｅ、Ｇ２８Ａ、Ｇ２８Ｓ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｔ６２Ｅ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｌ６６Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｋ７０Ｒ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｖ７５Ｌ、Ｑ７８Ｄ、Ｑ７８Ｈ、Ｋ８０Ｔ、Ｉ８２Ｍ、Ｋ９３Ｒ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｖ１０３Ｉ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｓ、Ｉ１２４Ｖ、Ｙ１２９Ｍ、Ｔ１３１Ａ、Ｔ１３５Ｌ、Ａ１３６Ｌ、Ｄ１３９Ｍ、Ｋ１４３Ｑ、Ｋ１４３Ｒ、Ｎ１５０Ｔ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｎ２１３Ａ、Ｋ２１４Ｉ、Ａ２１７Ｐ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｇ２５９Ｐ、Ｎ２６１Ｑ、Ｎ２６１Ｒ、Ｄ２８３Ｓ、Ｔ２８４Ａ、及びＴ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｖ、Ｍ１Ｌ、Ａ２Ｓ、Ｔ３Ｒ、Ｎ１０Ｔ、Ｐ１９Ｅ、Ｇ２８Ａ、Ｇ２８Ｓ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｔ６２Ｅ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｌ６６Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｋ７０Ｒ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｑ７８Ｄ、Ｋ８０Ｔ、Ｉ８２Ｍ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｖ１０３Ｉ、Ｅ１１１Ｄ、Ｅ１１１Ｓ、Ｉ１２４Ｖ、Ｙ１２９Ｍ、Ｔ１３１Ａ、Ｄ１３９Ｍ、Ｋ１４３Ｑ、Ｋ１４３Ｒ、Ｎ１５０Ｔ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｎ２１３Ａ、Ｋ２１４Ｉ、Ａ２１７Ｐ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｇ２５９Ｐ、Ｎ２６１Ｑ、Ｎ２６１Ｒ、Ｄ２８３Ｓ、Ｔ２８４Ａ、及びＴ２８４Ｅから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｍ１Ｖ、Ｇ４Ｓ、Ｙ６Ｓ、Ｙ６Ｅ、Ｎ１０Ｔ、Ｎ１０Ｓ、Ｐ１９Ｅ、Ｇ２８Ｓ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｋ６３Ｅ、Ｌ６６Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｋ７０Ｒ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｓ、Ｖ７５Ｌ、Ｑ７８Ｄ、Ｑ７８Ｈ、Ｋ８０Ｔ、Ｉ８２Ｍ、Ｎ９７Ｄ、Ｖ１０３Ｉ、Ｅ１１１Ｄ、Ｉ１２４Ｖ、Ｙ１２９Ｍ、Ｔ１３１Ａ、Ｋ１４３Ｑ、Ｋ１４３Ｒ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｌ、Ｋ２１４Ｉ、Ａ２１７Ｐ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｇ２５９Ｐ、Ｎ２６１Ｒ、Ｌ２６３Ｅ、Ｆ２７６Ｙ、及びＴ２８４Ａから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｐ１９Ｅ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｋ６３Ｅ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ７４Ｓ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｖ１０３Ｉ、Ｙ１２９Ｍ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｑ２４２Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｎ２６１Ｑ、及びＮ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｄ、Ｓ５９Ｖ、Ｎ６７Ｄ、Ａ６８Ｓ、Ｎ７１Ｄ、Ｎ７４Ｅ、Ｎ９７Ｄ、Ｎ９７Ｌ、Ｙ１２９Ｍ、Ｆ１６７Ｙ、Ｐ１６８Ａ、Ｐ１６８Ｓ、Ｑ１８４Ｄ、Ｑ１８４Ｌ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、Ｎ２６１Ｑ、及びＮ２６１Ｒから選択される２つ以上の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。別の実施形態は、以下から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し：（ｉ）Ｐ１９Ｅ、Ｓ３０Ｔ、Ｔ３８Ｅ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｋ６３Ｒ、Ｋ６３Ｌ、Ｋ６３Ｅ、Ｎ６７Ｄ、Ｎ９７Ｄ、Ｖ１０３Ｉ、Ｙ１２９Ｍ、Ｆ１６７Ｙ、Ｑ１８４Ｌ、Ｇ２２５Ｃ、Ｇ２２５Ｐ、Ｔ２２８Ｖ、Ｙ２３５Ｌ、Ｋ２４４Ｌ、Ｓ２５８Ｄ、及びＮ２６１Ｒから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換、並びに（ｉｉ）位置Ｚ２９８．０１Ｑでの挿入；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の実施形態は、１２９－２４４、１２９－１４３－２４４、３８－２５８、３８－１４３－２５８、１９－１８４、１９－１４３－１８４、９７－２２５、９７－１４３－２２５、６７－１６８、６７－１４３－１６８、６０－６１、６３－７１、６３－７１－１４３、２２８－２３５、及び１４３－２２８－２３５から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、１２９－２４４、１２９－１４３－２４４、３８－２５８、３８－１４３－２５８、１９－１８４、１９－１４３－１８４、９７－２２５、９７－１４３－２２５、６７－１６８、６７－１４３－１６８、６３－７１、６３－７１－１４３、２２８－２３５、及び１４３－２２８－２３５から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、１２９－２４４、３８－２５８、１９－１８４、９７－２２５、６７－１６８、６３－７１、及び２２８－２３５から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、１２９－１４３－２４４、３８－１４３－２５８、１９－１４３－１８４、９７－１４３－２２５、６７－１４３－１６８、６３－７１－１４３、及び１４３－２２８－２３５から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、１２９－２４４、３８－２５８、１９－１８４、９７－２２５、６７－１６８、６３－７１、及び２２８－２３５から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、１２９－１４３－２４４、３８－１４３－２５８、１９－１４３－１８４、９７－１４３－２２５、６７－１４３－１６８、６３－７１－１４３、及び１４３－２２８－２３５から選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の実施形態は、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｌ６０Ｘ－Ｙ６１Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ－Ｋ１４３Ｘ、Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘ、及びＫ１４３Ｘ－Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ－Ｋ１４３Ｘ、Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘ、及びＫ１４３Ｘ－Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ、及びＴ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ－Ｋ１４３Ｘ、及びＫ１４３Ｘ－Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ－Ｋ１４３Ｘ、Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘ、及びＫ１４３Ｘ－Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ、及びＴ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、Ｙ１２９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｋ２４４Ｘ、Ｔ３８Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｓ２５８Ｘ、Ｐ１９Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｑ１８４Ｘ、Ｎ９７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｇ２２５Ｘ、Ｎ６７Ｘ－Ｋ１４３Ｘ－Ｐ１６８Ｘ、Ｋ６３Ｘ－Ｎ７１Ｘ－Ｋ１４３Ｘ、及びＫ１４３Ｘ－Ｔ２２８Ｘ－Ｙ２３５Ｘから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の実施形態は、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６０Ｑ－Ｘ６１Ｗ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌ、及びＸ１４３Ｑ－Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌ、及びＸ１４３Ｑ－Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ、及びＸ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、及びＸ１４３Ｑ－Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌ、及びＸ１４３Ｑ－Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。別の実施形態は、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ、及びＸ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、Ｘ１２９Ｍ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２４４Ｌ、Ｘ３８Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２５８Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｄ、Ｘ１９Ｅ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１８４Ｌ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｃ、Ｘ９７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ２２５Ｐ、Ｘ６７Ｄ－Ｘ１４３Ｑ－Ｘ１６８Ｓ、Ｘ６３Ｌ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、Ｘ６３Ｒ－Ｘ７１Ｄ－Ｘ１４３Ｑ、及びＸ１４３Ｑ－Ｘ２２８Ｖ－Ｘ２３５Ｌから選択される１つ又は複数の位置での１つ又は複数の置換から選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、Ｘは、あらゆるアミノ酸であり；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の実施形態は、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ２４４Ｌ、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｋ２４４Ｌ、Ｔ３８Ｅ－Ｓ２５８Ｄ、Ｔ３８Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｓ２５８Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｌ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｐ、Ｌ６０Ｑ－Ｙ６１Ｗ、Ｎ６７Ｄ－Ｐ１６８Ｓ、Ｎ６７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ、及びＫ１４３Ｑ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。さらに別の実施形態は、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ２４４Ｌ、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｋ２４４Ｌ、Ｔ３８Ｅ－Ｓ２５８Ｄ、Ｔ３８Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｓ２５８Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｌ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ６７Ｄ－Ｐ１６８Ｓ、Ｎ６７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ、及びＫ１４３Ｑ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ２４４Ｌ、Ｔ３８Ｅ－Ｓ２５８Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｌ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ６７Ｄ－Ｐ１６８Ｓ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ、及びＴ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｋ２４４Ｌ、Ｔ３８Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｓ２５８Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ６７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、及びＫ１４３Ｑ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌから選択される２つ以上の改変を含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｑ２４２Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｌ６６Ｖ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７４Ｓ－Ｖ７５Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；又はＮ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｑ２４２Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｌ６６Ｖ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７４Ｓ－Ｖ７５Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；又はＮ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
別の実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｑ２４２Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｌ６６Ｖ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７４Ｓ－Ｖ７５Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
さらに別の実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｑ２４２Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｌ６６Ｖ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７４Ｓ－Ｖ７５Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；又はＮ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｑ２４２Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；又はＮ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し；変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態は、Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑを含むアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。
更なる実施形態において、マンナナーゼ変異体又は組換えポリペプチドは、配列番号１３及び配列番号４６～９１から選択される。更なる実施形態において、マンナナーゼ変異体又は組換えポリペプチドは、配列番号１３、４９、６０、６９、７４、７７、７８、８２、及び８３から選択される。
別の実施形態は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含むマンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅに関し、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに：位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフ（式中、Ｘａは、Ｆ又はＹであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）（「モチーフ１」）；位置２６３～２７４にてＬＤＸＸＸＧＰＸＧＸＬＴ（配列番号１６）のモチーフ（式中、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）（「欠失モチーフ１」）；位置２６３～２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）のモチーフ（式中、Ｘ１は、Ｍ又はＬであり、Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）（「欠失モチーフ２」）；及び位置２６３～２７４にてＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフ（「欠失モチーフ３」）から選択される１つ又は複数のモチーフを含み、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている。更なる実施形態は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含むマンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅに関し、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに：位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフ（式中、Ｘａは、Ｆ又はＹであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）；位置２６３～２７４にてＬＤＸＸＸＧＰＸＧＸＬＴ（配列番号１６）のモチーフ（式中、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）；位置２６３～２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）のモチーフ（式中、Ｘ１は、Ｍ又はＬであり、Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）；及び位置２６３～２７４にてＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフから選択される１つ又は複数のモチーフを含み、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられているが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３１、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、ＰｔｕＭａｎ２、ＡＡＸ８７００３、ＷＰ＿０４６２２７９３１、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＰｐａＭａｎ２、ＷＰ＿０１７８１３１１１、ＰｓｐＭａｎ９、ＡＥＸ６０７６２、ＷＰ＿０４６２１４４６２、ＹＰ＿００３８６８９８９、ＹＰ＿００３９４４８８４、ＷＰ＿０１７４２７９８１、ＡＡＸ８７００２、ＷＰ＿００９５９３７６９、ＹＰ＿００６１９０５９９、そしてＷＰ＿０１９９１２４８１でないことを条件とする。
更なる実施形態は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含むマンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅに関し、前記変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフを含み、Ｘａは、Ｆであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸であり、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられているが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３１、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、そしてＡＥＸ６０７６２でないことを条件とする。更なる実施形態は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含むマンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅに関し、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフを含み、Ｘａは、Ｆであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸であり、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられているが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３１、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、ＡＥＸ６０７６２、ＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、ＰｔｕＭａｎ２、ＰｐａＭａｎ２、そしてＰｓｐＭａｎ９でないことを条件とする。
更なる実施形態において、マンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅは、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含み、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、位置２６３～２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）又はＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフを含み、Ｘ１は、Ｍであり；Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり；Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮであり、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられているが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、そしてＷＰ＿０４６２１４４６２でないことを条件とする。更なる実施形態において、マンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅは、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含み、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、位置２６３～２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）又はＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフを含み、Ｘ１は、Ｍであり；Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり；Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮであり、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられているが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０４６２１４４６２、そしてＰａｍＭａｎ２でないことを条件とする。更なる実施形態において、マンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅは、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含み、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、（ｉ）位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフ（式中、Ｘａは、Ｆであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）、及び（ｉｉ）位置２６３～２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）又はＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフ（式中、Ｘ１は、Ｍであり；Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり；Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）を含み、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられているが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、そしてＷＰ＿０１７６８８７４５でないことを条件とする。更なる実施形態において、マンナナーゼのＮＤＬ－Ｃｌａｄｅは、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含み、前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、（ｉ）位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフ（式中、Ｘａは、Ｆであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）、及び（ｉｉ）位置２６３～２７４にて、ＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）又はＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフ（式中、Ｘ１は、Ｍであり；Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり；Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）を含み、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられているが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、そしてＰａｍＭａｎ２でないことを条件とする。
別の実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関する。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％又は８５％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、ＷＰ＿０４６２２７９３１、ＷＰ＿０１７８１３１１１、ＡＥＸ６０７６２、そしてＷＰ＿０４６２１４４６２でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％又は８５％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、ＷＰ＿０４６２２７９３１、ＷＰ＿０１７８１３１１１、ＡＥＸ６０７６２、ＷＰ＿０４６２１４４６２、ＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、ＰｔｕＭａｎ２、ＰｐａＭａｎ２、そしてＰｓｐＭａｎ９でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％又は８５％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、ＷＰ＿０４６２２７９３１、ＷＰ＿０１７８１３１１１、ＡＥＸ６０７６２、ＷＰ＿０４６２１４４６２、そしてＥＰ２２６０１０５－０４１８でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８０％又は８５％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、ＷＰ＿０４６２２７９３１、ＷＰ＿０１７８１３１１１、ＡＥＸ６０７６２、ＷＰ＿０４６２１４４６２、ＥＰ２２６０１０５－０４１８、ＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、ＰｔｕＭａｎ２、ＰｐａＭａｎ２、そしてＰｓｐＭａｎ９でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８８％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、そしてＡＡＸ８７００３でないことを条件とする。別の実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８８％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、ＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、ＰｔｕＭａｎ２、ＰｐａＭａｎ２、そしてＰｓｐＭａｎ９でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８８％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、そしてＥＰ２２６０１０５－０４１８でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも８８％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＷＰ＿０５３７８２１２７、ＷＰ＿０２４６３３８４８、ＡＡＸ８７００３、ＥＰ２２６０１０５－０４１８、ＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、ＰｔｕＭａｎ２、ＰｐａＭａｎ２、そしてＰｓｐＭａｎ９でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも９２％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、そしてＷＰ＿０１７６８８７４５でないことを条件とする。更なる実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも９２％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関するが、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＡＣＵ３０８４３、ＥＴＴ３７５４９、ＷＰ＿０３６６０８４７８、ＷＰ＿０３６６７０７０７、ＷＰ＿０１７６８８７４５、ＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、そしてＰｔｕＭａｎ２でないことを条件とする。別の実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも９５％であるアミノ酸配列を含むマンナナーゼ変異体、又は組換えポリペプチド若しくは活性断片に関する。
