JP6997706B2 - 洗濯ケアおよび織物ケアにおいて使用するためのグルカン繊維組成物 - Google Patents

洗濯ケアおよび織物ケアにおいて使用するためのグルカン繊維組成物 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本願は、それらの全開示がこれにより参照して本明細書に組み込まれる、２０１５年１１月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／２５５，１５５号明細書の優先権の利益を主張するものである。
配列表の参照による組込み
配列の正式な写しは、９９７，５４８バイトのサイズを有して本明細書と同時に提出される、２０１６年１１月２日に作成された２０１６１１０４＿ＣＬ６２７６ＷＯＰＣＴ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔのファイル名を備えるＡＳＣＩＩフォーマットの配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出される。このＡＳＣＩＩフォーマット文献に含有された配列表は、本明細書の一部であり、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
本開示は、オリゴ糖類、多糖類およびそれらの誘導体に関する。詳細には、本開示は、所定のα－グルカンポリマー、例えばα－グルカンエーテルなどのこれらのα－グルカンの誘導体ならびに織物ケアおよび洗濯ケア用途におけるそれらの使用に関する。
微生物の酵素合成または遺伝子操作を使用して新規な構造の多糖類を見出したいという欲求から、研究者らは、生分解性であって、再生可能な起源の供給原料から経済的に製造できるオリゴ糖類および多糖類を発見するに至った。
当分野においては、様々な糖オリゴマー組成物が報告されている。例えば、特許文献１は、少なくとも２０～約１００，０００のα－アンヒドログルコース単位を含むα－グルカンを開示しており、それらの３８～４８％は４－結合アンヒドログルコース単位であり、１７～２８％は６－結合アンヒドログルコース単位であり、および７～２０％は４，６－結合アンヒドログルコース単位および／または少なくとも２つの４－結合アンヒドログルコース単位、少なくとも１つの６－結合アンヒドログルコース単位および少なくとも１つの４，６－結合アンヒドログルコース単位を含有するグルコ－オリゴ糖である。特許文献２は、被験者の健康状態を改良するためのα－（１，２）－分岐状α－（１，６）オリゴデキストランを含む組成物を開示している。特許文献３は、グルコースもしくはイソマルトオリゴ糖がα－（１，６）グリコシド結合を通してα－グルカンの非還元末端に結合しており、１０～５２のＤＥを有する構造を有する分岐状デキストリンを開示している。特許文献４は、２２～３５％の（１，６）グリコシド結合；２０％未満の還元糖含量；５より大きい多分子性指数（Ｍｐ／Ｍｎ）；および４，５００ｇ／モル以下の数平均分子量（Ｍｎ）を含む分枝状マルトデキストリン組成物について開示している。特許文献５は、１％未満の還元糖含量、１３～１７％のα－（１，６）グリコシド結合のレベル、および０．９×１０５～１．５×１０５ダルトンの間の数値を有する分子量を有する可溶性高分枝状グルコースポリマーであって、７０～８５％の１５未満の重合度（ＤＰ）、１０～１４％の１５～２５のＤＰおよび８～１３％の２５超のＤＰの分岐鎖長分布プロファイルを有する可溶性高分枝状グルコースポリマーについて開示している。
ポリα－１，３－グルカンは、スクロースの水溶液とストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）から単離されたグルコシルトランスフェラーゼ（ｇｔｆ）酵素とを接触させることによって単離されてきた（非特許文献１）。特許文献６は、Ｓ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ｇｔｆＪ酵素を使用する多糖繊維の調製物を開示した。この繊維のポリマー内の少なくとも５０％のヘキソース単位は、α－１，３－グリコシド結合を介して結合された。開示されたポリマーは、溶媒中または溶媒を含む混合液中に臨界濃度を超えて溶解されると、液晶溶液を形成した。この溶液から、布地に使用するために極めて好適な連続的で強く、綿のような繊維が紡糸され、使用された。
新規なグルカン多糖類およびそれらの誘導体の開発は、様々な用途におけるそれらの潜在的有用性を前提にすると望ましい。さらに、新規なグルカン多糖類、特に混合グリコシド結合を備える新規なグルカン多糖類およびそれらの誘導体を合成できるグルコシルトランスフェラーゼ酵素を同定することもまた望ましい。これらの物質は、レオロジーを変化させる、構造化剤として作用させる、処理された織物、布地および／または医療品に利点（好ましくは表面実質的作用）（例えば改良された織物風合、汚れ沈着への改良された抵抗性など）を提供する目的で織物ケアおよび洗濯ケア用途において使用するためには魅力的であろう。例えば洗濯ケアなどの多数の用途には、例えばセルラーゼ、プロテアーゼ、アミラーゼなどの酵素が含まれることが多い。したがって、グルカン多糖類は、好ましくはセルラーゼ、アミラーゼおよび／またはプロテアーゼ活性に対して抵抗性である。
米国特許第６，４８６，３１４号明細書 米国特許出願公開第２０１０－０２８４９７２（Ａ１）号明細書 米国特許出願公開第２０１１－００２０４９６（Ａ１）号明細書 米国特許第６，６３０，５８６号明細書 米国特許第７，６１２，１９８号明細書 米国特許第７，０００，０００号明細書
Ｓｉｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ １４１：１４５１－１４６０，１９９５
１つの実施形態では、織物ケア組成物であって：
ａ．
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物；および
ｂ． 少なくとも１つの追加の織物ケア成分
を含む織物ケア組成物が提供される。
また別の実施形態では、洗濯ケア組成物であって：
ａ．
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物；および
ｂ． 少なくとも１つの追加の洗濯ケア成分
を含む洗濯ケア組成物が提供される。
また別の実施形態では、上記の織物ケア組成物もしくは上記の洗濯ケア組成物中の追加の成分は、少なくとも１種のセルラーゼ、少なくとも１種のプロテアーゼもしくはそれらの組み合わせである。
また別の実施形態では、織物ケア組成物もしくは洗濯ケア組成物は、０．０１～９０％重量％の可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含む。
また別の実施形態では、織物ケア組成物もしくは洗濯ケア組成物は、界面活性剤（アニオン性、非イオン性、カチオン性もしくは両性イオン性）、酵素（任意の組み合わせで、プロテアーゼ、セルラーゼ、ポリエステラーゼ、アミラーゼ、クチナーゼ、リパーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペルヒドロラーゼ、キシラナーゼ、ペルオキシダーゼおよび／またはラッカーゼ）、洗剤ビルダー、錯化剤、ポリマー（本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／またはα－グルカンエーテルに加えて）、防汚ポリマー、界面活性増強性ポリマー、漂白系、漂白活性剤、漂白触媒、織物コンディショナー、粘土、発泡増強剤、石鹸泡抑制剤（シリコーン系もしくは脂肪酸系）、防錆剤、汚れ懸濁剤、再汚染防止剤、染料、殺菌剤、変色防止剤、蛍光増白剤、香料、飽和もしくは不飽和脂肪酸、染料移動阻害剤、キレート剤、色相染料（ｈｕｅｉｎｇ ｄｙｅ）、カルシウムおよびマグネシウムカチオン、視覚信号化成分（ｖｉｓｕａｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）、消泡剤、構造剤、増粘剤、凝結防止剤、デンプン、砂、ゲル化剤およびそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む少なくとも１つの追加の成分を含む。
また別の実施形態では、織物ケア／洗濯ケア組成物であって、液体、ジェル、粉末、親水コロイド、水溶液、顆粒、タブレット、カプセル、単一区画小袋、多区画小袋またはそれらの任意の組み合わせである織物ケア／洗濯ケア組成物が提供される。
また別の実施形態では、織物ケア組成物もしくは洗濯ケア組成物は、単位用量方式で包装される。
様々なグルカンエーテルは、本α－グルカンオリゴマー／ポリマーから製造できる。また別の実施形態では、
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｉ． ５未満の多分散性指数を含むα－グルカンエーテル組成物であって；少なくとも１つの有機基との約０．０５～約３．０の置換度（ＤｏＳ）を有するα－グルカンエーテル組成物が提供される。
α－グルカンエーテル組成物は、例えばセルラーゼおよびプロテアーゼなどの酵素を含む織物ケアおよび／または洗濯ケア調製物において使用できる。また別の実施形態では、グルカンエーテル組成物は、セルラーゼ耐性、プロテアーゼ耐性、アミラーゼ耐性もしくはそれらの任意の組み合わせである。
α－グルカンエーテル組成物は、織物ケアおよび／または洗濯ケアおよび／またはパーソナルケア組成物において使用できる。また別の実施形態では、上記のα－グルカンエーテル組成物を含むパーソナルケア組成物、織物ケア組成物もしくは洗濯ケア組成物が提供される。
また別の実施形態では、水性組成物を調製するための方法であって、水性組成物を上記のα－グルカンエーテル組成物と接触させる工程を含み、前記水性組成物が少なくとも１種のセルラーゼ、少なくとも１種のプロテアーゼ、少なくとも１種のアミラーゼもしくはそれらの組み合わせを含む方法が提供される。
また別の実施形態では、衣料品、布地もしくは織物を処理する方法であって：
ａ．
ｉ． 上記の織物ケア組成物；
ｉｉ． 上記の洗濯ケア組成物；
ｉｉｉ． 上記のグルカンエーテル組成物；
ｉｖ．
ａ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｂ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｃ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｄ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｅ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｆ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｇ． ５未満の多分散性指数を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物；および
ｖ． （ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせから選択される組成物を提供する工程；
ｂ． 好適な条件下で（ａ）の組成物を織物、布地もしくは衣料品と接触させる工程であって、これにより織物、布地もしくは衣料品が処理されて利益を得る工程；および
ｃ． 任意選択的に、（ｂ）の処理された織物、布地もしくは衣料品をすすぎ洗う工程を含む方法が提供される。
上記の方法のまた別の実施形態では、α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物もしくはα－グルカンエーテル組成物は、表面実質的である。
上記の方法のまた別の実施形態では、利益は、改良された織物の風合、汚れ沈着に対する改良された抵抗性、改良された色堅牢度、改良された耐摩耗性、改良された防しわ性、改良された真菌活性、改良された染み抵抗性、洗濯した場合の改良されたクリーニング性能、改良された乾燥速度、改良された染料、顔料もしくはレーキ更新およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
また別の実施形態では、グルカンエーテル組成物を生成するための方法であって：
ａ．
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を提供する工程；
ｂ． アルカリ性条件下の反応中で（ａ）のα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を１つの有機基を含む少なくとも１種のエーテル化剤と接触させる工程であって；これにより少なくとも１つの有機基との約０．０５～約３．０の置換度（ＤｏＳ）を有するα－グルカンエーテルが生成される工程；および
ｃ． 任意選択的に、工程（ｂ）で生成されたα－グルカンエーテルを単離する工程を含む方法が提供される。
布地、糸、織物もしくは繊維は、上記のα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物もしくは対応するα－グルカンエーテル組成物を含むために修飾（例えば、混合する、またはコーティングする）されてよい。また別の実施形態では、
ａ．
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物；
ｂ．
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数を含むグルカンエーテル組成物であって；ここで少なくとも１つの有機基との約０．０５～約３．０の置換度（ＤｏＳ）を有するα－グルカンエーテル組成物；または
ｃ． それらの任意の組み合わせ
を含む布地、糸、織物もしくは繊維が提供される。
生物学的配列の簡単な説明
下記の文章は、米国連邦規則法典第３７編規則１．８２１～１．８２５（ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列の開示を含有する特許出願のための要件－配列規則）を順守しており、世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）標準ＳＴ．２５（２００９）、欧州特許条約（ＥＰＣ）および特許協力条約（ＰＣＴ）規則５．２および４９．５（ａ－ｂｉｓ）ならびに実施細則の第２０８章および附属書Ｃの配列表要件と一致している。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列データのために使用した記号およびフォーマットは、米国連邦規則法典第３７巻§１．８２２に規定された規則を順守している。
配列番号１は、ターミネーター配列のポリヌクレオチド配列である。
配列番号２は、リンカー配列のポリヌクレオチド配列である。
配列番号３は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：４７５２７において見いだされるストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）Ｇｔｆ－Ｊグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号４は、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）成熟Ｇｔｆ－Ｊグルコシルトランスフェラーゼをコードするポリヌクレオチド配列である。
配列番号５は、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）成熟Ｇｔｆ－Ｊグルコシルトランスフェラーゼ（本明細書では「７５２７」グルコシルトランスフェラーゼ」もしくは「ＧＴＦ７５２７」と呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号６は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：６６２３７９において見いだされるストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）Ｇｔｆ－Ｌグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７は、切断型ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）Ｇｔｆ－Ｌ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：６６２３７９）グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸配列である。
配列番号８は、切断型ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）Ｇｔｆ－Ｌグルコシルトランスフェラーゼ（本明細書では「２３７９グルコシルトランスフェラーゼ」もしくは「ＧＴＦ２３７９」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号９は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２９０５８０５４４において見いだされるストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＮＮ２０２５ Ｇｔｆ－Ｂグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号１０は、切断型ストレプトコッカス・ミュータンス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＮＮ２０２５ Ｇｔｆ－Ｂ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２９０５８０５４４）グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸配列である。
配列番号１１は、切断型ストレプトコッカス・ミュータンス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＮＮ２０２５ Ｇｔｆ－Ｂグルコシルトランスフェラーゼ（「０５４４」グルコシルトランスフェラーゼ」もしくは「ＧＴＦ０５４４」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号１２～１３は、プライマーの核酸配列である。
配列番号１４は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：４５０８７４において見いだされるストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）Ｇｔｆ－Ｉグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号１５は、切断型ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）Ｇｔｆ－Ｉ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：４５０８７４）グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸配列である。
配列番号１６は、切断型ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）Ｇｔｆ－Ｉグルコシルトランスフェラーゼ（本明細書では「０８７４グルコシルトランスフェラーゼ」もしくは「ＧＴＦ０８７４」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号１７は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：４９５８１０４５９（以前はＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３２２３７３２７９として公知であった）において見いだされるストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０ Ｇｔｆ－Ｓグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号１８は、切断型ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０ Ｇｔｆ－Ｓ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：４９５８１０４５９）グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸配列である。
配列番号１９は、切断型ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０ Ｇｔｆ－Ｓグルコシルトランスフェラーゼ（本明細書では「０４５９グルコシルトランスフェラーゼ」、「ＧＴＦ０４５９」、「３２７９グルコシルトランスフェラーゼ」もしくは「ＧＴＦ３２７９」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号２０は、ペニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２５７１５３２６５）をコードするアミノ酸配列であって、ここでＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２５７１５３２６４は、実施例１２で大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）を発現させるために使用される対応するポリヌクレオチド配列である。
配列番号２１は、実施例１２で大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）を発現させるために使用される成熟ペニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２５７１５３２６４；本明細書では「３２６４ムタナーゼ」もしくは「ＭＵＴ３２６４」と呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号２２は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２５７１５３２６４において見いだされるペニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼのアミノ酸配列である。
配列番号２３は、枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主ＢＧ６００６中での発現のために実施例１３において使用されたペニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼをコードする核酸配列である。
配列番号２４は、枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主ＢＧ６００６中での発現のために実施例１３において使用された成熟ペニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼのアミノ酸配列である。本明細書で使用するように、このムタナーゼは、本明細書ではさらに「ＭＵＴ３２６４」とも呼ぶことができる。
配列番号２５は、枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での発現のための様々な酵素に結合した発現ベクターにおいて使用された枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡｐｒＥシグナルペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号２６は、ペニシリウム・マルネッフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４（商標）ムタナーゼをコードする核酸配列である。
配列番号２７は、ペニシリウム・マルネッフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４（商標）ムタナーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２１２５３３３２５；本明細書では「３３２５ムタナーゼ」もしくは「ＭＵＴ３３２５」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号２８は、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）ＦＧＳＣ Ａ４ムタナーゼをコードする核酸配列である。
配列番号２９は、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）ＦＧＳＣ Ａ４ムタナーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２５９４８６５０５；本明細書では「６５０５ムタナーゼ」もしくは「ＭＵＴ６５０５」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号３０～５２は、実施例１７において使用した様々なプライマーの核酸配列である。
配列番号５３は、ヒポクレア・タワ（Ｈｙｐｏｃｒｅａ ｔａｗａ）ムタナーゼをコードする核酸配列である。
配列番号５４は、米国特許出願公開第２０１１－０２２３１１７（Ａ１）号明細書に開示されたヒポクレア・タワ（Ｈｙｐｏｃｒｅａ ｔａｗａ）（本明細書では「Ｈ．タワ（ｔａｗａ）ムタナーゼ」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号５５は、トリコデルマ・コニラングブラ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）ムタナーゼをコードする核酸配列である。
配列番号５６は、米国特許出願公開第２０１１－０２２３１１７（Ａ１）号明細書に開示されたトリコデルマ・コニラングブラ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）ムタナーゼ（本明細書では「Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）ムタナーゼ」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号５７は、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）ＲＬ－Ｐ３７ムタナーゼをコードする核酸配列である。
配列番号５８は、米国特許出願公開第２０１１－０２２３１１７（Ａ１）号明細書に開示されたトリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）ＲＬ－Ｐ３７ムタナーゼ（本明細書では「Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）５９２ムタナーゼ」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号５９は、プラスミドｐＴｒｅｘ３のポリヌクレオチド配列である。
配列番号６０は、切断型ストレプトコッカス・オラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ）グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：７６８４２９７）をコードする核酸配列である。
配列番号６１は、本明細書では「ＧＴＦ４２９７」と呼ぶ、配列番号６０によってコードされる切断型ストレプトコッカス・オラリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｏｒａｌｉｓ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号６２は、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３１３００８８）の切断バージョンをコードする核酸配列である。
配列番号６３は、配列番号６２によってコードされる、本明細書では「ＧＴＦ００８８」と呼ぶ切断型ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号６４は、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２４３７９３５８）の切断バージョンをコードする核酸配列である。
配列番号６５は、配列番号６４によってコードされる、本明細書では「ＧＴＦ９３５８」と呼ぶ切断型ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号６６は、ストレプトコッカス・ガロリティカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｌｌｏｌｙｔｉｃｕｓ）グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３２５９７８４２）の切断バージョンをコードする核酸配列である。
配列番号６７は、配列番号６６によってコードされる、本明細書では「ＧＴＦ７８４２」と呼ぶ切断型ストレプトコッカス・ガロリティカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｌｌｏｌｙｔｉｃｕｓ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号６８は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：５１５７４１５４において見いだされるラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号６９は、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：５１５７４１５４）の切断バージョンをコードする核酸配列である。
配列番号７０は、配列番号６９によってコードされる、本明細書では「ＧＴＦ４１５４」と呼ぶ切断型ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７１は、本明細書では「ＧＴＦ１７２９」とも呼ぶＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：１２１７２９（天然シグナル配列を備える前駆体）において見いだされるストレプトコッカス・ダウネイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｏｗｎｅｉ）ＧＴＦ－Ｓグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７２は、本明細書では「ＧＴＦ５６０４」とも呼ぶ、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３５７２３５６０４（天然シグナル配列を備える前駆体）において見いだされるストレプトコッカス・クリセティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｉｃｅｔｉ）ＨＳ－６ ＧＴＦ－Ｓグルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。同一アミノ酸配列は、ストレプトコッカス・クリセティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｉｃｅｔｉ）由来のグルコシルトランスフェラーゼに対してＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：４６９１４２８を付して報告されている。したがって、この特定アミノ酸配列は、本明細書では「ＧＴＦ１４２８」とも呼ぶ。
配列番号７３は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３５７２３６４７７（本明細書では「ＧＴＦ６４７７」とも呼ぶ）に由来する、天然シグナル配列が枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での発現のためにＡｐｒＥシグナル配列と置換された、ストレプトコッカス・クリセティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｉｃｅｔｉ）ＨＳ－６グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７４は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３５７２３６４７７（本明細書では「ＧＴＦ６４７７－Ｖ１」もしくは「３５７２３６４７７－Ｖ１」とも呼ぶ）に由来する、天然シグナル配列が枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での発現のためにＡｐｒＥシグナル配列と置換されており、単一アミノ酸置換を有する、ストレプトコッカス・クリセティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｉｃｅｔｉ）ＨＳ－６グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７５は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３４５５２６８３１（本明細書では「ＧＴＦ６８３１」とも呼ぶ）に由来する、天然シグナル配列が枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での発現のためにＡｐｒＥシグナル配列と置換された、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）Ｍ１８グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７６は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：３３５３５８１１７（本明細書では「ＧＴＦ８１１７」とも呼ぶ）に由来する、天然シグナル配列が枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での発現のためにＡｐｒＥシグナル配列と置換された、ラクトバチルス・アニマリス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｉｍａｌｉｓ）ＫＣＴＣ ３５０１グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７７は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：１０５４８７７（本明細書では「ＧＴＦ４８７７」とも呼ぶ）に由来する、天然シグナル配列が枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での発現のためにＡｐｒＥシグナル配列と置換された、ストレプトコッカス・ゴルドニイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７８は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：２２１３８８４５（本明細書では「ＧＴＦ８８４５」とも呼ぶ）に由来する、天然シグナル配列が枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での発現のためにＡｐｒＥシグナル配列と置換された、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号７９は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：１２１７２４において見いだされるストレプトコッカス・ダウネイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｏｗｎｅｉ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号８０は、切断型ストレプトコッカス・ダウネイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｏｗｎｅｉ）グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：１２１７２４）をコードする核酸配列である。
配列番号８１は、配列番号８０によってコードされる切断型ストレプトコッカス・ダウネイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｏｗｎｅｉ）グルコシルトランスフェラーゼ（本明細書では「１７２４グルコシルトランスフェラーゼ」もしくは「ＧＴＦ１７２４」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号８２は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：１６７７３５９２６において見いだされるストレプトコッカス・デンティロウセッティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｔｉｒｏｕｓｅｔｔｉ）グルコシルトランスフェラーゼのアミノ酸配列である。
配列番号８３は、切断型ストレプトコッカス・デンティロウセッティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｔｉｒｏｕｓｅｔｔｉ）（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：１６７７３５９２６）グルコシルトランスフェラーゼをコードする核酸配列である。
配列番号８４は、配列番号８３によってコードされる切断型ストレプトコッカス・デンティロウセッティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｔｉｒｏｕｓｅｔｔｉ）グルコシルトランスフェラーゼ（本明細書では「５９２６グルコシルトランスフェラーゼ」もしくは「ＧＴＦ５９２６」とも呼ぶ）のアミノ酸配列である。
配列番号８５は、本明細書では「ＤＤアーゼ」と呼ぶ菌株グルコノバクター・オキシダンス（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｏｘｙｄａｎｓ）によって発現したデキストランデキストリナーゼ（ＥＣ２．４．１．２）のアミノ酸配列である（例えば、特開２００７１８１４５２号公報を参照されたい）。
配列番号８６は、配列番号１９のＧＴＦ０４５９アミノ酸配列をコードする核酸配列である。
配列番号８７は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ０４７０の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号８８は、配列番号８７によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号８９は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ０７３１７の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号９０は、配列番号８９によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号９１は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ１６４５の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号９２は、配列番号９１によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号９３は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ６０９９の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号９４は、配列番号９３によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号９５は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ８４６７の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号９６は、配列番号９５によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号９７は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ８４８７の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号９８は、配列番号９７によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号９９は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ０６５４９の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１００は、配列番号９９によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１０１は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ３８７９の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１０２は、配列番号１０１によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１０３は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ４３３６の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１０４は、配列番号１０３によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１０５は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ４４９１の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１０６は、配列番号１０５によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１０７は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ３８０８の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１０８は、配列番号１０７によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１０９は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ０９７４の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１１０は、配列番号１０９によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１１１は、ＧＴＦ０４５９ホモログであるＧＴＦ００６０の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１１２は、配列番号１１１によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１１３は、ＧＴＦ０４５９非ホモログであるＧＴＦ０４８７の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１１４は、配列番号１１３によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１１５は、ＧＴＦ０４５９非ホモログであるＧＴＦ５３６０の切断形をコードする核酸配列である。
配列番号１１６は、配列番号１１５によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１１７、１１９、１２１および１２３は、ＧＴＦ０９７４、ＧＴＦ４３３６、ＧＴＦ４４９１およびＧＴＦ３８０８それぞれのＴ５ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１１８、１２０、１２２および１２４は、ＧＴＦ０９７４、ＧＴＦ４３３６、ＧＴＦ４４９１およびＧＴＦ３８０８それぞれのＴ５ Ｃ末端切断をコードするアミノ酸配列である。
配列番号１２５は、ＧＴＦ０４５９のＴ５ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２６は、配列番号１２５のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１２７は、ＧＴＦ０９７４のＴ４ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２８は、配列番号１２７のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１２９は、ＧＴＦ４３３６のＴ４ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３０は、配列番号１２９のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１３１は、ＧＴＦ４４９１のＴ４ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３２は、配列番号１３１のヌクレオチド配列によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１３３は、ＧＴＦ０４５９のＴ６ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３４は、配列番号１３３によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１３５は、ＧＴＦ０９７４のＴ１ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３６は、配列番号１３５によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１３７は、ＧＴＦ０９７４のＴ２ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３８は、配列番号１３７によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１３９は、ＧＴＦ０９７４のＴ６ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４０は、配列番号１３９によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１４１は、ＧＴＦ４３３６のＴ１ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４２は、配列番号１４１によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１４３は、ＧＴＦ４３３６のＴ２ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４４は、配列番号１４３によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１４５は、ＧＴＦ４３３６のＴ６ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４６は、配列番号１４５によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１４７は、ＧＴＦ４９９１のＴ１ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４８は、配列番号１４７によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１４９は、ＧＴＦ４９９１のＴ２ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１５０は、配列番号１４９によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１５１は、ＧＴＦ４９９１のＴ６ Ｃ末端切断をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１５２は、配列番号１５１によってコードされたアミノ酸配列である。
配列番号１５３は、ＧＴＦ０４５９およびその規定されたホモログのアラインメントに基づくアミノ酸コンセンサス配列である。
本開示では、多数の用語および略語を使用する。他に特に明記されない限り、下記の定義が当てはまる。
本明細書で使用するように、１つの要素もしくは成分に先行する不定冠詞「１つの」および「その」は、その要素もしくは成分の事例（すなわち、出現）の数に関して非制限的であることが意図されている。このため「１つの」および「その」は、１つもしくは少なくとも１つを含むと読むべきであり、要素もしくは成分の単数語形はまた、特にその数が明らかに単数であることを意味しない限り複数形も含む。
本明細書で使用する用語「～を含む」は、特許請求の範囲で言及された既定の特徴、整数、工程もしくは成分の存在を意味するが、１つ以上の他の特徴、整数、工程、成分もしくはそれらの群の存在もしくは添加を排除するものではない。用語「～を含む」は、用語「～から本質的になる」および「～からなる」によって包含される実施形態を含むことが意図されている。同様に、用語「～から本質的になる」は、用語「～からなる」によって包含される実施形態を含むことが意図されている。
使用される成分または反応物質の量を修飾する、本明細書で使用する用語「約」は、例えば、現実世界において濃縮物または使用溶液を作成するために使用される典型的な計量および液体取扱い手順を通して；これらの手順における偶発的誤差を通して；組成物を作成するため、または本方法を実施するために使用される成分の製造、入手源または純度における差などを通して発生する可能性がある数量における変動を意味している。用語「約」は、さらに特定の初期混合物から結果として生じる組成物についての異なる平衡条件に起因して異なる量もまた含んでいる。用語「約」によって修飾されていてもいなくても、本特許請求範囲は、量に関する同等物を含んでいる。
存在する場合、全ての範囲は、包括的および結合可能である。例えば、「１～５」の範囲が記載された場合、記載された範囲は、「１～４」、「１～３」、「１～２」、「１～２および４～５」、「１～３および５」などの範囲を含むと解釈すべきである。
本明細書で使用する用語「～から入手できる」は、原料（例えば、スクロース）が特定の起源から入手できるが、必ずしもその特定の起源に限定されないことを意味するものとする。
本明細書で使用する用語「有効量」は、所望の作用を達成するために好適である、使用もしくは投与される物質の量を意味するであろう。物質の有効量は、用途に依存して変動する可能性がある。当業者であれば、典型的には、過度の（ｕｎｄｏ）実験を行わずに特定の用途もしくは被験者にとっての有効量を決定できるであろう。
本明細書で使用する用語「単離（された）」は、物質が自然には発生しない形態もしくは環境にあることを意味する。単離物質の非限定的例には、（１）任意の非天然型物質、（２）それが自然に結び付いている天然型成分の１つ以上もしくは全部から少なくとも部分的に除去されている任意の宿主細胞、酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチドもしくは補因子を含むがそれらに限定されない任意の物質；（３）自然に見いだされる物質と比較してヒトの手によって修飾された任意の物質；または（４）それが自然に結び付いている他の成分と比較して物質の量を増加させることによって修飾された任意の物質が含まれる。
用語「体積によるパーセント」、「体積パーセント」、「体積％（ｖｏｌ％）」、「体積／体積％（ｖ／ｖ％）」などは、本明細書では互換的に使用される。溶液中の溶質の体積によるパーセントは、次式：［（溶質の体積）／（溶液の体積）］×１００％を用いて決定できる。
用語「重量によるパーセント」、「重量パーセンテージ（ｗｔ％）」、「重量／重量パーセンテージ（ｗ／ｗ％）」などは、本明細書では互換的に使用される。重量によるパーセントは、それが組成物中、混合物中もしくは溶液中に含まれるかのように質量ベースでの物質のパーセンテージを意味する。
用語「増加（した）」、「上昇（した）」および「改良（された）」は、本明細書では互換的に使用される。これらの用語は、最初の量もしくは活性よりわずかに大きい量もしくは活性または最初の量もしくは活性に比較して大きく過剰な量もしくは活性などの、それらの間の全ての量もしくは活性を含むより大きな量もしくは活性を意味する。または、これらの用語は、例えば、それに対して増加した量もしくは活性が比較される量もしくは活性より少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％もしくは２０％以上多い量もしくは活性を意味することができる。
用語「単離（された）」は、物質が自然には発生しない形態もしくは環境にあることを意味する。単離物質の非限定的例には、（１）任意の非天然型物質、（２）それが自然に結び付いている天然型成分の１つ以上もしくは全部から少なくとも部分的に除去されている任意の宿主細胞、酵素、変異体、核酸、タンパク質、ペプチドもしくは補因子を含むがそれらに限定されない任意の物質；（３）自然に見いだされる物質と比較してヒトの手によって修飾された任意の物質；または（４）それが自然に結び付いている他の成分と比較して物質の量を増加させることによって修飾された任意の物質が含まれる。
本明細書で使用する用語「水溶性」は、２５℃のｐＨ７の水中において２０重量％以上で可溶性である本グルカンオリゴマー／ポリマー組成物に関するであろう。
本明細書で使用する用語「可溶性グルカン繊維」、「α－グルカン繊維」、「α－グルカンポリマー」、「α－グルカンオリゴ糖」、「α－グルカン多糖」、「α－グルカンオリゴマー」、「α－グルカンオリゴマー／ポリマー」、「α－グルカンポリマー」および「可溶性グルカン繊維組成物」は、３以上のグルコース重合度を有する水溶性グルコースオリゴマーから構成される本α－グルカンポリマー組成物（非誘導体化；すなわち、α－グルカンエーテルではない）に関する。本可溶性グルカンポリマー組成物は、例えば、サトウキビおよび／またはサトウダイコンから入手できるスクロース（α－Ｄ－グルコピラノシルβ－Ｄ－フルクトフラノシド；ＣＡＳ＃５７－５０－１）から酵素的に合成される。１つの実施形態では、本可溶性α－グルカンポリマー組成物は、アルテルナンもしくはマルトアルテルナンオリゴ糖ではない。
本明細書で使用する「重量平均分子量」もしくは「Ｍｗ」は、
Ｍｗ＝ΣＮｉＭｉ ２／ΣＮｉＭｉ；（式中、Ｍｉは鎖の分子量であり、Ｎｉはその分子量の鎖の数である）として計算される。
重量平均分子量は、静的光散乱、小角中性子散乱、Ｘ線散乱および沈降速度などの専門技術によって決定できる。
本明細書で使用する「数平均分子量」もしくは「Ｍｎ」は、サンプル中の全ポリマー鎖の統計的平均分子量に関する。数平均分子量は、Ｍｎ＝ΣＮｉＭｉ／ΣＮｉ（式中、Ｍｉは鎖の分子量であり、Ｎｉはその分子量の鎖の数である）として計算される。ポリマーの数平均分子量は、例えばゲル透過クロマトグラフィー、（マーク・フウィンク方程式）による粘度測定法および例えば蒸気圧オスモメトリー法、末端基定量法もしくはプロトンＮＭＲ法などの束一的方法などの技術によって決定できる。
本明細書で使用する「多分散性指数」、「ＰＤＩ」、「不均一指数」および「分散度」は、所定のポリマー（例えば、グルコースオリゴマー）サンプル中の分子量分布の尺度に関しており、重量平均分子量を数平均分子量で割ることによって計算できる（ＰＤＩ＝Ｍｗ／Ｍｎ）。
本明細書で使用する用語「グルコース」および「グルコピラノース」は、同義語であると見なされ、互換的に使用される。同様に、本明細書で使用する用語「グルコシル」および「グルコピラノシル」単位は、同義語であると見なされ、互換的に使用される。
本明細書で使用する「グリコシド結合（ｌｉｎｋａｇｅ）」もしくは「グリコシド結合（ｂｏｎｄ）」は、糖オリゴマー（オリゴ糖類および／または多糖類）内の糖モノマーを結び付ける共有結合を意味するであろう。グリコシド結合の例としては、１，６－α－Ｄ－グリコシド結合（本明細書ではα－Ｄ－（１，６）結合もしくは単純にα－（１，６）結合とも呼ぶ）；１，３－α－Ｄ－グリコシド結合（本明細書ではα－Ｄ－（１，３）結合もしくは単純に「α－（１，３）」とも呼ぶ）；１，４－α－Ｄ－グリコシド結合（本明細書ではα－Ｄ－（１，４）結合もしくは単純に「α－（１，４）」結合；１，２－α－Ｄ－グリコシド結合（本明細書ではα－Ｄ－（１，２）結合もしくは「α－（１，２）」結合；および典型的には分岐状糖オリゴマーと関連しているそのような結合の組み合わせを備えるα－結合グルコースオリゴマーを挙げることができる。
本明細書で使用する用語「グルカンスクラーゼ」、「グルコシルトランスフェラーゼ」、「グルコシドヒドロラーゼ７０型」、「ＧＴＦ」および「ＧＳ」は、典型的には、例えばストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ワイステラ（Ｗｅｉｓｅｌｌａ）属もしくはラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属などの乳酸菌中で見いだされるグリコシド－ヒドロラーゼの第７０ファミリーに分類されるトランスグルコシダーゼに関するであろう（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｃｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅｓ ｄａｔａｂａｓｅ；“ＣＡＺｙ”；Ｃａｎｔａｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３７：Ｄ２３３－２３８を参照されたい）。ＧＴＦ酵素は、ホモオリゴ糖類もしくはホモ多糖類を形成するためにスクロースのＤ－グルコシル単位を重合できる。グルコシルトランスフェラーゼは、例えばＬｅｅｍｈｕｉｓ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２０１３）１６２：２５０－２７２）およびＭｏｎｃｈｏｉｓ ｅｔ ａｌ．（ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏ．Ｒｅｖｓ．（１９９９）２３：１３１－１５１）に記載されたもののような特徴的な構造的特徴によって同定できる。ＧＴＦ酵素の特異性に依存して、例えばα－（１，２）、α－（１，３）、α－（１，４）およびα－（１，６）などの様々なグリコシド結合を含む直鎖および／または分岐状グルカンを形成できる。グルコシルトランスフェラーゼは、さらにまたＤ－グルコシル単位をヒドロキシルアクセプター基に移動させることができる。アクセプターの非限定的リストには、炭水化物、アルコール、ポリオールまたはフラボノイドが含まれる。特定のアクセプターには、さらにマルトース、イソマルトース、イソマルトトリオースおよびメチル－α－Ｄ－グルカンが含まれる。結果として生じるグルコシル化生成物の構造は、酵素特異性に左右される。グルコシルトランスフェラーゼの非限定的リストは、アミノ酸配列３、５、６、８、９、１１、１４、１６、１７、１９、６１、６３、６５、６７、６８、７０、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８１、８２、８４、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０および１１２として提供される。１つの態様では、グルコシルトランスフェラーゼは、切断形および／または成熟形で発現させられる。切断型グルコシルトランスフェラーゼアミノ酸配列の非限定的例としては、配列番号１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０および１５２が挙げられる。
本明細書で使用する用語「イソマルトオリゴ糖」もしくは「ＩＭＯ」は、典型的にはＤＰ２～２０の平均サイズを有するα－Ｄ－（１，６）グリコシド結合から本質的に構成されるグルコースオリゴマーに関する。イソマルトオリゴ糖は、コーンスターチもしくはデンプン誘導体生成物上のα－アミラーゼ、プルラナーゼ、β－アミラーゼおよびα－グルコシダーゼの酵素反応から商業的に生成できる。商業的に入手できる生成物は、イソマルトオリゴ糖（３～８の範囲に及ぶＤＰ、例えばイソマルトトリオース、イソマルトテトラオース、イソマルトペンタオース、イソマルトヘキサオース、イソマルトヘプタオース、イソマルトオクタオース）の混合物を含み、さらにパノースを含むことができる。
本明細書で使用する用語「デキストラン」は、少なくとも９５％のα－Ｄ－（１，６）グリコシド結合（典型的には、分岐点で５％までのα－Ｄ－（１，３）グリコシド結合）を含む水溶性α－グルカンに関する。デキストランは、１，０００ｋＤａを超える平均分子量を有することが多い。本明細書で使用するスクロースからデキストランを合成できる酵素は、「デキストランスクラーゼ」（ＥＣ２．４．１．５）であると記載できる。
本明細書で使用する用語「ムタン」は、１，３－α－Ｄグリコシド結合の主として（存在する５０％以上のグリコシド結合）から構成される水不溶性α－グルカンに関しており、典型的には９を超えることが多い重合度（ＤＰ）を有する。スクロース由来の５０％を超える１，３－α－Ｄグリコシド結合を含むムタンもしくはα－グルカンオリゴマーを合成できる酵素は、酵素がアルテルナンを生成しないことを前提に、「ムタンスクラーゼ」（ＥＣ２．４．１．－）であると記載できる。
本明細書で使用する用語「アルテルナン」は、直鎖オリゴ糖主鎖の少なくとも５０％を超える交互の１，３－α－Ｄグリコシド結合および１，６－α－Ｄグリコシド結合を有するα－グルカンに関する。スクロースからアルテルナンを合成できる酵素は、「アルテルナンスクラーゼ」（ＥＣ２．４．１．１４０）であると記載できる。
本明細書で使用する用語「ロイテラン」は、１，４－α－Ｄ－グリコシド結合（典型的には５０％を超える）；１，６－α－Ｄ－グリコシド結合；および分岐点での４，６－二置換α－グルコシル単位から構成される可溶性α－グルカンに関する。スクロースからロイテランを合成できる酵素は、「ロイテランスクラーゼ」（ＥＣ２．４．１．－）であると記載できる。
本明細書で使用する用語「α－グルカノヒドロラーゼ」および「グルカノヒドロラーゼ」は、α－グルカンオリゴマーを加水分解できる酵素を意味するであろう。本明細書で使用するように、グルカノヒドロラーゼは、所定のα－Ｄ－グリコシド結合に向けての内加水分解活性によって定義できる。例としては、デキストラナーゼ（ＥＣ３．２．１．１１；α－（１，６）－結合グリコシド結合を内加水分解できる）、ムタナーゼ（ＥＣ３．２．１．５９；α－（１，３）－結合グリコシド結合を内加水分解できる）およびアルテルナーゼ（ＥＣ３．２．１．－；アルテルナンを内加水分解的に切断できる）が挙げられるがそれらに限定されない。所定のα－グルカン内の分岐のレベル、分岐のタイプおよび相対分岐鎖長を含むがそれらに限定されない様々な要素は、α－グルカノヒドロラーゼが一部のグリコシド結合を内加水分解する能力に有害な影響を及ぼす可能性がある。
本明細書で使用する用語「デキストラナーゼ」（α－１，６－グルカン－６－グルカノヒドロラーゼ；ＥＣ３．２．１．１１）は、１，６－α－Ｄ－グリコシド結合（デキストラン中で主として見いだされる結合）を内加水分解できる酵素を意味する。デキストラナーゼは、虫歯、プラークおよび／または歯石を予防するためおよび粗糖汁もしくはサトウキビおよびサトウダイコンのシロップを加水分解するための歯磨剤中の成分としての使用を含む多数の用途にとって有用であることが公知である。数種の微生物、特にペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、ペシロミセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、スピカリア（Ｓｐｉｃａｒｉａ）属、ベルチシリウム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、ヘルミントスポリウム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）属およびケトミウム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ）属の真菌；ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、セルビブリオ（Ｃｅｌｌｖｉｂｒｉｏ）属、サイトファガ（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アルトロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属およびフラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の細菌ならびに例えばリポミセス・スタルケィ（Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ ｓｔａｒｋｅｙｉ）などの酵母は、デキストラナーゼを生成できることが公知である。食品用デキストラナーゼは、市販で入手できる。食品用デキストリナーゼの例は、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ，Ｂａｇｓｖａｅｒｄ，Ｄｅｎｍａｒｋによって販売されるケトミウム・エラチカム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｅｒｒａｔｉｃｕｍ）由来の酵素であるＤＥＸＴＲＡＮＡＳＥ（登録商標）Ｐｌｕｓ Ｌである。
本明細書で使用する用語「ムタナーゼ」（グルカンエンド－１，３－α－グルコシダーゼ；ＥＣ３．２．１．５９）は、１，３－α－Ｄ－グリコシド結合（ムタン中で主として見いだされる結合）を加水分解により切断する酵素を意味する。ムタナーゼは、様々な細菌および真菌起源から入手できる。ムタナーゼの非限定的リストは、アミノ酸配列２１、２２、２４、２７、２９、５４、５６および５８として提供されている。
本明細書で使用する用語「アルテルナーゼ」（ＥＣ３．２．１．－）は、アルテルナンを内加水分解的に切断する酵素を意味する（Ｃｏｔｅ ｅｔ ａｌ．への米国特許第５，７８６，１９６号明細書）。