一実施形態において、基準ポリペプチドは、ＧＨ５マンナナーゼである。別の実施形態において、基準ポリペプチドは、配列番号１４、配列番号３０、配列番号４３、配列番号４５、配列番号４４、配列番号１６０、及び配列番号１６２から選択される。別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体は、配列番号１４、配列番号３０、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号１６０、及び／又は配列番号１６２のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。
更なる実施形態において、配列番号１４は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体が由来する基準ポリペプチドである。別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体は、配列番号１４のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。更なる実施形態において、配列番号３０は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体が由来する基準ポリペプチドである。別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体は、配列番号３０のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。更なる実施形態において、配列番号４３は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体が由来する基準ポリペプチドである。別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体は、配列番号４３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。更なる実施形態において、配列番号４４は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体が由来する基準ポリペプチドである。さらに別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体は、配列番号４４のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。さらに別の実施形態において、配列番号４５は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体が由来する基準ポリペプチドである。別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体は、配列番号４５のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。さらに別の実施形態において、配列番号１６０又は１６２は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体が由来する基準ポリペプチドである。更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体は、配列番号１６０又は１６２のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％である。更なる実施形態において、マンナナーゼ変異体は、ＧＨ５マンナナーゼである。
一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、単離されている。他の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体は、エンド－β－マンナナーゼである。更なる実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、マンナナーゼ活性を有する。さらに他の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、界面活性剤の存在下でマンナナーゼ活性を有する。一部の実施形態において、マンナナーゼ活性は、マンナンガム、ローカストビーンガムガラクトマンナン、及び／又はコンニャクグルコマンナンに対する活性である。更なる実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、洗剤組成物中で洗浄活性を有する。さらに他の実施形態は、プロテアーゼの存在下でマンナナーゼ活性を有するマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関する。更なる実施形態は、グアーガム、ローカストビーンガム、及びそれらの組合せからなる群から選択される基質を加水分解するマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関する。一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、炭水化物結合モジュールを含まない。
一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、広い範囲のｐＨ条件にわたって酵素活性を有する。特定の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４．０～約１１．０のｐＨで酵素活性を有する。更なる実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４．０～約１１．０、約４．５～約９．０、約５．５～約８．５、又は約６．０～約７．５のｐＨにて、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％のマンナナーゼ活性を有する。
更なる実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約２０℃～約９０℃、約３０℃～約８０℃、約２０℃～約５０℃、又は約３０℃～約６６℃に及ぶ温度にて、マンナナーゼ活性を有する。特定の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約２０℃～約９０℃、約３０℃～約８０℃、約２０℃～約５０℃、又は約３０℃～約６６℃の温度範囲にて、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％のマンナナーゼ活性を有する。
更なる実施形態は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、４．５～９．０、５．５～８．５、又は６．０～７．５のｐＨ範囲にて、その最大マンナナーゼ活性を少なくとも７０％保持する。一部の実施形態は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に関し、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、３．０、３．５、４．０、若しくは４．５を超えるｐＨにて、又は９．０、９．５、若しくは１０．０未満のｐＨにて、その最大マンナナーゼ活性を少なくとも７０％保持する。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、洗浄性能の向上、及び年数を経た洗浄性能の向上から選択される。別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、洗浄性能の向上、及び年数を経た洗浄性能の向上から選択され、基準ポリペプチドは、配列番号１４、４３、４４、４５、及び１６０から選択される。さらに別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号１４と比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、洗浄性能の向上、及び年数を経た洗浄性能の向上から選択される。さらに別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号４３と比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、洗浄性能の向上、及び年数を経た洗浄性能の向上から選択される。更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号４４と比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、洗浄性能の向上、及び年数を経た洗浄性能の向上から選択される。更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号４５と比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、洗浄性能の向上、及び年数を経た洗浄性能の向上から選択される。別の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号１６０と比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、洗浄性能の向上、及び年数を経た洗浄性能の向上から選択される。
更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の前記向上は、（ｉ）洗剤中での安定性の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４０℃～約７０℃、約４５℃～約６５℃、約５０℃～約６０℃、約６０℃～約７０℃、又は約５６℃の温度にて、少なくとも５分間、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％の残留マンナナーゼ活性を保持する、向上；（ｉｉ）プロテアーゼの存在下での安定性の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、プロテアーゼ及び／又は界面活性剤の存在下で、少なくとも１５日間、又は約１５～約４０日間、マンナナーゼ活性を少なくとも５０％保持する、向上；（ｉｉｉ）洗浄性能の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ローカストビーンガムの染みの洗浄性能指数（「ＰＩ」）が＞１である、向上；並びにｉｖ）年数を経た洗浄性能の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、７時間後に洗浄活性が少なくとも１５％残留しており、又は９時間後に洗浄活性が少なくとも１１％残留している、向上から選択される。更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の前記向上は、洗剤中での安定性の向上であり、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４０℃～約７０℃、約４５℃～約６５℃、約５０℃～約６０℃、約６０℃～約７０℃、又は約５６℃の温度にて、少なくとも５分間、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％の残留マンナナーゼ活性を保持する。更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の前記向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上であり、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、プロテアーゼ及び／又は界面活性剤の存在下で、少なくとも１５日間、又は約１５～約４０日間、マンナナーゼ活性を少なくとも５０％保持する。更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の前記向上は、洗浄性能の向上であり、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ローカストビーンガムの染みの洗浄ＰＩが＞１である。更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており、特性の前記向上は、年数を経た洗浄性能の向上であり、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、７時間後に洗浄活性が少なくとも１５％残留しており、又は９時間後に洗浄活性が少なくとも１１％残留している。
一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４０～７０℃、約４５～６５℃、約５０～６０℃、約６０～７０℃、又は約６０℃の温度にて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％の残留マンナナーゼ活性を保持する。更なる実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４０～７０℃、約４５～７５℃、約４５～６５℃、約５０～６０℃、又は約６０～７０℃の温度範囲にて、その最大マンナナーゼ活性を少なくとも７０％保持する。他の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、若しくは４０℃を超える温度にて、又は６０℃、６５℃、７０℃、７５℃、若しくは８０℃未満の温度にて、その最大マンナナーゼ活性を少なくとも７０％保持する。更なる実施形態において、保持される最大マンナナーゼ活性の量は、５分間にわたって判定される。
他の特定の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ポリペプチドの構造及び／又は機能に実質的に影響を及ぼさない置換を含む。例示的な置換は、表Ｉに要約されるような保存的突然変異である。
Figure 0007364331000001
天然に存在するアミノ酸に関わる置換は、一般に、本明細書中に記載される組換えポリペプチドをコードする核酸を突然変異させることによってもたらされる。天然に存在しないアミノ酸に関わる置換又はアミノ酸への化学改変は、一般に、本明細書中に記載される組換えポリペプチドを化学的に改変することによってもたらされる。
一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号１３と実質的に同一であり、これは、変異体、又はそのポリペプチド若しくは活性断片の構造、機能、又は発現に大きな影響を及ぼさないアミノ酸の置換、挿入、又は欠失を含有し得ることを意味する。そのようなマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片として、本記載を回避するようにのみ設計されたものが挙げられる。
一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、１，４－β－Ｄ－マンノシドヒドロラーゼ活性を有し、これとして、マンナナーゼ、エンド－１，４－β－Ｄ－マンナナーゼ、エキソ－１，４－β－Ｄ－マンナナーゼガラクトマンナナーゼ、及び／又はグルコマンナナーゼの活性が挙げられる。１，４－β－Ｄ－マンノシドヒドロラーゼ活性は、本明細書中に記載されるアッセイを用いて、又は当該技術分野において知られている他のアッセイによって、判定且つ測定され得る。一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、洗剤組成物の存在下で、活性を有する。
一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、例えば、抽出、検出、及び／又は精製を補助し、且つ／あるいは機能的特性を変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に付加するための、Ｎ末端融合タンパク質及び／又はＣ末端融合タンパク質として産生される。融合タンパク質パートナーの例として、以下に限定されないが、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６ＸＨｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合ドメイン及び／又は転写活性化ドメイン）、ＦＬＡＧ、ＭＹＣ、ＢＣＥ１０３（国際公開第２０１０／０４４７８６号パンフレット）、又は当業者に周知の他のタグが挙げられる。一部の実施形態において、タンパク質分解切断部位は、融合タンパク質パートナーと注目するタンパク質配列との間に提供されて、融合タンパク質配列の除去が可能となる。好ましくは、融合タンパク質は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の活性を妨害しない。
一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、リーダーペプチド、プロペプチド、１つ若しくは複数の結合ドメイン（モジュール）、及び／又は触媒ドメインが挙げられる機能ドメインに融合される。適切な結合ドメインとして、以下に限定されないが、種々の特異性の炭水化物結合モジュール（ＣＢＭ）が挙げられ、これは、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の使用中に存在する炭水化物成分への親和性の増大を付与する。本明細書中に記載されるように、ＣＢＭと、本発明のポリペプチドの触媒ドメインとは、作動可能に結合される。
ＣＢＭは、炭水化物結合活性を有する折畳みが控え目な（ｄｉｓｃｒｅｅｔ）、炭水化物活性酵素内の連続アミノ酸配列と定義される。少数の例外として、タンパク質中のセルロソームスカフォールド内のＣＢＭ、及び独立した推定のＣＢＭの稀な例がある。より大きな酵素内にモジュールとして存在するＣＢＭの要件は、炭水化物結合タンパク質のこのクラスを、レクチン及び糖輸送タンパク質等の他の非触媒糖結合タンパク質から区別する。ＣＢＭは以前に、セルロースに結合するいくつかのモジュールの初期の発見に基づいて、セルロース結合ドメイン（ＣＢＤ）と分類された（Ｔｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ，１７０：５７５－５８１，１９８８；及びＧｉｌｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２６３：１０４０１－１０４０７，１９８８）。しかしながら、セルロース以外の炭水化物に結合するが、それを別にすればＣＢＭ基準を満たす、炭水化物活性酵素中の追加的なモジュールが引き続いて発見されている。それゆえに、より包括的な専門用語を用いてこれらのポリペプチドを分類し直す必要がある。セルロース結合ドメインの以前の分類は、アミノ酸類似性に基づいていた。ＣＢＤのグループ化が、「型」と呼ばれており、ローマ数字の番号が付けられる（例えばＩ型ＣＢＤ又はＩＩ型ＣＢＤ）。グリコシドヒドロラーゼ分類に合わせて、当該グループ化は現在、ファミリーと呼ばれており、アラビア数字の番号が付けられる。ファミリー１～１３は、Ｉ型からＸＩＩＩ型と同じである（Ｔｏｍｍｅ ｅｔ ａｌ．（Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（Ｓａｄｄｌｅｒ，Ｊ．Ｎ． ＆ Ｐｅｎｎｅｒ，Ｍ．，ｅｄｓ．），Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ：ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．ｐｐ．１４２－１６３，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，１９９５））。ＣＢＭの構造及び結合モードについての詳細なレビューが、Ｂｏｒａｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ，３８２：７６９－８１，２００４に見出され得る。ＣＢＭのファミリー分類は、ＣＢＭの同定を補助し、結合特異性を予測し、機能残基の同定を補助し、進化関係を明らかにし、且つポリペプチドの折畳みをおそらく予測できると予想される。タンパク質の折畳みは、その配列よりもよく保存されているので、ＣＢＭファミリーの一部は、スーパーファミリー又はクランにグループ化され得る。現在のＣＢＭファミリーは、１～６３である。ＣＢＤは、タンパク質のＮ末端及びＣ末端に見出され、又は内部にある。酵素ハイブリッドが、当該技術分野において知られており（例えば、国際公開第９０／００６０９号パンフレット及び国際公開第９５／１６７８２号パンフレット参照）、これは、本明細書において記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするＤＮＡ配列に、リンカーと共に、又はリンカー無しで、ライゲーションされたセルロース結合ドメインをコードするＤＮＡの少なくとも断片を含むＤＮＡ構築物を宿主細胞に形質転換して、当該宿主細胞を増殖させて融合遺伝子を発現させることによって、調製され得る。
酵素ハイブリッドは、以下の式によって記載され得：ＣＢＭ－ＭＲ－Ｘ又はＸ－ＭＲ－ＣＢＭ、式中、ＣＢＭは、少なくとも炭水化物結合モジュールに対応するアミノ酸配列のＮ末端領域又はＣ末端領域であり；ＭＲは、中間の領域（リンカー）であり、且つ約２～約１００個の炭素原子、約２～約４０の炭素原子、約２～約１００個のアミノ酸、又は約２～約４０個のアミノ酸の結合基であっても短い結合基であってもよく；そしてＸは、マンナナーゼ触媒活性を有する、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のＮ末端領域又はＣ末端領域である。加えて、マンナナーゼは、非解糖機能の複数のＣＢＭ又は他のモジュール／ドメインを含有してよい。用語「モジュール」及び「ドメイン」は、本開示において互換的に用いられる。
触媒ドメインの非限定的な更なる例として、以下が挙げられる：セルラーゼ；ヘミセルラーゼ、例えばキシラナーゼ；エキソ－マンナナーゼ；グルカナーゼ；アラビナーゼ；ガラクトシダーゼ；ペクチナーゼ；並びに／又は他の活性物質、例えばプロテアーゼ、リパーゼ、酸ホスファターゼ、及び／若しくはその他、あるいはそれらの機能断片。融合タンパク質は、場合によっては、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と融合ドメインとを、いずれの成分の特性にも大きな影響を及ぼすことなく単純に結合するリンカー配列により結合され、あるいはリンカーは、場合によっては、意図される用途にとっての機能的重要性を有する。
これ以外にも、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、注目する１つ又は複数の追加的なタンパク質と併用される。注目するタンパク質の非限定な例として、以下が挙げられる：アシルトランスフェラーゼ、アミラーゼ、アルファ－アミラーゼ、ベータ－アミラーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼ、アラビナーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、ベータ－グルカナーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド－ベータ－１，４－グルカナーゼ、エンド－ベータ－マンナナーゼ、エキソ－ベータ－マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ－マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、脂肪分解酵素、リポキシゲナーゼ、マンナナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、リダクターゼ、ラムノガラクツロナーゼ、ベータ－グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチルエステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、キシロシダーゼ、メタロプロテアーゼ、及び／又は他の酵素。
他の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、変異体、又はそのポリペプチド若しくは活性断片の細胞外分泌を導くシグナルペプチドに融合される。例えば、特定の実施形態において、シグナルペプチドは、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の固有のシグナルペプチドである。他の実施形態において、シグナルペプチドは、外来のシグナルペプチド、例えば枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡｐｒＥシグナルペプチドである。
一部の実施形態において、本発明のポリペプチドは、異種生物、すなわちパエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種以外の生物中で発現される。例示的な異種生物として、グラム（＋）細菌、例えば枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｂ．レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）、Ｂ．ブレビス（Ｂ．ｂｒｅｖｉｓ）、ゲオバチルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）（以前はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ））・ステアロサーモフィラス（ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ．アルカロフィラス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ．アミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、Ｂ．コアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、Ｂ．サーキュランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、Ｂ．ロータス（Ｂ．ｌａｕｔｕｓ）、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、Ｂ．チューリンゲンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）、Ｓ．リビダンス（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）、又はＳ．ミュリナス（Ｓ．ｍｕｒｉｎｕｓ）；グラム（－）細菌、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）；酵母、例えばサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属種又はシゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属種、例えば出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）；並びに糸状菌類、例えばアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属種、例えばニホンコウジカビ（Ａ．ｏｒｙｚａｅ）又はクロコウジカビ（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、及びＴ．リーゼイ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉ）がいる。核酸をこれらの生物に形質転換する方法は、当該技術分野において周知である。アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属宿主細胞の形質転換に適した手順が、ＥＰ２３８０２３号明細書に記載されている。
特定の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、異種生物中で分泌ポリペプチドとして発現され、この場合、組成物及び方法は、異種生物中に分泌されたポリペプチドとしての変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を発現する方法を包含する。
更なる実施形態は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を生産する方法であって：マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターで宿主細胞を安定して形質転換することと；形質転換された宿主細胞を、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を産生するのに適した条件下で培養することと；マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を回収することとを含む方法に関する。
さらに別の実施形態は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチドに関する。一態様において、ポリヌクレオチドは、異種生物、例えば本明細書中で同定される生物中に含有される発現ベクター内に含有される。ポリヌクレオチドは、本明細書中に記載されるコードされた変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の発現を補助する調節要素（例えば、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー等）に作動可能に結合されていてよい。一実施形態は、配列番号１及び配列番号９３～１３９から選択されるヌクレオチド配列を有する変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチド配列に関する。別の実施形態は、配列番号１、９６、１０７、１１４、１１７、１２２、１２５、１２６、１３０、及び１３１から選択されるヌクレオチド配列を有する変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチド配列に関する。
一部の実施形態は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチドに関する。更なる実施形態は、配列番号１に対する同一性が少なくとも５９％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％であるポリヌクレオチドに関する。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、異なる宿主中での発現のためにコドン最適化され、クローニング部位を導入するように突然変異され、又はそれ以外では官能性を付加するように変更されている。
一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチドは、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の細胞外分泌を導くシグナルペプチドのコーディング配列の下流に融合される。発現ベクターは、本明細書中に記載される変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を発現するのに適した、あるいは適切な宿主細胞中に導入する前に発現ベクターを増殖させるのに適した異種宿主細胞内に提供されてよい。
一部の実施形態において、変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチドは、指定されたハイブリダイゼーション条件下で、配列番号１のポリヌクレオチド又はその相補体にハイブリダイズする。例示的な条件は、本明細書中に記載されるストリンジェントな条件及び高度にストリンジェントな条件である。
本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするＤＮＡは、公開されている配列から化学的に合成され得、又は遺伝子を有する宿主細胞から直接（例えば、ｃＤＮＡライブラリース洗浄又はＰＣＲ増幅によって）得られ得る。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、発現カセット内に含まれ、且つ／又は標準的な分子クローニング技術によって適切な発現ベクター中にクローニングされる。そのような発現カセット又はベクターは、転写の開始、そして終結を補助する配列（例えば、プロモーター及びターミネーター）を含有し、且つ選択可能なマーカーを一般に含有する。
発現カセット又はベクターは、適切な発現宿主細胞中に導入されて、これが次に、本明細書中に記載される、対応するマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を発現する。特に適した発現宿主は、細菌属の発現宿主であり、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属（例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属（例えば、Ｐ．フルオレッセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）又はＰ．スタッツェレイ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｅｉ））、プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）属（例えばＰ．ミラビリス（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ））、ラルストニア（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ）属（例えばＲ．ユートロファ（Ｒ．ｅｕｔｒｏｐｈａ））、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属（例えばＳ．カルノサス（Ｓ．ｃａｒｎｏｓｕｓ））、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属（例えばＬ．ラクティス（Ｌ．ｌａｃｔｉｓ））、又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属（枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、巨大菌（ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、リケニフォルミス（ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）その他）が挙げられる。また、特に適しているのは、酵母発現宿主、例えば出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、分裂酵母（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）、Ｙ．リポリティカ（Ｙ．ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ）、Ｈ．ポリモルファ（Ｈ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）、Ｋ．ラクティス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）、又はＰ．パストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ）である。とりわけ適しているのは、真菌発現宿主、例えば、Ｃ．ラクノウェンス（Ｃ．ｌｕｃｋｎｏｗｅｎｓｅ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属（例えば、ニホンコウジカビ（Ａ．ｏｒｙｚａｅ）、クロコウジカビ（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、Ａ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）その他）又はＴ．リーゼイ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉ）である。また、適しているのは、哺乳類発現宿主、例えば、マウス（例えばＮＳ０）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、又はベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）の細胞株である。他の真核生物宿主、例えば、昆虫細胞又はウィルス発現システム（例えば、バクテリオファージ、例えば、Ｍ１３、Ｔ７ファージ若しくはラムダ、又はウィルス、例えばバキュロウイルス）もまた、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を生産するのに適している。
注目する特定の宿主中で分泌されるタンパク質と関連するプロモーター及び／又はシグナル配列は、当該宿主における、又は他の宿主におけるマンナナーゼの異種生産及び異種分泌に用いられる候補である。一例として、糸状菌系において、セロビオヒドラーゼＩ（ｃｂｈ１）、グルコアミラーゼＡ（ｇｌａＡ）、ＴＡＫＡ－アミラーゼ（ａｍｙＡ）、キシラナーゼ（ｅｘｌＡ）、ｇｐｄ－プロモーターｃｂｈ１、ｃｂｈｌｌ、エンドグルカナーゼ遺伝子ＥＧＩ－ＥＧＶ、Ｃｅｌ６１Ｂ、Ｃｅｌ７４Ａ、ｅｇｌ１－ｅｇｌ５、ｇｐｄプロモーター、Ｐｇｋ１、ｐｋｉ１、ＥＦ－１ａｌｐｈａ、ｔｅｆ１、ｃＤＮＡ１、及びｈｅｘ１の遺伝子を駆動するプロモーターが特に適しており、いくつかの異なる生物（例えば、クロコウジカビ（Ａ．ｎｉｇｅｒ）、Ｔ．リーゼイ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉ）、ニホンコウジカビ（Ａ．ｏｒｙｚａｅ）、Ａ．アワモリ（Ａ．ａｗａｍｏｒｉ）、及びＡ．ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ））に由来し得る。一部の実施形態において、ポリヌクレオチドは、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を、細胞外（又はペリプラズム）空間中に分泌する適切な相同シグナル配列又は非相同シグナル配列をコードするポリヌクレオチドを組換えにより伴うことによって、細胞上澄み（又はペリプラズム空間又は溶解液）における酵素活性の直接の検出を可能にする。当該技術分野において知られている大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、他のグラム陰性菌、及び他の生物に特に適したシグナル配列として、ＨｌｙＡ、ＤｓｂＡ、Ｐｂｐ、ＰｈｏＡ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡ、ＯｍｐＴ、又はＭ１３ファージＧｉｌｌ遺伝子の発現を駆動するものが挙げられる。当該技術分野において知られている枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、グラム陽性生物、及び他の生物に特に適したシグナル配列としてさらに、ＡｐｒＥ、ＮｐｒＢ、Ｍｐｒ、ＡｍｙＡ、ＡｍｙＥ、Ｂｌａｃ、ＳａｃＢの発現を駆動するものが、そして出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）又は他の酵母について、キラー毒素、Ｂａｒ１、Ｓｕｃ２、接合因子アルファ、Ｉｎｕ１Ａ、又はＧｇｐｌｐシグナル配列が挙げられる。シグナル配列は、いくつかのシグナルペプチダーゼによって切断されることで、残りの発現されたタンパク質から除去され得る。一部の実施形態において、残りのポリペプチドは、単独で、又は、Ｎ末端若しくはＣ末端に位置決めされる他のペプチド、タグ、若しくはタンパク質（例えば、６ＸＨｉｓ、ＨＡ、又はＦＬＡＧタグ）との融合体として、発現される。適切な融合体として、親和性精製又は検出を促進するタグ、ペプチド、又はタンパク質（例えば、ＢＣＥ１０３、６ＸＨｉｓ、ＨＡ、キチン結合タンパク質、チオレドキシン、又はＦＬＡＧタグ）、及び標的マンナナーゼの発現、分泌、又はプロセシングを促進するものが挙げられる。適切なプロセシング部位として、インビボ又はインビトロでの切断のための、エンテロキナーゼ、ＳＴＥ１３、Ｋｅｘ２、又は他のプロテアーゼ切断部位が挙げられる。
本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、いくつかの形質転換方法によって発現宿主細胞中に導入され得、当該方法として、以下に限定されないが、電気穿孔法、脂質支援形質転換又は形質移入（「リポフェクション」）、化学的に媒介される形質移入（例えば、ＣａＣｌ及び／又はＣａＰ）、酢酸リチウム媒介形質転換（例えば、宿主細胞プロトプラストの形質転換）、バイオリスティック「遺伝子ガン」形質転換、ＰＥＧ媒介形質転換（例えば、宿主細胞プロトプラストの形質転換）、プロトプラスト融合（例えば、細菌プロトプラスト又は真核生物プロトプラストを用いる）、リポソーム媒介形質転換、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）、アデノウイルス、又は他のウィルス若しくはファージの形質転換又は形質導入が挙げられる。
これ以外にも、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、細胞内に発現され得る。場合によっては、酵素変異体の細胞内発現、又は上記されるようなシグナル配列を用いたペリプラズム空間中への分泌の後に、上澄み中にポリペプチドを放出する浸透化（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｓａｔｉｏｎ）工程又は溶解工程が用いられてよい。膜バリアの崩壊が、機械的手段、例えば超音波、圧力処理（フレンチプレス）、キャビテーションの使用、又は膜消化酵素、例えばリゾチーム若しくは酵素混合物の使用によってもたらされる。更なる代替法として、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードするポリヌクレオチドは、適切な無細胞発現システムの使用によって発現され得る。無細胞システムにおいて、注目するポリヌクレオチドは典型的に、プロモーターにより転写されるが、環状の発現ベクターを形成するためのライゲーションは、任意選択である。他の実施形態において、無細胞システム内にＲＮＡが、転写されることなく外生的に加えられて、又は生じて、翻訳される。
別の実施形態は、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含む洗浄組成物、及びそのような組成物を洗浄用途に用いる方法に関する。洗浄用途として、以下に限定されないが、洗濯物又は織物の洗浄、洗濯物又は織物の柔軟仕上げ、食器洗い（手動及び自動）、及び染み前処理が挙げられる。特定の用途として、マンナン（例えば、ローカストビーンガム、グアーガムその他）が、除去されるべき汚れ又は染みの成分であるものがある。
洗浄組成物は典型的に、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の有効量を含み、有効量は例えば、少なくとも０．０００１重量パーセント、約０．０００１～約１重量パーセント、約０．００１～約０．５重量パーセント、約０．０１～約０．１重量パーセント、約０．１～約１重量パーセント、又はそれ以上である。マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の有効量が洗浄組成物中に存在する結果、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、マンナン含有基質、例えばローカストビーンガム、グアーガム、又はそれらの組合せを加水分解するのに十分な酵素活性を有する。
一部の実施形態は、粉末、液体、顆粒、バー、固体、半固体、ゲル、ペースト、エマルジョン、タブレット、カプセル、単位用量、シート、及び泡から選択される形態の洗浄組成物に関する。一部の実施形態において、洗浄組成物は、洗剤組成物である。他の実施形態において、洗浄組成物又は洗剤組成物は、洗濯洗剤、布地柔軟仕上げ洗剤、食器洗い洗剤、及び硬質表面洗浄洗剤から選択される。
特段の記載がない限り、本明細書で提供される全ての成分又は組成物のレベルは、その成分又は組成物の活性レベルを基準に調整され、市販の供給源に存在し得る不純物、例えば、残存溶媒又は副産物を含まない。酵素成分の重量は、総活性タンパク質に基づいている。全てのパーセンテージ及び比率は、特段の記載がない限り、重量で計算される。全てのパーセンテージ及び比率は、特段の記載がない限り、総組成物に基づいて計算される。例示的な洗剤組成物では、酵素のレベルは、総組成物の重量によって純粋酵素で表され、そして特段の記載がない限り、洗剤成分は、総組成物の重量によって表される。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、界面活性剤を含む。一部の実施形態において、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、半極性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、並びにそれらの組合せ及び混合物から選択される。更なる実施形態において、界面活性剤は、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤、及びそれらの組合せから選択される。一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物は、界面活性剤を、組成物の重量で約０．１％～約６０％、約１％～約５０％、又は約５％～約４０％含む。例示的な界面活性剤として、以下に限定されないが、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、Ｃ１２－１４パレス－７、Ｃ１２－１５パレス－７、Ｃ１２－１５パレス硫酸ナトリウム、Ｃ１４－１５パレス－４、ラウレス硫酸ナトリウム（例えばＳｔｅｏｌ ＣＳ－３７０）、水添ヤシ脂肪酸ナトリウム、Ｃ１２エトキシレート（Ａｌｆｏｎｉｃ １０１２－６、Ｈｅｔｏｘｏｌ ＬＡ７、Ｈｅｔｏｘｏｌ ＬＡ４）、アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム（例えばＮａｃｃｏｎｏｌ ９０Ｇ）、並びにそれらの組合せ及び混合物が挙げられる。陰イオン性界面活性剤として、以下に限定されないが、直鎖アルキルベンゼンスルホネート（ＬＡＳ）、アルファ－オレフィンスルホネート（ＡＯＳ）、硫酸アルキル（脂肪アルコールサルフェート）（ＡＳ）、アルコールエトキシサルフェート（ＡＥＯＳ又はＡＥＳ）、第二アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、アルファ－スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル若しくはアルケニルコハク酸、又は石鹸が挙げられる。非イオン性界面活性剤として、以下に限定されないが、アルコールエトキシレート（ＡＥＯ又はＡＥ）、カルボキシル化アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグルコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド（例えば、国際公開第９２／０６１５４号パンフレットに記載）、脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えばＴＷＥＥＮ）、ポリオキシエチレンアルコール、ポリオキシエチレンイソアルコール、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ＴＲＩＴＯＮ及びＢＲＩＪ）、ポリオキシエチレンエステル、ポリオキシエチレン－ｐ－ｔｅｒｔ－オクチルフェノール又はオクチルフェニル－エチレンオキシド縮合物（例えばＮＯＮＩＤＥＴ Ｐ４０）、脂肪族アルコールとのエチレンオキシド縮合物（例えばＬＵＢＲＯＬ）、ポリオキシエチレンノニルフェノール、ポリアルキレングリコール（ＳＹＮＰＥＲＯＮＩＣ Ｆ１０８）、糖型界面活性剤（例えば、グルコピラノシド、チオグルコピラノシド）、並びにそれらの組合せ及び混合物が挙げられる。
更なる実施形態において、本明細書中で開示される洗剤組成物はさらに、以下に限定されないが、５～１５％陰イオン性界面活性剤、＜５％非イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、ホスホネート、石鹸、酵素、香料、ブチルフェニルプロピオン酸メチル、ゲラニオール、ゼオライト、ポリカルボキシレート、ヘキシルシンナマル、リモネン、陽イオン性界面活性剤、シトロネロール、及びベンズイソチアゾリノンを含む界面活性剤混合物を含む。
本明細書中で記載される洗浄組成物は追加的に、１つ又は複数の洗剤ビルダー又はビルダー系、錯体形成剤、ポリマー、漂白系、安定化剤、泡ブースター、起泡抑制剤、腐食防止剤、汚れ懸濁化剤、再汚染防止剤、色素、殺菌剤、ヒドロトロープ、変色阻害剤、蛍光増白剤、布地コンディショナ、及び香料を含んでもよい。本明細書中に記載される洗浄組成物はまた、プロテアーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、リパーゼ、ペクチン分解酵素、キシログルカナーゼ、又は追加的なカルボン酸エステルヒドロラーゼから選択される追加的な酵素を含んでもよい。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、ビルダーを、洗浄組成物の重量で約１％～、約３％～約６０％、又は約５％～約４０％含む。ビルダーとして、以下に限定されないが、ポリホスフェートのアルカリ金属、アンモニウム塩、及びアルカノールアンモニウム塩、ケイ酸アルカリ金属、炭酸アルカリ土類金属及び炭酸アルカリ金属、アルミノシリケート、ポリカルボキシレート化合物、エーテルヒドロキシポリカルボキシレート、エチレン又はビニルメチルエーテルとの無水マレイン酸のコポリマー、１，３，５－トリヒドロキシベンゼン－２，４，６－トリスルホン酸及びカルボキシメチルオキシコハク酸、ポリ酢酸、例えばエチレンジアミン四酢酸及びニトリロ三酢酸の種々のアルカリ金属、アンモニウム塩、及び置換アンモニウム塩、並びにポリカルボキシレート、例えばメリト酸、コハク酸、クエン酸、オキシジコハク酸、ポリマレイン酸、ベンゼン１，３，５－トリカルボン酸、カルボキシメチルオキシコハク酸、及びそれらの可溶性の塩が挙げられる。
一部の実施形態において、ビルダーは、水溶性硬度イオン錯体（例えば、封鎖性ビルダー）、例えば、シトレート及びポリホスフェート（例えば、トリポリリン酸ナトリウム及びトリポリリン酸ナトリウム六水和物、トリポリリン酸カリウム、並びにトリポリリン酸ナトリウムとトリポリリン酸カリウムとの混合物）を形成する。当該技術分野において知られているものが挙げられるあらゆる適切なビルダーが、本明細書中に記載される組成物に用いられ得る（例えばＥＰ２１００９４９号明細書参照）。
本明細書中で示されるように、一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、補助剤成分を含み、補助剤成分として、以下に限定されないが、界面活性剤、ビルダー、漂白剤、漂白活性化剤、漂白触媒、他の酵素、酵素安定化系、キレート剤、蛍光増白剤、汚れ遊離ポリマー、色素転移剤、色素転移阻害剤、触媒物質、過酸化水素、過酸化水素のソース、予め形成された過酸、ポリマー分散剤、土汚れ除去剤、構造弾性化剤、分散剤、起泡抑制剤、色素、香料、着色剤、フィラー塩、ヒドロトロープ、光活性化剤、蛍光剤、布地コンディショナ、加水分解性界面活性剤、溶媒、腐食防止剤、抗酸化剤、抗収縮剤、しわ防止剤、殺菌剤、殺真菌剤、色ムラ防止剤（ｃｏｌｏｒ ｓｐｅｃｋｌｅ）、シルバーケア、抗変色剤及び／又は腐食防止剤、アルカリソース、可溶化剤、キャリア、加工助剤、色素、並びにｐＨ制御剤が挙げられる（例えば、米国特許第６６１０６４２号明細書；米国特許第６６０５４５８号明細書；米国特許第５７０５４６４号明細書；米国特許第５７１０１１５号明細書；米国特許第５６９８５０４号明細書；米国特許第５６９５６７９号明細書；米国特許第５６８６０１４号明細書；及び米国特許第５６４６１０１号明細書参照）。一部の実施形態において、１つ又は複数の補助剤は、例えば、洗浄されることになる基質の処理用に洗浄性能を補助若しくは強化するために、又は香料、着色剤、色素等の場合と同様に洗浄組成物の美観を改変するために、組み込まれる。そのようなあらゆる補助剤成分は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片とは別である。これらの追加的な成分の正確な性質、及びその組込みレベルは、組成物の物理的形態、及び組成物が用いられることになる洗浄操作の性質によって決まることとなる。
１つ又は複数の補助剤成分が、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と適合しない実施形態において、洗浄補助剤成分及びマンナナーゼを、２つの成分の組合せがふさわしくなるまで、分離させて（すなわち、互いと接触させずに）維持する適切な方法が使用されてよい。そのような分離方法として、当該技術分野において知られているあらゆる適切な方法（例えば、ジェルキャップ、カプセル化、タブレット、物理的分離その他）が挙げられる。適切な補助剤成分の具体的な選択は、洗浄されることになる表面、アイテム、又は布地、及び使用中（例えば、洗い用洗剤の使用中）の洗浄条件について組成物の所望される形態を考慮することによって、容易になされる。
本明細書中に記載される洗浄組成物は、例えば、洗濯用途、硬い表面の洗浄、食器洗い用途、及び美容用途に有利に使用される。さらに、本発明のポリペプチドは、顆粒状組成物及び液体組成物に用いられ得る。
本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はまた、添加製品の洗浄にも用いられ得る。一部の実施形態では、添加剤は、洗浄プロセスへの添加のために適した剤形にパッケージングされる。一部の実施形態では、添加剤は、過酸素（ｐｅｒｏｘｙｇｅｎ）の供給源が利用され、高い漂白効果が望まれる洗浄プロセスへの添加のために剤形にパッケージングされる。限定されるものではないが、ピル、タブレット、ジェルキャップ、又は他の単回用量単位、例えば、予備計量された粉末又は液体を含む、任意の適切な単回用量単位形態を本開示に使用することができる。一部の実施形態では、充填剤又は担体物質が、このような組成物の嵩を増すために含められる。適切な充填剤又は担体物質としては、限定されるものではないが、硫酸塩、炭酸塩、及びケイ酸塩の様々な塩、並びにタルク及び粘土などが挙げられる。液体組成物に適した適切な充填剤又は担体物質としては、限定されるものではないが、水、又はポリオール及びジオールを含む低分子量の第１級アルコール及び第２級アルコールが挙げられる。このようなアルコールの例としては、限定されるものではないが、メタノール、エタノール、プロパノール、及びイソプロパノールが挙げられる。一部の実施形態では、組成物は、約５％～約９０％のこのような材料を含む。酸性充填剤は、ｐＨを下げるために使用することができる。あるいは、一部の実施形態では、洗浄添加剤は、１つ又は複数の補助剤成分を含む。
一実施形態において、洗浄組成物又は洗浄添加物は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の有効量を、場合によっては他のマンナナーゼ及び／又は付加的な酵素と組み合わせて、含有する。特定の実施形態において、付加的な酵素として、以下に限定されないが、アシルトランスフェラーゼ、アミラーゼ、アルファ－アミラーゼ、ベータ－アミラーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼ、アラビナーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、ベータ－グルカナーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド－ベータ－１，４－グルカナーゼ、エンド－ベータ－マンナナーゼ、エキソ－ベータ－マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ－マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、脂肪分解酵素、リポキシゲナーゼ、マンナナーゼ、メタロプロテアーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、リダクターゼ、ラムノガラクツロナーゼ、ベータ－グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチルエステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、キシロシダーゼ、及びそれらの組合せから選択される少なくとも１つの酵素が挙げられる。更なる実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物又は洗浄添加物はさらに、プロテアーゼ及び／又はアミラーゼを含む。
本明細書の洗浄組成物は、典型的には、水性洗浄作業で使用中に、洗い水のｐＨが約３．０～約１１となるように調合される。液体製品調合物は、典型的には、約３．０～約９．０の正味のｐＨを有するように調合される。顆粒状洗濯用製品は、典型的には、約８．０～約１１．０のｐＨを有するように調合される。一部の実施形態では、中性ｐＨ条件は、洗浄組成物が２０℃の脱イオン水で１：１００（ｗｔ：ｗｔ）に溶解されたときに、従来のｐＨ計を用いて測定することができる。ｐＨを推奨される使用レベルに調整する技術は、緩衝液、アルカリ、酸などの使用を含み、当業者に周知である。
適切な低いｐＨの洗浄組成物は典型的に、正味のｐＨが約３．０～約５．０、又は約３．５～約４．５である。低ｐＨ洗浄組成物は典型的に、そのようなｐＨ環境において加水分解する界面活性剤がない。そのような界面活性剤として、少なくとも１つのエチレンオキシド部分、又は約１～約１６モルのエチレンオキシドを含むアルキル硫酸ナトリウム界面活性剤が挙げられる。そのような洗浄組成物は典型的に、正味のｐＨが約３．０～約５．０であるそのような洗浄組成物を提供するのに十分な量のｐＨ調整剤、例えば水酸化ナトリウム、モノエタノールアミン、又は塩酸を含む。そのような組成物は典型的に、少なくとも１つの酸安定酵素を含む。一部の実施形態において、組成物は液体である一方、他の実施形態では固体である。そのような液体組成物のｐＨは典型的に、正味のｐＨとして測定される。そのような固体組成物のｐＨは、溶媒が蒸留水である、組成物の１０％固体溶液として測定される。これらの実施形態において、全てのｐＨ測定値は、特に明記されない限り、２０℃にて測定される。
適切な高いｐＨの洗浄組成物は典型的に、正味のｐＨが約９．０～約１１．０であり、又は正味のｐＨが９．５～１０．５である。そのような洗浄組成物は典型的に、正味のｐＨが約９．０～約１１．０であるそのような洗浄組成物を提供するのに十分な量のｐＨ調整剤、例えば水酸化ナトリウム、モノエタノールアミン、又は塩酸を含む。そのような組成物は典型的に、少なくとも１つの塩基安定酵素を含む。一部の実施形態において、組成物は液体である一方、他の実施形態では固体である。そのような液体組成物のｐＨは典型的に、正味のｐＨとして測定される。そのような固体組成物のｐＨは、溶媒が蒸留水である、前記組成物の１０％固体溶液として測定される。これらの実施形態において、全てのｐＨ測定値は、特に明記されない限り、２０℃にて測定される。
一部の実施形態において、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、保存の間に顆粒状組成物の他の成分から保護するために、カプセル化粒子の形態である。加えて、カプセル化は、洗浄プロセスの間の、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の有効性を制御する手段でもある。一部の実施形態において、カプセル化は、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、及び／あるいは付加的な酵素の性能を高める。この点に関して、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、当該技術分野において知られているあらゆる適切なカプセル化材料で封入される。典型的には、カプセル化材料は、水溶性及び／又は水分散性である。一部の実施形態では、カプセル化材料は、０℃以上のガラス転移温度（Ｔｇ）を有する。ガラス転移温度は、国際公開第９７／１１１５１号パンフレットにさらに詳細に記載されている。カプセル化材料は、典型的には、炭水化物、天然又は合成ガム、キチン、キトサン、セルロース及びセルロース誘導体、ケイ酸塩、リン酸塩、ホウ酸塩、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、パラフィンワックス、及びこれらの組み合わせから選択される。カプセル化材料が炭水化物である場合は、カプセル化材料は、典型的には、単糖、オリゴ糖、多糖、及びこれらの組み合わせから選択される。一部の典型的な実施形態では、カプセル化材料はデンプンである（例えば、ＥＰ０９２２４９９号明細書；及び米国特許第４，９７７，２５２号明細書；同第５，３５４，５５９号明細書、及び同第５，９３５，８２６号明細書を参照されたい）。一部の実施形態では、カプセル化材料は、プラスチック、例えば、熱可塑性樹脂、アクリロニトリル、メタクリロニトリル、ポリアクリロニトリル、ポリメタクリロニトリル、及びこれらの混合物から形成されるミクロスフェア；限定されるものではないが、ＥＸＰＡＮＣＥＬ（登録商標）（Ｓｔｏｃｋｖｉｋｓｖｅｒｋｅｎ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって供給されるミクロスフェア、並びにＰＭ６５４５、ＰＭ６５５０、ＰＭ７２２０、ＰＭ７２２８、ＥＸＴＥＮＤＯＳＰＨＥＲＥＳ（登録商標）、ＬＵＸＳＩＬ（登録商標）、Ｑ－ＣＥＬ（登録商標）、及びＳＰＨＥＲＩＣＥＬ（登録商標）（ＰＱ Ｃｏｒｐ．，Ｖａｌｌｅｙ Ｆｏｒｇｅ，ＰＡ）を含む、使用できる市販のミクロスフェアである。
用語「顆粒状組成物」は、不連続な固体の、巨視的粒子の集塊を指す。粉末は、小さな粒子サイズに起因する特別なクラスの顆粒状物質である。これにより、より凝集性となり、且つより容易に懸濁される。
典型的な洗い液中の洗剤組成物の濃度は、世界中で、約８００ｐｐｍ未満の洗剤組成物（低洗剤濃度の地域）、例えば、日本での約６６７ｐｐｍから、約８００ｐｐｍ～約２０００ｐｐｍ（「中間洗剤濃度の地域」）、例えば、米国での約９７５ｐｐｍ、ブラジルの約１５００ｐｐｍ、そして約２０００ｐｐｍ超（「高洗剤濃度の地域」）、例えば、欧州での約４５００ｐｐｍ～約５０００ｐｐｍ及び高泡立ちリン酸塩ビルダーの地域での約６０００ｐｐｍまでである。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗剤組成物は、約１０℃～約６０℃、約２０℃～約６０℃、約３０℃～約６０℃、約４０℃～約６０℃、約４０℃～約５５℃、又は１０℃から６０℃の全ての範囲内の温度にて利用されてよい。一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗剤組成物は、約１０℃～約４０℃、約２０℃～約３０℃、約１５℃～約２５℃、約１５℃～約３５℃、又は１０℃から４０℃の全ての範囲内の温度での「冷水洗い」に用いられる。