本明細書で使用する用語「野生型酵素」は、それから入手および／または注釈された生物中で見いだされるアミノ酸配列を含む酵素（全長およびそれらの活性切断形）を意味するであろう。酵素（全長もしくはその触媒活性切断形）は、微生物宿主細胞において組換え的に生成できる。酵素は、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物の生成における加工助剤として使用される前に、典型的には精製される。１つの態様では、本可溶性グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を入手するために、反応系中に同時に存在する少なくとも２種の野生型酵素の組み合わせが使用される。１つの実施形態では、付随して存在する少なくとも２種の酵素の組み合わせは、配列番号１もしくは３との少なくとも９０％のアミノ酸同一性を有するグリコシルトランスフェラーゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび配列番号４、６、９もしくは１１との少なくとも９０％のアミノ酸同一性を有するムタナーゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドを含む。１つの好ましい実施形態では、付随的に存在する少なくとも２種の酵素の組み合わせは、配列番号１もしくは３との少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％の同一性を有するグルコシルトランスフェラーゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドおよび配列番号４もしくは６との少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９もしくは１００％のアミノ酸同一性を有するムタナーゼ活性を有する少なくとも１つのポリペプチドを含む。また別の態様では、所定の反応条件（例えば、約４７℃～５０℃の反応温度）下では、本可溶性α－グルカンオリゴマー（実施例３７および４１を参照されたい）を生成するために単一野生型グルコシルトランスフェラーゼを使用することが可能な場合がある。また別の態様では、本方法は、５０％以上のα－（１，３）グリコシド結合（例えば、ムタンスクラーゼ）と反応系中に存在するグルコシルトランスフェラーゼから合成されたα－グルカンに対する内加水分解活性を有する少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼを含む可溶性α－グルカンポリマー組成物を形成できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼとを含む単一反応チャンバーを含む。
本明細書で使用する用語「基質」および「好適な基質」は、スクロースを含む組成物を意味するであろう。１つの実施形態では、基質組成物は、さらに１つ以上の好適なアクセプター、例えば少数の名を挙げると、マルトース、イソマルトース、イソマルトトリオースおよびメチル－α－Ｄ－グルカンを含むことができる。１つの実施形態では、グルコースオリゴマーを形成できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼの組み合わせは、同一反応混合物中の少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼと組み合わせて使用される（すなわち、それらは反応混合物中で同時に存在して活性である）。したがって、α－グルカノヒドロラーゼのための「基質」は、スクロースからグルコシルトランスフェラーゼによって反応系中で同時に合成されるグルコースオリゴマーである。１つの態様では、酵素が反応混合物中で同時には使用されない２酵素法（すなわち、少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）および少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼ）は、条件によって、本方法からは除外される。
本明細書で使用する用語「好適な酵素反応混合物」、「好適な反応成分」、「好適な水性反応混合液」および「反応混合液」は、反応物質がその中で酵素と接触させられる物質（好適な基質）および水を意味する。好適な反応成分は、複数の酵素から構成されてよい。１つの態様では、好適な反応成分は、少なくとも１種のグルカンスクラーゼ酵素を含む。また別の態様では、好適な反応成分は、少なくとも１種のグルカンスクラーゼおよび少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼを含む。
本明細書で使用する「１単位のグルカンスクラーゼ活性」もしくは「１単位のグルコシルトランスフェラーゼ活性」は、ｐＨ５．５および３７℃で２００ｇ／Ｌのスクロースとともにインキュベートした場合に１分間当たり１μｍｏｌのスクロースを変換させるために必要とされる酵素の量であると定義されている。スクロース濃度は、ＨＰＬＣを使用して決定した。
本明細書で使用する「１単位のデキストラナーゼ活性」は、ｐＨ５．５および３７℃で０．５ｍｇ／ｍＬのデキストラン基質とともにインキュベートした場合に１分間当たり１μｍｏｌの還元糖を形成する酵素の量であると定義されている。還元糖は、ＰＡＨＢＡＨアッセイを使用して決定した（Ｌｅｖｅｒ Ｍ．，（１９７２），Ａ Ｎｅｗ Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４７，２７３－２７９）。
本明細書で使用する「１単位のムタナーゼ活性」は、ｐＨ５．５および３７℃で０．５ｍｇ／ｍＬのムタン基質とともにインキュベートした場合に１分間当たり１μｍｏｌの還元糖を形成する酵素の量であると定義されている。還元糖は、ＰＡＨＢＡＨアッセイを使用して決定した（Ｌｅｖｅｒ Ｍ．、上記）。
本明細書で使用する用語「酵素触媒」は、所望の可溶性α－グルカンポリマー組成物を得るために必要な活性を有する酵素もしくは酵素の組み合わせを含む触媒を意味する。所定の実施形態では、酵素触媒の組み合わせは、所望の可溶性グルカンポリマー組成物を得るために必要とされる可能性がある。酵素触媒は、全微生物細胞、透過化微生物細胞、微生物細胞抽出物の１つ以上の細胞成分、部分精製酵素もしくは精製酵素の形態にあってよい。所定の実施形態では、酵素触媒は、さらに（例えばペグ化または架橋試薬との反応によって）化学修飾されていてもよい。酵素触媒は、さらに可溶性もしくは不溶性支持体上に当業者には周知の方法を使用して固定化することもできる；例えば、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌｓ；Ｇｏｒｄｏｎ Ｆ．Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ，Ｅｄｉｔｏｒ；Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，ＵＳＡ；１９９７を参照されたい。
用語「酵素加水分解に対する耐性」は、酵素加水分解に対する本物質（α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのエーテル化によって生成された対応するα－グルカンエーテル化合物）の相対安定性に関する。加水分解に対する耐性は、酵素が例えば織物ケアおよび洗濯ケア用途などにおいて存在することが多い用途における本物質の使用にとって特に重要であろう。１つの実施形態では、α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのエーテル化によって生成された対応するα－グルカンエーテル化合物は、セルラーゼに対して耐性（すなわち、セルラーゼ耐性）である。また別の実施形態では、α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのエーテル化によって生成された対応するα－グルカンエーテル化合物は、プロテアーゼに対して耐性（すなわち、プロテアーゼ耐性）である。また別の実施形態では、α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのエーテル化によって生成された対応するα－グルカンエーテル化合物は、アミラーゼに対して耐性（すなわち、アミラーゼ耐性）である。１つの好ましい態様では、α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのエーテル化によって生成された対応するα－グルカンエーテル化合物は、多数のクラスの酵素（セルラーゼ、プロテアーゼおよび／またはアミラーゼの組み合わせ）に対して耐性である。任意の特定酵素に対する耐性は、各酵素を用いた処理後に残留している物質の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０、７０、８０、９０、９５もしくは１００％を有すると定義されるであろう。残留％は、ＳＥＣ－ＨＰＬＣを使用して、酵素処理後の上清を測定することによって決定できる。酵素耐性を測定するためのアッセイは、下記を使用できる：可溶性物質のサンプル（例えば、１００ｍｇ）を２０ｍＬのシンチレーションバイアル中の１０．０ｍＬの水に加え、ＰＴＦＥマグネティックスターラーを使用して混合して１重量％溶液を作成する。この反応は、２０℃でｐＨ７．０でランした。繊維が完全に溶解した後、１．０ｍＬ（１重量％の酵素調製物）のセルラーゼ（ＰＵＲＡＤＥＸ（登録商標）ＥＧＬ）、アミラーゼ（ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）ＳＴ Ｌ）もしくはプロテアーゼ（ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）１６．０Ｌ）を加え、この溶液を２０℃で７２時間にわたり混合する。反応混合物は、添加された酵素を不活性化するために１０分間にわたり７０℃へ加熱し、生じた混合物を室温に冷却し、沈降物を除去するために遠心する。上清は、回収されたオリゴマー／ポリマーについてＳＥＣ－ＨＰＬＣによって分析し、反応混合液に酵素が全く添加されていないコントロールと比較する。各オリゴマー／ポリマーについての面積総数における変化率（％）を使用すると、各酵素処理に対する物質の相対耐性を試験するために使用できる。全≧３＋繊維についての面積総数における変化率は、特定酵素を用いた処理後に残留している物質の相対量を評価するために使用されるであろう。少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０、７０、８０、９０、９５もしくは１００％の回収率を有する物質は、各酵素処理に対して「耐性」（例えば、「セルラーゼ耐性」、「プロテアーゼ耐性」および／または「アミラーゼ耐性」）であると見なされるであろう。
用語「α－グルカンエーテル化合物」、「α－グルカンエーテル組成物」、「α－グルカンエーテル」および「α－グルカンエーテル誘導体」は、本明細書では互換的に使用される。本明細書のα－グルカンエーテル化合物は、１つ以上の有機基との約０．０５～約３．０の置換度（ＤｏＳ）を有するように、１つ以上の有機基を用いてエーテル化されている本α－グルカンポリマーである。そのようなエーテル化は、α－グルカンポリマーのグルコースモノマー単位の少なくとも３０％の１つ以上のヒドロキシル基で発生する。
α－グルカンエーテル化合物は、部分構造－ＣＧ－Ｏ－Ｃ（式中、「－ＣＧ－」は、α－グルカンエーテル化合物のグルコースモノマー単位の炭素原子を示し（ここで、そのような炭素原子はエーテルのα－グルカンポリマー前駆体中のヒドロキシル基［－ＯＨ］に結合している、「－Ｃ－」は、有機基の炭素原子である）を含むために、本明細書では「エーテル」と呼ぶ。したがって、例えば、本明細書のエーテル内の－１，３－Ｇ－１，３－に含まれているグルコースモノマー単位（Ｇ）に関して、グルコース（Ｇ）のＣＧ原子２、４および／または６は、独立してＯＨ基に結合していてよい、または有機基とエーテル結合していてよい。同様に、例えば、本明細書のエーテル内の－１，３－Ｇ－１，６－に含まれているグルコースモノマー単位（Ｇ）に関して、グルコース（Ｇ）のＣＧ原子２、４および／または６は、独立してＯＨ基に結合していてよい、または有機基とエーテル結合していてよい。さらに、例えば、本明細書のエーテル内の－１，６－Ｇ－１，６－に含まれているグルコースモノマー単位（Ｇ）に関して、グルコース（Ｇ）のＣＧ原子２、３および／または４は、独立してＯＨ基に結合していてよい、または有機基とエーテル結合していてよい。同様に、例えば、本明細書のエーテル内の－１，６－Ｇ－１，３－に含まれているグルコースモノマー単位（Ｇ）に関して、グルコース（Ｇ）のＣＧ原子２、３および／または４は、独立してＯＨ基に結合していてよい、または有機基とエーテル結合していてよい。
本明細書のα－グルカンエーテル化合物の「グルコース」モノマー単位が、典型的には、エーテル結合内に１つ以上の有機基を有することは理解されるであろう。したがって、そのようなグルコースモノマー単位はまた、エーテル化グルコースモノマー単位と呼ぶこともできる。
本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物は、合成の人工化合物である。同様に、本α－グルカンポリマーを含む組成物は、合成の人工化合物である。
本明細書で使用する「有機基」という基は、（ｉ）式－ＣｎＨ２ｎ＋１（すなわち、完全に飽和しているアルキル基）を有するか、または（ｉｉ）ほとんど飽和しているが、他の原子もしくは官能基（すなわち、「置換アルキル基」）で置換された１個以上の水素原子を有する、１個以上の炭素の鎖を意味する可能性がある。そのような置換は、１つ以上のヒドロキシル基、酸素原子（それによりアルデヒド基もしくはケトン基を形成する）、カルボキシル基または他のアルキル基とであってよい。したがって、例として、本明細書の有機基は、アルキル基、カルボキシアルキル基もしくはヒドロキシアルキル基であってよい。本明細書の有機基は、したがって、非荷電性もしくはアニオン性であってよい（アニオン性有機基の例は、カルボキシアルキル基である）。
本明細書の「カルボキシアルキル」基は、アルキル基の１個以上の水素原子がカルボキシル基で置換されている置換アルキル基を意味する。本明細書の「ヒドロキシアルキル」基は、アルキル基の１個以上の水素原子がヒドロキシル基で置換されている置換アルキル基を意味する。
本明細書で使用する語句「正荷電有機基」は、他の原子もしくは官能基（すなわち、「置換アルキル基」）で置換された１個以上の水素を有する、１個以上の炭素の鎖（「炭素鎖」）を意味するが、ここで１つ以上の置換は、正荷電基とである。正荷電有機基が正荷電基との置換に加えてさらに１つの置換を有する場合、そのような追加の置換は１つ以上のヒドロキシル基、酸素原子（それによりアルデヒド基もしくはケトン基を形成する）、アルキル基および／または追加の正荷電基とであってよい。正荷電有機基は、１つ以上の正荷電基を含むために正味の正荷電を有する。
用語「正荷電基」、「正荷電イオン基」および「カチオン基」は、本明細書では互換的に使用される。正荷電基は、１つのカチオン（正荷電イオン）を含む。正荷電基の例としては、置換アンモニウム基、カルボカチオン基およびアシルカチオン基が挙げられる。
本明細書の「正荷電」である組成物は、他の正荷電物質から反発されるが、負荷電物質には引き付けられる。
用語「置換アンモニウム基」、「置換アンモニムイオン」および「置換アンモニムカチオン」という用語は、本明細書では互換的に使用される。本明細書の「置換アンモニウム基」は、構造Ｉ：
Figure 0006997706000001
（構造Ｉ中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素原子またはアルキル基、アリール基、シクロアルキル基、アラルキル基もしくははアルカリル基を示す）を含む。
構造Ｉ中の炭素原子（Ｃ）は、正荷電有機基の１個以上の炭素の鎖（「炭素鎖」）の一部である。炭素原子は、α－グルカンポリマーのグルコースモノマーと直接的にエーテル結合している、またはα－グルカンポリマー／オリゴマーのグルコースモノマーにエーテル結合している２個以上の炭素原子の鎖の一部である。構造Ｉ中の炭素原子は、－ＣＨ２－、－ＣＨ－（ここで、１つのＨは、ヒドロキシ基などの別の基で置換されている）、または－Ｃ－（ここで、両方のＨ’が置換されている）であってよい。
置換アンモニウム基は、構造Ｉ中のＲ２、Ｒ３およびＲ４の組成に依存して、「第１級アンモニウム基」、「第２級アンモニウム基」、「第３級アンモニウム基」もしくは「第４級アンモニウム基」であってよい。本明細書の第１級アンモニウム基は、式中Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれが水素原子である構造Ｉ（すなわち、－Ｃ－ＮＨ３ ＋）を意味する。本明細書の第２級アンモニウム基は、式中Ｒ２およびＲ３のそれぞれが水素原子であり、Ｒ４がアルキル基、アリール基もしくはシクロアルキル基である構造Ｉを意味する。本明細書の第３級アンモニウム基は、式中Ｒ２が水素原子であり、Ｒ３およびＲ４のそれぞれがアルキル基、アリール基もしくはシクロアルキル基である構造Ｉを意味する。本明細書中の第４級アンモニウム基は、式中Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれがアルキル基、アリール基もしくはシクロアルキル基である（すなわち、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はいずれも水素原子ではない）構造Ｉを意味する。
本明細書の第４級アンモニウムα－グルカンエーテルは、例えば、トリアルキルアンモニウム基（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれはアルキル基である）を含むことができる。トリメチルアンモニウム基は、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれがメチル基であるトリアルキルアンモニウム基の１つの例である。この命名法で「第４級」が意味する第４のメンバー（すなわち、Ｒ１）が、本α－グルカンポリマー／オリゴマーのグルコースモノマー単位にエーテル結合している正荷電有機基の１個以上の炭素の鎖であることは理解されよう。
第４級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物の１つの例は、トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルα－グルカンである。このエーテル化合物の正荷電有機基は、構造ＩＩ：
Figure 0006997706000002
（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれはメチル基である）として表すことができる。構造ＩＩは、第４級アンモニウムヒドロキシプロピル基の１つの例である。
本明細書の「ハロゲン化物」は、１個以上のハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）を含む化合物を意味する。本明細書のハロゲン化物は、例えばフッ化物、塩化物、臭化物もしくはヨウ化物などの１つ以上のハロゲン化物基を含む化合物を意味することができる。ハロゲン化物基は、エーテル化剤の反応基として機能できる。
「非酵素的エーテル化反応」について言及する場合、用語「反応」、「反応組成物」および「エーテル化反応」は、本明細書では互換的に使用され、少なくともα－グルカンポリマーおよびエーテル化剤を含む反応を意味する。これらの成分は、典型的には、アルカリ性水酸化物を含む（有機および／または水性）溶媒中で混合（例えば、結果としてスラリーを生じる）および／または溶解される。反応は、それによりα－グルカンエーテル化合物を産生するために、１つの有機基を用いてα－グルカンポリマー／オリゴマーのグルコース単位の１つ以上のヒドロキシル基をエーテル化するためのエーテル化剤にとって好適な条件（例えば、時間、温度）下に置かれる。
本明細書の用語「アルカリ性条件」は、ｐＨが少なくとも１０、１１もしくは１２の溶液もしくは混合物を意味する。アルカリ性条件は、溶液もしくは混合物にアルカリ性水酸化物を溶解させる工程などの当分野において公知の任意の手段によって調製できる。
用語「エーテル化剤」および「アルキル化剤」は、本明細書では互換的に使用される。本明細書のエーテル化剤は、１つの有機基を用いて本α－グルカンポリマー／オリゴマーの１つ以上のグルコース単位の１つ以上のヒドロキシル基をエーテル化するために使用できる作用物質を意味する。したがって、エーテル化剤は、１つの有機基を含む。
本明細書で使用する用語「置換度」（ＤｏＳ）は、本α－グルカンエーテル化合物の各モノマー単位（グルコース）中で置換されたヒドロキシル基の平均数を意味する。α－グルカンポリマー／オリゴマー中のグルコースモノマー単位中に存在するヒドロキシル基は多くとも３つであるので、本明細書のα－グルカンエーテル化合物中の置換度は３以下である可能性がある。
本明細書で使用する用語「モル置換」（Ｍ．Ｓ．）は、本α－グルカンエーテル化合物の１モノマー単位当たりの有機基のモル数を意味する。または、Ｍ．Ｓ．は、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー中の各モノマー単位と反応させるために使用されるエーテル化剤の平均モル数を意味することもできる（したがって、Ｍ．Ｓ．はエーテル化剤を用いた誘導化度を説明できる）。本α－グルカンのためのＭ．Ｓ．値が上限を有していない可能性があることに留意されたい。例えば、ヒドロキシル基を含有する有機基（例えば、ヒドロキシエチル基もしくはヒドロキシプロピル基）がα－グルカンにエーテル化されている場合は、有機基のヒドロキシル基はさらに反応させられ、それによりα－グルカンオリゴマー／ポリマーにより多くの有機基を結合させる可能性がある。
本明細書の用語「架橋」は、１個以上のポリマー分子において２つの隣接原子を結び付ける化学結合、原子もしくは原子の群を意味する。架橋α－グルカンエーテルを含む組成物中では、架橋は少なくとも２つのα－グルカンエーテル化合物の間であってよい（すなわち、分子間架橋）；さらに分子内架橋があってもよい。本明細書で使用する「架橋剤」は、架橋を作成できる原子もしくは化合物である。
本明細書の「水性組成物」は、例えば、溶媒が少なくとも約２０重量％である、および本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのエーテル化に由来する本α－グルカンエーテル化合物を含む溶液もしくは混合液を意味する。本明細書の水性組成物の例は、水溶液および親水コロイドである。
用語「親水コロイド」および「ヒドロゲル」は、本明細書では互換的に使用される。親水コロイドは、水が分散媒であるコロイド系を意味する。本明細書の「コロイド」は、また別の物質全体に顕微的に分散している物質を意味する。このため、本明細書の親水コロイドは、水もしくは水溶液中のα－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または１種以上のα－グルカンエーテル化合物の分散液、エマルジョン、混合液もしくは溶液を意味することができる。
本明細書の用語「水溶液」は、溶媒が水である溶液を意味する。本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテル化合物は、水溶液中に分散、混合および／または溶解させることができる。水溶液は、本明細書の親水コロイドの分散媒として機能できる。
用語「溶剤」および「分散剤」は、１つの物質の別の物質中の分散液の形成および安定化を促進する物質を意味するために本明細書では互換的に使用される。本明細書の「分散液」は、水性組成物全体に散乱、または一様に散乱している１つ以上の粒子（例えば、本明細書に開示したパーソナルケア製品、医薬製品、食品、家庭用製品または工業製品のいずれかの成分）を含む水性組成物を意味する。本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテル化合物は、本明細書に開示した水性組成物中の分散剤として機能できると考えられる。
本明細書で使用する用語「粘度」は、それが流動するのを誘導する傾向を示す力に流体または例えば親水コロイドなどの水性組成物が抵抗する程度についての尺度を意味する。本明細書で使用できる粘度の様々な単位には、センチポイズ（ｃＰ）、およびパスカル秒（Ｐａ・ｓ）が含まれる。センチポイズは１００分の１ポイズであり、１ポイズは０．１００ｋｇ・ｍ－１・ｓ－１に相当する。したがって、本明細書において使用される用語「粘度調整剤」および「粘度修正剤」は、流体もしくは水性組成物の粘度を変化させる／修飾できるものを意味する。
本明細書で使用する用語「剪断減粘性挙動」は、剪断速度の上昇につれた親水コロイドもしくは水溶液の粘度の低下を意味する。本明細書で使用する用語「剪断増粘性挙動」は、剪断速度の上昇につれた親水コロイドもしくは水溶液の粘度の増加を意味する。本明細書の「剪断速度」は、進行性剪断変形が親水コロイドもしくは水溶液に適用される速度を意味する。剪断変形は、回転方向に適用できる。
本明細書で使用する水性組成物の粘度を変化させる方法に関する用語「接触させる工程」は、結果として水性組成物を本α－グルカンポリマー組成物および／またはα－グルカンエーテル化合物と一緒にさせる何らかの行動を意味する。「接触させる工程」は、さらに本明細書では表面実質的作用を提供するために織物、布地、糸もしくは繊維を本α－グルカンポリマーおよび／またはα－グルカンエーテル化合物により処理する工程に関して使用することもできる。接触させる工程は、例えば、溶解させる、混合する、振とうする、ホモジナイゼーション、スプレーする工程、処理する工程、浸漬する工程、フラッシュ洗浄する工程、上もしくは中に注入する工程、結合する工程、塗布する工程、コーティングする工程、適用する工程、貼付する工程およびさもなければ所望の作用を達成するために有効量のα－グルカンポリマー組成物および／またはα－グルカンエーテル化合物を水性組成物に、および／または織物、繊維、糸もしくは布地に直接的に伝える工程などの、当分野において公知の任意の手段によって実施できる。
用語「織物」、「布地」および「布」などは、本明細書では、天然および／または化学繊維の網状組織を有する織布もしくは不織布物質を意味するために互換的に使用される。そのような繊維は、例えば、撚り糸もしくは編み糸であってよい。
本明細書の「織物ケア組成物」は、何らかの方法で織物を処理するために好適な任意の組成物である。そのような組成物の例としては、非洗浄繊維処理（湯通し、精錬、シルケット加工、漂白、彩色、乾燥、印刷、バイオポリッシング、抗菌処理、防皺処理、耐汚染性処理など）、洗濯ケア組成物（例えば、洗濯ケア洗剤）および織物柔軟剤が挙げられる。
用語「ヘビーデューティ洗剤」および「万能洗剤」は、任意の温度で白色および着色布地の習慣的洗濯のために有用な洗剤を意味するために互換的に使用される。用語「ローデューティ洗剤」もしくは「微細織物洗剤」は、例えばビスコース、ウール、シルク、マイクロファイバーもしくは特別なケアを必要とする他の織物などの繊細な織物のケアのために有用な洗剤を意味するために本明細書では互換的に使用される。「特別なケア」は、例えば、過剰の水、低撹拌および／または漂白なしを使用する条件を含むことができる。
本明細書の用語「吸着」は、化合物（例えば、本α－グルカンポリマー／オリゴマーおよび／または本α－グルカンポリマー／オリゴマーに由来する本α－グルカンエーテル化合物）の物質の表面への接着を意味する。
用語「セルラーゼ」および「セルラーゼ酵素」は、セルロース中のβ－１，４－Ｄ－グルコシド結合を加水分解し、それによりセルロースを部分的もしくは完全に分解する酵素を意味するために互換的に使用される。セルラーゼは、または、例えば「β－１，４－グルカナーゼ」と呼ぶことができ、エンドセルラーゼ活性（ＥＣ３．２．１．４）、エキソセルラーゼ活性（ＥＣ３．２．１．９１）またはセロビアーゼ活性（ＥＣ３．２．１．２１）を有する可能性がある。本明細書の所定の実施形態におけるセルラーゼは、さらに例えばカルボキシメチルセルロースなどのセルロースエーテル誘導体中でβ－１，４－Ｄ－グルコシド結合を加水分解することもできる。「セルロース」は、β－１，４－結合Ｄ－グルコースモノマー単位の直鎖を有する不溶性多糖を意味する。
本明細書で使用する用語「織物の風合」もしくは「手触り」は、物理的、生理学的、心理学的、社会的またはそれらの任意の組み合わせであってよい織物に対する個人の触覚感覚応答を意味する。１つの実施形態では、織物風合は、相対風合値を測定するためのＰｈａｂｒＯｍｅｔｅｒ（登録商標）システム（Ｎｕ Ｃｙｂｅｒｔｅｋ，Ｉｎｃ．Ｄａｖｉｓ，ＣＡから入手できる）を使用して測定できる（米国繊維化学者・色彩技術者協会（ＡＡＴＣＣ ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ，“２０２－２０１２，Ｒｅｌａｔｉｖｅ Ｈａｎｄ Ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｔｅｘｔｉｌｅｓ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌ Ｍｅｔｈｏｄ”）。
本明細書で使用する「医薬上許容される」は、問題の化合物もしくは組成物が、合理的な損益比と釣り合って、無用な毒性、不適合性、不安定性、刺激、アレルギー反応などを伴わずに、ヒトおよび他の動物の組織と接触する際に使用するために好適であることを意味する。
本明細書で使用する用語「オリゴ糖」は、α－グリコシド結合によって結合された典型的には３～約３０単糖単位を含有するポリマーを意味する。
本明細書で使用する用語「多糖」は、α－グリコシド結合によって結合された典型的には３０を超える単糖単位を含有するポリマーを意味する。
本明細書で使用する「パーソナルケア製品」はシャンプー、ボディローション、シャワージェル、局所保湿剤、練り歯磨、歯磨ジェル、マウスウォッシュ、マウスリンス、抗プラークリンスおよび／または他の局所処理剤を含むがそれらに限定されない美容処理のヘア、スキン、スカルプおよび歯において使用される製品を意味する。一部の特に好ましい実施形態では、これらの製品はヒトにおいて利用されるが、他の実施形態では、これらの生成物は非ヒト動物とともに化粧使用（例えば、所定の獣医学用途において）に利用される。
本明細書で使用する「単離核酸分子」、「単離ポリヌクレオチド」および「単離核酸断片」は、互換的に使用され、一本鎖もしくは二本鎖の、任意選択的に合成、非天然もしくは改変ヌクレオチド塩基であるＲＮＡもしくはＤＮＡのポリマーを意味するであろう。ＤＮＡのポリマーの形態にある単離核酸分子は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡもしくは合成ＤＮＡの１つ以上のセグメントから構成されてよい。
用語「アミノ酸」は、タンパク質もしくはポリペプチドの基本的化学構造単位を意味する。下記の略語は、本明細書では特異アミノ酸を同定するために使用される。
Figure 0006997706000003
当業者であれば、本明細書に開示したアミノ酸配列は、開示したアミノ酸配列に関連する機能を保持しながら修飾できることを認識するであろう。例えば、所定の部位で化学的に等価のアミノ酸の生成を生じさせるが、コードされたタンパク質の機能的特性には影響を及ぼさない遺伝子の改変が一般的であることは、当分野においては周知である。本開示のためには、置換は、下記の５つの基の１つ内の交換であると定義されている。
１． 小さな脂肪族の非極性もしくは弱極性残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ（Ｐｒｏ、Ｇｌｙ）；
２． 極性負荷電残基およびそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；
３． 極性正荷電残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；
４． 大きな脂肪族の非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ（Ｃｙｓ）；および
５． 大きな芳香族残基：Ｐｈｅ、ＴｙｒおよびＴｒｐ。
したがって、疎水性アミノ酸であるアミノ酸のアラニンに対するコドンは、また別の低疎水性残基（例えばグリシン）もしくはより疎水性残基（例えばバリン、ロイシンもしくはイソロイシン）をコードするコドンによって置換されてよい。同様に、１つの負荷電残基の他の負荷電残基との（例えば、アスパラギン酸のグルタミン酸との）または１つの正荷電残基の他の正荷電残基との（例えばリシンのアルギニンとの）置換を生じさせる変化は、さらにまた機能的に同等の生成物を生成すると予測できる。多くの場合に、タンパク質分子のＮ末端およびＣ末端部分の変化を生じさせるヌクレオチド変化もまたそのタンパク質の活性を変化させるとは予測されないであろう。提案された修飾のそれぞれは、コードされた生成物の生物学的活性の保持の決定と同様に、当業者の技術の範囲内に明確に含まれている。
本明細書で使用する用語「コドン最適化」は、様々な宿主の形質転換のための核酸分子の遺伝子もしくはコーディング領域を意味するので、ＤＮＡがコードするポリペプチドを改変せずに宿主生物の典型的なコドン使用を反映するための核酸分子の遺伝子もしくはコーディング領域内のコドンの改変を意味する。
本明細書で使用する「合成遺伝子」は、当業者には公知の手法を使用して化学的に合成されるオリゴヌクレオチド構築ブロックから組み立てることができる。これらの構築ブロックは、その後に全遺伝子を構築するために酵素的に組み立てられる遺伝子断片を形成するためにライゲートおよびアニーリングされる。ＤＮＡ配列に関連する「化学合成（された）」は、構成要素のヌクレオチドがｉｎ ｖｉｔｒｏで組み立てられたことを意味する。ＤＮＡの手動による化学合成は、明確に確立された手法を使用して実施できる、または多数の商業的に入手できる機械の１つを使用して自動化化学合成を実施できる。したがって、遺伝子は、宿主細胞のコドン偏りを反映するためのヌクレオチド配列の最適化に基づいて最適遺伝子発現のために特別仕立てできる。当業者であれば、コドン使用が宿主によって好まれるそれらのコドンに向かって偏っている場合は、成功の得られる遺伝子発現の可能性が高いことを理解する。好ましいコドンの決定は、配列情報を入手できる宿主細胞に由来する遺伝子の調査に基づくことができる。
本明細書で使用する「遺伝子」は、コーディング配列に先行する調節配列（５’非コーディング配列）および後続する配列（３’非コーディング配列）を含む、特異タンパク質を発現する核酸分子を意味する。「天然遺伝子」は、自己の調節配列を備えて自然で見出される遺伝子を意味する。「キメラ遺伝子」は、天然遺伝子ではない、自然では一緒に見いだされることのない調節配列およびコーディング配列を含む任意の遺伝子を意味する。したがって、キメラ遺伝子は、異なる起源に由来する調節配列およびコーディング配列、または同一起源に由来するが自然に見いだされる方法とは異なる方法で配列された調節配列およびコーディング配列を含む可能性がある。「内在性遺伝子」は、生物のゲノム内でその天然の場所にある天然遺伝子を意味する。「外来」遺伝子は、宿主生物内で通常は見いだされないが、遺伝子導入によって宿主生物中に導入されている遺伝子を意味する。外来遺伝子は、非天然生物内に挿入された天然遺伝子またはキメラ遺伝子を含むことができる。「トランス遺伝子」は、形質転換手技によってゲノム内に導入されている遺伝子である。
本明細書で使用する「コーディング配列」は、特異アミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を意味する。「好適な調節配列」は、コーディング配列の上流（５’非コーディング配列）、コーディング配列内またはコーディング配列の下流（３’非コーディング配列）に位置しており、関連するコーディング配列の転写、ＲＮＡのプロセシングもしくは安定性または翻訳に影響を及ぼすヌクレオチド配列を意味する。調節配列は、プロモーター、翻訳リーダー配列、ＲＮＡプロセシング部位、エフェクター結合部位およびステムループ構造を含む可能性がある。
本明細書で使用する用語「機能的に結合した」は、一方の機能が他方の機能によって影響されるような単一核酸配列上での核酸配列の会合を意味する。例えば、プロモーターは、それがそのコーディング配列の発現に影響を及ぼすことができる場合、すなわちコーディング配列がプロモーターの転写制御下にある場合に、コーディング配列と機能的に結合している。コーディング配列は、センスもしくはアンチセンス方向で調節配列に機能的に結合させることができる。
本明細書で使用する用語「発現」は、本開示の核酸分子に由来するセンス（ｍＲＮＡ）もしくはアンチセンスＲＮＡの転写および安定性蓄積を意味する。発現は、さらにまたｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳もまた意味することができる。
本明細書で使用する「形質転換」は、結果として遺伝的に安定性の遺伝的形質を生じさせる、宿主生物のゲノム内への核酸分子の転移を意味する。本開示では、宿主細胞のゲノムには、染色体および染色体外（例えば、プラスミド）遺伝子が挙げられる。形質転換核酸分子を含有する宿主生物は、「トランスジェニック」、「組換え」もしくは「形質転換」生物と呼ばれる。
本明細書で使用する用語「配列解析ソフトウエア」は、ヌクレオチドもしくはアミノ酸配列を解析するために有用である任意のコンピューターアルゴリズムもしくはソフトウエアプログラムを意味する。「配列解析ソフトウエア」は、市販で入手できる、または別個に開発されてよい。典型的な配列解析ソフトウエアには、ＧＣＧ ｓｕｉｔｅ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎパッケージバージョン９．０、Ａｃｃｅｌｒｙｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０））およびＤＮＡＳＴＡＲ（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．１２２８ Ｓ．Ｐａｒｋ Ｓｔ．Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ５３７１５ ＵＳＡ）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ（例えば、バージョン１．８３；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２（２２）：４６７３－４６８０（１９９４））およびＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを組み込んでいるＦＡＳＴＡプログラム（Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，［Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ．Ｓｙｍｐ．］（１９９４），Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｄａｔｅ １９９２，１１１－２０．Ｅｄｉｔｏｒ（ｓ）：Ｓｕｈａｉ，Ｓａｎｄｏｒ．Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｐｌｅｎｕｍ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）およびＳｅｑｕｅｎｃｈｅｒ ｖ．４．０５が挙げられるであろうが、それらに限定されない。本出願の状況内では、配列分析ソフトウエアが分析に使用される場合は、他に規定されない限り、分析結果は、言及したプログラムの「デフォルト値」をベースとすることは理解されるだろう。本明細書で使用する「デフォルト値」は、最初に初期化されるとソフトウエアで最初にロードされる、ソフトウエア製造業者によって設定された任意の一連の数値もしくはパラメーターセットを意味するであろう。
可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物の構造的および機能的特性
本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、スクロース（例えば、サトウキビ）から、ヒトへの曝露の長い歴史を有する微生物（口腔内で自然に見いだされる、または例えばビール、発酵大豆などの食品中で見いだされる微生物）から自然において見出されるものと同一のアミノ酸配列（もしくはそれらの活性切断形）を本質的に有する１種以上の酵素加工助剤を使用して調製した。可溶性オリゴマー／ポリマーは、（広範囲の用途における使用を可能にする）低粘度を有する。
本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、下記のパラメーターの組み合わせによって特徴付けられる：
ａ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｂ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｃ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｄ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量（Ｍｗ）；
ｅ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｆ． ２５℃のｐＨ７の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｇ． ５未満の多分散性指数（ＰＤＩ）。
１つの実施形態では、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、いっそうより好ましくは少なくとも９０％および最も好ましくは少なくとも９５％のα－（１，３）グリコシド結合を含む。
また別の実施形態では、上述したα－（１，３）グリコシド結合実施形態に加えて、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、さらに２５％未満、好ましくは１０％未満、より好ましくは５％以下およびいっそうより好ましくは１％未満のα－（１，６）グリコシド結合を含む。
また別の実施形態では、上述したα－（１，３）およびα－（１，６）グリコシド結合含有実施形態に加えて、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、さらに１０％未満、好ましくは５％未満および最も好ましくは２．５％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合を含む。
１つの好ましい実施形態では、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、９３～９７％のα－（１，３）グリコシド結合および３％未満のα－（１，６）グリコシド結合を含み、ＤＰ３～７の混合物に対応する重量平均分子量を有する。別の好ましい実施形態では、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、約９５％のα－（１，３）グリコシド結合および約１％のα－（１，６）グリコシド結合を含み、ＤＰ３～７の混合物に対応する重量平均分子量を有する。上記の実施形態のまた別の態様では、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、さらに１～３％のα－（１，３，６）結合；好ましくは約２％のα－（１，３，６）結合を含む。
また別の実施形態では、上記に記載したグリコシド結合含有実施形態に加えて、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、さらに５％未満、好ましくは１％未満、および最も好ましくは０．５％未満のα－（１，４）グリコシド結合を含む。
また別の実施形態では、上述したグリコシド結合含有実施形態に加えて、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、５，０００ダルトン、好ましくは２，５００ダルトン未満、より好ましくは５００～２，５００ダルトンおよび最も好ましくは約５００～約２，０００ダルトンの重量平均分子量を含む。
また別の実施形態では、上記の特徴のいずれかに加えて、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、２０℃の水中において１２重量％で２５０センチポイズ（０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ））未満、好ましくは１０センチポイズ（ｃＰ）（０．０１パスカル秒（Ｐａ・ｓ））未満、好ましくは７センチポイズ（ｃＰ）（０．００７パスカル秒（Ｐａ・ｓ））未満、より好ましくは５センチポイズ（ｃＰ）（０．００５パスカル秒（Ｐａ・ｓ））未満、より好ましくは４センチポイズ（ｃＰ）（０．００４パスカル秒（Ｐａ・ｓ））未満および最も好ましくは３センチポイズ（ｃＰ）（０．００３パスカル秒（Ｐａ・ｓ））未満の粘度を含む。
上記の実施形態のいずれかに加えて、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、２５℃のｐＨ７の水中において少なくとも２０％（重量／重量）、好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％もしくは７０％の溶解度を有する。
α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／またはα－グルカンエーテルを含む組成物
所望の用途に依存して、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物および／またはその誘導体（例えば本α－グルカンエーテル）は、洗濯ケア、布地／織物ケアおよび／またはパーソナルケア製品において使用するために好適な１つ以上の他の物質および／または有効成分を用いて調製（例えば、ブレンド、混合、組み込むなど）することができる。したがって、本開示は、本グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含む組成物を含む。この状況における用語「本グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含む組成物」は、例えば、本グルカンオリゴマー／ポリマー、レオロジー改質組成物、織物処理／ケア組成物、洗濯ケア調製物／組成物、織物柔軟剤、パーソナルケア組成物（ヘア、スキンおよびオーラルケア）などを含む水性調製物を含むことができる。
本グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、所望の生成物中の成分として指示できる、または１種以上の追加の好適な成分（織物ケア用途、洗濯ケア用途および／またはパーソナルケア用途のために好適な成分）とブレンドできる。したがって、本開示は、本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物、本α－グルカンエーテルもしくはそれらの組み合わせを含む織物ケア、洗濯ケアもしくはパーソナルケア組成物を含む。１つの実施形態では、織物ケア、洗濯ケアもしくはパーソナルケア組成物は、０．０１～９９重量％（乾燥固体ベース）、好ましくは０．１～９０重量％、より好ましくは１～９０％および最も好ましくは５～８０重量％のグルカンオリゴマー／ポリマー組成物および／または本α－グルカンエーテル化合物を含む。
１つの実施形態では、織物ケア組成物であって：
ａ．
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数
を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物；および
ｂ． 少なくとも１つの追加の織物ケア成分
を含む織物ケア組成物が提供される。
また別の実施形態では、洗濯ケア組成物であって：
ａ）
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数
を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物；および
ｂ） 少なくとも１つの追加の洗濯ケア成分
を含む洗濯ケア組成物が提供される。
また別の実施形態では、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物に由来する：
１） 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
２） ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
３） １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
４） ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
５） ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
６） ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
７） ５未満の多分散性指数
を含むα－グルカンエーテルであって；組成物が少なくとも１つの有機基との約０．０５～約３．０の置換度（ＤｏＳ）を有するα－グルカンエーテルが提供される。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本グルカンエーテル組成物は、少なくとも１つの有機基との約０．０５～約３．０の置換度（ＤｏＳ）を有する。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本グルカンエーテル化合物は、カルボキシアルキル基、ヒドロキシアルキル基もしくはアルキル基である少なくとも１つの有機基を含む。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、少なくとも１つの有機基は、カルボキシメチル基、ヒドロキシプロピル基、ジヒドロキシプロピル基、ヒドロキシエチル基、メチル基またはエチル基である。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、少なくとも１つの有機基は、正荷電有機基である。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、グルカンエーテルは、第４級アンモニウムグルカンエーテルである。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、グルカンエーテル組成物は、トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカンである。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、有機基は、アルキル基、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基もしくはデシル基であってよい。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、有機基は、アルキル基の１個以上の炭素上に置換基が存在する置換アルキル基であってよい。置換基は、１つ以上のヒドロキシル基、アルデヒド基、ケトン基および／またはカルボキシル基であってよい。例えば、置換アルキル基は、ヒドロキシアルキル基、ジヒドロキシアルキル基もしくはカルボキシアルキル基であってよい。
好適なヒドロキシアルキル基の例は、ヒドロキシメチル（－ＣＨ２ＯＨ）基、ヒドロキシエチル（例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３）基、ヒドロキシプロピル（例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ３）基、ヒドロキシブチル基およびヒドロキシペンチル基である。他の例としては、例えばジヒドロキシメチル基、ジヒドロキシエチル（例えば、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ）基、ジヒドロキシプロピル（例えば、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３）基、ジヒドロキシブチル基およびジヒドロキシペンチル基などのジヒドロキシアルキル基（ジオール）が挙げられる。
好適なカルボキシアルキル基の例は、カルボキシメチル（－ＣＨ２ＣＯＯＨ）基、カルボキシエチル（例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ３））基、カルボキシプロピル（例えば、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ３、－ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ３）基、カルボキシブチル基およびカルボキシペンチル基である。
さらにまたは、アルキル基の１個以上の炭素は、また別のアルキル基との置換基を有することができる。そのような置換アルキル基の例は、メチル基、エチル基およびプロピル基である。具体例を挙げると、有機基は、例えば、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３基もしくは－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３基であってよいが、これらはどちらもメチル置換基を有するプロピル基である。
上記の様々な置換アルキル基の例から明らかなように、所定の実施形態では、アルキル基上の置換基（例えば、ヒドロキシ基もしくはカルボキシ基）は、アルキル基の末端炭素原子に結合できるが、ここで末端の炭素基は、α－グルカンエーテル化合物中のグルコースモノマー単位にエーテル結合している末端の反対側にある。この末端置換基の例は、ヒドロキシプロピル基－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである。または、置換基は、アルキル基の内部炭素原子上にあってもよい。内部置換基の１つの例は、ヒドロキシプロピル基－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３である。アルキル基は１つ以上の置換基を有することができ、それらは同一（例えば、２つのヒドロキシル基［ジヒドロキシ］）であっても、異なって（例えば、ヒドロキシル基およびカルボキシル基）いてもよい。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物は、１つのタイプの有機基を含有できる。そのような化合物の例は、有機基としてカルボキシアルキル基を含有する（一般的に言えば、カルボキシアルキルα－グルカン）。そのような化合物の特異的な非限定的例は、カルボキシメチルα－グルカンである。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物は、２つ以上の異なるタイプの有機基を含有できる。そのような化合物の例は、（ｉ）有機基としての２つの異なるアルキル基、（ｉｉ）有機基としてのアルキル基とヒドロキシアルキル基（一般的に言えば、アルキルヒドロキシアルキルα－グルカン）、（ｉｉｉ）有機基としてのアルキル基およびカルボキシアルキル基（一般的に言えば、アルキルカルボキシα－グルカン）、（ｉｖ）有機基としてのヒドロキシアルキル基およびカルボキシアルキル基（一般的に言えば、ヒドロキシアルキルカルボキシアルキルα－グルカン）、（ｖ）有機基としての２つの異なるヒドロキシアルキル基または（ｖｉ）有機基としての２つの異なるカルボキシアルキル基を含有する。そのような化合物の特定の非限定的例としては、エチルヒドロキシエチルα－グルカン、ヒドロキシアルキルメチルα－グルカン、カルボキシメチルヒドロキシエチルα－グルカンおよびカルボキシメチルヒドロキシプロピルα－グルカンが挙げられる。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書の有機基は、または正荷電有機基であってよい。上記で定義したように、正荷電有機基は、また別の原子もしくは官能基で置換された１個以上の水素を有する１個以上の炭素の鎖であって、１つ以上の置換が正荷電基とである炭素の鎖を含む。
正荷電基は、例えば、置換アンモニウム基であってよい。置換アンモニウム基の例は、第１級、第２級、第３級および第４級アンモニウム基である。構造Ｉは、構造ＩのＲ２、Ｒ３およびＲ４の組成に依存して、第１級、第２級、第３級および第４級アンモニウム基を表す。構造ＩのＲ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれは、独立して、水素原子、またはアルキル基、アリール基、シクロアルキル基、アラルキル基もしくはアルカリル基を表す。または、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれは、独立して水素原子もしくはアルキル基を表すことができる。アルキル基は、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノ二ル基もしくはデシル基であってよい。Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の２つもしくは３つがアルキル基の場合、それらは同一もしくは異なるアルキル基であってよい。
本明細書の「第１級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物」は、アンモニウム基を有する正荷電有機基を含む可能性がある。この例では、正荷電有機基は、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれが水素原子である構造Ｉを含む。そのような正荷電有機基の非限定的な例は、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれが水素原子である構造ＩＩによって示される。第１級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物の１つの例は、要するに、アンモニウムα－グルカンエーテルと表すことができる。上記命名法で「第１級」が意味する第１のメンバー（すなわち、Ｒ１）が、α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合している正荷電有機基の１個以上の炭素の鎖であることは理解されよう。
本明細書の「第２級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物」は、例えば、モノアルキルアンモニウム基を有する正荷電有機基を含む可能性がある。この例では、正荷電有機基は、Ｒ２およびＲ３のそれぞれが水素原子であり、Ｒ４がアルキル基である構造Ｉを含む。そのような正荷電有機基の非限定的な例は、Ｒ２およびＲ３のそれぞれが水素原子であり、Ｒ４がアルキル基である構造ＩＩによって表される。第２級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物の例は、本明細書では、要するに、モノアルキルアンモニウムα－グルカンエーテル（例えば、モノメチル－、モノエチル－、モノプロピル－、モノブチル－、モノペンチル－、モノヘキシル－、モノヘプチル－、モノオクチル－、モノノニル－またはモノデシル－アンモニウムα－グルカンエーテル）と表すことができる。上記命名法で「第２級」が意味する第２のメンバー（すなわち、Ｒ１）が、α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合している正荷電有機基の１個以上の炭素の鎖であることは理解されよう。
本明細書の「第３級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物」は、例えば、ジアルキルアンモニウム基を有する正荷電有機基を含む可能性がある。この例では、正荷電有機基は、Ｒ２が水素原子であり、Ｒ３およびＲ４のそれぞれがアルキル基である構造Ｉを含む。そのような正荷電有機基の非限定的な例は、Ｒ２が水素原子であり、Ｒ３およびＲ４のそれぞれがアルキル基である構造ＩＩによって表される。第３級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物の例は、要するに、ジアルキルアンモニウムα－グルカンエーテル（例えば、ジメチル－、ジエチル－、ジプロピル－、ジブチル－、ジペンチル－、ジヘキシル－、ジヘプチル－、ジクチル－、ジノニル－もしくはジデシル－アンモニウムα－グルカンエーテル）と表すことができる。上記命名法で「第３級」が意味する第３のメンバー（すなわち、Ｒ１）が、α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合している正荷電有機基の１個以上の炭素の鎖であることは理解されよう。
本明細書の「第４級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物」は、例えば、トリアルキルアンモニウム基を有する正荷電有機基を含む可能性がある。この例では、正荷電有機基は、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれがアルキル基である構造Ｉを含む。そのような正荷電有機基の非限定的な例は、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれがアルキル基である構造ＩＩによって表される。第４級アンモニウムα－グルカンエーテル化合物の例は、要するに、トリアルキルアンモニウムα－グルカンエーテル（例えば、トリメチル－、トリエチル－、トリプロピル－、トリブチル－、トリペンチル－、トリヘキシル－、トリヘプチル－、トリオクチル－、トリノニル－もしくはトリデシル－アンモニウムα－グルカンエーテル）と表すことができる。上記命名法で「第４級」が意味する第４のメンバー（すなわち、Ｒ１）が、α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合している正荷電有機基の１個以上の炭素の鎖であることは理解されよう。
本明細書の正荷電基として機能できる置換アンモニウム基の追加の非限定的な例は、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれが独立して、水素原子；例えばメチル基、エチル基もしくはプロピル基などのアルキル基；例えばフェニル基もしくはナフチル基などのアリール基；例えばベンジル基などのアラルキル基；アリカリル基；またはシクロアルキル基である構造Ｉで表される。Ｒ２、Ｒ３およびＲ４のそれぞれは、例えば、アミノ基もしくはヒドロキシル基をさらに含む可能性がある。
構造Ｉによって表される置換アンモニウム基中の窒素原子は、正荷電有機基に含まれる１個以上の炭素の鎖に結合させられる。この１個以上の炭素の鎖（「炭素鎖」）は、α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合しており、置換アンモニウム基の窒素原子との置換に加えて１つ以上の置換基を有する可能性がある。炭素鎖内には、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個の炭素が存在する可能性がある。具体例を挙げると、構造ＩＩの炭素鎖は、長さが３個の炭素原子である。
正荷電有機基との置換に加えて置換を有していない正荷電有機基の炭素鎖の例としては、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－および－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－が挙げられる。これらの例のそれぞれにおいては、鎖の最初の炭素原子はα－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合しており、鎖の最後の炭素原子は正荷電基に結合している。正荷電基が置換アンモニウム基である場合、これらの例のそれぞれにおける鎖の最後の炭素原子は、構造Ｉ中のＣによって表される。
正荷電有機基の炭素鎖が、正荷電基との置換に加えて１つの置換を有する場合、そのような追加の置換は、１つ以上のヒドロキシル基、酸素原子（これにより、アルデヒド基もしくはケトン基を形成する）、アルキル基（例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基）および／または追加の正荷電基との置換であってよい。正荷電基は、典型的には、炭素鎖の末端炭素原子に結合させられる。
ヒドロキシル基との１つ以上の置換を有する正荷電有機基の炭素鎖の例としては、ヒドロキシアルキル（例えば、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル）基およびジヒドロキシアルキル（例えば、ジヒドロキシエチル、ジヒドロキシプロピル、ジヒドロキシブチル、ジヒドロキシペンチル）基が挙げられる。ヒドロキシアルキルおよびジヒドロキシアルキル（ジオール）炭素鎖の例としては、－ＣＨ（ＯＨ）－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２、－Ｃ（ＯＨ）２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－、－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２および－ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２－が挙げられる。これらの例のそれぞれにおいては、鎖の最初の炭素原子は本α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合しており、鎖の最後の炭素原子が正荷電基に結合している。正荷電基が置換アンモニウム基である場合、これらの例のそれぞれにおける鎖の最後の炭素原子は、構造Ｉ中のＣによって表される。
アルキル基との１つ以上の置換を有する正荷電有機基の炭素鎖の例としては、１つ以上の置換基であるメチル基、エチル基および／またはプロピル基を有する鎖が挙げられる。メチルアルキル基の例としては、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２－および－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２－が挙げられ、これらはどちらもメチル置換を有するプロピル基である。これらの例のそれぞれにおいては、鎖の最初の炭素原子は本α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合しており、鎖の最後の炭素原子は正荷電基に結合している。正荷電基が置換アンモニウム基である場合、これらの例のそれぞれにおける鎖の最後の炭素原子は、構造Ｉ中のＣによって表される。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書のα－グルカンエーテル化合物は、１つのタイプの正荷電有機基を含有できる。例えば、α－グルカンのグルコースモノマーにエーテル結合している１つ以上の正荷電有機基は、トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピル基（構造ＩＩ）であってよい。または、本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物は、２つ以上の異なるタイプの正荷電有機基を含有できる。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書のα－グルカンエーテル化合物は、例えば、少なくとも１つの非イオン性有機基および少なくとも１つのアニオン性基を含むことができる。また別の例として、本明細書のα－グルカンエーテル化合物は、少なくとも１つの非イオン性有機基および少なくとも１つの正荷電有機基を含むことができる。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、α－グルカンエーテル化合物は、本明細書に開示した本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのいずれかに由来してよい。例えば、α－グルカンエーテル化合物は、本明細書に開示したエーテル化反応を使用して本α－グルカンオリゴマー／ポリマーをエーテル誘導体化する工程によって生成できる。
開示された本開示の所定の実施形態では、α－グルカンエーテル化合物を含む組成物は、少なくとも約１０ｃＰの粘度を有する親水コロイドもしくは水溶液であってよい。または、そのような親水コロイドもしくは水溶液は、例えば、少なくとも約１００、２５０、５００、７５０、１，０００、１，２５０、１，５００、１，７５０、２，０００、２，２５０、２，５００、３，０００、３，５００もしくは４，０００ｃＰ（または１００～４，０００ｃＰの間の任意の数値）の粘度を有する。