更なる例として、異なる地域は、典型的には異なる水の硬度を有する。水の硬度は通常、１ガロン当たりのＣａ２＋／Ｍｇ２＋の合計グレーン数を単位として記載される。硬度は、水中のカルシウム（Ｃａ２＋）及びマグネシウム（Ｍｇ２＋）の量の尺度である。米国の殆どの水は硬水であるが、硬さの程度は様々である。中程度に硬い（６０～１２０ｐｐｍ）から硬い（１２１～１８１ｐｐｍ）水は、６０～１８１ｐｐｍの硬度の鉱物を有する（ｐｐｍからグレーン／米国ガロンへの換算では、ｐｐｍ数を１７．１で除した値がグレーン／ガロンに等しい）。
Figure 0007364331000002
欧州の水の硬度は、典型的には、１ガロン当たり約１０．５（例えば、約１０．５～約２０．０）の合計Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋グレーン（例えば、１ガロン当たり約１５の合計Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋グレーン）を超える。北米の水の硬度は、典型的には、日本の水の硬度よりも高いが、欧州の水の硬度よりも低い。例えば、北米の水の硬度は、約３～約１０グレーン、約３～約８グレーン、又は約６グレーンであり得る。日本の水の硬度は、典型的には北米の水の硬度よりも低く、通常は約４未満、例えば、約３合計Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋グレーン／ガロンである。
一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、洗い性能が、市販のマンナナーゼに匹敵する。一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、市販のマンナナーゼと比較して高い洗い性能を示す。一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、高い酸化安定性、高い熱安定性、種々の条件下での高い洗浄能力、及び／又は高いキレーター安定性を示す。加えて、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、洗剤を含まない洗浄組成物に、ここでも単独で、又はビルダー及び安定化剤と組み合わされて、用いられてよい。
本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片に加えて、あらゆる他の適切なマンナナーゼが、本明細書中に記載される組成物に単独で、あるいは本明細書中に記載される変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と組み合わされて、用いられてよい。適切なマンナナーゼとして、以下に限定されないが、グリコシルヒドロラーゼのＧＨ２６ファミリーのマンナナーゼ、グリコシルヒドロラーゼのＧＨ５ファミリーのマンナナーゼ、酸性マンナナーゼ、中性マンナナーゼ、及びアルカリ性マンナナーゼが挙げられる。アルカリ性マンナナーゼの例として、米国特許第６０６０２９９号明細書；米国特許第６５６６１１４号明細書；及び米国特許第６６０２８４２号明細書；並びに国際公開第９５３５３６２号パンフレット、国際公開第９９６４５７３号パンフレット、国際公開第９９６４６１９号パンフレット、及び国際公開第２０１５０２２４２８号パンフレットに記載されるものが挙げられる。加えて、適切なマンナナーゼとして、以下に限定されないが、動物、植物、真菌、又は細菌起源のものが挙げられる。化学的に、又は遺伝的に改変された突然変異体が、本開示によって包含される。
有用なマンナナーゼの例として、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属エンド－β－マンナナーゼ、例えば枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６０６０２９９号明細書及び国際公開第９９６４５７３号パンフレット参照）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種Ｉ６３３エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９号パンフレット参照）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種ＡＡＩ１２エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９号パンフレット参照）、バチルス（Ｂ．）属種ＡＡ３４９エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９号パンフレット参照）、Ｂ．アガラドヘレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）ＮＣＩＭＢ ４０４８２エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９号パンフレット参照）、Ｂ．ハロデュランス（Ｂ．ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ）エンド－β－マンナナーゼ、Ｂ．クラウジィ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９号パンフレット参照）、Ｂ．リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９Ａ１号パンフレット参照）、フミコーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属エンド－β－マンナナーゼ、例えばＨ．インソレンス（Ｈ．ｉｎｓｏｌｅｎｓ）エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９号パンフレット参照）、及びカルドセルロシルプトル（Ｃａｌｄｏｃｅｌｌｕｌｏｓｉｒｕｐｔｏｒ）属エンド－β－マンナナーゼ、例えばカルドセルロシルプトル属種エンド－β－マンナナーゼ（例えば、米国特許第６５６６１１４号明細書及び国際公開第９９６４６１９号パンフレット参照）が挙げられる。
さらに、いくつかの同定されているマンナナーゼ（すなわち、エンド－β－マンナナーゼ及びエキソ－β－マンナナーゼ）が、本開示の一部の実施形態に用いられ、これらとして、以下に限定されないが、マッシュルーム（Ａ．ｂｉｓｐｏｒｕｓ）マンナナーゼ（Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，［２００１］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６７：２２９８－２３０３参照）、Ａ．タマリィ（Ａ．ｔａｍａｒｉｉ）マンナナーゼ（Ｃｉｖａｓ ｅｔ ａｌ．，［１９８４］Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２１９：８５７－８６３参照）、Ａ．アクレアツス（Ａ．ａｃｕｌｅａｔｕｓ）マンナナーゼ（Ｃｈｒｉｓｔｇａｕ ｅｔ ａｌ．，［１９９４］Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｉｎｔ．３３：９１７－９２５参照）、Ａ．アワモリ（Ａ．ａｗａｍｏｒｉ）マンナナーゼ（Ｓｅｔａｔｉ ｅｔ ａｌ．，［２００１］Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｐｕｒｉｆ．２１：１０５－１１４参照）、Ａ．フミガーツス（Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）マンナナーゼ（Ｐｕｃｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．，［２００４］Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ．１６７４：２３９－２５０参照）、クロコウジカビ（Ａ．ｎｉｇｅｒ）マンナナーゼ（Ａｄｅｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，［１９９８］Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６３：１９９－２１０参照）、ニホンコウジカビ（Ａ．ｏｒｙｚａｅ）ＮＲＲＬマンナナーゼ（Ｒｅｇａｌａｄｏ ｅｔ ａｌ．，［２０００］Ｊ．Ｓｃｉ．Ｆｏｏｄ Ａｇｒｉｃ．８０：１３４３－１３５０参照）、Ａ．スルフレウス（Ａ．ｓｕｌｐｈｕｒｅｕｓ）マンナナーゼ（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，［２００７］Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２８（３）：４５２－４６１参照）、Ａ．テルス（Ａ．ｔｅｒｒｕｓ）マンナナーゼ（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，［２００７］Ｗｅｉ Ｓｈｅｎｇ Ｗｕ Ｘｕｅ Ｂａｏ．４７（２）：２８０－２８４参照）、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種及びバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種マンナナーゼ（米国特許第６３７６４４５号明細書参照）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属ＡＭ００１マンナナーゼ（Ａｋｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，［１９８９］Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５２：１０－１５参照）、Ｂ．ブレビス（Ｂ．ｂｒｅｖｉｓ）マンナナーゼ（Ａｒａｕｊｏ ａｎｄ Ｗａｒｄ，［１９９０］Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．６８：２５３－２６１参照）、Ｂ．サーキュランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）Ｋ－１マンナナーゼ（Ｙｏｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．，［１９９８］Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２（３）：５１４－５２０参照）、Ｂ．ポリミキサ（Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａ）マンナナーゼ（Ａｒａｕｊｏ ａｎｄ Ｗａｒｄ，［１９９０］Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．６８：２５３－２６１参照）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種ＪＡＭＢ－７５０マンナナーゼ（Ｈａｔａｄａ ｅｔ ａｌ．，［２００５］Ｅｘｔｒｅｍｏｐｈｉｌｅｓ．９：４９７－５００参照）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種Ｍ５０マンナナーゼ（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，［２０００］Ｗｅｉ Ｓｈｅｎｇ Ｗｕ Ｘｕｅ Ｂａｏ．４０：６２－６８参照）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種Ｎ１６－５マンナナーゼ（Ｙａｎｈｅ ｅｔ ａｌ．，［２００４］Ｅｘｔｒｅｍｏｐｈｉｌｅｓ ８：４４７－４５４参照）、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）マンナナーゼ（Ｔａｌｂｏｔ ａｎｄ Ｓｙｇｕｓｃｈ，［１９９０］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５６：３５０５－３５１０参照）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）マンナナーゼ（Ｍｅｎｄｏｚａ ｅｔ ａｌ．，［１９９４］Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：５１－５４参照）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｂ３６マンナナーゼ（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，［２００６］Ｚ．Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ（Ｃ）．６１：８４０－８４６）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＭ９６０２マンナナーゼ（Ｃｕｉ ｅｔ ａｌ．，［１９９９］Ｗｅｉ Ｓｈｅｎｇ Ｗｕ Ｘｕｅ Ｂａｏ．３９（１）：６０－６３参照）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＳＡ－２２マンナナーゼ（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，［２００３］Ｓｈｅｎｇ Ｗｕ Ｇｏｎｇ Ｃｈｅｎｇ Ｘｕｅ Ｂａｏ．１９（３）：３２７－３３０参照）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）１６８マンナナーゼ（Ｈｅｌｏｗ ａｎｄ Ｋｈａｔｔａｂ，［１９９６］Ａｃｔａ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｈｕｎｇ．４３：２８９－２９９参照）、Ｂ．オバツス（Ｂ．ｏｖａｔｕｓ）マンナナーゼ（Ｇｈｅｒａｒｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，［１９８７］Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９：２０３８－２０４３参照）、Ｂ．ルミニコラ（Ｂ．ｒｕｍｉｎｉｃｏｌａ）マンナナーゼ（Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，［１９９１］Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１７３：６９１９－６９２６参照）、Ｃ．セルロボランス（Ｃ．ｃｅｌｌｕｌｏｖｏｒａｎｓ）マンナナーゼ（Ｓｕｎｎａ ｅｔ ａｌ．，［２０００］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６６：６６４－６７０参照）、Ｃ．サッカロリティカス（Ｃ．ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｓ）マンナナーゼ（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，［１９９５］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６１：２２６２－２２６９参照）、Ｃ．サッカロリチカム（Ｃ．ｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｍ）マンナナーゼ（Ｂｉｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，［１９９１］Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３６：３３７－３４３参照）、Ｃ．フィミ（Ｃ．ｆｉｍｉ）マンナナーゼ（Ｓｔｏｌｌ ｅｔ ａｌ．，［１９９９］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６５（６）：２５９８－２６０５参照）、Ｃ．ブチリカム／ベイジェリンキィ（Ｃ．ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ／ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋｉｉ）マンナナーゼ（Ｎａｋａｊｉｍａ ａｎｄ Ｍａｔｓｕｕｒａ，［１９９７］Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：１７３９－１７４２参照）、Ｃ．セルロリティカム（Ｃ．ｃｅｌｌｕｌｏｌｙｔｉｃｕｍ）マンナナーゼ（Ｐｅｒｒｅｔ ｅｔ ａｌ．，［２００４］Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４０：２５５－２５９参照）、Ｃ．テルティウム（Ｃ．ｔｅｒｔｉｕｍ）マンナナーゼ（Ｋａｔａｏｋａ ａｎｄ Ｔｏｋｉｗａ，［１９９８］Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８４：３５７－３６７参照）、Ｃ．サーモセラム（Ｃ．ｔｈｅｒｍｏｃｅｌｌｕｍ）マンナナーゼ（Ｈａｌｓｔｅａｄ ｅｔ ａｌ．，［１９９９］Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１４５：３１０１－３１０８参照）、Ｄ．サーモフィルム（Ｄ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）マンナナーゼ（Ｇｉｂｂｓ ｅｔ ａｌ．，［１９９９］Ｃｕｒｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３９（６）：３５１－３５７参照）、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属種マンナナーゼ（Ｚａｋａｒｉａ ｅｔ ａｌ．，［１９９８］Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：６５５－６６０参照）、Ｇ．プルモナタ（Ｇ．ｐｕｌｍｏｎａｔａ）マンナナーゼ（Ｃｈａｒｒｉｅｒ ａｎｄ Ｒｏｕｌａｎｄ，［２００１］Ｊ．Ｅｘｐｔ．Ｚｏｏｌ．２９０：１２５－１３５参照）、タマキビ（Ｌ．ｂｒｅｖｉｃｕｌａ）マンナナーゼ（Ｙａｍａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，［１９９６］Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６０：６７４－６７６参照）、トマト（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）マンナナーゼ（Ｆｉｌｉｃｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，［２０００］Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１３４：１０８０－１０８７参照）、Ｐ．カードラノリティカス（Ｐ．ｃｕｒｄｌａｎｏｌｙｔｉｃｕｓ）マンナナーゼ（Ｐａｓｏｎ ａｎｄ Ｒａｔａｎａｋｈａｎｏｋｃｈａｉ，［２００６］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．７２：２４８３－２４９０参照）、Ｐ．ポリミキサ（Ｐ．ｐｏｌｙｍｙｘａ）マンナナーゼ（Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．，［２００６］Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７３（３）：６１８－６３０参照）、Ｐ．クリソスポリウム（Ｐ．ｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）マンナナーゼ（Ｗｙｍｅｌｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，［２００５］Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１８：１７－３４参照）、ピロミセス（Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓ）属種マンナナーゼ（Ｆａｎｕｔｔｉ ｅｔ ａｌ．，［１９９５］Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０（４９）：２９３１４－２９３２２参照）、Ｐ．インスラルス（Ｐ．ｉｎｓｕｌａｒｓ）マンナナーゼ（Ｙａｍａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，［１９９３］Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．７：１３１６－１３１９参照）、Ｐ．フルオレッセンス亜種セルローサ（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｅｌｌｕｌｏｓａ）マンナナーゼ（Ｂｒａｉｔｈｗａｉｔｅ ｅｔ ａｌ．，［１９９５］Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０５：１００５－１０１０参照）、Ｒ．マリヌス（Ｒ．ｍａｒｉｎｕｓ）マンナナーゼ（Ｐｏｌｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，［２０００］Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５３（６）：７１５－７２１参照）、Ｓ．ロルフシィ（Ｓ．ｒｏｌｆｓｉｉ）マンナナーゼ（Ｓａｃｈｓｌｅｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，［２０００］Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８０：１２７－１３４参照）、Ｓ．ガルバス（Ｓ．ｇａｌｂｕｓ）マンナナーゼ（Ｋａｎｓｏｈ ａｎｄ Ｎａｇｉｅｂ，［２００４］Ａｎｔｏｎ．ｖａｎ．Ｌｅｅｕｗｅｎｈｏｅｋ．８５：１０３－１１４参照）、Ｓ．リビダンス（ｌｉｖｉｄａｎｓ）マンナナーゼ（Ａｒｃａｎｄ ｅｔ ａｌ．，［１９９３］Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９０：８５７－８６３参照）、Ｔ．ポリサッカロリティカム（Ｔ．Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｏｌｙｔｉｃｕｍ）マンナナーゼ（Ｃａｎｎ ｅｔ ａｌ．，［１９９９］Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８１：１６４３－１６５１参照）、Ｔ．フスカ（Ｔ．ｆｕｓｃａ）マンナナーゼ（Ｈｉｌｇｅ ｅｔ ａｌ．，［１９９８］Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ６：１４３３－１４４４参照）、Ｔ．マリティマ（Ｔ．ｍａｒｉｔｉｍａ）マンナナーゼ（Ｐａｒｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，［２００１］Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．７５（３）：３２２－３３３参照）、Ｔ．ネアポリタナ（Ｔ．ｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ）マンナナーゼ（Ｄｕｆｆａｕｄ ｅｔ ａｌ．，［１９９７］Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６３：１６９－１７７参照）、Ｔ．ハルジアナム（Ｔ．ｈａｒｚｉａｎｕｍ）株Ｔ４マンナナーゼ（Ｆｒａｎｃｏ ｅｔ ａｌ．，［２００４］Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４０：２５５－２５９参照）、Ｔ．リーゼイ（Ｔ．ｒｅｅｓｅｉ）マンナナーゼ（Ｓｔａｌｂｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．，［１９９３］Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９：２２９－２４２参照）、並びにビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）属種マンナナーゼ（Ｔａｍａｒｕ ｅｔ ａｌ．，［１９９７］Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．８３：２０１－２０５参照）が挙げられる。
適切な付加的マンナナーゼとして、市販のエンド－β－マンナナーゼ、例えばＨＥＭＩＣＥＬＬ（登録商標）（Ｃｈｅｍｇｅｎ）；ＧＡＭＡＮＡＳＥ（登録商標）及びＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ、Ｄｅｎｍａｒｋ）；ＥＦＦＥＣＴＥＮＺ（商標）Ｍ １０００、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（登録商標）Ｍ １００、ＰＵＲＡＢＲＩＴＥ（商標）、及びＭＡＮＮＡＳＴＡＲ（登録）（ＤｕＰｏｎｔ）；並びにＰＹＲＯＬＡＳＥ（登録商標）１６０及びＰＹＲＯＬＡＳＥ（登録商標）２００（Ｄｉｖｅｒｓａ）が挙げられる。
他の実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、及び１つ又は複数の付加的酵素を含む。１つ又は複数の付加的酵素は、アシルトランスフェラーゼ、アルファ－アミラーゼ、ベータ－アミラーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド－ベータ－１，４－グルカナーゼ、エンド－ベータ－マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ－マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、リポキシゲナーゼ、付加的マンナナーゼ、メタロプロテアーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、リダクターゼ、ラムノガラクツロナーゼ、ベータ－グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチルエステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、キシロシダーゼ、及びそれらのあらゆる組合せ又は混合物から選択される。一部の実施形態は、アミラーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、プロテアーゼ、及び／又はセルラーゼのような従来の酵素を、本明細書中に記載される１つ若しくは複数のマンナナーゼ変異体及び／又は１つ若しくは複数の付加的マンナナーゼと併せて含む酵素の組合せ（すなわち「カクテル」）に関する。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、プロテアーゼを含む。一部の実施形態において、組成物は、プロテアーゼを、組成物の重量で約０．００００１％～約１０％含む。別の実施形態において、洗浄組成物は、プロテアーゼを、組成物の重量で約０．０００１％～約１０％、約０．００１％～約５％、約０．００１％～約２％、又は約０．００５％～約０．５％含む。
一実施形態において、プロテアーゼはセリンプロテアーゼである。適切なプロテアーゼとして、動物、植物、又は微生物起源のものが挙げられる。一部の実施形態において、プロテアーゼは、微生物プロテアーゼである。他の実施形態において、プロテアーゼは、化学的に、又は遺伝的に改変された突然変異体である。別の実施形態において、プロテアーゼは、アルカリ微生物プロテアーゼ又はトリプシン様プロテアーゼである。例示的なアルカリプロテアーゼとして、例えば、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に由来するサブチリシン（例えば、サブチリシン、レンタス（ｌｅｎｔｕｓ）、アミロリケファシエンス（ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、サブチリシンＣａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７、及びサブチリシン１６８）が挙げられる。例示的な付加的プロテアーゼとして、以下に限定されないが、国際公開第９２／２１７６０号パンフレット、国際公開第９５／２３２２１号パンフレット、国際公開第２００８／０１０９２５号パンフレット、国際公開第０９／１４９２００号パンフレット、国際公開第０９／１４９１４４号パンフレット、国際公開第０９／１４９１４５号パンフレット、国際公開第 １０／０５６６４０号パンフレット、国際公開第１０／０５６６５３号パンフレット、国際公開第２０１０／０５６６３５６号パンフレット、国際公開第１１／０７２０９９号パンフレット、国際公開第２０１１／１３０２２号パンフレット、国際公開第１１／１４０３６４号パンフレット、国際公開第１２／１５１５３４号パンフレット、国際公開第２０１５／０３８７９２号パンフレット、国際公開第２０１５／０８９４４７号パンフレット、国際公開第２０１５／０８９４４１号パンフレット、国際公開第２０１５／１４３３６０号パンフレット、国際公開第２０１６／０６１４３８号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５４８号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５４４号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５５７号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５６３号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５６９号パンフレット、国際公開第２０１６／０６９５５２号パンフレット、国際公開第２０１６／１４５４２８号パンフレット、米国特許出願公開第２００８／００９０７４７号明細書、米国特許第５８０１０３９号明細書、米国特許第５３４０７３５号明細書、米国特許第５５００３６４号明細書、米国特許第５８５５６２５号明細書、ＲＥ３４６０６号明細書、米国特許第５９５５３４０号明細書、米国特許第５７００６７６号明細書、米国特許第６３１２９３６号明細書、米国特許第６４８２６２８号明細書、米国特許第８５３０２１９号明細書、米国仮特許出願第６２／３３１２８２号明細書、米国仮特許出願第６２／３３２４１７号明細書、米国仮特許出願第６２／３４３６１８号明細書、及び米国仮特許出願第６２／３５１６４９号明細書、並びにＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ１６／３２５１４号明細書及びＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０３８２４５号明細書に記載されるもの、並びに国際公開第１９９９０１４３４１号パンフレット、国際公開第１９９９０３３９６０号パンフレット、国際公開第１９９９０１４３４２号パンフレット、国際公開第１９９９０３４００３号パンフレット、国際公開第２００７０４４９９３号パンフレット、国際公開第２００９０５８３０３号パンフレット、国際公開第２００９０５８６６１号パンフレット、国際公開第２０１４０７１４１０号パンフレット、国際公開第２０１４１９４０３２号パンフレット、国際公開第２０１４１９４０３４号パンフレット、国際公開第２０１４１９４０５４号パンフレット、及び国際公開第２０１４／１９４１１７号パンフレットに記載されるメタロプロテアーゼが挙げられる。例示的なプロテアーゼとして、以下に限定されないが、トリプシン（例えば、ブタ又はウシ起源のもの）、及び国際公開第８９／０６２７０号パンフレットに記載されるフザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属プロテアーゼが挙げられる。例示的な市販のプロテアーゼとして、以下に限定されないが、ＭＡＸＡＴＡＳＥ（登録商標）、ＭＡＸＡＣＡＬ（商標）、ＭＡＸＡＰＥＭ（商標）、ＯＰＴＩＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＯＸＰ、ＰＵＲＡＭＡＸ（商標）、ＥＸＣＥＬＬＡＳＥ（商標）、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１００、Ｐ１１０、Ｐ２８０）、ＥＦＦＥＣＴＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１０００、Ｐ１０５０、Ｐ２０００）、ＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えばＰ１０００）、ＵＬＴＩＭＡＳＥ（登録商標）及びＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ）；ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＢＬＡＺＥ（登録商標）、ＢＬＡＺＥ（登録商標）ＥＶＩＴＹ（登録商標）、ＢＬＡＺＥ（登録商標）ＥＶＩＴＹ（登録商標）１６Ｌ、ＣＯＲＯＮＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）ＥＶＩＴＹ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）ＥＶＥＲＩＳ（登録商標）、ＰＲＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＺＹＭ（商標）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ ＥＶＥＲＩＳ（登録商標）、ＮＥＵＴＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＯＧＲＥＳＳ ＵＮＯ（登録商標）、ＲＥＬＡＳＥ（登録商標）及びＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ＢＬＡＰ（商標）及びＢＬＡＰ（商標）変異体（Ｈｅｎｋｅｌ）；ＬＡＶＥＲＧＹ（商標）ＰＲＯ １０４Ｌ（ＢＡＳＦ）、並びにＫＡＰ（Ｂ．アルカロフィラス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）サブチリシン（花王株式会社））が挙げられる。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、適切なアミラーゼを含む。一実施形態において、組成物は、アミラーゼを、組成物の重量で約０．００００１％～約１０％、約０．０００１％～約１０％、約０．００１％～約５％、約０．００１％～約２％、又は約０．００５％～約０．５％含む。アルカリ溶液での使用に適したあらゆるアミラーゼ（例えば、アルファ及び／又はベータ）が、そのような組成物に含めるのに有用であり得る。例示的なアミラーゼは、化学的に、又は遺伝的に改変された突然変異体であってよい。例示的なアミラーゼとしては、限定されるものではないが、細菌又は真菌由来のアミラーゼが挙げられ、例えば、英国特許第１，２９６，８３９号明細書、国際公開第９１００３５３号パンフレット、同第９４０２５９７号パンフレット、同第９４１８３３１４号パンフレット、同第９５１０６０３号パンフレット、同第９５２６３９７号パンフレット、同第９５３５３８２号パンフレット、同第９６０５２９５号パンフレット、同第９６２３８７３号パンフレット、同第９６２３８７４号パンフレット、同第９６３０４８１号パンフレット、同第９７１０３４２号パンフレット、同第９７４１２１３号パンフレット、同第９７４３４２４号パンフレット、同第９８１３４８１号パンフレット、同第９８２６０７８号パンフレット、同第９９０２７０２号パンフレット、同第９９０９１８３号パンフレット、同第９９１９４６７号パンフレット、同第９９２３２１１号パンフレット、同第９９２９８７６号パンフレット、同第９９４２５６７号パンフレット、同第９９４３７９３号パンフレット、同第９９４３７９４号パンフレット、同第９９４６３９９号パンフレット、同第００２９５６０号パンフレット、同第００６００５８号パンフレット、同第００６００５９号パンフレット、同第００６００６０号パンフレット、同第０１１４５３２号パンフレット、同第０１３４７８４号パンフレット、同第０１６４８５２号パンフレット、同第０１６６７１２号パンフレット、同第０１８８１０７号パンフレット、同第０１９６５３７号パンフレット、同第０２０９２７９７号パンフレット、同第０２１０３５５号パンフレット、同第０２３１１２４号パンフレット、同第２００４０５５１７８号パンフレット、同第２００４１１３５５１号パンフレット、同第２００５００１０６４号パンフレット、同第２００５００３３１１号パンフレット、同第２００５０１８３３６号パンフレット、同第２００５０１９４４３号パンフレット、同第２００５０６６３３８号パンフレット、同第２００６００２６４３号パンフレット、同第２００６０１２８９９号パンフレット、同第２００６０１２９０２号パンフレット、同第２００６０３１５５４号パンフレット、同第２００６０６３５９４号パンフレット、同第２００６０６６５９４号パンフレット、同第２００６０６６５９６号パンフレット、同第２００６１３６１６１号パンフレット、同第２００８０００８２５号パンフレット、同第２００８０８８４９３号パンフレット、同第２００８０９２９１９号パンフレット、同第２００８１０１８９４号パンフレット、同第２００８／１１２４５９号パンフレット、同第２００９０６１３８０号パンフレット、同第２００９０６１３８１号パンフレット、同第２００９１００１０２号パンフレット、同第２００９１４０５０４号パンフレット、同第２００９１４９４１９号パンフレット、同第２０１０／０５９４１３号パンフレット、同第２０１００８８４４７号パンフレット、同第２０１００９１２２１号パンフレット、同第２０１０１０４６７５号パンフレット、同第２０１０１１５０２１号パンフレット、同第１０１１５０２８号パンフレット、同第２０１０１１７５１１号パンフレット、同第２０１１０７６１２３号パンフレット、同第２０１１０７６８９７号パンフレット、同第２０１１０８０３５２号パンフレット、同第２０１１０８０３５３号パンフレット、同第２０１１０８０３５４号パンフレット、同第２０１１０８２４２５号パンフレット、同第２０１１０８２４２９号パンフレット、同第２０１１０８７８３６号パンフレット、同第２０１１０９８５３１号パンフレット、同第２０１３０６３４６０号パンフレット、同第２０１３１８４５７７号パンフレット、同第２０１４０９９５２３号パンフレット、同第２０１４１６４７７７号パンフレット、及び同第２０１５０７７１２６号パンフレットに記載されているアミラーゼが挙げられる。例示的な市販のアミラーゼとしては、限定されるものではないが、ＡＭＰＬＩＦＹ（登録商標）、ＡＭＰＬＩＦＹ ＰＲＩＭＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＵＬＴＲＡ（登録商標）ＥＶＩＴＹ（登録商標）、及びＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、ＥＦＦＥＣＴＥＮＺ（商標）Ｓ１０００、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（商標）、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）Ｓ１００、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）Ｓ１１０、ＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）Ｓ２０００、ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、及びＭＡＸＡＭＹＬ（登録商標）Ｐ（ＤｕＰｏｎｔ）が挙げられる。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、適切なペクチン分解酵素を含む。本明細書中で用いられる「ペクチン分解酵素」は、アラビナナーゼ（ＥＣ ３．２．１．９９）、ガラクタナーゼ（ＥＣ ３．２．１．８９）、ポリガラクツロナーゼ（ＥＣ ３．２．１．１５）、エキソ－ポリガラクツロナーゼ（ＥＣ ３．２．１．６７）、エキソ－ポリ－アルファ－ガラクツロノシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．８２）、ペクチンリアーゼ（ＥＣ ４．２．２．１０）、ペクチンエステラーゼ（ＥＣ ３．１．１．１１）、ペクチン酸リアーゼ（ＥＣ ４．２．２．２）、エキソ－ポリガラクツロ酸リアーゼ（ＥＣ ４．２．２．９）、及びヘミセルラーゼ、例えばエンド－１，３－β－キシロシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．３２）、キシラン－１，４－β－キシロシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．３７）、及びα－Ｌ－アラビノフラノシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．５５）を包含する。ペクチン分解酵素は、上述の酵素活性物質の天然の混合物である。したがって、ペクチン酵素として、ペクチンメチルエステル結合を加水分解するペクチンメチルエステラーゼ、ガラクツロン酸分子間のグリコシド結合を切断するポリガラクツロナーゼ、及びペクチン酸に作用して、α－１，４グリコシド結合の非加水分解切断をもたらして、ガラクツロン酸の不飽和誘導体を形成するペクチントランスアミナーゼ又はリアーゼが挙げられる。
適切なペクチン分解酵素として、植物、真菌、又は微生物起源のものが挙げられる。一部の実施形態において、化学的に、又は遺伝的に改変された突然変異体が含まれる。一部の実施形態において、ペクチン分解酵素は、アルカリペクチン分解酵素、すなわち、酵素活性が、約７．０～約１２のｐＨにて最大活性の少なくとも１０％、少なくとも２５％、又は少なくとも４０％である酵素である。他の特定の実施形態において、ペクチン分解酵素は、約７．０～約１２のｐＨにて最大活性を有する酵素である。アルカリペクチン分解酵素は、好アルカリ性微生物、例えば、細菌、真菌、及び酵母微生物、例えばバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種によって産生される。一部の実施形態において、微生物は、特開昭５６－１３１３７６号公報及び特開昭５６－０６８３９３号公報に記載されるＢ．フィルムス（Ｂ．ｆｉｒｍｕｓ）、Ｂ．サーキュランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、及び枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）である。アルカリペクチン分解酵素として、以下に限定されないが、ガラクツラン－１，４－α－ガラクツロナーゼ（ＥＣ ３．２．１．６．７）、ポリ－ガラクツロナーゼ活性物質（ＥＣ ３．２．１．１５）、ペクチンエステラーゼ（ＥＣ ３．１．１．１１）、ペクチン酸リアーゼ（ＥＣ ４．２．２．２）、及びそれらのイソ酵素が挙げられ得る。アルカリペクチン分解酵素は、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属種により産生され得る。一部の実施形態において、アルカリペクチン分解酵素は、特開昭５９－０６６５８８号公報、特開昭６３－０４２９８８号公報、及びＷｏｒｌｄ Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（８，２，１１５－１２０）１９９２に記載されるように、Ｅ．クリサンテミ（Ｅ．ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、Ｅ．カロトボラ（Ｅ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、Ｅ．アミロボラ（Ｅ．ａｍｙｌｏｖｏｒａ）、Ｅ．ヘルビコラ（Ｅ．ｈｅｒｂｉｃｏｌａ）、及びＥ．ジソルベンス（Ｅ．ｄｉｓｓｏｌｖｅｎｓ）によって産生される。他の特定の実施形態において、アルカリペクチン酵素は、ＪＰ７３００６５５７号明細書及びＡｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７２），３６（２）２８５－９３に開示されるように、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種によって産生される。一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、ペクチン分解酵素を、組成物の重量で約０．００００１％～約１０％、約０．０００１％～約１０％、約０．００１％～約５％、約０．００１％～約２％、又は約０．００５％～約０．５％含む。
一部の他の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、適切なキシログルカナーゼを含む。適切なキシログルカナーゼとして、以下に限定されないが、植物、真菌、又は細菌起源のものが挙げられる。化学的に、又は遺伝的に改変された突然変異体が、一部の実施形態において含まれる。本明細書中で用いられる「キシログルカナーゼ」は、Ｖｉｎｃｋｅｎ及びＶｏｒａｇｅｎ（Ｗａｇｅｎｉｎｇｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）［Ｖｉｎｃｋｅｎ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１０４，９９－１０７］によって記載される酵素のファミリーを包含し、そしてＨａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ（１９８９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０，１３９－１６８に記載されるように、キシログルカンを分解させることができる。Ｖｉｎｃｋｅｎらは、トリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）（エンド－ＩＶ－グルカナーゼ）から精製されるキシログルカナーゼによる、単離したリンゴ細胞壁のセルロースからのキシログルカンコーティングの除去を実証した。この酵素は、細胞壁に埋もれたセルロースの酵素分解、及びペクチン酵素との相乗効果による働きを高める。ＤＳＭ由来のラピダーゼＬＩＱ＋は、キシログルカナーゼ活性を含有する。一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、キシログルカナーゼを、組成物の重量で約０．００００１％～約１０％、約０．０００１％～約１０％、約０．００１％～約５％、約０．００１％～約２％、又は約０．００５％～約０．５％含む。他の特定の実施形態において、特定の用途用のキシログルカナーゼは、アルカリキシログルカナーゼ、すなわち、酵素活性が、７から１２に及ぶｐＨにて最大活性の少なくとも１０％、少なくとも２５％、又は少なくとも４０％である酵素である。特定の他の実施形態において、キシログルカナーゼは、約７．０～約１２のｐＨにて最大活性を有する酵素である。
一部の更なる実施形態において、本明細書中に記載される洗剤組成物はさらに、適切なセルラーゼを含む。一実施形態において、組成物は、セルラーゼを、組成物の重量で約０．００００１％～約１０％、０．０００１％～約１０％、約０．００１％～約５％、約０．００１％～約２％、又は約０．００５％～約０．５％含む。あらゆる適切なセルラーゼが、本明細書中に記載される組成物に用いられ得る。例示的なセルラーゼとして、化学的に、又は遺伝的に改変された突然変異体があり得る。例示的なセルラーゼとして、以下に限定されないが、細菌又は真菌起源のもの、例えば、国際公開第２００５０５４４７５号パンフレット、国際公開第２００５０５６７８７号パンフレット、米国特許第７４４９３１８号明細書、米国特許第７８３３７７３号明細書、米国特許第４４３５３０７号明細書；ＥＰ０４９５２５７号明細書；及び米国仮特許出願第６２／２９６６７８号明細書に記載されるものが挙げられる。例示的な市販のセルラーゼとして、以下に限定されないが、ＣＥＬＬＵＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）、ＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）、ＥＮＤＯＬＡＳＥ（登録商標）、ＲＥＮＯＺＹＭＥ（登録商標）、及びＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）ＰＲＥＭＩＵＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（商標）１００、ＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（商標）２００／２２０、及びＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（登録商標）２０００（ＤｕＰｏｎｔ）；並びにＫＡＣ－５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）が挙げられる。一部の実施形態において、セルラーゼは、成熟した野生型セルラーゼ又は変異型セルラーゼの、Ｎ末端の一部が欠失している部分又は断片として組み込まれる（例えば、米国特許第５８７４２７６号明細書参照）。
更なる実施形態において、本明細書中に記載される洗剤組成物はさらに、適切なリパーゼを含む。一部の実施形態において、組成物は、リパーゼを、組成物の重量で約０．００００１％～約１０％、約０．０００１％～約１０％、約０．００１％～約５％、約０．００１％～約２％、又は約０．００５％～約０．５％含む。例示的なリパーゼは、化学的に、又は遺伝的に改変された突然変異体であり得る。例示的なリパーゼとして、以下に限定されないが、例えば、細菌又は真菌起源のもの、例えば、Ｈ．ラヌギノーザ（Ｈ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）リパーゼ（例えば、ＥＰ２５８０６８号明細書及びＥＰ３０５２１６号明細書参照）、Ｔ．ラヌギノサス（Ｔ．ｌａｎｕｇｉｎｏｓｕｓ）リパーゼ（例えば、国際公開第２０１４／０５９３６０号パンフレット及び国際公開第２０１５／０１０００９号パンフレット参照）、リゾムコール・ミエヘイ（Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ ｍｉｅｈｅｉ）リパーゼ（例えばＥＰ２３８０２３号明細書参照）、カンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属リパーゼ、例えばＣ．アンタークティカ（Ｃ．ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）リパーゼ（例えば、Ｃ．アンタークティカ（Ｃ．ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）リパーゼＡ又はＢ）（例えばＥＰ２１４７６１号明細書参照）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属リパーゼ、例えばＰ．アルカリゲネス（Ｐ．ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）リパーゼ及びＰ．シュードアルカリゲネス（Ｐ．ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）リパーゼ（例えばＥＰ２１８２７２号明細書参照）、Ｐ．セパシア（Ｐ．ｃｅｐａｃｉａ）リパーゼ（例えばＥＰ３３１３７６号明細書参照）、Ｐ．スタツェリ（Ｐ．ｓｔｕｔｚｅｒｉ）リパーゼ（例えばＧＢ１３７２０３４号明細書参照）、Ｐ．フルオレセンス（Ｐ．ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）リパーゼ、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属リパーゼ（例えば枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）リパーゼ（Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１３１：２５３－２６０（１９９３））、Ｂ．ステアロサーモフィルス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）リパーゼ（例えば特表昭６４－７４４９９２号公報参照）、及びＢ．プミルス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）リパーゼ（例えば国際公開第９１／１６４２２号パンフレット参照））が挙げられる。クローニングされた例示的なリパーゼとして、以下に限定されないが、ペニシリウム・カマンベルティ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）リパーゼ（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０３：６１－６７（１９９１）参照）、ゲオトリカム・カンディダム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）リパーゼ（Ｓｃｈｉｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０６：３８３－３８８（１９８９）参照）、及び種々のリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属リパーゼ、例えば、Ｒ．デレマー（Ｒ．ｄｅｌｅｍａｒ）リパーゼ（Ｈａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０９：１１７－１１３（１９９１）参照）、Ｒ．ニベアス（Ｒ．ｎｉｖｅｕｓ）リパーゼ（Ｋｕｇｉｍｉｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：７１６－７１９（１９９２））、及びニホンコウジカビ（Ｒ．ｏｒｙｚａｅ）リパーゼが挙げられる。他の脂肪分解酵素、例えばクチナーゼもまた、本明細書中に記載される１つ又は複数の組成物に用いられ得、以下に限定されないが、例えば、シュードモナス・メンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）に由来するクチナーゼ（国際公開第８８／０９３６７号パンフレット参照）及び／又はフザリウム・ソラニピシ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉｐｉｓｉ）に由来するクチナーゼ（国際公開第９０／０９４４６号パンフレット参照）が挙げられる。例示的な市販のリパーゼとして、以下に限定されないが、Ｍ１ ＬＩＰＡＳＥ（商標）、ＬＵＭＡ ＦＡＳＴ（商標）、及びＬＩＰＯＭＡＸ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ）；ＬＩＰＥＸ（登録商標）、ＬＩＰＯＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）、及びＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；並びにＬＩＰＡＳＥ Ｐ（商標）（天野エンザイム株式会社）が挙げられる。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、ペルオキシダーゼを、過酸化水素又はそのソース（例えば、ペルカーボネート、ペルボレート、又はペルサルフェート）と組み合わせて含む。一部の代替の実施形態では、オキシダーゼは、酸素と組み合わせて使用される。両方のタイプの酵素は、「溶液漂白（ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｂｌｅａｃｈｉｎｇ）」のために（すなわち、洗い液中で複数の布地が一緒に洗われたときに染色された布地から他の布地へ織物染料が転移するのを防ぐために）、好ましくは増強剤とともに使用される（例えば、国際公開第９４／１２６２１号パンフレット及び同第９５／０１４２６号パンフレットを参照されたい）。適切なペルオキシダーゼ／オキシダーゼは、限定されるものではないが、植物、細菌、又は真菌由来のペルオキシダーゼ及び／又はオキシダーゼを含む。化学的又は遺伝子的に改変された突然変異体が一部の実施形態に含められる。一部の実施形態では、本開示の洗浄組成物は、この組成物の重量に対して約０．００００１％～約１０％、約０．０００１％～約１０％、約０．００１％～約５％、約０．００１％～約２％、約０．００５％～約０．５％のペルオキシダーゼ及び／又はオキシダーゼをさらに含む。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、以下に限定されないが、ペルヒドロラーゼ（例えば国際公開第０５／０５６７８２号パンフレット参照）が挙げられる付加的な酵素を含む。一部の実施形態は、上述の１つ又は複数のプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、マンナナーゼ、及び／又はセルラーゼの混合物に関する。
一部の実施形態は、洗浄組成物、例えば、米国特許第６６０５４５８号明細書に記載されるものに関する。一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物は、コンパクトな顆粒状の布地洗浄組成物である一方、他の実施形態では組成物は、着色された布地の洗濯に有用な顆粒状の布地洗浄組成物である。更なる実施形態において、組成物は、洗い容量について柔軟仕上げをもたらす顆粒状の布地洗浄組成物であり、更なる実施形態において、組成物は、重質液体（ＨＤＬ）布地洗浄組成物である。他の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物は、布地洗浄組成物、例えば、米国特許第６６１０６４２号明細書及び米国特許第６３７６４５０号明細書に記載されるものである。代替の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物は、硬い表面の適切な洗浄組成物である。硬い表面の適切な洗浄組成物として、例えば、米国特許第６６１０６４２号明細書；米国特許第６３７６４５０号明細書；及び米国特許第６３７６４５０号明細書に記載されるものが挙げられる。更なる実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物は、食器洗い組成物である。一部の更なる実施形態において、本明細書中に記載される組成物は、オーラルケア組成物、例えば、米国特許第６３７６４５０号明細書及び米国特許第６６０５４５８号明細書に記載されるものである。上述の米国特許第６３７６４５０号明細書；米国特許第６６０５４５８号明細書；及び米国特許第６６１０６４２号明細書に含有される化合物及び洗浄補助物質の配合及び記載は、本発明のポリペプチドに用いられる。
更なる実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物は、布地柔軟仕上げ組成物、例えば、ＧＢ４００８９８号明細書、ＧＢ５１４２７６号明細書、ＥＰ００１１３４０号明細書、ＥＰ００２６５２８号明細書、ＥＰ０２４２９１９号明細書、ＥＰ０２９９５７５号明細書、ＥＰ０３１３１４６号明細書、及び米国特許第５０１９２９２号明細書に記載されるものである。
本明細書中に記載される洗浄組成物は、適切なあらゆる形態に製剤化され得、且つ製剤者によって選択されるあらゆるプロセスによって調製され得、それらの非限定的な例が、米国特許第５８７９５８４号明細書；米国特許第５６９１２９７号明細書；米国特許第５５７４００５号明細書；米国特許第５５６９６４５号明細書；米国特許第５５６５４２２号明細書；米国特許第５５１６４４８号明細書；米国特許第５４８９３９２号明細書；及び米国特許第５４８６３０３号明細書に記載されている。低いｐＨの洗浄組成物が所望される場合、そのような組成物のｐＨは、モノエタノールアミン等の物質、又はＨＣｌ等の酸性物質の付加により調整される。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物は、タブレット、カプセル、サシェ、パウチ、シート、及び多区画パウチが挙げられる単位用量形態で提供される。一部の実施形態において、単位用量形式は、多区画パウチ（又は他の単位用量形式）内の成分の放出制御を実現するように設計される。適切な単位用量及び放出制御形式が、当該技術分野において知られている（例えば、ＥＰ２１００９４９号明細書、ＥＰ２１００９４７号明細書、国際公開第０２／１０２９５５号パンフレット、国際公開第０４／１１１１７８号パンフレット、国際公開第２０１３／１６５７２５号パンフレット、並びに米国特許第４７６５９１６号明細書及び米国特許第４９７２０１７号明細書参照）。一部の実施形態において、単位用量形態は、水溶性フィルム又は水溶性パウチで包まれたタブレットによって実現される。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、少なくとも１つのキレート剤を含む。適切なキレート剤として、以下に限定されないが、銅キレート剤、鉄キレート剤、及び／又はマンガンキレート剤、並びにそれらの混合物が挙げられ得る。少なくとも１つのキレート剤が使用される実施形態では、本開示の洗浄組成物は、この洗浄組成物の重量に対して約０．１％～約１５％、又はさらに約３．０％～約１０％のキレート剤を含む。
一部のなお更なる実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、少なくとも１つの沈着助剤をさらに含む。適切な沈着助剤としては、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリカルボン酸塩、防汚ポリマー、例えば、ポリテレフタル酸、粘土、例えば、カオリナイト、モンモリロナイト、アタプルガイト、イライト、ベントナイト、ハロイサイト、及びこれらの混合物が挙げられる。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、少なくとも１つの再付着防止剤を含む。一部の実施形態において、再付着防止剤は、例えば、ＥＰ２１００９４９号明細書に記載される非イオン性界面活性剤である。自動食器洗いの一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤が、特に敷布地用の表面改変剤として、被膜形成及び染み形成を回避するのに、且つ光沢を向上させるのに用いられる。
一部の実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、１つ以上の染料転移抑制剤を含む。適切なポリマー性染料転移抑制剤としては、限定されるものではないが、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ－オキシドポリマー、Ｎ－ビニルピロリドンとＮ－ビニルイミダゾールとのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドン、及びポリビニルイミダゾール、又はこれらの混合物をさらに含む。本明細書中に記載される洗浄組成物は、この洗浄組成物の約０．０００１重量％～約１０重量％、約０．０１重量％～約５重量％、又はさらに約０．１重量％～約３重量％の染料転移抑制剤を含む。
一部の実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、ケイ酸塩をさらに含む。一部のこのような実施形態では、ケイ酸ナトリウム（例えば、二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウム、及び結晶性フィロケイ酸塩）を使用することができる。一部の実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、この組成物の約１％～約２０％、約５重量％～約１５重量％のケイ酸塩を含む。
一部のなお更なる実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、１つ又は複数の分散剤をさらに含む。適切な水溶性有機物質は、限定されるものではないが、ホモ若しくはコポリマー酸又はこれらの塩を含み、このポリカルボン酸は、２つ以下の炭素原子によって互いに隔てられている少なくとも２つのカルボキシ基を含む。