粘度は、約３℃～約１１０℃（または３～１１０℃の間のいずれかの整数）の任意の温度で親水コロイドもしくは水溶液を用いて測定できる。または、粘度は４℃～３０℃、または約２０℃～２５℃の温度で測定できる。粘度は、大気圧（約７６０トル）もしくは他の任意の相互より高いもしくは低い圧力で測定できる。
本明細書に開示した親水コロイドもしくは水溶液の粘度は、粘度計もしくは流動計を使用して、または当分野において公知の任意の他の手段を使用して測定できる。当業者であれば、粘度計もしくは流動計を使用すると剪断減粘性挙動もしくは剪断増粘性挙動を示す本開示の親水コロイドもしくは水溶液（すなわち、流動条件に伴って変動する粘度を備える流体）の粘度を測定できることを理解できるであろう。そのような実施形態の粘度は、例えば、約１０～１，０００ｒｐｍ（毎分回転数）（もしくは１０～１，０００ｒｐｍの間の任意の整数）の回転剪断速度で測定できる。または、粘度は、約１０、６０、１５０、２５０もしくは６００ｒｐｍの回転剪断速度で測定できる。
本明細書に開示した親水コロイドもしくは水溶液のｐＨは、約２．０～約１２．０の間であってよい。または、ｐＨは、約２．０、３．０、４．０、５．０、６．０、７．０、８．０、９．０、１０．０、１１．０、１２．０；もしくは５．０～約１２．０の間；または約４．０～８．０の間；または約５．０～８．０の間であってよい。
例えば親水コロイドもしくは水溶液などの本明細書の水性組成物は、少なくとも約２０重量％の水を有する溶媒を含むことができる。他の実施形態では、溶媒は、例えば、少なくとも約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０もしくは１００重量％（または２０～１００重量％の間のいずれかの整数）の水である。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物は、例えば、親水コロイドもしくは水溶液中で少なくとも約０．０１％、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．２％、１．４％、１．６％、１．８％、２．０％、２．５％、３．０％、３．５％、４．０％、４．５％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％もしくは３０％の重量パーセンテージ（重量％）で存在することができる。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書の親水コロイドもしくは水溶液は、１種以上のα－グルカンエーテル化合物に加えて他の成分を含むことができる。例えば、親水コロイドもしくは水溶液は、１種以上の塩、例えば、ナトリウム塩（例えば、ＮａＣｌ、Ｎａ２ＳＯ４）を含むことができる。塩の他の非限定的例には、（ｉ）アルミニウム、アンモニウム、バリウム、カルシウム、クロム（ＩＩもしくはＩＩＩ）、銅（ＩもしくはＩＩ）、鉄（ＩＩもしくはＩＩＩ）、水素、鉛（ＩＩ）、リチウム、マグネシウム、マンガン（ＩＩもしくはＩＩＩ）、水銀（ＩもしくはＩＩ）、カリウム、銀、ストロンチウムナトリウム、スズ（ＩＩもしくはＩＶ）または亜鉛カチオンおよび（ｉｉ）酢酸塩、ホウ酸塩、臭素酸塩、臭化物、炭酸塩、塩素酸塩、塩化物、亜塩素酸塩、クロム酸塩、シアナミド、シアン化物、重クロム酸、二水素リン酸塩、フェリシアン化物、フェロシアン化第二鉄、フッ化物、炭酸水素塩、リン酸水素塩、硫酸水素塩、硫化水素、亜硫酸水素、水素化物、水酸化物、次亜塩素酸塩、ヨウ素酸塩、ヨウ化物、硝酸塩、窒化物、亜硝酸塩、シュウ酸塩、酸化物、過塩素酸塩、過マンガン酸塩、過酸化物、リン酸塩、リン化物、亜リン酸塩、ケイ酸塩、スズ酸塩、亜スズ酸塩、硫酸塩、硫化物、亜硫酸塩、酒石酸塩もしくはチオシアン酸塩アニオンが含まれる。したがって、例えば、上記の（ｉ）からのカチオンおよび上記の（ｉｉ）からのアニオンを有する任意の塩は、親水コロイドもしくは水溶液中にあってよい。塩は、本明細書の親水コロイドもしくは水溶液中に、例えば、約０．０１重量％～約１０．００重量％（もしくは０．０１重量％～１０．００重量％の間の任意の１００分の１増分）で存在してよい。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、当業者であれば、所定の実施形態では、α－グルカンエーテル化合物が親水コロイドもしくは水溶液中でアニオン性形態にあってよいことは理解されるであろう。例としては、カルボキシル基で置換されたアルキル基を含む有機基を有するそれらのα－グルカンエーテル化合物を挙げることができる。カルボキシアルキルα－グルカンエーテル化合物中のカルボキシル（ＣＯＯＨ）基は、水性条件においてカルボキシレート（ＣＯＯ－）基に変換させることができる。そのようなアニオン性基は、塩のカチオン、例えば、上記（ｉ）で挙げたいずれか（例えば、カリウム、ナトリウムもしくはリチウムカチオン）と相互作用できる。したがって、α－グルカンエーテル化合物は、例えば、ナトリウムカルボキシアルキルα－グルカンエーテル（例えば、ナトリウムカルボキシアルキルα－グルカン）、カリウムカルボキシアルキルα－グルカンエーテル（例えば、カリウムカルボキシアルキルα－グルカン）もしくはリチウムカルボキシアルキルα－グルカンエーテル（例えば、リチウムカルボキシメチルα－グルカン）であってよい。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書のα－グルカンエーテル化合物を含む組成物は、非水性（例えば、乾燥組成物）であってよい。そのような実施形態の例には、粉末、顆粒、マイクロカプセル、フレークまたは粒状物質の任意の他の形態が含まれる。他の例としては、例えば、ペレット、バー、カーネル、ビーズ、タブレット、スティックもしくは他の凝集体などのより大きな組成物が挙げられる。本明細書の非水性もしくは無水組成物は、典型的にはその中に含まれた３、２、１、０．５もしくは０．１重量％未満の水を有する。
所定の実施形態では、α－グルカンエーテル化合物は、当分野において公知の任意の手段を使用して架橋されてよい。そのような架橋は、ホウ酸塩架橋であってよいが、ここでホウ酸塩はホウ素含有化合物（例えば、ホウ酸、ホウ砂、四ホウ酸塩、五ホウ酸塩、例えばＰＯＬＹＢＯＲ（登録商標）などのポリマー化合物、ホウ酸のポリマー化合物、アルカリホウ酸塩）由来である。または、架橋は、例えばチタンもしくはジルコニウムなどの多価金属を用いて提供できる。チタン架橋は、例えば、乳酸アンモニウムチタン、トリエタノールアミンチタン、アセチルアセトナトチタンおよびチタンのポリヒドロキシ錯体などのＩＶチタン含有化合物を使用して提供できる。ジルコニウム架橋は、例えば、乳酸ジルコニウム、炭酸ジルコニウム、アセチルアセトナトジルコニウム、トリエタノールアミンジルコニウム、乳酸ジイソプロピルアミンジルコニウムおよびジルコニウムのポリヒドロキシ錯体などのジルコニウムＩＶ含有化合物を使用して提供できる。さらにまたは、架橋は、全てが参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４４６２９１７号明細書、同第４４６４２７０号明細書、同第４４７７３６０号明細書および同第４７９９５５０号明細書に記載された任意の架橋剤を用いて提供できる。架橋剤（例えば、ホウ酸塩）は、例えば、約０．２重量％～２０重量％、または約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５もしくは２０重量％の濃度で本明細書の水性組成物中に存在していてよい。
架橋している本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物は、典型的には、水溶液中でその非架橋結合対応物と比較してより高い粘度を有すると考えられる。さらに、架橋α－グルカンエーテル化合物は、その非架橋対応物と比較して増加した剪断増粘性挙動を有する可能性があると考えられる。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書の組成物（織物ケア、洗濯ケア、パーソナルケアなど）は、任意選択的に１種以上の活性酵素を含有していてよい。好適な酵素の非限定的例としては、プロテアーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペルオキシダーゼ、脂肪分解酵素（例えば、金属脂肪分解酵素）、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ（例えば、アリールエステラーゼ、ポリエステラーゼ）、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ（例えば、コリンオキシダーゼ）、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、メラナーゼ、β－グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、メタロプロテイナーゼ、アマドリアーゼ、グルコアミラーゼ、アラビノフラノシダーゼ、フィターゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼおよびアミラーゼが挙げられる。酵素が含まれる場合、酵素は、例えば、（例えば、純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％（例えば、０．０１～０．０３重量％）の活性酵素で本明細書の組成物中に含まれてよい。
本明細書のセルラーゼは、エンドセルラーゼ活性（ＥＣ３．２．１．４）、エキソセルラーゼ活性（ＥＣ３．２．１．９１）もしくはセロビアーゼ活性（ＥＣ３．２．１．２１）を有する可能性がある。本明細書のセルラーゼは、セルラーゼ活性を維持するための好適な条件下で活性を有する「活性セルラーゼ」である；そのような好適な条件を決定することは、当分野の技術の範囲内に含まれる。セルロースを分解できることに加えて、所定の実施形態におけるセルラーゼは、さらにセルロースエーテル誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースを分解することもできる。セルラーゼに対して安定性ではないと予想されるセルロースエーテル誘導体の例は、米国特許第７０１２０５３号明細書、同第７０５６８８０号明細書、同第６５７９８４０号明細書、同第７５３４７５９号明細書および同第７５７６０４８号明細書に開示されている。
本明細書のセルラーゼは、例えば細菌もしくは真菌などの任意の微生物起源由来であってよい。化学修飾されたセルラーゼもしくはタンパク質工学により作成された突然変異体セルラーゼが含まれる。好適なセルラーゼには、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、フミコラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属、チエラビア（Ｔｈｉｅｌａｖｉａ）属およびアクレモニウム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）属が含まれるが、それらに限定されない。他の例として、セルラーゼは、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、ミセリオフソラ・サーモフィラ（Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）もしくはフザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）に由来してよい；これらや他のセルラーゼは、参照により本明細書に全部が組み込まれる米国特許第４４３５３０７号明細書、同第５６４８２６３号明細書、同第５６９１１７８号明細書、同第５７７６７５７号明細書および同第７６０４９７４号明細書に開示されている。典型的なトリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）セルラーゼは、それらの全部が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４６８９２９７号明細書、同第５８１４５０１号明細書、同第５３２４６４９号明細書および国際公開第９２／０６２２１号パンフレットならびに同第９２／０６１６５号パンフレットに開示されている。典型的なバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属セルラーゼは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６５６２６１２号明細書に開示されている。例えば上記のいずれかなどのセルラーゼは、好ましくはＮ末端シグナルペプチドが欠如する成熟形にある。本明細書において有用な市販で入手できるセルラーゼにはＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）およびＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）；ＣＬＡＺＩＮＡＳＥ（登録商標）およびＰＵＲＡＤＡＸ（登録商標）ＨＡ（ＤｕＰｏｎｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）ならびにＫＡＣ－５００（Ｂ）（登録商標）（花王株式会社）が含まれる。
または、本明細書のセルラーゼは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４４３５３０７号明細書、同第５７７６７５７号明細書および同第７６０４９７４号明細書に記載された、当分野において公知の任意の手段によって生成できる。例えば、セルラーゼは、異種発現系内、例えば微生物もしくは心筋異種発現系内などで組換え的に生成できる。異種発現系の例としては、細菌（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）種）系および真核細胞系が含まれる。真核細胞系は、酵母（例えば、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）種、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ種）または真菌（例えば、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）種、例えば、Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、例えばＡ．ニガー（ｎｉｇｅｒ））発現系を使用できる。
１つ以上のセルラーゼは、本明細書に開示した組成物を調製する場合に１つの成分として直接的に加えることができる。または、１つ以上のセルラーゼは、本明細書に開示した組成物中に間接的に（意図せずに）提供される可能性がある。例えば、セルラーゼは、組成物を調製するために使用される非セルラーゼ酵素調製物中に存在することによって本明細書の組成物中に提供する可能性がある。その中にセルラーゼが間接的に提供されている組成物中のセルラーゼは、例えば、約０．１～１０ｐｐｂ（例えば、１ｐｐｍ未満）で存在する可能性がある。セルロースエーテル化合物の代わりにポリα－１，３－１，６－グルカンエーテル化合物を使用することによって、本明細書の組成物の企図された利点は、グルカンエーテルの所望の効果がその背景のセルラーゼ活性によって無効化されるという懸念を持たずに、背景のセルラーゼ活性を有する可能性がある非セルラーゼ酵素調製物を使用できることにある。
所定の実施形態におけるセルラーゼは、熱安定性であってよい。セルラーゼ熱安定性とは、ある時間（例えば、約３０～６０分間）にわたり、高温（例えば、約６０～７０℃）に曝露させた後も酵素がその活性を保持する能力を意味する。セルラーゼの熱安定性は、その時間中に規定条件下でセルラーゼ活性の半分が失われる分間、時間もしくは日数で与えられるその半減期（ｔ１／２）によって測定できる。
所定の実施形態におけるセルラーゼは、広範囲のｐＨ値（例えば、約７．０～約１１．０などの中性もしくはアルカリ性ｐＨ）まで安定性である可能性がある。そのような酵素は、そのようなｐＨ条件下で規定時間（例えば、少なくとも約１５分間、３０分間もしくは１時間）にわたり安定性を保持できる。
本組成物中には、少なくとも１つ、２つもしくはそれ以上のセルラーゼを含むことができる。本明細書の組成物中のセルラーゼの総量は、典型的には、組成物中のセルラーゼを使用するために好適な量（「有効量」）である。例えば、セルロース含有織物の感触および／または外観を改善するために意図された組成物中のセルラーゼの有効量は、織物の感触の測定可能な改善（例えば、織物の滑らかさおよび／または外観を改善する、織物の外観の鮮明度を低下させる傾向を示す毛玉やフィブリルを取り除く）を作り出す量である。また別の例として、本明細書の織物ストーンウォッシュ加工組成物中のセルラーゼの有効量は、所望の（例えば、縫目内および織物はぎ布上のすり切れて色褪せた外観を作り出すための）効果を提供するであろう量である。本明細書の組成物中のセルラーゼの量は、例えばさらにその中で組成物が使用される加工パラメーター（例えば、装置、温度、時間など）およびセルラーゼ活性に左右される可能性がある。その中で織物が処理される水性組成物中のセルラーゼの有効濃度は、当業者であれば容易に決定できる。織物ケア加工では、セルラーゼは、その中で織物が処理される水性組成物（例えば、洗浄液）中に、最少約０．０１～０．１ｐｐｍの全セルラーゼタンパク質、または約０．１～１０ｐｐｂ（例えば、１ｐｐｍ未満）の全セルラーゼタンパク質から最大約１００、２００、５００、１，０００、２，０００、３，０００、４，０００もしくは５，０００ｐｐｍの全セルラーゼタンパク質の濃度で存在してよい。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテル（本α－グルカンオリゴマー／ポリマーに由来する）は、セルラーゼによって分解されることにほとんどもしくは完全に安定性（耐性）である。例えば、１つ以上のセルラーゼによる本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／またはα－グルカンエーテル化合物の分解率（％）は、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％もしくは１％未満である、または０％である。そのような分解率（％）は、例えば、ある期間（例えば、約２４時間）にわたるセルラーゼを用いた処理の前後のポリマーの分子量を比較することによって決定できる。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本開示の所定の実施形態における親水コロイドおよび水溶液は、剪断減粘性挙動もしくは剪断増粘性挙動のいずれかを有すると考えられる。剪断減粘性挙動は、剪断速度の上昇につれた親水コロイドもしくは水溶液の粘度の低下として観察され、他方剪断増粘性挙動は、剪断速度の上昇につれた親水コロイドもしくは水溶液の粘度の増加として観察される。本明細書の水溶液の剪断減粘性挙動もしくは剪断増粘性挙動の修飾は、水性組成物へのα－グルカンエーテルの混合に起因する可能性がある。したがって、その流動学的プロファイルを修飾する（すなわち、水性液、水溶液または混合物の流動特性を修飾する）ためには、水性組成物に１種以上のα－グルカンエーテル化合物を加えることができる。さらに、その粘度を修飾するためには、水性組成物に１種以上のα－グルカンエーテル化合物を加えることができる。
親水コロイドおよび水溶液の流動学的特性は、回転剪断速度を（例えば、約１０ｒｐｍから約２５０ｒｐｍへ）増加させながら粘度を測定することによって観察できる。例えば、親水コロイドもしくは水溶液の剪断減粘性挙動は、回転剪断速度が約１０ｒｐｍから６０ｒｐｍへ、１０ｒｐｍから１５０ｒｐｍへ、１０ｒｐｍから２５０ｒｐｍへ、６０ｒｐｍから１５０ｒｐｍへ、６０ｒｐｍから２５０ｒｐｍもしくは１５０ｒｐｍから２５０ｒｐｍへ増加するにつれて、粘度における少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％（または５％～９５％の間の任意の整数）の粘度（ｃＰ）の低下として観察できる。また別の例として、本明細書に開示した親水コロイドもしくは水溶液の剪断増粘性挙動は、回転剪断速度が約１０ｒｐｍから６０ｒｐｍへ、１０ｒｐｍから１５０ｒｐｍへ、１０ｒｐｍから２５０ｒｐｍへ、６０ｒｐｍから１５０ｒｐｍへ、６０ｒｐｍから２５０ｒｐｍもしくは１５０ｒｐｍから２５０ｒｐｍへ増加するにつれて、粘度における少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１２５％、１５０％、１７５％もしくは２００％（または５％～２００％の間の任意の整数）の粘度（ｃＰ）の増加として観察できる。
本明細書に開示した親水コロイドもしくは水溶液は、布地ケア製品、洗濯ケア製品、パーソナルケア製品、医薬製品もしくは工業用製品の形態にあってよい、および／またはそれらの中に含まれていてよい。本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテル化合物は、これらの製品のそれぞれにおける増粘剤および／または分散剤として使用できる。そのような増粘剤は、所望であれば、その開示が参照により本明細書に全体として組み込まれる米国特許第８５４１０４１号明細書に開示されている増粘剤などの１種以上の他のタイプの増粘剤と結び付けて使用されてよい。
本明細書の家庭用および／または工業製品は、例えば、ドライウォールテープ接合化合物；モルタル；グラウト；セメントプラスター；スプレープラスター；セメントスタッコ；接着剤；ペースト；壁／天井結着剤；テープキャスティング用、押出成形用、射出成形用および陶磁器用の結合剤および加工助剤；殺虫剤用、除草剤用および肥料用のスプレー接着剤および懸濁化／分散助剤；織物柔軟剤および洗濯用洗剤などの織物ケア剤；硬質表面洗浄剤；空気清浄剤；ポリマーエマルジョン；ゲル剤、例えば水性ゲル；界面活性剤溶液；塗料、例えば水性塗料；保護コーティング；接着剤；シーラントおよびコーキング剤；インク類、例えば水性インク；金属工作液；または電気めっき、リン酸塩処理、亜鉛めっきおよび／または一般金属洗浄作業において使用されるエマルジョンベースの金属洗浄液；油圧液（例えば、坑内作業におけるフラッキング（水圧破砕）のために使用される油圧液）；および水性鉱石スラリーの形態にあってよい。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、本明細書に開示した組成物は、織物ケア組成物の形態にあってよい。本明細書の織物ケア組成物は、手洗い、洗濯機洗浄および／または他の目的、例えば織物の浸漬および／または前処理などの他の目的のために使用できる。織物ケア組成物は、例えば、洗濯用洗剤；織物コンディショナー、任意の洗濯用製品、リンス用製品もしくは乾燥機添加製品；単位用量もしくはスプレーの形態を取ることができる。液体形にある織物ケア組成物は、本明細書に開示した水性組成物の形態にあってよい。他の態様では、織物ケア組成物は、乾燥形、例えば顆粒状洗剤もしくは乾燥機添加用織物柔軟剤シートなどの乾燥形であってよい。本明細書の織物ケア組成物の他の非限定的例には；顆粒状もしくは粉末状の万能もしくは強力洗浄剤；液体形、ジェル形もしくはペースト形の万能もしくは強力洗浄剤；液体もしくはドライの細（例えば、繊細）繊維用洗剤；例えば漂白用添加物、「ステイン・スティック」もしくは前処理剤などのクリーニング補助剤；基質積載製品、例えばドライワイプもしくはウェットワイプ、パッドもしくはスポンジ；スプレー剤およびミスト剤が含まれる。
本明細書の洗剤組成物は、例えば、粉末、顆粒、ペースト、バー、単位用量もしくは液体などの任意の有用な形態にあってよい。液体洗剤は、典型的には、約７０重量％までの水および０重量％～約３０重量％の有機溶媒を含有する水性であってよい。液体洗剤は、さらにまた水を約３０重量％しか含有していないコンパクトジェルの形態にあってよい。
本明細書の洗剤組成物は、１種以上の界面活性剤を含み、このとき界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤およびそれらの混合物から選択される。一部の実施形態では、界面活性剤は、クリーニング組成物の約０．１重量％～約６０重量％の濃度で存在するが、また別の実施形態では濃度は約１重量％～約５０重量％であり、さらにまた別の実施形態では、濃度は約５重量％～約４０重量％である。洗剤は、通常は０重量％～約５０重量％のアニオン性界面活性剤、例えば直鎖状アルキルベンゼンスルホン酸塩（ＬＡＳ）、α－オレフィンスルホン酸塩（ＡＯＳ）、アルキル硫酸塩（高級アルコール硫酸エステル塩）（ＡＳ）、アルコールエトキシサルフェート（ＡＥＯＳもしくはＡＥＳ）、第２級アルカンスルホネート（ＳＡＳ）、α－スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル－もしくはアルケニルコハク酸または石鹸を含有するであろう。さらに、洗剤組成物は、任意選択的に、０重量％～約４０重量％の非イオン性界面活性剤、例えば、（例えば、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９２／０６１５４号パンフレットに記載されている）アルコールエトキシレート（ＡＥＯもしくはＡＥ）、カルボキシル化アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミン、脂肪酸モノエタノールアミドもしくはポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミドを含有することができる。
本明細書の洗剤組成物は、典型的には、１種以上の洗剤ビルダーもしくはビルダー系を含む。少なくとも１種のビルダーを組み込んでいる一部の実施形態では、クリーニング組成物は、本組成物の少なくとも約１重量％、約３重量％～約６０重量％もしくはいっそう約５重量％～約４０重量％のビルダーを含む。ビルダーには、アルカリ金属、ポリリン酸のアンモニウム塩およびアルカノールアンモニウム塩、アルカリ金属ケイ酸塩、アルカリ土類およびアルカリ金属炭酸塩、アルミノケイ酸塩、ポリカルボキシレート化合物、エーテルヒドロキシポリカルボキシレート、マレイン酸無水物とエチレンもしくはビニルメチルエーテルとのコポリマー、１，３，５－トリヒドロキシベンゼン－２，４，６－トリスルホン酸およびカルボキシメチルオキシコハク酸、ポリ酢酸の様々なアルカリ金属、アンモニウムおよび置換アンモニウム塩、例えばエチレンジアミン四酢酸およびニトリロ三酢酸ならびにポリカルボキシレート、例えばメリット酸、コハク酸、クエン酸、オキシジコハク酸、ポリマレイン酸、ベンゼン１，３，５－トリカルボン酸、カルボキシメチルオキシコハク酸およびそれらの可溶塩が含まれるがそれらに限定されない。実際に、本開示の様々な実施形態では、任意の好適なビルダーを利用することが企図されている。洗剤ビルダーもしくは錯化剤の例としては、ゼオライト、二リン酸塩、三リン酸塩、ホスホン酸塩、クエン酸塩、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＭＰＡ）、アルキルコハク酸およびアルケニルコハク酸、可溶性ケイ酸塩または層状ケイ酸塩（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ製のＳＫＳ－６）が挙げられる。洗剤はまた、まだ構築されていない、すなわち、洗剤ビルダーを本質的に含んでいなくてもよい。
一部の実施形態では、ビルダーは、水溶性硬質イオン錯体（例えば、金属イオン封鎖ビルダー）、例えばクエン酸塩およびポリリン酸塩（例えば、トリポリリン酸ナトリウムおよびトリポリリン酸ナトリウム六水和物、トリポリリン酸カリウムならびに混合トリポリリン酸ナトリウムおよびカリウムなど）を形成する。任意の好適なビルダーは、当分野において公知のビルダーも含めて本開示において利用されることが企図されている（例えば、欧州特許第２１００９４９号明細書を参照されたい）。
一部の実施形態では、本明細書で使用するためのビルダーには、リン酸塩ビルダーおよび非リン酸塩ビルダーが含まれる。一部の実施形態では、ビルダーはリン酸塩ビルダーである。一部の実施形態では、ビルダーは、非リン酸塩ビルダーである。存在する場合、ビルダーは、本組成物の０．１重量％～８０重量％もしくは５重量％～６０重量％または１０重量％～５０重量％の濃度で使用される。一部の実施形態では、本生成物は、リン酸塩ビルダーと非リン酸塩ビルダーとの混合物を含む。好適なリン酸塩ビルダーには、ナトリウム塩を含むこれらの化合物のアルカリ金属塩を含む、一リン酸塩、二リン酸塩、トリポリリン酸塩もしくオリゴマーポリリン酸塩が含まれる。一部の実施形態では、ビルダーは、トリポリリン酸ナトリウム（ＳＴＰＰ）であってよい。さらに、本組成物は、炭酸塩および／またはクエン酸塩、好ましくは本開示の中性ｐＨ組成物を達成するのに役立つクエン酸塩を含むことができる。他の好適な非リン酸塩ビルダーには、ポリカルボン酸ならびにそれらの部分もしくは完全中和塩のホモポリマーおよびコポリマー、モノマーポリカルボン酸およびヒドロキシカルボン酸およびそれらの塩が含まれる。一部の実施形態では、上記の化合物の塩には、アンモニウムおよび／またはアルカリ金属塩、すなわち、ナトリウム塩を含むリチウム、ナトリウムおよびカリウム塩が含まれる。好適なポリカルボン酸には、非環式、脂環式、複素環式および芳香族カルボン酸が含まれるが、このとき一部の実施形態では、それらはそれぞれの場合に相互から、一部の例では２個以下の炭素原子によって相互から分離できる少なくとも２つのカルボキシル基を含有することができる。
本明細書の洗剤組成物は、少なくとも１種のキレート剤を含むことができる。好適なキレート剤には、銅、鉄および／またはマンガンキレート剤およびそれらの混合物が含まれるがそれらに限定されない。少なくとも１種のキレート剤を使用する実施形態では、本開示のクリーニング組成物は、主題クリーニング組成物の約０．１重量％～約１５重量％または約３．０重量％～約１０重量％のキレート剤を含む。
本明細書の洗剤組成物は、少なくとも１種の沈着助剤を含むことができる。好適な沈着助剤には、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリカルボキシレート、防汚ポリマー、例えばポリテレフタル酸、粘土、例えばカオリナイト、モンモリロナイト、アタパルジャイト、イライト、ベントナイト、ハロイサイトおよびそれらの混合物が含まれるがそれらに限定されない。
本明細書の洗剤組成物は、１種以上の染料移動阻害剤を含むことができる。好適なポリマー染料移動阻害剤には、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ－オキシドポリマー、Ｎ－ビニルピロリドンおよびＮ－ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドンおよびポリビニルイミダゾールのコポリマーまたはそれらの混合物が含まれるがそれらに限定されない。追加の染料移動阻害剤には、マンガンフタロシアニン、ペルオキシダーゼ、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ－オキシドポリマー、Ｎ－ビニルピロリドンおよびＮ－ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドンおよびポリビニルイミダゾールのコポリマーおよび／またはそれらの混合物が含まれる；そのキレート剤の例には、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；ジエチレントリアミンペンタメチレンリン酸（ＤＴＰＭＰ）；ヒドロキシ－エタン二リン酸（ＨＥＤＰ）；エチレンジアミンＮ，Ｎ’－ジコハク酸（ＥＤＤＳ）；メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）；ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）；プロピレンジアミン四酢酸（ＰＤＴＡ）；２－ヒドロキシピリジン－Ｎ－オキシド（ＨＰＮＯ）；またはメチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）；グルタミン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸（Ｎ，Ｎ－ジカルボキシメチルグルタミン酸四ナトリウム塩）（ＧＬＤＡ）；ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）；４，５－ジヒドロキシ－ｍ－ベンゼンジスルホン酸；クエン酸およびそれらの任意の塩；Ｎ－ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、Ｎ－ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＥＩＤＡ）、ジヒドロキシエチルグリシン（ＤＨＥＧ）、エチレンジアミンテトラプロピオン酸（ＥＤＴＰ）および単独または上記のいずれかと組み合わせて使用できるそれらの誘導体が含まれる。少なくとも１種の染料移動阻害剤が使用される実施形態では、本開示のクリーニング組成物は、本クリーニング組成物の約０．０００１重量％～約１０重量％、約０．０１重量％～約５重量またはいっそう約０．１重量％～約３重量％を含んでいる。
本明細書の洗剤組成物は、ケイ酸塩を含むことができる。一部のそのような実施形態では、ケイ酸ナトリウム（例えば、二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウムおよび／または結晶性フィロケイ酸塩）が使用される。一部の実施形態では、ケイ酸塩は、約１％～約２０％の濃度で存在する。一部の実施形態では、ケイ酸塩は、本組成物の約５重量％～約１５重量％の濃度で存在する。
本明細書の洗剤組成物は、分散剤を含むことができる。好適な水溶性有機物質には、その中でポリカルボン酸が２個以下の炭素原子で相互から分離された少なくとも２つのカルボキシル基を含む、ホモポリマー酸もしくはコポリマー酸またはそれらの塩が含まれるがそれらに限定されない。
上記に開示した任意のセルラーゼは、本明細書に開示した洗剤組成物において使用するために企図されている。好適なセルラーゼには、フミコラ・インソレンス（Ｈｕｍｉｃｏｌａ ｉｎｓｏｌｅｎｓ）セルラーゼ（例えば、米国特許第４４３５３０７号明細書を参照されたい）が含まれるがそれには限定されない。そのような使用のために企図された代表的なセルラーゼは、布地にとってカラーケア利点を有するセルラーゼである。カラーケア利点を提供するセルラーゼの例は、それらの全部が参照により本明細書に組み込まれる欧州特許第０４９５２５７号明細書、同第０５３１３７２号明細書、同第５３１３１５号明細書、国際公開第９６／１１２６２号パンフレット、同第９６／２９３９７号パンフレット、同第９４／０７９９８号パンフレット；同第９８／１２３０７号パンフレット；同第９５／２４４７１号パンフレット、同第９８／０８９４０号パンフレットおよび米国特許第５４５７０４６号明細書、同第５６８６５９３号明細書および同第５７６３２５４号明細書に開示されている。洗剤中で有用な市販で入手できるセルラーゼの例には、ＣＥＬＬＵＳＯＦＴ（登録商標）、ＣＥＬＬＵＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＣＥＬＬＵＺＹＭＥ（登録商標）、およびＣＡＲＥＺＹＭＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／ＳおよびＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）；ＣＬＡＺＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＤＡＸ ＨＡ（登録商標）、およびＲＥＶＩＴＡＬＥＮＺ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＢＩＯＴＯＵＣＨ（登録商標）（ＡＢ Ｅｎｚｙｍｅｓ）；およびＫＡＣ－５００（Ｂ）（商標）（花王株式会社）が含まれる。追加のセルラーゼは、例えば、米国特許第７５９５１８２号明細書、米国特許第８５６９０３３号明細書、米国特許第７１３８２６３号明細書、米国特許第３８４４８９０号明細書、米国特許第４４３５３０７号明細書、米国特許第４４３５３０７号明細書および英国特許第２０９５２７５号明細書の中で開示されている。
本明細書の洗剤組成物は、追加して、少なくとも１種のセルラーゼに加えて１種以上の他の酵素を含むことができる。酵素の例としては、任意の組み合わせでプロテアーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペルオキシダーゼ、脂肪分解酵素（例えば、金属脂肪分解酵素）、キシラナーゼ、リパーゼ、ホスホリパーゼ、エステラーゼ（例えば、アリールエステラーゼ、ポリエステラーゼ）、ペルヒドロラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、マンナナーゼ、ケラチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ（例えば、コリンオキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ）、フェノールオキシダーゼ、リポキシゲナーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、タンナーゼ、ペントサナーゼ、マラナーゼ、β－グルカナーゼ、アラビノシダーゼ、ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼ、ラッカーゼ、メタロプロテイナーゼ、アマドリアーゼ、グルコアミラーゼ、α－アミラーゼ、β－アミラーゼ、ガラクトシダーゼ、ガラクタナーゼ、カタラーゼ、カラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ケラチナーゼ、ラクターゼ、リグニナーゼ、ペルオキシダーゼ、ホスファターゼ、ポリガラクツロナーゼ、プルラナーゼ、ラムノガラクトウロナーゼ、タンナーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシログルカナーゼ、キシロシダーゼ、メタロプロテアーゼ、アラビノフラノシダーゼ、フィターゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼおよび／またはアミラーゼが挙げられる。
一部の実施形態では、洗剤組成物は、それぞれが本組成物の約０．００００１重量％～約１０重量％の濃度にある１種以上の酵素および残余のクリーニング補助物質を含むことができる。一部の他の実施形態では、洗剤組成物は、さらに各酵素を本組成物の約０．０００１重量％～約１０重量％、約０．００１重量％～約５重量％、約０．００１重量％～約２重量％または約０．００５重量％～約０．５重量％の酵素の濃度で含むことができる。
好適なプロテアーゼには、動物起源、植物起源または微生物起源のプロテアーゼが含まれる。一部の実施形態では、微生物プロテアーゼが使用される。一部の実施形態では、化学修飾もしくは遺伝子組換え突然変異体が含まれる。一部の実施形態では、プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ、好ましくはアルカリ性微生物プロテアーゼもしくはトリプシン様プロテアーゼである。アルカリ性プロテアーゼの例としては、サブチリシン、特にバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のプロテアーゼ（例えば、サブチリシン、レンツス、アミロリケファシエンス、サブチリシンカールスバーグ、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７およびサブチリシン１６８）が挙げられる。追加の例には、それらの全部が参照により本明細書に組み込まれる米国再発行特許第３４６０６号明細書、米国特許第５，９５５，３４０号明細書、同第５，７００，６７６号明細書、同第６，３１２，９３６号明細書および同第６，４８２，６２８号明細書に記載されたそれらの突然変異体プロテアーゼが含まれる。追加のプロテアーゼの例には、トリプシン（例えば、ブタもしくはウシ起源）および国際公開第８９／０６２７０号パンフレットに記載されたフザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属プロテアーゼが含まれるがそれらに限定されない。一部の実施形態では、本開示にて使用される市販で入手可能な酵素には、ＭＡＸＡＴＡＳＥ（登録商標）、ＭＡＸＡＣＡＬ（商標）、ＭＡＸＡＰＥＭ（商標）、ＯＰＴＩＣＬＥＡＮ（登録商標）、ＯＰＴＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＯＰＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）、ＰＵＲＡＦＥＣＴ（登録商標）ＯＸＰ、ＰＵＲＡＭＡＸ（商標）、ＥＸＣＥＬＬＡＳＥ（商標）、ＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１００、Ｐ１１０、Ｐ２８０）、ＥＦＦＥＣＴＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１０００、Ｐ１０５０、Ｐ２０００）、ＥＸＣＥＬＬＥＮＺ（商標）プロテアーゼ（例えば、Ｐ１０００）、ＵＬＴＩＭＡＳＥ（登録商標）およびＰＵＲＡＦＡＳＴ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＡＬＣＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＳＡＶＩＮＡＳＥ（登録商標）、ＰＲＩＭＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＺＹＭ（商標）、ＰＯＬＡＲＺＹＭＥ（登録商標）、ＯＶＯＺＹＭＥ（登録商標）、ＫＡＮＮＡＳＥ（登録商標）、ＬＩＱＵＡＮＡＳＥ（登録商標）、ＮＥＵＴＲＡＳＥ（登録商標）、ＲＥＬＡＳＥ（登録商標）およびＥＳＰＥＲＡＳＥ（登録商標）（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ＢＬＡＰ（商標）およびＢＬＡＰ（商標）変異体（Ｈｅｎｋｅｌ Ｋｏｍｍａｎｄｉｔｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ａｕｆ Ａｋｔｉｅｎ，Ｄｕｅｓｓｅｌｄｏｒｆ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＫＡＰ（Ｂ．アルカロフィルス（ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ）サブチリシン；花王株式会社、日本国東京）が含まれるがそれらに限定されない。様々なプロテアーゼは、国際公開第９５／２３２２１号パンフレット、同第９２／２１７６０号パンフレット、同第０９／１４９２００号パンフレット、同第０９／１４９１４４号パンフレット、同第０９／１４９１４５号パンフレット、同第１１／０７２０９９号パンフレット、同第１０／０５６６４０号パンフレット、同第１０／０５６６５３号パンフレット、同第１１／１４０３６４号パンフレット、同第１２／１５１５３４号パンフレット、米国特許出願公開第２００８／００９０７４７号明細書および米国特許第５，８０１，０３９号明細書、同第５，３４０，７３５号明細書、同第５，５００，３６４号明細書、同第５，８５５，６２５号明細書、米国特許第ＲＥ３４，６０６号明細書、米国特許第５，９５５，３４０号明細書、同第５，７００，６７６号明細書、同第６，３１２，９３６号明細書、同第６，４８２，６２８号明細書、同第８，５３０，２１９号明細書および様々な他の特許に記載されている。一部のまた別の実施形態では、国際公開第１９９９０１４３４１号パンフレット、同第１９９９０３３９６０号パンフレット、同第１９９９０１４３４２号パンフレット、同第１９９９０３４００３号パンフレット、同第２００７０４４９９３号パンフレット、同第２００９０５８３０３号パンフレット、同第２００９０５８６６１号パンフレットに記載された中性金属プロテアーゼを含むがそれらに限定されない中性金属プロテアーゼが本開示において使用される。典型的な金属プロテアーゼには、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）（例えば、国際公開第０７／０４４９９３号パンフレットを参照されたい）中で発現する中性金属プロテアーゼの組換え形であるｎｐｒＥおよびバチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）由来の精製中性金属プロテアーゼであるＰＭＮが含まれる。
好適なマンナナーゼには、細菌もしくは真菌起源のマンナナーゼが含まれるがそれらには限定されない。一部の実施形態では、化学修飾もしくは遺伝子組換え突然変異体が含まれる。本開示において利用される様々なマンナナーゼは、公知である（例えば、それらの全部が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，５６６，１１４号明細書、同第６０２，８４２号明細書および同第６，４４０，９９１号明細書を参照されたい）。本開示において利用される市販で入手できるマンナーゼには、ＭＡＮＮＡＳＴＡＲ（登録商標）、ＰＵＲＡＢＲＩＴＥ（商標）およびＭＡＮＮＡＷＡＹ（登録商標）が含まれるがそれらに限定されない。
好適なリパーゼには、細菌もしくは真菌起源のリパーゼが含まれる。化学修飾突然変異体、タンパク質分解修飾突然変異体もしくはタンパク質操作突然変異体が含まれる。有用なリパーゼの例には、フミコラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属（例えば、Ｈ．ラヌギノサ（ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ）、欧州特許第２５８０６８号明細書および同第３０５２１６号明細書；Ｈ．インソレンス（ｉｎｓｏｌｅｎｓ）、国際公開第９６／１３５８０パンフレット）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属（例えば、Ｐ．アルカリゲネス（ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）もしくはＰ．シュードアルカリゲネス（ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）、欧州特許第２１８２７２号明細書；Ｐ．セパシア（ｃｅｐａｃｉａ）、欧州特許第３３１３７６号明細書；Ｐ．スツッツェリ（ｓｔｕｔｚｅｒｉ）、英国特許第１３７２０３４号明細書；Ｐ．フルオレセンス（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種ＳＤ７０５菌株、国際公開第９５／０６７２０号パンフレットおよび同第９６／２７００２号パンフレット；Ｐ．ウィスコンシネンシス（ｗｉｓｃｏｎｓｉｎｅｎｓｉｓ）、国際公開第９６／１２０１２号パンフレット）；ならびにバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属（例えば、枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｄａｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １１３１：２５３－３６０；Ｂ．ステアロサーモフィリス（ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、特開昭６４／７４４９９２号公報；Ｂ．パミルス（ｐｕｍｉｌｕｓ）、国際公開第９１／１６４２２号パンフレット）由来のリパーゼが含まれる。さらに、一部の実施形態では、ペニシリウム・カメンベルティイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃａｍｅｍｂｅｒｔｉｉ）リパーゼ（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０３：６１－６７［１９９１］を参照されたい）、ゲオトリクム・カンジドゥム（Ｇｅｏｔｒｉｃｕｍ ｃａｎｄｉｄｕｍ）リパーゼ（Ｓｃｈｉｍａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０６：３８３－３８８［１９８９］を参照されたい）および例えばＲ．デレマール（ｄｅｌｅｍａｒ）リパーゼ（Ｈａｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０９：１１７－１１３［１９９１］を参照されたい）、Ｒ．ニベウス（ｎｉｖｅｕｓ）リパーゼ（Ｋｕｇｉｍｉｙａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：７１６－７１９［１９９２］）およびＲ．オリゼ（ｏｒｙｚａｅ）リパーゼなどの様々なリゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属リパーゼを含むがそれらに限定されない多数のクローン化リパーゼが利用される。本明細書で有用な追加のリパーゼとしては、例えば、国際公開第９２／０５２４９号パンフレット、同第９４／０１５４１号パンフレット、同第９５／３５３８１号パンフレット、同第９６／００２９２号パンフレット、同第９５／３０７４４号パンフレット、同第９４／２５５７８号パンフレット、同第９５／１４７８３号パンフレット、同第９５／２２６１５号パンフレット、同第９７／０４０７９号パンフレット、同第９７／０７２０２号パンフレット、欧州特許第４０７２２５号明細書および同第２６０１０５号明細書に開示されたリパーゼが挙げられる。さらに、一部の実施形態では、例えばシュードモナス・メンドシナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｎｄｏｃｉｎａ）由来のクチナーゼ（例えば、国際公開第８８／０９３６７号パンフレットを参照されたい）およびフザリウム・ソラニ・ピシ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ ｐｉｓｉ）由来のクチナーゼ（例えば、国際公開第９０／０９４４６号パンフレットを参照されたい）を含むがそれらに限定されないクチナーゼなどの他のタイプのリパーゼポリペプチド酵素が利用される。本明細書において有用な所定の市販で入手できるリパーゼ酵素の例には、Ｍ１ ＬＩＰＡＳＥ（商標）、ＬＵＭＡ ＦＡＳＴ（商標）およびＬＩＰＯＭＡＸ（商標）（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）；ＬＩＰＥＸ（登録商標）、ＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）およびＬＩＰＯＬＡＳＥ（登録商標）ＵＬＴＲＡ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）；ならびにＬＩＰＡＳＥ Ｐ（商標）「Ａｍａｎｏ」（天野製薬株式会社、日本）が含まれる。
好適なポリエステラーゼには、例えば、国際公開第０１／３４８９９号パンフレット、同第０１／１４６２９号パンフレットおよび米国特許第６９３３１４０号明細書に開示されたポリエステラーゼが含まれる。
本明細書の洗剤組成物は、さらに家庭用および／または工業用布地／洗濯物上に存在する所定のバイオフィルムを除去／洗浄するために有効である２，６－β－Ｄ－フルクタンヒドロラーゼを含むことができる。
好適なアミラーゼには、細菌もしくは真菌起源のアミラーゼが含まれるがそれらには限定されない。一部の実施形態では、化学修飾もしくは遺伝子組換え突然変異体が含まれる。本開示において利用されるアミラーゼには、Ｂ．リケニホルミス（ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（例えば、英国特許第１２９６８３９号明細書を参照されたい）から得られるα－アミラーゼが含まれるがそれには限定されない。さらなる好適なアミラーゼとしては、国際公開第９５１０６０３号パンフレット、国際公開第９５２６３９７号パンフレット、同第９６２３８７４号パンフレット、同第９６２３８７３号パンフレット、同第９７４１２１３号パンフレット、同第９９１９４６７号パンフレット、同第００６００６０号パンフレット、同第００２９５６０号パンフレット、同第９９２３２１１号パンフレット、同第９９４６３９９号パンフレット、同第００６００５８号パンフレット、同第００６００５９号パンフレット、同第９９４２５６７号パンフレット、同第０１１４５３２号パンフレット、同第０２０９２７９７号パンフレット、同第０１６６７１２号パンフレット、同第０１８８１０７号パンフレット、同第０１９６５３７号パンフレット、同第０２１０３５５号パンフレット、同第９４０２５９７号パンフレット、同第０２３１１２４号パンフレット、同第９９４３７９３号パンフレット、同第９９４３７９４号パンフレット、同第２００４１１３５５１号パンフレット、同第２００５００１０６４号パンフレット、同第２００５００３３１１号パンフレット、同第０１６４８５２号パンフレット、同第２００６０６３５９４号パンフレット、同第２００６０６６５９４号パンフレット、同第２００６０６６５９６号パンフレット、同第２００６０１２８９９号パンフレット、同第２００８０９２９１９号パンフレット、同第２００８０００８２５号パンフレット、同第２００５０１８３３６号パンフレット、同第２００５０６６３３８号パンフレット、同第２００９１４０５０４号パンフレット、同第２００５０１９４４３号パンフレット、同第２０１００９１２２１号パンフレット、同第２０１００８８４４７号パンフレット、同第０１３４７８４号パンフレット、同第２００６０１２９０２号パンフレット、同第２００６０３１５５４号パンフレット、同第２００６１３６１６１号パンフレット、同第２００８１０１８９４号パンフレット、同第２０１００５９４１３号パンフレット、同第２０１１０９８５３１号パンフレット、同第２０１１０８０３５２号パンフレット、同第２０１１０８０３５３号パンフレット、同第２０１１０８０３５４号パンフレット、同第２０１１０８２４２５号パンフレット、同第２０１１０８２４２９号パンフレット、同第２０１１０７６１２３号パンフレット、同第２０１１０８７８３６号パンフレット、同第２０１１０７６８９７号パンフレット、同第９４１８３３１４号パンフレット、同第９５３５３８２号パンフレット、同第９９０９１８３号パンフレット、同第９８２６０７８号パンフレット、同第９９０２７０２号パンフレット、同第９７４３４２４号パンフレット、同第９９２９８７６号パンフレット、同第９１００３５３号パンフレット、同第９６０５２９５号パンフレット、同第９６３０４８１号パンフレット、同第９７１０３４２号パンフレット、同第２００８０８８４９３号パンフレット、同第２００９１４９４１９号パンフレット、同第２００９０６１３８１号パンフレット、同第２００９１００１０２号パンフレット、同第２０１０１０４６７５号パンフレット、同第２０１０１１７５１１号パンフレットおよび国際公開第２０１０１１５０２１号パンフレットに見いだされるアミラーゼが挙げられる。
好適なアミラーゼには、例えば、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ（登録商標）、ＳＴＡＩＮＺＹＭＥ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＮＡＴＡＬＡＳＥ（登録商標）、ＤＵＲＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ（登録商標）、ＴＥＲＭＡＭＹＬ ＵＬＴＲＡ（登録商標）、ＦＵＮＧＡＭＹＬ（登録商標）およびＢＡＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／ＳおよびＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）；ＲＡＰＩＤＡＳＥ（登録商標）、ＰＯＷＥＲＡＳＥ（登録商標）、ＰＵＲＡＳＴＡＲ（登録商標）およびＰＲＥＦＥＲＥＮＺ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）などの市販で入手できるアミラーゼが含まれる。
本組成物中で使用するために企図される好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼには、植物起源、細菌起源もしくは真菌起源のものが含まれる。化学修飾突然変異体もしくはタンパク質操作突然変異体が含まれる。本明細書において有用なペルオキダーゼの例としては、コプリヌス（Ｃｏｐｒｉｎｕｓ）属（例えば、Ｃ．キネレウス（ｃｉｎｅｒｅｕｓ）、国際公開第９３／２４６１８号パンフレット、同第９５／１０６０２号パンフレットおよび同第９８／１５２５７号パンフレット）由来のペルオキシダーゼならびに国際公開第２００５０５６７８２号パンフレット、同第２００７１０６２９３号パンフレット、同第２００８０６３４００号パンフレット、同第２００８１０６２１４号パンフレットおよび同第２００８１０６２１５号パンフレットに記載されたものが挙げられる。本明細書で有用な市販で入手できるペルオキシダーゼには、例えば、ＧＵＡＲＤＺＹＭＥ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／ＳおよびＮｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ）が含まれる。
一部の実施形態では、ペルオキシダーゼは、本開示の組成物中で過酸化水素もしくはその起源（例えば、過炭酸塩、過ホウ酸塩もしくは過硫酸塩）と組み合わせて使用される。一部の代替実施形態では、オキシダーゼは、酸素と組み合わせて使用される。どちらのタイプの酵素も「溶液漂白」（すなわち、織物が洗浄液中で一緒に洗浄された場合に染色織物から他の織物への布地染料の移動を防止すること）のために、好ましくは増強剤と一緒に使用される（例えば、国際公開第９４／１２６２１号パンフレットおよび同第９５／０１４２６号パンフレットを参照されたい）。好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼには、植物起源、細菌起源もしくは真菌起源のペルオキシダーゼ／オキシダーゼが含まれるがそれらに限定されない。一部の実施形態では、化学修飾もしくは遺伝子組換え突然変異体が含まれる。
本明細書の洗剤組成物中に含めることのできる酵素は、従来型の安定化剤、例えば、プロピレングリコールもしくはグリセロールなどのポリオール；糖もしくは糖アルコール；乳酸；ホウ酸もしくはホウ酸誘導体（例えば、芳香族ホウ酸エステル）を使用して安定化できる。
本明細書に記載の洗剤組成物は、約１重量％～約６５重量％の、例えばゼオライト、二リン酸塩、三リン酸塩、ホスホン酸塩、クエン酸塩、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＭＰＡ）、アルキルコハク酸およびアルケニルコハク酸、可溶性ケイ酸塩または層状ケイ酸塩（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ製のＳＫＳ－６）などの洗剤ビルダーもしくは錯化剤を含有する可能性がある。洗剤はまた、まだ構築されていない、すなわち、洗剤ビルダーを本質的に含んでいない場合もある。
所定の実施形態における洗剤組成物は、本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテル化合物に加えて、１つ以上の他のタイプのポリマーを含んでいてよい。本明細書において有用なポリマーの他のタイプの例としては、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ポリ（ビニルピロリドン）（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、例えば、ポリアクリレート、マレイン酸／アクリル酸コポリマーおよびラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマーが挙げられる。
本明細書の洗剤組成物は、漂白系を含有していてよい。例えば、漂白系は、Ｈ２Ｏ２起源、例えば過酸形成漂白活性化剤、例えばテトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）もしくはノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）と結合することのできる、過ホウ酸塩もしくは過炭酸塩を含むことができる。または、漂白系は、ペルオキシ酸（例えば、アミド、イミドもしくはスルホンタイプのペルオキシ酸）を含んでいてよい。またはさらに、漂白系は、例えば国際公開第２００５／０５６７８３号パンフレットに記載された系などのペルヒドロラーゼを含む酵素的漂白系であってよい。
本明細書の洗剤組成物は、さらに、従来型の洗剤成分、例えば、織物コンディショナー、粘土、発泡増強剤、石鹸泡抑制剤、防錆剤、汚れ懸濁化剤、汚れ再付着防止剤、染料、殺菌剤、曇り防止剤、蛍光増白剤もしくは香料も含んでいてよい。本明細書の洗剤組成物の（使用濃度にある水溶液中で測定した）ｐＨは、通常は中性もしくはアルカリ性（例えば、約７．０～約１１．０のｐＨ）である。
本明細書に開示した目的に適合させることのできる洗剤組成物の特定の形態は、例えば、それらの全部が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００９０２０９４４５（Ａ１）号明細書、同第２０１０００８１５９８（Ａ１）号明細書、同第７００１８７８（Ｂ２）号明細書、欧州特許第１５０４９９４（Ｂ１）号明細書、国際公開第２００１０８５８８８（Ａ２）号パンフレット、同第２００３０８９５６２（Ａ１）号パンフレット、同第２００９０９８６５９（Ａ１）号パンフレット、同第２００９０９８６６０（Ａ１）号パンフレット、同第２００９１１２９９２（Ａ１）号パンフレット、同第２００９１２４１６０（Ａ１）号パンフレット、同第２００９１５２０３１（Ａ１）号パンフレット、同第２０１００５９４８３（Ａ１）号パンフレット、同第２０１００８８１１２（Ａ１）号パンフレット、同第２０１００９０９１５（Ａ１）号パンフレット、同第２０１０１３５２３８（Ａ１）号パンフレット、同第２０１１０９４６８７（Ａ１）号パンフレット、同第２０１１０９４６９０（Ａ１）号パンフレット、同第２０１１１２７１０２（Ａ１）号パンフレット、同第２０１１１６３４２８（Ａ１）号パンフレット、同第２００８０００５６７（Ａ１）号パンフレット、同第２００６０４５３９１（Ａ１）号パンフレット、同第２００６００７９１１（Ａ１）号パンフレット、同第２０１２０２７４０４（Ａ１）号パンフレット、欧州特許第１７４０６９０（Ｂ１）号明細書、国際公開第２０１２０５９３３６（Ａ１）号パンフレット、米国特許第６７３０６４６（Ｂ１）号明細書、国際公開第２００８０８７４２６（Ａ１）号パンフレット、同第２０１０１１６１３９（Ａ１）号パンフレットおよび同第２０１２１０４６１３（Ａ１）号パンフレットに開示されている。
本明細書の洗濯用洗剤組成物は、任意選択的に強力（万能）洗濯用洗剤組成物であってよい。典型的な強力洗濯用洗剤組成物は、アニオン性洗浄性界面活性剤（１群の直鎖もしくは分岐鎖もしくはランダム鎖の置換もしくは未置換アルキルスルフェート、アルキルスルホネート、アルキルアルコキシル化スルフェート、アルキルホスフェート、アルキルホスホネート、アルキルカルボキシレートおよび／またはそれらの混合物から選択される）および任意選択的に非イオン性界面活性剤（１群の直鎖もしくは分岐鎖もしくはランダム鎖の置換もしくは未置換アルキルアルコキシル化アルコール、例えば、Ｃ８～Ｃ１８アルキルエトキシル化アルコールおよび／またはＣ６～Ｃ１２アルキルフェノールアルコキシレートから選択される）を含む洗浄性界面活性剤（１０重量／重量％～４０重量／重量％）を含み、ここで、アニオン性洗浄性界面活性剤（６．０～９の親水性指数（ＨＩｃ）を備える）対非イオン性洗浄性界面活性剤の重量比は１：１より大きい。好適な洗浄性界面活性剤にはさらに、カチオン性洗浄性界面活性剤（１群のアルキルピリジニウム化合物、アルキル第４級アンモニウム化合物、アルキル第４級ホスホニウム化合物、アルキル三元スルホニウム化合物および／またはそれらの混合物から選択される）；両性イオン性および／または両性洗浄性界面活性剤（１群のアルカノールアミンスルホ－ベタインから選択される）；両性界面活性剤；半極性非イオン性界面活性剤ならびにそれらの混合物が含まれる。
本明細書の洗剤、例えば強力洗濯用洗剤組成物は、任意選択的に、両親媒性アルコキシル化グリース洗浄ポリマー（１群の分岐鎖親水性および疎水性を有するアルコキシル化ポリマー、例えば０．０５重量％～１０重量％の範囲内にあるアルコキシル化ポリアルキレンイミンから選択される）および／またはランダムグラフトポリマー（典型的には不飽和Ｃ１～Ｃ６カルボン酸、エーテル、アルコール、アルデヒド、ケトン、エステル、糖単位、アルコキシ単位、マレイン酸無水物、飽和ポリアルコール、例えばグリセロールならびにそれらの混合物からなる群から選択されるモノマーを含む親水性主鎖；ならびにＣ４～Ｃ２５アルキル基、ポリプロピレン、ポリブチレン、飽和Ｃ１～Ｃ６モノ－カルボン酸のビニルエステル、アクリル酸もしくはメタクリル酸のＣ１～Ｃ６アルキルエステルおよびそれらの混合物からなる群から選択される疎水性側鎖を含む）からなる界面活性増強性ポリマーを含んでいてよい。
例えば強力洗濯用洗剤組成物などの本明細書の洗剤は、任意選択的に、追加のポリマー、例えば防汚ポリマー（非イオン性で末端キャップされたポリエステル、例えばＳＲＰ１などのランダムもしくはブロック構造にあるサッカライド、ジカルボン酸、ポリオールおよびそれらの組み合わせから選択される少なくとも１つのモノマー単位を含むポリマー、ランダムもしくはブロック構造にあるエチレンテレフタレートをベースとするポリマーおよびそれらのコポリマー、例えばＲＥＰＥＬ－Ｏ－ＴＥＸ ＳＦ、ＳＦ－２およびＳＲＰ６、ＴＥＸＣＡＲＥ ＳＲＡ１００、ＳＲＡ３００、ＳＲＮ１００、ＳＲＮ１７０、ＳＲＮ２４０、ＳＲＮ３００およびＳＲＮ３２５、ＭＡＲＬＯＱＵＥＳＴ ＳＬが含まれる）を含むことができ、再付着防止剤（０．１重量％～１０重量％）には、カルボキシレートポリマー、例えばアクリル酸、マレイン酸（もしくはマレイン酸無水物）、フマル酸、イタコン酸、アコニット酸、メサコン酸、シトラコン酸、メチレンマロン酸およびそれらの任意の混合物、ビニルピロリドン、ビニルピロリドンホモポリマーおよび／またはポリエチレングリコール（５００～１００，０００Ｄａの範囲内の分子量）から選択される少なくとも１つのモノマーを含むポリマー；ならびにポリマーカルボキシレート（例えば、マレエート／アクリレートランダムコポリマーもしくはポリアクリレートホモポリマー）が含まれる。
例えば強力洗濯用洗剤組成物などの本明細書の洗剤は、任意選択的に、さらに飽和もしくは非飽和脂肪酸、好ましくは飽和もしくは非飽和Ｃ１２～Ｃ２４脂肪酸（０重量％～１０重量％）；本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物に加えて沈着助剤（その例には、多糖類、セルロースポリマー、ポリジアリルジメチルアンモニウムハロゲン化物（ＤＡＤＭＡＣ）ならびにランダムもしくはブロック構造にあるＤＡＤ ＭＡＣとビニルピロリドン、アクリルアミド、イミダゾール、イミダゾリウムハロゲン化物およびそれらの混合物とのコポリマー、カチオン性グアールガム、カチオン性デンプン、カチオン性ポリアクリルアミドおよびそれらの混合物）を含むことができる。