一部の更なる実施形態では、洗浄組成物に使用される酵素は、任意の適切な技術によって安定化される。一部の実施形態では、本明細書で利用される酵素は、完成組成物中のカルシウム及び／又はマグネシウムイオンの水溶性源の存在によって安定化される。一部の実施形態では、酵素安定剤としては、オリゴ糖、多糖、及び無機二価金属塩が挙げられ、この無機二価金属塩は、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩を含む。酵素安定化のための様々な技術を本明細書で使用できることが企図される。例えば、一部の実施形態では、本明細書で利用される酵素は、完成組成物中の亜鉛（ＩＩ）イオン、カルシウム（ＩＩ）イオン、及び／又はマグネシウム（ＩＩ）イオン、並びに他の金属イオン（例えば、バリウム（ＩＩ）、スカンジウム（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、アルミニウム（ＩＩＩ）、スズ（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、及びオキソバナジウム（ＩＶ））の水溶性源の存在によって安定化される。塩化物及び硫酸塩も、一部の実施形態に使用することができる。適切なオリゴ糖及び多糖（例えば、デキストリン）の例は、当技術分野で公知である（例えば、国際公開第０７／１４５９６４号パンフレットを参照されたい）。一部の実施形態では、可逆的プロテアーゼ阻害剤、例えば、ホウ素含有化合物（例えば、ホウ酸塩、４－ホルミルフェニルホウ酸）及び／又はトリペプチドアルデヒドも、安定性をさらに改善するために使用することができる。
一部の実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、１つ又は複数の漂白剤、漂白活性化剤、及び／又は漂白触媒をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、無機及び／又は有機漂白化合物を含む。無機漂白剤としては、限定されるものではないが、過水和物塩（例えば、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩、及び過ケイ酸塩）が挙げられ得る。一部の実施形態では、無機過水和物塩はアルカリ金属塩である。一部の実施形態では、無機過水和物塩は、追加の保護なしに結晶性固体として含められるが、一部の別の実施形態では、この塩は被覆される。適切な塩として、例えば、ＥＰ２１００９４９号明細書に記載されるものが挙げられる。漂白活性化剤は、典型的には、６０℃以下の温度での洗浄の過程で漂白作用を高める有機過酸前駆体である。本明細書で使用するのに適した漂白活性化剤は、過加水分解条件下で、好ましくは約１～約１０の炭素原子、特に約２～約４の炭素原子を有する脂肪族ペルオキシカルボン酸、及び／又は任意選択で置換される過安息香酸を与える化合物を含む。適切な漂白活性化剤として、例えば、ＥＰ２１００９４９号明細書に記載されるものが挙げられる。漂白触媒として典型的に、例えば、マンガントリアザシクロノナン及び関連する錯体、並びにコバルト、銅、マンガン、及び鉄の錯体が、そして米国特許第４２４６６１２号明細書；米国特許第５２２７０８４号明細書；米国特許第４８１０４１０号明細書；並びに国際公開第９９／０６５２１号パンフレット及びＥＰ２１００９４９号明細書に記載されるものが挙げられる。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される洗浄組成物はさらに、１つ又は複数の触媒金属錯体を含む。他の実施形態では、金属含有漂白触媒を使用することができる。一部の実施形態では、金属漂白触媒は、指定された漂白触媒活性の遷移金属カチオン（例えば、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデン、又はマンガンのカチオン）、漂白触媒活性を殆ど又は全く有しない補助金属カチオン（例えば、亜鉛又はアルミニウムカチオン）、触媒及び補助金属カチオンに対して指定された安定性定数を有する封鎖剤、特にエチレンジアミン四酢酸、エチレンジアミン四（メチレンホスホン酸）、及びこれらの水溶性塩を含む触媒系を含む（例えば、米国特許第４，４３０，２４３号明細書を参照されたい）。一部の実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、マンガン化合物によって触媒される。このような化合物及び使用のレベルは、当技術分野で周知である（例えば、米国特許第５，５７６，２８２号明細書を参照されたい）。更なる実施形態では、コバルト漂白触媒を、本明細書中に記載される洗浄組成物に使用することができる。様々なコバルト漂白触媒が、当技術分野で公知であり（例えば、米国特許第５，５９７，９３６号明細書、及び同第５，５９５，９６７号明細書を参照されたい）、公知の方法によって容易に調製される。
一部の更なる実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、マクロ多環式剛性リガンド（ＭＲＬ）の遷移金属錯体をさらに含む。実際の問題として、かつ限定としてではなく、一部の実施形態では、本明細書に提供される組成物及び洗浄プロセスは、水性洗い媒体中に少なくとも１億分の１部程度の活性ＭＲＬ種を提供するように調整され、他の実施形態では、洗い液中に約０．００５ｐｐｍ～約２５ｐｐｍ、約０．０５ｐｐｍ～約１０ｐｐｍ、又は約０．１ｐｐｍ～約５ｐｐｍのＭＲＬを提供する。
一部の実施形態では、本遷移金属漂白触媒中の遷移金属は、限定されるものではないが、マンガン、鉄、及びクロムを含む。他の実施形態では、ＭＲＬは、限定されるものではないが、架橋された特別な超剛性リガンド（例えば、５，１２－ジエチル－１，５，８，１２－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン）を含む。適切な遷移金属ＭＲＬは、公知の方法によって容易に調製される（例えば、国際公開第２０００／３２６０１号パンフレット及び米国特許第６，２２５，４６４号明細書を参照されたい）。
一部の実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、金属クリーナー剤（ｍｅｔａｌ ｃａｒｅ ａｇｅｎｔ）をさらに含む。金属クリーナー剤は、アルミニウム、ステンレス鋼、及び非鉄金属（例えば、銀及び銅）を含む金属の変色、腐食、及び／又は酸化の防止及び／又は低減に使用することができる。適切な金属クリーナー剤は、ＥＰ２１００９４９号明細書、国際公開第９４／２６８６０号パンフレット、及び同第９４／２６８５９号パンフレットに記載された金属クリーナー剤を含む。一部の実施形態では、金属クリーナー剤は亜鉛塩である。一部の更なる実施形態では、本明細書中に記載される洗浄組成物は、約０．１重量％～約５重量％の１つ以上の金属クリーナー剤を含む。
本明細書中に記載される洗浄組成物は、表面、皿類、又は布地を洗浄するのに用いられ得る。典型的には、表面、皿類、又は布地の少なくとも一部が、少なくとも１つの（ｉ）本明細書中に記載される変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、あるいは（ｉｉ）本明細書中に記載される少なくとも１つの洗浄組成物と接触してから、表面、皿類、又は布地は、場合によっては洗われ、且つ／又は濯がれる。本開示の目的のために、「洗い」は、以下に限定されないが、こすり洗い及び機械的撹拌を含む。一部の実施形態において、洗浄組成物は典型的に、溶液中約５００ｐｐｍ～約１５，０００ｐｐｍの濃度にて使用される。洗い溶媒が水である場合、水の温度は典型的に、約５℃～約９０℃に及び、そして布地が包含される場合、水対布地の質量比は典型的に、約１：１～約３０：１である。
一部の実施形態は、洗浄方法であって、（ｉ）本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、あるいは（ｉｉ）本明細書中に記載される洗浄組成物の有効量を、マンナンを含む汚れ又は染みを含むアイテム又は表面と接触させて、汚れ又は染みに含有されるマンナンを加水分解することを含む洗浄方法に関する。
一部の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、織物及び布地から選択される１つ又は複数のアイテム上のバイオフィルムを阻止し、削減し、且つ／又は除去するのに用いられる。
本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、以下に限定されないが、マンナン、ガラクトマンナン、及びグルコマンナンが挙げられる、マンノース単位を含有する多糖鎖を加水分解することで、そのようなポリペプチドが、１，４－β－Ｄマンノシド結合を含有する多糖基質に関与するマンナン加水分解反応を実行するのに特に有用となる。一般的には、ドナー分子は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の存在下で、マンナン加水分解反応を実行するのに適した条件下でインキュベートされ、場合によっては、その後、反応から産物が単離される。これ以外にも、食品の文脈では、製品は、単離されない食品の成分となり得る。特定の実施形態において、ドナー分子は、以下に限定されないが、マンナン、グルコマンナン、ガラクトマンナン、及びガラクトグルコマンナンが挙げられる、マンノース単位を含む多糖鎖である。
一実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、パーム核油を抽出するプロセスに用いられる。別の実施形態は、パーム核又はパーム核ミールからパーム核油を抽出するプロセスであって、パーム核及び／又はパーム核ミールを用意することと、前記種子又はケーキを、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片で処理することとを含むプロセスに関する。
一実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含む組成物は、動物の飼料又は人間の食物を加工し、且つ／又は製造するのに用いられる。更なる実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ヒト以外の動物用の飼料への添加物であり得る。別の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、人間の食物に、例えば人間の食物への添加物として、有用であり得る。
いくつかの栄養因子が、動物の飼料及び人間の食物を調製するのに用いられ得る安価な植物材料の量を制限するおそれがある。例えば、オリゴマンナン、例えばマンナン、ガラクトマンナン、グルコマンナン、及びガラクトグルコマンナンを含有する植物材料は、栄養化合物、例えば鉱物、ビタミン、糖、及び脂肪を消化吸収する動物の能力を引き下げるおそれがある。当該悪影響は、特に、マンナン含有ポリマーの高い粘度に、そして栄養化合物を吸収するマンナン含有ポリマーの能力に起因する。当該影響は、飼料中に、マンナン含有ポリマーを分解する酵素、例えば本明細書中に記載されるエンド－β－マンナナーゼ酵素を含めることによって引き下げられ得、これにより、安価な植物材料中に典型的に見出されるマンナン含有ポリマーがより高い割合で飼料中に含まれてよく、このことで最終的に飼料のコストが引き下げられる。加えて、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、マンナン含有ポリマーをより単純な糖に分解することができ、これは、より容易に同化されて、付加的なエネルギーを提供することができる。
更なる実施形態において、植物材料を含有する動物の飼料は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の存在下で、マンナン含有ポリマーを分解するのに適した条件下で、インキュベートされる。
別の実施形態において、パン改良組成物が、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を、場合によってはマンナン、グルコマンナン、又はガラクトマンナンのソースと組み合わせて、そしてさらに場合によっては、１つ又は複数の他の酵素と組み合わせて、含む。
用語「ヒト以外の動物」は、全ての非反芻動物及び反芻動物を含む。特定の実施形態において、非反芻動物は、以下に限定されないが、ウマ、並びに単胃動物、例えば、以下に限定されないが、ブタ、家禽、及び魚からなる群から選択される。更なる実施形態において、ブタは、以下に限定されないが、子ブタ、成長中のブタ、及び雌ブタであってよく；家禽は、以下に限定されないが、シチメンチョウ、カモ、及びニワトリ（以下に限定されないが、ブロイラー雛及びレイヤーが挙げられる）であってよく；そして魚は、以下に限定されないが、サケ、マス、ティラピア、ナマズ、及びコイ；並びにエビが挙げられるがこれに限定されない甲殻類であってよい。更なる実施形態において、反芻動物は、以下に限定されないが、ウシ、若いカーフ、ヤギ、ヒツジ、キリン、バイソン、ムース、ヘラジカ、ヤク、スイギュウ、シカ、ラクダ、アルパカ、ラマ、アンテロープ、プロングホーン、及びニルガイからなる群から選択される。
一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、飼料添加物としての代わりに、飼料を前処理するのに用いられる。一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、離乳したてのブタ、保育中のブタ、子ブタ、肥育中のブタ、成長中のブタ、仕上げブタ、産卵鶏、ブロイラー雛、及びシチメンチョウ用の飼料に加えられ、又はこれを前処理するのに用いられる。
別の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、植物材料、例えばパーム核、ココナッツ、コンニャク、ローカストビーンガム、グアーガム、ダイズ、オオムギ、エンバク、アマ、コムギ、トウモロコシ、アマニ、柑橘類の果肉、綿実、ラッカセイ、ナタネ、ヒマワリ、エンドウ、及びルピナス由来の飼料に加えられ、又はこれを前処理するのに用いられる。
本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、熱安定性であり、そして結果として、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ペレット化された飼料を生産するプロセスに用いられ得、そこではペレット化工程前に熱が飼料混合物に加えられる。別の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ペレット化工程に先立って他の飼料成分に、又はペレット化工程の後に他の飼料成分に（すなわち、すでに形成された飼料ペレットに）加えられる。
さらに別の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含有する食物プロセシング組成物又は飼料補助剤組成物は、場合によってはさらに、着色剤、芳香化合物、安定化剤、ビタミン、鉱物、及び他の飼料又は食物増強酵素から選択される他の置換基を含有してよい。これは、いわゆるプレミックスに特に当てはまる。
更なる実施形態において、本発明に従う食品添加物は、他の食物成分、例えば禾穀類タンパク質又は植物タンパク質と適切な量で組み合わされて、加工された食品が形成されてよい。
一実施形態において、動物の飼料組成物及び／又は動物の飼料添加組成物及び／又はペットフードが、本明細書中に記載されるポリペプチドを含む。
別の実施形態は、動物の飼料組成物及び／又は動物の飼料添加組成物及び／又はペットフードを調製する方法であって、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を、１つ又は複数の、動物の飼料成分及び／又は動物の飼料添加成分及び／又はペットフード成分と混合することを含む方法に関する。
更なる実施形態は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の、動物の飼料成分及び／又は動物の飼料添加成分及び／又はペットフードを調製するための使用に関する用語「ペットフード」は、家庭動物、例えば、イヌ、ネコ、スナネズミ、ハムスター、チンチラ、ファンシーラット、モルモット；鳥類ペット、例えば、カナリア、インコ、及びオウム；爬虫類ペット、例えば、カメ、トカゲ、及びヘビ；水生動物、例えば、熱帯魚及びカエル用の試料を意味すると理解されるものとする。
用語「動物飼料組成物」、「試料」、及び「飼い葉」は、互換的に使用され、以下の群から選択される１つ以上の動物飼料材料を含み得る：（ａ）穀類、例えば、小さい穀物（例えば、小麦、大麦、ライ麦、オート麦、及びこれらの組み合わせ）、及び／又は大きい穀物、例えば、トウモロコシ又はモロコシなどの大粒；（ｂ）穀類からの副産物、例えば、トウモロコシグルテンミール、ＤＤＧＳ（Ｄｉｓｔｉｌｌｅｒｓ Ｄｒｉｅｄ Ｇｒａｉｎ Ｓｏｌｕｂｌｅｓ）（特にトウモロコシをベースとするＤＤＧＳ（ｃＤＤＧＳ）、小麦ふすま、小麦ミドリング（ｗｈｅａｔ ｍｉｄｄｌｉｎｇ）、小麦ショーツ、米ぬか、籾殻、オート麦、パーム核、及び柑橘類果肉；（ｃ）供給源、例えば、大豆、ヒマワリ、ピーナッツ、ルピナス、エンドウマメ、ソラマメ、綿、カノーラ、魚粉、乾燥血漿タンパク質、肉骨粉、ジャガイモタンパク質、ホエイ、コプラ、及びゴマから得られるタンパク質；（ｄ）植物及び動物起源から得られる油及び脂肪；及び（ｅ）鉱物及びビタミン。
一態様において、食物組成物又は食物添加物は、液体であっても固体であってもよい。
本発明の態様において、食物組成物は、以下に限定されないが発酵飲料、例えばビール及びワインが挙げられる飲料である。
本発明の文脈では、用語「発酵飲料」は、発酵プロセス、例えば微生物発酵、例えば細菌発酵及び／又は酵母発酵を含む方法によって生産されるあらゆる飲料を含むことを意味する。
本発明の態様において、発酵飲料は、ビールである。用語「ビール」は、デンプン含有植物材料の発酵／醸造によって生産されるあらゆる発酵麦汁を含むことを意味する。多くの場合、ビールは、麦芽、又はデンプン含有植物材料としての補助剤、又は麦芽及び補助剤のあらゆる組合せから生産される。本明細書中で用いられる用語「麦芽」は、あらゆる禾穀類穀粒麦芽、例えばオオムギ麦芽又はコムギ麦芽として理解される。
本明細書中で用いられる用語「補助剤」は、麦芽でない、例えばオオムギ麦芽でもコムギ麦芽でもないあらゆるデンプン及び／又は糖含有植物材料を指す。補助剤の例として、例えば、一般的なトウモロコシグリッツ、精製トウモロコシグリッツ、醸造者の粉砕酵母、イネ、モロコシ、精製コーンスターチ、オオムギ、オオムギデンプン、脱穀オオムギ、コムギ、コムギデンプン、加熱乾燥した（ｔｏｒｒｉｆｉｅｄ）禾穀類、禾穀類フレーク、ライムギ、エンバク、ジャガイモ、タピオカ、キャッサバ、並びにシロップ、例えばトウモロコシシロップ、サトウキビシロップ、転化糖シロップ、オオムギシロップ、及び／又はコムギシロップ等が挙げられ、これらがデンプンのソースとして用いられ得る。
本明細書中で用いられる用語「マッシュ」は、穀粉等のあらゆるデンプン及び／又はシュガー含有植物材料の水性スラリーを指し、例えば、水と混合された後に、麦汁及び使い終った穀粒に分離される、破砕オオムギ麦芽、破砕オオムギ、及び／若しくは他の補助剤又はそれらの組合せを含む。
本明細書中で用いられる用語「麦汁」は、マッシング中の穀粉の抽出後に溢れ出した非発酵液を指す。
別の態様において、本発明は、発酵飲料、例えばビールを調製する方法であって、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を、麦芽及び／又は補助剤と混合することを含む方法に関する。
ビールの例は：十分な麦芽で造られたビール、「Ｒｅｉｎｈｅｉｔｓｇｅｂｏｔ」の下で醸造されたビール、エール、ＩＰＡ、ラガー、ビター、発泡酒（第２のビール）、第３のビール、ドライビール、ニアビール、ライトビール、低アルコールビール、低カロリービール、ポーター、ボックビール、スタウト、麦芽リカー、ノンアルコールビール、ノンアルコール麦芽リカー等、並びに代替の禾穀類飲料及び麦芽飲料、例えば果実風味の麦芽飲料、例えば柑橘風味の、例えばレモン、オレンジ、ライム、若しくはベリー風味の麦芽飲料；リカー風味の麦芽飲料、例えば、ウォッカ、ラム、若しくはテキーラ風味の麦芽リカー；又はコーヒー風味の麦芽飲料、例えばカフェイン風味の麦芽リカー；等を含む。
本発明の一態様は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の、発酵飲料、例えばビールの生産における使用に関する。
別の態様は、発酵飲料を提供する方法であって、マッシュ及び／又は麦汁を、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と接触させる工程を含む方法に関する。
更なる態様は、発酵飲料を提供する方法であって：（ａ）マッシュを調製する工程と、（ｂ）当該マッシュを濾過して、麦汁を得る工程と、（ｃ）当該麦汁を発酵させて、発酵飲料、例えばビールを得る工程とを含み、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片が：（ｉ）工程（ａ）のマッシュ、及び／又は（ｉｉ）工程（ｂ）の麦汁、及び／又は（ｉｉｉ）工程（ｃ）の麦汁に加えられる、方法に関する。
さらに別の態様に従えば、（１）マッシュ及び／又は麦汁を、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と接触させる工程；及び／あるいは（２）（ａ）マッシュを調製する工程、（ｂ）当該マッシュを濾過して、麦汁を得る工程、（ｃ）当該麦汁を発酵させて、発酵飲料、例えばビールを得る工程を含み、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片が：（ｉ）工程（ａ）のマッシュ、及び／又は（ｉｉ）工程（ｂ）の麦汁、及び／又は（ｉｉｉ）工程（ｃ）の麦汁に加えられる、方法によって、発酵飲料、例えばビールが生産又は提供される。
一般的には、コーヒー抽出液は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の存在下で、液体コーヒー抽出液中に存在するガラクトマンナンを加水分解するのに適した条件下でインキュベートされる。
別の態様において、本発明は、ベイクド製品を調製する方法であって、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を生地に加えてから、当該生地を焼くことを含む方法に関する。ベイクド製品の例は、当業者に周知であり、パン、ロールパン、パフペストリー、甘い発酵生地、バンズ、ケーキ、クラッカー、クッキー、ビスケット、ワッフル、ウェハース、トルティーヤ、朝食のシリアル、押出し製品等が挙げられる。
本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、パン改良剤組成物の一部として生地に加えられてよい。パン改良剤は、種々の成分を含有する組成物であり、生地の特性、及びベーカリー製品、例えばパン及びケーキの品質を向上させる。パン改良剤は多くの場合、その有益な影響、例えば生地の安定性、並びにパンの質感及び容量のため、産業的なベーカリープロセスに加えられる。パン改良剤は通常、脂肪及び油、並びに乳化剤、酵素、酸化防止剤、酸化剤、安定化剤、及び還元剤のような添加物を含有する。本発明のいずれかのポリペプチドに加えて、パン改良剤中に存在してもよいし、それ以外では本発明のいずれかのポリペプチドと併用されてもよい他の酵素として、アミラーゼ、ヘミセルラーゼ、アミロース分解性複合体、リパーゼ、プロテアーゼ、キシラナーゼ、ペクチナーゼ、プルラナーゼ、非デンプン性多糖分解酵素、及びグルコースオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、又はアスコルビン酸オキシダーゼのようなレドックス酵素が挙げられる。
一実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、生地にパン改良剤組成物の一部として加えられてよく、これはまた、グルコマンナン及び／又はガラクトマンナンソース、例えばコンニャクガム、グアーガム、ローカストビーンガム（イナゴマメ（Ｃｅｒａｔｏｎｉａ ｓｉｌｉｑｕａ））、コプラミール、アイボリーナットマンナン（オオミゾウゲヤシ（Ｐｈｙｔｅｌｅｐｈａｓ ｍａｃｒｏｃａｒｐａ））、海草マンナン抽出物、ココナッツミール、及び醸造酵母の細胞壁（乾燥していてもよいし、醸造酵母抽出液の形態で用いられてもよい）も含む。本発明に用いられる他の許容可能なマンナン誘導体として、枝状に分かれていないβ－１，４－結合したマンナンホモポリマー及びマンノオリゴサッカライド（マンノビオース、マンノトリオース、マンノテトラオース、及びマンノペントース）が挙げられる。本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、単独で用いられてもよいし、生地の寛容性；生地の可撓性及び／又は生地の粘着性；及び／又はパン粉の構造、並びにパンのステーリングの遅延（ｒｅｔａｒｄｉｎｇ ｓｔａｌｉｎｇ）を向上させるために、グルコマンナン及び／又はガラクトマンナン及び／又はガラクトグルコマンナンと併用されてもよい。別の態様において、マンナナーゼ加水分解物は、可溶性のプレバイオティクス、例えばマンノオリゴサッカライド（ＭＯＳ）として作用し、これは、結腸中で好ましい集団密度にて見出される場合に、良好な健康状態と一般的に関連する乳酸菌の増殖を促進する。
一態様において、本発明のいずれかのポリペプチドが加えられる生地は、純粋な小麦粉に加えて、又はその代わりに、ブラン、又はエンバク、イネ、雑穀、トウモロコシ、又は豆類の粉を含む（すなわち、純粋な白色の小麦粉生地でない）。
別の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、乳又は他のあらゆる乳製品に加えられてよく、これには、グルコマンナン及び／又はガラクトマンナンも加えられている。典型的なグルコマンナン及び／又はガラクトマンナンソースは、ベーカリーの態様において先で一覧にされており、グアー又はコンニャクガムが挙げられる。本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の、グルコマンナン及び／又はガラクトマンナンとの組合せは、マンナナーゼ加水分解物（マンノオリゴサッカライド）を放出し、これは、大腸又は結腸中で好ましい集団密度にて見出される場合に、良好な健康状態と一般的に関連するプロバイオティック細菌（とりわけビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）属及びラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属乳酸菌）の選択的な増殖を促進することによって、可溶性のプレバイオティクスとして作用する。
別の態様は、乳又は乳製品を調製する方法であって、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、及びあらゆるグルコマンナン、ガラクトマンナン、又はガラクトグルコマンナンを加えることを含む方法に関する。
別の態様において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、プレバイオティックマンナン加水分解物を含む乳業ベースの食品を生産するために、乳業ベースの食品に加えられる前に、又は加えられた後に、あらゆるグルコマンナン又はガラクトマンナンと併用される。更なる態様において、このように生産されたマンノオリゴサッカライド含有乳製品は、有益なヒト腸内ミクロフローラの集団を増大させることができ、そして更なる態様において、乳業ベースの食品は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を、グルコマンナン及び／又はガラクトマンナン及び／又はガラクトグルコマンナンのあらゆるソース、並びにヒト大腸において有益であることが知られている細菌（例えばビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）属及びラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属）の少なくとも１つの株の接種に十分な用量と一緒に含んでよい。一態様において、乳業ベースの食品は、ヨーグルト又は乳飲料である。
本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、紙パルプ、例えば化学パルプ、半化学パルプ、クラフトパルプ、機械パルプ、及び亜硫酸塩法によって調製されるパルプの酵素補助漂白に用いられる。一般的には、紙パルプは、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と、紙パルプを漂白するのに適した条件下でインキュベートされる。
一部の実施形態において、パルプは、酸素、オゾン、パーオキシド、又はペルオキシ酸で漂白された塩素フリーのパルプである。一部の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、低いリグニン含有量を示す、改変され、又は連続的なパルプ化法によって生産されたパルプの酵素補助漂白に用いられる。一部の他の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、単独で、又は好ましくはキシラナーゼ及び／又はエンドグルカナーゼ及び／又はアルファ－ガラクトシダーゼ及び／又はセロビオヒドラーゼ酵素と組み合わされて、使用される。
グアーガム及びローカストビーンガム等のガラクトマンナンは、例えば食物（例えばアイスクリーム）、及び織物印刷用の印刷ペースト、例えばＴシャツへの印刷物中で、増粘剤として広く用いられる。ゆえに、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はまた、マンナン含有基質の厚さ又は粘度の引下げに用いられる。一部の実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、食物（例えばアイスクリーム）中のガラクトマンナンを加水分解して廃棄流を形成するのに用いられる。特定の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、加工装置内の残留食物の粘度を引き下げることによって、加工後の洗浄を促進するのに用いられる。特定の他の実施形態において、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、印刷ペーストの粘度を引き下げることによって、織物印刷後の過剰印刷ペーストの洗いを促進するのに用いられる。一般的には、マンナン含有基質は、本明細書中に記載されるマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片と、マンナン含有基質の粘度を引き下げるのに適した条件下でインキュベートされる。
更なる実施形態において、本明細書中に記載される１つ又は複数のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、油ガス業界において、例えば、掘削液の粘度を制御し；水圧破砕に用いられる流体が、ボアホールから岩中に延びる地下部の破損を生じさせる割合を増大させ；ボアホールの濾過ケーキを洗浄し；且つそれらを組み合わせて行うのに用いられ得る。
本組成物及び本方法の他の態様及び実施形態が、上述の記載及び以下の実施例から明らかとなろう。本明細書中に記載される実施形態を越える種々の代替の実施形態が、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく本発明を実行する際に使用され得る。したがって、本明細書中に記載される特定の実施形態ではなく特許請求の範囲が、本発明の範囲を定義する。したがって、特許請求の範囲内の方法及び構造、並びにそれらの等価物は、特許請求の範囲によって包含される。
実施例１
パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種マンナナーゼＰｓｐＭａｎ１３８のクローニング及び発現
パエニバチルス属（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）種ＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼ変異体ＰｓｐＭａｎ１３８を生じさせるＤＮＡ操作を、従来の分子生物学技術を用いて実行した（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ参照）。野生型パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種ＰｓｐＭａｎ４マンナナーゼの配列中に複数のアミノ酸改変を導入した人工ＤＮＡ配列を生じさせた。当該野生型マンナナーゼは、２０１５年７月１０日出願の国際出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／４００５７号明細書（後に国際公開第２０１６／００７９２９号パンフレットとして公開）中により完全に記載されている。
ＰｓｐＭａｎ１３８遺伝子のヌクレオチド配列を、配列番号１（予測される天然のシグナルペプチドをコードする配列を含む）として示す。
枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ａｐｒＥプロモーター（配列番号２）及び枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ａｐｒＥシグナルペプチド（配列番号３）を含むＤＮＡカセットを合成した。当該技術分野において知られている技術を用いて、ＰＣＲ断片を、Ｇｉｂｓｏｎ Ａｓｓｅｍｂｌｙを用いてアセンブルして、最終の発現カセットを作製した。配列番号３によってコードされる枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のａｐｒＥシグナルペプチドのアミノ酸配列を、配列番号４として示す。