例えば強力洗濯用洗剤組成物などの本明細書の洗剤はさらに、任意選択的に、その例には、マンガンフタロシアニン、ペルオキシダーゼ、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリアミンＮ－オキシドポリマー、Ｎ－ビニルピロリドンおよびＮ－ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルオキサゾリドンおよびポリビニルイミダゾールおよび／またはそれらの混合物が含まれる染料移動阻害剤、その例にはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸（ＤＴＰＭＰ）、ヒドロキシエタンジホスホン酸（ＨＥＤＰ）、エチレンジアミンＮ，Ｎ’－ジコハク酸（ＥＤＤＳ）、メチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、プロピレンジアミン四酢酸（ＰＤＴＡ）、２－ヒドロキシピリジン－Ｎ－オキシド（ＨＰＮＯ）もしくはメチルグリシン二酢酸（ＭＧＤＡ）、グルタミン酸Ｎ，Ｎ－二酢酸（Ｎ，Ｎ－ジカルボキシメチルグルタミン酸四ナトリウム塩（ＧＬＤＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、４，５－ジヒドロキシ－ｍ－ベンゼンジスルホン酸、クエン酸およびそれらの任意の塩、Ｎ－ヒドロキシエチルエチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、Ｎ－ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＥＩＤＡ）、ジヒドロキシエチルグリシン（ＤＨＥＧ）、エチレンジアミンテトラプロピオン酸（ＥＤＴＰ）およびそれらの誘導体が含まれるキレート剤を含んでいてよい。
例えば強力洗濯用洗剤組成物などの本明細書の洗剤は、任意選択的に、シリコンもしくは脂肪酸をベースとする石鹸泡抑制剤；ぼかし染料（ｈｕｅｉｎｇ ｄｙｅｓ）、カルシウムカチオンおよびマグネシウムカチオン、視覚的シグナル伝達成分、消泡剤（０．００１重量％～約４．０重量％）および／またはジグリセリドおよびトリグリセリド、エチレングリコールジステアレート、微結晶セルロース、マイクロファイバーセルロース、バイオポリマー、キサンタンガム、ゲランガムおよびそれらの混合物からなる群から選択される構造物質／増粘剤（０．０１重量％～約５重量％）を含むことができる。そのような構造剤／増粘剤は、洗剤に含まれる１種以上の本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／またはα－グルカンエーテル化合物に追加されてよい。
本明細書の洗剤は、例えば、強力乾燥／固体洗濯用洗剤組成物の形態にあってよい。そのような洗剤は：（ｉ）洗浄性界面活性剤、例えば本明細書に開示した任意のアニオン性洗浄性界面活性剤、本明細書に開示した任意の非イオン性洗浄性界面活性剤、本明細書に開示した任意のカチオン性洗浄性界面活性剤、本明細書に開示した任意の両性イオン性および／または両性洗浄性界面活性剤およびそれらの混合物；（ｉｉ）ビルダー、例えば任意の無リンビルダー（例えば、０重量％～１０重量％未満の範囲内のゼオライトビルダー）、任意のリン酸塩ビルダー（例えば、０重量％～１０重量％未満の範囲内のトリポリリン酸ナトリウム）、クエン酸、クエン酸塩およびニトリロ三酢酸、任意のケイ酸塩（例えば、０重量％～１０重量％未満の範囲内のケイ酸ナトリウムもしくはカリウムまたはメタケイ酸ナトリウム）；任意の炭酸塩（例えば、０重量％～８０重量％未満の範囲内の炭酸ナトリウムおよび／または重炭酸ナトリウム）およびそれらの混合物；（ｉｉｉ）漂白剤、例えば光漂白剤（例えば、スルホン化亜鉛フタロシアニン、スルホン化アルミニウムフタロシアニン、キサンテン染料およびそれらの混合物）、任意の疎水性もしくは親水性漂白活性化剤（例えば、ドデカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシ安息香酸もしくはそれらの塩、３，５，５－トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、テトラアセチルエチレンジアミン－ＴＡＥＤ、ノナノイルオキシベンゼンスルホネート－ＮＯＢＳ、ニトリルクアットおよびそれらの混合物）、過酸化水素の任意の起源（例えば、その例には過ホウ酸塩、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩もしくは過ケイ酸塩のモノもしくはテトラハイドレートナトリウム塩が含まれる無機ペルハイドレート塩）、任意の予備形成親水性および／または疎水性過酸（例えば、過カルボン酸および塩、過炭酸および塩、過イミド酸および塩、ペルオキソ一硫酸および塩ならびにそれらの混合物）；および／または（ｉｖ）任意の他の成分、例えば漂白触媒（例えば、その例にはイミニウムカチオンおよびポリイオン、イミニウム両性イオン、改質アミン、改質アミンオキシド、Ｎ－スルホニルイミン、Ｎ－ホスホニルイミン、Ｎ－アシルイミン、チアジアゾールジオキシド、ペルフルオロイミン、環状糖ケトンおよびそれらの混合物が含まれるイミン系漂白増強剤）ならびに金属含有漂白触媒（例えば亜鉛もしくはアルミニウムなどの補助金属カチオンおよび例えばＥＤＴＡ、エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン酸）などの金属イオン封鎖剤と一緒に、銅、鉄、チタン、ルテニウム、タングステン、モリブデンもしくはマンガンカチオン）を含んでいてよい。
本明細書に開示した組成物は、食器用洗剤組成物の形態にあってよい。食器用洗剤の例としては、自動食器洗い機用洗剤（典型的には、食器洗い機で使用される）および手洗い食器用洗剤が挙げられる。食器洗い機用洗剤組成物は、例えば、本明細書に開示した任意の乾燥もしくは液体／水性形にあってよい。食器用洗剤の所定の実施形態に含むことのできる成分には、例えば、リン酸塩；酸素系もしくは塩素系漂白剤；非イオン性界面活性剤；アルカリ塩（例えば、メタケイ酸塩；アルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウム）；本明細書に開示した任意の活性酵素；防錆剤（例えば、ケイ酸ナトリウム）；消泡剤；陶磁器からの艶や文様の除去を緩徐化するための添加物；香料；凝固防止剤（顆粒状洗剤中）；デンプン（錠剤ベースの洗剤中）；ゲル化剤（液体／ジェルベースの洗剤中）；および／または砂（粉末状洗剤）の内の１つ以上が含まれる。
例えば自動食器洗い機用洗剤もしくは液体食器洗い用洗剤などの食器洗い用洗剤は、（ｉ）０～１０重量％の量で存在する任意のエトキシル化非イオン性界面活性剤、アルコキシル化アルコール界面活性剤、エポキシキャップされたポリ（オキシアルキル化）アルコールもしくはアミンオキシド界面活性剤を含む非イオン性界面活性剤；（ｉｉ）約５～６０重量％の範囲内の、任意のリン酸塩ビルダー（例えば、一リン酸塩、二リン酸塩、トリポリリン酸塩、他のオリゴマーポリリン酸塩、ナトリウムトリポリリン酸塩－ＳＴＰＰ）、任意の無リンビルダー（例えば、メチル－グリシン二酢酸［ＭＧＤＡ］およびそれらの塩もしくは誘導体、グルタミン－Ｎ，Ｎ－二酢酸［ＧＬＤＡ］およびそれらの塩もしくは誘導体、イミノ二コハク酸（ＩＤＳ）およびそれらの塩もしくは誘導体、カルボキシメチルイヌリンおよびそれらの塩もしくは誘導体、ニトリロ三酢酸［ＮＴＡ］、ジエチレントリアミン五酢酸［ＤＴＰＡ］、Ｂ－アラニン二酢酸［Ｂ－ＡＤＡ］およびそれらの塩を含むアミノ酸ベースの化合物）、ポリカルボン酸およびそれらの部分もしくは完全中和塩のホモポリマーおよびコポリマー、０．５重量％～５０重量％の範囲内のモノマーポリカルボン酸およびヒドロキシカルボン酸およびそれらの塩または０．１重量％～約５０重量％の範囲内のスルホン化／カルボキシル化ポリマーを含むビルダー；（ｉｉｉ）０．１重量％～約１０重量％の範囲内の乾燥助剤（例えば、任意選択的にまた別の３～６つの官能基－典型的には重縮合を誘導する酸、アルコールもしくはエステル官能基を備えるモノマーと一緒にポリエステル、特にアニオン性ポリエステル、ポリカーボネート－、ポリウレタン－および／またはポリウレア－ポリオルガノシロキサン化合物もしくはそれらの、特に反応性環状炭酸塩およびウレアタイプの前駆体化合物）；（ｉｖ）約１重量％～約２０重量％の範囲内のケイ酸塩（例えば、ケイ酸ナトリウムもしくはカリウム、例えば二ケイ酸ナトリウム、メタケイ酸ナトリウムおよび結晶性フィロケイ酸塩）；（ｖ）無機漂白剤（例えば、過ホウ酸塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩および過ケイ酸塩などのペルハイドレート塩および／または有機漂白剤（例えば、ジアシル－およびテトラアシルペルオキシド、特にジペルオキシドデカン二酸およびジペルオキシヘキサデカン二酸などの有機ペルオキシ酸）；（ｖｉ）漂白活性化剤（例えば、０．１重量％～約１０重量％の範囲内の有機過酸前駆体）および／または漂白触媒（例えば、マンガントリアザシクロノナンおよび関連錯体；Ｃｏ、Ｃｕ、ＭｎおよびＦｅビスピリジルアミンおよび関連錯体；およびペンタミンコバルト（ＩＩＩ）酢酸塩および関連錯体）；（ｖｉｉ）０．１重量％～５重量％の範囲内の金属ケア剤（例えば、ベンザトリアゾール、金属塩および錯体および／またはケイ酸塩）；および／または（ｖｉｉｉ）自動食器洗い機用洗剤組成物１グラム当たり約０．０１～５．０ｍｇの範囲内の活性酵素の本明細書に開示した任意の活性酵素ならびに酵素安定化剤（例えば、オリゴ糖、多糖および無機二価金属塩）を含むことができる。
少なくとも１種のα－グルカンエーテル化合物（例えば、カルボキシメチルα－グルカンなどのカルボキシアルキルα－グルカンエーテル）を含む洗剤調製物の様々な例（１～１９）を下記に開示する：
１）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって：（酸として計算して）約７～１２重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約１～４重量％のアルコールエトキシスルフェート（例えば、Ｃ１２～１８アルコール、１～２エチレンオキシド［ＥＯ］）もしくはアルキルスルフェート（例えば、Ｃ１６～１８）；約５～９重量％のアルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１４～１５アルコール）；約１４～２０重量％の炭酸ナトリウム；約２～６重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約１５～２２重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約０～６重量％の硫酸ナトリウム；約０～１５重量％のクエン酸ナトリウム／クエン酸；約１１～１８重量％の過ホウ酸ナトリウム；約２～６重量％のＴＡＥＤ；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約０～３重量％の他のポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、石鹸泡抑制剤、香料、蛍光増白剤、光漂白剤）を含む洗剤組成物。
２）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって、（酸として計算して）約６～１１重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約１～３重量％のアルコールエトキシスルフェート（例えば、Ｃ１２～１８アルコール、１～２エチレンオキシド［ＥＯ］）もしくはアルキルスルフェート（例えば、Ｃ１６～１８）；約５～９重量％のアルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１４～１５アルコール）；約１５～２１重量％の炭酸ナトリウム；約１～４重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約２４～３４重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約４～１０重量％の硫酸ナトリウム；約０～１５重量％のクエン酸ナトリウム／クエン酸；約１１～１８重量％の過ホウ酸ナトリウム；約２～６重量％のＴＡＥＤ；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約１～６重量％の他のポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、石鹸泡抑制剤、香料、蛍光増白剤、光漂白剤）を含む洗剤組成物。
３）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって、（酸として計算して）約５～９重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約７～１４重量％のアルコールエトキシスルフェート（例えば、Ｃ１２～１８アルコール、７ＥＯ）；約１～３重量％の脂肪酸（例えば、Ｃ１６～２２脂肪酸）としての石鹸；約１０～１７重量％の炭酸ナトリウム；約３～９重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約２３～３３重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約０～４重量％の硫酸ナトリウム；約８～１６重量％の過ホウ酸ナトリウム；約２～８重量％のＴＡＥＤ；約０～１重量％のホスホン酸塩（例えば、ＥＤＴＭＰＡ）；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約０～３重量％の他のポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、石鹸泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）を含む洗剤組成物。
４）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって、（酸として計算して）約８～１２重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約１０～２５重量％のアルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２～１８アルコール、７ＥＯ）；約１４～２２重量％の炭酸ナトリウム；約１～５重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約２５～３５重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約０～１０重量％の硫酸ナトリウム；約８～１６重量％の過ホウ酸ナトリウム；約２～８重量％のＴＡＥＤ；約０～１重量％のホスホン酸塩（例えば、ＥＤＴＭＰＡ）；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約１～３重量％の他のポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、ＰＶＰ、ＰＥＧ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、石鹸泡抑制剤、香料）を含む洗剤組成物。
５）水性液体洗剤組成物であって、（酸として計算して）約１５～２１重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約１２～１８重量％のアルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２～１８アルコール、７ＥＯ；もしくはＣ１２～１５アルコール、５ＥＯ）；約３～１３重量％の脂肪酸（例えば、オレイン酸）としての石鹸；約０～１３重量％のアルケニルコハク酸（Ｃ１２～１４）；約８～１８重量％のアミノエタノール；約２～８重量％のクエン酸；約０～３重量％のホスホン酸塩；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約０～３重量％の他のポリマー（例えば、ＰＶＰ、ＰＥＧ）；約０～２重量％のホウ酸塩；約０～３重量％のエタノール；約８～１４重量％のプロピレングリコール；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、分散剤、石鹸泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）を含む水性液体洗剤組成物。
６）水性構造化液体洗剤組成物であって、（酸として計算して）約１５～２１重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約３～９重量％のアルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２～１８アルコール、７ＥＯ；もしくはＣ１２～１５アルコール、５ＥＯ）；約３～１０重量％の脂肪酸（例えば、オレイン酸）としての石鹸；約１４～２２重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約９～１８重量％のクエン酸カリウム；約０～２重量％のホウ酸塩；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約０～３重量％の他のポリマー（例えば、ＰＶＰ、ＰＥＧ）；約０～３重量％のエタノール；約０～３重量％の固定化ポリマー（例えば、ラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー、モル比２５：１、ＭＷ３８００）；約０～５重量％のグリセロール；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、分散剤、石鹸泡抑制剤、香料、蛍光増白剤）を含む水性構造化液体洗剤組成物。
７）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって、約５～１０重量％の高級アルコール硫酸エステル塩；約３～９重量％のエトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド；約０～３重量％の脂肪酸としての石鹸；約５～１０重量％の炭酸ナトリウム；約１～４重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約２０～４０重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約２～８重量％の硫酸ナトリウム；約１２～１８重量％の過ホウ酸ナトリウム；約２～７重量％のＴＡＥＤ；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約１～５重量％の他のポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、ＰＥＧ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、蛍光増白剤、石鹸泡抑制剤、香料）を含む洗剤組成物。
８）顆粒として調製された洗剤組成物であって、（酸として計算して）約８～１４重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約５～１１重量％のエトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド；約０～３重量％の脂肪酸としての石鹸；約４～１０重量％の炭酸ナトリウム；約１～４重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約３０～５０重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約３～１１重量％の硫酸ナトリウム；約５～１２重量％のクエン酸ナトリウム；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約１～５重量％の他のポリマー（例えば、ＰＶＰ、マレイン酸／アクリル酸コポリマー、ＰＥＧ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、石鹸泡抑制剤、香料）を含む洗剤組成物。
９）顆粒として調製された洗剤組成物であって、（酸として計算して）約６～１２重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約１～４重量％の非イオン性界面活性剤；約２～６重量％の脂肪酸としての石鹸；約１４～２２重量％の炭酸ナトリウム；約１８～３２重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約５～２０重量％の硫酸ナトリウム；約３～８重量％のクエン酸ナトリウム；約４～９重量％の過ホウ酸ナトリウム；約１～５重量％の漂白活性化剤（例えば、ＮＯＢＳもしくはＴＡＥＤ）；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約１～５重量％の他のポリマー（例えば、ポリカルボキシレートもしくはＰＥＧ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）；約０．０００１～０．１重量％の酵素および約０～５重量％の微量の成分（例えば、蛍光増白剤、香料）を含む洗剤組成物。
１０）水性液体洗剤組成物であって、（酸として計算して）約１５～２３重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約８～１５重量％のアルコールエトキシスルフェート（例えば、Ｃ１２～１５アルコール、２～３ＥＯ）；約３～９重量％のアルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２～１５アルコール、７ＥＯ；もしくはＣ１２～１５アルコール、５ＥＯ）；約０～３重量％の脂肪酸（例えば、ラウリン酸）としての石鹸；約１～５重量％のアミノエタノール；約５～１０重量％のクエン酸ナトリウム；約２～６重量％のヒドロトロープ（例えば、トルエンスルホン酸ナトリウム）；約０～２重量％のホウ酸塩；約１重量％までのα－グルカンエーテル；約１～３重量％のエタノール；約２～５重量％のプロピレングリコール；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、分散剤、香料、蛍光増白剤）を含む水性液体洗剤組成物。
１１）水性液体洗剤組成物であって、（酸として計算して）約２０～３２重量％の直鎖アルキルベンゼンスルホネート；約６～１２重量％のアルコールエトキシレート（例えば、Ｃ１２～１５アルコール、７ＥＯ；もしくはＣ１２～１５アルコール、５ＥＯ）；約２～６重量％のアミノエタノール；約８～１４重量％のクエン酸；約１～３重量％のホウ酸塩；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約１～３重量％のエタノール；約２～５重量％のプロピレングリコール；約０～３重量％の他のポリマー（例えば、マレイン酸／アクリル酸コポリマー；固定化ポリマー、例えばラウリルメタクリレート／アクリル酸コポリマー）；約３～８重量のグリセロール；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、ヒドロトープ、分散剤、香料、蛍光増白剤）を含む水性液体洗剤組成物。
１２）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって、約２５～４０重量％のアニオン性界面活性剤（例えば、直鎖アルキルベンゼンスルホネート、アルキルスルフェート、α－オレフィンスルホン酸、α－スルホ脂肪酸メチルエステル、アルカンスルホン酸塩、石鹸）；約１～１０重量％の非イオン性界面活性剤（アルコールエトキシレート）；約８～２５重量％の炭酸ナトリウム；約５～１５重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約１５～２８重量％のゼオライト（ＮａＡｌＳｉＯ４）；約０～２０重量％の過ホウ酸ナトリウム；約０～５重量％の漂白活性化剤（例えば、ＴＡＥＤもしくはＮＯＢＳ）；約２重量％までのα－グルカンエーテル；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～３重量％の微量の成分（例えば、香料、蛍光増白剤）を含む洗剤組成物。
１３）上記の（１）～（１２）に記載されているが、直鎖アルキルベンゼンスルホネートの全部もしくは一部がＣ１２～Ｃ１８アルキルスルフェートで置換されている洗剤組成物。
１４）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって、約９～１５重量％のＣ１２～Ｃ１８アルキルスルフェート；約３～６重量％のアルコールエトキシレート；約１～５重量％のポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド；約１０～２０重量％のゼオライト（例えば、ＮａＡｌＳｉＯ４）；約１０～２０重量％の層状二ケイ酸塩（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ社製のＳＫ５６）；約３～１２重量％の炭酸ナトリウム；約０～６重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約４～８重量％のクエン酸ナトリウム；約１３～２２重量％の過炭酸ナトリウム；約３～８重量％のＴＡＥＤ；約２重量％までのα－グルカンエーテル；約０～５重量％の他のポリマー（例えば、ポリカルボキシレートおよびＰＶＰ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～５重量％の微量の成分（例えば、蛍光増白剤、光漂白剤、香料、石鹸泡抑制剤）を含む洗剤組成物。
１５）少なくとも６００ｇ／Ｌのバルク密度を有する顆粒として調製された洗剤組成物であって、約４～８重量％のＣ１２～Ｃ１８アルキルスルフェート；約１１～１５重量％のアルコールエトキシレート；約１～４重量％の石鹸；約３５～４５重量％のゼオライトＭＡＰもしくはゼオライトＡ；約２～８重量％の炭酸ナトリウム；約０～４重量％の可溶性ケイ酸塩（例えば、Ｎａ２Ｏ ２ＳｉＯ２）；約１３～２２重量％の過炭酸ナトリウム；約１～８重量％のＴＡＥＤ；約３重量％までのα－グルカンエーテル；約０～３重量％の他のポリマー（例えば、ポリカルボキシレートおよびＰＶＰ）；任意選択的に（純粋酵素タンパク質として計算して）約０．０００１～０．１重量％の酵素；および約０～３重量％の微量の成分（例えば、蛍光増白剤、ホスホン酸塩、香料）を含む洗剤組成物。
１６）上記の（１）～（１５）に記載した洗剤調製物であって、追加の成分または既に特定した漂白系の代替物のいずれかとして安定化もしくはカプセル封入過酸を含有する洗剤調製物。
１７）上記の（１）、（３）、（７）、（９）および（１２）に記載した洗剤組成物であって、過ホウ酸塩が過炭酸塩と置換されている洗剤組成物。
１８）上記の（１）、（３）、（７）、（９）、（１２）、（１４）および（１５）に記載した洗剤組成物であって、追加してマンガン系触媒を含有する洗剤組成物。マンガン系触媒は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＨａｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６９：６３７－６３９）によって記載された化合物の１つである。
１９）非水性洗剤液体として調製された洗剤組成物であって、液体非イオン性界面活性剤（例えば、直鎖アルコキシル化第１級アルコール）、ビルダー系（例えば、ホスホン酸塩）、α－グルカンエーテル、任意選択的に酵素およびアルカリを含む洗剤組成物。洗剤は、さらにアニオン性界面活性剤および／または漂白剤系を含むことができる。
また別の実施形態では、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー（非誘導体化）は、上記の典型的な調製物のいずれかにおいてα－グルカンエーテル化合物と部分的もしくは完全に置換されてよい。
極めて多数の市販で入手できる洗剤調製物は、ポリα－１，３－１，６－グルカンエーテル化合物を含むために適応させることができると考えられる。例としては、ＰＵＲＥＸ（登録商標）ＵＬＴＲＡＰＡＣＫＳ（Ｈｅｎｋｅｌ）、ＦＩＮＩＳＨ（登録商標）ＱＵＡＮＴＵＭ（Ｒｅｃｋｉｔｔ Ｂｅｎｃｋｉｓｅｒ）、ＣＬＯＲＯＸ（商標）２ ＰＡＣＫＳ（Ｃｌｏｒｏｘ）、ＯＸＩＣＬＥＡＮ ＭＡＸ ＦＯＲＣＥ ＰＯＷＥＲ ＰＡＫＳ（Ｃｈｕｒｃｈ ＆ Ｄｗｉｇｈｔ）、ＴＩＤＥ（登録商標）ＳＴＡＩＮ ＲＥＬＥＡＳＥ、ＣＡＳＣＡＤＥ（登録商標）ＡＣＴＩＯＮＰＡＣＳおよびＴＩＤＥ（登録商標）ＰＯＤＳ（商標）（Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ）が挙げられる。
上記の実施形態のいずれかとはまた別の実施形態では、先行実施形態のいずれかにおいて記載したグルカンエーテル組成物を含むパーソナルケア組成物、織物ケア組成物もしくは洗濯ケア組成物が提供される。
本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物および／または本α－グルカンエーテル組成物は、織物、糸もしくは繊維への表面実質的処理として適用されてよい。さらにまた別の実施形態では、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物、本α－グルカンエーテル組成物またはそれらの組み合わせを含む織物、糸もしくは繊維が提供される。
本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物は、水性組成物の粘度を変化させるために使用できる。本明細書のα－グルカンエーテル化合物は、相当に低いＤｏＳを有するが、それでもまだ効果的な粘度改質剤である可能性がある。本明細書に開示したα－グルカンエーテル化合物の粘度改質作用はレオロジー修飾作用と結び付けることができると考えられる。さらに、本明細書の親水コロイドもしくは水溶液を表面（例えば、織物表面）、１種以上のα－グルカンエーテル化合物および／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物と接触させることによって、化合物はその表面に吸着するであろうと考えられる。
また別の実施形態では、水性組成物を調製するための方法であって、水性組成物を本α－グルカンエーテル組成物と接触させる工程を含み、ここで水性組成物が１つのセルラーゼ、１つのプロテアーゼもしくはそれらの組み合わせを含む方法が提供される。
また別の実施形態では、グルカンエーテル組成物を生成するための方法であって：
ａ）
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ．５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を提供する工程；
ｂ） アルカリ性条件下の反応中で（ａ）のα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を１つの有機基を含む少なくとも１種のエーテル化剤と接触させる工程であって；これにより少なくとも１つの有機基との約０．０５～約３．０の置換度（ＤｏＳ）を有するα－グルカンエーテルが生成される工程；および
ｃ） 任意選択的に、工程（ｂ）で生成されたα－グルカンエーテルを単離する工程を含む方法が提供される。
また別の実施形態では、衣料品、布地もしくは織物を処理する方法であって：
ａ）
１） 上記の織物ケア組成物；
２） 上記の洗濯ケア組成物；
３） 上記のα－グルカンエーテル組成物；
４）
ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数
を含むα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を提供する工程；および
５） （ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせから選択される組成物を提供する工程；
ｂ） 好適な条件下で（ａ）の組成物を織物、布地もしくは衣料品と接触させる工程であって、これにより織物、布地もしくは衣料品が処理されて利益を得る工程；および
ｃ） 任意選択的に、（ｂ）の処理された織物、布地もしくは衣料品をすすぎ洗う工程を含む方法が提供される。
上記の方法の好ましい実施形態では、（ａ）の組成物は、セルラーセ耐性、プロテアーゼ耐性もしくはそれらの組み合わせである。
上記の方法へのまた別の実施形態では、α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物もしくはα－グルカンエーテル組成物は、表面実質的である。
上記の方法のいずれかのまた別の実施形態では、利益は、改良された織物の風合、汚れ沈着に対する改良された抵抗性、改良された色堅牢度、改良された耐摩耗性、改良された防しわ性、改良された抗真菌活性、改良された染み抵抗性、洗濯した場合の改良されたクリーニング性能、改良された乾燥速度、改良された染料、顔料もしくはレーキ更新およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
本明細書の織物は、天然繊維、合成繊維、半合成繊維またはそれらの任意の組み合わせを含むことができる。本明細書の半合成繊維は、化学的に誘導体化されている天然型物質を使用して生成されるが、その１つの例はレーヨンである。本明細書の織物タイプの非限定的例には、（ｉ）セルロース繊維、例えば綿（例えば、ブロードクロス、キャンバス、シャンブレー、シェニール、チンツ、コーデュロイ、クレトン、ダマスク、デニム、フランネル、ギンガム、ジャガード、ニット、マテラーゼ、オックスフォード、パーケール、ポプリン、プリッス、サテン、シャーサッカー、シアー、テリークロス、ツイル、ベルベット）、レーヨン（例えば、ビスコース、モーダル、リオセル）、リネンおよびＴＥＮＣＥＬ（登録商標）；（ｉｉ）タンパク質性繊維、例えばシルク、ウールおよび関連哺乳動物繊維；（ｉｉｉ）合成繊維、例えばポリエステル、アクリル、ナイロンなど；（ｉｖ）ジュート、亜麻、ラミー、コイア、カポック、サイザル、ヘネッケン、アバカ、ヘンプおよびサンヘンプ由来の植物性長繊維；ならびに（ｖ）（ｉ）～（ｉｖ）の織物の任意の組み合わせから製造された織物が含まれる。織物タイプ（例えば、天然および合成）の組み合わせを含む織物には、例えば、綿繊維およびポリエステルの両方を備える織物が含まれる。本明細書の１種以上の織物を含有する物質／製品には、例えば、衣類、カーテン、厚手のカーテン、掛け布、カーペット、ベッド用リネン、バス用リネン、テーブルクロス、スリーピングバッグ、テント、車の内装材などが含まれる。天然および／または合成繊維を含む他の物質には、例えば、不織布、詰め物、紙および発泡体が含まれる。
織物と接触させられる水性組成物は、例えば、織物ケア組成物（例えば、洗濯用洗剤、織物柔軟剤もしくは他の織物処理組成物）であってよい。したがって、所定の実施形態における処理方法は、その中で織物ケア組成物を使用する場合は織物ケア法もしくは洗濯法であると見なすことができる。本明細書の織物ケア組成物は、下記の織物ケア利点：改良された織物の風合、汚れ沈着に対する改良された抵抗性、改良された色堅牢度、改良された耐摩耗性、改良された防しわ性、改良されたしわ除去性、改良された保形性、織物収縮の減少、ピリング減少、改良された抗真菌活性、改良された染み抵抗性、洗濯した場合の改良されたクリーニング性能、改良された乾燥速度、改良された染料、顔料もしくはレーキ更新およびそれらの任意の組み合わせの１つ以上に作用できる。
本明細書の織物ケア法もしくは洗濯法を実施するための条件（例えば、時間、温度、洗浄／すすぎ量）の例は、参照により本明細書に組み込まれる国際公開第１９９７／００３１６１号パンフレットおよび米国特許第４７９４６６１号明細書、同第４５８０４２１号明細書および同第５９４５３９４号明細書に開示されている。他の例では、織物を含む物質は、本明細書の水性組成物と：（ｉ）少なくとも約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０もしくは１２０分間にわたり；（ｉｉ）少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０もしくは９５℃（例えば、洗濯洗浄もしくはすすぎのためには；約１５～３０℃の「低」温、約３０～５０℃の「中」温、約５０～９５℃の「高」温）で；（ｉｉｉ）約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２のｐＨ（例えば、約２～１２もしくは約３～１１のｐＨ範囲）で；（ｉｖ）少なくとも約０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５もしくは４．０重量％の塩（例えば、ＮａＣｌ）濃度で；または（ｉ）～（ｉｖ）の任意の組み合わせで接触させることができる。織物ケア法もしくは洗濯法における接触させる工程は、例えば、洗浄工程、浸漬工程および／またはすすぎ洗い工程のいずれかを含むことができる。
織物を含む物質を処理する所定の実施形態では、水性組成物の本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテル化合物成分は、織物に吸着する。この特徴は、本明細書に開示した織物ケア組成物中の（それらの粘度修飾作用に加えて）再付着防止剤および／または黒ずみ防止剤として有用にさせると考えられる。本明細書の再付着防止剤または黒ずみ防止剤は、汚れが取り除かれた後の洗浄水中の衣類に汚れが再び付着することがないようにするのに役立つ。さらに、本明細書に記載の１種以上の本化合物の織物への吸着が織物の機械的特性を強化することも企図されている。
本明細書の織物への本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテルの吸着は、例えば、以下の実施例に開示した方法にしたがって測定できる。または、吸着は、比色定量技術（例えば、どちらも参照により本明細書に組み込まれるＤｕｂｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９５６，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２８：３５０－３５６；Ｚｅｍｌｊｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｌｅｎｚｉｎｇｅｒ Ｂｅｒｉｃｈｔｅ ８５：６８－７６）または当分野において公知の任意の他の方法を使用して測定できる。
上記の処理方法において接触させることのできる他の物質には、食器用洗剤（例えば、自動食器洗い機用洗剤もしくは手洗い食器用洗剤）を用いて処理できる表面が含まれる。そのような物質の例には、陶磁器物質、陶器、金属、ガラス、プラスチック（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレンなど）および木材から製造された食器、グラス、ポット、鍋、グラタン皿、調理器具および皿類（本明細書では集合的に「食卓用食器」と呼ぶ）の表面が含まれる。したがって、所定の実施形態における処理方法は、例えば、食器洗浄法もしくは食卓用食器洗浄法であると見なすことができる。本明細書の食器洗浄法もしくは食卓用食器洗浄法を実施するための条件（例えば、時間、温度、洗浄量）の例は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８５７５０８３号明細書に開示されている。他の例では、食卓用食器製品は、本明細書の水性組成物を例えば織物を含む物質と接触させることに関して上記に開示した条件のいずれかなどの好適な一連の条件下で接触させることができる。
本明細書の物質を処理する方法の所定の実施形態は、さらに、物質が水性組成物と接触させられた後に乾燥させられる乾燥させる工程を含んでいる。乾燥させる工程は、接触させる工程の直後に、または接触させる工程に続く可能性がある１つ以上の追加の工程（例えば、本明細書の水性組成物中での洗浄後に、例えば水中ですすぎ洗いした後に織物を乾燥させる工程）に続いて実施できる。乾燥させる工程は、例えば風乾させる工程（例えば、約２０～２５℃）または、例えば、少なくとも約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１７０、１７５、１８０もしくは２００℃などの温度で、当分野において公知の数種の手段のいずれかによって実施できる。本明細書の乾燥させられている物質は、典型的にはその中に含まれた３、２、１、０．５もしくは０．１重量％未満の水を有する。織物は、任意選択的に乾燥させる工程を実施するために好ましい物質である。
本明細書の処理法において使用される水性組成物は、例えば上記の実施形態もしくは下記の実施例におけるように、本明細書に開示した任意の水性組成物であってよい。水性組成物の例には、洗剤（例えば、洗濯用洗剤もしくは食器用洗剤）および例えば練り歯磨きなどの歯磨き剤が含まれる。
また別の実施形態では、１種以上の本α－グルカンエーテル化合物を水性組成物と接触させる工程を含む水性組成物の粘度を変化させるための方法であって、１種以上のα－グルカンエーテル化合物の存在が水性組成物の粘度を変化させる（増加もしくは減少させる）方法が提供される。
１つの好ましい態様では、粘度における変化は、接触させる工程の前の水性組成物の粘度と比較して、例えば、少なくとも約１％、１０％、１００％、１，０００％、１００，０００％もしくは１，０００，０００％（または１％～１，０００，０００％の間の任意の整数）の増加および／または減少であってよい。
本α－グルカンオリゴマー／ポリマーのエーテル化
上記エーテル化反応を調製するために、下記の工程を実施できる。
本α－グルカンオリゴマー／ポリマーは、アルカリ性条件下で１つの有機基を含む少なくとも１種のエーテル化剤と接触させられる。この工程は、例えば、混合物（例えば、スラリー）もしくは溶液を提供するために本α－グルカンオリゴマー／ポリマーを溶媒および１種以上のアルカリ性水酸化物と接触させることによって最初にアルカリ性条件を準備することによって実施できる。したがって、エーテル化反応のアルカリ性条件は、アルカリ性水酸化物溶液を含むことができる。アルカリ性条件のｐＨは、例えば、少なくとも約１１．０、１１．２、１１．４、１１．６、１１．８、１２．０、１２．２、１２．４、１２．６、１２．８もしくは１３．０であってよい。
例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化リチウムおよび／または水酸化テトラエチルアンモニウムなどの様々なアルカリ性水酸化物を使用できる。本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび溶媒を含む調製物中のアルカリ性水酸化物の濃度は、約１～７０重量％、５～５０重量％、５～１０重量％、１０～５０重量％、１０～４０重量％または１０～３０重量％（あるいは１～７０重量％の間の任意の整数）であってよい。または、水酸化ナトリウムなどのアルカリ性水酸化物の濃度は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０重量％であってよい。または、アルカリ性条件を準備するために使用するアルカリ性水酸化物は、完全な水溶液であっても、エタノールもしくはイソプロパノールなどの１種以上の水溶性有機溶媒を含む水溶液であってもよい。または、アルカリ性水酸化物は、アルカリ性条件を用意するために固体で加えることができる。
エーテル化反応を調製する際に、主溶媒として任意選択的に含むか使用できる様々な有機溶媒には、例えば、アルコール、アセトン、ジオキサン、イソプロパノールおよびトルエンが含まれる。所定の実施形態では、トルエンもしくはイソプロパノールを使用できる。有機溶媒は、アルカリ性水酸化物を添加する前または後に加えることができる。本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよびアルカリ性水酸化物を含む調製物中の有機溶媒（例えば、イソプロパノールもしくはトルエン）の濃度は、少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５もしくは９０重量％（または１０～９０重量％の間の任意の整数）であってよい。
または、エーテル化反応を調製する場合には、本α－グルカンオリゴマー／ポリマーを溶解できる溶媒を使用できる。これらの溶媒には、塩化リチウム（ＬｉＣｌ）／Ｎ，Ｎ－ジメチル－アセトアミド（ＤＭＡｃ）、ＳＯ２／ジエチルアミン（ＤＥＡ）／ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ＬｉＣｌ／１，３－ジメチ－２－イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）／Ｎ２Ｏ４、ＤＭＳＯ／フッ化テトラブチル－アンモニウム三水和物（ＴＢＡＦ）、Ｎ－メチルモルホリン－Ｎ－オキシド（ＮＭＭＯ）、Ｎｉ（ｔｒｅｎ）（ＯＨ）２ ［ｔｒｅｎ１／４トリス（２－アミノエチル）アミン］水溶液およびＬｉＣｌＯ４・３Ｈ２Ｏ、ＮａＯＨ／尿素水溶液、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、ギ酸およびイオン性液体の溶解物が含まれるがそれらに限定されない。
本α－グルカンオリゴマー／ポリマーは、溶媒および１種以上のアルカリ性水酸化物と混合する工程によって接触させることができる。そのような混合する工程は、これらの成分を相互に添加中または添加後に実施できる。混合する工程は、手動混合、オーバーヘッド式ミキサーを使用して混合する工程、磁気攪拌棒を使用する工程、または振とうする工程によって実施できる。所定の実施形態では、本α－グルカンオリゴマー／ポリマーは、最初に水もしくは水溶液中で混合することができ、その後に溶媒および／またはアルカリ性水酸化物と混合される。
本α－グルカンオリゴマー／ポリマー、溶媒および１種以上のアルカリ性水酸化物を相互に接触させた後、生じた組成物は、任意選択的に、１４日間まで周囲温度で維持できる。本明細書で使用する用語「周囲温度」は、約１５～３０℃もしくは２０～２５℃の間（または、１５～３０℃の間の任意の整数）の温度を意味する。または、組成物は還流しながら、または還流させずに、約３０℃～約１５０℃（または、３０～１５０℃の間の任意の整数）の温度で約４８時間まで加熱できる。所定の実施形態における組成物は、約５５℃で約３０分間～６０分間にわたり加熱できる。したがって、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー、溶媒および１種以上のアルカリ性水酸化物を相互に混合することにより得られた組成物は、例えば、約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０℃で約３０～９０分間加熱できる。
本α－グルカンオリゴマー／ポリマー、溶媒および１種以上のアルカリ性水酸化物を相互に接触させた後、生じた組成物は、任意選択的に（温度処理工程を適用して、または適用せずに）濾過できる。そのような濾過は、次に漏斗、遠心分離器、加圧濾過器または固体からの液体の除去を可能にする当分野において公知の任意の他の方法もしくは装置を使用して実施できる。濾過を通してアルカリ性水酸化物の多くが除去されるであろうが、濾過されたα－グルカンオリゴマー／ポリマーはアルカリ（すなわち、マーセル化α－グルカン）を保持するので、これによりアルカリ性条件を提供する。
有機基を含むエーテル化剤は、各α－グルカンエーテル化合物を生成する本明細書の方法においてアルカリ性条件下で反応中の本α－グルカンオリゴマー／ポリマーと接触させることができる。例えば、エーテル化剤は、上記に記載したように、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物、溶媒および１種以上のアルカリ性水酸化物を相互に接触させる工程によって調製した組成物に添加できる。または、エーテル化剤は、アルカリ性条件を準備するときに含めることができる（例えば、エーテル化剤は、アルカリ性水酸化物と混合する前に、α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび溶媒と混合できる）。
本明細書のエーテル化剤は、本明細書に開示した１つの有機基を用いて本α－グルカンポリマー／オリゴマーのグルコースモノマー単位の１つ以上のヒドロキシル基をエーテル化するために使用できる作用物質を意味できる。有機基の例としては、アルキル基、ヒドロキシルアルキル基およびカルボキシアルキル基が挙げられる。本反応には、１種以上のエーテル化剤を使用できる。
アルキルα－グルカンエーテル化合物を調製するために好適なエーテル化剤としては、例えば、硫酸ジアルキル、炭酸ジアルキル、ハロゲン化アルキル（例えば、塩化アルキル）、ヨードアルカン、アルキルトリフレート（アルキルトリフルオロメタンスルホネート）およびアルキルフルオロスルホネートが挙げられる。したがって、メチルα－グルカンエーテルを生成するためのエーテル化剤の例としては、硫酸ジメチル、炭酸ジメチル、塩化メチル、ヨードメタン、メチルトリフレートおよびメチルフルオロスルホネートが挙げられる。エチルα－グルカンエーテルを生成するためのエーテル化剤の例としては、硫酸ジエチル、炭酸ジエチル、塩化エチル、ヨードエタン、エチルトリフレートおよびエチルフルオロスルホネートが挙げられる。プロピルα－グルカンエーテルを生成するためのエーテル化剤の例としては、硫酸ジプロピル、炭酸ジプロピル、塩化プロピル、ヨードプロパン、プロピルトリフレートおよびプロピルフルオロスルホネートが挙げられる。ブチルα－グルカンエーテルを生成するためのエーテル化剤の例としては、硫酸ジジブチル、炭酸ジブチル、塩化ブチル、ヨードブタンおよびブチルトリフレートが挙げられる。
ヒドロキシアルキルα－グルカンエーテル化合物を調製するために好適なエーテル化剤としては、例えば、エチレンオキシド、プロピレンオキシド（例えば、１，２－プロピレンオキシド）、ブチレンオキシド（例えば、１，２－ブチレンオキシド；２，３－ブチレンオキシド；１，４－ブチレンオキシド）などのアルキレンオキシドまたはこれらの組み合わせが挙げられる。例としては、プロピレンオキシドはヒロドキシプロピルα－グルカンを調製するためのエーテル化剤として使用することができ、エチレンオキシドはヒドロキシエチルα－グルカンを調製するためのエーテル化剤として使用できる。または、ハロゲン化ヒドロキシアルキル（例えば、塩化ヒドロキシアルキル）は、ヒドロキシアルキルα－グルカンを調製するためのエーテル化剤として使用できる。ハロゲン化ヒドロキシアルキルの例としては、ハロゲン化ヒドロキシエチル、ハロゲン化ヒドロキシプロピル（例えば、２－ヒドロキシプロピルクロリド、３－ヒドロキシプロピルクロリド）およびハロゲン化ヒドロキシブチルが挙げられる。または、アルキレンクロロヒドリンは、ヒドロキシアルキルα－グルカンエーテルを調製するためのエーテル化剤として使用できる。使用できるアルキレンクロロヒドリンには、限定されないが、エチレンクロロヒドリン、プロピレンクロロヒドリン、ブチレンクロロヒドリンもしくはこれらの組み合わせが含まれる。
ジヒドロキシアルキルα－グルカンエーテル化合物の調製に好適なエーテル化剤としては、例えば、ハロゲン化ジヒドロキシエチル、ハロゲン化ジヒドロキシプロピル（例えば、２，３－ジヒドロキシプロピルクロリド［すなわち、３－クロロ－１，２－プロパンジオール］）またはハロゲン化ジヒドロキシブチルなどのハロゲン化ジヒドロキシアルキル（例えば、ジヒドロキシアルキルクロリド）が挙げられる。２，３－ジヒドロキシプロピルクロリドは、例えば、ジヒドロキシプロピルα－グルカンエーテルを調製するために使用できる。
カルボキシアルキルα－グルカンエーテル化合物を調製するために好適なエーテル化剤は、ハロアルキレート（例えば、クロロアルキレート）を含むことができる。ハロアルキレートの例としては、ハロアセテート（例えば、クロロアセテート）、３－ハロプロピオネート（例えば、３－クロロプロピオネート）および４－ハロブチレート（例えば、４－クロロブチレート）が挙げられる。例えば、クロロアセテート（モノクロロアセテート）（例えば、クロロ酢酸ナトリウムまたはクロロ酢酸）は、カルボキシメチルα－グルカンを調製するためのエーテル化剤として使用できる。本明細書のエーテル化剤は、または、正荷電有機基を含むことができる。
所定の実施形態におけるエーテル化剤は、正荷電有機基とのα－グルカンオリゴマー／ポリマーをエーテル化できるが、ここで正荷電有機基の炭素鎖だけが正荷電基との置換を有する（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）。そのようなエーテル化剤の例としては、硫酸ジアルキル、炭酸ジアルキル、ハロゲン化アルキル（例えば、塩化アルキル）、ヨードアルカン、アルキルトリフレート（アルキルトリフルオロメタンスルホネート）およびアルキルフルオロスルホネートが挙げられるが、ここでこれらの作用物質のそれぞれのアルキル基は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）による１つ以上の置換を有する。そのようなエーテル化剤の他の例としては、硫酸ジメチル、炭酸ジメチル、塩化メチル、ヨードメタン、メチルトリフレートおよびメチルフルオロスルホネートが挙げられるが、ここでこれらの作用物質のそれぞれのメチル基は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）との置換を有する。そのようなエーテル化剤の他の例としては、硫酸ジエチル、炭酸ジエチル、塩化エチル、ヨードエタン、エチルトリフレートおよびエチルフルオロスルホネートが挙げられるが、ここでこれら作用物質のそれぞれのエチル基は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）で置換されている。そのようなエーテル化剤の他の例としては、硫酸ジプロピル、炭酸ジプロピル、塩化プロピル、ヨードプロパン、プロピルトリフレートおよびプロピルフルオロスルホネートが挙げられるが、ここでこれらの作用物質のそれぞれのプロピル基は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）との１つ以上の置換を有する。そのようなエーテル化剤の他の例としては、硫酸ジブチル、炭酸ジブチル、塩化ブチル、ヨードブタンおよびブチルトリフレートが挙げられるが、ここでこれら作用物質のそれぞれのブチル基は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）との１つ以上の置換を有する。
エーテル化剤は、または、本α－グルカンオリゴマー／ポリマーを正荷電有機基でエーテル化できるエーテル化剤であってよいが、ここでその正荷電有機基の炭素鎖は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）との置換に加えて、１つの置換（例えば、ヒドロキシル基）を有する。そのようなエーテル化剤の例としては、例えばハロゲン化ヒドロキシプロピルおよびハロゲン化ヒドロキシブチルなどのハロゲン化ヒドロキシアルキル（例えば、塩化ヒドロキシアルキル）が挙げられるが、ここでこれらの作用物質の末端炭素は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）との置換を有する；１つの例は、３－クロロ－２－ヒドロキシプロピル－トリメチルアンモニウムである。そのようなエーテル化剤の他の例としては、例えば酸化プロピレン（例えば、１，２－プロピレンオキシド）および酸化ブチレン（例えば、１，２－ブチレンオキシド；２，３－ブチレンオキシド）が挙げられるが、ここでこれらの作用物質のそれぞれの末端炭素は、正荷電基（例えば、トリメチルアンモニウムなどの置換アンモニウム基）との１つの置換を有する。
上記のエーテル化剤の例のいずれかに含まれる置換アンモニウム基は、第１級、第２級、第３級もしくは第４級アンモニウム基であってよい。第２級、第３級および第４級アンモニウム基は、構造Ｉ（式中、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して水素原子またはメチル基、エチル基、プロピル基もしくはブチル基などのアルキル基を表す）で表される。本明細書のエーテル化剤は、典型的には、フッ化物、塩化物、臭化物もしくはヨウ化物の塩（上記のハロゲン化物のそれぞれがアニオンとして作用する）として提供できる。
２つ以上の異なる有機基を備える本α－グルカンエーテル化合物を生成する場合、それに応じて２種以上の異なるエーテル化剤が使用されるであろう。例えば、アルキルヒドロキシアルキルα－グルカンエーテルを生成するためには、酸化アルキレンおよび塩化アルキルの両方をエーテル化剤として使用することができよう。このため、２つ以上の異なる有機基を備えるα－グルカンエーテル化合物を生成するためには、本明細書で開示するエーテル化剤のいずれかを組み合わせることができる。そのような２種以上のエーテル化剤は、反応中同時に使用できる、または反応中に連続的に使用できる。連続的に使用した場合、各添加間には、以下に開示する任意の温度処理（例えば、加熱）工程を任意選択的に使用できる。各有機基の所望のＤｏＳを制御するために、エーテル化剤の連続的な導入を選択できる。一般に、エーテル生成物中でそれが形成する有機基が添加すべき他の有機基のＤｏＳと比較してより高いＤｏＳであることが所望である場合は、最初に特定のエーテル化剤が使用されるであろう。
アルカリ性条件下で反応中の本α－グルカンオリゴマー／ポリマーと接触させられるエーテル化剤の量は、生成されるα－グルカンエーテル化合物において必要とされるＤｏＳに基づいて決定できる。本明細書で生成されるα－グルカンエーテル化合物中の各グルコースモノマー単位上のエーテル置換基の量は、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法を使用して決定できる。α－グルカンに対するモル置換（ＭＳ）値には上限がない。一般に、エーテル化剤は、α－グルカン１モル当たり少なくとも約０．０５モルの量で使用できる。使用できるエーテル化剤の量に上限はない。
本明細書のα－グルカンエーテル化合物を生成するための反応は、任意選択的に、例えばＰａｒｒ反応装置、オートクレーブ、振とう機チューブなどの圧力容器または当分野において周知の任意の他の圧力容器中で実施できる。本明細書の反応は、アルカリ性条件下で本α－グルカンオリゴマー／ポリマーをエーテル化剤と接触させる工程後に任意選択的に加熱できる。反応温度およびそのような温度を適用する時間は、広範囲の限度内で変化させることができる。例えば、反応は、任意選択的に、周囲温度で１４日間まで維持できる。または、反応は、還流しながら、または還流せずに約２５℃～約２００℃で（または２５～２００℃の間の任意の整数）で加熱できる。反応時間は、対応して変動させることができる；低温ではより長時間および高温ではより短時間。
カルボキシメチルα－グルカンエーテルを生成する所定の実施形態では、反応は、約３時間にわたり約５５℃へ加熱できる。したがって、本明細書のカルボキシメチルα－グルカンエーテルを調製する反応は、例えば、２時間～約５時間にわたり約５０℃～６０℃（もしくは５０～６０℃の間の任意の整数）へ加熱できる。例えば、これらの実施形態では、例えばハロ酢酸塩（例えば、モノクロロ酢酸塩）などのエーテル化剤を使用できる。
任意選択的に、本明細書のエーテル化反応は、加熱する工程を用いて、または用いずに、不活性ガス雰囲気下で維持できる。本明細書で使用する用語「不活性ガス」とは、例えば本明細書の反応を調製するために開示した条件などの一連の所定の条件下で化学反応に曝されることのないガスを意味する。
本明細書に開示した反応の全ての成分は、同時に混合して所望の反応温度に導くことができ、その時点から、温度は、撹拌しながら、または撹拌せずに、所望のα－グルカンエーテル化合物が生成するまで維持される。または、混合成分は、上記のように、周囲温度で放置できる。
エーテル化に続いて、反応のｐＨを中和できる。反応の中和は１種以上の酸を用いて実施できる。本明細書で使用する用語「中性のｐＨ」は、実質的に酸性でも塩基性でもないｐＨ（例えば、約６～８、または約６．０、６．２、６．４、６．６、６．８、７．０、７．２、７．４、７．６、７．８もしくは８．０のｐＨ）を意味する。この目的で使用できる様々な酸には、それらに限定されないが、硫酸、酢酸（例えば氷酢酸）、塩酸、硝酸、任意の鉱（無機）酸、任意の有機酸またはこれらの酸の任意の組み合わせが含まれる。
本明細書の反応で生成される本α－グルカンエーテル化合物は、任意選択的に、この化合物を容易には溶解しない液体で１回以上洗浄できる。例えば、α－グルカンエーテルは、典型的には（洗浄のために溶解度の欠如が所望の場合は）その中の酸化化合物の溶解度に依存して、アルコール、アセトン、芳香族化合物またはこれらの任意の組み合わせを用いて洗浄できる。一般に、α－グルカンエーテルを洗浄するためには、例えばアルコールなどの有機溶媒を含む溶媒が好ましい。本α－グルカンエーテル生成物は、例えば、メタノールもしくはエタノールを含有する水溶液を用いて１回以上洗浄できる。生成物を洗浄するためには、例えば、７０～９５重量％のエタノールを使用できる。また別の実施形態では、本α－グルカンエーテル生成物は、メタノール：アセトン（例えば、６０：４０）溶液を用いて洗浄できる。
本明細書に開示した反応中で生成されたα－グルカンエーテルは、単離できる。この工程は、中和および／または洗浄工程の前または後に、漏斗、遠心分離器、加圧濾過器または当分野において公知の任意の他の方法もしくは装置を使用して実施できる。単離α－グルカンエーテル生成物は、例えば真空乾燥、風乾もしくは凍結乾燥などの当分野において公知の任意の方法を使用して乾燥させることができる。
上記のエーテル化反応はいずれも、α－グルカンエーテル生成物をさらなる修飾のための出発物質として使用して繰り返すことができる。このアプローチは、有機基のＤｏＳを増大させるため、および／またはエーテル生成物へ１つ以上の異なる有機基を付加するために好適な可能性がある。
α－グルカンエーテル生成物の構造、分子量およびＤｏＳは、例えばＮＭＲ分光法およびサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）などの当分野において公知の様々な物理化学的分析法を使用して確証できる。
本可溶性オリゴマー／ポリマーを含むパーソナルケアおよび／または医薬組成物
本グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテルは、パーソナルケア製品において使用できる。例えば、そのような物質は、保湿剤、親水コロイドもしくは場合により増粘剤として使用することが可能な場合がある。本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンエーテルは、所望であれば、その開示が参照により本明細書に全体として組み込まれる米国特許第８，５４１，０４１号明細書に開示されている増粘剤などの１種以上の他のタイプの増粘剤と結び付けて使用されてよい。
本明細書のパーソナルケア製品には、特別には限定はされないが、例えば、スキンケア組成物、化粧品組成物、抗真菌組成物および抗菌組成物が含まれる。本明細書のパーソナルケア製品は、例えば、ローション、クリーム、ペースト、鉱油、軟膏、ポマード、ジェル、リキッド、これらの組み合わせなどの形態にあってよい。本明細書に開示のパーソナルケア製品は、少なくとも１種の活性成分を含むことができる。有効成分は、一般に、意図された薬理学的作用を誘発する成分であると認識されている。
所定の実施形態では、スキンケア製品は、水分不足に関連する皮膚のダメージに対処するために皮膚に適用できる。スキンケア製品は、さらに皮膚の視覚的外観に対処するため（例えば、鱗状、ひび割れおよび／または赤みがかった皮膚の外観を減らすため）および／または皮膚の触感（例えば、皮膚の滑らかさおよび繊細さを改良しながら皮膚の粗さおよび／または乾燥度を減らすため）にも使用できる。スキンケア製品は、典型的には、化粧効果を提供しながら、皮膚の病気を治療もしくは予防するため、または皮膚に保湿効果を提供するための少なくとも１つの有効成分、例えば、酸化亜鉛、ワセリン、白色ワセリン、鉱油、タラ肝油、ラノリン、ジメチコン、硬質脂肪、ビタミンＡ、アラントイン、カラミン、カオリン、グリセリンもしくはコロイド状オートミールおよびこれらの組み合わせを含んでいてよい。スキンケア製品は、１種以上の天然保湿要素、例えば、セラミド、ヒアルロン酸、グリセリン、スクアラン、アミノ酸、コレステロール、脂肪酸、トリグリセリド、リン脂質、グリコスフィンゴ脂質、ウレア、リノール酸、グリコサミノグリカン、ムコ多糖、乳酸ナトリウムもしくはピロリドンカルボン酸ナトリウムを含むことができる。スキンケア製品に含むことのできる他の成分には、制限なく、グリセリド、杏仁油、キャノーラ油、スクアラン、スクアレン、ココナツ油、コーン油、ホホバ油、ホホバワックス、レシチン、オリーブ油、ベニバナ油、ゴマ油、シアバター、大豆油、甘扁桃油、ヒマワリ油、ティーツリー油、シアバター、パーム油、コレステロール、コレステロールエステル、ワックスエステル、脂肪酸およびオレンジ油が含まれる。
本明細書のパーソナルケア製品は、これらに限定されるものではないが、例えばリップクリーム、マスカラ、口紅、ファンデーション、頬紅、アイライナー、リップライナー、リップグロス、他の化粧品、サンスクリーン、サンブロック、マニュキュア、ムース、ヘアスプレー、スタイリングジェル、ネイルコンディショナー、バスジェル、シャワージェル、ボディーソープ、洗顔料、シャンプー、ヘアコンディショナー（リーブインもしくは洗い流し）、クリームリンス、ヘアダイ、ヘアカラー製品、ヘアシャイン製品、ヘアセラム、くせ毛防止製品、枝毛修復製品、リップバーム、スキンコンディショナー、コールドクリーム、保湿剤、ボディースプレー、石鹸、ボディースクラブ、スクラブ剤、収れん化粧水、スクラッフィングローション、脱毛剤、パーマ液、ふけ防止剤、制汗用組成物、消臭剤、シェービング製品、プレシェービング製品、アフターシェービング製品、洗浄剤、スキンジェル、リンス、歯磨き粉もしくは洗口液などの化粧品または他の製品の形態であってよい。
本明細書の医薬製品は、例えば、エマルション剤、リキッド剤、エリキシル剤、ジェル剤、懸濁剤、液剤、クリーム剤、カプセル剤、錠剤、小袋もしくは軟膏の形態にあってよい。さらに、本明細書の医薬製品は、本明細書に開示したパーソナルケア製品のいずれかの形態にあってよい。医薬製品は、医薬上許容される担体、希釈剤および／または医薬上許容される塩の内の１つ以上をさらに含むことができる。本α－グルカンオリゴマー／ポリマーおよび／または本α－グルカンオリゴマー／ポリマーを含む組成物は、さらにまたカプセル剤、カプセル封入剤、錠剤コーティングおよび医薬品および薬物のための賦形剤として使用することもできる。
可溶性α－グルカンポリマー／オリゴマー組成物の酵素的合成
可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を酵素的に生成するための方法が提供される。１つの実施形態では、方法は、基質としてスクロースを使用して消化耐性可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物の合成を触媒できるグルコシドヒドロラーゼ７０型（Ｅ．Ｃ．２．４．１．－）に属する少なくとも１種の組換えにより生成されるグルコシルトランスフェラーゼの使用を含む。グリコシドヒドロラーゼファミリー７０酵素は、例えばストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ワイセラ（Ｗｅｉｓｅｌｌａ）属もしくはラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属などの乳酸菌によって生成されるトランスグルコシダーゼである（炭水化物活性酵素データベース；“ＣＡＺｙ”；Ｃａｎｔａｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３７：Ｄ２３３－２３８を参照されたい）。組換えにより発現したグルコシルトランスフェラーゼは、好ましくは、自然において見いだされるアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有する（すなわち、起源生物もしくはそれらの触媒活性切断において見いだされる全長配列と同一である）。
ＧＴＦ酵素は、ホモオリゴ糖類もしくはホモ多糖類を形成するためにスクロースのＤ－グルコシル単位を重合することができる。ＧＴＦ酵素の特異性に依存して、例えばα－（１，２）、α－（１，３）、α－（１，４）およびα－（１，６）などの様々なグリコシド結合を含む直鎖および／または分岐状グルカンを形成できる。グルコシルトランスフェラーゼは、さらにまたＤ－グルコシル単位をヒドロキシルアクセプター基上に移動させることができる。アクセプターの非限定的リストは、炭水化物、アルコール、ポリオールもしくはフラボノイドを含むことができる。結果として生じるグルコシル化生成物の構造は、酵素特異性に左右される。