ＰｓｐＭａｎ１３８遺伝子及び先で記載した他の要素を組み込んだ発現カセットを、ｐＨＹＴ複製シャトルベクター中にクローニングして、適切な枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）株中に形質転換した。ＢｓｔＥＩＩ部位及びＥｃｏＲＩ部位（配列番号５）を用いてテトラサイクリン耐性遺伝子の後ろにターミネーターを付加することによって、ｐＨＹＴベクターをｐＨＹ３００ＰＬＫ（タカラバイオ株式会社）から得た。また、ＢａｍＨＩ部位及びＨｉｎｄＩＩＩ部位（配列番号６）中にクローニングしたリンカーを用いて、ｐＨＹ３００ＰＬＫ中のＨｉｎｄＩＩＩ部位を除去した。
表１に一覧にするプライマー（配列番号８～１１）を用いるＰＣＲによって、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現カセット（配列番号７）及びＰｓｐＭａｎ１３８遺伝子（配列番号１）を含むＤＮＡフラグメントを増幅した。
枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現カセット用の核酸配列を、配列番号７として示す：
Figure 0007364331000003
当該技術分野において知られている技術を用いて、Ｇｉｂｓｏｎ Ａｓｓｅｍｂｌｙ（ＳＧＩ ＤＮＡ Ｃａｔ＃ ＧＡ１１００－１０）を用いてＰＣＲ断片をアセンブルして、最終発現カセットを作製した。枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞を形質転換して、５μｇ／ｍｌクロラムフェニコールを補った、アガーで固めたＬＢ上で増殖させた。
ＰｓｐＭａｎ１３８遺伝子によってコードされるＰｓｐＭａｎ１３８前駆体タンパク質のアミノ酸配列を、配列番号１２として示す。成熟した酵素、ＰｓｐＭａｎ１３８（２９８アミノ酸）のアミノ酸配列を、配列番号１３として示す。
実施例２
マンナナーゼの活性及び安定性を特徴付ける方法
生化学的特徴付け用にＰｓｐＭａｎ４（成熟したタンパク質のアミノ酸配列を、配列番号１４として示す）及びＰｓｐＭａｎ１３８変異体（配列番号１３）の酵素サンプルを作製するために、形質転換した枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞の選択的増殖を、９６ウェルマイクロタイタープレート（ＭＴＰ）中で３７℃にて６８時間、各ウェル内の培地（主要な窒素源としての尿素、主要な炭素源としてのグルコースを有し、ロバストな細胞増殖のために１％ソイトンを補った、ＭＯＰＳバッファに基づく半規定富化培地）中で実行した。培養物を、３６００ｒｐｍにて４５分間の遠心分離によって収穫して、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ（登録商標）フィルタプレート（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）により、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ真空系を用いて濾過した。濾過した培養液の上澄みを、以下に記載するアッセイに用いた。
マンナナーゼ活性アッセイ
ＰｓｐＭａｎ４及びそのＰｓｐＭａｎ１３８変異体のマンナナーゼ活性を、溶液中ローカストビーンガム（ＬＢＧ）ガラクトマンナンの加水分解を測定することによって試験した。用いた基質は、５０ｍＭトリスＨＣｌバッファ、ｐＨ７．５（基質希釈バッファ）中０．２８％（ｗ／ｖ）ＬＢＧ溶液であった。作用基質溶液を調製するために、ＬＢＧ粉末（製品Ｎｏ．Ｇ０７５３，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、５０ｍＭトリスＨＣｌバッファ、ｐＨ７．５の加熱溶液中に撹拌下で溶解させた。室温に冷却して直ぐに、溶液を遠心分離して、澄明な上澄みを基質溶液として用いた。酵素サンプルを、酵素希釈バッファ（５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０含有）中に希釈して、希釈した酵素溶液のアリコートを、ＬＢＧ基質溶液を含有する平底クリアポリスチレンＭＴＰに加えた。プレートをシールして、９００ｒｐｍでの撹拌（例えばｉＥＭＳインキュベーター／シェーカー、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）により４０℃にて１０分間、インキュベートした。インキュベーションの後、放出された還元糖を、ＢＣＡ試薬アッセイ（カタログＮｏ．２３２２５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いて定量化した。詳細には、ＬＢＧアッセイプレートの各ウェル由来のアリコートを、ＢＣＡ作用試薬溶液（メーカーの説明書に従って調製した）を含有するＰＣＲプレートに加えた；サンプル対作用試薬の比は、１：９（ｖ／ｖ）であった。プレートをシールして、サーモサイクラー（例えばＴｅｔｒａｄ２ Ｐｅｌｔｉｅｒ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）内で９５℃にて２～３分間インキュベートした。プレートを３０℃に冷却した後、反応溶液を、フレッシュな平底クリアポリスチレンＭＴＰ（例えばＣｏｓｔａｒ ９０１７）に移して、吸光度をプレートリーダー分光光度計（例えばＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｐｌｕｓ ３８４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）内で５６２ｎｍにて測定した。マンナナーゼを含有しないサンプル（ブランク）の吸光度の値を、マンナナーゼ含有サンプルの吸光度の値から減算した。生じた吸光度を、マンナナーゼ活性の尺度とした。
安定性アッセイ
ＰｓｐＭａｎ４及びそのＰｓｐＭａｎ１３８変異体の安定性を、ストレス条件下で、市販のＴＩＤＥ（登録商標）液体洗濯洗剤（Ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｃｅｎｔ，Ｐｒｏｃｔｅｒ ａｎｄ Ｇａｍｂｌｅ、２０１４年に一地方のスーパーマーケットで購入して、以下の実施例４に記載するプロトコルを用いて熱不活化した）の１０％（ｖ／ｖ）水溶液中で、高温（５６℃）にて５分間インキュベーションした後のサンプルの残留活性を測定することによって、試験した。
熱不活化洗剤の１２．５％（ｖ／ｖ）水溶液を調製して、濾過した培養液の上澄み由来の酵素サンプルを、この洗剤溶液の、１０％（ｖ／ｖ）の最終洗剤濃度を達成するのに適切な容量と混合した。初期の（ストレスのない）活性を測定するために、先に記載した「マンナナーゼ活性アッセイ」を用いて、この混合物のアリコートを直ちに、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０中に希釈して、ＬＢＧに対する活性についてアッセイした。ストレスを受けた活性を測定するために、先の「マンナナーゼ活性アッセイ」に記載したように、洗剤溶液と混合した酵素サンプルを、シールしたＰＣＲプレート内で、サーモサイクラー（Ｔｅｔｒａｄ２ Ｐｅｌｔｉｅｒ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）において５６℃にて５分間インキュベートしてから、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０中に希釈して、活性についてアッセイした。
先に記載したように、ストレスを受けた活性の値及びストレスのない活性の値を、ＬＢＧ基質の加水分解によって一旦測定して、ストレスを受けた活性の、ストレスのない活性に対する比率をとって、１００を乗じることによって、％残留活性を算出した。結果を表２に要約する。ＰｓｐＭａｎ１３８が、ＴＩＤＥ（登録商標）液体洗濯洗剤におけるこの温度ストレス試験の後も、酵素活性を保持したことが示される。
Figure 0007364331000004
実施例３
マンナナーゼの洗浄性能
マンナナーゼ酵素を、ＭＥＳバッファｐＨ５．３中での硫酸アンモニウム沈殿によって清澄化したバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属培養液の上澄みから単離した。精製を、疎水性交換クロマトグラフィに続く、５０ｍＭ ＭＥＳバッファ、ｐＨ６．０中への透析によって達成した。次に、プロピレングリコールを加えて４０％の最終濃度にして、サンプルを、更なる特徴付けまで冷蔵保存した。
ＰｓｐＭａｎ１３８及び市販のマンナナーゼ（ＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４Ｌ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ ＡＳ，Ｄｅｎｍａｒｋ）の洗い性能を、洗濯洗剤用途において、Ｔｅｒｇ－ｏ－ｔｏｍｅｔｅｒを用いて試験した。性能評価を１６℃にて行った。汚れ負荷（ｓｏｉｌ ｌｏａｄ）は、１Ｌの脱イオン水で満たしたｔｅｒｇ－ｏ－ｔｏｍｅｔｅｒビーカーにおいて、２つのＣＦＴ Ｃ－Ｓ－７３ローカストビーンガム（ＬＢＧ）のスワッチ（Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ ＢＶ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）からなった。水硬度を１００ｐｐｍ（３：１ Ｃａ：Ｍｇ）に調整し、ｐＨを、５ｍＭ ＨＥＰＥＳを用いて８．２に調整した。熱で不活化したＴｉｄｅ（登録商標）Ｌｉｑｕｉｄ Ｌａｕｎｄｒｙ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ（Ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｃｅｎｔ、２０１４年に一地方のスーパーマーケットで購入した）を、ビーカーに１ｇ／ｌにて加えた。熱不活化プロトコルを、以下で実施例４に記載する。各マンナナーゼを、ビーカーに種々の用量にて、１５分の洗い用に加えた。洗い処理の後、スワッチを遠心乾燥させてから、空気乾燥させた。
各スワッチを、色彩計（Ｋｏｎｉｃａ Ｍｉｎｏｌｔａ Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ－４１０、５０ｍｍの口径）を用いて、処理の前後に測定した。Ｌ、ａ、ｂ値の差異を、ＣＩＥ－ＬＡＢ色空間によって定義される総色差（ｄＥ）に変換した。これらの値を用いて、スワッチの洗浄レベルを判定して、結果をパーセント染み除去（％ＳＲＩ）として表した。ＰｓｐＭａｎ１３８及びＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４ＬによるＣＳ－７３スワッチの洗浄結果を、図１に示す。この洗浄アッセイにおいて、ＰｓｐＭａｎ１３８及びＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４Ｌは、ＬＢＧの汚れに対して、匹敵する染み除去を示した。
実施例４
市販の液体洗濯洗剤中でのマンナナーゼの半減期の判定
市販の洗剤の不活化
本明細書中で以下に示す表３に一覧にする液体洗濯洗剤を、一地方のスーパーマーケットで購入した。バックグラウンド酵素活性を無効にするために、これらの市販の洗剤中に存在する酵素を、洗剤を９５℃にて３～４時間の加熱することによって、不活化した。加熱後、洗剤を、本明細書中で以下に示すプロテアーゼ及びアミラーゼ活性アッセイを介して、酵素活性についてアッセイした。洗剤を４時間加熱した後、プロテアーゼ及びアミラーゼ活性は、検出されなかった。さらに、熱不活化洗剤中のマンナナーゼ活性の不在が、以下の「残留マンナナーゼ活性アッセイ」中で記載するＬＢＧ基質に対する活性アッセイによって示された。
Figure 0007364331000005
市販の液体洗濯洗剤中のプロテアーゼ及びアミラーゼ活性アッセイ
最初に洗剤を５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２中に１：５で希釈することによって、酵素活性を測定した。
プロテアーゼアッセイ：プロテアーゼ活性を、ｐＨ８．６のバッファ、２５℃にて、スクシニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－フェニル－ｐ－ニトロアニリド基質（ｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡ，Ｓｉｇｍａ：Ｓ－７３８８）を用いて測定した。用いた試薬溶液は、以下の通りであった：１００ｍＭトリス／ＨＣｌ、ｐＨ８．６、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０含有（トリス希釈バッファ）；１００ｍＭトリスバッファ、ｐＨ８．６、１０ｍＭ ＣａＣｌ２及び０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０（トリス／Ｃａバッファ）含有；並びにＤＭＳＯ（ｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡストック溶液）（Ｓｉｇｍａ：Ｓ－７３８８）中１６０ｍＭ ｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡ。１５０μｌトリス希釈バッファを含有する各ウェルに１０μｌの希釈洗剤を加えてから直ぐ後に、１００μｌの２ｍｇ／ｍｌ ｓｕｃ－ＡＡＰＦ－ｐＮＡ作用溶液を２５℃にて加えることによって、アッセイを実行した。反応を、市販の非加熱洗濯洗剤に対して視覚的に評価した。そこでは、色の生成が酵素活性を示す。
アミラーゼアッセイ：Ｃｅｒａｌｐｈａ ＨＲキット（Ｍｅｇａｚｙｍｅ，Ｗｉｃｋｌｏｗ，Ｉｒｅｌａｎｄ）を用いて、Ｃｅｒａｌｐｈａアルファ－アミラーゼアッセイを実行した。用いた基質は、規定オリゴサッカライド「非還元末端ブロックドｐ－ニトロフェニールマルトヘプタオシド（ＢＰ－ＮＰＧ７）、及び過剰レベルのアルファ－グルコシダーゼ（「阻止基」の存在に起因して、固有の基質に対する活性がない）の混合物であった。反応を開始させるために、希釈した市販の洗剤を、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、２５℃中の基質に加えた。反応を、市販の非加熱洗濯洗剤に対して視覚的に評価した。そこでは、色の生成が酵素活性を示す。
ＰｓｐＭａｎ１３８及び市販のマンナナーゼ（ＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４Ｌ，Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ ＡＳ，Ｄｅｎｍａｒｋ）サンプルを、表３に一覧にした熱不活化洗剤に、０．３％（ｗ／ｗ）の最終濃度となるように加えた。マンナナーゼに加えて、プロテアーゼＢＰＮ’－Ｙ２１７Ｌサブチリシンを洗剤に３．０％（ｗ／ｗ）にて加えた。マンナナーゼ及びプロテアーゼサンプルを含有する洗剤を、３７℃に置いた。アリコートを種々の時点（０～２８日目）で取り出して、凍結させた。全てのサンプルの残留マンナナーゼ活性を、下記のようにアッセイした。
残留マンナナーゼ活性アッセイ
マンナナーゼのβ－１，４－マンナナーゼ活性を、放出された還元糖を定量化することによって測定した。用いた基質は、０．２８％ＬＢＧガラクトマンナン（Ｓｉｇｍａ Ｇ０７５３）であった。放出された糖を、還元糖と反応するジニトロサリチル酸（ＤＮＳ）を用いて定量化した；その５４０ｎｍでの吸光度は、酵素活性と比例する。
作用基質溶液（５０ｍＭトリスＨＣｌバッファ、ｐＨ７．５中２．８ｇ／ｌ ＬＢＧ、実施例２に記載したようにして調製）の０．４ｍＬアリコートを、水バス中で４０℃にて１０分間プレ平衡させることによって、アッセイを実行した。プレ平衡基質溶液中への０．１ｍＬの１．９ｐｐｍマンナナーゼ溶液の付加によって反応を開始させて、混合して、４０℃にて１５分間インキュベートした。反応は、０．６ｍＬの３，５－ジニトロサリチル酸試薬（４３．８ｍＭ ３，５－ジニトロサリチル酸、４００ｍＭ水酸化ナトリウム、１．０６Ｍ酒石酸カリウムナトリウム四水和物）の付加によって終了した。反応管を、１００℃の水バス内に１５分間置いてから、氷バス上で５分間冷却して、室温にて１０分間さらに平衡させた。吸光度を、５４０ｎｍにて測定して、ＬＢＧガラクトマンナンに対する相対酵素活性を判定した。
次に、各マンナナーゼについての残留マンナナーゼ活性データを、１フェーズ指数関数的減衰モデルを用いてフィットさせた。これらのデータから半減期（日）を判定して、表４に示す。半減期は、元のマンナナーゼ活性の５０％が観察される時期である。ＰｓｐＭａｎ１３８の半減期は、プロテアーゼの存在下で、市販の液体洗濯洗剤中のＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４Ｌ（表４において「ベンチマーク」と呼ぶ）よりも向上している。
Figure 0007364331000006
実施例５
相同マンナナーゼの同定
関連タンパク質を、ＰｓｐＭａｎ１３８の成熟したアミノ酸配列（配列番号１３）を用いて、ＮＣＢＩ非重複タンパク質データベースに対するＢＬＡＳＴ検索（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，２５：３３８９－４０２，１９９７）によって同定した。サブセットを表５Ａに示す。類似した検索を、Ｇｅｎｏｍｅ Ｑｕｅｓｔ Ｐａｔｅｎｔデータベースに対してランした。検索パラメータは、ＰｓｐＭａｎ１３８の成熟したタンパク質アミノ酸配列（配列番号１３）をクエリ配列として用いるデフォルト値に設定した。サブセットを表５Ｂに示す。
同一残基の数を、ペアワイズアラインメントにおいてアラインした残基の数で割ることによって、双方の検索セットについてのパーセント同一性（ＰＩＤ）を定義する。「アラインメント長」の名称の欄は、一覧にした受託Ｎｏ．と関連するタンパク質配列の長さ（アミノ酸）を指す一方、「配列長」の名称の欄は、ＰＩＤ計算に用いた、アラインしたタンパク質配列の長さ（アミノ酸）を指す。
Figure 0007364331000007
Figure 0007364331000008
Figure 0007364331000009
相同配列のアラインメント
ＰｓｐＭａｎ１３８（配列番号１３）及び親ＰｓｐＭａｎ４（配列番号１４）を含むＮＤＬ－クレードマンナナーゼについての成熟したタンパク質アミノ酸配列の、ＢｃｉＭａｎ１＿ＢＡＡ２５８７８．１（配列番号４０）、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＢＡＤ９９５２７．１（配列番号４３）、Ｂ．ネアルソニィ（Ｂ＿ｎｅａｌｓｏｎｉｉ）＿ＡＧＵ７１４６６．１（配列番号４２）、バチルス（Ｂａｃ．）属種＿ＷＯ２０１５０２２４２８－００１５（配列番号４４）、Ｂ．レンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）＿ＷＯ２０１４１０００１８－０００２（配列番号４１）、ＵＳ６５６６１１４－００２（配列番号１６０）、並びにＰａｍＭａｎ２、ＰａｍＭａｎ３、ＰｔｕＭａｎ２、ＰｐａＭａｎ２、及びＰｓｐＭａｎ９（これらは、２０１５年７月１０日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／４００５７号明細書（後に国際公開第２０１６／００７９２９号パンフレットとして公開）においてより完全に記載されている）の成熟した形態を含む他のマンナナーゼの成熟したタンパク質アミノ酸配列とのアラインメントを、図２に示す。配列を、Ｇｅｎｅｉｏｕｓソフトウェア（Ｂｉｏｍａｔｔｅｒｓ Ｌｔｄ．）のＭＵＳＣＬＥプログラム（Ｒｏｂｅｒｔ Ｃ．Ｅｄｇａｒ．ＭＵＳＣＬＥ：ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００４）３２（５）：１７９２－１７９７）を用いて、デフォルトのパラメータでアラインした。図２の種々のマンナナーゼの成熟した形態のアミノ酸配列についての系統樹を、Ｇｅｎｅｉｏｕｓ Ｔｒｅｅビルダープログラムを用いて構築して、図３に表す。
実施例６
ＰｓｐＭａｎ１３８マンナナーゼの特有の特徴
ＰｓｐＭａｎ１３８（配列番号１３）及び親ＰｓｐＭａｎ４（配列番号１４）のアミノ酸配列を、ＣＬＵＳＴＡＬＷソフトウェア（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２：４６７３－４６８０，１９９４）を用いて、デフォルトのパラメータでアラインして、図２に示した。アラインメントは、ＰｓｐＭａｎ１３８及びＰｓｐＭａｎ４が、残基Ｔｒｐ３１からＩｌｅ４０まで延びるモチーフを共有していることを示した。ポリペプチドのアミノ酸位置は、配列番号１４に示すアミノ配列との対応によって番号を付けている。ＮＤＬマンナナーゼは、クレード（以降ＮＤＬ－Ｃｌａｄｅと呼ぶ）を生じさせる特徴を共有しており、用語ＮＤＬは、Ｎ末端近くの保存された残基ＮＤＬ（Ａｓｎ３４－Ａｓｐ３５－Ｌｅｕ３６）に由来する。このモチーフを、ＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）と記載することができ、式中、Ｘａは、Ｆ又はＹであり、Ｘは、あらゆるアミノ酸である（「モチーフ１」）。当該モチーフは、２０１５年７月１０日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／４００５７号明細書（後に国際公開第２０１６／００７９２９号パンフレットとして公開）においてより完全に記載されている。
ＮＤＬ－Ｃｌａｄｅのメンバーはまた、保存されたモチーフを、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種ＪＡＭＢ－６０２＿ＢＡＤ９９５２７．１（Ａｋｉｔａ ｅｔ ａｌ（２００４）Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ６０：１４９０－１４９２）、並びに他の基準マンナナーゼ配列、例えば、Ｂ．ネアルソニィ（Ｂ＿ｎｅａｌｓｏｎｉｉ）＿ＡＧＵ７１４６６．１及びＢｃｉｍａｎ１＿Ｂ．サーキュランス（Ｂ＿ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）＿ＢＡＡ２５８７８．１に存在しない欠失の重要な特徴と共に共有する（以降「欠失モチーフ」）。欠失モチーフは、残基Ｌｅｕ２６３－Ａｓｐ２６４（ＬＤ）からＬｅｕ２７３－Ｔｈｒ２７４（ＬＴ）の間に出現し、ポリペプチドのアミノ酸位置は、配列番号１４に示すアミノ配列との対応によって番号を付けており、そして以下の配列を含む：ＬＤＸＸＸＧＰＸＧＸＬＴ（配列番号１６）（式中、Ｘは、あらゆるアミノ酸である）（「欠失モチーフ１」）；ＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）（式中、Ｘ１は、Ｌ又はＭであり、Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）（「欠失モチーフ２」）；又はＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）（「欠失モチーフ３」）。欠失モチーフは、２０１５年７月１０日出願の国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ１５／４００５７号明細書（後に国際公開第２０１６／００７９２９号パンフレットとして公開）においてより完全に記載されている。
実施例７
付加的なパエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種ＰｓｐＭａｎ４変異体のクローニング及び発現
付加的なパエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属種ＰｓｐＭａｎ４変異体を生じさせるＤＮＡ操作を、実施例１に記載するようにして、表１に一覧にしたプライマーで実行した。親ＰｓｐＭａｎ４（配列番号１４）に対して配列置換が生じたＰｓｐＭａｎ４変異体のリストを、表６に示す。成熟したＰｓｐＭａｎ４変異体のアミノ酸配列：ＰｓｐＭａｎ１１５～１２２、ＰｓｐＭａｎ１２４～１３０、ＰｓｐＭａｎ１３２～１４５、ＰｓｐＭａｎ１４８、ＰｓｐＭａｎ１５０～１５８、ＰｓｐＭａｎ６１５３、ＰｓｐＭａｎ６４２８、ＰｓｐＭａｎ６４３５、ＰｓｐＭａｎ６５７４、ＰｓｐＭａｎ６６６８、ＰｓｐＭａｎ６６７０、ＰｓｐＭａｎ６７２２、ＰｓｐＭａｎ７１５４、ＰｓｐＭａｎ＿ＨＭ４８～６４、ＰｓｐＭａｎ＿ＨＭ６６～６７、及びＰｓｐＭａｎ＿ＨＭ７１を、配列番号４６～９１、１４１～１５９、及び１６１に示す。
Figure 0007364331000010
Figure 0007364331000011
Figure 0007364331000012
ＰｓｐＭａｎ４変異体の固有のシグナルペプチドについての核酸配列を、配列番号９２として示す。成熟したＰｓｐＭａｎ４変異体をコードする遺伝子のヌクレオチド配列：ＰｓｐＭａｎ１１５～１２２、ＰｓｐＭａｎ１２４～１３０、ＰｓｐＭａｎ１３２～１４５、ＰｓｐＭａｎ１４８、ＰｓｐＭａｎ１５０～１５８、ＰｓｐＭａｎ６１５３、ＰｓｐＭａｎ６４２８、ＰｓｐＭａｎ６４３５、ＰｓｐＭａｎ６５７４、ＰｓｐＭａｎ６６６８、ＰｓｐＭａｎ６６７０、ＰｓｐＭａｎ６７２２、及びＰｓｐＭａｎ７１５４を、配列番号９３～１３９に示す。ＰｓｐＭａｎ４変異体のシグナルペプチドのアミノ酸配列を、配列番号１４０として示す。
実施例８
ミクロスワッチアッセイを用いたＰｓｐＭａｎ４変異体の洗浄性能
生化学的特徴付け用にＰｓｐＭａｎ４変異体酵素サンプルを作製するために、形質転換した枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞の選択的増殖を、９６ウェルＭＴＰ中で３７℃にて６８時間、各ウェル内の培地（主要な窒素源としての尿素、主要な炭素源としてのグルコースを有し、ロバストな細胞増殖のために１％ソイトンを補った、ＭＯＰＳバッファに基づく半規定富化培地）中で実行した。培養物を、３６００ｒｐｍにて４５分間の遠心分離によって収穫して、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ（登録商標）フィルタプレート（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）により、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ真空系を用いて濾過した。濾過した培養液の上澄みを、以下に記載するアッセイに用いた。
ＰｓｐＭａｎ４変異体を、以下の実施例で示すように、ローカストビーンガム（ＬＢＧ）ミクロスワッチ（ＣＦＴ Ｃ－Ｓ－７３，Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）に対する洗浄性能について、親の性能と比較して試験した。
人為的な汚れからのガラクトマンナン除去を測定するために開発された高スループットアッセイを用いて、洗浄性能を測定した。アッセイは、ＬＢＧを含有する人為的な汚れからのＬＢＧの放出を測定する。市販の試薬（カタログＮｏ．２３２２５，Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いたＢＣＡ反応を用いて、酵素の存在下での溶液中のオリゴサッカライドの還元末端を、ブランク対照と比較して測定した。この測定値は、酵素の洗浄性能と相関する。マンナナーゼがガラクトマンナンを加水分解するので、還元末端を有する様々な長さのオリゴサッカライドが、おそらく、ワタスワッチから放出される。次に、ＢＣＡ試薬中のビシンコニン酸により、Ｃｕ２＋の還元によって形成されるＣｕ１＋の高度に感度の良い比色検出が可能となる。
５．５ｃｍ直径の２つのＬＢＧミクロスワッチ（ＣＦＴ Ｃ－Ｓ－７３）を、平底ノンバインディング９６ウェルアッセイプレート（例えばＣｏｒｎｉｎｇ ３６４１）の各ウェルに入れた。酵素を、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０含有中に希釈した。ミクロスワッチアッセイバッファ（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８、２ｍＭ ＣａＣｌ２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０）及び希釈酵素のアリコートを、９６ウェルミクロスワッチアッセイプレートの各ウェルに、組み合わせて１００μＬ容量になるように加えた。プレートをシールして、（例えば、ｉＥＭＳインキュベーター／シェーカー、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡにおいて）１１５０ｒｐｍにて２０分間撹拌しながら、２５℃にてインキュベートした。インキュベーションの後、放出された還元糖を、実施例２の節「マンナナーゼ活性アッセイ」に記載したＢＣＡ試薬アッセイを用いて定量化した。生じた吸光度を、洗浄性能の尺度とした。変異体の洗浄性能を、同じタンパク質濃度の親の洗浄性能で割ることによって、洗浄性能ＰＩ値を算出した。親酵素の標準曲線について測定した値のＬａｎｇｍｕｉｒフィットから抽出したパラメータを用いて、関連タンパク質濃度での親酵素の洗浄性能についての理論値を算出した。表７は、先に記載したミクロスワッチアッセイにおいて、ＰｓｐＭａｎ４親に対して洗浄性能が向上したＰｓｐＭａｎ４変異体を示す。
Figure 0007364331000013
実施例９
バッファ溶液中でのＰｓｐＭａｎ４変異体の安定性
高温にて５分間のインキュベーション後にサンプルの残留活性を測定することによって、ＰｓｐＭａｎ４変異体の安定性を、表８に示す温度での、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０におけるストレス条件下で試験した。バッファ中でのタンパク質安定性アッセイに用いた条件を、表８に示す。
Figure 0007364331000014
初期の（ストレスのない）活性を測定するために、実施例２の節「マンナナーゼ活性アッセイ」に記載したアッセイを用いて、酵素サンプルを、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０中に希釈して、直ちに、ＬＢＧに対する活性についてアッセイした。ストレスを受けた活性を測定するために、実施例２の節「マンナナーゼ活性アッセイ」に記載したように、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０中に希釈した酵素サンプルを、シールしたＰＣＲプレート内で、サーモサイクラー（Ｔｅｔｒａｄ２ Ｐｅｌｔｉｅｒ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）において高温（表８に示す）にて５分間インキュベートしてから、活性についてアッセイした。
残留活性の計算
先に記載したように、ストレスを受けた活性の値及びストレスのない活性の値を、ＬＢＧ基質の加水分解によって一旦測定して、ストレスを受けた活性の、ストレスのない活性に対する比率をとって、１００を乗じることによって、％残留活性を算出した。表９は、表８に記載した条件下での安定性アッセイにおいて、ＰｓｐＭａｎ４親よりも安定性が向上したＰｓｐＭａｎ４変異体を示す。
Figure 0007364331000015
実施例１０
洗剤溶液中でのＰｓｐＭａｎ４変異体の安定性
ＰｓｐＭａｎ４変異体の安定性を、ストレス条件下で、市販のＴＩＤＥ（登録商標）液体洗濯洗剤（Ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｃｅｎｔ，Ｐｒｏｃｔｅｒ ａｎｄ Ｇａｍｂｌｅ、２０１４年に一地方のスーパーマーケットで購入して、実施例４に記載したプロトコルを用いて熱不活化した）の１０％（ｖ／ｖ）水溶液中で、高温（表１０に示す）にて５分間インキュベーションした後のサンプルの残留活性を測定することによって、試験した。
Figure 0007364331000016
熱不活化洗剤の１２．５％（ｖ／ｖ）水溶液を調製して、濾過した培養液の上澄み由来の酵素サンプルを、この洗剤溶液の、１０％（ｖ／ｖ）の最終洗剤濃度を達成するのに適切な容量と混合した。初期の（ストレスのない）活性を測定するために、実施例２で記載したマンナナーゼ活性アッセイを用いて、この混合物のアリコートを直ちに、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０中に希釈して、ＬＢＧに対する活性についてアッセイした。ストレスを受けた活性を測定するために、実施例２のマンナナーゼ活性アッセイに記載したように、洗剤溶液と混合した酵素サンプルを、シールしたＰＣＲプレート内で、サーモサイクラー（Ｔｅｔｒａｄ２ Ｐｅｌｔｉｅｒ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）において高温（表１０に示す）にて５分間インキュベートしてから、５０ｍＭ ＭＯＰＳバッファ、ｐＨ７．２、０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０中に希釈して、活性についてアッセイした。
残留活性の計算
先に記載したように、ストレスを受けた活性の値及びストレスのない活性の値を、ＬＢＧ基質の加水分解によって一旦測定して、ストレスを受けた活性の、ストレスのない活性に対する比率をとって、１００を乗じることによって、％残留活性を算出した。誤差限界は、約５％以内であった。表１１は、表１０に記載した条件下での安定性アッセイにおいて、ＰｓｐＭａｎ４親よりも安定性が向上したＰｓｐＭａｎ４変異体を示す。
Figure 0007364331000017
実施例１１
Ｔｅｒｇ－ｏ－ｔｏｍｅｔｅｒ中でのＰｓｐＭａｎ１１８変異体の洗浄性能
ＰｓｐＭａｎ１１８を、ＭＥＳバッファｐＨ５．３中での硫酸アンモニウム沈殿によって清澄化したバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属培養液の上澄みから単離した。精製を、疎水性交換クロマトグラフィに続く、５０ｍＭ ＭＥＳバッファ、ｐＨ６．０中への透析によって達成した。次に、プロピレングリコールを加えて４０％の最終濃度にして、サンプルを、更なる特徴付けまで冷蔵保存した。
ＰｓｐＭａｎ１１８及び市販のマンナナーゼ（ＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４Ｌ、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ ＡＳ，Ｄｅｎｍａｒｋ）の洗い性能を、洗濯洗剤用途において、Ｔｅｒｇ－ｏ－ｔｏｍｅｔｅｒを用いて試験した。性能評価を１６℃にて行った。汚れ負荷は、１Ｌの脱イオン水で満たしたｔｅｒｇ－ｏ－ｔｏｍｅｔｅｒビーカーにおいて、２つのＣＦＴ Ｃ－Ｓ－７３ ＬＢＧのスワッチ（Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｅｓｔｍａｔｅｒｉａｌｓ ＢＶ，Ｖｌａａｒｄｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）からなった。水硬度を１００ｐｐｍ（３：１ Ｃａ：Ｍｇ）に調整した。Ｕｌｔｒａ Ｔｉｄｅ（登録商標）Ｃｌｅａｎ Ｂｒｅｅｚｅ Ｐｏｗｄｅｒ Ｌａｕｎｄｒｙ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ（２０１４年に一地方のスーパーマーケットで購入した）を、ビーカーに０．６ｇ／Ｌにて加えた。各マンナナーゼを、ビーカーに種々の用量にて、１２分の洗い用に加えた。洗い処理の後、スワッチを遠心乾燥させてから、空気乾燥させた。各スワッチを、色彩計（Ｋｏｎｉｃａ Ｍｉｎｏｌｔａ Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ－４１０、５０ｍｍの口径）を用いて、処理の前後に測定した。
Ｌ、ａ、ｂ値の差異を、ＣＩＥ－ＬＡＢ色空間によって定義される総色差（ｄＥ）に変換した。これらの値を用いて、スワッチの洗浄レベルを判定して、結果をパーセント染み除去（％ＳＲＩ）として表した。ＰｓｐＭａｎ１１８及びＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４ＬによるＣＦＴ Ｃ－Ｓ－７３スワッチの洗浄結果を、図４に示す。この洗浄アッセイにおいて、ＰｓｐＭａｎ１１８及びＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）４Ｌは、粉末洗濯洗剤中で、ＬＢＧの汚れに対して、匹敵する染み除去を示した。
実施例１２
ＰｓｐＭａｎ４変異体の結晶構造
ＰｓｐＭａｎ４変異体、ＰｓｐＭａｎ１１８及びＰｓｐＭａｎ１４８の三次元構造を、Ｘ線結晶学的方法を用いて判定した。
突然変異Ｐ１９Ｅ／Ｔ３８Ｅ／Ｎ６７Ｄ／Ｎ９７Ｄ／Ｙ１２９Ｍ／Ｐ１６８Ｓ／Ｑ１８４Ｌ／Ｋ２４４Ｌ／Ｓ２５８Ｄ／Ｎ２６１Ｒを有するＰｓｐＭａｎ１１８（配列番号４９）（アミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けている）を、ハンギングドロップ法を用いて、５０ｍＭ塩化ナトリウムを有する５０ｍＭ ＭＥＳバッファ、ｐＨ６．０中１％タンパク質溶液で始めて結晶化させた。リザーバー溶液は、０．７Ｍリン酸ナトリウム、０．８Ｍリン酸カリウム、及び０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５を含有した。結晶は、一分子が単位格子定数（ｕｎｉｔ ｃｅｌｌ ｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓ）ａ＝５３．２Å、ｂ＝７６．７Å、及びｃ＝７７．３Åの非対称単位である空間群Ｐ２１２１２１に成長した。
突然変異Ｎ１０Ｔ／Ｐ１９Ｅ／Ｓ３０Ｔ／Ｔ３８Ｅ／Ｓ５９Ｖ／Ｌ６０Ｑ／Ｋ６３Ｒ／Ｎ６７Ｄ／Ｎ９７Ｄ／Ｙ１２９Ｍ／Ｋ１４３Ｑ／Ｐ１６８Ｓ／Ｑ１８４Ｌ／Ｇ２２５Ｐ／Ｔ２２８Ｖ／Ｙ２３５Ｌ／Ｋ２４４Ｌ／Ｓ２５８Ｄ／Ｎ２６１Ｒ／Ｚ２９８．０１Ｑを有するＰｓｐＭａｎ１４８（配列番号７４）（アミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けている）を、ハンギングドロップ法を用いて、５０ｍＭ塩化ナトリウムを有する５０ｍＭ ＭＥＳバッファ、ｐＨ６．０中１％タンパク質溶液で始めて結晶化させた。リザーバー溶液は、１６％ ２－プロパノール、０．１６Ｍ塩化カルシウム、及び８０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．６を含有した。結晶は、一分子が単位格子定数ａ＝５２．８Å、ｂ＝７７．０Å、及びｃ＝７８．５Åの非対称単位である空間群Ｐ２１２１２１に成長した。
ＰｓｐＭａｎ１１８結晶及びＰｓｐＭａｎ１４８結晶についてのデータを、Ｂｒｕｋｅｒ Ｘ８ Ｐｒｏｔｅｕｍ回折系で、それぞれ１．８Å及び１．７Åの分解能で収集した。データ収集についての付加的な統計を、表１２に示す。
ＰｓｐＭａｎ１１８の構造を、出発モデルとしてのバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種ＪＡＭＢ－６０２マンナナーゼ（受託番号ＢＡＤ９９５２７．１、ＰＤＢエントリ１ＷＫＹ＿Ａ）由来の残基２７～３２６の座標との分子置換を用いて判定した。モデルを、Ｃｏｏｔソフトウェアパッケージを用いてフィットさせた［Ｅｍｓｌｅｙ，Ｐ．ｅｔ ａｌ（２０１０），Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．Ｄ；６６：４８６－５０１］。
ＰｓｐＭａｎ１４８の構造を、出発モデルとしてのＰｓｐＭａｎ１１８の座標との分子置換を用いて判定した。付加的な置換について電子密度を合わせるように座標を調整して、Ｃｏｏｔソフトウェアパッケージを用いてフィットさせた。ＰｓｐＭａｎ１４８のＣ末端に挿入された付加的な残基、Ｚ２９８．０１Ｑについて、疎らな弱い密度が観察された。フィッティング調整及びリフィッティング調整の後に、双方の構造についての座標を、ＣＣＰ４ソフトウェアスイートにおいて標準的なデフォルト設定のＲＥＦＭＡＣプログラムを用いてリファインした。
表１３に報告するように、最終モデルは立体化学が良好であった。参照のため、ＰｓｐＭａｎ１１８変異体及びＰｓｐＭａｎ１４８変異体の座標をアラインすることができ、１９５４個の共通原子について、全体のｒｍｓ（二乗平均平方根）偏差が０．１３３Åであった。
Figure 0007364331000018
Figure 0007364331000019
ＰｓｐＭａｎ１１８モノマーの座標を、２つの他のマンナナーゼ構造：バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属種株ＪＡＭＢ－６０２マンナナーゼ（ＰＤＢエントリ１ＷＫＹ＿Ａ）及びＢ．アガラドハエレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）株ＮＣＩＭＢ ４０４８２マンナナーゼ（ＰＤＢエントリ２ＷＨＬ＿Ａ）の触媒ドメインと重ねると、全ての共通原子を用いて、全体のｒｍｓ偏差がそれぞれ０．３８Å及び０．４２Åである。ゆえに、これらの３つの酵素が、ＰｓｐＭａｎ４の残基１～２９５に対して約６０％のみのアミノ酸配列同一性を共有するにしても、３つのマンナナーゼは全て、触媒ドメインについて共通の折畳みを共有する。
図５は、１ＷＫＹ＿Ａマンナナーゼの、ＰｓｐＭａｎ１１８変異体との構造比較を表しており、１ＷＫＹ＿Ａの主鎖折畳み（灰色で示す）を、ＰｓｐＭａｎ１１８の主鎖折畳み（黒色で示す）と比較している。図５は、ＰｓｐＭａｎ１１８が、１ＷＫＹ＿Ａと共通の陽イオン結合部位を共有することを、そして１ＷＫＹ＿Ａが、付加的な炭水化物結合ドメインを有することを示す。ＰｓｐＭａｎ１１８が１ＷＫＹ＿Ａと共有する陽イオン結合部位は、Ｇｌｙ２２５残基のカルボニル酸素、Ａｓｐ２３１の側鎖、Ｔｈｒ２３２のカルボニル酸素、及びＧｌｕ２３４の側鎖によって形成される。
ＰｓｐＭａｎ１１８及びＰｓｐＭａｎ１４８は、他のＧＨ５マンナナーゼ配列、例えば１ＷＫＹ＿Ａ及び２ＷＨＬ＿Ａによって例示されるものに対して、２つのモチーフ：（ｉ）位置Ｎ３４Ｄ３５Ｌ３６のＮＤＬモチーフ、及び（ｉｉ）位置２６３～２７４にまたがる欠失モチーフ（アミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けている）によってさらに特徴付けられ得る。図６は、ＰｓｐＭａｎ１１８の、１ＷＫＹ＿Ａとの更なる構造比較を表しており、この比較は、ＰｓｐＭａｎ１１８のＮＤＬモチーフ及び欠失モチーフを包含する残基が、互いに近接であることを示す。
Ｂ．アガラドハエレンス（Ｂ．ａｇａｒａｄｈａｅｒｅｎｓ）２ＷＨＬ＿Ａマンナナーゼ構造は、マンノトリオシル－酵素複合体として報告されてきた。ＰｓｐＭａｎ１４８の構造を、２ＷＨＬ＿Ａとアラインして、活性部位において結合するマンノトリオースに対する変異部位の位置を研究した。ＰｓｐＭａｎ１４８を比較のために選択した。というのもこれは、ＰｓｐＭａｎ１１８に存在する１０個の置換を全て、そしてＣ末端の９個の付加的置換及び１個の挿入を含むからである。ＰｓｐＭａｎ１１８と同様に、ＰｓｐＭａｎ１４８の構造を２ＷＨＬ＿Ａの構造とアラインすることができ、結果として、１６６０個の共通原子について、０．４０５Åの全体的なｒｍｓ偏差が生じる。ＰｓｐＭａｎ１４８構造及び２ＷＨＬ＿Ａ構造の重ね合せを、図７Ａ～図７Ｃに表す。
図７Ａにおいて、２ＷＨＬ＿Ａの主鎖折畳みを淡い灰色で概略的に示し、そしてマンノトリオースを淡い灰色のスティックとして示す。ＰｓｐＭａｎ１４８の主鎖を黒色で示し、１９個の置換アミノ酸の側鎖を黒色のスティック図として示す。ＰｓｐＭａｎ１４８内に挿入されたアミノ酸Ｚ２９８．０１Ｑは、電子密度地図において乱れ（ｄｉｓｏｒｄｅｒｅｄ）、この図に含まれていない。
ＰｓｐＭａｎ１４８における１９個の置換のうち７個が、基質結合部位に位置する。これらは、Ｓ３０Ｔ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｋ６３Ｒ、Ｔ２２８Ｖ、Ｓ２５８Ｄ、及びＮ２６１Ｒを含む（アミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けている）。図７Ｂは、ＰｓｐＭａｎ１４８構造及び２ＷＨＬ＿Ａ構造の重ね合せを示し、基質結合部位の置換を黒色の球として示す。これらの置換のうち、Ｌ６０Ｑは、１ＷＫＹ＿Ａ構造及び２ＷＨＬ＿Ａ構造の双方における相同位置にて見られ得る側鎖を導入している。ＰｓｐＭａｎ１４８の活性部位中に見出される２つの他の残基：Ｔｒｐ６１及びＴｒｐ２６０は、１ＷＫＹ＿Ａ及び２ＷＨＬ＿Ａの双方に共通である（アミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けている）。これらのマンナナーゼ間の強い構造的類似性を考慮すると、１ＷＫＹ＿Ａマンナナーゼ又は２ＷＨＬ＿Ａマンナナーゼのいずれかの構造的相同部位にてＰｓｐＭａｎ４の向上を付与する置換を導入することで、これらの分子に、性能及び／又は安定性の類似した向上が付与され得ると予想することができる。
図７Ｂにおいて、２ＷＨＬ＿Ａマンナナーゼに結合したマンノトリオシル部分を、灰色のスティックとして示して、基質結合部位の相対的位置を示す。基質結合部位の周りの、且つ近くの、ＰｓｐＭａｎ１４８における７個の置換（Ｓ３０Ｔ、Ｓ５９Ｖ、Ｌ６０Ｑ、Ｋ６３Ｒ、Ｔ２２８Ｖ、Ｓ２５８Ｄ、及びＮ２６１Ｒ）の位置を、黒色の球として示す。
図７Ｃに見られるように、ＰｓｐＭａｎ１４８中の残りの１２個の置換は、分子の表面上に分配されている（黒色の球として示す）。これらの１２個の置換のうち、Ｑ１８４Ｌ及びＧ２２５Ｐに特に注目する。Ｑ１８４Ｌ置換は、Ａｒｇ１４９とＧｌｕ１８２との間の塩架橋を保護するロイシン側鎖を導入することによって、タンパク質を安定化させる。Ｇ２２５Ｐ置換は、剛性付与（ｒｉｇｉｄｉｆｙｉｎｇ）プロリン残基を導入し、そこで主鎖カルボニル酸素は、陽イオン（ＰｓｐＭａｎ１４８中のカルシウムイオン）に対するリガンドを形成することによって、結合したカルシウムを潜在的に安定化させて、これにより酵素は、洗剤製剤中に存在するキレート剤に対する感度がより低くなる。
実施例１３
ＰｓｐＭａｎ４変異体の、年数を経た洗浄性能
ＰｓｐＭａｎ４変異体を、１００％洗剤中での室温でのインキュベーションの前後の洗浄性能について試験した。インキュベーション後の残りの％洗浄活性を、インキュベーション前の初期の洗浄活性と比較した。
インキュベーションに用いる市販の液体洗濯洗剤を、一地方のスーパーマーケットで購入して（洗剤名：Ｔｏｔａｌ Ｃｏｌｏｒ；メーカー：自家ブランド；購入国：スイス；購入年：２０１１年）、先の実施例４に記載したプロトコルを用いて熱不活化した。
１枚のミニ撹拌ディスク（Ｔｕｍｂｌｅ Ｓｔｉｒ Ｄｉｓｋ，カタログＮｏ．Ｐ ７２１Ｆ－１，Ｖ＆Ｐ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を、Ｕ底のローバインディングポリプロピレン９６ウェルＭＴＰの各ウェルに入れてから、１００％Ｔｏｔａｌ Ｃｏｌｏｒ液体洗剤を加えた。濾過した培養液の上澄み由来の酵素サンプルを、この洗剤で満たしたＭＴＰに加えて（サンプルの、洗剤に対する比率はおおよそ１：１１（ｖ／ｖ））、磁気タンブリング混合装置（ＶＰ７１０シリーズ、Ｖ＆Ｐ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて５分間混合した。酵素－洗剤インキュベーションプレートの各ウェルからアリコートを採って、先の実施例８に記載したミクロスワッチ洗浄性能アッセイを実行することによって、初期の洗浄性能（時点Ｔ＝０）を測定した。ミクロスワッチアッセイプレートにおけるサンプルの、バッファに対する比率は、１：９（ｖ／ｖ）であった。
次に、洗剤－酵素プレートを、表１４Ａ及び表１４Ｂの見出しに示す時間（それぞれ７時間及び９時間）、室温にてインキュベートして、インキュベーション期間の終わりに酵素－洗剤インキュベーションプレートの各ウェルからアリコートを採って、先の実施例８に記載したミクロスワッチ洗浄性能アッセイを実行することによって、インキュベーション後に残留する洗浄活性を判定した。ミクロスワッチアッセイプレートにおけるサンプルの、バッファに対する比率は、１：９（ｖ／ｖ）であった。残留洗浄値（％残留洗浄活性）を、インキュベーション後の洗浄活性（ミクロスワッチ洗浄アッセイにおいて測定した）の、時間Ｔ＝０にて測定した初期の洗浄活性に対する比率をとって、１００を乗じることによって得た。
表１４Ａ及び表１４Ｂは、年数を経た洗浄性能アッセイ（示したインキュベーション期間後に残留する％洗浄活性として示す）におけるＰｓｐＭａｎ４変異体の性能を、ＰｓｐＭａｎ４親と比較して一覧にしている。
Figure 0007364331000020
Figure 0007364331000021

Claims (16)

  1. 配列番号１４のアミノ酸配列を有する基準ポリペプチドに由来し、マンナナーゼ活性を有する、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片であって、
    前記基準ポリペプチドと比較した改変として以下のアミノ酸置換の組み合わせまたはアミノ酸置換の組み合わせおよび位置２９８でのＱの挿入（以下、「Ｚ２９８．０１Ｑ」という。）：Ｙ１２９Ｍ－Ｋ２４４Ｌ、Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｋ２４４Ｌ、Ｔ３８Ｅ－Ｓ２５８Ｄ、Ｔ３８Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｓ２５８Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｄ、Ｐ１９Ｅ－Ｑ１８４Ｌ、Ｐ１９Ｅ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｃ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｃ、Ｌ６０Ｑ－Ｙ６１Ｗ、Ｎ９７Ｄ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ９７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｇ２２５Ｐ、Ｎ６７Ｄ－Ｐ１６８Ｓ、Ｎ６７Ｄ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ、Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ１４３Ｑ、Ｋ６３Ｒ－Ｎ７１Ｄ、Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ、Ｋ１４３Ｑ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ、Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｑ２４２Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｌ６６Ｖ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７４Ｓ－Ｖ７５Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｑ１８４Ｌ－Ａ２１７Ｐ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｉ１２４Ｖ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｈ－Ｋ８０Ｔ－Ｉ８２Ｍ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｇ４Ｓ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｔ１３１Ａ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｌ－Ｋ７０Ｒ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２１４Ｉ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｖ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｆ１６７Ｙ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ａ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｙ６Ｅ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｓ１３５Ｌ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｄ２８３Ｓ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｐ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ａ２Ｓ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ｓ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｎ７４Ｅ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｎ１５０Ｔ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｍ１Ｌ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ａ１３６Ｌ－Ｐ１６８Ａ－Ｑ１８４Ｌ－Ｎ２１３Ａ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｔ３Ｒ－Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｔ６２Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｌ－Ｅ１１１Ｓ－Ｙ１２９Ｍ－Ｄ１３９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｑ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｎ１０Ｔ－Ｐ１９Ｅ－Ｇ２８Ａ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｄ－Ｎ６７Ｄ－Ａ６８Ｓ－Ｎ７１Ｄ－Ｋ９３Ｒ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｑ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｄ－Ｇ２２５Ｃ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｔ２８４Ｅ－Ｚ２９８．０１Ｑ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｋ２４４Ｌ－Ｇ２５９Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ７１Ｄ－Ｑ７８Ｄ－Ｋ８０Ｔ－Ｎ９７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｎ６７Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ；Ｐ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｋ１４３Ｒ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｇ２５９Ｐ；又はＰ１９Ｅ－Ｔ３８Ｅ－Ｋ６３Ｌ－Ｎ７１Ｄ－Ｙ１２９Ｍ－Ｐ１６８Ｓ－Ｑ１８４Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒを含み、
    前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられ、
    前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、配列番号１３のアミノ酸配列に対するアミノ酸配列同一性が少なくとも９５％であり、
    前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、前記基準ポリペプチドと比較して、１つ又は複数の特性が向上しており；特性の前記向上は、プロテアーゼの存在下での安定性の向上、洗剤又はバッファ中での安定性の向上、及び洗浄性能の向上から選択され、
    特性の前記向上は、
    （ｉ）洗剤中またはバッファ中での安定性の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、約４０℃～約７０℃、約４５℃～約６５℃、約５０℃～約６０℃、約６０℃～約７０℃、又は約５６℃の温度にて、少なくとも５分間、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％の残留マンナナーゼ活性を保持する、向上；
    （ｉｉ）プロテアーゼの存在下での安定性の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、プロテアーゼ及び／又は界面活性剤の存在下で、少なくとも１５日間、又は約１５～約４０日間、マンナナーゼ活性を少なくとも５０％保持する、向上；
    （ｉｉｉ）洗浄性能の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ローカストビーンガムの染みの洗浄ＰＩが＞１である、向上；並びに
    （ｉｖ）所定時間経過後の洗浄性能の向上であって、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、７時間後に洗浄活性が少なくとも１５％残留しており、又は９時間後に洗浄活性が少なくとも１１％残留している、向上
    である、マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
  2. 前記改変は、Ｐ１９Ｅ－Ｓ３０Ｔ－Ｔ３８Ｅ－Ｓ５９Ｖ－Ｌ６０Ｑ－Ｋ６３Ｒ－Ｎ６７Ｄ－Ｎ９７Ｄ－Ｖ１０３Ｉ－Ｙ１２９Ｍ－Ｆ１６７Ｙ－Ｑ１８４Ｌ－Ｇ２２５Ｃ－Ｔ２２８Ｖ－Ｙ２３５Ｌ－Ｋ２４４Ｌ－Ｓ２５８Ｄ－Ｎ２６１Ｒ－Ｚ２９８．０１Ｑであり；
    前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている、請求項１に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
  3. 前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに：
    （ｉ）位置３１～４０にてＷＸａＫＮＤＬＸＸＡＩ（配列番号１５）のモチーフ（式中、Ｘａは、Ｆ又はＹであり、Ｘは、任意のアミノ酸である）；
    （ｉｉ）位置２６３～２７４にてＬＤＸＸＸＧＰＸＧＸＬＴ（配列番号１６）のモチーフ（式中、Ｘは、任意のアミノ酸である）；
    （ｉｉｉ）位置２６３～２７４にてＬＤＸ１Ｖ／ＡＴ／ＡＧＰＸ２ＧＸ３ＬＴ（配列番号１７）のモチーフ（式中、Ｘ１は、Ｍ又はＬであり、Ｘ２は、Ｎ、Ａ、又はＳであり、Ｘ３は、Ｓ、Ｔ、又はＮである）；及び
    （ｉｖ）位置２６３～２７４にてＬＤＭ／ＬＡＴＧＰＮ／ＡＧＳ／ＴＬＴ（配列番号１８）のモチーフ
    から選択される１つ又は複数のモチーフを含み、
    前記変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片のアミノ酸位置は、配列番号１４のアミノ酸配列との対応によって番号を付けられている、請求項１または２に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
  4. 前記基準ポリペプチドは、ＧＨ５マンナナーゼであり、前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片は、ＧＨ５マンナナーゼ又はエンド－β－マンナナーゼである、請求項１～３のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
  5. 前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片はさらに、炭水化物－結合モジュールを含まない、請求項１～４のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片。
  6. 請求項１～５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含む洗浄組成物。
  7. 少なくとも１つの界面活性剤；カルシウム及び亜鉛から選択される少なくとも１つのイオン；少なくとも１つの補助剤成分；少なくとも１つの安定化剤；約０．００１重量％～約１．０重量％の、請求項１～５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片；少なくとも１つの漂白剤；並びに／あるいはアシルトランスフェラーゼ、アミラーゼ、アルファ－アミラーゼ、ベータ－アミラーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼ、アラビナーゼ、アラビノシダーゼ、アリールエステラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、ベータ－グルカナーゼ、カラギナーゼ、カタラーゼ、セロビオヒドラーゼ、セルラーゼ、コンドロイチナーゼ、クチナーゼ、エンド－ベータ－１，４－グルカナーゼ、エンド－ベータ－マンナナーゼ、エキソ－ベータ－マンナナーゼ、エステラーゼ、エキソ－マンナナーゼ、ガラクタナーゼ、グルコアミラーゼ、ヘミセルラーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラッカーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、リパーゼ、脂肪分解酵素、リポキシゲナーゼ、マンナナーゼ、オキシダーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ペクチナーゼ、ペントサナーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペルオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、フィターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プロテアーゼ、プルラナーゼ、リダクターゼ、ラムノガラクツロナーゼ、ベータ－グルカナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシランアセチルエステラーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、キシロシダーゼ、メタロプロテアーゼ、及びそれら組合せから選択される少なくとも１つの酵素又は酵素誘導体：をさらに含む、請求項６に記載の洗浄組成物。
  8. 前記洗浄組成物は、（ｉ）洗濯洗剤、布地柔軟仕上げ洗剤、食器洗い洗剤、及び硬質表面洗浄洗剤から選択される洗剤組成物、及び／又は、（ｉｉ）液体、粉末、顆粒状の固体、タブレット、シート、及び単位用量から選択される形態の組成物、及び／又は、（ｉｉｉ）ホスフェートを含有し、若しくはホスフェートを含有せず、且つ／又はホウ素を含有し、若しくはホウ素を含有しない、組成物である、請求項６又は７に記載の洗浄組成物。
  9. マンナンを含む汚れ又は染みを含む表面又はアイテムを、（ｉ）請求項１～５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片、あるいは（ｉｉ）請求項６～８のいずれか一項に記載の洗浄組成物と接触させることを含み、前記汚れ又は前記染みに含有される前記マンナンは加水分解される、洗浄方法
  10. 前記アイテムは、皿類又は布地である、請求項９に記載の洗浄方法。
  11. 請求項１～５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチド。
  12. 請求項１１に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
  13. 請求項１２に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
  14. 請求項１～５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を生産する方法であって：
    （ａ）請求項１２に記載の発現ベクターで請求項１３に記載の宿主細胞を安定して形質転換することと、
    （ｂ）形質転換された前記宿主細胞を、前記宿主細胞が前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を産生するのに適した条件下で培養することと；
    （ｃ）前記マンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を回収することと、
    を含む方法。
  15. 請求項１～５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片を含む、食品組成物若しくは飼料組成物及び／又は食品添加物。
  16. 請求項１～５のいずれか一項に記載のマンナナーゼ変異体、又はその組換えポリペプチド若しくは活性断片の、食品組成物若しくは飼料組成物、並びに／又は食品添加物若しくは飼料添加物、並びに／又は食品若しくは飼料及び／若しくはペットフードの調製における使用。
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