本開示では、Ｄ－グルコピラノシルドナーは、スクロースである。したがって、反応は：
Figure 0006997706000004
グルコシルトランスフェラーゼ酵素は、主として形成されるグリコシド結合のタイプを使用して命名／分類される。例としては、デキストランスクラーゼ（α－（１，６）結合；ＥＣ２．４．１．５）、ムタンスクラーゼ（α－（１，３）結合；ＥＣ２．４．１．－）、アルテルナンスクラーゼ（交互α（１，３）－α（１，６）主鎖；ＥＣ２．４．１．１４０）およびロイテランスクラーゼ（α－（１，４）およびα－（１，６）結合の混合；ＥＣ２．４．１．－）が挙げられる。
１つの態様では、グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）は、そのグルカン生成物がアルテルナンではない（すなわち、この酵素はアルテルナンスクラーゼではない）ことを前提に、５０％以上のα－（１，３）グリコシド結合を有するグルカンを形成できる。１つの好ましい態様では、グルコシルトランスフェラーゼは、ムタンスクラーゼ（ＥＣ２．４．１．－）である。上述したように、ムタンスクラーゼ機能に影響を及ぼすアミノ酸残基は、以前に特徴付けられている。例えば、Ａ．Ｓｈｉｍａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，（１９９４）１７６：４８４５－４８５０）を参照されたい。
グルコシルトランスフェラーゼは、好ましくは少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合を備えるグルカンを生成できるグルコシルトランスフェラーゼである。所定の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、配列番号１５３との少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％を含む少なくとも９０％の配列同一性を有する、または配列番号１５３と同一であるアミノ酸配列を含む。所定の実施形態では、配列番号１５３との９０％以上の配列同一性を備えるアミノ酸配列を含むグルコシルトランスフェラーゼは、ＧＴＦ－Ｓ、そのホモログ、その切断形もしくはそのホモログの切断形である。所定の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、配列番号３、５、１７、１９、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。しかし、一部の野生型配列は切断形で自然において見いだされる可能性があることに留意すべきである。したがって、およびまた別の実施形態では、使用するために好適なグルコシルトランスフェラーゼは、野生型配列の切断形であってよい。また別の実施形態では、切断グルコシルトランスフェラーゼは、配列番号３および１７からなる群から選択した全長野生型アミノ酸配列に由来する配列を含む。また別の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、切断されていてよく、および配列番号５および１９からなる群から選択されたアミノ酸配列を有するであろう。また別の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、配列番号５を含む。さらに別の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、切断されており、配列番号１９に由来する。所定の実施形態では、切断グルコシルトランスフェラーゼは、配列番号１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０および１５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。水性反応調製物中の触媒の濃度は、触媒の特異的触媒活性に左右され、所望の反応速度を得るために選択される。各触媒（単一グルコシルトランスフェラーゼもしくは個別にグルコシルトランスフェラーゼおよびα－グルカノヒドロラーゼのいずれか）反応の重量は、典型的には全反応容積１ｍＬ当たり０．０００１ｍｇ～２０ｍｇ、好ましくは１ｍＬ当たり０．００１ｍｇ～１０ｍｇの範囲に及ぶ。触媒は、さらに可溶性もしくは不溶性支持体上に当業者には周知の方法を使用して固定化することもできる；例えば、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌｓ；Ｇｏｒｄｏｎ Ｆ．Ｂｉｃｋｅｒｓｔａｆｆ，Ｅｄｉｔｏｒ；Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，ＵＳＡ；１９９７を参照されたい。固定化触媒の使用は、その後の反応における触媒の回収および再使用を許容する。酵素触媒は、全微生物細胞、透過化微生物細胞、微生物細胞抽出物、部分精製もしくは精製酵素およびそれらの混合物の形態にあってよい。
最終反応調製物のｐＨは、約３～約８、好ましくは約４～約８、より好ましくは約５～約８、いっそうより好ましくは約５．５～約７．５およびいっそうより好ましくは約５．５～約６．５である。反応のｐＨは、任意選択的に、リン酸塩、ピロリン酸塩、重炭酸塩、酢酸塩もしくはクエン酸塩を含むがそれらに限定されない好適なバッファーの添加によって制御できる。使用された場合、バッファーの濃度は、典型的には０．１ｍＭ～１．０Ｍ、好ましくは１ｍＭ～３００ｍＭ、最も好ましくは１０ｍＭ～１００ｍＭである。
反応成分が組み合わされた場合に最初に存在したスクロース濃度は、少なくとも５０ｇ／Ｌ、好ましくは５０ｇ／Ｌ～６００ｇ／Ｌ、より好ましくは１００ｇ／Ｌ～５００ｇ／Ｌ、より好ましくは１５０ｇ／Ｌ～４５０ｇ／Ｌおよび最も好ましくは２５０ｇ／Ｌ～４５０ｇ／Ｌである。（存在する場合）α－グルカノヒドロラーゼのための基質は、グルコシルトランスフェラーゼによって形成されるグルコースオリゴマー集団のメンバーであろう。反応系中に存在するグルコースオリゴマーはアクセプターとして作用する可能性があるので、反応系中に存在する各種の正確な濃度は変動するであろう。さらに、最初の反応混合物には、少数例を挙げると、例えばマルトース、イソマルトース、イソマルトトリオースおよびメチル－α－Ｄ－グルカンなどの他のアクセプター（すなわち、外部アクセプター）を加えることができる。
反応の長さは変動する可能性があり、入手できるスクロース基質の全部を使用するために要する時間量によって決定される可能性が高い。１つの実施形態では、反応は、反応混合物中に最初に存在するスクロースの少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％および最も好ましくは少なくとも９９％が消費されるまで実施される。また別の実施形態では、反応は１時間～１６８時間、好ましくは１時間～７２時間および最も好ましくは１時間～２４時間である。
高い反応温度を使用する単一酵素法（グルコシルトランスフェラーゼ）
多数のＧＨ７０ファミリーグルコシルトランスフェラーゼにとっての最適温度は、２５℃～３５℃であることが多く、５５℃～６０℃を超える温度では迅速な不活性化が頻回に観察される。しかし、所定のグルコシルトランスフェラーゼは、反応が高温（本明細書ではこれより低温がこの酵素の不活性化温度である少なくとも４５℃の温度であると規定されている）で実施されると、スクロースから所望の可溶性グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を生成できる可能性があることが見いだされている。
１つの態様では、グルコシルトランスフェラーゼは、反応が少なくとも４５℃で実施されるとスクロースから本グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を生成できるが、酵素が熱的に不活性化されるこの温度より低いと生成できない。また別の態様では、グルコシルトランスフェラーゼ反応を実施するための温度は、特定酵素の不活性化温度より低いが少なくとも４７℃の温度で実施される。１つの態様では、反応温度の上限は、５５℃以下である。また別の実施形態では、反応温度は、４７℃～５２℃である。また別の態様では、単一酵素法において使用されるグルコシルトランスフェラーゼは、配列番号３および５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドに由来するアミノ酸配列を含む。好ましい態様では、グルコシルトランスフェラーゼは、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＧｔｆＪグルコシルトランスフェラーゼ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ｇｉ：４７５２７；配列番号３）由来である。また別の好ましい実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、配列番号３またはそのグルコシルトランスフェラーゼ活性を保持する触媒的に活性な切断形である。
可溶性グルカンオリゴマー／ポリマーの合成－グルコシルトランスフェラーゼ（Ｇｔｆ）およびα－グルカノヒドロラーゼを含む反応系
少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼを少なくとも１種の上記のグルコシルトランスフェラーゼと組み合わせて（すなわち、反応混合物中で同時に）使用して本可溶性グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を酵素的に生成するための方法が提供される。２種の酵素の同時使用は、同一酵素の連続投与（すなわち、最初にグルコシルトランスフェラーゼを使用してスクロースからグルカンポリマーを合成し、その後に引き続いてグルカンポリマーをα－グルカノヒドロラーゼにより処理する）に比較して異なる製品プロファイル（すなわち、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物のプロファイル）を生成する。１つの実施形態では、α－グルカノヒドロラーゼとのグルコシルトランスフェラーゼの連続的投与に基づくグルカンオリゴマー／ポリマー合成法は特に除外される。
グルコシルトランスフェラーゼに類似して、α－グルカノヒドロラーゼは、所定のα－Ｄ－グリコシド結合に向かう内加水分解活性によって定義できる。例としては、デキストラナーゼ（α－（１，６）－結合グリコシド結合を加水分解できる；Ｅ．Ｃ．３．２．１．１１）、ムタナーゼ（α－（１，３）－結合グリコシド結合を加水分解できる；Ｅ．Ｃ．３．２．１．５９）、ミコデキストラナーゼ（（１→３）－および（１→４）－結合の両方を含有するα－Ｄ－グルカン内の（１→４）－α－Ｄ－グルコシド結合を内加水分解できる；ＥＣ３．２．１．６１）、グルカン１，６－α－グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．７０）およびアルテルナナーゼ（アルテルナンを内加水分解的に切断できる；Ｅ．Ｃ．３．２．１．－；米国特許第５，７８６，１９６号明細書を参照されたい）を挙げることができるが、それらに限定されない。所定のα－グルカン内の分岐のレベル、分岐のタイプおよび相対分岐鎖長を含むがそれらに限定されない様々な要素は、α－グルカノヒドロラーゼが一部のグリコシド結合を内加水分解する能力に有害な影響を及ぼす可能性がある。
１つの実施形態では、α－グルカノヒドロラーゼは、デキストラナーゼ（ＥＣ３．２．１．１１）、ムタナーゼ（ＥＣ３．１．１．５９）またはそれらの組み合わせである。１つの実施形態では、デキストラナーゼは、ケトミウム・エラチクム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｅｒｒａｔｉｃｕｍ）由来の食品用デキストラナーゼである。また別の実施形態では、Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ Ａ／Ｓ，Ｄｅｎｍａｒｋから入手できるケトミウム・エラチクム（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｅｒｒａｔｉｃｕｍ）由来のデキストラナーゼは、ＤＥＸＴＲＡＮＡＳＥ（登録商標）ＰＬＵＳ Ｌである。
別の実施形態では、α－グルカノヒドロラーゼは、少なくとも１種のムタナーゼ（ＥＣ３．１．１．５９）である。本明細書に開示した方法において有用なムタナーゼは、それらの特徴的な構造によって同定できる。例えば、Ｙ．Ｈａｋａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，（２００８）９０：５２５－５３３）を参照されたい。一つの実施形態では、ムタナーゼは、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ヒポクレア（Ｈｙｐｏｃｒｅａ）属、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属およびトリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属から入手できるムタナーゼである。また別の実施形態では、ムタナーゼは、ペニシリウム・マルネファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ １８２２４もしくはパエニバチルス・フミクス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ Ｈｕｍｉｃｕｓ）由来である。１つの実施形態では、ムタナーゼは、配列番号２１、２２、２４、２７、２９、５４、５６、５８およびそれらの任意の組み合わせから選択されるアミノ酸配列を含む。さらにまた別の実施形態では、ムタナーゼは、配列番号２１、２２、２４、２７およびそれらの任意の組み合わせから選択されるアミノ酸配列を含む。また別の実施形態では、上記のムタナーゼは、ムタナーゼ活性が維持される限り、触媒活性切断形であってよい。少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼおよび少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼの同時使用を含む酵素反応系の温度は、反応速度および酵素触媒活性の安定性の両方を制御するために選択できる。反応の温度は、反応調製物の凝固点（およそ０℃）のすぐ上から約６０℃の範囲に及んでよく、好ましい範囲は５℃～約５５℃および反応温度のより好ましい範囲は約２０℃～約４７℃であってよい。
グルコシルトランスフェラーゼ対α－グルカノヒドロラーゼの比（体積／体積）は、選択された酵素に依存して変動してよい。１つの実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼ対α－グルカノヒドロラーゼの比（体積／体積）は、１：０．０１～０．０１：１．０の範囲に及ぶ。また別の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼ対α－グルカノヒドロラーゼの比（活性の単位／活性の単位）は、選択された酵素に依存して変動してよい。さらになお別の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼ対α－グルカノヒドロラーゼの比（活性の単位／活性の単位）は、１：０．０１～０．０１：１．０の範囲に及ぶ。１つの実施形態では：可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を生成するための方法であって：
１．
ａ． スクロース；
ｂ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合を有するグルカンポリマーの合成を触媒できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼ；
ｃ． １つ以上のα－（１，３）グリコシド結合もしくは１つ以上のα－（１，６）グリコシド結合を有するグルカンポリマーを加水分解できる少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼ；および
ｄ． 任意選択的に１種以上のアクセプター、を含む一連の反応成分を提供する工程；および
２． 好適な水性反応条件下で一連の反応成分を結合し、それにより可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物が生成される工程、を含む方法が提供される。
１つの好ましい実施形態では、少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼおよび少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼは、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を生成するために反応中に同時に存在する。
１つの実施形態では、１つ以上のα－（１，３）グリコシド結合を有するグルカンポリマーの合成を触媒できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼは、ムタンスクラーゼである。
また別の実施形態では、１つ以上のα－（１，３）グリコシド結合もしくは１つ以上のα－（１，６）グリコシド結合を有するグルカンポリマーを加水分解できる少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼは、エンドムタナーゼである。
１つの好ましい実施形態では、一連の反応成分は、ムタンスクラーゼおよびムタナーゼの同時使用を含む。
可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマーを生成する方法は、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を得るための１つ以上の追加の工程をさらに含む可能性がある。したがって、また別の実施形態では、
１．
ｉ） スクロース；
ｉｉ） 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合を有するグルカンポリマーの合成を触媒できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼ；
ｉｉｉ） １つ以上のα－（１，３）グリコシド結合もしくは１つ以上のα－（１，６）グリコシド結合を有するグルカンポリマーを加水分解できる少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼ；および
ｉｖ） 任意選択的に１種以上のアクセプター、を含む一連の反応成分を提供する工程；
２． 好適な水性反応条件下で一連の反応成分を結合し、それにより可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含む生成混合物が生成される工程；
３． 工程２の生成混合物から可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を単離する工程；および
４． 任意選択的に、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を濃縮する工程、を含む方法が提供される。
所望の活性を有する実質的に類似の酵素を同定するための方法
当業者であれば、所望の活性（すなわち、所望のグリコシド結合を有するグルカンもしくは標的グリコシド結合に向かう内加水分解活性を有するα－グルカノヒドロラーゼを形成できるグルコシルトランスフェラーゼ活性）が維持される限り、さらに、本組成物および方法において実質的に類似の酵素配列を使用できることを認識している。例えば、所望の活性が保持される（または比活性に関して改善さえされている）限り、触媒活性切断形を調製して使用できることは証明されている。１つの実施形態では、実質的に類似の配列は、本明細書に例示した配列と関連する核酸分子と高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズするそれらの能力によって定義される。また別の実施形態では、配列アラインメントアルゴリズムを使用すると、本明細書に提供したＤＮＡもしくはアミノ酸配列との同一性パーセントに基づいて実質的に類似の配列を定義することができる。
本明細書で使用する核酸分子は、第１分子の一本の鎖が温度および溶液イオン強度の適切な条件下で他の分子にアニーリングできる場合は、例えばｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡもしくはＲＮＡなどのまた別の核酸分子に「ハイブリダイズ可能」である。ハイブリダイゼーション条件および洗浄条件は周知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．，Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（２００１）に例示されている。温度およびイオン強度の条件がハイブリダイゼーションの「ストリンジェンシー」を決定する。ストリンジェンシー条件は、例えば遠縁の生物由来の相同配列などの中等度に類似の分子から、例えば近縁の生物由来の機能的酵素を複製する遺伝子などの高度に類似の分子までをスクリーニングするために調整できる。典型的には、ハイブリダイゼーション後の洗浄がストリンジェンシー条件を決定する。一連の好ましい条件は、室温で１５分間にわたり６ＸのＳＳＣ、０．５％のＳＤＳを用いて開始し、次に４５℃で３０分間にわたり２ＸのＳＳＣ、０．５％のＳＤＳを用いて繰返し、さらに５０℃で３０分間にわたり０．２ＸのＳＳＣ、０．５％のＳＤＳを用いて２回繰り返す一連の洗浄を使用する。より好ましい一連の条件は、０．２ＸのＳＳＣ、０．５％のＳＤＳ中での最終２回の３０分間にわたる洗浄の温度を６０℃へ上昇させた以外は洗浄が上記の洗浄と同一である、より高温を使用する。また別の好ましい一連の高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件は、６５℃で０．１ＸのＳＳＣ、０．１％のＳＤＳであり、２ＸのＳＳＣ、０．１％のＳＤＳの洗浄が続き、その後に６５℃での０．１ＸのＳＳＣ、０．１％のＳＤＳの最終洗浄が続く。
ハイブリダイゼーションは２つの核酸が相補的配列を含有することを必要とするが、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに依存して、塩基間のミスマッチが起こる可能性がある。核酸にハイブリダイズするための適切なストリンジェンシーは、当分野において周知の変量である核酸の長さおよび相補性度に左右される。２つのヌクレオチド配列間の類似性度もしくは相同性度が大きいほど、それらの配列を有する核酸のハイブリッドについてのＴｍ値が大きくなる。核酸ハイブリダイゼーションの相対的安定性（より高いＴｍに対応する）は、下記の順番で減少する：ＲＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＲＮＡ、ＤＮＡ：ＤＮＡ。長さが１００ヌクレオチドより長いハイブリッドについては、Ｔｍを計算するための方程式が導き出されている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．，Ｔ．、上記）。より短い核酸、すなわちオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションについては、ミスマッチの位置がより重要になり、オリゴヌクレオチドの長さがその特異性を決定する。１つの態様では、ハイブリダイズ可能な核酸についての長さは、少なくとも約１０ヌクレオチドである。好ましくは、ハイブリダイズ可能な核酸についての最小長さは、長さが少なくとも約１５ヌクレオチド、より好ましくは長さが少なくとも約２０ヌクレオチド、いっそうより好ましくは長さが少なくとも３０ヌクレオチド、いっそうより好ましくは長さが少なくとも３００ヌクレオチドおよびより好ましくは長さが少なくとも８００ヌクレオチドである。さらに、当業者であれば、温度および洗浄溶液塩濃度はプローブの長さなどの因子にしたがって必要に応じて調整できることを認識しているであろう。
本明細書で使用する用語「同一性パーセント」は、配列を比較することによって決定される２つ以上のポリペプチド配列間または２つ以上のポリヌクレオチド配列間の関係である。当分野では、「同一性」は、一連のそのような配列間のマッチによって決定されるように、場合によっては、ポリペプチド配列もしくはポリヌクレオチド配列間の配列関連性の程度をさらに意味する。「同一性」および「類似性」は：Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．）Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ Ｉ（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．）Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，ＮＪ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，ｅｄ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；およびＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．）Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９１）に記載されている方法を含むがそれらに限定されない公知の方法によって容易に計算できる。同一性および類似性を決定するための方法は、公的に入手できるコンピュータープログラムにおいて体系化されている。配列アラインメントおよび同一性パーセントの計算は、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥ ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ｓｕｉｔｅ（ＤＮＡＳＴＡＲ Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）のＭｅｇａｌｉｇｎプログラム、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ ｖ．７．０（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）のＡｌｉｇｎＸプログラムまたはＥＭＢＯＳＳ Ｏｐｅｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｓｕｉｔｅを使用して実施できる（ＥＭＢＬ－ＥＢＩ；Ｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １６，（６）：２７６－２７７（２０００））。配列の複数のアラインメントは、デフォルトパラメーターを用いてＣｌｕｓｔａｌ法（例えば、ＣＬＵＳＴＡＬＷ；例えば、バージョン１．８３）のアラインメント（欧州バイオインフォマティクス研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を介して欧州分子生物学研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から入手できるＨｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ，５：１５１－１５３（１９８９）；Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４６７３－４６８０（１９９４）；およびＣｈｅｎｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ３１（１３）：３４９７－５００（２００３））を使用して実施することができる。ＣＬＵＳＴＡＬＷタンパク質アラインメントについての好適なパラメーターには、ＧＡＰ Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｐｅｎａｌｔｙ＝１５、ＧＡＰ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ＝０．２、マトリックス＝Ｇｏｎｎｅｔ（例えば、Ｇｏｎｎｅｔ２５０）、タンパク質ＥＮＤＧＡＰ＝－１、タンパク質ＧＡＰＤＩＳＴ＝４およびＫＴＵＰＬＥ＝１が含まれる。１つの実施形態では、迅速もしくは緩徐なアラインメントは、緩徐なアラインメントが好ましいデフォルト設定を用いて使用される。または、ＣＬＵＳＴＡＬＷ法（例えば、バージョン１．８３）を使用するパラメーターは、さらにＫＴＵＰＬＥ＝１、ＧＡＰ ＰＥＮＡＬＴＹ＝１０、ＧＡＰ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ＝１、マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６４）、ウィンドウ＝５およびＴＯＰ ＤＩＡＧＯＮＡＬＳ ＳＡＶＥＤ＝５を使用するために修飾することもできる。
１つの態様では、好適な単離核酸分子は、本明細書に報告したアミノ酸配列と少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。また別の態様では、好適な単離核酸分子は、そのポリペプチドが各活性（すなわち、グルコシルトランスフェラーゼもしくはα－グルカノヒドロラーゼ活性）を保持することを前提に、本明細書に報告したアミノ酸配列と少なくとも約２０％、好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。所定の実施形態では、活性を保持するグルコシルトランスフェラーゼには、配列番号１５３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含むグルコシルトランスフェラーゼが含まれる。
酵素的に生成された可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を入手するための方法
反応系から本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を入手するためには、遠心分離、濾過、分別、クロマトグラフィー分離、透析、蒸発、沈殿、希釈もしくはそれらの任意の組み合わせ、好ましくは透析もしくはクロマトグラフィー分離、最も好ましくは透析（限外濾過）を含むがそれらに限定されない任意の数の一般的精製技術を使用することができる。
組換え微生物発現
本配列の遺伝子および遺伝子産物は、異種宿主細胞内、特に微生物宿主の細胞内で生成できる。本遺伝子および核酸分子を発現させるために好ましい異種宿主細胞は、真菌科もしくは細菌科内で見いだすことができる、および広範囲の温度、ｐＨ値および溶媒耐性にわたって増殖する微生物宿主である。例えば、任意の細菌、酵母および糸状菌が本核酸分子の発現に宿主として好適に機能できることが企図されている。酵素は、細胞内、細胞外または細胞内および細胞外両方の組み合わせで発現させることができるが、ここで細胞外発現は、発酵生成物からの所望のタンパク質の回収を細胞内発現により生成されたタンパク質を収集するための方法よりも容易にさせる。転写、翻訳およびタンパク質生合成装置は、細胞バイオマスを生成するために使用される細胞供給原料に対して不変のままである；機能的遺伝子は無関係に発現させられるであろう。宿主菌株の例としては、例えば、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）属、ファフィア（Ｐｈａｆｆｉａ）属、クルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ハンセヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属、ヤロウィア（Ｙａｒｒｏｗｉａ）属、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）属、ジモモナス（Ｚｙｍｏｍｏｎａｓ）属、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、エリスロバクター（Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）属、クロロビウム（Ｃｈｌｏｒｏｂｉｕｍ）属、クロマチウム（Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ）属、フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、サイトファガ（Ｃｙｔｏｐｈａｇａ）属、ロドバクター（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ）属、ロドコッカス（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ）属、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、コリネバクテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａ）属、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、デイノコッカス（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）属、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）属、パントエア（Ｐａｎｔｏｅａ）属、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属、スフィンゴモナス（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ）属、メチロモナス（Ｍｅｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ）属、メチロバクター（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒ）属、メチロコッカス（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）属、メチロシヌス（Ｍｅｔｈｙｌｏｓｉｎｕｓ）属、メチロミクロビウム（Ｍｅｔｈｙｌｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ）属、メチロシスティス（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｙｓｔｉｓ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ）属、シネコシスティス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ）属、シネココッカス（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）属、アナバエナ（Ａｎａｂａｅｎａ）属、チオバチルス（Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、メタノバクテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属およびミクソコッカス（Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ）属などの細菌種、真菌種もしくは酵母種が挙げられるが、それらに限定されない。１つの実施形態では、真菌宿主細胞は、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属、好ましくはトリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）の菌株である。１つの実施形態では、細菌宿主菌株には、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、クルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属およびシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属が含まれる。１つの好ましい実施形態では、細菌宿主細胞は、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）もしくは大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）である。
大規模の微生物増殖および機能的遺伝子発現は、広範囲の単純もしくは複合炭水化物、有機酸およびアルコールもしくは飽和炭化水素、例えば光合成もしくは化学的自己栄養宿主の場合におけるメタンもしくは二酸化炭素、窒素、リン、硫黄、酸素、炭素もしくは小無機イオンを含む任意の微量栄養素の形態および量を使用できる。増殖速度の調節は、培養への典型的には栄養源もしくはエネルギー源とは考えられない特定調節分子の添加もしくは非添加によって影響を受ける可能性がある。
好適な宿主細胞を形質転換させるために有用なベクターもしくはカセットは、当分野において周知である。典型的には、ベクターもしくはカセットは、関連遺伝子の転写および翻訳を指令する配列、選択可能なマーカーおよび自律複製もしくは染色体統合を可能にする配列を含有する。好適なベクターは、転写開始制御配列を有する遺伝子の５’領域および転写終結を制御するＤＮＡ断片の３’領域を含む。両方の制御領域が形質転換宿主細胞と相同である、および／または生成宿主にとって天然である遺伝子に由来する場合が最も好ましいが、そのような制御領域が必ずしもそのように由来する必要はない。
所望の宿主細胞内での本セファロスポリンＣデアセチラーゼコーディング領域の発現を駆動するために有用である開始制御領域もしくはプロモーターは数多くあり、当業者であれば精通している。本開示のためには、ＣＹＣ１、ＨＩＳ３、ＧＡＬ１、ＧＡＬ１０、ＡＤＨ１、ＰＧＫ、ＰＨＯ５、ＧＡＰＤＨ、ＡＤＣ１、ＴＲＰ１、ＵＲＡ３、ＬＥＵ２、ＥＮＯ、ＴＰＩ（サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属において発現させるために有用）；ＡＯＸ１（ピチア（Ｐｉｃｈｉａ）属において発現させるために有用）；ならびにｌａｃ、ａｒａＢ、ｔｅｔ、ｔｒｐ、ｌＰＬ、ｌＰＲ、Ｔ７、ｔａｃおよびｔｒｃ（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）において発現させるために有用）ならびにバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属において発現させるために有用であるａｍｙ、ａｐｒ、ｎｐｒプロモーターおよび様々なファージプロモーターを含むがそれらに限定されないこれらの遺伝子を駆動できる実質的に任意のプロモーターが好適である。
終結制御領域はまた、好ましい宿主細胞にとって天然である様々な遺伝子に由来してよい。１つの実施形態では、終結制御領域の包含は、任意選択的である。また別の実施形態では、キメラ遺伝子には、好ましい宿主細胞に由来する終結制御領域が含まれる。
工業的生産
酵素を生成するためには、様々な培養方法を適用できる。例えば、組換え微生物宿主からの過剰発現した特定遺伝子産物の大規模生産は、バッチ式、フェドバッチ式および連続式培養方法によって生成できる。バッチ式およびフェドバッチ式培養方法は一般的であり、当分野では周知であり、例は：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｂｙ Ｗｕｌｆ Ｃｒｕｅｇｅｒ ａｎｄ Ａｎｎｅｌｉｅｓｅ Ｃｒｕｅｇｅｒ（ａｕｔｈｏｒｓ），Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，ＭＡ（１９９０） ａｎｄ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒｉｃｈａｒｄ Ｈ．Ｂａｌｔｚ，Ａｒｎｏｌｄ Ｌ．Ｄｅｍａｉｎ，ａｎｄ Ｊｕｌｉａｎ Ｅ．Ｄａｖｉｓ（Ｅｄｉｔｏｒｓ），（ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（２０１０）の中に見いだすことができる。
所望の酵素の商業的生産は、さらに連続式培養を用いて遂行することもできる。連続式培養は、規定の培養培地がバイオリアクターに連続式に加えられ、加工処理のために等量の馴化培地が同時に除去される開放系である。連続式培養は、一般に、細胞が主として対数期増殖にある一定の高液相密度で細胞を維持する。または、連続式培養は、固定化細胞を用いて実施できるが、この場合は炭素および栄養素が連続的に加えられ、貴重な生成物、副生成物もしくは廃棄物が細胞集団から連続的に除去される。細胞固定化は、天然および／または合成物質から構成される広範囲の固体支持体を使用して実施することができる。
バッチ式発酵、フェドバッチ式発酵もしくは連続式培養からの所望の酵素の回収は、当業者であれば公知である方法のいずれかによって実施できる。例えば、酵素触媒が細胞内で生成される場合は、細胞ペーストは培養培地から遠心分離もしくは膜濾過によって分離され、任意選択的に水もしくは所望のｐＨにある水性バッファーを用いて洗浄され、その後に所望のｐＨにある水性バッファー中の細胞ペーストの懸濁液がホモジナイズされて所望の酵素触媒を含有する細胞抽出物が生成される。細胞抽出物は、酵素触媒溶液から望ましくないタンパク質を沈降させるための熱処理工程の前に細胞断片を除去するために、任意選択的に例えばセライトもしくはシリカなどの適切な濾過助剤に通して濾過されてよい。所望の酵素触媒を含有する溶液は、次に沈降した細胞断片およびタンパク質から膜濾過もしくは遠心分離によって分離することができ、生じた部分精製酵素触媒溶液は追加の膜濾過によって濃縮され、次に任意選択的に適切な担体（例えば、マルトデキストリン、リン酸バッファー、クエン酸バッファーもしくはそれらの混合物）と混合され、スプレー乾燥されて所望の酵素触媒を含む固体粉末が生成される。または、生じた部分精製酵素触媒溶液は、例えばそれにソルビン酸、ソルビン酸ナトリウムもしくは安息香酸ナトリウムなどの保存料が任意選択的に添加される例えばマルトデキストリン、ソルビトールもしくはプロピレングリコールなどのポリオールの添加によって液体調製物として安定化することができる。
量、濃度またはその他の値もしくはパラメーターが範囲、好ましい範囲または好ましい上限値および好ましい下限値のリストとして与えられる場合、これは、範囲が別個に開示されるかどうかにかかわらず、任意の上限範囲もしくは好ましい値および任意の下限範囲もしくは好ましい値の任意の対から形成された範囲のすべてを具体的に開示していると理解すべきである。数値の範囲が本明細書中に記載される場合、他に特に記載しない限り、範囲は、それらの端点ならびに範囲内のすべての整数および分数を含めるものとする。本発明の範囲が範囲を規定するときに列挙された特定の値に限定することは意図されない。
ある実施形態の説明
第１の実施形態（「第１実施形態」）では、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物であって：
ａ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、いっそうより好ましくは少なくとも９０％および最も好ましくは少なくとも９５％のα－（１，３）グリコシド結合；
ｂ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；好ましくは１０％未満、より好ましくは５％以下およびいっそうより好ましくは１％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
ｃ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；好ましくは５％未満および最も好ましくは２．５％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
ｄ． ５，０００ダルトン未満；好ましくは２，５００ダルトン未満；より好ましくは５００～２，５００ダルトンおよび最も好ましくは約５００～２，０００ダルトンの重量平均分子量；
ｅ． ２０℃の水中において１２重量％で、０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満、好ましくは０．０１パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満、好ましくは７ｃＰ（０．００７Ｐａ・ｓ）未満、より好ましくは５ｃＰ（０．００５Ｐａ・ｓ）未満、より好ましくは４ｃＰ（０．００４Ｐａ・ｓ）未満および最も好ましくは３ｃＰ（０．００３Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
ｆ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％、好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％もしくは７０％の溶解度；および
ｇ． ５未満の多分散性指数、を含む可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物が提供される。
第２実施形態では、０．０１～９９重量％（乾燥固体ベース）、好ましくは１０～９０重量％の上述の可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含む織物ケア、洗濯ケアもしくは水性組成物が提供される。
また別の実施形態では、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を生成するための方法であって：
ａ．
ｉ． スクロース；
ｉｉ． 少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、いっそうより好ましくは少なくとも９０％および最も好ましくは少なくとも９５％のα－（１，３）グリコシド結合を有するグルカンポリマーの合成を触媒できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼ；
ｉｉｉ． １つ以上のα－（１，３）グリコシド結合もしくは１つ以上のα－（１，６）グリコシド結合を有するグルカンポリマーを加水分解できる少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼ；および
ｉｖ． 任意選択的に１種以上のアクセプター、を含む一連の反応成分を提供する工程；
ｂ． 好適な水性反応条件下で結合する工程であって、それにより可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含む生成物が生成される工程；および
ｃ． 任意選択的に、工程（ｂ）の生成物から可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を単離する工程；および
ｄ． 任意選択的に、工程（ｃ）の単離可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を濃縮する工程、を含む方法が提供される。
また別の実施形態では、第１実施形態のα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を生成するための方法であって：
１．
１． スクロース；
２． 少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、いっそうより好ましくは少なくとも９０％および最も好ましくは少なくとも９５％のα－（１，３）グリコシド結合を有するグルカンポリマーの合成を触媒できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼ；
３． １つ以上のα－（１，３）グリコシド結合もしくは１つ以上のα－（１，６）グリコシド結合を有するグルカンポリマーを加水分解できる少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼ；および
４． 任意選択的に１種以上のアクセプター、を含む一連の反応成分を提供する工程；
２． 単一反応混合物を形成するために好適な水性条件下で（ａ）の一連の反応成分を結合する工程であって、これによりグルコースオリゴマーを含む生成混合物が形成される工程；
３． グルコースオリゴマーを含む生成混合物から可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を単離する工程；および
４． 任意選択的に、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を濃縮する工程、を含む方法が提供される。
可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物が５％未満、好ましくは１％未満、最も好ましくは０．５％未満のα－（１，４）グリコシド結合を含む、上記の実施形態のいずれかによる組成物もしくは方法。
α－グルカノヒドロラーゼがエンドムタナーゼであり、グルコシルトランスフェラーゼがムタンスクラーゼである、上記の実施形態のいずれかによる組成物もしくは方法。
０．０１～９９重量％（乾燥固体ベース）の本可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物および下記の成分：少なくとも１種のセルラーゼ、少なくとも１種のプロテアーゼもしくはそれらの組み合わせのうちの少なくとも１つを含む組成物。
単離する工程は、遠心分離、濾過、分別、クロマトグラフィー分離、透析、蒸発、希釈もしくはそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む、上記の実施形態のいずれかによる方法。
単一反応混合物中のスクロース濃度は、一連の反応成分を結合して最初は少なくとも２００ｇ／Ｌである、上記の実施形態のいずれかによる方法。
グルコシルトランスフェラーゼ活性対α－グルカノヒドロラーゼ活性の比率は、０．０１：１～１：０．０１である、上記の実施形態のいずれかによる方法。
好適な（酵素的グルカン合成のための）反応条件は０℃～４５℃の反応温度を含む、上記の実施形態のいずれかによる方法。
好適な反応条件は４～８のｐＨ範囲を含む、上記の実施形態のいずれかによる方法。
バッファーが存在し、リン酸塩、ピロリン酸塩、重炭酸塩、酢酸塩もしくはクエン酸塩からなる群から選択される、上記の実施形態のいずれかによる方法。
さらに、前記少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼが配列番号３、５、１７、１９、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２もしくはそれらの任意の組み合わせであるアミノ酸配列を含む、実施形態のいずれかによる方法もまた提供される。他の実施形態では、少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼは、ＧＴＦ－Ｓ、その切断形、そのホモログもしくはそのホモログの切断形である。また別の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、ＧＴＦ－Ｓの切断形であり、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、グルコシルトランスフェラーゼは、ＧＴＦ－Ｓのホモログの切断形であり、配列番号１１８、１２０、１２２、１２４、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４６、１４８、１５０、１５２もしくはそれらの組合せであるアミノ酸配列を含む。前記少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼは配列番号２１、２２、２４、２７、５４、５６、５８およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、上記の実施形態のいずれかによる方法。
前記少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼおよび前記少なくとも１種のα－グルカノヒドロラーゼは：
１． グルコシルトランスフェラーゼＧＴＦ７５２７（配列番号３、５もしくはそれらの組み合わせ）およびムタナーゼＭＵＴ３３２５（配列番号２７）
２． グルコシルトランスフェラーゼＧＴＦ７５２７（配列番号３、５もしくはそれらの組み合わせ）およびムタナーゼＭＵＴ３２６４（配列番号２１、２２、２４もしくはそれらの組み合わせ）
３． グルコシルトランスフェラーゼＧＴＦ０４５９（配列番号１７、１９もしくはそれらの組み合わせ）およびムタナーゼＭＵＴ３３２５（配列番号２７）および
４． グルコシルトランスフェラーゼＧＴＦ０４５９（配列番号１７、１９もしくはそれらの組み合わせ）およびムタナーゼＭＵＴ３２６４（配列番号２１、２２、２４もしくはそれらの組み合わせ）の組み合わせから選択される、上記の実施形態のいずれかによる方法。
また別の実施形態では、第１実施形態の可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を生成するための方法であって：
ａ．
ｉ． スクロース；
ｉｉ． １つ以上のα－（１，３）グリコシド結合を有するグルカンポリマーの合成を触媒できる少なくとも１種のグルコシルトランスフェラーゼ；
ｉｉｉ． 任意選択的に１種以上のアクセプター、を含む一連の反応成分を提供する工程；
ｂ． 好適な水性反応条件下で単一反応混合物を形成するために（ａ）の一連の反応成分を結合する工程であって、反応条件は４５℃超および５５℃未満、好ましくは４７℃～５３℃の反応温度を含み、これによりグルコースオリゴマーを含む生成混合物が形成される工程；
ｃ． グルコースオリゴマーを含む生成混合物から請求項１の可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を単離する工程；および
ｄ． 任意選択的に、可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を濃縮する工程、を含む方法が提供される。
グルコシルトランスフェラーゼは、好ましくは配列番号３、５およびそれらの組み合わせから選択されるアミノ酸配列を有するストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）から得られる、上記の実施形態のいずれかによる方法。
好ましくは、生成された生成物は、第１実施形態の可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物である、上記のプロセス実施形態のいずれかによって生成された生成物。
他に特に定義しない限り、本明細書において使用する全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者により一般に理解されるものと同一の意味を有する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，２Ｄ ＥＤ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９４）およびＨａｌｅ ＆ Ｍａｒｈａｍ，ＴＨＥ ＨＡＲＰＥＲ ＣＯＬＬＩＮＳ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｈａｒｐｅｒ Ｐｅｒｅｎｎｉａｌ，Ｎ．Ｙ．（１９９１）は、本開示で使用する用語の多数についての一般的辞書を当業者に提供する。
本開示を以下の実施例において詳細に規定する。これらの実施例は、本開示の好ましい実施形態を示しているが、例示するためにだけ提供されていることを理解すべきである。上記の考察およびこれらの実施例から、当業者であれば、本発明の本質的な特徴を確認することができ、本開示の精神および範囲から逸脱することなく、様々な使用および条件に適応させるために本開示を様々に変化させて、修飾を加えることができる。
略語の意味は以下の通りである：「ｓｅｃ」もしくは「ｓ」は、秒（間）を意味し、「ｍｓ」はミリ秒（間）を意味し、「ｍｉｎ」は分（間）を意味し、「ｈ」もしくは「ｈｒ」は時（間）を意味し、「μＬ」はマイクロリットルを意味し、「ｍＬ」はミリリットルを意味し、「Ｌ」はリットルを意味する；「ｍＬ／ｍｉｎ」は１分間当たりのミリリットル数である；「μｇ／ｍＬ」は１ミリリットル当たりのマイクログラム数である；「ＬＢ」はルリアブロスである；「μｍ」はマイクロメートルであり、「ｎｍ」はナノメートルである；「ＯＤ」は光学密度である；「ＩＰＴＧ」はイソプロピル－β－Ｄ－チオ－ガラクトシドである；「ｇ」は重力である；「ｍＭ」はミリモルである；「ＳＤＳ－ＰＡＧＥ」はドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドである；「ｍｇ／ｍＬ」は１ミリリットル当たりのミリグラム数である；「Ｎ」は正規である；「ｗ／ｖ」は体積に対する重量である；「ＤＴＴ」はジチオトレイトールである；「ＢＣＡ」はビシンコニン酸である；「ＤＭＡｃ」はＮ，Ｎ’－ジメチルアセトアミドである；「ＬｉＣｌ」は塩化リチウムである；「ＮＭＲ」は核磁気共鳴である；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドである；「ＳＥＣ」はサイズ排除クロマトグラフィーである；「ＧＩ」もしくは「ｇｉ」は、各データベース内のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチド配列を一意的に識別するためのＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）および他の配列データベースによって使用されるシステムであるＧｅｎＩｎｆｏ識別子を意味する；「ＤＰｘ」は長さに「ｘ」単位を有するグルカン重合度を意味する；「ＡＴＣＣ」はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を意味し、「ＤＳＭＺ」および「ＤＳＭ」はＬｅｉｂｎｉｚ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ＤＳＭＺ－Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を意味する；「ＥＥＬＡ」はＦｉｎｉｓｈ Ｆｏｏｄ Ｓａｆｅｔｙ Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ（Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）を意味する；「ＣＣＵＧ」は、Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｏｅｔｅｂｏｒｇ，Ｓｗｅｄｅｎを意味する；「Ｓｕｃ．」はスクロースを意味する；「Ｇｌｕｃ．」はグルコースを意味する；「Ｆｒｕｃ．」はフルクトースを意味する；「Ｌｅｕｃ．」はロイクロースを意味する；および「Ｒｘｎ」は反応を意味する。
一般的方法
本明細書で使用する標準組換えＤＮＡおよび分子クローニング技術は、当分野において周知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２００１）；Ｓｉｌｈａｖｙ，Ｔ．Ｊ．，Ｂｅｎｎａｎ，Ｍ．Ｌ．ａｎｄ Ｅｎｑｕｉｓｔ，Ｌ．Ｗ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｇｅｎｅ Ｆｕｓｉｏｎｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｌｄ Ｐｒｅｓｓ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８４）；およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ．Ｙ．，２００２の中でＡｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ．ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓによって記載されている。
微生物培養の維持および増殖に好適な物質および方法もまた、当分野において周知である。下記の実施例において使用するために好適な技術は、Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，Ｐｈｉｌｌｉｐｐ Ｇｅｒｈａｒｄｔ，Ｒ．Ｇ．Ｅ．Ｍｕｒｒａｙ，Ｒａｌｐｈ Ｎ．Ｃｏｓｔｉｌｏｗ，Ｅｕｇｅｎｅ Ｗ．Ｎｅｓｔｅｒ，Ｗｉｌｌｉｓ Ａ．Ｗｏｏｄ，Ｎｏｅｌ Ｒ．Ｋｒｉｅｇ ａｎｄ Ｇ．Ｂｒｉｇｇｓ Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，ｅｄｓ．，（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（１９９４）），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｂｙ Ｗｕｌｆ Ｃｒｕｅｇｅｒ ａｎｄ Ａｎｎｅｌｉｅｓｅ Ｃｒｕｅｇｅｒ（ａｕｔｈｏｒｓ），Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，ＭＡ（１９９０））およびＭａｎｕａｌ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒｉｃｈａｒｄ Ｈ．Ｂａｌｔｚ，Ａｒｎｏｌｄ Ｌ．Ｄｅｍａｉｎ，ａｎｄ Ｊｕｌｉａｎ Ｅ．Ｄａｖｉｓ（Ｅｄｉｔｏｒｓ），（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（２０１０）の中に見いだすことができる。
細菌細胞の増殖および維持のために使用される全ての試薬、制限酵素および物質は、他に特に規定されない限り、ＢＤ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ），ＱＩＡＧＥＮ（Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ）、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）もしくはＰｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ａ ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から入手した。ＩＰＴＧ（製品番号Ｉ６７５８）および塩化トリフェニルテトラゾリウムは、Ｓｉｇｍａ Ｃｏ．，（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した。Ｂｅｌｌｃｏスピンフラスコは、Ｂｅｌｌｃｏ Ｃｏ．，（Ｖｉｎｅｌａｎｄ，ＮＪ）から入手した。ＬＢ培地は、Ｂｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）からであった。ＢＣＡタンパク質アッセイは、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）からであった。
ＧＴＦ酵素を生成するための組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株の増殖
機能的ＧＴＦ酵素を発現する大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）菌株は、振とうフラスコ内で、アンピシリン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＬＢ培地を使用して３７℃および２２０ｒｐｍでＯＤ６００ｎｍ＝０．４～０．５へ増殖させ、その時点にイソプロピル－β－Ｄ－チオ－ガラクトシド（ＩＰＴＧ）を最終濃度が０．５ｍＭとなるように加え、３７℃で２～４時間にわたりインキュベーションを継続した。細胞は１５分間にわたる５，０００×ｇでの遠心分離によって採取し、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ７．０）中に再懸濁させた（２０～２５重量／体積％の湿潤細胞）。９５％を超える細胞溶解を保証するために、再懸濁細胞をＦｒｅｎｃｈプレッシャーセル（ＳＬＭ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に２回通過させた。細胞溶解物を１２，０００×ｇおよび４℃で３０分間遠心分離した。生じた上清（細胞抽出物）は、ＧＴＦ酵素の発現を確証するためにＢＣＡタンパク質アッセイおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、細胞抽出物を－８０℃で保管した。
ｐＨＹＴベクター
ｐＨＹＴベクター主鎖は、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ａｐｒＥプロモーターを含有する複製枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現プラスミドであった。ｐＨＹＴベクター主鎖は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）－枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）シャトルベクターｐＨＹ３２０ＰＬＫ（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号Ｄ００９４６、およびタカラバイオ株式会社（日本国大津市）から市販で入手できる）由来であった。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）の複製起源およびアンピシリン耐性遺伝子は、ｐＡＣＹＣ１７７（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）Ｘ０６４０２、およびＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ Ｉｎｃ．，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡから市販で入手できる）由来であった。枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の複製起源およびテトラサイクリン耐性遺伝子は、ｐＡＭａｌｐｈａ－１（Ｆｒａｎｃｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．２００２ Ｓｅｐ；１８４（１８）：５１８７－９３））由来であった。
ｐＨＹＴを構築するために、ファージλ由来のターミネーター配列：５’－ＡＴＡＡＡＡＡＡＣＧＣＴＣＧＧＴＴＧＣＣＧＣＣＧＧＧＣＧＴＴＴＴＴＴＡＴ－３’（配列番号１）をテトラサイクリン耐性遺伝子の後に挿入した。
ａｐｒＥプロモーター－関心対象の酵素をコードするＡｐｒＥシグナルペプチド配列コーディング配列（例えば、様々なＧＴＦに対するコーティング配列）－ＢＰＮ’ターミネーターを含有する全発現カセット（ＥｃｏＲＩ－ＢａｍＨＩ断片）は、ＨｉｎｄＩＩＩ部位を破壊したＢａｍＨＩ－ＨｉｎｄＩＩＩリンカーを使用してｐＨＹＴのＥｃｏＲＩ部位およびＨｉｎｄＩＩＩ部位内にクローニングした。リンカー配列は、５’－ＧＧＡＴＣＣＴＧＡＣＴＧＣＣＴＧＡＧＣＴＴ－３’（配列番号２）であった。ａｐｒＥプロモーターおよびＡｐｒＥシグナルペプチド配列（配列番号２５）は、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）にとって天然であった。ＢＰＮ’ターミネーターは、バチルス・アミロリケファシエンス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）のサブチリシン由来であった。天然シグナルペプチドを使用した場合は、ＡｐｒＥシグナルペプチドを発現遺伝子の天然シグナルペプチドと置き換えた。
Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）のバイオリスティック形質転換
トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）胞子懸濁液を約６ｃｍ径のアセトアミダーゼ形質転換プレート（１５０μＬの５×１０７～５×１０８個（胞子）／ｍＬ（懸濁液））の中心上に広げた。プレートを次に生物学的フード内で風乾させた。ストッピングスクリーン（ＢｉｏＲａｄ １６５－２３３６）およびマクロキャリアホルダー（ＢｉｏＲａｄ １６５２３２２）を７０％のメタノール中に浸漬して風乾させた。ＤＲＩＥＲＩＴＥ（登録商標）乾燥剤（硫酸カルシウム乾燥剤；Ｗ．Ａ．Ｈａｍｍｏｎｄ ＤＲＩＥＲＩＴＥ（登録商標）Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｘｅｎｉａ，ＯＨ）を小さなペトリ皿（６ｃｍ、Ｐｙｒｅｘ）内に配置し、ワットマン濾紙（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏ－Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）を被せた。マクロキャリア（ＢｉｏＲａｄ １６５－２３３５；Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を含有するマクロキャリアホルダーを濾紙の上に水平に配置し、ペトリ皿の蓋を取り換えた。タングステン粒子懸濁液は、６０ｍｇのタングステンＭ－１０粒子（マイクロキャリア、０．７ミクロン、ＢｉｏＲａｄ ＃１６５２２６６，Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）をエッペンドルフ型試験管に加えることによって調製した。エタノール（１ｍＬ）（１００％）を加えた。タングステンはエタノール溶液中でボルテックスミキサーにかけ、１５分間浸漬させた。タングステンをペレット化するために、エッペンドルフ型試験管を最高速度で短時間にわたり微量遠心した。エタノールをデカントし、無菌蒸留水を用いて３回洗浄した。水洗を３回デカントした後、タングステンを１ｍＬの無菌５０％グリセロール中に再懸濁させた。形質転換反応は、各形質転換のために２５μＬの懸濁化タングステンを１．５ｍＬのエッペンドルフ型試験管に加えることによって調製した。その後の添加は、２μＬのＤＮＡ ｐＴｒｅｘ３発現ベクター（配列番号３；米国特許第６，４２６，４１０号明細書を参照されたい）、２５μＬの２．５ＭのＣａＣｌ２、１０μＬの０．１Ｍのスペルミジンの順序で実施した。反応は、タングステンを懸濁させながら、５～１０分間にわたり継続的にボルテックスミキサーにかけた。次にエッペンドルフ型試験管を短時間微量遠心し、デカントした。タングステンペレットを２００μＬの７０％のエタノールを用いて洗浄し、短時間微量遠心し、ペレット化してデカントした。ペレットを２００μＬの１００％のエタノールを用いて洗浄し、短時間微量遠心してペレット化してデカントした。タングステンペレットを２４μＬの１００％のエタノール中に再懸濁させた。エッペンドルフ型試験管を１５秒間にわたり超音波水浴中に入れ、８μＬのアリコートを乾燥マクロキャリアの中心に移した。マクロキャリアを放置して乾燥ペトリ皿内で乾燥させた。
ヘリウムタンクのスイッチを１，５００ｐｓｉ（約１０．３ＭＰａ）へ入れた。ＰＤＳ－１０００／Ｈｅ（商標）型ＢＩＯＬＩＳＴＩＣ（登録商標）粒子送達システム（ＢｉｏＲａｄ）において１，１００ｐｓｉ（約７．５８ＭＰａ）破裂ディスク（ＢｉｏＲａｄ １６５－２３２９）を使用した。タングステン溶液が乾いている場合は、ストッピングスクリーンおよびマクロキャリアホルダーをＰＤＳ－１０００内に挿入した。標的Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）胞子を含有するアセトアミダーゼプレートは、ストッピングスクリーンの下方６ｃｍに配置した。チャンバー内に２９インチＨｇ（約９８．２ｋＰａ）の真空を引いて維持した。Ｈｅ ＢＩＯＬＩＳＴＩＣ（登録商標）粒子送達システムを始動させた。チャンバーを換気し、コロニーが出現するまで（５日間）２８℃でインキュベーションするためにアセトアミダーゼプレートを取り出した。
変性ａｍｄＳバイオリスティック寒天（ＭＡＢＡ）（１Ｌ当たり）
第Ｉ部、５００ｍＬの蒸留水（ｄＨ２Ｏ）中で作成する
１，０００×の塩 １ｍＬ
ノーブル寒天 ２０ｇ
ｐＨを６．０へ、オートクレーブ滅菌する
第ＩＩ部、５００ｍＬのｄＨ２Ｏ中で作成する
アセトアミド ０．６ｇ
ＣｓＣｌ １．６８ｇ
グルコース ２０ｇ
ＫＨ２ＰＯ４ １５ｇ
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．６ｇ
ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．６ｇ
ｐＨを４．５にし、０．２ミクロンのフィルターで滅菌する；５０℃のオーブン内に入れて加温し、寒天に加え、混合し、プレートに注入する。室温（約２１℃）で保管した。
１，０００×の塩（１Ｌ当たり）
ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ５ｇ
ＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ １．６ｇ
ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ １．４ｇ
ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ １ｇ
１ＬのｄＨ２Ｏにする。
０．２ミクロンのフィルターで滅菌する
グルコシルトランスフェラーゼ活性の決定
グルコシルトランスフェラーゼ活性アッセイは、２５ｇ／Ｌのデキストラン（約１，５００のＭＷ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、製品番号３１３９４）の存在下もしくは非存在下で、２５ｍＭもしくは５０ｍＭの酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．５）中で１～１０体積／体積％のＧＴＦ酵素を含有する粗タンパク質抽出物を２００ｇ／Ｌのスクロースとともに３７℃で１２５ｒｐｍの軌道振とうによってインキュベートすることにより実施した。１時間後、２時間後および３時間後に１アリコートの反応混合物を取り出し、９０℃で５分間にわたり加熱してＧＴＦを不活性化した。１３，０００×ｇで５分間にわたる遠心分離によって不溶性物質を除去し、その後に０．２μｍのＲＣ（再生セルロース）膜に通した濾過を実施した。生じた濾液は、２基のＡｍｉｎｅｘ ＨＰＸ－８７Ｃカラムシリーズ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を使用するＨＰＬＣによって８５℃で分析し、スクロース濃度を定量した。各時点のスクロース濃度を反応時間に対してプロットし、線形プロットの勾配から初期反応速度を決定した。１単位のＧＴＦ活性は、アッセイ条件下で１分間中に１μＭ（マイクロモル）のスクロースを消費するために必要とされる酵素の量として定義された。
α－グルカノヒドロラーゼ活性の決定
ムタナーゼ活性を決定するために必要とされる不溶性ムタンポリマーは、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）ＡＴＣＣ（登録商標）３３４７８（商標）により生成された分泌酵素を使用して調製した。詳細には、１ループのＳ．ソブリヌス（ｓｏｂｒｉｎｕｓ）ＡＴＣＣ（登録商標）３３４７８（商標）のグリセロールストックをＢＨＩ寒天プレート（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ ａｇａｒ，Ｔｅｋｎｏｖａ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）上に画線し、プレートを３７℃で２日間インキュベートした；ループを使用して小数のコロニーを取り上げ、Ｔｅｋｎｏｖａ製のオリジナル培地瓶中の２×の１００ｍＬのＢＨＩ液体培地を接種し、この培養を２４時間にわたり静的に３７℃でインキュベートした。生じた細胞を遠心分離によって除去し、生じた上清を０．２μｍの滅菌フィルターに通して濾過した；２×の１０１ｍＬの濾液を採取した。濾液に２×の１１．２ｍＬの２００ｇ／Ｌのスクロース（最終スクロース２０ｇ／Ｌ）を加えた。反応を撹拌せずに３７℃で６７時間にわたりインキュベートした。生じた多糖ポリマーは、１０分間にわたる５，０００×ｇでの遠心分離によって収集した。上清は注意深くデカントした。不溶性ポリマーは、４０ｍＬの無菌水を用いて４回洗浄した。生じたムタンポリマーを４８時間にわたり凍結乾燥させた。ムタンポリマー（３９０ｍｇ）を３９ｍＬの無菌水中に懸濁させて１０ｍｇ／ｍＬの懸濁液を作成した。ムタン懸濁液は、超音波処理（大きな塊が消失するまで４０％の振幅、計約１０分間）によってホモジナイズした。均質化懸濁液をアリコートに分割し、４℃で保管した。
ムタナーゼアッセイは、適切な量の酵素をｐＨ５．５および３７℃で２５ｍＭのＫＯＡｃバッファー中で０．５ｍｇ／ｍＬのムタンポリマーとともにインキュベートすることによって開始した。様々な時点に、１アリコートの反応混合物を引き出し、等量の１００ｍＭのグリシンバッファー（ｐＨ１０）によりクエンチした。各クエンチサンプル中の不溶性物質は、５分間にわたる１４，０００×ｇでの遠心分離によって除去した。各時点に生成されたオリゴ糖および多糖ポリマーの還元末端は、ｐ－ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド溶液（ＰＡＨＢＡＨ）アッセイ（Ｌｅｖｅｒ Ｍ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，（１９７２）４７：２７３－２７９）によって定量し、初期速度は時間経過の最初の３つもしくは４つの時点の線状プロットの勾配から決定した。ＰＡＨＢＡＨアッセイは、１０μＬの反応サンプル上清を１００μＬのＰＡＨＢＡＨ作業溶液に加え、５分間にわたり９５℃で加熱した。作業溶液は、１部の試薬Ａ（０．０５ｇ／ｍＬのｐ－ヒドロキシ安息香酸ヒドラジドおよび５体積％の濃塩酸）および４部の試薬Ｂ（０．０５ｇ／ｍＬのＮａＯＨ、０．２ｇ／ｍＬの酒石酸カリウムナトリウム）を混合することによって調製した。４１０ｎｍでの吸収を記録し、還元末端の濃度は適切なバックグラウンド吸収を減じ、標準物質としての様々な濃度のグルコースを用いて生成した標準曲線を使用して計算した。１単位のムタナーゼ活性は、ｐＨ５．５および３７℃での１μＭ／分のムタンポリマーの転換として定義されており、上述したように還元末端における増加を測定することによって決定した。
グリコシド結合の決定
一次元１Ｈ ＮＭＲデータは、高感度凍結探針を使用して５００ＭＨｚで作動するＶａｒｉａｎ Ｕｎｉｔｙ Ｉｎｏｖａシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）上で獲得した。水抑制は、「前飽和」実験における残留水シグナルについての共鳴上の観察トランスミッター周波数を注意深く配置し、その後に全期サイクル（３２回という多数）および１０ｍｓの混合時間を用いた「ｔｎｎｏｅｓｙ」実験を使用して入手した。
典型的には、乾燥サンプルを１．０ｍＬのＤ２Ｏ中に取り上げ、３０分間にわたり音波処理した。サンプルの可溶性部分から、１００μＬを３５０μＬのＤ２Ｏおよび内標準物質としての１５．３ｍＭのＤＳＳ（４，４－ジメチル－４－シラペンタン－１－スルホン酸ナトリウム塩）および殺菌剤としての０．２９％のＮａＮ３を含有する１００μＬのＤ２Ｏと一緒に５ｍｍのＮＭＲチューブに加えた。各タイプのアノマー結合の存在度は、対応する化学シフトでピーク面積を統合することによって測定した。各タイプのアノマー結合のパーセンテージは、特定結合の存在度およびオリゴ糖からのアノマー結合の全存在度から計算した。
メチル化分析
グルカン中のグルコシド結合の分布は、一般に「メチル化分析」もしくは「部分メチル化分析」と名付けられた周知の技術によって決定した（例えば：Ｆ．Ａ．Ｐｅｔｔｏｌｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，（２０１２）７（９）：１５９０－１６０７を参照されたい）。この技術は、多数の小さな変化を有するが、必ず：１．グルコース単位の全遊離ヒドロキシル基のメチル化、２．メチル化グルカンの個別モノマー単位への加水分解、３．アノマーを排除してメチル化グルシトールを作成するための還元的開環；アノマー炭素は、典型的には特徴的質量スペクトルを作り出すための重水素原子を用いてタグ付けされる、４．部分メチル化生成物としても公知である、部分メチル化酢酸グルシトールを作成するための（加水分解および開環により作成された）遊離ヒドロキシル基のアセチル化、５．生じた部分メチル化生成物の質量分析法および／または水素炎イオン化検出法と結合されたガスクロマトグラフィーによる分析を含む。
部分メチル化生成物には、非還元型末端グルコース単位、結合単位および分岐点が含まれる。個々の生成物は、保持時間および質量分析法によって同定される。部分メチル化生成物の分布は、全部分メチル化生成物の全ピーク面積内の各生成物のパーセンテージ（面積％）である。ガスクロマトグラフィー条件は、下記の通りであった：ＲＴｘ－２２５カラム（３０ｍ×２５０μｍのＩＤ×０．１μｍの膜厚、Ｒｅｓｔｅｋ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ，ＰＡ，ＵＳＡ）、ヘリウムキャリアーガス（０．９ｍＬ／分の一定流速）、８０℃（２分間保持する）で開始し、次に３０℃／分で１７０℃（０分間保持する）、次に４℃／分で２４０℃（２５分間保持する）へのオーブン温度プログラム、１μＬの注入量（５：１で分割）、電子衝撃質量分析法（フルスキャンモード）を使用する検出であった。
粘度の測定
可溶性オリゴマー／ポリマーの１２重量％の水溶液の粘度は、コーンおよびプレートの形状を備えたＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ＡＲ－Ｇ２制御ストレス回転式レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ－Ｗａｔｅｒｓ，ＬＬＣ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を使用して測定した。形状は、どちらも平滑な表面を備える４０ｍｍの２°の上方コーンおよびペルチェ下方プレートからなる。試験中の溶媒（水）蒸発を最小限に抑えるために、水飽和スポンジを装備した環境チャンバーを使用した。粘度は、２０℃で測定した。ペルチェは、所望の温度に設定し、０．６５ｍＬのサンプルは、エッペンドルフ型ピペット（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ Ｎｏｒｔｈ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｈａｕｐｐａｕｇｅ，ＮＹ）を使用してプレート上に装填した。コーンは、コーンの底部とプレートとの間のギャップを５０μｍに低下させた。サンプルは、３分間にわたり熱平衡させた。剪断速度掃引は、５００～１０ｓ－１の剪断速度範囲にわたって実施した。サンプル安定性は、試験の終了時に反復剪断速度点をランすることによって確証した。
スクロース、グルコース、フルクトースおよびロイクロースの濃度の決定
スクロース、グルコース、フルクトースおよびロイクロースは、２基の直列Ａｍｉｎｅｘ ＨＰＸ－８７Ｃカラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を用いるＨＰＬＣによって定量した。使用したクロマトグラフィー条件は、カラム区画および検出器区画で８５℃、サンプルおよびインジェクター区画で４０℃、流量０．６ｍＬ／分および注入量１０μＬであった。データ整理のために使用したソフトウエアパッケージは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）製のＥＭＰＯＷＥＲ（商標）バージョン３であった。較正は、各個別糖に対する様々な濃度の標準物質を用いて実施した。
オリゴ糖の濃度の決定
可溶性オリゴ糖は、２基の直列Ａｍｉｎｅｘ ＨＰＸ－４２Ａカラム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いるＨＰＬＣによって定量した。使用したクロマトグラフィー条件は、８５℃のカラム温度および４０℃の検出器区画温度、移動相としての水（流量０．６ｍＬ／分）および１０μＬの注入量であった。データ整理のために使用したソフトウエアパッケージは、Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．製のＥＭＰＯＷＥＲ（商標）バージョン３であった。ＤＰ２～ＤＰ７由来のオリゴ糖サンプルは、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ：マルトヘプタオース（ＤＰ７、製品番号４７８７２）、マルトヘキサノース（ＤＰ６、製品番号４７８７３）、マルトペントース（ＤＰ５、製品番号４７８７６）、マルトテトラオース（ＤＰ４、製品番号４７８７７）、イソマルトトリオース（ＤＰ３、製品番号４７８８４）およびマルトース（ＤＰ２、製品番号４７２８８）から入手した。較正は、様々な濃度の標準物質を用いて各個別オリゴ糖に対して実施した。
可溶性オリゴ糖の精製
下記の実施例で記載するような添加ムタナーゼを含む、もしくは含まないグルコシルトランスフェラーゼ酵素を使用したスクロースの転換により精製される生成混合物中に存在する可溶性オリゴ糖を精製し、サイズ排除カラムクロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって単離した。典型的な手技では、生成混合物を１５分間～３０分間にわたり６０℃～９０℃で熱処理し、その後に１０分間にわたり４，０００ｒｐｍで遠心分離した。生じた上清は、溶離液としての水を０．７ｍＬ／分で使用して、１．１ＬのＢｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ２ Ｇｅｌ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｆｉｎｅ ４５～９０μｍ）が充填されたＧＥ ＨＫ ５０／６０カラムと接続したＡＥＫＴＡｐｒｉｍｅ精製システム（ＳＥＣ；ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）（１０ｍＬ～５０ｍＬの注入量）に注入した。ＳＥＣ分画（チューブ１本当たり約５ｍＬ）をＢｉｏ－Ｒａｄ ＨＰＸ－４７Ａカラムを使用してオリゴ糖について分析した。＞ＤＰ２のオリゴ糖を含有する分画を結合し、３重量／重量％～６重量／重量％の固体を含有する溶液を生成するために結合分画の回転式蒸発によって可溶性オリゴマー／ポリマーを単離し、ここで生じた溶液は固体生成物としての可溶性オリゴマー／ポリマーを生成するために凍結乾燥させた。
実施例１
グルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ－Ｊ）発現菌株である大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＭＧ１６５５／ｐＭＰ５２の構築
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）（アクセッション番号Ｍ６４１１１．１；ｇｉ：４７５２７）に報告されたストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）（ＡＴＣＣ（登録商標）２５９７５（商標））由来の成熟グルコシルトランスフェラーゼ酵素（ｇｔｆ－Ｊ；ＥＣ２．４．１．５；配列番号３）をコードするポリヌクレオチド配列は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＤＮＡ２．０，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）中での発現のために最適化したコドンを使用して合成した。ｐＭＰ５２であると同定されたプラスミドを生成するために、成熟酵素（すなわち、シグナルペプチドが除去され、開始コドンが添加された；配列番号５）をコードする核酸生成物（配列番号４）をｐＪｅｘｐｒｅｓｓ４０４（登録商標）（ＤＮＡ２．０，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ））内にサブクローニングした。ＭＧ１６５５／ｐＭＰ５２であると同定された菌株を生成するために、プラスミドｐＭＰ５２を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＭＧ１６５５（ＡＴＣＣ（登録商標）４７０７６（商標））を形質転換させた。グルコシルトランスフェラーゼ酵素発現菌株を構築するために使用した全手技は、当分野において周知であり、当業者であれば過度の実験を行わずに実施することができる。
実施例２
発酵における組換えＧＴＦ－Ｊの生成
発酵槽内での組換え成熟グルコシルトランスフェラーゼＧｔｆ－Ｊの生成は、実施例１において記載したように構築した成熟Ｇｔｆ－Ｊ酵素（ＧＩ：４７５２７；「ＧＴＦ７５２７」；配列番号５）を発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株ＭＧ１６５５／ｐＭＰ５２のプレシード培養を調製することによって開始した。種培地の１０ｍＬのアリコートを１２５ｍＬのディスポーザブルのバッフル付きフラスコ内に添加し、２０％のグリセロール中の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＭＧ１６５５／ｐＭＰ５２の１．０ｍＬ培養を接種した。この培養を３時間にわたり３００ｒｐｍで振とうしながら３７℃で増殖するに任せた。
発酵槽を開始するための種培養は、２Ｌの振とうフラスコに０．５Ｌの種培地を装填することによって調製した。１．０ｍＬのプレシード培養をフラスコ内の０．５Ｌの種培地中に無菌法により移し、５時間にわたり３７℃および３００ｒｐｍで培養した。種培養は２（ＯＤ５５０）を超える光学密度で、３７℃で上述した８Ｌの発酵槽培地を含有する１４Ｌの発酵槽（Ｂｒａｕｎ，Ｐｅｒｔｈ Ａｍｂｏｙ，ＮＪ）に移した。
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＭＧ１６５５／ｐＭＰ５２の細胞を発酵槽内で増殖するに任せ、培地中のグルコース濃度が０．５ｇ／Ｌに減少した時点にグルコースの供給（１重量／重量％のＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏを含有する５０重量／重量％のグルコース溶液）を開始した。供給は、０．３６グラムフィード毎分（ｇフィード／分）で開始し、１時間毎に０．４２、０．４９、０．５７、０．６６、０．７７、０．９０、１．０４、１．２１、１．４１、１．６３、１．９２、２．２ｇフィード／分へ漸進的に増加させた。それ以後は、速度は一定のままであった。培地中のグルコース濃度は、ＹＳＩグルコース分析装置（ＹＳＩ，Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｐｒｉｎｇｓ，Ｏｈｉｏ）を使用して監視した。グルコース濃度が０．１ｇ／Ｌを超えると、供給速度は減少した、または一時的に停止した。グルコシルトランスフェラーゼ酵素活性の誘導を開始し、この時点に細胞は、９ｍＬの０．５ＭのＩＰＴＧ（イソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクト－ピラノシド）を添加すると、７０のＯＤ５５０に達した。溶存酸素（ＤＯ）濃度は、２５％の空気飽和度で制御した。ＤＯは、最初はインペラ撹拌速度（４００～１，２００ｒｐｍ）によって、後に通気速度（２～１０標準リットル毎分、ｓｌｐｍ）によって制御した。ｐＨは６．８で調節した。ｐＨ調節のためにはＮＨ４ＯＨ（１４．５重量／体積％、ｗ／ｖ）およびＨ２ＳＯ４（２０重量／体積％）を使用した。逆圧は、０．５バールで維持した。発泡形成を抑制するために、様々な間隔（２０、２５および３０時間）で、５ｍＬのＳｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ７１５３消泡剤（Ｃｏｇｎｉｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ，ＯＨ）を発酵槽に添加した。細胞はＩＰＴＧ添加の８時間後の遠心分離によって採取し、細胞ペーストとして－８０℃で保管した。
実施例３
細胞ペーストからのＧＴＦ－Ｊ粗タンパク質抽出物の調製
実施例２において記載したように得られた細胞ペーストは、スラリーを調製するために５０ｍＭのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ７．２）中に１５０ｇ／Ｌで懸濁させた。このスラリーを１２，０００ｐｓｉ（約８２．７ＭＰａ；Ｒａｎｎｉｅ型装置、ＡＰＶ－１０００もしくはＡＰＶ１６．５６；ＳＰＸ Ｃｏｒｐ．，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ）でホモジナイズし、ホモジネートを４℃へ冷却した。中等度に強力に撹拌しながら、５０ｇのフロック溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ社製品番号４０９１３８、細胞ホモジネート１Ｌ当たり５０ｍＭのリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．０）中で５％）を加えた。撹拌は、１５分間かけて軽度の撹拌に低下させた。次に細胞ホモジネートを５～１０℃で３時間にわたり４，５００ｒｐｍでの遠心分離によって浄化した。粗タンパク質抽出物中にＧｔｆ－Ｊ酵素を含有する上清は、３０ｋＤａ（キロダルトン）のカットオフ膜を用いて（およそ５×に）濃縮した。Ｇｔｆ－Ｊ粗タンパク質抽出物中の全可溶性タンパク質の濃度は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して４～８ｇ／Ｌであると決定された。
実施例４
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０中でのＧＴＦ－Ｊ ＧＩ：４７５２７の生成
ＴＯＰ１０／ｐＭＰ５２であると同定された菌株を生成するために、プラスミドｐＭＰ５２（実施例１）を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を形質転換させた。成熟Ｇｔｆ－Ｊ酵素「ＧＴＦ７５２７」（配列番号５として提供された）を発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株ＴＯＰ１０／ｐＭＰ５２の増殖およびＧＴＦ活性の決定は上述した方法にしたがった。
実施例５
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０中でのＧＴＦ－Ｌ ＧＩ：６６２３７９の生成
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）においてＧＩ：６６２３７９（配列番号６；ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧｔｆ－Ｌ）であると同定されたグルコシルトランスフェラーゼ（Ｇｔｆ）酵素の切断バージョンをコードするポリヌクレオチドは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＤＮＡ２．０，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）中での発現のために最適化されたコドンを使用して合成した。ｐＭＰ６５であると同定されたプラスミドを生成するために、タンパク質「ＧＴＦ２３７９」（配列番号８）をコードする核酸生成物（配列番号７）をｐＪｅｘｐｒｅｓｓ４０４（登録商標）（ＤＮＡ２．０）内にサブクローニングした。ＴＯＰ１０／ｐＭＰ６５であると同定された菌株を生成するために、プラスミドｐＭＰ６５を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ．）を形質転換させた。ｇｔｆ酵素「２３７９」（使用した各ＧＩ番号の最後の４文字）を発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株ＴＯＰ１０／ｐＭＰ６５の増殖およびＧｔｆ活性の決定は上述した方法にしたがった。
実施例６
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０中でのＧＴＦ－Ｂ ＧＩ：２９０５８０５４４の生成
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）においてＧＩ：２９０５８０５４４（配列番号９；ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＮＮ２０２５由来のＧｔｆ－Ｂ）であると同定されたグルコシルトランスフェラーゼ酵素の切断バージョンをコードするポリヌクレオチドは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＤＮＡ ２．０）中での発現のために最適化されたコドンを使用して合成した。ｐＭＰ６７であると同定されたプラスミドを生成するために、タンパク質「ＧＴＦ０５４４」（配列番号１１）をコードする核酸生成物（配列番号１０）をＰＪＥＸＰＲＥＳＳ４０４（登録商標）内にサブクローニングした。ＴＯＰ１０／ｐＭＰ６７であると同定された菌株を生成するために、プラスミドｐＭＰ６７を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０を形質転換させた。Ｇｔｆ－Ｂ酵素「ＧＴＦ０５４４」（配列番号１１）を発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株ＴＯＰ１０／ｐＭＰ６７の増殖およびＧＴＦ０５４４活性の決定は、上述した方法にしたがった。
実施例７
大腸菌（Ｅ．ＣＯＬＩ）ＢＬ２１ ＤＥ３中のＧＴＦ－Ｉ ＧＩ：４５０８７４の生成
ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）由来のグルコシルトランスフェラーゼ（ＡＴＣＣ（登録商標）２７３５１（商標））をコードするポリヌクレオチドは、当分野において周知のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法を使用して単離した。ＰＣＲプライマーは、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＢＡＡ１４２４１におよびＡｂｏ ｅｔ ａｌ．，（Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，（１９９１）１７３：９９８－９９６）によって記載された遺伝子配列に基づいて設計した。５’－末端プライマーである５’－ＧＧＧＡＡＴＴＣＣＣＡＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＡＴＴＡＴＴＡＣＴ－３’（配列番号１２）は、ｇｔｆ－Ｉ遺伝子の塩基４６６～４９１に対応する配列をコードするために設計した。さらに、このプライマーは、クローニング目的に使用されたＥｃｏＲＩ制限酵素部位のための配列を含有していた。
３’－末端プライマーであるＡＧＡＴＣＴＡＧＴＣＴＴＡＧＴＴＣＣＡＧＣＣＡＣＧＧＴＡＣＡＴＡ－３’（配列番号１３）は、Ｓ．ソブリヌス（ｓｏｂｒｉｎｕｓ）遺伝子の塩基４７４９～４７７４の逆相補体に対応する配列をコードするために設計した。逆ＰＣＲプライマーは、さらにクローニング目的に使用されたＸｂａＩ部位のための配列を含んでいた。生じた４．３１ＫｂのＤＮＡ断片は、ＥｃｏＲＩおよびＸｂａＩ制限酵素を用いて消化し、Ｐｒｏｍｅｇａ ＰＣＲクリーンアップキット（Ａ９２８１，Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を製造業者の推奨にしたがって使用して精製した。ＤＮＡ断片は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質発現ベクター（ｐＥＴ２４ａ，Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡの１事業部、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）内にライゲートした。ライゲートした反応はＢＬ２１ ＤＥ３細胞系（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ）内に形質転換させ、単一コロニーを選択するために固体ＬＢ培地（１０ｇ／Ｌ、トリプトン；５ｇ／Ｌの酵母抽出物；１０ｇ／ＬのＮａＣｌ；１４％の寒天；１００μｇ／ｍＬのアンピシリン）上でプレーティングした。
形質転換大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１ ＤＥ３細胞はＬＢ培地中の０．０２５の初期光学密度（６００ｎｍでのＯＤ）へ接種し、２５０ｒｐｍで振とうしながら３７℃のインキュベーター内で増殖するに任せた。培養が０．８～１．０のＯＤに達した時点に、切断型Ｇｔｆ－Ｉ酵素（配列番号１６）をコードする遺伝子（配列番号１５）を１ｍＭのＩＰＴＧのＩＰＴＧの添加によって誘導した。誘導した培養は振とう装置上に残留したので、誘導３時間後に採取した。細胞は、エッペンドルフ型遠心機を使用して遠心分離（２５℃、１６，０００ｒｐｍ）によって採取した。細胞ペレットは、５．０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）中に０．０１体積で懸濁させ、氷上で４℃に冷却した。細胞は、０．１ミリメートル（ｍｍ）のシリカビーズを含むビーズビーターを使用して破壊した。細胞断片は、遠心分離（４℃で１０分間にわたり１６，０００ｒｐｍ）によって除去した。粗タンパク質抽出物（可溶性Ｇｔｆ－Ｉ（「ＧＴＦ０８７４」酵素）を含有する）を等分し、－８０℃で保管した。
実施例８
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０中でのＧＴＦ－Ｉ酵素ＧＩ：４５０８７４の生成
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）においてＧＩ：４５０８７４（配列番号１４；ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）由来のＧｔｆ－Ｉ）であると同定されたグルコシルトランスフェラーゼ酵素の切断バージョンをコードする遺伝子は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＤＮＡ２．０）中での発現のために最適化されたコドンを使用して合成した。ｐＭＰ５３であると同定されたプラスミドを生成するために、切断グルコシルトランスフェラーゼ（「ＧＴＦ０８７４」；（配列番号１６）をコードする核酸生成物（配列番号１５）をＰＪＥＸＰＲＥＳＳ４０４（登録商標）内にサブクローニングした。ＴＯＰ１０／ｐＭＰ５３であると同定された菌株を生成するために、プラスミドｐＭＰ５３を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０を形質転換させた。Ｇｔｆ－Ｉ酵素「ＧＴＦ０８７４」を発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株ＴＯＰ１０／ｐＭＰ５３の増殖およびＧＴＦ活性の決定は、上述した方法にしたがった。
実施例９
大腸菌（Ｅ．ＣＯＬＩ）ＴＯＰ１０中でのＧＴＦ－Ｓ酵素ＧＩ：４９５８１０４５９の生成
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）においてＧＩ：４９５８１０４５９（配列番号１７；ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０由来のＧｔｆ－Ｓ）であると同定されたグルコシルトランスフェラーゼ酵素の切断バージョンをコードする遺伝子は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＤＮＡ２．０）中での発現のために最適化されたコドンを使用して合成した。ｐＭＰ７９であると同定されたプラスミドを生成するために、切断グルコシルトランスフェラーゼ（「ＧＴＦ０４５９」（配列番号１９）をコードする核酸生成物（配列番号１８）をＰＪＥＸＰＲＥＳＳ４０４（登録商標）内にサブクローニングした。ＴＯＰ１０／ｐＭＰ７９であると同定された菌株を生成するために、プラスミドｐＭＰ７９を使用して大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０を形質転換させた。Ｇｔｆ－Ｓ酵素を発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株ＴＯＰ１０／ｐＭＰ７９の増殖およびＧｔｆ活性の決定は、上述した方法にしたがった。
実施例１０
枯草菌（ＳＵＢＴＩＬＩＳ）ＢＧ６００６中でのＧＴＦ－Ｓ酵素ＧＩ：４９５８１０４５９の生成
ＳＧ１０６７－２は、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０（ＧＩ：４９５８１０４５９）由来のグリコシルトランスフェラーゼＧｔｆ－Ｓ（「ＧＴＦ０４５９」）の切断バージョンを発現する枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現菌株である。枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主ＢＧ６００６菌株は、９つのプロテアーゼ欠失（ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ－ｅｒｍＣ、ｄｅｇＵＨｙ３２、ｏｐｐＡ、ΔｓｐｏＩＩＥ３５０１、ΔａｐｒＥ、ΔｎｐｒＥ、Δｅｐｒ、ΔｉｓｐＡ、Δｂｐｒ、Δｖｐｒ、ΔｗｐｒＡ、Δｍｐｒ－ｙｂｆＪ、ΔｎｐｒＢ）を含有する。全長Ｇｔｆ－Ａは、１，５７０個のアミノ酸を有する。１，３９３個のアミノ酸を備えるＮ末端切断バージョンは、最初に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現に対してコドン最適化され、ＤＮＡ２．０によって合成された。このＮ末端切断Ｇｒｆ－Ｓ（配列番号１９）は、ａｐｒＥプロモーター下で複製バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属発現ｐＨＹＴベクターのＮｈｅＩ部位およびＨｉｎｄＩＩＩ部位内にクローニングし、ベクター上の枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡｐｒＥシグナルペプチドと融合させた。この構築物を最初に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ１０Ｂ内に形質転換させ、アンピシリン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレート上で選択した。このＧｔｆを発現する確証した構築物ｐＤＣＱ９６７を次に枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＧ６００６内に形質転換させ、テトラサイクリン（１２．５μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレート上で選択した。生じた枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現菌株ＳＧ１０６７を精製し、単離培養の１つであるＳＧ１０６７－２をＧｔｆ－Ｓ酵素の起源として使用した。ＳＧ１０６７－２菌株は、最初に１０μｇ／ｍＬのテトラサイクリンを含有するＬＢ内で増殖させ、次に１２．５μｇ／ｍＬのテトラサイクリンを含有するＧｒａｎｔｓＩＩ培地中に継代培養し、２～３日間にわたり３７℃で増殖させた。培養を４℃で３０分間にわたり１５，０００ｇで回転させ、上清を０．２２μｍフィルターに通して濾過した。ＧＴＦ０４５９を含有する濾過した上清をアリコートに分割し、－８０℃で凍結した。
実施例１１
ＧＴＦ－Ｓ ＧＩ：４９５８１０４５９を生成するための枯草菌（ＳＵＢＴＩＬＩＳ）ＳＧ１０６７－２の発酵
ＧＴＦ０４５９（配列番号１９）を発現する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＳＧ１０６７－２菌株（実施例１０）は、従来型のフェドバッチ式発酵によって好気性浸漬条件下で増殖させた。栄養培地は、０～１５％のＨＹ－ＳＯＹ（商標）（大豆粕の高度に可溶性の多目的酵素的加水分解物；Ｋｅｒｒｙ Ｉｎｃ．，Ｂｅｌｏｉｔ，ＷＩ）、５～２５ｇ／Ｌのリン酸ナトリウムおよびリン酸カリウム、０．５～４ｇ／Ｌの硫酸マグネシウムおよびクエン酸、硫酸第一鉄およびマンガンの溶液を含有した。発泡を制御するために、３～５ｍＬ／Ｌの消泡剤であるＦＯＡＭ ＢＬＡＳＴ（登録商標）８８２（食品用ポリエーテルポリオール脱泡剤助剤；Ｅｍｅｒａｌｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ＬＬＣ，Ｃｕｙａｈｏｇａ Ｆａｌｌｓ，ＯＨ）を加えた。２Ｌの発酵に、バッチ中の初期グルコースが検出不能になった時点に５０重量／重量％のグルコース供給材料を供給した。グルコース供給速度は、数時間にわたって上昇させた。発酵は２０％のＤＯおよび３７℃の温度で制御し、４００ｒｐｍの初期撹拌速度で開始した。ｐＨは、５０体積／体積％の水酸化アンモニウムを使用して７．２で制御した。例えば、ｐＨ、温度、空気流量、ＤＯ％などの発酵パラメーターは、全２日間の発酵ランを通して監視した。ランの終了時に培養ブロスを採取し、上清を得るために５℃で遠心した。ＧＴＦ０４５９を含有する上清を次に凍結し、－８０℃で保管した。
実施例１１Ａ
ＧＴＦ０４５９のホモログ遺伝子を発現する枯草菌（ＢＡＣＩＬＬＵＳ ＳＵＢＴＩＬＩＳ）菌株の構築
ＧＴＦ０４５９に相同である配列を同定するために検索を実施した。ＧＴＦ０４５９配列から始めて、２０１４年９月８日現在の非冗長ＮＣＢＩタンパク質データベースに対してＢＬＡＳＴ検索を実施することによって相同配列が同定された。ＢＬＡＳＴランは、１ｅ－１０のｅ値カットオフを使用して１，１００個の推定ホモログを同定した。長さが少なくとも１，０００アミノ酸のアラインメントについてフィルタリングして、アミノ酸配列同一性パーセンテージに基づいてソーティングした後に、密接に関連している、つまりＧＴＦ０４５９との９０％を超えるアミノ酸配列同一性を有している１３個のホモログが見いだされた。同定されたホモログを次に極めて高度に関連する配列をアラインメントするための標準配列アラインメントパッケージであるＣＬＵＳＴＡＬＷを使用することによってＧＴＦ０４５９に対して整列させた。ホモログ配列は、１，５７０残基の整列領域内でＧＴＦ０４５９のアミノ酸配列とおよそ９６～９７％同一である。整列領域は、ＧＴＦ０４５９ホモログ内ではアミノ酸１位～１，５７０位まで、およびＧＴＦ０４５９ホモログ内では１位～１，５８１位まで伸長する。１３個の同定されたＧＴＦ０４５９ホモログを過ぎると、次に密接なタンパク質はＧＴＦ０４５９または１３個の同定されたホモログのいずれかとの整列領域内で約５５％のアミノ酸配列同一性しか共有していない。下記の表１に提供したＧＴＦ０４５９およびホモログ（配列番号８６および８７～１１１の間の奇数配列番号）および２個の非ホモログ（＜５４％のアミノ酸配列同一性）（配列番号１１３、１１５）のＮ末端可変領域切断タンパク質をコードするＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔによって合成された。合成遺伝子は、ａｐｒＥプロモーター下で枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）統合的発現プラスミドｐ４ＪＨのＮｈｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位内にクローニングし、ベクター上の枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡｐｒＥシグナルペプチドと融合させた。一部の場合には、それらはシグナルペプチドを含まないａｐｒＥプロモーター下で枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）統合的発現プラスミドｐ４ＪＨのＳｐｅＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位内にクローン化した。これらの構築物を最初に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ１０Ｂ内に形質転換させ、アンピシリン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレート上で選択した。特定ＧＴＦを発現する確証した構築物を次に９つのプロテアーゼ欠失（ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ－ｅｒｍＣ、ｄｅｇＵＨｙ３２、ｏｐｐＡ、ΔｓｐｏＩＩＥ３５０１、ΔａｐｒＥ、ΔｎｐｒＥ、Δｅｐｒ、ΔｉｓｐＡ、Δｂｐｒ、Δｖｐｒ、ΔｗｐｒＡ、Δｍｐｒ－ｙｂｆＪ、ΔｎｐｒＢ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主内に形質転換させ、クロラムフェニコール（５μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレート上で選択した。５μｇ／ｍＬのクロラムフェニコールを含むＬＢプレート上で増殖させたコロニーは、２５μｇ／ｍＬのクロラムフェニコールを含むＬＢプレート上で数回画線した。生じた枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現菌株を最初に５μｇ／ｍＬのクロラムフェニコールを含むＬＢプレート上で増殖させ、次に２～３日間にわたり３０℃で増殖させたＧｒａｎｔｓｌｌ培地内に継代培養した。培養を４℃で３０分間にわたり１５，０００ｇで回転させ、上清を０．２２μｍフィルターに通して濾過した。濾過した上清をアリコートに分割し、－８０℃で凍結した。
Figure 0006997706000005
実施例１１Ｂ
ＧＴＦ０４５９のホモログ遺伝子のＣ末端切断を発現する枯草菌（ＢＡＣＩＬＬＵＳ ＳＵＢＴＩＬＩＳ）菌株の構築
グルコシルトランスフェラーゼは、通常はＮ末端可変ドメイン、中央触媒ドメインおよび複数のグルカン結合ドメインを含有するＣ末端ドメインを含有する。実施例１１Ａにおいて同定および発現させたＧＴＦ０４５９ホモログは、全部がＮ末端可変領域切断を含有していた。本実施例では、ＧＴＦ０４５９およびＧＴＦ０４５９ホモログ（上記の表１に記載のＧＩ番号における最後の４文字によって同定される）の個々のＣ末端切断を発現する枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株の構築について記載する。
Ｔ１（アミノ酸１７９位～１，０８６位に伸長する）、Ｔ２（アミノ酸１７９位～１，１２５位に伸長する）、Ｔ４（アミノ酸１７９位～１，１８２位に伸長する）、Ｔ５（１７９位～１，１８３位に伸長する）およびＴ６（アミノ酸１７９位～１，１９１位に伸長する）Ｃ末端切断は、実施例１１Ａの表１に列挙したＮ末端切断を含有するＧＴＦ０９７４、ＧＴＦ４３３６およびＧＴＦ４４９１グルコシルトランスフェラーゼから作成した。ＧＴＦ０４５９（ＧＴＦ３２７９）のＴ５およびＴ６切断もまた生成した。Ｔ５切断はさらにＧＴＦ３８０８からも作成した。配列表に提供した切断の配列についてのＤＮＡおよびタンパク質の配列番号は、下記の表２に列挙した。ＧＴＦ０４５９をコードするＤＮＡ断片、Ｎ末端切断ホモログおよびＣ末端切断は、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔによって合成遺伝子プラスミドからＰＣＲ増幅され、シグナルペプチドを含まないａｐｒＥプロモーター下で枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）統合的発現プラスミドｐ４ＪＨのＳｐｅＩ部位およびＨｉｎｄＩＩＩ部位内にクローニングした。これらの構築物を最初に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ１０Ｂ内に形質転換させ、アンピシリン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレート上で選択した。特定ＧＴＦを発現する確証した構築物を次に９つのプロテアーゼ欠失（ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ－ｅｒｍＣ、ｄｅｇＵＨｙ３２、ｏｐｐＡ、ΔｓｐｏＩＩＥ３５０１、ΔａｐｒＥ、ΔｎｐｒＥ、Δｅｐｒ、ΔｉｓｐＡ、Δｂｐｒ、Δｖｐｒ、ΔｗｐｒＡ、Δｍｐｒ－ｙｂｆＪ、ΔｎｐｒＢ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主内に形質転換させ、クロラムフェニコール（ＣＭ。５μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレート上で選択した。５μｇ／ｍＬのクロラムフェニコールを含むＬＢプレート上で増殖させたコロニーは、２５μｇ／ｍＬのクロラムフェニコールを含むＬＢプレート上で数回画線した。生じた枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現菌株を最初に５μｇ／ｍＬのクロラムフェニコールを含むＬＢプレート上で増殖させ、次に２～３日間にわたり３０℃で増殖させたＧｒａｎｔｓｌｌ培地内に継代培養した。培養を４℃で３０分間にわたり１５，０００ｇで回転させ、上清を０．２２μｍフィルターに通して濾過した。濾過した上清をアリコートに分割し、－８０℃で凍結した。
菌株のＧＴＦ活性は、３件の個別実験においてＰＡＨＢＡＨアッセイによって分析した。実験間には些細な偏差があるために、表２には活性が測定された実験に沿って枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主内の切断酵素の活性を列挙している。Ｔ１、Ｔ２およびＴ６切断の大多数は酵素の活性を減少させたが、他方Ｔ４およびＴ５のＣ末端切断は各Ｎ末端だけの切断（ＮＴ）に比較して類似の活性を維持した。ホモログおよびホモログのＣ末端切断は活性を維持し、ＧＴＦ０４５９に類似する可溶性α－グルカン繊維を生成したが（実施例３９Ａおよび３９Ｂを参照されたい）、これは切断内に保持された触媒ドメイン内の残基が繊維を生成することができる酵素に特徴的である可能性がある。可溶性α－グルカン繊維を生成することに関係する可能性がある触媒ドメイン内の特定のアミノ酸残基を同定するために、本出願者らは、結合リガンドの８Å（オングストローム）内の残基を同定するために３種のグルコシルトランスフェラーゼの触媒ドメインの結晶構造（ＰＤＢ識別子：３ＡＩＢ、３ＡＩＣおよび３ＨＺ３）を分析した。５７個の残基がその基準に合致した。ＧＴＦ０４５９内の対応する５７個のアミノ酸および同定されたホモログそれぞれに基づいて１つのモチーフが生成された。次にこのモチーフを使用して、ＧＴＦ０４５９と同定されたホモログとの触媒ドメインにおける変動性を把握するためのコンセンサス配列を生成した。コンセンサス配列は、配列番号１５３として提供される。
Figure 0006997706000006
実施例１１Ｃ
ＧＴＦ０４５９のホモログもしくはＧＴＦ０４５９ホモログのＣ末端切断を発現する枯草菌（ＢＡＣＩＬＬＵＳ ＳＵＢＴＩＬＩＳ）菌株の大豆加水分解物培地を使用した発酵
各ＧＴＦを発現する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、好気性浸漬条件下で従来型のフェドバッチ式発酵によって増殖させた。栄養培地は、１．７５～７％の大豆加水分解物（ＳｅｎｓｉｅｎｔもしくはＢＤ）、５～２５ｇ／Ｌのリン酸ナトリウムおよびリン酸カリウム、０．５～４ｇ／Ｌの硫酸マグネシウムおよび３～１０ｇ／Ｌのクエン酸、硫酸第一鉄およびマンガンの溶液を含有していた。発泡を制御するために、消泡剤であるＦｏａｍｂｌａｓｔ ８８２を２～４ｍＬ／Ｌで添加した。２Ｌもしくは１０Ｌの発酵に、バッチ中の初期グルコースが検出不能になった時点に５０重量／重量％のグルコース供給材料を供給した。グルコース供給速度は、数時間にわたって上昇させた。発酵は２０％のＤＯおよび３０℃の温度で制御し、４００ｒｐｍの初期撹拌速度で開始した。ｐＨは、５０体積／体積％の水酸化アンモニウムを使用して７．２で制御した。例えば、ｐＨ、温度、空気流量、ＤＯ％などの発酵パラメーターは、全２～３日間の発酵ランを通して監視した。ランの終了時に培養ブロスを採取し、ＧＴＦを含有する上清を得るために遠心した。濾過した上清を等分し、－８０℃で凍結して保管した。
実施例１１Ｄ
ＧＴＦ０４５９のホモログもしくはＧＴＦ０４５９ホモログのＣ末端切断を発現する枯草菌（ＢＡＣＩＬＬＵＳ ＳＵＢＴＩＬＩＳ）菌株のコーンスティープ固体培地を使用した発酵
各ＧＴＦを発現する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）は、好気性浸漬条件下で従来型のフェドバッチ式発酵によって増殖させた。栄養培地は、０．５～２．５％のコーンスティープ固体（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）、５～２５ｇ／Ｌのリン酸ナトリウムおよびリン酸カリウム、０．３～０．６Ｍの硫酸第一鉄、塩化マンガンおよび塩化カルシウムの溶液、０．５～４ｇ／Ｌの硫酸マグネシウムならびに０．０１～３．７ｇ／Ｌの硫酸亜鉛、硫酸銅、ホウ酸およびクエン酸の溶液を含有していた。発泡を制御するために、２～４ｍＬ／Ｌの消泡剤であるＦｏａｍｂｌａｓｔ ８８２を添加した。２Ｌの発酵に、バッチ中の初期グルコースが検出不能になった時点に５０重量／重量％のグルコース供給材料を供給した。グルコース供給速度は、数時間にわたって上昇させた。発酵は２０％のＤＯおよび３０℃もしくは３７℃いずれかの温度で制御し、４００ｒｐｍの初期撹拌速度で開始した。ｐＨは、５０体積／体積％の水酸化アンモニウムを使用して７．２で制御した。例えば、ｐＨ、温度、空気流量、ＤＯ％などの発酵パラメーターは、全２～３日間の発酵ランを通して監視した。ランの終了時に培養ブロスを採取し、ＧＴＦを含有する上清を得るために遠心した。次に上清を－８０℃で凍結して保管した。
実施例１２
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）中でのムタナーゼＭＵＴ３２６４ ＧＩ：２５７１５３２６４の生成
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）においてＧＩ：２５７１５３２６４（配列番号２２）であると同定されたパエニバチルス・フミクス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ＮＡ１１２３由来のムタナーゼをコードする遺伝子は、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ ＵＳＡ Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）によって合成された。タンパク質配列（「ＭＵＴ３２６４」；配列番号２１）をコードするヌクレオチド配列（配列番号２０）をｐＥＴ２４ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ；Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）内にサブクローニングした。生じたプラスミドは、ＳＧＺＹ６と同定された菌株を生成するために大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）内に形質転換させた。この菌株を２２０ｒｐｍで振とうしながら３７℃で約０．７のＯＤ６００へ増殖させ、次にこの温度を１８℃へ低下させ、ＩＰＴＧを０．４ｍＭの最終濃度になるように添加した。培養を一晩増殖させ、その後に４，０００ｇでの遠心分離によって採取した。６００ｍＬの培養由来の細胞ペレットを２２ｍＬの５０ｍＭのＫＰｉバッファー（ｐＨ７．０）中に懸濁させた。細胞は、Ｆｒｅｎｃｈ Ｃｅｌｌ Ｐｒｅｓｓ（１５，０００ｐｓｉ（１０３．４ＭＰａ）で２回の通過）によって破砕した；細胞残屑は４０分間にわたる遠心分離（ＳＯＲＶＡＬＬ（商標）ＳＳ３４ローター、１３，０００ｒｐｍで；Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）によって除去した。上清は、「ｍｕｔ３２６４」ムタナーゼの発現を確証するためにＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、活性アッセイのためには粗抽出物を使用した。ムタナーゼ遺伝子を含まないコントロール菌株は、ｐＥＴ２４ａベクターを用いて大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞を形質転換させることによって作成した。
実施例１３
枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株ＢＧ６００６株ＳＧ１０２１－１中でのムタナーゼＭＵＴ３２６４ ＧＩ：２５７１５３２６４の生成
ＳＧ１０２１－１は、発酵大豆の納豆から単離されたパエニバチルス・フミクス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ＮＡ１１２３由来のムタナーゼを発現する枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ムタナーゼ発現菌株である。枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）中での組換え発現のために、天然シグナルペプチドをバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属ＡｐｒＥシグナルペプチド（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＦＧ２８２０８；配列番号２５）と取り換えた。ＭＵＴ３２６４（配列番号２３）をコードするポリヌクレオチドは、配列番号２４として提供されたバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属発現ＭＵＴ３２６４をコードするＡｐｒＥシグナルペプチド（配列番号２５）の下流で機能的に結合された。ポリヒスチジンタグをコードする配列の前に終止コドンを提供するために、Ｃ末端リシンを欠失させた。
枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主ＢＧ６００６菌株は、９つのプロテアーゼ欠失（ａｍｙＥ：：ｘｙｌＲＰｘｙｌＡｃｏｍＫ－ｅｒｍＣ、ｄｅｇＵＨｙ３２、ｏｐｐＡ、ΔｓｐｏＩＩＥ３５０１、ΔａｐｒＥ、ΔｎｐｒＥ、Δｅｐｒ、ΔｉｓｐＡ、Δｂｐｒ、Δｖｐｒ、ΔｗｐｒＡ、Δｍｐｒ－ｙｂｆＪ、ΔｎｐｒＢ）を含有した。野生型ｍｕｔ３２６４（ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）ＧＩ：２５７１５３２６４の下で見いだされる）は、ＳｉｇｎａｌＰ ４．０プログラム（Ｎｏｒｄａｈｌ ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，８：７８５－７８６）によって天然シグナルペプチドであると推測されたＮ末端３３アミノ酸を備える１，１４６個のアミノ酸を有する。天然シグナルペプチドを含まない成熟ｍｕｔ３２６４は、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔによって合成され、ａｐｒＥプロモーター下で複製バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属発現ｐＨＹＴベクターのＮｈｅＩ部位およびＨｉｎｄＩＩＩ部位内にクローニングし、ベクター上の枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＡｐｒＥシグナルペプチド（配列番号２５）と融合させた。この構築物を最初に大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ１０Ｂ内に形質転換させ、アンピシリン（１００μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレートを上で選択した。この確証構築物ｐＤＣＱ９２１を次に枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＢＧ６００６内に形質転換させ、テトラサイクリン（１２．５μｇ／ｍＬ）を含むＬＢプレート上で選択した。生じた枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）発現菌株ＳＧ１０２１を精製し、単一コロニー単離体ＳＧ１０２１－１をムタナーゼｍｕｔ３２６４の起源として使用した。ＳＧ１０２１－１菌株は、最初に１０μｇ／ｍＬのテトラサイクリンを含有するＬＢ内で増殖させ、次に１２．５μｇ／ｍＬのテトラサイクリンを含有するＧｒａｎｔｓＩＩ培地中にサブクローニングし、２～３日間にわたり３７℃で増殖させた。培養は４℃で３０分間にわたり１５，０００ｇで回転させ、上清を０．２２μｍフィルターに通して濾過した。ＭＵＴ３２６４を含有する濾過した上清をアリコートに分割し、－８０℃で凍結した。
実施例１４
ムタナーゼＭＵＴ３３２５ ＧＩ：２１２５３３３２５の生成
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）においてＧＩ：２１２５３３３２５であると同定されたペニシリウム・マルネフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４（商標）ムタナーゼをコードする遺伝子は、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）によって合成された。タンパク質配列（ＭＵＴ３３２５；配列番号２７）をコードするヌクレオチド配列（配列番号２６）は、選択のためにアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）アセトアミダーゼを用いて、ＣＢＨＩプロモーターおよびターミネーターの制御下で、トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）中で関心対象の遺伝子を発現させるために設計されたベクターであるプラスミドｐＴｒｅｘ３（配列番号５９）内にＳａｃＩＩおよびＡｓｃＩ制限部位でサブクローニングした。生じたプラスミドは、上記の一般的方法の項に記載したようにバイオリスティック注入によってＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）内に形質転換させた。バイオリスティック形質転換の詳細な方法は、国際公開第２００９／１２６７７３（Ａ１）号パンフレットに記載されている。安定性クローンＴＲＭ０５－３由来の胞子を含む１ｃｍ２の寒天プラグを使用して生成培地（下記で記載する）に接種した。この培養を２８℃および２２０ｒｐｍで４～５日間にわたり振とうフラスコ内で増殖させた。分泌タンパク質を採取するために、細胞塊を最初に１０分間にわたる４，０００ｇでの遠心分離によって除去し、上清を０．２μＭの滅菌フィルターに通して濾過した。ムタナーゼＭＵＴ３３２５の発現は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって確証した。
生成培地成分を下記に列挙する。
Figure 0006997706000007
Figure 0006997706000008
実施例１５
発酵によるＭＵＴ３３２５の生成
発酵種培養は、ＭＵＴ３３２５発現菌株ＴＲＭ０５－３の１．０ｍＬの凍結胞子懸濁液を含む２Ｌのバッフル付きフラスコ内の０．５Ｌの最小培地を接種することによって調製した（実施例１４）（最小培地は、５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、４．５ｇ／Ｌの一塩基性リン酸カリウム、１．０ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水化物、１４．４ｇ／Ｌのクエン酸無水物、１ｇ／Ｌの塩化カルシウム二水化物、２５ｇ／Ｌのグルコースならびに０．４３７５ｇ／Ｌのクエン酸、０．５ｇ／Ｌの硫酸鉄七水化物、０．０４ｇ／Ｌの硫酸亜鉛七水化物、０．００８ｇ／Ｌの硫酸銅五水化物、０．００３５ｇ／Ｌの硫酸マンガン一水和物および０．００２ｇ／Ｌのホウ酸を含む微量元素から構成された。ｐＨは５．５であった）。この培養を３２℃でおよび１７０ｒｐｍで４８時間増殖させ、その後に１４Ｌの発酵槽内の８Ｌの生成培地に移した。生成培地は、７５ｇ／Ｌのグルコース、４．５ｇ／Ｌの一塩基性リン酸カリウム、０．６ｇ／Ｌの塩化カルシウム脱水物、１．０ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム七水化物、７．０ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、０．５ｇ／Ｌのクエン酸無水物、０．５ｇ／Ｌの硫酸鉄七水化物、０．０４ｇ／Ｌの硫酸亜鉛七水化物、０．００１７５ｇ／Ｌの硫酸銅五水和物、０．００３５ｇ／Ｌの硫酸マンガン一水和物、０．００２ｇ／Ｌのホウ酸および０．３ｍＬ／Ｌのｆｏａｍ ｂｌａｓｔ ８８２から構成された。
発酵は、最初に２４時間にわたり３４℃、５００ｒｐｍでグルコース上でのバッチ増殖によりランした。２４時間の終了時、温度を２８℃に低下させ、撹拌速度を１，０００ｒｐｍへ増加させた。次に発酵槽にグルコースおよびソホロース（６２重量／重量％）の混合物を０．０３０ｇのグルコース－ソホロース固体／ｇ（バイオマス）／時の特定供給速度で供給した。ランの終了時に、バイオマスを遠心分離によって除去し、ムタナーゼを含有する上清は１０ｋＤ分子量カットオフ限外濾過カートリッジ（ＵＦＰ－１０－Ｅ－３５；ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌｆｏｎｔ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用して限外濾過によって約１０倍に濃縮した。濃縮タンパク質は－８０℃で保管した。
実施例１６
ムタナーゼＭＵＴ６５０５（ＧＩ：２５９４８６５０５）の生成
ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）においてＧＩ：２５９４８６５０５であると同定されたアスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）ＦＧＳＣ Ａ４ムタナーゼをコードするポリヌクレオチドは、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）によって合成された。タンパク質配列（ＭＵＴ６５０５；配列番号２９）をコードするヌクレオチド配列（配列番号２８）は、選択のためにＡ．ニガー（ｎｉｇｅｒ）アセトアミダーゼを用いて、ＣＢＨＩプロモーターおよびターミネーターの制御下で、Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）中で関心対象の遺伝子を発現させるために設計されたベクターであるプラスミドｐＴｒｅｘ３内にサブクローニングした。生じたプラスミドは、バイオリスティック注入によってＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）内に形質転換させた。安定性クローン由来の胞子を含む１ｃｍ２の寒天プラグを使用して、生成培地（５ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、３３ｇ／ＬのＰＩＰＰＳ；９ｇ／ＬのＢＤ Ｂａｃｔｏカサミノ酸、４．５ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、１．３２ｇ／ＬのＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ、１ｇ／ＬのＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ、４．２５ｇ／ＬのＮａＯＨペレット、１．６ｇ／Ｌのラクトース、０．０１％の消泡剤２０４、０．４８ｇ／Ｌのクエン酸．Ｈ２Ｏ、０．５ｇ／ＬのＦｅＳＯ４．７Ｈ２Ｏ、０．０４ｇ／ＬのＺｎＳＯ４．７Ｈ２Ｏ、０．００８ｇ／ＬのＣｕＳＯ４．５Ｈ２Ｏ、０．００３６ｇ／ＬのＭｎＳＯ４．Ｈ２Ｏおよび０．００２ｇ／Ｌのホウ酸（ｐＨ５．５））に接種した。この培養を２８℃および２２０ｒｐｍで４～５日間にわたり振とうフラスコ内で増殖させた。分泌タンパク質を採取するために、細胞塊を最初に１０分間にわたる４，０００ｇでの遠心分離によって除去し、上清を０．２μＭの滅菌フィルターに通して濾過した。ＭＵＴ６５０５の発現は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって確証した。ＭＵＴ６５０５を含有する粗タンパク質抽出物は、－８０℃で保管した。
実施例１７
Ｈ．タワ（ＴＡＷＡ）、Ｔ．コニラングブラ（ＫＯＮＩＬＡＮＧＢＲＡ）およびＴ．リーゼイ（ＲＥＥＳＥＩ）ムタナーゼの生成
下記では、ヒポクレア・タワ（Ｈｙｐｏｃｒｅａ ｔａｗａ）（配列番号５３および５４）、トリコデルマ・コニラングブラ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）（配列番号５５および５６）ならびにトリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）（配列番号５７および５８）由来のムタナーゼについての各ポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列を得るために使用した方法について記載する。
ゲノムＤＮＡの単離
トリコデルマ・リーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ）５９２、トリコデルマ・コニラングブラ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）およびヒポクレア・タワ（Ｈｙｐｏｃｒｅａ ｔａｗａ）の真菌培養は、３０ｍＬの無菌ＹＥＧブロスを生物学的フード内の３個の２５０ｍＬのバッフル付きエルレンマイヤー振とうフラスコに添加することによって調製した（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．への欧州特許第２６４４１８７（Ａ１）号明細書および対応する米国特許出願公開第２０１１－０２２３１１７（Ａ１）号明細書を参照されたい）。１３１インチ（約３３３ｃｍ）平方を切断し、無菌プラスチックループを使用して各真菌培養プレートから除去し、適切な培養フラスコ内に配置した。接種されたフラスコは、次に一晩増殖させるために２８℃の振とう型インキュベーター内に配置した。
Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）、Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）およびＨ．タワ（ｔａｗａ）培養を振とう型インキュベーターから取り出し、各フラスコの内容物を別個の無菌５０ｍＬのザルスタットチューブ内に注入した。ザルスタットチューブを卓上型遠心分離機内に配置し、真菌菌糸体をペレット化するために４，５００ｒｐｍで１０分間回転させた。上清を廃棄し、大きなループの各菌糸体サンプルは、溶解マトリックス（ＦＡＳＴＤＮＡ（商標））を含有する別個のチューブに移した。ゲノムＤＮＡは、ＦＡＳＴＤＮＡ（商標）キット（Ｑｂｉｏｇｅｎｅ、現在はＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎｔａ Ａｎａ，ＣＡ）を使用して製造業者の藻類、真菌および酵母についてのプロトコルにしたがって採取した菌糸体から抽出した。ホモジナイゼーション時間は２５秒間であった。ゲノムＤＮＡ抽出物の量および品質は、ゲル電気泳動法によって決定した。
ＰＣＲによってα－グルカナーゼポリペプチドを入手する
Ａ． Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）
推定α－１，３グルカナーゼ遺伝子は、相同性によってＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）ゲノム（ＪＧＩ）内で同定された。Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）のためのＰＣＲプライマーは、推定ホモログＤＮＡ配列に基づいて設計した。縮重ＰＣＲプライマーは、Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）もしくはＨ．タワ（ｔａｗａｔａｗａ）に対しては推定Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）タンパク質配列および他の公表されたα－１，３グルカナーゼタンパク質配列に基づいて設計した。
Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）特異的ＰＣＲプライマー：
ＳＫ５９２：５’－ ＣＡＣＣＡＴＧＴＴＴＧＧＴＣＴＴＧＴＣＣＧＣ－３’（配列番号３０）
ＳＫ５９３：５’－ＴＣＡＧＣＡＧＴＡＣＴＧＧＣＡＴＧＣＴＧ－３’（配列番号３１）
Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）菌株ＲＬ－Ｐ３７（米国特許第４，７９７，３６１（Ａ）号明細書；ＮＲＲＬ－１５７０９，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＵＳＤＡ，Ｐｅｏｒｉａ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）から抽出したゲノムＤＮＡ由来の推定α－１，３グルカナーゼを増幅させるために使用したＰＣＲ条件は下記のとおりであった：
１． ２分間にわたり９４℃、
２． ３０秒間にわたり９４℃、
３． ３０秒間にわたり５６℃、
４． ３分間にわたり７２℃、
５． ２４サイクルにわたり工程２まで戻る、
６． ４℃で保持する。
反応サンプルは、２ｍＬのＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）ＲＬ－Ｐ３７ゲノムＤＮＡ、１０ｍＬの１０×バッファー、２ｍＬの１０ｍＭのｄＮ ＴＰ混合物、１ｍＬのプライマーＳＫ５９２およびＳＫ５９３（２０ｍＭ）、１ｍＬのＰｆｕＵｌｔｒａ高忠実度ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）および８３ｍＬの蒸留水を含有していた。
Ｂ． Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）およびＨ．タワ（ｔａｗａ）
初期ＰＣＲ反応は、数個の相同性配列のタンパク質アラインメントから設計した縮重プライマーを使用した。５’および３’末端の近くでアニーリングさせるために設計した縮重プライマーのプライマリーセットは、類似の配列をα－１，３グルカナーゼの配列に増幅させるための最初のＰＣＲ反応において使用した。最初のクローニングのための縮重プライマー：
Ｈ．タワ（ｔａｗａ）およびＴ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）：
ＭＡ１Ｆ：５’－ＧＴＮＴＴＹＴＧＹＣＡＹＴＴＹＡＴＧＡＴ－３’（配列番号３２）
ＭＡ２Ｆ：５’－ＧＴＮＴＴＹＴＧＹＡＣＡＹＴＴＹＡＴＧＡＴＨＧＧＮＡＴ－３’（配列番号３３）
ＭＡ４Ｆ：５’－ＧＡＹＴＡＹＧＡＹＧＡＹＧＡＹＡＴＧＣＡＲＣＧ－３’（配列番号３４）
ＭＡ５Ｆ：５’－ＧＴＲＣＡＹＴＴＲＣＡＩＧＧＩＣＣＩＧＧＩＧＧＲＣＡＲＴＡＮＣＣ－３’（配列番号３５）
ＭＡ６Ｒ：５’－ＹＴＣＩＣＣＩＧＧＮＡＧＮＧＧＲＣＡＮＣＣＲＴＴ－３’（配列番号３６）
ＭＡ７Ｒ：５’－ＲＣＡＲＴＡＹＴＧＲＣＡＩＧＣＹＧＴＹＧＧＹＧＧＲＣＡＲＴＡ－３’（配列番号３７）
これらのＰＣＲ反応の生成物を次に初期ＰＣＲ断片の生成物内に付着するように設計されたプライマーを使用するネステッドＰＣＲにおいて、同一増幅条件下で使用した。最初のクローニングのための特異的プライマー：
Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）：
ＴＰ１Ｓ：５’－ＣＣＣＣＣＴＧＧＣＣＡＡＧＴＡＴＧＴＧＴ－３’（配列番号３８）
ＴＰ２Ａ：５’－ＧＴＡＣＧＣＡＡＡＧＴＴＧＡＧＣＴＧＣＴ－３’（配列番号３９）
ＴＰ３Ｓ：５’－ＡＧＣＡＣＡＴＣＧＣＴＧＡＴＧＧＡＴＡＴ－３’（配列番号４０）
ＴＰ３Ａ：５’－ＡＡＧＴＡＴＡＣＧＴＴＧＣＴＴＣＣＧＧＣ－３’（配列番号４１）
ＴＰ４Ｓ：５’－ＣＴＧＡＣＧＡＴＣＧＧＡＣＴＲＣＡＣＧＴ－３’（配列番号４２）
ＴＰ４Ａ：５’－ＣＧＴＴＧＴＣＧＡＣＧＴＡＧＡＧＣＴＧＴ－３’（配列番号４３）

Ｈ．タワ（ｔａｗａ）：
ＨＰ２Ａ：５’－ＡＣＧＡＴＣＧＧＣＡＧＡＧＴＣＡＴＡＧＧ－３’（配列番号４４）
ＨＰ３Ｓ：５’－ＡＴＣＧＧＡＴＴＧＣＡＴＧＴＣＡＣＧＡＣ－３’（配列番号４５）
ＨＰ３Ａ：５’－ＴＡＣＡＴＣＣＡＧＡＣＣＧＴＣＡＣＣＡＧ－３’（配列番号４６）
ＨＰ４Ｓ：５’－ＡＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＧＣＧＧＴＡＴＣ－３’（配列番号４７）
ＨＰ４Ａ：５’－ＴＣＡＴＴＡＴＣＣＣＡＧＧＣＣＴＡＡＡＡ－３’（配列番号４８）
ＰＣＲ産物のゲル電気泳動法を使用して、予想サイズの断片が増幅させられたかどうかを決定した。予想サイズの単一ネステッドＰＣＲ産物は、ＱＩＡｑｕｉｃｋ ＰＣＲ精製キット（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して精製した。さらに、予想サイズ産物を切除し、複数の産物バンドを含有するアガロースゲルから抽出し、ＱｌＡｑｕｉｃｋ Ｇｅｌ抽出キット（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して精製した。
形質転換／単離体スクリーニング／プラスミド抽出
ＰＣＲ産物は、製造業者（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）の仕様書にしたがってＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＺＥＲＯ ＢＬＵＮＴ（登録商標）ＴＯＰＯ（登録商標）ＰＣＲクローニングキットを使用してクローニングベクター内に挿入した。ベクターは次に、製造業者の勧告にしたがってＯＮＥ ＳＨＯＴ（登録商標）ＴＯＰ１０化学的コンピテント大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞内に形質転換させ、５０ｐｐｍのカナマイシンを含有するＬＢプレート上に塗り広げた。これらのプレートを３７℃のインキュベーター内で一晩インキュベートした。
ベクターおよびＤＮＡインサートを含有している形質転換体を選択するために、コロニーを粗プラスミド抽出のためのプレートから選択した。５０ｍＬのＤＮＡ抽出溶液（１００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、２ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７））を清潔な１．５ｍＬのエッペンドルフチューブに添加した。生物学的フード内で、各ＴＯＰＯ（登録商標）形質転換クローンの７～１０個の個別コロニーにナンバリングし、取り上げ、抽出溶液中に再懸濁させた。化学的フード内で、５０ｍＬのフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコールを各サンプルに加え、十分にボルテックスミキサーにかけた。チューブは５分間にわたり最高速度で微量遠心し、その後に２０ｍＬの上方水層を除去し、清潔なＰＣＲチューブ内に配置した。１ｍＬのＲＮａｓｅ（２ｍｇ／ｍＬ）を次に添加し、サンプルを混合し、３７℃で３０分間にわたりインキュベートした。次に全サンプル容積をゲル上でランし、空ベクターとのサイズの相違に基づいてＴＯＰＯ（登録商標）ベクター内のインサートの存在を決定した。形質転換体コロニーが同定されると、それらのクローンをプレートから擦り取り、５ｍＬのＬＢ／カナマイシン培地（０．０００１％）を含有する別個の１５ｍＬチューブを接種するために使用した。培養を３７℃の振とう式インキュベーター内に一晩配置した。
サンプルをインキュベーターから取り出し、Ｓｏｒｖａｌ遠心分離機を使用して６分間にわたり６，０００ｒｐｍで遠心した。ＱＩＡｐｒｅｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（ＱＩＡＧＥＮ）およびプロトコルを使用してプラスミドＤＮＡを単離し、これを次にインサートの存在を確証するために消化した。使用した制限酵素は、インサート配列中および周囲に存在する部位に依存していた。ゲル電気泳動法を使用して、断片サイズを決定した。適切なＤＮＡサンプルをシークエンシングのために提出した（Ｓｅｑｕｅｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）。
３’末端および５’末端のクローニング
全ＤＮＡ断片をシークエンシングした。配列を整列および比較して、ＡＬＩＧＮＸ（登録商標）およびＣＯＮＴＩＧＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）（Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標）ｓｕｉｔｅ，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用してヌクレオチドおよびアミノ酸同一性を決定した。公知の配列から外方向に伸長させることによってＨ．タワ（ｔａｗａ）およびＴ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）由来の各不完全断片の３’末端および５’部分を増幅させるために、特異的プライマーを設計した。それぞれが以前のプライマーセットの増副産物内でそれぞれネスト化された少なくとも３個の特異的プライマーを各鋳型に対して設計した。５’配列および３’配列の増幅は、ＬＡ ＰＣＲ Ｉｎ ｖｉｔｒｏクローニングキット（タカラバイオ株式会社、日本国大津市）を含むネステッドプライマーセットを使用して実施した。
この増幅のために新鮮ゲノムＤＮＡを調製した。Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）およびＨ．タワ（ｔａｗａ）は、２５０ｍＬのバッフル付きエルレンマイヤーフラスコ内に適切な胞子無形成真菌プレート培養の１平方インチ切片を含む３０ｍＬのＹＥＧブロスを接種することによって調製した。フラスコを２８℃の振とう式インキュベーター内で一晩インキュベートした。培養は、１０分間にわたり４，５００ｒｐｍで５０ｍＬのザルスタットチューブ内での遠心分離によって採取した。上清を廃棄し、菌糸体は、－８０℃の冷凍室内で一晩保存した。凍結菌糸体を次に数片のドライアイスと一緒にコーヒーグラインダー内に配置した。グラインダーは、全混合物が粉末様稠度を有するまでランした。次に粉末を風乾させ、１０ｍＬのＥＡＳＹ－ＤＮＡ（商標）キット溶液Ａ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ．）を含有する無菌の５０ｍＬのザルスタットチューブに移し、製造業者のプロトコルにしたがった。抽出から収集したゲノムＤＮＡの濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ分光光度計を使用して測定した。ＬＡ ＰＣＲ Ｉｎ ｖｉｔｒｏクローニングキットカセットは、公知のＤＮＡ配列内の特定の制限部位の非存在に基づいて選択し、製造業者の取扱説明書にしたがった。最初のＰＣＲランのためには、１ｍＬのライゲーションＤＮＡサンプルを３３．５ｍＬの無菌蒸留水中に希釈した。サンプルおよび所望の末端断片に依存して、異なるプライマーを使用した。５’末端に対しては、Ｈ．タワ（ｔａｗａ）およびＴ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）それぞれのためのプライマーＨＰ４ＡおよびＴＰ３Ａを使用したが、３’末端に対してはＨ．タワ（ｔａｗａ）およびＴ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）のためのＨＰ４ＳおよびＴＰ３Ｓを使用した。ＰＣＲ混合物は、３４．５ｍＬの希釈ライゲーションＤＮＡ溶液、５ｍＬの１０×のＬＡバッファーＩＩ（Ｍｇ２＋）、８ｍＬのｄＮＴＰ混合物、１ｍＬのカセットプライマー１、１ｍＬの特異的プライマー１（サンプルおよび末端断片に依存して）および０．５ｍＬのＴａｋａｒａ ＬＡ Ｔａｑポリメラーゼを添加することによって調製した。ＰＣＲチューブを次にサーモサイクラー内に配置し、下記に列挙したプロトコル：
１． １０分間にわたり９４℃、
２． ３０秒間にわたり９４℃、
３． ３０秒間にわたり５５℃、
４． ４分間にわたり７２℃、工程２まで３０回戻る、
５． ４℃で保持する、にしたがった
第２ＰＣＲ反応は、１ｍＬの第１ＰＣＲ反応を取り上げ、サンプルを無菌蒸留水中に１：１０，０００の希釈係数まで希釈することによって調製した。最初に増幅した領域内でネスト化した第２セットのプライマーを使用して第１ＰＣＲ反応内で単離した断片を増幅させた。プライマーＨＰ３ＡおよびＴＰ４Ａを使用してＨ．タワ（ｔａｗａ）およびＴ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）それぞれの５’末端に向けて増幅させたが、他方プライマーＨＰ３ＳおよびＴＰ４Ｓを使用して３’末端に向けて増幅させた。希釈ＤＮＡは、３３．５ｍＬの蒸留無菌水、５ｍＬの１０×のＬＡバッファーＩＩ（Ｍｇ２＋）、８ｍＬのｄＮＴＰ混合物、１ｍＬのカセットプライマー２、１ｍＬの特異的プライマー２（サンプルおよび断片、末端に依存して）、０．５ｍＬのＴａｋａｒａ ＬＡ Ｔａｑを含有するＰＣＲ反応に添加し、ＰＣＲランの前に十分に混合した。ＰＣＲプロトコルは、１０分間にわたる初期の９４℃以外は、第１反応と同一であった。反応が完了した後、サンプルは、単離した断片のサイズおよび数を決定するためにゲル電気泳動法によってランした。単一バンドが存在した場合は、サンプルを生成して、シークエンシングのために送付した。断片が全く単離されなかった場合、ネステッドＰＣＲ反応のための以前のプロトコルを使用して第３ＰＣＲ反応を実施した。ゲル電気泳動法による増幅断片をランさせた後、最も明るいバンドを切除し、精製し、シークエンシングのために送付した。
配列アラインメントの分析
配列は、ＡＬＩＧＮＸ（登録商標）を含むＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ ｓｕｉｔｅおよびＣＯＮＴＩＧＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）を使用して入手および分析した。全遺伝子配列を入手するために、各末端断片配列を以前に入手したＨ．タワ（ｔａｗａ）およびＴ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）の断片とアラインメントした。Ｔ．ハルジアナム（ｈａｒｚｉａｎｕｍ）およびＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）配列とのヌクレオチドアラインメントは、Ｈ．タワ（ｔａｗａ）およびＴ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）両方における関心対象の遺伝子の翻訳開始点および翻訳停止点を解明した。全遺伝子配列が同定された後、ゲノムＤＮＡ由来の全遺伝子を増幅させるために特異的プライマーを設計した。プライマーは、翻訳開始点の前にＣＡＣＣヌクレオチド配列を添加すること以外は、ＧＡＴＥＷＡＹ（登録商標）クローニング（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ．）について以前に記載されたように設計した。
最終クローニングのためのプライマー：
Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）：
Ｔ１ＦＳ：ｃａｃｃａｔｇｃｔａｇｇｃａｔｔｃｔｃｃｇ（配列番号４９）
Ｔ１ＦＡ：ｔｃａｇｃａｇｔａｔｔｇｇｃａｔｇｃｃｇ（配列番号５０）
Ｈ．タワ（ｔａｗａ）：
Ｈ１ＦＳ：ＣＡＣＣＡＴＧＴＴＧＧＧＣＧＴＴＴＴＴＣＧ（配列番号５１）
Ｈ１ＦＡ：ＣＴＡＧＣＡＧＴＡＴＴＧＲＣＡＴＧＣＣＧ（配列番号５２）
アニーリング温度を５５℃に変化させたこと以外は、以前に記載されたＰＣＲプロトコルにしたがった。単一バンドを単離してゲル電気泳動法を通して観察した後に、増幅断片を以前に記載されたように生成し、製造業者の取扱説明書にしたがってｐＥＮＴＲ／Ｄ ＴＯＰＯ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ．）形質転換において使用した。化学的コンピテント大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞を次に以前に記載したように形質転換させ、５０ｐｐｍのカナマイシンを含有するＬＢプレートに移した。３７℃での一晩のインキュベーション後に、以前に記載されたように、プラスミドおよびインサートを含有する形質転換体を粗ＤＮＡ抽出およびプラスミドサイズ分析後に選択した。選択した形質転換体をプレートから擦り取り、５ｍＬのＬＢ／カナマイシン培地（０．０００１％）を含有する新鮮１５ｍＬチューブに接種するために使用した。培養を３７℃の振とう式インキュベーター内に一晩配置した。細胞を遠心分離によって採取し、プラスミドＤＮＡを以前に記載したように抽出した。プラスミドＤＮＡは、インサート配列の存在を確証するために消化し、次にシークエンシングのために提出した。ＬＲ Ｃｌｏｎａｓｅ反応（Ｇａｔｅｗａｙ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐ．））を製造業者の取扱説明書にしたがって使用し、ｐＥＮＴＲ（商標）／Ｄベクターからのインサートをデスティネーションベクター内に指向性で移した。デスティネーションベクターは、選択のためのＡ．ニガー（ｎｉｇｅｒ）アセトアミダーゼを使用して、ＣＢＨ１プロモーターおよびターミネーターの制御下で、Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）中で関心対象の遺伝子を発現させるために設計した。
バイオリスティック形質転換（一般的方法を参照されたい）
Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）形質転換体によるα－１，３グルカナーゼの発現
１ｃｍ２の寒天プラグを使用してＰｒｏｆｌｏ種培地に接種した。培養は、振とうしながら１Ｌ当たり２００ｒｐｍの変性ａｍｄＳバイオリスティック寒天（ＭＡＢＡ）とともに２８℃でインキュベートした。第２日に、精製培地中に１０％の移動を無菌的に実施した。培養は、２００ｒｐｍで振とうしながら２８℃でインキュベートした。第３日に、遠心分離によって培養を採取した。上清を無菌濾過し（０．２ｍｍのポリエーテルスルホンフィルター；ＰＥＳ）、４℃で保管した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる分析は、各α－グルカナーゼ遺伝子を発現するクローンを同定した。Ｔ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）形質転換体についての増殖条件は、実施例１４において使用した増殖条件にしたがった。
実施例１８
ムタナーゼの同時添加もしくは連続的添加を用いたグルコシルトランスフェラーゼＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７）を使用した可溶性オリゴ糖の生成
反応（１０ｍＬの総量）は、マグネチック・スターバーによって供給された混合を実施しながら、３５℃で５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．８）中の１００ｇ／Ｌのスクロースを用いてランした。各反応には、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７、ＧＴＦ７５２７；実施例３）を含有する０．３体積／体積％の濃縮大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物を加えた。Ｔ．コニラングブラ（ｋｏｎｉｌａｎｇｂｒａ）ムタナーゼもしくはＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）５９２ムタナーゼのいずれかを含有するＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（実施例１７）は、ＧＴＦ－Ｊを含有する粗タンパク質抽出物の添加と同時に、またはＧＴＦ－Ｊを含有する粗タンパク質抽出物の添加２４時間後のいずれかに、１０体積／体積％の最終反応体積で反応に添加した。コントロール反応は、ムタナーゼを全く添加せずにランした。アリコートを４時間後および２２時間後もしくは２４時間後のいずれかに引き出し、３０分間にわたり６０℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離によって熱処理サンプルから除去した。生じた上清をＨＰＬＣによって分析し、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表３および４）；ＤＰ３～ＤＰ７の収率は、スクロース転換に基づいて計算した。
Figure 0006997706000009
Figure 0006997706000010
実施例１９
ムタナーゼの同時添加もしくは連続的添加を用いたグルコシルトランスフェラーゼＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７）を使用した可溶性オリゴ糖の生成
反応（１０ｍＬの総量）は、マグネチック・スターバーによって供給された混合を実施しながら、３０℃で５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．８）中の１００ｇ／Ｌのスクロースを用いてランした。各反応には、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７、ＧＴＦ７５２７；実施例３）を含有する０．３体積／体積％の濃縮大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物を加えた。パエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼ（ＧＩ：２５７１５３２６４、ｍｕｔ３２６４；実施例１２）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物をＧＴＦ－Ｊを含有する粗タンパク質抽出物の添加と同時に、またはＧＴＦ－Ｊを含有する粗タンパク質抽出物の添加２４時間後のいずれかに、１０体積／体積％の最終反応体積で反応に添加した。コントロール反応は、ムタナーゼを全く添加せずにランした。アリコートを４時間後もしくは５時間後のいずれかおよび２０時間後もしくは２１時間後のいずれかに引き出し、３０分間にわたり６０℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離によって熱処理サンプルから除去した。生じた上清をＨＰＬＣによって分析し、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表５および４６）；ＤＰ３～ＤＰ７の収率は、スクロース転換に基づいて計算した。
Figure 0006997706000011
Figure 0006997706000012
実施例２０
グルコシルトランスフェラーゼＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７）酵素およびムタナーゼの組み合わせを使用した可溶性オリゴ糖の生成
反応１は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、Ｓ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７、ＧＴＦ７５２７；実施例３）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）濃縮粗タンパク質抽出物（０．３体積／体積％）を含んでいた。反応２および４は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、Ｓ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｊ（実施例３）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）濃縮粗タンパク質抽出物（０．３体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＧＩ：２１２５３３３２５、ｍｕｔ３３２５；実施例１４）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）またはパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）由来のムタナーゼ（ＧＩ：２５７１５３２６４、ｍｕｔ３２６４；実施例１２）を含む大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）を含んでいた。コントロール反応３および５は、それぞれムタナーゼを含有していないＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物のいずれかを使用した。各反応についての総量は１０ｍＬであり、全反応は１２５ｒｐｍで振とうしながら４０℃で実施した。アリコートは５時間後および２４時間後に取り出し、５分間にわたり９５℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離および濾過によって除去した。可溶性生成物をＨＰＬＣによって分析して、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表７）。２４時間後の各反応からの可溶性生成物をさらに１Ｈ ＮＭＲ分光法によって分析し、オリゴ糖のアノマー結合を決定した（表８）。
Figure 0006997706000013
Figure 0006997706000014
ムタナーゼが存在する場合は、反応の初期５時間中により多くのスクロースが消費された。ムタナーゼを発現しないＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株由来の粗抽出物は、スクロース消費速度に相乗作用を有していなかった。ロイクロース対フルクトース比は、ムタナーゼの存在下では有意に低かった。可溶性オリゴ糖の収率は、ムタナーゼの存在下では有意に増加した。可溶性オリゴ糖中のα－（１，３）結合は、ムタナーゼの存在によって実質的に増加した。
実施例２１
ＧＴＦ－Ｌおよびムタナーゼによる可溶性オリゴ糖の生成
反応１は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）およびストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｌ（ＧＩ：６６２３７９、ＧＴＦ２３７９；実施例５）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）濃縮粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）を含んでいた。反応２および４は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｌ（実施例５）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物およびＨ．タワ（ｔａｗａ）ムタナーゼ（実施例１７）を含有するＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）もしくはパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）（ＧＩ：２５７１５３２６４、ｍｕｔ３２６４；実施例１２）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物を含んでいた。コントロール反応３および５は、それぞれムタナーゼを含有していないＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）タンパク質粗抽出物（１０体積／体積％）または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物のいずれかを使用した。各反応についての総量は１０ｍＬであり、全反応は１２５ｒｐｍで振とうしながら４０℃で実施した。アリコートは５時間後および２４時間後に取り出し、反応は５分間にわたり９５℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離および濾過によって除去した。可溶性生成混合物をＨＰＬＣによって分析して、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表９）。２４時間後の各反応からの可溶性生成物をさらに１Ｈ ＮＭＲ分光法によって分析し、オリゴ糖内に存在する結合を決定した（表１０）。
Figure 0006997706000015
Figure 0006997706000016
ムタナーゼが存在する場合は、反応の初期５時間中により多くのスクロースが消費された。ムタナーゼを発現しないＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株由来の粗抽出物は、スクロース消費速度に相乗作用を有していなかった。スクロース消費がほぼ完了してから２４時間後に、ムタナーゼの存在下ではロイクロースはほとんど生成されなかった。ロイクロース対フルクトース比は、ムタナーゼの存在下では有意に低かった。ＤＰ３～ＤＰ７の可溶性オリゴ糖の量は、ｍｕｔ３２６４の存在下では有意に増加した。Ｈ．タワ（ｔａｗａ）ムタナーゼとの反応では他の反応におけるより多くのグルコースが生成された。可溶性オリゴ糖中のα－（１，３）結合のパーセンテージは、ムタナーゼの存在によって実質的に増加した。
実施例２２
ＧＴＦ－Ｂおよびムタナーゼによる可溶性オリゴ糖の生成
反応１は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）およびストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＮＮ２０２５由来のＧＴＦ－Ｂ（ＧＩ：２９０５８０５４４、ＧＴＦ０５４４；実施例６）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物（１０体積／体積％）を含んでいた。下記の反応２および４は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＮＮ２０２５由来のＧＴＦ－Ｂ（ＧＩ：２９０５８０５４４、ＧＴＦ０５４４；実施例６）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物およびＨ．タワ（ｔａｗａ）ムタナーゼ（実施例１７）を含有するＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）もしくはパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）（ＧＩ：２５７１５３２６４、ｍｕｔ３２６４；実施例１２）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物のいずれかを含んでいた。コントロール反応３および５は、それぞれムタナーゼを含有していないＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）または大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物のいずれかを使用した。各反応についての総量は１０ｍＬであり、全反応は１２５ｒｐｍで振とうしながら４０℃で実施した。アリコートは５時間後および２４時間後に取り出し、反応は５分間にわたりアリコートサンプルを９５℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は遠心分離および濾過によって除去し、生じた濾液をＨＰＬＣによって分析してスクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表１１）。２４時間後の各反応からの可溶性生成物をさらに１Ｈ ＮＭＲ分光法によって分析し、オリゴ糖の結合を決定した（表１２）。
Figure 0006997706000017
Figure 0006997706000018
ムタナーゼが存在する場合は、反応の初期５時間中により多くのスクロースが消費された。ムタナーゼを発現しなかったＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）由来の粗タンパク質抽出物は、スクロース消費速度に相乗作用を及ぼさなかった。ｍｕｔ３２６４の存在下ではＤＰ３～ＤＰ７のより多くのオリゴ糖が生成されたが、Ｈ．タワ（ｔａｗａ）ムタナーゼもしくはムタナーゼを含まない２種のタンパク質粗抽出物の存在下では生成されなかった。スクロース消費がほぼ完了してから２４時間後に、ムタナーゼの存在下ではロイクロースはほとんど生成されなかった。ロイクロース対フルクトース比は、ムタナーゼの存在下では有意に低かった。Ｈ．タワ（ｔａｗａ）ムタナーゼの存在下では、高濃度のグルコースが生成された。可溶性オリゴ糖中のα－（１，３）結合のパーセンテージは、ｍｕｔ３２６４の存在によって実質的に増加した。
実施例２３
ＧＴＦ－ＩおよびＭＵＴ３２６４ムタナーゼによる可溶性オリゴ糖の生成
反応１は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）およびストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｉ（ＧＩ：４５０８７４、ＧＴＦ０８７４；実施例８）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物（３体積／体積％）を含んでいた。反応２は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．８）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｉ（実施例８）およびパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼ（ｍｕｔ３２６４、ＧＩ：２５７１５３２６４、実施例１３）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）タンパク質粗抽出物（１０体積／体積％）を含んでいた。各反応についての総量は１０ｍＬであり、全反応はマグネチック・スターバーによって撹拌しながら３０℃で実施した。アリコートは５時間後、２４時間後および４８時間後に取り出し、反応は３０分間にわたりアリコートサンプルを６０℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は遠心分離によって除去し、生じた濾液をＨＰＬＣによって分析してスクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表１３）。
Figure 0006997706000019
実施例２４
ＧＴＦ－Ｉグルコシルトランスフェラーゼ対ＭＵＴ３３２５ムタナーゼ比がオリゴ糖生成に及ぼす作用
反応１～４は、５０ｍＭのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ５．４）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、ペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４ムタナーゼ（ｍｕｔ３３２５）；実施例１４）を含有するＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）タンパク質粗抽出物（１０体積／体積％）および０．５体積／体積％、２．５体積／体積％、５体積／体積％もしくは１０体積／体積％の１つでストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｉ（ＧＩ：４５０８７４、ＧＴＦ０８７４；実施例８）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物を含んでいた。反応６～９は、５０ｍＭのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ５．４）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、ＭＵＴ３３２５なし、および０．５体積／体積％、２．５体積／体積％、５体積／体積％もしくは１０体積／体積％の１つでストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｉ（ＧＩ：４５０８７４；実施例４）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）タンパク質粗抽出物を含んでいた。反応５は、同一バッファー中にスクロース（１００ｇ／Ｌ）だけを含有していた。全反応は、１２５ｒｐｍで振とうしながら３７℃で実施した。１時間後、５時間後および２５時間後にアリコート（５００μＬ）を各反応から取り出し、９０℃で５分間にわたり加熱して反応を停止させた。不溶性物質は、遠心分離および濾過によって除去した。生じた濾液をＨＰＬＣによって分析して、スクロース（Ｓｕｃ．）、グルコース（Ｇｌｕｃ．）、フルクトース（Ｆｒｕｃ．）、ロイクロース（Ｌｅｕｃ．）およびオリゴ糖（ＤＰ３～７）の濃度を決定した（表１４～１６）。
Figure 0006997706000020
Figure 0006997706000021
Figure 0006997706000022
表１４、１５および１６におけるデータの比較は、スクロースの変換が全濃度のＧＴＦ－Ｉでｍｕｔ３３２５の存在下でより高速であったことを示している。ＤＰ３～ＤＰ７の総量および収率は、ｍｕｔ３３２５の存在下での反応において有意に増加した。より高いｍｕｔ３３２５対ＧＴＦ－Ｉ比は、ＤＰ３～ＤＰ７オリゴ糖のより高い収率を生じさせた。
実施例２５
ＧＴＦ－Ｊグルコシルトランスフェラーゼ対ＭＵＴ３３２５ムタナーゼ比がオリゴ糖生成に及ぼす作用
下記の反応１～３は、表１０に示したように、２００ｇ／Ｌのスクロース、様々な濃度のＧＴＦ－Ｊ（Ｓ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｊ；ＧＩ：４７５２７、実施例３）（０．６および１体積／体積％）および様々な濃度のｍｕｔ３３２５（ペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４ムタナーゼ；実施例１４）（１０および２０％）を含んでいた。全反応は、１２５ｒｐｍで傾斜振とうしながら３７℃で実施した。１６～１９時間後に、反応を５分間にわたり９０℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離および濾過によって除去した。可溶性生成混合物をＨＰＬＣによって分析して、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表１７）。表１７のデータは、より高い比率のｍｕｔ３３２５対ＧＴＦ－Ｊ比が可溶性ＤＰ３～ＤＰ７オリゴ糖のより高い収率を生成したことを示している。
Figure 0006997706000023
実施例２６
ｐＨがオリゴ糖生成に及ぼす作用
下記の反応１～３は、ｐＨ５．０、６．０および６．８でスクロース（１００ｇ／Ｌ）、ｇｔｆ－Ｊ（０．３体積％、実施例３）およびｍｕｔ３２６４ムタナーゼ（１０体積％、実施例１２）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物を含んでいた。様々なｐＨに対して使用したバッファーは：５０ｍＭのクエン酸バッファー（ｐＨ５．０）；５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）および５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．８）であった。反応は、１２５ｒｐｍで振とうしながら３０℃で実施した。各反応からのアリコートは５時間後、２４時間後、４８時間後および７２時間後に取り出し、５分間にわたり９０℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離および濾過によって除去した。可溶性生成混合物をＨＰＬＣによって分析して、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表１８）。表１８に記載のデータは、ｐＨ５．０およびｐＨ６．８で生成したＤＰ４オリゴ糖が長時間のインキュベーションによりムタナーゼによってより低いＤＰに分解されたが、他方ｐＨ６．０ではそれ以上の分解が観察されなかったことを示している。
Figure 0006997706000024
実施例２７
温度がオリゴ糖生成に及ぼす作用
下記の反応１～４は、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、リン酸バッファー（５０ｍＭ、ｐＨ６．０）、ＧＴＦ－Ｊ（０．３体積％、実施例３）およびｍｕｔ３２６４ムタナーゼ（１０体積％、実施例１２）の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗抽出物を含んでいた。反応は、表１９に表示したように、１２５ｒｐｍで振とうしながら３０℃、４０℃、５０℃および６０℃で実施した。反応は、２４時間後に５分間にわたり９０℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離および濾過によって除去した。可溶性生成混合物をＨＰＬＣによって分析して、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表１９）。オリゴ糖ＤＰ３～ＤＰ７の総量は、４０℃で最高であった。
Figure 0006997706000025
実施例２８
ＭＵＴ６５０５ムタナーゼがＧＴＦ－Ｊによるスクロース消費に及ぼす作用
表２０（下記）に示したｍｕｔ６５０５（アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）ＦＧＳＣ Ａ４ムタナーゼＧＩ：２５９４８６５０５；実施例１６）を含有する様々な濃度のＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物を１ｍＬの最終体積中の１００ｇ／ＬのスクロースおよびＧＴＦ－Ｊ（実施例３）を含有する０．３体積／体積％の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物とともにインキュベートした。反応は、３時間にわたり１５０ｒｐｍで振とうしながら３７℃でインキュベートした。反応は、３分間にわたり９０℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離および０．２μｍの無菌フィルターに通しての濾過によって除去した。濾液は、一般的方法において記載したようにＨＰＬＣ上で分析した。データ（表２０）は、より高速のスクロース消費が増加したムタナーゼ濃度と相関することを示している。
Figure 0006997706000026
実施例２９
ＧＴＦ－ＳおよびＭＵＴ３２６４によるオリゴ糖の生成
反応は、５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、ＧＴＦ－Ｓ（ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０ ＧＩ：４９５８１０４５９、ＧＴＦ０４５９；実施例９）（１０体積／体積％）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物を含んでいた、または５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．０）中に、スクロース（１００ｇ／Ｌ）、ＧＴＦ－Ｓ（ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０ ＧＩ：４９５８１０４５９、ＧＴＦ０４５９；実施例９）（１０体積／体積％）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物およびｍｕｔ３２６４（１０体積／体積％）；実施例１２）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物を含んでいた。各反応についての総量は１０ｍＬであり、全反応は１２５ｒｐｍで振とうしながら３７℃で実施した。アリコートは３、６、２３および２６時間後に取り出し、反応は５分間にわたり９５℃で加熱することによってクエンチした。不溶性物質は、遠心分離および濾過によって除去した。濾液をＨＰＬＣによって分析して、スクロース、グルコース、フルクトース、ロイクロースおよびオリゴ糖の濃度を決定した（表２１）。
Figure 0006997706000027
実施例３０
ＧＴＦ－ＪおよびＭＵＴ３２６４の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、２００ｇ／Ｌのスクロース、Ｓ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７、ＧＴＦ７５２７；実施例３）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）濃縮粗タンパク質抽出物（１．０体積／体積％）およびパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼ（ＭＵＴ３２６４、ＧＩ：２５７１５３２６４；実施例１２）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）を含有する２００ｍＬの反応を３０℃で２０時間攪拌し、次に１５分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に８８ｍＬの上清はＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２２）。
Figure 0006997706000028
実施例３１
ＧＴＦ－ＬおよびＭＵＴ３２６４の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、２１０ｇ／Ｌのスクロース、Ｓ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｌ（ＧＩ：６６２３７９；実施例５）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）濃縮粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）およびパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）ムタナーゼ（ＭＵＴ３２６４、ＧＩ：２５７１５３２６４；実施例１２）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）を含有する１００ｍＬの反応を３７℃で２４時間攪拌し、次に１５分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に８８ｍＬの上清はＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２３）。
Figure 0006997706000029
実施例３２
ＧＴＦ－ＪおよびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、２１０ｇ／Ｌのスクロース、Ｓ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７；実施例３）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）濃縮粗タンパク質抽出物（０．６体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ｍｕｔ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１４）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（２０体積／体積％）を含有する１００ｍＬの反応を３７℃で２４時間攪拌し、次に１５分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に８４ｍＬの上清はＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２４）。
Figure 0006997706000030
実施例３３
ＧＴＦ－ＩおよびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、２００ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｉ（ＧＩ：４５０８７４；実施例８）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１４）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（１５体積／体積％）を含有する１００ｍＬの反応を３７℃で２４時間攪拌し、次に１５分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に８７ｍＬの上清はＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２５）。
Figure 0006997706000031
実施例３４
ＧＴＦ－ＳおよびＭＵＴ３２６４の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、２１０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０由来のＧＴＦ－Ｓ（ＧＩ：４９５８１０４５９；実施例９）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）およびパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３２６４、ＧＩ：２５７１５３２６４；実施例１２）を含む大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）を含有する２００ｍの反応を３７℃で４０時間攪拌し、４℃で８４時間保管し、次に１５分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に上清はＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２６）。
Figure 0006997706000032
実施例３５
ＧＴＦ－ＢおよびＭＵＴ３２６４の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、１００ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＮＮ２０２５由来のＧＴＦ－Ｂ（ＧＩ：２９０５８０５４４；実施例６）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）およびパエニバチルス・フミカス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｕｍｉｃｕｓ）由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３２６４、ＧＩ：２５７１５３２６４；実施例１２）を含む大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）粗タンパク質抽出物（１０体積／体積％）を含有する２００ｍＬの反応を３７℃で２４時間攪拌し、次に１５分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に１３２ｍＬの上清はＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２７）。
Figure 0006997706000033
実施例３６
ＧＴＦ－ＳおよびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、３００ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０由来のＧＴＦ－Ｓ（ＧＩ：４９５８１０４５９；実施例１１）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（２０体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１４）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物（２．５体積／体積％）を含有する６００ｍＬの反応を３７℃で２７．５時間攪拌し、次に電子レンジ（１，０００ワット）内で４分間にわたり加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に全上清はＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２８）。
Figure 0006997706000034
実施例３７
ＧＴＦ－Ｊによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に２００ｇ／ＬのスクロースおよびＳ．サリバリウス（ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）由来のＧＴＦ－Ｊ（ＧＩ：４７５２７；実施例３）を含有する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）濃縮粗タンパク質抽出物（１．０体積／体積％）を含有する３，０００ｍＬの反応を１２５ｒｐｍでｐＨ５．５および４７℃で２１時間にわたり攪拌し、その後に３０分間にわたり６０℃へ加熱してこの酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し、次に上清を回転式蒸発によって９００ｍＬに濃縮し、ＢｉｏＧｅｌ Ｐ２樹脂（ＢｉｏＲａｄ）を用いるＳＥＣによって精製した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表２９）。
Figure 0006997706000035
実施例３７Ａ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ０９７４およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）５７．Ｉ由来のＧＴＦ０９７４（ＧＩ：３８７７６０９７４；実施例１１Ａおよび１１Ｄ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２１時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３０）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３０）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000036
実施例３７Ｂ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ４３３６およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＳＫ１２６由来のＧＴＦ４３３６（ＧＩ：４８８９７４３３６；実施例１１Ａおよび１１Ｄ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２１時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３１）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３１）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000037
実施例３７Ｃ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ０４７０およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）Ｋ１２由来のＧＴＦ０４７０（ＧＩ：４８８９８０４７０；実施例１１Ａおよび１１Ｄ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で４４時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３２）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３２）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000038
実施例３７Ｄ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ６５４９およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）Ｍ１８由来のＧＴＦ６５４９（ＧＩ：４９０２８６５４９；実施例１１Ａおよび１１Ｄ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（７．５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で５３時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３３）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３３）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000039
実施例３７Ｅ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ４４９１およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＪＩＭ８７７７由来のＧＴＦ４４９１（ＧＩ：３８７７８４４９１；実施例１１Ａおよび１１Ｄ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２２時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３４）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３４）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000040
実施例３７Ｆ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ１６４５およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＨＳＩＳＳ３由来のＧＴＦ１６４５（ＧＩ：５４４７２１６４５；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で４６時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３５）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３５）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000041
実施例３７Ｇ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ６０９９およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＨＳＩＳＳ２由来のＧＴＦ６０９９（ＧＩ：５４４７１６０９９；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で５２時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３６）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３６）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000042
実施例３７Ｈ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ７３１７およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＰＳ４由来のＧＴＦ７３１７（ＧＩ：４８８９７７３１７；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で４６時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３７）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３７）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000043
実施例３７Ｉ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ８４８７およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＣＣＨＳＳ３由来のＧＴＦ８４８７（ＧＩ：３４０３９８４８７；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で４０時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３８）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３８）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000044
実施例３７Ｊ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ３８７９およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＨＳＩＳＳ４由来のＧＴＦ３８７９（ＧＩ：５４４７１３８７９；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（１５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で５２時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表３９）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表３９）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000045
実施例３７Ｋ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ３８０８およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＳＲ４由来のＧＴＦ３８０８（ＧＩ：５７３４９３８０８；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２２時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４０）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４０）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000046
実施例３７Ｌ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ８４６７およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＮＵ１０由来のＧＴＦ８４６７（ＧＩ：６６０３５８４６７；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で４７時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４１）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４１）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000047
実施例３７Ｍ
ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ００６０およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＡＣＳ２由来のＧＴＦ００６０（ＧＩ：５７６９８００６０；実施例１１Ａ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で４７時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４２）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４２）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000048
比較例３７Ｎ
ＧＴＦ－ＳおよびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）Ｃ１５０由来のＧＴＦ０４５９（ＧＩ：４９５８１０４５９；実施例１１Ａおよび１１Ｃ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（５体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で９０時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４３）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４３）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000049
比較例３７Ｏ
ＧＴＦ－Ｓ非ホモログＧＴＦ０４８７およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ＰＳ４由来のＧＴＦ０４８７（ＧＩ：４９５８１０４８７；実施例１１Ａおよび１１Ｃ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（２０体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２１４時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４４）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４４）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000050
比較例３７Ｐ
ＧＴＦ－Ｓ非ホモログＧＴＦ５３６０およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、ストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）ＪＰ９－４由来のＧＴＦ５３６０（ＧＩ：４４０３５５３６０；実施例１１Ａおよび１１Ｃ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（２０体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．０７５体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２１４時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４５）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４５）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000051
実施例３７Ｑ
Ｃ末端切断ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ０９７４－Ｔ４およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、グルカン結合ドメイン（ＧＴＦ０９７４－Ｔ４、実施例Ｂ）の一部の追加のＣ末端切断を有するストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）５７．Ｉ由来のＧＴＦ０９７４（ＧＩ：３８７７６０９７４；実施例１１Ａおよび１１Ｃ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（０．６１体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．１１体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２４時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４６）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４６）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000052
実施例３７Ｒ
Ｃ末端切断ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ０９７４－Ｔ５およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、グルカン結合ドメイン（ＧＴＦ０９７４－Ｔ５、実施例１１Ｂ）の一部の追加のＣ末端切断を有するストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）５７．Ｉ由来のＧＴＦ０９７４（ＧＩ：３８７７６０９７４；実施例１１Ａおよび１１Ｃ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（０．５１体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．１１体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で２４時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４７）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４７）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000053
実施例３７Ｓ
Ｃ末端切断ＧＴＦ－ＳホモログＧＴＦ３８０８－Ｔ５およびＭＵＴ３３２５の組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の単離
蒸留脱イオンＨ２Ｏ中に、４５０ｇ／Ｌのスクロース、グルカン結合ドメイン（ＧＴＦ３８０８－Ｔ５、実施例１１Ｂ）の一部の追加のＣ末端切断を有するストレプトコッカス種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．）ＳＲ４由来のＧＴＦ３８０８（ＧＩ：５７３４９３８０８；実施例１１Ａおよび１１Ｃ）を含有する枯草菌（ｓｕｂｔｉｌｉｓ）粗タンパク質抽出物（０．７７体積／体積％）およびペニシリウム・マルネッファイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）ＡＴＣＣ（登録商標）１８２２４由来のムタナーゼ（ＭＵＴ３３２５、ＧＩ：２１２５３３３２５；実施例１５）を含むＴ．リーゼイ（ｒｅｅｓｅｉ）粗タンパク質抽出物ＵＦＣ（０．１１体積／体積％）を含有する２５０ｍＬの反応をｐＨ５．５および４７℃で１９時間攪拌し、次に３０分間にわたり９０℃へ加熱して酵素を不活性化した。生じた生成混合物を遠心分離し、生じた上清を可溶性単糖類、二糖類およびオリゴ糖類についてＨＰＬＣによって分析し（表４８）、次にオリゴ糖はＤｉａｉｏｎ ＵＢＫ５３０（Ｎａ＋形）樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ）を使用して４０℃でＳＥＣによって単離した。ＤＰ３以上のオリゴ糖類を含有しているＳＥＣ分画を結合し、ＨＰＬＣによる分析のために回転式蒸発によって濃縮した（表４８）。結合ＳＥＣ画分を５重量％の乾燥固体（ＤＳ）へ希釈し、乾燥固体としての繊維を生成するために凍結乾燥した。
Figure 0006997706000054
実施例３８
ＧＴＦ－ＪおよびＧＴＦ／ムタナーゼの組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維のアノマー結合分析
実施例３０～実施例３７において記載したように調製したクロマトグラフィー精製可溶性オリゴ糖オリゴマー／ポリマーの溶液を凍結乾燥によって一定重量まで乾燥させ、生じた固体は（上記の）一般的方法の項に記載した１Ｈ ＮＭＲ分光法およびＧＣ／ＭＳによって分析した。これらの可溶性オリゴ糖オリゴマー／ポリマーのそれぞれについてのアノマー結合は、表４９および５０に報告した。
Figure 0006997706000055
Figure 0006997706000056
実施例３９
ＧＴＦ－ＪおよびＧＴＦ／ムタナーゼの組み合わせによって生成された可溶性オリゴ糖繊維の粘度
様々な実施例において記載したように調製したクロマトグラフィー精製可溶性オリゴ糖オリゴマー／ポリマーの溶液を凍結乾燥によって一定重量まで乾燥させ、生じた固体を使用して蒸留脱イオン水中の可溶性オリゴマー／ポリマーの１２重量％溶液を調製した。可溶性オリゴマー／ポリマー溶液の粘度（センチポイズ（ｃＰ）で報告したが、ここで１ｃＰ＝１ミリパスカル秒（ｍＰａ／ｓ））（表５１）は、一般的方法の項で記載したように２０℃で測定した。
Figure 0006997706000057
実施例４０
様々な温度での繊維生成のためのグルコシルトランスフェラーゼ（ＧＴＦ）酵素の抽出物の調製
実施例１および２において使用したストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）ｇｔｆＪ酵素（配列番号５）は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株ＤＨ１０Ｂ中でイソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）誘導発現系を使用して発現させた。手短には、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ１０Ｂ細胞は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中でｇｔｆＪ酵素を発現させるためにコドン最適化されたＤＮＡ配列（配列番号４）から配列番号５を発現するように形質転換させた。このＤＮＡ配列は、発現ベクターであるＰＪＥＸＰＲＥＳＳ４０４（登録商標）（ＤＮＡ２．０，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）中に含有された。形質転換細胞はＬＢ培地（１０ｇ／Ｌのトリプトン；５ｇ／Ｌの酵母抽出物、１０ｇ／ＬのＮａＣｌ）中で０．０２５の初期光学密度（６００ｎｍでのＯＤ）へ接種し、２５０ｒｐｍで振とうしながら３７℃のインキュベーター内で増殖するに任せた。培養はそれらが０．８～１．０のＯＤ６００に達した時点に１ｍＭのＩＰＴＧの添加によって誘導した。誘導した培養は振とう装置上に残留したので、誘導３時間後に採取した。
ｇｔｆＪ酵素（配列番号５）を採取するために、細胞をＥＰＰＥＮＤＯＲＦ（登録商標）遠心管中で遠心し（２５℃、１６，０００ｒｐｍ）、５．０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ７．０）中に再懸濁させ、氷上で４℃に冷却した。細胞は、０．１ｍｍのシリカビーズを備えるビーズビーターを使用して破砕し、次に４℃、１６，０００ｒｐｍで遠心して、未破壊細胞および細胞断片をペレット化した。粗抽出物（可溶性ｇｔｆＪ酵素、配列番号５）はペレットから分離し、ブラッドフォードタンパク質アッセイによって分析してタンパク質濃度（ｍｇ／ｍＬ）を決定した。
実施例４１において使用した追加のｇｔｆ酵素は、下記のとおりに調製した。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０（登録商標）細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）は、特定のＧＴＦコーディングＤＮＡ配列を含有するＰＪＥＸＰＲＥＳＳ４０４（登録商標）をベースとする構築物を用いて形質転換させた。各配列は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中でｇｔｆ酵素を発現させるためにコドン最適化された。特定ｇｔｆ酵素を発現する個々の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）菌株は、アンピシリン（１００ｍｇ／ｍＬ）を含むＬＢ培地中で３７℃で振とうしながらＯＤ６００ｎｍ＝０．４～０．５へ増殖させ、その時点にＩＰＴＧを０．５ｍＭの最終濃度まで加えた。この培養をＩＰＴＧ誘導後に３７℃で２～４時間にわたりインキュベートした。細胞は１５分間にわたる５，０００×ｇでの遠心分離によって採取し、ＤＴＴ（１．０ｍＭ）が補給された５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ７．０）中に再懸濁させた（２０重量／体積％）。９５％を超える細胞溶解を保証するために、再懸濁細胞をＦｒｅｎｃｈプレッシャーセル（ＳＬＭ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に２回通過させた。溶解細胞は、４℃、１２，０００×ｇで３０分間遠心分離した。生じた上清は、ｇｔｆ酵素の発現を確証するためにＢＣＡタンパク質アッセイおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、上清を－２０℃で保管した。
反応プロファイルの分析
反応混合物から周期的サンプルを取り出し、屈折指数検出器を装備したＡｇｉｌｅｎｔ １２６０Ｃ ＨＰＬＣを使用して分析した。０．６ｍＬ／分の流量および８５℃で脱イオン水を使用するＡｍｉｎｅｘ ＨＰ－８７Ｃカラム（ＢｉｏＲａｄ）を使用してスクロースおよびグルコースを監視した。０．６ｍＬ／分の流量および８５℃で脱イオン水を使用するＡｍｉｎｅｘ ＨＰ－４２Ａカラム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、以前にマルトオリゴ糖を使用して較正されたＤＰ２～ＤＰ７由来のオリゴ糖を定量した。
実施例４１
様々な温度でＧＴＦ－Ｊを使用したオリゴ糖の生成
所望の量のスクロース、一部の場合にはグルコースおよび２０ｍＭのリン酸二水素カリウムは、脱イオン水を用いて溶解させ、Ｌａｕｄａ ＲＫ２０再循環式冷却装置に接続された１Ｌのバッフルなし被覆フラスコ内で７５０ｍＬに希釈した。次にＦＥＲＭＡＳＵＲＥ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）を加え（０．５ｍＬ／Ｌの反応）、ｐＨは５重量％の水酸化ナトリウム水溶液もしくは５重量％の硫酸水溶液を使用して５．５へ調整した。この反応は、実施例４０に記載したように、０．３体積％の粗酵素抽出物（配列番号５）の添加によって開始させた。反応混合物の撹拌は、１００ｒｐｍで４枚羽根のＰＴＦＥオーバーヘッド式機械的ミキサーを使用して提供された。スクロースの完全消費もしくはその後の測定間のスクロース濃度の変化なしのいずれかによって反応が完了したと決定された後、反応スラリーを濾過して不溶性ポリマーを除去した。可溶性オリゴ糖の収率は、実施例４０に記載の方法にしたがってＨＰＬＣによって決定し、表５２に提示した。
Figure 0006997706000058
これらの結果は、反応が４２℃超でランされると可溶性オリゴ糖の収率が増加すること、オリゴ糖の収率は、例えばグルコースなどのアクセプター分子を添加することによってさらに増加させることができること、および形成されるロイクロースの量はアクセプター分子が添加されると減少することを証明している。
実施例４２
他のＧＴＦ酵素を使用したオリゴ糖の生成
所望の量のスクロースおよび２０ｍＭのリン酸二水素カリウムは脱イオン水を用いて溶解させ、ポリプロピレン製キャップを備えたガラス瓶に移した。次にＦｅｒｍａｓｕｒｅ（商標）（ＤｕＰｏｎｔ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）を加え（０．５ｍＬ／Ｌの反応）、ｐＨは５重量％の水酸化ナトリウム水溶液もしくは５重量％の硫酸水溶液を使用して５．５へ調整した。この反応は、実施例４１におけるように調製した、粗酵素抽出物の添加によって開始させた。下記の：ストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）（ＧＴＦ０８７４；配列番号１６）、ストレプトコッカス・ダウネイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｏｗｎｅｉ）（ＧＴＦ１７２４；配列番号８１）およびストレプトコッカス・デンティロウセッティ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｔｉｒｏｕｓｅｔｔｉ）（ＧＴＦ５９２６；配列番号８４）由来の追加の切断ＧＴＦを試験した。反応混合物の撹拌は、ＰＴＦＥ製スターバーもしくはＩｎｏｖａ ４２ インキュベーターシェーカーのいずれかを使用して提供され、反応は、蓄熱ヒーターもしくはインキュベーターシェーカーのいずれかを使用して加熱した。スクロースの完全消費もしくはその後の測定間のスクロース濃度の変化なしのいずれかによって反応が完了したと決定された後、反応スラリーを濾過して不溶性ポリマーを除去した。可溶性オリゴ糖の収率は、実施例４１に記載の方法にしたがってＨＰＬＣによって決定し、表５３に提示した。
Figure 0006997706000059
実施例４３
ナトリウムカルボキシメチルα－グルカンの調製
本実施例では、本明細書に記載したα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を使用して、グルカンエーテル誘導体であるカルボキシメチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６および３７で記載したα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物のおよそ１ｇを、温度監視用熱電対、循環浴に接続した凝縮器およびマグネチック・スターバーを備えた、容積５０ｍＬの丸底フラスコ中の２０ｍＬのイソプロパノールに加えた。水酸化ナトリウム（４ｍＬの１５％溶液）を調製物に滴下し、これを次に加熱板上で２５℃へ加熱した。調製物を１時間撹拌した後、温度を５５℃に上昇させた。次に反応を提供するためにモノクロロ酢酸ナトリウム（０．３ｇ）を加え、これを５５℃で３時間保持した後、氷酢酸で中和した。この材料を次に収集し、固体の置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲによって分析した。
カルボキシメチルα－グルカンの様々なＤｏｓサンプルは上記のプロセスに類似するが、例えば異なる試薬（モノクロロ酢酸ナトリウム））：α－グルカンオリゴマー／ポリマーモル比、様々なＮａＯＨ：α－グルカンオリゴマー／ポリマーモル比、異なる温度および／または反応時間の使用などの所定の修正を加えたプロセスを使用して調製した。
実施例４４
カルボキシメチルα－グルカンを使用した粘度修飾
本実施例では、カルボキシメチルα－グルカンが水性組成物の粘度に及ぼす作用について記載する。
実施例４３において調製した様々なナトリウムカルボキシメチルグルカンサンプルについて試験した。これらのサンプルそれぞれの０．６重量％の溶液を調製するために、０．１０２ｇのナトリウムカルボキシメチルα－グルカンを脱イオン水（１７ｇ）に加えた。各調製物は、次に完全に溶液中に溶解するまで卓上型ボルテックスミキサーを使用して混合した。
カルボキシメチルα－グルカンの粘度を決定するために、温度（２０℃）を制御するための再循環浴を装備したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＩＩＩ＋粘度計を使用して溶解α－グルカンエーテルサンプルの各溶液に様々な剪断速度を受けさせた。剪断速度は、０．１～２３２．５ｒｐｍに増加する勾配プログラムを用いて増加させ、剪断速度は２０秒間毎に４．５５（１／秒）ずつ増加させた。
実施例４５
固体デキストランからのカルボキシメチルデキストランの調製
本実施例では、実施例４６において使用するためのカルボキシメチルデキストランを調製する工程について記載する。
およそ０．５ｇの固体デキストラン（Ｍｗ＝７５０，０００）は、温度監視用の熱電対、再循環浴に接続したコンデンサーおよびマグネチック・スターバーを装備した容量５０ｍＬの丸底フラスコ中の１０ｍＬのイソプロパノールに加えた。水酸化ナトリウム（０．９ｍＬの１５％溶液）を調製物に滴下し、これを次に加熱板上で２５℃へ加熱した。調製物を１時間撹拌した後、温度を５５℃に上昇させた。次に反応を提供するためにモノクロロ酢酸ナトリウム（０．１５ｇ）を加え、これを５５℃で３時間保持した後、氷酢酸を用いて中和した。固体物質を真空濾過によって収集し、エタノール（７０％）を用いて４回洗浄し、２０～２５℃の真空下で乾燥させ、固体の置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲによって分析した。この固体は、カルボキシメチルデキストランナトリウムであると同定された。
追加のカルボキシメチルデキストランナトリウムは、異なるＭｗのデキストランを使用して調製した。本実施例において調製したカルボキシメチルデキストランサンプルのＤｏＳ値は、表５４に提供した。
Figure 0006997706000060
これらのカルボキシメチルデキストランサンプルの粘度修飾作用について実施例４６において試験した。
実施例４６（比較例）
剪断速度がカルボキシメチルデキストランの粘度に及ぼす作用
本実施例では、実施例４６において調製したカルボキシメチルデキストランサンプルを含有する溶液の粘度および溶液の粘度に剪断速度が及ぼす作用について記載する。
様々なカルボキシメチルデキストランナトリウムサンプル（２Ａおよび２Ｂ）は、実施例４５において記載したように調製した。これらのサンプルそれぞれの０．６重量％の溶液を調製するために、０．１０２ｇのカルボキシメチルデキストランナトリウムを脱イオン水（１７ｇ）に加えた。各調製物は次に、固体が完全に溶解するまで卓上型ボルテックスミキサーを１，０００ｒｐｍで使用して混合した。
様々な剪断速度でカルボキシメチルデキストランの粘度を決定するために、温度（２０℃）を制御するための再循環浴を装備したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＩＩＩ＋粘度計を使用して溶解デキストランエーテルサンプルの各溶液に様々な剪断速度を受けさせた。剪断速度は、０．１～２３２．５ｒｐｍに増加させる勾配プログラムを用いて増加させ、剪断速度は２０秒間毎に４．５５（１／秒）ずつ増加させた。１４．７２（１／秒）でのこの実験の結果は、表５５に列挙した。
Figure 0006997706000061
表５５に要約した結果は、カルボキシメチルデキストランの０．６重量％の溶液が約２．５～７ｃＰの粘度を有することを示している。
実施例４７（比較例）
カルボキシメチルα－グルカンの調製
本実施例では、実施例４８において使用するためのカルボキシメチルグルカンを調製する工程について記載する。
グルカンは、実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製した。
およそ１５０ｇのα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、温度監視用の熱電対、再循環浴に接続したコンデンサーおよびマグネチック・スターバーを装備した容量５００ｍＬの丸底フラスコ中の３，０００ｍＬのイソプロパノールに加えた。水酸化ナトリウム（６００ｍＬの１５％溶液）を調製物に滴下し、これを次に加熱板上で２５℃へ加熱した。調製物を１時間撹拌した後、温度を５５℃に上昇させた。反応を得るために、次にモノクロロ酢酸ナトリウムを加え、これを５５℃で３時間保持し、その後に９０％の酢酸を用いて中和した。この物質を次に収集し、置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲによって分析した。
カルボキシメチルα－グルカンの様々なＤｏｓサンプルは上記のプロセスに類似するが、例えば異なる試薬（モノクロロ酢酸ナトリウム））：α－グルカンオリゴマー／ポリマーモル比、様々なＮａＯＨ：α－グルカンオリゴマー／ポリマーモル比、異なる温度および／または反応時間の使用などの所定の修正を加えたプロセスを使用して調製した。
実施例４８（比較例）
カルボキシメチルα－グルカンを使用した粘度修飾
本実施例では、カルボキシメチルα－グルカンが水性組成物の粘度に及ぼす作用について記載する。
様々なナトリウムカルボキシメチルグルカンサンプルは、実施例４７において記載したように調製した。これらのサンプルそれぞれの０．６重量％の溶液を調製するために、０．１０２ｇのナトリウムカルボキシメチルα－グルカンを脱イオン水（１７ｇ）に加えた。各調製物は、次に完全に溶液中に溶解するまで卓上型ボルテックスミキサーを１，０００ｒｐｍで使用して混合した。
様々な剪断速度でカルボキシメチルグルカンの粘度を決定するために、温度（２０℃）を制御するための再循環浴を装備したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＩＩＩ＋粘度計を使用してグルカンエーテルサンプルの各溶液に様々な剪断速度を受けさせた。剪断速度は、０．１～２３２．５ｒｐｍに増加する勾配プログラムを用いて増加させ、次に剪断速度を２０秒間毎に４．５５（１／秒）ずつ増加させた。
実施例４９（比較例）
カルボキシメチルセルロースを使用した粘度修飾
本実施例では、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が水性組成物の粘度に及ぼす作用について記載する。
ＤｕＰｏｎｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ＆ Ｈｅａｌｔｈ（Ｄａｎｉｓｃｏ）から入手したＣＭＣサンプルは、各サンプルの０．６重量％の溶液を調製するために脱イオン水に溶解させた。
様々な剪断速度でＣＭＣの粘度を決定するために、温度（２０℃）を制御するための再循環浴を装備したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＩＩＩ＋粘度計を使用して溶解ＣＭＣサンプルの各溶液に様々な剪断速度を受けさせた。剪断速度は、０．１～２３２．５ｒｐｍに増加させる勾配プログラムを用いて増加させ、剪断速度は２０秒間毎に４．５５（１／秒）ずつ増加させた。１４．７２（１／秒）でのこの実験の結果は、表５６に列挙した。
Figure 0006997706000062
このためＣＭＣ（０．６重量％）は、水溶液の粘度を増加させることができる。
実施例５０
ダイレクトレッド８０およびトルイジンブルーＯ染料についてのＵＶ吸収を使用した較正曲線の作成
本実施例では、織物表面上へのグルカンエーテル誘導体の吸着の相対レベルを決定するために有用であろう較正曲線の作成について記載する。
ダイレクトレッド８０およびトルイジンブルーＯ染料を使用して、公知の濃度（ｐｐｍ）の溶液を作成した。これらの溶液の吸光度を５２０ｎｍ（ダイレクトレッド８０）もしくは６２０ｎｍ（トルイジンブルーＯ染料）のいずれかでＬＡＭＯＴＴＥ ＳＭＡＲＴ２比色計を使用して測定した。吸光度情報は、織物サンプルに曝露させた溶液の染料濃度を決定するために使用できるようにプロットした。各較正曲線の濃度および吸光度は、表５７および５８に提供した。
Figure 0006997706000063
Figure 0006997706000064
したがって、織物表面へのポリα－１，３－グルカンエーテルの吸着の相対レベルを決定するために有用である較正曲線を調製した。
実施例５１
第４級アンモニウムグルカンの調製
本実施例では、第４級アンモニウムグルカンエーテル誘導体を生成できるであろう方法について記載する。詳細には、トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカンを生成することができる。
およそ１０ｇのα－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物（実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７で記載した）は、温度監視用熱電対、循環浴に接続した凝縮器およびマグネチック・スターバーを備えた、容積５００ｍＬの丸底フラスコ中の１００ｍＬのイソプロパノールに加えた。３０ｍＬの水酸化ナトリウム（１７．５％溶液）をこの調製物に滴下し、次にこれを加熱板で２５℃に加熱した。調製物を１時間撹拌した後、温度を５５℃に上昇させた。反応を得るために次に３－クロロ－２－ヒドロキシプロピル－トリメチルアンモニウムクロリド（３１．２５ｇ）を加え、これを５５℃で１．５時間保持し、その後に９０％の酢酸を用いて中和した。（トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカン）を形成する生成物を真空濾過により回収し、エタノール（９５％）で４回洗浄し、２０～２５℃で真空乾燥させ、ＮＭＲおよびＳＥＣで分析して分子量およびＤｏＳを決定した。
したがって、第４級アンモニウムグルカンエーテル誘導体であるトリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカンを調製して単離できた。
実施例５２
剪断速度が第４級アンモニウムグルカンの粘度に及ぼす作用
本実施例では、実施例５１において調製したトリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカンの粘度に剪断速度が及ぼす作用について試験できる方法について記載する。このグルカンエーテル誘導体は、剪断減粘性もしくは剪断増粘性挙動を示すことが企図されている。
トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカンのサンプルは、実施例５１において記載したように調製した。各サンプルの２重量％を調製するために、１ｇのサンプルを４９ｇの脱イオン水に加えた。各調製物は、次に水中にトリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカンのサンプルを溶解させるために２０，０００ｒｐｍで１２～１５秒間ホモジナイズした。
様々な剪断速度での各２重量％の第４級アンモニウムグルカン溶液の粘度を決定するために、各溶液には、温度（２０℃）を制御するための再循環浴およびＵＬＡ（超低アダプター）スピンドルおよびアダプターセットを装備したＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＩＩＩ＋粘度計を使用して様々な剪断速度を受けさせた。剪断速度は、１０～２５０ｒｐｍに増加する勾配プログラムを用いて増加させ、剪断速度はＵＬＡスピンドルおよびアダプターに対して２０秒間毎に４．９（１／秒）ずつ増加させた。
剪断速度が増加するにつれて第４級アンモニウムグルカン溶液のそれぞれの粘度が増加することは企図されており、それにより溶液が剪断減粘性もしくは剪断増粘性挙動が証明されることを示している。そのようなことは、その流動学的プロファイルを修飾するために第４級アンモニウムグルカンを水性液体に加えることができることを示すであろう。
実施例５３
第４級アンモニウムグルカンの様々な織物への吸着
本実施例は、第４級アンモニウムグルカン（トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカン）の様々なタイプの織物への吸着度を試験できる方法について開示する。
（実施例５１で調製した）トリメチルアンモニウムヒドロキシプロピルグルカンの０．０７重量％の溶液は、１４９．８９ｇの脱イオン水中に０．１０５ｇのポリマーを溶解させることによって生成した。この溶液を異なる濃度のポリマーを備える数個のアリコートに分割した（表５９）。ｐＨを修飾するために、例えば酸（希塩酸）もしくは塩基（水酸化ナトリウム）またはＮａＣｌ塩などの他の成分を加えた。
Figure 0006997706000065
４つの異なる織物タイプ（クレトン、ポリエステル、６５：３５のポリエステル／クレトン、晒し木綿）を０．１７ｇの細片に裁断した。各細片は、４８ウエルの細胞培養プレート内の２ｍＬウエル内に配置した。各織物サンプルは、１ｍＬの上記の溶液それぞれに曝露させた（表５９）（各織物試験に化合物を含まないコントロール溶液を含めた）。織物サンプルは、ポリマー溶液中に少なくとも３０分間にわたり入れておいた。織物サンプルをポリマー溶液から取り出し、未結合ポリマーを除去するために少なくとも１分間にわたり脱イオン水中ですすぎ洗いした。織物サンプルは、次に６０℃で一定の乾燥が達成されるまで少なくとも３０分間乾燥させた。織物サンプルを乾燥させた後に計量し、清潔な４８ウエルの細胞培養プレート内の２ｍＬウエル内に個別に配置した。次に織物サンプルを１ｍＬの２５０ｐｐｍのダイレクトレッド８０染料溶液に曝露させた。サンプルは、少なくとも１５分間にわたり染料溶液中に放置した。各織物サンプルを染料溶液から取り出し、その後に染料溶液を１０倍に希釈した。
希釈溶液の吸光度をコントロールサンプルと比較して測定した。織物に吸着したグルカンポリマーの相対尺度は、ダイレクトレッド８０染料についての実施例５０において作成した較正曲線に基づいて計算した。詳細には、コントロール（化合物に曝露させていない織物）と比較したポリマーに曝露させた織物サンプルについてのＵＶ吸光度の差は、織物に吸着したポリマーの相対尺度を表した。ＵＶ吸光度におけるこの差は、さらに、較正曲線（すなわち、ＵＶ吸光度は染料ｐｐｍに変換される）を使用して計算される、織物に結合した（コントロールに結合した染料の量に比した）染料の量として表示することもできよう。正の値はコントロール織物に結合した染料の量に対して過剰である染料量を表すが、他方、負の数はコントロール織物に結合した染料量より少ない染料量を表す。正の値は、グルカンエーテル化合物が織物表面に吸着したことを反映するであろう。
このアッセイは、第４級アンモニウムグルカンが様々な塩およびｐＨ条件下で様々なタイプの織物に吸着できることを証明するであろうと考えられる。この吸着は、カチオン性グルカンエーテル誘導体が織物ケア洗剤において（例えば、再付着防止剤として）有用であることを示唆するであろう。
実施例５４
本α－グルカン繊維組成物の様々な織物への吸着
本実施例は、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物（未修飾）の様々なタイプの織物への吸着度を試験できる方法について開示する。
（実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７において調製した）本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物の０．０７重量％の溶液は、１４９．８９ｇの脱イオン水中に０．１０５ｇのポリマーを溶解させることによって生成した。この溶液を異なる濃度のポリマーを備える数個のアリコートに分割した（表６０）。ｐＨを修飾するために、例えば酸（希塩酸）もしくは塩基（水酸化ナトリウム）またはＮａＣｌ塩などの他の成分を加えた。
Figure 0006997706000066
４つの異なる織物タイプ（クレトン、ポリエステル、６５：３５のポリエステル／クレトン、晒し木綿）を０．１７ｇの細片に裁断した。各細片は、４８ウエルの細胞培養プレート内の２ｍＬウエル内に配置した。各織物サンプルは、１ｍＬの上記の溶液それぞれに曝露させた（表６０）（各織物試験に化合物を含まないコントロール溶液を含めた）。織物サンプルは、ポリマー溶液中に少なくとも３０分間にわたり入れておいた。織物サンプルをポリマー溶液から取り出し、未結合ポリマーを除去するために少なくとも１分間にわたり脱イオン水中ですすぎ洗いした。織物サンプルは、次に６０℃で一定の乾燥が達成されるまで少なくとも３０分間乾燥させた。織物サンプルを乾燥させた後に計量し、清潔な４８ウエルの細胞培養プレート内の２ｍＬウエル内に個別に配置した。次に織物サンプルを１ｍＬの２５０ｐｐｍのダイレクトレッド８０染料溶液に曝露させた。サンプルは、少なくとも１５分間にわたり染料溶液中に放置した。各織物サンプルを染料溶液から取り出し、その後に染料溶液を１０倍に希釈した。
希釈溶液の吸光度をコントロールサンプルと比較して測定した。織物に吸着したα－グルカンポリマーの相対尺度は、ダイレクトレッド８０染料についての実施例５０において作成した較正曲線に基づいて計算した。詳細には、コントロール（化合物に曝露させていない織物）と比較したポリマーに曝露させた織物サンプルについてのＵＶ吸光度の差は、織物に吸着したポリマーの相対尺度を表した。ＵＶ吸光度におけるこの差は、さらに、較正曲線（すなわち、ＵＶ吸光度は染料ｐｐｍに変換される）を使用して計算される、織物に結合した（コントロールに結合した染料の量に比した）染料の量として表示することもできよう。正の値はコントロール織物に結合した染料の量に対して過剰である染料量を表すが、他方、負の数はコントロール織物に結合した染料量より少ない染料量を表す。正の値は、グルカンエーテル化合物が織物表面に吸着したことを反映するであろう。
このアッセイは、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物が様々な塩およびｐＨ条件下で様々なタイプの織物に吸着できることを証明するであろうと考えられる。この吸着は、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物が織物ケア洗剤において（例えば、再付着防止剤として）有用であることを示唆するであろう。
実施例５５
カルボキシメチルα－グルカン（ＣＭＧ）の様々な織物への吸着
本実施例では、α－グルカンエーテル化合物（ＣＭＧ）の様々なタイプの織物への吸着度を試験できる方法について開示する。
ＣＭＧの０．２５重量％の溶液は、１４９．６２５ｇの脱イオン水中に０．３７５ｇのポリマーを溶解させることによって生成した。この溶液を異なる濃度のポリマーを備える数個のアリコートに分割した（表６１）。ｐＨを修飾するために、例えば酸（希塩酸）もしくは塩基（水酸化ナトリウム）またはＮａＣｌ塩などの他の成分を加えた。
Figure 0006997706000067
４つの異なる織物タイプ（クレトン、ポリエステル、６５：３５のポリエステル／クレトン、晒し木綿）を０．１７ｇの細片に裁断した。各細片は、４８ウエルの細胞培養プレート内の２ｍＬウエル内に配置した。各織物サンプルは、１ｍＬの上記の溶液それぞれに曝露させた（表６１）（各織物試験に化合物を含まないコントロール溶液を含めた）。織物サンプルは、ポリマー溶液中に少なくとも３０分間にわたり入れておいた。織物サンプルをポリマー溶液から取り出し、未結合ポリマーを除去するために少なくとも１分間にわたり脱イオン水中ですすぎ洗いした。織物サンプルは、次に６０℃で一定の乾燥が達成されるまで少なくとも３０分間乾燥させた。織物サンプルを乾燥させた後に計量し、清潔な４８ウエルの細胞培養プレート内の２ｍＬウエル内に個別に配置した。次に織物サンプルを１ｍＬの２５０ｐｐｍのトルイジンブルー染料溶液に曝露させた。サンプルは、少なくとも１５分間にわたり染料溶液中に放置した。各織物サンプルを染料溶液から取り出し、その後に染料溶液を１０倍に希釈した。
希釈溶液の吸光度をコントロールサンプルと比較して測定した。織物に吸着したグルカンポリマーの相対尺度は、トルイジンブルー染料についての実施例５０において作成した較正曲線に基づいて計算した。詳細には、コントロール（化合物に曝露させていない織物）と比較したポリマーに曝露させた織物サンプルについてのＵＶ吸光度の差は、織物に吸着したポリマーの相対尺度を表した。ＵＶ吸光度におけるこの差は、さらに、較正曲線（すなわち、ＵＶ吸光度は染料ｐｐｍに変換される）を使用して計算される、織物に結合した（コントロールに結合した染料の量に比した）染料の量として表示することもできよう。正の値はコントロール織物に結合した染料の量に対して過剰である染料量を表すが、他方、負の数はコントロール織物に結合した染料量より少ない染料量を表す。正の値は、ＣＭＧポリマーが織物表面に吸着したことを反映するものであろう。
このアッセイは、ＣＭＧポリマーが様々な塩およびｐＨ条件下で様々なタイプの織物に吸着できることを証明するであろうと考えられる。この吸着は、本グルカンエーテル誘導体が織物ケア洗剤において（例えば、再付着防止剤として）有用であることを示唆するものであろう。
実施例５６
セルラーゼがカルボキシメチルグルカン（ＣＭＧ）に及ぼす作用
本実施例では、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の安定性と比較して、セルラーゼの存在下で、α－グルカンエーテルであるＣＭＧの安定性を試験する方法について開示する。セルラーゼに対する安定性は、例えば織物ケアにおけるようにセルラーゼ含有組成物／プロセスを使用するためのＣＭＧの適用可能性を示すであろう。
ＣＭＣ（Ｍｗ＝９００００、ＤｏＳ＝０．７）もしくはＣＭＧの溶液（１重量％）を下記のようにセルラーゼもしくはアミラーゼを用いて処理した。ＣＭＧもしくはＣＭＣポリマー（１００ｍｇ）は、ＰＴＦＥスターバーを装備した清潔な２０ｍＬのガラス製シンチレーションバイアルに加えた。事前に５体積％の水酸化ナトリウムもしくは５体積％の硫酸を使用してｐＨ７．０へ事前に調整されている水（１０．０ｍＬ）を次にシンチレーションバイアルに加え、混合物を溶液（１重量％）が形成されるまで撹拌した。セルラーゼもしくはアミラーゼ酵素を溶液に加え、これを次に室温（約２５℃）で２４時間撹拌した。各酵素処理サンプルは、処理ポリマーの分子量を決定するためにＳＥＣ（上記）によって分析した。陰性コントロールは、セルラーゼもしくはアミラーゼを添加しなかった以外は上述のように実施した。例えば、実施することができたＣＭＧおよびＣＭＣの様々な酵素処理は、表６２に列挙した。
Figure 0006997706000068
表６２に記載の酵素試験は、ＣＭＣがセルラーゼによる分解に高度に感受性であるが、他方ＣＭＧはこの分解により耐性であると考えられている。さらに、これらの試験は、ＣＭＣおよびＣＭＧがアミラーゼに対して大きく安定性であることを示すであろうことも考えられている。
セルラーゼを含有する水性組成物（例えば、洗濯もしくは食器用洗剤）に粘度を提供するためのＣＭＣの使用は容認できないであろう。ＣＭＧは、他方、セルラーゼに対する安定性を前提にすると、例えば洗剤などのセルラーゼ含有水性組成物にとって有用であろう。
実施例５７
セルラーゼがカルボキシメチルグルカン（ＣＭＧ）に及ぼす作用
本実施例では、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）の安定性と比較して、セルラーゼの存在下で、本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物（未修飾）の安定性を試験できる方法について開示する。セルラーゼに対する安定性は、例えば織物ケアにおけるようにセルラーゼ含有組成物／プロセスを使用するための本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物の適用可能性を示すであろう。
ＣＭＣ（Ｍｗ＝９００００、ＤｏＳ＝０．７）もしくは実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載した本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物の溶液（１重量％）を下記のようにセルラーゼもしくはアミラーゼを用いて処理した。本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物もしくはＣＭＣポリマー（１００ｍｇ）は、ＰＴＦＥスターバーを装備した清潔な２０ｍＬのガラス製シンチレーションバイアルに加えた。事前に５体積％の水酸化ナトリウムもしくは５体積％の硫酸を使用してｐＨ７．０へ事前に調整されている水（１０．０ｍＬ）を次にシンチレーションバイアルに加え、混合物を溶液（１重量％）が形成されるまで撹拌した。セルラーゼもしくはアミラーゼ酵素を溶液に加え、これを次に室温（約２５℃）で２４時間撹拌した。各酵素処理サンプルは、処理ポリマーの分子量を決定するためにＳＥＣ（上記）によって分析した。陰性コントロールは、セルラーゼもしくはアミラーゼを添加しなかった以外は上述のように実施した。例えば、実施することができた本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物およびＣＭＣの様々な酵素処理は、表６３に列挙した。
Figure 0006997706000069
表６３に記載の酵素試験は、ＣＭＣがセルラーゼによる分解に高度に感受性であるが、他方本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物はこの分解により耐性であることを示すであろうと考えられる。さらに、これらの試験は、ＣＭＣおよび本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物がどちらもアミラーゼに対して大きく安定性であることを示すであろうことも考えられる。
セルラーゼを含有する水性組成物（例えば、洗濯用洗剤もしくは食器用洗剤）に粘度を提供するためのＣＭＣの使用は容認できないであろう。本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物（未修飾）は、他方、セルラーゼに対する安定性を前提にすると、例えば洗剤などのセルラーゼ含有水性組成物にとって有用であろう。
実施例５８
ヒドロキシプロピルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるヒドロキシプロピルα－グルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を１０１ｇのトルエンおよび５ｍＬの２０％の水酸化ナトリウムと混合した。この調製物を３０分間にわたり５５℃でマグネチックスタープレート上の５００ｍＬのガラス製ビーカー内で撹拌した。この調製物を次に振とう管反応装置に移し、その後に３４ｇの酸化プロピレンを加えた；次に反応を３時間にわたり７５℃で攪拌した。この反応を次に２０ｇの酢酸を用いて中和し、形成されたヒドロキシプロピルα－グルカンを収集し、７０％の水性エタノールもしくは温水を用いて洗浄し、乾燥させた。生成物のモル置換度（ＭＳ）は、ＮＭＲによって決定した。
実施例５９
ヒドロキシエチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるヒドロキシエチルポリα－グルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を１５０ｍＬのイソプロパノールおよび４０ｍＬの３０％の水酸化ナトリウムと混合した。この調製物は、１時間にわたり５５℃でマグネチックスタープレート上の５００ｍＬのガラス製ビーカー内で撹拌し、次に周囲温度で一晩撹拌した。この調製物を次に振とう管反応装置に移し、その後に１５ｇの酸化エチレンを加えた；次に反応を６時間にわたり６０℃で攪拌した。この反応を次に密閉型振とう管内に一晩（およそ１６時間）保持し、その後に２０．２ｇの酢酸により中和すると、それによりヒドロキシエチルグルカンが形成された。ヒドロキシエチルグルカン固体を収集し、ビーカー内でメタノール：アセトン（６０／４０（体積／体積））混合物を加え、２０分間にわたりスターバーを用いて撹拌することによって洗浄した。メタノール：アセトン混合物を次に固体から濾過により取り除いた。この洗浄工程は、生成物を乾燥する前に２回繰り返した。生成物のモル置換度（ＭＳ）は、ＮＭＲによって決定した。
実施例６０
エチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるエチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を振とう管に加え、その後に反応を提供するために水酸化ナトリウム（１～７０％の溶液）および塩化エチルを加えた。反応を２５～２００℃に加熱し、その温度で１～４８時間保持し、その後に反応を酢酸で中和した。生じた生成物を収集し、洗浄し、エチルグルカンの分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６１
エチルヒドロキシエチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるエチルヒドロキシエチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を振とう管に加え、その後に水酸化ナトリウム（１～７０％の溶液）および塩化エチルを加えた。次に、塩化エチルを加え、その後に反応を提供するために酸化エチレン／塩化エチレンを加えた。この反応を２５～２００℃に緩徐に加熱し、その温度で１～４８時間保持し、その後に酢酸で中和した。形成された生成物を収集し、洗浄し、２０～７０℃の真空下で乾燥させ、次にエチルヒドロキシエチルグルカンの分子量およびＤｏＳを決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６２
メチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるメチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を４０ｍＬの３０％の水酸化ナトリウムおよび４０ｍＬの２－プロパノールと混合し、アルカリグルカンを提供するために１時間にわたり５５℃で攪拌した。この調製物は、次に必要であれば、ブーフナー漏斗を使用して濾過した。このアルカリグルカンを次に１５０ｍＬの２－プロパノールと混合した。振とう管反応装置にこの混合物を装填し、反応を提供するために１５ｇの塩化メチルを加えた。この反応を７０℃で１７時間撹拌した。生じたメチルグルカン固体を濾過し、２０ｍＬの９０％の酢酸を用いて中和し、その後に２００ｍＬのエタノールを用いて３回洗浄した。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６３
ヒドロキシアルキルメチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるヒドロキシアルキルメチルα－グルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を容器に加え、その後に水酸化ナトリウム（５～７０％の溶液）および塩化エチルを加えた。この調製物を０．５～８時間撹拌した。次に、反応を提供するために容器に塩化メチルを加え、これを次に１４日間まで３０～１００℃へ加熱した。次に酸化アルキレン（例えば、酸化エチレン、酸化プロピレン、酸化ブチレンなど）は、温度を制御しながら反応に加えた。この反応を１４日間まで２５～１００℃へ加熱し、その後に酸を用いて中和した。このように形成された生成物を濾過し、洗浄し、乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６４
カルボキシメチルヒドロキシエチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるカルボキシメチルヒドロキシエチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を容量４００ｍＬの振とう管中のイソプロパノールもしくはトルエンなどの物質のアリコートに加え、その後に水酸化ナトリウム（１～７０％の溶液）を加えた。この調製物を４８時間まで撹拌した。次に、反応を提供するためにモノクロロ酢酸を加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱した。次にこの反応に酸化エチレンを加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱し、その後に酸（例えば、酢酸、硫酸、硝酸、塩酸など）を用いて中和した。このように形成された生成物を収集し、洗浄し、乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６５
ナトリウムカルボキシメチルヒドロキシエチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるナトリウムカルボキシメチルヒドロキシエチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を容量４００ｍＬの振とう管中のイソプロパノールなどのアルコールのアリコートに加え、その後に水酸化ナトリウム（１～７０％の溶液）を加えた。この調製物を４８時間まで撹拌した。次に、反応を提供するためにモノクロロ酢酸ナトリウムを加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱した。次にこの反応に酸化エチレンを加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱し、その後に酸（例えば、酢酸、硫酸、硝酸、塩酸など）を用いて中和した。このように形成された生成物を収集し、洗浄し、乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６６
カルボキシメチルヒドロキシメチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるカルボキシメチルヒドロキシプロピルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を容量４００ｍＬの振とう管中のイソプロパノールもしくはトルエンなどの物質のアリコートに加え、その後に水酸化ナトリウム（１～７０％の溶液）を加えた。この調製物を４８時間まで撹拌した。次に、反応を提供するためにモノクロロ酢酸を加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱した。次にこの反応に酸化プロピレンを加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱し、その後に酸（例えば、酢酸、硫酸、硝酸、塩酸など）を用いて中和した。このように形成された生成物を収集し、洗浄し、乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６７
ナトリウムカルボキシメチルヒドロキシプロピルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるナトリウムカルボキシメチルヒドロキシプロピルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を容量４００ｍＬの振とう管中のイソプロパノールもしくはトルエンなどの物質のアリコートに加え、その後に水酸化ナトリウム（１～７０％の溶液）を加えた。この調製物を４８時間まで撹拌した。次に、反応を提供するためにモノクロロ酢酸ナトリウムを加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱した。次にこの反応に酸化プロピレンを加え、これを次に１４日間まで２５～１００℃へ加熱し、その後に酸（例えば、酢酸、硫酸、硝酸、塩酸など）を用いて中和した。このように形成された生成物を収集し、洗浄し、乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６８
カリウムカルボキシメチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるカリウムカルボキシメチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を、温度監視用熱電対、循環浴に接続した凝縮器およびマグネチック・スターバーを備えた、容積５００ｍＬの丸底フラスコ中の２００ｍＬのイソプロパノールに加えた。４０ｍＬの水酸化カリウム（１５％溶液）をこの調製物に滴下し、次にこれを加熱板で２５℃に加熱した。調製物を１時間撹拌した後、温度を５５℃に上昇させた。反応を提供するために、次にクロロ酢酸カリウムを加え、これを５５℃で３時間保持し、その後に９０％の酢酸を用いて中和した。形成された生成物を収集し、エタノール（７０％）を用いて洗浄し、２０～２５℃の真空下で乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例６９
リチウムカルボキシメチルα－グルカンの調製
本実施例では、グルカンエーテル誘導体であるリチウムカルボキシメチルグルカンを生成する工程について記載する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を、温度監視用熱電対、循環浴に接続した凝縮器およびマグネチック・スターバーを備えた、容積５００ｍＬの丸底フラスコ中の２００ｍＬのイソプロパノールに加えた。５０ｍＬの水酸化カリウム（１１．３％溶液）をこの調製物に滴下し、次にこれを加熱板上で２５℃に加熱した。調製物を１時間撹拌した後、温度を５５℃に上昇させた。反応を提供するために、次にクロロ酢酸リチウム（１２ｇ）を加え、これを５５℃で３時間保持し、その後に９０％の酢酸を用いて中和した。形成された生成物を収集し、エタノール（７０％）を用いて洗浄し、２０～２５℃の真空下で乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。
実施例７０
ジヒドロキシアルキルα－グルカンの調製
本実施例では、α－グルカンのジヒドロキシアルキルエーテル誘導体を生成する工程について記載する。詳細には、ジヒドロキシプロピルグルカンを生成する。
実施例３０、３２、３３、３４、３６もしくは３７に記載したように調製したおよそ１０ｇの本α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を、温度監視用熱電対、循環浴に接続した凝縮器およびマグネチック・スターバーを備えた、容積５００ｍＬの丸底フラスコ中の１００ｍＬの２０％の水酸化テトラエチルアンモニウムに加えた（約９．１重量％のポリα－１，３－グルカンを生じる）。この調製物を撹拌し、加熱板上で３０℃に加熱した。あらゆる固体を溶解させるために調製物を１時間撹拌した後、温度を５５℃に上昇させた。次に反応（約５．２重量％の３－クロロ－１，２－プロパンジオール）を生成するために３－クロロ－１，２－プロパンジオール（６．７ｇ）および１１ｇの脱イオン水を加え、これを５５℃で１．５時間保持し、その後に５．６ｇの脱イオン水を反応に加えた。この反応をさらに３時間４５分間にわたり５５℃で保持し、その後に酢酸で中和した。中和後、過剰のイソプロパノールを加えた。形成された生成物を収集し、エタノール（９５％）を用いて洗浄し、２０～２５℃の真空下で乾燥させた。生じた生成物は、分子量および置換度（ＤｏＳ）を決定するためにＮＭＲおよびＳＥＣによって分析した。

Claims (15)

  1. 織物ケアまたは洗濯ケア組成物であって：
    ａ．
    ｉ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
    ｉｉ． ２５％未満のα－（１，６）グリコシド結合；
    ｉｉｉ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
    ここで、該％グルコシド結合は、本願明細書に開示されたメチル化分析法におけるＧＣ／ＭＳ分析により決定される；
    ｉｖ． ５，０００ダルトン未満の重量平均分子量；
    ｖ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
    ｖｉ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
    ｖｉｉ． ５未満の多分散性指数；
    を含む、α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物；ならびに
    ｂ． 少なくとも１つの追加の織物ケアまたは洗濯ケア成分
    を含む、前記織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  2. 前記追加の成分は、少なくとも１つのセルラーゼである、請求項１に記載の織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  3. 前記追加の成分は、少なくとも１つのプロテアーゼである、請求項１に記載の織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  4. 前記可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、５％未満のα－（１，４）グリコシド結合を含む、請求項１に記載の織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  5. 前記織物ケアもしくは洗濯ケア組成物は、０．０１～９０％重量％の前記可溶性α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物を含む、請求項１に記載の織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  6. 前記少なくとも１つの追加の成分は、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤もしくは両性イオン性界面活性剤から選択される界面活性剤、プロテアーゼ、セルラーゼ、ポリエステラーゼ、アミラーゼ、クチナーゼ、リパーゼ、ペクチン酸リアーゼ、ペルヒドロラーゼ、キシラナーゼ、ペルオキシダーゼおよび／またはラッカーゼの任意の組み合わせから選択される酵素、洗剤ビルダー、錯化剤、ポリマー、防汚ポリマー、界面活性増強性ポリマー、漂白系、漂白活性剤、漂白触媒、織物コンディショナー、粘土、発泡増強剤、石鹸泡抑制剤、防錆剤、汚れ懸濁剤、再汚染防止剤、染料、殺菌剤、変色防止剤、蛍光増白剤、香料、飽和もしくは不飽和脂肪酸、染料移動阻害剤、キレート剤、色相染料（ｈｕｅｉｎｇ ｄｙｅ）、カルシウムおよびマグネシウムカチオン、視覚信号化成分（ｖｉｓｕａｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）、消泡剤、構造剤、増粘剤、凝結防止剤、デンプン、砂、ゲル化剤、ならびにそれらの任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  7. 前記組成物は、液体、ジェル、粉末、親水コロイド、水溶液、顆粒、タブレット、カプセル、単一区画小袋、多区画小袋、またはそれらの任意の組み合わせの形態にある、請求項１に記載の織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  8. 前記α－グルカンオリゴマー／ポリマー組成物は、セルラーゼ耐性、プロテアーゼ耐性、アミラーゼ耐性、またはそれらの組合せである、請求項１に記載の織物ケアまたは洗濯ケア組成物。
  9. 織物ケアまたは洗濯ケア組成物であるグルカンエーテル組成物であって：
    ａ． 少なくとも７５％のα－（１，３）グリコシド結合；
    ｂ． ２５未満％のα－（１，６）グリコシド結合；
    ｃ． １０％未満のα－（１，３，６）グリコシド結合；
    ここで、該％グルコシド結合は、本願明細書に開示されたメチル化分析法におけるＧＣ／ＭＳ分析により決定される；
    ｄ． ５，０００ダルトン未満の、グルカンエーテルのグルカン部分の重量平均分子量；
    ｅ． ２０℃の水中において１２重量％で０．２５パスカル秒（Ｐａ・ｓ）未満の粘度；
    ｆ． ２５℃の水中において少なくとも２０重量／重量％の溶解度；および
    ｇ． ５未満の多分散性指数；
    を含み、
    少なくとも１つの有機基との０．０５～３．０の置換度（ＤｏＳ）を有する前記グルカンエーテル組成物。
  10. 前記少なくとも１つの有機基は、カルボキシアルキル基、ヒドロキシアルキル基、およびアルキル基からなる群から選択される、請求項９に記載のグルカンエーテル組成物。
  11. 前記少なくとも１つの有機基は、カルボキシメチル基、ヒドロキシプロピル基、ジヒドロキシプロピル基、ヒドロキシエチル基、メチル基、およびエチル基からなる群から選択される、請求項９に記載のグルカンエーテル組成物。
  12. 前記グルカンエーテルは、第４級アンモニウムグルカンエーテルである、請求項９に記載のグルカンエーテル組成物。
  13. 前記第４級アンモニウムグルカンエーテルは、トリメチルアンモニウムヒドロキシプロ
    ピルグルカンである、請求項１２に記載のグルカンエーテル組成物。
  14. 前記グルカンエーテル組成物は、セルラーゼ耐性、プロテアーゼ耐性、アミラーゼ耐性、またはそれらの任意の組み合わせである、請求項９に記載のグルカンエーテル組成物。
  15. 請求項９に記載のグルカンエーテル組成物を含む、織物ケア組成物、または洗濯ケア組成物。
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